特許 6982956 哺乳動物において骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを軽減する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6982956

(24)【登録日】2021年11月25日

(45)【発行日】2021年12月17日

(54)【発明の名称】哺乳動物において骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを軽減する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/205 20060101AFI20211206BHJP

   A23K 20/142 20160101ALI20211206BHJP

   A23K 50/40 20160101ALI20211206BHJP

   A23L 33/175 20160101ALI20211206BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20211206BHJP

   A61P 39/06 20060101ALI20211206BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20211206BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/205

   A23K20/142

   A23K50/40

   A23L33/175

   A61P21/00

   A61P39/06

   A61P43/00 105

【請求項の数】20

【全頁数】96

(21)【出願番号】特願2016-572631(P2016-572631)

(86)(22)【出願日】2015年6月11日

(65)【公表番号】特表2017-525660(P2017-525660A)

(43)【公表日】2017年9月7日

(86)【国際出願番号】US2015035286

(87)【国際公開番号】WO2015191827

(87)【国際公開日】20151217

【審査請求日】2018年6月7日

【審判番号】不服2020-6262(P2020-6262/J1)

【審判請求日】2020年5月8日

(31)【優先権主張番号】62/011,345

(32)【優先日】2014年6月12日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/147,065

(32)【優先日】2015年4月14日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】521093440

【氏名又は名称】ロンザ・コンシューマー・ヘルス・インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100106080

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 晶子

(72)【発明者】

【氏名】ロペス，ジョニー

(72)【発明者】

【氏名】オーウェン，ケヴィン

(72)【発明者】

【氏名】ウッドワース，ジェイソン

(72)【発明者】

【氏名】クーン，クレイグ

(72)【発明者】

【氏名】コーリングス，ジョージ

【合議体】

【審判長】 森次 顕

【審判官】 有家 秀郎

【審判官】 土屋 真理子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第０１／０６８７３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２００１−５１７０８５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表平３−５００００７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００７−３０６８４８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 ”Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｏｒａｌ Ｌ−ｃａｒｎｉｔｉｎｅ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｃｉｎｇ Ｇｒｅｙｈｏｕｎｄｓ”， ＴＳ Ｅｐｐ ｅｔ．ａｌ．， Ｅｑｕｉｎｅ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｅｘｅｒｃｉｓｅ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ．４， Ｉｓｓｕｅ３−４， Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００７， ｐａｇｅｓ１４１−１４７

【文献】 ”Ｌ−ＣＡＲＮＩＴＩＮＥ Ｖｉｔａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｗｅｌｌ Ｂｅｉｎｇ ｏｆ Ｐｅｏｐｌｅ ａｎｄ Ｐｅｔｓ Ａｒｏｕｎｄ ｔｈｅ Ｗｏｒｌｄ”， Ｄａｖｉｄ Ｂｅａｕｍｏｎｔ Ｌｏｈｍａｎｎ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ，［ｏｎｌｉｎｅ］，２０１０

【文献】 ”Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ Ｌ−ｔａｒｔｒａｔｅ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆａｖｏｒａｂｌｙ ａｆｆｅｃｔｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｆｒｏｍ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｓｔｒｅｓｓ”， ＪＥＦＦ Ｓ． ＶＯＬＥＫ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ， Ｖｏｌ．２８２， Ｐａｇｅｓ Ｅ４７４−Ｅ４８２， ２００２

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K31/00-31/80

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

活動的なイヌに有効量のＬ−カルニチン及び／又はその塩を含む飲食物サプリメントを投与することを含む、活動的なイヌの集中的な身体活動中及び集中的な身体活動後の骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを軽減する方法であって、活動的なイヌに投与される該Ｌ−カルニチンの投与量が、１日当たり、体重１キログラムにつき約１ミリグラム〜１日当たり、体重１キログラムにつき約５０ミリグラムの量であって、かつ、１日当たり約５０ミリグラム〜１日当たり約２５０ミリグラムの量であり、該集中的な身体活動が、少なくとも２０分継続し、イヌのＶＯ_２maxの少なくとも５０％に等しい運動強度を示す、方法。

【請求項2】

飲食物サプリメントがアミノ酸サプリメントを含まない、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

飲食物サプリメントが少なくとも１〜３日毎に投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

飲食物サプリメントが毎日投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

飲食物サプリメントが経口投与される、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。

【請求項6】

飲食物サプリメントが食物組成物と併用され、イヌに投与される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。

【請求項7】

該活動的なイヌが、その予想される寿命の約５％〜約８０％の年齢を有する、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。

【請求項8】

飲食物サプリメントが固体である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。

【請求項9】

Ｌ−カルニチンが、該イヌに１回投与量当たり５０ミリグラム〜約２５０ミリグラムの量で投与される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

該活動的なイヌが、その予想される寿命の約１０％〜約７０％の年齢を有する、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。

【請求項11】

該イヌに、活動後の血中ミオグロビン量の増加を阻害するのに十分な量で飲食物サプリメントが投与される、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。

【請求項12】

該イヌに、活動後の血中チオバルビツール酸反応性物質の増加を阻害するのに十分な量で飲食物サプリメントが投与される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。

【請求項13】

請求項１〜１２のいずれかに記載の方法であって、それにより血中ミオグロビン量が、該飲食物サプリメントを施さなかった同じイヌと比較して、活動後の活動前に対する上昇量が５０％より多く低下する方法。

【請求項14】

請求項１〜１３のいずれかに記載の方法であって、それにより血中チオバルビツール酸反応性物質の量が、該飲食物サプリメントを施さなかった同じイヌと比較して、活動後の活動前に対する上昇量が５０％より多く低下する方法。

【請求項15】

身体ストレスによる細胞膜の過酸化を低減するのに十分な量で飲食物サプリメントが投与される、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。

【請求項16】

身体活動中及び身体活動後に骨格筋損傷を低減しかつ酸化ストレスを低減するのに十分な量で飲食物サプリメントが投与される、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。

【請求項17】

飲食物サプリメントがＬ−カルニチンから本質的になる、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。

【請求項18】

飲食物サプリメントが液体である、請求項１に記載の方法。

【請求項19】

食物摂取量を増加させることなく、イヌが行う身体活動の量を増加させる、請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。

【請求項20】

Ｌ−カルニチンが、該イヌに１日当たり約１．５ｍｇ／ｋｇ体重より多い量で投与される、請求項１〜１９のいずれかに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
[0001]本出願は、２０１４年６月１２日付け出願の米国仮特許出願第６２／０１１，３４５号、及び２０１５年４月１４日付け出願の同第６２／１４７，０６５号に対する優先権を主張し、同各号を本明細書において参照によりそのまま組み込む。

【背景技術】

【0002】

[0002]Ｌ−カルニチンは、１９０５年に最初に発見された。以降、幅広く行われた研究により、身体が食物性脂肪をエネルギーとして利用するのを支援する際に、Ｌ−カルニチンが重要な役割を演じていることが実証された。身体内に十分量のＬ−カルニチンが存在しないと、ヒト及び動物は、脂肪を有効に活用することができず、長期的な健康問題が生ずる可能性がある。

【0003】

[0003]身体内では、Ｌ−カルニチンは、脂肪酸が代謝可能となり、エネルギーに変換されるように、ミトコンドリア内膜を横断して長鎖脂肪酸を往復輸送することが知られている。Ｌ−カルニチンが存在しなければ、これらの脂肪酸は輸送されず、適切に利用されない。

【0004】

[0004]哺乳動物は、Ｌ−カルニチンを２つの供給源から自然に取得することができる。第１に、Ｌ−カルニチンは、身体内で生合成され得る。しかし、身体は、少量のＬ−カルニチンを生成し得るにすぎない。Ｌ−カルニチンは、赤肉等の食物からも取得可能である。

【0005】

[0005]本開示の譲受者は、Ｌ−カルニチン及びその塩を哺乳動物用途のサプリメントとして上市している。過去には、Ｌ−カルニチン並びにその誘導体及び塩は、哺乳動物に投与されてきた。例えば、Ｌ−カルニチン並びにその誘導体及び／又は塩は、哺乳動物の飼料がＬ−カルニチンに乏しいとき、哺乳動物に投与され得る。また、Ｌ−カルニチン並びにその誘導体及び塩は、肥満を防止するためにも、哺乳動物に投与されてきた。また、Ｌ−カルニチン並びにその誘導体及び塩は、より高齢又は老齢のペットに対しても市販されてきた。哺乳動物が高齢化すると、例えば食物摂取量は通常減少するので、身体内のＬ−カルニチンの利用可能性が減少し、Ｌ−カルニチンを生成する身体能力の低下が始まる。Ｌ−カルニチン並びにその誘導体及び／又は塩の補給は、老化プロセスに好ましい影響を示した。

【0006】

[0006]Ｌ−カルニチンサプリメントは、より高齢の哺乳動物の健康維持に多大な進歩をもたらしたが、様々な改善もなお必要とされる。例えば、より若年の哺乳動物の多くは、過酷な身体活動を行うように求められる、又は期待される。例えば狩猟犬、競争犬、競走馬、家畜等は、過酷な運動を一般的に経験する。激しい運動中及び激しい運動後に、骨格筋損傷及び／又は有害な酸化が生ずる可能性があり、身体運動後に長期の回復時間を必要とし得る。従って、その他の身体機能に対して実質的な副作用を及ぼすことなく、哺乳動物の活動期間後に生じた骨格筋損傷を軽減し、及び／又は酸化ストレスを軽減し得るサプリメントに対する必要性が存在する。また、理想的な体重／スコアを維持するのに多くの食物を必要とせずに、パフォーマンス及び活動時間を増加させ得るサプリメントに対する必要性も存在する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

[0007]本開示は、概して、活動的な哺乳動物の身体活動中及び身体活動に骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを軽減する方法を対象とする。また本開示は、理想的な体重及びスコアを維持するための食物摂取量の増加を必要とせずに、パフォーマンス時間を増加させるサプリメントを対象とする。本開示の方法は、パフォーマンス及び効率も増加させ得る。本明細書で用いる場合、「活動的な哺乳動物」とは、集中的な身体活動を日常的に、例えば３０日毎に少なくとも１回、行う哺乳動物を意味する。

【課題を解決するための手段】

【0008】

[0008]一実施形態では、哺乳動物の身体は、身体活動又は体重減少等の負のエネルギーバランスの下に置かれ、身体が自然に生成するＬ−カルニチン量が低下する。次いで、Ｌ−カルニチンの補給は、筋肉損傷及び酸化ストレスの軽減に役立つように作用し得る。

【0009】

[0009]本開示によれば、方法は、哺乳動物に有効量のＬ−カルニチンサプリメントを投与するステップを含む。特に有利なこととして、Ｌ−カルニチンサプリメントは、哺乳動物に任意の他のアミノ酸サプリメントを投与することを必要とせずに、身体活動中及び身体活動後に骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを軽減することができる。

【0010】

[0010]Ｌ−カルニチンサプリメントは、Ｌ−カルニチンから本質的になり得、これは、サプリメントが他の薬物又は栄養補助食品を含有しないことを意味する。１つの実施形態では、Ｌ−カルニチンサプリメントは、Ｌ−カルニチンからなる。Ｌ−カルニチンは、例えば、リジン及びメチオニンから生合成され得る。Ｌ−カルニチンは、化学的合成法によっても製造され得る。

【0011】

[0011]Ｌ−カルニチンサプリメントは、哺乳動物に定期的に投与され得る。例えば、Ｌ−カルニチンサプリメントは、哺乳動物に少なくとも１〜３日毎に、例えば毎日、投与され得る。各用量は、約５ミリグラム〜約１０，０００ミリグラム、例えば約５ミリグラム〜約５，０００ミリグラム、例えば、約５０ミリグラム〜約１，０００ミリグラムであり得る。哺乳動物に応じて、各用量は、１日当たり、体重１キログラムにつき約１ミリグラム〜１日当たり、１キログラムにつき約５０ミリグラム、例えば１日当たり、１キログラムにつき約５ミリグラム〜１日当たり、１キログラムにつき約２５ミリグラムであり得る。Ｌ−カルニチンサプリメントは、経口投与することができ、食物組成物と併用することができる。

【0012】

[0012]本開示のその他の特徴及び態様は、以下においてより詳細に議論される。
[0013]本開示の十分で有効な開示が、添付の図面の参照を含む本明細書の残りの部分においてより具体的に記載される。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図2】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図2A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図2B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図2C】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図3】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図3A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図3B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図4A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図4B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図5A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図5B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図6】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図7】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図8】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図9】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図10A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図10B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図10C】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図11A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図11B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図11C】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図11D】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図12A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図12B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図12C】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図13A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図13B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図13C】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図14A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図14B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図14C】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図14D】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図15A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図15B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図16A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図16B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図17A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図17B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図18】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図19】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図20】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図21】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図22A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図22B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図23A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図23B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図24A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図24B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図24C】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図25A】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図25B】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【図25C】以下に記載する実施例で得られた結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

[0014]本明細書及び図面において繰り返し使用される参照文字は、同一の又は類似した本発明の特性又は要素を表すように意図されている。
定義
[0015]用語「集中的な身体活動」とは、少なくとも２０分継続する活動を意味し、この場合、心拍数の増加は、一般的に安静時心拍数の５％〜１５０％以上である。

【0015】

[0016]１つの実施形態では、「集中的な身体活動」とは、哺乳動物における負のエネルギーバランス、例えば身体活動、体重減少、食事制限、老化、妊娠、及び授乳等を意味し得る。

【0016】

[0017]用語「集中的な身体活動」とは、妊娠中又は分娩行為中の哺乳動物の活動も意味し得る。１つの実施形態では、Ｌ−カルニチンサプリメントは、哺乳動物が出産の準備をする際に、哺乳動物に投与され得る。

【0017】

[0018]用語「Ｌ−カルニチンサプリメント」は、Ｌ−カルニチン並びにその誘導体及び／又は塩を含み得る。Ｌ−カルニチンサプリメントは、Ｌ−カルニチンベース、又はアセチルＬ−カルニチン、バレリルＬ−カルニチン、イソバレリルＬ−カルニチン、ベンジルＬ−カルニチン、Ｌ−ロイシルＬ−カルニチン、Ｌ−バリルＬ−カルニチン、その他のＬ−アミノアシルカルニチン、Ｌ−アミノアシルＬ−カルニチンの塩、Ｌ−カルニチンＨＣＬ、Ｌ−カルニチンＬ−タルトレート、Ｌ−カルニチンフマレート、プロピオニルＬ−カルニチン、Ｌ−カルニチンホスフェート、アセチルＬ−カルニチンＬ−アスパルテート、アセチルＬ−カルニチンシトレート、アセチルＬ−カルニチンマレート、アセチルＬ−カルニチンホスフェート、アセチルＬ−カルニチンフマレート、プロピオニルＬ−カルニチンオロテート、アセチルＬ−カルニチンオロテート、ブチリルＬ−カルニチンオロテート、プロピオニルＬ−カルニチンフマレート、Ｌ−カルニチンオキザレート、Ｌ−カルニチンサルフェート、ＧＰＬＣグリシンプロピオニルＬ−カルニチン等を含むその誘導体及び／又は塩を含み得る。

【0018】

[0019]用語「哺乳動物」には、身体活動中及び身体活動後に骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを経験し得るあらゆる哺乳動物が含まれ、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヒト、又はブタ等の哺乳動物が含まれる。

【0019】

[0020]慣用句「有効量」とは、特別な状態若しくは障害、又は特別な状態若しくは障害の症状に対する反応を促進、改善、刺激、又は強化する化合物の量を意味する。
[0021]用語「サプリメント」とは、哺乳動物の通常の飼料に付加した、但し哺乳動物の通常の食物又は飲料組成物と併用可能な製品を意味する。サプリメントは、任意の形態であり得るが、但し固体、液体、ゲル、カプセル、又は粉末に限定されない。また、サプリメントは、食物組成物の一成分と同時に、又は一成分として投与される場合もあり、同食物組成物は、食料品、飲み物、ペット食品、スナック、又は嗜好品を含み得る。１つの実施形態では、飲み物は、活動用の飲料であり得る。

【詳細な説明】

【0020】

[0022]本考察は、代表的な実施形態のみに限定して記載されており、本開示のより広い態様を制限するように意図されないものと、当業者は理解すべきである。
[0023]哺乳動物におけるエネルギー生成は、ミトコンドリア内で生ずる。ミトコンドリアは、ＡＴＰの生成に関わり、身体内の本質的にすべての細胞内に比較的多数存在する。

【0021】

[0024]激しい身体活動中に、筋肉細胞は、多大なエネルギーを必要とする。このエネルギーは、ＡＴＰの形態を採り、ミトコンドリアに由来し得る。ミトコンドリアは、例えば食物源から得られる脂肪酸及びグルコースを分解することにより、ＡＴＰを生成し得る。ＡＴＰは、好気性代謝プロセスを通じて、ミトコンドリア内で生成される。

【0022】

[0025]激しい身体活動中に、より多量の酸素が、好気性代謝的プロセスに燃料供給し、また筋肉のために十分量のＡＴＰを生成するために必要とされる。しかし、酸素供給が減少すると、細胞はエネルギーを嫌気的に生じることができ、乳酸を生じさせる。

【0023】

[0026]激しい身体活動中に、筋肉細胞は、損傷を受ける可能性があり、その場合、血流中への様々な構成成分の放出を引き起こす。これらの化合物が高レベルに達する場合、腎臓及び／又は肝臓に損傷を与えるおそれがある。これらの化合物として、クレアチンキナーゼ及びミオグロビンを挙げることができる。また、激しい身体活動は、酸素フリーラジカルを生じることに起因して身体に対して酸化ストレスも惹起する可能性がある。酸化ストレス中、様々な組織において脂質の過酸化反応が生ずるおそれがある。１つのバイオマーカーについて、酸化ストレスの増加を示すのに利用可能であることが、血液中に存在する血清チオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）が増加することにより実証されている。酸化ストレスが終息しない場合には、その状態は細胞膜の破壊を引き起こすおそれがある。

【0024】

[0027]１つの実施形態では、哺乳動物は、身体活動又は体重減少を含む、負のエネルギーバランスであり得るが、この場合、身体によるＬ−カルニチンの自然生成量は低下する。前記負のエネルギーバランスにおいて、Ｌ−カルニチンを補給すると、筋肉損傷及び酸化ストレスは低下し得る。

【0025】

[0028]激しい身体活動の期間後に、筋肉損傷及び／又は酸化ストレスは、苦痛や場合によっては筋肉傷害を引き起こすおそれがある。本開示は、激しい身体活動を定期的に行う活動的な哺乳動物において筋肉傷害及び／又は酸化ストレスを予防する方法を対象とする。以下で説明されるように、本開示は、概して、身体活動中及び身体活動後に骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを軽減する有効量の栄養補助食品を哺乳動物に投与することを対象とする。

【0026】

[0029]１つの実施形態では、栄養補助食品は、Ｌ−カルニチンを含む。Ｌ−カルニチンを、激しい身体活動を行う哺乳動物に投与することは、骨格筋破壊を軽減し得る、及び／又は酸化ストレスを軽減し得る一方、食物変換効率も改善し、筋肉回復時間を短縮し、及び脂肪の燃料としての利用も増加させることが判明した。特に有利なこととして、上記結果は、その他の栄養補助食品、例えばアミノ酸を投与しなくても実現可能であることが挙げられる。更に、本開示の栄養補助食品は、顕著な副作用をもたらさない。例えば、除脂肪量、総重量、脂肪割合（％）、又は骨質量に有意な変化を認めることなく、栄養補助食品を規則的に投与することができる。

【0027】

[0030]上記のように、栄養補助食品は、Ｌ−カルニチンを含む。Ｌ−カルニチンは、リジン及びメチオニンから生合成され得る四級アミンである。Ｌ−カルニチンは、ミトコンドリア膜を横断する長鎖脂肪酸の移動を促進することにより、長鎖脂肪酸のβ−酸化を促進することが知られている。従って、Ｌ−カルニチンサプリメントが、飼料誘発性Ｌ−カルニチン欠損症を有し得る哺乳動物、特に高齢のペット及び哺乳動物に対してこれまで提供されてきた。

【0028】

[0031]Ｌ−カルニチンは、身体活動中に筋肉損傷及び／又は酸化ストレスを防止又は阻止し、活動後に必要とされる回復時間を最低限に抑えることが、今回判明した。
[0032]本開示は、身体活動中及び身体活動後に骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを軽減するために、活動的な哺乳動物に、有効量のＬ−カルニチンサプリメントを投与する方法を対象とする。上記利点及び有益性は、有害な結果を生ずることなく実現可能である。更に、１つの実施形態では、哺乳動物は、除脂肪量、総重量、脂肪割合（％）、又は骨質量について、実質的な差異を経験しないと考えられる。

【0029】

[0033]Ｌ−カルニチンサプリメントは、規則的に、例えば１週間に少なくとも２〜４回投与され得る。例えば、Ｌ−カルニチンサプリメントは、哺乳動物に少なくとも１〜３日毎に投与され得る。１つの特定の実施形態では、Ｌ−カルニチンサプリメントは、毎日投与される。用量は、１日当たり約５〜１０，０００ミリグラム、例えば１日当たり約５〜約５，０００ミリグラム、例えば１日当たり約５０ミリグラム〜約１０００ミリグラムであり得る。用量は、例えば１日当たり約１００ミリグラムを超える、例えば１日当たり約１５０ミリグラムを超える、例えば１日当たり約２００ミリグラムを超える、例えば１日当たり約２５０ミリグラムを超える場合もある。体重に基づき、用量は、１日当たり、体重１キログラムにつき約１ミリグラム〜１日当たり、体重１キログラムにつき約１００ミリグラムであり得る。例えば用量は、１日当たり、体重１キログラムにつき約５ミリグラム〜１日当たり、体重１キログラムにつき約５０ミリグラムであり得る。１つの特定の実施形態では、用量は、１日当たり、体重１キログラムにつき約５ミリグラム〜１日当たり、体重１キログラムにつき約２５ミリグラムであり得る。別の特定の実施形態では、用量は、１日当たり、体重１キログラムにつき約１．５ミリグラムを超える、１日当たり、体重１キログラムにつき約１．８ミリグラムを超える、１日当たり、体重１キログラムにつき約２．０ミリグラムを超える、１日当たり、体重１キログラムにつき約２．２ミリグラムを超える、１日当たり、体重１キログラムにつき約２．４ミリグラムを超える、１日当たり、体重１キログラムにつき約２．６ミリグラムを超える、１日当たり、体重１キログラムにつき約２．８ミリグラムを超える、又は１日当たり、体重１キログラムにつき約３．０ミリグラムを超える場合もある。

【0030】

[0034]Ｌ−カルニチンサプリメントは、哺乳動物に任意の適する形態で、任意の適する投与経路を用いて投与され得る。例えば、Ｌ−カルニチンサプリメントは、単独で、食物組成物と併用して、又は食物組成物の一部として経口投与され得る。また、Ｌ−カルニチンサプリメントは、栄養補助食品の一部又は機能性食品組成物でもあり得る。Ｌ−カルニチンサプリメントは、１つの実施形態では、本開示の有益性及び利点を享受するのに、その他の栄養補助食品、例えばアミノ酸サプリメント等を含有せず、Ｌ−カルニチンのみを含み得る。

【0031】

[0035]経口投与に付加して、Ｌ−カルニチン投与は、鼻腔内、静脈内、筋肉内、胃内等を含むその他の経路を用いて行うことも可能である。
[0036]カルニチンサプリメントが、食物又は飲料組成物と併用される場合、食物又は飲料組成物は、哺乳動物により消費される任意の適する組成物を含み得る。かかる組成物には、哺乳動物にとって必要な食物需要を満たすように意図された完全な食物若しくは飲料物、又は食物サプリメント、例えば嗜好品及びスナック等が含まれる。食物組成物は、ペレット、飲料、バー、カンに収納された調製済みの食物、酪農食物製品、又は任意のその他の機能性食物組成物を含み得る。また食物組成物は、任意の形態のサプリメント、例えば丸薬、ソフトゲル、ゴム状のフィギュア、ウェファー等も含み得る。

【0032】

[0037]またＬ−カルニチンサプリメントに付加して哺乳動物により摂取される食物組成物は、Ｌ−カルニチンに富む場合もある。本開示のＬ−カルニチンサプリメントは、例えば標準的な飼料に含まれる通常の量のＬ−カルニチン、及び／又は身体により生成される量のＬ−カルニチンに付加して、追加のＬ−カルニチンを提供するように意図される。

【0033】

[0038]こうしたことから、食物組成物は、約５％〜約５０％のタンパク質を含み得る。タンパク質源は、野菜、例えばダイズカス等であり得る、又は動物性タンパク質、例えば食肉タンパク質等であり得る。食肉タンパク質の例として、牛肉、豚肉、ラム、鶏肉、魚等が挙げられる。

【0034】

[0039]食物組成物は、約５％〜約４０％の脂肪を更に含み得る。脂肪は、動物性脂肪及び／又は植物性脂肪を含み得る。食物組成物は、炭水化物を更に含み得る。炭水化物は、約１０重量％を超える量で存在し得る。炭水化物は、穀物及び穀類から取得可能である。

【0035】

[0040]本開示に基づき処置される活動的な哺乳動物は、任意の適する哺乳動物を含み得る。例えば、哺乳動物は、イヌ又はウマであり得る。Ｌ−カルニチンサプリメントは、あらゆる年齢、例えば哺乳動物の出産時から成人期等の活動的な哺乳動物に供給され得る。様々な実施形態では、哺乳動物は、イヌ、ネコ、ウマ、又はヒトであり得る。多くの実施形態では、哺乳動物は、未成年又は若年成人から成人に至ると考えられる。例えば、活動的な哺乳動物は、その予想される寿命の少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、例えば少なくとも１５％、例えば少なくとも２０％、例えば少なくとも２５％、例えば少なくとも３０％の年齢であり得る。哺乳動物は、その予想される寿命の約８０％未満、例えば約７５％未満、例えば約７０％未満、例えば約６５％未満のような年齢であり得る。寿命の決定は、保険統計表、計算等に基づくことができる。

【0036】

[0041]Ｌ−カルニチンサプリメントは、哺乳動物が定期的に活動状態に留まる限り、本開示に従い哺乳動物に投与され得る。Ｌ−カルニチンサプリメントは、身体活動中及び身体活動後に骨格筋損傷を軽減する、身体活動又は身体活動後に酸化ストレスを軽減する、又は骨格筋損傷及び酸化ストレスの両方を軽減するのに十分な量で投与される。１つの実施形態では、骨格筋損傷は、血流内のバイオマーカーであるミオグロビンをモニタリングすることにより測定可能である。特に、ミオグロビン値は、身体活動の２４時間前及び身体活動の２４時間後に採取及び記録され得る。本開示に基づき処置される哺乳動物の場合、身体活動前後のミオグロビン値の変化は、３００％を超えない、例えば２５０％を超えない、例えば２００％を超えないと考えられる。

【0037】

[0042]１つの実施形態では、本開示に基づき処置される哺乳動物は、身体活動後に、Ｌ−カルニチンサプリメントが投与されない同一の哺乳動物よりも少なくとも５０％、例えば少なくとも７５％、例えば少なくとも１００％、例えば少なくとも１２５％、例えば少なくとも１５０％少ないミオグロビン値を有し得る。

【0038】

[0043]骨格筋損傷の低減に付加して、Ｌ−カルニチンサプリメントは、酸化ストレスも抑制し得る。特に、Ｌ−カルニチンサプリメントは、身体的ストレスに起因する膜の過酸化を抑制し得る。酸化ストレスは、血流内のチオバルビツール酸反応性物質をモニタリングすることにより測定可能である。比較測定は、身体活動の２４時間前及び身体活動の２４時間後に実施され得る。

【0039】

[0044]１つの実施形態では、本開示に基づき処置される哺乳動物は、身体活動後に、Ｌ−カルニチンサプリメントを投与されない同一の哺乳動物よりも少なくとも５０％、例えば少なくとも７５％、例えば少なくとも１００％、例えば少なくとも１２５％、例えば少なくとも１２５％少ないＴＢＡＲＳレベルを有し得る。

【0040】

[0045]本開示のＬ−カルニチンサプリメントは、身体活動後に血流中に存在するクレアチンキナーゼも低減し得る。１つの実施形態では、本開示に基づき処置される哺乳動物は、身体活動後に、Ｌ−カルニチンサプリメントが投与されない同一の哺乳動物よりも少なくとも５％、例えば少なくとも８％、例えば少なくとも１０％、例えば少なくとも１２％低いクレアチンキナーゼ値を有し得る。

【0041】

[0046]本開示は、下記の実施例を参照しながらより適切に理解され得る。

【実施例】

【0042】

実施例１
[0047]Ｌ−カルニチンが、激しい運動中に骨格筋破壊を軽減し、食物変換効率を改善し、酸化ストレスを軽減し、筋肉回復時間を短縮し、及び脂肪の燃料としての利用を増加させ得ることを示すために、評価用哺乳動物（ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｍａｍｍａｌ）、すなわちイヌを対象として、９０日試験を実施した。

【0043】

[0048]下記の実施例では、評価用のイヌに、Ｌｏｎｚａ社から得た商標名ＣＡＲＮＩＫＩＮＧのＬ−カルニチンサプリメントを投与した。
[0049]ラブラドールレトリーバー４０匹を、性別、体重（「ＢＷ」）、遺伝学、及び除脂肪量に基づき２０匹（オス１１匹、メス９匹）からなる２つの等しい群に分割し、そして９０日飼育期間において、低Ｌ−カルニチン基礎飼料を与えた。試験開始前の１０日間、実験用のイヌに低Ｌ−カルニチン基礎食を与えた。ラブラドール犬２０匹が、２５０ｍｇ／日のＬ−カルニチン（バッチ番号Ｄ２２３１２）及び３．７５ｇの糖を、ラブラドール犬２０匹が、４ｇ／ｄの糖を服用した。試験開始直前に、イヌをＧＥ Ｐｒｏｄｉｇｙ ＤＥＸＡシステムでスキャンし、そして測定した除脂肪量を、コントロール群とＬ−カルニチン投与群の間でイヌを等しく選別するのに役立つように、重要な成分として利用した。筋肉損傷及び抗酸化状態を評価するのに用いられる血中バイオマーカーについて、そのベースライン値を測定するために、血清サンプルを各イヌから得た。Ｌ−カルニチン投与した、及びコントロールの評価用のイヌは、１週間に２回、集中度がより高い全力疾走型の短距離走行のランニング（１０週間にわたり、１０９７メートル（１２００ヤード）／セッションから２１９４メートル（２４００ヤード）／セッションまで増加させる）、及び１週間に１回、走行距離がより長い耐久性の長距離走行のランニング（１０週間にわたり、８．０キロメートル（５マイル）／セッションから１６．１キロメートル（１０マイル）／セッションまで増加させる）からなる、毎週行われるランニングプログラムを実施した。

【0044】

[0050]各試験用のイヌは、短距離のより集中度の高い走行において、Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ社製Ａｃｔｉｃａｌ活動度モニターを首輪に装着したが、また毎週行われたより長距離の耐久走行においてもＡｃｔｉｃａｌ活動度モニターを装着した。活動データは、各イヌの識別情報と共にスプレッドシートにダウンロードされた。１３週間ランニングプログラム中、各長距離走行の２４時間後に、イヌ飼育員により、苦痛又はあらゆる種類の跛行について各イヌをスコア化した。運動プログラムは、第１１週目〜第１２週目にかけて、漸減式プログラムにて運動プログラムを軽減し、第１３週目に行われる最終的な長距離走行に備えてイヌを休ませた。最後の耐久走行の２４時間前に、各試験用のイヌから走行前血清サンプルを採取した。最後の長距離耐久走行前に、心拍数及び基礎体温を、試験用のイヌそれぞれについて測定した。

【0045】

[0051]各評価用のイヌは、最後の耐久走行中にもＡｃｔｉｃａｌ活動度モニターを装着した。イヌは、ぬかるみ、水たまり、高茎草本、及び水泳を含む２４．１キロメートル（１５マイル）走行を完了した。イヌがコースを完了した時刻を記録した。イヌは、すべての耐久走行中、４輪全地形型車両に搭乗したイヌ飼育員により鼓舞された。イヌは自由であり、規定した距離よりも有意に長い距離を走行することができたが、すべてのイヌは少なくとも記載された距離を走行した。コースを完了しなかったイヌはデータセットから除かれた。２４．１キロメートル（１５マイル）の耐久走行後、速やかに、各イヌをイヌ小屋内に配置し、体温（１５分毎に２時間）、及び心拍数（２分毎に１４分間）について回復時間を評価した。試験用のイヌが最後の２４．１キロメートル（１５マイル）の耐久走行を行った２４時間後に、走行後血清サンプルを採取して、筋肉損傷及び抗酸化状態に関するバイオマーカーを評価した。また、１３週間試験コース期間中に生じた身体組成変化についても調べるために、ＧＥ Ｐｒｏｄｉｇｙ ＤＥＸＡを用いて各試験用のイヌをスキャンした。

【0046】

[0052]Ｌ−カルニチンを服用したオス、メス両方のイヌは、試験終了時の２４．１キロメートル（１５マイル）時間計測走行において、コントロールのオスよりも平均６．５６分速く走行し（ｐ＝０．００２８）、Ｌ−カルニチン投与されたオスは８．６９分速く走行した（ｐ＝０．０００４）。Ｌ−カルニチンを与えられたイヌは、毎週行われた１３回の長距離耐久走行を平均したとき、コントロール群の１５５７ユニット／キロメートル／ｋｇ ＢＷ（１１３５ユニット／マイル／ポンドＢＷ）と比較して、有意に（ｐ＜０．０５）高い、１８０６ Ａｃｔｉｃａｌユニット／キロメートル／ｋｇ ＢＷ（１３１７ Ａｃｔｉｃａｌユニット／マイル／ポンドＢＷ）を生み出した。Ｌ−カルニチン投与したメスイヌは、コントロールのメス及びオスの両群の１７２３ユニット（１２５８ユニット）より有意に高い、２０７０ユニット（１５０９ユニット）の平均活動度を有した。

【0047】

[0053]長距離走行活動度ユニットに関する興味深い要素として、時間及び距離により影響を受けて、両処置群において、活動度／マイル／ポンドＢＷが有意に減少したことが挙げられた。また、Ｌ−カルニチン投与したイヌは、１３週間の期間において、短距離走行について平均したＡｃｔｉｃａｌユニット／キロメートル／ｋｇ ＢＷ（Ａｃｔｉｃａｌユニット／マイル／ポンドＢＷ）についても、コントロールのイヌの１７２１ユニット（１２５５ユニット）と比較して、１９９０ユニット（１４５１ユニット）とそれよりも有意に（ｐ＜０．０５）高い活動度を有した。Ｌ−カルニチンを投与したメスイヌは、毎週行われた短距離走行について平均２０８８（１５２２）活動度ユニットを有し、またコントロールのオスの１５９１（１１６０ユニット）より有意に高い（ｐ＜０．０５）活動度を有した。

【0048】

[0054]両群共に、試験期間において、脂肪割合（％）及び骨質量の増加と同時に、重量も増加した。Ｌ−カルニチン投与したイヌの脂肪量の割合（％）は、試験開始時から終了時にかけて、数値上小さめの増加（ｐ＝０．２５）を示したが、またＬ−カルニチン投与したメスイヌの脂肪量の割合（％）は、コントロールのメスと比較して、それよりも数値上低めの増加を示した（８．９％に対して４．２％）（ｐ＝０．２２）。いずれの群においても、除脂肪量の増加は検出されず、また総重量、脂肪割合（％）、及び骨質量の増加は、群間で有意に異なるとはみなされなかった。

【0049】

[0055]運動後のミオグロビン値の増加は有意とみなされ（ｐ＜０．０００１））、Ｌ−カルニチン投与したイヌの１９．６７ｎｇ／ｍＬと比較して、コントロール群の血清ミオグロビン値は３０．９７ｎｇ／ｍＬであり、有意に上昇した。走行前と比較して、走行後のコントロールのイヌ間におけるミオグロビン変化は、２４．９２ｎｇ／ｍＬであったが、これは、最後の走行期間中の有意な筋肉損傷を示唆する。

【0050】

[0056]血清の総合的な抗酸化能力は、トレーニングコース期間中に、両群において有意に向上したが、抗酸化能力値は、２４．１キロメートル（１５マイル）長距離走行後、両群において低下した（ｐ＜０．０００１）。しかし、いずれの時点においても、群間で有意差は認められなかった。血清のチオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）は、試験全体を通じて不変であった。個々のイヌについて認められた、走行前後の血液間におけるＴＢＡＲＳの差異から、コントロールのイヌの場合、ＴＢＡＲＳは２．１４ユニット増加した一方（Ｐ＝０．１５５）、Ｌ−カルニチン投与したイヌでは、０．４１ユニット増加したに過ぎないことが判明した。

【0051】

[0057]クレアチンキナーゼ値は、コントロールのイヌの場合、走行前と比較して長距離走行後では１３．６４ユニット増加し、Ｌ−カルニチン投与したイヌの場合、同一期間において９．３ユニット増加したに過ぎなかったが、その差異は有意に異ならなかった（ｐ＝０．１５５）。

【0052】

[0058]各長距離走行後の２４時間、各イヌを観察して評価した。イヌを苦痛及び跛行についてスコア化した。いずれの処置群においても、跛行又は苦痛に対して、長距離走行の顕著な効果は認められなかった。各群は、試験期間全体を通じて、類似した量のエネルギー及び栄養分を消費した。処置群間で食物摂取量（ｇ／ｋｇ ＢＷ、又はｋｃａｌ ＭＥ／ｋｇ ＢＷ）に有意差は認められなかった。しかし、Ｌ−カルニチン投与群では、体重（ＢＷ）１ｋｇ当たりの食物消費量が、特に評価試験の初期及び後期において、低めの傾向を有した。試験が進行するに従い、主にイヌの適応力向上、及び環境温度の上昇を理由として、両群の体重（ＢＷ）１ｋｇ当たりの食物消費量は減少した。

【0053】

[0059]実験デザイン：年齢が１〜３．５歳の範囲のラブラドールレトリーバー（ラブラドール犬）４０匹を、２つの食餌療法試験に組み込んだ。２つの食餌療法は、Ｌ−カルニチン投与群に１日当たり２５０ｍｇのＬ−カルニチンを付加した以外、試験用のイヌへの同一の低Ｌ−カルニチン食による飼育に基づいた。Ｌ−カルニチン投与したイヌそれぞれには、追加の糖３．７５ｇと混合したＬ−カルニチン２５０ｍｇを投与した。コントロールのイヌは、４ｇの糖を毎日投与した。性別、年齢、興奮レベル、フレームサイズ、体重、及び遺伝的背景が等しいラブラドール犬２０匹を、２つの処置群それぞれにおいて利用した。栄養試験に利用されたラブラドール犬は、最低６匹の異なるメスイヌに由来した。試験用のイヌ４０匹の除脂肪体重を、ＤＥＸＡを用いたスキャニングにより測定し、最終的な重要要素を、群が等しいことを保証するのに利用した。試験開始前に、ラブラドール犬を最低１０日間、実験食に順応させた。ラブラドール犬を９０日試験開始時に秤量し、また試験全体を通じて２週間毎に秤量した。食物消費量を、提供飼料及び残飼を毎日秤量することにより測定した。開始時における初期の最低体重が、試験全体を通じて維持されるように、各イヌに提供される１日当たりの食物の量を調整した。イヌ用の食物はＬｏｎｚａ社より提供されたが、評価用のイヌが試験開始前に消費していたという、Ｇｏｌｄ Ｎ Ｐｒｏ（ミズーリ州のＭＦＡ）の最低限保証分析結果に等しかった（表１）。

【0054】

[0060]運動レジメン：２つの異なる種類の運動プログラムを、各群のイヌに毎週実行させた。運動レジメン、９０日間において、全力疾走型（短距離走行）及び耐久型（長距離走行）労作の両方からなっていた。ＡＫＣ Ｊｕｎｉｏｒ Ｈｕｎｔ 試験（アメリカンケネルクラブ）に匹敵するであろう、模擬的な量の労作を、各群のイヌに実行させ、また１週間に１回、イヌに模擬的な耐久走行も行わせた。各群の試験用のイヌは、１週間に２回行われたＡＫＣ Ｈｕｎｔ試験運動を、１３週間の試験期間中に２６回行った。各週において、各群は、走行と走行の間に１日の休息を設けながら試験を２回走行した。

【0055】

[0061]最初の１週間のＡＫＣ Ｈｕｎｔ試験運動では、６回の連続した全力疾走型回収運動が２日間行われ、各方向最低９１メートル（１００ヤード）の、合計１日当たり１０９７メートル（１２００ヤード）又は１週間当たり２１９５メートル（２４００ヤード）に相当した。イヌは、運動期間中、バンパー（アヒル又はカモに類似）を調教師まで持ち運んだ。全力疾走型運動の回数及び長さは、試験用のイヌのアスレチック適応力及び労作効率の改善に適合するように、１０週間にわたり、各方向１１０メートル（１２０ヤード）に相当した１０回のマーク、すなわち合計２１９５メートル／日（２４００ヤード／日）及び４３８９メートル／週（４８００ヤード／週）まで徐々に増加させた。ＡＫＣ Ｈｕｎｔ試験を模倣した集中運動に関係する時間の長さは、短距離走行日毎に、イヌ１匹当たり約１０〜１５分であったが、両処置群で等しかった。模擬的な１週間ＡＫＣ Ｈｕｎｔ試験期間中、一連の回収運動（全力疾走）の間に設けられた休息時間は、すべてのイヌで等しかった。

【0056】

[0062]短距離走行（マーク）と関連する全力疾走の距離及び回数は、第１１週目に減少させ、合計１０９７メートル／日（１２００ヤード／日）又は２１９５メートル／週（２４００ヤード／週）まで戻し、そして第１２週目には、５４９メートル（６００ヤード／日）又は 合計１０９７メートル／週（１２００ヤード／週）まで再び減少させ、第１３週目の最終長距離走行に備えて休息を設けた。１週間の耐久走行は、最初８．０キロメートル（５マイル）であったが、１週間毎に０．８キロメートル（１／２マイル）ずつ増やして、第１０週目には、１６.１キロメートル（１０マイル）の距離まで増加した。イヌは、第１３週の期間中に行われる最終的な長距離走行に備えて休息するために、第１１週目に８．０キロメートル（５マイル）耐久走行のみを、そして第１２週目には３．２キロメートル（２マイル）耐久走行のみを行った。イヌ４０匹を対象に耐久（長距離）走行を、両処置群について各週の第５日目及び第６日目に実施した。半分のイヌが金曜日（第５日目）に走行し、半分のイヌが土曜日（第６日目に）に走行した。イヌを３日間休め、各群に由来するイヌの半分が月曜日に２４．１キロメートル（１５マイル）耐久走行を行い、そして残りのイヌ２０匹が火曜日に２４．１キロメートル（１５マイル）耐久走行を行って、第１３週中に運動レジメンは終了した。より長距離の耐久型の走行では、若干低速化して脂肪酸化を増強したが、これは、最大酸素消費量（ＶＯ２ ｍａｘ）の５０％〜６５％に等しい運動強度に相当する。

【0057】

[0063]身体スキャン：９０日試験の開始前の一週間及び最後の耐久走行の後の最初の労作日において、各イヌをＧＥ Ｐｒｏｄｉｇｙ Ｐｒｏ Ｆａｎビーム装置を用いて、身体組成についてスキャンした。イヌ毎に、除脂肪量の割合（％）、脂肪量の割合（％）、及び骨灰の割合（％）について、身体組成の数値を測定した。身体組成の差異を、試験用のイヌ毎に、開始時のスキャンと最後のスキャンを比較することにより測定した。最終スキャンを、走行の２４時間後に完了した。

【0058】

[0064]血液解析：血清サンプルを、９０日の期間中に各イヌから３回の異なる時期に採取した。血液サンプルを以下の通り収集した：１）試験開始時に身体組成について各イヌをスキャニングする直前、２）第１３週目の長距離走行前、及び３）第１３週目の長距離走行の後。運動プログラム中に、血清サンプルをホスホクレアチンキナーゼ及びイヌミオグロビンについて分析して、長距離走行後に生じた筋肉タンパク質の漏損量を調べ、またＴＢＡＲＳ及び総合的な抗酸化能力（ＴＡＣ）を測定して、試験用の各イヌの抗酸化状態を評価した。長距離走行の２４時間後に最終的な血液サンプルを採取して、過去に実施されたヒトアスリートによる類似した種類の運動研究に基づき、最大タンパク質漏損量を得た。

【0059】

[0065]パフォーマンス及び回復時間：イヌ毎に運動量（測定された総運動量及び強度）を見積もって、処置群間の労作が等しいことを評価するために、また１日の回収運動を行った際の個々の労作強度についても評価するために、Ａｃｔｉｃａｌモニター（Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ社）を各イヌの頸部周辺、首輪上に装着し、これを利用した。各イヌは、長距離走行毎にＡｃｔｉｃａｌモニターを装着し、また最終的な２４．１キロメートル（１５マイル）走行においても、Ａｃｔｉｃａｌモニターを装着した。Ａｃｔｉｃａｌモニターデータをコンピューターにダウンロードして評価した。

【0060】

[0066]試験終了時の最後の２４．１キロメートル（１５マイル）走行において、イヌを時間計測した。イヌ毎の体温及び心拍数を、長距離２４．１キロメートル（１５マイル）走行直前に測定した。心拍数測定を手作業により実施し、また体温を直腸温度計を用いて測定した。各スタッフメンバーは、各セットに含まれる試験用のイヌの１匹について、完走するのに要した時間を測定する責任を有した。また各スタッフメンバーは、走行後戻り次第速やかに、担当する特定のイヌの心拍数及び体温を測定する責任も有した。最後の長距離走行後に、心拍数を２分毎に１４分間測定し、また長距離走行完了後に、体温を１５分毎に２時間測定した。適応力、並びに走行後、基礎的なＨＲ及び体温に達するのに要する時間を評価するために、心拍数及び体温を、前後両方において測定した。

【0061】

[0067]主観的回復スコアを、１週間に１回、耐久走行の２４時間後に、試験用のイヌ毎に判定した。主観的回復スコア（１〜５；苦痛又は四肢の硬直が認められない場合、スコア１、及びスコア５は、顕著な苦痛及び硬直を意味した）は、各イヌの運動の容易さ及び苦痛に基づいた。イヌの回復を評価するために、苦痛及び移動への欲求に関する限り、同一の主観的システムを、長距離２４．１キロメートル（１５マイル）走行の６時間後に用い、２４及び４８時間後に再度用いた。

【0062】

[0068]バイオマーカー及びアッセイ法：血清セパレーターチューブを用いて、９０日間の３回の異なる時期に、血液を各イヌから採取した：１）試験開始時に、身体組成について、各イヌをスキャニングする直前に、２）第１３週目の長距離走行前に、及び３）第１３週目の長距離走行後。長距離走行の２４時間後に最終的な血液サンプルを採取して、過去に実施されたヒトアスリートによる類似した種類の運動研究に基づき、最大タンパク質漏損量を得た。血液採取後、毎回放置して凝固させた後、２０００ｇ、４℃で１５分間、遠心分離した。血清を、１．５ｍＬの微量遠心チューブに定量分取し、試験終了後、アッセイが行われるまで−８０℃で保管した。

【0063】

[0069]クレアチンキナーゼ（ＣＫ）及びイヌミオグロビンを測定して、長距離走行後に生じた筋肉タンパク質漏損の量を求めた。運動プログラム期間中に、チオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）及び総合的な抗酸化能力（ＴＡＣ）を測定して、各試験用のイヌの抗酸化状態を評価した。血清サンプルを、総合的な抗酸化能力（ＴＡＣ）及びチオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）について、Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ社（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）より供給された市販の比色分析キットを用い、製造業者の説明に従って分析した。血清イヌミオグロビンレベルを、Ｉｎｎｏｖａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社（Ｎｏｖｉ、ＭＩ）より供給された市販のＥＬＩＳＡを用い、製造業者の説明に従い測定した。クレアチンキナーゼ活性を、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）より供給された市販キットを用いて、比色分析により測定した。

【0064】

[0070]代謝可能エネルギーの測定：低Ｌ−カルニチン試験食のＭＥを、指示法２を用いて測定した（ＡＡＦＣＯ、２００７年）。収集前の５日間、各試験用のイヌに、低Ｌ−カルニチン試験食５００ｇを毎日与え、また収集期間中の４日間、各イヌに同一量の試験食を与えた。収集期間において、試験食５００ｇを提供するのと同時に、２ｇの二酸化チタンを、ゼラチンカプセルにより試験用のイヌそれぞれに与えた。チタンマーカーは、消費された試験食の０．４％であった。収集期間中の４日間、各試験用のイヌから得た糞便の一定分量を毎日収集し、そして４つの個々のサンプルとして維持した。糞便サンプルを収集直後に凍結した。各糞便サンプルを凍結乾燥し、そして未精製のタンパク質及び総エネルギーについて分析した（Ｐａｒｒ Ｂｏｍｂ熱量計）。排泄物中のチタンを、改変したＭｙｅｒｓらの方法（２００４年）を用いて測定した。

【0065】

[0071]統計的手法：独立ｔ検定を用いて、走行時間、食物摂取量、体重、及び血液化学の変化について、群間の平均値を比較するのに、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いた。結果は、ｐ値として０．０５を得た場合に有意とみなした。ＪＭＰ １０．０．２を、長距離走行、短距離走行、身体組成、及び血液化学について、混合モデルを構築するのに用いた。

【0066】

【表1】

【0067】

[0072]結果：表１は、試験期間中にイヌに与えられた基礎飼料を示す。飼料のＭＥ及びＤＥ（可消化エネルギー）が、ＭＥ３９６９ｋｃａｌ／ｋｇ及びＤＥ４２１４ｋｃａｌ／ｋｇとして測定された。１０日間の試験前期間に、食物を与えて、試験開始時には、イヌが新しい食物に順応したであろうことを確認した。

【0068】

【表2】

【0069】

【表3】

【0070】

[0073]表２は、評価用のイヌが２４．１キロメートル（１５マイル）の最終的な走行を完了するのに要した時間を示す。走行時間は、オス、メス両方からなるコントロールのイヌについて１０２．４分であったが、これと比較して、Ｌ−カルニチン投与したイヌのオスとメスとの組み合わせでは９５．８４分であり、有意に短縮した（ｐ＝０．００２８）。２４．１キロメートル（１５マイル）走行において、コントロールのオスと比較して、Ｌ−カルニチン投与したオスイヌの走行時間は有意に短かった（ｐ＝０．０００４）。Ｌ−カルニチン投与したメスがコースを完了するのに要した時間は、コントロールのメスイヌと比較して短かったが、但し有意ではなかった（ｐ＝０．３８）。

【0071】

【表4】

【0072】

[0074]最終的な長距離走行後の心拍数及び体温の回復は、２処置群で異ならなかった（表３）。

【0073】

【表5】

【0074】

【表6】

【0075】

【表7】

【0076】

[0075]心拍数が基底レベルまで戻るのに要した時間は、約１４分であり、両処置群共に、この時間を必要とした。長距離走行直後が、心拍数の差異が認められた最も近い箇所として挙げられる。Ｌ−カルニチン投与したイヌ（Ｍ＆Ｆ）の平均心拍数は、コントロールのイヌの１４９回と比較して、それよりも数値的に高い１５９回／分であった（ｐ＝０．１９９）。Ｌ−カルニチン投与したイヌのオス、メス両方について、その走行直後の心拍数は数値的により高かったが、オス、メスのいずれも、その心拍数は、コントロールのイヌのオス、メスそれぞれと比較して有意に異なることはなかった。相違は４分以内に消散して回復したが、両群の心拍数は、１４分間の回復期間中、継続的な低下が認められた。

【0077】

[0076]Ｌ−カルニチン投与したイヌでは、心拍数が数値上より高かったが、それは、２４．１キロメートル（１５マイル）走行期間中に、上記イヌが経験した労作がより過酷であったことを示唆する。コントロールのオスが有した走行後の体温は、Ｌ−カルニチン投与したオスと比較して、それよりも有意に高かった（ｐ＝０．０５）。Ｌ−カルニチン投与したオスとコントロールのオス間の体温差は、１５分以内に消散し、両群は、２４．１キロメートル（１５マイル）走行後、３０〜４５分において走行前コア温度まで戻った。コントロールのオスのコア体温は、２４．１キロメートル（１５マイル）走行期間中の燃料の使用が効率的でなかったので、Ｌ−カルニチン投与したオスの場合よりも上昇したと考えられる。Ｌ−カルニチン投与したオスは、コントロールのオスと比較して、それよりも効率的に筋肉脂質を、激しい運動中に利用することができたと考えられる。骨格筋内Ｌ−カルニチンの欠乏により、脂質利用が制限される場合、コントロールのオスでコア温度が１度上昇するが、その妥当な説明として、コントロールのオスは、グルコースを供給するために、燃料用としてタンパク質分解にシフトしなければならなかったという理由が挙げられる。タンパク質の異化及び尿素の生成は、すべての栄養素のうちでも最も多量の熱生成をもたらす。

【0078】

[0077]試験期間中に、各長距離走行の２４時間後に、及び最終的な走行後の数回において、イヌの回復を評価するために各イヌを観察した。イヌを苦痛及び跛行及び移動への欲求の欠如について１〜５にスコア化した。いずれのイヌに対しても、跛行又は苦痛を引き起こすような長距離走行の顕著な効果は認められなかった。万人が気づくような観察所見として、長距離走行後のイヌの朝食量が低下し得ること、また長距離走行後の夜に、イヌをイヌ小屋に配置すると、速やかにおとなしくなり、横臥したことが挙げられる。

【0079】

[0078]下記の表４に示す通り、食物消費量は、１３週間全体を通じて処置群間で有意に異ならなかった。

【0080】

【表8】

【0081】

[0079]試験の最初の４週間及び試験の最後の４週間において、Ｌ−カルニチン投与したイヌとコントロールのイヌの間の食物消費量の差異は、概ね有意に異なった（図１）。最初の４週間の差異を表すｐ値は、０．０３〜０．１５の間の範囲であり、また最後の４週間の差異を表すｐ値は、０．０４〜０．１３の間の範囲であった。コントロールのイヌの６７７ｇ／日と比較して、Ｌ−カルニチン投与したイヌの全体的な１日当たりの平均食物摂取量は６２６ｇ／日であった（ｐ＝０．１２）。９０日試験期間中、コントロールのイヌの体重増加はわずかであったので（有意ではない）、ｇ／日／ポンドＢＷ、又はｋｃａｌ ＭＥ／日／ポンドＢＷで報告された食物消費量は、Ｌ−カルニチン投与したイヌよりもその差は小さかった（ｐ＝０．１９）。

【0082】

[0080]Ｌ−カルニチン投与したイヌは、その労作及びＢＷを維持するための食物エネルギーについて、その必要性がより低いことを明確に示している。Ｌ−カルニチン投与したイヌは、９０日プログラム期間中に蓄積脂肪を活用することが可能であったが、またＢＷを持続するために、毎日必要とする食物エネルギーは少な目であった。イヌの体重は、試験期間中有意に異ならなかった（表５）。

【0083】

【表9】

【0084】

[0081]イヌはそれぞれ、ＢＷを１３週間にわたり増加させたが、処置群間の差異は有意ではなかった。長距離走行の際にＡｃｔｉｃａｌモニターにより測定された活動度を、表６及び図２に報告する（報告書の裏側の２ａ，２ｂ，２ｃは、週別の長距離走行、週別及び距離別の長距離走行、週別、距離別、及び性別の長距離走行を表す）。

【0085】

【表10-1】

【0086】

【表10-2】

【0087】

【表11】

【0088】

[0082]Ｌ−カルニチン投与したイヌは、１３週間試験期間中に、有意に多くの活動量を生み出し（ｐ＝０．００９４）、またメスイヌは、オスと比較してより多くの活動量を生み出した（ｐ＜０．０００１）。また、データは、両処置群のイヌが生成した活動量は、試験期間中、何週間か経過し（ｐ＜０．０００１）、また長距離走行の距離が延びる（ｐ＜０．０００１）につれて低下したことも示唆する。性別と処置群の交互作用は有意ではなかったが（ｐ＝０．３０）、活動量のデータは、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌは、コントロールのメスイヌの１７２５（１２５８）、Ｌ−カルニチン投与したオスイヌの１５４２（１１２４）、及びコントロールのオスイヌの１３８７（１０１１）より有意に多くの活動量、２０７０（活動運動／キロメートル／ｋｇ ＢＷ）（１５０９（活動運動／マイル／ポンドＢＷ））（ｐ＜０．０５）を生み出したことを明らかにした。Ｌ−カルニチン投与したオスイヌは、試験終了時のタイムトライアルにおいて、コントロールのオスイヌ及び両処置群のメスイヌと比較してそれよりも速かったが、１週間の長距離走行期間中では、メスがより多くの全体的活動量を示した。メスイヌは、ランニングにより集中したと考えられる一方、オスイヌは、メスの臭跡により多く気を取られ、またトラックに沿ってテリトリーをマーキングすることに専心する傾向を有した。

【0089】

[0083]１週間の短距離走行（１週間当たり２セッション）においてＡｃｔｉｃａｌモニターにより測定された活動量を表７及び図３に報告する（報告書の裏側の３ａ及び３ｂは、週別及び距離別の短距離走行、並びに週別、距離別、及び性別の短距離走行を表す）。

【0090】

【表12-1】

【0091】

【表12-2】

【0092】

【表13】

【0093】

[0084]両処置群のメスは、１３週間試験全体を通じて、オスと比較してそれよりも多くの活動量（活動単位／マイル／ポンドＢＷ）を生み出した（ｐ＝０．０３６９）。Ｌ−カルニチン投与したイヌは、コントロールのイヌと比較して、それよりも有意に多くの活動量（活動単位／マイル／ポンドＢＷ）を生み出した（ｐ＝０．０１９５）。また短距離走行では、イヌの活動量は、距離が長くなり（ｐ＜０．０００１）、そして試験の週間が継続する（ｐ＜０．０００１）に従って減少したことも判明した。週と週が同一とはみなされず、距離が長くなる試験の唯一の部分は、イヌが、第１１週目における距離の短縮とトレーニング漸減プログラムが行われる第１２週目を経験し、従って、２４．１キロメートル（１５マイル）最終走行を完了するのに必要とされるエネルギーの蓄積が可能になるときである。１３週間全体を通じて、Ｌ−カルニチン投与したイヌは、コントロールのイヌと比較して、明らかにこれよりも多くのエネルギーを短距離走行につぎ込んだ。

【0094】

[0085]トレーニング及び運動の異なる段階を表す各血清バイオマーカーの平均値（ベースライン、走行前、及び走行後）を表８に示す。

【0095】

【表14】

【0096】

表９において、ミオグロビン値を、異なる処置群について比較した。

【0097】

【表15-1】

【0098】

【表15-2】

【0099】

【表15-3】

【0100】

[0086]血清中のミオグロビン値は、走行前から走行後の期間において、ミオグロビンの有意な増加を示す（ｐ＜０．０００１）。結果は、長距離２４．１キロメートル（１５マイル）最終走行期間中の筋肉損傷により、ミオグロビンが骨格筋から失われていることを明確に示す。Ｌ−カルニチン投与したイヌでは、走行後の血清中ミオグロビンの増加は、走行前の血清と比較して、それよりも有意に小さかったが（ｐ＝０．０２１８）、それはＬ−カルニチン投与したイヌにおける筋肉損傷及びミオグロビン喪失がより少ないことを示唆する。性別と時間（走行後−走行前）において、有意な交互作用が認められた（ｐ＝０．０２６４）。走行前コントロールのイヌでは４．６８ｎｇ／ｍＬに過ぎなかったが、これと比較してコントロールのメスイヌのミオグロビンでは、走行後の数値は４０．５９ｎｇ／ｍＬであり、これは、時間と性別における交互作用を生み出した重要な変化である。

【0101】

[0087]ベースライン、走行前、及び走行後のイヌに関する血清中クレアチンキナーゼ（ＣＫ）を表１０に報告する。

【0102】

【表16-1】

【0103】

【表16-2】

【0104】

【表16-3】

【0105】

[0088]ＣＫ値は、試験開始前のイヌに認められたＣＫと比較して、走行前のイヌではそれよりも低い（ｐ＜０．０００１）。試験開始時のイヌの状態は、最終走行前のイヌの状態と比較して、同一ではなかった。試験開始前に行われた継続的トレーニングは、ベースライン初期値についてＣＫ値を高めた可能性がある。走行前のＣＫ値は、休息状態のイヌを表し、また漸減期間中に実施された運動のみが、第１０週目に行われた運動レジメンと比較して、それよりも長さが有意に短縮した。走行後のＣＫ値が、走行前のＣＫ値と比較して、それよりも有意に増加したことが、すべてのイヌで認められた（ｐ＜０．０００１）。ベースライン、走行前、及び走行後の数値を考慮すれば、全体的なＣＫ値は、Ｌ−カルニチン投与したイヌはコントロールのイヌとは有意に異なることを示唆する（ｐ＝０．０５）。Ｌ−カルニチン投与したイヌのベースラインＣＫは、コントロールのイヌと比較して、それよりも高く、数値に多大な影響が認められた。Ｌ−カルニチン投与したイヌのＣＫベースライン値が高めであったが、それは処置を反映したものではなく、むしろＬ−カルニチン投与したイヌにおけるＬ−カルニチン投与開始前及び９０日試験開始前の筋肉損傷の現れであった。メスイヌでも、３時点において有意となる最高値を示したが（ｐ＝０．００１９）、但しこの差異も、試験開始前に最高値を示したＬ−カルニチン投与したベースラインのメスイヌと関連する。コントロールのメスのベースライン値より高かったＬ−カルニチン投与したメスイヌにおいて、処置と性別との交互作用（ｐ＝０．０００３）は、ＣＫベースライン値の影響を顕著に受けた。

【0106】

[0089]表１１は、試験用のイヌ毎に、３時点における総合的な抗酸化能力（ＴＡＣ）を示す。

【0107】

【表17-1】

【0108】

【表17-2】

【0109】

【表17-3】

【0110】

[0090]１３週間評価試験を完了したイヌでは、そのベースライン値から走行前のＴＡＣまで、ＴＡＣが実際に増加した。１３週間試験の実施過程で、試験開始時と比較してそれよりも向上したＴＡＣに、イヌは益々うまく適応するようになることを示す傾向を、ＴＡＣデータ及びＣＫ値の両方が有したが、そのような点において、両者は相関関係を有する。すべてのイヌについて、ベースライン値を走行前血清値と比較すると、試験用のイヌのＣＫも、同じことを示した。ＴＡＣは、最終的な長距離走行の後、両群共に、走行前ＴＡＣ値と比較してそれよりも減少したが（ｐ＜０．０００１）、これは、２４．１キロメートル（１５マイル）最終走行のランニングに関わる酸化ストレスに対処するために、イヌは抗酸化能力を利用したはずであることを示している。メスの場合、イヌのベースライン血清値と走行前の数値間におけるＴＡＣ増加量は、オスイヌと比較してそれよりも小さかったが、それは、メスは１３週間試験コース期間中により多くの労力を一貫して消費したためである。試験期間中、Ｌ−カルニチンは、試験用のイヌのＴＡＣ変化に対して有意な効果を有さなかった。

【0111】

[0091]試験用のイヌのＴＢＡＲＳを、ベースライン、走行前、及び走行後の期間において測定した（表１２）。

【0112】

【表18-1】

【0113】

【表18-2】

【0114】

【表18-3】

【0115】

[0092]混合モデルより、３期間において、メスイヌは、オスイヌと比較してＴＢＡＲＳの数値的増加を示したが（ｐ＝０．０９）、処置効果又は交互作用について何らかの有意性を示さなかったことが示唆される。また混合モデルより、走行後の数値は、すべての群のイヌについて、走行前の数値よりも数値的に高い（ｐ＝０．１２）ことが明らかであり、最終的な長距離走行の酸化ストレス期間中に脂質の過酸化が進み、そして脂質生成物がマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）に分解してＴＢＡＲＳが増加したことが示唆される。メスではＴＢＡＲＳが増加するが、それは最終的な走行後に、膜の脂質がより多く分解したことを示唆し、またミオグロビンの有意な増加にもあてはまる。

【0116】

[0093]表１３は、すでに議論した血中バイオマーカーの、走行前から走行後の個々の変化を示す。

【0117】

【表19】

【0118】

[0094]データは、これまでの表に記載した混合モデルデータにおいて評価されたベースライン情報について考慮しない。表１３は、ＴＢＡＲＳ及びクレアチンキナーゼの数値は、個々のイヌにおいて、走行前と比較して走行後では増加することを主に示す。血中バイオマーカーの変化は、イヌについて個別の検討を可能にし、またＬ−カルニチンは、走行期間中の筋肉損傷を最低限に抑えるのに役立ち、また最終的な走行に関係したストレスに起因する膜の過酸化の抑制にも役立つことを裏付ける。

【0119】

[0095]性別の差異に関する平均値について、及び処置群と期間を比較するのに、混合モデルを用いたが、混合モデルは、異なる群における期間の間の実際の変化をイヌ毎に比較するのに用いることはできなかった。ＴＢＡＲＳは、最終的な長距離走行後のコントロールのオス及びメスイヌについて、走行前の数値と比較して２．１４増加するが、Ｌ−カルニチン投与したイヌは、同一の２期間において０．４１の増加を示したにすぎない（ｐ＝０．１５５）。走行後の血清値を走行前ＣＫと比較すると、ＣＫ値はコントロールのイヌで１３．６４増加する一方、ＣＫは、Ｌ−カルニチン投与したイヌの場合、９．３酵素ユニット増加するにすぎない（ｐ＝０．１４５）。コントロールのオスイヌは、筋肉損傷を反映する走行後血清値において、５．５４ユニットしか増加しないＬ−カルニチン投与したオスイヌと比較して、それよりもＣＫが増加する（１２．９４ユニット）ことを示す傾向を有する（ｐ＝０．０５２）。Ｌ−カルニチン投与したオスイヌは、コントロールのオスと比較して、それよりも少ないＣＫ増加を、またメスの両処置群よりも低いＣＫを示した。

【0120】

[0096]筋肉損傷のバイオマーカーであるミオグロビンでは、長距離走行期間中、Ｌ−カルニチン投与したメスと比較して、コントロールのメスの筋肉損傷は、最も増加したことが示唆された（ｐ＝０．０３）。上記バイオマーカーは、最終的な長距離走行期間におけるＬ−カルニチン投与したオス、メス両方のイヌの筋肉損傷がより少ないことを示す。ミオグロビン値は、Ｌ−カルニチンを消費するメスの筋肉損傷が小さいか、その大小を調べるのに最適である一方、ＣＫ値は、Ｌ−カルニチンを消費するオスイヌの筋肉損傷が小さいか、その大小を説明するのに最適である。

【0121】

[0097]評価用のイヌの身体組成を、表１４に示す。

【0122】

【表20】

【0123】

総重量（ポンド）、除脂肪量（ポンド）、脂肪割合（％）、及びｇ身体ミネラル含量（ＢＭＣ）を、性別、処置別、及び試験に要した時間別に報告する。
[0098]表１５は、評価を目的として、試験用のイヌの総体重を、混合統計モデルを用いて示す。

【0124】

【表21-1】

【0125】

【表21-2】

【0126】

【表21-3】

【0127】

[0099]総体重の統計的差異が性別で認められ（ｐ＜０．０００１）、メスの体重の方が低かった。すべてのイヌの総体重において、統計的に有意な増加が認められたが（ｐ＜０．０００１）、処置群間で有意差は認められなかった。Ｌ−カルニチン投与したメスイヌの総体重増加量は、開始時から最終走行後にかけて、コントロールのメスイヌと比較して、それよりも数値上低値であった（ｐ＝０．１２３）。試験期間中、メスの全体的な総体重増加量は、オスイヌについて認められた増加量よりも数値的に大きかったが、その増加量は有意ではなかった（ｐ＝０．１４７）。メスの総体重増加量は、脂肪増加量に比例して高くなった。

【0128】

[00100]脂肪割合（％）の増加（ｐ＜０．０００１）は、すべてのイヌで生じた（表１６）。

【0129】

【表22-1】

【0130】

【表22-2】

【0131】

【表22-3】

【0132】

試験期間中、メスイヌの脂肪割合（％）は、オスイヌと比較して、それよりも有意に増加した（ｐ＝０．０１２５）。Ｌ−カルニチン投与したイヌのオス、メス両方は、脂肪割合（％）で数値上低値の増加を示し（ｐ＝０．２５５）、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌが示した脂肪割合（％）の増加は、コントロールのメスイヌと比較して少なかった（ｐ＝０．２２）。また、脂肪重量データは、試験開始時にすべてのイヌに含まれる脂肪量は、最終的な脂肪量と比較して、それよりも少なかったことを示唆する（表１７）。

【0133】

【表23-1】

【0134】

【表23-2】

【0135】

【表23-3】

【0136】

試験開始時のすべてのメスイヌの脂肪量は、オスイヌに見出された脂肪重量よりも有意に低かった（ｐ＝０．０３）。試験開始時、Ｌ−カルニチン投与したイヌのオス、メス両方は、コントロールのイヌと比較して、それよりも数値上高値の脂肪量（ｐ＝０．１９）を有した。また、開始時において、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌは、コントロールのメスイヌと比較してそれよりも数値上高い量の脂肪重量を含んだ（ｐ＝０．２０）。

【0137】

[00101]表１８より、除脂肪量（ポンド）は、オスよりもメスの方が有意に低いこと（ｐ＜０．０００１）、及びメスが示した除脂肪量の増加量は、試験期間中、試験開始時から終了時にかけて、オスと比較してそれよりも数値上低値であった（ｐ＝０．１５７６）ことが明らかである。試験期間中、除脂肪量に対する処置の効果は認められなかった。

【0138】

【表24-1】

【0139】

【表24-2】

【0140】

【表24-3】

【0141】

[00102]試験コース期間中、メスイヌに含まれた身体ミネラル含量（ＢＭＣ）は、オスイヌよりも有意に低かったが（ｐ＝０．０１７９）、オス、メス両方のＢＭＣ量は、有意に増加した（ｐ＝０．００８５）（表１９）。

【0142】

【表25-1】

【0143】

【表25-2】

【0144】

【表25-3】

【0145】

[00103]試験中、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌに含まれたＢＭＣ濃度の平均値は、試験前スキャン及び走行後スキャンにおいて、コントロールのメスイヌと比較してそれよりも数値上高値であった（ｐ＝０．１０２９）。

【0146】

[00104]表２０は、試験コース期間中の、処置群別の身体組成、及び初期の身体組成、最終的な身体組成について、各処置群内の性別の身体組成、並びに身体組成成分変化の統計的差異を独立ｔ検定により比較する。また、表２０は、身体組成について測定されたパラメーター毎に、開始時から終了時までの変化も比較する。９０日試験コース期間中に、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌの脂肪割合（％）は、コントロールのメスイヌと比較して、それよりも数値上低値の増加を示した（９％に対して５．８％）（ｐ＝０．３０）。また、試験終了時、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌの脂肪量は、コントロールのイヌと比較して、それよりも数値上低値を示した（５．０ｋｇ（１１．１ポンド）に対して４．０ｋｇ（８．９ポンド））（ｐ＝０．２９）。

【0147】

【表26】

【0148】

[0100]Ｌ−カルニチン投与したイヌは、Ｌ−カルニチンの供給増に迅速に反応した。Ｌ−カルニチン投与したイヌは、追加のＬ−カルニチンを供給した週内に、短距離走行及び長距離走行において、Ａｃｔｉｃａｌモニターにより測定を行うと、より多くの活動度ユニット（運動／マイル／ポンドＢＷ）を生成した。Ｌ−カルニチン投与したイヌ（オス及びメス）は、１３週間試験全体を通じて、短距離走行及び長距離走行の両方において、コントロールのイヌと比較してそれよりも多くの活動度を生成した。Ｌ−カルニチン投与したイヌ（オス及びメス）は、最終的な２４．１キロメートル（１５マイル）長距離走行を、コントロールのイヌより６．５６分速く走行した。Ｌ−カルニチン投与したオスイヌは、２４．１キロメートル（１５マイル）走行を、コントロールのオスより８．６９分速く、またやはりメスの処置群より速く走行したが、これはオス、メス両方が走行目的で調教を受けた場合に、オスの余分の除脂肪量が激しい全力レースにおいて有利であり得ることを示している。

【0149】

[0101]Ｌ−カルニチン投与したメスイヌは、試験全体を通じて、オス、メスの両方及び両処置群のうちで最高活動度を生成し、また９０日間試験期間中、身体組成における脂肪割合（％）の増加も最低量であった。Ｌ−カルニチン投与したメスでは、身体内脂肪増加が少量認められたが、これが示唆することとして、これらのイヌでは、短距離走行及び長距離走行において、かなり激しいランニングを支援するのに役立つように、試験期間中、より多くの脂肪が燃料として利用されたことが挙げられる。また、血中バイオマーカーは、メスは、オスよりも多くの活動度／マイル／ポンドＢＷを生成し、その結果として、ミオグロビン、ＣＫ、及びＴＢＡＲＳの増加から明らかなように、より多くの筋肉損傷が生ずるという事実も裏付ける。

【0150】

[0102]バイオマーカーは、オス、メスの両方において、最終的な走行を原因とする筋肉損傷を示唆したが、ミオグロビン、ＴＢＡＲＳ、及びＣＫについては、メスが、オスと比較して最大の増加を示した。コントロールのメスイヌと比較して、ミオグロビン及びＴＢＡＲＳの増加は少なく、従ってＬ−カルニチン投与したメスイヌが示した筋肉損傷は少なかった。ＣＫ値も、すべてのイヌ（オス及びメス）において、走行前の数値と比較して、最終的な長距離走行期間において数値的に上昇したが、但しＬ−カルニチン投与したオスイヌでは、コントロールのオスイヌ又はメスイヌと比較して、それより多くの筋肉損傷に対する保護が認められた。

【0151】

[0103]Ｌ−カルニチン投与したイヌ及びコントロールのイヌにおいて、食物消費量への有意な全体的効果は認められなかったが、特に試験の最初の４週間、及びやはり試験の最後の４週間において、Ｌ−カルニチン投与したイヌが消費した食物はより少ないことが、データより明らかである。Ｌ−カルニチンは、短距離走行及び長距離走行に関係する激しい運動を行うために、身体燃料へのアクセスをより容易にしたものと考えられ、これは、食物エネルギーを消費するための全体的なニーズに影響を及ぼした可能性がある。栄養分を提供してイヌの重量を維持し、また短距離走行及び長距離走行に関係する余分な活動を賄うのにも役立つように、イヌには、正のエネルギー水準に調整された飼料が与えられた。試験が進行するに従い、両処置群の食物摂取量は低下したが、それは、イヌは労作により馴染んだことに起因し、また季節性の温度上昇が理由と考えられる。

【0152】

実施例２
[0104]評価用の哺乳動物、すなわちイヌを対象として、激しい運動中のタンパク質代謝回転及び除脂肪量の制御に、Ｌ−カルニチンが役立ち得ることを示すために、３パート交差試験を実施した。

【0153】

[0105]この試験期間中、実施例１でＬ−カルニチンが与えられたイヌを、コントロールのイヌとした；このイヌには、Ｌ−カルニチンを含まない低Ｌ−カルニチン基礎飼料を与えた。実施例１でコントロールのイヌとして扱われたイヌは、この試験ではＬ−カルニチンを投与するイヌとなった。統計的に比較した場合、実施例１及び２におけるＬ−カルニチン処置群は有意に異ならなかった。

【0154】

[0106]パート１：試験のパート１では、ラブラドールレトリーバー５６匹を、性別、ＢＷ、遺伝学、年齢、興奮レベル、フレームサイズ、及び除脂肪体重に基づき、２８匹からなる２つの等しい群に分割した（オス１４匹、メス１４匹）。イヌは、最低１０匹の異なるメスイヌと、少なくともできるだけ多くのオスイヌの子孫であった。試験を開始する前に、実施例１の記載に従い、除脂肪量、筋肉損傷、及び抗酸化状態についてイヌを試験した。

【0155】

[0107]評価用のイヌを、試験開始時、及びパート１の終了時まで１週間毎に秤量した。食物消費量及び拒絶量を秤量により毎日測定し、また提供した量又は拒絶した量を記録した。各イヌに毎日提供された食物の量は、試験全体を通じてイヌの最低体重維持を目的として調整した。

【0156】

[0108]評価用のイヌに、低Ｌ−カルニチン基礎飼料を、試験開始前の１３日間、次にこの試験のパート１の全１４週間飼育期間において供給した。低Ｌ−カルニチン基礎飼料は、表１に示す通り、Ｌｏｎｚａ社により提供された。

【0157】

[0109]低カルニチン基礎飼料に付加して、ラブラドール犬２８匹が、２５０ｍｇ／日のＬ−カルニチン（バッチ番号Ｄ２３０１３）及び３．７５ｇ／日の糖を服用した一方、ラブラドール犬２８匹は、４ｇ／日の糖を服用した。

【0158】

[0110]評価用のＬ−カルニチン投与したイヌ及び同コントロールのイヌの両方が、２回の均等に振り分けられた耐久走行からなる毎週のランニングプログラムを完了した。６〜１０匹のイヌの群が、各群の両処置群を含め、同時に走行した。耐久走行は、１週間に０．８キロメートル（０．５マイル）ずつ漸増させた（８キロメートル／セッション（５マイル／セッション）を、１１週間かけて、１６キロメートル／セッション（１０マイル／セッション）でまで増加させた）。走行と走行の間で１日、またスケジュールに従い運動距離を増加させる前の３日間、イヌを休息させた。イヌは、第１２週で２回、８キロメートル（５マイル）の、次に第１３週で２回、３．２キロメートル（２マイル）のメンテナンス走行を完了した。すべてのイヌには、第１４週の最終的な２４．１キロメートル（１５マイル）走行前に、少なくとも４日間の休息を設けた。

【0159】

[0111]週の第１の運動セッションは、耐久スタイルのランニングのみからなっていたが、毎週のレジメンに測定可能な無酸素運動を組み込むために、第２のセッションには、１マイルのインターバル毎に短距離１００ｍ全力疾走が含まれた。耐久走行は、脂肪酸化を強化するためにわずかに低速であったが、また最大酸素消費量の５０％〜６５％と同等の運動強度に該当した。

【0160】

[0112]各評価用のイヌは、最後の２４．１キロメートル（１５マイル）耐久走行期間中に、Ａｃｔｉｃａｌ活動度モニター及びＧＰＳ追跡用の首輪を装着した。最終的な走行を、実施例１の場合に類似した方式で実施した。ＧＰＳ追跡用モニターを用いて、すべての活動度を、正確かつ精密に計算した。２４．１キロメートル（１５マイル）耐久走行の直後に、各イヌをイヌ小屋内に配置し、そして体温（１５分毎に２時間）、及び心拍数（１分間当たりの基底心拍数（ＢＰＭ）に達するまで、２分毎に最長２０分）の回復時間について評価した。体温及び心拍数を、実施例１の記載に従い測定した。

【0161】

[0113]試験用のイヌが、最後の２４．１キロメートル（１５マイル）耐久走行を行った後の２４時間において、血清サンプルを採取して、筋肉損傷及び抗酸化状態に関するバイオマーカーを評価した。血液サンプルを、１）試験開始直前；２）第１４週目の最終的な２４．１キロメートル（１５マイル）走行を行う１日前；３）２４．１キロメートル（１５マイル）走行直後の１時間；及び４）最終的な２４．１キロメートル（１５マイル）走行の２４時間後に採取した。血液サンプルを採取した後、これを２５℃で３０分間放置して凝固させ、その後２０００ｇ、４℃で１５分間遠心分離した。血清を０．６５ｍＬの微量遠心チューブ内に定量分取し、そして試験終了時に、実施例１に記載の市販キットを用いて、クレアチンキナーゼ、イヌミオグロビン、チオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）、及び総合的な抗酸化防止能力（ＴＡＣ）についてアッセイが行われるまで、−８０℃で保管した。

【0162】

[0114]また、各イヌを、試験開始直前及び最終的な耐久走行の２４時間後に、実施例１の記載に従い、身体組成についてもスキャンした。
[0115]表２１に示す通り、評価用のイヌが２４．１キロメートル（１５マイル）の最終的な耐久走行を完了するのに要した時間は、処置群の間でほぼ有意であった（コントロールのイヌについて７２．２３分、これに対してＬ−カルニチン投与したイヌの場合７４．９０分、ｐ＝０．０６０）。性別に関して、走行時間は処置群間で有意でなかった。

【0163】

【表27】

【0164】

[0116]全体として、最終的な長距離走行後の心拍数及び体温の回復は、処置群間で異ならなかった（表２２）。長距離走行直後において、Ｌ−カルニチン投与したイヌの平均の１分間当たり心拍数（ＢＰＭ）は、コントロールのイヌの１７８．９３ＢＰＭと比較して、それよりも数値的に高い１８４．２３であった（ｐ＝０．２４６）。最終的な走行後の回復から４分経過時点では、心拍数は、処置群間でほぼ有意に異なり、Ｌ−カルニチン投与したイヌで平均１５６．１５ＢＰＭ、及びコントロールのイヌで平均１４５．２ＢＰＭであった（ｐ＝０．０６３）。しかし、４分間の走行後インターバルにおいて、Ｌ−カルニチン投与したオスの心拍数は、コントロールのオスの心拍数（１３８．１８ＢＰＭ）と比較して、それより有意に高かった（１６０ＢＰＭ）（ｐ＝０．０１４）。回復後の６分経過後には、この心拍数の差異は消散した。Ｌ−カルニチン投与したメスとコントロールのメスの間で、心拍数に有意差は認められなかった。

【0165】

[0117]両群共に、走行後のインターバルにおいて心拍数の継続的減少を示し、また回復には最長２０分を必要とした。最終的な走行直後、Ｌ−カルニチン投与したイヌの心拍数は数値的に高めであるが、それは、２４．１キロメートル（１５マイル）走行期間中に、より過酷な労作を経験したことを示唆する。

【0166】

【表28】

【0167】

[0118]図４Ａ及び４Ｂより、回帰モデルに基づき、Ｌ−カルニチン投与した群全体、並びにＬ−カルニチン投与したオス及びメスは、コントロールのイヌよりも速く基底心拍数に達することが明らかである。

【0168】

[0119]２４．１キロメートル（１５マイル）長距離走行後のいずれのタイムインターバルでも、処置群別又は性別の体温に有意差は認められなかった（表２３）。

【0169】

【表29】

【0170】

[0120]回帰モデルより、Ｌ−カルニチン投与したオスイヌ及びメスイヌは、コントロールのイヌよりも速く基底の温度に達することが明らかである（図５Ａ及び５Ｂ）。
[0121]１４週間試験期間中、いずれのタイムインターバルも問わず、処置群別又は性別の体重に有意差は認められなかった（表２４及び図６）。

【0171】

【表30】

【0172】

[0122]表２５は、試験コース期間中に、毎日提供された食物量（ｇ／日）は、両処置群において数値的に減少したことを示す。図７は、全体的な１日当たりの平均提供食物量は、Ｌ−カルニチン投与した群（６７７ｇ／日）及びコントロール群（６８３ｇ／日）について有意差無しと認められたことを示す。

【0173】

[0123]食物消費量は、第１週（コントロール群の５５４．３２ｇ／日に対してＬ−カルニチン投与群の６１８．２５ｇ／日；ｐ＝０．０５１）、第４週（コントロール群の５７２．９３ｇ／日に対してＬ−カルニチン投与群の６２９．４３ｇ／日；ｐ＝０．０４５）においてのみ、処置群間で有意に異なった。これら２つの週間において、Ｌ−カルニチン投与群の１日の食物摂取量は、コントロール群よりも有意に多かった（表２５）。全体として、図８に認められるように、Ｌ−カルニチン投与群の全体的な１日当たりの平均食物摂取量（５７４ｇ／日）は、コントロールのイヌ（５４０ｇ／日）よりも有意に多いことが実証された（ｐ＜０．０００１）。

【0174】

[0124]表２５及び図９に認められるように、ｇ／日／ｋｇ体重（ＢＷ）の差異は、第１週においてのみ、有意に近かった（コントロール群の１９．４９ｇ／日／ｋｇ ＢＷに対してＬ−カルニチン投与群の２０．９６；ｐ＝０．０９３）。イヌの適応性の向上及び環境温度の上昇を主な理由として、走行距離が延びるに従って、両群の体重（ＢＷ）１ｋｇ当たりの食物消費量は数値的に減少した。ＭＥのｋｃａｌ摂取量における処置群間の差異も、第１週においてのみ有意に近かった（コントロール群の７７．９４ｋｃａｌ／日／ｋｇ ＢＷに対してＬ−カルニチン投与群の８３．８３；ｐ＝０．０９３）。

【0175】

【表31】

【0176】

【表32】

【0177】

[0125]最初の身体スキャン、次に最終的な身体スキャン時に、各群の平均除脂肪量で、その１日の平均食物消費値を割算することにより、除脂肪量１ｋｇ当たりの消費量を求めた。図１０Ａ、Ｂ、及びＣより、処置群間及び性別において、除脂肪量（ＬＭ）１ｋｇ当たりの消費量の全体的な変化は、有意に異なったことが明らかである。

【0178】

[0126]Ｌ−カルニチン投与したイヌにおいて、パート１の開始時から終了時までのＬＭ１ｋｇ当たりの消費量の変化は減少を示したが、これは、試験が進行するに従い、ＬＭ１ｋｇ当たりの食物要求量が低下したことを示唆する；初期の消費量は２６．２４ｇ／日／ｋｇ ＬＭであったが、一方、最終的な消費量は２４．０２ｇ／日／ｋｇ ＬＭであった（ｐ＝０．０７３４）。コントロール群は、消費量の数値的な増加以外、有意な変化を示さなかった（２５．００ｇ／日／ｋｇ ＬＭから２５．５３ｇ／日／ｋｇ ＬＭ）（ｐ＝０．０６５６９）（表２６Ａ及び図１１Ａ）。

【0179】

【表33】

【0180】

[0127]１４週間試験が終了するまでに、Ｌ−カルニチン投与したイヌのＬＭ１ｋｇ当たりの食物摂取量は、コントロールのイヌ（０．５３ｇ／日／ｋｇ ＬＭ）との比較において有意に減少した（−２．２２ｇ／日／ｋｇ ＬＭ）（ｐ＜０．００１）（表２６Ｂ及び図１１Ｂ）。従って、Ｌ−カルニチン投与したイヌの場合、Ｌ−カルニチンの補給は、試験のパート１に関係する激しい運動のために、身体燃料へのアクセスをより容易にしたものと考えられ、これは、食物エネルギーを消費する全体的なニーズの減少を引き起こしたと考えられる。

【0181】

【表34】

【0182】

[0128]Ｌ−カルニチン投与群内のメス及びオスの両方は、ＬＭ１ｋｇ当たりの食物摂取量の有意な減少を示した；これとの比較において、コントロールのオスは、非常に小さい数値上の減少を示した一方、コントロールのメスは、数値的により多くの除脂肪量１ｋｇ当たりの食物を消費した（表２６Ｃ及び図１１Ｃ及びＤ）。コントロールのメスイヌで食物消費量が増加したが、これは、激しい運動レジメン中に自らもたらした細胞傷害及びタンパク質分解の修復に役立つようにその身体を補強する努力に起因すると考えられる。

【0183】

【表35】

【0184】

[0129]全体として、コントロール群の活動度の数値は、１４週間試験コース全体を通じて高めであった。図１２Ａ及び１３Ａが示すように、コントロール群の活動度／マイル／ｋｇ ＢＷ（ＡＰＭ／ｋｇ）及び活動度／マイル（ＡＰＭ）は、Ｌ−カルニチン投与群よりも有意に高い数値であった。コントロールのメスイヌ又はＬ−カルニチン投与したイヌのＡＰＭ／ｋｇ又はＡＰＭの間で有意差は認められなかったが、コントロールのオスイヌは、Ｌ−カルニチン投与したオスイヌより有意に高いＡＰＭ／ｋｇ及びＡＰＭを示した（図１２Ｂ及びＣ及び１３Ｂ及びＣ）。これらの結果は、図１４Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤの活動度のグラフ及び走行回帰モデルに反映されている。

【0185】

[0130]しかし、交差試験における活動度の差異に目を向けると、実施例１ではＬ−カルニチン投与したイヌであったコントロールのイヌ１７匹と比較したとき、実施例１ではコントロールのイヌであったＬ−カルニチン投与したイヌ１９匹の活動度の増加は、ＡＰＭ／ｋｇ及びＡＰＭの両方において有意に高かった（図１５Ａ及びＢ）。Ｌ−カルニチン投与したイヌ（実施例１のコントロールのイヌ）のＡＰＭは２７，６９７であり、またＡＰＭ／ｋｇは９７５であった。これとの比較において、コントロールのイヌ（実施例１のＬ−カルニチン投与したイヌ）のＡＰＭは１８，８６７であり、またＡＰＭ／ｋｇは６８９であった（それぞれ、ｐ＝０．０４８８８及びｐ＝０．０２２８）。

【0186】

[0131]両群の活動度の数値は、実施例１で収集したデータから有意な増加を示した。Ｌ−カルニチン投与したイヌは、１３６３から２２７４へのＡＰＭ／ｋｇの増加（ｐ＜０．０００１）を示したが、一方、コントロールのイヌは、１８００から２４００まで増加した（ｐ＜０．０００１）。また、Ｌ−カルニチン投与したイヌでは、３７，６２１から６３，２７２へのＡＰＭの増加を示したが（ｐ＜０．０００１）、一方コントロールのイヌでは、５１，８６１から６７，４５６に増加した（ｐ＜０．００１）。これらの結果は、図１６のＡとＢ、及び図１７のＡとＢの活動度のグラフ及び走行回帰モデルに反映されている。

【0187】

[0132]交差試験でＬ−カルニチン投与したイヌのＡＰＭ及びＡＰＭ／ｋｇは増加したが、それはコントロールのイヌと比較したときに、カルニチン投与したイヌが経験する交差試験上の増加において、Ｌ−カルニチンが重要な役割を演じていることを示す。更に、各処置群における活動度の増加の一部は、本試験において、１マイル当たりのイヌの活動度を測定する際に、各イヌが走行した実際の距離（マイル）をより正確に計算できるようにしたＧＰＳ追跡用の首輪の利用に起因し得る。

【0188】

[0133]表２７には、トレーニング及び運動の異なる段階における血清バイオマーカー（クレアチンキナーゼ、ミオグロビン、ＴＢＡＲＳ、及びＴＡＣ）それぞれに関する処置別及び性別・処置別の平均値が含まれる（ベースライン、走行前、走行の１時間後、及び走行の２４時間後）。血中バイオマーカーの変化は、イヌについて個別の検討を可能にし、またＬ−カルニチンが、走行期間中の筋肉損傷を最低限に抑えるだけでなく、最終的な走行と関係するストレスに起因する膜の過酸化の抑制にも役立つのことの更なる裏付けも提供する。全体として、バイオマーカーにより、Ｌ−カルニチン投与したオスイヌ及びメスイヌの両方において、最終的な長距離走行期間中の筋肉損傷がより少なかったことは明らかである。

【0189】

【表36】

【0190】

[0134]クレアチンキナーゼ（ＣＫ）値を、図１８に示す通り、各タイムインターバルにおいて、処置群間差について比較した。耐久走行後インターバルの１時間において、ＣＫ値は、Ｌ−カルニチン投与群及びコントロール群について、走行前の数値から１０．８１ユニット及び１０．３５ユニットそれぞれ上昇した。しかし、走行後インターバルの２４時間において、Ｌ−カルニチン投与群のＣＫ値は有意に減少した（２６．３９から２３．０６ｍＵ／ｍＬ）一方、コントロール群のレベルは、継続して増加した（２６．６３から２８．３７ｍＵ／ｍＬ）（ｐ＝０．００２８）。コントロール群でのＣＫ値の増加は、最終的な耐久走行後の２４時間において筋肉が損傷したことによる継続的なタンパク質の漏損を示唆する（表２７）。

【0191】

[0135]ミオグロビン値も、図１９に示す通り、処置群間差について比較した。両方の走行後タイムインターバルにおいて、運動後のミオグロビン値の増加が認められ、それは有意とみなされた（走行の１時間後：Ｐ＜０．００１、及び走行の２４時間後：Ｐ＝０．０００４）。走行後の１時間タイムインターバルにおいて、Ｌ−カルニチン投与したイヌの２３．８３ｎｇ／ｍＬと比較して、コントロール群の血清ミオグロビン値は３７．９１ｎｇ／ｍＬであり、有意に上昇した（ｐ＝０．０１５７）。走行後の２４時間タイムインターバルにおいて、コントロール群は、Ｌ−カルニチン投与群（９．２５ｎｇ／ｍＬ）よりも有意に高いミオグロビンレベル（１３．５ｎｇ／ｍＬ）をなおも維持したが、同コントロール群のミオグロビンレベルは走行前のレベルまで下落した。従って、両群は共に、筋肉傷害を受けたことを示すミオグロビンレベルの上昇を経験したが、Ｌ−カルニチン投与群では、走行の２４時間後にミオグロビンレベルは有意に減少しており、それは、被った損傷がコントロールのイヌより少ないこと、またコントロールのイヌより速く回復したことを示唆した（表２７）。特に、コントロールのメスのミオグロビン増加は最大であり、骨格筋破壊及びタンパク質分解に対する直接的な反応を示唆する。

【0192】

[0136]試験の進行に従い、血清中のチオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）のレベルが、運動に伴う筋肉が被る自然な損傷に起因して両群において高まった（図２０）。２４．１キロメートル（１５マイル）耐久走行前に、Ｌ−カルニチン投与群は、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）１５．３６μＭの平均ＴＢＡＲＳレベルを有したが、これは、コントロール群のＭＤＡ２３．４２μＭより有意に低かった（ｐ＝０．００１３）。耐久走行後、Ｌ−カルニチン投与群では、コントロール群よりも有意に低いレベルのＭＤＡが、走行後の１時間インターバルにおいて見出された（ＭＤＡ２０．６５μＭに対して１６．４５μＭ；ｐ＝０．０５６１）（表２７）。Ｌ−カルニチン投与群ではＭＤＡレベルが低いが、それは、最終的な長距離走行における酸化ストレス期間中、Ｌ−カルニチン投与したイヌでは、脂質過酸化の進行速度がかなり低いことを示唆する。これと比較して、コントロール群ではＭＤＡレベルが上昇したが、それは、コントロールのイヌでは、脂質生成物がかなり速い速度で分解されていることを示唆する。メスイヌではＴＢＡＲＳのレベルはより高いが、それは、膜の脂質分解がより多く生じたことを示唆し、最終走行後のメスでは、ミオグロビンが有意に増加することと整合する。

【0193】

[0137]基底レベルとの比較において、両群の総合的な抗酸化能力（ＴＡＣ）は、１４週間増加式トレーニングレジメンを通じて減少したが、抗酸化能力の数値は、走行後の２４時間インターバルにおいて有意に増加した（図２１）。走行後の２４時間インターバルにおいて、Ｌ−カルニチン投与群のＴＡＣレベルは、０．１６（ｍＭトロロックス当量）に達した一方、コントロール群のＴＡＣレベルは、０．１３（ｍＭトロロックス当量）まで低下した（ｐ＝０．０４９６）。コントロール群ではＴＡＣレベルが低下したが、それはコントロールのイヌは、２４．１キロメートル（１５マイル）の最終的な耐久走行の際に関係する酸化ストレスに対処するために、抗酸化能力を使用してフリーラジカルを中和しなければならなかったことを示唆する（表２７）。

【0194】

[0138]投与群別及び性別のＣＫ、ミオグロビン、ＴＢＡＲＳ、及びＴＡＣ値を図２２Ａ及びＢにまとめる。
[0139]表２８は、評価用のイヌの身体組成を示す。脂肪割合（％）、総組織重量（ｋｇ）、除脂肪量（ＬＭ）（ｋｇ）、骨ミネラル含量（ＢＭＣ）のグラム数、脂肪（ｋｇ）、及びｇ／ｃｍ^２を、性別、処置群別、及び時間別で報告した。

【0195】

【表37-1】

【0196】

【表37-2】

【0197】

[0140]除脂肪量を維持及び増加する能力に起因して、コントロール群の総組織重量の喪失（−０．１２ｋｇ）との比較において、Ｌ−カルニチン投与群では、総組織重量の有意な増加（０．７４ｋｇ）が認められた（ｐ＝０．０００６）（図２３Ａ及びＢ；図２４Ａ）。Ｌ−カルニチン投与群のオス及びメス両方共に、統計的に有意な総組織重量の増加を経験した（それぞれ０．７０ｋｇ；ｐ＝０．０２６８及び０．７８ｋｇ；ｐ＝０．０１１７、）。コントロール群のメスは、０．２２ｋｇの総組織重量の喪失を経験した一方、コントロールのオスでは、パート１の終了時までに総組織重量の変化は本質的に生じなかった（０．０１ｋｇ）（図２４Ｂ及びＣ）。オス、メス両方及び両処置群は、脂肪量（ｋｇ）及び脂肪割合（％）について、わずかな数値上の増加を経験した。Ｌ−カルニチン投与したメスイヌは、脂肪量割合（％）について、コントロールのメスと比較してこれより数値的に低い増加（３．０１％に対して１．５８％）を示したが（ｐ＝０．３８９３）、それは、Ｌ−カルニチン投与したメスは、燃料として脂肪を活用することが可能であった一方、コントロールのメスは、脂質の過酸化及びタンパク質分解の増加を経験したことを示す（表２８）。全体として、総重量、脂肪割合（％）、骨ミネラル含量、及び骨ミネラル密度の増加は、両群間で統計的に有意とみなされなかった。

【0198】

[0141]試験期間を通じて、両処置群内のイヌ及びオス、メス両方のイヌでは、特定の処置群において、除脂肪量変化と同時期に総組織重量変化が生じた（図２３Ａ及びＢ）。図２５Ａに示す通り、Ｌ−カルニチン投与したイヌのＬＭは、平均０．６８ｋｇ増加した一方、コントロールのイヌでは０．４１ｋｇ減少した（ｐ＜０．０００１）。Ｌ−カルニチン投与したメスイヌのＬＭは、０．４５ｋｇ増加した一方、コントロールのメスイヌのＬＭは０．８４ｋｇ減少した（ｐ＝０．０００６）（図２５Ｂ）。図２５Ｃに示すように、試験コース期間中に、Ｌ−カルニチン投与したオスイヌのＬＭは、０．９１ｋｇ増加した一方、コントロールのオスイヌのＬＭは、０．０９ｋｇ増加したに過ぎない（ｐ＝０．００５０）。これらの結果より、Ｌ−カルニチンは、除脂肪筋肉量の増加を引き起こし得るだけでなく、労作中のラブラドールレトリーバーにおける筋肉損傷を効果的に保護及び予防し得ることが明らかである。

【0199】

[0142]パート２：試験のパート２では、Ｌ−カルニチンは、骨格筋破壊速度を低下させることが明らかとなった。年齢が１．５〜４．５歳のラブラドールレトリーバー２６匹を、試験のパート１から選択し、そして試験のパート１終了後、更に６０日間飼育した。試験用のイヌは、前回の処置群にそのままとどまった。試験のパート１期間中に得られた、Ａｃｔｉｃａｌ運動／ｋｇ ＢＷ／マイル耐久走行に関する測定値を、コントロール群及びＬ−カルニチン投与群の両方が、潜在的なパフォーマンスについて等しいことを保証するのに利用した。群が等しいことを保証するための追加指標として、試験用のイヌの除脂肪体重を、ＤＥＸＡを用いたスキャニングにより測定した。イヌ１２匹（オス６匹及びメス６匹）を各処置群に割り振った。追加のイヌ２匹（オス１匹及びメス１匹）に、コントロール群の低カルニチン基礎飼料を与え、これを試験期間中に同位体濃縮されなかったコントロールとして用いた；これらのコントロールのイヌ２匹を、サンプル中の１５Ｎ Ｐｈｅの本来の量を測定するのに用いた。

【0200】

[0143]６０日トライアル期間中、試験のパート１に類似した方式で、Ｌ−カルニチン補給有り又は無しで、低カルニチン基礎飼料を試験用のイヌに与えた。最終的な筋生検及び血液収集前の３日間、すべての試験用のイヌに、低カルニチン基礎飼料と同等の栄養分規格を有するＰｕｒｉｎａ ＬａｂＤｉｅｔ社製「オール・ベジタリアン・プラス・エッグ（ａｌｌ ｖｅｇｅｔａｒｉａｎ ｐｌｕｓ ｅｇｇ）」食を与えた。ＧＣ−ＭＳ解析より、「オール・ベジタリアン・プラス・エッグ」食は３−メチルヒスチジンを含まないことが明らかになった。

【0201】

[0144]各イヌの身体組成を、試験のパート１の第１日目に１度、及びパート２終了後に再度、実施例１の記載に従い測定した。試験用のイヌを、やはりパート１と同様に秤量した。

【0202】

[0145]各群のイヌは、全力疾走及び耐久型の運動の両方に対応する２つの異なる種類の運動プログラムを、毎週完了した。毎週２回実施された耐久走行は、１回の走行につき８キロメートル（５マイル）から開始し、１週毎に１．６キロメートル（１マイル）増加して、第６週目に１回の走行につき１６キロメートル（１０マイル）の距離に延長された。第７週目の期間中、第１回目の耐久走行は８キロメートル（５マイル）であったが、第２回目は、３．２キロメートル（２マイル）の漸減式の走行であった。６０日の期間中、毎週、第１回目の耐久走行は有酸素能力を高める定常走行であったが、一方、第２回目の耐久走行は、ファルトレク走又はスピードプレイ走が混在する定常走行であった。毎週実施されたファルトレク走は、毎週実施された耐久走行のうちの１回の総距離の２０％を占め、また全力疾走型ファルトレク走の総距離は、各耐久走行の距離が毎週延びるに従い増加した。パート１と同様に、毎週実施された定常耐久型走行は、最大酸素消費量の５０％〜６５％と同等のペースであった。

【0203】

[0146]各イヌは、各走行全体を通じて運動の評価及び追跡を行うために、Ａｃｔｉｃａｌモニター及びＡｓｔｒｏ ３２０レシーバーに接続したＧａｒｍｉｎ Ａｓｔｒｏ ＤＣ５０を装着した。各デバイスから得たデータをコンピューターにダウンロードして、各イヌについて実際のＡｃｔｉｃａｌ活動度／ｋｇ ＢＷ／マイルを計算した。

【0204】

[0147]イヌ１２匹（オス３匹及びメス３匹のコントロールのイヌ及びオス３匹及びメス３匹のＬ−カルニチン投与したイヌ）が、最終的な２４．１キロメートル（１５マイル）時間計測耐久走行に参加した。２４．１キロメートル（１５マイル）走行後、実施例１と同様に、イヌの心拍数及び体温を測定した。

【0205】

[0148]コントロールのイヌ８匹（オス４匹及びメス４匹）及びＬ−カルニチン投与したイヌ６匹（オス３匹及びメス３匹）は、最終的な２４．１キロメートル（１５マイル）耐久走行に参加しなかった。これらのイヌが示した生理学的状態は、試験にとって熟練的及び休息的であった。

【0206】

[0149]６０日トレーニングプログラムの終了時に、１５Ｎ Ｐｈｅを大量瞬時投与方式でイヌ２４匹（休息中１２匹及びランニング中１２匹）に輸液した。最初に、休息中の試験用のイヌ１２匹に、２％の１５Ｎ Ｐｈｅ（１０５ｍＬ／イヌ）溶液（４０ＡＰＥ）を１０分間にわたり、７０ｍｇ／ｋｇ ＢＷ（４０ＭＰＥ）の速度で輸液した。輸液後４５分において、５ｍｍのＢｅｒｇｓｔｒｏｍ筋生検針を、大腿二頭筋の生検を採取するのに用いた。液体窒素中で筋肉サンプルを速やかに凍結し、後の解析用として−８０℃のフリーザー中に配置した。

【0207】

[0150]休息中のイヌに１５Ｎ Ｐｈｅを輸液した後、２４時間において、残りのイヌ１２匹（非カルニチン投与犬６匹；オス３匹及びメス３匹、並びにＬ−カルニチン投与犬６匹；オス３匹及びメス３匹）に、２４．１キロメートル（１５マイル）耐久走行を行わせた。生理学的な回復（心拍数及び体温）を３０分間測定した後、２４．１キロメートル（１５マイル）走行を完了した試験用のイヌに上記したように２％の１５Ｎ Ｐｈｅ溶液を輸液した；輸液の４５分後に、筋肉生検を採取した。

【0208】

[0151]低カルニチン基礎飼料が与えられたコントロールのイヌのうちの２匹について、他の試験用のイヌと同様に生検採取されたが、これには、生検前に１５Ｎ Ｐｈｅが輸液されなかった。これらのイヌは、この試験では、トレーニングを受けたが、安定同位体の輸液を受けなかったコントロールに相当した。

【0209】

[0152]血液サンプルを、試験用のイヌの頸動脈から採取し、３ＭＨについて分析した。血液中に見出された３ＭＨが、骨格筋タンパク質破壊を相当することを保証するために、血液サンプルを採取する前の３日間、Ｐｕｒｉｎａ ＬａｂＤｉｅｔ社製「オール・ベジタリアン・プラス・エッグ」非肉質食をイヌに与えた。

【0210】

[0153]サンプルを処理するために、２％（ｗ／ｖ）過塩素酸を添加して、遊離アミノ酸を含有する酸可溶性分画を除去した。ホモジナイゼーション後、サンプルを３，０００×ｇで遠心分離し、遊離アミノ酸を含有する上清を除去した。タンパク質析出物を２％の過塩素酸で３回洗浄した後、６ＮのＨＣＬ中で加水分解した。上清及び析出物それぞれを、次にＤｏｗｅｘ ５０ＷＸ８−２００が充填されたイオン交換カラムに通した。フェニルアラニン及び３−メチルヒスチジン（３−ＭＨ）を４ＮのＮＨ４ＯＨ、２ｍＬ、及びｎａｎｏｐｕｒｅ Ｈ_２Ｏ、１ｍＬで、新規バイアル中に溶出し、次に真空下で乾燥した。８００μＬのＣ２ＣＨ３ＣＮ−ＭＴＢＳＴＦＡ（１：１）を添加し、１１０℃で６０分間インキュベーションして、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ｔＢＤＭＳ）誘導体を形成した。

【0211】

[0154]筋肉サンプルのタンパク質析出物及び遊離アミノ酸の分析を、Ａｇｉｌｅｎｔ ６９７５Ｃ質量分析装置に連結したＡｇｉｌｅｎｔ ７８９０Ａ ＧＣシステム上で実施した。ヘリウムを、１ｍＬ／分でキャリヤガスとして用いた。１μＬの容量をスプリットレスモードのＧＣ／ＭＳに注入した。オーブン温度は、１５０℃より開始し、５０℃／分で上昇させて２００℃に達すると、以後、温度は２０℃／分で上昇させて２７０℃に達するようにした。温度を２７０℃で５．５分間維持した。質量分析装置をＥＩ及びＳＩＭモードで稼働した。フェニルアラニンのＭ及びＭ＋１フラグメントに該当する３９４及び３９５ｍ／ｚフラグメントをモニタリングした。

【0212】

[0155]同一の質量分析装置を、３−ＭＨを測定するのに用いた。ヘリウムを、１ｍＬ／分でキャリヤガスとして用い、そして１μＬの容量を、スプリットレスモードのＧＣ／ＭＳに注入した。オーブン温度を１１０℃にて０．６５分間維持し、次に２５０℃に達するまで３０℃／分で上昇させた。温度を２５０℃で１０分間維持した。３−ＭＨの２３８ｍ／ｚフラグメントをモニタリングした。

【0213】

[0156]筋肉サンプルをタンパク質分解率（ＦＢＲ）について分析した。ＦＢＲは、ｋｄ＝３−ＭＨの１日排泄量／３−ＭＨの筋肉プール量×１００として計算した。表２９は、性別及び運動状態について調整を行ったとき、イヌにＬ−カルニチンを与えるとＦＢＲが３．７０％から１．９２％に低下したことを示す（ｐ＝０．０４２）。Ｌ−カルニチン投与した試験用のイヌではＦＢＲは低下するが、それは、タンパク質分解の減少を示しており、Ｌ−カルニチンが存在すると筋肉破壊が阻止されることを示唆する。従って、走行期間中に分解した筋肉量がより少ないことから、Ｌ−カルニチン投与した試験用のイヌの除脂肪量は、試験のパート１期間中に増加した。

【0214】

【表38】

【0215】

全体として、メスのＦＢＲはオスより有意に高かった（Ｍの１．９３に対してＦの３．７０；ｐ＝０．０４４）（表３０）。

【0216】

【表39】

【0217】

[0157]表３１では、運動したメスイヌのＦＢＲは、運動しなかったメスイヌ、又は運動の有無によらずオスイヌより有意に高かった（ｐ＝０．０３８）。

【0218】

【表40】

【0219】

[0158]表３２は、運動を行ったＬ−カルニチン投与したメスのＦＢＲは、運動を行ったコントロールのイヌより有意に低く；Ｌ−カルニチン投与したメスのＦＢＲが３．２６％であったのと比較して、耐久走行を行ったコントロールのメスイヌが有した骨格筋のＦＢＲは７％であった（％タンパク質分解率／日）（ｐ＝０．０４６）ことを示す。

【0220】

【表41】

【0221】

[0159]Ｌ−カルニチンを与えた走行経験したオスのＦＢＲが１．２６％であったのと比較して、低Ｌ−カルニチン食を与えた走行経験したオスイヌが有した骨格タンパク質のＦＢＲは５．０４％であったが、それは、運動を行ったコントロールのイヌのＦＢＲは、運動を行ったＬ−カルニチン投与したオスのＦＢＲよりほぼ有意に高いことを示唆する（表３３）。

【0222】

【表42】

【0223】

[0160]また、筋肉サンプルを、タンパク質合成率（ＦＳＲ）についても分析した。ＦＳＲは、ｋｓ＝ＡＰＥｂ／ＡＰＥｆ×１／ｔ×１００として計算したが、式中、ＡＰＥｂ＝タンパク質に含まれるフェニルアラニンの１５Ｎ原子の過剰割合（％）（天然存在量と関連して）；ＡＰＥｆ＝前駆物質プールと仮定した組織に含まれる遊離フェニルアラニンの１５Ｎ原子の過剰割合（％）；及びｔ＝時間［日］である。コントロールのイヌとの比較において、骨格タンパク質の％ＦＳＲは、Ｌ−カルニチン投与したオス又はメスイヌでは増加しなかった。カルニチン投与群及びコントロール群の両処置群に由来する休息状態のイヌが示した骨格タンパク質の％ＦＳＲは、２４．１キロメートル（１５マイル）走行直後に評価したイヌと比較して数値上増加した（表６）。いずれの処置群においてもそれらの群間で％ＦＳＲに有意差が認められないのは、Ｌ−カルニチンは、タンパク質合成には関わらず、従って除脂肪筋肉量の形成において重要な役割を演じていないことを示す。

【0224】

【表43】

【0225】

[0161]パート３：試験のパート３では、Ｌ−カルニチンは、試験用のメスイヌの酸素消費量及びエネルギー消費量を増加させることが明らかとなった。年齢が１．５〜３歳のラブラドールレトリーバー１６匹に、低カルニチン基礎飼料をＬ−カルニチン添加有り、無しで、試験のパート１及び２を含む３７週間与えた。実験期間中、毎日、Ｌ−カルニチン投与した試験用のイヌ８匹（オス４匹及びメス４匹）それぞれに、糖３．７５ｇ及びＬ−カルニチン２５０ｍｇを与えた一方、他のイヌ８匹（オス４匹及びメス４匹）には、糖４ｇのみを与えた。試験のパート１、２、及び３において、試験用のイヌ１６匹に、同一の飼料を与えた。

【0226】

[0162]試験のパート２期間中に、試験用のイヌを、その体重、ランニング能力、遺伝学、及び身体組成に基づき選択した。等しい数のオスイヌ及びメスイヌを、各群について選択した。また、試験用のイヌを、ヒト用の（５３ｃｍ×１２７ｃｍ（２１インチ×５０インチ））トレッドミル上でのランニングにおける初期の能力に応じて選択した。

【0227】

[0163]試験のパート１及び２の期間中に、試験用のイヌ１６匹が、屋外を８〜２４．１キロメートル（５〜１５マイル）、各群の他のイヌと共に、１週間に２回走行した。
[0164]試験のパート２期間中、Ｏｘｙｍａｘ熱量測定システムに接続した酸素／二酸化炭素マスクに耐えるようにイヌを慣れさせるために、試験用のイヌ１６匹をトレッドミル、及びストラップを有するプラスチックコーンを備えた模擬的マスクに導入した。イヌは、特別仕様のＮｅｘｆｉｔイヌ用トレッドミル（０．９ｍ×２．７ｍ（３６インチ×９フィート））上で走行するトレーニングも受けた。Ｏｘｙｍａｘを装着してトレッドミル上で走行することを快適に感じるまで熟達するのにイヌが要した時間は異なったが、すべての試験用のイヌは、データ収集が開始したときには、マスク及びトレッドミルの両方に順応した。

【0228】

[0165]試験のパート３期間中、試験用のイヌ１６匹は、業界サイズのイヌ用トレッドミル上でもっぱら運動した。最大酸素消費濃度を実現するのに必要とされる、トレッドミル上でのふさわしいスピードを決定するために、様々な時間及びスピードで、試験用のイヌそれぞれについて初期のＯｘｙｍａｘデータを取得した。イヌを１０．５ｋｍｐｈ（６．５ｍｐｈ）で１５分間走行させて、最大酸素消費量を求めた。次に、試験用のイヌ１６匹を、トレッドミル上で３０分間、最大酸素消費量の５０％（６．４ｋｍｐｈ（４ｍｐｈ）と同等）で走行させて、全エネルギー消費量（熱産生量）を求めた。

【0229】

[0166]酸素消費容量及びエネルギー消費量に関する情報を取得するのに用いたシステムは、オープンサーキット型熱量計であったが、これは周辺環境に由来する空気を利用した。イヌ専用に設計されたマスクを、ガスサンプルの回収及びイヌの人工呼吸に用いた。少量のサンプルをガス分析用に採取し、これを乾燥して、チャンバーから排出された水蒸気の影響を受けなかったサンプルについて読み取りが行われたことを保証した。Ｏ_２及びＣＯ_２センサーをソフトウェアと接続し、そしてＯ_２及びＣＯ_２の値を直ちに測定した。

【0230】

[0167]試験用のイヌ１６匹（Ｌ−カルニチン投与したイヌ８匹、オス４匹及びメス４匹、及びコントロールのイヌ８匹、オス４匹及びメス４匹）を、最大酸素消費量、１０．５ｋｍｐｈ（６．５ｍｐｈ）で１５分間走行させる前に、３．２ｋｍｐｈ（２ｍｐｈ）のウォームアップスピードで５分間運動させた。翌週、試験用のイヌは、３．２ｋｍｐｈ（２ｍｐｈ）のウォームアップスピードで５分間再度走行し、次に最大酸素消費量の５０％にて、６．４ｋｍｐｈ（４ｍｐｈ）で３０分間走行した。

【0231】

[0168]ガス交換に関する統計分析を、要因分析法２×２（２性別及び２食餌療法）、並びに２×２×２（２性別、２食餌、２スピード）により、ｐ値＜０．０５で実施した。変数である、最大酸素消費量（Ｍａｘ ＶＯ_２）は、運動時間中の最高酸素消費量であった。平均酸素消費量（Ｍｅａｎ ＶＯ_２）は、運動時間中の平均的な酸素消費量であった。酸素消費量は、Ｌ／ｋｇ ＢＷ／時として報告した。

【0232】

[0169]エネルギー消費量をイヌ用の式を用いて計算した（ＥＥ（ｋｃａｌ／日）＝３．９４ＶＯ_２＋１．１１ＶＣＯ_２）（Ｗｅｉｒ、１９９０年）。最大及び平均エネルギー消費量も計算した。エネルギー消費量は、イヌに関する文献で通常表される、Ｋｃａｌ／代謝体重（Ｋｇ^０．７５）／日にて報告した。

【0233】

[0170]表３５は、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌの酸素消費量及び最大酸素消費量におけるエネルギー消費量が、低Ｌ−カルニチン投与したメスイヌより高かったことを示す。Ｌ−カルニチン投与したメスイヌの最大酸素消費量は、１０．５ｋｍｐｈ（６．５ｍｐｈ）において最高値に達した（３．６５Ｌ／Ｋｇ／時）；１０．５ｋｍｐｈ（６．５ｍｐｈ）におけるその平均酸素消費量は３．１１Ｌ／ｋｇ／時であった（ｐ＝０．０６）。低−カルニチン投与したメスイヌの最大酸素消費量は、１０．５ｋｍｐｈ（６．５ｍｐｈ）において最低であり（２．６１Ｌ／ｋｇ／時）（ｐ＝０．１１６）、また平均酸素消費量も最低であった（２．４６Ｌ／ｋｇ／時）（ｐ＝０．０６）。

【0234】

【表44】

【0235】

[0171]試験用のメスイヌについて、そのエネルギー消費量の最大値及び平均値は有意でなかった（それぞれｐ＝０．１９７及び０．１２７）。Ｌ−カルニチン投与したメス及び低カルニチン投与したイヌの最大エネルギー消費量は、９６１及び６９３であり、並びに平均エネルギー消費量はそれぞれ８１５及び６５１ｋｃａｌ／ｋｇＢＷ^０．７５／日であった（表３５）。このように、１０．５ｋｍｐｈ（６．５ｍｐｈ）においてエネルギー消費量に有意差は認められなかったが、それは、酸素呼吸ではなく無酸素呼吸が生じたことに起因し得る。

【0236】

[0172]表３６は、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌの酸素消費量、及び最大酸素消費量の５０％におけるエネルギー消費量もまた、低Ｌ−カルニチン投与したメスイヌよりも高かったことを示す。Ｌ−カルニチン投与したメスイヌは、最大酸素消費量の５０％において、酸素消費量の最大値を有した（２．５２Ｌ／Ｋｇ／時）。Ｌ−カルニチン投与したメスイヌは、最大酸素消費量の５０％において、平均酸素消費量１．９９Ｌ／Ｋｇ／時（ｐ＝０．１０５）を有した。これと比較して、低−カルニチン投与したメスイヌは、最大酸素消費量の５０％において、最大酸素消費量の最低値を有し（２．０８Ｌ／Ｋｇ／時）、また最大酸素消費量の５０％において、平均酸素消費量の最低値を有した（１．７５Ｌ／Ｋｇ／時）。

【0237】

【表45】

【0238】

[0173]Ｌ−カルニチン投与したメスイヌの最大及び平均エネルギー消費量は、最高値を示した（それぞれ７９４及び５９８ｋｃａｌ／Ｋｇ／時）一方、低カルニチン投与したメスイヌの最大及び平均エネルギー消費量は最低値を示した（５２３及び４７６ｋｃａｌ／Ｋｇ／時）。低カルニチン投与したメスと比較して、Ｌ−カルニチン投与したメスのエネルギー消費量のこのような有意な増加は、Ｌ−カルニチンは、延長された運動期間において、試験用のメスイヌに脂肪酸を燃料として提供したことを示す（表３６）。試験のパート１及び２の延長期間中に広範なトレーニングが行われたが、おそらくはこれを理由として、試験用のメスイヌは、筋肉内の燃料不足を代謝的に感知し、運動の初期において脂肪動員を開始した。

【0239】

[0174]試験のパート２の平均的なメスイヌの重量は２７．３２ｋｇであった。１日当たり２５０ｍｇのＬ−カルニチンを消費し、最大酸素消費量の５０％において走行したメスのラブラドールレトリーバーでは、非Ｌ−カルニチン食を消費したメスのラブラドールレトリーバーと比較して、１２２ｋｃａｌ／ｋｇ ＢＷ^０．７５／日の追加の熱放出が生じた。本試験では、平均的なメスのラブラドール犬に関するＬ−カルニチンの余分なエネルギー値は、１４５８ｋｃａｌ／日又は６０．７４５ｋｃａｌ／時と同等であった。低カルニチン基礎飼料の平均ｋｃａｌ ＭＥ／ｇは、４ｋｃａｌである。最大酸素消費量の５０％（６．４ｋｍｐｈ（４ｍｐｈ））において１時間走行した労作中のメスの場合、セーブされた低カルニチン基礎飼料の量は、１５．１８ｇである。

【0240】

[0175]低カルニチン食を与えられたメスでは、走行を継続するために骨格筋のタンパク質分解率が増加する（２×）ことが、パート２のタンパク質代謝回転試験において明らかであるが、このようなＯｘｙｍａｘデータは、その裏付けとなる。Ｌ−カルニチンを与えられたメスは、Ｌ−カルニチンの形態で、自らの燃料を動態化した脂肪酸として得ていたので、Ｌ−カルニチンが与えられたメスは、筋肉タンパク質を分解する必要がなかった。

【0241】

[0176]最大酸素消費量の５０％における飼料×性別のｐ値は０．０８８であった。最大酸素消費量の５０％において、エネルギー消費量の数値は、食物×性別交互作用について極めて有意であった（ｐ＝０．０２６及び０．０２５）。オス、メス両方について、最大酸素消費量の５０％における最大エネルギー消費量に対する飼料効果は、ほぼ有意であった（ｐ＝０．０６８）（表３６）。

【0242】

[0177]表３５及び３６に示す通り、Ｌ−カルニチン投与及び低カルニチン投与のオスイヌは、最大及び平均エネルギー消費量について有意に異ならなかった。短時間の３０分試験において、試験用のオスイヌは、燃料（グリコーゲン）に制限はないと考えられ、従って追加の脂肪酸を動態化する必要はない。更に、メスのラブラドール犬との比較において、オスのラブラドール犬は、労作期間中の燃料利用区分において、それほど効率的でない可能性がある。追加の脂肪が動態化されず、燃料に利用される場合には、酸素消費量及び熱放出量は低下する。従って、オスイヌの場合、Ｌ−カルニチンによる追加の熱放出を生み出すためには、最大酸素消費量の５０％における追加の走行時間が必要とされ得る。

【0243】

[0178]両方のスピード（最大酸素消費量の５０％の場合６．４ｋｍｐｈ（４ｍｐｈ）、及び最大酸素消費量の場合１０．５ｋｍｐｈ（６．５ｍｐｈ））で走行する処置群のイヌの最大酸素消費量、平均酸素消費量、最大熱放出量、及び平均熱放出量について、これらを組み合わせた平均データより、スピードが各変数について有意差を生み出したことが明らかとなった（表３７）。最大酸素消費量（ｐ＝０．０４）及び平均酸素消費量（ｐ＝０．０２）は、飼料と性別の交互作用についてスピードを組み合わせた場合、いずれも有意であった。スピード（最大酸素消費量の５０％の場合６．４ｋｍｐｈ（４ｍｐｈ）、及び最大酸素消費量の場合１０．５ｋｍｐｈ（６．５ｍｐｈ））を組み合わせた平均の場合、Ｌ−カルニチン投与したメスイヌの酸素消費量の最大値は３．０２Ｌ／Ｋｇ／時であり、また酸素消費量の平均値は２．５０Ｌ／ｋｇ／時であった。低カルニチン投与のメスイヌの場合、スピードを組み合わせた酸素消費量の最大値及び平均値は、それぞれ２．３４及び２．１０Ｌ／ｋｇ／時であった。最大酸素消費量の５０％及び最大酸素消費量を組み合わせた労作におけるエネルギー消費量の最大値及び平均値は、飼料×性別の交互作用について、有意に近かった（それぞれｐ＝０．１０７及び０．０５８）。

【0244】

【表46】

【0245】

本発明の態様
態様１
活動的な哺乳動物の身体活動中及び身体活動後に骨格筋損傷及び／又は酸化ストレスを軽減する方法であって、該哺乳動物に有効量のＬ−カルニチンサプリメントを投与すること含む方法。
態様２
態様１に記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、アミノ酸サプリメントを投与せずに投与される方法。
態様３
態様１に記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、少なくとも１〜３日毎に投与される方法。
態様４
態様１に記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが毎日投与される方法。
態様５
態様１〜４のいずれかに記載の方法であって、Ｌ−カルニチンが、該哺乳動物に１回当たり３０ミリグラム〜５，０００ミリグラムの量で投与される方法。
態様６
態様１〜５のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが経口投与される方法。
態様７
態様１〜６のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、食物組成物と併用され、哺乳動物に投与される方法。
態様８
態様１〜７のいずれかに記載の方法であって、該哺乳動物がイヌである方法。
態様９
態様１〜８のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが投与される該活動的な哺乳動物が、その予想される寿命の約５％〜約８０％の年齢を有する方法。
態様１０
態様１〜９のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが固体を含む方法。
態様１１
態様１〜１０のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンが、該哺乳動物に１回当たり５０ミリグラム〜１，０００ミリグラムの量で投与される方法。
態様１２
態様１〜１１のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが投与される該活動的な哺乳動物が、その予想される寿命の約１０％〜約７０％の年齢を有する方法。
態様１３
態様１〜１２のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、該哺乳動物に活動後の血中ミオグロビン量の増加を阻害するのに十分な量で投与される方法。
態様１４
態様１〜１３のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、該哺乳動物に活動後の血中チオバルビツール酸反応性物質の増加を阻害するのに十分な量で投与される方法。
態様１５
態様１〜１４のいずれかに記載の方法であって、血中ミオグロビン量が、該Ｌ−カルニチンサプリメントを施さなかった同じ哺乳動物と比較して、活動後に５０％より多く低下する方法。
態様１６
態様１〜１５のいずれかに記載の方法であって、血中チオバルビツール酸反応性物質の量が、該Ｌ−カルニチンサプリメントを施さなかった同じ哺乳動物と比較して、活動後に５０％より多く低下する方法。
態様１７
態様１〜１６のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、身体ストレスによる膜の過酸化を低減するのに十分な量で投与される方法。
態様１８
態様１〜１７のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、身体活動中及び身体活動後に骨格筋損傷を低減しかつ酸化ストレスを低減するのに十分な量で投与される方法。
態様１９
態様１〜１８のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、Ｌ−カルニチンから本質的になる方法。
態様２０
態様１に記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントがＬ−カルニチン並びにその誘導体及び／又は塩を含有する方法。
態様２１
態様１に記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが液体を含む方法。
態様２２
態様１〜２１のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンサプリメントが、食物摂取量を増加させることなく、哺乳動物が行う身体活動の量を増加させる方法。
態様２３
態様１〜２２のいずれかに記載の方法であって、該Ｌ−カルニチンが、該哺乳動物に１日当たり約１．５ｍｇ／ｋｇ体重より多い量で投与される方法。
[0179]本発明の精神及び範囲から逸脱せずに、本発明に対するこれらの、及びその他の修正形態及び変形形態も当業者により実践可能であり、それを添付の特許請求の範囲においてより具体的に記載する。更に、様々な実施形態の側面は全部又は一部において交換可能である、と理解すべきである。更に、当業者は、上記説明は単なる例であり、また本発明を限定するものではなく、かかる添付の特許請求の範囲に更に記載される通りであると認識する。

【図1】

【図2】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22A】

【図22B】

【図23A】

【図23B】

【図24A】

【図24B】

【図24C】

【図25A】

【図25B】

【図25C】