特開 2022-114263 ワインの抗糖化性を評価するための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022114263

(43)【公開日】2022-08-05

(54)【発明の名称】ワインの抗糖化性を評価するための方法

(51)【国際特許分類】

   A61B 5/16 20060101AFI20220729BHJP

   A61B 10/00 20060101ALI20220729BHJP

   G01N 33/14 20060101ALI20220729BHJP

【ＦＩ】

A61B5/16 110

A61B10/00 E

G01N33/14

【審査請求】未請求

【請求項の数】5

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021010489

(22)【出願日】2021-01-26

(71)【出願人】

【識別番号】399063714

【氏名又は名称】株式会社モトックス

(74)【代理人】

【識別番号】110002011

【氏名又は名称】特許業務法人井澤国際特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100072039

【弁理士】

【氏名又は名称】井澤 洵

(74)【代理人】

【識別番号】100123722

【弁理士】

【氏名又は名称】井澤 幹

(74)【代理人】

【識別番号】100157738

【弁理士】

【氏名又は名称】茂木 康彦

(74)【代理人】

【識別番号】100158377

【弁理士】

【氏名又は名称】三谷 祥子

(72)【発明者】

【氏名】杉浦 伸一

【テーマコード（参考）】

4C038

【Ｆターム（参考）】

4C038PP03

4C038PS00

(57)【要約】

【課題】ワインの抗糖化評価において消費者の実感に裏付けされた結果を得る。
【解決手段】工程１）被験者がワインを摂取する工程、（工程２）上記被験者から、アンケート方式で、上記被験者の心身の情報を取得する工程、（工程３）上記被験者について、糖化ストレスマーカーおよび／またはストレスを非侵襲法で定量的に測定する工程、を含む、ワインの抗糖化性を評価する方法。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の工程を含む、ワインの抗糖化性を評価する方法。
（工程１）被験者がワインを摂取する工程。
（工程２）上記被験者から、アンケート方式で、上記被験者の心身の情報を取得する工程。
（工程３）上記被験者について、糖化ストレスマーカーおよび／またはストレスを非侵襲法で定量的に測定する工程。

【請求項2】

上記工程２における上記心身の情報が、気分、睡眠、便通、食生活から選ばれる１以上に関する情報である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

上記工程３で、皮膚中ＡＧＥｓ、体内ＡＧＥｓ、心拍変動、皮膚状態から選ばれる１以上を非侵襲法で測定する、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

上記工程２および／または上記工程３で、インターネットに接続した端末および／または測定機器が用いられる、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

（工程４）上記ワインについて自動化された装置を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ 抗糖化作用を評価する工程
を更に有する、請求項１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ワインの抗糖化性を評価するための方法に関する。本方法は、ワイン試飲者に対して非侵襲測定を行うステップを含む。本方法は、被験ワインに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗糖化作用評価ステップを含む。

【背景技術】

【0002】

糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）は、アミノ酸・蛋白と還元糖の非酵素的な化学反応であり、メイラード（Ｍａｉｌｌａｒｄ）反応とも呼ばれる。糖化は食品の加熱中に起こる着色、香りや風味の変化、保存期間中の栄養価低下に関わる反応であることから食品化学の分野で注目されてきた。また、ヒト血中の糖化反応生成物ＨｂＡ１ｃの測定は血糖コントロール指標として糖尿病治療分野で臨床応用されている。糖化は生体内においてヘモグロビンだけでなく様々な蛋白で起こり、 種々のカルボニル化合物を中心とする中間体を経て、糖化最終生成物（ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ：ＡＧＥｓ）の生成に至ることが知られている。

【0003】

過去２０年余りの研究によって、体内で進行する糖化が様々な疾患と関係すること、その一方で、天然物に糖化を抑制する機能を持つ化合物が含まれることが明らかになった。非特許文献１には、動脈硬化、糖尿病、アルツハイマー、骨粗鬆症、腎疾患、白内障、皮膚のしわなどの老化現象と糖化との関係、さらに、食品に含まれる抗糖化物質について、それまでの知見がまとめられている。

【0004】

最近は、抗糖化作用の高い食品素材を利用して糖化ストレスによる老化や疾病を予防する試みが盛んである。非特許文献２に記載されているような評価方法を用いて、より有用な抗糖化性物質の探索が試みられている。

【0005】

中でもワインは、嗜好品でありながらアンチエイジングが期待される食品として注目されている。これまで、非特許文献３～８，特許文献１などに記載されたような、ワイン用ブドウ品種に由来する抗糖化性物質に関する様々な研究成果が存在する。

【0006】

しかしながら、アンチエイジングを期待してワインを購入して飲む消費者にとっては、上述の先行技術文献に記載されたｉｎ ｖｉｔｒｏの抗糖化性評価結果は身近な情報ではない。消費者にとっては、ワインを飲んだことで自分の体にアンチエイジング効果があったかどうかが興味の対象である。専門誌や専門書に掲載された専門家の研究成果を読むよりも、「ワインを飲むことで＊＊＊が良くなった。」「ワインを＊＊日飲んだおかげで体の＊＊＊に変化があった。」という実感や体験談で、より消費者のワイン購買意欲が高まる。ワインは健康食品であるとともに、伝統的な嗜好品である。消費者がワインを選択して購入する動機は、効能や効果の表示を見て医薬品や健康食品を選ぶ時のような単純なものではない。「体に良くて美味しい」が消費者の購入動機となる。

【0007】

これまで、ワインを市場と消費者に提供する側は、美味しさを消費者に実感してもらうための、売り場での試飲、ワイナリーツアー、ワインセミナーなどの販売促進活動を盛んに行ってきた。しかし、ワインを実際に飲んだ消費者に生じた抗糖化性効果を検出・分析し、その分析結果をワイン販売促進活動に活用する機会は乏しかった。上述の先行技術のような専門家による分析結果は数多く存在するが、これらは消費者の実感には触れていない。このため、消費者が好むワインを提案・予測するために直接的に役立つ情報が不足していた。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】「糖化による疾患と抗糖化食品・素材 普及版」シーエムシー出版，２０１６年発行，ＩＳＢＮ：９７８－４－７８１３－１１２７－２

【非特許文献2】「糖化ストレスと抗糖化作用の評価」オレオサイエンス 第１８巻第２号（２０１８），Ｏｎｌｉｎｅ ＩＳＳＮ：２０８７－３４６１

【非特許文献3】「ヤマブドウ機能性成分の新規抽出法による食品素材の開発」食品工業，第５１巻第１２号（２００８），ＩＳＳＮ：０５５９－８９９０

【非特許文献4】「ワイン圧搾残渣に含まれる抗糖化作用物質の探索」日本ブドウ・ワイン学会誌，第２３巻第２号９６－９７ページ（２０１２），ＩＳＳＮ：１３４２－２３２４

【非特許文献5】「ピノ・ノワールワイン圧搾残渣に含まれる抗糖化作用物質の探索」日本ブドウ・ワイン学会誌，第２５巻第２号７９－８０ページ（２０１４），ＩＳＳＮ：１３４２－２３２４

【非特許文献6】「メルローワインに含まれるＡＧＥｓ生成阻害物質の探索」日本ブドウ・ワイン学会誌，第２７巻第２号６２－６３ページ（２０１６），ＩＳＳＮ：１３４２－２３２４

【非特許文献7】「カベルネ・ソーヴィニヨンワインに含まれる抗糖化物質の探索」日本ブドウ・ワイン学会誌，第２９巻第２号１００－１０１ページ（２０１８），ＩＳＳＮ：１３４２－２３２４

【非特許文献8】「ぶどう酒製造副産物からの回収された赤ブドウ外皮のフェノール類のキャラクタリゼーションとｉｎ ｖｉｔｒｏ還元能力と抗糖化作用活性」Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，第１４０巻２６３－２６８ページ（２０１３），ＩＳＳＮ：０９６０－８５２４

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】特開２０１６－１３８０４２号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

このように、ワインの抗糖化性を、科学的客観性と消費者の主観との両方で検討・評価した事例は、未だ見つかっていない。そこで本発明者は、消費者の実体験に基づき、消費者の共感を得られ易い、ワインの抗糖化性を評価するための、新たな手段を求めた。

【課題を解決するための手段】

【0011】

その結果、本発明者は、ワインの抗糖化性の評価方法として、アンケートと非侵襲測定を組み合わせた方法を見出した。すなわち本発明は以下のものである。
（発明１）以下の工程を含む、ワインの抗糖化性を評価する方法。（工程１）被験者がワインを摂取する工程。（工程２）上記被験者から、アンケート方式で、上記被験者の心身の情報を取得する工程。（工程３）上記被験者について、糖化ストレスマーカーおよび／またはストレスを非侵襲法で定量的に測定する工程。
（発明２）上記工程２における上記心身の情報が、気分、睡眠、便通、食生活から選ばれる１以上に関する情報である、発明１の方法。
（発明３）上記工程３で、皮膚中ＡＧＥｓ、体内ＡＧＥｓ、心拍変動、皮膚状態から選ばれる１以上を非侵襲法で測定する、発明１の方法。
（発明４）上記工程２および／または上記工程３で、インターネットに接続した端末および／または測定機器が用いられる、発明１の方法。
（発明５）（工程４）上記ワインについて自動化された装置を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ 抗糖化作用を評価する工程 を更に有する、発明１の方法。

【発明の効果】

【0012】

本発明のワインの抗糖化性を評価する方法は、科学的客観性を担保し、かつ、被験者の感情や主観を考慮に入れた、評価方法である。本発明の方法では、客観的でありながら、ワインの購買者・消費者の共感や理解を得易い分析結果が得られる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】本発明の方法の１例を実行する様子を模式的に示す。

【発明を実施するための形態】

【0014】

［ワインの抗糖化性を評価する方法］
本発明：「ワインの抗糖化性を評価する方法」は、（工程１）被験者がワインを摂取する工程、（工程２）上記被験者から、アンケート方式で、上記被験者の心身の情報を取得する工程、（工程３）上記被験者について、糖化ストレスマーカーおよび／またはストレスを非侵襲法で定量的に測定する工程、を含む。

【0015】

本発明の方法で評価の対象とするワインは限定されない。上記ワインとしては、好ましくは、抗糖化性が高いとされるポリフェノール類の含有率が高いワイン、すなわち各種の赤ワインが用いられる。

【0016】

本発明の方法の被験者は健康な成人であれば制限されない。上記被験者としては、２０歳以上６５歳未満で糖尿病などのいわゆる生活習慣病に罹患していない男女が好ましい。

【0017】

［工程１］
本発明の方法の工程１は、被験者がワインを摂取する工程である。上記摂取は一般的には、いわゆるクール制で行う。１クールは、例えば、３日／週の摂取（１週間のいずれか１日は非摂取日とする）を６週間、６日／週の摂取（１週間のいずれか１日は非摂取日とする）を４週間と定める。１日のワイン摂取量は、市販のワインであれば一般的には５０ｍｌ～２５０ｍｌの範囲で設定する。

【0018】

［工程２］
本発明の工程２は、上記被験者から、アンケート方式で、上記被験者の心身の情報を取得する工程である。上記アンケートは本発明の方法の開始から終了までの期間、定期的に、例えば毎週、行うことが好ましい。

【0019】

上記心身の情報は、被験者の疲労やストレスに関連する要素であれば制限されない。このような心身の情報は、一般的には、気分、睡眠、便通、食生活に関する情報である。最初のアンケートでは例えば以下の質問と選択肢を設けることができる。

【0020】

Ｑ０１：現在の気分は？／Ａ０１：いつもより良い・いつもと同じ・いつもより悪い
Ｑ０２：昨夜の睡眠の質は？／Ａ０２：いつもより良い・いつもと同じ・いつもより悪い
Ｑ０３：今日の便通は？／Ａ０３：正常・不調
Ｑ４０：今日の食欲は？／Ａ０４：いつもより高い・いつもと同じ・いつもより低い
本発明では上記アンケートを、インターネットを介して行うことができる。上記被験者は、インターネットに接続されたスマートフォン、タブレット、ＰＣなどの端末機器で上記アンケートのサイトにログインし、回答を入力する。入力された回答はインターネット上のサーバに格納され、集計プログラムによって集計され、統計される。

【0021】

［工程３］
本発明の工程３は、上記被験者について、糖化ストレスマーカーおよび／またはストレスを非侵襲法で定量的に測定する工程である。上記糖化ストレスマーカーおよび／またはストレスの指標は、生化学や臨床医学で一般的なものであれば、制限されない。そのような指標としては例えば、皮膚中ＡＧＥｓ、体内ＡＧＥｓ、心拍変動、皮膚状態などを用いることができる。

【0022】

皮膚中ＡＧＥｓおよび体内ＡＧＥｓは、蛍光式センサーで非侵襲式に測定される。を用いてこの方法は、皮膚に紫外線を照射したときに、組織内に蓄積した蛍光性ＡＧＥｓが励起されて特有の自己蛍光を発する性質を利用している。このような蛍光式センサーとしては例えばＡＧＥ Ｒｅａｄｅｒ（登録商標）、シャープライフサイエンス社製ＡＧＥセンサ「ＲＱ－ＡＧ０１Ｊ」などが市販されている。

【0023】

心拍変動は、心電波と脈波の変化から検出される。心拍変動を測定する簡易機器として、株式会社疲労科学研究所製「バイタルモニターＶＭ５００」を利用可能である。このモニターは、指先から心電波と脈波を採取し、心拍変動データを生成する。生成した心拍変動データはスマートフォン、タブレット、ＰＣなどの端末機器に送信され、評価マトリックス上に評価結果が表示される。

【0024】

皮膚状態は、例えば、経皮水分蒸散量、角質水分量、真皮水分量、角質形態、角層ＣＭＬ量として検出される。経皮水分蒸散量、角質水分量、真皮水分量を測定する機器として種々のものが利用可能である。角層形態は、テープストリッピング法により測定することができる。この方法では、角層細胞を粘着テープで剥離採取する。この方法で、脱落角質細胞数、角質細胞面積、細胞携帯、核の残存率などを測定することができる。また、剥離採取した角層を生化学分析することもできる。剥離採取した角層の抽出液とＡＬＩＳＡ法による測定キットを用いて、角層抽出液に含まれるＣＭＬ（ＡＧＥの１種であるカルボキシメチルリジン）の量を測定する。別途、角層抽出液に含まれるタンパク量を測定し、角層タンパクあたりのＣＭＬ量（角質ＣＭＬ）を算出する。

【0025】

上記工程３は、本発明の方法の開始から終了までの期間、適当な頻度で、例えば４週間に１回、２週間に１回などの頻度で、行う。

【0026】

［工程４］
本発明の方法では、さらに工程４：上記ワインについて自動化された装置を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ 抗糖化作用を測定する工程を有することができる。上記工程４で得られた結果を、上記工程２と工程３とで得られた被験者のデータと比較・対照して、様々なワインの消費者に対するアンチエイジング機能を予想することができる。

【0027】

上記ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗糖化作用を測定するためには、ヒト血清アルブミン（ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ：ＨＳＡ）などのモデル蛋白と、グルコース、フルクトースなどの還元糖、試験対象のワインをリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中で６０°Ｃ、４０時間反応させる。その後、反応液中ＡＧＥｓ量を被験物質の有無で比較し、ＡＧＥｓ生成阻害率（％）を算出する。ＨＳＡとグルコースを６０°Ｃで４０時間インキュベートした時のＡＧＥｓの生成レベルは、３７°Ｃで約６０日に相当する。本発明では、インキュベート終了までの操作を自動化した装置で行うことができる。

【0028】

次に、生成したＡＧＥｓの検出と定量には、ＡＧＥｓ由来の蛍光強度測定（励起波長 ３７０ｎｍ、蛍光波長 ４４０ｎｍ）を用いることができる。蛍光性ＡＧＥｓにはペントシジン（励起波長（ｅｘ）３３５ｎｍ／蛍光波長（ｅｍ）３８５ｎｍ）、クロスリン（ｅｘ：３７９ｎｍ／ｅｍ：４６３ｎｍ）、ピロピリジン（ｅｘ：３７０ｎｍ／ｅｍ：４５５ｎｍ）などがある。反応液中には ＣＭＬ、ペントシジン、３－メチルデオキシグルコース（３ＤＣ）、グリオキサール（ＧＯ）、メチルグリオキサール（ＭＧＯ）も生成するので、これらの生成量を各方法で測定することもできる。上記蛍光強度測定でも、測定値の出力や表示を自動的に行う装置を用いることができる。このような装置として、ＴＥＣＡＭ社製インフィニット／サインライズシリーズを用いることができる。

【0029】

上記ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗糖化作用を測定する際には、試験対象のワインの濃度を３段階以上に設定して反応させた後、各反応液中のＡＧＥｓや糖化反応中間体の測定値をもとに上記ワインの５０％生成阻害濃度を算出する。

【0030】

［評価］
本発明の方法を様々なワインと被験者に対して行うことができる。上記工程２と上記工程３、更に好ましくは上記工程４とで得られた回答・測定結果を蓄積・参照・比較することによって、ワインの購入者・消費者にアンチエイジング効果やストレス解消効果などをもたらす抗糖化性ワイン銘柄をより正確に、詳しく、選ぶことができる、また、ワインの購入者・消費者に最適化したワイン銘柄を提案することができる。

【実施例0031】

以下の条件で赤ワインの抗糖化性を評価した。

【0032】

［ワイン，ミネラルウォーター］株式会社モトックスが輸入した２０１６年フランス・ボルドー産赤ワイン（アルコール濃度：１３．５％）を用いた。対照実験のために市販のミネラルウォーターを準備した。

【0033】

［被験者］糖尿病を発症しておらず糖尿病予備軍でもない２０歳以上６５ 歳未満の男性３０人と女性３０人を選んだ。

【0034】

［開始］被験者を集めて説明会を行った。被験者６０人をランダムに２つのグループ（グループＡとグループＢ）に分けた。被験者に摂取するワインとミネラルウォーター、グラスを配布した。

【0035】

［工程１（グループＡの被験者）］
・２～５週目の４週間、説明会で配布されたワインを摂取した。各週６回（６日／週）上記ワインを摂取した。１日の上記ワイン摂取量は１２５ｍｌであった。この期間中は他のアルコール類を摂取しなかった。
・６～７週目の２週間は、説明会で配布されたワインもミネラルウォーターも摂取せず、通常の生活を送った。ただし、この期間中はアルコール類を摂取しなかった。
・８～１１週目の４週間、ワインの代わりに説明会で配布されたミネラルウォーターを摂取した。各週６回（６日／週）上記ミネラルウォーターを摂取した。１日の上記ミネラルウォーター摂取量は１２５ｍｌであった。この期間中はアルコール類を摂取しなかった。

【0036】

［工程１（グループＢの被験者）］
・２～５週目の４週間、説明会で配布されたミネラルウォーターを摂取した。各週６回（６日／週）上記ミネラルウォーターを摂取した。１日の上記ミネラルウォーター摂取量は１２５ｍｌであった。この期間中はアルコール類を摂取しなかった。
・６～７週目の２週間は、説明会で配布されたワインもミネラルウォーターも摂取せず、通常の生活を送った。ただし、この期間中はアルコール類を摂取しなかった。
・８～１１週目の４週間、説明会で配布されたワインを摂取した。各週６回（６日／週）上記ワインを摂取した。１日のワイン摂取量は１２５ｍｌであった。この期間中は他のアルコール類を摂取しなかった。

【0037】

［工程２］全被験者に対して、開始時（説明会の日）、５週目の最終日、８週目の初日、１１週目の最終日に、以下の非侵襲測定を行った。
・体内ＡＧＥｓ量：指先をＡＧＥｓセンサー（シャープライフサイエンス社製ＡＧＥセンサ「ＲＱ－ＡＧ０１Ｊ」）にタッチして測定した。
・心拍変動：株式会社疲労科学研究所製「バイタルモニターＶＭ５００」を用いてストレス度を測定した。被験者の親指をセンサに差し入れて測定し、評価結果が測定会場の端末に出力される。
・皮膚状態：Ｄｅｌｆｉｎ社製「ＶＡＰＯ ＭＥＴＥＲ ＳＷＬ－５００１」を用いて経皮水分蒸散量を測定した。被験者の左腕の内側の皮膚に計測器の先端のセンサーを１０秒間接触させて測定した。

【0038】

［工程３］全被験者が、１週目（説明会から１週間）から毎週、Ｅ－ｍａｉｌで、気分、睡眠の質、便通などの体調全般を尋ねるアンケートに回答した。

【0039】

［工程４］別途、説明会で配布されたワインについて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ 抗糖化作用を測定した。リン酸緩衝液中で上記ワインとヒト血清アルブミン、還元糖を反応させる前処理は、半自動化して行った。生成したＡＧＥｓの検出と定量にはＴＥＣＡＮ社製蛍光プレートリーダー「Ｉｎｆｉｎｉｔｅ（登録商標）２００ＰＲＯ」を使用した。

【0040】

［評価］上記工程２で得られたアンケート結果と工程３で得られた測定結果を比較対照したところ、説明会で配布したワインの摂取によって被験者体内のＡＧＥｓ量の減少とストレス軽減がもたらされたことが明らかになった。工程４で得られた結果は、この効果を裏付けていた。

【産業上の利用可能性】

【0041】

本発明によって、消費者の実感に裏付けされたワインの抗糖化作用を確認することができる。本発明の方法によってワインを評価し選定することによって、消費者にとってより満足度が高いと期待されるワインを市場に提供することができる。本発明は、ワインの生産者と販売者にとって、新たな市場開拓の手段となり得る。

【符号の説明】

【0042】

１０１ グループＡのワイン摂取期間（工程１）
１０２ グループＢのワイン摂取期間（工程１）
２ アンケート回答（工程２）
３ 非侵襲測定
４ ｉｎ ｖｉｔｒｏ 抗糖化作用の測定

【図1】