特開 2022-126754 抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022126754

(43)【公開日】2022-08-30

(54)【発明の名称】抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/68 20170101AFI20220823BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20220823BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 38/05 20060101ALI20220823BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20220823BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20220823BHJP

   C07K 5/02 20060101ALI20220823BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20220823BHJP

【ＦＩ】

A61K47/68

A61K9/08 ZNA

A61K9/19

A61K47/10

A61K47/18

A61K47/26

A61P35/00

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61K39/395 C

A61K39/395 L

A61K38/05

A61K47/22

C07K16/28

C07K5/02

C12N15/13

【審査請求】有

【請求項の数】4

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022098605

(22)【出願日】2022-06-20

(62)【分割の表示】P 2020096643の分割

【原出願日】2014-03-14

(31)【優先権主張番号】61/790,490

(32)【優先日】2013-03-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】513144626

【氏名又は名称】アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー

(71)【出願人】

【識別番号】512212195

【氏名又は名称】アッヴィ・インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】マルクス・ツォープ

(72)【発明者】

【氏名】カタリナ・カレタ

(72)【発明者】

【氏名】ビニート・クマール

(57)【要約】      （修正有）

【課題】抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を含む製剤、および抗上皮成長因子受容体（抗ＥＧＦＲ）ＡＤＣによる治療を必要とする障害、例えば癌を治療するためのこのような複合体を使用する方法を提供する。
【解決手段】抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、糖、ヒスチジンおよび界面活性剤を含み、約５－７のｐＨを有し、前記抗ＥＧＦＲ ＡＤＣが、オーリスタチンと複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体又はこれらの抗原結合部分を含む製剤を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、糖、ヒスチジンおよび界面活性剤を含み、約５－７のｐＨを有し、前記抗ＥＧＦＲ ＡＤＣが、オーリスタチンと複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む製剤。

【請求項2】

オーリスタチンがモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である、請求項１に記載の製剤。

【請求項3】

ＭＭＡＦが、マレイミドカプロイルリンカーにより抗体と複合体化される、請求項２に記載の製剤。

【請求項4】

界面活性剤が、ポリソルベートまたはポロキサマーである、請求項１から３のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項5】

製剤が、０．０５－０．１５ｍｇ／ｍｌのポリソルベートを含む、請求項４に記載の製剤。

【請求項6】

ポリソルベートがポリソルベート８０である、請求項４または５に記載の製剤。

【請求項7】

製剤が、約１－４０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項8】

製剤が、約６０－８０ｍｇ／ｍｌの糖を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項9】

糖が、マンニトール、ソルビトール、スクロースおよびトレハロースからなる群から選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項10】

約５－２５ｍＭのヒスチジンを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項11】

製剤が、約５．５から６．５のｐＨを有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項12】

製剤が凍結乾燥される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項13】

製剤が凍結乾燥され、糖がスクロースである、請求項１から３のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項14】

界面活性剤がポリソルベートである、請求項１３に記載の製剤。

【請求項15】

ポリソルベートがポリソルベート８０である、請求項１４に記載の製剤。

【請求項16】

前記製剤が、約１－１００ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ、約１－１０ｍｇ／ｍＬのヒスチジン、約５０－９０ｍｇ／ｍｌの糖および約０．０１－０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤を含む水性製剤である、請求項１から３のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項17】

糖がスクロースである、請求項１６に記載の製剤。

【請求項18】

界面活性剤がポリソルベート８０である、請求項１６または１７に記載の製剤。

【請求項19】

製剤が、約５．５から６．５のｐＨを有する、請求項１６から１８のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項20】

１－１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む、請求項１６から１９のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項21】

１－４０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む、請求項２０に記載の製剤。

【請求項22】

抗体がヒト化抗体である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項23】

抗体またはこれらの抗原結合部分が、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項24】

前記抗体またはこれらの抗原結合部分が、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項25】

製剤が、スクロース、ポリソルベート８０およびヒスチジンを含む凍結乾燥製剤であり、抗体またはこれらの抗原結合部分が、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項26】

１－１２０ｍｇの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む、請求項２５に記載の製剤。

【請求項27】

製剤が、約３の平均ＤＡＲを有するＡＤＣ混合物または約２－４のＤＡＲを有するＡＤＣ混合物を含む、請求項１から２６のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項28】

モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含み、前記ＡＤＣ１－ＭＭＡＦが、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ、
スクロース、
ヒスチジン、および
ポリソルベート８０、
を含み、
製剤が、約３の平均ＤＡＲを有するＡＤＣ混合物または約２－４のＤＡＲを有するＡＤＣ混合物を含む、製剤。

【請求項29】

凍結乾燥される、請求項２８に記載の製剤。

【請求項30】

抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分が、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２８または２９に記載の製剤。

【請求項31】

医薬製剤である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項32】

約５から７に及ぶｐＨを有し、１－２０ｍｇのヒスチジン、約３２０－４１０ｍｇの糖、約０．１から０．９ｍｇの界面活性剤および約１－１５０ｍｇの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む水性製剤を凍結乾燥するステップを含む、請求項１から３または２９のいずれか一項に記載の製剤を調製する方法。

【請求項33】

治療有効量の、請求項１から３１のいずれか一項に記載の製剤を対象に投与するステップを含み、対象が抗ＥＧＦＲ ＡＤＣによる治療を必要とする障害を有する、対象を治療する方法。

【請求項34】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣによる治療を必要とする障害が癌である、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

癌が、神経膠芽腫、非小細胞肺がん、肺がん、結腸癌、頭部および頸部癌、乳がん、扁平上皮細胞腫瘍、肛門癌、皮膚癌および外陰癌からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

癌が、扁平上皮腫瘍、神経膠芽腫、グリオーマ、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、肺がん、結腸癌、頭部および頸部癌、乳がん、肛門癌、皮膚癌および外陰癌からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。

【請求項37】

扁平上皮腫瘍が、扁平上皮肺腫瘍、頭部および頸部の扁平上皮腫瘍ならびに扁平上皮子宮頸部腫瘍からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

癌が、ＥＧＦＲの過剰発現を有する固形腫瘍である、請求項３４に記載の方法。

【請求項39】

製剤が静脈内投与される、請求項３３から３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

請求項１から２９のいずれか一項に記載の製剤を含むキット。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１５日出願の米国特許仮出願第６１／７９０，４９０号明細書の利益を主張するものである。前述の優先権書類の内容は、参照によりこの全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

ヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ－１またはＥｒｂ－Ｂ１としても公知であり、本明細書においては「ＥＧＦＲ」と称される。）は、ｃ－ｅｒｂＢ癌原遺伝子によりコードされる１７０ｋＤａの膜貫通受容体であり、内因性のチロシンキナーゼ活性を示す（Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７３：２２８－２３５（１９９６）；Ｈｅｒｂｓｔ ａｎｄ Ｓｈｉｎ，Ｃａｎｃｅｒ ９４：１５９３－１６１１（２００２））。ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースのエントリー番号Ｐ００５３３は、ＥＧＦＲの配列を提供している。ＥＧＦＲは、数多くの細胞過程を、限定するものではないが、細胞増殖、分化、細胞生存、アポトーシス、血管新生、有糸分裂誘発および転移を調節するシグナル伝達経路の活性化を含む、チロシンキナーゼ介在性シグナル伝達経路を介して制御している。（Ａｔａｌａｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １４：１３４６－１３６３（２００３）；Ｔｓａｏ ａｎｄ Ｈｅｒｂｓｔ，Ｓｉｇｎａｌ ４：４－９（２００３）；Ｈｅｒｂｓｔ ａｎｄ Ｓｈｉｎ，Ｃａｎｃｅｒ ９４：１５９３－１６１１（２００２）；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７３：２２８－２３５（１９９６））。

【0003】

ＥＧＦＲの過剰発現は、膀胱、脳、頭部および頸部、膵臓、肺、乳房、卵巣、結腸、前立腺および腎臓の癌を含む、ヒトの悪性病態において報告されている（Ａｔａｌａｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １４：１３４６－１３６３（２００３）；Ｈｅｒｂｓｔ ａｎｄ Ｓｈｉｎ，Ｃａｎｃｅｒ ９４：１５９３－１６１１（２００２）Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７３：２２８－２３５（１９９６））。これらの病態の多くにおいて、ＥＧＦＲの過剰発現は、患者の予後不良と相関、または関連している（Ｈｅｒｂｓｔ ａｎｄ Ｓｈｉｎ，Ｃａｎｃｅｒ ９４：１５９３－１６１１（２００２）Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７３：２２８－２３５（１９９６））。ＥＧＦＲは、正常組織、特に、皮膚の上皮組織、肝臓および胃腸の細胞においても発現されるが、概して悪性細胞中より低レベルで発現される（Ｈｅｒｂｓｔ ａｎｄ Ｓｈｉｎ，Ｃａｎｃｅｒ ９４：１５９３－１６１１（２００２））。

【0004】

ＥＧＦＲ遺伝子の増幅（即ち、ＥＧＦＲ遺伝子の複数コピー）を含有する腫瘍のかなりの部分はまた、ｄｅ２－７ＥＧＦＲ、ΔＥＧＦＲまたはΔ２－７（本明細書において交換可能に使用される用語）として知られる受容体の切断型（Ｗｉｋｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌ．４，１４８－１５８）を同時発現する（Ｏｌａｐａｄｅ－Ｏｌａｏｐａ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．８２，１８６－９４）。ｄｅ２－７ＥＧＦＲにおいてみられる再配列は、エクソン２－７に及ぶ８０１ヌクレオチドが欠損するインフレーム成熟ｍＲＮＡをもたらす（Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９，２９６５－９；Ｙａｍａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８１，７７３－９；Ｙａｍａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，１８１６－２０；Ｓｕｇａｗａ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７，８６０２－６）。対応するＥＧＦＲタンパク質は、細胞外ドメインの残基６－２７３を含む２６７アミノ酸の欠失および新規なグリシン残基を融合接合部に有する（Ｓｕｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，１９９０）。この欠失は、グリシン残基の挿入と一緒に、欠失接点に特有の接合ペプチドを作り出す（Ｓｕｇａｗａ ｅｔ ａｌ．、１９９０）。

【0005】

ｄｅ２－７ＥＧＦＲは、グリオーマ、乳房、肺、卵巣および前立腺を含む多くの腫瘍型において報告されている（Ｗｉｋｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７，４１３０－４０；Ｏｌａｐａｄｅ－Ｏｌａｏｐａ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．８２，１８６－９４；Ｗｉｋｓｔｒａｎｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５，３１４０－８；Ｇａｒｃｉａ ｄｅ Ｐａｌａｚｚｏ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３，３２１７－２０）。この切断型受容体はリガンドと結合しないが、低構成活性を保有し、ヌードマウスにおいて腫瘍異種移植片として成長させたグリオーマ細胞に対して有利な、有意な成長をもたらし（Ｎｉｓｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１，７７２７－３１）、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（Ｂａｔｒａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．６，１２５１－９）およびＭＣＦ－７細胞の形質転換を可能にする。グリオーマ細胞中のｄｅ２－７ＥＧＦＲにより利用される細胞機序は、完全には明確にされていないが、アポトーシスの減少（Ｎａｇａｎｅ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６，５０７９－８６）および増殖のわずかな強化（Ｎａｇａｎｅ ｅｔ ａｌ．，１９９６）を含むことが報告されている。

【0006】

この切断型受容体の発現が腫瘍細胞に限定される場合、この発現は抗体療法の非常に特異的な標的を意味する。従って、抗ＥＧＦＲ抗体およびこれらを必要とする人々に対する有効な治療を提供可能な製剤が、当分野において必要である。

【0007】

抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、細胞障害性薬物に化学的リンカーにより複合体化された抗体を含む新しい種類の治療薬を表す。今日、トラスツズマブ（ＤＭ１に連結されたハーセプチン（抗ＨＥＲ２抗体）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）およびグレムバツムマブ・ベドチン（ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）（ＣＤＸ－０１１；ＭＭＡＥに連結された抗ＧＰＮＭＢ抗体；Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を含む、数多くのＡＤＣが臨床試験において試験されている。ＡＤＣの治療コンセプトは、標的表面抗原への結合を用いて、腫瘍細胞に細胞障害性薬物を送達するためのビヒクルとして抗体を使用することである。ＡＤＣは、非複合体化抗体より複雑で不均一な構造を有する。従って、ＡＤＣは、治療目的のための製剤化にとって困難な課題を提示する。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７３：２２８－２３５（１９９６）

【非特許文献2】Ｈｅｒｂｓｔ ａｎｄ Ｓｈｉｎ，Ｃａｎｃｅｒ ９４：１５９３－１６１１（２００２）

【非特許文献3】Ａｔａｌａｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １４：１３４６－１３６３（２００３）

【非特許文献4】Ｔｓａｏ ａｎｄ Ｈｅｒｂｓｔ，Ｓｉｇｎａｌ ４：４－９（２００３）

【非特許文献5】Ｗｉｋｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌ．４，１４８－１５８

【非特許文献6】Ｏｌａｐａｄｅ－Ｏｌａｏｐａ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．８２，１８６－９４

【非特許文献7】Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９，２９６５－９

【非特許文献8】Ｙａｍａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８１，７７３－９

【非特許文献9】Ｙａｍａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，１８１６－２０

【非特許文献10】Ｓｕｇａｗａ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７，８６０２－６

【非特許文献11】Ｗｉｋｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７，４１３０－４０

【非特許文献12】Ｗｉｋｓｔｒａｎｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５，３１４０－８

【非特許文献13】Ｇａｒｃｉａ ｄｅ Ｐａｌａｚｚｏ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３，３２１７－２０

【非特許文献14】Ｎｉｓｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１，７７２７－３１

【非特許文献15】Ｂａｔｒａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．６，１２５１－９

【非特許文献16】Ｎａｇａｎｅ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６，５０７９－８６

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を含む製剤および抗上皮成長因子受容体（抗ＥＧＦＲ）ＡＤＣによる治療を必要とする障害、例えば癌を治療するためのこのような複合体の使用に関連する方法を提供する。

【0010】

本発明は、抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、糖、ヒスチジンおよび界面活性剤を含み、約５－７のｐＨを有し、該抗ＥＧＦＲ ＡＤＣが、オーリスタチンと複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む製剤を提供する。

【0011】

本発明は、抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、糖、スクシネートまたはシトレートおよび／またはホスフェートバッファーおよび界面活性剤を含み、該約５－７のｐＨを有し、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣが、オーリスタチンと複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む製剤を提供する。一実施形態において、製剤は凍結乾燥される。

【課題を解決するための手段】

【0012】

一実施形態において、製剤は、界面活性剤としてポリソルベート、例えばポリソルベート８０またはポロキサマーを含む。一実施形態において、製剤は０．０５－０．１５ｍｇ／ｍｌのポリソルベートを含む。

【0013】

別の実施形態において、製剤は約６０－８０ｍｇ／ｍｌの糖を含む。一実施形態において、糖は、マンニトール、ソルビトール、スクロースおよびトレハロースからなる群から選択される。

【0014】

一実施形態において、本発明の製剤は、約５－２５ｍＭのヒスチジンを含む。

【0015】

さらに別の実施形態において、製剤は凍結乾燥される。一実施形態において、製剤は凍結乾燥され、糖はスクロースである。本発明の別の実施形態において、凍結乾燥製剤はラクトビオン酸を含まない。本発明の別の実施形態において、凍結乾燥製剤は糖酸を含まない。

【0016】

一実施形態において、本発明の製剤は水性であり、約１－４０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。

【0017】

さらなる実施形態において、本発明の製剤は１－１５０ｍｇの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。一実施形態において、本発明の製剤は９０－１１０ｍｇの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。

【0018】

一実施形態において、本発明の製剤は、約５から７のｐＨを有する。さらなる実施形態において、製剤は約５．５から６．５のｐＨを有する。

【0019】

一実施形態において、オーリスタチンはモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である。一実施形態において、本発明の製剤は、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。別の実施形態において、ＭＭＡＦは、マレイミドカプロイルリンカーを有する抗体と複合体化される。

【0020】

本発明は、オーリスタチンと複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分、糖、例えばスクロース、界面活性剤、例えばポリソルベート８０などのポリソルベートおよびヒスチジンを含む、抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を含む凍結乾燥製剤を、さらに提供する。一実施形態において、凍結乾燥製剤は、１－２０ｍｇのヒスチジン、約３２０－４１０ｍｇの糖、約０．１から０．９ｍｇの界面活性剤および約１－１５０ｍｇの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。

【0021】

本発明はまた、オーリスタチンと複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む、約１－１００ｍｇ／ｍｌの抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、約１－１０ｍｇ／ｍＬのヒスチジン、約５０－９０ｍｇ／ｍｌの糖、例えばスクロースおよび約０．０１－０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤、例えばポリソルベート８０を含む水性製剤を提供する。

【0022】

一実施形態において、本発明の製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体がヒト化された抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。

【0023】

別の実施形態において、本発明の製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体が列配列番号１３で示されるアミノ酸配を含む重鎖可変領域および配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。

【0024】

別の実施形態において、本発明の製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体が、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、配列番号１４で示されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域、配列番号１８で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域および配列番号１９で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。

【0025】

さらなる実施形態において、本発明の製剤は、抗体が、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。

【0026】

本発明の別の実施形態において、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣは、配列番号１８のアミノ酸配列で示される軽鎖可変領域に記載のＣＤＲ（即ち、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）および配列番号１３のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ（即ち、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を含む。

【0027】

本発明は、スクロース、ポリソルベート８０およびヒスチジンを含み、抗体が、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む凍結乾燥製剤をさらに提供する。一実施形態において、製剤は、１－１１０ｍｇの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。

【0028】

一実施形態において、本発明の製剤は、約３の平均ＤＡＲを有する抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含むＡＤＣ混合物または約２－４のＤＡＲを有する抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含むＡＤＣ混合物を含有する。

【0029】

一実施形態において、本発明の製剤は、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含み、前記ＡＤＣ１－ＭＭＡＦは、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域、スクロース、ヒスチジンおよびポリソルベート８０を含み、製剤は、約３の平均ＤＡＲを有するＡＤＣ混合物または約２－４のＤＡＲを有するＡＤＣ混合物を含む。本発明のさらなる実施形態において、製剤は凍結乾燥される。またさらなる発明において、抗ＥＧＦＲ抗体は、マレイミドカプロイルリンカーを介してＭＭＡＦに連結される。この上さらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分は、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0030】

一実施形態において、本発明の製剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含み、前記ＡＤＣ１－ＭＭＡＥは、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域、スクロース、ヒスチジンおよびポリソルベート８０を含み、製剤は、約３の平均ＤＡＲを有するＡＤＣ混合物または約２－４のＤＡＲを有するＡＤＣ混合物を含む。発明のさらなる実施形態において、製剤は凍結乾燥される。この上さらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分は、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0031】

一実施形態において、本発明の製剤は医薬製剤である。

【0032】

本発明はさらに、約５から７に及ぶｐＨを有し、１－２０ｍｇのヒスチジン、約３２０－４１０ｍｇの糖、約０．１から０．９ｍｇの界面活性剤および約１－１５０ｍｇの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む水性製剤を凍結乾燥するステップを含む、製剤の調製方法を特徴とする。

【0033】

本発明は、本明細書に記載の製剤において治療有効量の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを対象に投与するステップを含み、該対象が抗ＥＧＦＲ ＡＤＣによる治療を必要とする障害を有する、対象を治療する方法をさらに提供する。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣによる治療を必要とする障害は、癌、例えば、神経膠芽腫、非小細胞肺がん、肺がん、結腸癌、頭部および頸部癌、乳がん、扁平上皮細胞腫瘍、肛門癌、皮膚癌および外陰癌である。

【0034】

一実施形態において、本発明の製剤は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を過剰発現する可能性のある固形腫瘍または扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の治療に使用される。

【0035】

一実施形態において、本発明の製剤は、扁平上皮腫瘍（肺、頭部および頸部、子宮頸部などの扁平上皮腫瘍を含む）、神経膠芽腫、グリオーマ、非小細胞肺がん、肺がん、結腸癌、頭部および頸部癌、乳がん、扁平上皮細胞腫瘍、肛門癌、皮膚癌および外陰癌からなる群から選択される癌の治療に使用される。

【0036】

一実施形態において、本発明の製剤は、多形性神経膠芽腫の治療に使用される。

【0037】

一実施形態において、本発明の製剤は、ＥＧＦＲの過剰発現を有する固形腫瘍の治療に使用される。一実施形態において、本発明の製剤は、ＥＧＦＲを過剰発現する可能性のある進行性固形腫瘍を有する対象の治療に使用される。

【0038】

一実施形態において、本発明の製剤は、静脈内投与される。

【0039】

本発明は、本明細書に記載の製剤を含むキットをさらに提供する。

【図面の簡単な説明】

【0040】

【図1】リンカーにより対象となる抗体（ｍＡｂ）に結合されたＭＭＡＥ（ＧＮリンカー＋オーリスタチン：ｖｃＭＭＡＥ）の構造を示す略図である。

【図2】リンカーにより対象となる抗体（ｍＡｂ）に結合されたＭＭＡＦ（リンカー＋オーリスタチン：ｍｃＭＭＡＦ）の構造を示す略図である。

【図3A】動的走査蛍光により決定されたアンフォールディング発生温度をグラフに表した図である。◆抗体１；■抗体薬物複合体（ＡＤＣ）１－ＭＭＡＦ；▲ＡＤＣ１－ＭＭＡＥ。

【図3B】示差走査熱量計により決定されたアンフォールディング発生温度をグラフに表した図である。◆抗体１；■抗体薬物複合体（ＡＤＣ）１－ＭＭＡＦ；▲ＡＤＣ１－ＭＭＡＥ。

【図4A】フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）を使用して、抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥ中の構造不定要素の存在をグラフに表した図である。◆抗体１；■ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ；▲ＡＤＣ１－ＭＭＡＥ。

【図4B】図４Ｂは、近ＵＶ－円偏光二色性（ＣＤ）を使用して、抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥ中の構造不定要素の存在をグラフに表した図である。◆抗体１；■ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ；▲ＡＤＣ１－ＭＭＡＥ。

【図5】ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよび抗体１と比較した、低濃度のＡＤＣ１－ＭＭＡＥの凝集傾向をグラフに表した図である。

【図6】ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよび抗体１と比較した、高濃度のＡＤＣ１－ＭＭＡＥの凝集傾向をグラフに表した図である。

【図7】血清安定性アッセイの概要を示し、抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥを含む多数の分子の、ｉｎ ｖｉｔｒｏ血清安定性を説明する図である。

【図8A】１５ｍＭヒスチジンバッファー、ｐＨ５．７５中の抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥ製剤における、ＳＥＣにより決定されたモノマー存在の百分率により示される、凍結／解凍安定性をグラフに表した図である。

【図8B】１ｍｇ／ｍｌ ｐＨ７．０ １０ｍＭシトレートおよび１０ｍＭホスフェートバッファー中の抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥ製剤における、ＳＥＣにより決定されたモノマー存在の百分率により示される、凍結／解凍安定性をグラフに表した図である。

【図9A】マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）により決定された、凍結－解凍の間の不可視粒子形成を定量したグラフである。

【図9B】マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）により決定された、凍結－解凍の間の不可視粒子形成を定量したグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0041】

Ｉ．定義
本発明をより容易に理解可能にするために、特定の用語をまず定義する。加えて、パラメーターの値または値の範囲が列挙されるときは常に、列挙された値に介在する値および範囲もまた、本発明の一部であることが意図されることに留意するべきである。

【0042】

「抗上皮成長因子抗体薬物複合体」または「抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体」および「抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、ＥＧＦＲに特異的に結合して、これによって、抗体が薬物、例えば細胞障害性剤、例えばオーリスタチン（例えばモノメチルオーリスタチンＦ）と複合体化される抗体を含む抗体薬物複合体を指す。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体はＡＤＣ１－ＭＭＡＦであり、これは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）連結を介してＭＭＡＦと複合体化された抗体１である。抗体１の軽鎖および重鎖に対応するアミノ酸配列は、配列番号１３から２２で提供される。特に他のことが明記されない限り、本明細書において使用する場合、「ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ」という用語は、精製ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ（ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐとも称される。）を含む。

【0043】

本明細書において使用する場合、「オーリスタチン」という用語は、抗有糸分裂剤のファミリーを指す。オーリスタチン誘導体もまた「オーリスタチン」という用語の定義内に含まれる。オーリスタチンの例としては、限定するものではないが、、オーリスタチンＥ（ＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）およびドラスタチンの合成類似体が挙げられる。

【0044】

「抗ＥＧＦＲ抗体」という用語は、ＥＧＦＲに特異的に結合する抗体を指すことを意味する。対象となる抗原、即ちＥＧＦＲに「結合する」抗体は、抗体が、抗原を発現する細胞の標的化に有用であるような、十分な親和性を有するこの抗原に結合できる抗体である。

【0045】

本明細書において使用する場合、「ＡＤＣ混合物」という用語は、不均一なＤＡＲ分布のＡＤＣを含有する組成物を指す。一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、１から８、例えば２、４、６および８のＤＡＲ分布の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（即ち、２、４、６および８薬物負荷種）を含有する。別の実施形態において、ＡＤＣ混合物は、４未満のＤＡＲ、例えばＤＡＲが２－４の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含有する。特に、分解産物は、１、３、５および７のＤＡＲもまた混合物中に含まれるようにもたらし得る。さらに、混合物中のＡＤＣは、８を超えるＤＡＲを有してもよい。ＡＤＣ混合物は、鎖間ジスルフィド還元の後の複合体化から得られる。

【0046】

本明細書において使用する場合、「ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ」という用語は、ＡＤＣのＤＡＲが所望の範囲、例えば（２－４のＤＡＲ）である、またはＡＤＣが所望の平均値（例えば、３の平均ＤＡＲ）を有するＡＤＣ混合物中に含まれるように精製されている、ＡＤＣ混合物内に見出されるＡＤＣ１－ＭＭＡＦ分子を指す。

【0047】

本明細書において使用する場合、「製剤」という用語は、水性製剤または凍結乾燥製剤を指すことを意味する。一実施形態において、本発明の製剤は凍結乾燥される。一実施形態において、本発明の製剤は水性である。一実施形態において、本発明の製剤はキレート剤を含まない。一実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、キレート剤を含まない。

【0048】

「水性製剤」という用語は、溶媒が水である溶液を指す。一実施形態において「水性製剤」という用語は、溶媒が水であり、以前に凍結乾燥されていない液体製剤（即ち、凍結乾燥製剤の再構成から得られるものではない。）を指す。別の実施形態において、「水性製剤」という用語は、溶媒が水であり、以前に凍結乾燥された液体製剤（即ち、再構成された製剤）を指す。

【0049】

本明細書において本発明に従った製剤に関連して使用する場合、「凍結乾燥された」という用語は、製剤を凍結して、その後凍結内容物由来の氷を、当分野において公知の任意のフリーズドライ方法、例えば市販のフリーズドライ装置により昇華することによって乾燥される製剤を表す。

【0050】

「再構成された」製剤は、タンパク質、例えばＡＤＣを含有する凍結乾燥製剤を、タンパク質が再構成された製剤に分散されるように希釈剤に溶解することによって調製されている製剤である。再構成された製剤は、対象となるタンパク質（例えば、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体）により治療されるべき対象への投与（例えば、静脈内投与）に適切である。

【0051】

本明細書において対象となる「希釈剤」は、医薬として許容され（ヒトへの投与に関して安全で非毒性である。）、液体製剤、例えば凍結乾燥後に再構成される製剤の調製に有用である希釈剤である。例示的希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。代替の実施形態において、希釈剤としては、塩および／またはバッファーの水溶液を挙げることができる。

【0052】

「バッファー」という用語は、溶液中の場合、この酸－塩基複合体成分の作用によりｐＨの変化に抵抗する化合物を指す。一実施形態において、本発明に使用されるバッファーは、約４．５から約７．５の範囲のｐＨを有する。この範囲内にｐＨを調整するバッファーの例としては、アセテート（例えば酢酸ナトリウム）、スクシネート（例えば、コハク酸ナトリウム）、グルコネート、メチオニン、イミダゾール、ヒスチジン、グリシン、アルギニン、シトレート、ホスフェート、シトレートおよびホスフェート、Ｔｒｉｓならびに他の有機酸バッファーが挙げられる。一実施形態において、製剤に使用されるバッファーは、ヒスチジン、スクシネートまたはシトレートまたはホスフェートバッファーを含む。本発明の一実施形態において、製剤は、ヒスチジンを含む約１－１０ｍｇ／ｍｌのバッファーを含む。本発明の別の実施形態において、製剤は、ヒスチジンを含む１－２０ｍｇのバッファーを含む。

【0053】

「糖」という用語は、本明細書において使用する場合、単糖類またはオリゴ糖を表すことを意味する。単糖類は、単糖およびこれらの誘導体、例えばアミノ糖を含む、酸により加水分解されない単量体炭水化物である。単糖類の例としては、限定するものではないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、ソルボース、リボース、デオキシリボース、ノイラミン酸が挙げられる。オリゴ糖は、グリコシド結合を介して連結された、分枝型または鎖中のいずれかの複数の単量体糖単位からなる炭水化物である。オリゴ糖内の単量体糖単位は、同一であっても、または異なっていてもよい。単量体糖単位の数に依存して、オリゴ糖は、ジ－、トリ－、テトラ－、ペンタ－などの糖である。オリゴ糖の例としては、限定するものではないが、マルトース、スクロース、ラクトース、メレチトース、トレハロース、ソルボースおよびラフィノースが挙げられる。多糖類とは対照的に、単糖類およびオリゴ糖は水溶性である。糖の例としては、限定するものではないが、還元糖、非還元糖、糖アルコールおよび糖酸が挙げられる。「還元糖」は、遊離のアルデヒドまたはケトン基を含有し、金属イオンを還元でき、またはタンパク質中のリジンおよび他のアミノ基と共有結合的に反応できる糖である。「非還元糖」は、遊離のアルデヒドまたはケトン基を欠いており、穏やかな酸化剤、例えばフェーリング液またはベネディクト液により酸化されない糖である。還元糖の例は、フルクトース、マンノース、マルトース、ラクトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトースおよびグルコースである。非還元糖としては、スクロース、トレハロース、ソルボース、メレチトースおよびラフィノースが挙げられる。マンニトール、キシリトール、エリスリトール、トレイトール、ソルビトールおよびグリセロールは、糖アルコールの例である。本発明の一実施形態において、糖は、マンニトール、ソルビトール、スクロースまたはトレハロースである。本発明の別の実施形態において、製剤は、約５０－９０ｍｇ／ｍｌの糖、例えばスクロースを含む。本発明のさらに別の実施形態において、製剤は、約６０－８０ｍｇ／ｍｌの糖、例えばスクロースを含む。本発明のさらに別の実施形態において、製剤は、約７０ｍｇ／ｍｌの糖、例えばスクロースを含む。本発明のまた別のさらなる実施形態において、凍結乾燥製剤は、約３２０－４１０ｍｇの糖を含む。

【0054】

「界面活性剤」という用語は、概して、両親媒性構造を有する有機物質を指す、即ち、界面活性剤は、対抗する溶解性傾向の基、通常、油溶性炭化水素鎖および水溶性イオン性基から構成される。界面活性剤は、表面活性部分の電荷に依存して、陰イオン性、陽イオン性、および非イオン性界面活性剤に分類することができる。界面活性剤は、多くの場合、生体物質のさまざまな医薬組成物および調製物のための湿潤剤、乳化剤、可溶化剤および分散剤として使用される。適切な界面活性剤の例としては、限定するものではないが、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート、例えば、ポリオキシエチレン・ソルビタン・モノオレート、モノラウレート、モノパルミテート、モノステアレートまたはポリオキシエチレン・ソルビタンの別のエステル（例えば、市販のＴＷＥＥＮＳ、例えば、ＴＷＥＥＮ２０およびＴＷＥＥＮ８０（ＩＣＩ Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））、ナトリウムジオクチルスルホスクシネート（ＤＯＳＳ）、レシチン、ステアリルアルコール（ｓｔｅａｒｙｌｉｃ ａｌｃｏｈｏｌ）、セトステアリルアルコール（ｃｅｔｏｓｔｅａｒｙｌｉｃ ａｌｃｏｈｏｌ）、コレステロール、ポリオキシエチレンリシン油、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリド、ポロキサマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ Ｆ６８（商標）およびＦ１０８（商標）、これらは、エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのブロックコポリマーである）；ポリエチレンキャスター油誘導体またはこれらの混合物が挙げられる。

【0055】

「ポリソルベート」という用語は、本明細書において使用する場合、ソルビトールのオレートエステルおよびこの無水物を指し、通常エチレンオキサイドと共重合される。一実施形態において、ポリソルベートは、約１２００Ｄａ（ポリソルベート２０のおよこの分子量）から約１３５０Ｄａ（ポリソルベート８０のおよこの分子量）の範囲の分子量を有する。一実施形態において、製剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０またはポリソルベート８０を含む。一実施形態において、製剤は、約０．１から０．９ｍｇのポリソルベートを含む。別の実施形態において、製剤は、約０．０１－０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベートを含む。別の実施形態において、製剤は、０．０５－０．１５ｍｇ／ｍｌのポリソルベートを含む。

【0056】

「医薬製剤」という用語は、有効成分の生物活性を有効にするような形態であり、従って、治療的使用のために対象に投与できる調製物を指す。

【0057】

「安定な」製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が本質的にこの物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物活性を保存において保有する製剤である。タンパク質の安定性を測定するためのさまざまな分析技術が当分野において利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｐｐ．２４７－３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０に概説されている。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体の安定性は、溶液中の単量体タンパク質の百分率に従って決定され、分解された（例えば断片化）および／または凝集されたタンパク質の百分率が低い。例えば、安定な抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を含む製剤は、少なくとも９５％の単量体抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を含み得る。または、製剤は、５％以下の凝集および／または分解抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を含み得る。

【0058】

抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、色彩および／または透明度の目視検査による、またはＵＶ光散乱またはサイズ排除クロマトグラフィーによって測定される、凝集、沈殿および／または変性の実質的兆候を示さない場合、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体は、医薬製剤において「この物理的安定性を保有している」。一実施形態において、安定な水性製剤は、製剤中に約５％未満の抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体の凝集を有する製剤である。

【0059】

所与の時間における化学的安定性が、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、以下で定義されるこの生物活性を未だ保有しているとみなされるような場合、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体は、医薬製剤において「この化学的安定性を保有している」。化学的安定性は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体の化学的に改変された形態を検出および定量することによって評価できる。化学的改変は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析／飛行時間質量分析（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ ＭＳ）により評価可能なサイズ変更（例えばクリッピング）を伴い得る。化学的改変の他の型としては、例えばイオン交換クロマトグラフィーにより評価可能な（例えば脱アミドの結果として起こる。）電荷の改変が挙げられる。

【0060】

医薬製剤中のタンパク質が、この意図される目的に関して生物学的に活性である場合、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体は、医薬製剤において「この生物活性を保有している」。例えば、医薬製剤において、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体の生物活性が、（例えば、抗原結合アッセイで決定された場合）医薬製剤が調製される時点において示された生物活性の約３０％、約２０％または約１０％以内（アッセイの誤差範囲内）である場合、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体の生物活性は保有されている。一実施形態において、生物活性は、類表皮がん細胞の細胞障害性である。

【0061】

「抗体」という用語は、一般的に、４つのポリペプチド鎖、即ち２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）で構成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子またはＩｇ分子の本質的標的結合特徴を保有する任意の機能性断片、突然変異体、変異体もしくはこれらの誘導体を広範囲に指す。

【0062】

完全長抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＨＣＶＲまたはＶＨと略される。）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＬＣＶＲまたはＶＬと略される。）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域と、フレームワーク（ＦＲ）と称されるより保存的な散剤する領域とにさらに分割可能である。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから成り、アミノ末端からカルボキシ末端へ、次の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置されている。免疫グロブリン分子は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）およびクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであってよい。

【0063】

抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」）という用語は、本明細書において使用する場合、抗原（例えばｈＩＬ－１３）に特異的に結合する能力を保有する抗体の１以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片により実施可能であることが示されている。このような抗体の実施形態は、二特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）、二重特異性（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ）または多重特異性フォーマット；２以上の異なる抗原への特異的結合であってよい。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価の断片（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片、ヒンジ領域においてジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂ断片を含む２価の断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０５１４４Ａ１、参照により本明細書に組み込まれる）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは別の遺伝子によりコードされるが、これらは、組換え法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域対が１価の分子を形成する一本鎖タンパク質として作製可能にする合成リンカーにより接続することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えばＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照されたい。）。このような一本鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」という用語内に包含されることが意図される。一本鎖抗体の他の形態、例えばダイアボディもまた包含される。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが一本鎖ポリペプチドに発現されるが、短すぎて同じ鎖の上の２つのドメインの間で対形成できないリンカーを使用し、これによって、別の鎖の相補性ドメインと対形成させ、２つの抗原結合部分を作り出す、２価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照されたい。）。このような抗体結合部分は当分野において公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．７９０ｐｐ．（ＩＳＢＮ３－５４０－４１３５４－５）。

【0064】

「単離抗体」は、本明細書において使用する場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ＥＧＦＲと特異的に結合する単離抗体は、ＥＧＦＲ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない。）。しかし、ＥＧＦＲと特異的に結合する単離抗体は、他の抗原、例えば他の種由来のＥＧＦＲ分子との交差反応性を有してもよい。さらに、単離抗体は、他の細胞性材料および／または化学薬品を実質的に含んではいけない。

【0065】

「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種（例えばマウス）由来の重鎖および軽鎖可変領域の配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」、即ち、ヒト生殖細胞系可変配列により類似しているように改変されている抗体を指す。特定の実施形態において、「ヒト化抗体」という用語は、対象となる抗原に特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域を含み、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む抗体または抗体の変異体、誘導体もしくは断片を指す。本明細書において使用する場合、ＣＤＲに関連する「実質的」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。一実施形態において、ヒト化抗体の１つの型は、ヒトＣＤＲ配列を非ヒトＶＨおよびＶＬ配列に導入して、対応する非ヒトＣＤＲ配列を置き換えた、ＣＤＲグラフト化抗体である。

【0066】

本明細書において使用する場合、「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれに３つのＣＤＲが存在し、これらは、可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と名付けられる。「ＣＤＲセット」という用語は、本明細書において使用する場合、抗原に結合可能な単一の可変領域内で発生する３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なる系に従って定義が異なっている。Ｋａｂａｔにより記載される系（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）および（１９９１））は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基ナンバリング系を提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基の境界もまた提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ぶことができる。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）およびＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の特定のさらに小さい部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格構造に適用されることを見出した。これらのさらに小さい部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と名付けられ、「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖および重鎖領域を示している。これらの領域はＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと称され、これらは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎにより記載されている（ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－１３９（１９９５））およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２（５）：７３２－４５（１９９６））。さらに他のＣＤＲ境界の定義は、上記の系の１つに厳密に従ってはいないが、それでもＫａｂａｔ ＣＤＲとは重複するものであり、特定の残基または残基の群またはさらにＣＤＲ全体が、抗原結合に重要な影響を与えないという予測または実験的発見を考慮して、これらは短縮または伸長されてよい。本明細書において使用される方法は、これらの系のいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用可能であるが、好ましい実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａにより定義されるＣＤＲを使用する。

【0067】

「障害」という用語は、本発明の製剤による治療から利益を受ける任意の病態、例えば、製剤中の抗ＥＧＦＲ抗体による治療を必要とする障害を指す。これは、慢性および急性の障害または疾患を含み、対象を問題となる障害にかかりやすくする病態を含む。

【0068】

「癌」という用語は、通常、制御不能な細胞成長により特徴付けられる、哺乳動物における病態を指す、または説明することを意味する。癌の例としては、限定するものではないが、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病またはリンパ系腫瘍が挙げられる。このような癌のより具体的な例としては、神経膠芽腫、非小細胞肺がん、肺がん、結腸癌、頭部および頸部癌、乳がん、扁平上皮細胞腫瘍、肛門癌、皮膚癌および外陰癌が挙げられる。一実施形態において、製剤は、ＥＧＦＲ遺伝子の増幅を含有する腫瘍を有する患者に投与され、これによって、腫瘍がＥＧＦＲ ｄｅ２－７の切断型を発現する。一実施形態において、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦを含む製剤は、結腸直腸癌、頭部および頸部癌（限定するものではないが、下咽頭癌、口腔咽頭癌、食道癌、喉頭癌、および口腔癌を含む）、非小細胞肺がん、膵臓癌、胃がん、乳がん、固形腫瘍、例えば上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を過剰発現しやすい固形腫瘍または多形性神経膠芽腫の治療のために対象に投与することができる。

【0069】

「投与する」という用語は、本明細書において使用する場合、治療目的（例えば、ＥＧＦＲ関連障害の治療）を達成するための物質（例えば、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体）の送達を指すことを意味する。投与の様式は、非経口、経腸および局所であってよい。非経口投与は、普通は注射であり、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内および胸骨下（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）の注射および注入が挙げられる。

【0070】

ＡＤＣの「治療有効量」または「有効量」という用語は、本明細書において使用する場合、ＡＤＣが有効である治療のために、障害の症状の予防または治療または緩和に有効な量を指す。

【0071】

「治療」という用語は、治療および予防もしくは防止的基準の両方を指す。治療の必要な患者は、既に障害を有する患者および障害を防止されるべき患者を含む。

【0072】

本発明のさまざまな態様を、下記の項においてさらに詳細に記載する。

【0073】

ＩＩ．本発明の抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体製剤
本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む製剤を特徴とし、前記ＥＧＦＲ抗体は、１以上の薬物、例えばオーリスタチン（例えばＭＭＡＦ）と複合体化される。本発明は、少なくとも一部、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、（抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分が、オーリスタチン、例えばＭＭＡＦの１以上の分子と複合体化される。）を含む製剤が、再構成においてＡＤＣの生物活性を維持可能であり、５℃および２５℃において６ヶ月までの製剤を保存した後に薬物抗体比を維持するという発見に基づく。

【0074】

本明細書に記載の製剤は、凍結乾燥可能であるか、または水性であり得る。特に他のことが明記されない限り、「製剤」という用語は、凍結乾燥および水性の両方を示す。

【0075】

特定の製剤は、好ましくは、抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、糖、バッファーおよびポリソルベートを含み、約５－７のｐＨを有する。ある実施形態において、製剤は、オーリスタチン、例えばＭＭＡＦの１以上の分子と複合体化された、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分、例えば抗体１を含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣをさらに含む。

【0076】

一実施形態において、本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体、糖、例えばスクロース、界面活性剤、例えばポリソルベート（例えばポリソルベート８０）およびヒスチジンを含み、約５－７のｐＨを有し、該抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む、凍結乾燥製剤を提供する。

【0077】

一実施形態において、本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体、スクロース、界面活性剤およびバッファーを含み、約５－７のｐＨを有し、該抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、マレイミドカプロイルリンカーを介してモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と複合体化された（ｍｃ－ＭＭＡＦ）、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分、例えば抗体１を含む、凍結乾燥製剤を提供する。

【0078】

一実施形態において、本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体、スクロース、ポリソルベート、およびヒスチジンを含み、約５－７のｐＨを有し、該抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、マレイミドカプロイルリンカーを介してモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と複合体化された（ｍｃ－ＭＭＡＦ）、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分、例えば抗体１を含む、凍結乾燥製剤を提供する。

【0079】

本明細書に記載の製剤は、好ましくは、約４．０から約８．０のｐＨを有する。一実施形態において、製剤のｐＨは、約５．０から約７．０の範囲であり、またはｐＨは約５から約６．５の範囲であってよく、または製剤のｐＨは、約５．５から約６．５の範囲であってよい。前述のｐＨ値に介在する範囲、例えば、約５．６から約６．４もまた、本発明の一部であることが意図される。前述の値の上限／下限のいずれの組み合わせを使用する値の範囲、例えば約５．５から約６．２のｐＨ範囲もまた、含まれることが意図される。

【0080】

本発明の製剤は、好ましくは、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ、糖、界面活性剤およびバッファーを含む。本発明の製剤に使用可能な当分野において公知のバッファーの例としては、限定するものではないが、アセテート、ヒスチジン、グリシン、アルギニン、ホスフェート、Ｔｒｉｓおよびシトレートが挙げられる。一実施形態において、製剤に使用されるバッファーはヒスチジンである。

【0081】

一実施形態において、製剤は、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５のｐＨまたは約５．５から約６．５のｐＨおよびこれらの間の範囲を有する１－２０ｍｇ／ｍｌのヒスチジンバッファー（例えば、約１から約２０、約１から約１０；約１から約５または約１から約３ｍｇ／ｍｌ）を含む。

【0082】

一実施形態において、製剤は、約５－２５ｍＭのヒスチジン（例えば、約２から約２５ｍＭ；約５から約２５ｍＭ；約１０から約２５ｍＭまたは約２０から約２５ｍＭ）およびこれらの間の範囲を含む。

【0083】

一実施形態において、製剤は、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５のｐＨまたは約５．５から約６．５のｐＨおよびこれらの間の範囲を有する１－２０ｍｇ／ｍｌのスクシネートバッファー（例えば、約１から約２０、約１から約１０；約５から約２０または約５から約１０ｍｇ／ｍｌ）を含む。一実施形態において、製剤は、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５のｐＨまたは約５．５から約６．５のｐＨおよびこれらの間の範囲を有する約１－１０ｍｇ／ｍｌのスクシネートバッファーを含む。

【0084】

一実施形態において、製剤は、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５のｐＨ、約５．５から約６．５のｐＨおよびこれらの間の範囲を有する１－２０ｍｇ／ｍｌのシトレートバッファー（例えば、約１から約２０、約１から約１０、約５から約２０または約５から約１０ｍｇ／ｍｌ）を含む。一実施形態において、製剤に使用されるバッファーは、約１－１０ｍｇ／ｍｌのシトレートバッファーを含み、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５のｐＨまたは約５．５から約６．５のｐＨおよびこれらの間の範囲を有する。

【0085】

一実施形態において、製剤は、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５または約５．５から約６．５のｐＨ、およびこの間の範囲を有する１－２０ｍｇ／ｍｌのホスフェートバッファー（例えば、約１から約２０、約１から約１０、約５から約２０または約５から約１０ｍｇ／ｍｌ）を含む。一実施形態において、製剤に使用されるバッファーは、約１－１０ｍｇ／ｍｌのホスフェートバッファーを含み、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５のｐＨ、約５．５から約６．５のｐＨおよびこれらの間の範囲を有する。

【0086】

一実施形態において、製剤は、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５のｐＨ、約５．５から約６．５のｐＨを有する１－２０ｍｇ／ｍｌのシトレート／ホスフェートバッファー（例えば、約１から約２０、約１から約１０、約５から約２０または約５から約１０ｍｇ／ｍｌ）を含む。一実施形態において、製剤に使用されるバッファーは、約１－１０ｍｇ／ｍｌのシトレート／ホスフェートバッファーを含み、約５．０から約７．０のｐＨ、約５から約６．５のｐＨ、約５．５から約６．５のｐＨおよびこれらの間の範囲を有する。

【0087】

バッファーに加えて、糖が製剤に含まれる。製剤に使用可能な糖の例としては、限定するものではないが、マンニトール、ソルビトール、スクロースおよびトレハロースが挙げられる。一実施形態において、製剤に使用される糖はスクロースである。

【0088】

一実施形態において、製剤は、糖を、約５０から約９０ｍｇ／ｍｌ、約５０から約８５ｍｇ／ｍｌ、約５０から約８０ｍｇ／ｍｌ、約５０から約７５ｍｇ／ｍｌ、約５０から約７０ｍｇ／ｍｌ、約５０から約６５ｍｇ／ｍｌ、約５０から約６０ｍｇ／ｍｌ、約６０から約９０ｍｇ／ｍｌ、約６０から約８５ｍｇ／ｍｌ、約６０から約７５ｍｇ／ｍｌ、約６０から約７０ｍｇ／ｍｌまたは約６０から約７５ｍｇ／ｍｌおよびこの間の範囲の濃度で、例えば約５５から約８５ｍｇ／ｍｌの糖およびこれらの間の範囲を含む。

【0089】

一実施形態において、製剤は、スクロースを、約５０から約９０ｍｇ／ｍｌ、約５０から約８５ｍｇ／ｍｌ、約５０から約８０ｍｇ／ｍｌ、約５０から約７５ｍｇ／ｍｌ、約５０から約７０ｍｇ／ｍｌ、約５０から約６５ｍｇ／ｍｌ、約５０から約６０ｍｇ／ｍｌ、約６０から約９０ｍｇ／ｍｌ、約６０から約８５ｍｇ／ｍｌ、約６０から約７５ｍｇ／ｍｌ、約６０から約７０ｍｇ／ｍｌまたは約６０から約７５ｍｇ／ｍｌおよびこの間の範囲の濃度で、例えば約５５から約８５ｍｇ／ｍｌのスクロースおよびこれらの間の範囲で含む。

【0090】

界面活性剤もまた、例えば安定性を加えるために製剤に加えられる。例示的界面活性剤としては、限定するものではないが、非イオン性洗浄剤、例えばポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、８０）またはポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）が挙げられる。

【0091】

一実施形態において、製剤は、ポリソルベート、例えばポリソルベート８０を、約０．０５－０．２０ｍｇ／ｍｌの濃度（例えば、約０．０５－０．１９、０．０５－０．１８、０．０５－０．１７、０．０５－０．１６、０．０５－０．１５、０．０５－０．１４、０．０５－０．１３、０．０５－０．１２、０．０５－０．１１または０．０５－０．１０ｍｇ／ｍｌおよびこれらの間の範囲）で含む。一実施形態において、水性製剤は、０．０５－０．１５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート、例えばポリソルベート８０を含む。

【0092】

一実施形態において、製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を、約１－１５０ｍｇ／ｍｌの濃度（例えば、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５または１５０ｍｇ／ｍｌおよびこの間の値の抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体）で含む。

【0093】

一実施形態において、製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を、約１－１５０ｍｇ、約１０－１５０ｍｇ、約２０－１５０ｍｇ、約３０－１５０ｍｇ、約４０－１５０ｍｇ、約５０－１５０ｍｇ、約６０－１５０ｍｇ、約７０－１５０ｍｇ、約８０－１５０ｍｇ、約９０－１５０ｍｇ、約１００－１５０ｍｇ、約１０－１４０ｍｇ、約２０－１４０ｍｇ、約３０－１４０ｍｇ、約４０－１４０ｍｇ、約５０－１４０ｍｇ、約６０－１４０ｍｇ、約７０－１４０ｍｇ、約８０－１４０ｍｇ、約９０－１４０ｍｇ、約１００－１４０ｍｇ、約１０－１３０ｍｇ、約２０－１３０ｍｇ、約３０－１３０ｍｇ、約４０－１３０ｍｇ、約５０－１３０ｍｇ、約６０－１３０ｍｇ約７０－１３０ｍｇ、約８０－１３０ｍｇ、約９０－１３０ｍｇ、約１００－１３０ｍｇ、約１０－１２０ｍｇ、約２０－１２０ｍｇ、約３０－１２０ｍｇ、約４０－１２０ｍｇ、約５０－１２０ｍｇ、約６０－１２０ｍｇ、約７０－１２０ｍｇ、約８０－１２０ｍｇ、約９０－１２０ｍｇ、約１００－１２０ｍｇ、約１０－１１０ｍｇ、約２０－１１０ｍｇ、約３０－１１０ｍｇ、約４０－１１０ｍｇ、約５０－１１０ｍｇ、約６０－１１０ｍｇ、約７０－１１０ｍｇ、約８０－１１０ｍｇ、約９０－１１０ｍｇおよび約１００－１１０ｍｇならびにこれらの間の範囲の量で含む。

【0094】

一実施形態において、製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２１ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌ、２３ｍｇ／ｍｌ、２４ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、２６ｍｇ／ｍｌ、２７ｍｇ／ｍｌ、２８ｍｇ／ｍｌ、２９ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３１ｍｇ／ｍｌ、３２ｍｇ／ｍｌ、３３ｍｇ／ｍｌ、３４ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、３６ｍｇ／ｍｌ、３７ｍｇ／ｍｌ、３８ｍｇ／ｍｌ、３９ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４１ｍｇ／ｍｌ、４２ｍｇ／ｍｌ、４３ｍｇ／ｍｌ、４４ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、４６ｍｇ／ｍｌ、４７ｍｇ／ｍｌ、４８ｍｇ／ｍｌ、４９ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、５１ｍｇ／ｍｌ、５２ｍｇ／ｍｌ、５３ｍｇ／ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌ、５５ｍｇ／ｍｌ、５６ｍｇ／ｍｌ、５７ｍｇ／ｍｌ、５８ｍｇ／ｍｌ、５９ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、６１ｍｇ／ｍｌ、６２ｍｇ／ｍｌ、６３ｍｇ／ｍｌ、６４ｍｇ／ｍｌ、６５ｍｇ／ｍｌ、６６ｍｇ／ｍｌ、６７ｍｇ／ｍｌ、６８ｍｇ／ｍｌ、６９ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、７１ｍｇ／ｍｌ、７２ｍｇ／ｍｌ、７３ｍｇ／ｍｌ、７４ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、７６ｍｇ／ｍｌ、７７ｍｇ／ｍｌ、７８ｍｇ／ｍｌ、７９ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、８１ｍｇ／ｍｌ、８２ｍｇ／ｍｌ、８３ｍｇ／ｍｌ、８４ｍｇ／ｍｌ、８５ｍｇ／ｍｌ、８６ｍｇ／ｍｌ、８７ｍｇ／ｍｌ、８８ｍｇ／ｍｌ、８９ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、９１ｍｇ／ｍｌ、９２ｍｇ／ｍｌ、９３ｍｇ／ｍｌ、９４ｍｇ／ｍｌ、９５ｍｇ／ｍｌ、９６ｍｇ／ｍｌ、９７ｍｇ／ｍｌ、９８ｍｇ／ｍｌ、９９ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１０１ｍｇ／ｍｌ、１０２ｍｇ／ｍｌ、１０３ｍｇ／ｍｌ、１０４ｍｇ／ｍｌ、１０５ｍｇ／ｍｌ、１０６ｍｇ／ｍｌ、１０７ｍｇ／ｍｌ、１０８ｍｇ／ｍｌ、１０９ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、１１１ｍｇ／ｍｌ、１１２ｍｇ／ｍｌ、１１３ｍｇ／ｍｌ、１１４ｍｇ／ｍｌ、１１５ｍｇ／ｍｌ、１１６ｍｇ／ｍｌ、１１７ｍｇ／ｍｌ、１１８ｍｇ／ｍｌ、１１９ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、１２１ｍｇ／ｍｌ、１２２ｍｇ／ｍｌ、１２３ｍｇ／ｍｌ、１２４ｍｇ／ｍｌ、１２５ｍｇ／ｍｌ、１２６ｍｇ／ｍｌ、１２７ｍｇ／ｍｌ、１２８ｍｇ／ｍｌ、１２９ｍｇ／ｍｌ、１３０ｍｇ／ｍｌ、１３１ｍｇ／ｍｌ、１３２ｍｇ／ｍｌ、１３３ｍｇ／ｍｌ、１３４ｍｇ／ｍｌ、１３５ｍｇ／ｍｌ、１３６ｍｇ／ｍｌ、１３７ｍｇ／ｍｌ、１３８ｍｇ／ｍｌ、１３９ｍｇ／ｍｌ、１４０ｍｇ／ｍｌ、１４１ｍｇ／ｍｌ、１４２ｍｇ／ｍｌ、１４３ｍｇ／ｍｌ、１４４ｍｇ／ｍｌ、１４５ｍｇ／ｍｌ、１４６ｍｇ／ｍｌ、１４７ｍｇ／ｍｌ、１４８ｍｇ／ｍｌ、１４９ｍｇ／ｍｌまたは１５０ｍｇ／ｍｌの抗体の濃度で含む。前述の数値のいずれかを含む範囲、例えば、１０－１５０ｍｇ／ｍｌ、１０－１００ｍｇ／ｍｌ、２０－９０ｍｇ／ｍｌ、１０－７０ｍｇ／ｍｌ、１０－４０ｍｇ．ｍｌおよび１－７０ｍｇ／ｍｌもまた本発明に含まれる。

【0095】

一態様において、本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を含み、再構成された水性製剤が、約１－１００ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ、約１－１０ｍｇ／ｍＬのバッファー（例えばヒスチジン）、約５０－９０ｍｇ／ｍｌの糖（例えばスクロース）および約０．０１－０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート（例えばポリソルベート８０）を含み、約５－７のｐＨを有し、前記抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、オーリスタチン（例えばＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分、（例えば、抗体１）を含む、凍結乾燥製剤から再構成された水性製剤を特徴とする。

【0096】

凍結乾燥製剤は、初めに、凍結乾燥工程の前の製剤である予備凍結乾燥製剤として調製される。予備凍結乾燥製剤中に存在する抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体の量は、所望の投薬容積、投与の様式などを考慮して決定される。

【0097】

一態様において、本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体、糖、（例えばスクロース）、界面活性剤、（例えばポリソルベート８０）およびヒスチジンを含み、約５．０から７．０のｐＨを有し、該抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、オーリスタチン（例えばＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体、（例えば抗体１）を含む凍結乾燥製剤を特徴とする。

【0098】

本発明の一実施形態において、凍結乾燥製剤は、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ、例えばＡＤＣ１－ＭＭＡＦ、スクロース、ポリソルベート、例えばポリソルベート８０およびヒスチジンを含み、マンニトールおよび／またはセリンを含まない、または実質的に含まない。本発明の一実施形態において、凍結乾燥製剤は、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ、例えばＡＤＣ１－ＭＭＡＦ、スクロース、ポリソルベート、例えばポリソルベート８０およびヒスチジンを含み、二価の陽イオンを含まない、または実質的に含まない。本発明の別の実施形態において、凍結乾燥製剤はラクトビオン酸を含まない。本発明の別の実施形態において、凍結乾燥製剤は糖酸を含まない。

【0099】

ある例示的態様において、本発明は、約５．０から７．０の範囲のｐＨを有し、１－２０ｍｇのバッファー（例えばヒスチジン）、約３２０－４１０ｍｇの糖（例えばスクロース）、約０．１から０．９ｍｇの界面活性剤（例えばポリソルベート８０）および約５０－１５０ｍｇの抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を含み、該抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、オーリスタチン（例えばＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体、（例えば抗体１）を含む、凍結乾燥製剤を特徴とする。

【0100】

一実施形態において、凍結乾燥製剤は、約３２０－４１０ｍｇ、約３３０－４００ｍｇ、約３４０から３９０ｍｇ、約３５０から３８０ｍｇまたは約３６０から３７０ｍｇおよびこの間の範囲（例えば３５５ｍｇから３７５ｍｇ）の糖（例えばスクロース）を含む。

【0101】

一実施形態において、凍結乾燥製剤は、約０．１－０．９ｍｇの界面活性剤（例えば約０．１－０．８、０．１－０．７、０．０１－０．６、０．０１－０．５５、０．２－０．６、０．３－０．６、０．４－０．６およびこの間の範囲）を含む。

【0102】

一実施形態において、凍結乾燥製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を、約１－１５０ｍｇ、約１０－１５０ｍｇ、約２０－１５０ｍｇ、約３０－１５０ｍｇ、約４０－１５０ｍｇ、約５０－１５０ｍｇ、約６０－１５０ｍｇ、約７０－１５０ｍｇ、約８０－１５０ｍｇ、約９０－１５０ｍｇ、約１００－１５０ｍｇ、約１０－１４０ｍｇ、約２０－１４０ｍｇ、約３０－１４０ｍｇ、約４０－１４０ｍｇ、約５０－１４０ｍｇ、約６０－１４０ｍｇ、約７０－１４０ｍｇ、約８０－１４０ｍｇ、約９０－１４０ｍｇ、約１００－１４０ｍｇ、約１０－１３０ｍｇ、約２０－１３０ｍｇ、約３０－１３０ｍｇ、約４０－１３０ｍｇ、約５０－１３０ｍｇ、約６０－１３０ｍｇ、約７０－１３０ｍｇ、約８０－１３０ｍｇ、約９０－１３０ｍｇ、約１００－１３０ｍｇ、約１０－１２０ｍｇ、約２０－１２０ｍｇ、約３０－１２０ｍｇ、約４０－１２０ｍｇ、約５０－１２０ｍｇ、約６０－１２０ｍｇ、約７０－１２０ｍｇ、約８０－１２０ｍｇ、約９０－１２０ｍｇ、約１００－１２０ｍｇ、約１０－１１０ｍｇ、約２０－１１０ｍｇ、約３０－１１０ｍｇ、約４０－１１０ｍｇ、約５０－１１０ｍｇ、約６０－１１０ｍｇ、約７０－１１０ｍｇ、約８０－１１０ｍｇ、約９０－１１０ｍｇおよび約１００－１１０ｍｇならびにこの間の範囲の量で含む。

【0103】

一実施形態において、凍結乾燥製剤は、１－２０ｍｇ／ｍｌのヒスチジンを含み、または２－１８ｍｇ、３－１７ｍｇ、４－１６ｍｇ、５－１５ｍｇ、６－１４ｍｇもしくは７－１３ｍｇおよびこれらの間の範囲のヒスチジンを含む。

【0104】

凍結乾燥は、当分野において公知の方法に従って実施することができる。例えば、多くの異なるフリーズドライヤー、例えば、ＨＵＬＬ５０（Ｈｕｌｌ、ＵＳＡ）またはＧＴ２０（Ｌｅｙｂｏｌｄ－Ｈｅｒａｅｕｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）フリーズドライヤーがこの目的のために利用可能である。フリーズドライは、製剤を凍結して、この後凍結内容物由来の氷を、一次乾燥に適切な温度において昇華することによって達成される。この条件下で、生成物温度は製剤の共晶融点または崩壊温度未満である。通常、一次乾燥のための棚温度は、通常約５０から２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適切な圧力において、約－３０から２５℃の範囲である（生成物が一次乾燥の間凍結されたままであるという条件で）。製剤、サイズおよび試料を保持する容器の型（例えば、ガラスバイアル）ならびに液体の容積が、主に乾燥に必要な時間を決定し、この時間は、数時間から数日（例えば４０－６０時間）の範囲であり得る。場合により、二次乾燥段階もまた、生成物中の所望の残留水分レベルに依存して実施してもよい。二次乾燥が実施される温度は、主に用いる容器の型およびサイズならびにタンパク質の型に依存して、約０－４０℃の範囲である。例えば、凍結乾燥の水分除去段階全体を通して棚温度は、約１５－３０℃（例えば、約２０℃）であってよい。適切な凍結乾燥ケーキを生成する、二次乾燥に必要な時間および圧力は、例えば、温度および他のパラメーターに依存するものである。二次乾燥時間は、生成物中の所望の残留水分レベルに依存し、通常少なくとも約５時間（例えば、１０－１５時間）かかる。圧力は、一次乾燥ステップの際に用いられた圧力と同じであってよい。フリーズドライ条件は、製剤およびバイアルのサイズに依存して変動してよい。

【0105】

患者に投与する前に、凍結乾燥製剤は、再構成された製剤中の抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体の濃度が、例えば治療に必要な濃度、例えば、少なくとも約１－１５０ｍｇ／ｍｌであるように、医薬として許容される希釈剤で再構成される。再構成は、概して、完全な水和を確実にするために約２５℃の温度において行うが、所望に応じて他の温度を用いてもよい。再構成に必要な時間は、例えば、希釈剤の型、賦形剤およびタンパク質の量に依存するものである。例示的希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌食塩水（例えば、０．９％の食塩水）、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。一実施形態において、凍結乾燥物は、注射のために滅菌水に溶解され、滅菌生理食塩水で希釈される。希釈剤は、場合により、防腐剤を含有する。例示的防腐剤は上に記載されており、芳香族アルコール、例えばベンジルアルコールまたはフェノールアルコールが好ましい防腐剤である。用いる防腐剤の量は、タンパク質との適合性および防腐剤の有効性試験に対して、さまざまな防腐剤濃度を評価することによって決定される。例えば、防腐剤が芳香族アルコール（例えば、ベンジルアルコール）である場合、防腐剤は、約０．１－２．０％からの、約０．５－１．５％からのまたは約１．０－１．２％の量で存在してよい。

【0106】

ＩＩＩ．本発明の製剤に使用するための抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体
本明細書に記載の製剤および方法は、ＥＧＦＲに特異的に結合する抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の使用を包含する。本発明の製剤に使用される抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体は、治療薬と複合体化され、これによって、治療薬が、ＥＧＦＲ発現細胞に対して細胞障害性、細胞増殖抑制または免疫抑制の効果を発揮する。

【0107】

特に、本発明は、腫瘍原性、過剰増殖性または異常な細胞中に見出されるＥＧＦＲエピトープを認識する抗体またはこれらの抗原結合部分を含み、該エピトープが正常または野生型細胞において検出不能である、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を含む製剤に関する。好ましくは、抗体またはこれらの抗原結合部分は、過剰発現が不在であり、正常なＥＧＦＲの翻訳後修飾が存在する、正常または野生型ＥＧＦＲエピトープを含有する正常細胞または野生型細胞と結合しないか、またはこれらを認識しない。

【0108】

本製剤および方法に従った使用に適切な抗ＥＧＦＲ抗体は、通常モノクローナルであり、例えば、キメラ（例えば、ヒト定常領域およびマウス可変領域を有する）、ヒト化またはヒト抗体、一本鎖抗体などを含んでよい。免疫グロブリン分子は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または免疫グロブリン分子のサブクラスであってよい。例えば、本発明の抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体に使用される抗ＥＧＦＲ抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体１もしくは２またはこれらの抗原結合部分であってよい。抗体１および２の配列および特徴は、下記のとおりである（また、ＷＯ２０１１／０４１３１９およびＵＳ２０１１００７６２３２を参照されたい（例えば、図５５の抗体配列を参照されたい。）、これらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。）。抗体１および２は、それぞれ、上皮由来の全ての癌の５０％に存在する、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の過剰発現形態を標的化する。

【0109】

本発明の特定の実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体に使用される抗ＥＧＦＲ抗体は、増幅された野生型ＥＧＦＲおよびｄｅ２－７ＥＧＦＲを認識する。抗ＥＧＦＲ抗体（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ）は、ｄｅ２－７ＥＧＦＲおよび増幅されたＥＧＦＲを認識するが、正常、野生型のＥＧＦＲまたはｄｅ２－７ＥＧＦＲの特徴である特有の接合部ペプチドを認識しないという点で、有用な特異性を実証している。これらの結合特徴を有する抗体の例は、抗体１、抗体２および抗体３である。抗体１および抗体２の配列を下記に提供する。

【0110】

抗体２は、モノクローナルネズミ抗ＥＧＦＲ抗体である。抗体２のＶＨ鎖は、下記の核酸配列（配列番号：１）およびシグナルペプチドを有するアミノ酸配列（配列番号２）を含む（配列番号２において、シグナルペプチドに下線を引いてある。）。

【0111】

【化1】

【0112】

【化2】

【0113】

抗体２のＶＬ鎖は、下記の核酸配列（配列番号３）およびアミノ酸配列（配列番号４）を含む（配列番号４において、シグナルペプチドに下線を引いてある。）。

【0114】

【化3】

【0115】

【化4】

【0116】

シグナルペプチドを含まないＶＨ鎖配列、配列番号２（配列番号１１）の相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（それぞれ、配列番号５、６および７）を、下記に下線により示す。ＶＨ鎖配列（配列番号１１）の鍵となる残基は２４、３７、４８、６７および７８である。

【0117】

【化5】

【0118】

シグナルペプチドを含まないＶＬ鎖配列、配列番号４（配列番号１２）の相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（それぞれ、配列番号８、９および１０）を、下記に下線により示す。ＶＨ鎖配列（配列番号１２）の鍵となる残基は３６、４６、５７および７１である。

【0119】

【化6】

【0120】

抗体３は、抗体２の軽鎖および重鎖の可変ドメインならびにヒト定常領域を含む、キメラ抗体である。

【0121】

本発明の一実施形態において、本発明の製剤および方法に使用される抗ＥＧＦＲ抗体は、抗体１である。上記のように、抗体１は、抗体２のＣＤＲを含むヒト化抗ＥＧＦＲ抗体である。抗体１の重鎖の可変（ＶＨ）領域および定常（ＣＨ）領域は、それぞれ、下記の配列番号１３および１４のように示される。ＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（それぞれ、配列番号：１５、１６および１７）は、下線により示される。

【0122】

【化7】

【0123】

【化8】

【0124】

抗体１の軽鎖の可変（ＶＬ）領域および定常（ＣＬ）領域は、それぞれ、下記の配列番号１８および１９ように示される。ＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２０、２１および２２）は、下線により示される。

【0125】

【化9】

【0126】

【化10】

【0127】

一実施形態において、本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体、スクロース、ポリソルベート８０およびヒスチジンを含み、約５－７のｐＨを有し、該抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体が、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含み、前記抗体が、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域および配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、凍結乾燥製剤を特徴とする。

【0128】

一実施形態において、本発明は、約５－７のｐＨを有し、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４で示されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域および配列番号１８で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域および配列番号１９で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む抗体またはこれらの抗原結合部分を含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ、ヒスチジン、糖、例えばスクロースならびにポリソルベート、例えばポリソルベート８０を含む、凍結乾燥製剤を提供する。

【0129】

一実施形態において、本発明は、配列番号１８のアミノ酸配列で記載されるＣＤＲを含む軽鎖可変領域、配列番号１３のアミノ酸配列で記載されるＣＤＲを含む重鎖可変領域を有する、（オーリスタチン、例えばＭＭＡＦと複合体化された）抗ＥＧＦＲ抗体を含むＡＤＣを含む製剤を提供する。

【0130】

抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を調製するために使用可能な抗ＥＧＦＲ抗体は、当分野において公知の任意の適切な方法により作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマの使用、組換え法およびファージディスプレイ技術またはこれらの組み合わせを含む広範囲の技術を使用して調製することができる。ハイブリドーマ技術は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．，１９８８）；およびＨａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，ｐｐ．５６３－６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）において大まかに考察されている。抗ＣＤ７０抗体の調製に使用できるファージディスプレイ法の例としては、例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：９５２－９５８；Ｐｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｅ １８７：９－１８；Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１－２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；および米国特許第５，６９８，４２６号明細書；５，２２３，４０９号明細書；第５，４０３，４８４号明細書；第５，５８０，７１７号明細書；第５，４２７，９０８号明細書；第５，７５０，７５３号明細書；第５，８２１，０４７号明細書；第５，５７１，６９８号明細書；第５，４２７，９０８号明細書；第５，５１６，６３７号明細書；第５，７８０，２２５号明細書；第５，６５８，７２７号明細書；第５，７３３，７４３号明細書および第５，９６９，１０８号明細書に開示された技術が挙げられる（これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。）。

【0131】

特異的エピトープを認識する抗体断片の作製のための技術もまた、当分野において一般的に知られている。例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２断片は、酵素、例えば、パパイン（Ｆａｂ断片の作製用）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）_２断片の作製用）を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断により作製することができる。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含有する。Ｆａｂ，Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）_２断片を組換え的に作製するための技術は、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４－８６９；およびＳａｗａｉ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＡＪＲＩ ３４：２６－３４；およびＢｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３に開示される方法を使用して、採用可能である（これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。）。

【0132】

一本鎖Ｆｖおよび抗体を作製するために使用可能な技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号明細書および第５，２５８，４９８号明細書；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６－８８；Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：７９９５－７９９９；およびＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８－１０４０に記載の技術が挙げられる。

【0133】

抗体は、当分野において公知の任意の多数の技術により作製することができる。例えば、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターを、標準的技術により宿主細胞に形質移入する、宿主細胞からの発現。「形質移入」のさまざまな形態は、外来ＤＮＡを、原核宿主細胞または真核宿主細胞に導入するために一般的に使用される広範囲の技術、例えば、エレクトロポレーション、カルシウム－ホスフェート沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラン形質移入などを包含することが意図される。

【0134】

本発明の組換え抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載のｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ（１９８２年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－６２１に記載のＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に使用することを含む。）およびＤＧ４４またはＤＵＸＢ１１細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｓｏｍ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１２：５５５；Ｈａｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１１：６８７－７０６；Ｌａｕ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．４：１４６９－１４７５）、ＮＳ０骨髄腫細胞、サル腎臓系（例えば、ＣＶＩおよびＣＯＳ、例えばＣＯＳ７細胞）、ＳＰ２細胞、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞、例えばＨＥＫ－２９３細胞、チャイニーズハムスター線維芽細胞（例えば、Ｒ１６１０）、ヒト子宮頸がん（例えば、ＨＥＬＡ）、ネズミ線維芽細胞（例えば、ＢＡＬＢｃ／３Ｔ３）、ネズミ骨髄腫（Ｐ３ｘ６３－Ａｇ３．６５３；ＮＳ０；ＳＰ２／Ｏ）、ハムスター腎臓系（例えば、例えば、ＨＡＫ）、ネズミＬ細胞（例えば、Ｌ－９２９）、ヒトリンパ球（例えば、ＲＡＪＩ）、ヒト腎臓（例えば、２９３および２９３Ｔ）が挙げられる。宿主細胞系は、通常市販品として利用可能（例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、Ｋｙ．；Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍｄ．などから）またはＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．）から入手可能である。

【0135】

抗体をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合、抗体は、宿主細胞を、宿主細胞中における抗体の発現または宿主細胞が成長する培養培地への分泌に十分な期間培養することによって作製される。抗体は、標準的タンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。

【0136】

抗体の組換え発現のための例示的系において、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、カルシウム－ホスフェート介在性形質移入によりｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞に導入される。組換え発現ベクター内で、抗体の重鎖および軽鎖ｃＤＮＡが、それぞれ、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター制御要素に動作可能に連結され、ｃＤＮＡの高レベルの転写が駆動される。組換え発現ベクターはまた、ＤＨＦＲをコードするｃＤＮＡを担持し、ＤＨＦＲは、メトトレキセート選択／増幅を使用して、ベクターを形質移入されているＣＨＯ細胞の選択を可能にする。選択された組換え宿主細胞を培養して、抗体の重鎖および軽鎖を発現させ、無傷抗体が培養培地から回収される。標準的分子生物学技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞に形質移入し、組み換え体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収する。またさらに、本発明は、本発明の宿主細胞を、適切な培養培地において抗体が合成されるまで培養することによって、抗体を合成する方法を提供する。この方法は、培養培地から抗体を単離するステップをさらに含み得る。

【0137】

本発明に使用される抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体は、得られたＡＤＣが、ＥＧＦＲ発現がん細胞に細胞障害性または細胞増殖抑制効果を発揮するように、細胞障害剤または免疫抑制剤と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む。従って、抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体は、ＥＧＦＲ発現がん細胞に細胞障害性または細胞増殖抑制効果を発揮する。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣはＥＧＦＲ発現細胞内に内在化または蓄積され、ＡＤＣは治療効果（例えば、細胞障害性、細胞増殖抑制または免疫抑制果）を発揮する。

【0138】

抗体と複合体化するための適切な部分の例としては、化学療法薬、プロドラッグ変換酵素、放射性同位体もしくは化合物または毒素が挙げられる。例示的実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分は、オーリスタチン、例えば、ＭＭＡＦまたはＭＭＡＥと複合体化される。がん細胞または活性化された免疫細胞に対して治療効果を発揮する全ての薬剤が、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの誘導体と複合体化するための治療薬として使用できる（例えば、ＷＯ２００４／０１０９５７、「Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ，Ａｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ．Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｒ ａｎ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ」（上記）および米国特許仮出願第６０／４００，４０３号明細書（上記）を参照されたい。）。通常、治療薬は細胞障害性薬である。幾つかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ薬物複合体は、複数の治療薬／複合体、例えば、約１から約２０の治療薬／複合体を含む。

【0139】

好ましい実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分は、オーリスタチン（１以上）と複合体化される。オーリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰ加水分解および／または核および細胞分裂に干渉し、抗がんおよび／または抗真菌活性を有することが示されている。

【0140】

本発明の抗ＥＧＦＲ抗体は、少なくとも１つのオーリスタチンと複合体化され得る。オーリスタチンは、微小管動態およびＧＴＰ加水分解に干渉し、これによって細胞分裂を阻害することによって抗がん活性を保有することが一般に示されている、ドラスタチン類似体の群を表す。例えば、オーリスタチンＥ（米国特許第５，６３５，４８３号明細書に記載、参照により本明細書に組み込まれる。）は、海洋天然物のドラスタチン１０の合成類似体であり、チューブリンにおいて抗がん薬のビンクリスチンと同じ部位に結合することによってチューブリン重合を阻害する化合物である（Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔ，Ｐｒｏｇ．Ｃｈｅｍ．Ｏｒｇ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ，７０：１－７９（１９９７））。ドラスタチン１０、オーリスタチンＰＥおよびオーリスタチンＥは４個のアミノ酸を有する線形ペプチドであり、このうちの３個は、ドラスタチンクラスの化合物に特有である。有糸分裂阻害剤のオーリスタチンサブクラスの例示的実施形態としては、限定するものではないが、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤまたはオーリスタチンＤ誘導体）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥまたはオーリスタチンＥ誘導体）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦまたはオーリスタチンＦ誘導体）、オーリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）、オーリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、オーリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）および５－ベンゾイル吉草酸－ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）が挙げられる。オーリスタチン誘導体の合成および構造は、米国特許出願公開第２００３－００８３２６３号明細書、第２００５－０２３８６４９号明細書および第２００５－０００９７５１号明細書；国際特許公開第ＷＯ０４／０１０９５７号パンフレット、国際特許公開第ＷＯ０２／０８８１７２号パンフレットおよび米国特許第６，３２３，３１５号明細書；第６，２３９，１０４号明細書；第６，０３４，０６５号明細書；第５，７８０，５８８号明細書；第５，６６５，８６０号明細書；第５，６６３，１４９号明細書；第５，６３５，４８３号明細書；第５，５９９，９０２号明細書；第５，５５４，７２５号明細書；第５，５３０，０９７号明細書；第５，５２１，２８４号明細書；第５，５０４，１９１号明細書；第５，４１０，０２４号明細書；第５，１３８，０３６号明細書；第５，０７６，９７３号明細書；第４，９８６，９８８号明細書；第４，９７８，７４４号明細書；第４，８７９，２７８号明細書；第４，８１６，４４４号明細書および第４，４８６，４１４号明細書に記載されており、これらはそれぞれ、参照により本明細書に組み込まれる。

【0141】

一実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば抗体１は、リンカー、例えば限定するものではないが、マレイミドカプロイル（ｍｃ－ＭＭＡＦ）により少なくとも１つのＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）と複合体化される。ＭＭＡＦの構造は図２に提供される。抗ＥＧＦＲ抗体ＡＤＣは、２、４、６または８の薬物抗体比（ＤＡＲ）を有することができる。特に、ＡＤＣのＤＡＲは０から８の範囲であり得るが、高負荷、例えば１０も可能である。モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、チューブリンの重合を遮断することによって細胞分裂を阻害する。ＭＭＡＦは、この非荷電対応物のＭＭＡＥと比較して、この細胞障害性活性を弱める荷電Ｃ末端フェニルアラニン残基を有する。この毒性のために、ＭＭＡＦは、これ自体を薬剤として使用することはできないが、ＭＭＡＦをがん細胞に向かわせるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）と連結することができる。一実施形態において、リンカーと抗ＥＧＦＲ抗体とは、細胞外液中で安定であるが、複合体がひとたび腫瘍細胞に進入すると、カテプシンにより切断され、抗有糸分裂機序が活性化される。

【0142】

一実施形態において、本発明の抗ＥＧＦＲ抗体は、少なくとも１つのＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ）と複合体化される。ＭＭＡＥの構造は図１に提供され、これは、ＭＭＡＥを含む例示的ＡＤＣである。モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ、ベドチン）は、チューブリンの重合を遮断することによって細胞分裂を阻害する。この非常に強い毒性のため、ＭＭＡＥもまたこれ自体を薬物として使用することはできない。近年の癌療法の開発において、ＭＭＡＥはがん細胞において特異的マーカー発現を認識するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）に連結され、ＭＭＡＥをがん細胞に向かわせる。一実施形態において、ＭＭＡＥと抗ＥＧＦＲ抗体とを連結するリンカーは、細胞外液（即ち、細胞の外側の媒体または環境）中で安定であるが、ひとたびＡＤＣが特異的がん細胞抗原と結合し、がん細胞に進入するとカテプシンにより切断され、毒性ＭＭＡＥを放出し、強力な抗有糸分裂機序を活性化する。

【0143】

一実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分は、ＭＭＡＦであるオーリスタチンと複合体化される。一実施形態において、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣはＡＤＣ１－ＭＭＡＦである。ＡＤＣ１－ＭＭＡＦは、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）の１以上の分子と共有結合的に連結された抗体１（上記および配列番号１３から２２）（構造は図２を参照されたい。）を含む。ＡＤＣ１－ＭＭＡＦを作製するために、抗体１の鎖間ジスルフィド結合が、スルフヒドリル基に還元される。ＭＭＡＦはその後、これらのスルフヒドリル基によって抗体と結合される。ＡＤＣ１－ＭＭＡＦは、図２に示すように、非切断性リンカー、即ち、非切断性マレイミドカプロイル（ｍｃ）連結を使用して作製される。

【0144】

特定の一実施形態において、本発明の製剤は、検出可能または機能性の標識により標識される抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む。検出可能な標識としては、限定するものではないが、放射性標識、例えば、同位元素の^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３３Ｓ、^３４Ｓ、^３５Ｓ、^３６Ｓ、^３６Ｃ１、^５１Ｃｒ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^９０Ｙ、^１２１Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^２１１Ａｔ、^１９８Ａｕ、^６７Ｃｕ、^２２５Ａｃ、^２１３Ｂｉ、^９９Ｔｃおよび^１８６Ｒｅが挙げられ、これらは、抗体イメージングの分野において公知の従来の化学を使用して、本発明の抗体に結合することができる。標識としては、蛍光標識およびＭＲＩ－ＣＴ画像の分野において慣例的に使用される標識がさらに挙げられる。これらは酵素標識、例えば、ホースラッディシュペルオキシダーゼもまた含む。標識は、化学部分、例えばビオチンもさらに含み、ビオチンは、特異的な同種の検出可能部分、例えば、標識されたアビジンとの結合により検出することができる。

【0145】

機能性標識は、腫瘍の部位を標的化して、腫瘍組織の破壊を引き起こすようにデザインされた物質もまた含む。このような機能性標識としては、細胞障害性薬、例えば、５－フルオロウラシルまたはリシンならびに酵素、例えば細菌性カルボキシペプチターゼまたはニトロレダクターゼが挙げられ、これらは、腫瘍部位においてプロドラッグを活性薬剤に変換することができる。

【0146】

当業者には理解されるであろうように、上記の薬剤ならびに他の適切な薬剤は、本発明において有用な抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを作製するための任意の適切な様式で、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば抗体１と複合体化、または結合させることができる。例えば、限定するものではないが、本発明のさまざまな実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体および薬剤は、リンカー、スペーサーおよび／または伸長体（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）化合物を使用して共有結合的に結合および／または複合体化することができ、本発明のさまざまな実施形態において、これらは切断性または非切断性であり、標的細胞により内在化される治療薬をもたらす。

【0147】

一実施形態において、抗体１は、非切断性マレイミドカプロイル連結（抗体１－ｍｃ－ＭＭＡＦ）を使用して、ＭＭＡＦと複合体化される。

【0148】

治療薬とタンパク質、特に抗体とを複合体化する技術は周知である（例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，」Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２ｎｄ ｅｄ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ，」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８５）；およびＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９－５８。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ８９／１２６２４も参照されたい。）。

【0149】

一実施形態において、ＡＤＣは、細胞障害性薬物と抗体との間にリンカー領域を含む。例えば、このようなリンカー、スペーサーおよび／または伸長体（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）化合物としては、限定するものではないが、下記のアミノ安息香酸スペーサー（例えば、限定するものではないが、米国特許第７，０９１，１８６号明細書および第７，５５３，８１６号明細書を参照されたい、これらはそれぞれ、参照によりこの全体が本明細書に組み込まれる。）；マレイミドカプロイル；ｐ－アミノベンジルカルバモイル（ＰＡＢ）；リソソーム酵素切断性リンカー（例えば、限定するものではないが、米国特許第６，２１４，３４５号明細書を参照されたい、この全体が参照により本明細書に組み込まれる。）；マレイミドカプロイル－ポリエチレン２０グリコール（ＭＣ（ＰＥＧ）６－ＯＨ）；Ｎ－メチル－バリンシトルリン；Ｎ－スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）（例えば、限定するものではないが、Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ ｅｔ ａｌ．（１９７９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０１，３９５－３９９を参照されたい、この全体が参照により本明細書に組み込まれる。）；Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）（例えば、限定するものではないが、米国特許第４，５６３，３０４号明細書参照されたい、この全体が参照により本明細書に組み込まれる。）；Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）；バリン－シトルリンならびに他のリンカー、スペーサーおよび／または伸長体（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）化合物（例えば、限定するものではないが、米国特許第７，０９０，８４３号明細書、第７，２２３，８３７号明細書および第７，６５９，２４１号明細書ならびに米国特許公開第２００４／００１８１９４号明細書、第２００４／０１２１９４０号明細書、第２００６／０１１６４２２号明細書、第２００７／０２５８９８７号明細書、第２００８／０２１３２８９号明細書、第２００８／０２４１１２８号明細書、第２００８／０３１１１３６号明細書、第２００８／０３１７７４７号明細書および第２００９／００１０９４５号明細書を参照されたい、これらはそれぞれ、この全体が参照により本明細書に組み込まれる。）が挙げられる。一般的に言えば、上記の薬剤および他の薬剤と本発明の特異的結合メンバー、特に抗体およびこれらの断片とを結合および／または複合体化するための技術は、当分野において公知である。例えば、限定するものではないが、Ａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ （２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３－５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｅｗ」，Ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３－１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）およびＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９－５８（１９８２）を参照されたく、これらはそれぞれ、この全体を参照により本明細書に組み込まれる。

【0150】

多数の異なる反応が、薬物と抗体との共有結合に利用可能である。これは、多くの場合、リジンのアミノ基、グルタミン酸およびアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基および芳香族アミノ酸のさまざまな部分を含む、抗体分子のアミノ酸の残基の反応により達成される。共有結合の最も一般的に使用される非特異的方法の１つは、化合物のカルボキシ（またはアミノ）基と抗体のアミノ（またはカルボキシ）基とを連結するためのカルボジイミド反応である。さらに、二官能性薬剤、例えば、ジアルデヒドまたはイミドエステルは、化合物のアミノ基と抗体分子のアミノ基とを連結するために使用されている。さらに、シッフ塩基反応が、薬物と抗体との結合に利用可能である。この方法は、グリコールまたはヒドロキシ基を含有する薬物の過ヨウ素酸酸化を伴い、従って、その後抗体分子と反応するアルデヒドを形成する。結合は、抗体分子のアミノ基とのシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートは、薬物を抗体に共有結合させるカップリング剤として使用することができる。他の技術は当業者に公知であり、本発明の範囲内である。このような技術の限定されない例は、例えば、米国特許第５，６６５，３５８号明細書；第５，６４３，５７３号明細書および第５，５５６，６２３号明細書に記載されており、これらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0151】

ある実施形態において、リンカーの前駆体である中間体は、適切な条件下で薬物と反応される。ある実施形態において、反応基が薬物および／または中間体に対して使用される。薬物および中間体、または誘導体化された薬物との間の反応の生成物は、その後、適切な条件下で抗ＥＧＦＲ抗体と反応される。

【0152】

複合体化方法の他の例は、米国特許第７，８３７，９８０号明細書（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、Ｃａｒｔｅｒ ａｎｄ Ｓｅｎｔｅｒ（２００８年）Ｃａｎｃｅｒ Ｊ，１４（３）：１５４および米国出願公開第２００４－０１５７７８２Ａ１号明細書および第２００５－０２３８６４９号明細書および国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ０４／０３８３９２号に記載されている。

【0153】

ある実施形態において、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣは、所望の薬物抗体比（ＤＡＲ）を有するＡＤＣを得るために精製することができる。本発明の一実施形態において、製剤は、所望の平均薬物抗体比（ＤＡＲ）、例えば、約３の平均ＤＡＲを有する抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ混合物を含有する。本発明の一実施形態において、製剤は、所望のＤＡＲ比、例えば、約２－４のＤＡＲを有する抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含むＡＤＣ混合物を含む。

【0154】

一実施形態において、製剤は、存在するＡＤＣの７０％が４以下の薬物負荷種を有し、ＡＤＣが、抗ＥＧＦＲ抗体およびオーリスタチンを含むＡＤＣ混合物を含有する。または、存在するＡＤＣの７５％が４以下の薬物負荷種を有し、存在するＡＤＣの８０％が４以下の薬物負荷種を有し、存在するＡＤＣの８５％が４以下の薬物負荷種を有し、存在するＡＤＣの９０％が４以下の薬物負荷種を有し、または、存在するＡＤＣの９５％が４以下の薬物負荷種を有する。

【0155】

本発明の一実施形態において、製剤は、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含み、前記ＡＤＣ１－ＭＭＡＦは、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域、スクロース、ヒスチジンおよびポリソルベート８０を含み、製剤は、約３の平均ＤＡＲを有するＡＤＣ混合物または約２－４のＤＡＲを有するＡＤＣ混合物を含む。本発明のさらなる実施形態において、製剤は凍結乾燥される。またさらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、マレイミドカプロイルリンカーによってＭＭＡＦに連結される。さらにさらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分は、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0156】

一実施形態において、製剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）と複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分を含む抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含み、前記ＡＤＣ１－ＭＭＡＥは、配列番号１５、１６および１７で示されるアミノ酸配列を含む相補性ドメイン領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２０、２１および２２で示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域、スクロース、ヒスチジンおよびポリソルベート８０を含み、製剤は、約３の平均ＤＡＲを有するＡＤＣ混合物または約２－４のＤＡＲを有するＡＤＣ混合物を含む。本発明のさらなる実施形態において、製剤は凍結乾燥される。さらにさらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体またはこれらの抗原結合部分は、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0157】

ＡＤＣの精製は、特定のＤＡＲを有するＡＤＣが回収されるような方法で達成され得る。例えば、ＨＩＣ樹脂は、高薬物負荷ＡＤＣを、最適な薬物抗体比（ＤＡＲ）、例えば４以下のＤＡＲを有するＡＤＣから分離するために使用することができる。一実施形態において、疎水性樹脂が、望ましくないＡＤＣ、即ち高薬物負荷ＡＤＣが樹脂に結合して、混合物から選択的に除去できるように、ＡＤＣ混合物に加えられる。ある実施形態において、ＡＤＣの分離は、ＡＤＣ混合物（例えば、４以下のＡＤＣ薬物負荷種および６以上のＡＤＣ薬物負荷種を含む混合物）を、疎水性樹脂と接触させ、樹脂の量が、ＡＤＣ混合物から除去されるべき薬物負荷種を結合させるために十分であることによって達成することができる。樹脂およびＡＤＣ混合物は、除去されるＡＤＣ種（例えば、６以上の薬物負荷種）が樹脂と結合し、ＡＤＣ混合物中の他のＡＤＣ種から分離され得るように、一緒に混合される。この方法に使用される樹脂の量は、除去される種と樹脂との間の重量比に基づき、使用される樹脂の量は、所望の薬物負荷種の有意な結合を可能にするものではない。従って、平均ＤＡＲ５．５から４未満に低下させるための方法を使用可能である。さらに、精製方法は、任意の所望の範囲の薬物負荷種、例えば、４以下の薬物負荷種、３以下の薬物負荷種、２以下の薬物負荷種、１以下の薬物負荷種を有するＡＤＣを単離するために使用することができる。

【0158】

特定の種の分子は、種と疎水性樹脂との間の疎水性相互作用に基づき表面に結合する。一実施形態において、本発明の方法は、疎水性樹脂とＡＤＣの混合物との混合に頼る精製過程を指し、混合物に加える樹脂の量は、どの種（例えば、６以上のＤＡＲを有するＡＤＣ）が結合するかを決定する。発現系（例えば、哺乳動物発現系）から抗体を作製および精製後、抗体は還元され、複合体化反応を介して薬物に結合される。得られたＡＤＣ混合物は、多くの場合、一定範囲のＤＡＲ、例えば１から８を有するＡＤＣを含有する。一実施形態において、ＡＤＣ混合物は、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含む。本発明の方法に従って、ＡＤＣ混合物は、４以下の薬物負荷種を有するＡＤＣが選択され、より高い薬物負荷を有するＡＤＣ（例えば、６以上の薬物負荷種を有するＡＤＣ）から分離されるように、例えば、限定するものではないが、バッチ処理などの処理を使用して精製することができる。とりわけ、本明細書に記載の精製方法は、任意の所望の範囲のＤＡＲ、例えば４以下のＤＡＲ、３以下のＤＡＲ、２以下のＤＡＲを有するＡＤＣを単離するために使用することができる。

【0159】

従って、一実施形態において、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物を疎水性樹脂と接触させ、樹脂混合物を形成することができ、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、６以上の薬物負荷種と樹脂とを結合させるために十分であるが、４以下の薬物負荷種は有意に結合できない；また、ＡＤＣを含む組生物が得られるように、疎水性樹脂をＡＤＣ混合物から除去することができ、組成物は１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣはオーリスタチンと複合化された抗体を含む。別個の実施形態において、該方法は、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物と、疎水性樹脂とを接触させ、樹脂混合物を形成させ、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量が６以上の薬物負荷種を樹脂に結合させるために十分であるが、４以下の薬物負荷種を有意に結合させることができないステップ、および疎水性樹脂を、ＡＤＣを含む組成物が得られるように、ＡＤＣ混合物から除去して、該組成物が１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、該ＡＤＣがオーリスタチンと複合体化された抗体を含み、該疎水性樹脂の重量がＡＤＣ混合物中の６以上の薬物負荷種の重量の３から１２倍であるステップを含むことができる。

【0160】

ＡＤＣ分離方法は、バッチ精製方法を使用して実施することができる。バッチ精製処理は、概して、ＡＤＣ混合物を、容器中の疎水性樹脂に加えるステップ、混合するステップ、およびその後、樹脂を上清から分離するステップを含む。例えば、バッチ精製の文脈において、疎水性樹脂は、所望の平衡バッファー中で調製され得るか、またはこれに平衡化され得る。疎水性樹脂のスラリーは、このようにして得ることができる。その後、ＡＤＣ混合物をスラリーと接触させ、疎水性樹脂により分離されるべきＡＤＣの特定の種を吸着させることができる。疎水性樹脂材料と結合しない所望のＡＤＣを含む溶液を、その後、例えばろ過によりスラリーから分離する、またはスラリーを沈殿させて、上清から除去することができる。得られたスラリーは、１以上の洗浄ステップに供することができる。結合したＡＤＣを溶出するために、塩濃度を低下することができる。一実施形態において、本発明に使用される工程は、５０ｇ以下の疎水性樹脂を含む。

【0161】

従って、バッチ方法を使用して、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物と疎水性樹脂とを接触させ、樹脂混合物を形成することができ、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、６以上の薬物負荷種を樹脂に結合させるために十分であるが、４以下の薬物負荷種を有意に結合できず、疎水性樹脂は、ＡＤＣを含む組成物が得られるようにＡＤＣ混合物から除去することができ、該組成物は１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、該ＡＤＣがオーリスタチンと複合体化された抗体を含む。別個の実施形態において、バッチ方法を使用して、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物と疎水性樹脂とを接触させ、樹脂混合物を形成し、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、６以上の薬物負荷種を樹脂に結合させるために十分であるが、４以下の薬物負荷種を有意に結合できず、疎水性樹脂は、ＡＤＣを含む組成物が得られるようにＡＤＣ混合物から除去することができ、該組成物は１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、該ＡＤＣはオーリスタチンと複合体化された抗体を含み、疎水性樹脂の重量は、ＡＤＣ混合物中の６以上の薬物負荷種の重量の３から１２倍である。

【0162】

または、精製は、樹脂を容器に充填し、ＡＤＣ混合物を、分離されるべき特定種のＡＤＣが除去されるまで疎水性樹脂床を通過させる、循環処理を使用して実施することができる。その後、（所望のＡＤＣ種を含有する）上清を、容器からポンプで汲み出し、樹脂床を洗浄ステップに供することができる。

【0163】

また、循環処理を使用してもまた、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物と疎水性樹脂とを接触させ、樹脂混合物を形成することができ、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、６以上の薬物負荷種を樹脂に結合させるために十分であるが、４以下の薬物負荷種を有意に結合できず；疎水性樹脂は、ＡＤＣを含む組成物が得られるようにＡＤＣ混合物から除去することができ、該組成物は１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、該ＡＤＣはオーリスタチンと複合体化された抗体を含む。別個の実施形態において、循環処理を使用して、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物と疎水性樹脂とを接触させ、樹脂混合物を形成し、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、６以上の薬物負荷種を樹脂に結合させるために十分であるが、４以下の薬物負荷種を有意に結合できず、疎水性樹脂は、ＡＤＣを含む組成物が得られるようにＡＤＣ混合物から除去することができ、該組成物は１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、該ＡＤＣはオーリスタチンと複合体化された抗体を含み、疎水性樹脂の重量は、ＡＤＣ混合物中の６以上の薬物負荷種の重量の３から１２倍である。

【0164】

または、精製は、樹脂を容器、例えばカラムに充填し、ＡＤＣ混合物を、所望のＡＤＣ種が樹脂と実質的に結合しないように、充填された樹脂を通過させ、樹脂を通して流して、望ましくないＡＤＣ種が樹脂に結合される、フロースルー処理を使用して実施することができる。フロースルー処理は、シングルパス様式（対象となるＡＤＣ種が、容器の樹脂の単回通過の結果として得られる。）またはマルチパス様式（対象となるＡＤＣ種が、容器の樹脂の複数回通過の結果として得られる。）で実施することができる。フロースルー処理は、選択された樹脂の重量が望ましくないＡＤＣ集団と結合して、所望のＡＤＣ（例えばＤＡＲ２－４）が樹脂の間を流れ、１または複数回の通過の後でフロースルーにおいて回収されるように実施される。

【0165】

本発明の一実施形態において、フロースルー処理を使用して、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物と疎水性樹脂とを接触させることができ、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、６以上の薬物負荷種を樹脂に結合させるために十分であるが、４以下の薬物負荷種を有意に結合できず、４以下の薬物負荷種を樹脂の間を流し、その後、所望のＡＤＣ（例えばＤＡＲ２－４）を含む組成物が得られるように、１または複数回通過後回収し、該組成物は１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、ＡＤＣはオーリスタチンと複合体化された抗体を含む。別個の実施形態において、フロースルー処理を使用して、４以下の薬物負荷種および６以上の薬物負荷種を含むＡＤＣ混合物と疎水性樹脂とを、ＡＤＣ混合物を樹脂の間に通すことによって接触させ、ＡＤＣ混合物と接触させる疎水性樹脂の量は、６以上の薬物負荷種を樹脂に結合させるために十分であるが、４以下の薬物負荷種を有意に結合できず、４以下の薬物負荷種を樹脂の間に通し、その後、ＡＤＣを含む組成物が得られるように回収し、該組成物は１５％未満の６以上の薬物負荷種を含み、該ＡＤＣはオーリスタチンと複合体化された抗体を含み、疎水性樹脂の重量は、ＡＤＣ混合物中の６以上の薬物負荷種の重量の３から１２倍である。

【0166】

精製方法は、ＡＤＣの高薬物負荷種と低薬物負荷種とを分離するための疎水性樹脂の使用に基づくことができる。疎水性樹脂は、ＡＤＣの疎水特性と相互作用する疎水性基を含む。ＡＤＣの疎水性基は、疎水性樹脂内の疎水性基と相互作用する。タンパク質が疎水性であるほど、疎水性樹脂との相互作用は強くなると思われる。

【0167】

疎水性樹脂は普通、疎水性リガンド（例えば、アルキルまたはアリール基）が結合する、基材マトリックを含む（例えば、架橋されたアガロースまたは合成コポリマー材料）。多くの疎水性樹脂は市販されている。例としては、限定するものではないが、低置換度または高置換度のＰｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡＢ，Ｓｗｅｄｅｎ）；Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡＢ，Ｓｗｅｄｅｎ）；Ｏｃｔｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡＢ，Ｓｗｅｄｅｎ）；Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（商標）ＥＭＤ ＰｒｏｐｙｌまたはＦｒａｃｔｏｇｅｌ（商標）ＥＭＤ Ｐｈｅｎｙｌカラム（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；Ｍａｃｒｏ－Ｐｒｅｐ（商標）ＭｅｔｈｙｌまたはＭａｃｒｏ－Ｐｒｅｐ（商標）ｔ－Ｂｕｔｙｌ Ｓｕｐｐｏｒｔｓ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）；ＷＰ ＨＩ－Ｐｒｏｐｙｌ（Ｃ_３）（商標）（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）；およびＴｏｙｏｐｅａｒｌ（商標）エーテル、ヘキシル、フェニルまたはブチル（ＴｏｓｏＨａａｓ，ＰＡ）が挙げられる。一実施形態において、疎水性樹脂は、ブチル疎水性樹脂である。別の実施形態において、疎水性樹脂はフェニル疎水性樹脂である。別の実施形態において、疎水性樹脂はヘキシル疎水性樹脂、オクチル疎水性樹脂またはデシル疎水性樹脂である。一実施形態において、疎水性樹脂は、ｎ－ブチルリガンド（例えばＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（Ｒ）Ｂｕｔｙｌ－６００Ｍ）を有するメタクリル系ポリマーである。

【0168】

別個の低および高ＤＡＲ ＡＤＣを精製するさらなる方法は、米国特許仮出願第６１／７９２，８３４号明細書および２０１４年３月１４日出願の米国特許出願第１４／２１０，６０２号明細書に開示されており、これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0169】

ＩＶ．製剤の使用
本方法に従って、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体または抗ＥＧＦＲ－ＡＤＣによる治療を必要とする障害を有する（または有するリスクのある）対象に投与される。抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤は、抗ＥＧＦＲ抗体による治療を必要とする障害の予防または治療において、単独または他の組成物の併用とのいずれかで投与することができる。

【0170】

本明細書において使用する場合、「ＥＧＦＲ活性が有害である障害」という用語は、障害を患う対象においてＥＧＦＲの存在が、障害の病理生態学の原因であるか、もしくは障害の悪化に寄与する要因のいずれかであることが示されている、またはこのように疑われる、疾患および他の障害を含むことが意図される。従って、ＥＧＦＲ活性が有害である障害は、ＥＧＦＲ活性の阻害が、障害の症状および／または進行を緩和することが期待される障害である。このような障害は、例えば、ＥＧＦＲの活性の増加または障害を患う対象由来の生体試料中に存在するＥＧＦＲの量の増加（例えば、対象の組織試料中、血清、血漿、滑液などのＥＧＦＲ濃度の上昇）により証明することができ、これらは、例えば、抗ＥＧＦＲ抗体を使用して検出可能である。

【0171】

本発明の製剤は、癌の治療に使用することができる。治療可能な癌の例としては、限定するものではないが、、神経膠芽腫、非小細胞肺がん、肺がん、結腸癌、頭部および頸部癌、乳がん、扁平上皮細胞腫瘍、肛門癌、皮膚癌および外陰癌が挙げられる。

【0172】

一実施形態において、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦを含む製剤は、結腸直腸癌、頭部および頸部癌（限定するものではないが、下咽頭癌、口腔咽頭癌、食道癌、喉頭癌および口腔癌を含む）、膵臓癌および胃がんの治療のために、対象に投与することができる。本発明の一態様において、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦを含む製剤は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を過剰発現する可能性のある固形腫瘍、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）または多形性神経膠芽腫を治療するために、対象に投与される。本発明の組成物により治療することができるこのような癌のさらなる例としては、扁平上皮腫瘍（肺、頭部および頸部、子宮頸部などの扁平上皮腫瘍を含む）、神経膠芽腫、グリオーマ、非小細胞肺がん、肺がん、結腸癌、頭部および頸部癌、乳がん、扁平上皮細胞腫瘍、肛門癌、皮膚癌および外陰癌が挙げられる。

【0173】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣの特有の特異性は、多数の腫瘍原性細胞型、および腫瘍型、例えば、限定するものではないが、神経膠芽腫、非小細胞肺がん、肺がん、結腸癌、頭部および頸部癌、乳がん、扁平上皮細胞腫瘍、肛門癌、皮膚癌および外陰癌を、以前から知られているＥＧＦＲ抗体に見ることができる正常組織の取込みに関する問題を伴わずに、同定、特徴付け、標的化および治療、低減または排除するための診断的および治療的使用を提供する。従って、ＥＧＦＲを過剰発現する細胞（例えば、突然変異体または変異体ＥＧＦＲの増幅または発現により）、および特定の実施形態において、異常な翻訳後修飾を表す細胞が、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを利用して、認識、単離、特徴付け、標的化および治療または排除され得る。

【0174】

本発明の一態様において、本明細書に記載の製剤のいずれかにおいて治療有効量の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを投与するステップを含み、対象が、製剤中の抗ＥＧＦＲ抗体による治療を必要とする障害（例えば、腫瘍、がん性病態、前癌病態および過剰増殖性細胞成長に関連する、またはこれからもたらされる任意の病態）、例えば、限定するものではないが、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を過剰発現する可能性のある固形腫瘍または多形性神経膠芽腫を有する、対象を治療するための方法が提供される。

【0175】

腫瘍中のＥＧＦＲの発現を検出するための方法は、当分野において公知であり、例えば、ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘ（商標）Ｋｉｔ（Ｄａｋｏ）である。対照的に、「ＥＧＦＲ陰性腫瘍」は、免疫組織化学的技術により決定される、腫瘍試料中のバックグラウンドを超えたＥＧＦＲ膜染色が存在しない腫瘍として定義される。

【0176】

従って、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤は、染色またはＥＧＦＲの過剰発現、特に増幅および／またはＥＧＦＲの突然変異、特にｄｅ２－７ＥＧＦＲが存在する、腫瘍または細胞を認識する別な方法により、ＥＧＦＲ腫瘍または腫瘍原性細胞の性質を分類するために特に使用することができる。さらに、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣは、増幅されたＥＧＦＲを含有する腫瘍およびｄｅ２－７ＥＧＦＲ陽性異種移植片に対するｉｎ ｖｉｖｏの有意な抗腫瘍活性を表すことが示されてきている。

【0177】

従って、本発明のさらなる態様において、本明細書に記載の製剤で抗ＥＧＦＲ ＡＤＣの投与を含む、腫瘍、がん性病態、前がん性病態および過剰増殖性細胞成長に関連する、またはこれからもたらされる任意の病態の治療方法を提供する。

【0178】

さまざまな送達系が公知であり、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤を投与するために使用可能である。導入方法としては、限定するものではないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられる。ＡＤＣは、例えば、注入またはボーラス注入により、上皮または皮膚粘膜の内膜（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を介した吸収により投与することができ、他の生物学的活性剤、例えば、化学療法剤と一緒に投与することができる。投与は全身性または局所的であってよい。一実施形態において、本発明の製剤は、静脈内的に対象に送達される。別の実施形態において、本発明の製剤は、皮下的に対象に送達される。一実施形態において、対象が、彼自身／彼女自身に製剤を投与する（自己投与）。

【0179】

製剤中の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣによる治療を必要とする障害、例えば癌の治療または予防に有効なＡＤＣの量は、標準的臨床技術により決定することができる。加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが場合により用いられ、最適な投薬量範囲の同定を手助けすることができる。正確な用量は、投与の経路、免疫学的障害のステージまたはＥＧＦＲ発現癌に依存し、開業医の判断および各患者の状況に従って決定され得る。一実施形態において、製剤において治療有効量の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣが、これを必要とする対象に投与される。抗ＥＧＦＲ ＡＤＣの「治療有効量」または「有効量」という用語は、本明細書において使用する場合、ＡＤＣが有効である治療のために、障害の症状を予防または治療または緩和に有効な量を指す。製剤中の治療有効量の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣの例は、有害なＥＧＦＲ活性を阻害するため、またはＥＧＦＲ活性が有害である障害を治療するために十分な量である。

【0180】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣの用量は、例えば、毎日、週に一回（毎週）、週に２回、週に３回、週に４回、週に５回、２週間に１回、３週間に１回、月に１回もしくは４週間に１回または必要に応じて別の方法で投与することができる。

【0181】

ある実施形態において、ある実施形態において、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣは、癌治療のための１以上のさらなる治療薬と共に、対象に同時投与することができる。「同時投与」という用語は、同じ医薬組成物または別の医薬組成物において組み合わせて対象に投与される、２以上の異なる医薬品または治療（例えば、放射線治療）の投与を意味する。従って、同時投与は、２以上の医薬品を含む単一の医薬組成物での同時投与、または２以上の異なる組成物の同じ対象への同時もしくは異なる時点における投与を伴う。

【0182】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、薬剤の例としては、例えば、放射線、アルキル化剤、血管新生阻害薬、抗体、代謝拮抗薬、抗有糸分裂薬、抗増殖薬、抗ウイルス薬、オーロラキナーゼ阻害剤、アポトーシスプロモーター（例えば、Ｂｃｌ－ｘＬ、Ｂｃｌ－ｗおよびＢｆｌ－１）阻害剤、細胞死受容体経路の活性化物質、Ｂｃｒ－Ａｂｌキナーゼ阻害剤、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞誘導）抗体、抗体薬物複合体、生体応答調節剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、細胞周期阻害剤、シクロオキシゲナーゼ－２阻害剤、ＤＶＤ（二重可変ドメイン抗体）、白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ（ＥｒｂＢ２）受容体阻害剤、成長因子阻害剤、ヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）－９０阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ホルモン療法薬、免疫薬、アポトーシスタンパク質阻害剤（ＩＡＰ）の阻害剤、インターカレート抗生物質（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、キナーゼ阻害剤、キネシン阻害剤、Ｊａｋ２阻害剤、哺乳動物標的のラパマイシン阻害剤、マイクロＲＮＡ阻害剤、マイトジェン活性化細胞外シグナル制御キナーゼ阻害剤、多価結合タンパク質、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ポリＡＤＰ（アデノシン二リン酸）－リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、プラチナ化学療法薬、ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）阻害剤、ホスホイノシチド－３キナーゼ（ブロモドメイン）阻害剤、プロテオソーム阻害剤、プリン類似体、ピリミジン類似体、受容体型チロシンキナーゼ阻害剤、レチノイド（ｅｔｉｎｏｉｄｓ）／デルトイド（ｄｅｌｔｏｉｄｓ）植物アルカノイド、低分子阻害性リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、トポイソメラーゼ阻害剤、ユビキチンリガーゼ阻害剤などが挙げられ、これらの薬剤の１以上との組み合わせて同時投与することもできる。

【0183】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＢｉＴＥ抗体を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ＢｉＴＥ抗体は、Ｔ細胞とがん細胞とを同時に結合することによって、Ｔ細胞にがん細胞を攻撃するように仕向ける二重特異性抗体である。その後、Ｔ細胞は標的がん細胞を攻撃する。ＢｉＴＥ抗体の例としては、アデカツムマブ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ ＭＴ２０１）、ブリナツモマブ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ ＭＴ１０３）などが挙げられる。理論に縛られるものではないが、Ｔ細胞が標的がん細胞のアポトーシスを誘発する機序の１つは、パーフォリンおよびグランザイムＢを含む細胞溶解性顆粒成分のエキソサイトーシスによるものである。これに関して、Ｂｃｌ－２は、パーフォリンおよびグランザイムＢの両方によるアポトーシスの誘導を弱めることが示されてきた。これらのデータは、がん細胞を標的化する場合、Ｂｃｌ－２の阻害が、Ｔ細胞によって誘発される細胞障害性効果を強化し得ることを示唆している（Ｖ．Ｒ．Ｓｕｔｔｏｎ，Ｄ．Ｌ．Ｖａｕｘ ａｎｄ Ｊ．Ａ．Ｔｒａｐａｎｉ，Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９９７，１５８（１２），５７８３）。

【0184】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ｓｉＲＮＡを含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。ＳｉＲＮＡは、内在性ＲＮＡの塩基または化学修飾されたヌクレオチドを有する分子である。修飾は、細胞活性を無効にすることはなく、むしろ安定性の増加および／または細胞の分化能（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｔｅｎｃｙ）の増加をもたらす。化学修飾の例としては、ホスホロチオエート基、２’－デオキシヌクレオチド、２’－ＯＣＨ_３－含有リボヌクレオチド、２’－Ｆ－リボヌクレオチド、２’－メトキシエチルリボヌクレオチド、これらの組み合わせなどが挙げられる。ｓｉＲＮＡは、さまざまな長さ（例えば、１０－２００ｂｐｓ）および構造（例えば、ヘアピン、一本鎖／二本鎖、バルジ、ニック／ギャップ、ミスマッチ）を有することができ、細胞内でプロセシングされ、活性遺伝子のサイレンシングを提供する。二本鎖ｓｉＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、同じ数のヌクレオチドを各鎖に有しても（平滑末端）、または非対称の末端（オーバーハング）を有してもよい。１－２ヌクレオチドのオーバーハングは、センスおよび／またはアンチセンス鎖に存在してもよく、所与の鎖の５’－および／または３’－末端に存在してもよい。

【0185】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＤＶＤおよび他の多価結合タンパク質を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。多価結合タンパク質は、２以上の抗原結合部分を含む結合タンパク質である。多価結合タンパク質は、３以上の抗原結合部分を有するように遺伝子操作されており、一般に天然の抗体ではない。「多重特異的結合タンパク質」という用語は、２以上の関連する標的または関連しない標的を結合できる結合タンパク質を意味する。二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２以上の抗原結合部分を含む４価または多価の結合タンパク質結合タンパク質である。このようなＤＶＤは、単一特異的（即ち１つの抗原に結合できる。）であっても、または多重特異的（即ち２以上の抗原に結合できる。）であってもよい。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ Ｉｇと称される。ＤＶＤ Ｉｇの各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、軽鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの抗原結合部分を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含み、合計６つのＣＤＲが抗原結合／抗原結合部分に関与する。多重特異性ＤＶＤは、ＤＬＬ４とＶＥＧＦと、またはＣ－ｍｅｔとＥＧＦＲと、またはＥｒｂＢ３とＥＧＦＲとを結合させるＤＶＤ結合タンパク質を含む。

【0186】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、アルキル化剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。アルキル化剤としては、アルトレタミン、ＡＭＤ－４７３、ＡＰ－５２８０、アパジコン、ベンダムスチン、ブロスタリシン、ブスルファン、カルボコン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、クロラムブシル、ＣＬＯＲＥＴＡＺＩＮＥ（Ｒ）（ラロムスチン、ＶＮＰ４０１０１Ｍ）、シクロホスファミド、デカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、グルホスファミド、イホスファミド、ＫＷ－２１７０、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、マホスファミド、メルファラン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ニムスチン、ナイトロジェンマスタードＮ－オキシド、ラニムスチン、テモゾロミド、チオテパ、ＴＲＥＡＮＤＡ（Ｒ）（ベンダムスチン）、トレオスルファン、ロホスファミドなどが挙げられる。

【0187】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤は、血管新生阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。血管新生阻害剤としては、無内皮特異的受容体型チロシンキナーゼ（Ｔｉｅ－２）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、インスリン成長因子－２受容体（ＩＧＦＲ－２）阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ－２（ＭＭＰ－２）阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ－９（ＭＭＰ－９）阻害剤、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤、トロンボスポンジン類似体、血管内皮成長因子受容体チロシンキナーゼ（ＶＥＧＦＲ）阻害剤などが挙げられる。

【0188】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、代謝拮抗薬を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。代謝拮抗薬としては、ＡＬＩＭＴＡ（Ｒ）（ペメトレキセド二ナトリウム、ＬＹ２３１５１４、ＭＴＡ）、５－アザシチジン、ＸＥＬＯＤＡ（Ｒ）（カペシタビン）、カルモフール、ＬＥＵＳＴＡＴ（Ｒ）（クラドリビン）、クロファラビン、シタラビン、シタラビンオクホスフェート、シトシンアラビノシド、デシタビン、デフェロキサミン、ドキシフルリジン、エフロルニチン、ＥＩＣＡＲ（５－エチニル－１－β－Ｄ－リボフラノシルイミダゾール－４－カルボキサミド）、エノシタビン、エトニルシチジン、フルダラビン、５－フルオロウラシル単独またはロイコボリンと組み合わせた５－フルオロウラシル、ＧＥＭＺＡＲ（Ｒ）（ゲムシタビン）、ヒドロキシ尿素、ＡＬＫＥＲＡＮ（Ｒ）（メルファラン）、メルカプトプリン、６－メルカプトプリンリボシド、メトトレキセート、ミコフェノール酸、ネララビン、ノラトレキセド、オクホスフェート、ペリトレキソール、ペントスタチン、ラルチトレキセド、リバビリン、トリアピン、トリメトレキサート、Ｓ－１、チアゾフリン、テガフール、ＴＳ－１、ビダラビン、ＵＦＴなどが挙げられる。

【0189】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、抗ウイルス薬を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。抗ウイルス薬としては、リトナビル、ヒドロキシクロロキンなどが挙げられる。

【0190】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、オーロラキナーゼ阻害薬を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。オーロラキナーゼ阻害薬としては、ＡＢＴ－３４８、ＡＺＤ－１１５２、ＭＬＮ－８０５４、ＶＸ－６８０、オーロラＡ特異的キナーゼ阻害剤、オーロラＢ特異的キナーゼ阻害剤およびパンオーロラキナーゼ阻害薬などが挙げられる。

【0191】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、Ｂｃｌ－２タンパク質阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。Ｂｃｌ－２タンパク質阻害剤としては、ＡＴ－１０１（（－）ゴシポール）、ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（Ｒ）（Ｇ３１３９またはオブリメルセン（Ｂｃｌ－２標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド））、ＩＰＩ－１９４、ＩＰＩ－５６５、Ｎ－（４－（４－（（４’－クロロ（１，１’－ビフェニル）－２－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ベンゾイル）－４－（（（１Ｒ）－３－（ジチルアミノ）－１－（（フェニルスルファニル）メチル）プロピル）アミノ）－３－ニトロベンゼンスルホンアミド）（ＡＢＴ－７３７）、Ｎ－（４－（４－（（２－（４－クロロフェニル）－５，５－ジチル－１－クロロヘキサ－１－エン－１－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ベンゾイル）－４－（（（１Ｒ）－３－（モルホリン－４－イル）－１－（（フェニルスルファニル）メチル）プロピル）アミノ）－３－（（トリフルオロメチル）スルホニル）ベンゼンスルホンアミド（ＡＢＴ－２６３）、ＧＸ－０７０（オバトクラックス）、ＡＢＴ－１９９などが挙げられる。

【0192】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、Ｂｃｒ－Ａｂｌキナーゼ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、Ｂｃｒ－Ａｂｌキナーゼ阻害剤としては、例えば、ＤＡＳＡＴＩＮＩＢ（Ｒ）（ＢＭＳ－３５４８２５）、ＧＬＥＥＶＥＣ（Ｒ）（イマチニブ）などが挙げられる。

【0193】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＣＤＫ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。ＣＤＫ阻害剤としては、ＡＺＤ－５４３８、ＢＭＩ－１０４０、ＢＭＳ－０３２、ＢＭＳ－３８７、ＣＶＴ－２５８４、フラボピリドール、ＧＰＣ－２８６１９９、ＭＣＳ－５Ａ、ＰＤ０３３２９９１、ＰＨＡ－６９０５０９、セリシクリブ（ＣＹＣ－２０２、Ｒ－ロスコビチン）、ＺＫ－３０４７０９などが挙げられる。

【0194】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＣＯＸ－２阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。ＣＯＸ－２阻害剤としては、ＡＢＴ－９６３、ＡＲＣＯＸＩＡ（Ｒ）（エトリコキシブ）、ＢＥＸＴＲＡ（Ｒ）（バルデコキシブ）、ＢＭＳ３４７０７０、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（Ｒ）（セレコキシブ）、ＣＯＸ－１８９（ルミラコキシブ）、ＣＴ－３、ＤＥＲＡＭＡＸＸ（Ｒ）（デラコキシブ）、ＪＴＥ－５２２、４－メチル－２－（３，４－ジメチルフェニル）－１－（４－スルファモイルフェニル－１Ｈ－ピロール）、ＭＫ－６６３（エトリコキシブ）、ＮＳ－３９８、パレコキシブ、ＲＳ－５７０６７、ＳＣ－５８１２５、ＳＤ－８３８１、ＳＶＴ－２０１６、Ｓ－２４７４、Ｔ－６１４、ＶＩＯＸＸ（Ｒ）（ロフェコキシブ）などが挙げられる。

【0195】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、他のＥＧＦＲ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。ＥＧＦＲ阻害剤としては、ＥＧＦＲ抗体、ＡＢＸ－ＥＧＦ、抗ＥＧＦＲイムノリポソーム、ＥＧＦ－ワクチン、ＥＭＤ－７２００、ＥＲＢＩＴＵＸ（Ｒ）（セツキシマブ）、ＨＲ３、ＩｇＡ抗体、ＩＲＥＳＳＡ（Ｒ）（ゲフィチニブ）、ＴＡＲＣＥＶＡ（Ｒ）（エルロチニブまたはＯＳＩ－７７４）、ＴＰ－３８、ＥＧＦＲ融合タンパク質、ＴＹＫＥＲＢ（Ｒ）（ラパチニブ）などが挙げられる。

【0196】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＨＥＲ２阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。ＥｒｂＢ２受容体阻害剤としては、ＣＰ－７２４－７１４、ＣＩ－１０３３（カルネチニブ）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｒ）（トラスツズマブ）、ＴＹＫＥＲＢ（Ｒ）（ラパチニブ）、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（Ｒ）（２Ｃ４、ペツズマブ）、ＴＡＫ－１６５、ＧＷ－５７２０１６（イオナファルニブ）、ＧＷ－２８２９７４、ＥＫＢ－５６９、ＰＩ－１６６、ｄＨＥＲ２（ＨＥＲ２ワクチン）、ＡＰＣ－８０２４（ＨＥＲ－２ワクチン）、抗ＨＥＲ／２ｎｅｕ二重特異性抗体、Ｂ７．ｈｅｒ２ＩｇＧ３、ＡＳ ＨＥＲ２三官能性二重特異性抗体、ｍＡＢ ＡＲ－２０９、ｍＡＢ ２Ｂ－１などが挙げられる。

【0197】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ヒストン脱アセチラーゼ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ヒストン脱アセチラーゼ阻害剤としては、例えば、デプシペプチド、ＬＡＱ－８２４、ＭＳ－２７５、トラポキシン、スベロイラニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ＴＳＡ、バルプロ酸などが挙げられる。

【0198】

ＨＳＰ－９０阻害剤としては、１７－ＡＡＧ－ｎａｂ、１７－ＡＡＧ、ＣＮＦ－１０１、ＣＮＦ－１０１０、ＣＮＦ－２０２４、１７－ＤＭＡＧ、ゲルダナマイシン、ＩＰＩ－５０４、ＫＯＳ－９５３、ＭＹＣＯＧＲＡＢ（Ｒ）（ＨＳＰ－９０に対するヒト組換え抗体）、ＮＣＳ－６８３６６４、ＰＵ２４ＦＣｌ、ＰＵ－３、ラジシコール、ＳＮＸ－２１１２、ＳＴＡ－９０９０ ＶＥＲ４９００９などが挙げられる。

【0199】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、アポトーシス阻害剤タンパク質の阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、アポトーシス阻害剤タンパク質の阻害剤としては、例えば、ＨＧＳ１０２９、ＧＤＣ－０１４５、ＧＤＣ－０１５２、ＬＣＬ－１６１、ＬＢＷ－２４２などが挙げられる。

【0200】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、他のＡＤＣを含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、他のＡＤＣとしては、例えば、抗ＣＤ２２－ＭＣ－ＭＭＡＦ、抗ＣＤ２２－ＭＣ－ＭＭＡＥ、抗ＣＤ２２－ＭＣＣ－ＤＭ１、ＣＲ－０１１－ｖｃＭＭＡＥ、ＰＳＭＡ－ＡＤＣ、ＭＥＤＩ－５４７、ＳＧＮ－１９Ａｍ ＳＧＮ－３５、ＳＧＮ－７５ ＡＤＣなどが挙げられる。

【0201】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、細胞死受容体経路のアクチベーターを含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、細胞死受容体経路のアクチベーターとしては、例えば、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬまたは細胞死受容体（例えばＤＲ４およびＤＲ５）を標的化する抗体または他の薬剤、例えばアポマブ、コナツムマブ、ＥＴＲ２－ＳＴ０１、ＧＤＣ０１４５、（レクサツムマブ）、ＨＧＳ－１０２９、ＬＢＹ－１３５、ＰＲＯ－１７６２およびトラスツズマブが挙げられる。

【0202】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、キネシン阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、キネシン阻害剤としては、例えば、ＡＺＤ４８７７、ＡＲＲＹ－５２０などのＥｇ５阻害剤；ＧＳＫ９２３２９５ＡなどのＣＥＮＰＥ阻害剤などが挙げられる。

【0203】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＪＡＫ－２阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ＪＡＫ－２阻害剤としては、例えば、ＣＥＰ－７０１（レサウルチニブ）、ＸＬ０１９およびＩＮＣＢ０１８４２４などが挙げられる。

【0204】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＭＥＫ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ＭＥＫ阻害剤としては、例えば、ＡＲＲＹ－１４２８８６、ＡＲＲＹ－４３８１６２ ＰＤ－３２５９０１、ＰＤ－９８０５９などが挙げられる。

【0205】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ｍＴＯＲ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ｍＴＯＲ阻害剤としては、例えば、ＡＰ－２３５７３、ＣＣＩ－７７９、エベロリムス、ＲＡＤ－００１、ラパマイシン、テムシロリムス、ＰＩ－１０３、ＰＰ２４２、ＰＰ３０、Ｔｏｒｉｎ１を含むＡＴＰ－競合性ＴＯＲＣ１／ＴＯＲＣ２阻害剤などが挙げられる。

【0206】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）としては、例えば、ＡＭＩＧＥＳＩＣ（Ｒ）（サルサレート）、ＤＯＬＯＢＩＤ（Ｒ）（ジフルニサル）、ＭＯＴＲＩＮ（Ｒ）（イブプロフェン）、ＯＲＵＤＩＳ（Ｒ）（ケトプロフェン）、ＲＥＬＡＦＥＮ（Ｒ）（ナブメトン）、ＦＥＬＤＥＮＥ（Ｒ）（ピロキシカム）、イブプロフェンクリーム、ＡＬＥＶＥ（Ｒ）（ナプロキセン）およびＮＡＰＲＯＳＹＮ（Ｒ）（ナプロキセン）、ＶＯＬＴＡＲＥＮ（Ｒ）（ジクロフェナク）、ＩＮＤＯＣＩＮ（Ｒ）（インドメタシン）、ＣＬＩＮＯＲＩＬ（Ｒ）（スリンダク）、ＴＯＬＥＣＴＩＮ（Ｒ）（トルメチン）、ＬＯＤＩＮＥ（Ｒ）（エトドラク）、ＴＯＲＡＤＯＬ（Ｒ）（ケトロラク）、ＤＡＹＰＲＯ（Ｒ）（オキサプロジン）などが挙げられる。

【0207】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＰＤＧＦＲ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ＰＤＧＦＲ阻害剤としては、例えば、Ｃ－４５１、ＣＰ－６７３、ＣＰ－８６８５９６などが挙げられる。

【0208】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、プラチナ化学療法薬を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、プラチナ化学療法薬としては、例えば、シスプラチン、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（Ｒ）（オキサリプラチン）、エプタプラチン、ロバプラチン、ネダプラチン、ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（Ｒ）（カルボプラチン）、サトラプラチン、ピコプラチンなどが挙げられる。

【0209】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ポロ様キナーゼ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ポロ様キナーゼ阻害剤としては、例えば、ＢＩ－２５３６などが挙げられる。

【0210】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ホスホイノシチド－３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ホスホイノシチド－３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤としては、例えば、ウォルトマンニン、ＬＹ２９４００２、ＸＬ－１４７、ＣＡＬ－１２０、ＯＮＣ－２１、ＡＥＺＳ－１２７、ＥＴＰ－４５６５８、ＰＸ－８６６、ＧＤＣ－０９４１、ＢＧＴ２２６、ＢＥＺ２３５、ＸＬ７６５などが挙げられる。

【0211】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、トロンボスポンジン類似体を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、トロンボスポンジン類似体としては、例えばＡＢＴ－５１０（トロンボスポンジン模倣体）、ＡＢＴ－５６７、ＡＢＴ－８９８（トロンボスポンジン－１模倣体ペプチド）、ＴＳＰ－１などが挙げられる。

【0212】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＶＥＧＦＲ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ＶＥＧＦＲ阻害剤としては、例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（Ｒ）（ベバシズマブ）、ＡＢＴ－８６９、ＡＥＥ－７８８、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（商標）（血管新生を阻害するリボザイム（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ．）およびＣｈｉｒｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ））、アキシチニブ（ＡＧ－１３７３６）、ＡＺＤ－２１７１、ＣＰ－５４７，６３２、ＩＭ－８６２、ＭＡＣＵＧＥＮ（ペガプタミブ）、ＮＥＸＡＶＡＲ（Ｒ）（ソラフェニブ、ＢＡＹ４３－９００６）、パゾパニブ（ＧＷ－７８６０３４）、バタラニブ（ＰＴＫ－７８７、ＺＫ－２２２５８４）、ＳＵＴＥＮＴ（Ｒ）（スニチニブ、ＳＵ－１１２４８）、ＶＥＧＦ ｔｒａｐ、ＺＡＣＴＩＭＡ（商標）（バンデタニブ、ＺＤ－６４７４）、ＧＡ１０１、オファツムマブ、ＡＢＴ－８０６（ｍＡｂ－８０６）、ＥｒｂＢ３特異的抗体、ＢＳＧ２特異的抗体、ＤＬＬ４特異的抗体およびＣ－ｍｅｔ特異的抗体などが挙げられる。抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、抗生物質を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、抗生物質としては、例えば、インターカレート抗生物質のアクラルビシン、アクチノマイシンＤ、アムルビシン、アンナマイシン、アドリアマイシン、ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（Ｒ）（ブレオマイシン）、ダウノルビシン、ＣＡＥＬＹＸ（Ｒ）またはＭＹＯＣＥＴ（Ｒ）（リポソーマルドキソルビシン）、エルサミトルシン、エピルブシン、グラルブイシン、ＺＡＶＥＤＯＳ（Ｒ）（イダルビシン）、ミトマイシンＣ、ネモルビシン、ネオカルジノスタチン、ぺプロマイシン、ピラルビシン、レベッカマイシン、スチマラマー、ストレプトゾシン、ＶＡＬＳＴＡＲ（Ｒ）（バルルビシン）、ジノスタチンなどが挙げられる。

【0213】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、トポイソメラーゼ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、トポイソメラーゼ阻害剤としては、例えば、アクラルビシン、９－アミノカンプトテシン、アモナフィド、アムサクリン、ベカテカリン、ベロテカン、ＢＮ－８０９１５、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（Ｒ）（イリノテカンヒドロクロリド）、カンプトテシン、ＣＡＲＤＩＯＸＡＮＥ（Ｒ）（デクスラゾキシン）、ジフロモテカン、エドテカリン、ＥＬＬＥＮＣＥ（Ｒ）またはＰＨＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮ（Ｒ）（エピルビシン）、エトポシド、エキサテカン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、ギマテカン、ルルトテカン、ミトキサントロン、オラテシン、ピラルブシン、ピクロサントロン、ルビテカン、ソブゾキサン、ＳＮ－３８、タフルポシド、トポテカンなどが挙げられる。

【0214】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、治療用抗体を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、治療用抗体としては、例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（Ｒ）（ベバシズマブ）、ＣＤ４０特異的抗体、ｃｈＴＮＴ－１／Ｂ、デノスマブ、ＥＲＢＩＴＵＸ（Ｒ）（セツキシマブ）、ＨＵＭＡＸ－ＣＤ４（Ｒ）（ザノリムマブ）、ＩＧＦ１Ｒ特異的抗体、リンツズマブ、ＰＡＮＯＲＥＸ（Ｒ）（エドレコロマブ）、ＲＥＮＣＡＲＥＸ（Ｒ）（ＷＸ Ｇ２５０）、ＲＩＴＵＸＡＮ（Ｒ）（リツキシマブ）、チシリムマブ、トラスツジマブ、ＣＤ２０抗体Ｉ型およびＩＩ型などが挙げられる。

【0215】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ホルモン療法薬を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ホルモン療法薬としては、例えば、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（Ｒ）（アナストロゾール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（Ｒ）（エキセメスタン）、アルゾキシフェン、ＣＡＳＯＤＥＸ（Ｒ）（ビカルタミド）、ＣＥＴＲＯＴＩＤＥ（Ｒ）（セトロレリクス）、デガレリクス、デスロレリン、ＤＥＳＯＰＡＮ（Ｒ）（トリロスタン）、デキサメタゾン、ＤＲＯＧＥＮＩＬ（Ｒ）（フルタミド）、ＥＶＩＳＴＡ（Ｒ）（ラロキシフェン）、ＡＦＥＭＡ（商標）（ファドロゾール）、ＦＡＲＥＳＴＯＮ（Ｒ）（トレミフェン）、ＦＡＳＬＯＤＥＸ（Ｒ）（フルベストラント）、ＦＥＭＡＲＡ（Ｒ）（レトロゾール）、ホルメスタン、グルココルチコイド、ＨＥＣＴＯＲＯＬ（Ｒ）（ドキセルカルシフェロール）、ＲＥＮＡＧＥＬ（Ｒ）（セベラマーカルボネート）、ラソフォキシフェン、ロイプロリドアセテート、ＭＥＧＡＣＥ（Ｒ）（メゲステロール）、ＭＩＦＥＰＲＥＸ（Ｒ）（ミフェプリストン）、ＮＩＬＡＮＤＲＯＮ（商標）（ニルタミド）、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（Ｒ）（タモキシフェンシトレート）、ＰＬＥＮＡＸＩＳ（商標）（アバレリクス）、プレドニゾン、ＰＲＯＰＥＣＩＡ（Ｒ）（フィナステリド）、リロスタン、ＳＵＰＲＥＦＡＣＴ（Ｒ）（ブセレリン）、ＴＲＥＬＳＴＡＲ（Ｒ）（黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ））、ＶＡＮＴＡＳ（Ｒ）（ヒストレリンインプラント）、ＶＥＴＯＲＹＬ（Ｒ）（トリロスタンまたはモドラスタン）、ＺＯＬＡＤＥＸ（Ｒ）（ホスレリン、ゴセレリン）などが挙げられる。

【0216】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、デルトイドおよびレチノイドを含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、デルトイドおよびレチノイドとしては、例えば、セオカルシトール（ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３）、レクサカルシトール（ＫＨ１０６０）、フェンレチニド、ＰＡＮＲＥＴＩＮ（Ｒ）（アリレチノイン）、ＡＴＲＡＧＥＮ（Ｒ）（リポソーマルトレチノイン）、ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（Ｒ）（ベキサロテン）、ＬＧＤ－１５５０などが挙げられる。

【0217】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ＰＡＲＰ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ＰＡＲＰ阻害剤としては、例えば、ベリパリブ、オラパリブ、ＫＵ－５９４３６、ＡＺＤ－２２８１、ＡＧ－０１４６９９、ＢＳＩ－２０１、ＢＧＰ－１５、ＩＮＯ－１００１、ＯＮＯ－２２３１などが挙げられる。

【0218】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、植物アルカロイドを含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、植物アルカロイドとしては、例えば、限定するものではないが、、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビンなどが挙げられる。

【0219】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、プロテアソーム阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、プロテアソーム阻害剤としては、例えば、ＶＥＬＣＡＤＥ（Ｒ）（ボルテゾミブ）、ＭＧ１３２、ＮＰＩ－００５２、ＰＲ－１７１などが挙げられる。

【0220】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、免疫薬を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができる。免疫薬の例としては、インターフェロンおよび他の免疫強化剤が挙げられる。インターフェロンとしては、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ｂ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ－１ａ、ＡＣＴＩＭＭＵＮＥ（Ｒ）（インターフェロンガンマ－１ｂ）またはインターフェロンガンマ－ｎ１、これらの組み合わせなどが挙げられる。他の薬剤としては、ＡＬＦＡＦＥＲＯＮＥ（Ｒ）、（ＩＦＮ－α）、ＢＡＭ－００２（酸化型グルタチオン）、ＢＥＲＯＭＵＮ（Ｒ）（タソネルミン）、ＢＥＸＸＡＲ（Ｒ）（トシツモマブ）、ＣＡＭＰＡＴＨ（Ｒ）（アレムツズマブ）、ＣＴＬＡ４（細胞障害性リンパ球抗原４）、デカルバジン、デニロイキン、エプラツズマブ、ＧＲＡＮＯＣＹＴＥ（Ｒ）（レノグラスチム）、レンチナン、白血球アルファインターフェロン、イミキモド、ＭＤＸ－０１０（抗ＣＴＬＡ－４）、メラノーマワクチン、ミツモマブ、モルグラモスチム、ＭＹＬＯＴＡＲＧ（商標）（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（Ｒ）（フィルグラスチム）、ＯｎｃｏＶＡＣ－ＣＬ、ＯＶＡＲＥＸ（Ｒ）（オレゴボマブ）、ぺムツモマブ（Ｙ－ｍｕＨＭＦＧ１）、ＰＲＯＶＥＮＧＥ（Ｒ）（シプロイセル－Ｔ）、サルガラモスチム、シゾフィラン、テセロイキン、ＴＨＥＲＡＣＹＳ（Ｒ）（バチルス・カルメット－ゲリン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ））、ウベニメクス、ＶＩＲＵＬＩＺＩＮ（Ｒ）（免疫療法薬、Ｌｏｒｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｚ－１００（丸山ワクチン（ＳＳＭ））、ＷＦ－１０（テトラクロロデカオキシド（ＴＣＤＯ））、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（Ｒ）（アルデスロイキン）、ＺＡＤＡＸＩＮ（Ｒ）（チマルファシン）、ＺＥＮＡＰＡＸ（Ｒ）（ダクリズマブ）、ＺＥＶＡＬＩＮ（Ｒ）（９０Ｙ－イブリツモマブチウキセタン）などが挙げられる。

【0221】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、生体応答調節剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、生体応答調節剤としては、生命体の防御機序または組織細胞の生存、成長もしくは分化などの生体応答を調整して、抗腫瘍活性を有するよう仕向ける薬剤であり、クレスチン、レンチナン、シゾフィラン、ピシバニールＰＦ－３５１２６７６（ＣｐＧ－８９５４）、ウベニメクスなどが挙げられる。

【0222】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ピリミジン類似体を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ピリミジン類似体としては、例えば、シタラビン（ａｒａＣまたはアラビノシドＣ）、シトシンアラビノシド、ドキシフルリジン、ＦＬＵＤＡＲＡ（Ｒ）（フルダラビン）、５－ＦＵ（５－フルオロウラシル）、フロクスウリジン、ＧＥＭＺＡＲ（Ｒ）（ゲムシタビン）、ＴＯＭＵＤＥＸ（Ｒ）（ラチトレキセド）、ＴＲＯＸＡＴＹＬ（商標）（トリアセチルウリジントロキサシタビン）などが挙げられる。

【0223】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、プリン類似体を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、プリン類似体としては、例えば、ＬＡＮＶＩＳ（Ｒ）（チオグアニン）およびＰＵＲＩ－ＮＥＴＨＯＬ（Ｒ）（メルカプトプリン）が挙げられる。

【0224】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、抗有糸分裂薬を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、抗有糸分裂薬としては、例えば、バタブリン、エポチロンＤ（ＫＯＳ－８６２）、Ｎ－（２－（（４－ヒドロキシフェニル）アミノ）ピリジン－３－イル）－４－メトキシベンゼンスルホンアミド、イキサベピロン（ＢＭＳ２４７５５０）、パクリタキセル、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（Ｒ）（ドセタキセル）、ＰＮＵ１００９４０（１０９８８１）、パツピロン、ＸＲＰ－９８８１（ラロタキセル）、ビンフルニン、ＺＫ－ＥＰＯ（合成エポチロン）などが挙げられる。

【0225】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、ユビキチンリガーゼ阻害剤を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、ユビキチンリガーゼ阻害剤としては、例えば、ＭＤＭ２阻害剤、例えばヌトリン、ＮＥＤＤ８阻害剤、例えばＭＬＮ４９２４などが挙げられる。

【0226】

本発明の化合物は、放射線療法の有効性を強化する放射線増感剤としても使用することができる。放射線療法の例としては、外部ビーム放射線療法、遠隔放射線療法、小線源療法および密封、非密封線源放射線療法などが挙げられる。

【0227】

抗ＥＧＦＲ ＡＤＣ（または抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む製剤）は、化学療法薬を含む、治療有効量の１以上の癌治療薬と同時投与することができ、化学療法薬としては、例えば、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（ＡＢＩ－００７）、ＡＢＴ－１００（ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤）、ＡＤＶＥＸＩＮ（Ｒ）（Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３ワクチン）、ＡＬＴＯＣＯＲ（Ｒ）もしくはＭＥＶＡＣＯＲ（Ｒ）（ロバスタチン）、ＡＭＰＬＩＧＥＮ（Ｒ）（ポリＩ：ポリＣ１２Ｕ、合成ＲＮＡ）、ＡＰＴＯＳＹＮ（Ｒ）（エクシスリンド）、ＡＲＥＤＩＡ（Ｒ）（パミドロン酸）、アルグラビン、Ｌ－アスパラギナーゼ、アタメスタン（１－メチル－３，１７－ジオン－アンドロスタ－１，４－ジエン）、ＡＶＡＧＥ（Ｒ）（タザロテン）、ＡＶＥ－８０６２（コンブレスタチン誘導体）ＢＥＣ２（ミツモマブ）、カケクチンもしくはカケキシン（腫瘍壊死因子）、カンバキシン（ワクチン）、ＣＥＡＶＡＣ（Ｒ）（癌ワクチン）、ＣＥＬＥＵＫ（Ｒ）（セルモロイキン）、ＣＥＰＬＥＮＥ（Ｒ）（ヒスタミンジヒドロクロリド）、ＣＥＲＶＡＲＩＸ（Ｒ）（ヒトパピローマウイルスワクチン）、ＣＨＯＰ（Ｒ）（Ｃ：ＣＹＴＯＸＡＮ（Ｒ）（シクロホスファミド）；Ｈ：ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（Ｒ）（ヒドロキシドキソルビシン）；Ｏ：ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（Ｒ））；Ｐ：プレソニゾン）、ＣＹＰＡＴ（商標）（シプロテロンアセテート）、コンブレスタチンＡ４Ｐ、ＤＡＢ（３８９）ＥＧＦ（Ｈｉｓ－Ａｌａリンカーを介してヒト上皮成長因子に融合しているジフテリア毒素の触媒ドメインおよび転移ドメイン）もしくはＴｒａｎｓＭＩＤ－１０７Ｒ（商標）（ジフテリア毒素）、ダカルバジン、ダクチノマイシン、５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、エニルウラシル、ＥＶＩＺＯＮ（商標）（スクアラミンラクテート）、ＤＩＭＥＲＩＣＩＮＥ（Ｒ）（Ｔ４Ｎ５リポソームローション）、ディスコデルモライド、ＤＸ－８９５１ｆ（エキサテカンメシレート）、エンザスタウリン、ＥＰＯ９０６（エピチロンＢ）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（Ｒ）（四価ヒトパピローマウイルス（６型、１１型、１６型、１８型）組換えワクチン）、ＧＡＳＴＲＩＭＭＵＮＥ（Ｒ）、ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（Ｒ）、ＧＭＫ（ガングリオシド結合型ワクチン）、ＧＶＡＸ（Ｒ）（前立腺癌ワクチン）、ハロフギノン、ヒステレリン、ヒドロキシカルバミド、イバンドロン酸、ＩＧＮ－１０１、ＩＬ－１３－ＰＥ３８、ＩＬ－１３－ＰＥ３８ＱＱＲ（シントレデキンベスドトクス）、ＩＬ－１３－シードモナス外毒素、インターフェロン－α、インターフェロン－γ、ＪＵＮＯＶＡＮ（商標）もしくはＭＥＰＡＣＴ（商標）（ミファムルチド）、ロナファルニブ、５，１０－メチレンテトラヒドロフォレート、ミルテホシン（ヘキサデシルホスホコリン）、ＮＥＯＶＡＳＴＡＴ（Ｒ）（ＡＥ－９４１）、ＮＥＵＴＲＥＸＩＮ（Ｒ）（トリメトレキサートグルクロネート）、ＮＩＰＥＮＴ（Ｒ）（ペントスタチン）、ＯＮＣＯＮＡＳＥ（Ｒ）（リボヌクレアーゼ酵素）、ＯＮＣＯＰＨＡＧＥ（Ｒ）（メラノーマワクチン処置）、ＯＮＣＯＶＡＸ（Ｒ）（ＩＬ－２ワクチン）、ＯＲＡＴＨＥＣＩＮ（商標）（ルビテカン）、ＯＳＩＤＥＭ（Ｒ）（抗体系細胞薬）、ＯＶＡＲＥＸ（Ｒ）ＭＡｂ（ネズミモノクローナル抗体）、パクリタキセル、ＰＡＮＤＩＭＥＸ（商標）（２０（Ｓ）プロトパナキサジオール（ａＰＰＤ）および２０（Ｓ）プロトパナキサトリオール（ａＰＰＴ）を含むチョウセンニンジンのアグリコンのサポニン）、パニツムマブ、ＰＡＮＶＡＣ（Ｒ）－ＶＦ（治験中の癌ワクチン）、ペグアスパラガーゼ、ＰＥＧインターフェロンＡ、フェノキソジオール、プロカルバジン、レビマスタット、ＲＥＭＯＶＡＢ（Ｒ）（カツマキソマブ）、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（Ｒ）（レナリドミド）、ＲＳＲ１３（エファプロキシラル）、ＳＯＭＡＴＵＬＩＮＥ（Ｒ）ＬＡ（ランレオチド）、ＳＯＲＩＡＴＡＮＥ（Ｒ）（アシトレチン）、ステウロスポリン（ストレプトマイセス・スタウロスポレス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｅｓ））、タラボスタット（ＰＴ１００）、ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（Ｒ）（ベキサロテン）、ＴＡＸＯＰＲＥＸＩＮ（Ｒ）（ＤＨＡ－パクリタキセル）、ＴＥＬＣＹＴＡ（Ｒ）（カンホスファミド、ＴＬＫ２８６）、テミリフェン、ＴＥＭＯＤＡＲ（Ｒ）（テモゾロミド）、テスミリフェン、サリドマイド、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（Ｒ）（ＳＴｎ－ＫＬＨ）、チミタク（２－アミノ－３，４－ジヒドロ－６－メチル－４－オキソ－５－（４－ピリジルチオ）キナゾリンジヒドロクロリド）、ＴＮＦＥＲＡＤＥ（商標）（アデノベクター：腫瘍壊死因子－αに関する遺伝子を含有するＤＮＡ担体）、ＴＲＡＣＬＥＥＲ（Ｒ）もしくはＺＡＶＥＳＣＡ（Ｒ）（ボセンタン）、トレチノイン（レチン－Ａ）、テトランドリン、ＴＲＩＳＥＮＯＸ（Ｒ）（三酸化ヒ素）、ＶＩＲＵＬＩＺＩＮ（Ｒ）、ウクライン（クサノオウ植物由来のアルカロイドの誘導体）、ビタキシン（抗－アルファｖベータ３抗体）、ＸＣＹＴＲＩＮ（Ｒ）（モテキサフィンガドリニウム）、ＸＩＮＬＡＹ（商標）（アトラセンタン）、ＸＹＯＴＡＸ（商標）（パクリタキセルポリグルメックス）、ＹＯＮＤＥＬＩＳ（Ｒ）（トラベクテジン）、ＺＤ－６１２６、ＺＩＮＥＣＡＲＤ（Ｒ）（デクスラゾキサン）、ＺＯＭＥＴＡ（Ｒ）（ゾレドロン酸）、ゾルビシンなどが挙げられる。

【0228】

一実施形態において、抗ＥＧＦＲ－ＡＤＣを含む製剤は、放射線および／またはＴＥＭＯＤＡＲ（Ｒ）（テモゾロミド）と組み合わせて、神経膠芽腫を有する対象に静脈内投与される。

【0229】

さらに、一実施形態において、製剤は、（ａ）凍結乾燥形態の抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含有する容器および（ｂ）注射用の医薬として許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含有する第２の容器を含む医薬キットとして提供することができる。医薬として許容される希釈剤は、凍結乾燥ＡＤＣの再構成または希釈に使用することができる。場合により、このような容器は、医薬品もしくは生物学的製品の製造、使用もしくは販売を管理している政府機関により規定された形態の注意書きを伴うことができ、この注意書きは、ヒトへの投与に関する製造、使用もしくは販売の機関による承認を反映する。

【0230】

本発明は、下記の実施例においてさらに記載されるが、この実施例は、本発明の範囲を限定する意図のものではない。

【実施例0231】

［実施例１］
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の安定性試験
下記の実施例は、非複合体化抗体と比較した、特定の（液体形態の）ＡＤＣの安定性をアッセイするために使用される試験を記載する。ＭＭＡＦ（図２を参照されたい。）（下記において「ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ」と称され、これはヒト化抗ＥＧＦＲ抗体１－ＭＭＡＦ複合体である。）またはＭＭＡＥ（図１を参照されたい。）（下記において「ＡＤＣ１－ＭＭＡＥ」と称され、これはヒト化抗ＥＧＦＲ抗体１－ＭＭＡＥ複合体である。）のいずれかに複合体化された抗体を試験して、ヒト化抗ＥＧＦＲ抗体１単独と比較した。特性の中の、動的走査蛍光およびＤＳＣを使用したアンフォールディング発生温度、それぞれ、ＦＴＩＲおよび近ＵＶ－ＣＤによる二次および三次構造分析、低濃度および高濃度における安定性の促進、血清安定性、低濃度および高濃度における凍結／解凍安定性ならびに溶解度を検査した。本実施例に記載の製剤は、液体製剤であった。

【0232】

動的走査蛍光（ＤＳＦ）および示差走査熱量計（ＤＳＣ）を使用したアンフォールディングの発生の分析
２つの異なる技術、動的走査蛍光（ＤＳＦ）および示差走査熱量計（ＤＳＣ）を使用して、熱変性の間の抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥのアンフォールディングの発生および立体配座安定性を決定した。図３Ａに示すように、蛍光強度の変化は、タンパク質のアンフォールディングレベルおよび温度に関係した。熱安定性測定から得られた結果を、ＤＳＣ（図３Ｂ）を使用して得られたデータと比較した。５５℃を超える温度におけるタンパク質のアンフォールディングを、安定性の基準として使用した。図３ＡおよびＢに示すように、アンフォールディングの発生は、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ（５５℃）と比較してＡＤＣ１－ＭＭＡＥではより低温（４６℃）において発生し、抗体１において最も高く（６１℃）、抗体１が３種の分子の中で最も安定であることを示した。従って、ＡＤＣは、熱動的安定性の低下を示し、このことは、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ－１ＭＭＡＥ対抗体１単独に関する低アンフォールディング温度に反映されていた。

【0233】

抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥの二次および三次構造分析
抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥの安定性を、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）および近ＵＶ－円偏光二色性（ＣＤ）の両方を使用して決定した。２６０およびおよそ１８０ｎｍの間のＣＤスペクトルが、異なる二次構造型：アルファヘリックス、平行ベータシートおよび逆平行ベータシート、ターンなどに関して分析可能であることが示されている。ｐＨ５／６／７のシトレート／ホスフェートバッファー単独中の抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥの二次構造の変化を、ＦＴＩＲ（図４Ａ）およびＣＤ（図４Ｂ）によりモニターした。図４Ａおよび４Ｂに示すように、ＡＤＣ１－ＭＭＡＥおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＦの物理的特徴は、抗体１と比較して、構造化されていない構成要素においてわずかに改変された。さらに、図４ＡのＦＴＩＲデータにより証明されたように、抗体１単独と比較して、ＡＤＣ１－ＭＭＡＥおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＦにおいてわずかに改変された構造化されていない構成要素が存在した。しかし、全体として、３種の分子はそれぞれ、１６３８ｃｍ^－１において＞４０％のβシートのバンドの存在を示した。ＣＤの結果は、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよび抗体１と比較して、ＡＤＣ１－ＭＭＡＥに関して異なるプロファイルを示した（図４Ｂ）。しかし、全体として、これらの分子はそれぞれ、２８０ｎｍにおいて負の楕円率を有するＳ字型プロファイルを有した。

【0234】

抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥの安定性促進研究
安定性促進研究は、通常長期にわたって発生する条件への短期曝露の効果に対する情報を提供する助けになり得る。抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥを、１０ｍＭシトレート／ホスフェートバッファー、ｐＨ６中低濃度（１ｍｇ／ｍｌ）および１５ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．７５中高濃度（６０ｍｇ／ｍｌ）の両方で製剤化した。安定性は、最も安定なｐＨにおいて４０℃で７日後、モノマーの喪失が５％未満として定義した。

【0235】

これらの研究の結果を、図５および図６に示す。図５は、初期時点（Ｔ０）および４０℃において７日間保存後の凝集（ＳＥＣ分析により決定された凝集体の％として）を示す。図５は、１ｍｇ／ｍｌの濃度において、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよび抗体１と比較して、低濃度においてＡＤＣ１－ＭＭＡＥの凝集増加傾向が存在することを示している。図６は、初期時点（Ｔ０）および４０℃において７日間保存後の凝集（凝集体の％として）を示す。図６は、６０ｍｇ／ｍｌの濃度において、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよび抗体１と比較して、高濃度においてＡＤＣ１－ＭＭＡＥの有意な凝集増加傾向が存在することを示している。さらに、凝集に対して、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン（図６では、標識された「ＨＰＢＣＤ」）などの公知の安定化剤の影響は存在しなかった。

【0236】

抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥの血漿安定性
不安定な化合物は急速なクリアランスおよび短い半減期を有し、不十分なｉｎ ｖｉｖｏ性能をもたらすので、血漿安定性は、薬物の発見および開発において重要な役割を果たす。抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥのｉｎ ｖｉｔｒｏの血清安定性を、血清安定性アッセイで評価した。簡潔に言うと、抗体をＡｅｘａ Ｆｌｕｒ（Ｒ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識した。標識された抗体１およびＡＤＣ－１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ－１－ＭＭＡＥを、その後、ろ過された血清中でインキュベートした。試料を、０、１、３、５、７日目に回収し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により分析した。高分子量（ＨＭＷ）凝集体のパーセントの勾配を、０－７日目の間で計算した。安定性を、１日当たり１％未満のＨＭＷ種として定義した。従って、勾配が低いほど、凝集の存在が少ない。より詳細には、図７のグラフは、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦの勾配（０．５％）は、抗体１（１．１０％）およびＡＤＣ１－ＭＭＡＥ（２．３０）より低く、従って、凝集が少なく、血漿安定性が優れていることを示している。図７はまた、さまざまな他の分子、例えば、抗体およびＤＶＤ－Ｉｇに関するＨＭＷ凝集体のパーセントの勾配もまた、比較目的で記載している。

【0237】

高濃度および低濃度の抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－－ＭＭＡＥの凍結／解凍安定性
抗体の凝集は、開発、製造および保存の間の典型的なストレス因子である、凍結／解凍および昇温により誘導される。抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥを、０、１または２回の凍結－解凍サイクルに供し、分光技術（ＳＥＣ）により特徴付けた。高濃度の抗体１（２１０ｍｇ／ｍｌ）、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ（１３５ｍｇ／ｍｌ）およびＡＤＣ１－ＭＭＡＥ（１４５ｍｇ／ｍｌ）を、１５ｍＭヒスチジンバッファー、ｐＨ５．７５中で製剤化した。モノマー％（ＳＥＣにより決定）を示す結果を図８Ａに記載するが、図８Ａは３種の分子の中で凝集（２Ｆ／Ｔサイクル後にＨＭＷ種の増加が＜２％ととして定義された。）の変化がなかったことを示唆している。図８Ｂに示された実験において、同じ濃度の抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥを、１０ｍＭシトレートおよび１０ｍＭホスフェートバッファー、ｐＨ７．０中１ｍｇ／ｍｌの濃度において製剤化した。図８Ａおよび８Ｂに示すように、抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥの中で、高濃度または低濃度のいずれかにおいても、１または２回のサイクルの凍結／解凍後、凍結／解凍安定性に有意な変化はなかった。

【0238】

粒子形成を、シトレート／ホスフェートバッファー、ｐＨ６、単独中１ｍｇ／ｍｌの濃度で、凍結／解凍（０、１または２回の凍結／解凍サイクル）の間、３種の分子に関して試験した。不可視粒子（それぞれ、≧１０μｍおよび≧２５μｍ）は、薬局方限界以下であることが決定された（それぞれ、≧１０μｍおよび６００／Ｍｌ以下（≧２５μｍ）（図９Ａ）。マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）を使用して、不可視粒子（１０ミクロン未満）を検出および定量した（図９Ｂ）。図９Ａおよび９Ｂは、抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥに関する不可視粒子の全体の増加を継時的に記載している。

【0239】

抗体１対ＭＭＡＦまたはＭＭＡＥを含むＡＤＣ１の溶解度
１０ｍＭシトレートおよび１０ｍＭホスフェートバッファー系、ｐＨ６を含有する製剤中の抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥの溶解度を、５℃において検査した。溶解度は、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化された場合、沈殿を有さない溶液として定義された。抗体１、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥそれぞれの溶解度は、下記：抗体１＞２１０ｍｇ／ｍＬ；ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ：＞１３５ｍｇ／ｍＬ（ソース１）；ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ：＞９２ｍｇ／ｍＬＡ（ソース２）；ＡＤＣ１－ＭＭＡＥ：＞１４５ｍｇ／ｍＬ（ソース１）；およびＡＤＣ１－ＭＭＡＥ：＞１１６ｍｇ／ｍＬ（ソース２）であることが決定された。溶解度は上記の濃度を超えてもよいが、限定された材料はさらなる濃度が防止されることに留意されたい。

【0240】

結論
全体として、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびＡＤＣ１－ＭＭＡＥは、例えば、本明細書に記載の促進研究およびアンフォールディングアッセイに記載のように非複合体化抗体１より安定性が低いことが示された。

【0241】

［実施例２］
ＡＤＣ１－ＭＭＡＦの安定凍結乾燥製剤
ＡＤＣ１－ＭＭＡＦは、ＭＭＡＦに共有結合された抗体１を含む抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体である。ＡＤＣ１－ＭＭＡＦを、再構成による注射用凍結乾燥粉末として製剤化し、ガラスバイアルに充填した。凍結乾燥粉末を、５ｍＬの注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）で再構成し、２０ｍｇ／ｍＬのＡＤＣ１－ＭＭＡＦ注射用溶液を提供した。薬物製品製剤は、単回使用のためであり、防腐剤は含有しなかった。ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ／バイアル（凍結乾燥粉末）および／ｍＬ（再構成溶液）の組成を、下記の表１に記載する。再構成薬物製品は、注入による用量投与のために０．９％の食塩水（Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ＵＳＰ）で希釈した。

【0242】

【表1】

【0243】

表１に記載の製剤は、抗ＥＧＦＲ ＡＤＣに関する凍結乾燥製剤の代表であり、複合体はオーリスタチン誘導体、例えばＭＭＡＦである。該製剤は、バッファー、糖、界面活性剤および抗ＥＧＦＲ抗体薬物複合体を含む。

【0244】

実施例３－５は、実施例２に記載の凍結乾燥ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ製剤を試験する安定性研究を記載する。実施例６－８は、精製された実施例２に記載の凍結乾燥ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ製剤を試験する安定性研究を記載する。安定性研究のために、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ（またはＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ）は、灰色のゴムのストッパーおよび灰色のプラスチックキャップにより密閉された２０ｍｌの無色のガラスバイアルにおいて、凍結乾燥物として保存された。ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ（またはＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ）は、安定性試験のために、下記の３つの別個の条件下：５℃；２５℃（相対湿度６０％）；４０℃（相対湿度７５％）で保存された。

【0245】

［実施例３］
５℃における凍結乾燥製剤中のＡＤＣ１－ＭＭＡＦの安定性
下記の実験を、初期時点において、および凍結乾燥物を５℃において１８か月までの間保存した後に再構成後、ＳＷＦＩで再構成した後に実施した。

【0246】

凍結乾燥物および再構成溶液の外観は、５℃における長期保存により影響を受けなかった。

【0247】

凍結乾燥物および再構成溶液の外観を視覚的に評価し、凍結乾燥物が、実際に可視の異質な微粒子状物質を含まず、充填材料中に水分を含まないことを確認した。初期時点において、および５℃において１２ヶ月まで保存した後の再構成後、凍結乾燥物の外観は、前述の基準を満たした。５℃において１２ヶ月までの間保存した後の再構成後、再構成溶液は、無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まなかった。

【0248】

溶液の色は、５℃における長期保存により影響受けなかった
再構成溶液の色（視覚的）をブルー／イエロースケール（ＢＹスケール）を使用して評価し、試料を、参照溶液に対して試験して、値を記録した。初期時点において、および５℃において１２ヶ月まで保存した後の再構成後、全ての再構成溶液は、７以下のＢＹスケール基準を有した。従って、保存は溶液の色に影響を及ぼさなかった。

【0249】

溶液の透明度および乳白色は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液の透明度および乳白色を、光散乱原理を使用して標準的比濁計により測定し、それぞれＰｈ．ＥｕｒまたはＵＳＰの方法に従った。（この方法は、実施例４から８に関しても実施した。）。初期時点および５℃において１２ヶ月まで保存した後の再構成後において、再構成溶液の外観は、参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）、ｐｈ．Ｅｕｒによる）（≦ＲＳＩＩ）の乳白色を超えなかった。

【0250】

溶液のタンパク質含有量は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のタンパク質含有量を決定した。ＡＤＣのタンパク質濃度を、２８０ｎｍの波長およびＡＤＣ１－ＭＭＡＦ透過係数（１．４３）を使用して、分光測定的に決定した（これは、実施例４から８に関しても実施した。）。初期時点において、再構成溶液のタンパク質含有量は１８．８ｍｇ／ｍｌであった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のタンパク質含有量は２０．２ｍｇ／ｍｌであった。

【0251】

溶液の生物活性は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
ヒト類表皮がん細胞系を使用する細胞障害性アッセイを使用して、細胞障害活性を有することが既に確認されているＡＤＣ１－ＭＭＡＦ対照（１００％活性を有する対照）と比較した再構成溶液の生物活性（％）を試験した。初期時点において、相対生物活性は１０９％であった。５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１０５％であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は９７％であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１０８％であった。５℃において９ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１０５％であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は９９％であった。５℃において１８ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１１２％であった。

【0252】

分子および／または分子複合体のサイズは、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のサイズ排除クロマトグラフィーを、Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を使用して実施した。ＳＥ－ＨＰＬＣは、サイズ排除ＨＰＬＣを使用してＡＤＣ１－ＭＭＡＦの純度を決定した。巨大分子は、分子サイズの低下に従ってゲルろ過ＨＰＬＣの間に均一濃度で分離される。純度を、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ主要ピークの面積と、バッファー関連ピークを除く試料クロマトグラムの合計面積とを比較することによって決定した。この方法は、高分子量凝集体および切断型抗体種をＡＤＣ１－ＭＭＡＦ主要ピークから分離できる。この方法を、実施例４から８においても使用した。

【0253】

主要ピーク（％）を、高分子量種（％）および低分子量種（％）に加えて測定した。初期時点において、主要ピークは９８．９％であった。高分子量種は０．９％であり、低分子量種は０．２％であった。

【0254】

５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．８％であった。高分子量種は０．９％であり、低分子量種は０．２％であった。

【0255】

５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．８％であった。高分子量種は１．０％であり、低分子量種は０．２％であった。

【0256】

５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９９．０％であった。高分子量種は０．９％であり、低分子量種は０．２％であった。５℃において９ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．９％であった。高分子量種は０．９％であり、低分子量種は０．３％であった。

【0257】

５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．８％であった。高分子量種は０．８％であり、低分子量種は０．４％であった。

【0258】

５℃において１８ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．８％であった。高分子量種は０．９％であり、低分子量種は０．３％であった。

【0259】

従って、初期、１、３、６、９、１２および１８か月の時点の測定の中で、全ての時点において、主要ピークの％ならびに高分子量種および低分子量種は、わずかな変化から変化なしを示した。

【0260】

溶液のクロマトグラフピークは、５℃における長期保存により変化しなかった
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）を、Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）を使用して再構成溶液に対して実施した。陽イオン交換クロマトグラフィーにおいて、正に荷電した分子は、負に荷電した固体支持体に引き付けられる。陽イオン交換（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）クロマトグラフィーアッセイは、参照基準（既に特徴付けられたＡＤＣ１－ＭＭＡＦ）との比較を介した、試験試料中のＡＤＣ１－ＭＭＡＦの安定性をモニターするために使用される、荷電に基づく分離方法である。この方法は、主要ピークを酸性種および塩基性種から分離することができる。

【0261】

初期時点において、および５℃において１８か月まで保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、対照のピークパターンに適合した試料の優勢なクロマトグラフピークパターンにより特徴付けられ、対照は既に特徴付けられたＡＤＣ１－ＭＭＡＦであった。従って、クロマトグラフピークは、５℃における１８か月の過程にわたって相対的に変化しないままであった。

【0262】

溶液の純度は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ－Ｒ）を、初期時点および５℃において１８か月まで保存した後の再構成後において、再構成溶液に対して実施し、溶液の純度を決定した。初期時点において、純度パーセントは９７．４％であった。５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．６％であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９６．９％であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．１％であった。５℃において９ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９６．７％であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．２％であった。５℃において１８ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．３％であった。従って、再構成溶液の純度は、初期時点と、１８か月までの再構成後との間に有意に変化しなかった。

【0263】

溶液の薬物抗体比は、５℃における長期保存後変化しなかった
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、薬物抗体比（ＤＡＲ）を１８か月の期間にわたって決定するために、再構成溶液に対して実施した。ＨＩＣは、相対疎水性に基づきタンパク質を分離するために使用される。ＨＩＣ法は、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦの疎水性の測定法である。結合された成分は、 移動相の塩濃度を低下させる勾配を使用することによって、疎水性の増加の順にリガンドから溶出される。ＡＤＣ１－ＭＭＡＦに関して、カラムから溶出された最初のピークは非複合体化抗体であった。残存ピークは、薬物－リンカー分子／抗体の数の増加を表した。従って、薬物－リンカー分子／抗体の数を、ピーク保持時間および相対ピーク面積により決定した。この方法を、実施例４から８においても使用した。初期時点において、および５℃において１８ヶ月まで保存した後の再構成後、薬物抗体比（ＤＡＲ）は、全ての再構成溶液に関して４．１－４．２であった。

【0264】

溶液中の非複合体化抗体のパーセントは、５℃における長期保存後変化しなかった
再構成溶液をさらに分析し、ＤＡＲを決定するための（および実施例４から８においても使用した）上記のＨＩＣ法を使用して、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦに関する非複合体化抗体のパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは４．１以下であった。５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは４．１以下であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは４．１以下であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは３．９以下であった。５℃において９ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは４．０以下であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは４．０以下であった。５℃において１８ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは４．０以下であった。従って、全ての時点におけるパーセントは同様であった。

【0265】

溶液中のクエンチされた薬物リンカーのパーセントは、５℃における長期保存により変化しなかった
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を再構成溶液に対して実施して、クエンチされた薬物リンカーのパーセントを決定した。ＲＰ－ＨＰＬＣは、これらの極性に大きく基づく疎水性マトリックスとのこれらの相互作用に基づく、分子の分離である。この方法は、溶液中のクエンチされた薬物－リンカーおよび合計不純物の量を決定する。ＡＤＣ１－ＭＭＡＦを、メタノールによる沈殿、その後の遠心分離により試料から除去した、クエンチされた薬物－リンカーおよび合計不純物に関する上清の分析を、ＲＰ－ＨＰＬＣによりＣ－１８カラムおよび２１４ｎｍにおけるＵＶ検出を使用して実施した。この方法は、実施例４から８においても使用した。

【0266】

初期時点において、パーセントは０．００７以下であった。５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００６以下であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。５℃において９ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００７以下であった。５℃において１８ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。従って、全ての時点におけるパーセントはクエンチされた薬物リンカーのパーセントに関して同様であった。

【0267】

溶液中の合計不純物は、５℃における長期保存後変化しなかった
再構成溶液をさらに分析して、合計不純物のパーセントを、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用し、クエンチされたリンカーのパーセントに関する（実施例４から８においても使用した。）上記の方法を使用して決定した。初期時点において、パーセントは０．００７以下であった。５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００６以下であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。５℃において９ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００７以下であった。５℃において１８ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。従って、全ての時点における合計不純物に関するパーセントは同様であった。

【0268】

溶液の微粒子汚染は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
微粒子汚染を、不可視粒子を決定することによって評価した。許容基準は、１０μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６０００以下であること（ＵＳＰ（ＵＳ薬局方）およびヨーロッパ薬局方基準）によって満たされた。初期時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器は３３であった。５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は２２であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は２５であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は７３であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は２０であった。従って、全ての時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。

【0269】

許容基準は、２５μｍを超える粒子の数／容器を決定し、ＮＭＴが６００であること（ＵＳＰ（ＵＳ薬局方）およびヨーロッパ薬局方基準）によってさらに満たされた。初期時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は２であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は２であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は１０であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は３であった。従って、全ての時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。

【0270】

溶液の含水量は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
含水量を、Ｋａｒｌ－Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定により評価した。Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定は、電量的または容積的滴定を使用して試料中の微量の水を決定し、パーセントとして記録する。初期時点において、再構成溶液中の水分パーセントは２．０％であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．７％であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．７％であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。従って、初期時点において、ならびに５℃において１、３、６および１２ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の含水量は無視できるほどであった。

【0271】

溶液のｐＨは、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のｐＨを、初期時点において、ならびに５℃において１、３、６および１２ヶ月間保存した後の再構成後、決定した。初期時点において、再構成溶液のｐＨ値は６．０であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。５℃において６ヶ月間保存した後の再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。５℃において１２ヶ月間保存した後の再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。

【0272】

溶液のモル浸透圧濃度は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のモル浸透圧濃度を、初期時点および５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、溶質のミリオスモルの平均値／キログラム溶媒（ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）を測定することによって決定した。初期時点において、モル浸透圧濃度は２３５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇであった。１ヶ月において、モル浸透圧濃度は２５１ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇであった。

【0273】

［実施例４］
２５℃における凍結乾燥製剤中のＡＤＣ１－ＭＭＡＦの安定性
下記の試験を、初期時点において、ならびに凍結乾燥物を２５℃（相対湿度６０％）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、ＳＷＦＩで再構成した後に実施した。

【0274】

凍結乾燥物および再構成溶液の外観は、２５℃における長期保存により影響を受けなかった。
凍結乾燥物および再構成溶液の外観を視覚的に評価し、凍結乾燥物が実際に可視の異質な微粒子状物質を含まず、充填材料中に水分を含まないことを確認した。初期時点において、ならびに２５℃（相対湿度６０％）において１、３および６ヶ月保存した後の再構成後、凍結乾燥物の外観は、前述の基準を満たした。再構成後、再構成溶液は、無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まなかった。従って、初期時点において、ならびに２５℃（相対湿度６０％）において１、３および６ヶ月保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、溶液が無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の微粒子状物質は実際に含まれなかった。

【0275】

溶液の色は、２５℃における長期保存により影響を受けなかった
溶液の色（視覚的）をブルー／イエロースケール（ＢＹ）スケールを使用して評価し、試料を、参照溶液に対して試験して、値を記録した。初期時点において、ならびに２５℃（相対湿度６０％）において１、３および６ヶ月保存した後の再構成後、全ての再構成溶液は、７以下のＢＹスケール基準を有した。従って、保存は溶液の色に影響を及ぼさなかった。

【0276】

溶液の透明度および乳白色は、２５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液の透明度および乳白色を評価した。再構成溶液の許容基準は、再構成溶液が参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒ．による。）の乳白色を超えなかった場合、満たされた。初期時点において、ならびに２５℃（相対湿度６０％）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒ．による）（≦ＲＳＩＩ）の乳白色を超えなかった。

【0277】

溶液の生物活性は、２５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
ヒト類表皮がん細胞系を使用する細胞障害性アッセイを使用して、細胞障害活性を有することが既に確認されているＡＤＣ１－ＭＭＡＦ対照（１００％活性を有する対照）と比較した再構成溶液の生物活性（％）を試験した。初期時点において、相対生物活性は１０９％であった。２５℃（相対湿度６０％）において１ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１１３％であった。２５℃／相対湿度６０％において３ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１０３％であった。２５℃／相対湿度６０％において６ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１０９％であった。

【0278】

分子および／または分子複合体のサイズは、２５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
サイズ排除クロマトグラフィー（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）を、Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を使用して実施した。主要ピーク（％）を、高分子量種（％）および低分子量種（％）に加えて測定した。初期時点において、主要ピークは９８．９％であった。高分子量種は０．９％であり、低分子量種は０．２％であった。２５℃（相対湿度６０％）において１ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．８％であった。高分子量種は１．０％であり、低分子量種は０．２％であった。２５℃（相対湿度６０％）において３ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．８％であった。高分子量種は１．０％であり、低子量種は０．２％であった。２５℃（相対湿度６０％）において６ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．９％であった。高分子量種は０．９％であり、低分子量種は０．２％であった。従って、初期、１、３および６ヶ月の測定の中で、主要ピークの％ならびに高分子量種および低分子量種は、わずかに変化したものから変化しなかったものが存在した。

【0279】

溶液のクロマトグラフピークは、２５℃における長期保存により変化しなかった
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）を、Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）により実施した。初期時点において、ならびに２５℃／相対湿度６０％において１ヶ月間、３ヶ月間および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観を、参照基準のピークパターンに適合した試料の優勢なクロマトグラフピークパターンにより特徴付けた。

【0280】

溶液の純度は、２５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった。
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ－Ｒ）を、初期時点において、ならびに２５℃（相対湿度６０％）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液に対して実施した。初期時点において、純度パーセントは９７．４％であった。１ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセンは９７．４％であった。３ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９６．９％であった。６ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．１％であった。従って、再構成溶液の純度は、初期時点と、２５℃（相対湿度６０％）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後との間に有意に変化しなかった。

【0281】

溶液の薬物抗体比は、２５℃における長期保存後変化しなかった。
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、再構成溶液に対して実施した。初期時点において、ならびに２５℃（相対湿度６０％）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、全ての再構成溶液に関してＤＡＲが４．２であることを測定した。

【0282】

溶液中の非複合体化抗体のパーセントは、長期保存後変化しなかった
再構成溶液を分析して、非複合体化抗体のパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは４．１以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセント４．１以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは４．１以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは３．９以下であった。

【0283】

溶液中のクエンチされた薬物リンカーのパーセントは、２５℃における長期保存により変化しなかった
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を再構成溶液に対して実施し、クエンチされたリンカーのパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは０．００７以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００６以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。従って、全ての時点においてパーセントは、クエンチされた薬物リンカーのパーセントに関して同様であった。

【0284】

溶液中の合計不純物は、２５℃における長期保存後変化しなかった
再構成溶液を分析して、合計不純物のパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは０．００７以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００６以下であった。２５℃（相対湿度６０％）において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。従って、全ての時点において、合計不純物に関するパーセントは同様であった。

【0285】

溶液の微粒子汚染は、２５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
微粒子汚染を、不可視粒子を決定することによって評価した。許容基準は、１０μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６０００以下であること（ＵＳＰ（ＵＳ薬局方）およびヨーロッパ薬局方基準）によって満たされた。初期時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器は３３であった。２５℃（相対湿度６０％）において１ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は１８であった。２５℃（相対湿度６０％）において３ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は２５であった。２５℃（相対湿度６０％）において６ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は５０であった。従って、全ての時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。許容基準は、２５μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６００以下であることによってさらに満たされた。初期時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。２５℃（相対湿度６０％）において１ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は２であった。２５℃（相対湿度６０％）において３ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は２であった。２５℃（相対湿度６０％）において６ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は２であった。従って、全ての時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。

【0286】

溶液の含水量は、２５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
含水量を、Ｋａｒｌ－Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定により評価した。初期時点において、再構成溶液中の水分パーセントは２．０％であった。２５℃（相対湿度６０％）において１ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは検出不能であった。２５℃（相対湿度６０％）において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。２５℃（相対湿度６０％）において６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．９％であった。従って、初期時点および１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の含水量は無視できるほどであった。

【0287】

溶液のｐＨは、２５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のｐＨを、初期時点において、ならびに２５℃（相対湿度６０％）において３および６ヶ月間保存した後の再構成後、決定した。初期時点において、再構成溶液のｐＨ値は６．０であった。２５℃（相対湿度６０％）において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。２５℃（相対湿度６０％）において６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。

【0288】

［実施例５］
４０℃におけるＡＤＣ１－ＭＭＡＦ凍結乾燥製剤の安定性
下記の試験を、初期時点において、ならびに４０℃／（７５％相対湿度）において凍結乾燥物を１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、実施例２に記載の凍結乾燥ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ製剤をＳＷＦＩで再構成した後に実施した。

【0289】

凍結乾燥物および再構成溶液の外観は、４０℃における長期保存により影響を受けなかった
凍結乾燥物および再構成溶液の外観を視覚的に評価し、凍結乾燥物が、実際に可視の異質な微粒子状物質を含まず、充填材料中に水分を含まないことを確認した。初期時点において、ならびに４０℃（７５％相対湿度）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、凍結乾燥物の外観は、前述の基準を満たした。再構成後、再構成溶液は、無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まなかった。初期時点において、ならびに４０℃（７５％相対湿度）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まなかった。

【0290】

溶液の色は、４０℃における長期保存により影響を受けなかった
溶液の色（視覚的）を、ＢＹスケールを使用して評価し、試料を、参照溶液に対して試験して、値を記録した。初期時点において、ならびに４０℃（７５％相対湿度）において１、３および６ヶ月保存した後の再構成後、全ての再構成溶液は、７以下のＢＹスケール基準を有した。従って、保存は溶液の色に影響を及ぼさなかった。

【0291】

溶液の透明度および乳白色は、４０℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液の透明度および乳白色を評価した。再構成溶液の許容基準は、再構成溶液が参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒ．による。）の乳白色を超えなかった場合、満たされた。初期時点において、ならびに４０℃（７５％相対湿度）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒによる）（≦ＲＳＩＩ）の乳白色を超えなかった。

【0292】

溶液の生物活性は、４０℃における長期保存により影響を及ぼされなかった。
ヒト類表皮がん細胞系を使用する細胞障害性アッセイを使用して、細胞障害活性を有することが既に確認されているＡＤＣ１－ＭＭＡＦ対照（１００％活性を有する対照）と比較した再構成溶液の生物活性（％）を試験した。初期時点において、生物活性は１０９％であった。４０℃（７５％相対湿度）において１ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１１７％であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１１３％であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１１０％であった。従って、全ての時点における生物活性のパーセントは、１００％を超える生物活性を有した。

【0293】

分子および／または分子複合体のサイズは、４０℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
サイズ排除クロマトグラフィー（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）を、Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を使用して実施した。主要ピーク（％）を、高分子量種（％）および低分子量種（％）に加えて測定した。初期時点において、主要ピークは９８．９％であった。高分子量種は０．９％であり、低分子量種は０．２％であった。４０℃（７５％相対湿度）において１ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．８％であった。高分子量種は１．０％であり、低分子量種は０．２％であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．７％であった。高分子量種は１．１％であり、低分子量種は０．２％であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９８．８％であった。高分子量種は１．０％であり、低分子量種は０．２％であった。初期、１、３および６ヶ月の測定の中で、主要ピークの％ならびに高分子量種および低分子量種は、わずかに変化したものから変化しなかったものが存在した。

【0294】

溶液のクロマトグラフピークは、４０℃における長期保存により変化しなかった
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）を、Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）により実施した。初期時点において、ならびに４０℃（７５％相対湿度）において１ヶ月間、３ヶ月間および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観を、参照基準のピークパターンに適合した試料の優勢なクロマトグラフピークパターンにより特徴付けた。

【0295】

溶液の純度は、長期保存により影響を及ぼされなかった
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ－Ｒ）を、初期時点において、ならびに４０℃（７５％相対湿度）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液に対して実施し、溶液の純度パーセントを決定するために使用した。初期時点において、純度パーセントは９７．４％であった。１ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．５％であった。３ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９６．９％であった。６ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．２％であった。従って、再構成溶液の純度は、初期時点と、４０℃（７５％相対湿度）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後との間に有意に変化しなかった。

【0296】

溶液の薬物抗体比は、４０℃における長期保存後変化しなかった
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、再構成溶液に対して実施した。初期時点において、ならびに４０℃（７５％相対湿度）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、全ての再構成溶液に関してＤＡＲが４．２であることを測定した。

【0297】

溶液中の非複合体化抗体のパーセントは、４０℃における長期保存後変化しなかった
初期時点において、パーセントは４．１以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において、１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは４．１以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは４．１以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは３．９以下であった。従って、全ての時点においてパーセントは同様であった。

【0298】

溶液中のクエンチされた薬物リンカーのパーセントは、４０℃における長期保存により変化しなかった
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を再構成溶液に対して実施して、クエンチされた薬物リンカーのパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは０．００７以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００６以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。従って、全ての時点においてパーセントは、クエンチされた薬物リンカーのパーセントに関して同様であった。

【0299】

溶液中の合計不純物は、４０℃における長期保存後変化しなかった
再構成溶液を分析して、合計不純物のパーセントを、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して決定した。初期時点において、パーセントは０．００７以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００６以下であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００５以下であった。従って、全ての時点において、合計不純物に関するパーセントは同様であった。

【0300】

溶液の微粒子汚染は、４０℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
微粒子汚染を、不可視粒子を決定することによって評価した。許容基準は、１０μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６０００以下であること（ＵＳＰ（ＵＳ薬局方）およびヨーロッパ薬局方基準）によって満たされた。初期時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器は３３であった。４０℃（７５％相対湿度）において１ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は５であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は１２であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は３２であった。従って、全ての時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。許容基準は、２５μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６００以下であることによってさらに満たされた。初期時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。４０℃（７５％相対湿度）において１ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は２であった。従って、全ての時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。

【0301】

溶液の含水量は、４０℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
含水量を、Ｋａｒｌ－Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定により評価した。Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定は、電量的または容積的滴定を使用して試料中の微量の水を決定し、パーセントとして記録する。初期時点において、再構成溶液中の水分パーセントは２．０％であった。４０℃（７５％相対湿度）において１ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは検出不能であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．９％であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の含水量は１．０％であった。従って、初期時点および１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の含水量は無視できるほどであった。

【0302】

溶液のｐＨは、４０℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のｐＨを、初期時点において、ならびに４０℃（７５％相対湿度）において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、決定した。初期時点において、再構成溶液のｐＨ値は６．０であった。４０℃（７５％相対湿度）において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。４０℃（７５％相対湿度）において６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。

【0303】

ＡＤＣ１－ＭＭＡＦの精製を、本明細書に記載され、米国特許仮出願第６１／７９２８３４号明細書および２０１４年３月１４日出願の米国特許出願第１４／２１０，６０２号明細書に開示のバッチ精製方法に従って実施し、当該特許出願は、参照によりこの内容が本明細書に組み込まれる。実施例６から８に記載のＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐを含むＡＤＣ混合物に関する平均ＤＡＲは約３．０であった。

【0304】

実施例６から８に記載の安定性実験を、初期時点においてＳＷＦＩで再構成後およびＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐを含む凍結乾燥物を、５℃において３ヶ月間保存した後、ならびに２５℃（相対湿度６０％）および４０℃／（７５％相対湿度）において１および３ヶ月間保存した後の再構成後に実施した。

【0305】

［実施例６］
５℃における凍結乾燥製剤中の精製されたＡＤＣ１－ＭＭＡＦ（ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ）の安定性
下記の試験を、初期時点において、および５℃において凍結乾燥物を３ヶ月までの間保存した後の製剤の再構成後、実施例２に記載の凍結乾燥ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ製剤をＳＷＦＩで再構成した後に実施した。

【0306】

凍結乾燥物および再構成溶液の外観は、５℃における長期保存により影響を受けなかった
凍結乾燥物および再構成溶液の外観を視覚的に評価し、凍結乾燥物が、実際に可視の異質な微粒子状物質を含まず、充填材料中に水分を含まないことを確認した。初期時点において、および５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、凍結乾燥物の外観は、前述の基準を満たした。再構成後、再構成溶液は、無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まなかった。

【0307】

溶液の色は、５℃における長期保存により影響を受けなかった
再構成溶液の色（視覚的）をブルー／イエロースケール（ＢＹスケール）を使用して評価し、試料を、参照溶液に対して試験して、値を記録した。初期時点において、および５℃において３ヶ月保存した後の再構成後、全ての再構成溶液は、７以下のＢＹスケール基準を有した。従って、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ製剤の保存は溶液の色に影響を及ぼさなかった。

【0308】

溶液の透明度および乳白色は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液の透明度および乳白色を評価した。初期時点において、および５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒによる）（≦ＲＳＩＩ）の乳白色を超えなかった。

【0309】

溶液の生物活性は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
ヒト類表皮がん細胞系を使用する細胞障害性アッセイを使用して、細胞障害活性を有することが既に確認されているＡＤＣ１－ＭＭＡＦ対照（１００％活性を有する対照）と比較した再構成溶液の生物活性（％）を試験した。初期時点において、相対生物活性は１０２％であった。凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は９８％であった。

【0310】

分子および／または分子複合体のサイズは、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のサイズ排除クロマトグラフィー（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）を、Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を使用して実施した。主要ピーク（％）を、高分子量種（％）および低分子量種（％）に加えて測定した。初期時点において、主要ピークは９９．５％であった。高分子量種は０．２％であり、低分子量種は０．２％であった。凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９９．６％であった。初期および凍結乾燥形態で３ヶ月間保存した後の再構成後の両方において、高分子量種は０．２％であり、低分子量種は０．２％であった。

【0311】

従って、初期および３ヶ月の時点の測定の中で、主要ピークの％ならびに高分子量種および低分子量種は、全ての時点においてわずかな変化から変化なしを示した。

【0312】

溶液のクロマトグラフピークは、５℃における長期保存により変化しなかった
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）を、Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）を使用して、再構成溶液に対して実施した。陽イオン交換クロマトグラフィーにおいて、正に荷電した分子は、負に荷電した固体支持体に引き付けられる。初期時点において、および凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観を、対照のピークパターンに適合した試料の優勢なクロマトグラフピークパターンにより特徴付け、対照は既に特徴付けられたＡＤＣ１－ＭＭＡＦであった。従って、クロマトグラフピークは、５℃における３ヶ月の過程にわたって相対的に変化しないままであった。

【0313】

溶液の純度は、５℃における長期保存により影響を及ぼされなかった
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ－Ｒ）を、初期時点において、および５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液に対して実施して、溶液の純度を決定した。初期時点において、純度パーセントは９７．４％であった。凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．６％であった。従って、再構成溶液の純度は、初期時点と３ヶ月間保存との間に有意に変化しなかった。

【0314】

ＡＤＣ１－ＭＭＡＦの薬物抗体比（ＤＡＲ）は、５℃における保存後に変化しないままであった
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、３ヶ月の保存期間にわたった薬物抗体比（ＤＡＲ）を決定するために、再構成溶液に対して実施した。ＨＩＣは、相対疎水性に基づきタンパク質を分離するために使用される。初期時点において、および凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦに関する平均薬物抗体比（ＤＡＲ）は、それぞれ３．０および２．９であることが測定された。

【0315】

溶液中の非複合体化抗体１のパーセントは、５℃における保存後変化しなかった
再構成溶液を分析して、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦに関する非複合体化抗体のパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは７．６以下であった。凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは７．６以下であった。従って、非複合体化抗体１のパーセントは、３ヶ月の期間にわたって同じままであった。

【0316】

溶液中のクエンチされた薬物リンカーのパーセントは、５℃における保存により変化しなかった
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を再構成溶液に対して実施し、クエンチされた薬物リンカーのパーセントを決定した。クエンチされた薬物リンカーのパーセントは、初期および凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後の両方において検出されなかった（実用検出限界は０．００１％であった。）。

【0317】

溶液中の合計不純物は、５℃における保存後変化しなかった
再構成溶液を、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して分析し、合計不純物のパーセントを決定した。合計不純物のパーセントは、初期および凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後の両方において検出不能であった（実用検出限界は０．００１％であった；実用定量限界は０．００３％であった。）。

【0318】

溶液の微粒子汚染は、５℃における保存により影響を及ぼされなかった
微粒子汚染を、２種の異なる許容基準を使用して不可視粒子を決定することによって評価した。

【0319】

許容基準は、１０μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６０００以下であること（ＵＳＰ（ＵＳ薬局方）およびヨーロッパ薬局方基準）によって満たされた。初期時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器は１３であった。凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は２０であった。従って、両方の時点で１０μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準が満たされた。

【0320】

許容基準は、２５μｍを超える粒子の数／容器を決定し、ＮＭＴが６００であること（ＵＳＰ（ＵＳ薬局方）およびヨーロッパ薬局方基準）によってさらに満たされた。初期時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。従って、両方の時点で２５μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準が満たされた。

【0321】

溶液の含水量は、５℃における保存により影響を及ぼされなかった
含水量を、Ｋａｒｌ－Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定により評価した。Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定は、電量的または容積的滴定を使用して試料中の微量の水を決定し、パーセントとして記録する。初期時点において、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。凍結乾燥形態で５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。従って、初期時点および５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の含水量は無視できるほどであった。

【0322】

溶液のｐＨは、５℃における保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のｐＨを、初期時点において、および５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、決定した。初期時点において、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。５℃において３ヶ月保存した後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。従って、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ組成物の、５℃における３ヶ月間の保存は、ｐＨに影響を及ぼさなかった。

【0323】

［実施例７］
２５℃における凍結乾燥製剤中のＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐの安定性
下記の実験を、初期時点において、ならびに２５℃（相対湿度６０％）において凍結乾燥物を１および３ヶ月間保存した後の再構成後、凍結乾燥ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ製剤（実施例２を参照されたい。）をＳＷＦＩで再構成した後に実施した。

【0324】

凍結乾燥物および再構成溶液の外観は、２５℃における保存により影響を受けなかった
凍結乾燥物および再構成溶液の外観を視覚的に評価し、凍結乾燥物が、実際に可視の異質な微粒子状物質を含まず、充填材料中に水分を含まないことを確認した。初期時点において、ならびに２５℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、凍結乾燥物の外観は、前述の基準を満たした。再構成後、再構成溶液は、無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まなかった。従って、初期時点において、ならびに２５℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、溶液は、無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まないものであった。

【0325】

溶液の色は、２５℃における保存により影響を受けなかった
溶液の色（視覚的）をブルー／イエロー（ＢＹ）スケールを使用して評価し、試料を、参照溶液に対して試験して、値を記録した。初期時点において、ならびに２５℃において１および３ヶ月保存した後の再構成後、全ての再構成溶液は、７以下のＢＹスケール基準を有した。従って、保存は溶液の色に影響を及ぼさなかった。

【0326】

溶液の透明度および乳白色は、２５℃における保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液の透明度および乳白色を評価した。再構成溶液の許容基準は、再構成溶液が参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒ．による。）の乳白色を超えなかった場合、満たされた。初期時点において、ならびに２５℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒによる）（≦ＲＳＩＩ）の乳白色を超えなかった。

【0327】

溶液の生物活性は、２５℃における保存により影響を及ぼされなかった
ヒト類表皮がん細胞系を使用する細胞障害性アッセイを使用して、細胞障害活性を有することが既に確認されているＡＤＣ１－ＭＭＡＦ対照（１００％活性を有する対照）と比較した再構成溶液の生物活性（％）を試験した。
初期時点において、相対生物活性は１０２％であった。２５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１０１％であった。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は９７％であった。

【0328】

分子および／または分子複合体のサイズは、２５℃における保存により影響を及ぼされなかった
サイズ排除クロマトグラフィー（Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）を、Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）により実施した。主要ピーク（％）を、高分子量種（％）および低分子量種（％）に加えて測定した。初期時点において、主要ピークは９９．５％であった。高分子量種は０．２％であり、低分子量種は０．２％であった。２５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９９．５％であった。高分子量種は０．３％であり、低分子量種は０．２％であった。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９９．６％であった。高分子量種は０．３％であり、低分子量種は０．２％であった。従って、主要ピークの％ならびに高分子量種および低分子量種は、初期、１および３ヶ月の測定の中で、わずかに変化したものから変化しなかったものが存在した。

【0329】

溶液のクロマトグラフピークは、２５℃における保存により変化しなかった
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）を、Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）により実施した。初期時点において、ならびに２５℃において１ヶ月間および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観を、参照基準のピークパターンに適合した試料の優勢なクロマトグラフピークパターンにより特徴付けた。

【0330】

溶液の純度は、２５℃の保存により影響を及ぼされなかった
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ－Ｒ）を、初期時点において、ならびに２５℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液に対して実施した。初期時点において、純度パーセントは９７．４％であった。１ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．５％であった。３ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．６％であった。従って、再構成溶液の純度は、初期時点と、２５℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後との間に有意に変化しなかった。

【0331】

溶液中のＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐの薬物抗体比（ＤＡＲ）は、２５℃における保存後変化しないままであった
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、再構成溶液に対して実施した。初期時点において、ＤＡＲは３．０であることが測定された。２５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、ＤＡＲは３．０であることが測定された。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、ＤＡＲは２．９であることが測定された。従って、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐのＤＡＲは、初期時点と、２５℃おいて１および３ヶ月間保存した後の再構成後との間に有意に変化しなかった。

【0332】

溶液中の非複合体化抗体１のパーセントは、２５℃における保存後変化しなかった
再構成溶液を分析して、非複合体化抗体１のパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは７．６以下であった。２５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは７．６以下であった。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは７．６以下であった。

【0333】

溶液中のクエンチされた薬物リンカーのパーセントは、２５℃における保存により変化しなかった
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を再構成溶液に対して実施し、クエンチされたリンカーのパーセントを決定した。初期時点、１ヶ月時点および３ヶ月時点において、クエンチされたリンカー（ｑｕｅｎｃｈｅｄ ｌｉｎｋｅｄ）のパーセントは検出不能であった（実用検出限界は０．００１％であった；実用定量限界は０．００３％であった。）。

【0334】

溶液中の合計不純物は、２５℃における保存後変化しなかった
再構成溶液を分析して、合計不純物のパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは検出されなかった。２５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、不純物のパーセントは０．００３未満であった。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは検出されなかった（実用検出限界は０．００１％であった；実用定量限界は０．００３％であった。）。従って、合計不純物に関するパーセントは全ての時点において同様であった。

【0335】

溶液の微粒子汚染は、２５℃における保存により影響を及ぼされなかった
微粒子汚染を、２つの許容基準に従って、不可視粒子を決定することによって評価した。

【0336】

許容基準は、１０μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６０００以下であること（ＵＳＰ（ＵＳ薬局方）およびヨーロッパ薬局方基準）によって満たされた。初期時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器は１３であった。２５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は１２であった。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は１７であった。従って、全ての時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。許容基準は、２５μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６００以下であることによってさらに満たされた。初期時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。２５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は７であった。従って、全ての時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。

【0337】

溶液の含水量は、２５℃における保存により影響を及ぼされなかった
含水量を、Ｋａｒｌ－Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定により評価した。初期時点において、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。２５℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。従って、初期時点において、ならびに１および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の含水量は無視できるほどであった。

【0338】

溶液のｐＨは、２５℃における保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のｐＨを、初期時点において、ならびに２５℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、決定した。初期時点において、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。２５℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。２５℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。

【0339】

［実施例８］
４０℃におけるＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ凍結乾燥製剤の安定性
下記の試験を、初期時点において、ならびに４０℃／（７５％相対湿度）において凍結乾燥物を１および３ヶ月間保存した後の再構成後、実施例２に記載の凍結乾燥ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐ製剤をＳＷＦＩで再構成した後に実施した。

【0340】

凍結乾燥物および再構成溶液の外観は、４０℃における保存により影響を受けなかった
凍結乾燥物および再構成溶液の外観を視覚的に評価し、凍結乾燥物が、実際に可視の異質な微粒子状物質を含まず、充填材料中に水分を含まないことを確認した。初期時点において、ならびに４０℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、凍結乾燥物の外観は、前述の基準を満たした。再構成後、再構成溶液は、無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まなかった。初期時点において、ならび４０℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、溶液が無色からわずかに黄色の溶液であり、可視の粒子状物質は実際に含まないものであった。

【0341】

溶液の色は、４０℃における保存により影響を受けなかった
溶液の色（視覚的）をＢＹスケールを使用して評価し、試料を、参照溶液に対して試験して、値を記録した。初期時点において、ならびに４０℃において１および３ヶ月保存した後の再構成後、全ての再構成溶液は、７以下のＢＹスケール基準を有した。従って、保存は溶液の色に影響を及ぼさなかった。

【0342】

溶液の透明度および乳白色は、４０℃における保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液の透明度および乳白色を評価した。再構成溶液の許容基準は、再構成溶液が参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒ．による。）の乳白色を超えなかった場合、満たされた。初期時点において、ならびに４０℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観は、参照懸濁液ＩＶ（ヨーロッパ薬局方、ｐｈ．Ｅｕｒ．による）（≦ＲＳＩＩ）の乳白色を超えなかった。

【0343】

溶液の生物活性は、４０℃における保存により影響を及ぼされなかった
ヒト類表皮がん細胞系を使用する細胞障害性アッセイを使用して、細胞障害活性を有することが既に確認されているＡＤＣ１－ＭＭＡＦ対照（１００％活性を有する対照）と比較した再構成溶液の生物活性（％）を試験した。初期時点において、生物活性は１０２％であった。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１０１％であった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、相対生物活性は１０５％であった。従って、全ての時点における生物活性のパーセントは、実施例２の製剤を１００％として、これを上回る生物活性を有した。

【0344】

分子および分子複合体のサイズは、４０℃における保存により影響を及ぼされなかった
サイズ排除クロマトグラフィー（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）を、Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を使用して実施した。主要ピーク（％）を、高分子量種（％）および低分子量種（％）に加えて測定した。初期時点において、主要ピークは９９．５％であった。高分子量種は０．２％であり、低分子量種は０．２％であった。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９９．５％であった。高分子量種は０．３％であり、低分子量種は０．２％であった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、主要ピークは９９．５％であった。高分子量種は０．３％であり、低分子量種は０．２％であった。従って、主要ピークの％ならびに高分子量種および低分子量種は、初期、１および３ヶ月の測定の中で、わずかに変化したものから変化しなかったものが存在した。

【0345】

溶液のクロマトグラフピークは、４０℃における保存により変化しなかった
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）を、Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）により実施した。初期時点において、ならびに４０℃において１ヶ月間および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の外観を、参照基準のピークパターンに適合した試料の優勢なクロマトグラフパターンにより特徴付けた。

【0346】

溶液の純度は、４０℃における保存により影響を及ぼされなかった
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ－Ｒ）を、初期時点において、ならびに４０℃において１、３および６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液に対して実施し、溶液の純度パーセントを決定するために使用した。初期時点において、純度パーセントは９７．４％であった。１ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．５％であった。３ヶ月間保存した後の再構成後、純度パーセントは９７．６％であった。従って、再構成溶液の純度は、初期時点と、４０℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成時、およびその後との間に有意に変化しなかった。

【0347】

ＡＤＣ１－ＭＭＡＦｐの薬物抗体比（ＤＡＲ）は、４０℃における保存後変化しなかった
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、再構成溶液に対して実施した。初期時点において、ＤＡＲは３．０であることが測定された。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、ＤＡＲは３．０であることが測定された。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、ＤＡＲは２．９であることが測定された。従って、ＤＡＲは、初期時点と、４０℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後との間で有意に変化しなかった。

【0348】

溶液中の非複合体化抗体１のパーセントは、４０℃における保存後変化しなかった
初期時点において、非複合体化抗体１のパーセントは、７．６以下であった。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、非複合体化抗体１のパーセントは、７．６以下であった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、非複合体化抗体１のパーセントは、７．６以下であった。従って、全ての時点におけるパーセントは同様であった。

【0349】

溶液中のクエンチされた薬物リンカーのパーセントは、４０℃における保存により変化しなかった
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を再構成溶液に対して実施し、クエンチされたリンカーのパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは検出されなかった。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは検出されなかった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは検出されなかった。従って、全ての時点においてクエンチされた薬物リンカーのパーセントは検出されなかった。

【0350】

溶液中の合計不純物は、４０℃における保存後変化しなかった
再構成溶液を、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して分析し、合計不純物のパーセントを決定した。初期時点において、パーセントは検出されなかった。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは０．００３未満であった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、パーセントは検出されなかった。従って、合計不純物に関するパーセントは全ての時点において同様であった。

【0351】

溶液の微粒子汚染は、４０℃における保存により影響を及ぼされなかった
微粒子汚染を、２つの許容基準に従って、不可視粒子を決定することによって評価した。

【0352】

許容基準は、１０μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６０００以下であること（ＵＳＰ（ＵＳ薬局方）およびヨーロッパ薬局方基準）によって満たされた。初期時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器は１３であった。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は５であった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、１０μｍを超える粒子の数／容器は８であった。従って、全ての時点において、１０μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。

【0353】

許容基準は、２５μｍを超える粒子の数／容器を決定し、６００以下であることによってさらに満たされた。初期時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は０であった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、２５μｍを超える粒子の数／容器は２であった。従って、全ての時点において、２５μｍを超える粒子の数／容器に関する許容基準を満たした。

【0354】

溶液の含水量は、４０℃における保存により影響を及ぼされなかった
含水量を、Ｋａｒｌ－Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定により評価した。Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定は、電量的または容積的滴定を使用して試料中の微量の水を決定し、パーセントとして記録する。初期時点において、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。４０℃において１ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセントは０．８％であった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液中の水分パーセント０．８％であった。従って、初期時点において、ならびに１および３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液の含水量は無視できるほどであった。

【0355】

溶液のｐＨは、４０℃における保存により影響を及ぼされなかった
再構成溶液のｐＨを、初期時点において、ならびに４０℃において１および３ヶ月間保存した後の再構成後、決定した。初期時点において、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。４０℃において３ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。４０℃において６ヶ月間保存した後の再構成後、再構成溶液のｐＨ値は５．９であった。

【0356】

［実施例９］
凍結乾燥ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ製剤の大規模製造
バルク溶液の調製のために、ヒスチジンを注射用水に溶解し、ｐＨを１０％ｗ／ｗ塩酸により調整して、注射用水を最終重量まで加えた。製剤のバッファー賦形剤（スクロースおよびポリソルベート８０）を秤量して、１５ｍＭヒスチジン溶液に溶解した。得られた溶液を、その後、外観に関して検査した。

【0357】

ＡＤＣ１－ＭＭＡＦを、ウォーターバスにおいて３０℃で解凍し、外観に関して検査し、プールして、秤量した。１５ｍＭヒスチジンバッファー、ポリソルベート８０およびスクロースを、ＡＤＣ１－ＭＭＡＦに加えた。溶液の外観を検査し、このｐＨおよび密度を決定し、次いで、滅菌ろ過した。その後、管理された条件下で溶液を凍結乾燥した。

【0358】

注射溶液２０ｍｇ／ｍＬ用ＡＤＣ１－ＭＭＡＦ粉末の製造中に実行された、進行中の限界試験を下記の表にに列挙した。

【0359】

【表2】

【0360】

凍結乾燥のためのＡＤＣ１－ＭＭＡＦ溶液の典型的なバッチに使用されるＡＤＣ１－ＭＭＡＦおよびバッファー溶液の量を、下記の表３に示す。製剤のバッファーを製造するために使用される成分および量のリストを、表４および表５に記載する。

【0361】

【表3】

【0362】

【表4】

【0363】

【表5】

【0364】

本明細書に記載の実施例および実施形態が、単なる例示目的であること、およびこれらを考慮してさまざまな変形および変更が当業者には示唆されること、および添付の特許請求の範囲の精神および範囲内に含まれることは理解されるものと思われる。本明細書に引用された全ての出版物、特許および特許出願は、全ての目的のために、参照によりこの全体が本明細書に組み込まれる。

【0365】

配列の概要

【0366】

【表6】

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2022-07-19

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

抗上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、糖、緩衝液および界面活性剤を含む、凍結乾燥された製剤であって、
該製剤は再構成されると約５－７のｐＨを有し、
前記抗ＥＧＦＲ ＡＤＣが、オーリスタチンと複合体化された抗ＥＧＦＲ抗体を含み、及び
該抗体は、配列番号１５、１６及び１７で表されるアミノ酸配列を含む、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、重鎖可変領域を含み、かつ配列番号２０、２１及び２２で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲｓを含む、軽鎖可変領域を含むＩｇＧ抗体である、
凍結乾燥された製剤。

【請求項2】

オーリスタチンがモノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である、請求項１に記載の製剤。

【請求項3】

ＭＭＡＦが、マレイミドカプロイルリンカーにより抗体と複合体化される、請求項２に記載の製剤。

【請求項4】

約１－１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ ＡＤＣを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の製剤。