特許 6976446 イチョウジテルペンラクトン組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6976446

(24)【登録日】2021年11月11日

(45)【発行日】2021年12月8日

(54)【発明の名称】イチョウジテルペンラクトン組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/365 20060101AFI20211125BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20211125BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20211125BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20211125BHJP

   A61P 25/24 20060101ALI20211125BHJP

   A61P 39/06 20060101ALI20211125BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20211125BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/365

   A61K9/08

   A61K47/02

   A61K47/18

   A61P25/24

   A61P39/06

   A61P43/00 121

【請求項の数】8

【全頁数】12

(21)【出願番号】特願2020-536587(P2020-536587)

(86)(22)【出願日】2018年11月13日

(65)【公表番号】特表2021-508723(P2021-508723A)

(43)【公表日】2021年3月11日

(86)【国際出願番号】CN2018115167

(87)【国際公開番号】WO2019128499

(87)【国際公開日】20190704

【審査請求日】2020年6月29日

(31)【優先権主張番号】201711475539.2

(32)【優先日】2017年12月29日

(33)【優先権主張国】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】520072718

【氏名又は名称】ジアンスー カニョン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＪＩＡＮＧＳＵ ＫＡＮＩＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．，ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】100121728

【弁理士】

【氏名又は名称】井関 勝守

(74)【代理人】

【識別番号】100165803

【弁理士】

【氏名又は名称】金子 修平

(74)【代理人】

【識別番号】100170900

【弁理士】

【氏名又は名称】大西 渉

(72)【発明者】

【氏名】シャオ ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ジョウ オンリ

(72)【発明者】

【氏名】チャオ ジョユ

(72)【発明者】

【氏名】チャン シオウジュイエン

(72)【発明者】

【氏名】カン シャオドン

(72)【発明者】

【氏名】ワン ヨンシャン

(72)【発明者】

【氏名】フ ハンフェイ

(72)【発明者】

【氏名】ウ ユィン

(72)【発明者】

【氏名】ワン ジェンジョン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン チェンフォン

【審査官】 梅田 隆志

(56)【参考文献】

【文献】 中国特許出願公開第１９７７８４０（ＣＮ，Ａ）

【文献】 SHAO, F., et al.，European Journal of Clinical Pharmacology，2017年01月，Vol.73, No.5，pp.537-546.

【文献】 MA, S., et al.，Life Sciences，2014年，Vol.114, No.2，pp.93-101.

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／３６５

Ａ６１Ｋ ９／０８

Ａ６１Ｋ ４７／０２

Ａ６１Ｋ ４７／１８

Ａ６１Ｐ ２５／２４

Ａ６１Ｐ ３９／０６

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

重量で計算すると、３２〜３６％のギンコライドＡと、５５〜５８％のギンコライドＢと、２．２〜３．４％のギンコライドＫとを含み、また合計量２．６％以上、かつそれぞれの含有量が０．５％以上のギンコライドＣと、ギンコライドＪと、ギンコライドＬとをさらに含むことを特徴とする、抑うつ状態または酸化ストレスを改善するのに用いるためのイチョウジテルペンラクトン組成物。

【請求項2】

前記ギンコライドＣと、ギンコライドＪと、ギンコライドＬとの合計量は組成物の２．６〜１０.８％を占め、３．０〜６.０％が好ましく、４．６％が最も好ましいことを特徴とする請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

薬学的に許容される添加物をさらに含むことを特徴とする請求項１または２に記載の組成物を含むイチョウジテルペンラクトン製剤。

【請求項4】

請求項１または２に記載の組成物を含むイチョウジテルペンラクトン注射剤。

【請求項5】

１ｍｌまたは５ｍｌまたは１０ｍｌの用量で、５±０．５ｍｇまたは２５±０．５ｍｇまたは５０±０．５ｍｇの前記イチョウジテルペンラクトン組成物を含むことを特徴とする請求項４に記載の注射剤。

【請求項6】

メグルミンと塩化ナトリウムとをさらに含み、各成分の重量比はイチョウジテルペンラクトン組成物：メグルミン：塩化ナトリウム＝（２〜８）：（２〜８）：（４〜１２）であることを特徴とする請求項４または５に記載の注射剤。

【請求項7】

抑うつ状態を改善するのに用いるための請求項１または２に記載の組成物。

【請求項8】

酸化ストレスを改善するのに用いるための請求項１または２に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は医薬技術分野に関し、特にイチョウジテルペンラクトン組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

イチョウは別名で白果樹と呼ばれ、古代はまた鴨脚樹または公孫樹とも呼ばれ、世界で最も古い樹種の１つで、その資源は中国で最も広く分布し、世界中の合計の７０％以上を占める。イチョウは薬用として６００年の歴史がある。イチョウの葉は広範な生物活性があり、フラボノイド類、テルペン類、ポリフェノール類、フェニルプロパノイド類、有機酸、糖類、脂肪酸、脂質、無機塩、アミノ酸などの様々な化学成分を含む。現代薬理学研究では、イチョウ葉抽出物は抗酸化、抗老化、血圧降下、血液循環の促進、脳機能の改善などの機能を持っていることを証明した。

【0003】

ギンコライドはテルペン類の化合物に属し、テルペンラクトンと呼ばれる。１９６７年、米コロンビア大学の中西香爾教授は初めてイチョウ葉抽出物から発見された４つの特別な構造を持つジテルペンラクトン類（ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ ｌａｃｔｏｎｅｓ）化合物、すなわちギンコライドＡ、Ｂ、Ｃ、Ｍ（ＧＡ、ＧＢ、ＧＣ、ＧＭ）を報告した。１９８７年にギンコライドＪ（ＧＪ）が分離され、その後ギンコライドＫとＬ（ＧＫ、ＧＬ）が発見された。ギンコライド類化合物は特異的な抗血小板活性化因子活性を持つイチョウのユニークで重要な構成要素であり、血小板活性化因子ＰＡＦ（ＰＡＦは血小板や各種炎症組織により分泌される内因性リン脂質であり、今まで最も効果的な血小板凝集誘導剤である）の天然的強い拮抗剤であり、抗酸化、抗炎症、抗血小板凝集、抗アポトーシス及び細胞死、血管拡張、中枢神経系や虚血性組織の保護など他の薬理作用を有し、特に虚血性脳卒中の治療では独特な利点を持っている。

【0004】

ＣＮ１４２４０３１Ａは、ギンコライドＡ、ギンコライドＢ、ギンコライドＫの含有量がギンコライドＡ ３０〜４０％、ギンコライドＢ ５０〜６５％、ギンコライドＫ ０．５〜５％であるギンコライド製剤を報告した。伝統的な中国医学の理論に基づいて、伝統的な中国医学は、複数のコンポーネントの相乗効果を強調し、このことから、本発明者は、組成物の中に同時にギンコライドＣ、ギンコライドＪ、ギンコライドＬが含まれる時、ギンコライド組成物の薬理学的効果をある程度高めることができることを発見した。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

これに鑑み、本発明は、ギンコライド単量体間の相乗作用を利用して、より高い薬理活性を有する組成物を探すことを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明はイチョウジテルペンラクトン組成物であって、前記組成物は、重量部で計算すると、３２〜３６部のギンコライドＡと、５５〜５８部のギンコライドＢと、２．２〜３．４部のギンコライドＫとを含み、前記組成物はギンコライドＣと、ギンコライドＪと、ギンコライドＬとをさらに含み、かつギンコライドＣ、Ｊ、Ｌ三者の合計量は２．６部以上であることを特徴とする。好ましくは、ギンコライドＣ、Ｊ、Ｌのそれぞれの含有量はすべて０．５部以上である。

【0007】

好ましくは、前記ギンコライドＣ、ギンコライドＪ、ギンコライドＬ三者の合計量は１０．８部以下である。

【0008】

好ましくは、前記ギンコライドＣ、ギンコライドＪ、ギンコライドＬ三者の合計量は２．６部〜１０．８部である。

【0009】

好ましくは、前記ギンコライドＣ、ギンコライドＪ、ギンコライドＬ三者の合計量は３．０〜６．０部である。

【0010】

好ましくは、前記ギンコライドＣ、ギンコライドＪ、ギンコライドＬ三者の合計量は４．６部である。

【0011】

本発明はイチョウジテルペンラクトン組成物であって、前記組成物は、重量で３２〜３４％のギンコライドＡと、５６〜５８％のギンコライドＢと、２．２〜３．４％のギンコライドＫとを含み、前記組成物はギンコライドＣと、ギンコライドＪと、ギンコライドＬとをさらに含み、かつギンコライドＣと、ギンコライドＪと、ギンコライドＬとの含有量の合計は２．６％以上であることを特徴とする。好ましくは、ギンコライドＣ、Ｊ、Ｌのそれぞれの含有量はすべて０．５％以上である。

【0012】

好ましくは、前記ギンコライドＣと、ギンコライドＪと、ギンコライドＬとの三者の含有量の合計は２．６〜１０．８％である。

【0013】

好ましくは、前記ギンコライドＣと、ギンコライドＪと、ギンコライドＬとの三者の含有量の合計は３．０〜６．０％である。

【0014】

好ましくは、前記ギンコライドＣと、ギンコライドＪと、ギンコライドＬとの三者の含有量の合計は４．６％である。

【0015】

好ましくは、前記組成物はビロバリドを含有しない。

【0016】

本発明は上記組成物を含むイチョウジテルペンラクトン製剤であって、前記製剤は薬学的に許容される添加物をさらに含むことを特徴とする。

【0017】

本発明は上記組成物を含むイチョウジテルペンラクトン注射剤である。

【0018】

具体的には、前記注射剤は１ｍｌまたは５ｍｌまたは１０ｍｌの用量で、５±０．５ｍｇまたは２５±０．５ｍｇまたは５０±０．５ｍｇの前記イチョウジテルペンラクトン組成物を含む。さらに、前記注射剤はメグルミンと塩化ナトリウムとをさらに含み、各成分の重量比は、イチョウジテルペンラクトン組成物：メグルミン：塩化ナトリウム＝（２〜８）：（２〜８）：（４〜１２）である。

【0019】

また、本発明は上記組成物が抗うつ薬の調製における応用である。

【0020】

また、本発明は上記組成物が心・脳血管薬の調製における応用である。

【0021】

また、本発明は上記組成物が酸化ストレスを改善するための薬の調製における応用である。

【発明を実施するための形態】

【0022】

前記「応用」とは、上記組成物（抽出物を含む）を対応する疾病またはその疾病の傾向を有する被験者に投与することを指し、その目的は、上記の疾病又はその傾向を治癒、緩和、変化、影響、改善又は予防することなどの治療効果を与えることである。当業者は、治療する疾患の種類、投与経路、および賦形剤の使用に応じて、具体的な有効量を容易に確定することができ、それは、他の薬物と併用することにより異なる可能性がある。

【0023】

本発明はマウスモデルを利用して、イチョウジテルペンラクトン組成物は、テールフリック潜時と水泳潜時を異なる程度に延長することができると同時に、電気ショックを回避する回数を異なる程度に増やすことができ、かつ一定の含有量のギンコライドＣ、ギンコライドＪ及びギンコライドＬを追加した後、抑うつ状態を改善する効果を大きく高めた。また、本発明は、イチョウジテルペンラクトン組成物を投与した後、ＳＯＤ、ＭＤＡ、ＧＳＨやＴＡＣなどの指標が異なる程度に改善されることを実験によって証明し、ここで、一定の含有量のギンコライドＣ、ギンコライドＪ及びギンコライドＬを追加した後、その改善作用は更に明らかになり、酸化ストレスをより良く改善することができ、酸化的損傷を緩和することができる。

【0024】

本発明の「以上」は、本数を含み、例えば２．６部以上は２．６部を含み、また、例えば２．６％以上は２．６％を含む。

【0025】

以下、具体的な実施形態を通じて本発明をより詳しく説明することによって、本発明の考案および様々な態様の利点をよりよく理解することができる。しかし、以下に記載される具体的な実施形態の内容は説明のためだけであり、本発明を制限するためではない。

【0026】

なお、特定条件が指定されていない場合は、通常の条件又は製造者が推奨する条件に従って行う。使用される原料薬または添加物、および製造者を示さずに使用される試薬または機器は、いずれも市販で入手できる従来の製品である。別段の説明がない限り、すべての百分率、比率、割合または部数は重量で計算される。

【0027】

別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての専門用語及び科学用語は、当業者によく知られているものと同じ意味を有する。また、記載される内容に類似または同等のいかなる方法も材料も、本発明を適用できる。

【0028】

実施例１：イチョウジテルペンラクトン組成物の抗うつ作用
１．材料
動物：ＳＰＦ級雄ＳＤラット、体重２００〜２２０ｇ、ＳＰＦ級雄昆明マウス、体重２０−２４ｇ、南京市江寧区青龍山動物繁殖場により提供され、合格証番号ＳＣＸＫ（蘇）２０１６−０００８。

【0029】

試薬：各イチョウジテルペンラクトン化合物はいずれも市販の標準品であり、下表の比率によって異なる割合のイチョウジテルペンラクトン組成物Ａ〜Ｋ群を調製し、０．５％メグルミンと０．１５％クエン酸で溶解して実験用溶液を調製した。陽性薬は塩酸イミプラミン錠（上海九福薬業会社、２５ｍｇ／錠）で、１２．５ｍｇ／ｍＬと５ｍｇ／ｍＬの薬液を調製した。

【0030】

２．方法
２．１マウスのテールフリックテスト：体重２０〜２４ｇの健康な雄マウスを選択し、ランダムにモデル群、陽性薬群及びイチョウジテルペンラクトン組成物Ａ−Ｋ群に分け、各群１０匹である。陽性薬群には、毎日５０ｍｇ／ｋｇのイミプラミンを強制投薬し、イチョウジテルペンラクトン組成物Ａ−Ｋ群のマウスには、毎日９ｍｇ／ｋｇ（ｉｇ）を投薬し、１日１回、５日間連続投薬した。5回目の投与から３０ｍｉｎで実験を開始し、実験を開始した時、マウスの尾端２ｃｍの部位を棒に貼って、動物を逆さまにし、頭を地面から約５ｃｍ離れた状態にした。動物の視線を両側にプレートで区切り、６ｍｉｎ以内の後３分間の動物の不動時間を記録した。投薬前に１回測定し、投薬後５日目に１回測定した。マウス自身の２回の不動時間の差を計算してｌｇ（Ｘ＋８６）変換後に統計的解析を行った。

【0031】

２．２マウスの強制水泳テスト：体重２０〜２４ｇの雄マウスを選択し、グループ分けと投薬は２．１節と同じである。５回目の投薬の３０ｍｉｎ後に実験を開始した。マウスを深さ１０ｃｍ（高さ２０ｃｍ、直径１４ｃｍ）、水温30℃の測定筒に入れた。マウス自身の２回の不動時間の差を計算してｌｇ（Ｘ＋４５）変換後に統計的解析を行った。

【0032】

２．３ラットの電気ショック回避テスト：学習性無力感電気ショックモデルを用いて薬物の抗うつ作用を観察した。体重１８０〜２２０ｇの健康な雄性ラットを選択して、ランダムにノーマル群、モデル群、陽性薬群およびイチョウジテルペンラクトン組成物Ａ〜Ｋ群に分けて、各群１０匹である。モデル群には、毎日同じ容量の生理食塩水を胃内投与し、陽性薬群には、毎日３３ｍｇ／ｋｇのイミプラミンを胃内投与し、イチョウジテルペンラクトン組成物Ａ〜Ｋ群のラットには、毎日６．２６ｍｇ／ｋｇ（ｉｇ）を投与し、１日１回、３５日間連続投与した。３０回目の投与後３０ｍｉｎに実験を開始し、初日目に「無力誘導」を行い、底部が銅製柵である２０×１０×１０ｃｍのケージを使い、動物に逃れられないような電気ショック（０．８５ｍＡ、１５ｓ、１ｍｉｎに１回）をランダムで６０回足に与え、ノーマル群のラットを同じケージに置いたが、電気ショックを与えなかった。４８ｈ後に回避トレーニングを開始した。２０×１０×１０ｃｍのシャトルボックスを使用し、底部の銅製柵の間隔は１ｃｍである。動物を１つずつシャトルボックスの一端に入れ、それを５ｍｉｎに適応させてから、毎回３０ｓの間隔で２０回の回避トレーニングを行った。トレーニングの間、まず光信号を与え、動物が電気ショックを避けるためにこの間他端に達するのを許し、もし反応がなければ、光信号は３ｓに続き、同時に０．８ｍＡ、３ｓの電気ショックを足に与え、まだ反応がない場合は、電気ショックおよび光信号を直ちに停止し、一回の回避失敗として記録した。トレーニングは５日間実施し、日常トレーニング中の各ラットの回避成功回数を記録し、第５回のトレーニング結果を統計した。

【0033】

【0034】

３．結果
表１からわかるように、モデル群に比べて、イミプラミンはマウスのテールフリック潜時と水泳潜時を著しく延長し、統計学的に有意差がある（ノーマル群に比べてＰ＜０．０１）。イチョウジテルペンラクトン組成物を投与した後、テールフリック潜時と水泳潜時は異なる程度に延長され、Ａ−Ｃの３つの群の改善効果はより明らかであり（モデル群に比べてＰ＜０．０１）、Ｄ−Ｋ群より著しく優れていて（モデル群に比べてＰ＜０．０５）、うつ状態をよりよく改善することができる。

【0035】

【表1】

【0036】

表２から分かるように、ノーマル群に比べて、モデル群ラットの電気ショック回避回数は著しく減少した（Ｐ＜０．０１）。陽性薬イミプラミンを投与した後、モデル群に比べて、イミプラミンはラットの電気ショック回避回数を著しく増やし、統計学的に有意差がある（モデル群に比べてＰ＜０．０１）。イチョウジテルペンラクトン組成物を投与した後、ラットの電気ショック回避回数を著しく増加し、Ａ〜Ｃの３つの群の改善効果はより明らかであり（モデル群に比べてＰ＜０．０１）、Ｄ−Ｋ群より著しく優れていて（モデル群に比べてＰ＜０．０５）、うつ状態をよりよく改善することができる。

【0037】

【表2】

【0038】

実施例２：イチョウジテルペンラクトン組成物の抗酸化ストレス作用
１．材料
動物：ＳＰＦ級雄ＳＤラット、体重２００−２２０ｇ、南京市江寧区青龍山動物繁殖場により提供され、合格証番号ＳＣＸＫ（蘇）２０１６−０００８。

【0039】

試薬：各イチョウジテルペンラクトン化合物はいずれも市販の標準品であり、実施例１の配合比表に記載の比率によって異なる割合のイチョウジテルペンラクトン組成物Ａ−Ｋ群を調製し、０．５％メグルミンと０．１５％クエン酸で溶解して実験用溶液を調製した。陽性薬はエダラボン注射液（南京先声東元製薬有限会社、３０ｍｇ／本）である。

【0040】

主な試薬：１０％の抱水クロラール（北京鼎盛偉業生物科学技術会社）、マロンジアルデヒド測定キット（ＭＤＡ）、スーパーオキシドディスムターゼ測定キット（ＳＯＤ）、グルタチオン測定キット（ＧＳＨ）、トータル抗酸化能測定キット（ＴＡＣ）及びＢＣＡタンパク質測定キットはいずれも南京建成生物工学研究所から購入された。

【0041】

主な機器：ＭＰ１２００１型電子天秤（上海市恒平科学機器有限会社）、ＡＲ２１４０型電子分析天秤（オセス国際貿易（上海）有限会社）、ＤＨＧ−９０５３Ａ型電気恒温乾燥箱（上海医療恒温設備工場）、Ｅnｓｐｉｒｅ型マルチモードプレートリーダー（パーキンエルマー機器有限会社）、５８０４Ｒ低温高速遠心機（エッペンドルフ中国有限会社）。

【0042】

２．方法
２．１モデル制作と投薬：健康な雄ラットを選択し、ランダムにノーマル群、モデル群、陽性薬群及びイチョウジテルペンラクトン組成物Ａ〜Ｋ群に分け、ノーマル群以外の各群には毎日６ｇ／ｋｇのアルコールを胃内投与した。陽性薬群ラットには、毎日６．２５ｍｇ／ｋｇのエダラボン注射液（ｉｖ）を投与し、イチョウジテルペンラクトン組成物Ａ−Ｋ群ラットには、毎日の投与量は３ｍｇ／ｋｇ（ｉｖ）であり、薬またはアルコールを５週間連続投与した。

【0043】

２．２酸化ストレスレベルの測定：投与終了後、各群のラットを１０％の抱水クロラールで麻酔し、腹部大動脈の血液を採取し、ヘパリン抗凝固後に血清を分離し、キットの説明書に従って血清中のＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧＳＨとＴＡＣのレベル変化を測定し、各サンプルのタンパク質含有量はＢＣＡタンパク質測定キットによって測定された。

【0044】

【0045】

３．結果
表３からわかるように、ノーマル群に比べて、モデル群ＭＤＡのレベルは著しく上昇したが（Ｐ＜０．０１）、ＳＯＤ、ＧＳＨ、ＴＡＣのレベルは著しく下降し（ノーマル群に比べてＰ＜０．０１）、ラットが明らかに酸化によって損害を受けたことを示す。エダラボン注射液を投与した後、各指標は著しく補正された（モデル群に比べてＰ＜０．０１）。イチョウジテルペンラクトン組成物を投与した後、ＳＯＤ、ＭＤＡ、ＧＳＨ、ＴＡＣなどの指標は異なる程度に改善され、Ａ〜Ｃの３つの群の改善効果はより明らかであり（モデル群に比べてＰ＜０．０１）、Ｄ−Ｋ群（モデル群に比べてＰ＜０．０５）より著しく優れていて、酸化ストレスレベルを改善し、酸化的損傷を緩和することができる。

【0046】

【表3】

【0047】

以上は本発明の好ましい実施形態のみであり、当業者にとっては、本発明の原理を逸脱することなく、いくつかの改良及び潤飾を行うことができ、これらの改良及び潤飾も本発明の保護範囲と見なすべきであることを指摘すべきである。