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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】6987123
(24)【登録日】2021年12月2日
(45)【発行日】2021年12月22日
(54)【発明の名称】化合物、試薬およびその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 5/062 20060101AFI20211213BHJP
G01N 33/68 20060101ALI20211213BHJP
C07D 207/16 20060101ALI20211213BHJP
C07B 53/00 20060101ALN20211213BHJP
C07B 59/00 20060101ALN20211213BHJP
【ＦＩ】
C07K5/062
G01N33/68
C07D207/16
!C07B53/00 G
!C07B59/00
【請求項の数】24
【全頁数】60
(21)【出願番号】特願2019-503956(P2019-503956)
(86)(22)【出願日】2017年7月27日
(65)【公表番号】特表2019-531261(P2019-531261A)
(43)【公表日】2019年10月31日
(86)【国際出願番号】US2017044151
(87)【国際公開番号】WO2018022866
(87)【国際公開日】20180201
【審査請求日】2020年7月21日
(31)【優先権主張番号】62/367,839
(32)【優先日】2016年7月28日
(33)【優先権主張国】US
(73)【特許権者】
【識別番号】510041197
【氏名又は名称】メタボルン インコーポレーティッド
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100102118
【弁理士】
【氏名又は名称】春名 雅夫
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(72)【発明者】
【氏名】チャン キボ
(72)【発明者】
【氏名】エバンス アン エム．
【審査官】
山▲崎▼ 真奈
(56)【参考文献】
【文献】
特開２０１５−１３２５９８（ＪＰ，Ａ）
【文献】
特表２０１６−５２０１９２（ＪＰ，Ａ）
【文献】
Robert G. Fassett et al.，Biomarkers in chronic kidney disease: a review，Kidney International，2011年，Vol.80，pp.806-821
【文献】
Sabine Gebauer et al.，Three-Dimensional Quantitative Structure-Activity Relationship Analyses of Peptide Substrates of the Mammalian H+/Peptide Cotransporter PEPT1，J. Med. Chem.，Vol.46, No.26，2003年，pp.5725-5734
【文献】
William L. Mock et al.，Specificity and pH Dependence for Acylproline Cleavage by Prolidase，THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY，1990年，Vol.265, No.32，pp.19600-19605
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
Ｃ０７Ｋ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
次式：
により表され、その他の立体異性体に比べて、少なくとも６０重量％の純度である、化合物またはその塩。
【請求項2】
その他の立体異性体に比べて、少なくとも７０重量％の純度である、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
その他の立体異性体に比べて、少なくとも８０重量％の純度である、請求項１に記載の化合物。
【請求項4】
その他の立体異性体に比べて、少なくとも９０重量％の純度である、請求項１に記載の化合物。
【請求項5】
その他の立体異性体に比べて、少なくとも９５重量％の純度である、請求項１に記載の化合物。
【請求項6】
その他の立体異性体に比べて、少なくとも９９重量％の純度である、請求項１に記載の化合物。
【請求項7】
その他の立体異性体に比べて、少なくとも９９．５重量％の純度である、請求項１に記載の化合物。
【請求項8】
その他の立体異性体に比べて、少なくとも９９．９重量％の純度である、請求項１に記載の化合物。
【請求項9】
次式：
により表されるかまたはその塩である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項10】
同位体標識されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項11】
対象における、次式：
により表される化合物またはその塩のレベルを決定する方法であって、
（１）前記対象から得た生物試料由来の分析試料を調製すること、
（２）クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、またはこれらの組み合わせを用いて、化合物のレベルを決定すること
を含む、方法。
（１）前記対象から得た生物試料由来の分析試料を調製すること、
（２）クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、またはこれらの組み合わせを用いて、化合物のレベルを決定すること
を含む、方法。
【請求項12】
腎機能を検査する方法における次式：
により表される化合物またはその塩の使用であって、該方法は、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、またはこれらの組み合わせを用いて、対象から得た生物試料中の前記化合物のレベルを決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の前記化合物の上昇したレベルが、対象における腎機能低下の指標となる、前記使用。
【請求項13】
前記方法が、基準試料中の前記化合物のレベルと、前記対象から得た前記生物試料中の前記化合物のレベルを比較することをさらに含む、請求項１２に記載の使用。
【請求項14】
前記方法が、前記化合物の決定されたレベルを数学モデルで使用することをさらに含む、請求項１２または１３に記載の使用。
【請求項15】
前記方法が、前記生物試料を分析して、腎機能の評価に関連する１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルを決定することをさらに含む、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項16】
前記追加のバイオマーカーが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ６−カルバモイルトレオニルアデノシン、４−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、３−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ６−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、２−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ２，Ｎ５−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、３−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾールからなる群より選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項17】
前記方法が前記化合物の決定されたレベルを利用するアルゴリズムを用いて、対象の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算することをさらに含む、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項18】
次式：
により表される化合物またはその塩、および生物試料中の前記化合物のレベルを測定するための説明書を含む、キット。
【請求項19】
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象の腎機能を評価またはモニターすること、
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象における腎機能低下を発症する素因を判定すること、
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づく腎機能のレベルに応じて前記対象を分類すること、
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象の慢性腎疾患（ＣＫＤ）を診断またはモニターすること、
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象の急性腎傷害（ＡＫＩ）を診断またはモニターすること、および
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算すること、
からなる群より選択される、１つまたは複数の説明書をさらに含む、請求項１８に記載のキット。
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象における腎機能低下を発症する素因を判定すること、
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づく腎機能のレベルに応じて前記対象を分類すること、
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象の慢性腎疾患（ＣＫＤ）を診断またはモニターすること、
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象の急性腎傷害（ＡＫＩ）を診断またはモニターすること、および
対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて前記対象の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算すること、
からなる群より選択される、１つまたは複数の説明書をさらに含む、請求項１８に記載のキット。
【請求項20】
前記化合物が、次式：
により表されるかまたはその塩である、請求項１８または１９に記載のキット。
【請求項21】
前記化合物が同位体標識されているか、または(ii) 前記化合物がＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−１３Ｃ３−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリンである、請求項２０に記載のキット。
【請求項22】
腎機能の評価に関連する１つまたは複数の追加のバイオマーカーをさらに含み、前記追加のバイオマーカーが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ６−カルバモイルトレオニルアデノシン、４−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、３−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ６−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、２−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ２，Ｎ５−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、３−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾールからなる群より選択される、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載のキット。
【請求項23】
次式：
により表される化合物またはその塩を調製する方法であって、次式：
により表される化合物またはその塩を、メチル化試薬ＣＨ３Ｘまたは（ＣＨ３）２ＳＯ４と反応させることを含み、式中、ＸはＣｌ、Ｂｒ、ＩまたはＯＳＯ２ＣＦ３である、方法。
【請求項24】
前記化合物が、次式：
により表されるかまたはその塩であり、前記方法が、Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリンをＣＨ３Ｘまたは（ＣＨ３）２ＳＯ４と反応させることを含む、請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願本出願は、米国特許法１１９条（ｅ）に基づき、２０１６年７月２８日に出願の米国特許仮出願第６２／３６７，８３９号の出願日の利益を主張する。この仮出願の、全ての図面、式、明細書および特許請求の範囲を含む全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
腎臓の排泄機能（糸球体濾過量、ＧＦＲ）を評価する高感度の正確で簡便な検査に関する臨床上の必要性は、ほとんど満たされていない。腎機能の最も正確な測定値は、理想的濾過マーカー（例えば、イヌリン、イオタラメート、イオヘキソール）を使用することが必要な糸球体濾過量（ｍＧＦＲ）の測定値である。それは複雑であるため、この測定は、経費がかかり、定常的臨床診療で行うのが困難であり、通常、調査研究でまたは潜在的腎提供者に対し使用されるにすぎない。したがって、血清クレアチニンなどのマーカーに基づく腎機能の代替尺度が、推定ＧＦＲ（ｅＧＦＲ）を導出する式中で使用される。例えば、ｅＧＦＲを導出するために現在使用されているＭＤＲＤｃｒ、ＣＫＤ−ＥＰＩｃｒおよびＣＫＤ−ＥＰＩｃｒｃｙｓ式は、人口統計学的情報（例えば、年齢、社会的性別／性別、人種）と組み合わせて血清クレアチニンを使用する。この手法の利点は、腎機能の評価のための定常的臨床診療でのその使いやすさである。しかし、ＧＦＲを決定するこれらの方法は、腎機能を真に評価する上で制限があり、特に、腎機能が「正常」範囲にある場合、幾人かの患者で、いくつかの式が、ＧＦＲを過小評価する場合があり、また、その他の患者で、ＧＦＲを過大評価する場合がある。これらの制限のいくつかは、筋量、食事、および抗生物質を含むある種の薬剤により影響を受ける可能性のある血清クレアチニンレベルの変動が原因であると考えられ、これは個体間および経時的な変動に繋がる。この不正確さを含む臨床結果は、患者の誤診に繋がる。いくつかの場合、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の個体は、現在の方法により診断されないため、適切な治療を受けらない（偽陰性）。他の場合、個体は、実際にはＣＫＤでなくても、ＣＫＤであるとして診断される場合があり（偽陽性）、その結果、これらの個体は、罹患していない疾患の治療を受ける。さらに、毒性物質（例えば、特定の抗生物質、化学療法剤、毒物、毒素）による腎機能低下の早期検出は、急性腎傷害（ＡＫＩ）を検出およびさらなる腎障害を防ぐ処置をするために必要である。より最近では、腎機能を評価するためにシスタチンＣの血清レベルが使用されてきているが、腎機能のこの尺度の有用性は、個体間のシスタチンＣ血清レベルの変動により制限される。したがって、偽陰性および偽陽性の診断数を低減するために、簡便で、現在利用可能な腎機能評価検査よりも正確な検査の必要性が存在する。
【0003】
さらに、腎機能の現在の評価（例えば、血清クレアチニン、シスタチンＣによるｅＧＦＲの測定、ＢＵＮ、尿中アルブミン）は、急性腎傷害（ＡＫＩ）、初期腎疾患を検出するためには、またはその進行をモニターするためには、特に個体が無症状であるＡＫＩおよびＣＫＤの最初期段階では、十分な感度および／または確度を有していない。低下しつつある腎機能の早期検出がなされれば、現在利用可能な方法で問題が検出される前に、起こり得る腎機能の大きな低下を予防できるであろう。個体の腎機能を評価およびモニターする高感度の表示情報が得られる新規な検査であれば、現在の方法でＡＫＩおよびＣＫＤが検出できる前に、ＡＫＩおよび／またはＣＫＤのより早期の検出が可能になるであろう。結果として、ＡＫＩおよびＣＫＤならびに関連合併症の治療および管理にかかる全コストは削減されるであろう。ＣＫＤを初期に検出すれば、心血管疾患、貧血、栄養障害、および骨疾患を含む合併症は、より効果的に治療可能であり、さらにはおそらく予防も可能である。ＣＫＤの初期の検出により、健康食、禁煙、減量、高血圧治療などの生活習慣改善が可能になるであろう。これにより、さらなる腎傷害が予防または低減されるため、腎機能低下およびＣＫＤに関連付けられる転帰であることが多い透析および腎移植の必要性が低減される可能性がある。
【0004】
したがって、無症状の患者、ＣＫＤまたはＡＫＩに関するリスク因子を有する患者（例えば、６０才を超える年齢、高血圧、糖尿病、心血管疾患、ＣＫＤの家族歴）、および組成物または治療的介入に反応した患者の１つまたは複数のバイオマーカー代謝物のレベルを測定することにより、患者の腎機能を評価および／またはモニターできる血液または尿ベースの検査に対する満たされていない要求が存在する。例えば、このような検査であれば、バイオマーカー代謝物パネルを定量的に測定でき、それにより、標準的基準レベルに対するパネル中のそれぞれのバイオマーカーのレベルの増加または減少が腎機能の指標となる。このようなバイオマーカー試験用パネルは、現在の腎機能試験結果を置き換えるかまたは補足可能で、医師が初期に腎機能をより適切に評価し、および／または患者の腎機能を経時的にモニターできるようにする。このような検査はまた、腎機能低下を遅らせるための治療的介入の効果を評価するのにも有用であり得る。
【発明の概要】
【0005】
本発明は、新規化合物および組成物、および腎機能の評価およびモニターにおけるそれらの使用、ならびに腎疾患の診断方法を提供する。
【0006】
一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）：【0007】
別の実施形態では、本発明は、対象における、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定する方法を提供し、該方法は、（１）対象から得た生物試料から分析試料を調製すること、および（２）クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、化合物のレベルを決定すること、を含む。
【0008】
別の実施形態では、本発明は、対象における腎機能を評価する方法を提供し、該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の化合物の上昇したレベルが、対象における腎機能低下の指標となる。
【0009】
別の実施形態では、本発明は、対象における腎機能低下を発症する素因を決定する方法を提供し、該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の化合物の上昇したレベルが、対象における腎機能低下を発症する素因の指標となる。
【0010】
さらに別の実施形態では、本発明は、腎機能のレベル（またはステージ）に従って対象分類（またはステージ分類）する方法を提供し、該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の化合物のレベルを、腎機能のレベルに基づいて対象を分類するのに使用する。
【0011】
さらに別の実施形態では、本発明は、対象における腎機能をモニターする方法を提供し、該方法は、（１）第１の時点で対象から得た第１の生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを決定すること、および（２）第２の時点で対象から得た第２の生物試料中の、該化合物またはその塩のレベルを決定すること、を含み、第２の時点が第１の時点より後であり、該化合物のレベルが、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定され、第２の生物試料中の該化合物のレベルの、第１の生物試料中のレベルからの変化が、腎機能の変化の指標となる。
【0012】
さらに別の実施形態では、本発明は、対象における慢性腎疾患（ＣＫＤ）を診断する方法を提供し、該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の化合物の上昇したレベルが、慢性腎疾患の指標となる。
【0013】
別の実施形態では、本発明は、対象における慢性腎疾患（ＣＫＤ）の進行または軽減をモニターする方法を提供し、該方法は、（１）第１の時点で対象から得た第１の生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを決定すること、（２）第２の時点で対象から得た第２の生物試料中の、該化合物またはその塩のレベルを決定すること、を含み、第２の時点が第１の時点より後であり、第２の生物試料中の該化合物のレベルの、第１の生物試料中のレベルからの変化が、対象の前記疾患の進行または軽減の指標となり、該化合物のレベルが、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定される。
【0014】
さらに別の実施形態では、本発明は、対象における急性腎傷害（ＡＫＩ）を診断する方法を提供し、該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の化合物の上昇したレベルが、慢性腎疾患の指標となる。
【0015】
別の実施形態では、本発明は、対象における急性腎傷害（ＡＫＩ）の進行または軽減をモニターする方法を提供し、該方法は、（１）第１の時点で対象から得た第１の生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを決定すること、（２）第２の時点で対象から得た第２の生物試料中の、該化合物またはその塩のレベルを決定すること、を含み、第２の時点が第１の時点より後であり、第２の生物試料中の該化合物のレベルの、第１の生物試料中のレベルからの変化が、対象の前記疾患の進行または軽減の指標となり、該化合物のレベルが、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定される。
【0016】
さらに別の実施形態では、本発明は、組成物に反応した対象における腎機能を評価する方法を提供し、該方法は、組成物で治療された対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定することを含み、その組成物による治療のない対象中の化合物のレベルと比較した、生物試料中の化合物の上昇したレベルが、腎機能低下の指標となる（およびＡＫＩを示す場合もある）。
【0017】
別の実施形態では、本発明は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する対象を治療する方法を提供し、該方法は、（１）対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定すること、（２）対象が、基準レベルと比較した、化合物の上昇したレベルを有する場合に、慢性腎疾患の治療に好適する効果的療法を対象に投与することを含む。
【0018】
別の実施形態では、本発明は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する対象を治療する方法を提供し、該方法は、慢性腎疾患の治療に好適する効果的療法を対象に投与することを含み、対象は、基準レベルと比較して上昇したレベルの式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を有する。
【0019】
さらに別の実施形態では、本発明は、急性腎傷害（ＡＫＩ）を有する対象を治療する方法を提供し、該方法は、ＡＫＩの治療に好適する効果的療法を対象に投与することを含み、対象は、基準レベルと比較して上昇したレベルの式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を有する。
【0020】
別の実施形態では、本発明は、ＡＫＩを有する対象を治療する方法を提供し、該方法は、（１）対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定すること、（２）対象が、基準レベルと比較して化合物の上昇したレベルを有する場合に、ＡＫＩの治療に好適する効果的療法を対象に投与すること、を含む。
【0021】
いくつかの事例では、ＡＫＩは、治療（例えば、化学療法、治療薬による治療）が原因の場合がある。このような場合、治療的介入での、化学療法剤もしくは薬物治療の使用または治療用代用薬もしくは代替薬の使用を中断することになる。
【0022】
さらに別の実施形態では、本発明は、急性腎傷害（ＡＫＩ）を有する対象を治療する方法を提供し、該方法は、ＡＫＩの治療に好適する効果的療法を対象に投与することを含み、対象は、基準レベルと比較して上昇したレベルの式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を有する。
【0023】
別の実施形態では、本発明は、対象における推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算する方法を提供し、該方法は、１）対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩のレベルを、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定するステップ、および２）化合物の決定したレベルを利用するアルゴリズムを用いて、ｅＧＦＲを計算するステップ、を含む。
【0024】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物またはその塩を含むキットも提供する。
【0025】
別の実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩ならびに生物試料中の式（Ｉ）の化合物のレベルを測定するための説明書を含む。
【0026】
別の実施形態では、キットは、式（Ｉ）の標識化合物またはその塩を含む内部標準ならびに生物試料中の式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを測定するための説明書を含む。
【0027】
さらに別の実施形態では、キットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩、式（Ｉ）の標識化合物またはその塩、および生物試料中の式（Ｉ）の化合物のレベルを測定するための説明書を含む。
【0028】
一実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象の腎機能を評価またはモニターするための説明書を含む。
【0029】
別の実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象における腎機能低下を発症する素因を決定するための説明書を含む。
【0030】
別の実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づく腎機能のレベルに従って対象を分類するための説明書を含む。
【0031】
さらに別の実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象における慢性腎疾患（ＣＫＤ）を診断またはモニターするための説明書を含む。
【0032】
さらに別の実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象における急性腎傷害（ＡＫＩ）を診断またはモニターするための説明書を含む。
【0033】
別の実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象における推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算するための説明書を含む。[本発明1001]
次式：
[本発明1002]
次式：
[本発明1003]
少なくとも60％、70％、80％、90％、95％、99％、99．5％または99．9％の光学純度である、本発明1002の化合物。
[本発明1004]
同位体標識されている、本発明1001〜1003のいずれかの化合物。
[本発明1005]
重水素化されている、炭素13（13Ｃ）、窒素15（15Ｎ）で標識されている、またはこれらの組み合わせである、本発明1001〜1003のいずれかの化合物。
[本発明1006]
対象における、次式：
（1）前記対象から得た生物試料由来の分析試料を調製すること、
（2）クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、化合物のレベルを決定すること
を含む、方法。
[本発明1007]
対象における腎機能を評価する方法であって、
前記対象から得た生物試料中の、次式：
を含み、基準レベルと比較した、前記生物試料中の前記化合物の上昇したレベルが、前記対象における腎機能低下の指標となる、方法。
[本発明1008]
対象における腎機能低下を発症する素因を判定する方法であって、
前記対象から得た生物試料中の、次式：
を含み、基準レベルと比較した、前記生物試料中の前記化合物の上昇したレベルが、前記対象における腎機能低下を発症する素因の指標となる、方法。
[本発明1009]
慢性腎疾患（ＣＫＤ）を発症する素因を判定するためである、本発明1008の方法。
[本発明1010]
急性腎傷害（ＡＫＩ）を発症する素因を判定するためである、本発明1008の方法。
[本発明1011]
腎機能のレベルに応じて対象を分類する方法であって、
前記対象から得た生物試料中の、次式：
を含み、基準レベルと比較した、前記生物試料中の前記化合物のレベルが、腎機能のレベルに応じて前記対象を分類するのに使用される、方法。
[本発明1012]
対象における腎機能をモニターする方法であって、
（1）第1の時点で前記対象から得た第1の生物試料中の、次式：
（2）第2の時点で前記対象から得た第2の生物試料中の、前記化合物またはその塩のレベルを決定すること
を含み、前記第2の時点が前記第1の時点より後であり、前記化合物のレベルが、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定され、
前記第2の生物試料中の前記化合物のレベルの、前記第1の生物試料中のレベルからの変化が、腎機能の変化の指標となる、方法。
[本発明1013]
対象における慢性腎疾患（ＣＫＤ）を診断する方法であって、
前記対象から得た生物試料中の、次式：
を含み、基準レベルと比較した、前記生物試料中の前記化合物の上昇したレベルが、慢性腎疾患の指標となる、方法。
[本発明1014]
対象における慢性腎疾患（ＣＫＤ）の進行または軽減をモニターするための方法であって、
（1）第1の時点で前記対象から得た第1の生物試料中の、次式：
（2）第2の時点で前記対象から得た第2の生物試料中の、前記化合物またはその塩のレベルを決定すること
を含み、前記第2の時点が前記第1の時点より後であり、
前記第2の生物試料中の前記化合物のレベルの、前記第1の生物試料中のレベルからの変化が、前記対象の前記疾患の進行または軽減の指標となり、前記化合物のレベルが、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定される、方法。
[本発明1015]
対象における急性腎傷害（ＡＫＩ）を診断する方法であって、
前記対象から得た生物試料中の、次式：
を含み、基準レベルの前記化合物のレベルと比較した、前記生物試料中の前記化合物の上昇したレベルが、慢性腎疾患の指標となる、方法。
[本発明1016]
対象における急性腎傷害（ＡＫＩ）の進行または軽減をモニターするための方法であって、
（1）第1の時点で前記対象から得た第1の生物試料中の、次式：
（2）第2の時点で前記対象から得た第2の生物試料中の、前記化合物またはその塩のレベルを決定すること
を含み、前記第2の時点が前記第1の時点より後であり、
前記第2の生物試料中の前記化合物のレベルの、前記第1の生物試料中のレベルからの変化が、前記対象の前記疾患の進行または軽減の指標となり、前記化合物のレベルが、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて決定される、方法。
[本発明1017]
組成物に対し反応した対象における腎機能を評価する方法であって、
前記組成物で治療した対象から得た生物試料中の、次式：
を含み、前記組成物で治療していない前記対象中の前記化合物のレベルと比較した、前記生物試料中の前記化合物の上昇したレベルが、腎機能低下の指標となる、方法。
[本発明1018]
前記組成物が、コントラスト造影剤である、本発明1017の方法。
[本発明1019]
前記組成物が、治療薬である、本発明1017の方法。
[本発明1020]
前記組成物が、化学療法剤である、本発明1017の方法。
[本発明1021]
前記組成物が、抗生物質である、本発明1017の方法。
[本発明1022]
基準試料中の前記化合物のレベルと、前記対象から得た前記生物試料中の前記化合物のレベルを比較することをさらに含む、本発明1006〜1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する対象を治療する方法であって、
（1）前記対象から得た生物試料中の、次式：
（2）前記対象が、基準レベルと比較して、上昇したレベルの前記化合物を有する場合、慢性腎疾患の治療に好適する効果的療法を前記対象に投与すること
を含む、方法。
[本発明1024]
慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する対象を治療する方法であって、慢性腎疾患の治療に好適する効果的療法を前記対象に投与することを含み、前記対象が、基準レベルと比較して、上昇したレベルの次式：
[本発明1025]
前記慢性腎疾患が糖尿病または高血圧に起因する、本発明1023または1024の方法。
[本発明1026]
前記効果的療法が、有効量の抗糖尿病薬を前記対象に投与することを含む、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記抗糖尿病薬が、メトホルミン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、アカルボース、テトラヒドロリプスタチン、フェンテルミン／トピラマート、ブプロピオン／ナルトレキソン、ロルカセリン、リラグルチド、およびカナグリフロジンからなる群より選択される、本発明1026の方法。
[本発明1028]
前記効果的療法が、前記対象の生活習慣改善を含む、本発明1025の方法。
[本発明1029]
食事改善および／または身体活動もしくは運動の増加である、本発明1028の方法。
[本発明1030]
前記効果的療法が、高血圧を下げるために、有効量の治療薬を前記対象に投与することを含む、本発明1025の方法。
[本発明1031]
前記治療薬が、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬である、本発明1030の方法。
[本発明1032]
前記効果的療法が透析または腎移植である、本発明1023または1024の方法。
[本発明1033]
急性腎傷害を罹患している対象を治療する方法であって、
（1）前記対象から得た生物試料中の、次式：
（2）前記対象が、基準レベルと比較して、上昇したレベルの前記化合物を有する場合、前記急性腎傷害の治療に好適する効果的療法を前記対象に投与すること
を含む、方法。
[本発明1034]
急性腎傷害を罹患している対象を治療する方法であって、前記急性腎傷害の治療に好適する効果的療法を前記対象に投与することを含み、前記対象が、基準レベルと比較して、上昇したレベルの次式：
[本発明1035]
前記急性腎傷害が化学療法剤に起因する、本発明1033または1034の方法。
[本発明1036]
前記効果的療法が、前記化学療法剤の前記対象への投与を停止すること、または前記対象に投与される前記化学療法剤の投与量を減らすことを含む、本発明1035の方法。
[本発明1037]
前記効果的療法が透析または腎移植である、本発明1034の方法。
[本発明1038]
決定されたレベルの前記化合物を数学モデルで使用して腎機能を評価することをさらに含む、本発明1006〜1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
前記生物試料を分析して、腎機能の評価に関連する1つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルを決定することをさらに含む、本発明1006〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
前記追加のバイオマーカーが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、2−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ6−カルバモイルトレオニルアデノシン、4−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ2，Ｎ2−ジメチルグアノシン、Ｎ1−メチルアデノシン、3−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ6−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、2−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ2，Ｎ5−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、3−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾールからなる群より選択される、本発明1039の方法。
[本発明1041]
前記追加のバイオマーカーが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミン、2−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、キヌレニン、ミオイノシトール、およびクレアチニンからなる群より選択される、本発明1039の方法。
[本発明1042]
前記追加のバイオマーカーが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミンおよびクレアチニンからなる群より選択される、本発明1039の方法。
[本発明1043]
前記生物試料を分析して、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミン、およびクレアチニンのレベルを決定することをさらに含む、本発明1039の方法。
[本発明1044]
腎機能スコアが決定されて腎機能評価に使用される、本発明1006〜1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
ＢＵＮ、血清クレアチニン、尿中アルブミン、β−2ミクログロブリン、β−ＴＲＡＣＥ、および2−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファンからなる群より選択される、腎機能の臨床尺度またはその他の尺度の1つまたは複数を決定することをさらに含む、本発明1006〜1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
対象の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算する方法であって、
（1）前記対象から得た生物試料中の、次式：
（2）前記化合物の前記決定したレベルを利用するアルゴリズムを用いてｅＧＦＲを計算するステップ
を含む方法。
[本発明1047]
前記計算ｅＧＦＲが、前記対象の腎機能を評価するために使用される、本発明1046の方法。
[本発明1048]
前記計算ｅＧＦＲが、前記対象における腎機能低下を発症する素因を判定するために使用される、本発明1046の方法。
[本発明1049]
前記計算ｅＧＦＲが、腎機能のレベルに応じて前記対象を分類するために使用される、本発明1046の方法。
[本発明1050]
前記計算ｅＧＦＲが、前記対象の腎機能をモニターするために使用される、本発明1046の方法。
[本発明1051]
前記計算ｅＧＦＲが、前記対象の慢性腎疾患（ＣＫＤ）または急性腎傷害（ＡＫＩ）を診断するために使用される、本発明1046の方法。
[本発明1052]
前記計算ｅＧＦＲが、ＣＫＤまたはＡＫＩの進行または軽減をモニターするために使用される、本発明1046の方法。
[本発明1053]
前記ｅＧＦＲが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、2−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ6−カルバモイルトレオニルアデノシン、4−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ2，Ｎ2−ジメチルグアノシン、Ｎ1−メチルアデノシン、3−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ6−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、2−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ2，Ｎ5−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、3−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾールから選択される1つまたは複数の追加のバイオマーカーを利用して計算される、本発明1046〜1052のいずれかの方法。
[本発明1054]
前記ｅＧＦＲアルゴリズムが血清シスタチンＣレベルをさらに利用する、本発明1046〜1053のいずれかの方法。
[本発明1055]
前記ｅＧＦＲアルゴリズムが、年齢、性別および人種からなる群より選択される1種または複数の人口統計学的パラメーターをさらに利用する、本発明1046〜1054のいずれかの方法。
[本発明1056]
前記化合物が、次式：
[本発明1057]
前記化合物のレベルが、タンデム型液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）により決定される、本発明1006〜1056のいずれかの方法。
[本発明1058]
前記生物試料が、血液、血漿、血清、唾液または尿である、本発明1006〜1057のいずれかの方法。
[本発明1059]
前記生物試料が血清または血漿である、本発明1058の方法。
[本発明1060]
前記対象がヒトである、本発明1006〜1059のいずれかの方法。
[本発明1061]
前記対象が腎機能障害の症状を有さない、本発明1060の方法。
[本発明1062]
前記対象が、慢性腎疾患の発症に関するリスク因子を示す、本発明1060の方法。
[本発明1063]
前記対象が以前に高血圧と診断されたことがある、本発明1060の方法。
[本発明1064]
前記対象が以前に糖尿病と診断されたことがある、本発明1060の方法。
[本発明1065]
前記対象が慢性腎疾患の家族歴を有する、本発明1060の方法。
[本発明1066]
前記対象が腎機能障害の症状を有する、本発明1060の方法。
[本発明1067]
前記対象が、従来の方法を用いた腎機能評価が困難な対象である、本発明1060の方法。
[本発明1068]
前記対象が、以下からなる群より選択される、本発明1060の方法：肥満である、非常に痩せている、菜食主義である、慢性疾患を有する、および高齢である。
[本発明1069]
前記対象が、腎臓提供者となる予定の候補である、本発明1060の方法。
[本発明1070]
前記対象が、腎臓に対する毒性作用を有し得る薬剤で治療されたことがあるか、または該薬剤による治療について検討中である、本発明1060の方法。
[本発明1071]
前記薬剤がコントラスト造影剤である、本発明1070の方法。
[本発明1072]
前記薬剤が治療薬である、本発明1070の方法。
[本発明1073]
前記薬剤が化学療法剤である、本発明1070の方法。
[本発明1074]
前記薬剤が、抗生物質である、本発明1070の方法。
[本発明1075]
前記対象が、腎機能障害に関する既知のリスク因子を有さない、本発明1060の方法。
[本発明1076]
前記試料が、糸球体濾過量の直接測定を可能にする薬剤による治療の前に前記対象から取得される、本発明1006〜1075のいずれかの方法。
[本発明1077]
次式：
[本発明1078]
次式：
[本発明1079]
次式：
[本発明1080]
次式：
[本発明1081]
次式：
[本発明1082]
次式：
[本発明1083]
次式：
[本発明1084]
前記化合物が、少なくとも60％、70％、80％、90％、95％、99％、99．5％または99．9％の純度である、本発明1077〜1083のいずれかのキット。
[本発明1085]
前記化合物が、次式：
[本発明1086]
前記化合物が、少なくとも60％、70％、80％、90％、95％、99％、99．5％または99．9％の光学純度である、本発明1085のキット。
[本発明1087]
前記化合物が同位体標識されている、本発明1077〜1086のいずれかのキット。
[本発明1088]
前記化合物が重水素化されている、炭素13（13Ｃ）、窒素15（15Ｎ）で標識されている、またはこれらの組み合わせである、本発明1077〜1086のいずれかのキット。
[本発明1089]
前記化合物がＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−13Ｃ3−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリンである、本発明1088のキット。
[本発明1090]
腎機能の評価に関連する1つまたは複数の追加のバイオマーカーをさらに含む、本発明1077〜1089のいずれかのキット。
[本発明1091]
前記追加のバイオマーカーが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、2−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ6−カルバモイルトレオニルアデノシン、4−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ2，Ｎ2−ジメチルグアノシン、Ｎ1−メチルアデノシン、3−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ6−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、2−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ2，Ｎ5−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、3−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾールからなる群より選択される、本発明1090のキット。
[本発明1092]
前記追加のバイオマーカーが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミン、2−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、キヌレニン、ミオイノシトール、およびクレアチニンからなる群より選択される、本発明1091のキット。
[本発明1093]
前記追加のバイオマーカーが、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミンおよびクレアチニンからなる群より選択される、本発明1091のキット。
[本発明1094]
プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミンおよびクレアチニンをさらに含む、本発明1091のキット。
[本発明1095]
次式：
[本発明1096]
前記化合物が、次式：
[本発明1097]
次式：
[本発明1098]
前記化合物が、次式：
[本発明1099]
前記メチル化試薬がヨードメタンである、本発明1095〜1098のいずれかの方法。
[本発明1100]
前記反応が酸化銀の存在下で実施される、本発明1095〜1099のいずれかの方法。
[本発明1101]
前記反応が炭酸カリウムの存在下で実施される、本発明1095〜1099のいずれかの方法。
[本発明1102]
前記反応がメタノールと水の溶媒混合物中で実施される、本発明1095〜1101のいずれかの方法。
[本発明1103]
次式：
[本発明1104]
前記化合物が、次式：
[本発明1105]
本発明1103または1104の抗体のＶＨおよびＶＬ配列を含むポリペプチド。
[本発明1106]
融合タンパク質である、本発明1105のポリペプチド。
[本発明1107]
本発明1103もしくは1104の抗体もしくは抗体断片または本発明1105もしくは1106のポリペプチドを産生する、細胞。
[本発明1108]
本発明1103もしくは1104の抗体もしくはその抗原結合断片または本発明1105もしくは1106のポリペプチドを産生する方法であって、
（1）本発明1107の細胞を培養すること、および
（2）前記抗体もしくはその抗原結合断片またはポリペプチドを前記培養細胞から単離すること
を含む方法。
[本発明1109]
前記細胞が真核細胞である、本発明1108の方法。
[本発明1110]
本発明1103もしく1104の抗体もしくはその抗原結合断片または本発明1105もしくは1106のポリペプチド、および前記対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルを決定するための説明書を含む、キット。
[本発明1111]
本発明1103もしくは1104の抗体もしくはその抗原結合断片または本発明1105もしくは1106のポリペプチド、および前記対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて対象の腎機能を評価またはモニターするための説明書を含む、キット。
[本発明1112]
本発明1103もしくは1104の抗体もしくはその抗原結合断片または本発明1105もしくは1106のポリペプチド、および前記対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて対象における腎機能低下を発症する素因を判定するための説明書を含む、キット。
[本発明1113]
本発明1103もしくは1104の抗体もしくはその抗原結合断片または本発明1105もしくは1106のポリペプチド、および前記対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づく腎機能のレベルに応じて対象を分類するための説明書を含む、キット。
[本発明1114]
本発明1103もしくは1104の抗体もしくはその抗原結合断片または本発明1105もしくは1106のポリペプチド、および前記対象から得た生物試料中で検出した前記化合物のレベルに基づいて対象の慢性腎疾患（ＣＫＤ）を診断またはモニターするための説明書を含む、キット。
【図面の簡単な説明】
【0034】
【図1】ヒト血漿試料中の化合物ＡのＬＣ／ＭＳクロマトグラムおよびスペクトルを示す。
【図2】血漿試料中の化合物Ａの拡張スペクトルを含むプロダクトイオンスペクトル（ＭＳ２）を示す。
【図3】血漿試料中の化合物ＡのＱ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計によるプロダクトイオンスペクトル（ＭＳ２）を示す。
【図4】化合物Ａのｍ／ｚ １４２のＭＳ３スペクトルを示す。
【図5】化合物Ａのｍ／ｚ １７０のＭＳ３スペクトルを示す。
【図6】化合物Ａのｍ／ｚ １１４．０９のＭＳ４スペクトルを示す。
【図7】重水素交換化合物ＡのフルスキャンＭＳスペクトルを示す。
【図8】重水素交換化合物ＡのＭＳ２スペクトルを示す。
【図9】重水素交換化合物Ａのｍ／ｚ １４３のＭＳ３スペクトルを示す。
【図10】血漿試料中の化合物Ａ（上段パネル）、合成ＴＭＡＰ（中段パネル）およびこれらの同時注入（下段パネル）のＬＣ−ＭＳ／ＭＳクロマトグラムを示す。
【図11】血漿試料中の化合物Ａ（左パネル）および合成ＴＭＡＰ（右パネル）のＭＳ２スペクトルを示す。
【図12】血漿試料中の化合物Ａ（左パネル）および合成ＴＭＡＰ（右パネル）の娘イオンｍ／ｚ １４２のＭＳ３スペクトルを示す。
【図13】血漿試料中の化合物Ａ（左パネル）および合成ＴＭＡＰ（右パネル）の娘イオンｍ／ｚ １７０のＭＳ３スペクトルを示す。
【図14】血漿試料中の化合物Ａ（上段パネル）および合成ＴＭＡＰ（下段パネル）の娘イオンｍ／ｚ １１４．０９のＭＳ４スペクトルを示す。
【図15】血漿試料中の化合物Ａ（左パネル）および合成ＴＭＡＰ（右パネル）の重水素交換フルスキャンＭＳスペクトルを示す。
【図16】血漿試料中の化合物Ａ（左パネル）および合成ＴＭＡＰ（右パネル）の重水素交換ＭＳ２スペクトルを示す。
【図17】化合物Ａ（左パネル）および合成ＴＭＡＰ（右パネル）のｍ／ｚ １４３の重水素交換ＭＳ３スペクトルを示す。
【図18A】非標識ＴＭＡＰの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図18B】１３Ｃ標識ＴＭＡＰの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図19A】非標識ＴＭＡＰの質量スペクトルを示す。
【図19B】１３Ｃ標識ＴＭＡＰの質量スペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【0035】
定義別段の指定がない限り、本明細書で使われる場合、下記用語は、以下の通り定義される。
【0036】
本発明の化合物は、塩の形で存在してもよい。任意の好適な有機または無機の塩が本発明に包含される。特定の実施形態では、本発明の化合物の塩は、非毒性の「薬学的に許容可能な塩」を意味する。「薬学的に許容可能な」という語句は、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題や合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触して用いるのに適しており、妥当なベネフィットリスク比に見合っている化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す語句として本明細書で用いられる。
【0037】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な塩」は、親化合物が酸または塩基塩を作製することにより変性されている開示化合物の誘導体を意味する。薬学的に許容可能な塩型は、薬学的に許容可能な酸性／アニオン性塩または塩基性／カチオン性塩を含む。薬学的に許容可能な塩の例には、限定されないが、アミンなどの塩基性残基の鉱物または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩；などが含まれる。
【0038】
例えば、このような塩としては、酢酸塩、アスコルビン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、ベジル酸塩、重炭酸塩、酒石酸水素塩、臭化物、カルシウムエデト酸塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エタンジスルホン酸塩、エストル酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコール酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレソルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、メシル酸塩、臭化メチル塩、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムコン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、パントテン酸塩、フェニル酢酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、スルファミド塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオダイド塩、アンモニウム塩、ベンザチン塩、クロロプロカイン塩、コリン塩、ジエタノールアミン塩、エチレンジアミン塩、メグルミン塩およびプロカイン塩が挙げられる。さらなる薬学的に許容可能な塩は、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛などの金属由来のカチオンと共に形成できる（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓａｌｔｓ，Ｂｉｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，（１９７７），６６，１−１９も参照されたい）。
【0039】
本発明の薬学的に許容可能な塩は、塩基性または酸性部分を含む親化合物から通常の化学的手法により合成できる。一般に、このような塩は、遊離酸または塩基型のこれらの化合物を十分な量の適切な塩基または酸と、水中または、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、もしくはアセトニトリル、またはこれらの混合物などの有機希釈剤中で反応させて調製できる。
【0040】
前述の塩以外の他の酸の塩、例えば、本発明の化合物の精製または単離に有用なもの（例えば、トリフルオロ酢酸塩）も同様に本発明の一部を構成する。
【0041】
本発明の化合物は、異性体に特異的な合成により、または異性体混合物から分離することにより、個々の異性体として調製可能である。従来の分離技術には、光学的に活性な酸を用いて異性体対の各異性体の遊離塩基の塩を形成し（続いて分別結晶化および遊離塩基の再生を行い）、光学的に活性なアミンを用いて異性体対の各異性体の酸型の塩を形成し、（続いて分別結晶化および遊離酸の再生を行い）、光学的に純粋な酸、アミンまたはアルコールを用いて異性体対の各異性体のエステルまたはアミドを形成する（続いてクロマトグラフ分離およびキラル補助基の除去を行う）か、またはよく知られた種々のクロマトグラフ法を用いて出発材料または最終生成物の異性体混合物を分離することが含まれる。
【0042】
開示化合物の立体化学が構造により命名または示される場合、命名または示された立体異性体は、その他の立体異性体に比べて、少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％、９９重量％または９９．９重量％の純度である。単一のエナンチオマーが構造により命名または示される場合、示されたまたは命名されたエナンチオマーは、少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％、９９重量％または９９．９重量％の光学純度である。重量％光学純度は、エナンチオマーの重量＋その光学異性体の重量に対するエナンチオマーの重量の比率である。
【0043】
立体化学を示すことなく、開示化合物が構造により命名または示され、その化合物が少なくとも１つのキラル中心を有する場合、名称または構造は、対応する光学異性体を含まない１つのエナンチオマー、化合物のラセミ混合物および対応する光学異性体に比べて１種のエナンチオマーが濃縮された混合物を包含することを理解されたい。
【0044】
立体化学を示すことなく、開示化合物が構造により命名または示され、少なくとも２つのキラル中心を有する場合、名称または構造は他のジアステレオマーを含まないジアステレオマー、他のジアステレオマー対を含まない１対のジアステレオマー、ジアステレオマーの混合物、ジアステレオマー対の混合物、他のジアステレオマー（単一または複数）に比べて１つのジアステレオマーが濃縮されたジアステレオマーの混合物および他のジアステレオマー対（単一または複数）に比べて１つのジアステレオマー対が濃縮されたジアステレオマー対の混合物を包含することを理解されたい。
【0045】
１つまたは複数の立体中心を有する化合物が、少なくとも１つの立体中心に対して特定の立体化学で示される場合、本発明はまた、対応する立体中心（単一または複数）に逆立体化学を有する化合物および対応する立体中心（単一または複数）に特定の立体化学を有さない化合物も含む。
【0046】
状態または疾患を「治療すること」は、その状態または疾患の少なくとも１つの症状を治癒ならびに回復させることを意味する。
【0047】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意の動物を意味するが、好ましくは、哺乳動物、例えば、ヒト、サル、非ヒト霊長類、ラット、マウス、雌ウシ、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、またはウサギなどである。さらにより好ましくは、対象はヒトである。
【0048】
本明細書で使用される場合、「有効量」は、対象において目的の生物学的応答を誘発する活性な配合剤の量を意味する。このような応答には、治療される疾患または障害の症状の軽減が含まれる。このような治療方法での本発明の化合物の有効量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／日または約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【0049】
本明細書で使用される場合、「糖尿病」は、インスリン分泌または作用、または両方の不足に起因する高血糖（グルコース）値を特徴とする一連の代謝疾患を意味する。
【0050】
本明細書で使用される場合、「２型糖尿病」は、２つの主要な糖尿病の種類の内の１つで、膵臓のベータ細胞は、少なくともこの疾患の初期段階ではインスリンを産生するが、身体の細胞がインスリンの作用に対して抵抗性であるために、身体がそれを効果的に使用できない種類である。この疾患の後期では、ベータ細胞はインスリン産生を停止する場合がある。２型糖尿病はインスリン抵抗性糖尿病、インスリン非依存性糖尿病および成人発症型糖尿病としても知られる。
【0051】
本明細書で使用される場合、「バイオマーカー」という用語は、第１の表現型を有する（例えば、疾患を有する）対象または対象群からの生物試料中に、第２の表現型を有する（例えば、疾患を有してない）対象または対象群からの生物試料と比較して、示差的に存在する（すなわち、増加または減少した）化合物、好ましくは、代謝物を意味する。バイオマーカーは、任意のレベルで示差的に存在し得るが、一般的には、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、少なくとも１５０％、もしくはそれ以上増加したレベルで存在するか、または一般的には、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは１００％（すなわち、存在しない）減少したレベルで存在する。バイオマーカーは、好ましくは、統計的に有意なレベル（例えば、ウェルチのＴ検定またはウィルコクソンの順位和検定のいずれかを用いて決定したとき、０．０５未満のｐ値および／または０．１０未満のｑ値）で示差的に存在する。あるいは、バイオマーカーは、腎機能との相関を示す。可能な相関の範囲は、負（−）１と正（＋）１との間である。負（−）１の結果は、完全な負の相関を意味し、正（＋）１の結果は、完全な正の相関を意味し、０は相関が全くないことを意味する。「実質的に正の相関」は、障害または臨床的測定値（例えば、ｍＧＦＲ）と＋０．２５〜＋１．０の相関を有するバイオマーカーを意味し、一方、「実質的に負の相関」は、所定の障害または臨床的測定値と−０．２５〜−１．０の相関を有するバイオマーカーを意味する。「実質的に正の相関」は、所定の障害または臨床的測定値（例えば、ｍＧＦＲ）と＋０．５〜＋１．０の相関を有するバイオマーカーを意味し、一方、「実質的に負の相関」は、所定の障害または臨床的測定値と−０．５〜−１．０の障害の相関を有するバイオマーカーを意味する。
【0052】
本発明の化合物または１つまたは複数の追加のバイオマーカーの「レベル」とは、試料で測定されたバイオマーカーの絶対的または相対的な量または濃度を意味する。
【0053】
「試料」または「生物試料」とは、対象から単離された生体物質を意味する。生物試料は、目的のバイオマーカーを検出するのに好適な任意の生体物質を含有し得、また、対象からの細胞および／または非細胞物質を含み得る。試料は、任意の好適な生体組織または体液、例えば、腎臓組織、血液、血漿、血清、尿、唾液、または脳脊髄液（ＣＳＦ）などから単離可能である。生物試料は血液、血漿、血清、唾液または尿であるのが好ましい。別の好ましい実施形態では、生物試料は血清または血漿である。
【0054】
「基準レベル」とは、特定の疾患状態、表現型、またはそれらの欠如、ならびに疾患状態、表現型、またはそれらの欠如の組合せを示す本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）のレベルを意味する。「基準レベル」は、本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）の絶対的または相対的な量または濃度、本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）の存在または不在、本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）の量または濃度の範囲、本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）の最小および／または最大の量または濃度、本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）の平均の量または濃度、および／または本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）のメジアンの量または濃度であり得、さらに、本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）の組合せの「基準レベル」もまた、２つ以上のバイオマーカーの絶対的または相対的な量または濃度の相互に対する比であり得る。特定の疾患状態、表現型、またはそれらの欠如に対する本発明の化合物または追加のバイオマーカー（単一または複数）の適切な基準レベルは、１体または複数の適切な対象中の本発明の化合物または目的のバイオマーカーのレベルを測定することにより決定され得、また、そのような基準レベルは、特定の対象集団に合わせて調整され得る（例えば、特定の年齢の対象由来の試料中のバイオマーカーレベルと、特定の年齢群の特定の疾患状態、表現型、またはそれらの欠如に対する基準レベルと、の間で比較が行えるように、基準レベルは、年齢を一致させ得る）。「陽性」基準レベルとは、特定の疾患状態または表現型を示すレベルを意味する。「陰性」基準レベルとは、特定の疾患状態または表現型の欠如を示すレベルを意味する。例えば、「ＣＫＤ陽性基準レベル」とは、対象においてＣＫＤの陽性診断を示す本発明の化合物または追加のバイオマーカーのレベルを意味し、「ＣＫＤ陰性基準レベル」とは、対象においてＣＫＤの陰性診断（すなわち、正常腎機能、ＣＫＤの不在）を示す本発明の化合物または追加のバイオマーカーのレベルを意味する。同様に、「腎機能基準レベル」とは、対象に存在する腎機能の程度を示すものであり得る。例えば、「正常腎機能基準レベル」とは、対象において正常腎機能を示す本発明の化合物または追加のバイオマーカーのレベルを意味し、「中程度低下の腎機能基準レベル」とは、中程度の腎機能低下を示す本発明の化合物または追加のバイオマーカーのレベルを意味し、バイオマーカーの「重度低下の腎機能基準レベル」とは、対象において重度の腎機能低下を示す本発明の化合物または追加のバイオマーカーのレベルを意味する。
【0055】
本明細書で使用される場合、「基準試料」は、基準レベルのバイオマーカーを含む試料を意味する。例えば、基準試料は、ＣＫＤまたは急性腎傷害などの特定の疾患、病態または表現型を有さない対象から得ることができる。
【0056】
「非バイオマーカー化合物」とは、第１の表現型を有する（例えば、第１の疾患を有する）対象または対象群由来の生物試料中に、第２の表現型を有する（例えば、第１の疾患を有していない）対象または対象群からの生物試料と比較して、示差的に存在しない化合物を意味する。しかしながら、そのような非バイオマーカー化合物は、第１の表現型（例えば、第１の疾患を有する）または第２の表現型（例えば、第１の疾患を有していない）と比較して、第３の表現型を有する（例えば、第２の疾患を有する）対象または対象群由来の生物試料中のバイオマーカーであり得る。
【0057】
本明細書で使用される場合、「代謝物」または「小分子」という用語は、細胞中に存在する有機および無機の分子を意味する。この用語は、大きなタンパク質（例えば、２，０００，３，０００、４，０００，５，０００、６，０００，７，０００、８，０００，９，０００、または１０，０００を超える分子量を有するタンパク質）、大きな核酸（例えば、２，０００、３，０００，４，０００、５，０００，６，０００、７，０００，８，０００、９，０００、または１０，０００を超える分子量を有する核酸）、大きな多糖（例えば、２，０００、３，０００，４，０００、５，０００，６，０００、７，０００，８，０００、９，０００、または１０，０００を超える分子量を有する多糖）などの大きな高分子を含まない。細胞の小分子は、一般的には、細胞質または他のオルガネラ、例えば、ミトコンドリアの溶液中に遊離状態で見出され、そこでは、さらに代謝可能なまたは高分子と呼ばれる大分子の生成に使用可能な中間体のプールを形成する。「小分子」という用語は、シグナル伝達分子および食料に由来するエネルギーを使用可能な形態に変換する化学反応の中間体を含む。小分子の例としては、糖、脂肪酸、アミノ酸、ヌクレオチド、細胞プロセスで形成される中間体、および細胞内に見いだされる他の小分子が挙げられる。
【0058】
「糸球体濾過量」または「ＧＦＲ」とは、単位時間あたり腎糸球体毛細血管からボーマン嚢内に濾過される体液の体積である。ＧＦＲは、腎機能の尺度であり、特定の閾値以上のＧＦＲは、正常腎機能の指標となり、閾値未満のＧＦＲは、腎機能が損なわれているか障害されていることを示す。一般的には、高いＧＦＲ値は、より良好な腎機能の指標となり、一方、低いＧＦＲは、腎機能障害（例えば、慢性腎疾患、急性腎傷害）を示す。
【0059】
「測定糸球体濾過量」または「ｍＧＦＲ」は、イヌリン、イオタラメートまたはイオヘキソールなどの濾過マーカーを用いて決定された実際の糸球体濾過量を意味する。ｍＧＦＲは臨床現場で実施され、腎機能の最も正確な測定値である。
【0060】
「推定糸球体濾過量」または「ｅＧＦＲ」は、実際の糸球体濾過量の計算推定量を意味する。計算値は、１つまたは複数のバイオマーカーのレベルをベースにしてよく、人口統計学的情報（例えば、年齢、性別）などの他の変数を含んでもよい。ｅＧＦＲを計算するための１つの現行法は、血清クレアチニン濃度をベースにしている。ｅＧＦＲを計算するためのその他の現行法は、シスタチンＣの量を、単独でまたは血清クレアチニン量と組み合わせて使用する。一般的には、低いｅＧＦＲ値は、腎機能低下に関連付けられる。
【0061】
「ＳｒＣｒ ｅＧＦＲ」または「ｅＧＦＲｓｃｒ、ｅＧＦＲｃｒ」は、血清クレアチニンレベルをベースにしたｅＧＦＲ推定値を意味する。
【0062】
「ＣＫＤ−ＥＰＩ」または「慢性腎疾患疫学コラボレーション」は、ｅＧＦＲを計算するために導出された２つの式である。１つの式は、次の通りである。ＣＫＤ−ＥＰＩｃｒ ＧＦＲ＝１４１ ｘ ｍｉｎ（ＳＣｒ／κ，ｌ）α Ｘ ｍａｘ（ＳＣｒ／κ，ｌ）−１．２０９ ｘ ０．９９３年齢 ｘ １．０１８［女性の場合］ ｘ １．１５９［黒人の場合］；式中、ＳＣｒは血清クレアチニン（ｍｇ／ｄＬ）、κは０．７（女性）および０．９（男性）、αは−０．３２９（女性）および−０．４１１（男性）、ｍｉｎは、ＳＣｒ／κまたは１の内の最小値を示し、ｍａｘは、ＳＣｒ／κまたは１の内の最大値を示す。二つ目の式（ＣＫＤ−ＥＰＩｃｒｃｙｓ ｅＧＦＲ）は、ＳＣｒ量および人口統計学的変数に加えて、シスタチンＣの量を含む。
【0063】
「ＭＤＲＤ」または「成人患者用の腎臓病への蛋白制限と血圧管理の効果を調べた米国の無作為化比較試験ｅＧＦＲ」は、ｅＧＦＲを計算するための別の式である。式は、次のとおりである。ＭＤＲＤｃｒ ｅＧＦＲ＝１８６ ｘ （Ｓｃｒ）−１．１５４ ｘ （年齢）−０．２０３ ｘ （０．７４２、女性の場合） ｘ （１．２１２、黒人の場合）；式中、Ｓｃｒは、血清クレアチニン（ｍｇ／ｄＬ）である。現在では、ＭＤＲＤｃｒ ｅＧＦＲは通常、ｅＧＦＲを計算するための標準治療法と見なされている。
【0064】
「尿中アルブミン」とは、尿中のアルブミン量を測定する検査のことであり、腎疾患を検出するためにも使用される。
【0065】
「血清クレアチニン」または「ＳＣｒ」とは、血清中のクレアチニンの測定値を意味し、通常、ＧＦＲを推定するために使用される。
【0066】
「血中尿素窒素」または「ＢＵＮ」とは、尿素の形態の血中窒素量の測定値を意味する。ＢＵＮは、腎機能を測定するために使用される検査である。
【0067】
「慢性腎疾患」または「ＣＫＤ」は、腎臓に損傷を与えて生体から老廃物を除去する腎臓の能力を低下させる結果として、体内に高レベルの老廃物を生成し、疾病および高血圧、貧血、栄養健康不良、神経損傷などの合併症の発症のリスクの増加に繋がる状態を含む。少なくとも３ヶ月間にわたり腎機能の異常を有する患者は、ＣＫＤと診断され得る。ＣＫＤに起因する腎障害は、永続的である。
【0068】
「急性腎傷害」または「ＡＫＩ」とは、腎機能の急速な低下を生じる状態を意味する。ＡＫＩに起因する腎障害は、可逆的であり得る。
【0069】
「慢性腎疾患ステージ」または「ＣＫＤステージ」とは、測定または推定の糸球体濾過量（ｍＧＦＲ、ｅＧＦＲ）を用いて現在評価される腎障害の程度を意味する。臨床的には、ＣＫＤの５つのステージが一般に認知されており、ステージ１（ＧＦＲ＞９０）は正常、ステージ２（ＧＦＲ６０〜８９）は最小低下、ステージ３Ａおよび３Ｂ（ＧＦＲ３０〜５９）は中程度低下、ステージ４（ＧＦＲ１５〜２９）は重度低下、ステージ５（ＧＦＲ＜１５または透析導入）は確定腎不全とも呼ばれるかなり重度または末期の腎不全とみなされる腎機能である。腎機能ステージは、任意の期間にわたり存在する腎障害（すなわち、ＡＫＩまたはＣＫＤに起因する腎障害）を意味するように使用され得る。
【0070】
本発明は、以下の詳細説明と、本発明の非限定的実施形態を例示することを意図した実施例とを参照することによりさらに完全に理解され得る。
【0071】
化合物および組成物本発明は、新規化合物、組成物ならびに診断方法および治療方法におけるそれらの使用を提供する。
【0072】
第１の実施形態では、本発明は、次式：【0073】
特定の実施形態では、第１の実施形態の式（Ｉ）の化合物は、次式：【0074】
一実施形態では、式（ＩＩ）の化合物またはその塩は、少なくとも６０％の光学純度、少なくとも７０％の光学純度、少なくとも８０％の光学純度、少なくとも９０％の光学純度、少なくとも９５％の光学純度、または少なくとも９９％の光学純度であり得る。
【0075】
種々の実施形態では、本明細書に記載の本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物またはその塩）は、不純物を実質的に含まない。
【0076】
種々の実施形態では、本明細書に記載の本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物またはその塩）は、少なくとも６０％の純度、少なくとも７０％の純度、少なくとも８０％の純度、少なくとも９０％の純度、少なくとも９５％の純度、または少なくとも９９％の純度であり得る。
【0077】
特定の実施形態では、本明細書に記載の本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物またはその塩）は、同位体標識される。一実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩は、トリチウム（３Ｈ）または炭素１４（１４Ｃ）などで放射標識される。別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩は、重水素、炭素１３（１３Ｃ）、または窒素１５（１５Ｎ）、またはこれらの組み合わせで標識される。本発明の化合物の同位体標識のために任意に好適な方法を採用できる。
【0078】
本明細書で使用される場合、本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物またはその塩）は、同位体標識される場合、同位体標識を保持する位置は、天然の存在量よりも、少なくとも１０倍、５０倍、１００倍、または１０００倍高い存在量で指定同位体を有することを意味する。例えば、本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物またはその塩）が炭素１３（１３Ｃ）で標識される場合、１３Ｃ標識を保持する位置は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％のその位置での１３Ｃの組み込みを有する。同様に、本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物またはその塩）が重水素で標識される場合、重水素を保持する位置は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％のその位置での重水素の組み込みを有する。
【0079】
式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩（例えば、薬学的に許容可能なそれらの塩）などの上記化合物は、本明細書記載の方法のいずれかで使用できる。例えば、本発明の化合物は、対象の腎機能を評価するために、対象の糸球体濾過量の推定値を計算するために、対象をモニターして腎機能の変化（例えば、急性腎傷害または初期ＣＫＤを示し得る機能の低下）を検出するために、腎機能の程度（例えば、正常、軽度低下、中程度低下、重度低下、末期腎不全）に従って対象を分類するために、およびＣＫＤと診断されていない対照対象に対してＣＫＤを有する対象を区別するために、使用され得る。さらに、化合物は、経時的にまたは薬剤治療、疾患（例えば、２型糖尿病）、もしくは生活習慣介入（例えば、食事、運動）に対する反応で腎機能の変化をモニターするために、ならびに薬物療法および／または腎移植に好適な候補として対象を特定または除外するために、使用され得る。
【0080】
本明細書に記載の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩（例えば、薬学的に許容可能なそれらの塩））に特異的に結合する抗体または抗体断片も同様に本発明に含まれる。小分子に特異的に結合する抗体を生成する方法は、当技術分野において既知である。抗体誘導体、例えば、上記抗体のＶＨおよびＶＬ配列を含むポリペプチドも含まれる。特定の実施形態では、ポリペプチドは融合タンパク質である。本発明はまた、抗体または抗体断片および本明細書に記載の抗体誘導体を産生する細胞も含む。一実施形態では、細胞は、真核細胞である。
【0081】
方法第２の実施形態では、本発明は、対象における本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）のレベルを決定する方法を提供し、該方法は、（１）対象から生物試料得ること、および（２）化合物のレベルを決定すること、を含む。
【0082】
試料中の本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）のレベルを決定するために、任意の好適な方法を用いて生物試料を分析し得る。好適な方法としては、クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー）、質量分析（例えば、ＭＳ、ＭＳ−ＭＳ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的技術、およびこれらの組合せが挙げられる。
【0083】
一実施例では、生物試料は、質量分析の前に液体クロマトグラフィー（ＬＣ）に供せされ得る。ＬＣ法としては、例えば、超高速ＬＣ（ＵＨＰＬＣまたはＵＰＬＣ）が挙げられる。いくつかの実施例では、ＵＰＬＣは、逆相カラムクロマトグラフシステム、親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、または混合相カラムクロマトグラフシステム（ｍｉｘｅｄ ｐｈａｓｅ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｙｓｔｅｍ）を用いて行い得る。
【0084】
質量分析は、さらなる分析用の分画試料のイオン化および荷電分子生成のためのイオンソースを含む質量分析計を用いて実施される。試料のイオン化は、例えば、加熱エレクトロスプレーイオン化（ＨＥＳＩ−ＩＩ）によって実施し得る。試料はポジティブまたはネガティブモードでイオン化し得る。
【0085】
試料をイオン化後、正または負に荷電したイオンを分析し、質量電荷比を決定してもよい。質量電荷比を決定するために好適する代表的分析計には、四重極分析計、イオントラップ分析計、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）分析計、および飛行時間分析計が挙げられる。
【0086】
分析結果は、タンデム型ＭＳにより生成されたデータを含み得る。いくつかの実施例では、タンデム型ＭＳは、精密質量タンデムＭＳであり得る。例えば、精密質量タンデム質量分析は、四重極飛行時間（Ｑ−ＴＯＦ）分析計を使用し得る。その他の実施例では、タンデムＭＳは、ＦＴＭＳであり得る。タンデムＭＳは、錯体混合物中の化学成分の親−娘関連性を表すデータ構造を生成可能とする。この関連性は、親イオンと娘イオンの相互の関連性を示す樹状構造により表し得、娘イオンは親イオンのサブコンポーネントである。
【0087】
さらに、本発明の化合物のレベルは、例えば、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて測定が望まれる本発明の化合物のレベルと相関する化合物（または複数の化合物）のレベルを測定するアッセイを用いることにより、間接的に測定し得る。
【0088】
第３の実施形態では、本発明の化合物は、対象において腎機能の評価（または評価支援）を行うために使用可能である。本発明の化合物は、任意の対象を評価するために使用することができ、これらの評価には、無症状の対象において、症状の存在またはリスク因子（例えば、高血圧、糖尿病、ＣＫＤ家族歴、特定の化学／環境条件への暴露など）に起因してＣＫＤまたはＡＫＩのリスクのある対象において、および組成物または治療的介入（例えば、腎移植、生活習慣改善）に反応する対象において、腎機能を評価することが含まれることは理解されよう。対象は、１種または複数の腎機能の評価を受け得ることがさらに理解されよう。
【0089】
代表的方法では、対象の腎機能の評価は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）：【0090】
このような方法を用いて腎機能の評価支援を行う場合、その方法の結果は、対象が正常腎機能を有するか障害のある腎機能（急性腎傷害（ＡＫＩ）またはＣＫＤから生じ得る）を有するか、さらには腎機能レベル（例えば、正常、軽度障害、中程度障害、重度障害、末期腎不全）の臨床判断に有用な他の方法（またはその結果）および／または患者メタデータと一緒に使用され得る。
【0091】
特定の実施形態では、潜在的腎提供者である対象における腎機能の正確な評価は、潜在的提供者が腎臓の提供に適しているかを医師が決定するのを支援するであろう。
【0092】
第４の実施形態では、本発明の化合物は、対象における腎機能低下を発症する素因を判定する方法に使用できる。一実施形態では、該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の化合物の上昇したレベルが、対象における腎機能低下を発症する素因の指標となる。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0093】
第５の実施形態では、本発明の化合物は、腎機能のレベル（例えば、正常、軽度低下、中程度低下、重度低下、末期腎不全）に応じて対象を分類する方法に使用できる。一実施形態では、該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の化合物のレベルが、腎機能のレベルに応じて対象を分類するために使用される。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0094】
第６の実施形態では、本発明の化合物は、対象の腎機能のモニターする方法に使用できる。一実施形態では、該方法は、（１）第１の時点で対象から得た第１の生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定すること、および（２）第２の時点で対象から得た第２の生物試料中の該化合物またはその塩のレベルを決定すること、を含み、第２の時点は第１の時点より後であり、第２の生物試料中の該化合物のレベルの、第１の生物試料中のレベルからの変化が、腎機能の変化の指標となる。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0095】
化合物のレベルの経時的変化（もしあれば）（すなわち、第１の時点での対象からの第１の試料を、第２の時点で対象から得た第２の試料と比較して）は、患者における腎機能の経時的変化の指標となり得る。対象の腎機能を経時的に特徴付けるために、第１の試料中の化合物のレベル、第２の試料中の化合物のレベル、および／または第１および第２の試料中の化合物のレベルの比較の結果を、化合物の基準レベルと比較し得る。化合物のレベルが経時的に増加または減少して（例えば、第２の試料を第１の試料と比較して）、低い腎機能基準レベルにより類似してくる（または高い腎機能基準レベルへの類似が小さくなる）ことが比較から示される場合、その結果は、腎機能低下の指標となる。化合物のレベルが経時的に増加または減少して、高い腎機能基準レベルにより類似してくる（または低い腎機能基準レベルへの類似が小さくなる）ことが比較から示される場合、その結果は、正常腎機能の指標となる。例えば、対象は、第１の時点で正常腎機能を有し得るとともに（例えば、化合物のレベルは、高い腎機能基準レベルに類似しているかまたは低い腎機能基準レベルに類似していない）、第２の時点で正常な範囲内を維持することから（例えば、高い腎機能基準レベルに類似しているかまたは低い腎機能基準レベルに類似していない状態を維持することから）、腎機能の変化がないことが示される。別の例では、腎機能は、第１の時点で正常であり得るとともに（例えば、化合物のレベルは、高い腎機能基準レベルに類似しているかまたは低い腎機能基準レベルに類似していない）、その後、第２の時点で減少するが、それでもなお腎機能の正常な範囲内を維持することから、依然として正常な範囲内にあるが、腎機能が低下していることが示される。別の例では、第１の時点で正常とのボーダーライン上にある腎機能を有する対象は、第２の時点でバイオマーカーのレベルに基づいてＣＫＤと診断され得、対象において腎機能が悪化していることが示される。
【0096】
また、化合物の相対量と基準レベルとの間の差を用いて、経時的に腎機能を評価し得る。例えば、化合物のレベルと高い腎機能基準レベルとの間の差（または化合物のレベルと低い腎機能基準レベルとの間の差）が経時的に大きくなることが比較から示される場合、その結果は、患者が腎機能低下を発症していることを示す。
【0097】
第１の試料を得た後、より後の時点で１つまたは複数の追加の試料を対象から取得し得る。一態様では、１つまたは複数の追加の試料は、第１の試料の１、２、３、４、５、６日後、またはそれよりも後で取得される。他の態様では、１つまたは複数の試料は、第１の試料のまたは組成物による治療開始の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週間後、またはそれよりも後で取得される。別の態様では、１つまたは複数の追加の試料は、第１の試料のまたは組成物による治療開始の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月後、またはそれよりも後で取得され得る。
【0098】
特定の実施形態では、化合物のレベルを用いて、腎移植患者の腎機能をモニターし得る。
【0099】
第７の実施形態では、本発明の化合物は、対象の慢性腎疾患（ＣＫＤ）の診断または診断の支援方法に使用できる。本発明の化合物を、無症状の対象、ＣＫＤの存在に合致する１つまたは複数の症状を呈する対象、および／またはＣＫＤである可能性の高い対象（例えば、慢性疾病者、薬剤治療者、コントラスト造影剤使用者など）を含む、任意の対象において、ＣＫＤの診断または診断支援方法に使用可能であることを理解されたい。一実施形態では、該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の化合物の上昇したレベルが、慢性腎疾患の指標となる。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0100】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、腎機能を決定するための現在の標準（例えば、ＳＣｒ、ＭＤＲＤｃｒ−ｅＧＦＲ、ＣＫＤ−ＥＰＩｃｒ−ｅＧＦＲ、シスタチンＣ、尿中アルブミン、および／またはＢＵＮの測定値）を用いてＣＫＤが診断され得る前に、腎機能の評価（または評価支援）を行って初期ＣＫＤを検出することを可能にする。臨床測定は、腎機能の初期変化を検出するのに十分な感度を有していない場合があり、または例えば、慢性疾病、肥満症、高齢、菜食、および／もしくは一般的筋量減少に起因して、特定の対象において不正確な場合もある。例えば、２型糖尿病の対象において、本明細書の化合物を用いて、ＣＫＤの診断または診断支援を行い得る。ＣＫＤの正確で早期の診断により、さらなる腎障害およびより重度のＣＫＤの発症を遅延または予防し得るより早期の治療的介入が可能になり得る。
【0101】
特定の実施形態では、試料中の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および場合により１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルを決定した後、レベルをＣＫＤ陽性および／またはＣＫＤ陰性基準レベルと比較して、対象がＣＫＤを有するかの診断または診断支援を行う。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および場合により１つまたは複数の追加のバイオマーカー基準レベルのレベル（例えば、基準レベルと同じレベル、基準レベルと実質的に同じレベル、基準レベルの最小および／または最大をわずかに上回るおよび／または下回るレベル、および／または基準レベルの範囲内のレベル）は、対象におけるＣＫＤの診断の指標となる。ＣＫＤ陰性基準レベルに一致する試料中の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および場合により１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベル（例えば、基準レベルと同じレベル、基準レベルと実質的に同じレベル、基準レベルの最小および／または最大をわずかに上回るおよび／または下回るレベル、および／または基準レベルの範囲内のレベル）は、対象がＣＫＤではないという診断の指標となる。加えて、ＣＫＤ陰性基準レベルと比較して、試料中に示差的に存在する（とくに統計的に有意なレベルで）式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および場合により１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルは、対象がＣＫＤであるという診断の指標となる。ＣＫＤ陽性基準レベルと比較して、試料中に示差的に存在する（とくに統計的に有意なレベルで）式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および場合により１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルは、対象がＣＫＤでないという診断の指標となる。
【0102】
式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および場合により１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルは、ＣＫＤ陽性および場合によりＣＫＤ陰性基準レベルに対する生物試料中の１つまたは複数のバイオマーカーのレベルの単純比較（例えば、マニュアル比較）を含む種々の技術を用いて、ＣＫＤ陽性および／またはＣＫＤ陰性基準レベルと比較し得る。また、１種または複数の統計解析（例えば、ｔ検定、ウェルチのＴ検定、ウィルコクソンの順位和検定、相関分析、ランダムフォレスト、Ｔスコア、Ｚスコア）を用いて、または数学モデル（例えば、アルゴリズム、統計モデル）を用いて、生物試料中の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および／または１つまたは複数のバイオマーカーのレベルをＣＫＤ陽性および／またはＣＫＤ陰性基準レベルと比較し得る。
【0103】
例えば、単一のアルゴリズムまたは複数のアルゴリズムを含む数学モデルを用いて、対象における腎機能を評価し得る。数学モデルを用いて、推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算し得る。また、数学モデルを用いて、対象がＣＫＤを有するかを決定し得る。また、数学モデルを用いて、ＣＫＤステージ間を区別し得る。例示的な数学モデルにより、対象由来の本発明の化合物および／または任意の数（例えば、２、３、５、７、９個など）の腎機能の評価に関連する追加のバイオマーカーの測定レベルを用いて、バイオマーカーの測定レベル間の数学的関係に基づいてアルゴリズムまたは一連のアルゴリズムを使用し、対象が正常腎機能またはＣＫＤを有するか、対象がＣＫＤを発症する素因を有するか、対象においてＣＫＤが進行しているか、対象が高いステージ（重度もしくはきわめて重度の腎機能低下）、中間のステージ（中程度の機能低下）、または低いステージ（軽度の機能低下）のＣＫＤを有するかなど、を決定し得る。さまざまな例示的な数学モデルにより、対象由来の本発明の化合物および／または任意の数（例えば、２、３、５、７、９個など）の追加のバイオマーカーの測定レベルを用いて、腎機能のレベルまたはステージ（例えば、高、中、低）に基づいて対象を分類し得る。一実施例では、ＧＦＲを推定するために生成された数学モデルは、腎機能を評価するため、腎機能をモニターするため、対象がＣＫＤもしくはＡＫＩを有するかどうかを判定するため、ＣＫＤステージを区別するため、および／またはＣＫＤもしくはＡＫＩの素因を判定するために使用される。
【0104】
特定の実施形態では、本発明の方法は、以前にＣＫＤと診断されていない対象においてＣＫＤの診断を可能とする。例えば、ＣＫＤに関するリスク因子（例えば、６０歳を超える年齢、高血圧、糖尿病、心血管疾患、および／またはＣＫＤの家族歴など）を有する対象において、本明細書に記載のバイオマーカーを用いて、ＣＫＤの診断または診断支援を行い得る。
【0105】
特定の実施形態では、本発明の方法は、腎機能を決定するための現在の標準（例えば、ＳＣｒ、ＭＤＲＤｃｒ−ｅＧＦＲ、ＣＫＤ−ＥＰＩｃｒ−ｅＧＦＲ、ＣＫＤ−ＥＰＩｃｒｃｙｓ、尿中アルブミン、シスタチンＣ、および／またはＢＵＮの測定値）を用いてＣＫＤが診断され得る前に、早期検出および診断を可能とする。ＣＫＤの早期診断は、さらなる腎障害およびより重度のＣＫＤの発症を遅延または予防し得るより早期の治療的介入を可能にし得る。
【0106】
特定の実施形態では、対象のＣＫＤを決定するための現在の標準（例えば、ＳＣｒ、ＭＤＲＤｃｒ−ｅＧＦＲ、ＣＫＤ−ＥＰＩｃｒ−ｅＧＦＲ、ＣＫＤ−ＥＰＩｃｒｃｙｓ、尿中アルブミン、シスタチンＣ、および／またはＢＵＮの測定値）が、例えば、対象の慢性疾病、肥満症、高齢、菜食、および／または一般的筋量減少が原因で不正確である場合、本発明の方法を用いて、患者のＣＫＤの診断または診断支援を行い得る。例えば、２型糖尿病を有する対象に対し、本明細書に記載のバイオマーカーを用いて、ＣＫＤの診断または診断支援を行い得る。
【0107】
上記方法を用いてＣＫＤの診断支援を行う場合、本方法の結果は、対象がＣＫＤを有するかの臨床判断に有用な他の方法および測定（またはそれらの結果）および／または患者メタデータと一緒に使用され得る。対象がＣＫＤを有するかの臨床判断に有用な方法は、当技術分野で既知である。例えば、対象がＣＫＤを有するかの臨床判断に有用な方法は、例えば、ＳＣｒ、ＢＵＮ、ｅＧＦＲ、ｍＧＦＲ、尿中アルブミン、およびシスタチンＣを含む。対象がＣＫＤを有するかの決定に有用な他の測定は、例えば、β−２ミクログロブリン、β−ＴＲＡＣＥ、および／または２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファンを含む。対象がＣＫＤを有するかの臨床判断に有用な患者メタデータとしては、例えば、年齢、体重、性別、および人種が挙げられる。
【0108】
第８の実施形態では、本発明の化合物は、対象の慢性腎疾患（ＣＫＤ）の進行または軽減をモニターするための方法に使用できる。一実施形態では、該方法は、（１）第１の時点で対象から得た第１の生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定すること、および（２）第２の時点で対象から得た第２の生物試料中の該化合物またはその塩のレベルを決定すること、を含み、第２の時点は第１の時点より後であり、第２の生物試料中の該化合物のレベルの、第１の生物試料中のレベルからの変化が、対象の前記疾患の進行または軽減の指標となる。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0109】
第９の実施形態では、本発明の化合物は、対象の急性腎傷害（ＡＫＩ）の診断または診断の支援方法に使用できる。該方法は、対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定することを含み、基準レベルと比較した、生物試料中の該化合物の上昇したレベルが、ＡＫＩの指標となる。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0110】
第１０の実施形態では、本発明の化合物は、対象のＡＫＩの進行または軽減をモニターするための方法に使用できる。一実施形態では、該方法は、（１）第１の時点で対象から得た第１の生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定すること、および（２）第２の時点で対象から得た第２の生物試料中の該化合物またはその塩のレベルを決定すること、を含み、第２の時点は第１の時点より後であり、第２の生物試料中の該化合物のレベルの、第１の生物試料中のレベルからの変化が、対象の前記疾患の進行または軽減の指標となる。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0111】
第１１の実施形態では、本発明の化合物は、組成物または治療的介入（例えば、腎移植、生活習慣改善）に反応した対象の腎機能の評価方法に使用できる。一実施形態では、該方法は、組成物または治療的介入で治療した対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定することを含み、その組成物または治療的介入による治療のない対象中の化合物のレベルと比較した、生物試料中の該化合物の上昇したレベルが、腎機能低下の指標となる。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0112】
組成物は、任意の疾患または状態を治療するために対象に投与される任意の組成物、薬剤、または治療薬であり得る。さらに、組成物は、疾患または状態を有する患者に投与される任意の組成物であり得る。一実施形態では、組成物はコントラスト造影剤である。別の実施形態では、組成物は治療薬、例えば、化学療法剤である。別の実施形態では、組成物は抗生物質である。
【0113】
特定の実施形態では、第１１の実施形態で記載の方法は、腎機能を変える組成物に対する対象の反応の評価、ならびに腎機能を変える２種以上の組成物に対する相対的な患者の反応の評価を可能にする。このような評価は、例えば、特定の対象に対して癌を治療するための組成物の選択、または一連の治療もしくは臨床試験への組入れに対する対象の選択のために使用し得る。このような評価はまた、薬剤開発プロセスの前に、その全体を通して、および／またはその後に（すなわち、実行後に）、組成物に対する反応で腎機能をモニターするために使用し得る。
【0114】
特定の実施形態では、本発明の方法は、コントラスト造影剤が毒性である場合があり、その結果として、腎傷害を引き起こすことがある場合、造影剤を用いて画像検査を受けている患者において、腎機能の評価（または評価支援）を可能にする。例えば、腎機能低下（例えば、ステージ２のＣＫＤまたはステージ３もしくはステージ３ＡのＣＫＤ）の患者において、腎機能の正確な測定は、患者および臨床医が画像検査のリスク対効果比を評価するのに役立ち、また、より多くの情報に基づく決断が可能になろう。
【0115】
第１２の実施形態では、本発明は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する対象を治療する方法を提供し、該方法は、（１）対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定すること、（２）対象が基準レベルと比較して上昇したレベルの化合物を有する場合に、慢性腎疾患の治療に好適する効果的療法を対象に投与すること、を含む。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0116】
第１３の実施形態では、本発明は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する対象を治療する方法を提供し、該方法は、慢性腎疾患の治療に好適する効果的療法を対象に投与することを含み、対象は、基準レベルと比較して、上昇したレベルの式（Ｉ）の化合物またはその塩を有する。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0117】
慢性腎疾患は、基礎疾患（単一または複数）または状態（単一または複数）に起因する場合が多い。例えば、高血圧（血圧上昇）または糖尿病は、慢性腎疾患を招く。慢性腎疾患の他の原因には、（１）腎疾患および感染症、例えば、多発性嚢胞腎、腎盂腎炎、および糸球体腎炎、（２）狭小化または閉塞腎動脈、（３）前立腺腫大、腎結石および癌などの状態から来る長期尿路通過障害、（４）膀胱尿管逆流（尿を腎臓に戻させる状態）、および（５）腎臓を損傷する可能性のある医薬の長期使用（例えば、セレコキシブおよびイブプロフェンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ））を含み得る。
【0118】
慢性腎疾患は、ＣＫＤの原因となった基礎症状または疾患に対する効果的治療薬で治療されることが多い。特定の実施形態では、ＣＫＤは、糖尿病が原因であり、第１２および第１３の実施形態中のＣＫＤを治療する方法は、糖尿病の治療に好適する効果的な療法を対象に投与することを含む。糖尿病は、抗糖尿病薬で治療できる。代表的抗糖尿病薬には、限定されないが、メトホルミン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、アカルボース、テトラヒドロリプスタチン、フェンテルミン／トピラマート、ブプロピオン／ナルトレキソン、ロルカセリン、リラグルチドおよびカナグリフロジンが挙げられる。特定の実施形態では、糖尿病は生活習慣改善により治療できる。代表的生活習慣改善には、限定されないが、食事改善および／または身体活動もしくは運動の増加が含まれる。食事改善には、例えば、カロリー摂取量、一人前の分量、糖および澱粉質炭水化物含量の制限および／または低脂肪および低カロリーおよび高繊維質食の選択を含み得る。
【0119】
特定の実施形態では、ＣＫＤは、高血圧（血圧上昇）が原因であり、第１２および第１３の実施形態中のＣＫＤを治療する方法は、高血圧の治療に好適する効果的な療法を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、第１２および第１３の実施形態中に記載の方法は、有効量の血圧を下げる治療薬を対象に投与することを含む。代表的治療薬には、限定されないが、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤またはアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）が含まれる。好適なＡＣＥ阻害剤には、限定されないが、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリルおよびトランドラプリルが挙げられる。好適なＡＲＢには、限定されないが、カンデサルタン、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタンおよびバルサルタンが挙げられる。特定の実施形態では、利尿薬および／または低塩分食が血圧を下げるためにも用いられる。
【0120】
特定の実施形態では、第１２および第１３の実施形態中に記載のＣＫＤの治療には、生活習慣改善、例えば、食事改善および／または身体活動もしくは運動の増加が含まれる。食事改善には、低塩分食、低カリウム含量食の選択および／または毎日タンパク質摂取量の制限が含まれる。
【0121】
特定の実施形態では、第１２および第１３の実施形態中に記載のＣＫＤの治療には、例えば、ビタミンＤ、鉄、カルシウム、カリウム、またはこれらの組み合わせなどの栄養補助食品が含まれる。
【0122】
特定の実施形態では、ＣＫＤは、末期腎不全まで進行する場合があり、これは、透析または腎移植により治療できる。
【0123】
第１４の実施形態では、本発明は、急性腎傷害を罹患している対象を治療する方法を提供し、該方法は、（１）対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定すること、（２）対象が、基準レベルと比較して上昇したレベルの化合物を有する場合に、急性腎傷害の治療に好適する効果的療法を対象に投与すること、を含む。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0124】
第１５の実施形態では、本発明は、急性腎傷害を罹患している対象を治療する方法を提供し、該方法は、急性腎傷害の治療に好適する効果的療法を対象に投与すること、を含み、対象が、基準レベルと比較して上昇したレベルの式（Ｉ）の化合物またはその塩を有する。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0125】
急性腎傷害（ＡＫＩ）は、腎臓への血流を遅らせる状態、腎臓への直接損傷および／または尿管閉塞などの種々の状態が原因となり得る。腎臓への血流を低下させる状態には、限定されないが、血液または体液損失、血圧薬物、心臓発作、心臓疾患、感染症、肝不全、アスピリン、イブプロフェン（アドビル、モトリン ＩＢ、など）、ナプロキセン（アリーブ、など）または関連薬物の使用、重度のアレルギー反応（アナフィラキシー）、重度の火傷および重度の脱水が挙げられる。腎臓に直接損傷を引き起こし得る疾患、状態および薬剤には、限定されないが、腎臓中またはそのまわりの静脈および動脈中の血餅、腎臓中の血流を塞ぐコレステロール沈着物、糸球体腎炎、腎臓中の小さなフィルター（糸球体）の炎症、溶血性尿毒症症候群、赤血球の未成熟破壊から生じる状態、感染症、ループス、糸球体腎炎の原因となる免疫系障害、薬物、例えば、特定の化学療法剤、抗生物質、画像検査中に使用される染料および骨粗鬆症および高血中カルシウムレベル（高カルシウム血症）の治療に使用されるゾレドロン酸（リクラスト、ゾメタ）、多発性骨髄腫、プラズマ細胞の癌、強皮症、皮膚および結合組織に影響を及ぼす一連の希少疾患、血栓性血小板減少性紫斑病、希少血液障害、アルコール、重金属およびコカインなどの毒素、ならびに血管炎、血管の炎症が挙げられる。尿路閉塞を引き起こし、ＡＫＩに繋がり得る疾患および状態には、限定されないが、膀胱癌、尿路中の血餅、子宮頸癌、結腸癌、前立腺腫大、腎結石、膀胱を制御する神経に関連する神経損傷および前立腺癌が挙げられる。
【0126】
ＡＫＩは、根底にある原因に対する効果的療法で治療される場合が多い。特定の実施形態では、ＡＫＩは、化学療法剤などの薬物が原因であり、対象のＡＫＩを治療する方法には、対象に対する薬物の投与を中止すること、または対象に投与する薬物（例えば、化学療法剤）の投与量を減らすことが含まれる。
【0127】
特定の実施形態では、ＡＫＩは、高血圧または糖尿病が原因であり、対象のＡＫＩを治療する方法には、第１２および第１３の実施形態中で上記した高血圧または糖尿病に対する効果的療法を投与することが含まれる。
【0128】
特定の実施形態では、対象のＡＫＩの治療方法には、生活習慣改善、例えば、食事改善および／または身体活動もしくは運動の増加が含まれる。食事改善には、低塩分食、低カリウム含量食の選択および／または毎日タンパク質摂取量の制限が含まれる。
【0129】
特定の実施形態では、ＡＫＩは、透析または腎移植により治療される。
【0130】
第１６の実施形態では、本発明は、患者の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を計算する方法を提供し、該方法は、（１）対象から得た生物試料中の、式（Ｉ）の化合物またはその塩のレベルを決定するステップ、および（２）化合物の測定したレベルを利用するアルゴリズムを用いて、ｅＧＦＲを計算するステップ、を含み、アルゴリズムは外因性濾過マーカーを用いて測定されたＧＦＲを用いて開発される。任意に好適な方法を化合物のレベルの決定のために使用できる。一実施形態では、化合物のレベルは、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせを用いて、決定される。
【0131】
特定の実施形態では、ｅＧＦＲは、腎機能の評価に関連する１つまたは複数の追加のバイオマーカーを用いて計算される。一実施形態では、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ６−カルバモイルトレオニルアデノシン、４−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、３−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ６−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、２−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ２，Ｎ５−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、３−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾールから選択される。別の実施形態では、ｅＧＦＲアルゴリズムは、血清シスタチンＣレベルをさらに利用する。さらに別の実施形態では、ｅＧＦＲアルゴリズムは、年齢、性別および人種からなる群より選択される１種または複数の人口統計学的パラメーターをさらに利用する。
【0132】
第１７の実施形態では、第２〜第１６の実施形態に記載の方法に対し、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）：【0133】
第１８の実施形態では、第２〜第１６の実施形態に記載の方法に対し、化合物のレベルは、タンデム型液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）により決定される。
【0134】
第１９の実施形態では、第２〜第１８の実施形態に記載の方法は、決定されたレベルの化合物を数学モデルで使用して腎機能を評価することを含む。
【0135】
第２０の実施形態では、第２〜第１９の実施形態に記載の方法は、生物試料を分析して、腎機能の評価に関連する１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルを決定することをさらに含む。１つまたは複数のバイオマーカーは、次のバイオマーカーからなる群より選択され得る：プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ６−カルバモイルトレオニルアデノシン、４−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、３−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ６−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、２−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ２，Ｎ５−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、３−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾールおよびこれらの組み合わせ。
【0136】
特定の実施形態では、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２個またはそれを超える追加のバイオマーカーのレベルが、第２０の実施形態に記載の方法で決定される。
【0137】
特定の実施形態では、第２０の実施形態に記載の方法において、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、キヌレニン、ミオイノシトール、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0138】
特定の実施形態では、第２０の実施形態に記載の方法において、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、トリプトファン、Ｎ−アセチルトレオニン、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0139】
特定の実施形態では、第２０の実施形態に記載の方法において、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミン、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0140】
特定の実施形態では、第２０の実施形態に記載の方法において、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、Ｎ−アセチルトレオニン、ミオイノシトール、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0141】
特定の実施形態では、第２０の実施形態に記載の方法において、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、Ｎ−アセチルトレオニン、ミオイノシトール、キヌレニン、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0142】
特定の実施形態では、第２０の実施形態に記載の方法において、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルトレオニン、およびミオイノシトールからなる群より選択される。
【0143】
特定の実施形態では、第２０の実施形態に記載の方法において、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、ミオイノシトール、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0144】
特定の実施形態では、第２０の実施形態に記載の方法は、生物試料を分析して、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミン、およびクレアチニンのレベルを決定することをさらに含む。
【0145】
本発明の化合物および１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルを決定することにより、記載の方法でより大きい感度および特異度を可能にし得る。例えば、生物試料中の２種のバイオマーカーのペアワイズ分析または特定のバイオマーカー（および非バイオマーカー化合物）のレベルの比により、腎機能の評価および腎機能の評価支援でより大きい感度および特異度を可能にし得る。
【0146】
単純比較（例えば、マニュアル比較）を含む種々の技術を用いて、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および／または１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルを腎機能基準レベルと比較し得る。また、１種または複数の統計解析（例えば、ｔ検定、ウェルチのＴ検定、ウィルコクソンの順位和検定、相関分析、ランダムフォレスト、Ｔスコア、Ｚスコア）を用いて、または数学モデル（例えば、アルゴリズム、統計モデル）を用いて、生物試料中の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および／または１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルを基準レベルと比較し得る。例えば、単一のアルゴリズムまたは複数のアルゴリズムを含む数学モデルを用いて、対象の腎機能を評価し得る。
【0147】
本方法の結果は、対象における腎機能の評価に有用な他の方法および測定（またはそれらの結果）と一緒に使用され得る。例えば、臨床パラメーター、例えば、ＢＵＮ、ＳＣｒ、および／または尿中アルブミン測定値など、腎機能マーカー、例えば、β−２ミクログロブリン、β−ＴＲＡＣＥ、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファンなど、さらには患者情報、例えば、ＣＫＤ家族歴または他のリスク因子などは、バイオマーカーと共に使用可能である。
【0148】
特定の実施形態では、本発明の化合物および／または１つまたは複数の追加のバイオマーカーのレベルは、対象がＡＫＩもしくはＣＫＤの指標となり得る腎機能障害を有する腎機能レベルおよび／または可能性を示す数値スコア（「腎機能スコア」）を医師に提供するために、数学的または統計的なモデルまたは式中で使用可能である。スコアは、バイオマーカーおよび／またはバイオマーカーの組合せに対する基準レベルが臨床的に有意に変化することに基づく。基準レベルは、アルゴリズムから誘導可能であるか、またはＧＦＲ低下の指標から計算可能である。対象の腎機能スコアを決定する方法は、対象の腎機能スコアを決定するために、試料中の１つまたは複数の腎機能バイオマーカーのレベルを１つまたは複数のバイオマーカーの腎機能基準レベルと比較することを含み得る。方法は、次のリストから選択され得る任意の数のバイオマーカーを採用し得る：プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ６−カルバモイルトレオニルアデノシン、４−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、３−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ６−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、２−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ２，Ｎ５−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、３−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾール。回帰分析などの統計的手法を含む任意の方法により、複数のバイオマーカーを腎機能と相関付けることが可能である。
【0149】
腎機能スコアを用いて、正常（すなわち、腎機能障害なし）から、軽度低下、中低度低下、重度低下、または末期腎不全まで、の腎機能の範囲内に対象を配置することが可能である。腎機能スコアの非限定的使用例としては、腎機能の評価、ＧＦＲの推定、腎機能の分類、ＣＫＤ発症に対する感受性、ＡＫＩ発症に対する感受性、ＣＫＤの診断およびステージ、腎機能スコアの定期的決定およびモニターによるＣＫＤ進行のモニター、腎移植患者の腎機能状態のモニター、治療的介入に対する反応の測定、薬効の評価、ならびに治療薬および／またはコントラスト造影剤に対する耐容性の測定が挙げられる。
【0150】
特定の実施形態では、本明細書に記載の本発明の方法において、生物試料は血液、血漿、血清、唾液または尿である。一実施形態では、生物試料は血漿である。別の実施形態では、生物試料は血清である。
【0151】
特定の実施形態では、本明細書に記載の本発明の方法において、生物試料は、糸球体濾過量の直接測定を可能にする薬剤による治療の前に、対象から取得される。
【0152】
特定の実施形態では、本明細書に記載の本発明の方法において、対象はヒトである。
【0153】
特定の実施形態では、本明細書に記載の本発明の方法において、対象は、腎機能障害の症状がないか、腎機能障害に関する既知のリスク因子を有さない。他の実施形態では、対象は、慢性腎疾患の発症に関するリスク因子（例えば、６０歳を超える年齢、高血圧、糖尿病、心血管疾患、ＣＫＤの家族歴）を示す。特定の実施形態では、対象は、以前に高血圧または糖尿病と診断されたことがある。特定の実施形態では、対象は慢性腎疾患の家族歴を有する。特定の実施形態では、対象は、腎機能障害の症状がある。特定の実施形態では、対象は、従来の方法を用いた腎機能評価は困難である。
【0154】
特定の実施形態では、対象は、以下からなる群より選択される：肥満である、非常に痩せている、菜食主義である、慢性疾患を有する、および高齢である。
【0155】
特定の実施形態では、対象は、腎臓提供者となる候補である。
【0156】
特定の実施形態では、対象は、腎臓に対する毒性作用を有し得る薬剤で治療されたことがあるか、または該薬剤による治療について検討中である。一実施形態では、薬剤はコントラスト造影剤である。別の実施形態では、薬剤は、疾患または状態を治療する治療薬、例えば、化学療法剤である。さらに別の実施形態では、薬剤は抗生物質である。
【0157】
特定の実施形態では、本方法を用いて、ＣＫＤを有する対象またはＣＫＤを発症する素因を有することが疑われる対象（例えば、ＣＫＤ家族歴、薬物療法、慢性疾病などに起因してリスクのある対象）の腎機能をモニターし得る。一例では、本発明の化合物を用いて、ＣＫＤを有していない対象の腎機能をモニターし得る。例えば、ＣＫＤを発症する素因を有することが疑われる対象において、本明細書に記載のバイオマーカーを用いて、ＣＫＤの発症をモニターし得る。
【0158】
キット本発明は、生物試料中の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物のレベルを測定するためのキットを含む。
【0159】
本発明のキットを用いて、対象の腎機能を評価またはモニターして、腎機能低下を発症する素因の判定、腎機能のレベルに応じた対象の分類、慢性腎疾患の診断またはモニター、対象のＧＦＲの推定を行い得る。
【0160】
特定の実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩を含む。一実施形態では、本発明のキットは、式（ＩＩ）の化合物またはその塩を含む。
【0161】
特定の実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の化合物またはその塩ならびに生物試料中の式（Ｉ）の化合物のレベルを測定するための説明書を含む。一実施形態では、キットは、式（ＩＩ）の化合物またはその塩ならびに生物試料中の式（ＩＩ）の化合物のレベルを測定するための説明書を含む。
【0162】
特定の実施形態では、本発明のキットは、標識化合物（例えば、内部標準）または生物試料中の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物を検出できる物質を含み得る。
【0163】
特定の実施形態では、本発明のキットは、標識化合物（例えば、内部標準）または生物試料中の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物を検出できる物質および生物試料中の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物レベルを測定するための説明書を含み得る。
【0164】
一実施形態では、上記キット中の内部標準は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の標識化合物である。一実施形態では、上記キット中の内部標準は、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン−１３Ｃ３（１３Ｃ３−Ｌ，Ｌ−ＴＭＡＰ）である。
【0165】
一実施形態では、本発明のキットは、式（Ｉ）の非標識化合物またはその塩、内部標準としての式（Ｉ）の標識化合物および生物試料中の式（Ｉ）の化合物のレベルを測定するための説明書を含む。
【0166】
別の実施形態では、本発明のキットは、式（ＩＩ）の非標識化合物またはその塩、内部標準としての式（ＩＩ）の標識化合物および生物試料中の式（ＩＩ）の化合物のレベルを測定するための説明書を含む。一実施形態では、式（ＩＩ）の標識化合物は、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−１３Ｃ３−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン（１３Ｃ３−Ｌ，Ｌ−ＴＭＡＰ）である。
【0167】
別の実施形態では、本明細書に記載の１３Ｃ３−Ｌ，Ｌ−ＴＭＡＰは、下記の式により表される。【0168】
特定の実施形態では、本発明のキットは、標識化合物（例えば、内部標準）または生物試料中の式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物を検出できる物質および試料中の化合物の量を決定するための手段（例えば、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物に対する抗体）を含み得る。
【0169】
特定の実施形態では、生物試料中の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の量は、本明細書に記載の本発明のキットを用いて、クロマトグラフィー、質量分析、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合法、イムノブロッティング、免疫組織化学（ＩＨＣ）、その他の免疫化学的方法、またはこれらの組み合わせにより決定できる。特定の実施形態では、生物試料中の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の量は、クロマトグラフィー、質量分析、またはこれらの組み合わせを用いて決定できる。特定の実施形態では、生物試料中の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の量は、本発明のキットを用いて、ＬＣ−ＭＳにより決定できる。
【0170】
キットはまた、例えば、緩衝剤、保存剤、または安定化剤を含んでもよい。キットはまた、アッセイして、試験試料と比較できる対照試料または一連の対照試料を含んでもよい。それぞれのキットの要素は通常、個別の容器中に密閉され、全ての種々の容器は、試験する対象が当該小分子に関連する障害を罹患しているかどうか、またはその障害を発症するリスクがあるかどうかを判定するための説明書と一緒に単一のパッケージ中に収容される。
【0171】
第２１の実施形態では、本発明のキットは、上記本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）、および対象から得た生物試料中で検出した該化合物のレベルに基づいて対象の腎機能を評価またはモニターするための説明書を含む。
【0172】
第２２の実施形態では、本発明のキットは、上記本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）、および対象から得た生物試料中で検出した該化合物のレベルに基づいて対象における腎機能低下を発症する素因を判定するための説明書を含む。
【0173】
第２３の実施形態では、本発明のキットは、上記本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）、および対象から得た生物試料中で検出した該化合物のレベルに基づく腎機能のレベルに応じて対象を分類するための説明書を含む。
【0174】
第２４の実施形態では、本発明のキットは、上記本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）、および対象から得た生物試料中で検出した該化合物のレベルに基づいて対象の慢性腎疾患（ＣＫＤ）を診断またはモニターするための説明書を含む。
【0175】
第２５の実施形態では、本発明のキットは、上記本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）、および対象から得た生物試料中で検出した該化合物のレベルに基づいて対象の急性腎傷害（ＡＫＩ）を診断またはモニターするための説明書を含む。
【0176】
第２６の実施形態では、本発明のキットは、上記本発明の化合物（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）、および対象から得た生物試料中で検出した該化合物のレベルに基づいて対象のＧＦＲを推定するための説明書を含む。
【0177】
特定の実施形態では、第２１〜第２６の実施形態に記載のキットにおいて、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、同位体標識される。一実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、例えば、トリチウム（３Ｈ）または炭素１４（１４Ｃ）で放射標識される。別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、重水素化される、炭素１３（１３Ｃ）もしくは窒素１５（１５Ｎ）で標識される、またはこれらの組み合わせである。一例では、式（ＩＩ）の標識化合物は、内部標準として使用できるＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−１３Ｃ３−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン（１３Ｃ３−Ｌ，Ｌ−ＴＭＡＰ）である。
【0178】
本発明はまた、対象の腎機能の評価またはモニター、腎機能低下を発症する素因の判定、腎機能のレベルに応じた対象の分類、慢性腎疾患の診断またはモニター、対象のＧＦＲの推定について上述した、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩（例えば、薬学的に許容可能な塩）に特異的に結合する抗体または抗体断片を含むキットを提供する。特定の実施形態では、本発明のキットは、上記抗体のＶＨおよびＶＬ配列を含むポリペプチドなどの抗体誘導体を含む。一実施形態では、ポリペプチドは、融合タンパク質である。
【0179】
第２７の実施形態では、本発明のキットは、上記の抗体、抗体断片または抗体誘導体、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象の腎機能を評価またはモニターするための説明書を含む。
【0180】
第２８の実施形態では、本発明のキットは、上記の抗体、抗体断片または抗体誘導体、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象における腎機能低下を発症する素因を判定するための説明書を含む。
【0181】
第２９の実施形態では、本発明のキットは、上記の抗体、抗体断片または抗体誘導体、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づき、腎機能のレベルに応じて対象を分類するための説明書を含む。
【0182】
第３０の実施形態では、本発明のキットは、上記の抗体、抗体断片または抗体誘導体、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象の慢性腎疾患（ＣＫＤ）を診断またはモニターするための説明書を含む。
【0183】
第３１の実施形態では、本発明のキットは、上記の抗体、抗体断片または抗体誘導体、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象の急性腎傷害（ＡＫＩ）を診断またはモニターするための説明書を含む。
【0184】
第３２の実施形態では、本発明のキットは、上記の抗体、抗体断片または抗体誘導体、および対象から得た生物試料中で検出した化合物のレベルに基づいて対象のＧＦＲを推定するための説明書を含む。
【0185】
特定の実施形態では、上記キット（例えば、第２１〜第２６の実施形態で記載のキット）は、上記化合物以外の１つまたは複数の追加のバイオマーカーを含み、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、腎機能の評価に関連する。本明細書に記載の任意のバイオマーカーを本発明のキットで使用できる。
【0186】
特定の実施形態では、上記キット（例えば、第２７〜第３２の実施形態で記載のキット）は、１つまたは複数の追加のバイオマーカーを含み、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、腎機能の評価に関連する。本明細書に記載の任意のバイオマーカーを本発明のキットで使用できる。
【0187】
種々の実施形態では、１つまたは複数のバイオマーカーは、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−アセチルアラニン、Ｎ６−カルバモイルトレオニルアデノシン、４−アセトアミドブタノエート、エリトリトール、ミオイノシトール、エリトロネート、ウレア、アラビトール、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、３−メチルグルタリルカルニチン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｎ−アセチルメチオニン、Ｎ６−アセチルリジン、キヌレニン、アラボネート、スクシニルカルニチン、リボース、キシロネート、Ｎ−ホルミルメチオニン、Ｏ−メチルカテコールスルフェート、２−メチルブチリルカルニチン、フェニルアセチルグルタミン、Ｎ２，Ｎ５−ジアセチルオルニチン、トリプトファン、クレアチニン、尿酸塩、３−インドキシル硫酸、および硫酸ｐ−クレゾールからなる群より選択される。一実施形態では、追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、キヌレニン、ミオイノシトール、およびクレアチニンからなる群より選択される。別の実施形態では、追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミン、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0188】
特定の実施形態では、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、Ｎ−アセチルトレオニン、ミオイノシトール、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0189】
特定の実施形態では、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、Ｎ−アセチルトレオニン、ミオイノシトール、キヌレニン、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0190】
特定の実施形態では、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、２−Ｃ−マンノピラノシルトリプトファン、Ｎ−アセチルトレオニン、およびミオイノシトールからなる群より選択される。
【0191】
特定の実施形態では、１つまたは複数の追加のバイオマーカーは、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、ミオイノシトール、およびクレアチニンからなる群より選択される。
【0192】
特定の実施形態では、本発明のキットは、上記の本発明の化合物（式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩）、プソイドウリジン、Ｎ−アセチルトレオニン、トリプトファン、フェニルアセチルグルタミンおよびクレアチニンを含む。
【0193】
調製方法Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９８５またはＧｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ ｓｏｎｓ １９９１に記載のもの、およびＲｉｃｈａｒｄ Ｌａｒｏｃｋ，ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＶＣＨ ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ，１９８９にあるものなどの好適な合成方法に関する文献を参照できる。
【0194】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩＩ）：【0195】
別の実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）の化合物の調製方法を提供し、該方法は、式（ＩＶ）：【0196】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｖ）：【0197】
別の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＶＩ）：【0198】
特定の実施形態では、上記方法におけるメチル化試薬は、ＣＨ３Ｘまたは（ＣＨ３）２ＳＯ４であり、式中、ＸはＣｌ、Ｂｒ、ＩまたはＯＳＯ２ＣＦ３である。別の実施形態では、メチル化試薬は、ヨードメタン（ＣＨ３Ｉ）である。
【0199】
特定の実施形態では、上記の方法におけるメチル化反応は、塩基の存在下で実施される。任意の好適な塩基を使用できる。代表的塩基には、限定されないが、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、および水酸化ナトリウムが挙げられる。
【0200】
一実施形態では、上記の方法におけるメチル化反応は、酸化銀の存在下で実施される。
【0201】
別の実施形態では、上記の方法におけるメチル化反応は、炭酸カリウムの存在下で実施される。
【0202】
特定の実施形態では、上記の方法におけるメチル化反応は、水と有機溶媒の混合物中、または１００％の水中で実施される。任意の好適な有機溶媒を使用可能であり、これには、限定されないが、メタノール、エタノール、アセトン、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシドなどが挙げられる。例えば、メチル化反応は、メタノールと水の混合物中で実施される。メタノールの、水に対する体積比は、１：１０〜１０：１、１：５〜５：１、５：１〜１：１、４：１〜１：１とすることができる。一実施形態では、メタノールの水に対する体積比は、約４：１である。
【実施例】
【0203】
材料と方法試薬と測定器
酸化銀、炭酸カリウム、ヨードメタン、および質量分析グレード（９８％）ギ酸を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから、ＨＰＬＣグレードのメタノールおよび水をＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから、重水（９９．８％）をＡｃｒｏｓから、Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリンを東京化成工業株式会社から入手した。Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃのボルテックス混合機を混合に使用し、Ｓｏｒｖａｌｌ Ｌｅｇｅｎｄ Ｍｉｃｒｏ ２１Ｒ微量遠心機を１．５ｍＬエッペンドルフチューブの遠心分離に使用した。Ｃｏｒｎｉｎｇラボラトリースターラーを用いて化学反応を撹拌した。ヒト血漿（Ｋ２−ＥＤＴＡ）を、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎから取得し、−８０℃で貯蔵した。Ａｒｇｏｎａｕｔ ＳＰＥ ＤＲＹ（商標）９６ ＤＵＡＬエバポレーターを用いて溶媒を蒸発させた。
【0204】
クロマトグラフィー二成分溶媒マネージャー、冷凍保存試料マネージャー（１２℃に設定）およびカラムマネージャー（４０℃に設定）を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムを、逆相カラム（Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８、１．７μｍ、２．１ｘ１００ｍｍ）を用いて、液体クロマトグラフィー用として使用した。移動相Ａは水中の０．１％ギ酸とし、移動相Ｂはメタノール中の０．１％ギ酸とした。重水素交換実験では、代わりに、移動相Ａを重水中の０．１％ギ酸とした。直線勾配溶離は、０％移動相Ｂで保持２．００分間の初期条件で実施した。次に、移動相Ｂを０．５０分で９８％に増加させ、０．９０分間維持した。次の注入に対する平衡のために移動相Ｂを０．１０分で０％に戻した。流量を３５０μＬ／分で、総実行時間は４．５０分であった。各試料について、ループ固定で分取量５．０μＬの最終試料溶液を注入した。溶出液を質量分析計のエレクトロスプレー源に直接導入した。強力なニードル洗浄液を未希釈メタノール、弱いニードル洗浄液をメタノールと水の混合物（０．５：９９．５）とした。シール洗浄液をメタノールと水の混合物（１０：９０）とした。
【0205】
質量分析この調査では、加熱エレクトロスプレーイオン化（ＨＥＳＩ−ＩＩ）プローブを備えたＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ質量分析計をポジティブモードで使用した。測定器は、Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ（商標）２．７およびＸＣａｌｉｂｕｒ（商標）２．２ソフトウェアにより制御した。加熱エレクトロスプレー源を次のように設定した。ヒーター温度：４３０℃、シースガス：３０、および補助ガス流量：１２、スイープガス：０、イオンスプレー電圧：４．２０ｋＶ、キャピラリー温度：３５０℃、およびＳ−レンズ ＲＦレベル：６５％。３０，０００の解像度を使用して、ｍ／ｚ １００〜３００の質量範囲で、フルスキャンＦＴＭＳ（フーリエ変換質量分析）スペクトルを収集した。全てのＭＳフラグメンテーション実験で、０．２５０の活性化Ｑおよび１０．０ｍｓの活性化時間と共に、１５，０００の解像度を使用した。ＭＳ２実験の正規化衝突エネルギーは３１．０ｅＶで、１．０ｍ／ｚの単離幅およびｍ／ｚ ６０〜２４０のスキャン範囲であった。ｍ／ｚ ２２９．１５４７／１４２．０８６０（または重水素交換では、２３０．１６１０／１４３．０９２５）のＭＳ３実験では、正規化衝突エネルギーは第１と第２段目のフラグメンテーションに対しそれぞれ３１．０および２５．０ｅＶで、両段でｍ／ｚ ２．０の単離幅、ｍ／ｚ ５０〜２４０のスキャン範囲であった。ｍ／ｚ ２２９．１５４７／１７０．０８１０（または重水素交換では、２３０．１６１０／１７１．０８７８）のＭＳ３実験では、正規化衝突エネルギーは第１と第２段目のフラグメンテーションに対しそれぞれ３１．０および３０．０ｅＶであった。単離幅は、第１段と第２段のフラグメンテーションに対しそれぞれ、ｍ／ｚ ３．０および２．０で、スキャン範囲は、ｍ／ｚ ５０〜２４０であった。ｍ／ｚ ２２９．１５４７／１４２．０８６０／１１４．０９１１（または重水素交換では、２３０．１６１０／１４３．０９２５／１１５．０９７６）のＭＳ４実験では、正規化衝突エネルギーは第１〜第３段目のフラグメンテーションに対しそれぞれ３１．０、２０．０、および２０．０ｅＶであった。単離幅は、全３段に対し、ｍ／ｚ ２．０で、スキャン範囲は、ｍ／ｚ ５０〜２４０であった。
【0206】
実施例１．Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン（ＴＭＡＰ）の合成方法１．磁気攪拌子を備えた４ｍＬのガラスバイアルに、Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン（２０．０ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）、酸化銀（１００ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）、および１．０ｍＬのメタノール／水（４：１）を加えた。室温下、混合物をマグネチックスターラで撹拌し、７５μＬのヨードメタン（１７１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを緩くキャッピングし、混合物を室温下、暗所で一晩撹拌した。得られた混合物を、４０℃の穏やかな窒素流下で蒸発乾固させた。水（１．０ｍＬ）を残留物に加え、混合物を２分間超音波処理した。次に、混合物を１．５ｍＬのエッペンドルフチューブに移し、室温で１４，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。透明な上清を水中の０．１％ギ酸で１０，０００倍に希釈し、ＬＣ／ＭＳ分析のために試料バイアルに移した。Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−１３Ｃ３−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン（１３Ｃ３−Ｌ，Ｌ−ＴＭＡＰ）を合成するために、ヨードメタンをヨードメタン−１３Ｃで置換したこと以外は、同じ合成手順を用いた。
【0207】
図１８Ａおよび１８Ｂは、１３Ｃ標識したＴＭＡＰ（１３Ｃ３−Ｌ，Ｌ−ＴＭＡＰ）の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを、非標識ＴＭＡＰと比較して示す。図１９Ａおよび１９Ｂは、１３Ｃ標識したＴＭＡＰ（１３Ｃ３−Ｌ，Ｌ−ＴＭＡＰ）の質量スペクトルを、非標識ＴＭＡＰと比較して示す。
【0208】
方法２．磁気攪拌子を備えた４ｍＬのガラスバイアルに、Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン（２０．０ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５０．０ｍｇ、０．３６２ｍｍｏｌ）、および１．０ｍＬのメタノール／水（４：１）を加えた。室温下、溶液混合物をマグネチックスターラで撹拌し、７５μＬのヨードメタン（１７１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを緩くキャッピングし、混合物を室温下、暗所で一晩撹拌した。得られた混合物を、４０℃の穏やかな窒素流下で蒸発乾固させた。残留物を１．０ｍＬの水に溶解した。溶液を水中の０．１％ギ酸で１０，０００倍に希釈し、ＬＣ／ＭＳ分析のために試料バイアルに移した。
【0209】
方法３．第３の合成手法に対する一般的戦略を以下に示す。保護されたカルボキシル基を有するジペプチドを出発分子として使用し得る。任意の好適なカルボキシル保護基を使用できる（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ−Iｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９９）。一実施形態では、保護基Ｘは、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、またはベンジル基などのアルキル基であってよい。別の実施形態では、保護基は、トリアキルシリル基などのシリル基（例えば、トリメチルシリル基）である。保護基Ｘの除去は、保護基Ｘの性質に依存する。一実施形態では、保護基は、酸による処理で除去できる。【0210】
この一般的戦略の一例では、ｔ−ブチルエステルにより保護されたカルボキシル基を有するジペプチドを使用し得る。保護基の除去に続けてメチル化反応により、以下に示すように、ＴＭＡＰが生成されることになる。本方法は、より低い極性の出発材料が反応プロセスを容易にするために、より優れた反応収率およびより高い生成物純度の点で有利であり得る。【0211】
方法４．第４の合成方法に対する一般的戦略を以下に示す。Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−Ｌ−アラニンおよび保護されたカルボキシル基を有するＬ−プロリンを出発分子として使用する。上記の任意の好適なカルボキシル保護基を使用できる。カルボキシル基を活性剤により活性化することにより、カップリング反応を実現し得る。一実施形態では、活性剤はカルボジイミド、ウロニウム、活性エステル、ホスホニウム、２−アルキル−１−アルキルカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン、２−アルコキシ−１−アルコキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン、またはアルキルクロロホルメートである。特定の実施形態では、活性剤は、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、またはジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）などのカルボジイミドである。別の実施形態では、カルボキシル基は、例えば、ＳＯＣｌ２、塩化オキサリル、またはその他の好適な試薬を用いて、アシルハライドの形成により活性化できる。保護基Ｘの除去は、保護基Ｘの性質に依存する。一実施形態では、保護基は、酸による処理で除去される。【0212】
この一般的戦略の一例では、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−Ｌ−アラニンおよびｔ−ブチルエステルにより保護されたカルボキシル基を有するＬ−プロリンを使用し得る。Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−Ｌ−アラニンと、カルボキシル基保護Ｌ−プロリンとのカップリングは、ＥＤＣまたは任意の他の好適な上記の活性剤により実現し得る。保護基の除去により、ＴＭＡＰが生成されることになる。【0213】
方法５．別の例では、出発材料は、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン（Ｒ１＝ＨおよびＲ２＝ＣＨ３）またはＮ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリン（Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＨ３）であってよく、方法１で記載の反応条件を使用し得る。【0214】
実施例２．血漿代謝物化合物Ａの構造解明試料調製
１．５ｍＬエッペンドルフチューブ中に、１００μＬのヒト血漿（氷上で解凍）および５００μＬのメタノールを加えた。混合物を２分間ボルテックスし、室温で１４，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を新しいチューブに移し、４０℃の緩やかな窒素流下で乾燥した。残留物に２００μＬの０．１％のギ酸を含む水を加え、混合物を１分間ボルテックスし、室温下、１４，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。その後、上清をＬＣ／ＭＳ分析のために試料バイアルに移した。
【0215】
構造解明Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ質量分析計を用いて、高解像度質量スペクトルを取得した。プロトン化擬分子イオンの式は、以前に精密質量測定により、Ｃ１１Ｈ２１Ｏ３Ｎ２＋であると決定された。今回の調査は、抽出イオンクロマトグラムに示すように（図１）そのピーク形状に大きな強調をすることなく、代謝物化合物Ａのより長い保持（１．４８分）を達成するように、クロマトグラフィー条件を最適化することにより開始した。擬分子イオンの衝突誘起解離（ＣＩＤ）は、図２に示すように、７つの娘イオンを生成した。これらは、ｍ／ｚ １７０、１４２、１２６、１２４、１１４．０９、１１４．０５、および７０である（全て精密質量で収集したが、簡潔にするため以降では省略した）。以前にＱ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計で収集した代謝物のプロダクトイオンスペクトル（ＭＳ２）は、２つの追加の娘イオン、ｍ／ｚ ９６および５８を示した（図３）。主要イオンｍ／ｚ １４２のさらなるフラグメンテーション（ＭＳ３、図４）により、ｍ／ｚ ７０、１１４．０９、およびｍ／ｚ ９６イオンを生成したが、これは、Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＣＩＤ ＭＳ２スペクトルでは検出されなかった。ｍ／ｚ １１４．０５イオンは、ｍ／ｚ １４２のフラグメンテーションからは検出されなかったが、その代わりに、ｍ／ｚ １７０のフラグメンテーションにより形成された（ＭＳ３、図５）。ｍ／ｚ １１４．０９がさらにフラグメンテーションされると（ＭＳ４、図６）、ｍ／ｚ ７０イオンが検出された。
【0216】
これらの断片の理論的説明およびそれらの形成経路により、化合物Ａの化学構造を以下に示すように提案可能となった。【0217】
化合物Ａに対し立体化学分析を実施し、式は下記の構造により表されると決定された。【0218】
化合物Ａのプロトン化擬分子イオンからの可能なフラグメンテーション経路はスキーム１に示すように提案される。スキーム１．可能なフラグメンテーション経路
【0219】
重水素交換による構造検証化合物Ａの提案構造を最初に重水素交換実験により検証した。簡単に説明すると、クロマトグラフィーの移動相を重水素化溶媒に交換し、血漿抽出物を再度分析した。フルスキャン質量スペクトルを取得し、新規のｍ／ｚ ２３０．１６０７９イオン（Ｃ１１Ｈ２０ＤＮ２Ｏ３＋の計算値から−０．７ｐｐｍ外れる）を重水素化化合物Ａの主要種として検出し（図７）、これは、提案した構造の単一の交換可能なプロトンと一致する。ｍ／ｚ ２３０イオンのプロダクトイオンスペクトル（ＭＳ２）および対応するｍ／ｚ １４３イオンのＭＳ３スペクトルを図８および図９に示す。対応する重水素化断片は、１７１、１４３、１２７、１１５．０９、１１５．０６、および７１に検出されたが、１２４および９６の断片は変化しないでそのまま残った。全てのこれらのイオンは、元々提案したフラグメンテーション経路（スキーム２参照）中に組み込んでうまく理論的に説明でき、化合物Ａの提案した構造の妥当性に対して納得できる証拠が得られた。
【0220】
スキーム２．重水素化類似体の可能なフラグメンテーション経路【0221】
提案した構造を、合成標準（実施例１参照）に対する直接比較によりさらに確証した。方法１および方法２の両方により調製した合成ＴＭＡＰは、ＬＣ／ＭＳにより、それぞれ、ｍ／ｚ ２２９．１５４１５（計算値から−２．３ｐｐｍ外れる）および２２９．１５４０３（計算値から−２．８ｐｐｍ外れる）の分子イオンを含む１．４４分の溶離液を生成した。方法１により調製された生成物を、化合物Ａとのさらなる比較用として選択した。
【0222】
クロマトグラフ条件下で、合成ＴＭＡＰと化合物Ａを共溶出した場合（下段パネル）、合成ＴＭＡＰの保持時間（図１０の中央パネル）は、（上段パネル）の保持時間と完全に一致した。予想外の成果として、合成ＴＭＡＰの特徴的なピークの尾引きもまた、化合物Ａのものに類似している。合成ＴＭＡＰのプロダクトイオンスペクトル（ＭＳ２）は、化合物Ａのものと、断片およびそれらの相対強度に関し、極めてよく一致した（図１１）。合成ＴＭＡＰの１４２および１７０娘イオンのさらなるフラグメンテーションは、ＭＳ３スペクトルを生成し、これは、それぞれ図１２と１３で並べて比較すると、化合物Ａのものと基本的に同一である。合成ＴＭＡＰのｍ／ｚ １１４イオンのＭＳ４スペクトルは、ｍ／ｚ ７０断片を示し、化合物Ａのものと一致した（図１４）。さらに、合成ＴＭＡＰを重水素交換後分析し、得られたＭＳ、ＭＳ２、およびＭＳ３スペクトルも、図１５〜１７に示すように、化合物Ａのものに極めてよく一致した。全てのこれらのクロマトグラフおよびＭＳスペクトルデータは、化合物ＡがＴＭＡＰであることを強く裏付ける。
【0223】
実施例３．腎機能のためのバイオマーカーとしての化合物Ａ健常および病気の個体由来の多数の血漿および血清試料を分析することにより広範囲な研究を実施した（国際公開第２０１４／１８６３１１号を参照されたい）。結果は、特に中程度のｅＧＦＲの患者において、化合物Ａの血清レベルが糸球体濾過量（ＧＦＲ）と統計的に有意に相関することを示している（例えば、国際公開第２０１４／１８６３１１号の表１、２および４を参照されたい）。中程度のｅＧＦＲの患者では、従来の診断方法を用いた場合、腎機能の評価およびＣＫＤの診断は断定できない。
【0224】
ＴＭＡＰのＣＫＤ−ＥＰＩｃｒ ｅＧＦＲとの相関は−０．６４８で、ＭＤＲＤｃｒ ｅＧＦＲとの相関は−０．５８２である。血清クレアチニンのＣＫＤ−ＥＰＩｃｒ ｅＧＦＲとの相関は−０．６７３で、ＭＤＲＤｃｒ ｅＧＦＲとの相関は−０．６３２である。
【0225】
実施例４．化合物ＡのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定逆相液体クロマトグラフィーを実施して、化合物Ａを測定した。二成分溶媒マネージャー、冷凍保存試料マネージャー（１２℃に設定）およびカラムマネージャー（４０℃に設定）を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムを、逆相カラム（Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８、１．７μｍ、２．１ｘ１００ｍｍ）を用いて、液体クロマトグラフィー用として使用した。移動相Ａは水中の０．１％ギ酸とし、移動相Ｂはメタノール中の０．１％ギ酸とした。直線勾配溶離は、０％移動相Ｂで保持２．００分間の初期条件で実施した。次に、移動相Ｂを０．５０分で９８％に増加させ、０．９０分間維持した。次の注入に対する平衡のために移動相Ｂを０．１０分で０％に戻した。流量を３５０μＬ／分で、総実行時間は４．５０分であった。各試料について、ループ固定で分取量５．０μＬの最終試料溶液を注入した。溶出液を質量分析計のエレクトロスプレー源に直接導入した。強力なニードル洗浄液を未希釈メタノール、弱いニードル洗浄液をメタノールと水の混合物（０．５：９９．５）とした。シール洗浄液をメタノールと水の混合物（１０：９０）とした。
【0226】
ポジティブモードで動作する加熱エレクトロスプレーイオン化（ＨＥＳＩ−ＩＩ）プローブを備えたＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ質量分析計を用いて質量分析を実施した。測定器は、Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ（商標）２．７およびＸＣａｌｉｂｕｒ（商標）２．２ソフトウェアにより制御した。加熱エレクトロスプレー源を次のように設定した。ヒーター温度：４３０℃、シースガス：３０、および補助ガス流量：１２、スイープガス：０、イオンスプレー電圧：４．２０ｋＶ、キャピラリー温度：３５０℃、およびＳ−レンズ ＲＦレベル：６５％。３０，０００の解像度を使用して、ｍ／ｚ １００〜３００の質量範囲で、フルスキャンＦＴＭＳ（フーリエ変換質量分析）スペクトルを収集した。全てのＭＳフラグメンテーション実験で、０．２５０の活性化Ｑおよび１０．０ｍｓの活性化時間と共に、１５，０００の解像度を使用した。親イオンのＭＳ２実験の正規化衝突エネルギーは３１．０ｅＶで、１．０ｍ／ｚの単離幅およびｍ／ｚ ６０〜２４０のスキャン範囲であった。ｍ／ｚ ２２９．１５４７／１４２．０８６０のＭＳ３実験では、正規化衝突エネルギーは第１と第２段目のフラグメンテーションに対しそれぞれ３１．０および２５．０ｅＶで、両段でｍ／ｚ ２．０の単離幅、ｍ／ｚ ５０〜２４０のスキャン範囲であった。ｍ／ｚ ２２９．１５４７／１７０．０８１０のＭＳ３実験では、正規化衝突エネルギーは第１と第２段目のフラグメンテーションに対しそれぞれ３１．０および３０．０ｅＶであった。単離幅は、第１段と第２段のフラグメンテーションに対しそれぞれ、ｍ／ｚ ３．０および２．０で、スキャン範囲は、ｍ／ｚ ５０〜２４０であった。ｍ／ｚ ２２９．１５４７／１４２．０８６０／１１４．０９１１のＭＳ４実験では、正規化衝突エネルギーは第１〜第３段目のフラグメンテーションに対しそれぞれ３１．０、２０．０、および２０．０ｅＶであった。単離幅は、全３段に対し、ｍ／ｚ ２．０で、スキャン範囲は、ｍ／ｚ ５０〜２４０であった。