(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022119963
(43)【公開日】2022-08-17
(54)【発明の名称】多成分試料における物質の構造決定方法
(51)【国際特許分類】
G01N 30/02 20060101AFI20220809BHJP
G01N 30/26 20060101ALI20220809BHJP
G01N 30/88 20060101ALI20220809BHJP
G01N 23/207 20180101ALI20220809BHJP
【ＦＩ】
G01N30/02 N
G01N30/26 A
G01N30/88 C
G01N30/88 J
G01N30/88 D
G01N23/207
【審査請求】未請求
【請求項の数】8
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022090366
(22)【出願日】2022-06-02
(62)【分割の表示】P 2021090277の分割
【原出願日】2020-10-30
(31)【優先権主張番号】P 2019200020
(32)【優先日】2019-11-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2020014066
(32)【優先日】2020-01-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000253503
【氏名又は名称】キリンホールディングス株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100107342
【弁理士】
【氏名又は名称】横田 修孝
(74)【代理人】
【識別番号】100155631
【弁理士】
【氏名又は名称】榎 保孝
(74)【代理人】
【識別番号】100137497
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 未知子
(74)【代理人】
【識別番号】100217294
【弁理士】
【氏名又は名称】内山 尚和
(72)【発明者】
【氏名】谷口 慈将
(72)【発明者】
【氏名】三輪 真由佳
(72)【発明者】
【氏名】北田 直也
(72)【発明者】
【氏名】三田 穂高
(72)【発明者】
【氏名】西村 貴幸
(72)【発明者】
【氏名】武士 恵里子
(57)【要約】
【課題】多成分試料に含まれる対象物質の構造を決定する新規な方法の提供。
【解決手段】本発明によれば、２種以上の物質の混合物に含まれる対象物質の構造を決定
する方法であって、前記混合物から対象物質を超臨界流体クロマトグラフィーにより分離
する工程と、分離した対象物質を結晶スポンジに浸漬させて結晶構造解析用試料を作製す
る工程と、前記結晶構造解析用試料の結晶構造解析を行う工程とを含んでなる方法が提供
される。超臨界流体クロマトグラフィーの移動相には揮発性溶媒を用いることができる。
【選択図】なし
【解決手段】本発明によれば、２種以上の物質の混合物に含まれる対象物質の構造を決定
する方法であって、前記混合物から対象物質を超臨界流体クロマトグラフィーにより分離
する工程と、分離した対象物質を結晶スポンジに浸漬させて結晶構造解析用試料を作製す
る工程と、前記結晶構造解析用試料の結晶構造解析を行う工程とを含んでなる方法が提供
される。超臨界流体クロマトグラフィーの移動相には揮発性溶媒を用いることができる。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
２種以上の物質の混合物に含まれる対象物質の構造を決定する方法であって、（Ａ）前
記混合物から対象物質を超臨界流体クロマトグラフィーにより分離する工程と、（Ｂ）分
離した対象物質を結晶スポンジに浸漬させて結晶構造解析用試料を作製する工程と、（Ｃ
）前記結晶構造解析用試料の結晶構造解析を行う工程とを含んでなる、方法。
記混合物から対象物質を超臨界流体クロマトグラフィーにより分離する工程と、（Ｂ）分
離した対象物質を結晶スポンジに浸漬させて結晶構造解析用試料を作製する工程と、（Ｃ
）前記結晶構造解析用試料の結晶構造解析を行う工程とを含んでなる、方法。
【請求項2】
工程（Ａ）において、超臨界流体クロマトグラフィーの移動相として揮発性溶媒を用い
る、請求項１に記載の方法。
る、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
工程（Ａ）の後、かつ、工程（Ｂ）の前に、分離した対象物質から揮発性溶媒を蒸発さ
せる工程をさらに含む、請求項２に記載の方法。
せる工程をさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
工程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を連続して実施する、請求項１～３のいずれ
か一項に記載の方法。
か一項に記載の方法。
【請求項5】
工程（Ａ）の超臨界流体クロマトグラフィーの移動相に用いる溶媒が、工程（Ｂ）の結
晶スポンジへの浸漬に使用可能な溶媒である、請求項４に記載の方法。
晶スポンジへの浸漬に使用可能な溶媒である、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
工程（Ａ）を実施する装置と工程（Ｂ）を実施する装置とをシームレスに接続して、工
程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を実施する、請求項４または５に記載の方法。
程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を実施する、請求項４または５に記載の方法。
【請求項7】
前記混合物に含まれる対象物質のオクタノール／水分配係数（ｌｏｇ Ｐｏｗ）が－４
．６以上である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
．６以上である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記対象物質が鏡像異性体である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、多成分試料における物質の構造決定方法に関する。
【背景技術】
【0002】
多成分試料の定性分析は、創薬、食品、化粧品、材料科学などあらゆる産業界で実施さ
れており、研究開発、商品開発における必要不可欠なプロセスである。多成分試料の定性
分析は、多成分中から化学物質を分離するステップと分離した化学物質の構造を決定、す
なわち分離した化学物質を同定するステップから成り、一般的には容易ではない。化学物
質を分離する手法としては、例えばガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動などがある。ＧＣは分離能に優れるが、
分析対象試料が熱に安定な揮発性化合物に限定されるという制約を伴い、キャピラリー電
気泳動は水溶性のイオン化合物に限定されるという制約を伴う。ＨＰＬＣは分析対象試料
の制約が上述の手法に比べて少ないため、多成分試料における化学物質の分離手法として
広く普及している。
れており、研究開発、商品開発における必要不可欠なプロセスである。多成分試料の定性
分析は、多成分中から化学物質を分離するステップと分離した化学物質の構造を決定、す
なわち分離した化学物質を同定するステップから成り、一般的には容易ではない。化学物
質を分離する手法としては、例えばガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動などがある。ＧＣは分離能に優れるが、
分析対象試料が熱に安定な揮発性化合物に限定されるという制約を伴い、キャピラリー電
気泳動は水溶性のイオン化合物に限定されるという制約を伴う。ＨＰＬＣは分析対象試料
の制約が上述の手法に比べて少ないため、多成分試料における化学物質の分離手法として
広く普及している。
【0003】
近年、多成分試料における化学物質の分離手法として超臨界流体クロマトグラフィー（
ＳＦＣ）が注目されている。ＳＦＣは、移動相に超臨界流体状態の二酸化炭素を用いるた
め、ＨＰＬＣと比べて移動相に使用する有機溶剤量を圧倒的に削減することが可能で、低
炭素社会の実現という社会的ニーズの観点から環境負荷が少ない分離分析手法として注目
されている。また、分離能が高く、高速分析が可能であるだけでなく、幅広い極性の化学
物質の分離が可能で、ＧＣが得意とする揮発性化合物などの低極性化合物からＨＰＬＣで
分析されている高極性化合物まで分離対象とし得る（非特許文献１～３）。さらに、キラ
ルカラムと組み合わせた鏡像異性体の分離分析にも優れる（非特許文献４）。
ＳＦＣ）が注目されている。ＳＦＣは、移動相に超臨界流体状態の二酸化炭素を用いるた
め、ＨＰＬＣと比べて移動相に使用する有機溶剤量を圧倒的に削減することが可能で、低
炭素社会の実現という社会的ニーズの観点から環境負荷が少ない分離分析手法として注目
されている。また、分離能が高く、高速分析が可能であるだけでなく、幅広い極性の化学
物質の分離が可能で、ＧＣが得意とする揮発性化合物などの低極性化合物からＨＰＬＣで
分析されている高極性化合物まで分離対象とし得る（非特許文献１～３）。さらに、キラ
ルカラムと組み合わせた鏡像異性体の分離分析にも優れる（非特許文献４）。
【0004】
一方、多成分分析の定性分析における分離した化学物質を同定するステップに関しては
、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）の場合は、ＥＩ－ＭＳ検出器と組み合わせることで分
離した化学物質のＭＳスペクトル情報を得ることができ、検出頻度が高い既知成分につい
てはＭＳスペクトル情報がライブラリーとして整備されているため、分離した化学物質の
ＭＳスペクトルをライブラリー登録化合物と比較することで、化学物質の同定が可能なケ
ースも多い。しかし、新規化合物などライブラリーに登録されていない化学物質を同定す
ることはできず、また鏡像異性体の絶対立体配置を決定することもできない。ＨＰＬＣの
場合は、一般的にはＡＰＣＩ－ＭＳ検出器やＥＳＩ－ＭＳ検出器を組み合わせるが、イオ
ン化の原理上、測定機種や条件によってフラグメントイオンの生成パターンが異なること
から、得られる情報は限定的であり、ＧＣ－ＥＩＭＳのように化学物質の同定を行うこと
は容易でない。そのため、検出器にＮＭＲを組み合わせたＨＰＬＣ－ＮＭＲ法が実用化さ
れている。感度が低く、移動相に重水素化溶媒が必要になるため、高コストな手法ではあ
るものの、未知化学物質の構造が推定できる場合もある。これらに対しＳＦＣの場合は、
ＥＩ－ＭＳ検出器との組合せ、ＮＭＲとの組合せ、いずれも実用化されておらず、ＧＣや
ＨＰＬＣに比べると分離した化学物質の同定力に劣る。
、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）の場合は、ＥＩ－ＭＳ検出器と組み合わせることで分
離した化学物質のＭＳスペクトル情報を得ることができ、検出頻度が高い既知成分につい
てはＭＳスペクトル情報がライブラリーとして整備されているため、分離した化学物質の
ＭＳスペクトルをライブラリー登録化合物と比較することで、化学物質の同定が可能なケ
ースも多い。しかし、新規化合物などライブラリーに登録されていない化学物質を同定す
ることはできず、また鏡像異性体の絶対立体配置を決定することもできない。ＨＰＬＣの
場合は、一般的にはＡＰＣＩ－ＭＳ検出器やＥＳＩ－ＭＳ検出器を組み合わせるが、イオ
ン化の原理上、測定機種や条件によってフラグメントイオンの生成パターンが異なること
から、得られる情報は限定的であり、ＧＣ－ＥＩＭＳのように化学物質の同定を行うこと
は容易でない。そのため、検出器にＮＭＲを組み合わせたＨＰＬＣ－ＮＭＲ法が実用化さ
れている。感度が低く、移動相に重水素化溶媒が必要になるため、高コストな手法ではあ
るものの、未知化学物質の構造が推定できる場合もある。これらに対しＳＦＣの場合は、
ＥＩ－ＭＳ検出器との組合せ、ＮＭＲとの組合せ、いずれも実用化されておらず、ＧＣや
ＨＰＬＣに比べると分離した化学物質の同定力に劣る。
【0005】
このように、様々な化学物質を含む多成分試料の定性分析は、依然として改善の余地を
残すものであった。
残すものであった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】J. Chromatogr. A, 2012, 1266, 143-148
【非特許文献2】J. Agric. Food Chem. 2015, 63(18), 4457-4463
【非特許文献3】J. Chromatogr. A, 2014, 1362, 270-277
【非特許文献4】Anal. Chim. Acta, 2014, 821, 1-33
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明は、多成分試料における物質の構造を決定する新規な方法を提供することを目的
とする。
とする。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者らは、多成分試料における対象物質の同定方法について鋭意検討を重ねていた
ところ、超臨界流体クロマトグラフィー（以下、単に「ＳＦＣ」ということがある）と結
晶スポンジ（以下、単に「ＣＳ」ということがある）法を併用することで、多成分試料か
らの対象物質の分離と、分離した物質の同定が可能であること、さらにＭＳやＮＭＲでは
不可能である絶対立体配置の決定が可能であること、すなわち鏡像異性体の同定が可能で
あることを見出した。本発明者らはまた、内径４．６ｍｍ以下のカラムを用いた分析スケ
ールのＳＦＣとＣＳ法を併用して対象物質の絶対立体配置決定を含む構造決定が可能であ
ること、さらには、これに加えて、ＳＦＣの移動相（モディファイア溶媒およびメークア
ップ溶媒を含む）に用いる溶媒を結晶スポンジ法の実施が可能な溶媒とすることで、ＳＦ
Ｃによる分離の工程とＣＳ法による構造決定の工程をオンライン上で連続して実施可能で
あることを見出した。本発明者らはさらに、ＳＦＣの移動相に用いる溶媒と、その溶媒に
対して耐性がある結晶スポンジの組合せを見出した。本発明はこれらの知見に基づくもの
である。
ところ、超臨界流体クロマトグラフィー（以下、単に「ＳＦＣ」ということがある）と結
晶スポンジ（以下、単に「ＣＳ」ということがある）法を併用することで、多成分試料か
らの対象物質の分離と、分離した物質の同定が可能であること、さらにＭＳやＮＭＲでは
不可能である絶対立体配置の決定が可能であること、すなわち鏡像異性体の同定が可能で
あることを見出した。本発明者らはまた、内径４．６ｍｍ以下のカラムを用いた分析スケ
ールのＳＦＣとＣＳ法を併用して対象物質の絶対立体配置決定を含む構造決定が可能であ
ること、さらには、これに加えて、ＳＦＣの移動相（モディファイア溶媒およびメークア
ップ溶媒を含む）に用いる溶媒を結晶スポンジ法の実施が可能な溶媒とすることで、ＳＦ
Ｃによる分離の工程とＣＳ法による構造決定の工程をオンライン上で連続して実施可能で
あることを見出した。本発明者らはさらに、ＳＦＣの移動相に用いる溶媒と、その溶媒に
対して耐性がある結晶スポンジの組合せを見出した。本発明はこれらの知見に基づくもの
である。
【0009】
本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］２種以上の物質の混合物に含まれる対象物質の構造を決定する方法であって、（Ａ
）前記混合物から対象物質を超臨界流体クロマトグラフィーにより分離する工程と、（Ｂ
）分離した対象物質を結晶スポンジに浸漬させて結晶構造解析用試料を作製する工程と、
（Ｃ）前記結晶構造解析用試料の結晶構造解析を行う工程とを含んでなる、方法。
［２］工程（Ａ）において、超臨界流体クロマトグラフィーの移動相として揮発性溶媒を
用いる、上記［１］に記載の方法。
［３］工程（Ａ）の後、かつ、工程（Ｂ）の前に、分離した対象物質から揮発性溶媒を蒸
発させる工程をさらに含む、上記［２］に記載の方法。
［４］工程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を連続して実施する、上記［１］～［３
］のいずれかに記載の方法。
［５］工程（Ａ）の超臨界流体クロマトグラフィーの移動相に用いる溶媒が、工程（Ｂ）
の結晶スポンジへの浸漬に使用可能な溶媒である、上記［４］に記載の方法。
［６］工程（Ａ）を実施する装置と工程（Ｂ）を実施する装置とをシームレスに接続して
、工程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を実施する、上記［４］または［５］に記載
の方法。
［７］前記混合物に含まれる対象物質のオクタノール／水分配係数（ｌｏｇ Ｐｏｗ）が
－４．６以上である、上記［１］～［６］のいずれかに記載の方法。
［８］前記対象物質が鏡像異性体である、上記［１］～［７］のいずれかに記載の方法。
［１］２種以上の物質の混合物に含まれる対象物質の構造を決定する方法であって、（Ａ
）前記混合物から対象物質を超臨界流体クロマトグラフィーにより分離する工程と、（Ｂ
）分離した対象物質を結晶スポンジに浸漬させて結晶構造解析用試料を作製する工程と、
（Ｃ）前記結晶構造解析用試料の結晶構造解析を行う工程とを含んでなる、方法。
［２］工程（Ａ）において、超臨界流体クロマトグラフィーの移動相として揮発性溶媒を
用いる、上記［１］に記載の方法。
［３］工程（Ａ）の後、かつ、工程（Ｂ）の前に、分離した対象物質から揮発性溶媒を蒸
発させる工程をさらに含む、上記［２］に記載の方法。
［４］工程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を連続して実施する、上記［１］～［３
］のいずれかに記載の方法。
［５］工程（Ａ）の超臨界流体クロマトグラフィーの移動相に用いる溶媒が、工程（Ｂ）
の結晶スポンジへの浸漬に使用可能な溶媒である、上記［４］に記載の方法。
［６］工程（Ａ）を実施する装置と工程（Ｂ）を実施する装置とをシームレスに接続して
、工程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を実施する、上記［４］または［５］に記載
の方法。
［７］前記混合物に含まれる対象物質のオクタノール／水分配係数（ｌｏｇ Ｐｏｗ）が
－４．６以上である、上記［１］～［６］のいずれかに記載の方法。
［８］前記対象物質が鏡像異性体である、上記［１］～［７］のいずれかに記載の方法。
【0010】
本発明の方法によれば、分析が困難な多成分試料（特に様々な極性物質の混合物）にお
いて対象物質の構造（特に絶対立体配置）を迅速かつ正確に決定することができる点で有
利である。
いて対象物質の構造（特に絶対立体配置）を迅速かつ正確に決定することができる点で有
利である。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【発明の具体的説明】
【0012】
本発明は、多成分試料、すなわち、２種以上の物質の混合物に含まれる対象物質の構造
を決定する方法である。構造決定の対象となる物質は、工程（Ａ）で分離可能であり、工
程（Ｃ）で構造解析が可能である物質であれば特に限定されるものではないが、有機化合
物が構造決定の主たる対象となり、ペプチドや核酸なども構造決定の対象となる。
を決定する方法である。構造決定の対象となる物質は、工程（Ａ）で分離可能であり、工
程（Ｃ）で構造解析が可能である物質であれば特に限定されるものではないが、有機化合
物が構造決定の主たる対象となり、ペプチドや核酸なども構造決定の対象となる。
【0013】
本発明の方法は、（Ａ）２種以上の物質の混合物から対象物質を超臨界流体クロマトグ
ラフィー（ＳＦＣ）により分離する工程と、（Ｂ）分離した対象物質を結晶スポンジ（Ｃ
Ｓ）に浸漬させて結晶構造解析用試料を作製する工程と、（Ｃ）前記結晶構造解析用試料
の結晶構造解析を行う工程とを含んでなるものである。
ラフィー（ＳＦＣ）により分離する工程と、（Ｂ）分離した対象物質を結晶スポンジ（Ｃ
Ｓ）に浸漬させて結晶構造解析用試料を作製する工程と、（Ｃ）前記結晶構造解析用試料
の結晶構造解析を行う工程とを含んでなるものである。
【0014】
工程（Ａ）では、構造決定の対象物質を混合物からＳＦＣを使用して分離し、対象物質
が含まれる溶液を分取する。ＳＦＣ法は揮発性化合物や、疎水性の高い化合物から親水性
化合物まで、幅広い極性の物質を分離することができる。ＳＦＣの基本的な操作は公知で
あり、ＳＦＣや高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で通常行われている手順に従っ
て対象物質の分離ないし分取を行うことができる。またＳＦＣを市販の装置を用いて実施
する場合にはその操作手順に従って対象物質の分離ないし分取を行うことができる。
が含まれる溶液を分取する。ＳＦＣ法は揮発性化合物や、疎水性の高い化合物から親水性
化合物まで、幅広い極性の物質を分離することができる。ＳＦＣの基本的な操作は公知で
あり、ＳＦＣや高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で通常行われている手順に従っ
て対象物質の分離ないし分取を行うことができる。またＳＦＣを市販の装置を用いて実施
する場合にはその操作手順に従って対象物質の分離ないし分取を行うことができる。
【0015】
ＳＦＣの移動相は多くの場合、二酸化炭素とともにモディファイアと呼ばれる化合物の
分離を調整するための溶媒を添加したものが用いられる。モディファイアには揮発性の有
機溶媒、揮発性の酸および揮発性の塩基が用いられることが多い。ＳＦＣで分離された対
象物質を分取する際、移動相中の二酸化炭素は気化されるため、モディファイア溶媒に溶
解した状態となってフラクションコレクタなどに回収される。メークアップ溶媒は、対象
物質がカラムで分離してからフラクションコレクタなどに回収される間に別途添加される
溶媒であり、対象物質の溶解性を向上する目的などで添加される。分取された対象物質は
モディファイア溶媒に溶解した状態であっても、モディファイア溶媒とメークアップ溶媒
の混合溶媒に溶解した状態であってもよい。
分離を調整するための溶媒を添加したものが用いられる。モディファイアには揮発性の有
機溶媒、揮発性の酸および揮発性の塩基が用いられることが多い。ＳＦＣで分離された対
象物質を分取する際、移動相中の二酸化炭素は気化されるため、モディファイア溶媒に溶
解した状態となってフラクションコレクタなどに回収される。メークアップ溶媒は、対象
物質がカラムで分離してからフラクションコレクタなどに回収される間に別途添加される
溶媒であり、対象物質の溶解性を向上する目的などで添加される。分取された対象物質は
モディファイア溶媒に溶解した状態であっても、モディファイア溶媒とメークアップ溶媒
の混合溶媒に溶解した状態であってもよい。
【0016】
工程（Ａ）でＳＦＣに供される混合物は２種以上の物質を含むものであり、２種以上の
物質が含まれる限りその形態は特に限定されるものではない。ＳＦＣに供される混合物と
しては、例えば、食品組成物（飲料組成物を含む）、医薬組成物、ヘルスケア組成物、オ
ーラルケア組成物、香料、天然物（例えば、果実、野菜、香辛料、ハーブなどの食品素材
）およびその抽出物、有機合成化合物（例えば、塗料、顔料、農薬、殺虫剤）、生体試料
（例えば、血液、尿、唾液、鼻水、生体組織、臓器）、環境試料（例えば、河川水、湖水
、海水、土壌）、酵素反応物などが挙げられる。本発明の方法によれば、類似した物質を
複数種含む多成分試料に含まれる物質の構造を決定できることから、本発明の方法は類似
した物質を複数種含む可能性がある天然物や有機合成化合物に対して好ましくは適用する
ことができる。また、混合物中の対象物質は極性が高い物質であってもよく、例えば、オ
クタノール／水分配係数（ｌｏｇ Ｐｏｗ）の値が－４．６以上の極性物質を対象物質と
することができる。ここで、オクタノール／水分配比率は、オクタノールと水の２相にお
いて、ある化合物がオクタノール相に溶解している濃度と、水に溶解している濃度の比（
Ｋｏｗ）として定義され、本明細書ではオクタノール／水分配係数としてＫｏｗの常用対
数であるｌｏｇ Ｐｏｗを使用する。
物質が含まれる限りその形態は特に限定されるものではない。ＳＦＣに供される混合物と
しては、例えば、食品組成物（飲料組成物を含む）、医薬組成物、ヘルスケア組成物、オ
ーラルケア組成物、香料、天然物（例えば、果実、野菜、香辛料、ハーブなどの食品素材
）およびその抽出物、有機合成化合物（例えば、塗料、顔料、農薬、殺虫剤）、生体試料
（例えば、血液、尿、唾液、鼻水、生体組織、臓器）、環境試料（例えば、河川水、湖水
、海水、土壌）、酵素反応物などが挙げられる。本発明の方法によれば、類似した物質を
複数種含む多成分試料に含まれる物質の構造を決定できることから、本発明の方法は類似
した物質を複数種含む可能性がある天然物や有機合成化合物に対して好ましくは適用する
ことができる。また、混合物中の対象物質は極性が高い物質であってもよく、例えば、オ
クタノール／水分配係数（ｌｏｇ Ｐｏｗ）の値が－４．６以上の極性物質を対象物質と
することができる。ここで、オクタノール／水分配比率は、オクタノールと水の２相にお
いて、ある化合物がオクタノール相に溶解している濃度と、水に溶解している濃度の比（
Ｋｏｗ）として定義され、本明細書ではオクタノール／水分配係数としてＫｏｗの常用対
数であるｌｏｇ Ｐｏｗを使用する。
【0017】
工程（Ｂ）では、工程（Ａ）で分取した対象物質が含まれる溶液を結晶スポンジに浸漬
させて結晶構造解析用試料を作製する。ここで結晶スポンジとは、規則正しい細孔構造を
有する単結晶であり、例えば、金属有機構造体（ＭＯＦ）、共有結合性有機構造体（ＣＯ
Ｆ）、細孔性有機分子結晶（ＰＯＭＣ）、ゼオライトのような無機化合物などから得るこ
とができるが、細孔内に化合物をゲストとして取り込む性質を有する単結晶であれば、そ
の由来について限定されるものではない。金属有機構造体から構成される結晶スポンジと
しては、配位性部位を２つ以上有する配位子と中心金属としての金属イオンとを含む三次
元ネットワーク構造を有する高分子金属錯体が挙げられる。ここで、「三次元ネットワー
ク構造」とは、配位子（配位性部位を２つ以上有する配位子およびその他の単座配位子）
と金属イオンが結合して形成された構造単位が、三次元的に繰り返されてなる網状の構造
をいう。結晶スポンジとして使用可能な金属有機構造体の単結晶は、例えば、Nature 201
3, 495, 461-466、Chem. Commun. 2015, 51, 11252-11255、Science 2016, 353, 808-811
、Chem. Commun. 2016, 52, 7013-7015、Chem. Asian J. 2017, 12, 208-211、J. Am. Ch
em. Soc. 2017, 139, 11341-11344、Chem 2017, 3, 281-289、特許第５９６９６１６号な
どに記載されている。単結晶の調製しやすさなどの汎用性を考慮するとNature 2013, 495
, 461-466、Chem. Commun. 2015, 51, 11252-11255などに記載されている［（ＺｎＸ２）
３（ｔｐｔ）２・（ｓｏｌｖｅｎｔ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジが好適である（ここで
、Ｘは、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素などのハロゲン原子を表し、ｔｐｔは２，４，６－
トリ（４－ピリジル）－１，３，５－トリアジンを表し、ｓｏｌｖｅｎｔは細孔などに内
包された溶媒を表し、ａは０以上の任意の数を表し、ｎは任意の正の整数を表す。以下同
様。）。結晶構造解析用試料を調製するために対象物質を結晶スポンジに浸漬させてゲス
トとして細孔内に取り込ませる方法は、対象物質がゲストとして細孔内に取り込まれる限
り、特に限定されるものではない。例えば、IUCrJ 2016, 3, 139-151、Chem. Eur. J. 20
17, 23, 15035-15040、CrystEngComm, 2017, 19, 4528-4534、Org. Lett. 2018, 20, 353
6-3540、Science 2016, 353, 808-811、Chem. Commun. 2015, 51, 11252-11255などに記
載の方法によって対象物質をゲストとして細孔内に取り込ませることができる。
させて結晶構造解析用試料を作製する。ここで結晶スポンジとは、規則正しい細孔構造を
有する単結晶であり、例えば、金属有機構造体（ＭＯＦ）、共有結合性有機構造体（ＣＯ
Ｆ）、細孔性有機分子結晶（ＰＯＭＣ）、ゼオライトのような無機化合物などから得るこ
とができるが、細孔内に化合物をゲストとして取り込む性質を有する単結晶であれば、そ
の由来について限定されるものではない。金属有機構造体から構成される結晶スポンジと
しては、配位性部位を２つ以上有する配位子と中心金属としての金属イオンとを含む三次
元ネットワーク構造を有する高分子金属錯体が挙げられる。ここで、「三次元ネットワー
ク構造」とは、配位子（配位性部位を２つ以上有する配位子およびその他の単座配位子）
と金属イオンが結合して形成された構造単位が、三次元的に繰り返されてなる網状の構造
をいう。結晶スポンジとして使用可能な金属有機構造体の単結晶は、例えば、Nature 201
3, 495, 461-466、Chem. Commun. 2015, 51, 11252-11255、Science 2016, 353, 808-811
、Chem. Commun. 2016, 52, 7013-7015、Chem. Asian J. 2017, 12, 208-211、J. Am. Ch
em. Soc. 2017, 139, 11341-11344、Chem 2017, 3, 281-289、特許第５９６９６１６号な
どに記載されている。単結晶の調製しやすさなどの汎用性を考慮するとNature 2013, 495
, 461-466、Chem. Commun. 2015, 51, 11252-11255などに記載されている［（ＺｎＸ２）
３（ｔｐｔ）２・（ｓｏｌｖｅｎｔ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジが好適である（ここで
、Ｘは、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素などのハロゲン原子を表し、ｔｐｔは２，４，６－
トリ（４－ピリジル）－１，３，５－トリアジンを表し、ｓｏｌｖｅｎｔは細孔などに内
包された溶媒を表し、ａは０以上の任意の数を表し、ｎは任意の正の整数を表す。以下同
様。）。結晶構造解析用試料を調製するために対象物質を結晶スポンジに浸漬させてゲス
トとして細孔内に取り込ませる方法は、対象物質がゲストとして細孔内に取り込まれる限
り、特に限定されるものではない。例えば、IUCrJ 2016, 3, 139-151、Chem. Eur. J. 20
17, 23, 15035-15040、CrystEngComm, 2017, 19, 4528-4534、Org. Lett. 2018, 20, 353
6-3540、Science 2016, 353, 808-811、Chem. Commun. 2015, 51, 11252-11255などに記
載の方法によって対象物質をゲストとして細孔内に取り込ませることができる。
【0018】
用いる結晶スポンジの種類によっては、水の存在により結晶スポンジ自体の構造が破壊
されるため、工程（Ａ）で分離された対象物質を含む試料は、工程（Ｂ）に供するに当た
って水分を含まないものとしてもよい。特に様々な化合物をゲストとして取込め、構造決
定の実績に優れる［（ＺｎＸ２）３（ｔｐｔ）２・（ｓｏｌｖｅｎｔ）ａ］ｎタイプの結
晶スポンジは溶媒として水が含まれる環境では結晶構造が破壊されるため、水の混入は避
ける必要がある。前述のようにＳＦＣはその分離手順において揮発性移動相を用いること
から、工程（Ａ）で分離された対象物質を含むフラクションは揮発性溶媒を一部または全
部蒸発させた後、直ちに工程（Ｂ）の結晶構造解析用試料の作製工程に供することができ
る点で有利である。
されるため、工程（Ａ）で分離された対象物質を含む試料は、工程（Ｂ）に供するに当た
って水分を含まないものとしてもよい。特に様々な化合物をゲストとして取込め、構造決
定の実績に優れる［（ＺｎＸ２）３（ｔｐｔ）２・（ｓｏｌｖｅｎｔ）ａ］ｎタイプの結
晶スポンジは溶媒として水が含まれる環境では結晶構造が破壊されるため、水の混入は避
ける必要がある。前述のようにＳＦＣはその分離手順において揮発性移動相を用いること
から、工程（Ａ）で分離された対象物質を含むフラクションは揮発性溶媒を一部または全
部蒸発させた後、直ちに工程（Ｂ）の結晶構造解析用試料の作製工程に供することができ
る点で有利である。
【0019】
すなわち、本発明の方法では工程（Ａ）において、揮発性溶媒（好ましくは水を含まな
い揮発性溶媒）をＳＦＣの移動相に用いることが好ましい。本発明の方法ではまた、工程
（Ａ）の後、かつ、工程（Ｂ）の前に、分離した対象物質から揮発性溶媒を一部または全
部蒸発させる工程を含んでいてもよい。また、工程（Ｂ）では対象物質の濃度を調整する
ために適宜溶媒を添加してもよい。このような工程を採用することにより、本発明の方法
は工程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を連続して実施することができる点で有利で
ある。ここで、連続して実施するとは、オフライン上でこれらの操作を連続して実施する
のみならず、ＳＦＣを実施する装置とＣＳ法を実施する装置を連結し、工程（Ａ）、工程
（Ｂ）および工程（Ｃ）をオンラインで実施することを含む。
い揮発性溶媒）をＳＦＣの移動相に用いることが好ましい。本発明の方法ではまた、工程
（Ａ）の後、かつ、工程（Ｂ）の前に、分離した対象物質から揮発性溶媒を一部または全
部蒸発させる工程を含んでいてもよい。また、工程（Ｂ）では対象物質の濃度を調整する
ために適宜溶媒を添加してもよい。このような工程を採用することにより、本発明の方法
は工程（Ａ）、工程（Ｂ）および工程（Ｃ）を連続して実施することができる点で有利で
ある。ここで、連続して実施するとは、オフライン上でこれらの操作を連続して実施する
のみならず、ＳＦＣを実施する装置とＣＳ法を実施する装置を連結し、工程（Ａ）、工程
（Ｂ）および工程（Ｃ）をオンラインで実施することを含む。
【0020】
前記の連続した実施では、工程（Ａ）のＳＦＣの移動相に用いる溶媒（モディファイア
溶媒およびメークアップ溶媒を含む）として、工程（Ｂ）の結晶スポンジへの浸漬に使用
可能な溶媒を使用して実施することができる。すなわち、工程（Ａ）の溶媒は、工程（Ｂ
）で用いる溶媒と共通のものを用いることができ、あるいは、工程（Ｂ）で用いる溶媒と
異なるものを用いる場合には、結晶スポンジに悪影響（結晶スポンジの破壊、溶解など）
を及ぼさない溶媒を選択することができる。例えば、後記実施例（例５～２０）で記載す
るように、結晶スポンジが溶媒に浸った状態のバイアルなどを工程（Ｂ）の前に準備して
おき、ＳＦＣ装置で分離された物質をＳＦＣの移動相に用いる溶媒とともにこのバイアル
に直接分取してもよい。この場合、工程（Ａ）の後、かつ、工程（Ｂ）の前に、分離した
対象物質から揮発性溶媒を一部または全部蒸発させる工程を省略することができることか
ら、工程（Ａ）を実施する装置と工程（Ｂ）を実施する装置をシームレスに接続し、対象
物質の構造解析を迅速に実施できる点で有利である。特に揮発性化合物は揮発ロスする性
質を有するため、微量サンプルの構造解析が困難であるが、工程（Ａ）を実施する装置と
工程（Ｂ）を実施する装置をシームレスに接続し、混合物から分離した解析対象化合物を
そのまま結晶スポンジの細孔内に捕捉させることで、揮発ロスすることなく微量サンプル
の構造解析が可能な点で極めて有利である。
溶媒およびメークアップ溶媒を含む）として、工程（Ｂ）の結晶スポンジへの浸漬に使用
可能な溶媒を使用して実施することができる。すなわち、工程（Ａ）の溶媒は、工程（Ｂ
）で用いる溶媒と共通のものを用いることができ、あるいは、工程（Ｂ）で用いる溶媒と
異なるものを用いる場合には、結晶スポンジに悪影響（結晶スポンジの破壊、溶解など）
を及ぼさない溶媒を選択することができる。例えば、後記実施例（例５～２０）で記載す
るように、結晶スポンジが溶媒に浸った状態のバイアルなどを工程（Ｂ）の前に準備して
おき、ＳＦＣ装置で分離された物質をＳＦＣの移動相に用いる溶媒とともにこのバイアル
に直接分取してもよい。この場合、工程（Ａ）の後、かつ、工程（Ｂ）の前に、分離した
対象物質から揮発性溶媒を一部または全部蒸発させる工程を省略することができることか
ら、工程（Ａ）を実施する装置と工程（Ｂ）を実施する装置をシームレスに接続し、対象
物質の構造解析を迅速に実施できる点で有利である。特に揮発性化合物は揮発ロスする性
質を有するため、微量サンプルの構造解析が困難であるが、工程（Ａ）を実施する装置と
工程（Ｂ）を実施する装置をシームレスに接続し、混合物から分離した解析対象化合物を
そのまま結晶スポンジの細孔内に捕捉させることで、揮発ロスすることなく微量サンプル
の構造解析が可能な点で極めて有利である。
【0021】
結晶スポンジに悪影響を与えない溶媒は、例えば、［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ）２・
（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジについてはｎ－ヘキサン、シクロヘキ
サン、ベンゼン、トルエンなどの炭化水素類、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴ
ＢＥ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）などのエーテル類、酢酸エチルなどのエステル類、
アセトン、２－ブタノンなどのケトン類、超臨界、亜臨界、気体または液体状態の二酸化
炭素などであり、［ＣｕＢｒ（ｂｔｔ）］タイプの結晶スポンジについては上記炭化水素
類、エーテル類、エステル類、ケトン類および二酸化炭素に加えて、メタノール、エタノ
ール、プロパノール、イソプロパノールなどのアルコール類などであり、［Ｃｏ２（Ｒ－
ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプおよび［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ
）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジについては上記炭化水素類、エーテル類、エス
テル類、ケトン類、二酸化炭素およびアルコール類に加えて、アセトニトリルなどのニト
リル類などである。さらに結晶スポンジに悪影響を与えない上記溶媒は任意の組合せ、割
合で混合して用いてもよい。
（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジについてはｎ－ヘキサン、シクロヘキ
サン、ベンゼン、トルエンなどの炭化水素類、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴ
ＢＥ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）などのエーテル類、酢酸エチルなどのエステル類、
アセトン、２－ブタノンなどのケトン類、超臨界、亜臨界、気体または液体状態の二酸化
炭素などであり、［ＣｕＢｒ（ｂｔｔ）］タイプの結晶スポンジについては上記炭化水素
類、エーテル類、エステル類、ケトン類および二酸化炭素に加えて、メタノール、エタノ
ール、プロパノール、イソプロパノールなどのアルコール類などであり、［Ｃｏ２（Ｒ－
ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプおよび［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ
）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジについては上記炭化水素類、エーテル類、エス
テル類、ケトン類、二酸化炭素およびアルコール類に加えて、アセトニトリルなどのニト
リル類などである。さらに結晶スポンジに悪影響を与えない上記溶媒は任意の組合せ、割
合で混合して用いてもよい。
【0022】
工程（Ｃ）では、工程（Ｂ）で作製した結晶解析用試料を結晶構造解析することにより
、対象物質の分子構造を決定することができる。結晶構造解析には、Ｘ線回折、中性子線
回折および電子線回折のいずれの方法も使用することができる。また、測定データの解析
、すなわち、対象物質の構造解析は公知の方法に従って実施することができる。例えば、
工程（Ｂ）と工程（Ｃ）は国際公開第２０１４／０３８２２０号やIUCrJ 2016, 3, 139-1
51の記載に従って実施することができる。
、対象物質の分子構造を決定することができる。結晶構造解析には、Ｘ線回折、中性子線
回折および電子線回折のいずれの方法も使用することができる。また、測定データの解析
、すなわち、対象物質の構造解析は公知の方法に従って実施することができる。例えば、
工程（Ｂ）と工程（Ｃ）は国際公開第２０１４／０３８２２０号やIUCrJ 2016, 3, 139-1
51の記載に従って実施することができる。
【0023】
本発明の方法によれば、分析が困難な多成分試料において対象物質の構造を迅速かつ正
確に決定することができる点で有利である。対象物質が異性体の混合物であっても、それ
らを分離し、構造を同定し、決定することができる。異性体としては、構造異性体および
立体異性体があり、構造異性体には位置異性体などが含まれ、立体異性体には配座異性体
および配置異性体が含まれる。また、配置異性体には、鏡像異性体（エナンチオマー）お
よびジアステレオ異性体（ジアステレオマー）が含まれる。医薬品や機能性表示食品の有
効成分あるいは有効成分の候補となる化合物、呈味・香気化合物などは鏡像異性体の一方
のみが有効成分として機能する場合があることから、本発明の方法は多成分試料に含まれ
る化合物の絶対立体配置を迅速かつ正確に決定することができるので非常に有利である。
確に決定することができる点で有利である。対象物質が異性体の混合物であっても、それ
らを分離し、構造を同定し、決定することができる。異性体としては、構造異性体および
立体異性体があり、構造異性体には位置異性体などが含まれ、立体異性体には配座異性体
および配置異性体が含まれる。また、配置異性体には、鏡像異性体（エナンチオマー）お
よびジアステレオ異性体（ジアステレオマー）が含まれる。医薬品や機能性表示食品の有
効成分あるいは有効成分の候補となる化合物、呈味・香気化合物などは鏡像異性体の一方
のみが有効成分として機能する場合があることから、本発明の方法は多成分試料に含まれ
る化合物の絶対立体配置を迅速かつ正確に決定することができるので非常に有利である。
【実施例0024】
以下の例に基づき本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定される
ものではない。
ものではない。
【0025】
例１：ＳＦＣによるラセミ体サンプルの鏡像異性体分離（１）
例１では、内径１０ｍｍ以上のカラムの使用が適した分取型のＳＦＣ装置を使用してラ
セミ体サンプルの鏡像異性体分離を行った。
（１）方法
ラセミ体サンプルとして、市販医薬品の有効成分であり、一般試薬として入手可能なオ
メプラゾール（東京化成工業社）を用いた。オメプラゾール（ラセミ体）をメタノールで
１０ｍｇ／ｍＬに調製し、以下の条件で超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（Wate
rs Thar Supercritical Fluid Chromatography System、Waters社）に供した。
例１では、内径１０ｍｍ以上のカラムの使用が適した分取型のＳＦＣ装置を使用してラ
セミ体サンプルの鏡像異性体分離を行った。
（１）方法
ラセミ体サンプルとして、市販医薬品の有効成分であり、一般試薬として入手可能なオ
メプラゾール（東京化成工業社）を用いた。オメプラゾール（ラセミ体）をメタノールで
１０ｍｇ／ｍＬに調製し、以下の条件で超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（Wate
rs Thar Supercritical Fluid Chromatography System、Waters社）に供した。
【0026】
【表1】
【0027】
【0028】
例２：ＣＳ法による絶対立体構造決定（１）
例２では、例１で分離、分取したラセミ体化合物の２種の鏡像異性体についてＣＳ法に
より絶対立体構造の決定を行った。
例２では、例１で分離、分取したラセミ体化合物の２種の鏡像異性体についてＣＳ法に
より絶対立体構造の決定を行った。
【0029】
（１）方法
例１の図１に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を分取し、一部（４０μ
ｇ相当）をＶ底型１．２ｍＬバイアルに移し、溶出液であるメタノール（ＭｅＯＨ）を窒
素気流下で蒸発させた。その後、結晶スポンジ１粒（大きさを１００μｍ×１００μｍ×
１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：１．３μｇ）をメチル－
ｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）およびジメトキシエタン（ＤＭＥ）（体積比９：１）の
混合溶媒２０μＬとともに添加した。バイアルに蓋をし、５０℃で１日インキュベートし
た後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．
５４１８Å）で測定した。
例１の図１に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を分取し、一部（４０μ
ｇ相当）をＶ底型１．２ｍＬバイアルに移し、溶出液であるメタノール（ＭｅＯＨ）を窒
素気流下で蒸発させた。その後、結晶スポンジ１粒（大きさを１００μｍ×１００μｍ×
１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：１．３μｇ）をメチル－
ｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）およびジメトキシエタン（ＤＭＥ）（体積比９：１）の
混合溶媒２０μＬとともに添加した。バイアルに蓋をし、５０℃で１日インキュベートし
た後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．
５４１８Å）で測定した。
【0030】
結晶スポンジはChem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って作製した、
［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプのものを用いた。
結晶スポンジは使用前までｎ－ヘキサン（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）に浸して保存し、使用直前
に上記ＭＴＢＥ／ＤＭＥ混合溶媒に置換してから実験に用いた。
［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプのものを用いた。
結晶スポンジは使用前までｎ－ヘキサン（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）に浸して保存し、使用直前
に上記ＭＴＢＥ／ＤＭＥ混合溶媒に置換してから実験に用いた。
【0031】
測定データは、Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って解析した。
【0032】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１の図１のピーク１、ピーク２として
溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表２に示す。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１の図１のピーク１、ピーク２として
溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表２に示す。
【0033】
【表2】
【0034】
ピーク１および２として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の
非対称単位の結晶構造を図２および図３にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶スポン
ジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図４および
図５に示した。これらの結果から、ピーク１の鏡像異性体がオメプラゾールのＳ体、ピー
ク２がオメプラゾールのＲ体と決定、同定することができた。
非対称単位の結晶構造を図２および図３にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶スポン
ジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図４および
図５に示した。これらの結果から、ピーク１の鏡像異性体がオメプラゾールのＳ体、ピー
ク２がオメプラゾールのＲ体と決定、同定することができた。
【0035】
例３:ＳＦＣによるラセミ体サンプルの鏡像異性体分離（２）
例３では、内径４．６ｍｍ以下のカラムの使用が適した分析スケールのＳＦＣ装置（Ｓ
ｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社））にフラクションコレクタ（ＦＲ
Ｃ－４０ ＳＦ（島津製作所社））を併用してラセミ体サンプルの鏡像異性体分離を行っ
た。
例３では、内径４．６ｍｍ以下のカラムの使用が適した分析スケールのＳＦＣ装置（Ｓ
ｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社））にフラクションコレクタ（ＦＲ
Ｃ－４０ ＳＦ（島津製作所社））を併用してラセミ体サンプルの鏡像異性体分離を行っ
た。
【0036】
（１）方法
ラセミ体天然物サンプルとして、J. Inst. Brew. 1990, 96, 137-141に記載の方法に従
って、ｒａｃ－（４Ｒ，５Ｒ）－３，５－ジヒドロキシ－４－（３－メチルブタ－２－エ
ン－１－イル）－２－（３－メチルブタノイル）シクロペンタ－２－エン－１－オン（ra
c-(4R,5R)-3,5-dihydroxy-4-(3-methylbut-2-en-1-yl)-2-(3-methylbutanoyl)cyclopent-
2-en-1-one）（本化合物は互変異性化により、ｒａｃ－（４Ｒ，５Ｒ）－３，４－ジヒド
ロキシ－５－（３－メチルブタ－２－エン－１－イル）－２－（３－メチルブタノイル）
シクロペンタ－２－エン－１－オン（rac-(4R,5R)-3,4-dihydroxy-5-(3-methylbut-2-en-
1-yl)-2-(3-methylbutanoyl)cyclopent-2-en-1-one）の構造をとりうる）を調製した。本
ラセミ体化合物をメタノールで８６ｍｇ／ｍＬに調製し、表３の条件でＳＦＣに供した。
ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した
化合物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社）により回収した。
サンプルの回収効率を上げるために、フラクションコレクタにメークアップ溶媒を一定流
量で添加した。
ラセミ体天然物サンプルとして、J. Inst. Brew. 1990, 96, 137-141に記載の方法に従
って、ｒａｃ－（４Ｒ，５Ｒ）－３，５－ジヒドロキシ－４－（３－メチルブタ－２－エ
ン－１－イル）－２－（３－メチルブタノイル）シクロペンタ－２－エン－１－オン（ra
c-(4R,5R)-3,5-dihydroxy-4-(3-methylbut-2-en-1-yl)-2-(3-methylbutanoyl)cyclopent-
2-en-1-one）（本化合物は互変異性化により、ｒａｃ－（４Ｒ，５Ｒ）－３，４－ジヒド
ロキシ－５－（３－メチルブタ－２－エン－１－イル）－２－（３－メチルブタノイル）
シクロペンタ－２－エン－１－オン（rac-(4R,5R)-3,4-dihydroxy-5-(3-methylbut-2-en-
1-yl)-2-(3-methylbutanoyl)cyclopent-2-en-1-one）の構造をとりうる）を調製した。本
ラセミ体化合物をメタノールで８６ｍｇ／ｍＬに調製し、表３の条件でＳＦＣに供した。
ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した
化合物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社）により回収した。
サンプルの回収効率を上げるために、フラクションコレクタにメークアップ溶媒を一定流
量で添加した。
【0037】
【表3】
【0038】
【0039】
例４：ＣＳ法による絶対立体構造決定（２）
例４では、例３で分離、分取したラセミ体化合物の２種の鏡像異性体についてＣＳ法に
より絶対立体構造の決定を行った。
例４では、例３で分離、分取したラセミ体化合物の２種の鏡像異性体についてＣＳ法に
より絶対立体構造の決定を行った。
【0040】
（１）方法
例３の図６に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を分取し、一部（１回の
分取量の約１／４０量である５μｇ相当）をＶ底型１．２ｍＬバイアルに移し、溶出液で
ある移動相Ｂとメークアップ溶媒の混合溶液（メタノール、アセトニトリル、トリフルオ
ロ酢酸から成る）を窒素気流下で蒸発させた。その後、結晶スポンジ１粒（大きさを１０
０μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：１
．３μｇ）をｎ－ヘキサン５０μＬとともに添加した。バイアルに蓋をし、蓋に注射針を
刺して５０℃でインキュベートし、溶媒を緩やかに揮発させた。１日後、バイアルから結
晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定し
た。
例３の図６に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を分取し、一部（１回の
分取量の約１／４０量である５μｇ相当）をＶ底型１．２ｍＬバイアルに移し、溶出液で
ある移動相Ｂとメークアップ溶媒の混合溶液（メタノール、アセトニトリル、トリフルオ
ロ酢酸から成る）を窒素気流下で蒸発させた。その後、結晶スポンジ１粒（大きさを１０
０μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：１
．３μｇ）をｎ－ヘキサン５０μＬとともに添加した。バイアルに蓋をし、蓋に注射針を
刺して５０℃でインキュベートし、溶媒を緩やかに揮発させた。１日後、バイアルから結
晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定し
た。
【0041】
結晶スポンジはChem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って作製した、
［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプのものを用いた。
結晶スポンジは使用前までｎ－ヘキサン（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）に浸して保存した。
［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプのものを用いた。
結晶スポンジは使用前までｎ－ヘキサン（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）に浸して保存した。
【0042】
測定データは、Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って解析した。
【0043】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例３の図６のピーク１、ピーク２として
溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表４に示す。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例３の図６のピーク１、ピーク２として
溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表４に示す。
【0044】
【表4】
【0045】
ピーク１および２として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の
非対称単位の結晶構造を図７および図８にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶スポン
ジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図９および
図１０に示した。これらの結果から、ピーク１の鏡像異性体が（４Ｓ,５Ｓ）－３,５－ジ
ヒドロキシ－４－（３－メチルブタ－２－エン－１－イル）－２－（３－メチルブタノイ
ル）シクロペンタ－２－エン－１－オン）（(4S,5S)-3,5-dihydroxy-4-(3-methylbut-2-e
n-1-yl)-2-(3-methylbutanoyl)cyclopent-2-en-1-one）、ピーク２の鏡像異性体が（４Ｒ
,５Ｒ）－３，５－ジヒドロキシ－４－（３－メチルブタ－２－エン－１－イル）－２－
（３－メチルブタノイル）シクロペンタ－２－エン－１－オン）（(4R,5R)-3,5-dihydrox
y-4-(3-methylbut-2-en-1-yl)-2-(3-methylbutanoyl)cyclopent-2-en-1-one）と決定、同
定することができた。例３および例４の結果から、分析スケールのＳＦＣ装置を使用した
場合であっても、すなわち対象物質の精製量が数十μｇ程度であっても、本発明による方
法により対象物質の構造決定が可能であることが確認された。
非対称単位の結晶構造を図７および図８にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶スポン
ジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図９および
図１０に示した。これらの結果から、ピーク１の鏡像異性体が（４Ｓ,５Ｓ）－３,５－ジ
ヒドロキシ－４－（３－メチルブタ－２－エン－１－イル）－２－（３－メチルブタノイ
ル）シクロペンタ－２－エン－１－オン）（(4S,5S)-3,5-dihydroxy-4-(3-methylbut-2-e
n-1-yl)-2-(3-methylbutanoyl)cyclopent-2-en-1-one）、ピーク２の鏡像異性体が（４Ｒ
,５Ｒ）－３，５－ジヒドロキシ－４－（３－メチルブタ－２－エン－１－イル）－２－
（３－メチルブタノイル）シクロペンタ－２－エン－１－オン）（(4R,5R)-3,5-dihydrox
y-4-(3-methylbut-2-en-1-yl)-2-(3-methylbutanoyl)cyclopent-2-en-1-one）と決定、同
定することができた。例３および例４の結果から、分析スケールのＳＦＣ装置を使用した
場合であっても、すなわち対象物質の精製量が数十μｇ程度であっても、本発明による方
法により対象物質の構造決定が可能であることが確認された。
【0046】
例５：ＳＦＣによるラセミ体サンプルの鏡像異性体分離（３）
例５では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒に
はＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用してラセミ体サンプルの鏡像異性体分離を行っ
た。
例５では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒に
はＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用してラセミ体サンプルの鏡像異性体分離を行っ
た。
【0047】
（１）方法
ラセミ体サンプルとして、一般試薬として入手可能なｔｒａｎｓ－スチルベンオキサイ
ドのラセミ体（東京化成工業）を用いた。ｔｒａｎｓ－スチルベンオキサイド（ラセミ体
）をメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で１０ｍｇ／ｍＬに調製し、表５の
条件でＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ
ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した化合物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０
ＳＦ（島津製作所社）により回収した。サンプルの回収効率を上げるために、フラクショ
ンコレクタにメークアップ溶媒を一定流量で添加した。
ラセミ体サンプルとして、一般試薬として入手可能なｔｒａｎｓ－スチルベンオキサイ
ドのラセミ体（東京化成工業）を用いた。ｔｒａｎｓ－スチルベンオキサイド（ラセミ体
）をメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で１０ｍｇ／ｍＬに調製し、表５の
条件でＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ
ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した化合物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０
ＳＦ（島津製作所社）により回収した。サンプルの回収効率を上げるために、フラクショ
ンコレクタにメークアップ溶媒を一定流量で添加した。
【0048】
【表5】
【0049】
上記条件で分析したクロマトグラムの結果は、図１１に示す通りであった。本ラセミ体
化合物の２種の鏡像異性体を３分以内に分離度２．４で分離することができた。
化合物の２種の鏡像異性体を３分以内に分離度２．４で分離することができた。
【0050】
例６：ＣＳ法による絶対立体構造決定（３）
例６では、例５で分離、分取したラセミ体化合物の２種の鏡像異性体についてＣＳ法に
より絶対立体構造の決定を行った。
例６では、例５で分離、分取したラセミ体化合物の２種の鏡像異性体についてＣＳ法に
より絶対立体構造の決定を行った。
【0051】
（１）方法
Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って作製した、［（ＺｎＣｌ２
）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジ１粒（大きさを１
００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：
１．３μｇ）をＶ底型１．２ｍＬバイアルにｎ－ヘキサンとともに移した。ｎ－ヘキサン
を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）を５０μＬ添加し、結晶スポ
ンジ内の溶媒をＭＴＢＥに置換した。このバイアルを複数本用意し、フラクションコレク
タにセットした。
Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って作製した、［（ＺｎＣｌ２
）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジ１粒（大きさを１
００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：
１．３μｇ）をＶ底型１．２ｍＬバイアルにｎ－ヘキサンとともに移した。ｎ－ヘキサン
を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）を５０μＬ添加し、結晶スポ
ンジ内の溶媒をＭＴＢＥに置換した。このバイアルを複数本用意し、フラクションコレク
タにセットした。
【0052】
例５の図１１に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を上述の結晶スポンジ
が入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約１０μｇ）。５０℃で５０μＬ程度まで溶
媒を揮発させた後、バイアルに蓋をして、注射針を蓋に刺して５０℃でインキュベートす
ることで緩やかに残溶媒を揮発させた。１日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、
単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定した。
が入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約１０μｇ）。５０℃で５０μＬ程度まで溶
媒を揮発させた後、バイアルに蓋をして、注射針を蓋に刺して５０℃でインキュベートす
ることで緩やかに残溶媒を揮発させた。１日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、
単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定した。
【0053】
測定データは、Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って解析した。
【0054】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例５の図１１のピーク１、ピーク２とし
て溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表６に示す
。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例５の図１１のピーク１、ピーク２とし
て溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表６に示す
。
【0055】
【表6】
【0056】
ピーク１および２として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の
非対称単位の結晶構造を図１２および図１３にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図１４
および図１５に示した。これらの結果から、ピーク１の鏡像異性体がｔｒａｎｓ－スチル
ベンオキサイドのＲＲ体（（２Ｒ，３Ｒ）－２，３－ジフェニルオキシラン）、ピーク２
がｔｒａｎｓ－スチルベンオキサイドのＳＳ体（（２Ｓ，３Ｓ）－２，３－ジフェニルオ
キシラン）と決定、同定することができた。例５および例６の結果から、結晶スポンジが
入ったバイアルにＳＦＣで分離した化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構
造解析することが可能であることが確認された。
非対称単位の結晶構造を図１２および図１３にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図１４
および図１５に示した。これらの結果から、ピーク１の鏡像異性体がｔｒａｎｓ－スチル
ベンオキサイドのＲＲ体（（２Ｒ，３Ｒ）－２，３－ジフェニルオキシラン）、ピーク２
がｔｒａｎｓ－スチルベンオキサイドのＳＳ体（（２Ｓ，３Ｓ）－２，３－ジフェニルオ
キシラン）と決定、同定することができた。例５および例６の結果から、結晶スポンジが
入ったバイアルにＳＦＣで分離した化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構
造解析することが可能であることが確認された。
【0057】
例７：メタノール耐性結晶スポンジの作製
ＳＦＣの分離溶媒としてメタノールを使用する場合には、［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ
）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジはメタノール耐性がなくＳＦＣ
とＣＳ法をシームレスに実施することができなかった。そこで、例７では、メタノールに
耐性のある結晶スポンジの作製について検討した。
ＳＦＣの分離溶媒としてメタノールを使用する場合には、［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ
）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジはメタノール耐性がなくＳＦＣ
とＣＳ法をシームレスに実施することができなかった。そこで、例７では、メタノールに
耐性のある結晶スポンジの作製について検討した。
【0058】
（１）方法
Chem. Asian J. 2017, 12, 208-211に記載の方法に従って、ベンゼン－１，３，５－ト
リイルトリイソニコチン酸（ｂｔｔ）とＣｕＢｒから合成した［ＣｕＢｒ（ｂｔｔ）］タ
イプの結晶スポンジを作製した。この結晶スポンジを数日間メタノールに浸漬した後、そ
の結晶構造を解析した。
Chem. Asian J. 2017, 12, 208-211に記載の方法に従って、ベンゼン－１，３，５－ト
リイルトリイソニコチン酸（ｂｔｔ）とＣｕＢｒから合成した［ＣｕＢｒ（ｂｔｔ）］タ
イプの結晶スポンジを作製した。この結晶スポンジを数日間メタノールに浸漬した後、そ
の結晶構造を解析した。
【0059】
（２）結果
Chem. Asian J. 2017, 12, 208-211では、［ＣｕＢｒ（ｂｔｔ）］タイプの結晶スポン
ジは、メタノールに浸漬するとひび割れし、分析に適した良好な回折が得られないと報告
されていた。しかしながら、本発明者らが鋭意検討した結果、本例で作製した［ＣｕＢｒ
（ｂｔｔ）］タイプの結晶スポンジは、驚くことにメタノールに数日間浸漬した後であっ
ても、結晶構造を精度よく測定、観測することが可能であることを見出した（図１６）。
Chem. Asian J. 2017, 12, 208-211では、［ＣｕＢｒ（ｂｔｔ）］タイプの結晶スポン
ジは、メタノールに浸漬するとひび割れし、分析に適した良好な回折が得られないと報告
されていた。しかしながら、本発明者らが鋭意検討した結果、本例で作製した［ＣｕＢｒ
（ｂｔｔ）］タイプの結晶スポンジは、驚くことにメタノールに数日間浸漬した後であっ
ても、結晶構造を精度よく測定、観測することが可能であることを見出した（図１６）。
【0060】
例８：ＳＦＣによる位置異性体混合物サンプルの分離
例８では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒に
はＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して位置異性体混合物サンプルの分離を行った
。
例８では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒に
はＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して位置異性体混合物サンプルの分離を行った
。
【0061】
（１）方法
位置異性体混合物サンプルとして、１－アセチルナフタレン（東京化成工業）および２
－アセチルナフタレン（東京化成工業）を用い、メタノール（ＭｅＯＨ）で各化合物が２
０ｍｇ／ｍＬ含まれる溶液を調製し、表７の条件でＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦ
Ｃ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した化合
物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社）により回収した。サン
プルの回収効率を上げるために、フラクションコレクタにメークアップ溶媒を一定流量で
添加した。
位置異性体混合物サンプルとして、１－アセチルナフタレン（東京化成工業）および２
－アセチルナフタレン（東京化成工業）を用い、メタノール（ＭｅＯＨ）で各化合物が２
０ｍｇ／ｍＬ含まれる溶液を調製し、表７の条件でＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦ
Ｃ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した化合
物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社）により回収した。サン
プルの回収効率を上げるために、フラクションコレクタにメークアップ溶媒を一定流量で
添加した。
【0062】
【表7】
【0063】
【0064】
例９：ＣＳ法による位置異性体構造決定
例９では、例８で分離、分取した２種の位置異性体化合物について、例７で作製した結
晶スポンジを用いてＣＳ法により構造決定を行った。
例９では、例８で分離、分取した２種の位置異性体化合物について、例７で作製した結
晶スポンジを用いてＣＳ法により構造決定を行った。
【0065】
（１）方法
例７で作製した［ＣｕＢｒ（ｂｔｔ）］タイプの結晶スポンジ１粒（大きさを１００μ
ｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．５ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：１．５
μｇ、使用前までクロロホルム中で保存）をＶ底型１．２ｍＬバイアルにクロロホルムと
ともに移した。クロロホルムを除去し、メタノールを５０μＬ添加し、結晶スポンジ内の
溶媒をメタノールに置換した。このバイアルを複数本用意し、フラクションコレクタにセ
ットした。
例７で作製した［ＣｕＢｒ（ｂｔｔ）］タイプの結晶スポンジ１粒（大きさを１００μ
ｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．５ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：１．５
μｇ、使用前までクロロホルム中で保存）をＶ底型１．２ｍＬバイアルにクロロホルムと
ともに移した。クロロホルムを除去し、メタノールを５０μＬ添加し、結晶スポンジ内の
溶媒をメタノールに置換した。このバイアルを複数本用意し、フラクションコレクタにセ
ットした。
【0066】
例８の図１７に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を上述の結晶スポンジ
が入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約１００μｇ）。５０℃で２０μＬ程度まで
溶媒を揮発させた後、バイアルに蓋をしてさらに５０℃で４日間インキュベートした。４
日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１
．５４１８Å）で測定した。
が入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約１００μｇ）。５０℃で２０μＬ程度まで
溶媒を揮発させた後、バイアルに蓋をしてさらに５０℃で４日間インキュベートした。４
日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１
．５４１８Å）で測定した。
【0067】
測定データは、Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040およびChem. Asian J. 2017, 12,
208-211に記載の方法に準じて解析した。
208-211に記載の方法に準じて解析した。
【0068】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例８の図１７のピーク１、ピーク２とし
て溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表８に示す
。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例８の図１７のピーク１、ピーク２とし
て溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表８に示す
。
【0069】
【表8】
【0070】
ピーク１および２として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の
非対称単位の結晶構造を図１８および図１９にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図２０
および図２１に示した。これらの結果から、ピーク１の位置異性体が１－アセチルナフタ
レン、ピーク２の位置異性体が２－アセチルナフタレンと決定、同定することができた。
例８および例９の結果から、メタノール耐性のある結晶スポンジを用いることで、結晶ス
ポンジが入ったバイアルにＳＦＣ（移動相にメタノールを含む）で分離した化合物を直接
回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構造解析することが可能であることが確認された。
非対称単位の結晶構造を図１８および図１９にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図２０
および図２１に示した。これらの結果から、ピーク１の位置異性体が１－アセチルナフタ
レン、ピーク２の位置異性体が２－アセチルナフタレンと決定、同定することができた。
例８および例９の結果から、メタノール耐性のある結晶スポンジを用いることで、結晶ス
ポンジが入ったバイアルにＳＦＣ（移動相にメタノールを含む）で分離した化合物を直接
回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構造解析することが可能であることが確認された。
【0071】
例１０：アセトニトリル耐性結晶スポンジの作製
ＳＦＣの分離溶媒としてアセトニトリルを使用する場合には、［（ＺｎＣｌ２）３（ｔ
ｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジはアセトニトリル耐性がな
くＳＦＣとＣＳ法をシームレスに実施することができなかった。そこで、例１０では、ア
セトニトリルに耐性のある結晶スポンジの作製について検討した。
ＳＦＣの分離溶媒としてアセトニトリルを使用する場合には、［（ＺｎＣｌ２）３（ｔ
ｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジはアセトニトリル耐性がな
くＳＦＣとＣＳ法をシームレスに実施することができなかった。そこで、例１０では、ア
セトニトリルに耐性のある結晶スポンジの作製について検討した。
【0072】
（１）方法
J. Am. Chem. Soc. 2015, 137, 12045-12049に記載の方法に従って、４，４’－ビピリ
ジン（ｂｐｙ）、（Ｓ）－マンデル酸（Ｓ－ｍａｎ）または（Ｒ）－マンデル酸（Ｒ－ｍ
ａｎ）と、Ｃｏ（ＮＯ３）２から合成した［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（Ｎ
Ｏ３）２タイプの結晶スポンジおよび［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３
）２タイプの結晶スポンジを作製した。これらの結晶スポンジを数日間アセトニトリルに
浸漬した後、その結晶構造を解析した。
J. Am. Chem. Soc. 2015, 137, 12045-12049に記載の方法に従って、４，４’－ビピリ
ジン（ｂｐｙ）、（Ｓ）－マンデル酸（Ｓ－ｍａｎ）または（Ｒ）－マンデル酸（Ｒ－ｍ
ａｎ）と、Ｃｏ（ＮＯ３）２から合成した［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（Ｎ
Ｏ３）２タイプの結晶スポンジおよび［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３
）２タイプの結晶スポンジを作製した。これらの結晶スポンジを数日間アセトニトリルに
浸漬した後、その結晶構造を解析した。
【0073】
（２）結果
［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジおよび［
Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジは、アセトニ
トリルに数日間浸漬した後であっても、結晶構造を精度よく測定、観測することが可能で
あることを見出した（図２２）。
［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジおよび［
Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジは、アセトニ
トリルに数日間浸漬した後であっても、結晶構造を精度よく測定、観測することが可能で
あることを見出した（図２２）。
【0074】
例１１：ＳＦＣによる立体異性体混合物サンプルの分離
例１１では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒
にはＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して立体異性体混合物サンプルの分離を行っ
た。
例１１では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒
にはＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して立体異性体混合物サンプルの分離を行っ
た。
【0075】
（１）方法
立体異性体混合物サンプルとして、ＲＲ体とＳＳ体等量混合物のｒａｃ－ヒドロベンゾ
イン（東京化成工業）およびｍｅｓｏ－ヒドロベンゾイン（東京化成工業）を用い、アセ
トニトリル（ＭｅＣＮ）でそれぞれが２０ｍｇ／ｍＬ（ラセミ体として）および１０ｍｇ
／ｍＬ含まれる溶液を調製し、表９の条件でＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦＣ装置
はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した化合物は、
フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社）により回収した。サンプルの
回収効率を上げるために、フラクションコレクタにメークアップ溶媒を一定流量で添加し
た。
立体異性体混合物サンプルとして、ＲＲ体とＳＳ体等量混合物のｒａｃ－ヒドロベンゾ
イン（東京化成工業）およびｍｅｓｏ－ヒドロベンゾイン（東京化成工業）を用い、アセ
トニトリル（ＭｅＣＮ）でそれぞれが２０ｍｇ／ｍＬ（ラセミ体として）および１０ｍｇ
／ｍＬ含まれる溶液を調製し、表９の条件でＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦＣ装置
はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した化合物は、
フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社）により回収した。サンプルの
回収効率を上げるために、フラクションコレクタにメークアップ溶媒を一定流量で添加し
た。
【0076】
【表9】
【0077】
【0078】
例１２：ＣＳ法による立体異性体構造決定（１）
例１２では、例１１で分離、分取した３種の立体異性体化合物について、例１０で作製
した［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジを用い
てＣＳ法により構造決定を行った。
例１２では、例１１で分離、分取した３種の立体異性体化合物について、例１０で作製
した［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジを用い
てＣＳ法により構造決定を行った。
【0079】
（１）方法
例１０で作製した［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶
スポンジ１粒（大きさを１００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．４ｇ／ｃ
ｍ３としたときの理論量：１．４μｇ、使用前までクロロホルム中で保存）をＶ底型１．
２ｍＬバイアルにクロロホルムとともに移した。クロロホルムを除去し、アセトニトリル
を５０μＬ添加し、結晶スポンジ内の溶媒をアセトニトリルに置換した。このバイアルを
複数本用意し、フラクションコレクタにセットした。
例１０で作製した［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶
スポンジ１粒（大きさを１００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．４ｇ／ｃ
ｍ３としたときの理論量：１．４μｇ、使用前までクロロホルム中で保存）をＶ底型１．
２ｍＬバイアルにクロロホルムとともに移した。クロロホルムを除去し、アセトニトリル
を５０μＬ添加し、結晶スポンジ内の溶媒をアセトニトリルに置換した。このバイアルを
複数本用意し、フラクションコレクタにセットした。
【0080】
例１１の図２３に示す３つのピーク（ピーク１、２および３）の各成分を上述の結晶ス
ポンジが入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約１００μｇ）。５０℃で２０μＬ程
度まで溶媒を揮発させた後、バイアルに蓋をしてさらに５０℃で３日間インキュベートし
た。３日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα
λ＝１．５４１８Å）で測定した。
ポンジが入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約１００μｇ）。５０℃で２０μＬ程
度まで溶媒を揮発させた後、バイアルに蓋をしてさらに５０℃で３日間インキュベートし
た。３日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα
λ＝１．５４１８Å）で測定した。
【0081】
測定データは、Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040およびJ. Am. Chem. Soc. 2015, 1
37, 12045-12049に記載の方法に準じて解析した。
37, 12045-12049に記載の方法に準じて解析した。
【0082】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１１の図２３のピーク１、ピーク２、
ピーク３として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データ
を表１０に示す。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１１の図２３のピーク１、ピーク２、
ピーク３として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データ
を表１０に示す。
【0083】
【表10】
【0084】
ピーク１、２および３として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した
際の非対称単位の結晶構造を図２４、図２５および図２６にそれぞれ示す。点線で囲った
分子が結晶スポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそ
れぞれ図２７、図２８および図２９に示した。これらの結果から、ピーク１の立体異性体
が（Ｓ，Ｓ）－ヒドロベンゾイン、ピーク２の立体異性体がｍｅｓｏ－ヒドロベンゾイン
、ピーク３の立体異性体が（Ｒ，Ｒ）－ヒドロベンゾインと決定、同定することができた
。例１１および例１２の結果から、アセトニトリルに耐性がある結晶スポンジを用いるこ
とで、結晶スポンジが入ったバイアルにＳＦＣ（移動相にアセトニトリルを含む）で分離
した化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構造解析することが可能であるこ
とが確認された。
際の非対称単位の結晶構造を図２４、図２５および図２６にそれぞれ示す。点線で囲った
分子が結晶スポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそ
れぞれ図２７、図２８および図２９に示した。これらの結果から、ピーク１の立体異性体
が（Ｓ，Ｓ）－ヒドロベンゾイン、ピーク２の立体異性体がｍｅｓｏ－ヒドロベンゾイン
、ピーク３の立体異性体が（Ｒ，Ｒ）－ヒドロベンゾインと決定、同定することができた
。例１１および例１２の結果から、アセトニトリルに耐性がある結晶スポンジを用いるこ
とで、結晶スポンジが入ったバイアルにＳＦＣ（移動相にアセトニトリルを含む）で分離
した化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構造解析することが可能であるこ
とが確認された。
【0085】
例１３：ＣＳ法による立体異性体構造決定（２）
例１３では、例１１で分離、分取した３種の立体異性体化合物について、例１０で作製
した［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジを用い
てＣＳ法により構造決定を行った。
（１）方法
例１２で用いた［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶ス
ポンジをその鏡像異性体である［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タ
イプの結晶スポンジに変更したこと以外は例１２と同様の方法で分析、解析を行った。
例１３では、例１１で分離、分取した３種の立体異性体化合物について、例１０で作製
した［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジを用い
てＣＳ法により構造決定を行った。
（１）方法
例１２で用いた［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶ス
ポンジをその鏡像異性体である［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タ
イプの結晶スポンジに変更したこと以外は例１２と同様の方法で分析、解析を行った。
【0086】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１１の図２３のピーク１、ピーク２、
ピーク３として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データ
を表１１に示す。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１１の図２３のピーク１、ピーク２、
ピーク３として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データ
を表１１に示す。
【0087】
【表11】
【0088】
ピーク１、２および３として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した
際の非対称単位の結晶構造を図３０、図３１および図３２にそれぞれ示す。点線で囲った
分子が結晶スポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそ
れぞれ図３３、図３４および図３５に示した。これらの結果から、ピーク１の立体位置異
性体が（Ｓ，Ｓ）－ヒドロベンゾイン、ピーク２の立体異性体がｍｅｓｏ－ヒドロベンゾ
イン、ピーク３の立体異性体が（Ｒ，Ｒ）－ヒドロベンゾインと決定、同定することがで
きた。例１１および例１３の結果から、アセトニトリル耐性のある結晶スポンジを用いる
ことで、結晶スポンジが入ったバイアルにＳＦＣ（移動相にアセトニトリルを含む）で分
離した化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構造解析することが可能である
ことが確認された。
際の非対称単位の結晶構造を図３０、図３１および図３２にそれぞれ示す。点線で囲った
分子が結晶スポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそ
れぞれ図３３、図３４および図３５に示した。これらの結果から、ピーク１の立体位置異
性体が（Ｓ，Ｓ）－ヒドロベンゾイン、ピーク２の立体異性体がｍｅｓｏ－ヒドロベンゾ
イン、ピーク３の立体異性体が（Ｒ，Ｒ）－ヒドロベンゾインと決定、同定することがで
きた。例１１および例１３の結果から、アセトニトリル耐性のある結晶スポンジを用いる
ことで、結晶スポンジが入ったバイアルにＳＦＣ（移動相にアセトニトリルを含む）で分
離した化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構造解析することが可能である
ことが確認された。
【0089】
なお、［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジに
ピーク１を取り込ませた結晶構造と、［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３
）２タイプの結晶スポンジにピーク３を取り込ませた結晶構造は鏡像の関係にある。同様
に、［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジにピー
ク３を取り込ませた結晶構造と［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タ
イプの結晶スポンジにピーク１を取り込ませた結晶構造は鏡像の関係にある。さらに、［
Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジにピーク２を
取り込ませた結晶構造と、［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプ
の結晶スポンジにピーク２を取り込ませた結晶構造も鏡像の関係にある。
ピーク１を取り込ませた結晶構造と、［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３
）２タイプの結晶スポンジにピーク３を取り込ませた結晶構造は鏡像の関係にある。同様
に、［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジにピー
ク３を取り込ませた結晶構造と［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タ
イプの結晶スポンジにピーク１を取り込ませた結晶構造は鏡像の関係にある。さらに、［
Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジにピーク２を
取り込ませた結晶構造と、［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプ
の結晶スポンジにピーク２を取り込ませた結晶構造も鏡像の関係にある。
【0090】
例１４：ＳＦＣによる揮発性の構造異性体混合物サンプルの分離（１）
例１４では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒
にはＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して揮発性化合物の構造異性体混合物サンプ
ルの分離を行った。
例１４では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒
にはＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して揮発性化合物の構造異性体混合物サンプ
ルの分離を行った。
【0091】
（１）方法
構造異性体混合物サンプルとして、揮発性の高いモノテルペンである（＋）－イソメン
トン（東京化成工業）および（－）－イソプレゴール（シグマアルドリッチ）を用い、Ｍ
ＴＢＥで各化合物が１０ｍｇ／ｍＬ含まれる溶液を調製し、表１２の条件でＳＦＣに供し
た。例３と同様に、ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社
）を用い、分離した化合物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社
）により回収した。サンプルの回収効率を上げるために、フラクションコレクタにメーク
アップ溶媒を一定流量で添加した。
構造異性体混合物サンプルとして、揮発性の高いモノテルペンである（＋）－イソメン
トン（東京化成工業）および（－）－イソプレゴール（シグマアルドリッチ）を用い、Ｍ
ＴＢＥで各化合物が１０ｍｇ／ｍＬ含まれる溶液を調製し、表１２の条件でＳＦＣに供し
た。例３と同様に、ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社
）を用い、分離した化合物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社
）により回収した。サンプルの回収効率を上げるために、フラクションコレクタにメーク
アップ溶媒を一定流量で添加した。
【0092】
【表12】
【0093】
【0094】
例１５：ＣＳ法による絶対立体構造決定
例１５では、例１４で分離、分取した揮発性モノテルペン化合物の２種の構造異性体に
ついてＣＳ法により絶対立体構造の決定を行った。
例１５では、例１４で分離、分取した揮発性モノテルペン化合物の２種の構造異性体に
ついてＣＳ法により絶対立体構造の決定を行った。
【0095】
（１）方法
Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って作製した、［（ＺｎＣｌ２
）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジ１粒（大きさを１
００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：
１．３μｇ）をＶ底型１．２ｍＬバイアルにｎ－ヘキサンとともに移した。ｎ－ヘキサン
を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）を５０μＬ添加し、結晶スポ
ンジ内の溶媒をＭＴＢＥに置換した。このバイアルを複数本用意し、フラクションコレク
タにセットした。
Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って作製した、［（ＺｎＣｌ２
）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジ１粒（大きさを１
００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：
１．３μｇ）をＶ底型１．２ｍＬバイアルにｎ－ヘキサンとともに移した。ｎ－ヘキサン
を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）を５０μＬ添加し、結晶スポ
ンジ内の溶媒をＭＴＢＥに置換した。このバイアルを複数本用意し、フラクションコレク
タにセットした。
【0096】
例１４の図３６に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を上述の結晶スポン
ジが入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約２００μｇ）。５０℃で５０μＬ程度ま
で溶媒を揮発させた後、バイアルに蓋をして、注射針を蓋に刺して５０℃でインキュベー
トすることで緩やかに残溶媒を揮発させた。１日後、バイアルから結晶スポンジを取り出
し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定した。
ジが入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約２００μｇ）。５０℃で５０μＬ程度ま
で溶媒を揮発させた後、バイアルに蓋をして、注射針を蓋に刺して５０℃でインキュベー
トすることで緩やかに残溶媒を揮発させた。１日後、バイアルから結晶スポンジを取り出
し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定した。
【0097】
測定データは、Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って解析した。
【0098】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１４の図３６のピーク１、ピーク２と
して溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表１３に
示す。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１４の図３６のピーク１、ピーク２と
して溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表１３に
示す。
【0099】
【表13】
【0100】
ピーク１および２として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の
非対称単位の結晶構造を図３７および図３８にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図３９
および図４０に示した。これらの結果から、ピーク１が（＋）－イソメントン（（２Ｒ，
５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキサノン）、ピーク２が（－
）－イソプレゴール（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－２－イソプロペニル－５－メチルシクロヘ
キサノール）と決定、同定することができた。例１４および例１５の結果から、結晶スポ
ンジが入ったバイアルにＳＦＣで分離した揮発性化合物を直接回収し、結晶スポンジに取
り込ませ、構造解析することが可能であることが確認された。
非対称単位の結晶構造を図３７および図３８にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図３９
および図４０に示した。これらの結果から、ピーク１が（＋）－イソメントン（（２Ｒ，
５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキサノン）、ピーク２が（－
）－イソプレゴール（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－２－イソプロペニル－５－メチルシクロヘ
キサノール）と決定、同定することができた。例１４および例１５の結果から、結晶スポ
ンジが入ったバイアルにＳＦＣで分離した揮発性化合物を直接回収し、結晶スポンジに取
り込ませ、構造解析することが可能であることが確認された。
【0101】
例１６：ＳＦＣによる揮発性の構造異性体混合物サンプルの分離（２）
例１６では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒
にはＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して揮発性化合物の構造異性体混合物サンプ
ルの分離を行った。
（１）方法
構造異性体混合物サンプルとして、揮発性セスキテルペンである（＋）－β－ユーデス
モール（富士フイルム和光純薬）および（－）－α－ビサボロール（シグマアルドリッチ
）を用い、ＭＴＢＥで各化合物が１０ｍｇ／ｍＬ含まれる溶液を調製し、表１４の条件で
ＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（
島津製作所社）を用い、分離した化合物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（
島津製作所社）により回収した。サンプルの回収効率を上げるために、フラクションコレ
クタにメークアップ溶媒を一定流量で添加した。
例１６では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒
にはＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して揮発性化合物の構造異性体混合物サンプ
ルの分離を行った。
（１）方法
構造異性体混合物サンプルとして、揮発性セスキテルペンである（＋）－β－ユーデス
モール（富士フイルム和光純薬）および（－）－α－ビサボロール（シグマアルドリッチ
）を用い、ＭＴＢＥで各化合物が１０ｍｇ／ｍＬ含まれる溶液を調製し、表１４の条件で
ＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（
島津製作所社）を用い、分離した化合物は、フラクションコレクタＦＲＣ－４０ ＳＦ（
島津製作所社）により回収した。サンプルの回収効率を上げるために、フラクションコレ
クタにメークアップ溶媒を一定流量で添加した。
【0102】
【表14】
【0103】
【0104】
例１７：ＣＳ法による絶対立体構造決定
例１７では、例１６で分離、分取した揮発性セスキテルペン化合物の２種の構造異性体
についてＣＳ法により絶対立体構造の決定を行った。
例１７では、例１６で分離、分取した揮発性セスキテルペン化合物の２種の構造異性体
についてＣＳ法により絶対立体構造の決定を行った。
【0105】
（１）方法
Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って作製した、［（ＺｎＣｌ２
）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジ１粒（大きさを１
００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：
１．３μｇ）をＶ底型１．２ｍＬバイアルにｎ－ヘキサンとともに移した。ｎ－ヘキサン
を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）を５０μＬ添加し、結晶スポ
ンジ内の溶媒をＭＴＢＥに置換した。このバイアルを複数本用意し、フラクションコレク
タにセットした。
Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って作製した、［（ＺｎＣｌ２
）３（ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジ１粒（大きさを１
００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．３ｇ／ｃｍ３としたときの理論量：
１．３μｇ）をＶ底型１．２ｍＬバイアルにｎ－ヘキサンとともに移した。ｎ－ヘキサン
を除去し、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）を５０μＬ添加し、結晶スポ
ンジ内の溶媒をＭＴＢＥに置換した。このバイアルを複数本用意し、フラクションコレク
タにセットした。
【0106】
例１６の図４１に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を上述の結晶スポン
ジが入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約２００μｇ）。５０℃で５０μＬ程度ま
で溶媒を揮発させた後、バイアルに蓋をして、注射針を蓋に刺して５０℃でインキュベー
トすることで緩やかに残溶媒を揮発させた。１日後、バイアルから結晶スポンジを取り出
し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定した。
ジが入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約２００μｇ）。５０℃で５０μＬ程度ま
で溶媒を揮発させた後、バイアルに蓋をして、注射針を蓋に刺して５０℃でインキュベー
トすることで緩やかに残溶媒を揮発させた。１日後、バイアルから結晶スポンジを取り出
し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定した。
【0107】
測定データは、Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040に記載の方法に従って解析した。
【0108】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１６の図４１のピーク１、ピーク２と
して溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表１５に
示す。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１６の図４１のピーク１、ピーク２と
して溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表１５に
示す。
【0109】
【表15】
【0110】
ピーク１および２として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の
非対称単位の結晶構造を図４２および図４３にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図４４
および図４５に示した。これらの結果から、ピーク１が（＋）－β－ユーデスモール（（
３Ｒ，４ａＳ）－デカヒドロ－５－メチレン－α，α，８ａβ－トリメチル－３β－ナフ
タレンメタノール）、ピーク２が（－）－α－ビサボロール（（２Ｓ）－６－メチル－２
－［（１Ｓ）－４－メチルシクロヘキサ－３－エン－１－イル］ヘプタ－５－エン－２－
オール）と決定、同定することができた。例１６および例１７の結果から、結晶スポンジ
が入ったバイアルにＳＦＣで分離した揮発性化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込
ませ、構造解析することが可能であることが確認された。
非対称単位の結晶構造を図４２および図４３にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図４４
および図４５に示した。これらの結果から、ピーク１が（＋）－β－ユーデスモール（（
３Ｒ，４ａＳ）－デカヒドロ－５－メチレン－α，α，８ａβ－トリメチル－３β－ナフ
タレンメタノール）、ピーク２が（－）－α－ビサボロール（（２Ｓ）－６－メチル－２
－［（１Ｓ）－４－メチルシクロヘキサ－３－エン－１－イル］ヘプタ－５－エン－２－
オール）と決定、同定することができた。例１６および例１７の結果から、結晶スポンジ
が入ったバイアルにＳＦＣで分離した揮発性化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込
ませ、構造解析することが可能であることが確認された。
【0111】
例１８：イソプロパノール耐性結晶スポンジの作製
ＳＦＣの分離溶媒としてイソプロパノールを使用する場合には、［（ＺｎＣｌ２）３（
ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジはイソプロパノール耐性
がなくＳＦＣとＣＳ法をシームレスに実施することができなかった。そこで、例１８では
、イソプロパノールに耐性のある結晶スポンジの作製について検討した。
ＳＦＣの分離溶媒としてイソプロパノールを使用する場合には、［（ＺｎＣｌ２）３（
ｔｐｔ）２・（ｎ－ｈｅｘａｎｅ）ａ］ｎタイプの結晶スポンジはイソプロパノール耐性
がなくＳＦＣとＣＳ法をシームレスに実施することができなかった。そこで、例１８では
、イソプロパノールに耐性のある結晶スポンジの作製について検討した。
【0112】
（１）方法
J. Am. Chem. Soc. 2015, 137, 12045-12049に記載の方法に従って、４，４’－ビピリ
ジン（ｂｐｙ）、（Ｓ）－マンデル酸（Ｓ－ｍａｎ）または（Ｒ）－マンデル酸（Ｒ－ｍ
ａｎ）と、Ｃｏ（ＮＯ３）２から合成した［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（Ｎ
Ｏ３）２タイプの結晶スポンジおよび［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３
）２タイプの結晶スポンジを作製した。これらの結晶スポンジを数日間イソプロパノール
に浸漬した後、結晶構造を解析した。
J. Am. Chem. Soc. 2015, 137, 12045-12049に記載の方法に従って、４，４’－ビピリ
ジン（ｂｐｙ）、（Ｓ）－マンデル酸（Ｓ－ｍａｎ）または（Ｒ）－マンデル酸（Ｒ－ｍ
ａｎ）と、Ｃｏ（ＮＯ３）２から合成した［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（Ｎ
Ｏ３）２タイプの結晶スポンジおよび［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３
）２タイプの結晶スポンジを作製した。これらの結晶スポンジを数日間イソプロパノール
に浸漬した後、結晶構造を解析した。
【0113】
（２）結果
［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジおよび［
Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジは、イソプロ
パノールに数日間浸漬した後であっても、結晶構造を精度よく測定、観測することが可能
であることを見出した（図４６）。
［Ｃｏ２（Ｒ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジおよび［
Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶スポンジは、イソプロ
パノールに数日間浸漬した後であっても、結晶構造を精度よく測定、観測することが可能
であることを見出した（図４６）。
【0114】
例１９：ＳＦＣによる揮発性ラセミ体の鏡像異性体分離
例１９では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒
にはＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して揮発性ラセミ体の鏡像異性体分離を行っ
た。
例１９では、例３と同様のＳＦＣ装置およびフラクションコレクタを使用し、分離溶媒
にはＣＳ法に用いる溶媒と同様のものを使用して揮発性ラセミ体の鏡像異性体分離を行っ
た。
【0115】
（１）方法
揮発性ラセミ体サンプルとして、揮発性モノテルペンラセミ体であるｒａｃ－テルピネ
ン－４－オール（富士フイルム和光純薬）を用い、イソプロパノールで２０ｍｇ／ｍＬに
調製し、表１６の条件でＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ
Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した化合物は、フラクションコレク
タＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社）により回収した。サンプルの回収効率を上げるた
めに、フラクションコレクタにメークアップ溶媒を一定流量で添加した。
揮発性ラセミ体サンプルとして、揮発性モノテルペンラセミ体であるｒａｃ－テルピネ
ン－４－オール（富士フイルム和光純薬）を用い、イソプロパノールで２０ｍｇ／ｍＬに
調製し、表１６の条件でＳＦＣに供した。例３と同様に、ＳＦＣ装置はＳｈｉｍａｄｚｕ
Ｎｅｘｅｒａ ＵＣ（島津製作所社）を用い、分離した化合物は、フラクションコレク
タＦＲＣ－４０ ＳＦ（島津製作所社）により回収した。サンプルの回収効率を上げるた
めに、フラクションコレクタにメークアップ溶媒を一定流量で添加した。
【0116】
【表16】
【0117】
【0118】
例２０：ＣＳ法による絶対立体構造決定
例２０では、例１９で分離、分取した鏡像異性体化合物について、例１８で作製した結
晶スポンジを用いてＣＳ法により絶対立体構造決定を行った。
例２０では、例１９で分離、分取した鏡像異性体化合物について、例１８で作製した結
晶スポンジを用いてＣＳ法により絶対立体構造決定を行った。
【0119】
（１）方法
例１８で作製した［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶
スポンジ１粒（大きさを１００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．４ｇ／ｃ
ｍ３としたときの理論量：１．４μｇ、使用前までクロロホルム中で保存）をＶ底型１．
２ｍＬバイアルにクロロホルムとともに移した。クロロホルムを除去し、イソプロパノー
ルを５０μＬ添加し、結晶スポンジ内の溶媒をイソプロパノールに置換した。このバイア
ルを複数本用意し、フラクションコレクタにセットした。
例１８で作製した［Ｃｏ２（Ｓ－ｍａｎ）２（ｂｐｙ）３］（ＮＯ３）２タイプの結晶
スポンジ１粒（大きさを１００μｍ×１００μｍ×１００μｍとし、密度を１．４ｇ／ｃ
ｍ３としたときの理論量：１．４μｇ、使用前までクロロホルム中で保存）をＶ底型１．
２ｍＬバイアルにクロロホルムとともに移した。クロロホルムを除去し、イソプロパノー
ルを５０μＬ添加し、結晶スポンジ内の溶媒をイソプロパノールに置換した。このバイア
ルを複数本用意し、フラクションコレクタにセットした。
【0120】
例１９の図４７に示す２つのピーク（ピーク１および２）の各成分を上述の結晶スポン
ジが入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約２００μｇ）。窒素気流下で緩やかに溶
媒を５０μＬ程度まで揮発させた後、バイアルに蓋をして５０℃で３日間インキュベート
した。３日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα
λ＝１．５４１８Å）で測定した。
ジが入ったバイアルに直接分取した（各ピーク約２００μｇ）。窒素気流下で緩やかに溶
媒を５０μＬ程度まで揮発させた後、バイアルに蓋をして５０℃で３日間インキュベート
した。３日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃｕ Ｋα
λ＝１．５４１８Å）で測定した。
【0121】
測定データは、Chem. Eur. J.2017,23, 15035-15040およびJ. Am. Chem. Soc. 2015, 1
37, 12045-12049に記載の方法に準じて解析した。
37, 12045-12049に記載の方法に準じて解析した。
【0122】
（２）結果
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１９の図４７のピーク１、ピーク２と
して溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表１７に
示す。
単結晶Ｘ線回折装置による測定と測定データの解析の結果、結晶スポンジに取り込まれ
たゲスト化合物の構造を観測することができた。例１９の図４７のピーク１、ピーク２と
して溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の結晶データを表１７に
示す。
【0123】
【表17】
【0124】
ピーク１および２として溶出される化合物を取り込ませた結晶スポンジを解析した際の
非対称単位の結晶構造を図４８および図４９にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図５０
および図５１に示した。これらの結果から、ピーク１の鏡像異性体がＳ－テルピネン－４
－オール（（４Ｓ）－４－イソプロピル－１－メチル－１－シクロヘキセン－４－オール
）、ピーク２の鏡像異性体がＲ－テルピネン－４－オール（（４Ｒ）－４－イソプロピル
－１－メチル－１－シクロヘキセン－４－オール）と決定、同定することができた。例１
８、１９および例２０の結果から、イソプロパノール耐性の結晶スポンジを用いることで
、結晶スポンジが入ったバイアルにＳＦＣ（移動相にイソプロパノールを含む）で分離し
た揮発性化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構造解析することが可能であ
ることが確認された。
非対称単位の結晶構造を図４８および図４９にそれぞれ示す。点線で囲った分子が結晶ス
ポンジに取り込まれたゲストである。また、観測されたゲスト構造のみをそれぞれ図５０
および図５１に示した。これらの結果から、ピーク１の鏡像異性体がＳ－テルピネン－４
－オール（（４Ｓ）－４－イソプロピル－１－メチル－１－シクロヘキセン－４－オール
）、ピーク２の鏡像異性体がＲ－テルピネン－４－オール（（４Ｒ）－４－イソプロピル
－１－メチル－１－シクロヘキセン－４－オール）と決定、同定することができた。例１
８、１９および例２０の結果から、イソプロパノール耐性の結晶スポンジを用いることで
、結晶スポンジが入ったバイアルにＳＦＣ（移動相にイソプロパノールを含む）で分離し
た揮発性化合物を直接回収し、結晶スポンジに取り込ませ、構造解析することが可能であ
ることが確認された。
【0125】
例２１：イソプロパノールを窒素気流化で除去した場合の、従来の結晶スポンジを使用し
たＣＳ法による絶対立体構造決定
イソプロパノールは［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ）２］ｎタイプの結晶スポンジを破壊
してしまう。そこで、例２１では、分取液に含まれるイソプロパノールを窒素気流化によ
り除去する工程を含めた場合に、揮発性化合物のＣＳ法による絶対立体構造決定が可能か
検討した。具体的には、次の手順で行った。
たＣＳ法による絶対立体構造決定
イソプロパノールは［（ＺｎＣｌ２）３（ｔｐｔ）２］ｎタイプの結晶スポンジを破壊
してしまう。そこで、例２１では、分取液に含まれるイソプロパノールを窒素気流化によ
り除去する工程を含めた場合に、揮発性化合物のＣＳ法による絶対立体構造決定が可能か
検討した。具体的には、次の手順で行った。
【0126】
まず、フラクションコレクタに空のバイアルをセットし、例１９の図４７に示す２つの
ピーク（ピーク１および２）の各成分をそこに分取した（各ピーク約２００μｇ）。分取
液に含まれるイソプロパノールを窒素気流化で除去した後（イソプロパノールは［（Ｚｎ
Ｃｌ２）３（ｔｐｔ）２］ｎタイプの結晶スポンジを破壊してしまう）、［（ＺｎＣｌ２
）３（ｔｐｔ）２］ｎタイプの結晶スポンジをＭＴＢＥ５０μＬとともに添加した。バイ
アルに蓋をして、注射針を蓋に刺して５０℃でインキュベートすることで緩やかに残溶媒
を揮発させた。１日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃ
ｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定したが、解析対象化合物を観測することができな
かった。その要因として、イソプロパノールを分取液から除去する工程で揮発性解析対象
化合物も失われてしまったためではないかと考えられた。
ピーク（ピーク１および２）の各成分をそこに分取した（各ピーク約２００μｇ）。分取
液に含まれるイソプロパノールを窒素気流化で除去した後（イソプロパノールは［（Ｚｎ
Ｃｌ２）３（ｔｐｔ）２］ｎタイプの結晶スポンジを破壊してしまう）、［（ＺｎＣｌ２
）３（ｔｐｔ）２］ｎタイプの結晶スポンジをＭＴＢＥ５０μＬとともに添加した。バイ
アルに蓋をして、注射針を蓋に刺して５０℃でインキュベートすることで緩やかに残溶媒
を揮発させた。１日後、バイアルから結晶スポンジを取り出し、単結晶Ｘ線回折装置（Ｃ
ｕ Ｋα λ＝１．５４１８Å）で測定したが、解析対象化合物を観測することができな
かった。その要因として、イソプロパノールを分取液から除去する工程で揮発性解析対象
化合物も失われてしまったためではないかと考えられた。
【0127】
したがって、例１８、１９および２０の結果が示すように、ＳＦＣとＣＳ法をシームレ
スに実施することは、微量揮発性化合物を解析する場合に特に有利であることが確認され
た。
スに実施することは、微量揮発性化合物を解析する場合に特に有利であることが確認され
た。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35】
【図36】
【図37】
【図38】
【図39】
【図40】
【図41】
【図42】
【図43】
【図44】
【図45】
【図46】
【図47】
【図48】
【図49】
【図50】
【図51】