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特開2022-140710フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022140710

(43)【公開日】2022-09-27

(54)【発明の名称】フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物

(51)【国際特許分類】

C07D 491/22 20060101AFI20220916BHJP

A61K 31/475 20060101ALI20220916BHJP

A61P 37/02 20060101ALI20220916BHJP

A61K 36/24 20060101ALI20220916BHJP

【ＦＩ】

C07D491/22 CSP

A61K31/475

A61P37/02

A61K36/24

【審査請求】有

【請求項の数】10

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022039550

(22)【出願日】2022-03-14

(31)【優先権主張番号】202110270901.2

(32)【優先日】2021-03-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(71)【出願人】

【識別番号】510029841

【氏名又は名称】中国科学院昆明▲植▼物研究所

【氏名又は名称原語表記】ＫＵＮＭＩＮＧＩＮＳＴＩＴＵＴＥＯＦＢＯＴＡＮＹ，ＣＨＩＮＥＳＥＡＣＡＤＥＭＹＯＦＳＣＩＥＮＣＥＳ

【住所又は居所原語表記】１３２＃ＬａｎｈｅｉＲｏａｄ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ６５０２０１Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110001896

【氏名又は名称】弁理士法人朝日奈特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】蔡祥海

(72)【発明者】

【氏名】鐘桂生

(72)【発明者】

【氏名】趙思蒙

(72)【発明者】

【氏名】保梅芬

(72)【発明者】

【氏名】郁陽

【テーマコード（参考）】

4C050

4C086

4C088

【Ｆターム（参考）】

4C050AA04

4C050AA08

4C050BB04

4C050CC04

4C050DD01

4C050EE04

4C050FF02

4C050FF03

4C050GG03

4C050HH01

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB22

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB07

4C088AB31

4C088AC01

4C088BA08

4C088CA03

4C088NA14

4C088ZB07

(57)【要約】（修正有）

【課題】フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩ならびに医薬組成物を提供する。
【解決手段】下式に示す化合物又はその塩。

（Ｒ_１、Ｒ_１’、Ｒ_３、Ｒ_３’：Ｈ、ＯＨなど。ｎ：０－４。Ｒ_２、Ｒ_２’、Ｒ_２’’：Ｈなど。Ｒ_４：Ｈ、ＯＨ。Ｒ_５：＝Ｏなど。Ａ－Ｂ：ＣＨ_２－ＣＨ_２など。）
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩であって、式Ｉに示す構造を有し、

【化1】

ここで、前記Ｒ₁とＲ₁’は独立して水素、ヒドロキシル、またはＣ_1-6アルコキシであり、前記ｎは０～４の正の整数であり、
前記Ｒ₂、Ｒ₂’およびＲ₂''は独立して水素またはＣ_1-6アルキルであり、前記Ｒ₃およびＲ₃’は独立して水素、ヒドロキシルまたは＝Ｏであり、
Ｒ₄は水素またはヒドロキシル、Ｒ₅は置換基なしまたは＝Ｏであり、
前記Ａ－－Ｂは－ＣＨ₂－ＣＨ₂－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－、－ＣＨ₂－ＣＨＯＨ－又は

であり、
前記その薬学的に許容される塩は、Ｒ₂’およびＲ₂''の位置で置換された有機または無機の塩であることを特徴とするフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

前記Ａ－－Ｂが

である場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－１～式Ｉ－４に示される構造を有し、

【化2】

前記式Ｉ－１では、Ｒ₁はＨ、Ｒ₃’はＨ、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₃’はＨ、またはＲ₁は水素、Ｒ₃’は＝Ｏであり、

【化3】

前記式Ｉ－２では、Ｒ₁はヒドロキシ、またはＲ₁はメトキシであり、

【化4】

前記式Ｉ－３では、Ｒ₁は水素、Ｒ₅は置換基なし、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₅は置換基なし、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₅は＝Ｏであり、

【化5】

前記式Ｉ－４では、Ｒ₁はＯＨ、Ｒ₁'はＨ（化合物５と表記）、またはＲ₁はＨ、Ｒ₁'はＯＨ（化合物６と表記）、またはＲ₁はＯＨ、Ｒ₁'はメトキシ（化合物７と表記）であることを特徴とする請求項１に記載のフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ₂－ＣＨＯＨ－である場合、前記－ＣＨ₂－ＣＨＯＨ－のヒドロキシル基はＢ位にあり、かつ前記ヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－５に示される構造を有し、

【化6】

前記式Ｉ－５では、Ｒ₃’は＝Ｏであり、
前記Ａ－－Ｂが－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－である場合、前記－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－のＡ位にあるヒドロキシル基はα－ＯＨ、Ｂ位にあるヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－５に示される構造を有し、

【化7】

前記式Ｉ－５では、Ｒ₃’は水素であることを特徴とする請求項１に記載のフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ＝ＣＨ－である場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－６～式Ｉ－１１に示される構造を有し、

【化8】

前記式Ｉ－６では、Ｒ₁はＯＨ、Ｒ₂はＨ、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₂はＨ、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₂はメチルであり、

【化9】

前記式Ｉ－７では、Ｒ₁’はＨ、Ｒ₃’はＨ、またはＲ₁’はＯＨ、Ｒ₃’はＨ、またはＲ₁’はＨ、Ｒ₃’は－ＯＡｃであり、

【化10】

前記式Ｉ－８では、Ｒ₃はＨ、Ｒ₃’は＝Ｏ、Ｒ₄はＨ、またはＲ₃はＨ、Ｒ₃’は＝Ｏ、Ｒ₄はヒドロキシルまたはＲ₃は＝Ｏ、Ｒ₃’はＨ、Ｒ₄は水素であり、

【化11】

前記式Ｉ－９では、Ｒ₁はＨ、Ｒ₁₁はＨ、Ｒ₃’は水素、またはＲ₁はＨ、Ｒ₁₁はヒドロキシル、Ｒ₃’は水素、またはＲ₁はＨ、Ｒ₁₁はメトキシ、Ｒ₃’は水素、または、Ｒ₁はヒドロキシル、Ｒ₁₁は水素、Ｒ₃’は水素、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₁₁は水素、Ｒ₃’は水素、またはＲ₁はヒドロキシル、Ｒ₁₁はメトキシ、Ｒ₃’は＝Ｏであることを特徴とする請求項１に記載のフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

前記無機酸塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩またはリン酸塩であることを特徴とする請求項１に記載のフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

前記有機酸塩は、酒石酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩またはシュウ酸塩であることを特徴とする請求項１に記載のフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

エルウァタミア属植物またはＭｅｌｏｄｉｎｕｓｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ属植物に対して、順次浸出、抽出、勾配溶離を行い、前記フランアスピドスペルミン二量体を得るステップを含むことを特徴とする請求項１～４のいずれか一項に記載のフランアスピドスペルミン二量体。

【請求項8】

免疫疾患の治療のための医薬品の製造における、請求項１～６のいずれか一項に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の適用。

【請求項9】

医薬組成物であって、請求項１～４のいずれか一項に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。

【請求項10】

前記医薬組成物中の前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の質量パーセントは、１０％以上であることを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医薬の技術分野、特にフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

免疫不全や免疫欠乏によって引き起こされる腫瘍、エイズ、又はその他の病原性微生物による感染症などの病気は世界的な問題になり、この原因で中国では毎年数百万人の病人が亡くなる。化学療法、抗ウイルス薬、抗生物質などの現在臨床的に使用されている薬には特定の治療効果があり、薬は病変に直接作用することができるが、その高い毒性と強い薬剤耐性のために、患者に大きな肉体的苦痛と精神的圧力をもたらす。これらの病気のほとんどは、免疫力の低下または免疫系の欠陥の原因で、体の保護バリアの崩壊につながる。体の免疫力を向上させ維持することで、これらの病気を大幅に治療および予防することができ、これは、体の自然な耐病性の本能でもある。免疫細胞は体の免疫系の主要な武器であり、Ｔリンパ球は免疫細胞の主成分であり、その主な機能は外来の侵入者を貪食することであるため、体内のＴリンパ球の割合を増やし、その機能を強化することが上記の免疫疾患の治療と予防のキーポイントである。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

本発明は、免疫応答を活性化し、Ｔリンパ球の割合を増加させることによりその機能を強化できるフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩、及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0004】

上記発明の目的を達成するために、本発明は以下の技術解決手段を提供する。

【0005】

本発明は、式Ｉに示される構造を有するフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【化1】

【0006】

であり、
前記その薬学的に許容される塩は、Ｒ₂’およびＲ₂''の位置で置換された有機または無機の塩である。

【0007】

好ましくは、前記Ａ－－Ｂが

である場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－１～式Ｉ－４に示される構造を有し、

【化2】

前記式Ｉ－１では、Ｒ₁はＨ、Ｒ₃’はＨ、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₃’はＨ、またはＲ₁は水素、Ｒ₃’は＝Ｏであり、

【化3】

前記式Ｉ－２では、Ｒ₁はヒドロキシ、またはＲ₁はメトキシであり、

【化4】

前記式Ｉ－３では、Ｒ₁は水素、Ｒ₅は置換基なし、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₅は置換基なし、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₅は＝Ｏであり、

【化5】

前記式Ｉ－４では、Ｒ₁はＯＨ、Ｒ₁’はＨ（化合物５と表記）、またはＲ₁はＨ、Ｒ₁’はヒドロキシル（化合物６と表記）、またはＲ₁はＯＨ、Ｒ₁’はメトキシ（化合物７と表記）である。

【0008】

好ましくは、前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ₂－ＣＨＯＨ－である場合、前記－ＣＨ₂－ＣＨＯＨ－のヒドロキシル基はＢ位にあり、かつ前記ヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－５に示される構造を有し、

【化6】

【化7】

前記式Ｉ－５では、Ｒ₃’は水素である。

【0009】

好ましくは、前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ＝ＣＨ－である場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－６～式Ｉ－９に示される構造を有し、

【化8】

前記式Ｉ－６では、Ｒ₁はＯＨ、Ｒ₂はＨ、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₂はＨ、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₂はメチルであり、

【化9】

前記式Ｉ－７では、Ｒ₁’はＨ、Ｒ₃’はＨ、またはＲ₁’はＯＨ、Ｒ₃’はＨ、またはＲ₁’はＨ、Ｒ₃’は－ＯＡｃであり、

【化10】

【化11】

【0010】

好ましくは、前記無機酸塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩またはリン酸塩である。

【0011】

好ましくは、前記有機酸塩は、酒石酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩またはシュウ酸塩である。

【0012】

本発明はまた、上記の技術的解決手段に記載されたフランアスピドスペルミン二量体の製造方法を提供し、
エルウァタミア属植物またはＭｅｌｏｄｉｎｕｓｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ属植物に対して、順次浸出、抽出、勾配溶離を行い、前記フランアスピドスペルミン二量体を得るステップを含む。

【0013】

本発明はまた、免疫疾患を治療するための医薬品を製造する際の上記の技術的解決手段による前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の適用を提供する。

【0014】

本発明はまた、上記技術的解決手段に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0015】

好ましくは、前記医薬組成物中の前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の質量パーセントは、１０％以上である。

【0016】

本発明は、式Ｉに示される構造を有するフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩を提供し、式Ｉに示す構造を有し、ここで、前記Ｒ₁とＲ₁’は独立して水素、ヒドロキシル、またはＣ_1-6アルコキシであり、前記ｎは０～４の正の整数であり、前記Ｒ₂、Ｒ₂’およびＲ₂''は独立して水素またはＣ_1-6アルキルであり、前記Ｒ₃およびＲ₃’は独立して水素、ヒドロキシルまたは＝Ｏであり、Ｒ₄は水素またはヒドロキシル、Ｒ₅は置換基なしまたは＝Ｏであり、前記Ａ－－Ｂは－ＣＨ₂－ＣＨ₂－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－、－ＣＨ₂－ＣＨＯＨ－又は

であり、前記その薬学的に許容される塩は、Ｒ₂’およびＲ₂''の位置で置換された有機または無機の塩である。本発明に記載の式Ｉは、フラン環を介して、２つのアスピドスペルミンモノマーが接続されて形成される二量体であり、フラン環が開いているが不活性であるアスピドスペルミン二量体ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔｉｎｅｓＡ－Ｌと比較して、フラン環は活性重要な基であることを示している。また、フラン環アスピドスペルミン－コリナンテイン、フラン環アスピドスペルミン－イボガビスインドールは、どちらもマクロファージＭ２極性化の活性を阻害せず、これは、アスピドスペルミンモノマーも活性の必須単位であることを裏付け、つまり、アスピドスペルミンモノマーとフラン環の剛性接続方式は、活性の基本的な骨格である。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】図１は、ＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、およびＨＭＤの活性化免疫テストデータ図である。

【図2】図２は、化合物１～３および５～７の活性化免疫テストデータ図である。

【図3】図３は、化合物１体内の活性化免疫活性データ図である。

【図4】図４は、化合物１がＣＤ８⁺Ｔ細胞機能を改善および強化することを示すデータ図である。

【図5】図５は、ＣＰＬＤがＣＤ８⁺Ｔ細胞機能を改善および強化することを示すデータ図である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

本発明は、式Ｉに示される構造を有するフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【化12】

であり、
前記その薬学的に許容される塩は、Ｒ₂’およびＲ₂''の位置で置換された有機または無機の塩である。

【0019】

本発明において、前記Ａ－－Ｂが

である場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、好ましくは、式Ｉ－１～式Ｉ－４に示される構造を有し、

【化13】

前記式Ｉ－１では、Ｒ₁はＨ、Ｒ₃’はＨ（化合物１と表記）、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₃’はＨ（ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＡ又はＴＢＹＡと表記）、またはＲ₁は水素、Ｒ₃’は＝Ｏ（化合物２と表記）であり、

【化14】

前記式Ｉ－２では、Ｒ₁はヒドロキシ（ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＣと表記）、またはＲ₁はメトキシ（１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅと表記）であり、

【化15】

前記式Ｉ－３では、Ｒ₁は水素、Ｒ₅は置換基なし（化合物３と表記）、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₅は置換基なし（ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅ（ＣＰＬＬ）と表記）、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₅は＝Ｏ（化合物４と表記）であり、

【化16】

前記式Ｉ－４では、Ｒ₁はＯＨ、Ｒ₁'はＨ（化合物５と表記）、またはＲ₁はＨ、Ｒ₁'はＯＨ（化合物６と表記）、またはＲ₁はＯＨ、Ｒ₁'はメトキシ（化合物７と表記）である。

【0020】

本発明において、前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ₂－ＣＨＯＨ－の場合、前記－ＣＨ₂－ＣＨＯＨ－のヒドロキシル基はＢ位にあり、かつ前記ヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－５に示される構造を有し、

【化17】

前記式Ｉ－５では、Ｒ₃’は＝Ｏ（化合物８と表記）であり、
前記Ａ－－Ｂが－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－の場合、前記－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－のＡ位にあるヒドロキシル基はα－ＯＨ、Ｂ位にあるヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、好ましくは、式Ｉ－５に示される構造を有し、

【化18】

前記式Ｉ－５では、Ｒ₃’は水素（ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｉｎｅと表記）である。

【0021】

本発明において、前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ＝ＣＨ－の場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、好ましくは、式Ｉ－６～式Ｉ－９に示される構造を有し、

【化19】

前記式Ｉ－６では、Ｒ₁はＯＨ、Ｒ₂はＨ（ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ（ＣＰＬＤ）と表記）、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₂はＨ（１０－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅと表記）、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₂はメチル（１０，１５－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ）であり、

【化20】

前記式Ｉ－７では、Ｒ₁’はＨ、Ｒ₃’はＨ（ｍｅｌｏｄｉｎｅｉｎｅＫ（ＭＤＫ）と表記）、またはＲ₁’はＯＨ、Ｒ₃’はＨ（１９’－ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫ（ＨＭＤＫ）と表記）、またはＲ₁’はＨ、Ｒ₃’は－ＯＡｃ（３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫと表記）であり、

【化21】

前記式Ｉ－８では、Ｒ₃はＨ、Ｒ₃’は＝Ｏ、Ｒ₄はＨ（化合物９と表記）、またはＲ₃はＨ、Ｒ₃’は＝Ｏ、Ｒ₄はヒドロキシル（化合物１０と表記）、またはＲ₃は＝Ｏ、Ｒ₃’はＨ、Ｒ₄は水素（化合物１１と表記）であり、

【化22】

前記式Ｉ－９では、Ｒ₁はＨ、Ｒ₁₁はＨ、Ｒ₃’は水素（ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＢと表記）、またはＲ₁はＨ、Ｒ₁₁はヒドロキシル、Ｒ₃’は水素（化合物１２と表記）、またはＲ₁はＨ、Ｒ₁₁はメトキシ、Ｒ₃’は水素（化合物１３と表記）、または、Ｒ₁はヒドロキシル、Ｒ₁₁は水素、Ｒ₃’は水素（化合物１４と表記）、またはＲ₁はメトキシ、Ｒ₁₁は水素、Ｒ₃’は水素（化合物１５と表記）、またはＲ₁はヒドロキシル、Ｒ₁₁はメトキシ、Ｒ₃’は＝Ｏ（化合物１６と表記）である。

【0022】

本発明において、前記無機酸塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩またはリン酸塩であり、前記有機酸塩は、酒石酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩またはシュウ酸塩である。

【0023】

本発明はまた、上記の技術的解決手段に記載されたフランアスピドスペルミン二量体の製造方法を提供し、エルウァタミア属植物またはＭｅｌｏｄｉｎｕｓｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ属植物に対して、順次浸出、抽出、勾配溶離を行い、前記フランアスピドスペルミン二量体を得るステップを含む。

【0024】

本発明において、前記エルウァタミア属植物は、好ましくは、Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｂｏｖｉｎａ、Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｄｉｖａｒｉｃａｔａ、Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｃｏｒｙｍｂｏｓa、ＴａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｂｕｆａｌｉｎａＬｏｕｒ、およびＴａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｐａｎｄａｃａｑｕｉであり、前記Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ属植物は、好ましくはＭｅｌｏｄｉｎｕｓｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ又はＭｅｌｏｄｉｎｕｓｔｅｎｕｉｃａｕｄａｔｕｓである。

【0025】

本発明において、前記浸出は、好ましくは有機溶剤中で実施され、前記有機溶剤は、好ましくはアルコール系溶剤、ケトン系溶剤、エステル系溶剤、エーテル系溶剤またはハロゲン化アルキル系溶剤、より好ましくはＣ_1-6アルコール、Ｃ_3-6ケトン、Ｃ_3-6エステル、Ｃ_2-6エーテルまたはＣ_1-6ハロゲン化アルキルであり、前記Ｃ_1-6アルコールは、好ましくは、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、ｎ－ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、ｎ－アミルアルコール、イソアミルアルコール、シクロペンタノール、ｎ－ヘキサノールまたはシクロヘキサノールであり、前記Ｃ_3-6ケトンは、好ましくはアセトン、メチルエチルケトンまたはメチルイソブチルケトンであり、前記Ｃ_3-6エステルは、好ましくはギ酸エチルまたは酢酸エチルプロピオン酸エチルであり、前記Ｃ_2-6エーテルは、好ましくはメチルエーテルまたはエーテルであり、前記Ｃ_1-6ハロゲン化アルキルには、好ましくはジクロロメタン、クロロホルム、またはジクロロエタンが含まれる。

【0026】

前記浸出後、本発明はさらに、好ましくは得られた浸出液を減圧濃縮して総抽出物を得ることを含む。

【0027】

本発明において、前記抽出が採用する抽出剤は、好ましくは酢酸エチルである。そのプロセスは、好ましくは得られた総抽出物のｐＨ値を１．０～４．５に調整した後、酢酸エチルで抽出した後、得られた酸性水層のｐＨ値を７．０～１１．０に調整し、酢酸エチルを用いて２回目の抽出を行うことである。

【0028】

本発明において、前記勾配溶離は、好ましくはシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて実施し、使用する溶離機は、好ましくはクロロホルム－メタノール系（１：０→０：１、ｖ／ｖ）である。

【0029】

本発明において、式Ｉ－１～式Ｉ－９で表される構造の化合物の抽出プロセスは具体的には以下のとおりである。

【0030】

７５ｋｇのＴａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｂｏｖｉｎａ（Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｂｏｖｉｎａ）の乾燥した葉を粉砕した後にメタノールで３回（３×２０Ｌ）浸出し、得られた抽出液を減圧濃縮した後、ｐＨ値を２～３に調整し、酢酸エチルで２回抽出し、抽出して得られた酸性水層のｐＨ値を７～９に調整した後、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層を合わせて濃縮した後、総アルカロイド（８７５ｇ）を得た。総アルカロイドをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－メタノール（１：０～１：１、ｖ／ｖ）で溶離し、合わせて画分した後、成分Ｉ－Ｘを得た。２４６ｇの第ＩＩＩ成分を、まずＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムによる勾配溶離（３０～１００％メタノール）により、小さな１２段階（ＩＩＩ－１～ＩＩＩ－１２）に分割した。ＩＩＩ－１０（４５ｇ）をＲＰ－１中圧クロマトグラフィーカラムで５０～９０％メタノールを用いて溶離し、７つの小さな部分（ＩＩＩ－１０－１～ＩＩＩ－１０－７）を得て、その中で、ＩＩＩ－１０－７をゲル（メタノール）で２回精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（６０～７５％アセトニトリル）で精製して化合物６を得た。ＩＩＩ－１１（３７ｇ）を続いてＲＰ－１８－中圧クロマトグラフィーカラムにより５０～１００％メタノール溶液で勾配溶離し、８つの小さい部分（ＩＩＩ－１１－１～ＩＩＩ－１０－８）を得て、その中で、ＩＩＩ－１１－５をゲル（メタノール）で精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（７０～８５％アセトニトリル）で精製して化合物１５を得て、ＩＩＩ－１１－８をゲル（メタノール）で精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６０～７５％アセトニトリル）で精製して、化合物５を得た。ＩＩＩ－１２（２０ｇ）を続いてＲＰ－１８－中圧クロマトグラフィーカラムから勾配溶離（６０～１００％メタノール）で５つの小さい部分（ＩＩＩ－１２－１～ＩＩＩ－１２－５）を得て、その中で、ＩＩＩ－１２－４をゲル（メタノール）で２回精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）でさらに精製して化合物１６を得た。ＩＩＩ－１２－５をゲル（メタノール）で細分した後、さらにＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）で精製して、１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。第ＩＶ成分（７９ｇ）を最初にＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムにより、メタノール－水溶液勾配溶離（１５～８５％）で７段階（ＩＶ－１～ＩＶ－７）に分割した。ＩＶ－５（１６ｇ）を続いてＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムによりメタノール－水溶液で勾配溶離（３０～８０％）し、小さな５つの部分（ＩＶ－５－１～ＩＶ－５－５）を得て、その中で、ＩＶ－５－３をゲル（メタノール）で精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）でさらに精製してｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｉｎｅを得て、ＩＶ－５－４をゲル（メタノール）で精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）でさらに精製して化合物８を得た。

【0031】

Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｄｉｖａｒｉｃａｔａ（Ｔ．ｄｉｖａｒｉｃａｔａ）の乾燥した葉（７．５ｋｇ）を粉砕し、常温でメタノールで３回浸出させ、減圧下で濃縮することによって総抽出物を得た。総抽出物をｐＨ２～３に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酸性水層をｐＨ７～９に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、総アルカロイド（６８ｇ）を得て、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－メタノール系（１：０－０：１、ｖ／ｖ）で溶離し、合わせた後に化合物の５つの成分（Ｆｒ．Ｉ－Ｖ）を得た。Ｆｒ．ＩＩ（２５ｇ）を中圧カラムクロマトグラフィーで段階に分画し、メタノール－水系（１０～１００％）で勾配溶離し、５段階（Ｆｒ．ＩＩ－１～５）に分画した。Ｆｒ．ＩＩ－２（２ｇ）をさらに中圧で段階に分画し、メタノール－水系（３０～５５％）で勾配溶離し、５段階（Ｆｒ．ＩＩ－２－１～５）に分画し、Ｆｒ．ＩＩ－２－４（０．５ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０ゲルカラムで処理し、ＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物３を得た。Ｆｒ．ＩＩ－３（８．５ｇ）は白色の柱状結晶を析出させ、母液（５ｇ）を中圧で分離し、１０～８０％のメタノールで４段階（Ｆｒ．ＩＩ－３－１～４）に勾配溶離した。Ｆｒ．ＩＩ－３－４をＨＰＬＣ（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）で精製して、化合物４を得た。Ｆｒ．ＩＩ－４（３．５ｇ）を中圧で段階に分画し、メタノール－水系（４５～６５％）で勾配溶離し、７段階（Ｆｒ．ＩＩ－４－１～７）に分画した。Ｆｒ．ＩＩ－４－５（２．０ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０ゲルカラムで処理して４段階を得て、そのうち、Ｆｒ．ＩＩ－４－５－３をＨＰＬＣ（６５～８０％アセトニトリル）で精製して化合物７を得て、Ｆｒ．ＩＩ－４－５－４をＨＰＬＣ（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）で精製して、化合物１２を得て、Ｆｒ．ＩＩ－５（０．７ｇ）を中圧で段階に分画し、４５～６５％のメタノールで勾配溶離して８段階（Ｆｒ．ＩＩ－５－１～８）に分画し、Ｆｒ．ＩＩ－５－８（０．１ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０ゲルカラムで処理し、ＨＰＬＣ（６５～７５％アセトニトリル）で精製して化合物１３を得た。

【0032】

Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｃｏｒｙｍｂｏｓａの乾燥した茎と葉（１５ｋｇ）を粉砕した後にメタノールで液を抽出して、減圧下で総抽出物を得た。総抽出物を０．５％ＨＣｌ溶液で完全に溶解し、ｐＨを２～３に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し酸性水部分を１０％アンモニア水でｐＨ９～１０に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層を合わせて濃縮し、総アルカロイド（６１．５ｇ）を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－アセトン勾配溶離（１：０～２：１）により、同じ画分を合わせて８つの部分を得た（Ｆｒ．Ｉ－ＶＩＩＩ）。ＩＶ（１１．３ｇ）をＣ１８中圧（ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ：４０％、５０％、６０％、７０％、８０％）で調製して、ＩＶ－１～ＩＶ－５という５つの部分を得た。ＩＶ－４（１．２ｇ）をＣ１８中圧調製（ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ、４０～６５％）、および高圧調製（Ｃ１８カラム）ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ（６０～７０％）勾配溶離により、ＴａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＣを得た。Ｆｒ．ＶＩＩＩ（２０．３ｇ）を中圧（メタノール水：１５～６５％）で段階に分画し、ＶＩＩＩ－ＩとＶＩＩＩ－ＩＩの２つの成分を得た。ＶＩＩＩ－Ｉ（８．２ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－アセトン５：１～０：１）にかけて、５つの成分を得た。ＶＩＩＩ－Ｉ－２（１．５ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール２０：１～９：１）にかけて、ＶＩＩＩ－Ｉ－２－１を得て、次にＨＰＬＣ（メタノール－水：４０～５５％）によりさらに精製した後、ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ及びｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。ＶＩＩＩ－Ｉ－５（０．４２ｇ）をＨＰＬＣ（メタノール－水：６０～７５％）で精製して、１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。ＶＩＩＩ－ＩＩ（４．７ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール５：１～０：１）により、３つの成分ＶＩＩＩ－ＩＩ－１～ＶＩＩＩ－ＩＩ－３を得た。ＶＩＩＩ－ＩＩ－１（０．９ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール：１０：１）により、ＶＩＩＩ－ＩＩ－１－１を得て、次にＨＰＬＣ（メタノール－水：７０～８５％）で精製して、ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＡ及びｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＢを得た。

【0033】

Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ（Ｍ．ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）の乾燥した茎（２８ｋｇ）を粉砕し、メタノールで４回（４×７５Ｌ）抽出し、抽出液を減圧下で回収して総抽出物を得た。総抽出物をｐＨ２～３に調整した後、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酸性水部をｐＨ７～９に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、得られた全アルカロイド（２５０ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－アセトン勾配溶離して３つの段階（Ｆｒ．Ｉ－ＩＩＩ）を得た。Ｆｒ．ＩＩ（３．０ｇ）を中圧（３０～８０％メタノール）で分離し、９つの成分ＩＩ－１～ＩＩ－９を得た。ＩＩ－２を中圧（６０～８０％メタノール）で分離し、化合物ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫを得た。ＩＩ－９（１．１ｇ）を中圧で段階に分割して５つの部分ＩＩ－９－１～ＩＩ－９－５を得て、ＩＩ－９－１をＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０デキストランゲル（１００％メタノール）により２つの部分ＩＩ－９－１－１～ＩＩ－９－１－２に分割した。ＩＩ－９－１－１をＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物１０を得て、ＩＩ－９－１－２をそれぞれＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０デキストランゲル（メタノール）を介して、次にＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物２を得て、ＩＩ－９－２をＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０デキストランゲル（メタノール）で溶離した後、ＨＰＬＣ（４５～６０％アセトニトリル）で精製して化合物９を得て、ＩＩ－９－３をＨＰＬＣ（５５～７０％アセトニトリル）で精製して化合物１１を得た。

【0034】

Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ（Ｍ．ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）の乾燥した茎と葉（３．０ｋｇ）を粉砕した後に毎回２４時間に９５％エタノールに３回浸し、抽出液を合わせ、溶剤を減圧下で蒸留除去し、粗抽出物を水に懸濁させた。１％塩酸水溶液を加えてｐＨを２～３に調整し且つ撹拌し、ＥｔＯＡｃで抽出し、水層のｐＨを１０％アンモニア水溶液でｐＨ９～１０に調整し、次にＥｔＯＡｃで抽出して、９．８ｇの総アルカロイド抽出物を得た。サンプルを１０ｇシリカゲルと混合し、１００ｇシリカゲルカラムクロマトグラフィー、石油エーテル－アセトン（４０：１～２：１）で勾配溶離して、ＩＶ個成分を得た。第ＩＩＩ成分（３．２ｇ）をＲＰ－１８逆相カラムアセトニトリル－水５～４０％で溶離してＩＩＩ－１～ＩＩＩ－３を得て、そのうちＩＩＩ－３をＨＰＬＣで精製してｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫを得て、第ＩＶ成分（０．８ｇ）をＨＰＬＣ（７０～８０％メタノール）で精製して化合物３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫ及び１９’－ｈｙｄｒｏｘｙ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫを得た。

【0035】

Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓｔｅｎｕｉｃａｕｄａｔｕｓの乾燥した茎と葉（１４ｋｇ）を上記と同じ方法で処理して、総アルカロイド抽出物１７ｇを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－メタノール勾配溶離して、類似成分を組み合わせて５つの部分を得た。４番目の画分（２ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－メタノール（１５：１～８：１）で溶離し、次にシリカゲル大気圧および中圧カラムクロマトグラフィーを実施し、石油エーテル／アセトン（４：１）、石油エーテル／酢酸エチル（３：１）、クロマトグラフィー／アセトン（９：１）、メタノール／水（６０～８０％）等の溶離システムで繰り返し精製して、化合物ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫを得た。

【0036】

得られたｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫ、クロロホルム、過塩素酸、メタクロロ過安息香酸を混合し、０度の条件下で酸化反応を起こして化合物１を得て、反応式は

に示し、
得られたｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫを、まずメタクロロ過安息香酸、クロロホルム、次に無水トリフルオロ酢酸、アセトンと混合し、０度では、酸化および求核反応が起こり、３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫが得られ、反応式は

に示し、
ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ、ヨードメタン、およびアセトニトリルを混合して、室温で置換反応が起こり、１０－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅが得られ、反応式は

である。
ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ、ヨードメタン、およびアセトニトリルを混合して、５０度で置換反応が起こり、１０，１５－Ｏ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅが得られ、反応式は

である。

【0037】

【0038】

本発明はまた、医薬組成物を提供し、上記技術的解決手段に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む。

【0039】

本発明において、前記医薬組成物中の前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の質量パーセントは、好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上、最も好ましくは５０％以上である。本発明は、前記薬学的に許容される担体の種類に特別な制限はなく、当業者に周知の種類を使用すればよい。

【0040】

本発明は、前記医薬組成物の投与剤形に特別な制限はなく、当業者に周知の投与剤形を使用すればよい。

【0041】

本発明において、前記医薬組成物の投与経路は、好ましくは経口投与または非経口投与である。１日投与量は、好ましくは１～１０００ｍｇである。前記投与経路が経口投与である場合、前記医薬組成物はまた、好ましくは、医薬補剤を含み、前記医薬補剤は、好ましくは賦形剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、芳香剤および界面活性剤のうちの１つまたは複数を含む。前記医薬組成物中の前記医薬補剤の質量パーセント含有量は、好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上、最も好ましくは５０％以上である。前記医薬組成物の投与剤形は、好ましくは、顆粒剤、カプセルまたは錠剤である。前記投与経路が非経口投与である場合、前記医薬組成物の投与剤型は、好ましくは注射液、注射剤または坐剤である。

【0042】

以下に、実施例に関連して、本発明によって提供されるフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩、及びその製造方法と適用、医薬組成物を詳細に説明するが、それらを本発明の保護範囲を制限するものとして解釈することはできない。

【0043】

実施例１
７５ｋｇの薬用Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｂｏｖｉｎａ（Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａｂｏｖｉｎａ）の乾燥した葉を粉砕した後にメタノールで３回（３×２０Ｌ）浸出し、得られた抽出液を減圧濃縮した後、ｐＨ値を２～３に調整し、酢酸エチルで２回抽出し、抽出して得られた酸性水層のｐＨ値を７～９に調整した後、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層を合わせて濃縮した後、総アルカロイド（８７５ｇ）を得た。総アルカロイドをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－メタノール（１：０～１：１、ｖ／ｖ）で溶離し、合わせて画分した後、成分Ｉ－Ｘを得た。２４６ｇの第ＩＩＩ成分を、まずＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムによる勾配溶離（３０～１００％メタノール）により、小さな１２段階（ＩＩＩ－１～ＩＩＩ－１２）に分割した。ＩＩＩ－１０（４５ｇ）をＲＰ－１中圧クロマトグラフィーカラムで５０～９０％メタノールを用いて溶離し、７つの小さな部分（ＩＩＩ－１０－１～ＩＩＩ－１０－７）を得て、その中で、ＩＩＩ－１０－６をゲル（メタノール溶離）で分離した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、７０～８５％アセトニトリル）でさらに精製して、化合物１４を得た。ＩＩＩ－１０－７をゲル（メタノール）で２回精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（６０～７５％アセトニトリル）で精製して化合物６を得た。ＩＩＩ－１１（３７ｇ）を続いてＲＰ－１８－中圧クロマトグラフィーカラムにより５０～１００％メタノール溶液で勾配溶離し、８つの小さい部分（ＩＩＩ－１１－１～ＩＩＩ－１０－８）を得て、その中で、ＩＩＩ－１１－５をゲル（メタノール）で精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（７０～８５％アセトニトリル）で精製して化合物１５を得て、ＩＩＩ－１１－８をゲル（メタノール）で精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６０～７５％アセトニトリル）で精製して、化合物５を得た。ＩＩＩ－１２（２０ｇ）を続いてＲＰ－１８－中圧クロマトグラフィーカラムから勾配溶離（６０～１００％メタノール）で５つの小さい部分（ＩＩＩ－１２－１～ＩＩＩ－１２－５）を得て、その中で、ＩＩＩ－１２－４をゲル（メタノール）で２回精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）でさらに精製して化合物１６を得た。ＩＩＩ－１２－５をゲル（メタノール）で細分した後、さらにＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）で精製して、１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。第ＩＶ成分（７９ｇ）を最初にＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムにより、メタノール－水溶液勾配溶離（１５～８５％）で７段階（ＩＶ－１～ＩＶ－７）に分割した。ＩＶ－５（１６ｇ）を続いてＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムによりメタノール－水溶液で勾配溶離（３０～８０％）し、小さな５つの部分（ＩＶ－５－１～ＩＶ－５－５）を得て、その中で、ＩＶ－５－３をゲル（メタノール）で精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）でさらに精製してｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｉｎｅを得て、ＩＶ－５－４をゲル（メタノール）で精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）でさらに精製して化合物８を得た。

【0044】

【0045】

【0046】

【0047】

【0048】

Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓｔｅｎｕｉｃａｕｄａｔｕｓの乾燥した茎と葉（１４ｋｇ）を上記と同じ方法で処理して、総アルカロイド抽出物１７ｇを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－メタノール勾配溶離して、類似な成分を合わせて５つの部分を得た。４番目の画分（２ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－メタノール（１５：１～８：１）で溶離し、次にシリカゲル大気圧および中圧カラムクロマトグラフィーを実施し、石油エーテル／アセトン（４：１）、石油エーテル／酢酸エチル（３：１）、クロマトグラフィー／アセトン（９：１）、メタノール／水（６０～８０％）等の溶離システムで繰り返し精製して、化合物ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫを得た。

【0049】

に示し、
得られたｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫを、まずメタクロロ過安息香酸、クロロホルム、次に無水トリフルオロ酢酸及びアセトンと混合し、０度では、酸化および求核反応が起こり、３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫが得られ、反応式は

に示す。
ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ、ヨードメタン、およびアセトニトリルを混合して、室温で置換反応が起こり、１０－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅが得られ、反応式は

に示す。
ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ、ヨードメタン、およびアセトニトリルを混合して、５０度で置換反応が起こり、１０，１５－Ｏ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅが得られ、反応式は

に示す。

【0050】

実施例１の抽出によって得られた一連のフランアスピドスペルミン二量体のスペクトルデータは以下のとおりである。

【0051】

化合物１：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２４５、３３０ｎｍ。核磁気¹Ｈ（８００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（２００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩ－ＭＳｍ／ｚ：７１９（［Ｍ＋Ｈ］⁺）、分子式Ｃ₄₂Ｈ₄₆Ｎ₄Ｏ₇。

【0052】

化合物２：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９１、２５４、３２９ｎｍ。核磁気¹Ｈ（８００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（２００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩ－ＭＳｍ／ｚ：７３３（［Ｍ＋Ｈ］⁺）、分子式Ｃ₄₂Ｈ₄₄Ｎ₄Ｏ₈。

【0053】

化合物３：淡黄色の粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：１９６、２５４、３２８ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７８７［Ｍ＋Ｎａ］⁺、分子式はＣ₄₃Ｈ₄₈Ｎ₄Ｏ₉である。

【0054】

化合物４：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２５４、３３２ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：８０９．３４０５［Ｍ－Ｈ］、分子式Ｃ₄₄Ｈ₅₀Ｎ₄Ｏ₁₁。

【0055】

化合物５：黄色粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２４８、３３０ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７６５［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₃Ｈ₄₈Ｎ₄Ｏ₉。

【0056】

化合物６：黄色粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２４８、３３０ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７６５［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₃Ｈ₄₈Ｎ₄Ｏ₉。

【0057】

化合物７：黄色粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：１９６、２５４、３３２ｎｍ、核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ７９５．３６０１［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₄Ｈ₅₀Ｎ₄Ｏ₁₀。

【0058】

化合物８：黄色粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２４０、３２０、３４０ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：８１０［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₄Ｈ₅₀Ｎ₄Ｏ₁₁。

【0059】

化合物９：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９８、２５４、３２８ｎｍ。核磁気¹Ｈ（８００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（２００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７１７［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₂Ｈ₄₄Ｎ₄Ｏ₇。

【0060】

化合物１０：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２５４、３３２ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７３３［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₂Ｈ₄₄Ｎ₄Ｏ₈。

【0061】

化合物１１：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９５、２５４、３２９ｎｍ。核磁気¹Ｈ（８００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（２００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表３および４に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７１７［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₂Ｈ₄₄Ｎ₄Ｏ₇。

【0062】

化合物１２：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：１９６、２４３、３３１ｎｍ。核磁気¹Ｈ（５００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１２５ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表３および４に示し、ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７４９［Ｍ＋Ｈ］⁺。分子式はＣ₄₃Ｈ₄₈Ｎ₄Ｏ₈である。

【0063】

化合物１３：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：１９６、２４２、３２８ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）、データを表３および４に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ７８５．３５２６［Ｍ＋Ｎａ］⁺、分子式はＣ₄₄Ｈ₅₀Ｎ₄Ｏ₈である。

【0064】

化合物１４：黄色粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）（ｍａｘ）：１９８、２５０、３２６ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表３および４に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７４９［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₃Ｈ₄₈Ｎ₄Ｏ₈。

【0065】

化合物１５：黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９８、２５０、３３０ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ｈｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表３および４に示し、質量分析ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７６３［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₄Ｈ₅₀Ｎ₄Ｏ₈。

【0066】

化合物１６：黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９８、２４５、３３５ｎｍ。核磁気１Ｈ（６００ＭＨｚ）および¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表３および４に示し、質量スペクトルＥＳＩＭＳｍ／ｚ：７９３［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₄Ｈ₄₈Ｎ₄Ｏ₁₀。

【0067】

ＴａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＡ：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４２、３３０ｎｍ、核磁気¹ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）δ：７．４０（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ－９）、５．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ－１０）、４．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．８Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７１（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２Ｍｅ’）、３．６９（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２Ｍｅ）、３．６５（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＭｅ）、０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表５に示し、分子式はＣ₄₃Ｈ₄₈Ｎ₄Ｏ₈である。

【0068】

ＴａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＣ：白色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４１、３２８ｎｍ、核磁気¹ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）δ：８．８８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．４２（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５７（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－１０）、５．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－９）、４．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，４．８Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７２（６Ｈ，ｓ，Ｃ’Ｏ２Ｍｅ及びＣＯ₂Ｍｅ）、３．７３（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＭｅ）、０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表５に示す。質量分析ＨＲＥＳＩＭＳｍ／ｚ７６５．３４８０［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₃Ｈ₄₉Ｎ₄Ｏ₉。

【0069】

１０－Ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅ：白色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４８、３２９ｎｍ、核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）δ：８．８８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．４２（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５７（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－１０）、５．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－９）、４．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，４．８Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７２（６Ｈ，ｓ，ＣＯ₂Ｍｅ’及びＣＯ₂Ｍｅ）、３．６５（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＭｅ）、０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。質量分析ＥＳＩ－ＭＳｍ／ｚ７７９．３６２３［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式はＣ₄₄Ｈ₅₀Ｎ₄Ｏ₉である。

【0070】

Ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅ：白色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４３、３３０ｎｍ、核磁気¹ＨＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆，４００ＭＨｚ）：δ ８．７８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、４．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｈ－３）、５．６５（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９）、４．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．７，４．３Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．０９（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１５）、０．７０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，Ｈ－１８）、２．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－２１）、３．７０（３Ｈ，ｓ，１６－ＣＯＯＣＨ₃）、９．３７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．１９（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、３．１６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１４’）、０．７６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、２．６６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－２１’）、３．７１（３Ｈ，ｓ，１６’－ＣＯＯＣＨ₃）、３．７２（３Ｈ，ｓ，１１’－ＯＣＨ₃）、３．８６（３Ｈ，ｓ，１２’－ＯＣＨ₃）。¹³Ｃ（１００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）、データを表５に示す。

【0071】

Ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｉｎｅ黄色の粉末、核磁気¹ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆，）：δ ８．７７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、５．７５（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９）、４．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，３．５Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ－３）、３．８３（３Ｈ，ｓ，１２－ＯＣＨ₃）、３．７２（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＣＨ３）、３．６８（３Ｈ，ｓ，１６－ＣＯＯＣＨ₃）、０．６８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ－１８）、９．２６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．３８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、３．７０（３Ｈ，ｓ，１６’－ＣＯＯＣＨ３）、０．８２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ－１８’）。¹³Ｃ（１２５ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表５に示す。

【0072】

Ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４２、３３０ｎｍ、核磁気¹ＨＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆，４００ＭＨｚ）：δ：９．３７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、８．７７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、７．４０（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５９（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．６２（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９）、４．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．８６（３Ｈ，ｓ，１２’－ＯＣＨ₃）、３．７２（３Ｈ，ｓ，１１’－ＯＣＨ₃）、３．７１（３Ｈ，ｓ，１６’－ＣＯＯＣＨ３）、３．７０（３Ｈ，ｓ，１６－ＣＯＯＣＨ₃）、０．７０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８）、０．６９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８’）。¹³Ｃ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）データを表５に示す。

【0073】

１０－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４２、３３０ｎｍ。核磁気¹Ｈ（４００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）δ：９．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、６．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－９）、６．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－９）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１１）、７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１２）、５．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、４．８３（１Ｈ，ｓ，Ｈ－３）、７．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．８７（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、３．７７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ₃）、３．６６（３Ｈ，ｓ，Ｃ’ＯＯＣ’Ｈ₃）、２．０８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＣＯＣＨ₃）、０．８４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８）。質量分析ＨＲＥＳＩＭＳｍ／ｚ：８４９．４０７５［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₈Ｈ₅₆Ｎ₄Ｏ₁₀。

【0074】

１０，１５－Ｏ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４２、３３０ｎｍ。質量分析ＨＲＥＳＩＭＳｍ／ｚ：８６３．４２３１［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₉Ｈ₅₈Ｎ₄Ｏ₁₀。

【0075】

ＭｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫ：白色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２４２、３３０ｎｍ。核磁気¹ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）δ：９．２７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１１）、６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１２）、６．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、６．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１０）、６．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－９）、５．８９（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、５．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７２（３Ｈ，ｓ，Ｃ’Ｏ₂Ｍｅ’）、３．７１（３Ｈ，ｓ，ＣＯ₂Ｍｅ）、０．８２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表６に示す。質量分析ＥＳＩ－ＭＳｍ／ｚ７０３［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₂Ｈ₄₆Ｎ₄Ｏ₆。

【0076】

１９’－Ｈｙｄｒｏｘｙ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫ：白色の粉末。紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２４２、３３０ｎｍ。核磁気¹ＨＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆，４００ＭＨｚ）δ：９．２４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３３（１Ｈ，ｓ，Ｎ’Ｈ）、７．４３（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．９６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－１１）、６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－１２）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、６．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－１０）、６．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－９）、５．８５（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、４．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ₃）、３．６９（３Ｈ，ｓ，Ｃ’ＯＯＣ’Ｈ₃）、３．５５（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）、１．００（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－１８）。¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表６に示す。質量分析ＨＲ－ＥＳＩ－ＭＳｍ／ｚ：７１９．３４４３［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₂Ｈ₄₆Ｎ₄Ｏ₇。

【0077】

３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫ：白色の粉末。紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ３３０、２４７ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）δ：９．４９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、７．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、７．０１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１１）、７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１２）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、６．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１０）、６．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－９）、５．８７（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、４．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８３（１Ｈ，ｓ，Ｈ－３）、４．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ₃）、３．６６（３Ｈ，ｓ，Ｃ’ＯＯＣ’Ｈ₃）、２．０８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＣＯＣＨ₃）、０．８４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８）。¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表６に示す。質量分析ＨＲＥＳＩＭＳｍ／ｚ７５９．３７６１［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₅Ｈ₅₀Ｎ₄Ｏ₇。

【0078】

ＴａｂｅｒｙｕｎｉｎｅＢ：淡黄色の粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２０４、２４２、３３０ｎｍ。核磁気¹Ｈ（６００ＭＨｚ）ＮＭＲ δ：９．２３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．４４（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５７（２Ｈ，ｓ，Ｈ－１２／１２’）、５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ－９）、５．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ－１０）、５．８０（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、４．９５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，４．８Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７０（３Ｈ，ｓ，Ｃ’ＯＯＣ’Ｈ₃）、３．６９（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ₃）、３．６３（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＭｅ）、０．８４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。 ¹³Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ₆）データを表６に示す。ＨＲＥＳＩＭＳｍ／ｚ７３３．３６１２［Ｍ＋Ｈ］⁺、分子式Ｃ₄₃Ｈ₄₉Ｎ₄Ｏ₇。

【0079】

表１～６は、実施例１の抽出により得られた一連のフランアスピドスペルミン二量体の核磁気データ帰属表である。

【0080】

【表1】

【0081】

【表2】

【0082】

【表3】

【0083】

【表4】

【0084】

【表5】

【0085】

【表6】

【0086】

テスト例
活性化免疫テスト：ＢＭＭｓは骨髄から分離され、誘導して培養された初代細胞であり、マクロファージの機能を十分に反映することができ、マクロファージの機能を研究するために一般的に使用される細胞である。マウス大腿骨の骨髄を分離した後、ｍＣＳＦ因子を含む培地で６～７日間培養することによって成熟したＢＭＭｓが得られ、ＩＬ－４で１２時間刺激すると、ＡＲＧ１の高発現を伴う免疫抑制型のＭ２型に極性化するように誘導でき、タンパク質を抽出した後、体外でアルギニン加水分解を行い、さらにα－ｉｓｏｎｉｔｒｏｓｏｐｒｏｐｉｏｐｈｅｎｏｎｅを使用して加水分解物尿素と反応させて発色させ、波長５４０ｎｍで吸光度を測定し、ＡＲＧ１活性のマーカーとした。具体的なプロセスは以下のとおりである。細胞を薬物（ＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、ＨＭＤ、化合物１～３および化合物５～７）で前処理（１μＭ）した後、ＩＬ－４を１２時間刺激し、ＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ阻害剤を含む細胞溶解液で細胞を溶解し、総細胞タンパク質を取り、０．２～０．４ｍＭのＭｎ²⁺を添加した後、５５℃で１０分間加熱して、アルギナーゼＡＲＧ１を完全に活性化した。０．５ｍＭアルギニンを添加し、３７℃で１～２時間インキュベートして、アルギニンを完全に加水分解した。硫酸とリン酸を含む酸性溶液を加えて反応を停止し、９％α－ｉｓｏｎｉｔｒｏｓｏｐｒｏｐｉｏｐｈｅｎｏｎｅエタノール溶液を加え、９５℃で１５～３０分間加熱して発色できる。実験結果を図１に示すように、図１から、化合物ＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、およびＨＭＤが、マクロファージでＩＬ－４によって誘導されるａｒｇｉｎａｓｅ発現を有意に阻害し、マクロファージのＭ２極性化を阻害できることがわかり、図１（ＡはマクロファージＭ２極性化の抑制、ＢはＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、ＨＭＤの構造式、Ｃは化合物の濃度依存関係）から、ＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、およびＨＭＤは、マクロファージでのＩＬ－４誘導ａｒｇｉｎａｓｅ発現を有意に阻害でき、濃度依存的にマクロファージでのＭ２極性化を阻害できることがわかる。図２から、化合物１～３および５～７もマクロファージＭ２の極性化を阻害できることがわかる。

【0087】

免疫に依存した活性の検証：マウス黒色腫モデルでは、化合物１を２ｍｇ／ｋｇの用量で４回連続腹腔内投与し、テスト結果を図３に示し、化合物１には明らかな抗腫瘍効果があり、その抗腫瘍活性は免疫系に依存し、正常なマウス黒色腫モデル（Ａ）および乳がんモデル（Ｂ）では、化合物１は腫瘍の成長を有意に抑制し、乳がんの自然発生的な肺転移（ＣおよびＤ）を抑制した。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスを用いて構築した黒色腫モデル（Ｅ）と乳がん細胞モデル（Ｆ）では、化合物１の抗腫瘍活性が消失した。

【0088】

ＣＤ８⁺Ｔ細胞機能を改善および強化するための検証：ＦＡＣＳ分析により、化合物１のテスト結果を図３に示すように、化合物１は、腫瘍における免疫細胞の浸潤を促進し、ＣＤ８⁺Ｔ細胞の割合をアップレギュレートし、骨髄細胞の割合をダウンレギュレートできるが、ＣＤ４⁺Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞等には有意な影響を与えない。さらなる研究により、化合物１はＣＤ８⁺Ｔ細胞の機能を促進し、ＩＦＮγ、ＧｒａｎｚｙｍｅＢ、ＴＮＦαを増強し、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３をアップレギュレートできることがわかった。また、化合物１は、ＣＤ２０６⁺マクロファージの割合をダウンレギュレートできる（図－４）。そのうち、（Ａ）は、化合物１が腫瘍免疫応答を活性化できることを示している。（Ｂ）微小環境における免疫細胞分類群の割合を調整した。（Ｃ～Ｅ）Ｔ細胞、特にＣＤ８⁺Ｔ細胞の割合をアップレギュレーションした。（Ｆ～Ｈ）はＴｒｅｇ比に有意な影響を与えなかった。（Ｉ，Ｊ）ＣＤ８⁺Ｔ細胞の機能を促進し、ＩＦＮγ、ＧｒａｎｚｙｍｅＢ、ＴＮＦαの発現をアップレギュレーションした。（Ｋ，Ｌ）ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３の発現を同時にアップレギュレーションした。（Ｍ，Ｎ）腫瘍微小環境における骨髄細胞（ＣＤ１１ｂ⁺）の割合をダウンレギュレートした。（Ｏ，Ｐ）特にＭ２型のＴＡＭｓ（ＣＤ２０６^hi）の割合．^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．０１。

【0089】

ＣＯＬＤのテスト結果を図５に示すように、ＣＰＬＤ処理は、腫瘍内のＣＤ８⁺Ｔ細胞の割合を大幅に増加させることができるが、ＣＤ４⁺Ｔ細胞には有意な影響を与えず（図－５Ａ～Ｅ）、Ｔｒｅｇの割合（Ｆ～Ｇ）には影響を与えないことがわかった。細胞内染色は、ＣＰＬＤがＣＤ８⁺Ｔ細胞の機能を促進し、ＩＦＮγ、ＧｒａｎｚｙｍｅＢ、ＴＮＦαの発現を増強できることを示した（Ｈ～Ｋ）。さらなる免疫蛍光染色実験では、ＣＰＬＤがＣＤ８⁺Ｔ細胞の割合を増加させ、ＧｒａｎｚｙｍｅＢの発現を促進できることもわかった（Ｌ）。さらに、マウスにａｎｔｉ－ＣＤ８抗体を継続的に注入し、体内のＣＤ８⁺Ｔ細胞を削除して黒色腫モデルを構築し、化合物の抗腫瘍活性を調べた。結果は、ＣＰＬＤの抗腫瘍効果がＣＤ８⁺Ｔ細胞削除腫瘍モデルおよびヌードマウス腫瘍モデルで有意に減少したことを示し、ＣＰＬＤがＴＡＭｓの機能を調節することによってＣＤ８⁺Ｔ細胞の機能をさらに促進して抗腫瘍活性を発揮できることを確認した（Ｍ～Ｎ）。

【0090】

実施例２
硫酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度の硫酸エタノール溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させて硫酸塩を得た。

【0091】

実施例３
塩酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度の塩酸エタノール溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させて塩酸塩を得た。

【0092】

実施例４
リン酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度のリン酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させてリン酸塩を得た。

【0093】

実施例５
酒石酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度の酒石酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させて酒石酸塩を得た。

【0094】

実施例６
クエン酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度のクエン酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させてクエン酸塩を得た。

【0095】

実施例７
ギ酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度のギ酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させてギ酸塩を得た。