特開 2022-154069 植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022154069

(43)【公開日】2022-10-13

(54)【発明の名称】植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価する方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/29 20060101AFI20221005BHJP

   C12Q 1/68 20180101ALI20221005BHJP

   A01H 5/00 20180101ALI20221005BHJP

   A01H 1/00 20060101ALI20221005BHJP

   C12Q 1/686 20180101ALN20221005BHJP

   C12Q 1/6844 20180101ALN20221005BHJP

【ＦＩ】

C12N15/29

C12Q1/68 ZNA

A01H5/00 A

A01H1/00 Z

A01H1/00 A

C12Q1/686 Z

C12Q1/6844 Z

【審査請求】未請求

【請求項の数】15

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021056931

(22)【出願日】2021-03-30

(71)【出願人】

【識別番号】591060980

【氏名又は名称】岡山県

(71)【出願人】

【識別番号】000000941

【氏名又は名称】株式会社カネカ

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】特許業務法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】野田 壮一郎

(72)【発明者】

【氏名】小川 健一

(72)【発明者】

【氏名】毛利 拓

(72)【発明者】

【氏名】上北 健

(72)【発明者】

【氏名】田岡 直明

【テーマコード（参考）】

2B030

4B063

【Ｆターム（参考）】

2B030AA02

2B030AA03

2B030AD06

2B030AD08

2B030CA05

2B030CA14

4B063QA01

4B063QA08

4B063QA13

4B063QQ04

4B063QQ09

4B063QQ28

4B063QQ42

4B063QQ52

4B063QR08

4B063QR32

4B063QR35

4B063QR73

4B063QR78

4B063QS24

4B063QS25

4B063QX01

(57)【要約】

【課題】本発明は、植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価する方法を提供する。
【解決手段】本発明の方法は、植物におけるＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程１１を含む。前記発現又は活性が低い植物は、前記１以上の能力が高い植物であると結論付けることができる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価する方法であって、
植物におけるＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程１１
を含む方法。

【請求項2】

ＡＬＫＢＨ８又はＡＬＫＢＨ８のホモログの遺伝子が、以下の（１Ａ）～（１Ｆ）：
（１Ａ）配列番号１、２、３又は４８に記載の塩基配列、
（１Ｂ）配列番号４、５、６又は４９に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（１Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
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が付与されている遺伝子の塩基配列、
（１Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（１Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（１Ｅ）（１Ａ）、（１Ｂ）、（１Ｃ）又は（１Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（１Ｆ）（１Ａ）、（１Ｂ）、（１Ｃ）、（１Ｄ）又は（１Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ＴＧＡ９又はＴＧＡ９のホモログの遺伝子が、以下の（２Ａ）～（２Ｆ）：
（２Ａ）配列番号３４、３５、３６、３７又は３８に記載の塩基配列、
（２Ｂ）配列番号３９、４０、４１、４２又は４３に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（２Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
aly:9325751、csat:104755012、crb:17900540、eus:EUTSA_v10007490mg、bna:106412233、boe:106344082、brp:103871579、又は、rsz:108860791
が付与されている遺伝子の塩基配列、
（２Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（２Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（２Ｅ）（２Ａ）、（２Ｂ）、（２Ｃ）又は（２Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（２Ｆ）（２Ａ）、（２Ｂ）、（２Ｃ）、（２Ｄ）又は（２Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

ＧＲＦ１５又はＧＲＦ１５のホモログの遺伝子が、以下の（３Ａ）～（３Ｆ）：
（３Ａ）配列番号２６に記載の塩基配列、
（３Ｂ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（３Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
bna:106429451、boe:106342871、又は、brp:103863788
が付与されている遺伝子の塩基配列、
（３Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（３Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（３Ｅ）（３Ａ）、（３Ｂ）、（３Ｃ）又は（３Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（３Ｆ）（３Ａ）、（３Ｂ）、（３Ｃ）、（３Ｄ）又は（３Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

Ａｔ３ｇ６１５４０又はＡｔ３ｇ６１５４０のホモログの遺伝子が、以下の（４Ａ）～（４Ｆ）：
（４Ａ）配列番号２８に記載の塩基配列、
（４Ｂ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（４Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
aly:9314457、crb:17884851、csat:104788446、eus:EUTSA、rsz:108814367、bna:106406599、boe:106296419、又は、brp:103830306
が付与されている遺伝子の塩基配列、
（４Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（４Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（４Ｅ）（４Ａ）、（４Ｂ）、（４Ｃ）又は（４Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（４Ｆ）（４Ａ）、（４Ｂ）、（４Ｃ）、（４Ｄ）又は（４Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

Ａｔ２ｇ０１８１８又はＡｔ２ｇ０１８１８のホモログの遺伝子が、以下の（５Ａ）～（５Ｆ）：
（５Ａ）配列番号４４又は４５に記載の塩基配列、
（５Ｂ）配列番号４６又は４７に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（５Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
aly:9311163、eus:EUTSA_v10005480mg、csat:104710111、crb:17885477、brp:103854038、bna:106432932、boe:106325697、又は、rsz:108809176
が付与されている遺伝子の塩基配列、
（５Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（５Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（５Ｅ）（５Ａ）、（５Ｂ）、（５Ｃ）又は（５Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（５Ｆ）（５Ａ）、（５Ｂ）、（５Ｃ）、（５Ｄ）又は（５Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

工程１１が、植物から取得したＤＮＡ又はＲＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行い前記遺伝子の発現を測定することを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価するためのマーカーであって、
ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の全部又は一部、或いは、前記遺伝子に由来するタンパク質からなるマーカー。

【請求項9】

クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力が高い植物を選抜する方法であって、
植物におけるＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程２１と、
工程２１において測定された、前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、対照となる植物と比較して低い植物を選抜する工程２２と
を含む方法。

【請求項10】

工程２１が、植物から取得したＤＮＡ又はＲＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行い前記遺伝子の発現を測定することを含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力が高い植物を育種する方法であって、
植物の第１の親個体と、ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、前記第１の親個体と同じ又はより低い第２の親個体とを交配して子孫を得る工程３１と、
前記子孫における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程３２と、
工程３２において測定された、前記子孫における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、前記第２の親個体における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性と同じ又はより低い場合に、前記子孫を選抜する工程３３と
を含む方法。

【請求項12】

工程３１が、前記子孫から取得したＤＮＡ又はＲＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行い前記遺伝子の発現を測定することを含む、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を向上させる方法であって、
植物において、ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を抑制する工程４１
を含む方法。

【請求項14】

工程４１が、
（Ｉ）植物のゲノムＤＮＡにおける前記遺伝子の破壊、
（ＩＩ）植物への、前記遺伝子に対するアンチセンスＤＮＡの導入、並びに、
（ＩＩＩ）植物への、前記遺伝子に由来するタンパク質に対するアンタゴニストの導入、
のいずれか１つ以上を含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が抑制された植物（ただしシロイヌナズナである場合を除く）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価する方法に関する。

【0002】

本発明はまた、植物における前記１以上の能力を評価するためのマーカーに関する。
本発明はまた、前記１以上の能力が高い植物を選抜する方法に関する。
本発明はまた、前記１以上の能力が高い植物を育種する方法に関する。

【0003】

本発明はまた、植物における前記１以上の能力を向上させる方法に関する。
本発明はまた、前記１以上の能力が向上された植物に関する。

【背景技術】

【0004】

将来、世界の人口増加によって食糧危機が引き起こされると予測されており、作物の増産は人類にとって解決すべき課題である。その中、遺伝子組み換えによって作物の生長や収量を向上させる方法が開発されている。例えば、ＡＢＰ遺伝子の破壊によって植物内のサイトカイニンを増加させ、植物体あたりの収量を増加させることができる（特許文献１）。また。γ－グルタミルシステインシンセターゼ遺伝子を活性化させ、植物内のグルタチオン量を高めることで植物の生長や収量が向上させることができる（特許文献２）。さらに、ＺＩＭモチーフを含みＣＣＴモチーフ、ＧＡＴＡ型Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒドメインを含まない遺伝子群を、植物中で過剰発現されることで、植物の生長および収量を増加することができる（特許文献３）。

【0005】

ＡＬＫＢＨ８遺伝子は、様々な生物に広く保存されており、シロイヌナズナにおいてはｔＲＮＡの修飾に関わる遺伝子として報告されている（非特許文献１）。具体的には、ＡＬＫＢＨ８タンパク質はメチル化したウリジン(mcm⁵U: 5-methoxycarbonyl-methyluridine）をヒドロキシル化して(S)-mchm⁵U: 5-(S)-[methoxycarbonyl-(hydroxy)methyl]uridineに変換することに関わっている。一方、ＡＬＫＢＨ８遺伝子はこのｔＲＮＡの修飾に関わる機能以外は報告されていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】特表２０１４－５０１５２１

【特許文献2】ＷＯ２００８／０８７９３２

【特許文献3】特開２００８－２７１８０５

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Ｌｅｉｈｎｅ ｅｔ ａｌ．（２０１１） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３９：７６８８－７７０１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

これまで報告されている植物の生長を促進させる方法には、それぞれ課題が存在する。例えば、植物ホルモンは生長段階によって繊細に制御する必要があり、特許文献１の様に、サイトカイニン量を多くすることで、増収を促すことができる作物は一部の作物に限られる。

【0009】

特許文献２または特許文献３の様に、遺伝子群を植物内に導入し、過剰発現させた方法を用いた組み換え作物の作成は技術がいる上、実用的な作物にするために、様々な規制をクリアすることが必要であり、時間とコストがかかる。

【0010】

一方、クロロフィルを長期間保持する能力や、クロロフィルを生産する能力を高めることができれば、植物の生長を効果的に促進することができると考えられるが、これらの能力を向上させる技術として満足できるものは従来提供されてない。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明者らは、植物のＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパクの活性を抑制することで、葉中のクロロフィルが長時間保持され、クロロフィル含量が高まり、植物の生長が促進されるという驚くべき知見を見出し、本発明を完成するに至った。本発明は、以下の発明を包含する。

【0012】

（１）
植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価する方法であって、
植物におけるＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程１１
を含む方法。
（２）
ＡＬＫＢＨ８又はＡＬＫＢＨ８のホモログの遺伝子が、以下の（１Ａ）～（１Ｆ）：
（１Ａ）配列番号１、２、３又は４８に記載の塩基配列、
（１Ｂ）配列番号４、５、６又は４９に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（１Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
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が付与されている遺伝子の塩基配列、
（１Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（１Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（１Ｅ）（１Ａ）、（１Ｂ）、（１Ｃ）又は（１Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（１Ｆ）（１Ａ）、（１Ｂ）、（１Ｃ）、（１Ｄ）又は（１Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、（１）に記載の方法。
（３）
ＴＧＡ９又はＴＧＡ９のホモログの遺伝子が、以下の（２Ａ）～（２Ｆ）：
（２Ａ）配列番号３４、３５、３６、３７又は３８に記載の塩基配列、
（２Ｂ）配列番号３９、４０、４１、４２又は４３に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（２Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
aly:9325751、csat:104755012、crb:17900540、eus:EUTSA_v10007490mg、bna:106412233、boe:106344082、brp:103871579、又は、rsz:108860791
が付与されている遺伝子の塩基配列、
（２Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（２Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（２Ｅ）（２Ａ）、（２Ｂ）、（２Ｃ）又は（２Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（２Ｆ）（２Ａ）、（２Ｂ）、（２Ｃ）、（２Ｄ）又は（２Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、（１）に記載の方法。
（４）
ＧＲＦ１５又はＧＲＦ１５のホモログの遺伝子が、以下の（３Ａ）～（３Ｆ）：
（３Ａ）配列番号２６に記載の塩基配列、
（３Ｂ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（３Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
bna:106429451、boe:106342871、又は、brp:103863788
が付与されている遺伝子の塩基配列、
（３Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（３Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（３Ｅ）（３Ａ）、（３Ｂ）、（３Ｃ）又は（３Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（３Ｆ）（３Ａ）、（３Ｂ）、（３Ｃ）、（３Ｄ）又は（３Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、（１）に記載の方法。
（５）
Ａｔ３ｇ６１５４０又はＡｔ３ｇ６１５４０のホモログの遺伝子が、以下の（４Ａ）～（４Ｆ）：
（４Ａ）配列番号２８に記載の塩基配列、
（４Ｂ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（４Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
aly:9314457、crb:17884851、csat:104788446、eus:EUTSA、rsz:108814367、bna:106406599、boe:106296419、又は、brp:103830306
が付与されている遺伝子の塩基配列、
（４Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（４Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（４Ｅ）（４Ａ）、（４Ｂ）、（４Ｃ）又は（４Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（４Ｆ）（４Ａ）、（４Ｂ）、（４Ｃ）、（４Ｄ）又は（４Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、（１）に記載の方法。
（６）
Ａｔ２ｇ０１８１８又はＡｔ２ｇ０１８１８のホモログの遺伝子が、以下の（５Ａ）～（５Ｆ）：
（５Ａ）配列番号４４又は４５に記載の塩基配列、
（５Ｂ）配列番号４６又は４７に記載のアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（５Ｃ）ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）において以下のＩＤ：
aly:9311163、eus:EUTSA_v10005480mg、csat:104710111、crb:17885477、brp:103854038、bna:106432932、boe:106325697、又は、rsz:108809176
が付与されている遺伝子の塩基配列、
（５Ｄ）ＫＥＧＧにおいて（５Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列、又は、当該アミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列、
（５Ｅ）（５Ａ）、（５Ｂ）、（５Ｃ）又は（５Ｄ）の塩基配列と７０％以上の配列同一性を有する塩基配列、
（５Ｆ）（５Ａ）、（５Ｂ）、（５Ｃ）、（５Ｄ）又は（５Ｅ）の塩基配列と相補的な塩基配列、
のいずれかの塩基配列を含むＤＮＡ又はＲＮＡである、（１）に記載の方法。
（７）
工程１１が、植物から取得したＤＮＡ又はＲＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行い前記遺伝子の発現を測定することを含む、（１）～（６）のいずれかに記載の方法。
（８）
植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価するためのマーカーであって、
ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の全部又は一部、或いは、前記遺伝子に由来するタンパク質からなるマーカー。
（９）
クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力が高い植物を選抜する方法であって、
植物におけるＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程２１と、
工程２１において測定された、前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、対照となる植物と比較して低い植物を選抜する工程２２と
を含む方法。
（１０）
工程２１が、植物から取得したＤＮＡ又はＲＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行い前記遺伝子の発現を測定することを含む、（９）に記載の方法。
（１１）
クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力が高い植物を育種する方法であって、
植物の第１の親個体と、ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、前記第１の親個体と同じ又はより低い第２の親個体とを交配して子孫を得る工程３１と、
前記子孫における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程３２と、
工程３２において測定された、前記子孫における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、前記第２の親個体における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性と同じ又はより低い場合に、前記子孫を選抜する工程３３と
を含む方法。
（１２）
工程３１が、前記子孫から取得したＤＮＡ又はＲＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行い前記遺伝子の発現を測定することを含む、（１１）に記載の方法。
（１３）
植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を向上させる方法であって、
植物において、ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を抑制する工程４１
を含む方法。
（１４）
工程４１が、
（Ｉ）植物のゲノムＤＮＡにおける前記遺伝子の破壊、
（ＩＩ）植物への、前記遺伝子に対するアンチセンスＤＮＡの導入、並びに、
（ＩＩＩ）植物への、前記遺伝子に由来するタンパク質に対するアンタゴニストの導入、
のいずれか１つ以上を含む、（１３）に記載の方法。
（１５）
ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が抑制された植物（ただしシロイヌナズナである場合を除く）。

【発明の効果】

【0013】

上記（１）～（７）に記載の方法によれば、植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を簡便に評価することができる。

【0014】

上記（８）に記載のマーカーは、植物における前記１以上の能力を評価するために有用である。

【0015】

上記（９）又は（１０）に記載の方法によれば、前記１以上の能力が高い植物を選抜することができる。

【0016】

上記（１１）又は（１２）に記載の方法によれば、前記１以上の能力が高い植物を育種することができる。

【0017】

上記（１３）又は（１４）に記載の方法によれば、植物における前記１以上の能力を向上させることができる。
上記（１５）に記載の植物は、前記１以上の能力が高められた植物である。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】図１は、シロイヌナズナのＡＬＫＢＨ８遺伝子の４つのスプライスバリアント（Ａｔ１ｇ３１６００．１、Ａｔ１ｇ３１６００．２、Ａｔ１ｇ３１６００．３、Ａｔ１ｇ３１６００．４）のコーディング領域における、シロイヌナズナＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＬＫ＿０８３８３８Ｃ、ＳＡＬＫ＿０９４５０２Ｃ）でのＴ－ＤＮＡの挿入位置、及び、プライマーの位置を示す。

【図2】図２は、シロイヌナズナのＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＬＫ＿０８３８３８Ｃ、ＳＡＬＫ＿０９４５０２Ｃ）、及び、野生株のＤＮＡを鋳型とし、Ａｔ１ｇ３１６００遺伝子を検出するためのプライマーセット１、又は、Ｔ－ＤＮＡが挿入された境界領域を検出するためのプライマーセット２を用いたＰＣＲの結果を示す。

【図3】図３は、播種後１０週目の、シロイヌナズナの野生株及び２種のＡＬＫＢＨ８破壊株（ａｌｋｂｈ８－１、ａｌｋｂｈ８－２）の写真である。

【図4】図４は、シロイヌナズナのＧＲＦ１５（Ａｔ２ｇ１０４５０）遺伝子のコーディング領域における、シロイヌナズナＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＬＫ＿１１２８２５）でのＴ－ＤＮＡの挿入位置、及び、プライマーの位置を示す。

【図5】図５は、シロイヌナズナのＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＬＫ＿１１２８２５）、及び、野生株のＤＮＡを鋳型とし、ＧＲＦ１５（Ａｔ２ｇ１０４５０）遺伝子を検出するためのプライマーセット１、又は、Ｔ－ＤＮＡが挿入された境界領域を検出するためのプライマーセット２を用いたＰＣＲの結果を示す。

【図6】図６は、シロイヌナズナのＫＰＨＭＴ２（Ａｔ３ｇ６１５３０）遺伝子及びＡｔ３ｇ６１５４０遺伝子のコーディング領域における、シロイヌナズナＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＬＫ＿１３５８７８）でのＴ－ＤＮＡの挿入位置、及び、プライマーの位置を示す。

【図7】図７は、シロイヌナズナのＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＬＫ＿１３５８７８）、及び、野生株のＤＮＡを鋳型とし、ＫＰＨＭＴ２（Ａｔ３ｇ６１５３０）遺伝子及びＡｔ３ｇ６１５４０遺伝子を検出するためのプライマーセット１、又は、Ｔ－ＤＮＡが挿入された境界領域を検出するためのプライマーセット２を用いたＰＣＲの結果を示す。

【図8】図８は、シロイヌナズナのＴＧＡ９（Ａｔ１ｇ０８３２０）遺伝子の５つのスプライシングバリアント（Ａｔ１ｇ０８３２０．１、Ａｔ１ｇ０８３２０．２、Ａｔ１ｇ０８３２０．３、Ａｔ１ｇ０８３２０．４及びＡｔ１ｇ０８３２０．５）のコーディング領域における、シロイヌナズナＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＬＫ＿０９１３４９）でのＴ－ＤＮＡの挿入位置、及び、プライマーの位置を示す。

【図9】図９は、シロイヌナズナのＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＬＫ＿０９１３４９）、及び、野生株のＤＮＡを鋳型とし、ＴＧＡ９（Ａｔ１ｇ０８３２０）遺伝子を検出するためのプライマーセット１、又は、Ｔ－ＤＮＡが挿入された境界領域を検出するためのプライマーセット２を用いたＰＣＲの結果を示す。

【図10】図１０は、シロイヌナズナのＡｔ２ｇ０１８１８遺伝子の２つのスプライシングバリアント（Ａｔ２ｇ０１８１８．１及びＡｔ２ｇ０１８１８．２）のコーディング領域における、シロイヌナズナＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＩＬ＿５６８＿Ｅ０１）でのＴ－ＤＮＡの挿入位置、及び、プライマーの位置を示す。

【図11】図１１は、シロイヌナズナのＴ－ＤＮＡ挿入変異体（ＳＡＩＬ＿５６８＿Ｅ０１）、及び、野生株のＤＮＡを鋳型とし、Ａｔ２ｇ０１８１８遺伝子を検出するためのプライマーセット１、又は、Ｔ－ＤＮＡが挿入された境界領域を検出するためのプライマーセット２を用いたＰＣＲの結果を示す。

【図12】図１２は、クロロフィルが維持されている度合いを示す評価点が０点、１点、２点、３点である場合の、シロイヌナズナのロゼット葉の外観を示す。

【図13】図１３は、シロイヌナズナの野生株（Ｃｏｌ）及びＧＲＦ１５、Ａｔ３ｇ６１５４０、ＴＧＡ９、Ａｔ２ｇ０１８１８遺伝子破壊株の、播種後日数（ＤＡＳ）４８日目、５６日目、６３日目、７０日目の各時点での、１株あたりの緑葉指数の平均値（ｎ＝９）を示す。

【図14】図１４は、シロイヌナズナの野生株（Ｃｏｌ）及びＧＲＦ１５、Ａｔ３ｇ６１５４０、ＴＧＡ９、Ａｔ２ｇ０１８１８遺伝子破壊株の、生育終期の播種１０週目（７０日目）における、クロロフィル含量の評価点が１～３の範囲のロゼット葉（緑葉）の１株あたりの合計枚数の平均値（各株ｎ＝９）と、野生株の緑葉枚数を１００としたときの、各遺伝子破壊株の緑葉枚数の相対比を示す。

【図15】図１５は、イネにおけるＡＬＫＢＨ８遺伝子のオルソログに当たるＯｓ０４ｇ０６０２７００遺伝子のコーディング領域における、ＯｓＡＬＫＢＨ８＿ｓｅｑ＿ｆプライマー、ＯｓＡＬＫＢＨ８＿ｓｅｑ＿ｒプライマー及びゲノム編集に用いたガイドＲＮＡ（ｇＯｓＡＬＫＢＨ８－１）の位置を示す。

【図16】図１６は、イネＯｓＡＬＫＢＨ８遺伝子破壊株及び野生型イネの、８週齢時点でのＳＰＡＤ値（葉のクロロフィル量と相関する指標）を示す。

【発明を実施するための形態】

【0019】

本発明が対象とする「植物」の種類は特に限定されず双子葉植物、単子葉植物等の種々の植物であってよい。

【0020】

双子葉植物としては、例えばアサガオ属植物、ヒルガオ属植物、サツマイモ属植物、ネナシカズラ属植物、ナデシコ属植物、ハコベ属植物、タカネツメクサ属植物、ミミナグサ属植物、ツメクサ属植物、ノミノツヅリ属植物、オオヤマフスマ属植物、ワチガイソウ属植物、ハマハコベ属植物、オオツメクサ属植物、シオツメクサ属植物、マンテマ属植物、センノウ属植物、フシグロ属植物、ナデシコ科植物、モクマモウ科植物、ドクダミ科植物、コショウ科植物、センリョウ科植物、ヤナギ科植物、ヤマモモ科植物、クルミ科植物、カバノキ科植物、ブナ科植物、ニレ科植物、クワ科植物、イラクサ科植物、カワゴケソウ科植物、ヤマモガシ科植物、ボロボロノキ科植物、ビャクダン科植物、ヤドリギ科植物、ウマノスズクサ科植物、ヤッコソウ科植物、ツチトリモチ科植物、タデ科植物、アカザ科植物、ヒユ科植物、オシロイバナ科植物、ヤマトグサ科植物、ヤマゴボウ科植物、ツルナ科植物、スベリヒユ科植物、モクレン科植物、ヤマグルマ科植物、カツラ科植物、スイレン科植物、マツモ科植物、キンポウゲ科植物、アケビ科植物、メギ科植物、ツヅラフジ科植物、ロウバイ科植物、クスノキ科植物、ケシ科植物、フウチョウソウ科植物、アブラナ科植物、モウセンゴケ科植物、ウツボカズラ科植物、ベンケイソウ科植物、ユキノシタ科植物、トベラ科植物、マンサク科植物、スズカケノキ科植物、バラ科植物、マメ科植物、カタバミ科植物、フウロソウ科植物、アマ科植物、ハマビシ科植物、ミカン科植物、ニガキ科植物、センダン科植物、ヒメハギ科植物、トウダイグサ科植物、アワゴケ科植物、ツゲ科植物、ガンコウラン科植物、ドクウツギ科植物、ウルシ科植物、モチノキ科植物、ニシキギ科植物、ミツバウツギ科植物、クロタキカズラ科植物、カエデ科植物、トチノキ科植物、ムクロジ科植物、アワブキ科植物、ツリフネソウ科植物、クロウメモドキ科植物、ブドウ科植物、ホルトノキ科植物、シナノキ科植物、アオイ科植物、アオギリ科植物、サルナシ科植物、ツバキ科植物、オトギリソウ科植物、ミゾハコベ科植物、ギョリュウ科植物、スミレ科植物、イイギリ科植物、キブシ科植物、トケイソウ科植物、シュウカイドウ科植物、サボテン科植物、ジンチョウゲ科植物、グミ科植物、ミソハギ科植物、ザクロ科植物、ヒルギ科植物、ウリノキ科植物、ノボタン科植物、ヒシ科植物、アカバナ科植物、アリノトウグサ科植物、スギナモ科植物、ウコギ科植物、セリ科植物、ミズキ科植物、イワウメ科植物、リョウブ科植物、イチヤクソウ科植物、ツツジ科植物、ヤブコウジ科植物、サクラソウ科植物、イソマツ科植物、カキノキ科植、ハイノキ科植物、エゴノキ科植物、モクセイ科植物、フジウツギ科植物、リンドウ科植物、キョウチクトウ科植物、ガガイモ科植物、ハナシノブ科植物、ムラサキ科植物、クマツヅラ科植物、シソ科植物、ナス科植物、ゴマノハグサ科植物、ノウゼンカズラ科植物、ゴマ科植物、ハマウツボ科植物、イワタバコ科植物、タヌキモ科植物、キツネノマゴ科植物、ハマジンチョウ科植物、ハエドクソウ科植物、オオバコ科植物、アカネ科植物、スイカズラ科植物、レンプクソウ科植物、オミナエシ科植物、マツムシソウ科植物、ウリ科植物、キキョウ科植物、キク科植物等が例示できる。

【0021】

単子葉植物としては例えばウキクサ属植物、アオウキクサ属植物、カトレア属植物，シンビジウム属植物，デンドロビューム属植物，ファレノプシス属植物，バンダ属植物，パフィオペディラム属植物，ラン科植物、ガマ科植物、ミクリ科植物、ヒルムシロ科植物、イバラモ科植物、ホロムイソウ科植物、オモダカ科植物、トチカガミ科植物、ホンゴウソウ科植物、イネ科植物、カヤツリグサ科植物、ヤシ科植物、サトイモ科植物、ホシグサ科植物、ツユクサ科植物、ミズアオイ科植物、イグサ科植物、ビャクブ科植物、ユリ科植物、ヒガンバナ科植物、ヤマノイモ科植物、アヤメ科植物、バショウ科植物、ショウガ科植物、カンナ科植物、ヒナノシャクジョウ科植物等が例示できる。単子葉植物としてはイネ科植物が好ましく、イネ科植物としてはイネが特に好ましい。

【0022】

＜１．クロロフィルを保持する能力＞
本発明において「クロロフィルを保持する能力」とは、葉などの植物体中に生産されたクロロフィルを一定期間にわたり保持する能力を指す。植物体中にクロロフィルをより長時間に亘って保持することができる植物は、クロロフィルを保持する能力が高い植物であるといえる。

【0023】

高等植物はクロロフィルとしてクロロフィルａとクロロフィルｂとを有する。本発明においてクロロフィルは、クロロフィルａ及びクロロフィルｂの少なくとも一方、好ましくは両方を指す。

【0024】

＜２．クロロフィルを生産する能力＞
本発明において「クロロフィルを生産する能力」とは、葉などの植物体中においてクロロフィルを生産する能力を指す。植物体中において、特に葉において、クロロフィルをより多く生産することができる植物は、クロロフィルを生産する能力が高い植物であるといえる。

【0025】

＜３．生長する能力＞
本発明において植物の「生長」とは、典型的には、植物の各生長段階（幼苗、栄養生長、生殖生長）のいずれかの時期における、バイオマスの重量、草丈、葉面積、茎数のいずれか１項目以上が増加することを指す。これらの項目の増加がより大きい植物は、生長する能力が高い植物であるといえる。

【0026】

＜４．遺伝子＞
＜４．１．ＡＬＫＢＨ８又はＡＬＫＢＨ８のホモログ＞
ＡＬＫＢＨ８（ＡｌｋＢ ｈｏｍｏｌｏｇ ８）は、ＲＮＡ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆ（ＲＲＭ）、ヒドロキシル活性を持つＡｌｋＢ Ｄｏｍａｉｎ及びメチルトランスフェラーゼ活性を持つＴｒｍ９－Ｌｉｋｅ Ｄｏｍａｉｎのいずれかから構成されるＡＬＫＢＨファミリーの一つである。シロイヌナズナのＡＬＫＢＨ８（Ａｔ１ｇ３１６００）には４つのスプライシングバリアントＡｔ１ｇ３１６００．１、Ａｔ１ｇ３１６００．２、Ａｔ１ｇ３１６００．３、Ａｔ１ｇ３１６００．４が存在する。Ａｔ１ｇ３１６００．１及びＡｔ１ｇ３１６００．３のコーディング領域の塩基配列を配列番号１、Ａｔ１ｇ３１６００．２のコーディング領域の塩基配列を配列番号２、Ａｔ１ｇ３１６００．４のコーディング領域の塩基配列を配列番号３にそれぞれ示す。Ａｔ１ｇ３１６００．１及びＡｔ１ｇ３１６００．３のアミノ酸配列を配列番号４、Ａｔ１ｇ３１６００．２のアミノ酸配列を配列番号５、Ａｔ１ｇ３１６００．４のアミノ酸配列を配列番号６にそれぞれ示す。

【0027】

イネにおけるＡＬＫＢＨ８遺伝子のホモログ（オルソログ）に当たるＯｓ０４ｇ０６０２７００（以下、ＯｓＡＬＫＢＨ８と表記）は、ＫＥＧＧ（http://www.genome.jp/kegg/）にdosa:Os04t0602700-00のIDが付与され、その塩基配列と、該塩基配列にコードされるアミノ酸配列が登録されている。ＯｓＡＬＫＢＨ８の塩基配列を配列番号４８に、アミノ酸配列を配列番号４９に示す。

【0028】

本発明において「ＡＬＫＢＨ８又はＡＬＫＢＨ８のホモログの遺伝子」は、シロイヌナズナ由来のＡＬＫＢＨ８遺伝子に限らず、同等の機能を有する遺伝子、及び、その変異体も包含する。

【0029】

ＡＬＫＢＨ８又はＡＬＫＢＨ８のホモログの遺伝子として、ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）（http://www.genome.jp/kegg/）に以下のＩＤが付与された遺伝子が登録されている。ＫＥＧＧでは、各遺伝子についてその塩基配列と、該塩基配列にコードされるアミノ酸配列が登録されている。

【0030】

【表1】

【0031】

より好ましくは、ＡＬＫＢＨ８又はＡＬＫＢＨ８のホモログの遺伝子は、上記（１Ａ）～（１Ｆ）のいずれかの塩基配列を含む又は上記（１Ａ）～（１Ｆ）のいずれかの塩基配列からなるＤＮＡ又はＲＮＡである。

【0032】

ここで、ＡＬＫＢＨ８又はＡＬＫＢＨ８のホモログの遺伝子がＲＮＡである場合、上記（１Ａ）～（１Ｆ）のいずれかの塩基配列におけるチミン（Ｔ）は、ウラシル（Ｕ）に読み替える。

【0033】

上記（１Ｂ）のより好ましい実施形態は、配列番号４、５、６又は４９に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、配列番号４、５、６又は４９に記載のアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（１Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、ＡＬＫＢＨ８活性を有するものであればよい。本発明においてＡＬＫＢＨ８活性とは、メチル化したウリジン(mcm⁵U: 5-methoxycarbonyl-methyluridine）をヒドロキシル化して(S)-mchm⁵U: 5-(S)-[methoxycarbonyl-(hydroxy)methyl]uridineに変換する活性を指す。好ましくは、上記（１Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡＬＫＢＨ８活性は、配列番号４、５、６又は４９に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質のＡＬＫＢＨ８活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0034】

上記（１Ｄ）のより好ましい実施形態は、ＫＥＧＧにおいて上記（１Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、ＫＥＧＧにおいて上記（１Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（１Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、ＡＬＫＢＨ８活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（１Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡＬＫＢＨ８活性は、ＫＥＧＧにおいて上記（１Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質のＡＬＫＢＨ８活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0035】

上記（１Ｅ）のより好ましい実施形態は、上記（１Ａ）、上記（１Ｂ）、上記（１Ｃ）又は上記（１Ｄ）の塩基配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有する塩基配列である。上記（１Ｅ）の塩基配列は、それがコードするアミノ酸配列からなるタンパク質がＡＬＫＢＨ８活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（１Ｅ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡＬＫＢＨ８活性は、上記（１Ａ）、上記（１Ｂ）、上記（１Ｃ）又は上記（１Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡＬＫＢＨ８活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0036】

上記（１Ｂ）、（１Ｄ）及び（１Ｅ）において、同一性の値は、複数のアミノ酸配列又は塩基配列間の同一性を演算するソフトウェア（例えば、ＦＡＳＴＡ、ＤＮＡＳＩＳ、及びＢＬＡＳＴ）を用いてデフォルトの設定で算出した値を示す。塩基配列の同一性の値は、一致度が最大となるように一対の塩基配列をアライメントした際に一致する塩基の数を算出し、当該一致する塩基の数の、比較した塩基配列の全塩基数に対する割合として算出される。同一性の決定方法の詳細については、例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２５，３３８９－３４０２，１９７７及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０，１９９０に記載されている。後述する（２Ｂ）、（２Ｄ）、（２Ｅ）、（３Ｂ）、（３Ｄ）、（３Ｅ）、（４Ｂ）、（４Ｄ）、（４Ｅ）、（５Ｂ）、（５Ｄ）及び（５Ｅ）における同一性も同様に算出される。

【0037】

＜４．２．ＴＧＡ９又はＴＧＡ９のホモログ＞
ＴＧＡ９は、塩基性領域ロイシンジッパー転写因子の一つである。シロイヌナズナのＴＧＡ９（Ａｔ１ｇ０８３２０）には５つのスプライシングバリアントＡｔ１ｇ０８３２０．１、Ａｔ１ｇ０８３２０．２、Ａｔ１ｇ０８３２０．３、Ａｔ１ｇ０８３２０．４及びＡｔ１ｇ０８３２０．５が存在する。Ａｔ１ｇ０８３２０．１、Ａｔ１ｇ０８３２０．２、Ａｔ１ｇ０８３２０．３、Ａｔ１ｇ０８３２０．４及びＡｔ１ｇ０８３２０．５のそれぞれのコーディング領域の塩基配列を配列番号３４、３５、３６、３７、３８に、それぞれのアミノ酸配列を３９、４０、４１、４２、４３に示す。

【0038】

本発明において「ＴＧＡ９又はＴＧＡ９のホモログの遺伝子」は、シロイヌナズナ由来のＴＧＡ９遺伝子に限らず、同等の機能を有する遺伝子、及び、その変異体も包含する。

【0039】

ＴＧＡ９又はＴＧＡ９のホモログの遺伝子として、ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）（http://www.genome.jp/kegg/）に以下のＩＤが付与された遺伝子が登録されている。ＫＥＧＧでは、各遺伝子についてその塩基配列と、該塩基配列にコードされるアミノ酸配列が登録されている。

【0040】

【表2】

【0041】

より好ましくは、ＴＧＡ９又はＴＧＡ９のホモログの遺伝子は、上記（２Ａ）～（２Ｆ）のいずれかの塩基配列を含む又は上記（２Ａ）～（２Ｆ）のいずれかの塩基配列からなるＤＮＡ又はＲＮＡである。

【0042】

ここで、ＴＧＡ９又はＴＧＡ９のホモログの遺伝子がＲＮＡである場合、上記（２Ａ）～（２Ｆ）のいずれかの塩基配列におけるチミン（Ｔ）は、ウラシル（Ｕ）に読み替える。

【0043】

上記（２Ｂ）のより好ましい実施形態は、配列番号３９、４０、４１、４２又は４３に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、配列番号３９、４０、４１、４２又は４３に記載のアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（２Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、ＴＧＡ９活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（２Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＴＧＡ９活性は、配列番号３９、４０、４１、４２又は４３に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質のＴＧＡ９活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0044】

上記（２Ｄ）のより好ましい実施形態は、ＫＥＧＧにおいて上記（２Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、ＫＥＧＧにおいて上記（２Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（２Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、ＴＧＡ９活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（２Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＴＧＡ９活性は、ＫＥＧＧにおいて上記（２Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質のＴＧＡ９活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0045】

上記（２Ｅ）のより好ましい実施形態は、上記（２Ａ）、上記（２Ｂ）、上記（２Ｃ）又は上記（２Ｄ）の塩基配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有する塩基配列である。上記（２Ｅ）の塩基配列は、それがコードするアミノ酸配列からなるタンパク質がＴＧＡ９活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（２Ｅ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＴＧＡ９活性は、上記（２Ａ）、上記（２Ｂ）、上記（２Ｃ）又は上記（２Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＴＧＡ９活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0046】

＜４．３．ＧＲＦ１５又はＧＲＦ１５のホモログ＞
ＧＲＦ１５は、生長調節因子の一つである。シロイヌナズナのＧＲＦ１５（Ａｔ２ｇ１０４５０）遺伝子のコーディング領域の塩基配列を配列番号２６に示し、当該遺伝子によりコードされているシロイヌナズナＧＲＦ１５のアミノ酸配列を配列番号２７に示す。

【0047】

本発明において「ＧＲＦ１５又はＧＲＦ１５のホモログの遺伝子」は、シロイヌナズナ由来のＧＲＦ１５遺伝子に限らず、同等の機能を有する遺伝子、及び、その変異体も包含する。

【0048】

ＧＲＦ１５又はＧＲＦ１５のホモログの遺伝子として、ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）（http://www.genome.jp/kegg/）に以下のＩＤが付与された遺伝子が登録されている。ＫＥＧＧでは、各遺伝子についてその塩基配列と、該塩基配列にコードされるアミノ酸配列が登録されている。

【0049】

【表3】

【0050】

より好ましくは、ＧＲＦ１５又はＧＲＦ１５のホモログの遺伝子は、上記（３Ａ）～（３Ｆ）のいずれかの塩基配列を含む又は上記（３Ａ）～（３Ｆ）のいずれかの塩基配列からなるＤＮＡ又はＲＮＡである。

【0051】

ここで、ＧＲＦ１５又はＧＲＦ１５のホモログの遺伝子がＲＮＡである場合、上記（３Ａ）～（３Ｆ）のいずれかの塩基配列におけるチミン（Ｔ）は、ウラシル（Ｕ）に読み替える。

【0052】

上記（３Ｂ）のより好ましい実施形態は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（３Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、ＧＲＦ１５活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（３Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＧＲＦ１５活性は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質のＧＲＦ１５活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0053】

上記（３Ｄ）のより好ましい実施形態は、ＫＥＧＧにおいて上記（３Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、ＫＥＧＧにおいて上記（３Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（３Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、ＧＲＦ１５活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（３Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＧＲＦ１５活性は、ＫＥＧＧにおいて上記（３Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質のＧＲＦ１５活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0054】

上記（３Ｅ）のより好ましい実施形態は、上記（３Ａ）、上記（３Ｂ）、上記（３Ｃ）又は上記（３Ｄ）の塩基配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有する塩基配列である。上記（３Ｅ）の塩基配列は、それがコードするアミノ酸配列からなるタンパク質がＧＲＦ１５活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（３Ｅ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＧＲＦ１５活性は、上記（３Ａ）、上記（３Ｂ）、上記（３Ｃ）又は上記（３Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＧＲＦ１５活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0055】

＜４．４．Ａｔ３ｇ６１５４０又はＡｔ３ｇ６１５４０のホモログ＞
Ａｔ３ｇ６１５４０がコードするタンパク質は、α／β－ヒドロラーゼスーパーファミリータンパク質の一つである。シロイヌナズナのＡｔ３ｇ６１５４０遺伝子のコーディング領域の塩基配列を配列番号２８に示し、当該遺伝子によりコードされているシロイヌナズナＡｔ３ｇ６１５４０のアミノ酸配列を配列番号２９に示す。

【0056】

本発明において「Ａｔ３ｇ６１５４０又はＡｔ３ｇ６１５４０のホモログの遺伝子」は、シロイヌナズナ由来のＡｔ３ｇ６１５４０遺伝子に限らず、同等の機能を有する遺伝子、及び、その変異体も包含する。

【0057】

Ａｔ３ｇ６１５４０又はＡｔ３ｇ６１５４０のホモログの遺伝子として、ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）（http://www.genome.jp/kegg/）に以下のＩＤが付与された遺伝子が登録されている。ＫＥＧＧでは、各遺伝子についてその塩基配列と、該塩基配列にコードされるアミノ酸配列が登録されている。

【0058】

【表4】

【0059】

より好ましくは、Ａｔ３ｇ６１５４０又はＡｔ３ｇ６１５４０のホモログの遺伝子は、上記（４Ａ）～（４Ｆ）のいずれかの塩基配列を含む又は上記（４Ａ）～（４Ｆ）のいずれかの塩基配列からなるＤＮＡ又はＲＮＡである。

【0060】

ここで、Ａｔ３ｇ６１５４０又はＡｔ３ｇ６１５４０のホモログの遺伝子がＲＮＡである場合、上記（４Ａ）～（４Ｆ）のいずれかの塩基配列におけるチミン（Ｔ）は、ウラシル（Ｕ）に読み替える。

【0061】

上記（４Ｂ）のより好ましい実施形態は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、配列番号２９に記載のアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（４Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、Ａｔ３ｇ６１５４０活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（４Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ３ｇ６１５４０活性は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ３ｇ６１５４０活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0062】

上記（４Ｄ）のより好ましい実施形態は、ＫＥＧＧにおいて上記（４Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、ＫＥＧＧにおいて上記（４Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（４Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、Ａｔ３ｇ６１５４０活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（４Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ３ｇ６１５４０活性は、ＫＥＧＧにおいて上記（４Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ３ｇ６１５４０活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0063】

上記（４Ｅ）のより好ましい実施形態は、上記（４Ａ）、上記（４Ｂ）、上記（４Ｃ）又は上記（４Ｄ）の塩基配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有する塩基配列である。上記（４Ｅ）の塩基配列は、それがコードするアミノ酸配列からなるタンパク質がＡｔ３ｇ６１５４０活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（４Ｅ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ３ｇ６１５４０活性は、上記（４Ａ）、上記（４Ｂ）、上記（４Ｃ）又は上記（４Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ３ｇ６１５４０活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0064】

＜４．５．Ａｔ２ｇ０１８１８又はＡｔ２ｇ０１８１８のホモログ＞
Ａｔ２ｇ０１８１８がコードするタンパク質は、ＰＬＡＴＺ型転写因子ファミリータンパク質の一つである。シロイヌナズナのＡｔ２ｇ０１８１８遺伝子には２つのスプライシングバリアントＡｔ２ｇ０１８１８．１及びＡｔ２ｇ０１８１８．２が存在する。Ａｔ２ｇ０１８１８．１及びＡｔ２ｇ０１８１８．２のそれぞれのコーディング領域の塩基配列を配列番号４４、４５に、それぞれのアミノ酸配列を配列番号４６、４７に示す。

【0065】

本発明において「Ａｔ２ｇ０１８１８又はＡｔ２ｇ０１８１８のホモログの遺伝子」は、シロイヌナズナ由来のＡｔ２ｇ０１８１８遺伝子に限らず、同等の機能を有する遺伝子、及び、その変異体も包含する。

【0066】

Ａｔ２ｇ０１８１８又はＡｔ２ｇ０１８１８のホモログの遺伝子として、ＫＥＧＧ（京都エンサイクロペディア オブ ジーンズ アンド ゲノムス）（http://www.genome.jp/kegg/）に以下のＩＤが付与された遺伝子が登録されている。ＫＥＧＧでは、各遺伝子についてその塩基配列と、該塩基配列にコードされるアミノ酸配列が登録されている。

【0067】

【表5】

【0068】

より好ましくは、Ａｔ２ｇ０１８１８又はＡｔ２ｇ０１８１８のホモログの遺伝子は、上記（５Ａ）～（５Ｆ）のいずれかの塩基配列を含む又は上記（５Ａ）～（５Ｆ）のいずれかの塩基配列からなるＤＮＡ又はＲＮＡである。

【0069】

ここで、Ａｔ２ｇ０１８１８又はＡｔ２ｇ０１８１８のホモログの遺伝子がＲＮＡである場合、上記（５Ａ）～（５Ｆ）のいずれかの塩基配列におけるチミン（Ｔ）は、ウラシル（Ｕ）に読み替える。

【0070】

上記（５Ｂ）のより好ましい実施形態は、配列番号４６又は４７に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、配列番号４６又は４７に記載のアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（５Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、Ａｔ２ｇ０１８１８活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（５Ｂ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ２ｇ０１８１８活性は、配列番号４６又は４７に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ２ｇ０１８１８活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0071】

上記（５Ｄ）のより好ましい実施形態は、ＫＥＧＧにおいて上記（５Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列をコードする塩基配列、或いは、ＫＥＧＧにおいて上記（５Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。上記（５Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質は、Ａｔ２ｇ０１８１８活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（５Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ２ｇ０１８１８活性は、ＫＥＧＧにおいて上記（５Ｃ）に記載のＩＤが付与されている遺伝子にコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ２ｇ０１８１８活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0072】

上記（５Ｅ）のより好ましい実施形態は、上記（５Ａ）、上記（５Ｂ）、上記（５Ｃ）又は上記（５Ｄ）の塩基配列と好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の配列同一性を有する塩基配列である。上記（５Ｅ）の塩基配列は、それがコードするアミノ酸配列からなるタンパク質がＡｔ２ｇ０１８１８活性を有するものであればよい。好ましくは、上記（５Ｅ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ２ｇ０１８１８活性は、上記（５Ａ）、上記（５Ｂ）、上記（５Ｃ）又は上記（５Ｄ）の塩基配列がコードするアミノ酸配列からなるタンパク質のＡｔ２ｇ０１８１８活性の８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは１００％以上である。

【0073】

＜５．植物の能力を評価する方法＞
本発明の一態様は、
植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価する方法であって、
植物におけるＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程１１
を含む方法に関する。

【0074】

本発明者らは驚くべきことに、前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が抑制された植物は、前記発現及び活性が抑制されていない植物（例えば野生型植物）と比較して、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力が向上していることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0075】

工程１１において測定された検査対象植物の前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、対照となる植物（例えば、検査対象植物に対応する野生型植物や、育種の際の素材となった植物）と比較して抑制されている場合に、検査対象植物は、前記１以上の能力がより高い植物であると判断することができ、前記発現又は活性が、対照となる植物と比較して同等又はより高い場合には、検査対象植物は、前記１以上の能力が、対象となる植物と同等又はより低い植物であると判断することができる。

【0076】

本発明において「前記遺伝子に由来するタンパク質」とは、ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子から転写及び翻訳を経て生成されるタンパク質を指す。

【0077】

本発明において、前記遺伝子の発現は、植物の細胞内で前記遺伝子に対応するｍＲＮＡを定量することで測定してもよいし、植物の細胞内で前記遺伝子に由来するタンパク質を定量することで測定してもよいし、植物の細胞内で前記遺伝子に対応するゲノムＤＮＡの塩基配列の定量又は有無を検出することにより測定してもよい（前記遺伝子に対応するゲノムＤＮＡの塩基配列が存在しない場合は、前記遺伝子の発現はないと結論付けることができ、前記遺伝子に対応するゲノムＤＮＡの塩基配列が野生型よりも少ない場合は、前記遺伝子の発現が少ないと結論付けることができる）。

【0078】

本発明において、ＡＬＫＢＨ８及びＡＬＫＢＨ８のホモログから選択される１以上の遺伝子に由来するタンパク質の活性は、上記のＡＬＫＢＨ８活性を指標に測定することができる。

【0079】

本発明において、ＴＧＡ９及びＴＧＡ９のホモログから選択される１以上の遺伝子に由来するタンパク質の活性は、上記のＴＧＡ９活性を指標に測定することができる。

【0080】

本発明において、ＧＲＦ１５及びＧＲＦ１５のホモログから選択される１以上の遺伝子に由来するタンパク質の活性は、上記のＧＲＦ１５活性を指標に測定することができる。

【0081】

本発明において、Ａｔ３ｇ６１５４０及びＡｔ３ｇ６１５４０のホモログから選択される１以上の遺伝子に由来するタンパク質の活性は、上記のＡｔ３ｇ６１５４０活性を指標に測定することができる。

【0082】

本発明において、Ａｔ２ｇ０１８１８及びＡｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子に由来するタンパク質の活性は、上記のＡｔ２ｇ０１８１８活性を指標に測定することができる。

【0083】

工程１１は、好ましくは、植物から取得したＤＮＡ又はＲＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行い前記遺伝子の発現を測定することを含む。ここで、植物から取得したＤＮＡとしては、ゲノムＤＮＡや、ｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡ等が例示できる。植物から取得したＲＮＡとしてはｍＲＮＡが例示できる。核酸増幅反応のためのプライマーセットは、前記遺伝子の塩基配列に特徴的な領域を特異的に増幅できるように設計すればよい。核酸増幅反応は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）法により行ってもよいし、ＬＡＭＰ法などの等温増幅法により行ってもよい。

【0084】

＜６．マーカー＞
本発明の他の一態様は、
植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を評価するためのマーカーであって、
ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の全部又は一部、或いは、前記遺伝子に由来するタンパク質からなるマーカーに関する。

【0085】

上記の通り、前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が抑制された植物は、前記発現及び活性が抑制されていない植物（例えば野生型植物）と比較して、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力が向上していることから、前記遺伝子の全部又は一部、或いは、前記遺伝子に由来するタンパク質は、前記１以上の能力を評価するためのマーカーとして有用である。

【0086】

マーカーとしては特に、前記遺伝子に対応するｍＲＮＡ、当該ｍＲＮＡの断片、当該ｍＲＮＡから調製されたｃＤＮＡ、又は、当該ｃＤＮＡの断片が好ましい。

【0087】

＜７．植物を選抜する方法＞
本発明の他の一態様は、
クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力が高い植物を選抜する方法であって、
植物におけるＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程２１と、
工程２１において測定された、前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、対照となる植物と比較して低い植物を選抜する工程２２と
を含む方法に関する。

【0088】

工程２１は工程１１と同様に行うことができる。

【0089】

工程２１において測定された前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、対照となる植物と比較して低い植物は、当該対照となる植物と比較して、前記１以上の能力が高い植物であるから、工程２２ではこれを選抜する。

【0090】

工程２２における「対照となる植物」としては、対応する野生型植物や、育種の際の素材となった植物（親個体等）が典型例である。

【0091】

＜８．植物を育種する方法＞
本発明の他の一態様は、
クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力が高い植物を育種する方法であって、
植物の第１の親個体と、ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、前記第１の親個体と同じ又はより低い第２の親個体とを交配して子孫を得る工程３１と、
前記子孫における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を測定する工程３２と、
工程３２において測定された、前記子孫における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、前記第２の親個体における前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性と同じ又はより低い場合に、前記子孫を選抜する工程３３と
を含む方法に関する。

【0092】

工程３１における第２の親個体は、典型的には、前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が抑制された植物個体であり、より好ましくは、前記発現及び／又は活性が野生型と比較して抑制された植物個体である。

【0093】

本態様の方法では、前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が抑制された植物個体を第２の親個体として用い、第１の親個体と交配して得た子孫のなかから、前記発現及び／又は活性が第２の親個体と同様又はより低い植物個体を選抜することで、前記１以上の能力が高い植物を効率的に育種することが可能となる。

【0094】

工程３２は工程１１と同様に行うことができる。

【0095】

工程３２において測定された前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が、第２の親個体と比較して同じ又はより低い子孫は、第２の親個体と比較して、前記１以上の能力が同等またはより高い植物であるから、工程３３ではこれを選抜する。

【0096】

工程３３で選抜された子孫は、更に別の植物個体と交配して次世代の子孫を得るために用いてもよい。

【0097】

＜９．植物の能力を向上させる方法＞
本発明の他の一態様は、
植物における、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力を向上させる方法であって、
植物において、ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性を抑制する工程４１
を含む方法に関する。

【0098】

工程４１での、前記遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性の抑制は、植物の染色体上にある前記遺伝子の塩基配列又は前記遺伝子の発現を制御する機能を有する塩基配列（制御配列）を一部又は完全に欠損させること、前記遺伝子の発現量を低下させること、前記遺伝子の転写産物を分解すること、前記遺伝子の翻訳産物（タンパク質）の活性を抑制すること、前記タンパク質を分解すること、などを包含する。

【0099】

例えば、前記遺伝子の塩基配列又は制御配列を一部又は完全に欠損させる方法、或いは、前記遺伝子の発現を低下させる方法としては、薬剤、放射線や紫外線による遺伝子の変異、Ｔ－ＤＮＡ法、ゲノム編集法、トランスポゾン法、トランスジーン法、転写後遺伝子サイレンシング法、ＲＮＡｉ法、ナンセンス仲介減衰法（Ｎｏｎｓｅｎｓｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｅｃａｙ、ＮＭＤ）、リボザイム法、アンチセンス法、ｍｉＲＮＡ法（ｍｉｃｒｏ－ＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ法（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）、抗体法等を挙げることができる。

【0100】

前記タンパク質の活性を抑制する方法としては、前記タンパク質に対するアンタゴニストを植物に導入し、拮抗阻害、競争阻害させることを挙げることができる。

【0101】

工程４１は、特に好ましくは、
（Ｉ）植物のゲノムＤＮＡにおける前記遺伝子の破壊、
（ＩＩ）植物への、前記遺伝子に対するアンチセンスＤＮＡの導入、並びに、
（ＩＩＩ）植物への、前記遺伝子に由来するタンパク質に対するアンタゴニストの導入、
のいずれか１つ以上を含む。
（Ｉ）における前記遺伝子の破壊は、前記遺伝子の塩基配列又は制御配列を一部又は完全に欠損させることを指す。

【0102】

工程４１を行う時期は問わない。例えば、種子の段階でもいいし、各成長段階（幼苗、栄養成長、生殖成長）、カルスの段階でもよい。また、工程４１を行う植物の部位も問わない。例えば、生殖分裂組織または茎頂のような特定の細胞または細胞組織でのみでもよい。

【0103】

＜１０．植物＞
本発明の他の一態様は、
ＡＬＫＢＨ８、ＡＬＫＢＨ８のホモログ、ＴＧＡ９、ＴＧＡ９のホモログ、ＧＲＦ１５、ＧＲＦ１５のホモログ、Ａｔ３ｇ６１５４０、Ａｔ３ｇ６１５４０のホモログ、Ａｔ２ｇ０１８１８、及び、Ａｔ２ｇ０１８１８のホモログから選択される１以上の遺伝子の発現及び／又は前記遺伝子に由来するタンパク質の活性が抑制された植物（ただしシロイヌナズナである場合を除く）に関する。

【0104】

本態様の植物は、クロロフィルを保持する能力、クロロフィルを生産する能力、及び、生長する能力から選択される１以上の能力が高いため有用である。

【0105】

本態様の植物は、上記の工程４１を含む方法により生産することができる。
以下、本発明を、具体例を参照して説明する。しかしながら、以下の具体例は本発明の特範囲を限定するものではない。

【実施例0106】

（１）シロイヌナズナのＡＬＫＢＨ８遺伝子はＡＧＩコード：Ａｔ１ｇ３１６００で特定される。なお、このＡｔ１ｇ３１６００は、Leihne et al. (2011) Nucleic Acids Res 39: 7688-7701によってｔＲＮＡの修飾に関わる遺伝子として報告されている。

【0107】

シロイヌナズナＡＬＫＢＨ８（Ａｔ１ｇ３１６００）遺伝子のコーディング領域の塩基配列を配列番号１、２、３に示し、当該遺伝子によりコードされているＡＬＫＢＨ８のアミノ酸配列を配列番号４、５、６に示した。

【0108】

（２）シロイヌナズナのＴ－ＤＮＡタグライン
Ａｔ１ｇ３１６００遺伝子にＴ－ＤＮＡが挿入されたシロイヌナズナＴ－ＤＮＡ挿入変異体は、Nottingham Arabidopsis Stock Center (http://arabidopsis.info/)より入手したＳＡＬＫ＿０８３８３８ＣおよびＳＡＬＫ＿０９４５０２Ｃを用いた。

【0109】

（３）Ｔ－ＤＮＡ挿入位置およびホモラインの確認
ＳＡＬＫ＿０８３８３８Ｃ（「ａｌｋｂｈ８－１」とする）およびＳＡＬＫ＿０９４５０２Ｃ（「ａｌｋｂｈ８－２」とする）は、図１の通り、Ａｔ１ｇ３１６００遺伝子上にＴ－ＤＮＡが挿入されている。まず、入手した種子を栽培し、以下の手順により、ホモでＴ－ＤＮＡが挿入されている株であることを確認した。

【0110】

具体的には、下層にバーミキュライト（ニッタイ）、中層にクレハ園芸培土（クレハ）、上層にバーミキュライトを８０ｍｌ：４０ｍｌ：４０ｍｌの割合で積層した６ｃｍ×６ｃｍ×５ｃｍのポットに、ａｌｋｂｈ８－１株、ａｌｋｂｈ８－２株および野生型のシロイヌナズナ（Ｃｏｌ）を播種し、４週後、各々の株からロゼット葉を採取し、ＤＮＡを抽出した。ａｌｋｂｈ８－１株およびａｌｋｂｈ８－２株においてＴ－ＤＮＡが挿入された境界領域を検出するためのプライマーセット（プライマーセット２）として５’－ＴＧＧＴＴＣＡＣＧＴＡＧＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧ－３’（ＬＢａ１：配列番号７）および５’－ＴＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＣＧＴＴＴＧＴＴ－３’（ＡｔＡＬＫＢＨ８＿ｓｅｑ＿ｆ：配列番号８）を用い、Ａｔ１ｇ３１６００遺伝子を検出するためのプライマーセット（プライマーセット１）としてＡｔＡＬＫＢＨ８＿ｓｅｑ＿ｆおよび５’－ＴＣＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＧＧＡＴＡＡＴＡＡＧ－３’（ＡｔＡＬＫＢＨ８＿ｓｅｑ＿ｒ：配列番号９）を用いた（図１）。対照として野生型のシロイヌナズナ（Ｃｏｌ）においても上述のプライマーセットでＰＣＲを行った。ＰＣＲはいずれのプライマーセットにおいても１サイクルの９４℃（１分）に続けて、３５サイクルの９４℃（３０秒）、６０℃（３０秒）および７２℃（２分）で反応を行った。

【0111】

２つの変異株（ａｌｋｂｈ８－１株、ａｌｋｂｈ８－２株）のＤＮＡでは、どちらも、プライマーセット２を用いたＰＣＲによるＴ－ＤＮＡが挿入された境界領域の増幅が確認され、プライマーセット１を用いたＰＣＲによるＡｔ１ｇ３１６００遺伝子の増幅は確認されなかった（図２）。一方、野生型のシロイヌナズナ（Ｃｏｌ）のＤＮＡでは、プライマーセット２を用いたＰＣＲによるＴ－ＤＮＡが挿入された境界領域の増幅が確認されず、プライマーセット１を用いたＰＣＲによるＡｔ１ｇ３１６００遺伝子の増幅は確認された（図２）。これらのバンドパターンから、これらの変異体にはＴ－ＤＮＡがＡｔ１ｇ３１６００遺伝子へホモに挿入されていると判断した。

【実施例0112】

生長解析
＜実験１＞
野生型のシロイヌナズナ（Ｃｏｌ）と実施例１記載のＡＬＫＢＨ８破壊株（ａｌｋｂｈ８－１株、ａｌｋｂｈ８－２株）の生長を比較した。栽培は、約１００μｍｏｌ／ｍ^２／ｓの光強度にて１６時間明期、８時間暗期の日長周期とし、温度は２２℃の条件下で行った。培土はバーミキュライトとクレハ園芸培土を用いた。具体的には、６ｃｍ×６ｃｍ×５ｃｍポットの下層にバーミキュライト、中層にクレハ園芸培土、上層にバーミキュライトを８０ｍｌ：４０ｍｌ：４０ｍｌの割合で積層して栽培した。クレハ園芸培土には、窒素０．４７ｍｇ／ｍｌ、リン酸１．１８ｍｇ／ｍｌ、加里０．７１ｍｇ／ｍｌの割合で配合している。通常この条件で生育させたシロイヌナズナは新たな追肥なしでも窒素欠乏の兆候を示さない。栽植密度は１ポットあたり３個体になるように栽培した。水は適宜培土が乾燥しないように底面潅水した。Ｎ数は、地上部重の測定には各区９ポット、クロロフィル含量の測定には各区６個体とした。

【0113】

生長は４週目の地上部重および葉中のクロロフィル含量を測定し、評価した。その結果、４週目の野生株の地上部重は４８９ｍｇ／ポットであるのに対し、ＡＬＫＢＨ８破壊株の地上部重は６０１ｍｇ／ポット及び６１０ｍｇ／ポットであり、野生株と比較しＡＬＫＢＨ８破壊株は２３～２５％地上部重が大きいことが確認された。また、葉中の面積当たりのクロロフィル含量は、クロロフィルａ換算で野生株２１．６ｎｍｏｌ／ｃｍ^２に対し、ＡＬＫＢＨ８破壊株は２３．５ｎｍｏｌ／ｃｍ^２及び２２．６ｎｍｏｌ／ｃｍ^２であり、野生株に比較し５～９％増加していた。またクロロフィルｂは野生株５．４ｎｍｏｌ／ｃｍ^２に対し、ＡＬＫＢＨ８破壊株は５．９ｎｍｏｌ／ｃｍ^２及び５．７ｎｍｏｌ／ｃｍ^２であり、野生株と比較し６～９％増加していた。このように、ＡＬＫＢＨ８遺伝子を破壊することによって、葉中のクロロフィル含量が増加し、その結果光合成量が増加して植物の生長を促進することができることが確認された。

【0114】

【表6】

【0115】

＜実験２＞
次に、肥料量を増やし、シロイヌナズナ（Ｃｏｌ）野生株と実施例１記載のＡＬＫＢＨ８破壊株の生長を比較した。光強度、明暗期、温度は実験１と同様に行った。培土は６ｃｍ×６ｃｍ×５ｃｍポットの下層にバーミキュライト、中層にクレハ園芸培土、上層にバーミキュライトを４０ｍｌ：８０ｍｌ：４０ｍｌの割合で積層して栽培した。栽植密度は１ポットあたり３個体になるように栽培した。水は適宜培土が乾燥しないように底面潅水した。１週目から５週目まで週１回、１ｍＭの酸化型グルタチオンを底面潅水で施用した。また、４週目には液体肥料「ハイポネックス原液」（ハイポネックスジャパン製）を水で１０００倍希釈した液を底面潅水で与えた。Ｎ数は各区８ポット（２４個体）とした。

【0116】

試験は１０週目の分枝数、最終地上部重を測定し、生長を評価した。その結果、１０週目の分枝数は、野生株は１個体当たり平均３．７本であったのに対し、ＡＬＫＢＨ８破壊株は４．７本及び４．３本であり野生株と比較し８～１３％増加していた。最終地上部重は、野生株が１２６８ｍｇ／ポットであったのに対し、ＡＬＫＢＨ８破壊株は１２９８ｍｇ／ポット及び１３４３ｍｇ／ポットであり野生株と比較し２～６％増加した。

【0117】

以上の結果は、肥料を十分与えた条件下でもＡＬＫＢＨ８遺伝子を破壊することによって、さらに植物の生長速度を速くすることができることを示す。

【0118】

【表7】

【0119】

＜実験３＞
シロイヌナズナ（Ｃｏｌ）野生株と実施例１記載のＡＬＫＢＨ８破壊株のクロロフィル含量を経時的に比較した。試験条件（光強度、明暗期、温度）は実験１および２と同様に行った。培土は実験２と同様に６ｃｍ×６ｃｍ×５ｃｍポットの下層にバーミキュライト、中層にクレハ園芸培土、上層にバーミキュライトを４０ｍｌ：８０ｍｌ：４０ｍｌの割合で積層して栽培した。栽植密度は１ポットあたり３個体になるように栽培した。水は適宜培土が乾燥しないように底面潅水した。また、４週目には液体肥料「ハイポネックス原液」（ハイポネックスジャパン製）を水で１０００倍希釈した液を底面潅水で与えた。さらに、クロロフィル含量を測定する植物には、１週目から５週目まで週１回、１ｍＭの酸化型グルタチオンを底面潅水で施用した。

【0120】

播種後４週目、５週目、６週目にそれぞれ８個体からロゼット葉をサンプリングし、葉の重量あたりのクロロフィルａおよびクロロフィルｂの含量を測定した。また、各区２ポットで、１０週目にクロロフィルが保持されているロゼット葉の枚数を計数した。

【0121】

その結果、６週目に野生株はクロロフィルａおよびクロロフィルｂ含量がそれぞれ２．０７ｎｍｏｌ／ｍｇ、０．５６ｎｍｏｌ／ｍｇであるのに対し、ＡＬＫＢＨ８破壊株のａｌｋｂｈ８－１ではそれぞれ２．１６ｎｍｏｌ／ｍｇ、０．５９ｎｍｏｌ／ｍｇ、ａｌｋｂｈ８－２ではそれぞれ２．２３ｎｍｏｌ／ｍｇ、０．６１ｎｍｏｌ／ｍｇと、クロロフィル含量がより増加していた。また、１０週目の野生株は、ほぼ全てのロゼット葉が黄化し、クロロフィルが保持されていなかったのに対して、ＡＬＫＢＨ８破壊株のロゼット葉は、緑葉の数が１個体当たり２．３枚（ａｌｋｂｈ８－１）、１．０枚（ａｌｋｂｈ８－２）と、明らかにクロロフィルが保持されていることがわかった。

【0122】

従って、ＡＬＫＢＨ８を破壊することによって、長期間クロロフィル含量を保持することができることが明らかになった。

【0123】

【表8】

【0124】

【表9】