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特開2022-130504免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022130504
(43)【公開日】2022-09-06
(54)【発明の名称】免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220830BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20220830BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20220830BHJP
C07K 14/55 20060101ALI20220830BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20220830BHJP
C07K 16/10 20060101ALI20220830BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220830BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20220830BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20220830BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220830BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20220830BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20220830BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220830BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20220830BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20220830BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220830BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220830BHJP
A61K 38/20 20060101ALI20220830BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220830BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20220830BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220830BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C12N15/12 ZNA
C12N15/62 Z
C07K14/55
C07K19/00
C07K16/10
C12N5/10
C07K16/46
A61P37/02
A61P3/10
A61P17/00
A61P37/06
A61P9/00
A61P31/18
A61P17/14
A61P25/00
A61P43/00 121
A61K38/20
A61P43/00 111
A61K39/395 N
A61K39/395 M
A61K47/68
A61K45/00
A61P43/00 107
【審査請求】有
【請求項の数】27
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022098525
(22)【出願日】2022-06-20
(62)【分割の表示】P 2019564885の分割
【原出願日】2018-05-22
(31)【優先権主張番号】62/510,514
(32)【優先日】2017-05-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】504389991
【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100153693
【弁理士】
【氏名又は名称】岩田 耕一
(72)【発明者】
【氏名】ディア－デ－デュラナ，ヤイザ
(72)【発明者】
【氏名】ディドネート，マイケル
(72)【発明者】
【氏名】フィリッピ，クリストフ
(72)【発明者】
【氏名】ミーウセン，シェリー
(72)【発明者】
【氏名】スプラッゴン，グレン
(57)【要約】 （修正有）
【課題】高親和性インターロイキン受容体に結合し、それを通じた細胞内シグナル伝達を刺激する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
【解決手段】（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び、（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び、（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可
変領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
変領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項2】
前記ＩＬ２分子が重鎖ＣＤＲにグラフト化されている、請求項１に記載の抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質。
イングラフト化タンパク質。
【請求項3】
前記重鎖ＣＤＲが、相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２
）、及び相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）から選択される、請求項２に記載の抗体サイト
カイングラフト化タンパク質。
）、及び相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）から選択される、請求項２に記載の抗体サイト
カイングラフト化タンパク質。
【請求項4】
前記ＩＬ２分子がＨＣＤＲ１にグラフト化されている、請求項３に記載の抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質。
イングラフト化タンパク質。
【請求項5】
前記ＩＬ２分子が軽鎖ＣＤＲにグラフト化されている、請求項１に記載の抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質。
イングラフト化タンパク質。
【請求項6】
前記軽鎖ＣＤＲが、相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２
）、及び相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）から選択される、請求項５に記載の抗体サイト
カイングラフト化タンパク質。
）、及び相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）から選択される、請求項５に記載の抗体サイト
カイングラフト化タンパク質。
【請求項7】
前記ＩＬ２分子が、低親和性ＩＬ２受容体に対する前記ＩＬ２分子の親和性を低下させ
る突然変異を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質。
る突然変異を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質。
【請求項8】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＴｒｅｇ細胞増殖の刺激が天然ＩＬ
２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、請求項１～７のいずれか一項に記
載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、請求項１～７のいずれか一項に記
載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項9】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖の
刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、請求項１～８のい
ずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、請求項１～８のい
ずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項10】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登
録商標）よりも長い半減期を有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質。
録商標）よりも長い半減期を有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質。
【請求項11】
前記ＩＬ２分子が配列番号４からなる、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
イトカイングラフト化タンパク質。
【請求項12】
前記ＩＬ２分子が配列番号６からなる、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
イトカイングラフト化タンパク質。
【請求項13】
ＩｇＧクラス抗体重鎖を更に含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体サイト
カイングラフト化タンパク質。
カイングラフト化タンパク質。
【請求項14】
前記ＩｇＧクラス抗体重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択される、請
求項１３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
求項１３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項15】
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子によって１０
％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８
％、９９％、又は１００％低下する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体サイト
カイングラフト化タンパク質。
％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８
％、９９％、又は１００％低下する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体サイト
カイングラフト化タンパク質。
【請求項16】
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子の存在下で１
０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９
８％、９９％、又は１００％保持される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９
８％、９９％、又は１００％保持される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
【請求項17】
前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ２分子の結合特異性と異なる、請求項１～１６のい
ずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項18】
前記ＣＤＲの結合特異性が非ヒト抗原に対するものである、請求項１～１７のいずれか
一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項19】
前記非ヒト抗原がウイルスである、請求項１８に記載の抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質。
ンパク質。
【請求項20】
前記ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、請求項１９に記載の抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質。
トカイングラフト化タンパク質。
【請求項21】
前記ＲＳＶが、ＲＳＶサブグループＡ及びＲＳＶサブグループＢから選択される、請求
項２０に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
項２０に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項22】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質の前記抗体足場部分がヒト化又はヒトであ
る、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
る、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項23】
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ
）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変
領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０のＨＣＤＲ２、（ｃ
）配列番号７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号８２のＬＣＤＲ１
、（ｅ）配列番号８３のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可
変領域；又は
（ｉｖ）（ａ）配列番号９５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９６のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号９７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号１０８のＬＣＤＲ１
、（ｅ）配列番号１０９のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１１０のＬＣＤＲ３を含む軽
鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ
）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変
領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０のＨＣＤＲ２、（ｃ
）配列番号７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号８２のＬＣＤＲ１
、（ｅ）配列番号８３のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可
変領域；又は
（ｉｖ）（ａ）配列番号９５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９６のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号９７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号１０８のＬＣＤＲ１
、（ｅ）配列番号１０９のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１１０のＬＣＤＲ３を含む軽
鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項24】
（ｉ）配列番号２０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３を含む軽鎖可変領
域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号７２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８５を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）；又は
（ｉｖ）配列番号９８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１１を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号７２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８５を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）；又は
（ｉｖ）配列番号９８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１１を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項25】
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域を更に含む、請求項１～２４のいず
れか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
れか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項26】
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ
、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、請求項２５に記載の抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、請求項２５に記載の抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
【請求項27】
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／
Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２
３５Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、請求項２６に記載の抗体
サイトカイングラフト化タンパク質。
Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２
３５Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、請求項２６に記載の抗体
サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項28】
配列番号１７のＨＣＤＲ１、配列番号１８のＨＣＤＲ２、配列番号１９のＨＣＤＲ３、
配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号３２のＬＣＤＲ３、突
然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対
する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号３２のＬＣＤＲ３、突
然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対
する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項29】
配列番号４３のＨＣＤＲ１、配列番号４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５のＨＣＤＲ３、
配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号５８のＬＣＤＲ３、突
然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対
する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号５８のＬＣＤＲ３、突
然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対
する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項30】
配列番号６９のＨＣＤＲ１、配列番号７０のＨＣＤＲ２、配列番号７１のＨＣＤＲ３、
配列番号８２のＬＣＤＲ１、配列番号８３のＬＣＤＲ２、配列番号８４のＬＣＤＲ３、突
然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対
する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
配列番号８２のＬＣＤＲ１、配列番号８３のＬＣＤＲ２、配列番号８４のＬＣＤＲ３、突
然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対
する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項31】
配列番号９５のＨＣＤＲ１、配列番号９６のＨＣＤＲ２、配列番号９７のＨＣＤＲ３、
配列番号１０８のＬＣＤＲ１、配列番号１０９のＬＣＤＲ２、配列番号１１０のＬＣＤＲ
３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡
大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
配列番号１０８のＬＣＤＲ１、配列番号１０９のＬＣＤＲ２、配列番号１１０のＬＣＤＲ
３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡
大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項32】
（ｉ）配列番号２３の重鎖及び配列番号３６の軽鎖；
（ｉｉ）配列番号４９の重鎖及び配列番号６２の軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７５の重鎖及び配列番号８８の軽鎖；又は
（ｉｖ）配列番号１０１の重鎖及び配列番号１１４の軽鎖
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸。
（ｉｉ）配列番号４９の重鎖及び配列番号６２の軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７５の重鎖及び配列番号８８の軽鎖；又は
（ｉｖ）配列番号１０１の重鎖及び配列番号１１４の軽鎖
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸。
【請求項33】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の産生に好適な組換え宿主細胞であって、前記
タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチド、及び任意選択で分泌シグナルをコードする請求
項３２に記載の核酸を含む、組換え宿主細胞。
タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチド、及び任意選択で分泌シグナルをコードする請求
項３２に記載の核酸を含む、組換え宿主細胞。
【請求項34】
哺乳類細胞株である、請求項３３に記載の組換え宿主細胞。
【請求項35】
前記哺乳類細胞株がＣＨＯ細胞株である、請求項３４に記載の組換え宿主細胞。
【請求項36】
請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学
的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項37】
それを必要としている個体の免疫関連障害の治療方法であって、請求項１～３１のいず
れか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は請求項３６に記載の医薬組
成物の治療有効量を前記個体に投与することを含む方法。
れか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は請求項３６に記載の医薬組
成物の治療有効量を前記個体に投与することを含む方法。
【請求項38】
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主
病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形
脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択され
る、請求項３７に記載の方法。
病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形
脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択され
る、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物が別の治療剤と併用して投
与される、請求項３７又は３８に記載の方法。
与される、請求項３７又は３８に記載の方法。
【請求項40】
前記治療剤が別の抗体サイトカイングラフト化タンパク質である、請求項３９に記載の
方法。
方法。
【請求項41】
それを必要としている患者のＴｒｅｇ細胞を拡大する方法であって、請求項１～３１の
いずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は請求項３６に記載の医
薬組成物を前記患者に投与することを含む方法。
いずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は請求項３６に記載の医
薬組成物を前記患者に投与することを含む方法。
【請求項42】
前記Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＣＤ８ Ｔエフェクター細胞が拡大されない、請求
項４１に記載の方法。
項４１に記載の方法。
【請求項43】
前記Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＮＫ細胞が拡大されない、請求項４１又は４２に記
載の方法。
載の方法。
【請求項44】
免疫関連障害の治療における、
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ
）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
；又は
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変
領域
を含む免疫関連障害の治療における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用。
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ
）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
；又は
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変
領域
を含む免疫関連障害の治療における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用。
【請求項45】
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主
病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形
脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択され
る、請求項４４に記載の使用。
病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形
脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択され
る、請求項４４に記載の使用。
【請求項46】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が別の治療剤と併用して投与される、請求
項４４又は４５に記載の使用。
項４４又は４５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年５月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／５１０５１４号
の利益を主張するものであり、この仮特許出願の内容は、全体が参照により本明細書に援
用される。
本出願は、２０１７年５月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／５１０５１４号
の利益を主張するものであり、この仮特許出願の内容は、全体が参照により本明細書に援
用される。
【0002】
本開示は、インターロイキン－２（ＩＬ２）高親和性受容体に結合する抗体－サイトカ
イングラフト化タンパク質、並びに自己免疫障害及び免疫関連障害の治療方法に関する。
イングラフト化タンパク質、並びに自己免疫障害及び免疫関連障害の治療方法に関する。
【0003】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により
本明細書に援用される。２０１８年３月３０日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ
ＡＴ０５６４９１－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと称され、１１５，２５５バイトのサイ
ズである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により
本明細書に援用される。２０１８年３月３０日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ
ＡＴ０５６４９１－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと称され、１１５，２５５バイトのサイ
ズである。
【背景技術】
【0004】
ＩＬ２は１９８３年に初めてクローニングされた（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．
，Ｎａｔｕｒｅ １９８３，３０２：３０５－３１０、Ｄｅｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９８３，１１（１３）：４３０７－４３２３、Ｍａｅ
ｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９８３，
１１５：１０４０－１０４７）。ＩＬ２タンパク質は、アミノ酸１～２０のシグナルペプ
チドを含めて１５３アミノ酸の長さがあり、４つの逆平行両親媒性αヘリックス構造に折
り畳まれている（Ｓｍｉｔｈ Ｋ．Ａ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４０：１１６９
－１１７６）。
，Ｎａｔｕｒｅ １９８３，３０２：３０５－３１０、Ｄｅｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９８３，１１（１３）：４３０７－４３２３、Ｍａｅ
ｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９８３，
１１５：１０４０－１０４７）。ＩＬ２タンパク質は、アミノ酸１～２０のシグナルペプ
チドを含めて１５３アミノ酸の長さがあり、４つの逆平行両親媒性αヘリックス構造に折
り畳まれている（Ｓｍｉｔｈ Ｋ．Ａ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４０：１１６９
－１１７６）。
【0005】
ＩＬ２は、高親和性又は低親和性受容体を通じたシグナル伝達によってその生物学的効
果を媒介する（Ｋｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ２０１０，１０７（２６）１１９
０６－１１９１１）。高親和性受容体は、ＩＬ２－Ｒα（ＣＤ２５）ＩＬ２－Ｒβ（ＣＤ
１２２）及びＩＬ２－Ｒγ（ＣＤ１３２）からなる三量体である。低親和性受容体は、Ｉ
Ｌ２－Ｒβ（ＣＤ１２２）及びＩＬ２－Ｒγ（ＣＤ１３２）鎖のみからなる二量体である
。低親和性受容体はＩＬ２に結合するが、親和性は三量体である高親和性受容体の１０～
１００分の１であり、ＩＬ２－Ｒα（ＣＤ２５）が親和性の増加に重要であるものの、シ
グナル伝達成分ではないことが示唆される（Ｋｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ．、前掲）。ＩＬ２
受容体の発現もまた特徴的である。高親和性ＩＬ２受容体は、活性化Ｔ細胞及びＣＤ４＋
／Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に発現する。対照的に、低親和性ＩＬ２受容体
はＣＤ８＋ Ｔ記憶細胞、Ｔコンベンショナル細胞（Ｔｃｏｎ）及びナチュラルキラー細
胞（ＮＫ）に見られる。
果を媒介する（Ｋｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ２０１０，１０７（２６）１１９
０６－１１９１１）。高親和性受容体は、ＩＬ２－Ｒα（ＣＤ２５）ＩＬ２－Ｒβ（ＣＤ
１２２）及びＩＬ２－Ｒγ（ＣＤ１３２）からなる三量体である。低親和性受容体は、Ｉ
Ｌ２－Ｒβ（ＣＤ１２２）及びＩＬ２－Ｒγ（ＣＤ１３２）鎖のみからなる二量体である
。低親和性受容体はＩＬ２に結合するが、親和性は三量体である高親和性受容体の１０～
１００分の１であり、ＩＬ２－Ｒα（ＣＤ２５）が親和性の増加に重要であるものの、シ
グナル伝達成分ではないことが示唆される（Ｋｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ．、前掲）。ＩＬ２
受容体の発現もまた特徴的である。高親和性ＩＬ２受容体は、活性化Ｔ細胞及びＣＤ４＋
／Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に発現する。対照的に、低親和性ＩＬ２受容体
はＣＤ８＋ Ｔ記憶細胞、Ｔコンベンショナル細胞（Ｔｃｏｎ）及びナチュラルキラー細
胞（ＮＫ）に見られる。
【0006】
組換えＩＬ２（ｒｈＩＬ２）は当初、１９９２年に臨床使用が承認された（Ｃｏｖｅｎ
ｔｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｍｇｔ Ｒｅｓ．２０１２ ４：２１５－２２１
）。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（アルデスロイキン）は、非グリコシル化型の、Ｎ
末端アラニンを欠いた、且つアミノ酸１２５でシステインがセリンに置換（Ｃ１２５Ｓ）
された修飾ＩＬ２である。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は当初、悪性黒色腫及び腎細
胞癌に対する療法薬として適応されたが、結腸直腸癌、乳癌、肺癌及び中皮腫などの他の
癌型に使用されるようになっている（Ｃｏｖｅｎｔｒｙ ｅｔ ａｌ．、前掲）。１９８
６～２００６年の２５９人の腎細胞癌患者にわたる研究では、２３人の患者が完全奏効と
なり、３０人が部分奏効となったことが見出された（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃ
ａｎｃｅｒ ２００８ １１３（２）：２９３－３０１）。これは２０％の全客観的奏効
率に相当し、腎細胞癌患者の７％で完全腫瘍退縮が得られた（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａ
ｌ．、前掲）。
ｔｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｍｇｔ Ｒｅｓ．２０１２ ４：２１５－２２１
）。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（アルデスロイキン）は、非グリコシル化型の、Ｎ
末端アラニンを欠いた、且つアミノ酸１２５でシステインがセリンに置換（Ｃ１２５Ｓ）
された修飾ＩＬ２である。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は当初、悪性黒色腫及び腎細
胞癌に対する療法薬として適応されたが、結腸直腸癌、乳癌、肺癌及び中皮腫などの他の
癌型に使用されるようになっている（Ｃｏｖｅｎｔｒｙ ｅｔ ａｌ．、前掲）。１９８
６～２００６年の２５９人の腎細胞癌患者にわたる研究では、２３人の患者が完全奏効と
なり、３０人が部分奏効となったことが見出された（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃ
ａｎｃｅｒ ２００８ １１３（２）：２９３－３０１）。これは２０％の全客観的奏効
率に相当し、腎細胞癌患者の７％で完全腫瘍退縮が得られた（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａ
ｌ．、前掲）。
【0007】
しかしながら、ＩＬ２による癌治療に有害作用がなかったわけではない。この２５９人
の患者の研究では、毛細血管／血管漏出、血管拡張及び乏尿が認められた。また、カテー
テル感染症及び一般感染症の両方の、好中球機能不全に起因するグレード３及びグレード
４の感染症もあった（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．、前掲）。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登
録商標）の文献は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）が、クローン病、強皮症、甲状腺炎
、炎症性関節炎、真性糖尿病、眼筋・球麻痺型重症筋無力症、半月体形成性ＩｇＡ糸球体
腎炎、胆嚢炎、脳血管炎、スティーブンス・ジョンソン症候群及び水疱性類天疱瘡などの
自己免疫疾患及び免疫関連障害の増悪と関連付けられていることを指摘している。
の患者の研究では、毛細血管／血管漏出、血管拡張及び乏尿が認められた。また、カテー
テル感染症及び一般感染症の両方の、好中球機能不全に起因するグレード３及びグレード
４の感染症もあった（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．、前掲）。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登
録商標）の文献は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）が、クローン病、強皮症、甲状腺炎
、炎症性関節炎、真性糖尿病、眼筋・球麻痺型重症筋無力症、半月体形成性ＩｇＡ糸球体
腎炎、胆嚢炎、脳血管炎、スティーブンス・ジョンソン症候群及び水疱性類天疱瘡などの
自己免疫疾患及び免疫関連障害の増悪と関連付けられていることを指摘している。
【0008】
Ｔｒｅｇ細胞が高親和性ＩＬ２受容体を構成的に発現し、生存及び機能に関してＩＬ２
に依存したことが発見され、研究の焦点はＴｒｅｇ細胞を模擬する（ｓｉｍｕｌａｔｅ）
方法としてのＩＬ２に置かれるようになっている（Ｄ’Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
．Ｉｍｍｕｎｏ．２００５，６：１１５２－１１５９）。低用量ＩＬ２は、Ｉ型糖尿病患
者に安全且つ有効な治療であることが示された（Ｈａｒｔｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌ
ａｎｃｅｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１３，１：２９５－３０５
）。Ｃ型肝炎ウイルスは脈管炎（Ｓａａｄｏｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅ
ｄ．２０１１，３６５：２０６７－２０７７）及び慢性移植片対宿主病（Ｋｏｒｅｔｈ
ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１ ３６５：２０５５－２０６６）を誘
発した。しかしながら、ＩＬ２は体内での半減期が極めて短く、複数回投与が必要である
。これは、ＩＬ２低受容体に対する活性が低く、且つ薬物動態が改善された、高親和性受
容体を介したＴｒｅｇの刺激に選択性のあるＩＬ２療法薬の必要性を示すものである。
に依存したことが発見され、研究の焦点はＴｒｅｇ細胞を模擬する（ｓｉｍｕｌａｔｅ）
方法としてのＩＬ２に置かれるようになっている（Ｄ’Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
．Ｉｍｍｕｎｏ．２００５，６：１１５２－１１５９）。低用量ＩＬ２は、Ｉ型糖尿病患
者に安全且つ有効な治療であることが示された（Ｈａｒｔｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌ
ａｎｃｅｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１３，１：２９５－３０５
）。Ｃ型肝炎ウイルスは脈管炎（Ｓａａｄｏｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅ
ｄ．２０１１，３６５：２０６７－２０７７）及び慢性移植片対宿主病（Ｋｏｒｅｔｈ
ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１ ３６５：２０５５－２０６６）を誘
発した。しかしながら、ＩＬ２は体内での半減期が極めて短く、複数回投与が必要である
。これは、ＩＬ２低受容体に対する活性が低く、且つ薬物動態が改善された、高親和性受
容体を介したＴｒｅｇの刺激に選択性のあるＩＬ２療法薬の必要性を示すものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0009】
本開示は、公知の臨床で使用されている分子に優る好ましい治療プロファイルを備えた
、抗体のＣＤＲ配列にグラフト化されたＩＬ２分子を有する抗体サイトカイングラフト化
タンパク質を提供する。詳細には、提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は
、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞の活性を増加させることなくＴｒｅｇ活性を
増加させる、又はそれを維持する。加えて、提供される組成物は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標）などの組換えヒトＩＬ２製剤と比べて向上した半減期、安定性及び生産性（ｐ
ｒｏｄｕｃｅａｂｉｌｉｔｙ）を付与する。こうした組成物の好ましい特性は、これまで
臨床で使用されているもの又は文献に記載されているものに優る好ましい治療組成物をも
たらす。例えば、本明細書に開示される一部の実施形態は、好ましくはＩＬ２低親和性受
容体よりもＩＬ２高親和性受容体に結合し、それを通じたシグナル伝達を促進する抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質を提供する。本明細書に開示される一部の実施形態は、
好ましくはＣＤ８＋ Ｔ細胞、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞よりもＴｒｅｇを活性化する抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質を提供する。
、抗体のＣＤＲ配列にグラフト化されたＩＬ２分子を有する抗体サイトカイングラフト化
タンパク質を提供する。詳細には、提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は
、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞の活性を増加させることなくＴｒｅｇ活性を
増加させる、又はそれを維持する。加えて、提供される組成物は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標）などの組換えヒトＩＬ２製剤と比べて向上した半減期、安定性及び生産性（ｐ
ｒｏｄｕｃｅａｂｉｌｉｔｙ）を付与する。こうした組成物の好ましい特性は、これまで
臨床で使用されているもの又は文献に記載されているものに優る好ましい治療組成物をも
たらす。例えば、本明細書に開示される一部の実施形態は、好ましくはＩＬ２低親和性受
容体よりもＩＬ２高親和性受容体に結合し、それを通じたシグナル伝達を促進する抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質を提供する。本明細書に開示される一部の実施形態は、
好ましくはＣＤ８＋ Ｔ細胞、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞よりもＴｒｅｇを活性化する抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質を提供する。
【0010】
本開示の実施形態は、
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変
領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体－サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変
領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体－サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
【0011】
重鎖ＣＤＲにグラフト化されたＩＬ２分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質。
ク質。
【0012】
ＩＬ２分子が、相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）又
は相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）から選択される領域にグラフト化されている、抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
は相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）から選択される領域にグラフト化されている、抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
【0013】
ＨＣＤＲ１にグラフト化されたＩＬ２分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質。
ク質。
【0014】
軽鎖ＣＤＲにグラフト化されたＩＬ２分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質。
ク質。
【0015】
ＩＬ２分子が、相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、
及び相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）から選択される領域にグラフト化されている、抗体
サイトカイングラフト化タンパク質。
及び相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）から選択される領域にグラフト化されている、抗体
サイトカイングラフト化タンパク質。
【0016】
低親和性ＩＬ２受容体に対するＩＬ２分子の親和性を低下させる突然変異を含むＩＬ２
分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【0017】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＴｒｅｇ細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又
はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質。
はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質。
【0018】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＣＤ８ Ｔエフェクター増殖の刺激が天
然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、抗体サイトカイングラフト
化タンパク質。
然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、抗体サイトカイングラフト
化タンパク質。
【0019】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商
標）よりも長い半減期を有する、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
標）よりも長い半減期を有する、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【0020】
ＩＬ２分子が配列番号４からなる、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【0021】
ＩＬ２分子が配列番号６からなる、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【0022】
ＩｇＧクラス抗体重鎖を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【0023】
ＩｇＧクラス抗体重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択される、抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
イトカイングラフト化タンパク質。
【0024】
抗体ＣＤＲの結合特異性がグラフト化されたＩＬ２分子によって低下する、抗体サイト
カイングラフト化タンパク質。
カイングラフト化タンパク質。
【0025】
抗体ＣＤＲの結合特異性がグラフト化されたＩＬ２分子の存在下で保持される、抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質。
イトカイングラフト化タンパク質。
【0026】
抗体ＣＤＲの結合特異性がＩＬ２分子の結合特異性と異なる、抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質。
ト化タンパク質。
【0027】
抗体可変ドメインの結合特異性が非ヒト抗原に対するものである、抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質。
ラフト化タンパク質。
【0028】
非ヒト抗原がウイルスである、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【0029】
ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質。
パク質。
【0030】
ＲＳＶが、ＲＳＶサブグループＡ及びＲＳＶサブグループＢから選択される、抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質。
トカイングラフト化タンパク質。
【0031】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の抗体足場部分がヒト化又はヒトである、抗体
サイトカイングラフト化タンパク質。
サイトカイングラフト化タンパク質。
【0032】
本開示の実施形態は、
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列
番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）
配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（
ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領
域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号８２のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号８３のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変
領域；又は
（ｉｖ）（ａ）配列番号９５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号９７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号１０８のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１０９のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１１０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖
可変領域
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列
番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）
配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（
ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領
域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号８２のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号８３のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変
領域；又は
（ｉｖ）（ａ）配列番号９５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号９７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号１０８のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１０９のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１１０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖
可変領域
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
【0033】
本開示の実施形態は、
（ｉ）配列番号２０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３を含む軽鎖可変領域
（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変領
域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号７２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８５を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）；又は
（ｉｖ）配列番号９８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１１を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
（ｉ）配列番号２０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３を含む軽鎖可変領域
（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変領
域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号７２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８５を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）；又は
（ｉｖ）配列番号９８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１１を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
【0034】
抗体が、低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域を含む、抗体サイトカイン
グラフト化タンパク質。
グラフト化タンパク質。
【0035】
修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及
びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質。
びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質。
【0036】
修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２
３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５
Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、抗体サイトカイングラフト化
タンパク質。
３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５
Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、抗体サイトカイングラフト化
タンパク質。
【0037】
本開示の実施形態は、配列番号１７のＨＣＤＲ１、配列番号１８のＨＣＤＲ２、配列番
号１９のＨＣＤＲ３、配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号
３２のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質
はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
号１９のＨＣＤＲ３、配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号
３２のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質
はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
【0038】
本開示の実施形態は、配列番号４３のＨＣＤＲ１、配列番号４４のＨＣＤＲ２、配列番
号４５のＨＣＤＲ３、配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号
５８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質
はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
号４５のＨＣＤＲ３、配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号
５８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質
はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
【0039】
本開示の実施形態は、配列番号６９のＨＣＤＲ１、配列番号７０のＨＣＤＲ２、配列番
号７１のＨＣＤＲ３、配列番号８２のＬＣＤＲ１、配列番号８３のＬＣＤＲ２、配列番号
８４のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質
はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
号７１のＨＣＤＲ３、配列番号８２のＬＣＤＲ１、配列番号８３のＬＣＤＲ２、配列番号
８４のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質
はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
【0040】
本開示の実施形態は、配列番号９５のＨＣＤＲ１、配列番号９６のＨＣＤＲ２、配列番
号９７のＨＣＤＲ３、配列番号１０８のＬＣＤＲ１、配列番号１０９のＬＣＤＲ２、配列
番号１１０のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗
体サイトカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タン
パク質はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有す
る。
号９７のＨＣＤＲ３、配列番号１０８のＬＣＤＲ１、配列番号１０９のＬＣＤＲ２、配列
番号１１０のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗
体サイトカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タン
パク質はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有す
る。
【0041】
本開示の実施形態は、
（ｉ）配列番号２３の重鎖及び配列番号３６の軽鎖；
（ｉｉ）配列番号４９の重鎖及び配列番号６２の軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７５の重鎖及び配列番号８８の軽鎖；又は
（ｉｖ）配列番号１０１の重鎖及び配列番号１１４の軽鎖
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸を提供する。
（ｉ）配列番号２３の重鎖及び配列番号３６の軽鎖；
（ｉｉ）配列番号４９の重鎖及び配列番号６２の軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７５の重鎖及び配列番号８８の軽鎖；又は
（ｉｖ）配列番号１０１の重鎖及び配列番号１１４の軽鎖
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸を提供する。
【0042】
本開示の実施形態は、タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチド、及び任意選択で分泌シ
グナルをコードする本明細書に開示される核酸を含む、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質の産生に好適な組換え宿主細胞を提供する。
グナルをコードする本明細書に開示される核酸を含む、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質の産生に好適な組換え宿主細胞を提供する。
【0043】
哺乳類細胞株である組換え宿主細胞。
【0044】
本開示の実施形態は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質と１つ以上の薬学的に許
容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。
容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。
【0045】
本開示の実施形態は、それを必要としている個体の免疫関連障害を治療する方法を提供
し、この方法は、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬
組成物の治療有効量を個体に投与することを含む。
し、この方法は、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬
組成物の治療有効量を個体に投与することを含む。
【0046】
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主
病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形
脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択され
る、方法。
病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形
脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択され
る、方法。
【0047】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物が別の治療剤と併用して投与さ
れる、方法。
れる、方法。
【0048】
治療剤が別の抗体サイトカイングラフト化タンパク質である、方法。
【0049】
本開示の実施形態は、それを必要としている患者のＴｒｅｇ細胞を拡大する方法を提供
し、この方法は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物を患者に投与す
ることを含む。
し、この方法は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物を患者に投与す
ることを含む。
【0050】
Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＣＤ８ Ｔエフェクター細胞が拡大されない、方法。
【0051】
Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＮＫ細胞が拡大されない、方法。
【0052】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物が別の治療剤と併用して投与さ
れる、方法。
れる、方法。
【0053】
治療剤が別の抗体サイトカイングラフト化タンパク質である、方法。
【0054】
本開示の実施形態は、治療剤としての使用のための抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質を提供する。
ク質を提供する。
【0055】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質が、（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域
及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配
列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；及び（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤ
Ｒ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可
変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び
（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、免疫関連障害の治療におけ
る使用。
（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域
及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配
列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；及び（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤ
Ｒ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可
変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び
（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、免疫関連障害の治療におけ
る使用。
【0056】
免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（
ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛
症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、
使用。
ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛
症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、
使用。
【0057】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質が別の治療剤と併用して投与される、使用。
【0058】
本開示の実施形態は、それを必要としている個体の免疫関連障害の治療用医薬品の製造
のための本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用を提供する
。
のための本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用を提供する
。
【0059】
免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（
ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛
症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、
使用。
ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛
症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、
使用。
【0060】
特定の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩｇＧクラス抗体
Ｆｃ領域を含む。詳細な実施形態において、免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又
はＩｇＧ４サブクラスＦｃ領域から選択される。抗体、抗体断片、又は抗原結合分子は、
任意選択で、Ｆｃ受容体への抗体又は抗体断片の結合を調節する（即ち増加又は低下させ
る）少なくとも１つの修飾を含む。免疫グロブリン重鎖は、任意選択で、修飾されたエフ
ェクター機能を付与する修飾を含み得る。詳細な実施形態において、免疫グロブリン重鎖
は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２
６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及
びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフェクター機能の低
下を付与する突然変異を含み得る。
Ｆｃ領域を含む。詳細な実施形態において、免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又
はＩｇＧ４サブクラスＦｃ領域から選択される。抗体、抗体断片、又は抗原結合分子は、
任意選択で、Ｆｃ受容体への抗体又は抗体断片の結合を調節する（即ち増加又は低下させ
る）少なくとも１つの修飾を含む。免疫グロブリン重鎖は、任意選択で、修飾されたエフ
ェクター機能を付与する修飾を含み得る。詳細な実施形態において、免疫グロブリン重鎖
は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２
６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及
びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフェクター機能の低
下を付与する突然変異を含み得る。
【0061】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、分子のＩＬ２部分の変異も含む。この
変異は、単一のアミノ酸変化、単一のアミノ酸欠失、複数のアミノ酸変化及び複数のアミ
ノ酸欠失であってもよい。分子のＩＬ２サイトカイン部分のこれらの変化は、低親和性Ｉ
Ｌ２受容体に対するサイトカイングラフト化タンパク質の親和性を低下させることができ
る。
変異は、単一のアミノ酸変化、単一のアミノ酸欠失、複数のアミノ酸変化及び複数のアミ
ノ酸欠失であってもよい。分子のＩＬ２サイトカイン部分のこれらの変化は、低親和性Ｉ
Ｌ２受容体に対するサイトカイングラフト化タンパク質の親和性を低下させることができ
る。
【0062】
更には、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質の少なくとも重鎖及び／又は軽鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供す
る。別の関連する態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質の産生に好適な宿主細胞を更に提供する。詳細な実施形態にお
いて、宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の軽鎖及び／又は重鎖ポリペ
プチドをコードする核酸を含む。更に別の態様において、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質の作製方法が提供され、この方法は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の
発現、形成、及び分泌に好適な条件下で本明細書に記載されるとおりの提供される宿主細
胞を培養すること、及び培養物から抗体サイトカイングラフト化タンパク質を回収するこ
とを含む。更なる態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質を含むキットを更に提供する。
ク質の少なくとも重鎖及び／又は軽鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供す
る。別の関連する態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質の産生に好適な宿主細胞を更に提供する。詳細な実施形態にお
いて、宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の軽鎖及び／又は重鎖ポリペ
プチドをコードする核酸を含む。更に別の態様において、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質の作製方法が提供され、この方法は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の
発現、形成、及び分泌に好適な条件下で本明細書に記載されるとおりの提供される宿主細
胞を培養すること、及び培養物から抗体サイトカイングラフト化タンパク質を回収するこ
とを含む。更なる態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質を含むキットを更に提供する。
【0063】
別の関連する態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイ
ングラフト化タンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物を更に提供する。一
部の実施形態において、本開示は、個体に投与するための抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質を含む医薬組成物を提供する。
ングラフト化タンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物を更に提供する。一
部の実施形態において、本開示は、個体に投与するための抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質を含む医薬組成物を提供する。
【0064】
別の態様において、本開示は、それを必要としている個体の免疫関連障害を治療する方
法を提供し、この方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質の治療有効量を個体に投与することを含む。更なる態様において、本開示は、個
体の免疫関連障害の治療又は予防における使用のための抗体サイトカイングラフト化タン
パク質を提供する。
法を提供し、この方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質の治療有効量を個体に投与することを含む。更なる態様において、本開示は、個
体の免疫関連障害の治療又は予防における使用のための抗体サイトカイングラフト化タン
パク質を提供する。
【0065】
一部の実施形態において、患者は、免疫関連障害、例えば、１型糖尿病、全身性エリテ
マトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧ
ｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リン
脂質症候群を有する。一部の適応疾患については、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質はステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プ
レドニゾロン、ブデソニド、デキサメタゾン）と共投与される。
マトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧ
ｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リン
脂質症候群を有する。一部の適応疾患については、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質はステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プ
レドニゾロン、ブデソニド、デキサメタゾン）と共投与される。
【0066】
定義
「抗体」は、四量体構造単位を含む免疫グロブリンファミリーの分子を指す。各四量体
が２つの同一のポリペプチド鎖対を含み、各対が、ジスルフィド結合で結び付けられた１
つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）とを有する。認めら
れている免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、ε、及びμ定常領域遺伝子、
並びに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖はκ又はλのいずれかに分
類される。重鎖はγ、μ、α、δ、又はεに分類され、ひいてはこれが免疫グロブリンク
ラス、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを定義する。抗体は、任意
のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）、又
は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、Ｉ
ｇＡ２）であり得る。
「抗体」は、四量体構造単位を含む免疫グロブリンファミリーの分子を指す。各四量体
が２つの同一のポリペプチド鎖対を含み、各対が、ジスルフィド結合で結び付けられた１
つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）とを有する。認めら
れている免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、ε、及びμ定常領域遺伝子、
並びに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖はκ又はλのいずれかに分
類される。重鎖はγ、μ、α、δ、又はεに分類され、ひいてはこれが免疫グロブリンク
ラス、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを定義する。抗体は、任意
のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）、又
は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、Ｉ
ｇＡ２）であり得る。
【0067】
軽鎖及び重鎖は両方とも、構造的及び機能的相同性領域に分けられる。構造的及び機能
的に、用語「定常」及び「可変」が用いられる。各鎖のＮ末端は、抗原認識に一義的に関
与する約１００～１１０アミノ酸又はそれ以上の可変（Ｖ）領域又はドメインを画成する
。用語の可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）は、それぞれ軽鎖及び重鎖のこれらの領
域を指す。ＶＨとＶＬとが共に対になって単一の抗原結合部位を形成する。Ｖ領域に加え
、重鎖及び軽鎖は両方とも定常（Ｃ）領域又はドメインを含む。分泌型の免疫グロブリン
Ｃ領域は、３つのＣドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、任意選択でＣＨ４（Ｃμ）、及び
ヒンジ領域で構成される。膜結合型の免疫グロブリンＣ領域はまた、膜ドメイン及び細胞
内ドメインを有する。各軽鎖はＮ末端にＶＬを有し、続いてその他端に定常ドメイン（Ｃ
）を有する。軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の定常ドメインは、分
泌、経胎盤移動、Ｆｃ受容体結合、補体結合など、重要な生物学的特性を付与する。慣習
上、定常領域ドメインの番号は、抗原結合部位又は抗体のアミノ末端から遠位になるに従
い大きくなる。Ｎ末端が可変領域であり、Ｃ末端が定常領域である；実際にはＣＨ３及び
ＣＬドメインが、それぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端ドメインを含む。ＶＬはＶＨと
整列し、及びＣＬは重鎖の第１の定常ドメインと整列する。本明細書で使用されるとき、
「抗体」は、従来の抗体構造及び変種の抗体を包含する。従って、この概念の範囲内には
、抗体サイトカイングラフト化タンパク質、完全長抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト
抗体、及びその抗体断片がある。
的に、用語「定常」及び「可変」が用いられる。各鎖のＮ末端は、抗原認識に一義的に関
与する約１００～１１０アミノ酸又はそれ以上の可変（Ｖ）領域又はドメインを画成する
。用語の可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）は、それぞれ軽鎖及び重鎖のこれらの領
域を指す。ＶＨとＶＬとが共に対になって単一の抗原結合部位を形成する。Ｖ領域に加え
、重鎖及び軽鎖は両方とも定常（Ｃ）領域又はドメインを含む。分泌型の免疫グロブリン
Ｃ領域は、３つのＣドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、任意選択でＣＨ４（Ｃμ）、及び
ヒンジ領域で構成される。膜結合型の免疫グロブリンＣ領域はまた、膜ドメイン及び細胞
内ドメインを有する。各軽鎖はＮ末端にＶＬを有し、続いてその他端に定常ドメイン（Ｃ
）を有する。軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の定常ドメインは、分
泌、経胎盤移動、Ｆｃ受容体結合、補体結合など、重要な生物学的特性を付与する。慣習
上、定常領域ドメインの番号は、抗原結合部位又は抗体のアミノ末端から遠位になるに従
い大きくなる。Ｎ末端が可変領域であり、Ｃ末端が定常領域である；実際にはＣＨ３及び
ＣＬドメインが、それぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端ドメインを含む。ＶＬはＶＨと
整列し、及びＣＬは重鎖の第１の定常ドメインと整列する。本明細書で使用されるとき、
「抗体」は、従来の抗体構造及び変種の抗体を包含する。従って、この概念の範囲内には
、抗体サイトカイングラフト化タンパク質、完全長抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト
抗体、及びその抗体断片がある。
【0068】
抗体は、インタクトな免疫グロブリン鎖として存在するか、又は様々なペプチダーゼに
よる消化によって産生される幾つもの十分に特徴付けられた抗体断片として存在する。用
語「抗体断片」は、本明細書で使用されるとき、６つのＣＤＲを保持している抗体の１つ
以上の一部分を指す。従って、例えば、ペプシンがヒンジ領域のジスルフィド結合の下で
抗体を消化すると、それ自体軽鎖がジスルフィド結合によってＶＨ－ＣＨ１に連結したも
のであるＦａｂ’の二量体、Ｆ（ａｂ）’２が産生される。Ｆ（ａｂ）’２を穏和条件下
で還元するとヒンジ領域のジスルフィド結合が壊れ、それによりＦ（ａｂ）’２二量体が
Ｆａｂ’単量体に変換され得る。Ｆａｂ’単量体は本質的に、ヒンジ領域の一部分を有す
るＦａｂである（Ｐａｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ ３ｄ ｅｄ．（１９９３））。様々な抗体断片がインタクトな抗体の消化という観
点で定義されているが、当業者は、かかる断片が化学的に、或いは組換えＤＮＡ方法を用
いることによりデノボ合成されてもよいことを理解するであろう。本明細書で使用される
とき、「抗体断片」は、全抗体の修飾によって作製されるか、又は組換えＤＮＡ方法を用
いてデノボ合成されるかのいずれかの、結合特異性及び機能活性を保持している抗体の１
つ以上の一部分を指す。抗体断片の例としては、同じ結合特異性を備えたＦｖ断片、単鎖
抗体（ＳｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｄ（Ｖｈ及びＣＨ１ドメイン）、ｄＡｂ（Ｖｈ
及び単離ＣＤＲ）；及びこれらの断片の多量体型（例えば、Ｆ（ａｂ’）２）が挙げられ
る。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、所望の結合特異性及び活性を実現す
るのに必要な抗体断片も含み得る。
よる消化によって産生される幾つもの十分に特徴付けられた抗体断片として存在する。用
語「抗体断片」は、本明細書で使用されるとき、６つのＣＤＲを保持している抗体の１つ
以上の一部分を指す。従って、例えば、ペプシンがヒンジ領域のジスルフィド結合の下で
抗体を消化すると、それ自体軽鎖がジスルフィド結合によってＶＨ－ＣＨ１に連結したも
のであるＦａｂ’の二量体、Ｆ（ａｂ）’２が産生される。Ｆ（ａｂ）’２を穏和条件下
で還元するとヒンジ領域のジスルフィド結合が壊れ、それによりＦ（ａｂ）’２二量体が
Ｆａｂ’単量体に変換され得る。Ｆａｂ’単量体は本質的に、ヒンジ領域の一部分を有す
るＦａｂである（Ｐａｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ ３ｄ ｅｄ．（１９９３））。様々な抗体断片がインタクトな抗体の消化という観
点で定義されているが、当業者は、かかる断片が化学的に、或いは組換えＤＮＡ方法を用
いることによりデノボ合成されてもよいことを理解するであろう。本明細書で使用される
とき、「抗体断片」は、全抗体の修飾によって作製されるか、又は組換えＤＮＡ方法を用
いてデノボ合成されるかのいずれかの、結合特異性及び機能活性を保持している抗体の１
つ以上の一部分を指す。抗体断片の例としては、同じ結合特異性を備えたＦｖ断片、単鎖
抗体（ＳｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｄ（Ｖｈ及びＣＨ１ドメイン）、ｄＡｂ（Ｖｈ
及び単離ＣＤＲ）；及びこれらの断片の多量体型（例えば、Ｆ（ａｂ’）２）が挙げられ
る。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、所望の結合特異性及び活性を実現す
るのに必要な抗体断片も含み得る。
【0069】
「Ｆａｂ」ドメインは、この文脈で使用されるとき、重鎖可変ドメイン、定常領域ＣＨ
１ドメイン、軽鎖可変ドメイン、及び軽鎖定常領域ＣＬドメインを含む。これらのドメイ
ンの相互作用はＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間のジスルフィド結合によって安定し
ている。一部の実施形態において、Ｆａｂの重鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＶＨ－Ｃ
Ｈの順序であり、Ｆａｂの軽鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＶＬ－ＣＬの順序である。
一部の実施形態において、Ｆａｂの重鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＣＨ－ＶＨの順序
であり、Ｆａｂの軽鎖ドメインはＣＬ－ＶＬの順序である。Ｆａｂ断片は歴史的にはイン
タクトな免疫グロブリンのパパイン消化によって同定されたが、「Ｆａｂ」は、典型的に
は任意の方法により組換えで作製される。各Ｆａｂ断片は抗原結合に関して一価であり、
即ちそれは単一の抗原結合部位を有する。
１ドメイン、軽鎖可変ドメイン、及び軽鎖定常領域ＣＬドメインを含む。これらのドメイ
ンの相互作用はＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間のジスルフィド結合によって安定し
ている。一部の実施形態において、Ｆａｂの重鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＶＨ－Ｃ
Ｈの順序であり、Ｆａｂの軽鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＶＬ－ＣＬの順序である。
一部の実施形態において、Ｆａｂの重鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＣＨ－ＶＨの順序
であり、Ｆａｂの軽鎖ドメインはＣＬ－ＶＬの順序である。Ｆａｂ断片は歴史的にはイン
タクトな免疫グロブリンのパパイン消化によって同定されたが、「Ｆａｂ」は、典型的に
は任意の方法により組換えで作製される。各Ｆａｂ断片は抗原結合に関して一価であり、
即ちそれは単一の抗原結合部位を有する。
【0070】
「相補性決定ドメイン」又は「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、同義的に、ＶＬ及
びＶＨの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗体鎖の中でかかる標的タンパク質に対する特異
性を備えた標的タンパク質結合部位である。各ヒトＶＬ又はＶＨ中に３つのＣＤＲ（ＣＤ
Ｒ１～３、Ｎ末端から連続的に番号付けされる）があり、可変ドメインの約１５～２０％
を占める。ＣＤＲは、標的タンパク質のエピトープに対して構造的に相補的であり、した
がって、結合特異性に直接関与している。ＶＬ又はＶＨの残りの区間、いわゆるフレーム
ワーク領域（ＦＲ）は、アミノ酸配列の変化をあまり示さない（Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ４．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．
，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０００）。
びＶＨの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗体鎖の中でかかる標的タンパク質に対する特異
性を備えた標的タンパク質結合部位である。各ヒトＶＬ又はＶＨ中に３つのＣＤＲ（ＣＤ
Ｒ１～３、Ｎ末端から連続的に番号付けされる）があり、可変ドメインの約１５～２０％
を占める。ＣＤＲは、標的タンパク質のエピトープに対して構造的に相補的であり、した
がって、結合特異性に直接関与している。ＶＬ又はＶＨの残りの区間、いわゆるフレーム
ワーク領域（ＦＲ）は、アミノ酸配列の変化をあまり示さない（Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ４．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．
，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０００）。
【0071】
ＣＤＲ及びフレームワーク領域の位置は、当該技術分野における様々な周知の定義、例
えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＡｂＭ（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．１
９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ
ａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎ
ｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉ
ｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９：２０５－２０６（２０
０１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１
－９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７
－８８３（１９８９）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２
７：７９９－８１７（１９９２）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－７４８（１９９７）を参照）を用いて決定され得る。抗
原結合部位の定義は、以下にも記載されている：Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８：２１９－２２１（２０００）；及びＬｅｆｒａｎｃ，
Ｍ．Ｐ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９：２０７－２０９（２００１）
；（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ
．－Ｐ．，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）；Ｌｅ
ｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２７，
５５－７７（２００３）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．
，２６２：７３２－７４５（１９９６）；及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：９２６８－９２７２（１９８９）；Ｍａｒ
ｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３：１２１－１５３（
１９９１）；及びＲｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（
ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１４１－１７２（１９９６）。
えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＡｂＭ（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．１
９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ
ａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎ
ｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉ
ｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９：２０５－２０６（２０
０１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１
－９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７
－８８３（１９８９）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２
７：７９９－８１７（１９９２）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－７４８（１９９７）を参照）を用いて決定され得る。抗
原結合部位の定義は、以下にも記載されている：Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８：２１９－２２１（２０００）；及びＬｅｆｒａｎｃ，
Ｍ．Ｐ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９：２０７－２０９（２００１）
；（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ
．－Ｐ．，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）；Ｌｅ
ｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２７，
５５－７７（２００３）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．
，２６２：７３２－７４５（１９９６）；及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：９２６８－９２７２（１９８９）；Ｍａｒ
ｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３：１２１－１５３（
１９９１）；及びＲｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（
ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１４１－１７２（１９９６）。
【0072】
Ｋａｂａｔに基づけば、ＶＨのＣＤＲアミノ酸残基は３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０
～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；及びＶＬのＣＤＲ
アミノ酸残基は２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７
（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａに基づけば、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は２６
～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と
付番され；及びＶＬのアミノ酸残基は２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ
２）、及び９１～９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両
方のＣＤＲ定義を組み合わせることにより、ＣＤＲはヒトＶＨにおいてアミノ酸残基２６
～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）、
及びヒトＶＬにおいてアミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２
）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）からなる。
～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；及びＶＬのＣＤＲ
アミノ酸残基は２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７
（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａに基づけば、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は２６
～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と
付番され；及びＶＬのアミノ酸残基は２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ
２）、及び９１～９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両
方のＣＤＲ定義を組み合わせることにより、ＣＤＲはヒトＶＨにおいてアミノ酸残基２６
～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）、
及びヒトＶＬにおいてアミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２
）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）からなる。
【0073】
「抗体可変軽鎖」又は「抗体可変重鎖」は、本明細書で使用されるとき、それぞれＶＬ
又はＶＨを含むポリペプチドを指す。内因性ＶＬは遺伝子セグメントＶ（可変）及びＪ（
連結）によってコードされ、及び内因性ＶＨはＶ、Ｄ（多様性）、及びＪによってコード
される。ＶＬ又はＶＨの各々はＣＤＲ並びにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。用語「
可変領域」又は「Ｖ領域」は、同義的に、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３
－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含む重鎖又は軽鎖を指す。Ｖ領域は天然に存在するもの、組換え又
は合成であってもよい。本願において、抗体軽鎖及び／又は抗体重鎖はまとめて「抗体鎖
」と称することができる。本明細書に提供され及び更に記載されるとおり、「抗体可変軽
鎖」又は「抗体可変重鎖」及び／又は「可変領域」及び／又は「抗体鎖」は任意選択で、
ＣＤＲに組み込まれたサイトカインポリペプチド配列を含む。
又はＶＨを含むポリペプチドを指す。内因性ＶＬは遺伝子セグメントＶ（可変）及びＪ（
連結）によってコードされ、及び内因性ＶＨはＶ、Ｄ（多様性）、及びＪによってコード
される。ＶＬ又はＶＨの各々はＣＤＲ並びにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。用語「
可変領域」又は「Ｖ領域」は、同義的に、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３
－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含む重鎖又は軽鎖を指す。Ｖ領域は天然に存在するもの、組換え又
は合成であってもよい。本願において、抗体軽鎖及び／又は抗体重鎖はまとめて「抗体鎖
」と称することができる。本明細書に提供され及び更に記載されるとおり、「抗体可変軽
鎖」又は「抗体可変重鎖」及び／又は「可変領域」及び／又は「抗体鎖」は任意選択で、
ＣＤＲに組み込まれたサイトカインポリペプチド配列を含む。
【0074】
本明細書における免疫グロブリン重鎖の、例えばＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むＣ末
端部分は、「Ｆｃ」ドメインである。「Ｆｃ領域」は、本明細書で使用されるとき、第１
の定常領域（ＣＨ１）免疫グロブリンドメインを除外した抗体の定常領域を指す。Ｆｃは
、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥ
及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにこれらのドメインの
可動性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡ及びＩｇＭについては、ＦｃはＪ鎖を含み得る。Ｉｇ
Ｇについては、Ｆｃは免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３並びにＣγ１とＣγとの
間のヒンジを含む。当該技術分野においては、Ｆｃ領域の境界は様々であり得るが、しか
しながらヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常は残基Ｃ２２６又はＰ２３０～そのカルボキシル
末端まで（使用する付番はＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃ
ａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａ
ｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，Ｖａ．）にあるＥＵインデックス
に従う）を含むと定義されることが理解される。「Ｆｃ領域」は、この領域を単独で指す
こともあり、又は抗体若しくは抗体断片のコンテクストでこの領域を指すこともある。「
Ｆｃ領域」は、例えばエフェクター機能を調節する修飾を含め、Ｆｃ領域の天然に存在す
る対立遺伝子変異体を例えばＣＨ２及びＣＨ３領域に含む。Ｆｃ領域はまた、生物学的機
能に変化をもたらさない変異体も含む。例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端又は
Ｃ末端から、生物学的機能を実質的に失うことなく１つ以上のアミノ酸が欠失される。例
えば、特定の実施形態においてＣ末端リジンが修飾され、置き換えられ、又は除去される
。詳細な実施形態においてＦｃ領域の１つ以上のＣ末端残基が変更又は除去される。特定
の実施形態においてＦｃの１つ以上のＣ末端残基（例えば、末端リジン）が欠失される。
特定の他の実施形態においてＦｃの１つ以上のＣ末端残基が別のアミノ酸で置換される（
例えば、末端リジンが置き換えられる）。かかる変異体は、活性に及ぶ効果が最小限とな
るように当該技術分野において公知の一般的規則に従い選択される（例えば、Ｂｏｗｉｅ
，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：３０６－１３１０，１９９０を参照のこと）
。Ｆｃドメインは、ＦｃＲなどの細胞受容体によって認識される免疫グロブリン（Ｉｇ）
の一部分であり、そこに補体活性化タンパク質Ｃ１ｑが結合する。ＣＨ２エクソンの５’
部分にコードされる下方のヒンジ領域は、ＦｃＲ受容体への結合のための抗体内の可動性
を提供する。
端部分は、「Ｆｃ」ドメインである。「Ｆｃ領域」は、本明細書で使用されるとき、第１
の定常領域（ＣＨ１）免疫グロブリンドメインを除外した抗体の定常領域を指す。Ｆｃは
、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥ
及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにこれらのドメインの
可動性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡ及びＩｇＭについては、ＦｃはＪ鎖を含み得る。Ｉｇ
Ｇについては、Ｆｃは免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３並びにＣγ１とＣγとの
間のヒンジを含む。当該技術分野においては、Ｆｃ領域の境界は様々であり得るが、しか
しながらヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常は残基Ｃ２２６又はＰ２３０～そのカルボキシル
末端まで（使用する付番はＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃ
ａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａ
ｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，Ｖａ．）にあるＥＵインデックス
に従う）を含むと定義されることが理解される。「Ｆｃ領域」は、この領域を単独で指す
こともあり、又は抗体若しくは抗体断片のコンテクストでこの領域を指すこともある。「
Ｆｃ領域」は、例えばエフェクター機能を調節する修飾を含め、Ｆｃ領域の天然に存在す
る対立遺伝子変異体を例えばＣＨ２及びＣＨ３領域に含む。Ｆｃ領域はまた、生物学的機
能に変化をもたらさない変異体も含む。例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端又は
Ｃ末端から、生物学的機能を実質的に失うことなく１つ以上のアミノ酸が欠失される。例
えば、特定の実施形態においてＣ末端リジンが修飾され、置き換えられ、又は除去される
。詳細な実施形態においてＦｃ領域の１つ以上のＣ末端残基が変更又は除去される。特定
の実施形態においてＦｃの１つ以上のＣ末端残基（例えば、末端リジン）が欠失される。
特定の他の実施形態においてＦｃの１つ以上のＣ末端残基が別のアミノ酸で置換される（
例えば、末端リジンが置き換えられる）。かかる変異体は、活性に及ぶ効果が最小限とな
るように当該技術分野において公知の一般的規則に従い選択される（例えば、Ｂｏｗｉｅ
，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：３０６－１３１０，１９９０を参照のこと）
。Ｆｃドメインは、ＦｃＲなどの細胞受容体によって認識される免疫グロブリン（Ｉｇ）
の一部分であり、そこに補体活性化タンパク質Ｃ１ｑが結合する。ＣＨ２エクソンの５’
部分にコードされる下方のヒンジ領域は、ＦｃＲ受容体への結合のための抗体内の可動性
を提供する。
【0075】
「キメラ抗体」は、（ａ）異なる又は変更されたクラス、エフェクター機能及び／又は
種の定常領域、又はそのキメラ抗体に新規特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵
素、毒素、ホルモン、成長因子、及び薬物に抗原結合部位（可変領域）が連結するように
定常領域、又はその一部分が変更され、置き換えられ、又は交換されている；又は（ｂ）
異なる又は変更された抗原特異性を有する可変領域によって可変領域、又はその一部分が
変更され、置き換えられ、又は交換されている抗体分子である。
種の定常領域、又はそのキメラ抗体に新規特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵
素、毒素、ホルモン、成長因子、及び薬物に抗原結合部位（可変領域）が連結するように
定常領域、又はその一部分が変更され、置き換えられ、又は交換されている；又は（ｂ）
異なる又は変更された抗原特異性を有する可変領域によって可変領域、又はその一部分が
変更され、置き換えられ、又は交換されている抗体分子である。
【0076】
「ヒト化」抗体は、ヒトにおいて免疫原性が低いながらも非ヒト抗体の反応性（例えば
、結合特異性、活性）を保持している抗体である。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を
保持し、且つ抗体の残りの部分をヒト対応物に置き換えることによって実現し得る。例え
ば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
，８１：６８５１－６８５５（１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉ，Ａｄｖ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５－９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．
，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅ
ｃ．Ｉｍｍｕｎ．，２８：４８９－４９８（１９９１）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉ
ｍｍｕｎ．，３１（３）：１６９－２１７（１９９４）を参照のこと。
、結合特異性、活性）を保持している抗体である。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を
保持し、且つ抗体の残りの部分をヒト対応物に置き換えることによって実現し得る。例え
ば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
，８１：６８５１－６８５５（１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉ，Ａｄｖ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５－９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．
，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅ
ｃ．Ｉｍｍｕｎ．，２８：４８９－４９８（１９９１）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉ
ｍｍｕｎ．，３１（３）：１６９－２１７（１９９４）を参照のこと。
【0077】
「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方が、ヒト起源の配列
に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域
はまた、このようなヒト配列、例えば、ヒト生殖系列配列、又はヒト生殖系列配列の突然
変異型、又は例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：
５７－８６，２０００）に記載されるような、ヒトフレームワーク配列分析から得られる
コンセンサスフレームワーク配列を含む抗体に由来する。ヒト抗体は、ヒト配列によって
コードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位
特異的突然変異によって、又はインビボでの体細胞突然変異によって、又は安定性若しく
は製造を促進するための保存的置換によって導入される突然変異）。
に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域
はまた、このようなヒト配列、例えば、ヒト生殖系列配列、又はヒト生殖系列配列の突然
変異型、又は例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：
５７－８６，２０００）に記載されるような、ヒトフレームワーク配列分析から得られる
コンセンサスフレームワーク配列を含む抗体に由来する。ヒト抗体は、ヒト配列によって
コードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位
特異的突然変異によって、又はインビボでの体細胞突然変異によって、又は安定性若しく
は製造を促進するための保存的置換によって導入される突然変異）。
【0078】
「対応するヒト生殖系列配列」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン可変領域配
列によってコードされる全ての他の公知の可変領域アミノ酸配列と比較して、参照可変領
域アミノ酸配列又はサブ配列との最も高い決定されたアミノ酸配列同一性を有するヒト可
変領域アミノ酸配列又はサブ配列をコードする核酸配列を指す。対応するヒト生殖系列配
列はまた、全ての他の評価された可変領域アミノ酸配列と比較して、参照可変領域アミノ
酸配列又はサブ配列との最も高いアミノ酸配列同一性を有するヒト可変領域アミノ酸配列
又はサブ配列を指し得る。対応するヒト生殖系列配列は、フレームワーク領域のみ、相補
性決定領域のみ、フレームワーク及び相補性決定領域、可変セグメント（上で定義される
ような）、又は可変領域を含む配列若しくはサブ配列の他の組合せであり得る。配列同一
性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、又は当該技術分野において公知の別のアライン
メントアルゴリズムを用いて、２つの配列を整列する、本明細書に記載される方法を用い
て決定され得る。対応するヒト生殖系列核酸又はアミノ酸配列は、参照可変領域核酸又は
アミノ酸配列との少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し得る。
列によってコードされる全ての他の公知の可変領域アミノ酸配列と比較して、参照可変領
域アミノ酸配列又はサブ配列との最も高い決定されたアミノ酸配列同一性を有するヒト可
変領域アミノ酸配列又はサブ配列をコードする核酸配列を指す。対応するヒト生殖系列配
列はまた、全ての他の評価された可変領域アミノ酸配列と比較して、参照可変領域アミノ
酸配列又はサブ配列との最も高いアミノ酸配列同一性を有するヒト可変領域アミノ酸配列
又はサブ配列を指し得る。対応するヒト生殖系列配列は、フレームワーク領域のみ、相補
性決定領域のみ、フレームワーク及び相補性決定領域、可変セグメント（上で定義される
ような）、又は可変領域を含む配列若しくはサブ配列の他の組合せであり得る。配列同一
性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、又は当該技術分野において公知の別のアライン
メントアルゴリズムを用いて、２つの配列を整列する、本明細書に記載される方法を用い
て決定され得る。対応するヒト生殖系列核酸又はアミノ酸配列は、参照可変領域核酸又は
アミノ酸配列との少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し得る。
【0079】
用語「価数」は、本明細書で使用されるとき、ポリペプチド中の潜在的な標的結合部位
の数を指す。各標的結合部位は、１つの標的分子又は標的分子の特異的部位に特異的に結
合する。ポリペプチドが２つ以上の標的結合部位を含むとき、各標的結合部位は同じ又は
異なる分子に特異的に結合し得る（例えば、異なる分子、例えば異なる抗原、又は同じ分
子上の異なるエピトープに結合し得る）。従来の抗体は、例えば２つの結合部位を有し、
二価であり；「三価」及び「四価」は、抗体分子にそれぞれ３つの結合部位及び４つの結
合部位が存在することを指す。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、一価（即ち、
１つの標的分子に結合する）、二価、又は多価（即ち、２つ以上の標的分子に結合する）
であり得る。
の数を指す。各標的結合部位は、１つの標的分子又は標的分子の特異的部位に特異的に結
合する。ポリペプチドが２つ以上の標的結合部位を含むとき、各標的結合部位は同じ又は
異なる分子に特異的に結合し得る（例えば、異なる分子、例えば異なる抗原、又は同じ分
子上の異なるエピトープに結合し得る）。従来の抗体は、例えば２つの結合部位を有し、
二価であり；「三価」及び「四価」は、抗体分子にそれぞれ３つの結合部位及び４つの結
合部位が存在することを指す。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、一価（即ち、
１つの標的分子に結合する）、二価、又は多価（即ち、２つ以上の標的分子に結合する）
であり得る。
【0080】
語句「特異的に結合する」又は「結合特異性」は、標的（例えば、タンパク質）と抗体
サイトカイングラフト化タンパク質との間の相互作用について記載する文脈で使用される
とき、タンパク質及び他の生物学的物質の異種集団中、例えば、生体試料、例えば、血液
、血清、血漿又は組織試料中の標的の存在を決定付ける結合反応を指す。従って、特定の
指定される条件下では、特定の結合特異性を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク
質は特定の標的にバックグラウンドの少なくとも２倍結合し、その試料中に存在する他の
標的に有意な量で結合することは実質的にない。一実施形態において、指定される条件下
では、特定の結合特異性を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク質は特定の抗原に
バックグラウンドの少なくとも１０倍結合し、その試料中に存在する他の標的に有意な量
で結合することは実質的にない。かかる条件下での抗体サイトカイングラフト化タンパク
質との特異的結合には、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が特定の標的タンパク質
に対するその特異性に関して選択されている必要があり得る。本明細書で使用されるとき
、特異的結合は、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合する抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質を含み、例えば他のサイトカイン受容体スーパーファミリーメンバーと交
差反応する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含まない。一部の実施形態において
、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合し、且つ非ヒト霊長類ＩＬ２Ｒ（例えばカニ
クイザルＩＬ２Ｒ）と交差反応する抗体サイトカイングラフト化タンパク質が選択される
。一部の実施形態において、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合し、且つ更なる標
的抗原と反応する抗体グラフト化タンパク質が選択される。特定の標的抗原タンパク質と
特異的反応性を示す抗体サイトカイングラフト化タンパク質の選択には、種々のフォーマ
ットが用いられ得る。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイが、タンパク質と特異的に
免疫反応性の抗体を選択するのに日常的に使用される（例えば、特異的免疫反応性を決定
するのに使用され得るイムノアッセイ形式及び条件の説明については、Ｈａｒｌｏｗ ＆
Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ（１９９８）を参照されたい）。典型的に、特異的又は選択的結合反応は、バックグ
ラウンドシグナルの少なくとも２倍、より典型的に、バックグラウンドより少なくとも１
０～１００倍、シグナルを生成するであろう。
サイトカイングラフト化タンパク質との間の相互作用について記載する文脈で使用される
とき、タンパク質及び他の生物学的物質の異種集団中、例えば、生体試料、例えば、血液
、血清、血漿又は組織試料中の標的の存在を決定付ける結合反応を指す。従って、特定の
指定される条件下では、特定の結合特異性を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク
質は特定の標的にバックグラウンドの少なくとも２倍結合し、その試料中に存在する他の
標的に有意な量で結合することは実質的にない。一実施形態において、指定される条件下
では、特定の結合特異性を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク質は特定の抗原に
バックグラウンドの少なくとも１０倍結合し、その試料中に存在する他の標的に有意な量
で結合することは実質的にない。かかる条件下での抗体サイトカイングラフト化タンパク
質との特異的結合には、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が特定の標的タンパク質
に対するその特異性に関して選択されている必要があり得る。本明細書で使用されるとき
、特異的結合は、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合する抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質を含み、例えば他のサイトカイン受容体スーパーファミリーメンバーと交
差反応する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含まない。一部の実施形態において
、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合し、且つ非ヒト霊長類ＩＬ２Ｒ（例えばカニ
クイザルＩＬ２Ｒ）と交差反応する抗体サイトカイングラフト化タンパク質が選択される
。一部の実施形態において、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合し、且つ更なる標
的抗原と反応する抗体グラフト化タンパク質が選択される。特定の標的抗原タンパク質と
特異的反応性を示す抗体サイトカイングラフト化タンパク質の選択には、種々のフォーマ
ットが用いられ得る。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイが、タンパク質と特異的に
免疫反応性の抗体を選択するのに日常的に使用される（例えば、特異的免疫反応性を決定
するのに使用され得るイムノアッセイ形式及び条件の説明については、Ｈａｒｌｏｗ ＆
Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ（１９９８）を参照されたい）。典型的に、特異的又は選択的結合反応は、バックグ
ラウンドシグナルの少なくとも２倍、より典型的に、バックグラウンドより少なくとも１
０～１００倍、シグナルを生成するであろう。
【0081】
「平衡解離定数（ＫＤ、Ｍ）」という用語は、解離速度定数（ｋｄ、時間－１）を結合
速度定数（ｋａ、時間－１、Ｍ－１）で除算した値を指す。平衡解離定数は、当該技術分
野における任意の公知の方法を用いて測定され得る。抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質は、一般に、約１０－７又は１０－８Ｍ未満、例えば、約１０－９Ｍ又は１０－１０
Ｍ未満、ある実施形態において、約１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ又は１０－１３Ｍ未満の
平衡解離定数を有するであろう。
速度定数（ｋａ、時間－１、Ｍ－１）で除算した値を指す。平衡解離定数は、当該技術分
野における任意の公知の方法を用いて測定され得る。抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質は、一般に、約１０－７又は１０－８Ｍ未満、例えば、約１０－９Ｍ又は１０－１０
Ｍ未満、ある実施形態において、約１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ又は１０－１３Ｍ未満の
平衡解離定数を有するであろう。
【0082】
本明細書で使用されるとき、用語「エピトープ」又は「結合領域」は、抗体ＣＤＲと抗
原タンパク質との間の特異的結合に関与する抗原タンパク質におけるドメインを指す。
原タンパク質との間の特異的結合に関与する抗原タンパク質におけるドメインを指す。
【0083】
本明細書で使用されるとき、用語「受容体－サイトカイン結合領域」は、グラフト化さ
れたサイトカインとその受容体（例えばＩＬ２高親和性受容体）との間の特異的結合に関
与する抗体サイトカイングラフト化タンパク質のグラフト化されたサイトカイン部分にお
けるドメインを指す。各抗体サイトカイングラフト化タンパク質に少なくとも１つのかか
る受容体－サイトカイン結合領域が存在し、結合領域の各々は他と同一であることも、又
は異なることもある。
れたサイトカインとその受容体（例えばＩＬ２高親和性受容体）との間の特異的結合に関
与する抗体サイトカイングラフト化タンパク質のグラフト化されたサイトカイン部分にお
けるドメインを指す。各抗体サイトカイングラフト化タンパク質に少なくとも１つのかか
る受容体－サイトカイン結合領域が存在し、結合領域の各々は他と同一であることも、又
は異なることもある。
【0084】
用語「アゴニスト」は、同義的に、受容体を活性化させて完全な又は部分的な受容体媒
介性応答を誘導する能力を有する抗体を指す。例えば、ＩＬ２高親和性受容体のアゴニス
トはＩＬ２高親和性受容体に結合し、ＩＬ２媒介性細胞内シグナル伝達、細胞活性化及び
／又はＴｒｅｇ細胞増殖を誘導する。抗体サイトカイングラフト化タンパク質アゴニスト
は、幾つかの点で天然ＩＬ２リガンドと同様にＩＬ２高親和性受容体を通じたシグナル伝
達を刺激する。ＩＬ２がＩＬ２高親和性受容体に結合するとＪａｋ１及びＪａｋ２活性化
が誘導され、それによりＳＴＡＴ５リン酸化がもたらされる。一部の実施形態において、
抗体サイトカイングラフト化タンパク質アゴニストは、ＩＬ２高親和性受容体に結合し、
且つＳＴＡＴ５リン酸化、及び／又はＴｒｅｇ細胞増殖を誘導するその能力によって同定
することができる。
介性応答を誘導する能力を有する抗体を指す。例えば、ＩＬ２高親和性受容体のアゴニス
トはＩＬ２高親和性受容体に結合し、ＩＬ２媒介性細胞内シグナル伝達、細胞活性化及び
／又はＴｒｅｇ細胞増殖を誘導する。抗体サイトカイングラフト化タンパク質アゴニスト
は、幾つかの点で天然ＩＬ２リガンドと同様にＩＬ２高親和性受容体を通じたシグナル伝
達を刺激する。ＩＬ２がＩＬ２高親和性受容体に結合するとＪａｋ１及びＪａｋ２活性化
が誘導され、それによりＳＴＡＴ５リン酸化がもたらされる。一部の実施形態において、
抗体サイトカイングラフト化タンパク質アゴニストは、ＩＬ２高親和性受容体に結合し、
且つＳＴＡＴ５リン酸化、及び／又はＴｒｅｇ細胞増殖を誘導するその能力によって同定
することができる。
【0085】
用語「ＩＬ２」又は「ＩＬ－２」又は「インターロイキン２」又は「インターロイキン
－２」は、同義的に、天然タンパク質が炎症過程の調節及び維持において機能するαヘリ
ックスサイトカインファミリーメンバーを指す。ＩＬ２の特性は、Ｎ末端とＣ末端とが空
間的に互いに近いことであり、そのためＩＬ２サイトカインタンパク質は抗体グラフトに
好適となる。アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質のコンテクストでは、完
全長天然ヒトの残基２１～１５３を含むＩＬ２が利用される。本明細書に開示されるとお
りのヒトＩＬ２は、その全長にわたってアミノ酸配列番号２と少なくとも約９０％、９１
％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％
の配列同一性を有し、及び本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質の優先的なアゴニスト活性を保持し、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００５７
７として公開されている。配列番号１はヒトＩＬ２ ｃＤＮＡ配列である。本明細書に開
示されるとおりのＩＬ２タンパク質をコードするヒトＩＬ２核酸は、その全長にわたって
配列番号１の核酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、ＧｅｎＢａｎｋ
受託番号ＮＭ＿０００５８６の下に公開された。
－２」は、同義的に、天然タンパク質が炎症過程の調節及び維持において機能するαヘリ
ックスサイトカインファミリーメンバーを指す。ＩＬ２の特性は、Ｎ末端とＣ末端とが空
間的に互いに近いことであり、そのためＩＬ２サイトカインタンパク質は抗体グラフトに
好適となる。アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質のコンテクストでは、完
全長天然ヒトの残基２１～１５３を含むＩＬ２が利用される。本明細書に開示されるとお
りのヒトＩＬ２は、その全長にわたってアミノ酸配列番号２と少なくとも約９０％、９１
％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％
の配列同一性を有し、及び本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質の優先的なアゴニスト活性を保持し、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００５７
７として公開されている。配列番号１はヒトＩＬ２ ｃＤＮＡ配列である。本明細書に開
示されるとおりのＩＬ２タンパク質をコードするヒトＩＬ２核酸は、その全長にわたって
配列番号１の核酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、ＧｅｎＢａｎｋ
受託番号ＮＭ＿０００５８６の下に公開された。
【0086】
用語「抗体サイトカイングラフト化タンパク質」又は「抗体サイトカイングラフト」又
は「グラフト化された」は、少なくとも１つのサイトカインが抗体のＣＤＲ内に直接取り
込まれ、ＣＤＲの配列に割り込んでいることを意味する。サイトカインは、ＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２又はＬＣＤＲ３内に取り込むことがで
きる。サイトカインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２
又はＬＣＤＲ３内に取り込み、ＣＤＲのＮ末端配列の方に、又はＣＤＲのＣ末端配列の方
に取り込むことができる。ＣＤＲ内に取り込まれたサイトカインは、元の標的タンパク質
に対する抗体部分の特異的結合を低下させてもよく、又は抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質は、その標的タンパク質に対するその特異的結合を保持していてもよい。例示的
サイトカインとしては、限定はされないが、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－
３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－α、Ｉ
ＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮ
Ｆ－α、及びＴＮＦ－βが挙げられる。また、サイトカインを抗体の一方の「アーム」の
特異的ＣＤＲにグラフト化すること、及び別の異なるサイトカインを抗体の他方の「アー
ム」のＣＤＲにグラフト化することも可能である。例えば、ＩＬ２を抗体の一方の「アー
ム」のＨＣＤＲ１にグラフト化し、且つＩＬ－７を抗体サイトカイングラフト化タンパク
質の他方の「アーム」のＬＣＤＲ１にグラフト化すると、二重機能抗体サイトカイングラ
フト化タンパク質を作り出すことができる。
は「グラフト化された」は、少なくとも１つのサイトカインが抗体のＣＤＲ内に直接取り
込まれ、ＣＤＲの配列に割り込んでいることを意味する。サイトカインは、ＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２又はＬＣＤＲ３内に取り込むことがで
きる。サイトカインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２
又はＬＣＤＲ３内に取り込み、ＣＤＲのＮ末端配列の方に、又はＣＤＲのＣ末端配列の方
に取り込むことができる。ＣＤＲ内に取り込まれたサイトカインは、元の標的タンパク質
に対する抗体部分の特異的結合を低下させてもよく、又は抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質は、その標的タンパク質に対するその特異的結合を保持していてもよい。例示的
サイトカインとしては、限定はされないが、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－
３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－α、Ｉ
ＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮ
Ｆ－α、及びＴＮＦ－βが挙げられる。また、サイトカインを抗体の一方の「アーム」の
特異的ＣＤＲにグラフト化すること、及び別の異なるサイトカインを抗体の他方の「アー
ム」のＣＤＲにグラフト化することも可能である。例えば、ＩＬ２を抗体の一方の「アー
ム」のＨＣＤＲ１にグラフト化し、且つＩＬ－７を抗体サイトカイングラフト化タンパク
質の他方の「アーム」のＬＣＤＲ１にグラフト化すると、二重機能抗体サイトカイングラ
フト化タンパク質を作り出すことができる。
【0087】
用語「単離された」は、核酸又はタンパク質に適用されるとき、核酸又はタンパク質に
自然状態でそれが関連している他の細胞成分が本質的に含まれないことを意味する。これ
は好ましくは均一状態にある。これは乾燥又は水溶液のいずれかである。純度及び均一性
は、典型的にはポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーなどの
分析化学技法を用いて決定される。調製物中に存在する優勢種であるタンパク質が、実質
的に精製される。詳細には、単離された遺伝子は、その遺伝子に隣接し、且つ目的の遺伝
子以外のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームと分離されている。用語
「精製される」は、核酸又はタンパク質が電気泳動ゲルに本質的に１つのバンドを生じさ
せることを意味する。特に、これは核酸又はタンパク質が少なくとも８５％純度、より好
ましくは少なくとも９５％純度、及び最も好ましくは少なくとも９９％純度であることを
意味する。
自然状態でそれが関連している他の細胞成分が本質的に含まれないことを意味する。これ
は好ましくは均一状態にある。これは乾燥又は水溶液のいずれかである。純度及び均一性
は、典型的にはポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーなどの
分析化学技法を用いて決定される。調製物中に存在する優勢種であるタンパク質が、実質
的に精製される。詳細には、単離された遺伝子は、その遺伝子に隣接し、且つ目的の遺伝
子以外のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームと分離されている。用語
「精製される」は、核酸又はタンパク質が電気泳動ゲルに本質的に１つのバンドを生じさ
せることを意味する。特に、これは核酸又はタンパク質が少なくとも８５％純度、より好
ましくは少なくとも９５％純度、及び最も好ましくは少なくとも９９％純度であることを
意味する。
【0088】
用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」は、一本鎖形態又は二本鎖形態のいずれかのデ
オキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びこれらのポリマーを指す。具体的
に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在す
るヌクレオチドと同じように代謝される天然ヌクレオチドの公知の類似体を含む核酸が包
含される。特に指示されない限り、特定の核酸配列はまた、明示的に指示される配列のみ
ならず、その保存的に修飾された変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オル
ソログ、ＳＮＰ、及び相補配列も黙示的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１
つ以上の選ばれた（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイ
ノシン残基に置換されている配列を作成することにより実現し得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ
ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓ
ｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８
５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：
９１－９８（１９９４））。
オキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びこれらのポリマーを指す。具体的
に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在す
るヌクレオチドと同じように代謝される天然ヌクレオチドの公知の類似体を含む核酸が包
含される。特に指示されない限り、特定の核酸配列はまた、明示的に指示される配列のみ
ならず、その保存的に修飾された変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オル
ソログ、ＳＮＰ、及び相補配列も黙示的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１
つ以上の選ばれた（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイ
ノシン残基に置換されている配列を作成することにより実現し得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ
ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓ
ｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８
５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：
９１－９８（１９９４））。
【0089】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書では、アミノ酸
残基のポリマーを指して同義的に使用される。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基
が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学的模倣体であるアミノ酸ポリマー、並
びに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用され
る。
残基のポリマーを指して同義的に使用される。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基
が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学的模倣体であるアミノ酸ポリマー、並
びに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用され
る。
【0090】
「アミノ酸」という用語は、天然、及び合成アミノ酸、並びに天然アミノ酸と同様に機
能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然アミノ酸は、遺伝子コードによっ
てコードされるもの、並びに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ
－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然アミ
ノ酸と同じ基本化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、
及びＲ基、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメ
チルスルホニウムに結合されたα－炭素を指す。このような類似体は、修飾されたＲ基（
例えば、ノルロイシン）又は修飾されたペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基
本化学構造を保持する。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を
有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化合物を指す。
能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然アミノ酸は、遺伝子コードによっ
てコードされるもの、並びに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ
－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然アミ
ノ酸と同じ基本化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、
及びＲ基、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメ
チルスルホニウムに結合されたα－炭素を指す。このような類似体は、修飾されたＲ基（
例えば、ノルロイシン）又は修飾されたペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基
本化学構造を保持する。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を
有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化合物を指す。
【0091】
「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸及び核酸配列の両方に適用される。特定の
核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体は、同一の若しくは本質的に同一のアミノ
酸配列をコードする核酸、又は核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の
配列を指す。遺伝子コードの縮重のため、多数の機能的に同一の核酸が、任意の所与のタ
ンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵは全て、アミ
ノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって特定される全ての位
置で、コドンは、コードされるポリペプチドを変化させずに、記載される対応するコドン
のいずれかに変化され得る。このような核酸変化は、「サイレント変異」であり、これは
、保存的に修飾された変異の１種である。ポリペプチドをコードする、本明細書における
全ての核酸配列はまた、核酸の全ての可能なサイレント変異を説明する。当業者は、核酸
中の各コドン（通常はメチオニンのための唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常はトリプ
トファンのための唯一のコドンであるＴＧＧを除く）が、機能的に同一の分子を生じるよ
うに修飾され得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸
の各サイレント変異は、それぞれの記載される配列において黙示的なものである。
核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体は、同一の若しくは本質的に同一のアミノ
酸配列をコードする核酸、又は核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の
配列を指す。遺伝子コードの縮重のため、多数の機能的に同一の核酸が、任意の所与のタ
ンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵは全て、アミ
ノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって特定される全ての位
置で、コドンは、コードされるポリペプチドを変化させずに、記載される対応するコドン
のいずれかに変化され得る。このような核酸変化は、「サイレント変異」であり、これは
、保存的に修飾された変異の１種である。ポリペプチドをコードする、本明細書における
全ての核酸配列はまた、核酸の全ての可能なサイレント変異を説明する。当業者は、核酸
中の各コドン（通常はメチオニンのための唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常はトリプ
トファンのための唯一のコドンであるＴＧＧを除く）が、機能的に同一の分子を生じるよ
うに修飾され得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸
の各サイレント変異は、それぞれの記載される配列において黙示的なものである。
【0092】
アミノ酸配列に関して、コード配列における単一のアミノ酸又はごく一部のアミノ酸を
変化させ、付加し又は欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質配列に
対する個々の置換、欠失又は付加は、その変化が化学的に同様のアミノ酸によるアミノ酸
置換をもたらす場合に「保存的に修飾された変異体」であることは、当業者であれば認識
するであろう。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野にお
いて周知である。このような保存的に修飾された変異体は、多型変異体、種間相同体、及
び対立遺伝子に対して追加的なものであり、それらを除外しない。以下の８つの群の各々
は、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）
；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミ
ン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（
Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）
、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（
Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）
を参照）。
変化させ、付加し又は欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質配列に
対する個々の置換、欠失又は付加は、その変化が化学的に同様のアミノ酸によるアミノ酸
置換をもたらす場合に「保存的に修飾された変異体」であることは、当業者であれば認識
するであろう。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野にお
いて周知である。このような保存的に修飾された変異体は、多型変異体、種間相同体、及
び対立遺伝子に対して追加的なものであり、それらを除外しない。以下の８つの群の各々
は、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）
；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミ
ン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（
Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）
、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（
Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）
を参照）。
【0093】
「配列同一性パーセンテージ」は、２つの最適にアラインメントした配列を比較ウィン
ドウにわたって比較することにより決定され、ここでポリヌクレオチド配列のうち比較ウ
ィンドウ内にある部分は、２つの配列の最適アラインメントのため、付加又は欠失を含ま
ない参照配列（例えばポリペプチド）と比較したとき付加又は欠失（即ちギャップ）を含
み得る。パーセンテージは、両方の配列に同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が現れる位置
の数を決定してマッチする位置の数を求め、そのマッチする位置の数を比較ウィンドウ内
の位置の総数で除し、その結果に１００を乗じて配列同一性パーセンテージを求めること
により計算される。
ドウにわたって比較することにより決定され、ここでポリヌクレオチド配列のうち比較ウ
ィンドウ内にある部分は、２つの配列の最適アラインメントのため、付加又は欠失を含ま
ない参照配列（例えばポリペプチド）と比較したとき付加又は欠失（即ちギャップ）を含
み得る。パーセンテージは、両方の配列に同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が現れる位置
の数を決定してマッチする位置の数を求め、そのマッチする位置の数を比較ウィンドウ内
の位置の総数で除し、その結果に１００を乗じて配列同一性パーセンテージを求めること
により計算される。
【0094】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈における「同一である」又はパーセント「
同一性」という用語は、２つ以上の配列又はサブ配列が同じ配列でこと程度を指す。以下
の配列比較アルゴリズムのうちの１つを用いて、又は手作業でのアラインメント及び目視
検査によって測定したとき、２つの配列が比較ウィンドウ、又は指示領域にわたって最大
限対応するように比較及びアラインメントしたときに同じであるアミノ酸残基又はヌクレ
オチドを指定のパーセンテージだけ有する（即ち、参照配列の指定の領域にわたって、又
は指定されない場合には配列全体にわたって少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性
を有する）場合に、２つの配列は「実質的に同一である」。本開示は、本明細書に例示さ
れるそれぞれポリペプチド又はポリヌクレオチド（例えば、配列番号２０、配列番号３３
、配列番号４６、配列番号５９、配列番号７２、配列番号８５、配列番号９８、又は配列
番号１１１のいずれか１つに例示される可変領域と実質的に同一であるポリペプチド又は
ポリヌクレオチドを提供する。同一性は、参照配列の少なくとも約１５、２５又は５０ヌ
クレオチド長の領域にわたって、又はより好ましくは１００～５００又は１０００ヌクレ
オチド長又はそれ以上の領域にわたって、又は完全長にわたって存在する。アミノ酸配列
に関して、同一性又は実質的な同一性は、参照配列の少なくとも５、１０、１５又は２０
アミノ酸長、任意選択で少なくとも約２５、３０、３５、４０、５０、７５又は１００ア
ミノ酸長、任意選択で少なくとも約１５０、２００又は２５０アミノ酸長の領域にわたっ
て、又は完全長にわたって存在し得る。より短いアミノ酸配列、例えば、２０アミノ酸以
下のアミノ酸配列に関しては、１又は２アミノ酸残基が本明細書に定義される保存的置換
に従い保存的に置換されているとき、実質的な同一性が存在する。
同一性」という用語は、２つ以上の配列又はサブ配列が同じ配列でこと程度を指す。以下
の配列比較アルゴリズムのうちの１つを用いて、又は手作業でのアラインメント及び目視
検査によって測定したとき、２つの配列が比較ウィンドウ、又は指示領域にわたって最大
限対応するように比較及びアラインメントしたときに同じであるアミノ酸残基又はヌクレ
オチドを指定のパーセンテージだけ有する（即ち、参照配列の指定の領域にわたって、又
は指定されない場合には配列全体にわたって少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性
を有する）場合に、２つの配列は「実質的に同一である」。本開示は、本明細書に例示さ
れるそれぞれポリペプチド又はポリヌクレオチド（例えば、配列番号２０、配列番号３３
、配列番号４６、配列番号５９、配列番号７２、配列番号８５、配列番号９８、又は配列
番号１１１のいずれか１つに例示される可変領域と実質的に同一であるポリペプチド又は
ポリヌクレオチドを提供する。同一性は、参照配列の少なくとも約１５、２５又は５０ヌ
クレオチド長の領域にわたって、又はより好ましくは１００～５００又は１０００ヌクレ
オチド長又はそれ以上の領域にわたって、又は完全長にわたって存在する。アミノ酸配列
に関して、同一性又は実質的な同一性は、参照配列の少なくとも５、１０、１５又は２０
アミノ酸長、任意選択で少なくとも約２５、３０、３５、４０、５０、７５又は１００ア
ミノ酸長、任意選択で少なくとも約１５０、２００又は２５０アミノ酸長の領域にわたっ
て、又は完全長にわたって存在し得る。より短いアミノ酸配列、例えば、２０アミノ酸以
下のアミノ酸配列に関しては、１又は２アミノ酸残基が本明細書に定義される保存的置換
に従い保存的に置換されているとき、実質的な同一性が存在する。
【0095】
配列比較のために、典型的に、１つの配列は、試験配列が比較される参照配列として働
く。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列が、コンピュータに入力さ
れ、サブ配列が、指定され、必要に応じて、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指
定される。デフォルトプログラムパラメータが使用され得るか、又は代替パラメータが指
定され得る。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配
列と比べた試験配列に対する配列同一性パーセントを計算する。
く。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列が、コンピュータに入力さ
れ、サブ配列が、指定され、必要に応じて、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指
定される。デフォルトプログラムパラメータが使用され得るか、又は代替パラメータが指
定され得る。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配
列と比べた試験配列に対する配列同一性パーセントを計算する。
【0096】
本明細書において使用される際の「比較ウインドウ」は、２つの配列が最適に整列され
た後、配列が、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る、２０～６００、通常、
約５０～約２００、より通常は、約１００～約１５０からなる群から選択される連続する
位置の数のいずれか１つのセグメントに対する参照を含む。比較のための配列のアライン
メントの方法は、当該技術分野において周知である。比較のための配列の最適なアライン
メントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐ
ｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの部分相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ
ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性ア
ラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，（１９８
８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似検索法に
よって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅ
ｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡ
Ｐ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）によって、又は手動によるアライ
ンメント及び視覚的検査（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５補遺）を参照
）によって行われ得る。
た後、配列が、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る、２０～６００、通常、
約５０～約２００、より通常は、約１００～約１５０からなる群から選択される連続する
位置の数のいずれか１つのセグメントに対する参照を含む。比較のための配列のアライン
メントの方法は、当該技術分野において周知である。比較のための配列の最適なアライン
メントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐ
ｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの部分相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ
ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性ア
ラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，（１９８
８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似検索法に
よって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅ
ｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡ
Ｐ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）によって、又は手動によるアライ
ンメント及び視覚的検査（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５補遺）を参照
）によって行われ得る。
【0097】
配列同一性及び配列類似性パーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの２つの例は
、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれ、Ａｌｔｓ
ｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４
０２，；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５
：４０３－４１０，に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、Ｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａ
ｔｉｏｎによって公表されている。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さ
のワードと整列される場合、いくつかの正の値の閾値スコア（ｓｏｍｅ ｐｏｓｉｔｉｖ
ｅ－ｖａｌｕｅｄ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｓｃｏｒｅ）Ｔと一致するか、又はそれを満た
す、クエリー配列中の短いワード長Ｗを同定することによって、高スコア配列ペア（ＨＳ
Ｐ）をまず同定することを含む。Ｔは、近隣ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈ
ｕｌ ｅｔ ａｌ．上掲）。これらの初期近隣ワードヒットは、それらを含有するより長
いＨＳＰを発見するための検索を開始させるためのシードとして働く。ワードヒットは、
累積アラインメントスコアが増加され得る限り、各配列に沿った両方の方向に伸長される
。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一致する残基のペアに関す
る報酬スコア；常に＞０）及びＮ（不一致の残基に関するペナルティースコア；常に＜０
）を用いて計算される。アミノ酸配列について、スコアリングマトリックスが、累積スコ
アを計算するのに使用される。各方向におけるワードヒットの伸長は、以下の場合に停止
される：累積アラインメントスコアが、その最大達成値から量Ｘだけ減少する場合；１つ
又は複数の負のスコアの残基アラインメントの累積のため、累積スコアが、ゼロ以下にな
る場合；又はいずれかの配列の末端に到達する場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータ
Ｗ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム
（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の期
待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列について、ＢＬ
ＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、３のワード長、及び１０の期待値（Ｅ）、及
び５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅ
ｎｉｋｏｆｆ，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１
０９１５を参照）アラインメントｓ（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及
び両鎖の比較を使用する。
、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれ、Ａｌｔｓ
ｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４
０２，；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５
：４０３－４１０，に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、Ｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａ
ｔｉｏｎによって公表されている。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さ
のワードと整列される場合、いくつかの正の値の閾値スコア（ｓｏｍｅ ｐｏｓｉｔｉｖ
ｅ－ｖａｌｕｅｄ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｓｃｏｒｅ）Ｔと一致するか、又はそれを満た
す、クエリー配列中の短いワード長Ｗを同定することによって、高スコア配列ペア（ＨＳ
Ｐ）をまず同定することを含む。Ｔは、近隣ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈ
ｕｌ ｅｔ ａｌ．上掲）。これらの初期近隣ワードヒットは、それらを含有するより長
いＨＳＰを発見するための検索を開始させるためのシードとして働く。ワードヒットは、
累積アラインメントスコアが増加され得る限り、各配列に沿った両方の方向に伸長される
。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一致する残基のペアに関す
る報酬スコア；常に＞０）及びＮ（不一致の残基に関するペナルティースコア；常に＜０
）を用いて計算される。アミノ酸配列について、スコアリングマトリックスが、累積スコ
アを計算するのに使用される。各方向におけるワードヒットの伸長は、以下の場合に停止
される：累積アラインメントスコアが、その最大達成値から量Ｘだけ減少する場合；１つ
又は複数の負のスコアの残基アラインメントの累積のため、累積スコアが、ゼロ以下にな
る場合；又はいずれかの配列の末端に到達する場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータ
Ｗ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム
（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の期
待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列について、ＢＬ
ＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、３のワード長、及び１０の期待値（Ｅ）、及
び５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅ
ｎｉｋｏｆｆ，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１
０９１５を参照）アラインメントｓ（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及
び両鎖の比較を使用する。
【0098】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計分析を行う（例えば、Ｋ
ａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７，を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって
提供される類似性の１つの尺度は、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然
生じる確率の指標を提供する最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、試験核酸と参照
核酸との比較における最小合計確率が、約０．２未満、より好ましくは、約０．０１未満
、最も好ましくは、約０．００１未満である場合、核酸は、参照配列と類似すると考えら
れる。
ａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７，を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって
提供される類似性の１つの尺度は、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然
生じる確率の指標を提供する最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、試験核酸と参照
核酸との比較における最小合計確率が、約０．２未満、より好ましくは、約０．０１未満
、最も好ましくは、約０．００１未満である場合、核酸は、参照配列と類似すると考えら
れる。
【0099】
２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることの別の指標は、後述される
ように、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、第２の核酸によってコードさ
れるポリペプチドに対して生じた抗体と免疫学的に交差反応することである。したがって
、例えば、２つのペプチドの保存的置換のみが異なる場合、ポリペプチドは、典型的に、
第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一であることの
別の指標は、後述されるように、２つの分子又はその補体が、ストリンジェントな条件下
で互いにハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であることのさ
らに別の指標は、同じプライマーを用いて、配列を増幅することができることである。
ように、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、第２の核酸によってコードさ
れるポリペプチドに対して生じた抗体と免疫学的に交差反応することである。したがって
、例えば、２つのペプチドの保存的置換のみが異なる場合、ポリペプチドは、典型的に、
第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一であることの
別の指標は、後述されるように、２つの分子又はその補体が、ストリンジェントな条件下
で互いにハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であることのさ
らに別の指標は、同じプライマーを用いて、配列を増幅することができることである。
【0100】
用語「連結」は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質内で結合領域がどのようにつ
ながっているかについて記載する文脈で使用されるとき、それらの領域を物理的に結び付
ける可能なあらゆる手段を包含する。多数の結合領域が高頻度で共有結合（例えば、ペプ
チド結合又はジスルフィド結合）又は非共有結合などの化学結合によって結び付けられ、
これは直接結合（即ち、２つの結合領域間にリンカーなし）又は間接的結合（即ち、２つ
以上の結合領域間に少なくとも１つのリンカー分子の助けを借りる）のいずれかであり得
る。
ながっているかについて記載する文脈で使用されるとき、それらの領域を物理的に結び付
ける可能なあらゆる手段を包含する。多数の結合領域が高頻度で共有結合（例えば、ペプ
チド結合又はジスルフィド結合）又は非共有結合などの化学結合によって結び付けられ、
これは直接結合（即ち、２つの結合領域間にリンカーなし）又は間接的結合（即ち、２つ
以上の結合領域間に少なくとも１つのリンカー分子の助けを借りる）のいずれかであり得
る。
【0101】
「免疫関連障害」又は「免疫疾患」は免疫系の機能不全を指し、ここでは体自身の免疫
系が健常組織を攻撃する。機能不全は、免疫細胞の構成成分におけるものであってよく、
過活性及び低活性の両方の免疫系を含む。
系が健常組織を攻撃する。機能不全は、免疫細胞の構成成分におけるものであってよく、
過活性及び低活性の両方の免疫系を含む。
【0102】
用語「対象」、「患者」、及び「個体」は、同義的に、哺乳類、例えばヒト又は非ヒト
霊長類哺乳類を指す。哺乳類はまた、実験動物哺乳類、例えば、マウス、ラット、ウサギ
、ハムスターであることもある。一部の実施形態において、哺乳類は、農業動物哺乳類（
例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダ）又は家庭内動物哺乳類（例えば、イヌ、ネ
コ）であることもある。
霊長類哺乳類を指す。哺乳類はまた、実験動物哺乳類、例えば、マウス、ラット、ウサギ
、ハムスターであることもある。一部の実施形態において、哺乳類は、農業動物哺乳類（
例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダ）又は家庭内動物哺乳類（例えば、イヌ、ネ
コ）であることもある。
【0103】
本明細書において使用される際、任意の疾患又は障害の「治療する」、「治療すること
」、又は「治療」という用語は、一実施形態において、疾患又は障害を改善すること（す
なわち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの発生を減速するか又は停止させるか又
は軽減すること）を指す。別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又
は「治療」は、患者によって認識できないものを含む少なくとも１つの物理的パラメータ
を軽減又は改善することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療す
ること」、又は「治療」は、疾患又は障害を、身体的に、（例えば、認識できる症状の安
定化）、生理学的に、（例えば、物理的パラメータの安定化）、又はその両方で調節する
ことを指す。更に別の実施形態において、「治療する」、「治療している」、又は「治療
」は、疾患又は障害の発生又は発症又は進行を妨げる又は遅らせることを指す。
」、又は「治療」という用語は、一実施形態において、疾患又は障害を改善すること（す
なわち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの発生を減速するか又は停止させるか又
は軽減すること）を指す。別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又
は「治療」は、患者によって認識できないものを含む少なくとも１つの物理的パラメータ
を軽減又は改善することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療す
ること」、又は「治療」は、疾患又は障害を、身体的に、（例えば、認識できる症状の安
定化）、生理学的に、（例えば、物理的パラメータの安定化）、又はその両方で調節する
ことを指す。更に別の実施形態において、「治療する」、「治療している」、又は「治療
」は、疾患又は障害の発生又は発症又は進行を妨げる又は遅らせることを指す。
【0104】
「治療的に許容できる量」又は「治療的に有効な用量」という用語は、所望の結果（す
なわち、炎症の減少、痛みの阻害、炎症の防止、炎症反応の阻害又は防止）をもたらすの
に十分な量を同義的に指す。ある実施形態において、治療的に許容できる量は、望ましく
ない副作用を誘導しないか、又は引き起こさない。治療的に許容できる量は、最初は低用
量を投与し、次に、所望の効果が達成されるまでその用量を徐々に増加することによって
決定され得るＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質の「予防的に有効な投与量」
、及び「治療的に有効な投与量」は、免疫関連障害に関連する症状を含む疾患の症状の、
開始を防止するか、又はその重症度の低下をもたらし得る。
なわち、炎症の減少、痛みの阻害、炎症の防止、炎症反応の阻害又は防止）をもたらすの
に十分な量を同義的に指す。ある実施形態において、治療的に許容できる量は、望ましく
ない副作用を誘導しないか、又は引き起こさない。治療的に許容できる量は、最初は低用
量を投与し、次に、所望の効果が達成されるまでその用量を徐々に増加することによって
決定され得るＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質の「予防的に有効な投与量」
、及び「治療的に有効な投与量」は、免疫関連障害に関連する症状を含む疾患の症状の、
開始を防止するか、又はその重症度の低下をもたらし得る。
【0105】
「同時投与する」という用語は、個体中の２つ（以上）の活性薬剤の同時の存在を指す
。同時投与される活性薬剤は、同時に又は連続的に送達され得る。
。同時投与される活性薬剤は、同時に又は連続的に送達され得る。
【0106】
本明細書で使用されるとき、語句「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓ
ｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、方法又は組成物に含まれる医薬活性薬剤の属又は種、
並びにその方法又は組成物の意図される目的のための任意の不活性担体又は賦形剤を指す
。一部の実施形態において、語句「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓ
ｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、ＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質以外の１
つ以上の追加的な活性薬剤の包含を明示的に除外する。一部の実施形態において、語句「
～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、Ｉ
Ｌ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質以外の更なる追加的な活性薬剤及び第２の共
投与される薬剤の包含を明示的に除外する。
ｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、方法又は組成物に含まれる医薬活性薬剤の属又は種、
並びにその方法又は組成物の意図される目的のための任意の不活性担体又は賦形剤を指す
。一部の実施形態において、語句「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓ
ｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、ＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質以外の１
つ以上の追加的な活性薬剤の包含を明示的に除外する。一部の実施形態において、語句「
～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、Ｉ
Ｌ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質以外の更なる追加的な活性薬剤及び第２の共
投与される薬剤の包含を明示的に除外する。
【0107】
用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上特に明確に指示されない限り複数の
指示対象を含む。
指示対象を含む。
【図面の簡単な説明】
【0108】
【図1】ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１が組換えＩＬ２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と比較してＴｒｅｇを優先的に拡大することを示す、抗体サイトカイングラフト化構築物の表である。
【図2】抗体サイトカイングラフト化タンパク質を組換えＩＬ２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と比較する表である。ＳＴＡＴ５リン酸化によって測定したとき、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１分子はＴｒｅｇ細胞上のＩＬ２受容体を刺激するが、Ｔエフェクター細胞（Ｔｅｆｆ）又はＮＫ細胞上のＩＬ２受容体は刺激しないことに留意されたい。この分子はまた、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）より長い半減期も有し、インビボで一層のＴｒｅｇ細胞拡大を引き起こす。
【図3】種々の免疫調節細胞型のパネルにおける等モル用量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質をＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときの変化倍数の表である。
【図4】Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときの、及びＳＴＡＴ５リン酸化によって測定したときの、抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＩＬ２低親和性又は高親和性受容体の差次的活性化に関する実験データを示す。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１が、Ｔｒｅｇ細胞に発現するがＣＤ４＋又はＣＤ８＋ Ｔｃｏｎ細胞には発現しない高親和性ＩＬ２受容体を刺激することに留意されたい。
【図5】抗体サイトカイングラフト化タンパク質（例えばＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１）で拡大したＴｒｅｇがＴエフェクター細胞（Ｔｅｆｆ）よりも良好な抑制因子であるという実験データを示す（上のパネルを参照）。下のパネルは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質によって拡大したＴｒｅｇ細胞が、Ｆｏｘｐ３タンパク質発現により、及びＦｏｘｐ３メチル化により安定するという実験データを示す。
【図6】抗体サイトカイングラフト化タンパク質が、ＩＬ２低親和性受容体を発現するＮＫ細胞に効果をほとんど乃至全く及ぼさないという実験データを示す。対照的に、ｐＳＴＡＴ５活性化によって測定したときＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）はＮＫ細胞を刺激する。
【図7】カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）におけるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較した抗体サイトカイングラフト化タンパク質の薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）及び毒性プロファイルに関する実験データを示す。例えば、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べてはるかに低い好酸球増加毒性プロファイルを有する。
【図8】ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１の半減期延長を示すグラフである。
【図9】マウスＧｖＨＤモデルにおける抗体サイトカイングラフト化タンパク質分子に関する実験データを示す。これは、このモデルにおける抗体サイトカイングラフト化タンパク質による治療がＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも良好にＴｒｅｇを拡大する一方、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔｅｆｆ細胞又はＮＫ細胞にはほとんど乃至全く効果を及ぼさないことを示す。
【図10】ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１の投与に伴う体重減少がほとんどない一方での、ＧｖＨＤマウスモデルにおけるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療に伴う体重減少に関する実験データを示す。
【図11】前糖尿病（ＮＯＤ）マウスモデルにおける抗体サイトカイングラフト化タンパク質とＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）との比較に関する実験データを示し、このモデルでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１が１型糖尿病を予防することを実証する。
【図12】前糖尿病ＮＯＤマウスモデルにおけるＴｒｅｇ対ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞比の比較に関する実験データを示す。
【図13-1】図１３：図１３Ａは１．３ｍｇ／ｋｇ用量でのＮＯＤマウスモデルにおけるＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態に関する実験データを示す。図１３Ｂは０．４３ｍｇ／ｋｇ用量でのＮＯＤマウスモデルにおけるＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態に関する実験データを示す。
【図13-2】（上記の通り。）
【図14】前糖尿病ＮＯＤマウスモデルにおいて使用した用量範囲の表であり、等モル量のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を比較する。
【図15-1】図１５：図１５Ａは白斑患者（ｐａｔｅｎｔ）から採取してインビトロでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１により処理し、及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したヒトＰＢＭＣ上でのｐＳＴＡＴ５活性化の大きさを示す一連のグラフを示す。図１５Ｂは１型糖尿病患者（ｐａｔｅｎｔ）から採取してインビトロでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）により処理したヒトＰＢＭＣ上でのｐＳＴＡＴ５活性化の大きさを示す一連のグラフを示す。
【図15-2】（上記の通り。）
【図16】ＩＬ２を抗ＲＳＶ抗体のＣＤＲＨ１にグラフト化したとき、ＲＳＶ結合が維持されることを示すＥＬＩＳＡデータのグラフを示す。しかしながら、ＩＬ２をＣＤＲＬ３にグラフト化したときＲＳＶへの結合は低下する。ＩＬ２を異なる抗体骨格（Ｘｏｌａｉｒ）にグラフト化したとき、ＲＳＶへの結合はない。
【図17】ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の単回投与後のカニクイザルにおけるＴｒｅｇ拡大に関する実験データを示す。
【図18】漸増濃度の架橋剤抗ヒトＩｇＧ抗体がＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの選択的活性に及ぼす効果に関する実験データを示す。
【図19】ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａによる異なる自己免疫性患者ＰＢＭＣにおける選択的シグナル伝達に関する実験データを示す。
【図20】ヒトＰＢＭＣにおけるＴエフェクター細胞よりも優先的なＴｒｅｇにおけるシグナル伝達に関してＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９ＡがＰｒｏｌｅｕｋｉｎよりも高い選択性を有することに関する実験データを示す。
【発明を実施するための形態】
【0109】
ＩＬ２高親和性受容体を標的化する抗体サイトカイングラフト化タンパク質
本明細書には、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）にグラフト化されたＩＬ２を含むタン
パク質構築物が提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はヒト患者での使用
に好適な特性を示し、例えば、天然又は組換えヒトＩＬ２と同様の免疫刺激活性を保持し
ている。しかしながら、負の効果、例えばＮＫ細胞の刺激は減少している。他の活性及び
特徴もまた本明細書全体を通じて実証される。従って、これまで公知のＩＬ２及び修飾Ｉ
Ｌ２治療剤、例えばＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べて治療プロファイルが改善さ
れた抗体サイトカイングラフト化タンパク質、及び提供される抗体サイトカイングラフト
化タンパク質の治療における使用方法が提供される。
本明細書には、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）にグラフト化されたＩＬ２を含むタン
パク質構築物が提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はヒト患者での使用
に好適な特性を示し、例えば、天然又は組換えヒトＩＬ２と同様の免疫刺激活性を保持し
ている。しかしながら、負の効果、例えばＮＫ細胞の刺激は減少している。他の活性及び
特徴もまた本明細書全体を通じて実証される。従って、これまで公知のＩＬ２及び修飾Ｉ
Ｌ２治療剤、例えばＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べて治療プロファイルが改善さ
れた抗体サイトカイングラフト化タンパク質、及び提供される抗体サイトカイングラフト
化タンパク質の治療における使用方法が提供される。
【0110】
従って、本開示は、選択的活性プロファイルを備えた、ＩＬ２高親和性受容体のアゴニ
ストである抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。免疫グロブリン重鎖配列
と免疫グロブリン軽鎖配列とを含む提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
各免疫グロブリン重鎖配列は重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）とを含み、こ
こで重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３定常領域からなる。各免疫グロブリン軽
鎖配列は軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）とを含む。各抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質において、ＩＬ２分子は抗体のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤ
Ｒ）に取り込まれる。
ストである抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。免疫グロブリン重鎖配列
と免疫グロブリン軽鎖配列とを含む提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
各免疫グロブリン重鎖配列は重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）とを含み、こ
こで重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３定常領域からなる。各免疫グロブリン軽
鎖配列は軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）とを含む。各抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質において、ＩＬ２分子は抗体のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤ
Ｒ）に取り込まれる。
【0111】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、重鎖ＣＤＲに取
り込まれたＩＬ２分子を含む。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性決定領域
１（ＨＣＤＲ１）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性決定
領域２（ＨＣＤＲ２）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性
決定領域３（ＨＣＤＲ３）に取り込まれる。
り込まれたＩＬ２分子を含む。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性決定領域
１（ＨＣＤＲ１）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性決定
領域２（ＨＣＤＲ２）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性
決定領域３（ＨＣＤＲ３）に取り込まれる。
【0112】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、軽鎖ＣＤＲに取
り込まれたＩＬ２分子を含む。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性決定領域
１（ＬＣＤＲ１）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性決定
領域２（ＬＣＤＲ２）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性
決定領域３（ＬＣＤＲ３）に取り込まれる。
り込まれたＩＬ２分子を含む。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性決定領域
１（ＬＣＤＲ１）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性決定
領域２（ＬＣＤＲ２）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性
決定領域３（ＬＣＤＲ３）に取り込まれる。
【0113】
一部の実施形態において、グラフト化される抗体サイトカインは、ＣＤＲに取り込まれ
るＩＬ２配列を含み、それによりＩＬ２配列がＣＤＲ配列に挿入される。挿入はＣＤＲの
Ｎ末端領域若しくはその近傍、ＣＤＲの中央領域、又はＣＤＲのＣ末端領域若しくはその
近傍であってもよい。他の実施形態において、グラフト化される抗体サイトカインは、Ｃ
ＤＲに取り込まれるＩＬ２分子を含み、それによりＩＬ２配列がＣＤＲ配列の全て又は一
部に置き換わる。置き換えは、ＣＤＲのＮ末端領域、ＣＤＲの中央領域又はＣＤＲのＣ末
端領域若しくはその近傍であってもよい。置き換えは、ＣＤＲ配列の１又は２アミノ酸ほ
どの少ないものであっても、又はＣＤＲ配列全体であってもよい。
るＩＬ２配列を含み、それによりＩＬ２配列がＣＤＲ配列に挿入される。挿入はＣＤＲの
Ｎ末端領域若しくはその近傍、ＣＤＲの中央領域、又はＣＤＲのＣ末端領域若しくはその
近傍であってもよい。他の実施形態において、グラフト化される抗体サイトカインは、Ｃ
ＤＲに取り込まれるＩＬ２分子を含み、それによりＩＬ２配列がＣＤＲ配列の全て又は一
部に置き換わる。置き換えは、ＣＤＲのＮ末端領域、ＣＤＲの中央領域又はＣＤＲのＣ末
端領域若しくはその近傍であってもよい。置き換えは、ＣＤＲ配列の１又は２アミノ酸ほ
どの少ないものであっても、又はＣＤＲ配列全体であってもよい。
【0114】
一部の実施形態においてＩＬ２分子はペプチドリンカーなしにＣＤＲに直接グラフト化
され、ＣＤＲ配列とＩＬ２配列との間に追加的なアミノ酸はない。
され、ＣＤＲ配列とＩＬ２配列との間に追加的なアミノ酸はない。
【0115】
一部の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩｇＧクラス抗体重
鎖の免疫グロブリン重鎖を含む。特定の実施形態においてＩｇＧ重鎖は、ＩｇＧ１、Ｉｇ
Ｇ２又はＩｇＧ４サブクラスのいずれか１つである。
鎖の免疫グロブリン重鎖を含む。特定の実施形態においてＩｇＧ重鎖は、ＩｇＧ１、Ｉｇ
Ｇ２又はＩｇＧ４サブクラスのいずれか１つである。
【0116】
一部の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、既知の臨床的に利
用されている免疫グロブリン配列から選択される重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む
。特定の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒト化配列である
重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。他の特定の実施形態において抗体サイトカイン
グラフト化タンパク質は、ヒト配列である重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。
用されている免疫グロブリン配列から選択される重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む
。特定の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒト化配列である
重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。他の特定の実施形態において抗体サイトカイン
グラフト化タンパク質は、ヒト配列である重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。
【0117】
一部の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、生殖細胞系列免疫
グロブリン配列から選択される重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。
グロブリン配列から選択される重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。
【0118】
一部の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ＩＬ２分子の結合
特異性と異なる標的に対する免疫グロブリン可変ドメインの結合特異性を有する重鎖及び
軽鎖免疫グロブリン配列を含む。一部の実施形態において免疫グロブリン可変ドメインの
その標的に対する結合特異性は、グラフト化されたサイトカインの存在下で１０％、２０
％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９
％、又は１００％保持される。特定の実施形態において保持される結合特異性は非ヒト標
的に対するものである。特定の実施形態において保持される結合特異性は、ウイルス、例
えばＲＳＶに対するものである。他の実施形態において結合特異性は、ＩＬ２療法と併せ
て治療的有用性を有するヒト標的に対するものである。特定の実施形態において、免疫グ
ロブリンの結合特異性を標的化することにより、ＩＬ２成分に更なる治療利益が付与され
る。特定の実施形態において免疫グロブリンのその標的に対する結合特異性はＩＬ２との
相乗活性を付与する。
特異性と異なる標的に対する免疫グロブリン可変ドメインの結合特異性を有する重鎖及び
軽鎖免疫グロブリン配列を含む。一部の実施形態において免疫グロブリン可変ドメインの
その標的に対する結合特異性は、グラフト化されたサイトカインの存在下で１０％、２０
％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９
％、又は１００％保持される。特定の実施形態において保持される結合特異性は非ヒト標
的に対するものである。特定の実施形態において保持される結合特異性は、ウイルス、例
えばＲＳＶに対するものである。他の実施形態において結合特異性は、ＩＬ２療法と併せ
て治療的有用性を有するヒト標的に対するものである。特定の実施形態において、免疫グ
ロブリンの結合特異性を標的化することにより、ＩＬ２成分に更なる治療利益が付与され
る。特定の実施形態において免疫グロブリンのその標的に対する結合特異性はＩＬ２との
相乗活性を付与する。
【0119】
なおも他の実施形態において、免疫グロブリンのその標的に対する結合特異性は、ＩＬ
２分子をグラフト化することにより１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、
７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％低下する。
２分子をグラフト化することにより１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、
７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％低下する。
【0120】
提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。
一部の実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
又は１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４
の配列を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列からなる。提供
される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。一部の
実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１
００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列
を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列からなる。
ンパク質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。
一部の実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
又は１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４
の配列を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列からなる。提供
される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。一部の
実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１
００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列
を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列からなる。
【0121】
提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。
一部の実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
又は１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６
の配列を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列からなる。提供
される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。一部の
実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１
００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列
を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列からなる。
ンパク質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。
一部の実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
又は１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６
の配列を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列からなる。提供
される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。一部の
実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１
００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列
を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列からなる。
【0122】
一部の実施形態において、グラフト化される抗体サイトカインは、ヒトＩＬ２、組換え
ヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも優れた抗炎症特性を付与する。一
部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は
、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＴ
ｒｅｇ細胞に対する活性の増加を付与する一方で、比例した炎症誘発活性の低下を提供す
る。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質は、高親和性ＩＬ２受容体（登録商標）の優先的刺激を提供する。一部の実施形態に
おいて、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、Ｔｅｆｆ細胞
、Ｔｃｏｎ細胞、及び／又はＮＫ細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の優先的活性化を提供する。
一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質
は、Ｔｅｆｆ細胞、Ｔｃｏｎ細胞、及び／又はＮＫ細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の優先的拡
大を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質は、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞又はＮＫ細胞の拡大なしにＴｒｅｇ細胞
の拡大増加を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイ
ングラフト化タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０である、およそ
それである、それより大きいＴｒｅｇ細胞：ＮＫ細胞拡大比を提供する。一部の実施形態
において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０である、およそそれである、それより大きいＴｒｅｇ細
胞：ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞拡大比を提供する。一部の実施形態において、本明細書
に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０である、およそそれである、それより大きいＴｒｅｇ細胞：ＣＤ４ Ｔｃｏ
ｎ細胞拡大比を提供する。
ヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも優れた抗炎症特性を付与する。一
部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は
、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＴ
ｒｅｇ細胞に対する活性の増加を付与する一方で、比例した炎症誘発活性の低下を提供す
る。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質は、高親和性ＩＬ２受容体（登録商標）の優先的刺激を提供する。一部の実施形態に
おいて、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、Ｔｅｆｆ細胞
、Ｔｃｏｎ細胞、及び／又はＮＫ細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の優先的活性化を提供する。
一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質
は、Ｔｅｆｆ細胞、Ｔｃｏｎ細胞、及び／又はＮＫ細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の優先的拡
大を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質は、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞又はＮＫ細胞の拡大なしにＴｒｅｇ細胞
の拡大増加を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイ
ングラフト化タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０である、およそ
それである、それより大きいＴｒｅｇ細胞：ＮＫ細胞拡大比を提供する。一部の実施形態
において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０である、およそそれである、それより大きいＴｒｅｇ細
胞：ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞拡大比を提供する。一部の実施形態において、本明細書
に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０である、およそそれである、それより大きいＴｒｅｇ細胞：ＣＤ４ Ｔｃｏ
ｎ細胞拡大比を提供する。
【0123】
一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク
質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＣ
Ｄ４ Ｔｃｏｎ細胞において低下するＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実
施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒト
ＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＣＤ８ Ｔｅ
ｆｆ細胞において低下するＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実施形態にお
いて、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組
換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＮＫ細胞において低下す
るＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示さ
れる抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒ
ｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１，０００倍、約２，０００倍、約３，０００倍、約４
，０００倍、約５，０００倍、約６，０００倍、約７，０００倍、約８，０００倍、約９
，０００倍、約１０，０００倍、又はそれ以上高いＣＤ４ Ｔエフェクター細胞と比べた
Ｔｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示され
る抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏ
ｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１００倍、約２００倍、約３００倍、約４００倍、約５０
０倍、約６００倍、約７００倍、約８００倍、約９００倍、約１，０００倍、又はそれ以
上高いＣＤ８ Ｔエフェクター細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。一
部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は
、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１００倍、約
２００倍、約３００倍、約４００倍、約５００倍、約６００倍、約７００倍、約８００倍
、約９００倍、約１，０００倍、又はそれ以上高いＣＤ８ Ｔエフェクター／記憶細胞と
比べたＴｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。
質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＣ
Ｄ４ Ｔｃｏｎ細胞において低下するＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実
施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒト
ＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＣＤ８ Ｔｅ
ｆｆ細胞において低下するＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実施形態にお
いて、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組
換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＮＫ細胞において低下す
るＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示さ
れる抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒ
ｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１，０００倍、約２，０００倍、約３，０００倍、約４
，０００倍、約５，０００倍、約６，０００倍、約７，０００倍、約８，０００倍、約９
，０００倍、約１０，０００倍、又はそれ以上高いＣＤ４ Ｔエフェクター細胞と比べた
Ｔｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示され
る抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏ
ｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１００倍、約２００倍、約３００倍、約４００倍、約５０
０倍、約６００倍、約７００倍、約８００倍、約９００倍、約１，０００倍、又はそれ以
上高いＣＤ８ Ｔエフェクター細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。一
部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は
、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１００倍、約
２００倍、約３００倍、約４００倍、約５００倍、約６００倍、約７００倍、約８００倍
、約９００倍、約１，０００倍、又はそれ以上高いＣＤ８ Ｔエフェクター／記憶細胞と
比べたＴｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。
【0124】
一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク
質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、
好酸球増加の拡大など、毒性の低下を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開
示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又は
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、４時間超、６時間超、８時間超、１２時間
超、２４時間超、４８時間超など、半減期の増加を提供する。一部の実施形態において、
本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒ
トＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）
患者などにおける体重減少の軽減を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示
される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰ
ｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して１型糖尿病の発症に対するより良好な保護を提
供する。
質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、
好酸球増加の拡大など、毒性の低下を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開
示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又は
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、４時間超、６時間超、８時間超、１２時間
超、２４時間超、４８時間超など、半減期の増加を提供する。一部の実施形態において、
本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒ
トＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）
患者などにおける体重減少の軽減を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示
される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰ
ｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して１型糖尿病の発症に対するより良好な保護を提
供する。
【0125】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、修飾エフェクタ
ー機能を付与する修飾Ｆｃを有する修飾免疫グロブリンＩｇＧを含む。特定の実施形態に
おいて修飾Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ
、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む。詳細な実施形態において免
疫グロブリン重鎖は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／
Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ
／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフ
ェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わせを含み得る。
ー機能を付与する修飾Ｆｃを有する修飾免疫グロブリンＩｇＧを含む。特定の実施形態に
おいて修飾Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ
、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む。詳細な実施形態において免
疫グロブリン重鎖は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／
Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ
／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフ
ェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わせを含み得る。
【0126】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、（ｉ）配列番号
２０の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を
有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号３３の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖
は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施
形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ
２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、
Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいず
れかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わ
せを含む。
２０の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を
有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号３３の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖
は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施
形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ
２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、
Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいず
れかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わ
せを含む。
【0127】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、（ｉ）配列番号
４６の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を
有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号５８の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖
は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施
形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ
２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、
Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいず
れかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わ
せを含む。
４６の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を
有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号５８の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖
は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施
形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ
２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、
Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいず
れかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わ
せを含む。
【0128】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、（ｉ）配列番号
７１の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を
有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号８４の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖
は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施
形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ
２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、
Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいず
れかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わ
せを含む。
７１の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を
有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号８４の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖
は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施
形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ
２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、
Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいず
れかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わ
せを含む。
【0129】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、（ｉ）配列番号
９７の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を
有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号１１０の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８
９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン
鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実
施形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、
Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ
、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのい
ずれかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合
わせを含む。
９７の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を
有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号１１０の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８
９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン
鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実
施形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、
Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ
、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのい
ずれかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合
わせを含む。
【0130】
操作及び修飾された抗体サイトカイングラフト化タンパク質
特定の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ＩＬ２配列を免疫グ
ロブリン足場のＣＤＲ領域にグラフト化することにより作成される。重鎖及び軽鎖の両方
の免疫グロブリン鎖が作製されて、最終的な抗体グラフト化タンパク質が生じる。抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質はＴｒｅｇ細胞に好ましい治療活性を付与するが、しか
しながら抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、天然又は組換えヒトＩＬ２（ｒｈＩ
Ｌ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と比較したとき炎症誘発活性が低下している
。
特定の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ＩＬ２配列を免疫グ
ロブリン足場のＣＤＲ領域にグラフト化することにより作成される。重鎖及び軽鎖の両方
の免疫グロブリン鎖が作製されて、最終的な抗体グラフト化タンパク質が生じる。抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質はＴｒｅｇ細胞に好ましい治療活性を付与するが、しか
しながら抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、天然又は組換えヒトＩＬ２（ｒｈＩ
Ｌ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と比較したとき炎症誘発活性が低下している
。
【0131】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を操作するため、特定のムテインを含有するＩ
Ｌ２配列（配列番号４又は配列番号６）が免疫グロブリン鎖足場タンパク質のＣＤＲルー
プに挿入される。グラフト化構築物は、臨床セッティングで利用されている種々の公知の
免疫グロブリン配列、現在創薬及び／又は臨床開発中の公知の免疫グロブリン配列、ヒト
生殖細胞系列抗体配列、並びに新規抗体免疫グロブリン鎖の配列のいずれを使用して調製
してもよい。構築物は、関連性のある配列をコードする組換えＤＮＡを利用した標準的な
分子生物学的方法を用いて作製される。ＧＦＴＸ３ｂと称される例示的足場におけるＩＬ
２の配列を表２に示す。挿入点は、利用可能な構造又は相同性モデルデータに基づきルー
プの中間点となるように選択されたが、しかしながら挿入点はＣＤＲループのＮ端側又は
Ｃ端側末端の方に調整することができる。
Ｌ２配列（配列番号４又は配列番号６）が免疫グロブリン鎖足場タンパク質のＣＤＲルー
プに挿入される。グラフト化構築物は、臨床セッティングで利用されている種々の公知の
免疫グロブリン配列、現在創薬及び／又は臨床開発中の公知の免疫グロブリン配列、ヒト
生殖細胞系列抗体配列、並びに新規抗体免疫グロブリン鎖の配列のいずれを使用して調製
してもよい。構築物は、関連性のある配列をコードする組換えＤＮＡを利用した標準的な
分子生物学的方法を用いて作製される。ＧＦＴＸ３ｂと称される例示的足場におけるＩＬ
２の配列を表２に示す。挿入点は、利用可能な構造又は相同性モデルデータに基づきルー
プの中間点となるように選択されたが、しかしながら挿入点はＣＤＲループのＮ端側又は
Ｃ端側末端の方に調整することができる。
【0132】
従って本開示は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が作成されるように異種抗体
タンパク質又はポリペプチドに組み換えで挿入されたＩＬ２タンパク質を含む高親和性Ｉ
Ｌ２受容体に特異的に結合する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。詳細
には、本開示は、本明細書に記載される抗体又は抗体の抗原結合断片又は任意の他の関連
性のある足場抗体ポリペプチド（例えば、完全抗体免疫グロブリンタンパク質、Ｆａｂ断
片、Ｆｃ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ ＣＤＲ、ＶＬドメイ
ン、ＶＬ ＣＤＲ等）と、異種サイトカインタンパク質、ポリペプチド、又はペプチド、
例えばＩＬ２とを含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。タンパク質、
ポリペプチド、又はペプチドを抗体又は抗体断片と融合又はコンジュゲートする方法は当
該技術分野において公知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号明細書、同第
５，６２２，９２９号明細書、同第５，３５９，０４６号明細書、同第５，３４９，０５
３号明細書、同第５，４４７，８５１号明細書、及び同第５，１１２，９４６号明細書；
欧州特許第３０７，４３４号明細書及び同第３６７，１６６号明細書；国際公開第９６／
０４３８８号パンフレット及び同第９１／０６５７０号パンフレット；Ａｓｈｋｅｎａｚ
ｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：
１０５３５－１０５３９；Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１５４：５５９０－５６００；及びＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１１３３７－１１３４１を参照のこと。加えて、
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリ
ング、エクソンシャッフリング、及び／又はコドンシャッフリング（まとめて「ＤＮＡシ
ャフリング」と称される）の技法によって作成することができる。ＤＮＡシャフリングは
、抗体サイトカイングラフト化タンパク質を調製するため、及び／又は抗体又はその断片
の活性を変化させる（例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する抗体又はそ
の断片）ために用いることができる。概して、米国特許第５，６０５，７９３号明細書、
同第５，８１１，２３８号明細書、同第５，８３０，７２１号明細書、同第５，８３４，
２５２号明細書、及び同第５，８３７，４５８号明細書；Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，
１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４－３３；Ｈａ
ｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６－８
２；Ｈａｎｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５
－７６；及びＬｏｒｅｎｚｏ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ２４（２）：３０８－３１３（これらの特許及び文献の各々は、本明細書によっ
て全体として参照により援用される）を参照のこと。抗体若しくはその断片、又はコード
される抗体若しくはその断片は、組換え前にエラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチ
ド挿入又は他の方法によるランダム突然変異誘発に供することにより変化させることがで
きる。目的の抗原タンパク質に特異的に結合する抗体又はその断片をコードするポリヌク
レオチドが、本明細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質の調
製のため、１つ以上の異種サイトカイン分子、例えばＩＬ２の１つ以上の成分、モチーフ
、セクション、パート、ドメイン、断片等で組み換えられてもよい。
タンパク質又はポリペプチドに組み換えで挿入されたＩＬ２タンパク質を含む高親和性Ｉ
Ｌ２受容体に特異的に結合する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。詳細
には、本開示は、本明細書に記載される抗体又は抗体の抗原結合断片又は任意の他の関連
性のある足場抗体ポリペプチド（例えば、完全抗体免疫グロブリンタンパク質、Ｆａｂ断
片、Ｆｃ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ ＣＤＲ、ＶＬドメイ
ン、ＶＬ ＣＤＲ等）と、異種サイトカインタンパク質、ポリペプチド、又はペプチド、
例えばＩＬ２とを含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。タンパク質、
ポリペプチド、又はペプチドを抗体又は抗体断片と融合又はコンジュゲートする方法は当
該技術分野において公知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号明細書、同第
５，６２２，９２９号明細書、同第５，３５９，０４６号明細書、同第５，３４９，０５
３号明細書、同第５，４４７，８５１号明細書、及び同第５，１１２，９４６号明細書；
欧州特許第３０７，４３４号明細書及び同第３６７，１６６号明細書；国際公開第９６／
０４３８８号パンフレット及び同第９１／０６５７０号パンフレット；Ａｓｈｋｅｎａｚ
ｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：
１０５３５－１０５３９；Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１５４：５５９０－５６００；及びＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１１３３７－１１３４１を参照のこと。加えて、
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリ
ング、エクソンシャッフリング、及び／又はコドンシャッフリング（まとめて「ＤＮＡシ
ャフリング」と称される）の技法によって作成することができる。ＤＮＡシャフリングは
、抗体サイトカイングラフト化タンパク質を調製するため、及び／又は抗体又はその断片
の活性を変化させる（例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する抗体又はそ
の断片）ために用いることができる。概して、米国特許第５，６０５，７９３号明細書、
同第５，８１１，２３８号明細書、同第５，８３０，７２１号明細書、同第５，８３４，
２５２号明細書、及び同第５，８３７，４５８号明細書；Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，
１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４－３３；Ｈａ
ｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６－８
２；Ｈａｎｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５
－７６；及びＬｏｒｅｎｚｏ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ２４（２）：３０８－３１３（これらの特許及び文献の各々は、本明細書によっ
て全体として参照により援用される）を参照のこと。抗体若しくはその断片、又はコード
される抗体若しくはその断片は、組換え前にエラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチ
ド挿入又は他の方法によるランダム突然変異誘発に供することにより変化させることがで
きる。目的の抗原タンパク質に特異的に結合する抗体又はその断片をコードするポリヌク
レオチドが、本明細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質の調
製のため、１つ以上の異種サイトカイン分子、例えばＩＬ２の１つ以上の成分、モチーフ
、セクション、パート、ドメイン、断片等で組み換えられてもよい。
【0133】
抗体Ｆａｂは、サイトカインタンパク質の潜在的な挿入部位として働き得る６つのＣＤ
Ｒループ、軽鎖に３つ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）及び重鎖に３つ（ＣＤＲ
Ｈ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）を含む。どの１つ又は複数のＣＤＲループにサイトカイ
ンを挿入すべきかの決定には、構造的及び機能的考慮点が勘案される。ＣＤＲループのサ
イズ及びコンホメーションは異なる抗体間で大きく変わるため、挿入に最適なＣＤＲは、
各詳細な抗体／タンパク質の組み合わせについて実験的に決定されてもよい。加えて、サ
イトカインタンパク質はＣＤＲループに挿入されることになるため、これがサイトカイン
タンパク質の構造に更なる制約を課し得る。例えば、サイトカインタンパク質のアミノ末
端とカルボキシ末端とは、比較的近い間隔（約２５Å）に制約される可能性を許容しなけ
ればならない。加えて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、生物学的活性につい
てオリゴマー形成に頼ってはならない。利用可能なタンパク質データベース構造の分析か
らは、ＩＬ２を含めた多くのサイトカインタンパク質がこの範疇に入ることが指摘される
。
Ｒループ、軽鎖に３つ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）及び重鎖に３つ（ＣＤＲ
Ｈ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）を含む。どの１つ又は複数のＣＤＲループにサイトカイ
ンを挿入すべきかの決定には、構造的及び機能的考慮点が勘案される。ＣＤＲループのサ
イズ及びコンホメーションは異なる抗体間で大きく変わるため、挿入に最適なＣＤＲは、
各詳細な抗体／タンパク質の組み合わせについて実験的に決定されてもよい。加えて、サ
イトカインタンパク質はＣＤＲループに挿入されることになるため、これがサイトカイン
タンパク質の構造に更なる制約を課し得る。例えば、サイトカインタンパク質のアミノ末
端とカルボキシ末端とは、比較的近い間隔（約２５Å）に制約される可能性を許容しなけ
ればならない。加えて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、生物学的活性につい
てオリゴマー形成に頼ってはならない。利用可能なタンパク質データベース構造の分析か
らは、ＩＬ２を含めた多くのサイトカインタンパク質がこの範疇に入ることが指摘される
。
【0134】
免疫グロブリン鎖のＣＤＲは、本明細書に記載されるものを含め、当該技術分野におい
て公知の周知の付番方式によって決定される。例えば、ＣＤＲは、（１）Ｋａｂａｔ ｅ
ｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌ
ｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ
，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム），ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔ
ｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；及び（２）Ｃｈｏｔｈｉａに記載される付番方式を用い
ることにより識別及び定義されており、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９
９７）“Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎ
ｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，”Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８を参照のこと。２０アミノ酸長未満の識別される
ＣＤＲアミノ酸配列については、所望の特異的結合及び／又はアゴニスト活性をなお保持
しながら、１又は２つの保存的アミノ酸残基置換が許容され得る。
て公知の周知の付番方式によって決定される。例えば、ＣＤＲは、（１）Ｋａｂａｔ ｅ
ｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌ
ｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ
，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム），ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔ
ｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；及び（２）Ｃｈｏｔｈｉａに記載される付番方式を用い
ることにより識別及び定義されており、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９
９７）“Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎ
ｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，”Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８を参照のこと。２０アミノ酸長未満の識別される
ＣＤＲアミノ酸配列については、所望の特異的結合及び／又はアゴニスト活性をなお保持
しながら、１又は２つの保存的アミノ酸残基置換が許容され得る。
【0135】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は更に、出発抗体グラフト化タンパク質から特
性が変化していてもよい修飾抗体サイトカイングラフト化タンパク質を操作するための出
発材料として、本明細書（例えば表２）に示されるＣＤＲ及び／又はＶＨ及び／又はＶＬ
配列のうちの１つ以上を有する抗体を使用して調製することができる。或いは、修飾抗体
サイトカイングラフト化タンパク質を操作するための足場として任意の公知の抗体配列を
利用してもよい。例えば、任意の公知の臨床で利用されている抗体を抗体グラフト化タン
パク質の調製用の出発材料足場として利用してもよい。公知の抗体及び対応する免疫グロ
ブリン配列としては、例えば、パリビズマブ、アリロクマブ、メポリズマブ、ネシツムマ
ブ、ニボルマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、エボロクマブ、ブリナツモマブ、ペン
ブロリズマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、シルツキシマブ、オビヌツズマブ、トラス
ツズマブ、ラキシバクマブ、ペルツズマブ、ベリムマブ、イピリムマブ、デノスマブ、ト
シリズマブ、オファツムマブ、カナキヌマブ、ゴリムマブ、ウステキヌマブ、セルトリズ
マブ、カツマキソマブ、エクリズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、ナタリズマブ、ベ
バシズマブ、セツキシマブ、エファリズマブ、オマリズマブ、トシツモマブ、イブリツモ
マブチウキセタン、アダリムマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、インフリキシマブ、
バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、アブシキシマブ、ムロモナブ、又はこれ
らの修飾体が挙げられる。公知の抗体及び免疫グロブリン配列としてはまた、生殖細胞系
列抗体配列も挙げられる。フレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含む公
的なＤＮＡデータベース又は既発表の参考文献から入手することができる。例えば、ヒト
重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列については、「ＶＢａｓｅ」ヒト
生殖系列配列データベース並びにＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔ
ｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅ
ａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ
Ｎｏ．９１－３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｊ．
ｆｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８；及びＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，
１９９４ Ｅｕｒ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６を参照することができる
。なおも他の例では、初期創薬及び／又は薬剤開発中であり得る他の公知の実体からの抗
体及び対応する免疫グロブリン配列が、同様に修飾抗体サイトカイングラフト化タンパク
質を操作するための出発材料として適合し得る。
性が変化していてもよい修飾抗体サイトカイングラフト化タンパク質を操作するための出
発材料として、本明細書（例えば表２）に示されるＣＤＲ及び／又はＶＨ及び／又はＶＬ
配列のうちの１つ以上を有する抗体を使用して調製することができる。或いは、修飾抗体
サイトカイングラフト化タンパク質を操作するための足場として任意の公知の抗体配列を
利用してもよい。例えば、任意の公知の臨床で利用されている抗体を抗体グラフト化タン
パク質の調製用の出発材料足場として利用してもよい。公知の抗体及び対応する免疫グロ
ブリン配列としては、例えば、パリビズマブ、アリロクマブ、メポリズマブ、ネシツムマ
ブ、ニボルマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、エボロクマブ、ブリナツモマブ、ペン
ブロリズマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、シルツキシマブ、オビヌツズマブ、トラス
ツズマブ、ラキシバクマブ、ペルツズマブ、ベリムマブ、イピリムマブ、デノスマブ、ト
シリズマブ、オファツムマブ、カナキヌマブ、ゴリムマブ、ウステキヌマブ、セルトリズ
マブ、カツマキソマブ、エクリズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、ナタリズマブ、ベ
バシズマブ、セツキシマブ、エファリズマブ、オマリズマブ、トシツモマブ、イブリツモ
マブチウキセタン、アダリムマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、インフリキシマブ、
バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、アブシキシマブ、ムロモナブ、又はこれ
らの修飾体が挙げられる。公知の抗体及び免疫グロブリン配列としてはまた、生殖細胞系
列抗体配列も挙げられる。フレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含む公
的なＤＮＡデータベース又は既発表の参考文献から入手することができる。例えば、ヒト
重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列については、「ＶＢａｓｅ」ヒト
生殖系列配列データベース並びにＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔ
ｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅ
ａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ
Ｎｏ．９１－３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｊ．
ｆｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８；及びＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，
１９９４ Ｅｕｒ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６を参照することができる
。なおも他の例では、初期創薬及び／又は薬剤開発中であり得る他の公知の実体からの抗
体及び対応する免疫グロブリン配列が、同様に修飾抗体サイトカイングラフト化タンパク
質を操作するための出発材料として適合し得る。
【0136】
結果として生じるポリペプチドがサイトカイン（例えばＩＬ２）の取り込みに適応した
少なくとも１つの結合領域を含む限り、多種多様な抗体／免疫グロブリンフレームワーク
又は足場を用いることができる。かかるフレームワーク又は足場は、ヒト免疫グロブリン
、又はその断片の５つの主要なイディオタイプを含み、他の動物種の、好ましくはヒト化
及び／又はヒトの側面を有する免疫グロブリンを含む。新規抗体、フレームワーク、足場
及び断片が当業者により継続的に発見及び開発される。
少なくとも１つの結合領域を含む限り、多種多様な抗体／免疫グロブリンフレームワーク
又は足場を用いることができる。かかるフレームワーク又は足場は、ヒト免疫グロブリン
、又はその断片の５つの主要なイディオタイプを含み、他の動物種の、好ましくはヒト化
及び／又はヒトの側面を有する免疫グロブリンを含む。新規抗体、フレームワーク、足場
及び断片が当業者により継続的に発見及び開発される。
【0137】
抗体は、当該技術分野において公知の方法を用いて作成することができる。モノクロー
ナル抗体の調製には、当該技術分野において公知の任意の技法を用いることができる（例
えば、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７（
１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７
２（１９８３）；Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｐ．７７－９６．Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓ
ｓ，Ｉｎｃ．１９８５を参照のこと）。単鎖抗体の作製技法（米国特許第４，９４６，７
７８号明細書）は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に使用するための抗体の作製
に適合させることができる。また、トランスジェニックマウス、又は他の哺乳類などの他
の生物を使用して霊長類化若しくはヒト化抗体又はヒト抗体を発現させ、同定してもよい
。或いは、ファージディスプレイ技術を用いて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質
に使用するための選択の抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーＦａｂ断片を同定す
ることができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．、前掲；Ｍａｒｋｓ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３，（１９９２）を参照
のこと）。
ナル抗体の調製には、当該技術分野において公知の任意の技法を用いることができる（例
えば、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７（
１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７
２（１９８３）；Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｐ．７７－９６．Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓ
ｓ，Ｉｎｃ．１９８５を参照のこと）。単鎖抗体の作製技法（米国特許第４，９４６，７
７８号明細書）は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に使用するための抗体の作製
に適合させることができる。また、トランスジェニックマウス、又は他の哺乳類などの他
の生物を使用して霊長類化若しくはヒト化抗体又はヒト抗体を発現させ、同定してもよい
。或いは、ファージディスプレイ技術を用いて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質
に使用するための選択の抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーＦａｂ断片を同定す
ることができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．、前掲；Ｍａｒｋｓ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３，（１９９２）を参照
のこと）。
【0138】
霊長類化又はヒト化非ヒト抗体のための方法は当該技術分野において周知である。概し
て、霊長類化又はヒト化抗体は、そこに非霊長類又は非ヒトの供給源から導入された１つ
以上のアミノ酸残基を有する。かかる非霊長類又は非ヒトアミノ酸残基は多くの場合に移
入残基（ｉｍｐｏｒｔ ｒｅｓｉｄｕｅ）と称され、これは典型的には移入可変ドメイン
（ｉｍｐｏｒｔ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ）から取られる。ヒト化は、本質的に
Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者の方法に従い（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ
ａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．
，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒ
ｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと）、
ヒト抗体の対応する配列をげっ歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列に置換することにより実施し得
る。従って、かかるヒト化抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号明
細書）、ここでは実質的にインタクトに満たないヒト可変ドメインが、非ヒト種からの対
応する配列によって置換されている。実際には、霊長類化又はヒト化抗体は典型的には、
霊長類又はヒト抗体であって、一部の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）残基及び場合により
一部のフレームワーク（「ＦＲ」）残基が結合特異性を付与するため由来種（例えばげっ
歯類抗体）の類似部位からの残基によって置換されているものである。
て、霊長類化又はヒト化抗体は、そこに非霊長類又は非ヒトの供給源から導入された１つ
以上のアミノ酸残基を有する。かかる非霊長類又は非ヒトアミノ酸残基は多くの場合に移
入残基（ｉｍｐｏｒｔ ｒｅｓｉｄｕｅ）と称され、これは典型的には移入可変ドメイン
（ｉｍｐｏｒｔ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ）から取られる。ヒト化は、本質的に
Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者の方法に従い（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ
ａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．
，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒ
ｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと）、
ヒト抗体の対応する配列をげっ歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列に置換することにより実施し得
る。従って、かかるヒト化抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号明
細書）、ここでは実質的にインタクトに満たないヒト可変ドメインが、非ヒト種からの対
応する配列によって置換されている。実際には、霊長類化又はヒト化抗体は典型的には、
霊長類又はヒト抗体であって、一部の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）残基及び場合により
一部のフレームワーク（「ＦＲ」）残基が結合特異性を付与するため由来種（例えばげっ
歯類抗体）の類似部位からの残基によって置換されているものである。
【0139】
それに代えて又は加えて、非ヒト抗体と比べて同じ結合特性を維持しつつ又はより良好
な結合特性を提供しつつ抗体においてヒト可変領域で非ヒト抗体可変領域を置き換えるイ
ンビボ方法を利用して非ヒト抗体を操作されたヒト抗体に変換してもよい。例えば、米国
特許出願公開第２００５０００８６２５号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２５
５５５２号明細書を参照のこと。或いは、逐次的なカセット置換によりヒトＶセグメント
ライブラリを作成することができ、ここでは初めに参照抗体Ｖセグメントの一部のみがヒ
ト配列のライブラリに置き換えられ；次に残りの参照抗体アミノ酸配列のコンテクストで
結合を支持する同定されたヒト「カセット」が第２のライブラリスクリーニングで組み換
えられて完全ヒトＶセグメントが作成される（米国特許出願公開第２００６／０１３４０
９８号明細書を参照のこと）。
な結合特性を提供しつつ抗体においてヒト可変領域で非ヒト抗体可変領域を置き換えるイ
ンビボ方法を利用して非ヒト抗体を操作されたヒト抗体に変換してもよい。例えば、米国
特許出願公開第２００５０００８６２５号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２５
５５５２号明細書を参照のこと。或いは、逐次的なカセット置換によりヒトＶセグメント
ライブラリを作成することができ、ここでは初めに参照抗体Ｖセグメントの一部のみがヒ
ト配列のライブラリに置き換えられ；次に残りの参照抗体アミノ酸配列のコンテクストで
結合を支持する同定されたヒト「カセット」が第２のライブラリスクリーニングで組み換
えられて完全ヒトＶセグメントが作成される（米国特許出願公開第２００６／０１３４０
９８号明細書を参照のこと）。
【0140】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の調製に使用するための様々な抗体又は抗原結
合断片は、インタクトな抗体の酵素的又は化学的修飾によって作製することができ、又は
組換えＤＮＡ方法を用いてデノボ合成することができ（例えば単鎖Ｆｖ）、又はファージ
ディスプレイライブラリを用いて同定することができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４，１９９０を参照のこと）。例
えばミニボディは、当該技術分野において、例えばＶａｕｇｈａｎ ａｎｄ Ｓｏｌｌａ
ｚｚｏ，Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ．４：４
１７－３０ ２００１に記載される方法を用いて作成することができる。二重特異性抗体
は、ハイブリドーマのグラフト化又はＦａｂ’断片の連結を含め、種々の方法によって作
製することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉ
ｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３（１９９２）を参照の
こと。単鎖抗体は、ファージディスプレイライブラリ又はリボソームディスプレイライブ
ラリ、遺伝子シャフリングライブラリを用いて同定することができる。かかるライブラリ
は、合成、半合成又は天然及び免疫適格供給源から構築することができる。従って、本明
細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質構築物の調製において
は、選択の免疫グロブリン配列を利用し得る。
合断片は、インタクトな抗体の酵素的又は化学的修飾によって作製することができ、又は
組換えＤＮＡ方法を用いてデノボ合成することができ（例えば単鎖Ｆｖ）、又はファージ
ディスプレイライブラリを用いて同定することができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４，１９９０を参照のこと）。例
えばミニボディは、当該技術分野において、例えばＶａｕｇｈａｎ ａｎｄ Ｓｏｌｌａ
ｚｚｏ，Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ．４：４
１７－３０ ２００１に記載される方法を用いて作成することができる。二重特異性抗体
は、ハイブリドーマのグラフト化又はＦａｂ’断片の連結を含め、種々の方法によって作
製することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉ
ｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３（１９９２）を参照の
こと。単鎖抗体は、ファージディスプレイライブラリ又はリボソームディスプレイライブ
ラリ、遺伝子シャフリングライブラリを用いて同定することができる。かかるライブラリ
は、合成、半合成又は天然及び免疫適格供給源から構築することができる。従って、本明
細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質構築物の調製において
は、選択の免疫グロブリン配列を利用し得る。
【0141】
本開示の抗体、抗原結合分子又は抗体サイトカイングラフト化分子は、二重特異性抗体
を更に含む。二重特異性又は二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対及び２つの異な
る結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。他の抗原結合断片又は抗体部分として
は、二価ｓｃＦｖ（ダイアボディ）、抗体分子が２つの異なるエピトープを認識する二重
特異性ｓｃＦｖ抗体、シングル結合ドメイン（ｄＡｂ）、及びミニボディが挙げられる。
従って、本明細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質構築物の
調製においては、選択の免疫グロブリン配列を利用することができる。
を更に含む。二重特異性又は二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対及び２つの異な
る結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。他の抗原結合断片又は抗体部分として
は、二価ｓｃＦｖ（ダイアボディ）、抗体分子が２つの異なるエピトープを認識する二重
特異性ｓｃＦｖ抗体、シングル結合ドメイン（ｄＡｂ）、及びミニボディが挙げられる。
従って、本明細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質構築物の
調製においては、選択の免疫グロブリン配列を利用することができる。
【0142】
抗体の抗原結合断片、例えばＦａｂ断片、ｓｃＦｖを構成要素として使用して抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を構築することができ、任意選択で多価形態が含まれても
よい。一部の実施形態において、かかる多価分子は抗体の定常領域（例えばＦｃ）を含む
。
トカイングラフト化タンパク質を構築することができ、任意選択で多価形態が含まれても
よい。一部の実施形態において、かかる多価分子は抗体の定常領域（例えばＦｃ）を含む
。
【0143】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体の一方又は両方の可変領域（即ち、Ｖ
Ｈ及び／又はＶＬ）内、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を修飾すること
により操作することができ、及びかかる適合されたＶＨ及び／又はＶＬ領域配列は、サイ
トカインのグラフト化に、又はサイトカイングラフト化の調製に利用することができる。
抗体は、主に６つの重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基を通
じて標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個々の抗体間の多
様性がＣＤＲ外の配列よりも高い。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体－抗原相互作用に関与し
、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列にグラフトされた特異的抗体
からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより特異的抗体の特性を模倣する
組換え抗体を発現することが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ
．，１９９８ Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．
，１９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，
１９８９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９－１００３
３；Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号明細書、並びにＱｕｅｅｎら
に対する米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同
第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照のこと）。特
定の例では、フレームワーク領域内の残基を突然変異させることにより抗体の抗原結合能
力を維持又は増強することが有益である（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌに対する米国
特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３
，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照のこと）。
Ｈ及び／又はＶＬ）内、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を修飾すること
により操作することができ、及びかかる適合されたＶＨ及び／又はＶＬ領域配列は、サイ
トカインのグラフト化に、又はサイトカイングラフト化の調製に利用することができる。
抗体は、主に６つの重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基を通
じて標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個々の抗体間の多
様性がＣＤＲ外の配列よりも高い。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体－抗原相互作用に関与し
、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列にグラフトされた特異的抗体
からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより特異的抗体の特性を模倣する
組換え抗体を発現することが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ
．，１９９８ Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．
，１９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，
１９８９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９－１００３
３；Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号明細書、並びにＱｕｅｅｎら
に対する米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同
第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照のこと）。特
定の例では、フレームワーク領域内の残基を突然変異させることにより抗体の抗原結合能
力を維持又は増強することが有益である（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌに対する米国
特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３
，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照のこと）。
【0144】
一部の態様において、目的の抗体の１つ以上の結合特性（例えば、親和性）を改善する
ための、「親和性成熟」として知られるＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び
／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基の突然変異が、例えばサイトカイングラフト化タン
パク質のコンテクストと併せた抗体の抗原結合の最適化に有益であり得る。部位特異的突
然変異誘発又はＰＣＲ媒介突然変異誘発を実施して１つ又は複数の突然変異を導入するこ
とができ、及び抗体結合への効果、又はその他の目的の機能特性について、本明細書に記
載され及び実施例に提供されるとおりのインビトロ若しくはインビボアッセイ及び／又は
当該技術分野において公知の代替的若しくは追加的アッセイで評価することができる。保
存的修飾を導入することができる。突然変異はアミノ酸置換、付加又は欠失であってもよ
い。更に、典型的にはＣＤＲ領域内の１、２、３、４又は５つ以下の残基を変化させる。
ための、「親和性成熟」として知られるＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び
／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基の突然変異が、例えばサイトカイングラフト化タン
パク質のコンテクストと併せた抗体の抗原結合の最適化に有益であり得る。部位特異的突
然変異誘発又はＰＣＲ媒介突然変異誘発を実施して１つ又は複数の突然変異を導入するこ
とができ、及び抗体結合への効果、又はその他の目的の機能特性について、本明細書に記
載され及び実施例に提供されるとおりのインビトロ若しくはインビボアッセイ及び／又は
当該技術分野において公知の代替的若しくは追加的アッセイで評価することができる。保
存的修飾を導入することができる。突然変異はアミノ酸置換、付加又は欠失であってもよ
い。更に、典型的にはＣＤＲ領域内の１、２、３、４又は５つ以下の残基を変化させる。
【0145】
操作された抗体又は抗体断片は、ＶＨ及び／又はＶＬ内のフレームワーク残基に例えば
抗体の特性を改善するため修飾が行われたものを含む。一部の実施形態においてかかるフ
レームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば、一つの手法
は、１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列に変更することである。より
具体的には、体細胞突然変異を受けた抗体は、その抗体の由来である生殖系列配列と異な
るフレームワーク残基を含み得る。かかる残基は、抗体フレームワーク配列をその抗体の
由来である生殖系列配列と比較することにより同定し得る。フレームワーク領域配列をそ
の生殖細胞系列構成に戻すため、体細胞突然変異を例えば部位特異的突然変異誘発によっ
て生殖系列配列に「復帰突然変異」させることができる。追加的なフレームワーク修飾は
、フレームワーク領域内、又は更には１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を突然変
異させてＴ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の潜在的な免疫原性を低下させるこ
とを含む。この手法は「脱免疫化」とも称され、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２
００３０１５３０４３号明細書に更に詳細に記載されている。
抗体の特性を改善するため修飾が行われたものを含む。一部の実施形態においてかかるフ
レームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば、一つの手法
は、１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列に変更することである。より
具体的には、体細胞突然変異を受けた抗体は、その抗体の由来である生殖系列配列と異な
るフレームワーク残基を含み得る。かかる残基は、抗体フレームワーク配列をその抗体の
由来である生殖系列配列と比較することにより同定し得る。フレームワーク領域配列をそ
の生殖細胞系列構成に戻すため、体細胞突然変異を例えば部位特異的突然変異誘発によっ
て生殖系列配列に「復帰突然変異」させることができる。追加的なフレームワーク修飾は
、フレームワーク領域内、又は更には１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を突然変
異させてＴ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の潜在的な免疫原性を低下させるこ
とを含む。この手法は「脱免疫化」とも称され、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２
００３０１５３０４３号明細書に更に詳細に記載されている。
【0146】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の調製に利用される抗体又は抗体断片の定常領
域は、適宜、任意のタイプ又はサブタイプであってよく、本方法によって治療される対象
の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類又は他の哺乳類、例えば、農業動物哺乳類（例えば、
ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダ）、家庭用動物哺乳類（例えば、イヌ、ネコ）又はげ
っ歯類（例えば、ラット、マウス、ハムスター、ウサギ）から選択することができる。一
部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に利用される抗体は、ヒ
ト化抗体又はＨｕｍａｎｅｅｒｅｄ（登録商標）抗体が作成されるように操作される。一
部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に利用される抗体はヒト
抗体である。一部の実施形態において、抗体定常領域アイソタイプはＩｇＧ、例えば、Ｉ
ｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４である。特定の実施形態において、定常領域アイ
ソタイプはＩｇＧ１である。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質はＩｇＧを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質はＩｇＧ１ Ｆｃを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質はＩｇＧ２ Ｆｃを含む。
域は、適宜、任意のタイプ又はサブタイプであってよく、本方法によって治療される対象
の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類又は他の哺乳類、例えば、農業動物哺乳類（例えば、
ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダ）、家庭用動物哺乳類（例えば、イヌ、ネコ）又はげ
っ歯類（例えば、ラット、マウス、ハムスター、ウサギ）から選択することができる。一
部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に利用される抗体は、ヒ
ト化抗体又はＨｕｍａｎｅｅｒｅｄ（登録商標）抗体が作成されるように操作される。一
部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に利用される抗体はヒト
抗体である。一部の実施形態において、抗体定常領域アイソタイプはＩｇＧ、例えば、Ｉ
ｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４である。特定の実施形態において、定常領域アイ
ソタイプはＩｇＧ１である。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質はＩｇＧを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質はＩｇＧ１ Ｆｃを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質はＩｇＧ２ Ｆｃを含む。
【0147】
フレームワーク又はＣＤＲ領域内に行われる修飾に加えて、又はそれに代えて、抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質の調製に利用される抗体又は抗体断片は、典型的には抗
体の１つ以上の機能特性、例えば血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、及び／又は抗
原依存性細胞傷害などを変化させるため、Ｆｃ領域内に修飾を含むように操作されてもよ
い。更に、抗体、抗体断片、又は抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、この場合も
やはり抗体サイトカイングラフト化タンパク質の１つ以上の機能特性を変化させるため、
化学的に修飾することができ（例えば、１つ以上の化学的部分を抗体に付加することがで
きる）又はそのグリコシル化が変化するように修飾することができる。
イトカイングラフト化タンパク質の調製に利用される抗体又は抗体断片は、典型的には抗
体の１つ以上の機能特性、例えば血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、及び／又は抗
原依存性細胞傷害などを変化させるため、Ｆｃ領域内に修飾を含むように操作されてもよ
い。更に、抗体、抗体断片、又は抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、この場合も
やはり抗体サイトカイングラフト化タンパク質の１つ以上の機能特性を変化させるため、
化学的に修飾することができ（例えば、１つ以上の化学的部分を抗体に付加することがで
きる）又はそのグリコシル化が変化するように修飾することができる。
【0148】
一実施形態では、ヒンジ領域のシステイン残基の数が変化する、例えば増加又は減少す
るようにＣＨ１のヒンジ領域が修飾される。例えば、この手法は更にＢｏｄｍｅｒらによ
る米国特許第５，６７７，４２５号明細書に記載され、ここでは例えば軽鎖及び重鎖のア
センブリが促進されるように、又は抗体サイトカイングラフト化タンパク質の安定性が増
加若しくは減少するように、ＣＨ１のヒンジ領域にあるシステイン残基の数を変化させる
。別の実施形態では、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の生物学的半減期が変化す
るように抗体のＦｃヒンジ領域を突然変異させる。より具体的には、抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質のブドウ球菌プロテインＡ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ ｐｒｏ
ｔｅｉｎ Ａ）（ＳｐＡ）結合が天然Ｆｃ－ヒンジドメインＳｐＡ結合と比べて損なわれ
るように、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン接合部領域に１つ以上のアミノ酸
突然変異が導入される。この手法については、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，
７４５号明細書に更に詳細に記載されている。
るようにＣＨ１のヒンジ領域が修飾される。例えば、この手法は更にＢｏｄｍｅｒらによ
る米国特許第５，６７７，４２５号明細書に記載され、ここでは例えば軽鎖及び重鎖のア
センブリが促進されるように、又は抗体サイトカイングラフト化タンパク質の安定性が増
加若しくは減少するように、ＣＨ１のヒンジ領域にあるシステイン残基の数を変化させる
。別の実施形態では、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の生物学的半減期が変化す
るように抗体のＦｃヒンジ領域を突然変異させる。より具体的には、抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質のブドウ球菌プロテインＡ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ ｐｒｏ
ｔｅｉｎ Ａ）（ＳｐＡ）結合が天然Ｆｃ－ヒンジドメインＳｐＡ結合と比べて損なわれ
るように、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン接合部領域に１つ以上のアミノ酸
突然変異が導入される。この手法については、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，
７４５号明細書に更に詳細に記載されている。
【0149】
本開示は、長いインビボ半減期を有するＩＬ２高親和性受容体に特異的に結合する抗体
サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。別の実施形態において、抗体サイトカイ
ングラフト化タンパク質は、その生物学的半減期が増加するように修飾される。様々な手
法が可能である。インビボ半減期が増加した抗体サイトカイングラフト化タンパク質はま
た、１つ以上のアミノ酸修飾（即ち、置換、挿入又は欠失）をＩｇＧ定常ドメイン、又は
そのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃ又はヒンジＦｃドメイン断片）に導入して作成す
ることもできる。例えば、Ｗａｒｄに対する米国特許第６，２７７，３７５号明細書に記
載されるとおり、以下の突然変異のうちの１つ以上を導入することができる：Ｔ２５２Ｌ
、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。例えば、国際公開第９８／２３２８９号パンフレット；国際
公開第９７／３４６３１号パンフレット；及び米国特許第６，２７７，３７５号明細書を
参照のこと。或いは、生物学的半減期を増加させるため、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号明細書及び同第６，
１２１，０２２号明細書に記載されるとおり、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つ
のループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含むようにＣＨ１又はＣＬ領域
内で変化させる。更に他の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ
酸残基に置き換えることによりＦｃ領域を変化させて、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質のエフェクター機能を変化させる。例えば、エフェクターリガンドに対する親和性
は変化しているが、親抗体の抗原結合能力は保持している抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質となるように、１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基に置き換えることがで
きる。親和性を変化させる対象のエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ
）又は補体のＣ１成分であってもよい。この手法については、いずれもＷｉｎｔｅｒらに
よる米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び同第５，６４８，２６０号明細書に更に
詳細に記載されている。
サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。別の実施形態において、抗体サイトカイ
ングラフト化タンパク質は、その生物学的半減期が増加するように修飾される。様々な手
法が可能である。インビボ半減期が増加した抗体サイトカイングラフト化タンパク質はま
た、１つ以上のアミノ酸修飾（即ち、置換、挿入又は欠失）をＩｇＧ定常ドメイン、又は
そのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃ又はヒンジＦｃドメイン断片）に導入して作成す
ることもできる。例えば、Ｗａｒｄに対する米国特許第６，２７７，３７５号明細書に記
載されるとおり、以下の突然変異のうちの１つ以上を導入することができる：Ｔ２５２Ｌ
、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。例えば、国際公開第９８／２３２８９号パンフレット；国際
公開第９７／３４６３１号パンフレット；及び米国特許第６，２７７，３７５号明細書を
参照のこと。或いは、生物学的半減期を増加させるため、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号明細書及び同第６，
１２１，０２２号明細書に記載されるとおり、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つ
のループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含むようにＣＨ１又はＣＬ領域
内で変化させる。更に他の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ
酸残基に置き換えることによりＦｃ領域を変化させて、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質のエフェクター機能を変化させる。例えば、エフェクターリガンドに対する親和性
は変化しているが、親抗体の抗原結合能力は保持している抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質となるように、１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基に置き換えることがで
きる。親和性を変化させる対象のエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ
）又は補体のＣ１成分であってもよい。この手法については、いずれもＷｉｎｔｅｒらに
よる米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び同第５，６４８，２６０号明細書に更に
詳細に記載されている。
【0150】
別の実施形態では、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のＣ１ｑ結合が変化し及び
／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が低下又は消失するように、アミノ酸残基から選択
される１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基に置き換えることができる。この手法に
ついては、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書に更に詳細
に記載されている。
／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が低下又は消失するように、アミノ酸残基から選択
される１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基に置き換えることができる。この手法に
ついては、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書に更に詳細
に記載されている。
【0151】
かかる突然変異を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質によって媒介される抗体
依存細胞傷害（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）は低下し、又は全くなくな
る。一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｌ２３４及びＬ２３５がＡｌ
ａ２３４及びＡｌａ２３５に置換される。一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミ
ノ酸残基Ｎ２６７がＡｌａ２６７に置換される。
依存細胞傷害（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）は低下し、又は全くなくな
る。一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｌ２３４及びＬ２３５がＡｌ
ａ２３４及びＡｌａ２３５に置換される。一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミ
ノ酸残基Ｎ２６７がＡｌａ２６７に置換される。
【0152】
別の実施形態では、１つ以上のアミノ酸残基を変化させて、それにより抗体サイトカイ
ングラフト化タンパク質の補体結合能力を変化させる。この手法については、Ｂｏｄｍｅ
ｒらによる国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに更に記載されている。
ングラフト化タンパク質の補体結合能力を変化させる。この手法については、Ｂｏｄｍｅ
ｒらによる国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに更に記載されている。
【0153】
更に別の実施形態では、抗体が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する能力が増加
するように及び／又はＦｃγ受容体に対する抗体サイトカイングラフト化タンパク質の親
和性が増加するように、Ｆｃ領域が１つ以上のアミノ酸の修飾によって修飾される。この
手法については、Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第００／４２０７２号パンフレットに更に
記載されている。更に、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎに対す
るヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされており、結合が改善した変異体が記載され
ている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００１ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｎ．
２７６：６５９１－６６０４を参照のこと）。
するように及び／又はＦｃγ受容体に対する抗体サイトカイングラフト化タンパク質の親
和性が増加するように、Ｆｃ領域が１つ以上のアミノ酸の修飾によって修飾される。この
手法については、Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第００／４２０７２号パンフレットに更に
記載されている。更に、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎに対す
るヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされており、結合が改善した変異体が記載され
ている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００１ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｎ．
２７６：６５９１－６６０４を参照のこと）。
【0154】
なおも別の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のグリコシル化
が修飾される。例えば、非グリコシル化抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作るこ
とができる（即ち、この抗体サイトカイングラフト化タンパク質はグリコシル化を欠いて
いる）。グリコシル化は、例えば、「抗原」に対する抗体の親和性を増加させるため変化
させることができる。かかる糖質修飾は、例えば抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部
位を変化させることにより達成し得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリ
コシル化部位の除去をもたらし、それにより当該部位でのグリコシル化を除去する１つ以
上のアミノ酸置換を作ることができる。かかる非グリコシル化は抗原に対する抗体の親和
性を増加させ得る。かかる手法については、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０
号明細書及び同第６，３５０，８６１号明細書に更に詳細に記載されている。
が修飾される。例えば、非グリコシル化抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作るこ
とができる（即ち、この抗体サイトカイングラフト化タンパク質はグリコシル化を欠いて
いる）。グリコシル化は、例えば、「抗原」に対する抗体の親和性を増加させるため変化
させることができる。かかる糖質修飾は、例えば抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部
位を変化させることにより達成し得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリ
コシル化部位の除去をもたらし、それにより当該部位でのグリコシル化を除去する１つ以
上のアミノ酸置換を作ることができる。かかる非グリコシル化は抗原に対する抗体の親和
性を増加させ得る。かかる手法については、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０
号明細書及び同第６，３５０，８６１号明細書に更に詳細に記載されている。
【0155】
それに加えて又は代えて、フコシル残基の量が低下した低フコシル化抗体サイトカイン
グラフト化タンパク質又は二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体など、変化したタイプの
グリコシル化を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作ることができる。かか
る変化したグリコシル化パターンは、抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）能力を増加
させることが実証されている。かかる糖質修飾は、例えば、グリコシル化機構が変化した
宿主細胞において抗体サイトカイングラフト化タンパク質を発現させることにより達成し
得る。グリコシル化機構が変化した細胞については当該技術分野において記載されており
、組換え抗体サイトカイングラフト化タンパク質を発現して、それによりグリコシル化が
変化した抗体サイトカイングラフト化タンパク質を産生する宿主細胞として使用すること
ができる。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１，１７６，１９５号明細書は、機能が
破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株について記載しており、この遺伝子はフコシル
トランスフェラーゼをコードするため、かかる細胞株において発現する抗体サイトカイン
グラフト化タンパク質は低フコシル化を呈することになる。Ｐｒｅｓｔａによる国際公開
第０３／０３５８３５号パンフレットは、フコースをＡｓｎ（２９７）結合糖質に付加す
る能力が低下した変異ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃｌ３細胞について記載し、これもまた当該宿
主細胞において発現する抗体サイトカイングラフト化タンパク質の低フコシル化をもたら
す（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７
７：２６７３３－２６７４０もまた参照のこと）。Ｕｍａｎａらによる国際公開第９９／
５４３４２号パンフレットは、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば
、β（１，４）－ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）
）を発現するように操作された細胞株について記載しており、この操作された細胞株で発
現する抗体サイトカイングラフト化タンパク質は二分ＧｌｃＮａｃ構造の増加を呈し、そ
れにより抗体のＡＤＣＣ活性の増加がもたらされる（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，１９９
９ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０もまた参照のこと）。
グラフト化タンパク質又は二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体など、変化したタイプの
グリコシル化を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作ることができる。かか
る変化したグリコシル化パターンは、抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）能力を増加
させることが実証されている。かかる糖質修飾は、例えば、グリコシル化機構が変化した
宿主細胞において抗体サイトカイングラフト化タンパク質を発現させることにより達成し
得る。グリコシル化機構が変化した細胞については当該技術分野において記載されており
、組換え抗体サイトカイングラフト化タンパク質を発現して、それによりグリコシル化が
変化した抗体サイトカイングラフト化タンパク質を産生する宿主細胞として使用すること
ができる。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１，１７６，１９５号明細書は、機能が
破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株について記載しており、この遺伝子はフコシル
トランスフェラーゼをコードするため、かかる細胞株において発現する抗体サイトカイン
グラフト化タンパク質は低フコシル化を呈することになる。Ｐｒｅｓｔａによる国際公開
第０３／０３５８３５号パンフレットは、フコースをＡｓｎ（２９７）結合糖質に付加す
る能力が低下した変異ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃｌ３細胞について記載し、これもまた当該宿
主細胞において発現する抗体サイトカイングラフト化タンパク質の低フコシル化をもたら
す（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７
７：２６７３３－２６７４０もまた参照のこと）。Ｕｍａｎａらによる国際公開第９９／
５４３４２号パンフレットは、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば
、β（１，４）－ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）
）を発現するように操作された細胞株について記載しており、この操作された細胞株で発
現する抗体サイトカイングラフト化タンパク質は二分ＧｌｃＮａｃ構造の増加を呈し、そ
れにより抗体のＡＤＣＣ活性の増加がもたらされる（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，１９９
９ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０もまた参照のこと）。
【0156】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の１つ以上のドメイ
ン、又は領域は、当該技術分野において周知のものなど、リンカー、例えばペプチドリン
カーを介して接続される（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊ
ａｋ，ＲＪ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３
を参照のこと）。ペプチドリンカーは長さが様々であってよく、例えばリンカーは１～１
００アミノ酸長であることができ、典型的にはリンカーは５～５０アミノ酸長、例えば、
５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、
２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３
３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６
、４７、４８、４９、又は５０アミノ酸長である。
ン、又は領域は、当該技術分野において周知のものなど、リンカー、例えばペプチドリン
カーを介して接続される（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊ
ａｋ，ＲＪ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３
を参照のこと）。ペプチドリンカーは長さが様々であってよく、例えばリンカーは１～１
００アミノ酸長であることができ、典型的にはリンカーは５～５０アミノ酸長、例えば、
５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、
２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３
３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６
、４７、４８、４９、又は５０アミノ酸長である。
【0157】
一部の実施形態において、ＩＬ２は、任意選択で１つ以上のペプチドリンカー配列を用
いてＣＤＲ配列にグラフト化される。特定の実施形態において、１つ以上のペプチドリン
カーは、（Ｇｌｙｎ－Ｓｅｒ）ｍ配列（配列番号１１５）、（Ｇｌｙｎ－Ａｌａ）ｍ配列
（配列番号１１６）、又は（Ｇｌｙｎ－Ｓｅｒ）ｍ／（Ｇｌｙｎ－Ａｌａ）ｍ配列の任意
の組み合わせ（それぞれ配列番号１１５及び１１６）［式中、各ｎは独立に１～５の整数
であり、各ｍは独立に０～１０の整数である］から独立して選択される。リンカーの例と
しては、限定はされないが、グリシンベースのリンカー又はｇｌｙ／ｓｅｒリンカーＧ／
Ｓ、例えば（ＧｍＳ）ｎ［式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に
等しい正の整数であり、ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等し
い整数である］（配列番号１１７）が挙げられる。特定の実施形態において、１つ以上の
リンカーはＧ４Ｓリピート（配列番号１１８）、例えばＧｌｙ－Ｓｅｒリンカー（Ｇ４Ｓ
）ｎ［式中、ｎは１以上の正の整数である（配列番号１１８）。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２
、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０］を含む。
一部の実施形態において、ＳｅｒはＡｌａに置き換えることができ、例えば、（ＧｍＡ）
ｎ［式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等しい正の整数であり
、ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等しい整数である］（配列
番号１１９）などのリンカーＧ／Ａである。特定の実施形態において、１つ以上のリンカ
ーはＧ４Ａリピート（配列番号１２０）、（Ｇ４Ａ）ｎ［式中、ｎは１以上の正の整数で
ある（配列番号１２０）。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３。ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６
、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０］を含む。一部の実施形態において、リンカーは
リンカーの複数のリピートを含む。他の実施形態において、リンカーは組み合わせ及び複
数のＧ４Ｓ（配列番号１１８）及びＧ４Ａ（配列番号１２０）を含む。
いてＣＤＲ配列にグラフト化される。特定の実施形態において、１つ以上のペプチドリン
カーは、（Ｇｌｙｎ－Ｓｅｒ）ｍ配列（配列番号１１５）、（Ｇｌｙｎ－Ａｌａ）ｍ配列
（配列番号１１６）、又は（Ｇｌｙｎ－Ｓｅｒ）ｍ／（Ｇｌｙｎ－Ａｌａ）ｍ配列の任意
の組み合わせ（それぞれ配列番号１１５及び１１６）［式中、各ｎは独立に１～５の整数
であり、各ｍは独立に０～１０の整数である］から独立して選択される。リンカーの例と
しては、限定はされないが、グリシンベースのリンカー又はｇｌｙ／ｓｅｒリンカーＧ／
Ｓ、例えば（ＧｍＳ）ｎ［式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に
等しい正の整数であり、ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等し
い整数である］（配列番号１１７）が挙げられる。特定の実施形態において、１つ以上の
リンカーはＧ４Ｓリピート（配列番号１１８）、例えばＧｌｙ－Ｓｅｒリンカー（Ｇ４Ｓ
）ｎ［式中、ｎは１以上の正の整数である（配列番号１１８）。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２
、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０］を含む。
一部の実施形態において、ＳｅｒはＡｌａに置き換えることができ、例えば、（ＧｍＡ）
ｎ［式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等しい正の整数であり
、ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等しい整数である］（配列
番号１１９）などのリンカーＧ／Ａである。特定の実施形態において、１つ以上のリンカ
ーはＧ４Ａリピート（配列番号１２０）、（Ｇ４Ａ）ｎ［式中、ｎは１以上の正の整数で
ある（配列番号１２０）。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３。ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６
、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０］を含む。一部の実施形態において、リンカーは
リンカーの複数のリピートを含む。他の実施形態において、リンカーは組み合わせ及び複
数のＧ４Ｓ（配列番号１１８）及びＧ４Ａ（配列番号１２０）を含む。
【0158】
リンカーの他の例としては、リンカー及び接合部によって生じる免疫原性を最小限に抑
えるため、抗体において天然に存在する可動性リンカー配列をベースとするものが挙げら
れる。例えば、抗体分子構造の可変ドメインとＣＨ１定常ドメインとの間には天然の可動
性連結がある。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端から４～６残基が寄与し且つＣＨ
１ドメインのＮ末端から４～６残基が寄与する約１０～１２アミノ酸残基を含む。抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質は、例えば、ＣＨ１の末端５～６アミノ酸残基、又は１
１～１２アミノ酸残基をリンカーとして取り込むリンカーを用いることができる。ＣＨ１
ドメインのＮ末端残基、特に最初の５～６アミノ酸残基は、強力な二次構造のないループ
コンホメーションをとり、従って可動性リンカーとして働くことができる。ＣＨ１ドメイ
ンのＮ末端残基は、それがＩｇ配列の一部であるとおり、可変ドメインの天然の伸長部で
あり、従ってリンカー及び接合部によって潜在的に生じる可能性のある任意の免疫原性を
大幅に最小限に抑える。一部の実施形態においてリンカー配列は、ヒンジ配列をベースと
する修飾ペプチド配列を含む。
えるため、抗体において天然に存在する可動性リンカー配列をベースとするものが挙げら
れる。例えば、抗体分子構造の可変ドメインとＣＨ１定常ドメインとの間には天然の可動
性連結がある。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端から４～６残基が寄与し且つＣＨ
１ドメインのＮ末端から４～６残基が寄与する約１０～１２アミノ酸残基を含む。抗体サ
イトカイングラフト化タンパク質は、例えば、ＣＨ１の末端５～６アミノ酸残基、又は１
１～１２アミノ酸残基をリンカーとして取り込むリンカーを用いることができる。ＣＨ１
ドメインのＮ末端残基、特に最初の５～６アミノ酸残基は、強力な二次構造のないループ
コンホメーションをとり、従って可動性リンカーとして働くことができる。ＣＨ１ドメイ
ンのＮ末端残基は、それがＩｇ配列の一部であるとおり、可変ドメインの天然の伸長部で
あり、従ってリンカー及び接合部によって潜在的に生じる可能性のある任意の免疫原性を
大幅に最小限に抑える。一部の実施形態においてリンカー配列は、ヒンジ配列をベースと
する修飾ペプチド配列を含む。
【0159】
更に、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質の精製を促進するためペプチドなどのマーカー配列に融合することができる。好まし
い実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥ
Ｎ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）に提供されるタグなど、ヘキサヒスチジン
ペプチド（配列番号１２１）であり、その多くは市販されている。Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－８２
４に記載されるとおり、例えばヘキサヒスチジン（配列番号１２１）は、グラフト化タン
パク質の好都合な精製をもたらす。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定はされ
ないが、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応するヘマ
グルチニン（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７
：７６７）、及び「ｆｌａｇ」タグが挙げられる。
ク質の精製を促進するためペプチドなどのマーカー配列に融合することができる。好まし
い実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥ
Ｎ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）に提供されるタグなど、ヘキサヒスチジン
ペプチド（配列番号１２１）であり、その多くは市販されている。Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－８２
４に記載されるとおり、例えばヘキサヒスチジン（配列番号１２１）は、グラフト化タン
パク質の好都合な精製をもたらす。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定はされ
ないが、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応するヘマ
グルチニン（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７
：７６７）、及び「ｆｌａｇ」タグが挙げられる。
【0160】
抗体はまた固体支持体に付加されてもよく、これは標的抗原のイムノアッセイ又は精製
に特に有用である。かかる固体支持体としては、限定はされないが、ガラス、セルロース
、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリプロピレンが
挙げられる。
に特に有用である。かかる固体支持体としては、限定はされないが、ガラス、セルロース
、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリプロピレンが
挙げられる。
【0161】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質活性のアッセイ
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を同定するためのアッセイは当該技術分野にお
いて公知であり、本明細書に記載される。アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質はＩＬ２高親和性受容体に結合し、細胞内シグナル伝達を促進、誘導、刺激してＴｒ
ｅｇ効果並びに免疫刺激効果をもたらす。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を同定するためのアッセイは当該技術分野にお
いて公知であり、本明細書に記載される。アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質はＩＬ２高親和性受容体に結合し、細胞内シグナル伝達を促進、誘導、刺激してＴｒ
ｅｇ効果並びに免疫刺激効果をもたらす。
【0162】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＩＬ２高親和性受容体への結合は、当該
技術分野において公知の任意の方法を用いて決定することができる。例えば、ＩＬ２高親
和性受容体への結合は、限定なしに、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、表面プラズモン
共鳴（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）、及びフローサイトメトリーを含めた公知の技法を用い
て決定することができる。
技術分野において公知の任意の方法を用いて決定することができる。例えば、ＩＬ２高親
和性受容体への結合は、限定なしに、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、表面プラズモン
共鳴（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）、及びフローサイトメトリーを含めた公知の技法を用い
て決定することができる。
【0163】
ＩＬ２高親和性受容体を通じた細胞内シグナル伝達は、当該技術分野において公知の任
意の方法を用いて測定することができる。例えば、ＩＬ２を通じた活性化はＳＴＡＴ５活
性化及びシグナル伝達を促進する。ＳＴＡＴ５活性化の測定方法は当該技術分野において
標準的である（例えば、ＳＴＡＴ５タンパク質のリン酸化状態、レポーター遺伝子アッセ
イ、下流シグナル伝達アッセイ等）。ＩＬ２高親和性受容体を通じた活性化はＴｒｅｇ効
果の増加を伴う。加えて、ＩＬ２低親和性受容体の結合低下によりナチュラルキラー（Ｎ
Ｋ）細胞及びＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖が低下する。細胞増殖の測定方法は当該技
術分野において標準的である（例えば、３Ｈ－チミジン取込みアッセイ、ＣＦＳＥ標識）
。サイトカイン産生の測定方法は当該技術分野において周知である（例えば、ＥＬＩＳＡ
アッセイ、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）。インビトロアッセイの実施においては、アゴニス
ト抗体サイトカイングラフト化タンパク質に接触させた試験細胞又は試験細胞からの培養
上清と、アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質に接触させていない対照細胞
又は対照細胞からの培養上清及び／又は組換えヒトＩＬ２（例えばＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標））と接触させたものとを比較することができる。
意の方法を用いて測定することができる。例えば、ＩＬ２を通じた活性化はＳＴＡＴ５活
性化及びシグナル伝達を促進する。ＳＴＡＴ５活性化の測定方法は当該技術分野において
標準的である（例えば、ＳＴＡＴ５タンパク質のリン酸化状態、レポーター遺伝子アッセ
イ、下流シグナル伝達アッセイ等）。ＩＬ２高親和性受容体を通じた活性化はＴｒｅｇ効
果の増加を伴う。加えて、ＩＬ２低親和性受容体の結合低下によりナチュラルキラー（Ｎ
Ｋ）細胞及びＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖が低下する。細胞増殖の測定方法は当該技
術分野において標準的である（例えば、３Ｈ－チミジン取込みアッセイ、ＣＦＳＥ標識）
。サイトカイン産生の測定方法は当該技術分野において周知である（例えば、ＥＬＩＳＡ
アッセイ、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）。インビトロアッセイの実施においては、アゴニス
ト抗体サイトカイングラフト化タンパク質に接触させた試験細胞又は試験細胞からの培養
上清と、アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質に接触させていない対照細胞
又は対照細胞からの培養上清及び／又は組換えヒトＩＬ２（例えばＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標））と接触させたものとを比較することができる。
【0164】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の活性はまた、エキソビボ及び／又はインビボ
で測定することができる。一部の態様において、未治療の対照動物及び／又はＰｒｏｌｅ
ｕｋｉｎ（登録商標）で同様に治療した動物と比較したときの抗体サイトカイングラフト
化タンパク質で治療した動物からエキソビボで様々な細胞型にわたってＳＴＡＴ５活性化
を測定する方法を用いて、細胞型間でのアゴニスト抗体グラフト化タンパク質の差次的活
性を示すことができる。好ましいアゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、
Ｔｒｅｇ細胞を活性化して拡大する能力を有する。例えば、Ｔｒｅｇ細胞のインビボでの
活性化及び拡大は、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて、例えばフローサイ
トメトリーにより測定することができる。好ましいアゴニスト抗体サイトカイングラフト
化タンパク質は、免疫関連障害、例えば：１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、
慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘
発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リン脂質症候群の予防、
低減、阻害又は除去において治療上有用であり得る。１型糖尿病及びＳＬＥにおけるアゴ
ニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質の有効性は、治療有効量の抗体サイトカイ
ングラフト化タンパク質を対象に投与し、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の投与
前及び投与後の対象を比較することにより決定し得る。１型糖尿病及びＳＬＥに対する療
法におけるアゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質の有効性はまた、治療有効
量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質を試験対象に投与し、試験対象を抗体未投与
の対照対象と比較すること及び／又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で同様に治療した
対象との比較によっても決定し得る。
で測定することができる。一部の態様において、未治療の対照動物及び／又はＰｒｏｌｅ
ｕｋｉｎ（登録商標）で同様に治療した動物と比較したときの抗体サイトカイングラフト
化タンパク質で治療した動物からエキソビボで様々な細胞型にわたってＳＴＡＴ５活性化
を測定する方法を用いて、細胞型間でのアゴニスト抗体グラフト化タンパク質の差次的活
性を示すことができる。好ましいアゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、
Ｔｒｅｇ細胞を活性化して拡大する能力を有する。例えば、Ｔｒｅｇ細胞のインビボでの
活性化及び拡大は、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて、例えばフローサイ
トメトリーにより測定することができる。好ましいアゴニスト抗体サイトカイングラフト
化タンパク質は、免疫関連障害、例えば：１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、
慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘
発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リン脂質症候群の予防、
低減、阻害又は除去において治療上有用であり得る。１型糖尿病及びＳＬＥにおけるアゴ
ニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質の有効性は、治療有効量の抗体サイトカイ
ングラフト化タンパク質を対象に投与し、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の投与
前及び投与後の対象を比較することにより決定し得る。１型糖尿病及びＳＬＥに対する療
法におけるアゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質の有効性はまた、治療有効
量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質を試験対象に投与し、試験対象を抗体未投与
の対照対象と比較すること及び／又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で同様に治療した
対象との比較によっても決定し得る。
【0165】
アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードするポリヌクレオチド
別の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の重鎖及び軽鎖タンパク質
をコードする単離核酸が提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、限定は
されないが、組換え発現、化学合成、及び抗体四量体の酵素消化を含め、当該技術分野に
おいて公知の任意の手段により作製することができる。組換え発現は、当該技術分野にお
いて公知の任意の適切な宿主細胞、例えば、哺乳類宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細
胞、昆虫宿主細胞等からであってよい。
別の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の重鎖及び軽鎖タンパク質
をコードする単離核酸が提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、限定は
されないが、組換え発現、化学合成、及び抗体四量体の酵素消化を含め、当該技術分野に
おいて公知の任意の手段により作製することができる。組換え発現は、当該技術分野にお
いて公知の任意の適切な宿主細胞、例えば、哺乳類宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細
胞、昆虫宿主細胞等からであってよい。
【0166】
本明細書には、配列番号２１、配列番号３４、配列番号４７、配列番号６０、配列番号
７３、配列番号８６、配列番号９９、及び配列番号１１２のいずれか１つに例示される可
変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
７３、配列番号８６、配列番号９９、及び配列番号１１２のいずれか１つに例示される可
変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【0167】
従って本開示は、本明細書に記載される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の軽鎖
及び／又は重鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載さ
れるとおりの相補性決定領域を含む軽鎖又は重鎖可変領域又はセグメントをコードするポ
リヌクレオチドを提供する。一部の実施形態において、重鎖可変領域をコードするポリヌ
クレオチドは、配列番号２１、配列番号４７、配列番号７３、及び配列番号９９からなる
群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配
列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、軽鎖可変領域をコードするポリ
ヌクレオチドは、配列番号３４、配列番号６０、配列番号８６、及び配列番号１１２から
なる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核
酸配列同一性を有する配列を含む。
及び／又は重鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載さ
れるとおりの相補性決定領域を含む軽鎖又は重鎖可変領域又はセグメントをコードするポ
リヌクレオチドを提供する。一部の実施形態において、重鎖可変領域をコードするポリヌ
クレオチドは、配列番号２１、配列番号４７、配列番号７３、及び配列番号９９からなる
群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配
列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、軽鎖可変領域をコードするポリ
ヌクレオチドは、配列番号３４、配列番号６０、配列番号８６、及び配列番号１１２から
なる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核
酸配列同一性を有する配列を含む。
【0168】
一部の実施形態において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２３のポリ
ヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一
部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３６のポリヌク
レオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
ヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一
部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３６のポリヌク
レオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【0169】
一部の実施形態において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４９のポリ
ヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一
部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６２のポリヌク
レオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
ヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一
部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６２のポリヌク
レオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【0170】
一部の実施形態において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号７５のポリ
ヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一
部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８８のポリヌク
レオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
ヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一
部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８８のポリヌク
レオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【0171】
一部の実施形態において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１０１のポ
リヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
一部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１４のポリ
ヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
リヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
一部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１４のポリ
ヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【0172】
ポリヌクレオチドは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の可変領域配列のみをコ
ードすることができる。ポリヌクレオチドはまた、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質の可変領域及び定常領域の両方をコードすることもできる。一部のポリヌクレオチド配
列は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のうちの１つの重鎖及び軽鎖の両方の可変
領域を含むポリペプチドをコードする。他の一部のポリヌクレオチドは、抗体タンパク質
グラフト化されたもの（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｒａｆｔｅｄｓ）の
うちの１つの重鎖及び軽鎖の可変領域とそれぞれ実質的に同一の２つのポリペプチドセグ
メントをコードする。
ードすることができる。ポリヌクレオチドはまた、抗体サイトカイングラフト化タンパク
質の可変領域及び定常領域の両方をコードすることもできる。一部のポリヌクレオチド配
列は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のうちの１つの重鎖及び軽鎖の両方の可変
領域を含むポリペプチドをコードする。他の一部のポリヌクレオチドは、抗体タンパク質
グラフト化されたもの（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｒａｆｔｅｄｓ）の
うちの１つの重鎖及び軽鎖の可変領域とそれぞれ実質的に同一の２つのポリペプチドセグ
メントをコードする。
【0173】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチド又は核酸はＤＮＡを含む。他の実施形態に
おいて、ポリヌクレオチド又は核酸はＲＮＡを含み、これは一本鎖であっても又は二本鎖
であってもよい。
おいて、ポリヌクレオチド又は核酸はＲＮＡを含み、これは一本鎖であっても又は二本鎖
であってもよい。
【0174】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の１つ以上の免疫グ
ロブリンタンパク質鎖、及び任意選択で分泌シグナルをコードする核酸を含む組換え宿主
細胞が提供される。特定の実施形態において組換え宿主細胞は、１つの免疫グロブリンタ
ンパク質鎖と分泌シグナルとをコードするベクターを含む。他の特定の実施形態において
組換え宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の２つの免疫グロブリンタン
パク質鎖と分泌シグナルとをコードする１つ以上のベクターを含む。一部の実施形態にお
いて組換え宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の２つの免疫グロブリン
タンパク質鎖と分泌シグナルとをコードするシングルベクターを含む。一部の実施形態に
おいて組換え宿主細胞は、１つが抗体サイトカイングラフト化タンパク質の重鎖免疫グロ
ブリンタンパク質鎖をコードし、もう１つが軽鎖免疫グロブリンタンパク質鎖をコードす
る２つのベクターを含み、各々が分泌シグナルを含む。組換え宿主細胞は原核細胞又は真
核細胞であってもよい。一部の実施形態において宿主細胞は真核細胞株である。一部の実
施形態において宿主細胞は哺乳類細胞株である。一部の実施形態において宿主細胞はＣＨ
Ｏ細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞株は抗体産生用のＣＨＯ細胞株である
。
ロブリンタンパク質鎖、及び任意選択で分泌シグナルをコードする核酸を含む組換え宿主
細胞が提供される。特定の実施形態において組換え宿主細胞は、１つの免疫グロブリンタ
ンパク質鎖と分泌シグナルとをコードするベクターを含む。他の特定の実施形態において
組換え宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の２つの免疫グロブリンタン
パク質鎖と分泌シグナルとをコードする１つ以上のベクターを含む。一部の実施形態にお
いて組換え宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の２つの免疫グロブリン
タンパク質鎖と分泌シグナルとをコードするシングルベクターを含む。一部の実施形態に
おいて組換え宿主細胞は、１つが抗体サイトカイングラフト化タンパク質の重鎖免疫グロ
ブリンタンパク質鎖をコードし、もう１つが軽鎖免疫グロブリンタンパク質鎖をコードす
る２つのベクターを含み、各々が分泌シグナルを含む。組換え宿主細胞は原核細胞又は真
核細胞であってもよい。一部の実施形態において宿主細胞は真核細胞株である。一部の実
施形態において宿主細胞は哺乳類細胞株である。一部の実施形態において宿主細胞はＣＨ
Ｏ細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞株は抗体産生用のＣＨＯ細胞株である
。
【0175】
加えて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の作製方法が提供される。一部の実施
形態において、この方法は、（ｉ）抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブ
リンタンパク質鎖をコードする１つ以上のベクターを含む宿主細胞を抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質の発現、形成、及び分泌に好適な条件下で培養する工程、及び（ｉｉ
）抗体サイトカイングラフト化タンパク質を回収する工程を含む。
形態において、この方法は、（ｉ）抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブ
リンタンパク質鎖をコードする１つ以上のベクターを含む宿主細胞を抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質の発現、形成、及び分泌に好適な条件下で培養する工程、及び（ｉｉ
）抗体サイトカイングラフト化タンパク質を回収する工程を含む。
【0176】
ポリヌクレオチド配列は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のポリペプチド鎖を
コードする既存の配列（例えば、本明細書に記載される配列）のデノボ固相ＤＮＡ合成又
はＰＣＲ突然変異誘発によって生成され得る。核酸の直接化学合成が、Ｎａｒａｎｇ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：９０，１９７９のホスホトリエステル法
；Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：１０９，１９７９のホ
スホジエステル法；Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．，２２：
１８５９、１９８１のジエチルホスホロアミダイト法；及び米国特許第４，４５８，０６
６号明細書の固体担体法などの、当該技術分野において公知の方法によって行われ得る。
ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入が、例えば、ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮ
Ａ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｈ．Ａ．Ｅｒｌｉｃｈ（Ｅｄ．），Ｆｒｅｅｍａｎ
Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ＮＹ，１９９２；ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔ
ｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（
Ｅｄ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０；Ｍａ
ｔｔｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：９６７，１９
９１；及びＥｃｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉ
ｃａｔｉｏｎｓ １：１７，１９９１に記載されるように行われ得る。
コードする既存の配列（例えば、本明細書に記載される配列）のデノボ固相ＤＮＡ合成又
はＰＣＲ突然変異誘発によって生成され得る。核酸の直接化学合成が、Ｎａｒａｎｇ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：９０，１９７９のホスホトリエステル法
；Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：１０９，１９７９のホ
スホジエステル法；Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．，２２：
１８５９、１９８１のジエチルホスホロアミダイト法；及び米国特許第４，４５８，０６
６号明細書の固体担体法などの、当該技術分野において公知の方法によって行われ得る。
ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入が、例えば、ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮ
Ａ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｈ．Ａ．Ｅｒｌｉｃｈ（Ｅｄ．），Ｆｒｅｅｍａｎ
Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ＮＹ，１９９２；ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔ
ｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（
Ｅｄ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０；Ｍａ
ｔｔｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：９６７，１９
９１；及びＥｃｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉ
ｃａｔｉｏｎｓ １：１７，１９９１に記載されるように行われ得る。
【0177】
また、上記に記載される抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作製するための発現
ベクター及び宿主細胞も提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロ
ブリンポリペプチド鎖、又は断片をコードするポリヌクレオチドを発現させるため、様々
な発現ベクターを用いることができる。哺乳類宿主細胞における免疫グロブリンタンパク
質の作製には、ウイルスベースの発現ベクター及び非ウイルス発現ベクターの両方を使用
することができる。非ウイルスベクター及び系としては、典型的に、タンパク質又はＲＮ
Ａを発現するための発現カセットを含む、プラスミド、エピソームベクター、及びヒト人
工染色体（例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １５：
３４５，１９９７を参照）が挙げられる。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞内での
抗体サイトカイングラフト化タンパク質ポリヌクレオチド及びポリペプチドの発現に有用
な非ウイルスベクターとしては、ｐＴｈｉｏＨｉｓ Ａ、Ｂ ＆ Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１
／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ Ａ、Ｂ ＆ Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、及び他のタンパク質を発現するための当該技術分野にお
いて公知の多くの他のベクターが挙げられる。有用なウイルスベクターとしては、レトロ
ウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、
ＳＶ４０に基づくベクター、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタインバーウイルス、ワ
クシニアウイルスベクター及びセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。Ｂｒｅｎ
ｔ ｅｔ ａｌ．、上掲；Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：
８０７，１９９５；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６８：１４３，
１９９２を参照されたい。
ベクター及び宿主細胞も提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロ
ブリンポリペプチド鎖、又は断片をコードするポリヌクレオチドを発現させるため、様々
な発現ベクターを用いることができる。哺乳類宿主細胞における免疫グロブリンタンパク
質の作製には、ウイルスベースの発現ベクター及び非ウイルス発現ベクターの両方を使用
することができる。非ウイルスベクター及び系としては、典型的に、タンパク質又はＲＮ
Ａを発現するための発現カセットを含む、プラスミド、エピソームベクター、及びヒト人
工染色体（例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １５：
３４５，１９９７を参照）が挙げられる。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞内での
抗体サイトカイングラフト化タンパク質ポリヌクレオチド及びポリペプチドの発現に有用
な非ウイルスベクターとしては、ｐＴｈｉｏＨｉｓ Ａ、Ｂ ＆ Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１
／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ Ａ、Ｂ ＆ Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、及び他のタンパク質を発現するための当該技術分野にお
いて公知の多くの他のベクターが挙げられる。有用なウイルスベクターとしては、レトロ
ウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、
ＳＶ４０に基づくベクター、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタインバーウイルス、ワ
クシニアウイルスベクター及びセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。Ｂｒｅｎ
ｔ ｅｔ ａｌ．、上掲；Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：
８０７，１９９５；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６８：１４３，
１９９２を参照されたい。
【0178】
発現ベクターの選択は、ベクターが発現される意図される宿主細胞に応じて決まる。典
型的に、発現ベクターは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリンタン
パク質をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されるプロモーター及び他の調節
配列（例えば、エンハンサー）を含有する。ある実施形態において、誘導性プロモーター
が、誘導条件下を除いて挿入された配列の発現を防止するのに用いられる。誘導性プロモ
ーターとしては、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター又は
熱ショックプロモーターが挙げられる。形質転換された生物の培養物が、発現生成物が宿
主細胞によってより良好に許容されるコード配列について集団を偏らせずに非誘導条件下
で拡張され得る。プロモーターに加えて、他の調節エレメントも抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質の免疫グロブリン鎖又はフラグメントの効率的発現のために必要とされる
か又は所望され得る。これらのエレメントは、典型的に、ＡＴＧ開始コドン及び隣接する
リボソーム結合部位又は他の配列を含む。さらに、発現の効率が、使用の際に細胞系への
適切なエンハンサーの包含によって高められ得る（例えば、Ｓｃｈａｒｆ ｅｔ ａｌ．
，Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５，１９９４；及
びＢｉｔｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６，１９
８７を参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサー又はＣＭＶエンハンサーは、哺乳動物宿主
細胞内での発現を増加させるのに使用され得る。
型的に、発現ベクターは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリンタン
パク質をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されるプロモーター及び他の調節
配列（例えば、エンハンサー）を含有する。ある実施形態において、誘導性プロモーター
が、誘導条件下を除いて挿入された配列の発現を防止するのに用いられる。誘導性プロモ
ーターとしては、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター又は
熱ショックプロモーターが挙げられる。形質転換された生物の培養物が、発現生成物が宿
主細胞によってより良好に許容されるコード配列について集団を偏らせずに非誘導条件下
で拡張され得る。プロモーターに加えて、他の調節エレメントも抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質の免疫グロブリン鎖又はフラグメントの効率的発現のために必要とされる
か又は所望され得る。これらのエレメントは、典型的に、ＡＴＧ開始コドン及び隣接する
リボソーム結合部位又は他の配列を含む。さらに、発現の効率が、使用の際に細胞系への
適切なエンハンサーの包含によって高められ得る（例えば、Ｓｃｈａｒｆ ｅｔ ａｌ．
，Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５，１９９４；及
びＢｉｔｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６，１９
８７を参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサー又はＣＭＶエンハンサーは、哺乳動物宿主
細胞内での発現を増加させるのに使用され得る。
【0179】
発現ベクターはまた、細胞から運び出されて培養培地中に入る抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質を形成するように分泌シグナル配列位置も提供することができる。特定の
態様において、挿入される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリン配列
は、ベクターに含める前にシグナル配列に連結される。免疫グロブリン軽鎖及び重鎖可変
ドメインをコードする配列を受け取るために使用されるベクターは、時にまた定常領域又
はその一部もコードする。かかるベクターは、定常領域を含むグラフト化タンパク質とし
ての可変領域の発現を可能にし、それによりインタクトな抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質又はその断片の作製につながる。典型的には、かかる定常領域はヒトである。
ト化タンパク質を形成するように分泌シグナル配列位置も提供することができる。特定の
態様において、挿入される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリン配列
は、ベクターに含める前にシグナル配列に連結される。免疫グロブリン軽鎖及び重鎖可変
ドメインをコードする配列を受け取るために使用されるベクターは、時にまた定常領域又
はその一部もコードする。かかるベクターは、定常領域を含むグラフト化タンパク質とし
ての可変領域の発現を可能にし、それによりインタクトな抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質又はその断片の作製につながる。典型的には、かかる定常領域はヒトである。
【0180】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質鎖を担持及び発現するための宿主細胞は、原核
又は真核のいずれかであり得る。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本開示のポリヌクレオチド
をクローニングし、発現するのに有用な１つの原核宿主である。使用するのに好適な他の
微生物宿主としては、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの桿菌、並び
にサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、及び様々なシ
ュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種などの他の腸内細菌科が挙げられる。これら
の原核宿主においては、典型的に、宿主細胞と適合する発現制御配列（例えば、複製起点
）を含む発現ベクターを作製することもできる。さらに、ラクトースプロモーター系、ト
リプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、β－ラクタマーゼプロモーター系、又はラムダ
ファージに由来するプロモーター系などの、任意の数の様々な周知のプロモーターば存在
することになる。プロモーターは、典型的に、任意選択的に、オペレーター配列とともに
発現を制御し、転写及び翻訳を開始及び完了させるためのリボソーム結合部位配列などを
有する。酵母などの他の微生物も、抗体サイトカイングラフト化タンパク質ポリペプチド
を発現するのに用いられ得る。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用
され得る。
又は真核のいずれかであり得る。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本開示のポリヌクレオチド
をクローニングし、発現するのに有用な１つの原核宿主である。使用するのに好適な他の
微生物宿主としては、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの桿菌、並び
にサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、及び様々なシ
ュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種などの他の腸内細菌科が挙げられる。これら
の原核宿主においては、典型的に、宿主細胞と適合する発現制御配列（例えば、複製起点
）を含む発現ベクターを作製することもできる。さらに、ラクトースプロモーター系、ト
リプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、β－ラクタマーゼプロモーター系、又はラムダ
ファージに由来するプロモーター系などの、任意の数の様々な周知のプロモーターば存在
することになる。プロモーターは、典型的に、任意選択的に、オペレーター配列とともに
発現を制御し、転写及び翻訳を開始及び完了させるためのリボソーム結合部位配列などを
有する。酵母などの他の微生物も、抗体サイトカイングラフト化タンパク質ポリペプチド
を発現するのに用いられ得る。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用
され得る。
【0181】
一部の好ましい実施形態では、抗体サイトカイングラフト化タンパク質ポリペプチドの
発現及び作製に哺乳類宿主細胞が使用される。例えば、それは外因性発現ベクターを有す
るいずれかの哺乳類細胞株であってもよい。これらは、任意の正常な死滅する又は正常若
しくは異常な不死の動物又はヒト細胞を含む。例えば、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞
株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換されたＢ細胞及びハイブリドーマを含む、無
傷の免疫グロブリンを分泌することが可能ないくつかの好適な宿主細胞株が開発されてい
る。ポリペプチドを発現するための哺乳動物組織細胞培養物の使用は、例えば、Ｗｉｎｎ
ａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ
ｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．，１９８７に一般に記載されている。哺乳動物宿主細胞のための
発現ベクターは、複製起点、プロモーター、及びエンハンサーなどの発現制御配列（例え
ば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９－６８，１９８６
を参照）、並びにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及
び転写ターミネーター配列などの必要なプロセッシング情報部位を含み得る。これらの発
現ベクターは、通常、哺乳動物遺伝子又は哺乳動物ウイルスに由来するプロモーターを含
有する。好適なプロモーターは、構成的、細胞型特異的、段階特異的、及び／又は調節可
能又は制御可能であり得る。有用なプロモーターとしては、限定はされないが、メタロチ
オネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘
導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰｐｏｌＩＩＩプロモーター、
構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（ヒト最初期
ＣＭＶプロモーターなど）、構成的ＣＭＶプロモーター、及び当該技術分野において公知
のプロモーター－エンハンサーの組合せが挙げられる。
発現及び作製に哺乳類宿主細胞が使用される。例えば、それは外因性発現ベクターを有す
るいずれかの哺乳類細胞株であってもよい。これらは、任意の正常な死滅する又は正常若
しくは異常な不死の動物又はヒト細胞を含む。例えば、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞
株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換されたＢ細胞及びハイブリドーマを含む、無
傷の免疫グロブリンを分泌することが可能ないくつかの好適な宿主細胞株が開発されてい
る。ポリペプチドを発現するための哺乳動物組織細胞培養物の使用は、例えば、Ｗｉｎｎ
ａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ
ｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．，１９８７に一般に記載されている。哺乳動物宿主細胞のための
発現ベクターは、複製起点、プロモーター、及びエンハンサーなどの発現制御配列（例え
ば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９－６８，１９８６
を参照）、並びにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及
び転写ターミネーター配列などの必要なプロセッシング情報部位を含み得る。これらの発
現ベクターは、通常、哺乳動物遺伝子又は哺乳動物ウイルスに由来するプロモーターを含
有する。好適なプロモーターは、構成的、細胞型特異的、段階特異的、及び／又は調節可
能又は制御可能であり得る。有用なプロモーターとしては、限定はされないが、メタロチ
オネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘
導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰｐｏｌＩＩＩプロモーター、
構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（ヒト最初期
ＣＭＶプロモーターなど）、構成的ＣＭＶプロモーター、及び当該技術分野において公知
のプロモーター－エンハンサーの組合せが挙げられる。
【0182】
対象とするポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入するための方法は、細
胞宿主の型に応じて変化する。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションが、原核細
胞のために一般的に用いられるが、リン酸カルシウム処理又はエレクトロポレーションが
、他の細胞宿主のために使用され得る（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，上掲
を参照）。他の方法としては、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム処理
、リポソーム媒介性形質転換、インジェクション及びマイクロインジェクション、弾道法
、ビロソーム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工
ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２へのグラフト化（Ｅｌｌｉｏｔ ａ
ｎｄ Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｃｅｌｌ ８８：２２３，１９９７）、ＤＮＡの薬剤促進性取り込
み、及びエクスビボ形質導入が挙げられる。組み換えタンパク質の長期の高収率の生成の
ために、安定した発現が望ましいことが多い。例えば、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質鎖を安定に発現する細胞株は、ウイルスの複製起点又は内因性発現エレメントと、
選択マーカー遺伝子とを含有する発現ベクターを用いて調製され得る。ベクターの導入後
、細胞が、富化培地中で１～２日間成長されてから、選択培地に切り替えられる。選択マ
ーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、その存在が、選択培地中で導
入された配列を首尾よく発現する細胞の成長を可能にする。耐性の安定にトランスフェク
トされた細胞が、細胞型にとって適切な組織培養技術を用いて増殖され得る。
胞宿主の型に応じて変化する。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションが、原核細
胞のために一般的に用いられるが、リン酸カルシウム処理又はエレクトロポレーションが
、他の細胞宿主のために使用され得る（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，上掲
を参照）。他の方法としては、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム処理
、リポソーム媒介性形質転換、インジェクション及びマイクロインジェクション、弾道法
、ビロソーム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工
ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２へのグラフト化（Ｅｌｌｉｏｔ ａ
ｎｄ Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｃｅｌｌ ８８：２２３，１９９７）、ＤＮＡの薬剤促進性取り込
み、及びエクスビボ形質導入が挙げられる。組み換えタンパク質の長期の高収率の生成の
ために、安定した発現が望ましいことが多い。例えば、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質鎖を安定に発現する細胞株は、ウイルスの複製起点又は内因性発現エレメントと、
選択マーカー遺伝子とを含有する発現ベクターを用いて調製され得る。ベクターの導入後
、細胞が、富化培地中で１～２日間成長されてから、選択培地に切り替えられる。選択マ
ーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、その存在が、選択培地中で導
入された配列を首尾よく発現する細胞の成長を可能にする。耐性の安定にトランスフェク
トされた細胞が、細胞型にとって適切な組織培養技術を用いて増殖され得る。
【0183】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含む組成物
薬学的に許容可能な担体と共に製剤化された抗体サイトカイングラフト化タンパク質を
含む医薬組成物が提供される。任意選択で、医薬組成物は、所与の障害の治療又は予防に
好適な他の治療剤を更に含む。薬学的に許容可能な担体は組成物を増強し、若しくは安定
化させるか、又は組成物の調製を促進する。薬学的に許容可能な担体としては、生理的に
適合性のある溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延
剤などが挙げられる。
薬学的に許容可能な担体と共に製剤化された抗体サイトカイングラフト化タンパク質を
含む医薬組成物が提供される。任意選択で、医薬組成物は、所与の障害の治療又は予防に
好適な他の治療剤を更に含む。薬学的に許容可能な担体は組成物を増強し、若しくは安定
化させるか、又は組成物の調製を促進する。薬学的に許容可能な担体としては、生理的に
適合性のある溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延
剤などが挙げられる。
【0184】
医薬組成物は、当該技術分野において公知の種々の方法によって投与することができる
。投与経路及び／又は投与様式は所望の結果に応じて変わる。投与が非経口投与（例えば
、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、動脈内、又は皮下のいずれかから選択される）によ
るか、又は標的部位の近位に投与されることが好ましい。薬学的に許容可能な担体は、静
脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、動脈内、皮下、鼻腔内、吸入、脊髄又は表皮投与（例え
ば、注射により、又は移植で）のうちの任意の１つ以上による投与に好適である。投与経
路に応じて、活性化合物、例えば抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、酸の作用及
びその他、化合物を不活性化し得る天然条件から化合物を保護する材料でコーティングす
ることができる。一部の実施形態において、医薬組成物は静脈内投与用に製剤化される。
一部の実施形態において、医薬組成物は皮下投与用に製剤化される。
。投与経路及び／又は投与様式は所望の結果に応じて変わる。投与が非経口投与（例えば
、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、動脈内、又は皮下のいずれかから選択される）によ
るか、又は標的部位の近位に投与されることが好ましい。薬学的に許容可能な担体は、静
脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、動脈内、皮下、鼻腔内、吸入、脊髄又は表皮投与（例え
ば、注射により、又は移植で）のうちの任意の１つ以上による投与に好適である。投与経
路に応じて、活性化合物、例えば抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、酸の作用及
びその他、化合物を不活性化し得る天然条件から化合物を保護する材料でコーティングす
ることができる。一部の実施形態において、医薬組成物は静脈内投与用に製剤化される。
一部の実施形態において、医薬組成物は皮下投与用に製剤化される。
【0185】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、単独で、又は他の好適な成分と組み合わせ
て、吸入によって投与するためのエアロゾル製剤にされてもよい（即ち、それは「噴霧化
」されてもよい）。エアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素など
、加圧された許容可能な噴射剤の中に置かれ得る。
て、吸入によって投与するためのエアロゾル製剤にされてもよい（即ち、それは「噴霧化
」されてもよい）。エアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素など
、加圧された許容可能な噴射剤の中に置かれ得る。
【0186】
一部の実施形態において、医薬組成物は無菌且つ流動体である。適切な流動性は、例え
ば、レシチンなどのコーティングの使用、分散剤の場合には必要な粒径の維持、及び界面
活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖
類、マンニトール又はソルビトールなどの多価アルコール類、及び塩化ナトリウムを含む
ことが好ましい。吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム又はゼラ
チンを組成物中に含めることにより、注射用組成物の長期吸収をもたらすことができる。
特定の実施形態では、組成物は、適切な賦形剤（例えばスクロース）を使用して凍結乾燥
形態での貯蔵用に調製することができる。
ば、レシチンなどのコーティングの使用、分散剤の場合には必要な粒径の維持、及び界面
活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖
類、マンニトール又はソルビトールなどの多価アルコール類、及び塩化ナトリウムを含む
ことが好ましい。吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム又はゼラ
チンを組成物中に含めることにより、注射用組成物の長期吸収をもたらすことができる。
特定の実施形態では、組成物は、適切な賦形剤（例えばスクロース）を使用して凍結乾燥
形態での貯蔵用に調製することができる。
【0187】
医薬組成物は、当該技術分野において周知の常法に従い調製することができる。薬学的
に許容可能な担体は、一部には、投与される詳細な組成物、並びに組成物の投与に用いら
れる詳細な方法によって決まる。従って、医薬組成物の好適な製剤の種類は幅広くある。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の製剤化並びに適切な投与及びスケジュールの決
定に適用可能な方法については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．，Ｕｎｉｖｅ
ｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｅｄ
ｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）；及
びＭａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｄｒｕｇ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，
Ｓｗｅｅｔｍａｎ，２００５，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓ
ｓ．、及びＭａｒｔｉｎｄａｌｅ，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，３１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ．，１９９６，Ａｍｅｒ Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｎ、及びＳｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅ
ｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉ
ｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７
８（これらの各々は本明細書によって参照により本明細書に援用される）を参照すること
ができる。医薬組成物は、好ましくはＧＭＰ条件下で製造される。典型的には、医薬組成
物中には治療有効用量又は効果的用量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質が利用さ
れる。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、当業者に公知の従来方法によって薬学
的に許容可能な剤形に製剤化される。投薬量レジメンは、所望の応答（例えば治療応答）
を提供するように調整される。治療上又は予防上有効な用量の決定においては、低用量を
投与し、次に望ましくない副作用は最小限として又は全くなく所望の応答が達成されるま
で漸増させることができる。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、数回に分割され
た用量が時間をかけて投与されてもよく、又は治療状況の危急性が示すところに従い用量
を比例的に増減させてもよい。特に、容易な投与及び投薬量の均一性のため、非経口組成
物を投薬量単位形態で製剤化することが有利である。投薬量単位形態は、本明細書で使用
されるとき、治療対象への単位投薬量として適した物理的に別個の単位を指し；各単位が
、必要な医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定の分量の活性
化合物を含有する。
に許容可能な担体は、一部には、投与される詳細な組成物、並びに組成物の投与に用いら
れる詳細な方法によって決まる。従って、医薬組成物の好適な製剤の種類は幅広くある。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の製剤化並びに適切な投与及びスケジュールの決
定に適用可能な方法については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．，Ｕｎｉｖｅ
ｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｅｄ
ｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）；及
びＭａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｄｒｕｇ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，
Ｓｗｅｅｔｍａｎ，２００５，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓ
ｓ．、及びＭａｒｔｉｎｄａｌｅ，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，３１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ．，１９９６，Ａｍｅｒ Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｎ、及びＳｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅ
ｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉ
ｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７
８（これらの各々は本明細書によって参照により本明細書に援用される）を参照すること
ができる。医薬組成物は、好ましくはＧＭＰ条件下で製造される。典型的には、医薬組成
物中には治療有効用量又は効果的用量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質が利用さ
れる。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、当業者に公知の従来方法によって薬学
的に許容可能な剤形に製剤化される。投薬量レジメンは、所望の応答（例えば治療応答）
を提供するように調整される。治療上又は予防上有効な用量の決定においては、低用量を
投与し、次に望ましくない副作用は最小限として又は全くなく所望の応答が達成されるま
で漸増させることができる。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、数回に分割され
た用量が時間をかけて投与されてもよく、又は治療状況の危急性が示すところに従い用量
を比例的に増減させてもよい。特に、容易な投与及び投薬量の均一性のため、非経口組成
物を投薬量単位形態で製剤化することが有利である。投薬量単位形態は、本明細書で使用
されるとき、治療対象への単位投薬量として適した物理的に別個の単位を指し；各単位が
、必要な医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定の分量の活性
化合物を含有する。
【0188】
本開示の医薬組成物中にある活性成分の実際の投薬量レベルは、患者にとって毒性でな
く、詳細な患者、組成物、及び投与様式に対して所望の治療応答を実現するのに有効な活
性成分の量に達するように変えられてもよい。選択される投薬量レベルは、用いられる詳
細な組成物、又はそのエステル、塩若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、用いら
れる詳細な化合物の排泄速度、治療継続期間、他の薬物、用いられる詳細な組成物と併用
して使用される化合物及び／又は材料、治療下の患者の年齢、性別、体重、状態、全般的
な健康及び前病歴などの要因を含め、種々の薬物動態学的要因に依存する。
く、詳細な患者、組成物、及び投与様式に対して所望の治療応答を実現するのに有効な活
性成分の量に達するように変えられてもよい。選択される投薬量レベルは、用いられる詳
細な組成物、又はそのエステル、塩若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、用いら
れる詳細な化合物の排泄速度、治療継続期間、他の薬物、用いられる詳細な組成物と併用
して使用される化合物及び／又は材料、治療下の患者の年齢、性別、体重、状態、全般的
な健康及び前病歴などの要因を含め、種々の薬物動態学的要因に依存する。
【0189】
第２の薬剤との共製剤化
一部の実施形態において、薬理学的組成物は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質
と１つ以上の追加的な薬理学的薬剤との混合物を含む。本抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質と共に混合物中に含められる例示的な第２の薬剤としては、限定なしに、抗炎症
剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸、及び抗生物質が挙げられる。適切な選択は、好まし
い製剤、投薬量及び／又は送達方法に依存し得る。
一部の実施形態において、薬理学的組成物は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質
と１つ以上の追加的な薬理学的薬剤との混合物を含む。本抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質と共に混合物中に含められる例示的な第２の薬剤としては、限定なしに、抗炎症
剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸、及び抗生物質が挙げられる。適切な選択は、好まし
い製剤、投薬量及び／又は送達方法に依存し得る。
【0190】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は抗炎症剤と共製剤
化される（即ち、混合物として提供されるか、又は混合物中に調製される）。詳細な実施
形態において、コルチコステロイド抗炎症剤が抗体サイトカイングラフト化タンパク質と
併せて使用されてもよい。使用のためのコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロン、
ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｎｉｓｏｎｉｄｅ）、メサラミ
ン、及びデキサメタゾンのいずれかから選択され得る。適切な選択は製剤化及び送達の優
先性に依存することになる。
化される（即ち、混合物として提供されるか、又は混合物中に調製される）。詳細な実施
形態において、コルチコステロイド抗炎症剤が抗体サイトカイングラフト化タンパク質と
併せて使用されてもよい。使用のためのコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロン、
ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｎｉｓｏｎｉｄｅ）、メサラミ
ン、及びデキサメタゾンのいずれかから選択され得る。適切な選択は製剤化及び送達の優
先性に依存することになる。
【0191】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は免疫調節剤と共製
剤化される。詳細な実施形態において、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、シクロ
スポリンＡ、タクロリムス、及びメトトレキサートのいずれかから選択される免疫調節薬
。詳細な実施形態において、免疫調節薬は、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、ア
ダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ）、ナタリズマブ、及びベドリズマブから選択
される。
剤化される。詳細な実施形態において、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、シクロ
スポリンＡ、タクロリムス、及びメトトレキサートのいずれかから選択される免疫調節薬
。詳細な実施形態において、免疫調節薬は、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、ア
ダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ）、ナタリズマブ、及びベドリズマブから選択
される。
【0192】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はアミノサリチル酸
剤と共製剤化される。詳細な実施形態において、アミノサリチル酸は、スルファサラジン
、メサラミン、バルサラジド、オルサラジン又は他の５－アミノサリチル酸誘導体から選
択される。
剤と共製剤化される。詳細な実施形態において、アミノサリチル酸は、スルファサラジン
、メサラミン、バルサラジド、オルサラジン又は他の５－アミノサリチル酸誘導体から選
択される。
【0193】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は抗細菌剤と共製剤
化される。例示的抗細菌剤としては、限定なしに、スルホンアミド類（例えば、スルファ
ニルアミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフイソオキサゾール、ス
ルファセタミド）、トリメトプリム、キノロン類（例えば、ナリジクス酸、シノキサシン
、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、フレ
ロキサシン、ペフロキサシン（ｐｅｒｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン、ガレノキサ
シン及びゲミフロキサシン）、メテナミン、ニトロフラントイン、ペニシリン類（例えば
、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリンオキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサ
シリン、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｉｎ）、アンピシリン、アモキシシリン、カルベニシ
リン、チカルシリン、メズロシリン、及びピペラシリン）、セファロスポリン類（例えば
、セファゾリン、セファレキシン、セファドロキシル、セフォキシチン、セファクロル、
セフプロジル、セフロキシム、セフロキシムアキセチル（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ａｃｅ
ｔｉｌ）、ロラカルベフ、セフォテタン、セフォラニド、セフォタキシム、セフポドキシ
ムプロキセチル、セフチブテン（ｃｅｆｉｂｕｔｅｎ）、セフジニル、セフジトレンピボ
キシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ ｐｉｖｏｒｘｉｌ）、セフチゾキシム、セフトリアキソ
ン、セフォペラゾン、セフタジジム、及びセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｎｅ））、カルバペ
ネム類（例えば、イミペネム、アズトレオナム）、及びアミノグリコシド類（例えば、ネ
オマイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン（ｔ
ｏｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン、及びアミカシン）が挙げられる。
化される。例示的抗細菌剤としては、限定なしに、スルホンアミド類（例えば、スルファ
ニルアミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフイソオキサゾール、ス
ルファセタミド）、トリメトプリム、キノロン類（例えば、ナリジクス酸、シノキサシン
、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、フレ
ロキサシン、ペフロキサシン（ｐｅｒｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン、ガレノキサ
シン及びゲミフロキサシン）、メテナミン、ニトロフラントイン、ペニシリン類（例えば
、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリンオキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサ
シリン、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｉｎ）、アンピシリン、アモキシシリン、カルベニシ
リン、チカルシリン、メズロシリン、及びピペラシリン）、セファロスポリン類（例えば
、セファゾリン、セファレキシン、セファドロキシル、セフォキシチン、セファクロル、
セフプロジル、セフロキシム、セフロキシムアキセチル（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ａｃｅ
ｔｉｌ）、ロラカルベフ、セフォテタン、セフォラニド、セフォタキシム、セフポドキシ
ムプロキセチル、セフチブテン（ｃｅｆｉｂｕｔｅｎ）、セフジニル、セフジトレンピボ
キシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ ｐｉｖｏｒｘｉｌ）、セフチゾキシム、セフトリアキソ
ン、セフォペラゾン、セフタジジム、及びセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｎｅ））、カルバペ
ネム類（例えば、イミペネム、アズトレオナム）、及びアミノグリコシド類（例えば、ネ
オマイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン（ｔ
ｏｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン、及びアミカシン）が挙げられる。
【0194】
製品／キット
一部の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は製品（即ちキット）で
提供される。提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、概してバイアル又は
容器内にある。従って、製品は、容器及び容器上にある又はそれと関連付けられたラベル
又は添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、溶液
バッグ等が挙げられる。適宜、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は液体又は乾燥形
態（例えば、凍結乾燥形態）であってもよい。容器は、それ自体で、又は別の組成物との
組み合わせで、免疫関連障害の治療、予防及び／又は改善用の組成物の調製に有効な組成
物を保持する。ラベル又は添付文書は、組成物が免疫関連障害の治療、予防及び／又は改
善に使用されることを指示する。本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質を含む製品（キット）は、任意選択で１つ以上の追加的薬剤を含む。一部
の実施形態において、製品（キット）は抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学的
に許容可能な希釈剤とを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質は、製品（キット）において１つ以上の追加的な活性薬剤と共に同じ製剤に（例
えば、混合物として）提供される。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト
化タンパク質は製品（キット）において第２又は第３の薬剤と共に別個の製剤に（例えば
、別個の容器に）提供される。特定の実施形態において、製品（キット）は抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質のアリコートを含み、ここでアリコートは１用量以上を提供す
る。一部の実施形態において複数回投与用のアリコートが提供され、ここで用量は均一で
あるか、又は変化する。詳細な実施形態において、変化する投与レジメンは、適宜、漸増
又は漸減するものである。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質及び第２の薬剤の投薬量は、独立に均一であるか、又は独立に変化する。特定の実施
形態において、製品（キット）は、抗炎症剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸、及び抗生
物質のいずれかから選択される追加的薬剤を含む。１つ以上の追加的薬剤の選択は、投薬
量、送達、及び治療しようとする疾患状態に依存することになる。
一部の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は製品（即ちキット）で
提供される。提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、概してバイアル又は
容器内にある。従って、製品は、容器及び容器上にある又はそれと関連付けられたラベル
又は添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、溶液
バッグ等が挙げられる。適宜、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は液体又は乾燥形
態（例えば、凍結乾燥形態）であってもよい。容器は、それ自体で、又は別の組成物との
組み合わせで、免疫関連障害の治療、予防及び／又は改善用の組成物の調製に有効な組成
物を保持する。ラベル又は添付文書は、組成物が免疫関連障害の治療、予防及び／又は改
善に使用されることを指示する。本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質を含む製品（キット）は、任意選択で１つ以上の追加的薬剤を含む。一部
の実施形態において、製品（キット）は抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学的
に許容可能な希釈剤とを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タ
ンパク質は、製品（キット）において１つ以上の追加的な活性薬剤と共に同じ製剤に（例
えば、混合物として）提供される。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト
化タンパク質は製品（キット）において第２又は第３の薬剤と共に別個の製剤に（例えば
、別個の容器に）提供される。特定の実施形態において、製品（キット）は抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質のアリコートを含み、ここでアリコートは１用量以上を提供す
る。一部の実施形態において複数回投与用のアリコートが提供され、ここで用量は均一で
あるか、又は変化する。詳細な実施形態において、変化する投与レジメンは、適宜、漸増
又は漸減するものである。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパ
ク質及び第２の薬剤の投薬量は、独立に均一であるか、又は独立に変化する。特定の実施
形態において、製品（キット）は、抗炎症剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸、及び抗生
物質のいずれかから選択される追加的薬剤を含む。１つ以上の追加的薬剤の選択は、投薬
量、送達、及び治療しようとする疾患状態に依存することになる。
【0195】
免疫関連障害の治療方法及びその治療用組成物の使用
治療又は予防の対象となる病態
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、免疫関連障害の治療、改善又は予防に使用
が見出される。一態様において、本開示は、それを必要としている個体の免疫関連障害の
治療方法を提供し、この方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質の治療有効量を個体に投与することを含む。本開示はまた、一態様におい
て、治療剤としての使用のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質も提供する。一
部の実施形態において、個体の免疫関連障害の治療又は予防における治療剤としての使用
のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質が提供される。一部の実施形態において
、それを必要としている個体の免疫関連障害の治療用医薬品の製造のための抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質の使用が提供される。更なる態様において、本開示は、それを
必要としている個体の免疫関連障害の治療又は改善における使用のためのかかる抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を含む組成物を提供する。
治療又は予防の対象となる病態
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、免疫関連障害の治療、改善又は予防に使用
が見出される。一態様において、本開示は、それを必要としている個体の免疫関連障害の
治療方法を提供し、この方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフ
ト化タンパク質の治療有効量を個体に投与することを含む。本開示はまた、一態様におい
て、治療剤としての使用のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質も提供する。一
部の実施形態において、個体の免疫関連障害の治療又は予防における治療剤としての使用
のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質が提供される。一部の実施形態において
、それを必要としている個体の免疫関連障害の治療用医薬品の製造のための抗体サイトカ
イングラフト化タンパク質の使用が提供される。更なる態様において、本開示は、それを
必要としている個体の免疫関連障害の治療又は改善における使用のためのかかる抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を含む組成物を提供する。
【0196】
治療の対象となる病態としては、免疫関連障害が挙げられる。治療目的については、個
体は免疫関連障害を有し得る。防御又は予防目的については、個体は、活性状態の免疫関
連障害から寛解していてもよく、又は将来的な発生が予測されてもよい。一部の実施形態
において、患者は免疫関連障害を有するか、免疫関連障害を有する疑いがあるか、又は免
疫関連障害から寛解している。抗体サイトカイングラフト化タンパク質による治療の対象
となる免疫関連障害は、Ｔｒｅｇ細胞上でのＩＬ２受容体シグナル伝達の活性化から利益
を得る。治療の対象となる免疫関連障害としては、限定なしに：１型糖尿病、全身性エリ
テマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐ
ＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リ
ン脂質症候群が挙げられる。
体は免疫関連障害を有し得る。防御又は予防目的については、個体は、活性状態の免疫関
連障害から寛解していてもよく、又は将来的な発生が予測されてもよい。一部の実施形態
において、患者は免疫関連障害を有するか、免疫関連障害を有する疑いがあるか、又は免
疫関連障害から寛解している。抗体サイトカイングラフト化タンパク質による治療の対象
となる免疫関連障害は、Ｔｒｅｇ細胞上でのＩＬ２受容体シグナル伝達の活性化から利益
を得る。治療の対象となる免疫関連障害としては、限定なしに：１型糖尿病、全身性エリ
テマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐ
ＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リ
ン脂質症候群が挙げられる。
【0197】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の投与
医師又は獣医師は、医薬組成物中に用いる抗体サイトカイングラフト化タンパク質の用
量を所望の治療効果の実現に必要な用量よりも低いレベルで開始し、所望の効果が実現す
るまで投薬量を徐々に増加させることができる。一般に、組成物の有効用量は、治療され
ることになる具体的な疾患又は病態、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者が
ヒトか、それとも動物か、投与されている他の薬物療法、及び治療が予防的か、それとも
療法的かを含め、多くの異なる要因に応じて変わる。治療投薬量は、安全性及び有効性を
最適化するため典型的には滴定が必要である。抗体サイトカイングラフト化タンパク質を
伴う投与について、投薬量は宿主体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、及びより通
常は０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば投薬量は１ｍｇ／ｋｇ体重又は１０ｍ
ｇ／ｋｇ体重又は１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であってもよい。投与は必要又は所望に応
じて毎日、毎週、隔週、毎月、又はそれより多い若しくは少ない頻度であってもよい。例
示的治療レジームは必然的に、週１回、２週間毎に１回又は月１回又は３～６ヵ月毎に１
回の投与を伴う。
医師又は獣医師は、医薬組成物中に用いる抗体サイトカイングラフト化タンパク質の用
量を所望の治療効果の実現に必要な用量よりも低いレベルで開始し、所望の効果が実現す
るまで投薬量を徐々に増加させることができる。一般に、組成物の有効用量は、治療され
ることになる具体的な疾患又は病態、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者が
ヒトか、それとも動物か、投与されている他の薬物療法、及び治療が予防的か、それとも
療法的かを含め、多くの異なる要因に応じて変わる。治療投薬量は、安全性及び有効性を
最適化するため典型的には滴定が必要である。抗体サイトカイングラフト化タンパク質を
伴う投与について、投薬量は宿主体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、及びより通
常は０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば投薬量は１ｍｇ／ｋｇ体重又は１０ｍ
ｇ／ｋｇ体重又は１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であってもよい。投与は必要又は所望に応
じて毎日、毎週、隔週、毎月、又はそれより多い若しくは少ない頻度であってもよい。例
示的治療レジームは必然的に、週１回、２週間毎に１回又は月１回又は３～６ヵ月毎に１
回の投与を伴う。
【0198】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は単回用量又は分割用量で投与することができ
る。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は通常、複数の機会に投与される。単回投薬
量間の間隔は、必要又は所望に応じて毎週、隔週、毎月又は毎年であってもよい。間隙は
また、患者における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の血中レベルの測定によって
指示されるとおり不規則であってもよい。一部の方法では、投薬量は、１～１０００μｇ
／ｍｌ、及び一部の方法では２５～３００μｇ／ｍｌの血漿抗体サイトカイングラフト化
タンパク質濃度が実現するように調整される。或いは、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質は徐放製剤として投与することができ、この場合より低い頻度での投与が必要であ
る。投薬量及び頻度は患者における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の半減期に応
じて変わる。一般に、抗体グラフト化タンパク質は天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標）などの組換えサイトカインよりも長い半減期を示す。投薬量及び投与頻度は、
治療が予防的か、それとも療法的かに応じて変わり得る。一般に予防適用については、比
較的低い投薬量が比較的低い頻度間隔で長期にわたって投与される。一般に療法適用につ
いては、疾患の進行が減少又は終了するまで、及び好ましくは患者が疾患の症状の部分的
又は完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投薬量が時に必要となる。そ
の後、患者は予防レジームを投与されてもよい。
る。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は通常、複数の機会に投与される。単回投薬
量間の間隔は、必要又は所望に応じて毎週、隔週、毎月又は毎年であってもよい。間隙は
また、患者における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の血中レベルの測定によって
指示されるとおり不規則であってもよい。一部の方法では、投薬量は、１～１０００μｇ
／ｍｌ、及び一部の方法では２５～３００μｇ／ｍｌの血漿抗体サイトカイングラフト化
タンパク質濃度が実現するように調整される。或いは、抗体サイトカイングラフト化タン
パク質は徐放製剤として投与することができ、この場合より低い頻度での投与が必要であ
る。投薬量及び頻度は患者における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の半減期に応
じて変わる。一般に、抗体グラフト化タンパク質は天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標）などの組換えサイトカインよりも長い半減期を示す。投薬量及び投与頻度は、
治療が予防的か、それとも療法的かに応じて変わり得る。一般に予防適用については、比
較的低い投薬量が比較的低い頻度間隔で長期にわたって投与される。一般に療法適用につ
いては、疾患の進行が減少又は終了するまで、及び好ましくは患者が疾患の症状の部分的
又は完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投薬量が時に必要となる。そ
の後、患者は予防レジームを投与されてもよい。
【0199】
第２の薬剤との共投与
用語「併用療法」は、本開示に記載される治療上の病態又は障害を治療するための２つ
以上の治療剤の投与を指す。このような投与は、固定比の活性成分を有する単一のカプセ
ルなどの、実質的に同時の様式でのこれらの治療剤の同時投与を包含する。或いは、この
ような投与は、各活性成分について、複数の、又は別々の容器（例えば、カプセル、粉末
、及び液体）中での同時投与を包含する。粉末及び／又は液体は、投与前に所望の用量に
再構成又は希釈され得る。さらに、このような投与は、ほぼ同時に又は異なる時間に、連
続的様式での、それぞれのタイプの治療剤の使用も包含する。いずれの場合も、治療計画
は、本明細書に記載される病態又は障害を治療する際に薬物の組合せの有益な効果を提供
する。
用語「併用療法」は、本開示に記載される治療上の病態又は障害を治療するための２つ
以上の治療剤の投与を指す。このような投与は、固定比の活性成分を有する単一のカプセ
ルなどの、実質的に同時の様式でのこれらの治療剤の同時投与を包含する。或いは、この
ような投与は、各活性成分について、複数の、又は別々の容器（例えば、カプセル、粉末
、及び液体）中での同時投与を包含する。粉末及び／又は液体は、投与前に所望の用量に
再構成又は希釈され得る。さらに、このような投与は、ほぼ同時に又は異なる時間に、連
続的様式での、それぞれのタイプの治療剤の使用も包含する。いずれの場合も、治療計画
は、本明細書に記載される病態又は障害を治療する際に薬物の組合せの有益な効果を提供
する。
【0200】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は１つ以上の追加的
な薬理学的薬剤と共投与される。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化
タンパク質及び追加的な１つ以上の薬剤は、混合物として投与される。一部の実施形態に
おいて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質及び追加的な１つ以上の薬剤は、別個の
製剤として投与される。別個の製剤が利用される特定の実施形態において、投与は同時で
ある。別個の製剤が利用される特定の実施形態において、投与は逐次的である。別個の製
剤が利用される特定の実施形態において、投与は同じ経路による。別個の製剤が利用され
る特定の実施形態において、投与は異なる経路による。抗体サイトカイングラフト化タン
パク質と共投与するための例示的な追加的薬剤としては、限定なしに、抗炎症剤、免疫調
節剤、アミノサリチル酸、及び抗生物質が挙げられる。適切な選択は、好ましい製剤、投
薬量及び／又は送達方法に依存し得る。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、
免疫関連障害病態を治療するための追加的な確立された手技、例えば外科手術との併用療
法にも使用が見出される。
な薬理学的薬剤と共投与される。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化
タンパク質及び追加的な１つ以上の薬剤は、混合物として投与される。一部の実施形態に
おいて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質及び追加的な１つ以上の薬剤は、別個の
製剤として投与される。別個の製剤が利用される特定の実施形態において、投与は同時で
ある。別個の製剤が利用される特定の実施形態において、投与は逐次的である。別個の製
剤が利用される特定の実施形態において、投与は同じ経路による。別個の製剤が利用され
る特定の実施形態において、投与は異なる経路による。抗体サイトカイングラフト化タン
パク質と共投与するための例示的な追加的薬剤としては、限定なしに、抗炎症剤、免疫調
節剤、アミノサリチル酸、及び抗生物質が挙げられる。適切な選択は、好ましい製剤、投
薬量及び／又は送達方法に依存し得る。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、
免疫関連障害病態を治療するための追加的な確立された手技、例えば外科手術との併用療
法にも使用が見出される。
【0201】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は抗炎症剤と共投与
される。詳細な実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質と併せてコル
チコステロイド抗炎症剤が使用されてもよい。使用のためのコルチコステロイドは、メチ
ルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｎｉｓｏｎ
ｉｄｅ）、メサラミン、及びデキサメタゾンのいずれかから選択され得る。適切な選択は
製剤化及び送達の優先性に依存することになる。
される。詳細な実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質と併せてコル
チコステロイド抗炎症剤が使用されてもよい。使用のためのコルチコステロイドは、メチ
ルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｎｉｓｏｎ
ｉｄｅ）、メサラミン、及びデキサメタゾンのいずれかから選択され得る。適切な選択は
製剤化及び送達の優先性に依存することになる。
【0202】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は免疫調節剤と共投
与される。詳細な実施形態において、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、シクロス
ポリンＡ、タクロリムス、及びメトトレキサートのいずれかから選択される免疫調節薬。
別の実施形態において免疫調節薬は、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、アダリム
マブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ）、ナタリズマブ、及びベドリズマブから選択される
。
与される。詳細な実施形態において、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、シクロス
ポリンＡ、タクロリムス、及びメトトレキサートのいずれかから選択される免疫調節薬。
別の実施形態において免疫調節薬は、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、アダリム
マブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ）、ナタリズマブ、及びベドリズマブから選択される
。
【0203】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はアミノサリチル酸
剤と共投与される。詳細な実施形態においてアミノサリチル酸は、スルファサラジン、メ
サラミン、バルサラジド、オルサラジン又は他の５－アミノサリチル酸誘導体から選択さ
れる。
剤と共投与される。詳細な実施形態においてアミノサリチル酸は、スルファサラジン、メ
サラミン、バルサラジド、オルサラジン又は他の５－アミノサリチル酸誘導体から選択さ
れる。
【0204】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は抗細菌剤と共投与
される。例示的抗細菌剤としては、限定なしに、スルホンアミド類（例えば、スルファニ
ルアミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフイソオキサゾール、スル
ファセタミド）、トリメトプリム、キノロン類（例えば、ナリジクス酸、シノキサシン、
ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、フレロ
キサシン、ペフロキサシン（ｐｅｒｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン、ガレノキサシ
ン及びゲミフロキサシン）、メテナミン、ニトロフラントイン、ペニシリン類（例えば、
ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリンオキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシ
リン、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｉｎ）、アンピシリン、アモキシシリン、カルベニシリ
ン、チカルシリン、メズロシリン、及びピペラシリン）、セファロスポリン類（例えば、
セファゾリン、セファレキシン、セファドロキシル、セフォキシチン、セファクロル、セ
フプロジル、セフロキシム、セフロキシムアキセチル（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ａｃｅｔ
ｉｌ）、ロラカルベフ、セフォテタン、セフォラニド、セフォタキシム、セフポドキシム
プロキセチル、セフチブテン（ｃｅｆｉｂｕｔｅｎ）、セフジニル、セフジトレンピボキ
シル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ ｐｉｖｏｒｘｉｌ）、セフチゾキシム、セフトリアキソン
、セフォペラゾン、セフタジジム、及びセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｎｅ））、カルバペネ
ム類（例えば、イミペネム、アズトレオナム）、及びアミノグリコシド類（例えば、ネオ
マイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン（ｔｏ
ｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン、及びアミカシン）が挙げられる。
される。例示的抗細菌剤としては、限定なしに、スルホンアミド類（例えば、スルファニ
ルアミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフイソオキサゾール、スル
ファセタミド）、トリメトプリム、キノロン類（例えば、ナリジクス酸、シノキサシン、
ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、フレロ
キサシン、ペフロキサシン（ｐｅｒｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン、ガレノキサシ
ン及びゲミフロキサシン）、メテナミン、ニトロフラントイン、ペニシリン類（例えば、
ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリンオキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシ
リン、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｉｎ）、アンピシリン、アモキシシリン、カルベニシリ
ン、チカルシリン、メズロシリン、及びピペラシリン）、セファロスポリン類（例えば、
セファゾリン、セファレキシン、セファドロキシル、セフォキシチン、セファクロル、セ
フプロジル、セフロキシム、セフロキシムアキセチル（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ａｃｅｔ
ｉｌ）、ロラカルベフ、セフォテタン、セフォラニド、セフォタキシム、セフポドキシム
プロキセチル、セフチブテン（ｃｅｆｉｂｕｔｅｎ）、セフジニル、セフジトレンピボキ
シル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ ｐｉｖｏｒｘｉｌ）、セフチゾキシム、セフトリアキソン
、セフォペラゾン、セフタジジム、及びセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｎｅ））、カルバペネ
ム類（例えば、イミペネム、アズトレオナム）、及びアミノグリコシド類（例えば、ネオ
マイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン（ｔｏ
ｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン、及びアミカシン）が挙げられる。
【0205】
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は標準治療と共投与
される。例えば、１型糖尿病の治療においては、標準治療はインスリンの投与又はインス
リン療法である。本明細書に開示されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質
は、インスリンが正常糖値を一次的に回復することに伴い免疫寛容の促進においてなおも
良好に機能するであろう。
される。例えば、１型糖尿病の治療においては、標準治療はインスリンの投与又はインス
リン療法である。本明細書に開示されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質
は、インスリンが正常糖値を一次的に回復することに伴い免疫寛容の促進においてなおも
良好に機能するであろう。
【実施例0206】
実施例１：ＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質の創製
ＩＬ２配列を様々な免疫グロブリン足場のＣＤＲ領域内に操作することにより抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を作成し、次に重鎖及び軽鎖の両方の免疫グロブリン鎖を
使用して最終的な抗体サイトカインタンパク質を作成した。抗体サイトカイングラフト化
タンパク質はＩＬ２の好ましい治療特性を付与する；しかしながら、抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質は、ｒｈＩＬ２と比較したときＮＫ細胞活性の増加などの望ましくな
い効果が低下している。
ＩＬ２配列を様々な免疫グロブリン足場のＣＤＲ領域内に操作することにより抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質を作成し、次に重鎖及び軽鎖の両方の免疫グロブリン鎖を
使用して最終的な抗体サイトカインタンパク質を作成した。抗体サイトカイングラフト化
タンパク質はＩＬ２の好ましい治療特性を付与する；しかしながら、抗体サイトカイング
ラフト化タンパク質は、ｒｈＩＬ２と比較したときＮＫ細胞活性の増加などの望ましくな
い効果が低下している。
【0207】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を創製するため、ムテインを含むＩＬ２配列（
配列番号４又は６）を免疫グロブリン鎖足場のＣＤＲループに挿入した。臨床的セッティ
ングで利用されている種々の公知の免疫グロブリン配列並びに生殖細胞系列抗体配列を使
用して抗体サイトカイングラフト化タンパク質を調製した。ＧＦＴＸ３ｂと称される例示
的足場におけるＩＬ２の配列を表２に示す。挿入点は、利用可能な構造的又は相同性モデ
ルデータに基づいて、ループの中間点であると選択された。抗体サイトカイン移植タンパ
ク質を、関連する配列をコードする組み換えＤＮＡを用いる標準的な分子生物学方法を用
いて生成した。
配列番号４又は６）を免疫グロブリン鎖足場のＣＤＲループに挿入した。臨床的セッティ
ングで利用されている種々の公知の免疫グロブリン配列並びに生殖細胞系列抗体配列を使
用して抗体サイトカイングラフト化タンパク質を調製した。ＧＦＴＸ３ｂと称される例示
的足場におけるＩＬ２の配列を表２に示す。挿入点は、利用可能な構造的又は相同性モデ
ルデータに基づいて、ループの中間点であると選択された。抗体サイトカイン移植タンパ
ク質を、関連する配列をコードする組み換えＤＮＡを用いる標準的な分子生物学方法を用
いて生成した。
【0208】
サイトカイングラフト化にどのＣＤＲを選ぶかの選択は、以下のパラメータに関して選
択される：要求される生物学、生物物理学的特性及び好ましい開発プロファイル。どのＣ
ＤＲ及びＣＤＲ内のどの位置が所望のパラメータを提供することになるかを予測する際に
モデル化ソフトウェアが部分的にのみ有用であったため、従って６つ全ての可能な抗体サ
イトカイングラフトを作り、次に生物学的アッセイで評価する。要求される生物学的活性
が実現する場合、次に抗体サイトカイングラフト化分子がそれぞれのサイトカイン受容体
とどのように相互作用するかに関する構造分解などの生物物理学的特性を解く。
択される：要求される生物学、生物物理学的特性及び好ましい開発プロファイル。どのＣ
ＤＲ及びＣＤＲ内のどの位置が所望のパラメータを提供することになるかを予測する際に
モデル化ソフトウェアが部分的にのみ有用であったため、従って６つ全ての可能な抗体サ
イトカイングラフトを作り、次に生物学的アッセイで評価する。要求される生物学的活性
が実現する場合、次に抗体サイトカイングラフト化分子がそれぞれのサイトカイン受容体
とどのように相互作用するかに関する構造分解などの生物物理学的特性を解く。
【0209】
抗体ＩＬ２グラフト化分子について、初めにサイトカイングラフト化に考えられる抗体
候補の構造を解いた。この構造から、抗体のなかでエピトープと相互作用する一部分であ
るパラトープが抗体「アーム」のＮ末端先端にあること、及びサイトカインをこの位置に
グラフト化すればそのそれぞれの受容体に対してサイトカインが提示されるであろうこと
が分かった。グラフト技術に起因して、各抗体ＩＬ２グラフト化タンパク質は、異なる長
さ、配列及び構造環境のＣＤＲループの制約を受ける。そのため、ＬＣＤＲ－１、ＬＣＤ
Ｒ－２、ＬＣＤＲ－３及びＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２及びＨＣＤＲ－３に対応する６つ
全てのＣＤＲにＩＬ２をグラフト化した。図１は、様々な点突然変異を含む、及びＩＬ２
挿入点をＣＤＲループのＮ部分又はＣ部分のいずれかにシフトさせて（ｎＨ１、ｃＨ１、
ｎＨ２、ｃＨ２）作製した異なる例示的バージョンのＩＬ２抗体サイトカイングラフトを
示す。図１のこの表から、ＣＤＲ２の軽鎖にグラフト化されたＩＬ２（ＩｇＧ．ＩＬ２．
Ｌ２）が発現しなかったことを含め、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が全てその
活性の点で異なることが明らかである。また、Ｆｃ機能が変化した（例えばＦｃサイレン
トの）ＩＬ２抗体サイトカイングラフトがより良好なプロファイルを有することも観察さ
れた。
候補の構造を解いた。この構造から、抗体のなかでエピトープと相互作用する一部分であ
るパラトープが抗体「アーム」のＮ末端先端にあること、及びサイトカインをこの位置に
グラフト化すればそのそれぞれの受容体に対してサイトカインが提示されるであろうこと
が分かった。グラフト技術に起因して、各抗体ＩＬ２グラフト化タンパク質は、異なる長
さ、配列及び構造環境のＣＤＲループの制約を受ける。そのため、ＬＣＤＲ－１、ＬＣＤ
Ｒ－２、ＬＣＤＲ－３及びＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２及びＨＣＤＲ－３に対応する６つ
全てのＣＤＲにＩＬ２をグラフト化した。図１は、様々な点突然変異を含む、及びＩＬ２
挿入点をＣＤＲループのＮ部分又はＣ部分のいずれかにシフトさせて（ｎＨ１、ｃＨ１、
ｎＨ２、ｃＨ２）作製した異なる例示的バージョンのＩＬ２抗体サイトカイングラフトを
示す。図１のこの表から、ＣＤＲ２の軽鎖にグラフト化されたＩＬ２（ＩｇＧ．ＩＬ２．
Ｌ２）が発現しなかったことを含め、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が全てその
活性の点で異なることが明らかである。また、Ｆｃ機能が変化した（例えばＦｃサイレン
トの）ＩＬ２抗体サイトカイングラフトがより良好なプロファイルを有することも観察さ
れた。
【0210】
特性（生物物理学的及び生物学的）の最良の組み合わせを有し、且つ含まれたＩＬ２点
突然変異が所望の生物学的特性を増強したため、ＨＣＤＲ－１が選択された。挿入点の選
択については、ＣＤＲループの構造中心が、いずれの側にも最も大きい（直線サイズ３．
８Å×残基数の）間隔をもたらし得ることに伴い選ばれ、及びいかなる一つの理論によっ
ても拘束されるものではないが、これはＩＬ２のより容易な折り畳みを独立に可能にする
ことにより安定分子を提供した。グラフト足場ＧＦＴＸ３ｂの構造は既に分かっていたた
め、各ＣＤＲの構造中心もまた分かっていた。これは、Ｃｈｏｔｈｉａ付番方式を用いて
定義したときのＣＤＲループ配列の中心と一致した。既述のとおり、ＩＬ－２グラフトの
挿入点をＣＤＲループの中心から離れてＮ末端部分又はＣ末端部分のいずれかの方にシフ
トさせた。しかしながら、ＣＤＲループ内でＩＬ２をシフトさせても生物学的活性に大き
な差は生じなかった。
突然変異が所望の生物学的特性を増強したため、ＨＣＤＲ－１が選択された。挿入点の選
択については、ＣＤＲループの構造中心が、いずれの側にも最も大きい（直線サイズ３．
８Å×残基数の）間隔をもたらし得ることに伴い選ばれ、及びいかなる一つの理論によっ
ても拘束されるものではないが、これはＩＬ２のより容易な折り畳みを独立に可能にする
ことにより安定分子を提供した。グラフト足場ＧＦＴＸ３ｂの構造は既に分かっていたた
め、各ＣＤＲの構造中心もまた分かっていた。これは、Ｃｈｏｔｈｉａ付番方式を用いて
定義したときのＣＤＲループ配列の中心と一致した。既述のとおり、ＩＬ－２グラフトの
挿入点をＣＤＲループの中心から離れてＮ末端部分又はＣ末端部分のいずれかの方にシフ
トさせた。しかしながら、ＣＤＲループ内でＩＬ２をシフトさせても生物学的活性に大き
な差は生じなかった。
【0211】
要約すれば、ＣＤＲ内にグラフトすることによりあるレベルの立体障害がＩＬ２受容体
の個々のサブユニットにもたらされ得るという仮説の下、構造に基づき各ＣＤＲにおける
挿入点を選択した。特定のサイトカインにどのＣＤＲグラフトが最良かについての最終的
な選択は、所望の生物学及び生物物理学的特性に基づいた。サイトカイン受容体の性質、
サイトカイン／受容体相互作用及びシグナル伝達機構もまた役割を果たしたとともに、こ
れは各個別の抗体サイトカイン分子をそのそれぞれの特性に関して比較することにより行
った。
の個々のサブユニットにもたらされ得るという仮説の下、構造に基づき各ＣＤＲにおける
挿入点を選択した。特定のサイトカインにどのＣＤＲグラフトが最良かについての最終的
な選択は、所望の生物学及び生物物理学的特性に基づいた。サイトカイン受容体の性質、
サイトカイン／受容体相互作用及びシグナル伝達機構もまた役割を果たしたとともに、こ
れは各個別の抗体サイトカイン分子をそのそれぞれの特性に関して比較することにより行
った。
【0212】
【表1】
【0213】
【表2】
【0214】
【表3】
【0215】
【表4】
【0216】
【表5】
【0217】
【表6】
【0218】
【表7】
【0219】
【表8】
【0220】
【表9】
【0221】
【表10】
【0222】
【表11】
【0223】
【表12】
【0224】
【表13】
【0225】
【表14】
【0226】
実施例２：抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＴｒｅｇ細胞に対するより高い活性
及び増加した半減期を示す
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を上回る所望の生物学的効果を実現したことに伴いＩ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３を選択した（図１に相対的変化を
まとめている）。これらの効果には以下が含まれる；Ｔｃｏｎ及びＮＫ細胞よりも優先的
なＴｒｅｇ上のＩＬ－２Ｒ選択性、マウスにおけるＴｃｏｎ及びＮＫ細胞と比べたＴｒｅ
ｇのより大きい半減期拡大。
及び増加した半減期を示す
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を上回る所望の生物学的効果を実現したことに伴いＩ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３を選択した（図１に相対的変化を
まとめている）。これらの効果には以下が含まれる；Ｔｃｏｎ及びＮＫ細胞よりも優先的
なＴｒｅｇ上のＩＬ－２Ｒ選択性、マウスにおけるＴｃｏｎ及びＮＫ細胞と比べたＴｒｅ
ｇのより大きい半減期拡大。
【0227】
高親和性ＩＬ－２受容体刺激の評価においては、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及び
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１グラフトの両方がＴｒｅｇ細胞上で同等のシグナル効力を
示したが、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と異なり
、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞及びＮＫ細胞の両方で低下した活性乃至無活性を示した。
ＣＤＲＬ３にグラフト化されたＩＬ２（ＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３）は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ
（登録商標）よりも低いＴｒｅｇ上でのシグナル効力を示したが、ＮＫ細胞上では活性を
示さなかった。ＨｅｍａＣａｒｅ Ｃｏｒｐ．からヒト末梢血単核球（ｈＰＢＭＣ）を購
入し、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＩｇＧ．Ｉ
Ｌ２．Ｌ３のいずれかによってインビトロで試験してＩＬ－２高親和性受容体に対する選
択的活性を評価した。細胞を無血清試験培地中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルに抗
体サイトカイングラフト化タンパク質又は天然ヒトＩＬ－２のいずれかを加え、３７℃で
２０分間インキュベートした。２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処
理し、ＳＴＡＴ５抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した
。
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１グラフトの両方がＴｒｅｇ細胞上で同等のシグナル効力を
示したが、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と異なり
、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞及びＮＫ細胞の両方で低下した活性乃至無活性を示した。
ＣＤＲＬ３にグラフト化されたＩＬ２（ＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３）は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ
（登録商標）よりも低いＴｒｅｇ上でのシグナル効力を示したが、ＮＫ細胞上では活性を
示さなかった。ＨｅｍａＣａｒｅ Ｃｏｒｐ．からヒト末梢血単核球（ｈＰＢＭＣ）を購
入し、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＩｇＧ．Ｉ
Ｌ２．Ｌ３のいずれかによってインビトロで試験してＩＬ－２高親和性受容体に対する選
択的活性を評価した。細胞を無血清試験培地中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルに抗
体サイトカイングラフト化タンパク質又は天然ヒトＩＬ－２のいずれかを加え、３７℃で
２０分間インキュベートした。２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処
理し、ＳＴＡＴ５抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した
。
【0228】
血漿中でのＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３の薬物動態は、僅
か１用量後にＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べて半減期の延長を示した。Ｐｒｏｌ
ｅｕｋｉｎ（登録商標）又はグラフトのいずれかによる１回の治療後８日における前糖尿
病ＮＯＤマウスの脾臓で細胞拡大を評価した。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＴエフェ
クター細胞及びＮＫ細胞と比べて優れたＴｒｅｇ拡大を実現し、前糖尿病マウスにおいて
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも良好に忍容された。ＳＴＡＴ５刺激、ＩｇＧ．Ｉ
Ｌ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３のＰＫ／ＰＤの要約を図２に示す。これは
、抗体サイトカイングラフト化タンパク質がＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い
半減期を有するのみならず、Ｔエフェクター細胞及びＮＫ細胞の望ましくない刺激なしに
標的Ｔｒｅｇ細胞を刺激できることを示している。
か１用量後にＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べて半減期の延長を示した。Ｐｒｏｌ
ｅｕｋｉｎ（登録商標）又はグラフトのいずれかによる１回の治療後８日における前糖尿
病ＮＯＤマウスの脾臓で細胞拡大を評価した。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＴエフェ
クター細胞及びＮＫ細胞と比べて優れたＴｒｅｇ拡大を実現し、前糖尿病マウスにおいて
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも良好に忍容された。ＳＴＡＴ５刺激、ＩｇＧ．Ｉ
Ｌ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３のＰＫ／ＰＤの要約を図２に示す。これは
、抗体サイトカイングラフト化タンパク質がＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い
半減期を有するのみならず、Ｔエフェクター細胞及びＮＫ細胞の望ましくない刺激なしに
標的Ｔｒｅｇ細胞を刺激できることを示している。
【0229】
実施例３：抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＴｒｅｇ細胞に対してより高い活性
を示す
非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスは１型糖尿病を自然発症し、ヒト１型糖尿病の動物モデ
ルとして用いられることが多い。前糖尿病ＮＯＤマウスに等モルのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標）（週３回）及び種々の抗体サイトカイングラフト化タンパク質（１回／週）を
投与した。初回治療から８日後、脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、ＲＰＭＩ（１
０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ ＃Ｒ７７５７）で溶
解させて、細胞を細胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡ
ＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を使用してＦ
ＡＣＳ染色を実施した。細胞を表面抗体：ラット抗マウスＣＤ３－ＢＶ６０５（ＢＤ Ｐ
ｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５６３００４）、ラット抗マウスＣＤ４－パシフィックブルー（
ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５８１０７）、ラット抗マウスＣＤ８－ＰｅｒＣｐ（
ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５３０３６）、ＣＤ４４ ＦＩＴＣ（Ｐｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ ＃５５３１３３）ラット抗マウスＣＤ２５－ＡＰＣ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
＃１７－０２５１）で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染
色セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して
染色した。細胞はＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）又はＢＤ ＦＡＣＳ Ｌ
ＳＲ ＩＩ（登録商標）で分析し、及びデータはＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア
で分析した。図３は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ１１３Ａ．Ｈ
１をＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較した、各脾臓から絶対数として計算した倍数
値及び比を示す。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞又は
ＮＫ細胞の拡大のないＴｒｅｇ細胞の拡大の増加が一番上の列に示される。これは、全て
の細胞型の拡大につながる低用量及び高用量Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と対照的で
ある。
を示す
非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスは１型糖尿病を自然発症し、ヒト１型糖尿病の動物モデ
ルとして用いられることが多い。前糖尿病ＮＯＤマウスに等モルのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標）（週３回）及び種々の抗体サイトカイングラフト化タンパク質（１回／週）を
投与した。初回治療から８日後、脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、ＲＰＭＩ（１
０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ ＃Ｒ７７５７）で溶
解させて、細胞を細胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡ
ＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を使用してＦ
ＡＣＳ染色を実施した。細胞を表面抗体：ラット抗マウスＣＤ３－ＢＶ６０５（ＢＤ Ｐ
ｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５６３００４）、ラット抗マウスＣＤ４－パシフィックブルー（
ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５８１０７）、ラット抗マウスＣＤ８－ＰｅｒＣｐ（
ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５３０３６）、ＣＤ４４ ＦＩＴＣ（Ｐｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ ＃５５３１３３）ラット抗マウスＣＤ２５－ＡＰＣ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
＃１７－０２５１）で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染
色セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して
染色した。細胞はＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）又はＢＤ ＦＡＣＳ Ｌ
ＳＲ ＩＩ（登録商標）で分析し、及びデータはＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア
で分析した。図３は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ１１３Ａ．Ｈ
１をＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較した、各脾臓から絶対数として計算した倍数
値及び比を示す。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞又は
ＮＫ細胞の拡大のないＴｒｅｇ細胞の拡大の増加が一番上の列に示される。これは、全て
の細胞型の拡大につながる低用量及び高用量Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と対照的で
ある。
【0230】
実施例４：インビトロでＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力はＣＤ４ Ｔｃｏｎ及びＣＤ８ Ｔ
ｅｆｆにおいて低下するがＴｒｅｇにおいては低下しない
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を両方ともにＩＬ
－２Ｒに対するシグナル効力に関してヒトＰＢＭＣ及びカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏ
ｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）ＰＢＭＣの両方でインビトロで試験した。等モルＩＬ２濃度のＩ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は両方ともに、高親和
性ＩＬ－２Ｒを発現するＴｒｅｇ細胞に対しては同様のシグナル効力を示したが、低親和
性ＩＬ－２受容体を発現する従来のＣＤ４及びＣＤ８ Ｔエフェクター細胞に対してはＩ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１のみが効力の低下を示した。これらの結果はヒト及びカニク
イザルの両方のＰＢＭＣで観察された。このアッセイについて、ＰＢＭＣ細胞は無血清試
験培地中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＰｒ
ｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）のいずれかを加え、３７℃で２０分間インキュベートした。
２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処理し、ＳＴＡＴ５抗体（ＢＤ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した。細胞はＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒ
ｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、及びデータはＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア
で分析した。
ｅｆｆにおいて低下するがＴｒｅｇにおいては低下しない
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を両方ともにＩＬ
－２Ｒに対するシグナル効力に関してヒトＰＢＭＣ及びカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏ
ｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）ＰＢＭＣの両方でインビトロで試験した。等モルＩＬ２濃度のＩ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は両方ともに、高親和
性ＩＬ－２Ｒを発現するＴｒｅｇ細胞に対しては同様のシグナル効力を示したが、低親和
性ＩＬ－２受容体を発現する従来のＣＤ４及びＣＤ８ Ｔエフェクター細胞に対してはＩ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１のみが効力の低下を示した。これらの結果はヒト及びカニク
イザルの両方のＰＢＭＣで観察された。このアッセイについて、ＰＢＭＣ細胞は無血清試
験培地中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＰｒ
ｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）のいずれかを加え、３７℃で２０分間インキュベートした。
２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処理し、ＳＴＡＴ５抗体（ＢＤ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した。細胞はＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒ
ｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、及びデータはＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア
で分析した。
【0231】
図４に示されるとおりの結果が特に明らかであった。ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ
ｍｏｌｏｇｕｓ）の両方のＰＢＭＣにおいて、ＴｒｅｇでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１
によるｐＳＴＡＴ５活性化が見られ、これはＣＤ８ Ｔエフェクターではほとんど見られ
なかった。
ｍｏｌｏｇｕｓ）の両方のＰＢＭＣにおいて、ＴｒｅｇでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１
によるｐＳＴＡＴ５活性化が見られ、これはＣＤ８ Ｔエフェクターではほとんど見られ
なかった。
【0232】
実施例５：ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はインビトロで機能性安定Ｔｒｅｇを拡大する
Ｔｒｅｇ選択性の改善には機能的効果が伴う。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１で拡大し
たＴｒｅｇは、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で拡大したＴｒｅｇと比べて同等か又は
より良好なＴエフェクターの抑制因子である。このアッセイのため、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙ
ｐａｑｕｅ勾配（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ カタログ番号１７－１４４０－０３）で
遠心することにより全血からヒトＰＢＭＣを精製した。ＰＢＭＣをＲＢＣ溶解させた（Ａ
ｍｉｍｅｄ カタログ番号３－１３Ｆ００－Ｈ）。ＥａｓｙＳｅｐ ＣＤ４＋ Ｔ細胞エ
ンリッチメントキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号１
９０５２）を使用してＣＤ４＋ Ｔ細胞をエンリッチした。エンリッチしたＣＤ４＋をＶ
５００抗ＣＤ４（クローンＲＰＡＴ４）、ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗ＣＤ１２７（及びＡ
ＰＣ抗ＣＤ２５で染色し、ＣＤ４＋ＣＤ１２７－ＣＤ２５＋天然調節性Ｔ細胞（ｎＴｒｅ
ｇ）及びＣＤ４＋ＣＤ１２７＋ＣＤ２５－ Ｔレスポンダー（Ｔｒｅｓｐ）を単離するた
め選別した。選別したＴｒｅｇを培地を満たした９６ウェル丸底マイクロプレートにレプ
リケートでプレーティングし（１×１０５／１００μｌ／ウェル）、等モル濃度の１ｎＭ
又は０．３ｎＭ Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）又はＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の
存在下において３：１のビーズ対細胞比でマイクロビーズによって刺激した。３７℃で２
４時間インキュベートした後、ウェルに同じＩＬ２濃度を含む１００μｌ培地を補充した
。３日目、培養物を懸濁し、半分に分割し、同じＩＬ２濃度を含む１００μｌ培地を補充
した。６日目、培養物を３日目と同じく処理した。８日目、細胞を回収し、チューブにプ
ールし、チューブをマルチスタンド磁石上に１～２分間置くことによりビーズを除去した
。細胞を含有する上清を収集し、室温下２００ｇで５分間遠心した。次に細胞をカウント
し、元のＩＬ２濃度の５分の１を含む培地を補充した４８ウェル平底マイクロプレートに
約５×１０５／ｍｌで再びプレーティングした。２日間静置した後、細胞を回収し、カウ
ントし、分析するか、又は抑制アッセイに使用した。拡大したＴｒｅｇ及び新鮮に解凍し
たＣＤ４＋ＣＤ１２７＋ＣＤ２５－ Ｔレスポンダー（Ｔｒｅｓｐ）細胞をそれぞれ０．
８μＭ ＣＴＶｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号Ｃ３４
５５７）及び１μＭ ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号Ｃ
３４５５４）で製造者の指示に記載されるとおり標識した。拡大したＴｒｅｇの抑制特性
を評価するため、３×１０４ ＣＦＳＥ標識Ｔｒｅｓｐを単独で、又はＣＴＶｉｏｌｅｔ
標識Ｔｒｅｇと共に（異なるＴｒｅｓｐ：Ｔｒｅｇ比）トリプリケートでプレーティング
し、Ｄｙｎａｂｅａｄｓによって１：８のビーズ対細胞比で刺激した（最終容積２００μ
ｌ／ウェル）。４～５日後、細胞を収集し、レスポンダー細胞の増殖をフローサイトメト
リーによって判定した。
Ｔｒｅｇ選択性の改善には機能的効果が伴う。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１で拡大し
たＴｒｅｇは、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で拡大したＴｒｅｇと比べて同等か又は
より良好なＴエフェクターの抑制因子である。このアッセイのため、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙ
ｐａｑｕｅ勾配（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ カタログ番号１７－１４４０－０３）で
遠心することにより全血からヒトＰＢＭＣを精製した。ＰＢＭＣをＲＢＣ溶解させた（Ａ
ｍｉｍｅｄ カタログ番号３－１３Ｆ００－Ｈ）。ＥａｓｙＳｅｐ ＣＤ４＋ Ｔ細胞エ
ンリッチメントキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号１
９０５２）を使用してＣＤ４＋ Ｔ細胞をエンリッチした。エンリッチしたＣＤ４＋をＶ
５００抗ＣＤ４（クローンＲＰＡＴ４）、ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗ＣＤ１２７（及びＡ
ＰＣ抗ＣＤ２５で染色し、ＣＤ４＋ＣＤ１２７－ＣＤ２５＋天然調節性Ｔ細胞（ｎＴｒｅ
ｇ）及びＣＤ４＋ＣＤ１２７＋ＣＤ２５－ Ｔレスポンダー（Ｔｒｅｓｐ）を単離するた
め選別した。選別したＴｒｅｇを培地を満たした９６ウェル丸底マイクロプレートにレプ
リケートでプレーティングし（１×１０５／１００μｌ／ウェル）、等モル濃度の１ｎＭ
又は０．３ｎＭ Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）又はＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の
存在下において３：１のビーズ対細胞比でマイクロビーズによって刺激した。３７℃で２
４時間インキュベートした後、ウェルに同じＩＬ２濃度を含む１００μｌ培地を補充した
。３日目、培養物を懸濁し、半分に分割し、同じＩＬ２濃度を含む１００μｌ培地を補充
した。６日目、培養物を３日目と同じく処理した。８日目、細胞を回収し、チューブにプ
ールし、チューブをマルチスタンド磁石上に１～２分間置くことによりビーズを除去した
。細胞を含有する上清を収集し、室温下２００ｇで５分間遠心した。次に細胞をカウント
し、元のＩＬ２濃度の５分の１を含む培地を補充した４８ウェル平底マイクロプレートに
約５×１０５／ｍｌで再びプレーティングした。２日間静置した後、細胞を回収し、カウ
ントし、分析するか、又は抑制アッセイに使用した。拡大したＴｒｅｇ及び新鮮に解凍し
たＣＤ４＋ＣＤ１２７＋ＣＤ２５－ Ｔレスポンダー（Ｔｒｅｓｐ）細胞をそれぞれ０．
８μＭ ＣＴＶｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号Ｃ３４
５５７）及び１μＭ ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号Ｃ
３４５５４）で製造者の指示に記載されるとおり標識した。拡大したＴｒｅｇの抑制特性
を評価するため、３×１０４ ＣＦＳＥ標識Ｔｒｅｓｐを単独で、又はＣＴＶｉｏｌｅｔ
標識Ｔｒｅｇと共に（異なるＴｒｅｓｐ：Ｔｒｅｇ比）トリプリケートでプレーティング
し、Ｄｙｎａｂｅａｄｓによって１：８のビーズ対細胞比で刺激した（最終容積２００μ
ｌ／ウェル）。４～５日後、細胞を収集し、レスポンダー細胞の増殖をフローサイトメト
リーによって判定した。
【0233】
新鮮な拡大したＴｒｅｇにおいて、Ｔｒｅｓｐ細胞と比較してメチル化状態を判定した
。ＱｉａｇｅｎからのＡｌｌｐｒｅｐ（登録商標）ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉ（カタログ
番号８０２０４）を使用して＞５．０×１０５細胞からゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）を単離
した。次に、ＳｉｇｍａからのＩｍｐｒｉｎｔ（登録商標）ＤＮＡ修飾キット（カタログ
番号ＭＯＤ５０）を使用して２００ｎｇのｇＤＮＡを処理し、非メチル化シトシンをウラ
シルに変換した（一方でメチル化シトシンは変化しないままとした）。次に、ＥｐｉＴｅ
ｃｔ ＭｅｔｈｙＬｉｇｈｔ（登録商標）ＰＣＲ＋ＲＯＸ（Ｑｉａｇｅｎ カタログ番号
５９４９６）、Ｅｐｉｔｅｃｔ対照ＤＮＡ（Ｑｉａｇｅｎ カタログ番号５９６９５）、
標準メチル化（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２ＡＡＺ７ＦＰ）
及び非メチル化（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２ＡＡＺ７ＦＰ
）プラスミド、Ｔｒｅｇ特異的脱メチル化領域（ＴＳＤＲ）、メチル化及び非メチル化フ
ォワード及びリバースプライマー、及びプローブ（ＭｉｃｒｏＳｙｎｔｈ）を利用した配
列特異的プローブベースのリアルタイムＰＣＲを用いて８ｎｇの亜硫酸水素変換ｇＤＮＡ
に関して定量的メチル化を判定した。メチル化パーセンテージはＥｐｉＴｅｃｔ Ｍｅｔ
ｈｙＬｉｇｈｔ（登録商標）ＰＣＲハンドブックに記載されるとおり計算した。
。ＱｉａｇｅｎからのＡｌｌｐｒｅｐ（登録商標）ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉ（カタログ
番号８０２０４）を使用して＞５．０×１０５細胞からゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）を単離
した。次に、ＳｉｇｍａからのＩｍｐｒｉｎｔ（登録商標）ＤＮＡ修飾キット（カタログ
番号ＭＯＤ５０）を使用して２００ｎｇのｇＤＮＡを処理し、非メチル化シトシンをウラ
シルに変換した（一方でメチル化シトシンは変化しないままとした）。次に、ＥｐｉＴｅ
ｃｔ ＭｅｔｈｙＬｉｇｈｔ（登録商標）ＰＣＲ＋ＲＯＸ（Ｑｉａｇｅｎ カタログ番号
５９４９６）、Ｅｐｉｔｅｃｔ対照ＤＮＡ（Ｑｉａｇｅｎ カタログ番号５９６９５）、
標準メチル化（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２ＡＡＺ７ＦＰ）
及び非メチル化（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２ＡＡＺ７ＦＰ
）プラスミド、Ｔｒｅｇ特異的脱メチル化領域（ＴＳＤＲ）、メチル化及び非メチル化フ
ォワード及びリバースプライマー、及びプローブ（ＭｉｃｒｏＳｙｎｔｈ）を利用した配
列特異的プローブベースのリアルタイムＰＣＲを用いて８ｎｇの亜硫酸水素変換ｇＤＮＡ
に関して定量的メチル化を判定した。メチル化パーセンテージはＥｐｉＴｅｃｔ Ｍｅｔ
ｈｙＬｉｇｈｔ（登録商標）ＰＣＲハンドブックに記載されるとおり計算した。
【0234】
図５は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１で拡大し
たＴｒｅｇによるＦｏｘｐ３遺伝子座の安定脱メチル化をグラフで示す。インビトロでＩ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１によって拡大したヒトＴｒｅｇはＦｏｘｐ３発現及び脱メチ
ル化によって安定し、これが安定Ｔｒｅｇ細胞につながる。
たＴｒｅｇによるＦｏｘｐ３遺伝子座の安定脱メチル化をグラフで示す。インビトロでＩ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１によって拡大したヒトＴｒｅｇはＦｏｘｐ３発現及び脱メチ
ル化によって安定し、これが安定Ｔｒｅｇ細胞につながる。
【0235】
実施例６：インビトロでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１によるＩＬ－２Ｒシグナル伝達に対
する効力はヒトＮＫにおいて低下した
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は等モル濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較
してＮＫ細胞におけるシグナル伝達効力の低下を示した。ＰＢＭＣ細胞を無血清試験培地
中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＰｒｏｌｅ
ｕｋｉｎ（登録商標）のいずれかを加え、３７℃で２０分間インキュベートした。２０分
後、細胞を１．６％ホルムアルデヒドで固定し、洗浄し、表面マーカーで染色した。室温
で３０分後、試料を洗浄し、再懸濁した細胞ペレットを－２０℃メタノールで透過処理し
、洗浄して、ＳＴＡＴ５及びＤＮＡインターカレーターで染色した。細胞をＣｙｔｏｆに
かけ、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。結果は図６に示し、
ここでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＮＫ細胞にほとんど乃至全く効果を及ぼさなかっ
た。対照的に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標
）治療の望ましくない副作用として、ＮＫ細胞上のｐＳＴＡＴ５活性を増加させた。
する効力はヒトＮＫにおいて低下した
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は等モル濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較
してＮＫ細胞におけるシグナル伝達効力の低下を示した。ＰＢＭＣ細胞を無血清試験培地
中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＰｒｏｌｅ
ｕｋｉｎ（登録商標）のいずれかを加え、３７℃で２０分間インキュベートした。２０分
後、細胞を１．６％ホルムアルデヒドで固定し、洗浄し、表面マーカーで染色した。室温
で３０分後、試料を洗浄し、再懸濁した細胞ペレットを－２０℃メタノールで透過処理し
、洗浄して、ＳＴＡＴ５及びＤＮＡインターカレーターで染色した。細胞をＣｙｔｏｆに
かけ、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。結果は図６に示し、
ここでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＮＫ細胞にほとんど乃至全く効果を及ぼさなかっ
た。対照的に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標
）治療の望ましくない副作用として、ＮＫ細胞上のｐＳＴＡＴ５活性を増加させた。
【0236】
実施例７：雌カニクイザルに皮下投与したときのＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動
態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、及び毒性効果の判定
カニクイザルにおけるＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、薬物動態の延長、Ｔエフェク
ター細胞よりも優先的な優れたＴｒｅｇ拡大及び低用量Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）
よりも低い毒性を示した。この非臨床的実験室試験は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ実験動物委員会
（Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）が承認済みの一般的
プロトコル第ＴＸ ４０３９号、本プロトコル及び施設内標準実施要領（Ｓｔａｎｄａｒ
ｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ：ＳＯＰ）に従い行われた。
態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、及び毒性効果の判定
カニクイザルにおけるＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、薬物動態の延長、Ｔエフェク
ター細胞よりも優先的な優れたＴｒｅｇ拡大及び低用量Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）
よりも低い毒性を示した。この非臨床的実験室試験は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ実験動物委員会
（Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）が承認済みの一般的
プロトコル第ＴＸ ４０３９号、本プロトコル及び施設内標準実施要領（Ｓｔａｎｄａｒ
ｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ：ＳＯＰ）に従い行われた。
【0237】
試験初日に動物にＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）
のいずれかを皮下投与した。試験における各用量レベルで全ての動物から血液を採取した
。投与１日前、投与後１時間、６時間及び１２時間、その後２、３、４、５、６、７、８
、１０、及び１２日目。薬物動態学及び薬力学用の血液試料は全て遠心し、血漿試料を入
手した。得られた血漿試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－７０℃以下で凍結し
た。全ての試料を分析し、血漿中のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉ
ｎ（登録商標）の濃度を免疫アッセイを用いて測定した。半減期などの薬物動態パラメー
タを計算し、薬力学用にＦＡＣＳによって細胞の免疫表現型を決定した。ＩＬ－２／ＩＬ
－２ Ｇｙｒｏｓアッセイプロトコルは以下のとおりである。各試料はデュプリケートで
実行し、デュプリケートの分析の各々に５μＬの１：２０希釈した試料が必要であった。
捕捉抗体はヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２
）であり、Ａｌｅｘａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（Ｂｉｏｌ
ｅｇｅｎｄ ５００３１５）ＬＯＱ：０．０８ｎｇ／ｍｌで検出し、イムノアッセイは全
て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－２００（
登録商標）と共に使用して行った。
のいずれかを皮下投与した。試験における各用量レベルで全ての動物から血液を採取した
。投与１日前、投与後１時間、６時間及び１２時間、その後２、３、４、５、６、７、８
、１０、及び１２日目。薬物動態学及び薬力学用の血液試料は全て遠心し、血漿試料を入
手した。得られた血漿試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－７０℃以下で凍結し
た。全ての試料を分析し、血漿中のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉ
ｎ（登録商標）の濃度を免疫アッセイを用いて測定した。半減期などの薬物動態パラメー
タを計算し、薬力学用にＦＡＣＳによって細胞の免疫表現型を決定した。ＩＬ－２／ＩＬ
－２ Ｇｙｒｏｓアッセイプロトコルは以下のとおりである。各試料はデュプリケートで
実行し、デュプリケートの分析の各々に５μＬの１：２０希釈した試料が必要であった。
捕捉抗体はヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２
）であり、Ａｌｅｘａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（Ｂｉｏｌ
ｅｇｅｎｄ ５００３１５）ＬＯＱ：０．０８ｎｇ／ｍｌで検出し、イムノアッセイは全
て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－２００（
登録商標）と共に使用して行った。
【0238】
図７は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１とＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）との対比を
示す。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は１２時間の半減期を有し、一方、Ｐｒｏｌｅｕｋ
ｉｎ（登録商標）は３時間の半減期を有する。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の半減期の
延長に伴いＴｒｅｇ活性が増加し、好酸球増加毒性がはるかに低くなる。
示す。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は１２時間の半減期を有し、一方、Ｐｒｏｌｅｕｋ
ｉｎ（登録商標）は３時間の半減期を有する。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の半減期の
延長に伴いＴｒｅｇ活性が増加し、好酸球増加毒性がはるかに低くなる。
【0239】
実施例８：ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を上回る半
減期の延長を示す
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、単回投与後にＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の４
時間の半減期と比較して約１２時間の半減期を示した。ナイーブＣＤ－１動物に静脈内又
は皮下投与し、投与前、投与後１時間、３、７、２４、３１、４８、５５及び７２時間に
全ての動物から血液を採取した。血液試料を遠心し、血漿試料を入手した。得られた血漿
試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－８０℃で凍結した。全ての試料を分析し、
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の血漿中濃度をイムノアッセイを用いて測定した。ＩＬ－
２／ＩＬ－２ Ｇｙｒｏｓアッセイプロトコルは以下のとおりである。各試料はデュプリ
ケートで実行し、デュプリケートの分析の各々に５μＬの１：２０希釈した試料が必要で
あった。捕捉抗体はヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡ
Ｆ２０２）であり、Ａｌｅｘａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（
Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ５００３１５）ＬＯＱ：０．０８ｎｇ／ｍｌで検出し、イムノアッ
セイは全て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－
２００（登録商標）と共に使用して行った。このアッセイは、実施例７の半減期の決定を
更に展開したものである。このアッセイの結果は図８に示し、ここでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４
９Ａ．Ｈ１の半減期は１２～１４時間であると決定され、これは４時間の半減期を有する
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と対照的である。
減期の延長を示す
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、単回投与後にＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の４
時間の半減期と比較して約１２時間の半減期を示した。ナイーブＣＤ－１動物に静脈内又
は皮下投与し、投与前、投与後１時間、３、７、２４、３１、４８、５５及び７２時間に
全ての動物から血液を採取した。血液試料を遠心し、血漿試料を入手した。得られた血漿
試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－８０℃で凍結した。全ての試料を分析し、
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の血漿中濃度をイムノアッセイを用いて測定した。ＩＬ－
２／ＩＬ－２ Ｇｙｒｏｓアッセイプロトコルは以下のとおりである。各試料はデュプリ
ケートで実行し、デュプリケートの分析の各々に５μＬの１：２０希釈した試料が必要で
あった。捕捉抗体はヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡ
Ｆ２０２）であり、Ａｌｅｘａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（
Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ５００３１５）ＬＯＱ：０．０８ｎｇ／ｍｌで検出し、イムノアッ
セイは全て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－
２００（登録商標）と共に使用して行った。このアッセイは、実施例７の半減期の決定を
更に展開したものである。このアッセイの結果は図８に示し、ここでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４
９Ａ．Ｈ１の半減期は１２～１４時間であると決定され、これは４時間の半減期を有する
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と対照的である。
【0240】
実施例９：異種ＧｖＨＤマウスにおいてヒトＴｒｅｇは拡大するが、Ｔエフェクター又は
ＮＫ細胞は拡大しない
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は異種ＧｖＨＤモデルにおいてＴエフェクター又はＮＫ
細胞と比べてＴｒｅｇを選択的に拡大するが、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ではこれ
はない。ＮＯＤ－ｓｃｉｄ ＩＬ２Ｒγヌルマウス（ＮＳＧ）に健常ドナーからのｈＰＢ
ＭＣを腹腔内注射によって注射した（ＨｅｍａＣａｒｅ Ｃｏｒｐ）。注射２４時間後、
動物にＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１ １回／週又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）５
回／週を試験期間中にわたって毎週投与した。試験期間中にわたって体重を週２回モニタ
した。初回投与の２８日後に各群４匹のマウスを回収し、脾臓を処理して単一細胞懸濁液
を入手し、ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させ
て、細胞を細胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩
衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染
色を実施した。細胞を表面抗体で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦ
ｏｘＰ３染色セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ
３に関して染色した。細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、デ
ータをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。倍数値及び比は各脾臓絶対数
から計算した相対数に基づく。図９は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がこのマウスモデ
ルにおいてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりもはるかに良好にＴｒｅｇ細胞を拡大し
、またＴｃｏｎ及びＮＫ細胞の望ましくない拡大も低減することを示している。
ＮＫ細胞は拡大しない
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は異種ＧｖＨＤモデルにおいてＴエフェクター又はＮＫ
細胞と比べてＴｒｅｇを選択的に拡大するが、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ではこれ
はない。ＮＯＤ－ｓｃｉｄ ＩＬ２Ｒγヌルマウス（ＮＳＧ）に健常ドナーからのｈＰＢ
ＭＣを腹腔内注射によって注射した（ＨｅｍａＣａｒｅ Ｃｏｒｐ）。注射２４時間後、
動物にＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１ １回／週又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）５
回／週を試験期間中にわたって毎週投与した。試験期間中にわたって体重を週２回モニタ
した。初回投与の２８日後に各群４匹のマウスを回収し、脾臓を処理して単一細胞懸濁液
を入手し、ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させ
て、細胞を細胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩
衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染
色を実施した。細胞を表面抗体で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦ
ｏｘＰ３染色セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ
３に関して染色した。細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、デ
ータをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。倍数値及び比は各脾臓絶対数
から計算した相対数に基づく。図９は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がこのマウスモデ
ルにおいてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりもはるかに良好にＴｒｅｇ細胞を拡大し
、またＴｃｏｎ及びＮＫ細胞の望ましくない拡大も低減することを示している。
【0241】
異種ＧｖＨＤマウスをＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１で治療し、それにヒトＰＢＭＣ（外
来細胞）を注射したとき、マウスは治療経過中、正常体重を維持した。対照的に、Ｐｒｏ
ｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で治療したマウスには重篤な体重減少があった。体重は試験期
間中にわたって週２回モニタし、パーセント体重は、登録時点における動物の初期体重を
考慮に入れて計算した。この改善は、このモデルにおいてＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１
がＴｒｅｇ増強に及ぼす効果と関連付けられ、データは図１０にグラフで示す。このデー
タは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及び他の抗体サイトカイングラフト化タンパク質が
より高い治療指数及び安全性の幅を有することを示している。
来細胞）を注射したとき、マウスは治療経過中、正常体重を維持した。対照的に、Ｐｒｏ
ｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で治療したマウスには重篤な体重減少があった。体重は試験期
間中にわたって週２回モニタし、パーセント体重は、登録時点における動物の初期体重を
考慮に入れて計算した。この改善は、このモデルにおいてＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１
がＴｒｅｇ増強に及ぼす効果と関連付けられ、データは図１０にグラフで示す。このデー
タは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及び他の抗体サイトカイングラフト化タンパク質が
より高い治療指数及び安全性の幅を有することを示している。
【0242】
実施例１０：ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＮＯＤマウス糖尿病モデルにおいて１型糖
尿病の発症を予防する
前糖尿病ＮＯＤ雌に等モルのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（週３回）及びＩｇＧ．
ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。試験の継続期間中（
初回投与後４ヵ月）、血糖及び体重に関してマウスを週２回モニタした。図１１は、Ｉｇ
Ｇ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療マウスが低血糖値を維持することを示す。このように、Ｉ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１で治療したマウスでは顕性１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）に進行しな
かった。対照的に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療マウスは初めは低血糖値であっ
たが、しかしこれは時間が経つと上昇し、１型糖尿病の症状をもたらした。
尿病の発症を予防する
前糖尿病ＮＯＤ雌に等モルのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（週３回）及びＩｇＧ．
ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。試験の継続期間中（
初回投与後４ヵ月）、血糖及び体重に関してマウスを週２回モニタした。図１１は、Ｉｇ
Ｇ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療マウスが低血糖値を維持することを示す。このように、Ｉ
ｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１で治療したマウスでは顕性１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）に進行しな
かった。対照的に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療マウスは初めは低血糖値であっ
たが、しかしこれは時間が経つと上昇し、１型糖尿病の症状をもたらした。
【0243】
実施例１１：前糖尿病ＮＯＤマウスにおける低用量Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比
べたＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＮＯＤマウスモデルにおいて３用量のＰｒｏｌｅｕｋ
ｉｎ（登録商標）と比較して１用量で優れたＴｒｅｇ拡大、より良好な忍容性及び有害事
象なしを示した。前糖尿病ＮＯＤ雌に低用量等モルＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（週
３回）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。
初回投与後４日で各群４匹のマウスを取り、脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、Ｒ
ＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させて、細胞を細
胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩衝液（１×Ｐ
ＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染色を実施した
。細胞を表面抗体：ラット抗マウスＣＤ３－ＢＶ６０５（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ
＃５６３００４）、ラット抗マウスＣＤ４－パシフィックブルー（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ ＃５５８１０７）、ラット抗マウスＣＤ８－ＰｅｒＣｐ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ ＃５５３０３６）、ＣＤ４４ ＦＩＴＣ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５３１３
３）ラット抗マウスＣＤ２５－ＡＰＣ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１７－０２５１）で
染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染色セットＰＥ（Ｅｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して染色した。細胞をＢＤ
ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）又はＢＤ ＦＡＣＳ ＬＳＲ ＩＩ（登録商標
）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。倍数値及び比
は各脾臓絶対数から計算した相対数に基づく。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の単回用量
の投与は、図１２に示されるとおり、ＮＯＤマウスモデルにおいてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標）の反復投与よりも大きいＴｒｅｇ拡大を示した。
べたＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＮＯＤマウスモデルにおいて３用量のＰｒｏｌｅｕｋ
ｉｎ（登録商標）と比較して１用量で優れたＴｒｅｇ拡大、より良好な忍容性及び有害事
象なしを示した。前糖尿病ＮＯＤ雌に低用量等モルＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（週
３回）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。
初回投与後４日で各群４匹のマウスを取り、脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、Ｒ
ＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させて、細胞を細
胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩衝液（１×Ｐ
ＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染色を実施した
。細胞を表面抗体：ラット抗マウスＣＤ３－ＢＶ６０５（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ
＃５６３００４）、ラット抗マウスＣＤ４－パシフィックブルー（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ ＃５５８１０７）、ラット抗マウスＣＤ８－ＰｅｒＣｐ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ ＃５５３０３６）、ＣＤ４４ ＦＩＴＣ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５３１３
３）ラット抗マウスＣＤ２５－ＡＰＣ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１７－０２５１）で
染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染色セットＰＥ（Ｅｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して染色した。細胞をＢＤ
ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）又はＢＤ ＦＡＣＳ ＬＳＲ ＩＩ（登録商標
）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。倍数値及び比
は各脾臓絶対数から計算した相対数に基づく。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の単回用量
の投与は、図１２に示されるとおり、ＮＯＤマウスモデルにおいてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（
登録商標）の反復投与よりも大きいＴｒｅｇ拡大を示した。
【0244】
実施例１２：ＮＯＤマウスモデルにおける効果的用量のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の
薬物動態
１．３ｍｇ／ｋｇ及び０．４３ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態
を１用量後に４８時間まで血漿中でアッセイした。前糖尿病１０週齢ＮＯＤマウスに２つ
の異なる濃度のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を腹腔内投与し、投与後１時間、３、７、
２４及び４８時間に全ての動物から血液を採取した。血液試料を遠心し、血漿試料を入手
した。得られた血漿試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－８０℃で凍結した。Ｇ
ｙｒｏｓプラットフォームに適合させた３つの異なる方法：１）ＩＬ２ベースの捕捉及び
検出、２）ＩＬ２ベースの捕捉及びｈＦｃベースの検出、及び３）ｈＦｃベースの捕捉及
び検出を用いて各試料を分析することによりＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１血漿濃度を検
出した。
薬物動態
１．３ｍｇ／ｋｇ及び０．４３ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態
を１用量後に４８時間まで血漿中でアッセイした。前糖尿病１０週齢ＮＯＤマウスに２つ
の異なる濃度のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を腹腔内投与し、投与後１時間、３、７、
２４及び４８時間に全ての動物から血液を採取した。血液試料を遠心し、血漿試料を入手
した。得られた血漿試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－８０℃で凍結した。Ｇ
ｙｒｏｓプラットフォームに適合させた３つの異なる方法：１）ＩＬ２ベースの捕捉及び
検出、２）ＩＬ２ベースの捕捉及びｈＦｃベースの検出、及び３）ｈＦｃベースの捕捉及
び検出を用いて各試料を分析することによりＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１血漿濃度を検
出した。
【0245】
各試料はデュプリケートで実行し、デュプリケートの分析の各々に５μＬの１：２０希
釈した試料が必要であった。Ｇｙｒｏｓ ＩＬ－２／ＩＬ－２アッセイは捕捉ヤギ抗ヒト
ＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２）を使用し、Ａｌｅｘ
ａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ５００
３１５）で検出する。ＩＬ－２／Ｆｃ検出には、捕捉ヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体
（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２）を使用し、検出には、Ａｌｅｘａ ６４７ヤ
ギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９
－６０５－０９８）抗体を使用する。ヒトＦｃ／Ｆｃアッセイには、捕捉ビオチン化ヤギ
抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃１０９
－０６５－０９８）を使用した。検出工程にはＡｌｅｘａ ６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ
ｃγ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃１０９－６０５－０９
８）を使用した。イムノアッセイは全て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録
商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－２００と共に用いて行った。このマウスモデルにおける定量
限界（ＬＯＱ）は、図１３Ａに示されるとおり４８時間である。図１３Ｂにおいてこれを
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩＬ２－Ｆｃ融合タンパク質と比較する。このグラ
フは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１などの抗体サイトカイン（ｃｙｏｋｉｎｅ）グラフト
化タンパク質についてＬＯＱがより高いことを示している。
釈した試料が必要であった。Ｇｙｒｏｓ ＩＬ－２／ＩＬ－２アッセイは捕捉ヤギ抗ヒト
ＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２）を使用し、Ａｌｅｘ
ａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ５００
３１５）で検出する。ＩＬ－２／Ｆｃ検出には、捕捉ヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体
（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２）を使用し、検出には、Ａｌｅｘａ ６４７ヤ
ギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９
－６０５－０９８）抗体を使用する。ヒトＦｃ／Ｆｃアッセイには、捕捉ビオチン化ヤギ
抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃１０９
－０６５－０９８）を使用した。検出工程にはＡｌｅｘａ ６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ
ｃγ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃１０９－６０５－０９
８）を使用した。イムノアッセイは全て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録
商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－２００と共に用いて行った。このマウスモデルにおける定量
限界（ＬＯＱ）は、図１３Ａに示されるとおり４８時間である。図１３Ｂにおいてこれを
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩＬ２－Ｆｃ融合タンパク質と比較する。このグラ
フは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１などの抗体サイトカイン（ｃｙｏｋｉｎｅ）グラフト
化タンパク質についてＬＯＱがより高いことを示している。
【0246】
実施例１３：前糖尿病ＮＯＤマウスにおける用量範囲設定
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、同じ等モル濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）
と比較したときＣＤ４ Ｔｃｏｎ及びＣＤ８ Ｔエフェクターのいずれよりも優先的な優
れたＴｒｅｇ拡大を示した。最も高いＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）群では死亡などの
有害事象が認められ、いずれの用量のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１で治療したマウスにも
死亡は見られなかった。
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、同じ等モル濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）
と比較したときＣＤ４ Ｔｃｏｎ及びＣＤ８ Ｔエフェクターのいずれよりも優先的な優
れたＴｒｅｇ拡大を示した。最も高いＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）群では死亡などの
有害事象が認められ、いずれの用量のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１で治療したマウスにも
死亡は見られなかった。
【0247】
前糖尿病ＮＯＤ雌に低用量等モルＩＬ－２（週３回）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ
１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。初回投与後８日で各群３匹のマウスを安
楽死させ、脾臓を摘出した。脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、ＲＰＭＩ（１０％
ＦＢＳ）で洗浄した。血液を採取し、赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させて、細胞を細
胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩衝液（１×Ｐ
ＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染色を実施した
。細胞を表面抗体で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染色
セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して染
色した。細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、データをＦｌｏ
ｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。比は、各脾臓から計算した相対細胞数に基
づく。このデータは図１４に提供される。この表は抗体サイトカイングラフト化タンパク
質の用量範囲フォーマットを提供する。これはまた、投与がより広い範囲にわたって良好
に忍容されたことに伴いＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標
）よりも高い治療指数を有したことも実証する。対照的に、高用量のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ
（登録商標）の投与ではマウスに罹患及び死亡が生じた。最も高用量のＰｒｏｌｅｕｋｉ
ｎ（登録商標）では、この用量での治療を中断せざるを得ない十分な罹患及び死亡が生じ
た。
１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。初回投与後８日で各群３匹のマウスを安
楽死させ、脾臓を摘出した。脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、ＲＰＭＩ（１０％
ＦＢＳ）で洗浄した。血液を採取し、赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させて、細胞を細
胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩衝液（１×Ｐ
ＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染色を実施した
。細胞を表面抗体で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染色
セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して染
色した。細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、データをＦｌｏ
ｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。比は、各脾臓から計算した相対細胞数に基
づく。このデータは図１４に提供される。この表は抗体サイトカイングラフト化タンパク
質の用量範囲フォーマットを提供する。これはまた、投与がより広い範囲にわたって良好
に忍容されたことに伴いＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標
）よりも高い治療指数を有したことも実証する。対照的に、高用量のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ
（登録商標）の投与ではマウスに罹患及び死亡が生じた。最も高用量のＰｒｏｌｅｕｋｉ
ｎ（登録商標）では、この用量での治療を中断せざるを得ない十分な罹患及び死亡が生じ
た。
【0248】
実施例１４：ヒトＰＢＭＣ上でのＳＴＡＴ５シグナル伝達
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、健常ドナーヒトＰＢＭＣ並びに自己免疫性ドナーか
らのＰＢＭＣにおいてＴｃｏｎ及びＮＫよりも優先的にＴｒｅｇ活性化に選択的であった
。ＳＴＡＴ５シグナル伝達効力は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１によるインビトロ治療後
にＴｃｏｎでは低下したが、Ｔｒｅｇでは低下しなかった。健常及び自己免疫性患者から
のヒトＰＢＭＣ（Ｈｅｍａｃａｒｅ Ｃｏｒｐ）細胞を無血清試験培地に静置し、各ウェ
ルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を加え、３７℃で２０分間インキュ
ベートした。２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処理し、ＳＴＡＴ５
抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した。細胞をＢＤ Ｌ
ＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフ
トウェアで分析した。図１５Ａのデータは、ヒト白斑患者から採取したＰＢＭＣのＩｇＧ
．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療について、Ｔｒｅｇ活性が維持された一方で、ＮＫ、ＣＤ４
Ｔｃｏｎ、又はＣＤ８ Ｔエフェクター細胞の活性化がほとんどなかったことを示して
いる。この結果はまた、ＳＬＥ及び橋本病患者から採取されたＰＢＭＣにおいても観察さ
れた（データは示さず）。図１５Ｂは、１型糖尿病（Ｔｙｐｅ １ Ｄｉａｂｅｔｉｅｓ
）（Ｔ１Ｄ）のヒト患者から採取してＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋ
ｉｎ（登録商標）で治療したＰＢＭＣにおいて、ＮＫ細胞、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞
又はＣＤ４ Ｔｃｏｎ細胞上のｐＳＴＡＴ５活性が大きく低下していたことを示している
。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療が正常ＰＢＭＣで有効であったとともにＴ１Ｄ患者
から採取されたＰＢＭＣで良好に忍容されたことに伴い、これは、患者がインスリン療法
を受けている場合であっても、抗体サイトカインタンパク質がＴ１Ｄの治療において有用
となるであろうことを示している。これは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がこれらの免
疫関連障害を有する患者で良好に忍容されるであろうこと、及びこれらの免疫関連障害へ
の対処において有効であることを示している。
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、健常ドナーヒトＰＢＭＣ並びに自己免疫性ドナーか
らのＰＢＭＣにおいてＴｃｏｎ及びＮＫよりも優先的にＴｒｅｇ活性化に選択的であった
。ＳＴＡＴ５シグナル伝達効力は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１によるインビトロ治療後
にＴｃｏｎでは低下したが、Ｔｒｅｇでは低下しなかった。健常及び自己免疫性患者から
のヒトＰＢＭＣ（Ｈｅｍａｃａｒｅ Ｃｏｒｐ）細胞を無血清試験培地に静置し、各ウェ
ルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を加え、３７℃で２０分間インキュ
ベートした。２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処理し、ＳＴＡＴ５
抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した。細胞をＢＤ Ｌ
ＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフ
トウェアで分析した。図１５Ａのデータは、ヒト白斑患者から採取したＰＢＭＣのＩｇＧ
．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療について、Ｔｒｅｇ活性が維持された一方で、ＮＫ、ＣＤ４
Ｔｃｏｎ、又はＣＤ８ Ｔエフェクター細胞の活性化がほとんどなかったことを示して
いる。この結果はまた、ＳＬＥ及び橋本病患者から採取されたＰＢＭＣにおいても観察さ
れた（データは示さず）。図１５Ｂは、１型糖尿病（Ｔｙｐｅ １ Ｄｉａｂｅｔｉｅｓ
）（Ｔ１Ｄ）のヒト患者から採取してＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋ
ｉｎ（登録商標）で治療したＰＢＭＣにおいて、ＮＫ細胞、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞
又はＣＤ４ Ｔｃｏｎ細胞上のｐＳＴＡＴ５活性が大きく低下していたことを示している
。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療が正常ＰＢＭＣで有効であったとともにＴ１Ｄ患者
から採取されたＰＢＭＣで良好に忍容されたことに伴い、これは、患者がインスリン療法
を受けている場合であっても、抗体サイトカインタンパク質がＴ１Ｄの治療において有用
となるであろうことを示している。これは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がこれらの免
疫関連障害を有する患者で良好に忍容されるであろうこと、及びこれらの免疫関連障害へ
の対処において有効であることを示している。
【0249】
実施例１５：抗体サイトカイングラフト化タンパク質の結合
ムテインを含むＩＬ２配列（配列番号４又は６）を免疫グロブリン鎖足場のＣＤＲルー
プに挿入した。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、臨床セッティングで利用され
ている種々の既知の免疫グロブリン配列並びに生殖細胞系列抗体配列を使用して調製した
。使用した抗体のうちの１つはその抗原としてＲＳＶを有する。ＩＬ２をこの抗体のＣＤ
Ｒにグラフト化するとＲＳＶへの結合が低下又は消失したかどうかを決定するため、ＰＢ
Ｓ又は炭酸塩緩衝液のいずれかにおいてＲＳＶタンパク質に関するＥＬＩＳＡアッセイを
行った。図１６に示すとおり、これはＩＬ２グラフト化にどのＣＤＲを選択したかに影響
を受けるように見える。例えば、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、元の非グラフト化（
非修飾）抗体と同様のＲＳＶ結合を有する。対照的に、ＩＬ２をＣＤＲ３の軽鎖（ＣＤＲ
－Ｌ３）又はＣＤＲ－Ｈ３にグラフト化すると、結合が低下する。予想どおり、ＩＬ２を
無関係の抗体（Ｘｏｌａｉｒ）にグラフト化すると、結合は生じない。これは、抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質が抗体足場の元の標的に対する結合を保持し得ること、又
はこの結合が低下し得ることを実証している。
ムテインを含むＩＬ２配列（配列番号４又は６）を免疫グロブリン鎖足場のＣＤＲルー
プに挿入した。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、臨床セッティングで利用され
ている種々の既知の免疫グロブリン配列並びに生殖細胞系列抗体配列を使用して調製した
。使用した抗体のうちの１つはその抗原としてＲＳＶを有する。ＩＬ２をこの抗体のＣＤ
Ｒにグラフト化するとＲＳＶへの結合が低下又は消失したかどうかを決定するため、ＰＢ
Ｓ又は炭酸塩緩衝液のいずれかにおいてＲＳＶタンパク質に関するＥＬＩＳＡアッセイを
行った。図１６に示すとおり、これはＩＬ２グラフト化にどのＣＤＲを選択したかに影響
を受けるように見える。例えば、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、元の非グラフト化（
非修飾）抗体と同様のＲＳＶ結合を有する。対照的に、ＩＬ２をＣＤＲ３の軽鎖（ＣＤＲ
－Ｌ３）又はＣＤＲ－Ｈ３にグラフト化すると、結合が低下する。予想どおり、ＩＬ２を
無関係の抗体（Ｘｏｌａｉｒ）にグラフト化すると、結合は生じない。これは、抗体サイ
トカイングラフト化タンパク質が抗体足場の元の標的に対する結合を保持し得ること、又
はこの結合が低下し得ることを実証している。
【0250】
実施例１６：非ヒト霊長類におけるＴｒｅｇ拡大
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を２用量群（３匹の雄／群）間で交互に４週間の無投与
間隔を伴い与える２つの単回漸増皮下投与でカニクイザルに投与した。この後、緩衝液又
は５ｍｇ／ｋｇ ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の６回の皮下用量（隔日で２週間）を受
けた２群（３匹の雄／群）における２週間複数回投与相が続いた。「単回投与相」（２９
日の間隔を空けて２用量が投与された）からのフローサイトメトリー（免疫表現型タイピ
ング）によって評価したリンパ球集団の変化を図１７に示す。１２５及び３７５μｇ／ｋ
ｇ用量では、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞に対する明らかな効果は何らなしに、Ｔｒｅｇ絶対数
の３～４倍及び最大５．５倍の増加が観察された。最大のＴｒｅｇ拡大は４日目に見られ
たとともに、Ｔｒｅｇ数は１０日目までにほぼベースラインに戻る。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４
９Ａ．Ｈ１は安全で且つ良好に忍容され、死亡、臨床徴候、又は体重、摂食量、サイトカ
インレベル若しくは臨床病理の変化はなかった。更に、この試験において最高２．４ｍｇ
／ｋｇの単回投与後又は２週間にわたる５ｍｇ／ｋｇの隔日の複数回投与後に心血管効果
（ＥＣＧ又は血圧）は観察されなかった。血液漏出の徴候又は他のＣＶ関連所見はなかっ
た。
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を２用量群（３匹の雄／群）間で交互に４週間の無投与
間隔を伴い与える２つの単回漸増皮下投与でカニクイザルに投与した。この後、緩衝液又
は５ｍｇ／ｋｇ ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の６回の皮下用量（隔日で２週間）を受
けた２群（３匹の雄／群）における２週間複数回投与相が続いた。「単回投与相」（２９
日の間隔を空けて２用量が投与された）からのフローサイトメトリー（免疫表現型タイピ
ング）によって評価したリンパ球集団の変化を図１７に示す。１２５及び３７５μｇ／ｋ
ｇ用量では、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞に対する明らかな効果は何らなしに、Ｔｒｅｇ絶対数
の３～４倍及び最大５．５倍の増加が観察された。最大のＴｒｅｇ拡大は４日目に見られ
たとともに、Ｔｒｅｇ数は１０日目までにほぼベースラインに戻る。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４
９Ａ．Ｈ１は安全で且つ良好に忍容され、死亡、臨床徴候、又は体重、摂食量、サイトカ
インレベル若しくは臨床病理の変化はなかった。更に、この試験において最高２．４ｍｇ
／ｋｇの単回投与後又は２週間にわたる５ｍｇ／ｋｇの隔日の複数回投与後に心血管効果
（ＥＣＧ又は血圧）は観察されなかった。血液漏出の徴候又は他のＣＶ関連所見はなかっ
た。
【0251】
実施例１７：抗薬物抗体効果のリスク
ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの選択的プロファイルに対する抗薬物抗体効
果のリスクを決定するため、用量反応においてＦｃ架橋結合抗体の存在下でシグナル伝達
アッセイを行った。
ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの選択的プロファイルに対する抗薬物抗体効
果のリスクを決定するため、用量反応においてＦｃ架橋結合抗体の存在下でシグナル伝達
アッセイを行った。
【0252】
ヒトＰＢＭＣをＲＰＭＩ完全培地に３×１０６細胞／ｍｌで再懸濁し、３×１０５細胞
／ウェル（１００ｕｌ）でプレーティングして２時間静置した。別個の９６ウェルプレー
トに、最高濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ、ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ及びＧ
ＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ＋モル過剰のヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ、
ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ単独（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ カタログ番
号２０４２－０１、ロット番号Ｊ１７１５－ＰＩ７７）、及び培地中２×最終濃度で滴定
曲線を作成した。全ての条件について、最高濃度のＩＬ２当量は２００ｎＭであった。最
高濃度を調製し、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ及びＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａにつ
いて、最高濃度の下に１０ｐｔ希釈曲線を（１：２希釈物を間に入れて）作成した。加え
て、２００ｎＭ（ＩＬ－２当量）のＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ最高濃度及
びモル濃度に基づき０．５×、１×、２．５×、５×及び１０×ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２
－Ｈ１－Ｄ４９Ａの抗ヒトＩｇで滴定曲線を作成した。各条件について最高濃度の下に１
０ｐｔ、１：１０希釈曲線を作成した。抗ヒトＩｇＧ＋ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－
Ｄ４９Ａ滴定を調製し、室温で２０分間インキュベートした後、ＰＢＭＣに加えた。
／ウェル（１００ｕｌ）でプレーティングして２時間静置した。別個の９６ウェルプレー
トに、最高濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ、ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ及びＧ
ＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ＋モル過剰のヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ、
ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ単独（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ カタログ番
号２０４２－０１、ロット番号Ｊ１７１５－ＰＩ７７）、及び培地中２×最終濃度で滴定
曲線を作成した。全ての条件について、最高濃度のＩＬ２当量は２００ｎＭであった。最
高濃度を調製し、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ及びＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａにつ
いて、最高濃度の下に１０ｐｔ希釈曲線を（１：２希釈物を間に入れて）作成した。加え
て、２００ｎＭ（ＩＬ－２当量）のＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ最高濃度及
びモル濃度に基づき０．５×、１×、２．５×、５×及び１０×ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２
－Ｈ１－Ｄ４９Ａの抗ヒトＩｇで滴定曲線を作成した。各条件について最高濃度の下に１
０ｐｔ、１：１０希釈曲線を作成した。抗ヒトＩｇＧ＋ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－
Ｄ４９Ａ滴定を調製し、室温で２０分間インキュベートした後、ＰＢＭＣに加えた。
【0253】
調製した条件（又は媒体単独）を１００ｕｌ／ウェルの最終容積となるようにＰＢＭＣ
に加えた。ＰＢＭＣを３７℃、５％ＣＯ２で２５分間刺激した。インキュベーション後、
細胞を速やかに固定し、バーコード付加の処理をし、表面に関して染色し、透過処理し、
ｐＳＴＡＴ５及びＦｏｘｐ３に関して染色した。細胞をＣｙｔｏｆで読み取り、データを
ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。漸増濃度の架橋剤抗ヒトＩｇＧ抗体はＧＦＴＸ３
ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの選択的活性に干渉しない（図１８）。
に加えた。ＰＢＭＣを３７℃、５％ＣＯ２で２５分間刺激した。インキュベーション後、
細胞を速やかに固定し、バーコード付加の処理をし、表面に関して染色し、透過処理し、
ｐＳＴＡＴ５及びＦｏｘｐ３に関して染色した。細胞をＣｙｔｏｆで読み取り、データを
ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。漸増濃度の架橋剤抗ヒトＩｇＧ抗体はＧＦＴＸ３
ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの選択的活性に干渉しない（図１８）。
【0254】
実施例１８：種々の自己免疫性患者において維持された選択的シグナル伝達
自己免疫性患者からのヒトＰＢＭＣ（Ｈｅｍａｃａｒｅ Ｃｏｒｐ）細胞を無血清試験
培地に静置し、各ウェルに加えた。別個のプレートに、最高濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ又
はＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａのいずれかを作り、培地中４×最終濃度で滴
定曲線を作成した。最高濃度（２００ｎＭのＩＬ－２当量）を調製し、最高濃度のＧＦＴ
Ｘ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ又は天然ヒトＩＬ－２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）のいず
れかの下に４ｐｔ希釈曲線（又はＡＤについて１０ｐｔ）を作成した。作成した条件をウ
ェルに加え、３７℃で２５分間インキュベートした。２５分後、細胞を固定し、表面マー
カーで染色し、透過処理し、及び細胞内抗体（ｐＳＴＡＴ５、Ｆｏｘｐ３）で染色して、
Ｃｙｔｏｆで（抗体は全てＦｌｕｉｄｉｇｍから）製造者の指示に従い取得した。Ｆｌｏ
ｗＪｏソフトウェアを用いてデータを分析した。
自己免疫性患者からのヒトＰＢＭＣ（Ｈｅｍａｃａｒｅ Ｃｏｒｐ）細胞を無血清試験
培地に静置し、各ウェルに加えた。別個のプレートに、最高濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ又
はＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａのいずれかを作り、培地中４×最終濃度で滴
定曲線を作成した。最高濃度（２００ｎＭのＩＬ－２当量）を調製し、最高濃度のＧＦＴ
Ｘ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ又は天然ヒトＩＬ－２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）のいず
れかの下に４ｐｔ希釈曲線（又はＡＤについて１０ｐｔ）を作成した。作成した条件をウ
ェルに加え、３７℃で２５分間インキュベートした。２５分後、細胞を固定し、表面マー
カーで染色し、透過処理し、及び細胞内抗体（ｐＳＴＡＴ５、Ｆｏｘｐ３）で染色して、
Ｃｙｔｏｆで（抗体は全てＦｌｕｉｄｉｇｍから）製造者の指示に従い取得した。Ｆｌｏ
ｗＪｏソフトウェアを用いてデータを分析した。
【0255】
ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａは、１型糖尿病、ＳＬＥ、白斑及びアトピー
性皮膚炎を含めた幾つかの試験した自己免疫性適応疾患においてＣＤ４ Ｔｃｏｎ及びＣ
Ｄ８ Ｔｅｆｆよりも優先的にＴｒｅｇに選択的であった（図１９）。インビトロでのＩ
Ｌ－２Ｒシグナル伝達効力はＴｃｏｎ及びＴｅｆｆで低下したが、Ｔｒｅｇでは低下しな
かった。
性皮膚炎を含めた幾つかの試験した自己免疫性適応疾患においてＣＤ４ Ｔｃｏｎ及びＣ
Ｄ８ Ｔｅｆｆよりも優先的にＴｒｅｇに選択的であった（図１９）。インビトロでのＩ
Ｌ－２Ｒシグナル伝達効力はＴｃｏｎ及びＴｅｆｆで低下したが、Ｔｒｅｇでは低下しな
かった。
【0256】
実施例１９：ヒトＰＢＭＣにおけるＴエフェクター細胞よりも優先的なＴｒｅｇにおける
シグナル伝達選択性
ＰＢＭＣ細胞をＲＰＭＩ培地に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩＬ－２グラフト
Ｄ４９Ａ又は天然ヒトＩＬ－２のいずれかを加え、３７℃で２５分間インキュベートした
。２５分後、細胞を１．６％ホルムアルデヒドで固定し、洗浄して、表面マーカーで染色
した。室温で３０分後、試料を洗浄し、再懸濁した細胞ペレットを－２０℃メタノールで
透過処理し、洗浄して、ＳＴＡＴ５及びＤＮＡインターカレーターで染色した。細胞をＣ
ｙｔｏｆにかけ、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。
シグナル伝達選択性
ＰＢＭＣ細胞をＲＰＭＩ培地に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩＬ－２グラフト
Ｄ４９Ａ又は天然ヒトＩＬ－２のいずれかを加え、３７℃で２５分間インキュベートした
。２５分後、細胞を１．６％ホルムアルデヒドで固定し、洗浄して、表面マーカーで染色
した。室温で３０分後、試料を洗浄し、再懸濁した細胞ペレットを－２０℃メタノールで
透過処理し、洗浄して、ＳＴＡＴ５及びＤＮＡインターカレーターで染色した。細胞をＣ
ｙｔｏｆにかけ、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。
【0257】
【0258】
本明細書に記載される例及び実施形態は例示を目的とし、それらを踏まえた様々な修正
又は変更が当業者に提案され得るとともに本願の趣旨及び範囲並びに添付の特許請求の範
囲に包含されるべきであることが理解される。本明細書に引用される刊行物、配列受託番
号、特許、及び特許出願は全て、本明細書によってあらゆる目的から全体として参照によ
り援用される。
又は変更が当業者に提案され得るとともに本願の趣旨及び範囲並びに添付の特許請求の範
囲に包含されるべきであることが理解される。本明細書に引用される刊行物、配列受託番
号、特許、及び特許出願は全て、本明細書によってあらゆる目的から全体として参照によ
り援用される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13-1】
【図13-2】
【図14】
【図15-1】
【図15-2】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-07-14
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）前記ＨＣＤＲ１にグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、
前記ＩＬ２分子が配列番号６からなる、
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）前記ＨＣＤＲ１にグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、
前記ＩＬ２分子が配列番号６からなる、
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項2】
前記ＩＬ２分子が、低親和性ＩＬ２受容体に対する前記ＩＬ２分子の親和性を低下させる突然変異を含む、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項3】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＴｒｅｇ細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、請求項１又は２に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項4】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項5】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い半減期を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項6】
ＩｇＧクラス抗体重鎖を更に含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項7】
前記ＩｇＧクラス抗体重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択される、請求項６に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項8】
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子によって１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％低下する、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項9】
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子の存在下で１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％保持される、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項10】
前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ２分子の結合特異性と異なる、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項11】
前記ＣＤＲの結合特異性が非ヒト抗原に対するものである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項12】
前記非ヒト抗原がウイルスである、請求項１１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項13】
前記ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、請求項１２に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項14】
前記ＲＳＶが、ＲＳＶサブグループＡ及びＲＳＶサブグループＢから選択される、請求項１３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項15】
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質の前記抗体足場部分がヒト化又はヒトである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項16】
（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項17】
配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項18】
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域を更に含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項19】
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、請求項１８に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項20】
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、請求項１９に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項21】
配列番号４３のＨＣＤＲ１、配列番号４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５のＨＣＤＲ３、配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号５８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項22】
配列番号４８を含む重鎖、及び配列番号６１を含む軽鎖を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
【請求項23】
配列番号４９の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び配列番号６２の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸。
【請求項24】
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の産生に好適な組換え宿主細胞であって、前記タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードする請求項２３に記載の核酸を含む、組換え宿主細胞。
【請求項25】
哺乳類細胞株である、請求項２４に記載の組換え宿主細胞。
【請求項26】
前記哺乳類細胞株がＣＨＯ細胞株である、請求項２５に記載の組換え宿主細胞。
【請求項27】
請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0258】
本明細書に記載される例及び実施形態は例示を目的とし、それらを踏まえた様々な修正又は変更が当業者に提案され得るとともに本願の趣旨及び範囲並びに添付の特許請求の範囲に包含されるべきであることが理解される。本明細書に引用される刊行物、配列受託番号、特許、及び特許出願は全て、本明細書によってあらゆる目的から全体として参照により援用される。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［発明１］
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２］
前記ＩＬ２分子が重鎖ＣＤＲにグラフト化されている、発明１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３］
前記重鎖ＣＤＲが、相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、及び相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）から選択される、発明２に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明４］
前記ＩＬ２分子がＨＣＤＲ１にグラフト化されている、発明３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明５］
前記ＩＬ２分子が軽鎖ＣＤＲにグラフト化されている、発明１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明６］
前記軽鎖ＣＤＲが、相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、及び相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）から選択される、発明５に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明７］
前記ＩＬ２分子が、低親和性ＩＬ２受容体に対する前記ＩＬ２分子の親和性を低下させる突然変異を含む、発明１～６のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明８］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＴｒｅｇ細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、発明１～７のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明９］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、発明１～８のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１０］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い半減期を有する、発明１～９のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１１］
前記ＩＬ２分子が配列番号４からなる、発明１～１０のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１２］
前記ＩＬ２分子が配列番号６からなる、発明１～１０のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１３］
ＩｇＧクラス抗体重鎖を更に含む、発明１～１２のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１４］
前記ＩｇＧクラス抗体重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択される、発明１３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１５］
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子によって１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％低下する、発明１～１４のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１６］
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子の存在下で１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％保持される、発明１～１５のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１７］
前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ２分子の結合特異性と異なる、発明１～１６のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１８］
前記ＣＤＲの結合特異性が非ヒト抗原に対するものである、発明１～１７のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１９］
前記非ヒト抗原がウイルスである、発明１８に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２０］
前記ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、発明１９に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２１］
前記ＲＳＶが、ＲＳＶサブグループＡ及びＲＳＶサブグループＢから選択される、発明２０に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２２］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質の前記抗体足場部分がヒト化又はヒトである、発明１～２１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２３］
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号８２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８３のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｉｖ）（ａ）配列番号９５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号１０８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０９のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１１０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２４］
（ｉ）配列番号２０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号７２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；又は
（ｉｖ）配列番号９８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２５］
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域を更に含む、発明１～２４のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２６］
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、発明２５に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２７］
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、発明２６に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２８］
配列番号１７のＨＣＤＲ１、配列番号１８のＨＣＤＲ２、配列番号１９のＨＣＤＲ３、配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号３２のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２９］
配列番号４３のＨＣＤＲ１、配列番号４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５のＨＣＤＲ３、配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号５８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３０］
配列番号６９のＨＣＤＲ１、配列番号７０のＨＣＤＲ２、配列番号７１のＨＣＤＲ３、配列番号８２のＬＣＤＲ１、配列番号８３のＬＣＤＲ２、配列番号８４のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３１］
配列番号９５のＨＣＤＲ１、配列番号９６のＨＣＤＲ２、配列番号９７のＨＣＤＲ３、配列番号１０８のＬＣＤＲ１、配列番号１０９のＬＣＤＲ２、配列番号１１０のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３２］
（ｉ）配列番号２３の重鎖及び配列番号３６の軽鎖；
（ｉｉ）配列番号４９の重鎖及び配列番号６２の軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７５の重鎖及び配列番号８８の軽鎖；又は
（ｉｖ）配列番号１０１の重鎖及び配列番号１１４の軽鎖
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸。
［発明３３］
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の産生に好適な組換え宿主細胞であって、前記タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチド、及び任意選択で分泌シグナルをコードする発明３２に記載の核酸を含む、組換え宿主細胞。
［発明３４］
哺乳類細胞株である、発明３３に記載の組換え宿主細胞。
［発明３５］
前記哺乳類細胞株がＣＨＯ細胞株である、発明３４に記載の組換え宿主細胞。
［発明３６］
発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
［発明３７］
それを必要としている個体の免疫関連障害の治療方法であって、発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は発明３６に記載の医薬組成物の治療有効量を前記個体に投与することを含む方法。
［発明３８］
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、発明３７に記載の方法。
［発明３９］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物が別の治療剤と併用して投与される、発明３７又は３８に記載の方法。
［発明４０］
前記治療剤が別の抗体サイトカイングラフト化タンパク質である、発明３９に記載の方法。
［発明４１］
それを必要としている患者のＴｒｅｇ細胞を拡大する方法であって、発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は発明３６に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む方法。
［発明４２］
前記Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＣＤ８ Ｔエフェクター細胞が拡大されない、発明４１に記載の方法。
［発明４３］
前記Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＮＫ細胞が拡大されない、発明４１又は４２に記載の方法。
［発明４４］
免疫関連障害の治療における、
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む免疫関連障害の治療における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用。
［発明４５］
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、発明４４に記載の使用。
［発明４６］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が別の治療剤と併用して投与される、発明４４又は４５に記載の使用。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［発明１］
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２］
前記ＩＬ２分子が重鎖ＣＤＲにグラフト化されている、発明１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３］
前記重鎖ＣＤＲが、相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、及び相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）から選択される、発明２に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明４］
前記ＩＬ２分子がＨＣＤＲ１にグラフト化されている、発明３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明５］
前記ＩＬ２分子が軽鎖ＣＤＲにグラフト化されている、発明１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明６］
前記軽鎖ＣＤＲが、相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、及び相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）から選択される、発明５に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明７］
前記ＩＬ２分子が、低親和性ＩＬ２受容体に対する前記ＩＬ２分子の親和性を低下させる突然変異を含む、発明１～６のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明８］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＴｒｅｇ細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、発明１～７のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明９］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、発明１～８のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１０］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い半減期を有する、発明１～９のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１１］
前記ＩＬ２分子が配列番号４からなる、発明１～１０のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１２］
前記ＩＬ２分子が配列番号６からなる、発明１～１０のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１３］
ＩｇＧクラス抗体重鎖を更に含む、発明１～１２のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１４］
前記ＩｇＧクラス抗体重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択される、発明１３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１５］
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子によって１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％低下する、発明１～１４のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１６］
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子の存在下で１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％保持される、発明１～１５のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１７］
前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ２分子の結合特異性と異なる、発明１～１６のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１８］
前記ＣＤＲの結合特異性が非ヒト抗原に対するものである、発明１～１７のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１９］
前記非ヒト抗原がウイルスである、発明１８に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２０］
前記ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、発明１９に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２１］
前記ＲＳＶが、ＲＳＶサブグループＡ及びＲＳＶサブグループＢから選択される、発明２０に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２２］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質の前記抗体足場部分がヒト化又はヒトである、発明１～２１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２３］
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号８２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８３のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｉｖ）（ａ）配列番号９５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号１０８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０９のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１１０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２４］
（ｉ）配列番号２０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号７２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；又は
（ｉｖ）配列番号９８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２５］
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域を更に含む、発明１～２４のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２６］
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、発明２５に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２７］
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、発明２６に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２８］
配列番号１７のＨＣＤＲ１、配列番号１８のＨＣＤＲ２、配列番号１９のＨＣＤＲ３、配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号３２のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２９］
配列番号４３のＨＣＤＲ１、配列番号４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５のＨＣＤＲ３、配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号５８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３０］
配列番号６９のＨＣＤＲ１、配列番号７０のＨＣＤＲ２、配列番号７１のＨＣＤＲ３、配列番号８２のＬＣＤＲ１、配列番号８３のＬＣＤＲ２、配列番号８４のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３１］
配列番号９５のＨＣＤＲ１、配列番号９６のＨＣＤＲ２、配列番号９７のＨＣＤＲ３、配列番号１０８のＬＣＤＲ１、配列番号１０９のＬＣＤＲ２、配列番号１１０のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３２］
（ｉ）配列番号２３の重鎖及び配列番号３６の軽鎖；
（ｉｉ）配列番号４９の重鎖及び配列番号６２の軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７５の重鎖及び配列番号８８の軽鎖；又は
（ｉｖ）配列番号１０１の重鎖及び配列番号１１４の軽鎖
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸。
［発明３３］
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の産生に好適な組換え宿主細胞であって、前記タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチド、及び任意選択で分泌シグナルをコードする発明３２に記載の核酸を含む、組換え宿主細胞。
［発明３４］
哺乳類細胞株である、発明３３に記載の組換え宿主細胞。
［発明３５］
前記哺乳類細胞株がＣＨＯ細胞株である、発明３４に記載の組換え宿主細胞。
［発明３６］
発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
［発明３７］
それを必要としている個体の免疫関連障害の治療方法であって、発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は発明３６に記載の医薬組成物の治療有効量を前記個体に投与することを含む方法。
［発明３８］
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、発明３７に記載の方法。
［発明３９］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物が別の治療剤と併用して投与される、発明３７又は３８に記載の方法。
［発明４０］
前記治療剤が別の抗体サイトカイングラフト化タンパク質である、発明３９に記載の方法。
［発明４１］
それを必要としている患者のＴｒｅｇ細胞を拡大する方法であって、発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は発明３６に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む方法。
［発明４２］
前記Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＣＤ８ Ｔエフェクター細胞が拡大されない、発明４１に記載の方法。
［発明４３］
前記Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＮＫ細胞が拡大されない、発明４１又は４２に記載の方法。
［発明４４］
免疫関連障害の治療における、
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む免疫関連障害の治療における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用。
［発明４５］
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、発明４４に記載の使用。
［発明４６］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が別の治療剤と併用して投与される、発明４４又は４５に記載の使用。