特許 6979595 プロテインキナーゼ阻害剤としてのアミノチアゾール化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6979595

(24)【登録日】2021年11月18日

(45)【発行日】2021年12月15日

(54)【発明の名称】プロテインキナーゼ阻害剤としてのアミノチアゾール化合物

(51)【国際特許分類】

   C07D 417/14 20060101AFI20211202BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20211202BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20211202BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20211202BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20211202BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20211202BHJP

【ＦＩ】

   C07D417/14CSP

   A61K31/506

   A61K31/5377

   A61P43/00 111

   A61P35/00

   A61P35/02

【請求項の数】22

【全頁数】24

(21)【出願番号】特願2019-568372(P2019-568372)

(86)(22)【出願日】2018年6月13日

(65)【公表番号】特表2020-523348(P2020-523348A)

(43)【公表日】2020年8月6日

(86)【国際出願番号】US2018037221

(87)【国際公開番号】WO2018231910

(87)【国際公開日】20181220

【審査請求日】2021年1月5日

(31)【優先権主張番号】62/518,855

(32)【優先日】2017年6月13日

(33)【優先権主張国】US

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】516348555

【氏名又は名称】ナショナル ヘルス リサーチ インスティチューツ

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】特許業務法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】シー チュアン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン ウィアー−トーン

(72)【発明者】

【氏名】ツァイ ホイ−ジェン

【審査官】 奥谷 暢子

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００６−５０７３０２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１３／１４３４６６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 米国特許出願公開第２０１２／０２２５８８０（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 特表２００８−５４３７５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 CHRISTOPHER,L.J. et al，Metabolism and disposition of dasatinib after oral administration to humans，Drug Metabolism and Disposition，2008年，Vol.36, No.7，p.1357-1364

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ ４１７／１４

Ａ６１Ｋ ３１／５０６

Ａ６１Ｋ ３１／５３７７

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ａ６１Ｐ ３５／０２

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩：

【化1】

（式中、
Ｒ₁は、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆チオアルキルであり、
ＸはＯ又はＮＲ_aであり、ここでＲ_aは、Ｈ又はＣ₁〜₆アルキルであり、
ＹはＣＲ_bＲ_c又はＮＲ_dであり、ここでＲ_b及びＲ_cは各々独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ₁〜₆アルキル、Ｃ₁〜₆アルコキシル若しくはアミノであるか、又はＲ_bはＲ_aと、Ｒ_bに結合した炭素原子と、Ｒ_aに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、Ｒ_dはＨ若しくはＣ₁〜₆アルキルであるか、又はＲ_dはＲ_aと、Ｒ_d及びＲ_aに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ₂は−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｒ_e又はＮＲ_fＲ_gであり、ここでＲ_eはＨ、ハロ、Ｃ₁〜₆アルキル又はＯＲ_hであり、Ｒ_f及びＲ_gは各々独立して、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₃〜₈シクロアルキルであり、Ｒ_hはＨ若しくはＣ₁〜₆アルキルであるか、又はＲ_hはＲ_dと、Ｒ_hに結合した酸素原子と、Ｒ_dに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ₃は１つ以上の（ＣＨ₂）_nＺ部分（ここで、ｎは０又は１であり、ＺはＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆アルコキシルである）で独立して置換された６員のヘテロアリールであるか、又はハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル及びＣ₁〜₆アルコキシルからなる群から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよいフェニル環と縮合した６員のヘテロアリールである）。

【請求項2】

前記化合物が、式（ＩＩ）：

【化2】

（式中、Ｒ₁はＣ₁〜₆アルキルである）のものである、請求項１に記載の化合物又は塩。

【請求項3】

ＸがＯであり、ＹがＮＲ_dであり、Ｒ₂が−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｒ_eであり、ここでＲ_eはＯＲ_hであり、Ｒ_hはＲ_dと、Ｒ_hに結合した酸素原子と、Ｒ_dに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルである、請求項２に記載の化合物又は塩。

【請求項4】

ＸがＮＲ_aであり、ＹがＣＲ_bＲ_c又はＮＲ_dであり、ここでＲ_aはＲ_bと、Ｒ_aに結合した窒素原子と、Ｒ_bに結合した炭素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、Ｒ_cはＨ、ハロ、Ｃ₁〜₆アルキル、Ｃ₁〜₆アルコキシル又はアミノであり、Ｒ_dはＲ_aと、Ｒ_a及びＲ_dに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルである、請求項２に記載の化合物又は塩。

【請求項5】

ＸがＮＲ_aであり、ＹがＣＲ_bＲ_cであり、Ｒ₂がＮＲ_fＲ_gであり、ここでＲ_aはＲ_bと、Ｒ_aに結合した窒素原子と、Ｒ_bに結合した炭素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、Ｒ_cはＨ、ハロ、Ｃ₁〜₆アルキル、Ｃ₁〜₆アルコキシル又はアミノであり、Ｒ_f及びＲ_gは各々、Ｃ₁〜₆アルキルである、請求項４に記載の化合物又は塩。

【請求項6】

ＸがＮＲ_aであり、ＹがＮＲ_dであり、Ｒ₂が−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｒ_eであり、ここでＲ_aはＲ_dと、Ｒ_a及びＲ_dに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、Ｒ_eはＨ、ハロ又はＯＲ_hであり、Ｒ_hはＨ又はＣ₁〜₆アルキルである、請求項４に記載の化合物又は塩。

【請求項7】

Ｒ₃が１つ以上の（ＣＨ₂）_nＺ部分（ここで、ｎは０又は１であり、ＺはＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆アルコキシルである）で独立して置換された６員のヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物又は塩。

【請求項8】

Ｒ₃がピリジル又はピリミジルである、請求項７に記載の化合物又は塩。

【請求項9】

Ｒ₃がピリジル又はピリミジルである、請求項３に記載の化合物又は塩。

【請求項10】

前記化合物が、

【化3】

である、請求項９に記載の化合物又は塩。

【請求項11】

Ｒ₃がピリジル又はピリミジルである、請求項５に記載の化合物又は塩。

【請求項12】

前記化合物が、

【化4】

である、請求項１１に記載の化合物又は塩。

【請求項13】

Ｒ₃がピリジル又はピリミジルである、請求項６に記載の化合物又は塩。

【請求項14】

前記化合物が以下の化合物：

【化5】

の１つである、請求項１３に記載の化合物又は塩。

【請求項15】

前記化合物が以下の化合物：

【化6】

の１つである、請求項１に記載の化合物又は塩。

【請求項16】

前記化合物が式（ＩＩＩ）：

【化7】

（式中、Ｒ₁はＣ₁〜₆アルキルである）のものである、請求項１に記載の化合物又は塩。

【請求項17】

薬学的に許容可能な担体と請求項１に記載の化合物又は塩とを含む医薬組成物。

【請求項18】

請求項１に記載の化合物又は塩を含む、チロシンキナーゼ阻害剤。

【請求項19】

チロシンキナーゼと関連する癌を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の化合物又は塩を含む、医薬組成物。

【請求項20】

前記チロシンキナーゼがＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ４、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）Ａ、ＰＤＧＦＲ Ｂ、チロシン−プロテインキナーゼＫｉｔ（ｃ−ＫＩＴ）、ｃ−Ｓｒｃ（ＳＲＣ）、チロシン−プロテインキナーゼＬｙｎ（ＬＹＮ） Ａ、ＬＹＮ Ｂ、トランスフェクション時に再編成したチロシンキナーゼ（ＲＥＴ）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ、ガードナー−ラシードネコ肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ、ジスコイジンドメイン受容体１、キナーゼ挿入ドメイン受容体、Ｂリンパ球キナーゼ、チロシン−プロテインキナーゼＹｅｓ、アベルソンマウス白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ１（ＡＢＬ１）、チロシン受容体キナーゼＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＺＡＫ／ＭＬＴＫ、ＩＲＡＫ４、ＲＥＴ Ｖ８０４Ｌ、ＲＥＴ Ｙ７９１Ｆ、ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ、ＰＤＧＦＲ Ａ Ｖ５６１Ｄ又はＡＢＬ１ Ｔ３１５Ｉである、請求項１９に記載の医薬組成物。

【請求項21】

前記チロシンキナーゼがＦＬＴ３、ＶＥＧＦＲ又はｃ−ＫＩＴである、請求項２０に記載の医薬組成物。

【請求項22】

前記癌が、急性骨髄性白血病、緑色腫、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、骨髄異形成症候群、膵癌、膀胱癌、結腸直腸癌、乳癌、男性生殖器癌、腎癌、肝細胞癌、肺癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、妊娠性絨毛性疾患、胃癌、胆管癌、胆嚢癌、小腸癌、食道癌、中咽頭癌、下咽頭癌、眼癌、神経癌、頭頸部癌、黒色腫、形質細胞腫、内分秘腺新生物、神経内分泌癌、脳腫瘍、骨癌、又は肉腫である、請求項２１に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

プロテインキナーゼは、分化、増殖、移動及びアポトーシスを含む様々な細胞機能を調節する細胞シグナル経路において重要である。プロテインキナーゼの脱調節（Deregulation）は、癌及び多数の他の疾患に関わる。

【0002】

プロテインキナーゼのサブクラスであるチロシンキナーゼは、ＡＴＰから標的タンパク質のチロシンのヒドロキシル基へのホスフェートの転移により標的タンパク質機能を調節する。ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（「ＦＬＴ３」）、血管内皮増殖因子受容体（「ＶＥＧＦＲ」）及びチロシン−プロテインキナーゼＫｉｔ（「ｃ−Ｋｉｔ」）は、癌治療における魅力的な治療標的として研究されている３つのチロシンキナーゼである。

【0003】

受容体チロシンキナーゼであるＦＬＴ３の突然変異は、癌、例えば急性骨髄性白血病の発症につながる可能性がある。非特許文献１を参照されたい。

【0004】

シグナルタンパク質である血管内皮増殖因子は、ＶＥＧＦＲに結合し、それをリン酸基転移によって活性化することで新生血管の成長を刺激する。ＶＥＧＦＲは、腫瘍の血管新生の主要調節因子として同定されている。非特許文献２を参照されたい。

【0005】

同様に受容体チロシンキナーゼであるｃ−Ｋｉｔは、細胞内シグナル伝達に関与する。ｃ−Ｋｉｔの突然変異型は、一部の癌の発生において重要な役割を果たす。ｃ−Ｋｉｔの阻害は、消化管間質腫瘍、急性骨髄性白血病及び黒色腫の治療に効果的であることが証明されている。非特許文献３を参照されたい。

【0006】

強力なチロシンキナーゼ阻害剤として幅広く調査されているアミノチアゾール化合物は、薬物候補としての幾つかの課題を示す。アミノチアゾール化合物は、キナーゼ選択性が低く、毒性研究において動物の死を引き起こすことが多く、概して前臨床研究又は臨床研究において望ましい有効性を発揮するのに十分なｉｎ ｖｉｖｏ曝露を欠く。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Pratz et al., Current Drug Targets, 2010, 11(7), 781-9

【非特許文献2】Hicklin et al., J Clin Oncol., 2005, 23, 1011-1027

【非特許文献3】Babaei et al., Drug Des Devel Ther., 2016 10, 2443-2459

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

或る特定のチロシンキナーゼを特異的に阻害し、望ましい安全性プロファイルを示し、標的癌の治療において十分なｉｎ ｖｉｖｏ有効性を発揮する新たなアミノチアゾール化合物を開発する必要がある。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明は、或る特定のアミノチアゾール化合物が複数のチロシンキナーゼ、例えばＦＬＴ３、ＶＥＧＦＲ及びｃ−Ｋｉｔを効果的に阻害するという予期せぬ発見に基づく。

【0010】

一態様では、本発明は、式（Ｉ）のアミノチアゾール化合物：

【化1】

（式中、
Ｒ₁は、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆チオアルキルであり、
ＸはＯ又はＮＲ_aであり、ここでＲ_aは、Ｈ又はＣ₁〜₆アルキルであり、
ＹはＣＲ_bＲ_c又はＮＲ_dであり、ここでＲ_b及びＲ_cは各々独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ₁〜₆アルキル、Ｃ₁〜₆アルコキシル若しくはアミノであるか、又はＲ_bはＲ_aと、Ｒ_bに結合した炭素原子と、Ｒ_aに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、Ｒ_dはＨ若しくはＣ₁〜₆アルキルであるか、又はＲ_dはＲ_aと、Ｒ_d及びＲ_aに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ₂は−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｒ_e又はＮＲ_fＲ_gであり、ここでＲ_eはＨ、ハロ、Ｃ₁〜₆アルキル又はＯＲ_hであり、Ｒ_f及びＲ_gは各々独立して、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₃〜₈シクロアルキルであり、Ｒ_hはＨ若しくはＣ₁〜₆アルキルであるか、又はＲ_hはＲ_dと、Ｒ_hに結合した酸素原子と、Ｒ_dに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ₃はヘテロアリールである）に関する。

【0011】

本明細書における「アルキル」という用語は、−ＣＨ₃又は分岐−Ｃ₃Ｈ₇等の飽和した直鎖又は分岐炭化水素部分を指す。「シクロアルキル」という用語は、シクロヘキシル、シクロヘキセン−３−イル又はアダマンチル等の非芳香族の単環式、二環式、三環式又は四環式炭化水素部分を指す。「アルコキシル」という用語は、−Ｏ−アルキルラジカルを指す。アルコキシルの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ及びｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられるが、これらに限定されない。「チオアルキル」という用語は、−Ｓ−アルキルラジカルを指す。チオアルキルの例としては、メチルチオール、エチルチオール及びベンジルチオールが挙げられるが、これらに限定されない。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、１つ以上の環ヘテロ原子（例えばＮ、Ｏ又はＳ）を有する非芳香族の単環式、二環式、三環式又は四環式部分を指す。ヘテロシクロアルキルの例としては、４−モルホリニル、１−ピペラジニル、４−テトラヒドロピラニル及び４−ピラニルが挙げられるが、これらに限定されない。「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１つのヘテロ原子（例えばＮ、Ｏ又はＳ）を含有する１つ以上の芳香環を有する部分を指す。ヘテロアリール部分の例としては、フリル、フリレン、フルオレニル、ピロリル、チエニル、オキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、キナゾリニル、キノリル、イソキノリル、及びインドリルが挙げられる。

【0012】

本明細書で言及されるアルキル、チオアルキル、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、及びヘテロアリールは、他の特定が無い限り置換及び非置換の部分の両方を含む。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、及びヘテロアリール上の考えられる置換基としては、Ｃ₁〜₁₀アルキル、Ｃ₂〜₁₀アルケニル、Ｃ₂〜₁₀アルキニル、Ｃ₃〜₂₀シクロアルキル、Ｃ₃〜₂₀シクロアルケニル、Ｃ₁〜₂₀ヘテロシクロアルキル、Ｃ₁〜₂₀ヘテロシクロアルケニル、Ｃ₁〜₁₀アルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、アミノ、Ｃ₁〜₁₀アルキルアミノ、Ｃ₁〜₂₀ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヒドロキシル、ハロゲン、チオ、Ｃ₁〜₁₀アルキルチオ、アリールチオ、Ｃ₁〜₁₀アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アシルアミノ、アミノアシル、アミノチオアシル、アミジノ、グアニジン、ウレイド、シアノ、ニトロ、アシル、チオアシル、アシルオキシ、カルボキシル、及びカルボン酸エステルが挙げられる。一方、アルキル上の考えられる置換基としては、Ｃ₁〜₁₀アルキル、Ｃ₂〜₁₀アルケニル、及びＣ₂〜₁₀アルキニル以外の上述の全ての置換基が挙げられる。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールは互いに縮合してもよい。

【0013】

上記のアミノチアゾール化合物には化合物自体、並びに該当する場合にそれらの塩、プロドラッグ及び溶媒和物が含まれる。塩は例えば、陰イオンとアミノチアゾール化合物上の正に帯電した基（例えばアミノ）との間で形成され得る。好適な陰イオンとしては、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、リン酸イオン、クエン酸イオン、メタンスルホン酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、酢酸イオン、リンゴ酸イオン、トシル酸イオン、酒石酸イオン、フマル酸イオン、グルタミン酸イオン、グルクロン酸イオン、乳酸イオン、グルタル酸イオン及びマレイン酸イオンが挙げられる。同様に、塩は、陽イオンとアミノチアゾール化合物上の負に帯電した基（例えばカルボキシレート）との間でも形成され得る。好適な陽イオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、及びテトラメチルアンモニウムイオン等のアンモニウム陽イオンが挙げられる。アミノチアゾール化合物には第四級窒素原子を含有する塩も含まれる。プロドラッグの例としては、被験体に投与した後に活性アミノチアゾール化合物をもたらすことが可能なエステル及び他の薬学的に許容可能な誘導体が挙げられる。溶媒和物は、活性アミノチアゾール化合物と薬学的に許容可能な溶媒との間で形成される複合体を指す。薬学的に許容可能な溶媒の例としては、水、エタノール、イソプロパノール、酢酸エチル、酢酸及びエタノールアミンが挙げられる。

【0014】

別の態様では、本発明は、チロシンキナーゼ、例えばＦＬＴ３、ＶＥＧＦＲ及びｃ−Ｋｉｔを阻害する方法に関する。該方法は、チロシンキナーゼと有効量の上記の１つ以上のアミノチアゾール化合物とを接触させることを含む。

【0015】

チロシンキナーゼと関連する癌を治療する方法も本発明の範囲に含まれる。該方法は、有効量の上記の１つ以上の式（Ｉ）のアミノチアゾール化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。

【0016】

癌に関連付けられるチロシンキナーゼは、野生型又は突然変異型であり得る。チロシンキナーゼの例としては、ＦＬＴ３、ＦＬＴ４、ＶＥＧＦＲ、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）Ａ、ＰＤＧＦＲ Ｂ、ｃ−Ｋｉｔ、ｃ−Ｓｒｃ（ＳＲＣ）、チロシン−プロテインキナーゼＬｙｎ（ＬＹＮ） Ａ、ＬＹＮ Ｂ、トランスフェクション時に再編成した（rearranged during transfection）チロシンキナーゼ（ＲＥＴ）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ、ガードナー−ラシードネコ肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログ、ジスコイジンドメイン受容体１、キナーゼ挿入ドメイン受容体、Ｂリンパ球キナーゼ、チロシン−プロテインキナーゼＹｅｓ、アベルソンマウス白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ１（ＡＢＬ１）、チロシン−プロテインキナーゼＴｅｋ、ＲＥＴ Ｖ８０４Ｌ、ＲＥＴ Ｙ７９１Ｆ、ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ、ＰＤＧＦＲ Ａ Ｖ５６１Ｄ又はＡＢＬ１ Ｔ３１５Ｉが挙げられるが、これらに限定されない。

【0017】

例示的な方法では、式（Ｉ）のアミノチアゾール化合物は、ＦＬＴ３、ＶＥＧＦＲ又はｃ−Ｋｉｔと関連する癌の治療に使用される。

【0018】

前記癌の例としては、急性骨髄性白血病、緑色腫、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、骨髄異形成症候群、膵癌、膀胱癌、結腸直腸癌、乳癌、男性生殖器癌、腎癌、肝細胞癌、肺癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、妊娠性絨毛性疾患、胃癌、胆管癌、胆嚢癌、小腸癌、食道癌、中咽頭癌、下咽頭癌、眼癌、神経癌、頭頸部癌、黒色腫、形質細胞腫、内分秘腺新生物、神経内分泌癌、脳腫瘍、骨癌、及び肉腫（例えば消化管間葉系腫瘍、すなわちＧＩＳＴ）が挙げられる。

【0019】

上記の１つ以上の式（Ｉ）のアミノチアゾール化合物を含有する医薬組成物が更に本発明の範囲に含まれる。該医薬組成物は、癌の治療に使用することができる。

【0020】

本発明は、癌の治療のための薬剤の製造への上記の１つ以上の式（Ｉ）のアミノチアゾール化合物の使用も包含する。

【0021】

「治療する」又は「治療」という用語は、１つ以上のアミノチアゾール化合物を、上記の疾患、すなわち癌、かかる疾患の症状又はかかる疾患になりやすい傾向を有する被験体に、治療効果をもたらす、例えば上記の疾患、その症状又はそれになりやすい傾向を治癒する、軽減する、変化させる、それらに影響を及ぼす、改善する又は予防する目的で投与することを指す。「有効量」は、治療効果をもたらすために必要とされる活性化合物の量を指す。有効用量は、当業者に認識されるように、治療する疾患の種類、投与経路、賦形剤の使用、及び他の治療処置との併用（co-usage）の可能性に応じて異なる。

【0022】

本発明の方法を実行するために、上記の１つ以上のアミノチアゾール化合物を含む組成物を非経口的に、経口的に、経鼻的に、直腸に、局所的に又は口腔に投与することができる。「非経口的」という用語は本明細書で使用される場合、皮下、皮内、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内（intrasternal）、髄腔内、病巣内又は頭蓋内注射、更には任意の好適な注入法を指す。

【0023】

滅菌注射用組成物は、１，３−ブタンジオール溶液等の非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒中の溶液又は懸濁液であり得る。用いることができる許容可能なビヒクル及び溶媒には、マンニトール、水、リンガー液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、不揮発性油が溶媒又は懸濁媒として従来用いられる（例えば、合成モノグリセリド又はジグリセリド）。オレイン酸等の脂肪酸及びそのグリセリド誘導体が、オリーブ油及びヒマシ油等の天然の薬学的に許容可能な油、特にそれらのポリオキシエチル化バージョンと同様、注射剤の調製に有用である。これらの油の溶液又は懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、カルボキシメチルセルロース、若しくは同様の分散剤を含有していてもよい。Ｔｗｅｅｎ及びＳｐａｎ等の他の一般に使用される界面活性剤、又は薬学的に許容可能な固体、液体若しくは他の剤形の製造に一般に使用される他の同様の乳化剤若しくはバイオアベイラビリティ増強剤（bioavailability enhancers）を配合目的で使用することもできる。

【0024】

経口投与用の組成物は、カプセル、錠剤、エマルション、並びに水性懸濁液、分散液及び溶液を含む任意の経口的に許容可能な剤形とすることができる。錠剤の場合、一般に使用される担体としては、ラクトース及びトウモロコシデンプンが挙げられる。ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤も通例添加される。カプセル形態での経口投与については、有用な希釈剤として、ラクトース及び乾燥トウモロコシデンプンが挙げられる。水性懸濁液又はエマルションを経口投与する場合、乳化剤又は懸濁化剤と合わせた油相中に有効成分を懸濁又は溶解することができる。必要に応じて、或る特定の甘味料、香料又は着色料を添加してもよい。

【0025】

鼻エアロゾル又は吸入用組成物は、医薬配合物の技術分野で既知の技法に従って調製することができる。例えば、かかる組成物は、ベンジルアルコール若しくは他の好適な保存料、バイオアベイラビリティを増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、及び／又は当該技術分野で既知の他の可溶化剤若しくは分散剤を用いて、生理食塩水溶液として調製することができる。

【0026】

上記の１つ以上のアミノチアゾール化合物を含む組成物は、直腸投与用の坐剤の形態で投与することもできる。

【0027】

医薬組成物中の担体は、組成物の有効成分に適合し（好ましくは、有効成分を安定させることが可能であり）、治療対象の被験体に有害でないという意味で「許容可能」でなければならない。１つ以上の可溶化剤を活性１，５−ジフェニル−ペンタ−１，４−ジエン−３−オン化合物の送達のための医薬賦形剤として用いることができる。他の担体の例としては、コロイド状酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウム及びＤ＆Ｃ Ｙｅｌｌｏｗ ＃１０が挙げられる。

【0028】

本発明の１以上の実施形態の詳細を以下の明細書において説明する。本発明の他の特徴、目的及び利点は明細書及び特許請求の範囲から明らかである。

【発明を実施するための形態】

【0029】

式（Ｉ）：

【化2】

（式中、可変部Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｘ及びＹは、上の発明の概要の節に規定される）のアミノチアゾール化合物を詳細に開示する。

【0030】

通例、式（Ｉ）の化合物は、１つ以上の（ＣＨ₂）_nＺ部分（ここで、ｎは０又は１であり、ＺはＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆アルコキシルである）で独立して置換された５員若しくは６員のヘテロアリールであるＲ₃を有するか、又はＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル及びＣ₁〜₆アルコキシルからなる群から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されたフェニル環と縮合した５員若しくは６員のヘテロアリールであるＲ₃を有する。例示的な化合物は、１つ以上の（ＣＨ₂）_nＺ部分（ここで、ｎは０又は１であり、ＺはＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆アルコキシルである）で独立して置換された６員のヘテロアリールであるＲ₃を有する。Ｒ₃の２つの例は、ピリジル及びピリミジルである。

【0031】

上に記載される新規のアミノチアゾール化合物の群は、式（ＩＩ）：

【化3】

（式中、Ｒ₁はＣ₁〜₆アルキルである）の化合物である。

【0032】

１つのサブセットでは、式（ＩＩ）の化合物は、ＯであるＸ、ＮＲ_dであるＹ、及び−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｒ_eであるＲ₂を有し、ここでＲ_eはＯＲ_hであり、Ｒ_hはＲ_dと、Ｒ_hに結合した酸素原子と、Ｒ_dに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルである。このサブセットの化合物は、１つ以上の（ＣＨ₂）_nＺ部分（ここで、ｎは０又は１であり、ＺはＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆アルコキシルである）で独立して置換された５員若しくは６員のヘテロアリールであるか、又はＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル及びＣ₁〜₆アルコキシルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されたフェニル環と縮合した５員若しくは６員のヘテロアリールであるＲ₃を有し得る。例えば、Ｒ₃はピリジル又はピリミジルであり得る。例示的な化合物としては、以下の化合物：

【化4】

が挙げられるが、これらに限定されない。

【0033】

別のサブセットでは、式（ＩＩ）の化合物は、ＮＲ_aであるＸ及びＣＲ_bＲ_c又はＮＲ_dであるＹを有し、ここでＲ_aはＲ_bと、Ｒ_aに結合した窒素原子と、Ｒ_bに結合した炭素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、Ｒ_cはＨ、ハロ、Ｃ₁〜₆アルキル、Ｃ₁〜₆アルコキシル又はアミノであり、Ｒ_dはＲ_aと、Ｒ_a及びＲ_dに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルである。

【0034】

注目すべきことに、これらの化合物は、ＮＲ_aであるＸ、ＣＲ_bＲ_cであるＹ及びＮＲ_fＲ_gであるＲ₂を有していてもよく、ここでＲ_aはＲ_bと、Ｒ_aに結合した窒素原子と、Ｒ_bに結合した炭素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、Ｒ_cはＨ、ハロ、Ｃ₁〜₆アルキル、Ｃ₁〜₆アルコキシル又はアミノであり、Ｒ_f及びＲ_gは各々、Ｃ₁〜₆アルキルである。これらの化合物は、一般に、１つ以上の（ＣＨ₂）_nＺ部分（ここで、ｎは０又は１であり、ＺはＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆アルコキシルである）で独立して置換された５員若しくは６員のヘテロアリールであるか、又はＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル及びＣ₁〜₆アルコキシルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されたフェニル環と縮合した５員若しくは６員のヘテロアリールであるＲ₃を有する。Ｒ₃はピリジル又はピリミジルであり得る。例示的な化合物としては、以下の化合物：

【化5】

が挙げられるが、これらに限定されない。

【0035】

一方、このサブセットの化合物は、ＮＲ_aであるＸ、ＮＲ_dであるＹ及び−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｒ_eであるＲ₂を有していてもよく、ここでＲ_aはＲ_dと、Ｒ_a及びＲ_dに結合した窒素原子と共にＣ₃〜₁₀ヘテロシクロアルキルであり、Ｒ_eはＨ、ハロ又はＯＲ_hであり、Ｒ_hはＨ又はＣ₁〜₆アルキルである。これらの化合物は、一般に、１つ以上の（ＣＨ₂）_nＺ部分（ここで、ｎは０又は１であり、ＺはＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル又はＣ₁〜₆アルコキシルである）で独立して置換された５員若しくは６員のヘテロアリールであるか、又はＨ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＦ₃、Ｃ₁〜₆アルキル及びＣ₁〜₆アルコキシルから独立して選択される１つ以上の置換基で置換されたフェニル環と縮合した５員若しくは６員のヘテロアリールであるＲ₃を有する。例えば、Ｒ₃はピリジル又はピリミジルである。例示的な化合物としては、以下の化合物：

【化6】

が挙げられるが、これらに限定されない。

【0036】

上に記載される新規のアミノチアゾール化合物の別の群は、式（ＩＩＩ）：

【化7】

（式中、Ｒ₁はＣ₁〜₆アルキルである）の化合物である。

【0037】

式（ＩＩＩ）の例示的な化合物は、

【化8】

である。

【0038】

化合物番号を各々割り当てた本発明の例示的な化合物を下に挙げる。

【化9】

【0039】

１つ以上の式（Ｉ）のアミノチアゾール化合物を含有する癌を治療するための医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。

【0040】

癌を治療する方法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法が本発明に更に包含される。

【0041】

式（Ｉ）の化合物の合成に用いられる合成化学変換及び保護基の方法論（保護及び脱保護）は、当該技術分野で既知である。例えば、R. Larock, Comprehensive Organic Transformations (2^nd Ed., VCH Publishers 1999)、P. G. M. Wuts and T. W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis (4^th Ed., John Wiley and Sons 2007)、L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis (John Wiley and Sons 1994)、L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis (2^nd ed., John Wiley and Sons 2009)及びG. J. Yu et al., J. Med. Chem. 2008, 51, 6044-6054を参照されたい。

【0042】

そのように調製される式（Ｉ）の化合物は、初めに生化学アッセイ、例えば下記実施例２〜４に記載のキナーゼアッセイ、又は細胞アッセイ、例えば下記実施例５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌活性アッセイを用いて、チロシンキナーゼを阻害するか、又は或る特定のチロシンキナーゼを発現する癌細胞の成長を阻害する効力についてスクリーニングすることができる。化合物を続いてｉｎ ｖｉｖｏアッセイ、例えば異種移植片動物モデルアッセイを用いて、哺乳動物における腫瘍成長を抑制する活性について評価することができる。選択された化合物を癌の治療における有効性を検証するために更に試験することができる。例えば、癌を有する動物（例えばマウス）に化合物を投与することができ、その治療効果を続いて評価する。結果に基づいて、適切な投与量範囲及び投与経路を調査し、決定することができる。

【0043】

更なる詳細な説明がなくとも、当業者であれば上記の説明に基づいて本発明を最大限に利用することができると考えられる。したがって、以下の具体的な例は、単なる例示として解釈すべきであり、いかなる形にも本開示の残りの部分を限定するものではない。本明細書に引用される全ての文献は、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。

【0044】

１３種の式（Ｉ）の例示的な化合物の合成及び特性評価を下記実施例１に示す。そのように調製される化合物の分析データも実施例１に記載し、これらの化合物を試験するための手順をその後の実施例２〜５に記載する。

【0045】

全ての化学物質及び溶媒は商業供給業者から購入し、そのまま（as received）使用した。全ての反応を乾燥窒素の雰囲気下で行った。反応を、Merckの６０ Ｆ２５４シリカゲルガラス支持プレート（５×１０ｃｍ）を使用してＴＬＣによってモニタリングし、ゾーンを紫外線照射（２５４ｎｍ）下で、又はリンモリブデン酸試薬（Aldrich）を吹き付け、続いて８０℃で加熱することによって視覚的に検出した。全てのフラッシュカラムクロマトグラフィーを、MerckのＫｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０、Ｎｏ．９３８５、２３０メッシュ〜４００メッシュＡＳＴＭシリカゲルを固定相として用いて行った。プロトン（¹Ｈ）核磁気共鳴スペクトルをＶａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−３００又はＶａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ−４００分光計で測定した。化学シフトを、溶媒ピークの共鳴に対するデルタ（δ）スケールでのパーツパーミリオン（ｐｐｍ）で記録した。カップリングを表すために以下の略語を使用した：ｓ＝シングレット；ｄ＝ダブレット；ｔ＝トリプレット；ｑ＝カルテット；ｑｕｉｎ＝クインテット；ｂｒ＝ブロード；及びｍ＝マルチプレット。ＬＣＭＳデータは、AgilentのＭＳＤ−１１００ ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ、Agilentの１２００シリーズＬＣ／ＭＳＤ ＶＬ及びWatersのＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳシステムで測定した。

【実施例】

【0046】

実施例１：化合物１〜１３の合成
化合物１〜１３は、下記スキーム１に示す合成経路に従って調製した。列挙した試薬において、ＴＥＡはトリエチルアミンであり、ＫＯＡｃは酢酸カリウムであり、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄はテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）であり、ＤＭＡｃはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドであり、ＣｓＦはフッ化セシウムであり、ＨＣｌは塩酸であり、ＮａＨＣＯ₃は重炭酸ナトリウムであり、ＮａＨは水素化ナトリウムであり、ＮＭＰは１−メチル−２−ピロリジノンであり、ＫＯＨは水酸化カリウムであり、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドである。

【化10】

スキーム１． 試薬及び条件：（ａ）ＴＥＡ、ＣＨ₂Ｃｌ₂、０℃〜室温；（ｂ）ＫＯＡｃ、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄、ＤＭＡｃ、１５０℃（Ｐｙ＝ピリジン−２−イルの場合に、ＫＯＡｃはＣｓＦに置き換えられる）；（ｃ）１２Ｎ ＨＣｌ、Ｈ₂Ｏ、還流；（ｄ）ＮａＨＣＯ₃、Ｈ₂Ｏ、室温；（ｅ）ＮａＨ、ＮＭＰ、０℃；（ｆ）ＤＭＳＯ、ＲＨ、１００℃、又はＲＨ＝４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリンの場合にジグリム、ＫＯＨ、１６０℃；及び（ｇ）６Ｎ ＨＣｌ、０℃。

【0047】

工程Ｉ． ２，２−ジメチル−Ｎ−チアゾール−２−イル−プロピオンアミドＢの合成
無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（２５０ｍＬ）中の２−アミノチアゾールＡ（３００ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３３０ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃でトリメチルアセチルクロリド（３１０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌した。混合物を６Ｎ ＨＣｌ（６０ｍＬ）で洗浄し、有機層を分離し、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ₄）で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、表題の生成物Ｂをオフホワイト色の固体として得た（７２％）。¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．７５（ｓ，１Ｈ）、７．４６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．１７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、１．２２（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₈Ｈ₁₂Ｎ₂ＯＳについての算出値：１８４．０７；実測値：１８５．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。

【0048】

工程ＩＩ． 化合物Ｃ（Ｐｙ＝ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル及びピリミジン−５−イル）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（６０ｍＬ）中の２，２−ジメチル−Ｎ−チアゾール−２−イル−プロピオンアミドＢ（３０ｍｍｏｌ）、クロロピリジン（３０ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１２０ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．５ｍｍｏｌ）の混合物を１５０℃、アルゴン雰囲気下で２４時間加熱した。溶媒の大部分を蒸留（１２０℃／１６０ｍｍＨｇ）によって除去し、残渣を水（２５０ｍＬ）で洗浄した。沈殿物を濾過によって回収し、１０％ＣＨ₃ＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍＬ）に再溶解し、セライトパッドに通して濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（１％ＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂）によって精製して、所望の生成物をオフホワイト色の固体として得た（４０％〜８５％）。

【0049】

工程ＩＩ． 化合物Ｃ（Ｐｙ＝ピリジン−２−イル）の合成
ジメチルスルホキシド（２０ｍＬ）中の２，２−ジメチル−Ｎ−チアゾール−２−イル−プロピオンアミドＢ（１０ｍｍｏｌ）、クロロピリジン（１０ｍｍｏｌ）、フッ化セシウム（２０ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．５ｍｍｏｌ）の混合物を１６０℃、アルゴン雰囲気下で１６時間加熱した。得られた混合物を０．５Ｎ ＨＣｌ（１５０ｍＬ）及びＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０ｍＬ）で分配した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（３％アセトン／ＣＨ₂Ｃｌ₂）によって精製して、所望の生成物を淡褐色の固体として得た（２０％）。

【0050】

Ｃの１つのみを、そのＮＭＲスペクトル及び質量を示すために選択した。

【化11】

２，２−ジメチル−Ｎ−（５−ピリジン−４−イル−チアゾール−２−イル）−プロピオンアミド。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ９．２８（ｂｓ，１Ｈ）、８．６１（ｄｄ，Ｊ＝４．８、１．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．８４（ｓ，１Ｈ）、７．４２（ｄｄ，Ｊ＝４．８、１．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．３８（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₃Ｈ₁₅Ｎ₃ＯＳについての算出値：２６１．０９；実測値：２６２．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。

【0051】

工程ＩＩＩ． 化合物Ｄの合成
水（５ｍＬ）中のＣ（５ｍｍｏｌ）及び１２Ｎ ＨＣｌ（５ｍＬ）の混合物を２時間加熱還流した。溶媒の大部分を減圧下で除去し、残渣をＣＨ₃ＯＨ（１５ｍＬ）で希釈した。溶媒の大部分を蒸留によって除去し、残渣を真空で乾燥させ、Ｄの塩酸塩を淡褐色の固体として得た。

【0052】

水（３０ｍＬ）中の上記の固体の撹拌懸濁液を、室温で重炭酸ナトリウムによりｐＨ＝７に調整し、混合物を５０℃で２時間撹拌した。沈殿物を濾過によって回収し、真空で乾燥させ、所望の生成物Ｄを淡褐色の固体として得た（８５％〜９０％）。

【0053】

Ｄの１つのみを、そのＮＭＲスペクトル及び質量を示すために選択した。

【化12】

５−ピリジン−４−イル−チアゾール−２−イルアミン。¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．４１（ｄｄ，Ｊ＝４．８、１．５Ｈｚ，２Ｈ）、７．７３（ｓ，１Ｈ）、７．４８（ｓ，２Ｈ）、７．３５（ｄｄ，Ｊ＝４．８、１．５Ｈｚ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₈Ｈ₇Ｎ₃Ｓについての算出値：１７７．０４；実測値：１７８．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。

【0054】

工程ＩＶ． 化合物Ｅの合成
１−メチル−２−ピロリジノン（２０ｍＬ）中のＤ又は市販の４−ピリジン−３−イル−チアゾール−２−イルアミン（４ｍｍｏｌ）及び４，６−ジクロロ−２−メチルピリミジン（８ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃で水素化ナトリウム（油中６０％、１０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌した。反応を水（１００ｍＬ）により０℃でクエンチし、６Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝２に調整した。スラリーを重炭酸ナトリウムでｐＨ＝７に調整し、沈殿物を濾過によって回収し、水（５０ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ₂Ｃｌ₂、次いで５％→１０％のＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂の勾配）によって精製して、所望の生成物Ｅを褐色の固体として得た（４５％〜６０％）。

【0055】

Ｅの１つのみを、そのＮＭＲスペクトル及び質量を示すために選択した。

【化13】

（６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）−（５−ピリジン−４−イル−チアゾール−２−イル）−アミン。¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．１５（ｓ，１Ｈ）、８．５３（ｄｄ，Ｊ＝４．５、１．５Ｈｚ，２Ｈ）、８．１８（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｄｄ，Ｊ＝４．５、１．５Ｈｚ，２Ｈ）、６．９０（ｓ，１Ｈ）、２．５９（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₃Ｈ₁₀ＣｌＮ₅Ｓについての算出値：３０３．０３；実測値：３０４．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。

【0056】

工程Ｖ． 化合物１〜４及び７〜１３の合成
ジメチルスルホキシド（２ｍＬ）中の化合物Ｅ（２ｍｍｏｌ）及び１−エチルピペラジン（８ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で１時間加熱した。室温まで冷却した後、混合物を水（５０ｍＬ）で希釈した。沈殿物を濾過によって回収し、水（１０ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥させた。残渣を酸化アルミニウムクロマトグラフィー（０．５％→１．５％のＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂の勾配）によって精製して、化合物１〜４及び７〜１３の各々の遊離塩基をオフホワイト色の固体として得た。

【0057】

撹拌した６Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）に０℃で上記の固体を添加し、溶液を０．４５μｍ ＰＶＤＦ膜に通して濾過した。撹拌した濾液にアセトン（４０ｍＬ）を１時間にわたって滴加し、０℃で更に１時間撹拌した。沈殿物を濾過によって回収し、アセトン（１５ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥させ、化合物１〜４及び７〜１３の各々のＨＣｌ塩を黄色の固体として得た（９０％〜９５％）。
［６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］−（５−ピリジン−４−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物１）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．５５（ｂｓ，１Ｈ）、８．７２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、８．６１（ｓ，１Ｈ）、８．１４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．２７（ｓ，１Ｈ）、４．３５（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５５（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．４５（ｔ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．１３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．０２（ｑ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．５０（ｓ，３Ｈ）、１．２８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₇Ｓについての算出値：３８１．１７；実測値：３８２．２（Ｍ＋Ｈ⁺）。
｛６−［４−（２−フルオロ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリミジン−４−イル｝−（５−ピリジン−４−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物２）。¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．８９（ｂｓ，１Ｈ）、８．７３（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）、８．６２（ｓ，１Ｈ）、８．１５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）、６．２６（ｓ，１Ｈ）、４．９５（ｄ，Ｊ＝４７．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．３８（ｓ，２Ｈ、水のピークと重複）、３．７０〜３．３５（ｍ、６Ｈ）、３．１８（ｂｓ，２Ｈ）、２．５０（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₂ＦＮ₇Ｓについての算出値：３９９．１６；実測値：４００．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。
２−｛４−［２−メチル−６−（５−ピリジン−４−イル−チアゾール−２−イルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−ピペラジン−１−イル｝−エタノール塩酸塩（化合物３）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．０３（ｓ，１Ｈ）、８．７３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、８．６３（ｓ，１Ｈ）、８．１５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．２６（ｓ，１Ｈ）、４．３４（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．８２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．６２（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．４３（ｔ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．３０〜３．０９（ｍ、４Ｈ）、２．４９（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₇ＯＳについての算出値：３９７．１７；実測値：３９８．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。
［６−（４−ジメチルアミノ−ピペリジン−１−イル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］−（５−ピリジン−４−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物４）。¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．０７（ｓ，１Ｈ）、８．７３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、８．６２（ｓ，１Ｈ）、８．１５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、６．２５（ｓ，１Ｈ）、４．４３（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，２Ｈ）、３．４４（ｑｕｉｎ、Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．９４（ｔ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ）、２．６９（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，６Ｈ）、２．４９（ｓ，３Ｈ）、２．１５（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，２Ｈ）、１．６０（ｑ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₂₀Ｈ₂₅Ｎ₇Ｓについての算出値：３９５．１９；実測値：３９６．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。
［６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］−（５−ピリジン−３−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物７）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．２３（ｂｓ，１Ｈ）、９．１５（ｓ，１Ｈ）、８．６８（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．６０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．１９（ｓ，１Ｈ）、７．９３（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．２１（ｓ，１Ｈ）、４．３５（ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５５（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．４０（ｔ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．１３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．０１（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、２．５０（ｓ，３Ｈ）、１．２８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₇Ｓについての算出値：３８１．１７；実測値：３８２．２（Ｍ＋Ｈ⁺）。
｛６−［４−（２−フルオロ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリミジン−４−イル｝−（５−ピリジン−３−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物８）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．８０（ｂｓ，１Ｈ）、９．１６（ｓ，１Ｈ）、８．６８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．６２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．２０（ｓ，１Ｈ）、７．９５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．２２（ｓ，１Ｈ）、４．９８（ｄ，Ｊ＝４６．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．３４（ｂｓ，２Ｈ）、３．７０〜３．３５（ｍ、６Ｈ）、３．１６（ｂｓ，２Ｈ）、２．４９（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₂ＦＮ₇Ｓについての算出値：３９９．１６；実測値：４００．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。
２−｛４−［２−メチル−６−（５−ピリジン−３−イル−チアゾール−２−イルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−ピペラジン−１−イル｝−エタノール塩酸塩（化合物９）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．０２（ｂｓ，１Ｈ）、９．１８（ｓ，１Ｈ）、８．６９（ｓ，１Ｈ）、８．６４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．２２（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．２５（ｓ，１Ｈ）、４．３３（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．８０（ｓ，１Ｈ）、３．６０（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．１９（ｓ，２Ｈ）、３．１３（ｓ，２Ｈ）、２．４８（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₇ＯＳについての算出値：３９７．１７；実測値：３９８．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。
［６−（４−ジメチルアミノ−ピペリジン−１−イル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］−（５−ピリジン−３−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物１０）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．２７（ｂｓ，１Ｈ）、９．１８（ｓ，１Ｈ）、８．６９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．６４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．２３（ｓ，１Ｈ）、７．９７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．３６（ｂｓ，１Ｈ）、４．４２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．４３（ｂｓ，１Ｈ）、２．９９（ｔ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．６８（ｓ，３Ｈ）、２．６７（ｓ，３Ｈ）、２．５５（ｓ，３Ｈ）、２．１７（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．６４（ｑ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₂₀Ｈ₂₅Ｎ₇Ｓについての算出値：３９５．１９；実測値：３９６．２（Ｍ＋Ｈ⁺）。
［６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］−（５−ピリジン−２−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物１１）。¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．３４（ｓ，１Ｈ）、８．５４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３２（ｓ，１Ｈ）、８．０１〜７．９６（ｍ、２Ｈ）、７．４０〜７．３４（ｍ、１Ｈ）、６．３１（ｓ，１Ｈ）、４．３７（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．６２〜３．３８（ｍ、４Ｈ）、３．２０〜２．９０（ｍ、４Ｈ）、２．４７（ｓ，３Ｈ）、１．２６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₇Ｓについての算出値：３８１．１７；実測値：３８２．２（Ｍ＋Ｈ⁺）。
［６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］−（５−ピリミジン−５−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物１２）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．３５（ｂｓ，１Ｈ）、９．２０〜９．０３（ｍ、３Ｈ）、８．０９（ｓ，１Ｈ）、６．２８（ｓ，１Ｈ）、４．４０（ｓ，２Ｈ）、３．５６（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．４４（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．１３（ｂｓ，２Ｈ）、３．０２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、１．２８（ｂｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₈Ｈ₂₂Ｎ₈Ｓについての算出値：３８２．１７；実測値：３８３．３（Ｍ＋Ｈ⁺）。
［６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］−（４−ピリジン−３−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物１３）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．８０（ｂｓ，１Ｈ）、１１．５４（ｂｓ，１Ｈ）、９．２８（ｓ，１Ｈ）、８．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．８４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．１５〜８．０７（ｍ、２Ｈ）、６．３１（ｂｓ，２Ｈ）、４．３５（ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．５５（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．４５（ｔ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．１５〜３．０７（ｍ、２Ｈ）、３．００（ｑ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．４９（ｓ，３Ｈ）、１．２７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₇Ｓについての算出値：３８１．１７；実測値：３８２．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。

【0058】

工程Ｖ． 化合物５及び６の合成
ジグリム（１ｍＬ）中の化合物Ｅ（１ｍｍｏｌ）及び４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン（４ｍｍｏｌ）の混合物に、１００℃で水酸化カリウム（１０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１６０℃、アルゴン雰囲気下で１０分間撹拌した。反応を水（２０ｍＬ）により０℃でクエンチし、６Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝２に調整した。スラリーを重炭酸ナトリウムでｐＨ＝７に調整し、沈殿物を濾過によって回収し、水（１０ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥させた。残渣を酸化アルミニウムクロマトグラフィー（０．５％→１．５％のＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂の勾配）によって精製して、化合物６の遊離塩基をオフホワイト色の固体として得た。

【0059】

ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の上記の固体の懸濁液に、０℃で６Ｎ ＨＣｌ（１ｍＬ）を撹拌しながら添加した。溶媒の大部分を減圧下で除去し、残渣をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）で処理した。沈殿物を濾過によって回収し、アセトン（１０ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥させ、化合物５及び６の各々のＨＣｌ塩を黄色の固体として得た（４５％〜５０％）。
［２−メチル−６−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ピリミジン−４−イル］−（５−ピリジン−４−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物５）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．６１（ｓ，１Ｈ）、８．７４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、８．６４（ｓ，１Ｈ）、８．１７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、６．３７（ｓ，１Ｈ）、４．７２（ｓ，２Ｈ）、４．００〜３．８０（ｍ、４Ｈ）、３．６４〜３．４２（ｍ、４Ｈ）、３．１６（ｂｓ，２Ｈ）、２．５９（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₂Ｎ₆Ｏ₂Ｓについての算出値：３９８．１５；実測値：３９９．２（Ｍ＋Ｈ⁺）。
［２−メチル−６−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ピリミジン−４−イル］−（５−ピリジン−３−イル−チアゾール−２−イル）−アミン塩酸塩（化合物６）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．５１（ｂｓ，１Ｈ）、９．２０（ｓ，１Ｈ）、８．７１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．６６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．２４（ｓ，１Ｈ）、７．９８（ｄｄ，Ｊ＝８．０、５．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．３５（ｓ，１Ｈ）、４．７２（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．９６（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．８５（ｔ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．５５（ｂｓ，２Ｈ）、３．４７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．１９（ｂｓ，２Ｈ）、２．５９（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ⁺）ｍ／ｚ Ｃ₁₉Ｈ₂₂Ｎ₆Ｏ₂Ｓについての算出値：３９８．１５；実測値：３９９．１（Ｍ＋Ｈ⁺）。

【0060】

実施例２：ＦＬＴ３活性の阻害
研究を以下のように行い、実施例１に従って調製した或る特定の化合物をＦＬＴ３活性の阻害において試験した。

【0061】

ＦＬＴ３キナーゼ触媒ドメイン（残基Ｙ５６７〜Ｓ９９３）を含有するＧＳＴ−ＦＬＴ３−ＫＤ^WTを、ｐＢａｃ−ＰＡＫ８−ＧＳＴ−ＦＬＴ３−ＫＤプラスミドを含有するバキュロウイルスをトランスフェクトしたＳｆ９昆虫細胞において発現させた。ＦＬＴ３^WTキナーゼ−Ｇｌｏアッセイを９６ウェルプレートにおいて３０℃で４時間行い、化合物を以下の構成要素：７５ｎｇのＧＳＴ−ＦＬＴ３−ＫＤ^WTタンパク質、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、４ｍＭ ＭｎＣｌ₂、１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、２ｍＭ ＤＴＴ、０．０２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン、２５μＭ Ｈｅｒ２ペプチド基質、０．５ｍＭ Ｎａ₃ＶＯ₄及び１μＭ ＡＴＰを含む５０μｌの最終容量で試験した。インキュベーション後に、５０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ Ｐｌｕｓ試薬（Promega、米国ウィスコンシン州マディソン）を各ウェルに添加し、混合物を２５℃で２０分間インキュベートした。各反応混合物の７０μＬアリコートを黒色マイクロタイタープレートに移し、発光をＷａｌｌａｃ Ｖｅｃｔｏｒ １４２０マルチラベルカウンター（PerkinElmer、米国コネチカット州シェルトン）で測定した。

【0062】

複数の化合物を試験した。予期せぬことに、化合物１〜１１は、１００ｎＭ未満のＩＣ₅₀（応答が半減する阻害剤の濃度）値を示した。

【0063】

実施例３：ＶＥＧＦＲ２活性の阻害
研究を以下のように行い、実施例１に従って調製した或る特定の化合物をＶＥＧＦＲ２活性の阻害において試験した。ＶＥＧＦＲ２がＶＥＧＦＲの３つの主要サブタイプの１つであることに留意されたい。

【0064】

キナーゼドメインを含有する組み換えＧＳＴ−ＶＥＧＦＲ２（残基Ｖ７８９〜Ｖ１３５６）をＳｆ９昆虫細胞において発現させた。キナーゼアッセイを、９６ウェルプレートにおいて以下の構成要素：２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、４ｍＭ ＭｎＣｌ₂、０．５ｍＭ Ｎａ₃ＶＯ₄、２ｍＭ ＤＴＴ、０．０２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００、０．０１％ＢＳＡ、１μＭ ＡＴＰ、２μＭポリＧｌｕ４：Ｔｙｒペプチド、５０ｎｇ〜１００ｎｇの組み換えＶＥＧＦＲ２を含む５０μｌの反応物の最終容量で試験化合物を用いて３０℃で１２０分間行った。インキュベーション後に、５０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ Ｐｌｕｓ試薬（Promega、米国ウィスコンシン州マディソン）を各ウェルに添加し、混合物を２５℃で２０分間インキュベートした。各反応混合物の７０μＬアリコートを黒色マイクロタイタープレートに移し、発光をＷａｌｌａｃ Ｖｅｃｔｏｒ １４２０マルチラベルカウンター（PerkinElmer、米国コネチカット州シェルトン）で測定した。

【0065】

複数の化合物をＶＥＧＦＲ２アッセイにおいて試験した。化合物１、９及び１０は予期せぬことに、３０ｎＭ未満のＩＣ₅₀値を示した。

【0066】

実施例４：ｃ−Ｋｉｔ活性の阻害
研究を以下のように行い、実施例１に従って調製した或る特定の化合物をｃ−Ｋｉｔ活性の阻害において試験した。

【0067】

Ｓｆ９バキュロウイルス−昆虫細胞発現系において発現させたＮ末端Ｈｉｓタグ付きヒトｃ−Ｋｉｔ（残基Ｔ５４４〜Ｖ９７６）組換えタンパク質を、ｃ−Ｋｉｔ ＡＤＰ Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイのために精製した。ｃ−Ｋｉｔ−ＡＤＰ Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏアッセイを４０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、２０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、２ｍＭ ＭｎＣｌ₂、２ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ＢＳＡ、２０μＭ ＡＴＰ、２０μＭポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１ペプチド、０．１ｍＭ Ｎａ₃ＶＯ₄、２５０ｎｇの組み換えｃ−Ｋｉｔタンパク質及び指定濃度の試験化合物を含む１０μｌの最終容量で９６ウェルプレートにおいて３０℃で１５０分間行った。２５℃で５μｌのＡＤＰ−Ｇｌｏ（商標）試薬（Promega、米国ウィスコンシン州マディソン）を添加し、４０分間インキュベーションすることによって反応を停止させ、続いて１０μｌのキナーゼ検出試薬を添加し、更に３０分間インキュベートした。最後に、各反応混合物の３０μＬアリコートを黒色マイクロタイタープレートに移し、発光をＷａｌｌａｃ Ｖｅｃｔｏｒ １４２０マルチラベルカウンター（PerkinElmer、米国コネチカット州シェルトン）で測定した。

【0068】

複数の化合物を試験した。予期せぬことに、化合物１〜７及び１１〜１２は、１００ｎＭ未満のＩＣ₅₀値を示した。

【0069】

実施例５：ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌活性
研究を以下のように行い、実施例１に従って調製した或る特定の化合物のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌活性を、細胞株及びＭＴＳ細胞生存性アッセイ（ＭＴＳは、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムを表す）を用いて評価した。

【0070】

白血病細胞株ＭＯＬＭ−１３、ＭＶ４：１１及びＫａｓｕｍｉｎ−１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ、米国バージニア州マナサス）から購入した。ヒト消化管間質腫瘍ＧＩＳＴ−Ｔ１細胞株は、コスモ・バイオ株式会社（日本、東京都）から購入した。全ての白血病細胞株を１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１０Ｕ／ｍｌペニシリン及び１０ｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ １６４０培地中、３７℃及び５％ＣＯ₂で維持した。細胞株ＧＩＳＴ−Ｔ１は、１０％ＦＢＳ、０．０１％非必須アミノ酸、１０Ｕ／ｍｌペニシリン及び１０ｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭ培地中で培養した。

【0071】

ＧＩＳＴ８８２、ＧＩＳＴ４８及びＧＩＳＴ４３０細胞は全て、３７℃及び５％ＣＯ₂で維持したインキュベーター内で培養した。ＧＩＳＴ８８２は、２０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０中で培養した。ＧＩＳＴ４８は、２０％ＦＢＳ、０．５％Ｍｉｔｏシーラムエクステンダー（BD Bioscience、３５５００６）及び１％ウシ脳下垂体抽出物（BD Bioscience、３５４１２３）を添加したＦ１０を用いて培養した。ＧＩＳＴ４３０は、２０％ＦＢＳを添加したＩＭＤＭ中で培養した。ＧＩＳＴ８８２、ＧＩＳＴ４３０及びＧＩＳＴ４８細胞は、Jonathan A. Fletcher博士（ハーバードメディカルスクール（Harvard Medical School）、米国）によって提供された。

【0072】

ＭＯＬＭ−１３、ＭＶ４：１１及びＫａｓｕｍｉｎ−１のＭＴＳアッセイ
細胞を９６ウェル培養プレートに１×１０⁴細胞／１００μｌ／ウェルの密度にて三連で播種し、１ｎＭ〜１０μＭの範囲の指定濃度の試験化合物で７２時間処理した。比色ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標） Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎアッセイ（ＭＴＳアッセイ；Promega、米国ウィスコンシン州マディソン）を用いて細胞毒性を決定した。４９２ｎｍでの光学密度を、マイクロプレート光度計（Ｖｉｃｔｏｒ２；Perkin-Elmer、米国マサチューセッツ州ウォルサム）を用いて測定した。細胞を試験化合物で７２時間処理した場合のＩＣ₅₀値をＭＴＳアッセイによって決定し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６で算出した。各実験を三連とした。

【0073】

ＧＩＳＴ−Ｔ１のＭＴＳアッセイ
ＧＩＳＴ−Ｔ１細胞を９６ウェル培養プレートに８０００細胞／１００μｌ／ウェルの密度にて三連で播種し、１ｎＭ〜１０μＭの範囲の指定濃度の試験化合物で７２時間処理した。比色ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（商標） Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎアッセイ（ＭＴＳアッセイ；Promega、米国ウィスコンシン州マディソン）を用いて細胞毒性を決定した。４９２ｎｍでの光学密度を、マイクロプレート光度計（Ｖｉｃｔｏｒ２；Perkin-Elmer、米国マサチューセッツ州ウォルサム）を用いて測定した。細胞を試験化合物で７２時間処理した場合のＩＣ₅₀値をＭＴＳアッセイによって決定し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６で算出した。各実験を三連とした。

【0074】

ＧＩＳＴ８８２、ＧＩＳＴ４８及びＧＩＳＴ４３０のＭＴＳアッセイ
ＧＩＳＴ細胞（４×１０⁴個）を異なる用量の化合物で処理した。処理したＧＩＳＴ８８２細胞は１４４時間インキュベートし、ＧＩＳＴ４８及びＧＩＳＴ４３０細胞は５％ＣＯ₂中、３７℃で１２０時間インキュベートした。細胞をメチレンブルー（Clontech、米国カリフォルニア州）と共に１時間インキュベートすることによって細胞増殖を決定した。吸光度は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５マイクロプレートリーダー（Molecular Devices、米国）を用いて４５０ｎｍで測定した。

【0075】

或る特定の式（Ｉ）の化合物のＧＩ₅₀（細胞増殖の最大阻害の５０％についての濃度）値を下記表に示す。

【0076】

【表1】

【0077】

その他の実施形態
本明細書に開示される全ての特徴は、あらゆる組み合わせで組み合わせることができる。本明細書に開示される各々の特徴は、同じ目的、同等の目的又は同様の目的にかなう代替となる特徴によって置き換えられてもよい。このように、特に明示的に述べられない限り、開示される各々の特徴は、包括的な一連の同等の特徴又は同様の特徴のうちの単なる一例である。

【0078】

上記明細書から、当業者であれば、本発明の本質的な特性を容易に特定することができ、その趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な使用法及び条件に適合するために本発明の様々な変更及び修正を行うことができる。このように、その他の実施形態も添付の特許請求の範囲内である。