特許 6974660 抗菌活性を有する６−アミノウラシルカス酸エステルおよびその調製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】6974660

(24)【登録日】2021年11月9日

(45)【発行日】2021年12月1日

(54)【発明の名称】抗菌活性を有する６−アミノウラシルカス酸エステルおよびその調製方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 239/545 20060101AFI20211118BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20211118BHJP

   A61K 31/513 20060101ALN20211118BHJP

【ＦＩ】

   C07D239/545CSP

   A61P31/04

   !A61K31/513

【請求項の数】6

【外国語出願】

【全頁数】11

(21)【出願番号】特願2020-168910(P2020-168910)

(22)【出願日】2020年10月6日

【審査請求日】2021年1月29日

(31)【優先権主張番号】16/909,862

(32)【優先日】2020年6月23日

(33)【優先権主張国】US

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】521378163

【氏名又は名称】シーアン・カンユアンシェン・バイオメディカル・テクノロジー・カンパニー・リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＸＩ’ＡＮ ＫＡＮＧＹＵＡＮＳＨＥＮＧ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110001818

【氏名又は名称】特許業務法人Ｒ＆Ｃ

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ジャ

(72)【発明者】

【氏名】コン，チュンチュン

(72)【発明者】

【氏名】チャオ，グアイピン

(72)【発明者】

【氏名】ヤオ，ウェンボ

(72)【発明者】

【氏名】シュー，ムーダン

(72)【発明者】

【氏名】ジエン，ヤンリン

(72)【発明者】

【氏名】プー，フアイン

【審査官】 高森 ひとみ

(56)【参考文献】

【文献】 中国特許出願公開第１０５８８４６４５（ＣＮ，Ａ）

【文献】 特開平０５−００１０４４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６３−２８７７７０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 STASEVYCH, M. et al.，Synthesis and investigation of antimicrobial and antioxidant activity of anthraquinonylhydrazones，Monatshefte fur Chemie - Chemical Monthly，2018年，Vol.149, No.6，pp.1111-1119，DOI:10.1007/s00706-018-2157-3

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記の式（Ｉ）の化合物。

【化1】

【請求項2】

式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と反応させて前記式（Ｉ）の化合物を得る工程を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を調製する方法。

【化2】

【請求項3】

前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、下記の工程、
前記式（ＩＩ）の化合物および前記式（ＩＩＩ）の化合物を、１：１〜１：１．３のモル比で反応容器中に入れる工程と、
有機溶媒および触媒量のＥＤＣを窒素雰囲気下で加えて反応混合物を得る工程と、
前記反応混合物を５０〜８０℃で４〜８時間加熱する工程と、
前記反応混合物を濃縮し、前記反応混合物を酢酸エチルで抽出して粗生成物を得る工程と、
溶離剤として石油エーテルおよび酢酸エチルを用いてシリカゲルフレッシュクロマトグラフィーカラム上で前記粗生成物を精製して前記式（Ｉ）の化合物を得る工程と、を含む、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記有機溶媒はトルエン、テトラヒドロフランまたはアセトニトリルである、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物とのモル比は１：１．１である、前記反応混合物を７０℃で加熱する、前記反応混合物を６時間加熱する、および、前記溶離剤は石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０である、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、下記の工程、
前記式（ＩＩ）の化合物、触媒、およびイオン性液体を窒素雰囲気下で反応容器中に入れる工程であって、前記触媒は１２−モリブド珪酸水和物（Ｈ_６Ｍｏ_１２Ｏ_４１Ｓｉ）である、工程と、
前記式（ＩＩＩ）の化合物を前記反応容器に加えて反応混合物を形成する工程と、
前記反応混合物を２５〜５０℃で５〜１０時間加熱する工程と、
前記反応混合物を分液漏斗に入れ、粗生成物を分離する工程と、
メタノール中で再結晶して前記粗生成物を精製し、前記式（Ｉ）の化合物を得る工程と、
前記イオン性液体をリサイクルする工程と、を含む、請求項２に記載の方法。

【請求項6】

前記イオン性液体は１−ブチル−３−メチルイミダゾリウムテトラフルオロホウ酸塩（［ＢＭＩＭ］［ＢＦ_４］）である、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物は、１：１〜１：１．３のモル比を有する、前記反応混合物を３０℃で加熱する、および、前記反応混合物を８時間加熱する、請求項５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は医薬化学の分野に関し、特に、抗菌活性を有する６−アミノウラシルカス酸エステルおよびその調製方法に関する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
抗生物質が広く使用されるようになって、抗生物質の過剰使用がより一般的になりつつある。対応する抗生物質に耐性を発現する微生物が出現し、ヒトの健康に対する新たな脅威となっている。薬剤耐性細菌の出現は、感染症の治癒の困難さを増す。グラム陽性細菌、グラム陰性細菌ともに薬剤耐性の傾向があり、グラム陽性細菌の薬剤耐性の問題はより深刻である。メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）は臨床でよくみられる毒性の強い細菌である。その発見以来、ほぼ世界中に広がっており、臨床的な抗感染治療において非常に厳しい問題である。新規な抗菌薬剤の開発が急務であり、世界中の多くの製薬企業が多剤耐性細菌に対応できる新規な薬剤を積極的に探している。構造活性相関の指針のもとに既存の抗菌薬剤の化学構造を改変することは、薬剤耐性細菌に対する新規な薬剤を開発するための一般的な方法である。

【0003】

カス酸（cassic acid）（レイン（rhein）としても知られる）は天然のアントラキノン化合物（式（ＩＩ）の化合物）であり、これは、種々の生物学的および薬理学的活性を有し、そして、ルバーブから抽出され得る。糖・脂質代謝の改善、肝臓の保護、抗線維化、抗酸化、抗炎症、抗菌、抗がん、抗腫瘍など多くの作用を有している。しかしながら、その臨床応用はその水溶性が乏しく、生物学的利用能が低いために、かなりの程度まで制限される。

【0004】

６−アミノウラシル（式（ＩＩＩ）の化合物）は、医薬品の合成に使用される。例えば、カフェイン、テオフィリン、ＳＤＭなどの中間体として使用される。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明では、６−アミノウラシル構造によりカス酸を改変して、６−アミノウラシルカス酸エステルを得る。予備的な抗菌活性実験は化合物が優れた抗菌活性を有し、多剤耐性細菌によって引き起こされる感染症の治療において高い医学的研究および応用価値を有することを示す。

【課題を解決するための手段】

【0006】

発明の概要
一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）を有する化合物（６−アミノウラシルカス酸エステル）を提供する。

【化1】

【0007】

別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製する方法を提供する。この方法は、有機溶媒中で式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と反応させて前記式（Ｉ）の化合物を得る工程を含む。

【化2】

【0008】

別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、下記の工程、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物とを１：１〜１：１．３のモル比で反応容器中に入れる工程と、有機溶媒および触媒量のＥＤＣを加えて反応混合物を得る工程と、前記反応混合物を５０〜８０℃で４〜８時間加熱する工程と、前記反応混合物を濃縮し、前記反応混合物を酢酸エチルで抽出して粗生成物を得る工程と、石油エーテルおよび酢酸エチルを溶離剤として用いるシリカゲルフレッシュクロマトグラフィーカラム上で前記粗生成物を精製して前記式（Ｉ）の化合物を得るス工程と、を含む。

【0009】

別の実施形態では、前記有機溶媒は、トルエン、テトラヒドロフランまたはアセトニトリルである。

【0010】

別の実施形態では、前記有機溶媒はアセトニトリルである。

【0011】

別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物とのモル比は１ ： １．１である。

【0012】

別の実施形態では、前記反応混合物を７０℃で加熱する。

【0013】

別の実施形態では、前記反応混合物を６時間加熱する。

【0014】

別の実施形態では、前記溶離剤は石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０である。

【0015】

別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、下記の工程、前記式（ＩＩ）の化合物、触媒、およびイオン性液体を窒素雰囲気下で反応容器中に入れ、前記触媒は１２−モリブド珪酸水和物（Ｈ_６Ｍｏ_１２Ｏ_４１Ｓｉ）である工程と、前記式（ＩＩＩ）の化合物を前記反応容器に加えて反応混合物を形成する工程と、前記反応混合物を２５〜５０℃で５〜１０時間加熱する工程と、前記反応混合物を分液漏斗中に入れて粗生成物を分離する工程と、メタノール中での再結晶によって前記粗生成物を精製して前記式（Ｉ）の化合物を得る工程と、イオン性液体をリサイクルする工程と、を含む。

【0016】

別の実施形態では、前記イオン性液体は１−ブチル−３−メチルイミダゾリウムテトラフルオロホウ酸塩（［ＢＭＩＭ］［ＢＦ_４］）である。

【0017】

別の実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物とのモル比は１：１．１である。

【0018】

別の実施形態では、前記反応混合物を３０℃で加熱する。

【0019】

別の実施形態では、前記反応混合物を８時間加熱する。

【0020】

前記した一般的な説明と、下記の詳細な説明とは、どちらも例示的および説明的であり、特許請求される本発明のさらなる説明を提供するように意図されていることを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【0021】

本発明のさらなる理解を提供するために含まれ、本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は本発明の実施形態を示し、説明と共に本発明の原理を説明するのに役立つ。

【図1】図１は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対する６−アミノウラシルカス酸エステルのin vitroでの抗菌活性の結果を示す。

【図2】図２は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するカス酸のin vitroでの抗菌活性の結果を示す。

【図3】図３は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対する６−アミノウラシルカス酸エステルのin vitroでの抗菌活性の結果を示す。

【図4】図４は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するゲンタマイシンのin vitroでの抗菌活性の結果を示す。

【図5】図５は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するセファゾリンナトリウムのin vitroでの抗菌活性の結果を示す。

【図6】図６は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するセフトリアキソンナトリウムのin vitroでの抗菌活性の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0022】

図示の実施形態の詳細な説明
次に、本発明の実施形態を詳細に参照し、その例を添付の図面に示す。下記の実施例は本発明を説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。

【0023】

実施例１
Ｎ−（２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−４−イル）−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−カルボキサミド（式（Ｉ）の化合物）の調製

【0024】

２５０ｍＬの三口フラスコ中で、１７０．４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のカス酸および１１５．０ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）を、窒素雰囲気下で９０ｍＬのアセトニトリルに溶解した。８３．８ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）の６−アミノウラシルを１５ｍＬのアセトニトリルに溶解し、分液漏斗によってフラスコにゆっくりと滴下した。滴下終了後、７０℃まで昇温し、６時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を溶離剤として、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥して、１６９．４ｍｇの表題化合物を収率７１．８５％で得た。

【0025】

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ（ｐｐｍ）：１１．９１（１Ｈ、ｓ）、１０．０７（１Ｈ、ｓ）、８．１５（３Ｈ、ｄ）、７．７８（１Ｈ、ｓ）、７．０７（１Ｈ、ｄ）、６．９９（１Ｈ、ｓ）、６．８３（３Ｈ、ｓ）；^１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ（ｐｐｍ）：１９１．８、１８１．４、１６５．８、１６１．９、１５７．２、１３８．５、１３８．０、１３４．３、１３３．７、１２４．６、１１９．９、１１６．９、１１５．７。

【0026】

実施例２
化合物Ｎ−（２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−４−イル）−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−カルボキサミドの調製

【0027】

２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、１７０．４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のカス酸および１１５．０ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で９０ｍＬのトルエンに溶解した。８３．８ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）の６−アミノウラシルを１５ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によってフラスコにゆっくりと滴下した。滴下終了後、５０℃まで昇温し、８時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を溶離剤として、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥して、１６１．６ｍｇの表題化合物を収率６８．５４％で得た。

【0028】

実施例３
化合物Ｎ−（２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−４−イル）−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−カルボキサミドの調製

【0029】

２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、１７０．４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のカス酸および１１５．０ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で９０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した。８３．８ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）の６−アミノウラシルを１５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、分液漏斗によりフラスコにゆっくり滴下した。滴下終了後、８０℃まで昇温し、４時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を溶離剤として、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに精製し、溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥させて、１４４．６ｍｇの表題化合物を収率６１．３２％で得た。

【0030】

実施例４
化合物Ｎ−（２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−４−イル）−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−カルボキサミドの調製

【0031】

２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、１７０．４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のカス酸および１１５．０ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で９０ｍＬのトルエンに溶解した。９１．４ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）の６−アミノウラシルを１５ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によってフラスコにゆっくりと滴下した。滴下終了後、６５℃まで昇温し、６時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を溶離剤として、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製し、溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥させて、１５８．３ｍｇの表題化合物を収率６７．１４％で得た。

【0032】

実施例５
化合物Ｎ−（２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−４−イル）−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−カルボキサミドの調製

【0033】

２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、１７０．４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のカス酸および１１５．０ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で９０ｍＬのアセトニトリルに溶解した。９１．４ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）の６−アミノウラシルを１５ｍＬのアセトニトリルに溶解し、分液漏斗によってフラスコにゆっくりと滴下した。滴下終了後、７０℃まで昇温し、７時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を溶離剤として、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに精製し、溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥させて、１４５．２ｍｇの表題化合物を収率６１．５６％で得た。

【0034】

実施例６
化合物Ｎ−（２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−４−イル）−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−カルボキサミドの調製

【0035】

２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、１７０．４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のカス酸および１１５．０ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣを、窒素雰囲気下で９０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した。８３．８ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）の６−アミノウラシルを１５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、分液漏斗によりフラスコにゆっくり滴下した。滴下終了後、６０℃まで昇温し、５時間反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。濃縮溶液を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、石油エーテル：酢酸エチル＝３：１０を溶離剤として、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりさらに精製し、溶離剤を減圧下で濃縮し、乾燥して、１５４．１ｍｇの表題化合物を収率６５．３３％で得た。

【0036】

実施例７
化合物Ｎ−（２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−４−イル）−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−カルボキサミドの調製

【0037】

２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、１７０．４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のカス酸、８３．８ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）の６−アミノウラシルおよび１０．３ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）のモリブド珪酸を、窒素雰囲気下で１００ｍＬの１−ブチル−３−メチルイミダゾリウムテトラフルオロホウ酸塩に溶解した。完全に溶解した後、温度を３０℃に上げ、反応を８時間行った。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。反応混合物系を層に分離させて、粗生成物を得た。粗生成物を４０ｍＬのメタノールで再結晶し、乾燥させて、１９５．２ｍｇの表題化合物を収率８２．７９％で得た。

【0038】

実施例８
化合物Ｎ−（２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−４−イル）−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−カルボキサミドの調製

【0039】

２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で、１７０．４ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のカス酸、８３．８ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）の６−アミノウラシルおよび１０．３ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）のモリブド珪酸を、窒素雰囲気下で１００ｍＬの１−ブチル−３−メチルイミダゾリウムテトラフルオロホウ酸塩に溶解した。完全に溶解した後、温度を５０℃に上げ、反応を５時間行った。薄層クロマトグラフィーを用いて反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、保護装置を取り外した。反応混合物系を層に分離させて、粗生成物を得た。粗生成物を４０ｍＬのメタノールで再結晶し、乾燥させて、１８３．６ｍｇの表題化合物を収率７７．８５％で得た。

【0040】

実施例９
本発明の化合物の抗菌活性試験

【0041】

ゲンタマイシン、セファゾリンナトリウムおよびセフトリアキソンナトリウムを陽性対照とするマイクロブロス希釈法により測定した化合物の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）。

【0042】

実験菌株は、メチシリン耐性グラム陽性細菌：メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）ＭＲＳＡ １８−２２２、１８−５７５、多剤耐性グラム陰性細菌：バンコマイシン耐性腸球菌（enterococci）ＶＲＥ １８−８０、１８−９４、多剤耐性緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７７４、１８−２０２、カルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニ（Acinetobacter baumannii） ＣＲ−ＡＢ １８−１８３、１８−５６０であった。すべての実験菌株はフダン大学（フダン大学抗生物質研究所）に所属するフアサン病院から供与され、ルーチンの同定後に使用された。

【0043】

試験菌株の調製：
ＭＨＢ培地の調製：２０．０ｇのＭＨＢ培地を、１Ｌの蒸留水に加えて、完全に溶解するまで沸騰させ、コニカルボトルに充填し、１２１℃で１５分間滅菌した。

【0044】

実験菌株を対数増殖期まで培養した、無菌条件下で、実験菌株を１００ｍＬのＭＨＢ培地に接種し、３７℃の恒温恒湿インキュベーター中で２０〜２２時間インキュベートした。

【0045】

保存溶液の調製：
試験する試料を秤量し、１％ ＤＭＳＯ溶液で溶解し、濃度２５６０μｇ／ｍＬの保存溶液を調製し、陽性標準物質を秤量し、無菌蒸留水で溶解し、濃度２５６０μｇ／ｍＬの保存溶液を調製する。

【0046】

細菌懸濁液の調製：
無菌条件下で、対数増殖期まで培養した実験菌株をＭＨＢ培地で０．５ＭＣＦ濁度基準に調整し、１：１０に従って希釈し、１０^６ ＣＦＵ／ｍＬの濃度の細菌懸濁液をスタンバイ用に調製した。

【0047】

保存溶液の希釈および実験菌株の接種：
無菌条件下で、保存溶液を２５６μｇ／ｍＬ溶液に希釈した。滅菌の９６ウェルプレートをとり、１２番目のウェルに２００μＬのＭＨＢ培地を加え、各ウェルに１００μＬのＭＨＢ培地を加える。最初のウェルに１００μＬの陽性対照溶液を加え、よく混合し、それから１００μＬを吸引し、廃棄する。２番目のウェルに１００μＬの化合物試料溶液を加え、よく混合した後、３番目のウェルに１００μＬをピペットで移す。混合後、４番目のウェルに１００μＬをピペットで移し、このようにして１１番目のウェルまで希釈する。最後に、１００μＬを１１番目のウェルからピペットで採取し、廃棄した。１２番目の穴は、薬剤を含まない増殖対照であった。これまでのところ、陽性標準物質の濃度は１２８μｇ／ｍＬであり、試料溶液の濃度はそれぞれ１２８、６４、１６、８、４、２、１、０．５、０．２５μｇ／ｍＬである。次に、調製した細菌懸濁液１００μＬを各ウェルに加えて、各ウェル中の細菌液の終濃度を５×１０^５ＣＦＵ／ｍＬとする。

【0048】

インキュベーション：
実験菌株を接種した９６ウェルプレートを被覆し、３７℃の恒温恒湿ボックス内で２０〜２２時間インキュベートする。

【0049】

ＭＩＣエンドポイントの解釈：
黒色バックグラウンド下の９６ウェルプレート中の細菌の増殖を完全に阻害することができる濃度は、細菌に対するサンプルの最低発育阻止濃度である。

【0050】

図１〜６において、１２個のウェルは１２群を表し、左から右に、陽性、１２８μｇ／ｍＬ、６４μｇ／ｍＬ、３２μｇ／ｍＬ、１６μｇ／ｍＬ、８μｇ／ｍＬ、４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、０．２５μｇ／ｍＬ、０．０６２５μｇ／ｍＬ、陰性である。図１は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するレイン６−アミノウラシル誘導体のin vitroでの抗菌活性を示したものである。図２は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するレインのin vitroでの抗菌活性を示したものである。図３は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対する６−アミノウラシルのin vitroでの抗菌活性を示す。図４は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するゲンタマイシンのin vitroでの抗菌活性を示す。図５は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するセファゾリンナトリウムのin vitroでの抗菌活性を示す。図６は、薬剤耐性細菌ＭＤＲ−ＰＡ １８−１７４に対するセフトリアキソンナトリウムのin vitroでの抗菌活性を示す。その結果を表１に示す。

【0051】

【表1】

【0052】

図１〜６および表１の実験結果によると、カス酸および６−アミノウラシルは薬剤耐性細菌に対して阻止作用を示さなかったが、６−アミノウラシルカス酸エステルはバンコマイシン耐性腸球菌ＶＲＥ（ＭＩＣ＝６４μｇ／ｍＬ）と同様に多剤耐性緑膿菌ＭＤＲ−ＰＡ（ＭＩＣ＝１２８μｇ／ｍＬ）に対して強い阻止作用を示した。要約すると、本発明の６−アミノウラシルカス酸エステルは、グラム陰性細菌の多剤耐性緑膿菌の抗菌薬剤候補として、および、さらなる前臨床研究に使用することができる。

【要約】      （修正有）

【課題】抗菌活性を有する６−アミノウラシルカス酸エステルおよびその調製方法を提供する。
【解決手段】下記反応式により式（Ｉ）を有する化合物を調製する方法である。

【選択図】なし

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】