特許 6934196 ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加抑制剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6934196

(24)【登録日】2021年8月25日

(45)【発行日】2021年9月15日

(54)【発明の名称】ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加抑制剤

(51)【国際特許分類】

   C07D 317/68 20060101AFI20210906BHJP

   C07D 405/12 20060101ALI20210906BHJP

   C07D 295/135 20060101ALI20210906BHJP

   C07D 295/185 20060101ALI20210906BHJP

   A61K 31/496 20060101ALN20210906BHJP

   A61K 31/495 20060101ALN20210906BHJP

   A61K 31/4525 20060101ALN20210906BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALN20210906BHJP

   A61K 31/452 20060101ALN20210906BHJP

   A61P 29/00 20060101ALN20210906BHJP

   A61P 25/04 20060101ALN20210906BHJP

   A61P 43/00 20060101ALN20210906BHJP

【ＦＩ】

   C07D317/68

   C07D405/12

   C07D295/135

   C07D295/185

   !A61K31/496

   !A61K31/495

   !A61K31/4525

   !A61K31/5377

   !A61K31/452

   !A61P29/00

   !A61P25/04

   !A61P43/00 111

【請求項の数】2

【全頁数】31

(21)【出願番号】特願2018-517688(P2018-517688)

(86)(22)【出願日】2016年10月7日

(65)【公表番号】特表2018-529748(P2018-529748A)

(43)【公表日】2018年10月11日

(86)【国際出願番号】US2016056051

(87)【国際公開番号】WO2017062804

(87)【国際公開日】20170413

【審査請求日】2019年9月26日

(31)【優先権主張番号】62/238,182

(32)【優先日】2015年10月7日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】505167532

【氏名又は名称】アリゾナ ボード オブ リージェンツ オン ビハーフ オブ ザ ユニバーシティ オブ アリゾナ

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】特許業務法人ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】カンナ，メイ

(72)【発明者】

【氏名】カンナ，ラジェッシュ

(72)【発明者】

【氏名】ゴケール，ヴィジェイ

(72)【発明者】

【氏名】チャウラ，リーナ

【審査官】 六笠 紀子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１５／１３４９２０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１３−５０７９８０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１３−５３６２４１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１１−５０７９１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 SUBSTANCE RECORD FOR SID 844767，２００５年 ６月 ４日，DATABASE PUBCHEM SUBSTANCE [ONLINE]，AN: SID 844767，ＵＲＬ，https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/substance/844767

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／００−３３／４４

Ａ６１Ｋ ３８／００−３８／５８

Ａ６１Ｋ ４５／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式の範囲内に包含される化合物。

【化1】

ＸはＮＨ又はＯであり；
Ｒ_１は、下記式

【化2】

からなる群より選択され；
Ｒ_２は、水素、ＯＣＨ_３及びフッ素からなる群より選択され；
Ｒ_３は、下記式

【化3】

からなる群より選択される。

【請求項2】

【化4】

である、請求項１に記載の化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、神経表面に存在する、電位依存性（ｖｏｌｔａｇｅ−ｇａｔｅｄ）ナトリウムチャンネルＮａｖ１．７たんぱく質の量を調節することができる化合物と、そのような化合物を用いる方法とに関する。特に、本発明の化合物は、ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加を調節することによって、細胞表面でのＮａｖ１．７たんぱく質の量を調節すると考えられており、ここで、ＳＵＭＯ付加とは、小さなユビキチン様修飾因子（ＳＵＭＯ）の付加である。

【0002】

〔関連出願との相互参照〕
本願は、米国仮出願第６２／２３８，１８２号（出願日：２０１５年１０月７日）の利益に対する優先権を主張し、これは、参照によってその全体がここに組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

慢性の痛み、特に、神経障害性の痛みは、数百万人に影響を与え、何十億ドルもの費用がかかり、そして、疾病、苦しみ、自殺の主因となっている。いくつかの慢性の痛みの状態は、既存の薬剤で十分治療可能だが、多くの患者は、多剤投与しても、十分な痛みの除去が達成できていない。さらに、現在利用可能なオピオイド痛み治療は、一般にはただ部分的に効果的であるだけであり、耐性や常用癖を含めて、その臨床効果を制限する多くの副作用と関連する場合が多い。

【0004】

分子および細胞レベルでの神経障害性の痛みのメカニズムの現在の理解は不完全である。したがって、従来処方されている鎮痛剤は、苦しんでいる患者のほぼ３分の１でしか有効でない。

【0005】

したがって、特定の、より効果的な治療のために新しい道を開くことができる痛みメカニズムをさらに理解するには、新しい研究と治療が必要である。

【発明の概要】

【0006】

本発明のいくつかの特徴は、ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加抑制剤に向けられている。ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加を抑制することは、細胞表面でのＮａｖ１．７たんぱく質の個数を減少させ、それによって、細胞表面Ｎａｖ１．７の過剰な存在および／または過度の活性化と関連する種々の臨床状態を緩和する。いくつかの実施形態において、ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加抑制剤は、式：

【0007】

【化1】

【0008】

の化合物であり、Ａｒ^ａ１は、随意的に置換されたフェニルであり、Ｌ^ａ１は、水素結合受容体部分を有するリンカーであり、Ａｒ^ａ２は、フェニレン、ピリジレンまたはピラジニレンであり、そのそれぞれは随意的に置換され、Ｒ^ａ１は、少なくとも１つの水素結合受容体を有するヘテロシクリルまたはヘテロアルキルであり、Ａｒ^ｂ１は、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソリル、ベンゾ［ｄ］オキサゾリル、ベンゾ［ｄ］イソキサゾリル、ベンゾ［ｄ］イミダゾリル、ナフチルまたはキノリニルであり、Ｌ^ｂ１は、立体構造的に窮屈なリンカーであり、Ｒ^ｂ１は、ヘテロシクリルまたは窒素−ヘテロアルキルであり、Ａｒ^ｃ１は、２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシニル、キノロニル、ベンゾキサジニル、キナゾリニルまたはキノキサリニルであり、Ｌ^ｃ１は、水素結合受容体部分を有するリンカーであり、Ｒ^ｃ１は、少なくとも１つの水素結合受容体を有するヘテロシクリルまたはヘテロアルキルである。式Ｉの一つの特定の化合物は、式：

【0009】

【化2】

【0010】

であり、Ａｒ^ａ１およびＲ^ａ１は、ここで規定されたものである。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】ラットの後根神経節（ＤＲＧ）の神経細胞における細胞質ゾルＮａ^＋の、ベラトラジンで誘導された増加を軽減する、本発明の各化合物の能力を示す棒グラフである。

【図2A】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、活性化のグラフサマリーである。

【図2B】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、不活性化適合度（ｆｉｔｓ）のグラフサマリーである。

【図2C】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、電流−電圧の関係のグラフである。

【図2D】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、ＤＭＳＯまたは本発明の化合物で処理されたラットＤＲＧからの、使用に依存した不活性化を示す。

【図3A】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、活性化のグラフサマリーである。

【図3B】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、不活性化適合度のグラフサマリーである。

【図3C】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、電流−電圧の関係のグラフである。

【図3D】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、ＤＭＳＯまたは本発明の化合物で処理されたラットＤＲＧからの、使用に依存した不活性化を示す。

【図4A】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、活性化のグラフサマリーである。

【図4B】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、不活性化適合度のグラフサマリーである。

【図4C】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、電流−電圧の関係のグラフである。

【図4D】本発明の化合物がラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流を抑制していることを示す、グラフ形式での実験結果であり、ＤＭＳＯまたは本発明の化合物で処理されたラットＤＲＧからの、使用に依存した不活性化を示す。

【図5】パネルＡは、ナトリウム電流トレースの代表系統を示し、パネルＢは、化合物ＡＺ００２のサマリーピーク電流を示し、パネルＣは、ＤＭＳＯまたは本発明の化合物で処理されたラットＤＲＧからの活性化および不活性化の適合度を示し、パネルＤは、ＡＺ００２での一晩の培養が細胞の形態や健康に影響を与えないことを示している、混合されたグリア−ＤＲＧの共培養における２つのヒトＤＲＧ（黄色い矢印）を示す写真であり、パネルＥは、ＡＺ００２で処理されたヒトＤＲＧにおけるＨ−無限大を差し引かれた（すなわちＮａＶ１．７）電流の抑制を示している電流トレースの系統を示す。

【発明を実施するための形態】

【0012】

〔定義〕
他のことを文脈が要求していない限り、明細書全体で以下の定義が用いられる。「アルキル」は、１個ないし１２個の、典型的には１個ないし６個の、炭素原子の、１価の直線状飽和炭化水素部分、または、３個ないし１２個の、好ましくは３個ないし６個の、炭素原子の、１価の分岐状飽和炭化水素部分、を指す。例示的なアルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、２−プロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルなどを含むが、これに限定されない。「アルキレン」は、１個ないし１２個の、典型的には１個ないし６個の、炭素原子の、２価の直線状飽和炭化水素部分、または、３個ないし１２個の、好ましくは３個ないし６個の、炭素原子の、２価の分岐状飽和炭化水素部分、を指す。例示的なアルキレン基は、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレンなどを含むが、これに限定されない。「アリール」は、随意的に、環状構造の中にて１つ以上、好ましくは１個、２個または３個の置換基で置換された、６個ないし１５個の環状原子の、１価の、単環式、二環式または三環式の芳香族炭化水素部分を指す。アリール基に２つ以上の置換基が存在する場合、各置換基は独立して選択される。用語「ハロ」、「ハロゲン」、「ハライド」は、ここでは交換可能に用いられ、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを指す。「ハロアルキル」は、１つ以上の水素原子が同じまたは異なるハロ原子で置き換えられた、ここで定義されたようなアルキル基を指す。用語「ハロアルキル」は、全てのアルキル水素原子がハロゲン原子で置き換えられた、過ハロゲン化されたアルキル基も含む。例示的なハロアルキル基は、−ＣＨ_２Ｃｌ、−ＣＦ_３、−ＣＨ_２ＣＦ_３、−ＣＨ_２ＣＣｌ_３などを含むが、これに限定されない。「ヘテロシクリル」は、１個または２個の環状原子がＮ，ＯまたはＳ（Ｏ）_ｎから選択され（ｎは０ないし２の整数）、残りの環状原子がＣであり、１個または２個のＣ原子が随意的にカルボニル基であることができる、３個ないし８個の環状原子の、非芳香族単環部分を意味する。ヘテロシクリル環は、随意的に、独立して１つ以上、好ましくは１個、２個または３個の置換基で選択されることができる。ヘテロシクリル基に２つ以上の置換基が存在する場合、各置換基は独立して選択される。「薬学的に受容可能な補形剤」は、一般に、安全で、非毒性で、生物学的にもそれ以外でも望ましくないものではない薬学的組成物を調製するのに有用な補形剤を指し、人間の医薬用途と同様に獣医用途にも受容可能な補形剤を含む。化合物の「薬学的に受容可能な塩」は、薬学的に受容可能な塩であって、親化合物の望ましい薬理活性を持つ塩を意味する。このような塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、燐酸などのような無機酸で形成された、または、酢酸、プロピオン酸、ヘキサノン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、琥珀酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔｉａｒｙブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などのような有機酸で形成された、酸付加塩（ａｃｉｄ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｓａｌｔ）、または、（２）親化合物に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、またはアルミニウムイオン、によって置き換えられたとき、または、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどのような有機塩基と調和して働くときに、形成される塩を含む。用語「プロ−ドラッグ」または「プロドラッグ」は、ここでは交換可能に用いられ、哺乳類の対象者にこのようなプロドラッグが投与されたときにｉｎ ｖｉｖｏで式Ｉに係る活性親薬剤を放出する任意の化合物を指す。式Ｉの化合物のプロドラッグは、式Ｉの化合物に存在する１つ以上の官能基を修飾して、その修飾が、親化合物をｉｎ ｖｉｖｏで放出するように開裂されるようにすることによって調製される。プロドラッグは、式Ｉの化合物を含み、そこでは、式Ｉの化合物におけるヒドロキシ基、アミノ基またはメルカプト基がそれぞれ、遊離のヒドロキシ基、アミノ基またはメルカプト基を再生するようにｉｎ ｖｉｖｏで開裂されるような任意の基と結合している。プロドラッグの例は、式Ｉの化合物のヒドロキシ官能基のエステル（例えばアセテート、フォルメートおよびベンゾエート誘導体）、カルバメート（例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミノカルボニル）などを含むが、これに限定されない。「保護基」は、分子マスクにおいて反応性基に結合されると反応性を減少させるまたは防止する、アルキル基を除く部分を指す。保護基の例は、Ｔ．Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ． Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９、およびＨａｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｈａｒｒｉｓｏｎｅｔ ａｌ．、Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｖｏｌｓ． １−８（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９７１−１９９６）に見出すことができ、これらはその全てが参照によりここに盛り込まれる。代表的なヒドロキシ保護基は、アシル基、ベンジルおよびトリチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、トリアルキルシリルエーテルおよびアリルエーテルを含む。代表的なアミノ保護基は、ホルミル、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、２−トリメチルシリル−エタンスルホニル（ＳＥＳ）、トリチルおよび置換されたトリチル基、アリルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、ニトロ−ベラチルオキシカルボニル（ＮＶＯＣ）などを含む。「対応する保護基」は、それが結合されるヘテロ原子（すなわちＮ、Ｏ、ＰまたはＳ）に対応する適切な保護基を意味する。「治療上の有効量」は、疾病の治療のために化合物が投与されると、そのような疾病の治療を果たすのに十分な、化合物の量を意味する。「治療上の有効量」は、化合物、疾病およびその重症度および治療される哺乳類の年齢、体重などによって変化する。疾病の「治療」は、（１）疾病を防止すること、すなわち、疾病に曝露したまたはかかりやすくなっているが、その疾病の症状をまだ経験したり示したりしていない哺乳類においてその疾病の臨床症状が進行しないようにすること、（２）疾病を抑制すること、すなわち、その疾病またはその臨床症状の進行を抑止するまたは減少させること、または（３）疾病を軽減すること、すなわち、その疾病またはその臨床症状を後退させること、を含む。化学反応を記述するとき、用語「処理」、「接触」および「反応」は、ここでは交換可能に用いられ、示されたおよび／または所望の生成物を生成するための適切な条件下で、２つ以上の試薬を加えるまたは混ぜることを指す。示されたおよび／または所望の生成物を生成する反応は、始めに加えられた２つの試薬の組み合わせから直接得られるとは限らないこと、すなわち、混合物中で生成した１つ以上の中間体であって最終的に、示されたおよび／または所望の生成物を生成するような中間体がありうることを理解すべきである。ここで用いられるときには、用語「上で定義したもの」および「ここで定義したもの」は、変数を指す場合には、任意の狭いおよび／または好ましい、より好ましいおよび最も好ましい定義があればそれと同様に、その変数の広い定義を、参照により盛り込む。

【0013】

〔本発明の化合物〕
慢性の痛みは、公共の主要な健康問題であり、１億人を超えるアメリカ人に影響を与えている。オピオイドは、有用な鎮痛剤であり、多くのタイプの痛みに対する痛み管理で不可欠なものである。しかしながら、オピオイドは、便秘、吐き気、精神的曇りおよび、ときに死に至る呼吸低下を含めて、多くの副作用を有する。痛み状態の広範囲とリンクされているたんぱく質である、電位依存性ナトリウムチャンネルＮａｖ１．７を狙うことが、痛み治療の進展のための方策として出現した。

【0014】

本発明のいくつかの特徴は、細胞表面に存在するＮａｖ１．７たんぱく質の量を直接または間接に調節することができる化合物の本発明者による発見に基づいている。したがって、本発明の化合物は、細胞表面でのＮａｖ１．７の存在と関連する任意の数の臨床状態を治療するのに用いられることができる。本発明の一つの特定の実施形態では、本発明の化合物は、慢性および／または急性の痛みを含む痛みを治療するのに用いられる。

【0015】

電位依存性Ｎａｖ１．７ナトリウムチャンネルは、後根神経節（ＤＲＧ）、三叉神経の神経節および交感神経神経節を含めて、組織損傷性の痛みに関連する神経節内の末梢神経系で優先的に発現されると考えられている。痛み信号の形質導入の原因である組織損傷性の神経細胞では、チャンネルは、刺激に応じて活動電位を始動させるのに必要な電圧活動閾値を修飾する。機能獲得型変異（ｇａｉｎ−ｏｆ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ）、すなわち、活動電位の開始のためのＮａｖ１．７電流閾値を下げる変化は、異痛症―下げられた、痛みの刺激閾値を生成する。このような変異は、肢端紅痛症、発作性の極度の痛み障害、および、小さな繊維組織神経障害を含めて、痛み症状の原因となる。

【0016】

細胞表面でのＮａｖ１．７の増加した存在は、また、糖尿病の神経障害、炎症、それに続く組み合わされた座骨神経の圧迫、髄核適用モデリング腰部椎間板ヘルニア、およびその後の神経枝結紮損傷（ＳＮＩ）から起こる痛みとも関連している。逆に、Ｎａｖ１．７における機能喪失型変異（ｌｏｓｓ−ｏｆ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ）は、刺激が、痛みを伝搬するための閾値に達するのを防止する。このような変異を有する患者は、痛み感覚の完全な消失を示す。さらに、ＤＲＧ感覚神経におけるＮａｖ１．７の、ヘルペス媒介動物で媒介されるノックダウンは、完全フロインドアジュバントに応答する痛覚過敏（すなわち、痛みのある刺激への増加した反応）の進行を著しく防止する。したがって、Ｎａｖ１．７は、痛み形質導入にとって必要であり十分でもある。事実、このような役割の証拠として、Ｎａｖ１．７ノックアウトのマウスは、炎症および神経障害性の痛みモデルにおいて痛覚過敏を進行させないが、形質欠損は発現しないことが示されている。

【0017】

どの理論にも拘束されることなく、本発明の化合物は、細胞表面に存在するＮａｖ１．７たんぱく質の量を調節し、またそれによって、このたんぱく質によって制御される細胞興奮性を調節すると考えられる。特に、本発明の化合物は、細胞表面に対する特定の電位依存性ナトリウムチャンネルの細胞通行（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）を引き起こす原因である細胞内処理を調節（例えば抑制）し、それによって、細胞表面でのこのチャンネル（すなわちＮａｖ１．７たんぱく質）の存在を選択的に減少させると考えられている。

【0018】

どの理論にも拘束されることなく、本発明の化合物は、ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加処理を抑制すると考えられる。ＳＵＭＯ付加処理は、種々の細胞処理に関与する翻訳後の修飾である。用語「ＳＵＭＯ」は、小さなユビキチン様修飾因子を指す。ＳＵＭＯたんぱく質は、細胞内の標的と共有結合的に脱着してその機能を修飾する小さなたんぱく質の系統である。ここで用いられるときには、「ＳＵＭＯ付加」または「ＳＵＭＯ付加処理」を調節または抑制することは、ＳＵＭＯたんぱく質の結合を調節または抑制すること、および／または、ＳＵＭＯたんぱく質の結合の後のたんぱく質の修飾を調節または抑制すること、を意味する。

【0019】

細胞表面に存在するＮａｖ１．７たんぱく質の量は、一つには、ＣＲＭＰ２たんぱく質、すなわちＣＲＭＰ２、のＳＵＭＯ付加によって調節される。ＣＲＭＰ２は、小さな分子サイズ（６０−６６ｋＤａ）の、５つの細胞内燐酸たんぱく質（ＣＲＭＰ１、ＣＲＭＰ２、ＣＲＭＰ３、ＣＲＭＰ４、ＣＲＭＰ５）からなる、コラプシン（ｃｏｌｌａｐｓｉｎ）反応媒介たんぱく質（ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍｅｄｉａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＣＲＭＰ）系統のメンバーである。ＣＲＭＰ２の発現または生物活性を調節することができる化合物は、また、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病および脳卒中などの神経疾患に関連する臨床状態を治療するのにも用いられることができる。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病および脳卒中などの神経疾患を、これらの疾患のうちのいくつかのものと関連する痛みを含めて、治療するのに用いられることができる。

【0020】

痛み治療に関して、本発明の化合物は、慢性の痛み、急性の痛み、そう痒、および臭覚障害を含めて、種々のタイプの痛みを治療するのに用いられることができる。本発明の化合物で治療することができる例示的な慢性の痛みは、癌性疼痛、火傷の痛み、関節痛、化学療法で誘導された末梢神経障害、疱疹後神経痛、原発性肢端紅痛症などの散発的痛み、および、発作性の極度の痛み障害などを含むが、これに限定されない。本発明の化合物で治療することができる例示的な急性の痛みは、有害な熱痛み、そう痒、および外科的な痛みを含むが、これに限定されない。

【0021】

オピオイド化合物を用いる伝統的な痛み治療と比べて、本発明の化合物の利点のうちのいくつかは、運動性の機能障害や鎮静作用がないこと、所定の用量レベルにおける、モルヒネやガバペンチン（ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ）に対しての、より高い有効性および同等の効き目、麻薬性鎮痛薬と比べて、有益な効果および誤用に対して、存在しないかまたは大きく減少された可能性、を含むが、これに限定されない。

【0022】

本発明の他の特徴は、対象者の痛みを治療する方法を含み、この方法は、この治療の必要な対象者に、本発明の化合物の治療上の有効量を投与することを含む。本発明の他の特徴は、細胞表面でのＮａｖ１．７たんぱく質の存在および／または活性化と関連する臨床状態を治療する方法を含み、この方法は、細胞表面でのＮａｖ１．７たんぱく質の存在および／または活性化と関連する臨床状態に苦しむ対象者に、本発明の化合物の治療上の有効量を投与して、それによって細胞表面でのＮａｖ１．７たんぱく質の量を減少させることを含む。どの理論にも拘束されることなく、本発明の化合物は、ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加を抑制することによって、神経細胞表面に存在するＮａｖ１．７の量を減少させると考えられる。

【0023】

本発明の代表的な化合物は、式：

【0024】

【化3】

【0025】

を含むが、これに限定されない。

【0026】

式Ｉの化合物の中で、Ａｒ^ａ１は、随意的に置換された、フェニルまたはピリジンのようなアリールである。ある実施形態では、Ａｒ^ａ１は、（Ｃ１位として任意に指定された、Ｌ^ａ１を有する炭素に対して、）３位、４位および／または５位に置換基を有する置換されたフェニルである。式Ｉの化合物のフェニル基（例えばＡｒ^ａ１およびＡｒ^ａ２）（または本発明の化合物における任意の他のフェニル基）に対する例示的な置換基は、アルコキシ（例えば、メトキシ、イソプロピロキシなど）、シクロアルコキシ（例えばシクロプロピロキシ）、アリールオキシ（例えばフェノキシであり、ここに記載の通り、フェノキシのフェニル基は随意的に置換される）、アルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ（すなわちＲ−Ｏ−であり、Ｒは、トリフルオロメトキシなどのようなハロアルキルである）、フルオロ、シアノ、アラルコキシ（すなわちＡｒ−Ｒ−Ｏ−であり、Ａｒはアリールであり、Ｒは、ベンジルオキシのようなアルキレンであり、アリール基は、随意的に、上述したもののような１−３個の置換基で置換される）、および、ヘテロシクリルアルコキシ（すなわちＨｅｔ−Ｒ−Ｏ−であり、Ｈｅｔはヘテロシクリルであり、Ｒはアルキレンである）を含む。典型的には、フェニルＡｒ^ａ１の３位および／または４位は、相対的に疎水性のエーテル基で置換されている。フェニルＡｒ^ａ１の５位は、典型的には、Ｈ結合受容体で置換されている。用語「Ｈ結合受容体」および「Ｈ結合受容体部分」は、ここでは交換可能に用いられ、窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）などのような電気陰性度の高い原子に結合された水素原子を有する分子と水素結合を形成することができる非共有電子対を有するヘテロ原子（例えばＯ、Ｎ、Ｓ、Ｐなど）を指す。例えば、ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｈｙｄｒｏｇｅｎ＿ｂｏｎｄを参照されたい。Ａｒ^ａ１に適した例示的なＨ結合受容体は、アルコキシおよびハロアルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシおよびトリフルオロメトキシ）のような、酸素を含有する置換基を含むが、これに限定されない。

【0027】

式Ｉの化合物のＬ^ａ１は、水素結合受容体部分を有するリンカーである。ある特定の実施形態では、Ｌ^ａ１は、式：−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ−の部分であり、Ｒは、水素、アルキルまたは窒素保護基である。別の実施形態では、Ｌ^ａ１は、（例えば、環の１、３位にイミダゾリルの２つのＮ原子を有する）イミダゾリル部分である。

【0028】

式Ｉの化合物のＡｒ^ａ２は、フェニレン、ピリジレンまたはピラジニレンであり、そのそれぞれは１−３個の置換基で随意的に置換され、そのそれぞれは独立して選択される。適切な置換基は、上述したものを含む。全てのＡｒ^ａ２がＲ^ａ１で置換されていることが認識されるべきであり、それゆえ、Ａｒ^ａ２のことを置換されているものと呼ぶときには、Ａｒ^ａ２がＲ^ａ１のほかにも少なくとも１つの他の置換基を有していることを意味する。典型的には、Ｒ^ａ１は、Ｌ^ａ１基に対してパラ位にて置換されている。特に、Ａｒ^ａ２に対する適切な置換基は、ハロ（例えば、クロロ、ブロモ、ヨードおよび／またはフルオロ）、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アルキルアミノ、アルキルオキシアルキルアミノなどを含む。

【0029】

式Ｉの化合物のＲ^ａ１は、少なくとも１つの水素結合受容体を有するヘテロシクリルまたはヘテロアルキルである。Ｒ^ａ１に適した例示的なヘテロシクリルは、ピペラジン−１−イル（例えば４−メトキシピペラジン−１−イルまたは４−アルキルピペラジン−１−イル）、モルフォリニル、ピロリジニル、ピペリジニルなどを含むが、これに限定されない。あるいは、Ｒ^ａ１は、式：−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｍ−ＯＲ_３の部分、または式：−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｎ（Ｒ_４）（Ｒ_５）の部分であり、ここで、ｍは２または３であり、Ｒ_３は、水素、アルキルまたはヒドロキシル保護基であり、Ｒ_４およびＲ_５は、水素、アルキル、シクロアルキル、または、Ｒ_４およびＲ_５、ならびに、そのＲ_４およびＲ_５が窒素原子に結合されて、置換されたまたは置換されていない環系であってその環系の中に随意的に１つ以上のさらなるヘテロ原子を有するような環系を形成するような当該窒素原子、からなるグループから独立して選択される。

【0030】

他の実施形態では、Ｒ^ａ１はヘテロアルキルである。典型的には、Ｒ^ａ１のヘテロアルキルは、塩基性アミノ基、カルボニル基（すなわち−Ｃ（＝Ｏ）−）、アルコキシ、アリールオキシまたはそれらの組み合わせのような、Ｈ結合受容体を含む。

【0031】

ある実施形態では、化合物Ｉは、式：

【0032】

【化4】

【0033】

であり、ここで、Ａｒ^ａ１およびＲ^ａ１は、ここで定義したものである。Ａｒ^ａ１の具体例は、３，５−ジメトキシフェニル；３−メトキシフェニル；３−イソプロポキシフェニル；３，４，５−トリメトキシフェニル；３−フルオロ−４−［（２−ピペリジン−１−イル）エトキシ］フェニルまたはその塩；３−メトキシ−４−［（４−トリフルオロメトキシフェニル）メトキシ］フェニル；ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル；３−フルオロ−４−［（２−モルフォリノ）エトキシ］フェニル；３−メトキシ−４−［（３−フルオロフェニル）メトキシ］フェニル；３−メトキシ−４−［（４−フルオロフェニル）メトキシ］フェニル；３−メトキシ−４−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メトキシ］フェニル；３−メトキシ−４−［（４−シアノフェニル）メトキシ］フェニルなどを含むが、これに限定されない。Ｒ^ａ１の具体例は、４−メチルピペラジニルおよびその塩；４−アセチルピペラジニル；４−メトキシピペラジニル；、および、他の、置換された、ピペラジニルおよびピペラジニル部分を含むが、これに限定されない。

【0034】

一般に、ＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加を調節（例えば妨害または抑制）することができる任意の化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、実施例セクションで記載したｉｎ ｓｉｌｉｃｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでの分析方法を用いることによって容易に特定されることができる。神経細胞表面でのＮａｖ１．７の数（すなわち量）を制御するのに用いられることができるＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加抑制剤を開発するために、高い処理能力の分析を行って、Ｅ２ ＳＵＭＯ結合酵素であるＵｂｃ９の、ＣＲＭＰ２への結合能力をテストした。簡単に言えば、Ｎｉキレート受容体ビード（ｂｅａｄ）に結合されたＣＲＭＰ２−Ｈｉｓたんぱく質を、グルタチオンでコーティングされたドナービードに結合されたＵｂｃ９−ＧＳＴたんぱく質と共に培養した。受容体ビードがドナービードの近傍に入ると、受容体ビードは、５２０−６２０ｎｍの蛍光信号を放出した。ドナービードは、周囲の（ａｍｂｉｅｎｔ）の酸素を励起一重項形式の酸素に変換する光感作物質であるフタロシアニンを含有した。この一重項酸素は、化学発光による反応において最高点に達する（ｃｕｌｍｉｎａｔｉｎｇ）受容体ビードにてチオキセン誘導体と反応する。この反応は、ビードが互いのおよそ２００ナノメートル以内にある場合だけ起こる。一重項酸素反応の強さは、また、存在する検体の量にも比例し、そえゆえ、スクリーニングに用いられることができる。このビードに基づく増幅発光近傍均質分析（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ａｓｓａｙ）（ＡＬＰＨＡ）技術（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて、ＣＲＭＰ２−ＨｉｓとＵｂｃ９−ＧＳＴとの間の推定上の相互作用を検査した。Ｕｂｃ９が、ＣＲＭＰ２に対してマイクロモル以下（ｓｕｂ−ｍｉｃｒｏｍｏｌａｒ）の親和性で結合したことが明らかになり、この結合は、少なくとも１８時間の期間中ずっと安定であった。

【0035】

本発明の化合物を生成するのに用いられることができる方法のうちのいくつかを以下に示す：

【0036】

【化5】

【0037】

上から分かるように、典型的には、開始物質としては、適切な芳香族化合物（例えば化合物の左側部）が用いられ、所望の部分が結合され、化合物の所望の右側部へ転換される。異なる「左側部」および異なる「右側部」を用いることによって、非常に様々な本発明の化合物を調製することができる。異なる置換基を有する化合物を生成するために、中間体および／または生成物のいずれかにおいて置換基をさらに転換することもできる。本発明の化合物は、以下の化合物：

【0038】

【化6】

【0039】

を含むが、これに限定されない。

【0040】

化合物ＡＺ００２のいくつかのＰＫプロフィールは、ｔ_ｍａｘ＝２ｈｒ、Ｃ_ｍａｘ＝２６３．１ｎｇ／ｍｌ、ＡＵＣ（０−２４ｈｒ）＝２３７５．１ｈｒ．ｎｇ／ｍｌ、ｔ_１／２＝５．８ｈｒ、生物学的利用性（Ｆ）＝３１％である。いくつかの例では、本発明の化合物は、薬学的に受容可能な塩として提供される。適切な薬学的に受容可能な塩は、ここに記載したものを含む。いくつかの実施形態では、本発明の薬学的に受容可能な塩は、より良好な薬物動態を提供する。例えば、化合物ＡＺ００２塩酸塩の薬物動態（「ＰＫ」）分析は、化合物ＡＺ００２自身よりも大きな溶解度を示し、ＣＲＭＰ２で媒介される他の機能に影響を与えることなく、〜４５％、Ｎａｖ１．７電流を抑制した。

【0041】

図１ないし図５に、有効性を示す化合物のうちのいくつかのものの生物学的データを示す。簡単に言えば、図１は、培養された、ラットの後根神経節（ＤＲＧ）の神経細胞における細胞質ゾルＮａ^＋の、ベラトラジンで誘導された増加を軽減する、本発明の代表的な化合物の能力を示すデータである。これは、痛みにリンクされた電位依存性Ｎａｖ１．７チャンネルを介してナトリウムの流入を減少させる化合物能力を示している。ＤＲＧの神経細胞に、Ｃａ^２＋に感受性のある色素であるＦｕｒａ２−ＡＭを装填し、次いで、Ｎａ^＋チャンネルを開けるための３０μＭのベラトラジンのみ（ＤＭＳＯ）で、または、５μＭのＡＺ化合物で、ＤＲＧの神経細胞を処理した。ベラトラジンおよびＡＺ化合物を適用した後に、１２０秒間、濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を計算することによって、時間に対する細胞内ナトリウム濃度（［Ｎａ^＋］ｃ）における、ベラトラジンで誘導された変化を定量化した。示したデータは、平均値±ＳＥＭ．Ｎ＝４の独立した実験（１実験あたり細胞ｎ＝１０４−５２０個）である。

【0042】

図２Ａないし図４Ｄは、主要なラットＤＲＧにおけるテトロドトキシン感受性（ＴＴＸ−Ｓ）のＮａＶ１．７電流に対する化合物ＡＺ００２、ＡＺ１５５およびＡＺ１９１の効果を示す。活性化のサマリーを図２Ａ、図３Ａおよび図４Ａにそれぞれ示す。不活性化適合度のサマリーを図２Ｂ、図３Ｂおよび図４Ｂにそれぞれ示す。図２Ｃ、図３Ｃおよび図４Ｃは、それぞれ、化合物ＡＺ００２、ＡＺ１５５およびＡＺ１９１の電流−電圧の関係を示す。図２Ｄ、図３Ｄおよび図４Ｄは、それぞれ、ＤＭＳＯまたは化合物ＡＺ００２、ＡＺ１５５およびＡＺ１９１で処理されたラットＤＲＧからの、使用に依存した不活性化を示す。示したデータは、示されたように、平均値±ＳＥＭ．Ｎ＝１０ないし１１の細胞である。

【0043】

図５は、化合物ＡＺ００２がラットとヒトのＤＲＧにおけるＴＴＸ−Ｓ Ｎａｖ１．７電流を抑制することを示す。ｔｈａｔパネルＡは、対照（ＤＭＳＯ）および化合物ＡＺ００２で処理されたラットＤＲＧの、ナトリウム電流トレースを示す。パネルＢは、種々の濃度の化合物ＡＺ００２で処理したＤＲＧのサマリーピーク電流を示す。パネルＣは、活性化および不活性化の適合度を示す。パネルＤは、混合されたグリア−ＤＲＧの共培養におけるヒトＤＲＧ（黄色い矢印）の写真である。パネルＥは、対照（ＤＭＳＯ処理された）または化合物ＡＺ００２で処理されたヒトＤＲＧからＨ−無限大を差し引かれた（すなわちＮａＶ１．７）電流を示すトレースの系統である。＊、Ｐ＜０．０５（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−テスト）。

【0044】

〔薬学的組成物〕
本発明は、本発明の少なくとも１つの化合物、または、個々の異性体、異性体のラセミ体または非ラセミ体の混合物、または、薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物、ならびに、少なくとも１つの薬学的に受容可能な担体、および、随意的に他の治療上のおよび／または予防的な成分を含む薬学的組成物を含む。

【0045】

一般に、本発明の化合物は、同様の効用を果たす薬剤について受容されている投与形式のうちの任意のものによって、治療上の有効量分、投与される。治療される疾患の重篤度、対象者の年齢および相対的な健康、用いられる化合物の効力、投与の経路および形式、投与が指導された適応、および、関与する医師の優先傾向および経験、などの多くの要因に依存して、適切な用量範囲は、典型的には一日１−５００ｍｇ、典型的には一日１−１００ｍｇ、および、しばしば、１−３０ｍｇである。このような疾患を治療する当業者は、典型的には、過度の経験なしに、また、個人的な知識および本願の開示に頼って、本発明の化合物の治療上の有効量を確認することができる。

【0046】

典型的には、本発明の化合物は、経口（バッカルおよび舌下を含む）、直腸、点鼻、局所、肺、膣、または非経口（筋肉内、動脈内、くも膜下、皮下および静脈内を含む）の投与に適したものを含む薬学的処方として、または、吸入または吹き入れによる投与に適した形式で、投与される。投与の典型的な方法は、一般に、苦痛の程度に応じて調整されることができる便利な一日用量処方計画（ｄａｉｌｙ ｄｏｓａｇｅ ｒｅｇｉｍｅｎ）を用いる経口である。

【0047】

本発明の化合物、ならびに、１つ以上の従来のアジュバント、担体、または賦形剤は、薬学的組成物および単位用量の形式で配置されることができる。薬学的組成物および単位用量の形式は、追加の活性化合物や原理を用いてまたは用いずに、従来の比率で、従来の成分から構成されることができ、また、単位用量の形式は、採用されるべき意図した一日用量範囲と釣り合った活性成分の任意の適切な有効量を含有することができる。薬学的組成物は、錠剤または充填されたカプセルなどの固体、半固体、粉末、徐放性処方、溶液などの液体、懸濁液、乳化液、エリキシル剤、または経口用途のための充填されたカプセルとして、または、直腸または膣の投与のための座剤の形式で、または、非経口用途のための無菌の注射液の形式で、用いられることができる。したがって、１錠あたり、およそ１ミリグラム、または、より広くは、およそ０．０１ないしおよそ１００ミリグラムの活性成分を含有する処方が、代表的な適切な単位用量形式である。

【0048】

本発明の化合物は、非常に様々な経口投与用量形式で処方されることができる。薬学的組成物および用量形式は、活性成分として、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含むことができる。薬学的に受容可能な担体は、固体または液体とすることができる。固体形式の調製物は、粉末、錠剤、ピル、カプセル、カシェ剤（ｃａｃｈｅｔｓ）、座剤および分散顆粒を含む。固体の担体は、賦形剤、香料添加剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁化剤、結合剤、保存料、錠剤分解剤、または被包物質として作用することもできる。粉末では、担体は一般に、細かく分割された活性成分との混合物である細かく分割された固体である。錠剤では、活性成分は一般に、適切な比率で必要な結合能力を持つ担体と混合され、所望の形状およびサイズに圧縮される。粉末と錠剤は、好ましくは、活性化合物のおよそ１ないしおよそ７０パーセントを含有する。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバターなどを含むが、これに限定されない。用語「調製」は、担体としての被包物質で活性化合物を処方することを含むことを意図され、担体のあるまたは無い活性化合物が、それに関連する担体によって囲まれるようなカプセルを提供する。同様に、カシェ剤およびトローチ剤も含まれる。錠剤、粉末、カプセル、ピル、カシェ剤およびトローチ剤は、経口投与のために適した固体形式であることができる。

【0049】

経口投与に適した他の形式は、乳化液、シロップ、エリキシル剤、水溶液、水性懸濁液を含む液体形式の調製物、または、使用直前に液体形式の調製物に変換されることを意図された固体形式の調製物を含む。乳化液は、溶液にて、例えば、プロピレングリコール水溶液にて調製されることができ、または、乳化剤、例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアカシアを含有してもよい。水溶液は、水に活性成分を溶解させ、適切な着色料、風味、安定剤および増粘剤を加えることによって調製されることができる。水性懸濁液は、天然または合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび他の公知の懸濁剤のような、粘性物質と共に、水に細かく分割された活性成分を分散させることによって調製されることができる。固体形式の調製物は、溶液、懸濁液および乳化液を含み、また、活性成分に加えて、着色料、風味、安定剤、緩衝液、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、安定剤などを含むことができる。

【0050】

本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注射、例えば、ボーラス注射または連続注入）として処方されることもでき、また、アンプル、事前に充填された注射器、小体積注入での単位用量形式で、または、追加の保存料を有する多重用量容器で、提供されることができる。組成物は、油性または水性の媒体で、例えば水性ポリエチレングリコール中の溶液で、懸濁液、溶液または乳化液のような形式をとることができる。油性または非水性の担体の例、賦形剤、溶媒または媒体は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、野菜油（例えばオリーブオイル）、および注射可能な有機エステル（例えばオレイン酸エチル）を含み、また、保存料、湿潤剤、乳化剤または懸濁剤、安定剤および／または分散剤のような、処方剤を含有することができる。あるいは、活性成分は、無菌の固体の無菌の分離によって、または、適切な媒体、例えば無菌で発熱物質の無い水、での使用前に構成のための溶液からの凍結乾燥によって、粉末形式とすることができる。

【0051】

本発明の化合物は、軟膏、クリーム、ローションとして、または経皮貼布として、表皮への局所投与のために処方されることができる。軟膏とクリームは、例えば、水性または油性の基剤に、適切な増粘剤および／またはゲル化剤を加えて処方されることができる。ローションは、水性または油性の基剤で処方されることができ、また、一般に、同じく、１つ以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤または着色剤を含有することができる。口での局所投与に適した処方は、香料基剤、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント、中に活性成分を含むトローチ剤と、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアのような不活性な基剤中に活性成分を含む錠剤と、適切な液体担体中に活性成分を含む口腔洗浄液と、を含む。

【0052】

本発明の化合物は、座剤としての投与のために処方されることができる。脂肪酸グリセリドまたはカカオバターの混合物のような低融点ワックスが最初に融解し、例えば撹拌によって、活性成分が均質に分散する。その後、融解した均質な混合物は、使いやすいサイズの型に流し込まれ、冷却されて固化することができる。

【0053】

本発明の化合物はまた、膣投与のために処方されることもできる。活性成分に加えてこのような担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、泡またはスプレーが当業者には適切であることが知られている。

【0054】

本発明の化合物は、点鼻投与のために処方されることができる。溶液または懸濁液が、従来の方法、例えば、点滴器、ピペットまたはスプレーによって、鼻腔に直接適用される。処方は、単一または多重形式で提供されることができる。点滴器またはピペットの多重形式は、溶液または懸濁液の適切な好ましい体積を投与する患者によって達成されることができる。スプレーの場合は、例えば計量噴霧スプレーポンプを用いて達成されることができる。

【0055】

本発明の化合物は、特に気道への、また、鼻腔内投与を含む、エアロゾル投与のために処方されることができる。化合物は、一般に、例えば５ミクロンまたはそれ未満のオーダーの、小さい粒子径を有する。このような粒子径は、当業者に知られた方法、例えば微粉化によって達成されることができる。活性成分は、加圧されたパックにて、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタンまたはジクロロテトラフルオロエタンのような、または、二酸化炭素または他の適切なガスのような、適切な発射薬と共に提供される。エアロゾルは、好都合には、レシチンのような界面活性剤を含有することもできる。薬剤の用量は、計量弁によって制御されることができる。あるいは、活性成分は、乾燥粉末の形式で、例えば、ラクトース、澱粉、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）のような澱粉誘導体などの、適切な粉体基剤における化合物の粉末混合物の形式で、提供されることができる。粉末担体は、典型的には、部空内にゲルを形成する。粉末組成物は、単位用量形式で、例えば、粉末がそこから吸入器を用いて投与されることができるような、例えばゼラチンまたはブリスターパックのカプセルまたはカートリッジで、提示されることができる。

【0056】

所望であれば、処方には、活性成分の徐放性または制御された放出の投与のために適用された腸溶性のコーティングを調製することができる。例えば、本発明の化合物は、経皮的または皮下薬剤送達装置にて処方されることができる。これらの送達システムは、化合物の徐放性が必要または所望のとき、また、治療計画での患者のコンプライアンスが命に関わるときに、有利である。経皮的送達システムでの化合物は、しばしば、皮膚粘着性の固体支持材に結合される。当該化合物は、貫通促進剤、例えばアゾン（Ａｚｏｎｅ）（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）と結合されることができる。徐放送達システムは、外科手術または注射によって皮下層に皮内挿入されることができる。皮下注入物は、脂質可溶性膜、例えばシリコーンゴムまたは生物分解性ポリマー、例えばポリ乳酸にて、化合物をカプセルに包む。

【0057】

薬学的調製物は、典型的には、単位用量形式である。このような形式では、調製物は、しばしば、適切な量の活性成分を含有する単位用量に再分割される。単位用量形式は、包装された調製物であることができ、包装は、ガラスビンまたはアンプル内の、包装された錠剤、カプセルおよび粉末のような、個別量の調製物を含有する。また、単位用量形式は、カプセル、錠剤、カシェ剤またはトローチ剤そのものであることができ、または、それは、包装された形式でのこれらのうちの適切な数の任意のものであることができる。

【0058】

他の適切な薬学的担体およびそれらの処方は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ １９９５、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ編集、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、第１９版、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．に記載されている。

【0059】

治療での使用のために、式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に受容可能な塩の治療上の有効量が、未加工の化学物質として投与されることができる可能性があれば、その活性成分は、薬学的組成物として提示されることができる。したがって、本開示はさらに、薬学的組成物を提供し、これは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグ、および、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、賦形剤または補形剤の治療上の有効量を含む。組み合わせに適用された場合、組み合わせて、順次、または同時に投与されたかを問わず、用語は、治療上の効果を生む活性成分の組み合わせられた量を指す。式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に受容可能な塩は上述されている。担体、賦形剤または補形剤は、処方の他の成分と両立でき、その受領者にとって有害でないという意味で受容可能でなければならない。本開示の他の特徴によれば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩またはそのプロドラッグ、および、１つ以上の薬学的に受容可能な担体、賦形剤または補形剤を混合することを含む、薬学的処方の調製のための処理も提供される。

【0060】

本開示の組成物は、本開示の化合物と、１つ以上の追加の治療上のおよび／または予防的な薬剤との組み合わせを含み、化合物と追加の薬剤との両方が、通常、単位治療計画において通常に投与される用量の、およそ１０ないし１５０％、より典型的にはおよそ１０ないし８０％の用量レベルで存在する。

【0061】

本発明のさらなる目的、利点および新規な特徴は、限定を意図するものではない以下の実施例の試験に基づき、当業者には明らかである。実施例では、構造的に減少されて実行される処理は現在時制で記載し、実験室で行われた処理は過去時制で記載する。

【実施例】

【0062】

〔ｉｎ ｓｉｌｉｃｏモデリング〕
ヒトＣＲＭＰ２に対する化合物のｉｎ ｓｉｌｉｃｏドッキングを行った。簡単に言えば、５３個のドッキングされた化合物を有するヒトＣＲＭＰ２の構造を分析した。ＣＲＭＰ２に結合する低分子を探索するために、コンピュータによるスクリーニングを用いた。ドッキングは、ＳＵＭＯ付加のモチーフの中のＫ３７４残基を収容するＣＲＭＰ２における１０Å^３のポケットに集中させた。得られた複合体を、すべり（Ｇｌｉｄｅ）スコアおよび他のエネルギー関連条件を用いてランク分けした。ほとんどの化合物は、ＣＲＭＰ２上の２つの異なる部位にドッキングした。先導的な化合物を確認するために、化合物のドッキングからＣＲＭＰ １、４および５の結晶構造までのすべりスコアを用いた。

【0063】

〔スクリーニング分析〕
ＡＬＰＨＡ分析によって、Ｕｂｃ９−ＣＲＭＰ２抑制剤のスクリーニングを行った。簡単に言えば、さらに先導的な化合物を確認するために、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏモデリングでの先導的な化合物として確認された１００μＭの化合物を、Ｕｂｃ９−ＣＲＭＰ２たんぱく質の相互作用のパーセント抑制について分析した。

【0064】

〔ベラトラジンで誘導されたスクリーン〕
ＮａＶ不活性化の抑制剤であるベラトラジンは、Ｎａ^＋の開口を増加させることによって、電圧開閉式のカルシウムチャンネルの開口をもたらす脱分極を起こす。レシオメトリック（ｒａｔｉｏｍｅｔｒｉｃ）Ｆｕｒａ２−ＡＭ分析によって、カルシウムの流入をモニターした。ここで、本発明の種々の化合物を用いて感覚神経を一晩中培養し、ベラトラジンで誘導されたカルシウムの流入に影響を与える能力をテストした。対照（ＤＭＳＯ、０．０３％）および化合物において、平均３４０ｎｍ／３８０ｎｍの比率を要約する棒をプロットした。条件あたり＞１００細胞からのデータを得た。閾値より上を示す化合物は、おそらく活性化剤を表していると思われ、一方、閾値より下を示す化合物は、Ｎａｖ１．７に影響を与えるＣＲＭＰ２のＳＵＭＯ付加の潜在的な抑制剤として確認された。

【0065】

〔ラットの行動痛み分析〕
化合物ＡＺ００２は、神経損傷で誘導された慢性痛みのモデルにおいて、機械的な過敏性を逆転させた。ＡＺ００２（５μｇ／１０μＬ）の脊髄投与は、神経障害性痛みの神経枝結紮損傷モデルにおいて、機械的な過敏性を著しく逆転させた。前足引き閾値の結果、ＡＺ００２投与後の３０ないし２４０分の時間に（ｎ＝６、＊ｐ＜０．０５）著しく逆転した、損傷の７日後での著しい減少となったが、媒体対照（ＤＭＳＯ）ではそうならなかった。

【0066】

さらに、ＡＺ００２（５μｇ／１０μＬ）およびＡＺ００８（５μｇ／１０μＬ）の脊髄投与は、神経障害性痛みの神経枝結紮損傷モデルにおいて、機械的な過敏性を著しく逆転させた。前足引き閾値の結果、ＡＺ００２投与後の１５、３０、９０および１２０分の時間に（ｎ＝６、＊ｐ＜０．０５）、および、ＡＺ００８投与後の９０、１２０、１５０および２１０分の時間に（ｎ＝６、＊ｐ＜０．０５）、著しく逆転した、損傷の７日後での著しい減少となった。対照として損傷後の基準線を用い、一方通行のＡＮＯＶＡおよびその後のＤｕｎｎｅｔｔ’ｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｔｅｓｔを用いてデータを分析した。

【0067】

〔カテコールアミンＡ分化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ）（ＣＡＤ）およびヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞株の培養およびトランスフェクション〕
マウスの神経由来のＣＡＤおよびヒト由来のＨＥＫ２９３細胞を、３７℃、５％ ＣＯ_２の標準細胞培養条件で増殖させた。全ての培地に、１０，０００μｇ／ｍｌのストックから、１０％ ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）および１％ペニシリン／硫酸ストレプトマイシンを補った。ＣＡＤ細胞をＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で維持し、ＨＥＫ２９３細胞をＤＭＥＭ培地で維持した。Ｄｒ．Ｔｈｅｏｄｏｒｅ Ｒ．Ｃｕｍｍｉｎｓ（Ｉｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）から、種々のＮａＶ１．Ｘアイソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍｓ）を発現するＨＥＫ２９３細胞株を得た。ｐＴａｒｇｅｔベクターにおけるｈＮａＶ１．１、ｐｃＤＮＡ３．１−ｍｏｄベクターにおけるｒＮａＶ１．３またはｈＮａＶ１．７、または、ｐＲｃＣＭＶＩＩベクターにおけるＮａＶ１．５の燐酸カルシウム沈殿トランスフェクションによって、ＮａＶ１．Ｘサブタイプ（ｓｕｂｔｙｐｅｓ）を安定して発現するＨＥＫ２９３細胞が生成された。ＮａＶ１．Ｘ発現細胞を選択するために、ゲネチシン（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）（Ｃａｔ＃１０１３１０３５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を５００μｇ／ｍｌで用いた。全体のナトリウム電流に対してＮａＶ１．７による〜８０％の寄与により、モデルの神経細胞株として、ＣＡＤ細胞を選択した。この〜８０％の寄与は、ＨＷＴＸ−ＩＶ（Ａｌｏｍｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ、Ｉｓｒａｅｌ）およびＰｒｏＴｏｘ−ＩＩ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）の両方によって、ＮａＶ１．７のアイソフォーム特異性の遮断によって決定した。細胞は、２μｇ／μｌのＣＲＭＰ２プラスミドおよび／または１μｇ／μｌの他の指示されたプラスミドと複合された１μｇ／μｌのポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を用いてトランスフェクションした。これらの条件下で、トランスフェクション効率は〜５０％であった。たんぱく質の定量化に必要な、より高いトランスフェクション効率を達成するために、製造者の指示に沿い、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｃａｔ＃１１６６８０１９、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を用いてトランスフェクションされた細胞においていくつかのウェスタンブロットを行った。これらのケースでは、トランスフェクション効率は典型的には＞９５％であった。５００ｎＭの濃度で、製造者の指示に沿い、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いてｓｉＲＮＡをトランスフェクションした。すべての実験は、トランスフェクション後の４８ｈと７２ｈとの間に行った。プラスミドのトランスフェクションはｄｓＲｅｄ蛍光性によって確認し、ノックダウンはウェスタンブロットによって確認した。

【0068】

〔ラットの主要な後根神経節ＤＲＧの神経細胞の培養およびトランスフェクション〕
ラットＤＲＧの神経細胞を５０−１７４ｇのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから分離し、次いで、公知の処置を用いてトランスフェクションした。簡単に言えば、背部の皮膚と筋肉を除去することと、解体段階に並行に最高点の骨の処理を行うことによって、ＤＲＧを露出させた。次いで、ＤＲＧが集められ、その根で切り取って形を整え、中性のプロテアーゼ（３．１２５ｍｇ．ｍｌ−１、Ｃａｔ＃ＬＳ０２１０４、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）とコラゲナーゼＴｙｐｅ Ｉ（５ｍｇ．ｍｌ−１、Ｃａｔ＃ＬＳ００４１９４、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）とを含む３ｍｌの、重炭酸塩の無い、血清の無い、無菌のＤＭＥＭ（Ｃａｔ＃１１９６５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）溶液にて消化し、異邦人の撹拌下で４５分、３７℃にて培養した。次いで、分離されたＤＲＧ神経細胞（〜１．５ｘ１０６）を穏やかに遠心分離し、細胞を集め、１０，０００μｇ／ｍｌのストックからの１％ペニシリン／硫酸ストレプトマイシン、３０ｎｇ．ｍｌ−１の神経増殖因子、および１０％のウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含有するＤＲＧ培地ＤＭＥＭで洗浄した。集められた細胞を、上述の動作濃度で、プラスミドまたはｓｉＲＮＡを含有する核因子トランスフェクション試薬に再度懸濁した。次いで、細胞を、Ａｍａｘａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ（Ｌｏｎｚａ、Ｂａｓｅｌ、スイス）にて電気穿孔法プロトコルＯ−００３に付し、ポリ−Ｄ−リジンおよびラミニンでコーティングされたガラスの１２ｍｍまたは１５ｍｍのカバーガラス上に置いた。トランスフェクション効率は定期的に２０％ないし３０％であり、細胞死はおよそ〜１０％であった。Ａδ−およびｃ−線維痛覚神経細胞（ｆｉｂｅｒ ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｎ）を狙うために、小さい直径の神経細胞を選択した。ラットＤＲＧ培養については、小さい細胞は〜＜３０μｍであると考えられた。

【0069】

〔パッチクランプ電気生理現象〕
ＥＰＣ １０ Ａｍｐｌｉｆｉｅｒ−ＨＥＫＡを用いて、室温で、全部の細胞の電圧クランプおよび電流クランプの記録を行った。電圧クランプＣＡＤ細胞記録のための内部溶液は、１１０ ＣｓＣｌ、５ ＭｇＳＯ_４、１０ ＥＧＴＡ、４ ＡＴＰ Ｎａ２−ＡＴＰ、および２５ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．３、２９０−３１０ ｍＯｓｍ／Ｌ）を含み（ｍＭで）、外部溶液は、１００ ＮａＣｌ、１０ 塩化テトラエチルアンモニウム、１ ＣａＣｌ_２、１ ＣｄＣｌ_２、１ ＭｇＣｌ_２、１０ Ｄ−グルコース、４ ４−アミノピリジン、０．１ ＮｉＣｌ_２、１０ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３、３１０−３１５ｍｏｓＭ／Ｌ）を含んだ（ｍＭで）。ＤＲＧおよびＨＥＫ２９３細胞については、電圧クランプのための内部溶液は、１４０ ＣｓＦ、１．１Ｃｓ−ＥＧＴＡ、１０ ＮａＣｌおよび１５ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３、２９０−３１０ｍＯｓｍ／Ｌ）を含み（ｍＭで）、外部溶液は、１４０ ＮａＣｌ、３ ＫＣｌ、３０ 塩化テトラエチルアンモニウム、１ ＣａＣｌ_２、０．５ ＣｄＣｌ_２、１ ＭｇＣｌ_２、１０ Ｄ−グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３、３１０−３１５ｍｏｓＭ／Ｌ）を含んだ（ｍＭで）。ＤＲＧについては、電流クランプのための内部溶液は、１４０ ＫＣｌ、１０ ＮａＣｌ、１ ＭｇＣｌ_２、１ ＥＧＴＡ、１０ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．２）および１ ＡＴＰ−Ｍｇ（ｐＨ７．３、２８５−２９５ｍＯｓｍ／Ｌ）を含み（ｍＭで）、外部溶液は、１５４ ＮａＣｌ、５．６ ＫＣｌ、２ ＣａＣｌ_２、２．０ ＭｇＣｌ_２、１．０ グルコースおよび１０ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４、３０５−３１５ｍＯｓｍ／Ｌ）を含んだ（ｍＭで）。クラスリンで媒介されるエンドサイトーシスを２０μＭ Ｐｉｔｓｔｏｐ２（Ｃａｔ＃ａｂ１２０６８７、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）で防止した実験では、実験の前に組織細胞ウェルにて化合物を培養した。Ｓｕｔｔｅｒ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓからのＰ−９７電極引き抜き器具で、Ｗａｒｎｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓからの標準壁ホウケイ酸塩ガラスキャピラリから電極を引き抜き、熱で磨き上げて、内部溶液で満たしたときに最終抵抗を１．５−３メガオームとした。全体の細胞キャパシタンスと直列抵抗を、電圧クランプ実験についてＰ／４法にてデジタル的に減算した直線リーク電流で補償し、電流クランプ実験においてブリッジバランスを補償した。信号を１０ｋＨｚでフィルター処理し、１０−２０ｋＨｚでデジタル化した。直列抵抗またはブリッジバランスが１５メガオームを超える、または、実験方針から３０％を超えて変動する細胞は、データセットから省いた。ＨＥＫＡからのＦｉｔｍａｓｔｅｒソフトウェアおよびＯｒｉｇｉｎＬａｂ ＣｏｒｐからのＯｒｉｇｉｎ９．０ソフトウェアを用いて分析を行った。

【0070】

〔電圧クランププロトコル〕
ＣＡＤ細胞およびＨＥＫ２９３細胞を、電流−密度（Ｉ−Ｖ）プロトコルおよび高速不活性化電圧プロトコルに付した。Ｉ−Ｖプロトコルでは、細胞は、５ｍＶの増加量で−７０ｍＶから＋６０ｍＶまでの２０ｍｓの電圧ステップでの脱分極の前に、−８０ｍＶの保持電位に保持された。この結果、電流密度データの収集によって、電流対（ｖｓ．）電圧の関数としてのナトリウムチャンネルの活性化と、典型的に〜０−１０ｍＶの近くで観察されて細胞キャパシタンス（ｐＦ）に対して正規化されたピーク電流密度と、を分析することが可能になった。高速不活性化プロトコルでは、細胞は、５ｍＶの増加量で−１２０ｍＶから−１０ｍＶまでの間での５００ｍｓ間の過分極化および再分極のパルスの前に、−８０ｍＶの保持電位に保持された。このステップは、２０ｍｓに対する０ｍＶのテストパルスが、最大電流に対して正規化された相対的な高速不活性化を示すことができるように、チャンネルの種々のパーセンテージを高速不活性化状態に調整した。ラットおよびヒトの両方からのＤＲＧを、電流−密度（Ｉ−Ｖ）プロトコルとＨ−無限大（予備パルス（ｐｒｅ−ｐｕｌｓｅ）不活性化プロトコル）とに付した。ＴＴＸ−Ｒ寄与を評価するため、５００ｎＭのＴＴＸで培養した後でＩ−Ｖプロトコルを実行した。−１００ｍＶに保持した後、５ｍＶの増加量で−７０ｍＶから＋６０ｍＶまでの２００ｍｓの電圧ステップによって、ピーク電流の分析が可能になった。ＴＴＸ−Ｒピーク電流密度は、常に、０ｍＶに近い脱分極で、および、電圧ステッププロトコルの１０ｍｓ以内で、測定された。ＮａＶ１．８およびＮａＶ１．９ ＴＴＸ−Ｒ電流の以前確認された特性を考慮すれば、この電圧依存性と活性化プロフィールは、およそＮａＶ１．８電流のピーク電流密度の分析を示した。したがって、−６０ｍＶまでの電圧パルスに続く１５０ｍｓに存在するナトリウム電流を分析し、ＮａＶ１．９電流を分離する確立された方法である。しかしながら、ＣＲＭＰ２プラスミドで電気穿孔した細胞では、このプロトコルではＮａＶ１．９電流は観察されなかった。ＣＲＭＰ２修飾の変化に応じたＮａＶ１．９電流の分析は、記録溶液とトランスフェクションプロトコルの最適化との両方を必要としうる可能性がある。このＴＴＸ−Ｒ電流密度データから推論はすべきではない。

【0071】

Ｈ−無限大プロトコルでは、細胞を、−１００ｍＶに保持し、１０ｍＶの増加量で−１２０ｍＶから０ｍＶまで変化する１ｓ間の調整電圧ステップに付した。この調整ステップの次に、電流を分析するための２００ｍｓ間の０ｍＶテストパルスが続いた。Ｈ−無限大プロトコルは、ＴＴＸ−Ｓ電流を評価するために、全体の電流（−１２０ｍＶの予備パルスの後に利用可能な電流）から、電気的に分離されたＴＴＸ−Ｒ（−４０ｍＶの予備パルスの後に利用可能な電流）を減算することを可能にする。このプロトコルは、ＴＴＸ−Ｒチャンネル対（ｖｓ．）ＴＴＸ−Ｓチャンネルの差動不活性化動力学（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ）によって可能であり、ここで、ＴＴＸ−Ｓ電流は、活性化し、その後、１ｓの−４０ｍＶのパルス中に高速不活性化する。電圧プロトコル中の減速（ｒｕｎ−ｄｏｗｎ）または加速（ｒｕｎ−ｕｐ）を評価するために、また、時間の関数として変化した電流を有する細胞からデータを省くために、全てのプロトコルに対し、テストパルスを、電圧プロトコルの前後に実行した。

【0072】

〔留置くも膜下カテーテル〕
ラットを麻酔し（ケタミン／キシラジン麻酔、８０／１２ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、定位の頭部ホルダーに置いた。くも膜下槽マグナが露出されて切断され、８ｃｍのカテーテル（ＰＥ−１０；Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）を注入し、脊髄の腰部で終結させた。深い筋肉の中にカテーテルが縫合され（３−０絹縫合）、首の後ろで外面化（ｅｘｔｅｒｎａｌｉｚｅｄ）し、皮膚はオートクリップで閉じた。留置カニューレの注入の５−７日後の回復期間の後に、神経枝結紮損傷が誘導された。

【0073】

〔神経枝結紮損傷（ＳＮＩ）〕
イソフルレン麻酔下（２Ｌ／分の空気中で、５％誘導、２．０％維持）で、左後部太腿の横表面上の皮膚を切開した。大腿二頭筋を無遠慮に（ｂｌｕｎｔｌｙ）切開し、坐骨神経の３つの末端分岐を露出した。簡単に言えば、共通の腓骨分岐および脛骨分岐を、４−０絹できつく縛り、結紮まで２．０ｍｍ離れた所で軸索切断した。偽の動物も同じ処理を受けたが、露出した神経は縛られなかった。切開の封鎖は、２つの層で行われた。筋肉は５−０ 吸収性の縫合糸でいったん縫合され、皮膚は自動的に切り取られた。動物は、任意の試験の前の５−７日間、回復することが許容された。

【0074】

〔機械的異痛症〕
行動評価の前に３０分間、吊り下げられた金網のかごの中でラットを新環境に慣れるようにさせた。左後部足の横足底表面に垂直になっていることが立証された、校正されたｖｏｎ Ｆｒｅｙフィラメント（ｇ）に対する反応を測定するために、前（基準線前）、ＳＮＩ後（基準線後）および５時間まで、を用いた。Ｄｉｘｏｎノンパラメトリックテストを用いて、前足引き閾値をグラムで計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０において、前足引き閾値（平均±標準誤差、ＳＥＭ）として表現した。全ての行動実験は、条件を隠して行われた。

【0075】

〔化合物の合成〕
以下の略語を用いる：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）；ジクロロメタン（ＤＣＭ）；酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）；メタノール（ＭｅＯＨ）；２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロフォスフェート（ＨＢＴＵ）；Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；エタノール（ＥｔＯＨ）；トリエチルアミン（Ｅｔ_３Ｎ）；薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）；核磁気共鳴（ＮＭＲ）；１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）および１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム ３−オキシド ヘキサフルオロフォスフェート（ＨＡＴＵ）。

【0076】

〔一般的手順〕
全ての化学物質は、商業的供給メーカーから購入した。全ての溶媒は、Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから得られた。フラッシュ・クロマトグラフィーは、シリカゲル（２３０／４００メッシュ、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で行った。全ての無水反応は、窒素の正圧下で行った。ＨＰＬＣ−ＭＳ分析は、Ｚｏｒｂａｘ Ｃ１８逆相カラムを用いたＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ機器にて行った。ＨＲＭＳの結果は、ａｐｅｘ−Ｑｅ機器にて得られた。全ての１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、重水素を含む溶媒を用いて、ＢＲＵＫＥＲ ＡＶＡＮＣＥ−ＩＩＩ ４００ＭＨｚ ＮＭＲ機器で記録した。スペクトルは、ｐｐｍで報告され、重水素を含むＤＭＳＯ（１Ｈに対して２．４９ｐｐｍ、１３Ｃに対して３９．５ｐｐｍ）または重水素を含むクロロホルム（１Ｈに対して７．２６ｐｐｍ、１３Ｃに対して７７ｐｐｍ）と関連する。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、Ｂｒｕｋｅｒ ９．４ Ｔ Ａｐｅｘ−Ｑｈ ＦＴＩＣＲ質量分析計で得られた。全ての化合物は、ＭＳまたはＵＶ吸収度検出器のいずれかを用いて、ＨＰＬＣによって純度を分析した。全ての最終化合物は、≧９５％の純度を示した。

【0077】

〔３−フルオロ−４−ヒドロキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズアミドの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、２００ｍｇ（１．２８ｍｍｏｌ）の３−フルオロ−４−ヒドロキシ安息香酸を加えた。反応に、塩化チオニル（２ｍｌ、２７．３２ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。次いで、混合物を１１０℃で２時間撹拌し、その後、追加の塩化チオニル（１ｍｌ、１３．６６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を還流させながら一晩中撹拌した。過剰の塩化チオニルをトルエンで共蒸発（ｃｏ−ｅｖａｐｏｒａｔｅｄ）させ、２２５ｍｇ（１００％）の所望の生成物を得た。無加工の生成物を次のステップで用いた。２２５ｍｇ（１．２８ｍｍｏｌ）の３−フルオロ−４−ヒドロキシベンゾイルクロライドを含有するフラスコに、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中の４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（２４５ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（１３１ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を室温で一晩中撹拌した。反応混合物に１０ｍＬの水を加え、得られた緑色の沈殿を濾過した。沈殿を真空で乾燥し、２５３ｍｇ（６０％）の所望の生成物を暗緑色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ８．３６（ｓ、１Ｈ）、７．６４（ｓ、１Ｈ）、７．０９（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．６２（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、５．２０（ｓ、２Ｈ）、４．３２（ｂｓ、４Ｈ）、２．５４（ｔ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、４Ｈ）、２．３４（ｄ、Ｊ＝０．７Ｈｚ、３Ｈ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：３３０（ＭＨ＋）；実測：３３０。

【0078】

〔３−フルオロ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）ベンズアミドの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた丸底フラスコに、炭酸カリウム（２５４ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）、３−フルオロ−４−ヒドロキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズアミド ３（２００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（１０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（５ｍＬ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、その後、４−（２−クロロエチル）−塩酸ピペリジン（１１２ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を還流温度で一晩中撹拌した。形成された灰色の沈殿を濾過し、水で洗浄し、次いで、真空で乾燥した。ＨＰＬＣは、１０％の３−フルオロ−４−ヒドロキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズアミドがまだ反応中に存在していることを示した。反応に、炭酸カリウム（３８．１０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（１．５ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（５ｍＬ）および４−（２−クロロエチル）塩酸ピペリジン（１６．８ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を還流温度で一晩中撹拌した。形成された灰色の沈殿を濾過し、水で洗浄し、次いで、真空で乾燥し、１５１ｍｇ（５５％）の生成物を得た。極逆相ＨＰＬＣを用いて灰色の固体を精製し、５１ｍｇ（６％）の純粋な３−フルオロ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）ベンズアミドを蟻酸塩として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ９．５５（ｓ、１Ｈ、ＮＨ^＋）、８．５１（ｓ、１Ｈ、ＨＣＯＯ⁻）、７．６１（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．５０（ｄｄ、Ｊ＝１３．５、２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．４５（ｄｄ、Ｊ＝８．６、２．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．９３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、２Ｈ）、６．５５（ｔ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．７１−３．３１（ｍ、１０Ｈ）、３．１６（ｓ、３Ｈ）、２．６７（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．４４−２．３２（ｍ、４Ｈ）、１．５３−１．４０（ｍ、４Ｈ）、１．４１−１．２６（ｍ、２Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６５．５８、１６４．９５、１４５．３３、１３３．４６、１２５．４２、１２１．４６、１１９．１４、１１６．２７、１１４．７８（ｄ、Ｊ＝２１．２Ｈｚ）、５９．８９、５９．１７、５４．２１、５１．８１、４６．８２、４２．８１、２５．９１、２４．２４。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：４４１（ＭＨ＋）；実測：４４１。

【0079】

〔エチル ４−ヒドロキシ−３−メトキシベンゾエートの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた丸底フラスコに、ＥｔＯＨ（４００ｍＬ）中のバニリン酸（１０ｇ、５９．４９ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。上記の溶液に、６００ｍｇ（６．１１ｍｍｏｌ）のｃｏｎｃ．Ｈ_２ＳＯ_４を加えた。次いで、混合物を還流温度で４８時間撹拌した。溶液をロータリー・エバポレータにかけた。次いで、残渣に水（１００ｍＬ）を加え、次いで、分液漏斗を用いて、分離された緑がかった油を除去した。次いで、生成物を真空で乾燥し、１１．４５ｇ（９８％）のエチル ４−ヒドロキシ−３−メトキシベンゾエートを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．６２（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．５３（ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．９１（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．３３（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、１．３６（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：１９７（ＭＨ＋）；実測：１９７。

【0080】

〔エチル ３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾエートの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、炭酸カリウム（１．８６ｇ、１３．４６ｍｍｏｌ）、エチル ４−ヒドロキシ−３−メトキシベンゾエート（１．２ｇ、６．１２ｍｍｏｌ）およびＣＨ_３ＣＮ（２６ｍＬ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、その後、１−（ブロモメチル）−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン（１．５９ｇ、６．６５ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を還流温度で一晩中撹拌した。反応混合物をロータリー・エバポレータにかけた。次いで、残渣に水（１００ｍＬ）を加え、次いで、水相をＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を蒸発させ、次いで、真空で乾燥し、２．０８ｇ（９６％）のエチル ３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾエートをベージュ色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ７．６９（ｓ、１Ｈ）、７．６３（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６０（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５７（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６（ｓ、１Ｈ）、７．４８（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２２（ｓ、２Ｈ）、４．３４（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、１．３６（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：３５５（ＭＨ＋）；実測：３５５。

【0081】

〔エチル ４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシベンゾエートの合成〕
エチル ３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾエートと同様の手順を用いて、エチル ４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシベンゾエートを２．０４ｇ（４９％）のベージュ色の固体として合成した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ７．８０−７．３５（ｍ、６Ｈ）、６．８２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２４（ｓ、２Ｈ）、４．３４（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、１．３６（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）。

【0082】

〔エチル ３−メトキシ−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）ベンゾエートの合成〕
エチル ３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾエートと同様の手順を用いて、エチル ３−メトキシ−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）ベンゾエートを２．２６ｇのベージュ色の固体として合成した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ７．６１（ｄｄｄ、Ｊ＝８．４、２．０、０．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６（ｓ、１Ｈ）、７．４５（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．３３（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、７Ｈ）、１．３６（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）。

【0083】

〔３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）安息香酸の合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、ＭｅＯＨ（２８ｍＬ）中の３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾエート（２．０８ｇ、５．８８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。上記のものに、８ｍＬの５％ ＮａＯＨを加えた。反応混合物を室温で一晩中撹拌した。混合物をロータリー・エバポレータにかけ、２０ｍＬの冷水を加えた。水相を６Ｎ ＨＣｌで酸性にした。沈殿を濾過し、固体を５ｍＬの水で洗浄し、次いで、真空で乾燥し、純粋な３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）安息香酸として１．６７ｇ（８７％）の白色の固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ ７．７７（ｓ、１Ｈ）、７．７１（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．６９−７．４７（ｍ、４Ｈ）、７．０７（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．２４（ｓ、２Ｈ）、３．８８（ｓ、３Ｈ）。

【0084】

〔４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシ安息香酸の合成〕
３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）安息香酸と同様の手順を用いて、４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシ安息香酸を合成し、純粋で所望の生成物として１．２８ｇ（７４％）の白色の固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ７．６５（ｄｔ、Ｊ＝６．３、１．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．６１−７．５６（ｍ、１Ｈ）、７．５６−７．５０（ｍ、３Ｈ）、７．２４（ｔ、Ｊ＝１．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．２２（ｓ、２Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（ネガティブモード）：予想：２８２（Ｍ−１）；実測：２８２。

【0085】

〔３−メトキシ−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）安息香酸の合成〕
３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）安息香酸と同様の手順を用いて、３−メトキシ−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）安息香酸を合成し、純粋で所望の生成物として２．０９６ｇ（１００％）の白色の固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ７．５８（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、１．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．４５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、３．８７（ｓ、３Ｈ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（ネガティブモード）：予想：３４１（Ｍ−１）；実測：３４１。

【0086】

〔３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾイルクロライドの合成〕
３００ｍｇ（０．８３ｍｍｏｌ）の３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）安息香酸を含む２５ｍＬの丸底フラスコに、塩化チオニル（１．５ｍｌ、２０．６８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１１０℃で２時間撹拌し、その後、追加の塩化チオニル（１．０ｍｌ、１３．７８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を還流させながら一晩中撹拌した。過剰の塩化チオニルをトルエンで共蒸発させ、２９２ｍｇ（＞１００％）の３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾイルクロライドを得た。化合物を次のステップで用いた。

【0087】

〔４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシベンゾイルクロライドの合成〕
３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾイルクロライドと同様の手順を用いて、４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシベンゾイルクロライドを合成し、ベージュ色の固体として４５１ｍｇ（８５％）の所望の生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ ７．７５（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．６６（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．５５（ｓ、２Ｈ）、７．５３（ｓ、１Ｈ）、６．８５（ｄｄ、Ｊ＝２２．７、８．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．２６（ｓ、２Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）。

【0088】

〔３−メトキシ−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）ベンゾイルクロライドの合成〕
３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾイルクロライドと同様の手順を用いて、３−メトキシ−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）ベンゾイルクロライドを合成し、ベージュ色の固体として４６３ｍｇ（７８％）の所望の生成物を得た。化合物を次のステップで用いた。

【0089】

〔３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）ベンズアミドの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた丸底フラスコに、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中の３−メトキシ−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）ベンゾイルクロライド（１４７ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（７８ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（０．１３ｍＬ、０．９３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を室温で一晩中撹拌した。沈殿を濾過し、薄い灰色の固体をＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄し、次いで、真空で乾燥し、１７ｍｇ（８％）の純粋な３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）オキシ）ベンズアミドを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ９．８８（ｓ、１Ｈ）、７．６５−７．４３（ｍ、６Ｈ）、７．３８（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．１１（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．８８（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）、５．１８（ｓ、２Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）、３．１６−２．８９（ｍ、４Ｈ）、２．４４−２．３３（ｍ、４Ｈ）、２．１８（ｓ、３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．７０、１５０．５０、１４８．９７、１４８．３５、１４７．８１、１３６．７３、１３１．４６、１３０．４３、１２９．８７、１２８．１２、１２２．３４、１２１．８１（ｄ、Ｊ＝１０．９Ｈｚ）、１２１．２９（ｄ、Ｊ＝１４．４Ｈｚ）、１２０．７７、１１５．８４、１１２．９０（ｄ、Ｊ＝３９．０Ｈｚ）、１１１．６６（ｄ、Ｊ＝５９．９Ｈｚ）、６９．３０、５６．１３（ｄ、Ｊ＝１６．７Ｈｚ）、５５．０７（ｔ、Ｊ＝３０．８Ｈｚ）、４８．９１、４６．２１（ｄ、Ｊ＝３１．９Ｈｚ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：５１６（ＭＨ^＋）；実測：５１６。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：５１６（ＭＨ^＋）；実測：５１６。

【0090】

〔３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンズアミドの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた丸底フラスコに、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中の３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾイルクロライド（１４３ｍｇ、０．４１５ｍｍｏｌ）、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（７９．４ｍｇ、０．４１５ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（０．１５ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を室温で一晩中撹拌した。次いで、原料を濾過し、白色の固体を得た。白色の固体をＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄し、真空で乾燥し、１０ｍｇの所望の化合物を得た。沈殿に１０ｍＬの水を加え、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、ロータリー・エバポレータにかけた。ＣＨ_２Ｃｌ_２中の１０％ ＭｅＯＨを用いて原料をプレパラティブＴＬＣによって精製し、８０ｍｇの３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンズアミドを得た。全体に渡っての収量は９０ｍｇ（３９％）であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ９．８６（ｓ、１Ｈ）、７．８２（ｓ、１Ｈ）、７．７５（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２（ｔ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８−７．４５（ｍ、４Ｈ）、７．１４（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、２Ｈ）、５．２６（ｓ、２Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．１５−２．９５（ｍ、４Ｈ）、２．４８（ｔ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、４Ｈ、ＤＭＳＯ ＮＭＲ溶媒ピークによって部分的にカバーされる）、２．２１（ｓ、３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．７２、１５０．４７、１４９．１０、１４７．８４、１３８．８１、１３２．２５、１３１．５２、１３０．０８、１２８．３７、１２５．９３−１２５．０６（ｍ）、１２４．６４（ｄ、Ｊ＝４．１Ｈｚ）、１２２．０７、１２１．１０、１１５．９２、１１３．１７、１１１．７６、６９．５０、５６．２０、５５．０５、４８．８８、４６．１２。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：５００（ＭＨ＋）；実測：５００。

【0091】

〔４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズアミドの合成〕
３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンズアミドの合成と同様の手順を用いて、４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズアミドを調製した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ９．９６（ｓ、１Ｈ）、７．８５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．６７−７．５７（ｍ、４Ｈ）、７．５７−７．５０（ｍ、２Ｈ）、７．０９（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、２Ｈ）、５．２７（ｓ、２Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．８０−３．５０（ｍ、４Ｈ）、２．７５（ｓ、３Ｈ）、２．５８−２．２８で（ｂｓ、ＤＭＳＯピークの下にカバーされたピペラジン環からの４つのプロトン）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６５．０２、１５０．３０、１４８．９８、１４６．３２、１４２．９４、１３２．８６（ｄ、Ｊ＝３２．３Ｈｚ）、１３２．３９、１２８．５８（ｄ、Ｊ＝３６．７Ｈｚ）、１２８．０６、１２２．２３（ｄ、Ｊ＝３７．８Ｈｚ）、１２１．１５（ｄ、Ｊ＝３８．５Ｈｚ）、１１９．２０、１１６．６７、１１３．０３（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ）、１１１．６０（ｄ、Ｊ＝３７．６Ｈｚ）、１１０．９２、６９．２７、５６．１６（ｄ、Ｊ＝２２．９Ｈｚ）、５２．９１、４６．５３、４２．６８（ｄ、Ｊ＝２８．４Ｈｚ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：４５７（ＭＨ^＋）；実測：４５７。

【0092】

〔４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メトキシピペリジン−１−イル）フェニル）ベンズアミドの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた丸底フラスコに、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中の４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシベンゾイルクロライド（１４２ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、４−（４−メトキシピペリジン−１−イル）アニリン（９７ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（０．１４ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＨ_２Ｏで洗浄し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、次いで、ロータリー・エバポレータを用いて濃縮した。残渣に１０ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２および４ｍＬの３Ｎメタノール性ＨＣｌを加え、室温で５時間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、次いで、真空で乾燥し、無加工の生成物として黒色の固体を得た。生成物をＥｔＯＨに溶解し、灰色がかった化合物を濾過し、真空で乾燥し、５０ｍｇ（２１％）の４−（（４−シアノベンジル）オキシ）−３−メトキシ−Ｎ−（４−（４−メトキシピペリジン−１−イル）フェニル）ベンズアミド（１００％ ＨＰＬＣ純度）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １０．３４（ｓ、１Ｈ）、７．９２−７．８２（ｍ、４Ｈ）、７．７９−７．６６（ｍ、２Ｈ）、７．６２（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．６０−７．５５（ｍ、３Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．２８（ｓ、２Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．６１−３．４８（ｍ、５Ｈ）、３．２７（ｓ、３Ｈ）、２．２９−２．１１（ｍ、２Ｈ）、２．０８−１．８８（ｍ、２Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６５．４０、１５０．７１、１４９．１０、１４２．９７、１３３．８６−１３１．３７（ｍ）、１２８．８５、１２８．２５、１２７．６７、１２２．７９−１２０．３５（ｍ）、１２１．１４、１１９．１６、１１３．３１、１１２．８３、１１２．２８、１１１．６７、１１１．００、６９．３１、５６．３４、５６．２２、５５．８４、５５．５３。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：４７２（ＭＨ^＋）；実測：４７２。

【0093】

〔Ｎ−（４−（４−メトキシピペリジン−１−イル）フェニル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミドの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた丸底フラスコに、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中のベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボニルクロライド（１３６ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、４−（４−メトキシピペリジン−１−イル）アニリン（１５０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（０．３０ｍＬ、２．１５ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を室温で一晩中撹拌した。反応に２０ｍＬの水を加え、層を分離した。次いで、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｘ１５ｍＬ）で洗浄した。次いで、合わせた有機溶媒をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、ロータリー・エバポレーションによって濃縮し、次いで、真空で乾燥した。原料をカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の３５％ ＥｔＯＡｃで生成物を溶出させ、４１ｍｇ（１６％）のＮ−（４−（４−メトキシピペリジン−１−イル）フェニル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミドをベージュ色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ ７．５４−７．５０（ｍ、３Ｈ）、７．４５（ｓ、１Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、６．０９（ｓ、２Ｈ）、３．４３−３．３７（ｍ、２Ｈ）、３．３０−３．２５（ｍ、１Ｈ）、３．２３（ｓ、３Ｈ）、２．８２−２．７６（ｍ、２Ｈ）、１．９１−１．８７（ｍ、２Ｈ）、１．５２−１．４４（ｍ、２Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６４．３０、１５０．２０、１４７．８０、１４７．７３、１３１．２５、１２９．３６、１２２．９９、１２１．８９、１１６．３５、１０８．３０、１０８．００（ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、１０２．１２（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ）、７５．８３、５５．２６（ｄ、Ｊ＝４．３Ｈｚ）、４７．１５、３０．６１。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：３５５（ＭＨ^＋）；実測：３５５。

【0094】

〔Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミドの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた丸底フラスコに、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中のベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボニルクロライド（１６４ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（１７０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（０．３８ｍＬ、２．７３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を室温で一晩中撹拌した。次いで、形成された沈殿を濾過し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄し、残渣を真空で乾燥し、２０５ｍｇ（６８％）のＮ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミドを黒みがかった固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ９．８３（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、７．５５−７．５２（ｍ、３Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、６．０９（ｓ、２Ｈ）、３．０５（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、４Ｈ）、２．４１（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、４Ｈ）、３．２３（ｓ、３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １６４．３０、１５０．２０、１４７．８３、１４７．７３、１３１．４５、１２９．３５、１２．０３、１２１．８７（ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、１１５．８５、１０８．３０、１０８．００（ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、１０２．１５（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ）、５５．０７、４８．９０、４６．２１（ｄ、Ｊ＝４．３Ｈｚ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：３４０（ＭＨ^＋）；実測：３４０。

【0095】

〔エチル ３−フルオロ−４−ヒドロキシベンゾエートの合成〕
エチル ４−ヒドロキシ−３−メトキシベンゾエートの調製と同様の手順を用いて、エチル ３−フルオロ−４−ヒドロキシベンゾエートを合成し、保存時にベージュ色の固体に変わるような黄色の固体として１．６７ｇ（５６％）の所望の生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ ７．８７−７．３６（ｍ、２Ｈ）、７．９４（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．３０（ｑ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．３４（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：１８５（ＭＨ＋）；実測：１８５。

【0096】

〔エチル ３−フルオロ−４−（２−モルフォリノエトキシ）ベンゾエートの合成〕
エチル ３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）ベンゾエートの調製と同様の手順を用いて、エチル ３−フルオロ−４−（２−モルフォリノエトキシ）ベンゾエートを合成し、ベージュ色の固体として１．２６ｇ（９８％）の所望の生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ−ｄ）δ ７．７７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝１１．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．９５（ｔ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．３２（ｑ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．２１（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、３．７４−３．６６（ｍ、４Ｈ）、２．８３（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．６３−２．４５（ｍ、４Ｈ）、１．３５（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：２９９（Ｍ＋１）；実測：２９９。

【0097】

〔３−フルオロ−４−（２−モルフォリノエトキシ）安息香酸の合成〕
３−メトキシ−４−（（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）オキシ）安息香酸の調製と同様の手順を用いて、３−フルオロ−４−（２−モルフォリノエトキシ）安息香酸を合成し、純粋で所望の生成物としてベージュ色の固体の１．２５ｇ（１００％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４）δ ８．５１（ｓ、１Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２（ｄｄ、Ｊ＝１２．４、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｔ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．７０−３．６４（ｍ、２Ｈ）、２．８３（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．６７−２．５６（ｍ、４Ｈ）、２．５１（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：２７０（ＭＨ＋）；実測：２７０。

【0098】

〔３−フルオロ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（２−モルフォリノエトキシ）ベンズアミドの合成〕
窒素注入口および磁気撹拌棒を備えた丸底フラスコに、３ｍＬ ＤＭＦ中の３−フルオロ−４−（２−モルフォリノエトキシ）安息香酸（１３５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４９４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ、０．７３ｍｍｏｌ）の混合物を加えた。次いで、混合物を室温で１時間撹拌した。上記の溶液に、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）アニリン（９５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物に飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加え、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、ロータリー・エバポレーションによって除去し、ＤＣＭ中の１０％ ＭｅＯＨを用いて原料をプレパラティブＴＬＣによって精製し、１２６ｍｇ（５７％）の純粋な３−フルオロ−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−４−（２−モルフォリノエトキシ）ベンズアミドを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ−ｄ）δ ７．６２−７．５４（ｍ、２Ｈ）、７．４６（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、２Ｈ）、６．９６（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．１９（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、３．６９（ｔ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、４Ｈ）、３．１５（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、４Ｈ）、２．８１（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．６０−２．４９（ｍ、８Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）。^１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ−ｄ）δ １６３．９８、１５３．３２、１５０．８６、１４９．５７（ｄ、Ｊ＝１０．９Ｈｚ）、１４８．４２、１３０．１６、１２８．０８（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、１２３．５０（ｄ、Ｊ＝１５．５Ｈｚ）、１２１．７８（ｄ、Ｊ＝１４．４Ｈｚ）、１１６．４９、１１５．３７、１１４．１０、６７．５５（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ）、６６．９０（ｔ、Ｊ＝１５．２Ｈｚ）、５７．３０（ｔ、Ｊ＝８．６Ｈｚ）、５５．０４（ｔ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、５４．１１（ｔ、Ｊ＝１２．９Ｈｚ）、４９．３６（ｔ、Ｊ＝３．６Ｈｚ）、４６．１１（ｄ、Ｊ＝１４．２Ｈｚ）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：予想：４４３（ＭＨ^＋）；実測：４４３。

【0099】

上記の本発明の記載は、例証と記述の目的のために示した。上記のものは、本発明をここに記載した形式に限定することを意図しない。本発明の記述は、１つ以上の実施形態およびある変形および修飾を含んでいるが、例えば、本記述の理解の後に当業者の技術および知識の範囲内となり得るような、他の変形および修飾も本発明の範囲内である。特許請求されるものの、代替の、交換可能な、および／または等価な構造、機能、範囲またはステップを含めて、このような代替の、交換可能な、および／または等価な構造、機能、範囲またはステップがここに記載されているかどうかにかかわらず、また、特許可能な主題を公に献呈することを意図せず、許可される範囲にまで、代替の実施形態を含む権利を得ることが意図される。ここで引用した全ての参考文献は、参照によりその全体が盛り込まれる。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5】