特許 6948774 ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6948774

(24)【登録日】2021年9月24日

(45)【発行日】2021年10月13日

(54)【発明の名称】ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/366 20060101AFI20210930BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20210930BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20210930BHJP

   A61K 8/49 20060101ALI20210930BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20210930BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20210930BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/366

   A61P43/00 105

   A61P3/04

   A61K8/49

   A61Q19/00

   A23L33/10

【請求項の数】3

【全頁数】14

(21)【出願番号】特願2016-177083(P2016-177083)

(22)【出願日】2016年9月9日

(65)【公開番号】特開2018-39769(P2018-39769A)

(43)【公開日】2018年3月15日

【審査請求日】2019年8月19日

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】000002901

【氏名又は名称】株式会社ダイセル

(74)【代理人】

【識別番号】110002860

【氏名又は名称】特許業務法人秀和特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】古旗 賢二

(72)【発明者】

【氏名】中谷 祥恵

(72)【発明者】

【氏名】工藤 眞丈

【審査官】 高橋 樹理

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１４−５０１７６４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Mol. Nutr. Food Res.，2016年05月，Vol.60，p.1129-1138

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／００

Ａ６１Ｋ ８／００

Ａ２３Ｌ ３３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥ、ウロリチンＭ３、ウロリチンＭ４、ウロリチンＭ５、ウロリチンＭ６、ウロリチンＭ７、及びイソウロリチンＡからなる群より選択される１種以上のウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制剤（ただし、肥満、新陳代謝速度低下、メタボリックシンドローム、糖尿病、心血管疾患、高脂血症、神経変性疾患、認知障害、気分障害、ストレス及び不安障害の治療又は予防の用途と、脂肪蓄積阻害の用途と、体重管理の用途と、筋機能又は精神能力の向上の用途を除く。）。

【請求項2】

前記ウロリチン類がウロリチンＡである、請求項１に記載の前駆脂肪細胞分化抑制剤。

【請求項3】

ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥ、ウロリチンＭ３、ウロリチンＭ４、ウロリチンＭ５、ウロリチンＭ６、ウロリチンＭ７、及びイソウロリチンＡからなる群より選択される１種以上のウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制用飲食品（ただし、肥満、新陳代謝速度低下、メタボリックシンドローム、糖尿病、心血管疾患、高脂血症、神経変性疾患、認知障害、気分障害、ストレス及び不安障害の治療又は予防の用途と、脂肪蓄積阻害の用途と、体重管理の用途と、筋機能又は精神能力の向上の用途を除く。）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は前駆脂肪細胞分化抑制剤に関し、更に詳しくは成熟脂肪細胞数を抑制し全身及び／又は局所の過剰な脂肪の蓄積を防ぐことにより肥満を解消及び／又は防止する飲食品、医薬、サプリメントまたは化粧料に関する。

【背景技術】

【0002】

肥満はからだの脂肪組織及び種々の臓器における異常な脂肪沈着によるものと考えられている。また、肥満により高脂血症を発症し、さらには高血圧、糖尿病、そして動脈硬化を発症する確率が高くなることが知られている。

【0003】

肥満は、体質的因子、食餌性因子、精神的因子、中枢性因子、代謝性因子、運動不足などが要因となり、結果的に摂取カロリーが消費カロリーを上回り、脂肪が蓄積して起こると言われている。体内では、生体内における個々の脂肪細胞に蓄積している脂肪、すなわちトリグリセリド量が増加し細胞が肥大化している。また近年、成人期以降でも脂肪細胞数が増加することが明らかとなり、前駆脂肪細胞から成熟脂肪細胞への分化を抑制し、成熟脂肪細胞数の増加を抑制することや、成熟脂肪細胞の脂肪蓄積を抑制することにより肥満の進行を抑え、肥満を改善させることが期待される。

【0004】

脂肪細胞数の増加を抑制し抗肥満効果を示す食品、医薬、サプリメントまたは化粧料はあまり多くはなく、例えば前駆脂肪細胞分化抑制ペプチドを有効成分とするもの（特許文献１）や、活性化乳清を有効成分とするもの（特許文献２）がある。またω‐３系高度不飽和脂肪酸を有効成分として皮膚外用剤に適用させる（特許文献３）試みがある。

【0005】

一方、ウロリチン類と呼ばれるポリフェノールが存在することが知られている。ウロリチンＡに代表されるウロリチン類は、ザクロ、ラズベリー、ブラックベリー、クラウドベリー、イチゴ、クルミなどに含まれるエラジタンニンに由来するエラグ酸の代謝物として知られている。エラジタンニンは加水分解性タンニンに分類され、摂取されると体内で加水分解され、エラグ酸に変換されることが知られている。
エラジタンニンやエラグ酸は体内の腸管吸収性は非常に低いと言われているが、これらが摂取された際、ヒト結腸微生物叢によって更に代謝されることによってウロリチン類に変換されることが知られている。このようにして生成されるウロリチン類は生体内で最も重要な化合物の１つである。近年、ウロリチン類を生成する腸内細菌としてGordonibacter urolithinfaciensが報告されている（非特許文献１）。

【0006】

生体におけるウロリチン類の生成については、ゲラニインなどのエラジタンニンを摂取させた後、尿中のウロリチン類を分析することによって、エラジタンニンの生体内における代謝物としてウロリチン類が生じることがラットを用いた試験で報告されている（非特許文献２）。また、非特許文献３では、ヒトにおいて、プニカラジンを主としたエラジタンニンを含むザクロ抽出物を摂取後、尿中においてウロリチン類縁体が検出され、特にウロリチンＡが主な代謝物として機能することが報告されている。このほかにも、ウロリチンＡには抗酸化作用や抗炎症作用など様々な有効性があることが報告されており（非特許文献４〜６）、肥満、新陳代謝速度低下、メタボリックシンドローム、糖尿病、高脂血症などの症状の治療または予防のためのウロリチンＡを含有する食品等も報告されている（特許文献４）。しかし、ウロリチン類が前駆脂肪細胞の分化を抑制する作用は知られていない。
また、ウロリチン類を用いてミトコンドリア活性を亢進させることにより肥満を防止・改善すること（特許文献４）や、ウロリチン類を用いてオートファジーを亢進させ、脂肪
肝を予防・治療する試み（特許文献５）もある。しかしながら、未だ十分な効果がなく、新規な前駆脂肪細胞分化抑制剤が望まれている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特開平６−２９３７９６号公報

【特許文献2】特開２００２−３７７３８号公報

【特許文献3】特開平１１−１３０６５６号公報

【特許文献4】特表２０１４−５０１７６４号公報

【特許文献5】特表２０１５−５２３３６２号公報

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 64, 2346-2352 (2014)

【非特許文献2】J. Agric. Food Chem. 56(2), 393-400 (2008)

【非特許文献3】Mol. Nutr. Food Res. 58, 1199-1211 (2014)

【非特許文献4】Biosci. Biotechnol. Biochem. 76(2), 395-399 (2012)

【非特許文献5】J. Agric. Food Chem. 60(36), 8866-8876 (2012)

【非特許文献6】Mol. Nutr. Food Res. 55, S35-S43 (2011)

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明の課題は、効果的で安全性の高い前駆脂肪細胞分化抑制剤、ならびに、前駆脂肪細胞の分化抑制効果を奏する飲食品、医薬、サプリメントおよび化粧料を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明者は、ウロリチン類が効果的で安全性の高い前駆脂肪細胞分化抑制活性を有することを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は以下の通りである。
〔１〕ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制剤。
〔２〕前記ウロリチン類がウロリチンＡである、〔１〕に記載の前駆脂肪細胞分化抑制剤。
〔３〕ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制用飲食品。
〔４〕ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制用化粧料。

【発明の効果】

【0011】

本発明によれば、効果的で安全性の高い前駆脂肪細胞分化抑制剤、ならびに、前駆脂肪細胞の分化抑制効果を奏する飲食品、医薬、サプリメントおよび化粧料を提供できる。これらは効果的で高い安全性の下、前駆脂肪細胞から成熟脂肪細胞への分化を抑制する。体内における成熟脂肪細胞数の増加が抑制されることに伴い、体内に蓄積される脂肪の量が小さく抑えられることから、これらは肥満症などの治療、改善、予防に寄与し得る。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】本発明の一実施態様における、ウロリチンＡ濃度と波長５１０ｎｍにおける吸光度との関係を示すグラフである。

【図2】本発明の一実施態様における、ウロリチンＡ濃度と波長４４０ｎｍにおける吸光度との関係を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本発明は、ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制剤に係る第一の実施態様を含む。
本発明の第一の実施態様は、下記一般式（１）で表されるウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制剤である。

【0014】

【化1】

【0015】

（ウロリチン類）
第一の実施態様におけるウロリチン類は特に限定されないが、その構造が上記一般式（１）で表される物質である。また、表１に示すように、ウロリチン類は化学式におけるＲ１〜Ｒ６によって、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥ、ウロリチンＭ３、ウロリチンＭ４、ウロリチンＭ５、ウロリチンＭ６、ウロリチンＭ７、及びイソウロリチンＡなどを含む。

【0016】

【表1】

【0017】

このうち、前駆脂肪細胞分化抑制作用が高いことから、ウロリチンＡが好ましい。

【0018】

ウロリチン類を得る方法は特段限定されず、市販されているものを用いてもよく、化学合成により合成してもよい。
市販のウロリチン類としては、例えば、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、
ウロリチンＤ、ウロリチンＥ（Ｄａｌｔｏｎ Ｐｈａｒｍａ社製）などを挙げることができる。
また、化学合成による合成方法としては常法に従うことができ、例えば、本明細書の実施例で説明するように、２−ブロモ−５−メトキシ安息香酸と塩化アルミニウムとを原料に用いてウロリチンＡを合成する方法が挙げられる。

【0019】

また、植物からエラジタンニンの一種であるプニカラジンを抽出し、これをエラグ酸に加水分解した後、もしくはエラグ酸を抽出し、微生物を用いてウロリチン類に変換してもよい。
植物の種類は特段限定されず、ザクロ、ラズベリー、ブラックベリー、クラウドベリー、ボイセンベリー、イチゴ、クルミ、ゲンノショウコ等が挙げられる。このうち、エラジタンニン及び／又はエラグ酸を高含有していることから、ザクロ、ボイセンベリー、ゲンノショウコが好ましく、ザクロがより好ましい。
これらの植物は、いずれか１種のみを用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。また、該植物からの抽出方法及び抽出条件は特段限定されず、常法に従えばよい。例えば、水抽出、熱水抽出、温水抽出、アルコール抽出、超臨界抽出等の公知の抽出方法を用いることができる。

【0020】

溶媒抽出を行う場合、溶媒としては、例えば、水；メタノール、エタノール等の低級アルコールや、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール等のアルコール類（無水、含水の別を問わない）；アセトン等のケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルエステル等のエステル類、キシレン等が挙げられ、好ましくは水、エタノール等である。これらの溶媒は、いずれか１種のみを用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
抽出したプニカラジンなどのエラジタンニンをエラグ酸に加水分解する方法としては特段限定されないが、酸、酵素、微生物によって加水分解する方法が挙げられる。
微生物を用いてエラグ酸をウロリチン類に変換する方法としては特段限定されないが、例えば、Food Funct., 5, 8, 1779-1784 (2014)に記載にされている公知の方法を用いる
ことができる。

【0021】

得られたウロリチン類をそのままの状態で使用することもできるが、乾燥させて粉末状のものを用いてもよい。また、必要に応じて、得られたウロリチン類に精製、濃縮処理等を施してもよい。精製処理としては、濾過又はイオン交換樹脂や活性炭カラム等を用いた吸着、脱色といった処理を行うことができる。また、濃縮処理としては、エバポレーター等の常法を利用できる。

【0022】

また、得られたウロリチン類（又は精製処理物若しくは濃縮物）を凍結乾燥処理に供して粉末化する方法、デキストリン、コーンスターチ、アラビアゴム等の賦形剤を添加してスプレードライ処理により粉末化する方法等、公知の方法に従って粉末化してもよい。さらにその後に、必要に応じて純水、エタノール等に溶解して用いてもよい。

【0023】

ウロリチン類が、前駆脂肪細胞の分化抑制活性を有することは、従来から全く知られておらず、本発明により得られた新知見である。
ウロリチン類は、高い安全性で卓越した前駆脂肪細胞の分化抑制活性を有しており、前駆脂肪細胞分化抑制、脂肪蓄積阻害、肥満症の治療、肥満症の改善、肥満症の予防などの用途に好ましく用いられ、ウロリチン類を含有する好ましい形態としては、飲食品、医薬、サプリメント及び化粧料である。以下では、前駆脂肪細胞分化抑制用途の場合について記載するが、上記した他の用途の場合でも同様である。また、肥満症のほかには、前駆脂肪細胞分化抑制により予防又は改善される症状や疾患が挙げられ、例えば、高血糖、高脂血症、糖尿病、動脈硬化症などの生活習慣病が挙げられる。

【0024】

（前駆脂肪細胞分化抑制剤）
本実施態様に係る前駆脂肪細胞分化抑制剤とは、前駆脂肪細胞から成熟脂肪細胞への分化を抑制するものである。体内における成熟脂肪細胞数の増加が抑制されることで、体内に蓄積される脂肪の量が小さく抑えられることから、肥満症を治療し、改善し、予防するものである。前駆脂肪細胞分化抑制活性は公知の方法に従って評価することができる。例えば、Oil Red O 染色液で染色し、蛍光測定法で定量することにより評価できる。
本実施態様に係る前駆脂肪細胞分化抑制剤はウロリチン類を含有することから、上記と同様に、脂肪蓄積阻害、肥満症の治療、肥満症の改善、肥満症の予防などの用途に好ましく用いられ、その好ましい形態としては、飲食品、医薬、サプリメント及び化粧料である。

【0025】

本実施態様に係る前駆脂肪細胞分化抑制剤は、上記したウロリチン類のうち一種を含有してもよく、複数種を含有してもよい。また、ウロリチン類を単独で含有してもよいが、ウロリチン類以外に公知の賦形剤、香料、着色料、乳化剤、安定化剤、増粘剤、酵素、防腐剤、滑沢剤、界面活性剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、結合剤、吸収促進剤、吸着剤、保湿剤、可溶化剤、保存剤、風味剤、甘味剤等を、本実施態様の効果を損なわない範囲で必要に応じて配合することができる。

【0026】

本実施態様に係る前駆脂肪細胞分化抑制剤全量に対するウロリチン類の含有量は、本実施態様による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．００００１質量％以上、好ましくは０.０００１質量％以上、より好ましくは
０．００１質量％以上であり、また、通常２０質量％以下、好ましくは３質量％以下、より好ましくは１質量％以下である。
また、通常４０μＭ以上、好ましくは５０μＭ以上、より好ましくは６０μＭ以上であり、細胞生存率を顕著に低下させないことから、通常１０００μＭ以下、好ましくは５００μＭ以下、より好ましくは２００μＭ以下である。

【0027】

（医薬）
ウロリチン類を前駆脂肪細胞分化抑制用医薬の素材として用いる場合、医薬としての適用方法は、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。

【0028】

前駆脂肪細胞分化抑制用医薬全量に対するウロリチン類の含有量は、所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。

【0029】

有効投与量は、患者の年齢、体重、症状、患者の程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の阻害活性の強さなどにより、適宜選択・決定されるが、例えば、経口投
与の場合、一般に１日当たり、ウロリチン類の総量として、０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重程度、１日に数回に分けて投与してもよい。

【0030】

（飲食品）
ウロリチン類を前駆脂肪細胞分化抑制用飲食品の素材として用いる場合、一般の飲食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品、食品添加物等（これらには飲料も含まれる。本明細書において同じ。）として使用できる。飲食品の形態としては、ウロリチン類を含有する植物自体や動物自体ではなく、例えば、適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。

【0031】

ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制用飲食品は、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を主成分として使用することができる。タンパク質としては、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、及びこれらの加水分解物、バターなどが挙げられる。糖質としては、糖類、加工澱粉（デキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン、乳清ミネラルなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用してもよく、合成品及び／又はこれらを多く含む飲食品を用いてもよい。

【0032】

ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制用飲食品は、常法に従って製造することができる。また、ウロリチン類の飲食品への配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。さらに、必要に応じて、瓶、袋、缶、箱、パック等の適宜の容器に封入することができる。

【0033】

前駆脂肪細胞分化抑制用飲食品全量に対するウロリチン類の含有量は、所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。

【0034】

有効摂取量は、摂取者の年齢、体重、症状、摂取者の程度、摂取経路、摂取スケジュール、加工形態、素材の阻害活性の強さなどにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一般に１日当たり、ウロリチン類の総量として、０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重程度、１日に数回に分けて摂取してもよい。

【0035】

（サプリメント）
サプリメントとは、dietary supplementからなる飲食品区分の１つであり、本明細書では、前駆脂肪細胞分化抑制作用等を発揮する機能補助物質をいう。
本実施態様に係る前駆脂肪細胞分化抑制剤をサプリメントの素材として用いる場合、固形物、ゲル状物、液状物の何れの形態とすることができる。サプリメントの形態としては、例えば、各種加工飲食品、粉末、錠剤、丸剤、カプセル、ゼリー、顆粒等の形態にすることができる。

【0036】

ウロリチン類を前駆脂肪細胞分化抑制用サプリメントの素材として用いる場合、デキストリン等の賦形剤、ビタミンＣ等の保存剤、バニリン等の嬌味剤、ベニバナ色素等の色素、単糖、オリゴ糖および多糖類（例、グルコース、フルクトース、スクロース、サッカロース、およびこれらを含有する糖質）、酸味料、香料、油脂、乳化剤、全脂粉乳、または寒天などの添加剤を含有していてもよい。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用してもよく、合成品及び／又はこれらを多く含んでもよい。

【0037】

ウロリチン類を前駆脂肪細胞分化抑制用サプリメントの素材として用いる場合、常法に従って製造することができる。また、サプリメントへの配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。さらに、必要に応じて、瓶、袋、缶、箱、パック等の適宜の容器に封入することができる。

【0038】

前駆脂肪細胞分化抑制用サプリメント全量に対するウロリチン類の含有量は、上記効果が発揮される限り特段限定されないが、ウロリチン類として、総量で、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。

【0039】

（化粧料）
ウロリチン類を前駆脂肪細胞分化抑制用化粧料の素材として使用する場合、例えば、ウロリチン類を小麦胚芽油あるいはオリーブ油に添加して前駆脂肪細胞分化抑制剤含有組成物とし、これを化粧料素材として使用することができる。ウロリチン類の添加量は、特に限定されるものではないが、一例としてあげると、小麦胚芽油あるいはオリーブ油に対して、ウロリチン類の総量として、０．１質量％以上６０質量％以下、好ましくは０．５質量％以上５０質量％以下である。
また、ウロリチン類を直接、化粧料成分として使用し、前駆脂肪細胞分化抑制作用を有する化粧料を製造することができる。

【0040】

化粧料としては特に限定されるものではないが、機能面からは、例えばフェイス又はボディ用乳液、化粧液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、シートなどが好ましい。このような化粧料は、常法に従って製造することができる。ウロリチン類の添加量は、特に限定されるものではないが、一例としてあげると、前駆脂肪細胞分化抑制用化粧料全量に対して、ウロリチン類の総量として、０．０１質量％以上２０質量％以下である。

【0041】

ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制用化粧料は、常法に従って製造することができる。また、化粧料への育毛剤の配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。さらに、必要に応じて、瓶、袋、缶、スプレー缶、噴霧容器、箱、パック等の適宜の容器に封入することができる。

【0042】

また、一部上記と重複するが、通常用いられる公知の成分を適宜加えて用いることができる。
例えば、アニオン性界面活性剤（脂肪酸石鹸、スルホン酸塩型アニオン性界面活性剤、硫酸エステル型アニオン性界面活性剤、リン酸エステル型アニオン性界面活性剤、アシルメチルタウリン塩、モノアルキルリン酸塩、アシルグルタミン酸塩、イセチオン酸エステル塩等）、カチオン性界面活性剤（アミン塩型カチオン性界面活性剤、第四アンモニウム
型カチオン性界面活性剤（テトラアルキルアンモニウム型、ピリジニウム型））、非イオン性界面活性剤（グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリグリセリン脂肪酸エステル等）、両性界面活性剤（イミダゾリン型、ベタイン型、アミノ酸型）、フッソ系界面活性剤、シリコーン系界面活性剤等の天然、合成界面活性剤、
アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、アラビアガム、キサンタンガム、ペクチン、トラガント、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カチオン化セルロース、カチオン化デキストラン、カチオン化デキストリン、キトサン、カチオン化ビニルピロリドンポリマー、塩化Ｎ，Ｎ−ジメチル−３，５−メチレンピペリジニウムポリマー、乳タンパク、大豆タンパク、ゼラチン、卵タンパク、カゼインナトリウム、ホエータンパク等の水溶性高分子、
イチョウ、ツボクサ、トウヤク、ニンジン、シコッピ、カイカ、インチコウ、ヤシャジツ、甘草分画物、ゴカヒ、センプクカ、ヒカイ、ユズリハ、カミツレ、マロニエ、エスシン、テルミナリア、ルスコゲニン、ブッチャーブルーム、コラ、ガラナ、マテ、コーヒー、カカオ、プレクトランタス、タンジン、ビスナガ、シリマリン、ロイコシアニン、オトギリ草、クマハゼ、シソ、オウゴン、ケイガイ、ローズマリー、セージ、タイム、ヨモギ、カワラヨモギ、ソウジュツ、セイヨウノコギリソウ、シコン、ウイキョウ、オウバク、ショウキョウ、トウキ、センキュウ、チンビ、カノコソウ、ビャクシ、トウヒ、芍薬、紅花、菖蒲、ブクリョウ、ハッカ等の植物成分、
コハク酸、フマル酸、クエン酸、ピルビン酸、グルクロン酸、２−ヒドロキシ酪酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、タルトロン酸、ピルビン酸メチル、ピルビン酸エチル、ビタミンＡ酸、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＤ、ビタミンＥ、オリゴペプチド、トラネキサム酸エステル等の活性成分、・多価アルコール、アミノ酸、ムコ多糖類、蛋白質、生体抽出物、発酵代謝物、多糖類、植物抽出物、リン脂質、セラミドなどの保湿剤、
油脂類（大豆油、ヌカ油、ホホバ油、アボガド油、アーモンド油、カカオ油、オリーブ油、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油およびミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸グリセリド等の合成トリグリセリド、ジグリセリド等）、ロウ類（カルナウバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等）、炭化水素類（流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、マイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、プリスタン等）、高級脂肪酸類（ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等）、高級アルコール類（ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール等）、エステル類（オクタン酸セチル、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレスチール等）、精油類（ハッカ油、ジャスミン油、シヨウ脳油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイ皮油、ベルガモット油、ミカン油、シヨウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、ペパーミント油、タイム油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン、テルペン系化合物等）、シリコーン油類等の油脂成分（エモリエント成分）、
炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、ホウ砂、硫酸ナトリウム、硫化ナトリウム、硝酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、り
ん酸ナトリウム、塩化カリウム、硫化カリウム、酸化カルシウム、酸化マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム等の無機塩類、
ホウ酸、メタケイ酸、無水ケイ酸等の無機酸類、
黄色４号、青色１号、黄色２０２号、クロロフィル、リボフラビン、紅花、クロシン、アントラキノン等の色素類、
香料類、
アクリル樹脂、スチレン樹脂、エポキシ樹脂、ナイロン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリテトラフルオロエタン等の高分子、これらの高分子のコポリマー、ケイ酸、ケイ酸カルシウム、天然ケイ酸アルミニウム、合成ケイ酸アルミニウム、ゼオライト、酸化チタン、タルク、カオリン、マイカ、ベントナイト等の微粉体、
硫黄、湯の花、鉱砂、雲母末、中性白土、いり糠、殺菌剤、防腐剤、
をはじめ、その他製剤上必要な成分などが挙げられる。

【0043】

（表示）
ウロリチン類を含有する前駆脂肪細胞分化抑制剤、前駆脂肪細胞分化抑制用飲食品、前駆脂肪細胞分化抑制用医薬、前駆脂肪細胞分化抑制用サプリメント、前駆脂肪細胞分化抑制用化粧料は、前駆脂肪細胞分化抑制のために用いられるものである旨の表示を付した飲食品、医薬、サプリメント、化粧料として販売することができる。
尚、必ずしも、「前駆脂肪細胞分化抑制のために用いられるものである旨」の表示である必要はなく、例えば、「前駆脂肪細胞分化抑制用」や「前駆脂肪細胞の分化を抑制する旨」等の表示であってもよく、さらに、前駆脂肪細胞分化抑制によって生じる効果の表示も含まれる。

【0044】

また、上記用途が表示される対象や媒体としては、例えば、商品等の本体をはじめ、包装、説明書、販促物（パネルやＰＯＰ、音声や動画を用いたもの等を含む。）、宣伝物（カタログやチラシ、パンフレット等を含む。）、営業資料（カタログやパンフレット、価格表、取引書類等を含む。）などが挙げられ、上記用途を表示できる対象や媒体であれば特段限定されない。

【0045】

さらに、前駆脂肪細胞分化抑制用飲食品には、一般的な飲食品のほか、例えば、健康食品、機能性食品、保健機能食品、特別用途食品、医薬部外品など、医薬品以外で健康の維持や増進を目的として摂取できる飲食品が含まれる。「健康食品」等の「食品」には「飲料」も含まれる。
健康食品としては、例えば、栄養補助食品、健康補助食品、美容飲食品の名称で提供される食品が挙げられる。また、保健機能食品とは、食品衛生法又は健康増進法により定義されるものであり、特定の保健の効果や栄養成分の機能、疾病リスクの低減などが表示できる。保健機能食品には、特定保健用食品（トクホ；条件付き特定保健用食品を含む。）及び栄養機能食品（トクホと異なり、個別に消費者庁長官の許可を受けている食品ではない。）が含まれる。
本発明における「表示」には、このような飲食品や医薬部外品としての表示が含まれる。

【実施例】

【0046】

以下に実施例を挙げて具体的に説明するが、これに限定されるものではない。本実施例において、作用効果の比較にはダネット検定を用いた。データは、平均値±ＳＤ（標準偏差）で表し、有意水準１％未満を有意差ありと判定した。

【0047】

（ウロリチン類の分析方法）
ウロリチン類の一例としてウロリチンＡを用いた場合を説明する。ウロリチンＡの分析
はＨＰＬＣを用いて行った。即ち、ウロリチンＡ（Ｄａｌｔｏｎ Ｆａｒｍａ社製）を適当な溶媒に溶解させて調製した溶液を下記のＨＰＬＣ条件下で分析し、純度（％）（Ａ）およびＨＰＬＣにおけるピーク面積値（Ｂ）を用いて、下記算出式（１）及び算出式（２）によりウロリチンＡのファクター及びサンプルのウロリチンＡ濃度を算出した。

【0048】

（ウロリチンＡのファクター算出式）
ウロリチンＡのファクター＝（Ｂ）／（ウロリチンＡの標準液の濃度（ｍｇ／Ｌ）×（Ａ）／１００） ・・・（１）
（サンプルのウロリチンＡ濃度算出式）
サンプルのウロリチンＡ濃度（ｍｇ／Ｌ）＝サンプル中のウロリチンＡのピーク面積値／ウロリチンＡのファクター ・・・（２）

【0049】

（分析条件）
分析カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−３（２５０×４．６ｍｍ）（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）
検出波長：３０５ｎｍ
移動相：水／アセトニトリル／酢酸 ＝ ７４／２５／１
カラム温度：４０℃
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
上記条件下、ウロリチンＡは保持時間を１６．５分とした。

【0050】

（ウロリチンＡの調製）
２−ブロモ−５−メトキシ安息香酸５ｇ（和光純薬工業株式会社製）と塩化アルミニウム１５ｇを１５０ｍＬのクロロベンゼン中で２．５時間還流した。冷却後、反応液を氷水に移し、２５０ｍＬのジエチルエーテルを用いて３回抽出を行った。得られた抽出液を減圧濃縮してジエチルエーテルを留去し、２−ブロモ−５−ヒドロキシ安息香酸４．２ｇを得た。得られた２−ブロモ−５−ヒドロキシ安息香酸３．９ｇとレゾルシノール３．９ｇ（東京化成工業株式会社製）を９ｍＬの４Ｍ ＮａＯＨ水溶液中で６０℃、３０分間加熱した。この反応液に１０％硫酸銅水溶液１．８ｍＬを加えた後、更に８０℃、１０分間の加熱を行った。生成した沈殿物をろ過によって回収し、ウロリチンＡの白色粉末を得た。

【0051】

＜前駆脂肪細胞分化抑制活性の評価＞
［脂肪蓄積率の測定］
（実施例１）
９６ウェルプレートに、３Ｔ３−Ｌ１細胞を１．５×１０^３細胞／ウェルで播種し、４８時間培養することでコンフルエントとした（０ｄａｙ）。その後、１μｇ／ｍＬ ＩＮＳ、１μＭ ＤＥＸ、０．５ｍＭ ＩＢＭＸ、Ｄ‐（＋）‐グルコース（ＳＩＧＭＡ社）を加えた培地（Dulbecco's Modified Eagle Medium （DMEM）（Gibco（登録商標），Thermo Fisher Scientific Inc.）に交換し、２日間分化誘導刺激を加えた（２ｄａｙ）。こ
のとき血清は、細胞の過剰な増殖を防ぐため、５％ウシ胎児血清に変更した。それ以降は通常の培養培地（DMEM）に１μｇ／ｍＬ ＩＮＳ、５％ウシ胎児血清、Ｄ‐（＋）‐グルコースを加えた培地に交換し、５日間培養した後、Ｏｉｌ Ｒｅｄ Ｏ 染色を行った（７ｄａｙ）。また、この５日間の培地交換は毎日行った。また、同様の方法で、最終濃度が１０、３０、又は１００μＭとなるようにウロリチンＡを−１ｄａｙから７ｄａｙまで継続的に添加した。
Ｏｉｌ Ｒｅｄ Ｏ染色液は、Ｏｉｌ Ｒｅｄ Ｏ（ＳＩＧＭＡ社）をイソプロパノール（Ｗａｋｏ社）に３０％の濃度で溶解させたものを原液とし、原液を純水で６０％に希釈したものを用いた。

【0052】

培養終了後、乾燥による細胞の剥離を防ぐため、ウェル中の培地を半量取り除き、取り
除いた量だけ１０％ホルマリン（Ｗａｋｏ社）を添加して、２０分間静置した。その後、１０％ホルマリンで２０分間静置することで細胞を固定し、純水によって２回洗浄した。純水で６０％に希釈したイソプロパノールを細胞に３分間馴染ませ、調製したＯｉｌ Ｒｅｄ Ｏ染色液を添加して６０分間静置した。６０分後、６０％イソプロパノール、純水の順に洗浄を行い、顕微鏡で観察を行った。その後、４８時間室温で乾燥させ、乾燥後１００％イソプロパノールを添加して６０分間静置し、染色した脂肪滴の抽出を行った。抽出した脂肪滴の定量として、Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ（日本モレキュラーデバイス株式会社）を用いて波長５１０ｎｍにおける吸光度を測定した。

【0053】

（比較例１）
ウロリチンＡを添加しなかったこと以外は実施例１と同様にした。

【0054】

試料無添加群の吸光度（比較例１）に対する試料添加群の吸光度（実施例１）の割合を百分率で求め、脂肪蓄積率（％）とした。得られた各試料の脂肪蓄積率を表２及び図１に示す。脂肪蓄積率の低いものほど、脂肪細胞の分化を抑制していると見ることができる。

【0055】

【表2】

【0056】

［細胞生存率の測定］
（実施例２）
９６ウェルプレートに、３Ｔ３−Ｌ１細胞を１．５×１０^３細胞／ウェルで播種し、２４時間培養した（−１ｄａｙ）。その後、最終濃度が１０、３０、又は１００μＭとなるように培地（DMEM）にウロリチンＡを添加し、２４時間後にＷＳＴ−１（Ｒｏｃｈｅ社）１０％含有血清培地（DMEM）に交換した。ＷＳＴ−１試薬添加から１時間後に、Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘを用いて波長４４０ｎｍにおける吸光度を測定した。

【0057】

（比較例２）
ウロリチンＡを添加しなかったこと以外は実施例２と同様にした。

【0058】

試料無添加群の吸光度（比較例２）に対する試料添加群の吸光度（実施例２）の割合を百分率で求め、細胞生存率（％）とした。得られた各試料の細胞生存率を表３及び図２に示す。ウロリチン濃度が１００μＭ以下であれば分化前の３Ｔ３−Ｌ１細胞に対して毒性がないことが少なくともわかった。

【0059】

【表3】

【産業上の利用可能性】

【0060】

本発明は、飲食品、医薬、サプリメント、化粧料等の製剤技術に適用できる。これらは、前駆脂肪細胞分化抑制、脂肪蓄積阻害、肥満症の治療、肥満症の改善、肥満症の予防等のために用いられる。

【図1】

【図2】