特許 6985666 ローヤルゼリー素材の製造方法、ローヤルゼリー素材、ローヤルゼリー含有飲食品、及びローヤルゼリー含有化粧料

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6985666

(24)【登録日】2021年11月30日

(45)【発行日】2021年12月22日

(54)【発明の名称】ローヤルゼリー素材の製造方法、ローヤルゼリー素材、ローヤルゼリー含有飲食品、及びローヤルゼリー含有化粧料

(51)【国際特許分類】

   A23L 21/20 20160101AFI20211213BHJP

   C12P 1/02 20060101ALI20211213BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20211213BHJP

   A61K 8/98 20060101ALI20211213BHJP

   A61K 8/9728 20170101ALI20211213BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20211213BHJP

【ＦＩ】

   A23L21/20

   C12P1/02 D

   A23L33/10

   A61K8/98

   A61K8/9728

   A61Q19/00

【請求項の数】8

【全頁数】31

(21)【出願番号】特願2017-243972(P2017-243972)

(22)【出願日】2017年12月20日

(65)【公開番号】特開2018-102292(P2018-102292A)

(43)【公開日】2018年7月5日

【審査請求日】2020年11月6日

(31)【優先権主張番号】特願2016-254419(P2016-254419)

(32)【優先日】2016年12月27日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】591045471

【氏名又は名称】アピ株式会社

(73)【特許権者】

【識別番号】391016842

【氏名又は名称】岐阜県

(74)【代理人】

【識別番号】110000800

【氏名又は名称】特許業務法人創成国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】秦 健敏

(72)【発明者】

【氏名】市原 賢二

(72)【発明者】

【氏名】吉村 明浩

(72)【発明者】

【氏名】澤井 美伯

【審査官】 安田 周史

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００６−２１９４３４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１１−１１６６６６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１０−０１１８４７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１２−１６２４８８（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ２３Ｌ ２１／２０

Ｃ１２Ｐ １／０２

Ａ２３Ｌ ３３／１０

Ａ６１Ｋ ８／９８

Ａ６１Ｋ ８／９７２８

Ａ６１Ｑ １９／００

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ローヤルゼリーを乾燥固形分換算で２〜３０質量％含有する液状基質に調製し、これに酵母を添加して、（１）ローヤルゼリー含有の糖分を減量するための処理、及び／又は（２）処理後の褐変を抑制するための処理として、ｐＨ５．５〜１１の条件下に発酵処理するローヤルゼリー素材の製造方法。

【請求項2】

前記酵母発酵処理後の乾燥固形分換算での１０−ヒドロキシ−２−デセン酸含有量が、処理前より増量される、請求項１記載のローヤルゼリー素材の製造方法。

【請求項3】

前記酵母発酵処理は、ローヤルゼリー由来のグルコース及びフルクトースからなる糖質の合計含有量が乾燥固形分換算で１０質量％以下となるように行う、請求項１又は２記載のローヤルゼリー素材の製造方法。

【請求項4】

下記（１）〜（３）から選ばれた１つ又は２つ以上に対し酵素処理を行なう、請求項１〜３のいずれか１項に記載のローヤルゼリー素材の製造方法。
（１）前記酵母発酵処理前のローヤルゼリー
（２）前記酵母発酵処理中のローヤルゼリー及び／又はその発酵物
（３）前記酵母発酵処理後の発酵物

【請求項5】

ローヤルゼリーの酵母発酵物を含み、ローヤルゼリー由来のグルコース及びフルクトースからなる糖質の合計含有量が乾燥固形分換算で１０質量％以下、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸の含有量が乾燥固形分換算で５質量％以上とされていることを特徴とするローヤルゼリー素材。

【請求項6】

蛋白質及び／又はペプチドの合計含有量が乾燥固形分換算で３５質量％以上である請求項５記載のローヤルゼリー素材。

【請求項7】

請求項５又は６記載のローヤルゼリー素材を含有するローヤルゼリー含有飲食品。

【請求項8】

請求項５又は６記載のローヤルゼリー素材を含有するローヤルゼリー含有化粧料。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ローヤルゼリーを酵母発酵処理してなるローヤルゼリー素材、そのローヤルゼリー素材を利用した飲食品、及びそのローヤルゼリー素材を利用した化粧料に関する。

【背景技術】

【0002】

ローヤルゼリーは、羽化後３〜１５日の雌のミツバチが下咽頭腺及び大腮腺から分泌する分泌物を混合して作るクリーム状の物質で、特有のタンパク質、脂肪酸、ミネラル等を含有し、血圧降下作用、抗腫瘍作用、創傷治癒促進、抗菌作用等の種々の機能性を有することが報告されている。したがって、従来、ローヤルゼリーは、栄養価の高い健康食品のみならず、医薬品、化粧品等の用途にも用いられてきた。

【0003】

しかしながら、ローヤルゼリーは、保存安定性が悪く、経時的に外観が変色するという問題があった。そこで、例えば、特許文献１には、ローヤルゼリーと、デンプン及びデキストロース当量が１８以下のデキストリンから選ばれる少なくとも一種とを、溶媒に溶解した後、凍結乾燥することにより得られるローヤルゼリー含有組成物が開示され、そのように構成した組成物においては、経時的な外観の変色が抑制されることが記載されている。

【0004】

一方、ローヤルゼリーの機能性をより優れたものとするために様々な処理が行われている。一例を挙げれば、例えば、特許文献２には、ローヤルゼリーを微生物で発酵させて得られる発酵物が開示され、かかる発酵物が、発酵前のローヤルゼリーよりも強い線維芽細胞賦活作用と細胞内チロシナーゼ活性抑制作用とを有しており、保存安定性にも優れ、化粧料への配合素材として好適であることが記載されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特開２０１１−１５２１０３号公報

【特許文献2】特開２００６−２１９４３４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

しかしながら、特許文献１に記載された方法によるデンプン等の添加だけでは変色抑制効果が十分ではなかった。また、変色抑制効果を得るための相当量でデンプン等を添加する必要があるので、得られる素材の全体中に含まれるローヤルゼリー成分の割合が目減りしてしまうという問題があった。一方、特許文献２には、ローヤルゼリーの乳酸菌発酵液について、それが沈殿・濁り、変色・着色などの保存安定性に優れていることが記載されているが、錠剤等の固形状の形態に調製されたときも同様の効果が認められるかどうか、明らかではなく、また、微生物として酵母を用いたときにも同様の効果が認められるか、明らかではなかった。

【0007】

よって、本発明の目的は、ローヤルゼリーの有用成分の目減りを最小限に抑えつつ、経時的な外観の変色を抑制することができるローヤルゼリー素材を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0008】

上記目的を達成するため、本発明者らが鋭意研究した結果、ローヤルゼリーを酵母発酵処理することにより、ローヤルゼリー製品の品質の１つの指標物質として知られるデセン酸の含有量を目減りさせることなく、ローヤルゼリー含有の糖分を顕著に減量させることができ、かかるローヤルゼリー素材は、経時的な外観の変色も抑制されることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0009】

すなわち、本発明の第１は、ローヤルゼリーを酵母発酵処理してローヤルゼリー含有の糖分を減量するローヤルゼリー素材の製造方法を提供するものである。

【0010】

また、本発明の第２は、ローヤルゼリーを酵母発酵処理して処理後の褐変を抑制するローヤルゼリー素材の製造方法を提供するものである。

【0011】

上記製造方法においては、前記酵母発酵処理後の乾燥固形分換算での１０−ヒドロキシ−２−デセン酸含有量が、処理前より増量されることが好ましい。

【0012】

また、上記製造方法においては、前記酵母発酵処理は、ローヤルゼリーを乾燥固形分換算で２〜３０質量％含有する液状基質に酵母を添加し、ｐＨ５．５〜１１の条件下に行うことが好ましい。

【0013】

また、上記製造方法においては、前記酵母発酵処理は、ローヤルゼリー由来のグルコース及びフルクトースからなる糖質の合計含有量が乾燥固形分換算で１０質量％以下となるように行うことが好ましい。

【0014】

また、上記製造方法においては、下記（１）〜（３）から選ばれた１つ又は２つ以上に対し酵素処理を行なうことが好ましい。
（１）前記酵母発酵処理前のローヤルゼリー
（２）前記酵母発酵処理中のローヤルゼリー及び／又はその発酵物
（３）前記酵母発酵処理後の発酵物

【0015】

一方、本発明の第３は、ローヤルゼリーの酵母発酵物を含み、ローヤルゼリー由来のグルコース及びフルクトースからなる糖質の合計含有量が乾燥固形分換算で１０質量％以下とされていることを特徴とするローヤルゼリー素材を提供するものである。

【0016】

上記ローヤルゼリー素材においては、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸の含有量が乾燥固形分換算で５質量％以上であることが好ましい。

【0017】

また、上記ローヤルゼリー素材においては、蛋白質及び／又はペプチドの合計含有量が乾燥固形分換算で３５質量％以上であることが好ましい。

【0018】

更に、本発明の第４は、上記のローヤルゼリー素材を含有するローヤルゼリー含有飲食品を提供するものである。

【0019】

更に、本発明の第５は、上記のローヤルゼリー素材を含有するローヤルゼリー含有化粧料を提供するものである。

【0020】

また、別の観点からは、本発明はさらに以下の技術も提供するものである。
すなわち、第６には、ローヤルゼリーを酵母発酵処理した後、乾燥して、褐変の抑制された乾燥固形状物を得るローヤルゼリー素材の製造方法を提供するものである。

【0021】

また、第７には、ローヤルゼリーを酵母発酵処理した後、乾燥して、凝集の抑制された乾燥固形状物を得るローヤルゼリー素材の製造方法を提供するものである。

【0022】

一方、第８には、ローヤルゼリーの酵母発酵物であって、ローヤルゼリー由来のグルコース及びフルクトースからなる糖質の合計含有量が乾燥固形分換算で１０質量％以下とされている該ローヤルゼリーの酵母発酵物を含み、乾燥固形状であることを特徴とするローヤルゼリー素材を提供するものである。

【0023】

上記の乾燥固形状であるローヤルゼリー素材においては、更に、乾燥助剤を含むことが好ましい。

【0024】

また、上記の乾燥固形状であるローヤルゼリー素材においては、前記乾燥助剤が、該乾燥助剤によって褐変が抑制される有効量で含まれることが好ましい。

【0025】

また、上記の乾燥固形状であるローヤルゼリー素材においては、前記乾燥助剤が、デンプン 、デキストリン、食物繊維、及びタンパク質からなる群から選ばれた１種又は２種以上の食用素材であることが好ましい。

【0026】

また、第９には、ローヤルゼリーの酵母発酵物に、乾燥助剤を、該乾燥助剤によって褐変が抑制される有効量で添加して、乾燥固形状にすることを特徴とするローヤルゼリー素材の褐変抑制方法を提供するものである。

【0027】

上記褐変抑制方法においては、前記乾燥助剤が、デンプン、デキストリン、食物繊維、及びタンパク質からなる群から選ばれた１種又は２種以上の食用素材であることが好ましい。

【0028】

更に、第１０には、上記の乾燥固形状であるローヤルゼリー素材を含有するローヤルゼリー含有飲食品を提供するものである。

【0029】

更に、第１１には、上記の乾燥固形状であるローヤルゼリー素材を含有するローヤルゼリー含有化粧料を提供するものである。

【発明の効果】

【0030】

本発明によれば、ローヤルゼリーを酵母発酵処理することにより、ローヤルゼリー製品の品質の１つの指標物質として知られるデセン酸の含有量を目減りさせることなく、ローヤルゼリー含有の糖分を顕著に減量させることができ、これにより経時的な外観の変色が抑制されたローヤルゼリー素材を提供することができる。更に、かかるローヤルゼリー素材は、これを乾燥固形状にしたときの凝集も抑制される。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1】試験例２において、各種ローヤルゼリー素材を使用した錠剤について、錠剤中の糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）、錠剤中の１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）の含有量、及び錠剤を所定環境下に保管したときの褐変について調べた結果を示す図表である。

【図2】試験例３において、各種ローヤルゼリー素材からなる粉末について、４０℃、湿度７５％の環境下での加速試験を行って、その際の粉末中の１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）の安定性を調べた結果を示す図表である。

【図3】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果を写真により示す図表であり、サンプルＡ０〜Ａ８についての結果を示す図表である。

【図4】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果を写真により示す図表であり、サンプルＡ９〜Ａ１６についての結果を示す図表である。

【図5】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果を写真により示す図表であり、サンプルＢ０〜Ｂ８についての結果を示す図表である。

【図6】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果を写真により示す図表であり、サンプルＢ９〜Ｂ１６についての結果を示す図表である。

【図7】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果を写真により示す図表であり、サンプルＣ０〜Ｃ８についての結果を示す図表である。

【図8】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果を写真により示す図表であり、サンプルＣ９〜Ｃ１６についての結果を示す図表である。

【図9】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果を写真により示す図表であり、サンプルＤ０〜Ｄ８についての結果を示す図表である。

【図10】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果を写真により示す図表であり、サンプルＤ９〜Ｄ１６についての結果を示す図表である。

【図11】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果をグラフ化して示す図表であり、図１１（１）はサンプルＡ０、Ａ３〜Ａ５、Ｂ０、Ｂ３〜Ｂ５についての結果を示す図表であり、図１１（２）はサンプルＡ０、Ａ１〜Ａ２、Ａ１６、Ｂ０、Ｂ１〜Ｂ２、Ｂ１６についての結果を示す図表であり、図１１（３）はサンプルＡ０、Ａ６〜Ａ８、Ｂ０、Ｂ６〜Ｂ８についての結果を示す図表であり、図１１（４）はサンプルＡ０、Ａ９〜Ａ１０、Ａ１４、Ｂ０、Ｂ９〜Ｂ１０、Ｂ１４についての結果を示す図表であり、図１１（５）はサンプルＡ０、Ａ１１〜Ａ１３、Ｂ０、Ｂ１１〜Ｂ１３についての結果を示す図表であり、図１１（６）はサンプルＡ０、Ａ１５、Ｂ０、Ｂ１５についての結果を示す図表である。

【図12】試験例７において、各種乾燥助剤を使用して調製された粉末状のローヤルゼリー素材について、５０℃での過酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた結果をグラフ化して示す図表であり、図１２（１）はサンプルＣ０、Ｃ３〜Ｃ５、Ｄ０、Ｄ３〜Ｄ５についての結果を示す図表であり、図１２（２）はサンプルＣ０、Ｃ１〜Ｃ２、Ｃ１６、Ｄ０、Ｄ１〜Ｄ２、Ｄ１６についての結果を示す図表であり、図１２（３）はサンプルＣ０、Ｃ６〜Ｃ８、Ｄ０、Ｄ６〜Ｄ８についての結果を示す図表であり、図１２（４）はサンプルＣ０、Ｃ９〜Ｃ１０、Ｃ１４、Ｄ０、Ｄ９〜Ｄ１０、Ｄ１４についての結果を示す図表であり、図１２（５）はサンプルＣ０、Ｃ１１〜Ｃ１３、Ｄ０、Ｄ１１〜Ｄ１３についての結果を示す図表であり、図１２（６）はサンプルＣ０、Ｃ１５、Ｄ０、Ｄ１５についての結果を示す図表である。

【発明を実施するための形態】

【0032】

本発明において用いられるローヤルゼリーとしては、特にその形態、産地等に制限はなく、生ローヤルゼリーや、生ローヤルゼリーを乾燥させて粉末化したローヤルゼリー粉末等のいずれの形態のものを使用してもよい。産地としては、例えば、中国、台湾、日本等のアジア諸国、ヨーロッパ諸国、北アメリカ諸国、ブラジル等の南アメリカ諸国のいずれでもよい。更には、原料ローヤルゼリーとして、例えば、酸・アルカリ処理や加熱処理、微粒子化処理、限外濾過、亜臨界処理、これらの処理の組合わせ等の前処理を行ったものを用いてもよい。

【0033】

本発明において用いられる酵母としては、特にその種属等に制限はないが、食品安全性の観点からは、飲食品の製造等のために従来用いられている食経験の豊富な酵母菌株や酵母含有製剤等であることが好ましい。例えば、酵母菌株としてサッカロマイセス セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）等が好ましく例示され、酵母含有製剤としては、パンやアルコール飲料製造用のイースト製剤等が好ましく採用され得る。

【0034】

本発明においては、上記ローヤルゼリーに上記酵母を作用させて、発酵処理を行なう。その条件等に特に制限はなく、適宜適当な条件を設定して酵母発酵物を得ることができるが、典型的な例を挙げると、ローヤルゼリーを適当な溶媒、例えば水（又は緩衝液）で所定倍率に希釈し、ローヤルゼリーを乾燥固形分換算で好ましくは２〜３０質量％、より好ましくは２．５〜３０質量％、更により好ましくは５〜３０質量％、最も好ましくは１０〜２５質量％含有する液状基質とし、これに酵母を添加して、好ましくはｐＨ５．５〜１１、より好ましくはｐＨ５．５〜１０、更により好ましくはｐＨ７〜８の条件下に振とうあるいは静置することなどにより行うことができる。酵母発酵に必要な酵母の栄養素は、ほぼローヤルゼリーのみで十分であるが、必要に応じて、例えば、ビタミン、ミネラル、アミノ酸等の栄養素を補填してもよい。あるいは本発明の作用効果を害しない範囲であれば、必要最小限の糖質を補填してもよい。また、温度条件としては、２５〜３５℃であることが好ましい。また、酵母の添加量としてはその液状基質の容量に対して酵母の生菌が最終濃度で１×１０^５〜５×１０^９個／ｍＬとなるように添加することが好ましく、最終濃度で１×１０^６〜２×１０^８個／ｍＬとなるように添加することがより好ましい。また、酵母発酵の処理時間としては、典型的には０．５時間〜７日間であり、より典型的には３時間〜５日間であり、更により典型的には２４時間〜３日間である。酵母発酵の処理条件が、それぞれ上記範囲外であると、ローヤルゼリー含有の糖分を減量する等の作用効果を奏しない場合があるので、好ましくない。なお、「乾燥固形分換算」とは、水分を除いた部分の量に換算することをいう。水分は、従来周知の食品分析法である加熱乾燥法やカール・フィッシャー法等に基づいて測定することが可能である。

【0035】

本発明においては、（１）酵母発酵処理前のローヤルゼリー、（２）酵母発酵処理中のローヤルゼリー及び／又はその発酵物、（３）酵母発酵処理後の発酵物、のそれぞれに対応する１つ又は２つ以上の段階又は工程において、酵素処理を行なってもよい。具体的には、酵素処理は、例えば、ローヤルゼリー及び／又はその発酵物、プロテアーゼ、多糖類分解酵素等の酵素、及び水（又は緩衝液）を含む反応液を、所定条件下でインキュベートすることにより実施され得る。そして、その際の処理条件は、酵素の種類、反応温度、酵素の力価等により適宜設定され得る。

【0036】

酵素処理のための酵素としては、例えば、プロテアーゼとしては、パパイン、ブロメライン、マイクロバイアル・アスパルティック・プロテアーゼの一種アスペルギロペプチダーゼＡ、ペプシン、パンクレアチン、バチルス・サブティリス（Bacillus subtilis）由来の中性プロテアーゼ（例えばプロテアーゼＮ「アマノ」Ｇ（アマノエンザイム社製））等が挙げられる。また、多糖類分解酵素としては、例えば、セルラーゼ、アビセラーゼ、ヘミセルラーゼ、グルコシダーゼ、マンナナーゼ（例えばスミチームＡＣＨ（新日本化学工業社製））、マンノシダーゼ、ガラクトシダーゼ、キシラナーゼ等が挙げられる。

【0037】

上記のようにして得られたローヤルゼリーの酵母発酵物は、それをそのまま液体の状態で本発明にかかるローヤルゼリー素材と成してもよく、濃縮等により溶媒を除いて濃縮液と成してもよく、更に、乾燥・粉末化して粉体と成してもよい。更には、加熱殺菌処理を施してもよく、酵母を生菌の状態で残存させてもよい。ただし、本発明にかかるローヤルゼリー素材の形態はこれらの形態に限られるものではない。

【0038】

上記に説明したローヤルゼリーの酵母発酵処理により、後述の実施例でも示されるように、ローヤルゼリー含有の糖分が顕著に減量される一方で、ローヤルゼリー製品の品質の１つの指標物質として知られるデセン酸の含有量の目減りがない（あるいは、糖分の減量により相対的に増量される。）。また、上記に説明したローヤルゼリーの酵母発酵処理により、後述の実施例でも示されるように、経時的な外観の変色が抑制される（特に褐変が抑制される。）。このような変色抑制効果は、糖分の減量によりメーラード反応や酸化反応等の変色に関わる反応が抑制されたことが１つの原因として考えられる。また、上記に説明したローヤルゼリーの酵母発酵処理により、後述の実施例でも示されるように、乾燥固形状にしたときの凝集が抑制される。このような凝集抑制効果は、糖分の減量により乾燥固形状物を構成する粒子どうしの結着に関わる性質が変化したことが１つの原因として考えられる。

【0039】

より具体的には、上記ローヤルゼリー素材は、グルコース及びフルクトースからなる糖質の合計含有量が乾燥固形分換算で１０質量％以下とされていることが好ましく、８質量％以下とされていることがより好ましく、５質量％以下とされていることが更により好ましい。また、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸の含有量が乾燥固形分換算で５質量％以上とされていることが好ましく、６質量％以上とされていることがより好ましく、６〜１５質量％とされていることが更により好ましく、６〜１０質量％とされていることが最も好ましい。また、蛋白質及び／又はペプチドの合計含有量は、乾燥固形分換算で３５質量％以上とされていることが好ましく、４０質量％以上とされていることがより好ましく、４０〜６０質量％とされていることが更により好ましく、４５〜５５質量％とされていることが最も好ましい。

【0040】

なお、これらの物質の定量は、糖分やデセン酸については、周知の低分子分析方法、例えば、ＨＰＬＣ分析や超高速液体クロマトグラフ分析等によって行うことができる。また、蛋白質及び／又はペプチドについては、周知の蛋白質・ペプチド分析方法、例えば、ＢＣＡ法、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法、Ｌｏｗｒｙ法等によって行うことができる。ただし、定量方法はこれらに限られるものではなく、当業者に周知の測定方法により、標準品の段階希釈液で予め作成された検量線にあてはめを行う等によって、適宜定量することが可能である。

【0041】

更に、本発明の別の態様においては、ローヤルゼリー素材は、上記に説明したローヤルゼリーの酵母発酵処理物であって、ローヤルゼリー由来のグルコース及びフルクトースからなる糖質の合計含有量が乾燥固形分換算で１０質量％以下、より好ましくは８質量％以下、更に好ましくは５質量％以下である、そのローヤルゼリーの酵母発酵物を含み、乾燥固形状とされていることが好ましい。乾燥固形状物となすための乾燥手段は、公知の手段を利用でき、特に制限はない。例えば、凍結乾燥、噴霧乾燥、ドラム乾燥、熱風乾燥、真空乾燥などが挙げられる。なかでも、熱変性が少ないという理由から凍結乾燥が好ましい。ここで、「乾燥固形状」もしくは「乾燥固形状物」とは、粉末状の形態に限られず、例えば、顆粒状、錠剤状等の形態を含む意味である。また、このような乾燥固形状の形態のローヤルゼリー素材においては、その全体中に上記ローヤルゼリー酵母発酵処理物を１０〜１００質量％含有するものであることが好ましく、より典型的には３０〜７５質量％含有するものである。また、その水分含量が１０質量％以下であればよく、５質量％以下であることがより好ましい。このような乾燥固形状と成すことにより、保存性の良いローヤルゼリー素材を提供することができる。

【0042】

また、本発明の好ましい態様において、上記ローヤルゼリー素材が乾燥固形状である場合には、更に、乾燥助剤を含むことがより好ましい。これによれば、乾燥助剤の配合によって、粉末状等の乾燥固形状の形態の維持が容易になるとともに、所定の場合には、経時的な外観の変色が更により一層抑制される（特に褐変が更により一層抑制される。）。その際、乾燥助剤は、糖分を減量したローヤルゼリー酵母発酵物を液体状、湿潤状等の形態から乾燥固形状と成すための調製工程に添加することがより好ましい。このとき使用する乾燥助剤としては、当業者に賦形剤等として周知の物質等を用いればよく、特に制限はない。例えば、下記表１に示すような賦形剤等が種々知られているので、これらを使用可能である。

【0043】

【表1】

【0044】

上記の態様に使用する乾燥助剤としては、１種類のものを単独で使用してもよく、２種類以上のものを併用してもよい。使用する乾燥助剤の含有量としては、所望する形態等に応じて乾燥助剤の種類を適宜選択し、含有量もそれに応じて適宜設定すればよいが、例えば、典型的には、上記ローヤルゼリー素材中に、乾燥助剤を乾燥固形分換算（複数添加する場合はその合計として）で１〜５０質量％程度含有させることが好ましく、１０〜２０質量％程度含有させることがより好ましい。

【0045】

より具体的には、上記の態様に使用する乾燥助剤としては、ヒドロキシプロピルデンプン、還元デンプン分解物、α化デンプン等のデンプン類や、粉あめ（ＤＥ２０〜４０程度）、マルトデキストリン（ＤＥ１０〜２０程度）、デキストリン（ＤＥ１０以下）、クラスターデキストリン、α-シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン等のデキストリン類や、ペクチン、アルギン酸ナトリウム、イヌリン、ローカストビーンガム、セルロース、キトサン等の食物繊維類や、ゼラチン等のタンパク質類等が挙げられる。なかでも、粉末状等の乾燥固形状の形態への調製の容易化とともに、褐変を抑制する観点からは、ヒドロキシプロピルデンプン、α化デンプン、還元デンプン分解物等のデンプン類や、デキストリン（ＤＥ３）、デキストリン（ＤＥ１１）、γ-シクロデキストリン、α-シクロデキストリン、クラスターデキストリン等のデキストリン類や、アルギン酸ナトリウム、キトサン、イヌリン、ローカストビーンガム、微結晶セルロース等の食物繊維類や、ゼラチン等のタンパク質類等が挙げられる。

【0046】

本発明にかかるローヤルゼリー素材は、ローヤルゼリー含有飲食品の製造のために好ましく用いられる。すなわち、種々の飲食品用の素材又は基材を用いた飲食品の調製や加工等の際に、あるいはその素材又は基材自体の調製や加工等の際に、その原料の一部として添加することなどによってローヤルゼリー含有飲食品を成すことができる。その形態に特に制限はなく、液状、粉末状、ゲル状、固形状等であり得る。また、剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤のいずれであってもよい。その中でも、吸湿性が抑えられることから、糖衣錠、セラック錠などのコーティング錠やカプセル剤であることが好ましい。また、その他の成分としてゲル化剤含有食品、糖類、香料、甘味料、油脂、基材、賦形剤、乾燥助剤、食品添加剤、副素材、増量剤等を適宜配合してもよい。

【0047】

本発明にかかるローヤルゼリー素材は、ローヤルゼリー含有化粧料の製造のために好ましく用いられる。すなわち、種々の化粧品用の素材又は基材を用いた化粧料の調製や加工等の際に、あるいはその素材又は基材自体の調製や加工等の際に、その原料の一部として添加することなどによってローヤルゼリー含有化粧料を成すことができる。その形態・剤形に特に制限はなく、乳液状、クリーム状、粉末状等であり得る。また、化粧品素材又は基材としては、一般に化粧料に共通して配合されるものであって、例えば、油分、精製水及びアルコールを主要成分として、界面活性剤、保湿剤、酸化防止剤、増粘剤、抗脂漏剤、血行促進剤、美白剤、ｐＨ調整剤、色素顔料、防腐剤、香料等が適宜配合され得る。

【0048】

本発明にかかるローヤルゼリー素材は、ローヤルゼリー由来の特有のタンパク質、脂肪酸、ミネラル等を豊富に含有しているので、生体への様々な有益な効果が期待できる。よって、上記の態様に代え、あるいは加えて、例えば、健康食品、サプリメント、栄養補助食品、機能性食品、化粧品、医薬品、医薬部外品、動物用健康食品、動物用サプリメント、動物用栄養補助食品、動物用機能性食品、動物用医薬品、動物用医薬部外品など各種の製品形態で、あるいはそれら製品と組み合わせて使用されることが可能である。また、各種の飲食品や動物・魚類用飼料と組み合わせて使用されることが可能である。

【実施例】

【0049】

以下に実施例を挙げて本発明について更に具体的に説明する。なお、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。

【0050】

＜調製例１−１＞
固形分３４質量％の生ローヤルゼリーに対して蒸留水を加えて、その乾燥固形分含量が１１質量％となるように調整し、これを攪拌して成分をよく溶解・分散させ、３Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを７．０に調整した。このローヤルゼリー溶液（ＲＪ溶液：以下、「ローヤルゼリー」を「ＲＪ」と称する場合がある。）の１００ｇに対して、市販のパン酵母含有製剤Ａ５００ｍｇを添加し、好気条件下に３０℃で２４時間インキュベートすることにより、酵母発酵処理を行なった。酵母発酵処理後、８０℃で３０分間加熱殺菌し、その後に凍結乾燥、粉末化して、調製例１−１の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0051】

＜調製例１−２＞
ＲＪ溶液の１００ｇに対して、パン酵母含有製剤Ａの５００ｍｇに加えて、糖化酵素製剤（「グルクザイムＡＦ６」天野エンザイム株式会社製）の１００ｍｇを添加した以外は、調製例１−１と同様にして、調製例１−２の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0052】

＜調製例２−１＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｂを使用した以外は、調製例１−１と同様にして、調製例２−１の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0053】

＜調製例２−２＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｂを使用した以外は、調製例１−２と同様にして、調製例２−２の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0054】

＜調製例３−１＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｃを使用した以外は、調製例１−１と同様にして、調製例３−１の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0055】

＜調製例３−２＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｃを使用した以外は、調製例１−２と同様にして、調製例３−２の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0056】

＜調製例４−１＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｄを使用した以外は、調製例１−１と同様にして、調製例４−１の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0057】

＜調製例４−２＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｄを使用した以外は、調製例１−２と同様にして、調製例４−２の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0058】

＜調製例５−１＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｅを使用した以外は、調製例１−１と同様にして、調製例５−１の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0059】

＜調製例５−２＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｅを使用した以外は、調製例１−２と同様にして、調製例５−２の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0060】

＜調製例６−１＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｆを使用した以外は、調製例１−１と同様にして、調製例６−１の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0061】

＜調製例６−２＞
酵母含有製剤として、市販のパン酵母含有製剤Ｆを使用した以外は、調製例１−２と同様にして、調製例６−２の酵母発酵ＲＪ末を得た。

【0062】

［試験例１］
調製例１−１〜調製例６−２で得られた酵母発酵ＲＪ末のそれぞれについて、その糖分含量を以下に示す方法で測定した。なお、比較のために、酵母発酵処理の原料としたＲＪ溶液や、酵母を添加直後に殺菌を行い、酵母発酵処理を施さないで調製例１−１と同様にして調製したＲＪ末についても、同様に、それらの糖分含量を測定した。

【0063】

（糖分含量の測定方法）
標準品（グルコース、フルクトース、スクロースその他の糖）５０ｍｇを５０ｍＬ容のメスフラスコに合一して秤量し、５０％アセトニトリルで１．００ｍｇ／ｍＬに定容した。公比５で段階希釈し、０．２０ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬの標準溶液を調製した。また、各被測定検体については、その６０ｍｇを２０ｍＬ容のメスフラスコに秤量し、５０％アセトニトリルで定容し、０．２０μｍフィルターで濾過をして分析試料とした。分析にはＨＰＬＣ−ＲＩＤ（示差屈折系）を使用し、各被測定検体について得られた測定値曲線下面積値を、別途上記標準溶液により予め作成した検量線にあてはめ、定量した。なお、ＨＰＬＣ−ＲＩＤ（示差屈折系）の分析条件は、以下のとおりとした。

【0064】

・移動相：７２％アセトニトリル
・カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ Ｓｕｇａｒ−Ｄ Ｐａｃｈｅｄ Ｃｏｌｕｍｎ
・流速：１ｍＬ／ｍ
・検出：ＲＩ（３０℃、ポジティブ）
・注入量１０μＬ

【0065】

その結果を表２に示す。

【0066】

【表2】

【0067】

その結果、表２に示すように、酵母発酵処理を施さないで調製した対照のＲＪ末では糖分がほとんど減量されなかったのに対して、酵母発酵処理によりローヤルゼリー含有の糖分が顕著に減量され、なかでもグルコースやフルクトースの減量化が顕著であった。

【0068】

［試験例２］
ローヤルゼリー素材においてローヤルゼリー含有の糖分を減量することによるメリットを検証するため、以下に示す錠剤を調製した。

【0069】

（錠剤１）
ローヤルゼリーの凍結乾燥製品（アピ株式会社製）を使用し、その１９２．５ｍｇに対して、賦形剤を５７．５ｍｇ使用して、１錠あたり２５０ｍｇの錠剤を常法に従い打錠成形した。

【0070】

（錠剤２）
ローヤルゼリーの酵素処理製品（アピ株式会社製）（１０質量％の乾燥助剤を含有）を使用し、その１９２．５ｍｇに対して、賦形剤を５７．５ｍｇ使用して、１錠あたり２５０ｍｇの錠剤を常法に従い打錠成形した。

【0071】

（錠剤３）
調製例５−１と同様にして調製した酵母発酵ＲＪ末を使用し、その１９２．５ｍｇに対して、賦形剤を５７．５ｍｇ使用して、１錠あたり２５０ｍｇの錠剤を常法に従い打錠成形した。

【0072】

（錠剤４）
調製例５−１と同様にして調製した酵母発酵ＲＪ末を使用し、調製例５−１と同様にローヤルゼリーの酵母発酵処理を行ない、その発酵処理液の固形分１００質量部に対して、乾燥助剤を３７質量部添加し、８０℃で１５分間加熱殺菌した後、凍結乾燥、粉末化した。得られた粉末の１９２．５ｍｇに対して、賦形剤を５７．５ｍｇ使用して、１錠あたり２５０ｍｇの錠剤を常法に従い打錠成形した。

【0073】

（錠剤５）
調製例５−１と同様にローヤルゼリーの酵母発酵処理を行ない、その後さらに酵素処理を施した。具体的には、酵母発酵処理後のＲＪ溶液のｐＨを３Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ８．７５に再調整し、その１５００ｍＬに対して、蛋白質分解酵素製剤（「スミチームＦＰ−Ｇ」新日本化学工業株式会社製）の１．６５ｇを添加し、５０℃で３時間、酵素処理を行なった。その酵素処理液の固形分１００質量部に対して、乾燥助剤を３０質量部添加し、８０℃で１５分間加熱殺菌した後、凍結乾燥、粉末化した。得られた粉末の１９２．５ｍｇに対して、賦形剤を５７．５ｍｇ使用して、１錠あたり２５０ｍｇの錠剤を常法に従い打錠成形した。

【0074】

（錠剤６）
錠剤５の調製において、酵素処理液の固形分１００質量部に対して、乾燥助剤を１０質量部添加した以外は、錠剤５と同様にして、１錠あたり２５０ｍｇの錠剤を得た。

【0075】

得られた錠剤１〜錠剤６について、その錠剤中の糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）含有量、及び錠剤を所定環境下に保管したときの外観の変色を調べた。具体的には、糖分は、試験例１で測定した方法と同様にして測定した。１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）は、以下に示す方法で測定した。錠剤の外観の変色は、常温、４０℃、５０℃の環境下（それぞれ湿度７５％の環境下）に３日間保管した後の錠剤の色調を、目視により観察した。

【0076】

（１０ＨＤＡの含有量の測定方法）
標準品（１０−ヒドロキシ−２−デセン酸：10-hydroxy-2-decenoic acid）５ｍｇを１００ｍＬ容のメスフラスコに秤量し、１００％メタノールで５０．０μｇ／ｍＬに定容した。公比５で段階希釈し、１０．０μｇ／ｍＬ、２．０μｇ／ｍＬの標準溶液を調製した。また、各被測定検体については、その２５ｍｇを５０ｍＬ容のメスフラスコに秤量し、１００％メタノールで定容し、０．２０μｍフィルターで濾過をして分析試料とした。分析にはＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフ）を使用し、各被測定検体について得られた測定値曲線下面積値を、別途上記標準溶液により予め作成した検量線にあてはめ、定量した。なお、ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフ）の分析条件は、以下のとおりとした。

【0077】

・移動相：超純水／アセトニトリル（ともに０．１％リン酸を含む）
・カラム：ＢＥＨ−Ｃ１８（１０ｃｍ）
・流速：０．３ｍＬ/ｍｉｎ
・検出：ＰＤＡ（２１０ｎｍ）
・注入量：１μＬ

【0078】

その結果を図１に示す。

【0079】

図１に示すように、酵母発酵処理を施さないローヤルゼリー素材を使用して調製した錠剤１，２に比べ、酵母発酵処理を経たローヤルゼリー素材を使用して調製した錠剤３〜６では、錠剤中の糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）が顕著に減量され、４０℃や５０℃での加速試験における褐変が抑制された。また、乾燥助剤を使用せずに調製された錠剤１と錠剤３との比較において、酵母発酵処理を施さないローヤルゼリー素材を使用して調製した錠剤１に比べ、酵母発酵処理を経たローヤルゼリー素材を使用して調製した錠剤３では、錠剤中の１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）含有量が相対的に増量された。よって、ローヤルゼリー含有の糖分が減量されたローヤルゼリー素材を使用することによって、錠剤全体の糖分含量が減量され、それに伴いデセン酸含有量が相対的に増量されるとともに、経時的な外観の変色（特に褐変）が抑制されることが明らかとなった。

【0080】

［試験例３］
ローヤルゼリー素材においてローヤルゼリー含有の糖分を減量することによるメリットを検証するため、以下に示す粉末を準備した。

【0081】

（粉末１）
調製例５−１と同様にして調製した酵母発酵ＲＪ末。この粉末の糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）は０質量％（測定限界以下）であった。

【0082】

（粉末２）
ローヤルゼリーの凍結乾燥処理製品（アピ株式会社製）。この粉末の糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）は３５．２質量％であった。

【0083】

（粉末３）
ローヤルゼリーの加熱処理製品（アピ株式会社製）。この粉末の糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）は３６．４質量％であった。

【0084】

（粉末４）
ローヤルゼリーの酵素処理製品（アピ株式会社製）。この粉末の糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）は２６．０質量％であった。

【0085】

上記粉末１〜粉末４について、その粉末をサンプル袋に入れ、４０℃、湿度７５％の環境下で保存することで加速試験を行い、経時的にサンプリングし、試料中の１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）の含有量を測定して、その安定性を検証した。１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）は、試験例３で測定した方法と同様にして測定した。

【0086】

その結果を図２に示す。

【0087】

図２に示すように、酵母発酵処理を施さないローヤルゼリー素材である粉末２〜４に比べ、酵母発酵処理を経たローヤルゼリー素材である粉末１では、粉末中の１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）含有量が、糖分含量の減量に伴い相対的に増量されるとともに、保存時の安定性も向上することが明らかとなった。これは、ローヤルゼリー原料に含まれる糖分その他の成分であって、デセン酸の安定性に影響を与える成分が、酵母発酵処理によって減量されたためであろうと考えられた。

【0088】

［試験例４］
発酵処理のための酵母として酵母含有製剤Ｅを使用した調製例５−１において、酵母発酵処理するＲＪ溶液の乾燥固形分換算含量を２．６、５．１、７．７、１１質量％と変え、更にｐＨ条件をｐＨ４〜７の範囲で変えて、それ以外は調製例５−１と同様にして、それぞれの条件における酵母発酵ＲＪ末を調製し、試験例１と同様にして、それらの糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）を求めた。なお、それぞれのｐＨ条件において、ＲＪ溶液の乾燥固形分換算含量を１０質量％に調整した場合であって、酵母を添加直後に殺菌を行い、酵母発酵処理を施さないで調製例５−１と同様にして調製したＲＪ末についても、対照として、同様にそれらの糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量）を求めた。

【0089】

その結果を表３に示す。

【0090】

【表3】

【0091】

その結果、表３に示すように、液状基質たるＲＪ溶液のｐＨをｐＨ５．０から酸性側に調整して酵母発酵処理を行なった場合、ローヤルゼリー含有の糖分はほとんど減量されなかった。また、液状基質たるＲＪ溶液のｐＨをｐＨ６．０に調整して酵母発酵処理を行なうと、ＲＪ溶液の乾燥固形分含量が５．１質量％以下の場合には、ローヤルゼリー含有の糖分はほぼ消失したが、ＲＪ溶液の乾燥固形分含量が７．７質量％の場合には、ローヤルゼリー含有の糖分は半分程度残存し、ＲＪ溶液の乾燥固形分含量が１１質量％の場合には、ローヤルゼリー含有の糖分はほとんど減量されなかった。一方、液状基質たるＲＪ溶液のｐＨをｐＨ７．０に調整して酵母発酵処理を行なうと、ＲＪ溶液の乾燥固形分含量が２．６〜１１質量％の範囲で、いずれの場合においても、ローヤルゼリー含有の糖分はほぼ消失した。よって、ローヤルゼリー含有の糖分を効率よく減量するには、ｐＨと固形分含量の両方のファクターが重要であることが明らかとなった。

【0092】

［試験例５］
発酵処理のための酵母として酵母含有製剤Ｅを使用した調製例５−１において、酵母発酵処理するＲＪ溶液の乾燥固形分換算含量を、下記表４に示すとおりに２．６〜３０質量％の範囲で変え、更にｐＨ条件をｐＨ５．５〜１２の範囲で変えて、それ以外は調製例５−１と同様にして、それぞれの条件における酵母発酵ＲＪ末を調製した。なお、酵母発酵処理の時間は、基本的には調製例５−１と同様に２４時間とし（下記表４では「１ｄ」で示される。）、ＲＪ溶液の乾燥固形分換算含量を２５又は３０質量％に調製した場合にあっては、更に３日間（下記表４中「３ｄ」で示される。）、５日間（下記表４では「５ｄ」で示される。）、又は７日間（下記表４では「７ｄ」で示される。）の処理時間についても酵母発酵ＲＪ末を調製した。得られた酵母発酵ＲＪ末について、試験例１と同様にして、それらの糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量、ないしはグルコースとフルクトースとスクロースの合計含有量）を求めた。また、試験例２と同様にして、それらの１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）の含有量を求めた。また、以下に示す方法で、それらの蛋白質及び／又はペプチドの含有量を求めた。なお、それぞれのｐＨ条件において、ＲＪ溶液の乾燥固形分換算含量を１１、２２、２５、又は３０質量％に調整した場合であって、酵母を添加直後に殺菌を行い、酵母発酵処理を施さないで調製例５−１と同様にして調製したＲＪ末についても、対照として（下記表４では「Ｎ」で示される。）、同様にそれらの糖分含量（グルコースとフルクトースの合計含有量、ないしはグルコースとフルクトースとスクロースの合計含有量）、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）の含有量、及び蛋白質及び／又はペプチドの含有量を求めた。

【0093】

（蛋白質・ペプチドの含有量の測定方法）
標準品（ウシ血清アルブミン：ＢＳＡ）２０ｍｇを１０ｍＬ容のメスフラスコに秤量し、超純水で２．００ｍｇ／ｍＬに定容した。その後、公比２で段階希釈し、１．００ｍｇ／ｍＬ〜０．０３ｍｇ／ｍＬの標準溶液を調製した。また、各被測定検体については、その５ｍｇを１５ｍＬ容の遠沈管に秤量し、２．５％ＳＤＳ水溶液を５ｍＬ加えたうえ、９５℃で１０分間加熱した後、３０００ｒｐｍで、５分間後遠心分離して、得られた上清を分析試料とした。分析には、蛋白質・ペプチド用定量キット（「BCA Protein assay kit」Thermo Fisher Scientific社）を使用し、キットの添付プロトコールに従い、プレートリーダーにて５６２ｎｍの吸光度を測定した。別途上記標準溶液により予め作成した検量線にあてはめ、定量した。

【0094】

その結果を表４に示す。

【0095】

【表4】

【0096】

その結果、表４に示すように、液状基質たるＲＪ溶液のｐＨがｐＨ５．５〜１１の範囲において、ローヤルゼリー含有の糖分を減量する効果や１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）の増量効果が認められた。更には、蛋白質及び又はペプチドについても、増量効果が認められた。また、液状基質たるＲＪ溶液の乾燥固形分含量が２．６〜３０質量％の範囲において、ローヤルゼリー含有の糖分を減量する効果や１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０ＨＤＡ）の増量効果が認められた。更には、蛋白質及び又はペプチドについても、増量効果が認められた。ただし、液状基質たるＲＪ溶液の乾燥固形分含量が２５質量％や３０質量％の場合には、本試験例の条件においては、処理に時間を要した。一方、液状基質たるＲＪ溶液のｐＨをｐＨ１２に調整して酵母発酵処理を行なうと、液状基質たるＲＪ溶液の乾燥固形分含量が１１質量％の場合であっても、ローヤルゼリー含有の糖分を減量する効果は得られなかった。よって、試験例４の結果同様に、ローヤルゼリー含有の糖分を効率よく減量するには、ｐＨと固形分含量の両方のファクターが重要であることが明らかとなった。

【0097】

［試験例６］
特開２００６−２１９４３４号公報に記載された発明と、本発明の相異を検証するため、以下に示す検体を調製した。

【0098】

（検体１）
特開２００６−２１９４３４号公報の製造例４と同様にしてローヤルゼリーの酵母発酵物を調製した。

【0099】

具体的には、ローヤルゼリーの凍結乾燥製品（アピ株式会社製）を使用し、その凍結乾燥ローヤルゼリー粉末３０ｇに、蒸留水９７０ｇを加えて懸濁液を調製し、加熱殺菌した。この懸濁液にグルコアミラーゼ０．３ｇ、パパイン０．３ｇ、及びペクチナーゼ０．３ｇを加えた後、市販のパン酵母含有製剤Ｅを酵母菌数が１０^８個／ｍＬとなるように接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、その後に凍結乾燥して、これを検体１のＲＪ末とした。

【0100】

（検体２）
特開２００６−２１９４３４号公報の製造例９と同様にしてローヤルゼリーの酵母発酵物を調製した。

【0101】

具体的には、ローヤルゼリーの凍結乾燥製品（アピ株式会社製）を使用し、その凍結乾燥ローヤルゼリー粉末３０ｇに、蒸留水９７０ｇを加えて懸濁液を調製し、加熱殺菌した。この懸濁液に市販のパン酵母含有製剤Ｅを酵母菌数が１０^８個／ｍＬとなるように接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、その後に凍結乾燥して、これを検体２のＲＪ末とした。

【0102】

（検体３）
検体１の調製において、酵母を接種する前の懸濁液に添加したグルコアミラーゼ、パパイン、及びペクチナーゼを、いずれも加熱失活させて使用し、その後接種する酵母含有製剤Ｅも加熱失活させて使用した以外は、上記検体１と同様にして、検体３のＲＪ末を調製した。

【0103】

（検体４）
検体２の調製において、酵母含有製剤Ｅを加熱失活させて使用した以外は、上記検体２と同様にして、検体４のＲＪ末を調製した。

【0104】

（検体５）
検体２の調製において、酵母を接種する懸濁液のｐＨを６Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを７．０に調整した以外は、上記検体２と同様にして、検体５のＲＪ末を調製した。

【0105】

得られた検体１〜検体５について、その粉末中のグルコース、フルクトース、及びスクロースの含有量を、試験例１で測定した方法と同様にして測定した。なお、比較のために、原料としたローヤルゼリーの凍結乾燥製品についても、同様に、糖分含量を測定した。

【0106】

その結果を表５に示す。

【0107】

【表5】

【0108】

その結果、表５に示すように、特開２００６−２１９４３４号公報の製造例４と同様にして調製した検体１のＲＪ末や、同製造例９と同様にして調製した検体２のＲＪ末では、酵素や酵母を加熱失活させて添加して調製した検体３のＲＪ末や、酵素処理を施さずに酵母を加熱失活させて添加して調製した検体４のＲＪ末に比べて、糖分の減量がほとんど認められなかった。これに対して、酵母を接種する際の懸濁液のｐＨをｐＨ７．０に調整して調製した検体５のＲＪ末では、糖分の減量が顕著であった。よって、特開２００６−２１９４３４号公報に記載された酵母発酵物では、糖分の減量化が本発明のようには十分になされておらずに、その原因の１つにはｐＨ条件の不適合が挙げられるのではないかと考えられた。

【0109】

［試験例７］
ローヤルゼリー素材においてローヤルゼリー含有の糖分を減量することによるメリットを検証するため、以下に示すようにして検体を調製した。

【0110】

＜Ａ＞ローヤルゼリーの酵母発酵処理
固形分３０質量％の生ローヤルゼリーの３．９５ｋｇに対して超純水８．００ｋｇを加えて、これを攪拌して成分をよく溶解・分散させるとともに、２０％水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを７．０に調整した（乾燥固形分含量：約１０質量％）。このローヤルゼリー溶液（ＲＪ溶液）の約１２．２ｋｇに対して、市販のパン酵母含有製剤Ｅ６０ｇを添加し（ＲＪ溶液の固形分の５％）、好気条件下に３０℃で４８時間インキュベートすることにより、酵母発酵処理を行なった。酵母発酵処理後には、６０℃達温後に３０分間維持して加熱殺菌した。このようにして得られたローヤルゼリーの酵母発酵処理液を、以下「ＦＹ−ＲＪ溶液」と称する場合がある。
上記ＦＹ−ＲＪ溶液の糖分含量（グルコース、フルクトース、及びスクロース）を試験例１と同様にして測定したところ、いずれも検出限界以下の含有量であり、ローヤルゼリー含有の糖分は著しく減量していた。
上記ＦＹ−ＲＪ溶液に対して、後述の表６に示す乾燥助剤をそれぞれ、乾燥固形分換算にして１５質量％の量となるように添加し、よく混合したうえ、ディスポーザブルアルミ角皿に２０ｇ程度分注し、棚式凍結乾燥器にて凍結乾燥した。乾燥温度は３５℃とし、乾燥時間は３日とした。また、コントロールとして、乾燥助剤を添加していないＦＹ−ＲＪ溶液も同様に凍結乾燥した。なお、乾燥助剤として増粘性のあるペクチン、アルギン酸ナトリウム、ローカストビーンガムを使用する場合については、それぞれを乾燥固形分換算にして５質量％の量となるように添加したうえ、更に微結晶セルロースを併用して、これを１０質量％の量となるように添加した。
得られたブロック状の凍結乾燥物を卓上ミルで粉砕し、検体とした。

【0111】

＜Ｂ＞ローヤルゼリー溶液（非処理）
上記＜Ａ＞で使用した固形分３０質量％の生ローヤルゼリーの４．００ｋｇに対して超純水８．００ｋｇを加えて、これを攪拌して成分をよく溶解・分散させ、乾燥固形分含量約１０．９２質量％のローヤルゼリー溶液（ＲＪ溶液）を得、この非処理のローヤルゼリー溶液に対して、上記＜Ａ＞で行ったのと同様にして、後述の表６に示す乾燥助剤をそれぞれ添加したうえ、凍結乾燥物を得た。得られたブロック状の凍結乾燥物を卓上ミルで粉砕し、検体とした。
なお、上記ＲＪ溶液の糖分含量（グルコース、フルクトース、及びスクロース）を試験例１と同様にして測定したところ、それぞれの乾燥固形分換算質量は、グルコースで１３．８６質量％であり、フルクトースで１３．２２質量％であり、スクロースで０．９７質量％の含有量であった。

【0112】

＜Ｃ＞ローヤルゼリー酵母発酵液の酵素処理
上記＜Ａ＞で調製したＦＹ−ＲＪ溶液の４．７５ｋｇに２０％水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨを８．７５に調整したうえ、蛋白質分解酵素製剤（「スミチームＦＰ−Ｇ」新日本化学工業株式会社製）の４．９６ｇを添加し（ＦＹ−ＲＪ溶液の固形分の１％）、５０℃で３時間、酵素処理を行なった。酵素処理後には、７８℃達温後に１５分間維持して失活処理した。このようにして得られたローヤルゼリー酵母発酵液の酵素処理液に対して、上記＜Ａ＞で行ったのと同様にして、後述の表６に示す乾燥助剤をそれぞれ添加したうえ、凍結乾燥物を得た。得られたブロック状の凍結乾燥物を卓上ミルで粉砕し、検体とした。

【0113】

＜Ｄ＞ローヤルゼリー溶液の酵素処理
上記＜Ｂ＞で調製したＲＪ溶液の６．００ｋｇに２０％水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨを８．７４に調整したうえ、蛋白質分解酵素製剤（「スミチームＦＰ−Ｇ」新日本化学工業株式会社製）の６．５６ｇを添加し（ＲＪ溶液の固形分の１％）、５０℃で３時間、酵素処理を行なった。酵素処理後には、８０℃達温後に１５分間維持して失活処理した。このようにして得られたローヤルゼリー溶液の酵素処理液に対して、上記＜Ａ＞で行ったのと同様にして、後述の表６に示す乾燥助剤をそれぞれ添加したうえ、凍結乾燥物を得た。得られたブロック状の凍結乾燥物を卓上ミルで粉砕し、検体とした。

【0114】

表６には、上記の検体の調製に使用した乾燥助剤の情報とともに、各乾燥助剤ごとに付したサンプル名をまとめて示す。

【0115】

【表6-1】

【0116】

【表6-2】

【0117】

【表6-3】

【0118】

【表6-4】

【0119】

［評価１］
（１）苛酷試験による色調の変化
５０℃での苛酷試験を行って、その際の粉末の色調の変化を調べた。具体的には、サンプルＲＪ粉末を約１０ｇずつ樹脂フィルムからなるジップ容器に入れ、封を閉じて容器ごと５０℃の恒温器に入れた。苛酷試験開始前と、開始１日後、３日後、７日後、１４日後に写真撮影と色差測定を行った。

【0120】

色差測定には色差計（ZE-2000、NIPPON DENSHOKU）を使用し、ＣＩＥ（国際照明委員会）Ｌ＊ａ＊ｂ＊色空間表示系におけるａ＊値、ｂ＊値、Ｌ＊値を測定し、下記式（１）によってＲＪ粉末の色差（ΔＥ_ｉ）を算出した（ｎ＝３）。

【0121】

ΔＥ_ｉ＝｛（Ｌ_ｉ−Ｌ_０）^２＋（ａ_ｉ−ａ_０）^２＋（ｂ_ｉ−ｂ_０）^２｝^１/２・・・（１）
（式中、Ｌ_０、ａ_０、及びｂ_０は、それぞれ苛酷試験開始前におけるＲＪ粉末のＬ＊値、ａ＊値、及びｂ＊値であり、Ｌ_ｉ、ａ_ｉ、及びｂ_ｉは、それぞれ苛酷試験後におけるＲＪ粉末のＬ＊値、ａ＊値、及びｂ＊値である。）

【0122】

写真撮影の結果を図３〜図１０に、色差測定の結果を表７に、それぞれ示す。また、図１１及び図１２には、色差測定の結果をグラフ化して示す。

【0123】

【表7-1】

【0124】

【表7-2】

【0125】

【表7-3】

【0126】

【表7-4】

【0127】

その結果、特に、図１１にグラフ化して示されるように、ローヤルゼリーに酵母発酵処理を施して調製したＲＪ粉末（Ａ０〜Ａ１６のサンプル）は、酵母発酵処理を施さないで調製したＲＪ粉末（Ｂ０〜Ｂ１６のサンプル）に比べ、苛酷試験における経時的な外観の変色（特に褐変）が抑制された。また、図１２にグラフ化して示されるように、ローヤルゼリーに酵母発酵処理と酵素処理を施して調製したＲＪ粉末（Ｃ０〜Ｃ１６のサンプル）は、ローヤルゼリーに酵素処理を施したが、酵母発酵処理を施さないで調製したＲＪ粉末（Ｄ０〜Ｄ１６のサンプル）に比べ、苛酷試験における経時的な外観の変色（特に褐変）が抑制された。このような変色抑制効果は、酵母発酵処理が施されたことにより糖分が減量し、メーラード反応や酸化反応等の変色に関わる反応が抑制されたことが１つの原因として考えられた。

【0128】

また、サンプルＡ５（デキストリンＤＥ３）、Ａ１（ヒドロキシプロピルデンプン）、Ａ２（α化デンプン）、Ａ１６（還元デンプン分解物）、Ａ７（γ-シクロデキストリン）、Ａ８（α-シクロデキストリン）、Ａ１０（アルギン酸ナトリウム）、Ａ１４（キトサン）、Ａ１１（イヌリン）、Ａ１２（ローカストビーンガム）、Ａ１３（微結晶セルロース）、Ａ１５（ゼラチン）、Ｃ４（デキストリンＤＥ１１）、Ｃ５（デキストリンＤＥ３）、Ｃ１（ヒドロキシプロピルデンプン）、Ｃ２（α化デンプン）、Ｃ１６（還元デンプン分解物）、Ｃ６（クラスターデキストリン）、Ｃ７（γ-シクロデキストリン）、Ｃ８（α-シクロデキストリン）、Ｃ１０（アルギン酸ナトリウム）、Ｃ１４（キトサン）、Ｃ１１（イヌリン）、Ｃ１２（ローカストビーンガム）、Ｃ１５（ゼラチン）の結果にみられるように、それぞれに使用された乾燥助剤、デキストリン（ＤＥ３）、デキストリン（ＤＥ１１）、ヒドロキシプロピルデンプン、α化デンプン、還元デンプン分解物、γ-シクロデキストリン、α-シクロデキストリン、アルギン酸ナトリウム、キトサン、イヌリン、ローカストビーンガム、微結晶セルロース、ゼラチン、クラスターデキストリンによって、酵母発酵処理による変色抑制効果は、更に増長された。一方で、サンプルＡ３、Ａ９、Ｃ３、Ｃ９の結果にみられるように、それぞれに使用された乾燥助剤、デキストリン（ＤＥ２５）、ペクチンは、かえって酵母発酵処理による変色抑制効果を打ち消してしまう結果となった。

【0129】

［評価２］
（２）苛酷試験による凝集状態の変化
上記（１）と同様にして５０℃での苛酷試験を行って、その際の粉末の凝集状態の変化を調べた。具体的には、下記の基準で評価した。

【0130】

（スコア基準）
０ - 凝集がまったく認められない
１ * ごく僅かに凝集が認められるが、流動しただけで崩壊する程度
２ ** 凝集物の長径が４ｍｍ未満の凝集が多数認められる
３ *** 凝集物の長径が４ｍｍ以上８ｍｍ未満の凝集が多数認められる
４ **** 凝集物の長径が８ｍｍ以上の凝集が認められる
５ ***** 完全に固化している

【0131】

結果は、表８にまとめた。

【0132】

【表8-1】

【0133】

【表8-2】

【0134】

【表8-3】

【0135】

【表8-4】

【0136】

その結果、上記表８−１及び表８−３に示した結果にみられるように、ローヤルゼリーに酵母発酵処理を施して調製したＲＪ粉末（Ａ０〜Ａ１６のサンプル）は、酵母発酵処理を施さないで調製したＲＪ粉末（Ｂ０〜Ｂ１６のサンプル）に比べ、苛酷試験における粉末の凝集が抑制された。また、上記表８−２及び表８−４に示した結果にみられるように、ローヤルゼリーに酵母発酵処理と酵素処理を施して調製したＲＪ粉末（Ｃ０〜Ｃ１６のサンプル）は、ローヤルゼリーに酵素処理を施したが、酵母発酵処理を施さないで調製したＲＪ粉末（Ｄ０〜Ｄ１６のサンプル）に比べ、苛酷試験における粉末の凝集が抑制された。このような凝集抑制効果は、酵母発酵処理が施されたことにより糖分が減量し、ＲＪ粉末を構成する粒子どうしの結着に関わる性質が変化したことが１つの原因として考えられた。

【0137】

なお、サンプルＡ３、Ａ４、Ａ６の結果にみられるように、それぞれに使用された乾燥助剤、デキストリン（ＤＥ２５）、デキストリン（ＤＥ１１）、クラスターデキストリンにより、かえって酵母発酵処理による粉末の凝集抑制効果が打ち消される結果となった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】