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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022100365
(43)【公開日】2022-07-05
(54)【発明の名称】排尿障害を予防または改善するための機能性食品
(51)【国際特許分類】
A23L 33/10 20160101AFI20220628BHJP
A23L 17/60 20160101ALI20220628BHJP
A61P 13/00 20060101ALI20220628BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20220628BHJP
A61P 13/10 20060101ALI20220628BHJP
A61K 36/02 20060101ALI20220628BHJP
A61K 36/05 20060101ALI20220628BHJP
A61K 36/03 20060101ALI20220628BHJP
A61K 36/04 20060101ALI20220628BHJP
A61K 31/202 20060101ALI20220628BHJP
A61K 31/336 20060101ALI20220628BHJP
【ＦＩ】
A23L33/10
A23L17/60 W
A23L17/60 102
A23L17/60 Z
A61P13/00
A61P13/08
A61P13/10
A61K36/02
A61K36/05
A61K36/03
A61K36/04
A61K31/202
A61K31/336
【審査請求】未請求
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022072035
(22)【出願日】2022-04-26
(62)【分割の表示】P 2021540976の分割
【原出願日】2020-08-19
(31)【優先権主張番号】62/889,106
(32)【優先日】2019-08-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】591040513
【氏名又は名称】株式会社マルハチ村松
(71)【出願人】
【識別番号】507219686
【氏名又は名称】静岡県公立大学法人
(74)【代理人】
【識別番号】100104411
【弁理士】
【氏名又は名称】矢口 太郎
(72)【発明者】
【氏名】保苅 義則
(72)【発明者】
【氏名】青島 啓太
(72)【発明者】
【氏名】山田 静雄
(72)【発明者】
【氏名】伊藤 由彦
(57)【要約】
【解決課題】 本発明は、安価で資源豊富で、容易に入手および摂取でき、排尿障害に対する予防および改善することができる、副作用の少ない新規の機能性食品・健康補助食品を提供することにある。
【解決手段】 本発明の実施形態によれば、海藻からアルコール溶液もしくは水抽出された海藻由来抽出物を含むことを特徴とする、排尿障害予防または改善用の機能性食品が提供される。ここで、前記排尿障害は、前立腺肥大または過活動膀胱を要因とするものであり、前記海藻は、アオサ、アオノリ、コンブ、アラメ、カジメ、ワカメ、メカブ、ヒジキ、モズク、テングサ、ダルス、岩ノリ、およびアカモクからなる群から一つの海藻を選択されるものであり、特にアカモクが好ましい。
【選択図】 図１
【解決手段】 本発明の実施形態によれば、海藻からアルコール溶液もしくは水抽出された海藻由来抽出物を含むことを特徴とする、排尿障害予防または改善用の機能性食品が提供される。ここで、前記排尿障害は、前立腺肥大または過活動膀胱を要因とするものであり、前記海藻は、アオサ、アオノリ、コンブ、アラメ、カジメ、ワカメ、メカブ、ヒジキ、モズク、テングサ、ダルス、岩ノリ、およびアカモクからなる群から一つの海藻を選択されるものであり、特にアカモクが好ましい。
【選択図】 図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
海藻由来抽出物を含むことを特徴とする、排尿障害予防または改善用の機能性食品。
【請求項2】
請求項１記載の食品において、前記排尿障害は、前立腺肥大または過活動膀胱を要因とするものである
ことを特徴とする、機能性食品。
ことを特徴とする、機能性食品。
【請求項3】
請求項１記載の食品において、前記海藻は、アオサ、アオノリ、コンブ、アラメ、カジメ、ワカメ、メカブ、ヒジキ、モズク、テングサ、ダルス、岩ノリ、およびアカモクからなる群から一つの海藻を選択される
ことを特徴とする、機能性食品。
ことを特徴とする、機能性食品。
【請求項4】
請求項１記載の食品において、前記海藻由来抽出物は、特定の海藻から５０％以上のエタノール溶液で抽出されたものである
ことを特徴とする機能性食品。
ことを特徴とする機能性食品。
【請求項5】
請求項４記載の食品において、前記海藻由来抽出物は、特定の海藻から９５％以上のエタノールで抽出されたものである
ことを特徴とする機能性食品。
ことを特徴とする機能性食品。
【請求項6】
請求項１記載の食品において、前記海藻由来抽出物は、抽出エキス濃度が３００μｇ／ｍＬ以上である
ことを特徴とする機能性食品。
ことを特徴とする機能性食品。
【請求項7】
請求項６記載の食品において、前記海藻由来抽出物は、抽出エキス濃度が１ｍｇ／ｍＬ以上である
ことを特徴とする機能性食品。
ことを特徴とする機能性食品。
【請求項8】
請求項１記載の食品において、前記海藻由来抽出物に含まれるフコキサンチン濃度が０．５ｍｇ／Ｋｇ以上、エイコサペンタエン酸が７１μｇ／ｍＬ以上、ステアリドン酸が４７μｇ／ｍＬ以上、である
ことを特徴とする機能性食品。
ことを特徴とする機能性食品。
【請求項9】
請求項１記載の食品において、前記海藻由来抽出物は、特定の海藻から水抽出あるいは熱水抽出されたものである
ことを特徴とする機能性食品。
ことを特徴とする機能性食品。
【請求項10】
請求項１記載の食品において、前記海藻由来抽出物は、抽出エキス濃度が５０ｍｇ／ｍＬ以上である
ことを特徴とする機能性食品。
ことを特徴とする機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、機能性食品に関し、特に、排尿障害を予防または改善するための食品に関するものである。
【背景技術】
【0002】
一般的に年齢が上がるにつれて、遺伝子要因、食生活、肥満、高血圧、高血糖、脂質異常等を含む何らかの原因で排尿に困難をきたす排尿障害に関連する症状が出てくることが多い。排尿障害とは、膀胱と尿道（男性では前立腺を含む）、および尿道括約筋で構成される下部尿路の機能に障害があることである。主に、排尿障害の二大要因として、過活動膀胱および前立腺肥大があるが、それらの症状の程度は個人により様々である。
【0003】
そのような現状の中、近年、手軽に摂取可能な排尿障害に効果のある補助食品として、ノコギリヤシが注目されている。ノコギリヤシ果実の抽出物は、泌尿器症状、慢性骨盤痛、膀胱障害、性欲減退、脱毛、ホルモンバランスの不均衡および前立腺癌に対して効果があるとして日本を初め米国・欧州でも良く知られ、活用されてきた。
【0004】
しかしながら、ノコギリヤシの国内需要が高まる一方で、近年、ノコギリヤシの主産地である米国・フロリダ半島やメキシコでの天候不順などの影響を受け４年連続の不作となり、日本への供給が不安定となっている。また、そのために価格が高騰するなどの問題も引き起こしている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
特許文献１：特開２０２０－０７８２９２
特許文献２：特開２０１４－１７２９０３
特許文献３：特開２０１４－１７２９０２
特許文献４：特開２０１３－０６６４５０
特許文献５：特開平０２－２０３７７１
特許文献２：特開２０１４－１７２９０３
特許文献３：特開２０１４－１７２９０２
特許文献４：特開２０１３－０６６４５０
特許文献５：特開平０２－２０３７７１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明は、安価で資源豊富で、容易に入手および摂取でき、排尿障害に対する予防および改善することができる、副作用の少ない新規の機能性食品・健康補助食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明者らは、上述の目的を達成するために、多種多様な天然素材を試す中で、安価で資源豊富で、容易に入手および摂取できる素材として、海藻の一種であるアカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ Ｈｏｒｎｅｒｉ）に着目した。
【0008】
アカモクは、ヒジキ等と同属である、ヒバマタ目、ホンダワラ科ホンダワラ属の多年性褐藻類であり、北海道東部を除く日本全国の海岸、朝鮮半島から中国・ベトナム北部に渡って幅広く分布する。特に、ホンダワラ属は、「大西洋サルガッサム巨大ベルト」と呼ばれる程の資源量がある。
【0009】
そして、アカモクは、以前より、東北地方で郷土食として食されてきた。アカモクには、フコイダンとアルギン酸を始めとする多糖類、ミネラル、フコキサンチン、多価不飽和脂肪酸およびポリフェノールなどの様々な成分を含むため、美容や健康に良い薬理効果と機能性があると知られている。
【0010】
発明者らは、上述のようなアカモクの資源量の多さ及び多機能性に着目し、当該アカモクを含む海藻類に排尿障害予防または改善に寄与する機能を奏する可能性があるとの仮説を立て、鋭意実験を重ねることによって当該機能を奏する要件を同定し、本発明を完成するに至ったものである。
【0011】
すなわち、本発明の主要な観点によれば、以下の発明が提供される。
【0012】
（１） 海藻由来抽出物を含むことを特徴とする、排尿障害予防または改善用の機能性食品。
【0013】
（２） 前記（１）の食品において、前記排尿障害は、前立腺肥大または過活動膀胱を要因とするものであることを特徴とする、機能性食品。
【0014】
（３） 前記（１）の食品において、前記海藻は、アオサ、アオノリ、コンブ、アラメ、カジメ、ワカメ、メカブ、ヒジキ、モズク、テングサ、ダルス、岩ノリ、およびアカモクからなる群から一つの海藻を選択されることを特徴とする、機能性食品。
【0015】
（４） 前記（１）の食品において、前記海藻由来抽出物は、特定の海藻から５０％以上のエタノール溶液で抽出されたものであることを特徴とする機能性食品。
【0016】
（５） 前記（４）の食品において、前記海藻由来抽出物は、特定の海藻から９５％以上のエタノールで抽出されたものであることを特徴とする機能性食品。
【0017】
（６） 前記（１）の食品において、前記海藻由来抽出物は、抽出エキス濃度が３００μｇ／ｍＬ以上であることを特徴とする機能性食品。
【0018】
（７） 前記（６）の食品において、前記海藻由来抽出物は、抽出エキス濃度が１ｍｇ／ｍＬ以上であることを特徴とする機能性食品。
【0019】
（８） 前記（１）の食品において、前記海藻由来抽出物に含まれるフコキサンチン濃度が０．５ｍｇ／Ｋｇ以上、エイコサペンタエン酸が７１μｇ／ｍＬ以上、ステアリドン酸が４７μｇ／ｍＬ以上、であることを特徴とする機能性食品。
【0020】
（９） 前記（１）の食品において、前記海藻由来抽出物は、特定の海藻から水抽出あるいは熱水抽出されたものであることを特徴とする機能性食品。
【0021】
（１０） 前記（１）の食品において、前記海藻由来抽出物は、抽出エキス濃度が５０ｍｇ／ｍＬ以上であることを特徴とする機能性食品。
【0022】
上記の構成によれば、過活動膀胱の過剰な収縮の抑制、前立腺肥大の原因となる５α還元酵素の活性阻害、アンドロゲン受容体結合の阻害を奏することができる。
【0023】
上記作用を奏することにより、結果として、過活動膀胱の過剰な収縮及び前立腺肥大を抑制することできる。これにより、排尿障害が予防もしくは改善することができるという効果がある。
【0024】
そして、アカモク等の海藻類は資源が豊富で安価であるため、副作用のない安全な機能性食品を大量生産することが可能であるという効果を得ることができるものである。
【0025】
なお、上記以外の本発明の特徴については、以下で説明する本発明の実施形態の説明中で明らかにされる。
【0026】
また、本明細書中ではいくつかの文献を参照しているが、各文献の内容は、その全体が当該参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【0027】
【0028】
【0029】
【0030】
【0031】
【0032】
【0033】
【0034】
【0035】
【0036】
【0037】
【0038】
【0039】
【0040】
【0041】
【0042】
【0043】
【0044】
【0045】
【0046】
【0047】
【0048】
【0049】
【0050】
【0051】
【0052】
【0053】
【0054】
【0055】
【0056】
【発明を実施するための形態】
【0057】
以下、この発明の一実施形態を、図面や表を参照しながら説明する。
【0058】
（本発明の実施形態）
上述したように、本発明者らは、上述の目的を達成するために、多種多様な天然素材を試す中で、安価で資源豊富で、容易に入手および摂取できる素材として、海藻の一種であるアカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ Ｈｏｒｎｅｒｉ）に着目した。
上述したように、本発明者らは、上述の目的を達成するために、多種多様な天然素材を試す中で、安価で資源豊富で、容易に入手および摂取できる素材として、海藻の一種であるアカモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ Ｈｏｒｎｅｒｉ）に着目した。
【0059】
アカモクは、ヒジキ等と同属である、ヒバマタ目、ホンダワラ科ホンダワラ属の多年性褐藻類であり、北海道東部を除く日本全国の海岸、朝鮮半島から中国・ベトナム北部に渡って幅広く分布する。特に、ホンダワラ属は、「大西洋サルガッサム巨大ベルト」と呼ばれる程の資源量がある。
【0060】
そして、アカモクは、フコイダンとアルギン酸を始めとする多糖類、ミネラル、フコキサンチン、多価不飽和脂肪酸およびポリフェノールなどの様々な成分を含んでおり、美容や健康に良い薬理効果と機能性があることが知られている。
【0061】
発明者らは、上述のようなアカモクの資源量の多さ及び多機能性に着目し、当該アカモクを含む海藻類に排尿障害予防または改善に寄与する機能を奏する可能性、特に、排尿障害の２大要因である過活動膀胱及び前立腺肥大に作用する可能性があるとの仮説を立て、鋭意実験を重ねることによって当該機能を奏する要件を同定し、本発明を完成するに至ったものである。
【0062】
本発明を構成及び機能を説明するため、まず、排尿障害の２大要因について説明する。
【0063】
（過活動膀胱）
前述したように、排尿障害の二大要因の一つとして過活動膀胱がある。
前述したように、排尿障害の二大要因の一つとして過活動膀胱がある。
【0064】
過活動膀胱による排尿障害は、神経因性と神経以外の原因で起こる非神経因性のものが存在する。前者は、脳血管障害、パーキンソン病、多系統萎縮症、認知症などの脳の神経障害から、または脊髄損傷、多発性硬化症、脊髄小脳変性症状などの脊髄の神経障害のために脳と膀胱（尿道）の筋肉に関連する神経の回路に障害が起き、排尿障害につがなる可能性もある。また、上記前立腺肥大症に合併したり、出産などによる骨盤低筋の弱くなったりしたために排尿障害に発展することもある。
【0065】
これらの治療薬には、膀胱の収縮および弛緩をコントロールする抗コリン薬やβ３アドレナリン受容体作動薬などが一般的である。しかしながら、抗コリン薬には口の渇き、便秘、目の調節障害等の副作用があり、β３アドレナリン受容体作動薬には、生殖可能な年齢の患者への投与を避けた方が良いとされる年齢制限がある。
【0066】
（前立腺肥大）
また、排尿障害の二大要因のもう一つに前立腺肥大がある。前立腺肥大は、前立腺が尿道の周囲を取り囲むように存在しているため、前立腺が肥大することによって尿道が狭くなり、排尿障害が生じるものである。この前立腺は男性ホルモンの一つであるテストステロンが５α還元酵素という酵素によって、より作用が強く前立腺を肥大させるジヒドロテストステロンへと変換され、このジヒドロテストステロンはアンドロゲン受容体（ＡＲ）結合をすることにより、さらなる前立腺細胞増殖を繰り返すことによって肥大化し得る。
また、排尿障害の二大要因のもう一つに前立腺肥大がある。前立腺肥大は、前立腺が尿道の周囲を取り囲むように存在しているため、前立腺が肥大することによって尿道が狭くなり、排尿障害が生じるものである。この前立腺は男性ホルモンの一つであるテストステロンが５α還元酵素という酵素によって、より作用が強く前立腺を肥大させるジヒドロテストステロンへと変換され、このジヒドロテストステロンはアンドロゲン受容体（ＡＲ）結合をすることにより、さらなる前立腺細胞増殖を繰り返すことによって肥大化し得る。
【0067】
そのため、５α還元酵素阻害薬等の５α還元酵素を阻害する治療薬、または抗アンドロゲン薬等のアンドロゲン受容体とジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の結合阻害を促進する治療薬および治療法の研究が現在進められている。しかしながら、これらの治療薬には、長期間の内服を必要とされ、血清テストステロン値を低下させることによる性機能障害等の副作用の存在が認められることが現状である。
【0068】
（本発明について）
これに対して、本発明者らは、資源量が豊富で安価に入手できる特定の海藻に着目し、その抽出物が、特定の条件の下、膀胱の収縮を阻害する機能を奏するとともに、５α還元酵素阻害薬等の５α還元酵素を阻害する機能を有することの知見を得、それを実験で確かめることによって本発明を完成するに至ったものである。
これに対して、本発明者らは、資源量が豊富で安価に入手できる特定の海藻に着目し、その抽出物が、特定の条件の下、膀胱の収縮を阻害する機能を奏するとともに、５α還元酵素阻害薬等の５α還元酵素を阻害する機能を有することの知見を得、それを実験で確かめることによって本発明を完成するに至ったものである。
【0069】
すなわち、本発明は、海藻由来抽出物を含むことを特徴とする、排尿障害予防または改善用の機能性食品である。
【0070】
ここで、本発明の第１の実施形態によれば、上記海藻由来抽出は、海藻を特定濃度のエタノール溶液によりエタノール抽出するものである。この海藻としてはアカモクであることが好ましい。また、抽出に使用するエタノール溶液の濃度は５０％、さらに好ましくはエタノール溶液の濃度は９０％以上、抽出エキス濃度は３００μｇ／ｍＬ以上、さらに好ましくは１ｍｇ／ｍＬであることが好ましい。
【0071】
例えば、この第１の実施形態の機能性食品は、以下のようにして製造可能である。
【0072】
この実施形態では、国産アカモクを用いた例を図１に示すフローチャートを参照して説明する。
【0073】
まず、この国産アカモク３．６ｋｇを、上水７２Ｌを用いて一晩（１６時間）浸漬した後、上水ですすぎ洗いながら脱塩処理を行う。その後、室温で送風機によって含水率１０％以下に乾燥させる。
【0074】
次に、このように乾燥処理したアカモクを、５倍量の９５％のエタノール溶液あるいは２０倍量の５０％のエタノール溶液に浸し、浸漬あるいは撹拌によって抽出を行う。抽出は室温で１時間から１６時間行う。それにより、回収した抽出溶液は、減圧濃縮機で１／５０以下の体積に濃縮した後、遠心型減圧濃縮機で溶媒を除去させてアカモクエタノール抽出物を回収する。
【0075】
この実施形態では、回収したアカモクエタノール抽出物をそのまま容器に封入し、機能性食品とする。
【0076】
ただし、機能性食品はそのような形態に限定されるものではなく、上記で生成したアカモクエタノール抽出物を植物油脂等で希釈溶解してソフトカプセル剤等の形態に加工することによって、機能性食品とすることができる。
【0077】
また、本発明の第２の実施形態は、以下のようにして製造可能である。
【0078】
国産アカモクを、２０倍量の上水に浸し、浸漬または撹拌抽出によって抽出を行う。抽出は水（室温）または熱水（７０～９０℃）で１時間から一晩かけて行う。それにより回収した抽出溶液は減圧濃縮機で１／５０以下の体積に濃縮した後、遠心型減圧濃縮機または凍結乾燥機もしくは噴霧乾燥機（スプレードライヤー）で乾燥させ、アカモク水（熱水）抽出物として回収する。
【0079】
この実施形態では、回収したアカモク水（熱水）抽出物をそのまま容器に封入し、機能性食品とする。
【0080】
ただし、機能性食品はそのような形態に限定されるものではなく、上記で生成したアカモク水（熱水）抽出物を錠剤、カプセル剤、あるいは水溶性である特性を活用して清涼飲料水、ゼリー等の形態に加工することによって、機能性食品とすることができる。
【0081】
以下、上記のように生成したアカモク由来抽出物を含む機能性食品が過活動膀胱及び前立腺肥大に対して有効に作用するか検討するために行った実験及びその実験結果を説明する。
【0082】
［実験１］アカモクエキスの抽出及び効果評価のための準備
この実験１では、アカモク含有成分が過活動膀胱に対して有効に作用するのかを効果評価するために、まず、図２に示すフローチャートに従って、アカモク９５％ＥｔＯＨ（エタノール溶液）抽出物（アカモクエキス）を得た。
この実験１では、アカモク含有成分が過活動膀胱に対して有効に作用するのかを効果評価するために、まず、図２に示すフローチャートに従って、アカモク９５％ＥｔＯＨ（エタノール溶液）抽出物（アカモクエキス）を得た。
【0083】
さらに、後で説明するさらなる抽出物質の分析のために、粗精製により、脂溶性を有するｎ－Ｈｅｘ（ｎヘキサン）、ＭｅＣＮ（アセトニトリル）、ＣＨＣｌ３（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）クロロホルム回収（不溶物を再溶解）の各画分を得た。
【0084】
［実験２］マグヌス試験（アカモクエキス１ｍｇ／ｍＬ）<１ｍＭＡＣｈ収縮阻害試験>
実験２では、収縮／弛緩作用の評価を行うマグヌス装置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験を行うことによって、アカモクエキスのアセチルコリン（ＡＣｈ）誘発収縮に対する影響を検討した。
実験２では、収縮／弛緩作用の評価を行うマグヌス装置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験を行うことによって、アカモクエキスのアセチルコリン（ＡＣｈ）誘発収縮に対する影響を検討した。
【0085】
図３に示すように、まず、ラットから摘出した膀胱平滑筋切片を作製し、マグヌス管の中心部にセットした。前記実験１で得たアカモクエキスをマグヌス槽に添加し、３０分後に１ｍＭ ＡＣｈを添加し収縮を惹起した。またこの実験においては、アカモク抽出物の濃度および放置時間を変更することによって、収縮に対する作用に最適な濃度および時間を検討した。
【0086】
図４の左２つのグラフでは、Ｘ軸が、比較対象、アカモクエキス１ｍｇ／ｍＬ １０分、アカモクエキス１ｍｇ／ｍＬ ３０分のピークと静止相の時間差での収縮抑制を示すものである。図４の右２つのグラフでは、Ｘ軸が、比較対象コントロール、アカモクエキス１ｍｇ／ｍＬ ３０分、アカモクエキス１０μｇ／ｍＬ ３０分のピークと静止相でアカモクエキスの濃度差での収縮抑制度を示すものである。
【0087】
結果として、１ｍＭ ＡＣｈ（アセチルコリン）収縮を最も有意に抑制するのは、実験１で得たアカモクエキス１ｍｇ／ｍＬ ３０分であることがわかった。
【0088】
［実験３］マグヌス試験結果（アカモクエキス１ｍｇ／ｍＬ）<８０ｍＭ ＫＣｌ収縮阻害試験、１０ｍＭ ｃａｒｂａｃｏｌ収縮阻害試験>
次に、アカモクエキス１ｍｇ／ｍＬをマグヌス槽に添加し、５分後に８０ｍＭ ＫＣｌ又は３０分後にアセチルコリン誘発をさらに促進する１０ｍＭのカルバコール（ｃａｒｂａｃｏｌ）を夫々別々に添加し、収縮を惹起することによって、より強い収縮の状況下におけるアカモクエキスによる抑制効果を検討した。
次に、アカモクエキス１ｍｇ／ｍＬをマグヌス槽に添加し、５分後に８０ｍＭ ＫＣｌ又は３０分後にアセチルコリン誘発をさらに促進する１０ｍＭのカルバコール（ｃａｒｂａｃｏｌ）を夫々別々に添加し、収縮を惹起することによって、より強い収縮の状況下におけるアカモクエキスによる抑制効果を検討した。
【0089】
図５の左側のグラフでは、８０ｍＭ ＫＣｌによる収縮に対するアカモクエキス１ｍｇ／ｍＬの収縮抑制と、右側のグラフの１０ｍＭのカルバコールによる収縮に対するアカモクエキス１ｍｇ／ｍＬ収縮抑制の比較を示す。
【0090】
図５に示すように、アカモクエキス１ｍｇ／ｍＬは、１０ｍＭ ｃａｒｂａｃｏｌ添加による収縮が促進された状況下においても、実験１のアカモクエキスは収縮を有意に抑制したことがわかった。
【0091】
［実験４］マグヌス試験結果（アカモクエキス分液画分３００μｇ／ｍＬ）<８０ｍＭ ＫＣｌ収縮阻害試験>
この実験４では、実験１で粗精製によって取得したアカモクエキス中の脂溶性の各分画物（夫々濃度３００μｇ／ｍＬ）のｎ－Ｈｅｘ（ｎヘキサン）、ＭｅＣＮ（アセトニトリル）、ＣＨＣｌ３（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）クロロホルム回収（不溶物を再溶解）について収縮に対する抑制作用を検討した。
この実験４では、実験１で粗精製によって取得したアカモクエキス中の脂溶性の各分画物（夫々濃度３００μｇ／ｍＬ）のｎ－Ｈｅｘ（ｎヘキサン）、ＭｅＣＮ（アセトニトリル）、ＣＨＣｌ３（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）クロロホルム回収（不溶物を再溶解）について収縮に対する抑制作用を検討した。
【0092】
図６に示すように、Ｘ軸は、比較対象、ｎ－Ｈｅｘ（ｎヘキサン）、ＭｅＣＮ（アセトニトリル）、ＣＨＣｌ３（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）クロロホルム回収（不溶物を再溶解）の各分画物の収縮抑制を比較し、Ｙ軸は、８０ｍＭ ＫＣｌ収縮率を表す。
【0093】
結果として、上述の各分画物中、特にアカモクエキス中のＭｅＣＮ（アセトニトリル）画分が有意に抑制することがわかった。
【0094】
［実験５］マグヌス試験結果（アカモクエキス分液画分３００μｇ／ｍＬ）<１ｍＭ ＡＣｈ収縮阻害試験>
この実験５では、実験４に加え、さらに、アカモクエキス中各分画物（夫々濃度３００μｇ／ｍＬ）ｎ－Ｈｅｘ（ｎヘキサン）、ＭｅＣＮ（アセトニトリル）、ＣＨＣｌ３（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）クロロホルム回収（不溶物を再溶解）について、一定の期間観察することによって、特にどのＰｈａｓｅで収縮抑制が有効に作用するのかを検討した。
この実験５では、実験４に加え、さらに、アカモクエキス中各分画物（夫々濃度３００μｇ／ｍＬ）ｎ－Ｈｅｘ（ｎヘキサン）、ＭｅＣＮ（アセトニトリル）、ＣＨＣｌ３（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）クロロホルム回収（不溶物を再溶解）について、一定の期間観察することによって、特にどのＰｈａｓｅで収縮抑制が有効に作用するのかを検討した。
【0095】
図７の左のグラフでは、Ｘ軸は、比較対象、ｎ－Ｈｅｘ（ｎヘキサン）、ＭｅＣＮ（アセトニトリル）、ＣＨＣｌ３（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）クロロホルム回収（不溶物を再溶解）の各分画物の収縮抑制のｅａｒｌｙ ｐｈａｓｅ（早期）と図７の右のグラフのＰｌａｔｅａｕ ｐｈａｓｅ（定常期）を示す。Ｙ軸は、８０ｍＭ ＫＣｌ収縮率を表す。
【0096】
結果として、図７の両グラフに示すように、ｅａｒｌｙ ｐｈａｓｅ（早期）よりも、特にＰｌａｔｅａｕ（Ｔｏｎｉｃ）ｐｈａｓｅにおいて、収縮を有意に抑制した。また、各分画物中、特にＭｅＣＮ（アセトニトリル）画分のＰｌａｔｅａｕ（Ｔｏｎｉｃ）ｐｈａｓｅにおいて、収縮を有意に抑制した。
【0097】
［実験６］マグヌス試験結果（アカモクエキス分液画分１００μｇ／ｍＬ）<１ｍＭ ＡＣｈ収縮阻害試験>
この実験６では、実験５のアカモクエキス分液画分の濃度３００μｇ／ｍＬを１００μｇ／ｍＬに変えて、実験５と同様の実験を行い、Ｐｌａｔｅａｕ ｐｈａｓｅ（定常期）でどのような差異が生じるかを検討した。
この実験６では、実験５のアカモクエキス分液画分の濃度３００μｇ／ｍＬを１００μｇ／ｍＬに変えて、実験５と同様の実験を行い、Ｐｌａｔｅａｕ ｐｈａｓｅ（定常期）でどのような差異が生じるかを検討した。
【0098】
結果として、図８の両グラフに示すように、実験５の結果と同様に、Ｐｌａｔｅａｕ（Ｔｏｎｉｃ）ｐｈａｓｅ収縮を有意に抑制した。また、各分画物中、特にＭｅＣＮ（アセトニトリル）画分のＰｌａｔｅａｕ（Ｔｏｎｉｃ）ｐｈａｓｅにおいて、収縮を有意に抑制した。
【0099】
［実験７］マグヌス試験結果（アカモクエキス分液画分）<ＡＣｈ累積投与収縮阻害試験>
実験５および６の結果に基づき、３つの画分中でより収縮を有意に抑制したＭｅＣＮ（アセトニトリル）画分を、夫々１００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、および１ｍｇ／ｍＬと濃度を変化させて比較した。
実験５および６の結果に基づき、３つの画分中でより収縮を有意に抑制したＭｅＣＮ（アセトニトリル）画分を、夫々１００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、および１ｍｇ／ｍＬと濃度を変化させて比較した。
【0100】
図９に示すように、ＭｅＣＮ画分は、ＡＣｈの濃度反応曲線を濃度依存的に右にシフトさせた。これにより、ＭｅＣＮ（アセトニトリル）画分の濃度が高いほど収縮を有意に抑制することがわかった。
【0101】
［実験８］マグヌス試験（収縮阻害実験）<抽出エタノール濃度の検討実験>
上述と同様の収縮／弛緩作用の評価を行うマグヌス装置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験に基づき、アカモクエキス（夫々９５％エタノール抽出物、５０％エタノール抽出物、水抽出物）で濃度１００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬをマグヌス槽に添加し、３０分後に収縮薬剤である８０ｍＭ ＫＣｌを添加し収縮を惹起した。その後、ラットから摘出した膀胱平滑筋切片の張力（収縮力）を測定し、夫々のエタノールの濃度、抽出物の濃度における収縮阻害効果の評価を行い、収縮が有意に抑制される最適な濃度を検討した。
上述と同様の収縮／弛緩作用の評価を行うマグヌス装置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験に基づき、アカモクエキス（夫々９５％エタノール抽出物、５０％エタノール抽出物、水抽出物）で濃度１００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬをマグヌス槽に添加し、３０分後に収縮薬剤である８０ｍＭ ＫＣｌを添加し収縮を惹起した。その後、ラットから摘出した膀胱平滑筋切片の張力（収縮力）を測定し、夫々のエタノールの濃度、抽出物の濃度における収縮阻害効果の評価を行い、収縮が有意に抑制される最適な濃度を検討した。
【0102】
図１０Ａ～図１０Ｃにおいて、マグヌス試験による収縮阻害実験の結果を示す。図１０Ａ～図１０Ｃのグラフは、Ｘ軸において、比較対象コントロールのエタノールのみ、１００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、および１０００μｇ／ｍＬのアカモクエキス、Ｙ軸には８０ｍＭ ＫＣｌによる収縮の割合を示す。
【0103】
図１０Ａに示すように、アカモクエキス（９５％エタノール抽出物）では、３００μｇ／ｍＬおよび１０００μｇ／ｍＬのアカモクエキスの量で有意に抑制した。
【0104】
図１０Ｂに示すように、アカモクエキス（５０％エタノール抽出物）では、３００μｇ／ｍＬおよび１０００μｇ／ｍＬのアカモクエキスの量で有意に抑制した。
【0105】
［実験９］マグヌス試験（海藻１２種類の９５％エタノール抽出物および水抽出物における収縮阻害実験）
この実験は、マグヌス装置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験によって、他の海藻の抽出物の過活動膀胱への作用を検討したものである。
この実験は、マグヌス装置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験によって、他の海藻の抽出物の過活動膀胱への作用を検討したものである。
【0106】
検証した海藻は、アカモクの他に、緑藻であるアオサ、アオノリ、褐藻であるコンブ、アラメ、カジメ、ワカメ、メカブ、ヒジキ、モズク、紅藻であるテングサ、ダルス、岩ノリ（スサビノリ・アサクサノリ）である。各海藻を９５％エタノールまたは水で抽出し、１ｍｇ／ｍＬの抽出物を使用した。また、収縮を惹起させるため、収縮薬剤である８０ｍＭ ＫＣｌを添加した。その後、ラットから摘出した膀胱平滑筋切片の張力（収縮力）を測定し、収縮阻害効果の評価を行った。
【0107】
図１１Ａ～図１１Ｂに、マグヌス試験による各海藻による収縮阻害実験の結果を示す。図１１Ａ～図１１Ｂのグラフは、Ｘ軸において、比較対象のエタノールのみ、左から緑藻であるアオサ、アオノリ、褐藻であるコンブ、アラメ、カジメ、ワカメ、メカブ、ヒジキ、モズク、紅藻であるテングサ、ダルス、岩ノリ（スサビノリ・アサクサノリ）順に示し、Ｙ軸には８０ｍＭ ＫＣｌによる収縮の割合を示す。
【0108】
図１１Ａに示すように、海藻１２種類の９５％エタノール抽出物において、アオサで平均７７．７％、アオノリで平均７４．２％、コンブで平均７６．９％、アラメで平均６４．９％、カジメで平均７９．６％、ワカメで平均７９．２％、メカブで平均７０．７％、ヒジキで平均４７．４％、モズクで平均６７．５％、テングサで平均６６．８％、ダルスで平均８５．６、岩ノリで平均７６．７％収縮を抑制した。特に、アラメ、ヒジキ、モズク、およびテングサで有意に抑制した。
【0109】
図１１Ｂに示すように、海藻１２種類の水抽出物において、アオサで平均８７．３％、アオノリで平均８９．７％、コンブで平均１０２．４％、アラメで平９６．２％、カジメで平均９６．１％、ワカメで平均９３．６％、メカブで平均９６．０％、ヒジキで平均９６．８％、モズクで平均９４．２％、テングサで平均８４．８％、ダルスで平均１０２．７、岩ノリで平均９８．３％という割合でいずれも有意差がなく、収縮を抑制しなかった。
【0110】
これにより、１２種類の海藻いずれも、９５％エタノール抽出物において、収縮を有意に抑制することがわかった。
【0111】
［実験１０］マグヌス試験（アカモク中の成分の不飽和脂肪酸における収縮阻害実験）
次に、マグヌス装置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験によって、アカモク中の成分である不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、アラキドン酸、ステアリドン酸、αリノレン酸）の過活動膀胱への作用を成分別に検討した。すなわち、成分別に分析することにより、その成分がより過活動膀胱への作用を有するのかを検証した。
次に、マグヌス装置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験によって、アカモク中の成分である不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、アラキドン酸、ステアリドン酸、αリノレン酸）の過活動膀胱への作用を成分別に検討した。すなわち、成分別に分析することにより、その成分がより過活動膀胱への作用を有するのかを検証した。
【0112】
各脂肪酸の濃度は、アカモク９５％エタノール抽出物中の含有量（日本食品分析センター；ＪＦＲＬ定量分析）から設定した。具体的には、ＥＰＡの含有量を７１μｇ／ｍＬ、アラキドン酸の含有量を４４μｇ／ｍＬ、ステアリドン酸の含有量を４７μｇ／ｍＬ、αリノレン酸の含有量を３６μｇ／ｍＬと設定した。比較対象は、エタノールとした。また、上述の実施例と同様に、収縮を惹起させるため、収縮薬剤である８０ｍＭ ＫＣｌを添加した。その後、ラットから摘出した膀胱平滑筋切片の張力（収縮力）を測定し、収縮阻害効果の評価を行った。
【0113】
図１２は、マグヌス試験によるアカモクの各成分による収縮阻害実験の結果を示したものである。図１２のグラフは、Ｘ軸において、左から、比較対象のエタノール、ＥＰＡ、アラキドン酸、ステアリドン酸、αリノレン酸の成分含有量順に示し、Ｙ軸には８０ｍＭ ＫＣｌによる収縮の割合を示す。
【0114】
図１２に示すように、エタノールにおいて平均９１．０％、ＥＰＡで平均７８．２％、アラキドン酸で平均８２．０％、ステアリドン酸で平均６８．５％、αリノレン酸で平均８６．８％収縮を抑制した。特に、ＥＰＡおよびステアリドン酸で有意に抑制した。これにより、アカモクエキス中のＥＰＡおよびステアリドン酸という成分に収縮抑制をする作用が含まれることがわかった。
【0115】
［実験１１］マグヌス試験（アカモク中の成分の組み合わせにおける収縮阻害実験）
次に、アカモク中の成分である不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、アラキドン酸、ステアリドン酸、αリノレン酸）において、ＥＰＡ、アラキドン酸、αリノレン酸の組み合わせによる過活動膀胱への作用を検討した。すなわち、組み合わせを変えることによって、成分の作用の相加相乗効果を検討した。
次に、アカモク中の成分である不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、アラキドン酸、ステアリドン酸、αリノレン酸）において、ＥＰＡ、アラキドン酸、αリノレン酸の組み合わせによる過活動膀胱への作用を検討した。すなわち、組み合わせを変えることによって、成分の作用の相加相乗効果を検討した。
【0116】
各脂肪酸の濃度は、アカモク９５％エタノール抽出物中の含有量（ＪＦＲＬ定量分析）から設定した。ＥＰＡ＋アラキドン酸＋およびαリノレン酸の組み合わせ、ＥＰＡ＋アラキドン酸の組み合わせ、ＥＰＡ＋αリノレン酸の組み合わせを比較とした。比較対象は、ＥＰＡのみとした。また、上述の実施例と同様に、収縮を惹起させるため、収縮薬剤である８０ｍＭ ＫＣｌを添加した。その後、ラットから摘出した膀胱平滑筋切片の張力（収縮力）を測定し、収縮阻害効果の評価を行った。
【0117】
図１３は、マグヌス試験によるアカモクの各成分の組み合わせによる収縮阻害実験の結果を示す。図１３のグラフは、Ｘ軸において、左から、比較対象のＥＰＡ、ＥＰＡ＋アラキドン酸＋αリノレン酸の組み合わせ、ＥＰＡ＋アラキドン酸の組み合わせ、ＥＰＡ＋αリノレン酸の組み合わせの順に示し、Ｙ軸には８０ｍＭ ＫＣｌによる収縮の割合を示す。
【0118】
図１３に示すように、ＥＰＡで平均７８．２％、ＥＰＡ＋アラキドン酸＋αリノレン酸の組み合わせで平７６．８％、ＥＰＡ＋アラキドン酸の組み合わせで平均７８．８％、ＥＰＡ＋αリノレン酸の組み合わせで平均７５．７％収縮を抑制した。結果、ＥＰＡ単独と比較して、夫々の組み合わせに有意差がなく、相加相乗効果が無いことが明らかとなった。
【0119】
［実験１２］マグヌス試験（アカモク中の成分のＥＰＡおよびステアリドン酸における含有量別収縮阻害実験）
この実験では、アカモク中の成分である不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、アラキドン酸、ステアリドン酸、αリノレン酸）において、上述の実験１０で有意に抑制したＥＰＡおよびステアリドン酸の濃度を調整し再度実験を行った。
この実験では、アカモク中の成分である不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、アラキドン酸、ステアリドン酸、αリノレン酸）において、上述の実験１０で有意に抑制したＥＰＡおよびステアリドン酸の濃度を調整し再度実験を行った。
【0120】
各脂肪酸の最高濃度は、アカモク９５％エタノール抽出物中の含有量（ＪＦＲＬ定量分析）から設定した。ＥＰＡ７．１μｇ／ｍＬ、ＥＰＡ２１．３μｇ／ｍＬ、ＥＰＡ７１μｇ／ｍＬ、ステアリドン酸４．７μｇ／ｍＬ、ステアリドン酸１４．１μｇ／ｍＬ、ステアリドン酸４７μｇ／ｍＬに設定した。また、上述の実施例と同様に、収縮を惹起させるため、収縮薬剤である８０ｍＭ ＫＣｌを添加した。その後、ラットから摘出した膀胱平滑筋切片の張力（収縮力）を測定し、収縮阻害効果の評価を行った。
【0121】
図１４は、マグヌス試験によるアカモクの各成分の組み合わせによる収縮阻害実験の結果を示すものである。図１４のフラフは、Ｘ軸において、左から、比較対象のエタノール、ＥＰＡ７．１μｇ／ｍＬ、ＥＰＡ２１．３μｇ／ｍＬ、ＥＰＡ７１μｇ／ｍＬ、ステアリドン酸４．７μｇ／ｍＬ、ステアリドン酸１４．１μｇ／ｍＬ、ステアリドン酸４７μｇ／ｍＬの順に示し、Ｙ軸には８０ｍＭ ＫＣｌによる収縮の割合を示す。
【0122】
図１４に示すように、エタノールで平均９０．１％、ＥＰＡ７．１μｇ／ｍＬにおいて平均９１．１％、ＥＰＡ２１．３μｇ／ｍＬにおいて平均８７．２％、ＥＰＡ７１μｇ／ｍＬにおいて平均７３．３％、ステアリドン酸４．７μｇ／ｍＬにおいて平均８７．８％、ステアリドン酸１４．１μｇ／ｍＬにおいて平均８９．５％、ステアリドン酸４７μｇ／ｍＬにおいて平均７５．６％収縮を抑制した。結果、ＥＰＡおよびステアリドン酸の濃度が高いほど有意性が見られることがわかった。
【0123】
［実験１３］酢酸誘発頻尿モデルラットを用いたｉｎ ｖｉｖｏ試験（アカモクエキス９５％エタノール抽出物）
この実験では、ウレタン麻酔下、生理食塩水で希釈した０．１％酢酸をラット膀胱に直接注入することにより、膀胱過敏を誘起し、急性（慢性）頻尿の症状のあるモデルラットを作成し、酢酸誘発頻尿モデルラットを用いたｉｎ ｖｉｖｏ試験を行ったものである。図１５の概略図に示すように、アカモク９５％エタノール抽出物、５０ｍｇ／ｍＬ単回経口投与前後の膀胱内圧および排尿量をウレタン麻酔下シストメトリー法により経時的に測定した。これにより、アカモク９５％エタノール抽出物のラットにおける頻尿状態への影響を検討した。
この実験では、ウレタン麻酔下、生理食塩水で希釈した０．１％酢酸をラット膀胱に直接注入することにより、膀胱過敏を誘起し、急性（慢性）頻尿の症状のあるモデルラットを作成し、酢酸誘発頻尿モデルラットを用いたｉｎ ｖｉｖｏ試験を行ったものである。図１５の概略図に示すように、アカモク９５％エタノール抽出物、５０ｍｇ／ｍＬ単回経口投与前後の膀胱内圧および排尿量をウレタン麻酔下シストメトリー法により経時的に測定した。これにより、アカモク９５％エタノール抽出物のラットにおける頻尿状態への影響を検討した。
【0124】
アカモクエキス投与前後の排尿機能を比較（単回投与）した。
【0125】
投与サンプルは、
比較対象（ｖｅｈｉｃｌｅ）＝０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液
アカモクエキス＝アカモクエキス５０ｍｇ／ｍＬ ＭＣ溶液
である。
比較対象（ｖｅｈｉｃｌｅ）＝０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液
アカモクエキス＝アカモクエキス５０ｍｇ／ｍＬ ＭＣ溶液
である。
【0126】
また、シストメトリー測定項目を以下に記載する。
【0127】
<シストメトリー測定項目>
・最大膀胱内圧（排尿時圧）
・基線圧
・閾値圧
・排尿間隔
・１回排尿量
酢酸誘発頻尿モデルラットへの作用（シストメトリー）結果の代表例（最大膀胱内圧（排尿時圧）、一回排尿量、および排尿間隔を図１６に示す。このようにして得られた個々のデータを解析し、後述する。
・最大膀胱内圧（排尿時圧）
・基線圧
・閾値圧
・排尿間隔
・１回排尿量
酢酸誘発頻尿モデルラットへの作用（シストメトリー）結果の代表例（最大膀胱内圧（排尿時圧）、一回排尿量、および排尿間隔を図１６に示す。このようにして得られた個々のデータを解析し、後述する。
【0128】
図１７Ａに示すように、左のグラフから最大膀胱内圧（ｍｍＨｇ）、基線圧（ｍｍＨｇ）、閾値圧（ｍｍＨｇ）を夫々数値化した。各グラフのＸ軸は、比較対象の０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液のみ投与されたラットと比較して、アカモク９５％エタノール抽出物５０ｍｇ／ｍＬ ＭＣ溶液を経口投与されたモデルラットの最大膀胱内圧（ｍｍＨｇ）、基線圧（ｍｍＨｇ）、および閾値圧（ｍｍＨｇ）を比較した。このとき最大膀胱内圧および基線圧、閾値圧（ｍｍＨｇ）には影響を与えなかった。
【0129】
さらに、図１７Ｂに示すように、左のグラフから排尿間隔（分）、一回排尿量（ｍＬ）、単位時間排尿回数（回／時間）を夫々数値化した。各グラフのＸ軸は、比較対象０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと比較して、アカモク９５％エタノール抽出物を経口投与されたモデルラットの排尿間隔が３．９２分から８．７９分に延長した。また、単位時間あたりの排尿回数が１９．４１から９．１４回／時間に減少した。さらに一回排尿量が０．３９から０．７４ｍＬに増加した。結果、アカモク９５％エタノール抽出物を経口投与された頻尿モデルラットの症状を有意に改善した。
【0130】
［実験１４］酢酸誘発頻尿モデルラットを用いたｉｎ ｖｉｖｏ試験（アカモクエキス５０％エタノール抽出物）
実験１３で作成した急性（慢性）頻尿の症状のあるモデルラットを使用し、アカモク５０％エタノール抽出物、５０ｍｇ／ｍＬ ＭＣ溶液をモデルラット（ｎ＝７）に経口投与した。図１８のグラフに示すように、ラットの排尿間隔、一回排尿量、および単位時間排尿回数を測定項目とし、比較対象０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと頻尿症状のあるモデルラットを比較した。これにより、アカモク５０％エタノール抽出物のラットにおける頻尿状態への影響を検討する。
実験１３で作成した急性（慢性）頻尿の症状のあるモデルラットを使用し、アカモク５０％エタノール抽出物、５０ｍｇ／ｍＬ ＭＣ溶液をモデルラット（ｎ＝７）に経口投与した。図１８のグラフに示すように、ラットの排尿間隔、一回排尿量、および単位時間排尿回数を測定項目とし、比較対象０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと頻尿症状のあるモデルラットを比較した。これにより、アカモク５０％エタノール抽出物のラットにおける頻尿状態への影響を検討する。
【0131】
図１８に示すように、左のグラフから排尿間隔（分）、一回排尿量（ｍＬ）、単位時間排尿回数（回／時間）を夫々数値化した。各グラフによると、比較対象の０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと比較し、アカモク５０％エタノール抽出物を経口投与されたモデルラットの排尿間隔が６．９４分から１１．０９分に延長した。また、単位時間あたりの排尿回数が１１．３９から６．７５回／時間に減少した。さらに一回排尿量が０．５６から０．６２ｍＬに増加した。結果、アカモク５０％エタノール抽出物を経口投与されたモデルラットの頻尿の症状を有意に改善した。
【0132】
［実験１５］酢酸誘発頻尿モデルラットを用いたｉｎ ｖｉｖｏ試験（アカモクエキス水抽出物）
実験１３で作成した急性（慢性）頻尿の症状のあるモデルラットを使用し、アカモク水抽出物、５０ｍｇ／ｍＬ水溶液をモデルラットに経口投与した。図１９のグラフに示すように、ラットの排尿間隔、一回排尿量、および単位時間排尿回数を測定項目とし、比較対象超純水を投与されたラットと比較した。これにより、アカモク水抽出物のラットにおける頻尿状態への影響を検討する。
実験１３で作成した急性（慢性）頻尿の症状のあるモデルラットを使用し、アカモク水抽出物、５０ｍｇ／ｍＬ水溶液をモデルラットに経口投与した。図１９のグラフに示すように、ラットの排尿間隔、一回排尿量、および単位時間排尿回数を測定項目とし、比較対象超純水を投与されたラットと比較した。これにより、アカモク水抽出物のラットにおける頻尿状態への影響を検討する。
【0133】
図１９に示すように、左のグラフから排尿間隔（分）、一回排尿量（ｍＬ）、単位時間排尿回数（回／時間）を夫々数値化した。各グラフによると、比較対象の０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと比較して、アカモク水抽出物を経口投与されたモデルラットの排尿間隔が６．６０分から１３．２８分に延長した。また、単位時間あたりの排尿回数１２．７９から６．２８回／時間に減少した。さらに一回排尿量が０．４３から０．７９ｍＬに増加した。結果、アカモク水抽出物を経口投与された頻尿モデルラットの症状を有意に改善した。
【0134】
なお、前述したアカモクのエタノール抽出物ではマグヌス試験およびシストメトリー試験で有効性が認められ、その作用機序として膀胱平滑筋を構成ずる細胞上に存在するムスカリン受容体を介する、あるいは膜脱分極性による膀胱平滑筋収縮を抑制しているであろうと推察される。
【0135】
これに対して、アカモク水抽出物はマグヌス試験で効果が認めていないが（図１０Ｃ）、このシストメトリー試験で効果が認められた。
【0136】
すなわち、アカモク水抽出物は、エタノール抽出物と異なる作用機序によりＩｎ ｖｉｖｏのシストメトリー試験で頻尿改善が認められたと推察している。
【0137】
また、一般的に、エタノール抽出物よりも、水あるいは熱水抽出の方が安価かつ簡単に製造することができるという効果もある。さらには、水よりも熱水（約７０℃～９０℃）において、効果があることが推察される。
【0138】
［実験１６］酢酸誘発頻尿モデルラットを用いたｉｎ ｖｉｖｏ試験（アカモク由来フコキサンチンＦｘ経口投与）
実験１３で作成した急性（慢性）頻尿の症状のあるモデルラットを使用し、アカモク由来フコキサンチンＦｘ（ＭＣ溶液）０．５ｍｇ／ｋｇをモデルラットに経口投与した。なお、アカモク由来フコキサンチンＦｘ（ＭＣ溶液）０．５ｍｇ／ｋｇはアカモク９５％エタノール抽出物５０ｍｇ／ｋｇに相当する。図２０のグラフに示すように、ラットの排尿間隔、一回排尿量、および単位時間排尿回数を測定項目とし、比較対象０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと比較した。
実験１３で作成した急性（慢性）頻尿の症状のあるモデルラットを使用し、アカモク由来フコキサンチンＦｘ（ＭＣ溶液）０．５ｍｇ／ｋｇをモデルラットに経口投与した。なお、アカモク由来フコキサンチンＦｘ（ＭＣ溶液）０．５ｍｇ／ｋｇはアカモク９５％エタノール抽出物５０ｍｇ／ｋｇに相当する。図２０のグラフに示すように、ラットの排尿間隔、一回排尿量、および単位時間排尿回数を測定項目とし、比較対象０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと比較した。
【0139】
図２０に示すように、アカモク由来フコキサンチン０．５ｍｇ／ｋｇは０．１％酢酸誘発頻尿において、有意に改善した。また、一回排尿量を増加し、単位時間当たりの排尿回数を減少させた。また、排尿間隔は延長傾向を示した。結果、アカモク由来フコキサンチンＦｘ０．５ｍｇ／ｋｇを経口投与されたモデルラットの頻尿の症状を有意に改善した。
【0140】
［実験１７］ＣＹＰ誘発頻尿（膀胱炎）モデルラットを用いたｉｎ ｖｉｖｏ試験（アカモク９５％エタノール抽出物５０ｍｇ／ｋｇ）
シクロホスファミド（ＣＹＰ）を腹腔内注射して、ＣＹＰ誘発頻尿（膀胱炎）のモデルラットを作成し、アカモク９５％エタノール抽出物２５ｍｇ／ｋｇ ＭＣ溶液を一日二回モデルラットに経口投与した（アカモク９５％エタノール抽出物５０ｍｇ／ｋｇ／Ｄａｙ ＭＣ溶液）。図２１のグラフに示すように、ラットの排尿間隔、一回排尿量、および単位時間排尿回数を測定項目とし、比較対象０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと比較した。
シクロホスファミド（ＣＹＰ）を腹腔内注射して、ＣＹＰ誘発頻尿（膀胱炎）のモデルラットを作成し、アカモク９５％エタノール抽出物２５ｍｇ／ｋｇ ＭＣ溶液を一日二回モデルラットに経口投与した（アカモク９５％エタノール抽出物５０ｍｇ／ｋｇ／Ｄａｙ ＭＣ溶液）。図２１のグラフに示すように、ラットの排尿間隔、一回排尿量、および単位時間排尿回数を測定項目とし、比較対象０．５％メチルセルロース（ＭＣ）溶液を投与されたラットと比較した。
【0141】
図２１に示すように、左のグラフから排尿間隔（分）、一回排尿量（ｍＬ）、単位時間排尿回数（回／時間）を夫々数値化した。各グラフによると、ＣＹＰを投与されたラットと比較して、アカモク９５％エタノール抽出物５０ｍｇ／ｋｇ／Ｄａｙ ＭＣ溶液を経口投与されたモデルラットの排尿間隔が４．３分から１４．６分に延長した。また、単位時間あたりの排尿回数が２０．０から７．４回／時間に減少した。さらに一回排尿が０．２６から０．７７ｍＬに増加した。結果、アカモク９５％エタノール抽出物５０ｍｇ／ｋｇ／Ｄａｙ ＭＣ溶液を経口投与されたモデルラットのＣＹＰ誘発頻尿（膀胱炎）の症状を有意に改善した。
【0142】
［実験１８］５α還元酵素阻害作用実験（ＨＰＬＣ法）
上述したように、前立腺を肥大させる男性ホルモンのテストステロンをジヒドロテストステロンへと変換させる５α還元酵素に対するアカモク抽出物の阻害作用を観察するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験を高速液体クロマトグラフ法（ＨＰＬＣ法）によって行った。
上述したように、前立腺を肥大させる男性ホルモンのテストステロンをジヒドロテストステロンへと変換させる５α還元酵素に対するアカモク抽出物の阻害作用を観察するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験を高速液体クロマトグラフ法（ＨＰＬＣ法）によって行った。
【0143】
（５α還元酵素阻害実験結果１）
図２２Ａに５α還元酵素阻害作用実験の結果１を示す。Ｘ軸は左から比較対象、夫々のアカモク抽出エキス濃度：１０、５、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを含む５０％エタノールの溶液、夫々のアカモク抽出エキス濃度：１０、５、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを含む１００％エタノールの溶液、夫々のアカモク抽出エキス濃度：１０、５、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを含むアカモク水抽出物（０％エタノール）、およびノコギリヤシ（ＳＰＥ）濃度：１０、５、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを比較した。Ｙ軸は、５α還元酵素阻害率（％）を示す。
図２２Ａに５α還元酵素阻害作用実験の結果１を示す。Ｘ軸は左から比較対象、夫々のアカモク抽出エキス濃度：１０、５、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを含む５０％エタノールの溶液、夫々のアカモク抽出エキス濃度：１０、５、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを含む１００％エタノールの溶液、夫々のアカモク抽出エキス濃度：１０、５、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを含むアカモク水抽出物（０％エタノール）、およびノコギリヤシ（ＳＰＥ）濃度：１０、５、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを比較した。Ｙ軸は、５α還元酵素阻害率（％）を示す。
【0144】
夫々のアカモク抽出エキス濃度：１０．０、５．０、２．５、１．２５、０．６３、および０．３２ｍｇ／ｍｌを含む１００％エタノールの溶液で阻害率が高く、０．３２ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では５α還元酵素阻害が約１８％、０．６３ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では５α還元酵素阻害が約３９％、１．２５ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では５α還元酵素阻害が約６１％、２．５ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では５α還元酵素阻害が約７８％、５．０ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では５α還元酵素阻害が約９１％、１０．０ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では５α還元酵素阻害が約９６％と、アカモク抽出エキス濃度が高くなるほど阻害率が上昇した。
【0145】
（５α還元酵素阻害実験結果２）
図２２Ｂに５α還元酵素阻害作用実験の結果２を示す。抽出するエタノールの濃度を変えたアカモクと、メカブ、コンブ、ダルス、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、フコキサンチン（Ｆｕｃｏｘａｎｔｈｉｎ）、フコキサンチノール（Ｆｕｃｏｘａｎｔｈｉｎｏｌ）の夫々の濃度で比較した。図２２Ｂに示すように、１００％エタノールの溶液の１０．０ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では５α還元酵素阻害が約８７％、また１００％エタノールの溶液の５.０ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では、５α還元酵素阻害が約８７％と、阻害率がかなり高いことを示した。また、９５％エタノール溶液中のアカモク抽出エキス濃度において、濃度が高くなるにつれて５α還元酵素阻害率が上昇することを示した。また、９５％エタノール溶液中における１．２５ｍｇ／ｍｌ以上のアカモク抽出エキス濃度では、他の種および他の物質と比較して、５α還元酵素阻害率が高いことがわかった。
図２２Ｂに５α還元酵素阻害作用実験の結果２を示す。抽出するエタノールの濃度を変えたアカモクと、メカブ、コンブ、ダルス、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、フコキサンチン（Ｆｕｃｏｘａｎｔｈｉｎ）、フコキサンチノール（Ｆｕｃｏｘａｎｔｈｉｎｏｌ）の夫々の濃度で比較した。図２２Ｂに示すように、１００％エタノールの溶液の１０．０ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では５α還元酵素阻害が約８７％、また１００％エタノールの溶液の５.０ｍｇ／ｍｌのアカモク抽出エキス濃度では、５α還元酵素阻害が約８７％と、阻害率がかなり高いことを示した。また、９５％エタノール溶液中のアカモク抽出エキス濃度において、濃度が高くなるにつれて５α還元酵素阻害率が上昇することを示した。また、９５％エタノール溶液中における１．２５ｍｇ／ｍｌ以上のアカモク抽出エキス濃度では、他の種および他の物質と比較して、５α還元酵素阻害率が高いことがわかった。
【0146】
［実験１９］アンドロゲン受容体（ＡＲ）結合阻害作用実験
次に、上述したように、５α還元酵素によって変換されたジヒドロテストステロンをさらに前立腺細胞増殖させ、肥大化させるＡＲ結合に対するアカモク抽出物の阻害作用を観察するためのＩｎ ｖｉｔｒｏ試験を行った。
次に、上述したように、５α還元酵素によって変換されたジヒドロテストステロンをさらに前立腺細胞増殖させ、肥大化させるＡＲ結合に対するアカモク抽出物の阻害作用を観察するためのＩｎ ｖｉｔｒｏ試験を行った。
【0147】
ＡＲを介したアンタゴニスト作用を評価する目的で大塚製薬が開発したＡＲ－Ｅｃｏ Ｓｃｒｅｅｎ Ａｓｓａｙシステムを用いて検討した。テストステロンから変換されたジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）がＡＲに結合すると化学発光するため、ＤＨＴと被験物質を共添加した際に蛍光強度が低くなればＡＲ結合阻害作用があることが示唆される。また、０．２ｎＭＤＨＴおよび０．１％ＤＭＳＯを含むアカモク９５％エタノール抽出物エキスにおけるルシフェラーゼ活性を検討した。
【0148】
図２３にＡＲ結合阻害作用結果を示す。図２３左の表において、Ｘ軸はアカモク抽出物エキスの量（ｍｇ／ｍｌ）を示し、Ｙ軸が化学発光強度を表す。四角点が０ｎＭＤＨＴを含むアカモク抽出物エキスであり、三角点が０．２ｎＭＤＨＴを含むアカモク抽出物エキスである。０．２ｎＭＤＨＴを含むアカモク抽出物エキスは０ｎＭＤＨＴを含むアカモク抽出物エキスに比べて、急激に化学発光強度が弱くなったことからアンドロゲン受容体結合を阻害している可能性が示唆された。図２３右の表において、Ｘ軸はアカモク抽出物エキスの量（－ｌｏｇ ｇ／ｍｌ）を示し、Ｙ軸がルシフェラーゼ活性を表す。約６.６－ｌｏｇ ｇ／ｍｌでルシフェラーゼ活性が低下し始め、４.０－ｌｏｇ ｇ／ｍｌで活性が０まで減少した。
【0149】
［実験２０］ヒト前立腺癌由来細胞ＬＮＣａＰ．ＦＧＣにおける細胞増殖抑制作用実験
ヒト前立腺癌由来細胞ＬＮＣａＰ．ＦＧＣにおける細胞増殖抑制作用を観察するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験を行った。具体的に、ヒト前立腺癌由来細胞ＬＮＣａＰ．ＦＧＣを１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＲＰＭＩ１６４０培地を使用して９６ウェルプレートの各ｗｅｌｌに１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ・１００μＬとなるように播種して２４時間培養後、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭおよび夫々のＤＨＴにアカモク９５％エタノール抽出物１２．５μｇ／ｍＬを混合した１％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＲＰＭＩ１６４０に培地交換し、培養３日後に夫々の条件下のプレートにおける吸光度（４５０ｎｍ、６３０ｎｍ）をプレートリーダーにより測定した。
ヒト前立腺癌由来細胞ＬＮＣａＰ．ＦＧＣにおける細胞増殖抑制作用を観察するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験を行った。具体的に、ヒト前立腺癌由来細胞ＬＮＣａＰ．ＦＧＣを１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＲＰＭＩ１６４０培地を使用して９６ウェルプレートの各ｗｅｌｌに１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ・１００μＬとなるように播種して２４時間培養後、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭおよび夫々のＤＨＴにアカモク９５％エタノール抽出物１２．５μｇ／ｍＬを混合した１％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＲＰＭＩ１６４０に培地交換し、培養３日後に夫々の条件下のプレートにおける吸光度（４５０ｎｍ、６３０ｎｍ）をプレートリーダーにより測定した。
【0150】
図２４にヒト前立腺癌由来細胞ＬＮＣａＰ．ＦＧＣにおける細胞増殖抑制作用実験結果を示す。図２４のグラフにおいて、Ｘ軸はアカモク抽出物エキスの量（ｍｇ／ｍｌ）を示し、Ｙ軸は、吸光度（４５０ｎｍ～６３０ｎｍ）を表す。すなわち、吸光度が高ければヒト前立腺癌由来細胞ＬＮＣａＰ．ＦＧＣの増殖が多く、低ければ細胞増殖が抑制されたことを表す。
【0151】
図２４のグラフに示すように、夫々ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭにおいて、アカモク抽出物１２．５μｇ／ｍＬを加えた場合、ＤＨＴのみの場合と比較して吸光度が低く、ヒト前立腺癌由来細胞ＬＮＣａＰ．ＦＧＣにおける細胞増殖抑制していることを示した。
【0152】
［実験２１］ラット前立腺肥大モデルにおける薬効評価実験
前立腺肥大の状態を有するモデルラットを使用し、ラット前立腺肥大モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの薬効評価実験を行った。モデルラットに対してアカモク９５％エタノール抽出物を１日６０ｍｇ／ｋｇ投与した。また、比較対象として、モデルラットに対して０．５％メチルセルロース溶液を投与した。この投与を２８日間繰り返した後、夫々のモデルラットから前立腺を摘出し、測定した。
前立腺肥大の状態を有するモデルラットを使用し、ラット前立腺肥大モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの薬効評価実験を行った。モデルラットに対してアカモク９５％エタノール抽出物を１日６０ｍｇ／ｋｇ投与した。また、比較対象として、モデルラットに対して０．５％メチルセルロース溶液を投与した。この投与を２８日間繰り返した後、夫々のモデルラットから前立腺を摘出し、測定した。
【0153】
図２５にラット前立腺肥大モデルにおける薬効評価実験の結果を示す。図２５の左の表は、夫々投与後のモデルラットの前立腺肥大の総量（ｍｇ）を示し、ＰＩは、前立腺の指標（Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｉｎｄｅｘ）を示す。図２５の右は総量およびＰＩを夫々グラフにし、比較したものである。これらの表およびグラフを参照すると、比較対象を投与したラットの前立腺重量の総量の平均は１０６２．１３ｍｇ（ＰＩ：０．３９９）であったのに対し、アカモク抽出物を投与したラットの前立腺重量の総量の平均は１０１４．５０（ＰＩ：０．３８５）であり、減少傾向にあることがわかった。
【0154】
以上、本発明の一実施形態を説明したが、この発明はこれに限定されるものではなく、発明の要旨を変更しない範囲で種々変形可能である。
【0155】
上記一実施形態の機能性食品はアカモクエキスを使用するものであったが、資源量が豊富で利用しやすい海藻由来抽出物であればアカモクと同等の効果を奏することが確認できていることから、アカモク以外の海藻を用いるものであっても良い。特に、アラメ、ヒジキ、モズク、およびテングサが、利用及び資源量の点及び効果の点から特に適している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図11A】
【図11B】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22A】
【図22B】
【図23】
【図24】
【図25】
