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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022143162
(43)【公開日】2022-10-03
(54)【発明の名称】急性脳梗塞の予後予測方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/68 20060101AFI20220926BHJP
【ＦＩ】
G01N33/68
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021043539
(22)【出願日】2021-03-17
(71)【出願人】
【識別番号】591122956
【氏名又は名称】株式会社ＬＳＩメディエンス
(74)【代理人】
【識別番号】100139594
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 健次郎
(74)【代理人】
【識別番号】100090251
【氏名又は名称】森田 憲一
(72)【発明者】
【氏名】桑城 貴弘
(72)【発明者】
【氏名】田辺 和弘
【テーマコード（参考）】
2G045
【Ｆターム（参考）】
2G045AA25
2G045CA25
2G045CA26
2G045DA36
2G045DA38
2G045FB03
(57)【要約】
【課題】臨床検査現場での使用に耐え得る、採取・取り扱いが容易な血液検体において、急性脳梗塞患者の予後を正確に予測することが可能なマーカーを提供する。
【解決手段】前記マーカーは、対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はCartilage Acidic Protein 1（ＣＲＴＡＣ１）値である。
【選択図】なし
【解決手段】前記マーカーは、対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はCartilage Acidic Protein 1（ＣＲＴＡＣ１）値である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はCartilage Acidic Protein 1（ＣＲＴＡＣ１）値によって、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法。
【請求項2】
対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値を測定する工程、
前記の酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高値である場合に、予後不良であると判断する工程
を含む、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法。
前記の酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高値である場合に、予後不良であると判断する工程
を含む、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法。
【請求項4】
対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、及びＤダイマー値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、及びＤダイマー値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
下記式１：
式１：mRS-PI = A × (Ｄダイマー濃度) + B × (酸化アルブミン比) + C × (ＣＲＴＡＣ１濃度)
で判別されることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
式１：mRS-PI = A × (Ｄダイマー濃度) + B × (酸化アルブミン比) + C × (ＣＲＴＡＣ１濃度)
で判別されることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
請求項１～５のいずれか一項に記載の方法を用いた、急性脳梗塞の治療法を選択する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、急性脳梗塞の予後予測方法に関する。
【背景技術】
【0002】
血管閉塞およびそれに伴う虚血を原因とする急性脳梗塞症は、最も生命を脅かす、または身体自由を奪う危険な疾患である。また、脳梗塞ペナンブラ領域に発生する活性酸素発生を抑制することは、新たな脳細胞死を抑え、患者予後を改善させる重要なファクターである。例えば、ラジカルスカベンジャーであるエダラボンは活性酸素を取り除き、脳神経破壊のさらなるリスクを減らす。しかしながら、多量のエダラボン投与は深刻な腎不全を引き起こすため、厳しい投与量管理が行われている。
【0003】
またこれまで、脳梗塞の予後状態と酸化ストレスの関係を調べる様々な試験が行われている。虚血脳から放出される尿中の８－ＯＨｄｇ（Urinary 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine）は、身機能不全と深く関連し、またＭＤＡ（malondialdehyde）は脳梗塞性うつや認知症に関係することが報告されている。さらには８－イソプロスタン（8-isoprostane）は脳梗塞死と関連し、ＯｘＬＤＬ（oxidized low-density lipoprotein）は血管炎症と閉塞因子としてとらえられている。しかしながら、これらエビデンスは未だ不足しており、これらマーカーが実際にどの程度酸化ストレス状態を反映しているかは未だ不明である。
【0004】
ヒト血清アルブミンは、１７のジスルフィド結合と、一つのチオール基をもち、これは血中遊離システインとジスルフィド結合を形成しうる。この遊離システインとの結合型を酸化アルブミン（ＯｘＨＳＡ）と呼ぶ。健常人の酸化アルブミン比は一般に４０％以下だが、糖尿病、腎不全、心不全、肝不全など強い酸化ストレスを受けると、酸化アルブミン比が５０％を超えることもある。アルブミンは血中の主要タンパク質（３．５～５．５ｇ／ｄＬ）であるため、その酸化率は体全体の酸化ストレスを反映する最も確からしい指標である。脳梗塞と酸化アルブミンの関係を調べた研究が過去いくつか実施されている。
【0005】
Ｍｏｏｎらは脳脊髄液の酸化アルブミン比が健常人に比べ、脳梗塞患者にて著しく増加していることを見出した（非特許文献１）。またＲａｅｌらは退院時のｍＲＳ（modified Rankin Scale）と酸化アルブミン比の関係を調べて、酸化アルブミン比が少ないほど退院時ｍＲＳが高いことを示した（非特許文献２）。酸化アルブミンは最も有力は酸化ストレスマーカーにも関わらず、その検査工程が長くかつ煩わしいため、これまで臨床検査として実用化されてこなかった。Ｍｏｏｎらが使った電気泳動法は極めて煩雑であり、複数検体を測定するには向いていなかった。一方、液体クロマトグラフィーは測定に３０分以上かかる上、ピーク分離が不十分であり正確性に欠く。これら問題を解決するために、南雲らは高分解能質量分析装置を導入し、スループットと正確性を著しく向上させた（非特許文献３）。
【0006】
もう一つの大きな課題として採血後の酸化アルブミンの安定性がある。アルブミンは採血後、直ちに遊離システインと結合し、酸化アルブミンを生成するため、採血後の酸化抑制が大きな課題である。久保田らは採血後直ちに酸（０．５ｍｏｌ／Ｌクエン酸バッファー（ｐＨ４．２））を血液に加えると酸化を抑制できることを見出した（非特許文献４）。高分解能質量分析と酸化抑制法の組合せにより、酸化アルブミンは精度よく、かつ高スループットで検査できるようになった。
【0007】
酸化アルブミンのみでなく、ペナンブラ領域の神経再生状態も脳梗塞患者の予後を占う上で重要な指標である。内因性のＮＰＣ細胞（Neural precursor cells）はすみやかに脳損傷部位に移動し、神経再生を促進することが知られている。しかしながらこの神経再生機能は一般的に不十分であり、完全な神経再生に至らない。一方、血漿タンパク質であるＣＲＴＡＣ１（Cartilage Acidic Protein 1）タンパク質は脳内のＮｏｇｏレセプター１（ＮｇＲ１）に結合し、アクソン伸張を促す。Ｎｏｇｏタンパク質はＮｏｇｏレセプターに結合し、神経再生を阻害する働きがあるため、結果としてＣＲＴＡＣ１がＮｏｇｏレセプターへ結合すると、神経伸張を促進する。また高瀬らはＣＲＴＡＣ１の血中濃度を高めると、それが神経再生を促すことを、動物モデルを使って明らかにした（非特許文献５）。
【0008】
一方、血液を使った脳梗塞の判定、もしくは重症度・予後の判定技術は、古くから強いニーズがあったが、現時点で医療に使われているマーカーはＤダイマーのみである。しかし、Ｄダイマーは、疾患に対して特異性が低く、臨床現場からは更に病態を正確に反映するマーカーが求められている。また、血液試料中のＣＲＴＡＣ１（Cartilage Acidic Protein 1）タンパク質の量を測定する工程を含み、該タンパク質量が健常者と比較して低下していた場合に脳梗塞であると判断することを特徴とする、該動物における脳梗塞の診断のための検査方法が知られている（特許文献１）。しかし、健常人と比較して低下していることを指標にするバイオマーカーは、臨床現場で使用することが難しく、実用化に至っていない。
【0009】
最近発明されたバイオマーカーとして、島津製作所、国立循環器センター（特許文献２）のＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型、バイオオコモ、三重大学（特許文献３）のロイシンリッチα２グリコプロテイン（ＬＲＧ）、さらには藤倉化成、国立がん研究センター（特許文献４）のＤＩＤＯ１蛋白質、ＣＰＳＦ２蛋白質などがあるが、いずれも臨床意義が不明確であり、実用化に至っていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0010】
【特許文献1】国際公開第２０１２／０６７１５１号
【特許文献2】特開２０２０－０９２６６０号公報
【特許文献3】特開２０１９－１４４２１８号公報
【特許文献4】特開２０１９－１００８１１号公報
【非特許文献】
【0011】
【非特許文献1】Moon GJ, Shin DH, Im DS, Bang OY, Nam HS, Lee JH, et al. Identification of oxidized serum albumin in the cerebrospinal fluid of ischaemic stroke patients. European journal of neurology. 2011;18:1151-1158
【非特許文献2】Rael LT, Leonard J, Salottolo K, Bar-Or R, Bartt RE, Wagner JC, et al. Plasma oxidized albumin in acute ischemic stroke is associated with better outcomes. Frontiers in neurology. 2019;10:709
【非特許文献3】Nagumo K, Tanaka M, Chuang VT, Setoyama H, Watanabe H, Yamada N, et al. Cys34-cysteinylated human serum albumin is a sensitive plasma marker in oxidative stress-related chronic diseases. PloS one. 2014;9:e85216
【非特許文献4】Kubota K, Nakayama A, Takehana K, Kawakami A, Yamada N, Suzuki E. A simple stabilization method of reduced albumin in blood and plasma for the reduced/oxidized albumin ratio measurement. International journal of biomedical science : IJBS. 2009;5:293-301
【非特許文献5】Takase H, Kurihara Y, Yokoyama TA, Kawahara N, Takei K. Lotus overexpression accelerates neuronal plasticity after focal brain ischemia in mice. PloS Ine. 2017;12:e0184258
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0012】
本発明者らは、臨床検査現場での使用に耐え得る、採取・取り扱いが容易な血液検体において、急性脳梗塞患者の予後を正確に予測することが可能なマーカーを開発することを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【0013】
本発明者らは、前記の課題を解決すべく鋭意検討した結果、急性脳梗塞治療の過程で、患者から採取された血液検体において、酸化アルブミン及び／又はＣＲＴＡＣ１の血中の値が変動し、それが患者の予後と関係することを見出した。
【0014】
すなわち、本発明は、
［１］対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はCartilage Acidic Protein 1（ＣＲＴＡＣ１）値によって、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法、
［２］対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、［１］の方法、
［３］対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値を測定する工程、
前記の酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高値である場合に、予後不良であると判断する工程
を含む、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法、
［４］対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、及びＤダイマー値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、及びＤダイマー値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、［１］～［３］のいずれかの方法、
［５］下記式１：
式１：mRS-PI = A × (Ｄダイマー濃度) + B × (酸化アルブミン比) + C × (ＣＲＴＡＣ１濃度)
で判別されることを特徴とする、［４］の方法、
［６］［１］～［５］のいずれかの方法を用いた、急性脳梗塞の治療法を選択する方法
に関する。
［１］対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はCartilage Acidic Protein 1（ＣＲＴＡＣ１）値によって、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法、
［２］対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、［１］の方法、
［３］対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値を測定する工程、
前記の酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高値である場合に、予後不良であると判断する工程
を含む、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法、
［４］対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、及びＤダイマー値が、転帰良好患者又は健常人群に由来する血液中酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、及びＤダイマー値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、［１］～［３］のいずれかの方法、
［５］下記式１：
式１：mRS-PI = A × (Ｄダイマー濃度) + B × (酸化アルブミン比) + C × (ＣＲＴＡＣ１濃度)
で判別されることを特徴とする、［４］の方法、
［６］［１］～［５］のいずれかの方法を用いた、急性脳梗塞の治療法を選択する方法
に関する。
【発明の効果】
【0015】
本発明の方法により、急性脳梗塞患者の病態に応じて、退院時期や治療法の選択をすることができる。例えば、患者の酸化ストレス状態を正確に把握することで、患者それぞれに適したラジカルスカベンジャー量を投与することが可能となり、患者の予後をさらに改善させることができる。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【発明を実施するための形態】
【0017】
以下において、本発明の実施形態について詳細に説明するが、利用方法の態様についてはこれに限定されるものではない。
【0018】
本発明は、対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値によって、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法である。
本発明の別の態様としては、対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、健常人又は転帰良好患者に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法である。
本発明の更に別の態様としては、対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値及びＤダイマー値が、転帰良好患者に由来する血液中酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値及びＤダイマー値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法である。
本発明の別の態様としては、対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値が、健常人又は転帰良好患者に由来する血液中に存在する酸化アルブミン値及び／又はＣＲＴＡＣ１値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法である。
本発明の更に別の態様としては、対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値及びＤダイマー値が、転帰良好患者に由来する血液中酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値及びＤダイマー値と比較して高いことが、対象患者の予後不良であることを示す、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法である。
【0019】
本発明で使用可能な血液検体としては、対象の患者から採取可能且つ対象のマーカーが分析可能であれば良く、例えば、全血、血漿、血清等が挙げられる。また、前記血液検体の採取・調製法は、当業者であれば、公知の方法から適宜選択して使用することができる。
【0020】
以下、対象患者から採取された血液中に存在する酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、Ｄダイマー値によって、急性脳梗塞患者の予後を予測する方法への適用の一例について説明をするが、本発明はこれに限定されるものではない。
【0021】
本発明で使用可能な酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、Ｄダイマー値の分析方法それ自体は公知であり、公知の測定方法、市販の測定試薬や測定装置を使用することもできる。測定方法としては、質量分析法や免疫学的測定法等から適宜選択することができる。例えば、酸化アルブミン値としては、国際公開第２００７／０１３６７９号に記載の方法を参考に、酸化アルブミン比（総アルブミン量に対する酸化型アルブミンの存在比率）や酸化アルブミン濃度を使用することができる。また、ＣＲＴＡＣ１値としては、国際公開第２０１２／０６７１５１号に記載の方法を参考に、ＣＲＴＡＣ１濃度を使用することができる。また、Ｄダイマー値としては、公知の臨床検査に使用されるＤダイマー濃度を使用することができる。
【0022】
本発明方法では、対象患者から採取された血液中の酸化アルブミン値の上昇を、急性脳梗塞患者の予後不良を予測する指標とすることができる。例えば、後述する実施例５に示すように、高ｍＲＳ群では有意に酸化アルブミン比が高くなる。そのため、酸化アルブミン比が高いことを指標に、急性脳梗塞患者の転帰不良を判別することができる。好ましくは、酸化アルブミン比が低ｍＲＳ群に対して高いことを指標に、急性脳梗塞患者の転帰不良を判別することができる。一方、酸化アルブミン比が、低ｍＲＳ群と同等以下であることを指標に、急性脳梗塞患者の転帰良好を判別することができる。例えば、転帰不良と判断される場合には、入院期間を延長したり、治療薬（脳保護剤等）を追加したりすることができる。
また、別の態様としては、酸化アルブミン比が健常人群に対して高いことを指標に、急性脳梗塞患者の転帰不良を判別することができる。一方、酸化アルブミン比が、健常人群と同等であることを指標に、急性脳梗塞患者の転帰良好を判別することができる。判定のための基準は、事前に用意しておいた「閾値」を使用することができる。
また、別の態様としては、酸化アルブミン比が健常人群に対して高いことを指標に、急性脳梗塞患者の転帰不良を判別することができる。一方、酸化アルブミン比が、健常人群と同等であることを指標に、急性脳梗塞患者の転帰良好を判別することができる。判定のための基準は、事前に用意しておいた「閾値」を使用することができる。
【0023】
本発明方法において、急性脳梗塞患者の予後不良を予測するための酸化アルブミン値の閾値は、種々条件、例えば、性別、年齢などにより変化することが予想されるが、当業者であれば、被験者に対応する適当な母集団を適宜選択して、その集団から得られたデータを用いて統計学的処理を行うことにより、判定用閾値を決定することができる。本発明方法では、判定用閾値を決定し、患者血液中の酸化アルブミン値と判定用閾値を比較することにより、医師の判断を補助可能な、急性脳梗塞患者の予後を予測することができる。
【0024】
また、本発明方法では、対象患者から採取された血液中のＣＲＴＡＣ１値の上昇を、急性脳梗塞患者の予後不良を予測する指標とすることができる。例えば、後述する実施例６に示すように、高ｍＲＳ群では有意にＣＲＴＡＣ１濃度が高くなる。そのため、ＣＲＴＡＣ１濃度が、低ｍＲＳ群に対して高いことを指標に、急性脳梗塞患者の転帰不良を判別することができる。一方、ＣＲＴＡＣ１濃度が、低ｍＲＳ群と同等以下であることを指標に、急性脳梗塞患者の転帰良好を判別することができる。例えば、転帰不良と判断される場合には、入院期間を延長したり、治療薬（脳保護剤等）を追加したりすることができる。
また、別の態様としては、ＣＲＴＡＣ１濃度が健常人群に対して高いことを指標に、急性脳梗塞患者の転帰不良を判別することができる。一方、ＣＲＴＡＣ１濃度が、健常人群と同等であることを指標に、急性脳梗塞患者の転帰良好を判別することができる。判定のための基準は、事前に用意しておいた「閾値」を使用することができる。
また、別の態様としては、ＣＲＴＡＣ１濃度が健常人群に対して高いことを指標に、急性脳梗塞患者の転帰不良を判別することができる。一方、ＣＲＴＡＣ１濃度が、健常人群と同等であることを指標に、急性脳梗塞患者の転帰良好を判別することができる。判定のための基準は、事前に用意しておいた「閾値」を使用することができる。
【0025】
本発明方法において、急性脳梗塞患者の予後不良を予測するためのＣＲＴＡＣ１値の閾値は、種々条件、例えば、性別、年齢などにより変化することが予想されるが、当業者であれば、被験者に対応する適当な母集団を適宜選択して、その集団から得られたデータを用いて統計学的処理を行うことにより、判定用閾値を決定することができる。本発明方法では、判定用閾値を決定し、患者血液中のＣＲＴＡＣ１値と判定用閾値を比較することにより、医師の判断を補助可能な、急性脳梗塞患者の予後を予測することができる。
【0026】
また、本発明方法では、対象患者から採取された血液中の酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、Ｄダイマー値を組み合わせて、急性脳梗塞患者の予後不良を予測する指標とすることができる。例えば、後述する実施例４に示すように、高ｍＲＳ群では有意に酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度、Ｄダイマー濃度が高くなる。そのため、これらを組み合わせて判別することが好ましい。
【0027】
また、実施例７のように、下記の式１で定義されるｍＲＳ－ＰＩ（ｍＲＳ－predictive index）値を使用することにより、簡便且つ正確に判別できるので更に好ましい。
式１：mRS-PI = A × (Ｄダイマー濃度) + B × (酸化アルブミン比) + C × (ＣＲＴＡＣ１濃度)
式１：mRS-PI = A × (Ｄダイマー濃度) + B × (酸化アルブミン比) + C × (ＣＲＴＡＣ１濃度)
【0028】
ｍＲＳ－ＰＩ値が、低ｍＲＳ群に対して高いことを指標に、急性脳梗塞患者の転帰不良を判別することができる。一方、ｍＲＳ－ＰＩ値が、低ｍＲＳ群と同等以下であることを指標に、急性脳梗塞患者の転帰良好を判別することができる。例えば、転帰不良と判断される場合には、入院期間を延長したり、治療薬（脳保護剤等）を追加したりすることができる。判定のための基準は、事前に用意しておいた「閾値」を使用することができる。なお、Ｄダイマー濃度、酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度は測定値そのものでもよく、または測定値の対数でもよい。さらには平均値をゼロ、分散を１に正規化した値を使うことが望ましい。
【0029】
本発明方法において、急性脳梗塞患者の予後不良を予測するためのｍＲＳ－ＰＩ値の閾値は、種々条件、例えば、性別、年齢などにより変化することが予想されるが、当業者であれば、被験者に対応する適当な母集団を適宜選択して、その集団から得られたデータを用いて統計学的処理を行うことにより、判定用閾値を決定することができる。本発明方法では、判定用閾値を決定し、患者血液中の酸化アルブミン値、ＣＲＴＡＣ１値、Ｄダイマー値を測定し、それらから算出されるｍＲＳ－ＰＩ値と判定用のｍＲＳ－ＰＩ値の閾値を比較することにより、医師の判断を補助可能な、急性脳梗塞患者の予後を予測することができる。
【0030】
本発明方法において、転帰不良を評価する閾値を決定するための分類は、公知のスケールを使用することができるが、例えば、ｍＲＳ（modified Ranking Scale：脳卒中の概括予後評価スケール）、ＮＩＨＳＳ（National Institute of Health Stroke Scale：脳卒中神経学的重症度評価スケール）等から選択して使用することができる。特に、ｍＲＳ（例えば、日本版modified Rankin Scale（ｍRS）判定基準（篠原幸人らmRS信頼性研究グループ、modified Rankin Scaleの信頼性に関する研究－日本語版判定基準書および問診表の紹介、脳卒中 2007；29：6-13））は、脳梗塞からの転帰不良との関連性が高く評価できるので好ましい。脳梗塞における転帰不良（すなわち障害）とは、主に自立歩行を目安にし、その他、会話、認知機能、排泄機能、運動機能などに障害があることも含まれる。
ｍＲＳの場合、「０」（全く症候がない）から「６」（死亡）の７段階に区分され、高ｍＲＳとは、上記障害が認められるｍＲＳ値が２より大きいことで分類することができ、また、より障害が強く認められるｍＲＳが３より大きいことで分類しても良い。当業者であれば、被験者に対応する適当な母集団を適宜選択して閾値を決定することができる。
ｍＲＳの場合、「０」（全く症候がない）から「６」（死亡）の７段階に区分され、高ｍＲＳとは、上記障害が認められるｍＲＳ値が２より大きいことで分類することができ、また、より障害が強く認められるｍＲＳが３より大きいことで分類しても良い。当業者であれば、被験者に対応する適当な母集団を適宜選択して閾値を決定することができる。
【0031】
本発明方法において、検体の採取時期は、急性脳梗塞の疑いが生じた段階、入院時（入院０日目）、入院後（入院１日後、７日後、１４日後等）、治療を行った後、などが好ましい。経時的に採取して測定することにより、適切に病態の変化を把握することができる。また、退院時期の判断や治療法を選択する際に実施することが好ましく、例えば、所定の処置を行った７日後で、最も有意に急性脳梗塞患者の予後を予測することができるので特に好ましい。
【0032】
本発明方法において、選択できる治療法等としては、エダラボンなどの脳保護剤投与量の増加、投与期間の延長などが挙げられる。
【実施例0033】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【0034】
《実施例１：検査項目の測定と測定値の解析》
（１）検体の準備
後述する実施例において、２０１７年３月から２０１８年２月までの間、脳梗塞被験者から前向きに収集した検体を使用した。国立病院機構九州医療センターおよび株式会社ＬＳＩメディエンス双方にて倫理委員会の承認を得た。
（１）検体の準備
後述する実施例において、２０１７年３月から２０１８年２月までの間、脳梗塞被験者から前向きに収集した検体を使用した。国立病院機構九州医療センターおよび株式会社ＬＳＩメディエンス双方にて倫理委員会の承認を得た。
【0035】
脳梗塞症状を示してから２４時間以内に九州医療センターに搬送された患者を対象とした。すべての患者に対し、ＣＴ検査により脳梗塞を確認し、深刻な腎臓、肝臓、肺、心臓の機能低下を有する症例は研究対象から除外した。また入院時に感染症、パーキンソン病、統合失調症、うつ、身体麻痺を発症している患者はすべて除外した。すべての患者からインフォームドコンセントを得た。
【0036】
また、すべての患者は入院時、退院時にＮＩＨＳＳ（National Institutes of Health Stroke Scale：脳卒中神経学的重症度評価スケール）およびｍＲＳ（modified Ranking Scale：脳卒中の概括予後評価スケール）を判定するためのフィジカルテストを受けた。さらに退院３か月後にｍＲＳを受診した。入院時に循環器リスク、既往歴、喫煙歴を記録した他、さらに肝機能、脂質代謝、腎機能に関する検査を入院時に実施した。酸化アルブミン比およびＣＲＴＡＣ１濃度の検査のために、入院時、入院１日後、７日後、１４日後にそれぞれ採血した。ただし約４０％以上が１４日前に退院したため、１４日後のデータは使用しなかった。
【0037】
患者の特徴を表１にまとめた。ＡＩＳ（acute ischemic stroke：急性虚血性脳卒中）患者７４名を退院後３ヵ月後のｍＲＳのレベルによって２つのグループに分けた。低ｍＲＳ群はｍＲＳが０または１として４８名、高ｍＲＳ群はｍＲＳが２以上として２６名であった。低ｍＲＳ群は男性３２人（６７％）、女性１６人（３３％）で、平均年齢は７０．４歳、そのうちアテローム性動脈硬化症５人、ラクナ梗塞１１人、心原性脳塞栓症８人、未分類２４人であった。高ｍＲＳ群は男性１３人（５０％）、女性１３人（５０％）で、平均年齢７４．２歳、うちアテローム性動脈硬化症３人、ラクナ梗塞４人、心原性脳塞栓症７人、未分類１２人であった。
【0038】
【表1】
【0039】
また、各々の患者から、約２ｍＬの血液をニプロ社製０．５ｍｏｌ／Ｌクエン酸血漿採血管（ｐＨ４．３）にて採血した。それぞれの採血管は採血後４時間以内に遠心し、上清（血漿）を１ｍＬマイクロチューブに移した。また採血後、採血管を４℃冷蔵庫に保管し、２４時間以内に血漿を分離した。分離血漿は－８０℃にて保管し、酸化アルブミン比については３か月以内に分析した。
【0040】
また、患者に対して、以下の血液学、凝固、生化学に関する検査を入院時に実施した。白血球数、赤血球数、ヘマトクリット値、ヘモグロビン値、血小板数、ＡＳＴ（aspartate aminotransferase）、ＡＬＴ（alanine aminotransferase）、ＬＤＨ（lactate dehydorogenase）、ＡＬＰ（alkaline phosphatase）、γ－ＧＴＰ（γ-glutamyltransferase）、Ｔ－Ｂｉｌ（総ビリルビン）、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、トリグリセライド、ＴＰ（総タンパク質）、アルブミン、ＣＰＫ（Creatine phosphokinase）、ＢＵＮ（blood urea nitrogen）、Ｃｒ（クレアチニン）、ｅＧＦＲ（estimated glomerular filtration rate）、尿酸、ＦＢＳ（fasting blood sugar）、ＢＳ（血糖値）、ＨｂＡ１ｃ（ヘモグロビンA1c）、ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）、ＰＴ－ＩＮＲ（プロトロンビン時間）、ＡＰＴＴ（activated partial thromboplastin time）、フィブリノーゲン、Ｄダイマー。
【0041】
（２）酸化アルブミン比（％ＯｘＨＳＡ）の分析
（１）で調製した血漿２５μＬを５０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）１ｍＬに希釈した。希釈したサンプルはボンドエリュートＣ１８ ＥＷＰカラム（Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA）に通液し、１ｍＬの溶液Ａ（０．１％ギ酸、９．９％アセトニトリル、９０％水（％ｖ／ｖ））にて洗浄後、１ｍＬの溶液Ｂ（０．１％ギ酸、９．９％水、９０％アセトニトリル（％ｖ／ｖ））にて酸化アルブミンをカラムから溶出した。ＬＣ－ＭＳデータは液体クロマトグラフィー質量分析装置（Agilent HP1200, Agilent 6520, Agilent Technologies）を使用した。液体クロマトグラフィーと質量分析装置は内径０．１ｍｍ、長さ１ｍのステンレス管で接続し、カラムは使用していない。０．１％ギ酸及び４０％アセトニトリル水溶液を溶離液とし、流速５０μＬ／分、室温にて溶出した。質量分析装置はキャピラリーボルテージ４０００Ｖ、陽イオンモードに設定した。ネブライザーガス圧は２０ｐｓｉ、対抗ガスは３２５℃、５Ｌ／ｍｉｎとした。質量計測範囲は８００～３０００とした。注入量は２μＬとした。全分析時間は約３分である。ＬＣ－ＭＳデータはマスハンターソフトウエア（Agilent Technologies）にてＣＳＶ形式に変換し、エクセルＶＢＡプログラム（Microsoft）にてデコンボリューションした。
（１）で調製した血漿２５μＬを５０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）１ｍＬに希釈した。希釈したサンプルはボンドエリュートＣ１８ ＥＷＰカラム（Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA）に通液し、１ｍＬの溶液Ａ（０．１％ギ酸、９．９％アセトニトリル、９０％水（％ｖ／ｖ））にて洗浄後、１ｍＬの溶液Ｂ（０．１％ギ酸、９．９％水、９０％アセトニトリル（％ｖ／ｖ））にて酸化アルブミンをカラムから溶出した。ＬＣ－ＭＳデータは液体クロマトグラフィー質量分析装置（Agilent HP1200, Agilent 6520, Agilent Technologies）を使用した。液体クロマトグラフィーと質量分析装置は内径０．１ｍｍ、長さ１ｍのステンレス管で接続し、カラムは使用していない。０．１％ギ酸及び４０％アセトニトリル水溶液を溶離液とし、流速５０μＬ／分、室温にて溶出した。質量分析装置はキャピラリーボルテージ４０００Ｖ、陽イオンモードに設定した。ネブライザーガス圧は２０ｐｓｉ、対抗ガスは３２５℃、５Ｌ／ｍｉｎとした。質量計測範囲は８００～３０００とした。注入量は２μＬとした。全分析時間は約３分である。ＬＣ－ＭＳデータはマスハンターソフトウエア（Agilent Technologies）にてＣＳＶ形式に変換し、エクセルＶＢＡプログラム（Microsoft）にてデコンボリューションした。
【0042】
（３）ＣＲＴＡＣ１濃度の分析
ＣＲＴＡＣ１の血中濃度は、（１）で調製した血漿を用いて、ＥＬＩＳＡキット（Human Cartilage acidic protein 1 (CRTAC1) ELISA kit, CUSABIO, Houston, USA）を使用して測定した。分析方法はメーカー指定のインストラクションマニュアルに従った。
ＣＲＴＡＣ１の血中濃度は、（１）で調製した血漿を用いて、ＥＬＩＳＡキット（Human Cartilage acidic protein 1 (CRTAC1) ELISA kit, CUSABIO, Houston, USA）を使用して測定した。分析方法はメーカー指定のインストラクションマニュアルに従った。
【0043】
（４）主成分分析
酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度、生化学検査のデータを主成分分析にて解析した。主成分分析にはＳＩＭＣＡソフトウエア（version 13.0.3; Umetrics; Umea, Sweden）を使用した。主成分分析前に全データに対してユニットスケーリング、およびゼロ平均センタリングを実施した。欠損値は無視した。
酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度、生化学検査のデータを主成分分析にて解析した。主成分分析にはＳＩＭＣＡソフトウエア（version 13.0.3; Umetrics; Umea, Sweden）を使用した。主成分分析前に全データに対してユニットスケーリング、およびゼロ平均センタリングを実施した。欠損値は無視した。
【0044】
《実施例２：急性脳梗塞と入院時の検査項目との関係》
表２に、血管リスク（血圧）、肝機能（ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ、ＡＬＰ、γ－ＧＴＰ、Ｔ－Ｂｉｌ、血小板、アルブミン、ＰＴ－ＩＮＲ）、脂質代謝（総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、トリグリセリド）、糖代謝（ＢＳ、ＦＢＳ、ＨｂＡ１ｃ）、腎機能（ＢＵＮ、Ｃｒ、尿酸、ｅＧＦＲ）に関連する入院時の臨床検査の平均値と標準偏差を示した。線維溶解により血栓から生成したフィブリン分解産物であるＤダイマー濃度のみが、低ｍＲＳ群と比較して高ｍＲＳ群で顕著に上昇した（ｐ＜０．０５）。一方、それ以外のマーカーにおいては、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の間には有意差はなかった（ｐ＞０．１）。ｐ値はすべてスチューデントｔ検定により求めた。
表２に、血管リスク（血圧）、肝機能（ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ、ＡＬＰ、γ－ＧＴＰ、Ｔ－Ｂｉｌ、血小板、アルブミン、ＰＴ－ＩＮＲ）、脂質代謝（総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、トリグリセリド）、糖代謝（ＢＳ、ＦＢＳ、ＨｂＡ１ｃ）、腎機能（ＢＵＮ、Ｃｒ、尿酸、ｅＧＦＲ）に関連する入院時の臨床検査の平均値と標準偏差を示した。線維溶解により血栓から生成したフィブリン分解産物であるＤダイマー濃度のみが、低ｍＲＳ群と比較して高ｍＲＳ群で顕著に上昇した（ｐ＜０．０５）。一方、それ以外のマーカーにおいては、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の間には有意差はなかった（ｐ＞０．１）。ｐ値はすべてスチューデントｔ検定により求めた。
【0045】
【表2】
【0046】
《実施例３：入院中の酸化アルブミンおよびＣＡＴＡＣ１の推移》
図１に、入院当日（０日目）から７日後までの酸化アルブミン比とＣＡＴＡＣ１濃度レベルの推移を示す。７２例中４８例（２例欠測）で７日後に酸化アルブミン比の低下が認められた。０日目の酸化アルブミン比の平均値（４１．１％）は、７日目には４０．１％と減少した（ｐ＝０．１５、図１Ａ）。一方、ＣＲＴＡＣ１濃度の増加は７１人中５８人（３人欠測）に認められ、０日目の平均値（１８７．５ｎｇ／ｍＬ）が７日後には２７６．１ｎｇ／ｍＬと有意に上昇した（ｐ＜１０－５、図１Ｂ）。ｐ値は、スチューデントｔ検定により求めた。
図１に、入院当日（０日目）から７日後までの酸化アルブミン比とＣＡＴＡＣ１濃度レベルの推移を示す。７２例中４８例（２例欠測）で７日後に酸化アルブミン比の低下が認められた。０日目の酸化アルブミン比の平均値（４１．１％）は、７日目には４０．１％と減少した（ｐ＝０．１５、図１Ａ）。一方、ＣＲＴＡＣ１濃度の増加は７１人中５８人（３人欠測）に認められ、０日目の平均値（１８７．５ｎｇ／ｍＬ）が７日後には２７６．１ｎｇ／ｍＬと有意に上昇した（ｐ＜１０－５、図１Ｂ）。ｐ値は、スチューデントｔ検定により求めた。
【0047】
《実施例４：主成分分析》
主成分分析（ＰＣＡ）を行い、１）低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の患者の分布、２）バイオマーカーの存在パターンの類似性と非類似性、３）ｍＲＳに対するバイオマーカーの寄与を検討した。図２Ａは、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の両方の患者の分布を表すＰＣＡスコアプロットを示し、赤丸は高ｍＲＳ群の患者を表し、青丸は低ｍＲＳ群の患者を意味する。高ｍＲＳ群（赤丸）の分布は低ｍＲＳ群（青丸）の分布からやや左上方向にシフトしている。図２Ｂは、バイオマーカーの発現の類似性と非類似性を示すローディングプロットを示している。例えば、赤血球、ヘマトクリット、ヘモグロビンは右上の隣接領域に位置しており、ＡＩＳ患者間での発現パターンが比較的類似していることが示唆される。スコアプロットとローディングプロットの軸は、２つのプロットが比較できるように相同性があり、ローディングプロット（図２Ｂ）の左上に位置するバイオマーカーは、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の識別に寄与していることを意味する。そして、酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度、およびＤダイマー濃度がこの領域で観察された。
主成分分析（ＰＣＡ）を行い、１）低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の患者の分布、２）バイオマーカーの存在パターンの類似性と非類似性、３）ｍＲＳに対するバイオマーカーの寄与を検討した。図２Ａは、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の両方の患者の分布を表すＰＣＡスコアプロットを示し、赤丸は高ｍＲＳ群の患者を表し、青丸は低ｍＲＳ群の患者を意味する。高ｍＲＳ群（赤丸）の分布は低ｍＲＳ群（青丸）の分布からやや左上方向にシフトしている。図２Ｂは、バイオマーカーの発現の類似性と非類似性を示すローディングプロットを示している。例えば、赤血球、ヘマトクリット、ヘモグロビンは右上の隣接領域に位置しており、ＡＩＳ患者間での発現パターンが比較的類似していることが示唆される。スコアプロットとローディングプロットの軸は、２つのプロットが比較できるように相同性があり、ローディングプロット（図２Ｂ）の左上に位置するバイオマーカーは、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の識別に寄与していることを意味する。そして、酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度、およびＤダイマー濃度がこの領域で観察された。
【0048】
《実施例５：酸化アルブミンにおける低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の有意差の検討》
入院当日（０日目）、１日後、７日後の酸化アルブミン比を、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の間でスチューデントｔ検定を行ったところ、０日目、１日後、７日後の高ｍＲＳ群の酸化アルブミン比は、低ｍＲＳ群に比べて有意に上昇していた（表３、図３Ａ）。これにより、酸化アルブミン比は、ＡＩＳからの転帰と強く関連していると考えられる。本発明では、急性脳梗塞発症から転帰に際して、転帰不良患者の血液中酸化アルブミン比が、転帰良好患者の血液中酸化アルブミン比に比較して高いことを明らかにし、このことにより、血液中酸化アルブミン比により、退院時期の判断、治療法の選択等が行えることを示すことができた。またこれらの結果から、転帰不良患者の虚血脳では転帰良好患者よりもはるかに多くの活性酸素が発生している可能性が高く、酸化アルブミン比は活性酸素の発生量を相対的に反映していることが考えられる。
入院当日（０日目）、１日後、７日後の酸化アルブミン比を、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の間でスチューデントｔ検定を行ったところ、０日目、１日後、７日後の高ｍＲＳ群の酸化アルブミン比は、低ｍＲＳ群に比べて有意に上昇していた（表３、図３Ａ）。これにより、酸化アルブミン比は、ＡＩＳからの転帰と強く関連していると考えられる。本発明では、急性脳梗塞発症から転帰に際して、転帰不良患者の血液中酸化アルブミン比が、転帰良好患者の血液中酸化アルブミン比に比較して高いことを明らかにし、このことにより、血液中酸化アルブミン比により、退院時期の判断、治療法の選択等が行えることを示すことができた。またこれらの結果から、転帰不良患者の虚血脳では転帰良好患者よりもはるかに多くの活性酸素が発生している可能性が高く、酸化アルブミン比は活性酸素の発生量を相対的に反映していることが考えられる。
【0049】
【表3】
【0050】
ここで、本発明者らが知る限り、２０１９年に報告されたＲａｅｌ氏の研究は、血中の酸化アルブミン比とＡＩＳ転帰との関係を実証した唯一の研究である（非特許文献２）。この研究でＲａｅｌ氏は、退院時のｍＲＳと酸化アルブミン比との間にわずかな負の相関があることを明らかにした（ｒ＝－０．１７、ｐ＝０．０８）ことから、酸化アルブミン比が高い患者ほど比較的良好な転帰を示している。この結果は、本実施例の結果とは反対であったので、グループ分けの基準の違い（Ｒａｅｌ氏の研究ではカットオフを３としたのに対し、本実施例では２とした）や、ｍＲＳの判定時期の違い（Ｒａｅｌ氏の研究では退院時に判定したのに対し、本実施例では退院後３ヶ月後に判定した）によるものなのかを検証した。つまり、本実施例において、Ｒａｅｌ氏の基準に従って患者を２つのグループに再分類し、新しい２つのグループ間の酸化アルブミン比のスチューデントｔ検定のｐ値を再計算した。その結果、高ｍＲＳ（３以上）群の酸化アルブミン比は低ｍＲＳ（＜３）群と比較して有意に上昇しており（ｐ＜０．０５）、本実施例の結果は、患者の割り付けやｍＲＳの測定時期のわずかな変更による影響を強く受けていないことが確認された。本実施例で異なる結果が得られた理由の１つは、採血方法に起因するものが考えられる。上述したように、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は酸化環境に弱く、血漿を酸性に保たないと採血後に酸化しやすい。第二に、Ｒａｅｌ氏の研究で使用した液体クロマトグラフィーでは、分離が不十分な場合があり、酸化アルブミンの値が正しくなかったことが予想される。
【0051】
《実施例６：ＣＲＴＡＣ１濃度における低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の有意差の検討》
高ｍＲＳ群のＣＲＴＡＣ１濃度のレベルは、入院７日後には低ｍＲＳ群に比べて有意に上昇した（表３、図３Ｂ）。これにより、７日後のＣＲＴＡＣ１濃度は、ＡＩＳからの転帰と強く関連していると考えられる。高瀬らは、ＣＲＴＡＣ１を過剰発現させた虚血ラットモデルでは、ＣＲＴＡＣ１がＮｇＲ１シグナルを阻害して神経系を再生させることで、神経学的スコアが有意に改善されることを明らかにしている（非特許文献５）。つまり、高瀬らの結果は、重度の虚血状態では神経系の回復に十分な量のＣＲＴＡＣ１が必要であることを示唆している。また、北園らは、血液試料中のＣＲＴＡＣ１濃度が健常人と比較して低下していた場合に脳梗塞であると判断できると報告している（特許文献１）。これらの結果から、重度の脳梗塞患者では、血液中ＣＲＴＡＣ１濃度が低いことが予想される。しかし意外にも、本発明では、急性脳梗塞発症から転帰に際して、転帰不良患者の血液中ＣＲＴＡＣ１濃度が、転帰良好患者の血液中ＣＲＴＡＣ１濃度に比較して高いことを明らかにし、このことにより、血液中ＣＲＴＡＣ１濃度により、退院時期の判断、治療法の選択等が行えることを示すことができた。
高ｍＲＳ群のＣＲＴＡＣ１濃度のレベルは、入院７日後には低ｍＲＳ群に比べて有意に上昇した（表３、図３Ｂ）。これにより、７日後のＣＲＴＡＣ１濃度は、ＡＩＳからの転帰と強く関連していると考えられる。高瀬らは、ＣＲＴＡＣ１を過剰発現させた虚血ラットモデルでは、ＣＲＴＡＣ１がＮｇＲ１シグナルを阻害して神経系を再生させることで、神経学的スコアが有意に改善されることを明らかにしている（非特許文献５）。つまり、高瀬らの結果は、重度の虚血状態では神経系の回復に十分な量のＣＲＴＡＣ１が必要であることを示唆している。また、北園らは、血液試料中のＣＲＴＡＣ１濃度が健常人と比較して低下していた場合に脳梗塞であると判断できると報告している（特許文献１）。これらの結果から、重度の脳梗塞患者では、血液中ＣＲＴＡＣ１濃度が低いことが予想される。しかし意外にも、本発明では、急性脳梗塞発症から転帰に際して、転帰不良患者の血液中ＣＲＴＡＣ１濃度が、転帰良好患者の血液中ＣＲＴＡＣ１濃度に比較して高いことを明らかにし、このことにより、血液中ＣＲＴＡＣ１濃度により、退院時期の判断、治療法の選択等が行えることを示すことができた。
【0052】
《実施例７：ｍＲＳ－ＰＩによる低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群の有意差の検討》
Ｄダイマー濃度については、既にＺｈａｎｇらによって報告されているように、高ｍＲＳ群では、入院０日目のＤダイマー濃度のレベルが低ｍＲＳ群に比べて有意に上昇していた（図３Ｃ）。なお、１日目と７日目はＤダイマーの解析は行わなかった。
そこで、本発明では、酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度、Ｄダイマー濃度を用いてＡＩＳ患者の転帰を予測するための新しい指標を作成することを試みた。その結果、次の式で定義されるｍＲＳ－ＰＩ（ｍＲＳ－predictive index）は、高ｍＲＳ群で有意な上昇を示した（ｐ＝０．０００４、図３Ｄ）。係数はＥｘｃｅｌソルバーで提供される逐次二次計画法により最適化した。
式１ａ：mRS-PI = 0.23 × (Ｄダイマー濃度) + 0.44 × (酸化アルブミン比) + 0.33 × (ＣＲＴＡＣ１濃度)
ここで、Ｄダイマー濃度、酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度の値は、単位分散とゼロ平均中心で予備的に正規化した。
このように、ｍＲＳ－ＰＩにより、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群を非常に高い確度（ｐ＝０．０００４）で有意に判別することができた。また、ｍＲＳ－ＰＩを使用することにより、各々のマーカーを個別に判断するよりも更に簡便且つ正確に判別し、退院時期の判断、治療法の選択等が行えることを示すことができた。
Ｄダイマー濃度については、既にＺｈａｎｇらによって報告されているように、高ｍＲＳ群では、入院０日目のＤダイマー濃度のレベルが低ｍＲＳ群に比べて有意に上昇していた（図３Ｃ）。なお、１日目と７日目はＤダイマーの解析は行わなかった。
そこで、本発明では、酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度、Ｄダイマー濃度を用いてＡＩＳ患者の転帰を予測するための新しい指標を作成することを試みた。その結果、次の式で定義されるｍＲＳ－ＰＩ（ｍＲＳ－predictive index）は、高ｍＲＳ群で有意な上昇を示した（ｐ＝０．０００４、図３Ｄ）。係数はＥｘｃｅｌソルバーで提供される逐次二次計画法により最適化した。
式１ａ：mRS-PI = 0.23 × (Ｄダイマー濃度) + 0.44 × (酸化アルブミン比) + 0.33 × (ＣＲＴＡＣ１濃度)
ここで、Ｄダイマー濃度、酸化アルブミン比、ＣＲＴＡＣ１濃度の値は、単位分散とゼロ平均中心で予備的に正規化した。
このように、ｍＲＳ－ＰＩにより、低ｍＲＳ群と高ｍＲＳ群を非常に高い確度（ｐ＝０．０００４）で有意に判別することができた。また、ｍＲＳ－ＰＩを使用することにより、各々のマーカーを個別に判断するよりも更に簡便且つ正確に判別し、退院時期の判断、治療法の選択等が行えることを示すことができた。
【産業上の利用可能性】
【0053】
本発明は、非侵襲性の血液検体を使用した急性脳梗塞患者の予後予測に利用することができる。脳梗塞患者に対し、ある時点での予後を適切に予測できれば、治療（例えば脳保護剤の投与）期間の延長など、適正な処置を施すことができる。これらのように、簡便且つ正確に梗塞巣の状態を把握して、適切な治療方針の策定に役立てることができることは患者、医師にとって重要である。
【図1】
【図2】
【図3】
