特許 6934904 バイオフィルム除去のための結合モイエティ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6934904

(24)【登録日】2021年8月26日

(45)【発行日】2021年9月15日

(54)【発明の名称】バイオフィルム除去のための結合モイエティ

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20210906BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20210906BHJP

   C07K 16/08 20060101ALI20210906BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20210906BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20210906BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20210906BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20210906BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20210906BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20210906BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20210906BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 9/14 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 27/16 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20210906BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210906BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/13ZNA

   C12P21/08

   C07K16/08

   C12Q1/02

   C12N1/15

   C12N1/19

   C12N1/21

   C12N5/10

   A61K38/02

   A61K39/395 N

   A61K39/395 R

   A61K48/00

   A61P1/02

   A61P9/00

   A61P9/14

   A61P11/00

   A61P11/02

   A61P13/02 105

   A61P17/02

   A61P27/16

   A61P31/04

   A61P37/06

   A61P43/00 105

【請求項の数】9

【全頁数】26

(21)【出願番号】特願2019-61094(P2019-61094)

(22)【出願日】2019年3月27日

(62)【分割の表示】特願2016-517452(P2016-517452)の分割

【原出願日】2014年9月26日

(65)【公開番号】特開2019-141055(P2019-141055A)

(43)【公開日】2019年8月29日

【審査請求日】2019年4月26日

(31)【優先権主張番号】61/926,828

(32)【優先日】2014年1月13日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】521055703

【氏名又は名称】トレリス・バイオサイエンス，エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100187540

【弁理士】

【氏名又は名称】國枝 由紀子

(72)【発明者】

【氏名】カウバー、 ローレンス エム．

(72)【発明者】

【氏名】ライザー、 ステファン

(72)【発明者】

【氏名】エステルス、 アンジェレス

(72)【発明者】

【氏名】サイモン、 レイナ ジェー．

(72)【発明者】

【氏名】バカレッツ、ローレン オプレムカク

(72)【発明者】

【氏名】グッドマン、スティーブン デービッド

【審査官】 佐久 敬

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１３−５２９８９３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Current Opinion in Structural Biology (2004), Vol.14, pp.28-35

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｎ

Ｃ０７Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）のＩＨＦタンパク質の５６〜７８番目のアミノ酸残基に対する親和性を有する抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項2】

前記抗体が、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、Ｆｖ抗体、二重特異性抗体、及び完全抗体から選択される、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項3】

ヒトｍＡｂ、またはネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ヤギもしくはヒツジ適合ｍＡｂである、請求項１または請求項２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項4】

インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）のＩＨＦタンパク質の５６〜７８番目のアミノ酸残基が、ＲＤＫＳＳＲＰＧＲＮＰＫＴＧＤＶＶＡＡＳＡＲＲ（配列番号５０）、ＲＤＫＲＥＲＰＧＲＮＰＫＴＧＥＥＩＰＩＳＡＲＲ（配列番号５２）、ＲＤＫＲＱＲＰＧＲＮＰＫＴＧＥＥＩＰＩＴＡＲＲ（配列番号５３）、又はＲＤＫＮＱＲＰＧＲＮＰＫＴＧＥＤＩＰＩＴＡＲＲ（配列番号５４）から選択される、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項5】

産業プロセスに関連したバイオフィルムの形成を防止するか、または該バイオフィルムを破壊する方法であって、バイオフィルムの影響を受けやすい表面またはバイオフィルムを含む表面を、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントで処理することを含んでなる方法。

【請求項6】

請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを生産する組換え発現系を含むように改変された組換え宿主細胞であって、ここで、該発現系が、１つ以上の発現のための異種制御配列に機能的に連結された該抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を１つ以上含む、宿主細胞。

【請求項7】

インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）のＩＨＦタンパク質に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを調製する方法であって、請求項６に記載の細胞を培養すること、及び該抗体またはその抗原結合フラグメントを回収することを含んでなる方法。

【請求項8】

対象におけるバイオフィルムの形成により特徴づけられる該対象の疾患を治療する方法において用いられるための、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項9】

前記疾患が、心臓弁心内膜炎、静脈性潰瘍および糖尿病性足潰瘍を含む慢性の非治癒性創傷、耳感染症、副鼻腔感染症、尿路感染症、肺感染症、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患カテーテル関連感染症、移植補綴物に関連した感染症、ならびに歯周病である、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、免疫反応を抑制しかつ抗生物質に対して細菌を耐性にするバイオフィルム（菌膜）を溶解するための方法および組成物に関する。より具体的には、本発明は、前記バイオフィルムの完全な構造の形成に重要なタンパク質に対する親和性が、バイオフィルム構成要素に対するこれらのタンパク質の親和性を超えている、ヒト細胞由来もしくはヒト抗体遺伝子を発現するトランスジェニック動物由来のモノクローナル抗体、または他の種の天然の抗体のヒト化形態であるモノクローナル抗体に関する。また、この特性を有するモノクローナル抗体全般および他の結合モイエティ（ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｉｅｔｙ）も包含される。

【背景技術】

【0002】

細菌感染がバイオフィルムの形成につながる可能性があり、該バイオフィルムは、免疫系から細菌を保護し、かつ大部分の抗生物質に対して細菌を耐性にする静止低成長状態に入るように誘導することが当技術分野でよく理解されている（Ｄｏｎｌａｎ，Ｒ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．（２００２）１５：１６７−１９３）。その結果、除去することが非常に困難な、持続性で反復性の感染症となる。これらのバイオフィルムは、主な構成要素として、一般にＤＮＡＢＩＩタンパク質（そのホモログがほとんどの細菌種で見つかっている）と呼ばれる特定のタンパク質によって共に保持された分岐ＤＮＡ分子を含んでいる（Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｓ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｕｃｏｓａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１１）４：６２５−６３７）。これらのタンパク質の実質的な相同性はバイオフィルムの共同形成を容易にし、こうした特徴が治療の観点から細菌をさらに厄介なものにしている。本発明は、このクラスのタンパク質に対して十分に高い親和性を有する結合モイエティにより、バイオフィルムから該タンパク質を引き抜き、それによって、該タンパク質が有する、分岐ＤＮＡと結合して一緒になって保持する能力を破壊することにより、バイオフィルムを破壊する効果的な方法を提供する、という概念に基づいている。ＤＮＡＢＩＩタンパク質に対する結合モイエティはまた、バイオフィルム中に存在する他の構成要素に結合する能力をも破壊する可能性がある。

【0003】

結合モイエティ（その中でモノクローナル抗体またはそのフラグメントが重要な実施形態である）は、バイオフィルムに直接供給されるか、またはＤＮＡＢＩＩタンパク質（複数可）を閉じ込めるための免疫吸着剤を提供するため表面の被覆に使用され得る。用途としては、全身投与、皮下、局所または吸入投与による細菌感染症の治療、ならびにパイプラインおよび他の産業機器に影響を与える菌付着の低減が挙げられる。動物における対応するバイオフィルム関連疾患への適応もまた、本発明の一部である。

【0004】

国際公開公報第ＷＯ２０１１／１２３３９６は、このようなバイオフィルムの広範囲にわたる議論を提供しており、ＤＮＡＢＩＩタンパク質それ自体に相当するポリペプチドを対象に投与し、バイオフィルムの完全性を破壊できる抗体を該生物に生成させることにより、バイオフィルムが除去できることを示唆している。本公報はまた、他の方法として、エクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）で生物の外側に存在するバイオフィルムに、または受動感染防御を付与するために対象に、抗体それ自体を供給することを示唆している。

【0005】

このＰＣＴ出願は、一般的な耳の感染症（中耳炎）の動物モデルと歯周病の動物モデルを治療するために、特定のＤＮＡＢＩＩタンパク質（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の組込み宿主因子（ＩＨＦ））に対して生成されたポリクローナル抗体を使用することについて記載している。また、当該公報は、該タンパク質、または該タンパク質を代表するペプチドを対象に提供することによって、能動免疫を生じさせることを記載している。このタンパク質に対する、所望の親和性を有するモノクローナル抗体については一切記載されていない。ＩＨＦタンパク質のホモログに対する異種間活性（ｃｒｏｓｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を示す結合モイエティについてもいかなる開示も存在しない。両方の特性を達成することは、有効な薬物の探索への大きな障害となっている。本発明はこうした障害を克服して、受動免疫のための改善された薬剤を提供する。

【発明の概要】

【0006】

発明の開示
本発明は、ＤＮＡＢＩＩタンパク質と結合するのに特に有効であり、したがって、バイオフィルムを溶解するのに有効である、アプタマー、タンパク質模倣体、またはモノクローナル抗体もしくはそのフラグメントなどの、結合モイエティの均一な組成物を提供する。よって、本発明は、一態様において、少なくとも１種類のＤＮＡＢＩＩタンパク質に対する親和性を有し、該親和性がＤＮＡＢＩＩタンパク質に対する分岐ＤＮＡ（バイオフィルムの構成要素）の親和性を超える、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）などの結合モイエティに関する。使用される抗体はいずれも、哺乳動物対象、特にヒト対象またはネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギもしくはウマ対象での使用を想定する場合、これらの対象と全身的に適合することが特に好ましい。このような天然のｍＡｂは、他の供給源からのｍＡｂよりも、体内の他のタンパク質に結合するリスクが低いため、毒性リスクがより低くなる。同様に、対象由来の天然ｍＡｂの免疫原性は、他のｍＡｂ由来のｍＡｂよりも低く、そのため反復投与を容易にすることが期待される。本明細書に示される特定の結合モイエティは、ｍＡｂであるＴＲＬ２９５、ＴＲＬ１０１２、ＴＲＬ１０６８、ＴＲＬ１０７０、ＴＲＬ１０８７、ＴＲＬ１２１５、ＴＲＬ１２１６、ＴＲＬ１２１８、ＴＲＬ１２３０、ＴＲＬ１２３２、ＴＲＬ１２４２およびＴＲＬ１２４５の重鎖のＣＤＲ領域を少なくとも含有し、任意に軽鎖のＣＤＲ領域を含有する。しかし、例えば、アプタマー、ラクダ型一本鎖抗体のような抗体の改変体などの、他のタイプの結合モイエティも本発明の範囲内に含まれる。

【0007】

本発明はさらに、バイオフィルムを溶解するかまたはその形成を防止するために本発明の結合モイエティを用いることによって、産業プロセスに関連したバイオフィルムを処理する方法に関する。この場合、結合モイエティが十分な多様性を持つ方が適しており、ｍＡｂの種起源は問題とはならない。結合モイエティはまた、バイオフィルムを溶解するために、またはその形成を防止するために、対象に局所的に適用することができる。結合モイエティはまた、バイオフィルムの処理のために全身投与することもできる。

【0008】

さらに他の態様において、本発明は、タンパク質である本発明の結合モイエティを調製するための組換え材料および方法、ならびにＤＮＡＢＩＩタンパク質を調製するための改善された組換え方法に関する。

【0009】

他の態様において、本発明は、免疫原として使用されるＤＮＡＢＩＩタンパク質の新規な発現系、ならびに複数の細菌種における薬剤耐性を阻害する物質を同定するためにこれらのＤＮＡＢＩＩタンパク質を使用する方法に関する。後者の方法は、複数の微生物種によって産生されたＤＮＡＢＩＩタンパク質への結合活性について物質を評価することを含んでなる。

【0010】

本発明はまた、大腸菌ＤＮＡＢＩＩのＩＨＦα鎖の予測された免疫原性エピトープ領域にまたがる特定の単離されたペプチド、ならびにこれらのペプチドを免疫原として使用することによってＩＨＦタンパク質に対する抗体を生成させる方法に関する。

【0011】

さらに別の態様において、本発明は、バイオフィルムが薬剤耐性を引き起こすヒトまたは動物の疾患を治療する方法に関する。例として、以下が挙げられる：心臓弁心内膜炎（バイオフィルムに関連した耐性のために高用量の抗生物質でも治癒することができない症例のかなりの割合が、外科的弁置換を必要とする）、慢性の非治癒性創傷（静脈性潰瘍および糖尿病性足潰瘍を含む）、耳および副鼻腔感染症、尿路感染症、肺感染症（嚢胞性線維症および慢性閉塞性肺疾患を有する対象を含む）、カテーテル関連感染症（腎透析患者を含む）、移植補綴物（股関節および膝関節置換を含む）を有する対象、ならびに歯周病。この方法は哺乳動物全般の対象において有効であり、したがって、家庭で飼うペットにも適用可能である。例えば、３歳以上のイヌの８５％は、バイオフィルムが原因で治療するのが困難な歯周病に罹患している（Ｋｏｒｔｅｇａａｒｄ，Ｈ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｓｍａｌｌ Ａｎｉｍ．Ｐｒａｃｔ．（２００８）４９：６１０−６１６）。同様に、本発明は家畜を治療するためにも有用である。例えば、乳房炎がある乳牛からの培養物の９８％は、バイオフィルム生産に関連した細菌感染症を示す：Ｐｏｌｉａｎａｄｅ Ｃａｓｔｒｏ Ｍｅｌｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｚｉｌｉａｎ Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２０１３）４４：１１９−１２４）。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1A】図１Ａは、抗体の攻撃を特に受けやすそうな（スコア０．９以上）、ＩＨＦ上の部位をコンピュータで解析した結果を示す。インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（Ｈｉ））のＩＨＦの残基１０−２５、５６−７８、および８６−９６が有望な標的として同定される。

【図1B】図１Ｂは、ＩＨＦタンパク質の結晶構造（プロテインデータバンク（ｐｄｂ）において１ＯＷＦと名付けられた構造に基づく）上にマッピングされた抗原部位と思われる部位を示す。

【図2】図２は、さまざまな細菌種のＩＨＦタンパク質における本発明の予測エピトープの位置を示す。

【図3A】図３Ａは、ＤＮＡと複合体化された、天然の二量体の形のＩＨＦタンパク質の三次元モデルを示す。

【図3B】図３Ｂは、予測された高度に抗原性の領域（表示した暗い領域（カラー版では赤色の領域））を示す。図１で同定されたエピトープ２および３は、バイオフィルムに豊富に存在するＤＮＡにより免疫系への暴露から部分的に遮蔽されている。

【図4A】図４Ａは、標的タンパク質に結合しないアイソタイプ対照ｍＡｂ（増殖対照）、またはＤＮＡＢＩＩタンパク質上の保存されたエピトープに対する天然のヒトｍＡｂであるＴＲＬ１０６８を１．２μｇ／ｍＬ（約１０ｎＭ）用いて、１２時間処理した黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（Ｓａ））のバイオフィルムを示す。ＴＲＬ１０６８は、低倍率（５００×）と高倍率（２５００×）（走査型電子顕微鏡画像）の両方で明らかなように、バイオフィルムの溶解を引き起こした。

【図4B】図４Ｂは、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（Ｐａ））のバイオフィルムに対する同様な実験の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本発明は、バイオフィルムを溶解することができる、単クローン性のまたは均一な性質の、さまざまな結合モイエティを包含する。「単クローン性の」は、結合モイエティが、均一な集団を形成することができることを意味し、これはモノクローナル抗体とポリクローナル抗体の区別と似たものである。一つの重要な実施形態として例示される結合モイエティは、ｍＡｂまたはそのフラグメントである。ほとんどの実施形態では、結合モイエティは少なくとも１種類のＤＮＡＢＩＩタンパク質に対する親和性を低ナノモル範囲で有する−すなわち、そのＫｄは、１０ｎＭ〜１００ｎＭの範囲内（２５ｎＭまたは５０ｎＭ等の介在値を含む）であり、好ましい実施形態として＜１０ｎＭであってもよい。

【0014】

本明細書中で以下の実施例に開示する例示的な抗体がヒト由来であるように、本発明の抗体の定常領域は、ヒトでの反復使用において特に有利であるヒトの定常領域である。ｍＡｂを投与される対象が非ヒトである場合は、その種に由来する天然のｍＡｂを投与することが反復使用にとって有利である。あるいは、ヒト可変領域の等価物を、必要に応じて治療すべき宿主種由来のＦｃ領域に融合させて、使用することができる。この可変領域は、いくつかの実施形態では、Ｆａｂ部分、または重鎖と軽鎖の両方からのＣＤＲ領域を含む一本鎖抗体であり得る。これらの可変領域の等価物の二重特異性形態も構築することができ、多数の構築物が文献に記載されている。典型的な「ｍＡｂ」は、対象において使用されるタンパク質またはポリペプチド（「タンパク質」、「ポリペプチド」および「ペプチド」は、長さに関係なく、本明細書中で交換可能に使用される）であるが、ｍＡｂはまた、核酸の送達によっても供給することができ、該核酸はその後タンパク質をｉｎ ｓｉｔｕで生成する。さらに、これらのポリペプチドまたはタンパク質の結合特性を模倣する核酸分子を構築することができる−すなわち、アプタマーは、結合モイエティを模倣することができることから、以下の記載のように同定された分子と結合するように構築することができる。アプタマーがタンパク質ベースの結合モイエティの模倣に成功したかどうかは、生化学的および機能的の両面において、該アプタマーの親和性が治療効果にとって十分であることを確認することで検証することができる。

【0015】

タンパク質ベースの単クローン性の結合モイエティとして、典型的なモノクローナル抗体、または該抗体と同一の抗原に対して免疫学的に特異的である該抗体のフラグメントに加えて、一本鎖抗体の形態（例えばラクダ、ラマまたはサメ由来のものなど）を含む、他の足場タンパク質のさまざまな形態を使用することができるだけでなく、例えばフィブロネクチン、リポカリン、水晶体クリスタリン、テトラネクチン、アンキリン、プロテインＡ（Ｉｇ結合ドメイン）などの他の足場に基づく抗体模倣体を使用することもできる。構造化された短鎖ペプチドもまた、それらが十分な親和性および特異性を提供する場合には使用することができ、例えば、コノトキシンまたはトリ膵臓ペプチドなどの本質的に安定した構造に基づくペプチド、あるいは非天然アミノ酸の使用および／または架橋により安定した構造を実現するペプチド模倣体が使用される：Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ（２００５）１２７（３３）：１１７２７−１１７２５）。一般に、「モノクローナル抗体（ｍＡｂ）」は、上記のすべてを包含する。

【0016】

本明細書で使用する用語「抗体」は、「フラグメント」が重複して記載される場合でも、伝統的な抗体の免疫反応性フラグメントを包含する。したがって、抗体には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖフラグメント、実質的に可変領域のみを含む一本鎖抗体、二重特異性抗体、および免疫特異性を保持するそれらの様々なフラグメント化形態、ならびに、より伝統的な、天然に存在する抗体の可変領域の活性に近似するアミノ酸配列または修飾アミノ酸配列を含むことによって「天然」の抗体の活性を模倣するタンパク質全般（すなわち、擬似ペプチド）が含まれる。

【0017】

ｍＡｂの可変領域に関して、周知のように、重要なアミノ酸配列は、フレームワーク（必ずしも特異性に影響を与えることなく、または許容できないレベルに親和性を低下させることなく、変更することができる）上に配置されたＣＤＲ配列である。これらのＣＤＲ領域の定義は、当技術分野で公知の方法により成し遂げられる。具体的には、関連するＣＤＲ領域を同定するための最もよく使用される方法は、Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９７０）１３２：２１１−２５０および書籍Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，３２３ページに開示されるような、Ｋａｂａｔの方法である。よく利用される別の類似する方法は、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８７）１９６：９０１−９１７およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８９）３４２：８７７−８８３に発表された、Ｃｈｏｔｈｉａの方法である。さらなる改変は、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ，Ｋ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００８）４５：３８３２−３８３９により提案されている。本発明は、これらのシステムまたは当技術分野で公知の他の一般に認められたシステムのいずれかによって定義されるＣＤＲ領域を包含する。

【0018】

既述の通り、本発明のｍＡｂの結合特異性はＣＤＲ領域、たいていは重鎖のＣＤＲ領域によって規定されるが、軽鎖のＣＤＲ領域によっても補完される（軽鎖は幾分か交換可能である）。したがって、本発明のｍＡｂは、重鎖の３つのＣＤＲ領域と、任意に、それにマッチする軽鎖の３つのＣＤＲ領域を含むことができる。本発明はまた、これらのＣＤＲ領域を実際に含むものと同じエピトープに結合する結合物質を包含する。よって、例えば、同じ結合特異性を有するアプタマー−すなわち、ＣＤＲ領域を実際に含むｍＡｂが結合するエピトープと同じエピトープに結合するアプタマーも含まれる。結合親和性はまた、ＣＤＲがフレームワーク上に配置される方法によって決定されるので、本発明のｍＡｂは、３つの関連するＣＤＲを含む重鎖の完全な可変領域、ならびに任意で、当該重鎖を補完する軽鎖と関連した３つのＣＤＲを含む完全な軽鎖可変領域を含むことができる。このことは、単一のエピトープに免疫特異的なｍＡｂに関してだけでなく、２つの別個のエピトープ、例えば２つの細菌種からの分岐したＤＮＡＢＩＩタンパク質、に結合できる二重特異性抗体または結合モイエティに対しても当てはまる。

【0019】

本発明のｍＡｂは、公知の技術を用いて組換え的に産生させることができる。よって、本明細書に記載する新規な抗体について、本発明はまた、それらをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、ならびにこれらのヌクレオチド配列を含むベクターまたは発現系、これらの発現系またはベクターを含有する、これらのヌクレオチド配列を発現させるための細胞、およびこれらの細胞を培養して、産生された結合モイエティを回収することによる結合モイエティの製造方法に関する。組換え方法に一般的に使用されるあらゆる細胞を使用することができ、例えば、原核細胞、酵母、哺乳動物細胞、昆虫細胞および植物細胞を利用することができる。新規抗体をコードする組換え分子で形質転換されたヒト細胞（例えば、筋肉細胞またはリンパ球）も含まれる。

【0020】

二重特異性の結合モイエティは、異なる特異性を有する２つの異なる結合モイエティを共有結合で連結することによって形成することができる。例えば、１つの単一特異性ｍＡｂ由来の重鎖および任意に軽鎖のＣＤＲ領域を、適当な連結手段を介して、第２のｍＡｂの重鎖配列および任意に軽鎖のＣＤＲ領域を含むペプチドに結合させることができる。その連結がアミノ酸配列を介している場合は、二重特異性結合モイエティを組換え的に産生させることができ、二重特異性エンティティ（ｅｎｔｉｔｙ）全体をコードする核酸を組換え的に発現させることができる。単一の特異性を有する結合モイエティの場合と同様に、本発明はまた、ＣＤＲ領域を実際に含む二重特異性の抗体または結合エンティティ／結合モイエティと同じエピトープの一方または両方に結合する結合モイエティをも包含する。

【0021】

本発明はさらに、完全な重鎖および軽鎖配列を含む二重特異性構築物、または完全な重鎖配列および少なくとも軽鎖のＣＤＲを含む二重特異性構築物、または重鎖のＣＤＲおよび完全な軽鎖配列を含む二重特異性構築物を包含する。

【0022】

本発明はまた、二重特異性モイエティをコードする核酸、およびそれらを産生させるための組換え方法に関する。

【0023】

現在では、２つの別個の抗体からの抗原特異性ドメインを組み込んだ単一の抗体様分子（二重特異性抗体）を作製するために、多くの技術が存在する。したがって、それぞれグループ１とグループ２に広い反応性を示す個別の抗体のＦａｂドメインを用いて、非常に広範な菌株反応性を有する単一の抗体を構築することができる。適当な技術は、Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ社（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、Ｍｉｃｒｏｍｅｔ社（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）およびＭｅｒｒｉｍａｃ社（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）により記載されている。（例えば、Ｏｒｃｕｔｔ，Ｋ．Ｄ．，Ａｃｋｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｅ．，Ｃｉｅｓｌｅｗｉｃｚ，Ｍ．，Ｑｕｉｒｏｚ，Ｅ．，Ｓｌｕｓａｒｃｚｙｋ，Ａ．Ｌ．，Ｆｒａｎｇｉｏｎｉ，Ｊ．Ｖ．，Ｗｉｔｔｒｕｐ，Ｋ．Ｄ．，「Ａ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｇＧ−ｓｃＦｖ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｏｐｏｌｏｇｙ（モジュラーＩｇＧ−ｓｃＦｖ二重特異性抗体トポロジー）」，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．（２０１０）２３：２２１−２２８；Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ｊ．，Ｌｕｇｏｖｓｋｏｙ，Ａ．，「Ｒａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｐａｔｈｗａｙｓ（複数の癌遺伝子経路を標的とする抗体治療薬の合理的エンジニアリング）」，ＭＡｂｓ．（２０１１）１：３（３）；Ｂａｅｕｅｒｌｅ，Ｐ．Ａ．，Ｒｅｉｎｈａｒｄｔ，Ｃ．，「Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ−ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（癌治療用の二重特異性Ｔ細胞エンゲージング抗体）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００９）６９：４９４１−４９４４を参照されたい。）

【0024】

本発明はまた、上述のｍＡｂなどの本発明の結合モイエティの、候補ペプチドまたは他の分子への結合を評価することにより、抗体を生成するために用いるのに適した免疫原を同定する方法を包含する。これは、適切な免疫原を同定するためだけでなく、本発明の結合モイエティを模倣するアプタマーを設計するための基礎として使用できる物質を同定するためにも有効である。この方法は、ワクチン免疫原が最も有効なｍＡｂに結合することができない場合、そのような抗体を誘導しないであろうという事実に基づいている。反対に、最適なｍＡｂの正確な結合相手となる免疫原は、最適なｍＡｂの模倣体を構築するのに有用なテンプレートとなる。最も単純な形では、この方法は、結合モイエティ（例えば本発明のｍＡｂの１つ）をアッセイ成分として利用し、候補免疫原のライブラリ中の候補免疫原に対する結合モイエティの結合力を試験する。結合モイエティが結合した免疫原は、脊椎動物対象、例えばマウス、ウサギ、ラット、他の哺乳動物またはトリ対象に、それらを投与することによって、バイオフィルム処置用のさらなる抗体を生成させるために使用することができる。

【0025】

また、本発明の結合モイエティのさまざまな細菌の薬剤耐性を克服する能力は、多様な微生物種からのＤＮＡＢＩＩタンパク質のパネルまたはライブラリに対して本発明の結合モイエティを試験することによって、評価することができる。多様な該タンパク質と効果的に結合することができる結合モイエティは、バイオフィルム全般を溶解するのに適切なだけでなく、さまざまな微生物株に対して有効なものとして同定される。また、酸性環境において有用性がある結合モイエティを同定することが有用であり、ここで、広範囲のｐＨ条件にわたってＤＮＡＢＩＩタンパク質に対する候補結合モイエティの親和性が試験され、ｐＨ４．５において低ナノモルの親和性を有する結合モイエティを酸性環境で有用性があるとして同定することができる。

【0026】

本発明の結合モイエティは、ＤＮＡＢＩＩタンパク質に対するバイオフィルム構成要素の親和性よりも大きい、少なくとも１種類のＤＮＡＢＩＩタンパク質に対する親和性を有するか否かについて検証することができ、当該検証は、ＤＮＡＢＩＩタンパク質に対する本発明の結合モイエティの親和性を、ＤＮＡＢＩＩタンパク質に対するバイオフィルム構成要素（典型的には分岐ＤＮＡ）の親和性と比較することを含んでなる。これは競合アッセイで行われるか、または親和性を別々に測定して行うことができる。

【0027】

これらのアッセイに使用するＤＮＡＢＩＩタンパク質は、哺乳動物細胞において比較的高い収量で調製することができる。

【0028】

上記アッセイのすべては、さまざまな方法で２つの予想される結合パートナー同士の結合を評価することを含む。

【0029】

２つの有望な結合パートナーの結合が成功するか否かを評価するために、多くのタイプのアッセイが利用可能である。例えば、結合パートナーの一方を固相支持体に結合させて、他方を放射性物質、蛍光物質または比色物質で標識し、未結合の標識を除去した後に、固相支持体への標識の結合を測定する。このアッセイは、言うまでもなく、結合モイエティを固相支持体に付着させて候補免疫原もしくはＤＮＡＢＩＩタンパク質を標識する方法、またはその逆に、該候補を固相支持体に結合させて結合モイエティを標識する方法のいずれでも行うことができる。あるいは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥなどの分子量に基づくクロマトグラフィー手段により複合体を検出することができる。結合アッセイとの関連において、検出可能な標識はどの時点で添加してもよい。したがって、例えば、ｍＡｂまたは他の結合モイエティを固相支持体に結合させる場合、候補免疫原を添加し、更に該免疫原に特異的な標識成分を加えて結合を測定することができる。結合を検出するための何百ものアッセイ方法が当技術分野で公知であり、例えば、両成分がタンパク質である場合には、酵母ツーハイブリッドアッセイなどがある。

【0030】

本発明の結合モイエティの有用性の直接的な利用に加えて、適切かつ強力な免疫原の同定がより洗練された一連の実験で判定することができ、ここで、ＤＮＡＢＩＩタンパク質に対するｍＡｂのパネルが取得され、有効性の順にランク付けされる。追加される結合モイエティが以前のパネルのメンバーとの結合について競合するかどうかを評価することによって、すべての可能性のあるエピトープに対する抗体または他の結合モイエティの完全なセットを作製することができる。完全なセットの各メンバーを代表する結合ｍＡｂのエピトープは、免疫原の可能性のある重複エピトープを提示するペプチドアレイへの結合によって、またはＸ線結晶構造解析、ＮＭＲもしくは低温電子顕微鏡観察によって得ることができる。より効果的でないｍＡｂと比較して最も効果的なｍＡｂにより認識されるエピトープとして定義される最適なエピトープの空間的および化学的特性を最適なワクチン抗原は保持するであろうが、必ずしも直鎖状のペプチドである必要はない。それは非天然アミノ酸または他の架橋モチーフを含んでいてもよい。

【0031】

さらに、スクリーニングは、抗体によって認識される蓋然性、及び、細菌種間での保存に基づいて選択されたペプチドを含むことができる。以下の実施例３に記載するように、ＩＨＦの場合には、これら２つの基準は、単一のペプチド−インフルエンザ菌の残基５６−７８および他のアナログの対応する位置−に集まっている。

【0032】

本明細書に記載する特定のｍＡｂを用いなくても、能動免疫ワクチンに有用であるだけでなく、アプタマーを選択するための標的として有用である、最適な免疫原を取得することができる。具体的には、インフルエンザ菌の位置５６−７８に加えて、インフルエンザ菌の位置１０−２５および８６−９６のペプチドが同定される。

【0033】

本発明の別の態様は、一般的には細菌にいくらか毒性である細菌／微生物ＤＮＡＢＩＩタンパク質をより高い収量で調製する方法である。これらのタンパク質の標準的な調製方法は、Ｎａｓｈ，Ｈ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ（１９８７）１６９：４１２４−４１２７に記載されており、そこでは、大腸菌のＩＨＦは、該タンパク質の両鎖（ＩＨＦαおよびＩＨＦβ）が同じ形質転換体において産生される場合、効率的に調製され得ることが示された。本出願人らは、ＨＥＫ２９３細胞において両鎖を一過性に産生させることによって、ＩＨＦを５〜１０ｍｇ／ｌの高収量で得ることができることを見出した。高レベルでは細菌に毒性である細菌タンパク質は、哺乳動物細胞により発現させるのに都合がよく、特に、このように発現させたときに該タンパク質の修飾をもたらすグリコシル化部位のないものの場合にそうである。得られたタンパク質の精製は、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）を用いて行うことができる。

【0034】

用途
抗体を含む本発明の結合モイエティは、バイオフィルムを生じさせる感染症にかかりやすいいかなる対象の治療および予防においても有用である。したがって、各種の哺乳動物、例えばウシ、ヒツジ、および他の哺乳動物対象（ウマ、ペットなど）、ならびにヒトは、これらのｍＡｂの予防・治療的使用から恩恵を受けることができる。

【0035】

本発明の結合モイエティは、さまざまな方法で投与することができる。抗体（二重特異性型および一本鎖型または代替足場型を含む）のＣＤＲ領域に基づくペプチドは、標準的な賦形剤を含む獣医学的または薬学的組成物として直接投与することができる。リポソーム組成物は特に有用であり、各種タイプのミセルまたは他のナノ粒子を含む組成物も同様である。ｍＡｂと同様の結合物質として働くアプタマーは、同じ方法で投与することができる。さらに、バイオフィルムからＩＨＦを引き抜くための免疫吸着剤として機能するように、例えばＰＥＧ、アガロースまたはデキストランなどの文献で知られた固相支持体のいずれかに結合物質を結合させることができる。あるいは、ペプチドベースのｍＡｂは、ＲＮＡもしくはＤＮＡそのままや、ベクターまたは発現構築物のいずれかの形で、コードする核酸として投与することができる。ベクターはアデノウイルスベクター（ＡＡＶ）などの非複製ウイルスベクターであってよく、また、核酸配列はリポソームまたは他の脂質粒子に封入したｍＲＮＡとして投与することもできる。薬物としての核酸の使用は、それらのタンパク質対応物とは対照的に、製造コストを抑えるのに有益である。

【0036】

これらは、静脈内、皮下、筋肉内、局所（特に慢性の非治癒性創傷および歯周病の場合）、吸入および経口を含むさまざまなプロトコルで、または座薬により投与される。同様の投与経路を、結合モイエティ自体に関して使用することができる。結合モイエティ自体（アプタマー）またはタンパク質形態の結合モイエティをコードする核酸のいずれかである核酸ベースの形態を投与するための１つの有用な方法は、無針アプローチ、例えば、ＵＳ２００１／０１７１２６０に記載されるアグロジェット（ａｇｒｏ−ｊｅｔ）無針注射器を介するものである。

【0037】

本明細書に記載するＩＨＦタンパク質のエピトープを表すペプチドはまた、ｉｎ ｓｉｔｕで抗体を生成してバイオフィルムを破壊するという免疫原性応答を刺激するための、ワクチンの有効成分として有用である。これらの免疫原または同様に有効であるペプチド模倣体の投与のタイプは、さまざまな種類の抗体などの結合モイエティの投与のタイプに類似する。ペプチド模倣体は、それ自体が、本明細書に記載の免疫原性ペプチドを模倣するアプタマーまたは別の構造体の形態であり得る。しかし、タンパク質またはペプチドである免疫原については、投与は、これらのタンパク質をｉｎ ｓｉｔｕで生成するよう形態のコーディング核酸の形態で行なってもよい。製剤化、投与経路、および投与量は、当業者によって従来通りに決定される。

【0038】

バイオフィルム制御のための抗体の能動的生成のためにワクチンタイプが投与される疾患か、または抗体自体を投与することによって受動的治療が施される疾患の種類には、バイオフィルムの形成を特徴とする疾患、またはバイオフィルムの形成に関連する疾患が含まれる。これらの疾患としては、以下が挙げられる：自然発症と移植の両方の心臓弁心内膜炎（症例のかなりの割合が、バイオフィルムに関連した耐性のために、高用量の抗生物質でも治癒することができない）、慢性の非治癒性創傷（静脈性潰瘍および糖尿病性足潰瘍を含む）、耳および副鼻腔感染症、尿路感染症、肺感染症（嚢胞性線維症および慢性閉塞性肺疾患を有する対象を含む）、カテーテル関連感染症（腎透析患者を含む）、移植補綴物（股関節および膝関節置換を含む）を有する対象、ならびに歯周病。

【0039】

上述したように、本発明の結合モイエティは、それらの有用性が治療（または診断）用途に限定されるものではなく、パイプラインまたは他の産業上の設定など、バイオフィルムが問題となるどのような状況においても使用することができる。こうした状況でのバイオフィルムへの結合モイエティの適用形態は、従来から行われているものである。

【0040】

以下の実施例は、本発明を例示するために提供され、本発明を限定するためのものではない。

【実施例】

【0041】

実施例１
抗体の作製
ヒト末梢抗体を産生する記憶Ｂ細胞は、インフォームドコンセントの下で、回復した敗血症患者から、または匿名の血液バンクドナーから取得した。該細胞は、インフルエンザウイルス由来のＤＮＡＢＩＩタンパク質に結合する能力を判定するために、ＣｅｌｌＳｐｏｔ（商標）アッセイに供した。ＣｅｌｌＳｐｏｔ（商標）アッセイは、米国特許第７，４１３，８６８号および第７，９３９，３４４号に記載されている。全血からＢ細胞を単離した後、それらをサイトカインとマイトジェンで刺激して、短期間の増殖および抗体分泌を開始させ（約１０日間持続する）、アッセイに供するためにプレーティングした；コーディング核酸を抽出して、抗体を組換え的に産生させるために使用した。

【0042】

ＤＮＡＢＩＩタンパク質またはその断片の少なくとも１つへの結合に基づいて選択された抗体の特性を評価した：ＴＲＬ２９５、ＴＲＬ１０１２、ＴＲＬ１０６８、ＴＲＬ１０７０、ＴＲＬ１０８７、ＴＲＬ１２１５、ＴＲＬ１２１６、ＴＲＬ１２１８、ＴＲＬ１２３０、ＴＲＬ１２３２、ＴＲＬ１２４２およびＴＲＬ１２４５。親和性は、オン速度（ｏｎ ｒａｔｅ）とオフ速度（ｏｆｆ ｒａｔｅ）（その比はＫｄをもたらす）を測定するために、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（商標）社製のＯｃｔｅｔ（商標）バイオセンサを用いて測定した。その結果から、高親和性の異種菌株間（ｃｒｏｓｓ−ｓｔｒａｉｎ）結合性抗体を単離するための集中的なスクリーニングの実現可能性が確立される。

【0043】

ＴＲＬ２９５ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＮＧＡＤＳＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＴＳＲＤＫＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＭＲＲＹＨＹＤＳＳＧＬＨＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号１）；
ＴＲＬ２９５ 軽鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＥＬＴＱＡＰＳＶＳＶＹＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＱＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＶＶＩＹＫＤＳＥＲＰＳＧＩＳＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＳＶＤＴＳＶＳＹＹＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ （配列番号２）；

【0044】

ＴＲＬ１０１２ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＮＧＡＤＳＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＴＳＲＤＫＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＭＲＲＹＨＹＤＳＳＧＬＨＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号３）；
ＴＲＬ１０１２ 軽鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＭＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＴＮＹＶＳＷＦＱＱＶＰＧＴＡＰＫＦＬＩＹＤＮＹＫＲＰＳＥＴＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＤＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＮＹＹＣＡＴＷＤＳＳＬＳＡＷＶＦＧＧＧＴＫＶＴＶＬ （配列番号４）；

【0045】

ＴＲＬ１０６８ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＲＶＳＧＤＳＮＲＰＳＹＷＳＷＩＲＱＡＰＧＫＡＭＥＷＩＧＹＶＹＤＳＧＶＴＩＹＮＰＳＬＫＧＲＶＴＩＳＬＤＴＳＫＴＲＦＳＬＫＬＴＳＶＩＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＦＤＲＴＳＹＫＳＷＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ （配列番号５）；
ＴＲＬ１０６８ 軽鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＶＬＴＱＡＰＧＴＬＳＬＳＰＧＤＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＬＧＧＴＳＬＡＷＹＱＨＲＳＧＱＡＰＲＬＩＬＹＧＴＳＮＲＡＴＤＴＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＶＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＰＰＹＴＦＧＱＧＴＴＬＤＩＫ （配列番号６）；

【0046】

ＴＲＬ１０７０ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＴＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＹＹＳＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＨＤＧＴＥＲＮＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＥＫＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＹＹＧＡＧＴＮＹＰＬＫＹＷＧＱＧＴＲＶＴＶＳＳ （配列番号７）；
ＴＲＬ１０７０ 軽鎖κ可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＬＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＤＹＮＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ （配列番号８）；

【0047】

ＴＲＬ１０８７ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＬＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＤＴＬＳＬＴＣＴＦＳＡＤＬＳＴＮＡＹＷＴＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＭＳＨＳＧＧＲＤＹＮＰＳＦＮＲＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＶＦＬＲＬＴＳＶＴＳＡＤＴＡＶＹＦＣＶＲＥＶＧＳＹＹＤＹＷＧＱＧＩＬＶＴＶＳＳ （配列番号９）；
ＴＲＬ１０８７ 軽鎖κ可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＥＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＴＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＦＳＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＫＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＴＮＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＫＷＥＴＰＹＳＦＧＱＧＴＫＬＤＭＩＲ （配列番号１０）；

【0048】

ＴＲＬ１２１５ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＴＥＶＫＮＰＧＡＳＶＫＶＳＣＴＡＳＧＹＫＦＤＥＹＧＶＳＷＶＲＱＳＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＶＹＮＧＫＴＮＹＳＱＮＦＱＧＲＬＴＬＴＴＥＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＴＳＬＲＰＤＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＫＮＷＦＤＰＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号１１）；
ＴＲＬ１２１５ 軽鎖λ可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＡＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＮＴＤＹＮＹＶＳＷＹＱＨＨＰＧＫＡＰＫＶＩＩＹＤＶＫＫＲＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＮＴＡＴＬＴＶＳＧＬＱＴＥＤＥＡＤＹＹＣＶＳＹＡＤＮＮＨＹＶＦＧＳＧＴＫＶＴＶＬ （配列番号１２）；

【0049】

ＴＲＬ１２１６ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＶＳＣＡＡＳＡＦＳＦＲＤＹＧＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＶＩＳＨＤＧＧＫＫＦＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＥＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＶＡＳＣＳＧＳＴＣＴＴＱＰＡＡＦＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号１３）；
ＴＲＬ１２１６ 軽鎖λ可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＭＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＫＹＴＹＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＬＩＹＥＤＲＫＲＰＳＥＩＰＥＲＦＳＡＦＴＳＷＴＴＡＴＬＴＩＴＧＡＱＶＲＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＩＳＧＤＩＧＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ （配列番号１４）；

【0050】

ＴＲＬ１２１８ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＬＥＳＧＡＤＭＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＦＲＴＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＳＨＤＧＹＴＫＹＹＳＤＳＶＲＧＱＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＮＬＲＰＤＤＴＡＩＹＹＣＡＲＧＬＴＧＬＳＶＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号１５）；
ＴＲＬ１２１８ 軽鎖λ可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＶＬＴＱＳＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＴＴＲＰＳＧＶＳＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＳＳＧＳＴＰＡＬＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬ （配列番号１６）；

【0051】

ＴＲＬ１２３０ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＧＡＳＧＦＮＬＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＳＲＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＶＳＰＳＴＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ （配列番号１７）；
ＴＲＬ１２３０ 軽鎖λ可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＶＬＴＱＰＳＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＥＬＰＫＱＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＮＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＡＤＳＳＧＴＹＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ （配列番号１８）；

【0052】

ＴＲＬ１２３２ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＬＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＫＳＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＰＳＮＬＥＲＦＬＥＲＬＱＰＲＹＳＹＤＤＫＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ （配列番号１９）；
ＴＲＬ１２３２ 軽鎖κ可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＡＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＩＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＦＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ （配列番号２０）；

【0053】

ＴＲＬ１２４２ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＴＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＥＧＳＲＹＮＦＡＲＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＤＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＳＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＮＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＬＧＳＥＬＧＶＶＳＤＹＹＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号２１）；
ＴＲＬ１２４２ 軽鎖κ可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＶＬＤＲＳＮＮＫＮＣＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＡＡＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＹＹＳＩＰＮＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ （配列番号２２）； かつ

【0054】

ＴＲＬ１２４５ 重鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＳＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＳＦＩＳＳＳＧＤＴＩＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＶＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＧＶＳＤＥＥＬＬＲＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号２３）；
ＴＲＬ１２４５ 軽鎖可変領域は次のアミノ酸配列を有する：
ＤＩＶＬＴＱＤＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＫＹＡＹＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＥＤＴＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＶＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＳＳＧＮＱＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ （配列番号２４）。

【0055】

ＴＲＬ２９５の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｔｇｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｔａｃｃｔｔｃａｇｔｇａｔｔａｔａｇｔａｔｇａａｃｔｇｇｇｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇａｃｔｇｇａａｔｇｇｃｔｔｔｃａｔａｃａｔｔａｇｔｃａｃａｃｔａｔｔａｃｔａｃｃａｔａｔａｃｔａｃｇｃｃｇａｃｔｃｔｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｔｇｃｃｇａｃａｇｃｔｃａｃｔｇｔａｔｃｔｃｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇｇｇａｇａｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｔｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇａｇｃｔｃｃａｔｔａｇｔａａａｃｔｇｔａｇｔａｃｔａｇｔｇｇｃｔｇｃｃａｇｔｃｃｇｇａａｇｃｔｇｇｔｔｃｇａｃａｃｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇａａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号２５）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇａｇｃｔｇａｃｔｃａｇｇｃａｃｃｃｔｃｇｇｔｇｔｃａｇｔｇｔａｔｃｃａｇｇａｃａｇａｃｇｇｃｃａｇｇａｔｃａｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇａｇａｔｇｃａｃｔｇｃｃａａａｇｃａａｔａｔｇｃｔｔａｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｃｃａｇｇｃｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｔｇｇｔｇｇｔｇａｔａｔａｔａａａｇａｃａｇｔｇａｇａｇｇｃｃｃｔｃａｇｇｇａｔｃｔｃｔｇａｇｃｇａｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａｇｃｔｃｇｇｇｇａｃａａｃａｇｔｃａｃｇｔｔｇａｃｃａｔｃａｇｔｇｇａｇｔｃｃａｇｇｃａｇｇｇｇａｃｇａｇｇｃｔｇａｃｔａｔｔａｔｔｇｔｃａａｔｃａｇｔｔｇａｃａｃｃａｇｔｇｔｔｔｃｔｔａｔｔａｔｇｔｇｇｔｃｔｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｃｃａａｇｔｔｇａｃｃｇｔｃｃｔａ （配列番号２６）

【0056】

ＴＲＬ１０１２の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｔｇｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｔｔｃｃｔｇｔｇｃｃｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃｃｃｃｔｔｃａｇｔａｇｔｔａｔｇｃｃａｔｇａｇｔｔｇｇｇｔｃｃｇｔｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｃｔｃａｇｃｃａｔｃａｇｔｇｇｃａａｃｇｇｃｇｃｔｇａｃｔｃａｔａｔｔａｃｇｃａｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇｃｔｔｃａｃｃａｃｔｔｃｃａｇａｇａｃａａｇｔｃｃａａｇａａｔａｃａｇｔｔｔａｔｔｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇａｃｔｃａｇｇｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔａｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａａａｇａｔａｔｇｃｇａｃｇｇｔａｔｃａｔｔａｔｇａｃａｇｔａｇｔｇｇｔｃｔｇｃａｃｔｔｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇａａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号２７）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃａｔｇｃｔｇａｃｔｃａｇｃｃｃｃｃｃｔｃａｇｔｇｔｃｔｇｃｇｇｃｃｃｃｃｇｇａｃａｇａａｇｇｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇａａｇｃａｇｃｔｃｃａａｃａｔｔｇｇｇａｃｇａａｔｔａｔｇｔｇｔｃｃｔｇｇｔｔｃｃａｇｃａｇｇｔｃｃｃａｇｇａａｃａｇｃｃｃｃｃａａａｔｔｃｃｔｃａｔｔｔａｔｇａｃａａｔｔａｔａａａｃｇａｃｃｃｔｃａｇａａａｃｔｃｃｔｇａｃｃｇａｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａａｇｔｃｔｇｇｃａｃｇｔｃｇｇｃｃａｃｃｃｔｇｇａｃａｔｃａｃｃｇｇａｃｔｃｃａｇａｃｔｇｇｇｇａｃｇａｇｇｃｃａａｔｔａｔｔａｃｔｇｃｇｃａａｃａｔｇｇｇａｃａｇｔａｇｃｃｔｇａｇｔｇｃｔｔｇｇｇｔｇｔｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｔｃｃｔｇ （配列番号２８）

【0057】

ＴＲＬ１０６８の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｇｇｃｃｃａｇｇａｃｔｇｇｔｇａａｇｃｃｔｔｃｇｇａｇａｃｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃａｃｃｔｇｃａｇｇｇｔｃｔｃｔｇｇｔｇａｃｔｃｃａａｔｃｇｇｃｃｔｔｃｃｔａｃｔｇｇａｇｃｔｇｇａｔｃａｇｇｃａｇｇｃｃｃｃａｇｇｇａａｇｇｃａａｔｇｇａｇｔｇｇａｔａｇｇｔｔａｔｇｔｃｔａｔｇａｃａｇｔｇｇｇｇｔｃａｃｃａｔｃｔａｃａａｔｃｃｃｔｃｃｃｔｃａａｇｇｇｔｃｇａｇｔｃａｃａａｔａｔｃａｃｔａｇａｃａｃｇｔｃｇａａｇａｃｇｃｇｇｔｔｃｔｃｃｃｔｇａａａｃｔｇａｃｃｔｃｔｇｔｇａｔｃｇｃｔｇｃｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔａｔａｔｔａｔｔｇｔｇｃｇｃｇａｇａａｃｇｔｔｔｔｇａｔｃｇｇａｃａｔｃｇｔａｔａａｇａｇｔｔｇｇｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇａａｃｇｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号２９）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇｔｇｃｔｇａｃｔｃａｇｇｃｃｃｃａｇｇｃａｃｔｃｔｇｔｃｔｔｔｇｔｃｔｃｃａｇｇｇｇａｃａｇａｇｃｃａｃｃｃｔｃｔｃｃｔｇｔａｇｇｇｃｃａｇｔｃａｇｃｇｔｃｔｔｇｇｃｇｇｃａｃｇｔｃｃｔｔａｇｃｃｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｃａｇａｔｃｔｇｇｃｃａｇｇｃｔｃｃｃａｇｇｃｔｃａｔｃｃｔｃｔａｃｇｇａａｃｔｔｃａａａｃａｇｇｇｃｃａｃｔｇａｃａｃｃｃｃｔｇａｃａｇｇｔｔｔａｇｔｇｇｃａｇｔｇｇｇｔｃｔｇｇｇａｃａｇａｃｔｔｃｇｔｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｔｔｃｃｃｔｇｇａｇｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃａｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｃａｇｃａａｔａｔｇｇｃａｇｃｃｃａｃｃｇｔａｃａｃｔｔｔｔｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃａｃｔｃｔｇｇａｃａｔｃａａａ （配列番号３０）

【0058】

ＴＲＬ１０７０の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａａｃｃｔｔｇｇｔｃｃａｇｃｃｇｇｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｃｔｔｔａｇｔｔａｃｔａｃｔｃｇａｔｇａｇｃｔｇｇｇｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｇｇｃｃａａｃａｔａａａｇｃａｃｇａｔｇｇａａｃｔｇａｇａｇａａａｔｔａｔｇｔｇｇａｃｔｃｔｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｃａｇｃｇａｇａａｇｔｃｔｃｔｔｔａｃｃｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａｇａｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｔｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａａｇｔａｔｔａｔｔａｔｇｇｔｇｃｃｇｇｇａｃｔａａｔｔａｔｃｃｃｃｔｔａａｇｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇａａｃｃｃｇｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号３１）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｃｔｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｔｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｇｃａｔｃｔｇｔａｇｇａｇａｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｃｃｇｇｇｃａａｇｔｃａｇｇｇｃａｔｔａｇａａａｔｇａｔｔｔａｇｇｃｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａａｃｃａｇｇｇａａａｇｃｃｃｃｔａａｇｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｔｇｃｔｇｃａｔｃｃａｇｔｔｔａｃａａａｇｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｔｃａａｇｇｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃｔｇｇｃａｃａｇａｔｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃａａｃｔｔａｔｔａｃｔｇｔｃｔａｃａａｇａｔｔａｃａａｔｔａｃｃｃｇｃｔｃａｃｔｔｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｇｇａｇａｔｃａａａｃｇａ （配列番号３２）

【0059】

ＴＲＬ１０８７の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｃｔｃｇａｇｔｃａｇｇｃｃｃａｇｇｃｃｔｇｇｔｔａｇｇｃｃｃｔｃｇｇａｃａｃｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃａｃｃｔｇｃａｃｔｔｔｔｔｃｃｇｃｔｇａｃｃｔｃａｇｃａｃｃａａｃｇｃｃｔａｔｔｇｇａｃｃｔｇｇａｔｃｃｇｇｃａｇｃｃｃｃｃａｇｇａａａｇｇｇａｃｔｇｇａｇｔｇｇａｔｔｇｇｃｔａｔａｔｇｔｃｔｃａｔａｇｔｇｇｇｇｇａａｇｇｇａｔｔａｃａａｔｃｃｃｔｃｃｔｔｃａａｃｃｇｇｃｇａｇｔｃａｃｃａｔｔｔｃａｇｔｇｇａｃａｃｇｔｃｇａａｇａａｃｃａｇｇｔｔｔｔｃｔｔｇａｇｇｃｔｇａｃｇｔｃａｇｔｇａｃｃｔｃｔｇｃｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔｃｔａｔｔｔｃｔｇｔｇｔｇａｇａｇａａｇｔｃｇｇｃａｇｔｔａｃｔａｃｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇａａｔｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号３３）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇａｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｔｃｃｔｃｔｔｔｇｔｃｔｇｃａｔｃｔｇｔｃｇｇａｇａｃａｇａａｔｃａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｔｃｇｇｇｃｇａｇｔｃａｇｇｇｔａｔｔａｇｃａｃｃｔｇｇｔｔａｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａａｃｃｇｇｇｇａａａｇｃｃｃｃｔａａｇｔｃｃｃｔｇａｔｃｔｔｔｔｃｔａｃｇｔｃｃａｇｃｃｔｇｃａｔａｇｔｇｇｇｇｔｃｃｃｃｔｃａａａｇｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇｇｔｃｔｇｇｇａｃａｇａｃｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｃｃａａｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃａａｃｔｔａｔｔａｃｔｇｃｃａａｃａｇａａａｔｇｇｇａｇａｃｃｃｃｔｔａｔａｇｔｔｔｔｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇｇａｃａｔｇａｔａｃｇａ （配列番号３４）

【0060】

ＴＲＬ１２１５の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇａａｃｔｇａｇｇｔｇａａｇａａｃｃｃｔｇｇａｇｃｃｔｃａｇｔｇａａｇｇｔｃｔｃｃｔｇｃａｃｇｇｃｃｔｃｔｇｇｔｔａｃａａａｔｔｔｇａｃｇａａｔａｔｇｇｔｇｔｃａｇｔｔｇｇｇｔｇｃｇａｃａｇｔｃｃｃｃｔｇｇａｃａａｇｇａｃｔｔｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇａｔｇｇａｔｃａｇｔｇｔｔｔａｔａａｔｇｇｃａａｇａｃａａａｃｔａｔａｇｃｃａｇａａｃｔｔｔｃａｇｇｇｃａｇａｃｔｃａｃｃｃｔｇａｃｃａｃａｇａｇａｃａｔｃｃａｃｃｇａｃａｃａｇｃｃｔａｃａｔｇｇａｇｃｔｔａｃｇａｇｃｃｔｃａｇａｃｃｔｇａｃｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔｃｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｃａｇａｃａａａａａｃｔｇｇｔｔｃｇａｃｃｃｃｔｇｇｇｇｃｃｃｇｇｇａａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号３５）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃｃｔｃｃｇｃｇｔｃｃｇｇｇｔｃｔｃｃｔｇｇａｃａｇｔｃａａｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｔｇｃａｃｔｇｇａａｃｃａａｃａｃｔｇａｔｔａｔａａｔｔａｔｇｔｔｔｃｃｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｃｃａｃｃｃｃｇｇｃａａａｇｃｃｃｃｃａａａｇｔｃａｔｔａｔｔｔａｔｇａｃｇｔｃａａａａａｇｃｇｇｃｃｃｔｃｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔａｇｔｃｇｃｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａｇｇｔｃｔｇｇｃａａｃａｃｇｇｃｃａｃｃｃｔｇａｃｃｇｔｃｔｃｔｇｇｇｃｔｃｃａｇａｃｔｇａｇｇａｔｇａｇｇｃｔｇａｔｔａｔｔａｔｔｇｔｇｔｃｔｃａｔａｔｇｃａｇａｃａａｃａａｔｃａｔｔａｔｇｔｃｔｔｃｇｇａａｇｔｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇ （配列番号３６）

【0061】

ＴＲＬ１２１６の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｔｇｇｔｃｃａｇｃｃｔｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｇｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｃｇｔｔｃａｇｔｔｔｃａｇｇｇａｔｔａｔｇｇｃａｔａｃａｃｔｇｇｇｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｃａａｇｇｇｇｃｔｇｃａａｔｇｇｇｔｇｇｃｇｇｔｔａｔｔｔｃａｃａｔｇａｔｇｇａｇｇｔａａｇａａａｔｔｃｔａｔｇｃａｇａｃｔｃｃｇｔｇａｇｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｔｔｃｃｇａｇａａｃａｃａｃｔｇｔａｔｃｔｃｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａｇａｔｃｔｇａｃｇａｃａｃｇｇｃｔｇｔｃｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇｇｃｔｃｇｔｔｇｃｃａｇｔｔｇｃａｇｔｇｇｔｔｃｃａｃｃｔｇｃａｃａａｃｇｃａａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｔｔｔｇａｃａｔｔｔｇｇｇｇｃｃｃａｇｇｇａｃａｔｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｔｔｃａ （配列番号３７）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃａｔｇｃｔｇａｃｔｃａｇｃｃｇｃｃｃｔｃｇｇｔｇｔｃａｇｔｇｔｃｃｃｃａｇｇａｃａａａｃｇｇｃｃａｇｇａｔｃａｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇａｇａｔｇｃａｔｔｇｃｃａａａａａａａｔａｔａｃｔｔａｔｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａｇｔｃａｇｇｃｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｔｔｃｔｇｃｔｃａｔｃｔａｔｇａｇｇａｃａｇｇａａａｃｇａｃｃｃｔｃｃｇａｇａｔｃｃｃｔｇａｇａｇａｔｔｃｔｃｔｇｃｃｔｔｃａｃｃｔｃａｔｇｇａｃｇａｃｇｇｃｃａｃｃｔｔｇａｃｔａｔｃａｃｔｇｇｇｇｃｃｃａｇｇｔｇａｇａｇａｔｇａａｇｃｔｇａｃｔａｃｔａｃｔｇｔｔａｔｔｃａａｃａｇａｃａｔｃａｇｔｇｇｔｇａｔａｔａｇｇａｇｔｇｔｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｃｃｔａ （配列番号３８）

【0062】

ＴＲＬ１２１８の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｇａｔａｔｃｇｔｇｃｔｇａｃｔｃａｇｔｃｇｇｃｃｔｃｃｇｔｇｔｃｔｇｇｇｔｃｔｃｃｔｇｇａｃａｇｔｃｇａｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｔｇｃａｃｔｇｇａａｃｃａｇｃａｇｔｇａｃｇｔｔｇｇｔｇｇａｔａｔａａｃｔａｔｇｔｃｔｃｃｔｇｇｔａｃｃａａｃａａｃａｃｃｃａｇｇｃａａａｇｃｃｃｃｃａａａｃｔｃａｔｇａｔｔｔａｔｇａｔｇｔｃａｃｔａｃｔｃｇｇｃｃｔｔｃａｇｇｇｇｔｔｔｃｔｇａｔｃｇｃｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａａｇｔｃｔｇｇｃａａｃａｃｇｇｃｃｔｃｃｃｔｇａｃｃａｔｃｔｃｔｇｇｇｃｔｇｃａｇｇｃｔｇａｇｇａｃｇａｇｇｃｔｇａｔｔａｔｔａｔｔｇｃａｇｃｔｃａｔａｔｔｃａａｇｃｇｇｃｔｃｃａｃａｃｃｔｇｃｔｃｔｇｔｔｔｇｇｇｇｇｇｇｇｃａｃｃｃａｇｃｔｇａｃｃｇｔｃｃｔｃ （配列番号３９）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇｔｇｃｔｇａｃｔｃａｇｔｃｇｇｃｃｔｃｃｇｔｇｔｃｔｇｇｇｔｃｔｃｃｔｇｇａｃａｇｔｃｇａｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｔｇｃａｃｔｇｇａａｃｃａｇｃａｇｔｇａｃｇｔｔｇｇｔｇｇａｔａｔａａｃｔａｔｇｔｃｔｃｃｔｇｇｔａｃｃａａｃａａｃａｃｃｃａｇｇｃａａａｇｃｃｃｃｃａａａｃｔｃａｔｇａｔｔｔａｔｇａｔｇｔｃａｃｔａｃｔｃｇｇｃｃｔｔｃａｇｇｇｇｔｔｔｃｔｇａｔｃｇｃｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａａｇｔｃｔｇｇｃａａｃａｃｇｇｃｃｔｃｃｃｔｇａｃｃａｔｃｔｃｔｇｇｇｃｔｇｃａｇｇｃｔｇａｇｇａｃｇａｇｇｃｔｇａｔｔａｔｔａｔｔｇｃａｇｃｔｃａｔａｔｔｃａａｇｃｇｇｃｔｃｃａｃａｃｃｔｇｃｔｃｔｇｔｔｔｇｇｇｇｇｇｇｇｃａｃｃｃａｇｃｔｇａｃｃｇｔｃｃｔｃ （配列番号４０）

【0063】

ＴＲＬ１２３０の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｃｔｇｇｔｃａａｇｃｃｔｇｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｇａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｔａａｃｃｔｃａｇｔａｇｔｔａｔａｇｃａｔｇａａｃｔｇｇｇｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｃｔｃａｔｃｃａｔｔａｇｔａｇｔａｇａａｇｔａｇｔｔａｃａｔａｔａｃｔａｔｇｃａｇａｃｔｃａｇｔｇｃａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃｔｃａｃｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａｇａｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｔａｔａｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇａｇｔａｔｃｔｃｃｇｔｃｃａｃｃｔａｔｔａｔｔａｔｔａｔｇｇｔａｔｇｇａｃｇｔｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａｃｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号４１）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇｔａｃｔｃａｃｔｃａｇｃｃｇｔｃｃｔｃｇｇｔｇｔｃａｇｔｇｔｃｃｃｃａｇｇａｃａｇａｃｇｇｃｃａｇｇａｔｃａｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇａｇａｔｇａａｔｔｇｃｃａａａｇｃａａｔａｔｇｃｔｔａｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｃｃａｇｇｃｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｔｇｔｔｇｇｔａａｔａｔａｔａａａｇａｃａａｔｇａｇａｇｇｃｃｃｔｃａｇｇｇａｔｃｃｃｔｇａｇｃｇａｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａｇｃｔｃａｇｇｇａｃａａｃａｇｔｃａｃｇｔｔｇａｃｃａｔｃａｇｔｇｇａｇｔｃｃａｇｇｃａｇａａｇａｃｇａｇｇｃｔｇａｃｔａｔｔａｃｔｇｔｃａａｔｃａｇｃａｇａｃａｇｔａｇｔｇｇｔａｃｔｔａｔｇｔｇｇｔｇｔｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｃｃｔａ （配列番号４２）

【0064】

ＴＲＬ１２３２の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｃｔｇａｇｇｔｇａａｇａａｇｃｃｔｇｇｇｇｃｃｔｔａｇｔｇａａｇｇｔｃｔｃｃｔｇｃａａｇｇｃｔｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔｔｃａｇｃｇｇｃｔａｃｔａｔａｔｇｃａｃｔｇｇｇｔｇｃｇａｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｇａｃａａｇｇｇｃｔｔｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇａｔｇｇａｔｃａａｃｃｃｔａａｇａｇｔｇｇｔｇｇｃａｃａａａｇｔａｔｇｃａｃａｇａａｇｔｔｔｃａｇｇｇｃｃｇｇｇｔｃａｃｃａｔｇａｃｃａｇｇｇａｃａｃｇｔｃｃａｔｃａｇｃａｃａｇｃｃｔａｃａｔｇｇａｇｔｔｇａｇｃａｇｇｃｔａａｇａｔｃｔｇａｃｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔｇｔａｔｔｔｃｔｇｔｇｃｇａｇａｇｇｃｇｇａｃｃｔｔｃａａａｔｔｔｇｇａａｃｇａｔｔｔｔｔｇｇａｇａｇｇｔｔａｃａａｃｃｃｃｇｃｔａｃａｇｔｔａｃｇａｃｇａｃａａｇｔａｔｇｃｔａｔｇｇａｃｇｔｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａｃｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号４３）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｇｇｃａｃｃｃｔｇｔｃｔｔｔｇｔｃｔｃｃａｇｇｇｇｃａａｇａｇｃｃａｃｃｃｔｃｔｃｃｔｇｃａｇｇｇｃｃａｇｔｃａｇａｇｔｇｔｔａｇｃａｇｃａｔｃｔａｔｔｔａｇｃｃｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａａｃｃｔｇｇｃｃａｇｇｃｔｃｃｃａｇｇｃｔｃｃｔｃａｔｃｔｔｔｇｇｔｇｃａｔｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｃｔｇｇｃａｔｃｃｃａｇａｃａｇｇｔｔｃａｇｔｇｇｃａｇｔｇｇｇｔｃｔｇｇｇａｃａｇａｃｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇａｃｔｇｇａｇｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃａｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｃａｇｃａｇｔａｔｇｇｔａｇｃｔｃａｃｃｇｔａｃａｃｔｔｔｔｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇｇａｇａｔｃａａａｃｇａａ （配列番号４４）

【0065】

ＴＲＬ１２４２の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｔｇｇａａｃａｇａａｇｔｇａａａａａｇｃｃｃｇｇｇｇａｇｔｃｔｃｔｇａａｇａｔｃｔｃｃｔｇｔｇａｇｇｇｔｔｃｔｃｇａｔａｃａａｃｔｔｔｇｃｃａｇｇｔａｃｔｇｇａｔｃｇｇｃｔｇｇｇｔｇｃｇｃｃａｇａｔｇｃｃｃｇｇａａａａｇｇｃｃｔｇｇａｃｔｇｇａｔｇｇｇｇａｔｃａｔｃｔａｔｃｃｔｇｇｔｇａｃｔｃｃｇａｔａｃｃａｇａｔａｃａｇｃｃｃｇｔｃｃｔｔｃｃａａｇｇｃｃａｇｇｔｃａｇｃａｔｃｔｃａｇｃｃｇａｃａａｇｔｃｃａｔｃａｇｔａｃｃｇｃｃｔａｃｃｔｇｃａｇｔｇｇａａｃａｇｃｃｔｇａａｇｇｃｃｔｃｇｇａｃａｃｃｇｃｃａｔｇｔａｔｔａｔｔｇｔｇｃｇａｇａｃｔｔｇｇｇａｇｃｇａｇｃｔｔｇｇａｇｔｇｇｔｃｔｃｔｇａｔｔａｔｔａｃｔｔｔｇａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇａａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号４５）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇｔｇｔｔｇａｃｔｃａｇｔｃｔｃｃａｇａｃｔｃｃｃｔｇｇｃｔｇｔｇｔｃｔｃｔｇｇｇｃｇａｇａｇｇｇｃｃａｃｃａｔｃａａｃｔｇｃａａｇｔｃｃａｇｃｃａｇａｇｔｇｔｔｔｔａｇａｃａｇｇｔｃｃａａｃａａｔａａｇａａｃｔｇｔｇｔａｇｃｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａａｃｃｇｇｇａｃａｇｃｃｔｃｃｔａａａｃｔｇｃｔｃａｔｔｔａｃｃｇｇｇｃｔｇｃｔａｃｃｃｇｇｇａａｔｃｃｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｔｃｇａｔｔｃａｇｔｇｇｃａｇｃｇｇｇｔｃｔｇｇｇａｃａｇａｃｔｔｃａｇｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇｃｃｔｇｃａｇｇｃｔｇａａｇａｔｇｔｇｇｃａｇｔｔｔａｔｔｔｃｔｇｔｃａｇｃａａｔａｔｔａｔａｇｔａｔｔｃｃｇａａｃａｃｔｔｔｔｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇｇａｇａｔｃａａａｃｇａ （配列番号４６）

【0066】

ＴＲＬ１２４５の可変領域をコードするヌクレオチド配列は次のとおりである：
重鎖：
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｔｇｇｔｃａａｇｇｃｔｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｔａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｃｔｔｃａｇｃｇａｃｔａｃｔａｃａｔｇｔｃｃｔｇｇａｔｔｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇａｔｔｔｃａｔｔｔａｔｔａｇｔａｇｔａｇｔｇｇｔｇａｔａｃｃａｔａｔｔｔｔａｃｇｃａｇａｃｔｃｔｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃａｇｇｇａｃａｇｃｇｃｃａａｇａａｃｔｃａｃｔｇｔａｔｃｔｔｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａａａｇｔｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇｇａａｇｇｇｇｇｔｇｔｃｃｇａｃｇａｇｇａａｃｔａｃｔｇｃｇｃｔｔｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇａａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号４７）；
軽鎖：
ｇａｔａｔｃｇｔｇｃｔｇａｃｔｃａｇｇａｃｃｃｃｔｃｇｇｔｇｔｃａｇｔｇｔｃｃｃｃａｇｇａｃａａａｃｇｇｃｃａｇｇａｔｃａｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇａｇａｔｇｃａｔｔｇｃｃａａａａａａａｔａｔｇｃｔｔａｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｔｃａｇｇｃｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｔａｔｇａｇｇａｃａｃｃａａａｃｇａｃｃｃｔｃｃｇｇｇａｔｃｃｃｔｇａｇａｇａｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａｇｃｔｃａｇｇｇａｃａｇｔｇｇｃｃａｃｃｔｔｇａｃｔａｔｃａｇｔｇｇｇｇｃｃｃａｇｇｔｇｇａｇｇａｔｇａａｇｃｔｇａｃｔａｃｔａｔｔｇｔｔａｃｔｃａａｃａｇａｃａｇｃａｇｃｇｇｔａａｔｃａｇａｇｇｇｔａｔｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｃｃｔａ （配列番号４８）

【0067】

実施例２
親和性の測定
アッセイ法の実施には、約１ｍｇのＩＨＦを必要とした。ＩＨＦを細菌において発現させるのは困難である（それは遺伝子調節に係る二重機能を有しており、高レベルを発現する細菌に毒性をもたらすからである）。したがって、ｍＡｂ探索に十分な量の物質を細菌供給源から取得することは、困難（かつ高価）である。そのため、該タンパク質をＨＥＫ２９３（哺乳動物）細胞において発現させ、精製を容易にするためにポリヒスチジンタグを用いた。黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ （Ｓａ））、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ （Ｐａ））、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ （ＫＰ））およびインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ （Ｈｉ））からのホモログは、すべてこの方法で調製した。これらの４種は、ＤＮＡＢＩＩファミリーの配列の多様性のかなりの部分にわたっているので、特に有用である。

【0068】

ＴＲＬ２９５は、インフルエンザ菌のＩＨＦペプチドに高い親和性で結合し、さらに追加の細菌種からのＩＨＦに結合することが示された。

【0069】

以下の表は、さまざまな細菌種由来の種々のＩＨＦおよびＨＵタンパク質のインフルエンザ菌に対する同一性の程度を示している。

【0070】

【表1】

【0071】

さらに、ＴＲＬ２９５の高親和性結合は、以下に示すように、ｐＨが生理的ｐＨ（ｐＨ７．５）からｐＨ４．５に低下したときでさえ、保持されることが示された。

【0072】

【表2】

【0073】

細菌は、免疫系の攻撃を阻止する方法として、局所微小環境のｐＨを低下させる乳酸を分泌することが多いことから、この結果は重要である。

【0074】

以下の表は、種々のＤＮＡＢＩＩタンパク質の結合を測定するためのＥＬＩＳＡアッセイを行った結果を示す。数字は、ＴＲＬ１０６８との比較のために有用なＯＤ値を表す−より高い数値はより高い結合親和性を表す。ＴＲＬ１０６８は、４種すべてのホモログに対して同様の結合を示すが、ＢＳＡに対しては低い結合を示し、ＴＲＬ１２１５も同様である。略語は次のとおりである：
Ｈｉ＝インフルエンザ菌；Ｋｐ＝肺炎桿菌；
Ｐａ＝緑膿菌；Ｓａ＝黄色ブドウ球菌

【0075】

【表3】

【0076】

標的タンパク質に対するＴＲＬ１０６８の親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ社製Ｏｃｔｅｔ（商標）バイオセンサモデルＱＫ（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ； Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ， ＣＡ）を用いて直接測定し、オン速度とオフ速度の比を測定する標準的な方法によりＫｄを求めた（Ｈｏ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＰｈａｒｍ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２０１３）４８−５１）。その値は次のとおりであった：黄色ブドウ球菌（Ｓａ）に関して１ｎＭ、緑膿菌（Ｐａ）に関して１ｎＭ、肺炎桿菌（Ｋｐ）に関して７ｎＭ、およびインフルエンザ菌（Ｈｉ）に関して３５０ｎＭ。

【0077】

実施例３
集中的ｍＡｂ探索のためのエピトープ選択
抗原性（抗体応答の誘導）の可能性を分析するためのコンピュータによる方法は、当技術分野で公知である（ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（２００８）９：５１４中でＪ．Ｐｏｎｏｍａｒｅｎｋｏらによってレビュー）。これらの発表された方法の改良法を用いて、インフルエンザ菌由来のＩＨＦについて、プロテイン・データ・バンクで見出された公開構造（ｐｄｂ １ＯＷＦ）に基づく構造モデルから可能性のあるエピトープのマップを作成した（図１Ｂ）。図１Ａの表示では、それぞれ１１アミノ酸セグメントの中点の残基に数値を割り当てた。０．９以上の数値は、抗体結合を起こす可能性が高い領域を示す。

【0078】

３つの領域が抗体によって認識される可能性が高いとして同定された：領域１０−２５、５６−７８、および８６−９６。

【0079】

図２に示すように、ＩＨＦタンパク質の残基５６−７８の領域は、複数の臨床的に重要な細菌種間で実質的に保存されている。複数の種由来のＩＨＦの構造モデリングから、相同性は、特にＤＮＡ結合領域において、高いことが確認された（Ｓｗｉｎｇｅｒ，Ｋ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００４）１４：２８−３５）。この最適な領域と部分的にしか重複しないペプチドは、関連する三次元構造に自然発生的に折りたたまれにくく、かつ、その立体構造に固定するために化学的に架橋することもより困難である。このようにして天然のタンパク質に忠実となるように最適化することは、ｍＡｂ探索および免疫原としての該ペプチドの使用のどちらにも有利である。

【0080】

上述したように、このようにして同定されたエピトープは、インフルエンザ菌ＩＨＦの１０−２５番目：ＩＥＹＬＳＤＫＹＨＬＳＫＱＤＴＫ （配列番号４９）；インフルエンザ菌ＩＨＦの５６−７８番目：ＲＤＫＳＳＲＰＧＲＮＰＫＴＧＤＶＶＡＡＳＡＲＲ （配列番号５０）；およびインフルエンザ菌ＩＨＦの８６−９６番目：ＱＫＬＲＡＲＶＥＫＴＫ （配列番号５１）である。

【0081】

図３Ａは、ＤＮＡと複合体化したＩＨＦ二量体のコンピュータによる構築を示す。本発明のＢ細胞エピトープは図３Ｂに示される。図３Ａは、結合した場合、エピトープがＤＮＡによって部分的にマスクされることを示す。しかし、露出した場合には、該タンパク質のこれらの部分は、それらに結合可能な高親和性の抗体を生成させることができ、バイオフィルムの形成を防止し、またはＤＮＡＢＩＩタンパク質が抗体によって隔離されるので確立されたバイオフィルムの構造的完全性を失わせることが可能である。ＤＮＡＢＩＩタンパク質上の他の部位もまた、バイオフィルムの構成要素に対する該タンパク質の親和性と比較して、より高い親和性のｍＡｂによる結合により、バイオフィルムから該タンパク質を引き抜きくことを達成するのに十分でありうる。

【0082】

実施例４
インビトロ生物活性評価
ＴＲＬ１０６８は、Ｉｎｎｏｖｏｔｅｃｈ社（Ｅｄｍｏｎｔｏｎ，Ａｌｂｅｒｔａ；カナダ）からの市販のアッセイを用いて生物活性について試験した。バイオフィルムは、緑膿菌（ＡＴＣＣ ２７８５３）または黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ ２９２１３）を含む培地に曝した９６ウェルマイクロプレートフォーマットのピン上に複数を複製するよう形成させた。バイオフィルムの形成後、ピンを、非免疫性のアイソタイプ対照ｍＡｂ、または１．２μｇ／ｍＬ（約１０ｎＭ）のＴＲＬ１０６８で異なるウェルを１２時間処理した。図４の処理表面の走査型電子顕微鏡写真から明らかなように、ＴＲＬ１０６８は、バイオフィルムを溶解させるのに非常に有効であった。これらの結果から、このｍＡｂはバイオフィルムを分解することができ、それによって付着した細菌を除去することが立証される。

【0083】

実施例５
インビボ生物活性評価
いくつかの動物モデルが活性の評価のために存在する。例えば、バーゼル大学病院（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｂａｓｅｌ（スイス））では、移植補綴物上のバイオフィルムのためのモデルは、テフロン（登録商標）組織ケージ（Ａｎｇｓｔ＋Ｐｆｉｓｔｅｒ社；チューリッヒ，スイス）をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下移植し、次いで該マウスを２週間治癒させることを含む。ケージから流体を抽出することによってケージの無菌性を確認した後、その部位に、周術期感染を模倣する接種材料として４×１０^３ＣＦＵ（コロニー形成単位）の黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ ３５５５６）を感染させる。２４時間後、その部位に薬物を注入する。７２時間後、マウスを屠殺して、組織ケージを回収する。血液寒天上にプレーティングすることによって生菌をカウントする（Ｎｏｗａｋｏｗｓｋａ Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ（２０１３）５７：３３３）。

【0084】

２番目の例は、心臓弁上にバイオフィルムを誘導することを含むモデルであり、自然発症弁心内膜炎を模倣するものである（Ｔａｔｔｅｖｉｎ Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ（２０１３）５７：１１５７）。ニュージーランド白ウサギに麻酔をかける。右頸動脈を切断し、大動脈弁を横切ってポリエチレンカテーテルを配置し、所定の位置に固定する。２４時間後、１ｍＬの生理食塩水と８×１０^７ＣＦＵの黄色ブドウ球菌をカテーテルから注入すると、動物の９５％においてバイオフィルム感染を誘導する。薬物（抗バイオフィルムおよび抗生物質）を静脈内投与し、４日後に組織病理および血中細菌レベルにより有効性を評価する。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]