【図1】左図は、野生型マウスのＴＡＣ処置６週間後の、心臓でのＡＮＧＰＴＬ２タンパク質の発現を、ウェスタンブロットを用いて定量した結果である。Ｓｈａｍは、擬似コントロールマウスを表す。グラフは、各グループｎ＝５の平均である。右図は、アンジオテンシンＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）で誘導した病的肥大のマウスモデルの心臓でのＡＮＧＰＴＬ２タンパク質の発現を、誘導２週間後に、ウェスタンブロットを用いて定量した結果である。Ｖｅｈｉｃｌｅは、コントロールマウスを示す。グラフは、各グループｎ＝８の平均である。コントロールの値を１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図2】ＧＦＰ⁺心筋細胞及びＧＦＰ^-心筋細胞におけるＡＮＧＰＴＬ２の発現を確認した結果である。図２ａは、Ｍｙｈ６−ＥＧＦＰ ＴｇマウスからのＧＦＰ⁺心筋細胞及びＧＦＰ^-非心筋筋細胞での、ＡＮＧＰＴＬ２及びＧＦＰをウェスタンブロットにより分析した結果である。Ｈｓｃ７０は、コントロールとして用いた。ＧＦＰ⁺の値を１とした。グラフは、各グループｎ＝３の平均である。図２ｂは、ＴＡＣ処置又は擬似コントロール処置（Ｓｈａｍ）の６週間後の、ＧＦＰ⁺及びＧＦＰ^-細胞中のＡｎｇｐｔｌ２発現を定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析した結果である。各グループｎ＝３の平均である。コントロールの値を１とした。図２ｃは、Ａｎｇ ＩＩ処置又はビークル処置の２週間後の、ＧＦＰ⁺及びＧＦＰ^-細胞中のＡｎｇｐｔｌ２発現を定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析した結果である。各グループｎ＝３の平均である。コントロールの値を１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５である。

【図3】図３ａは、８週齢及び１２週齢のαＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２ Ｔｇマウス及び野生型同腹子の心収縮機能障害を確認した結果である。図３ａの上段は、Ｍ−モードの超音波検査の記録である。図３ａの中段は、小麦胚芽凝集素（ＷＧＡ）で染色した左心室切片の結果であり、心筋細胞の大きさを示している（スケールバー：５０μｍ）。図３ａの下段は、ＤＡＰＩで染色した左心室切片の結果であり、心筋細胞の大きさを示している（スケールバー：２００μｍ）。図３ｂは、８週齢、１２週齢及び１８週齢のαＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２ Ｔｇマウス及び野生型同腹子（各群ｎ＝５−７）の、拡張期左室後壁の厚さ（ＬＶＰＷ；ｄ）、左心室拡張末期内径（ＬＶＩＤ；ｄ）、及びパーセント短縮率（％ＦＳ）の結果である。図３ｃは、１２週齢のαＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２ Ｔｇマウス及び野生型同腹子（各群ｎ＝５−７）の心臓におけるＨＦ及び線維症と関連する遺伝子の相対的発現の結果である。野生型（ＷＴ）の値を１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５である。

【図4】αＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２のＴｇ及び野生型対照マウスから単離した単一細胞を用いて心筋細胞の興奮収縮（ＥＣ）カップリングを評価した結果である。図４ａは、αＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２のＴｇ（ｎ＝３１、Ｎ＝３）及び野生型対照マウス（ｎ＝４０、Ｎ＝３）から単離した心筋細胞の短縮率を、図４ｂは、１Ｈｚの刺激での平均Ｃａ²⁺移行を、図４ｃは、Ｃａ²⁺移行のピーク値を、図４ｄは、ピーク［Ｃａ²⁺］ｉに達する時間を、図４ｅは、αＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２のＴｇ（ｎ＝５４、Ｎ＝３）及び野生型対照マウス（ｎ＝３５、Ｎ＝３）からの心筋細胞におけるＣａ²⁺移行減衰の時定数τを示している。図４ｆは、αＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２ Ｔｇマウス（ｎ＝５４，Ｎ＝３）及び野生型マウス（ｎ＝３５，Ｎ＝３）からの心筋細胞中の平均ＳＲ Ｃａ⁺値を示している。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。Ｎは、独立した実験の回数である。

【図5】αＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２ Ｔｇマウス及び野生型マウスの、ＴＡＣ処置の３週間後の心臓組織切片を、Masson's Trichrome染色した結果である（スケールバー：１００μｍ）。

【図6】αＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２ Ｔｇマウス及び野生型マウスの、ＴＡＣ処置の３週間後の心臓組織における、心不全及び心臓線維症関連遺伝子の相対的発現を確認した結果である。各群ｎ＝６である。ＷＴの値を１とした。

【図7】αＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２ Ｔｇマウス（ｎ＝１３）及び野生型マウス（ｎ＝２８）のＴＡＣ処置後の生存率を示している。

【図8】１２週齢のＡｎｇｐｔｌ２ ＫＯマウス及び野生型同腹子マウス（ＷＴ）の、心不全及び線維症関連遺伝子の相対発現を確認した結果である。ＷＴの値を１とした。

【図9】Ａｎｇｐｔｌ２ ＫＯ及び同腹子マウス（ＷＴ）の心臓における種々のシグナル因子及びＳＥＲＣＡ２ａのイムノブロッティングの結果を定量的に示している。各群ｎ＝３−６である。対照の値を１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図10】αＭＨＣ−Ａｎｇｐｔｌ２ Ｔｇ及び同腹子マウス（ＷＴ）の心臓における種々のシグナル因子及びＳＥＲＣＡ２ａの免疫ブロッティングの結果を定量的に示している。各群ｎ＝３−６である。対照の値を１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図11】Ａｎｇｐｔｌ２又は対照のｓｉＲＮＡで形質転換したＮＲＣＭｓにおける、各因子の免疫ブロッティングの結果を定量的に示している。各群ｎ＝２−４である。対照の値を１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図12】Ａｄ−Ａｎｇｐｔｌ２又は対照Ａｄ−ＬａｃＺで形質転換したＮＲＣＭｓにおける、各因子の免疫ブロッティングの結果を定量的に示している。各群ｎ＝２−４である。対照の値を１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図13】運動負荷を行っていない対照マウス、トレッドミルランニングによる急性の訓練及び持続訓練を受けたマウス、の心臓からのＡＮＧＰＴＬ２タンパク質の免疫ブロッティングの結果である。Ｈｓｃ７０を、泳動コントロールとして用いた。運動負荷を行っていない対照マウスの値を１とした。各群ｎ＝６−８である。

【図14】ＦＬｕｃ−Ａｎｇｐｔｌ２−３’ＵＴＲ構築物のマウスＡｎｇｐｔｌ２ ３’ＵＴＲ上の、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２１１、ｍｉＲ−２２１、及びｍｉＲ−２２２の結合部位の予測である。ＦＬｕｃ−Ａｎｇｐｔｌ２−３’ＵＴＲ構築物を有し、対照のｐｃＤＮＡ３．１ベクター、或いはｍｉＲ−２２１、ｍｉＲ−２２２、ｍｉＲ−２１１、ｍｉＲ−２０４又はｍｉＲ−１３５ａを発現するベクターで形質転換したＮＲＣＭｓの相対ルシフェラーゼ活性を示している。対照のｐｃＤＮＡ３．１ベクターで形質転換したＮＲＣＭｓの値を１とした。各群ｎ＝１０−１２である。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図15】図１５ａの模式図は、ｍｉＲ−２２１／２２２結合部位を有する（上段）又は有しない（下段）ＦＬｕｃ−Ａｎｇｐｔｌ２−３’ＵＴＲ構築物を模式的に示した図である。図１５ａのグラフは、ＷＴ又は欠失したＦＬｕｃ−Ａｎｇｐｔｌ２−３’ＵＴＲ構築物を有し、対照ベクター或いはｍｉＲ−２２１又はｍｉＲ−２２２を発現するベクターで形質転換したＮＲＣＭｓの相対ルシフェラーゼ活性を示している。対照のｐｃＤＮＡ３．１ベクターで形質転換したＮＲＣＭｓの値を１とした。各群ｎ＝１０−１２である。図１５ｂは、持久運動トレーニング後の、対照及びｍｉＲ−２２１／２２２ＫＯマウスの心臓のＡＮＧＰＴＬ２のウェスタンブロット（左図）及び定量（右図）の結果を示した図である。Ｈｓｃ７０は、泳動コントロールである。運動負荷を行っていないｍｉＲ−２２１／２２２非ＫＯ対照マウスのレベルを１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図16】野生型マウスに、マウスＡｎｇｐｔｌ２のｓｈＲＮＡ（ＡＡＶ６−ｓｈＡｎｇｐｔｌ２−Ａ及び−Ｂ）を、１×１０¹⁰ｖｇ／マウス及び３×１０¹⁰ｖｇ／マウスで静脈内投与した２週間後の、ＡＮＧＰＴＬ２の免疫ブロティングの結果である。投与していないマウスの値を１とした。各群ｎ＝４である。

【図17】図１６と同様に、図１７ａは、ｓｈＲＮＡ投与の２週間後の、ＰＧＣ−１α及びＰＰＡＲα転写物の測定結果であり、図１７ｂは、ｓｈＲＮＡ投与の２週間後の、ＡＫＴ及びＳＥＲＣＡ２ａタンパク質レベルの測定結果である。

【図18】ウイルスなし（コントロール）、或いは、１×１０¹⁰ ｖｇ／マウス又は３×１０¹⁰ ｖｇ／マウスにてＡＡＶ６−ｓｈＡｎｇｐｔｌ２−Ｂを静脈内投与した４週間後の、ＴＡＣ誘導異常肥大心臓におけるＡＮＧＰＴＬ２の免疫ブロッティングの結果を示している。Ｈｓｃ７０を泳動コントロールとして用いた。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図19】ウイルスなし（コントロール）、或いは、１×１０¹⁰ ｖｇ／マウス又は３×１０¹⁰ ｖｇ／マウスにてＡＡＶ６−ｓｈＡｎｇｐｔｌ２−Ｂを静脈内投与したマウス間の指標パラメーターの比較結果である。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１である。

【図20】対照、ＴＡＣ処置マウス、及びＡＡＶ６−ｓｈＡｎｇｐｔｌ２−Ｂ投与４週間のＴＡＣ処置マウスの、Ｍ−モード心臓エコー検査の記録、心臓の中央部の切片のＨＥ染色の結果（スケールバー：１ｍｍ）、及び全心臓の形状である。

【図21】ＴＡＣ処置及びウイルス投与なし（コントロール）、或いは、ＴＡＣモデルに、３×１０¹⁰ ｖｇ／マウスにてＡＡＶ−ｓｈＳｃｒａｍｂｌｅ又はＡＡＶ６−ｓｈＡｎｇｐｔｌ２−Ａを静脈内投与したマウス間の指標パラメーターの比較結果である。各グループｎ＝１０。データは、平均±ＳＥＭで表した。＊＊：ｐ＜０．０１、⁺：ｐ＜０．００１である。

【図22】ＡＮＧＰＴＬ２を標的とするｓｉＲＮＡ（ｓｉＡＮＧＰＴＬ２−Ｂ：ｓ２３８５４）又はコントロールｓｉＲＮＡで形質転換したヒトｉＰＳ由来心筋細胞における、ＡＮＧＰＴＬ２、ＡＫＴ及びＳＥＲＣＡ２Ａの発現を確認した結果である。図２２ａは、培地中のＡＮＧＰＴＬ２タンパク質レベルを測定した結果である。各群ｎ＝４である。図２２ｂは、ＡＮＧＰＴＬ２、ＡＫＴ及びＳＥＲＣＡ２Ａのウェスタンブロットの結果（左図）、及びＡＫＴ及びＳＥＲＣＡ２Ａの相対タンパク質レベルである。実験は、少なくとも３回行った。Ｈｓｃ７０を泳動コントロールとして用いた。コントロールｓｉＲＮＡの値を１とした。図２２ｃは、エネルギー関連遺伝子、ＰＧＣ−１α及びＰＰＡＲαの発現の結果である。コントロールｓｉＲＮＡの値を１とした。データは、平均±ＳＥＭで表した。*：ｐ＜０．０５，＊＊：ｐ＜０．０１、＋：ｐ＜０．００１である。

【図23】ＡＮＧＰＴＬ２を標的とする７種類のｓｉＲＮＡ（ｓｉＡＮＧＰＴＬ２−Ａ〜Ｇ）又はコントロールｓｉＲＮＡで形質転換したヒトｉＰＳ由来心筋細胞における、培地中のＡＮＧＰＴＬ２タンパク質レベルをウェスタンブロットにより検出した結果である。Ｈｓｃ７０を泳動コントロールとして用いた。

【図24】実施例で用いたヒトＡＮＧＰＴＬ２を標的としたｓｉＲＮＡのそれぞれの配列のヒトＡＮＧＰＴＬ２配列上の位置を示している。線で囲った部分は、翻訳領域を示す。