特開 2022-115260 有機アニオントランスポーターの機能を測定するための検査薬

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022115260

(43)【公開日】2022-08-09

(54)【発明の名称】有機アニオントランスポーターの機能を測定するための検査薬

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/60 20060101AFI20220802BHJP

【ＦＩ】

G01N33/60 Z

【審査請求】未請求

【請求項の数】4

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021011777

(22)【出願日】2021-01-28

(71)【出願人】

【識別番号】504160781

【氏名又は名称】国立大学法人金沢大学

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】特許業務法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】小林 正和

(72)【発明者】

【氏名】川井 恵一

(72)【発明者】

【氏名】水谷 明日香

(72)【発明者】

【氏名】村中 由佳

【テーマコード（参考）】

2G045

【Ｆターム（参考）】

2G045CA26

2G045CB03

2G045CB26

2G045DA80

2G045FB08

(57)【要約】      （修正有）

【課題】簡便にＯＡＴＰの取り込み能を評価できる検査薬を提供する。
【解決手段】放射性核種で標識されたアセトアミノフェン化合物を含有する有機アニオントランスポーターの機能を測定するための検査薬。放射性核種が１２３－ヨード（１２３Ｉ）、１２４－ヨード（１２４Ｉ）、１２５－ヨード（１２５Ｉ）、１３１－ヨード（１３１Ｉ）、１８－フッ素（１８Ｆ）、７６－臭素（７６Ｂｒ）、７７－臭素（７７Ｂｒ）又は２１１－アスタチン(２１１Ａｔ)である検査薬。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

次式（Ｉ）：

【化1】

（式中、Ｘは放射性核種を表し、Ｒは水素原子又は炭素数１～５のアルキル基を表す。）
で示される化合物を含有する有機アニオントランスポーターの機能を測定するための検査薬。

【請求項2】

前記式（Ｉ）において、Ｘで表される放射性核種が１２３－ヨード（^１２３Ｉ）、１２４－ヨード（^１２４Ｉ）、１２５－ヨード（^１２５Ｉ）、１３１－ヨード（^１３１Ｉ）、１８－フッ素（^１８Ｆ）、７６－臭素（^７６Ｂｒ）、７７－臭素（^７７Ｂｒ）又は２１１－アスタチン(^２１１Ａｔ)である請求項１記載の検査薬。

【請求項3】

経口投与され、前記放射性核種の膀胱での集積量を測定することによって有機アニオントランスポーターの機能を測定するための請求項１又は２記載の検査薬。

【請求項4】

経口投与された対象者由来の尿試料の放射能を液体シンチレーションカウンター又はγカウンターで測定することによって有機アニオントランスポーターの機能を測定するための請求項１又は２記載の検査薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、有機アニオントランスポーターの機能を測定するための検査薬に関する。

【背景技術】

【0002】

治療薬を経口投与した場合、小腸腸管から血液内に吸収される。その取り込みを担うトランスポーターが有機アニオントランスポーター（ＯＡＴＰ）、有機カチオントランスポーター（ＯＣＴ）などで、このＯＡＴＰトランスポーターは特に、複数の臨床的な薬物の取り込みに関係している。例えば、コレステロール低下のため処方されるスタチン系薬物は、ＯＡＴＰ１Ｂ１の輸送基質となる。このＯＡＴＰの取り込み能はヒトにおいて多様性があるので、化学療法等を行う場合も、創薬の場合も、事前に評価をしておくことが好ましい。

【0003】

しかしながら、経口薬の消化管吸収量の確認作業は、質量分析器等を用いた血液分析により行われており、患者への負荷が大きく、経口薬の消化管吸収に関与する個々の薬物トランスポーター機能は測定できない。

【0004】

一方、^１２５Ｉ－２－ヨードアセトアミノフェン（^１２５Ｉ－ＩＡＰ）等の放射性核種で標識されたアセトアミノフェンは、特許文献１に薬物代謝機能を測定するための検査薬として有用であることが開示されているが、トランスポーターとの関連性についてはこれまで報告されていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特開２０１６－６９３１１号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明の課題は、簡便にＯＡＴＰの取り込み能を評価できる検査薬を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、放射性核種で標識されたアセトアミノフェン又はその類縁体を用いることにより、簡便にＯＡＴＰの取り込み能を評価できることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0008】

すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）次式（Ｉ）：

【化1】

（式中、Ｘは放射性核種を表し、Ｒは水素原子又は炭素数１～５のアルキル基を表す。）
で示される化合物を含有する有機アニオントランスポーターの機能を測定するための検査薬。
（２）前記式（Ｉ）において、Ｘで表される放射性核種が１２３－ヨード（^１２３Ｉ）、１２４－ヨード（^１２４Ｉ）、１２５－ヨード（^１２５Ｉ）、１３１－ヨード（^１３１Ｉ）、１８－フッ素（^１８Ｆ）、７６－臭素（^７６Ｂｒ）、７７－臭素（^７７Ｂｒ）又は２１１－アスタチン(^２１１Ａｔ)である前記（１）に記載の検査薬。
（３）経口投与され、前記放射性核種の膀胱での集積量を測定することによって有機アニオントランスポーターの機能を測定するための前記（１）又は（２）に記載の検査薬。
（４）経口投与された対象者由来の尿試料の放射能を液体シンチレーションカウンター又はγカウンターで測定することによって有機アニオントランスポーターの機能を測定するための前記（１）又は（２）に記載の検査薬。

【発明の効果】

【0009】

本発明によれば、簡便にＯＡＴＰの取り込み能を評価できる。本発明の検査薬を用いて、経口薬の投与前に患者個々のトランスポーター機能を測定した上で経口薬の薬剤投与量を各患者で調整できるようになる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】図１は正常マウスにおける経口投与時と静脈投与時の血液の重量集積率を示す図である。

【図2】図２は正常マウス群とＯＡＴＰ阻害群の経口投与時の血液と、高集積を示した主要臓器である膀胱、肝臓及び胆嚢の重量集積率を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本発明に用いる前記式（Ｉ）で示される化合物は、解熱鎮痛剤アセトアミノフェン（４－（アセチルアミノ）フェノール）の２位を放射性核種で標識したものである。

【0012】

前記式（Ｉ）において、Ｘで表される放射性核種としては、例えばトリチウム（^３Ｈ）、１１－炭素（^１１Ｃ）、１８－フッ素（^１８Ｆ）、７６－臭素（^７６Ｂｒ）、７７－臭素（^７７Ｂｒ）、１２３－ヨード（^１２３Ｉ）、１２４－ヨード（^１２４Ｉ）、１２５－ヨード（^１２５Ｉ）、１３１－ヨード（^１３１Ｉ）及び２１１－アスタチン(^２１１Ａｔ)、好ましくは１８－フッ素（^１８Ｆ）、７６－臭素（^７６Ｂｒ）、７７－臭素（^７７Ｂｒ）、１２３－ヨード（^１２３Ｉ）、１２４－ヨード（^１２４Ｉ）、１２５－ヨード（^１２５Ｉ）、１３１－ヨード（^１３１Ｉ）及び２１１－アスタチン(^２１１Ａｔ)等が挙げられる。

【0013】

前記式（Ｉ）において、Ｒで表される炭素数１～５のアルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基が挙げられる。

【0014】

本発明に用いる前記式（Ｉ）で示される化合物は、次式（II）：

【化2】

（式中、Ｒは前記と同義である。）
で示される化合物に放射性核種を導入することにより製造することができる。

【0015】

前記式（II）で示される化合物への放射性核種の導入法としては一般的な方法を用いることができ、例えば、放射性核種が１２３－ヨード（^１２３Ｉ）、１２４－ヨード（^１２４Ｉ）、１２５－ヨード（^１２５Ｉ）又は１３１－ヨード（^１３１Ｉ）である場合は、クロラミンＴ法を用いることができる。

【0016】

本発明の検査薬の投与経路としては、経口投与が挙げられる。

【0017】

本発明の検査薬の投与形態としては、投与経路に適した剤形であれば、液剤、錠剤、カプセル剤等から適宜選択すればよく、本発明の作用及び効果を損なわない限り、薬学的に許容される担体、又は剤形によって当該技術分野において一般的に使用される添加剤を更に含んでもよい。添加剤として、例えば、着色剤、保存剤、風味剤、香り改善剤、呈味改善剤、甘味剤、又は安定剤、その他薬学的に許容される添加剤を含有することができる。

【0018】

本発明の検査薬の投与量は、投与方法、投与する化合物ならびに患者の年齢、性別及び体重によって、適宜決定すればよい。

【0019】

本発明の検査薬を画像診断薬として、イメージングのために用いる場合は、体内の透過性を必要とするので、放射性核種として^１２３Ｉ等の放射線エネルギーの高いものを用いることが好ましいが、本発明の検査薬を経口投与した対象者由来の尿試料を用いて検査する場合は、^１２５Ｉ及び^１２３Ｉのいずれを用いてもよい。

【0020】

画像診断薬として、イメージングのために用いる場合は、経口投与後の対象者の^１２３Ｉ等の放射性核種の膀胱での集積量を測定することによって有機アニオントランスポーター（ＯＡＴＰ）の機能を測定することができる。

【0021】

対象者由来の尿試料を用いて検査する場合は、例えば、^{１２５／１２３}Ｉ－ＩＡＰを経口投与した後に、１０～３０分後の間に尿試料を採取して、γカウンターで測定することで、放射能を取得する。健常者とＯＡＴＰ低下患者において、その放射能を比較すると、ＯＡＴＰ低下患者の尿試料の放射能は健常者と比較して低下する。その結果、小腸を中心とする消化管のＯＡＴＰ発現量を推測することができる。

【実施例0022】

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に限定されるものではない。

【0023】

（実施例１）
Ｉ．^１２５Ｉ－２－ヨードアセトアミノフェンの合成

【0024】

【化3】

【0025】

クロラミンＴ法でアセトアミノフェンの^１２５Ｉ標識を行った。^１２５Ｉ－ＮａＩ（１．５ＭＢｑ）をリン酸緩衝化食塩水（ｐＨ７．４）で１０μＬに希釈し、１０ｍＭアセトアミノフェンのエタノール溶液１００μＬ及び４ｍＭクロラミンＴ水溶液（塩酸でｐＨ５．６に調整したｍｉｌｌｉＱに溶解）２５μＬを加えて十分に撹拌し、２５℃で３０分間反応させた後、ピロ亜硫酸ナトリウムの１／１０飽和溶液２５μＬを加え、反応を停止した。反応液を窒素気流下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分離精製した。検出機器には、ＵＶ－ＶＩＳ検出器（ＳＰＤ－１０Ａ，Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、ＲＩ検出器；ラジオアナライザー（ＲＬＣ－７０１，Ａｌｏｋａ）を使用し、下記の分析条件で行った。条件を最適化した結果、標識率は８０％以上、放射化学的純度は９９％以上で^１２５Ｉ－２－ヨードアセトアミノフェン（^１２５Ｉ－ＩＡＰ）が得られた。

【0026】

（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム 5C₁₈-MS-II(Nacalai tesque)
移動相 20％メタノール：80％50mM KH₂PO₄(pH4.7), 0-10分
50％メタノール：50％50mM KH₂PO₄(pH4.7), 10-18分
流速 1.0mL/分
UV 225nm
RI 27keV±5%

【0027】

II．^１２５Ｉ－ＩＡＰの正常マウス体内分布実験
Ａ）実験方法と材料
^１２５Ｉ－ＩＡＰを約４０ｋＢｑ／２００μＬとなるように生理食塩水で希釈し、経口ゾンデ（Ｆｕｃｈｉｇａｍｉ）を用いて予め６時間絶食しておいたｄｄＹマウス（雄、８週齢、日本ＳＬＣ）に１匹当たり約３７ｋＢｑ／２００μＬを経口投与法として胃内投与した。投与５分、１０分、３０分、６０分後（ｎ＝４）に、イソフルラン（Ｗａｋｏ）麻酔下で心臓採血を行い、頸椎脱臼によりマウスを屠殺した。その後、速やかに各臓器（血液、心臓、肺、肝臓、脾臓、膵臓、胆嚢、胃、小腸、大腸、腎臓、膀胱、脳、甲状腺）を摘出し、それぞれの重量と放射能を電子天秤（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）及びオートウェルガンマカウンタで測定した。

【0028】

また、^１２５Ｉ－ＩＡＰを約２０ｋＢｑ／２００μＬとなるように生理食塩水で希釈し、マウスの尾静脈から静脈投与した。投与５分、１５分、３０分、６０分後に、心臓採血を行い、重量と放射能を測定した。

【0029】

Ｂ）結果と考察
経口投与時と静脈投与時の血液の重量集積率を図１に示した。経口投与時の血液の時間放射能曲線は、静脈投与時の結果と同様に、最大放射能を示した後に放射能の低下が確認できた。したがって、^１２５Ｉ－ＩＡＰは経口投与後、小腸から血液内に吸収されたと考えられた。

【0030】

III．^１２５Ｉ－ＩＡＰのＯＡＴＰ阻害マウス体内分布実験
Ａ）実験方法と材料
予め６時間絶食しておいたマウスにＯＡＴＰ特異的阻害薬bromosulfalein（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を経口ゾンデにより経口投与法として胃内投与した。^１２５Ｉ－ＩＡＰを約２０ｋＢｑ／１００μＬとなるように生理食塩水で希釈し、bromosulfalein投与（１ｍＭ／１００μＬ）５分後に、^１２５Ｉ－ＩＡＰを経口ゾンデによりマウスに１匹当たり２０ｋＢｑ／１００μＬを経口投与した。^１２５Ｉ－ＩＡＰ投与５分、１０分、３０分、６０分後（ｎ＝４）に、イソフルラン麻酔下で心臓採血を行い、頸椎脱臼によりマウスを屠殺した。その後、速やかに各臓器を摘出し、それぞれの重量と放射能を電子天秤及びオートウェルガンマカウンタで測定した。

【0031】

Ｂ）結果と考察
正常マウス群とＯＡＴＰ阻害群の経口投与時の血液と、高集積を示した主要臓器である膀胱、肝臓及び胆嚢の重量集積率を図２に示した。ＯＡＴＰ阻害群では血液集積率が、正常群に比べて^１２５Ｉ－ＩＡＰ投与後５分で有意に低下したため、ＯＡＴＰ阻害薬の影響により、^１２５Ｉ－ＩＡＰの消化管吸収機能が一時的に阻害され、小腸から血液内への取り込みが減少したと考えられた。したがって、^１２５Ｉ－ＩＡＰはＯＡＴＰを介して血液内に吸収されていることが確認された。また、膀胱では、ＯＡＴＰ阻害群が正常群に比べて^１２５Ｉ－ＩＡＰの集積率の遅延が見られた。特に、^１２５Ｉ－ＩＡＰ投与後１０分と３０分において有意な集積率低下が確認された。一方、肝臓と胆嚢ではともにＯＡＴＰ阻害群は正常群と比べて、集積率の低下傾向が確認されたが、有意差は見られなかった。膀胱、肝臓、胆嚢以外の臓器において、正常群とＯＡＴＰ阻害群で集積率がほとんど変わらなかった。したがって、膀胱の集積率を測定することで、小腸を中心とする消化管のＯＡＴＰ機能を推測できる可能性が示された。

【0032】

IV．結語
^１２５Ｉ－ＩＡＰは小腸刷子縁膜上のＯＡＴＰを介して血液内に吸収されることが確認された。更に、小腸に発現するＯＡＴＰの機能を阻害することで、^１２５Ｉ－ＩＡＰの膀胱集積が有意に低下した。

【0033】

以上の実施例では、^１２３Ｉよりも放射線半減期が長い^１２５Ｉを放射性核種として用いたが、画像診断薬として、イメージングのためには放射線エネルギーの高い^１２３Ｉが用いられている。

【0034】

したがって、^１２３Ｉ－ＩＡＰイメージングにおける膀胱の集積を測定することで、ＯＡＴＰ発現量を反映した消化管吸収機能を推測できる可能性が示された。

【図1】

【図2】