特許 6961586 α４β７インテグリンを標的とする環状ペプチド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6961586

(24)【登録日】2021年10月15日

(45)【発行日】2021年11月5日

(54)【発明の名称】α４β７インテグリンを標的とする環状ペプチド

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/06 20060101AFI20211025BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 1/14 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 15/14 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 11/08 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 19/10 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 25/24 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20211025BHJP

   A61K 38/12 20060101ALI20211025BHJP

【ＦＩ】

   C07K7/06ZNA

   A61P29/00

   A61P37/06

   A61P1/04

   A61P1/14

   A61P19/02

   A61P1/00

   A61P35/00

   A61P1/18

   A61P3/10

   A61P15/14

   A61P1/16

   A61P11/08

   A61P11/02

   A61P11/06

   A61P31/18

   A61P19/10

   A61P25/00

   A61P25/04

   A61P3/04

   A61P25/24

   A61P31/12

   A61P31/14

   A61P31/20

   A61P25/28

   A61P7/04

   A61P7/00

   A61K38/12

【請求項の数】20

【全頁数】152

(21)【出願番号】特願2018-524794(P2018-524794)

(86)(22)【出願日】2016年11月14日

(65)【公表番号】特表2019-503340(P2019-503340A)

(43)【公表日】2019年2月7日

(86)【国際出願番号】CA2016000274

(87)【国際公開番号】WO2017079820

(87)【国際公開日】20170518

【審査請求日】2019年11月13日

(31)【優先権主張番号】62/254,003

(32)【優先日】2015年11月11日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】521048772

【氏名又は名称】ジーランド ファーマ エイ／エス

(74)【代理人】

【識別番号】100120891

【弁理士】

【氏名又は名称】林 一好

(74)【代理人】

【識別番号】100165157

【弁理士】

【氏名又は名称】芝 哲央

(74)【代理人】

【識別番号】100205659

【弁理士】

【氏名又は名称】齋藤 拓也

(74)【代理人】

【識別番号】100126000

【弁理士】

【氏名又は名称】岩池 満

(74)【代理人】

【識別番号】100185269

【弁理士】

【氏名又は名称】小菅 一弘

(73)【特許権者】

【識別番号】506162895

【氏名又は名称】ウニヴェルシテ・ドゥ・モントリオール

(74)【代理人】

【識別番号】100120891

【弁理士】

【氏名又は名称】林 一好

(74)【代理人】

【識別番号】100165157

【弁理士】

【氏名又は名称】芝 哲央

(74)【代理人】

【識別番号】100205659

【弁理士】

【氏名又は名称】齋藤 拓也

(74)【代理人】

【識別番号】100126000

【弁理士】

【氏名又は名称】岩池 満

(74)【代理人】

【識別番号】100185269

【弁理士】

【氏名又は名称】小菅 一弘

(74)【代理人】

【識別番号】100202577

【弁理士】

【氏名又は名称】林 浩

(72)【発明者】

【氏名】ヴァスケス マヌエル ペレス

(72)【発明者】

【氏名】モーシェッド エム． モンズール

(72)【発明者】

【氏名】ヒッキー ジェニファー エル．

(72)【発明者】

【氏名】カファル アダム ポール

(72)【発明者】

【氏名】ギラード ジェームズ

(72)【発明者】

【氏名】パテル ナレンドラ

(72)【発明者】

【氏名】チャッカ サイ クマール

(72)【発明者】

【氏名】ロートン アンドリュー エル．

(72)【発明者】

【氏名】ポウパート マルク−アンドレ

(72)【発明者】

【氏名】ヤン ガオチアン

【審査官】 坂崎 恵美子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００２／０６６５００（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表平１０−５０８３１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 ChemBioChem，2002年，No.6，p.575-578

【文献】 Journal of Medicinal Chemistry，2001年，Vol.44，p.2586-2592

【文献】 Journal of Peptide Science，2000年，Vol.6，p.321-341

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ ７／０６

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物であって、

【化1】

式中、
Ｒ^１は、Ｈ；低級アルキル；アリール；ヘテロアリール；アルケニル；またはヘテロ環であり、それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換され、
Ｒ^２およびＲ^３は各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸のアミノ酸側鎖であるが、
但し、Ｒ^２およびＲ^３が互いに共有結合して環を形成し得ることを条件とし、
Ｒ^４およびＲ^５の一方がＨ、他方がＣ（Ｏ）−ＮＨＲ^ｔであり、Ｒ^ｔがｔｅｒｔ−ブチルであるが、
但し、Ｒ^２もしくはＲ^３がＲ^１に共有結合して環状二級アミンを形成し得、ならびに／またはＲ^４もしくはＲ^５に共有結合して環を形成し得、Ｒ^４およびＲ^５はまた、互いに共有結合して環を形成し得ることを条件とし、
Ｒ^６は、Ｈ、低級アルキル、ベンジル、アルケニル、低級アルキルオキシ；アリール；ヘテロアリール；ヘテロ環；−Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊＊＊＊（式中、Ｒ^＊＊＊＊は独立して、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、アミノアルキル、アミノアリール、アミノヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシから選択される）；−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ；または−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり、それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換されるか、
またはＲ^７もしくはＲ^８と共に、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸の環側鎖であって、そのＮ末端がＮ−Ｒ^６であるＮ末端を有する、環側鎖であり、前記タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸が好適な置換基で置換され得、
Ｒ^７およびＲ^８は独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸のアミノ酸側鎖であって、そのＮ末端がＮ−Ｒ^６であるＮ末端を有する、前記アミノ酸側鎖から選択されるか、またはＲ^６と環側鎖を形成し得、
立体中心１^＊、２^＊、および３^＊は各々独立して、ＲおよびＳから選択され、
ｎは１、２、３、または４であり、ｎが２〜４である場合、各Ｒ^７および各Ｒ^８は互いに独立しており、
Ｚはアミノ酸のアミノ末端であり、Ｌに隣接する−Ｃ＝Ｏ−はアミノ酸のカルボキシ末端であり、ＬはＺおよび−Ｃ＝Ｏ−と共に以下の式：
Ｘ^ｙ−Ｘ^ｚ−Ｘ^１−Ｘ^２−Ｘ^３
を有するペプチドであり、
式中、Ｘ^ｙは、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸であり、Ｘ^ｚは、存在しない又はタンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸であり、
Ｘ^１はロイシンもしくはｔｅｒｔ−ブチル−Ａｌａであり、
Ｘ^２はＡｓｐであり、
Ｘ^３はＴｈｒ、ｏ−ベンジル−トレオニン、ｏ−エチル−トレオニン、ｏ−メチル−トレオニン、ペニシラミン、Ｎ−メチルトレオニン、ａｌｌｏ−トレオニン、２−アミノ酪酸、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、及びａｌｌｏ−イソロイシンからなる群から選択されるアミノ酸である、化合物。

【請求項2】

Ｒ^１がＨである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ^２またはＲ^３がＲ^１に共有結合して、Ｎ末端としてＮＲ^１を有するプロリンを形成する、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ^２およびＲ^３が両方ともＨでない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ^２およびＲ^３が各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸のアミノ酸側鎖からなる群から選択される、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ^２およびＲ^３がそれぞれＨおよびＣＨ_３であるか、またはその逆である、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項7】

Ｒ^２またはＲ^３が−ＣＨ_２−Ｓ−Ｒ^ｓであり、Ｒ^ｓが低級アルキル；低級アミノアルキル；アリール；ヘテロアリール；アルケニル；またはヘテロ環から選択され、それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換され、好ましくは、Ｒ^ｓがフェニル、または低級アルキル、ハロゲン、もしくは低級アミノアルキルで置換されたフェニルである、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項8】

Ｒ^６がＨであり、任意選択で、
Ｒ^６およびＲ^８またはＲ^９のいずれかが環を形成し、そのＮ末端としてＮ−Ｒ^６を有するプロリン残基を生じる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

ｎが１である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

ＺがＬおよび−Ｃ＝Ｏと共に配列番号１〜３８０のいずれか１つである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

Ｘ^１がＬｅｕであり、
Ｘ^２がＡｓｐであり、および／または
Ｘ^３がＴｈｒ、Ｖａｌまたはｌｌｅである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項12】

Ｘ^ｙおよびＸ^ｚが各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸であり、任意選択で、
Ｘ^ｚがタンパク質原性もしくは非タンパク質原性のベータ−アミノ酸であり、任意選択で、
Ｘ^ｚがベータＨｏｍｏＬｙｓまたはメチルベータＨｏｍｏＬｙｓである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項13】

Ｘ^ｙおよびＸ^ｚが各々、一次アミノ酸である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項14】

Ｘ^ｙおよびＸ^ｚが各々、以下からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。

【表14-1】

【表14-2】

【表14-3】

【表14-4】

【表14-5】

【表14-6】

【表14-7】

【表14-8】

【請求項15】

化合物１〜３９７のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。

【表15-1】

【表15-2】

【表15-3】

【表15-4】

【表15-5】

【表15-6】

【表15-7】

【表15-8】

【表15-9】

【表15-10】

【表15-11】

【請求項16】

化合物３４０、３４８、３４９、及び３５８のいずれか１つである、請求項１５に記載の化合物。

【請求項17】

薬学的に許容される担体と共に、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物を含む薬学的組成物であって、
好ましくは、前記薬学的組成物は、経口送達、局所送達または非経口送達のために製剤化された薬学的組成物。

【請求項18】

患者の炎症または自己免疫疾患を処置する方法に使用する化合物であって、
好ましくは、患者は人であり、前記炎症または自己免疫疾患が胃腸のものであり、
更に好ましくは、前記状態または疾患が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病（非熱帯性スプルー）、血清反応陰性関節炎に関連する関節症、微視的大腸炎、コラーゲン大腸炎、好酸球性胃腸炎、放射線療法、化学療法、直腸結腸切除および回腸肛門吻合後に発症した回腸嚢炎、胃腸癌、膵臓炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息、原発性硬化性胆管炎、胃腸管のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、好酸球性喘息、好酸球性食道炎、胃炎、大腸炎、微視的大腸炎、移植片対宿主病、放射線療法もしくは化学療法に関連する大腸炎、白血球粘着不全症１型における先天性免疫障害に関連する大腸炎、慢性肉芽腫症、糖原病１ｂ型、ヘルマンスキー・プドラック症候群、チェディアック・東症候群、およびウィスコット・アルドリッチ症候群、または直腸結腸切除および回腸肛門吻合後に発症した回腸嚢炎、ならびに種々の形態の胃腸癌、骨粗鬆症、関節炎、多発性硬化症、慢性痛、体重増加、およびうつである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項19】

膵臓炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息、または移植片対宿主病を処置する方法に使用する請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項20】

前記状態が炎症性腸疾患であり、
前記炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎であり、または
前記炎症性腸疾患がクローン病である、請求項１８又は１９に記載の化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１５年１１月１１日に出願された米国特許仮出願第６２／２５４００３号の優先権を主張する。

【0002】

技術分野
本発明は、α４β７インテグリンの拮抗剤、より具体的には環状ペプチド拮抗剤に関する。

【背景技術】

【0003】

インテグリンは、細胞−細胞相互作用および細胞−細胞外マトリックス（ＥＣＭ：ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ）相互作用のためのブリッジである膜貫通受容体である。トリガーされると、インテグリンは、ＥＣＭの化学組成および機械的状態など、内部への化学経路（シグナル伝達）をトリガーする。

【0004】

インテグリンは、２つの異なる鎖であるα（アルファ）サブユニットおよびβ（ベータ）サブユニットを有する強制的ヘテロ二量体である。

【0005】

α４β７インテグリンは、リンパ球上で発現し、粘膜リンパ器官の高内皮細静脈に存在する粘膜アドレシン細胞接着分子（ＭＡｄＣＡＭ：ｍｕｃｏｓａｌ ａｄｄｒｅｓｓｉｎ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）へのその結合による腸管関連リンパ組織へのＴ細胞ホーミングの原因となる。

【0006】

特異的インテグリン−リガンド相互作用の抑制剤は、種々の自己免疫疾患の処置のための抗炎症剤として有効であることが示されてきた。例えば、α４β７に対して高い結合親和性を示すモノクローナル抗体は、クローン病および潰瘍性大腸炎など胃腸の自己炎症疾患／自己免疫疾患に対する治療的利益を示した。

【0007】

炎症状態および／または自己免疫疾患を予防または処置するための改善されたα４β７拮抗剤を開発する必要がある。

【0008】

環状ペプチド（ナセルリン（ｎａｃｅｌｌｉｎｓ））を製造する特定の方法は、出願人の特許文献１に記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】国際公開第２０１０／１０５３６３号

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0010】

一態様では、式（Ｉ）の化合物であって、

【0011】

【化1】

【0012】

式中、
Ｒ^１は、Ｈ；低級アルキル；アリール；ヘテロアリール；アルケニル；またはヘテロ環であり、それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換され、
Ｒ^２およびＲ^３は各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸のアミノ酸鎖であるが、
但し、Ｒ^２およびＲ^３が互いに共有結合して環を形成し得ることを条件とし、
Ｒ^４およびＲ^５は各々独立して、Ｈ；低級アルキル；アリール；ヘテロアリール；アルケニル；ヘテロ環；式−Ｃ（Ｏ）ＯＨの酸；式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^＊のエステル（式中、Ｒ^＊はアルキルおよびアリールから選択される）；式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^＊＊Ｒ^＊＊＊のアミド（式中、Ｒ^＊＊およびＲ^＊＊＊は独立して、Ｈ、アルキル、およびアリールから選択される）；−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは−ＯＨ、低級アルキル、アリール、−低級アルキル−アリール、または−ＮＲａＲｂから選択され、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、低級アルキル、アリール、もしくは−低級アルキル−アリールから選択される）；または−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ（式中、Ｒｃは低級アルキル、アリール、もしくは−低級アルキル−アリールから選択される）；または−低級アルキル−ＯＲｄ（式中、Ｒｄは好適な保護基もしくはＯＨ基である）であり；それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換されるが、
但し、Ｒ^２もしくはＲ^３がＲ^１に共有結合して環状二級アミンを形成し得、ならびに／またはＲ^４もしくはＲ^５に共有結合して環を形成し得、Ｒ^４およびＲ^５はまた、互いに共有結合して環を形成し得ることを条件とし、
Ｒ^６は、Ｈ、低級アルキル、ベンジル、アルケニル、低級アルキルオキシ；アリール；ヘテロアリール；ヘテロ環；−Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊＊＊＊（式中、Ｒ^＊＊＊＊は独立して、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、アミノアルキル、アミノアリール、アミノヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシから選択される）；−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ；または−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり、それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換されるか、
またはＲ^７もしくはＲ^８と共に、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸の環側鎖であって、そのＮ末端がＮ−Ｒ^６であるＮ末端を有する、環側鎖であり、前記タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸が好適な置換基で置換され得、
Ｒ^７およびＲ^８は独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸のアミノ酸側鎖であって、そのＮ末端がＮ−Ｒ^６であるＮ末端を有する、アミノ酸側鎖から選択されるか、またはＲ^６と環側鎖を形成し得、
立体中心１^＊、２^＊、および３^＊は各々独立して、ＲおよびＳから選択され、
ｎは１、２、３、または４であり、ｎが２〜４である場合、各Ｒ^７および各Ｒ^８は互いに独立しており、
Ｚはアミノ酸のアミノ末端であり、Ｌに隣接する−Ｃ＝Ｏ−はアミノ酸のカルボキシ末端であり、ＬはＺおよび−Ｃ＝Ｏ−と共に以下の式：
Ｘ^ｙ−Ｘ^ｚ−Ｘ^１−Ｘ^２−Ｘ^３
を有するペプチドであり、
式中、Ｘ^ｙおよびＸ^ｚは各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸であり、
Ｘ^１はロイシンもしくはｔｅｒｔ−ブチル−Ａｌａであり、
Ｘ^２はＡｓｐであり、
Ｘ^３は表１Ｂの列Ｘ^３の下に列挙される任意のアミノ酸である、化合物が提供される。

【0013】

一態様では、薬学的に許容される担体と共に本明細書において記載される化合物を含む薬学的組成物が提供される。薬学的組成物を、経口送達、局所送達、および非経口送達のいずれか１つのために製剤化することができる。

【0014】

一態様では、患者の炎症または自己免疫疾患を処置する方法であって、本明細書において記載される化合物の治療的に有効な量を患者に投与することを含む、方法が提供される。好ましくは、炎症または自己免疫疾患は胃腸のものである。

【0015】

一態様では、α４β７インテグリンの生物学的機能に関連する患者の状態を処置するための方法であって、方法が、本明細書において記載される化合物の治療的に有効な量を患者に投与することを含む、方法が提供される。

【0016】

一態様では、本明細書において記載される化合物の治療的に有効な量を患者に投与することを含む、患者の疾患または状態を処置するための方法であって、疾患または状態がウイルスまたはレトロウイルスの局所感染症または全身感染症である、方法が提供される。

【0017】

一態様では、本明細書において記載される化合物の治療的に有効な量を患者に投与することを含む、患者の疾患または状態を処置するための方法であって、疾患または状態がＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、もしくはＣ型肝炎、肝性脳症、非アルコール性脂肪性肝炎、硬変症、静脈瘤出血、ヘモクロマトーシス、ウイルソン病、チロシン血症、アルファ１アンチトリプシン欠損症、糖原病、肝細胞癌、肝癌、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、原発性胆管硬化症、胆道疾患、自己免疫性肝炎、または移植片対宿主病である、方法が提供される。

【0018】

本発明の好ましい実施形態のこれらおよび他の特徴は、添付の図面および表に対して参照がなされる以下の詳細な説明においてより明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】本出願の代表的な化合物、つまり、以下のクラス、１８員環、２１員環、２１員環（非古典的、すなわち、デルタアミノ酸を有する）、２２員環、および２４員環の化合物を示す。

【図2】代表的な１８員環の化合物を、ある特定の位置でなされた変異と、これらの変異に関連する対応するα４β７インテグリンＥＬＩＳＡ ＩＣ５０結合値と共に示す。

【図3】代表的な２１員環の化合物を、ある特定の位置でなされた変異と、これらの変異に関連する対応するα４β７インテグリンＥＬＩＳＡ ＩＣ５０結合値と共に示す。

【図4】代表的な２１員環（非古典的、すなわち、デルタアミノ酸を有する）化合物を、ある特定の位置でなされた変異と、これらの変異に関連する対応するα４β７インテグリンＥＬＩＳＡ ＩＣ５０結合値と共に示す。

【図5】代表的な２２員環の化合物を、ある特定の位置でなされた変異と、これらの変異に関連する対応するα４β７インテグリンＥＬＩＳＡ ＩＣ５０結合値と共に示す。

【図6】種々の化合物の単回投薬後のＴリンパ球輸送（末梢血から腸間膜リンパ節まで）の研究結果を示す。

【図7】ナイーブマウスにおける１回および２回の経口投薬による試験物質（ＥＴ１７９２）についての薬物動態プロファイルを示す。

【図8】単回経口投薬後の試験物質（ＥＴ１７９２）についての薬物動態プロファイルを示す。

【図9】単回経口投薬または静脈内投薬として試験化合物を受容したナイーブマウスの肝臓内でのＥＴ２４５１の曝露を示す。

【図10】マウスにおけるデキストラン硫酸ナトリウム処置の開始後の５日目および８日目の種々の処置群についての疾患活動性指標スコアを示す。

【図11】ＤＳＳに曝露し、種々の試験化合物で処置したマウスから採取した結腸のｅｘ ｖｉｖｏ評価からのデータを示す。

【図12】マウスにおけるＤＳＳ曝露および試験ナセルリン処置後の結腸損傷についてのさらなる詳細を示す。

【図13】ＤＳＳ刺激剤に曝露され、種々の試験ナセルリンまたは対照で３日間処置したマウスから採取した末梢リンパ節、腸間膜リンパ節、および末梢血中のＴリンパ球含有量のＦＡＣＳ分析の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0020】

表１は、α４β７インテグリンの親和性、選択性、および／または活性を示す化合物を示し、特に、これらの化合物に関して、（Ａ）リンカー部分の構造、（Ｂ）ペプチド部分の構造、ならびに（Ｃ）親和性、選択性、および活性の値を示す。

【0021】

表の理解を助けるために、以下に留意されたい。
表１Ａ：
Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＣＨ３である場合、Ｒ２およびＲ３を有する炭素原子はＳ立体配置を有する。
Ｒ２がＣＨ３であり、Ｒ３がＨである場合、Ｒ２およびＲ３を有する炭素原子はＲ立体配置を有する。
Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＣＨ２−Ｓ−Ｐｈである場合、Ｒ２およびＲ３を有する炭素原子はＳ立体配置を有する。
Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣ（Ｏ）−ＮＨ−ｔｅｒｔ−ブチルである場合、Ｒ４およびＲ５を有する炭素原子はＳ立体配置を有する。
Ｒ４がＣ（Ｏ）−ＮＨ−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ５がＨである場合、Ｒ４およびＲ５を有する炭素原子はＲ立体配置を有する。
Ｒ１およびＲ２が両方ともＰｒｏ−である場合、Ｒ１の置換基およびＲ２の置換基は共有結合してＰｒｏのピロリジン環を形成する。

【0022】

表１Ｂ
Ｒ６およびＲ７が両方ともＰｒｏである場合、Ｒ６の置換基およびＲ７の置換基は共有結合してＰｒｏのピロリジン環を形成する。
Ｒ６およびＲ８が両方ともｄＰｒｏである場合、Ｒ６の置換基およびＲ８の置換基は共有結合してｄＰｒｏのピロリジン環を形成する。
Ｒ６およびＲ７が両方とも［（４Ｓ）−フルオロ−Ｐｒｏ］である場合、Ｒ６の置換基およびＲ７の置換基は共有結合して［（４Ｓ）−フルオロ−Ｐｒｏ］のピロリジン環を形成する。
Ｒ７がＮｖａであり、Ｒ８がＨである場合、Ｒ７およびＲ８を有する炭素原子はＳ立体配置を有する。
Ｒ６およびＲ７が両方ともＨｙｐである場合、Ｒ６の置換基およびＲ７の置換基は共有結合してＨｙｐのピロリジン環を形成する。
列Ｘｚの下に入力がない場合、残基は存在しない。

【0023】

表１Ｃ
いずれの列の下にも入力がない場合、データは採取されなかった。

【0024】

表２は、より少ないα４β７インテグリンの親和性、選択性、および／または活性を示す化合物を示し、特に、これらの化合物に関して、（Ａ）リンカー部分の構造、（Ｂ）ペプチド部分の構造、ならびに（Ｃ）親和性、選択性、および活性の値を示す。

【0025】

表の理解を助けるために、以下に留意されたい。
表２Ａ
Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＣＨ３である場合、Ｒ２およびＲ３を有する炭素原子はＳ立体配置を有する。
Ｒ２がＣＨ３であり、Ｒ３がＨである場合、Ｒ２およびＲ３を有する炭素原子はＲ立体配置を有する。
Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣ（Ｏ）−ＮＨ−ｔｅｒｔ−ブチルである場合、Ｒ４およびＲ５を有する炭素原子はＳ立体配置を有する。
Ｒ４がＣ（Ｏ）−ＮＨ−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ５がＨである場合、Ｒ４およびＲ５を有する炭素原子はＲ立体配置を有する。
Ｒ１およびＲ２が両方ともＰｒｏ−である場合、Ｒ１の置換基およびＲ２の置換基は共有結合してＰｒｏのピロリジン環を形成する。

【0026】

表２Ｂ
Ｒ６およびＲ７が両方ともＰｒｏである場合、Ｒ６の置換基およびＲ７の置換基は共有結合してＰｒｏのピロリジン環を形成する。
Ｒ６およびＲ８が両方ともｄＰｒｏである場合、Ｒ６の置換基およびＲ８の置換基は共有結合してｄＰｒｏのピロリジン環を形成する。
列Ｘｚの下に入力がない場合、残基は存在しない。

【0027】

表２Ｃ
いずれの列の下にも入力がない場合、データは採取されなかった。

【0028】

表Ｓ１は、本明細書において記載される化合物を方法および材料において概説した合成プロトコルと関連付ける対応表である。

【0029】

詳細な説明
以下の説明において、数多くの具体的な詳細を記載して本発明の完全な理解を提供する。しかしながら、本発明をこれらの具体的な詳細なしで遂行することができることを理解されたい。

【0030】

一態様では、式（Ｉ）の化合物であって、

【0031】

【化2】

【0032】

式中、
Ｒ^１は、Ｈ；低級アルキル；アリール；ヘテロアリール；アルケニル；またはヘテロ環であり、それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換され、
Ｒ^２およびＲ^３は各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸のアミノ酸鎖であるが、
但し、Ｒ^２およびＲ^３が互いに共有結合して環を形成し得ることを条件とし、
Ｒ^４およびＲ^５は各々独立して、Ｈ；低級アルキル；アリール；ヘテロアリール；アルケニル；ヘテロ環；式−Ｃ（Ｏ）ＯＨの酸；式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ^＊のエステル（式中、Ｒ^＊はアルキルおよびアリールから選択される）；式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^＊＊Ｒ^＊＊＊のアミド（式中、Ｒ^＊＊およびＲ^＊＊＊は独立して、Ｈ、アルキル、およびアリールから選択される）；−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは−ＯＨ、低級アルキル、アリール、−低級アルキル−アリール、または−ＮＲａＲｂから選択され、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、低級アルキル、アリール、もしくは−低級アルキル−アリールから選択される）；または−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ（式中、Ｒｃは低級アルキル、アリール、もしくは−低級アルキル−アリールから選択される）；または−低級アルキル−ＯＲｄ（式中、Ｒｄは好適な保護基もしくはＯＨ基である）であり；それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換されるが、
但し、Ｒ^２もしくはＲ^３がＲ^１に共有結合して環状二級アミンを形成し得、ならびに／またはＲ^４もしくはＲ^５に共有結合して環を形成し得、Ｒ^４およびＲ^５はまた、互いに共有結合して環を形成し得ることを条件とし、
Ｒ^６は、Ｈ、低級アルキル、ベンジル、アルケニル、低級アルキルオキシ；アリール；ヘテロアリール；ヘテロ環；−Ｃ（Ｏ）Ｒ^＊＊＊＊（式中、Ｒ^＊＊＊＊は独立して、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、アミノアルキル、アミノアリール、アミノヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシから選択される）；−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ；または−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり、それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換されるか、
またはＲ^７もしくはＲ^８と共に、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸の環側鎖であって、そのＮ末端がＮ−Ｒ^６であるＮ末端を有する、環側鎖であり、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸が好適な置換基で置換され得、
Ｒ^７およびＲ^８は独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸のアミノ酸側鎖であって、そのＮ末端がＮ−Ｒ^６であるＮ末端を有する、アミノ酸側鎖から選択されるか、またはＲ^６と環側鎖を形成し得、
立体中心１^＊、２^＊、および３^＊は各々独立して、ＲおよびＳから選択され、
ｎは１、２、３、または４であり、ｎが２〜４である場合、各Ｒ^７および各Ｒ^８は互いに独立しており、
Ｚはアミノ酸のアミノ末端であり、Ｌに隣接する−Ｃ＝Ｏ−はアミノ酸のカルボキシ末端であり、ＬはＺおよび−Ｃ＝Ｏ−と共に以下の式：
Ｘ^ｙ−Ｘ^ｚ−Ｘ^１−Ｘ^２−Ｘ^３
を有するペプチドであり、
式中、Ｘ^ｙおよびＸ^ｚは各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸であり、
Ｘ^１はロイシンもしくはｔｅｒｔ−ブチル−Ａｌａであり、
Ｘ^２はＡｓｐであり、
Ｘ^３は表１Ｂの列Ｘ^３の下に列挙される任意のアミノ酸である、化合物が提供される。

【0033】

表１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに示される化合物は、α４β７インテグリンに対して拮抗活性を示し、α４β１インテグリンに対する選択性を有する。異なる化合物に関して表１Ａおよび１Ｂに概説される置換基Ｒ^１〜Ｒ^８ならびにアミノ酸Ｘ^ｙ、Ｘ^Ｚ、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、任意の様式で混合することができ、おそらくα４β７インテグリンの活性および選択性を示すであろう化合物を生じるであろうことを当業者は推定するであろう。

【0034】

本明細書において使用される際、用語「アミノ酸」は、アミン基、カルボン酸基、および変化する側鎖を含有する分子を指す。アミノ酸は、一般的にタンパク質中に見出される２０個のアミノ酸だけでなく、当業者には公知の非標準アミノ酸および非天然アミノ酸誘導体も含むことが意図されており、したがって、アルファアミノ酸、ベータアミノ酸、およびガンマアミノ酸を含むが、これらに限定されない。ペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸のポリマーであり、標準アミノ酸、非標準アミノ酸、および非天然アミノ酸を含み得る。ペプチドは、２つ以上のアミノ酸のポリマーである。

【0035】

以下の略称を本明細書において使用する。

【0036】

【表1-1】

【0037】

【表1-2】

【0038】

【表1-3】

【0039】

本発明の文脈において使用される際、用語「好適な置換基」は、独立して、Ｈ；ヒドロキシル；シアノ；低級アルキルなどのアルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ヘキシルなど；低級アルコキシなどのアルコキシ、例えばメトキシ、エトキシなど；アリールオキシ、例えばフェノキシなど；ビニル；アルケニル、例えばヘキセニルなど；アルキニル；ホルミル；ハロアルキル、例えばＣＦ_３、ＣＣｌ_３などを含む低級ハロアルキル；ハライド；アリール、例えばフェニルおよびナフチル；ヘテロアリール、例えばチエニルおよびフラニルなど；アミド、例えばＣ（Ｏ）ＮＲ_ａＲ_ｂ、式中、Ｒ_ａおよびＲ_ｂは独立して、低級アルキル、アリール、もしくはベンジルなどから選択される；アシル、例えばＣ（Ｏ）−Ｃ_６Ｈ_５など；エステル、例えば−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ_３など；エーテルおよびチオエーテル（例えば、Ｏ−Ｂｎなど）；チオアルコキシ；ホスフィノ；ならびに−ＮＲ_ａＲ_ｂ、式中、Ｒ_ａおよびＲ_ｂは独立して、低級アルキル、アリール、もしくはベンジルなどから選択される、を含むことが意図されている。本発明の文脈において使用される際、好適な置換基は、本発明のプロセスによる所望の生成物の形成を妨害しない置換基を示すことが意図されていることが理解される。

【0040】

本発明の文脈において使用される場合、単独でまたは別の置換基との組み合わせで本明細書において使用される際、用語「低級アルキル」は、１〜６個の炭素を含有する非環状、直鎖、または分枝鎖のアルキル置換基を意味し、例えば、メチル、エチル、１−メチルエチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピルなどを含む。用語の同様の使用は、炭素原子の数に関して、「低級アルコキシ」、「低級チオアルキル」、「低級アルケニル」などについて理解される。例えば、本明細書において使用される際、「低級アルコキシ」は、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシを含む。

【0041】

用語「アルキル」は、低級アルキルを包含し、また、例えば、７〜１０個の炭素原子を有する非環状、直鎖、または分枝鎖のアルキル置換基など、６個超の炭素原子を有するアルキル基を含む。

【0042】

単独でまたは別の置換基との組み合わせで本明細書において使用される際、用語「アリール」は、芳香族単環系または芳香族多環系を意味する。例えば、用語「アリール」は、フェニルまたはナフチル環を含み、蛍光性（例えば、アントラセン）または放射性標識およびそれらの誘導体など、より大きな芳香族多環系も含み得る。

【0043】

単独でまたは別の置換基との組み合わせで本明細書において使用される際、用語「ヘテロアリール」は、窒素、酸素、および硫黄から選択された１〜４個のヘテロ原子を含有し、芳香族系を形成する５員環、６員環、または７員環の不飽和ヘテロ環を意味する。用語「ヘテロアリール」はまた、窒素、酸素、および硫黄から選択された１〜４個のヘテロ原子を含有する、５員環、６員環、または７員環の不飽和ヘテロ環を含む多環芳香族系を含む。

【0044】

単独でまたは別の置換基との組み合わせで本明細書において使用される際、用語「シクロアルキル」は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルを含むが、これらに限定されないシクロアルキル置換基を意味する。

【0045】

本明細書において使用される際、用語「シクロアルキル−アルキル−」は、アルキルラジカルであって、そこにシクロアルキルラジカルが直接結合している、アルキルラジカルを意味し、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、１−シクロペンチルエチル、２−シクロペンチルエチル、シクロヘキシルメチル、１−シクロヘキシルエチル、および２−シクロヘキシルエチルを含むが、これらに限定されない。用語「アルキル」または「低級アルキル」の同様の使用は、本明細書において使用されるアリール−アルキル−、アリール−低級アルキル−（例えば、ベンジル）、−低級アルキル−アルケニル（例えば、アリル）、ヘテロアリール−アルキル−などについて理解される。例えば、用語「アリール−アルキル−」は、アルキルラジカルであって、そこにアリールが結合している、アルキルラジカルを意味する。アリール−アルキル−の例としては、ベンジル（フェニルメチル）、１−フェニルエチル、２−フェニルエチル、およびフェニルプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0046】

本明細書において使用される際、用語「ヘテロ環」は、単独でまたは別のラジカルとの組み合わせで、窒素、酸素、および硫黄から選択された１〜４個のヘテロ原子を含有する、３〜７員環の飽和または不飽和（芳香族含む）環状化合物から水素を除去することによって誘導された一価のラジカルを意味する。かかるヘテロ環の例としては、アジリジン、エポキシド、アゼチジン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、チアゾリジン、ピロール、チオフェン、ヒダントイン、ジアゼピン、イミダゾール、イソキサゾール、チアゾール、テトラゾール、ピペリジン、ピペラジン、ホモピペリジン、ホモピペラジン、１，４−ジオキサン、４−モルホリン、４−チオモルホリン、ピリジン、ピリジン−Ｎ−オキシド、またはピリミジンなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0047】

単独でまたは別のラジカルとの組み合わせで本明細書において使用される際、用語「アルケニル」は、２個以上の炭素原子であって、それらのうちの少なくとも２個が二重結合によって互いに結合している、炭素原子を含有する不飽和非環状直鎖ラジカルを意味することを意図するものである。かかるラジカルの例としては、エテニル（ビニル）、１−プロペニル、２−プロペニル、および１−ブテニルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0048】

本明細書において使用される際、用語「アルキニル」は、２個以上の炭素原子であって、それらのうちの少なくとも２個が三重結合によって互いに結合している、炭素原子を含有する不飽和非環状直鎖ラジカルを意味することを意図するものである。かかるラジカルの例としては、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、および１−ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0049】

単独でまたは別のラジカルとの組み合わせで本明細書において使用される際、用語「アルコキシ」は、ラジカルな−Ｏ−（Ｃ_１−ｎ）アルキルであって、アルキルが上記で定義されるように１個以上の炭素原子を含有し、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、１−メチルエトキシ、ブトキシ、および１，１−ジメチルエトキシを含む、−Ｏ−（Ｃ_１−ｎ）アルキルを意味する。式中、ｎは１〜６であり、上記に記載されるように、用語「低級アルコキシ」にあてはまるが、用語「アルコキシ」は「低級アルコキシ」同様、ｎが６より大きい（例えば、ｎは７〜１０である）アルコキシ基を包含する。単独でまたは別のラジカルとの組み合わせで本明細書において使用される際、用語「アリールオキシ」は、−Ｏ−アリールであって、アリールが上記に記載されるように定義されている、−Ｏ−アリールを意味する。

【0050】

保護基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）または保護的基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ）は、後続の化学反応において化学選択性を得るために分子中に導入される置換基である。多くの保護基が当該技術分野において公知であり、本明細書において記載される方法に関連して組み込まれ、使用され得る保護基の種類を当業者は理解するであろう。「保護基を用いたペプチド合成」、典型的には、ペプチド固相合成において、所望のペプチドは、構築中のペプチド鎖へのアミノ酸部分の段階的付加によって調製される。固相合成において、２つの最も広く使用されるプロトコルは、アミノ保護基としてｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ：ｂｕｔｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）または９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ：ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）を用いる。アミノ保護基は、概ね、合成手順中の望ましくない反応からアミノ基を保護し、アミンを出現させるように後で除去することができる。一般的に使用されるアミノ保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．ＷらのＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９９）に記載されている。アミノ保護基は、アシル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、．アルファ．−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイルなど；スルホニル基、例えば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなど；（保護されたアミンとウレタンを形成する）アルコキシカルボニル基もしくはアリールオキシカルボニル基、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ：ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニルイル）−１−メチルエトキシカルボニル、．アルファ．−，．アルファ．−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドロキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ：ｂｕｔｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ：ａｌｌｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−トリメチルシリルエチルオキシカルボニル（Ｔｅｏｃ：ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｅｔｈｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ：ｆｌｕｏｒｅｎｙｌ−９−ｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなど；アラルキル基、例えば、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなど；およびシリル基、例えば、トリメチルシリルなどを含む。アミン保護基は、アミノ窒素をヘテロ環中に組み込む、フタロイルおよびジチオスクシンイミジルなどの環状アミノ保護基も含む。典型的には、アミノ保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、フェニルスルホニル、Ａｌｌｏｃ、Ｔｅｏｃ、ベンジル、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、およびＣｂｚを含む。目下の合成作業のための適切なアミノ保護基を選択および使用することは、十分当業者の技術範囲内である。

【0051】

いくつかの実施形態では、Ｒ^１はＨである。

【0052】

いくつかの実施形態では、Ｒ^２またはＲ^３は、Ｒ^１に共有結合して、Ｎ末端としてＮＲ^１を有するプロリンを形成する。

【0053】

いくつかの実施形態では、Ｒ^２およびＲ^３は両方ともＨでない。

【0054】

いくつかの実施形態では、Ｒ^２およびＲ^３は各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアルファ−アミノ酸のアミノ酸鎖からなる群から選択される。

【0055】

いくつかの実施形態では、Ｒ^２およびＲ^３はそれぞれＨおよびＣＨ_３であるか、またはその逆である。

【0056】

いくつかの実施形態では、Ｒ^２またはＲ^３は−ＣＨ２−Ｓ−Ｒ^ｓであり、Ｒ^ｓは低級アルキル；低級アミノアルキル；アリール；ヘテロアリール；アルケニル；またはヘテロ環から選択され、それらのすべてが、任意選択で、１つ以上の置換可能な位置において１つ以上の好適な置換基で置換され、好ましくは、Ｒ^ｓがフェニル、または低級アルキル、ハロゲン、もしくは低級アミノアルキルで置換される。

【0057】

いくつかの実施形態では、Ｒ^４およびＲ^５は両方ともＨでない。

【0058】

いくつかの実施形態では、Ｒ^＊＊およびＲ^＊＊＊は両方ともＨでない。

【0059】

いくつかの実施形態では、Ｒ^４およびＲ^５は各々独立して、ＨまたはＣ（Ｏ）−ＮＨＲ^ｔであり、式中、Ｒ^ｔはＨもしくは低級アルキルである。好ましくは、Ｒ^ｔはｔｅｒｔ−ブチルまたはＨである。

【0060】

いくつかの実施形態では、Ｒ^６はＨである。

【0061】

いくつかの実施形態では、Ｒ^６およびＲ^８またはＲ^９のいずれかは環を形成し、そのＮ末端としてＮ−Ｒ^６を有するプロリン残基を生じる。

【0062】

いくつかの実施形態では、ｎは１である。

【0063】

いくつかの実施形態では、ＺはＬおよび−Ｃ＝Ｏと共に配列番号１〜３８０のいずれか１つである。

【0064】

いくつかの実施形態では、Ｘ^１はＬｅｕである。

【0065】

いくつかの実施形態では、Ｘ^２はＡｓｐである。

【0066】

いくつかの実施形態では、Ｘ^３はＴｈｒである。

【0067】

いくつかの実施形態では、Ｘ^３はＶａｌである。

【0068】

いくつかの実施形態では、Ｘ^３はＩｌｅである。

【0069】

いくつかの実施形態では、Ｘ^ｙおよびＸ^ｚは各々独立して、タンパク質原性もしくは非タンパク質原性のアミノ酸である。

【0070】

いくつかの実施形態では、Ｘ^ｚはタンパク質原性もしくは非タンパク質原性のベータ−アミノ酸である。

【0071】

いくつかの実施形態では、Ｘ^ｚはベータＨｏｍｏＬｙｓまたはメチルベータＨｏｍｏＬｙｓである。

【0072】

いくつかの実施形態では、Ｘ^ｙおよびＸ^ｚは各々、一次アミノ酸である。

【0073】

いくつかの実施形態では、Ｘ^ｙおよびＸ^ｚは各々、表１Ｂの列Ｘ^ｙおよび列Ｘ^ｚの下にそれぞれ列挙される任意のアミノ酸である。

【0074】

種々の実施形態において、化合物は化合物１〜３９７のいずれか１つである。

【0075】

特定の実施形態では、本明細書において記載される化合物の薬学的に許容される塩が提供される。本明細書において使用される際、用語「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物であって、過度の毒性、刺激、およびアレルギー反応を伴わない疾患の処置に適している水溶性もしくは水分散性または油溶性もしくは油分散性のものであり、合理的なベネフィット／リスク比にふさわしいものであり、かつそれらの意図された使用に有効である、化合物の塩または双性イオンの形態を表す。塩は、化合物の最終的な単離および精製中に、またはアミノ基を好適な酸で処置することによって別個に調製することができる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈａｎｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、炭酸水素塩、パラ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。また、本発明の化合物中のアミノ基は、塩化、臭化、ヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチル；硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル；塩化、臭化、ヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリル；ならびに臭化ベンジルおよびフェネチルで四級化することができる。治療的に許容される付加塩を形成するために用いることができる酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸などの無機酸、ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸などの有機酸が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書において記載されるペプチド化合物のいずれかは、塩の形態、例えば、酢酸塩である。

【0076】

一態様では、薬学的に許容される担体と共に本明細書において記載される化合物を含む薬学的組成物が提供される。薬学的組成物を、経口送達、局所送達、および非経口送達のいずれか１つのために製剤化することができる。

【0077】

本明細書において使用される際、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性のある任意のおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを意味する。薬学的に許容される担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノールなどの１つ以上、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール例えばマンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましいであろう。薬学的に許容される担体は、薬剤の貯蔵寿命または有効性を高める少量の補助物質、例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤、または緩衝剤をさらに含み得る。

【0078】

一態様では、患者の炎症または自己免疫疾患を処置する方法であって、本明細書において記載される化合物の治療的に有効な量を患者に投与することを含む、方法が提供される。好ましくは、炎症または自己免疫疾患は胃腸のものである。

【0079】

一態様では、α４β７インテグリンの生物学的機能に関連する患者の状態を処置するための方法であって、方法が、本明細書において記載される化合物の治療的に有効な量を患者に投与することを含む、方法が提供される。

【0080】

いくつかの実施形態では、状態または疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓｅａｓｅ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病（非熱帯性スプルー）、血清反応陰性関節炎に関連する関節症、微視的大腸炎、コラーゲン大腸炎、好酸球性胃腸炎、放射線療法、化学療法、直腸結腸切除および回腸肛門吻合後に発症した回腸嚢炎、胃腸癌、膵臓炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息、原発性硬化性胆管炎、胃腸管のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ：ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）感染症、好酸球性喘息、好酸球性食道炎、胃炎、大腸炎、微視的大腸炎、移植片対宿主病、放射線療法もしくは化学療法に関連する大腸炎、白血球粘着不全症１型における先天性免疫障害に関連する大腸炎、慢性肉芽腫症、糖原病１ｂ型、ヘルマンスキー・プドラック症候群、チェディアック・東症候群、およびウィスコット・アルドリッチ症候群、または直腸結腸切除および回腸肛門吻合後に発症した回腸嚢炎、ならびに種々の形態の胃腸癌、骨粗鬆症、関節炎、多発性硬化症、慢性痛、体重増加、およびうつである。別の実施形態では、状態は、膵臓炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息、または移植片対宿主病である。

【0081】

好ましい実施形態では、状態は、潰瘍性大腸炎またはクローン病などの炎症性腸疾患である。

【0082】

一態様では、本明細書において記載される化合物の治療的に有効な量を患者に投与することを含む、患者の疾患または状態を処置するための方法であって、疾患または状態がウイルスまたはレトロウイルスの局所感染症または全身感染症である、方法が提供される。

【0083】

いくつかの実施形態では、ウイルスまたはレトロウイルスは、エコーウイルス１型および８型、エコーウイルス９型／Ｂａｒｔｙ株、ヒト乳頭腫ウイルス、ハンタウイルス、ロタウイルス、アデノウイルス、口蹄疫ウイルス、コクサッキーウイルスＡ９型、ヒトパレコウイルス１型、またはヒト免疫不全ウイルス１型である。

【0084】

一態様では、本明細書において記載される化合物の治療的に有効な量を患者に投与することを含む、患者の疾患または状態を処置するための方法であって、疾患または状態がＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、もしくはＣ型肝炎、肝性脳症、非アルコール性脂肪性肝炎、硬変症、静脈瘤出血、ヘモクロマトーシス、ウイルソン病、チロシン血症、アルファ１アンチトリプシン欠損症、糖原病、肝細胞癌、肝癌、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、原発性胆管硬化症、胆道疾患、自己免疫性肝炎、または移植片対宿主病である、方法が提供される。

【0085】

いくつかの実施形態では、化合物はα４β７インテグリンのＭＡｄＣＡＭへの結合を抑制する。好ましくは、化合物は選択的にα４β７インテグリンのＭＡｄＣＡＭへの結合を抑制する。

【0086】

任意の実施形態では、患者は好ましくはヒトである。

【0087】

本明細書において使用される際、用語「疾患」、「障害」、および「状態」は互換的に使用され得る。

【0088】

本明細書において使用される際、「抑制」、「処置」、「処置する」、および「改善する」は、互換的に使用され、被験体、例えば、哺乳類における、例えば、症状の停止、生存率の延長、症状の部分的もしくは完全な改善、および状態、疾患、または障害の部分的もしくは完全な根絶を指す。

【0089】

本明細書において使用される際、「予防する」または「予防」は、（ｉ）被験体、例えば、哺乳類において、特に、かかる被験体が状態になりやすいが、その状態を有するとまだ診断されていない場合に、疾患、損傷、もしくは状態が発生するのを予防もしくは抑制すること、または（ｉｉ）疾患、損傷、もしくは状態が被験体において発生する可能性を低減することを含む。

【0090】

本明細書において使用される際、「治療的に有効な量」は、所望の治療結果を達成するのに必要な投薬の有効量および特定の期間を指す。薬剤の治療的に有効な量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する薬剤の能力などの要因に応じて変化し得る。治療的に有効な量はまた、治療的に有益な効果が薬剤のいずれの毒性または有害な影響を凌ぐものである。

【0091】

いくつかの実施形態では、化合物は経口、静脈内、腹膜、皮内、皮下、筋肉内、髄腔内、吸入、気化、噴霧、舌下、口腔、非経口、経直腸、経腟、および局所からなる群から選択される投与の形態で投与される。

【0092】

いくつかの実施形態では、化合物は初回投薬に続いて１回以上後続の投薬が投与され、任意の２回の投薬の間の最小間隔が１日未満の期間であり、投薬の各々は化合物の有効量を含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、化合物の有効量は、ａ）α４β７インテグリン分子上のＭＡｄＣＡＭ結合部位の約５０％以上の飽和、ｂ）細胞表面上のα４β７インテグリン発現の約５０％以上の抑制、およびｃ）α４β７分子上のＭＡｄＣＡＭ結合部位の約５０％以上の飽和および細胞表面上のα４β７インテグリン発現の約５０％以上の抑制からなる群から選択されるもののうちの少なくとも１つを達成するのに十分な量であり、ｉ）飽和が１日２回以下の投薬頻度に一致する期間にわたって維持されるか、ｉｉ）抑制が１日２回以下の投与頻度に一致する期間にわたって維持されるか、またはｉｉｉ）飽和および抑制が各々、１日２回以下の投与頻度に一致する期間にわたって維持される。

【0094】

いくつかの実施形態では、化合物は１日中、時間毎、４時間毎、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日おき、１週間毎、２週間毎週、および１か月毎からなる群から選択される間隔で投与される。

【0095】

本発明の利点を以下の実施例によりさらに説明する。本明細書において記載される実施例およびそれらの特定の詳細は、説明のためのみに提示されており、本発明の特許請求の範囲に対する限定として解釈されるべきではない。

【実施例】

【0096】

方法および材料
合成
本明細書において記載される環状ペプチドを製造するために適用可能な方法は、概ね、出願人の特許文献１およびそれと共に同日に出願された「Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｃｙｃｌｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」（代理人整理番号５５８１３８３２−６ＰＣＴ）と題する出願内に見出すことができ、２０１５年１１月１１日に出願された米国特許仮出願第６２／２５４００３号の共通の優先権を主張する。

【0097】

より具体的には、以下のプロトコルを使用して、表Ｓ１に示される化合物の各々を合成した。

【0098】

プロトコルＡ：一般的なナセルリン合成
１．樹脂の調製：Ｆｍｏｃアミノ酸（樹脂に対して１．１当量）をＣＨ_２Ｃｌ_２（樹脂１０ｍＬ／ｇ）中に溶解させた。アミノ酸が完全に溶解しなかった場合、均一混合物が攪拌／超音波処理時に持続するようになるまでＤＭＦを緩徐に滴下添加した。２−クロロトリチル樹脂を１５分間、ＣＨ_２Ｃｌ_２（樹脂５ｍＬ／ｇ）中で膨張させた。次いで、ＣＨ_２Ｃｌ_２を排出し、２−Ｃｌ Ｔｒｔ樹脂を含有する容器にＦｍｏｃアミノ酸溶液を添加した。ＤＩＰＥＡを添加（アミノ酸に対して２当量）し、容器を５分間攪拌した。次いで、ＤＩＰＥＡの別の２当量を添加し、容器をさらに６０分間攪拌し続けた。次いで、樹脂をメタノール（樹脂１ｍＬ／ｇ）で処置して、いずれの残りの反応性２−Ｃｌ Ｔｒｔ基をエンドキャップした。溶液を１５分間混合して排出し、次いで、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３回）、ＤＭＦ（３回）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）、およびＭｅＯＨ（３回）ですすいだ。次いで、樹脂を真空下で乾燥させ、秤量してＦｍｏｃアミノ酸の推定負荷を決定した。
２．手動または自動合成による線状ペプチド配列の調製：完全に保護された樹脂に結合したペプチドを、標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド化学によって、手動でまたは自動ペプチド合成機を使用して合成した。すべてのＮ−Ｆｍｏｃアミノ酸を用いた。
ａ． Ｆｍｏｃ脱保護：樹脂をＮＭＰ中２０％ピペリジンで２回、それぞれ５分間および１０分間処置し、各添加後に連続的にＤＭＦおよびＮＭＰで洗浄した。
ｂ． Ｆｍｏｃアミノ酸カップリング：樹脂を、ＮＭＰ中、Ｆｍｏｃアミノ酸３当量、ＨＡＴＵ３当量、およびＤＩＰＥＡ６当量で６０分間処置した。難しいカップリングについては、ＮＭＰ中、Ｆｍｏｃアミノ酸３当量、ＨＡＴＵ３当量、およびＤＩＰＥＡ６当量で４０分間の二次処置を用いた。
３．保護基の保持による一般的な開裂：所望の線状配列が合成されたら、樹脂を、１）１：３、ＨＦＩＰ：ＣＨ_２Ｃｌ_２、または２）ＣＨ_２Ｃｌ_２中５％のＴＦＡのいずれかで、２回、各々３０分間処置して、固体支持体からの開裂を提供した。次いで、溶媒を除去し、続いて冷却したｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（またはジエチルエーテル／ヘキサン）で２回倍散して、所望の生成物を得た。次いで、純度を逆相ＬＣＭＳにより分析した。

【0099】

プロトコルＢ：Ｎ−アルキル化Ｆｍｏｃアミノ酸構築ブロックの調製
１．樹脂調製：プロトコルＡのステップ１参照。
２．Ｆｍｏｃ脱保護：プロトコルＡのステップ２ａ参照。
３．ノシル保護：脱保護された樹脂を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（樹脂５ｍＬ／ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６．５当量）中で撹拌した。急速な発熱反応を避けるために、ノシルクロリド（４．０当量）の溶液を３０分かけて緩徐に滴下添加した。添加が完了した後、攪拌を室温で３時間続けた。得られたノシル保護された樹脂を濾過し、ＣＨ_２Ｃｌ_２、ＭｅＯＨ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、およびＴＨＦで洗浄した。
４．Ｎ−メチル化：ＴＨＦ（樹脂１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の樹脂の懸濁液に、ＴＨＦ（２ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１０当量）中のトリフェニルホスフィン（５当量）の溶液を添加した。攪拌懸濁液を氷浴内で冷却した。ＴＨＦ（１Ｍ）中のＤＩＡＤ（５当量）の溶液を、滴下漏斗を介して滴下添加した。添加の完了後、浴を除去し、反応物を室温でさらに９０分間撹拌した。樹脂を濾過し、ＴＨＦ（４回）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３回）、およびＴＨＦ（２回）で洗浄した。
５．ノシル脱保護：ＮＭＰ（樹脂１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の樹脂の懸濁液に、２−メルカプトエタノール（１０．１当量）およびＤＢＵ（５．０当量）を添加した。溶液は暗緑色になった。５分後、樹脂を濾過し、洗浄物が無色になるまでＤＭＦで洗浄した。この手順を２回繰り返し、次いで、樹脂を最後にＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。
６．Ｆｍｏｃ保護：ＣＨ_２Ｃｌ_２（樹脂７ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の樹脂の懸濁液に、ＣＨ_２Ｃｌ_２（７ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｃｌ（４当量）およびＤＩＰＥＡ（６．１当量）の溶液を加えた。懸濁液を室温で４時間撹拌し、次いで、濾過し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）、ＭｅＯＨ（２回）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）、およびＥｔ_２Ｏ（２回）で洗浄した。
７．樹脂からの開裂：プロトコルＡのステップ３参照。

【0100】

プロトコルＣ：還元的アミノ化
１．Ｆｍｏｃワインレブアミド形成：ＣＨ_２Ｃｌ_２（６．５ｍＬ）中のＦｍｏｃアミノ酸（１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン−ＨＣｌ（１．２当量）、およびＨＣＴＵ（１．２当量）の混合物を０℃に冷却した。次いで、ＤＩＰＥＡ（３当量）を攪拌混合物に緩徐に添加した。冷却浴を除去し、反応物を室温で１６時間撹拌した。１０％ＨＣｌ溶液（４ｍＬ）を添加して沈殿物の形成をもたらし、これを濾過により除去した。濾液を１０％ＨＣｌ（４ｍＬを３回）およびブライン（４ｍＬを２回）で洗浄した。次いで、有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去して粗Ｆｍｏｃワインレブアミドを得、これを精製することなく次の反応に使用した。
２．Ｆｍｏｃアミノアルデヒド形成：水素化リチウムアルミニウム粉末（３当量）を乾燥フラスコ内に置いた。ＴＨＦ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、２５０ｐｐｍのＢＨＴ、ＡＣＳ試薬＞９９．０％、６．５ｍＬ）を添加し、得られたスラリーを撹拌しながら−７８℃に冷却した。スラリーに、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、Ｆｍｏｃワインレブアミドの溶液を添加した。反応容器を氷／水浴に移動させ、０℃で１時間維持した。０℃での反応物に、アセトン（１．５ｍＬ）を、次いでＨ_２Ｏ（０．２５ｍＬ）を滴下添加し、次いで、反応物を室温でさらに１時間撹拌し続けた。混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１０ｍＬ）で洗浄し、濾液を濃縮した。粗材料をＣＨＣｌ_３（６．５ｍＬ）中に溶解させ、ブライン（３ｍＬを２回）で洗浄し、次いで、有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮してＦｍｏｃアミノアルデヒドを得た。
３．樹脂上での還元的アミノ化：樹脂上の線状ペプチドを固相ペプチド合成反応容器内に置き、ＤＭＦ（樹脂２２ｍＬ／ｇ）で希釈した。Ｆｍｏｃアルデヒド（４．０当量）を添加し、反応物を一晩振とうさせ続けた。次いで、溶液を排出し、樹脂をＣＨ_２Ｃｌ_２（３回）およびＤＭＦ（３回）で洗浄した。次いで、樹脂をＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（樹脂２２ｍＬ／ｇ、１：３の割合）の混合物で希釈し、ＮａＢＨ４（７当量）をその後添加した。混合物を４時間振とうさせ続け、次いで、溶液を排出し、樹脂をＣＨ_２Ｃｌ_２（３回）およびＤＭＦ（３回）で洗浄した。

【0101】

プロトコルＤ：フラグメントを用いた大環状化
２ドラムバイアル中で、０．１ｍｍｏｌの線状ペプチドおよびＤＥＰＢＴ（１．５当量）を、新たに蒸留した５ｍＬのＴＨＦ（０．０２Ｍ）中に溶解させた。次いで、ＤＩＰＥＡ（３当量）を添加し、反応混合物を室温で一晩（１６時間）撹拌し続けた。次いで、炭酸テトラアルキルアンモニウム樹脂（６当量）を反応混合物に添加し、撹拌をさらに２４時間続けた。次いで、反応物を固相抽出容器で濾過し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）ですすいだ。濾液および洗浄物を組み合わせ、溶媒を減圧下で除去した。

【0102】

プロトコルＥ：アジリジンアルデヒドを用いた大環状化
線状ペプチドをＴＦＥ中に溶解させた（溶解性の問題が生じた場合は、ＴＦＥ：ＣＨ_２Ｃｌ_２が５０：５０の混合物を環化に使用した）。次いで、ＴＦＥ原液（０．２Ｍ）として、（文献プロトコル：Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６，１２８（４６），１４７７２−１４７７３およびＮａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２０１０，５（１１），１８１３−１８２２に従って調製した）０．６当量の（Ｓ）−アジリジン−２−カルボキアルデヒド二量体を添加し、０．１Ｍの最終反応混合物濃度を得、次いで、ｔｅｒｔ−ブチルイソシアニド（１．２当量）を添加し、反応混合物を４時間撹拌した。進捗をＬＣ−ＭＳによる方法に沿って分析した。

【0103】

プロトコルＦ：アシルアジリジンの求核的開環、大環状化後
ａ．）チオ酢酸／チオ安息香酸：チオ酸（４当量）を粗反応混合物に添加した。反応進捗をＬＣ−ＭＳによって監視し、概ね１〜２時間後に完了した。
または代替的に、ｂ．）チオフェノール：チオフェノール（４当量）およびＤＩＰＥＡ（４当量）を粗環化混合物に添加した。反応進捗をＬＣ−ＭＳによって監視し、概ね１〜２時間後に完了した。溶媒を減圧下で除去し、真空下で乾燥させた。粗材料をＥｔ_２Ｏ／ヘキサンまたはＴＢＭＥで倍散するか、または代替的にＨ_２Ｏで希釈し、凍結し、凍結乾燥させた。

【0104】

プロトコルＧ：一般的な鈴木カップリング、大環状化後
ヨード−Ｐｈｅ含有大環状分子（０．１ｍｍｏｌ）、Ｎａ_２Ｃ０_３（２当量）、置換ボロン酸（１．１当量）、および４ｍＬの水：アセトニトリル（１：１の割合）をマイクロ波バイアル中で混合した。混合物をＮ２流によって１０分間脱気した。Ｎ２下の間、シリコン系Ｐｄ触媒（Ｓｉｌｉａｃａｔ−ＤＰＰ Ｐｄ不均質触媒、０．０５当量）を添加した。反応バイアルをシールし、１５０℃で１０分間マイクロ波中に置いた。反応進捗をＬＣＭＳによって監視した。いったん完了すると、反応物をＣｅｌｉｔｅプラグで濾過し、溶媒を減圧下で除去した。

【0105】

プロトコルＨ：一般的なウルマンカップリング、大環状化後
不活性雰囲気下で、ペプチド大環状分子（０．０１８ｍｍｏｌ）を、２ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２を含有する２ドラムバイアル内に置いた。次いで、Ｃｕ（ＯＡｃ）_２（１当量）、ベンゼンボロン酸（２当量）、および４Ａ（オーブン乾燥）分子ふるいをバイアルに添加し、続いてＤＩＰＥＡ（４当量）を添加した。バイアルの内容物を室温で一晩撹拌した。反応進捗をＬＣＭＳによって評価した。反応が完了したとみなされたら、混合物をＣｅｌｉｔｅプラグで濾過し、溶媒を減圧下で除去した。

【0106】

プロトコルＩ：一般的な包括的脱保護および開裂
側鎖保護基の脱保護は、ペプチドをＴＦＡ：Ｈ_２Ｏ：ＴＩＳ（９５：２．５：２．５）からなる２ｍＬの開裂カクテル中に２時間溶解することによって達成された。続いて、開裂混合物を減圧下で蒸発させ、ペプチドを冷却ジエチルエーテル／ヘキサン（またはｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル）から２回沈殿させた。

【0107】

プロトコルＪ：還元的に不安定な保護基の一般的な開裂
ａ．）Ｐｄ／Ｃおよびギ酸による脱ベンジル化：ベンジルで保護された大環状分子（０．３５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（８ｍＬ）中に１０％ギ酸、５０重量％Ｐｄ／Ｃ（１ｍｇ）と共に溶解させ、５５℃に加熱した。反応が完了したとみなされたら、混合物をＣｅｌｉｔｅプラグで濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、溶媒を減圧下で除去した。
または代替的に、ｂ．）ラネーＮｉによる脱硫化／脱ベンジル化：ラネーＮｉスラリー（１〜２ｍＬ）を環化反応混合物に直接添加し、一晩力強く撹拌した。次いで、バイアルを遠心分離し、ピペットを使用して液体を風袋計量されたバイアルに移動させた。ラネーＮｉを含有するバイアルにＭｅＯＨを添加した。次いで、バイアルを超音波処理し、ボルテックスし、遠心分離した。再度、液体を風袋計量されたバイアルに移動させた。このプロセスをＥｔＯＡｃで繰り返し、次いで、最後にＭｅＯＨで繰り返した。次いで、混合した洗浄物を減圧下で除去し、残渣を真空下で乾燥させた。

【0108】

プロトコルＫ：側鎖のアミド化、大環状化後
大環状分子（０．０２１ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＣＨ_３ＣＮ中に溶解させた。次いで、Ｋ_２ＣＯ_３（５当量）および酸クロリド（２当量）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌し続けた。朝、反応進捗をＬＣ−ＭＳによって確認した。完了時に、溶媒を減圧によって除去した。

【0109】

プロトコルＬ：蛍光色素の付着
大環状分子（４μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２００μＬ）中に溶解させた。次いで、ＤＩＰＥＡ（５当量）を添加した。別個のバイアル内で、ＮＨＳエステルとして５ｍｇの蛍光色素を２００μＬのＤＭＳＯ中に溶解させた。次いで、大環状分子溶液を蛍光標識の溶液に添加した。反応混合物を一晩撹拌した。朝、反応進捗をＬＣ−ＭＳによって確認し、次いで、溶媒を凍結乾燥によって除去した。

【0110】

プロトコルＭ：精製方法
すべての大環状分子を、３０ｇのＲｅｄｉＳｅｐ Ｃ１８ Ｇｏｌｄカラムを使用する逆相カラムクロマトグラフィーを使用して精製した。勾配は、３５ｍＬ／分の流速で、溶離剤Ａ（二重蒸留水中０．１％ギ酸）およびＢ（ＨＰＬＣ−グレードのアセトニトリル中０．１％ギ酸）からなっていた。

【0111】

インテグリンα４β７ − ＭＡｄＣＡＭ−１競合アッセイ
９６ウェルＭｉｃｒｏｌｏｎ２００プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、６５５００１）を、炭酸緩衝剤（５０ｍＭ、ｐＨ９．６）中１μｇ／ｍｌの組み換えインテグリンα４β７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、５３９７−Ａ３−０５０）の溶液の１ウェル当たり１００μｌでコーティングした。プレートを４℃で一晩インキュベートした。溶液を除去し、１ウェル当たり２５０μｌのブロッキング緩衝剤（５０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｎＣｌ_２、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ：ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ）、０．０５％のＴｗｅｅｎ）を添加した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝剤（５０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｎＣｌ_２、０．０５％のＴｗｅｅｎ）で３回洗浄した。各ウェルに、アッセイ緩衝剤中に希釈した５０μｌの化合物を化合物段階希釈プレートから移動させて添加した。５０μｌの組み換えＭＡｄＣＡＭ−ＦＣ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、６０５６−ＭＣ−０５０）をアッセイ緩衝剤（５０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｎＣｌ_２、０．１％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ）中に１ｍｇ／ｍｌの濃度で各ウェルに添加した。プレートを振とうさせながら室温で２時間インキュベートして、結合平衡に到達させた。次いで、プレートを洗浄緩衝剤で３回洗浄し、アッセイ緩衝剤中１：２０００で希釈した１００μｌの抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ：ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）（Ａｂｃａｍ、Ａｂ９７２２５）を各ウェルに添加した。プレートを攪拌下、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを３回洗浄し、次いで、１００μｌの１，３’，５，５’−テトラメチルベンキジエ（ＴＭＢ：ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｘｉｄｉｅ）を各ウェルに添加した。反応を、５０μｌの１ＭのＨ_２ＳＯ_２を添加することによって２分間のインキュベーション後に停止させ、光学吸光度を４５０ｎＭで読み取った。

【0112】

インテグリンα４β１ − ＶＣＡＭ−１競合アッセイ
９６ウェルＭｉｃｒｏｌｏｎ２００プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、６５５００１）を、炭酸緩衝剤（５０ｍＭ、ｐＨ９．６）中０．５μｇ／ｍｌの組み換えインテグリンα４β１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、５３９７−Ａ３−０５０）の溶液の１ウェル当たり１００μｌでコーティングした。プレートを４℃で一晩インキュベートした。溶液を除去し、１ウェル当たり２５０μｌのブロッキング緩衝剤（５０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｎＣｌ_２、１％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ）を添加した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝剤（５０ｍＭのトリス、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｎＣｌ_２、０，０５％のＴｗｅｅｎ）で３回洗浄した。各ウェルに、アッセイ緩衝剤中に希釈した５０μｌの化合物を化合物段階希釈プレートから移動させて添加した。５０μｌの組み換えＶＣＡＭ−ＦＣ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、８６２−ＶＣ−１００）をアッセイ緩衝剤（５０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｎＣｌ_２、０．１％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ）中に１ｍｇ／ｍｌの濃度で各ウェルに添加した。プレートを振とうさせながら室温で２時間インキュベートして、結合平衡に到達させた。次いで、プレートを洗浄緩衝剤で３回洗浄し、アッセイ緩衝剤中１：２０００で希釈した１００μｌの抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的−ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ、Ａｂ９７２２５）を各ウェルに添加した。プレートを攪拌下、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを３回洗浄し、次いで、１００μｌの１，３’，５，５’−ＴＭＢを各ウェルに添加した。反応を、５０μｌの１ＭのＨ_２ＳＯ_２を添加することによって２分間のインキュベーション後に停止させ、光学吸光度を４５０ｎＭで読み取った。

【0113】

ＲＰＭＩ８８６６細胞接着競合アッセイ
ＲＰＭＩ８８６６ヒト細胞（Ｓｉｇｍａ＃９５０４１３１６）を、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ：Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）（Ｗｉｓｅｎｔ、０８１−１０５）で補充されたＲＰＭＩ１６４０媒体（Ｗｉｓｅｎｔ、３５０−０００−ＣＬ）中で培養し、１％のペニシリン−ストレプトマイシンＡ ＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ、４４２４０４）を、コーティング緩衝剤（５０ｍＭの炭酸ナトリウム、ｐＨ９．６）中０．２５ｍｇ／ｍｌで１００ｍｌ／ウェルの組み換えヒトＭＡｄＣＡＭ−１ Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、６０５６−ＭＣ−０５０）溶液でコーティングした。プレートを４℃で一晩インキュベートし、１ウェル当たり１５０μｌの洗浄緩衝剤（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ：ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）中０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で２回洗浄し、１ウェル当たり２５０μｌのブロッキング緩衝剤（ＰＢＳ中１％の脱脂粉乳）でブロックし、室温で１時間インキュベートした。ＲＰＭＩ８８６６細胞を５ｍＭのカルセインを含有するＰＢＳ中１０００万細胞／ｍｌで再懸濁し、５０ｍｌのチューブ中に３７℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳを添加してチューブを充填し、細胞を下に回転させて、ＲＰＭＩ１６４０媒体中２００万／ｍｌまで再懸濁した。化合物を結合緩衝剤（１．５ｍＭのＣａＣｌ_２、０．５ｍＭのＭｎＣｌ_２、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５）中に段階希釈によって、２倍の濃度の１ウェル当たり５０μｌの最終体積まで希釈した。プレートを３００μｌのＰＢＳで１回洗浄し、５０μｌの化合物および５０μｌの細胞（１００，０００細胞）を各ウェルに移動させ、細胞接着するようにプレートを暗所で３７℃、５％のＣＯ_２で４５分間インキュベートした。プレートを反転させ、ペーパータオル上でブロットすることによって空にし、手で２回、ＰＢＳで洗浄した。次いで、１００μｌのＰＢＳを各ウェルに添加した。ＦＩＴＣ９６ボトムリードを使用してＢｉｏｔｅｋ Ｎｅｏ製の機器上でプレートを読み取った。投薬応答を計算するために、細胞を含有しない対照ウェルの蛍光値を各試験ウェルから引いた。

【0114】

緩衝剤
コーティング緩衝剤（５０ｍＭの炭酸塩）
４２０ｍｇの炭酸水素ナトリウムを１００ｍｌの水中に溶解させる（溶液１）。２７０ｍｂの炭酸ナトリウムを５０ｍｌの水中に溶解させる（溶液２）。ｐＨ９．６まで溶液２を溶液１に添加する。
洗浄緩衝剤
ＰＢＳ中０．０５％のＴｗｅｅｎ２０
ブロッキング緩衝剤
ＰＢＳ中１％の脱脂粉乳
結合緩衝剤
１．５ｍＭのＣａＣｌ_２
０．５ｍＭのＭｎＣｌ_２
５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨをＨＣｌで７．５にする。

【0115】

血漿タンパク質結合の決定
ＣＤ−１マウスまたはＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから採取した５０％の血漿を用いる平衡透析（ＨＴＤｉａｌｙｓｉｓ）法を使用し、Ｋ２ＥＤＴＡと共にインキュベートした。試験物質を三複製中１マイクロＭの濃度で評価した。５時間のインキュベーション時間ならびに血漿標準および緩衝剤標準をＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して評価した。回収率（Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ）は、（Ｃ_{ｂＵｆｆｅｒ}＋Ｃ_{ｐｌａｓｍａ}）／［平均］Ｃ_{ｉｎｉｔｉａｌ}、［平均］Ｃ_{ｉｎｉｔｉａｌ}が透析前の試験試料から三連で測定されるように計算した。結合していない化合物の割合をＣ_{ｂｕｆｆｅｒ}／Ｃ_{ｐｌａｓｍａ}として計算した。

【0116】

水性溶解性アッセイ
水性溶解性は、ｐＨ７．４のリン酸緩衝食塩水中の試験化合物の１、０．５、または０．２ｍＭ（最大）を使用することによって決定した。溶液を室温で４時間インキュベートし、６００ｒｐｍで攪拌し、三連で行った。遠心分離を６０００ｒｐｍで１５分間遂行し、溶液濃度をＨＰＬＣ−ＵＶ（２２０ｎｍの波長と３００ｎｍの波長の間で獲得するフォトダイオードアレイ検出器）を使用して測定した。

【0117】

シトクロムＰ４５０抑制アッセイ
ヒト肝ミクロソーム（０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度を用いたＣＹＰ１Ａ２を除く）を使用して、シトクロムＰ４５０（「ＣＹＰ」）の４つのアイソフォームＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｃ９、およびＣＹＰ１Ａ２の活性に関する試験化合物について、ＩＣ５０（二連で０．２５ｎＭ〜１５マイクロＭの濃度範囲）を評価した。デキストロメトルファン（１５マイクロＭ、ＣＹＰ２Ｄ６）、テストステロン（５０マイクロＭ、ＣＹＰ３Ａ４）、ジクロフェナク（１０マイクロＭ、ＣＹＰ２Ｃ９）、およびフェナセチン（１００マイクロＭ、ＣＹＰ１Ａ２）の基質を用いた。対照抑制剤は、キニジン（０．０３ｎＭ〜１．５マイクロＭ、ＣＹＰ２Ｄ６）、ケトコナゾール（０．０８ｎＭ〜５マイクロＭ、ＣＹＰ３Ａ４）、ミコナゾール（０．２５ｎＭ〜１５マイクロＭ、ＣＹＰ２Ｃ９）、およびアルファ−ナホフラボン（０．０３ｎＭ〜１．５マイクロＭ、ＣＹＰ１Ａ２）であった。インキュベーション時間は１０〜２０分であり、評価された代謝物はデキストロルファン（ＣＹＰ２Ｄ６）、６−ベータ−ＯＨ−テストステロン（ＣＹＰ３Ａ４）、４’−ＯＨ−ジクロフェナク（ＣＹＰ２Ｃ９）、およびアセトアミノフェン（ＣＹＰ１Ａ２）であった。内部標準は、ラベタロール（ＣＹＰ２Ｄ６）、ロラチジン（ＣＹＰ３Ａ４）、カルバマゼピン（ＣＹＰ２Ｃ９）、およびメトプロロール（ＣＹＰ１Ａ２）であった。標準ＬＣ／ＭＳ／ＭＳプロトコルを使用して分析を遂行した。

【0118】

ｉｎ ｖｉｖｏでのＴリンパ球輸送分析
動物管理委員会。用いられた動物管理施設はカナダ動物管理協会（ＣＣＡＣ：Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）公認のものである。この研究は、認証動物管理委員会によって承認され、研究のための動物の使用を管理するＣＡＣＣ基準および規則に準拠した。

【0119】

動物。この研究のために、引き渡し時に重量１６〜１９ｇの雌のＣ５７Ｂｌ／６マウス（ケベック州サン・コスタンのＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ製）を使用した。動物施設に到着した後、すべての動物を全体的な健康評価に供した。研究の開始前に７〜１４日の順化期間を許可した。

【0120】

住環境。動物を標準化された環境条件下で収容した。マウスを１ケージ当たり２〜３匹、自動換気ケージ内に収容した。各ケージには手動配水システムを装備した。標準的な認定商業齧歯類食餌を自由に提供した。水道水を常時自由に提供した。研究の目的を妨げるであろう公知の汚染物質は食餌および水に存在しないと考えられる。各ケージを対応する群について同定し、ケージ内に収容された動物の処置および同一性を示した。異なる処置群からのマウスは混合しなかった。

【0121】

動物室は、２１．５±１℃の制御された温度および４０±１０％の相対湿度で維持した。制御された照明システムは、当該動物に対して１日当たり１２時間の光、１２時間の暗がりを保証した。適切な換気、１時間当たり８〜１０回の空気換気を維持した。

【0122】

ＤＳＳの投与。デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ：Ｄｅｘｔｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ）を２〜３％マウスの飲料水に添加することによりＣ５７Ｂｌ／６マウスに投与した。マウスは、５日間にわたって自由にＤＳＳ処置水にアクセスした。投薬前に２つの均一な群にＤＳＳ処置動物を配分するために、体重および疾患活動性指標（「ＤＡＩ：ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ」）を５日目に測定した。大腸炎に関連する特定の症状を各特定の症状の重篤度に基づいてスコア付けした。１．糞便中の血液（ヘモカルト法陰性、ヘモカルト法陽性、目に見える糞便中の血液の痕跡、直腸の出血）；２．糞便の堅さ（正常、柔らかいがまだ形をなしている、非常に柔らかい、下痢）；３．姿勢と毛（正常；毛の逆立ち；毛の逆立ちと共に軽微な猫背姿勢および軽微な脱水症状；毛の逆立ちと共に猫背姿勢、脱水症状、および歩行異常；瀕死状態（当該動物がこの時点に達する前の安楽死が必須である）。全体のＤＡＩスコアは、３つのパラメータの合計であった（最大スコア９）。ＤＡＩ評価は、５日目のみ（投薬前）に遂行した。

【0123】

試験物質およびビヒクルの経口投薬。６日目に、強制摂食による溶液の投与手順に従って、経口経路を介する単回の緩徐なボーラス（約５秒間）として、試験物質を朝、投与した（当該動物はしっかり拘止した）。２２Ｇの先端に球の付いた胃の強制摂食用ニードルを口の側面を通過させて、食道に向かって前進させた。試験物質およびビヒクルを１０ｍＬ／ｋｇ経口投薬した。投薬量は、各動物の体重に応じて個別に調整して目標投薬に到達させた。

【0124】

試験物質およびビヒクルの静脈内投薬。６日目に、静脈内投与による溶液の投与手順に従って、試験物質、ＤＡＴＫ３２抗体、およびビヒクルを、尾静脈を介する単回の緩徐なボーラス注射（約５秒間）として、朝投与した（当該動物を拘止し、その尾を投薬前に温めた）。３０Ｇのニードルを使用して、５ｍＵｋｇの投薬量で正中尾静脈を通じて試験物質またはビヒクルを注入した。投薬量は、各動物の体重に応じて個別に調整して、ＤＡＴＫ３２対照抗体の目標投薬に到達させた。

【0125】

試料の採取。６日目、試験物質またはビヒクル投薬の５時間後、ＣＣＡＣによって出版された「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌｓ」に従って全身麻酔下で心臓穿刺により動物を安楽死させた。血液を、ＥＤＴＡを含有するＳａｒｓｔｅｄｔ製チューブ内に移動させた。腸間膜および末梢（鼠径、補助、および上腕）リンパ節を採取し、氷上で、冷却ＰＢＳを含有する対応するチューブ内に移動させた。組織調製まで、節を氷上に置いた。

【0126】

細胞集団標識付け。血液を心臓穿刺により中断させ、ＥＤＴＡ被覆チューブ上で採取した。腸間膜リンパ節（ＭＬＮ：Ｍｅｎｓｅｎｔｅｒｉｃ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ）および末梢リンパ節（ＰＬＮ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ）も採取した。組織からの単核細胞は密度勾配（Ｌｙｍｐｈｏｌｙｔｅ）を使用して単離され、それらは蛍光抗体で染色された。細胞（５×１０４）を最初にＢＤマウスＦｃＢｌｏｃｋ（Ｆｃｙ ＩＩＩ／ＩＩ受容体）と１５分間、続いて特異的抗体と３０分間インキュベートした。洗浄後、ＢＤ固定溶液を使用して細胞を固定した。

【0127】

【表2】

【0128】

次いで、ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒサイトメーターを使用して、Ｔリンパ球の異なる亜集団の割合を分析した。

【0129】

齧歯類におけるｉｎ ｖｉｖｏでの薬物動態評価
試験化合物の経口生物学的利用度は、マウスにおける１回または２回の経口投薬後の血漿曝露を評価することによって行い、場合によっては、当該血漿曝露を同じ化合物の単回静脈内投薬後のものと比較することによって行った。

【0130】

実験設計に関する詳細は以下の通りである。

【0131】

【表3】

【0132】

すべての場合において、試験化合物の製剤化は、経口投薬についてはＰＢＳ（ｖ／ｖ）中３０％のＬａｂｒａｓｏｌ、静脈内投薬についてはＰＢＳ（ｖ／ｖ）中２５％のＰＥＧ−４００であった。

【0133】

末梢血の採取は以下のように進めた。

【0134】

【表4】

【0135】

場合によっては、採取を最大２４時間続行した。また、いくつかの研究では、肝臓および結腸を、末梢血および末端（ならびに逐次）ベースで同時にマウスから採取したことにも留意されたい。

【0136】

他の研究詳細としては以下が挙げられる。
動物：Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ製の雄のＣＤ−１マウス（２０〜２５ｇ）を、投薬前に最低５日間、気候順応化させた。投薬日に体重を記録した。

【0137】

食料制限：経口投薬された動物は、一晩食物が取り上げられ、投薬後約２時間、給餌された。

【0138】

臨床的観察：投薬時および各試料採取時に動物を観察した。いかなる異常も記録した。

【0139】

投薬：試験化合物を含有する製剤を、使い捨ての給餌ニードルで強制摂食によって経口投与した。

【0140】

試料採取：末端血液および組織試料を、心臓穿刺によるＯ２／ＣＯ２麻酔下で採取した。結腸試料（盲腸から遠位に２．５ｃｍの０．５ｃｍの部分）を切除し、氷冷したＰＢＳですすぎ、ブロットし、計量する（該当する場合）。肝臓をブロットし、軽量する。血漿、肝臓、および結腸の試料は、生物分析まで摂氏−８０度で凍結保存する。

【0141】

試料の加工／貯蔵：すべての血液試料を湿った氷上でＫ２ＥＤＴＡチューブ内に移動させ、５分間（３２００ｘｇで５分間４℃で）遠心分離して血漿を得た。試料を生物分析まで−８０℃で凍結保存した。

【0142】

試料保持：血漿試料を分析し、任意の残りの試料を研究が完了するまで−８０℃で凍結保存した。残りの試料は廃棄した。

【0143】

生体分析の方法条件および試料分析：
マトリックス：マウス血漿
計測器具：バイナリポンプ、溶媒脱気装置、サーモスタット付きカラムコンパートメント、ＣＴＣオートサンプラー、およびカラムと質量分析計のインレットとの間に設置された切換弁を備えたＡｇｉｌｅｎｔ製ＬＣシステムを装備したＡＢ Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ ４０００ Ｑ−ＴＲＡＰ ＭＳ／ＭＳシステム。

【0144】

方法条件：
一重項における非ゼロ較正標準（ＳＴＤ：ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄ）を使用した定量ダイナミックレンジの決定。ＳＴＤは、ブランクマトリックス試料（ＩＳなし）、ゼロ試料（ＩＳあり）、および予測レンジを網羅し、より低い定量レベル（ＬＬＯＱ：ｌｏｗｅｒ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）を含む少なくとも６つの非ゼロＳＴＤからなる。

【0145】

バッチをブラケッティングするシステム適合性試料（検体およびＩＳを含有する未希釈の溶液）の注入３回。

【0146】

方法承認基準：
非ゼロＳＴＤの少なくとも７５％を、公称濃度から±２０％の偏差内のすべての逆算濃度（より低い定量レベル（ＬＬＯＱ：ｌｏｗｅｒ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）の場合は±２５％）を含む較正曲線内に含めなければならない。

【0147】

較正曲線の相関係数（ｒ）は、０．９９以上でなければならない。

【0148】

システム適合性試料の注入前後の面積比の変化は、±２５％以内である。

【0149】

最も高い較正標準の＞１倍である試料を、希釈し、対応する希釈品質対照基準と共に再アッセイする。

【0150】

試料分析バッチ：
バッチをブラケッティングするシステム適合性試料の注入３回
研究試料および投薬溶液をブラケッティングする昇順時のＳＴＤ
１．研究試料
２．投薬溶液を３つの独立した希釈物としてブランクマトリックス（マウス血漿）中に希釈

【0151】

ＥＴ０２４５１−０１（化合物番号３４０）およびＥＴ０２４５２−０１（化合物番号３４１）を用いた（治療上の）ＤＳＳモデルにおける８日間の有効性研究

【0152】

【表5】

【0153】

試験された化合物の説明
名称：ビヒクル Ｌａｂｒａｓｏｌ／ＰＢＳ
量：８．０ｍＬ
溶液：Ｌａｂｒａｓｏｌ（３０％）／ＰＢＳ（７０％）
貯蔵：４℃

【0154】

名称：ＥＴ０２４５１（化合物番号３４０）
量：３．７ｍＬ
溶液：Ｌａｂｒａｓｏｌ（３０％）／ＰＢＳ（７０％）中８ｍｇ／ｍＬ
貯蔵：４℃

【0155】

名称：ＥＴ０２４５２（化合物番号３４１）
量：３．４５ｍＬ
溶液：Ｌａｂｒａｓｏｌ（３０％）／ＰＢＳ（７０％）中８ｍｇ／ｍＬ
貯蔵：４℃

【0156】

名称：ＥＴ０２４５２（化合物番号３４１）
量：３．４０ｍＬ
溶液：ＰＥＧ４００（４０％）／ＰＢＳ（６０％）中１３ｍｇ／ｍＬ
貯蔵：４℃

【0157】

名称：ＤＡＴＫ３２抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃１４−５８８７−８５、ロット＃４２８２１９０）
量：５ｍＬ
溶液：濃縮ステップ後に０．５ｍｇ／ｍＬを２．５ｍｇ／ｍＬまで濃縮
貯蔵：４℃

【0158】

名称：ビヒクル ＰＥＧ／ＰＢＳ
量：８．０ｍＬ
溶液：ＰＥＧ４００（４０％）／ＰＢＳ（６０％）
貯蔵：４℃

【0159】

動物管理委員会。用いられた動物管理施設はカナダ動物管理協会（ＣＣＡＣ：Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）公認のものである。この研究は、認証動物管理委員会によって承認され、研究のための動物の使用を管理するＣＡＣＣ基準および規則に準拠した。

【0160】

動物。この研究のために、引き渡し時に重量１６〜１９ｇの雌のＣ５７Ｂｌ／６マウス（ケベック州サン・コスタンのＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ製）を使用した。動物施設に到着した後、すべての動物を全体的な健康評価に供した。研究の開始前に７〜１４日の順化期間を許可した。

【0161】

住環境。動物を標準化された環境条件下で収容した。マウスを１ケージ当たり２〜３匹、自動換気ケージ内に収容した。各ケージには手動配水システムを装備した。標準的な認定商業齧歯類食餌を自由に提供した。水道水を常時自由に提供した。研究の目的を妨げるであろう公知の汚染物質が食餌および水に存在しないと考えられる。各ケージを対応する群について同定し、ケージ内に収容された動物の処置および同一性を示した。異なる処置群からのマウスは混合しなかった。

【0162】

動物室は、２１．５±１℃の制御された温度および４０±１０％の相対湿度で維持した。制御された照明システムは、当該動物に対して１日当たり１２時間の光、１２時間の暗がりを保証した。適切な換気、１時間当たり８〜１０回の空気換気を維持した。

【0163】

試験物質およびビヒクルの経口投薬。５日目〜８日目まで、強制摂食による溶液の投与手順に従って、経口経路を介する単回の緩徐なボーラス（約５秒間）として、ナセルリンおよびビヒクルを投与した（当該動物はしっかり拘止した）。２２Ｇの先端に球の付いた胃の強制摂食用ニードルを口の側面を通過させて、食道に向かって前進させた。試験物質およびビヒクルを５ｍＬ／ｋｇ経口投薬した。投薬量は、各動物の体重に応じて個別に調整して、ＥＴ０２４５１およびＥＴ０２４５２の目標投薬（４０ｍｇ／ｋｇ）に到達させた。

【0164】

試験物質およびビヒクルの腹腔内投薬。５日目に、ＤＡＴＫ３２抗体を５日目のみ、腹腔内経路を介する単回の緩徐なボーラス（約５秒間）として投与した。ＰＥＧ４００（４０％）／ＰＢＳ（６０％）中で調製したＥＴ０２４５２および腹腔内のビヒクル（ＰＥＧ４００（４０％）／ＰＢＳ（６０％））を５日目〜８日目まで投与した。以下の手順に従って腹腔内投与を遂行し、マウスを手で拘止し、頭および体を下に傾けて保持した。ニードルの先端（２７Ｇ）を、皮膚を通して、腹壁のすぐ上に挿入した。注射器がいかなる腹部臓器にも挿入されていなかったことを確認するために、溶液の投与前に注射器のプランジャーの短い引き戻しを行った（この場合、流体は注射器内に引き戻されることになる）。投薬量は、各動物の体重に応じて個別に調整して、ＤＡＴＫ３２抗体の目標投薬（１５ｍｇ／ｋｇ）およびＥＴ０２４５２の目標投薬（６５ｍｇ／ｋｇ）に到達させた。

【0165】

炎症スコア。マウスを安楽死させた後、結腸を採取し、その長さを測定した。病変の長さも測定した。浮腫および潰瘍の重篤度に基づいて結腸炎症をスコア化した。

【0166】

疾患活動性指標（ＤＡＩ：Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ）の評価。投薬前に２つの均一な群にＤＳＳ処置動物を配分するために、体重およびＤＡＩを５日目に測定した。ＵＣに関連する特定の症状を各特定の症状の重篤度に基づいてスコア化した。１．糞便中の血液（ヘモカルト法陰性、ヘモカルト法陽性、目に見える糞便中の血液の痕跡、直腸の出血）；２．糞便の堅さ（正常、柔らかいがまだ形をなしている、非常に柔らかい、下痢）；３．姿勢と毛（正常；毛の逆立ち；毛の逆立ちと共に軽微な猫背姿勢および軽微な脱水症状；毛の逆立ちと共に猫背姿勢、脱水症状、および歩行異常；瀕死状態（当該動物がこの時点に達する前の安楽死が必須である）。全体のＤＡＩスコアは、３つのパラメータの合計であった（最大スコア９）。体重測定およびＤＡＩ評価を、８日目にも遂行し、処置の効果を評価した。

【0167】

試料の採取。８日目、ＥＴ０２４５１−０１、ＥＴ０２４５２−０１、およびビヒクル投薬の５時間後、ＣＣＡＣによって出版された「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌｓ」に従って全身麻酔下で心臓穿刺により動物を安楽死させた。血液を、ＥＤＴＡを含有するＳａｒｓｔｅｄｔ製チューブ内に移動させた。腸間膜および末梢（鼠径、補助、および上腕）リンパ節を採取し、氷上で、冷却ＰＢＳを含有する対応するチューブ内に移動させた。組織調製まで、節を氷上に置いた。

【0168】

細胞集団標識付け。血液を心臓穿刺により中断させ、ＥＤＴＡ被覆チューブ上で採取した。腸間膜リンパ節（ＭＬＮ：Ｍｅｎｓｅｎｔｅｒｉｃ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ）および末梢リンパ節（ＰＬＮ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ）も採取した。組織からの単核細胞は密度勾配（Ｌｙｍｐｈｏｌｙｔｅ）を使用して単離され、それらは蛍光抗体で染色された。細胞（５×１０４）を最初にＢＤマウスＦｃＢｌｏｃｋ（Ｆｃｙ ＩＩＩ／ＩＩ受容体）と１５分間、続いて特異的抗体と３０分間インキュベートした。洗浄後、ＢＤ固定溶液を使用して細胞を固定した。次いで、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒサイトメーターを使用して、Ｔリンパ球の異なる亜集団の割合を分析した。用いた抗体は、上記の単回投薬ＰＤ研修について列挙したものと同じであった。

【0169】

結果および考察
化合物を上記の方法に従って合成した。化合物の選択はＮＭＲを使用して特性付けた（すべてのデータが示されているわけではない）。選択された化合物のＮＭＲデータのサブセットを以下に示す。

【0170】

【表6】

【0171】

【表7】

【0172】

【表8】

【0173】

【表9】

【0174】

【表10】

【0175】

【表11】

【0176】

【表12】

【0177】

【表13】

【0178】

【表14】

【0179】

【表15】

【0180】

【表16】

【0181】

【表17】

【0182】

【表18】

【0183】

【表19】

【0184】

【表20】

【0185】

【表21】

【0186】

【表22】

【0187】

【表23】

【0188】

【表24】

【0189】

【表25】

【0190】

【表26】

【0191】

【表27】

【0192】

【表28】

【0193】

【表29】

【0194】

【表30】

【0195】

【表31】

【0196】

【表32】

【0197】

【表33】

【0198】

【表34】

【0199】

【表35】

【0200】

【表36】

【0201】

【表37】

【0202】

【表38】

【0203】

【表39】

【0204】

血漿タンパク質結合の決定
血漿タンパク質によるナセルリンの隔離は比較的低かった。ラットの血漿では、遊離画分（非結合％）は９．５％〜７６．９％（平均４２．６％）に及んだが、マウスの血漿では、遊離画分は１５．７％〜７９．９％（平均４７．８％）に及んだ。小分子陽性対照であるプロプラノロールに対する血漿タンパク質結合は、マウスの血漿では約２１％（遊離画分）、ラットの血漿では約１５％（遊離画分）の正常範囲内であった。評価された化合物としては以下が挙げられる。
ＥＴ０１７９２（化合物番号５）
ＥＴ００７６２（フェニルアラニン残基がトリプトファン残基で置換されている化合物番号５の類似体）
ＥＴ０１８１３（化合物番号１２）
ＥＴ０１８２７（化合物番号１５）

【0205】

【表40】

【0206】

【表41】

【0207】

水性溶解性アッセイ
以下の表に示されるように、インテグリンアルファ−４−ベータ−７−抑制ナセルリンの水性溶解性は比較的高く、７１５マイクロＭの平均溶解性であった。１５個の別個の化合物について三連測定した溶解性の範囲は、１８３マイクロＭ〜１０００マイクロＭ超であった。評価された最大濃度は、推定された水性溶解性に基づいて、異なる試験物質ごとに異なったことに留意されたい。評価された化合物としては以下が挙げられる。
ＵＭ０１３１９９５−０５（化合物番号４）
ＵＭ０１３２３６６−０１（化合物番号８７）
ＵＭ０１３２３６８−０１（化合物番号８８）
ＵＭ０１３２３６９−０１（化合物番号８９）
ＵＭ０１３２３７０−０１（化合物番号５２）
ＵＭ０１３２３７１−０１（化合物番号９０）
ＵＭ０１３２３７４−０１（化合物番号６５）
ＵＭ０１３２３７５−０２（化合物番号４２）
ＵＭ０１３２３７６−０１（化合物番号９２）
ＵＭ０１３２３７７−０１（リシン残基がオルニチン残基で置換されている化合物番号９２の類似体）
ＵＭ０１３４８３９−０１（フェニルアラニン残基およびベータＨｏｍｏＬｙｓ残基がチロシン残基で置換されている化合物番号４５５の類似体）
ＵＭ０１３４６９０−０１（化合物番号３５８）
ＵＭ０１３４８３０−０１（チロシン残基およびアラニン残基が配列内の位置に関して交換されている化合物番号１５９の類似体）
ＵＭ０１３４６７７−０１（化合物番号１５８）
ＵＭ０１３４７００−０１（化合物番号６２）

【0208】

【表42】

【0209】

シトクロムＰ４５０抑制アッセイ
シトクロムＰ４５０の４つのアイソフォームに対する種々のナセルリンの抑制活性を、ヒト肝ミクロソームを使用して評価した。評価された４つのアイソフォームは、ＣＹＰ２Ｄ５、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｃ９、およびＣＹＰ１Ａ２であった。以下に示されるように、この実験で評価された７つのナセルリンについて、アッセイの結果の８５％は、（検出の限界を超える）ＩＣ_５０＞１５マイクロＭを示した。しかしながら、いくつかの化合物については、１０マイクロＭ未満の、およびある場合には、１マイクロＭ未満のＩＣ_５０が記録された。この軽度のＣＹＰ４５０抑制活性に寄与する官能基を理解するように、これらの化合物を構造解析に供した。評価された化合物としては以下が挙げられる。
ＥＴ０１７９２（化合物番号５）
ＥＴ００７６２−０２（フェニルアラニン残基がトリプトファン残基で置換されている化合物番号５の類似体）
ＥＴ０１８１３（化合物番号１２）
ＥＴ００３２８−０１（チロシン残基、ロイシン残基、アスパラギン酸残基、およびトレオニン残基が、トレオニン残基、メチルロイシン残基、バリン残基、およびフェニルアラニン残基で置換されている化合物番号４の類似体）
ＥＴ０１８２７（化合物番号１５）
ＥＴ０１８４２−０１（化合物番号４１３）

【0210】

【表43】

【0211】

ｉｎ ｖｉｖｏでのＴリンパ球輸送分析
いくつかのインテグリンアルファ−４−ベータ−７−抑制ナセルリンがインテグリンアルファ−４−ベータ−７−発現Ｔリンパ球の輸送を減衰させる能力が、ＤＳＳ処置マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの薬力学研究で実証された。図６に示されるように、この研究は、飲料水中のデキストラン硫酸に５日間暴露されたマウスで行った。６日目に、試験物質の単回投薬を投与し、５〜６時間後に末梢血、腸間膜リンパ節、および他の組織を採取し、評価した。

【0212】

示されるように、ネズミ抗−アルファ−４−ベータ−７モノクローナル抗体（ＤＡＴＫ３２；２５ｍｇ／ｋｇ）は、インテグリンａ４ｂ７＋Ｔリンパ球の腸間膜リンパ節（「ＭＬＮ：ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ」）へのホーミングを実質的に低減するが、末梢血中のＣＤ１１ａ＋Ｔリンパ球の数には影響しなかった。ナセルリンについては、１００ｍｇ／ｋｇでは、低い経口生物学的利用度のナセルリンＥＴ２１５４（化合物番号１０５）ではなく、高い経口生物学的利用度のナセルリンＥＴ１７９２（化合物番号５）が、経口投薬後のＭＬＮへのホーミングの著しい低減を誘発した。ＥＴ２１５４の投薬を２００ｍｇ／ｋｇに増加した場合、ＭＬＮへのホーミングの重大かつ強い減衰を誘発した。これらの結果は、腸管関連リンパ組織における高内皮細静脈からの溢血事象を促進したインテグリンアルファ−４−ベータ−７−ＭＡｄＣＡＭを介したＴリンパ球の輸送を減衰させる経口生物学的利用度（および付随する全身曝露）の重要性を実証する。いかなる状況であっても、試験ナセルリンは末梢血中のＣＤ１１ａ＋Ｔ細胞の含有量に著しい変化を生じなかった（同様に、いずれのナセルリンについても末梢血中のＣＤ３４およびＣＤ４５Ｔリンパ球含有量の変化は記録されず、データは示されていない）。

【0213】

齧歯類におけるｉｎ ｖｉｖｏでの薬物動態評価
ナイーブマウスの経口投薬後、および場合によっては静脈内投薬後のいくつかのインテグリンアルファ−４−ベータ−７−抑制ナセルリンの薬物動態プロファイルを我々は評価した。

【0214】

以下の図７に示されるように、ナイーブマウスに対する４８ｍｇ／ｋｇでのＥＴ１７９２（化合物番号５）の１回および２回の経口投薬は、著しい吸収および全身曝露をもたらした。最初の投薬後の曝露（ＡＵＣ−Ｏ−ｔｌａｓｔ）は１，４７５ｈ^＊ｎｇ／ｍｌであったが、２回目の投薬後の曝露は２，１８８ｈ^＊ｎｇ／ｍｌであった。最初の投薬後に記録された最大血漿中濃度は、ほぼ１，６００ｎｇ／ｍｌであった。

【0215】

図８を参照すると、５８９ｈ^＊ｎｇ／ｍｌの暴露（ＡＵＣＯ−ｔｌａｓｔ）で、（４０ｍｇ／ｋｇで）経口投与されたＥＴ１７９２の二次研究において、類似のプロファイルが記録された。二相性の吸収および遅延Ｔｍａｘは、腸細胞の初回の経細胞灌流、その後のより持続する経細胞灌流後を示す可能性が高い。

【0216】

ＥＴ１８１３（化合物番号１２）のその後の研究では、経口強制摂食（４０ｍｇ／ｋｇ）および静脈内注射（５ｍｇ／ｋｇ）を介して単回投薬を投与した。この化合物の吸収はＥＴ１７９２の吸収よりも小さく、ほぼ２時間の著しい終末相半減期にもかかわらず、約１％の計算された経口生物学的利用度を有した。

【0217】

【表44】

【0218】

【表45】

【0219】

ナイーブマウスにおけるＥＴ２４５１（化合物番号３４０）について、別の組の薬物動態研究を行った。この研究では、単回経口投薬（４０ｍｇ／ｋｇ）および単回静脈内投薬（５ｍｇ／ｋｇ）の両方に続いて、血漿、結腸、および肝臓における化合物暴露を測定した。図９および以下の表に説明されるように、ＥＴ２４５１は、血漿中で約１１％の経口生物学的利用度を有し、結腸では１００％に近いことが見出された。また、注目すべきは、消失半減期の差である。血漿中の半減期は、経口投薬後約３０分であることが見出されたが、結腸内の半減期は２１時間超であった。我々はまた、肝臓における生物学的利用度を評価し（以下の図）、これは、血漿中で測定されたもの（約８％）と同様であったが、半減期は経口投薬後約８時間と著しく長かった。ＥＴ２４５１および他のナセルリンの主要な消失経路が肝胆道クリアランスによるものであることは、本研究および他のものから明らかである。

【0220】

【表46】

【0221】

（治療上の）ＤＳＳモデルにおける８日間の有効性研究
潰瘍性大腸炎のＤＳＳ実験モデル（ＥＴ２４５１（化合物番号３４０）およびＥＴ２４５２（化合物番号３４１））における２つの別個のナセルリンの有効性を我々は評価した。上記に示されるように、ＥＴ２４５１は経口投薬後の腸管および全身暴露からの著しい吸収を実証するが、ＥＴ２４５２は経口生物学的利用度の低い実体である。両方の試験化合物を１日２回、マウスの飲料水中のＤＳＳ（２〜３％）に最初に５日間暴露した後、３日間にわたってマウスに投与した。ナセルリンの有効性および薬力学的効果を、マウス抗−インテグリンアルファ−４−ベータ−７ｍＡｂ（ＤＡＴＫ３２）と比較した。ＥＴ２４５２を経口投与、および別の群には腹腔内注射を介した投与の両方で投与した。経口投与した場合には有効ではないかもしれないが、腹腔内投薬では実質的な有効性をもたらしたことを実証することがこの実験設計の目的であった。

【0222】

疾患活動性指標（「ＤＡＩ：Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ」）スコアは、５日目および８日目に、糞便中の血液、糞便の堅さ、および全体的な健康評価（姿勢、毛、および脱水）の３つの特異的症状の重篤度に基づいて個別に評価した。図１０に示されるように、ＤＡＩスコアはＤＳＳ＋ビヒクル対照群で５日目から８日目まで著しく増加した。ＥＴ０２４５１−０１の経口投与およびＤＡＴＫ３２の腹腔内投与は、それぞれ１５％および１９％の低減をもたらしたが、ＥＴ０２４５１−０１誘発効果のみが統計学的に有意であることが証明された。ＥＴ０２４５２−０１の経口投与は、ＤＡＩについていずれの有益な効果も有さなかった。対照的に、腹腔内のＥＴ０２４５２−０１処置は、ＤＳＳ＋ビヒクル対照群（ｐ＜０．０５）と比較して、８日目のＤＡＩスコアで４６％と著しい低減をもたらした。実際、ＥＴ０２４５２−０１の腹腔内処置は、５日目から８日目までの対照ビヒクル処置群で観察されたＵＣ症状の重篤度の増加を防止した。

【0223】

潰瘍性大腸炎は、マウスの結腸の長さの低減を伴う腸管の炎症の変化と関連付けられる（附属書ＩＶの生データ）。ＤＳＳ＋ビヒクル対照群は、病変／結腸長の４０％に相当する４．３±０．３ｃｍの平均結腸長および１．７±０．３ｃｍの病変長を示した（図１１）。処置は結腸長にいずれの影響も与えなかった（図１１）。しかしながら、ＥＴ０２４５１−０１は、この群の病変長を著しく低減し（ｐ＜０．０５）、病変／結腸長の１２％の値（ｐ＜０．０５）に達することにより病変／結腸長比の著しい改善をもたらした。ＥＴ０２４５２−０１の経口投与および腹腔内投与は、対照ビヒクル処置群と比較して、病変長のそれぞれ５３％および２０％の低減をもたらしたが、これらの低減は統計学的に有意ではなかった（図１１Ｂ）。５日目に腹腔内経路によって投与されたＤＡＴＫ３２に加え、対照ビヒクル処置群と比較して、統計学的に有意ではない４５％の低減をもたらした。

【0224】

処置を別個の実験で比較したか否かにかかわらず、各試験物質処置群と対照ビヒクル処置群との統計的比較のためにスチューデントｔ検定を使用したはずである。その場合、別個のスチューデントｔ検定によって、経口ＥＴ０２４５２−０１および腹腔内ＤＡＴＫ３２による統計学的に有意な効果が、病変長および病変／結腸長で得られたはずである。

【0225】

結腸炎症の最終スコアは、各マウスの巨視的スコアに病変／結腸長比を掛けることによって計算した。図１２を参照すると、このパラメータの測定は、対照ビヒクル処置群と比較して、ＥＴ０２４５１−０１（７７％）およびＥＴ０２４５２−０１（７６％）の経口投与による病変炎症の著しい低減を示す。ＥＴ０２４５２−０１およびＤＡＴＫ３２の腹腔内投与は、それぞれ３９％および５３％の低減をもたらしたが、この効果は統計学的に有意ではなかった。

【0226】

細胞集団
ビヒクルマウスにおけるＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ１１ａ＋Ｔ細胞集団の割合と、試験した３つの組織における化合物処置されたものとの間には統計学的な差異はない（図１３参照）。すべての組織において、ＣＤ３４＋細胞の集団は、ビヒクルマウスおよびナセルリン処置マウスにおいて同じである。しかしながら、抗α４β７抗体（ＤＡＴＫ３２）を受容するマウスでは、ＣＤ３４＋細胞の著しい増加（ｐ＜０．０１）が観察されている。ＣＤ３＋ＣＤ４＋α４β７＋細胞集団については、末梢リンパ節でも血液中の差は観測されなかった。しかしながら、ＥＴ０２４５２（化合物番号３４１）の腹腔内投与またはＥＴ０２４５１（化合物番号３４０）の経口投与を受けるマウスの腸間膜リンパ節において、この集団の著しい減少が観察された。ＤＡＴＫ３２の腹腔内投与はまた、ＣＤ３＋ＣＤ４＋α４β７＋Ｔリンパ球の割合を著しく減少させた。

【0227】

表１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに概略されたものより低い活性を示した６００以上の大環状分子が製造されたことに留意したい。より少ないまたは少ない活性を有する大環状分子の選択を表２Ａ、２Ｂ、および２Ｃに概略する。

【0228】

本発明の好ましい実施形態を本明細書において記載してきたが、本発明の趣旨または添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、それらに対する変形がなされ得ることを当業者は理解するであろう。以下の参照リスト内のものを含み、本明細書において開示されるすべての文献が参照により組み込まれる。

【0229】

【表47】

【0230】

【表48】

【0231】

【表49】

【0232】

【表50】

【0233】

【表51】

【0234】

【表52】

【0235】

【表53】

【0236】

【表54】

【0237】

【表55】

【0238】

【表56】

【0239】

【表57】

【0240】

【表58】

【0241】

【表59】

【0242】

【表60】

【0243】

【表61】

【0244】

【表62】

【0245】

【表63】

【0246】

【表64】

【0247】

【表65】

【0248】

【表66】

【0249】

【表67】

【0250】

【表68】

【0251】

【表69】

【0252】

【表70】

【0253】

【表71】

【0254】

【表72】

【0255】

【表73】

【0256】

【表74】

【0257】

【表75】

【0258】

【表76】

【0259】

【表77】

【0260】

【表78】

【0261】

【表79】

【0262】

【表80】

【0263】

【表81】

【0264】

【表82】

【0265】

【表83】

【0266】

【表84】

【0267】

【表85】

【0268】

【表86】

【0269】

【表87】

【0270】

【表88】

【0271】

【表89】

【0272】

【表90】

【0273】

【表91】

【0274】

【表92】

【0275】

【表93】

【0276】

【表94】

【0277】

【表95】

【0278】

【表96】

【0279】

【表97】

【0280】

【表98】

【0281】

【表99】

【0282】

【表100】

【0283】

【表101】

【0284】

【表102】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]