特許 6974614 β−ラクタマーゼ阻害剤の結晶形およびその製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6974614

(24)【登録日】2021年11月8日

(45)【発行日】2021年12月1日

(54)【発明の名称】β−ラクタマーゼ阻害剤の結晶形およびその製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/08 20060101AFI20211118BHJP

   A61K 31/439 20060101ALI20211118BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20211118BHJP

【ＦＩ】

   C07D471/08CSP

   A61K31/439

   A61P31/04

【請求項の数】12

【全頁数】21

(21)【出願番号】特願2020-529494(P2020-529494)

(86)(22)【出願日】2018年12月3日

(65)【公表番号】特表2021-504416(P2021-504416A)

(43)【公表日】2021年2月15日

(86)【国際出願番号】CN2018118864

(87)【国際公開番号】WO2019105479

(87)【国際公開日】20190606

【審査請求日】2020年7月2日

(31)【優先権主張番号】201711251386.3

(32)【優先日】2017年12月1日

(33)【優先権主張国】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】512078616

【氏名又は名称】チールー ファーマシューティカル カンパニー、リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100166165

【弁理士】

【氏名又は名称】津田 英直

(72)【発明者】

【氏名】リー チョン

(72)【発明者】

【氏名】ホアン チーカン

(72)【発明者】

【氏名】チャールズ ゼット．ディング

(72)【発明者】

【氏名】リー ウェイトン

【審査官】 三木 寛

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１７／２０６９４７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２０１４／０２８８０５１（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特表２０１５−５２６５０１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２０１６−５０３０００（ＪＰ，Ａ）

【文献】 第十六改正 日本薬局方，2011年，pp.64-68,2070

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ４７１／０８

Ａ６１Ｋ ３１／４３９

Ａ６１Ｐ ３１／０４

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）化合物のＡ結晶形であって、その粉末Ｘ線回折スペクトルは、16.053 ± 0.2°, 16.53 ± 0.2°, 18.501 ± 0.2°, 21.302 ± 0.2° , 21.778 ± 0.2°, 22.782 ± 0.2°, 25.742 ± 0.2° 及び 27.833 ± 0.2°といった２θ角に特徴的回折ピークを有することを特徴とする結晶形。

【化1】

【請求項2】

ＸＲＰＤスペクトルは、以下の：

【表1】

で示された通りである、請求項１に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形。

【請求項3】

示差走査熱量測定曲線は２２１．１１±３℃に放熱ピークを有する請求項１又は２に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形。

【請求項4】

ＤＳＣスペクトルは、以下の：

【表2】

で示された通りである請求項３に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形。

【請求項5】

熱重量分析曲線は１９４．６１±３℃に重量減少が０．５６８９％に達する、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形。

【請求項6】

ＴＧＡグラムは、以下の：

【表3】

で示された通りである請求項５に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形。

【請求項7】

前記DVSパターンが、下記の図：

【表4】

に示されるとおりである、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形。

【請求項8】

式（I）化合物のA結晶形が、２５℃８０％RHで、０．２９１０％の吸湿増重を有する、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形。

【請求項9】

請求項１〜８のいずれか一項に記載される式（Ｉ）化合物：

【化2】

のＡ結晶形の製造方法であって、
（ａ）式（Ｉ）化合物を溶媒に入れた後、５５〜６０℃に加熱して完全に溶解させる工程、
（ｂ）撹拌しながらゆっくり０℃に冷却する工程、
（ｃ）１０〜１６時間撹拌して結晶を析出させる工程、
（ｄ）ろ過し、吸引乾燥する工程を含み、
ここで、前記溶媒は純水である方法。

【請求項10】

請求項１〜８のいずれか一項に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形を含む、細菌感染を治療するためのβ−ラクタマーゼ阻害剤。

【請求項11】

請求項１〜８のいずれか一項に記載の式（Ｉ）化合物を含む、カルバペネマーゼ産生菌の感染を治療するためのβ−ラクタマーゼ阻害剤。

【請求項12】

請求項１〜８のいずれか一項に記載の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形を含む、ＫＰＣ−２型カルバペネマーゼ産生肺炎桿菌、ＮＤＭ−１カルバペネマーゼ産生肺炎桿菌、又はＯＸＡ−１８１カルバペネマーゼ産生肺炎桿菌の感染を治療するためのβ−ラクタマーゼ阻害剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は以下の優先権を要求する：
ＣＮ２０１７１１２５１３８６．３、出願日２０１７年１２月１日。

【0002】

本発明は、新規なβ−ラクタマーゼ阻害剤に関し、具体的に、式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を公開する。

【背景技術】

【0003】

細菌のβ−ラクタム系抗生物質に薬剤耐性が生じる機序はいくつかあるが、主に細菌がβ−ラクタム環を加水分解して断裂させた酵素を生成することで、抗生物質が抗菌活性を失う。また、細菌は選択的に抗生物質の作用標的を変えることができる。たとえば、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌が多剤耐性を有することは、新たなＰＢＰ_2aの生成、ＰＢＰ合成の増加、薬物の親和力の低下に関連する。β−ラクタマーゼは一部の酵素耐性β−ラクタム系抗生物質と迅速に結合し、薬物を形質膜外の隙間に滞らせ、作用標的に到達して抗菌作用を発揮することができないようにする。また、グラム陰性菌の外膜は一部のβ−ラクタム系抗生物質にとって透過しにくく、非特異的な低レベルの薬剤耐性が生じる。さらに、一部の細菌の形質膜に能動的な排出系が存在し、細菌はこれによって能動的に薬物を排出する。そのため、β−ラクタム系抗生物質とβ−ラクタマーゼ阻害剤の併用は臨床において最も有効な方法である。細菌は数種類のβ−ラクタマーゼを生成するが、そのアミノ酸およびヌクレオチドの配列によってＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄの４つのクラスに分かれる。クラスＡ、ＢおよびＤの酵素はセリンを活性部位として加水分解を触媒し、クラスＢの酵素はその活性部位における一つまたは複数の金属原子によって開環させる。

【化1】

【0004】

初めての周知の高活性β−ラクタマーゼ阻害剤はクラブラン酸カリウムで、今まで、そのアモキシシリンの組み合わせは未だに市場でよく売れている。市場では、もう二つの重要なβ−ラクタマーゼ阻害剤はスルバクタムおよびタゾバクタムである。この三つの薬物の共通点はいずれも構造に高活性のβ−ラクタム環があり、阻害剤の活性部位である。この三つの薬物は市販では売れているが、その自信の抗菌スペクトルが狭い。これらはクラスＡおよびＤのβ−ラクタマーゼのみに対して作用効果があるが、クラスＣおよびクラスＡの酵素の中で非常に重要なＫＰＣ酵素にまったく効果がない。

【0005】

２０１５年２月に、ＦＤＡによって許可された新たなβ−ラクタマーゼ阻害剤はアビバクタム（ＮＸＬ−１０４）である。当該薬物の構造に新規なジアザ二環が含まれ、上記三つの前世代のβ−ラクタマーゼ阻害剤よりも広い抗菌スペクトルを有する。ＷＯ２００９１３３４４２、ＷＯ２００９０９１８５６、ＷＯ２０１０１２６８２０、ＷＯ２０１２０８６２４１、ＷＯ２０１３０３０７３３、ＷＯ２０１３０３０７３５、ＷＯ２０１３１４９１２１、ＷＯ２０１３１４９１３６、ＷＯ２０１３１８０１９７、ＷＯ２０１４０１９１２６８、ＷＯ２０１４１４１１３２、ＷＯ２０１４１３５９３１、ＷＯ２０１５０６３６５３、ＷＯ２０１５１１０８８５、ＵＳ２０１４０２９６５２６を含むβ−ラクタマーゼ阻害剤の特許では、大量のジアザ二環の新規な化合物が公開された。中では、ＭＫ−７６５５およびＯＰ−０５９５の二つの新薬は臨床段階に入った。ＭＫ−７６５５はＩＩＩ期臨床に、ＯＰ−０５９５はＩ期臨床に入った。ＯＰ−０５９５は体外活性が非常に良く、ロシェ製薬に所有されている。そのため、ジアザ二環系阻害剤はβ−ラクタマーゼ阻害剤の開発の一つの新たな方向になる。

【化2】

【発明の概要】

【0006】

式（Ｉ）化合物のＡ結晶形であって、その粉末Ｘ線回折スペクトルは、１６．０５３±０．２°、１６．５３±０．２°、２２．７８２±０．２°、２５．７４２±０．２°といった２θ角に特徴的回折ピークを有することを特徴とする結晶形。

【化3】

【0007】

式（Ｉ）化合物のＡ結晶形であって、その粉末Ｘ線回折スペクトルは、１６．０５３±０．２°、１６．５３±０．２°、１８．５０１±０．２°、２１．３０２±０．２°、２１．７７８±０．２°、２２．７８２±０．２°、２５．７４２±０．２°、２７．８３３±０．２°といった２θ角に特徴的回折ピークを有することを特徴とする結晶形。

【0008】

本発明の一部の形態において、上記Ａ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図１で示された通りである。

【0009】

本発明の一部の形態において、上記Ａ結晶形のＸＲＰＤスペクトルの解析データは表１の通りである。

【0010】

【表1】

【0011】

本発明の一部の形態において、上記Ａ結晶形の示差走査熱量測定曲線は２２１．１１±３℃に放熱ピークを有する。

【0012】

本発明の一部の形態において、上記Ａ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２で示された通りである。

【0013】

ＤＳＣスペクトルから、２２１．１１℃の近くに１つの放熱ピークを有することがわかる。

【0014】

本発明の一部の形態において、上記Ａ結晶形の熱重量分析曲線は１９４．６１±３℃に重量減少が０．５６８９％に達する。

【0015】

ＴＧＡグラフでは、１９４．６１℃に加熱すると、重量が０．５６８９％減少し、２００℃以降大きい重量減少が現れることが示される。Ａ結晶形は結晶水または結晶溶媒を含まず、熱安定性が良い。

【0016】

ＤＶＳグラフは図４に示すように、結果から、２５℃／８０％ＲＨにおいてＡ結晶形の吸湿増重が０．２９１０％で、やや吸湿性を有することが示される。

【0017】

また、本発明の式（Ｉ）化合物のＡ結晶形の製造方法であって、
（ａ）式（Ｉ）化合物を溶媒に入れた後、５５〜６０℃に加熱して完全に溶解させる工程、
（ｂ）撹拌しながらゆっくり０℃に冷却する工程、
（ｃ）１０〜１６時間撹拌して結晶を析出させる工程、
（ｄ）ろ過し、吸引乾燥する工程を含み、
ここで、前記溶媒は純水である方法を提供する。
また、細菌感染を治療するβ−ラクタマーゼ阻害剤の製造における上記Ａ結晶形または上記製造方法によって得られる結晶形の使用を提供する。

【0018】

技術効果
本発明の技術特徴は、主に、ジアザ二環に基づき、まったく新しいグアニジルオキシ基の側鎖を導入することにある。当該基はアミノ基と比べ、より多い水素結合の結合部位を有することで、より良い水溶性などの物理・化学的性質を有する。また、当該基のｐＫａ＝８．８３はアミノ基のｐＫａに近く（たとえばリシンにおける末端側鎖のアミノ基のｐＫａ＝８．９５）、従来のグアニジル基よりも遥かに小さいため（たとえばアルギニンのｐＫａ＝１２．４８）、化合物はＯＰ−０５９５と同様の化学安定性を維持することができる。本発明によって提供される化合物の体内外活性実験における測定データからも、式（Ｉ）化合物はＯＰ−０５９５よりも良い活性を有することが示される。本発明に記載の結晶形は、製造しやすい、安定性が良い、相転移しにくいといった技術的利点があり、後の薬物の生産および応用に有利である。

【発明を実施するための形態】

【0019】

定義と説明
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語および連語は以下の意味を含む。一つの特定の連語または用語は、特別に定義されたいない場合、不確定または不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品またはその活性成分を指す。

【0020】

本発明の中間体化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造するができ、以下挙げられた具体的な実施形態、ほかの化学合成方法と合わせた実施形態および当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。

【0021】

本発明の具体的な実施形態の化学反応は適切な溶媒で完成され、前記の溶媒は本発明の化学変化およびそれに必要な試薬と材料に適するべきである。本発明の化合物を得るため、当業者が既存の実施形態に基づいて合成工程または反応スキームを変更または選択することが必要であることもある。

【0022】

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の何らの制限にもならない。

【0023】

本発明に使用されたすべての溶媒は市販品で、さらに精製せずにそのままで使用してもよい。

【0024】

本発明は下記略号を使用する。ＭＷはマイクロ波を、ｒ．ｔ．は室温を、ａｑは水溶液を、ＤＣＭはジクロロメタンを、ＴＨＦはテトラヒドロフランを、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを、ＮＭＰはＮ−メチルピロリドンを、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを、ＥｔＯＨはエタノールを、ＭｅＯＨはメタノールを、ｄｉｏｘａｎｅはジオキサンを、ＨＯＡｃは酢酸を、Ｂｏｃはｔ−ブトキシカルボニル基を、Ｃｂｚはベンジルオキシカルボニル基を、両者ともアミン保護基であり、Ｂｏｃ₂Ｏはジカルボン酸ジ−ｔ−ブチルを、ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンを、ＴＥＡまたはＥｔ₃Ｎはトリエチルアミンを、ＢｎＮＨ₂はベンジルアミンを、ＰＭＢＮＨ₂はｐ−メトキシベンジルアミンを、ＫＯＡｃは酢酸カリウムを、ＮａＯＡｃは酢酸ナトリウムを、Ｃｓ₂ＣＯ₃は炭酸セシウムを、Ｋ₂ＣＯ₃は炭酸カリウムを、ＮａＨＣＯ₃は炭酸水素ナトリウムを、Ｎａ₂ＳＯ₄は硫酸ナトリウムを、ｐｙｒｉｄｉｎｅはピリジンを、ＮａＯＨは水酸化ナトリウムを、ＴＥＡまたはＥｔ₃Ｎはトリエチルアミンを、ＮａＨは水素化ナトリウムを、ＬｉＨＭＤＳはリチウムヘキサメチルジシラジドを、ｉ−ＰｒＭｇＢｒはイソプロピルマグネシウムブロミドを、ｔ−ＢｕＯＫはカリウムｔ−ブトキシドを、ｔ−ＢｕＯＮａはナトリウムｔ−ブトキシドを、Ｐｄ₂（ｄｂａ）₃はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムを、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄はテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムを、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ₂ＣＨ₂Ｃｌ₂は［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド・ジクロロメタンを、Ｐｄ（ＯＡｃ）₂は酢酸パラジウムを、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₂Ｃｌ₂はビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウムジクロリドを、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₃Ｃｌはトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウムクロリドを、Ｐｄ（ＯＨ）₂は水酸化パラジウムを、キサントホスは４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテンを、Ｘｐｈｏｓは２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニルを、ＢＩＮＡＰは（±）−２，２’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチルを、Ｘantphosは、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテンを、Ｘｐｈｏｓ−Ｐｄ−Ｇ１は（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノエチルフェニル）］パラジウム（ＩＩ）クロリドを、Ｘｐｈｏｓ−ＰＤ−Ｇ₂は（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）クロリドを、Ｘｐｈｏｓ−Ｐｄ−Ｇ３は（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）メタンスルホネートを、Ｉ₂はヨウ素単体を、ＬｉＣｌは塩化リチウムを、ＨＣｌは塩酸を、ｍａｌｅｉｃ ａｃｉｄはマレイン酸を表す。

【0025】

化合物は人工的にまたはＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトによって名付けられ、市販化合物はメーカーのカタログの名称が使用された。

【0026】

本発明の装置と分析方法：
１．１ 粉末Ｘ線回折（Ｘ−ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）
装置型式：ブルカーＤ８ ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折装置
測定方法：約１０〜２０ ｍｇのサンプルをＸＲＰＤ検出に使用した
詳細なＸＲＰＤパラメーターは以下の通りである。
Ｘ線管：Ｃｕ、ｋα、（λ＝１．５４０５６Å）
管電圧：４０ ｋＶ、管電流：４０ ｍＡ
発散スリット：０．６０ ｍｍ
検出器スリット：１０．５０ ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ ｍｍ
走査範囲：４〜４０度
ステップ幅：０．０２度
ステップ時間：０．１２秒
サンプルプレート回転数：１５ ｒｐｍ
１．２ 示差走査熱量分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）
装置型式：ＴＡ Ｑ２０００示差走査熱量計
測定方法：サンプル（〜１ ｍｇ）をＤＳＣアルミニウムパン内に置いて測定し、５０ ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ₂の条件において、１０℃／ｍｉｎの升温速度で、サンプルを３０℃から３００℃に加熱する。

【0027】

１．３ 熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）
装置型式：ＴＡ Ｑ５０００熱重量分析装置
測定方法：サンプル（２〜５ ｍｇ）をＴＧＡ白金パン内に置いて測定し、２５ ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ₂の条件において、１０℃／ｍｉｎの升温速度で、サンプルを室温から２１０℃まで加熱する。

【0028】

１．４ 動的水蒸気吸着測定（Ｄｙｎａｍｉｃ Ｖａｐｏｒ Ｓｏｒｐｔｉｏｎ、ＤＶＳ）
装置型式：ＳＭＳ ＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的水蒸気吸着測定装置
測定条件：サンプル（１０〜１５ ｍｇ）をＤＶＳサンプルパンに取って測定する。

【0029】

ＤＶＳパラメーターの詳細は以下の通りである。

【0030】

温度：２５℃
平衡化：ｄｍ／ｄｔ＝０．０１ ％／ｍｉｎ（最短：１０ ｍｉｎ、最長：１８０ ｍｉｎ）
乾燥：０％ ＲＨで１２０ ｍｉｎ乾燥する
ＲＨ（％）測定刻み幅：１０％
ＲＨ（％）測定範囲：０％ − ９０％ − ０％
吸湿性評価の分類は以下の通りである。

【表2-1】

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1】図１は式（Ｉ）化合物のＡ結晶形のＣｕ−Ｋα線のＸＲＰＤスペクトルである。

【図2】図２は式（Ｉ）化合物のＡ結晶形のＤＳＣスペクトルである。

【図3】図３は式（Ｉ）化合物のＡ結晶形のＴＧＡグラフである。

【図4】図４は式（Ｉ）化合物のＡ結晶形のＤＶＳグラフである。

【図5】図５は式（Ｉ）ＫＰＣ型β−ラクタマーゼを生成する肺炎桿菌に対する化合物の実験結果のグラフである。

【0032】

具体的な実施形態
以下、本発明の内容がより良く理解されるように、具体的な実施例と合わせてさらに説明するが、具体的な実施形態は本発明の内容に対する制限ではない。

【実施例】

【0033】

実施例１ 式（Ｉ）化合物の製造

【化4】

工程１：
原料１−Ａ（５０ ｇ、２６．６２ ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド（８．６９ ｇ、５３．２４ ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６．７３ ｇ、６６．５５ ｍｍｏｌ）を１００ ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解させ、５０℃に加熱し、１６時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、撹拌しながら１００ ｍＬの氷水に注ぎ、吸引ろ過し、固体を１０ ｍＬの冷水で３回洗浄し、乾燥して化合物１−Ｂを得た。

【0034】

工程２：
化合物１−Ｂ（６．０ ｇ、１７．０３ ｍｍｏｌ）を４００ ｍＬのジクロロメタンおよび１５０ ｍＬのメタノールに懸濁させ、それに８５％水加ヒドラジン（１．７１ ｇ、３４．０６ ｍｍｏｌ、１．６６ ｍＬ）を入れた。反応液を２５℃で１８時間撹拌し、ろ過し、ケーキを５０ ｍＬの酢酸エチルで洗浄し、ろ液を乾燥するまで濃縮し、残留物を４０ ｍＬの石油エーテル／酢酸酢酸（３：１）でかき混ぜ、ろ過し、かき混ぜを２回繰り返し、ろ液を合併して濃縮し、化合物１−Ｃを得た。

【0035】

工程３：
化合物１−Ｃ（９８０ ｍｇ、１０．６４ ｍｍｏｌ）を５０ ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、−１０℃に冷却し、注射器でトリエチルアミン（１．０８ ｇ、１０．６４ ｍｍｏｌ、１．４７ ｍＬ）を入れ、さらにジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル（２．３２ ｇ、１０．６４ ｍｍｏｌ）の３０ ｍＬジクロロメタン溶液を滴下した。反応液をゆっくり室温（２５℃）に昇温させ、２０時間撹拌した。濃縮し、残留物をシリカゲルカラムによって精製し（酢酸エチル／石油エーテル混合液、勾配３０％〜５０％）、化合物１−Ｄを得た。

【0036】

工程４：
化合物１−Ｄ（３００ ｍｇ、１．５６ ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，５Ｒ）−６−ベントキシ−７−オキシ−１，６−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン−２−カルボン酸（４３１．２３ ｍｇ、１．５６ ｍｍｏｌ）（合成方法は特許ＷＯ２０１２１７２３６８Ａ１を参照する）、ＥＤＣＩ（３８８．７７ ｍｇ、２．０３ ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２７４．０２ ｍｇ、２．０３ ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（２０１．６２ ｍｇ、１．５６ ｍｍｏｌ、２７２．４６ μＬ）を順に２０ ｍＬのジクロロメタンに入れた。反応液を室温（２５℃）で２０時間撹拌した後、３０ ｍＬのジクロロメタンを入れて希釈し、１５ ｍＬの水で２回洗浄し、１５ ｍＬの食塩水で１回洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過し、ろ液を乾燥するまで濃縮し、粗製品をシリカゲルカラムによって精製し（酢酸エチル／石油エーテル混合液、勾配３０％〜５０％）、化合物１−Ｅを得た。

【0037】

工程５：
化合物１−Ｅ（７６０．００ ｍｇ、１．６９ ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７．００ ｍＬ）に溶解させ、２０℃でトリフルオロ酢酸（３．０８ ｇ、２７．０１ ｍｍｏｌ、２．００ ｍＬ）を入れて３時間撹拌し、反応混合物を濃縮し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈して飽和炭酸水素ナトリウム（５０ ｍＬ）で洗浄し、さらに飽和食塩水（５０ｍＬ）で１回洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮し、化合物１−Ｆを得た。

【0038】

工程６：
化合物１−Ｆ （２００．００ ｍｇ、５７０．８３ μｍｏｌ）および（Ｅ）−（ブトキシカルボニル）アミノ（メチレン）カルバミン酸ｔ−ブチル（１７７．１６ ｍｇ、５７０．８３μｍｏｌ）をアセトニトリル（２ ｍＬ）に溶解させて２０℃で１６時間撹拌し、反応完了後、濃縮し、残留物に対してシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い（酢酸エチル／石油エーテル＝０〜２／１勾配溶離）、化合物１−Ｇを得た。

【0039】

工程７：
化合物１−Ｇ（３００．００ ｍｇ、５０６．２１ μｍｏｌ）をイソプロパノール（３．００ ｍＬ）／水（３．００ ｍＬ）に溶解させ、湿潤パラジウム炭素（５０．００ ｍｇ、１０％）を入れ、混合物を水素ガスの雰囲気において１８〜２８℃で２時間撹拌し、ろ過し、化合物１−Ｈのイソプロパノール／水のろ液を得たが、そのまま次の工程の反応に使用した。

【0040】

工程８：
化合物１−Ｈ（２５０．００ ｍｇ、４９７．４９ μｍｏｌ）のイソプロパノール（３．００ ｍＬ）／水（３．００ ｍＬ）に三酸化硫黄−トリメチルアミン錯体（６９．２４ ｍｇ、４９７．４９ μｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１０．０７ ｍｇ、９９．５０ μｍｏｌ、１３．７９ μＬ）を入れ、この混合物を１８〜２８℃で１６時間撹拌した。反応完了後、酢酸エチル／石油エーテル（２／１、６ ｍＬ、２回）で洗浄し、水相を収集して硫酸水素テトラブチルアンモニウム（１６８．４３ ｍｇ、４９６．０７ μｍｏｌ）を入れて室温で０．５時間撹拌した後、酢酸エチル（１５ ｍＬ、２回）で抽出し、抽出液を飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、化合物１−Ｉを得た。

【0041】

工程９：
化合物１−Ｉ（２００．００ ｍｇ、２４２．７１ μｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（２．００ ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの雰囲気の保護下において０Ｌに冷却してトリフルオロ酢酸（１．５４ ｇ、１３．５１ ｍｍｏｌ、１．００ ｍＬ）を入れて２時間撹拌し、さらに２５℃で４時間撹拌した後、空気中で濃縮し、残留物をアセトニトリル（２ ｍＬ）で３回かき混ぜ、得られた粗製品を高速液体クロマトグラフィーによって分離し、式（Ｉ）化合物を得た。

【0042】

¹Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， Ｄ₂Ｏ） ４．１５ （ｓ， １Ｈ）， ４．１０ − ４．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０３ − ３．９９ （ｍ， ３Ｈ）， ３．２６ （ｄ， Ｊ ＝ １２Ｈｚ， １Ｈ）， ３．０９ （ｄ， Ｊ ＝ １２Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１３ − １．９９ （ｍ， ２Ｈ）， １．９４ - １．７４ （ｍ， ２Ｈ）； ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３８３．１（Ｍ＋１）。

【0043】

実施例２ 式（Ｉ）化合物のＡ結晶形の製造
１．４ ｋｇの式（Ｉ）化合物を７ Ｌの純水で５５〜６０℃に加熱して完全に溶解させた後、撹拌しながらゆっくり０℃に冷却し、１２時間撹拌して結晶を析出させた。ろ過して吸引乾燥し、式（Ｉ）化合物の結晶Ａを得た。

【0044】

実施例３ 式（Ｉ）化合物のＡ結晶形の吸湿性の研究
実施材料：式（Ｉ）化合物のＡ結晶形
実験方法：サンプル（１０〜１５ ｍｇ）をＤＶＳサンプルパンに取って測定し、動的水蒸気吸着測定（Ｄｙｎａｍｉｃ Ｖａｐｏｒ Ｓｏｒｐｔｉｏｎ、ＤＶＳ）方法によって分析した。

【0045】

実験結果：吸湿増重 ΔＷ＝０．２９１０％
実験結論：式（Ｉ）化合物のＡ結晶形は吸湿性がややあり、ＸＲＰＤでは結晶形に変化がなかった。

【0046】

実施例４ 式（Ｉ）化合物の多形の製造
実施材料：式（Ｉ）化合物。
実験方法：
１．約３５ ｍｇの式（Ｉ）化合物を３つ秤量し、それぞれ１．５ ｍＬホウケイ酸ガラス瓶に置き、２００μＬの溶媒（溶媒プランは表２を参照する）を入れ、超音波で均一に混合した後、恒温シェーカーにセットし、４０℃で光を避けて２日撹拌し、迅速に遠心し、得られた固体に対してＸＲＰＤ測定を行い（湿潤品）、さらに３０℃の真空乾燥器に置いて約１５時間乾燥し、得られた乾燥サンプルに対してＸＲＰＤ測定を行った（乾燥品）。

【0047】

【表2-2】

２．約３５ ｍｇの式（Ｉ）化合物を３つ秤量し、それぞれ１．５ ｍＬホウケイ酸ガラス瓶に置き、６００μＬの溶媒（溶媒プランは表３を参照する）を入れ、超音波で均一に混合した後、恒温シェーカーにセットし、４０℃で光を避けて２日撹拌した後、サンプルをドラフトチャンバーに置いて乾燥するまで揮発させ、得られたサンプルに対してＸＲＰＤ測定を行った（湿潤品）。続いて、サンプルを３０℃の真空乾燥器に置いて約１５時間乾燥し、得られた乾燥サンプルに対してＸＲＰＤ測定を行った（乾燥品）。

【0048】

【表3】

【0049】

実験結果：表２と表３に示す。
実験結論：懸濁および揮発のいずれも新たな結晶形が見られず、式（Ｉ）化合物のＡ結晶形は安定している。

【0050】

実施例５ 式（Ｉ）化合物のＡ結晶形の溶解度試験
実験材料：式（Ｉ）化合物のＡ結晶形
実験方法：約２．０ ｍｇのサンプルを秤量して１．５ ｍＬのホウケイ酸ガラス瓶に置き、それぞれピペットで以下のような溶媒を入れ、適切に超音波で溶解させた。当該測定は室温で行われ、肉眼で溶解の様子を判断した。

【0051】

実験結果：表５に示す。

【0052】

実験結論：式（Ｉ）化合物のＡ結晶形は様々な有機溶媒における溶解度が低く、水およびアルコール系溶媒にある程度の溶解性がある。

【0053】

【表4】

【0054】

【表5】

【0055】

実験例６ 中国臨床分離菌の体外協同抑制濃度（ＳＩＣ）の測定方法
実験目的：
主要カルバペネマーゼの活性に対する式（Ｉ）化合物の抑制作用を調査する。

【0056】

実験方法：
ブロス微量希釈法によって、臨床で分離されたカルバペネマーゼ産生菌株に対する式（Ｉ）化合物の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。

【0057】

１．薬物感受性試験：２０１６年版の米国臨床検査標準協議会（ＣＬＳＩ）の文献に記載の抗微生物薬物感受性試験の方法に従って行い、微量ブロス希釈法によって通常の抗菌薬の臨床で分離された細菌のＭＩＣを測定した。

【0058】

２．菌株：ＫＰＣ−２型カルバペネマーゼ産生菌株およびＮＤＭ−１産生菌株８株ずつ、ＯＸＡ型カルバペネマーゼ産生菌株６株。全ての菌株はいずれも臨床で分離された肺炎桿菌である。

【0059】

３．濃度：抗菌薬物の濃度範囲は０．０６μｇ／ｍＬ〜１２８μｇ／ｍＬであり、計１２の濃度で、酵素阻害剤の濃度は４μｇ／ｍＬに固定した。

【0060】

４．品質管理菌株：薬物感受性試験の品質管理菌株は大腸菌ＡＴＣＣ ２５９２２およびＡＴＣＣ ３５２１８を含む。

【0061】

実験結果：

【表6】

結論：
式（Ｉ）化合物と抗生物質の組み合わせは、ＫＰＣ−２、ＮＤＭ−１またはＯＸＡ−１８１型カルバペネマーゼを産生する臨床で分離された肺炎桿菌のいずれにも強い抗菌作用を有する。特にＮＤＭ−１型カルバペネマーゼの細菌に対して、式（Ｉ）化合物の抑制作用は顕著にアビバクタムよりも優れた。

【0062】

実験例７ マウス肺部感染モデル
実験目的：
本試験の目的は、式（Ｉ）化合物がマウス肺部感染モデルにおいて有効かどうか考察し、さらにその薬物効果が参照化合物ＯＰ−０５９５に対して顕著な優勢があるかどうか評価することにある。

【0063】

実験材料：
約７週齢の雌ＣＤ−１マウスで、体重は２６〜２８グラム程度であった。シクロホスファミドは感染の４日前に１５０ ｍｇ／ｋｇ、１日前にさらに１００ ｍｇ／ｋｇ注射した。感染させた細菌は肺炎桿菌（ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５、ＫＰＣ−２）であった。式（Ｉ）化合物、参照化合物ＯＰ−０５９５はいずれも実験室で合成された。

【0064】

実験手順：
雌ＣＤ−１マウスを点鼻で肺炎桿菌に感染させ、各マウスは鼻腔から５０μＬの菌液を滴下し、投与量は各マウスに３．１４Ｅ＋０７ＣＦＵで、感染後２ｈ、４ｈ、６ｈおよび８ｈで、各群のマウスに腹腔注射でそれぞれ相応する化合物または併用化合物を投与して治療した。

【0065】

感染後１０ｈで、１、２および３群目のマウスを安楽死させた後、肺を取って１０ ｍＬの無菌生理食塩水を入れた５０ ｍＬ遠心管に入れ、湿潤氷の上に移してＢＳＬ−２実験室でＣＦＵ計数を行い、感染後２０ｈで、４、５および６群目のマウスを安楽死させ、処理手順は前記と同様であった。

【0066】

肺をＩＫＡ Ｔ１０ホモジナイザーで研磨し（最高回転数２０Ｓ、１回繰返し）、均質化液を勾配希釈した後、トリプトンソイブロス寒天プレートに接種し、３７度のインキュベーターに入れて細菌培養を行い、２４ｈ後、プレートを取り出し、プレートにおける各希釈勾配の均質化液から生えた単一集落数を数え、そしてそれから各マウスの肺部の菌担持量を計算した。

【0067】

実験プラン：

【表7】

実験結果：
表７の実験プランに従い、薬物効果の結果は図５を参照する。薬物効果の結果図から、二つの異なる投与量では、式（Ｉ）化合物群のマウスモデルにおける体内薬物効果は参照化合物ＯＰ−０５９５群と比べ、菌担持量が０．５〜１．５ｌｏｇ低下した。式（Ｉ）化合物の薬物効果は顕著に参照化合物ＯＰ−０５９５よりも優れた。
体外抗菌、体外酵素抑制実験、体内薬物効果実験は、異なる面から実施例を評価し、実施例における式（Ｉ）化合物はいずれも参照化合物ＯＰ−０５９５に対する顕著な優勢を示した。日々深刻になっている薬剤耐性菌の感染に対抗する臨床新薬が切望されている現状において、実施例における化合物はこの問題を解決する非常に将来性のある開発可能な薬物である。現在注目されている参照化合物ＯＰ−０５９５と比べ、式（Ｉ）化合物が将来の臨床においてより優れた臨床効果を示すことが予想される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】