特許 6987041 脊髄性筋萎縮症におけるエクソン包含のための修飾アンチセンスオリゴマー

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6987041

(24)【登録日】2021年12月2日

(45)【発行日】2021年12月22日

(54)【発明の名称】脊髄性筋萎縮症におけるエクソン包含のための修飾アンチセンスオリゴマー

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/113 20100101AFI20211213BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20211213BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20211213BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20211213BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20211213BHJP

【ＦＩ】

   C12N15/113 ZZNA

   A61P21/00

   A61P43/00 111

   A61P43/00 105

   A61K31/675

   A61K47/64

【請求項の数】15

【全頁数】230

(21)【出願番号】特願2018-510718(P2018-510718)

(86)(22)【出願日】2016年8月26日

(65)【公表番号】特表2018-525015(P2018-525015A)

(43)【公表日】2018年9月6日

(86)【国際出願番号】US2016048965

(87)【国際公開番号】WO2017040271

(87)【国際公開日】20170309

【審査請求日】2019年8月22日

(31)【優先権主張番号】62/379,696

(32)【優先日】2016年8月25日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/211,678

(32)【優先日】2015年8月28日

(33)【優先権主張国】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】515192368

【氏名又は名称】サレプタ セラピューティクス，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100107489

【弁理士】

【氏名又は名称】大塩 竹志

(72)【発明者】

【氏名】パッシーニ， マルコ エー．

(72)【発明者】

【氏名】ハンソン， ガンナー ジェイ．

【審査官】 佐久 敬

(56)【参考文献】

【文献】 特表２０１５−５０４６５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１５／１２０４５０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１４／１６９２４３（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 国際公開第２０１４／１１３５４０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１２−５３０７１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 米国特許出願公開第２０１４／０３２９７７２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】 国際公開第２０１３／０８６２０７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１５−５２３８５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１５／０３５４６０（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ１２Ｎ

Ａ６１Ｋ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｖ）：

【化302】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であって、
式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化303】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化304】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化305】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化306】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化307】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、該ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、該ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
該ターゲティング配列は、（ａ）配列番号３７を含むか、または（ｂ）配列番号３５および３７から選択され、
ここで、以下の条件のうちの少なくとも１つが存在する：
ａ）少なくとも１つのＲ^１が式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）であるか、あるいは
ｂ）Ｒ^２がＧであるか、またはＴが

【化308】

[この文献は図面を表示できません]

である、化合物または薬学的に許容されるその塩。

【請求項2】

Ｔが式：

【化309】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２がＨである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

各Ｒ^１が

【化310】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔが

【化311】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２がＨであり、ここで、少なくとも１つのＲ^１が

【化312】

[この文献は図面を表示できません]

である、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

各Ｒ^１が

【化313】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔが

【化314】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２がＨであり、ここで、少なくとも１つのＲ^１が

【化315】

[この文献は図面を表示できません]

である、請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ^２がＧであり、Ｔが式：

【化317】

[この文献は図面を表示できません]

であり、各Ｒ^１が−Ｎ（ＣＨ_３）_２である、請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ^２がＨおよびアシルから選択され、Ｔが式：

【化318】

[この文献は図面を表示できません]

であり、各Ｒ^１が−Ｎ（ＣＨ_３）_２である、請求項１に記載の化合物。

【請求項7】

Ｇが式：

【化319】

[この文献は図面を表示できません]

であり、式中、Ｒ^ａがＨ、アセチル、ベンゾイルおよびステアロイルから選択される、請求項５または６に記載の化合物。

【請求項8】

前記ターゲティング配列が、配列番号３５および３７から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

前記ターゲティング配列が配列番号３７である、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

前記ターゲティング配列が配列番号３５である、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

Ｚが１６〜２３の整数であり、前記ターゲティング配列が配列番号３５および３７から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項12】

Ｚが１６であり、前記ターゲティング配列が配列番号３５である、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項13】

Ｚが２３であり、前記ターゲティング配列が配列番号３７である、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項14】

式（Ｖ）：

【化320】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物であって、
式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化321】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化322】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化323】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化324】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化325】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、該ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、該ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
該ターゲティング配列は、（ａ）配列番号３７を含むか、または（ｂ）配列番号３５および３７から選択され、
ここで、以下の条件のうちの少なくとも１つが存在する：
ａ）少なくとも１つのＲ^１が式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）であるか、あるいは
ｂ）Ｒ^２がＧであるか、またはＴが

【化326】

[この文献は図面を表示できません]

である、医薬組成物。

【請求項15】

式（Ｖ）：

【化327】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、脊髄性筋萎縮症の処置を必要とする対象において脊髄性筋萎縮症を処置するための組成物であって、
式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化328】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化329】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化330】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化331】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化332】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、該ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、該ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
該ターゲティング配列は、（ａ）配列番号３７を含むか、または（ｂ）配列番号３５および３７から選択され、
ここで、以下の条件のうちの少なくとも１つが存在する：
ａ）少なくとも１つのＲ^１が式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）であるか、あるいは
ｂ）Ｒ^２がＧであるか、またはＴが

【化333】

[この文献は図面を表示できません]

である、組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本国際出願は、２０１５年８月２８日に出願された米国仮出願第６２／２１１，６７８号および２０１６年８月２５日に出願された米国仮出願第６２／３７９，６９６号に対する優先権を主張し、これらのそれぞれは、その全体が参考として本明細書に援用される。

【0002】

機能的な生存運動ニューロン（ＳＭＮ）タンパク質の発現レベルを増大させるための方法、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置するための方法、およびＳＭＡのための処置としてエクソン包含を誘導するための方法を含む、修飾アンチセンスオリゴマーならびに関連の組成物および方法が開示される。さらに、ＳＭＮ遺伝子によってコードされるＳＭＮタンパク質のレベルを回復させるためのエクソン７の包含を誘導するための方法が開示される。

【背景技術】

【0003】

アンチセンス技術は近年、メッセンジャーＲＮＡ前駆体（プレｍＲＮＡ）のスプライシング過程を変更するように適応している。プレｍＲＮＡとは、転写として公知の過程を介して、ＤＮＡ転写物から合成されるメッセンジャーＲＮＡの未成熟一本鎖である。プレｍＲＮＡ転写物は、２つの異なるセグメント型である、イントロンおよびエクソンを含む。イントロンは、スプライソソーム複合体により一般になされる、スプライシングと呼ばれる過程において除去される。残りのエクソンは、一体に接続され、最終的な成熟ｍＲＮＡ分子の一部となる。

【0004】

イントロン／エクソンスプライシングの正確な過程は、イントロン領域内の、多様な構造エレメントを伴う。これらは、イントロンの５’末端に位置するイントロンスプライスドナー部位、イントロンの３’末端近傍に位置する分岐部位、およびイントロンの３’末端に位置するスプライスアクセプター部位を含む。スプライスドナー部位は一般に、エクソン／イントロン接合部の５’末端において、保存的ＧＵ配列を含む。スプライスアクセプター部位は一般に、イントロン／エクソン接合部の３’末端において、ＡＧ配列を含む。

【0005】

スプライシング過程の変異は、ｍＲＮＡ内のエクソン組成を変異させることにより、結果として生じるｍＲＮＡの変異を創出する場合があり、選択的スプライシングと称することが多い過程である。選択的スプライシングは、多くの形で生じうる。エクソンは、延長される場合もあり、スキップされる場合もある。イントロンの一部が保持される場合もある。選択的スプライシングは、単一の遺伝子から複数のタンパク質を産生することにより、ヒトゲノムのコード潜在力を増加させる。不適切な選択的スプライシングはまた、ヒト疾患数の増加とも関連する。

【0006】

ＳＭＡは、生存運動ニューロンＳＭＮ遺伝子によってコードされるＳＭＮタンパク質の喪失から生じる、多くの場合致死性の遺伝性障害である。ＳＭＮ遺伝子、ＳＭＮ１およびＳＭＮ２は、第５染色体に位置付けられており、ＳＭＡは両染色体由来のＳＭＮ１の喪失によって生じる。ＳＭＮ２は、ＳＭＮ１とほとんど同一であるが、ＳＭＮタンパク質を作製する効果がより低い。ＳＭＡの重症度は、いくつかのコピーがあるＳＭＮ２がＳＭＮタンパク質を産生する効率によって影響を受ける。

【0007】

ＳＭＮ１は、細胞生存のために必須の工程である、ｓｎＲＮＰの組み立てのために必要である、遍在的に発現される３８ｋＤａ ＳＭＮタンパク質をコードしている。ほとんど同一のコピーの遺伝子であるＳＭＮ２は、エクソン７スキッピングのためにＳＭＮ１の喪失を代償できず、不安定な切断型タンパク質であるＳＭＮΔ７を産生する。ＳＭＮ１およびＳＭＮ２は、エクソン７の６位におけるＣからＴへの決定的な置換だけ異なっている（ＳＭＮ２の転写物中のＣ６Ｕ）。Ｃ６Ｕは、コード配列を変化させないが、ＳＭＮ２においてエクソン７スキッピングを生じるのに十分である。

【0008】

ＳＭＡに対する現在の処置は、慢性運動単位喪失の二次的影響の予防および管理からなる。現在、ＳＭＡの処置または予防のために利用可能な薬物療法はない。

【0009】

ＲＮＡ下方制御のために主に使用されるアンチセンス技術は、スプライシングプロセスを変えるように近年適応されている。ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのスプライシングを変えることができる有効な薬剤は、治療的に有用である可能性が高い。

【0010】

したがって、新規のアンチセンスオリゴマーおよび本明細書に記載する通りの機能的なＳＭＮタンパク質の発現を増加させる方法は、有利であると考えられる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0011】

ある特定の態様では、本開示は、機能的なＳＭＮタンパク質の発現を増大させるための組成物および方法を提供する。さらなる態様では、本開示は、被験体におけるエクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルを増強するための多様に記載される修飾アンチセンスオリゴマーを提供する。さらなる態様では、本開示は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の領域に特異的にハイブリダイズするのに十分な長さおよび相補性を有する修飾アンチセンスオリゴマーを投与するステップを含む、被験体においてエクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルを増強する方法を提供する。ある特定の態様では、被験体は、ＳＭＡを有する。

【0012】

多様な態様は、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である、少なくとも１つのサブユニットと；ＳＭＮ２遺伝子のイントロン６、エクソン７、イントロン７またはエクソン８内の領域（またはスプライス接合部をまたぐ領域）などのＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の８またはこれを超える連続ヌクレオチドの標的領域と相補的なターゲティング配列とを任意選択で含む８〜４０サブユニットの修飾アンチセンスオリゴマーを含む。さらなる態様では、修飾アンチセンスオリゴマーは、細胞取り込みを増強するペプチド部分をさらに含む。

【0013】

さらなる態様は、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、および（ｉｉｉ）ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７に相補的なターゲティング配列を有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む８〜４０サブユニットの修飾アンチセンスオリゴマーを含む。さらなる態様では、アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７の−７／−１４、−７／−１６、−１０／−２７、−１０／−２９、−１０／−３４、−１３７／−１５９、−１４９／−１７４、−１６７／−１８６、−２４９／−２７３もしくは−２８１／−２９９領域またはイントロン６の−５８／−３９、−１１２／−６７もしくは−２６４／−２４５領域に相補的な配列を含む。一部の態様では、修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７の−１０／−２７、−１０／−２９または−１０／−３４領域に相補的な配列を含む。

【0014】

さらなる態様は、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、および（ｉｉｉ）配列番号４〜１６から選択される配列を含むターゲティング配列を有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む８〜４０サブユニットの修飾アンチセンスオリゴマーを含む。一部の態様では、アンチセンスオリゴマーは、配列番号６、７および８から選択される配列を含む。

【0015】

さらなる態様は、修飾糖部分を含むヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーを含む。多様な実施形態では、少なくとも１つの修飾糖部分は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）サブユニット、ロックト核酸（ＬＮＡ）サブユニット、２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）サブユニット、トリシクロＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）サブユニット、２’Ｏ−メチルサブユニット、２’Ｏ−メトキシエチルサブユニット、２’−フルオロサブユニット、２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］サブユニット、およびモルホリノサブユニットを含む。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾糖部分を有し、ここで、少なくとも１つの修飾糖部分は、モルホリノサブユニットである。

【0016】

さらなる態様は、修飾ヌクレオシド間連結を含むヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーを含む。多様な実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、およびホスホロトリアミデートヌクレオシド間連結から選択される。さらなる実施形態では、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結は、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、置換（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、４−アミノピペリジン−１−イル部分、または置換４−アミノピペリジン−１−イル部分に共有結合したリン原子を含む。

【0017】

さらなる態様は、修飾糖部分と修飾ヌクレオシド間連結との少なくとも１つの組合せを含む、ヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーを含み、ここで、１または複数のサブユニットは、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロトリアミデートヌクレオシド間連結もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、モルホリノサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’Ｏ−メチルサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’Ｏ−メトキシエチルサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’−フルオロサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸サブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］サブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、トリシクロＤＮＡサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、ロックト核酸サブユニット、
ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含み、ホスホロジアミデートのリン原子を、モルホリノ環の窒素原子に共有結合させ、かつ、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、もしくは置換（１，４−ピペラジン）−１−イル部分に共有結合させたモルホリノサブユニット、
ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含み、ホスホロジアミデートのリン原子を、モルホリノ環の窒素原子に共有結合させ、かつ、４−アミノピペリジン−１−イル（４−ａｍｉｎｏｐｉｐｅｒｄｉｎ−１−ｙｌ）部分、もしくは置換４−アミノピペリジン−１−イル部分に共有結合させたモルホリノサブユニット、
ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含み、ホスホロジアミデートのリン原子を、モルホリノ環の窒素原子に共有結合させ、かつ、ジメチルアミノ部分に共有結合させたモルホリノサブユニット、
ホスホロチオエートヌクレオシド間もしくはホスホルアミデートヌクレオシド間連結で置換された、リボース糖サブユニット、
ホスホロチオエートヌクレオシド間連結もしくはホスホルアミデートヌクレオシド間連結で置換された、デオキシリボース糖サブユニット、
任意選択で置換された、ペプチド核酸サブユニット、
または前出の任意の組合せから選択される。

【0018】

多様な態様および実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマーに共有結合したペプチドをさらに含む。多様な実施形態では、アルギニンに富む細胞透過性ペプチドは、アンチセンスオリゴマーの３’末端または５’末端にコンジュゲートしている。

【0019】

多様な実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、以下：表１に明示されたターゲティング配列、表１のターゲティング配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片、または表１のターゲティング配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体のうちのいずれかを含む。さらなる実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、表１に明示されたターゲティング配列からなるかまたはこれらから本質的になる。

【0020】

多様な態様および実施形態では、ヌクレオチドサブユニットのヌクレオ塩基は、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、イノシン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジン、および１０−（９−（アミノエトキシ）フェノキサジニル）から独立に選択される。

【0021】

多様な態様では、本開示のアンチセンスオリゴマーは、式（Ｉ）：

【化1】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化2】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨおよび−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化3】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例（ｉｎｓｔａｎｃｅ）は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化4】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化5】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝
ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、Ｇ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^２３、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｓＮＲ^２４Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２４Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および式：

【化6】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^２３は、式−（Ｏ−アルキル）_ｖ−ＯＨを有し、式中、ｖは、３〜１０の整数であり、ｖ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^２４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｓは、１〜５の整数であり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_６Ｃ（Ｏ）−および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２Ｓ_２（ＣＨ_２）_２Ｃ（Ｏ）−から選択され；
各Ｒ^２５は、式−（ＣＨ_２）_２ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^２６）_２を有し、式中、各Ｒ^２６は、式−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２を有し、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化7】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
ここで、ターゲティング配列は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域内の、８またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的である］
である。一部の実施形態では、連続ヌクレオチドは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７内の８またはこれを超える連続ヌクレオチドの標的領域を含む。
多様な実施形態では、Ｎｕは独立に、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、イノシン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジン、または１０−（９−（アミノエトキシ）フェノキサジニル）である。

【0022】

多様な実施形態では、ターゲティング配列は、（ａ）配列番号４〜１６から選択される配列を含むか、（ｂ）配列番号４〜１６から選択されるか、（ｃ）配列番号４〜１６から選択されるターゲティング配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または、（ｄ）配列番号４〜１６から選択されるターゲティング配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。一部の実施形態では、配列番号４〜１６の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、配列番号４〜１６の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。

【0023】

一部の実施形態では、式（Ｉ）のターゲティング配列は、
ａ）配列番号７（ＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは１６である）、
ｂ）配列番号８（ＡＸＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは１８である）、および
ｃ）配列番号６（ＧＸＡＡＧＡＸＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは２３である）、
から選択され、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。一部の実施形態では、配列番号６〜８の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、配列番号６〜８の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。

【0024】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＴである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＸはＴである。

【0025】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＵである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＸはＵである。

【0026】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＹは５ｍＣである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各Ｙは５ｍＣである。

【0027】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＹはＣである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＹはＣである。

【0028】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＸはＴである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＸはＴである。

【0029】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＵである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＸはＵである。

【0030】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＹは５ｍＣである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各Ｙは５ｍＣである。

【0031】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＹはＣである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＹはＣである。

【0032】

多様な実施形態では、式（Ｉ）のＲ^１は、−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。一部の実施形態では、Ｒ^１基のうちの約５０〜約９０％は、−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は、

【化8】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される。

【0033】

多様な実施形態では、Ｔは、式：

【化9】

[この文献は図面を表示できません]

［式中、Ａは、−Ｎ（ＣＨ_３）_２であり、Ｒ^６は、式：

【化10】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、Ｒ^１０は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^１１ＯＨである。

【0034】

多様な実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、式（Ｖ）：

【化11】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化12】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化13】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例（ｉｎｓｔａｎｃｅ）は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化14】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化15】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝
ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、式中、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは式

【化16】

[この文献は図面を表示できません]

であり、式中、該ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、該ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
以下の条件のうち少なくとも１つが存在する：
ａ）少なくとも１つのＲ^１は式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）である、または
ｂ）Ｒ^２はＧであるか、またはＴは

【化17】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0035】

種々の実施形態では、化合物（Ｖ）のターゲティング配列は、（ａ）配列番号４〜１６から選択される配列を含むか、（ｂ）配列番号４〜１６から選択されるか、（ｃ）配列番号４〜１６から選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または（ｄ）配列番号４〜１６から選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙはシトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。一部の実施形態では、配列番号４〜１６の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、配列番号４〜１６の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。

【0036】

一部の実施形態では、式（Ｖ）のターゲティング配列は、
ａ）配列番号７（ＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは１６である）、
ｂ）配列番号８（ＡＸＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは１８である）、および
ｃ）配列番号６（ＧＸＡＡＧＡＸＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは２３である）
から選択され、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。一部の実施形態では、配列番号６〜８の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、配列番号６〜８の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。

【0037】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＴである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＸはＴである。

【0038】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＵである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＸはＵである。

【0039】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＹは５ｍＣである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各Ｙは５ｍＣである。

【0040】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＹはＣである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＹはＣである。

【0041】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＸはＴである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＸはＴである。

【0042】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＵである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＸはＵである。

【0043】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＹは５ｍＣである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各Ｙは５ｍＣである。

【0044】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＹはＣである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＹはＣである。

【0045】

一部の実施形態では、ターゲティング配列は配列番号４〜１６から選択される。

【0046】

多様な実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、細胞取込みを増強するペプチド部分をさらに含む。

【0047】

種々の態様では、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域における８またはそれより多くの連続ヌクレオチドに相補的なターゲティング配列を含む修飾アンチセンスオリゴマーが提供される。一部の実施形態では、連続ヌクレオチドは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７内の８またはそれより多くの連続ヌクレオチドの標的領域を含む。一部の実施形態では、ターゲティング配列は、（ａ）配列番号４〜１６のうちの１つを含むか、（ｂ）配列番号４〜１６から選択されるか、（ｃ）配列番号４〜１６から選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または（ｄ）配列番号４〜１６から選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。種々の実施形態では、ターゲティング配列は、配列番号４〜１６を含む。

【0048】

また、生理学的に許容される担体と、本明細書で記載される修飾アンチセンスオリゴマーとを含む医薬組成物も含まれる。

【0049】

多様な態様は、それを必要とする被験体において、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置する方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の、本明細書で記載される修飾アンチセンスオリゴマーを投与するステップを含む方法に関する。そのような方法は、エクソン欠失ＳＭＮ２ ｍＲＮＡに対するエクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルが増強され、それにより患者を処置するように、ＳＭＮ２遺伝子内の領域に特異的にハイブリダイズするのに十分な長さおよび相補性を有するヌクレオチド配列を含む修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドを患者に投与するステップを含む。多様な実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーを含む。さらなる実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、モルホリノ部分を含む。

【0050】

機能的な生存運動ニューロン（ＳＭＮ）タンパク質の発現を増大させるための方法は、それを必要とする被験体に修飾アンチセンスオリゴマーを投与するステップを含み、ここで、修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡの標的領域に結合し、機能的なＳＭＮタンパク質の発現が増大される。エクソン７を含有するＳＭＮ２ ｍＲＮＡの発現が、増大される。多様な実施形態では、標的はＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７内の領域である。さらなる実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７内の領域である。さらなる実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、モルホリノ部分を含む。

【0051】

種々の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーを投与することは、エクソン７を有するＳＭＮ２のｍＲＮＡの量における少なくとも約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％の増大をもたらす。

【0052】

種々の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーを投与することは、発現される機能的ＳＭＮタンパク質の量における少なくとも約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％の増大をもたらす。

【0053】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置するための医薬であって、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットと；ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域中の８またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列であって、連続ヌクレオチドが、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７内の８またはこれを超える連続ヌクレオチドの標的領域を含む、ターゲティング配列とを含む８〜４０サブユニットの修飾アンチセンスオリゴマー化合物を含む医薬が提供される。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、モルホリノ部分を含む。

【0054】

脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の進行を阻害する方法は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡの標的領域に結合し、機能的なＳＭＮタンパク質の翻訳を増大させる本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーを投与するステップを含む。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、モルホリノ部分を含む。

【0055】

それを必要とする被験体において脊髄性筋萎縮症を処置する方法は、多様な実施形態では、有効量の本開示の修飾アンチセンスオリゴマーを被験体に投与するステップを含み、ここで、修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡの標的領域に結合し、機能的なＳＭＮタンパク質の発現が増大される。さらなる態様は、脊髄性筋萎縮症を処置するための医薬の調製において使用するための修飾アンチセンスオリゴマーを含む。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、モルホリノ部分を含む。

【0056】

ある特定の実施形態では、本明細書で記載される方法は、有効量の本開示の修飾アンチセンスオリゴマーを被験体に投与することによって、被験体における機能的なＳＭＮタンパク質の発現レベルを対照と比べて少なくとも約１０％だけ増大させるステップを含む。一部の実施形態では、被験体における機能的なＳＭＮタンパク質のレベルは、少なくとも約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０および１００％だけ増大される。

【0057】

以下の詳細な記載および添付の図面を参照すれば、本開示のこれらの態様および他の態様が明らかとなるであろう。本明細書で開示される全ての参考文献は、あたかも各々が個別に組み込まれたように、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
８〜４０サブユニットの修飾アンチセンスオリゴマー化合物であって、
ａ．（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出のものの組合せを有するヌクレオチド類似体である、少なくとも１つのサブユニットと；
ｂ．ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域中の８またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列であって、前記標的領域がＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７内の領域を含む、ターゲティング配列と
を含む、修飾アンチセンスオリゴマー化合物。
（項目２）
前記修飾ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロトリアミデートヌクレオシド間連結、またはホスホロジアミデートから選択され、ここで、リン原子は、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、置換（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、４−アミノピペリジン−１−イル部分、または置換４−アミノピペリジン−１−イル部分に共有結合している、項目１に記載の修飾アンチセンスオリゴマー化合物。
（項目３）
前記修飾糖部分が、ペプチド核酸（ＰＮＡ）サブユニット、ロックト核酸（ＬＮＡ）サブユニット、２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）サブユニット、トリシクロＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）サブユニット、２’Ｏ−メチルサブユニット、２’Ｏ−メトキシエチルサブユニット、２’−フルオロサブユニット、２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］サブユニット、またはモルホリノサブユニットのうちの少なくとも１つを含む、項目１または２に記載の修飾アンチセンスオリゴマー化合物。
（項目４）
前記修飾アンチセンスオリゴマー化合物の３’末端または５’末端にコンジュゲートしたアルギニンに富む細胞透過性ペプチドをさらに含む、項目１〜３のいずれかに記載の修飾アンチセンスオリゴマー化合物。
（項目５）
前記ターゲティング配列が、配列番号４〜１６または３３〜４５から選択される、項目１〜４のいずれか一項に記載の修飾アンチセンスオリゴマー化合物。
（項目６）
前記サブユニットの各々のヌクレオ塩基が独立に、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、イノシン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジン、または１０−（９−（アミノエトキシ）フェノキサジニル）から選択される、項目１から４のいずれか一項に記載の修飾アンチセンスオリゴマー。
（項目７）
式（Ｖ）：

【化302】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であって、
式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化303】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化304】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化305】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化306】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化307】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、該ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、該ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
該ターゲティング配列は、（ａ）配列番号４〜１６から選択される配列を含むか、（ｂ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるか、（ｃ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるターゲティング配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または、（ｄ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるターゲティング配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択され、
ここで、以下の条件のうちの少なくとも１つが存在する：
ａ）Ｒ^１の少なくとも１つが式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）であるか、あるいは
ｂ）Ｒ^２がＧであるか、またはＴが

【化308】

[この文献は図面を表示できません]

である、化合物または薬学的に許容されるその塩。
（項目８）
Ｔが式：

【化309】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２がＨである、項目７に記載の化合物。
（項目９）
各Ｒ^１が

【化310】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔが

【化311】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２がＨであり、ここで、少なくとも１つのＲ^１が

【化312】

[この文献は図面を表示できません]

である、項目７に記載の化合物。
（項目１０）
各Ｒ^１が

【化313】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔが

【化314】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２がＨであり、ここで、少なくとも１つのＲ^１が

【化315】

[この文献は図面を表示できません]

である、項目７に記載の化合物。
（項目１１）
各Ｒ^１が−Ｎ（ＣＨ_３）_２であり、Ｒ^２がＨおよびアシルから選択され、Ｔが式：

【化316】

[この文献は図面を表示できません]

である、項目７に記載の化合物。
（項目１２）
Ｒ^２がＧであり、Ｔが式：

【化317】

[この文献は図面を表示できません]

であり、各Ｒ^１が−Ｎ（ＣＨ_３）_２である、項目７に記載の化合物。
（項目１３）
Ｒ^２がＨまたはアシルから選択され、Ｔが式：

【化318】

[この文献は図面を表示できません]

であり、各Ｒ^１が−Ｎ（ＣＨ_３）_２である、項目７に記載の化合物。
（項目１４）
Ｇが式：

【化319】

[この文献は図面を表示できません]

であり、式中、Ｒ^ａがＨ、アセチル、ベンゾイルおよびステアロイルから選択される、項目１１、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１５）
前記ターゲティング配列が、配列番号３５、３６または３７から選択される、項目１から１４のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１６）
前記ターゲティング配列が配列番号３７である、項目１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１７）
前記ターゲティング配列が配列番号３５である、項目１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１８）
前記ターゲティング配列が配列番号３６である、項目１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１９）
Ｚが１６〜２３の整数であり、前記ターゲティング配列が配列番号３５、３６または３７から選択される、項目７から１４のいずれか一項に記載の化合物。
（項目２０）
Ｚが１６であり、前記ターゲティング配列が配列番号３５である、項目７から１５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目２１）
Ｚが１８であり、前記ターゲティング配列が配列番号３６である、項目７から１５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目２２）
Ｚが２３であり、前記ターゲティング配列が配列番号３７である、項目７から１５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目２３）
式（Ｖ）：

【化320】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物であって、
式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化321】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化322】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化323】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化324】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化325】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、該ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、該ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
該ターゲティング配列は、（ａ）配列番号４〜１６から選択される配列を含むか、（ｂ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるか、（ｃ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるターゲティング配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または、（ｄ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるターゲティング配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択され、
ここで、以下の条件のうちの少なくとも１つが存在する：
ｃ）Ｒ^１の少なくとも１つが式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）であるか、あるいは
ｄ）Ｒ^２がＧであるか、またはＴが

【化326】

[この文献は図面を表示できません]

である、医薬組成物。
（項目２４）
有効量の式（Ｖ）：

【化327】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩を対象に投与するステップを含む、脊髄性筋萎縮症の処置を必要とする該対象において脊髄性筋萎縮症を処置する方法であって、
式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化328】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化329】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化330】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化331】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化332】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、該ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、該ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
該ターゲティング配列は、（ａ）配列番号４〜１６から選択される配列を含むか、（ｂ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるか、（ｃ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるターゲティング配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または、（ｄ）配列番号４〜１６または３３〜４５から選択されるターゲティング配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択され、
ここで、以下の条件のうちの少なくとも１つが存在する：
ａ）Ｒ^１の少なくとも１つが式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）であるか、あるいは
ｂ）Ｒ^２がＧであるか、またはＴが

【化333】

[この文献は図面を表示できません]

である、方法。

【図面の簡単な説明】

【0058】

【図1A】図１Ａは、修飾オリゴマーの実施形態を例示する。

【図1B】図１Ｂは、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）にコンジュゲートしたアンチセンスオリゴマーを例示する。

【図1C】図１Ｃは、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）にコンジュゲートしたアンチセンスオリゴマーを例示する。

【図1DEFG】図１Ｄ、１Ｅ、１Ｆ、および１Ｇは、Ｄ〜Ｇと称する、例示的なホスホロジアミデートモルホリノベースのオリゴマーの、反復サブユニットセグメントを例示する。

【0059】

【図2A】図２Ａは、トリチルピペラジンフェニルカルバメートの調製を例示する。

【図2B】図２Ｂは、樹脂／試薬混合物の調製を例示する。

【0060】

【図3】図３は、イントロン７中の重複領域をターゲティングするホスホロジアミデートモルホリノベースのオリゴマー（ＰＭＯベースのオリゴマー）のインビトロのエクソン７包含率を示す。ｘ軸に表される０．００３μＭ〜１０μＭの複数の用量を、ＧＭ０３８１３、ＳＭＡ患者由来線維芽細胞で試験した。ｙ軸に表されるエクソン７包含率は、エクソン７が包含された増幅産物およびエクソン７が排除された増幅産物の強度から算出した。

【0061】

【図4】図４は、イントロン７をターゲティングするＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率を示す。ｘ軸に表される０．０１μＭ〜１μＭの複数の用量を、ＧＭ０３８１３線維芽細胞で試験した。ｙ軸に表されるエクソン７包含率は、エクソン７が包含された増幅産物およびエクソン７が排除された増幅産物の強度から算出した。

【0062】

【図5A】図５Ａおよび５Ｂは、異なる長さを有するＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率を示す。１８量体および２０量体のデータは図５Ａに示されており、１８量体および２５量体のデータは図５Ｂに示されている。０．００１μＭ〜１μＭの複数の用量をＧＭ０３８１３線維芽細胞で試験したが、ｘ軸に表されている。ｙ軸に表されるエクソン７包含率は、エクソン７が包含された増幅産物およびエクソン７が排除された増幅産物の強度から算出した。

【図5B】図５Ａおよび５Ｂは、異なる長さを有するＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率を示す。１８量体および２０量体のデータは図５Ａに示されており、１８量体および２５量体のデータは図５Ｂに示されている。０．００１μＭ〜１μＭの複数の用量をＧＭ０３８１３線維芽細胞で試験したが、ｘ軸に表されている。ｙ軸に表されるエクソン７包含率は、エクソン７が包含された増幅産物およびエクソン７が排除された増幅産物の強度から算出した。

【0063】

【図6】図６は、異なる化学修飾を有するＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率を示す。同じ領域をターゲティングする２’−ＯＭｅ修飾アンチセンスオリゴマーを同様に試験した。ｘ軸に表される０．００３μＭ〜１μＭの複数の用量を、ＧＭ０３８１３線維芽細胞で試験した。ｙ軸に表されるエクソン７包含率は、エクソン７が包含された増幅産物およびエクソン７が排除された増幅産物の強度から算出した。

【0064】

【図7A】図７Ａは、異なる化学修飾を有するＰＭＯベースのオリゴマーによって誘導した場合のエクソン７含有ＳＭＮタンパク質のウエスタンブロット分析を示す。ＰＭＯベースのオリゴマーと同じ領域をターゲティングする２’−ＯＭｅ修飾アンチセンスオリゴマーを並行して試験した。ＳＭＮ２タンパク質を、抗ＳＭＮ抗体でブロットした。アクチンを、ローディング対照として抗アクチン抗体で検出した。

【0065】

【図7B】図７Ｂは、ＳＭＮタンパク質に対応するバンドの平均定量強度を図７Ａに示す各実験群について表す。

【0066】

【図8】図８Ａは、２０μｇのＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓもしくはＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ化合物または生理食塩水のいずれかで処置したＳＭＮΔ７マウスの生存曲線を示す。各マウスは、Ｐ１（出生翌日）に生理食塩水またはＰＭＯベースのオリゴマーの脳室内（ＩＣＶ）注射で処置した。各実験群の最初のマウス数と比較した任意の残りのマウスの百分率がｙ軸に表されている。図８Ｂは、実験を通しての各実験群の体重増加を示す。生理食塩水で処置した野生型マウスの群を参照として使用した。

【0067】

【図9】図９Ａは、２０μｇのＰＭＯ−、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓもしくはＰＭＯ−Ｒ６Ｇｌｙ化合物または生理食塩水で処置したＳＭＮΔ７マウスの立直り反射を示す。生理食塩水で処置した野生型マウスの群を参照として使用した。各マウスは、Ｐ１（出生翌日）に脳室内（ＩＣＶ）注射で処置し、立直り反射試験は４日目から定期的に実施した。マウスが立ち上がるのに要した時間を測定したが、各実験群の平均時間がｙ軸に秒（ｓ）で表されている。図９Ｂは、実験を通して定期的に測定した各実験群の握力試験を示す。メッシュを握るためにマウスがかけた力のピーク量を測定し、各群の平均力がｙ軸にグラム（ｇ）で表されている。得られたデータは、ＰＭＯベースのオリゴマーのサブセットが平均力を野生型マウスのものに正常化したことを示している。具体的には、驚くべきことにＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓおよびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙは、１４日目からの研究期間を通しておよび延長された生存期間の間、握力を野生型マウスに正常化した。

【0068】

【図10A】図１０Ａは、図７Ａで試験されたマウスから得られた試料中のエクソン７含有ＳＭＮタンパク質のウエスタンブロット分析を示す。ＳＭＮ２タンパク質を、抗ＳＭＮ抗体でブロットした。アクチンを、ローディング対照として抗アクチン抗体で検出した。Ｗ１〜Ｗ４は、４匹の異なる生理食塩水処置野生型マウス由来の頸髄試料を表している。Ｓ１〜Ｓ３は、３匹の異なる生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウス由来の頸髄試料を表している。Ａ１は、ＰＭＯ−３で処置したＳＭＮΔ７マウスから得られた頸髄試料を表している。Ｂ１〜Ｂ６は、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１６で処置した６匹の異なるＳＭＮΔ７マウス由来の頸髄試料を表している。Ｃ１〜Ｃ２およびＤ１は、それぞれ、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−８およびＰＭＯ−Ｒ_６−Ｇｌｙ−３で処置したＳＭＮΔ７マウス由来の頸髄試料を表している。

【0069】

【図10B】図１０Ｂは、ＳＭＮタンパク質に対応するバンドの平均定量強度を図１０Ａに示す各実験群について表す。

【0070】

【図11】図１１は、２０μｇの２つの異なる長さを有するＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓもしくはＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ化合物または生理食塩水のいずれかで処置したＳＭＮΔ７マウスの生存曲線を示す。生理食塩水で処置した野生型マウスの群を参照として使用した。各マウスは、Ｐ１（出生翌日）に生理食塩水またはＰＭＯベースのオリゴマーの脳室内（ＩＣＶ）注射で処置した。各実験群の最初のマウス数と比較した任意の残りのマウスの百分率がｙ軸に表されている。

【図12】図１２は、図１１に示す実験を通しての各実験群の体重増加を示す。生理食塩水で処置した野生型マウスの群を参照として使用した。統計解析は、線形回帰で行った。

【0071】

【図13】図１３は、図１１に示す実験を通して定期的に測定した各実験群の握力試験を示す。メッシュを握るためにマウスがかけた力のピーク量を測定し、各群の平均力がｙ軸にグラム（ｇ）で表されている。

【0072】

【図14A】図１４Ａは、図１１で試験されたマウスから得られた試料中のエクソン７含有ＳＭＮタンパク質のウエスタンブロット分析を示す。ＳＭＮ２タンパク質を、抗ＳＭＮ抗体でブロットした。アクチンを、ローディング対照として抗アクチン抗体で検出した。ＷＴ１〜ＷＴ３は、３匹の異なる生理食塩水処置野生型マウス由来の頸髄試料を表している。Ｓ１〜Ｓ３は、３匹の異なる生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウス由来の頸髄試料を表している。Ｂ１〜Ｂ５は、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１６で処置した５匹の異なるＳＭＮΔ７マウスから得られた頸髄試料を表している。Ｃ１〜Ｃ４は、ＰＭＯ−２で処置した４匹の異なるＳＭＮΔ７マウスから得られた頸髄試料を表している。Ｄ１〜Ｄ３は、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１１で処置した３匹の異なるＳＭＮΔ７マウスから得られた頸髄試料を表している。Ｅ１〜Ｅ４は、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−３で処置した４匹の異なるＳＭＮΔ７マウスから得られた頸髄試料を表している。最後にＦ１は、ＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ−２で処置したＳＭＮΔ７マウスから得られた頸髄試料を表している。

【0073】

【図14B】図１４Ｂは、ＳＭＮタンパク質に対応するバンドの平均定量強度を図１４Ａに示す各実験群について表す。

【発明を実施するための形態】

【0074】

詳細な説明
Ｉ．定義
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される、全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で記載される方法および材料と同様または同等な、任意の方法および材料を、本開示の主題の実施または試験において使用しうるが、好ましい方法および材料について記載する。本開示の目的で、下記では、以下の用語について規定する。

【0075】

本明細書では、冠詞の「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」を、冠詞の文法的対象物の１つまたは１つを超える対象物（すなわち、少なくとも１つの対象物）を指すのに使用する。例を目的として述べると、「ある要素」とは、１つの要素または１つを超える要素を意味する。

【0076】

用語「約」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、または長さに対して、３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％ほど変動する、数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、または長さを意味する。「約」という用語は、数的範囲と共に使用される場合、記載の数値の上下に境界を広げることによってその範囲を改変する。一般に、「約」という用語は、記述された値の上下に１０％以下の変動だけ数値を改変するように意図される。

【0077】

用語「配列」および「コード配列」は、遺伝子のポリペプチド産物のコードに寄与する、任意の核酸配列を意味する。これに対して、「非コード配列」という用語は、遺伝子のポリペプチド産物のコードに直接寄与しない、任意の核酸配列を指す。

【0078】

本開示を通して、文脈によりそうでないことが要請されない限り、「〜を含む」、「〜を含む」、および「〜を含むこと」という語は、言明されるステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群の包含を含意するが、他の任意のステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群の除外は含意しないことが理解されるであろう。

【0079】

用語「〜からなること」は、「〜からなること」という語句に後続するあらゆる語句を含み、かつ、これに限定されることを意味する。したがって、「〜からなること」という語句は、列挙される要素が要請されるかまたは必須であり、他の要素は存在しえないことを指し示す。用語「〜から本質的になること」は、この語句の後に列挙される任意の要素を含み、かつ、列挙される要素について、本開示で指定される活性または作用に干渉または寄与しない、他の要素に限定されることを意味する。したがって、「〜から本質的になること」という語句は、列挙される要素が要請されるかまたは必須であるが、他の要素は任意選択であり、それらが列挙される要素の活性または作用に、実質的に影響を及ぼすのかどうかに応じて、存在してもよく、存在しなくてもよいことを示す。

【0080】

「〜を投与すること」または「〜を投与する」という用語は、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの、被験体への、局所投与または全身投与による送達を含む。投与は、局所投与（眼投与、ならびに膣送達および直腸送達を含む、粘膜への投与を含む）、例えば、噴霧器による投与を含む、粉末またはエアゾールによる吸入または送気による、肺投与、気管内投与、鼻腔内投与、表皮投与および経皮投与、経口投与、または非経口投与でありうる。非経口投与は、静脈内注射もしくは静脈内注入、動脈内注射もしくは動脈内注入、皮下注射もしくは皮下注入、腹腔内注射もしくは腹腔内注入、または筋内注射もしくは筋内注入；あるいは頭蓋内投与、例えば、髄腔内投与または脳室内投与を含む。

【0081】

「細胞を接触させること」、「導入すること」、または「送達すること」という用語は、本開示のオリゴマーの、細胞への、当技術分野で慣例的な方法、例えば、トランスフェクション（例えば、リポソーム、リン酸カルシウム、ポリエチレンイミン）、エレクトロポレーション（例えば、ヌクレオフェクション）、マイクロインジェクション）による送達を含む。

【0082】

「アルキル」という用語は、直鎖状（すなわち、非分枝状または非環式）、分枝状、環式、または多環式非芳香族の炭化水素基であって、任意選択で、１または複数の官能基により置換された炭化水素基を指す。そうでないことが指定されない限りにおいて、「アルキル」基は、１〜８個の炭素原子を含有し、好ましくは、１〜６個の炭素原子を含有する。Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルとは、Ｃ_１アルキル基、Ｃ_２アルキル基、Ｃ_３アルキル基、Ｃ_４アルキル基、Ｃ_５アルキル基、およびＣ_６アルキル基を含むことを意図する。低級アルキルとは、１〜６個の炭素原子を含有するアルキル基を指す。アルキルの例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシルなどを含むがこれらに限定されない。アルキルは、置換アルキルの場合もあり、非置換アルキルの場合もある。例示的な置換アルキル基は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２−フルオロエチル、３−フルオロプロピル、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、ベンジル、置換ベンジル、フェネチル、置換フェネチルなどを含むがこれらに限定されない。

【0083】

「アルコキシ」という用語は、アルキルのサブセットであって、上記で規定した、表示の数の炭素を伴うアルキル基が、酸素架橋を介して結合しているサブセットを指す。例えば、「アルコキシ」とは、直鎖状立体配置、分枝状立体配置、環式立体配置である、１〜８個の炭素原子を含有する−Ｏ−アルキル基を指す。「アルコキシ」の例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ブトキシ、ｓ−ペントキシなどを含むがこれらに限定されない。

【0084】

単独で、または「アラルキル」、「アラルコキシ」、または「アリールオキシアルキル」における通り、より大型の部分の一部として使用される「アリール」という用語は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントラシル、および２−アントラシルなど、６〜１４個の環原子を有する芳香環基を指す。「アリール」環は、１または複数の置換基を含有しうる。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と互換的に使用することができる。「アリール」はまた、芳香環を１または複数の環へと縮合させた、縮合多環式芳香環系も含む。有用なアリール環基の非限定的な例は、フェニル、ヒドロキシフェニル、ハロフェニル、アルコキシフェニル、ジアルコキシフェニル、トリアルコキシフェニル、アルキレンジオキシフェニル、ナフチル、フェナントリル、アントリル、フェナントロなどのほか、１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントラシル、および２−アントラシルを含む。本明細書で使用される「アリール」という用語の範囲内にはまた、芳香環を１または複数の非芳香環へと縮合させた基であって、ラジカルまたは結合点が芳香環上にある、インダニル、フェナントリジニル、またはテトラヒドロナフチルなどにおける基も含まれる。

【0085】

「アシル」という用語は、Ｃ（Ｏ）Ｒ基（式中、Ｒは、上記で規定したＨ、アルキル、またはアリールを意味する）を指す。アシル基の例は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、フェニルアセチル、および類似の基を含む。

【0086】

「同族化合物」という用語は、同じ化学基の逐次的付加により規則的に異なる化合物を指す。例えば、化合物の同族化合物は、１または複数の−ＣＨ_２−基、アミノ酸残基、ヌクレオチド、またはヌクレオチド類似体の付加により異なりうる。

【0087】

「細胞透過性ペプチド」（ＣＰＰ）または「細胞取込みを増強するペプチド部分」という用語は、互換的に使用され、「輸送ペプチド」、「担体ペプチド」、または「ペプチド導入ドメイン」ともまた呼ばれる、カチオン性細胞透過性ペプチドを指す。例えば、ペプチドコンジュゲートホスホルアミデートまたはホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＰＭＯ）は、本明細書で記載される、細胞取込みを増強する細胞透過性ペプチドまたは細胞透過性ペプチド部分を含みうる。多様な実施形態では、ペプチドは、修飾アンチセンスオリゴマーに共有結合させることができる。さらなる実施形態では、ペプチドは、修飾アンチセンスオリゴマーの３’末端または５’末端にコンジュゲートさせることができる。さらなる実施形態では、ペプチドは、３’末端のモルホリノ環のピペラジニル部分または窒素原子へと連結することができる。一部の実施形態では、細胞取込みを増強する、細胞透過性ペプチドまたは細胞透過性ペプチド部分は、本明細書で記載される、アルギニンに富むペプチドを含みうる。非限定的例では、本明細書で開示される通りの修飾アンチセンスオリゴマーは、（Ａｒｇ）６Ｇｌｙ（アルギニン６個およびグリシン１個がオリゴヌクレオチドに連結される）などのアルギニンに富むペプチドに結合されてよい。

【0088】

本明細書で示されるペプチドは、全身投与されると、所与の細胞培養物集団の細胞のうちの約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％、または少なくともほぼこれらの比率の細胞内の細胞透過を誘導し、インビボにおいて、複数の組織内の高分子のトランスロケーションを可能とする能力を有する。一部の実施形態では、ＣＰＰは、式−［（Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ）_ｍ］Ｒ’’［式中、Ｒ’は、天然に存在するアミノ酸、またはその１炭素同族化合物もしくは２炭素同族化合物の側鎖であり、Ｒ’’は、水素またはアシルから選択され、ｍは、最大で５０の整数である］を有する。当技術分野では、さらなるＣＰＰも周知であり、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国出願公開第２０１０００１６２１５号において開示されている。他の実施形態では、ｍは、１〜５０から選択される整数であり、ここで、ｍが１である場合、部分は、単一のアミノ酸またはその誘導体である。

【0089】

「アミノ酸」という用語は、一級アミノ基、カルボン酸基、側鎖、および水素原子が結合している炭素原子を含む化合物を指す。例えば、「アミノ酸」という用語は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アスパラギン酸、ヒスチジン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、システイン、グルタミン酸、セリン、チロシン、ピロリシン、セレノシステイン、およびアルギニンを含むがこれらに限定されない。加えて、本明細書で使用される「アミノ酸」はまた、エステル、およびアミド、および塩など、アミノ酸の誘導体のほか、活性形態へと代謝されると薬理学的特性を有する誘導体を含む、他の誘導体も含む。したがって、「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸を含むことが理解される。

【0090】

「電子対」という用語は、他の原子と結合しないかまたは共有されていない、電子の原子価対を指す。

【0091】

「相同性」という用語は、同一なアミノ酸、または保存的置換を構成するアミノ酸の百分率数を指す。相同性は、ＧＡＰなどの配列比較プログラムを使用して決定することができる（Ｄｅｖｅｒａｕｘら、１９８４年、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１２巻、３８７〜３９５頁）。このようにして、本明細書で引例される配列と、類似の長さまたは実質的に異なる長さの配列を、アラインメントへのギャップの挿入により比較することができ、このようなギャップを、例えば、ＧＡＰにより使用される比較アルゴリズムにより決定する。

【0092】

「単離された」という用語は、その生来の状態では通常それに随伴する成分を、実質的または本質的に含まない材料を指す。例えば、本明細書で使用される「単離オリゴヌクレオチド」または「単離オリゴマー」とは、天然に存在する状態ではそれを挟む配列から精製されるかまたは取り出されたオリゴマー、例えば、ゲノム内の断片に隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指す場合がある。細胞に関する場合の、「〜を単離すること」という用語は、細胞（例えば、線維芽細胞、リンパ芽球）の、供給源となる被験体（例えば、オリゴヌクレオチドリピート病を伴う被験体）からの精製を指す。ｍＲＮＡまたはタンパク質の文脈では、「〜を単離すること」とは、ｍＲＮＡまたはタンパク質の、供給源、例えば、細胞からの回収を指す。

【0093】

「〜をモジュレートする」という用語は、１または複数の定量化可能なパラメータを、任意選択で、規定された量および／または統計学的に有意な量で「増加」または「減少」させることを含む。「〜を増加させる」もしくは「〜を増加させること」、「〜を増強する」もしくは「〜を増強すること」、または「〜を刺激する」もしくは「〜を刺激すること」とは一般に、１または複数の修飾アンチセンスオリゴマー化合物または組成物が、細胞または被験体において、アンチセンスオリゴマー化合物を伴わずに引き起こされる応答、または対照化合物により引き起こされる応答と比べて、より大きな生理学的応答（すなわち、下流における効果）をもたらすかまたは引き起こす能力を指す。関係のある生理学的応答または細胞応答（インビボまたはインビトロ）は、当業者には明らかであり、ＳＭＮ２ ｍＲＮＡにおけるエクソン７の包含の増加、および／または細胞、もしくは例えばそれを必要とする被験体の組織における機能的なＳＭＮタンパク質の発現の増加を含みうる。「減少された」または「低減された」量とは、典型的には、「統計学的に有意な」量であり、修飾アンチセンスオリゴマー化合物の投与の非存在下で、それを必要とする被験体によりもたらされる量（例えば、特定の被験体またはコホートの、「生来」または「天然」の発現率）、または対照化合物によりもたらされる量の、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０分の１またはこれ未満（例えば、１００、５００、１０００分の１）であって、全ての整数およびそれらの間にあり１より大きい小数（ｄｅｃｉｍａｌ ｐｏｉｎｔ）（例えば、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９）を含む分数の減少を含みうる。「〜を低減する」または「〜を阻害する」という用語は一般に、１または複数のアンチセンスオリゴマー化合物または組成物が、本明細書で記載される疾患または状態の症状など、関与性の生理学的応答または細胞応答であって、診断技術分野で慣例的な技法に従い、測定される応答「を減少させる」能力に関する場合がある。「増加した」または「増強された」量とは通常、「統計学的に有意な」量であり、修飾アンチセンスオリゴマー化合物の投与の非存在下で、それを必要とする被験体によりもたらされる量（例えば、特定の被験体またはコホートの「生来の」または「天然の」発現率）または対照化合物によりもたらされる量に対して、全ての整数およびその間にあって１より大きい小数（例えば、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９）を含めて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０倍またはそれを超える（例えば、１００、５００、１０００倍）増加を含みうる。「〜を増強する」という用語は一般に、１または複数の修飾アンチセンスオリゴマー化合物または組成物が、本明細書で記載される疾患または状態の症状などの関係のある生理学的応答または細胞応答を、診断技術分野における慣例的な技法に従って測定したとき「増加させる」能力に関しうる。

【0094】

関係のある生理学的応答または細胞応答（インビボまたはインビトロ）は、当業者には明らかであり、ＳＭＡ Ｉ型、ＳＭＡ ＩＩ型、ＳＭＡ ＩＩＩ型およびＳＭＡ ＩＶ型などの脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の症状または病変の軽減を包含し得る。他の実施形態では、例えば、症状または病変の軽減が、機能的なＳＭＮタンパク質の発現の増加に随伴するか、またはこれに関連しうる、脊髄性筋萎縮症を処置する方法が提供される。応答の「増加」は、修飾アンチセンスオリゴマー化合物の投与の非存在下で、それを必要とする被験体によりもたらされる応答（例えば、特定の被験体またはコホートの「生来の」または「天然の」発現率）または対照化合物によりもたらされる応答に比べて「統計学的に有意」であり得、間にある全ての整数を含めて、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の増加を含みうる。

【0095】

ＳＭＮタンパク質に関しての「機能的」という用語は、エクソン７が含まれているｍＲＮＡ転写由来のおよび／または野生型もしくは正常ＳＭＮタンパク質の機能性を保有しているＳＭＮタンパク質を包含する。

【0096】

非機能的、機能不全または不活性タンパク質は、エクソン７が除かれたｍＲＮＡ転写物由来のおよび／または野生型ＳＭＮタンパク質の機能性をほとんど乃至全く有しないタンパク質を包含する。

【0097】

したがって、多様な実施形態では、機能的なＳＭＮタンパク質の存在、発現または発現の増大は、例えば、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーで処置したＳＭＡ患者由来線維芽細胞のウエスタンブロット分析およびＳＭＮ２遺伝子発現によって判定することができる。多様な実施形態では、ＳＭＡ線維芽細胞またはＳＭＡの処置を必要とする被験体を本開示の修飾アンチセンスオリゴマーで処置すると、例えば、正常細胞または正常被験体における正常なＳＭＮタンパク質発現量の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは１００％、または上で開示した百分位数範囲のいずれかである量でのエクソン７含有ＳＭＮタンパク質の発現をもたらしうる。

【0098】

多様な実施形態では、組織またはＳＭＡの処置を必要とする被験体によって発現されたエクソン７包含ＳＭＮタンパク質の機能性は、例えば、筋肉中の神経筋接合部の構造、脊髄中の運動ニューロンの量および質、非処置同等物と比較した場合のエクソン７含有ＳＭＮタンパク質の量の免疫組織化学分析によって判定することができる。ＳＭＡの処置を必要とする被験体のエクソン７包含ＳＭＮタンパク質の機能性は、筋肉サイズの測定、筋緊張、圧痛、強さ、反射、筋肉の不随意運動、筋電図検査、神経伝達速度試験、および心電図（ＥＫＧまたはＥＧＧ）を含む心血管系機能試験を含む運動機能試験などの身体および生理学的試験によってさらに分析することができる。

【0099】

この場合では、修飾アンチセンスオリゴマーを使用してエクソン７包含を誘起した結果として、非処置に比べて約３０％〜約１００％の範囲または機能性に関して上で開示した百分率で、脊髄性筋萎縮症症状が改善される（すなわち、ＳＭＮタンパク質の機能性または安定性が回復する）。症状のそのような改善は、ミクロレベル（すなわち、例えば、免疫組織化学、免疫蛍光、ウエスタンブロット分析によって測定される、ＳＭＮ１／２タンパク質発現の回復；運動ニューロンの増大；筋肉中の神経筋接合部の回復）および生理学的レベル（すなわち、身体検査によって評価される運動機能の改善）で観察することができる。

【0100】

「ヌクレオチド」という用語は、ヌクレオ塩基と、糖と、少なくとも１つのリン酸基（例えば、ホスホジエステル連結基）とを含む、天然に存在するヌクレオチドを指す。

【0101】

「ヌクレオチド類似体」という用語は、天然に存在するヌクレオチドの誘導体、または天然に存在するヌクレオチドに対する修飾、例えば、少なくとも１つの修飾を含むヌクレオチドを指す。このような修飾は、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せのうちの少なくとも１つを含みうる。当業者は、修飾を、ヌクレオチドサブユニットのうちの任意の１つの構成要素（例えば、修飾糖）に関して指定する場合、ヌクレオチドサブユニットのうちの、指定されていない部分は、依然として非修飾（例えば、非修飾ヌクレオシド間連結、非修飾ヌクレオ塩基）でありうることを察知すると予想される。

【0102】

「オリゴヌクレオチド」、「オリゴマー」、「オリゴ」、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、「アンチセンスオリゴマー」、「修飾アンチセンスオリゴマー」および「アンチセンスオリゴ」という用語、ならびにこれらの他の適切な組合せおよび派生語は、ヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体の直鎖状配列であって、１または複数のヌクレオ塩基が、ワトソン−クリック塩基対合により、標的配列と称される、オリゴマーが指向される標的ＲＮＡの部分とハイブリダイズして、標的配列内で、オリゴマー：ＲＮＡヘテロ二重鎖を形成しうる直鎖状配列を指す。具体的に、「アンチセンス」、「オリゴヌクレオチド」、「オリゴマー」、「オリゴ」、および「化合物」という用語は、このようなオリゴマーを指すように、多様な組合せで、かつ、互換的に使用することができる。ヌクレオチドの部分を含む環式サブユニットは、リボースまたは別の五炭糖、糖類似体に基づく場合もあり、ある特定の実施形態では、修飾糖、例えば、モルホリノ基である場合もある（下記のモルホリノベースのオリゴマーについての記載を参照されたい）。

【0103】

オリゴマーに言及する場合の、「修飾された」、「天然に存在しない」、または「類似体」という用語、ならびにこれらの他の適切な組合せおよび派生形は、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、例えば、天然に存在するオリゴヌクレオチド内に見出される、標準的なホスホジエステル連結以外のヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、例えば、天然に存在するオリゴヌクレオチド内に見出される、リボース部分もしくはデオキシリボース部分以外の部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せから選択される、少なくとも１つの修飾を有する、１または複数のヌクレオチドサブユニットを有するオリゴマーを指す。多様な実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結から選択される。さらなる実施形態では、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結は、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、置換（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、４−アミノピペリジン−１−イル部分、または置換４−アミノピペリジン−１−イル部分に共有結合したリン原子を含む。多様な実施形態では、修飾糖部分は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）サブユニット、ロックト核酸（ＬＮＡ）サブユニット、２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）サブユニット、トリシクロＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）サブユニット、２’Ｏ−メチルサブユニット、２’Ｏ−メトキシエチルサブユニット、２’−フルオロサブユニット、２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］サブユニット、およびモルホリノサブユニットから選択される。

【0104】

ヌクレオシド間連結への修飾は、オリゴマーの、少なくとも２つの糖部分および／または修飾糖部分の間の修飾でありうる。ヌクレオチド類似体は、ワトソン−クリック塩基対合により、天然に存在するオリゴヌクレオチド塩基への水素結合が可能な塩基を担い、ここで、類似体は、オリゴマー類似体分子と、天然に存在するオリゴヌクレオチド（例えば、一本鎖ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡ）内の塩基との間で、配列特異的に、このような水素結合を可能とするように、塩基を提示する。例示的な類似体は、実質的に非荷電の、リンを含有するヌクレオシド間連結を有する類似体である。

【0105】

「ヌクレアーゼ耐性」オリゴマーとは、そのヌクレオシド間連結が、非ハイブリダイズ形態でも、ハイブリダイズ形態でも、ヌクレアーゼによる切断であって、体内の、一般的な、細胞外ヌクレアーゼおよび細胞内ヌクレアーゼによる（例えば、３’−エクソヌクレアーゼなどのエクソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮアーゼＨによる）切断に対
して実質的に耐性であるオリゴマーを指す；すなわち、オリゴマーは、オリゴマーが曝露される、体内の正常なヌクレアーゼ条件下で、ヌクレアーゼによる切断を、ほとんどまたは全く示さない。「ヌクレアーゼ耐性ヘテロ二重鎖」とは、ヘテロ二重鎖が、細胞内ヌクレアーゼおよび細胞外ヌクレアーゼによる、インビボにおける分解であって、二本鎖ＲＮＡ／ＲＮＡ複合体または二本鎖ＲＮＡ／ＤＮＡ複合体を切断することが可能な分解に対して、実質的に耐性となるように、修飾アンチセンスオリゴマーの、その相補的な標的への結合により形成されるヘテロ二重鎖を指す。「ヘテロ二重鎖」とは、修飾アンチセンスオリゴマーと、標的ＲＮＡの相補的部分との二重鎖を指す。例えば、ヌクレアーゼ耐性オリゴマーは、本明細書で記載される修飾アンチセンスオリゴマーでありうる。

【0106】

「ヌクレオ塩基」（Ｎｕ）、「塩基対合部分」、または「塩基」という用語は、自然発生または「生来」のＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ウラシル、チミン、アデニン、シトシン、およびグアニン）のほか、天然に存在するプリンおよびピリミジンの類似体であって、結合アフィニティーなど、改善された特性を、オリゴマーへと付与する類似体において見出される、プリン塩基またはピリミジン塩基を指すように、互換的に使用される。例示的な類似体は、ヒポキサンチン（ヌクレオシドであるイノシンの塩基成分）；２，６−ジアミノプリン；５−メチルシトシン；Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジン；１０−（９−（アミノエトキシ）フェノキサジニル（Ｇクランプ）などを含む。

【0107】

塩基対合部分のさらなる例は、それらのそれぞれのアミノ基を、アシル保護基で保護した、ウラシル、チミン、アデニン、シトシン、グアニン、およびヒポキサンチン（イノシン）、２−フルオロウラシル、２−フルオロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、２，６−ジアミノプリン、アザシトシン、シュードイソシトシンおよびシュードウラシルなどのピリミジン類似体、ならびに８−置換プリン、８−置換キサンチン、または８−置換ヒポキサンチン（後者の２つは、天然の分解産物である）など、他の修飾ヌクレオ塩基を含むがこれらに限定されない。それらの内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＣｈｉｕおよびＲａｎａ、ＲＮＡ、２００３年、９巻、１０３４〜１０４８頁、Ｌｉｍｂａｃｈら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９４年、２２巻、２１８３〜２１９６頁；ならびにＲｅｖａｎｋａｒおよびＲａｏ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７巻、３１３頁において開示されている修飾ヌクレオ塩基もまた想定される。

【0108】

塩基対合部分のさらなる例は、１または複数のベンゼン環を付加したサイズ拡大型ヌクレオ塩基を含むがこれらに限定されない。Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈのカタログ（ｗｗｗ．ｇｌｅｎｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ）；Ｋｒｕｅｇｅｒ ＡＴら、Ａｃｃ． Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓ．、２００７年、４０巻、１４１〜１５０頁；Ｋｏｏｌ， ＥＴ、Ａｃｃ．
Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓ．、２００２年、３５巻、９３６〜９４３頁；Ｂｅｎｎｅｒ Ｓ．Ａ．ら、Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｇｅｎｅｔ．、２００５年、６巻、５５３〜５４３頁；Ｒｏｍｅｓｂｅｒｇ， Ｆ．Ｅ．ら、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ．、２００３年、７巻、７２３〜７３３頁；Ｈｉｒａｏ， Ｉ．、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ．、２００６年、１０巻、６２２〜６２７頁（これらの内容は、本明細書において参考として援用される）において記載されている核塩基置換（ｎｕｃｌｅｉｃ ｂａｓｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）も、本明細書で記載されるオリゴマーの合成に有用であると想定される。サイズ拡大型ヌクレオ塩基の例を、下記：

【化18】

[この文献は図面を表示できません]

に示す。

【0109】

リボース、糖類似体、修飾糖、またはモルホリノに共有結合的に連結されたヌクレオ塩基は、ヌクレオシドを含む。「ヌクレオチド」は、少なくとも１つの連結リン酸基と併せたヌクレオシドを含む。リン酸基は、オリゴマーを形成するように、隣接するヌクレオチドへの共有結合的連結を含む。こうして、ヌクレオチドのリン酸基は一般に、「ヌクレオシド間連結」を形成すると称する。したがって、ヌクレオチドは、本明細書でさらに記載されるヌクレオシドと、ヌクレオシド間連結とを含む。一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、サブユニットを含み、ここで、「サブユニット」は、天然に存在するヌクレオチド、本明細書で記載されるヌクレオチド類似体、およびこれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、サブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのサブユニットは、ヌクレオチド類似体である。

【0110】

「ＰＭＯ−ＡＰＮ」という用語は、ジメチルアミノホスホロジアミデート連結および２−（４−アミノピペラジニル）ホスホロジアミデート連結（「ＡＰＮ」連結とも称される）からそれぞれ独立に選択されるサブユニット間連結を含むホスホロジアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉａｍｉｔａｔｅ）モルホリノオリゴマーを指し、ここで少なくとも１つのサブユニット間連結は、ＡＰＮ連結である。例えば、本開示の一部の実施形態では、「ＰＭＯ−ＡＰＮ」は、例えば式（Ｉ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）および（ＶＩＩａ）の化合物の各Ｒ^１が

【化19】

[この文献は図面を表示できません]

（ＡＰＮ連結について）および−Ｎ（ＣＨ_３）_２（ジメチルアミノホスホロジアミデート連結について）から独立に選択され、少なくとも１つのＲ^１が

【化20】

[この文献は図面を表示できません]

である（ＡＰＮ連結について）ものを含む。

【0111】

「ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ」という用語は、ジメチルアミノホスホロジアミデート連結および１−ピペラジニルホスホロジアミデート連結（「Ｐｌｕｓ」連結とも称される）からそれぞれ独立に選択されるサブユニット間連結を含むホスホロジアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉａｍｉｔａｔｅ）モルホリノオリゴマーを指し、ここで少なくとも１つのサブユニット間連結は、Ｐｌｕｓ連結である。例えば、本開示の一部の実施形態では、「ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ」は、例えば式（Ｉ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩＩ）および（ＶＩＩＩａ）の化合物の各Ｒ^１が

【化21】

[この文献は図面を表示できません]

（Ｐｌｕｓ連結について）および−Ｎ（ＣＨ_３）_２（ジメチルアミノホスホロジアミデート連結について）から独立に選択され、少なくとも１つのＲ^１が

【化22】

[この文献は図面を表示できません]

である（Ｐｌｕｓ連結について）ものを含む。

【0112】

「ＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ」という用語は、ジメチルアミノホスホロジアミデート連結および、グリシンリンカーによってオリゴマーの３’または５’末端のいずれかに連結された６個のアルギニン残基からなる細胞透過性ペプチド（下にさらに詳細に考察される「ＣＰＰ」）を含むホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーを指す。３’連結ＣＰＰについて、例えば、グリシンは、アミド結合によって最も３’側のモルホリノサブユニット環窒素に結合されてよい。５’連結ＣＰＰについて、グリシンはアミド結合によってＰＩＰ基の環窒素に連結されてよい。「ＰＩＰ」は、式：

【化23】

[この文献は図面を表示できません]

の化学部分を指す。

【0113】

「２’−ＯＭｅ」という用語は、下にさらに記載する２’−Ｏメチルホスホロチオエートオリゴマーを指す。

【0114】

「ＰＭＯ−ＥＴｐｉｐＴ」という用語は、ジメチルアミノホスホロジアミデート連結および１−（２−エチルピペラジニル）ホスホロジアミデート連結（ＥＴｐｉｐＴ連結とも称される）からそれぞれ独立に選択されるサブユニット間連結を含むホスホロジアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉａｍｉｔａｔｅ）モルホリノオリゴマーを指し、ここで少なくとも１つのサブユニット間連結は、ＥＴｐｉｐＴ連結である。例えば、本開示の一部の実施形態では、「ＰＭＯ−ＥＴｐｉｐＴ」は、例えば式（Ｉ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩＩ）および（ＶＩＩＩａ）の化合物の各Ｒ^１が

【化24】

[この文献は図面を表示できません]

（ＥＴｐｉｐＴ連結について）および−Ｎ（ＣＨ_３）_２（ジメチルアミノホスホロジアミデート連結について）から独立に選択され、少なくとも１つのＲ^１が

【化25】

[この文献は図面を表示できません]

である（ＥＴｐｉｐＴ連結について）ものを含む。

【0115】

「配列同一性」および「配列相同性」という用語（例えば、「〜と５０％同一な配列」）は、配列が、ヌクレオチド対ヌクレオチドベースで、比較ウィンドウ（ｗｉｎｄｏｗ ｏｆ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）にわたり同一である程度を指す。「同一性百分率」は、２つの最適にアラインメントされた配列を、比較ウィンドウにわたり比較し、両方の配列内で、同一な核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）が生じる位置の数を決定して、マッチさせた位置の数をもたらし、マッチさせた位置の数を、比較ウィンドウ内の位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性の百分率をもたらすことにより計算することができる。比較ウィンドウをアラインメントするための、配列の最適のアラインメントは、コンピュータへのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ７．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．、ＵＳＡにおける、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）の実行により行うこともでき、精査と、選択される多様な方法のうちのいずれかにより生成される、最良のアラインメント（すなわち、比較ウィンドウにわたり最高の相同性百分率をもたらすアラインメント）とにより行うこともできる。また、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５巻：３３８９頁、１９９７年により開示されている通り、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムも参照することができる。多様な実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、表１におけるターゲティング配列（配列番号４〜１６）に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有しうる。

【0116】

本明細書で使用される通り、融点（Ｔｍ）が、４０℃、４５℃、５０℃を実質的に超え、多様な実施形態では、６０℃〜８０℃またはこれを超える生理学的条件下で、オリゴマーが、標的とハイブリダイズする場合に、オリゴマーは、標的オリゴヌクレオチドと、「特異的にハイブリダイズする」。このようなハイブリダイゼーションは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件に対応することが好ましい。所与のイオン強度およびｐＨにおいて、Ｔｍは、標的配列のうちの５０％が、相補的な配列とハイブリダイズする温度である。このようなハイブリダイゼーションは、修飾アンチセンスオリゴマーの、標的配列への「ほぼ（ｎｅａｒ）」または「実質的な」相補性により生じうるほか、正確な相補性によっても生じうる。一部の実施形態では、オリゴマーは、標的配列と、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％でハイブリダイズしうる。

【0117】

本明細書で使用される、「サブユニット」という用語は、天然に存在するヌクレオチド、または少なくとも１つの修飾を含む、天然に存在するヌクレオチドを指す。修飾は、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せのうちの少なくとも１つを含みうる。さらなる実施形態では、修飾は、修飾ヌクレオ塩基を含みうる。

【0118】

本明細書で使用するとき、「十分な長さ」という用語は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７などのＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の領域内の少なくとも８、より典型的には８〜４０の連続ヌクレオ塩基と相補的な修飾アンチセンスオリゴマーを指す。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ配列の標的領域と特異的にハイブリダイズすることが可能な、少なくともいくつかのヌクレオチドを含む。好ましくは、十分な長さのオリゴマーは、８〜３０ヌクレオチド、８〜２５ヌクレオチド、８〜２０ヌクレオチド、８〜１８ヌクレオチド、１０〜３０ヌクレオチド、１０〜２５ヌクレオチド、１０〜２０ヌクレオチド、１０〜１８ヌクレオチド、１５〜３０ヌクレオチド、１５〜２５ヌクレオチド、１５〜２０ヌクレオチド、１５〜１８ヌクレオチド、１８〜３０ヌクレオチド、１８〜２５ヌクレオチド、または１８〜２０ヌクレオチド、これらの範囲の間の全ての整数を含めた長さである。好ましくは、修飾アンチセンスオリゴマーは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ヌクレオチドの長さである。好ましくは、十分な長さのオリゴマーは、１８〜２５ヌクレオチドの長さである。

【0119】

本明細書で使用するとき「被験体」または「それを必要とする被験体」という用語は、ヒト被験体などの哺乳動物被験体を含む。例示的な哺乳動物被験体は、脊髄性筋萎縮症を有する。

【0120】

本明細書で使用するとき、「標的」または「標的領域」という用語は、本明細書で企図する修飾アンチセンスオリゴマーと関係している、プレｍＲＮＡ転写物内の領域を指す。多様な態様では、標的は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡの領域である。多様な態様では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７を含む領域である。多様な実施形態では、標的領域は、イントロン７の−７／−１４、−７／−１６、−１０／−２７、−１０／−２９、−１０／−３４、−１３７／−１５９、−１４９／−１７４、−１６７／−１８６、−２４９／−２７３もしくは−２８１／−２９９領域またはイントロン６の−５８／−３９、−１１２／−６７もしくは−２６４／−２４５領域を含む。好ましくは一部の態様では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７の−１０／−２７、−１０／−２９もしくは−１０／−３４領域を含む。

【0121】

多様な実施形態では、「ターゲティング配列」という用語は、アンチセンスオリゴマー内またはアンチセンスオリゴマー類似体内の配列であって、プレｍＲＮＡ転写物内の標的配列と相補的な配列を指す。修飾アンチセンスオリゴマーの全配列が、標的配列と相補的な場合もあり、アンチセンスオリゴマーの一部分だけが、標的配列と相補的な場合もある。例えば、１５〜３０塩基を有するオリゴマー内の、約７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個は、プレｍＲＮＡ転写物内の標的領域と相補的な配列（例えば、「ターゲティング配列」）を含有しうる。ターゲティング配列は、オリゴマー内の連続塩基から形成されることが典型的であるが、代替的に、例えば、オリゴマーの反対側の末端から一体とされると、標的配列にわたる配列を構成する非連続配列から形成される場合もある。

【0122】

「ターゲティング配列」は、標的配列に対して「ほぼ」または「実質的な」相補性を有し得、それでもなお、その意図した目的のため、例えば、エクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルを向上させる、または機能的なＳＭＮタンパク質の発現を増加させるために機能しうる。本開示で用いる修飾アンチセンスオリゴマー化合物は、標的配列に対して、多くても１２ヌクレオチドに１つのミスマッチ、好ましくは、多くても２０ヌクレオチドに１つのミスマッチを有することが好ましい。代替的に、用いる修飾アンチセンスオリゴマーは、本明細書で示す例示的なターゲティング配列に対して、少なくとも９０％の配列相同性、好ましくは、少なくとも９５％の配列相同性を有する。ターゲティング配列は、配列番号４〜１６から選択される配列を含むか、配列番号４〜１６から選択されるか、配列番号４〜１６から選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号４〜１６から選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり得、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。一部の実施形態では、配列番号４〜１６の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、配列番号４〜１６の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。

【0123】

一部の実施形態では、ターゲティング配列は、
ａ）配列番号７（ＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは１６である）、
ｂ）配列番号８（ＡＸＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは１８である）、および
ｃ）配列番号６（ＧＸＡＡＧＡＸＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは２３である）
から選択され、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。一部の実施形態では、配列番号６〜８の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、配列番号６〜８の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。

【0124】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＴである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＸはＴである。

【0125】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＵである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＸはＵである。

【0126】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＹは５ｍＣである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各Ｙは５ｍＣである。

【0127】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＹはＣである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＹはＣである。

【0128】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＸはＴである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＸはＴである。

【0129】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＵである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＸはＵである。

【0130】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＹは５ｍＣである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各Ｙは５ｍＣである。

【0131】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＹはＣである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＹはＣである。

【0132】

本明細書で使用される「ＴＥＧ」、「トリエチレングリコールテール」または「ＥＧ３」という用語は、例えば、その３’末端または５’末端でオリゴマーにコンジュゲートしたトリエチレングリコール部分を指す。例えば、一部の実施形態では、「ＴＥＧ」は、例えば、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）および（Ｘ）の化合物のＴが、式：

【化26】

[この文献は図面を表示できません]

を有するものを含む。

【0133】

本明細書で使用される、組成物の「治療有効量」または「有効量」という用語は、組成物が有効な処置のために、障害の防止または処置において有効な量を指す。「障害」とは、任意のＳＭＡ Ｉ型、ＳＭＡ ＩＩ型、ＳＭＡ ＩＩＩ型およびＳＭＡ ＩＶ型などの脊髄性筋萎縮症を指す。

【0134】

本明細書で使用される「〜を定量化すること」、「定量化」という用語、または他の類縁の語は、核酸、オリゴヌクレオチド、オリゴマー、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の、数量、質量、または単位容量中の濃度を決定することを指す。

【0135】

多様な実施形態では、本明細書で使用される「処置」という用語は、被験体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）または細胞の処置（処理）であって、被験体または細胞の現在の経過を変更する処置を含む。処置は、医薬組成物の投与を含むがこれに限定されず、予防的に実施することもでき、病理学的事象の開始または病因作用物質との接触に後続して実施することもできる。また、処置される疾患もしくは状態の進行速度の低減、この疾患もしくは状態の発症の遅延、またはその発症の重症度の軽減を指向しうる「予防的」処置も含まれる。「処置」または「予防」とは、必ずしも、疾患もしくは状態、またはこれらの関連する症状の、完全な根絶、治癒、または防止を指し示すものではない。
ＩＩ．ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのスプライシングのモジュレーション

【0136】

多様な態様は、所与の試料（例えば、血清試料、血漿試料、組織試料、細胞試料など）においてエクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルがエクソン７欠失ＳＭＮ２ ｍＲＮＡのレベルと比べて増強されるように、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロンおよびエクソンのスプライシングをモジュレートするための方法に関する。多様な方法は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域と相補的な、本明細書で記載される修飾アンチセンスオリゴマーを投与するステップを含み、エクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの発現は、エクソン７欠失ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの発現と比べて増加する。

【0137】

例示を目的とし、理論に束縛されずに述べると、本明細書で記載される通りのアンチセンスオリゴマーは、スプライソソームの作用および成熟ｍＲＮＡ転写物の産生を阻害するなどにより、プレｍＲＮＡのプロセシングの遮断、阻害、またはモジュレーションを促進すると考えられ、また、標的としたｍＲＮＡの分解も誘導しうる。一部の例では、スプライソソームがエクソン／イントロンスプライス接合部に結合するのを阻害して、エクソン／イントロンスプライス接合部がスキップされ、ｍＲＮＡ転写物から１つまたは複数のエクソンが除去されるようにすることができる。野生型ｍＲＮＡ転写物より１つまたは複数少ないエクソンを有する成熟ｍＲＮＡ転写物は、オープンリーディングフレームを保持するｍＲＮＡ転写物をもたらし得、それにより、ｍＲＮＡ転写物は、分解されるのでなく、機能的なタンパク質へと翻訳されうる。野生型ｍＲＮＡより少ないエクソンを有するｍＲＮＡ転写物から翻訳されたタンパク質は、結果として、野生型ｍＲＮＡ転写物から転写されたタンパク質より少ないアミノ酸残基を含む転写タンパク質となりうる。野生型タンパク質より少ないアミノ酸残基で構成された機能的なタンパク質は、野生型タンパク質と同じまたは同様の活性／機能性を有しうる。修飾アンチセンスオリゴマーは、それがハイブリダイズする標的配列または標的領域「を指向する」またはこれら「に対してターゲティングされた」ということができる。ある特定の実施形態では、標的配列は、プレｍＲＮＡの３’スプライス接合部位もしくは５’スプライス接合部位を含む領域、分岐点、エクソンのスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ）もしくはイントロンのスプライシングエンハンサー（ＩＳＥ）、またはスプライシングの調節に関与する他の配列を含む。イントロン内では、ドナー部位（イントロンの５’末端）およびアクセプター部位（イントロンの３’末端）がスプライシングに必要である。スプライスドナー部位は、イントロンの５’末端にあるほとんど不変の配列ＧＵを、より大きい、それほど高度に保存されていない領域内に含む。イントロンの３’末端にあるスプライスアクセプター部位は、ほとんど不変のＡＧ配列によってイントロンを終結させる。標的配列は、エクソン／イントロンスプライス接合部部位内にある、またはエクソン／イントロンスプライス接合部にわたる配列を含み得る。標的配列は、エクソン／イントロンドナースプライス部位を含み得る。

【0138】

標的プレｍＲＮＡ配列に対する配列相補性であって、標的ＲＮＡのスプライシングをモジュレートするのに十分な配列相補性を有する修飾アンチセンスオリゴマーは、スプライソソーム複合体に対する結合部位の遮蔽または妨害を誘発するのに十分な配列であって、他の点で、このようなスプライシングに影響を及ぼし、かつ／または、他の点で、ターゲティングされたプレｍＲＮＡの三次元構造の変更を含む配列を有する修飾アンチセンスオリゴマーを含む。

【0139】

多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の配列に対する、十分な長さと相補性とを有する。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマー内のターゲティング配列は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的配列の領域、例えば、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７の−７／−１４， −７／−１６、−１０／−２７、−１０／−２９、−１０／−３４、−１３７／−１５９、−１４９／−１７４、−１６７／−１８６、−２４９／−２７３もしくは−２８１／−２９９領域またはイントロン６の−５８／−３９、−１１２／−６７もしくは−２６４／−２４５領域とハイブリダイズする。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約８塩基〜約４０塩基であり得、配列が、標的配列へのハイブリダイゼーション時に、スプライスモジュレーションを行うのに十分に相補的であり、任意選択で、ＲＮＡと共に、Ｔｍが、４５℃またはこれを超える、ヘテロ二重鎖を形成する限り、少数のミスマッチを含む。

【0140】

多様な実施形態では、アンチセンスターゲティング配列と、標的配列との相補性の程度は、安定的な二重鎖を形成するのに十分である。修飾アンチセンスオリゴマーの、標的配列との相補性の領域は、８〜１５塩基という短い領域でありうるが、８〜１８塩基またはこれを超える領域であることが可能であり、例えば、これらの範囲の間の全ての整数を含む、８〜４０塩基、８〜３０塩基、８〜２５塩基、８〜２２塩基、８〜２０塩基、１５〜２５塩基、１５〜２２塩基、または１５〜２０塩基でありうる。ある特定の実施形態では、本明細書で論じられる、必須の結合Ｔｍを達成するのに、最小の長さの相補塩基が要請されうる。

【0141】

多様な態様では、オリゴマーを、バイオアベイラビリティー、安定性、細胞更新（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｄａｔｅ）、およびヌクレアーゼ分解に対する耐性を含むがこれらに限定されない、さらなる機能性のために構成する。一般に、４０塩基を含むオリゴマーは、適切である可能性があり、ここで、少なくとも最小数の塩基、例えば、８塩基は、標的配列と相補的である。多様な態様では、オリゴマーを、促進された細胞取込みまたは能動的な細胞取込みを増強するように構成する。多様な態様では、修飾アンチセンスオリゴマーは、１または複数のホスホルアミデートモルホリノ単量体サブユニットまたはホスホロジアミデートモルホリノ単量体サブユニットを含む。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約８〜４０ホスホルアミデートモルホリノ単量体サブユニットまたはホスホロジアミデートモルホリノ単量体サブユニットを含む。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約８〜２６ホスホルアミデートモルホリノ単量体サブユニットまたはホスホロジアミデートモルホリノ単量体サブユニットを含む。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約１５〜２５ホスホルアミデートモルホリノ単量体サブユニットまたはホスホロジアミデートモルホリノ単量体サブユニットを含む。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約１８〜２５ホスホルアミデートモルホリノ単量体サブユニットまたはホスホロジアミデートモルホリノ単量体サブユニットを含む。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約１８〜２６ホスホルアミデートモルホリノ単量体サブユニットまたはホスホロジアミデートモルホリノ単量体サブユニットを含む。

【0142】

多様な態様では、修飾アンチセンスオリゴマーは、任意選択で、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットと；ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の８またはこれを超える連続ヌクレオチドの標的領域と相補的なターゲティング配列とを含む８〜４０サブユニットを含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。多様な実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２遺伝子のイントロン６、エクソン７、イントロン７またはエクソン８の領域（またはスプライス接合部をまたぐ領域）内の８またはこれを超える連続ヌクレオチドを含む。多様な実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７内の領域を含む。さらなる実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７の−７／−１４、−７／−１６、−１０／−２７、−１０／−２９、−１０／−３４、−１３７／−１５９、−１４９／−１７４、−１６７／−１８６、−２４９／−２７３もしくは−２８１／−２９９領域またはイントロン６の−５８／−３９、−１１２／−６７もしくは−２６４／−２４５領域を含む。さらなる実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７の−１０／−２７、−１０／−２９または−１０／−３４領域を含む。

【0143】

多様な態様では、修飾アンチセンスオリゴマーは、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットと；配列番号４〜１６から選択される配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になるターゲティング配列とを任意選択で含む８〜４０サブユニットを含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。好ましくは、一部の態様では、修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号６、７および８から選択される配列を含む。

【0144】

追加の態様は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域に特異的にハイブリダイズする８〜４０サブユニットの修飾アンチセンスオリゴマーを含む。多様な実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２遺伝子のイントロン６、エクソン７、イントロン７またはエクソン８内の領域（またはスプライス接合部をまたぐ領域）を含む。多様な実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７内の領域を含む。さらなる実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７の−７／−１４、−７／−１６、−１０／−２７、−１０／−２９、−１０／−３４、−１３７／−１５９、−１４９／−１７４、−１６７／−１８６、−２４９／−２７３もしくは−２８１／−２９９領域またはイントロン６の−５８／−３９、−１１２／−６７もしくは−２６４／−２４５領域を含む。さらなる実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン７の−１０／−２７、−１０／−２９または−１０／−３４領域を含む。

【0145】

さらなる態様は、修飾糖部分を含む、ヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーを含む。多様な実施形態では、修飾糖部分は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）サブユニット、ロックト核酸（ＬＮＡ）サブユニット、２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）サブユニット、トリシクロＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）サブユニット、２’Ｏ−メチルサブユニット、２’Ｏ−メトキシエチルサブユニット、２’−フルオロサブユニット、２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］サブユニット、およびモルホリノサブユニットから選択される。

【0146】

さらなる態様は、修飾ヌクレオシド間連結を含む、ヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーを含む。多様な実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結およびホスホロトリアミデートヌクレオシド間連結から選択される。さらなる実施形態では、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結は、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、置換（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、４−アミノピペリジン−１−イル部分、または置換４−アミノピペリジン−１−イル部分に共有結合したリン原子を含む。

【0147】

さらなる態様は、修飾糖部分と修飾ヌクレオシド間連結との少なくとも１つの組合せを含む、ヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーであって、多様な実施形態では、１または複数のサブユニットが、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロトリアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、モルホリノサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’Ｏ−メチルサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’Ｏ−メトキシエチルサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’−フルオロサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸サブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］サブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、トリシクロＤＮＡサブユニット、
任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結、もしくはホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換された、ロックト核酸サブユニット、
ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含み、ホスホロジアミデートのリン原子を、モルホリノ環の窒素原子に共有結合させ、かつ、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、もしくは置換（１，４−ピペラジン）−１−イル部分に共有結合させたモルホリノサブユニット、
ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含み、ホスホロジアミデートのリン原子を、４−アミノピペリジン−１−イル部分、もしくは置換４−アミノピペリジン−１−イル部分に共有結合させたモルホリノサブユニット、
ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含み、ホスホロジアミデートのリン原子を、モルホリノ環の窒素原子に共有結合させ、かつ、ジメチルアミノ部分に共有結合させたモルホリノサブユニット、
ホスホロチオエートヌクレオシド間もしくはホスホルアミデートヌクレオシド間連結で置換された、リボース糖サブユニット、
ホスホロチオエートヌクレオシド間連結もしくはホスホルアミデートヌクレオシド間連結で置換された、デオキシリボース糖サブユニット、
任意選択で置換された、ペプチド核酸サブユニット、
または前出の任意の組合せ
から選択されるアンチセンスオリゴマーを含む。

【0148】

多様な態様および実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、修飾アンチセンスオリゴマーに共有結合したペプチドをさらに含む。多様な実施形態では、アルギニンに富む細胞透過性ペプチドを、アンチセンスオリゴマーの３’末端または５’末端にコンジュゲートさせる。

【0149】

種々の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０塩基からなる場合もあり、８〜４０、８〜３０、８〜３０、８〜２５、８〜２０、８〜１８、１０〜３０、１０〜２５、１０〜２０、１０〜１８、１５〜３０、１５〜２５、１５〜２０、１５〜１８、１８〜３０、１８〜２５または１８〜２０塩基の、これらの範囲の間の全ての整数を含む範囲の場合もある。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約８〜約４０または約８〜約３０塩基の長さである。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約１８〜約２５塩基の長さである。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマー配列は、少なくとも約８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０の連続塩基または非連続塩基であって、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７などのＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的配列、あるいはＳＭＮ２プレｍＲＮＡの少なくとも一部にわたる配列と相補的な連続塩基または非連続塩基を含む。

【0150】

修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮタンパク質のＳＭＮ２プレｍＲＮＡ配列のイントロン６、エクソン７もしくはイントロン７内の配列もしくは領域と十分に相補的な塩基配列を含むことが典型的である。以下の表１は、イントロン６、エクソン７およびイントロン７内の配列もしくは領域を列挙する。

【表1-1】

[この文献は図面を表示できません]

【表1-2】

[この文献は図面を表示できません]

【0151】

修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡの異常なスプライシングを、有効にモジュレートし、これにより、機能的なＳＭＮタンパク質の発現を増加させることが可能なことが理想的である。この要件は、任意選択で、オリゴマー化合物が、哺乳動物細胞により能動的に取り込まれ、取り込まれると、標的ｍＲＮＡと共に、任意選択で、Ｔｍが、約４０℃または４５℃を超える、安定的な二重鎖（またはヘテロ二重鎖）を形成する能力を有する場合に満たされる。

【0152】

本明細書で使用される「相補的（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）」または「相補的（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）」とは、標的配列と相補的なヌクレオチド配列のうちの、約９０％〜約１００％を有する修飾アンチセンスオリゴマーを指す。複数の実施形態では、相補的なヌクレオチド配列は、標的配列と特異的にハイブリダイズして、所望の効果、例えば、本明細書で記載される治療効果を誘導する。ある特定の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、オリゴマーと標的配列との間に形成されるヘテロ二重鎖が、細胞ヌクレアーゼの作用、およびインビボにおいて生じうる、他の様態の分解に抗するのに十分に安定である限りにおいて、標的配列と１００％相補的な場合もあり、例えば、改変体を擁するように、ミスマッチを含む場合もある。よって、ある特定のオリゴマーは、オリゴマーと、標的配列との間の、約９０％または少なくとも約９０％の配列相補性、例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列相補性を意味する、実質的な相補性を有しうる。本明細書では、ヌクレアーゼによる切断を受けにくいオリゴマーのヌクレオシド間連結が提供される。ミスマッチは、存在する場合、ハイブリッド二重鎖の中央部より、末端領域に向かって、より不安定化しにくくなることが典型的である。許容されるミスマッチの数は、よく理解されている、二重鎖安定性の原理に従い、オリゴマーの長さ、二重鎖内のＧ：Ｃ塩基対の百分率、および二重鎖内のミスマッチの位置に依存すると予想される。このような修飾アンチセンスオリゴマーは必ずしも、標的配列に対する、１００％の相補性を含むわけではないが、標的プレｍＲＮＡのスプライシングを十分にモジュレートする、例えば、本明細書で記載される治療効果を達成するように、標的配列に、有効に、安定的に、かつ特異的に結合するのに十分な相補性を有するべきである。

【0153】

理論に束縛されずに述べると、オリゴマーと、標的配列との間で形成される二重鎖の安定性は、結合Ｔｍと、二重鎖の、細胞酵素による切断の受けやすさとの関数であると考えられる。相補配列であるＲＮＡ二重鎖との関連における、オリゴマーのＴｍは、Ｈａｍｅｓら、「Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８５年、１０７〜１０８頁により記載されている方法、またはＭｉｙａｄａ Ｃ． Ｇ．およびＷａｌｌａｃｅ Ｒ． Ｂ．、１９８７年、「Ｏｌｉｇｏｍｅｒ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５４巻、９４〜１０７頁（この内容は、本明細書中に参考として援用される）において記載されている方法など、従来の方法により測定することができる。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、相補配列であるＲＮＡ二重鎖との関連における結合Ｔｍであって、例えば、約４５℃または５０℃を超えるなど、体温を超えるＴｍを有する。６０〜８０℃またはこれを超える範囲のＴｍもまた含まれる。周知の原理に従い、相補性ベースのＲＮＡハイブリッド二重鎖との関連における、オリゴマーのＴｍは、二重鎖内のＣ：Ｇ対合塩基の比を増加させ、かつ／またはヘテロ二重鎖の長さ（塩基対での）を増加させることにより、上昇させることができる。

【0154】

下記の表２は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７内の標的領域と相補的な例示的なターゲティング配列を示す（５’−３’の配向性で）。

【表2-1】

[この文献は図面を表示できません]

【表2-2】

[この文献は図面を表示できません]

【0155】

ある特定の修飾アンチセンスオリゴマーは、表１における配列（例えば、配列番号４〜１６）を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になるか、配列番号４〜１６から選択されるか、配列番号４〜１６から選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、あるいは、配列番号４〜１６から選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、独立に、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から選択され、各Ｙは、独立に、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から選択される。例えば、ある特定のアンチセンスオリゴマーは、配列番号４〜１６のいずれかのうちの約８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０の連続ヌクレオチドもしくは非連続ヌクレオチド、または少なくともほぼこれらの数の連続ヌクレオチドもしくは非連続ヌクレオチドを含む。非連続部分については、介在ヌクレオチドを、欠失させるか、または異なるヌクレオチドで置換することもでき、介在ヌクレオチドを付加することもできる。改変体のさらなる例は、約９０％または少なくとも約９０％の配列同一性または配列相同性、例えば、配列番号４〜１６のいずれかの全長にわたる、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性または配列相同性を有するオリゴマーを含む。ある特定の実施形態では、ターゲティング配列は、配列番号４〜１６から選択される。

【0156】

修飾アンチセンスオリゴマーおよびその改変体の活性／機能性は、当技術分野における慣例的な技法に従いアッセイすることができる。例えば、サーベイされるＲＮＡのスプライス形態および発現レベルを、転写される核酸またはタンパク質のスプライス形態および／または発現を検出するための、多種多様な周知の方法のうちのいずれかにより評価することができる。このような方法の非限定的な例は、ＲＮＡのスプライシング形態についてのＲＴ−ＰＣＲに続く、ＰＣＲ産物のサイズによる分離、核酸ハイブリダイゼーション法、例えば、ノーザンブロット、ならびに／または核酸アレイ；核酸増幅法；タンパク質を検出するための免疫学的方法；タンパク質精製法；およびタンパク質機能アッセイまたはタンパク質活性アッセイの使用を含む。

【0157】

ＲＮＡ発現レベルは、ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡ（すなわち、転写されるオリゴヌクレオチド）を、細胞、組織、または生物体から調製し、ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡを、アッセイされる核酸またはその断片の相補体である基準オリゴヌクレオチドとハイブリダイズさせることにより評価することができる。ｃＤＮＡは、任意選択で、相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションの前に、様々なポリメラーゼ連鎖反応またはインビトロにおける転写法のうちのいずれかを使用して増幅することもできるが；増幅しないことが好ましい。１または複数の転写物の発現はまた、転写物の発現レベルについて評価する、定量的ＰＣＲを使用して検出することもできる。

【0158】

ＩＩＩ．修飾アンチセンスオリゴマー化学
Ａ．一般的特徴
多様な態様および実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域と特異的にハイブリダイズする。例示的な修飾アンチセンスオリゴマーは、表１に明示されたターゲティング配列、表１のターゲティング配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片、または表１のターゲティング配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体を含む。他の例示的な修飾アンチセンスオリゴマーは、表１に明示されたターゲティング配列からなるか、またはこれらから本質的になる。

【0159】

さらなる態様では、ヌクレアーゼ耐性修飾アンチセンスオリゴマーが提供される。多様な実施形態では、１または複数のヌクレオシド間連結の修飾を含む修飾アンチセンスオリゴマーが提供される。他の実施形態では、１または複数の修飾糖部分を含む修飾アンチセンスオリゴマーが提供される。他の実施形態では、１または複数の修飾ヌクレオシド間連結と、１または複数の修飾糖部分との組合せを含む、修飾アンチセンスオリゴマーが提供される。他の実施形態では、修飾ヌクレオ塩基単独、または修飾ヌクレオシド間連結もしくは修飾糖部分のうちのいずれかと組み合わせた修飾ヌクレオ塩基を含む、修飾アンチセンスオリゴマーが提供される。

【0160】

多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、完全に修飾されたヌクレオシド間連結を有するオリゴマーを含むことが可能であり、例えば、ヌクレオシド間連結の１００％が修飾されている（例えば、２５量体の修飾アンチセンスオリゴマーは、本明細書で記載される修飾のうちの１つまたはこれらの任意の組合せで修飾された、２４のヌクレオシド間連結を含む）。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、そのヌクレオシド間連結の約１００％〜２．５％が修飾されたものを含みうる。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、そのヌクレオシド間連結のうちの約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または２．５％、およびその間の整数（ｉｔｅｒａｔｉｏｎ）の％が修飾されたものを含みうる。他の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、本明細書で記載される修飾の任意の組合せを含みうる。

【0161】

修飾ヌクレオシド間連結のパーセントについての実施形態と組み合わせた実施形態を含む、多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、完全修飾糖部分を有するオリゴマーを含むことが可能であり、例えば、糖部分の１００％が修飾されている（例えば、２５量体の修飾アンチセンスオリゴマーは、本明細書で記載される修飾のうちの１つまたはこれらの任意の組合せで修飾された、２５の糖部分を含む）。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、その糖部分の約１００％〜２．５％が修飾されたものを含みうる。多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、その糖部分のうちの約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または２．５％、およびその間の整数の％が修飾されたものを含みうる。他の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、本明細書で記載される修飾の任意の組合せを含みうる。

【0162】

多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、実質的に非荷電であり、任意選択で、細胞膜を横切る、能動的な輸送または促進された輸送のための基質として適する。一部の実施形態では、全てのヌクレオシド間連結は、非荷電である。オリゴマーが、標的プレｍＲＮＡと共に、安定的な二重鎖を形成する能力はまた、標的との関連における、修飾アンチセンスオリゴマーの相補性の長さおよび程度、Ｇ：Ｃ塩基マッチの、Ａ：Ｔ塩基マッチに対する比、ならびに任意のミスマッチ塩基の位置を含む、オリゴマーの他の特色にも関しうる。修飾アンチセンスオリゴマーが、細胞ヌクレアーゼに抵抗する能力は、薬剤の存続および細胞質への最終的な送達を促進しうる。

【0163】

多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、生理学的ｐＨで正に荷電しているか、またはカチオン性である、少なくとも１つのヌクレオシド間連結を有する。さらなる実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約５．５〜約１２の間のｐＫａを呈示する、少なくとも１つのヌクレオシド間連結を有する。さらなる実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、もしくは１０のヌクレオシド間連結、少なくともほぼこれらの数のヌクレオシド間連結、またはほぼこれらの数を超えないヌクレオシド間連結であって、約４．５〜約１２の間のｐＫａを呈示するヌクレオシド間連結を含有する。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは１００％のヌクレオシド間連結、または少なくともほぼこれらの比率のヌクレオシド間連結であって、約４．５〜約１２の間のｐＫａを呈示するヌクレオシド間連結を含有する。任意選択で、修飾アンチセンスオリゴマーは、塩基性の窒素と、アルキル基、アリール基、またはアラルキル基との両方を伴う、少なくとも１つのヌクレオシド間連結を有する。特定の実施形態では、１または複数のカチオン性ヌクレオシド間連結は、４−アミノピペリジン−１−イル（ＡＰＮ）基またはその誘導体を含む。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、モルホリノ環を含む。理論に束縛されるわけではないが、オリゴマー内の、１または複数のカチオン性連結（例えば、ＡＰＮ基またはＡＰＮ誘導体）の存在は、標的ヌクレオチド内の、負に荷電したホスフェートへの結合を促進することが考えられる。こうして、変異体ＲＮＡと、カチオン性連結を含有するオリゴマーとの間のヘテロ二重鎖の形成は、イオン性引力およびワトソン−クリック塩基対合の両方により一体に保持されうる。

【0164】

多様な実施形態では、カチオン性連結の数は、少なくとも２つであり、全ヌクレオシド間連結の約半分を超えず、例えば、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０のカチオン性連結、またはほぼこれらを超えないカチオン性連結である。一部の実施形態では、しかし、ヌクレオシド間連結のうちの、最大で全ては、カチオン性連結であり、例えば、全ヌクレオシド間連結のうちの約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０、または少なくともほぼこれらの数は、カチオン性連結である。さらなる実施形態では、約１９〜２０単量体サブユニットのオリゴマーは、２つ〜１０、例えば、４〜８つのカチオン性連結と、残りの非荷電連結とを有しうる。他の具体的な実施形態では、１４〜１５サブユニットのオリゴマーは、２〜７つ、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つのカチオン性連結と、残りの非荷電連結とを有しうる。こうして、オリゴマー内のカチオン性連結の総数は、約１〜１０〜１８〜２０〜３０またはこれを超えて（間の全ての整数を含む）変動することが可能であり、オリゴマー全体にわたり散在しうる。

【0165】

一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、１０の非荷電連結ごとに約４つ〜５つまたは４つもしくは５つなど、２つ〜５つまたは２つ、３つ、４つ、もしくは５つの非荷電連結ごとに約１つのカチオン性連結または最大で約１つのカチオン性連結を有しうる。

【0166】

ある特定の実施形態は、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のカチオン性連結を含有する修飾アンチセンスオリゴマーを含む。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性の最適な改善は、ヌクレオシド間連結のうちの約２５％がカチオン性である場合に見ることができる。ある特定の実施形態では、増強は、少数（例えば、１０〜２０％）のカチオン性連結に関して見ることもでき、カチオン性連結の数が、約６０％など、５０〜８０％の範囲内にある場合に見ることもできる。

【0167】

さらなる実施形態では、カチオン性連結を、ヌクレオシド間連結に沿って散在させる。このようなオリゴマーは任意選択で、少なくとも２つの連続非荷電連結を含有する；すなわち、オリゴマーは任意選択で、その全長に沿って、厳密に交互のパターンを有さない。具体的な場合では、各１つまたは２つのカチオン性連結は、ヌクレオシド間連結に沿って、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つの非荷電連結により隔てられる。

【0168】

また、カチオン性連結のブロックと、非荷電連結のブロックとを有するオリゴマーも含まれる。例えば、中央の非荷電連結のブロックが、カチオン性連結のブロックに挟まれる場合もあり、この逆の場合もある。一部の実施形態では、オリゴマーは、ほぼ等長の５’領域、３’領域、および中央領域を有し、中央領域内のカチオン性連結の百分率は、カチオン性連結の総数のうちの、約５０％、６０％、７０％、または８０％を超える。

【0169】

ある特定の修飾アンチセンスオリゴマーでは、カチオン性連結のバルク（例えば、カチオン性連結のうちの７０、７５％、８０％、９０％）は、ヌクレオシド間連結の「中央領域」、例えば、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、または１５の真ん中の連結（ｃｅｎｔｅｒｍｏｓｔ ｌｉｎｋａｇｅ）に近接して分布する。例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４量体のオリゴマーは、全カチオン性連結のうちの、少なくとも５０％、６０％、７０％、または８０％を、８つ、９つ、１０、１１、または１２の真ん中の連結へと局在化させうる。

【0170】

Ｂ．化学の特色
修飾アンチセンスオリゴマーは、様々なヌクレオチド類似体サブユニットを含有しうる。さ
らなる例は、
ホスホルアミデートを含有するオリゴマー、
ホスホロジアミデートを含有するオリゴマー、
ホスホロトリアミデートを含有するオリゴマー、
ホスホロチオエートを含有するオリゴマー、
モルホリノを含有するオリゴマーであって、任意選択で、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結またはホスホロジアミデートヌクレオシド間連結で置換されたオリゴマー、
２’Ｏ−メチルを含有するオリゴマーであって、任意選択で、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換されたオリゴマー、
ロックト核酸（ＬＮＡ）を含有するオリゴマーであって、任意選択で、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換されたオリゴマー、
２’Ｏ−メトキシエチル（ＭＯＥ）を含有するオリゴマーであって、任意選択で、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換されたオリゴマー、
２’−フルオロを含有するオリゴマーであって、任意選択で、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換されたオリゴマー、
２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）を含有するオリゴマーであって、任意選択で、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換されたオリゴマー、
トリシクロＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）を含有するオリゴマーであって、任意選択で、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換されたオリゴマー、
２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］を含有するオリゴマーであって、任意選択で、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結で置換されたオリゴマー、
モルホリノを含有するオリゴマーであって、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含み、ホスホロジアミデートのリン原子を、モルホリノ環の窒素原子に共有結合させ、かつ、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、または置換（１，４−ピペラジン）−１−イル（ＰＭＯプラス）部分に共有結合させたオリゴマー、
モルホリノを含有するオリゴマーであって、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含み、ホスホロジアミデートのリン原子を、モルホリノ環の窒素原子に共有結合させ、かつ、４−アミノピペリジン−１−イル部分（すなわち、ＡＰＮ）または置換４−アミノピペリジン−１−イル（ＰＭＯ−Ｘ）部分に共有結合させたオリゴマー、
ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結をさらに含むモルホリノサブユニットであって、ホスホロジアミデートのリン原子を、モルホリノ環の窒素原子に共有結合させ、かつ、ジメチルアミノ部分に共有結合させたサブユニット、
リボース糖を含有するオリゴマーであって、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結またはホスホルアミデートヌクレオシド間連結をさらに含むオリゴマー、
デオキシリボース糖を含有するオリゴマーであってホスホロチオエートヌクレオシド間連結オリゴマーまたはホスホルアミデートヌクレオシド間連結をさらに含むオリゴマー、
任意選択でさらに置換された、ペプチドコンジュゲートホスホロジアミデートモルホリノ含有オリゴマー（ＰＰＭＯ）、
さらなる置換を含む、任意選択でさらに置換された、ペプチド核酸（ＰＮＡ）オリゴマー、
および前出のうちのいずれかの組合せを含む。

【0171】

ある特定の実施形態では、ホスホロジアミデート連結のリン原子を、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、置換（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、４−アミノピペリジン−１−イル部分、または置換４−アミノピペリジン−１−イル部分で、さらに置換する。

【0172】

一般に、ＰＮＡ化学およびＬＮＡ化学は、ＰＭＯおよび２’Ｏ−Ｍｅオリゴマーと比べた、それらの比較的高度な標的結合強度のために、より短いターゲティング配列を活用しうる。ホスホロチオエート化学と、２’Ｏ−Ｍｅ化学とを組み合わせて、２’Ｏ−Ｍｅ−ホスホロチオエート類似体を作出することができる。例えば、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１３／１１２０５３号および同第ＷＯ／２００９／００８７２５号を参照されたい。

【0173】

場合によって、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）などの修飾アンチセンスオリゴマーを、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）にコンジュゲートさせて、細胞内送達を促進することができる。ペプチドコンジュゲートＰＭＯは、ＰＰＭＯと呼ばれ、ある特定の実施形態は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１２／１５０９６０号において記載されているＰＰＭＯを含む。一部の実施形態では、例えば、本明細書で記載される修飾アンチセンスオリゴマーの３’末端にコンジュゲートまたは連結させた、アルギニンに富むペプチド配列を使用することができる。

【0174】

１．ペプチド核酸（ＰＮＡ）
ペプチド核酸（ＰＮＡ）とは、骨格が、デオキシリボース骨格と構造的に同形である、ＤＮＡの類似体であって、ピリミジン塩基またはプリン塩基を結合させた、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン単位からなる類似体である。天然のピリミジン塩基およびプリン塩基を含有するＰＮＡは、ワトソン−クリック塩基対合則に従う相補的オリゴマーとハイブリダイズし、塩基対認識の点で、ＤＮＡを模倣する（Ｅｇｈｏｌｍ、Ｂｕｃｈａｒｄｔら、１９９３年）。ＰＮＡのヌクレオシド間連結は、ホスホジエステル結合ではなく、ペプチド結合により形成されることから、アンチセンス適用（下記の構造を参照されたい）に良好に適する。骨格が非荷電である結果として、通常を超える熱安定性を呈示する、ＰＮＡ／ＤＮＡ二重鎖またはＰＮＡ／ＲＮＡ二重鎖がもたらされる。ＰＮＡは、ヌクレアーゼによっても、プロテアーゼによっても認識されない。ＰＮＡサブユニットを含むＰＮＡオリゴマーの非限定的な例を、下記：

【化27】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。

【0175】

天然構造に対する大幅な構造変化にもかかわらず、ＰＮＡは、ヘリックス形態による、ＤＮＡまたはＲＮＡへの配列特異的結合が可能である。ＰＮＡの特徴は、相補的なＤＮＡまたはＲＮＡに対する高結合アフィニティー、単一塩基ミスマッチにより引き起こされる不安定化効果、ヌクレアーゼおよびプロテアーゼに対する耐性、塩濃度に依存しない、ＤＮＡまたはＲＮＡとのハイブリダイゼーション、およびホモプリンＤＮＡとの三重鎖形成を含む。ＰＡＮＡＧＥＮＥ（Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）は、Ｂｔｓ ＰＮＡ単量体（Ｂｔｓ；ベンゾチアゾール−２−スルホニル基）と、オリゴマー化工程とを開発している。Ｂｔｓ ＰＮＡ単量体を使用する、ＰＮＡのオリゴマー化は、脱保護、カップリング、およびキャッピングの反復的サイクルから構成される。ＰＮＡは、当技術分野で公知の任意の技法を使用して、合成により作製することができる。例えば、米国特許第６，９６９，７６６号、同第７，２１１，６６８号、同第７，０２２，８５１号、同第７，１２５，９９４号、同第７，１４５，００６号、および同第７，１７９，８９６号を参照されたい。ＰＮＡの調製についてはまた、米国特許第５，５３９，０８２号；同第５，７１４，３３１号；および同第５，７１９，２６２号も参照されたい。ＰＮＡ化合物についてのさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５４巻：１４９７〜１５００頁、１９９１年においても見出すことができる。前出の各々は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。

【0176】

２．ロックト核酸（ＬＮＡ）
修飾アンチセンスオリゴマー化合物はまた、「ロックト核酸」サブユニット（ＬＮＡ）も含有しうる。「ＬＮＡ」とは、架橋核酸（ＢＮＡ）と呼ばれる修飾のクラスのメンバーである。ＢＮＡは、リボース環のコンフォメーションを、Ｃ３０−エンド（ノーザン）糖パッカー（ｓｕｇａｒ ｐｕｃｋｅｒ）にロックする共有結合的連結を特徴とする。ＬＮＡでは、架橋は、２’−Ｏ位と４’−Ｃ位との間のメチレンから構成される。ＬＮＡは、骨格の事前組織化（ｐｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）および塩基スタッキングを増強して、ハイブリダイゼーションおよび熱安定性を増加させる。

【0177】

ＬＮＡの構造は、例えば、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｗｅｎｇｅｌら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９８年）、４５５巻；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９８年）、５４巻：３６０７頁、およびＡｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９年）、３２巻：３０１頁）；Ｏｂｉｋａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９７年）、３８巻：８７３５頁；（１９９８年）、３９巻：５４０１頁、ならびにＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００８年）、１６巻：９２３０頁において見出すことができる。ＬＮＡサブユニットと、ホスホジエステルヌクレオシド間連結とを含む、ＬＮＡオリゴマーの非限定的な例を、下記：

【化28】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。

【0178】

本開示の化合物には、１または複数のＬＮＡを組み込むことができ、場合によって、化合物を、ＬＮＡから完全に構成することもできる。個別のＬＮＡヌクレオシドサブユニットの合成およびオリゴマーへのそれらの組込みのための方法については、例えば、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５７２，５８２号、同第７，５６９，５７５号、同第７，０８４，１２５号、同第７，０６０，８０９号、同第７，０５３，２０７号、同第７，０３４，１３３号、同第６，７９４，４９９号、および同第６，６７０，４６１号において記載されている。典型的なヌクレオシド間リンカーは、ホスホジエステル部分およびホスホロチオエート部分を含み、代替的に、リン非含有リンカーを使用することもできる。さらなる実施形態は、ＬＮＡ含有化合物を含み、各ＬＮＡサブユニットは、ＤＮＡサブユニットで隔てられている。ある特定の化合物は、交互のＬＮＡサブユニットおよびＤＮＡサブユニットから構成され、ヌクレオシド間リンカーは、ホスホロチオエートである。

【0179】

２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）は、ＢＮＡのクラスの別のメンバーである。ＥＮＡサブユニットおよびホスホジエステルヌクレオシド間連結の非限定的な例を、下記：

【化29】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。
ＥＮＡオリゴマーおよびそれらの調製については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｏｂｉｋａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｔｔ、３８巻（５０号）：８７３５頁において記載されている。本開示の化合物には、１または複数のＥＮＡサブユニットを組み込むことができる。

【0180】

３．ホスホロチオエート
「ホスホロチオエート」（またはＳ−オリゴ）とは、生来ＤＮＡまたは生来ＲＮＡの改変体であって、ホスホジエステルヌクレオシド間連結の非架橋酸素のうちの１つを、硫黄で置きかえた改変体である。デオキシリボースサブユニットと、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結とを含む、ホスホロチオエートＤＮＡ（左）、および、リボースサブユニットと、ホスホロチオエート（ｐｈｏｓｏｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ）ヌクレオシド間連結とを含む、ホスホロチオエートＲＮＡ（右）の非限定的な例を、下記：

【化30】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。
ヌクレオシド間結合の硫黄化（ｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ）は、５’−３’および３’−５’ＤＮＡ ＰＯＬ １エクソヌクレアーゼ、ヌクレアーゼＳ１およびＰ１、ＲＮアーゼ、血清ヌクレアーゼ、ならびにヘビ毒ホスホジエステラーゼを含む、エンドヌクレアーゼおよびエクソヌクレアーゼの作用を低減する。ホスホロチオエートは、２つの主要な経路：ホスホン酸水素上の炭素ジスルフィド内の硫黄元素の溶解作用、または亜リン酸トリエステルを、テトラエチルチウラムジスルフィド（ＴＥＴＤ）もしくは３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン１，１−ジオキシド（３Ｈ−１，２−ｂｅｎｓｏｄｉｔｈｉｏｌ−３−ｏｎｅ １，１−ｄｉｏｘｉｄｅ；ＢＤＴＤ）で硫黄化する方法（例えば、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｉｙｅｒら、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．５５巻、４６９３〜４６９９頁、１９９０年を参照されたい）により作製し得る。後者の方法は、大半の有機溶媒中の硫黄元素の不溶性および炭素ジスルフィドの毒性の問題を回避する。ＴＥＴＤ法およびＢＤＴＤ法はまた、高純度のホスホロチオエートももたらす。

【0181】

４．トリシクロＤＮＡおよびトリシクロホスホロチオエートヌクレオチド
トリシクロＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）とは、各ヌクレオチドを、シクロプロパン環の導入
により修飾して、骨格のコンフォメーション可撓性を制約し、ねじれ角γの骨格形状を最適化した、拘束ＤＮＡ類似体のクラスである。ホモ塩基性のアデニン含有ｔｃ−ＤＮＡおよびチミン含有ｔｃ−ＤＮＡは、相補的なＲＮＡと共に、極めて安定的なＡ−Ｔ塩基対を形成する。トリシクロＤＮＡおよびそれらの合成については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／１１５９９３号において記載されている。本開示の化合物には、１または複数のトリシクロＤＮＡサブユニットを組み込むことができ、場合によって、化合物は、トリシクロＤＮＡサブユニットから完全に構成されうる。

【0182】

トリシクロホスホロチオエートヌクレオチドとは、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結を伴うトリシクロＤＮＡサブユニットである。トリシクロホスホロチオエートヌクレオチドおよびそれらの合成については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０５３９２８号において記載されている。本開示の化合物には、１または複数のトリシクロＤＮＡサブユニットを組み込むことができ、場合によって、化合物は、トリシクロＤＮＡヌクレオチドから完全に構成されうる。トリシクロＤＮＡ／三環系（ｔｒｉｃｙｃｌｅ）サブユニットおよびホスホジエステルヌクレオシド間連結の非限定的な例を、下記：

【化31】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。
５． ２’Ｏ−メチルオリゴマー、２’Ｏ−ＭＯＥオリゴマー、および２’−Ｆオリゴマー
「２’Ｏ−Ｍｅオリゴマー」分子は、リボース分子の２’−ＯＨ残基において、メチル基を保有するサブユニットを含む。２’−Ｏ−Ｍｅ−ＲＮＡは、ＤＮＡと同じ（または類似の）挙動を示すが、ヌクレアーゼによる分解に対して保護されている。２’−Ｏ−Ｍｅ−ＲＮＡはまた、さらなる安定化のために、ホスホロチオエートオリゴマー（ＰＴＯ）と組み合わせることもできる。２’Ｏ−Ｍｅオリゴマー（２’ＯＭｅサブユニットが、ホスホジエステルヌクレオシド間連結またはホスホロチオエートヌクレオシド間連結により接続されている）は、当技術分野における慣例的な技法（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｙｏｏら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、３２巻：２００８〜１６頁、２００４年を参照されたい）に従い、合成することができる。２’ＯＭｅサブユニットおよびホスホジエステルサブユニット間連結を含む２’Ｏ−Ｍｅオリゴマーの非限定的な例を、下記：

【化32】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。
２’Ｏ−Ｍｅオリゴマーはまた、ホスホロチオエート連結（２’Ｏ−Ｍｅホスホロチオエートオリゴマー）も含みうる。２’Ｏ−Ｍｅオリゴマーなどの２’Ｏ−メトキシエチルオリゴマー（２’−Ｏ ＭＯＥ）は、リボース分子の２’−ＯＨ残基において、メトキシエチル基を保有するサブユニットを含み、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｍａｒｔｉｎら、Ｈｅｌｖ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ、７８巻、４８６〜５０４頁、１９９５年において論じられている。２’Ｏ−ＭＯＥサブユニットの非限定的な例を、下記：

【化33】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。

【0183】

前出のアルキル化２’ＯＨリボース誘導体と対照的に、２’−フルオロオリゴマーは、２’位において、２’ＯＨの代わりにフルオロラジカルを有するサブユニットを含む。２’−Ｆサブユニットおよびホスホジエステルヌクレオシド間連結を含む２’−Ｆオリゴマーの非限定的な例を、下記：

【化34】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。
２’−フルオロオリゴマーについては、参照によりその全体において本明細書に組み込
まれる、ＷＯ２００４／０４３９７７においてさらに記載されている。本開示の化合物には、１または複数の２’Ｏ−メチルサブユニット、２’Ｏ−ＭＯＥサブユニット、および２’−Ｆサブユニットを組み込むことができ、本明細書で記載されるヌクレオシド間連結のうちのいずれかを活用することができる。場合によって、本開示の化合物は、２’Ｏ−メチル、２’Ｏ−ＭＯＥ、または２’−Ｆサブユニットから完全に構成しうると予想される。本開示の化合物についての一実施形態は、２’Ｏ−メチルサブユニットから完全に構成される。

【0184】

６． ２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］オリゴマー（ＭＣＥ）
ＭＣＥは、本開示の化合物中で有用な、２’Ｏ修飾リボヌクレオチドの別の例である。この例では、２’ＯＨを、２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル部分へと誘導体化して、ヌクレアーゼ耐性を増加させる。ＭＣＥサブユニットおよびホスホジエステルヌクレオシド間連結を含むＭＣＥオリゴマーの非限定的な例を、下記：

【化35】

[この文献は図面を表示できません]

に描示する。
ＭＣＥおよびそれらの合成については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｙａｍａｄａら、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．、７６巻（９号）：３０４２〜５３頁において記載されている。本開示の化合物には、１または複数のＭＣＥサブユニットを組み込むことができる。

【0185】

７．モルホリノベースのオリゴマー
モルホリノベースのオリゴマーとは、ヌクレオ塩基を支持するモルホリノサブユニットを含むオリゴマーを指し、リボースの代わりに、モルホリニル環を含有する。例示的なヌクレオシド間連結は、例えば、１つのモルホリノサブユニットのモルホリニル環窒素を、隣接するモルホリノサブユニットの４’環外炭素に接合する、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結またはホスホロジアミデートヌクレオシド間連結を含む。各モルホリノサブユニットは、塩基特異的水素結合により、オリゴヌクレオチド内の塩基に結合するのに有効な、プリンまたはピリミジンのヌクレオ塩基を含む。

【0186】

モルホリノベースのオリゴマー（修飾アンチセンスオリゴマーを含む）については、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６９８，６８５号；同第５，２１７，８６６号；同第５，１４２，０４７号；同第５，０３４，５０６号；同第５，１６６，３１５号；同第５，１８５，４４４号；同第５，５２１，０６３号；同第５，５０６，３３７号；ならびに係属中の米国特許出願第１２／２７１，０３６号；同第１２／２７１，０４０号；およびＰＣＴ公開第ＷＯ／２００９／０６４４７１号および同第ＷＯ／２０１２／０４３７３０号；ならびにＳｕｍｍｅｒｔｏｎら、１９９７年、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、７巻、１８７〜１９５頁において詳述されている。本明細書では、用語「モルホリノサブユニット」を、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎらに記載されるとおりに使用する。

【0187】

オリゴマー構造内で、リン酸基は一般に、オリゴマーの「ヌクレオシド間連結」を形成する基として言及される。ＲＮＡおよびＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間連結は、３’−５’ホスホジエステル連結である。「ホスホルアミデート」基が、３つの結合酸素原子と、１つの結合窒素原子とを有するリンを含むのに対し、「ホスホロジアミデート」基は、２つの結合酸素原子と、２つの結合窒素原子とを有するリンを含む。「ホスホロトリアミデート」基（またはリン酸トリアミド基）は、接合した酸素原子１個および接合した窒素原子３個を有するリンを含む。本明細書で記載されるモルホリノベースのオリゴマーの非荷電ヌクレオシド間連結またはカチオン性ヌクレオシド間連結では、１つの窒素は常に、連結鎖に対してペンダントであるものである。ホスホロジアミデート連結における第２の窒素は、モルホリン環構造内の環窒素であることが典型的である。

【0188】

「ＰＭＯ」とは、（ｉ）モルホリン環の窒素原子への共有結合、および（ｉｉ）ジメチルアミノの窒素への第２の共有結合を伴うリン原子を有するホスホロジアミデートモルホリノベースのオリゴマーを指す。「ＰＭＯ−Ｘ」とは、（ｉ）モルホリン環の窒素原子への共有結合、および（ｉｉ）例えば、４−アミノピペリジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）または４−アミノピペリジン−１−イルの誘導体の環窒素への第２の共有結合を伴うリン原子を有するホスホロジアミデートモルホリノベースのオリゴマーを指す。例示的なＰＭＯ−Ｘオリゴマーについては、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／３８４５９号およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０７４８３４号において開示されている。ＰＭＯ−Ｘは、リン原子を、モルホリノ基、および４−アミノピペリジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）の環窒素へと連結する、少なくとも１つのヌクレオシド間連結を含む、ＰＭＯ−Ｘオリゴマーを指す、「ＰＭＯ−ａｐｎ」、「ＰＭＯ−ＡＰＮ」または「ＡＰＮ」を含む。具体的な実施形態では、表２に明示されたターゲティング配列を含む修飾アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つのＡＰＮを含有する連結またはＡＰＮ誘導体を含有する連結を含む。多様な実施形態は、モルホリノベースのオリゴマーであって、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の、ＡＰＮ／ＡＰＮ誘導体を含有する連結を有し、残りの連結（１００％未満である場合）が、非荷電連結であり、例えば、全ヌクレオシド間連結のうちの約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０、または少なくともほぼこれらの数が、ＡＰＮ／ＡＰＮ誘導体を含有する連結であるオリゴマーを含む。

【0189】

多様な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（Ｉ）：

【化36】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化37】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化38】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例（ｉｎｓｔａｎｃｅ）は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化39】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化40】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝
ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、Ｇ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^２３、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｓＮＲ^２４Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２４Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および式：

【化41】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^２３は、式−（Ｏ−アルキル）_ｖ−ＯＨを有し、式中、ｖは、３〜１０の整数であり、ｖ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^２４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｓは、１〜５の整数であり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_６Ｃ（Ｏ）−および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２Ｓ_２（ＣＨ_２）_２Ｃ（Ｏ）−から選択され；
各Ｒ^２５は、式−（ＣＨ_２）_２ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^２６）_２を有し、式中、各Ｒ^２６は、式−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２を有し、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化42】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合している］
である。

【0190】

一部の実施形態では、Ｒ^２は、式：

【化43】

[この文献は図面を表示できません]

の部分であり、
式中、Ｌは−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_６Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２Ｓ_２（ＣＨ_２）_２Ｃ（Ｏ）−から選択され、
各Ｒ^２５は式−（ＣＨ_２）_２ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^２６）_２を有し、各Ｒ^２６は式−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２を有する。そのような部分は、米国特許第７，９３５，８１６号に記載されており、これは、その全体が参考として本明細書に援用される。

【0191】

ある特定の実施形態では、Ｒ^２は、

【化44】

[この文献は図面を表示できません]

に描示するいずれかの部分を含みうる。

【0192】

種々の実施形態では、各ＹはＯであり、Ｒ^２は、ＨまたはＧから選択される。一部の実施形態では、Ｒ^２はＧであり、式中、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。ある特定の実施形態では、Ｒ^２はＨである。

【0193】

ある特定の実施形態では、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。一部の実施形態では、Ｒ^１基の約５０〜９５％はジメチルアミノ（すなわち−Ｎ（ＣＨ_３）_２）である。ある特定の実施形態では、Ｒ^１基の約７０％〜約８０％はジメチルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ^１基の約７５％はジメチルアミノである。ある特定の実施形態では、Ｒ^１基の約６６％はジメチルアミノである。

【0194】

本開示の一部の実施形態では、Ｒ^１は、

【化45】

[この文献は図面を表示できません]

から選択されうる。

【0195】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は、

【化46】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される。

【0196】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化47】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0197】

種々の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化48】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0198】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化49】

[この文献は図面を表示できません]

であり、少なくとも１つの他のＲ^１は

【化50】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0199】

ある特定の実施形態では、Ｔは式：

【化51】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ａは−Ｎ（ＣＨ_３）_２であり、Ｒ^６は式：

【化52】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^１０は−Ｃ（Ｏ）Ｒ^１１ＯＨである。

【0200】

一部の実施形態では、各ＹはＯであり、Ｒ^２はＨ、Ｇまたはアシルであり、Ｔは、

【化53】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される。

【0201】

一部の実施形態では、Ｔは、

【化54】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される。

【0202】

ある特定の実施形態では、Ｔは式：

【化55】

[この文献は図面を表示できません]

を有する。

【0203】

種々の実施形態では、Ｔは式：

【化56】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
各ＹはＯであり、Ｒ^２はＧである。

【0204】

一部の実施形態では、Ｔは式：

【化57】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
各ＹはＯであり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0205】

種々の実施形態では、Ｒ^２は、Ｈまたはアシルから選択され、Ｔは式：

【化58】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。

【0206】

ある特定の実施形態では、Ｔは式：

【化59】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２であり、Ｒ^２はＧである。

【0207】

種々の実施形態では、Ｔは式：

【化60】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各ＹはＯであり、Ｒ^２はＨである。

【0208】

一部の実施形態では、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は

【化61】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔは

【化62】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨであり、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化63】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0209】

ある特定の実施形態では、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は

【化64】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔは

【化65】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨであり、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化66】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0210】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化67】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化68】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＧである。

【0211】

一部の実施形態では、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。

【0212】

一部の実施形態では、Ｇは式：

【化69】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0213】

ある特定の実施形態では、ＣＰＰは式：

【化70】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0214】

種々の実施形態では、各ＹはＯであり、Ｒ^２は、ＨまたはＧから選択される。一部の実施形態では、Ｒ^２はＧであり、式中、ＣＰＰは以下で記載される配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。

【0215】

他の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＩＶ）：

【化71】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｔは、式：

【化72】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、
式中、Ｒ^３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
Ｒ^１の各例は独立に−Ｎ（Ｒ^４）_２であり、式中、各Ｒ^４はＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^２は、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択される。
種々の実施形態では、Ｒ^２は、Ｈまたはアシルから選択される。一部の実施形態では、Ｒ^２はＨである。

【0216】

ある特定の実施形態では、Ｔは式：

【化73】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２は水素である。

【0217】

別の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＩＶａ）：

【化74】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは６〜３８の整数である。

【0218】

別の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（Ｖ）：

【化75】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、６〜３８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ^５は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：

【化76】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^７）_２Ｒ^８およびＲ^１から選択され、式中、
各Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ^６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ^９）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、および式：

【化77】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、式中、
Ｒ^９は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
ｍは、１〜５の整数であり、
Ｒ^１１は、式−（Ｏ−アルキル）_ｙ−を有し、式中、ｙは、３〜１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され；
Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
Ｒ^１の各例（ｉｎｓｔａｎｃｅ）は、
−Ｎ（Ｒ^１３）_２Ｒ^１４［式中、各Ｒ^１３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、そしてＲ^１４は電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：

【化78】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｑＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２から選択され、式中、
Ｒ^１８は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｑは、１〜５の整数であり；
Ｒ^１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ^１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：

【化79】

[この文献は図面を表示できません]

の部分［式中、
Ｒ^１９は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｒＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝
ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、およびＧから選択され、式中、
Ｒ^２２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；
ｒは、１〜５の整数であり、
Ｒ^２０は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、Ｒ^２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化80】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
ここで、以下の条件のうちの少なくとも１つが存在する：
ｃ）Ｒ^１の少なくとも１つが式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）であるか、または
ｄ）Ｒ^２がＧであるか、またはＴが

【化81】

[この文献は図面を表示できません]

である］
である。

【0219】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は、

【化82】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される。

【0220】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化83】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0221】

一部の実施形態では、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は

【化84】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔは

【化85】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨであり、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化86】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0222】

種々の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化87】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0223】

ある特定の実施形態では、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は

【化88】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔは

【化89】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨであり、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化90】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0224】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化91】

[この文献は図面を表示できません]

であり、
少なくとも１つの他のＲ^１は

【化92】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0225】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化93】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化94】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0226】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化95】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化96】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0227】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化97】

[この文献は図面を表示できません]

であり、少なくとも１つの他のＲ^１は

【化98】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化99】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0228】

一部の実施形態では、Ｔは式：

【化100】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各ＹはＯであり、Ｒ^２はＨである。

【0229】

種々の実施形態では、Ｔは式：

【化101】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＧである。

【0230】

一部の実施形態では、Ｔは式：

【化102】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0231】

種々の実施形態では、Ｒ^２はＨまたはアシルから選択され、Ｔは式：

【化103】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。

【0232】

ある特定の実施形態では、Ｔは式：

【化104】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２であり、Ｒ^２はＧである。

【0233】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化105】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化106】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＧである。

【0234】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化107】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは式：

【化108】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0235】

種々の実施形態では、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。

【0236】

一部の実施形態では、Ｇは式：

【化109】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0237】

ある特定の実施形態では、ＣＰＰは式：

【化110】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0238】

種々の実施形態では、各ＹはＯであり、Ｒ^２は、ＨまたはＧから選択される。一部の実施形態では、Ｒ^２はＧであり、式中、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。ある特定の実施形態では、Ｒ^２はＨである。

【0239】

一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（Ｖａ）：

【化111】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｔは、

【化112】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される部分であり、
各Ｒ^１は、

【化113】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
式中、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは式：

【化114】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、ＣＰＰは、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
ここで、以下の条件のうち少なくとも１つが存在する：
ｅ）少なくとも１つのＲ^１は

【化115】

[この文献は図面を表示できません]

である、または
ｆ）Ｒ^２はＧであるか、またはＴは

【化116】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0240】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は、

【化117】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される。

【0241】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化118】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0242】

一部の実施形態では、各Ｒ^１は

【化119】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔは

【化120】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨであり、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化121】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0243】

種々の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化122】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0244】

ある特定の実施形態では、各Ｒ^１は

【化123】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔは

【化124】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨであり、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化125】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0245】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化126】

[この文献は図面を表示できません]

であり、
少なくとも１つの他のＲ^１は

【化127】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0246】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化128】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化129】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0247】

ある特定の実施形態では、各Ｒ^１は、

【化130】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択される。

【0248】

種々の実施形態では、以下の条件のうち少なくとも１つが存在する：
ａ）少なくとも１つのＲ^１は

【化131】

[この文献は図面を表示できません]

である、または
ｂ）Ｒ^２はＧであるか、またはＴは

【化132】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0249】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化133】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化134】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0250】

種々の実施形態では、Ｒ^２はＨまたはアシルから選択され、Ｔは式：

【化135】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。

【0251】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化136】

[この文献は図面を表示できません]

であり、少なくとも１つの他のＲ^１は

【化137】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化138】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0252】

種々の実施形態では、Ｔは式：

【化139】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＧである。

【0253】

ある特定の実施形態では、Ｔは式：

【化140】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２であり、Ｒ^２はＧである。

【0254】

一部の実施形態では、Ｔは式：

【化141】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0255】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化142】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化143】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＧである。

【0256】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化144】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは式：

【化145】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0257】

種々の実施形態では、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。

【0258】

一部の実施形態では、Ｇは式：

【化146】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0259】

ある特定の実施形態では、ＣＰＰは式：

【化147】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0260】

一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（Ｖｂ）：

【化148】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｔは、

【化149】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される部分であり、
各Ｒ^１は、

【化150】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、およびアシルから選択され、
式中、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、Ｇは式：

【化151】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、ＣＰＰは、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
ここで、以下の条件のうち少なくとも１つが存在する：
ｃ）少なくとも１つのＲ^１は

【化152】

[この文献は図面を表示できません]

である、または
ｄ）Ｒ^２はＧであるか、またはＴは

【化153】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0261】

ある特定の実施形態では、各Ｒ^１は、

【化154】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択される。

【0262】

種々の実施形態では、以下の条件のうち少なくとも１つが存在する：
ａ）少なくとも１つのＲ^１は

【化155】

[この文献は図面を表示できません]

である、または
ｂ）Ｒ^２はＧであるか、またはＴは

【化156】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0263】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化157】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0264】

一部の実施形態では、各Ｒ^１は

【化158】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔは

【化159】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨであり、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化160】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0265】

ある特定の実施形態では、各Ｒ^１は

【化161】

[この文献は図面を表示できません]

および−Ｎ（ＣＨ_３）_２から独立に選択され、Ｔは

【化162】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨであり、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化163】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0266】

種々の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化164】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0267】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化165】

[この文献は図面を表示できません]

であり、少なくとも１つの他のＲ^１は

【化166】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0268】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化167】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化168】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0269】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化169】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化170】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0270】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化171】

[この文献は図面を表示できません]

であり、少なくとも１つの他のＲ^１は

【化172】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化173】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0271】

種々の実施形態では、Ｔは式：

【化174】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＧである。

【0272】

一部の実施形態では、Ｔは式：

【化175】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0273】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化176】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化177】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＧである。

【0274】

ある特定の実施形態では、Ｔは式：

【化178】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２であり、Ｒ^２はＧである。

【0275】

種々の実施形態では、Ｒ^２はＨまたはアシルから選択され、Ｔは式：

【化179】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。

【0276】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化180】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは式：

【化181】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0277】

一部の実施形態では、Ｇは式：

【化182】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0278】

ある特定の実施形態では、ＣＰＰは式：

【化183】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0279】

一部の実施形態では、Ｔは式：

【化184】

[この文献は図面を表示できません]

を有する。

【0280】

ある特定の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＶＩ）：

【化185】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
各ＹはＯおよび−ＮＲ^４から独立に選択され、式中、各Ｒ^４は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｎＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、およびＧから独立に選択され、ここで、Ｒ^５はＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、ｎは、１〜５の整数であり、
Ｔは、式：

【化186】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、
式中、Ｒ^３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
各Ｒ^１は、

【化187】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、
Ｒ^２は、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化188】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0281】

一部の実施形態では、各ＹはＯであり、少なくとも１つのＲ^１は

【化189】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0282】

種々の実施形態では、各ＹはＯであり、少なくとも１つのＲ^１は

【化190】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0283】

一部の実施形態では、各ＹはＯであり、少なくとも１つのＲ^１は

【化191】

[この文献は図面を表示できません]

であり、少なくとも１つの他のＲ^１は

【化192】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0284】

ある特定の実施形態では、各ＹはＯであり、少なくとも１つのＲ^１は

【化193】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化194】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0285】

種々の実施形態では、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は

【化195】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化196】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化197】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0286】

一部の実施形態では、各ＹはＯであり、少なくとも１つのＲ^１は

【化198】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化199】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0287】

種々の実施形態では、各ＹはＯであり、各Ｒ^１は

【化200】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化201】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化202】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0288】

ある特定の実施形態では、各ＹはＯであり、少なくとも１つのＲ^１は

【化203】

[この文献は図面を表示できません]

であり、少なくとも１つの他のＲ^１は

【化204】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化205】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0289】

ある特定の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＶＩａ）：

【化206】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
各Ｒ^１は、

【化207】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、
Ｒ^２は、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化208】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0290】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化209】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0291】

種々の実施形態では、各Ｒ^１は、

【化210】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化211】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化212】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0292】

種々の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化213】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0293】

種々の実施形態では、各Ｒ^１は、

【化214】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化215】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化216】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0294】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化217】

[この文献は図面を表示できません]

であり、少なくとも１つの他のＲ^１は

【化218】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0295】

一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＶＩＩ）：

【化219】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｔは、

【化220】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、
各Ｒ^１は、

【化221】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、
Ｒ^２は、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化222】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0296】

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化223】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0297】

ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＲ^１は

【化224】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化225】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0298】

種々の実施形態では、各Ｒ^１は、

【化226】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化227】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｔは

【化228】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0299】

一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＶＩＩａ）：

【化229】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
各Ｒ^１は、

【化230】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、
式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化231】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0300】

種々の実施形態では、各ＹはＯであり、Ｒ^２は、ＨまたはＧから選択される。一部の実施形態では、Ｒ^２はＧであり、式中、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。ある特定の実施形態では、Ｒ^２はＨである。

【0301】

一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＶＩＩＩ）：

【化232】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｔは、式：

【化233】

[この文献は図面を表示できません]

の部分から選択され、
各Ｒ^１は、

【化234】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、
Ｒ^２は、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化235】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0302】

ある特定の実施形態では、Ｔは

【化236】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0303】

一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＶＩＩＩａ）：

【化237】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
各Ｒ^１は、

【化238】

[この文献は図面を表示できません]

から独立に選択され、
式中、少なくとも１つのＲ^１は

【化239】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0304】

ある特定の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＩＸ）：

【化240】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｔは、

【化241】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される部分であり、式中、Ｒ^３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
Ｒ^１の各例は独立に−Ｎ（Ｒ^４）_２であり、ここで、各Ｒ^４はＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、およびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
式中、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは式：

【化242】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、ＣＰＰは、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
式中、Ｒ^２はＧであるか、またはＴは

【化243】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0305】

種々の実施形態では、Ｔは式：

【化244】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＧである。

【0306】

一部の実施形態では、Ｔは式：

【化245】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0307】

一部の実施形態では、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。

【0308】

一部の実施形態では、Ｇは式：

【化246】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0309】

ある特定の実施形態では、ＣＰＰは式：

【化247】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0310】

一部の実施形態では、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。

【0311】

ある特定の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＩＸａ）：

【化248】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｔは、

【化249】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される部分であり、
Ｒ^２は、Ｇ、Ｈ、およびアシルから選択され、
式中、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは式：

【化250】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、ＣＰＰは、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
式中、Ｒ^２はＧであるか、またはＴは

【化251】

[この文献は図面を表示できません]

である。

【0312】

種々の実施形態では、Ｔは式：

【化252】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＧである。

【0313】

一部の実施形態では、Ｔは式：

【化253】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、Ｒ^２はＨまたはアシルである。

【0314】

一部の実施形態では、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。

【0315】

一部の実施形態では、Ｇは式：

【化254】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0316】

ある特定の実施形態では、ＣＰＰは式：

【化255】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0317】

ある特定の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（Ｘ）：

【化256】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｔは、

【化257】

[この文献は図面を表示できません]

から選択される部分であり、
式中、Ｒ^３は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され、
Ｒ^１の各例は独立に−Ｎ（Ｒ^４）_２であり、ここで、各Ｒ^４はＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
式中、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは式：

【化258】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、ＣＰＰは、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合している。

【0318】

種々の実施形態では、Ｔは式：

【化259】

[この文献は図面を表示できません]

を有する。

【0319】

一部の実施形態では、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。

【0320】

一部の実施形態では、Ｇは式：

【化260】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。ある特定の実施形態では、ＣＰＰは式：

【化261】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0321】

一部の実施形態では、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。

【0322】

ある特定の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（Ｘａ）：

【化262】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0323】

一部の実施形態では、Ｒ^ａはアシルである。

【0324】

ある特定の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＸＩ）：

【化263】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｒ^１の各例は独立に−Ｎ（Ｒ^２）_２であり、ここで、各Ｒ^２はＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立に選択され、
ＲはＨまたはアシルから選択され、
式中、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは式：

【化264】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、ＣＰＰは、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合している。

【0325】

一部の実施形態では、ＣＰＰは配列番号１７〜３２から選択される配列を有する。

【0326】

一部の実施形態では、Ｇは式：

【化265】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。ある特定の実施形態では、ＣＰＰは式：

【化266】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、
式中、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。

【0327】

一部の実施形態では、各Ｒ^１は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。

【0328】

ある特定の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、式（ＸＩａ）：

【化267】

[この文献は図面を表示できません]

の化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり、
Ｚは、６〜３８の整数であり、
Ｒは、Ｈまたはアシルから選択され、
Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択される。
一部の実施形態では、Ｒ^ａはアシルである。ある特定の実施形態では、ＲはＨである。

【0329】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）のターゲティング配列は、
ａ）配列番号７（ＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは１６である）、
ｂ）配列番号８（ＡＸＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは１８である）、および
ｃ）配列番号６（ＧＸＡＡＧＡＸＸＹＡＹＸＸＸＹＡＸＡＡＸＧＹＸＧＧ）（Ｚは２３である）
から選択され、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。一部の実施形態では、配列番号６〜８の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、配列番号６〜８の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。

【0330】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＴである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＸはＴである。

【0331】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＵである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＸはＵである。

【0332】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＹは５ｍＣである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各Ｙは５ｍＣである。

【0333】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＹはＣである。種々の実施形態では、ターゲティング配列の各ＹはＣである。

【0334】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＸはＴである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＸはＴである。

【0335】

種々の実施形態では、ターゲティング配列の少なくとも１つのＸはＵである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＸはＵである。

【0336】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＹは５ｍＣである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各Ｙは５ｍＣである。

【0337】

種々の実施形態では、配列番号４〜１６の少なくとも１つのＹはＣである。種々の実施形態では、配列番号４〜１６の各ＹはＣである。

【0338】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、６〜２８の整数である。

【0339】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、８〜２８の整数である。

【0340】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、１４〜２８の整数である。

【0341】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、１６〜２８の整数である。

【0342】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、６〜２６の整数である。

【0343】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、８〜２６の整数である。

【0344】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、１４〜２６の整数である。

【0345】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、１６〜２６の整数である。

【0346】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、６〜２３の整数である。

【0347】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、８〜２３の整数である。

【0348】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、１４〜２３の整数である。

【0349】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、１６〜２３の整数である。

【0350】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、６〜１６の整数である。

【0351】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、は６である。

【0352】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、８〜１６の整数である。

【0353】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、は８である。

【0354】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、６〜１０の整数である。

【0355】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、は１０である。

【0356】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、１６〜１８の整数である。

【0357】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、は１６である。

【0358】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、１８〜２０の整数である。

【0359】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、は１８である。

【0360】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、２３〜２５の整数である。

【0361】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｚは、は２３である。

【0362】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの各Ｎｕは、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、ヒポキサンチン（イノシン）、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジン、および１０−（９−（アミノエトキシ）フェノキサジニル）から独立に選択される。

【0363】

例えば、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖｂ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む多様な実施形態では、ターゲティング配列は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域に相補的である。一部の実施形態では、ターゲティング配列は、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡのイントロン６またはイントロン７（例えば、配列番号４〜１６または３３〜４５）内の標的領域における８またはそれより多くの連続ヌクレオチドに相補的である。

【0364】

種々の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）のターゲティング配列は、配列番号４〜１６または３３〜４５のうちの１つを含むか、配列番号４〜１６または３３〜４５のうちの１つから選択されるか、配列番号４〜１６または３３〜４５のうちの少なくとも１つから選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号４〜１６または３３〜４５のうちの少なくとも１つから選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、配列番号４〜１６について、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。一部の実施形態では、配列番号４〜１６の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、および配列番号４〜１６の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。

【0365】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖｂ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーのターゲティング配列は、配列番号４〜１６から選択される配列を含むか、配列番号４〜１６から選択されるか、配列番号４〜１６から選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号４〜１６から選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。

【0366】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーのターゲティング配列は、配列番号６、７、および８から選択される配列を含むか、配列番号６、７、および８から選択されるか、配列番号６、７、および８から選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号６、７、および８から選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここで、各Ｘは、ウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から独立に選択され、各Ｙは、シトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から独立に選択される。

【0367】

種々の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）のターゲティング配列は、配列番号３３〜４５のうちの１つを含むか、配列番号３３〜４５のうちの１つから選択されるか、配列番号３３〜４５のうちの少なくとも１つから選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号３３〜４５のうちの少なくとも１つから選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体である。

【0368】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーのターゲティング配列は、配列番号３５、３６、および３７から選択される配列を含むか、配列番号３５、３６、および３７から選択されるか、配列番号３５、３６、および３７から選択される配列のうちの、少なくとも８連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号３５、３６、および３７から選択される配列に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体である。

【0369】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）のターゲティング配列は、
ａ）配列番号３５（ＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧ）（Ｚは１６である）、
ｂ）配列番号３６（ＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧ）（Ｚは１８である）、および
ｃ）配列番号３７（ＧＴＡＡＧＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧ）（Ｚは２３である）
から選択される。

【0370】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号７、１０、１４、および１５から選択されるターゲティング配列を含む。

【0371】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号８および１２から選択されるターゲティング配列を含む。

【0372】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号１３および１６から選択されるターゲティング配列を含む。

【0373】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号６、７、および８から選択されるターゲティング配列を含む。

【0374】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号６であるターゲティング配列を含む。

【0375】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号７であるターゲティング配列を含む。

【0376】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号８であるターゲティング配列を含む。

【0377】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号３５、３６、および３７から選択されるターゲティング配列を含む。

【0378】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号３５であるターゲティング配列を含む。

【0379】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号３６であるターゲティング配列を含む。

【0380】

一部の実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩ）、（ＶＩａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ）、（Ｘ）、（Ｘａ）、（ＸＩ）、および（ＸＩａ）の化合物を含む本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、配列番号３７であるターゲティング配列を含む。

【0381】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A1-1】

[この文献は図面を表示できません]

【表A1-2】

[この文献は図面を表示できません]

【表A1-3】

[この文献は図面を表示できません]

【0382】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A2-1】

[この文献は図面を表示できません]

【表A2-2】

[この文献は図面を表示できません]

【0383】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A3】

[この文献は図面を表示できません]

【0384】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A4】

[この文献は図面を表示できません]

【0385】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A5】

[この文献は図面を表示できません]

【0386】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A6】

[この文献は図面を表示できません]

【0387】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A7】

[この文献は図面を表示できません]

【0388】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A8】

[この文献は図面を表示できません]

【0389】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A9】

[この文献は図面を表示できません]

【0390】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A10】

[この文献は図面を表示できません]

【0391】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A11】

[この文献は図面を表示できません]

【0392】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A12】

[この文献は図面を表示できません]

【0393】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A13】

[この文献は図面を表示できません]

【0394】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A14】

[この文献は図面を表示できません]

【0395】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A15】

[この文献は図面を表示できません]

【0396】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A16】

[この文献は図面を表示できません]

【0397】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A17】

[この文献は図面を表示できません]

【0398】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A18】

[この文献は図面を表示できません]

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A19-1】

[この文献は図面を表示できません]

【表A19-2】

[この文献は図面を表示できません]

【表A19-3】

[この文献は図面を表示できません]

【0399】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A20-1】

[この文献は図面を表示できません]

【表A20-2】

[この文献は図面を表示できません]

【表A20-3】

[この文献は図面を表示できません]

【0400】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A21】

[この文献は図面を表示できません]

【0401】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A22】

[この文献は図面を表示できません]

【0402】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A23】

[この文献は図面を表示できません]

【0403】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A24】

[この文献は図面を表示できません]

【0404】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A25】

[この文献は図面を表示できません]

【0405】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A26】

[この文献は図面を表示できません]

【0406】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A27】

[この文献は図面を表示できません]

【0407】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A28】

[この文献は図面を表示できません]

【0408】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A29】

[この文献は図面を表示できません]

【0409】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A30】

[この文献は図面を表示できません]

【0410】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A31】

[この文献は図面を表示できません]

【0411】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A32】

[この文献は図面を表示できません]

【0412】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A33】

[この文献は図面を表示できません]

【0413】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A34】

[この文献は図面を表示できません]

【0414】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A35】

[この文献は図面を表示できません]

【0415】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A36】

[この文献は図面を表示できません]

【0416】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A37】

[この文献は図面を表示できません]

【0417】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A38】

[この文献は図面を表示できません]

【0418】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A39】

[この文献は図面を表示できません]

【0419】

一部の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、以下の化合物から選択される。

【表A40】

[この文献は図面を表示できません]

【0420】

先行頁の表に記載の化合物それぞれについて、ターゲティング配列の配列番号の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、ターゲティング配列の配列番号の各Ｙはシトシン（ｃｙｓｔｏｓｉｎｅ）（Ｃ）であり、各太字および下線付き塩基はそのサブユニットと先行するサブユニットとの間に修飾の列に示す種類のサブユニット間連結を有するサブユニットを示している。太字および下線付きではない場合、サブユニット間連結はジメチルアミノホスホロジアミデート連結である。

【0421】

上記の表および本開示全体において記載の化合物それぞれの化学構造は、本開示全体を通じて提供される記載に基づいて当業者によって容易に理解される。例えばＰＭＯ−２が次の構造：

【化268】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１１が次の構造：

【化269】

[この文献は図面を表示できません]

を有することは容易に理解される。

【0422】

同様に、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−３が次の構造：

【化270】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、ＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ−２が次の構造：

【化271】

[この文献は図面を表示できません]

を有することは容易に理解される。

【0423】

既に考察の通り、表の全ての他の化合物の構造も同様に理解される。明確にするために、例えばＰＭＯ−２、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１１、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−３およびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ−２の上の構造を含む本開示の構造は、５’から３’に連続的であり、コンパクトな形態で全体構造を示す利便性のために、「中断Ａ」および「中断Ｂ」および「中断Ｃ」と標識される多様な図示による中断が含まれている。当業者によって理解される通り、例えば「中断Ａ」という各表示は、これらの点における構造の図の連続を示している。当業者は、上の構造中の「中断Ｂ」および「中断Ｃ」の各場合についても同じであることを理解する。しかし、図の中断は、上の構造の実際の不連続性を示すことを意図しておらず、当業者はそれを意味すると理解しない。

【0424】

本開示に従い使用されうる、さらなる修飾アンチセンスオリゴマー／化学は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許公報：ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／００２３９０号；同第ＷＯ２０１０／１２０８２０号；および同第ＷＯ２０１０／１４８２４９号；米国特許第７，８３８，６５７号；ならびに米国特許出願第２０１１／０２６９８２０号において記載されているアンチセンスオリゴマー／化学を含む。

【0425】

Ｃ．モルホリノサブユニットおよびホスホルアミデートヌクレオシド間リンカーの調製
モルホリノ単量体サブユニット、修飾ヌクレオシド間連結、およびこれらを含むオリゴマーは、例えば、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第５，１８５，４４４号および同第７，９４３，７６２号において記載されている通りに調製することができる。モルホリノサブユニットは、以下の一般的な反応スキームＩに従い調製することができる。

【化272】

[この文献は図面を表示できません]

【0426】

反応スキーム１［式中、Ｂは、塩基対合部分を表し、ＰＧは、保護基を表す］を参照すると、モルホリノサブユニットは、示される通り、対応するリボヌクレオシド（１）から調製することができる。モルホリノサブユニット（２）は、任意選択で、適切な保護基前駆体、例えば、トリチルクロリドを伴う反応により保護することができる。下記でより詳細に記載される通り、３’保護基は一般に、固体オリゴマー合成時に除去する。塩基対合部分は、固相オリゴマー合成に適するように保護することができる。適切な保護基は、アデニンおよびシトシンのためのベンゾイル、グアニンのためのフェニルアセチル、およびヒポキサンチン（Ｉ）のためのピバロイルオキシメチルを含む。ピバロイルオキシメチル基は、ヒポキサンチン複素環塩基のＮ１位へと導入することができる。非保護のヒポキサンチンサブユニットも使用しうるが、塩基を保護する場合の活性化反応の収率は、はるかに優れている。他の適切な保護基は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０７６，４７６号において開示されている保護基を含む。

【0427】

活性化リン化合物４を伴う化合物３の反応は、所望の連結部分である化合物５を有するモルホリノサブユニットをもたらす。構造４の化合物は、任意の数の、当業者に公知の方法を使用して調製することができる。例えば、このような化合物は、対応するアミンと、オキシ塩化リン（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ ｏｘｙｃｈｌｏｒｉｄｅ）との反応により調製することができる。この点で、アミン出発材料は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、実施例、ならびに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，１８５，４４４号、同第７，９４３，７６２号、および同第８，７７９，１２８号において記載されている方法を使用して調製することができる。

【0428】

構造５の化合物は、ヌクレオシド間連結を含むオリゴマーを調製するための固相自動式オリゴマー合成において使用することができる。このような方法は、当技術分野で周知である。略述すると、構造５の化合物は、固体支持体へのリンカーを含有するように、５’末端において修飾することができる。例えば、化合物５は、Ｌ^１１およびＬ^１５を含むリンカーにより、固体支持体へと連結することができる。支持がなされたら、保護基（例えば、トリチル）を除去し、遊離アミンを、第２の構造５の化合物の活性化リン部分と反応させる。このシークエンスを、所望の長さのオリゴが得られるまで繰り返す。５’末端における保護基は、除去することもでき、５’修飾が望ましい場合は、残すこともできる。オリゴは、任意の数の方法、例えば、ＤＴＴによる処理に続く、水酸化アンモニウムによる処理を使用して、固体支持体から除去することができる。

【0429】

修飾モルホリノサブユニットおよびモルホリノベースのオリゴマーの調製については、実施例においてより詳細に記載する。本明細書で記載される方法、当技術分野で公知であり、かつ／または参照により本明細書で記載される方法を使用して、任意の数の修飾連結を含有するモルホリノベースのオリゴマーを調製することができる。実施例ではまた、既に記載されている（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／０３６１２７号を参照されたい）通りに調製された、モルホリノベースのオリゴマーの全般的な修飾についても記載する。

【0430】

「保護基」という用語は、化合物の一部または全部の反応性部分をブロックし、保護基を除去するまで、このような部分が、化学反応に参与することを防止する化学的部分、例えば、Ｔ．Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐ．Ｇ．Ｍ． Ｗｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、３版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９９年）（その全体が本明細書において参考として援用される）において列挙および記載されている部分を指す。異なる保護基を使用する場合、各（異なる）保護基が、異なる手段により除去可能であることは、有利でありうる。完全に非対応の反応条件下で切断される保護基は、このような保護基の示差的な除去を可能とする。例えば、保護基は、酸、塩基、および加水分解により除去することができる。トリチル、ジメトキシトリチル、アセタール、およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルなどの基は、酸不安定性であり、加水分解により除去可能なＣｂｚ基、および塩基不安定性のＦｍｏｃ基で保護されるアミノ基の存在下で、カルボキシ反応性部分およびヒドロキシ反応性部分を保護するのに使用することができる。カルボン酸部分は、限定なしに述べると、メチルまたはエチルなどの塩基不安定性基でブロックすることができ、ヒドロキシ反応性部分は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメートなどの酸不安定性基、または酸安定性であり、かつ、塩基安定性であるが、加水分解により除去可能なカルバメートでブロックされるアミンの存在下では、アセチルなどの塩基不安定性基でブロックすることができる。

【0431】

カルボン酸反応性部分およびヒドロキシル反応性部分はまた、ベンジル基など、加水分解により除去可能な保護基でブロックしうるのに対し、アミン基は、Ｆｍｏｃなどの塩基不安定性基でブロックすることができる。式（Ｉ）の化合物を合成するのに、特に有用なアミン保護基は、トリフルオロアセトアミドである。カルボン酸反応性部分が、２，４−ジメトキシベンジルなど、酸化により除去可能な保護基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ）でブロックしうるのに対し、共存するアミノ基は、フルオリド不安定性シリルカルバメートでブロックすることができる。

【0432】

アリルブロッキング基は、酸保護基および塩基保護基の存在下において、前者が、安定であり、その後、金属またはパイ−酸触媒により除去されうるので、有用である。例えば、アリルでブロックされたカルボン酸は、酸不安定性ｔ−ブチルカルバメートまたは塩基不安定性アセテートアミン保護基の存在下で、パラジウム（０）触媒反応により脱保護することができる。保護基のさらに別の形態は、化合物または中間体が結合しうる樹脂である。残基が樹脂に結合する限りにおいて、その官能基は、ブロックされており、反応することができない。樹脂から放出されると、官能基は、反応に利用可能である。

【0433】

典型的なブロッキング／保護基は、当技術分野で公知であり、以下：

【化273】

[この文献は図面を表示できません]

の部分を含むがこれらに限定されない。

【0434】

そうでないことが注記されない限りにおいて、全ての化学物質は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ−Ｆｌｕｋａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から得た。ベンゾイルアデノシン、ベンゾイルシチジン、およびフェニルアセチルグアノシンは、Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ、ＵＫ）から得た。

【0435】

本明細書で記載される、さらなる連結修飾を含有する、ＰＭＯ、ＰＭＯプラス、ＰＰＭＯ、およびＰＭＯ−Ｘの合成は、当技術分野で公知であり、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、米国特許出願第１２／２７１，０３６号および同第１２／２７１，０４０号ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０６４４７１号において記載されている方法を使用して行った。

【0436】

３’トリチル修飾を伴うＰＭＯは、脱トリチル化（ｄｅｔｒｉｔｙｌａｔｉｏｎ）ステップを省くことを除き、本質的に、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０６４４７１号において記載されている通りに合成する。

【0437】

Ｄ．細胞透過性ペプチド
本開示の修飾アンチセンスオリゴマー化合物は、本明細書ではまた、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）とも称するペプチドにコンジュゲートしていてもよい。ある特定の好ましい実施形態では、ペプチドは、化合物の、細胞への輸送を増強するのに有効な、アルギニンに富むペプチド輸送部分である。輸送部分は、オリゴマーの末端に結合させることが好ましい。ペプチドは、全身投与されると、所与の細胞培養物集団の細胞のうちの３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％であって、間の全ての整数を含む％の細胞内の細胞透過を誘導し、インビボにおいて、複数の組織内の高分子のトランスロケーションを可能とする能力を有する。一実施形態では、細胞透過性ペプチドは、アルギニンに富むペプチド輸送体でありうる。別の実施形態では、細胞透過性ペプチドは、ペネトラチンまたはＴａｔペプチドでありうる。当技術分野では、これらのペプチドが周知であり、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１０−００１６２１５Ａ１号において開示されている。ペプチドの、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーへのコンジュゲーションのための１つの手法は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／１５０９６０号において見出すことができる。本開示のペプチドコンジュゲートオリゴマーについての一部の実施形態は、ＣＰＰと、修飾アンチセンスオリゴマーとの間のリンカーとして、グリシンを活用する。例えば、本開示のペプチドコンジュゲートＰＭＯは、Ｒ_６−Ｇ−ＰＭＯからなる。

【0438】

上記で記載した輸送部分は、結合オリゴマーの細胞移入を、結合輸送部分の非存在下におけるオリゴマーの取込みと比べて大幅に増強することが示されている。取込みは、非コンジュゲート化合物と比べて、少なくとも１０倍増強することが好ましく、２０倍増強することがより好ましい。

【0439】

アルギニンに富むペプチド輸送体（すなわち、細胞透過性ペプチド）の使用は、本開示を実施するのに特に有用である。ある特定のペプチド輸送体は、アンチセンス化合物の、筋細胞を含む初代細胞への送達において、高度に有効であることが示されている（参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｍａｒｓｈａｌｌ， Ｏｄａら、２００７年；Ｊｅａｒａｗｉｒｉｙａｐａｉｓａｒｎ， Ｍｏｕｌｔｏｎら、２００８年；Ｗｕ， Ｍｏｕｌｔｏｎら、２００８年）。さらに、ペネトラチンおよびＴａｔペプチドなど、他の公知のペプチド輸送体と比較して、本明細書で記載されるペプチド輸送体は、アンチセンスＰＭＯにコンジュゲートさせると、複数の遺伝子転写物のスプライシングを変更する能力の増強を裏付ける（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｍａｒｓｈａｌｌ， Ｏｄａら、２００７年）。

【0440】

リンカーを除く、例示的なペプチド輸送体を、下記の表３に示す。

【表3】

[この文献は図面を表示できません]

【0441】

多様な実施形態では、Ｇ（式Ｉ、ＩＶ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、ＩＸ、ＩＸａ、ＸおよびＸＩで列挙された）は、以下：
−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_５ＮＨ−ＣＰＰ、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：

【化274】

[この文献は図面を表示できません]

を有し、式中、ＣＰＰは、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合している。一部の実施形態では、ＣＰＰは、配列番号１７〜３２から選択される。

【0442】

一部の実施形態では、Ｇ（式Ｉ、ＩＶ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、ＩＸ、ＩＸａ、ＸおよびＸＩにおいて列挙する通り）は、式：

【化275】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択され、Ｊは、４〜９の整数である。ある特定の実施形態では、Ｊは、６である。

【0443】

一部の実施形態では、Ｇ（式Ｉ、ＩＶ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、ＩＸ、ＩＸａ、ＸおよびＸＩにおいて列挙する通り）はＡｃ−Ｒ_６Ｇｌｙ−であり、式中Ｇは式：

【化276】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^ａは、アセチルである。

【0444】

多様な実施形態では、ＣＰＰ（式Ｉ、ＩＶ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、ＩＸ、ＩＸａ、ＸおよびＸＩにおいて列挙する通り）は、式：

【化277】

[この文献は図面を表示できません]

であり、Ｒ^ａは、Ｈ、アセチル、ベンゾイル、およびステアロイルから選択され、Ｊは、４〜９の整数である。ある特定の実施形態では、ＣＰＰは、配列番号１５である。多様な実施形態では、Ｊは、６である。一部の実施形態では、Ｒ_ａは、Ｈおよびアセチルから選択される。例えば、一部の実施形態では、Ｒ_ａは、Ｈである。ある特定の実施形態では、Ｒ_ａは、アセチルである。

【0445】

ＩＶ．製剤
本開示の化合物はまた、取込み、分布、および／または吸収を支援するために、例えば、リポソーム、受容体にターゲティングされた分子、経口製剤、直腸製剤、局所製剤、または他の製剤として、他の分子、分子構造、または化合物の混合物と混合するか、これらと共に封入するか、これらにコンジュゲートさせるか、またはこれらと他の形で会合させることもできる。このような取込み支援製剤、分布支援製剤、および／または吸収支援製剤の調製について教示する、代表的な米国特許は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第５，１０８，９２１号；同第５，３５４，８４４号；同第５，４１６，０１６号；同第５，４５９，１２７号；同第５，５２１，２９１号；同第５，５４３，１５８号；同第５，５４７，９３２号；同第５，５８３，０２０号；同第５，５９１，７２１号；同第４，４２６，３３０号；同第４，５３４，８９９号；同第５，０１３，５５６号；同第５，１０８，９２１号；同第５，２１３，８０４号；同第５，２２７，１７０号；同第５，２６４，２２１号；同第５，３５６，６３３号；同第５，３９５，６１９号；同第５，４１６，０１６号；同第５，４１７，９７８号；同第５，４６２，８５４号；同第５，４６９，８５４号；同第５，５１２，２９５号；同第５，５２７，５２８号；同第５，５３４，２５９号；同第５，５４３，１５２号；同第５，５５６，９４８号；同第５，５８０，５７５号および同第５，５９５，７５６号を含むがこれらに限定されない。

【0446】

本開示のアンチセンス化合物は、任意の薬学的に許容される塩、エステル、もしくはこのようなエステルの塩、またはヒトを含む動物へと投与されると、生物学的に活性の代謝物もしくはその残余物をもたらす（直接的または間接的に）ことが可能な、他の任意の化合物を包含する。したがって、例えば、本開示はまた、本開示の化合物のプロドラッグおよび薬学的に許容される塩、このようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、および他の生物学的同等物へも導かれる。

【0447】

「プロドラッグ」という用語は、内因性酵素または他の化学物質および／もしくは条件の作用により、体内またはその細胞内で活性形態（すなわち、薬物）へと転換される、不活性形態で調製された治療剤を指し示す。特に、本開示のオリゴマーのプロドラッグバージョンは、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、１９９３年１２月９日に公開された、ＧｏｓｓｅｌｉｎらによるＰＣＴ公開第ＷＯ１９９３／２４５１０号またはＩｍｂａｃｈらによる、ＰＣＴ公開第ＷＯ１９９４／２６７６４号および米国特許第５，７７０，７１３号において開示されている方法に従い、ＳＡＴＥ［（Ｓ−アセチル−２−チオエチル）ホスフェート］誘導体として調製される。

【0448】

「薬学的に許容される塩」という用語は、本開示の化合物の、生理学的かつ薬学的に許容される塩：すなわち、親化合物の望ましい生物学的活性を保持し、望ましくない毒性効果をこれに付与しない塩を指す。オリゴマーについては、薬学的に許容される塩およびそれらの使用の例については、その全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。

【0449】

本開示はまた、本開示のアンチセンス化合物を含む医薬組成物および製剤も含む。本開示の医薬組成物は、局所処置が望ましいのか、全身処置が望ましいのか、および処置される領域に応じて、多数の方式で投与することができる。投与は、局所投与（眼投与および膣送達および直腸送達を含む粘膜への投与を含む）、肺投与、例えば、噴霧器による投与を含む、散剤またはエアゾールによる吸入または送気による投与；気管内投与、鼻腔内投与、表皮投与および経皮投与、経口投与、または非経口投与でありうる。非経口投与は、静脈内注射もしくは静脈内注入、動脈内注射もしくは動脈内注入、皮下注射もしくは皮下注入、腹腔内注射もしくは腹腔内注入、または筋内注射もしくは筋内注入；あるいは頭蓋内投与、例えば、髄腔内投与または脳室内投与を含む。少なくとも１つの２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を伴うオリゴマーは、経口投与に特に有用であると考えられる。局所投与のための医薬組成物および製剤は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液剤（ｌｉｑｕｉｄ）、および散剤を含みうる。従来の医薬担体、水性、粉末、または油性の基剤、増粘剤などが、必要であるかまたは望ましい場合がある。コーティングされたコンドーム、手袋などもまた、有用でありうる。

【0450】

単位剤形で提示されると好都合でありうる本開示の医薬製剤は、製薬業界で周知の従来の技法に従い調製することができる。このような技法は、有効成分を、医薬担体または賦形剤と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、有効成分を、液体担体もしくは微細に分割された固体担体、またはこれらの両方と、均一かつ十分に会合させ、次いで、必要な場合、生成物を成形することにより調製する。

【0451】

本開示の組成物は、錠剤、カプセル、ゲルカプセル、液体シロップ、軟質ゲル、坐剤、および浣腸剤（ｅｎｅｍａ）などであるがこれらに限定されない、多くの可能な剤形のうちのいずれかへと製剤化することができる。本開示の組成物はまた、水性媒体中、非水性媒体中、または混合媒体中の懸濁物としても製剤化することができる。水性懸濁物は、懸濁物の粘性を増加させる物質であって、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランを含む物質をさらに含有しうる。懸濁物はまた、安定化剤も含有しうる。

【0452】

本開示の医薬組成物は、溶液、エマルジョン、泡沫、およびリポソームを含有する製剤を含むがこれらに限定されない。本開示の医薬組成物および製剤は、１または複数の浸透増強剤、担体、賦形剤、または他の活性成分もしくは不活性成分を含みうる。

【0453】

エマルジョンは、通常０．１μｍの直径を超える液滴の形態で、別の液体中に分散させた１つの液体による不均質系であることが典型的である。エマルジョンは、分散相に加えたさらなる成分と、水相中、油相中の溶液、または分離相としてのそれ自体として存在しうる活性薬物とを含有しうる。マイクロエマルジョンは、本開示の実施形態として含まれる。当技術分野では、エマルジョンおよびそれらの使用が周知であり、その全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。

【0454】

本開示の製剤は、リポソーム製剤を含む。本開示で使用される「リポソーム」という用語は、１または複数の球状の二重層内に配置された、両親媒性脂質から構成される小胞を意味する。リポソームとは、親油性材料から形成された膜と、送達される組成物を含有する水性の内部とを有する、単層または多重層の小胞である。カチオン性リポソームは、正に荷電したリポソームであり、負に荷電したＤＮＡ分子と相互作用して、安定的な複合体を形成すると考えられる。ｐＨ感受性であるか、または負に荷電したリポソームは、ＤＮＡと複合体化するのではなく、ＤＮＡを捕獲すると考えられる。カチオン性リポソームおよび非カチオン性リポソームのいずれも、ＤＮＡを、細胞へと送達するのに使用されている。

【0455】

リポソームはまた、本明細書で使用される用語であって、１または複数の特殊化された脂質を含むリポソームを指す、「立体安定化」リポソームも含み、この脂質は、リポソームへと組み込まれると、このような特殊化された脂質を欠くリポソームと比べて、循環寿命の増強を結果としてもたらす。立体安定化リポソームの例は、リポソームの小胞形成脂質部分の一部が、１もしくは複数の糖脂質を含むか、またはリポソームの小胞形成脂質部分の一部を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分など、１もしくは複数の親水性ポリマーで誘導体化した立体安定化リポソームである。リポソームおよびそれらの使用については、その全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。

【0456】

本開示の医薬製剤および医薬組成物はまた、界面活性剤も含みうる。当技術分野では、薬物製品中、製剤中、およびエマルジョン中の界面活性剤の使用が周知である。界面活性剤およびそれらの使用については、その全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。

【0457】

一部の実施形態では、本開示は、多様な浸透増強剤を使用して、核酸、特に、オリゴマーの効率的な送達を行う。細胞膜を横切る非親油性薬物の拡散の支援に加えて、浸透増強剤はまた、親油性薬物の透過性も増強する。浸透増強剤は、５つの大きな類別、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、および非キレート化非界面活性剤のうちの１つに属するものとして分類することができる。浸透増強剤およびそれらの使用については、その全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。

【0458】

当業者は、製剤が、それらの意図される使用、すなわち、投与経路に従い、慣例的にデザインされることを認識するであろう。

【0459】

局所投与のための製剤は、本開示のオリゴマーを、脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド、キレート化剤、および界面活性剤など、局所送達剤と混合した製剤を含む。脂質およびリポソームは、中性（例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＰＥ、ジミリストイルホスファチジルコリンＤＭＰＣ、ジステアロイルホスファチジルコリン）、陰性（例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロールＤＭＰＧ）、およびカチオン性（例えば、ジオレオイルテトラメチルアミノプロピルＤＯＴＡＰおよびジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＴＭＡ）を含む。

【0460】

局所投与または他の投与のために、本開示のオリゴマーを、リポソーム内に封入することもでき、リポソーム、特に、カチオン性リポソームとの複合体を形成することもできる。代替的に、オリゴマーは、脂質、特に、カチオン性脂質と複合体化させることもできる。脂肪酸およびエステル、薬学的に許容されるそれらの塩、ならびにそれらの使用については、その全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。局所製剤については、それらの全体において本明細書に参考として援用される、１９９９年５月２０日に出願された、米国特許出願第０９／３１５，２９８号およびＭｏｕｒｉｃｈら，２００９， Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．， １２９（８）：１９４５−５３において詳細に記載されている。

【0461】

経口投与のための組成物および製剤は、粉末または顆粒、マイクロ粒子、ナノ粒子、水中または非水性媒体中の懸濁物または溶液、カプセル、ゲルカプセル、小袋（ｓａｃｈｅｔ）、錠剤またはミニ錠剤（ｍｉｎｉｔａｂｌｅｔ）を含む。増粘剤、矯味矯臭剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤、または結合剤が望ましい場合がある。経口製剤は、本開示のオリゴマーを、１または複数の浸透増強剤、界面活性剤、およびキレート剤と共に投与する経口製剤である。界面活性剤は、脂肪酸および／またはそのエステルもしくは塩、胆汁酸および／またはその塩を含む。胆汁酸／塩および脂肪酸ならびにそれらの使用については、その全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。一部の実施形態では、本開示は、浸透増強剤の組合せ、例えば、胆汁酸／塩と組み合わせた脂肪酸／塩を提示する。例示的な組合せは、ラウリン酸、カプリン酸、およびＵＤＣＡのナトリウム塩である。さらなる浸透増強剤は、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−２０−セチルエーテルを含む。本開示のオリゴマーは、経口送達することもでき、噴霧乾燥粒子を含む顆粒形態で送達することもでき、マイクロ粒子またはナノ粒子を形成するように複合体化させることもできる。オリゴマー複合体化剤およびそれらの使用については、その全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，２８７，８６０号においてさらに記載されている。オリゴマーのための経口製剤およびそれらの調製については、それらの全体において本明細書に参考として援用される、米国出願第０９／１０８，６７３号（１９９８年７月１日に出願された）、同第０９／３１５，２９８号（１９９９年５月２０日に出願された）、および同第１０／０７１，８２２号（２００２年２月８日に出願された）において詳細に記載されている。

【0462】

非経口投与、髄腔内投与、または脳室内投与のための組成物および製剤は、浸透増強剤、担体化合物、および他の薬学的に許容される担体または賦形剤などであるがこれらに限定されない、緩衝液、希釈剤および他の適切な添加剤もまた含有しうる、滅菌水溶液を含みうる。

【0463】

別の関連する実施形態では、本開示の組成物は、第１の核酸へとターゲティングされた、１または複数のアンチセンス化合物、特にオリゴマーと、第２の核酸標的へとターゲティングされた、１または複数のさらなるアンチセンス化合物とを含有しうる。代替的に、本開示の組成物は、同じ核酸標的の異なる領域へとターゲティングされた、２つまたはこれを超えるアンチセンス化合物を含有しうる。当技術分野では、アンチセンス化合物の多数の例が公知である。２つまたはこれを超える組合せ化合物を、併せて使用することもでき、逐次的に使用することもできる。

【0464】

Ｖ．使用方法
ある特定の態様は、治療目的（例えば、脊髄性筋萎縮症を有する被験体を処置すること）のために本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーを使用して機能的なＳＭＮタンパク質を増大させる方法に関する。一部の態様では、修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＮ２遺伝子のプレｍＲＮＡ内の領域に特異的にハイブリダイズするのに十分な長さおよび相補性を有するヌクレオチド配列を含み、ここでこの領域への修飾アンチセンスオリゴマーの結合は、被験体の細胞および／または組織におけるエクソン７含有ＳＮＭ２ ｍＲＮＡのレベルを増大させる。被験体におけるエクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡの増大は、機能的なＳＭＮタンパク質の発現を増大させるようにさらに変換される場合がある。それにより、本開示は、本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーを使用してエクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡを増大させることによる機能的なＳＭＮタンパク質の増大方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）に罹患しているか、またはこれを発症する危険性がある個体を処置する方法であって、有効量の本開示の修飾アンチセンスオリゴマーを、被験体に投与するステップを含む方法を提供する。本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーによってターゲティングされる例示的な配列は、表１および２に示されている。

【0465】

また、ＳＭＡを処置するためまたはＳＭＡを処置するための医薬の調製において使用するための修飾アンチセンスオリゴマーであって、処置または医薬が本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーを含む、修飾アンチセンスオリゴマーも含まれ、例えば、ここで修飾アンチセンスオリゴマーは、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットと；ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ内の標的領域中の８またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列とを任意選択で有する８〜４０のサブユニットを含む。一部の実施形態では、標的領域は、ＳＭＮ２遺伝子および／またはプレｍＲＮＡ ＳＭＮ２のイントロン６、イントロン７、またはエクソン７内の領域（配列番号１〜３）を含む。さらなる実施形態では、標的領域は、イントロン７内の領域（配列番号１）を含む。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーのターゲティング配列は、（ａ）配列番号４〜１６から選択される配列を含む、（ｂ）配列番号４〜１６から選択される、（ｃ）配列番号４〜１６から選択される配列の少なくとも８の連続ヌクレオチドの断片である、または（ｄ）配列番号４〜１６から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有する改変体であり、ここでＸはウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）から選択され、Ｃはシトシン（Ｃ）または５−メチルシトシン（５ｍＣ）から選択される。

【0466】

一部の実施形態では、ＳＭＡを処置する方法またはＳＭＡの処置のための医薬は、修飾糖部分を含む、ヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーを含む。修飾糖部分は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）サブユニット、ロックト核酸（ＬＮＡ）サブユニット、２’Ｏ，４’Ｃ−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）サブユニット、トリシクロＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）サブユニット、２’Ｏ−メチルサブユニット、２’Ｏ−メトキシエチルサブユニット、２’−フルオロサブユニット、２’−Ｏ−［２−（Ｎ−メチルカルバモイル）エチル］サブユニット、およびモルホリノサブユニットから選択されうる。

【0467】

これらのさらなる態様および実施形態は、修飾ヌクレオシド間連結を含む、ヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーを含む。多様な実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結、ホスホルアミデートヌクレオシド間連結、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結から選択される。さらなる実施形態では、ホスホロジアミデートヌクレオシド間連結は、（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、置換（１，４−ピペラジン）−１−イル部分、４−アミノピペリジン−１−イル部分、または置換４−アミノピペリジン−１−イル部分に共有結合したリン原子を含む。

【0468】

これらのさらなる態様および実施形態は、修飾糖部分と修飾ヌクレオシド間連結との少なくとも１つの組合せを含む、ヌクレオチド類似体サブユニットを有する、修飾アンチセンスオリゴマーを含む。

【0469】

一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、哺乳動物細胞によって活発に取り込まれる。さらなる実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、そのような取り込みを促進するために本明細書で記載される通りの輸送部分（例えば、輸送ペプチドまたはＣＰＰ）にコンジュゲートされてよい。

【0470】

多様な態様は、本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーを使用してエクソン７含有ＳＭＮ ｍＲＮＡ転写物および／または機能的なＳＭＮタンパク質の発現を増大させる方法に関する。いくつかの場合では、エクソン７含有ＳＭＮ ｍＲＮＡ転写物および／または機能的なＳＭＮタンパク質を、対照、例えば、対照細胞／被験体（例えば、ＳＭＡを有する被験体）、修飾アンチセンスオリゴマーを含まない対照組成物、処置の非存在、および／またはより前の時点と比べて約または少なくとも約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは１００％だけ増大されるまたは増強される。また、対照、例えばＳＭＡを有する被験体のレベルと比べて、機能的なＳＭＮタンパク質の発現を増大させる方法も含まれる。本明細書で使用するとき「有効量」または「治療量」は、ＳＭＮプレｍＲＮＡ転写物の標的領域に結合でき、エクソン７含有ＳＭＮ２ ｍＲＮＡ転写物および機能的なＳＭＮタンパク質の発現を、被験体に投与された場合に対照細胞／被験体と比較したときの増大に関して開示された百分率の範囲内で増大できる修飾アンチセンスオリゴマーの用量を指す。

【0471】

多様な態様は、本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーを使用して、細胞、組織、および／または被験体においてエクソン７含有ＳＭＮ ｍＲＮＡ転写物および／または機能的なＳＭＮタンパク質の発現を増大させる方法に関する。いくつかの場合では、エクソン７欠失ＳＭＮ ｍＲＮＡ転写物または機能不全ＳＭＮタンパク質を、対照、例えば、対照細胞／被験体（例えば、ＳＭＡを有する被験体）、修飾アンチセンスオリゴマーを含まない対照組成物、処置の非存在、および／またはより前の時点と比べて約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは１００％、またはほぼこれらの比率で減少させるまたは低減する。また、対照、例えばＳＭＡを有する被験体のレベルと比べて、エクソン７含有ＳＭＮ ｍＲＮＡ転写物の発現を増大させるまたは機能不全ＳＭＮタンパク質の発現を減少させる方法も含まれる。

【0472】

本明細書で使用するとき、被験体は、脊髄、脳および末梢神経系などの神経系組織、心臓、筋肉、腎臓ならびに肝臓を含む１つまたは複数の組織におけるＳＭＮタンパク質の発現および／または活性が低減している（例えば、健常被験体またはより前の時点と比べて）場合がある。一部の実施形態では、被験体は脊髄中の運動ニューロンの数が減少している。被験体は、クレアチンキナーゼを含む脊髄性筋萎縮症に関連する生物学的マーカーの循環レベルが上昇している場合がある。一部の実施形態では、被験体はこれだけに限らないが、筋力低下、脊柱湾曲症ならびに呼吸、吸気、嚥下および真っすぐに座ることに伴う困難などのＳＭＡに関する１つまたは複数の症状を呈する。一部の実施形態では、被験体はそのような症状をまだ呈しておらず、被験体は、ＳＭＮ１遺伝子の存在、変異および／または欠失を検出する現在利用可能な遺伝子試験によって同定されていてもよい。ある特定の実施形態では、被験体は、ＳＭＡ Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型またはＩＶ型を有するとして診断された患者である。

【0473】

本明細書の修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＡを処置するために被験体に投与することができる。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーは、ＳＭＡの１つまたは複数の症状を呈している被験体に対して好適な医薬用担体において投与される。本明細書で使用するとき、「処置する」という用語は、ＳＭＡ、またはＳＭＡに関する少なくとも１つの識別可能な症状の改善を指す。一部の実施形態では「処置する」は、被験体によって必ずしも識別可能ではない少なくとも１つの測定可能な身体的および／または生物学的パラメーターの改善を指す。被験体は、例えば、筋肉の力および協調の身体的改善、および脊髄中の運動ニューロンの数の増大を経験する場合がある。これらのパラメーターは、例えば、自己評価、医師の検査、身体的および生理学的測定物のための検査室の試験、ならびに被験体由来の試料の生物学的試験によって評価することができる。別の実施形態では、「処置する」はＳＭＡの進行を遅くするまたは進行を元に戻すことを指す。本明細書で使用するとき、「予防する」または「阻害する」は、ＳＭＡの発病を遅らせるまたは発症の危険性を低減することを指す。

【0474】

このような処置と共に、ゲノム薬理学（すなわち、個体の遺伝子型と、外来化合物または薬物へのその個体の応答との関係についての研究）について考慮することもできる。治療剤の代謝の差違は、薬理学的な活性薬物の用量と血中濃度との関係を変更することにより、重度の毒性または治療の失敗をもたらしうる。こうして、医師または臨床医は、治療剤を投与すべきなのかどうかの決定においてのほか、治療剤による処置の投与量および／または治療レジメンの調整においても関与性のゲノム薬理学研究において得られる知見の適用について考慮することができる。

【0475】

修飾アンチセンスオリゴマーの、標的核酸への有効な投与および送達は、処置の１つの側面である。修飾アンチセンスオリゴマーの送達経路は、経口経路および非経口経路を含む、多様な全身経路、例えば、静脈内送達、皮下送達、腹腔内送達、および筋内送達のほか、吸入送達、経皮送達、および局所送達を含むがこれらに限定されない。適切な経路は、当業者が、処置下にある被験体の状態に適切な経路として決定することができる。血管循環または血管外循環の、血液またはリンパ系、および脳脊髄液は、ＲＮＡを導入しうる、一部の非限定的な部位である。直接的なＣＮＳ送達を使用することができ、例えば、脳室内（ＩＣＶ）投与または髄腔内（ＩＴ）投与を、投与経路として使用することができる。

【0476】

一部の実施形態では、本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーは、ＩＣＶ投与によって被験体に投与される。例示的目的のためだけに、脳内脳室を通じて修飾アンチセンスオリゴマーを投与するための例示的方法は、次の通り提供される：被験体は、脳半球中の側脳室に位置付けられた頭蓋内カテーテルを受ける。非優位脳半球は、カテーテルを埋め込むために好ましい。カテーテルは、修飾アンチセンスオリゴマーの溶液を含有する皮下に埋め込まれた注入ポンプまたは体外ポンプに繋がれていてもよい。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される通りの修飾アンチセンスオリゴマーは、ＩＴ投与によって被験体に投与される。例えば、被験体は側臥位にされる。修飾アンチセンスオリゴマーは、脊髄穿刺針を有するシリンジにロードされ、この針が下部腰椎間空に挿入され、修飾アンチセンスオリゴマーを脊髄に直接送達する。一部の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーのＰＭＯ、ＰＭＯ−ＸまたはＰＰＭＯ形態はＩＣＶまたはＩＴ注射によって投与される。

【0477】

特定の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーを、被験体に、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与する、すなわち、アンチセンスオリゴマーを、静脈へと静脈内投与もしくは静脈内送達するか、または皮膚と筋肉との間の脂肪層へと皮下投与もしくは皮下送達する。静脈内注射部位の非限定的な例は、腕、手、脚、または足の静脈を含む。皮下注射部位の非限定的な例は、腹部、大腿部、下方背部（ｌｏｗｅｒ ｂａｃｋ）、または上腕部を含む。例示的な実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーのＰＭＯ形態、ＰＭＯ−Ｘ形態、またはＰＰＭＯ形態を、ＩＶ投与またはＳＣ投与する。他の実施形態では、修飾アンチセンスオリゴマーを、被験体に、筋内内（ＩＭ）投与する、例えば、修飾アンチセンスオリゴマーを、腕部の三角筋、脚部の外側広筋、腰部の腹側臀筋（ｖｅｎｔｒｏｇｌｕｔｅａｌ ｍｕｓｃｌｅ）、臀部の背側臀筋（ｄｏｒｓｏｇｌｕｔｅａｌ ｍｕｓｃｌｅ）、横隔膜および胸郭の肋間筋へと投与または送達する。

【0478】

ある特定の実施形態では、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは、経皮的な方法により（例えば、このような修飾アンチセンスオリゴマーを、任意選択で、リポソームへとパッケージングする、修飾アンチセンスオリゴマーの、例えば、エマルジョンへの組込みを介して）送達することができる。送達のこのような経皮的な方法およびエマルジョン／リポソーム媒介型の方法は、修飾アンチセンスオリゴマーの送達について、当技術分野、例えば、それらの全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，９６５，０２５号において記載されている。

【0479】

本明細書で記載される修飾アンチセンスオリゴマーはまた、植込み可能なデバイスを介して送達することもできる。このようなデバイスのデザインは、当技術分野で認知された工程であって、例えば、それらの全体において本明細書に参考として援用される、米国特許第６，９６９，４００号において記載されている、例えば、合成インプラントデザインを伴う工程である。

【0480】

当技術分野で認知された技法（例えば、トランスフェクション、エレクトロポレーション、融合、リポソーム、コロイド状ポリマー性粒子、およびウイルスベクターおよび非ウイルスベクターのほか、当技術分野で公知の他の手段）を使用して、修飾アンチセンスオリゴマーを、細胞へと導入することができる。選択される送達法は、少なくとも、オリゴマー化学、処置（処理）される細胞、および細胞の場所に依存し、そして当業者には明らかであろう。例えば、局在化は、表面上にリポソームを方向づける特異的なマーカーを伴うリポソーム、標的細胞を含有する組織への直接的な注射、特異的な受容体媒介型の取込みなどにより達成することができる。

【0481】

当技術分野で公知の通り、修飾アンチセンスオリゴマーは、例えば、リポソーム媒介型の取込み、脂質コンジュゲート、ポリリシン媒介型の取込み、ナノ粒子媒介型の取込み、および受容体媒介型のエンドサイトーシスのほか、マイクロインジェクション、透過化（例えば、ストレプトリジンＯによる透過化、アニオン性ペプチドによる透過化）、エレクトロポレーション、およびエンドサイトーシス以外の多様な非侵襲性送達法であって、当技術分野で公知の送達法など、エンドサイトーシス以外のさらなる送達方式（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＤｏｋｋａおよびＲｏｊａｎａｓａｋｕｌ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、４４巻、３５〜４９頁（２０００）を参照されたい）を伴う方法を使用して送達することができる。

【0482】

修飾アンチセンスオリゴマーは、生理学的および／または薬学的に許容される、任意の好都合なビヒクルまたは担体により投与することができる。このような組成物は、薬学的に許容される、様々な標準的担体であって、当業者により使用される担体のうちのいずれかを含みうる。例は、食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、水、水性エタノール、油／水エマルジョンまたはトリグリセリドエマルジョンなどのエマルジョン、錠剤、およびカプセルを含むがこれらに限定されない。生理学的に許容される適切な担体の選出は、選び出される投与方式に応じて変動するであろう。「薬学的に許容される担体」は、薬学的投与に適合性の担体など、任意で全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤を含むことを意図する。当技術分野では、薬学的に活性な物質のための、このような媒体および薬剤の使用が周知である。任意の従来の媒体または薬剤が、活性化合物に不適合性である場合を除き、組成物中のその使用が想定される。補充の活性化合物もまた、組成物へと組み込むことができる。

【0483】

本開示の修飾アンチセンスオリゴマーは一般に、遊離酸または遊離塩基として活用することができる。代替的に、本開示の化合物は、酸付加塩または塩基付加塩の形態で使用することもできる。本開示の遊離アミノ化合物の酸付加塩は、当技術分野で周知の方法により調製することができ、有機酸および無機酸から形成することができる。適切な有機酸は、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、ケイ皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸、およびベンゼンスルホン酸を含む。

【0484】

適切な無機酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、および硝酸を含む。塩基付加塩は、カルボン酸アニオンと共に形成される塩を含み、さらに、アルカリ金属およびアルカリ土類金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、バリウム、およびカルシウム）から選択されるもののほか、アンモニウムイオンおよびその置換誘導体（例えば、ジベンジルアンモニウム、ベンジルアンモニウム、２−ヒドロキシエチルアンモニウムなど）などの、有機カチオンおよび無機カチオンと共に形成される塩を含む。こうして、「薬学的に許容される塩」という用語は、任意で全ての許容される塩形態を包含することを意図する。

【0485】

加えて、本開示の文脈にはまた、プロドラッグも含まれる。プロドラッグとは、このようなプロドラッグを、患者へと投与すると、インビボにおいて、化合物を放出する、共有結合した任意の担体である。プロドラッグは一般に、慣例的な操作により、またはインビボにおいて、修飾が切断されて、親化合物をもたらすように、官能基を修飾することにより調製する。プロドラッグは、例えば、本開示の化合物であって、ヒドロキシ基、アミン基、またはスルフヒドリル基を、患者へと投与されると、切断されて、ヒドロキシ基、アミン基、またはスルフヒドリル基を形成する任意の基に結合させた化合物を含む。こうして、プロドラッグの代表例は、本開示の修飾アンチセンスオリゴマーのアルコール官能基およびアミン官能基の、酢酸誘導体、ギ酸誘導体、および安息香酸誘導体を含む（がこれらに限定されない）。さらに、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）の場合は、メチルエステル、エチルエステルなどのエステルも使用することができる。

【0486】

場合によって、リポソームを使用して、修飾アンチセンスオリゴマーの、細胞への取込みを促進することもできる（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｓ．Ａ．、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、１０巻（１２号）：１９８０〜１９８９頁、１９９６年；Ｌａｐｐａｌａｉｎｅｎら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．、２３巻：１１９頁、１９９４年；Ｕｈｌｍａｎｎら、「ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ： ａ ｎｅｗ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ」、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、９０巻、４号、２５ ５４４〜５８４頁、１９９０年；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ， Ｇ．、１４章、「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ， Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、２８７〜３４１頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９７９年を参照されたい）。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ１９９３／０１２８６において記載されている通り、ヒドロゲルもまた、修飾アンチセンスオリゴマーを投与するためのビヒクルとして使用することができる。代替的に、オリゴマーは、マイクロスフェアまたはマイクロ粒子により投与することもできる（例えば、Ｗｕ， Ｇ．Ｙ．およびＷｕ， Ｃ．Ｈ．、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６２巻：４４２９〜４４３２頁、３０ １９８７年を参照されたい）。代替的に、米国特許第６，２４５，７４７号において記載されている通り、修飾アンチセンスオリゴマーと複合体化させたガス充填マイクロバブルの使用によっても、標的組織への送達を増強することができる。持続放出組成物もまた、使用することができる。これらは、フィルムまたはマイクロカプセルなどの成形品の形態にある半透性ポリマーマトリクスを含みうる。かかる文献の各々は、その全体が本明細書において参考として援用される。

【0487】

一部の実施形態では、アンチセンス化合物を、少なくとも２００〜４００ｎＭの修飾アンチセンスオリゴマーのピーク血中濃度を結果としてもたらすのに有効な量および様式で投与する。一般に、約１〜２週間にわたり、定期的な間隔で、１または複数の用量の修飾アンチセンスオリゴマーが投与されることが典型的である。経口投与に好ましい用量は、７０ｋｇ当たりのオリゴマー約１〜１０００ｍｇである。場合によって、患者１人当たりのオリゴマー１０００ｍｇを超える用量が必要でありうる。ｉ．ｖ．投与では、好ましい用量は、７０ｋｇ当たりのオリゴマー約０．５〜１０００ｍｇである。修飾アンチセンスオリゴマーは、短期間にわたり、定期的な間隔で、例えば、２週間またはこれ未満にわたり、毎日投与することができる。しかし、場合によって、オリゴマーを、より長期間にわたり、間欠的に投与する。投与は、抗生剤または他の治療的処置の投与が後続する場合もあり、これらと共時的な場合もある。処置レジメンは、処置下の被験体についての、イムノアッセイ、他の生化学的試験および生理学的精査の結果に基づき指し示される通りに、調整することができる（用量、頻度、経路など）。

【0488】

本開示の修飾アンチセンスオリゴマーを使用する、インビボにおける有効な処置レジメンは、持続期間、用量、頻度、および投与経路のほか、処置下の被験体の状態（すなわち、限局感染または全身感染に応答した投与と対比した予防的投与）に従い変化させることができる。したがって、このようなインビボにおける治療は、最適な治療転帰を達成するために、処置下にある特定の種類の障害に適切な試験によるモニタリング、および用量または処置レジメンにおける対応する調整を要請することが多いであろう。

【0489】

処置は、例えば、当技術分野で公知の、疾患についての一般的な指標によりモニタリングすることができる。インビボにおいて投与される、修飾アンチセンスオリゴマーの効力は、修飾アンチセンスオリゴマーの投与前、投与時、および投与後に、被験体から採取される生物学的試料（組織、血液、尿など）により決定することができる。このような試料についてのアッセイは、（１）当業者に公知の手順、例えば、電気泳動によるゲル移動度アッセイを使用して、標的配列および非標的配列とのヘテロ二重鎖形成の存在または非存在についてモニタリングすること；（２）ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロット法、ＥＬＩＳＡ、またはウエスタンブロット法などの標準的技法により決定される、基準のエクソン７欠失ＳＭＮタンパク質のｍＲＮＡとの関係で、ＳＭＮタンパク質エクソン７を含むｍＲＮＡの量をモニタリングすることを含む。一部の実施形態では、処置は症状の評価によってモニタリングされる。これらの評価として、これだけに限らないが、自己評価、医師の検査、運動機能試験（例えば、改訂ハマースミス運動機能スケール［ＭＨＦＭＳ］およびフィラデルフィア小児病院の乳児神経筋疾患試験［ＣＨＯＰ ＩＮＴＥＮＤ］）、例えば、筋肉サイズの測定、筋緊張、圧痛、強さ、反射、筋肉の不随意運動、筋電図検査、神経伝達速度測定試験、および心電図（ＥＫＧまたはＥＧＧ）を含む心血管系機能試験が挙げられる。

【0490】

ＶＩ．投薬
治療用組成物の製剤化およびそれらのその後における投与（投薬）は、当業者の技術の範囲内にあると考えられる。投薬は、処置される疾患状態の重症度および応答性に依存し、処置の過程は、数日間から数カ月間にわたり持続するか、または治癒がなされるか、もしくは疾患状態の減殺が達成されるまで持続する。最適の投薬スケジュールは、患者の体内の薬物蓄積の測定値から計算することができる。当業者は、最適の投与量、投薬法、および反復速度を容易に決定することができる。最適の投与量は、個々のオリゴマーの相対的効力に応じて変動させることができ、一般に、インビトロおよびインビボの動物モデルにおいて有効であることが見出されているＥＣ５０に基づき推定することができる。一般に、投与量は、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ〜１００ｇであり、毎日、毎週、毎月、もしくは毎年１回もしくは複数回にわたり、なおまたは２〜２０年間ごとに１回施すことができる。当業者は、体液中または組織内の、薬物の測定された滞留時間および濃度に基づき、投薬の反復速度を、容易に推定することができる。処置が成功した後、患者に、疾患状態の再発を防止する維持療法であって、オリゴマーを、経口投与のためには、体重７０ｋｇ当たり１〜１０００ｍｇのオリゴマー、またはｉ．ｖ．投与のためには、体重７０ｋｇ当たり０．５ｍｇ〜１０００ｍｇのオリゴマーの範囲の維持用量で、毎日１回または複数回〜２０年ごとに１回投与する維持療法を受けさせることが望ましい場合がある。

【0491】

その実施形態のうちのいくつかに従い、本開示について具体的に記載してきたが、以下の実施例は、本開示を例示することだけに資するものであり、これを限定することを意図するものではない。本出願で列挙される、参考文献、特許、特許出願、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号などの各々は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【0492】

ＶＩＩ．実施例
次の実施例は、例示的目的のために使用されてよく、本発明の範囲を狭めると考えるべきではない。

【0493】

本開示の修飾アンチセンスオリゴマーを、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡ転写物内の標的領域に結合するように設計し、次のプロトコルを使用して調製した。
活性サブユニットの調製のための手順Ａ：

【化278】

[この文献は図面を表示できません]

【0494】

ジクロロメタン中の６（１当量）の撹拌溶液にＰＯＣｌ_３（１．１当量）、続いてジイソプロピルエチルアミン（３当量）を０℃で添加し、氷浴で冷却した。１５分後、氷浴を除き、溶液を１時間室温に温めた。反応完了時に、反応溶液をジクロロメタンで希釈し、１０％クエン酸水溶液で３回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、有機層をシリカゲルのプラグに通し、減圧下で濃縮した。得られたホスホロアミドジクロリド（４）をさらなる精製を行わずに次のステップに直接使用した。

【0495】

ジクロロメタン中のホスホロアミドジクロリド（４）（１当量）、２，６−ルチジン（１当量）の溶液にＭｏ（Ｔｒ）Ｔ（７）（０．５当量）／ジクロロメタン溶液、続いてＮ−メチルイミダゾール（０．２当量）を添加した。反応は室温で一晩撹拌した。反応完了時に、反応溶液をジクロロメタンで希釈し、１０％クエン酸水溶液で３回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、有機層を濾過し、次いで濃縮した。生成物（８）をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサンの勾配で溶出）によって精製し、次いで−２０℃で保存した。構造をＬＣＭＳ分析によって確認した。
活性化サブユニットの調製のための手順Ｂ：

【化279】

[この文献は図面を表示できません]

【0496】

ジクロロメタン中のＰＯＣｌ_３（１．１当量）の溶液に２，６−ルチジン（２当量）を添加した後、Ｍｏ（Ｔｒ）Ｔ（７）（１当量）／ジクロロメタン溶液を０℃で滴下添加した。１時間後、反応溶液をジクロロメタンで希釈し、１０％クエン酸水溶液で素早く３回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた後、所望のホスホジクロリデート（９）を得た。

【0497】

ジクロロメタン中のホスホジクロリデート（１当量）の溶液にアミン（１当量）／ジクロロメタンを溶液への滴下によって０℃で添加した。１５分後、反応混合物を約１時間室温に温めた。反応完了時に、ヘキサンの添加によって沈殿させた後、濾過によって白色固体の生成物（８）を回収した。生成物を真空での乾燥後に−２０℃で保存した。構造をＬＣＭＳ分析によって確認した。
（実施例１）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチルホスホロジクロリデート

【化280】

[この文献は図面を表示できません]

【0498】

オキシ塩化リン（２．１２ｍＬ、２２．７ｍｍｏｌ）の冷却（氷／水浴）ＤＣＭ溶液（２０ｍＬ）に、２，６−ルチジン（４．８２ｍＬ、４１．４ｍｍｏｌ）を滴下添加し、次いでＤＣＭ溶液（２０ｍＬ）Ｍｏ（Ｔｒ）Ｔ（２）（１０．０ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）を１５分間かけて滴下添加し（開始温度０〜１０℃）、次いで浴を除き、周囲温度で２０分間撹拌を続けた。反応物をクエン酸溶液（４０ｍＬ×３、１０％ｗ／ｖ水溶液）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、白色のフォーム（９．７９ｇ）に濃縮し、次いで続く手順に直接使用した。
（実施例２）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化281】

[この文献は図面を表示できません]

【0499】

実施例１からのジクロロホスフェート（５．００ｇ、５．００ｍｍｏｌ）の冷却（氷／水浴）ＤＣＭ溶液（５ｍＬ）にピペリジン（０．６１ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（５ｍＬ）を滴下添加し、次いで浴を除き、周囲温度で３０分間撹拌し続けた。反応物をカラムに直接ロードした。［ＳｉＯ_２カラム（４０ｇ）、ＤＣＭ／ＥｔＯＨ溶離液（１：０から１：１への勾配）］でのクロマトグラフィーは、表題化合物（２．５ｇ）を白色のフォームとして与えた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４６Ｈ_５５Ｎ_８Ｏ_７ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は８６２．４、実測値ｍ／ｚ＝８６３．６（Ｍ＋１）だった。
（実施例３）
１−（１−（クロロ（（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メトキシ）ホスホリル）ピペリジン−４−イル）−１−メチルピロリジン−１−イウムクロリド

【化282】

[この文献は図面を表示できません]

【0500】

表題化合物を実施例２に記載の方法と類似した方法で合成し、表題化合物（０．６ｇ）が白色固体として生じた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４９Ｈ_６０Ｎ_８Ｏ_７ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は９０３．４、実測値ｍ／ｚ＝９０３．７（Ｍ＋）だった。
（実施例４）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−メチルピペラジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化283】

[この文献は図面を表示できません]

【0501】

オキシ塩化リン（１．０２ｍＬ、１１．０ｍｍｏｌ）の冷却（氷／水浴）ＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）に、２，６−ルチジン（３．４９ｍＬ、２９．９ｍｍｏｌ）を滴下添加し、次いでメチルピペラジン（１．００ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）を滴下添加し、１時間撹拌を続けた。Ｍｏ（Ｔｒ）Ｔ（２）（４．８２、１０．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）およびＮＭＩ（７９μＬ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、４時間撹拌し、次いでカラムに直接ロードした。

【0502】

［ＳｉＯ_２カラム（８０ｇ）、２％ＴＥＡを含むＤＣＭ／アセトン溶離液（１：０から０：１への勾配）］でのクロマトグラフィーは、表題化合物（０．８ｇ）を白色のフォームとして与えた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４３Ｈ_４８Ｎ_７Ｏ_８ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は８３４．４、実測値ｍ／ｚ＝８３５．５（Ｍ＋ｌ）だった。
（実施例５）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−エチルピペラジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化284】

[この文献は図面を表示できません]

【0503】

表題化合物を実施例４に記載の方法と類似した方法で合成し、表題化合物（１１．５ｇ）が白色のフォームとして生じた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４５Ｈ_５３Ｎ_８Ｏ_７ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は８４８．４、実測値ｍ／ｚ＝８４９．７（Ｍ＋ｌ）だった。
（実施例６）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−エチルピペラジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化285】

[この文献は図面を表示できません]

【0504】

表題化合物を実施例４に記載の方法と類似した方法で合成し、表題化合物（４．５ｇ）が白色のフォームとして生じた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_５２Ｈ_５６Ｎ_１１Ｏ_６ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は９６１．４、実測値ｍ／ｚ＝９６２．８（Ｍ＋ｌ）だった。
（実施例７）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化286】

[この文献は図面を表示できません]

【0505】

表題化合物を実施例４に記載の方法と類似した方法で合成し、表題化合物（３．５ｇ）が白色のフォームとして生じた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４６Ｈ_５５Ｎ_８Ｏ_７ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は８６２．４、実測値ｍ／ｚ＝８６３．７（Ｍ＋１）だった。
（実施例８）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチルメチル（２−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）エチル）ホスホラミドクロリデート

【化287】

[この文献は図面を表示できません]

【0506】

表題化合物を実施例４に記載の方法と類似した方法で合成し、表題化合物（１．０ｇ）が白色のフォームとして生じた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４４Ｈ_４８Ｆ_３Ｎ_８Ｏ_８ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は９０４．３、実測値ｍ／ｚ＝９０３．７（Ｍ−１）だった。
（実施例９）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチルメチル（２−（２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチルアセトアミド）エチル）ホスホルアミドクロリデート

【化288】

[この文献は図面を表示できません]

【0507】

表題化合物を実施例４に記載の方法と類似した方法で合成し、表題化合物（１．８ｇ）が白色のフォームとして生じた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４５Ｈ_５０Ｆ_３Ｎ_８Ｏ_８ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は９１８．３、実測値ｍ／ｚ＝１８３６．６（２Ｍ＋）だった。
（実施例１０）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）ピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化289】

[この文献は図面を表示できません]

【0508】

ＤＣＭ（１９０ｍＬ）中のオキシ塩化リン（１７．７ｍＬ、１９０ｍｍｏｌ）の冷却溶液（氷／水浴）に、２，６−ルチジン（１０１ｍＬ、８６４ｍｍｏｌ）を滴下添加し、次いでＭｏ（Ｔｒ）Ｔ（２）（８３．５ｇ、１７３ｍｍｏｌ）を少量ずつ１５分間かけて添加し（開始温度０〜１０℃）、撹拌した。３０分後、４−アミノピペリジンモノトリフルオロアセトアミド（４８．９ｇ、約１９０ｍｍｏｌ）を１５分間かけて滴下添加し（開始温度０〜８℃）、撹拌した。１時間後、ＤＩＰＥＡ（５０ｍＬ）を滴下添加し（開始温度０〜１０℃）、１時間撹拌した。反応物をクエン酸溶液（５００ｍＬ×３、１０％ｗ／ｖ水溶液）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、粘性オイルに濃縮し、カラムに直接ロードした。［ＳｉＯ_２カラム（３３０ｇ）、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ溶離液（１：０から０：１への勾配）］でのクロマトグラフィーは、表題化合物（９１．３ｇ、収率７０％）を白色のフォームとして与えた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４３Ｈ_４８Ｎ_７Ｏ_８ＰについてのＥＳＩ／ＭＳ計算値は９３０．９、実測値ｍ／ｚ＝９５４．４（Ｍ＋Ｎａ）だった。

【0509】

実施例１１から１４を、上に記載の手順Ａを介して調製した。
（実施例１１）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（１−（２，２，２−トリフルオロアセチル）ピペリジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化290】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例１２）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−モルホリノピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化291】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例１３）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチルビス（３−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）プロピル）ホスホルアミドクロリデート

【化292】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例１４）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル［１，４’−ビピペリジン］−１’−イルホスホノクロリデート

【化293】

[この文献は図面を表示できません]

下の実施例１５から２０を、上に記載の手順Ｂを介して調製した。
（実施例１５）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化294】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例１６）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化295】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例１７）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−フェニルピペラジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化296】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例１８）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチルアセトアミド）ピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化297】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例１９）
（６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチルメチル（３−（２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチルアセトアミド）プロピル）ホスホルアミドクロリデート

【化298】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例２０）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）ピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート

【化299】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例２１）
（４−（ピロリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）ホスホン酸ジクロリド塩酸塩

【0510】

ＤＣＭ（３０ｍＬ）中のオキシ塩化リン（５．７０ｍＬ、５５．６ｍｍｏｌ）の冷却（氷／水浴）溶液に、２，６−ルチジン（１９．４ｍＬ、１６７ｍｍｏｌ）および４−（１−ピロリジニル）−ピペリジン（８．５８ｇ、５５．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（３０ｍＬ）を添加し、１時間撹拌した。懸濁物を濾過し、固形物を過剰のジエチルエーテルで洗浄し、表題のピロリジン（１７．７ｇ、収率９１％）が白色固体として生じた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_１９Ｈ_３０Ｎ_５Ｏ_４ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は４２３．２、実測値ｍ／ｚ＝４２２．２（Ｍ−１）だった。

【化300】

[この文献は図面を表示できません]

（実施例２２）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（ピロリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート塩酸塩

【化301】

[この文献は図面を表示できません]

【0511】

ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の実施例２１からのジクロロホスホルアミデート（１７．７ｇ、５０．６ｍｍｏｌ）の撹拌冷却（氷／水浴）溶液にＭｏ（Ｔｒ）Ｔ（２）（２４．５ｇ、５０．６ｍｍｏｌ）、２，６−ルチジン（１７．７ｍＬ、１５２ｍｍｏｌ）および１−メチルイミダゾール（０．４０１ｍＬ、５．０６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１００ｍＬ）を１０分間かけて滴下添加した。懸濁物を撹拌しながら浴を周囲温度に温めた。６時間後、懸濁物をジエチルエーテル（１Ｌ）に注ぎ、１５分間撹拌し、濾過し、固形物を追加のエーテルで洗浄し、白色固体（４５．４ｇ）が生じた。粗産生物をクロマトグラフィー［ＳｉＯ_２カラム（１２０グラム）、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ溶離液（１：０から６：４への勾配）］によって精製し、合わせた画分をジエチルエーテル（２．５Ｌ）に注ぎ、１５分間撹拌し、濾過し、生じた固形物を追加のエーテルで洗浄し、白色固体として表題化合物（２３．１ｇ、収率６０％）が生じた。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ_４８Ｈ_５７Ｎ_８Ｏ_７ＰについてＥＳＩ／ＭＳ計算値は８８８．４、実測値ｍ／ｚ＝８８７．６（Ｍ−１）だった。
（実施例２３）
修飾アンチセンスオリゴマーの設計および製造ならびに例示的な修飾アンチセンスオリゴマー

【0512】

トリチルピペラジンフェニルカルバメート３５の調製：ジクロロメタン中の化合物１１の冷却懸濁物（６ｍＬ／ｇの１１）に、水中の炭酸カリウム（３．２当量）溶液（４ｍＬ／ｇの炭酸カリウム）を添加した。この２相混合物に、ジクロロメタン中のクロロギ酸フェニル（１．０３当量）溶液（２ｇ／ｇのクロロギ酸フェニル）を、ゆっくりと添加した。反応混合物を、２０℃へと温めた。反応が完了したら（１〜２時間）、層を分離した。有機層を、水で洗浄し、無水炭酸カリウムで乾燥させた。生成物３５を、アセトニトリルからの結晶化により単離した。

【0513】

カルバメートアルコール３６の調製：水素化ナトリウム（１．２当量）を、１−メチル−２−ピロリジノン（３２ｍＬ／ｇの水素化ナトリウム）中に懸濁させた。この懸濁物に、トリエチレングリコール（１０．０当量）および化合物３５（１．０当量）を添加した。結果として得られるスラリーを、９５℃へと加熱した。反応が完了したら（１〜２時間）、混合物を、２０℃へと冷却した。この混合物に、３０％のジクロロメタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ｖ：ｖ）および水を添加した。生成物を含有する有機層を、水性ＮａＯＨ、水性コハク酸、および飽和水性塩化ナトリウムで、逐次洗浄した。生成物３６を、ジクロロメタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ヘプタンからの結晶化により単離した。

【0514】

テール型酸（Ｔａｉｌ ａｃｉｄ）３７の調製：テトラヒドロフラン中の化合物３６の溶液（７ｍＬ／ｇの３６）に、無水コハク酸（２．０当量）およびＤＭＡＰ（０．５当量）を添加した。混合物を、５０℃へと加熱した。反応が完了したら（５時間）、混合物を、２０℃へと冷却し、水性ＮａＨＣＯ_３により、ｐＨ８．５へと調整した。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを添加し、生成物を、水性層へと抽出した。ジクロロメタンを添加し、混合物を、水性クエン酸により、ｐＨ３へと調整した。生成物を含有する有機層を、クエン酸緩衝液と、飽和水性塩化ナトリウムとの、ｐＨ＝３の混合物で洗浄した。この３７のジクロロメタン溶液を、単離せずに、化合物３８の調製において使用した。

【0515】

３８の調製：化合物３７の溶液に、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボン酸イミド（ＨＯＮＢ）（１．０２当量）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３４当量）を添加し、次いで、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）（１．１当量）を添加した。混合物を、５５℃へと加熱した。反応が完了したら（４〜５時間）、混合物を、２０℃へと冷却し、１：１の０．２Ｍクエン酸／ブラインおよびブラインで、逐次洗浄した。ジクロロメタン溶液に、アセトンへの溶媒交換、次いで、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドへの溶媒交換を施し、生成物を、アセトン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドからの、飽和水性塩化ナトリウムへの沈殿により単離した。粗生成物を、水中で、複数回にわたり、再スラリー化させて、残留するＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび塩を除去した。

【0516】

活性化「テール」の、アンカーロード樹脂への導入は、固相合成におけるサブユニットの組込みのために使用される手順により、ジメチルイミダゾリジノン（ＤＭＩ）中で実施した。

【0517】

モルホリノベースのオリゴマーの合成のための固体支持体の調製：この手順は、粗い多孔性（４０〜６０μｍ）のガラスフリット、オーバーヘッド撹拌機、および、フリットを介してＮ２を沸騰させるかまたは真空抽出を可能とする、Ｔｅｆｌｏｎ製の三方止め栓を伴う、シラン化、ジャケット付きのペプチド容器（ＣｈｅｍＧｌａｓｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）内で実施した。

【0518】

以下の手順における樹脂処理／洗浄ステップは、２つの基本的な操作からなる：樹脂流動化または撹拌床樹脂反応器および溶媒／溶液抽出。樹脂の流動化のために、フリットを通ってＮ２の逆流（ｆｌｏｗ ｕｐ）を可能とするように、止め栓を位置付け、指定の樹脂処理／洗浄液を、反応器へと添加し、樹脂を透過化させ、完全に湿潤させた。次いで、混合を開始し、指定の回数にわたり、樹脂スラリーを混合した。溶媒／溶液抽出のために、混合およびＮ２の流れを停止させ、真空ポンプを始動させ、次いで、樹脂処理／洗浄液を排出して廃棄することを可能とするように、止め栓を位置付けた。そうでないことが注記されない限りにおいて、樹脂処理／洗浄液の全容量は、樹脂１ｇ当たり１５ｍＬであった。

【0519】

シラン化、ジャケット付きのペプチド容器内のアミノメチルポリスチレン樹脂（１００〜２００メッシュ；窒素置換に基づき、１ｇ当たり約１．０ｍｍｏｌのロード；７５ｇ、１当量、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｓ、ＵＫ、型番：１４６４−Ｘ７９９）に、１−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ；樹脂１ｇ当たり２０ｍｌ）を添加し、樹脂を、混合しながら、１〜２時間にわたり膨潤させた。膨潤溶媒（ｓｗｅｌｌ ｓｏｌｖｅｎｔ）の排出後、樹脂を、ジクロロメタン（２×１〜２分間）、２５％のイソプロパノール／ジクロロメタン中に５％のジイソプロピルエチルアミン（２×３〜４分間）、およびジクロロメタン（２×１〜２分間）で洗浄した。最終洗浄液を排出した後、樹脂を、１−メチル−２−ピロリジノン中の、ジスルフィドアンカー３４溶液（０．１７Ｍ；樹脂１ｇ当たり１５ｍＬ、約２．５当量）で処理し、樹脂／試薬混合物を、４５℃で６０時間にわたり加熱した。反応が完了したら、加熱を中断し、アンカー溶液を排出し、樹脂を、１−メチル−２−ピロリジノン（４×３〜４分間）およびジクロロメタン（６×１〜２分間）で洗浄した。樹脂を、ジクロロメタン中に１０％（ｖ／ｖ）のジエチルジカーボネート溶液（１６ｍＬ／ｇ；２×５〜６分間）で処理し、次いで、ジクロロメタン（６×１〜２分間）で洗浄した。樹脂３９を、Ｎ２流下で、１〜３時間にわたり、次いで、真空下で、一定の重量（±２％）まで乾燥させた。収率：元の樹脂重量の１１０〜１５０％。

【0520】

アミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂のローディングの決定：樹脂のローディング（潜在的に利用可能な反応性部位の数）は、分光アッセイにより、樹脂１グラム当たりのトリフェニルメチル（トリチル）基の数について決定する。

【0521】

公知の重量（２５±３ｍｇ）の乾燥樹脂を、２５ｍｌのシラン化メスフラスコへと移し、ジクロロメタン中に２％（ｖ／ｖ）のトリフルオロ酢酸約５ｍＬを添加する。内容物を、静かな回旋により混合し、次いで、３０分間にわたり静置する。容量を、ジクロロメタン中に２％（ｖ／ｖ）の、さらなるトリフルオロ酢酸により、２５ｍＬへと増量し、内容物を、完全に混合した。容積型ピペット（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｐｉｐｅｔｔｅ）を使用して、トリチル含有溶液（５００μＬ）のアリコートを、１０ｍＬのメスフラスコへと移し、容量を、メタンスルホン酸により、１０ｍＬへと増量する。

【0522】

最終溶液中のトリチルカチオン含量は、４３１．７ｎｍにおけるＵＶ吸光度により測定し、樹脂のローディングは、適切な容量、希釈率、消衰係数（ε：４１μｍｏｌ−１ｃｍ−１）、および樹脂重量を使用して、樹脂１グラム当たりのトリチル基（μｍｏｌ／ｇ）により計算する。アッセイは、三連で実施し、平均ローディングを計算する。

【0523】

本実施例における樹脂のローディング手順により、約５００μｍｏｌ／ｇのローディングを有する樹脂を提供する。ジスルフィドアンカーの組込みステップを、室温で２４時間にわたり実施する場合、μｍｏｌ／ｇ単位で３００〜４００のローディングが得られた。

【0524】

テールローディング：アミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂を調製するための設定および容量と同じ設定および容量を使用して、テールを、固体支持体へと導入することができる。アンカーロード樹脂をまず、酸性条件下で脱保護し、結果として得られる材料を中性化させてから、カップリングした。カップリングステップのために、ジスルフィドアンカー溶液の代わりに、４−エチルモルホリン（ＮＥＭ、０．４Ｍ）を含有するＤＭＩ中の、３８の溶液（０．２Ｍ）を使用した。４５℃で２時間後、樹脂３９を、２５％のイソプロパノール／ジクロロメタン中に５％のジイソプロピルエチルアミンで２回にわたり洗浄し、ＤＣＭで１回洗浄した。樹脂に、安息香酸無水物（０．４Ｍ）およびＮＥＭ（０．４Ｍ）の溶液を添加した。２５分後、反応器ジャケットを、室温へと冷却し、樹脂を、２５％のイソプロパノール／ジクロロメタン中に５％のジイソプロピルエチルアミンで、２回にわたり洗浄し、ＤＣＭで、８回にわたり洗浄した。樹脂４０を濾過し、高真空下で乾燥させた。樹脂４０に対するローディングは、テールローディングにおいて使用した、元のアミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂３９のローディングであると規定する。

【0525】

固相合成：モルホリノベースのオリゴマーは、Ｇｉｌｓｏｎ ＡＭＳ−４２２ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上、２ｍＬのＧｉｌｓｏｎポリプロピレン反応カラム（型番：３９８０２７０）内で調製した。カラムを合成器に静置するときに、カラムの周囲に、水流のためのチャネルを伴うアルミニウム製のブロックを入れた。ＡＭＳ−４２２は、代替的に、試薬／洗浄液を添加し、指定された時間にわたり保持し、真空を使用して、カラムを排気する。

【0526】

最大で約２５サブユニットの長さの範囲のオリゴマーでは、ローディングを、樹脂１ｇ当たり約５００μｍｏｌとする、アミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂が好ましい。より大型のオリゴマーでは、ローディングを、樹脂１ｇ当たり３００〜４００μｍｏｌとする、アミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂が好ましい。５’テールを伴う分子が所望される場合も、同じローディング指針により、テールでローディングした樹脂を選択する。

【0527】

以下の試薬溶液を調製した。
脱トリチル化溶液：４：１ジクロロメタン／アセトニトリル中に、１０％のシアノ酢酸（ｗ／ｖ）；中性化溶液：３：１のジクロロメタン／イソプロパノール中に、５％のジイソプロピルエチルアミン；カップリング溶液：所望の塩基型および連結型を有する、０．１８Ｍ（または２０サブユニットより長くなったオリゴマーには、０．２４Ｍ）の活性化モルホリノサブユニット、ならびに１，３−ジメチルイミダゾリジノン中に、０．４ＭのＮエチルモルホリン。ジクロロメタン（ＤＣＭ）を、異なる試薬溶液の洗浄を隔てる、一過性洗浄液として使用した。

【0528】

ブロックを４２℃に設定した合成器上で、３０ｍｇのアミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂（またはテール樹脂）を含有する各カラムに、２ｍＬの１−メチル−２−ピロリジノンを添加し、室温で、３０分間にわたり静置した。２ｍＬのジクロロメタンで、２回にわたる洗浄の後、以下の合成サイクルを使用した。

【表4】

[この文献は図面を表示できません]

【0529】

各カラムが、適正な配列の、適正なカップリング溶液（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、Ｉ）を受容するように、個々のオリゴマーの配列を、合成器へとプログラムした。カラム内のオリゴマーが、その最終的なサブユニットの組込みを完了したら、カラムを、ブロックから取り出し、０．８９Ｍの４−エチルモルホリンを含有する、４−メトキシトリフェニルメチルクロリド（ＤＭＩ中に０．３２Ｍ）を含むカップリング溶液により、最終サイクルを、手動で実施した。

【0530】

樹脂からの切断ならびに塩基および保護基の除去：メトキシトリチル化の後、樹脂を、２ｍＬの１−メチル−２−ピロリジノンで、８回にわたり洗浄した。１−メチル−２−ピロリジノン中に、０．１Ｍの１，４−ジチオトレイトール（ＤＴＴ）および０．７３Ｍのトリエチルアミンを含む、１ｍＬの切断溶液を添加し、カラムに蓋をし、室温で、３０分間にわたり静置した。この時間の後、溶液を、１２ｍＬのＷｈｅａｔｏｎバイアルへと排出した。大幅に縮んだ樹脂を、３００μＬの切断溶液で、２回にわたり洗浄した。溶液に、４．０ｍＬの濃縮アンモニア水（−２０℃で保存された）を添加し、バイアルにきつく蓋をし（テフロン（登録商標）加工のねじ蓋により）、混合物を回旋にかけて、溶液をミックスした。バイアルを、４５℃のオーブンに、１６〜２４時間にわたり入れて、塩基および保護基の切断を行った。

【0531】

粗生成物の精製：バイアルに入れた（ｖｉａｌｅｄ）アンモノリシス溶液を、オーブンから取り出して、室温へと冷却した。溶液を、２０ｍＬの０．２８％の水性アンモニアで希釈し、Ｍａｃｒｏｐｒｅｐ ＨＱ樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を含有する、２．５×１０ｃｍのカラムに通した。塩勾配（Ａ：０．２８％のアンモニアに、Ｂ：０．２８％のアンモニア中に１Ｍの塩化ナトリウムを伴う；６０分間でＢを０〜１００％とする）を使用して、メトキシトリチルを含有するピークを溶出させた。合わせた画分をプールし、所望される生成物に応じて、さらに加工した。

【0532】

モルホリノベースのオリゴマーの脱メトキシトリチル化：Ｍａｃｒｏｐｒｅｐによる精製からプールされた画分を、１ＭのＨ３ＰＯ４で処理して、ｐＨを２．５へと低下させた。初期の混合の後、試料を、室温で４分間にわたり静置し、この時間に、それらを、２．８％のアンモニア／水で、ｐＨ１０〜１１へと中性化させる。生成物は、固相抽出（ＳＰＥ）により精製した。

【0533】

ＳＰＥカラムのパッキングおよびコンディショニング：Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍｅ ＣＧ−３００Ｍ（Ｒｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ；Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ）（３ｍＬ）を、２０ｍＬのフリットカラム（ＢｉｏＲａｄ Ｅｃｏｎｏ−Ｐａｃ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｃｏｌｕｍｎｓ（７３２〜１０１１））へとパッキングし、樹脂を、３ｍＬの以下のもの：０．２８％のＮＨ４ＯＨ／８０％のアセトニトリル；０．５ＭのＮａＯＨ／２０％のエタノール；水；５０ｍＭのＨ３ＰＯ４／８０％のアセトニトリル；水；０．５のＮａＯＨ／２０％のエタノール；水；０．２８％のＮＨ４ＯＨですすいだ。

【0534】

ＳＰＥの精製：脱メトキシトリチル化からの溶液を、カラムへとロードし、樹脂を、０．２８％の水性アンモニア３〜６ｍＬで、３回にわたりすすいだ。Ｗｈｅａｔｏｎバイアル（１２ｍＬ）を、カラムの下に置き、生成物を、０．２８％の水性アンモニア中に、４５％のアセトニトリル２ｍＬで２回にわたる洗浄により溶出させた。

【0535】

生成物の単離：溶液を、ドライアイス内で凍結させ、バイアルを凍結乾燥機に入れて、綿毛状の白色粉末をもたらした。試料を、水中に溶解させ、シリンジを使用して、０．２２ミクロンのフィルター（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｃｒｏｄｉｓｃ ２５ｍｍシリンジフィルターに、０．２ミクロンのＨＴ Ｔｕｆｆｒｙｎ膜を伴う）を通して濾過し、ＵＶ分光光度計上で、光学濃度（ＯＤ）を測定して、存在するオリゴマーのＯＤ単位を決定したほか、試料を解析のために分注した。次いで、凍結乾燥させるために、溶液を、Ｗｈｅａｔｏｎバイアルに戻した。

【0536】

ＭＡＬＤＩによる、モルホリノベースのオリゴマーについての解析：ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析を、使用して、精製物中の画分の組成を決定したほか、オリゴマーの正体の証拠（分子量）ももたらした。マトリックスとしての、３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシケイ皮酸（シナピン酸）、３，４，５−トリヒドロキシアセトフェノン（ＴＨＡＰ）、またはアルファ−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（ＨＣＣＡ）の溶液による希釈後に、試料を試行にかけた。

【0537】

以下の表５は、合成した本開示の修飾アンチセンスオリゴマーの非限定例を提供する。これらの例において、ターゲティング配列の配列番号の各Ｘはチミン（Ｔ）であり、ターゲティング配列の配列番号の各Ｙはシトシン（Ｃ）である。さらに、それぞれの太字かつ下線の塩基は、そのサブユニットと先行するサブユニットとの間に修飾の列に示される種類のサブユニット間連結を有するサブユニットを示し、そうでなければ、サブユニット間連結はジメチルアミノホスホロジアミデート連結である。

【表5-1】

[この文献は図面を表示できません]

【表5-2】

[この文献は図面を表示できません]

【表5-3】

[この文献は図面を表示できません]

＊「Ａｃ」は、ペプチドのアミノ末端にコンジュゲートしたＣＨ_３Ｃ（＝Ｏ）−部分を示す
（実施例２４）
ＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率

【0538】

インビトロのエクソン７包含率を測定するための例示的方法を本明細書に記載する。ＰＭＯベースのオリゴマーを、アンチセンスオリゴマーがＳＭＮ２エクソン７包含を増強するかどうかを判定するために試験した。表１に示すそれぞれのアンチセンスオリゴマーを下に記載するヌクレオフェクションプロトコルを使用して細胞に導入した。エクソン７包含率を下に提供する逆転写酵素ＰＣＲプロトコルおよび可視化技術を使用して算出した。エクソン７含有ＳＭＮ２タンパク質の発現がアンチセンスオリゴマーによって誘導されたことを確認するために、ウエスタンブロット分析を下に記載するプロトコルに従って実施した。
ＰＭＯベースのオリゴマーのＳＭＡ細胞へのヌクレオフェクション

【0539】

ＰＭＯベースのオリゴマーをヌクレアーゼ不含有水（ＤＥＰＣによる処理なし）中の１〜２ｍＭ保存溶液として調製し、それから適切な希釈物をヌクレオフェクションのために作製した。ＳＭＡを有する個体由来の患者由来線維芽細胞（Ｃｏｒｉｅｌｌ、ＧＭ０３８１３）を、１０％ウシ胎児血清を含むイーグル最小必須培地で培養した。細胞を実験の３〜５日前に継代し、ヌクレオフェクションのときにおよそ８０％コンフルエントであった。線維芽細胞をトリプシン処理し、計数し、９０ｒｃｆで１０分間遠心分離した。１ウエルあたり細胞１〜５×１０^５個をＰ３ヌクレオフェクション溶液（Ｌｏｎｚａ）に再懸濁した。ＰＭＯベースのオリゴマー溶液および細胞を次いでＮｕｃｌｅｏｃｕｖｅｔｔｅ １６ウエルストリップの各ウエルに加え、プログラムＣＡ−１３７でパルスした。細胞を室温、１０分間インキュベートし、２４ウエルプレートに２回反復で移し、３７℃の細胞インキュベーターに入れた。インキュベーション２４時間後、全ＲＮＡをＧＥ Ｉｌｌｕｓｔｒａ ＲＮＡｓｐｉｎ ９６ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で製造者の推奨プロトコルに従って処置細胞から単離した。単離したＲＮＡ試料を分析前に−８０℃で保存した。
逆転写酵素ＰＣＲ

【0540】

ＳＭＮ２対立遺伝子を増幅するために、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して逆転写酵素ＰＣＲを実施した。ヌクレオフェクトした細胞から単離した４００ｎｇのＲＮＡを逆転写し、次の遺伝子特異的プライマーで増幅した：フォワードプライマー５’−ＡＣＴＴＴＣＣＣＣＡＡＴＣＴＧＴＧＡＡＧＴ−３’（配列番号５２）およびリバースプライマー５’−ＣＡＴＴＴＡＧＴＧＣＴＧＣＴＣＴＡＴＧＣＣ−３’（配列番号５４）。逆転写および増幅のためのＰＣＲ条件は、次の通り設定した：逆転写、５５℃、２０分間；ＲＴ不活性化、９４℃、２分間；変性、９４℃、２分間；アニーリング、５９℃、４５秒間；伸長、６８℃、１分間；変性／アニーリング／伸長を４５サイクル繰り返した。エクソン７が適切に含まれる場合、増幅産物のサイズは、４９４ｂｐであるはずである。エクソン７排除物の増幅産物のサイズは、４３４ｂｐのはずである。ｃＤＮＡ試料は、さらなる分析のために−２０℃で保存した。

【0541】

エクソン７包含率を算出するためにｃＤＮＡ試料を可視化し、試料中の増幅産物のモル濃度を測定した。ｃＤＮＡ試料を調製し、ＬａｂＣｈｉｐ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に製造者のプロトコルに従ってロードした。簡潔には、ｃＤＮＡ試料を融解し、製造者による提供のＤＮＡ色素と混合した。試料をＬａｂＣｈｉｐにロードして、調製したＬａｂＣｈｉｐをＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｃａｌｉｐｅｒ）に挿入した。ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸは各増幅産物のモル濃度を増幅産物に対応するバンドの強度に基づいて算出する。
ウエスタンブロット分析

【0542】

ＰＭＯオリゴマーを上に記載のＳＭＡ患者由来線維芽細胞にヌクレオフェクトした。ヌクレオフェクション２４時間後、細胞をＲＩＰＡ溶解緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で溶解した。各溶解物を１４，０００ｘｇで１０分間遠心下降させた。細胞デブリのペレットを遠心分離後に廃棄し、上清だけをさらなる分析のために回収した。２０ｕｇの各タンパク質試料をＴＧＸ ｓｔａｉｎ ｆｒｅｅ ｇｅｌ（Ｂｉｏ−ｒａｄ）にロードし、タンパク質電気泳動によって分離した。ゲルをＰＶＤＦ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｂｉｏ−ｒａｄ）に移し、ＳＭＮタンパク質を抗ＳＭＮ抗体（ＢＤ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で検出した。ＳＭＮタンパク質がエクソン７によってコードされる部分を含有する場合、タンパク質のサイズは３８ｋＤａである。アクチンを抗アクチン抗体（Ａｂｃａｍ）でブロッティングすることによってローディング対照として測定した。
重複領域をターゲティングするＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率

【0543】

イントロン７中の重複領域をターゲティングするＰＭＯベースのオリゴマーを、この化合物がインビトロのエクソン７包含を誘導する効率を測定するために試験した。イントロン７の−７／−１４領域をターゲティングするさまざまな量のＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮおよびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ８量体オリゴマー（化合物ＰＭＯ−１、ＰＭＯ−ＡＰＮ−２およびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−２）ならびにイントロン７の−１０／−２７領域をターゲティングするＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮおよびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ１８量体オリゴマー（化合物ＰＭＯ−３、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１６およびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−８）をＳＭＡ患者由来線維芽細胞（ＧＭ０３８１３）にヌクレオフェクトした。インビトロのエクソン７包含率を各ＰＭＯベースのオリゴマーについて上に記載の通り算出した。図３および表６に要約の通り、−１０／−２７領域をターゲティングする化合物は、−７／−１４領域をターゲティングするものと比べて１００倍効力があった。ＰＭＯ−ＡＰＮおよびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ修飾は、両標的領域においてＰＭＯ修飾と比べてエクソン７包含を誘導する効力をさらに増強した。

【表6】

[この文献は図面を表示できません]

異なる領域をターゲティングするＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率

【0544】

イントロン７中の領域をターゲティングするＰＭＯベースのオリゴマーを試験し、この化合物がインビトロのエクソン７包含を誘導する効率を上に記載の通り算出した。イントロン７の−１０／−２９領域をターゲティングするさまざまな量のＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮおよびＰＭＯ−Ｐｌｕｓオリゴマー（化合物ＰＭＯ−４、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１７およびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−９）をＧＭ０３８１３線維芽細胞にヌクレオフェクトした。並行して、イントロン７の−１３７／−１５９領域または−１４９／−１７４領域をターゲティングするさまざまな量のＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮおよびＰＭＯ−ＰＬＵＳオリゴマー（化合物ＰＭＯ−７、ＰＭＯ−９、ＰＭＯ−ＡＰＮ−２９、ＰＭＯ−ＡＰＮ−３１およびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−１１およびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−１３）を同様にヌクレオフェクトした。インビトロのエクソン７包含率を各ＰＭＯベースのオリゴマーについて上に記載の通り算出した。図４および表７に示す通り、−１０／−２７領域をターゲティングするオリゴマーは、他の化合物と比べてはるかにより効力があった。ＰＭＯ−ＡＰＮおよびＰＭＯ−Ｐｌｕｓ修飾はイントロン７の−１０／−２９領域をターゲティングする化合物の効力をさらに増強した一方で、これらの化学修飾の増強効果は、イントロン７の−１４９／−１７４領域をターゲティングする化合物よりはるかに低かった。驚くべきことに、これらの化学修飾は、イントロン７の−１３７／−１５９領域をターゲティングするオリゴマーでエクソン７包含よりもエクソン７スキッピング（エクソン７包含の代わりにエクソン７排除）の増大を生じた。

【表7】

[この文献は図面を表示できません]

異なる長さを有するＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率

【0545】

さまざまな長さを有するＰＭＯベースのオリゴマーを、この化合物がインビトロのエクソン７包含を誘導する効率を測定するために試験した。異なる長さを有するさまざまな量のＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ、およびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙオリゴマー（化合物ＰＭＯ−２−４、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１１、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１６、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−８、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−９、ＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ−２およびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ−３）をＧＭ０３８１３線維芽細胞にヌクレオフェクトした。インビトロのエクソン７包含率を各ＰＭＯベースのオリゴマーについて上に記載の通り算出した。図５Ａおよび表８に修飾１８量体および２０量体のヌクレオフェクションによるエクソン７包含率を要約する。試験した用量範囲内では、修飾１８量体および２０量体は、インビトロのエクソン７包含を誘導する同様の効力を示した。同様に、図５Ｂおよび表９に示す通り、インビトロのエクソン７包含を誘導する同様の効力が修飾１８量体および２５量体で観察された。前記と同様に、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓおよびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ修飾を有する化合物は、ＰＭＯ化合物よりも優れていた。

【表8】

[この文献は図面を表示できません]

【表9】

[この文献は図面を表示できません]

異なる修飾を有するＰＭＯベースのオリゴマーのインビトロのエクソン７包含率

【0546】

ＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓおよびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙで修飾されたＰＭＯベースのオリゴマーを、化学修飾のインビトロのエクソン７包含への効果を分析するために試験した。２’−ＯＭｅ修飾オリゴマーをＰＭＯベースのオリゴマーと並行して試験した。上に記載のプロトコルに従って、さまざまな量のＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ、ＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙおよび２’−ＯＭｅオリゴマー（化合物ＰＭＯ−３、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１６、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−８、ＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ−３および２’−ＯＭｅ−２）をＧＭ０３８１３線維芽細胞にヌクレオフェクトした。インビトロのエクソン７包含率を各化合物について上に記載の通り算出した。図６および表１０に示す通り、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰＬＵＳまたはＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙで修飾された化合物は、ＰＭＯで修飾された化合物と比べてエクソン７包含を誘導する効力の顕著な改善を示した。さらに、ＰＭＯまたは次世代ＰＭＯで修飾された全ての化合物は、２’−ＯＭｅオリゴマーの効力をはるかに超える大きな効力の改善を示した。

【表10】

[この文献は図面を表示できません]

【0547】

エクソン７包含が誘導されると、エクソン７コード部分を含むＳＭＮ２タンパク質の発現レベルもそれにより増大されるはずである。ＰＭＯベースのオリゴマーが実際にインビトロでエクソン７包含を誘導することを確認するためにウエスタンブロット分析を上に記載の通り実施した（図７Ａおよび７Ｂ）。０．１μＭの低濃度で、ＰＭＯ、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓおよびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ化合物は、ＳＭＡ患者由来線維芽細胞において正常線維芽細胞におけるＳＭＮ１発現のレベルに匹敵するエクソン７コード部分を含むＳＭＮ２タンパク質の発現を誘導できた。
（実施例２５）
ＰＭＯベースのオリゴマーのインビボ投与

【0548】

ＰＭＯベースのオリゴマーの治療有効性および安全性を適切な動物モデルで試験した。ＳＭＡの処置におけるＰＭＯベースのオリゴマーの有効性を分析するための例示的な方法を提供する。ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウスを、寿命、体重増加、握力および立直り反射について下のプロトコルに従ってモニタリングおよび試験した。本明細書で記載される他の例示的な方法は、ＰＭＯベースのオリゴマーのインビボ投与における組織像、毒性および免疫原性応答を評価することに関する。表１１は、次のインビボ試験で使用したＰＭＯベースのオリゴマーを要約している。

【表11】

[この文献は図面を表示できません]

ＳＭＡマウスモデル

【0549】

多様なＳＭＡマウスモデルが当技術分野において公知である（例えば、Ｓｃｈｒａｎｋら、１９９７年；Ｈｓｉｅｈ−Ｌｉら、２０００年；Ｍｏｎａｎｉら、２０００年を参照されたい）。マウスにおけるＳＭＡ表現型の重症度は、マウスに存在するＳＭＮ遺伝子のコピー数に依存する。例えば、ｍＳＭＮ遺伝子の１コピーを欠失しているヘテロ接合性マウスは、ヒトのＩＩＩ型ＳＭＡを模倣する。ＳＭＮノックアウトマウスは、胚性致死性である。ヒトのＩ型またはＩＩ型ＳＭＡに類似したマウス株を作製するために、ヒトＳＭＮ２をマウスに導入することができる。例えば、Ｔａｉｗａｎｅｓｅ−ＳＭＡマウスモデルは、ＳＭＮ−ヌルバックグラウンドにおいてヒトＳＭＮ２遺伝子の４コピーを有する（Ｓｍｎ−／−、ｈＳＭＮ２ｔｇ／ｔｇ）。Ｔａｉｗａｎｅｓｅマウスは、ヒトでのＩ型またはＩＩ型ＳＭＡに類似する中程度から重症のＳＭＡ表現型を呈する。「ｓＳＭＡ」株マウス（Ｓｍｎ−／−、ｈＳＭＮ２＋／＋）は、２コピーのヒトＳＭＮ２遺伝子だけを保有しており、Ｔａｉｗａｎｅｓｅマウスよりも重症の表現型を生じる。別の重症のＳＭＡマウス株は、ＳＭＮΔ７マウス（Ｓｍｎ−／−、ｈＳＭＮ２＋／＋、ＳＭＮΔ７＋／＋）である。ＳＭＮΔ７マウスの平均寿命は、およそ１５〜２０日間である。ＳＭＮΔ７マウスは、ヒトＩ型ＳＭＡ患者に類似した症状および神経病理を示す。
ＰＭＯベースのオリゴマーの投与

【0550】

ＰＭＯベースのオリゴマーを、以前記載された通りＳＭＮΔ７マウスに脳室内（ＩＣＶ）注射を介して送達した（Ｐａｓｓｉｎｉら、２００１年）。インビボで試験した全てのＰＭＯベースのオリゴマーを注射の前に５μｇ／μｌの濃度で生理食塩水に溶解した。インビボでＰＭＯベースのオリゴマーをスクリーニングするための典型的投与量は２０μｇであり、日齢Ｐ１（出生翌日）にＩＣＶ注射によって送達した。各マウスに、２μｌのＰＭＯベースのオリゴマー溶液の注射を各側脳室に与え、マウス１匹あたり合計４μｌとした。インビボで使用される投与量は、数を増やしてもよく、一度にまたは複数回の注射で送達され得る。他の例示的な送達方法は、皮下注射、筋肉内注射、末梢顔面静脈注射、眼注射、くも膜下腔内注射および尾静脈注射を含む。送達方法のいずれかの１つが、マウスに異なる日齢でＰＭＯベースのオリゴマーを複数回投与するために組み合わされてよい。

【0551】

ヒトにおけるＳＭＡ発症の分子機構に基づいて、早期のＣＮＳ処置が頑強な効果をもたらすと期待されることが理解される。ＩＣＶ注射がＰＭＯベースのオリゴマーを脳および脊髄に直接送達し、若年齢で投与できることから、ＩＣＶ注射は、ニューロン内のＳＭＮレベルを回復させるための好ましい方法であり得る。血液脳関門の外の自律神経系においてＳＭＮ発現を増大させることがＳＭＡ関連症状の重症度を軽減できる可能性もある。
ＰＭＯベースのオリゴマーの投与におけるＳＭＡ関連症状の分析

【0552】

ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したＳＭＮΔ７マウスを寿命および体重についてモニタリングし、筋力および運動機能について試験した。ＳＭＡマウスモデルはヒトＳＭＡ患者において同様に観察されるＳＭＡ関連症状を呈するので、マウスのＳＭＡ関連症状および表現型を測定するさまざまな試験が、当技術分野において公知である（Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１１年）。ＳＭＡマウスモデルの最も注目すべき表現型は、寿命の減少である。野生型マウスの典型的寿命は、およそ２年である。しかし、ＳＭＡ表現型の重症度に応じてＳＭＡマウスモデルの寿命の平均中央値は、５〜２５日間の間で変動しうる。それにより、生理食塩水処置マウスと比べてＰＭＯベースのオリゴマー処置マウスの寿命をモニタリングすることは、ＳＭＡの処置におけるオリゴマーの有効性を評価するための良好な測定であり得る。体重増加などの他の生体測定結果ならびに、オープンフィールド試験および歩行時の歩き方（ｗａｌｋｉｎｇ ｇａｉｔ）を含む行動的生体測定結果は、処置マウスの健康を評価するために同様に分析され得る。ＭＲＩによって測定される除脂肪率および体脂肪率などの身体組成は、試験を通して同様に分析されてよい。

【0553】

ＳＭＡマウスモデルの他の表現型は、筋力および運動機能の衰弱などの神経筋機能障害を含む。神経筋機能を定量的に測定するために、ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウスを、１４日目に開始して、握力試験に供した。各マウスの前肢をワイヤグリッドに置き、次いでマウスをメッシュに沿って水平に穏やかに引いた。メッシュを握るためにマウスがかけた力のピーク量を力変換器（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）でグラムで測定した。前肢および後肢の評価は、同時の試験で実施してもよいし、別々の試験で実施してもよい。最初の注射後の４日目に始めて、立直り反射を以前に記載のプロトコル（Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１１年）に従って同様に測定した。簡潔には、立直り反射を、背臥位に置かれた後にマウスが４本の全ての肢を軸とした体位に変わるのに要する時間を測定することによって判定した。立ち直りに要する時間は、神経筋力に反比例する。トレッドミルの使用および車輪運動などの他の試験を、ＰＭＯベースのオリゴマーの投与における全般的な筋力の改善を測定するために使用できる。筋肉サイズ、筋緊張、圧痛、不随意運動の頻度および心血管系機能の測定を含む身体検査を、ＳＭＡマウスモデルにおいてＰＭＯベースのオリゴマーの全身効果を分析するために追加的に行う。
ＰＭＯベースのオリゴマーによる処置における分子分析および細胞分析

【0554】

分子および細胞アッセイをＰＭＯベースのオリゴマーのインビボでの生理学的効果を分析するために行う。ＰＭＯベースのオリゴマーをマウスに投与した後、脳、脊髄および末梢器官などの組織由来の生検試料を、実験を通して定期的に回収する。処置マウスを実験の最後に屠殺し、そのような組織をさらなる分析のために秤量し、回収する。そのようなアッセイは、当技術分野において慣用的に使用され、例示的な方法は本明細書に記載されている。

【0555】

ＰＭＯベースのオリゴマーが実際にエクソン７包含をインビボで誘導することを確認するために、脳、脊髄および末梢器官などの組織におけるエクソン７包含率を測定する。全ＲＮＡを単離し、ｃＤＮＡを上に記載の逆転写ＰＣＲによって生成する。増幅産物を可視化し、エクソン７包含率を上に記載の通り算出する。生検試料をさらに処理して、エクソン７コード部分を含むＳＭＮ２タンパク質の量を、上に記載のプロトコルに従ってウエスタンブロット分析によって測定する。

【0556】

脊髄生理に対するＰＭＯベースのオリゴマーの効果を定量的に分析する。例えば、処置ＳＭＡマウスの脊髄に存在する運動ニューロンの数を計数し、対照マウスと比較する。脊髄中の運動ニューロンを分析するための方法は、当技術分野において公知である（Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１１年）。簡潔には、マウスから単離された脊髄の試料をパラホルムアルデヒドで固定し、Ｈ＆Ｅ（ヘマトキシリンおよびエオシン）で染色する。複数の横断切片を生成し、ニューロンを可視化するためにコリンアセチルトランスフェラーゼなどの運動ニューロンに特異的なマーカーに対する抗体で染色する。

【0557】

心臓および筋肉を当技術分野において公知の方法（Ａｖｉｌｉａら、２００７年；Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１０年；Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１１年）に従って同様に組織学的に分析する。例えば、心臓ならびに大腿四頭筋および肋間筋を含む筋肉を回収し、パラホルムアルデヒドで固定し、Ｈ＆Ｅで染色する。組織の横断切片に基づいて、これらの組織における筋肉繊維の平均厚を測定する。これらの組織の神経筋接合部の構造は、神経フィラメント中鎖およびアセチルコリン受容体などの特異的マーカーに対する抗体で可視化することができる。
非ヒト霊長類へのＰＭＯベースのオリゴマーの投与

【0558】

カニクイザルなどの非ヒト霊長類をＰＭＯベースのオリゴマーの送達実行可能性を分析するために使用する。くも膜下腔内およびＩＣＶ注射などのさまざまな注射選択肢が、当技術分野において公知である（例えば、Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１１年；Ｓｍｉｔｈら、２００６年を参照されたい）。これらの方法は、両方の投与経路が非ヒト霊長類およびヒトにおいて治療剤を送達するために日常的に使用されていることから、臨床的に実行可能である。くも膜下腔内注射のためにカニクイザルを麻酔し、くも膜下腔内留置カテーテルを埋め込む。ＩＣＶ注射のために、右（もしくは左または両方の）大脳側脳室にカニューレを埋め込むための定位脳手術を各サルに実施する。ＰＭＯベースのオリゴマーの注入を受ける前にサルを数日間埋め込み手術から回復させる。さまざまな用量のＰＭＯベースのオリゴマーを１日または複数日かけて注入する。初回注入の５〜２０日後、全てのサルを屠殺し、上に記載のさらなる分析のために組織を回収する。
ＰＭＯベースのオリゴマーの安全性分析

【0559】

ＰＭＯベースのオリゴマーのインビボでの安全性を当技術分野において公知のさまざまな方法（例えば、Ｈｕａら、２０１０年を参照されたい）によって評価する。慢性炎症がＳＭＡなどの神経変性疾患と関連していることから、神経炎症に関する多様なバイオマーカーを、ＰＭＯベースのオリゴマーの投与における脳、脊髄、心臓および筋肉などの組織内の炎症性応答を分析するために使用する。例示的なバイオマーカーは、同種移植炎症因子−１、腫瘍壊死因子−αおよびインターロイキン−１βを含む。免疫細胞浸潤もＣＤ４およびＣＤ８などの特異的免疫細胞マーカーで測定することができる。これらの組織における反応性酸素種は、当技術分野において公知の方法（Ｄｉｋａｌｏｖら、２００７年）に従って同様に測定することができる。

【0560】

炎症マーカーに加えて、毒性に関連する他の生理学的パラメーターを、ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウスまたは非ヒト霊長類において測定できる。動物に、望ましい生物学的応答、すなわち１００％のインビボのエクソン７包含率を誘発する最大用量を超えて、各化合物の単一用量または複数用量を負荷する。さまざまな用量の化合物で処置した動物を、任意の急性応答についてモニタリングする。局所注射部位も同様にモニタリングする。血圧および心拍数などの心血管系パラメーターならびに血清および尿の生化学をＰＭＯベースのオリゴマーの潜在的な任意の急性または慢性効果を検出するために測定する。遺伝毒性を当技術分野において公知のプロトコル（例えば、Ｓａｚａｎｉら、２０１０年）に従って同様に評価する。化合物の薬物動態および薬力学も、当技術分野において公知のプロトコル（Ｈｅａｌｄら、２０１５年）に従って治療用量を推定するために各処置動物の血清を試料採取することによって測定する。
ＳＭＮΔ７マウスへのＰＭＯベースのオリゴマーの投与

【0561】

初期スクリーニング方法として、ＳＭＮΔ７マウスをインビボ実験に使用した。日齢Ｐ１（出生翌日）において、マウスを上に記載のＩＣＶ注射によって生理食塩水または２０μｇのＰＭＯベースのオリゴマー（化合物ＰＭＯ−３、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１６、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−８およびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ−３）で処置した。全ての注射は、Ｐａｓｓｉｎｉら（２００１年）に記載のものと同様に３０．５ゲージハミルトンシリンジで実施した。日齢が一致する野生型マウスの群も参照として同時にモニタリングした。日齢６３において、全ての残っているマウスを上に記載のとおりのさらなる分子および細胞分析のために屠殺した。表１２は、各実験群のために使用した遺伝子型、処置、用量およびマウスの数を要約している。

【表12】

[この文献は図面を表示できません]

ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したＳＭＮΔ７マウスの生存

【0562】

図８Ａおよび表１３に示す通り、ＰＭＯベースのオリゴマーによる処置は、ＳＭＮΔ７マウスの寿命中央値を顕著に増大させた。各実験群のＰ値は、ログランクマンテル−コックス検定によって算出した。生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウスは２１日を超えて生存しなかった一方で、全ての試験したオリゴマーは生存中央値を３４〜４２日間に延ばすことができた。さらに、オリゴマーで処置したマウスの８〜４６％は、６３日齢でも依然として生きていた。さらに、ＰＭＯオリゴマーで処置したマウスは、生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウスと比べてそれらが十分身繕いされ、自発的で、より活発であることから、警戒性および一般的健康の改善を呈した。

【表13】

[この文献は図面を表示できません]

ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したＳＭＮΔ７マウスの体重

【0563】

実験の間、体重を毎日記録した（図８Ｂ）。６３日目の各実験群の平均体重を表１４に要約する。ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウスは、野生型群に匹敵するほど、実験を通して体重が顕著に増大していた。驚くべきことに、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓまたはＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙオリゴマーで処置したマウスは、ＰＭＯオリゴマーよりも顕著に多く体重が増加し、これらの化学修飾がインビボでＳＭＡ関連症状を処置するオリゴマーの有効性をさらに増大させたことを実証している。

【表14】

[この文献は図面を表示できません]

筋力および運動機能へのＰＭＯベースのオリゴマーの効果

【0564】

筋力および運動機能に対するＰＭＯベースのオリゴマーの効果を分析するために、オリゴヌクレオチドで処置したマウスの立直り反射を上に記載のプロトコルに従って実験を通して定期的に測定した。図９Ａおよび表１５に示す通り、ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウスは、生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウスと比較して立直り反射の顕著な改善を呈した。オリゴマーで処置した全てのマウスは、２８日後に野生型に匹敵する反射を示した。驚くべきかつ予想外なことに、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓまたはＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙオリゴマーで処置したマウスは、ＰＭＯオリゴマーで処置したマウスより７日早く、２１日目に野生型と同様に行動し始めた。

【0565】

オリゴマーで処置したマウスの握力を上に記載のプロトコルに従って同様に定期的に試験したが、これを図９Ｂおよび表１６に示す。表１５および１６は、１４、２１、２８、４２および５６または６３日目に測定した各実験群の筋力および立直り反射を要約している。試験した全てのオリゴマーは、ＳＭＮΔ７マウスの筋力を増強した。立直り反射と一致して、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓまたはＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙオリゴマーで処置したマウスは、野生型群と統計的に識別できなかった。ＰＭＯオリゴマーはマウスの筋力を増強したが、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓおよびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ修飾はＰＭＯ修飾よりも顕著に有効であり、驚くべきことに強さを野生型マウスのものに正常化した。さらにより予想外かつ驚くべきことに、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓおよびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ処置マウスの握力は、約２８日目に野生型へと正常化し、試験終了までの延長された生存期間を通して野生型と統計的に識別不能なままであった。このことは、上に記載のインビトロスクリーニングからは予測できなかった。

【表15】

[この文献は図面を表示できません]

【表16】

[この文献は図面を表示できません]

上記データについての単位は「力（ｇ）」である
^＃：ｐ＜０．００１（生理食塩水で処置したＳＭＡマウスと比べて）
^＊：ｐ＜０．０５（ＰＭＯ−３で処置したＳＭＡマウスと比べて）
^＄：ｐ＜０．０５、^＆：ｐ＜０．０１および^％： ｐ＜０．００１（生理食塩水で処置した野生型マウスと比べて）
ＮＴ：「非試験」（残りのマウスは、前肢壊死のため試験を実施できなかった）
インビボにおけるＳＭＮタンパク質発現に対するＰＭＯベースのオリゴマーの効果

【0566】

ＰＭＯベースのオリゴマーの投与がインビボでＳＭＮタンパク質の発現を誘導するかどうかを確認するために、ＰＭＯベースオリゴマーで処置したマウス由来の脊髄試料を日齢６３で回収した。陽性対照として、日齢が一致する野生型マウスも脊髄試料回収のために屠殺した。生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウスを日齢１２で屠殺し、これらのマウス由来の脊髄試料を比較として回収した。脊髄試料由来のタンパク質抽出物を実施例２４に記載の方法に従って得た。各試料のＳＭＮタンパク質発現レベルを同様に実施例２４に記載のウエスタンブロット分析によって検出した。

【0567】

図１０Ａに示す通り、ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウス由来の脊髄試料は、顕著により高いＳＭＮタンパク質発現レベルを示した。図１０Ｂは、図１０Ａに示すウエスタンブロット分析の定量を示している。驚くべきことに、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１６で処置したマウスにおけるＳＭＮタンパク質発現レベルは、野生型マウスのものの約２５％であった。
（実施例２６）
異なる長さを有するＰＭＯベースのオリゴマーのインビボ効果

【0568】

ＰＭＯベースのオリゴマーの第２のセットのインビボ有効性をＳＭＮΔ７マウスにおいて実施例２５に記載の方法に従って試験した。簡潔には、日齢Ｐ１（出生翌日）に、マウスを生理食塩水または２０μｇのＰＭＯベースのオリゴマー（長さ１８ヌクレオチドの化合物ＰＭＯ−ＡＰＮ−１６および長さ２５ヌクレオチドの化合物ＰＭＯ−２、ＰＭＯ−ＡＰＮ−１１、ＰＭＯ−Ｐｌｕｓ−３、ＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ−２）で処置した。日齢が一致する野生型マウスの群も参照として同時にモニタリングした。表１７は、各実験群のために使用した遺伝子型、処置、用量およびマウスの数を要約している。

【表17】

[この文献は図面を表示できません]

ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したＳＭＮΔ７マウスの生存

【0569】

図１１および表１８に示す通り、ＰＭＯベースのオリゴマーによる処置は、ＳＭＮΔ７マウスの寿命中央値を顕著に増大させた。各実験群のＰ値は、ログランクマンテル−コックス検定によって算出した。特に、ＰＭＯ−ＡＰＮ修飾オリゴマーは、生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウスと比較してＳＭＮΔ７マウスの生存中央値をおよそ３倍にした。ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したＳＭＮΔ７マウスは、生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウスと比較して健康で、十分身繕いされ、自発的で、活発であった。

【表18】

[この文献は図面を表示できません]

ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したＳＭＮΔ７マウスの体重

【0570】

各処置群の体重を投与後６３日間毎日記録した（図１２）。日齢６３での各処置群の体重を表１９に要約する。ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウスは、野生型群に匹敵するほど、実験を通して体重が顕著に増大していた。実施例２５で考察した体重データと一致して、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓまたはＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙオリゴマーで処置したマウスは、対応するＰＭＯオリゴマーよりも顕著に多く体重が増加した。これらのデータは、これらの化学修飾がＰＭＯベースのオリゴマーのインビボ有効性をさらに増大させたことを再度証明している。

【表19】

[この文献は図面を表示できません]

筋力に対するＰＭＯベースのオリゴマーの効果

【0571】

実施例２５に記載の手順に従って、ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したＳＭＮΔ７マウスの筋力を実験の間モニタリングした。図１３および表２０は、２８、３５、４２、４９、５６および６３日目に測定した各実験群の筋力を要約している。表１９に示す統計は、一元配置ＡＮＯＶＡチューキーの多重比較によって算出されている。驚くべきことに、ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウスの平均筋力は、野生型マウス群のレベルに匹敵した。実施例２５に示す結果と同様に、ＰＭＯ−ＡＰＮ、ＰＭＯ−ＰｌｕｓおよびＰＭＯ−Ｒ_６Ｇｌｙ修飾は、ＰＭＯ修飾と比べた場合に、長さ２５ヌクレオチドのオリゴマーの有効性を顕著に増強した。

【表20】

[この文献は図面を表示できません]

上記データについての単位は「力（ｇ）」である
^＃：ｐ＜０．００１（生理食塩水で処置したＳＭＡマウスと比べて）
^＊：ｐ＜０．０５（ＰＭＯ−２で処置したＳＭＡマウスと比べて）
^＄：ｐ＜０．０５、^＆：ｐ＜０．０１および^％：ｐ＜０．００１（生理食塩水で処置した野生型マウスと比べて）
ＮＴ：非試験（残りのマウスは、前肢壊死のため試験を実施できなかった）
インビボでのＳＭＮタンパク質発現に対するＰＭＯベースのオリゴマーの効果

【0572】

ＰＭＯベースのオリゴマーの投与がインビボでＳＭＮタンパク質の発現を誘導するかどうかを確認するために、ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウス由来の脊髄試料を日齢６３で回収した。陽性対照として、日齢が一致する野生型マウスも脊髄試料回収のために屠殺した。生理食塩水処置ＳＭＮΔ７マウスを日齢１２で屠殺し、これらのマウス由来の脊髄試料を比較として回収した。脊髄試料由来のタンパク質抽出物を実施例２４に記載の方法に従って得た。各試料のＳＭＮタンパク質発現レベルを同様に実施例２４に記載のウエスタンブロット分析によって検出した。

【0573】

図１４Ａおよび１４Ｂに示す通り、ＰＭＯベースのオリゴマーで処置したマウス由来の脊髄試料は、高いＳＭＮタンパク質発現レベルを示した。

【0574】

前出の詳細な記載および付随する実施例が単なる例示であり、添付の特許請求の範囲およびその等価物によってのみ規定される本発明の範囲に対する限定として解釈されないことが理解されるべきである。開示の実施形態へのさまざまな変更および改変は、当業者に明らかである。本発明の化学構造、置換体、誘導体、中間体、合成、製剤および／または使用方法に関するものを非限定的に含むそのような変更および改変は、その精神および範囲から逸脱することなく行うことができる。本明細書に引用する全ての刊行物、特許および特許出願は、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【図1A】

[この文献は図面を表示できません]

【図1B】

[この文献は図面を表示できません]

【図1C】

[この文献は図面を表示できません]

【図1D】

[この文献は図面を表示できません]

【図1E】

[この文献は図面を表示できません]

【図1F】

[この文献は図面を表示できません]

【図1G】

[この文献は図面を表示できません]

【図2A】

[この文献は図面を表示できません]

【図2B】

[この文献は図面を表示できません]

【図3】

[この文献は図面を表示できません]

【図4】

[この文献は図面を表示できません]

【図5A】

[この文献は図面を表示できません]

【図5B】

[この文献は図面を表示できません]

【図6】

[この文献は図面を表示できません]

【図7A】

[この文献は図面を表示できません]

【図7B】

[この文献は図面を表示できません]

【図8】

[この文献は図面を表示できません]

【図9】

[この文献は図面を表示できません]

【図10A】

[この文献は図面を表示できません]

【図10B】

[この文献は図面を表示できません]

【図11】

[この文献は図面を表示できません]

【図12】

[この文献は図面を表示できません]

【図13】

[この文献は図面を表示できません]

【図14A】

[この文献は図面を表示できません]

【図14B】

[この文献は図面を表示できません]

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]