特開 2022-127918 変形性関節症を処置する化合物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022127918

(43)【公開日】2022-09-01

(54)【発明の名称】変形性関節症を処置する化合物及び方法

(51)【国際特許分類】

   C07H 3/06 20060101AFI20220825BHJP

   G01N 33/493 20060101ALI20220825BHJP

   C12N 9/16 20060101ALI20220825BHJP

   C12Q 1/44 20060101ALI20220825BHJP

【ＦＩ】

C07H3/06 CSP

G01N33/493 A

C12N9/16 Z

C12Q1/44

【審査請求】有

【請求項の数】5

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2021026160

(22)【出願日】2021-02-22

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 令和２年２月２１日にウェブサイト ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｓ．ａｃｓ．ｏｒｇ／ｄｏｉ／ｐｄｆ／１０．１０２１／ｊａｃｓ．０ｃ００００５に掲載。 また、当該刊行物のＳｕｐｐｏｒｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎは、ウェブサイト ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｓ．ａｃｓ．ｏｒｇ／ｄｏｉ／ｓｕｐｐｌ／１０．１０２１／ｊａｃｓ．０ｃ００００５／ｓｕｐｐｌ＿ｆｉｌｅ／ｊａ０ｃ００００５＿ｓｉ＿００１．ｐｄｆに掲載。

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】596118493

【氏名又は名称】アカデミア シニカ

【氏名又は名称原語表記】ＡＣＡＤＥＭＩＡ ＳＩＮＩＣＡ

【住所又は居所原語表記】１２８ Ｓｅｃ ２，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｒｏａｄ，Ｎａｎｋａｎｇ，Ｔａｉｐｅｉ １１５２９ ＴＷ

(74)【代理人】

【識別番号】100167689

【弁理士】

【氏名又は名称】松本 征二

(72)【発明者】

【氏名】ハング， シャング・チェング

(72)【発明者】

【氏名】ウォング， チ・ヒューイー

(72)【発明者】

【氏名】チェング， ティング・ジェン

【テーマコード（参考）】

2G045

4B050

4B063

4C057

【Ｆターム（参考）】

2G045AA25

2G045CB03

2G045DA20

2G045FB01

2G045FB12

4B050DD11

4B050LL03

4B063QA01

4B063QA19

4B063QQ03

4B063QQ32

4B063QQ61

4B063QQ67

4B063QR12

4B063QR24

4B063QR41

4B063QR43

4B063QR57

4B063QS36

4B063QX02

4C057BB04

4C057CC03

4C057DD03

4C057EE03

4C057GG02

4C057JJ03

4C057JJ09

(57)【要約】      （修正有）

【課題】変形性関節症の診断に有用な方法を提供する。
【解決手段】エンド－Ｏ－スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）の基質及び／又は阻害物質は、下式（Ｉ）で表される化合物である。

変形性関節症を有し又は有すると疑われる被検体を特定及び処置する方法は、（ａ）被検体の尿サンプルを４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ）及びＳｕｌｆ－１阻害物質と混合するステップと、（ｂ）（ａ）の混合物の蛍光強度を決定するステップと、（ｃ）（ｂ）の決定された蛍光強度が尿サンプル及び４－ＭＵＳの混合物であるコントロールサンプルのものよりも小さい場合に、鎮痛剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はコルチコステロイドによって被検体を処置するステップとを含む。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の化合物又はその溶媒和物であって、

【化1】

Ｘは、メチレン、Ｏ又はＮであり、
Ｒ_１は、－ＳＯ_３Ｍ又は－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、
Ｒ_２はＣ_１－６アルキル又はＣ_１－６アルキルアミンであり、
Ｍは、Ｈ、又はリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである、化合物。

【請求項2】

前記化合物が、

【化2】

【化3】

【化4】

【化5】

【化6】

【化7】

【化8】

【化9】

【化10】

【化11】

【化12】

からなる群から選択されるヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）阻害物質である、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

前記化合物がＳｕｌｆ－１の基質であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

式（ＩＩ）の化合物又はその溶媒和物であって、

【化13】

ｎは、２又は３であり、
Ｘは、メチレン、Ｏ又はＮであり、
Ｒ_１は、－ＳＯ_３Ｍ又は－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル又はＣ_１－６アルキルアミンであり、
Ｍは、Ｈ、又はリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである、化合物。

【請求項5】

前記化合物がヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ（Ｓｕｌｆ－１）阻害物質であり、ｎが２であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである、請求項４に記載の化合物。

【請求項6】

前記化合物がＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが２であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである、請求項４に記載の化合物。

【請求項7】

前記化合物がＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが３であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである、請求項４に記載の化合物。

【請求項8】

変形性関節症を有する被検体を特定する方法であって、
（ａ）被検体の尿サンプルを４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ）及び請求項２又は５のいずれか一項に記載の化合物と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の前記混合物の蛍光強度を決定するステップと、を備え、
前記ステップ（ｂ）の前記決定された蛍光強度が、前記尿サンプル及び４－ＭＵＳの混合物であるコントロールサンプルのものよりも小さい場合に、前記被検体は変形性関節症を有する、方法。

【請求項9】

請求項２又は５のいずれか一項に記載の前記化合物がタグ分子で標識されて膜の表面にコーティングされ、前記４－ＭＵＳが前記膜の一端に線状にコーティングされる、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記タグ分子がビオチン、金コロイド又は三糖硫酸塩ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓである、請求項８に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、概略として新規のエンド－Ｏ－スルファターゼ－１（Ｓｕｌｆ－１）基質及び阻害物質並びにその使用に関する。

【背景技術】

【0002】

変形性関節症（ＯＡ）は、直ちに生命を危険にさらすことはないが生活の質に深刻に影響し得る老化疾患である。人口の高齢化に伴い、（日本のような）高齢化社会に分類される国が増えており、それにより生活の質を維持するコストが増加する。

【0003】

ＯＡの診断について、ＯＡの段階を臨床的に定義する黄金律はない。ＯＡの診断は、（疼痛などの）病理学的診断及び画像診断（Ｘ線及びＭＲＩ）によってのみ行われ得る。画像診断は、主に関節腔狭窄（ＪＳＮ）及び骨棘（ケルグレン－ローレンス グレーディングスケール）に従って行われる。これらの評価方法は、初期のＯＡでの変化を検出するのに十分な感度がないだけでなく、グレーダーとスコアラーの間の差異を正確に評価することもできない。例えば、グレード１のＪＳＮの場合、軟骨の体積損失は、約１１～１３％であり、Ｘ線撮影又は膝の疼痛の評価によっては判断できない。これらの従来の感度の低い検出方法に基づくと、変形性関節症の警告、予防及び治療の重要な時期を逃すことが多い。この目的で、ＯＡの診断及び予測のための新規の方法を開発する必要がある。

【0004】

臨床現場では、画像診断は、ＯＡの第３段階及び第４段階のみを判断することができる。ＯＡのバイオマーカーについての研究は非常に普及している。軟骨基質は、主にコラーゲン、ヒアルロン酸、糖タンパク質で構成される。コラーゲンタンパク質は、繊維の長いストリップの形態であり、軟骨基質に織り込まれて、３次元の主な枠組みを形成する。格子の内部の領域は、ヒアルロン酸及び糖タンパク質で満たされる。コンドロイチン硫酸（ＣＳ）は、糖タンパク質の主成分である。これらの軟骨基質に特異的なタンパク質、合成又は分解中に生成される中間生成物は、通常、ＯＡのバイオマーカーとして使用される。

【0005】

現在、ＦＮＩＨ（国立衛生研究所財団）及びＯＡＲＳＩ（国際変形性関節症学会）のバイオマーカーデータベースには、変性関節炎を判断する可能性のある約１８個のバイオマーカーがある。これらのバイオマーカーをモニタリングする標本材料は、主に局所（関節液、軟骨組織）及び全身（血液など）に分けられ、それらは全て侵襲的な方法によって取得される必要がある。これらのバイオマーカーは、主に合成、軟骨基質の異化作用又は炎症をモニタリングする。変形性関節症は炎症性疾患でありながら炎症指標のバイオマーカーとして使用されるものの、身体の他の部分の炎症によって影響されやすい。軟骨基質代謝については、ＡＤＡＭＴＳ（トロンボスポンジンモチーフを有するディスインテグリン及びメタロプロテイン）、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテイナーゼ）が、主要なモニタリング標的である。ＮＯＳ－２（一酸化窒素合成酵素２）のような、高い酸化ストレスによって生成されるサイトカイン及びＣｏｌＩＩ（ＩＩ型コラーゲン）のような軟骨特異的タンパク質からの分解中間粒子も、主要なモニタリング対象物である。これらのＯＡバイオマーカーは、主に変形性関節症の中期段階又は後期段階での軟骨基質の分解をモニタリングする。変形性関節症の初期段階については、それらの有効な検出率は非常に低い。

【0006】

スルファターゼは、生体系において硫酸エステルを開裂するエステラーゼの部類の酵素である。それは、発生細胞シグナル伝達、病因、ホルモン調節及び細胞外マトリックスの分解に関与する多くの生理学的分子の機能を決定する硫酸化状態を調節する。しかし、スルファターゼのメカニズムは軟骨のホメオスタシスに影響し、軟骨形成は不明なままである。

【0007】

我々は、ＯＡ病変でのスルファターゼ１（ｓｕｌｆ１）の発現は、遠い病変部分よりも高いことを見出した。ｓｕｌｆ１は、免疫学的刺激剤の後にも誘発された。ＣＳ－６：ＣＳ－４の比率の変化は、ＯＡ患者の尿及び軟骨で見られた。成人期ではＣＳ－６は小児期よりもはるかに多いが、変形性関節症の患者についてはＣＳ－６の発現は減少した。スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ１）は、ヘパリン硫酸、ケラチン硫酸及びコンドロイチン硫酸から６－Ｏ－硫酸基を開裂する。我々は、６－Ｏ－硫酸基を開裂してＣＳの構造安定性を変化させるスルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）が、変形性関節症での細胞外マトリックスの分解に重要な役割を果たしていると仮定する。軟骨の不安定な細胞外マトリックスは、マトリックスの分解及びＯＡプロセスを誘発する。そこで、スルファターゼ１は、ＯＡの診断及び治療について有望な候補となる。

【0008】

関連技術において、ＯＡを有し又は有するものと疑われる被検体を特定及び処置する改善された方法のニーズが存在する。

【発明の概要】

【0009】

上記を考慮して、本開示は、新規のエンド－Ｏ－スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）基質及び阻害物質並びにＯＡを有する被検体を特定及び処置する方法を提供する。

【0010】

そこで、本開示の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物又はその溶媒和物であって、

【化1】

Ｘは、メチレン、Ｏ又はＮであり、
Ｒ_１は、－ＳＯ_３Ｍ又は－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、
Ｒ_２はＣ_１－６アルキル又はＣ_１－６アルキルアミンであり、
Ｍは、Ｈ、又はリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである、化合物に向けられる。

【0011】

本開示のある実施形態によれば、化合物は、

【化2】

【化3】

【化4】

【化5】

【化6】

【化7】

【化8】

【化9】

【化10】

【化11】

【化12】

からなる群から選択されるヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）阻害物質である。

【0012】

本開示の更なる実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物はＳｕｌｆ－１の基質であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである。

【0013】

本開示の第２の態様は、式（ＩＩ）の化合物又はその溶媒和物であって、

【化13】

ｎは、２又は３であり、
Ｘは、メチレン、Ｏ又はＮであり、
Ｒ_１は、－ＳＯ_３Ｍ又は－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、
Ｒ_２は、Ｃ_１－６アルキル又はＣ_１－６アルキルアミンであり、
Ｍは、リチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである、化合物に向けられる。

【0014】

本開示のある実施形態によれば、式（ＩＩ）の化合物はヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ（Ｓｕｌｆ－１）阻害物質であり、ｎが２であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである。

【0015】

本開示の更なる実施形態によれば、式（ＩＩ）の化合物はＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが２であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである。

【0016】

本開示のまた更なる実施形態によれば、式（ＩＩ）の化合物はＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが３であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである。

【0017】

本開示の第３の態様は、変形性関節症を有する被検体を特定及び処置する方法に向けられる。方法は、
（ａ）被検体の尿サンプルを４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ）及び上記の式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の混合物の蛍光強度を決定するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の決定された蛍光強度が尿サンプル及び４－ＭＵＳの混合物であるコントロールサンプルのものよりも小さい場合に、鎮痛剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はコルチコステロイドによって被検体を処置するステップと、を備える。

【0018】

本開示のある実施形態によれば、式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質はタグ分子で標識されて膜の表面にコーティングされ、４－ＭＵＳは膜の一端に線状にコーティングされる。

【0019】

タグ分子の例は、ビオチン、金コロイド及び三糖硫酸塩ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓを含むが、これに限定されない。

【0020】

本方法での使用に適した鎮痛剤の例は、アセトアミノフェン及びコデインなどを含むが、これに限定されない。

【0021】

本方法での使用に適したＮＳＡＩＤの例は、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ピロキシカム、インドメタシン、メロキシカム、ケトプロフェン、スリンダク、ジフルニサル、ナブメトン、オキサプロジン、トルメチン、サルサレート、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート及びメフェナム酸を含むが、これに限定されない。

【0022】

本方法での使用に適したコルチコステロイドの例は、コルチゾールを含むが、これに限定されない。

【0023】

本開示の１以上の実施形態の詳細を、以下の付随する説明において説明する。発明の他の特徴及び効果が、詳細な説明から、及び特許請求の範囲から明らかとなる。

【0024】

以上の概略説明及び以下の詳細な説明の双方は例示としてのものであり、特許請求される発明の更なる説明を与えることが意図されていることが理解されるべきである。

【0025】

明細書に取り込まれてその一部を構成する添付図面は、発明の種々の態様の種々の例示のシステム、方法及び他の例示的な実施形態を示す。本説明は、添付図面を考慮して読まれる以下の詳細な説明からより深く理解されることになる。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】図１は、４－ＭＵＳとの競合アッセイに基づくＳｕｌｆ－１基質のスクリーニングを示し、（Ａ）は、４－ＭＵＳ及びＳｕｌｆ－１基質としての競合物の蛍光アッセイであり、（Ｂ）は、Ｓｕｌｆ－１との４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の加水分解での競合物としての二糖１８、四糖１９、六糖２０及びヘパリン３０００の３２０μＭの蛍光強度である。Ｓｕｌｆ－１との４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の純水での強度を１００％に設定した。（Ｃ）Ｓｕｌｆ－１に対する競合基質としての種々のスルホン化四糖２１～３５の０．３２ｍＭの蛍光スクリーニング。

【図2A】図２Ａは、Ｓｕｌｆ－１との４．３５ｍＭの４－ＭＵＳの加水分解における競合基質としての３２０μＭの三糖３６の蛍光強度を示し、Ｓｕｌｆ－１との４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の純水での強度を１００％に設定した。

【図2B】図２Ｂは、硫酸塩の量のＨＰＬＣ測定を介したＳｕｌｆ－１に対する３６、１８又は１９（４８０μＭ）の基質特異性の決定である。

【図2C】図２Ｃは、ヒトＳｕｌｆ－１による４８０μＭの３６のＳＯ_４ ^２－の濃度依存性放出を示す。

【図2D】図２Ｄは、ヒトＳｕｌｆ－１による４８０μＭの３６のＳＯ_４ ^２－の時間依存性放出を示す。

【図2E】図２Ｅは、ヒトＳｕｌｆ－１に対する３６の動態パラメータの決定を示す。

【図3】図３は、４－ＭＵＳ蛍光アッセイを使用して化合物４６のＫｉ値を決定する速度論的測定を示す。

【図4】図４は、本開示の一実施形態による、化合物４６の結合反応速度を示す。

【発明を実施するための形態】

【0027】

添付図面との関連で以下に与えられる詳細な説明は、本開示の説明としてのものであり、本開示が構成又は利用され得る形態のみを示すものではない。

【0028】

１．定義
特に断りがない限り、用語「患者」又は「被検体」は、本開示において互換可能に使用することができ、任意の動物のことをいう。動物は、ヒト被検体であってもよいし、ヒト以外の被検体であってもよい。被検体はヒトであり得るが、獣医学的処置を必要とする哺乳動物、例えば、飼育動物又は狩猟動物、家畜及び実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット及び霊長類など）であってもよい。通常、動物は、ヒト以外の霊長類のようなヒト以外の哺乳動物である。ヒト以外の霊長類は、チンパンジー、シノモロガスサル、クモザル及びマカク、例えばＲｈｅｓｕｓ又はＰａｎを含む。飼育動物及び狩猟動物は、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、シカ、バイソン、バッファロー、ミンク、ネコ科動物（例えば、飼いネコ）、イヌ科動物（例えば、イヌ）、オオカミ及びキツネ、鳥類（例えば、トリ、シチメンチョウ及びダチョウ）並びに魚（例えば、マス、ナマズ及びサケ）を含む。被検体は、ここに記載の薬剤（例えば、本開示のＳｕｌｆ－１阻害物質）によって変形性関節症を患い又は発症するリスクを有しているとしてまだ特定されておらず、したがってそのための処置をまだ受けていないものであり得る。

【0029】

特に断りがない限り、用語「治療する／処置する／処理する（ｔｒｅａｔ）」、「治療している／処置している／処理している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」及び「治療／処置／処理（ｔｒｅａｍｅｎｔ）」は、患者が特定の疾患又は障害を患う間に生じる作用であって、疾患若しくは障害の重症度又はその症状の１以上を軽減し、又は疾患若しくは障害の進行を阻止又は減速する作用を考慮する。

【0030】

本発明の化合物の溶媒和物も、ここでは考慮される。用語「溶媒和物」は、溶質（例えば、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物）及び溶媒によって形成される可変化学量論の複合体を意味すると理解されるべきである。適切な溶媒の例は、水、アセトン、メタノール、エタノール及び酢酸を含むが、これに限定されない。好ましくは、使用される溶媒は、薬学的に許容可能な溶媒である。薬学的に許容可能な適切な溶媒の例は、水、エタノール及び酢酸を含む。最も好ましくは、溶媒は水である。塩又は溶媒和物の調製は、当技術内で既知の方法によって実施され得る。薬学的に非許容な塩又は溶媒和物も、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物又はプロドラッグの調製に有用であり得るため、本発明の範囲内であることが留意されるべきである。

【0031】

発明の広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータは概数であるものの、特定の実施例で説明される数値は可能な限り厳密に報告される。ただし、いずれの数値も、それぞれの試験測定値に見られる標準偏差から必然的にもたらされる所定の誤差を本来的に含む。また、ここで使用されるように、用語「約」は、所与の値又は範囲の１０％、５％、１％又は０．５％内を一般に意味する。あるいは、用語「約」は、当業者によって考慮される場合の平均の許容標準誤差内を意味する。有効な／効果的な実施例以外、又は明示の断りがない限り、ここに開示されるその材料の量、継続時間、温度、動作条件、量の比率などに対するものなどの数値範囲、量、値及び割合の全ては、いずれの場合においても用語「約」によって変更されるものとして理解されるべきである。したがって、逆のことが示されない限り、本開示及び添付の特許請求の範囲で説明される数値パラメータは、所望のように変化し得る概数である。少なくとも、各数値パラメータは、報告される有効数字の数を考慮してかつ通常の四捨五入手段を適用して少なくとも解釈されるべきである。

【0032】

ここで、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、そうでないことを文脈が明示しない限り、複数の参照を含むものとして使用される。

【0033】

２．本発明の化合物
本開示の態様は、所定の硫酸化オリゴ糖がヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ、特にＳｕｌｆ－１の基質であるという発見に関連し、それらのスルホンアミドはＳｕｌｆ－１の阻害物質であり、したがってこれらのオリゴ糖スルホンアミドは変形性関節症を有し又は有する疑いのある被検体を特定するために使用されることができ、それにより、適切な処置又は予防手段をそのような被検体に適時に展開させることができる。硫酸化オリゴ糖及びそれらのスルホンアミドの例は、ここに記載される。

【0034】

一態様では、本発明は式（Ｉ）の硫酸化三糖又は薬学的に許容可能なその溶媒和物に関する。

【化14】

【0035】

式（Ｉ）において、Ｘはメチレン、Ｏ又はＮであり、Ｒ_１は－ＳＯ_３Ｍ又は－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、Ｒ_２はＣ_１－６アルキル又はＣ_１－６アルキルアミンであり、Ｍはリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである。

【0036】

本開示の好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）の三糖は、以下からなる群から選択されるＳｕｌｆ－１阻害物質である。

【化15】

【化16】

【化17】

【化18】

【化19】

【化20】

【化21】

【化22】

【化23】

【化24】

【化25】

【0037】

本開示のある実施形態によれば、式（Ｉ）の三糖はＳｕｌｆ－１の基質であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである。

【0038】

他の態様では、本開示は、式（ＩＩ）のオリゴ糖又は薬学的に許容可能なその溶媒和物に向けられる。

【化26】

【0039】

式（ＩＩ）において、ｎは２又は３であり、Ｘはメチレン、Ｏ又はＮであり、Ｒ_１は－ＳＯ_３Ｍ又は－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、Ｒ_２はＣ_１－６アルキル又はＣ_１－６アルキルアミンであり、Ｍはリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである。

【0040】

本開示の好ましい実施形態によれば、式（ＩＩ）のオリゴ糖はＳｕｌｆ－１阻害物質であり、ｎは２であり、ＸはＯであり、Ｒ_１は－ＳＯ_２ＮＨ_２であり、Ｒ_２は－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍはナトリウムである。

【0041】

本開示のある実施形態によれば、式（ＩＩ）の三糖はＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが２であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである。

【0042】

本開示の更なる実施形態によれば、式（ＩＩ）の三糖はＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが３であり、ＸがＯであり、Ｒ_１が－ＳＯ_３Ｍであり、Ｒ_２が－（ＣＨ_２）_５ＮＨ_２であり、Ｍがナトリウムである。

【0043】

本開示の硫酸化三糖又はオリゴ糖及びそれらのスルホンアミド（すなわち、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物）は、効果的な実施例に記載の手順に従って調製され得る。エナンチオマー及びジアステレオマーの形態を含む式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物の置換基上の不斉炭素に起因して存在し得るもののような、本化合物の全ての立体異性体は、本発明の範囲内で考慮される。発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば、実質的に他の異性体を含んでいなくてもよいし、例えばラセミ体として、又は他の全ての立体異性体若しくは他の選択された立体異性体と共に混合されてもよい。本発明のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ１９７４勧告によって定義されるようなＳ又はＲ配置を有し得る。

【0044】

３．使用方法
本開示の他の態様は、変形性関節症を有し又は有すると疑われる被検体を特定及び処置する方法を提供することにある。この目的のために、本開示の実施形態は、競合物アッセイでの蛍光の変化を測定することを介して、ＯＡ被検体に由来する生物学的サンプル中のＳｕｌｆ－１のレベルの測定に向けられ、本オリゴ糖スルホンアミドは、Ｓｕｌｆ－１によって開裂された後に蛍光生成物（すなわち、４－メチルウンベリフェロン、（４－ＭＵ））を生じさせるＳｕｌｆ－１基質（すなわち、４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ））と競合する。したがって、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の本オリゴ糖スルホンアミドがＳｕｌｆ－１の活性を抑制した場合、コントロールのものと比較して、蛍光の減少が観察されるはずである。

【0045】

したがって、本発明は、変形性関節症を有し又は有すると疑われる被検体を特定及び処置する方法を包含する。方法は、
（ａ）被検体の尿サンプルを４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ）及び本開示の式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の混合物の蛍光強度を決定するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の決定された蛍光強度が尿サンプル及び４－ＭＵＳの混合物であるコントロールサンプルのものよりも小さい場合に、鎮痛剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はコルチコステロイドによって被検体を処置するステップと、を含む。

【0046】

本開示での使用に適した式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質の例は、以下を含むが、これに限定されない。

【化27】

【化28】

【化29】

【化30】

【化31】

【化32】

【化33】

【化34】

【化35】

【化36】

【化37】

【化38】

【0047】

追加的又は代替的に、式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質はタグ分子でさらに標識されて膜の表面にコーティングされ、４－ＭＵＳは膜の一端に線状にコーティングされる。タグ分子の例は、ビオチン、金コロイド及び三糖硫酸塩ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓを含むが、これに限定されない。

【0048】

本方法での使用に適した鎮痛剤の例は、アセトアミノフェン及びコデインなどを含むが、これに限定されない。

【0049】

本方法での使用に適したＮＳＡＩＤの例は、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ピロキシカム、インドメタシン、メロキシカム、ケトプロフェン、スリンダク、ジフルニサル、ナブメトン、オキサプロジン、トルメチン、サルサレート、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート及びメフェナム酸を含むが、これに限定されない。

【0050】

本方法での使用に適したコルチコステロイドの例は、コルチゾールを含むが、これに限定されない。

【0051】

ここで、限定ではなく例証を目的として提供される以下の実施形態を参照して、本発明をより具体的に説明する。それらは標準的に使用され得るものであるが、当業者に公知の他の手順、方法論又は技術が代替的に使用されてもよい。

【実施例0052】

材料及び方法
４－ＭＵＳ基質との競合アッセイ
３２０μＭの基質を含有する溶液を５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中のＳｕｌｆ－１及び４－ＭＵＳと共に３７℃で１時間インキュベートし、蛍光強度を３５５／４６０ｎｍで測定した。競合する基質を有さないコントロール混合物を１００％蛍光強度として定義し、基質を有するサンプルを蛍光強度の割合：（基質サンプルの蛍光強度）／（コントロールサンプルの蛍光強度）として決定した。

【0053】

Ｓｕｌｆ－１活性アッセイ
ヒトＳｕｌｆ－１を、以前に報告された手順に従って過剰発現及び精製した^４８。Ｓｕｌｆ－１の活性を５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ_２及び５ｍＭのＭｇＣｌ_２（ｐＨ７．４）中で４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）をＳｕｌｆ－１と共に３７℃で１時間インキュベートすることによって決定し、蛍光強度をＥＬＩＳＡリーダー（ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒプレートリーダー）において３５５ｎｍでの励起に続いて４６０ｎｍで測定した。

【0054】

ＨＰＬＣアッセイ
基質の溶液（４８０μＭ）を、Ｓｕｌｆ１とともに又はＳｕｌｆ１なしで、５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ_２及び５ｍＭのＭｇＣｌ_２（ｐＨ７．４）中において３７℃で１６時間インキュベートした。基質からの硫酸イオンの放出を、ＨＰＬＣを介して定量化した。各サンプル（５μＬ）をＡＳ９ＨＣ陰イオン交換カラム（Ｄｉｏｎｅｘ）に注入し、硫酸イオンを９ｍＭのＮａ_２ＣＯ_３で溶出し、そしてリージェントフリーコントローラー（ＰＲＯＤ、ＲＦＣ－１０）を有する導電率検出器（ＰＲＯＤ、ＡＥＲＳ５００、４ｍｍ、Ｔｈｅｒｍａｌ）で分析し、０～５００μＭのＮａ_２ＳＯ_４（Ｍｅｒｃｋ）による標準曲線と比較した。

【0055】

Ｓｕｌｆ－１阻害アッセイ
阻害活性を、ヒトＳｕｌｆ－１及び阻害物質の存在下で４－ＭＵＳから放出される４－ＭＵによって測定した。Ｓｕｌｆ－１を、５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ_２及び５ｍＭのＭｇＣｌ_２（ｐＨ７．４）中で、阻害物質（０～１０μＭ）及び４－ＭＵＳ（０～２０ｍＭ）と共に３７℃で１時間インキュベートした。４－ＭＵＳ加水分解の初期速度を、３５５ｎｍでの励起に続く４６０ｎｍでの蛍光強度を測定することによって決定した（ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ、ＢＭＧ ＬＡＢＴＥＣＨ）。得られたデータを、ＧｒａｐｈＰａｄを使用してミカエリスメンテン式に整合させ、酵素阻害パラメータを決定した。

【0056】

表面プラズモン共鳴を使用する解離定数（Ｋ_Ｄ）の決定
化合物４６を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００システムを使用して、製造元のガイドラインに従ってＢｉａｃｏｒｅセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の表面に固定化した。動態解析研究を、ランニングバッファー［２０ｍＭのＮａＯＡｃ（ｐＨ５．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ及び０．０５％のＴｗｅｅｎ２０］中で２５０、１２５、６３、３１及び１５ｎＭに段階希釈され、２５℃で２５μＬ／分の流速でチップ表面に注入された、異なる濃度のｈＳｕｌｆ１_{ｄ４１７－７２６}タンパク質で行った。各実行で、チップセンサーの表面を４ＭのＮａＣｌを注入することによって再生した。滴定曲線は、平衡定数を計算するための１：１ラングミュア結合モデルに良好に整合した。

【実施例0057】

実施例１ ＨＳオリゴ糖の化学合成及びＳｕｌｆ－１基質のスクリーニング
１．１ 二糖供与体４及び四糖供与体７の合成
糖供与体４及び７の合成を、以前の報告（Ｚｕｌｕｅｔａ Ｍ．Ｍ．Ｌ．他、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１２、１３４、８９８８－８９９５）による、個々の単糖１及び２から（ ）－立体選択的グリコシル化によって生成される共通の二糖３（スキーム１）から開始した。化合物３のＣｕ（ＯＴｆ）_２触媒によるアセトリシスに続いて、ＺｎＩ_２の存在下でトリメチルシリルｐ－トルエニルチオエーテル（ＴＭＳＳＴｏｌ）を添加し、チオグリコシド供与体４（２ステップで７７％）を得た。２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）による３の２－ナフチルメチル（２－ＮＡＰ）基の４’－Ｏ位置での開裂は、４’－アルコール５（７５％）を供与した。Ｎ－ヨードスクシンイミド／トリフルオロメタンスルホン酸（ＮＩＳ／ＴｆＯＨ）活性に応じた化合物４とのカップリングは、期待される四糖６（８０％）を提供した。（ ）－グリコシド結合を、隣接基（２－Ｏ－Ｂｚ）の関与によって形成した。そして、化合物６を、アセトリシス及びチオグリコシド形成に供し、２ステップで所望の供与体７（７８％）を提供した。

【0058】

スキーム１ 二糖供与体４及び四糖供与体７の調製

【化39】

試薬及び条件：（ａ）（１）１．５ｍｏｌ％のＣｕ（ＯＴｆ）_２、Ａｃ_２Ｏ、０℃、２時間、（２）ＴＭＳＳＴｏｌ、ＺｎＩ_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２、２時間、４：７７％（２ステップ）、７：７８％（２ステップ）、（ｂ）ＤＤＱ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／Ｈ_２Ｏ（１８／１、ｖ／ｖ）、室温、４時間、７５％、（ｃ）４、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３Åのモレキュラーシーブ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、６０℃～－４０℃、４時間、８０％。Ａｃ、アセチル；Ｂｎ、ベンジル；Ｂｚ、ベンゾイル；２－ＮＡＰ、２－ナフチルメチル；ＰＢＢ、ｐ－ブロモベンジル；ＴＢＤＰＳ、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル；Ｔｆ、トリフルオロメチルスルホニル；ＴＭＳ、トリメチルシリル；Ｔｏｌ、４－メチルフェニル。

【0059】

１．２ ＨＳオリゴ糖１８、１９及び２０の合成
直交的に保護されたチオグリコシド供与体４及び７を元に、スキーム２に記載される手順に従って、種々の鎖長のＨＳオリゴ糖を調製した。リンカー付着の二糖８の合成を、ＮＩＳ及びＴｆＯＨの組合せ下で、化合物４を５－（Ｎ－ベンジル－Ｎ－ベンジルオキシカルボニル）アミノ－１－ペンタノール［ＨＯ（ＣＨ_２）_５Ｎ（Ｂｎ）Ｃｂｚ］とカップリングすることにより開始した。対応する（ ）型の生成物８を、７７％の収率で得た。化合物８のＤＤＱによる処置は、二糖受容体９（７５％）を提供し、それをその後、供与体４及び７と排他的（ ）－立体選択性でカップリングし、それぞれ四糖１０（８１％）及び六糖１１（８２％）を形成した。ナトリウムメトキシドを使用して化合物８、１０及び１１における全てのＡｃ及びＢｚ基を除去し、続いて（２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－イル）オキシル（ＴＥＭＰＯ）で酸化し、それぞれラクトン１２（６７％）、１３（７０％）及び１４（８０％）を得た。環状エステルは、ＨＭＢＣスペクトルにおける内部Ｌ－イズロニル残基の２－Ｈと６－Ｃの間の相関関係を通して、及び１７９０ｃｍ^－１付近で観察された相対的に高いＩＲのＣ＝Ｏ伸縮バンドによって確認された。さらに、フッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）による６－Ｏ－脱シリル化、塩基性条件下でのラクトン開環及びＳＯ_３・Ｅｔ_３Ｎによる全ての遊離ヒドロキシ基のＯ－スルホン化は、硫酸塩誘導体１５、１６及び１７を３段階で、それぞれ６６％、７８％及び３０％の全収率で供与した。最後に、個々の標的化合物１８（９０％）、１９（８５％）及び２０（７０％）を、アジド基のアミノ基へのシュタウディンガー還元、全ての第一級アミンのＮ－硫酸化、並びに全てのベンジル、ＰＢＢ、２－ＮＡＰ及びＣｂｚ基を開裂するＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃを介した水素化分解を含む３ステップの変更を通して１５～１７から生成した。高頻度なピークの重複により、四糖１９及び六糖２０のＮＭＲスペクトルにおけるプロトンの直接的な割り当ては困難であった。化合物１８の分子量（Ｍ＋Ｈ^＋、Ｃ_１７Ｈ_２９Ｎ_２Ｏ_２０Ｓ_３Ｎａ_４ ^＋ に対して計算上７６９．００６７であり、７６９．００７６であった）、化合物１９の分子量（Ｍ＋Ｈ^＋、Ｃ_２９Ｈ_４４Ｎ_３Ｏ_３９Ｓ_６Ｎａ_８ ^＋ に対して計算上１４３３．９０５８であり、１４３３．９０５５であった）及び化合物２０の分子量（Ｍ－４Ｈ^４－、Ｃ_４１Ｈ_６６Ｎ_４Ｏ_５８Ｓ_９ ^４－ に対して計算上４５７．４９５１であり、４５７．４９８１であった）を、高分解能エレクトロスプレーイオン化質量スペクトルによってさらに確認した。

【0060】

スキーム２ ＨＳオリゴ糖１８、１９及び２０の合成

【化40】

試薬及び条件：（ａ）ＨＯ（ＣＨ_２）_５Ｎ（Ｂｎ）Ｃｂｚ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３ÅのＭＳ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＣＨ_３ＣＮ（１／２、ｖ／ｖ）、７８℃～－４０℃、３時間、７７％、（ｂ）ＤＤＱ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／Ｈ_２Ｏ（１８／１、ｖ／ｖ）、４時間、７５％、（ｃ）ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３Åのモレキュラーシーブ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、７８℃～－４０℃、３時間、１０（ｎ＝２、化合物４＋化合物９から）：８１％、１１（ｎ＝３、化合物７＋化合物９から）：８２％、（ｄ）（１）ＮａＯＭｅ、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（１／１、ｖ／ｖ）、室温、１８時間、（２）ＴＥＭＰＯ、ＢＡＩＢ、Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（１／２、ｖ／ｖ）、室温、１６時間、１２：６７％（２ステップ）、１３：７０％（２ステップ）、１４：８０％（２ステップ）、（ｅ）（１）１ＭのＴＢＡＦ、ＴＨＦ、５０℃、１日、（２）ＬｉＯＨ、室温、３時間、（３）ＳＯ_３・Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ、１６時間、１５：６６％（３ステップ）、１６：７８％（３ステップ）、１７：３０（３ステップ）、（ｆ）（１）１ＭのＰＭｅ_３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、５時間、（２）ＳＯ_３・ピリジン、Ｅｔ_３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１日、（３）Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ、Ｈ_２（バルーン）、ＭｅＯＨ、リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）、室温、２日、１８：９０％（３ステップ）、１９：８５％（３ステップ）、２０：７０％（３ステップ）。ＢＡＩＢ、［ビス（アセトキシ）ヨード］ベンゼン；Ｃｂｚ、ベンジロオキシカルボニル；ＴＨＦ、テトラヒドロフラン。

【0061】

本開示のＨＳオリゴ糖の化学的データを以下に提供する。

【0062】

化合物７

【化41】

【0063】

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.11-8.08 (m, 2H, Bz-H), 8.00-7.97 (m, 2H, Bz-H), 7.85 (dd, J = 6.0, 3.4 Hz, 1H, Ar-H), 7.78-7.73 (m, 2H, Ar-H), 7.67 (dd, J = 7.9, 1.2 Hz, 2H, Ar-H), 7.65-7.62 (m, 2H, Ar-H), 7.60 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 2H, Ar-H), 7.58-7.54 (m, 3H, Ar-H), 7.52-7.48 (m, 2H, Ar-H), 7.48-7.44 (m, 4H, Ar-H), 7.43-7.35 (m, 13H, Ar-H), 7.35-7.32 (m, 3H, Ar-H), 7.32-7.28 (m, 4H, Ar-H), 7.28-7.24 (m, 5H, Ar-H), 7.24-7.20 (m, 4H, Ar-H), 7.15 (t, J = 7.5 Hz, 2H, Ar-H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ar-H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 5.54 (s, 1H, H-1), 5.36-5.33 (m, 2H, H-2, H-1’’), 5.14 (bs, 1H, H-2’’), 4.96 (d, J = 11.6 Hz, 1H, ArCH₂), 4.85 (m, 4H, H-5, ArCH₂), 4.71 (d, J = 11.4 Hz, 2H, ArCH₂), 4.65 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1’’’), 4.51 (d, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH₂), 4.43 (d, J = 3.8 Hz, 1H, H-1’), 4.36-4.31 (m, 2H, H-6a, ArCH₂), 4.28 (dt, J = 7.0, 2.0 Hz, 1H, H-5’’), 4.11-3.98 (m, 7H, H-3, H-6b, H-4’, H-6’a, H-3’’, H-6’’a, ArCH₂), 3.93 (dd, J = 10.9, 7.0 Hz, 1H, H-6’’b), 3.89-3.84 (m, 2H, H-6’b, ArCH₂), 3.82 (d, J = 10.6 Hz, 1H, H-4’’’), 3.77-3.72 (m, 2H, H-6’’’), 3.72-3.68 (m, 1H, H-5’’’), 3.67-3.62 (m, 1H, H-3’’’), 3.62-3.58 (m, 1H, H-5’), 3.51-3.48 (m, 2H, H-4, H-4’’), 3.45 (t, J = 9.0 Hz, 1H, H-3’), 3.28 (dd, J = 10.2, 3.5 Hz, 1H, H-2’’’), 3.20 (dd, J = 10.0, 3.8 Hz, 1H, H-2’), 2.33 (s, 3H, CH₃), 1.87 (s, 3H, CH₃), 1.69 (s, 3H, CH₃), 1.06 (s, 9H, 3 TBDPS), 0.97 (s, 9H, 3 TBDPS).

【0064】

¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 170.2 (C), 170.0 (C), 165.7 (C), 165.5 (C), 137.7 (C), 137.4 (C), 137.2 (C), 136.9 (C), 136.7 (C), 135.83 (CH), 135.90 (CH), 135.6 (CH), 135.5 (CH), 135.4 (C), 133.3 (C), 133.2 (C), 133.1 (C, CH), 132.90 (C), 132.86 (C), 132.3 (CH), 131.5 (C), 131.4 (CH), 130.8 (CH), 129.80 (CH), 129.77 (CH), 129.71 (CH), 129.69 (CH), 129.66 (CH), 129.61 (CH), 129.59 (CH), 129.55 (CH), 129.5 (CH), 128.8 (CH), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.22 (CH), 128.15 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 127.8 (CH), 127.70 (CH), 127.65 (CH), 127.6 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 126.3 (CH), 126.2 (CH), 126.0 (CH), 125.7 (CH), 98.4 (CH), 97.8 (CH), 96.9 (CH), 86.2 (CH), 80.3 (CH), 79.1 (CH), 77.6 (CH), 75.1 (CH2), 74.22 (CH), 74.15 (CH2), 73.9 (CH2), 73.7 (CH), 73.1 (CH), 72.78 (CH, CH2), 72.75 (CH2),72.5 (CH), 72.4 (CH), 71.4 (CH), 69.7 (CH), 68.4 (CH), 66.1 (CH), 64.6 (CH), 64.2 (CH), 63.9 (CH), 62.9 (CH2), 62.2 (CH2), 62.1 (CH2), 61.9 (CH2), 26.8 (CH3), 26.7 (CH3), 21.1 (CH3), 20.59 (CH3), 20.57 (CH3), 19.4 (C), 19.3 (C); HRMS m/z (MALDI, M+Na⁺) C₁₂₀H₁₂₄N₆O₂₂SBr₂Si₂Na⁺ 2273.3711, found 2273.3811.

【0065】

化合物８

【化42】

【0066】

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ = 8.18-8.15 (m, 2H, Ar-H), 7.88-7.86 (m, 1H, Ar-H), 7.81-7.79 (m, 2H, Ar-H), 7.72-7.69 (m, 4H, Ar-H), 7.62 (s, 1H, Ar-H), 7.55-7.53 (m, 2H, Ar-H), 7.43-7.34 (m, 26H, Ar-H), 7.18 (s, 1H, Ar-H), 7.04 (d, J = 8.2 Hz, 2H, Ar-H), 5.22-5.18 (m, 3H, H-2, ArCH₂) 4.99-4.92 (m, 4H, H-1, ArCH₂), 4.80-4.76 (m, 2H, H-1’, ArCH₂), 4.54-4.50 (m, 3H, ArCH₂), 4.45-4.41 (m, 1H, H-6a), 4.38 (s, 1H, H-5), 4.21 (d, J = 9.8 Hz, 1H, ArCH₂), 4.15 (dd, J = 4.5, 11.1 Hz, 1H, H-6b), 4.12-4.11 (m, 1H, H-3), 4.07-4.05 (m, 1H, H-6’a), 3.92 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H-6’b), 3.87-3.78 (m, 5H, H-3’, H-4’, H-5’, H-4, linker CH₂), 3.48-3.43 (m, 1H, linker CH₂), 3.34 (dd, J = 3.4, 10.1 Hz, 1H, H-2’), 3.28-3.21 (m, 2H, linker CH₂), 2.00-1.95 (m, 3H, OAc), 1.67-1.57 (m, 4H, linker CH₂), 1.36-1.31 (m, 2H, linker CH₂), 1.09 (s, 9H, TBDPS).

【0067】

¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ = 170.2 (C), 165.5 (C), 156.5 (C), 156.0 (C), 137.8 (C), 137.7 (C), 136.6 (C), 135.7 (CH), 135.4 (CH), 135.3 (C),133.3 (C), 133.1 (C), 133.0 (CH), 132.89 (C), 132.87 (C), 131.3 (CH), 129.8 (CH), 129.7 (CH), 129.6 (CH), 129.5 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 127.0 (CH), 126.4 (CH), 126.2 (CH), 126.1 (CH), 125.9 (CH), 125.5 (CH), 121.6 (C), 98.3 (CH), 98.1 (CH), 80.5 (CH), 77.9 (CH), 77.8 (CH), 75.0 (CH₂), 74.3 (CH), 74.4 (CH₂), 72.9 (CH), 72.8 (CH), 72.3 (CH₂), 68.9 (CH), 67.8 (CH₂), 67.0 (CH₂), 65.5 (CH), 63.8 (CH), 62.8 (CH₂), 62.1 (CH₂), 50.4 (CH₂), 50.1 (CH₂), 47.0 (CH₂), 46.0 (CH₂), 26.7 (CH₃), 19.4 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na⁺) calcd for C₈₂H₈₇N₄O₁₄SiBrNa⁺ 1481.5069, found 1481.5057.

【0068】

化合物９

【化43】

【0069】

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ = 8.14-8.11 (m, 2H, Ar-H), 7.66-7.63 (m, 4H, Ar-H), 7.51-7.38 (m, 21H, Ar-H), 7.23-7.20 (m, 4H, Ar-H), 7.14-7.11 (m, 3H, Ar-H), 5.19-5.13(m, 3H, H-2, ArCH₂), 4.93 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H-1), 4.83 (d, J = 11.1 Hz, 1H, ArCH₂), 4.72-4.67 (m, 2H, H-1’, ArCH₂), 4.52 (d, J = 11.0 Hz, 1H, ArCH₂), 4.47-4.44 (m, 2H, ArCH₂), 4.40-4.37 (m ,1H, H-6a), 4.34-4.31 (m, 1H, ArCH₂), 4.29-4.26 (m, 1H, H-5), 3.91-3.87(m, 1H, H-6b), 4.04 (s, 1H, H-3), 3.91-3.87 (m, 1H, H-6’a), 3.81-3.77 (m, 1H, H-6’b), 3.73-3.68 (m, 4H, H-4, H-4’, H-5’, linker CH₂), 3.61-3.57 (m, 1H, H-3’), 3.44-3.37 (m, 1H, linker CH₂), 3.22-3.14 (m, 3H, H-2’, linker CH₂), 1.95 (s, 3H, OAc), 1.53-1.47 (m, 4H, linker CH₂), 1.31-1.25 (m, 2H, linker CH₂), 1.02 (s, 9H, TBDPS).

【0070】

¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ = 170.4 (C), 165.7 (C), 156.7 (C), 156.1 (C), 137.9 (C), 137.7 (C), 137.0 (C), 135.6 (CH), 135.5 (CH), 133.2 (CH), 132.8 (C), 132.7 (C), 131.5 (CH), 129.97 (CH), 129.95 (CH), 129.8 (CH), 129.6 (CH), 128.55 (CH), 128.50 (CH), 128.3 (CH), 128.0 (CH), 127.89 (CH), 127.84 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 121.7 (C), 98.2 (CH), 98.0 (CH), 80.2 (CH), 74.2 (CH₂), 73.9 (CH), 73.1 (CH), 72.5 (CH₂), 72.0 (CH), 69.4 (CH), 68.0 (CH₂), 67.1 (CH₂), 66.0 (CH), 64.0 (CH₂), 63.0 (CH), 50.5 (CH₂), 50.2 (CH₂), 47.1 (CH₂), 46.2 (CH₂), 29.1 (CH₂), 27.9 (CH₂), 27. 5(CH₂), 26.8 (CH₃), 23.4 (CH₂), 20.8 (CH₃), 19.4 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na⁺) calcd for C₇₁H₇₉N₄O₁₄SiBrNa⁺ 1341.4436, found 1341.4443.

【0071】

化合物１０

【化44】

【0072】

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ = 8.24 (d, J = 7.2 Hz, 2H, Ar-H), 8.13 (d, J = 7.0 Hz, 2H, Ar-H), 7.93-7.80 (m, 12H, Ar-H), 7.57-7.41 (m, 45H, Ar-H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 2H, Ar-H), 5.54 (s, 1H, H-1’’), 5.35-5.29 (m, 4H, H-2, H-2’’, ArCH₂), 5.13-5.04 (m, 5H, H-1, ArCH₂), 4.87-4.77 (m, 5H, H-1’, H-1’’’, ArCH₂), 4.61-4.52 (m, 6H, H-6’’a, ArCH₂), 4.26-4.12 (m, 12H, H-3, H-3’’, H-5, H-5’’, H-5’’’, H-6, H-6’, H-6’’b, H-6’’’), 3.92-3.78 (m, 8H, H-3’, H-3’’’, H-4, H-4’, H-4’’, H-4’’’, H-5’, linker CH₂), 3.59-3.52 (m, 1H, ArCH₂), 3.42 (dd, J = 2.8, 10.3 Hz, 1H, H-2’’’), 3.38-3.34 (m, 2H, H-2’, linker CH₂), 3.30-3.25 (m, 1H, linker CH₂), 1.94 (d, J = 9.3 Hz, 3H, OAc), 1.85 (s, 3H, OAc), 1.78-1.67 (m, 4H, linker CH₂), 1.48-1.41 (m, 2H, linker CH₂), 1.20 (s, 9H, TBDPS), 1.11 (s, 9H, TBDPS).

【0073】

¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ = 171.0 (C), 170.3 (C), 170.0 (C), 165.8 (C), 165.7 (C), 156.8 (C), 156.2 (C), 138.1 (C), 137.9 (C), 137.6 (C), 137.2 (C), 137.0 (C), 136.9 (C), 136.0 (CH), 136.0 (CH), 135.7 (CH), 135.6 (CH), 133.5 (C), 133.4 (C), 133.3 (CH), 133.15 (C), 133.11 (C), 131.6 (CH), 131.4 (CH), 131.4 (CH), 131.1 (CH), 130.2 (CH), 130.0 (CH), 130.0 (CH), 129.9 (CH), 129.9 (CH), 129.9 (CH), 129.8 (CH), 129.8 (CH), 129.6 (CH), 129.1 (CH), 128.9 (CH), 128.7 (CH), 128.6 (CH), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.0 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7(CH), 127.6 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 127.3 (CH), 126.6 (CH), 126.3 (CH), 126.2 (CH), 125.9 (CH), 121.8 (C), 121.1 (C), 98.6 (CH), 98.4 (CH), 97.6 (CH), 97.1 (CH), 80.5 (CH), 79.3 (CH), 77.9 (CH), 77.6 (CH), 77.4 (CH), 77.2 (CH), 75.3 (CH₂), 74.3 (CH₂), 74.1 (CH₂), 74.0 (CH), 73.8 (CH), 73.7 (CH), 73.2 (CH), 73.0 (CH₂), 72.9 (CH₂), 72.7 (CH), 72.6 (CH₂), 69.2 (CH), 68.6 (CH), 68.1 (CH₂), 67.2 (CH₂), 65.4 (CH), 64.8 (CH), 64.4 (CH), 64.2 (CH), 62.99 (CH₂), 62.94 (CH₂), 62.5 (CH₂), 62.2 (CH₂), 60.4 (CH₂), 50.7 (CH₂), 50.3 (CH₂), 47.3 (CH₂), 46.3 (CH₂), 29.2 (CH₂), 28.1 (CH₂), 27.6 (CH₂), 27.1 (CH₃), 26.9 (CH₃), 21.1 (CH₃), 20.8 (CH₃), 20.7 (CH₃), 19.6 (C), 19.5 (C), 14.4 (CH₃); HRMS m/z (ESI, M+2Na²⁺) calcd for C₁₃₃H₁₄₁N₇O₂₅Si₂Br₂Na₂ ²⁺ 1247.8839, found 1247.8829.

【0074】

化合物１１

【化45】

【0075】

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ = 8.12-8.10 (m, 2H, Ar-H), 8.00-7.98 (m, 4H, Ar-H), 7.86-7.84 (m, 1H Ar-H), 7.78-7.75 (m, 2H, Ar-H), 7.68-7.67 (m, 2H, Ar-H), 7.63-7.60 (m, 11H, Ar-H), 7.55 (s, 1H, Ar-H), 7.51-7.50 (m, 2H, Ar-H), 7.43-7.38 (m, 24H, Ar-H), 7.31-7.28 (m, 21H, Ar-H), 7.22-7.17 (m, 13H, Ar-H), 7.00-6.99 (m, 2H, Ar-H), 6.92-6.90 (m, 4H, Ar-H), 5.40 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.19-5.14 (m, 5H), 4.96-4.94 (m, 1H), 4.89-4.84 (m, 5H), 4.70-4.62 (m, 8H), 4.49-4.47 (m, 2H), 4.36-4.30 (m, 5H), 4.12-4.04 (m, 13H), 3.90-3.85 (m, 5H), 3.76-3.61 (m, 12H), 3.38 (s, 1H), 3.28-3.20 (m, 5H), 1.85-1.82 (m, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.61-1.53 (m, 4H), 1.33-1.28 (m, 2H), 1.06 (s, 9H), 0.99 (s, 9H), 0.97 (s, 9H).

【0076】

¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ = 170.2 (C), 170.0 (C), 169.9 (C), 165.79 (C), 165.70 (C), 165.5 (C), 156.7 (C), 156.2 (C), 138.0 (C), 137.7 (C), 137.38 (C), 137.36 (C), 137.09 (C), 137.00 (C), 136.8 (C), 135.9 (CH), 135.67 (CH), 135.63 (CH), 135.6 (CH), 135.5 (CH), 133.49 (CH), 133.40 (CH), 133.3 (CH), 133.26 (CH), 133.21 (CH), 133.1 (CH), 133.09 (CH), 133.00 (CH), 132.9 (CH), 131.5 (CH), 130.9 (CH), 129.87 (CH), 129.81 (CH), 129.78 (CH), 129.71 (CH), 129.6 (CH), 129.5 (CH), 129.0 (CH), 128.9 (CH), 128.8 (CH), 128.7 (CH), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.46 (CH), 128.44 (CH), 128.3 (CH), 128.28 (CH), 128.26 (CH), 128.17 (CH), 128.11 (CH), 127.95 (CH), 127.91 (CH), 127.86 (CH), 127.80 (CH), 127.7 (CH), 127.67 (CH), 127.62 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 127.28 (CH), 127.20 (CH), 126.4 (CH), 126.2 (CH), 126.0 (CH), 125.8 (CH), 121.7 (C), 121.09 (C), 121.02 (C), 98.5 (CH), 98.2 (CH), 97.4 (CH), 97.09 (CH), 97.02 (CH), 96.9 (CH), 80.4 (CH), 79.1 (CH), 78.9 (CH), 77.7 (CH), 75.2 (CH₂), 74.2 (CH₂), 74.0 (CH₂), 73.8 (CH), 73.7 (CH), 73.6 (CH), 73.03 (CH₂), 73.00 (CH), 72.9 (CH), 72.88 (CH₂), 72.83 (CH), 72.55 (CH₂), 72.51 (CH), 72.3 (CH), 72.2 (CH), 69.2 (CH), 68.8 (CH), 68.4 (CH), 68.0 (CH₂), 67.1 (CH₂), 65.5 (CH), 65.0 (CH), 64.5 (CH), 64.2 (CH), 64.0 (CH), 62.7 (CH), 62.38 (CH₂), 62.33 (CH₂), 62.18 (CH₂), 62.13 (CH₂), 62.0 (CH₂), 50.5 (CH₂), 50.2 (CH₂), 47.17 (CH₂), 46.19 (CH₂), 29.1 (CH₂), 27.9 (CH₂), 27.5 (CH₂), 26.9 (CH₃), 26.8 (CH₃), 26.8 (CH₃), 23.4 (CH₂), 20.7 (CH₂), 20.66 (CH₂), 20.60 (CH₂), 19.49 (C), 19.45 (C), 19.40 (C); HRMS m/z (ESI, M+H⁺) calcd for C₁₈₄H₁₉₆Br₃N₁₀O₃₆Si₃ ⁺ 3442.4810, found 3442.4816.

【0077】

化合物１２

【化46】

【0078】

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ = 7.86-7.84 (m, 1H, Ar-H), 7.79-7.75 (m, 4H, Ar-H), 7.70-7.65 (m, 3H, Ar-H), 7.52-7.50 (m, 2H, Ar-H), 7.45-7.43 (m, 2H, Ar-H), 7.41-7.34 (m, 21H, Ar-H), 7.22-7.19 (m, 3H, Ar-H), 5.24-5.19 (m, 2H, ArCH₂) 5.13-5.07 (m, 2H, H-1, H-1’), 4.98-4.88 (m, 4H, ArCH₂), 4.77-4.71 (m, 2H, ArCH₂), 4.60-4.53 (m, 3H, H-2, ArCH₂), 4.41 (d, J = 3.1 Hz, 1H, H-5), 4.28-4.24 (m, 1H, H-4), 4.04-4.00 (m, 2H, H-6’), 3.95-3.92 (m, 2H, H-3, H-3’), 3.88-3.81 (m, 3H, H-4’, H-5’, linker CH₂), 3.52-3.43 (m, 2H, H-2’, linker), 3.31.-3.24 (m, 2H, linker), 1.72-1.59 (m, 4H, linker CH₂), 1.42-1.32 (m, 2H, linker CH₂), 1.09 (s, 9H, TBDPS).

【0079】

¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ = 167.6 (C), 156.6 (C), 156.1 (C), 137.8 (C), 137.2 (C), 136.7 (C), 135.8 (CH), 135.5 (CH), 135.2 (C), 133.3 (C), 133.1 (C),132.9 (C), 132.8 (C), 131.4 (CH), 129.6 (CH), 129.5 (CH), 128.6 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.4 (CH), 127.2 (CH), 127.0 (CH), 126.0 (CH), 125.8 (CH), 125.4 (CH), 121.7 (C), 99.7 (CH), 96.8 (CH), 80.3 (CH), 79.6 (CH), 79.4 (CH), 78.0 (CH), 74.9 (CH₂), 74.5 (CH₂), 72.6 (CH), 72.1(CH), 72.0 (CH₂), 69.4 (CH₂), 69.3 (CH), 67.1 (CH₂), 63.2 (CH), 62.1 (CH₂), 50.4 (CH₂), 50.1 (CH₂), 47.0 (CH₂), 46.0 (CH₂), 29.0 (CH₂), 26.8 (CH₃), 19.2 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na⁺) calcd for C₇₃H₇₇N₄O₁₂SiBrNa⁺ 1331.4388, found 1331.4397.

【0080】

化合物１３

【化47】

【0081】

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ = 7.91-7.88 (m, 1H, Ar-H), 7.84-7.81 (m, 4H, Ar-H), 7.75-7.71 (m, 7H, Ar-H), 7.57-7.54 (m, 4H, Ar-H), 7.50-7.45 (m, 20H, Ar-H), 7.39-7.35 (m, 13H, Ar-H), 7.29-7.25 (m, 6H, Ar-H), 5.50 (s, 1H, H-1’’), 5.27-5.11 (m, 7H, H-1, H-1’, ArCH₂), 4.90-4.71 (m, 10H, H-2, H-2’’, ArCH₂), 4.38-4.31 (m, 5H, H-1’’’, H-3’’, H-5, H-5’’, ArCH₂), 4.13 (t, 1H, H-4’’), 4.08-4.07 (m, 1H, H-6’a), 3.99-3.88 (m, 11H, H-3, H-3’, H-3’’’, H-4, H-4’’’, H-5’, H-5’’’, H-6’b, H-6’’’, linker CH₂), 3.73-3.72 (m, 1H, H-4’), 3.57-3.51 (m, 1H, linker CH₂), 3.44-3.42 (m, 1H, H-2’), 3.37 (dd, J = 3.7, 10.2 Hz, 1H, H-2’’’), 3.34-3.28 (m, 2H, linker CH₂), 1.75-1.64 (m, 4H, linker CH₂), 1.45-1.38 (m, 2H, linker CH₂), 1.16 (s, 9H, TBDPS), 1.11 (s, 9H, TBDPS).

【0082】

¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ = 167.8 (C), 167.1 (C), 156.2 (C), 137.9 (C), 137.6 (C), 137.2 (C), 136.9 (C), 136.8 (C), 136.7 (C), 136.0 (CH), 135.9 (CH), 135.6 (CH), 135.57 (CH), 135.52 (C), 133.6 (C), 133.3 (C), 133.0 (C), 132.8 (C), 132.7 (C), 131.64 (CH), 131.60 (CH), 130.0 (CH), 129.88 (CH), 129.80 (CH), 129.7 (CH), 129.7 (CH), 128.6 (CH), 128.58 (CH), 128.55 (CH), 128.50 (CH), 128.2 (CH), 128.08 (CH), 128.01 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.79 (CH), 127.75 (CH), 127.69 (CH), 127.60 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 126.2 (CH), 126.1 (CH), 125.9 (CH), 125.5 (CH), 121.9 (C), 121.2 (C), 99.8 (CH), 99.5 (CH), 97.1 (CH), 96.9 (CH), 80.7 (CH), 80.4 (CH), 79.8 (CH), 79.4 (CH), 78.4 (CH), 78.0 (CH), 77.8 (CH), 77.3 (CH), 77.1 (CH), 76.9 (CH), 76.4 (CH), 75.1 (CH₂), 74.7 (CH₂), 73.5 (CH₂), 72.7 (CH), 72.4 (CH), 72.3 (CH), 72.2 (CH), 72.1 (CH₂), 69.6 (CH₂), 69.5 (CH), 69.2 (CH), 67.2 (CH₂), 63.4 (CH), 63.1 (CH), 61.9 (CH₂), 61.7 (CH₂), 50.5 (CH₂), 50.2 (CH₂), 47.2 (CH₂), 46.1 (CH₂), 29.2 (CH₂), 26.99 (CH₃), 26.95 (CH₃), 23.2 (CH₂), 19.4 (C), 19.2 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na⁺) calcd for C₁₁₅H₁₂₁N₇O₂₁Si₂Br₂Na⁺ 2175.6434, found 2175.6418.

【0083】

化合物１４

【化48】

【0084】

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ = 7.70 (s, 1H, Ar-H), 7.64-7.57 (m, 16H, Ar-H), 7.37-7.35 (m, 5H, Ar-H), 7.31-7.27 (m, 29H, Ar-H), 7.20-7.13 (m, 23H, Ar-H), 5.34 (s, 2H), 5.09-5.00 (m, 4H), 4.87-4.83 (m, 4H), 4.72-4.64 (m, 4H), 4.54-4.44 (m, 10H), 4.20-4.12 (m, 8H), 3.96-3.91 (m,3H), 3.81-3.75 (m, 6H), 3.65-3.58 (m, 11H), 3.45-3.43 (m, 1H), 3.26-3.16 (m, 5H), 1.50-1.43 (m, 4H), 1.25-1.19 (m, 2H), 0.99-0.96 (m, 27H).

【0085】

¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ= 167.7 (C), 167.1 (C), 167.0 (C), 156.6 (C), 156.1 (C), 137.8 (C), 137.5 (C), 137.4 (C), 137.1 (C), 136.8 (C), 136.79 (C), 136.75 (CH), 135.9 (CH), 135.8 (CH), 135.7 (CH), 135.5 (CH), 135.45 (CH), 135.43 (CH), 133.5 (C), 133.2 (C), 132.89 (C), 132.86 (C), 132.83 (C), 132.7 (C), 132.5 (C), 132.4 (C), 131.5 (CH), 131.49 (CH), 131.45 (CH), 129.9 (CH), 129.8 (CH), 129.79 (CH), 129.70 (CH), 129.6 (CH), 128.5 (CH), 128.46 (CH), 128.44 (CH), 128.3 (CH), 128.1 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.89 (CH), 127.87 (CH), 127.7 (CH), 127.67 (CH), 127.63 (CH), 127.60 (CH), 127.57 (CH), 127.50 (CH), 127.2 (CH), 127.09 (CH), 126.07 (CH), 125.8 (CH), 125.4 (CH), 121.7 (C), 121.18 (C), 121.13 (C), 99.7 (CH), 99.37 (CH), 99.32 (CH), 97.0 (CH), 96.9 (CH), 96.8 (CH), 80.6 (CH), 80.4 (CH), 80.2 (CH), 79.7 (CH), 79.2 (CH), 78.3 (CH), 78.2 (CH), 77.9 (CH), 76.9 (CH), 76.7 (CH), 76.36 (CH), 76.32 (CH), 75.0 (CH₂), 74.6 (CH₂), 73.5 (CH₂), 73.4 (CH₂), 72.6 (CH), 72.2 (CH), 72.17 (CH), 72.14 (CH), 72.0 (CH₂), 69.5 (CH₂), 69.3 (CH), 69.0 (CH), 67.1 (CH₂), 63.3 (CH), 63.1 (CH), 63.0 (CH), 61.7 (CH₂), 61.6 (CH₂), 61.3 (CH₂), 50.4 (CH₂), 50.1 (CH₂), 47.0 (CH₂), 46.0 (CH₂), 29.1 (CH₂), 27.7 (CH₂), 27.2 (CH₂), 26.86 (CH₃), 26.83 (CH₃), 23.1 (CH₂), 19.2 (C), 19.1 (C), 19.0 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na⁺) calcd for C₁₅₇H₁₆₅Br₃N₁₀O₃₀Si₃Na⁺ 3019.0520, found 3019.0515.

【0086】

化合物１８

【化49】

【0087】

¹H NMR (600 MHz, D₂O) δ = 5.39 (s, 1H, H-1’), 5.17 (s, 1H, H-1), 4.53 (s, 1H, H-5), 4.46-4.39 (m, 1H, H-6’b), 4.33-4.24 (m, 3H, H-2, H-3, H-6’a), 4.08 (m, 2H, H-4), 4.04-3.98 (m, 1H, H-5’), 3.81-3.69 (m, 4H, H-3’, H-4’, linker CH₂), 3.36-3.28 (m, 1H, H-2’), 3.11-3.03 (m, 2H, linker CH₂) , 1.85-1.71 (m, 4H, linker CH₂), 1.58-1.47 (m, 2H, linker CH₂).

【0088】

¹³C NMR (150 MHz, D₂O) δ = 174.8 (C), 98.6 (CH), 97.0 (CH), 75.7 (CH), 75.6 (CH), 70.9 (CH), 69.6 (CH), 69.1 (CH), 68.3 (CH), 68.3 (CH), 68.1 (CH₂), 66.4 (CH₂), 57.9 (CH), 39.4 (CH₂), 27.8 (CH₂), 26.2 (CH₂), 22.2 (CH₂); HRMS m/z (ESI, M+H⁺) calcd for C₁₇H₂₉N₂O₂₀S₃Na₄ ⁺ 769.0067, found 769.0076.

【0089】

化合物１９

【化50】

【0090】

¹H NMR (600 MHz, D₂O) δ = 5.49-5.43 (m, 2H, H-1’, H-1’’’), 5.26 (s, H-1’’), 5.16 (s, 1H, H-1), 4.87 (s, 1H, H-5’’), 4.53 (s, 1H, H-5), 4.45-4.34 (m, 8H, H-2, H-2’’, H-3, H-3’’, H-6’, H-6’’’), 4.15-4.12 (m , 2H, H-4, H-4’’), 4.07-4.04 (m, 2H, H-5’, H-5’’’), 3.83-3.70 (m, 6H, H-3’, H-3’’’, H-4’, H-4’’’, linker CH₂), 3.36-3.31 (m, 2H, H-2’, H-2’’’), 3.09-3.04 (m, 2H, linker CH₂), 1.75-1.69 (m, 4H, linker CH₂), 1.54-1.50 (m, 2H, linker CH₂).

【0091】

¹³C NMR (150MHz, D₂O) δ = 174.8 (C), 174.7 (C), 99.1 (CH), 98.9 (CH), 96.8 (CH), 96.7 (CH), 76.2 (CH), 75.8 (CH), 75.78 (CH), 75.72 (CH), 71.0 (CH), 69.9 (CH), 69.5 (CH), 69.2 (CH), 68.9 (CH), 68.7 (CH), 68.6 (CH), 68.1 (CH₂), 66.4 (CH₂), 66.3 (CH₂) , 57.95 (CH), 57.92 (CH), 39.4 (CH₂), 27.8 (CH₂), 26.2 (CH₂), 22.2 (CH₂); HRMS m/z (ESI, M+H⁺) C₂₉H₄₄N₃O₃₉Na₈S₆ ⁺ 1433.9058, found 1433.9055.

【0092】

化合物２０

【化51】

【0093】

¹H NMR (600 MHz, D₂O) δ = 5.44 (s, 3H), 5.24 (s, 2H), 5.12 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.85 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.45-4.40 (m, 5H), 4.31-4.29 (m, 2H), 4.26-4.23 (m, 2H), 4.26-4.23 (m, 5H), 4.15-4.12 (m, 3H), 4.08-4.04 (m, 3H), 3.83-3.80 (m, 3H), 3.72-3.69 (m, 4H), 3.59 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.26 (dd, J = 3.2, 10.3 Hz, 1H), 3.04-3.02 (m, 2H), 1.74-1.70 (m, 4H), 1.51-1.48 (m, 2H).

【0094】

¹³C NMR (150 MHz, D₂O) δ = 174.8 (C), 174.58 (C), 174.51 (C), 99.2 (CH), 99.1 (CH), 99.0 (CH), 96.8 (CH), 96.5 (CH), 96.4 (CH), 76.8 (CH), 75.95 (CH), 75.91 (CH), 75.7 (CH), 75.6 (CH), 70.9 (CH), 69.8 (CH), 69.49 (CH), 69.44 (CH), 69.3 (CH), 69.2 (CH), 69.1 (CH), 69.1 (CH), 69.0 (CH), 67.9 (CH₂), 66.37 (CH₂), 66.31 (CH₂), 57.8 (CH₂), 39.3 (CH₂), 27.8 (CH₂), 26.1 (CH₂), 22.1 (CH₂); HRMS m/z (ESI, M-4H^4-) calcd for C₄₁H₆₆N₄O₅₈S₉ ^4- 457.4951, found 457.4981.

【0095】

１．３ ４－ＭＵＳとの競合アッセイに基づくＳｕｌｆ－１基質のスクリーニング
実施例１．２のＨＳオリゴ糖を、Ｓｕｌｆ－１基質の特定のために、４－ＭＵＳの存在下で競合基質として使用した。市販のヘパリン３０００と同様に化合物１８～２０を、Ｓｕｌｆ－１による４－ＭＵＳ開裂に対するそれらの競合効果について独立して評価して、蛍光性４－メチルウンベリフェロン（４－ＭＵ）を得た（図１、（Ａ））。４６０ｎｍの発光波長（３５５ｎｍの励起波長）での蛍光強度を測定し、純水での一般的な４－ＭＵＳ加水分解を１００％と見なした。精製されたＳｕｌｆ－１を４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の競合物として二糖１８（３２０μＭ）とインキュベートした場合、もたらされる蛍光（９４．５％）はコントロールの蛍光と同等であり、１８がＳｕｌｆ－１活性部位への４－ＭＵＳの侵入を阻止できなかったことを示している（図１、（Ｂ））。一方、四糖１９、六糖２０及びヘパリン３０００による結果は、４以上の糖単位が４－ＭＵＳと強く競合することを示した。

【0096】

Ｓｕｌｆ－１によるその基質中の構造的な必要条件をより良く理解するために、ＧｌｃＮ単位でＮ－Ａｃ／ＳＯ_３ ^－及び６－Ｏ－ＳＯ_３ ^－を有し、ＧｌｃＡ／ＩｄｏＡ単位で２－Ｏ－Ｈ／ＳＯ_３ ^－を有するＨＳ四糖のアレイ（すなわち、化合物２１～３５、図１、（Ｃ））を、４－ＭＵＳに対する競合結合体としてアッセイした。この体系的な研究は、化合物１９に加えて化合物３１も優れた結合体であることを明らかにし、非還元末端付近の２－Ｏ－硫酸化ＩｄｏＡ単位が必須であり、還元末端でのＧｌｃＮでのＮ－硫酸基及びＧｌｃＡ／ＩｄｏＡでの２－Ｏ－硫酸基がＳｕｌｆ－１との相互作用において重要な役割を果たすことを示した。１９及び３１の双方が、それぞれ８７．８μＭ及び１５１μＭのＥＣ_５０値を表した。