特許 6957455 ベータ細胞の複製及び／または生存の亢進

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6957455

(24)【登録日】2021年10月8日

(45)【発行日】2021年11月2日

(54)【発明の名称】ベータ細胞の複製及び／または生存の亢進

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/197 20060101AFI20211021BHJP

   A61K 31/5513 20060101ALI20211021BHJP

   A61K 31/5517 20060101ALI20211021BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20211021BHJP

   A61P 5/50 20060101ALI20211021BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20211021BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20211021BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/197

   A61K31/5513

   A61K31/5517

   A61P43/00 111

   A61P43/00 121

   A61P43/00 105

   A61P43/00 107

   A61P5/50

   A61P3/10

   A61K45/00

【請求項の数】60

【全頁数】45

(21)【出願番号】特願2018-519274(P2018-519274)

(86)(22)【出願日】2016年10月12日

(65)【公表番号】特表2018-530581(P2018-530581A)

(43)【公表日】2018年10月18日

(86)【国際出願番号】US2016056528

(87)【国際公開番号】WO2017066240

(87)【国際公開日】20170420

【審査請求日】2019年10月9日

(31)【優先権主張番号】62/241,566

(32)【優先日】2015年10月14日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/279,908

(32)【優先日】2016年1月18日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】506115514

【氏名又は名称】ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア

【氏名又は名称原語表記】Ｔｈｅ Ｒｅｇｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】ダニエル・エル・カウフマン

(72)【発明者】

【氏名】ジドゥ・ティエン

【審査官】 濱田 光浩

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１４／０４８７８８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１５／１４００８１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１２／０５０９０７（ＷＯ，Ａ２）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ａ６１Ｐ ５／５０

Ａ６１Ｐ ３／１０

Ａ６１Ｋ ３１／５５１７

Ａ６１Ｋ ３１／５５１３

Ａ６１Ｋ ３１／１９７

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

哺乳動物におけるベータ細胞の複製、生存、及び／または機能を促進する、及び／または前記ベータ細胞の量を増加させるのに十分な量のベンゾジアゼピンから選択されるＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）を含む、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、増殖、生存及び／または機能を促進するための医薬製剤であって、
ＧＡＢＡから選択されるＧＡＢＡ受容体活性化リガンドと併用され、
前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、単独で用いられる場合にベータ細胞の複製、生存及び／または機能に対する同様の効果を達成するために用いられることとなる用量よりも低い用量で用いられる及び/又は前記ＰＡＭが、前記ＰＡＭが単独で用いられる場合に前記ＰＡＭの設計及び／または認可の対象である活性を達成するために用いられることとなる用量よりも低い用量で用いられる、医薬製剤。

【請求項2】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、前記ＰＡＭと併用される場合に、前記哺乳動物におけるベータ細胞の複製、生存、及び／または機能を、いずれかの薬剤が単独で投与される場合よりもより効果的に促進する、請求項１に記載の医薬製剤。

【請求項3】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、ＰＡＭと併用される場合に、前記哺乳動物におけるベータ細胞の複製、生存、及び／または機能を、いずれかの薬剤が単独で投与される場合よりも、少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％である、少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％、または少なくとも１．２倍、または少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍より効果的に促進する、請求項２に記載の医薬製剤。

【請求項4】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが単独で用いられる場合にベータ細胞の複製、生存、及び／または機能に対する同様の効果を達成するために用いられることとなる用量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で用いられる、請求項１に記載の医薬製剤。

【請求項5】

前記陽性アロステリック調節因子が、前記ＰＡＭが単独で用いられる場合に前記ＰＡＭの設計及び／または認可の対象である活性を達成するために用いられることとなる用量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で用いられる、請求項１〜４のいずれか１に記載の医薬製剤。

【請求項6】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、単独で用いられる場合にベータ細胞の複製、生存及び／または機能に対する同様の効果を達成するために用いられることとなる用量よりも低い用量で用いられる、及び／または前記陽性アロステリック調節因子が治療用量未満の用量で用いられる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項7】

ベータ細胞の複製を促進する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項8】

ベータ細胞の量を増加させる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項9】

ベータ細胞の生存を促進する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項10】

ベータ細胞の機能を促進する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項11】

ベータ細胞によって分泌されるインスリンのインスリン含量及び／または量を増加させる、請求項１０に記載の医薬製剤。

【請求項12】

インスリン陽性ベータ細胞の数を増加させることによって機能を促進する、請求項１０に記載の医薬製剤。

【請求項13】

前記哺乳動物がヒトである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項14】

前記哺乳動物がＩ型糖尿病と診断されたヒトである、請求項１３に記載の医薬製剤。

【請求項15】

前記哺乳動物が前糖尿病と診断されている、請求項１３に記載の医薬製剤。

【請求項16】

前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項17】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び前記ＰＡＭが相乗的に作用して、ベータ細胞の複製、生存、増殖、及び／または機能を向上させる、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項18】

前記ＰＡＭが、アルプラゾラム、ブロマゼパム、クロルジアゼポキシド、ミダゾラム、クロナゼパム、クロラゼパート、ジアゼパム、エスタゾラム、フルラゼパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロラゼパム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、及びトリアゾラムからなる群より選択されるベンゾジアゼピンを含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項19】

前記ＰＡＭがアルプラゾラムを含む、請求項１８に記載の医薬製剤。

【請求項20】

前記アルプラゾラムが、不安障害、パニック障害、及び／またはうつ病によって生じる不安症を治療するために用いられる用量よりも少ない用量で含まれる、請求項１９に記載の医薬製剤。

【請求項21】

前記アルプラゾラムを、１日当たり経口投与で１．５ｍｇ未満、もしくは１日当たり経口投与で１．０ｍｇ未満、もしくは１日当たり経口投与で０．５ｍｇ未満の即時放出性錠剤として、または１日当たり経口投与で０．５ｍｇ未満、もしくは１日当たり経口投与で約０．４ｍｇ未満、もしくは１日当たり経口投与で約３ｍｇ未満の持続放出性錠剤として投与するための、請求項１９に記載の医薬製剤。

【請求項22】

前記ＰＡＭがミダゾラムを含む、請求項１８に記載の医薬製剤。

【請求項23】

前記ミダゾラムが、不安を軽減するために、または医療処置もしくは手術の前に眠気もしくは麻酔を生じさせるために、または鎮静もしくは麻酔を維持するために用いられる用量よりも少ない用量である、請求項２２に記載の医薬製剤。

【請求項24】

前記ミダゾラムが、静脈内投与で１ｍｇ未満、または静脈内投与で約０．８ｍｇ未満、または静脈内投与で約０．５ｍｇ未満、または静脈内投与で約０．０１ｍｇ／ｋｇ未満、または筋内投与で約０．０７ｍｇ／ｋｇ未満、または筋内投与で約０．０５ｍｇ／ｋｇ未満、または筋内投与で約０．０３ｍｇ／ｋｇ未満、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ未満の用量である、請求項２２に記載の医薬製剤。

【請求項25】

前記ＰＡＭがクロナゼパムを含む、請求項１８に記載の医薬製剤。

【請求項26】

前記クロナゼパムが、発作性障害（欠神発作またはレノックス・ガストー症候群を含む）を治療するために用いられる用量よりも少ない、または成人におけるパニック障害（広場恐怖症を含む）を治療するために用いられる用量よりも少ない用量である、請求項２５に記載の医薬製剤。

【請求項27】

前記クロナゼパムが、１日当たり経口投与で約０．５ｍｇ未満、または１日当たり経口投与で約０．２５ｍｇ未満、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日未満、または約０．００５ｍｇ／ｋｇ／日未満の用量である、請求項２５に記載の医薬製剤。

【請求項28】

膵島移植後のベータ細胞の生存を増加させる、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項29】

膵島移植後の膵島におけるベータ細胞の複製を増加させる、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項30】

低酸素及びストレスに起因するβ細胞の減損を低減するために膵島移植の後に投与される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項31】

移植後３日まで、または移植後１週間まで、または移植後２週間まで、または移植後３週間まで、または移植後４週間まで、または移植後５週間まで、または移植後６週間まで、または移植後７週間まで、または移植後８週間まで、または移植後３カ月まで、または移植後４カ月まで、または移植後５カ月まで、または移植後６カ月までの間投与される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項32】

前記哺乳動物が、神経障害性疼痛、脊髄損傷、不安障害、パニック障害、うつ病によって生じる不安症、発作性疾患（欠神発作またはレノックス・ガストー症候群を含む）、及び月経随伴性てんかんからなる群より選択される１種または複数種の疾病の治療中ではない、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項33】

前記ＰＡＭが、医療処置もしくは手術の前に眠気または麻酔を生じさせるために、または鎮静もしくは麻酔を維持するために投与されない、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項34】

ＢＢＢ透過性である前記ＰＡＭが、ＣＮＳの適応症に用いられる用量よりも低い用量である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の医薬製剤。

【請求項35】

ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及びＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）を含み、前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡから選択され、前記ＰＡＭがベンゾジアゼピンから選択される、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、増殖、生存及び／または機能を促進するための医薬製剤であって、
前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡ受容体活性化リガンドを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、及び／または前記ＰＡＭが前記ＰＡＭを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、医薬製剤。

【請求項36】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、請求項３５に記載の製剤。

【請求項37】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが単独で存在する場合にベータ細胞の複製、生存及び／または機能に対する同様の効果を達成するために提供されることとなる用量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で存在する、請求項３６に記載の製剤。

【請求項38】

前記ＰＡＭが前記ＰＡＭを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項39】

前記ＰＡＭが、前記ＰＡＭが単独で用いられる場合に前記ＰＡＭの設計及び／または認可の対象である活性を達成するために存在することとなる量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で存在する、請求項３８に記載の製剤。

【請求項40】

前記ＧＡＢＡ及び前記ＰＡＭが、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現する細胞の複製を刺激する上で相乗的活性を与えるのに十分な濃度で存在する、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項41】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び前記ＰＡＭが、ベータ細胞の複製を刺激する、ベータ細胞の生存を促進する、及び／またはベータ細胞の機能を向上させる上で相乗的活性を与えるのに十分な濃度で存在する、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項42】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び前記ＰＡＭが、いずれかの薬剤が単独で投与される場合よりも、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または機能を促進する上で少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％、または少なくとも１．２倍、または少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍大きい有効性を与えるのに十分な濃度で存在する、請求項３５〜４１のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項43】

前記ＰＡＭが、アルプラゾラム、ブロマゼパム、クロルジアゼポキシド、ミダゾラム、クロナゼパム、クロラゼパート、ジアゼパム、エスタゾラム、フルラゼパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロラゼパム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、及びトリアゾラムからなる群より選択されるベンゾジアゼピンを含む、請求項３５〜４２のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項44】

前記ＰＡＭがアルプラゾラムを含む、請求項４３に記載の製剤。

【請求項45】

前記ＰＡＭがミダゾラムを含む、請求項４３に記載の製剤。

【請求項46】

前記ＰＡＭがクロナゼパムを含む、請求項４３に記載の製剤。

【請求項47】

ＧＡＢＡから選択されるＧＡＢＡ受容体活性化リガンドを収納した容器と、
ベンゾジアゼピンから選択されるＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）を収納した容器と
を備える、哺乳動物におけるＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現する細胞の複製を促進するためのキットであって、
前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、及び／または前記ＰＡＭが前記ＰＡＭを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、キット。

【請求項48】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び前記ＰＡＭが同一の容器中に存在する、請求項４７に記載のキット。

【請求項49】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び前記ＰＡＭが別個の容器中に存在する、請求項４７に記載のキット。

【請求項50】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、請求項４７〜４９のいずれか１項に記載のキット。

【請求項51】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが単独で存在する場合に、ベータ細胞の複製、生存、及び／または機能に対する同様の効果を達成するために提供されることとなる用量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で存在する、請求項５０に記載のキット。

【請求項52】

前記ＰＡＭが前記ＰＡＭを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、請求項４７〜５１のいずれか１項に記載のキット。

【請求項53】

前記陽性アロステリック調節因子が、前記ＰＡＭが単独で用いられる場合に前記ＰＡＭの設計及び／または認可の対象である活性を達成するために存在することとなる量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で存在する、請求項４７〜５２のいずれか１項に記載のキット。

【請求項54】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び前記ＰＡＭが、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現する細胞の複製を刺激する上で相乗的活性を与えるのに十分な濃度で存在する、請求項４７〜５３のいずれか１項に記載のキット。

【請求項55】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び前記ＰＡＭが、ベータ細胞の複製を刺激する及び／またはベータ細胞の機能を向上させる上で相乗的活性を与えるのに十分な濃度で存在する、請求項４７〜５４のいずれか１項に記載のキット。

【請求項56】

前記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び前記ＰＡＭが、いずれかの薬剤が単独で投与される場合よりも、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、生存及び／または機能を促進する上で少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％、または少なくとも１．２倍、または少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍大きい有効性を与えるのに十分な濃度で存在する、請求項４７〜５５のいずれか１項に記載のキット。

【請求項57】

前記ＰＡＭが、アルプラゾラム、ブロマゼパム、クロルジアゼポキシド、ミダゾラム、クロナゼパム、クロラゼパート、ジアゼパム、エスタゾラム、フルラゼパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロラゼパム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、及びトリアゾラムからなる群より選択されるベンゾジアゼピンを含む、請求項４７〜５６のいずれか一項に記載のキット。

【請求項58】

前記ＰＡＭがアルプラゾラムを含む、請求項５７に記載のキット。

【請求項59】

前記ＰＡＭがクロナゼパムを含む、請求項５７に記載のキット。

【請求項60】

前記ＰＡＭがミダゾラムを含む、請求項５７に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１０月１４日出願の米国特許出願第６２／２４１，５６６号及び２０１６年１月１８日出願の米国特許出願第６２／２７９，９０８号の優先権を主張し、上記出願は共に、あらゆる目的に対してそれらの全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

政府による助成の表示
本発明は、国立衛生研究所により裁定された助成金第ＤＫ０９２４８０号を受ける政府の支援によってなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。

【背景技術】

【0003】

ベータ細胞（β細胞）は、膵臓中のランゲルハンス島に位置する膵細胞の１種であり、血液中のグルコースのレベルを制御するホルモンであるインスリンを産生及び分泌する。

【0004】

膵臓は２つの主要な機能、すなわち、（ｉ）外分泌腺房細胞によって分泌され、分岐した管ネットワークによって腸に送られる消化酵素の産生、及び（ｉｉ）ランゲルハンス島の内分泌細胞によって達成される血糖の調節を果たす。数種の別個の内分泌細胞型が膵島を構成する。β細胞または「ベータ細胞」とも呼ばれる膵β細胞は、種に応じて全体の約５０〜８０％を構成し最も突出している。β細胞は、血液中のグルコースのレベルを制御するホルモンであるインスリン、インスリン産生の副産物であり、神経障害及び血管の劣化に関連する糖尿病の他の症状を予防するのに役立つＣ−ペプチド、ならびに膵内分泌部の一部として機能し、血糖制御に寄与する、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰまたはＩＡＰＰ）としても知られるアミリンを含む多数のポリペプチドを産生する。グルカゴンを産生するα細胞は二番目に最も多く存在する細胞型である。それぞれが全体の僅かな部分を構成する残りの膵島細胞としては、ソマトスタチンを産生するδ細胞、膵ポリペプチドを産生するＰＰ細胞、及びグレリンを産生するε細胞が挙げられる。

【0005】

ベータ細胞の機能障害及び／または数の減少は、糖尿病、肥満、及び他の障害を含む代謝疾患に関与する。

【発明の概要】

【0006】

ＧＡＢＡは、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の種々のモデルにおいて自己免疫応答を阻害し、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の応答を亢進させ、ベータ細胞のアポトーシスを阻害し、マウスベータ細胞の複製を促進し得ることが発見された。これらの知見を拡大させて、ＧＡＢＡ_Ａ受容体（ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ）及びＧＡＢＡ_Ｂ−Ｒの両方の活性化が、マウスベータ細胞の複製及び同様にヒトベータ細胞の複製も促進し得ることが発見された。しかしながら、ＧＡＢＡはその受容体に対する親和性が比較的低く、オフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）が速く、且つイン・ビボでの半減期が短く、これらのことから、患者は治療上の有効性のためには数グラムのＧＡＢＡを１日数回服用することが必要となる場合があり、これは多少面倒であり、そのことによって患者の服薬遵守が低下する。

【0007】

ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）との併用でのＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、哺乳動物においてベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能（例えば、インスリン産生、血糖に対する感受性など）を促進することができるということは驚くべき発見であった。更に、ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドとＰＡＭとの併用が、ベータ細胞に対するこれらの効果において相乗的であることは特に驚くべきことであった。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本明細書で企図される種々の実施形態としては、以下の１または複数を挙げることができるが、これらに限定される必要はない。

【0009】

実施形態１：哺乳動物におけるベータ細胞の複製、増殖、及び／または生存、及び／または機能の促進方法であって、上記哺乳動物に、上記哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を促進する、及び／または上記ベータ細胞の量を増加させるのに十分な量でＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）を投与することを含む上記方法。

【0010】

実施形態２：上記ＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）がＧＡＢＡ受容体活性化リガンドとの併用で投与される、実施形態１に記載の方法。

【0011】

実施形態３：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、上記ＰＡＭと併用される場合に、上記哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を、いずれかの薬剤が単独で投与される場合よりもより効果的に促進する、実施形態２に記載の方法。

【0012】

実施形態４：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、ＰＡＭと併用される場合に、上記哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を、いずれかの薬剤が単独で投与される場合よりも、少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％である、少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％、または少なくとも１．２倍、または少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍より効果的に促進する、実施形態３に記載の方法。

【0013】

実施形態５：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、単独で用いられる場合にベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能に対する同様の効果を達成するために用いられることとなる用量よりも低い用量で用いられる、及び／または上記陽性アロステリック調節因子が、上記ＰＡＭが単独で用いられる場合に上記ＰＡＭの設計及び／または認可の対象である活性を達成するために用いられることとなる用量よりも低い用量で用いられる、実施形態２に記載の方法。

【0014】

実施形態６：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが単独で用いられる場合にベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能に対する同様の効果を達成するために用いられることとなる用量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％で用いられる、実施形態５に記載の方法。

【0015】

実施形態７：上記陽性アロステリック調節因子が、上記ＰＡＭが単独で用いられる場合に上記ＰＡＭの設計及び／または認可の対象である活性を達成するために用いられることとなる用量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％で用いられる、実施形態５〜６のいずれか１に記載の方法。

【0016】

実施形態８：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、単独で用いられる場合にベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能に対する同様の効果を達成するために用いられることとなる用量よりも低い用量で用いられる、及び／または上記陽性アロステリック調節因子が治療用量未満の用量で用いられる、実施形態５〜７のいずれか１項に記載の方法。

【0017】

実施形態９：上記投与がベータ細胞の複製を促進する、実施形態１〜８のいずれか１項に記載の方法。

【0018】

実施形態１０：上記投与がベータ細胞の量を増加させる、実施形態１〜９のいずれか１項に記載の方法。

【0019】

実施形態１１：上記投与がベータ細胞の生存を促進する、実施形態１〜１０のいずれか１項に記載の方法。

【0020】

実施形態１２：上記投与がベータ細胞の機能を促進する、実施形態１〜１１のいずれか１項に記載の方法。

【0021】

実施形態１３：上記投与が、ベータ細胞によって分泌されるインスリンのインスリン含量及び／または量を増加させる、実施形態１２に記載の方法。

【0022】

実施形態１４：上記投与がインスリン陽性ベータ細胞の数を増加させることによって機能を促進する、実施形態１２に記載の方法。

【0023】

実施形態１５：上記哺乳動物がヒトである、実施形態１〜１４のいずれか１項に記載の方法。

【0024】

実施形態１６：上記哺乳動物がＩ型糖尿病と診断されたヒトである、実施形態１５に記載の方法。

【0025】

実施形態１７：上記哺乳動物が前糖尿病と診断されている、実施形態１５に記載の方法。

【0026】

実施形態１８：上記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、実施形態１〜１４のいずれか１項に記載の方法。

【0027】

実施形態１９：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び上記ＰＡＭが相乗的に作用して、ベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または増殖、及び／または機能を向上させる、実施形態１〜１８のいずれか１項に記載の方法。

【0028】

実施形態２０：上記ＰＡＭがＡＰ３２５及びＡＰ３からなる群より選択される薬剤を含む、実施形態１〜１９のいずれか１項に記載の方法。

【0029】

実施形態２１：上記ＰＡＭがＡＰ３２５を含む、実施形態２０に記載の方法。

【0030】

実施形態２２：上記ＡＰ３２５が、神経因性疼痛または脊髄損傷に用いられる用量よりも低い用量で投与される、実施形態２１に記載の方法。

【0031】

実施形態２３：上記ＰＡＭが、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、キナゾリノン、及び神経ステロイドからなる群より選択される薬剤を含む、実施形態１〜１９のいずれか１項に記載の方法。

【0032】

実施形態２４：上記ＰＡＭがバルビツレートを含む、実施形態２３に記載の方法。

【0033】

実施形態２５：上記ＰＡＭが、アロバルビタール（５，５−ジアリルバルビツレート）、アモバルビタール（５−エチル−５−イソペンチル−バルビツレート）、アプロバルビタール（５−アリル−５−イソプロピル−バルビツレート）、アルフェナール（５−アリル−５−フェニル−バルビツレート）、バルビタール（５，５−ジエチルバルビツレート）、ブラロバルビタール（５−アリル−５−（２−ブロモ−アリル）−バルビツレート）、ペントバルビタール（５−エチル−５−（１−メチルブチル）−バルビツレート）、フェノバルビタール（５−エチル−５−フェニルバルビツレート）、セコバルビタール（５−［（２Ｒ）−ペンタン−２−イル］−５−プロパ−２−エニル−バルビツレート）からなる群より選択されるバルビツレートを含む、実施形態２４に記載の方法。

【0034】

実施形態２６：上記ＰＡＭがベンゾジアゼピンを含む、実施形態２３に記載の方法。

【0035】

実施形態２７：上記ＰＡＭが、アルプラゾラム、ブロマゼパム、クロルジアゼポキシド、ミダゾラム、クロナゼパム、クロラゼパート、ジアゼパム、エスタゾラム、フルラゼパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロラゼパム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、及びトリアゾラムからなる群より選択されるベンゾジアゼピンを含む、実施形態２６に記載の方法。

【0036】

実施形態２８：上記ＰＡＭがアルプラゾラムを含む、実施形態２６に記載の方法。

【0037】

実施形態２９：上記アルプラゾラムが、不安障害、パニック障害、及び／またはうつ病によって生じる不安症を治療するために用いられる用量よりも少ない用量で投与される、実施形態２８に記載の方法。

【0038】

実施形態３０：上記アルプラゾラムが、１日当たり経口投与で１．５ｍｇ未満、もしくは１日当たり経口投与で１．０ｍｇ未満、もしくは１日当たり経口投与で０．５ｍｇ未満の即時放出性錠剤として、または１日当たり経口投与で０．５ｍｇ未満、もしくは１日当たり経口投与で約０．４ｍｇ未満、もしくは１日当たり経口投与で約３ｍｇ未満の持続放出性錠剤として投与される、実施形態２８に記載の方法。

【0039】

実施形態３１：上記ＰＡＭがミダゾラムを含む、実施形態２６に記載の方法。

【0040】

実施形態３２：上記ミダゾラムが、不安を軽減するために、または医療処置もしくは手術の前に眠気もしくは麻酔を生じさせるために、または鎮静もしくは麻酔を維持するために用いられる用量よりも少ない用量で投与される、実施形態３１に記載の方法。

【0041】

実施形態３３：上記ミダゾラムが、静脈内投与で１ｍｇ未満、または静脈内投与で約０．８ｍｇ未満、または静脈内投与で約０．５ｍｇ未満、または静脈内投与で約０．０１ｍｇ／ｋｇ未満、または筋内投与で約０．０７ｍｇ／ｋｇ未満、または筋内投与で約０．０５ｍｇ／ｋｇ未満、または筋内投与で約０．０３ｍｇ／ｋｇ未満、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ未満の用量で投与される、実施形態３１に記載の方法。

【0042】

実施形態３４：上記ＰＡＭがクロナゼパムを含む、実施形態２６に記載の方法。

【0043】

実施形態３５：上記クロナゼパムが、発作性障害（欠神発作またはレノックス・ガストー症候群を含む）を治療するために用いられる用量よりも少ない、または成人におけるパニック障害（広場恐怖症を含む）を治療するために用いられる用量よりも少ない用量で投与される、実施形態３４に記載の方法。

【0044】

実施形態３６：上記クロナゼパムが、１日当たり経口投与で約０．５ｍｇ未満、または１日当たり経口投与で約０．２５ｍｇ未満、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日未満、または約０．００５ｍｇ／ｋｇ／日未満の用量で投与される、実施形態３４に記載の方法。

【0045】

実施形態３７：上記ＰＡＭが神経ステロイドを含む、実施形態２３に記載の方法。

【0046】

実施形態３８：上記ＰＡＭがアロプレグナノロン（３α−ヒドロキシ−５α−プレグナン−２０−オン）及びプレグナノロンからなる群より選択される神経ステロイドを含む、実施形態３７に記載の方法。

【0047】

実施形態３９：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡを含む、実施形態２〜３８のいずれか１項に記載の方法。

【0048】

実施形態４０：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、バマルゾール、ガバミド、ＧＡＢＯＢ、ガボキサドール、イボテン酸、イソグアバシン、イソニペコチン酸、ムシモール、フェニバット、ピカミロン、プロガビド、キスカラミン、プロガビド酸（ＳＬ ７５１０２）、チオムシモール、プレガバリン、ビガバトリン、６−アミノニコチン酸、ホモタウリン、及びＸＰ１３５１２［（±）−１−（［（α−イソブタノイルオキシエトキシ）カルボニル］アミノメチル）−１−シクロヘキサン酢酸］からなる群より選択される薬剤を含む、実施形態２〜３８のいずれか１項に記載の方法。

【0049】

実施形態４１：膵島移植後のベータ細胞の生存を増加させる、実施形態１〜４０のいずれか１項に記載の方法。

【0050】

実施形態４２：膵島移植後の膵島におけるベータ細胞の複製を増加させる、実施形態１〜４１のいずれか１項に記載の方法。

【0051】

実施形態４３：低酸素及びストレスに起因するβ細胞の減損を低減するために膵島移植の後に実施される、実施形態１〜４０のいずれか１項に記載の方法。

【0052】

実施形態４４：移植後３日まで、または移植後１週間まで、または移植後２週間まで、または移植後３週間まで、または移植後４週間まで、または移植後５週間まで、または移植後６週間まで、または移植後７週間まで、または移植後８週間まで、または移植後３カ月まで、または移植後４カ月まで、または移植後５カ月まで、または移植後６カ月までの間実施される、実施形態１〜４３のいずれか１項に記載の方法。

【0053】

実施形態４５：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがアルコールではない、実施形態２〜４４のいずれか１項に記載の方法。

【0054】

実施形態４６：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがカバラクトンではない、実施形態２〜４５のいずれか１項に記載の方法。

【0055】

実施形態４７：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがスカルキャップまたはスカルキャップの構成成分ではない、実施形態２〜４６のいずれか１項に記載の方法。

【0056】

実施形態４８：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがバレリアンまたはバレリアンの構成成分ではない、実施形態２〜４７のいずれか１項に記載の方法。

【0057】

実施形態４９：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが揮発性ガスではない、実施形態２〜４８のいずれか１項に記載の方法。

【0058】

実施形態５０：上記哺乳動物が、神経障害性疼痛、脊髄損傷、不安障害、パニック障害、うつ病によって生じる不安症、発作性疾患（欠神発作またはレノックス・ガストー症候群を含む）、及び月経随伴性てんかんからなる群より選択される1種または複数種の疾病の治療中ではない、実施形態１〜４９のいずれか１項に記載の方法。

【0059】

実施形態５１：上記ＰＡＭが、医療処置もしくは手術の前に眠気または麻酔を生じさせるために、または鎮静もしくは麻酔を維持するために投与されない、実施形態１〜５０のいずれか１項に記載の方法。

【0060】

実施形態５２：ＢＢＢ透過性である上記ＰＡＭが、中枢神経系（ＣＮＳ）の適応症に用いられる用量よりも低い用量で投与される、実施形態１〜５１のいずれか１項に記載の方法。

【0061】

実施形態５３：ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及びＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）を含む医薬製剤。

【0062】

実施形態５４：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡ受容体活性化リガンドを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、及び／または上記ＰＡＭが上記ＰＡＭを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、実施形態５３に記載の製剤。

【0063】

実施形態５５：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡまたはＧＡＢＡ類似体を単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、実施形態５４に記載の製剤。

【0064】

実施形態５６：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが単独で存在する場合にベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能に対する同様の効果を達成するために提供されることとなる用量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で存在する、実施形態５５に記載の製剤。

【0065】

実施形態５７：上記ＰＡＭが上記ＰＡＭを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、実施形態５３〜５６のいずれか１項に記載の製剤。

【0066】

実施形態５８：上記陽性アロステリック調節因子が、上記ＰＡＭが単独で用いられる場合に上記ＰＡＭの設計及び／または認可の対象である活性を達成するために存在することとなる量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で存在する、実施形態５７に記載の製剤。

【0067】

実施形態５９：上記ＧＡＢＡまたはＧＡＢＡ類似体及び上記ＰＡＭが、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現する細胞の複製を刺激する上で相乗的活性を与えるのに十分な濃度で存在する、実施形態５３〜５８のいずれか１項に記載の製剤。

【0068】

実施形態６０：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び上記ＰＡＭが、ベータ細胞の複製を刺激する及び／またはベータ細胞の生存を促進する及び／またはベータ細胞の機能を向上させる上で相乗的活性を与えるのに十分な濃度で存在する、実施形態５３〜５８のいずれか１項に記載の製剤。

【0069】

実施形態６１：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び上記ＰＡＭが、いずれかの薬剤が単独で投与される場合よりも、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を促進する上で少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％、または少なくとも１．２倍、または少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍大きい有効性を与えるのに十分な濃度で存在する、実施形態５３〜６０のいずれか１項に記載の製剤。

【0070】

実施形態６２：上記ＰＡＭが、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、キナゾリノン、及び神経ステロイドからなる群より選択される薬剤を含む、実施形態５３〜６１のいずれか１項に記載の製剤。

【0071】

実施形態６３：上記ＰＡＭがバルビツレートを含む、実施形態６２に記載の製剤。

【0072】

実施形態６４：上記ＰＡＭが、アロバルビタール（５，５−ジアリルバルビツレート）、アモバルビタール（５−エチル−５−イソペンチル−バルビツレート）、アプロバルビタール（５−アリル−５−イソプロピル−バルビツレート）、アルフェナール（５−アリル−５−フェニル−バルビツレート）、バルビタール（５，５−ジエチルバルビツレート）、ブラロバルビタール（５−アリル−５−（２−ブロモ−アリル）−バルビツレート）、ペントバルビタール（５−エチル−５−（１−メチルブチル）−バルビツレート）、フェノバルビタール（５−エチル−５−フェニルバルビツレート）、セコバルビタール（５−［（２Ｒ）−ペンタン−２−イル］−５−プロパ−２−エニル−バルビツレート）からなる群より選択されるバルビツレートを含む、実施形態６３に記載の製剤。

【0073】

実施形態６５：上記ＰＡＭがベンゾジアゼピンを含む、実施形態６２に記載の製剤。

【0074】

実施形態６６：上記ＰＡＭが、アルプラゾラム、ブロマゼパム、クロルジアゼポキシド、ミダゾラム、クロナゼパム、クロラゼパート、ジアゼパム、エスタゾラム、フルラゼパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロラゼパム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、及びトリアゾラムからなる群より選択されるベンゾジアゼピンを含む、実施形態６５に記載の製剤。

【0075】

実施形態６７：上記ＰＡＭがアルプラゾラムを含む、実施形態６５に記載の製剤。

【0076】

実施形態６８：上記ＰＡＭがミダゾラムを含む、実施形態６５に記載の製剤。

【0077】

実施形態６９：上記ＰＡＭがクロナゼパムを含む、実施形態６５に記載の製剤。

【0078】

実施形態７０：上記ＰＡＭが神経ステロイドを含む、実施形態６２に記載の製剤。

【0079】

実施形態７１：上記ＰＡＭがアロプレグラノロン及びプレグナノロンからなる群より選択される神経ステロイドを含む、実施形態７０に記載の製剤。

【0080】

実施形態７２：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡを含む、実施形態５３〜７１のいずれか一項に記載の製剤。

【0081】

実施形態７３：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、バマルゾール、ガバミド、ＧＡＢＯＢ、ガボキサドール、イボテン酸、イソグアバシン、イソニペコチン酸、ムシモール、フェニバット、ピカミロン、プロガビド、キスカラミン、プロガビド酸（ＳＬ ７５１０２）、チオムシモール、プレガバリン、ビガバトリン、６−アミノニコチン酸、ホモタウリン、及びＸＰ１３５１２［（±）−１−（［（α−イソブタノイルオキシエトキシ）カルボニル］アミノメチル）−１−シクロヘキサン酢酸］からなる群より選択される薬剤を含む、実施形態５３〜７１のいずれか１項に記載の製剤。

【0082】

実施形態７４：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがアルコールではない、実施形態５３〜７３のいずれか１項に記載の製剤。

【0083】

実施形態７５：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがカバラクトンではない、実施形態５３〜７４のいずれか１項に記載の製剤。

【0084】

実施形態７６：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがスカルキャップまたはスカルキャップの構成成分ではない、実施形態５３〜７５のいずれか１項に記載の製剤。

【0085】

実施形態７７：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがバレリアンまたはバレリアンの構成成分ではない、実施形態５３〜７６のいずれか１項に記載の製剤。

【0086】

実施形態７８：ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドを収納した容器と、
ＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）を収納した容器と
を備える、哺乳動物におけるＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現する細胞の複製を促進するためのキット。

【0087】

実施形態７９：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び上記ＰＡＭが同一の容器中に存在する、実施形態７８に記載のキット。

【0088】

実施形態８０：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び上記ＰＡＭが別個の容器中に存在する、実施形態７８に記載のキット。

【0089】

実施形態８１：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡまたはＧＡＢＡ類似体を単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、及び／または上記ＰＡＭが上記ＰＡＭを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、実施形態７８〜８０のいずれか１項に記載のキット。

【0090】

実施形態８２：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡまたはＧＡＢＡ類似体を単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、実施形態７８〜８０のいずれか１項に記載のキット。

【0091】

実施形態８３：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが単独で存在する場合に、ベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能に対する同様の効果を達成するために提供されることとなる用量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で存在する、実施形態８２に記載のキット。

【0092】

実施形態８４：上記ＰＡＭが上記ＰＡＭを単独で含む治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する、実施形態７８〜８３のいずれか１項に記載のキット。

【0093】

実施形態８５：上記陽性アロステリック調節因子が、上記ＰＡＭが単独で用いられる場合に上記ＰＡＭの設計及び／または認可の対象である活性を達成するために存在することとなる量の約９５％未満、または約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満で存在する、実施形態７８〜８４のいずれか１項に記載のキット。

【0094】

実施形態８６：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び上記ＰＡＭが、ＧＡＢＡ_Ａ受容体を発現する細胞の複製を刺激する上で相乗的活性を与えるのに十分な濃度で存在する、実施形態７８〜８５のいずれか１項に記載のキット。

【0095】

実施形態８７：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び上記ＰＡＭが、ベータ細胞の複製を刺激する及び／またはベータ細胞の生存を促進する及び／またはベータ細胞の機能を向上させる上で相乗的活性を与えるのに十分な濃度で存在する、実施形態７８〜８５のいずれか１項に記載のキット。

【0096】

実施形態８８：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及び上記ＰＡＭが、いずれかの薬剤が単独で投与される場合よりも、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を促進する上で少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％、または少なくとも１．２倍、または少なくとも１．５倍、または少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍大きい有効性を与えるのに十分な濃度で存在する、実施形態７８〜８７のいずれか１項に記載のキット。

【0097】

実施形態８９：上記ＰＡＭが、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、キナゾリノン、及び神経ステロイドからなる群より選択される薬剤を含む、実施形態７８〜８８のいずれか１項に記載のキット。

【0098】

実施形態９０：上記ＰＡＭがバルビツレートを含む、実施形態８９に記載のキット。

【0099】

実施形態９１：上記ＰＡＭが、アロバルビタール（５，５−ジアリルバルビツレート）、アモバルビタール（５−エチル−５−イソペンチル−バルビツレート）、アプロバルビタール（５−アリル−５−イソプロピル−バルビツレート）、アルフェナール（５−アリル−５−フェニル−バルビツレート）、バルビタール（５，５−ジエチルバルビツレート）、ブラロバルビタール（５−アリル−５−（２−ブロモ−アリル）−バルビツレート）、ペントバルビタール（５−エチル−５−（１−メチルブチル）−バルビツレート）、フェノバルビタール（５−エチル−５−フェニルバルビツレート）、セコバルビタール（５−［（２Ｒ）−ペンタン−２−イル］−５−プロパ−２−エニル−バルビツレート）からなる群より選択されるバルビツレートを含む、実施形態９０に記載のキット。

【0100】

実施形態９２：上記ＰＡＭがベンゾジアゼピンを含む、実施形態８９に記載のキット。

【0101】

実施形態９３：上記ＰＡＭが、アルプラゾラム、ブロマゼパム、クロルジアゼポキシド、ミダゾラム、クロナゼパム、クロラゼパート、ジアゼパム、エスタゾラム、フルラゼパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロラゼパム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、及びトリアゾラムからなる群より選択されるベンゾジアゼピンを含む、実施形態９２に記載のキット。

【0102】

実施形態９４：上記ＰＡＭがアルプラゾラムを含む、実施形態９２に記載のキット。

【0103】

実施形態９５：上記ＰＡＭがクロナゼパムを含む、実施形態９２に記載のキット。

【0104】

実施形態９６：上記ＰＡＭがミダゾラムを含む、実施形態９２に記載のキット。

【0105】

実施形態９７：上記ＰＡＭが神経ステロイドを含む、実施形態８９に記載のキット。

【0106】

実施形態９８：上記ＰＡＭがアロプレグラノロン及びプレグナノロンからなる群より選択される神経ステロイドを含む、実施形態９７に記載のキット。

【0107】

実施形態９９：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがＧＡＢＡを含む、実施形態７８〜９８のいずれか一項に記載のキット。

【0108】

実施形態１００：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、バマルゾール、ガバミド、ＧＡＢＯＢ、ガボキサドール、イボテン酸、イソグアバシン、イソニペコチン酸、ムシモール、フェニバット、ピカミロン、プロガビド、キスカラミン、プロガビド酸（ＳＬ ７５１０２）、チオムシモール、プレガバリン、ビガバトリン、６−アミノニコチン酸、ホモタウリン、及びＸＰ１３５１２［（±）−１−（［（α−イソブタノイルオキシエトキシ）カルボニル］アミノメチル）−１−シクロヘキサン酢酸］からなる群より選択される薬剤を含む、実施形態７８〜９８のいずれか１項に記載のキット。

【0109】

実施形態１０１：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがアルコールではない、実施形態７８〜１００のいずれか１項に記載のキット。

【0110】

実施形態１０２：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがカバラクトンではない、実施形態７８〜１０１のいずれか１項に記載のキット。

【0111】

実施形態１０３：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがスカルキャップまたはスカルキャップの構成成分ではない、実施形態７８〜１０２のいずれか１項に記載のキット。

【0112】

実施形態１０４：上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドがバレリアンまたはバレリアンの構成成分ではない、実施形態７８〜１０３のいずれか１項に記載のキット。

【0113】

定義
用語「ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド」とは、１種または複数種のＧＡＢＡ受容体に対するアゴニストである薬剤をいう。特定の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドは少なくともＧＡＢＡ_Ａ受容体に対するアゴニストである。

【0114】

用語「ＧＡＢＡ_Ａ受容体の陽性アロステリック調節因子」すなわちＰＡＭとは、脊椎動物の中枢神経系におけるＧＡＢＡ_Ａ受容体タンパク質の活性を増加させる分子をいう。ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭはＧＡＢＡ_Ａ受容体アゴニストとは異なり、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）神経伝達物質分子と同一の活性部位では結合しない。種々の実施形態において、上記ＰＡＭは、上記ＧＡＢＡ_Ａ受容体がその塩素イオンチャネルを開口することを誘導するまたはそれを亢進させる。

【0115】

用語「ベータ細胞の機能」とは、特にインスリン産生、分泌、及びβ細胞領域に関するベータ細胞の機能をいう。ベータ細胞機能の増加とは、ベータ細胞のインスリン含量の増加及び／またはベータ細胞によるインスリン分泌の増加及び／またはインスリン陽性ベータ細胞の数の増加をいう。

【0116】

用語「治療用量未満の用量」とは、ＰＡＭに関して用いられる場合、当該ＰＡＭが元々設計及び／または認可の対象とした活性を目的として用いられる場合の、認可された及び／または推奨される及び／または認知された当該ＰＡＭの用量よりも低い用量をいう。したがって、例えば、アルプラゾラムなどのベンゾジアゼピンの治療用量未満の用量とは、うつ病、パニック障害、及び／または不安症に対する当該ベンゾジアゼピンの認可された及び／または推奨される及び／または認知された用量よりも低い用量をいう。特定の実施形態において、上記治療用量未満の用量は、当該ＰＡＭが設計及び／または認可の対象とした活性（例えば、うつ病、パニック障害、及び／または不安症）を目的として推奨される用量の９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、また約２０％未満、または約１０％未満である。

【0117】

語句「〜と併用の（ｉｎ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）」または「〜と併用の（ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）」とは、本明細書に記載の活性薬剤（複数可）（例えば、１種または複数種のＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可））の本明細書に記載の１種または複数種の他の薬剤（例えば、１種または複数種のＰＡＭ）との併用に関して用いられる場合、当該ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及び当該ＰＡＭ（複数可）が、当該の生体、特にベータ細胞に対する上記薬剤の生理学的活性において少なくとも一部の時間的重複があるように投与されることを示す。したがって、種々の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可）は、同時に及び／または逐次的に投与されてもよい。逐次投与においては、２番目に投与される薬剤が投与された時点または当該の生体において活性となる時点で、最初に投与される薬物／薬剤が該生体に対してある程度の生理学的変化を及ぼしている限り、例え第２の部分の投与前にある程度の実質的な遅延（例えば、数分または例え数時間もしくは数日であってもよい）があってもよい。

【図面の簡単な説明】

【0118】

【図1】ＧＡＢＡ受容体サブユニットを図解する模式図である。この図は、ベンゾジアゼピン結合部位のみを示す。他の種別のＰＡＭに対しては他の結合部位がある。

【図2】ヒト膵島（５０／ウェル）の、^３Ｈチミジンの存在下、アルプラゾラム（３０ｎｇ／ｍｌ）を含むまたは含まない培地中で４日間行ったインキュベーションにおける、培地のみを用いた培養物の平均増殖速度（１と設定）に対する相対的な平均増殖速度のデータを示すグラフである。Ｎ＝同一の培養物の３回繰り返しによる２回の独立した実験。２回の実験においてデータは非常に類似していた。

【図3】ヒト膵島（５０ＩＥＱ／ウェル）の、^３Ｈチミジンの存在下、アルプラゾラム（３０ｎｇ／ｍｌ）と一緒にまたはアルプラゾラムなしで、表示した用量のＧＡＢＡと共に４日間行ったインキュベーションにおける、ＧＡＢＡまたはアルプラゾラムなしでの培養物の平均増殖速度（１と設定）に対する相対的な平均増殖速度のデータを示すグラフである。Ｎ＝２回の独立した実験。

【図4】ミダゾラムによってＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進したことを示すグラフである。図Ａは広範な用量範囲にわたる１０倍刻みでの結果を示す。図Ｂはより小さい用量範囲にわたるより小さな用量増分での結果を示す。

【図5】ミダゾラムまたはクロナゼパムによる処理によって、イン・ビトロでのＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進することを示すグラフである。

【図6】ＡＰ３２５またはＡＰ３による処理によって、イン・ビトロでのＩＮＳ−１細胞の増殖が刺激されないことを示すグラフである。データは、少なくとも３回の別個の実験のいずれの処理もしていない対照に対する相対的な％表記の細胞増殖の平均値±標準偏差として表わされる。対照の細胞増殖を１００と設定した。

【図7】ＡＰ３２５によって、イン・ビトロでのＧＡＢＡ刺激性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進することを示すグラフである。データは、少なくとも３回の別個の実験のいずれの処理もしていない対照に対する相対的な細胞増殖の平均値±標準偏差として表わされる。対照の細胞増殖を１と設定した。

【図8】ＡＰ３によって、イン・ビトロでのＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進することを示すグラフである。データは、３回の別個の実験のいずれの処理もしていない対照に対する相対的な細胞増殖の平均値±標準偏差として表わされる。対照の細胞増殖を１と設定した。対照からの有意差を誘導する処理は実施例３に記載されている。

【図9】図ＡはＩＮＳ−１細胞におけるＧＡＤ酵素活性を示すグラフである。ＩＮＳ−１細胞及び２９３Ｔ細胞（増殖期に採取）ならびに新鮮なマウス脳及びヒト膵島を使用するまで−８０℃で保存した。これらの試料を、プロテアーゼ阻害因子を含むＧＡＤ活性アッセイ緩衝液中でホモジナイズした。ホモジネート中のＧＡＤ酵素活性を既報（Ｋａｕｆｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｊ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． ５６： ７２０−７２３）の標準的なＣＯ_２トラッピングアッセイを用いて評価した（同一試料の４回繰り返し）。示したデータは、３回の実験の代表的なアッセイの平均ＣＰＭ＋／−ＳＥＭである。図ＢはＩＮＳ−１細胞の増殖に対するＰＡＭの効果を示すグラフである。ＩＮＳ−１細胞を、１０^−９〜１０^−６Ｍの用量範囲の表示したＰＡＭと共に培養し、その増殖を評価した。示したデータは、培地のみを用いた培養物の平均増殖速度（１と設定）に対する相対的な平均増殖速度である。アルプラゾラム（図Ｃ）、ミダゾラム（図Ｄ）、クロナゼパム（図Ｅ）、ＡＰ３２５（図Ｆ）またはＡＰ３（図Ｇ）を表示した濃度で、ある用量範囲のＧＡＢＡと共にインキュベートした結果を示すグラフである。対照培養物を表示した濃度のＧＡＢＡのみと共にインキュベートした。培地のみによる対照培養物に対して^††††ｐ＜０．００１。同一用量のＧＡＢＡを用いた培養物に対して^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１。図Ｈは、ＩＮＳ−１細胞を、ＴＳＰＯ阻害因子ＰＫ１１１９５（１μＭ）と共にまたはそれなしで、ＧＡＢＡ（０．３ｍＭ）及びミダゾラムまたはクロナゼパム（１００ｎＭ）と共に４８時間培養した結果を示すグラフである。

【図10】アルプラゾラムによって、ヒト膵島細胞の複製が亢進することを示すグラフである。新鮮なヒト膵島を、方法項に記載したようにして、表示したＰＡＭと一緒にまたはＰＡＭなしで表示した用量のＧＡＢＡで処理した。示したデータは、培地のみを用いた培養物の平均増殖速度（１と設定）に対する相対的な平均増殖速度である。Ｎ＝同一の培養物の３回繰り返しによる２回の独立した実験。２回の実験においてデータは非常に類似していた。^＊ｐ＜０．０５。

【図11】ＧＡＢＡ結合部位遮断因子／阻害因子であるビククリンによって、アルプラゾラムの膵島細胞の複製を亢進させる能力が消失することを示すグラフである。ヒト膵島を、標準的な用量範囲のビククリン（０〜５０ｕＭ）と一緒に、アルプラゾラム（１００ｎＭ）と共にインキュベートした。示したデータは、培地のみを用いた培養物の平均増殖速度（１と設定）に対する相対的な平均増殖速度である。

【図12】アルプラゾラムによって、ＧＡＢＡのヒト膵島細胞の複製を促進する能力が亢進することを示すグラフである。ヒト膵島を、^３Ｈチミジンと共に、アルプラゾラム（１００ｎｇ／ｍｌ）と一緒に、ある用量範囲のＧＡＢＡと共に４日間インキュベートした。示したデータは、代表的な実験における、培地のみを用いた培養物の平均増殖速度（１と設定）に対する相対的な平均増殖速度である。Ｎ＝同一の培養物の３回繰り返しによる２回の独立した実験。ＧＡＢＡまたはＧＡＢＡ＋アルプラゾラムについては、対照である培地に対して^††ｐ＜０．０１及び^†††ｐ＜０．００１。ＧＡＢＡ＋アルプラゾラムについては、ＧＡＢＡのみに対して^＊ｐ＜０．０５及び^＊＊＊Ｐ＜０．０１。

【発明を実施するための形態】

【0119】

本明細書に記載の組成物及び方法は、ＧＡＢＡ_Ａ受容体の陽性アロステリック調節因子との併用でのＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を促進することができるとの発見に関する。更に、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドの上記陽性アロステリック調節因子との併用により、単独で用いられるＧＡＢＡ受容体活性化リガンドよりも、ベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能に対する有意により大きな効果が生じる。特定の理論に拘束されるものではないが、ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドとＰＡＭとの併用は、ベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能に対して相乗効果を有すると思われる。

【0120】

上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドと上記ＰＡＭとの併用によってもたらされる効果の向上に鑑みれば、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド並びに／もしくは上記ＰＡＭのいずれか、またはそれらの両方を、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドまたは上記ＰＡＭが単独で用いられる場合に、哺乳動物における（例えば膵島移植を受けている哺乳動物における）ベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を促進するために用いられることとなる用量よりも低い用量で用いることができることが認識されよう。

【0121】

したがって、種々の実施形態において、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能の促進方法が提供され、該方法は、それを必要とする哺乳動物（例えば膵島移植を受けている対象）にＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）との併用でＧＡＢＡ受容体活性化リガンドを投与することを含み、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドは、単独で用いられる場合にベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能に対する同様の効果を達成するために用いられることとなる用量よりも低い用量で用いられる、及び／または上記陽性アロステリック調節因子は治療用量未満の用量で用いられる。特定の実施形態において、上記両方の薬剤の投与はベータ細胞の複製を促進する。特定の実施形態において、上記両方の薬剤の投与はベータ細胞の生存を促進する。特定の実施形態において、上記両方の薬剤の投与はベータ細胞の機能（例えば、インスリンの含量及び／または分泌の増加）を促進する。特定の実施形態において、上記両方の薬剤の投与はインスリン陽性ベータ細胞の数を増加させる。

【0122】

特定の実施形態において、ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及びＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）を含む医薬製剤が提供される。特定の実施形態において、本明細書に記載の方法の実施のためのキットもまた企図される。種々の実施形態において、かかるキットは、ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドを収納する容器と、ＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）を収納する容器と、任意選択で、なかんずく本明細書に記載の方法におけるこれらの薬剤の使用を教示する取扱説明書とを備える。

【0123】

ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド
ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドは当業者に周知である。かかるリガンドとしては、例えば、ＧＡＢＡ受容体の天然のリガンドであるガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）が挙げられる。他のＧＡＢＡ受容体活性化リガンドとしては、ホモタウリン、バマルゾール、ガバミド、ＧＡＢＯＢ、ガボキサドール、イボテン酸、イソグアバシン、イソニペコチン酸、ムシモール、フェニバット、ピカミロン、プロガビド、キスカラミン、プロガビド酸（ＳＬ ７５１０２）、チオムシモール、プレガバリン、ビガバトリン、６−アミノニコチン酸、ＸＰ１３５１２（（±）−１−（［（α−イソブタノイルオキシエトキシ）カルボニル］アミノメチル）−１−シクロヘキサン酢酸）などが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0124】

これらのＧＡＢＡ受容体活性化リガンドは例示的なものであって、限定的なものではないことが意図される。他のＧＡＢＡ受容体活性化リガンドは当業者に公知であり、本明細書に記載の方法、製剤、及びキットにおけるそれらの使用が企図される。

【0125】

ＧＡＢＡ_Ａ受容体陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）
ＧＡＢＡ_Ａ受容体の陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）は当業者には周知である。例示的なＰＡＭとしては、アルコール（例えば、エタノール、イソプロパノール）、アベルメクチン（例えばイベルメクチン）、バルビツレート（例えばフェノバルビタール）、ベンゾジアゼピン、臭化物（例えば臭化カリウム）、カルバメート（例えば、メプロバメート、カリソプロドール）、クロラロース、クロルメザノン、クロメチアゾール、ジヒドロエルゴリン（例えば、エルゴロイド（ジヒドロエルゴトキシン））、エタゼピン、エチフォキシン、イミダゾール（例えばエトミデート）、カバラクトン（カバに含まれる）、ロレクレゾール、神経活性ステロイド（例えば、アロプレグナノロン、ガナキソロン）、非ベンゾジアゼピン系（例えば、ザレプロン、ゾルピデム、ゾピクロン、エスゾピクロン）、ペトリクロラール、フェノール類（例えばプロポフォール）、ピペリジンジオン（例えば、グルテチミド、メチプリロン）、プロパニジド、ピラゾロピリジン（例えばエタゾレート）、キナゾリノン（例えば、メタクアロン）、スカルキャップの構成成分（例えば、バイカレインなどのフラボノイドを始めとする、但しこれらに限定されないＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｓｐ．の成分）、スチリペントール、スルホニルアルカン（例えば、スルホンメタン、テトロナール、トリオナール）、バレリアンの構成成分（例えば、吉草酸、バレレニン酸）、及びある種の揮発性物質／ガス（例えば、クロラール水和物、クロロホルム、ジエチルエーテル、セボフルラン）が挙げられるが、これらに限定はされない。種々の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドと併用されるＰＡＭからは、アルコール、及び／またはカバラクトン、及び／またはスカルキャップもしくはスカルキャップの構成成分、及び／またはバレリアンもしくはバレリアンの構成成分、及び／または揮発性ガスが除外される。

【0126】

特定の実施形態において、上記ＰＡＭは、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、キナゾリノン、及び神経ステロイドからなる群より選択される薬剤を含む。例示的なバルビツレートとしては、アロバルビタール（５，５−ジアリルバルビツレート）、アモバルビタール（５−エチル−５−イソペンチル−バルビツレート）、アプロバルビタール（５−アリル−５−イソプロピル−バルビツレート）、アルフェナール（５−アリル−５−フェニル−バルビツレート）、バルビタール（５，５−ジエチルバルビツレート）、ブラロバルビタール（５−アリル−５−（２−ブロモ−アリル）−バルビツレート）、ペントバルビタール（５−エチル−５−（１−メチルブチル）−バルビツレート）、フェノバルビタール（５−エチル−５−フェニルバルビツレート）、セコバルビタール（５−［（２Ｒ）−ペンタン−２−イル］−５−プロパ−２−エニル−バルビツレート）などが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0127】

例示的なベンゾジアゼピンとしては、アルプラゾラム、ブロマゼパム、クロルジアゼポキシド、クロナゼパム、クロラゼパート、ジアゼパム、エスタゾラム、フルラゼパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロラゼパム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、トリアゾラムなどが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0128】

例示的な神経ステロイドとしては、アロプレグナノロン、及びプレグナノロンが挙げられるが、これらに限定はされない。

【0129】

特定の実施形態において、特に有用性の高い上記ＰＡＭはアルプラゾラム（ＸＡＮＡＸ（登録商標））を含む。

【0130】

これらのＰＡＭは例示的なものであって、限定的なものではないことが意図される。他のＰＡＭは当業者に公知であり、本明細書に記載の方法、製剤、及びキットにおけるそれらの使用が企図される。

【0131】

複合製剤
種々の実施形態において、１種または複数種のＧＡＢＡ受容体活性化リガンドと１種または複数種のＧＡＢＡ_Ａ受容体の陽性アロステリック調節因子とを含む医薬製剤が企図される。特定の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドは、ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドを単独で含む治療用製剤よりも低い単位投与量で存在する、及び／または上記ＰＡＭは、上記ＰＡＭを単独で含む一般的な、及び／または認可された、及び／または推奨される治療用製剤中よりも低い単位用量で存在する。

【0132】

特定の実施形態において、例えば本明細書に記載のように、複合製剤中のＧＡＢＡ受容体活性化リガンドは、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、ホモタウリン、バマルゾール、ガバミド、ＧＡＢＯＢ、ガボキサドール、イボテン酸、イソグアバシン、イソニペコチン酸、ムシモール、フェニバット、ピカミロン、プロガビド、キスカラミン、プロガビド酸（ＳＬ ７５１０２）、チオムシモール、プレガバリン、ビガバトリン、６−アミノニコチン酸、ＸＰ１３５１２（（±）−１−（［（α−イソブタノイルオキシエトキシ）カルボニル］アミノメチル）−１−シクロヘキサン酢酸）などの１種または複数種を含む。

【0133】

特定の実施形態において、上記複合製剤中の上記ＰＡＭは、アルコール（例えば、エタノール、イソプロパノール）、アベルメクチン（例えばイベルメクチン）、バルビツレート（例えばフェノバルビタール）、ベンゾジアゼピン、臭化物（例えば臭化カリウム）、カルバメート（例えば、メプロバメート、カリソプロドール）、クロラロース、クロルメザノン、クロメチアゾール、ジヒドロエルゴリン（例えば、エルゴロイド（ジヒドロエルゴトキシン））、エタゼピン、エチフォキシン、イミダゾール（例えばエトミデート）、カバラクトン（カバに含まれる）、ロレクレゾール、神経活性ステロイド（例えば、アロプレグナノロン、ガナキソロン）、非ベンゾジアゼピン系（例えば、ザレプロン、ゾルピデム、ゾピクロン、エスゾピクロン）、ペトリクロラール、フェノール類（例えばプロポフォール）、ピペリジンジオン（例えば、グルテチミド、メチプリロン）、プロパニジド、ピラゾロピリジン（例えばエタゾレート）、キナゾリノン（例えばメタクアロン）、スカルキャップの構成成分（例えば、バイカレインなどのフラボノイドを始めとする、但しこれらに限定されないＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｓｐ．の成分）、スチリペントール、スルホニルアルカン（例えば、スルホンメタン、テトロナール、トリオナール）、バレリアンの構成成分（例えば、吉草酸、バレレニン酸）の１種または複数種を含む。種々の実施形態において、例えば本明細書に記載のように、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドと併用される上記ＰＡＭからは、アルコール、及び／またはカバラクトン、スカルキャップもしくはスカルキャップの構成成分などが除外される。

【0134】

特定の実施形態において、上記複合製剤はＧＡＢＡとアルプラゾラムとを含む。

【0135】

上記活性薬剤（複数可）（例えば、本明細書に記載のＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可））は、「原形の」形態で、または必要に応じて、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、誘導体などの形態で製剤及び投与してもよい。但し、上記塩、エステル、アミド、プロドラッグまたは誘導体が薬理学的に適したものである、すなわち、本方法（複数可）において有効であるとの前提である。上記活性薬剤の塩、エステル、アミド、プロドラッグ及び他の誘導体は、合成有機化学の当業者に公知の、及び、例えば、Ｍａｒｃｈ （１９９２） Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ４ｔｈ Ｅｄ． Ｎ．Ｙ． Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅによって記述される、ならびに上記の標準的な手順を用いて調製することができる。

【0136】

例えば、塩を形成することができる官能基を有する、本明細書に記載の薬剤（複数可）（例えば、本明細書に記載のＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可））のいずれかに対して、薬学的に許容される塩を調製することができる。薬学的に許容される塩は、親化合物の活性を保持し、それが投与される対象及び投与される状況において有害な影響または悪影響を与えない任意の塩である。

【0137】

種々の実施形態において、薬学的に許容される塩は有機または無機の塩基から誘導してもよい。上記塩は、１価または多価のイオンであってよい。特に興味深いのは、無機イオン、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウムである。有機塩、特にアンモニウム塩は、モノ、ジ及びトリアルキルアミンまたはエタノールアミンなどのアミンを用いて製造してもよい。塩はまた、カフェイン、トロメタミン及び類似の分子を用いて形成してもよい。

【0138】

塩、エステル、アミド、プロドラッグなどとして薬学的に活性な薬剤を製剤する方法は当業者に周知である。例えば、遊離塩基から、一般的には適宜の酸との反応を含む従来の方法論を用いて塩を調製することができる。一般に、当該薬物の塩基形態をメタノールまたはエタノールなどの極性有機溶媒に溶解し、ここに当該の酸を添加する。生成した塩は沈殿するか、またはより極性の低い溶媒を添加することによって溶液から取り出すことができるかのいずれかである。酸付加塩を調製するのに好適な酸としては、有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの有機酸、並びに無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの両方が挙げられるが、これらに限定はされない。酸付加塩は、適宜の塩基で処理することによって遊離塩基に再転化することができる。本明細書における活性薬剤の特定の特に好ましい酸付加塩としては、塩酸または臭化水素酸を用いて調製してもよいハロゲン化物塩が挙げられる。逆に、本発明の活性薬剤の塩基性塩は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミンなどの薬学的に許容される塩基を用いて類似の方法で調製される。特に好ましい塩基性塩としては、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩、及び銅塩が挙げられる。

【0139】

塩基性薬物の塩形態の調製のためには、当該対イオンのｐＫａは、好ましくは当該薬物のｐＫａよりも少なくとも約２ｐＨ単位低い。同様に、酸性薬物の塩形態の調製のためには、当該対イオンのｐＫａは、好ましくは当該薬物のｐＫａよりも少なくとも約２ｐＨ単位高い。こうすることにより、当該対イオンが溶液のｐＨを、塩の溶解度が遊離酸または遊離塩基の溶解度に勝る塩のプラトーに到達するためのｐＨ_ｍａｘよりも低いレベルにすることができる。医薬品有効成分（ＡＰＩ）中のイオン化基と当該の酸または塩基中のイオン化基におけるｐＫａ単位の差に関する一般化された上記の法則は、プロトン移動をエネルギー的に有利にすることを意味する。当該ＡＰＩ及び対イオンのｐＫａが有意に異なっていない場合、固体の複合体が形成される場合があるが、水性環境においては速やかに不均化する（すなわち、薬物の個々の実体及び対イオンに分解する）場合がある。

【0140】

上記対イオンは薬学的に許容される対イオンであるであることが好ましい。好適なアニオン性塩の形態としては、酢酸塩、安息香酸塩、ベンジル酸塩、酒石酸水素塩、臭化物、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩（ｅｓｔｏｌａｔｅ）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化物、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、臭化メチル、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、リン酸塩及び二リン酸塩、サリチル酸塩及びビスサリチル酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド、吉草酸塩などが挙げられるがこれらに限定はされず、一方、好適なカチオン性塩の形態としては、アルミニウム、ベンザチン、カルシウム、エチレンジアミン、リシン、マグネシウム、メグルミン、カリウム、プロカイン、ナトリウム、トロメタミン、亜鉛などが挙げられるがこれらに限定はされない。

【0141】

エステルの調製は、一般的には、上記活性薬剤の分子構造内に存在するヒドロキシル基及び／またはカルボキシル基の官能化を伴う。特定の実施形態において、上記エステルは、一般的には、遊離アルコール基のアシル置換誘導体、すなわち、式ＲＣＯＯＨ（Ｒはアルキル、好ましくは低級アルキルである）のカルボン酸に由来する部分である。エステルは、所望であれば、従来の水素化分解または加水分解手法を用いて遊離酸に再転化することができる。

【0142】

アミドもまた、当業者に公知のまたは関連する文献に記載される技法を用いて調製することができる。例えば、アミドはエステルから適宜のアミン反応剤を用いて調製してもよく、または無水物もしくは酸塩化物からアンモニアもしくは低級アルキルアミンとの反応によって調製してもよい。

【0143】

種々の実施形態において、本明細書中で特定された活性薬剤（例えば、複合化されたＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可））は、哺乳動物におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を促進するための非経口投与、局所投与、経口投与、経鼻投与（または他の手段による吸入）、直腸投与、またはエアゾールもしくは経皮投与によるなどの局所投与に有用である。

【0144】

種々の実施形態において、本明細書に記載の活性薬剤はまた、薬学的に許容される担体（複数可）（賦形剤（複数可））と配合して、両方の薬剤を含有する薬理学的組成物を形成してもよい。薬学的に許容される担体は、例えば、当該組成物を安定化させるまたは上記活性薬剤（複数可）の吸収を増加もしくは減少させるように作用する１種または複数種の生理学的に許容される化合物（複数可）を含有していてもよい。生理学的に許容される化合物としては、例えば、グルコース、スクロース、またはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、脂質などの保護及び取り込みの増強剤、上記活性薬剤のクリアランスまたは加水分解を低減する組成物、または賦形剤もしくは他の安定剤及び／または緩衝剤を挙げることができる。

【0145】

他の生理学的に許容される化合物、特に錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤などの製剤に用いる化合物としては、結合剤、希釈剤／充填剤、崩壊剤、潤滑剤、懸濁化剤などがあげられるが、これらに限定はされない。

【0146】

特定の実施形態において、経口剤形（例えば錠剤）を製造するためには、賦形剤（例えば、ラクトース、スクロース、デンプン、マンニトール等）、任意選択で崩壊剤（例えば、炭酸カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスポビドン等）、結合剤（例えば、アルファ−デンプン、アラビアガム、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、シクロデキストリン等）、及び任意選択で潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール６０００等）が、例えば、上記活性成分または複数の活性成分（例えば、アラプロクラート及び本明細書に記載の他の化合物、またはそれらの互変異性体（複数可）もしくは立体異性体（複数可）、または上記アラプロクラート及び他の化合物、上記立体異性体（複数可）、または上記互変異性体（複数可）の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはそれらの類似体、誘導体、もしくはプロドラッグ）に添加され、得られた組成物が圧縮成型される。上記圧縮成型された製品は、必要に応じて、例えば、味覚をマスキングするためまたは腸溶性もしくは持続性放出のための公知の方法を用いてコーティングされる。好適なコーティング材料としては、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ＰＯＬＹＯＸ（登録商標）ポリエチレングリコール、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びオイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）（Ｒｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ、ドイツ国；メタクリル−アクリル共重合体）が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0147】

他の生理学的に許容される化合物としては、湿潤剤、乳化剤、分散剤または特に微生物の増殖もしくは作用を防止するのに有用な防腐剤が挙げられる。種々の防腐剤が周知であり、防腐剤としては、例えば、フェノール及びアスコルビン酸が挙げられる。当業者であれば、生理学的に許容される化合物を含む薬学的に許容される担体（複数可）の選択は、例えば、当該活性薬剤（複数可）の投与経路及び該活性薬剤（複数可）の特定の生理化学的特性に依存することを理解しよう。

【0148】

特定の実施形態において、上記賦形剤は無菌であり、一般に望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技法によって滅菌することができる。錠剤及びカプセル剤などの種々の経口剤形の賦形剤については、無菌性は必要ではない。通常、ＵＳＰ／ＮＦ基準で十分である。

【0149】

本医薬組成物は、投与方法に応じて種々の単位剤形で投与してもよい。好適な単位剤形としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、坐剤、貼付剤、鼻用噴霧剤、注射剤、移植用徐放性製剤、粘膜付着性フィルム、局所ワニス、脂質複合体等が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0150】

本明細書に記載の活性薬剤（例えば、ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可））を含む医薬組成物は、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、湿式粉砕、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスを用いて製造してもよい。医薬組成物は、当該活性薬剤の薬学的に用いることができる製剤への加工を容易にする１種または複数種の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤または補助剤を用いて、従来の方法で製剤化してもよい。適切な製剤は選択される投与経路に依存する。

【0151】

特定の実施形態において、上記複合化された活性薬剤（例えば、ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可））が経口投与用に製剤化される。経口投与用の好適な製剤は、上記活性薬剤（複数可）を、当技術分野で周知の経口送達に適した薬学的に許容される担体と配合することによって、容易に調製することができる。かかる担体によって、本明細書に記載の活性薬剤（複数可）を、治療を受ける患者による経口摂取用の、錠剤、丸剤、糖衣剤、カプレット剤、トローチ剤、ゲルカプセル剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液剤などとして製剤することが可能になる。例えば、散剤、カプセル剤及び錠剤などの経口投与用の固体製剤について、好適な賦形剤としては、糖類（例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール及びソルビトール）、セルロース調製物（例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、合成ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））、顆粒化剤、及び結合剤を挙げることができる。所望であれば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの崩壊剤を添加してもよい。所望であれば、固体剤形は、標準的な技法を用いて糖コーティングまたは腸溶性コーティングしてもよい。腸溶性コーティングされた粒子の調製は、例えば、米国特許第４，７８６，５０５号及び第４，８５３，２３０号に開示される。

【0152】

吸入による投与に関しては、上記活性薬剤（複数可）（例えば、本明細書に記載のＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可））は、加圧容器または噴霧器からの、適宜の噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適宜のガスを用いたエアゾール噴霧の形態で簡便に送達される。加圧エアゾールの場合、計量した量を送達するための弁を備えることによって用量単位を測定することができる。吸入器または送気器で用いるための、上記化合物とラクトースまたはデンプンなどの適宜の粉末基剤との粉体混合物を含む、例えばゼラチンのカプセルまたはカートリッジを製剤してもよい。

【0153】

特定の実施形態において、本明細書に記載の活性薬剤は、当業者に周知の標準的な方法に従って、全身投与用に（例えば注射剤として）製剤される。全身投与製剤としては、注射、例えば、皮下、静脈内、筋内、髄腔内または腹腔内注射による投与用に設計された製剤、ならびに経皮、経粘膜経口または肺投与用に設計された製剤が挙げられるが、これらに限定はされない。注射用には、本明細書に記載の活性薬剤を、水溶液中、好ましくはハンクス溶液、リンガー溶液、または生理的食塩水緩衝液などの生理学的に適合する緩衝液中、及び／または特定の乳化液製剤中で製剤してもよい。上記溶液（複数可）は、懸濁化剤、安定剤及び／または分散剤などの製剤化剤を含有してもよい。特定の実施形態において、上記活性薬剤（複数可）は、使用前に適宜のビヒクル（例えば発熱物質を含まない無菌水）で構成するための粉末形態で提供されてもよい。経粘膜投与用、及び／または血液／脳関門通過用に、透過すべき障壁に適した浸透剤を製剤に用いてもよい。かかる浸透剤は当技術分野において一般的に知られている。注射製剤及び吸入製剤は、一般的に無菌または実質的に無菌の製剤として提供される。

【0154】

上述の製剤に加えて、上記活性薬剤（例えば、本明細書に記載のＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可））はまた、デポー製剤として製剤してもよい。かかる長時間作用する製剤は、移植（例えば、皮下もしくは筋内）によってまたは筋内注射によって投与してもよい。したがって、例えば、上記活性薬剤（複数可）は、適宜のポリマー材料もしくは疎水性材料（例えば、許容される油中の乳化液として）またはイオン交換樹脂と共に、あるいは難溶性誘導体、例えば難溶性塩として製剤されてもよい。

【0155】

特定の実施形態において、本明細書に記載の活性薬剤（複数可）はまた、従来の経皮薬物送達システム、すなわち、上記活性薬剤（複数可）が、一般的には、皮膚に貼付される薬物送達デバイスとしての役割を果たす積層構造内に含まれる経皮「貼付剤」を用いて、皮膚を通して送達されてもよい。かかる構造においては、上記薬物組成物は一般的に、上部の裏打層の下にある層、すなわち「リザーバー」に含まれる。この文脈における用語「リザーバー」とは、最終的に皮膚の表面への送達に利用可能なある量の「活性成分（複数可）」をいうことが理解されよう。したがって、例えば、上記「リザーバー」は、上記貼付剤の裏打層上の粘着剤中、または当業者に公知の種々の異なるマトリクス配合物中に上記活性成分（複数可）を含んでいてもよい。上記貼付剤は単一のリザーバーを含んでいてもよく、または複数のリザーバーを含んでいてもよい。

【0156】

例示的な一実施形態において、上記リザーバーは、薬物送達の間に皮膚に当該システムを付着させる役割を果たす、薬学的に許容される接触粘着剤のポリマーマトリクスを備える。好適な皮膚接触粘着剤の例としては、ポリエチレン、ポリシロキサン、ポリイソブチレン、ポリアクリレート、ポリウレタンなどが挙げられるが、これらに限定はされない。あるいは、上記薬物含有リザーバーと皮膚接触粘着剤とが別個の区別される層として存在し、この場合には、上記粘着剤は、上記ポリマーマトリクスであってもよく、または液体もしくはヒドロゲルリザーバーであってもよく、または他の何らかの形態を取っていてもよい上記リザーバーの下にある。当該デバイスの上面としての役割を果たすこれらの積層体の上記裏打層は、好ましくは当該「貼付剤」の主要な構造的構成要素としての役割を果たし、当該デバイスの柔軟性の多くの部分が該裏打層によって与えられる。この裏打層に選択される材料は、好ましくは上記活性薬剤（複数可）及び存在する他のいずれの物質に対しても実質的に不浸透性である。

【0157】

あるいは、他の医薬送達システムを用いることもできる。例えば、リポソーム、乳化液、及びマイクロエマルション／ナノエマルションが薬学的に活性な化合物を保護及び送達するために用いてもよい送達ビヒクルの周知の例である。ジメチルスルホキシドなどの特定の有機溶媒も用いることはできるが、通常はより大きな毒性という犠牲を伴う。

【0158】

特定の実施形態において、上記複合製剤は、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドまたはＰＡＭを単独で用いた場合に提供される用量よりも低い用量（単位用量）の当該ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及び／または上記ＰＡＭ（複数可）を含む。特定の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドは、当該ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドが単独で用いられる場合にベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を促進するために必要とされる該ＧＡＢＡ受容体活性化リガンドの約９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、または約４０未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満で存在する。

【0159】

特定の実施形態において、上記ＰＡＭ（複数可）は治療用量未満の用量で提供される。これは、当該ＰＡＭが元々設計及び／または認可の対象とした活性を目的として用いられる場合の、認可された及び／または推奨される及び／または認知された当該ＰＡＭの用量よりも低い用量をいう。

【0160】

例えば、パニック障害の治療のためのアルプラゾラム（即時放出性錠剤）の推奨される／認可された用量は、経口投与による１日当たり３回の０．５ｍｇの初期用量及び分割投与で１〜１０ｍｇ／日の維持用量（分割投与で５〜６ｍｇ／日の平均用量）である。持続放出性アルプラゾラム錠剤の推奨される／認可された用量は１日１回０．５ｍｇ〜１ｍｇであり、維持用量は１日１回１〜１０ｍｇ（平均用量は１日１回３〜６ｍｇ）である。成人のうつ病の治療のためのアルプラゾラム（即時放出性錠剤）の推奨される／認可された用量は、経口投与による１日当たり３回の０．５ｍｇの初期用量であり、これが分割投与での経口投与による１日当たり３ｍｇの平均有効用量に増加される。高齢者または衰弱した患者において、不安症に対する高齢者向けの投与は、経口投与による１日当たり２〜３回の０．２５ｍｇの初期用量で提供され、２ｍｇを越える日用量は、高齢者における使用には不適当である可能性がある投薬としてのビアーズ基準に該当する。

【0161】

一製剤において、治療用量未満の用量は、一般的には、最低の推奨される／認可された単位剤形より少なく、一治療方法において、例えばアルプラゾラムの場合、単位剤形として０．２５ｍｇ未満、且つ１日当たり０．５ｍｇ未満の総量である。特定の実施形態において、上記治療用量未満の用量は、この推奨される／認可された用量の９０％未満、または約８０％未満、または約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満である。

【0162】

これらの用量は例示的なものであり、限定するものではないことが意図される。対象に投与されるＧＡＢＡ受容体活性化リガンド及びＰＡＭの実際の投与量は、体重、疾病の重篤度、過去のまたは同時に行われる治療的介入、当該患者の特発性疾患及び投与経路などの身体的及び生理学的要因によって決定することができる。上記用量及び投与経路に応じて、好ましい用量及び／または有効量の投与回数は、当該対象の応答次第で変化し得る。いずれにしても、投与を担当する医師は、個々の対象に対して、組成物中の活性成分（複数可）の濃度及び適した用量（複数可）を決定することとなる。

【0163】

キット
特定の実施形態において、本明細書に記載の方法を実施するためのキットが提供される。種々の実施形態において、上記キットは、ＧＡＢＡ活性化リガンドを収納した容器と、本明細書に記載のＧＡＢＡ_Ａ受容体の陽性アロステリック調節因子を収納した容器とを備える。特定の実施形態において、上記キットはＧＡＢＡ及びアルプラゾラムを備える。

【0164】

特定の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及び上記ＰＡＭ（複数可）は単位剤形（複数可）（例えば、錠剤、カプレット剤、貼付剤など）で提供されてもよく、及び／または任意選択で１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤と配合されていてもよい。特定の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）と上記ＰＡＭ（複数可）とは別個の容器中で提供されてもよい。特定の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）と上記ＰＡＭ（複数可）とは同一容器中で提供されてもよい。特定の実施形態において、上記ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）と上記ＰＡＭ（複数可）とは複合製剤として同一容器中で提供されてもよい。

【0165】

更に、上記キットは任意選択で、本発明の方法の実施のための指示（すなわちプロトコル）を提供するラベル及び／または取扱説明書を備える。特定のラベルまたは取扱説明書では、哺乳動物（例えば、膵島細胞移植を受けている哺乳動物）におけるベータ細胞の複製、及び／または生存、及び／または機能を促進するためのＧＡＢＡ受容体活性化リガンド（複数可）及びＰＡＭ（複数可）の併用が説明される。上記ラベルまたは取扱説明書ではまた、任意選択で、好ましい用量／治療レジメン、禁忌症などを教示してもよい。

【0166】

上記取扱説明書は一般的には書面または印刷物を含むが、それらには限定されない。かかる説明を記憶し、それらをエンドユーザに伝えることができる任意の媒体が、本発明によって企図される。かかる媒体としては、電子的記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学的媒体（例えばＣＤ ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定はされない。かかる媒体は、かかる取扱説明書を提供するインターネットサイトへのアドレスを包含していてもよい。

【実施例】

【0167】

以下の実施例は例証のために提示するものであって、特許請求の範囲に係る発明を限定するものではない。

【0168】

実施例１ ベータ細胞の複製を亢進させるためのＧＡＢＡ受容体活性化リガンドのアルプラゾラムとの併用
この実施例において、本発明者らは、ベンゾジアゼピン アルプラゾラム（ＸＡＮＡＸ（登録商標））のＧＡＢＡとの併用を、ベータ細胞の増殖及び／または生存に及ぼすその効果に関して検討した。アルプラゾラムは、不安症及びパニック障害の治療に広く処方されている。アルプラゾラムは１９８１年の導入後、急速に処方箋が５千万件を超える大ヒット薬物となった。アルプラゾラムは、指示通りに用いられれば長期間使用しても安全である（ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１１／０１８２７６ｓ０４５ｌｂｌ．ｐｄｆにおけるＦＤＡ認可のラベル及びＪｏｎａｓ ａｎｄ Ｃｏｈｏｎ （１９９３） Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ． ５４ Ｓｕｐｐｌ：２５−４５；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ６−８を参照のこと）。本発明者らは、アルプラゾラムを、１）その長期的安全性プロファイル、及び２）その適合するＧＡＢＡ_Ａ−Ｒサブユニットとの相互作用に基づいて、検討することを選択した。

【0169】

ＧＡＢＡ受容体活性化リガンド
ＧＡＢＡはヒトによる摂取に対して安全である。ＧＡＢＡは栄養補助食品として処方箋なしで販売されている。本発明者らは、２６週間のＧＡＢＡ処理によって、脾臓単核細胞の総数またはＣＤ４＋、ＣＤ８＋、Ｔ及びＢリンパ球の割合が有意に変化しない（Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７３（８）： ５２９８−５３０４）だけでなく、自己反応性Ｔ細胞がＧＡＢＡ媒介性阻害に対して脱感作されることもない（Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７３（８）： ５２９８−５３０４；Ｔｉａｎ （２０１１） Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ， ４４： ４６５−４７０）ことを認めた。１９５０年代〜１９８０年代に、ヒトによる治験において、長期間の経口投与でのＧＡＢＡによる治療が、数百人の個人において、てんかん発作を低減する能力及び脳血管障害を改善する能力について試験された（Ｏｔｏｍｏ ｅｔ ａｌ． （１９８１） Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ． ３１（９）： １５１１−１５２３；Ｌｏｅｂ ｅｔ ａｌ． （１９８７） Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｒｅｓ． １（３）： ２０９−２１２；Ｔｏｗｅｒ ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｄｓ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ＧＡＢＡ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ， １９６０；Ｋｕｒｉｙａｍａ ａｎｄ Ｓｚｅ （１９７１） Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ． １０（１）： １０３−１０８）。結果は、悪影響は示さなかったが臨床的利点も示さず、これはＧＡＢＡが血液脳関門を通過しないためである可能性がある。

【0170】

薬学的関心が、血液脳関門を通過し、ＣＮＳ神経細胞上のＧＡＢＡ−Ｒを調節して、発作性障害、不安症及び不眠症を改善することができる薬物に集まっている。ＧＡＢＡは、血液脳関門を通過できないことによって、ＣＮＳへの副作用を伴わずに末梢ＧＡＢＡ−Ｒを調節することに関して理想的である。炎症反応を下方制御するＧＡＢＡの能力は適度であり、本発明者らはこのことが、他の免疫抑制剤によるような免疫系機能への妨害が少なく、白血球の減少がないことから、有利であると見なしている。ＧＡＢＡは、その温和な効果にもかかわらず、異なる遺伝的背景を有するマウスにおいて、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）（Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７３（８）： ５２９８−５３０４： Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７）、好酸球性血管性浮腫（ＥＡＥ）（Ｂｈａｔ （２０１０） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０７（６）： ２５８０−２５８５）及び関節リウマチ（Ｔｉａｎ （２０１１） Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ， ４４： ４６５−４７０）を効率的に予防し、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）を改善した（Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１１） ＰｌｏＳ ｏｎｅ． ６（９）： ｅ２５３３８）。

【0171】

ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ及びＧＡＢＡ_Ｂ−Ｒ
ＧＡＢＡ−Ｒには２種の異なる型、すなわちＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ及びＧＡＢＡ_Ｂ−Ｒがある。免疫細胞は主としてＧＡＢＡ_Ａ−Ｒを発現する（Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｊ． Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ． ９６（１）： ２１−２８；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７３（８）： ５２９８−５３０４；Ｂｈａｔ （２０１０） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０７（６）： ２５８０−２５８５；Ｂｊｕｒｓｔｏｍ ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｊ． Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ． ２０５： ４４−５０）一方、β細胞はＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ及びＧＡＢＡ_Ｂ−Ｒの両方を発現する（Ｌｉｇｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ５０（４）： ７６４−７７３；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６２（１１）： ３７６０−３７６５；Ｂｒａｕｎ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ５９（７）： １６９４−２７０１；Ｇｕ ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ． ５２（８）： ６８７−６９４；Ｂｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ４５（２）： ２４２−２５２；Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｂｉｏｌｏｇｙ， １９（３）： １４６−１４８）。ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒは、迅速作動性（ｆａｓｔ−ａｃｔｉｎｇ）塩素イオンチャネルを形成する種々のサブユニットの五量体である。ＧＡＢＡ_Ｂ−Ｒは２種のサブユニットのみのヘテロ二量体であるが、それらの特性は他の細胞タンパク質によって変化し得る（Ｓｃｈｗｅｎｋ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｎａｔｕｒｅ， ４６５（７２９５）： ２３１−２３５）。ＧＡＢＡ_Ｂ−Ｒは遅効性（ｓｌｏｗ−ａｃｔｉｎｇ）Ｇタンパク質共役型受容体を形成する（Ｂｅｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｒｅｖ． ８４（３）： ８３５−８６７）。したがって、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ及びＧＡＢＡ_Ｂ−Ｒは大きく異なる（塩素イオンチャネル対Ｇタンパク質共役型受容体）。この実施例において本発明者らはＧＡＢＡ_Ａ−Ｒに焦点を当てている。というのもＧＡＢＡ_Ａ−Ｒは自己免疫応答を阻害するのと同時にβ細胞の複製及び生存を促進する能力を有するからである。

【0172】

１９種の異なるＧＡＢＡ_Ａ−Ｒサブユニット、すなわち、６種のαサブユニット、３種の異なるβサブユニット、３種のγサブユニット、ならびにδ、ε、π、及びθサブユニット、加えて３種の非古典的ρサブユニットがある。５種のこれらのサブユニットが異なる様式で結合して、通常は２のα、２のβ、及び１の他のサブユニットタイプからなるＧＡＢＡ_Ａチャネルを形成する（図１の模式図を参照のこと）。異なるサブユニットの組み合わせを有するＧＡＢＡ_Ａ−Ｒは、異なる薬理学的特性ならびに特異的アゴニスト及びアンタゴニストを有する（Ｏｌｓｅｎ ａｎｄ Ｔｏｂｉｎ （１９９０） ＦＡＳＥＢ Ｊ． ４（５）： １４６９−１４８０；Ｌｕｄｄｅｎｓ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ３４（３）： ２４５−２５４）。β細胞において、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ Ｃｌ⁻チャネルの活性化によって脱分極、電位開口型カルシウムチャネルの開口、ならびにＣａ^２＋依存性Ｐｉ３Ｋ／Ａｋｔ細胞の増殖及び生存シグナル伝達経路の活性化が生じる（Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７；Ｐｕｒｗａｎａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ；６３（１２）：４１９７−４２０５；Ｂｒａｕｎ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ５９（７）： １６９４−２７０１）。

【0173】

ベンゾジアゼピン
ベンゾジアゼピンはＧＡＢＡ結合部位ではなく、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ上の他の部位（図中の「ＢＺＤ」部位）に結合する。ベンゾジアゼピンは塩素イオンチャンネルを開口することはできないが、ＧＡＢＡが上記受容体に結合している場合にはＣｌ⁻コンダクタンスを増加させる陽性アロステリック調節因子として作用する。血液脳関門を通過する能力がほとんどまたは全くないＧＡＢＡとは異なり、ベンゾジアゼピンは血液脳関門を通過し、ＣＮＳ神経細胞によって産生されるＧＡＢＡの作用を亢進させることができる。異なるベンゾジアゼピンは、異なるサブユニット組成を有する異なるＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ（サブタイプ）に優先的に結合する。

【0174】

異なるＧＡＢＡ_Ａ−Ｒサブタイプ特異性を有するベンゾジアゼピンが、発作、不眠症、または不安症を改善するために用いられてきた。この実施例において、本発明者らはベンゾジアゼピン アルプラゾラム（ＸＡＮＡＸ（登録商標））を検討する。アルプラゾラムは不安症及びパニック障害の治療に広く処方されている。アルプラゾラムは１９８１年のその導入後、急速に処方箋が５千万件を超える大ヒット薬物となった。アルプラゾラムは、指示通りに用いられれば長期間使用しても安全である（ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１１／０１８２７６ｓ０４５ｌｂｌ．ｐｄｆにおけるＦＤＡ認可のラベル及びＪｏｎａｓ ａｎｄ Ｃｏｈｏｎ （１９９３） Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ． ５４ Ｓｕｐｐｌ：２５−４５；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ６−８を参照のこと）。本発明者らは、アルプラゾラムを、１）その長期的安全性プロファイル、２）ヒト膵島において適合するＧＡＢＡ_Ａ−Ｒサブユニットが発現されること（Ｂｒａｕｎ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ５９（７）： １６９４−２７０１）、及び３）グルコース制御が低下した個人においてＨｂＡ１ｃレベルを低減するアルプラゾラムの能力（Ｌｕｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ， １８（８）： １１３３−１１３９、下記を参照のこと）に基づいて、検討することを選択した。

【0175】

アルプラゾラムはグルコース制御が低下した患者においてＨｂＡ１ｃを低減した。
本発明者らは、ヒトβ細胞により発現される特定のＧＡＢＡ_Ａ−Ｒサブタイプ（複数可）に結合するベンゾジアゼピンが、膵島内で局所的に放出されるＧＡＢＡの作用を亢進させることができるとの仮説を立てた。臨床治験において、Ｔ１ＤまたはＴ２Ｄによってグルコース制御が低下した（ＨｂＡ１ｃの平均値が約１２）不安症の及び不安症ではない個人にアルプラゾラムを投与した。８週間の治療後、アルプラゾラムの投与を受けた患者においてはＨｂＡ１ｃレベルが有意に低下したが、プラセボにおいては低下が見られなかった（Ｌｕｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ， １８（８）： １１３３−１１３９）。この効果は不安症の及び不安症ではない患者の両方で同様であり、このことは、ＨｂＡ１ｃの低下は不安症の改善に依存しないことを示した。

【0176】

アルプラゾラムはイン・ビトロでヒト膵島細胞の増殖を促進する。
本発明者らはパイロットでの検討において、アルプラゾラム単独及び低レベルのＧＡＢＡとの併用によって、イン・ビトロでヒト膵島細胞の複製が亢進し得るかについて試験した。本発明者らは、ベンゾジアゼピン自体はＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ塩素イオンチャンネルを開口させることはできないが、β細胞はＧＡＤを発現しＧＡＢＡを分泌することから、アルプラゾラム単独を試験した。したがって、本発明者らは、アルプラゾラムが、内因的に産生された膵島ＧＡＢＡの作用を亢進させることができるとの仮説を立てた。

【0177】

アルプラゾラムを０．５〜６．０ｍｇ／日を送達する持続放出性錠剤で処方し、治療として当該薬物の投与を受けた人の血清中のアルプラゾラム濃度は通常１０〜１００ｎｇ／ｍｌの範囲である（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｔｈｅｒａｐ． Ｄｒｕｇ Ｍｏｎｉｔｏｒ． ２９（２）： ２４８−３６０；Ｆｒａｓｅｒ ａｎｄ Ｂｒｙａｎ （１９９１） Ｊ． Ａｎａｌｙｔ． Ｔｏｘｉｃｏｌ．， １５（２）： ６３−６５）。本発明者らは３０ｎｇ／ｍｌのアルプラゾラムと共に、またはアルプラゾラムなしでヒト膵島を培養した。本発明者らは、アルプラゾラムが、アルプラゾラムなしでの培養物と比較して、約１２３％ヒト膵島細胞増殖を促進することを見出した（図２）。本発明者らはこれらの培養物にＧＡＢＡを添加しなかったことから、アルプラゾラムがβ細胞から分泌されたＧＡＢＡと共に作用して、膵島細胞の増殖を促進した可能性が高い。この場合、５０個の培養膵島／ウェルから分泌されたＧＡＢＡは、おそらく非常に速やかに拡散して離れ、それによってアルプラゾラムの有効性が制限されており、この考え方は、ＧＡＢＡを培養培地に添加した本発明者らの検討の結果によって支持される（後述を参照のこと）。

【0178】

新たにＴ１Ｄと診断された患者においては、β細胞の量が大幅に減少し、その結果膵島内の分泌ＧＡＢＡのレベルが低くならざるを得ない。本発明者らは、残っているＧＡＢＡ分泌がアルプラゾラムと共に、残存するβ細胞の複製及び生存に対するＧＡＢＡの作用を亢進させ、このことが、Ｔ１Ｄ及びＴ２Ｄ患者においてアルプラゾラムが如何にしてＨｂＡ１ｃレベルを減少させるかを説明することができるとの仮説を立てた。注目すべきことに、本発明者らは、ＧＡＢＡ単剤療法によって、新たに糖尿病になったＮＯＤマウスにおいてβ細胞の複製及び生存が亢進し得ることを明らかにしている（Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ． ６３（９）： ３１２８−３１３４）。

【0179】

この検討で試験した本発明者らの仮説は、残存するβ細胞のＧＡＢＡを分泌する能力が最適なものよりも低いこと、及び外因性ＧＡＢＡによる治療が新たに糖尿病になったマウスにおいて、β細胞の複製及び生存を促進するのに有益であることであった。更に、本発明者らは、ＧＡＢＡとアルプラゾラムとによる併用療法が、β細胞の複製及び生存を促進する亢進した能力を有するか、及び／またはこれらの効果を達成するために必要ないずれかの薬物の量を低減することができるかを更に試験した。

【0180】

アルプラゾラムとＧＡＢＡとは相乗的に作用して、イン・ビトロにおいて少ない用量でヒト膵島細胞の複製を促進する。
次に本発明者らは、アルプラゾラム（３０ｎｇ／ｍｌ）と共に、またはアルプラゾラムなしで、ある用量範囲のＧＡＢＡを含有するヒト膵島培養物におけるヒト膵島細胞の増殖を比較した。０．０３ｍＭのＧＡＢＡによる処理ではヒト膵島細胞の増殖が有意に亢進しなかった一方で、同一用量のＧＡＢＡとアルプラゾラムとで一緒に処理するとヒト膵島細胞の増殖が１３８％亢進した（図３）。ＧＡＢＡを単独で用いて同様のレベルの増殖を達成するには、１０倍高いレベルのＧＡＢＡ（０．３ｍＭ）を必要とした。したがって、アルプラゾラムによって、十分確実なβ細胞の増殖を誘導するのに必要なＧＡＢＡの量が大幅に低下する。これらのデータは、ＧＡＢＡとアルプラゾラムとの併用が、イン・ビトロでのヒト膵島細胞の増殖に対して相乗的なプラスの効果を有することを実証している。

【0181】

複合化アルプラゾラム−ＧＡＢＡは相乗的に作用し、β細胞の自己免疫を阻害する。
アルプラゾラムと共にＧＡＢＡを投与することの更なる利点は、相乗的に自己反応性Ｔ細胞を阻害し、Ｔｒｅｇを促進する可能性である。血液中のＧＡＢＡのレベルは非常に低い（ＧＡＢＡを産生するＣＮＳ外のＧＡＤは非常に僅かしかなく、ＧＡＢＡの循環系中での半減期は非常に短い）。ＧＡＢＡを伴わずにアルプラゾラム単独では、免疫細胞に対する大きな効果はないはずであるが、併用においては、アルプラゾラムとＧＡＢＡは、おそらくは少ない用量のそれぞれの薬物を用いても、相乗的に作用して炎症を抑制しＴｒｅｇを促進し得る。アルプラゾラム＋ＧＡＢＡの免疫応答に対する効果の研究は大きな関心事ではあるが、これらの研究は本研究の範囲外であり、本研究はヒトβ細胞の複製に特化した。ヒトにおけるβ細胞の複製及び生存を亢進させるためのアルプラゾラムの変換能。アルプラゾラムはヒトにおいて、免疫抑制を起こさずまたは感染症に対する感受性を高めることはなく（ｈｔｔｐ：／／ｌａｂｅｌｉｎｇ．ｐｆｉｚｅｒ．ｃｏｍ／ＳｈｏｗＬａｂｅｌｉｎｇ．ａｓｐｘ？ｉｄ＝５４７にてアルプラゾラムの概況報告書を参照のこと）、このことは、ＧＡＢＡを伴わない場合、アルプラゾラムはヒト免疫細胞上のＧＡＢＡ−Ｒを活性化できないという考えと整合する。アルプラゾラムの主な副作用は眠気である。

【0182】

長期間のアルプラゾラムの使用後には、一般的に離脱及びリバウンド症状が起こり、このことから用量を徐々に減少させる必要がある（Ｖｅｒｓｔｅｒ ａｎｄ Ｖｏｌｋｅｒｔｓ （２００４） ＣＮＳ Ｄｒｕｇ Ｒｅｖ．， １０（１）： ４５−７６）。げっ歯動物における研究において、アルプラゾラムはストレスを与えたラットのＥＡＥ及び脊髄における炎症を抑制しており（Ｎｕｎｅｚ−Ｉｇｌｅｓｉａｓ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， Ｂｅｈａｖ． ９７（２）： ３５０−３５６）、このことは、アルプラゾラムにより、神経細胞によって産生されたＧＡＢＡの浸潤性免疫細胞に対する作用が亢進した可能性があることから興味深い。この場合、アルプラゾラムは、膵島の浸潤性免疫細胞に対しても同様に有利に作用する可能性がある。アルプラゾラムが免疫系に影響を及ぼすことの他の報告としては、１）１つのグループが、アルプラゾラムがマウスリンパ球の増殖応答を阻害し、Ｔ細胞によるＩＬ−２の産生及びマクロファージによるＴＮＦの産生を低下させたことを報告し（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １３（２−３）： ２５９−２６６；Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １４（２）： ２２７−３３７）、２）別のグループが、直接対比することによって、アルプラゾラムが有糸分裂促進因子誘導性のリンパ球の増殖及びＮＫ細胞の活性を亢進させることを報告した（Ｆｒｉｄｅ ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．， ４７（２６）： ２４０９−２４２０）ものしかない。

【0183】

アルプラゾラムは、免疫系及びＣＮＳに対する有害な副作用のあるジアゼパム（バリウム）及びロラゼパムなどの他のベンゾジアゼピンと混同してはならない。本発明者らは、アルプラゾラムが、かつては「末梢性ベンゾジアゼピン受容体」として知られ、現在はミトコンドリア外膜上のトランスロケータータンパク質（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＴＳＰＯ）（Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｔｒｅｎｄ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｓｃｉ． ２７（８）： ４０２−４０９）として知られ、ジアゼパムの二次結合部位であるタンパク質に対して有意に結合することの如何なる報告も認識していない。

【0184】

上述のように、アルプラゾラムはグルコース制御が低下した患者においてＨｂＡ１ｃを有意に低下させた（Ｌｕｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ， １８（８）： １１３３−１１３９）。本発明者らのパイロットによる検討によって、適度なレベルのアルプラゾラム（単独）がイン・ビトロでヒト膵島細胞の増殖に対して十分確実な効果を有していたことが明らかになっている（図２）。アルプラゾラムとＧＡＢＡとの併用には、同様の増殖効果を達成するためには１０倍高いレベルのＧＡＢＡ（単独）が必要とされるような、ヒト膵島細胞の増殖に対する相乗効果がある（図３）。このことは、ＧＡＢＡとの併用において、より低いレベルのアルプラゾラムがβ細胞の複製及び生存を促進し得ることを示唆する。アルプラゾラムは血液脳関門を通過する必要がないことから、抗不安（ａｎｘｉｏｌｙｔｉｃ）（抗不安（ａｎｔｉ−ａｎｘｉｅｔｙ））作用を目的として用いられる用量よりも低い用量のアルプラゾラムが、末梢におけるβ細胞ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒの調節に有効な場合がある。また、ＣＮＳにおいて、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒは神経細胞のシナプス上で互いにクラスタ形成する一方、シナプス外ＧＡＢＡ−Ｒは拡散性分布を有する（Ｃｒａｉｇ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９１（２６）： １２３７３−１２３７７）。クラスタ形成したＧＡＢＡ_Ａ−Ｒは、ＧＡＢＡに対する親和性の低下によって、散在性のシナプス外ＧＡＢＡ−Ｒに比較して３〜４倍高いＧＡＢＡに対するＥＣ_５０を有し、より速やかに不活性化すると考えられている（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９７（２１）： １１５５７−１１５６）。クラスタ形成したＧＡＢＡ−Ｒ間のタンパク質−タンパク質相互作用が結合部位またはチャネル活性化に影響を与えると考えられている（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９７（２１）： １１５５７−１１５６）。特定の理論に拘束されるものではないが、本発明者らは、β細胞上のＧＡＢＡ_Ａ−Ｒは散在し、ＧＡＢＡ及びアロステリック調節因子に対してより感受性であると考える。

【0185】

β細胞に対する自己免疫応答を有意に低下させることができない場合、β細胞の再生及び健全性を促進することはほとんど役に立たないことを強調する必要がある。この点に関して、提案するアルプラゾラム＋ＧＡＢＡ併用療法は、自己反応性Ｔ細胞を阻害するのと同時にＴｒｅｇを促進する該療法の能力に起因して勝ると考えられる。注目すべきことに、抗不安剤としての用量のアルプラゾラムは、糖尿病患者においてＨｂＡ１ｃを減少させることができた（Ｌｕｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ， １８（８）： １１３３−１１３９）。本発明者らは、β細胞の生存及び複製を促進するために抗不安剤としての用量のアルプラゾラムが必要であるとしても、短期のアルプラゾラムによる治療の利点は副作用（主として眠気）に勝ると主張する。例えば膵島移植の場合、アルプラゾラムによる治療は、低酸素及びストレスに起因するβ細胞の減損を低減するために、膵島移植直後の期間に限定されることとなる。新たに発症したＴ１Ｄの場合、アルプラゾラムによる治療はＧＡＢＡ及び、例えば、抗ＣＤ３剤との併用で短期間行ってもよく、これは相乗的に自己免疫を抑制し且つＴｒｅｇを誘導し、Ｃペプチドレベルを抗ＣＤ３剤単独による治療後よりもより長期間維持することができる場合がある。

【0186】

実施例２ イン・ビトロにおけるＩＮＳ−１細胞の増殖に対するミダゾラム及びクロナゼパムの効果の試験
この実験の目的は、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖に対する以下の化合物の効果を試験することであった。

【0187】

ミダゾラム（ＭＷ ３２５）：６．２５ｍＭで液体に可溶、及び

【0188】

クロナゼパム（ＭＷ３１５）：５０ｍＭでエタノールに溶解。

【0189】

方法：
１．^３Ｈ−チミジン取り込みアッセイ：１×１０^５／ウェルのＩＮＳ−１細胞を表示した濃度の個々の化合物で処理し（同一試料を３回繰り返し）、０．３μＣｉ／ウェルの^３Ｈ−チミジンの存在下、１０％のＦＣＳ ＲＰＭＩ１６４培地中で４８時間（最適な期間）培養した。上記細胞を回収し、個々のウェルにおける^３Ｈ−チミジンの取り込み量のレベルをベータカウンターにより測定した。

【0190】

２．ＭＴＴアッセイ：１×１０^５／ウェルのＩＮＳ−１細胞を、１０％のＦＣＳ ＲＰＭＩ１６４培地（フェノールを含まない）中、表示した化合物で４４時間処理した（同一試料を４回繰り返し）。上記細胞を２０ｍｌのＭＴＴ（２０ｍｇ／ｍｌ）に４時間接触させ、培養した細胞の上清を取り出した。得られた生成物を１００ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、マイクロプレートリーダーにて５４０／６５０ｎｍの吸光度で測定した。

【0191】

結果：
１．ミナゾラムによる処理には、イン・ビトロでＩＮＳ−１細胞の増殖を亢進させる多少の能力があるが、クロナゼパムによる処理にはその能力はない。本発明者らは、１０^−４〜１０^−９Ｍのクロナゼパムによる処理では、ＩＮＳ−１細胞の増殖は有意に変化しないことを見出した。１０^−５Ｍのミダゾラムによる処理では、ＩＮＳ−１細胞に対して僅かに毒性が見られ、１０^−７〜１０^−８Ｍによる処理では、イン・ビトロでＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に亢進した（図４Ａ、ｐ＜０．０５）。次に本発明者らは、これらの結果に基づいて、これらの薬物をより少ない用量範囲にわたって、更に中間的な用量も追加して試験し、１０^−７〜３×１０^−８Ｍのミダゾラムによって、イン・ビトロにおいてＩＮＳ細胞の増殖が有意に亢進することを認めた（図４Ｂ）。同様のパターンの細胞増殖がＭＴＴアッセイによって認められた（データ非表示）。

【0192】

２．ミダゾラムまたはクロナゼパムによる処理では、イン・ビトロにおいて、ＧＡＢＡ刺激性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進する。次に本発明者らは、イン・ビトロにおいて、ＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖に対するミダゾラム及びクロナゼパムの効果を試験した。本発明者らは、１〜０．１ｍＭのＧＡＢＡによる処理によって、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖が刺激されることを見出した。１０^−７または３×１０^−８Ｍのミダゾラムによる処理では、ＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進した。０．０３〜０．０１ｍＭのＧＡＢＡによる処理ではＩＮＳ−１細胞の増殖が誘導できなかった一方で、かかる低用量のＧＡＢＡと１０^−７または３×１０^−８Ｍのミダゾラムの両方による処理では、ＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に亢進した。低用量のＧＡＢＡとミダゾラムの両方で処理した細胞におけるＩＮＳ−１細胞の増殖の程度は、ミダゾラム単独で処理した細胞の増殖の程度よりも高く、このことは、ミダゾラムがＧＡＢＡ誘導性の細胞増殖を亢進させたことを示している。同様に、１０^−７または３×１０^−８Ｍのクロナゼパムによる処理では、イン・ビトロにおいて、ＧＡＢＡ刺激性のＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に亢進した。ＧＡＢＡ誘導性の細胞増殖に対するこれらの薬剤の同様のパターンの薬理学的効果がＭＴＴアッセイによって検出された。

【0193】

上記ミダゾラムまたはクロナゼパムの亢進効果は、いくつかのベンゾジアゼピンに結合することができるトランスロケータータンパク質（１８ｋＤａ）（ＴＳＰＯ）によって媒介されない。

【0194】

ミダゾラム及びクロナゼパムの上記効果が部分的にＴＳＰＯによって媒介されるかを試験するために、本発明者らは、ミダゾラムまたはクロナゼパムに対するＴＳＰＯ阻害因子ＰＫ１１１９５の影響によって、ＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進することを試験した。本発明者らは、表示したＧＡＢＡまたはミダゾラムによる処理ではＩＮＳ−１細胞の増殖が誘導されるが、クロナゼパムまたはＰＫ１１１９５による処理では誘導されないことを見出した。ＧＡＢＡとミダゾラムの両方、またはＧＡＢＡとクロナゼパムの両方による処理では細胞増殖が亢進し、これはＰＫ１１１９５の影響を受けなかった。これらのデータは、ミダゾラムまたはクロナゼパムによるＩＮＳ−１細胞の増殖の亢進は、ＩＮＳ−１細胞におけるＴＳＰＯの活性化によって媒介されないことを示した。

【0195】

実施例３ イン・ビトロにおけるＩＮＳ−１細胞の増殖に対するＡＰ３２５及びＡＰ３の効果の試験
この実験の目的は、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖に対する以下の化合物の効果を試験することであった。

【0196】

ＡＰ３２５：ＤＭＳＯに５０ｍＭで可溶、及び

【0197】

ＡＰ３：ＤＭＳＯに５０ｍＭで溶解。

【0198】

方法：
１．^３Ｈ−チミジン取り込みアッセイ：１×１０^５／ウェルのＩＮＳ−１細胞を表示した濃度の個々の化合物で処理し（同一試料を３回繰り返し）、０．３ｕＣｉ／ウェルの^３Ｈ−チミジンの存在下、１０％のＦＣＳ ＲＰＭＩ１６４培地中で４８時間（最適な期間）培養した。上記細胞を回収し、個々のウェルにおける^３Ｈ−チミジンの取り込み量のレベルをベータカウンターにより測定した。

【0199】

２．ＭＴＴアッセイ：１×１０^５／ウェルのＩＮＳ−１細胞を、１０％のＦＣＳ ＲＰＭＩ１６４培地（フェノールを含まない）中、表示した化合物で４４時間処理した（同一試料を４回繰り返し）。この細胞を２０ｍｌのＭＴＴ（２０ｍｇ／ｍｌ）に４時間接触させ、培養した細胞の上清を取り出した。得られた生成物を１００ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、マイクロプレートリーダーにて５４０／６５０ｎｍの吸光度で測定した。

【0200】

結果：
ＡＰ３２５またはＡＰ３（単独）による処理では、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖は刺激されない。
本発明者らは、１０^−４〜１０^−５ＭのＡＰ３２５またはＡＰ３による処理では、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に阻害されることを見出した（図６）。１０^−６〜１０^−１０ではどちらの化合物による処理でもＩＮＳ−１細胞の増殖は阻害されなかったが、これらの処理ではＩＮＳ−１細胞の増殖は有意に増加することはなかった。注目すべきことに、１０^−７〜１０^−８のＡＰ３２５による処理ではＩＮＳ−１細胞の増殖が僅かに増加した（但し、これは有意な増加ではなかった）が、ＡＰ３による処理では増加は見られなかった。同様のパターンの細胞の生存がＭＴＴアッセイによって検出された（データ非表示）。したがって、高用量の両方の化合物はＩＮＳ−１細胞に対して毒性を有し、１０^−６〜１０^−１０のこれらの化合物はイン・ビトロにおいてＩＮＳ細胞の増殖の如何なる刺激も示さなかった。

【0201】

ＡＰ３２５による処理では、イン・ビトロにおいて、ＧＡＢＡ刺激性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進する。
次に本発明者らは、イン・ビトロにおいて、ＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖に対するＡＰ３２５またはＡＰ３の効果を試験した。本発明者らは、１〜０．１ｍＭのＧＡＢＡによる処理では、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖が刺激されるが、ＧＡＢＡ ０．０３または０．０１ｍＭによる処理では、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖は有意に刺激されないことを見出した（図７）。１０^−６ＭのＡＰ３２５による処理ではＩＮＳ−１細胞の増殖は有意に変化しなかった（データ非表示）。しかしながら、１０^−７〜１０^−８ＭのＡＰ３２５による処理、特に３×１０^−７〜３×１０^−８ＭのＡＰ３２５による処理では、ＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に亢進した。注目すべきことに、０．０３または０．０１ｍＭのＧＡＢＡ単独での処理では、本発明者らの実験条件下でＩＮＳ−１細胞の増殖を刺激することができなかった一方で、０．０３ｍＭのＧＡＢＡを伴う３×１０^−７〜１０^−８ＭのＡＰ３２５による処理では、ＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に促進された。更に、０．０１ｍＭのＧＡＢＡを伴う１０^−７ＭのＡＰ３２５による処理でも、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に刺激された。同様のパターンのデータがＭＴＴアッセイから得られた（データ非表示）。したがって、これらのデータは、ＡＰ３２５によって、イン・ビトロにおいて、ＧＡＢＡ刺激性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進することを示した。

【0202】

ＡＰ３による処理では、イン・ビトロにおいて、ＧＡＢＡ刺激性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進する。
ＡＰ３の分析によって、１０^−６ＭのＡＰ３による処理では、ＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に変化しないことが明らかになった（データ非表示）。しかしながら、３×１０^−７〜３×１０^−８ＭのＡＰ３による処理では、０．１ｍＭ ＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に亢進した（図８）。注目すべきことに、０．０３ｍＭのＧＡＢＡを伴う３×１０^−７〜１０^−８ＭのＡＰ３による処理ではＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に促進された。更に、０．０１ｍＭのＧＡＢＡを伴う１０^−７〜１０^−８ＭのＡＰ３による処理でも、イン・ビトロにおいて、ＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に刺激された。同様のパターンのデータがＭＴＴアッセイから得られた（データ非表示）。したがって、これらのデータは、ＡＰ３によって、イン・ビトロにおいて、ＧＡＢＡ刺激性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進することを示した。

【0203】

結論：
ＡＰ３２５及びＡＰ３はイン・ビトロにおいてＧＡＢＡ誘導性のＩＮＳ−１細胞の増殖を亢進させることができる。

【0204】

実施例４ 臨床的に適用可能なＧＡＢＡ受容体陽性アロステリック調節因子がβ細胞の複製を促進することができる。
１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）研究の重要な目標は、ヒトβ細胞の複製を安全に促進するための治療法を開発することである。β細胞上のγ−アミノ酪酸受容体（ＧＡＢＡ−Ｒ）の活性化がβ細胞の生存及び複製を促進することができることが最近認識されるようになっている。神経細胞のＧＡＢＡ_Ａ−Ｒに対するＧＡＢＡの作用を亢進させる多くの陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）が臨床で使用されている。これらのＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭを糖尿病の治療に役立てるための別の目的に用いることは、それらの安全性ならびに、β細胞から分泌される、または外因的に投与されるＧＡＢＡのβ細胞の複製及び生存を促進する能力を亢進する潜在的能力という理由により、理論的に魅力がある。ここでは、本発明者らは、臨床的に適用可能なＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭがＩＮＳ−１ β細胞の複製を亢進させることができること、及びこれが外因性ＧＡＢＡの適用によって増幅されることを示す。更に、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭは、イン・ビトロにおいて、ヒト膵島細胞の複製を促進した。この効果はＧＡＢＡ_Ａ−Ｒアンタゴニストによって消失し、このことはβ細胞から放出されたＧＡＢＡが、ＰＡＭによって亢進し得る自己分泌有糸分裂促進効果を有し得ることを示唆した。ＰＡＭと低レベルの外因性ＧＡＢＡの併用によって、ヒトβ細胞の複製を促進する能力が向上した。これらの検討によって、Ｔ１Ｄ治療に対する可能性をもつ新規な種別の薬物が特定され、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭが糖尿病患者においてＨｂＡ１ｃを低減した過去の所見を説明することができる。

【0205】

序論
Ｔ１Ｄ研究の目標は、β細胞の複製を安全に促進できる手法を見出すことである。しかしながら、ヒトβ細胞の複製を亢進させることができる薬剤はほとんど見つかっていない。げっ歯動物及びヒトのβ細胞は、ＧＡＢＡ−Ｒ（ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ及びＧＡＢＡ_Ｂ−Ｒの両方）を発現することが長い間知られている（Ｂｒａｕｎ ｅｔ ａｌ． （ＧＡＢＡ） （２０１０） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ５９： １６９４−１７０１）が、ごく最近になって、ＧＡＢＡ−Ｒを活性化することによってβ細胞の生存及び複製を促進し、量を増加させることができることが明らかになっている（Ｌｉｇｏｎ ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ５０： ７６４−７７３；Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６２： ３７６０−３７６５；Ｐｒｕｄ’ｈｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ． （２１０３） Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ， ９６（７）： ６１６−６２３；Ｐｕｒｗａｎａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３（１２）： ４１９７−４２０５）。ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭはＧＡＢＡの作用を亢進させる。ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭはＧＡＢＡ結合部位に結合するのではなく、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ上の他の場所に結合し、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ塩素イオンチャネルを開口させることができない一方で、ＧＡＢＡが受容体に結合していると、Ｃｌ⁻コンダクタンスを増加させる。ＧＡＢＡは血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する能力がほとんどまたは全くないことから、ベンゾジアゼピンなどのＢＢＢ透過性ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭが、発作、不眠症、及び不安症などのＣＮＳ障害を治療するために、ＣＮＳ神経細胞によって分泌されるＧＡＢＡの作用を亢進させるために開発された。理論的には、これらのＰＡＭを、β細胞の有糸分裂誘導を促進するために膵島内で放出されるＧＡＢＡの作用を亢進させるための異なる目的に用いることができる。

【0206】

ここでは、本発明者らは、臨床的に適用可能なＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭをβ細胞の複製を促進する能力について試験した。詳細には、異なる種別のベンゾジアゼピンを代表するアルプラゾラム、ミダゾラム、及びクロナゼパムを、β細胞株ＩＮＳ−１の複製を促進する能力について試験した。アルプラゾラムは不安症の治療に広く使用されており、この薬剤に対して年間５千万件近くの処方箋が書かれている。アルプラゾラムは、指示通りに用いられれば長期間使用しても安全である（Ｊｏｎａｓ ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ， ５４ Ｓｕｐｐｌ： ２５−４５；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ４６−２８及びｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｓａｆｅｔｙ／ｍｅｄｗａｔｃｈ／ｓａｆｅｔｙｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／ｕｃｍ２７１３９８．ｈｔｍ）。また、本発明者らは、末梢に制限されている新規に開発された非ベンゾジアゼピン系ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭであるＡＰ３を試験した。次いで本発明者らは、イン・ビトロでのヒト膵島細胞の複製に対する、外因性ＧＡＢＡを伴うまたは伴わないアルプラゾラムの効果を調べた。

【0207】

研究設計及び方法
アルプラゾラム、ミダゾラム、クロナゼパム、ＰＫ１１１９５、及びビククリンはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、ＡＰ３はＡｌｇｉａｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＧｍｂＨから供給を受けた。アルプラゾラム（１０ｍＭのＤＭＳＯ溶液）、ミダゾラム（６．２５ｍＭの水溶液）、クロナゼパム（５０ｍＭのＥｔＯＨ溶液）、またはＡＰ３（５０ｍＭのＤＭＳＯ溶液）の原液を表示した濃度へと培地中で希釈した。

【0208】

増殖アッセイ
１×１０^５／ウェルのＩＮＳ−１細胞を表示した濃度の個々の化合物で処理し（同一試料を３回繰り返し）、^３Ｈ−チミジン（０．３μＣｉ／ウェル）の存在下、１０％のＦＣＳ ＲＰＭＩ１６４培地中で４８時間（最適な期間）培養した。個々のウェルにおける^３Ｈ−チミジンの取り込み量のレベルをシンチレーションカウンターにより測定した。

【0209】

新鮮なヒト膵島を、ｔｈｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｉｓｌｅｔ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍより入手し、膵島（５０〜７５ＩＥＱ／ウェル）を、^３Ｈ−チミジン（０．２μＣｉ／ウェル）の存在下、表示したＰＡＭと共に、またはＰＡＭなしで４日間、表示した用量のＧＡＢＡで処理した。

【0210】

結果
ＩＮＳ−１細胞はベンゾジアゼピン結合ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒサブユニットを発現する。
ＧＡＢＡはＩＮＳ−１細胞の増殖を亢進させることができる（Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７）が、ＩＮＳ−１細胞がベンゾジアゼピンに感受性のＧＡＢＡ_Ａサブユニットを発現するかは不明である。本発明者らは、ｑＲＴ−ＰＣＲを用いて、ベンゾジアゼピンに対する感受性を付与するＧＡＢＡ_Ａ−Ｒサブユニット（α_１、α_２、α_３、及びα_５）の発現に関して、ＩＮＳ−１細胞ＲＮＡを試験した。本発明者らは、α_１、α_３、及びα_５転写物ならびにβ１、γ１、γ２、γ３サブユニットを検出し（データ非表示）、このことはＩＮＳ−１細胞がベンゾジアゼピンに感受性であるＧＡＢＡ_Ａ−Ｒを発現し得ることを示す。

【0211】

ＩＮＳ−１細胞はＧＡＢＡを合成する能力が比較的低い。
β細胞はＧＡＤを発現し、自己分泌の形態で作用し得るＧＡＢＡを分泌する。ＩＮＳ−１細胞もまたＧＡＢＡを合成するかどうかは不明である。したがって、本発明者らはＩＮＳ−１細胞におけるＧＡＤ酵素活性を試験した。本発明者らは、ＩＮＳ−１細胞におけるＧＡＤ活性はヒト膵島におけるＧＡＤ活性よりもかなり小さく、同様にマウスの脳におけるＧＡＤ活性よりも小さいことを見出した（図９Ａ）。それにもかかわらず、ＩＮＳ−１細胞におけるＧＡＤ活性は、陰性対照２９３Ｔ細胞のＧＡＤ活性よりも一貫して約２倍大きく、このことは、ＩＮＳ−１細胞が自己分泌の形態で作用し得る低レベルのＧＡＢＡを産生することができることを示唆している。

【0212】

ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭはイン・ビトロにおいてＩＮＳ−１の増殖を促進する。
本発明者らは、イン・ビトロにおいてＩＮＳ−１細胞の増殖に対する種々の濃度の各ＰＡＭの影響を試験した。１０ｎＭまたは／及び１００ｎＭのアルプラゾラムまたはミダゾラムによる処理ではＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に刺激されたが、クロルナゼパムまたはＡＰ３による処理では刺激されなかった（図９Ｂ）。更に、０．０３〜０．３ｍＭのＧＡＢＡ（単独）による処理では、以前の所見と同様にＩＮＳ−１細胞の増殖が刺激された（図９Ｃ〜Ｇ）（Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７）。０．０１ｍＭのＧＡＢＡによる処理ではＩＮＳ−１の増殖が刺激されなかった（図９Ｃ〜Ｇ）一方で、３０ｎＭまたは１００ｎＭのアルプラゾラムの存在下での同一用量のＧＡＢＡでは、ＩＮＳ−１細胞の増殖が有意に増加し、該増殖はアルプラゾラム単独による処理または１０倍高い濃度のＧＡＢＡ単独（０．１ｍＭ）による処理と比較した場合でさえも有意に高かった（図９Ｃ）。しかし、高濃度のＧＡＢＡ（０．１ｍＭまたは０．３ｍＭ）では、アルプラゾラムのＧＡＢＡの有糸分裂促進効果を亢進させる能力がより小さく、これはおそらく高濃度のＧＡＢＡが既に最大のＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ応答を誘導したためであった。同様に、低用量のミダゾラム、クロナゼパム、またはＡＰ３では、ＧＡＢＡ刺激性のＩＮＳ−１細胞の増殖が亢進した（図９Ｄ〜Ｇ）。したがって、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭは、ＧＡＢＡ誘導性のβ細胞の増殖を亢進させることができる。

【0213】

いくつかのベンゾジアゼピンは、以前「末梢性ベンゾジアゼピン受容体」と呼ばれていたミトコンドリアトランスロケータータンパク質（ＴＳＰＯ）に結合する。アルプラゾラムはＴＳＰＯに結合しない（Ｓｃｈｍｏｕｔｚ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｂｅｈａｖ． Ｂｒａｉｎ． Ｒｅｓ． ２７１： ２６９−２７６）。ミダゾラム及びクロナゼパムがＴＳＰＯを介してＩＮＳ−１細胞の増殖を亢進させ得るかを試験するために、ＩＮＳ−１細胞をＴＳＰＯ阻害因子ＰＫ１１１９５と共に培養し、ミダゾラムまたはクロナゼパムの存在下、０．３ｍＭのＧＡＢＡで刺激した。ＰＫ１１１９による処理では、ＧＡＢＡ及び被験ベンゾジアゼピンのＩＮＳ−１細胞の複製を亢進させる能力に影響はなく（図９Ｈ）、このことは、この効果がＴＳＰＯによって媒介されてはいないことを示す。

【0214】

アルプラゾラムは膵島産生ＧＡＢＡのヒト膵島細胞の複製を促進する能力を亢進させる。
次に本発明者らは、ＰＡＭがヒト膵島細胞の複製を亢進させることができるかを試験した。本発明者らはアルプラゾラムの試験に絞り込んだ。その理由はアルプラゾラムの安全性の記録及びアルプラゾラムによる治療が糖尿病患者のＨｂＡ１ｃを低減したとの知見にあった（Ｌｕｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ１８： １１３３−１１３９）。本発明者らはある用量範囲のアルプラゾラムと共にヒト膵島を培養し、低濃度のアルプラゾラムがヒト膵島細胞の増殖を促進することを認めた（図１０）。免疫組織学的研究により、ＧＡＢＡはヒトβ細胞の複製を増加させるが、α細胞の複製には影響を及ぼさないことが明らかになっており（Ｐｕｒｗａｎａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３（１２）： ４１９７−４２０５及び本発明者らの未発表の所見）、他の膵島細胞型はＧＡＢＡ−Ｒを発現しないことから、複製する膵島細胞の大部分はβ細胞である可能性が高い。これらの培養物にＣａ^２＋チャネル遮断因子であるニフェジピン（１ｕＭ）を添加したところ、アルプラゾラムの有糸分裂促進効果がブロックされ（データ非表示）、このことは、このＰＡＭがＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ媒介性のＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化を亢進させるとの考えと整合する（Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７）。

【0215】

アルプラゾラムは、ＧＡＢＡと無関係にはＧＡＢＡ_Ａ−Ｒを有意に活性化することができないことから、アルプラゾラムは、膵島β細胞から分泌されるＧＡＢＡと連動して作用し、β細胞の複製をその基礎レベルを超えて増加させたと考えられる。本発明者らは、アルプラゾラムを、ＧＡＢＡ_Ａ−Ｒに対するＧＡＢＡの結合を競争的に阻害するＧＡＢＡ_Ａ−Ｒアンタゴニストであるビククリン（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ （２０１３） Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １６９： ３２８−３３６）と共にヒト膵島培養物に添加した。本発明者らは、ビククリンの適用によって、膵島細胞の増殖を促進するアルプラゾラムの能力が消失したことを認めた（図１１）。このことは、膵島産生ＧＡＢＡが自己分泌の形態でβ細胞の複製を促進する可能性があること、及びＧＡＢＡ_Ａ−Ｒの活性を亢進させることがβ細胞の複製をより高いレベルに押し上げる可能性があることを示唆している。

【0216】

アルプラゾラムとＧＡＢＡの併用では、イン・ビトロにおいて、低用量でヒト膵島細胞の複製を促進する能力が亢進する。
次に本発明者らは、イン・ビトロにおいて、アルプラゾラムが、外因性ＧＡＢＡのヒト膵島細胞の複製を促進する能力を亢進させることができるかを試験した。ヒト膵島を、１００ｎＭのアルプラゾラムの存在下または非存在下で、種々の濃度のＧＡＢＡを用いてまたは用いずに処理した。本発明者らは、０．３〜３ｍＭのＧＡＢＡ（単独）では、用量依存の形態でヒト膵島細胞の増殖が有意に亢進するが、より低い用量では亢進しないことを見出した（図１２）。アルプラゾラムとＧＡＢＡとの併用療法では、対応するＧＡＢＡ（単独）の用量と比較してヒト膵島細胞の増殖が有意に増加した（図１２）。注目すべきことに、０．０３ｍＭのＧＡＢＡによる処理ではヒト膵島細胞の増殖は有意に亢進しなかった一方で、同一用量のＧＡＢＡとアルプラゾラムとで一緒に処理すると、ヒト膵島細胞の増殖が有意に亢進した（図１２）。ＧＡＢＡを単独で用いて同様のレベルの増殖を達成するには、１０倍高いレベルのＧＡＢＡ（０．３ｍＭ）を必要とした。したがって、アルプラゾラムは、β細胞の増殖を誘導するのに必要なＧＡＢＡの量を大幅に減少させる。

【0217】

考察
ＧＡＢＡ−Ｒの活性化によって、β細胞をアポトーシスから保護し、β細胞の複製を促進することができる（Ｌｉｇｏｎ ｅｔ ａｌ． （２００７） Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ５０： ７６４−７７３；Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６２： ３７６０−３７６５；Ｐｒｕｄ’ｈｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ． （２１０３） Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ， ９６（７）： ６１６−６２３；Ｐｕｒｗａｎａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３（１２）： ４１９７−４２０５）。経口投与でのＧＡＢＡによる処置によって、膵島異種移植物において、ヒトβ細胞の複製が数倍、一般的には成人のヒトβ細胞の１％未満から約２〜３％へと増加し（Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６２： ３７６０−３７６５；Ｐｕｒｗａｎａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３（１２）： ４１９７−４２０５）、これは出生直後に起こる最大レベルのβ細胞の複製に類似する。この亢進はＧＡＢＡによる処置の５週間後において減弱せず、ヒト膵島異種移植物においてβ細胞の量及び機能が増加する結果となった（Ｐｕｒｗａｎａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３（１２）： ４１９７−４２０５）。したがって、臨床的に適用可能なＰＡＭを、膵島内で産生されるＧＡＢＡの活性または外因性ＧＡＢＡの効果を亢進するための別の目的に用いることは、Ｔ１Ｄの治療に役立つ魅力的な戦略である。

【0218】

本発明者らはまず、３種の臨床的に適用可能なＢＢＢ透過性ベンゾジアゼピンＰＡＭ、ならびに末梢に制限されている非ベンゾジアゼピンＰＡＭが、ＩＮＳ−１細胞の増殖を促進することができるかを試験した。本発明者らは、ＩＮＳ−１細胞がベンゾジアゼピン感受性を付与するであろうＧＡＢＡ_Ａ−Ｒサブユニットを発現すること、及びこれらの細胞が低レベルのＧＡＢＡを産生することができることを見出した。本発明者らは、４種の被験ＰＡＭの内の２種が、少なくとも１の試験した用量において、低位ではあるが有意である、ＩＮＳ−１の複製を促進する能力を有することを見出した。ＧＡＢＡを外因的に培養培地に加えたところ、全ての被験ＰＡＭによって、低レベルのＧＡＢＡのＩＮＳ−１細胞の増殖を誘導する能力が亢進した。事実、ＩＮＳ−１細胞の複製を促進する能力を殆どまたは全くもたなかった低レベルの外因性ＧＡＢＡが、ナノモルレベルのそれぞれのＰＡＭの存在下では上記能力を有していた。

【0219】

本発明者らは、本発明者らがＩＮＳ−１細胞に対して試験した４種のＰＡＭの中から、アルプラゾラムの安全性プロファイル及びアルプラゾラムによる治療によって糖尿病患者におけるＨｂＡ１ｃが低下したとの過去の所見（Ｌｕｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ１８： １１３３−１１３９、後述を参照のこと）を理由に、アルプラゾラムを前に進めて、ヒト膵島細胞の複製に対するその効果を検討した。本発明者らは、アルプラゾラム（単独）がイン・ビトロにおいてヒト膵島細胞の複製を亢進させることを認めており、これは、アルプラゾラムがβ細胞から分泌されたＧＡＢＡと連動して作用したためである可能性が最も高い。実際に、アンタゴニストであるビククリンによってＧＡＢＡの結合を遮断することにより、アルプラゾラムの膵島細胞の複製を亢進させる能力が消失した。このことは、β細胞から放出されるＧＡＢＡがβ細胞に対する有糸分裂促進活性を有することができ、この活性がＰＡＭによって亢進し得ることを示唆する。これらの培養物にニフェジピンを添加することによってアルプラゾラムの有糸分裂促進効果が遮断されており、このことは、アルプラゾラムによってＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ媒介性のＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化が亢進することを示唆している（Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７）。

【0220】

アルプラゾラムと外因性ＧＡＢＡとは、併用においてより高いヒトβ細胞の複製を促進する能力を有し、１０倍高いレベルのＧＡＢＡと同様のレベルのβ細胞の複製を実現した。免疫組織学的分析によって、ＧＡＢＡはヒトβ細胞の複製を増加させるが、α細胞の複製に対しては影響を及ぼさないことが明らかになっており（Ｐｕｒｗａｎａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３（１２）： ４１９７−４２０５、及び本発明者らの未発表の所見）、また膵島δ及びＰＰ細胞がＧＡＢＡ−Ｒを発現することは知られていないことから、本発明者らのアッセイにおいて複製が起きた膵島細胞の大部分はβ細胞である可能性が高い。

【0221】

１９９０年代初頭に実施された臨床治験において、糖尿病が十分に管理されていない不安症の及び不安症ではない個人をアルプラゾラムによって治療し、不安症を軽減することが、不安症の患者が当該患者の糖尿病をより良好に管理することに対して役立つことができるかを判定した。アルプラゾラムによる治療では、当該患者が不安症を患っているか否かにかかわらずＨｂＡ１ｃレベルが低下し、プラセボでは低下が見られなかったことが予期せぬ知見であった（Ｌｕｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ１８： １１３３−１１３９）。これらの結果は、アルプラゾラムが神経伝達物質及び神経ホルモンの放出を鈍化させることに起因すると考えられた。本発明者らの知見に照らして、ＨｂＡ１ｃに対するアルプラゾラムの有益な効果は、少なくとも部分的に、β細胞の生存及び複製を促進する膵島ＧＡＢＡの能力の亢進から生じている可能性がある。

【0222】

本発明者らは、本発明者らの知見が臨床上の利益につながることができるいくつかの異なる経路を想定している。第１に、ＢＢＢ透過性ＰＡＭをＣＮＳ適応症に用いられる用量よりも低い用量で用いて、糖尿病患者においてβ細胞の量及び機能を向上させることができる可能性がある。第２に、Ｔ１Ｄ発症後のβ細胞の量が介入療法の成功を決定づける主要な要因であることから、短期間のＰＡＭによる治療が残存するβ細胞の量を維持することに役立ち、それによって介入療法の結果を改善する可能性がある。この線に沿って、ＧＡＢＡによる治療が、新たに糖尿病になったＮＯＤマウスにおけるβ細胞の複製及び生存を亢進させており（Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３： ３１２８−３１３４）、このことは、僅かな量のβ細胞しか残存していない場合であっても、β細胞の自己反応性の存在下では、ＧＡＢＡ−Ｒ活性を亢進させることが有益であり得ることを示している。第３に、ヒト膵島異種移植においてβ細胞の生存を向上させるＧＡＢＡによる治療の能力（Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６２： ３７６０−３７６５；Ｐｕｒｗａｎａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３（１２）： ４１９７−４２０５）によって示唆されるように、短期間のＰＡＭによる治療が、膵島移植後の低酸素及びストレスに起因するβ細胞の減損を低減するのに役立つ可能性がある。最後に、免疫細胞もまたＧＡＢＡ−Ｒを発現し、免疫細胞の活性化は炎症促進性免疫応答を阻害し、その結果、Ｔ１Ｄ、実験的自己免疫脳脊髄炎、関節リウマチ及びＴ２Ｄのマウスモデルにおいて、ＧＡＢＡによる治療が疾患を改善する（Ｓｏｌｔａｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０８： １１６９２−１１６９７；Ｐｒｕｄ’ｈｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ． （２１０３） Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ， ９６（７）： ６１６−６２３；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ６３： ３１２８−３１３４；Ｍｅｎｄｕ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４８： ３９９−４０７；Ｂｈａｔ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０７： ２５８０−２５８５；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ． （２０１５） Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２３０： １４３８−１４４７；Ｄｕｔｈｅｙ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｅｘｐ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ． １９： ６６１−６６６；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１１） ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ６（９）： ｅ２５３３８；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７３： ５２９８−５３０４；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ， ４４： ４６５−４７０）。したがって、末梢に制限されているＧＡＢＡ_Ａ−Ｒ ＰＡＭ、または臨床的用量未満のＢＢＢ透過性ＰＡＭと低用量ＧＡＢＡとの併用は、ＣＮＳの影響を回避し、β細胞の量／機能を促進し、ならびに自己反応性Ｔ細胞の応答を制御するのに役立つ可能性がある。

【0223】

本明細書に記載の実施例及び実施形態は例証のみを目的とすること、ならびにその目的に照らして種々の改変または変更が当業者に示唆されることとなり、該改変または変更は、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲に包含されることが理解される必要がある。本明細書において引用される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、この記載により、あらゆる目的のためにそれらの全体が参照により援用される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9-1】

【図9-2】

【図9-3】

【図10】

【図11】

【図12】