特許 6976263 免疫調節剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6976263

(24)【登録日】2021年11月11日

(45)【発行日】2021年12月8日

(54)【発明の名称】免疫調節剤

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/56 20060101AFI20211125BHJP

   C07K 7/08 20060101ALI20211125BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20211125BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20211125BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20211125BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20211125BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20211125BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20211125BHJP

【ＦＩ】

   C07K7/56ZNA

   C07K7/08

   A61K38/10

   A61K45/00

   A61P37/04

   A61P31/12

   A61P35/00

   A61P43/00 111

【請求項の数】14

【全頁数】130

(21)【出願番号】特願2018-546499(P2018-546499)

(86)(22)【出願日】2017年3月2日

(65)【公表番号】特表2019-512478(P2019-512478A)

(43)【公表日】2019年5月16日

(86)【国際出願番号】US2017020304

(87)【国際公開番号】WO2017151830

(87)【国際公開日】20170908

【審査請求日】2020年2月28日

(31)【優先権主張番号】62/303,673

(32)【優先日】2016年3月4日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】391015708

【氏名又は名称】ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー

【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ−ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(74)【代理人】

【識別番号】100162695

【弁理士】

【氏名又は名称】釜平 双美

(74)【代理人】

【識別番号】100156155

【弁理士】

【氏名又は名称】水原 正弘

(72)【発明者】

【氏名】マーティン・パトリック・アレン

(72)【発明者】

【氏名】エリック・ピー・ギリス

(72)【発明者】

【氏名】デイビッド・アール・ラングレー

(72)【発明者】

【氏名】マイケル・マシュー・ミラー

(72)【発明者】

【氏名】エリック・マル

(72)【発明者】

【氏名】リ−チアン・スン

(72)【発明者】

【氏名】カプ−スン・イェウン

(72)【発明者】

【氏名】キャサリン・エイ・グラント−ヤング

(72)【発明者】

【氏名】ニコラス・エイ・ミーンウェル

(72)【発明者】

【氏名】ポール・マイケル・スコラ

【審査官】 坂崎 恵美子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１４／１５１６３４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１５−５１２９１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１５／０４４９００（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 ChemMedChem，2016年，Vol.11，p.787-794，（2015年11月13日オンライン掲載), DOI:10.1002/cmdc.201500450

【文献】 Journal of the American Chemical Society，2013年，Vol.135, No.32，p.11990-11995

【文献】 Molecular Medicine Reports，2012年，Vol.6，p.553-557

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｋ ７／５６

Ａ６１Ｋ ３８／１０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）：

【化1】

［式中：
Ａは、

【化2】

であり；
ここで：

【化3】

はカルボニル基との結合点を示し、

【化4】

は窒素原子との結合点を示し；
ｚは０であり；
ｗは１であり；
Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素であり；
Ｒ^ｚは、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ^１６であり；
Ｒ^ａおよびＲ^ｊは、各々、水素およびメチルより独立して選択され；
Ｒ^ｃ、Ｒ^ｆ、Ｒ^ｈ、Ｒ^ｉ、Ｒ^ｍ、およびＲ^ｎは水素であり；
Ｒ^１はフェニルＣ_１−Ｃ_３アルキルであり、ここで該フェニルがヒドロキシで置換されてもよく；
Ｒ^８は−（ＣＨ_２）インドリルであり；
Ｒ^１０は、−（ＣＨ_２）インドリルおよび−（ＣＨ_２）ベンゾチエニルより選択され、その各々が−ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈで置換されてもよく；
Ｒ^３は−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１−Ｃ_７アルキル、およびＣＦ_３Ｃ（Ｏ）−で置換されてもよい−ＣＨ_２（イミダゾリル）より選択され；
Ｒ^６は、Ｃ_１−Ｃ_７アルキルおよび−（ＣＨ_２）_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２より選択されるか、あるいはＲ^３とＲ^５またはＲ^６の一方が一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^９はヒドロキシメチルおよび−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈより選択され；
Ｒ^１３は、Ｃ_１−Ｃ_７アルキルおよび−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２より選択されるか、あるいはＲ^９とＲ^１３は一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^１６は、水素、−ＣＨＲ^１７Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＣＨＲ^１７Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨＲ^１８Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および−ＣＨＲ^１７Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨＲ^１８Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２より選択され；ここでＲ^１７は水素および−ＣＨ_２ＯＨより選択され、Ｒ^１８は水素およびメチルより選択され；
Ｒ^７は水素であるか；あるいはＲ^７とＲ^１６は一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成するか；またはＲ^７およびＲ^ｇは、それらの結合する原子と一緒になって、ヒドロキシ基で置換されてもよいピロリジン環を形成する；
ただし、Ｒ^３、Ｒ^９、およびＲ^７の少なくとも１つは架橋を形成し；
Ｒ^２はＣ_１−Ｃ_７アルキルであり；
Ｒ^１１およびＲ^１２はＣ_１−Ｃ_７アルキルであり；
Ｒ^ｂは、メチルであるか、またはＲ^ｂとＲ^２は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し；ここで各環はアミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１〜４個の基で置換されてもよく；
Ｒ^ｄとＲ^４は、それらの結合する原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し；ここで該環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシ、およびフェニルより独立して選択される１〜４個の基で置換されてもよく；
Ｒ^ｅは、水素またはメチルであるか、またはＲ^ｅおよびＲ^５は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し；ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１〜４個の基で置換されてもよく；
Ｒ^ｇは、水素またはメチルであるか、またはＲ^ｇとＲ^７は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し得；ここで各環は、アミノ、ハロ基で置換されてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ基で置換されてもよいイソキノリニルオキシ、ハロ基で置換されてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリルより独立して選択される１〜４個の基で置換されてもよく；ならびに、ピロリジンおよびピペリジン環は、シクロヘキシル、フェニル、またはインドール基に縮合してもよく；
Ｒ^ｋは、水素またはメチルであるか、またはＲ^ｋとＲ^１１は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し；ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１〜４個の基で置換されてもよく；および
Ｒ^ｌはメチルであるか、またはＲ^ｌとＲ^１２は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジンおよびピロリジンより選択される環を形成し、ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１〜４個の基で置換されてもよい］
で示される化合物、またはその医薬的に許容される塩。

【請求項2】

下式：

【化5】

【化6】

【化7】

【化8】

【化9】

【化10】

【化11】

【化12】

【化13】

【化14】

【化15】

【化16】

【化17】

【化18】

【化19】

【化20】

【化21】

【化22】

【化23】

【化24】

【化25】

【化26】

【化27】

【化28】

【化29】

【化30】

【化31】

【化32】

および

【化33】

より選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩。

【請求項3】

免疫応答を強化、刺激および／または亢進するための、請求項１または２に記載の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【請求項4】

医薬組成物を投与する前に、後に、または同時に、別の薬剤をさらに投与することを特徴とする、請求項３に記載の医薬組成物。

【請求項5】

別の薬剤が、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性剤、および／または免疫応答調整剤である、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

別の薬剤がＨＤＡＣ阻害剤である、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項7】

別の薬剤がＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニストである、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項8】

がん細胞を成長、増殖または転移の阻害するための、請求項１または２に記載の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【請求項9】

がんが、黒色腫、腎細胞がん、扁平非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平ＮＳＣＬＣ、結腸直腸がん、去勢抵抗性前立腺がん、卵巣がん、胃がん、肝細胞がん、膵臓がん、頭頸部扁平上皮がん、食道、消化器および乳房のがん腫、および血液悪性腫瘍より選択される、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項10】

感染病を治療するための、請求項１または２に記載の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【請求項11】

感染病がウイルスにより引き起こされる、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項12】

ウイルスが、ＨＩＶ、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、およびインフルエンザより選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

敗血性ショックを治療するための、請求項１または２に記載の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【請求項14】

ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１および／またはＣＤ８０との相互作用を遮断するための、請求項１または２に記載の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本願は、２０１６年３月４日付け出願の、その内容のすべてがすべて本明細書に組み込まれる、米国特許出願番号６２／３０３，６７３の利益を主張する。

【0002】

（発明の分野）
本開示は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ８０／ＰＤ−Ｌ１のタンパク質／タンパク質の相互作用を阻害し、かくして、がんおよび感染疾患を含む、種々の疾患を改善するのに有用である、新規な大環状化合物を提供する。

【背景技術】

【0003】

Programmed Death 1（ＰＤ−１）タンパク質は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含む、ＣＤ２８ファミリーの受容体の阻害作用性メンバーである。ＰＤ−１は活性化したＢ細胞、Ｔ細胞および骨髄細胞にて発現する（Agataら、後掲；Okazakiら、Curr. Opin. Immunol., 14：779-782 (2002)；Bennettら、J. Immunol., 170：711-718 (2003)）。

【0004】

ＰＤ−１タンパク質は、Ｉｇ遺伝子スーパーファミリーの一員である、５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である（Agataら、Int. Immunol., 8：765-772 (1996)）。ＰＤ−１は膜近位性免疫受容体チロシン抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）および膜遠位性チロシン依存性スイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を有する（Thomas, M.L.、J. Exp. Med., 181：1953-1956 (1995)；Vivier, E.ら、Immunol. Today, 18：286-291 (1997)）。ＰＤ−１は、構造上はＣＴＬＡ−４と類似するが、ＣＤ８０ ＣＤ８６（Ｂ７−２）の結合に重要な、MYPPYモチーフを欠く。ＰＤ−１に対して２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）が同定された。ＰＤ−１を発現するＴ細胞の活性化は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２を発現する細胞との相互作用により、ダウンレギュレートされることが分かった（Freemanら、J. Exp. Med., 192：1027-1034 (2000)；Latchmanら、Nat. Immunol., 2：261-268 (2001)；Carterら、Eur. J. Immunol., 32：634-643 (2002)）。ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２は両方とも、ＰＤ−１と結合するが、他のＣＤ２８ファミリーのメンバーと結合しない、Ｂ７タンパク質ファミリーのメンバーである。ＰＤ−Ｌ１リガンドは種々のヒトがんにて豊富に存在する（Dongら、Nat. Med., 8：787-789 (2002)）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１とが相互に作用することで、腫瘍にて浸潤するリンパ球が減少し、Ｔ細胞受容体が介在する増殖が減少し、がん細胞による免疫の回避がもたらされる（Dongら、J. Mol. Med., 81：281-287 (2003)；Blankら、Cancer Immunol. Immunother., 54：307-314 (2005)；Konishiら、Clin. Cancer Res., 10：5094-5100 (2004)）。免疫抑制作用は、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１との局所的相互作用を阻害することにより、解除され、その上、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ２との相互作用が遮断されると、その効果は相加的となり得る（Iwaiら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99：12293-12297 (2002)；Brown ら、J. Immunol., 170：1257-1266 (2003)）。

【0005】

ＰＤ−Ｌ１はＣＤ８０と相互作用することも分かっている（Butte MJら、Immunity；27：111-122 (2007)）。ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０の相互作用は、免疫細胞の発現について、阻害的であることが分かった。この相互作用を遮断することでこの阻害的作用が無効とされることが分かった（Paterson AMら、J Immunol., 187：1097-1105 (2011)；Yang Jら、J Immunol. Aug 1；187(3)：1113-9 (2011)）。

【0006】

ＰＤ−１を発現するＴ細胞がそのリガンドを発現する細胞と接触すると、抗原刺激に応答して機能的活性が、増殖、サイトカイン分泌、細胞傷害を含め、減少する。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の相互作用は、感染または腫瘍の治癒の間に、または自己免疫寛容の発達の間に、免疫応答をダウンレギュレートする（Keir, M.E.ら、Annu. Rev. Immunol., 26：Epub (2008)）。慢性抗原刺激、例えば、腫瘍疾患または慢性感染の罹患の間に起こる刺激は、ＰＤ−１を高レベルで発現し、慢性抗原に対する活性については機能障害を起こす、Ｔ細胞を生じさせる（Kimら、Curr. Opin. Imm. (2010)を参照のこと）。これは「Ｔ細胞疲弊」と称される。Ｂ細胞もＰＤ−１／ＰＤ−リガンド抑制および「疲弊」を示す。

【0007】

ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１のライゲーションの、ＰＤ−Ｌ１に拮抗する抗体を用いての遮断は、多数の系においてＴ細胞の活性化を回復かつ増大させることが知られている。進行がんの患者は、ＰＤ−Ｌ１に拮抗するモノクローナル抗体を用いた療法より利益を受ける（Brahmerら、New Engl. J. Med. (2012)）。腫瘍および慢性感染の前臨床性動物実験において、モノクローナル抗体によるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の遮断が、免疫応答を強化し、腫瘍拒絶反応または感染の制御をもたらし得ることが分かった。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断を介する抗腫瘍免疫療法は、多くの組織学的に異なる腫瘍に対して治療的免疫応答を増大させ得る（Dong, H.ら、「Ｂ７−Ｈ１経路、および腫瘍免疫性の回避におけるその役割（B7-H1 pathway and its role in the evasion of tumor immunity）」, J. Mol. Med., 81(5)：281-287 (2003)；Dong, H.ら、「腫瘍関連のＢ７−Ｈ１は、Ｔ細胞アポトーシス：可能性のある免疫回避機構を促進する（Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion）」, Nat. Med., 8(8)：793-800 (2002)）。

【0008】

ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の相互作用を干渉することで、慢性感染した系においてＴ細胞活性の強化が引き起こされる。ＰＤ−Ｌ１の遮断は、リンパ球性脈路髄膜炎ウイルス感染のマウスにおいて、ウイルスクリアランスの改善および免疫力の回復を惹起した（Barber, D.L.ら、「慢性ウイルス感染の間に疲弊したＣＤ８ Ｔ細胞の機能の回復（Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection）」, Nature, 439 (7077)：682-687 (2006)）。ＨＩＶ−１に感染したヒト化マウスは、ウイルス血症に対する保護の強化、およびＣＤ４＋ Ｔ細胞のウイルス枯渇を示す（Palmerら、J. Immunol. (2013)）。ＰＤ−Ｌ１に対するモノクローナル抗体を通してＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１を遮断することにより、インビトロにおいて、ＨＩＶ患者から由来のＴ細胞にて抗原特異的機能性を回復させることができ（Day, Nature (2006)；Petrovas、J. Exp. Med. (2006)；Trautman、Nature Med. (2006)；D’Souza、J. Immunol. (2007)；Zhang、Blood (2007)；Kaufmann、Nature Imm. (2007)；Kasu、J. Immunol. (2010)；Porichis、Blood (2011)）、ＨＣＶ患者（Golden-Mason、J. Virol. (2007)；Jeung、J. Leuk. Biol. (2007)；Urbani、J. Hepatol. (2008)；Nakamoto、PLoS Path. (2009)；Nakamoto、Gastroenterology (2008)）、そしてＨＢＶ患者から由来のＴ細胞にて抗原特異的機能性を回復させることができる（Boni、J. Virol. (2007)；Fisicaro、Gastro. (2010)；Fisicaroら、Gastroenterology (2012)；Boniら、Gastro. (2012)；Pennaら、J. Hep. (2012)；Raziorrough、Hepatology (2009)；Liang、World J. Gastro. (2010)；Zhang、Gastro. (2008)）。

【0009】

ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０相互作用の遮断も免疫力を刺激することが分かった（Yang J.ら、J Immunol. Aug 1；187(3)：1113-9 (2011)）。ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０相互作用を遮断することで得られる免疫刺激は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ２相互作用のさらなる遮断と合わさって強化されることが分かった。

【0010】

免疫細胞の表現型の変化が敗血性ショックにおける重要な因子であると仮定される（Hotchkissら、Nat Rev Immunol (2013)）。これらの変化は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１のレベルを高くすることを包含する（Guignantら、Crit. Care (2011)）。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１のレベルが上がった敗血性ショックの患者からの由来の細胞は、高レベルのＴ細胞アポトーシスを示す。ＰＤ−Ｌ１を指向する抗体は、免疫細胞アポトーシスのレベルを減少させ得る（Zhangら、Crit. Care (2011)）。さらには、ＰＤ−１発現を欠くマウスは、野生型マウスより敗血性ショック症候に対する耐性が強い（Yang J.ら、J Immunol. Aug 1；187(3)：1113-9 (2011)）。実験は、ＰＤ−Ｌ１の、抗体を用いる相互作用の遮断が、不適切な免疫応答を抑制し、疾患の兆候を改善し得ることを示した。

【0011】

慢性抗原に対する免疫応答の強化に加えて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の遮断も、慢性感染との関連でワクチン接種（治療としてのワクチン接種を含む）に対する応答を強化することが分かった（Ha, S.J.ら、「慢性感染の間にＰＤ−１介在性阻害シグナルを遮断することによる治療としてのワクチン接種の強化（Enhancing therapeutic vaccination by blocking PD-1-mediated inhibitory signals during chronic infection）」, J. Exp. Med., 205(3)：543-555 (2008)；Finnefrock, A.C.ら、「アカゲザルでのＰＤ−１遮断：慢性感染に対する影響および予防としてのワクチン接種（PD-1 blockade in rhesus macaques: impact on chronic infection and prophylactic vaccination）」, J. Immunol., 182(2)：980-987 (2009)；Song, M.-Y.ら、「可溶性ＰＤ−１によるワクチン誘発の一次および記憶ＣＤ８＋ ｔ−細胞応答の強化（Enhancement of vaccine-induced primary and memory CD8+ t-cell responses by soluble PD-1）」, J. Immunother., 34(3)：297-306 (2011)）。

【0012】

本明細書に記載の分子は、生化学および細胞を基礎とする両方の実験系にて、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１との相互作用を遮断する能力を示した。これらの結果は、がんおよび慢性感染における免疫力を強化するために、治療ワクチンを含め、治療的投与の可能性と矛盾するものではない。

【発明の概要】

【0013】

本明細書に記載の大環状化合物は、ＰＤ−Ｌ１と、ＰＤ−１との、およびＣＤ８０との相互作用を阻害する能力を有する。これらの化合物は、ＰＤ−Ｌ１と非常に効率的な結合、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１またはＣＤ８０のいずれかとの相互作用の遮断、Ｔ細胞機能活性の強化を促進する能力を示し、かくしてそれらは非経口、経口、経肺、経鼻、口腔、および徐放性処方のための候補体となる。

【0014】

一の態様において、本開示は、式（Ｉ）：

【化1】

［式中：
Ａは、結合手、

【化2】

より選択され；
ここで：

【化3】

はカルボニル基との結合点を示し、

【化4】

は窒素原子との結合点を示し；
ｚは０、１または２であり；
ｗは１または２であり；
ｎは０または１であり；
ｍは１または２であり；
ｍ’は０または１であり；
ｐは０、１または２であり；
Ｒ^ｘは、水素、アミノ、ヒドロキシ、およびメチルより選択され；
Ｒ^１４およびＲ^１５は、水素およびメチルより独立して選択され；
Ｒ^ｚは、水素および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ^１６より選択され；ここでＲ^１６は水素、−ＣＨＲ^１７Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−ＣＨＲ^１７Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨＲ^１８Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および−ＣＨＲ^１７Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨＲ^１８Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２より選択され；ここでＲ^１７は水素および−ＣＨ_２ＯＨより選択され、Ｒ^１８は水素およびメチルより選択され；および
Ｒ^ｖは、水素または天然アミノ酸側鎖であって；
Ｒ^ａおよびＲ^ｊは、各々、水素およびメチルより独立して選択され；
Ｒ^ｃ、Ｒ^ｆ、Ｒ^ｈ、Ｒ^ｉ、Ｒ^ｍ、およびＲ^ｎは水素であり；
Ｒ^１、Ｒ^８およびＲ^１０は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖より独立して選択され；
Ｒ^３およびＲ^６は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖より独立して選択されるか、あるいはＲ^３とＲ^６は一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^９およびＲ^１３は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖より独立して選択されるか、あるいはＲ^９とＲ^１３は一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^７は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖より選択されるか；あるいはＲ^７とＲ^１６は一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成するか；またはＲ^７およびＲ^ｇは下記のように環を形成し得る；
ただし、Ｒ^３とＲ^６、Ｒ^９とＲ^１３、およびＲ^７とＲ^１６の少なくとも１つは架橋を形成し；
Ｒ^５は、天然アミノ酸側鎖または非天然アミノ酸側鎖であるか、あるいはＲ^３とＲ^５は一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成するか；またはＲ^５およびＲ^ｅは下記のように環を形成し得；
Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^１１およびＲ^１２は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖より独立して選択されるか、または下記のように対応する隣接のＲ基と一緒になって環を形成し；
Ｒ^ｂは、メチルであるか、またはＲ^ｂとＲ^２は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し；ここで各環はアミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１〜４個の基で所望により置換されてもよく；
Ｒ^ｄは、水素またはメチルであるか、またはＲ^ｄとＲ^４は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し得；ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシ、およびフェニルより独立して選択される１〜４個の基で所望により置換されてもよく；
Ｒ^ｅは、水素またはメチルであるか、またはＲ^ｅおよびＲ^５は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し；ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１〜４個の基で所望により置換されてもよく；
Ｒ^ｇは、水素またはメチルであるか、またはＲ^ｇとＲ^７は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し得；ここで各環は、アミノ、ハロ基で所望により置換されてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ基で所望により置換されてもよいイソキノリニルオキシ、ハロ基で所望により置換されてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリルより独立して選択される１〜４個の基で所望により置換されてもよく；ならびに、ピロリジンおよびピペリジン環は、所望により、シクロヘキシル、フェニル、またはインドール基と縮合してもよく；
Ｒ^ｋは、水素またはメチルであるか、またはＲ^ｋとＲ^１１は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し；ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１〜４個の基で所望により置換されてもよく；および
Ｒ^ｌはメチルであるか、またはＲ^ｌとＲ^１２は、それらの結合する原子と一緒になって、アゼチジンおよびピロリジンより選択される環を形成し、ここで各環は、アミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１〜４個の基で所望により置換されてもよい］
で示される化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。

【0015】

第１の態様の第１の実施態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩であって、
Ａが

【化5】

である、化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。

【0016】

第１の態様の第２の実施態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩であって、
Ａが

【化6】

であり；
ｚが０であり；
ｗが１であり；
Ｒ^１４およびＲ^１５が水素であり；および
Ｒ^ｚが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ^１６である
化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。

【0017】

第１の態様の第３の実施態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩であって、
Ａが

【化7】

であり；
ｚが０であり；
ｗが１であり；
Ｒ^１４およびＲ^１５が水素であり；
Ｒ^ｚが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ^１６であり；
Ｒ^１がフェニルＣ_１−Ｃ_３アルキルであり、ここで該フェニルはヒドロキシで所望により置換されてもよく；
Ｒ^２がＣ_１−Ｃ_７アルキルであり；
Ｒ^３が−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２であるか、またはＲ^３およびＲ^６が一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成するか、あるいはＲ^３およびＲ^５が一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^４およびＲ^ｄが、それらの結合する原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し；
Ｒ^５が、Ｃ_１−Ｃ_７アルキルおよび−ＣＨ_２（イミダゾリル）（所望によりＣＦ_３Ｃ（Ｏ）−で置換されてもよい）より選択されるか、またはＲ^３とＲ^５が一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^６が、Ｃ_１−Ｃ_７アルキルおよび−（ＣＨ_２）_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２より選択されるか、またはＲ^３とＲ^６が一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^７が水素であるか、またはＲ^７とＲ^ｇが、それらの結合する原子と一緒になって、ヒドロキシ基で所望により置換されてもよいピロリジン環を形成するか、またはＲ^７とＲ^１６が一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^８が−（ＣＨ_２）インドリルであり；
Ｒ^９がヒドロキシメチルおよび−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈより選択されるか、またはＲ^９とＲ^１３が一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成し；
Ｒ^１０が−（ＣＨ_２）インドリルおよび−（ＣＨ_２）ベンゾチエニルより選択され、その各々は−ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈで所望により置換されてもよく；
Ｒ^１１がＣ_１−Ｃ_７アルキルであり；
Ｒ^１２がＣ_１−Ｃ_７アルキルであり；および
Ｒ^１３がＣ_１−Ｃ_７アルキルおよび−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２より選択されるか、またはＲ^９とＲ^１３が一緒になって、２〜７個の炭素原子を含有し、所望により１個の二重結合を含有してもよく、かつ１個の−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−ＮＨＣ（Ｏ）−基を含有してもよい、架橋を形成する
化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。

【0018】

第２の態様において、本開示は、下記の必要とする対象において、免疫応答を強化、刺激、および／または亢進する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。第２の態様の第１の実施態様において、該方法は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩の前に、の後に、またはと同時に、さらなる薬剤を投与することをさらに含む。第２の態様の第２の実施態様において、さらなる薬剤は、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性剤、および／または免疫応答調整剤である。第２の態様の第３の実施態様において、そのさらなる薬剤はＨＤＡＣ阻害剤である。第２の態様の第４の実施態様において、そのさらなる薬剤はＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニストである。

【0019】

第３の態様において、本開示は、下記の必要とする対象において、がん細胞の成長、増殖、または転移を阻害する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。該阻害は直接的または間接的とすることができることを理解すべきである。第３の態様の第１の実施態様において、がんは、黒色腫、腎細胞がん、扁平非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平ＮＳＣＬＣ、結腸直腸がん、去勢抵抗性前立腺がん、卵巣がん、胃がん、肝細胞がん、膵臓がん、頭頸部扁平上皮がん、食道、消化器および乳房のがん腫、および血液悪性腫瘍より選択される。

【0020】

第４の態様において、本開示は、下記の必要とする対象において、感染病を治療する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。第４の態様の第１の実施態様において、感染病はウイルスにより引き起こされる。第４の態様の第２の実施態様において、ウイルスはＨＩＶ、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、およびインフルエンザウイルスより選択される。

【0021】

第５の態様において、本開示は、下記の必要とする対象において、敗血性ショックを治療する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の１または複数の本明細書に記載の大環状化合物を投与することを含む、方法を提供する。

【0022】

第６の態様において、本開示は、対象においてＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１および／またはＣＤ８０との相互作用を遮断する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の少なくとも１つの本明細書に記載の大環状化合物を投与することを含む、方法を提供する。

【0023】

Ｒ側鎖がメチルで置換される環の一部である式（Ｉ）の化合物において、そのメチル基は、大環状の親構造の一部である炭素を含め、環内の置換可能ないずれの炭素原子上にあってもよいことが理解される。本開示の化合物において、該環の骨格にて、水素以外の４個の置換基を有する、少なくとも１つの１個の炭素が存在するが、式（ＩＩ）：

【化8】

［式中、Ａは特許請求の範囲に記載される環であり、

【化9】

は大環状構造の残基との結合点を示す］
で示されるアルファ位でメチル置換された環の構造ではない。

【0024】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^１側鎖は、フェニルアラニン、チロシン、３−チエン−２−イル、４−メチルフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、３−メトキシフェニルアラニン、イソトリプトファン、３−メチルフェニルアラニン、１−ナフチルアラニン、３,４−ジフルオロフェニルアラニン、４−フルオロフェニルアラニン、３,４−ジメトキシフェニルアラニン、３,４−ジクロロフェニルアラニン、４−ジフルオロメチルフェニルアラニン、２−メチルフェニルアラニン、２−ナフチルアラニン、トリプトファン、４−ピリジニル、４−ブロモフェニルアラニン、３−ピリジニル、４−トリフルオロメチルフェニルアラニン、４−カルボキシフェニルアラニン、４−メトキシフェニルアラニン、ビフェニルアラニン、および３−クロロフェニルアラニン、および２,４−ジアミノブタンである。

【0025】

Ｒ^２が環を形成しない場合、式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^２側鎖は、アラニン、セリン、およびグリシンである。

【0026】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^３側鎖は、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、セリン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、スレオニン、ロイシン、アラニン、２,３−ジアミノプロパン、および２,４−ジアミノブタンである。

【0027】

Ｒ^４が環を形成しない場合、式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^４側鎖は、バリン、アラニン、イソロイシン、およびグリシンである。

【0028】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^５側鎖は、アミノメタン、ヒスチジン、アスパラギン、２,３−ジアミノプロパン、セリン、グリシン、２,４−ジアミノブタン、スレオニン、アラニン、リジン、アスパラギン酸、アラニン、および３−チアゾリルアラニンである。

【0029】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^６側鎖は、ロイシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、リジン、３−シクロヘキサン、スレオニン、オルニチン、２,４−ジアミノブタン、アラニン、アルギニン、およびオルニチン（ＣＯＣＨ_３）である。

【0030】

Ｒ^７が環を形成しない場合、式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^７側鎖は、グリシン、２,４−ジアミノブタン、セリン、リジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン、アスパラギン、グルタミン、アラニン、および２,４−ジアミノブタン（Ｃ（Ｏ）シクロブタン）である。

【0031】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^８側鎖は、トリプトファン、および１,２−ベンズイソチアゾリニルアラニンである。

【0032】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^９側鎖は、セリン、ヒスチジン、リジン、オルニチン、２,４−ジブチルアミン、スレオニン、リジン、グリシン、グルタミン酸、バリン、２,３−ジアミノプロパン、アルギニン、アスパラギン酸、およびチロシンである。

【0033】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^１０側鎖は、所望により置換されてもよいトリプトファン、ベンズイソチアゾリルアラニン、１−ナフチルアラニン、およびメチオニンである。

【0034】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^１１側鎖は、ノルロイシン、ロイシン、アスパラギン、フェニルアラニン、メチオニン、エトキシメタン、アラニン、トリプトファン、イソロイシン、フェニルプロパン、グルタミン酸、ヘキサン、およびヘプタンである。

【0035】

Ｒ^１２が環を形成しない場合、式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^１２側鎖は、ノルロイシン、アラニン、エトキシメタン、メチオニン、セリン、フェニルアラニン、メトキシエタン、ロイシン、トリプトファン、イソロイシン、グルタミン酸、ヘキサン、ヘプタン、およびグリシンである。

【0036】

式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ^１３側鎖は、アルギニン、オルニチン、アラニン、２,４−ジアミノブタン、２,３−ジアミノプロパン、ロイシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、リジン、スレオニン、シクロプロピルメタン、グリシン、バリン、イソロイシン、ヒスチジン、および２−アミノブタンである。

【0037】

本開示によれば、本発明者らは、ＰＤ−Ｌ１と特異的に結合し、ＰＤ−Ｌ１と、ＰＤ−１およびＣＤ８０との相互作用を阻害する能力を有する化合物を見出した。これらの大環状化合物は、インビトロにおいて免疫調節剤としての効能を示し、それ故に該化合物はがんおよび感染病を含む種々の疾患の治療のための候補治療剤となる。

【発明を実施するための形態】

【0038】

「特異的結合」または「特異的に結合する」なる語は、タンパク質と、化合物またはリガンドなどの結合分子との間の相互作用をいう。その相互作用は結合分子により認識されるタンパク質の特定の構造（すなわち、酵素結合部位、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存する。例えば、化合物がタンパク質結合部位「Ａ」と特異的に結合するならば、該化合物が、結合部位Ａを含むタンパク質と、タンパク質結合部位Ａに特異的に結合する標識された化合物とを含む反応において存在することは、標識された化合物の、タンパク質との結合量を減らすであろう。対照的に、化合物と該タンパク質との非特異的結合は、標識された化合物の該タンパク質での濃度依存的置換を生じさせない。

【0039】

本開示は本化合物に存する原子のあらゆる同位体を包含するものとする。同位体は原子番号が同じであるが、質量数の異なるそれらの原子を包含する。一般例であって、限定されるものではないが、水素の同位体は、二重水素および三重水素を包含する。炭素の同位体は^１３Ｃおよび^１４Ｃを包含する。本発明の同位体で標識された化合物は、一般に、当業者に公知の慣用的技法により、または別のやり方で利用される非標識の試薬の代わりに同位体で適切に標識された試薬を用い、本明細書に記載の方法と類似する方法により調製され得る。かかる化合物は、例えば、生物学的活性を測定する際の標体および試薬として、種々の使用の可能性がある。同位体が安定している場合には、かかる化合物は、生物学的、薬理学的、または薬物動態学的特性を修飾することが望ましい可能性もある。

【0040】

本明細書に記載の事項のさらなる態様は、開示の化合物を、リガンド結合アッセイの開発のために、あるいはインビボにおける吸着、代謝作用、分布、受容体の結合または占有、または化合物の配置をモニター観察するために放射性標識されたリガンドとして用いることである。例えば、本明細書に記載の大環状化合物は、放射活性な同位体、^１２５Ｉを用いて調製されてもよく、得られる放射性標識された化合物を用いて結合アッセイを開発してもよく、あるいは代謝作用の研究のために使用されてもよい。あるいはまた、同じ目的のために、本明細書に記載の大環状化合物は、当業者に公知の方法を用いて、触媒性トリチウム化により放射性標識された形態に変換されてもよい。

【0041】

本開示の大環状化合物はまた、当業者に知られた方法を用いて、放射性トレーサーを添加することによりＰＥＴ造影剤として使用され得る。

【0042】

好ましい化合物として、本明細書にて提供される少なくとも１つの大環状化合物が挙げられ、これらの化合物は医薬組成物および組み合わせに配合されてもよい。

【0043】

本明細書にて供される定義は、限定されるものではなく、特定の場合に別段の限定がない限り、本明細書を通して使用される用語に適用される。

【0044】

アミノ酸およびペプチド化学の分野における当業者であれば、アミノ酸が一般構造式：

【化10】

［式中、ＲおよびＲ’は本明細書中に記載されるとおりである］
で示される化合物を包含することが分かる。

【0045】

別段の指示のない限り、本明細書にて単独で、または他の基の一部として利用されるような「アミノ酸」なる語は、限定されないが、「α」炭素と称される同じ炭素に連結する、アミノ基とカルボキシル基とを含み、ここでＲおよび／またはＲ’は、水素を含む、天然または非天然の側鎖とすることができる。「α」炭素での「Ｓ」絶対配置は、通常、「Ｌ」または「天然」配置と称される。「Ｒ」および「Ｒ’」の両方の（プライム）置換基が水素である場合には、該アミノ酸はグリシンであり、キラルではない。

【0046】

本明細書にて使用されるような「天然アミノ酸側鎖」および「天然に存在するアミノ酸側鎖」なる語は、通常、Ｓ−配置にある、天然に存在するいずれかのアミノ酸（すなわち、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン,−ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）（すなわち、Ｌ−アミノ酸）の側鎖をいう。

【0047】

本明細書で使用されるような「非天然アミノ酸側鎖」および「天然に存在しないアミノ酸側鎖」なる語は、通常、Ｒ−配置にある、天然に存在するいずれかのアミノ酸（すなわち、Ｄ−アミノ酸）の側鎖をいうか、あるいはＲ−またはＳ−配置にある天然に存在する下記のアミノ酸（すなわち、各々、Ｄ−またはＬ−アミノ酸）の側鎖以外の基をいう：
Ｃ_２−Ｃ_７アルケニル、Ｃ_１−Ｃ_３アルコキシＣ_１−Ｃ_３アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニルＣ_１−Ｃ_３アルキル、Ｃ_１−Ｃ_７アルキル、Ｃ_１−Ｃ_３アルキルスルファニルＣ_１−Ｃ_３アルキル、アミドＣ_１−Ｃ_３アルキル、アミノＣ_１−Ｃ_３アルキル、アザインドリルＣ_１−Ｃ_３アルキル、ベンゾチアゾリルＣ_１−Ｃ_３アルキル、ベンゾチエニルＣ_１−Ｃ_３アルキル、ベンジルオキシＣ_１−Ｃ_３アルキル、カルボキシＣ_１−Ｃ_３アルキル、Ｃ_３−Ｃ_１４シクロアルキルＣ_１−Ｃ_３アルキル、ジフェニルメチル、フラニルＣ_１−Ｃ_３アルキル、イミダゾリルＣ_１−Ｃ_３アルキル、ナフチルＣ_１−Ｃ_３アルキル、ピリジニルＣ_１−Ｃ_３アルキル、チアゾリルＣ_１−Ｃ_３アルキル、チエニルＣ_１−Ｃ_３アルキル；
ビフェニルＣ_１−Ｃ_３アルキル（ここで、該ビフェニルはメチル基で所望により置換されてもよい）；
ヘテロシクリル（Ｃ_１−Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_４アルキル、Ｃ_１−Ｃ_３アルキルスルホニルアミノ、アミド、アミノ、アミノＣ_１−Ｃ_３アルキル、アミノスルホニル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロＣ_１−Ｃ_３アルキル、ヒドロキシ、−ＮＣ（ＮＨ_２）_２、ニトロ、および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２より独立して選択される１、２、３、４または５個の基で所望により置換されてもよい）；
インドリルＣ_１−Ｃ_３アルキル（ここで、該インドリル部分は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、カルボキシＣ_１−Ｃ_３アルキル、ハロ、ヒドロキシ、およびフェニルより選択される１個の基で所望により置換されてもよく、該フェニルはＣ_１−Ｃ_３アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、およびハロより独立して選択される１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよい）；
フェニル（Ｃ_１−Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_４アルキル、Ｃ_１−Ｃ_３アルキルスルホニルアミノ、アミド、アミノ、アミノＣ_１−Ｃ_３アルキル、アミノスルホニル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロＣ_１−Ｃ_３アルキル、ヒドロキシ、−ＮＣ（ＮＨ_２）_２、ニトロ、および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２より独立して選択される１、２、３、４または５個の基で所望により置換されてもよい）；
ＮＲ^ａ’Ｒ^ｂ’（Ｃ_１−Ｃ_７アルキル）（ここで、Ｒ^ａ’およびＲ^ｂ’は、水素、Ｃ_２−Ｃ_４アルケニルオキシカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、Ｃ_１−Ｃ_３アルキルカルボニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキルカルボニル、フラニルカルボニル、およびフェニルカルボニルより独立して選択される）（アルキルリンカーの炭素が１個より多い場合、さらなるＮＲ^ａ’Ｒ^ｂ’基が鎖上に存することができる）；
ＮＲ^ｃ’Ｒ^ｄ’カルボニルＣ_１−Ｃ_３アルキル（ここで、Ｒ^ｃ’およびＲ^ｄ’は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、およびトリフェニルメチルより独立して選択される）；
フェニルＣ_１−Ｃ_３アルキル（ここで、該フェニル部分は、Ｃ_１−Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_４アルキル、Ｃ_１−Ｃ_３アルキルスルホニルアミノ、アミド、アミノ、アミノＣ_１−Ｃ_３アルキル、アミノスルホニル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロＣ_１−Ｃ_３アルキル、ヒドロキシ、−ＮＣ（ＮＨ_２）_２、ニトロ、および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２より独立して選択される１、２、３、４、または５個の基で所望により置換されてもよい）；および
フェノキシＣ_１−Ｃ_３アルキル（ここで、該フェニルは、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基で所望により置換されてもよい）。

【0048】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_２−Ｃ_４アルケニル」なる語は、少なくとも１個の炭素−炭素の二重結合を含有する２〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の基をいう。

【0049】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_２−Ｃ_７アルケニル」なる語は、少なくとも１個の炭素−炭素の二重結合を含有する２〜７個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の基をいう。

【0050】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_２−Ｃ_４アルケニルオキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子に結合したＣ_２−Ｃ_４アルケニル基をいう。

【0051】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルコキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子に結合したＣ_１−Ｃ_３アルキル基をいう。

【0052】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_４アルコキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_４アルキル基をいう。

【0053】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_６アルキル基をいう。

【0054】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルコキシＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_３アルコキシ基をいう。

【0055】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_６アルコキシ基をいう。

【0056】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニル基をいう。

【0057】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、１〜３個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素より誘導される基をいう。

【0058】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_４アルキル」なる語は、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素より誘導される基をいう。

【0059】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_６アルキル」なる語は、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素より誘導される基をいう。

【0060】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルキルアミノ」なる語は、−ＮＨＲ^１（ここでＲ^１はＣ_１−Ｃ_３アルキル基である）をいう。

【0061】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルキルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_３アルキル基をいう。

【0062】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルキルスルファニル」なる語は、硫黄原子を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_３アルキル基をいう。

【0063】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルキルスルファニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_３アルキルスルファニル基をいう。

【0064】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルキルスルホニル」なる語は、スルホニル基を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_３アルキル基をいう。

【0065】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３アルキルスルホニルアミノ」なる語は、アミノ基を通して親分子の部分に結合したＣ_１−Ｃ_３アルキルスルホニル基をいう。

【0066】

本明細書にて使用されるような「アミド」なる語は−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２をいう。

【0067】

本明細書にて使用されるような「アミドＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したアミド基をいう。

【0068】

本明細書にて使用されるような「アミノ」なる語は−ＮＨ_２をいう。

【0069】

本明細書にて使用されるような「アミノＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したアミノ基をいう。

【0070】

本明細書にて使用されるような「アミノスルホニル」なる語は、スルホニル基を通して親分子の部分に結合したアミノ基をいう。

【0071】

本明細書にて使用されるような「アザインドリルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したアザインドリル基をいう。そのアザインドリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0072】

本明細書にて使用されるような「ベンゾチアゾリルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したベンゾチアゾリル基をいう。そのベンゾチアゾリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0073】

本明細書にて使用されるような「ベンゾチエニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したベンゾチエニル基をいう。そのベンゾチエニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0074】

本明細書にて使用されるような「ベンジルオキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したベンジル基をいう。

【0075】

本明細書にて使用されるような「ベンジルオキシＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したベンジルオキシ基をいう。

【0076】

本明細書にて使用されるような「ビフェニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したビフェニル基をいう。そのビフェニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0077】

本明細書にて使用されるような「カルボニル」なる語は、−Ｃ（Ｏ）−をいう。

【0078】

本明細書にて使用されるような「カルボキシ」なる語は、−ＣＯ_２Ｈをいう。

【0079】

本明細書にて使用されるような「カルボキシＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したカルボキシ基をいう。

【0080】

本明細書にて使用されるような「シアノ」なる語は、−ＣＮをいう。

【0081】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_３−Ｃ_１４シクロアルキル」なる語は、３〜１４個の炭素原子を有し、ヘテロ原子を含まない、単環、二環または三環式の飽和炭化水素環系をいう。二環および三環式環は縮合、スピロ環化、または架橋されてもよい。シクロアルキル基の代表例として、限定されないが、シクロプロピル、シクロペンチル、ビシクロ［３.１.１］ヘプチル、およびアダマンチルが挙げられる。

【0082】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_３−Ｃ_１４シクロアルキルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ_３−Ｃ_１４シクロアルキル基をいう。

【0083】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_３−Ｃ_１４シクロアルキルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＣ_３−Ｃ_１４シクロアルキル基をいう。

【0084】

本明細書にて使用されるような「Ｃ_１−Ｃ_３ジアルキルアミノ」なる語は、−ＮＲ^１Ｒ^２をいい、ここでＲ^１およびＲ^２は、各々、１〜３個の炭素原子を有するアルキル基である。その基は同じであっても、異なっていてもよい。

【0085】

本明細書にて使用されるような「フラニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したフラニル基をいう。そのフラニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0086】

本明細書にて使用されるような「フラニルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したフラニル基をいう。

【0087】

本明細書にて使用されるような「ハロ」および「ハロゲン」なる語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩをいう。

【0088】

本明細書にて使用されるような「ハロＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、１、２、または３個のハロゲン原子で置換されるＣ_１−Ｃ_３アルキル基をいう。

【0089】

本明細書にて使用されるような「ハロメチル」なる語は、１、２、または３個のハロゲン原子で置換されるメチル基をいう。

【0090】

本明細書にて使用されるような「ヘテロシクリル」なる語は、窒素、酸素および硫黄より独立して選択される１、２、または３個のヘテロ原子を含有する、５、６、または７員の環をいう。５員環は０〜２個の二重結合を有し、６および７員環は０〜３個の二重結合を有する。「ヘテロシクリル」なる語はまた、ヘテロシクリル環が４〜６員の芳香族または非芳香族炭素環式環、あるいはもう一つ別の単環式ヘテロシクリル基と縮合している二環式基を包含する。本開示のヘテロシクリル基は、その基中の炭素原子を通して親分子に結合と結合する。ヘテロシクリル基の例として、限定されないが、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、モルホリニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、チアゾリル、チエニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。

【0091】

本明細書にて使用されるような「ヒドロキシ」なる語は、−ＯＨをいう。

【0092】

本明細書にて使用されるような「イミダゾリルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したイミダゾリル基をいう。そのイミダゾリル基は、その基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0093】

本明細書にて使用されるような「インドリルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したインドリル基をいう。そのインドリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0094】

本明細書にて使用されるような「ナフチルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したナフチル基をいう。そのナフチル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0095】

本明細書にて使用されるような「ニトロ」なる語は、−ＮＯ_２をいう。

【0096】

本明細書にて使用されるような「ＮＲ^ａ’Ｒ^ｂ’」なる語は、２個の基、Ｒ^ａ’およびＲ^ｂ’が窒素原子を通して親分子に結合している基をいう。Ｒ^ａ’およびＲ^ｂ’は、水素、Ｃ_２−Ｃ_４アルケニルオキシカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_３アルキルカルボニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキルカルボニル、フラニルカルボニル、およびフェニルカルボニルより独立して選択される。

【0097】

本明細書にて使用されるような「ＮＲ^ａ’Ｒ^ｂ’（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＮＲ^ａ’Ｒ^ｂ’基をいう。

【0098】

本明細書にて使用されるような「ＮＲ^ｃ’Ｒ^ｄ’」なる語は、窒素原子を通して親分子に結合している２個の基、Ｒ^ｃ’およびＲ^ｄ’をいう。Ｒ^ｃ’およびＲ^ｄ’は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、およびトリフェニルメチルより独立して選択される。

【0099】

本明細書にて使用されるような「ＮＲ^ｃ’Ｒ^ｄ’カルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＮＲ^ｃ’Ｒ^ｄ’基をいう。

【0100】

本明細書にて使用されるような「ＮＲ^ｃ’Ｒ^ｄ’カルボニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＮＲ^ｃ’Ｒ^ｄ’カルボニル基をいう。

【0101】

本明細書にて使用されるような「フェノキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したフェニル基をいう。

【0102】

本明細書にて使用されるような「フェノキシＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したフェノキシ基をいう。

【0103】

本明細書にて使用されるような「フェニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したフェニル基をいう。

【0104】

本明細書にて使用されるような「フェニルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したフェニル基をいう。

【0105】

本明細書にて使用されるような「ピリジニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したピリジニル基をいう。そのピリジニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0106】

本明細書にて使用されるような「スルファニル」なる語は、−Ｓ−をいう。

【0107】

本明細書にて使用されるような「スルホニル」なる語は、−ＳＯ_２−をいう。

【0108】

本明細書にて使用されるような「チアゾリルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したチアゾリル基をいう。そのチアゾリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0109】

本明細書にて使用されるような「チエニルＣ_１−Ｃ_３アルキル」なる語は、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基を通して親分子の部分に結合したチエニル基をいう。そのチエニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。

【0110】

「治療する」なる語は、（ｉ）疾患、障害、および／または症状に罹患しやすい可能性があるが、まだ罹患していないと診断される患者において、該疾患、障害、または症状を発症することを防止すること；（ｉｉ）該疾患、障害、または症状を阻害すること、すなわちその進行を阻むこと；および（ｉｉｉ）該疾患、障害、または症状を緩和すること、すなわち、該疾患、障害、および／または症状、および／または該疾患、障害、および／または症状に付随する徴候の退行を生じさせることをいう。

【0111】

大環状化合物の、ＰＤ−Ｌ１との結合は、例えば、均一性時間分解蛍光測定法（ＨＴＲＦ）、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）、等温滴定型熱量測定法（ＩＴＣ）、核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）等などの方法により測定され得る。さらには、大環状化合物の、細胞表面にて発現されるＰＤ−Ｌ１との結合は、細胞結合アッセイにおいて、本明細書に記載されるように測定され得る。

【0112】

本明細書に記載の治療剤の投与は、限定されることなく、治療的に効果的な量の治療剤の投与を包含する。本明細書にて使用されるような「治療的に効果的な量」なる語は、限定されることなく、本明細書に記載のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１結合阻害剤の組成物を投与することで治療できる症状を治療または防止するための治療剤の量をいう。その量は検出できる治療または予防または改善効果を示すのに十分な量である。その効果は、例えば、限定されるものではなく、本明細書に列挙した症状の治療または予防を包含しうる。対象に対する正確な有効量は、その対象の大きさおよび健康状態、治療される症状の特性および程度、治療する医師の助言、投与するのに選択される治療剤または治療剤の組み合わせに依存するであろう。かくして、正確な有効量を前以て特定することは有用ではない。

【0113】

もう一つ別の態様において、本開示は、本発明の大環状化合物を用いて対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法に関する。本明細書において明らかにされるように、本開示の大環状化合物は、ＰＤ−Ｌ１と結合し、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１との相互作用に干渉し、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１との相互作用を遮断することが分かっている抗ＰＤ−１モノクローナル抗体との結合と競合し、ＣＭＶ特異的Ｔ細胞ＩＦＮγ分泌を強化し、ＨＩＶ特異的Ｔ細胞ＩＦＮｇ分泌を強化する能力を有する。結果として、本開示の大環状化合物は、免疫応答を修飾し、がんまたは感染病などの疾患を治療し、保護的自己免疫応答を刺激し、あるいは（例えば、ＰＤ−Ｌ１遮断化合物と目的とする抗原とを共投与することにより）抗原特異的免疫応答を刺激するのに有用である。

【0114】

本開示がさらに容易に理解され得るように、特定の用語をまず定義する。さらなる定義は詳細な説明を通して示される。

【0115】

「プログラムされた死リガンド１（Programmed Death Ligand 1）」、「プログラムされた細胞死リガンド１」、「タンパク質ＰＤ−Ｌ１」、「ＰＤ−Ｌ１」、「ＰＤＬ１」、「ＰＤＣＤＬ１」、「ｈＰＤ−Ｌ１」、「ｈＰＤ−ＬＩ」、「ＣＤ２７４」および「Ｂ７−Ｈ１」は互換的に使用され、ヒトＰＤ−Ｌ１の変異体、イソフォーム、種相同体、およびＰＤ−Ｌ１と共通する少なくとも１つのエピトープを有するアナログを包含する。ＰＤ−Ｌ１の完全な配列は、GENBANK（登録商標）Accession No.NP_054862の下で知ることができる。

【0116】

「プログラムされた死１（Programmed Death 1）」、「プログラムされた細胞死１」、「タンパク質ＰＤ−１」、「ＰＤ−１」、「ＰＤ１」、「ＰＤＣＤ１」、「ｈＰＤ−１」および「ｈＰＤ−Ｉ」は互換的に用いられ、ヒトＰＤ−１の変異体、イソフォーム、種相同体、および少なくとも１つのＰＤ−１と共通する少なくとも１つのエピトープを有するアナログを包含する。ＰＤ−１の完全な配列は、GENBANK（登録商標）Accession No.NP U64863の下で知ることができる。

【0117】

「細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４」、「ＣＴＬＡ−４」、「ＣＴＬＡ４」、「ＣＴＬＡ−４抗原」および「ＣＤ１５２」（例えば、Murata、Am. J. Pathol., 155：453-460（1999）を参照のこと）なる語は互換的に用いられ、ヒトＣＴＬＡ−４の変異体、イソフォーム、種相同体、および少なくとも１つのＣＴＬＡ−４と共通するエピトープを有するアナログを包含する（例えば、Balzano、Int. J. Cancer Suppl., 7：28-32 (1992) を参照のこと）。ＣＴＬＡ−４の完全な核酸配列は、GENBANK（登録商標）Accession No. L15006の下で知ることができる。

【0118】

「免疫応答」なる語は、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および上記した細胞または肝臓により産生される可溶性巨大分子（大員環、サイトカイン、および補体を含む）の作用であって、侵入病原体、病原体に感染した細胞または組織、がん細胞、あるいは自己免疫性または病理学的炎症の場合、正常なヒト細胞または組織の、選択的損傷、破壊、または人体からの除去をもたらす、作用をいう。

【0119】

本明細書にて使用されるような「有害事象」（ＡＥ）は、好ましくない、一般には意図しない、まさに望ましくない、医学的治療の実施に付随する兆候（実験室での異常な知見を含む）、症状、または疾患である。例えば、有害事象は、治療に応答して、免疫系が活性化すること、または免疫系細胞（例えば、Ｔ細胞）が拡張することと関連付けられるかもしれない。薬物治療は１または複数のＡＥを伴う可能性があり、ＡＥは、各々、同じまたは異なるレベルの重篤性を有してもよい。「有害事象を改変する」ことのできる方法についての言及は、異なる治療計画を用いることに伴う１または複数のＡＥの発生率および／または重篤度を減少させる治療計画を意味する。

【0120】

本明細書にて使用されるような「過剰増殖性疾患」は、細胞増殖が正常なレベルよりも大きい症状をいう。例えば、過剰増殖性疾患または障害として、悪性疾患（例、食道がん、大腸がん、胆がん）および非悪性疾患（例、アテローム性動脈硬化症、良性過形成、および良性前立腺肥大）が挙げられる。

【0121】

本明細書にて使用されるような「約」または「本質的に含む」は、特定の数値がどのように測定または決定されるかに幾分依存するであろう、すなわち、測定システムの限界を示す、当業者により決定されるような数値に対して許容される誤差の範囲内にあることを意味する。例えば、「約」または「本質的に含む」は、当該分野における実施当たりで１またはそれ以上の標準偏差の範囲内にあることを意味しうる。あるいはまた、「約」または「本質的に含む」は２０％までの範囲を意味しうる。さらには、特に生体系または生体内作用に関して、該用語は数値が最大で１桁違う、または５倍までを意味しうる。特定の数値が本願明細書および特許請求の範囲にて供される場合、特記されない限り、「約」または「本質的に含む」の意味は、その特定の数値について許容される誤記の範囲内にあると想定されるべきである。

【0122】

本明細書にて使用されるようないずれの濃度範囲、パーセント範囲、割合の範囲または整数の範囲は、列挙された範囲内にあるいずれの整数の数値も、必要とあれば、特段の指示のない限り、その分数（整数の１０分の一および１００分の一など）も含むものと理解されるべきである。

【0123】

競合アッセイ
本開示はまた、対照となる抗−ＰＤ−Ｌ１抗体（ＭＤＸ−１１０５）の結合と、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、および少なくとも約１００％の競合能を有する大環状化合物を対象とする。かかる大環状化合物は、本明細書に開示の１または複数の大環状化合物（変異体、保存的置換、機能的置換、および欠失形態を含む；ただし、該化合物はＰＤ−Ｌ１と特異的に結合する）と構造的相同性を共有し得る。例えば、大環状化合物が、実質的に、ＰＤ−Ｌ１の、対照となる抗−ＰＤ−Ｌ１抗体と同じ領域に結合するならば、その大環状化合物は、抗−ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体が結合するＰＤ−Ｌ１エピトープと少なくとも重複する、ＰＤ−Ｌ１のエピトープと結合するはずである。その重複する領域は１個のアミノ酸残基から数百個のアミノ酸残基の範囲とすることができる。該大環状化合物は、次に、抗−ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体と競合し、および／またはそのＰＤ−Ｌ１との結合を遮断し、それにより抗−ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体とＰＤ−Ｌ１との結合は減少し、好ましくは競合アッセイにて少なくとも約５０％は減少するはずである。

【0124】

競合アッセイのための対照となる抗体を目的として使用され得る抗−ＰＤ−Ｌ１抗体は当該分野において知られている。例えば、以下の代表的な抗−ＰＤ−Ｌ１抗体：ＭＤＸ−１１０５（BMS）；Ｌ０１Ｘ−Ｃ（Serono）、Ｌ１Ｘ３（Serono）、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（Serono）、およびＰＤ−Ｌ１Ｐｒｏｂｏｄｙ（CytomX）、および共同出願のＷＯ ２００７／００５８７４において開示されるＰＤ−Ｌ１抗体を用いてもよい。

【0125】

競合アッセイのための対照となる抗体を目的として使用され得る抗−ＰＤ−Ｌ１抗体は当該分野において知られている。例えば、以下の代表的な抗−ＰＤ−Ｌ１抗体：ニボルマブ（nivolumab）（BMS）；１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、４Ａ１１、７Ｄ３および５Ｆ４（各々、共有の米国特許第８,００８,４４９号（BMS）に開示される）、ＭＫ−３４７５（Merck、米国特許第８,１６８,７５７号に開示される）、および米国特許第７,４８８,８０２号に開示される抗体を用いてもよい。

【0126】

医薬組成物
もう一つ別の態様において、本開示は、組成物、例えば、本開示の１の大環状化合物またはその組み合わせを含有し、医薬的に許容される担体と一緒に処方した、医薬組成物を提供する。かかる組成物は、本開示の１または組み合わせた（例、２種またはそれ以上の異なる）大環状化合物、あるいは免疫抱合体または二重特異性分子を含んでもよい。例えば、本開示の医薬組成物は、標的とする抗原にある異なるエピトープと結合するか、または補体活性を有する、大環状化合物（あるいは免疫抱合体または二重特異性体）の組み合わせを含み得る。

【0127】

本開示の医薬組成物は、併用療法にて、すなわち他の薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、併用療法は、大環状化合物を、少なくとも１種の他の抗炎症剤または免疫抑制剤と組み合わせて包含しうる。併用療法にて使用され得る治療剤の例が、下記の本開示の大環状化合物の使用でのセクションにおいてより詳細に記載される。

【0128】

本明細書において使用されるような「医薬的に許容される担体」は、ありとあらゆる、生理学的に適合しうる、溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌および抗真菌剤、等張剤、および吸収遅延化剤等を包含する。好ましくは、該担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例、注射または注入による投与）に適する。投与経路に応じて、活性な化合物、すなわち、大環状化合物、免疫抱合体、または二重特異性分子は、該化合物が酸の作用から、該化合物を不活性化する他の天然条件から保護されるように、材料で被覆されてもよい。

【0129】

本開示の医薬としての化合物は１または複数の医薬的に許容される塩を包含しうる。「医薬的に許容される塩」または「治療的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくないいずれの毒性効果も付与しない塩をいう（例えば、Berge, S.M.ら、J. Pharm. Sci., 66：1-19（1977）を参照のこと）。かかる塩の例として、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩は、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等などの非毒性の無機酸、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換のアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族酸、および芳香族スルホン酸等などの非毒性の有機酸より誘導される塩を包含する。塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等などのアルカリまたはアルカリ土類金属より、ならびにＮ,Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等より誘導される塩を包含する。

【0130】

本開示の医薬組成物はまた、医薬的に許容される抗酸化剤を含んでもよい。医薬的に許容される抗酸化剤の例として：（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等などの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロール等などの油溶性抗酸化剤；および（３）クエン酸、エチレンジアミン四作酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等などの金属キレート化剤が挙げられる。

【0131】

本開示の医薬組成物に利用され得る適切な水性および非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等など）、および適切なその混合液、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を用いることで、分散液の場合には必要とされる粒度を維持することで、および界面活性剤を用いることで維持され得る。

【0132】

これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントを含有してもよい。微生物の存在の防止は、上記の滅菌操作に供すること、および種々の抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等を配合することの両方を行うことにより保証され得る。糖類、塩化ナトリウム等などの等張剤を組成物に含めることも望ましい。さらに、注入可能な製剤形態の長期にわたる吸収作用はモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収作用を遅らせる物質を配合することによりもたらされてもよい。

【0133】

医薬的に許容される担体は、滅菌水溶液または分散液、および注入可能な滅菌溶液または分散液をその場で調製するための滅菌粉末を包含する。そのような媒体および薬剤を医薬的に活性な物質に用いることは当該分野にて公知である。任意の従来の媒体または薬剤が該活性化合物と不適合である場合を除き、それらを本開示の医薬組成物中にて用いることを考慮する。補助的な活性化合物も該組成物に配合され得る。

【0134】

治療用組成物は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で、滅菌性を保持し、かつ安定していなければならない。該組成物は、溶液、ミクロエマルジョン、リポソーム、または薬物高濃度に適する他の規則構造体として処方され得る。担体は、溶媒、または、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等）、およびそれらの適切な混合物を含有する分散媒体であり得る。適当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤を用いることで、分散液の場合には必要とされる粒度を維持することで、および界面活性剤を用いることで維持され得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物に配合することが好ましい。注入可能な組成物の長期にわたる吸収作用は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを配合することによりもたらされ得る。

【0135】

注入可能な滅菌溶液は、活性な化合物を必要とされる量で、必要とあれば、上記の１の成分またはその組み合わせと一緒に適切な溶媒に配合し、つづいてミクロ濾過の滅菌処理に付すことにより調製され得る。一般に、分散液は、活性な化合物を、基剤となる分散媒体および上記したそれらの成分から必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルに入れることにより調製される。滅菌注入可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合には、その好ましい調製方法は、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）であり、それにより活性成分の粉末に、その前に滅菌濾過に付した溶液から由来のさらに所望の成分を付加して生成する。

【0136】

単一剤形を生成するのに担体材料と組み合わせることのできる活性成分の量は、治療されるべき対象、および個々の投与方法に応じて変化するであろう。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることのできる活性成分の量は、一般に、治療効果を生じさせる組成物の量であろう。一般に、この量は、１００％の中から、約０.０１％〜約９９％の範囲の活性成分、好ましくは約０.１％〜約７０％、最も好ましくは約１％〜約３０％の範囲の活性成分であり、医薬的に許容される担体と組み合わされる。

【0137】

投与計画は最適な所望とする応答（例えば、治療的応答）を供するように調整される。例えば、単一のボーラスを投与してもよく、数個の細分割した用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に減少または増加させてもよい。投与を容易に、および用量を均一にするために非経口用組成物を単位剤形にて処方するのが特に有利である。本明細書にて使用されるような単位剤形は、治療すべき対象の単位投与量として適した物理的に分離した単位をいい；各単位は必要とされる医薬担体と関連して所望の治療効果を生成するように計算された所定量の活性化合物を含有する。本開示の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特な特性、および達成されるべき特定の治療効果、および（ｂ）個体での感度を治療するためにかかる活性化合物を合成する分野にて固有の制限によって決定され、それに直接依存する。

【0138】

大環状化合物を投与する場合、その用量は宿主の体重１ｋｇに付き約０.０００１〜１００ｍｇ、より一般的には０.０１〜５ｍｇである。例えば、用量は０.３ｍｇ／体重ｋｇ、１ｍｇ／体重ｋｇ、３ｍｇ／体重ｋｇ、５ｍｇ／体重ｋｇ、または１０ｍｇ／体重ｋｇ、あるいは１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができる。典型的な治療計画では、１日に１回、１日に２回、週に２回、週に３回、毎週、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、月に１回、３月毎に１回、または３月ないし６月毎に１回の投与が必要となる。本開示の大環状化合物についての好ましい投与計画は、１ｍｇ／体重ｋｇまたは３ｍｇ／体重ｋｇを静脈内に投与することであり、その大員環は次の投薬スケジュールの一つで投与される：（ｉ）４週間毎に６回投与され、次に３月毎に投与される；（ｉｉ）３週間毎に投与される；（ｉｉｉ）３ｍｇ／体重ｋｇで１回投与され、つづいて１ｍｇ／体重ｋｇで３週間毎に投与される。

【0139】

ある種の方法では、結合特異性の異なる２種以上の大環状化合物を同時に投与し、その場合、投与される各化合物の投与量は示唆される範囲内にある。化合物は、通常、何度も投与される。単回投与間の間隔は、例えば、毎週、毎月、３月毎、または毎年とすることができる。間隔は、患者における標的抗原に対する大環状化合物の血中レベルを測定することにより、示唆されるように不規則とすることもできる。ある種の方法では、約１〜１０００ｍｕｇ／ｍｌの、またある方法では約２５〜３００ｍｕｇ／ｍｌの血漿中濃度が達成されるように用量を調整する。

【0140】

あるいはまた、大環状化合物は、徐放性製剤として投与することができ、その場合にはそれほど頻繁に投与する必要がない。投与の用量および頻度は、処置が予防的であるか、または治療的であるかに応じて変化し得る。予防的適用においては、相対的に低用量で長期にわたり相対的に頻繁ではない間隔で投与される。ある患者はこれからずっと続けて処置を受ける。治療的適用においては、疾患の進行が縮小または止むまで、好ましくは、患者が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、時に、相対的に短期間で相対的に高用量が必要とされる。その後、患者は予防的投与計画にて投与され得る。

【0141】

本開示の医薬組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、特定の患者、組成物、および投与方法に対して所望の治療的応答を達成するのに効果的であり、該患者に対して毒性でない、活性成分の量が得られるように変化させてもよい。選択される用量レベルは、利用される本開示の特定の組成物の活性、またはそのエステル、塩もしくはアミド、投与経路、投与期間、利用される特定の化合物の排泄速度、治療期間、利用される特定の組成物と併用して使用される他の薬物、化合物および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態および病歴、および医療分野にて周知の同様の因子を含む、種々の薬物動態学的因子に依存するであろう。

【0142】

本開示の大環状化合物の「治療的に効果的な用量」は、好ましくは、疾患の徴候の重篤度の低下、疾患の徴候のない期間の頻度およびその持続期間の増加、または疾患の苦痛に起因する損傷または障害の予防をもたらす。例えば、腫瘍を治療する場合、「治療的に効果的な用量」は、未処理の対象と比べて、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、その上さらにより好ましくは少なくとも約８０％までの細胞増殖または腫瘍増殖を阻害する。化合物の腫瘍増殖および／またはＨＩＶを阻害する能力は、ヒト腫瘍における効能またはウイルス効能を予測する動物実験システムにて評価され得る。あるいはまた、組成物のこの特性は、当業者に公知のアッセイにより、化合物のインビトロにおけるそのような阻害能を試験することによって評価され得る。治療用化合物は、治療的に効果的な量で、腫瘍の大きさを減少させるか、ウイルス負荷を減らすか、あるいはまた対象おける症状を改善することができる。当業者は、対象の大きさ、対象の症状の重篤度、および選択される特定の組成物および投与経路などの要因に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。

【0143】

もう一つ別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるような、大環状化合物およびもう一つ別の免疫調整剤を含む部材の薬理学キットを提供する。該キットはまたさらに、過剰増殖性疾患（本明細書に記載されるようながんなど）および／または抗ウイルス疾患の治療にて用いるための取扱説明書を含んでもよい。

【0144】

本開示の組成物は、当該分野にて既知の１または複数の種々の方法を用い、１または複数の投与経路を介して投与され得る。当業者にとって明らかであるように、投与経路および／または方法は所望する結果に応じて変化するであろう。本開示の大環状化合物について好ましい投与経路は、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路、例えば、注射または注入による投与を包含する。本明細書にて使用されるような「非経口投与」なる語は、腸内および局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心内膜、皮内、腹腔内、経皮、皮下、表皮下、関節内、皮膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、および胸骨下の注射および注入を包含する。

【0145】

あるいはまた、本開示の大環状化合物は、局所、表皮、または粘膜性投与経路などの非経口以外の経路、例えば、経鼻的、経口的、膣的、経直腸的、舌下的または局所的に通して投与され得る。

【0146】

活性な化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化輸送系を含む、放出調整製剤などで、化合物を迅速な放出から保護するであろう担体を用いて調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解可能な生体適合性ポリマーを用いることができる。かかる製剤の調製方法が多数特許されており、当業者に周知である。例えば、Robinson, J.R.らSustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, Marcel Dekker, Inc., New York (1978)を参照のこと。

【0147】

治療用組成物は当該分野にて公知の医療装置を用いて投与され得る。例えば、好ましい実施態様において、本開示の治療用組成物は、米国特許第５,３９９,１６３号、第５,３８３,８５１号、第５,３１２,３３５号、第５,０６４,４１３号、第４,９４１,８８０号、第４,７９０,８２４号、または第４,５９６,５５６号において開示される装置などの、無針皮下注射器を用いて投与され得る。本開示にて有用な周知のインプラントおよびモジュールの例として、米国特許第４,４８７,６０３号（制御された速度で医薬を分配するためのインプラント可能なマイクロ注入ポンプを開示する）；米国特許第４,４８６,１９４号（皮膚を通して医薬を投与するための治療装置を開示する）；米国特許第４,４４７,２３３号（正確な分配速度で医薬を送達するための医薬品注入ポンプを開示する）；米国特許第４,４４７,２２４号（連続的な薬物送達のための可変流速性インプラント式注入装置を開示する）；米国特許第４,４３９,１９６号（マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧性薬物送達系を開示する）；および米国特許第４,４７５,１９６号（浸透圧性薬物送達系を開示する）が挙げられる。これらの特許は出典明示により本明細書に組み込まれる。かかる他のインプラント、送達系、およびモジュールの多くは、当業者に知られている。

【0148】

ある実施態様において、本開示の大環状化合物はインビボにて適切な分布を確かにするために処方され得る。例えば、血液−脳関門（ＢＢＢ）は多数の高親水性化合物を排除する。本開示の治療用化合物を確実にＢＢＢを通過させるために、（必要ならば、）該化合物を、例えば、リポソームに処方することができる。リポソームを製造する方法については、例えば、米国特許第４,５２２,８１１号、第５,３７４,５４８号、および第５,３９９,３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞または器官に選択的に移され、そうして標的とされる薬物の送達を強化する、１または複数の部分を含んでもよい（例えば、Ranade. V.V.、J. Clin. Pharmacol., 29：685（1989）を参照のこと）。代表的な標的となる部分として、フォラートまたはビオチン（例えば、米国特許第５,４１６,０１６号（Lowら）を参照のこと）；マンノシド（Umezawaら、Biochem. Biophys. Res. Commun., 153：1038（1988））；マクロサイクル（Bloeman, P.G.ら、FEBS Lett., 357：140（1995）；Owais, M. ら、Antimicrob. Agents Chemother, 39: 180（1995））；界面活性タンパク質Ａ受容体（Briscoeら、Am. J. Physiol., 1233：134（1995））；ｐ１２０（Schreierら、J. Biol. Chem., 269：9090（1994））；Keinanen, K.ら、FEBS Lett., 346：123（1994）も参照のこと；Killion, J.J.ら、Immunomethods 4：273（1994）が挙げられる。

【0149】

開示の使用および方法
本開示の大環状化合物、組成物および方法は、例えば、ＰＤ−Ｌ１の検出、またはＰＤ−Ｌ１の遮断による免疫応答の強化を含め、インビトロおよびインビボにて多数の有用性を有する。例えば、これらの分子は、インビトロまたはエクスビボにて培養細胞に、あるいは例えば、インビボにてヒト対象に投与され、種々の状態にある免疫性を強化することができる。従って、１の態様において、本開示は、対象における免疫応答を修飾する方法であって、該対象における免疫応答が修飾されるように、本開示の大環状化合物を該対象に投与することを含む方法を提供する。該応答が強化されるか、刺激されるか、アップレギュレートされるのが好ましい。他の点では、該大環状化合物は、抗イヌ、抗マウス、および／または抗ウッドチャック結合特性、および治療活性を有してもよい。

【0150】

本明細書において使用されるように、「対象」なる語は、ヒトおよびヒト以外の動物を含むものとする。ヒト以外の動物は、あらゆる脊椎動物、例えば、哺乳類、およびヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、トリ、ウッドチャック、両生類、は虫類などの非哺乳類を含むが、ヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシおよびウマなどの哺乳類が好ましい。好ましい対象として、免疫応答の強化を必要とするヒト患者が挙げられる。該方法は、Ｔ細胞介在の免疫応答を増大させることによって治療され得る障害を有するヒト患者を治療するのに特に適している。特定の実施態様において、該方法はインビボにてがん細胞の処置に特に適している。免疫性の抗原特異的強化を達成するのに、大環状化合物が関心のある抗原と一緒に投与され得る。ＰＤ−Ｌ１と結合する大環状化合物がもう一つ別の薬剤と一緒に投与される場合、その２つは順番を決めて、または同時に投与するかのいずれかで投与され得る。

【0151】

該開示は、さらに、サンプル中のヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ−Ｌ１抗原の存在を検出する方法、またはヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ−Ｌ１抗原の量を測定する方法であって、サンプル、および対照のサンプルを、大員環と、ヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ−Ｌ１との間で複合体の形成を可能とする条件下、ヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ−Ｌ１と特異的に結合する対照の大環状ペプチドと接触させることを含む、方法を提供する。次に複合体の形成を検出し、ここで対照のサンプルと比べて、そのサンプルとの間で異なる複合体が形成されることはサンプル中にヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ−Ｌ１抗原が存在することを示唆するものである。

【0152】

開示の大環状化合物が、ＣＤ２８、ＩＣＯＳおよびＣＴＬＡ−４と比べて、ＰＤ−Ｌ１と特異的に結合するならば、該開示の大環状化合物は細胞表面上でのＰＤ−Ｌ１発現を特異的に検出するのに用いることができ、その上に、免疫親和性精製を介してＰＤ−Ｌ１を精製するのに用いることができる。

【0153】

がん
ＰＤ−１の、大環状化合物による遮断は、患者におけるがん細胞への免疫応答を強化しうる。ＰＤ−１のリガンドである、ＰＤ−Ｌ１は、正常なヒト細胞では発現されないが、種々のヒトがんにて豊富に存在する（Dongら、Nat. Med., 8：787-789（2002））。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１とが相互に作用することで、腫瘍浸潤性リンパ球の減少、Ｔ−細胞受容体介在性増殖の低下、がん細胞による免疫の回避がもたらされる（Dongら、J. Mol. Med., 81：281-287（2003）；Blankら、Cancer Immunol. Immunother., 54：307-314（2005）； Konishiら、Clin. Cancer Res., 10：5094-5100（2004））。免疫抑制は、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１との局所的相互作用を阻害することにより、無効とされ、その上、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ２との相互作用が遮断されると、その作用は相加的となり得る（Iwaiら、Proc. Natl. Acad. Sci., 99：12293-12297（2002）；Brownら、J. Immunol., 170：1257-1266（2003））。従来の研究によれば、Ｔ細胞の増殖が、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１との相互作用を阻害することによって、復元され得ることが示されたが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断することによるインビボでのがん腫瘍の成長に対する直接的な効果について報告はなされていない。一の態様において、本開示はがん腫瘍の成長が抑制されるように大環状化合物を用いてインビボにて対象を治療することに関する。大環状化合物は単独で使用されてがん腫瘍の成長を阻害してもよい。あるいはまた、大環状化合物は他の免疫原性剤、標準的ながん治療剤、または下記に示される他の大環状化合物と共に使用されてもよい。

【0154】

従って、一の実施態様において、該開示は対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の大環状化合物を投与することを含む、方法を提供する。

【0155】

その増殖が本開示の大環状化合物を用いて阻害され得る好ましいがんとして、典型的には免疫療法に応答するがんが挙げられる。治療するのに好ましいがんの例として、限定されるものではないが、黒色腫（例、転移性悪性黒色腫）、腎細胞がん（例、明細胞がん）、前立腺がん（例、ホルモン不応性前立腺がんおよび去勢抵抗性前立腺がん）、乳がん、結腸直腸がんおよび肺がん（例、扁平および非扁平非小細胞肺がん）が挙げられる。さらには、本開示は難治性または再発性悪性腫瘍であって、その増殖が該開示の大環状化合物を用いて阻害され得る腫瘍を包含する。

【0156】

本開示の方法を用いて治療され得る他のがんの例として、骨肉腫、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、子宮がん、卵管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、慢性または急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病を含む）、小児期に見られる充実性腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓または尿管がん、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、Ｔ−細胞リンパ腫、環境誘発性がん（アスベストにより誘発されるがんを含む）、および当該がんの組み合わせが挙げられる。本開示は、転移がん、特にＰＤ−Ｌ１を発現する転移がんの治療にも有用である（Iwaiら、Int. Immunol., 17：133-144（2005））。

【0157】

所望により、ＰＤ−Ｌ１と結合する大環状化合物は、がん細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、化合物、および炭水化物分子を含む）、細胞、および免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞などの免疫原性物質と組み合わせることができる（Heら、J. Immunol., 173：4919-4928（2004））。使用可能な腫瘍ワクチンの例として、限定されるものではないが、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼのペプチドなどの黒色腫抗原のペプチド、またはサイトカインＧＭ−ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞（以下にさらに記載）が挙げられる。

【0158】

ヒトにおいて、黒色腫などのある種の腫瘍は免疫原性であることが分かった。ＰＤ−Ｌ１を遮断することによってＴ細胞活性化の閾値を上げることで、宿主における腫瘍応答の活性化が期待されうると予想される。

【0159】

ＰＤ−Ｌ１遮断はワクチン接種のプロトコルと組み合わせた時が最も効果的であるようである。腫瘍に対するワクチン接種について多くの実験的な戦略方法が提案されている（Rosenberg, S.、Development of Cancer Vaccines、ASCO Educational Book Spring：60-62（2000）；Logothetis, C.、ASCO Educational Book Spring：300-302（2000）；Khayat, D.、ASCO Educational Book Spring：414-428（2000）；Foon, K.、ASCO Educational Book Spring：730-738（2000）を参照のこと；Restifo, N.ら、Cancer Vaccines, Chapter 61, pp.3023-3043, DeVita, V.ら編、Cancer：Principles and Practice of Oncology、Fifth Edition（1997）も参照のこと）。これらの戦略の１つでは、自己または同種の腫瘍細胞を用いてワクチンを調製する。これらの細胞ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ−ＣＳＦを発現するように形質導入される場合に、最も効果的であることが分かった。ＧＭ−ＣＳＦは腫瘍ワクチン接種のための抗原提示の強力なアクチベーターであることがわかった（Dranoffら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90：3539-3543（1993））。

【0160】

様々な腫瘍における遺伝子発現およびラージスケールな遺伝子発現パターンを研究することで、いわゆる腫瘍特異的抗原が特定されるに至った（Rosenberg, S.A.、Immunity, 10：281-287（1999））。多くの場合、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍にて、および腫瘍が発生した細胞にて発現した分化抗原、例えば、メラニン細胞抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、およびＴｒｐ−２である。より重要なことは、これらの抗原の多くが、宿主にて見られる腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であると示し得ることである。ＰＤ−Ｌ１遮断を、これらのタンパク質に対して免疫応答を生じさせるために、腫瘍にて発現される組換えタンパク質および／またはペプチドの収集体と併合して使用してもよい。これらのタンパク質は、免疫系によって、通常は、自己抗原とみなされ、従ってそれらに対して耐性である。腫瘍抗原はまた、染色体のテロメアの合成に必要とされ、ヒトがんの８５％以上で、限られた数の体組織のみで発現される、タンパク質テロメラーゼを含んでもよい（Kim, Nら、Science, 266：2011-2013（1994））。（これらの体組織は様々な手段で免疫攻撃から保護され得る）。腫瘍抗原はがん細胞で発現される「ネオ抗原」であってもよく、というのも体組織の変異がタンパク質配列を改変させるか、または２つの関連しない配列間で融合タンパク質（すなわち、フィラデルフィア染色体でのｂｃｒ−ａｂｌ）またはＢ細胞腫瘍より由来のイデオタイプを生成するからである。

【0161】

他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶおよびＨＣＶ）およびカポジ型ヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）などのヒトがんに関与するウイルスからのタンパク質を含んでもよい。ＰＤ−Ｌ１遮断と関連して使用されてもよい他の形態の腫瘍特異的抗原は、腫瘍組織それ自体から単離されたヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）の精製物である。これらのヒートショックタンパク質は腫瘍細胞から由来のタンパク質のフラグメントを含有し、これらのＨＳＰは、抗原提示細胞への送達において、腫瘍免疫を誘発するのに極めて効果的である（Suot, R.ら、Science, 269：1585-1588（1995）；Tamura, Y.ら、Science, 278：117-120（1997））。

【0162】

樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答をプライミングするのに使用され得る、強力な抗原提示細胞である。ＤＣはエクスビボにて産生され、種々のタンパク質およびペプチド抗原、ならびに腫瘍細胞抽出物をロードし得る（Nestle, F.ら、Nat. Med., 4：328-332（1998））。ＤＣはまた、遺伝的手段により形質導入され、これらの腫瘍抗原も同様に発現してもよい。ＤＣはまた、免疫化を目的として腫瘍細胞と直に融合してもよい（Kugler, A.ら、Nat. Med., 6：332-336（2000））。ワクチン接種の方法として、ＤＣ免疫付与をＰＤ−Ｌ１遮断と効果的に組み合わせ、より強力な抗腫瘍応答を活性化してもよい。

【0163】

ＰＤ−Ｌ１遮断は標準的ながん治療と組み合わされてもよい。ＰＤ−Ｌ１遮断は、効果的には、化学療法と組み合わされてもよい。これらの場合には、投与される化学療法の薬剤量は減らすことが可能である（Mokyr, M.ら、Cancer Res., 58：5301-5304（1998））。そのような組み合わせの一例が、黒色腫を治療するための、大環状化合物と、ダカルバジン（decarbazine）との組み合わせである。そのような組み合わせのもう一つ別の例が、黒色腫を治療するための、大環状化合物と、インターロイキン−２（ＩＬ−２）との組み合わせである。ＰＤ−Ｌ１遮断および化学療法の併用の背後にある科学的根拠は、大抵の化学療法用化合物の細胞傷害作用の結果としての、細胞死が、抗原提示経路にて腫瘍抗原のレベルの向上をもたらすはずである、というものである。細胞死を通してＰＤ−Ｌ１遮断と相乗作用をもたらす可能性のある他の併用療法が、放射線療法、手術、およびホルモン欠乏療法である。これらのプロトコルは、各々、宿主にて腫瘍抗原の供給源を生み出す。血管形成阻害剤をＰＤ−Ｌ１遮断と組み合わせてもよい。血管形成は腫瘍抗原を宿主抗原提示経路に送り込むことができ、その阻害は腫瘍細胞死をもたらす。

【0164】

ＰＤ−Ｌ１を遮断する大環状化合物はまた、ＦｃアルファまたはＦｃガンマ受容体発現のエフェクター細胞ないし腫瘍細胞を標的とする、二重特異性大員環と組み合わせて使用され得る（例えば、米国特許第５,９２２,８４５号および第５,８３７,２４３号を参照のこと）。二重特異性大員環を用いて２種の別個の抗原を標的とすることができる。例えば、抗Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原（例、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）の二重特異性大員環が、マクロファージないし腫瘍部位を標的とするのに使用された。この標的設定は、腫瘍特異的応答をより効率的に活性化しうる。これらの応答のＴ細胞アームは、ＰＤ−Ｌ１遮断を使用することによって増強される。あるいは、腫瘍抗原および樹状細胞特異的細胞表面マーカーに結合する二重特異性大員環を使用することによって、抗原がＤＣに直接送達されてもよい。

【0165】

腫瘍は多種多様な機構により宿主免疫の監視を回避する。これらの機構の多くは、腫瘍により発現され、免疫抑制的である、タンパク質を不活化することで克服され得る。これらは、とりわけ、ＴＧＦ−ベータ（Kehrl, J.ら、J. Exp. Med., 163：1037-1050（1986））、ＩＬ−１０（Howard, M.ら、Immunology Today, 13：198-200（1992））、およびＦａｓリガンド（Hahne, M.ら、Science, 274：1363-1365（1996））を包含する。これらの各化学物質に対して大環状化合物を抗−ＰＤ−Ｌ１と組み合わせて用い、免疫抑制剤の効果を相殺し、宿主による腫瘍免疫応答を有利にすることができる。

【0166】

宿主免疫応答性を活性化するのに使用され得る他の大環状化合物は、抗−ＰＤ−Ｌ１と組み合わせて使用され得る。これらはＤＣ機能および抗原提示を活性化する樹状細胞の表面にある分子を包含する。抗−ＣＤ４０大環状化合物は効果的にＴ細胞ヘルパー活性と置換され得（Ridge, J.ら、Nature, 393：474-478（1998））、ＰＤ−１抗体と一緒に使用され得る（Ito, N.ら、Immunobiology, 201（5）：527-540（2000））。大環状化合物を、ＣＴＬＡ−４（例えば、米国特許第５,８１１,０９７号）、ＯＸ−４０（Weinberg, A.ら、Immunol., 164：2160-2169（2000））、４−１ＢＢ（Melero, I.ら、Nat. Med., 3：682-685（1997）、およびＩＣＯＳ（Hutloff, A.ら、Nature, 397：262-266（1999））などのＴ細胞共刺激性分子に対して活性にすることはまた、Ｔ細胞の活性化のレベルを高めるかもしれない。

【0167】

骨髄移植は、現在、造血起源の種々の腫瘍を治療するのに使用されている。対宿主移植片疾患はこの治療の結果であるが、治療的利益は移植片対腫瘍応答より得ることができる。ＰＤ−Ｌ１遮断を用いてドナーの移植腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を増大させることができる。

【0168】

また、腫瘍に拮抗する抗原特異的Ｔ細胞を付与するために、抗原特異的Ｔ細胞をエクスビボにて活性化および増加させ、これらの細胞を受容者に養子免疫伝達することを含む実験的治療プロトコルもいくつか存在する（Greenberg, R.ら、Science, 285：546-551（1999））。これらの方法を用いてＣＭＶなどの感染物質に対するＴ細胞応答を活性化することもできる。大環状化合物の存在下でのエクスビボにおける活性化は、養子免疫伝達されたＴ細胞の頻度および活性を増大させると期待され得る。

【0169】

感染疾患
本開示の他の方法は、特定の毒素または病原体に曝された患者を治療するのに使用される。従って、本開示のもう一つ別の態様は、対象における感染疾患を治療する方法であって、該対象が感染疾患について治療されるように、該対象に本開示の大環状化合物を投与することを含む、方法を提供する。

【0170】

上記される腫瘍に対するその適用と同様に、ＰＤ−Ｌ１遮断は、単独で、またはアジュバントとして、ワクチンと組み合わせて使用され、病原体、毒素、または自己抗原に対する免疫応答を刺激することができる。この治療方法が特に有用である可能性のある病原体の例として、現在のところ効果的なワクチンのない病原体、または従来のワクチンが決して完全には効果的でない病原体が挙げられる。これらは、以下に限定されないが、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ、およびＣ型）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア（Butler, N.S.ら、Nature Immunology 13, 188-195（2012）；Hafalla, J.C.R.ら、PLOS Pathogens；February 2, 2012）、リーシュマニア、黄色ブドウ球菌、緑膿菌を包含する。ＰＤ−Ｌ１遮断は、感染の間に抗原の改変を示す、ＨＩＶなどの物質によって確立された感染に対して特に有用である。これらの新規なエピトープは抗−ヒトＰＤ−Ｌ１投与の時点で異物として認識され、かくしてＰＤ−Ｌ１を介する負のシグナルによって減衰されない強力なＴ細胞応答を誘発する。

【0171】

本開示の方法により治療可能な感染を引き起こす病原性ウイルスのいくつかの例として、ＨＩＶ、肝炎ウイルス（Ａ、Ｂ、またはＣ）、ヘルペスウイルス（例、ＶＺＶ、ＨＳＶ−１、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩ、およびＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルル、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デング熱ウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウイルス脳炎ウイルスが挙げられる。

【0172】

本開示の方法により治療可能な感染を引き起こす病原性細菌のいくつかの例として、クラミジア、リケッチア菌、ミコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌（conococci）が、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、バチルス、コレラ、破傷風、ボツリヌス菌中毒、炭疽、腺ペスト、レプトスピラ症、およびライム病の細菌が挙げられる。

【0173】

本開示の方法により治療可能な感染を引き起こす病原性真菌のいくつかの例として、カンジダ（アルビカンス、クルセイ、グラブラタ、トロピカリス等）、クリプトコッカス・ネオフォーム、アスペルギルス（フミガーツス、ニガー等）、ケカビ属（ケカビ、アブジディア、クモノスカビ）、スポロトリックス・シェンキィ、ブラストミセス・デルマチチジス、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、コクシジオイデス・イミティスおよびヒストプラスマ・カプスラーツムが挙げられる。

【0174】

本開示の方法により治療可能な感染を引き起こす病原性寄生体のいくつかの例として、赤痢アメーバ、大腸バランチジウム、ネグレリア・フォーレリ、アカントアメーバ・スピーシズ、ジアルジア・ランブリア、クリプトスポリジウム・スピーシズ、ニューモシスティス・カリニ、プラスモディウム・ビバックス、バベシア・ミクロチ、トリパノソーマ・ブルーセイ、トリパノソーマ・クルーズ、リーシュマニア・ドノバン、トキソプラズマ・ゴンジイ、およびブラジル鉤虫が挙げられる。

【0175】

上記したいずれの方法においても、ＰＤ−Ｌ１遮断は、腫瘍抗原の提示の強化を提供する、サイトカイン治療（例、インターフェロン、ＶＥＧＦ活性を標的とする物質またはＶＥＧＦ−受容体、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−２）、または二重特異性抗体療法などの他の形態の免疫療法と組み合わせることができる（例えば、Holliger、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90：6444-6448（1993）；Poljak、Structure, 2：1121-1123（1994）を参照のこと）。

【0176】

自己免疫反応
大環状化合物は自己免疫応答を誘発および増幅しうる。実際、腫瘍細胞およびペプチドワクチンを用いて抗腫瘍応答が誘発されることで、多くの抗腫瘍応答が、抗自己反応性（抗−ＣＴＬＡ−４＋ＧＭ−ＣＳＦ−修飾のＢ１６黒色腫にて観察される脱色素（van Elsasら、前掲）；Ｔｒｐ−２ワクチン接種したマウスにおける脱色素（Overwijk, W.ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96：2982-2987（1999））；ＴＲＡＭＰ腫瘍細胞ワクチンにより惹起される自己免疫前立腺炎（Hurwitz, A.、supra（2000））、黒色腫ペプチド抗原ワクチン接種およびヒト臨床実験において観察される白斑（Rosenberg, S.A.ら、J. Immunother. Emphasis Tumor Immunol., 19（1）：81-84（1996）））と関連していることが明らかにされた。

【0177】

従って、疾患の治療用のこれらの自己タンパク質に対する免疫応答を効果的に生じさせるワクチン接種プロトコルを考案するために、抗−ＰＤ−Ｌ１遮断を種々の自己タンパク質と併用することを考慮することが可能である。例えば、アルツハイマー病は、脳内に沈着したアミロイドのベータペプチドが不当に蓄積していることが関与しており、アミロイドに対する抗体反応でこれらのアミロイド沈着を除去することができる（Schenkら、Nature, 400：173-177（1999））。

【0178】

他の自己タンパク質も、アレルギーおよび喘息を治療するためのＩｇＥ、および関節リウマチ用のＴＮＦアルファなどの標的として使用されてもよい。最後に、種々のホルモンに対する抗体応答が本明細書に開示の大員環の使用によって誘発されてもよい。生殖ホルモンに対する中和抗体応答が避妊に使用されてもよい。特定の腫瘍の成長に必要とされるホルモンおよび他の可溶性因子に対する中和抗体応答を、可能性のあるワクチン接種の標的として考えてもよい。

【0179】

抗−ＰＤ−Ｌ１大員環を使用する上記と類似する方法は、治療的自己免疫応答を誘発し、アルツハイマー病におけるＡベータを含むアミロイド沈着物、ＴＮＦアルファおよびＩｇＥなどのサイトカインのような他の自己抗原が不適切に蓄積した患者を治療するのに使用され得る。

【0180】

ワクチン
大環状化合物は、抗−ＰＤ−１大員環を関心のある抗原（例、ワクチン）と一緒に共投与することにより抗原特異的免疫応答を刺激するのに使用されてもよい。従って、もう一つ別の態様において、本開示は、対象での抗原に対する免疫応答を強化する方法であって、該対象に、（ｉ）抗原；および（ｉｉ）対象にて抗原に対する免疫応答を強化するような抗−ＰＤ−１大員環、を投与することを含む、方法を提供する。抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または病原体から由来の抗原とすることができる。限定されるものではないが、かかる抗原の例として、上記される腫瘍抗原（または腫瘍ワクチン）、または上記のウイルス、細菌または他の病原体から由来の抗原などの、上記のセクションにて記載される抗原が挙げられる。

【0181】

本開示の組成物（例、大環状化合物、多重特異的または二重特異性分子、および免疫抱合体）をインビボおよびインビトロにて投与する適切な経路は当該分野にて周知であり、当業者により選択され得る。例えば、組成物は注射（例、静脈内または皮下注射）により投与され得る。使用される分子の適切な用量は、対象の年齢および体重、および組成物の濃度および／または処方に依存するであろう。

【0182】

上記されるように、本開示の大環状化合物は、１または複数の他の治療剤、例えば、細胞毒性剤、放射毒性剤、または免疫抑制剤と共投与され得る。該化合物は該薬剤と（免疫複合体として）リンクさせることができ、または薬剤と別個に投与することができる。後者の場合（別個の投与の場合）には、化合物は、薬剤の前に、後に、または同時に投与することができ、あるいは他の既知の療法、例、抗癌療法、例、放射線療法と共投与することができる。かかる治療剤として、とりわけ、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シスプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、デカルバジンおよびシクロホスファミドヒドロキシ尿素などの抗新生物剤を挙げることができ、それ自体は患者に対して毒性または亜毒性にあるレベルで効果があるに過ぎない。シスプラチンは、４週間毎に１回、１００ｍｇ／用量として静脈内投与され、アドリアマイシンは、２１日毎に１回、６０〜７５ｍｇ／ｍｌの用量として静脈内投与される。本開示の大環状化合物の、化学療法剤との共投与は、異なる作用機序を介して作用し、ヒト腫瘍細胞に対して細胞毒性作用を生じさせる、２種の抗がん剤を提供する。かかる共投与は、薬物に対する耐性の発達による、または腫瘍細胞を該化合物と非反応性とするであろうその抗原性の変化による、問題を解決しうる。

【0183】

本開示の範囲内には、本開示の組成物（例、大環状化合物、二重特異性または多重特異性分子、あるいは免疫抱合体）および使用説明書を含むキットもある。該キットは、少なくとも１個のさらなる試薬、あるいは１または複数の本開示のさらなる大環状化合物（例、該大員環とは異なる、ＰＤ−Ｌ１抗原でのエピトープと結合する相補的活性を有するヒト抗体）をさらに含有しうる。キットは、典型的には、キットの中身の意図した使用を示すラベルを含む。ラベルなる語は、該キットにて、または一緒に供給されるか、さもなければ該キットに添付して供給される、いずれの筆記または記録材料をも包含する。

【0184】

併用療法
本開示の大環状化合物と、もう一つ別のＰＤ−Ｌ１アンタゴニストおよび／または他の免疫調節剤との組み合わせは、過剰増殖性疾患に対して免疫応答を強化するのに有用である。例えば、これらの分子は、インビトロまたはエクスビボにて、培養中の細胞に、あるいは、例えばインビボにて、ヒト対象に投与され、種々の状況での免疫性を強化することができる。従って、１の態様にて、該開示は、対象において免疫応答を修飾する方法であって、該対象における免疫応答が修飾されるように、該対象に本開示の大環状化合物を投与することを含む、方法を提供する。該応答は強化、刺激、またはアップレギュレートされるのが好ましい。もう一つ別の実施態様において、本開示は、過剰増殖性疾患の免疫刺激治療剤での治療に付随する有害事象を改変する方法であって、本開示の大環状化合物および治療用量以下のもう一つ別の免疫調節剤を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0185】

ＰＤ−Ｌ１の大環状化合物による遮断は、患者でのがん細胞に対する免疫応答を強化しうる。その増殖が本開示の大環状化合物を用いて阻害され得るがんは、典型的には、免疫療法に応答するがんを包含する。本開示の併用療法で治療するのに代表的ながんの例として、黒色腫（例、転移性悪性黒色腫）、腎臓がん、前立腺がん、乳がん、大腸がんおよび肺がんが挙げられる。本開示の方法を用いて治療され得る他のがんの例として、骨肉腫、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、子宮がん、卵管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、慢性または急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病を含む）、小児期に見られる充実性腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓または尿管がん、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、Ｔ−細胞リンパ腫、環境誘発性がん（アスベストにより誘発されるがんを含む）、および当該がんの組み合わせが挙げられる。本開示はまた、転移性がんの治療にも有用である。

【0186】

特定の実施態様において、本明細書に記載の少なくとも１つの大環状化合物を含有する治療剤の組み合わせは、医薬的に許容される担体中に単一の組成物として同時に、または各治療剤が連続して投与され得る別個の組成物として同時に投与されてもよい。例えば、第２免疫調節剤および本開示の大環状化合物は、第２免疫調節剤を最初に投与し、大環状化合物を次に投与するか、あるいは大環状化合物を最初に投与し、第２免疫調節剤を次に投与するように、連続して投与され得る。さらには、併用療法が複数回にわたって連続して投与される場合、逐次投与の順序は、投与の各時点で、逆にすることも、あるいは同じ順番を保持すこともでき、逐次投与が同時投与と組み合わされてもよく、あるいはそのいずれの組み合わせであってもよい。例えば、第２免疫調節剤および大環状化合物の第１投与は同時であってもよく、第２投与は第２免疫調節剤が最初で、大環状化合物が次で逐次的であってもよく、第３投与は大環状化合物が最初で、免疫調節剤が次で逐次的であってもよい等である。もう一つ別の代表的な投与計画は、大環状化合物を最初に、第２免疫調節剤を次に連続して投与する第１投与を含んでもよく、その後の投与が同時であってもよい。

【0187】

所望により、大環状化合物と、第２免疫調節剤との組み合わせは、がん細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド、および炭水化物分子を含む）、細胞、および遺伝子をコード化する免疫刺激サイトカインでトランスフェクトされた細胞などの免疫原性剤とさらに組み合わせることができる（Heら、J. Immunol., 173：4919-4928（2004））。限定されないが、使用できる腫瘍ワクチンの例として、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼのペプチド、あるいはチロシンＧＭ−ＣＳＦを発現するためにトランスフェクトされた腫瘍細胞（下記にさらに記載される）が挙げられる。

【0188】

ＰＤ−Ｌ１大環状化合物および第２免疫調節剤の組み合わせは、さらに、ワクチン接種のプロトコルと組み合わせることができる。腫瘍に拮抗する多くの実験的方法が創作された（Rosenberg, S.、Development of Cancer Vaccines、ASCO Educational Book Spring：60-62（2000）；Logothetis, C.、ASCO Educational Book Spring：300-302（2000）；Khayat, D.、ASCO Educational Book Spring：414-428（2000）；Foon, K.、ASCO Educational Book Spring：730-738（2000）を参照のこと；またRestifoら、Cancer Vaccines, Chapter 61, pp. 3023-3043, DeVitaら編、Cancer：Principles and Practice of Oncology, Fifth Edition（1997））。これらのうちの１つの方法では、自己または同種の腫瘍細胞を用いてワクチンが調製される。これらの細胞ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ−ＣＳＦを発現するように形質導入される時に、最も効果的であると示されている。ＧＭ−ＣＳＦは腫瘍ワクチン接種における抗原提示の強力な活性化剤であると示されている（Dranoffら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90：3539-3543（1993））。

【0189】

様々な腫瘍における遺伝子発現およびラージスケールな遺伝子発現パターンを研究することで、いわゆる腫瘍特異的抗原を明確にするに至った（Rosenberg、Immunity, 10：281-287（1999））。多くの場合、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍にて、および腫瘍が発生した細胞にて発現した分化抗原、例えば、メラニン細胞抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、およびＴｒｐ−２である。より重要なことは、これらの抗原の多くは宿主にて見られる腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であると示されうることである。特定の実施態様において、ＰＤ−Ｌ１の大環状化合物と、第２免疫調節剤とを組み合わせ、これらのタンパク質に対する免疫応答を生じさせるために、腫瘍にて発現される組換えタンパク質および／またはペプチドの収集体と併合して使用されてもよい。これらのタンパク質は、免疫系によって、通常は、自己抗原として観察され、従ってそれらに対して耐性がある。腫瘍抗原はまた、染色体のテロメアの合成に必要とされ、ヒトがんの８５％以上で、限られた数の体組織のみで発現される、タンパク質テロメラーゼを含んでもよい（Kimら、Science, 266：2011-2013（1994））。（これらの体組織は様々な手段で免疫攻撃から保護され得る）。腫瘍抗原はがん細胞で発現される「ネオ抗原」であってもよく、というのも体組織の変異がタンパク質配列を改変させるか、または２つの関連しない配列間で融合タンパク質（すなわち、フィラデルフィア染色体でのｂｃｒ−ａｂｌ）またはＢ細胞腫瘍より由来のイデオタイプを生成するからである。

【0190】

他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶおよびＨＣＶ）およびカポジ型ヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）などのヒトがんに関与するウイルスからのタンパク質を含んでもよい。ＰＤ−Ｌ１大環状化合物の遮断と関連して使用されてもよい他の形態の腫瘍特異的抗原は、腫瘍組織それ自体から単離されたヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）の精製物である。これらのヒートショックタンパク質は腫瘍細胞から由来のタンパク質のフラグメントを含有し、これらのＨＳＰは、抗原提示細胞への送達において、腫瘍免疫を誘発するのに極めて効果的である（Suotら、Science, 269：1585-1588（1995）；Tamura Y.ら、Science, 278：117-120（1997））。

【0191】

樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答をプライミングするのに使用され得る、強力な抗原提示細胞である。ＤＣはエクスビボにて産生され、種々のタンパク質およびペプチド抗原、ならびに腫瘍細胞抽出物でロードされ得る（Nestleら、Nat. Med., 4：328-332（1998））。これらの腫瘍抗原を発現するために、遺伝的手段によりＤＣが形質導入されてもよい。ＤＣはまた、免疫化を目的として腫瘍細胞に直に融合されてもよい（Kuglerら、Nat. Med., 6：332-336（2000））。ワクチン接種の方法として、ＤＣ免疫化は抗−ＰＤ−Ｌ１の大環状化合物および第２免疫調節剤の組み合わせと効果的にさらに組み合わされ、より強力な抗腫瘍応答を活性化してもよい。

【0192】

抗−ＰＤ−Ｌ１大環状化合物と、さらなる免疫調節剤との組み合わせもまた、標準的ながん治療とさらに組み合わされてもよい。例えば、大環状化合物と、第２免疫調節剤との組み合わせは、化学療法計画と効果的に組み合わされてもよい。これらの場合には、大環状化合物と、第２免疫調節剤との組み合わせで観察されるように、本開示の組み合わせと一緒に投与される他の化学療法試剤の用量を減らすことが可能である（Mokyrら、Cancer Res., 58：5301-5304（1998））。かかる組み合わせの例は、大環状化合物と、第２免疫調節剤に、さらにデカルバジンを合わせた、黒色腫の治療用の組み合わせである。もう一つ別の例が、大環状化合物と、第２免疫調節剤に、さらにインターフェロン−２（ＩＬ−２）を合わせた、黒色腫の治療用の組み合わせである。ＰＤ−Ｌ１大環状化合物およびもう一つ別の免疫調節剤と、化学療法との組み合わせの背後にある科学的根拠は、化学療法の化合物の多くが細胞毒性作用を有する結果として、細胞死が抗原提示経路において腫瘍抗原のレベルの上昇をもたらすはず、というものである。抗−ＰＤ−Ｌ１大環状化合物とさらなる免疫調節剤との組み合わせが細胞死を通して相乗作用をもたらす可能性のある他の併用療法として、放射線、手術、またはホルモン除去療法が挙げられる。これらのプロトコルは、各々、宿主にて腫瘍抗原の供給源をクリエートする。血管形成阻害剤もまたＰＤ−Ｌ１と第２免疫調節剤との併用と組み合わされてもよい。血管形成は腫瘍抗原を宿主抗原提示経路に送り込む供給源でもあり、その阻害は腫瘍細胞死をもたらす。

【0193】

ＰＤ−Ｌ１と、もう一つ別の免疫調節剤との組み合わせはまた、ＦｃアルファまたはＦｃガンマ受容体を発現するエフェクター細胞から腫瘍細胞を標的とする、二重特異性大員環と組み合わせて使用され得る（例えば、米国特許第５,９２２,８４５号および第５,８３７,２４３号を参照のこと）。二重特異性大員環は２つの別個の抗原を標的とするのに使用され得る。例えば、抗−Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原（例、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）の二重特異性大員環を用いて、マクロファージから腫瘍の部位を標的とした。この標的化は腫瘍特異的応答をより効果的に活性化させるかもしれない。これらの応答のＴ細胞アームはＰＤ−Ｌ１と第２の免疫調節剤との組み合わせを用いることによって増強されるであろう。あるいはまた、腫瘍抗原と樹状細胞特異的細胞表面マーカーとに結合する、二重特異性大員環を用いることで、抗原をＤＣに直接送達してもよい。

【0194】

もう一つ別の例において、大環状化合物と、第２免疫調節剤との組み合わせを、RITUXAN（登録商標）（リツキシマブ）、HERCEPTIN（登録商標）（トラスツズマブ）、BEXXAR（登録商標）（トシツモマブ）、ZEVALIN（登録商標）（イブリツモマブ）、CAMPATH（登録商標）（アレムツズマブ）、リムホシド（Lymphocide）（エプラツズマブ（eprtuzumab））、AVASTIN（登録商標）（ベバシズマブ）、およびTARCEVA（登録商標）（エルロチニブ）等などの抗腫瘍性大環状薬剤と合わせて使用しうる。例示であって、理論により拘束されるものではなく、抗がん抗体または毒素とコンジュゲートした抗がん抗体での治療は、第２免疫調節剤標的またはＰＤ−Ｌ１によって媒介される免疫応答を増強させるであろう、がん細胞死（例、腫瘍細胞死）をもたらしうる。例示的な実施態様において、過剰増殖性疾患（例、がん腫瘍）の治療は、宿主によって抗腫瘍免疫応答が強化される可能性のある、抗がん抗体と、大環状化合物および第２免疫調節剤とを同時にまたは連続して、あるいはそのいずれかで併用して組み合わせることを包含しうる。

【0195】

腫瘍は多種多様な作用機構によって宿主免疫監視を逃れている。これらの作用機構の多くは、腫瘍により発現され、免疫抑制的である、タンパク質を不活化することにより克服され得る。これらは、とりわけ、ＴＧＦ−ベータ（Kehrl, J.ら、J. Exp. Med., 163：1037-1050（1986））、ＩＬ−１０（Howard, M.ら、Immunology Today, 13：198-200（1992））、およびＦａｓリガンド（Hahne, M.ら、Science, 274：1363-1365（1996））を包含する。もう一つ別の例において、これらの各実体に対する抗体をさらに、大環状化合物、およびもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせて免疫抑制剤の作用を弱め、宿主による抗腫瘍免疫応答に有利に働くものとさせてもよい。

【0196】

宿主免疫応答性を活性化するのに使用され得る他の薬剤が、本開示の大環状化合物と組み合わされてさらに使用され得る。これらは、ＤＣ機能および抗原提示を活性化する樹状細胞の表面にある分子を包含する。抗ＣＤ４０大環状ペプチドは、Ｔ細胞ヘルパー活性と効果的に置き換えることができ（Ridge, J.ら、Nature, 393：474-478（1998））、本開示の大環状化合物と、単独で、または抗−ＣＴＬＡ−４の組み合わせとの併用のいずれかで合わせて使用され得る（Ito, N.ら、Immunobiology, 201（5）：527-540（2000））。大環状化合物をＯＸ−４０（Weinberg, A.ら、Immunol., 164：2160-2169（2000））、４−１ＢＢ（Melero, I.ら、Nat. Med., 3：682-685（1997）、およびＩＣＯＳ（Hutloff, A.ら、Nature, 397：262-266（1999））などのＴ細胞共刺激分子に対して活性にすることはまた、Ｔ細胞の活性化のレベルを増加させるかもしれない。

【0197】

造血起源の種々の腫瘍を治療するのに、現在では、骨髄移植が使用されている。対宿主移植片疾患がこの治療の結果であるが、対腫瘍移植片応答から治療的利益を得ることができるかもしれない。本開示の大環状化合物は、単独で、またはもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせて使用され、ドナー移植の腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を増大させることができる。

【0198】

また、腫瘍に拮抗する抗原特異的Ｔ細胞を得るために、抗原特異的Ｔ細胞をエクスビボにて活性化および増大させ、これらの細胞を受容者に養子免疫伝達することを含む、実験的治療プロトコルもいくつか報告されている（Greenberg, R.ら、Science, 285：546-551（1999））。これらの方法を用いてＣＭＶなどの感染物質に対するＴ細胞応答を活性化することもできる。本開示の大環状化合物の存在下でのエクスビボにおける活性化は、単独で、またはもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせるかのいずれかで、養子免疫伝達されたＴ細胞の頻度および活性を増大させると期待され得る。

【0199】

特定の実施態様において、本開示は、過剰増殖性疾患の免疫刺激剤での治療に付随する有害事象を改変する方法であって、本開示の大環状化合物を治療用量以下のもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせて対象に投与することを含む、方法を提供する。例えば、本開示の方法は、非吸収性ステロイドを患者に投与することによって、免疫刺激性治療抗体誘発の大腸炎または下痢の発生率を下げる方法を提供する。免疫刺激性治療抗体を受けるであろう患者はいずれも、そのような治療によって誘発される大腸炎または下痢を発症する危険があるため、このすべての患者集団は本開示の方法による治療に適する。
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療し、ＩＢＤの増悪を防止するためにステロイドが投与されるが、ＩＢＤと診断されていない患者においてＩＢＤを防止するのに（ＩＢＤの発生を減らすのに）ステロイドが使用されたことはなかった。非吸収性ステロイドであっても、ステロイドに伴う有意な副作用がその予防的使用を妨げた。

【0200】

さらなる実施態様において、本開示の大環状化合物は、単独で、またはもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせて、いずれかの非吸収性ステロイドの使用とさらに組み合わせることができる。本明細書にて使用される「非吸収性ステロイド」は、肝臓にて代謝した後に、ステロイドの生物学的利用能が低く、すなわち約２０％未満であるような、広範囲に及ぶ初回通過代謝作用を示すグルココルチコイドである。本開示の１の実施態様において、非吸収性ステロイドはブデソニドである。ブデソニドは局所的に作用するグルココルチコステロイドであり、それは経口投与した後に、主に肝臓で広く代謝される。エントコート（ENTOCORT（登録商標））ＥＣ（Astra-Zeneca）は、薬物を回腸に、結腸のあらゆる箇所に送達することを最適化するように開発されたブデソニドのｐＨ−および時間−依存性経口製剤である。エントコート（登録商標）ＥＣは、回腸および／または上行結腸にて作用する軽度から中程度のクローン病の治療用に米国にて承認された。エントコート（登録商標）ＥＣのクローン病の治療における通常の経口用量は６〜９ｍｇ／日である。エントコート（登録商標）ＥＣは腸内で放出され、その後で腸粘膜にて吸収および保持される。エントコート（登録商標）ＥＣは胃粘膜を通り標的組織に入ると、肝臓にてシトクロムＰ４５０系によってグルココルチコイド活性がわずかにしかない代謝産物に広く代謝される。従って、生物学的利用能は低い（約１０％）。ブデソニドの低生物学的利用能は、あまり広くない初回通過代謝の他のグルココルチコイドと比べて、治療可能比の改善をもたらす。ブデソニドは、全身作用性のコルチコステロイドよりも、視床下部−下垂体の抑制が小さいことを含め、副作用が少ない。しかしながら、エントコート（登録商標）ＥＣの慢性投与は、副腎皮質機能亢進症および副腎抑制などの全身性グルココルチコイド作用をもたらしうる。Physicians’ Desk Reference Supplement, 第58版, 608-610（2004）を参照のこと。

【0201】

その上さらなる実施態様において、ＰＤ−Ｌ１およびもう一つ別の免疫調節剤の組み合わせを非吸収性ステロイドと一緒にし、サリチラートとさらに合わせることができる。サリチラートは、例えば：スルファサラジン（AZULFIDINE（登録商標）、Pharmacia & Upjohn）；オルサラジン（DIPENTUM（登録商標）、Pharmacia & UpJohn）；バラサラジド（COLAZAL（登録商標）、Salix Pharmaceuticals, Inc.）；およびメサラミン（ASACOL（登録商標）、Procter & Gamble Pharmaceuticals；PENTASA（登録商標）、Shire US；CANASA（登録商標）、Axcan Scandipharm, Inc.；ROEASA（登録商標）、Solvay）などの５−ＡＳＡ薬剤を包含する。

【0202】

投与量および製剤
式Ｉの適切な化合物、より具体的には本明細書に記載の大環状化合物は、化合物として単独で、および／または許容される担体と混合して医薬製剤の形態にて、糖尿病、および他の関連する疾患を治療するために患者に投与され得る。糖尿病を治療する分野の当業者は、該化合物をかかる治療を必要とするヒトを含む哺乳動物に投与する量および経路を容易に決定し得る。投与経路は、限定されないが、経口、口内、経直腸、経皮、バッカル、経鼻、経肺、皮下、筋肉内、皮内、舌下、結腸内、眼内、静脈内、または腸内投与を包含しうる。該化合物は、許容される薬局実務を基礎とし、投与経路に従って、処方される（Finglら、in The Pharmacological Basis of Therapeutics、第1章、1頁（1075）；Remington’s Pharmaceutical Sciences、第18版、Mack Publishing Co.、Easton、PA（1990））。

【0203】

本明細書に記載の医薬的に許容される化合物の組成物は、錠剤、カプセル（その各々が徐放性製剤または時間放出製剤を包含する）、ピル、散剤、顆粒、エリキシル、インサイチュゲル、ミクロスフェア、結晶複合体、リポソーム、ミクロエマルジョン、チンキ、懸濁液、シロップ、エアロゾルスプレー、およびエマルジョンなどの複数の剤形にて投与され得る。本明細書に記載の組成物はまた、経口、静脈内（ボーラスまたは点滴）、腹腔内、皮下、経皮または筋肉内形態にて投与され得、そのすべてが製薬の分野における当業者に周知の剤形を用いる。該組成物は単独で投与されてもよいが、一般に、選択される投与経路および標準的薬務を基礎として選択される医薬担体と一緒に投与されるであろう。

【0204】

本明細書に記載の組成物の投与計画は、もちろん、個々の薬剤の薬理学的特性およびその投与方法および経路；受容者の種類、年齢、性別、健康、病状および体重；症状の特性および程度；併用治療の種類；治療頻度；投与の経路、患者の腎臓および肝機能、および所望する効果などの既知の因子に応じて変化するであろう。医師または獣医師は、病態を防止、反撃、またはその進行を阻むのに必要とされる薬物の効果的な量を決定および処方することができる。

【0205】

一般的指針によれば、活性成分の一日の経口用量は、指示される効果を得るのに使用されるとすれば、約０.００１〜１０００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、および最も好ましくは約０.６〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であろう。静脈内投与では、活性成分の一日の用量は、指示される効果を得るのに使用されるとすれば、一定の速度で注入する間で０.００１ｎｇ〜１００.０ｎｇ／分／体重ｋｇの範囲であろう。かかる一定の静脈内注入は、好ましくは、０.０１ｎｇ〜５０ｎｇ／分／体重ｋｇの速度で、最も好ましくは、０.０１ｎｇ〜１０.０ｍｇ／分／体重ｋｇの速度で投与され得る。本明細書に記載の組成物は、一回の日用量にて投与されてもよく、あるいは全体の日用量を一日に２回、３回、または４回に分割した用量にて投与されてもよい。本明細書に記載の組成物はまた、必要とあれば数日／数週間／数ヶ月の期間にわたって薬物の持続放出を可能とするであろう、デポー製剤によって投与されてもよい。

【0206】

本明細書に記載の組成物は、適切な鼻腔内ベヒクルの局所的使用を介するか、または経皮パッチを用いる経皮経路を介して、鼻腔内形態にて投与され得る。経皮デリバリーシステムの形態にて投与される場合、その用量投与は、もちろん、投与計画を通じて間欠的であるよりもむしろ連続的であろう。

【0207】

組成物は、典型的には、意図する投与形態、すなわち、経口用錠剤、カプセル、エリキシル、噴射剤と共にまたは無しで生成されるエアロゾルスプレー、およびシロップについて適宜選択される、適切な医薬希釈剤、賦形剤、または担体（本明細書にて包括的に医薬担体と称される）との混合物にて、従来の薬務と一致して投与される。

【0208】

例えば、錠剤またはカプセルの形態にて経口投与する場合、活性な薬物成分は、限定されないが、ラクトース、澱粉、シュークロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、およびソルビトールなどの経口で非毒性の医薬的に許容される不活性な担体と組み合わされてもよく；液体形態にて経口投与される場合、経口用薬物成分は、限定されないが、エタノール、グリセロール、および水などの経口で非毒性の医薬的に許容される不活性ないずれの担体と組み合わせることもできる。その上、望ましいか、必要とあれば、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤も該混合物に配合することができる。適切な結合剤として、限定されないが、澱粉、ゼラチン、限定されないが、グルコースまたはベータ−ラクトースなどの天然糖、コーン甘味剤、アカシア、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウムなどの天然および合成ガム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、およびワックスが挙げられる。これらの剤形にて使用される滑沢剤として、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および塩化ナトリウムが挙げられる。崩壊剤は、限定されないが、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、およびキサンタンガムを包含する。

【0209】

本明細書に記載の組成物はまた、小型単層ベシクル、大型単層ベシクル、および多層ベシクルなどの混合ミセルまたはリポソーム送達系の形態にて投与されてもよい。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質より形成され得る。透過促進剤を加えて薬物吸収を強化してもよい。

【0210】

プロドラッグは医薬の望ましい多くの特性（すなわち、溶解性、生物学的利用能、製造性等）を強化することが知られているため、本明細書に記載の化合物はプロドラッグの形態にて送達されてもよい。かくして、本明細書に記載の主題は、この特許請求の範囲に記載の化合物、その送達方法、および該化合物を含有する組成物に及ぶものとする。

【0211】

本明細書に記載の組成物はまた、標的可能な薬物担体として可溶性ポリマーとカップリングさせてもよい。かかるポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリジンを包含し得る。さらには、本明細書に記載の組成物は、薬物の制御放出を達成するのに有用な一連の生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアシラート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーと組み合わされてもよい。

【0212】

投与に適する剤形（医薬組成物）は、投与単位に付き約０.０１ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含有してもよい。活性成分は、通常、これらの医薬組成物中に、組成物の総重量に基づき約０.５−９５重量％の量で配合されるであろう。

【0213】

ゼラチンカプセルは、活性成分、およびラクトース、澱粉、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸などの粉末の担体を含有してもよい。同様の希釈剤を用いて圧縮錠剤を製造することができる。錠剤およびカプセルは共に徐放性の生成物として製造され、数時間にわたって医薬の持続的放出を提供することができる。圧縮錠剤は、糖衣錠とし、またはフィルムコーティングに付され、いずれの不快な味もマスクすること、および該錠剤を環境から保護することができ、あるいは消化管において選択的に崩壊するように腸溶コーティングされ得る。

【0214】

経口投与用の液体剤形は、着色剤およびフレーバー剤を含有し、患者の支持を高めることができる。

【0215】

一般に、水、適切な油、セイライン、水性デキストロース（グルコース）および関連する糖の溶液、ならびにプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが、非経口用溶液の適切な担体である。非経口投与用溶液は、好ましくは、活性成分の水可溶性の塩、適切な安定化剤、必要であれば、緩衝物質を含有する。亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、またはアスコルビン酸などの酸化防止剤は、単独で、または組み合わせて、適切な安定化剤である。クエン酸およびその塩ならびにＥＤＴＡナトリウムも使用される。さらには、非経口用溶液は、塩化ベンズアルコニウム、メチルまたはプロピルパラベン、およびクロロブタノールなどの保存剤を含有しうる。

【0216】

適切な医薬担体は、当該分野における標準的な参考書である、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, Mack Publishing Company（1995）に記載される。

【0217】

本明細書に記載の化合物を投与するのに有用な代表的医薬剤形は次のように説明され得る：

【0218】

カプセル
標準的な２ピースのハードゼラチンカプセルに、１００ｍｇの粉末の活性成分、１５０ｍｇのラクトース、５０ｍｇのセルロース、および６ｍｇのステアリン酸マグネシウムを充填することによって、多数の単位カプセルが調製され得る。

【0219】

ソフトゼラチンカプセル
活性成分の、大豆油、綿実油、またはオリーブ油などの可消化油中混合物を調製し、容積式ポンプを用いて、ゼラチン中に注入し、１００ｍｇの活性成分を含有するソフトゼラチンカプセルを形成することができる。該カプセルは洗浄かつ乾燥させる必要がある。

【0220】

錠剤
錠剤は、投与単位が、例えば、１００ｍｇの活性成分、０.２ｍｇのコロイド状二酸化ケイ素、５ｍｇのステアリン酸マグネシウム、２７５ｍｇの微結晶セルロース、１１ｍｇの澱粉、および９８.８ｍｇのラクトースを含有するように、慣用的操作によって調製されてもよい。適切なコーティングを施し、口当たりを良くし、吸収を遅延させてもよい。

【0221】

注入可能な製剤
本明細書に記載の化合物を含む組成物の注入可能な製剤は、賦形剤、例えば、取締機関により承認されている賦形剤の使用を必要とするし、また必要ともしない。これらの賦形剤は、限定されないが、溶媒および共溶媒、可溶化、乳化または増粘剤、キレート化剤、酸化防止剤、還元剤、抗菌性保存剤、緩衝およびｐＨ調整剤、増量剤、防止剤、等張化調整剤、および特別な添加剤を包含する。注入可能な製剤は、滅菌状態の発熱物質フリーでなければならず、溶液の場合には、粒子材料が不含でなければならない。

【0222】

注入による投与に適する非経口用組成物は、例えば、１.５重量％の活性成分を、共溶媒または他の賦形剤を含有しても、しなくてもよい医薬的に許容される緩衝液中で攪拌することによって調製されてもよい。その溶液は、塩化ナトリウムで等張にされ、滅菌処理に供されるべきである。

【0223】

懸濁液
経口および／または非経口投与用の水性懸濁液は、例えば、各５ｍＬで、１００ｍｇの細分割された活性成分、２０ｍｇのナトリウムカルボキシメチルセルロース、５ｍｇの安息香酸ナトリウム、１.０ｇのソルビトール溶液（U.S.P.）、および０.０２５ｍＬのバニリンまたは他の口当たりのよいフレーバー剤が含まれるように、調製され得る。

【0224】

生分解性微粒子
注入による投与に適する徐放性非経口用組成物は、例えば、適切な生分解性ポリマーを溶媒に溶かし、そのポリマー溶液に配合される活性剤を添加し、溶媒をそのマトリックスから取り除き、それによって活性剤がマトリックス全体に分散されている、ポリマーマトリックスを形成することによって調製されてもよい。

【0225】

化合物の合成
本明細書における本開示の記載は、化学結合の法則および原理と一致するように解釈されるべきである。本開示により包含される化合物は医薬として用いるのに適当に安定しているものであると理解されるべきである。当業者であれば、化学結合および安定性の一般的原理に基づいて、どのような化合物が安定であるか、そうでないかを認識しているであろう。

【0226】

本開示の大環状化合物の化学合成は、段階的固相合成、ペプチドフラグメントの立体的にアシストされた再ライゲーションによる半合成、クローン化または合成ペプチドセグメントの酵素的ライゲーション、および化学ライゲーションを含む、種々の該分野にて認識されている方法を用いて実施され得る。本明細書に記載の大環状化合物およびそのアナログを合成する好ましい方法は、Chan, W.C.ら編、Fmoc Solid Phase Synthesis, Oxford University Press, Oxford（2000）；Barany, G.ら、The Peptides：Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 2：「ペプチド合成での特別な方法、パートＡ（Special Methods in Peptide Synthesis, Part A）」, pp. 3-284, Gross, E.ら編、Academic Press, New York（1980）；およびStewart, J.M.ら、Solid-Phase Peptide Synthesis, 2nd Edition, Pierce Chemical Co., Rockford, IL（1984）に記載の方法などの種々の固相技法を用いる化学合成法である。好ましい方法は、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチル メチル−オキシカルボニル）基を用いてα−アミノ基を一時的に保護し、tert-ブチル基と組み合わせてアミノ酸側鎖を一時的に保護することを基礎とする（例えば、Atherton, E.ら、The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 9における「フルオレニルメトキシカルボニルアミノ保護基（The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group）」：「ペプチド合成での特別な方法、パートＣ（Special Methods in Peptide Synthesis、Part C）」, pp. 1-38, Undenfriend, S.ら編, Academic Press, San Diego（1987）を参照のこと）。

【0227】

該化合物は、不溶性ポリマー支持体（「樹脂」とも言う）で、化合物のＣ−末端から段階的に開始して合成され得る。化合物のＣ−末端のアミノ酸をアミドまたはエステル結合の形成を介して樹脂に付加する（appending）ことにより合成を始める。これにより、各々、Ｃ−末端アミドまたはカルボン酸として得られる化合物の最終的な切り離しが可能となる。

【0228】

合成にて使用されるＣ−末端アミノ酸および他のすべてのアミノ酸は、そのα位にアミノ基を有する必要があり、側鎖官能基は（あるとすれば）α−アミノ保護基が合成の間に選択的に除去され得るように別個に保護される。アミノ酸カップリングは、そのカルボキシル基を活性エステルとして活性化し、それを樹脂に付加されたＮ−末端アミノ酸の遮断されていないα−アミノ基と反応させることにより行われる。α−アミノ基の脱保護およびカップリングのシーケンスを化合物の完全なシーケンスが組み立てられるまで繰り返す。次に、通常は副反応を限定するために適切なスカベンジャーの存在下で、側鎖官能基を同時に脱保護して、化合物を樹脂から切り離す。最後は、得られた化合物を逆相ＨＰＬＣによって精製する。

【0229】

最終化合物の前駆体として必要とされるペプチジル−樹脂の合成は、商業的に入手可能な架橋したポリスチレンポリマー樹脂を利用する（Novabiochem, San Diego, CA；Applied Biosystems, Foster City, CA）。好ましい固形支持体は：４−（２’,４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシアセチル−ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（リンク（Rink）アミドMBHA樹脂）；９−Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィールド（Merrifield）樹脂（シーバー（Sieber）アミド樹脂）；４−（９−Ｆｍｏｃ）アミノメチル−３,５−ジメトキシフェノキシ）バレリル−アミノメチル−メリフィールド樹脂（PAL樹脂）（Ｃ−末端カルボキシアミドの場合）である。最初の、そしてその後のアミノ酸カップリングは、各々、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰより、あるいはＤＩＣ／６−Ｃｌ−ＨＯＢｔ、ＨＣＴＵ、ＤＩＣ／ＨＯＡｔまたはＨＡＴＵより生成されるＨＯＢｔ、６−Ｃｌ−ＨＯＢｔまたはＨＯＡｔ活性エステルを用いて達成され得る。好ましい固形支持体は：２−クロロトリチルクロリド樹脂および９−Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィールド樹脂（シーバーアミド樹脂）（保護された化合物のフラグメントの場合）である。第１のアミノ酸の、２−クロロトリチルクロリド樹脂へのローディングを達成する最良の方法は、Ｆｍｏｃ−保護のアミノ酸を樹脂とジクロロメタンおよびＤＩＥＡ中で反応させることである。必要ならば、少量のＤＭＦを添加し、アミノ酸の溶解を促進させてもよい。

【0230】

本明細書に記載の化合物類の合成は、ＣＥＭリバティー・マイクロウェーブ社（CEM Liberty Microwave）の合成装置、またはProtein Technologies, Inc.社のプレリュード（Prelude）（６チャネル）、シンフォニー（Symphony）（１２チャネル）またはシンフォニー−Ｘ（Symphony-X）（１２または２４チャネル）合成装置などの単チャンネルまたは多チャンネルペプチド合成装置を用いて実施され得る。

【0231】

ペプチジル−樹脂先駆体は、どのような標準的操作を用いて切断および脱保護されてもよい（例えば、King, D.S.ら、Int. J. Peptide Protein Res., 36：255-266 (1990) を参照のこと）。水およびスカベンジャーとしてのＴＩＳの存在下でＴＦＡを用いる方法が望ましい。典型的には、ペプチジル−樹脂をＴＦＡ／水／ＴＩＳ（９４：３：３、ｖ：ｖ：ｖ；１ｍＬ／１００ｍｇのペプチジル樹脂）中に室温で２〜６時間攪拌する。次に使用済みの樹脂を濾去し、そのＴＦＡ溶液を減圧下で濃縮するか、乾燥させる。得られた粗化合物は、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させて洗浄するか、分取性ＨＰＬＣで精製するのに、ＤＭＳＯまたは５０％水性酢酸に直に再溶解させるかのいずれかである。

【0232】

所望の純度を有する化合物は、分取性ＨＰＬＣを用いて、例えば、ウォーターズ・モデル（Waters Model）４０００または島津モデル（Shimadzu Model）ＬＣ−８Ａ液体クロマトグラフで精製することによって得ることができる。粗化合物の溶液をＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（２０ｘ１００ｍｍ）カラムに注入し、ＭｅＣＮ／水の線形勾配を用い、共に０.１％ＴＦＡで緩衝化させ、１４〜２０ｍＬ／分の流速を用いて溶離させ、溶出液を２２０ｎｍでＵＶ吸光をモニターする。精製した化合物の構造は電子噴射ＭＳ分析により確認され得る。

【0233】

実施例
本願において、特に下記の例示としてのスキームおよび実施例において使用される略語は当業者に周知である。使用される略語のいくつかは次のとおりである：ｍｉｎまたはｍｉｎｓは分について；ｈまたはｈｒまたはｈｒｓは時間について；ＲＴまたはｒｔ は室温または保持時間について（文脈からいずれかを決定する）；ｓａｔ．は飽和について；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸について；ＤＭＦはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドについて；ＤＣＭはジクロロメタンについて；Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメチルオキシカルボニルについて；ＨＡＴＵは（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１,２,３−トリアゾロ［４,５−ｂ］ピリジニウム３−オキシド ヘキサフルオロホスファート）について；ＤＩＥＡまたはＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンについて；ＮＭＰはＮ−メチルピロリドンについて；ＥＤＣは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドについて；ＭｅＯＨはメタノールについて；ＥｔＯＡｃは酢酸エチルについて；Ｅｔ３Ｎはトリエチルアミンについて；ＭｅＣＮまたはＡＣＮはアセトニトリルについて；ＤＩＡＤはジエチルアゾジカルボキシラートについて；およびＴＭＳＩはトリメチルシリルヨーダイドについての略語である。

【0234】

分析データ：
質量分析：「ＥＳＩ−ＭＳ（＋）」は陽イオンモードで行われた電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ−ＭＳ（−）」は陰イオンモードで行われた電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）」は陽イオンモードで行われた高分解能電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（−）」は陰イオンモードで行われた高分解能電子噴射イオン化質量分析を意味する。検出された質量を「ｍ／ｚ」単位記号の後に報告する。正確な質量が１０００よりも大きい化合物は、しばしば、二重荷電イオンまたは三重荷電イオンとして検出された。

【0235】

次の分析プロトコルおよび合成方法を実施例１４００−１５０８に適用する。

【0236】

分析データ：
質量分析：「ＥＳＩ−ＭＳ（＋）」は陽イオンモードで行われた電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ−ＭＳ（−）」は陰イオンモードで行われた電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）」は陽イオンモードで行われた高分解能電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（−）」は陰イオンモードで行われた高分解能電子噴射イオン化質量分析を意味する。検出された質量を「ｍ／ｚ」単位記号の後に報告する。正確な質量が１０００よりも大きい化合物は、しばしば、二重荷電イオンまたは三重荷電イオンとして検出された。

【0237】

分析ＬＣＭＳ条件Ａ：
カラム：ＢＥＨ Ｃ１８、２.１ｘ５０ ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：水＋０.０５％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ＴＦＡ；温度：５０℃；勾配：２分間にわたって２％Ｂから９８％Ｂとし、次に９８％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.８ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0238】

分析ＬＣＭＳ条件Ｂ：
カラム：ＢＥＨ Ｃ１８、２.１ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.０５％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.０５％ＴＦＡ；温度：５０℃；勾配：３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.７５分間保持する；流速：１.１１ｍＬ／分

【0239】

分析ＬＣＭＳ条件Ｃ：
カラム：ＢＥＨ Ｃ１８、２.１ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：水＋０.２％ギ酸および０.０１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.２％ギ酸および０.０１％ＴＦＡ；温度：５０℃；勾配：２分間にわたって２％Ｂ〜８０％Ｂとし、０.１分間にわたって８０％Ｂ〜９８％Ｂとし、次に９８％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.８ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0240】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：
カラム：ウォーターズ・アクイティー（Waters Acquity）ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２.１ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.７５分間保持する；流速：１.１１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0241】

分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：
カラム：ウォーターズ・アクイティーＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２.１ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；温度：５０℃；勾配：３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.７５分間保持する；流速：１.１１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0242】

分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：
カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ（Waters Xbridge）Ｃ１８、２.１ｘ５０ｍｍ；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：３５℃；勾配：４分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで１分間保持する；流速：４ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0243】

分析ＬＣＭＳ条件Ｇ：
フィニガン（Finnigan）ＬＴＱマス・スペクトロメーター；カラム：フェノメネックス・ジュピター（Phenomenex Jupiter）Ｃ４、１ｘ５０ｍｍ；移動相Ａ：１％ギ酸／水；移動相Ｂ：０.１％ギ酸／アセトニトリル；温度：３０℃；勾配：１％Ｂで１分間保持し、３分間にわたって１−９５％Ｂとし、次に９５％Ｂで３分間保持する；流速：０.１５ｍＬ／分

【0244】

分析ＬＣＭＳ条件Ｈ：
カラム：ウォーターズ（Waters）ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：１.０ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0245】

分析ＬＣＭＳ条件Ｉ：
カラム：ウォーターズ ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.５ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0246】

分析ＨＰＬＣ条件Ａ：
カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ（YMC Pack ODS）−ＡＱ ３μｍ １５０ｘ４.６ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；温度：６０℃；勾配：２５分間にわたって３５％Ｂから８０％Ｂとする；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２１７ｎｍ）

【0247】

分析ＨＰＬＣ条件Ｂ：
カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＱ ３μｍ １５０ｘ４.６ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；温度：６０℃；勾配：２５分間にわたって２５％Ｂから７５％Ｂとする；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２１７ｎｍ）

【0248】

分析ＨＰＬＣ条件Ｃ：
カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＱ ３μｍ １５０ｘ４.６ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；温度：６０℃；勾配：２５分間にわたって２０％Ｂから７０％Ｂとする；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２１７ｎｍ）

【0249】

分析ＨＰＬＣ条件Ｄ：
カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＱ ３μｍ １５０ｘ４.６ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；温度：６０℃；勾配：２５分間にわたって１５％Ｂから６５％Ｂとする；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２１７ｎｍ）

【0250】

分析ＨＰＬＣ条件Ｅ：
カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＱ ３μｍ １５０ｘ４.６ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；温度：６０℃；勾配：２０分間にわたって２５％Ｂから６０％Ｂとする；流速：１.２５ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２１７ｎｍ）

【0251】

分析ＨＰＬＣ条件Ｆ：
カラム：ＹＭＣパックＯＤＳ−ＡＱ ３μｍ １５０ｘ４.６ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；温度：６０℃；勾配：２０分間にわたって２５％Ｂから６５％Ｂとする；流速：１.２５ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２１７ｎｍ）

【0252】

分析ＨＰＬＣ条件Ｇ：
カラム：サンファイア（Sunfire）Ｃ１８ ３.５μｍ、３.０ｘ１５０ｍｍ；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.０５％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.０５％トリフルオロ酢酸；温度：５０℃；勾配：１２分間にわたって１０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで３分間保持する；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0253】

分析ＨＰＬＣ条件Ｈ：
カラム：エックスブリッジ・フェニル（Xbridge Phenyl） ３.５ｘ１５０μｍ、移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.０５％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.０５％トリフルオロ酢酸；温度：５０℃；勾配：１２分間にわたって１０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで３分間保持する；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0254】

分析ＨＰＬＣ条件Ｉ：
カラム：フェノメネックス・ルナ（Phenomenex Luna） ５μ Ｃ１８（２）１５０ｘ４.６ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％トリフルオロ酢酸、移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.１％トリフルオロ酢酸、勾配：２０分間にわたって５−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：１ｍＬ／分、検出：ＵＶ（２２０）

【0255】

分析ＨＰＬＣ条件Ｊ：
カラム：フェノメネックス・ルナ ５μ Ｃ１８（２）１５０ｘ４.６ｍｍ；移動相Ａ：水＋０.１％トリフルオロ酢酸、移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.１％トリフルオロ酢酸、勾配：２０分間にわたって１０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：１ｍＬ／分、検出：ＵＶ（２２０）

【0256】

一般的操作：
プレリュード（Prelude）方法Ａ：
すべての操作はプレリュード型ペプチド合成装置（Protein Technologies）での自動化の下で行われた。特に断りのない限り、操作はすべて、底部フリットで取り付けられた１０または４５ｍＬのポリプロピレン製の管において行われた。該管の底部と上部の両方を通して、該管をプレリュード型ペプチド合成装置に接続する。ＤＭＦおよびＤＣＭは該管の上部から加えることができ、それにより該管の側面が等しく洗い流される。残りの試薬は該管の底部から加えられ、下からフリットを通って樹脂と接触する。溶液はすべて該管の底部から取り出される。「周期的なかき混ぜ」はＮ_２ガスを短いパルスで底部フリットに通すことをいい；パルスは約５秒間続き、それが３０秒毎に発生する。アミノ酸溶液は、一般に、調製から３週間を越えては使用されなかった。シーバー（Sieber）はＦｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシであり、ここで「３−イルオキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、シーバーリンカー（窒素にてＦｍｏｃ−保護されている）を用いた、１００−２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.７１ミリモル／ｇ負荷のメリフィールド（Merrifield）ポリマー（ポリスチレン）である。使用されるコモンアミノ酸（common amino acid）を、側鎖保護基を括弧内に示して、下記に列挙する。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｂｚｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ

【0257】

「プレリュード方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記のシーバー−メリフィールド樹脂の約１４０ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、「樹脂膨潤操作」にて下記に示されるように、樹脂膨潤操作をもってすべての化合物の合成シーケンスを始めた。アミノ酸と第一アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「単一のカップリング操作」を用いた。Ｆｍｏｃ−Ｎ−メチルアミノ酸の、第二アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「第二アミンカップリング操作」を用いた。クロロアセチル基の、該化合物のＮ−末端とのカップリングは、下記の「塩化クロロアセチルカップリング操作」または「クロロ酢酸カップリング操作」にて記載される。

【0258】

樹脂膨潤操作：
４０ｍＬのポリプロピレン製固相反応容器に、メリフィールド：シーバー樹脂（１４０ｍｇ、０.１００ミリモル）を添加した。その樹脂を以下のように３回洗浄した：反応容器にＤＭＦ（５.０ｍＬ）およびＤＣＭ（５.０ｍＬ）を添加し、その際に該混合物を該反応容器の底部からＮ_２を吹き込むことにより周期的に１０分間かき混ぜ、その後で溶媒を排出（drain）させた。

【0259】

単一のカップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を６０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸およびＨＯＡｃの溶液（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、ついでＤＩＣ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物を周期的に６０分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、次に溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0260】

第二アミンカップリング操作：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を６０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸およびＨＯＡｃの溶液（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、５当量）を、ついでＤＩＣ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、５当量）を添加した。該混合物を３００分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、次に溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0261】

塩化クロロアセチルカップリング操作：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ＤＩＰＥＡ（４.０ミリモル、０.６９９ｍＬ、４０当量）および塩化クロロアセチル（２.０ミリモル、０.１６０ｍＬ、２０当量）のＤＭＦ中溶液（３.０ｍＬ）を添加した。混合物を１２〜１８時間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液を排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液を排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＣＭ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液を排出させた。

【0262】

プレリュード方法Ｂ：
すべての操作はプレリュード型ペプチド合成装置（Protein Technologies）での自動化の下で行われた。操作はすべて、底部フリットで取り付けられた１０または４５ｍＬのポリプロピレン製の管において行われた。ＤＭＦおよびＤＣＭは該管の上部から加えることができ、それにより該管の側面が等しく洗い流される。残りの試薬は該管の底部から加えられ、下からフリットを通って樹脂と接触する。溶液はすべて該管の底部から取り出される。「周期的なかき混ぜ」はＮ_２ガスを短いパルスで底部フリットに通すことをいい；パルスは約５秒間続き、それが３０秒毎に発生する。アミノ酸溶液は、一般に、調製から３週間を越えては使用されなかった。シーバーはＦｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシであり、ここで「３−イルオキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、シーバーリンカー（窒素にてＦｍｏｃ−保護されている）を用いた、１００−２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.７１ミリモル／ｇ負荷のメリフィールドポリマー（ポリスチレン）である。使用されるコモンアミノ酸を、側鎖保護基を括弧内に示して、下記に列挙する。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｂｚｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ

【0263】

「プレリュード方法Ｂ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記のシーバー−メリフィールド樹脂の約１４０ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、「樹脂膨潤操作」にて下記に示されるように、樹脂膨潤操作をもってすべての化合物の合成シーケンスを始めた。アミノ酸の第一アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「単一のカップリング操作」を用いた。アミノ酸の第二アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「第二アミンカップリング操作」を用いた。クロロアセチル基の、該化合物のＮ−末端とのカップリングは、下記の「塩化クロロアセチルカップリング操作」または「クロロ酢酸カップリング操作」にて記載される。

【0264】

樹脂膨潤操作：
４０ｍＬのポリプロピレン製固相反応容器に、メリフィールド：シーバー樹脂（１４０ｍｇ、０.１００ミリモル）を添加した。その樹脂を以下のように３回洗浄した（膨潤させた）：反応容器にＤＭＦ（５.０ｍＬ）およびＤＣＭ（５.０ｍＬ）を添加し、その際に該混合物を該反応容器の底部からＮ_２を吹き込むことにより周期的に１０分間かき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。

【0265】

単一のカップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を６０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、ついでＨＣＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、２０当量）を添加した。該混合物を周期的に３０分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0266】

二重カップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を６０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、ついでＨＣＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、２０当量）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を容器の上部を通してＤＭＦ（４.０ｍＬ）で連続して３回洗浄し、得られた混合物を６０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、ついでＨＣＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、２０当量）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0267】

第二アミンカップリング操作：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、１０当量）を、ついでＨＣＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、１０当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.５ｍＬ、１２当量）を添加した。該混合物を周期的に１２時間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0268】

塩化クロロアセチルカップリング操作Ａ：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ＤＩＰＥＡ（４.０ミリモル、０.６９９ｍＬ、４０当量）および塩化クロロアセチル（２.０ミリモル、０.１６０ｍＬ、２０当量）のＤＭＦ中溶液（３.０ｍＬ）を添加した。混合物を１２〜１８時間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液を排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２.０ｍＬ）を容器の上部に添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。

【0269】

クロロ酢酸カップリング操作Ｂ：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）、クロロ酢酸（１.２ミリモル、１１３ｍｇ、１２当量）およびＮ,Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１.２ミリモル、０.１８７ｍＬ、１２当量）を添加した。混合物を１２〜１８時間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部に添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２.０ｍＬ）を容器の上部に添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。

【0270】

プレリュード方法Ｃ：
すべての操作はプレリュード型ペプチド合成装置（Protein Technologies）での自動化の下で行われた。操作はすべて、特に限定されない限り、底部フリットで取り付けられた１０または４５ｍＬのポリプロピレン製の管において行われた。該管を、その管の底部および上部の両方で、プレリュード型ペプチド合成装置に接続する。ＤＭＦおよびＤＣＭは該管の上部から加えることができ、それにより該管の側面が等しく洗い流される。残りの試薬は該管の底部から加えられ、下からフリットを通って樹脂と接触する。溶液はすべて該管の底部から取り出される。「周期的なかき混ぜ」はＮ_２ガスを短いパルスで底部フリットに通すことをいい；パルスは約５秒間続き、それが３０秒毎に発生する。アミノ酸溶液は、一般に、調製から３週間を越えては使用されなかった。ＨＡＴＵ溶液は調製から５日以内に使用された。シーバーはＦｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシであり、ここで「３−イルオキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、シーバーリンカー（窒素にてＦｍｏｃ−保護されている）を用いた、１００−２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.７１ミリモル／ｇ負荷のメリフィールドポリマー（ポリスチレン）である。使用されるコモンアミノ酸を、側鎖保護基を括弧内に示して、下記に列挙する。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｂｚｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ

【0271】

「プレリュード方法Ｃ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記したシーバー−メリフィールド樹脂の約１４０ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、「樹脂膨潤操作」において下記に示されるように、樹脂膨潤操作をもってすべての化合物の合成シーケンスを始めた。アミノ酸と第一アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「単一のカップリング操作」を用いた。アミノ酸と第二アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「第二アミンカップリング操作」を用いた。樹脂の最終洗浄は下記の「最終洗浄操作」を用いた。

【0272】

樹脂膨潤操作：
４０ｍＬのポリプロピレン製固相反応容器に、メリフィールド：シーバー樹脂（１４０ｍｇ、０.１００ミリモル）を添加した。その樹脂を以下のように３回洗浄した（膨潤させた）：反応容器にＤＭＦ（５.０ｍＬ）およびＤＣＭ（５.０ｍＬ）を添加し、その際に該混合物を該反応容器の底部からＮ_２を吹き込むことにより周期的に１０分間かき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。

【0273】

単一のカップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を６０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、５.０ｍＬ、１０当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、２０当量）を添加した。該混合物を周期的に６０分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0274】

第二アミンカップリング操作：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.５ｍＬ、１２当量）を添加した。該混合物を３００分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.５ｍＬ、１２当量）を添加した。該混合物を３００分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0275】

カスタム（custom）アミノ酸カップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、０.５〜２.５ｍＬ、１〜５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、０.５〜２.５ｍＬ、１〜５当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、０.５〜１.５ｍＬ、４〜１２当量）を添加した。該混合物を周期的に６０分間〜６００分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0276】

最終洗浄操作：
樹脂を次のように連続して２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＣＭ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0277】

クロロ酢酸カップリング操作：
手動工程に注意のこと。上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を室温で５分間震盪させ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物をかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）、クロロ酢酸（１.２ミリモル、１１３ｍｇ、１２当量）およびＮ,Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１.２ミリモル、０.１８７ｍＬ、１２当量）を添加した。混合物を室温で１２〜１８時間震盪させ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部に添加し、得られた混合物を９０秒間かき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＣＨ_２Ｃｌ_２（４.０ｍＬ）を容器の上部に添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。

【0278】

プレリュード方法Ｄ：
すべての操作はプレリュード型ペプチド合成装置（Protein Technologies）での自動化の下で行われた。操作はすべて、特に限定されない限り、底部フリットで取り付けられた１０または４５ｍＬのポリプロピレン製の管において行われた。該管は、その管の底部および上部の両方で、プレリュード型ペプチド合成装置に接続される。ＤＭＦおよびＤＣＭは該管の上部から加えることができ、それにより該管の側面が等しく洗い流される。残りの試薬は該管の底部から加えられ、下からフリットを通って樹脂と接触する。溶液はすべて該管の底部から取り出される。「周期的なかき混ぜ」はＮ_２ガスを短いパルスで底部フリットに通すことをいい；パルスは約５秒間続き、それが３０秒毎に発生する。アミノ酸溶液は、一般に、調製から３週間を越えては使用されなかった。ＨＡＴＵ溶液は調製から５日以内に使用された。シーバーはＦｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシであり、ここで「３−イルオキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、シーバーリンカー（窒素にてＦｍｏｃ−保護されている）を用いた、１００−２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.７１ミリモル／ｇ負荷のメリフィールドポリマー（ポリスチレン）である。使用されるコモンアミノ酸を、側鎖保護基を括弧内に示して、下記に列挙する。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｂｚｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ

【0279】

「プレリュード方法Ｄ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記したシーバー−メリフィールド樹脂の約１４０ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、下記の「樹脂膨潤操作」において示されるように、樹脂膨潤操作をもってすべての化合物の合成シーケンスを始めた。アミノ酸と第一アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「単一のカップリング操作」を用いた。アミノ酸と第二アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「第二アミンカップリング操作」を用いた。樹脂の最終洗浄は下記の「最終洗浄操作」を用いた。

【0280】

樹脂膨潤操作：
４０ｍＬのポリプロピレン製固相反応容器に、メリフィールド：シーバー樹脂（１４０ｍｇ、０.１００ミリモル）を添加した。その樹脂を以下のように３回洗浄した（膨潤させた）：反応容器にＤＭＦ（５.０ｍＬ）およびＤＣＭ（５.０ｍＬ）を添加し、その際に該混合物を該反応容器の底部からＮ_２を吹き込むことにより周期的に１０分間かき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。

【0281】

単一のカップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を６０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、２.５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、２.５当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、０.７５ｍＬ、５当量）を添加した。該混合物を周期的に３０分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0282】

第二アミンカップリング操作：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、２.５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、２.５当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、０.７５ｍＬ、５当量）を添加した。該混合物を周期的に３０分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂は次の工程にそのまま使用された。

【0283】

最終洗浄操作：
樹脂を次のように連続して２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＣＭ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0284】

クロロ酢酸カップリング操作：
手動工程に注意のこと。上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を室温で５分間震盪させ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物をかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）、クロロ酢酸（１.２ミリモル、１１３ｍｇ、１２当量）およびＮ,Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１.２ミリモル、０.１８７ｍＬ、１２当量）を添加した。混合物を室温で１２〜１８時間震盪させ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を容器の上部に添加し、得られた混合物を９０秒間かき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＣＨ_２Ｃｌ_２（４.０ｍＬ）を容器の上部に添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。

【0285】

ＣＥＭ方法Ａ：
すべての操作はＣＥＭリバティー型（CEM Liberty）マイクロ波ペプチド合成装置（CEM
Corporation）での自動化の下で行われた。操作はすべて、特に限定されない限り、底部フリットでＣＥＭディスカバリー（CEM Discovery）マイクロ波ユニットに取り付けられた３０または１２５ｍＬのポリプロピレン製の管において行われた。該管は、その管の底部および上部の両方で、ＣＥＭリバティー型合成装置に接続される。ＤＭＦおよびＤＣＭは該管の上部および底部から加えることができ、それにより該管の側面が等しく洗い流される。溶液はすべて、樹脂が上部から移動する間を除いて、該管の底部から取り出される。「周期的な泡立て」はＮ_２ガスを短い泡立てで底部フリットに通すことをいう。アミノ酸溶液は、一般に、調製から３週間を越えては使用されなかった。ＨＡＴＵ溶液は調製から５日以内に使用された。ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＨＣＴＵ＝２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム；ＨＡＴＵ＝１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１,２,３−トリアゾロ［４,５−ｂ］ピリジニウム ３−オキシド・ヘキサフルオロリン酸塩；ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン；シーバー（Sieber）＝Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシであり、ここで「３−イルオキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、シーバーリンカー（窒素にてＦｍｏｃ−保護されている）を用いた、１００−２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.７１ミリモル／ｇ負荷のメリフィールドポリマー（ポリスチレン）である。リンク（Rink）、クロロトリチル（ChloroTrityl）などの他の通常の樹脂、または他の酸敏感リンカーを合成に利用することができ、特記されない限り、シーバーアミド樹脂を特定の実施例にて利用される。使用される通常のアミノ酸が、括弧内に側鎖保護基を示すことで、下記に列挙される：Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｂｚｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ。

【0286】

「ＣＥＭ方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記のシーバー−メリフィールド樹脂の約１４０ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、下記の「樹脂膨潤操作」にて示されるように、樹脂膨潤操作をもってすべての化合物の合成シーケンスを始めた。アミノ酸と第一アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「単一のカップリング操作」を用いた。アミノ酸の、第二アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「第二アミンカップリング操作」を用いた。クロロアセチル基の、該化合物のＮ−末端とのカップリングは、上記の「塩化クロロアセチルカップリング操作」または「クロロ酢酸カップリング操作」にて記載される。

【0287】

樹脂膨潤操作：
５０ｍＬのポリプロピレン製円錐管に、メリフィールド：シーバー樹脂（１４０ｍｇ、０.１００ミリモル）を添加した。次に、ＤＭＦ（７ｍＬ）を、つづいてＤＣＭ（７ｍＬ）を該管に添加した。ついで該樹脂を容器の上部から反応容器に移した。操作をさらに２回繰り返した。ＤＭＦ（７ｍＬ）を、つづいてＤＣＭ（７ｍＬ）を添加した。該樹脂をその反応容器の底部からＮ_２を１５分間通気することにより膨潤させ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。

【0288】

標準的カップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）の溶液を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で容器の上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量）を、ＨＡＴＵ（０.５Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、５当量）、およびＤＩＰＥＡ（２Ｍ／ＮＭＰ、０.５ｍＬ、１０当量）を添加した。その混合物を、５０℃でカップリングさせるＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨを除く、すべてのアミノ酸について、７５℃で５分間、Ｎ_２を吹き込むことにより混合し、該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に６５℃で２分間通気させ、次に溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0289】

二重カップルカップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）の溶液を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で容器の上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量）を、ＨＡＴＵ（０.５Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、５当量）、およびＤＩＰＥＡ（２Ｍ／ＮＭＰ、０.５ｍＬ、１０当量）を添加した。その混合物を、５０℃でカップリングさせるＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨを除く、すべてのアミノ酸について、７５℃で５分間、Ｎ_２を吹き込むことにより混合し、該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量）、ＨＡＴＵ（０.５Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、５当量）、およびＤＩＰＥＡ（２Ｍ／ＮＭＰ、０.５ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物を、５０℃でカップリングさせるＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨを除く、すべてのアミノ酸について、７５℃で５分間、Ｎ_２を吹き込むことにより混合し、該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に６５℃で２分間通気させ、次に溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0290】

第二アミンカップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、５％ピペラジンおよび０.１Ｍ ＨＯＢｔ／ＤＭＦ（７ｍＬ）の溶液を添加した。該混合物を周期的に７５℃で３分間かき混ぜ、次に該溶液を排出させた。この操作をもう一度繰り返した。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量）、ＨＣＴＵ（０.５Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、５当量）、およびＤＩＰＥＡ（２Ｍ／ＮＭＰ、０.５ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物をすべてのアミノ酸について７５℃で（Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨについては５０℃で）５分間、つづいて加熱することなく６時間、Ｎ_２を吹き込むことにより混合した。排出させた後、該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。該反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に６５℃で２分間通気させ、次に溶液を排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0291】

カスタムアミノ酸カップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦの溶液（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦの溶液（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。該反応容器に、ＨＡＴＵ（２.５当量〜１０当量）含有のアミノ酸溶液（１.２５ｍＬ〜５ｍＬ、２.５当量〜１０当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（２Ｍ／ＮＭＰ、０.５ｍＬ〜１ｍＬ、２０当量）を添加した。該混合物を、２５℃〜７５℃で５分間〜２時間、Ｎ_２を通気することにより混合し、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。反応容器に、無水酢酸：ＤＩＥＡ：ＤＭＦの溶液（１０：１：８９ ｖ／ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に６５℃で２分間通気させ、次に溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：ＤＭＦ（７ｍＬ）で上部から洗浄し、つづいてＤＭＦ（７ｍＬ）で底部より洗浄し、最後にＤＭＦ（７ｍＬ）で上部より洗浄した。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0292】

シンフォニー（Symphony）方法Ａ
すべての操作はシンフォニー型ペプチド合成装置（Protein Technologies）での自動化の下で行われた。特に断りのない限り、操作はすべて、底部フリットで取り付けられたシンフォニーポリプロピレン管において行われた。該管を、その管の底部と上部の両方を通して、シンフォニー型ペプチド合成装置に接続する。すべての溶媒、ＤＭＦ、ＤＣＭ、アミノ酸および試薬は該管の底部から加えられ、下からフリットを通って樹脂と接触する。溶液はすべて該管の底部から取り出される。「周期的なかき混ぜ」はＮ_２ガスを短いパルスで底部フリットに通すことをいい；パルスは約５秒間続き、それが１５秒毎に発生する。アミノ酸溶液は、一般に、調製から３週間を越えては使用されなかった。ＨＡＴＵ溶液は調製から５日以内に使用された。ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＨＣＴＵ＝２−（６−クロロ−１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム；ＨＡＴＵ＝１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１,２,３−トリアゾロ［４,５−ｂ］ピリジニウム ３−オキシド・ヘキサフルオロリン酸塩；ＮＭＭ＝ｎ−メチルモルホリン；ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン；シーバー＝Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシであり、ここで「３−イルオキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、シーバーリンカー（窒素にてＦｍｏｃ−保護されている）を用いた、１００−２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.７１ミリモル／ｇ負荷のメリフィールド（Merrifield）ポリマー（ポリスチレン）である。リンク（Rink）または官能基を付与したクロロトリチル樹脂などの、他のコモン酸敏感樹脂も該合成において使用され得る。使用されるコモンアミノ酸を、側鎖保護基を括弧内に示して、下記に列挙する。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｂｚｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ

【0293】

「シンフォニー方法Ａ」の操作は、０.０５０ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記のシーバー−メリフィールド樹脂の約７０ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.０５０ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、下記の「膨潤操作」にて示されるように、樹脂膨潤操作をもってすべての化合物の合成シーケンスを始めた。アミノ酸と第一アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「標準的カップリング操作」を用いた。アミノ酸の、第二アミンのＮ−末端とのカップリングは、「二重カップリング」を用い、カスタムアミノ酸を下記の「ブランクカップリング」におけるアミノ酸の手動でのブランク付加を介してカップリングさせる。

【0294】

膨潤操作：
シンフォニー型ポリプロピレン製固相反応容器に、メリフィールド：シーバー樹脂（７０ｍｇ、０.０５０ミリモル）を添加した。該樹脂を次のように３回洗浄した（膨潤させた）：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を添加し、その中の混合物を周期的に該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより１０分間にわたってかき混ぜ、その後でフリットを通して溶媒を排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を加えた。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、ついで該反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂をＤＭＦ（６.２５ｍＬ）で洗浄し、該容器の底部を介して添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、次にＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を加えた。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、ついで該反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように３回洗浄した：該反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を周期的に該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたってかき混ぜ、その後でフリットを通して溶媒を排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。.

【0295】

標準的カップリング操作：
樹脂を次のように３回洗浄した：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を添加した。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を、その容器の底部を通して加えたＤＭＦ（６.２５ｍＬ）で洗浄し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0296】

第二アミンカップリング操作：
樹脂を次のように３回洗浄した：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を添加した。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を加えた。該混合物を３００分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を、その容器の底部を通して加えたＤＭＦ（６.２５ｍＬ）で洗浄し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を加えた。該混合物を３００分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0297】

カスタムアミノ酸−カップリング操作：
樹脂を次のように３回洗浄した：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を添加した。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器にカスタムアミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を手動で加えるために、シンフォニーソフトウェアによりその合成を一時停止させ、次に自動化を再び開始させ、ＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を添加した。混合物を３００分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を、次のように、６回洗浄した；ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、Ａｃ２Ｏ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ（ｖ／ｖ／ｖ １：１：３ ２.５ｍＬ）を添加し、該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0298】

シンフォニー方法Ｂ：
すべての操作はシンフォニー型ペプチド合成装置（Protein Technologies）での自動化の下で行われた。特に断りのない限り、操作はすべて、底部フリットで取り付けられたシンフォニーポリプロピレン管において行われた。該管を、その管の底部と上部の両方を通して、シンフォニー型ペプチド合成装置に接続する。すべての溶媒、ＤＭＦ、ＤＣＭ、アミノ酸および試薬は該管の底部から加えられ、下からフリットを通って樹脂と接触する。溶液はすべて該管の底部から取り出される。「周期的なかき混ぜ」はＮ_２ガスを短いパルスで底部フリットに通すことをいい；パルスは約５秒間続き、それが１５秒毎に発生する。アミノ酸溶液は、一般に、調製から３週間を越えては使用されなかった。ＨＡＴＵ溶液は調製から５日以内に使用された。ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＨＣＴＵ＝２−（６−クロロ−１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム；ＨＡＴＵ＝１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１,２,３−トリアゾロ［４,５−ｂ］ピリジニウム ３−オキシド・ヘキサフルオロリン酸塩；ＮＭＭ＝ｎ−メチルモルホリン；ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン；シーバー＝Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシであり、ここで「３−イルオキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、シーバーリンカー（窒素にてＦｍｏｃ−保護されている）を用いた、１００−２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.７１ミリモル／ｇ負荷のメリフィールドポリマー（ポリスチレン）である。リンク（Rink）または官能基を付与したクロロトリチル樹脂などの、他のコモン酸敏感樹脂も該合成において使用され得る。使用されるコモンアミノ酸を、側鎖保護基を括弧内に示して、下記に列挙する：Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｂｚｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ。「シンフォニー方法Ｂ」の操作は、０.０５０ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記のシーバー−メリーフィールド樹脂の約７０ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.０５０ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、下記の「膨潤操作」にて示されるように、樹脂膨潤操作をもってすべての化合物の合成シーケンスを始めた。アミノ酸と第一アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「標準的カップリング操作」を用いた。アミノ酸の、第二アミンのＮ−末端とのカップリングは、「第二アミンカップリング操作Ｂ」を用い、カスタムアミノ酸を下記の「ブランクカップリング」におけるアミノ酸の手動でのブランク付加を介してカップリングさせ、クロロアセチル無水物（ChloroAcetyl Anhydride）を下記の「最終キャッピング操作」を用いて配列の最終位置に加える。

【0299】

膨潤操作：
シンフォニー型ポリプロピレン製固相反応容器に、メリフィールド：シーバー樹脂（７０ｍｇ、０.０５０ミリモル）を添加した。該樹脂を次のように３回洗浄した（膨潤させた）：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を添加し、その中の混合物を周期的に該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより１０分間にわたってかき混ぜ、その後でフリットを通して溶媒を排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を加えた。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、ついで該反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を、該容器の底部を介して添加したＤＭＦ（６.２５ｍＬ）で洗浄し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、次にＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を加えた。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、ついで該反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように３回洗浄した：該反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を周期的に該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたってかき混ぜ、その後でフリットを通して溶媒を排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。.

【0300】

標準的カップリング操作：
樹脂を次のように３回洗浄した：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を添加した。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物を周期的に１５分間にわたってかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように６回洗浄した：ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、Ａｃ２Ｏ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ（ｖ／ｖ／ｖ １：１：３ ２.５ｍＬ）を加え、該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0301】

第二アミンカップリング操作：
樹脂を次のように３回洗浄した：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を添加した。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を加えた。該混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を、その容器の底部を通して加えたＤＭＦ（６.２５ｍＬ）で洗浄し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を加えた。該混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、Ａｃ２Ｏ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ（ｖ／ｖ／ｖ １：１：３ ２.５ｍＬ）を添加し、該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0302】

カスタムアミノ酸−カップリング操作：
樹脂を次のように３回洗浄した：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を添加した。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器にカスタムアミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を手動で加えるために、システムを一時停止させ、次に自動化を再び開始させ、ＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、５当量）を、最後にＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を反応ベシクルに添加した。混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を、次のように、６回洗浄した：ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、Ａｃ２Ｏ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ（ｖ／ｖ／ｖ １：１：３ ２.５ｍＬ）を添加し、該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0303】

最終キャッピング操作：
樹脂を次のように３回洗浄した：反応容器に、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）を加え、その中の混合物を該反応容器の底部よりＮ_２を通気することにより３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.５ｍＬ）を添加した。該混合物を２.５分間にわたって周期的にかき混ぜ、ついで該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を、つづいて無水クロロギ酸（０.４Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を添加した。混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂をその容器の底部を通して加えたＤＭＦ（６.２５ｍＬ）で洗浄し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ＮＭＭ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を、つづいて無水クロロギ酸（０.４Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量）を添加した。該混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように６回洗浄した：ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、Ａｃ２Ｏ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ（ｖ／ｖ／ｖ １：１：３ ２.５ｍＬ）を加え、該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＣＭ（２.５ｍＬ）をその容器の底部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。次に得られた樹脂を窒素流で１０分間にわたって乾燥させた。

【0304】

グローバルな脱保護方法Ａ：
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「グローバルな脱保護方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。「脱保護溶液」はトリフルオロ酢酸：水：トリイソプロピルシラン：ジチオスレイトール（９２.５：２.５：２.５：２.５ ｖ：ｖ：ｖ：ｗ）を用いて調製された。樹脂を反応容器から取り出し、フリットを備えた２５ｍＬのシリンジに移した。該シリンジに、「脱保護溶液」（５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器で８５分間混合した。溶液を濾過し、濃縮してジエチルエーテル（３０ｍＬ）で希釈した。沈殿した固体を３分間遠心分離に付した。上清溶液をデカントし、固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に再び懸濁させた。該懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカントし、残りの固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に懸濁させた。懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカンテーションに供し、残りの固体を高真空下で乾燥させた。粗化合物を白色ないし灰白色の固体として得た。

【0305】

グローバルな脱保護方法Ｂ：
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「グローバルな脱保護方法Ｂ」の操作は、０.０４ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.０４ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。「脱保護溶液」はトリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン（９６：４ ｖ：ｖ）を用いて調製された。樹脂を反応容器から取り出し、フリットを備えた１０ｍＬのシリンジに移した。該シリンジに、「脱保護溶液」（２.０〜３.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器で１時間または１.５時間混合した。溶液を濾過し、脱保護溶液（０.５ｍＬ）で洗浄し、濃縮してジエチルエーテル（３０ｍＬ）で希釈した。沈殿した固体を３分間遠心分離に付した。上清溶液をデカントし、固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に再び懸濁させた。該懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカントし、残りの固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に懸濁させた。懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカンテーションに供し、残りの固体を高真空下で乾燥させた。粗化合物を白色ないし灰白色の固体として得た。

【0306】

グローバルな脱保護方法Ｃ：
すべての操作は、特記されない限り、手動でなされた。「グローバルな脱保護方法Ｃ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。「脱保護溶液」はトリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン：ジチオスレイトール（９５：２.５：２.５ ｖ：ｖ：ｗ）を用いて調製された。樹脂を反応容器から取り出し、Bio-Rad管に移した。該Bio-Rad管に、「脱保護溶液」（４.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器で６０分間混合した。溶液を濾過し、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）で希釈した。沈殿した固体を３分間遠心分離に付した。上清溶液をデカントし、固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に再び懸濁させた。該懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカントし、残りの固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に懸濁させた。懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカンテーションに供し、残りの固体を高真空下で乾燥させた。粗化合物を白色ないし灰白色の固体として得た。

【0307】

グローバルな脱保護方法Ｄ：
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「グローバルな脱保護方法Ｄ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。「脱保護溶液」はトリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン：ジチオスレイトール（９４：３：３ ｖ：ｖ：ｗ）を用いて調製された。樹脂を反応容器から取り出し、フリットを備えた２５ｍＬのシリンジに移した。該シリンジに、「脱保護溶液」（５.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器で５分間混合した。溶液を濾過し、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）で希釈した。沈殿した固体を３分間遠心分離に付した。上清溶液をデカントし、固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に再び懸濁させた。該懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカントし、残りの固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に懸濁させた。懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカンテーションに供し、残りの固体を高真空下で乾燥させた。粗化合物を白色ないし灰白色の固体として得た。

【0308】

グローバルな脱保護方法Ｅ：
すべての操作は、特記されない限り、手動でなされた。「グローバルな脱保護方法Ｅ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているＦｍｏｃＧｌｙ−ＣｌＴｒｔリンカーの量で決定されるものとする。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。「脱保護溶液」はトリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン：ジチオスレイトール（９５：２.５：２.５ ｖ：ｖ：ｗ）を用いて調製された。樹脂を反応容器から取り出し、Bio-Rad管に移した。該Bio-Rad管に、「脱保護溶液」（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器にて３分間混合した。溶液を濾過し、遠心管に集めた。該Bio-Rad管に「脱保護溶液」（２.０ｍＬ）を加えた。該混合物を振盪器にて３分間混合した。該溶液を濾過し、遠心管において集めた。そのBio-Rad管に、「脱保護溶液」（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器にて３分間混合した。溶液を濾過し、遠心管に集めた。その遠心管に入れた溶液を６０分間放置させた。次に溶液を集め、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）で希釈し、沈殿物を形成させた。沈殿した固体を３分間遠心分離に付した。上清溶液をデカントし、固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に再び懸濁させた。該懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカントし、残りの固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に懸濁させた。懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカンテーションに供し、残りの固体を高真空下で乾燥させた。粗化合物を白色ないし灰白色の固体として得た。

【0309】

グローバルな脱保護方法Ｆ：
すべての操作は、特記されない限り、手動でなされた。「グローバルな脱保護方法Ｆ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているリンク（Rink）リンカーの量で決定されるものとする。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。「脱保護溶液」はトリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン：ジチオスレイトール（９５：２.５：２.５ ｖ：ｖ：ｗ）を用いて調製された。樹脂を反応容器から取り出し、６ｍｌのBio-Rad管に移した。該Bio-Radに、「脱保護溶液」（４.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器にて９０分間混合した。溶液を濾過し、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）で希釈した。沈殿した固体を３分間遠心分離に付した。上清溶液をデカントし、固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に再び懸濁させた。該懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカントし、残りの固体をジエチルエーテル（２５ｍＬ）に懸濁させた。懸濁液を３分間遠心分離に付した。上清をデカンテーションに供し、残りの固体を高真空下で乾燥させた。粗化合物を白色ないし灰白色の固体として得た。

【0310】

環化方法Ａ
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「環化方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは、化合物を生成するのに使用された樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールはその操作にて使用される化合物の量を直接測定することをベースとするものではない。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。粗化合物の固体をアセトニトリル：８Ｍ水性グアニジン／５０ｍＭ ＴＲＩＳ（１：３）（ｐＨ８.６）（７ｍＬ：１８ｍＬまたは同じような割合）の溶液に溶かし、次に該溶液のｐＨを、必要ならば、ＮａＯＨ水溶液（１.０Ｍ）を用いて８.５〜９.０に調整した。ついで、該溶液を振盪器を用いて１２〜１８時間混合した。反応溶液を濃縮し、次にその残渣をアセトニトリル：水に溶かした。この溶液を逆相ＨＰＬＣ精製に供し、所望の環状化合物を得た。

【0311】

環化方法Ｃ：
すべての操作は、特記されない限り、手動でなされた。「環化方法Ｃ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは、化合物を生成するのに使用された樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールはその操作にて使用される化合物の量を直接測定することをベースとするものではない。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。粗化合物の固体をアセトニトリル：０.１Ｍ炭酸水素アンモニウム水性緩衝液（１１ｍＬ：２４ｍＬまたは同じような割合）の溶液に溶かし、次に該溶液のｐＨを、注意して、ＮａＯＨ水溶液（１.０Ｍ）を用いて８.５〜９.０に調整した。ついで、該溶液を振盪器を用いて１２〜１８時間混合した。反応溶液を濃縮し、次にその残渣をアセトニトリル：水に溶かした。この溶液を逆相ＨＰＬＣ精製に供し、所望の環状化合物を得た。

【0312】

環化方法Ｄ：
すべての操作は、特記されない限り、手動でなされた。「環化方法Ｄ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは、化合物を生成するのに使用された樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールはその操作にて使用される化合物の量を直接測定することをベースとするものではない。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。粗化合物の固体をアセトニトリル：０.１Ｍ炭酸水素アンモニウム水性緩衝液（１１ｍＬ：２４ｍＬ）の溶液に溶かし、次に該溶液のｐＨを、注意して、ＮａＯＨ水溶液（１.０Ｍ）を用いて８.５〜９.０に調整した。ついで、該溶液を攪拌しながら１２〜１８時間混合した。反応溶液を濃縮し、次にその残渣をアセトニトリル：水に溶かした。この溶液を逆相ＨＰＬＣ精製に供し、所望の環状化合物を得た。

【0313】

環化方法Ｅ：
すべての操作は、特記されない限り、手動でなされた。「環化方法Ｅ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは、化合物を生成するのに使用された樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールはその操作にて使用される化合物の量を直接測定することをベースとするものではない。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。粗化合物の固体を６ＭグアニジンＨＣｌ緩衝剤水溶液（１５ｍＬ）に溶かし、ついで該溶液を攪拌しながら１２〜１８時間混合した。反応溶液を濃縮し、１５ｍＬのＤＭＳＯを該残渣に加えてスラリーを得、それを濾過した。この濾過した溶液を逆相ＨＰＬＣ精製に供し、所望の環状化合物を得た。

【0314】

手動カップリング操作Ａ：
上記の工程から由来の樹脂含有のBio-Rad反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。その混合物を５分間にわたって周期的に震盪し、次に該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を該容器の頂部から加え、得られた混合物を６０秒間震盪し、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（１.２−１０当量）を、典型的には０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量で、ついでＨＡＴＵ（１.２−１０当量）を、典型的には０.２Ｍ／ＤＭＦ、２.５ｍＬ、５当量で、最後にＤＩＰＥＡ（２.４−２０当量）を、典型的には０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.２５ｍＬ、１０当量で添加した。該混合物を６０分間ないし１８時間振盪し、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（４.０ｍＬ）を該容器の頂部から加え、得られた混合物を６０秒間震盪し、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。

【0315】

樹脂上（on-resin）でのＮ−メチル化方法Ａ（Turner, R. A.；Hauksson, N. E.；Gipe, J. H.；Lokey, R. S.、Org. Lett., 2013, 15（19）, 5012-5015）：
すべての操作は、特記されない限り、手動でなされた。「樹脂上でのＮ−メチル化方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは、化合物を生成するのに使用された樹脂と結合しているシーバーリンカーの量で決定されるものとする。このスケールはその操作にて使用される化合物の量を直接測定することをベースとするものではない。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。

【0316】

樹脂を２５ｍＬのフリットシリンジに移した。その樹脂に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、５.０ｍＬ）を添加した。混合物を３分間震盪させ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂をＤＭＦ（４.０ｍＬ）で３回洗浄した。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、４.０ｍＬ）を添加した。混合物を３分間震盪させ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂をＤＭＦ（４.０ｍＬ）で３回、そしてＤＣＭ（４.０ｍＬ）で３回連続して洗浄した。該樹脂をＤＭＦ（２.０ｍＬ）に懸濁させ、トリフルオロ酢酸エチル（０.１１９ｍｌ、１.００ミリモル）、１,８−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−７−エン（０.１８１ｍｌ、１.２０ミリモル）を加えた。その混合物を振盪器に６０分間置いた。該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂をＤＭＦ（４.０ｍＬ）で３回、そしてＤＣＭ（４.０ｍＬ）で３回連続して洗浄した。

【0317】

該樹脂を乾燥ＴＨＦ（２.０ｍＬ）で３回洗浄し、残りのいずれの水も除去した。オーブンにて４.０ｍＬのバイアルを乾燥させ、ＴＨＦ（１.０ｍＬ）およびトリフェニルホスフィン（１３１ｍｇ、０.５００ミリモル）を乾燥４Åモレキュラーシーブ（２０ｍｇ）と共に添加した。該溶液を樹脂に移し、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（０.０９７ｍＬ、０.５ミリモル）をゆっくりと添加した。該樹脂を１５分間攪拌した。該溶液をフリットを通して排出させ、該樹脂を乾燥ＴＨＦ（２.０ｍＬ）で３回洗浄し、残りのいずれの水も除去した。オーブンにて４.０ｍＬのバイアルを乾燥させ、ＴＨＦ（１.０ｍＬ）、トリフェニルホスフィン（１３１ｍｇ、０.５００ミリモル）を乾燥４Åモレキュラーシーブ（２０ｍｇ）と共に添加した。該溶液を樹脂に移し、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（０.０９７ｍＬ、０.５ミリモル）をゆっくりと添加した。該樹脂を１５分間攪拌した。該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂をＤＭＦ（４.０ｍＬ）で３回、そしてＤＣＭ（４.０ｍＬ）で３回連続して洗浄した。該樹脂をエタノール（１.０ｍＬ）およびＴＨＦ（１.０ｍＬ）に懸濁させ、水素化ホウ素ナトリウム（３７.８ｍｇ、１.０００ミリモル）を添加した。混合物を３０分間攪拌し、排出させた。該樹脂をＤＭＦ（４.０ｍＬ）で３回、ＤＣＭ（４.０ｍＬ）で３回連続して洗浄した。

【0318】

ラクタム形成Ａ：
「環化方法Ｄ」より得られた粗化合物に、無水ジメチルホルムアミド（７.５ｍＬ）を、つづいて１.５当量のＨＡＴＵ、３当量のＮ−メチルモルホリンを加える。反応物を室温で３時間ないし一夜にわたって攪拌する。氷酢酸（３滴）を添加し、溶媒をGenevac EZ2にて蒸発させて除去する。化合物をＤＭＦ（２ｍＬ）に可溶化させ、シリンジフィルター（０.２μｍ）に通して濾過し、逆相精製に供する。

【0319】

ラクタム形成Ｂ：
精製して得られた化合物に、無水ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）を、つづいて１.５当量の新たに製造されたストックとしてのＨＡＴＵ（０.１Ｍ／ＤＭＦ）、および３当量の新たに調製されたストックとしてのＮ−メチルモルホリン（０.３Ｍ／ＤＭＦ）を添加する。反応混合物を室温で一夜攪拌し、フィルター（０.２μｍ）に通して濾過し、逆相精製に供する。

【0320】

マイクロ切断Ａ：
少量の樹脂のサンプル（＜１０ｍｇ）に、ＴＩＳ（２滴）およびトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、室温で震盪させる。１時間後、少量のアリコートを取り出し、アセトニトリル（０.５ｍＬ）で希釈し、濾過し、ＬＳ−ＭＳによる分析を得る。

【0321】

一般的な合成シーケンス
「一般的な合成シーケンス」は、本明細書に記載の環状化合物を得るのに使用された一般的な一連の操作を記載する。そのシーケンスは上記した一般的方法からなる。そのシーケンスは樹脂を膨潤させる操作から始まる。次に、樹脂結合の化合物のＮ−末端が第一アミンであるならば、単一のカップリング操作を、または樹脂結合の化合物のＮ−末端が第二アミンであるならば、二重カップリング操作を用い、一連のアミノ酸カップリングを連続して行った。そのシーケンスにおいてすべてのアミノ酸をカップリングさせた後、さらなる操作：最終洗浄、クロロ酢酸カップリング、広範囲にわたる脱保護、環化、そして最後的なラクタム形成を所定の順序で行った。

【0322】

実施例１４００の調製

【化11】

【0323】

実施例１４００は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｃ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。

【0324】

その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂ、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は０.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９９％であった。

【0325】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.４４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１４.７（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.４６分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１４.６（Ｍ＋２Ｈ）

【0326】

実施例１４０１の調製

【化12】

【0327】

実施例１４０１は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｃ」、「環化方法Ｄ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。

【0328】

その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１０−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ（XBridge）Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１５−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３.７ｍｇであった。

【0329】

「ラクタム形成Ｂ」の記載に従った。
その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１５−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１.２ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９１％であった。

【0330】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.５４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５４.３（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.５２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５４.１（Ｍ＋２Ｈ）

【0331】

実施例１４０２の調製

【化13】

【0332】

実施例１４０２は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｃ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は４.６ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９９％であった。

【0333】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.４４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２１.７（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.４６分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２１.７（Ｍ＋２Ｈ）

【0334】

実施例１４０３の調製

【化14】

【0335】

実施例１４０３は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｃ」、「環化方法Ｄ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１０−６１％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１９.２ｍｇであった。

【0336】

「ラクタム形成Ｂ」の記載に従った。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９１％であった。

【0337】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.３９分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９６１.３（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.４１分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９６１.２（Ｍ＋２Ｈ）

【0338】

実施例１４０４の調製

【化15】

【0339】

実施例１４０４は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｃ」、「環化方法Ｄ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１５−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１２.８ｍｇであった。

【0340】

「ラクタム形成Ｂ」の記載に従った。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１.１ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９２％であった。

【0341】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.４９分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９６１.２（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.５１分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９６１.３（Ｍ＋２Ｈ）

【0342】

実施例１４０５の調製

【化16】

【0343】

実施例１４０５は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｃ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。

【0344】

その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１５−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は２.４ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９４％であった。

【0345】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.５５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０５.４（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.５５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０５.６（Ｍ＋２Ｈ）

【0346】

実施例１５００の調製

【化17】

【0347】

実施例１５００は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｃ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって２０−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１.３ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９９％であった。

【0348】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.５０分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ８９８.５（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.４４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ８９８.２（Ｍ＋２Ｈ）

【0349】

実施例１５０１の調製

【化18】

【0350】

実施例１５０１は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｃ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１５−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は４.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９９％であった。

【0351】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.４５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０５.３（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.４１分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０５.４（Ｍ＋２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９０４.９３２５（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：９０４.９３０５（Ｍ＋２Ｈ）

【0352】

実施例１５０２の調製

【化19】

【0353】

実施例１５０２は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｅ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって２０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって２０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は９.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９７％であった。

【0354】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.６０分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ８９８.５（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.５６分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ８９８.４（Ｍ＋２Ｈ）

【0355】

実施例１５０３の調製

【化20】

【0356】

実施例１５０３は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｅ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１５−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって２５−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９６％であった。

【0357】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.６３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ８９１.７（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.６０分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ８９１.２（Ｍ＋２Ｈ）

【0358】

実施例１５０４の調製

【化21】

【0359】

実施例１５０４は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｆ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１０−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は２.４ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0360】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.４３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０５.４（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.４０分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０５.３（Ｍ＋２Ｈ）

【0361】

実施例１５０５の調製

【化22】

【0362】

実施例１５０５は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｆ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって１０−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせおよび遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって１５−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0363】

分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝１.５０分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１２.２（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.４２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１２.４（Ｍ＋２Ｈ）

【0364】

実施例１５０６の調製

【化23】

【0365】

実施例１５０６は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｅ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって４０−８０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１.２ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９６％であった。

【0366】

分析ＬＣＭＳ条件Ｈ：保持時間＝１.４９分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１２.６（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｉ：保持時間＝２.６０分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１２.７（Ｍ＋２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９１１.９４０３（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：９１１.９３９１（Ｍ＋２Ｈ）

【0367】

実施例１５０７の調製

【化24】

【0368】

実施例１５０７は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｅ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって４０−８０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は４.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９８％であった。

【0369】

分析ＬＣＭＳ条件Ｈ：保持時間＝１.５４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１３.２（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｉ：保持時間＝２.６７分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１２.９（Ｍ＋２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９１１.９３８５（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：９１１.９４０３（Ｍ＋２Ｈ）

【0370】

実施例１５０８の調製

【化25】

【0371】

実施例１５０８は、次の一般的操作：「プレリュード方法Ｃ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ｃ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：第二アミンカップリング操作」、「プレリュード方法Ｃ：最終洗浄操作」、クロロ酢酸カップリング操作Ｂ「グローバルな脱保護方法Ｅ」、「環化方法Ｄ」、および「ラクタム形成Ａ」からなる、上記の「一般的な合成シーケンス」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：３０分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって４０−８０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は６.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0372】

分析ＬＣＭＳ条件Ｈ：保持時間＝１.５５分；ＥＳＩ−ＭＳ（−）ｍ／ｚ ９０４.７（Ｍ＋２Ｈ）
分析ＬＣＭＳ条件Ｉ：保持時間＝３.１１分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０５.１（Ｍ＋２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９０４.９３０２（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：９０４.９３２５（Ｍ＋２Ｈ）

【0373】

実施例５００１−５００８について次の操作を用いた：

【0374】

分析データ：
質量分析：「ＥＳＩ−ＭＳ（＋）」は陽イオンモードで行われる電子噴射イオン化質量分析を意味する；「ＥＳＩ−ＭＳ（−）」は陰イオンモードで行われる電子噴射イオン化質量分析を意味する；「ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）」は陽イオンモードで行われる高分解能電子噴射イオン化質量分析を意味する；「ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（−）」は陰イオンモードで行われる高分解能電子噴射イオン化質量分析を意味する。検出された質量を「ｍ／ｚ」単位記号の後に報告する。正確な質量が１０００よりも大きい化合物は、しばしば、二重荷電イオンまたは三重荷電イオンとして検出された。

【0375】

分析条件Ａ：
カラム：ウォーターズ（Waters）ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：０％Ｂ、３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0376】

分析条件Ｂ：
カラム：ウォーターズ ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：０％Ｂ、３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.５ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0377】

分析条件Ｃ：
カラム：フェノメネックス・ルナ Ｃ１８ ２.０ｘ３０ｍｍ ３.０μｍ粒子；移動相Ａ： アセトニトリル：水（１０：９０）＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル：水（９０：１０）＋０.１％ＴＦＡ；温度：４０℃；勾配：０％Ｂ、２分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで１.０分間保持する；流速：０.８ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0378】

分析条件Ｄ：
カラム：ウォーターズ・アクイティ ＢＥＨ Ｃ１８ ２.１ｘ５０ｍｍ １.７μｍ粒子；移動相Ａ：水＋０.０５％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ＴＦＡ；温度：４０℃；勾配：０％Ｂ、１.５分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.８ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0379】

分析条件Ｅ：
カラム：ウォーターズ・アクイティ ＢＥＨ Ｃ１８ ２.１ｘ５０ｍｍ １.７μｍ粒子；移動相Ａ：水＋０.０５％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ＴＦＡ；温度：４０℃；勾配：０％Ｂ、３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.８ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0380】

一般的操作：
プレリュード方法Ａ：
すべての操作はプレリュード型ペプチド合成装置（Protein Technologies）での自動化の下で行われた。特に断りのない限り、操作はすべて、底部フリットで取り付けられた１０ｍＬのポリプロピレン製の管において行われ；反応スケールが０.１００ミリモルを超える場合に、底部フリットが取り付けられている４０ｍＬのポリプロピレン管を使用した。該管の底部と上部の両方を通して、該管をプレリュード型ペプチド合成装置に接続する。ＤＭＦおよびＤＣＭは該管の上部から加えることができ、それにより該管の側面が等しく洗い流される。残りの試剤は管の底部より加えられ、下からフリットを通って樹脂と接触する。溶液はすべて該管の底部から取り出される。「周期的なかき混ぜ」はＮ_２ガスを短いパルスで底部フリットに通すことをいい；パルスは約５秒間続き、それが３０秒毎に発生する。塩化クロロアセチルのＤＭＦ中溶液は調製から２４時間以内に使用された。アミノ酸溶液は、一般に、調製から３週間を越えては使用されなかった。ＨＡＴＵ溶液は調製の５日以内に使用された。ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＨＡＴＵ＝１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１,２,３−トリアゾロ［４,５−ｂ］ピリジニウム ３−オキシド・ヘキサフルオロリン酸塩；ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン；リンク（Rink）＝（２,４−ジメトキシフェニル）（４−アルコキシフェニル）メタナミンであり、ここで「４−アルコキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、リンクリンカー（窒素にてＦｍｏｃ−保護されている）を用いた、１００−２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.５６ミリモル／ｇ負荷のメリフィールドポリマー（ポリスチレン）である。使用されるコモンアミノ酸を、側鎖保護基を括弧内に示して、下記にて列挙する：Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｂｚｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ； Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ａｌａ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−［Ｎ−Ｍｅ］Ｎｌｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓａｒ−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ；Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ。

【0381】

「プレリュード方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているリンクリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記のリンク−メリフィールド樹脂の約１７８ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、「樹脂膨潤操作」にて下記に示されるように、樹脂膨潤操作をもってすべての化合物の合成シーケンスを始めた。アミノ酸と第一アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「単一のカップリング操作」を用いた。アミノ酸の、第二アミンのＮ−末端とのカップリングは下記の「二重カップリング操作」を用いた。塩化クロロアセチルの、該化合物のＮ−末端とのカップリングは、下記の「塩化クロロアセチルカップリング操作」にて記載される。

【0382】

樹脂膨潤操作：
１０ｍＬのポリプロピレン製固相反応容器に、メリフィールド：リンク樹脂（１７８ｍｇ、０.１００ミリモル）を添加した。樹脂を次のように３回洗浄した（膨潤させた）：反応容器に、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を加え、その中の混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。

【0383】

単一のカップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、次にＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、そして最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、０.５ｍＬ、４当量）を添加した。該混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、無水酢酸（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0384】

二重カップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように６回連続して洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、次にＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、そして最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、０.５ｍＬ、４当量）を添加した。該混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。 該反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、次にＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、０.５ｍＬ、４当量）を添加した。該混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に反応溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、無水酢酸（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を１０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように４回連続して洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から加え、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。

【0385】

塩化クロロアセチルカップリング操作：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、ＤＩＰＥＡ（０.８Ｍ／ＤＭＦ、３.０ｍＬ、２４当量）を、次に塩化クロロアセチル（０.８Ｍ／ＤＭＦ、１.６５ｍＬ、１３.２当量）を添加した。混合物を３０分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から加え、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、後でその溶液をフリットを通して排出させた。樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＣＨ_２Ｃｌ２（２.０ｍＬ）を容器の上部に加え、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で溶液をフリットを通して排出させた。 得られた樹脂をＮ_２流の下に１５分間置いた。

【0386】

シンフォニー方法Ａ：
この一連の操作は、特記する場合を除き、「プレリュード方法Ａ」の操作の同じである。あらゆる操作で、プレリュード型ペプチド合成装置の代わりに、シンフォニー型Ｘペプチド合成装置（Protein Technologies）を用い、すべての試剤を反応容器の上部より添加した。

【0387】

樹脂膨潤操作：
この操作は「プレリュード方法Ａ：樹脂膨潤操作」と同じである。

【0388】

単一のカップリング操作：
この操作は、ＤＩＰＥＡ溶液の濃度が０.４Ｍであり、この溶液が１.０ｍＬで反応物に送達されることを除き、「プレリュード方法Ａ：単一のカップリング操作」と同じである。

【0389】

二重カップリング操作：
この操作は、ＤＩＰＥＡ溶液の濃度が０.４Ｍであり、この溶液が１.０ｍＬで反応物に送達されることを除き、「プレリュード方法Ａ：二重カップリング操作」と同じである。

【0390】

塩化クロロアセチルカップリング操作：
この操作は、「プレリュード方法Ａ：塩化クロロアセチルカップリング操作」と同じである。

【0391】

グローバルな脱保護方法Ａ：
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「グローバルな脱保護方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているリンクリンカーの量で決定されるものとする。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。「脱保護溶液」は、４０ｍＬのガラスバイアルにおいて、トリフルオロ酢酸 （２２ｍＬ）、フェノール（１.３２５ｇ）、水（１.２５ｍＬ）およびトリイソプロピルシラン（０.５ｍＬ）を合わせることによって調製された。樹脂を反応容器より取り出し、４ｍＬのガラスバイアルに移した。該バイアルに「脱保護溶液」（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器で激しく混合した（１０００ＲＰＭで１分間、ついで５００ＲＰＭで１−２時間）。混合物を０.２ミクロンのシリンジフィルターを通して濾過し、固体を「脱保護溶液」（１.０ｍＬ）またはＴＦＡ（１.０ｍＬ）で抽出した。２４ｍＬの試験管に、濾液を合わせて入れ、Ｅｔ２Ｏ（１５ｍＬ）を添加した。該混合物を激しく混合すると、有意な量の白色固体が沈殿した。該混合物を５分間遠心分離に付し、次に溶液を固体からデカンテーションに付して廃棄した。固体をＥｔ２Ｏ（２０ｍＬ）に懸濁させ；次に該混合物を５分間遠心分離に付し；溶液を固体からデカンテーションに付して廃棄した。最後にもう一度、固体をＥｔ２Ｏ（２０ｍＬ）に懸濁させ；該混合物を５分間遠心分離に付し；溶液を固体からデカンテーションに付して廃棄し、粗化合物を白色ないし灰白色の固体として得た。

【0392】

環化方法Ａ：
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「環化方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは、化合物を生成するのに使用された樹脂と結合しているリンクリンカーの量で決定されるものとする。このスケールはその操作にて使用される化合物の量を直接測定することをベースとするものではない。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。粗化合物の固体を、総容量が６０ｍＬまでの、ＭｅＣＮ：水性０.１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ（１：１）に溶かし、次に該溶液のｐＨを水性ＮａＯＨ（１.０Ｍ）を用いることで注意して８.５−９.０に調整した。次に該溶液を１２−１８時間撹拌した。反応溶液を濃縮し、ついでその残渣をＤＭＳＯ：ＭｅＯＨに溶かした。この溶液を逆相ＨＰＬＣ精製に供して所望の環状化合物を得た。

【0393】

環化方法Ｂ：
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「環化方法Ｂ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは、化合物を生成するのに使用された樹脂と結合しているリンクリンカーの量で決定されるものとする。このスケールはその操作にて使用される化合物の量を直接測定することをベースとするものではない。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えるスケールに拡大することができる。粗化合物の固体を、総容量が１８−２２ｍＬまでの、ＭｅＣＮ：水性０.１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ（１：１）に溶かし、次に該溶液のｐＨを水性ＮａＯＨ（１.０Ｍ）を用いることで注意して８.５−９.０に調整した。次に該溶液を撹拌することなく１２−１８時間放置した。反応溶液を濃縮し、ついでその残渣をＤＭＳＯ：ＭｅＯＨに溶かした。この溶液を逆相ＨＰＬＣ精製に供して所望の環状化合物を得た。

【0394】

一般的な合成シーケンスＡ：
「一般的な合成シーケンスＡ」は、本明細書に記載の環状化合物を得るのに使用された一連の一般的操作を記載する。この一般的操作の目的で、「シンフォニー方法Ａ」の操作は「プレリュード方法Ａ」の操作と互換的であった。１０ｍＬのポリプロピレン製固相反応容器に、リンク−メリフィールド樹脂（１７８ｍｇ、０.１００ミリモル）を加え、その反応容器をプレリュード型ペプチド合成装置に配置した。「プレリュード方法Ａ：樹脂膨潤操作」に従った。次に一連のアミノ酸カップリングを、仮に樹脂結合の化合物のＮ−末端が第１アミンである場合に、プレリュード型の「プレリュード方法Ａ：単一のカップリング操作」に従って、樹脂結合の化合物のＮ−末端が第２アミンである場合に、プレリュード型の「プレリュード方法Ａ：二重カップリング操作」に従って連続的に実施された。「プレリュード方法Ａ：塩化クロロアセチルカップリング操作」に従い；次に「グローバルな脱保護方法Ａ」に従い；ついで「環化方法Ａ」に従った。

【0395】

実施例５００１の調製

【化26】

【0396】

中間体５００１は、０.２００ミリモルのスケールで、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。粗材料は、分取性ＨＰＬＣを介し、次の条件：カラム：ルナ（Luna）Ｃ１８、３０ｘ１００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１０分間にわたって０−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４２ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物は９.３２分に溶出した。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は５３.８ｍｇであった。分析条件Ｄ：保持時間＝１.１０６分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９３４.０５（Ｍ＋２Ｈ）

【0397】

実施例５００１は次のように調製された：中間体５００１（５３.８ｍｇ、０.０２９ミリモル）／ＤＭＦ（３ｍＬ）が充填されている２ｍＬのバイアルに、ＤＩＰＥＡ（０.１０１ｍＬ、０.５７７ミリモル）およびＨＡＴＵ（４３.８ｍｇ、０.１１５ミリモル）を添加した。該溶液を室温で１時間攪拌した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：１５分間にわたって５０−９０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１１.２ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９９％であった。

【0398】

分析条件Ａ：保持時間＝１.９６分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２４.６（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝３.１３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２４.７（Ｍ＋２Ｈ）

【0399】

実施例５００２の調製

【化27】

【0400】

中間体５００２は、０.２００ミリモルのスケールで、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。粗材料は、分取性ＨＰＬＣを介し、次の条件：カラム：ルナ Ｃ１８、３０ｘ１００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１０分間にわたって１０−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４２ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は５０.０ｍｇであった。分析条件Ｃ：保持時間＝１.２７２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９３３.７５（Ｍ＋２Ｈ）

【0401】

実施例５００２を次のように調製した：中間体５００２（５０ｍｇ、０.０２４ミリモル）／ＤＭＦ（３ｍＬ）を充填した７ｍＬのバイアルに、ＤＩＰＥＡ（０.０８３ｍＬ、０.４７８ミリモル）およびＨＡＴＵ（３６.３ｍｇ、０.０９６ミリモル）を添加した。その溶液を室温で３０分間攪拌した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：１５分間にわたって３０−７０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１４.６ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0402】

分析条件Ａ：保持時間＝１.８２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２４.８（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝３.０１分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２３.３（Ｍ−２Ｈ）

【0403】

実施例５００３の調製

【化28】

【0404】

中間体５００３は、０.２００ミリモルのスケールで、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。粗材料は、分取性ＨＰＬＣを介し、次の条件：カラム：ルナ Ｃ１８、３０ｘ１００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１０分間にわたって１０−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４２ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は５０.０ｍｇであった。分析条件Ｃ：保持時間＝１.３００分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２６.７５（Ｍ＋２Ｈ）

【0405】

実施例５００３は次のように調製された：中間体５００３（５０ｍｇ、０.０２４ミリモル）／ＤＭＦ（３ｍＬ）を充填した７ｍＬのバイアルに、ＤＩＰＥＡ（０.０８４ｍＬ、０.４８１ミリモル）およびＨＡＴＵ（３６.６ｍｇ、０.０９６ミリモル）を添加した。該溶液を室温で３０分間攪拌した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：１５分間にわたって２５−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって５０−９０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１２.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９８％であった。

【0406】

分析条件Ａ：保持時間＝１.９４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１７.５（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝３.０３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１７.４（Ｍ＋２Ｈ）

【0407】

実施例５００４の調製

【化29】

【0408】

中間体５００４は、０.２００ミリモルのスケールで、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。粗材料は、分取性ＨＰＬＣを介し、次の条件：カラム：ルナ Ｃ１８、３０ｘ１００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：１０分間にわたって１０−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４２ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３５.５ｍｇであった。分析条件Ｄ：保持時間＝１.５５７分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９６３.６（Ｍ＋２Ｈ）

【0409】

実施例５００４は次のように調製された：中間体５００４（３５.５ｍｇ、０.０１８ミリモル）をＤＭＦ（２.０ｍＬ）に溶かした。該溶液にＤＩＰＥＡ（０.０７５ｍＬ、０.４３ミリモル）を、ついでＨＡＴＵ（２８ｍｇ、０.０７４ミリモル）を添加した。その溶液を室温で４５分間攪拌した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：１５分間にわたって３５−７５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は４.９ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９５％であった。

【0410】

分析条件Ａ：保持時間＝２.１４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５４.１（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.９３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５２.４（Ｍ−２Ｈ）

【0411】

実施例５００５の調製

【化30】

【0412】

中間体５００５は、０.６００ミリモルのスケールで、「環化方法Ａ」の代わりに「環化方法Ｂ」を用い、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：１５分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：４０分間にわたって４５−８５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。得られた材料を水性ＨＣｌでトリチュレートし、ついで真空下で乾燥させた。生成物の収量は１１２.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９３％であった。

【0413】

分析条件Ａ：保持時間＝１.３７分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９７１.２（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.５８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９７１.３（Ｍ＋２Ｈ）

【0414】

実施例５００５は次のように調製された：攪拌棒を装着し、中間体５００５（２６.０ｍｇ、０.０１３ミリモル）を充填した１５ｍＬのバイアルに、ＤＭＦ（０.５０ｍＬ）を、次にＤＩＰＥＡ（０.０２３ｍＬ、０.１２９ミリモル）を、ついでＨＡＴＵ（１２.２８ｍｇ、０.０３２ミリモル）を添加した。その溶液を室温で１５分間攪拌した。反応液にエタノールアミン（０.１ｍＬ）を添加した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：
カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって４５−８５％Ｂとし、次に１００％Ｂで７分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は８.０ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0415】

分析条件Ａ：保持時間＝１.５８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５２.８（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.７３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５３.２（Ｍ＋２Ｈ）

【0416】

実施例５００６の調製

【化31】

【0417】

中間体５００６は、０.４００ミリモルのスケールで、「環化方法Ａ」の代わりに「環化方法Ｂ」を用い、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１０−５０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって４０−８０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は５４.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0418】

分析条件Ａ：保持時間＝１.４３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９４１.３（Ｍ−２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.６２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９４０.８（Ｍ−２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９４２.４４８５；測定値：９４２.４４７５

【0419】

実施例５００６は次のように調製された：攪拌棒を装着し、中間体５００６（４０ｍｇ、０.０２０ミリモル）を充填した１ドラムのバイアルに、ＮＭＰ（１.００ｍＬ）を、次にＤＩＰＥＡ（０.０３６ｍＬ、０.２０ミリモル）を、ついでＨＡＴＵ （１９ｍｇ、０.０５１ミリモル）を添加した。該溶液を室温で４時間攪拌した。その反応溶液にＭｅＮＨ_３Ｃｌ（５ｍｇ）およびＨＡＴＵ（１０ｍｇ）を添加した。反応物を室温で３０分間攪拌した。該溶液にＡｃＯＨ（３滴）を添加した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって４５−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１０−５０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は５.２ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0420】

分析条件Ａ：保持時間＝１.４９７分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９３３.４５（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.１３９分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９３３.７０（Ｍ＋２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９３３.４４３２；測定値：９３３.４４１６

【0421】

実施例５００７の調製

【化32】

【0422】

中間体５００７は、０.４００ミリモルのスケールで、「環化方法Ａ」の代わりに「環化方法Ｂ」を用い、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１０−５０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は７５.１ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0423】

分析条件Ａ：保持時間＝１.４０８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９６１.４０（Ｍ−２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.９１２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９６３.４５（Ｍ＋２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９６２.９６１８；測定値：９６２.９５９２

【0424】

実施例５００７は次のように調製された：攪拌棒を装着し、中間体５００７（４９ｍｇ、０.０２５ミリモル）を充填した１ドラムのバイアルに、ＮＭＰ（１.００ｍＬ）を、次にＤＩＰＥＡ（０.０４３ｍＬ、０.２５ミリモル）を、ついでＨＡＴＵ（２３ｍｇ、０.０６２ミリモル）を添加した。該溶液を室温で４時間攪拌した。該反応溶液にＭｅＮＨ_３Ｃｌ（５ｍｇ）およびＨＡＴＵ（１０ｍｇ）を添加した。反応液を室温で１時間攪拌した。該溶液に、ＡｃＯＨ（３滴）を添加した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３.３ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９７％であった。

【0425】

分析条件Ａ：保持時間＝１.５５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５２.３（Ｍ−２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.６８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５４.３（Ｍ＋２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９５３.９５６５；測定値：９５３.９５４２

【0426】

実施例５００８の調製

【化33】

【0427】

中間体５００８は、０.４００ミリモルのスケールで、「環化方法Ａ」の代わりに「環化方法Ｂ」を用い、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１２２.４ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９７％であった。

【0428】

分析条件Ａ：保持時間＝１.５５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５７.５（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝１.８２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９５４.５（Ｍ−２Ｈ）
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ（＋）ｍ／ｚ：計算値：９５５.９５７７；測定値：９５５.９５４３

【0429】

実施例５００８は次のように調製された：攪拌棒を装着し、中間体５００８（４６ｍｇ、０.０２３ミリモル）を充填した１ドラムのバイアルに、ＮＭＰ（１.００ｍＬ）を、次にＤＩＰＥＡ（０.０４１ｍＬ、０.２３ミリモル）を、ついでＨＡＴＵ（２２ｍｇ、０.０５８ミリモル）を添加した。該溶液を室温で４時間攪拌した。該反応溶液に、ＭｅＮＨ_３Ｃｌ（５ｍｇ）およびＨＡＴＵ（１０ｍｇ）を加えた。該溶液を室温で１時間攪拌し、次に該溶液にＡｃＯＨ（３滴）を添加した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって２０−６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって５０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0430】

分析条件Ｅ：保持時間＝１.８３３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９４８.１５（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.５４５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９４６.５５（Ｍ＋２Ｈ）

【0431】

実施例７１５５の調製

【化34】

【0432】

実施例７１５５は、１００マイクロモルｘ４のスケールで、次の一般的操作：「プレリュード方法Ａ：樹脂膨潤操作」、「プレリュード方法Ａ：単一のカップリング操作」、「プレリュード方法Ａ：二重カップリング操作」、「プレリュード方法Ａ：塩化クロロアセチルカップリング操作」からなる、実施例５００１の調製について記載される一般的な合成シーケンスに従って調製された。

【0433】

得られたマイクロ波バイアル中の樹脂結合の化合物（１００マイクロモル）に、Hoveyda-Grubb第２世代触媒（１当量、１００マイクロモル、６３ｍｇ）およびジクロロエタン（１７ｍｌ）を添加した。そのバイアルを密封し、混合物を脱気／窒素でのフラッシュ処理に付し、次にマイクロ波で１２０℃での加熱に１時間供した。該反応を４回繰り返し、得られた樹脂を固相合成容器中で合わせ、濾過し、ＤＭＦ（４ｘ２０ｍＬ）で、次にＤＣＭ（５ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、真空下で一夜乾燥させた。その材料を４個の１００マイクロモルのバッチに分割した。

【0434】

次に「グローバルな脱保護方法Ａ」および「環化方法Ａ」を利用した。

【0435】

グローバルな脱保護方法Ａ：「グローバルな脱保護方法Ａ」の操作は、１００マイクロモルｘ４のスケールで行われる実験を記載し、ここでそのスケールは樹脂と結合するリンク（Rink）リンカーの量で決定される。「脱保護溶液」は、４０ｍＬのガラスジャーにて、トリフルオロ酢酸（２２ｍＬ）、フェノール（１.３２５ｇ）、水（１.２５ｍＬ）およびトリイソプロピルシラン（０.５ｍＬ）を合わせることで調製した。固相合成容器に含まれる樹脂のバイアルに、「脱保護溶液」（８.０ｍＬ）を添加した。該混合物をオービタルシェーカーで混合した（１７５ＲＰＭ、２時間）。混合物を濾過し、固体を「脱保護溶液」（４.０ｍＬ）でさらに洗浄し、４０ｍＬのスクリュ式キャップのバイアル中に集めた。濾液を合わせ、Ｅｔ２Ｏ（１５ｍＬ）を添加した。該混合物を激しく混合し、その時に有意な量の白色固体が沈殿した。該混合物を２０００ＲＰＭで３分間遠心分離に付し、溶液を固体からデカントさせ、廃棄した。このプロセスを３回繰り返し、次にその固体を作業台に置き、継続して行う前に１〜２時間風乾させ、粗化合物をオフホワイトな固体として得た。

【0436】

環化方法Ａ：「環化方法Ａ」の操作は、１００マイクロモルｘ４のスケールで行われる実験を記載する。粗化合物の固体をＭｅＣＮ：水性０.１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ（６０ｍＬ：６０ｍＬ）に溶かし、次にその溶液を、水性ＮａＯＨ（１.０Ｍ）を用い、注意してｐＨ＝９.０に調整した。バイアルに蓋をし、次に該溶液をオービタルシェーカーで一夜（約１８時間）にわたって１７５ＲＰＭで混合した。反応溶液を濃縮し、ついで残渣をＭｅＯＨに溶かした。

【0437】

その粗化合物は、分取性ＬＣ／ＭＳを介して、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、５μｍ、１９ｘ２００ｍｍ、移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて調製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３.０ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は８４％であった。

【0438】

分析条件Ａ：保持時間＝１.６３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ＝９０９.５（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.７０分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ＝９０９.５（Ｍ＋２Ｈ）

【0439】

次の分析用ＬＣ／ＭＳ条件を用いて最終純度を測定した。

【0440】

分析条件Ａ：カラム：ウォーターズ（Waters）ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：０％Ｂ、３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0441】

分析条件Ｂ：カラム：ウォーターズ ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：０％Ｂ、３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.５ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0442】

実施例７１５６の調製

【化35】

【0443】

丸底フラスコに、３.０ｍｇの実施例７１５５（１.６５マイクロモル）およびメタノール（２ｍＬ）を添加した。フラスコを密封し、該溶液を脱気および窒素でのフラッシュ処理に付した。次にその溶液に、１当量の１０％Ｐｄ／Ｃを添加し、フラスコに水素のバルーンと適合させ、その混合物を室温で一夜攪拌した。得られた生成物を濾過し、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、５μｍ、１９ｘ２００ｍｍ、移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって４５−８５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製した。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0444】

分析条件Ａ：保持時間＝１.６９ 分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ＝９１０.５（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.７０ 分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ＝９１０.５（Ｍ＋２Ｈ）

【0445】

次の分析用ＬＣ／ＭＳ条件を用いて最終純度を測定した。

【0446】

分析条件Ａ：カラム：ウォーターズ ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：０％Ｂ、３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：１ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0447】

分析条件Ｂ：カラム：ウォーターズ ＢＥＨ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：５０℃；勾配：０％Ｂ、３分間にわたって０−１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.５ｍＬ／分；検出：ＵＶ（２２０ｎｍ）

【0448】

中間体１０５００の調製

【化36】

【0449】

中間体１０５００は、「環化方法Ａ」の代わりに「環化方法Ｂ」を用い、「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ メタノール：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって４０−８０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。該材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：４０分間にわたって１０−５０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いてさらに精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は２５.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９９％であった。

【0450】

分析条件Ａ：保持時間＝１.６６分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０８.４（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.８１分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０８.４（Ｍ＋２Ｈ）

【0451】

実施例１０５００の調製

【化37】

【0452】

中間体１０５００（１５ｍｇ、８.２６マイクロモル）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶かし、つづいてヒューニッヒ塩基（Hunig’s Base）（７.２２μｌ、０.０４１ミリモル）を、ついでＨＡＴＵ（４.７１ｍｇ、０.０１２ミリモル）を添加した。反応物を１時間攪拌した。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって３０−７０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１.２ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９９％であった。
分析条件Ａ：保持時間＝１.８５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ８９９.５（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.９８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ８９９.７（Ｍ＋２Ｈ）

【0453】

中間体１０５０１の調製

【化38】

【0454】

中間体１０５０１は「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３４.０ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0455】

分析条件Ａ：保持時間＝１.６４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２９.４（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.８２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２９.８（Ｍ＋２Ｈ）

【0456】

実施例１０５０１の調製

【化39】

【0457】

実施例１０５０１は、実施例１０５００を調製するのに用いられる方法に従って、調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって２５−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は６.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0458】

分析条件Ａ：保持時間＝１.７５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２０.６（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.８８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２０.６（Ｍ＋２Ｈ）

【0459】

中間体１０５０２の調製

【化40】

【0460】

中間体１０５０２は「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３４.０ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0461】

分析条件Ａ：保持時間＝１.６８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２２.５（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.８３分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９２２.８（Ｍ＋２Ｈ）

【0462】

実施例１０５０２の調製

【化41】

【0463】

実施例１０５０２は、実施例１０５００を調製するのに用いられる方法に従って、調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって２５−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は３.１ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は９８％であった。

【0464】

分析条件Ａ：保持時間＝１.７７分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１３.４（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.８８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１３.７（Ｍ＋２Ｈ）

【0465】

中間体１０５０３の調製

【化42】

【0466】

中間体１０５０３は「一般的な合成シーケンスＡ」に従って調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって１５−５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は２３.４ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0467】

分析条件Ａ：保持時間＝１.６５分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１５.８（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.８４分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９１５.８（Ｍ＋２Ｈ）

【0468】

実施例１０５０３の調製

【化43】

【0469】

実施例１０５０３は、実施例１０５００を調製するのに使用される方法に従って、調製された。その粗材料は、分取性ＬＣ／ＭＳを介し、次の条件：カラム：エックスブリッジ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：３０分間にわたって２５−６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分を用いて精製された。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心エバポレーターを介して乾燥させた。生成物の収量は１.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によって推定されるその純度は１００％であった。

【0470】

分析条件Ａ：保持時間＝１.７８分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０６.８（Ｍ＋２Ｈ）
分析条件Ｂ：保持時間＝２.９２分；ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ９０６.７（Ｍ＋２Ｈ）

【0471】

均一性時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）結合アッセイを用いて、大環状化合物の、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１との結合について、競合する能力を試験する方法
本開示の大環状化合物のＰＤ−Ｌ１と結合する能力を、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の均一性時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）結合アッセイを用いて測定した。

【0472】

方法
可溶性ＰＤ−１の可溶性ＰＤ−Ｌ１との結合の均一性時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）アッセイ：可溶性ＰＤ−１および可溶性ＰＤ−Ｌ１は、膜貫通領域を除去し、異種配列と、具体的にはヒト免疫グロブリンＧ配列（Ｉｇ）またはヘキサヒスチジンエピトープタグ（Ｈｉｓ）のＦｃ部と融合する、カルボキシル末端の切断したタンパク質をいう。結合の実験はすべて、０.１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンおよび０.０５％（ｖ／ｖ）ツィーン−２０を補足したｄＰＢＳからなるＨＴＲＦアッセイ緩衝液中でなされた。ＰＤ−１−Ｉｇ／ＰＤ−Ｌ１−Ｈｉｓの結合アッセイの場合、阻害剤を、アッセイ緩衝液（４μｌ）中、ＰＤ−Ｌ１−Ｈｉｓ（最終１０ｎＭ）と一緒に１５分間予めインキュベートし、つづいてアッセイ緩衝液（１μｌ）中のＰＤ−１−Ｉｇ（最終２０ｎＭ）を添加し、さらに１５分間インキュベートした。ヒト、カニクイザル、マウスまたは他の種のいずれかより由来のＰＤ−Ｌ１融合タンパク質を用いた。ＨＴＲＦ検出は、ユーロピウムクリプタート標識の抗モノクローナル抗体（最終１ｎＭ）およびアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識の抗Ｈｉｓモノクローナル抗体（最終２０ｎＭ）を用いて達成された。抗体をＴＲＦ検出緩衝液で希釈し、５μｌを結合反応の上部に分注した。反応を３０分間にわたって平衡にさせ、シグナル（６６５ｎｍ／６２０ｎｍの割合）をEn Vision蛍光光度計を用いて得た。さらなる結合アッセイが、ＰＤ−１−Ｉｇ／ＰＤ−Ｌ２−Ｈｉｓ（各々、２０および５ｎＭ）、ＣＤ８０−Ｈｉｓ／ＰＤ−Ｌ１−Ｉｇ（各々、１００および１０ｎＭ）およびＣＤ８０−Ｈｉｓ／ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（各々、１０および５ｎＭ）の間で達成された。ビオチニル化された化合物番号７１と、ヒトＰＤ−Ｌ１−Ｈｉｓとの間の結合／競合実験が次のようになされた。大環状化合物の阻害剤を、アッセイ緩衝液（４μｌ）中、ＰＤ−Ｌ１−Ｈｉｓ（最終１０ｎＭ）と一緒に６０分間予めインキュベートし、つづいてアッセイ緩衝液（１μｌ）中のビオチニル化された化合物番号７１（最終０.５ｎＭ）を添加した。結合を３０分間にわたって平衡にさせ、つづいてユーロピウムクリプタート標識のストレプトアビジン（最終２.５ｐＭ）およびＡＰＣ標識の抗−Ｈｉｓ（最終２０ｎＭ）／ＨＴＲＦ（５μｌ）緩衝液を添加した。反応を３０分間にわたって平衡にさせ、シグナル（６６５ｎｍ／６２０ｎｍの割合）をEn Vision蛍光光度計を用いて得た。

【0473】

組換えタンパク質：カルボキシル末端切断したヒトＰＤ−１（アミノ酸２５-１６７）をＣ−末端ヒトＩｇエピトープタグ［ｈＰＤ−１（２５-１６７）−３Ｓ−ＩＧ］と共に、ヒトＰＤ−Ｌ１（アミノ酸１８−２３９）をＣ−末端Ｈｉｓエピトープタグ［ｈＰＤ−Ｌ１（１９−２３９）−タバコベインモトリングウイルス・プロテアーゼ切断部位（ＴＶＭＶ）−Ｈｉｓ］と一緒にＨＥＫ２９３Ｔ細胞にて発現させ、組換えタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーによって連続的に精製した。ヒトＰＤ−Ｌ２−Ｈｉｓ（Sino Biologicals）、ＣＤ８０−Ｈｉｓ（Sino Biologicals）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（RnD Systems）はすべて商業的供給源を通して得られた。

【0474】

組換えヒトＰＤ−１−Ｉｇの配列

【表1】

（配列番号：１）

【0475】

組換えヒトＰＤ−Ｌ１−ＴＶＭＶ−Ｈｉｓ（ＰＤ−Ｌ１−Ｈｉｓ）

【表2】

（配列番号：２）

【0476】

結果を表１に示す。ご覧のとおり、本開示の大環状化合物はＰＤ−１−ＩｇのＰＤ−Ｌ１−ＴＶＭＶ−Ｈｉｓ（ＰＤ−Ｌ１−Ｈｉｓ）との結合活性を強く阻害することが証明された。範囲は次のとおりである：Ａ＝０.１０−１μＭ；Ｂ＝０.０１−０.０９９μＭ；Ｃ＝０.００３−０.００９９μＭ

【0477】

表１

【表3】

【0478】

本開示が上記の例示としての実施例に限定されないこと、および本開示が、その本質的な特性を逸脱することなく、他の特定の形態にて具現化されうることは当業者に明らかであろう。従って、実施例はあらゆる点で例示であり、制限するものではないとして考えられるのが望ましく、上記した実施例よりもむしろ添付した特許請求の範囲について言及するものであって、かくして特許請求の範囲の意義の範囲内にあり、均等の範囲内にある変形はすべて本開示に含まれるものとする。

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]