特許 6983814 抗ウイルス活性を示すヌクレオシド誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6983814

(24)【登録日】2021年11月26日

(45)【発行日】2021年12月17日

(54)【発明の名称】抗ウイルス活性を示すヌクレオシド誘導体

(51)【国際特許分類】

   C07H 19/173 20060101AFI20211206BHJP

   A61K 31/7076 20060101ALI20211206BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20211206BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20211206BHJP

【ＦＩ】

   C07H19/173CSP

   A61K31/7076

   A61P1/16

   A61P31/20ZNA

【請求項の数】3

【全頁数】40

(21)【出願番号】特願2018-556739(P2018-556739)

(86)(22)【出願日】2017年12月14日

(86)【国際出願番号】JP2017044885

(87)【国際公開番号】WO2018110643

(87)【国際公開日】20180621

【審査請求日】2020年10月2日

(31)【優先権主張番号】特願2016-242503(P2016-242503)

(32)【優先日】2016年12月14日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000006770

【氏名又は名称】ヤマサ醤油株式会社

(73)【特許権者】

【識別番号】510192802

【氏名又は名称】国立研究開発法人国立国際医療研究センター

(74)【代理人】

【識別番号】100109634

【弁理士】

【氏名又は名称】舛谷 威志

(74)【代理人】

【識別番号】100129263

【弁理士】

【氏名又は名称】中尾 洋之

(72)【発明者】

【氏名】満屋 裕明

(72)【発明者】

【氏名】山田 浩平

(72)【発明者】

【氏名】大野 裕太郎

【審査官】 神谷 昌克

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００４−５２０３６７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００５−５０４０８７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第０３／０６８７９６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開昭６３−２５８８９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０３−１４５４９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開平０６−０５６８７７（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｈ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記一般式（１）で表されるヌクレオシド誘導体。

【化1】

式（１）中、Ｒは、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよい
アルケニル基、シアノ基、又はアジド基である。

【請求項2】

Ｒは、モノフルオロメチル基、エテニル基、シアノ基、又はアジド基である、請求項１
に記載のヌクレオシド誘導体。

【請求項3】

請求項１又は２に記載のヌクレオシド誘導体を有効成分とする抗Ｂ型肝炎ウイルス剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗ウイルス活性を示すヌクレオシド誘導体に関し、より詳しくは、少なくともＢ型肝炎ウイルスに対して抗ウイルス活性を有する、２’−デオキシプリンヌクレオシド誘導体、及び該誘導体を有効成分とする抗ウイルス剤に関する。

【背景技術】

【0002】

Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）が感染すると、急性又は劇症的に肝炎が生じ、時に死に至ることがある。また、慢性的に肝炎を発症させ、肝硬変、そして肝細胞癌へと進行する場合もある。その感染者数は全世界で約４億人いると推定され、東南アジアを中心として罹患率は非常に高く、その有効な治療方法の開発が世界的に希求されている。

【0003】

ＨＢＶは、不完全２本鎖ＤＮＡウイルスであり、その生活環においてＲＮＡからＤＮＡを合成する逆転写を行うことが知られている。一方、宿主となるヒトにおいては、逆転写は行われないので、この段階を阻害することにより、ＨＢＶの複製のみを阻止できることが可能となる。そして、このような観点からのＨＢＶ感染症の治療薬として、ヌクレオシド誘導体製剤が開発されている（例えば、特許文献１及び２、並びに非特許文献１参照）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２００４−２４４４２２号公報

【特許文献2】特開２００８−２７３９６０号公報

【非特許文献1】Yuki Takamatsu et al., HEPATOLOGY, Vol. 62, No. 4, 2015, pp. 1024-1036

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

現状のヌクレオシド誘導体製剤において、その多くが宿主細胞、すなわち服用するヒトの細胞に対しても毒性を有しており、中長期の服用による副作用が問題となっている。また、服用期間にヌクレオシド誘導体への耐性株が生じることもある。そのため、ＨＢＶ等のウイルス感染症に対する有効な治療方法は確立されていないのが現状である。

【0006】

本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、少なくともＨＢＶに対して抗ウイルス活性を有し、宿主細胞に対する毒性が低いヌクレオシド誘導体を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、以下の構造式により表されるヌクレオシド誘導体が、少なくともＨＢＶに対して抗ウイルス活性を有すると共に、宿主細胞に対する毒性が特に低いことを見出した。

【0008】

【化1】

【0009】

式（１）中、Ｒは、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、シアノ基、又はアジド基である。

【0010】

即ち、本発明者らは、２’−デオキシアデノシンにおいて、プリン塩基の２位をアミノ基とすると共に、その６位を水素原子とすることにより、ＨＢＶに対して優れた抗ウイルス活性が得られると共に、宿主細胞に対する毒性を特に低くできることを見出した。

【0011】

すなわち、本発明は、少なくともＢ型肝炎ウイルスに対して抗ウイルス活性を有するヌクレオシド誘導体、及び該誘導体を有効成分とする抗ウイルス剤に関し、より詳しくは、以下を提供するものである。

【0012】

＜１＞ 下記一般式（１）で表されるヌクレオシド誘導体。

【化2】

式（１）中、Ｒは、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、シアノ基、又はアジド基である。

【0013】

＜２＞Ｒは、モノフルオロメチル基、エテニル基、シアノ基、又はアジド基である、＜１＞に記載のヌクレオシド誘導体。

【0014】

＜３＞＜１＞又は＜２＞に記載のヌクレオシド誘導体を有効成分とする抗ウイルス剤。

【0015】

＜４＞ 抗Ｂ型肝炎ウイルス剤である、＜３＞に記載の抗ウイルス剤。

【発明の効果】

【0016】

本発明によれば、少なくともＨＢＶに対して抗ウイルス活性を有し、宿主細胞に対して毒性が低いヌクレオシド誘導体を提供することが可能となる。

【発明を実施するための形態】

【0017】

（ヌクレオシド誘導体）
後述の実施例において示す通り、下記式で表されるヌクレオシド誘導体は、Ｂ型肝炎ウイルスに対して抗ウイルス活性を有すると共に、宿主細胞に対する毒性が特に低いことが明らかになった。したがって、本発明は、抗ウイルス活性を示すヌクレオシド誘導体に関し、より詳しくは、少なくともＢ型肝炎ウイルスに対して抗ウイルス活性を有する、下記一般式（１）で表されるヌクレオシド誘導体を提供するものである。

【0018】

【化3】

式（１）中、Ｒは、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、シアノ基、又はアジド基である。

【0019】

本発明のヌクレオシド誘導体は、少なくともＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に対して抗ウイルス活性を有する。本発明において「ＨＢＶ」は、Ｂ型肝炎を発症させる能力を有するウイルスを意味する。ＨＢＶとしては、Ａ（Ａ２／Ａｅ、Ａ１／Ａａ）、Ｂ（Ｂａ、Ｂ１／Ｂｊ）、Ｃ（Ｃｓ、Ｃｅ）、Ｄ〜Ｈ及びＪの遺伝子型が知られているが、本発明のヌクレオシド誘導体は、少なくとも１つの遺伝子型のＨＢＶに対して抗ウイルス活性を有するものであればよい。上記の遺伝子型のうちＨＢＶ／Ｃｅは、既存のヌクレオシド誘導体製剤であるエンテカビルに対して耐性を示す遺伝子型であることが知られている。したがって、本発明のヌクレオシド誘導体は、好ましくは、ＨＢＶ／Ｃｅに対して抗ウイルス活性を有するヌクレオシド誘導体である。

【0020】

本発明において「抗ウイルス活性」とは、ＨＢＶ等のウイルスが感染した細胞（宿主細胞）において、当該ウイルスを消滅させる又はその増殖を抑制する活性を意味し、例えば、宿主細胞におけるウイルス複製を抑制する活性が挙げられる。また、かかる抑制等の対象がゲノムとしてＤＮＡを有するウイルス（ＤＮＡウイルス）である場合には、「抗ＤＮＡウイルス活性」と称する。さらに、かかる活性は、後述の実施例に示すように、宿主細胞におけるウイルスのコピー数等を指標として算出されるＥＣ_５０値にて評価することができる。本発明のヌクレオシド誘導体は、抗ウイルス活性のＥＣ_５０値が０．１μＭ以下であることが好ましく、０．０５μＭ以下であることがより好ましく、０．０１μＭ以下であることがさらに好ましく、０．００５μＭ以下（例えば、０．００４μＭ以下、０．００３μＭ以下、０．００２μＭ以下、０．００１μＭ以下）であることがより好ましい。

【0021】

また、本発明のヌクレオシド誘導体は、細胞毒性が低いことが好ましい。本発明において「細胞毒性」とは、細胞を殺傷する、その機能を阻害する、またはその増殖を抑制する活性を意味する。かかる活性は、後述の実施例に示すように、細胞の生存数等を指標として算出されるＣＣ_５０値にて評価することができる。本発明のヌクレオシド誘導体は、ＣＣ_５０値が１０μＭ以上であることが好ましく、５０μＭ以上であることがより好ましく、１００μＭ以上であることが更に好ましく、２００μＭ以上であることが特に好ましい。

【0022】

本発明のヌクレオシド誘導体に少なくともＨＢＶに対する抗ウイルス活性を発揮させつつ、当該誘導体の細胞毒性を低下させることができるという観点から、各置換基は、以下に示す通り選択することが好ましい。

【0023】

Ｒは、上述した通り、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、シアノ基、又はアジド基である。

【0024】

「置換基を有していてもよいアルキル基」におけるアルキル基としては特に制限はないが、炭素数１〜６の直鎖状、分岐状又は環状のアルキル基が好ましく、メチル基又はエチル基がより好ましい。「置換基を有していてもよいアルキル基」における置換基としては特に制限はなく、例えば、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、シアノ基、アミノ基が挙げられるが、ハロゲン原子が好ましく、フッ素原子がより好ましい。より具体的には、「置換基を有していてもよいアルキル基」は、モノフルオロメチル基が好ましい。

【0025】

「置換基を有していてもよいアルケニル基」におけるアルケニル基としては特に制限はないが、炭素数２以上の直鎖状、分岐状、又は環状のアルケニル基が好ましく、炭素数２〜６の直鎖状、分岐状、又は環状のアルケニル基がより好ましく、エテニル基がさらに好ましい。「置換基を有していてもよいアルケニル基」における置換基としては特に制限はなく、例えば、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、シアノ基、アミノ基が挙げられる。

【0026】

本発明のヌクレオシド誘導体には、薬理学上許容される塩、水和物又は溶媒和物も含まれる。このような薬理学上許容される塩としては、特に制限はなく、ヌクレオシド誘導体の構造等に応じて適宜選択することができ、例えば、酸付加塩（塩酸塩、硫酸塩、臭化水素塩、硝酸塩、硫酸水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、スルファミン酸塩、マンデル酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、ステアリン酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、パモン酸塩、フェニル酢酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、スルファニル酸塩、２−アセトキシ安息香酸塩、エタンジスルホン酸塩、シュウ酸塩、イセチオン酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、エチルコハク酸塩、ラクトビオン酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ラウリル硫
酸塩、アスパラギン酸塩、アジピン酸塩、ヨウ化水素酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、ピクリン酸塩、チオシアン酸塩、ウンデカン酸塩等）、塩基付加塩（ナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、カルシウム塩、ビスマス塩、バリウム塩、マグネシウム塩、アルミニウム塩、銅塩、コバルト塩、ニッケル塩、カドミウム塩、アンモニウム塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン塩）が挙げられる。また、水和物又は溶媒和物としては、特に制限はなく、例えば、ヌクレオシド誘導体又はその塩１分子に対し、０．１〜３分子の水又は溶媒が付加したものが挙げられる。

【0027】

本発明のヌクレオシド誘導体には、互変異性体、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体等の総ての異性体及び異性体混合物が含まれる。さらに、本発明のヌクレオシド誘導体が生体内で酸化、還元、加水分解、アミノ化、脱アミノ化、水酸化、リン酸化、脱水酸化、アルキル化、脱アルキル化、抱合等の代謝を受けてなお所望の活性を示す化合物をも包含し、また本発明は生体内で酸化、還元、加水分解等の代謝を受けて本発明のヌクレオシド誘導体を生成する化合物（所謂、プロドラッグの形態）をも包含する。さらに、本発明のヌクレオシド誘導体は、後述の通り、公知の製剤学的方法により製剤化することができる。

【0028】

また、本発明のヌクレオシド誘導体の合成は、たとえば、リボース糖（ヒドロキシ基がアセチル基、ベンジル基等によって置換されることにより保護されたＤ−リボフラノース）と、プリン塩基（アデニン等）とを、シリル体経由で反応させ、さらにフェノキシチオカルボニル誘導体経由で還元してリボース糖の２位をデオキシ化し、また必要に応じ、公知の手法により、リボース糖及び／又はプリン塩基の目的の位置に置換基を導入することによって行うことができる。
このような本発明のヌクレオシド誘導体の合成方法は後述の実施例において詳細に示されているので、当業者であれば、実施例の記載を参照しつつ、反応原料、反応試薬、反応条件（例えば、溶媒、反応温度、触媒、反応時間）等を適宜選択しつつ、必要に応じてこれらの方法に適宜、修飾ないし改変を加えることにより、本発明のヌクレオシド誘導体を合成することは可能である。また、このようにして合成されたヌクレオシド誘導体は、一般のヌクレオシド、ヌクレオチドの単離・精製に使用されている方法（逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、再結晶法）を適宜単独又は組み合わせて用いることにより、分離、精製することができる。

【0029】

（抗ウイルス剤、ウイルス感染症の予防方法、治療方法）
後述の実施例において示す通り、本発明のヌクレオシド誘導体は、少なくともＢ型肝炎ウイルスに対して抗ウイルス活性を有する。したがって、本発明のヌクレオシド誘導体を有効成分とする抗ウイルス剤を提供することができる。

【0030】

本発明の抗ウイルス剤並びに後述の予防方法、治療方法が対象とする感染症としては特に制限はなく、例えば、ＨＢＶ感染症が挙げられ、より具体的には、Ｂ型肝炎（慢性肝炎、急性肝炎、劇症肝炎）、それに伴う肝硬変、肝繊維化、肝細胞癌が挙げられる。

【0031】

本発明の抗ウイルス剤は、公知の製剤学的方法により製剤化することができる。例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、液剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、フィルムコーティング剤、ペレット剤、トローチ剤、舌下剤、咀嚼剤、バッカル剤、ペースト剤、シロップ剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、塗布剤、軟膏剤、硬膏剤、パップ剤、経皮吸収型製剤、ローション剤、吸引剤、エアゾール剤、注射剤、坐剤等として、経口的又は非経口的に使用することができる。

【0032】

これら製剤化においては、薬理学上許容される担体又は媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、溶剤、基剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、芳香剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤、希釈剤、等張化剤、無痛化剤、増量剤、崩壊剤、緩衝剤、コーティング剤、滑沢剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、あるいはその他の添加剤等と適宜組み合わせることができる。より具体的には、担体として、乳糖、カオリン、ショ糖、結晶セルロース、コーンスターチ、タルク、寒天、ペクチン、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、レシチン、塩化ナトリウム等の固体状担体、グリセリン、落花生油、ポリビニルピロリドン、オリーブ油、エタノール、ベンジルアルコール、プロピレングリコール、水等の液状担体も挙げられる。

【0033】

また、本発明の抗ウイルス剤は、公知の他の抗ウイルス剤と併用してもよい。このような公知の抗ウイルス剤としては、対象疾患がＨＢＶ感染症である場合には、例えば、エンテカビル、３ＴＣ（ラミブジン）、アデフォビル等の公知のヌクレオシドアナログ製剤、インターフェロン（ＩＦＮ）が挙げられる。また、このような薬剤を用いた抗ウイルス療法の他、免疫療法（副腎皮質ステロイドホルモン離脱療法、プロパゲルニウム製剤内服等）、肝庇護療法（グリチルリチン製剤の静注、胆汁酸製剤の内服等）との併用療法に、本発明の抗ウイルス剤を用いることもできる。

【0034】

本発明の抗ウイルス剤の好ましい投与形態としては特に制限はなく、経口投与又は非経口投与、より具体的には、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、皮内投与、気道内投与、直腸投与及び筋肉内投与、輸液による投与が挙げられる。

【0035】

本発明の抗ウイルス剤は、主にヒトを対象として使用することができるが、実験用動物等のヒト以外の動物も対象とすることができる。

【0036】

本発明の抗ウイルス剤を投与する場合、その投与量は、対象の年齢、体重、症状、健康状態、重篤状態、薬物に対する忍容性、投与形態等に応じて、適宜選択される。１日当たりの本発明の抗ウイルス剤の投与量は、有効成分であるヌクレオシド誘導体の量として、通常０．００００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、１回又は複数回に分けて対象に投与される。本発明の抗ウイルス剤の製品又はその説明書は、ウイルス感染症を治療又は予防するために用いられる旨の表示を付したものであり得る。ここで「製品又は説明書に表示を付した」とは、製品の本体、容器、包装等に表示を付したこと、又は製品の情報を開示する説明書、添付文書、宣伝物、その他の印刷物等に表示を付したことを意味する。また、ウイルス感染症を治療するために用いられる旨の表示においては、本発明のヌクレオシド誘導体を投与することにより、ウイルスの逆転写酵素反応を阻害し、当該ウイルスの複製を抑制できることも本発明の抗ウイルス剤の作用機序に関する情報として含むことができる。

【0037】

このように本発明は、本発明の抗ウイルス剤を対象に投与することによって、感染症を予防又は治療することができる。したがって、本発明は、本発明のヌクレオシド誘導体を投与することを特徴とする、ウイルス感染症を予防又は治療するための方法をも提供するものである。

【0038】

本発明のヌクレオシド誘導体を投与する対象としては特に制限はなく、例えば、ＨＢＶ等のウイルス感染症患者、感染症が発症する前のウイルス保有者、感染する前の者が挙げられる。

【実施例】

【0039】

抗ウイルス活性を有するヌクレオシド誘導体を得るために、下記表１に示す組み合わせにて官能基を有する下記一般式（１）で表されるヌクレオシド誘導体を、以下に示す方法にて合成した。なお、表中の番号は、以下に示す化合物の番号を示す。

【0040】

【化4】

【0041】

【表1】

【0042】

また、比較化合物として、以下の表２に示す化合物Ｃ１及びＣ２を合成した。また、参照化合物として、以下の表３に化合物Ｒ１乃至Ｒ４を合成した。

【0043】

【表2】

【表3】

【0044】

なお、このようにして合成された化合物が、所望の構造を有する化合物であることは、^１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを測定することにより確認した。それらの結果も併せて以下に示す。

【0045】

合成例１：９−（３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−シアノ−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノ−６−（２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルオキシ）プリン（化合物６）の合成
化合物６を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0046】

【化5】

【0047】

先ず、化合物１（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，１９８５，４，６４１−６４９ 参照）から、化合物２（９−（３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノ−１Ｈ−プリン−６−オン）を合成した。すなわち、化合物１（８．３３ｇ，１３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６５ｍＬ）に溶解させた後、イミダゾール（２．８３ｇ，４２ｍｍｏｌ）とｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（５．８９ｇ，３９ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２０時間攪拌した。反応終了後、飽和重曹水でクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。続いて硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製の３’水酸基保護体（１３ｍｍｏｌ）を得た。粗精製の３’水酸基保護体（１３ｍｍｏｌ）をクロロホルム（８７ｍＬ）に溶解させた後、メタノール（３７ｍＬ）に溶解させたｐ−トルエンスルホン酸一水和物（７．４２ｇ，３９ｍｍｏｌ）を−１５℃で滴下し、同温で１．５時間攪拌した。反応終了後、反応液がオレンジから無色になるまで飽和重曹水を加え、クロロホルムによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１→酢酸エチル→メタノール／クロロホルム＝１／２０）で精製を行い、化合物２を得た（５．４４ｇ，１２ｍｍｏｌ，２工程９３％）。

【0048】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ１２．０８（１Ｈ，ｂｒｓ），８．３６（１Ｈ，ｂｒｓ），７．７３（１Ｈ，ｓ），６．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．５Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ），４．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ），３．９４（１Ｈ，ｍ），３．７４（１Ｈ，ｍ），２．７９（１Ｈ，ｍ），２．６５（１Ｈ，ｍ），２．２３（１Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），１．２７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），０．９３（９Ｈ，ｓ），０．１１８（３Ｈ，ｓ），０．１１５（３Ｈ，ｓ）。

【0049】

次に、このようにして得られた化合物２から、化合物３（９−（３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−Ｏ−デオキシ−４−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノ−１Ｈ−プリン−６−オン）を合成した。すなわち、化合物２（１０３ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）をトルエン（０．２３ｍＬ）とジメチルスルホキシド（０．２３ｍＬ）に溶解させた後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１３２ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）、ピリジン（３６．９μＬ，０．４６ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（１８μＬ，０．２３ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１４時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。続いて硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製のアルデヒドを得た。粗精製のアルデヒドを１，４−ジオキサン（４．６ｍＬ）に溶解させた後、３７％ホルムアルデヒド水溶液（１００μＬ，１．０ｍｍｏｌ）と１規定の水酸化ナトリウム水溶液（２７５μＬ，０．２８ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２０分攪拌した。次に１規定の水酸化ナトリウム水溶液（２７５μＬ，０．２８ｍｍｏｌ）を追加し、室温で３５分攪拌した後、０℃で水素化ホウ素ナトリウム（２６．０ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）を加え、室温で４５分攪拌した。反応終了後、１規定塩酸でクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝１／２０）で精製を行い、化合物３を得た（３８．９ｍｇ，０．０８１ｍｍｏｌ，２工程３５％）。

【0050】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ１２．０８（１Ｈ，ｂｒｓ），９．７８（１Ｈ，ｂｒｓ），７．９２（１Ｈ，ｓ），６．２７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），４．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，４．０Ｈｚ），４．７６（１Ｈ，ｂｒｓ），３．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），３．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），３．６８−３．６１（３Ｈ，ｍ），２．８５−２．７７（２Ｈ，ｍ），２．４１（１Ｈ，ｍ），１．２５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．２２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．９０（９Ｈ，ｓ），０．１３（３Ｈ，ｓ），０．１２（３Ｈ，ｓ）。

【0051】

次に、このようにして得られた化合物３から、化合物４（９−（３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−Ｏ−デオキシ−４−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノ−１Ｈ−プリン−６−オン）を合成した。すなわち、化合物３（７２６ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸させた後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解させ、０℃でトリエチルアミン（４２１μＬ，３．０ｍｍｏｌ）と４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（７６７ｍｇ，２．３ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２０分、０℃で１時間攪拌した。反応終了後、メタノールでクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝２／１→酢酸エチル）で精製を行い、粗精製の６’水酸基保護体（９５８ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を得た。６’水酸基保護体（９５８ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）に溶解させた後、イミダゾール（２９１ｍｇ，４．２７ｍｍｏｌ）とｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（５５２ｍｇ，３．７ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２５分攪拌した。反応終了後、飽和重曹水でクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。続いて硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製の５’水酸基保護体を得た。粗精製の５’水酸基保護体をクロロホルム（８ｍＬ）に溶解させた後、メタノール（４．５ｍＬ）に溶解させたｐ−トルエンスルホン酸一水和物（９２８ｍｇ，４．９ｍｍｏｌ）を−１５℃で滴下し、同温で１．５時間攪拌した。反応終了後、反応液がオレンジから無色になるまで飽和重曹水を加え、クロロホルムによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝２／１）で精製を行い、化合物４を得た（４６１ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ，３工程５１％）。

【0052】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ１２．０３（１Ｈ，ｂｒｓ），８．６８（１Ｈ，ｂｒｓ），７．９４（１Ｈ，ｓ），６．２４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，５．０Ｈｚ），３．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０，４．５Ｈｚ），３．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ），３．６９−３．６５（２Ｈ，ｍ），２．６８−２．５８（３Ｈ，ｍ），２．５０−２．４５（１Ｈ，ｍ），１．２７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．２４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．９２（９Ｈ，ｓ），０．９１（９Ｈ，ｓ），０．１４（３Ｈ，ｓ），０．１３（３Ｈ，ｓ），０．０８（３Ｈ，ｓ），０．０７（３Ｈ，ｓ）。

【0053】

次に、このようにして得られた化合物４から、化合物５（９−（３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−シアノ−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノ−１Ｈ−プリン−６−オン）を合成した。すなわち、化合物４（７０．４ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をトルエン（０．１２ｍＬ）とジメチルスルホキシド（０．１２ｍＬ）に溶解させた後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（６７．９ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ）、ピリジン（１９．０μＬ，０．２４ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（９．０μＬ，０．１２ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１４時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。続いて硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製のアルデヒドを得た。粗精製のアルデヒドをピリジン（１．２ｍＬ）に溶解させた後、塩酸ヒドロキシルアミン（１２．３ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）を加え、室温で３５分攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。続いて硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製のオキシムを得た。粗精製のオキシムをジクロロメタン（１．２ｍＬ）に溶解させた後、０℃でトリエチルアミン（３３μＬ，０．２４ｍｍｏｌ）とメタンスルホニルクロリド（１４μＬ，０．１８ｍｍｏｌ）を順次加え、同温で１時間攪拌した。反応終了後、飽和重曹水でクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。続いて硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝２／１）で精製を行い、化合物５を得た（６１．１ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ，３工程８８％）。

【0054】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ１２．００（１Ｈ，ｂｒｓ），７．９７（１Ｈ，ｂｒｓ），７．８１（１Ｈ，ｓ），６．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），４．８２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．９１（２Ｈ，ｓ），２．６６−２．５５（３Ｈ，ｍ），１．３１（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．９７（９Ｈ，ｓ），０．９０（９Ｈ，ｓ），０．１９（３Ｈ，ｓ），０．１７（３Ｈ，ｓ），０．１１（３Ｈ，ｓ），０．０７（３Ｈ，ｓ）。

【0055】

次に、このようにして得られた化合物５から、化合物６（９−（３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−シアノ−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノ−６−（２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルオキシ）プリン）を合成した。すなわち、化合物５（４６．１ｍｇ，０．０７８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解させた後、トリエチルアミン（２２μＬ，０．１６ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（４７．３ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ），４−ジメチルアミノピリジン（０．９５ｍｇ，７．８μｍｏｌ）を順次加え、室温で１．５時間攪拌した。反応終了後、飽和重曹水でクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／４）で精製を行い、化合物６を得た（５８．５ｍｇ，０．０６８ｍｍｏｌ，８８％）。

【0056】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ７．９９（１Ｈ，ｓ），７．９５（１Ｈ，ｂｒｓ），７．２３（２Ｈ，ｓ），６．３８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），５．１８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．２５（２Ｈ，ｍ），４．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），３．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），３．２０（１Ｈ，ｍ），２．９４（１Ｈ，ｍ），２．６９（１Ｈ，ｂｒｓ），２．５１（１Ｈ，ｍ），１．３０−１．２６（１８Ｈ，ｍ），１．２３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），１．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），０．９６（９Ｈ，ｓ），０．８８（９Ｈ，ｓ），０．２２（３Ｈ，ｓ），０．１４（３Ｈ，ｓ），０．０７０（３Ｈ，ｓ），０．０６５（３Ｈ，ｓ）。

【0057】

合成例２：９−（３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−シアノ−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノプリン（化合物７）の合成
化合物７を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0058】

【化6】

【0059】

化合物６（６２６ｍｇ，０．７３０ｍｍｏｌ） をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に溶解させた後、ヒドラジン一水和物（０．２ｍＬ，４．１２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製の６位ヒドラジド化体を得た。
粗精製の６位ヒドラジド化体（＜０．７３０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４ｍＬ）に溶解させた後、酸化銀（I）（５０８ｍｇ，２．１９ｍｍｏｌ）を加え、遮光下および加熱還流下で１５時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１）で精製を行い、化合物７（１８０ｍｇ，０．３１３ｍｍｏｌ，２工程４３％） を得た。

【0060】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．９１（１Ｈ，ｓ），８．１８（１Ｈ，ｂｒｓ），８．０７（１Ｈ，ｓ），６．４３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ），５．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ ＝６．０ Ｈｚ），４．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），３．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ），３．２３（１Ｈ，ｍ），２．７６（１Ｈ，ｂｒｓ），２．５５（１Ｈ，ｍ），１．２３（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），０．９７（９Ｈ，ｓ），０．８９（９Ｈ，ｓ），０．２３（３Ｈ，ｓ），０．１６（３Ｈ，ｓ）， ０．０８１（３Ｈ，ｓ），０．０６７（３Ｈ，ｓ）。

【0061】

合成例３：２−アミノ−９−（３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−シアノ−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（化合物８）の合成
化合物８を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0062】

【化7】

【0063】

化合物７（１８０ｍｇ，０．３１３ｍｍｏｌ）をイソプロピルアルコール（２．５ｍＬ）に溶解させた後、ヨウ化アンモニウム（４５．３ｍｇ，０．３１３ｍｍｏｌ）、ヒドラジン一水和物（２．５ｍＬ）を順次加え、室温で６．５時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製を行い、化合物８（１２０ｍｇ，０．２３８ｍｍｏｌ，７６％）を得た。

【0064】

^１Ｈ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．７０（１Ｈ，ｓ），７．８８（１Ｈ，ｓ），６．４０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，１．５Ｈｚ），５．０４（２Ｈ，ｂｒｓ），４．９５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ），３．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ），３．０５（１Ｈ，ｍ），２．５６（１Ｈ，ｍ），０．９７（９Ｈ，ｓ），０．８７（９Ｈ，ｓ），０．２０（３Ｈ，ｓ），０．１８（３Ｈ，ｓ），０．０８３（３Ｈ，ｓ），０．０２３（３Ｈ，ｓ）。

【0065】

合成例４：２−アミノ−９−（４−Ｃ−シアノ−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（化合物Ｐ１）の合成
化合物Ｐ１を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0066】

【化8】

【0067】

化合物８（１２０ｍｇ，０．２３８ｍｍｏｌ）をクロロホルム（２ｍＬ）とメタノール（４ｍＬ）に溶解させた後、酸性フッ化アンモニウム（８１５ｍｇ，１４．３ｍｍｏｌ）を加え、室温下で１３７．５時間攪拌した。反応終了後、溶媒の減圧留去を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝１／４）で精製を行い、粗精製の化合物Ｐ１を得た。粗精製の化合物Ｐ１に対し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝１／６）で精製を行い、化合物Ｐ１（５７．５ｍｇ，０．２０８ｍｍｏｌ，８８％）を得た。

【0068】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）；δ８．５６（１Ｈ，ｓ），８．２１（１Ｈ，ｓ），６．５１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），４．９０（１Ｈ，ｍ），３．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），３．０２（１Ｈ，ｍ），２．５６（１Ｈ，ｍ）。

【0069】

合成例５：２−アミノ−９−（２−Ｏ−アセチル−３，５−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−クロロプリン（化合物１０）の合成
化合物９を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0070】

【化9】

【0071】

化合物９（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，Ｖｏｌ．５３，Ｎｏ．３９，ｐｐ．１３３１５−１３３２２（１９９７）参照）（１１７ｍｇ，０．２６３ｍｍｏｌ）と２−アミノ−６−クロロプリン（６６．８ｍｇ，０．３９４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１．３ｍＬ）に溶解させた後、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（２０６μＬ，０．８４２ ｍｍｏｌ）を加え、加熱還流下で１時間攪拌した。続いて反応溶液を室温に戻した後、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（６４μＬ，０．３４２ｍｍｏｌ）を加え、加熱還流下で５時間攪拌した。反応終了後、飽和重曹水によるクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／２→１／１）で精製を行い、化合物１０（１２２ｍｇ，０．２２０ｍｍｏｌ，８４％）を得た。

【0072】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ７．９９（１Ｈ，ｓ），７．３８−７．２９（１０Ｈ，ｍ），６．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５ Ｈｚ），５．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ），５．０１（２Ｈ，ｂｒｓ），４．７１−４．５４（７Ｈ，ｍ），３．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，２．０ Ｈｚ），３．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，２．０Ｈｚ），２．０６（３Ｈ，ｓ）。

【0073】

合成例６：２−アミノ−９−（３，５−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−フルオロメチル−２−Ｏ−フェニルチオホルミル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−クロロプリン（化合物１２）の合成
化合物１２を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0074】

【化10】

【0075】

化合物１０（１２２ｍｇ，０．２２０ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）に溶解させた後、アンモニア水（０．５ｍＬ） を加え、室温で１３時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製の化合物１１を得た。
粗精製の化合物１１（＜０．２２０ｍｍｏｌ）をジオキサンによる共沸脱水を行った。次にアセトニトリル（３ｍＬ）に溶解させた後、４−ジメチルアミノピリジン（８０．６ｍｇ，０．６６０ｍｍｏｌ）、フェニルクロロチオノホルメート（４５．６μＭ，０．３３０ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／２）で精製を行い、化合物１２（１１０．６ｍｇ，０．１７０ｍｍｏｌ，２工程７７％）を得た。

【0076】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．００（１Ｈ，ｓ），７．４１−７．３３（１３Ｈ，ｍ），６．９７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．３，５．５Ｈｚ），６．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），５．００（２Ｈ，ｂｒｓ），４．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），４．７６−４．５９（６Ｈ，ｍ），３．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，２．０Ｈｚ），３．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，２．０Ｈｚ）。

【0077】

合成例７：２−アミノ−９−（３，５−ジ−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−デオキシ−４−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−クロロプリン（化合物１３）の合成
化合物１３を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0078】

【化11】

【0079】

化合物１２（１１０．６ｍｇ，０．１７０ｍｍｏｌ）をトルエン（６ｍＬ）に溶解させた後、水素化トリブチルスズ（２２９μＬ，０．８５０ｍｍｏｌ）とアゾビスイソブチロニトリル（７．０ｍｇ，０．０４２５ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１時間攪拌した。反応終了後、溶媒の減圧留去を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／２→１／１）で精製を行い、化合物１３（５９．３ｍｇ，０．１１９ｍｍｏｌ，７０％）を得た。

【0080】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ７．９９（１Ｈ，ｓ），７．３９−７．２５（１０Ｈ，ｍ），６．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，６．５Ｈｚ），５．０２（２Ｈ，ｂｒｓ），４．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４７．５ Ｈｚ），４．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），４．５５−４．５１（４Ｈ，ｍ），３．６３（１Ｈ，ｓ），３．６２（１Ｈ，ｓ），２．７８（１Ｈ，ｍ），２．６３（１Ｈ，ｍ）。

【0081】

合成例８：２−アミノ−９−（３，５−ジ−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−デオキシ−４−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（化合物１４）の合成
化合物１４を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0082】

【化12】

【0083】

化合物１３（５９．３ｍｇ，０．１１９ｍｍｏｌ）と１０％ パラジウム炭素（２９．７ｍｇ，５０ｗｔ％）にメタノール（３ｍＬ）を加えた後、トリエチルアミン（１６６μＬ，１．１９ｍｍｏｌ）を加え、室温、水素雰囲気下で１９時間攪拌した。反応終了後、溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製を行い、化合物１４（３７．６ｍｇ，０．０８１１ｍｍｏｌ，６８％）を得た。

【0084】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．６５（１Ｈ，ｓ），７．９４（１Ｈ，ｓ），７．３９−７．２６（１０Ｈ，ｍ），６．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，６．５Ｈｚ），４．９７（２Ｈ，ｂｒｓ），４．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４７Ｈｚ），４．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），４．５７−４．５０（４Ｈ，ｍ），３．６５（１Ｈ，ｓ），３．６４（１Ｈ，ｓ），２．８１（１Ｈ，ｍ），２．６２（１Ｈ，ｍ）。

【0085】

合成例９：２−アミノ−９−（２−Ｏ−デオキシ−４−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（化合物Ｐ２）の合成
化合物Ｐ２を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0086】

【化13】

【0087】

化合物１４（１８．０ｍｇ，０．０３８８ｍｍｏｌ）をトルエンで共沸脱水した後、ジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解させ、三塩化ホウ素（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１．０Ｍ，０．２９ｍｇ，０．２９１ｍｍｏｌ）を加え、−７８℃で２１時間攪拌した。反応終了後、１Ｍのトリエチルアミン‐二酸化炭素緩衝液（４．４ｍＬ）でクエンチを行った後、メタノールによる共沸を行った。その後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝１／５）と 分取薄層クロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝１／４）で精製を行い、化合物Ｐ２（６．７ｍｇ，０．０２３７ｍｍｏｌ，６１％）を得た。

【0088】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）；δ８．５６（１Ｈ，ｓ），８．２６（１Ｈ，ｓ），６．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，６．５ Ｈｚ），４．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，４．０Ｈｚ），４．６３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４７．５，２．５Ｈｚ），３．７６（２Ｈ，ｓ），２．９７（１Ｈ，ｍ），２．４８（１Ｈ，ｍ）。

【0089】

合成例１０：９−（５−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノ−１Ｈ−プリン−６−オン（化合物１５）の合成
化合物１５を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0090】

【化14】

【0091】

化合物２（１５．０ｍｇ，０．０３３２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解させた後、トリエチルアミン（１３．９μＬ，０．０９９６ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．４１ｍｇ，３．３２μｍｏｌ）、無水酢酸（４．７１μＬ，０．０４９８ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２時間攪拌した。反応終了後、飽和重曹水によるクエンチと酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝２／１→酢酸エチル）で精製を行い、化合物１５（１１．４ｍｇ，０．０２３１ｍｍｏｌ，７０％）を得た。

【0092】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．５７（１Ｈ，ｂｒｓ），８．０２（１Ｈ，ｓ），７．７４（１Ｈ，ｓ），６．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，６．０Ｈｚ），４．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５，５．５Ｈｚ），４．４８（１Ｈ，ｍ），４．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５，６．０Ｈｚ），２．７６（１Ｈ，ｍ），２．６７（１Ｈ，ｍ），２．３３（１Ｈ，ｍ），２．１１（３Ｈ，ｓ），１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ）０．９３（９Ｈ，ｓ），０．１２３（３Ｈ，ｓ），０．１２０（３Ｈ，ｓ）。

【0093】

合成例１１：９−（５−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノ−６−（２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルオキシ）プリン（化合物１６）の合成
化合物１６を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0094】

【化15】

【0095】

化合物１５（５．５５ｇ，１１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５６ｍＬ）に溶解させた後、トリエチルアミン（３．１ ｍＬ，２２．４ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１３７ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（６．７８ｇ，２２．４ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２時間攪拌した。反応終了後、飽和重曹水によるクエンチとクロロホルムによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／４）で精製を行い、化合物１６（７．２６ｇ，９．５５ｍｍｏｌ，８５％）を得た。

【0096】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．０４（１Ｈ，ｓ），７．８５（１Ｈ，ｂｒｓ），７．２３（２Ｈ，ｓ），６．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），４．７６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５，４．５Ｈｚ），４．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，４．５Ｈｚ），４．３０−４．２３（３Ｈ，ｍ），４．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．５，４．５Ｈｚ），２．９３（２Ｈ，ｍ），２．８６（１Ｈ，ｂｒｓ），２．４４（１Ｈ，ｍ），２．０５（３Ｈ，ｓ），１．３０−１．２６（１８Ｈ，ｍ），１．２３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），１．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）０．９１（９Ｈ，ｓ），０．１３（３Ｈ，ｓ），０．１１（３Ｈ，ｓ）。

【0097】

合成例１２：９−（３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノプリン（化合物１８）の合成
化合物１８を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0098】

【化16】

【0099】

化合物１６（６．９２ｇ，９．１０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（６５ｍＬ）に溶解させた後、トリエチルアミン（７．６ｍＬ，５４．６ｍｍｏｌ），ギ酸（２．１ｍＬ，５４．６ｍｍｏｌ），１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（４１３ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ），酢酸パラジウム（ＩＩ）（２０４ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ）を順次加え、９０℃で３．５時間攪拌した。反応終了後、溶媒の減圧留去を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル、ショート）で精製を行い、粗精製の化合物１７を得た。
粗精製の化合物１７（＜９．１０ ｍｍｏｌ）をメタノール（４６ｍＬ）に溶解させた後、アンモニア水（１５ｍＬ）を加え、室温で１２．５時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝２／１→酢酸エチル）で精製を行い、化合物１８（１．８２ ｇ，４．１８ ｍｍｏｌ，２工程４６％） を得た。

【0100】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．９６（１Ｈ，ｓ），８．３０（１Ｈ，ｂｒｓ），８．０９（１Ｈ，ｓ），６．３１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．０ Ｈｚ），４．８８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝５．５，２．５，２．５ Ｈｚ），４．４４（１Ｈ，ｍ），４．０９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５，２．０Ｈｚ），３．９５（１Ｈ，ｍ），３．８２（１Ｈ，ｍ），３．０２（１Ｈ，ｍ），２．７９（１Ｈ，ｍ），２．３０（１Ｈ，ｍ），１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），０．９２７（９Ｈ，ｓ），０．１３８（３Ｈ，ｓ），０．１２１（３Ｈ，ｓ）。

【0101】

合成例１３：９−（３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−Ｏ−デオキシ−４−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノプリン（化合物２０）の合成
化合物２０を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0102】

【化17】

【0103】

化合物１８（２６．８ｍｇ，０．０６１８ｍｍｏｌ）をトルエン（０．５ｍＬ）とジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）に溶解させた後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３５．５ｍｇ，０．１８５ｍｍｏｌ），ピリジン（１０μＬ，０．１２４ｍｍｏｌ），トリフルオロ酢酸（４．７μＬ，０．０６１８ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１４時間攪拌した。その後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１１８ｍｇ，０．６１８ｍｍｏｌ），ピリジン（３０μＬ，０．３７１ｍｍｏｌ），トリフルオロ酢酸（１４μＬ，０．１８６ｍｍｏｌ）を順次追加し、室温で２時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製の化合物１９を得た。
粗精製の化合物１９（＜０．０６１８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１ｍＬ）に溶解させた後、３７％ ホルムアルデヒド水溶液（２７μＬ，０．２７２ ｍｍｏｌ）、１規定の水酸化ナトリウム水溶液（１５５μＬ，０．１５５ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１時間攪拌した。続いて０℃で水素化ホウ素ナトリウム（７．０ｍｇ，０．１８５ｍｍｏｌ）を加え、同温で３０分攪拌した。反応終了後、メタノールによるクエンチと酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （酢酸エチル→メタノール／クロロホルム＝１／１０）で精製を行い、化合物２０（１８．３ｍｇ，０．０３９３ｍｍｏｌ，２工程６４％）を得た。

【0104】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．９４（１Ｈ，ｓ），８．７５（１Ｈ，ｂｒｓ），８．０９（１Ｈ，ｓ），６．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，６．５Ｈｚ），５．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，５．０Ｈｚ），４．２８（１Ｈ，ｂｒｓ），３．９０−３．６３（５Ｈ，ｍ），３．０９（１Ｈ，ｍ），２．９４（１Ｈ，ｍ），２．５１（１Ｈ，ｍ），１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ），０．９４５（９Ｈ，ｓ），０．２１５（３Ｈ，ｓ），０．１５２（３Ｈ，ｓ）。

【0105】

合成例１３：９−（２−Ｏ−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノプリン（化合物２３）の合成
化合物２３を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0106】

【化18】

【0107】

化合物２０（１０３．４ ｍｇ，０．２２２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．３ｍＬ）に溶解させた後、トリエチルアミン（６２μＬ，０．４４４ｍｍｏｌ），４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１１３ｍｇ，０．３３３ｍｍｏｌ）を順次加え、０℃で１．５時間攪拌した。反応終了後、メタノールによるクエンチと、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製の化合物２１を得た。
粗精製の化合物２１（＜０．２２２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．２ｍＬ）に溶解した後、イミダゾール（５２．９ｍｇ，０．７７７ｍｍｏｌ），ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（１００ｍｇ，０．６６６ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１６．５時間攪拌した。反応終了後、飽和重曹水でクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製の化合物２２を得た。
粗精製の化合物２２（＜０．２２２ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１．５ｍＬ）に溶解させた後、−１５℃でメタノール（０．６ｍＬ）に溶解させたｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１２７ｍｇ，０．６６６ ｍｍｏｌ）を滴下し、同温で２時間攪拌した。反応終了後、１規定の水酸化ナトリウム水溶液によるクエンチを行った後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝２／１）で精製を行い、化合物２３（１９．８ ｍｇ，０．０３４１ｍｍｏｌ，３工程１５．４％） を得た。

【0108】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．９８（１Ｈ，ｓ），８．８３（１Ｈ， ｂｒｓ），８．２７（１Ｈ，ｓ），６．４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，６．０Ｈｚ），４．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，５．５ Ｈｚ），３．８７（１Ｈ，ｍ），３．８２（２Ｈ，ｓ），３．７３（１Ｈ，ｍ），２．９３（１Ｈ，ｍ），２．７８（１Ｈ，ｍ），２．５９（１Ｈ，ｍ），１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），０．９３９（９Ｈ，ｓ），０．８８３（９Ｈ，ｓ），０．１６５（３Ｈ，ｓ），０．１４７（３Ｈ，ｓ），０．０４３（６Ｈ，ｓ）。

【0109】

合成例１４：９−（２−Ｏ−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノプリン（化合物２５）の合成
化合物２５を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0110】

【化19】

【0111】

化合物２３（４２．７ｍｇ，０．０７３７ｍｍｏｌ）をトルエン（０．５ｍＬ）とジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）に溶解させた後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１４１．３ｍｇ，０．７３７ｍｍｏｌ），ピリジン（３６μＬ，０．４４２ｍｍｏｌ），トリフルオロ酢酸（１７μＬ，０．２２１ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行い、粗精製の化合物２４を得た。
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（７９．０ ｍｇ，０．２２１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解させた後、−７８℃でｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．６Ｍ，０．１３ｍＬ，０．２１４ｍｍｏｌ）を加え、０℃で３０分攪拌した。続いて、テトラヒドロフラン（４ｍＬ）に溶解させた粗精製の化合物２４（＜０．０７３７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４ｍＬ）に溶解させた後、室温で１１時間攪拌した。続いて、別途調製した９．９当量のウィッティヒ（Ｗｉｔｔｉｇ）試薬を０℃で加え、室温で３時間攪拌した。反応終了後、飽和塩化アンモニウム水溶液によるクエンチと酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１）で精製を行い、化合物２５（１４．４ｍｇ，０．０２５０ｍｍｏｌ，２工程３４％）を化合物２５’との混合物（２５：２５’＝１：０．３）として得た。なお、化合物２５と化合物２５’の混合比は^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルより決定した。
化合物２５のＬＲＭＳ（ＥＳＩ^＋）； ｍ／ｚ ５９８．４１１４［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

【0112】

合成例１５：２−アミノ−９−（２−Ｏ−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（化合物２６）の合成
化合物２６を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0113】

【化20】

【0114】

化合物２５と化合物２５’の混合物（１８．１ｍｇ，０．０３１４ｍｍｏｌ）をイソプロピルアルコール（１ｍＬ）に溶解させた後、ヨウ化アンモニウム（４．６ｍｇ，０．０３１４ｍｍｏｌ）、ヒドラジン一水和物（１ｍＬ）を順次加え、室温で１．５時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１）で精製を行い、化合物２６（１０．１ｍｇ，０．０２００ｍｍｏｌ，６４％）を化合物２６’との混合物（２６：２６’＝１：０．３）として得た。なお、化合物２６と化合物２６’の混合比は^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルより決定した。
化合物２６のＬＲＭＳ（ＥＳＩ^＋）； ｍ／ｚ ５２８．３３７８［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

【0115】

合成例１６：２−アミノ−９−（２−Ｏ−デオキシ−４−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（化合物Ｐ３）の合成
化合物Ｐ３を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0116】

【化21】

【0117】

化合物２６と化合物２６’の混合物（１０．１ｍｇ，０．０２００ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１ｍＬ）とメタノール（１ｍＬ）に溶解させた後、酸性フッ化アンモニウム（６８．４ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を加え、室温下で８４時間攪拌した。続いて、酸性フッ化アンモニウム（６８．４ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を追加し、室温で４８時間攪拌した。その後、酸性フッ化アンモニウム（２０５ｍｇ，３．６ｍｍｏｌ）を追加し、室温で２１６時間攪拌した。反応終了後、溶媒の減圧留去を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝１／４）で精製を行い、化合物Ｐ３（４．４ｍｇ，０．０１５９ｍｍｏｌ，７９％）を、化合物Ｐ３’との混合物（Ｐ３：Ｐ３’＝１：０．３）として得た。なお、化合物Ｐ３と化合物Ｐ３’との混合比は ^１Ｈ−ＮＭＲ スペクトルより決定した。

【0118】

化合物Ｐ３の^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）；δ８．５６（１Ｈ，ｓ），８．３６（１Ｈ，ｓ），６．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，４．５Ｈｚ），６．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．５，１１．０Ｈｚ），５．５３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．５，２．０Ｈｚ），５．３２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，２．０Ｈｚ），４．８０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），３．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），３．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），２．７４（１Ｈ，ｍ），２．４１（１Ｈ，ｍ）；
化合物Ｐ３’の^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）；δ８．５６（１Ｈ，ｓ），８．３０（１Ｈ，ｓ），６．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），４．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．０，４．０Ｈｚ），３．７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），３．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），２．９３（１Ｈ，ｍ），２．４２（１Ｈ，ｍ），１．７７（１Ｈ，ｍ），１．６８（１Ｈ，ｍ），０．９９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）。

【0119】

合成例１７：９−（３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２，５−ジ−Ｏ−デオキシ−５−Ｏ−ヨード−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノプリン（化合物２７）の合成
化合物２７を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0120】

【化22】

【0121】

化合物１８（３２３ｍｇ，０．７４２ｍｍｏｌ）をピリジン（３．７ｍＬ）に溶解させた後、トリフェニルホスフィン（５８４ｍｇ，２．２３ｍｍｏｌ）とヨウ素（５６５ｍｇ，２．２３ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で３時間攪拌した。その後、トリフェニルホスフィン（３８９ｍｇ，１．４８ｍｍｏｌ）とヨウ素（３７７ｍｇ，１．４８ｍｍｏｌ）を追加し、室温で１６時間攪拌した。反応終了後、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液によるクエンチと酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、溶媒の減圧留去を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝２／１）で精製を行い、化合物２７（３５２ｍｇ，０．６４５ｍｍｏｌ，８７％）を得た。

【0122】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．９３（１Ｈ，ｓ），８．３５（１Ｈ，ｓ），８．１８（１Ｈ，ｓ），６．３８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ），４．７３（１Ｈ，ｍ），４．０６（１Ｈ，ｍ），３．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５，６．５ Ｈｚ），３．４７（１Ｈ，ｄｄ，１１，６．０Ｈｚ），３．２１（１Ｈ，ｍ），２．８６（１Ｈ，ｂｒｓ），２．３８（１Ｈ，ｍ），１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５ Ｈｚ），０．９３（９Ｈ，ｓ），０．１８（３Ｈ，ｓ），０．１５（３Ｈ，ｓ）。

【0123】

合成例１８：９−（３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２，５−ジ−Ｏ−デオキシ−β−Ｄ−エリトロ−ペント−４−エノフラノシル）−２−イソブチリルアミノプリン（化合物２８）の合成
化合物２８を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0124】

【化23】

【0125】

化合物２７（３５２ｍｇ，０．６４５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４ｍＬ）に溶解させた後、ジアザビシクロウンデセン（４８１μＬ，３．２３ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１．５時間攪拌した。反応終了後、溶媒の減圧留去を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝２／１）で精製を行い、化合物２８（２４０ｍｇ，０．５７４ｍｍｏｌ，８９％）を得た。

【0126】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．９５（１Ｈ，ｓ），８．１９（１Ｈ，ｓ），８．０６（１Ｈ，ｓ），６．５７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．５１（１Ｈ，ｍ），４．２６（１Ｈ，ｍ），３．０５（１Ｈ，ｂｒｓ），２．９５（１Ｈ，ｍ），２．５５ （１Ｈ，ｍ），１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０ Ｈｚ），１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０ Ｈｚ），０．９４（９Ｈ，ｓ），０．１８（３Ｈ，ｓ），０．１７（３Ｈ，ｓ）。

【0127】

合成例１９：９−（４− Ｃ−アジド−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２，５−ジ−Ｏ−デオキシ−５−Ｏ−ヨード−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−イソブチリルアミノプリン（化合物２９）の合成
化合物２９を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0128】

【化24】

【0129】

アジ化ナトリウム（１８７ｍｇ，２．８７ｍｍｏｌ）と一塩化ヨウ素（ヘキサン中１．０Ｍ，１．４４ｍＬ，１．４４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解させた後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解させた化合物２８（２４０ｍｇ，０．５７４ｍｍｏｌ）を加え、室温で３．５時間攪拌した。反応終了後、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液によるクエンチと酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、溶媒の減圧留去を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１）で精製を行い、化合物２９（２０６ｍｇ，０．３５１ｍｍｏｌ，６１％） を得た。

【0130】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．９４（１Ｈ，ｓ），８．６９（１Ｈ，ｓ），８．０８（１Ｈ，ｓ），６．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，６．０Ｈｚ），５．３９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），３．３４（１Ｈ，ｍ），２．７４（１Ｈ，ｂｒｓ），２．５８（１Ｈ，ｍ），１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），０．９７（９Ｈ，ｓ），０．２５（３Ｈ，ｓ），０．１８ （３Ｈ， ｓ）。

【0131】

合成例２０：２−アミノ−９−（４− Ｃ−アジド−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（化合物３１）の合成
化合物３１を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0132】

【化25】

【0133】

化合物２９（１５２ｍｇ，０．２５９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解させた後、安息香酸ナトリウム（３７３ｍｇ，２．５９ｍｍｏｌ）と１５−クラウン−５（５１４μＬ，２．５９ ｍｍｏｌ）を加え、９０℃で２４時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１） で精製を行い、粗精製の化合物３０を得た。
粗精製の化合物３０（＜０．１１３ ｍｍｏｌ）をイソプロピルアルコール（１．５ｍＬ）に溶解させた後、ヨウ化アンモニウム（１６．４ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）、ヒドラジン一水和物（１．５ｍＬ）を順次加え、室温で１５時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチルによる抽出を行った。硫酸マグネシウムによる有機層の乾燥と溶媒の減圧留去を行った後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝１／１０）で精製を行い、化合物３１（３８．４ｍｇ，０．０９４５ｍｍｏｌ，２工程３７％）を得た。

【0134】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）；δ８．７４（１Ｈ，ｓ），７．８３（１Ｈ，ｓ），７．４１（１Ｈ，ｓ），６．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．５Ｈｚ），５．１４（２Ｈ，ｂｒｓ），４．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，１．５ Ｈｚ），３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５ Ｈｚ），３．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５ Ｈｚ），３．２１（１Ｈ，ｍ），２．３８（１Ｈ，ｍ），０．９７（９Ｈ，ｓ），０．２１（３Ｈ，ｓ），０．１８（３Ｈ，ｓ）。

【0135】

合成例２１：２−アミノ−９−（４−Ｃ−アジド−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（化合物Ｐ４）の合成
化合物Ｐ４を、以下に示す反応工程にて合成した。

【0136】

【化26】

【0137】

化合物３１（３８．４ｍｇ，０．０９４５ｍｍｏｌ）をクロロホルム（２ｍＬ）とメタノール（２ｍＬ）に溶解させた後、酸性フッ化アンモニウム（３２３ｍｇ，５．６７ｍｍｏｌ）を加え、室温で４１時間攪拌した。続いて、酸性フッ化アンモニウム（３２３ｍｇ，５．６７ｍｍｏｌ）を追加し、室温で７２時間攪拌した。その後、５０℃で４２時間攪拌した。反応終了後、溶媒の減圧留去を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝１／６→１／４）で精製を行い、化合物Ｐ４（２２．６ｍｇ，０．０７７３ｍｍｏｌ，８２％）を得た。

【0138】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，５００ＭＨｚ）；δ８．５６（１Ｈ，ｓ），８．２６（１Ｈ，ｓ），６．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．０，４．０Ｈｚ），４．８８（１Ｈ，ｍ），３．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０ Ｈｚ），３．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），２．９０（１Ｈ，ｍ），２．５９（１Ｈ，ｍ）。

【0139】

合成例２２：化合物Ｃ１及びＣ２の合成
上述した非特許文献１の記載に基いて、以下の式で表される化合物Ｃ１及びＣ２を合成した。

【0140】

【化27】

【化28】

【0141】

合成例２３：２−アミノ−２’−デオキシ−４’−フルオロメチルアデノシン（化合物Ｒ１）の合成
２−アミノ−２’−デオキシ−４’−フルオロメチルアデノシン（化合物Ｒ１）を合成すべく、先ず、下記化合物３２（２’−Ｏ−Ａｃｅｔｙｌ−２−ａｍｉｎｏ−３’，５’−ｄｉ−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌ−４’−ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ）を、以下の通りにして合成した。

【0142】

【化29】

【0143】

すなわち、化合物９（５．７８ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）、２，６−ジアミノプリン（３．８７ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（３７．８ｍＬ、０．１５５ｍｏｌ）に１，２−ジクロロエタン（１０４ｍＬ）を加え、１時間加熱還流した。反応液を０℃に冷却した後、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（４．６６ｍＬ、２５．８ｍｍｏｌ）を加え、８時間加熱還流した。反応液を０℃に冷却後、飽和重曹水を加え撹拌し、生じた不溶物をセライト濾過により除去後、濾液有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１）により精製し、化合物３２を得た（５．１５ｇ、９．６０ｍｍｏｌ、７４．４％）。

【0144】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ）：δ７．６５（１Ｈ，ｓ），７．２４−７．０８（１０Ｈ，ｍ），６．０２（１Ｈ，ｄ），５．９８（１Ｈ，ｔ），５．７０（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．９５（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．８２（１Ｈ，ｄ），４．７１（１Ｈ，ｄｄ），４．６１（１Ｈ，ｄｄ），４．６２（１Ｈ，ｄ），４．５９（２Ｈ，ｄ），４．５６（１Ｈ，ｄ），４．５３（１Ｈ，ｄ），３．７０（２Ｈ，ｍ），２．０１（３Ｈ，ｓ）。

【0145】

次に、前記の通りにして得られた化合物３２を用い、下記の通りに化合物３３（２−Ａｍｉｎｏ−３’，５’−ｄｉ−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌ−４’−ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ）を合成した。

【0146】

【化30】

【0147】

すなわち、化合物３２（５．１５ｇ、９．６０ｍｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を酢酸で中和した後、濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解、水洗した。有機層を硫酸マグネシウム上乾燥、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１〜１０：１）により精製し、化合物３３を得た（４．７０ｇ、９．５０ｍｍｏｌ、９９．０％）。

【0148】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．８４（１Ｈ，ｓ），７．３８−７．２８（１０Ｈ，ｍ），６．７２（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），５．８６（１Ｈ，ｄ），５．８１（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），５．７４（１Ｈ，ｄ），５．０１（１Ｈ，ｄｄ），４．８９（１Ｈ，ｄ），４．６８−４．５３（５Ｈ，ｍ），４．２８（１Ｈ，ｄ），３．６８（１Ｈ，ｄｄ），３．６４（１Ｈ，ｄｄ）。

【0149】

次に、前記の通りにして得られた化合物３３を用い、下記の通りに化合物３４（２−Ａｍｉｎｏ−３’，５’−ｄｉ−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−４’−ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ）を合成した。

【0150】

【化31】

【0151】

すなわち、化合物３３（４．７０ｇ、９．５０ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．７４ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３８．０ｍＬ）に溶解し、０℃にてクロロチオノギ酸フェニル（１．５４ｍＬ、１１．４ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。メタノール（２ｍＬ）を加え撹拌した後、反応液を酢酸エチルで希釈、洗浄（飽和食塩水→０．１Ｍ塩酸→飽和食塩水→飽和炭酸水素ナトリウム水溶液）した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥後、濃縮し、残渣をトルエンで共沸し、粗製のチオ炭酸エステルを得た。
粗製のチオ炭酸エステル、水素化トリブチルスズ（１０．２ｍＬ、３７．９ｍｍｏｌ）をトルエン（９５．０ｍＬ）に溶解後、８５℃に加熱し、アゾビスイソブチロニトリル（２０ｍｇ）を加え、２時間撹拌した。反応液を濃縮後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１）により精製し、化合物３４を得た（３．２３ｇ、６．７５ｍｍｏｌ、７１．１％）。

【0152】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．８７（１Ｈ，ｓ），７．３７−７．２６（１０Ｈ，ｍ），６．７１（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．２３（１Ｈ，ｄ），５．８０（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．７０−４．５０（７Ｈ，ｍ），３．６４（２Ｈ，ｄｄ），３．６０（２Ｈ，ｄｄ），２．９１（１Ｈ，ｍ），２．５９（１Ｈ，ｍ）。

【0153】

次に、前記の通りにして得られた化合物３４を用い、下記の通りに化合物Ｒ１（２−Ａｍｉｎｏ−２’−ｄｅｏｘｙ−４’−ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ）を合成した。

【0154】

【化32】

【0155】

すなわち、ナフタレン（９．０８ｇ、７０．８ｍｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン（７６．１ｍＬ）に溶解し、金属リチウム（３６９ｍｇ、５３．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。溶液を−７８℃に冷却後、化合物３４（２．１２ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）の脱水テトラヒドロフラン溶液（３５．６ｍＬ）を加え、−４５℃で２時間撹拌した。メタノール（５ｍＬ）を加えた後、反応液を酢酸エチルで希釈し、脱イオン水で抽出した。水層を合わせ少量にまで濃縮した後、ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（脱イオン水〜５％メタノール）により精製し、真空乾燥の後、化合物Ｒ１を得た（０．９０ｇ、３．０ｍｍｏｌ、６８％）。

【0156】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．９１（１Ｈ，ｓ），６．７０（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．２４（１Ｈ，ｄｄ），５．７２（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），５．３６−５．３５（２Ｈ，ｍ），４．６０（１Ｈ，ｄｄ），４．５０（１Ｈ，ｄｄ），４．５１（１Ｈ，ｍ），３．５４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．５３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．８１（１Ｈ，ｍ），２．２２（１Ｈ，ｍ）。

【0157】

合成例２４：６、４’−フルオロメチル−２’−デオキシグアノシン（化合物Ｒ２）の合成
合成例２３にて得られた化合物Ｒ１を用い、下記の通り６、４’−フルオロメチル−２’−デオキシグアノシン（化合物Ｒ２）を合成した。

【0158】

【化33】

【0159】

すなわち、化合物Ｒ１（５００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）（４５．０ｍＬ）に溶解し、子牛脾臓由来アデノシンデアミナーゼ（５０ｕＬ、６．５ｕｎｉｔｓ）を加え、４０℃で２時間撹拌した。５℃で終夜静置し、析出した化合物Ｒ２を濾取、乾燥した（４０９ｍｇ）。更に濾液を少量にまで濃縮後、ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（ＯＤＳ ５０ｃｃ、０〜５％ ＭｅＯＨ）により精製（４４ｍｇ）した。先に得られたものと合わせ、化合物Ｒ２を得た（４５３ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、８９．９％）。

【0160】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ１０．５８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．９１（１Ｈ，ｓ），６．４２（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．１９（１Ｈ，ｄｄ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．０９（１Ｈ，ｔ），４．５９（１Ｈ，ｄｄ），４．４９（１Ｈ，ｄｄ），４．４９（１Ｈ，ｍ），３．５０（２Ｈ，ｍ），２．７１（１Ｈ，ｍ），２．２５（１Ｈ，ｍ）。

【0161】

合成例２５：２−アミノ−２’−デオキシ−４’−ビニルアデノシン（化合物Ｒ３）の合成
２−アミノ−２’−デオキシ−４’−ビニルアデノシン（化合物Ｒ３）を合成すべく、先ず、下記化合物３６（２−Ｂｅｎｚａｍｉｄｏ−Ｎ^６−ｂｅｎｚｏｙｌ−３’，５’−ｄｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−４’−ｖｉｎｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ）を以下の通りにして合成した。

【0162】

【化34】

【0163】

すなわち、化合物３５（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４，ｐｐ．６７１−６９０，２００４ 参照）（０．４２ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルスルホキシド（２．５ｍＬ）、乾燥トルエン（１．３ｍＬ）に溶解し、塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（３２８ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、乾燥ピリジン（１０４μＬ）、トリフルオロ酢酸（５２μＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈後、洗浄（飽和食塩水）、乾燥（無水硫酸マグネシウム）、濃縮した。残渣をテトラヒドロフランと３回共沸後、真空乾燥し、粗アルデヒドを得た。

【0164】

臭化メチルトリフェニルホスホニウム（１．０２ｇ、２．８６ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（７．１ｍＬ）に懸濁し、−７８℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウムヘキサン溶液（１．６０Ｍ、１．７９ｍＬ、２．８６ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌後、前記粗アルデヒド乾燥テトラヒドロフラン溶液（５．９ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を加え撹拌後、生成物を酢酸エチルにより抽出した。有機層を乾燥（無水硫酸マグネシウム）、濃縮後、残渣を少量のジクロロメタンに溶解し、シリカゲルを加え濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）により精製し、化合物３６を得た（２９３ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ、７１％）。

【0165】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ９．２９（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），９．２４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．４４（１Ｈ，ｓ），８．０４−７．４９（１０Ｈ，ｍ），６．４９（１Ｈ，ｔ），５．９８（１Ｈ，ｄｄ），５．５７（１Ｈ，ｄｄ），５．３４（１Ｈ，ｄｄ），４．９０（１Ｈ，ｔ），３．７２（１Ｈ，ｄ），３．６８（１Ｈ，ｄｄ），２．８７（３Ｈ，ｂｒ．ｓ），２．４９（２Ｈ，ｍ），０．９４（９Ｈ，ｓ），０．９１（９Ｈ，ｓ），０．０４，０．０３（１２Ｈ，ｓ）。

【0166】

次に、前記の通りにして得られた化合物３６を用い、下記の通りに化合物Ｒ３（２−Ａｍｉｎｏ−２’−ｄｅｏｘｙ−４’−ｖｉｎｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ）を合成した。

【0167】

【化35】

【0168】

すなわち、化合物３６（２９３ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（１．３ｍＬ）に溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウムテトラヒドロフラン溶液（１．０Ｍ、２．０１ｍＬ、２．０１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を濃縮後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２０：１）により精製し、粗ジオール（２９３ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ、７１％）を得た。粗ジオールをメタノール（１０ｍＬ）、４０％メチルアミン水溶液（１０ｍＬ）に溶解し、室温で４８時間撹拌した。反応液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１〜５：１）により精製した。残渣を脱イオン水から再結晶化し、化合物Ｒ３を得た（８３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、７０％）。

【0169】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．９４（１Ｈ，ｓ），６．７１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．１６（１Ｈ，ｔ），５．９５（１Ｈ，ｄｄ），５．６９（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），５．４９（１Ｈ，ｔ），５．３５（１Ｈ，ｄｄ），５．１９−５．１６（２Ｈ，ｍ），５．１８（１Ｈ，ｄｄ），４．５８（１Ｈ，ｑ），３．５０（１Ｈ，ｄｄ），３．４１（１Ｈ，ｄｄ），２．５４（１Ｈ，ｍ），２．１７（１Ｈ，ｍ）。

【0170】

合成例２６：２’−デオキシ−４’−ビニルグアノシン（化合物Ｒ４）の合成
２’−デオキシ−４’−ビニルグアノシン（化合物Ｒ４）を、以下の通りにして合成した。

【0171】

【化36】

【0172】

すなわち、合成例２５にて得られた化合物Ｒ３（３０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をトリス塩酸緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．５、２．８ｍＬ）に溶解し、子牛脾臓由来アデノシンデアミナーゼ（３μＬ、３．５ｕｎｉｔｓ）を加え、４０℃で５時間撹拌した。５℃で終夜静置後、析出した固体を濾取し、少量の脱イオン水で洗浄した。得られた固体を真空乾燥し、化合物２５を得た（２５ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ、８３％）。

【0173】

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ１０．６０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．９８（１Ｈ，ｓ），６．４４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．１０（１Ｈ，ｄｄ），５．９５（１Ｈ，ｄｄ），５．３４（１Ｈ，ｄｄ），５．２４（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），５．１９（１Ｈ，ｄｄ），５．１１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．５７（１Ｈ，ｔ），３．５０（１Ｈ，ｄ），３．４０（１Ｈ，ｄ），２．４４（１Ｈ，ｍ），２．１９（１Ｈ，ｍ）。

【0174】

上述の通りに合成して得られたヌクレオシド誘導体において、以下に示す方法にて、抗ウイルス活性及び細胞毒性を評価した。なお、化合物Ｐ３については、化合物Ｐ３’との混合物の形で評価に供した。

【0175】

試験例１：抗ＨＢＶ活性の評価（２週間評価系）
供試細胞として、ヒト肝ガン由来細胞株（ＨｅｐＧ２細胞）にＨＢＶ遺伝子を導入することにより、持続的にＨＢＶを産生するように調製された、ＨｅｐＧ２ ２．２．１５細胞を用いた。なお、ＨｅｐＧ２ ２．２．１５細胞は、１０％胎児ウシ血清含有ＤＭＥＭにおける継続培養にて維持した。また、当該細胞は、エピソームとして産生するＨＢＶ遺伝子を有するため、このエピソームＨＢＶのＤＮＡを定量し、上記ヌクレオシド誘導体の存在下における当該量の減少度によって抗ＨＢＶ活性を評価とした。得られた結果を表４乃至６に示す。

【0176】

より具体的には、ＨｅｐＧ２ ２．２．１５細胞を、１２穴細胞培養皿の各ウェルに１．５×１０^５ｃｅｌｌｓ／２ｍＬの濃度になるよう播種した。細胞が８０％コンフルエントに達した段階で、各ヌクレオシド誘導体を様々な濃度にて添加した。各ヌクレオシド誘導体を添加した培養液は４日毎に交換し、当該誘導体の存在下で１２日間培養した。その後、各ＨｅｐＧ２ ２．２．１５細胞から、ＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用い、全細胞ＤＮＡを抽出し、２００μＬの１×ＴＥバッファーに溶解した。次いで、このようにして抽出したＤＮＡを鋳型として、リアルタイムＰＣＲでＨＢＶ ＤＮＡを定量した。すなわち、ＨｅｐＧ２ ２．２．１５細胞からの抽出ＤＮＡのうち２μＬを２×ＳＹＢＲ ＰＣＲ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて増幅した。その増幅（ＰＣＲ）反応には、ＨＢＶポリメラーゼ領域を検出する下記のプライマーセットを用いた：
５’−ＧＣＧＡＧＧＡＣＴＧＧＧＧＡＣＣＣＴＧＴＧＡＣＧＡＡＣ−３’（配列番号：１）、及び ５’−ＧＴＣＣＡＣＣＡＣＧＡＧＴＣＴＡＧＡＣＴＣＴＧＣ−３’（配列番号：２）。
また、ＰＣＲの反応は、９５℃で１０分間、その後、９５℃で１５秒と６０℃で１分間とを４０サイクル行った。

【0177】

このようなＰＣＲ反応によって得られたデータを、ＳｔｅｐＯｎｅＴＭ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ２．０（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）で解析し、ＣＴ値を得た。次いで、既知濃度のＨＢＶプラスミドを１０倍ごとに希釈（２０から２×１０^８コピー）したものを用いて作成された検量線により、前記ＣＴ値を各ヌクレオシド誘導体存在下におけるＨＢＶのコピー数（ＨＢＶのＤＮＡ量）へと変換した。そして、ヌクレオシド誘導体の非存在下にて培養した対照におけるそれと比較し、その減少度からＥＣ_５０値を算出し、各ヌクレオシド誘導体の抗ＨＢＶ活性を評価した。得られた結果を表４乃至６に示す。

【0178】

試験例２：抗ＨＢＶ活性の評価(１週間評価系)
供試細胞として、前記ＨｅｐＧ２ ２．２．１５細胞を親株とする、ＨｅｐＧ２ ２．２．１５．７細胞を用いた。なお、ＨｅｐＧ２ ２．２．１５細胞は、１０％胎児ウシ血清、Ｇ４１８（５００μｇ／ｍｌ）及び抗生剤（ペニシリンとカナマイシン）含有ＤＭＥＭにおける継続培養にて維持した。また、ＨｅｐＧ２ ２．２．１５．７細胞は、ＨｅｐＧ２ ２．２．１５細胞同様、ゲノムに統合されたＤＮＡだけでなくエピソームとして産生されるＨＢＶ遺伝子を保持するＨＢＶ持続産生細胞である。そこで、各ヌクレオシド誘導体と共培養し、培養上清に放出されるウイルスのＤＮＡコピー数を定量し、その減少度を抗ＨＢＶ活性の評価の指標とした。

【0179】

より具体的には、コラーゲンコートされた９６穴細胞培養皿に細胞生存性９０％以上のＨｅｐＧ２ ２．２．１５．７細胞を２×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度で播種し、細胞播種同日に、様々な濃度にて各ヌクレオシド誘導体を添加した。３７℃、５％ＣＯ_２の標準培養条件で３日培養した後、さらに各ヌクレオシド誘導体を含むフレッシュな培地に交換し、交換後３日目の培養上清からＨＢＶ ＤＮＡを回収した。そして、回収した培地から、上記同様にして、定量的ＰＣＲを行い検量線からウイルスコピー数を求め、ヌクレオシド誘導体ごとのＥＣ_５０を算出した。得られた結果を表４乃至６に併せて示す。

【0180】

なお、表中、１Ｗは１週間評価形の結果を表し、２Ｗは２週間評価系の結果を表す。両者の違いは、培養期間だけでなく、評価するDNAが細胞内を含めた全ＤＮＡ(２週間評価系)か細胞外のみのＤＮＡ（１週間評価系）かの違いもある。

【0181】

試験例３：細胞毒性試験
上記ヌクレオシド誘導体に関し、ＨｅｐＧ２細胞に対する細胞毒性試験も行った。段階希釈後の各濃度の各ヌクレオシド誘導体を添加した培地と共に、ＨｅｐＧ２細胞を１×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度になるよう播種した。このようにして様々な濃度の各ヌクレオシド誘導体の存在下、３７℃、５％ＣＯ_２の標準培養条件で７日間、これら細胞を培養した後、各ウェルの生存細胞数をＭＴＴアッセイで定量化した。そして、得られた生存細胞数に基づき、各ヌクレオシド誘導体に関し、ＣＣ_５０を算出した。得られた結果を表４乃至６に併せて示す。

【0182】

なお、表４乃至６には、選択性指数として、ＣＣ_５０値をＥＣ_５０値で除した値も示している。この選択性指数が大きいほど、毒性／活性比が大きく、薬剤として好適である。

【0183】

【表4】

【0184】

【表5】

【0185】

【表6】

【0186】

表４乃至６に示した結果から明らかな通り、化合物Ｐ１乃至Ｐ４は、化合物Ｃ１及びＣ２並びにＲ１乃至Ｒ４と比較して、細胞毒性がより低いことが明らかとなった。また、化合物Ｐ１乃至Ｐ４は、ＨＢＶに対する優れた抗ウイルス活性を有することも明らかとなった。

【産業上の利用可能性】

【0187】

以上説明したように、本発明によれば、少なくともＨＢＶに対して優れた抗ウイルス活性を有し、宿主細胞に対する毒性が低いヌクレオシド誘導体を提供することが可能となる。したがって、本発明は、ウイルス感染症の予防又は治療において極めて有用である。

【配列表フリーテキスト】

【0188】

配列番号：１及び２
＜２２３＞人工的に合成されたプライマーの配列

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]