特許 6962984 液体医薬組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6962984

(24)【登録日】2021年10月18日

(45)【発行日】2021年11月5日

(54)【発明の名称】液体医薬組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20211025BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20211025BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20211025BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20211025BHJP

   A61K 47/14 20060101ALI20211025BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20211025BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20211025BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20211025BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/395 U

   A61K47/22

   A61K47/26

   A61K9/08

   A61K47/14

   A61K47/02

   A61K47/12

   A61P19/02

   A61P29/00 101

   A61P17/06

   A61P19/00

   A61P1/04

【請求項の数】14

【外国語出願】

【全頁数】62

(21)【出願番号】特願2019-187090(P2019-187090)

(22)【出願日】2019年10月10日

(62)【分割の表示】特願2017-513323(P2017-513323)の分割

【原出願日】2015年5月15日

(65)【公開番号】特開2020-33361(P2020-33361A)

(43)【公開日】2020年3月5日

【審査請求日】2019年11月11日

(31)【優先権主張番号】14169754.0

(32)【優先日】2014年5月23日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】504022456

【氏名又は名称】フレゼニウス カビ ドイチュラント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100182730

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 浩明

(72)【発明者】

【氏名】ジャンルカ リナルディ

(72)【発明者】

【氏名】シルビア フラタルカンジェリ

(72)【発明者】

【氏名】アレッサンドラ デル リオ

【審査官】 六笠 紀子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１４／０３９９０３（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 国際公開第２０１３／１６４８３７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開昭６３−０８８１９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１４／０６８０２６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００８−５０７５５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００７−５２４６０２（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３９／００−３９／４４

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

水性医薬組成物であって、以下：
（ａ）５０ｍｇ／ｍＬのアダリムマブ；
（ｂ）ヒスチジン緩衝剤、ヒスチジンを、そのイミダゾリウム型との平衡状態で含有するヒスチジン緩衝系、当該ヒスチジン緩衝剤は、ヒスチジン緩衝剤とアダリムマブのモル比１４：１〜４０：１で存在する；
（ｃ）１００ｍＭ〜１５０ｍＭのトレハロース、スクロース、ソルビトール、マルトース、ラクトース、キシリトール、アラビトール、エリスリトール、ラクチトール、マルチトール、イノシトールからなる群から選択される糖安定化剤；及び
（ｄ）ポリソルベート２０又はポリソルベート８０から選択される０．０５〜１．５ｍｇ／ｍＬの界面活性剤；
を含有し、
・ｐＨが５．０〜６．７であり；
・ヒスチジン以外のアミノ酸を含有せず；
・リン酸緩衝剤を含有せず；かつ
・最大で１つの糖安定化剤を含有する；
水性医薬組成物。

【請求項2】

最大で１０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝剤を含有する、請求項１に記載の水性医薬組成物。

【請求項3】

０．５〜１．５ｍｇ／ｍＬの濃度の界面活性剤を含有する、請求項１又は２のいずれかに記載の水性医薬組成物。

【請求項4】

前記糖安定化剤が、ソルビトール、キシリトール、アラビトール、エリスリトール、ラクチトール、マルチトール及びイノシトールからなる群から選択される糖アルコールである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の水性医薬組成物。

【請求項5】

前記糖安定化剤がソルビトールである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の水性医薬組成物。

【請求項6】

前記界面活性剤がポリソルベート２０である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の水性医薬組成物。

【請求項7】

更にクエン酸緩衝剤を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の水性医薬組成物。

【請求項8】

等張化剤として２５〜７５ｍＭの塩化ナトリウムを含有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水性医薬組成物。

【請求項9】

糖安定化剤である単一の非緩衝等張化剤を含有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の水性医薬組成物。

【請求項10】

請求項１〜８のいずれか１項に記載の水性医薬組成物であって、以下：
（ａ）５０ｍｇ／ｍＬのアダリムマブ；
（ｂ）ヒスチジン緩衝剤、ヒスチジンを、そのイミダゾリウム型との平衡状態で含有するヒスチジン緩衝系、当該ヒスチジン緩衝剤は、ヒスチジン緩衝剤とアダリムマブのモル比１４：１〜４０：１で存在する；
（ｃ）１００〜１５０ｍＭのソルビトール；及び
（ｄ）０．０５〜１．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０；
を含有し、
・ヒスチジン以外のアミノ酸を含有せず；かつ
・リン酸緩衝剤を含有しない；
水性医薬組成物。

【請求項11】

請求項１に記載の水性医薬組成物であって、以下：
（ａ）５０ｍｇ／ｍＬのアダリムマブ；
（ｂ）単独又は更なる緩衝系と組み合わせられたヒスチジン緩衝系、当該ヒスチジン緩衝系は、ヒスチジン緩衝剤、ヒスチジンを、そのイミダゾリウム型との平衡状態で含有し、当該ヒスチジン緩衝剤は、ヒスチジン緩衝剤とアダリムマブのモル比１４：１〜４０：１で存在する；
（ｃ）１００〜１５０ｍＭの糖ポリオールである糖安定化剤、ここで当該糖ポリオールは、ソルビトール、キシリトール、アラビトール、エリスリトール、ラクチトール、マルチトール及びイノシトールからなる群から選択される；
（ｄ）０．０５〜１．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０；及び
（ｅ）水；
からなる、水性医薬組成物。

【請求項12】

請求項１に記載の水性医薬組成物であって、以下：
（ａ）５０ｍｇ／ｍＬのアダリムマブ；
（ｂ）単独又は更なる緩衝系と組み合わせられたヒスチジン緩衝系、当該ヒスチジン緩衝系は、ヒスチジン緩衝剤、ヒスチジンを、そのイミダゾリウム型との平衡状態で含有し、当該ヒスチジン緩衝剤は、ヒスチジン緩衝剤とアダリムマブのモル比１４：１〜４０：１で存在する；
（ｃ）１００〜１５０ｍＭのソルビトール；
（ｄ）０．０５〜１．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０；及び
（ｅ）水；
からなる、水性医薬組成物。

【請求項13】

請求項１〜１２のいずれか１項に記載の水性医薬組成物を含有する薬物送達デバイス。

【請求項14】

関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、中度から重度の慢性乾癬及び／又は若年性特発性関節炎の治療に用いる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の水性医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規タンパク質製剤に関する。特に、本発明は、アダリムマブの液体医薬組成物、当該組成物の製造方法、当該組成物を含有するキット、当該組成物を含むパッケージ、当該パッケージを製造する方法、及び当該組成物及び／又はパッケージを使用する治療方法に関する。

【背景技術】

【0002】

腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）関連自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、乾癬及び他の自己免疫疾患の治療は、ＦＤＡ認可薬物、例えばアダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて達成されている。アダリムマブは、ヒトＴＮＦ−α活性を阻害することによりＴＮＦ受容体の活性化を阻害して自己免疫疾患に関与する炎症性応答を下方制御する、ヒトモノクローナル抗体である。アダリムマブの認可された医学的適応は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、中度から重度の慢性乾癬及び若年性特発性関節炎を含む。

【0003】

アダリムマブは、一般に皮下注射によって患者に投与されるため、液体形態で、典型的にはバイアル、装填済みシリンジ、又は装填済み「ペンデバイス」等のパッケージで提供される。市販のペンデバイス（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）ペン）は、一般に、０．８ｍｌの４０ｍｇアダリムマブ滅菌製剤が装填された１ｍｌ充填済みガラスシリンジ（下記）、固定された針（灰色の天然ゴム又はラテックスフリー版）及び針カバーを備える。アダリムマブの市販の製剤（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））は、以下の成分を含有する。

【表1】

【0004】

アダリムマブ及びその製造方法は、ＷＯ９７／２９１３１ （ＢＡＳＦ）にＤ２Ｅ７として、又は本分野の何処かに記載されている。

【0005】

上記アダリムマブの市販の製剤は安定である（少なくともある程度は）が、関連する抗体は長期間又はストレス条件下で不安定であり得るため、当該製剤の長期間の保存を妨げる。そのような製剤の分解は、以下のような様々な要因によるものであり得る。
・物理的作用、例えば：
・関連するタンパク質分子の凝集阻害（Ｔｗｅｅｎ−８０による機能）の不十分；
・沈殿阻害の不十分；
・水と空気の境界、又は何らかのパッケージ材料の接触表面における関連するタンパク質分子の吸着阻害（Ｔｗｅｅｎ−８０による機能）の不十分；
・浸透圧の制御（マンニトールによる機能）の不十分；
・化学的作用、例えば：
・酸化の制御（マンニトールによる機能で、潜在的にＴｗｅｅｎ−８０により抑制され、二重結合の酸化を促進し得る）の不十分；
・光酸化の阻害の不十分；
・酸、アルデヒド及びペルオキシド産物の形成をもたらして抗体の安定性に影響するエステル結合の加水分解の阻害の不十分；
・ｐＨの維持及び安定化の不十分；
・タンパク質断片化の阻害の不十分；
・タンパク質アンフォールディングの阻害の不十分；

【0006】

上記の全て又は一部の要因が、利用出来ない薬物産物（医学的治療における使用において安全性を欠く）、又はその利用可能性が、特に異なるバッチの薬物が製造、輸送及び保存の過程で晒され得る様々なストレス（振動、熱、光等）の観点において、変化して予測出来ない薬物産物をもたらし得る。

【0007】

アダリムマブの物理的及び化学的安定性に関して、上記の市販製剤内の成分が、特に多数の成分の観点において、期待を下回っているように見える。この特定の助剤の組み合わせが明確に「微妙なバランス」（様々な技術的要素の間での相互作用によりもたらされる）を表し、発展的な研究開発の結果であったが、明らかな低調な成績のリスクの観点において、そのような多数の異なる助剤が正当化されるか否かは疑問であり、これは、不可避的に、加工、コスト負荷、毒性リスク、及び製剤の機能を損ない得る成分間の有害な相互作用を増大させる。市販製剤の全体の成績を上回れないとしても、同等の成績を有しつつも構成成分がより少ない代替製剤は、少なくとも上記の理由により、市販の製剤の代替として高度な需要が有る。

【0008】

タンパク質ベースの医薬品の臨床成績を保証するためには、そのような製品は一定期間に渡り安定かつ定常的な状態を維持しなければならない。最終製品の製造の過程及び保存の過程を含む製造プロセスのあらゆる段階の過程で、分子の変化は起こり得ることは周知である。分子の変化は、バイオ医薬品の品質特性を変化させ、製品の同一性、強度又は純度の望ましくない変化をもたらす。そのような問題の幾つかを以下に紹介する。

【0009】

薬剤開発の主要なゴールは、その生産、保存、輸送及び使用の全ての段階でバイオ医薬タンパク質の安定性を支持し得る医薬組成物を提供することである。革新的なバイオ医薬タンパク質、又はバイオシミラーモノクローナル抗体（ｍＡｂ）における製剤開発は、その安全性、臨床効率及び商業的成功において必須である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

従って、アダリムマブの改善された又は代替の液体製剤の提供には需要が存在する。何らかの新規製剤が、１つ以上の上記問題及び／又は１つ以上の当該技術分野で内在する問題を解決するのが望ましく、それらの問題を１つ以上解決するのが適切であり得る。望ましくは、本分野の問題は、製剤の複雑性を低下しながら解決され得る。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明の第一の側面において、液体医薬組成物が提供され、当該組成物は、アダリムマブ（適切にはその任意のバイオシミラーを含む）；ヒスチジン緩衝剤（又はヒスチジン緩衝系）；及び糖安定化剤；を含有し、任意で、液体医薬組成物に関連して本明細書中で規定する任意の１つ以上の追加の成分（例えば等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）を含み、アルギニンを除く、等）を、本明細書中に示す任意の量、濃度又は形態で含有し（又は除き）；及び任意で、液体医薬組成物に関連して本明細書中に記載の１つ以上のパラメーター又は特性（例えばｐＨ、浸透圧、凝集性、断片化、タンパク質アンフォールディング、濁度（ｔｕｒｂｉｔｙ）等）を呈する。

【0012】

本発明の第二の側面において、液体医薬組成物が提供され、当該組成物は、アダリムマブ；ヒスチジン緩衝剤（又はヒスチジン緩衝系）；及び糖安定化剤；を含有し、ｐＨは６．３０以上である。

【0013】

本発明の第三の側面において、液体医薬組成物が提供され、当該組成物は、アダリムマブ；ヒスチジン緩衝剤（又はヒスチジン緩衝系）；及び糖安定化剤；を含有し、アルギニン（適切にはＬ−アルギニン）を（実質的に又は完全に）含有しない、又はアルギニンを最大０．１ｍＭ含有する。

【0014】

本発明の第四の側面において、液体医薬組成物が提供され、当該組成物は、アダリムマブ；ヒスチジン緩衝剤（又はヒスチジン緩衝系）；及び糖安定化剤；を含有し、ヒスチジン以外のアミノ酸を（実質的に又は完全に）含有しない、又はヒスチジン以外の１つ以上のアミノ酸を（総）濃度で最大０．１ｍＭ含有する。

【0015】

本発明の第五の側面において、本発明の液体医薬組成物を含むパッケージ（例えば充填済みシリンジ、ペン、静脈内バッグ、又は上記のいずれかを含むパッケージ／容器）が提供される。

【0016】

本発明の第六の側面において、本発明の液体医薬組成物を含む薬物送達デバイス（例えば充填済みシリンジ若しくはペン、又は静脈内バッグ）が提供される。

【0017】

本発明の第七の側面において、薬物送達デバイス、本発明の液体医薬組成物（任意でパッケージ又は容器に納められる）、及び任意で液体医薬組成物の投与（例えば皮下投与）に関する指示の説明、を含む部分のキットが提供される。

【0018】

本発明の第八の側面において、液体医薬組成物の製造方法が提供され、当該方法は、アダリムマブ；ヒスチジン緩衝剤（又はヒスチジン緩衝系）；糖安定化剤；及び任意で本明細書中で液体医薬組成物に関連して規定する１つ以上の成分を、任意の量、濃度、又は規定される形態で共に混合する工程；及び任意で液体医薬組成物に関連して本明細書中に示す１つ以上の任意のパラメーター（例えばｐＨ、浸透圧）を調整する工程、を含む。

【0019】

本発明の第九の側面において、本明細書中に規定する液体医薬組成物の製造方法によって取得可能な、取得される、又は直接取得される、液体医薬組成物が提供される。

【0020】

本発明の第十の側面において、パッケージ又は薬物送達デバイスの製造方法が提供され、当該方法は、パッケージ又は薬物送達デバイス内に本明細書中に規定する液体医薬組成物を納める工程を含む。

【0021】

本発明の第十一の側面において、本明細書中に規定するパッケージ又は薬物送達デバイスの製造方法によって取得可能な、取得される、又は直接取得される、パッケージ又は薬物送達デバイスが提供される。

【0022】

本発明の第十二の側面において、疾患又は医学的障害の治療を要する患者の疾患又は医学的障害を治療する方法が提供され、当該方法は、本明細書中に規定する治療有効量の液体医薬組成物を患者に投与する工程を含む。

【0023】

本発明の第十三の側面において、治療に使用する本明細書中に規定する液体医薬組成物が提供される。

【0024】

本発明の第十四の側面において、疾患又は障害の治療のための医薬の製造における本明細書中に規定する液体医薬組成物の使用が提供される。

【0025】

本発明の第十五の側面において、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）関連自己免疫疾患の治療を要する患者の当該疾患を治療する方法が提供され、当該方法は、本明細書中に規定する治療有効量の液体医薬組成物を患者に投与する工程を含む。

【0026】

本発明の第十六の側面において、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）関連自己免疫疾患の治療に用いる本明細書中に規定する液体医薬組成物が提供される。

【0027】

本発明の第十七の側面において、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）関連自己免疫疾患の治療のための医薬の製造における本明細書中に規定する液体医薬組成物の使用が提供される。

【0028】

本発明の第十八の側面において、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、中度から重度の慢性乾癬及び／又は若年性特発性関節炎の治療を要する患者におけるそれらの疾患を治療する方法が提供され、当該方法は、本明細書中に規定する治療有効量の液体医薬組成物を患者に投与する工程を含む。

【0029】

本発明の第十九の側面において、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、中度から重度の慢性乾癬及び／又は若年性特発性関節炎の治療に用いる本明細書中に規定する液体医薬組成物が提供される。

【0030】

本発明の第二十の側面において、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、中度から重度の慢性乾癬及び／又は若年性特発性関節炎の治療のための医薬の製造における本明細書中に規定する液体医薬組成物の使用が提供される。

【0031】

更なる側面において、本発明は、液体医薬組成物、パッケージ、薬物送達デバイス、部分のキット、液体医薬組成物を製造する方法、使用のための液体医薬組成物、及び医薬の製造のための液体医薬組成物の使用を提供し、本質的には本明細書中に規定されている（上記二十個の側面のいずれかに含まれる）が、「アダリムマブ」（及びそのバイオシミラー）に固有であるというよりも、本発明は、任意のＴＮＦ−α阻害抗体（抗ＴＮＦ−α抗体）が利用され得て（従って関連すると規定される）、但し適切には、当該抗体は、ヒトＴＮＦ−α活性を阻害し、最も適切にはヒトＴＮＦ−α活性を阻害するヒトモノクローナル抗体である。適切には、当該抗ＴＮＦ−α抗体は、治療的に有効な医薬であり（少なくとも治療を要する患者に適切な量が投与されたとき）（又はそのバイオシミラー−下記アダリムマブに関連するバイオシミラーの定義を参照されたい。全ての抗ＴＮＦ−α抗体を等しく利用している）、適切には、ＦＤＡの認可を受けたものである。このように、本願における「アダリムマブ」の言及は、それと適合しない限り、本発明のこれらの追加の側面の目的で、任意の抗ＴＮＦ−α抗体についての言及と解釈され得る（これが相対量又は絶対量、濃度、パラメーター、又は特性に関連するか否か、又はこれが特定の定義、例えば何がバイオシミラーを構成するか等に関連するか否か）。

【0032】

本発明のこれらの更なる側面の一つは、抗ＴＮＦ−α抗体（適切にはその任意のバイオシミラーを含む）；ヒスチジン緩衝剤（又はヒスチジン緩衝系）；及び糖安定化剤；を含有する液体医薬組成物を提供し、当該組成物は、任意で、本明細書中で液体医薬組成物に関連して規定される１つ以上の任意の追加の成分を、任意で、本明細書中で言及する任意の量、濃度又は形態で含み（又は除き）（例えば界面活性剤を含みアルギニンを除く）；そして当該組成物は、任意で、本明細書中で液体医薬組成物に関連して示す任意の１つ以上のパラメーター又は特性（例えばｐＨ、浸透圧、凝集性、断片化、タンパク質アンフォールディング、濁度）を呈する。

【0033】

特定の態様において、抗ＴＮＦ−α抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブからなる群から選択される。

【0034】

本発明のいずれかの特定の側面に関連して記載される、任意の、適切な、及び好ましい特徴を含むいずれかの特徴は、本発明のいずれかの他の側面の、任意の、適切な、及び好ましい特徴を含む特徴でもあり得る。

【0035】

本発明をより良く理解するために、そして本発明のいかなる態様が実施されるかを示すために、例示として、下記図面を参考に示す。

【図面の簡単な説明】

【0036】

【図1】図１は、実施例１のＤｏＥ１製剤のＯＤにより決定されるタンパク質濃度（ｍｇ／ｍＬ）を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）及び４０℃加熱後４週（網掛け無し）に行われた。

【0037】

【図2】図２は、実施例１のＤｏＥ１製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0038】

【図3】図３は、実施例１のＤｏＥ１製剤のバイオアナライザーにより決定される断片化％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0039】

【図4】図４は、実施例１のＤｏＥ１製剤のＤＳＦにより決定されるアンフォールディング温度（℃）を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定された。

【0040】

【図5】図５は、実施例２のＤｏＥ２製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0041】

【図6】図６は、実施例２のＤｏＥ２製剤のバイオアナライザーにより決定される断片化％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0042】

【図7】図７は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される主要ピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0043】

【図8】図８は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される酸クラスターピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0044】

【図9】図９は、実施例２のＤｏＥ２製剤のネフェロメトリーにより決定される濁度を示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0045】

【図10】図１０は、実施例２のＤｏＥ２製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、機械的撹拌（振盪）後２４時間（薄い斜線網掛け）及び４８時間（網掛け無し）に行われた。

【0046】

【図11】図１１は、実施例２のＤｏＥ２製剤のバイオアナライザーにより決定される断片化％を示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、機械的撹拌（振盪）後２４時間（薄い斜線網掛け）及び４８時間（網掛け無し）に行われた。

【0047】

【図12】図１２は、実施例２のＤｏＥ２製剤のネフェロメトリーにより決定される濁度を示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、機械的撹拌（振盪）後２４時間（薄い斜線網掛け）及び４８時間（網掛け無し）に行われた。

【0048】

【図13】図１３は、実施例２のＤｏＥ２製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0049】

【図14】図１４は、実施例２のＤｏＥ２製剤のバイオアナライザーにより決定される断片化％を示す棒グラフであり、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0050】

【図15】図１５は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される主要ピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0051】

【図16】図１６は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される酸クラスターピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0052】

【図17】図１７は、実施例２のＤｏＥ２製剤のネフェロメトリーにより決定される濁度を示す棒グラフであり、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0053】

【図18】図１８は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される主要ピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0054】

【図19】図１９は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される酸クラスターピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0055】

【図20】図２０は、実施例２のＤｏＥ２製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0056】

【図21】図２１は、実施例２のＤｏＥ２製剤の、可視下粒子カウント解析によって決定される、１０ミクロン以下の粒径の可視下粒子の個数濃度（＃／ｍｇ）を示す棒グラフであり、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0057】

【図22】図２２は、実施例２のＤｏＥ２製剤の、可視下粒子カウント解析によって決定される、２５ミクロン以下の粒径の可視下粒子の個数濃度（＃／ｍｇ）を示す棒グラフであり、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【発明を実施するための形態】

【0058】

定義
他の言及が無い限り、本明細書等で用いる下記の用語は、下記に示す意味で用いられている。

【0059】

本明細書中、「アダリムマブ」は、オリジナルの薬剤物質（市販のもの）、ＷＯ９７／２９１３１（ＢＡＳＦ）（特にその中のＤ２Ｅ７）に規定のアダリムマブ及びその他の本分野で知られているもの、並びにそれらのバイオシミラーを含む。ＷＯ９７／２９１３１のＤ２Ｅ７は、「配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン」を有する。好ましくは、Ｄ２Ｅ７抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＣＬＶＲ）及び配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を有する。ＷＯ９７／２９１３１は、これらの配列表のそれぞれの詳細を示す。「アダリムマブ」は、バイオシミラー、例えばＷＯ９７／２９１３１に開示のタンパク質配列（特にＤ２Ｅ７に関連するもの）又はその他「アダリムマブ」に関連するもののいずれか１つと、７５％以上、８０％以上、適切には８５％以上、適切には９０％以上、適切には９５％以上、適切には９６％以上、適切には９７％以上、適切には９８％以上、又は最も適切には９９％以上のタンパク質配列同一性を共有し得る、バイオシミラーを含み得る。あるいは、又は加えて、「アダリムマブ」は、バイオシミラー、例えばＷＯ９７／２９１３１に開示のタンパク質配列（特にＤ２Ｅ７に関連するもの）又はその他「アダリムマブ」に関連するもののいずれか１つと、７５％以上、８０％以上、適切には８５％以上、適切には９０％以上、適切には９５％以上、適切には９６％以上、適切には９７％以上、適切には９８％以上、又は最も適切には９９％以上のタンパク質配列相同性を呈する、バイオシミラーを含み得る。あるいは、又は加えて、バイオシミラーは、タンパク質配列が実質的に同一、又は上記で特定した範囲で異なるものであるとしても、（僅かに）異なる糖化プロフィールを有し得る。

【0060】

「バイオシミラー」（別名バイオ後続品）は本分野で周知であり、当業者は、如何なる場合に薬剤物質がアダリムマブのバイオシミラーと見做され得るかを容易に理解し得る。更に、そのような「バイオシミラー」は、そのような「バイオシミラー」が公開市場で販売される前に、販売のために「バイオシミラー」として公的に認可される必要が有り得る。「バイオシミラー」は、一般に、製造承認によって既に公的に許可された「革新者バイオ医薬製品（ｉｎｎｏｖａｔｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ）」（「生物製剤」は、生きている生物によって生産される、又は生きている生物に由来する、又は組換えＤＮＡ又はコントロールされた遺伝子発現手段を通じて生産された薬剤物質を意味する）の後続版（一般に供給元が異なる）を記載するのに用いられる。生物製剤は高度な分子的複雑性を有しており、一般に製造プロセスの変化（例えば異なる細胞系統を生産に用いる等）に敏感で、後続品の製造者が、先行者の分子クローン、細胞バンク、発酵及び精製プロセスに関するノウハウへの、又は活性な薬剤物質自体（革新者の市販の薬物製品のみ）へのアクセスを有しないため、「バイオシミラー」が、革新者の薬物製品と全く同一である可能性は低い。

【0061】

様々なモル計算（例えばアダリムマブと本発明の液体医薬組成物の他の成分との間のモル比）のため、ＣＡＳデータベースのＣＡＳ ＃ ３３１７３１−１８−１， Ａｄａｌｉｍｕｍａｂに開示された詳細に基づいて、分子式はＣ_６４２８Ｈ_９９１２Ｎ_１６９４Ｏ_１９８７Ｓ_４６としてアダリムマブの分子量が１４４１９０．３ ｇ／ｍｏｌと求められた（参照分子量）。従って、５０ｍｇ／ｍＬのアダリムマブを含有する液体医薬組成物は、アダリムマブの０．３４７ｍＭ（又は３４７μＭ）とみなされる。これは、実際の分子量に影響し得る、本発明の範囲内に含まれるアダリムマブのバイオシミラーの性質や糖化のレベルに関して、何らかの限定を意図するものではない。しかしながら、バイオシミラーが異なる分子量を有する場合に、上記参照分子量は、適切には、本明細書中で言及される何らかのモルの規定の範囲内にそのようなバイオシミラーが納まるかどうかを評価する目的で使用されるべきである。従って、当該バイオシミラーの既知の重量におけるモルの数が、上記参照分子量を用いて、本発明の目的の為だけに計算されるべきである。

【0062】

ここで、「緩衝剤」又は「緩衝溶液」は、酸（通常は弱酸、例えば酢酸、クエン酸、ヒスチジンのイミダゾリウム型）及びその共役塩基（例えば酢酸塩又はクエン酸塩、例えば酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム又はヒスチジン）の混合物、又は塩基（通常は弱塩基、例えばヒスチジン）及びその共役酸（例えば水素化ヒスチジン塩）の混合物を含有する、一般に水性の溶液を意味する。「緩衝溶液」のｐＨは、「緩衝剤」によって付与される「緩衝作用」のため、少量の強酸又は塩基の添加によって非常に僅かに変化し得る。

【0063】

「緩衝系」は、１つ以上の緩衝剤及び／又はその共役酸／塩基を含有し、より適切には、１つ以上の緩衝剤及びその共役酸／塩基を含有し、最も適切には、１つの緩衝剤その共役酸／塩基を含有する。他に言及が無い限り、本明細書中で「緩衝系」に関連して言及する濃度は、適切には、緩衝剤及び／又はその共役酸／塩基の組み合わせの濃度を意味する。言い換えると、本明細書中で「緩衝系」に関連して言及する濃度は、適切には、関連する全ての緩衝種（即ち互いに動的平衡状態にある種、例えばクエン酸塩／クエン酸）の組み合わせの濃度を意味する。ヒスチジン緩衝系の濃度は、一般に、ヒスチジンとヒスチジンのイミダゾリウム形態との組み合わせ濃度に関する。しかしながら、ヒスチジンの場合、通常、そのような濃度は、ヒスチジン又はその塩のインプット量を参照して直接計算される。関連する緩衝系を含有する組成物の総ｐＨは、一般に、関連する緩衝種のそれぞれの平衡濃度の反映である（即ち緩衝剤とその共役酸／塩基とのバランス）。

【0064】

「緩衝剤」は、緩衝剤又は緩衝溶液の酸又は塩基成分（通常は弱酸又は弱塩基）を意味する。緩衝剤は、溶液のｐＨを所定の値に又はその付近に維持するのを助け、緩衝剤は、一般に、所定の値を補うように選択される。緩衝剤は、適切には、特に、緩衝剤が適切な量（所望の所定のｐＨに依存する）のその対応する「共役酸／塩基」と混合される（そして適切にはプロトンを交換することが出来る）とき、又は所望の量のその対応する「共役酸／塩基」がｉｎ ｓｉｔｕで形成される場合（これは所望のｐＨに達するまで強酸又は塩基を添加することにより達成される）、所望の緩衝効果をもたらす、単一の化合物である。以下に例を示す。
・ヒスチジン「緩衝剤」は、遊離アミノ酸のヒスチジンである。ヒスチジン等のアミノ酸は両性であり、酸及び塩基のいずれとして振る舞うことも可能であるため、「緩衝剤」は、単純に両性化合物自体（適切には両性イオン形態）である。しかしながら、ヒスチジン緩衝系又は緩衝溶液は、任意で、ヒスチジンに加えて、所望のｐＨに達するまで一定量の酸（適切には強酸、例えば塩酸）又は塩基（適切には強塩基、例えば水酸化ナトリウム）が添加され得る。存在するヒスチジンの幾つかは、両性イオンアミノ酸とは異なるプロトン化状態を呈し得る。ここで、異なる言及の無い限り、ヒスチジン緩衝系に関連して示す濃度は、緩衝剤（例えばヒスチジン）及び／又はその共役酸／塩基（例えばヒスチジンのイミダゾリウム形態）の組み合わせ濃度を意味する。当業者は、そのような濃度を容易に計算出来、ヒスチジン又はその共役酸／塩基（例えば塩酸ヒスチジン）のインプット量を単純に参照することにより、そうすることが出来る。そのような濃度は、緩衝系が緩衝剤と共役酸／塩基とを単純に混合して形成されている場合、組み合わせられた緩衝剤と共役酸／塩基の濃度を参照することにより計算できる。あるいは、緩衝系が、緩衝剤又は共役酸／塩基のいずれかと、それぞれの混合物を作製するためのｐＨ調整剤（例えば強酸又は強塩基）とを混合することによって形成される場合、適切には、そのような濃度は、緩衝剤又は共役酸／塩基のそれぞれの出発量／濃度を参照して計算され得る。例えば、緩衝系が、所望のｐＨに達するまでｐＨ調整剤（例えば水酸化ナトリウム）と混合される既知の量／濃度のヒスチジンを使用して形成される場合、緩衝系の濃度は、ヒスチジンの初期量を参照することによって計算され得る。同様に、緩衝系が、所望のｐＨに達するまでｐＨ調整剤（例えば水酸化ナトリウム）と混合される既知の量／濃度のヒスチジンイミダゾリウム塩（例えば塩酸ヒスチジン）を用いて形成される場合も同様で、この場合、緩衝系の濃度は、ヒスチジンイミダゾリウム塩の初期量を参照して計算され得る。

【0065】

「共役酸／塩基」は、特定の「緩衝剤」の共役酸又は共役塩基（特定のｐＨで関連する方−本発明の背景において典型的には共役酸である）を意味する。ヒスチジン緩衝剤（例えばヒスチジン）の共役酸／塩基は、適切には、ヒスチジンのイミダゾリウム型、適切にはヒスチジンのイミダゾリウム塩である。ヒスチジンのイミダゾリウム型は、本願において「イミダゾリウム−ヒスチジン」と称する場合があり、以下の構造を有する。

【化1】

ヒスチジンのイミダゾリウム塩は、ヒスチジン−イミダゾリウム塩と表記されてもよく、関連する対作用は別として、上記に示したのと本質的に同一の構造を有する。

【0066】

「緩衝種」は、互いに動的平衡状態にある（プロトンを交換している）所定の緩衝系の特定の種を意味する（関連する対アニオン又は対カチオンを除く−即ちヒスチジン／イミダゾリウム−ヒスチジン系における塩化物又は水酸化物対イオンを無視する）。例えば、ヒスチジン及びイミダゾリウム−ヒスチジンは、共に「ヒスチジン緩衝系」の「ヒスチジン緩衝種」を構成する。

【0067】

重量を参照することによって緩衝系の量（絶対量又は相対量）を規定することはしばしば困難であるため（総重量が存在する対イオンの量に影響し得る所望のｐＨ次第であるため）、本願において、重量に基づく定量は、関連する「緩衝種」の理論上の重量を参照して代替的に決定され得る。２つ以上の種は、それぞれ異なる分子量で（通常は１程度異なる）所定の「緩衝種」のセットにおいて（ｐＨを参照してのみ決定され得る相対量で）一般に存在する。従って、実行可能な重量計算及び参照を可能とするために、この明細書の目的で、「緩衝種」のセットの重量は、１つだけの緩衝種に基づく理論上の重量として、即ち緩衝種の最も塩基性のもの（即ちあるｐＨで最もプロトン化されていない型）として与えられる。従って、「緩衝種」のセットの重量は、塩基種の同等物の重量として表記される。例えば、ヒスチジン緩衝系において、ヒスチジン緩衝種は、ヒスチジン及びイミダゾリウム−ヒスチジンカチオンからなり得る。この「緩衝種」の重量は、緩衝系中に存在する唯一の種がヒスチジンであると仮定して（ヒスチジンと共にイミダゾリウム−ヒスチジンが存在するとしても）計算される。従って、適切には、「ヒスチジン緩衝種」を含む重量又は重量比の言及は、緩衝系内のヒスチジン同等物の理論上の重量を言及している。このように、固定された量のイミダゾリウムヒスチジン、又は実際は固定された量のヒスチジン（適切には希釈剤中に溶解すると幾らかのイミダゾリウム−ヒスチジンを形成し得る）に、ｐＨ調整剤（例えば水酸化ナトリウム）を添加することによって、組成物が形成される場合、ヒスチジンの元の重量は、最終的なｐＨに拘らず「緩衝種」の重量であると見做され得る。あるいは、緩衝系の濃度（即ちモル濃度）が既知である場合、これは、関連する緩衝種（例えばヒスチジン）の最も塩基性の型の分子量を参照することによって「緩衝種」の重量に変換されてもよく、イミダゾリウム−ヒスチジンカチオンも存在するという事実は無視される。

【0068】

他の言及が無い限り、「アミノ酸」は、特定のもの（例えばアルギニン、ヒスチジン）も一般的なもの（例えば任意のアミノ酸）も、それらの存在又はさもなければ組成物内（特に本発明の液体医薬組成物）の文脈において、対応する「遊離アミノ酸」に関する（そのプロトン化状態及び／又は塩形態に拘らず一貫量（ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ ａｍｏｕｎｔ）は適切には遊離アミノ酸自体を参照して計算される）。これは、適切には天然及び／又は人工アミノ酸を含む。反対の言及が無い限り、そのような言及は、アミノ酸残基がより長い化合物（複数の化合物を含有する組成物ではない）、例えばペプチド又はタンパク質の部分として共有結合で組み込まれるアミノ酸残基（そのようなアミノ酸残基はペプチド結合によって連結される）に関するものであることと意図されない。アダリムマブはタンパク質としてアミノ酸残基を含んでいるが、このことは「遊離アミノ酸」を含有するとはみなされない。例えば、「アルギニンを含有しない」と規定される組成物は遊離アルギニンを含まないが、アルギニン残基を有するタンパク質（例えばアダリムマブ）を１つ以上含んでも良い。

【0069】

他に言及の無い限り、本明細書中の「アミノ酸」の記載は、特定のものも一般的なものも、適切には、Ｌ−立体異性体又はそのラセミ体に関し、最も適切にはＬ−アミノ酸である。

【0070】

「実質的に含有しない」とは、組成物のある成分に関連して用いている場合（例えば「アルギニンを実質的に含有しない液体医薬組成物」）、その成分が組成物に実質的に添加されなかったことを意味する。上記のように、そのような言及は、タンパク質構造内のアミノ酸残基の存在に影響しない。組成物がある成分を「実質的に含有しない」場合、当該組成物は、適切には、当該成分を０．００１重量％を超えて含有せず、適切には、当該成分を０．０００１重量％を超えて含有せず、適切には、当該成分を０．００００１重量％を超えて含有せず、適切には、当該成分を０．０００００１重量％を超えて含有せず、適切には、当該成分を０．００００００１重量％を超えて含有せず、最も適切には、当該成分を０．０００１パーツパービリオン（重量）を超えて含有しない。

【0071】

「全く含有しない」は、組成物のある成分に関連して使用される場合（例えば「アルギニンを全く含有しない液体医薬組成物」）、組成物がその成分を全く含有しないことを意味する。上記のように、そのような言及は、タンパク質構造内のアミノ酸残基の存在に影響しない。

【0072】

ここで、本明細書の背景において、「強酸」は、適切にはｐＫ_ａが−１．０以下の酸を意味し、「弱酸」は、適切にはｐＫ_ａが２．０以上のものを意味する。ここで、本明細書の背景において、「強塩基」は、適切にはその共役酸のｐＫ_ａが１２以上（適切には１４以上）の塩基を意味し、「弱塩基」は、適切にはその共役酸のｐＫ_ａが１０以下の塩基を意味する。

【0073】

「安定化剤」は、特に凍結及び／又は凍結乾燥及び／又は保存の過程で（特にストレスに晒される場合）生物製剤薬物の構造的完全性の維持を促進する成分を意味する。この安定化効果は、様々な理由によってもたらされ得るが、典型的には、そのような安定化剤は、タンパク質の変性を緩和するオスモライトとして作用する。典型的な安定化剤は、アミノ酸（即ちペプチド又はタンパク質の部分ではない遊離アミノ酸、例えばグリシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、リジン等）、及び糖安定化剤、例えば糖ポリオール（例えばマンニトール、ソルビトール）、及び／又は二糖類（例えばトレハロース、スクロース、マルトース、ラクトース）を含むが、本発明の液体医薬組成物は、１つ以上が糖安定化剤（即ち糖ポリオール又は二糖類のいずれか）である安定化剤を含有する。最も適切には、１つ以上の糖安定化剤は、非還元糖（糖ポリオールであろうと二糖類であろうと）である。

【0074】

「非還元糖」は、一般に、アルデヒド部分を有しない、又はアルデヒド部分を形成する（例えば異性化により）能力を有しない糖である。

【0075】

「浸透圧調整剤」又は「等張化剤」は、それが組成物内に含有されていることが全体の浸透圧及び組成物の浸透圧に貢献する（又は増大する）薬剤を意味する。適切には、等張化剤は、溶液の浸透圧特性を生体液に似せるように機能する薬剤を含む。

【0076】

本明細書中、組成物のある成分、特に緩衝剤、安定化剤、アミノ酸、界面活性剤又は等張化剤の具体的な量の言及は、その成分（又は当該量の純粋な無水物を使用して構成される組成物）の純粋な無水物の量に関するが、そのような成分は、その組成物を形成するときに非無水形態で用いられても良い。非無水形態（例えば一水和物、二水和物等）に対応する量は、適切な乗数を用いて容易に求められる。例えば、他に言及の無い限り（実施例ではトレハロース二水和物に関する量が記載されている）、トレハロースに関して規定される量は、分子量が３４２．２９６ｇ／ｍｏｌであるトレハロースの無水形態（又は規定の量／濃度の無水トレハロースを使用して形成される組成物）の量を意味する。従って、同一の組成物を形成するのに必要なトレハロース二水和物の対応する量を計算するためには（添加する水の量がより少なくなる）、規定された量に３７８．３３／３４２．２９６を掛ける必要がある。３７８．３３はトレハロース二水和物の分子量だからである。当業者は、所望の濃度を達成するために使用する成分の形態に応じて希釈剤／水の量をどのように調整すべきかを容易に理解し得る。

【0077】

「医薬組成物」は、医薬的に活性な製剤であり、治療的に効果的な有効成分の生理活性をもたらすが、その製剤の投与が想定される対象に明らかに毒性である他の成分を含有しないものを意味する。

【0078】

本明細書中、「安定」は、一般に、保存、保管の過程で、成分の、典型的にはその活性又は組成物の、物理的、化学的、生物的安定性を意味する。

【0079】

「治療する」又は「治療」は、症状の予防や既存の兆候の緩和を含む。症状、障害又は状態を「治療する」又は「治療」は、以下を含む：（１）症状、障害又は状態に苦しむ又はその素因を有するが未だ症状、障害又は状態の臨床的又は無症状の兆候を経験していない又は示していない人間に発症する症状、障害又は状態の臨床的兆候の出現の防止又は遅延、（２）症状、障害又は状態の阻害、即ち疾患又はその再発（維持治療の場合）、又は１つ以上の臨床的又は無症状の兆候の、停止、減少又は発症の遅延、（３）疾患の緩和又は無害化、即ち症状、障害又は状態又は臨床的又は無症状の兆候の減退を引き起こすこと。

【0080】

本発明の背景において、抗体の「治療有効量」又は「有効量」は、疾患又は障害を治療するために哺乳類に投与されるときに予防的及び治療的側面で有効であり、抗体が所望の疾患の治療に有効である量を意味する。

【0081】

「治療有効量」は、化合物、疾患及びその重症度、並びに治療する哺乳類の年齢、体重等に依存して変化し得る。

【0082】

「ヒトＴＮＦ−α」は、１７ｋＤ分泌型及び２６ｋＤ膜連結型、及び生理活性型で存在するヒトサイトカインで、ＴＮＦ−αは、共有結合した１７ｋＤ分子の三量体として観察され得る。その具体的な構造は、Ｐｅｎｎｉｃａ， Ｄ． ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｎａｔｕｒｅ ３１２： ７２４−７２９； Ｄａｖｉｓ， Ｊ． Ｍ． ｅｔ ａｌ． （１９８７） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６， １３２２−１３２６；及びＪｏｎｅｓ， Ｅ． Ｙ． ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３３８： ２２５−２２８に見られる。

【0083】

「組換えヒト抗体」は、組換え技術を用いて調製、発現、生産又は単離されたヒト抗体を含むと意図される。

【0084】

ここで、成分において規定される量が、「部」、ｐｐｍ（パーツパーミリオン）、パーセンテージ（％、例えばｗｔ％）、又は比率のいずれによって特定されていても、他に言及の無い限りは重量によるものであることが意図される。

【0085】

ある組成物の特定の成分の量又は濃度が重量パーセンテージ（ｗｔ％又は％ｗ／ｗ）として特定されている場合、重量パーセンテージは、組成物全体の総重量に対する成分の重量のパーセンテージを意味する。当業者は、組成物の全ての成分の重量パーセントの合計が１００ｗｔ％となることを理解している。しかしながら、全ての成分が列挙されていない場合（例えば組成物が１つ以上の特定の組成物を「含有する」と述べている場合）、重量パーセンテージバランスは、任意で、不特定の成分（例えば希釈剤、例えば水、又は他の必須ではないが適切な添加物）を加えることによって１００ｗｔ％になる。

【0086】

本明細書中、他に言及の無い限り、「部」（例えば重量部、ｐｂｗ）は、複数の成分に関連して使用される場合、それらの複数の成分の間の相対比を意味する。２つ、３つ又はそれ以上の成分のモル又は重量比の表現は、同一の効果をもたらす（例えばｘ、ｙ及びｚのモル比はそれぞれｘ_１：ｙ_１：ｚ_１、又は範囲ｘ_１−ｘ_２：ｙ_１−ｙ_２：ｚ_１−ｚ_２である）。多くの態様において、組成物内の個々の成分の量は「ｗｔ％」の値として示されているが、別の態様において、一部の又は全てのそのようなｗｔ％値は、複数の成分からなる組成物を規定するために、重量部（又は相対比）に変換されてもよい。成分間の相対比は、しばしば、本発明の液体医薬組成物において、絶対濃度よりも重要だからである。複数の成分を含有する組成物が重量部によってのみ記載されている場合（即ち成分の相対比のみ示されている）、成分の絶対量又は濃度の規定（全体も個別も）は必要ではない。本発明の利点は各成分の絶対量や濃度よりもむしろ各成分の相対比に基づくものであるからである。しかしながら、幾つかの態様において、そのような組成物は、規定される成分及び希釈剤（例えば水）からなり、又は本質的にそれらからなる。

【0087】

組成物が複数の規定された成分を（任意で規定された量の濃度で）含有する場合、組成物は、任意で、規定されたもの以外の追加の成分を含有してもよい。しかしながら、幾つかの態様において、複数の規定された成分を含有するという組成物は、実際は、全ての規定された成分からなり、又は本質的にそれらからなり得る。

【0088】

本明細書中、組成物が特定の成分から「本質的になる」という場合、当該組成物は、適切には、当該成分を７０ｗｔ％以上、適切には９０ｗｔ％以上、適切には９５ｗｔ％以上、最も適切には９９ｗｔ％以上含有する。適切には、特定の成分から「本質的になる」組成物は、１つ以上の微量不純物は別として、当該成分からなる。

【0089】

本明細書中、「粒径」又は「孔径」は、粒子又は孔の最長の直径の長さを意味する。いずれかのサイズも、レーザー粒径解析機及び／又は電子顕微鏡（例えばトンネル電子顕微鏡、ＴＥＭ、又は走査型電子顕微鏡、ＳＥＭ）を使用して測定され得る。

【0090】

液体医薬組成物
本発明は、適切には本明細書中で規定する液体医薬組成物を提供する。適切には、当該組成物は、適切にはＴＮＦ受容体の活性化を阻害する、適切にはヒトＴＮＦ−α活性を阻害するものである、適切にはヒトモノクローナル抗体、を含有する。最も適切には、液体医薬組成物は、適切にはその任意のバイオシミラーを含むアダリムマブを含有する。適切には、当該組成物は、ヒスチジン緩衝剤（又はヒスチジン緩衝系）を含有する。当該組成物は、適切には、糖安定化剤を含有する。当該組成物は、適切には、ｐＨが６．３０以上である。当該組成物は、適切には、アルギニンを（実質的に又は全く）含有しないか、又はアルギニンを濃度で最大０．１ｍＭ、アルギニンとヒスチジン緩衝剤（又はヒスチジン緩衝系）とのモル比で最大１：１５０、又はアルギニンとアダリムマブの重量比で最大１：３０００（即ち３０００重量部のヒスチジン緩衝剤あたり１重量部以下のヒスチジンが存在する）含有する。あるいは、又は加えて、当該組成物は、適切には、任意の１つ以上の本明細書中で液体医薬組成物に関連して規定する追加の成分（例えば等張化剤を含み、アルギニンを除く等）を、任意の量、濃度又は形態で含有し、任意で本明細書中で液体組成物に関連して示される１つ以上のパラメーター（例えばｐＨ、浸透圧）を呈する。

【0091】

有利な場合、本発明は、代替の及び改善された液体医薬組成物を提供し、それは一般に従来のものよりも良好な安定性及び保存性を呈する。本明細書中で例示するように（実施例参照）、本発明の液体医薬組成物は、様々なストレス条件（熱、機械及び光ストレス）に晒されたとき、市販の製剤Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）等のアダリムマブの既存の製剤と比較して、同等又はより改善された特性を有する。それらの性能は、一般に、同一のストレス試験に晒された他の同等の多くの製剤と同等、又はより良好でもある。これらのストレス条件は、製造、輸送及び保存の過程でそのような製剤が晒されるストレスの種類を高度に代表するもので、それらは、本発明の長所の優れた指標である。そのような良好な安定性性能は、多くの助剤や複雑な製剤プロセスを用いずに達成され得るもので、これは、従来の一般的技術に基づいて驚異的なものと見做された。

【0092】

アダリムマブ
アダリムマブはＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤として市販されており、アダリムマブ及びその製造方法は、ＷＯ９７／２９１３１（ＢＡＳＦ）や本分野の他の文献に記載されている。ＷＯ９７／２９１３１において、アダリムマブに相当するＤ２Ｅ７は、「配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメイン」を有すると記載されている。更に、Ｄ２Ｅ７抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＣＬＶＲ）及び配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を有すると記載されている。

【0093】

アダリムマブの医学的適応及び機能は、本明細書中の上記で挙げている。

【0094】

本発明の背景において、「アダリムマブ」は、本明細書中で規定するバイオシミラーを含み、当業者は、本発明の背景における「アダリムマブ」の範囲を容易に理解し得る。

【0095】

一つの態様において、液体医薬組成物は、約５〜１５０ｍｇ／ｍｌ、適切には約２５〜７５ｍｇ／ｍｌの濃度のアダリムマブを含有する。例えば製剤中のアダリムマブの濃度は、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０又は約７５ ｍｇ／ｍｌであってもよい。一つの態様において、アダリムマブ濃度は、約４５〜５５ｍｇ／ｍｌであってもよい。一つの態様において、アダリムマブ濃度は、約５０ｍｇ／ｍｌである。

【0096】

緩衝、緩衝剤及びｐＨ
適切には、液体医薬組成物は緩衝された溶液であり、そのｐＨは緩衝剤（又は緩衝系）によって安定化されており、適切には、緩衝剤の共役酸／塩基と組み合わせられる。また、適切には、液体医薬組成物は、本明細書中に規定する緩衝剤を含有する。好ましくは、液体医薬組成物は、追加で共役酸／塩基を含有し、ここで共役酸／塩基は、緩衝剤がそれ自体塩基又は酸であるかに依存して、緩衝剤の共役酸又は共役塩基に対応する。まとめると、緩衝剤及びその共役酸／塩基は、「緩衝系」と見做され得る。従って、液体医薬組成物は、適切には、「緩衝系」（適切には緩衝剤及びその共役酸／塩基を含有する）を含有し、当該緩衝系に関連して規定される任意の濃度は、緩衝剤及びその任意の共役酸／塩基の組み合わせ濃度に一般に関連する。「緩衝系」は、適切には、弱酸及び弱塩基（上記定義参照）を含有する。

【0097】

適切には、緩衝剤は、ヒスチジン緩衝剤である。適切には、ヒスチジン緩衝剤はヒスチジン（又はその塩）、最も適切には遊離ヒスチジン（例えば双性イオンヒスチジン）である。

【0098】

適切には、液体医薬組成物は、緩衝剤の共役酸／塩基を含有する。これは、多くの他の通常のカルボン酸／カルボン酸緩衝系よりもヒスチジン緩衝剤にとって簡単ではない。ヒスチジンのイミダゾール部分は、ヒスチジンが通常水溶液中でプロトン化（イミダゾリウム）と脱プロトン化（遊離イミダゾール）の平衡混合物として存在してｐＨ６〜７を形成することを意味するからである。ヒスチジンのプロトン化（イミダゾリウム）形態は、医薬として許容されるアニオン（水酸化又は塩化等のアニオンを含む）と関連し得るが、イミダゾリウム型は、希釈剤（例えば水）中で溶媒和カチオンとして追加的に又は代替的に存在し得る。ヒスチジンのプロトン化（イミダゾリウム）形態は、ヒスチジンの共役酸を表すため、ヒスチジンの共役酸／塩基と見做され得る。このヒスチジンの共役酸は、適切には、プロトン化したアミノ及びイミダゾール基のいずれも有するが、脱プロトン化したカルボン酸基も有し、これで全体では＋１の電荷を有する。緩衝剤及びその共役酸／塩基の組み合わせは、緩衝系を構成する。適切には、液体医薬組成物は、緩衝剤及びその対応する共役酸／塩基を含有し、適切には、当該緩衝剤及びその共役酸／塩基は、組成物が所望のｐＨとなるのに十分なレベル（即ち絶対値又は濃度）及び相対量（又は濃度）で存在する。緩衝系は、適切には所望のｐＨの組成物を得るのに適した量で、緩衝剤（例えばヒスチジン）とその共役酸／塩基（例えばヒスチジンのイミダゾリウム塩形態、例えばヒスチジン一塩酸）とを単純に混合することによって形成されてもよい。あるいは、緩衝系は、酸又は塩基を緩衝剤又はその共役酸／塩基と混合してｉｎ ｓｉｔｕで所望の緩衝剤と共役酸／塩基の混合物を形成することによって形成されてもよい。例えば、緩衝系は、適切には所望のｐＨを達成するのに適した量の緩衝剤（例えばヒスチジン、水に溶解すると即座に自己平衡化してヒスチジンとその共役酸を生じる）及び当該緩衝剤（例えばヒスチジン）と対応する共役酸／塩基（即ちヒスチジンのイミダゾリウム塩）に、塩基（例えば水酸化ナトリウム）を添加することによって形成され得る。あるいは、緩衝系を形成するいずれかの方法が採用され得て、そしてｐＨは、更なる酸（適切には強酸、例えばＨＣｌ）又は更なる塩基（適切には強塩基、例えば水酸化ナトリウム）のいずれかが所望のｐＨに達するまで添加することによって賢明に調整され得る。

【0099】

上記のように、「ｐＨ調整剤」は、所望のｐＨにするためにヒスチジン（又はイミダゾリウムヒスチジン塩、例えば塩酸ヒスチジン）と組み合わせて使用され得る。ｐＨ調整剤は強酸又は強塩基であり得るが、好ましくは強塩基、例えば水酸化ナトリウムである。

【0100】

最も適切には、緩衝系はヒスチジン緩衝系であり、適切にはヒスチジンとそのイミダゾリウム型が平衡状態で存在する。

【0101】

適切には、液体医薬組成物は、最大で１つの緩衝剤を含有する。適切には、液体医薬組成物は、最大で１つの緩衝系を含有する。

【0102】

適切には、液体医薬組成物のｐＨは５．０以上である。適切には、液体医薬組成物のｐＨは６．３以上である。適切には、液体医薬組成物のｐＨは６．７以下である。

【0103】

特定の態様において、特に緩衝剤がヒスチジン緩衝剤である場合、液体医薬組成物のｐＨは６．０〜６．６である。特定の態様において、液体医薬組成物のｐＨは６．３〜６．５である。特定の態様において、液体医薬組成物のｐＨは約６．４である。

【0104】

適切には、液体医薬組成物は、約２〜５０ｍＭの濃度の緩衝系（適切にはヒスチジン緩衝剤を含有するヒスチジン緩衝系）を含む。一つの態様において、緩衝系の濃度は５〜１４ｍＭ、最も適切には約１０ｍＭである。一つの態様において、緩衝系／緩衝剤の濃度は１０ｍＭである。一つの態様において、液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度のヒスチジン（及び／又はその塩）を含有する。これは、適切には、「緩衝剤」（例えばヒスチジン）が緩衝剤（例えばヒスチジンのイミダゾリウム型）の共役酸に強塩基（例えば水酸化ナトリウム）を添加することによって形成される場合を含む。

【0105】

適切には、液体医薬組成物は、約０．３１ｍｇ／ｍＬ〜約７．８ｍｇ／ｍＬの濃度の緩衝種（適切にはヒスチジン緩衝種、例えばヒスチジン自体）を含有する。一つの態様において、緩衝種は、０．７７ｍｇ／ｍＬ〜２．２ ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは１．５５ ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。一つの態様において、緩衝系／緩衝剤は、１．５５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これは、「緩衝剤」（例えばヒスチジン）が、緩衝剤（例えばヒスチジンのイミダゾリウム型）の共役酸に強塩基（例えば水酸化ナトリウム）を添加することによって形成される場合を含む。

【0106】

適切には、液体医薬組成物は、緩衝系とアダリムマブとのモル比が約５：１〜１４５：１となる量の緩衝系（適切にはヒスチジン緩衝系）を含有する。一つの態様において、緩衝系とアダリムマブとのモル比は約１４：１〜４０：１、最も好ましくは約２９：１である。一つの態様において、緩衝系／緩衝剤は、２９：１の濃度で存在する。これは、「緩衝剤」（例えばヒスチジン）が、緩衝剤（例えばヒスチジンのイミダゾリウム型、例えばヒスチジン一塩酸）の共役酸に強塩基（例えば水酸化ナトリウム）を添加することによって形成される場合を含む。

【0107】

実施例の項目で例示するように、ヒスチジン緩衝剤／緩衝系を含有する本発明の液体医薬組成物は、特に安定性及び薬物製品の保存性の重要な指標である断片化及びタンパク質アンフォールディングに関して、ストレス試験が実施されている。更に、ヒスチジン緩衝系によってｐＨ６．４が定常的に維持されている液体医薬組成物は、執拗に試験が実施されている。

【0108】

糖安定化剤
適切には、液体医薬組成物は、安定化剤、最も適切には糖安定化剤を含有する。適切には、そのような組成物は、特に凍結及び／又は凍結乾燥及び／又は保存の過程で（特にストレスに晒されたとき）、生物製剤の構造的完全性の維持を促進する。

【0109】

液体医薬組成物は、１つ以上の糖安定化剤を含有し得るが、好ましい態様において、単一の糖安定化剤のみ存在する。

【0110】

適切には、糖安定化剤は、糖ピオール（糖アルコールを含む）及び／又は二糖類である。

【0111】

糖安定化剤は、適切には、トレハロース、マンニトール、スクロース、ソルビトール、マルトース、ラクトース、キシリトール、アラビトール、エリスリトール、ラクチトール、マルチトール、イノシトールを含む群から選択される。

【0112】

特定の態様において、糖安定化剤は、トレハロース、マンニトール、スクロース、マルトース、ラクトース、キシリトール、アラビトール、エリスリトール、ラクチトール、マルチトール、イノシトールを含む群から選択される。

【0113】

特定の態様において、糖安定化剤は非還元糖、任意で本明細書中に列挙している非還元糖である。

【0114】

特定の態様において、糖安定化剤は、トレハロース及びマンニトールを含む群から選択される。

【0115】

特定の態様において、糖安定化剤はトレハロースである。トレハロースは、液体アダリムマブ製剤においてヒスチジン緩衝剤／緩衝系と共に使用されるのに特に有利な安定化剤である。

【0116】

適切には、液体医薬組成物は最大で１つの糖安定化剤、適切には最大で１つの糖ピオール及び／又は二糖類を含有する。

【0117】

適切には、液体医薬組成物を形成するのに使用するトレハロースは、トレハロース二水和物であるが、適切には、トレハロースに関連して規定される量は、（他に言及の無い限り−実施例では言及が有る）純粋な無水トレハロースに関連する。そのような量は、適切な乗数を適用することによって、トレハロース二水和物の量に変換され得る。更に、ある製剤が本明細書中に記載のトレハロース量の規定のいずれかの範囲内に納まるかどうかを評価するために、トレハロース二水和物の量は、乗数を逆に適用することによって、純粋なトレハロース二水和物の対応する量（モル数に等しい）に容易に変換され得る。この原則は、いかなる糖安定化剤成分にも適用され得る。モル濃度として示される場合、濃度は、当然に、糖安定化剤の水和状態に関わらず同一である。

【0118】

適切には、液体医薬組成物は、約５０〜４００ｍＭ、より適切には約１００〜３００ｍＭ、より適切には約１５０〜２５０ｍＭの濃度の糖安定化剤（最も適切にはトレハロース）を含有する。一つの態様において、糖安定化剤の濃度は１９０〜２１０ｍＭ、最も適切には約２００ｍＭである。一つの態様において、トレハロースの濃度は２００ｍＭである。

【0119】

適切には、液体医薬組成物は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約１４０ｍｇ／ｍＬ、より適切には約３５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、より適切には約４５ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬの濃度の糖安定化剤（最も適切にはトレハロース）を含有する。一つの態様において、糖安定化剤の濃度は、６５ ｍｇ／ｍＬ〜７２ ｍｇ／ｍＬ、最も適切には約６８ ｍｇ／ｍＬである。特定の態様において、トレハロースの濃度は約６８ｍｇ／ｍＬ（トレハロース二水和物約７５．７ｍｇ／ｍＬに相当する）である。

【0120】

適切には、液体医薬組成物は、糖安定化剤（最も適切にはトレハロース）を含有し、糖安定化剤とアダリムマブのモル比は、約１４５：１〜約１１５０：１、より適切には約２９０：１〜約８６０：１、より適切には４３０：１〜約７２０：１である。一つの態様において、糖安定化剤とアダリムマブのモル比は、約５５０：１〜約６０５：１、最も適切には約５７６：１である。一つの態様において、糖安定化剤とアダリムマブのモル比は約５７６：１である。

【0121】

実施例の項目で例示するように、本明細書中に規定のように糖安定化剤を含有する本発明の液体医薬組成物は、安定性及び薬物製品の保存性の重要な指標であり得る凝集性、断片化及びタンパク質アンフォールディングに関して、ストレス試験が実施されている。更に、糖安定化剤としてトレハロースを含有する液体医薬組成物は、執拗に試験が実施されている。

【0122】

希釈剤
本発明の液体医薬組成物は、１つ以上の医薬として許容される希釈剤又はその混合物を含有し得る。しかしながら、最も適切には、液体医薬組成物は、水性医薬組成物である。最も適切には、希釈剤が水であり、適切には水のみである。水は、適切には注射用水（ＷＦＩ）である。

【0123】

適切には、希釈剤は、例えば重量パーセンテージが合計で１００％となるように、液体医薬組成物中の成分のバランスをとり得る。適切には、液体医薬組成物の成分に関連して示される濃度は、他の成分と混合された希釈剤中の（適切には溶解した）当該成分の濃度を表す。

【0124】

本発明の液体医薬組成物は、適切には液体であり、適切には粒子又は沈殿物を（実質的に又は全く）有しない。

【0125】

低レベルの又は含有しない成分
アルギニン
適切には、液体医薬組成物は、アルギニン（適切にはＬ−アルギニン）を（実質的に又は全く）含有しないか、又は０．１ｍＭ以下、より適切には０．０１ｍＭ以下、最も適切には０．００１ｍＭ以下の濃度のアルギニンを含有する。

【0126】

適切には、液体医薬組成物は、アルギニンを（実質的に又は全く）含有しないか、又はアルギニンと緩衝剤（又は緩衝系）とのモル比が１：１５０以下（即ち緩衝剤又は緩衝系１５０モルに対してアルギニンが１モル以下）、より適切には１：１５００以下、最も適切には１：１５０００以下のアルギニンを含有する。

【0127】

適切には、液体医薬組成物は、アルギニンを（実質的に又は全く）含有しないか、又はアルギニンとアダリムマブとの重量比が１：３０００以下（即ちアダリムマブ３０００重量部に対してアルギニンが１重量部以下）、より適切には１：３００００以下、最も適切には１：３０００００以下のアルギニンを含有する。

【0128】

適切には、液体医薬組成物は、アルギニンを（実質的に又は全く）含有しないか、又はアルギニンとアダリムマブとのモル比が１：３．７５以下（即ちアダリムマブ３．７５モルに対してアルギニンが１モル以下）、より適切には１：３７．５以下、最も適切には１：３７５以下のアルギニンを含有する。

【0129】

本明細書中、液体医薬組成物の背景における「アルギニン」に関する言及は、対応する「遊離アミノ酸」に関連し、ペプチドやタンパク質等のより大きい化合物の部分として共有結合的に組み込まれたアミノ酸残基に関連しない。

【0130】

実施例の項目で例示するように、アルギニンを（実質的に又は全く）含有しない本発明の液体医薬組成物は、特に凝集性、断片化及びタンパク質アンフォールディングに関して、ストレス試験が実施されている。

【0131】

アミノ酸
適切には、液体医薬組成物は、ヒスチジン（適切には緩衝剤である）以外の遊離アミノ酸を（実質的に又は全く）含有しないか、又は０．１ｍＭ以下、より適切には０．０１ｍＭ以下、最も適切には０．００１ｍＭ以下の合計濃度の１つ以上のヒスチジン以外のアミノ酸を含有する。

【0132】

適切には、液体医薬組成物は、ヒスチジン以外の遊離アミノ酸を（実質的に又は全く）含有しないか、又はアミノ酸と緩衝剤（又は緩衝系）との合計のモル比が１：１５０以下（即ち緩衝剤又は緩衝系１５０モルに対してヒスチジン以外のアミノ酸が１モル以下）、より適切には１：１５００以下、最も適切には１：１５０００以下の１つ以上のヒスチジン以外のアミノ酸を含有する。

【0133】

適切には、液体医薬組成物は、ヒスチジン以外の遊離アミノ酸を（実質的に又は全く）含有しないか、又はアミノ酸とアダリムマブとの合計の重量比が１：３０００以下（即ちアダリムマブ３０００重量部に対してヒスチジン以外のアミノ酸が１重量部以下）、より適切には１：３００００以下、最も適切には１：３０００００以下の１つ以上のヒスチジン以外のアミノ酸を含有する。

【0134】

適切には、液体医薬組成物は、ヒスチジン以外の遊離アミノ酸を（実質的に又は全く）含有しないか、又はアミノ酸とアダリムマブとの合計のモル比が１：３．７５以下（即ちアダリムマブ３．７５モルに対してヒスチジン以外のアミノ酸が１モル以下）、より適切には１：３７．５以下、最も適切には１：３７５以下の１つ以上のヒスチジン以外のアミノ酸を含有する。

【0135】

本明細書中で説明するように、液体医薬組成物の背景における「アミノ酸」に関する言及は、対応する「遊離アミノ酸」に関連し、ペプチドやタンパク質等のより大きい化合物の部分として共有結合的に組み込まれたアミノ酸残基に関連しない。

【0136】

適切には、この項目で言及される（そして含有しないか微量存在すると見做される）アミノ酸は、天然及び／又は人工アミノ酸であり得るが、それらは好ましくは天然アミノ酸である。特に、液体医薬組成物は、アルギニン、リジン及びアスパラギン酸を含む群から選択されるアミノ酸を（実質的に又は全く）含まず、又は１つ以上の上記アミノ酸を、「ヒスチジン以外のアミノ酸」に関連して上記で規定する量、濃度、モル比又は重量比で含有する。

【0137】

実施例の項目で例示するように、ヒスチジン以外のアミノ酸又は上記の幾つかのアミノ酸を（実質的に又は全く）含有しない本発明の液体医薬組成物は、特に凝集性、断片化及びタンパク質アンフォールディングに関して、ストレス試験が実施されている。

【0138】

界面活性剤
適切には、液体医薬組成物は、任意でポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）を除く界面活性剤（カチオン性、アニオン性、両性、又は非イオン性）を（実質的に又は全く）含有しないか、又は０．１ｍＭ以下、より適切には０．０１ｍＭ以下、より適切には０．００１ｍＭ以下、最も適切には０．０００１ｍＭ以下の合計濃度の１つ以上の界面活性剤（任意でポリソルベート８０を除く）を含有する。液体医薬組成物は、そのような状況下、任意で本明細書中で規定するポリソルベート８０を含有する。しかしながら、好ましい態様において、液体医薬組成物は、ポリソルベート８０を（実質的に又は全く）含有しないか、又は適切には他のいずれかの界面活性剤と合わせて、上記の限定した量／濃度でのみ含有する。

【0139】

適切には、液体医薬組成物は、任意でポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）を除く界面活性剤（カチオン性、アニオン性、両性、又は非イオン性）を（実質的に又は全く）含有しないか、又は界面活性剤と緩衝剤（又は緩衝系）の合計モル比が最大で１：１０、より適切には最大で１：１００、最も適切には最大で１：１０００、より適切には最大で１：１００００、適切には最大で１：１０００００の１つ以上の界面活性剤（任意でポリソルベート８０を除く）を含有する。液体医薬組成物は、そのような状況下、任意で本明細書中で規定するポリソルベート８０を含有する。しかしながら、好ましい態様において、液体医薬組成物は、ポリソルベート８０を（実質的に又は全く）含有しないか、又は適切には他のいずれかの界面活性剤と合わせて、上記の限定した量／濃度でのみ含有する。

【0140】

適切には、液体医薬組成物は、任意でポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）を除く界面活性剤（カチオン性、アニオン性、両性、又は非イオン性）を（実質的に又は全く）含有しないか、又は界面活性剤とアダリムマブの重量比が最大で１：５０（即ちアダリムマブ５０重量部に対して界面活性剤１重量部以下）、より適切には最大で１：５００、より適切には最大で１：５０００、より適切には最大で１：５００００、適切には最大で１：５０００００の１つ以上の界面活性剤（任意でポリソルベート８０を除く）を含有する。液体医薬組成物は、そのような状況下、任意で本明細書中で規定するポリソルベート８０を含有する。しかしながら、好ましい態様において、液体医薬組成物は、ポリソルベート８０を（実質的に又は全く）含有しないか、又は適切には他のいずれかの界面活性剤と合わせて、上記の限定した量／濃度でのみ含有する。

【0141】

適切には、液体医薬組成物は、任意でポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）を除く界面活性剤（カチオン性、アニオン性、両性、又は非イオン性）を（実質的に又は全く）含有しないか、又は界面活性剤とアダリムマブのモル比が最大で３：１、より適切には最大で０．３：１、より適切には最大で０．０３：１、より適切には０．０００３：１、適切には０．００００３：１の１つ以上の界面活性剤（任意でポリソルベート８０を除く）を含有する。液体医薬組成物は、そのような状況下、任意で本明細書中で規定するポリソルベート８０を含有する。しかしながら、好ましい態様において、液体医薬組成物は、ポリソルベート８０を（実質的に又は全く）含有しないか、又は適切には他のいずれかの界面活性剤と合わせて、上記の限定した量／濃度でのみ含有する。

【0142】

適切には、この項目で言及する（そして含有しないか微量含有すると見做される）界面活性剤は、カチオン性、アニオン性、両性又は非イオン性界面活性剤であり得る。適切には、この項目で言及する（そして含有しないか微量含有すると見做される）界面活性剤は、カチオン性、アニオン性及び両性界面活性剤を含むが、任意で非イオン性界面活性剤（例えばポリソルベート又はスパン）を含まないか、又は少なくとも任意でポリソルベート８０を除外し得る。従って、液体医薬組成物は、カチオン性、アニオン性又は両性界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか、１つ以上の当該界面活性剤を、「界面活性剤」に関連してこの項目の段落でより一般的に規定している量、濃度、モル比又は重量比を最大値として含有する。

【0143】

液体医薬組成物は、任意でポリソルベート８０を除く比イオン性界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか、１つ以上の当該界面活性剤を、「界面活性剤」に関連してこの項目の段落でより一般的に規定している量、濃度、モル比又は重量比を最大値として含有する。

【0144】

液体医薬組成物は、任意でポリソルベート８０を除くポリソルベート界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか、１つ以上の当該界面活性剤を、「界面活性剤」に関連してこの項目の段落でより一般的に規定している量、濃度、モル比又は重量比を最大値として含有する。液体医薬組成物は、そのような状況下、任意で本明細書中で規定するポリソルベート８０を含有する。しかしながら、好ましい態様において、液体医薬組成物は、ポリソルベート８０を（実質的に又は全く）含有しないか、又は適切には他のいずれかの界面活性剤と合わせて、上記の限定した量／濃度でのみ含有する。

【0145】

液体医薬組成物は、ポリソルベート２０（別名Ｔｗｅｅｎ２０−ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか、１つ以上の当該界面活性剤を、「界面活性剤」に関連してこの項目の段落でより一般的に規定している量、濃度、モル比又は重量比を最大値として含有する。

【0146】

液体医薬組成物は、ポリソルベート８０界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか、１つ以上の当該界面活性剤を、「界面活性剤」に関連して上記で規定している量、濃度、モル比又は重量比で含有する。液体医薬組成物は、そのような状況下、任意で本明細書中で規定するポリソルベート８０を含有する。ポリソルベート８０界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか、１つ以上の当該界面活性剤を、「界面活性剤」に関連してこの項目の段落でより一般的に規定している量、濃度、モル比又は重量比を最大値として含有する。

【0147】

実施例の項目で例示するように、上記の界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しない本発明の液体医薬組成物は、特に凝集性、断片化及びタンパク質アンフォールディングに関して、ストレス試験が実施されている。

【0148】

リン酸塩
適切には、液体医薬組成物は、リン酸緩衝剤（例えばリン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム）を（実質的に又は全く）含有しないか、又は０．１ｍＭ以下、より適切には０．０１ｍＭ以下、最も適切には０．００１ｍＭ以下のリン酸緩衝系を含有する。

【0149】

適切には、液体医薬組成物は、リン酸緩衝剤（例えばリン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム）を（実質的に又は全く）含有しないか、又はリン酸緩衝系と任意の非リン酸緩衝系とのモル比が１：１５０以下（即ち非リン酸緩衝系１５０モルに対してリン酸緩衝系１モル以下）、より適切には１：１５００以下、最も適切には１：１５０００以下のリン酸緩衝系を含有する。

【0150】

適切には、液体医薬組成物は、リン酸緩衝剤を（実質的に又は全く）含有しないか、又はリン酸緩衝系とアダリムマブとのモル比が１：３．７５以下（即ちアダリムマブ３．７５モルに対してリン酸緩衝系１モル以下）、より適切には１：３７．５以下、最も適切には１：３７５以下のリン酸緩衝系を含有する。

【0151】

液体医薬組成物の背景における「リン酸緩衝剤」の言及は、リン酸塩、一水素リン酸塩、及び二水素リン酸塩を含む、任意の形態又はプロトン化状態の、任意のリン酸塩に関する。しかしながら、適切には、リン酸化又は糖化ペプチド又はタンパク質等のより大きい化合物の部分として共有結合的に組み込まれているリン酸部分又は残基は除外される。

【0152】

実施例の項目で例示するように、リン酸緩衝剤を（実質的に又は全く）含有しない本発明の液体医薬組成物は、特に凝集性、断片化及びタンパク質アンフォールディングに関して、ストレス試験が実施されている。

【0153】

任意の追加成分
等張化剤（Ｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）
本発明の液体医薬組成物は、適切には、本明細書中で規定する「浸透圧調整剤」（又は「等張化剤」）又は１つ以上の等張化剤を含有する。

【0154】

等張化剤の存在は、適切には、正味の浸透圧及び組成物の浸透圧に貢献する（又は浸透圧が増大する）。適切には、等張化剤は、組成物が体液と（実質的に）等張となるのに十分な量又は濃度で組成物中に存在する。適切には、等張化剤は、組成物が一定の浸透圧又は本明細書中に規定の浸透圧となるのに十分な量又は濃度で組成物中に存在する。

【0155】

任意の適切な等張化剤が使用されてもよい。しかしながら、適切には、等張化剤は、水溶性金属塩（例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム）、水溶性等張化糖／糖アルコール（例えばグルコース、スクロース、マンニトール）、及び／又は他の水溶性ポリオールを含む群から選択される。

【0156】

液体医薬組成物は、１つ以上の等張化剤を含有し得るが、好ましくは、単一のそのような「等張化剤」のみ存在する（他の機能をもたらすことが意図される本明細書中に規定の成分により組成物に与えられる等張化作用は考慮しない）。

【0157】

最も好ましくは、等張化剤は、金属塩（好ましくは非緩衝水溶性金属塩）であるかこれを含む。適切には、当該金属塩は、ハロゲン化金属、適切にはハロゲン化アルカリ若しくはアルカリ土類金属、適切にはハロゲン化アルカリ金属であるかこれを含む。

【0158】

好ましい態様において、等張化剤は塩化ナトリウムであるかこれを含む。特定の態様において、等張化剤は塩化ナトリウムである。塩化ナトリウムは、液体アダリムマブ製剤中でヒスチジン緩衝剤／緩衝系と共に使用されるのに特に有利な安定化剤である。

【0159】

適切には、液体医薬組成物は、約１０〜２００ｍＭ、より適切には約２０〜１００ｍＭ、より適切には約２５〜７５ｍＭの濃度の等張化剤（最も適切には塩化ナトリウム）を含有する。一つの態様において、等張化剤の濃度は４０〜６０ｍＭ、最も適切には約５０ｍＭである。一つの態様において、塩化ナトリウムの濃度は５０ｍＭである。

【0160】

適切には、液体医薬組成物は、約０．５〜１２ｍｇ／ｍＬ、より適切には約１．２〜５ｍｇ／ｍＬ、より適切には約１．５〜４．４ｍｇ／ｍＬの濃度の等張化剤（最も適切には塩化ナトリウム）を含有する。一つの態様において、等張化剤の濃度は２．７〜３．１ｍｇ／ｍＬ、最も適切には約２．９ｍｇ／ｍＬである。特定の態様において、塩化ナトリウムの濃度は約２．９ｍＭである。

【0161】

適切には、液体医薬組成物は、等張化剤とアダリムマブのモル比が約３０：１〜５８０：１、より適切には約６０：１〜２９０：１、より適切には約７０：１〜約２２０：１の等張化剤（最も適切には塩化ナトリウム）を含有する。一つの態様において、等張化剤とアダリムマブのモル比は、約１１５：１〜１７５：１、最も適切には約１４５：１である。一つの態様において、塩化ナトリウムとアダリムマブのモル比は約１４５：１である。

【0162】

実施例の項目で例示するように、本明細書中に規定の等張化剤を含有する本発明の液体医薬組成物は、安定性及び薬物製品の保存性の重要な指標であり得る凝集性、断片化及びタンパク質アンフォールディングに関して、ストレス試験が実施されている。更に、塩化ナトリウムを含有する液体医薬組成物は、執拗に試験が実施されている。

【0163】

界面活性剤
本発明の液体医薬組成物は、適切には本明細書中に記載の界面活性剤又は１つ以上の界面活性剤を含有し得る。

【0164】

任意の適切な界面活性剤が用いられ得る。しかしながら、適切には、当該界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、最も適切にはポリソルベート（ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル）又はスパン（ソルビタンアルキルエステル）界面活性剤である。

【0165】

本発明の液体医薬組成物中に１つ以上の界面活性剤が含有され得るが、最も適切には、界面活性剤は１つだけ存在し、最も適切には、１つの非イオン性界面活性剤（適切には本明細書中に規定のもの）が存在する。

【0166】

界面活性剤は、適切には、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２９）ソルビタンモノラウレート）、ポリソルベート４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、ポリソルベート６０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート）、ポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート、及び／又はソルビタンモノオレエートから選択される。

【0167】

特定の態様において、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及び／又はポリソルベート８０から選択される。特定の態様において、液体医薬組成物は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０から選択される単一の界面活性剤を含有する。

【0168】

特定の態様において、界面活性剤はポリソルベート８０又はポリソルベート２０である。特定の態様において、界面活性剤はポリソルベート８０である。

【0169】

適切には、液体医薬組成物は、約０．０００１〜５ｍＭ（即ち０．１μＭ〜５ｍＭ）、より適切には約０．００１〜２ｍＭ、より適切には、約０．０１〜１．０ｍＭの濃度の界面活性剤（最も好ましくはポリソルベート８０）を含有する。一つの態様において、界面活性剤の濃度は、０．７２〜０．８０ｍＭ、最も適切には約０．７６ｍＭである。一つの態様において、ポリソルベート８０の濃度は、０．７６ｍＭである。

【0170】

適切には、液体医薬組成物は、約０．００１〜５ｍｇ／ｍＬ、より適切には約０．０１〜２ｍｇ／ｍＬ、より適切には約０．０５〜１．５ｍｇ／ｍＬの濃度の界面活性剤（最も好ましくはポリソルベート８０）を含有する。一つの態様において、界面活性剤の濃度は、０．９〜１．１ｍｇ／ｍＬ、最も適切には約１．０ｍｇ／ｍＬである。一つの態様において、ポリソルベート８０の濃度は、約１．０ｍｇ／ｍＬである。

【0171】

適切には、液体医薬組成物は、界面活性剤とアダリムマブのモル比が約１：３５００〜１５：１、より好ましくは約１：３５０〜６：１、より適切には約１：３５〜３：１の界面活性剤（最も好ましくはポリソルベート８０）を含有する。一つの態様において、界面活性剤とアダリムマブのモル比は、約２．１：１〜２．３：１、最も適切には２．２：１である。一つの態様において、ポリソルベート８０とアダリムマブのモル比は、約２．２：１である。

【0172】

しかしながら、好ましい態様において、液体医薬組成物は、ポリソルベート８０を（実質的に又は全く）含有せず、より適切には、いかなる界面活性剤も（実質的に又は全く）含有しない。

【0173】

本発明に関する他のパラメーター
浸透圧
適切には、液体医薬組成物の浸透圧は２００〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、より適切には２２０〜３９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、より適切には２３０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、より適切には２４０〜３４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、より適切には２６０〜３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、最も適切には２８０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇである。適切には、組成物の様々な成分の相対量及び濃度は、所望の浸透圧を達成するように賢明に調整され得て、特定の成分の新規な組み合わせにより、他の重要なパラメーターを損なわずに、これが達成され得る。しかしながら、適切には、組成物の様々な成分の相対量及び濃度は、他のパラメーターを最適化するように選択され得て、明細書中に記載されている実施例やプロトコルを含む本発明は、当業者がその目的を達成し、本発明の利益の全てを実現することを可能とする。

【0174】

タンパク質アンフォールディング温度
適切には、本発明の液体医薬組成物中のアダリムマブのタンパク質アンフォールディング温度（適切には本明細書中に規定のＤＳＦプロトコルによって測定される）は、６５℃以上、より適切には７０℃以上である。本発明の組成物中に存在する成分の新規な組み合わせは、当業者が、熱安定性の観点から望ましいと見做され得る高いアンフォールディング温度を達成することを可能とする。

【0175】

熱ストレスに晒されたときのパラメーター
適切には、液体医薬組成物中に存在する凝集物（適切にはアダリムマブに由来するもので、適切には本明細書中に規定のＳＥ−ＨＰＬＣプロトコルによって決定される）の量（又は濃度）は、組成物に対する熱ストレスが２８日間４０℃である（即ち組成物の温度が４０℃に維持される）場合、４倍（即ち任意の開始時間での量の４倍）未満、適切には３倍未満、適切には２．５倍未満、適切には２．２倍未満に増大する。

【0176】

適切には、液体医薬組成物中に存在する断片（適切にはアダリムマブに由来するもので、適切には本明細書中に規定のバイオアナライザープロトコールによって測定される）の量（又は濃度）は、組成物に対する熱ストレスが２８日間４０℃である（即ち組成物の温度が４０℃に維持される）場合、４倍（即ち任意の開始時間での量の４倍）未満、適切には３倍未満、適切には２．５倍未満、適切には２．２倍未満に増大する。

【0177】

適切には、液体医薬組成物の濁度（適切には、本明細書中に記載のプロトコールに従って比濁法によって測定される）は、組成物に対する熱ストレスが２８日間４０℃である（即ち組成物の温度が４０℃に維持される）場合、２倍（即ち任意の開始時間での量の２倍）未満、適切には１．５倍未満、適切には１．２倍未満増大し、適切には、濁度は全く増大しない。

【0178】

適切には、液体医薬組成物のｐＨは、組成物に対する熱ストレスが２８日間４０℃である（即ち組成物の温度が４０℃に維持される）場合、０．５ｐＨ単位未満、適切には０．２ｐＨ単位未満、適切には０．１ｐＨ単位未満変化し（増大又は低下であるが一般にｐＨの低下）、最も適切にはｐＨは全く変化しない（少数第二位で四捨五入する）。

【0179】

機械的ストレスに晒されたときのパラメーター
適切には、液体医薬組成物中に存在する凝集物（適切にはアダリムマブに由来するもので、適切には本明細書中に規定のＳＥ−ＨＰＬＣプロトコルによって決定される）の量（又は濃度）は、組成物に対して４８時間機械的ストレスを与えた（本明細書中に概説するように撹拌する）場合、２倍（即ち任意の開始時間での量の２倍）未満、適切には１．５倍未満、適切には１．２倍未満、適切には１．１倍未満に増大する。

【0180】

適切には、液体医薬組成物中に存在する断片（適切にはアダリムマブに由来するもので、適切には本明細書中に規定のバイオアナライザープロトコルによって決定される）の量（又は濃度）は、組成物に対して４８時間機械的ストレスを与えた（本明細書中に概説するように撹拌する）場合、２倍（即ち任意の開始時間での量の２倍）未満、適切には１．５倍未満、適切には１．２倍未満、適切には１．１倍未満に増大する。

【0181】

適切には、液体医薬組成物中に存在する濁度（適切には、本明細書中に記載のプロトコールに従って比濁法によって測定される）は、組成物に対して４８時間機械的ストレスを与えた（本明細書中に概説するように撹拌する）場合、２倍（即ち任意の開始時間での量の２倍）未満、適切には１．５倍未満、適切には１．２倍未満、適切には１．１倍未満に増大し、適切には、濁度は全く増大しない。

【0182】

適切には、液体医薬組成物のｐＨは、組成物に対して４８時間機械的ストレスを与えた（本明細書中に概説するように撹拌する）場合、０．５ｐＨ単位未満、適切には０．２ｐＨ単位未満、適切には０．１ｐＨ単位未満変化し（増大又は低下であるが一般にｐＨの低下）、最も適切にはｐＨは全く変化しない（少数第二位で四捨五入する）。

【0183】

光ストレスに晒されたときのパラメーター
適切には、液体医薬組成物中に存在する凝集物（適切にはアダリムマブに由来するもので、適切には本明細書中に規定のＳＥ−ＨＰＬＣプロトコルによって決定される）の量（又は濃度）は、組成物に対して光ストレスを与えた（即ち、本明細書中に開示のプロトコルに従い、当該組成物を７時間７６５Ｗ／ｍ^２の光に暴露する）場合、５０倍（即ち任意の開始時間での量の５０倍）未満、適切には４５倍未満、適切には３５倍未満、適切には３０倍未満に増大する。

【0184】

適切には、液体医薬組成物中に存在する断片（適切にはアダリムマブに由来するもので、適切には本明細書中に規定のバイオアナライザープロトコルによって決定される）の量（又は濃度）は、組成物に対して光ストレスを与えた（即ち、本明細書中に開示のプロトコルに従い、当該組成物を７時間７６５Ｗ／ｍ^２の光に暴露する）場合、４倍（即ち任意の開始時間での量の４倍）未満、適切には３倍未満、適切には２．５倍未満、適切には２倍未満に増大する。

【0185】

適切には、液体医薬組成物中に存在する濁度（適切には、本明細書中に記載のプロトコールに従って比濁法によって測定される）は、組成物に対して光ストレスを与えた（即ち、本明細書中に開示のプロトコルに従い、当該組成物を７時間７６５Ｗ／ｍ^２の光に暴露する）場合、２倍（即ち任意の開始時間での量の２倍）未満、適切には１．５倍未満、適切には１．２倍未満、適切には１．１倍未満に増大し、適切には、濁度は全く増大しない。

【0186】

適切には、液体医薬組成物のｐＨは、組成物に対して光ストレスを与えた（即ち、本明細書中に開示のプロトコルに従い、当該組成物を７時間７６５Ｗ／ｍ^２の光に暴露する）場合、０．５ｐＨ単位未満、適切には０．２ｐＨ単位未満、適切には０．１ｐＨ単位未満変化し（増大又は低下であるが一般にｐＨの低下）、最も適切にはｐＨは全く変化しない（少数第二位で四捨五入する）。

【0187】

凍結融解サイクルに晒されたときのパラメーター
適切には、液体医薬組成物中に存在する凝集物（適切にはアダリムマブに由来するもので、適切には本明細書中に規定のＳＥ−ＨＰＬＣプロトコルによって決定される）の量（又は濃度）は、組成物を５回の凍結／融解サイクルに供した（即ち、当該組成物を本明細書中のプロトコールに従い５回凍結及び融解した、即ち温度を−８０℃〜２０℃に変化させた）場合、１．５倍（即ち任意の開始時間での量の１．５倍）未満、適切には１．２倍未満、適切には１．１倍未満増大し、適切には凝集物の量（濃度）は（実質的に）全く変化しない。

【0188】

適切には、液体医薬組成物中に存在する、２５ミクロン以下の粒径の可視下粒子又は沈殿物の量（又は濃度）は、組成物を５回の凍結／融解サイクルに供した（即ち、当該組成物を本明細書中のプロトコールに従い５回凍結及び融解した、即ち温度を−８０℃〜２０℃に変化させた）場合、４倍（即ち任意の開始時間での量の４倍）未満、適切には３倍未満、適切には２．５倍未満、適切には２．２倍未満増大する。適切には、液体医薬組成物中に存在する、１０ミクロン以下の粒径の可視下粒子又は沈殿物の量（又は濃度）は、組成物を５回の凍結／融解サイクルに供した（即ち、当該組成物を本明細書中のプロトコールに従い５回凍結及び融解した、即ち温度を−８０℃〜２０℃に変化させた）場合、４倍（即ち任意の開始時間での量の４倍）未満、適切には３倍未満、適切には２．５倍未満、適切には２．２倍未満増大する。

【0189】

適切には、液体医薬組成物中に存在する、２５ミクロン以下の粒径の可視下粒子又は沈殿物の量（又は濃度）は、組成物を５回の凍結／融解サイクルに供した場合、４倍（即ち任意の開始時間での量の４倍）未満、適切には３倍未満、適切には２．５倍未満、適切には２．２倍未満増大する。適切には、液体医薬組成物中に存在する、１０ミクロン以下の粒径の可視下粒子又は沈殿物の量（又は濃度）は、組成物を５回の凍結／融解サイクルに供した場合、４倍（即ち任意の開始時間での量の４倍）未満、適切には３倍未満、適切には２．５倍未満、適切には２．２倍未満増大する。

【0190】

抗体を安定化する方法
この項目における上記の点及び実施例を参照して、本発明は、液体アダリムマブ組成物を安定化する方法（化学的及び／又は物理的に任意で上記１つ以上のパラメーター／特性に関連して）を提供し当該方法は、アダリムマブを、本明細書中に規定の医薬組成物を形成するのに必要な関連する１つ以上のいずれかの成分と混合する工程を含む。様々な態様に応じて、適切には、様々な量の様々な混合されるべき成分の組み合わせが必要となり、当業者は、液体組成物に関する上記開示を参照することによって、そのような組み合わせや量を容易に推定することが出来る。そのような様々な成分の組み合わせは、様々な仕組みで液体アダリムマブを安定化し得る。例えば、アダリムマブを、本明細書中に規定の医薬組成物を形成するのに必要な上記成分と混合する工程は、以下のようにしてアダリムマブを安定化する：
ｉ）アダリムマブのタンパク質アンフォールディング温度の増大；
ｉｉ）凝集物の形成の阻害；
ｉｉｉ）断片の形成の阻害；
ｉｖ）可視下粒子（２５ミクロン以下又は１０ミクロン以下）の形成の阻害；
ｖ）濁り（ｔｕｒｂｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）の阻害；
ｖｉ）ｐＨ変化の阻害；
ｖｉｉ）光酸化の阻害；及び／又は
ｖｉｉｉ）凍結／融解サイクルによる不安定性の低下。

【0191】

従って、本発明は、以下の利益の１つ、幾つか又は全てを達成する方法を提供し：
ｉ）アダリムマブのタンパク質アンフォールディング温度の増大；
ｉｉ）凝集物の形成の阻害；
ｉｉｉ）断片の形成の阻害；
ｉｖ）可視下粒子（２５ミクロン以下又は１０ミクロン以下）の形成の阻害；
ｖ）濁りの阻害；
ｖｉ）ｐＨ変化の阻害；
ｖｉｉ）光酸化の阻害；及び／又は
ｖｉｉｉ）凍結／融解サイクルによる不安定性の低下；
当該方法は、本明細書中に規定するようにアダリムマブの液体医薬組成物を製造する工程を含む。

【0192】

適切には、本発明の液体医薬組成物は、６ヶ月以上、適切には１２ヶ月以上、適切には１８ヶ月以上、より適切には２４ヶ月以上の棚寿命を有する。適切には、本発明の液体医薬組成物の棚寿命は、温度２〜８℃で、６ヶ月以上、適切には１２ヶ月以上、適切には１８ヶ月以上、より適切には２４ヶ月以上である。

【0193】

当業者による重要な安定性特性の最適化
本発明の液体医薬組成物に用いるために開示された成分の新規組み合わせは、当業者が、従来技術の組成物と比較して同等又はより優れた特性を呈する組成物を生産する（そして賢明に微調整する）ことを可能とする。特に、本開示は、当業者に、製剤の安定性を最適化する、特に：凝集、断片化、タンパク質アンフォールディング、沈殿、ｐＨ変動及び酸化（特に光酸化）の１つ以上を最適化するのに必要な全てのツールを提供する。更に、当業者は、そのような最適化（成分組成を賢明に変化させることにより）をどのようにして達成するか、及び当該プロセスにおいて何らかの有害な副作用をどのようにして最小化するかについて、手引きが与えられる。本開示は、当業者が、本発明の範囲内でそれを実施して、従来技術の組成物と比較して同等又は改善した特性を呈する様々な特定の組成物を生産することを可能とし、これは、より少ない成分を用いて達成され得る。

【0194】

特定の態様
一つの態様において、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ；
−ヒスチジン緩衝剤（例えばヒスチジン）（又はヒスチジン緩衝系）；
−糖安定化剤（例えばトレハロース）；及び
−界面活性剤（例えばポリソルベート８０）；
を含有する。

【0195】

一つの態様において、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ；
−ヒスチジン緩衝剤（例えばヒスチジン）（又はヒスチジン緩衝系）；
−糖安定化剤（例えばトレハロース）；
−等張化剤（例えば塩化ナトリウム）；及び
−界面活性剤（例えばポリソルベート８０）；
を含有する。

【0196】

一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン緩衝剤（又は緩衝系）、及び糖安定化剤を、それぞれ１：１４〜４０：２８８〜８６５のモル比で含有する。一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン緩衝剤（又は緩衝系）、糖安定化剤、及び等張化剤を、それぞれ１：１４〜４０：２８８〜８６５：２８〜５７６のモル比で含有する。

【0197】

一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン緩衝剤（又は緩衝系）、及び糖安定化剤を、それぞれ１：１４〜４０：５４８〜６０５のモル比で含有する。一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン緩衝剤（又は緩衝系）、糖安定化剤、及び等張化剤を、それぞれ１：１４〜４０：５４８〜６０５：１１５〜１７３のモル比で含有する。

【0198】

一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）、及びトレハロースを、それぞれ１：５．７〜１４５：２８８〜８６５のモル比で含有する。一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）、トレハロース、及び塩化ナトリウムを、それぞれ１：５．７〜１４５：２８８〜８６５：２８〜５７６のモル比で含有する。

【0199】

一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）、及びトレハロースを、それぞれ１：１４〜４０：５４８〜６０５のモル比で含有する。一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）、トレハロース、及び塩化ナトリウムを、それぞれ１：１４〜４０：５４８〜６０５：１１５〜１７３のモル比で含有する。

【0200】

一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）、及びトレハロースを、それぞれ１：２８．８：５７６のモル比で含有する。一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）、トレハロース、及び塩化ナトリウムを、それぞれ１：２８．８：５７６：１４４のモル比で含有する。

【0201】

一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝種）、及びトレハロースを、それぞれ２５〜７５：０．３１〜７．８：１５〜１４０の重量比で含有する。一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝種）、トレハロース、及び塩化ナトリウムを、それぞれ２５〜７５：０．３１〜７．８：１５〜１４０：０．５〜１２の重量比で含有する。

【0202】

一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝種）、及びトレハロースを、それぞれ４５〜５５：０．７７〜２．２：６５〜７２の重量比で含有する。一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝種）、トレハロース、及び塩化ナトリウムを、それぞれ４５〜５５：０．７７〜２．２：６５〜７２：２．７〜３．１の重量比で含有する。

【0203】

一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝種）、及びトレハロースを、それぞれ５０：１．５５：６８の重量比で含有する。一つの態様において、液体医薬組成物は、アダリムマブ、ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝種）、トレハロース、及び塩化ナトリウムを、それぞれ５０：１．５５：６８：２．９の重量比で含有する。

【0204】

様々な成分のモル及び／又は重量比に関する上記態様のいずれかは、本明細書中に規定される、ヒスチジン以外のアミノ酸、アルギニン、界面活性剤（任意でポリソルベート８０を除く）、及び／又はリン酸緩衝剤／系等の、（実質的に又は完全に）含有しない又は低レベルの成分を参照することにより、追加的に規定される場合もある。

【0205】

上記態様のいずれかの緩衝剤（例えばヒスチジン）又は緩衝系（例えばヒスチジン／イミダゾリウム−ヒスチジン）は、組成物中に直接組み込まれ、又はｉｎ ｓｉｔｕで、例えば酸塩基反応により、適切には緩衝剤の共役酸（例えばヒスチジンのイミダゾリウム型、塩酸ヒスチジン等の形成済の塩又は遊離ヒスチジンの溶解時に発生するイミダゾリウム型）と塩基（例えば水酸化ナトリウム）とを反応させることにより、生産されてもよい。緩衝剤又は緩衝系を提供又は生産するのに用いる方法に拘らず、適切には、得られる組成物は最終的には適切なバランスの所望のｐＨを達成する緩衝剤及び任意の共役酸／塩基を含有する。当業者は、過剰な労力を要さずに、緩衝剤と共役酸／塩基との適切なバランス、及び／又は適切な量の緩衝剤を生産して所望のｐＨを達成するために共役酸に添加すべき塩基の量を、計算し、実験的に決定することが容易に出来る。

【0206】

一つの態様において、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ；
−ヒスチジン緩衝剤（例えばヒスチジン）（又はヒスチジン緩衝系）；
−糖安定化剤（例えばトレハロース）；
−等張化剤（例えば塩化ナトリウム）；
−任意で界面活性剤（例えばポリソルベート８０）；及び
−水（注射用）；
を含有し、当該組成物は：
・アルギニン（適切にはＬ−アルギニン）を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの濃度のアルギニンを含有する；
・ヒスチジン以外のアミノ酸を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの（合計）濃度のヒスチジン以外の１つ以上のアミノ酸を含有する；
・任意でポリソルベート８０を除く界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか；最大１ｍＭの（合計）濃度の１つ以上の当該界面活性剤（任意でポリソルベート８０を除く）を含有する；及び／又は
・リン酸緩衝剤（例えばリン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム）を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの濃度のリン酸緩衝系を含有する。

【0207】

一つの態様において、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ（適切には本明細書中に規定の濃度）；
−ヒスチジン緩衝剤（例えばヒスチジン）（又はヒスチジン緩衝系）５〜１４ｍＭ；
−糖安定化剤（例えばトレハロース）１００〜約３００ｍＭ；
−等張化剤（例えば塩化ナトリウム）１０〜約２００ｍＭ；及び
−水（注射用）；
を含有し、当該組成物は：
・ｐＨが６．３〜６．７（例えばｐＨ６．４）である；
・アルギニン（適切にはＬ−アルギニン）を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの濃度のアルギニンを含有する；
・ヒスチジン以外のアミノ酸を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの（合計）濃度のヒスチジン以外の１つ以上のアミノ酸を含有する；
・任意でポリソルベート８０を除く界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか；最大１ｍＭの（合計）濃度の１つ以上の当該界面活性剤（任意でポリソルベート８０を除く）を含有する；及び／又は
・リン酸緩衝剤（例えばリン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム）を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの濃度のリン酸緩衝系を含有する。

【0208】

一つの態様において、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ２５〜約７５ｍｇ／ｍＬ；
−ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）２〜約５０ｍＭ；
−トレハロース１００〜約３００ｍＭ；
−塩化ナトリウム１０〜約２００ｍＭ；及び
−水（注射用）；
を含有し、当該組成物は：
・ｐＨが６．３〜６．５である；
・アルギニン（適切にはＬ−アルギニン）を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの濃度のアルギニンを含有する；
・ヒスチジン以外のアミノ酸を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの（合計）濃度のヒスチジン以外の１つ以上のアミノ酸を含有する；
・界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか最大１ｍＭの（合計）濃度の１つ以上の当該界面活性剤を含有する；及び／又は
・リン酸緩衝剤（例えばリン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム）を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．１ｍＭの濃度のリン酸緩衝系を含有する。

【0209】

一つの態様において、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ４５〜約５５ｍｇ／ｍＬ；
−ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）５〜１４ｍＭ；
−トレハロース１９０〜２１０ｍＭ；
−塩化ナトリウム４０〜６０ｍＭ；及び
−水（注射用）；
を含有し、当該組成物は：
・ｐＨが６．３〜６．５である；
・アルギニン（適切にはＬ−アルギニン）を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．００１ｍＭの濃度のアルギニンを含有する；
・ヒスチジン以外のアミノ酸を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．００１ｍＭの（合計）濃度のヒスチジン以外の１つ以上のアミノ酸を含有する；
・界面活性剤を（実質的に又は全く）含有しないか最大０．０００１ｍＭの（合計）濃度の１つ以上の当該界面活性剤を含有する；及び／又は
・リン酸緩衝剤（例えばリン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム）を（実質的に又は全く）含有しないか；最大０．００１ｍＭの濃度のリン酸緩衝系を含有する。

【0210】

一つの態様において、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ５０ｍｇ／ｍＬ；
−ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）１０ｍＭ；
−トレハロース２００ｍＭ；
−塩化ナトリウム５０ｍＭ；
−１．０ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０；及び
−水（注射用）；
を含有し、当該組成物は：
・ｐＨが６．４である；
・アルギニンを含有しない；
・ヒスチジン以外のアミノ酸を含有しない；
・界面活性剤を含有しない；及び
・リン酸緩衝剤／緩衝系を含有しない。

【0211】

好ましくは、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ２５〜約７５ｍｇ／ｍＬ；
−ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）２〜約５０ｍＭ；
−トレハロース１００〜約３００ｍＭ；
−塩化ナトリウム１０〜約２００ｍＭ；及び
−水（注射用）；
から本質的に成り、当該組成物は：
・ｐＨが６．３〜６．５である。

【0212】

好ましくは、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ４０〜約６０ｍｇ／ｍＬ；
−ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）５〜約１５ｍＭ；
−トレハロース１７５〜約２２５ｍＭ；
−塩化ナトリウム２５〜約７５ｍＭ；及び
−水（注射用）；
から本質的に成り、当該組成物は：
・ｐＨが６．３〜６．５である。

【0213】

好ましくは、液体医薬組成物は：
−アダリムマブ５０ｍｇ／ｍＬ；
−ヒスチジン（又はヒスチジン緩衝系）１０ｍＭ；
−トレハロース２００ｍＭ；
−塩化ナトリウム５０ｍＭ；及び
−水（注射用）；
から本質的に成り、当該組成物は：
・ｐＨが６．４である。

【0214】

適切には、液体医薬組成物は、上記態様のいずれかに記載の通りであり得るが、但し、不含又は低レベルの成分、例えばアルギニン、アミノ酸、界面活性剤（任意でポリソルベート８０を除く）、及びリン酸緩衝剤／系は、濃度（即ちモル）に関連して規定されず、代りに当該成分と緩衝剤／緩衝系との対応するモル比；当該成分とアダリムマブとの対応する重量比；又は当該成分とアダリムマブとの対応するモル比、を参照することによって、規定されてもよい。本明細書中には関連するモル及び重量比がそれぞれ所定の濃度に関連して列挙されているため、当業者は、特定の成分に関連する明細書中の関連する項目から、各成分において、いずれのモル及び重量比がいずれの濃度に対応するかを、容易に推定できる。例えば、アルギニンの場合、任意の濃度「最大で０．１ｍＭ、より適切には最大で０．０１ｍＭ、最も適切には最大で０．００１ｍＭ」は、それぞれ、アルギニンと緩衝剤とのモル比「最大で１：１５０・・・より適切には最大で１：１５００、最も適切には最大で１：１５０００」に、アルギニンとアダリムマブとの重量比「最大で１：３０００・・・より適切には最大で１：３００００、最も適切には最大で１：３０００００」に、そしてアルギニンとアダリムマブとのモル比「最大で１：３．７５・・・より適切には最大で１：３７．５、最も適切には最大で１：３７５」に、対応する。アミノ酸、界面活性剤、及びリン酸緩衝剤／系にも同一の対応が適用される。

【0215】

液体医薬組成物を製造する方法
本発明は、適切には本明細書中で規定する液体医薬組成物を製造する方法を提供する。当該方法は、適切には、適当と認められる任意の特定の順番で、本明細書中に規定の液体医薬組成物を形成するのに必要な任意の関連する成分を、混合する工程を含む。当業者は、実施例、又は本分野で液体医薬組成物（特にシリンジにより注射するもの）を形成するのに周知の技術を参照し得る。適切には、様々な態様が、混合すべき成分を潜在的に様々な量かつ様々な組み合わせで必要とし得る。当業者は、液体医薬組成物に関する上記開示を参照して、そのような組み合わせ及び量を容易に推定し得る。

【0216】

適切には、前記方法は、関連する成分を、適切には希釈剤（例えば水）中で、適切には全ての成分が希釈物中に（実質的に又は完全に）溶解するように、混合することを含む。

【0217】

前記方法は、アダリムマブを除く幾つかの又は全ての成分の（任意で一部の又は全ての希釈剤と共に）前混合物（又は前溶液）を最初に調製することを含んでもよく、アダリムマブは、それ自体が（任意で一部の希釈剤と共に、又はこれに溶解させて）、当該前混合物（又は前溶液）と混合することにより、液体医薬組成物が、又は最終的な液体医薬組成物を得るために最終成分が加えられる組成物が、取得される。最も適切には、前混合物は、アダリムマブ以外の全ての成分及び任意で一部の希釈剤（アダリムマブを予め溶解するのに用いられ得る）を含有し、適切には、アダリムマブは、最適なアダリムマブの安定性をもたらす混合物に添加される。適切には、上記前混合物は、最終的な液体医薬製剤が所望のｐＨとなるように調整される。

【0218】

適切には、前記方法は、緩衝系、適切には本明細書中に規定の緩衝剤を含有する緩衝系を形成する工程を含む。当該緩衝系は、適切には、アダリムマブを添加する前に前混合物中で形成されるが、任意で、アダリムマブ存在下で形成されてもよい。緩衝系は、緩衝剤（供給される既製品）をその共役酸／塩基と（適切には、所望のｐＨを提供するのに適した相対量で−これは、当業者によって理論的に又は実験的に決定され得る）単純に混合することによって形成されてもよい。ヒスチジン緩衝系の場合、これは、ヒスチジンをヒスチジンのイミダゾリウム型（例えば塩酸ヒスチジン）と混合することを意味する。あるいは、緩衝系は、緩衝剤（例えばヒスチジン）に強酸（例えばＨＣｌ）を添加して、ｉｎ ｓｉｔｕで緩衝剤（適切には、所望のｐＨを提供するのに適した相対量で）との共役酸／塩基（例えばヒスチジンのイミダゾリウム型）を形成する。あるいは、緩衝系は、緩衝剤の共役酸／塩基に（又は緩衝剤自体に、この場合溶解時等の動的平衡状態で当該共役酸／塩基を形成する）強塩基（例えば水酸化ナトリウム）を添加することにより、ｉｎ ｓｉｔｕで緩衝剤（適切には、所望のｐＨを提供するのに適した相対量で）を形成し得る。最終的な液体医薬組成物の前混合物のｐＨは、必要な強塩基又は強酸の添加、又は緩衝剤若しくは共役酸／塩基の量により、賢明に調整され得る。

【0219】

幾つかの態様において、緩衝剤及び／又は緩衝系は、別個の混合物として予め形成され、緩衝系は、緩衝剤交換（例えば関連する濃度又は浸透圧に達するまで透析濾過を用いて）により、医薬組成物の前駆物（緩衝剤及び／又は緩衝系以外の一部又は全ての成分を含有し、適切にはアダリムマブを含有し、潜在的にはアダリムマブのみを含有する）に移される。必要に応じて、最終的な液体医薬組成物を生産するために、追加の助剤がその後添加されてもよい。ｐＨは、全ての成分が存在する時点又はその前に調整されてもよい。

【0220】

いずれかの、幾つかの又は全ての成分が、他の成分と混合される前に希釈剤に予め溶解又は混合されてもよい。

【0221】

最終的な液体医薬組成物は、適切には沈殿物を除去するために、濾過されてもよい。適切には、濾過は、１μｍ以下、適切には０．２２μｍ以下のサイズのフィルターを用いて行われる。適切には、濾過は、ＰＥＳフィルター又はＰＶＤＦフィルターを用いて、適切には０．２２μｍのＰＥＳフィルターを用いて行われる。

【0222】

本発明は、本明細書中に記載の製造方法によって取得可能な、取得された、又は直接取得される、液体医薬組成物を提供する。

【0223】

薬物送達デバイス
本発明は、本明細書中に規定の液体医薬組成物を含有する薬物送達デバイスを提供する。適切には、薬物送達デバイスは、内部に医薬組成物が納められた容器を備える。適切には、薬物送達デバイスは滅菌されている。

【0224】

薬物送達デバイスは、バイアル、アンプル、シリンジ、インジェクションペン（例えば本質的にシリンジを組み込む）、又は静脈内バッグであり得る。最も適切には、薬物送達デバイスは、シリンジ、適切にはインジェクションペンである。適切には、シリンジはガラス製である。適切には、シリンジは、針、適切には２９Ｇ1/2”の針を備える。

【0225】

本発明は、適切には本明細書中に規定の薬物送達デバイスを製造する方法を提供し、当該方法は、薬物送達デバイス内に本明細書中に規定の液体医薬組成物を組み込む工程を含む。そのような製造は、典型的には、本明細書中に規定の液体医薬組成物を、シリンジに、適切にはそれに取り付けられた針を通じて、充填する工程を含む。当該針は、その後に除去され、取り替えられ、又はそのまま残置されてもよい。

【0226】

本発明の第十一の側面において、本明細書中に規定の製造方法により取得可能な、取得された、又は直接取得された、薬物送達デバイスが提供される。

【0227】

パッケージ
本発明は、本明細書中に規定の液体医薬組成物を含有するパッケージを提供する。適切には、当該パッケージは、本明細書中に規定の薬物送達デバイス、適切には複数の薬物送達デバイスを備える。当該パッケージは、１つ以上の薬物送達デバイスを備えるための任意の適切な容器を備え得る。

【0228】

本発明は、パッケージを製造する方法を提供し、当該方法は、パッケージ内に本明細書中で規定の液体医薬組成物を組み込む工程を含む。適切には、これは、液体医薬組成物を１つ以上の薬物送達デバイス内に組み込み、その後、１つ以上の充填済み薬物送達デバイスを、パッケージ内に存在する容器中に組み込むことにより、達成される。

【0229】

本発明は、本明細書中に規定の製造方法により取得可能な、取得された、又は直接取得された、パッケージを提供する。

【0230】

部分のキット
本発明は、薬物送達デバイス（内部に充填される液体医薬組成物無し）、本明細書中に規定の液体医薬組成物（任意で個別の包装又は容器中に納められる）、及び任意で液体医薬組成物の投与（例えば皮下）に関する指示を含む一揃いの説明書を備える、部分のキットを提供する。使用者は、投与の前に、薬物送達デバイスに液体医薬組成物（バイアルやアンプルのようなものに入れて提供され得る）を充填する。

【0231】

本発明の第十二の側面において、疾患又は医学的障害を治療する方法；治療における使用のための液体医薬組成物；疾患又は障害の治療のための医薬の製造における液体医薬組成物の使用；腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）−関連自己免疫疾患を治療する方法；腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）−関連自己免疫疾患の治療における使用のための液体医薬組成物；腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）−関連自己免疫疾患の治療のための医薬の製造における液体医薬組成物の使用；関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、中度から重度の慢性乾癬及び／又は若年性特発性関節炎を治療する方法；関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、中度から重度の慢性乾癬及び／又は若年性特発性関節炎の治療における使用のための医薬組成物；及び関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、中度から重度の慢性乾癬及び／又は若年性特発性関節炎の治療のための医薬の製造における液体医薬組成物の使用；を提供する。

【0232】

液体医薬組成物の使用及び治療方法
本明細書中に規定の液体医薬組成物は、１つ以上の上記疾患又は医学的障害を治療するのに使用され得る。好ましい態様において、液体医薬組成物は、関節リウマチ、適切にはクローン病及び乾癬を治療するのに使用される。

【0233】

液体医薬組成物は、適切には非経口投与され、適切には皮下注射される。

【実施例】

【0234】

材料及び機材
実施例に記載の製剤の調製において、以下の材料が使用された：

【表2】

【0235】

実施例及びスクリーン実験において、以下の使い捨て機材及び材料が使用された：

【表3】

【0236】

実施例及びスクリーン実験において、以下のパッケージングが使用された：

【表4】

【0237】

実施例及びスクリーン実験において、以下の機材が使用された：

【表5】

【0238】

解析技術及びプロトコール
下記表に示す理由で、実施例及びスクリーン実験において、以下のプロトコールの方法が採用された：

【表6】

【0239】

上記各解析方法における個別のプロトコールは下記に記載されており、そのような解析方法に対する実施例及びスクリーニング実験における参照はこれらのプロトコールを使用した。

【0240】

１．純度−バイオアナライザー
Ａ２１００バイオアナライザーが使用された。プロトコールは、関連する説明書中に記載されている。しかしながら、当該プロトコールは、下記のように追加で調整された。

【0241】

溶液
ゲル−色素混合物（染色溶液）：
プロテイン２３０プラスゲルマトリックスチューブに、２５μｌの２３０プラス色素濃縮物を添加した。良く撹拌し、チューブを１５秒間スピンダウンした。内容物をスピンフィルターに写し、これを２０分以上２５００ｒｐｍで遠心分離した。当該溶液はすぐに使用できる。当該溶液は、４週間以内、５±３℃で保存された。

【0242】

脱染色溶液：
スピンフィルターにピペットで６５０μｌのゲルマトリックスを入れた。２５分間以上２５００ｒｐｍで遠心分離した。当該溶液は、４週間以内、５±３℃で保存された。
Ｄｅｓｔａｉｎｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ：

【0243】

試料緩衝剤：
２００μｌの試料緩衝剤を２５μｌのアリコートに分けて、各チップにおいてアリコートを解凍することを推奨する。当該試料緩衝剤ストック溶液及びアリコートを、供給者によって提供された有効期限より短い期間、−２０℃で保存した。

【0244】

マレイミドストック溶液：
１ｍＬのＭｉｌｌｉＱ水に、２３．４ｍｇのマレイミドを溶解した（０．２４Ｍ）。この溶液を良く撹拌した。続いてこの溶液をＭｉｌｌｉＱ水で１：４に希釈した（例えばストック溶液５０μＬ＋ＭｉｌｌｉＱ１５０μＬ）。希釈されたマレイミド溶液の最終濃度は、６０ｍＭである（この溶液の安定性について利用出来るデータはまだ無いため、各解析試験を開始する前に新しく調整されなければならない）。

【0245】

ＯＴｆ−溶液：
アダリムマブ試料の解析のため、ＤＴＴ１Ｍを用いて還元溶液を調製しなければならないので、ＭｉｌｌｉＱ水１ｍＬにＤＴＴ１５４．０ｍｇを溶解した。
ＯＴｆ−Ｓｏｌｕｔｉｏｎ：

【0246】

非還元溶液：
試料緩衝剤アリコート（２５μＬ）にＭｉｌｌｉＱ水１μｌを添加し、５秒間撹拌した。当該非還元溶液は、調製した日のうちに使用した。

【0247】

還元溶液：
試料緩衝剤アリコート（２５μＬ）に上記ＤＴｆ−溶液１μｌを添加し、５秒間撹拌した。当該還元溶液は、調製した日のうちに使用した。
試料調製：
・試料は、２．４〜３ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で解析される。
・必要な場合、試料は、ＭｉｌｌｉＱ水を用いて目標濃度に希釈され得る。

【0248】

試料は、Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ Ｇｕｉｄｅ中の説明及び上記の事項に従い、還元及び非還元試料緩衝剤を使用してＲｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ Ｇｕｉｄｅに従って調製される。当該ガイドとは異なるが、再現可能で正確な結果を達成するために、より大きい体積を使用することを強く推奨する。ラダー及び試料を調製する一例を以下に示す：

【表7】

【0249】

補足１：濃度が２．４〜３．０ｍｇ／ｍｌであるＩＰＣにおいて、試料の調製は上記表に従うが、試料加熱後のＭｉｌｌｉＱ水の体積は、最終タンパク質濃度が０．１ｍｇ／ｍＬに達するように計算される。

【0250】

濃度２．４〜３．０ｍｇ／ｍＬの試料の試料調製の例を下記に示す：

【表8】

【0251】

補足２：全てのウェルは充填されなければならない。試料数が利用可能なウェルを下回る場合、空のウェルは、追加の複製又はブランク試料の為に使用できる。
系及びチップの調製
−解析の前及び後に系を洗浄するために、ＭｉｌｌｉＱ水６００ＩＩＬで「電極クリーナー」を満たし、それをＡｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ内に置き、蓋を閉め、当該系を停止させる。更なる動作を要しない。
−チッププライミングステーションのベースプレートを位置「Ａ」に、シリンジクリップをその中間の位置に調整した。

【表9】

ラダー及び試料の充填：
−各試料６μｌを試料ウェルに移し、同様に６μｌのラダーを、ラダーシンボルで明確に表示してある専用のウェルに移した。

【0252】

チップをＡｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒに写し、５分以内に解析を開始する。

【表10】

【0253】

データ解析及び結果の評価：
結果を取得するために、以下の最小の動作を遂行しなければならない。
・チップを特定のスポットに置き蓋を閉める。
・装置の文脈中でＡｓｓａｙ − Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ− Ｐｒｏｔｅｉｎ− Ｐｒｏｔｅｉｎ ２３０ Ｐｌｕｓを選択する。
・ＳＴＡＲＴをクリックして解析を開始する。解析は３０分以内に終了する。
・「Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ」をクリックすると生データが表示され、その日に実施された全ての実験が列挙される。関心の有る実験をクリックしてそれを選択する。
・選択された実験から生じたゲルが自動で開く。
・データが電気泳動図又はゲル状の画像として示され得る。

【0254】

電気泳動図中のピークの統合に関する詳細な情報（純度データを得るため）は、ソフトウエアのマニュアルに含まれている。試料の純度は、自動の統合によってシステムにより自動で与えられるが、必要な場合、手動統合が利用され得る。

【0255】

結果：
非還元条件中、結果は％純度及び％ＬＭＷ（モノマーの前のピークの合計）として示される。

【0256】

還元条件において、結果は％純度として、重鎖及び軽鎖の合計として示される。

【0257】

指標的な分子量の値を、以下の表に示す：

【表11】

【0258】

２．アンフォールディング温度−ＤＳＦ
ＤＳＦ（差走査蛍光定量）は、以下のように実施された。
２． Ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ - ＤＳＦ

【0259】

２マイクロリットルのＳｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ （橙色タンパク質ゲル染料、ｃｏｄ． Ｓ６６５０， Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を注射用水で５００倍に予め希釈し、これを２０マイクロリットルの薬物製品溶液に添加した。Ｓｙｐｏ Ｏｒａｎｇｅの添加後、ＤＰ溶液（３つ調製する）を９６ウェルプレート（ＭｉｃｒｏＡｍｐ Ｆａｓｔ ９６−Ｗ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｐｌａｔｅ ０．１ ｍＬ， ｃｏｄ． ４３４６９０７）に充填した。プレートを透明な保護カバーで密封し（ＭｉｃｒｏＡｍｐ Ｏｐｔｉｃａｌ Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｆｉｌｍ， ｃｏｄ． ４３１１９７１）、遠心分離して空気の泡を除去した。プレートをシステムに挿入し、室温から９０〜１００℃の温度での発光プロフィールを走査した。蛍光発光強度の温度への依存は、典型的には変性温度での反転点／中止を示し、異なる組成物を比較するのに使用するパラメーターである。

【0260】

３．アイソフォームプロフィール−ｉＣＥ２８０
ｉＣＥ２８０（アイソフォームプロフィール）によるｃＩＥＦ：Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−４遠心分離デバイス（カットオフ１０ｋＤａ）中での遠心分離による精製及び塩類の除去後、試料を純水で５．０ｍｇ／ｍＬの濃度に予め希釈した。そして、メチルセルロース、Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ ５−８ （ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ ８−１０．５ （ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、低ｐＩマーカー７．０５ （Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）、高ｐＩマーカー９．５０ （Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）及び純水からなる溶液で、１．０ｍｇ／ｍＬとなるように２回目の希釈を行った。希釈後、試料を１００００ｒｐｍで３分間遠心分離した。追加の遠心分離工程（７０００ｒｐｍ２分間）が、ガラスインサート中に移された１５０マイクロリットルの各試料に対して行われる。ｃＩＥＦ（キャピラリー等電点電気泳動）は、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ社製ｉＣＥ２８０システムにより、１００ミクロンＩＤコーティング及び全長５０ｎｍのキャピラリーカートリッジＦＣ（Ｃａｔ． Ｎｏ． １０１７００／１０１７０１ ｂｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）を使用して実施された。様々なアイソフォームの分離は、カソード溶液として１００ｍＭ水酸化ナトリウム（０．１％メチルセルロース中）及びアノード溶液として８０ｍＭｏ−リン酸（０．１％メチルセルロース中）を用いて実施される。電気泳動図は、１５００Ｖ（収束前）及び３０００ｖ（収束）の電圧で、それぞれ１分間及び６分間の収束前及び収束時間に渡り、２８０ｎｍで取得される。

【0261】

４−タンパク質量−ＯＤ
ＯＤ（タンパク質量）測定は、約１０ｍｇ／ｍＬの関連する緩衝剤又は偽薬でまず重量測定法で希釈された試料について実行された（３つの独立した希釈物が作製された）。希釈された溶液は、０．１ｃｍパス長水晶キュベット中、室温で、２８０及び３２０ｎｍの吸光度を、ダブルビーム分光光度計（Ｌａｍｂｄａ３５ ｂｙ Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定された。アダリムマブのモル吸光係数として数値１．３５を用いた。

【0262】

５．凝集性の判定−ＳＥ−ＨＰＬＣ
試料を、ＤＰＢＳ １ｘで、０．５ｍＬの濃度まで希釈し、等張条件を維持して、Ｃｏｌｕｍｎ ＴＳＫ ｇｅｌ Ｓｕｐｅｒ ＳＷ３０００ ４．６ｍｍ ＩＤ Ｘ３０．０ｃｍ ｃｏｄ．１８６７５ ｂｙ Ｔｏｓｏｈ（泳動層：５０ｍＭリン酸ナトリウム＋０．４Ｍ過塩素酸ナトリウム、ｐＨ６．３±０．１）中に注入した（注入体積２０マイクロＬ）。ＵＶ検出は、０．３５ｍＬの流速で２１４ｎｍで行った。各解析ランの時間は１５分であった。解析の前に、この試験に用いるＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣシステムのオートサンプラー中で２〜８℃で試料を維持した。

【0263】

６．濁度−ネフェロメトリー
濁度は、室温で、濁度計２１００ＡＮ ＩＳ Ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｅｒ ｂｙ Ｈａｃｈを用いて実施される、ネフェロメトリー（典型的には１ミクロン未満の直径の粒子により起こる光分散効果に基づく効果）測定により評価された。最小量の３ｍｌの溶液を減体積ガラスキュベット中に入れ、一揃いの標準溶液（０．１〜７５００ＮＴＵ）で装置を校正した後、分散効果を試験した。

【0264】

７．浸透圧の決定−浸透圧
浸透圧は、溶液の凝固点効果特性に基づき測定された。当該試験は、試料５０マイクロリットルを凍結に供するＯｓｍｏｍａｔ ０３０−Ｄ ｂｙ Ｇｏｎｏｔｅｃｈを用いて実施された。凍結温度は溶液の浸透圧（即ち塩、糖、他のイオン性及び非イオン性種等の溶解している成分の存在）に依存する。

【0265】

８．ｐＨの決定−ｐＨ
ｐＨは、室温でＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ Ｓｅｖｅｎ Ｍｕｌｔｉ ｐＨメーターを用いて実施される電位差測定を使用して決定された。

【0266】

９．粒子計数−可視下粒子
試料を純水で５倍に希釈して最終体積２５ｍＬとした。粒子の数は、ＰＡＭＡＳ ＳＶＳＳ ｂｙ Ａｍｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓにより室温で決定され、４回の独立したランを回収し、所望の各フラクションにおいて結果を平均化した。

【0267】

実施例１−第一の製剤スクリーニングにおける製剤
第一の製剤のセット（本明細書中ではしばしばＤｏＥ１製剤と表記する）を、下記表１に示す。

【表12】

【0268】

表１の製剤は、製剤前の界面活性剤不含ＤＳ材料から出発して製造された。

【0269】

ＤＳのアリコートは、緩衝剤と三倍体積の交換が達成されるまで、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤で透析濾過された。そして、所望の助剤が緩衝剤交換されたＤＳ材料に添加され、ｐＨが、水酸化ナトリウムの希釈溶液の添加によって、目的の値に調整された。各製剤は、０．２２μｍＰＥＳフィルターで濾過された。

【0270】

表２に、２つの緩衝剤交換したＤＳ材料における材料の回収率及び浸透圧に関する結果を示す。

【表13】

【0271】

ヒスチジン緩衝系において回収率が良好であった（９０％以下）。浸透圧の値は、元のＤＳに由来する種の最小の残留物で達成した緩衝剤交換の満足度を示す。

【0272】

実施例２−第二の製剤スクリーニングの製剤
第二の製剤のセット（本明細書中ではしばしばＤｏＥ２製剤と表記する）を、下記表３に示す（その下の表４に由来する）。

【表14】

【表15】

【0273】

ＤｏＥ２製剤（表３）は、製剤前の界面活性剤不含ＤＳ材料から出発して製造された。

【0274】

ＤＳの３つのアリコートは、三倍体積の交換が達成されるまで透析濾過された。そして、所望の助剤が緩衝剤交換されたＤＳ材料に添加され、ｐＨが、水酸化ナトリウムの希釈溶液の添加によって、目的の値に調整された。各製剤は、０．２２μｍＰＥＳフィルターで濾過された。

【0275】

表５において、緩衝剤交換したＤＳ材料における材料の浸透圧及び濁度に関する結果を示す。

【0276】

これらの浸透圧の値は（４０ｍＯｓｍ／ｋｇ）、元のＤＳに由来する種の最小の残留物で達成した緩衝剤交換の満足度を示す。

【表16】

【0277】

実施例３−両第一及び第二のスクリーニングの製剤の比較
比較及びコントロールの為、３つの参照製剤が調製又は取得され、それらはＲｅｆ−１ （Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）、出願人により製造された）；Ｒｅｆ−２ （ＲＭＰ ＵＳ - Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）、米国製市販薬物製品）；及びＲｅｆ−３ （ＲＭＰ ＥＵ - Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）、欧州製市販薬物製品）を含む。これらの全ての参照製剤は、表６に示す組成を有していた。

【表17】

【0278】

スクリーニング
第一の製剤のスクリーニング（ＤｏＥ１）は、タンパク質安定性に関与する様々な要因（例えばｐＨ、ＮａＣｌの存在、助剤の種類）の同定をもたらし、最終的に、製剤を微調整し、界面活性剤、例えばポリソルベート８０が、タンパク質の安定性にどうやって影響するかを評価する、第二のスクリーニング（ＤｏＥ２）において追求すべき製剤の選択をもたらした。

【0279】

各２つのスクリーニングは、上記に規定のように、また後述のように、長期間に渡る（例えば１ヶ月）、様々なレベルの熱、機械的、及び光ストレスに晒された様々な異なる製剤に対する、様々な解析試験を含む。これらの製剤のスクリーニングは、夥しい量のデータの収集を可能とし、それは、新しい有利な製剤の開発を可能とする驚異的かつ有益な洞察を提供した。

【0280】

２つの製剤のスクリーニングの結果を下記に示す。

【0281】

スクリーニング実験１−実施例３の比較製剤に対する実施例１の製剤の解析及びスクリーニング
予備的なＤｏＥスクリーニング（工程１）は、イオン強度（ＮａＣｌにより与えられる）、ｐＨ及び異なる安定化剤がタンパク質に対してもたらす効果を、短期間の安定性試験の過程で評価した。

【0282】

反応表面Ｄ−最適統計デザインが適用された。３つの要素が考慮された：
−イオン強度（ＮａＣｌ濃度により駆動され、２５ｍＭ〜１００ｍＭの範囲内で変化し、数因子として設定された）、
−ヒスチジンにより緩衝されるｐＨ（４．６〜６．４）が調査された；
−安定化剤／助剤（幾つかのレベルを含む分類要素：塩酸リジン、アルギニン＋アスパラギン酸、マンニトール、トレハロース二水和物）。

【0283】

これらの製剤は、上記実施例１に記載のように、ポリソルベート８０無し、故に界面活性剤不含のＤＳから出発して製造された。

【0284】

下記表７は、このスクリーニング内で試験された製剤を要約したものである。提示された８つの製剤に加えて、２つの対象も、比較物として解析されている：
・Ｈｕｍｉｒａ市販薬物製品ＤＰ（上記実施例３の通りに製剤化された）
・Ｈｕｍｉｒａ市販ＤＰとして製剤化されたＭＳ薬物基質ＤＳ（上記実施例３の通りに製剤化された）

【表18】

【0285】

製剤は、表８に示す計画に従って試験された。熱ストレスは、最長で１ヶ月４０℃が考慮された。ＤＳＦ技術（タンパク質アンフォールディング温度の決定に基づく急速スクリーニングに向けられる）を用いて高効率の評価がＴ０で実施された。

【表19】

【0286】

１．１浸透圧スクリーニング
緩衝剤交換ＤＳ材料（ｐａｒ． ５．１．１）から出発して作製されたＤｏＥ１製剤の浸透圧を図９に示す。

【0287】

殆どの製剤の浸透圧は２５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲に見られたが、塩化ナトリウム濃度が最も高い場合に僅かに高い値が観察された。

【表20】

【0288】

１．２タンパク質量（ＯＤ）
ＤｏＥ１製剤のタンパク質量は時間０及び４０℃１ヶ月後に測定された。

【0289】

図１は、実施例１のＤｏＥ１製剤のタンパク質濃度（ｍｇ／ｍＬ）を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）及び４０℃加熱後４週（網掛け無し）に行われた。

【0290】

図１に表す結果は、経時的に起こる顕著な変化は無いことを示した。全ての濃度は、５０ｍｇ／ｍＬの目標の範囲内に見出された。

【0291】

１．３ 凝集（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
図２は、実施例１のＤｏＥ１製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。４０℃での安定性に関するＳＥ−ＨＰＬＣにより観察された全凝集物は、図２中にグラフで表されている。凝集性の僅かな増大が全ての製剤で観察された。しかしながら、１ヶ月経過しても、全ての凝集レベルは１％未満であった。

【0292】

１．４断片化（バイオアナライザー）
図３は、実施例１のＤｏＥ１製剤のバイオアナライザーにより決定される断片化％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0293】

図３において、バイオアナライザーにより決定される時間に対する断片の変化が示されている。より酸性のｐＨでの製剤は、より急速な断片化速度をもたらす傾向がある。更に、このｐＨ範囲でのアミノ酸の存在は、安定性プロフィールを顕著に悪化させ得る。

【0294】

ｐＨ＞６．０かつ糖／ポリオールの存在下、参照を含む全ての製剤は、同等である（４０℃１ヶ月後の断片化が１％未満）。

【0295】

塩化ナトリウムは、２５〜１００ｍＭの範囲内で、安定性に重要な要素とは認められなかった。

【0296】

１．５ｐＨスクリーニング
表１０は、実施例１のＤｏＥ１製剤のｐＨを示し、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（時間＝０）、４０℃加熱後２週及び４週に行われた。

【0297】

表１０から見られるように、目標ｐＨからの逸脱は見られなかった。

【表21】

【0298】

１．６アンフォールディング温度（ＤＳＦ）
ＤＳＦは、温度上昇が試料に適用されたとき蛍光プローブとの相互作用が増大することに基づくタンパク質のアンフォールディング温度の決定を目的とする高効率の方法である。タンパク質がアンフォールディングを開始するとき、タンパク質は、疎水性パッチを蛍光プローブを誘引する溶媒に進行的に露出し、蛍光プローブが溶液中の遊離状態（無蛍光）からタンパク質との結合状態（疎水性相互作用による）に移行することにより、蛍光シグナルが増大する。

【0299】

蛍光シグナルの評価から、各製剤の転移点を示すシグモイド曲線の中点を決定することができた。転移点が高い程、熱ストレスに対する製剤の耐性が高いことを意味する。

【0300】

ＤｏＥ１スクリーニング製剤に対して実施された評価の結果を図４に示す。図４は、実施例１のＤｏＥ１製剤のＤＳＦにより決定されるアンフォールディング温度（℃）を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定された。

【0301】

３つの参照製剤のアンフォールディング温度は、７１〜７２℃であった。参照製剤以外の製剤でアンフォールディング温度が７０℃を超えるものは殆ど無かったが、以下のものを含んでいた：
・製剤２３、２４及び２５（異なる塩化ナトリウム濃度でトレハロース二水和物又はＤ−マンニトールの何れかの存在下、ｐＨ６．２〜６．４のヒスチジン緩衝剤中の製剤）。

【0302】

従って、この試験により、ポリオール／糖が特にｐＨ６．２以上でタンパク質の熱安定性に正の影響を与える一方、塩化ナトリウムはその挙動に顕著に影響しないという、バイオアナライザーによって断片化に関して既に得られた結果が確認された。

【0303】

１．７アイソフォームプロフィールの変化対ＲＭＰ
ＤｏＥスクリーニング製剤２５のアイソフォームプロフィールは、４０℃で１０〜１１週間後に試験され、参照試料と比較された。

【0304】

主要ピーク及び酸クラスター変動におけるデータを表１１に示す。

【0305】

試験された４つの試料において同等の変動が得られ、製剤２５（ヒスチジン）によって僅かに良好な成績が示された。

【表22】

【0306】

スクリーニング実験１の結論
バイオアナライザー及びＤＳＦ試験で得られた結果は、タンパク質に対する最高の熱安定性を保証し得る最良の組成物を決定するための反応表面におけるＡＮＯＶＡモデルにより組み合わせて評価された。

【0307】

推奨される組成物の一覧を表１２に示す。これは、１ヶ月４０℃でのアンフォールディング温度及び断片化の変化に関して、得られた試作製剤の性能をＨｕｍｉｒａ ＲＭＰと比較もする。

【0308】

製剤ＣはＤｏＥ１製剤２５に対応し、真のデータが示された。

【0309】

これらの製剤をＲＭＰと比較して、熱応答に対するこれらの試作製剤の挙動は、ＲＭＰにおいて認められるのと同等であると結論付けられる。

【表23】

【0310】

些か予想外なことに、単一の安定化剤としてトレハロース二水和物を含有する製剤が、特に断片化阻害、アンフォールディング阻害及びｐＨ維持に関して、非常に良好な成績を示した。そのようなトレハロースベースの製剤は、凝集及び沈殿に関しても良好な成績を呈した。トレハロースが安定化剤としてそのような強力な候補であったことは、アダリムマブ製剤に対する更なる長期間の化学的安定性（特に酸化及び／又は光酸化に対して）をもたらし得る抗酸化特性に関して極めて有望であった。更に、トレハロースが単独で使用されながらも優れた性能を呈することは、より少ない成分を採用するより複雑でない製剤を特に促進し、道を開くと考えられた。これは、アダリムマブ薬物製品の生産に関するプロセスやコストを減少し得る。こうして、これらのトレハロースベースの製剤は、製剤を微調整するためのスクリーニング実験の第二段階に持ち込まれた。

【0311】

スクリーニング実験２−実施例３の比較製剤に対する実施例２の製剤の解析及びスクリーニング
これまでのスクリーニングで、製剤試作品が同定された（表１２）。これまでの工程は界面活性剤を添加せずに行われたため、第二の工程は、良好なタンパク質安定性に界面活性剤の添加が必要か否かを評価するために、一揃いのレベルのポリソルベート８０界面活性剤（範囲：０〜１ｍｇ／ｍＬ）のスクリーニングを目的とした。

【0312】

表３（実施例２）は、本研究のこの第二の工程の設計をまとめ、この第二のスクリーニングにおいて試験された製剤（ＤｏＥ２製剤）を列挙している。

【0313】

典型的には、界面活性剤は、機械的ストレスが誘導する凝集を対比するために観察され、撹拌ストレス試験は、ポリソルベート８０がどのようにタンパク質安定性に影響し、撹拌に応答するかを評価するために実施された。

【0314】

工程１と同様に、実施例３に記載の参照組成物も、新しい製剤の開発のためのベースラインを提供するために評価されている。

【0315】

この製剤のブロックに対して実施された解析の完全なリストを表１３に示す。この第二のスクリーニングにおいて、各製剤は、熱、機械及び光の３つの異なる種類のストレスに晒された。

【表24】

【0316】

熱ストレス試験は、関連する製剤の試料を所定の温度で所定の期間（典型的には２週間又は４週間／１ヶ月）加熱することによって実施された。

【0317】

機械的ストレス試験は、関連する製剤の試料を室温で所定の時間（典型的には２４時間又は４８時間）２００ｒｐｍで機械的に撹拌することによって実施された。

【0318】

光ストレス試験は、関連する製剤の試料を７時間７６５Ｗ／ｍ^２の光に暴露することにより実施された（新しい活性基質及び医薬製品の光安定性試験に関するＥｕｒｏｐｅａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ＡｇｅｎｃｙのＩＣＨ Ｑ１Ｂガイドラインに従う）。

【0319】

２．１．浸透圧
ＤｏＥ２スクリーニング製剤の浸透圧を表１４に示す。３７８〜４０１ｍＯｓｍ／ｋｇに含まれる値は、恐らく、溶液の凝固点及びそれ故に浸透圧に影響する粘性の幾らかの増大をもたらし得るトレハロース二水和物の存在のため過大評価されている。これは、粘性の減少のために浸透圧試験の前にＷＦＩで３倍に希釈した他の試験製剤に関する測定によって確認されており：これら全ての製剤の実際の浸透圧は３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満である。

【表25】

【0320】

２．２．タンパク質含有量（ＯＤ）
時間０での全てのＤｏＥ２製剤のタンパク質含有量は、目標タンパク質濃度の５０ｍｇ／ｍＬと一致した（表１５）。

【表26】

【0321】

２．３．熱ストレスによる凝集（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
ＳＥ−ＨＰＬＣによる全凝集物の変動を、図５に示す。図５は、実施例２のＤｏＥ２製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0322】

全ての製剤において観察された変化は僅かであり、４０℃で１ヶ月後の全凝集物量は１％未満であった。

【0323】

ＤｏＥ２スクリーニング製剤の性能は、ＲＭＰ材料と比較して同等／僅かに良好であった。

【0324】

２．４．熱ストレスによる断片化（バイオアナライザー）
バイオアナライザーによる断片の変化を、図６に示す。図６は、実施例２のＤｏＥ２製剤のバイオアナライザーにより決定される断片化％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0325】

製剤ＤｏＥ２−７（ポリソルベート８０無し）は、他の２つが界面活性剤の存在下ＲＭＰ材料と同等と認められたのに対して、断片の定常的な増大を示す。製剤＃２５（ＤｏＥ２のフォーム７と同等）に対するＤｏＥ１実験から得られるデータを考慮して、ＤｏＥ２−７の分解の増大は、試料の汚染が原因の可能性が有ると結論付けられる。

【0326】

２．５．熱ストレスによるアイソフォームプロフィール（ｉＣＥ２８０）
１ヶ月４０℃での３つの製剤の主要ピーク及び酸クラスターの変化を、それぞれ図７及び８に示す。

【0327】

図７は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される主要ピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0328】

図８は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される酸クラスターピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0329】

最高の変化はＤｏＥ２−７で見られた（主要ピークにおいて−１５％）が、これは、上記で言及したように、試料の汚染に由来する可能性がある。

【0330】

これらの結果は、試作製剤（第一のスクリーニングから得た）に対するｉＣＥ２８０により既に示された実験的証拠を確認するもので、ヒスチジンを含有する製剤は、アイソフォームプロフィールに関して、ＲＭＰと同等の分解速度を示す。

【0331】

酸クラスターに関して、これらの結果は、主要ピークで得られた結果と一致する。

【0332】

２．６．熱ストレスによるｐＨスクリーニング
製剤を一定期間４０℃で加熱した場合のＤｏＥ２製剤（実施例２の）のｐＨの変化を表１６に示す。

【0333】

表１６に示すように、ＤｏＥ２−７においてｐＨの低下が観察された。これは、試料の汚染／細菌増殖によるものと思われる。

【表27】

【0334】

２．７．熱ストレスによる濁度（ネフェロメトリー）
図９は、実施例２のＤｏＥ２製剤のネフェロメトリーにより決定される濁度を示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、４０℃加熱後２週（薄い斜線網掛け）及び４週（網掛け無し）に行われた。

【0335】

３つの製剤の濁度は、時間０において、典型的に乳白色の溶液（６〜１８ＮＴＵ）の範囲内である。ＤＳ材料由来のものに関して、典型的な濁度は１９〜５２ＮＴＵであったが、無菌濾過後のＤＰ溶液は顕著に清澄化される。

【0336】

重要なことに、Ｈｕｍｉｒａ ＲＭＰの値は、通常、我々の製剤と同様に、１０ＮＴＵ周辺である。

【0337】

２．８．機械的ストレスによる凝集（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
図１０は、実施例２のＤｏＥ２製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、機械的撹拌（振盪）後２４時間（薄い斜線網掛け）及び４８時間（網掛け無し）に行われた。

【0338】

ＳＥ−ＨＰＬＣによる全凝集物の変化を図１０に示す。

【0339】

全てのヒスチジン緩衝剤中の製剤において、観察された変化は僅かであった（＋０．１％）。

【0340】

２．９．機械的ストレスによる断片化（バイオアナライザー）
図１１は、実施例２のＤｏＥ２製剤のバイオアナライザーにより決定される断片化％を示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、機械的撹拌（振盪）後２４時間（薄い斜線網掛け）及び４８時間（網掛け無し）に行われた。

【0341】

バイオアナライザーによる断片の変化を図１１に示す。観察された変化は僅かで、記録された値は変化無しか又は０．５％未満であった。

【0342】

室温で４８時間撹拌した後、全ての試料において、０．２〜０．４％の断片化が認められた。機械的撹拌の場合、断片化の増大に向かう傾向が見られなかった。

【0343】

２．１０．機械的ストレスによるｐＨスクリーニング
製剤を一定時間機械的に撹拌（振盪）した場合のＤｏＥ２製剤（実施例２の）の変化を表１７に示す。変化は観察されなかった。

【表28】

【0344】

２．１１．機械的ストレスによる濁度（ネフェロメトリー）
図１２は、実施例２のＤｏＥ２製剤のネフェロメトリーにより決定される濁度を示す棒グラフであり、測定は、任意の出発点（濃い斜線網掛け、時間＝０）、機械的撹拌（振盪）後２４時間（薄い斜線網掛け）及び４８時間（網掛け無し）に行われた。変化は観察されなかった。

【0345】

２．１２．光ストレスによる凝集物（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
図１３は、実施例２のＤｏＥ２製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0346】

比較は、同一の条件で処理されたＨｕｍｉｒａ試料（米国製及び欧州製）とも行われた。ＲＭＰにおいて、凝集の増大は光暴露後に９〜１５％に上る（時間０では凝集は１％未満）。全てのＤｏＥ２製剤における増大はそれを下回るか同等であり、故に、熱ストレスに対する良好な／同等の耐性を呈する。より詳細には：
・ヒスチジン緩衝剤中の製剤：５．８→９．８％（光暴露後の全凝集物）

【0347】

２．１３．光ストレスによる断片化（バイオアナライザー）
図１４は、実施例２のＤｏＥ２製剤のバイオアナライザーにより決定される断片化％を示す棒グラフであり、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0348】

増大は僅かであった（暴露後最大で＋０．３％）。全ての断片化の量は、７時間の暴露後、１％を大きく下回る（図１４）。

【0349】

２．１４．光ストレスによるアイソフォームプロフィール（ｉＣＥ２８０）
図１５は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される主要ピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0350】

図１６は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される酸クラスターピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0351】

Ｈｕｍｉｒａ ＲＭＰにおいて、光暴露は、顕著な効果を決定する：もっとも重要なことに、光毒性現象に関連して、主要ピークの存在度の減少（−９％付近）及び酸クラスターの増大（最大＋９％）が観察される。

【0352】

ヒスチジン中の製剤は、光暴露による分解に対してＲＭＰよりも感受性が高かった：主要ピークの存在度の減少は−１１．４％（ＤｏＥ２−７）又はそれ以上（他のもので−１８％付近）に、酸クラスターの増大は＋２７％に達した。

【0353】

ヒスチジンは、多量の光暴露と、ストレス条件下でポリソルベートにより放出される分解産物（典型的にはペルオキシド）との両方に由来する酸化に感受性である。従って、ポリソルベート８０＋ヒスチジンは、光ストレス下で不安定性の増大をもたらし得る組み合わせである。

【0354】

界面活性剤の影響を更に解明し、それが、凍結融解サイクルによるタンパク質の分解／粒子形成を阻止するのに必要かどうかを決定するために、専用の実験が実施され、ポリソルベート８０により付加価値はもたらされないことが示された。これは、最終的に、ヒスチジン中の界面活性剤不含バックアップ製剤をもたらし得る。

【0355】

２．１５．光ストレスによる濁度（ネフェロメトリー）
図１７は、実施例２のＤｏＥ２製剤のネフェロメトリーにより決定される濁度を示す棒グラフであり、測定は、光暴露前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、７６５Ｗ／ｍ^２の光暴露後７時間（網掛け無し）に行われた。

【0356】

２．１６．光ストレスによるｐＨスクリーニング
製剤を７６５Ｗ／ｍ^２の光に７時間暴露した期間に渡る実施例２のＤｏＥ２製剤のｐＨの変化を図１８に示す。変化は観察されなかった。

【表29】

【0357】

２．１７．凍結融解サイクルに対する界面活性剤の効果
３つのＤｏＥ２製剤のアイソフォームプロフィール、凝集物及び可視下粒子が、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）前及び後に決定されて、界面活性剤が何らかの影響を呈するかが評価された。

【0358】

図１８は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される主要ピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0359】

図１９は、実施例２のＤｏＥ２製剤のｉＣＥ２８０により決定される酸クラスターピークアイソフォームプロフィールを示す棒グラフであり、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0360】

図２０は、実施例２のＤｏＥ２製剤のＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される凝集性％を示す棒グラフであり、参照標準（比較物ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）製剤）と共に測定され、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0361】

図２１は、実施例２のＤｏＥ２製剤の、可視下粒子カウント解析によって決定される、１０ミクロン以下の粒径の可視下粒子の個数濃度（＃／ｍｇ）を示す棒グラフであり、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0362】

図２２は、実施例２のＤｏＥ２製剤の、可視下粒子カウント解析によって決定される、２５ミクロン以下の粒径の可視下粒子の個数濃度（＃／ｍｇ）を示す棒グラフであり、測定は、５回の凍結融解サイクル（−８０℃→室温）を行う前（濃い斜線網掛け、時間＝０）、及び後（網掛け無し）に行われた。

【0363】

凍結融解において、アイソフォームと凝集物において変化は見られなかった（図１８〜２０）。一方、僅かな顕著でない変化が可視下粒子において見られ（図２１〜２２）、これは、界面活性剤の存在と関連しないと見出された。ＤｏＥ２−８において粒子のカウントが高かったのは、試料の汚染によるものと思われる。

【0364】

従って、凍結融解サイクルにおいて、粒子及び凝集物形成／タンパク質分解を阻止という目的で界面活性剤の添加における付加価値は無い。これは、新規製剤の有効性が界面活性剤に拘らないことを示す。

【0365】

スクリーニング実験２の結果
熱、機械的及び光ストレスに関して回収されたデータに基づき、下記の結果が導き出される。
ｐＨ６．４の１０ｍＭヒスチジン緩衝剤中の製剤（ＤｏＥ２−７、ＤｏＥ２−８、ＤｏＥ２−９）
−熱ストレスを与えた後、Ｈｕｍｉｒａと同等の性能が示された。
−機械的撹拌御の凝集物の増大は僅かであった。
−分解の増大及びアイソフォームプロフィールのＨｕｍｉｒａに関する変化は、光及びポリソルベート８０の分解産物に対するヒスチジンの感受性による。このグループ中のポリソルベート８０を含有しない製剤（Ｄｏｅ２−７）は、ＲＭＰよりも尚も僅かに悪化しているが、ヒスチジン＋ポリソルベート８０（０．５又は１．０ｍｇ／ｍＬ）の他のものよりは顕著に良好である。

【0366】

ポリソルベート８０の存在のタンパク質の保護剤（凍結融解に対する保護）としての有効性及び機能が評価された。凍結融解サイクル（８０℃→室温）を５回行った後、界面活性剤によって付加価値は与えられないことが観察され、界面活性剤不含のＤｏＥ２−７（５０ｍｇ／ｍＬアダリムマブ、２００ｍＭトレハロース二水和物、１０ｍＭヒスチジンｐＨ６．４中塩化ナトリウム５０ｍＭ）を更に発展させることが推奨される。

【0367】

緩衝剤／ｐＨ、安定化剤、等張化剤（ＮａＣｌ）量及び界面活性剤（ポリソルベート８０）レベルの異なる様々な製剤に対して実施されたスクリーニング作業に基づいて、複数のストレス条件（熱、機械、光）に対して同等又は改善された特性を示す最良の組成物は、以下のように同定された。

【表30】

【0368】

このような製剤は、２９Ｇ 1/2”針を有する充填済みガラスシリンジ内に容易に組み込める。

【0369】

略語
ＤｏＥ 実験のデザイン
ＤＰ 薬物製剤
ＤＳ 薬物基質
ＤＳＦ 差走査蛍光定量
ＯＤ 光学密度
ＰＥＳ ポリエチレンスルホン
ｒｐｍ ラウンドパーミニット
ＲＴ 室温
ＳＥ−ＨＰＬＣサイズ排除高性能液体クロマトグラフィー
ＳＭＩ 要約製造指示
ＳＯＰ 標準操作手順
ＷＩ 動作指示

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】