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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022159137
(43)【公開日】2022-10-17
(54)【発明の名称】アデノ随伴ウイルスベクターを含有する医薬組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 35/76 20150101AFI20221006BHJP
C12N 15/35 20060101ALI20221006BHJP
A61K 47/18 20060101ALI20221006BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20221006BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20221006BHJP
A61K 47/10 20060101ALI20221006BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20221006BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20221006BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20221006BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20221006BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221006BHJP
C12N 15/864 20060101ALN20221006BHJP
【ＦＩ】
A61K35/76
C12N15/35 ZNA
A61K47/18
A61K47/02
A61K47/26
A61K47/10
A61K9/08
A61K9/19
A61K48/00
A61P3/00
A61P43/00 105
C12N15/864 100Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】54
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2022054718
(22)【出願日】2022-03-30
(31)【優先権主張番号】63/169428
(32)【優先日】2021-04-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/268676
(32)【優先日】2022-02-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】593141953
【氏名又は名称】ファイザー・インク
(74)【代理人】
【識別番号】100133927
【弁理士】
【氏名又は名称】四本 能尚
(74)【代理人】
【識別番号】100147186
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 眞紀
(74)【代理人】
【識別番号】100174447
【弁理士】
【氏名又は名称】龍田 美幸
(74)【代理人】
【識別番号】100185960
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 理愛
(72)【発明者】
【氏名】タマラ シェーファー ホッジ
(72)【発明者】
【氏名】エカテリーナ ワシリエヴナ トーレス
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076AA29
4C076BB13
4C076CC21
4C076DD09E
4C076DD23
4C076DD50Z
4C076DD67
4C076FF15
4C076FF36
4C076FF61
4C076GG06
4C076GG47
4C084AA13
4C084MA17
4C084MA44
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZC21
4C084ZC54
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC83
4C087CA12
4C087MA44
4C087MA66
4C087NA14
4C087ZC21
4C087ZC54
(57)【要約】
【課題】臨床投与に適した安定なｒＡＡＶベクター調合物を提供すること。
【解決手段】本発明は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターおよび１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む組成物を提供する。当該組成物は、他のｒＡＡＶ組成物と比較して安定性が向上している。
【解決手段】本発明は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターおよび１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む組成物を提供する。当該組成物は、他のｒＡＡＶ組成物と比較して安定性が向上している。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
バッファー、
塩、
凍結保護物質、および
界面活性剤
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
バッファー、
塩、
凍結保護物質、および
界面活性剤
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【請求項2】
バッファーの濃度が、約１ｍＭから約１００ｍＭ、場合により約２０ｍＭである、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
バッファーがＴｒｉｓである、請求項１から２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項4】
塩の濃度が約１０ｍＭから約２００ｍＭ、場合により約１００ｍＭである、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
塩が塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）である、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項6】
凍結保護物質の濃度が、約１％（ｗ／ｖ）から約１０％（ｗ／ｖ）、場合により約４％（ｗ／ｖ）である、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項7】
凍結保護物質がスクロースである、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
界面活性剤の濃度が、約０．００２％（ｗ／ｖ）から約０．２％（ｗ／ｖ）、場合により約０．０２％（ｗ／ｖ）である、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
界面活性剤がポリオキサマー１８８である、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項10】
約１Ｅ＋１１ベクターゲノム（ｖｇ）／ｍＬから約１Ｅ＋１５ｖｇ／ｍＬ、または約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項11】
ｐＨが、約７．３から約７．９、場合により約７．６である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項12】
組成物の粘度が、約０．５ｍＰａから約５ｍＰａ、場合により約１ｍＰａから約１．５ｍＰａ、または場合により約１．１９ｍＰａである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項13】
組成物の密度が、約０．５ｇ／ｃｍ３から約５ｇ／ｃｍ３、場合により約１ｇ／ｃｍ３から約１．５ｇ／ｃｍ３、または場合により約１．０３ｇ／ｃｍ３である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項14】
組成物の伝導性が、約１ｍＳ／ｃｍから約４０ｍＳ／ｃｍ、場合により約１０ｍＳ／ｃｍから約２０ｍＳ／ｃｍ、または場合により約１６．９ｍＳ／ｃｍである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項15】
ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ２ｉ８、ＮＰ４、ＮＰ２２、ＮＰ６６、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶＤＪ／８、ＡＡＶＤＪ／９、ＡＡＶＬＫ０３、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＲＨＭ４－１、ＲＨＭ１５－１、ＲＨＭ１５－２、ＲＨＭ１５－３／ＲＨＭ１５－５、ＲＨＭ１５－４、ＲＨＭ１５－６、ＡＡＶ ｈｕ．２６、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ２９Ｇ、ＡＡＶ２．８Ｇ９、ＡＶＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ２－ＴＴ、ＡＡＶ２－ＴＴ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶ３Ｂ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶＨＳＣ１、ＡＡＶＨＳＣ２、ＡＡＶＨＳＣ３、ＡＡＶＨＳＣ４、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ６、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ８、ＡＡＶＨＳＣ９、ＡＡＶＨＳＣ１０、ＡＡＶＨＳＣ１１、ＡＡＶＨＳＣ１２、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１４、およびＡＡＶＨＳＣ１５からなる群から選択されるＡＡＶ血清型のカプシドポリペプチドを含み、場合により、カプシドポリペプチドがＡＡＶ３Ｂ血清型のものである、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項17】
ｒＡＡＶベクターが、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子またはその断片を含むｒＡＡＶベクターゲノムを含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項18】
ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子が、ｉ）配列番号２の核酸配列を含むかもしくはこれからなる、ｉｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、またはｉｖ）これらの組み合わせである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項19】
ｒＡＡＶベクターゲノムが、ＡＡＴプロモーター、ポリＡシグナル配列、ならびに隣接する５’および３’ＩＴＲ配列からなる群から選択される、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子の発現のための１つまたは複数のエレメントをさらに含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項20】
ＩＴＲ配列がＡＡＶ２血清型のものである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項21】
ｒＡＡＶベクターが、配列番号９の核酸配列を含むかまたはこれからなるベクターゲノムを含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項22】
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、および
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である、請求項１に記載の医薬組成物。
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、および
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項23】
約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項24】
ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶ３Ｂ血清型のポリペプチドを含み、前記ポリペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなっていてもよい、請求項２２から２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項25】
ｒＡＡＶベクターが、導入遺伝子および１つまたは複数のエレメントを含むベクターゲノムを含み、前記導入遺伝子がＡＴＰ７Ｂまたはその断片であってもよく、前記ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子が、金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸を含んでいてもよく、また、前記ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子が、配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸を含んでいてもよく、またはその両方であってもよい、請求項２２から２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項26】
１つまたは複数のエレメントが、ＡＡＴプロモーター、ポリＡシグナル配列、ならびに隣接する５’および３’ＩＴＲ配列を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項27】
ＩＴＲ配列がＡＡＶ２血清型のものである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項28】
ｒＡＡＶベクターが、配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含むプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡシグナル配列、ならびに配列番号５～８のいずれか一つの配列を含んでいてもよい５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲを含む核酸を含むかまたはこれからなるベクターゲノムを含む、請求項２２から２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項29】
ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約１４ｍＭから約２６ｍＭのＴｒｉｓ、
約７０ｍＭから約１３０ｍＭのＭｇＣｌ２、
約２．８％（ｗ／ｖ）から約５．２％（ｗ／ｖ）のスクロース、および
約０．０１４％（ｗ／ｖ）から約０．２６％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約１４ｍＭから約２６ｍＭのＴｒｉｓ、
約７０ｍＭから約１３０ｍＭのＭｇＣｌ２、
約２．８％（ｗ／ｖ）から約５．２％（ｗ／ｖ）のスクロース、および
約０．０１４％（ｗ／ｖ）から約０．２６％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【請求項30】
ｒＡＡＶベクターが、導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項31】
ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチド、および銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２タンパク質またはその断片をコードする導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【請求項32】
導入遺伝子が、ｉ）配列番号２の核酸配列を含むかもしくはこれからなる、ｉｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、またはｉｖ）これらの組み合わせである、請求項３０から３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項33】
ベクターゲノムが、プロモーター、ポリＡシグナル配列、少なくとも１つのＩＴＲ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つのエレメントを含む、請求項３０から３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項34】
プロモーターが、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなる、請求項３３に記載の組成物。
【請求項35】
ポリＡシグナル配列が、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなる、請求項３３から３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項36】
ＩＴＲ配列が、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含むかまたはこれからなる、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項37】
ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチド、および配列番号１のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【請求項38】
ベクターゲノムが、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなるプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなるポリＡシグナル配列、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含むかまたはこれからなる少なくとも１つのＩＴＲ配列、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つのさらなるエレメントを含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項39】
ベクターゲノムが、配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含むプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡシグナル配列、ならびに配列番号５～８のいずれか一つの配列を含んでいてもよい５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲを含む核酸を含むかまたはこれからなる、請求項３７から３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項40】
凍結乾燥されているまたは凍結乾燥されていない、請求項１から３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項41】
０．５ｍＬから１０ｍＬの請求項１から４０のいずれか一項に記載の組成物を含むバイアル。
【請求項42】
環状オレフィンコポリマー製であるか、適所の熱可塑性エラストマーストッパーを有するか、またはその両方である、請求項４１に記載のバイアル。
【請求項43】
有効量の請求項１から４０のいずれか一項に記載の医薬組成物を、疾患を有するヒト対象に投与することを含む、疾患を処置する方法。
【請求項44】
医薬組成物が、約４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項45】
医薬組成物が静脈内投与される、請求項４３から４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
医薬組成物の有効量が、約５Ｅ＋１１ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１４ｖｇ／ｋｇ、場合により約１Ｅ＋１２ｖｇ／ｋｇまたは約１＋Ｅ１３ｖｇ／ｋｇである、請求項４３から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項47】
疾患が、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または機能障害に起因し、場合により疾患がウィルソン病である、請求項４３から４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項48】
請求項１から４０のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項４１から４２のいずれか一項に記載のバイアルの内容物を、ヒト対象に静脈内投与することを含み、場合によりヒト対象がウィルソン病を有する、それを必要とするヒト対象における肝銅を低減させる方法。
【請求項49】
請求項１から４０のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項４１から４２のいずれか一項に記載のバイアルの内容物を、ヒト対象に静脈内投与することを含む、それを必要とするヒト対象におけるウィルソン病を処置する方法。
【請求項50】
疾患の処置のための薬品の製造における、請求項１～４０のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項51】
場合により疾患がウィルソン病である、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または調節異常に起因する疾患の処置のための薬剤の製造における、請求項１～４０のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項52】
ヒト対象を処置する方法における使用のための、請求項１～４０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項53】
場合により疾患がウィルソン病である、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または調節異常に起因する疾患を有するヒト対象を処置する方法における使用のための、請求項１～４０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項54】
請求項１から４０のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項４１から４２のいずれか一項に記載の少なくとも一つのバイアル、および使用のための指示を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
配列表の参照
本願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子出願され、電子的に提出されたテキストフォーマットの配列表を含む。このテキストファイルは、２０２２年３月７日に作成され、２９．３ＫＢのサイズを有する、「ＰＣ０７２７２３Ａ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というタイトルの配列表を含有する。このテキストファイルに含まれる配列表は、明細書の一部であり、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
本願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子出願され、電子的に提出されたテキストフォーマットの配列表を含む。このテキストファイルは、２０２２年３月７日に作成され、２９．３ＫＢのサイズを有する、「ＰＣ０７２７２３Ａ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というタイトルの配列表を含有する。このテキストファイルに含まれる配列表は、明細書の一部であり、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
本発明は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターを含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの医薬調合物の分野に関する。具体的には、本発明は、医薬品の調合物、およびｒＡＡＶベクター、特にＡＡＶ３Ｂカプシドポリペプチドを含むｒＡＡＶベクターの使用に関する。
【0003】
治療用導入遺伝子を送達するために組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターを使用するものを含む、遺伝子療法は、治療法がない、また多くのケースにおいて存在する処置が限られている広範な重篤な疾患を処置する可能性を有する（Ｗａｎｇら（２０１９）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ １８：３５８～３７８）。ｒＡＡＶベクターを使用する遺伝子療法は、欠陥遺伝子の健康なコピーを患者に導入し、すると当該患者は、正常な構造または機能を有するタンパク質を発現する。
【0004】
ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶの天然血清型、合成血清型、またはキメラ血清型のいずれかを使用して作製することができる。良く特徴付けされたＡＡＶ２血清型と緊密に関連するＡＡＶ３は、ヒト由来源から誘導された（Ｈｏｇｇａｎら（１９６６）ＰＮＡＳ ５５：１４６７～１４７４）。ＡＡＶ３はアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）にＡＡＶ３ Ｈ株として寄託され、その後、２つの異なる単離株、ＡＡＶ３ＡおよびＡＡＶ３Ｂを含むことが明らかにされた。これら２つの単離株は後でクローニングされ、シーケンシングされ、そして、Ｃａｐタンパク質の間で６つのアミノ酸の違いが、またＲｅｐタンパク質の間で５つのアミノ酸の違いが明らかにされた（Ｍｕｒａｍａｔｓｕら（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２１：２８～２１７；Ｒｕｔｌｅｄｇｅら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７２：３０９～３１９）。ＡＡＶ３Ｂ ＶＰ１ポリペプチドのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０２８７０５．１）は、ＡＡＶ２ ＶＰ１ポリペプチドのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００１４０１．２）に８７．９％同一である。ＡＡＶ３Ｂ ＶＰ１遺伝子のヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０２８７０５．１）は、ＡＡＶ２ ＶＰ１遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００１４０１．２）のヌクレオチド配列に８１％同一である。ＡＡＶ３Ｂが固有の血清型であることの確証は、抗ＡＡＶ２血清がＡＡＶ３Ｂによる細胞導入をブロックできないことによって示された（Ｒｕｔｌｅｄｇｅら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７２：３０９～３１９）。組換えＡＡＶ３ベクターはヒト初代肝細胞に効率的に形質導入することが示されているが、それは、ＡＡＶ３Ｂがヒト肝細胞増殖因子受容体を細胞受容体として使用するためである（Ｌｉら（２０１５）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２３（１２）：１８６７～１８７６）。
【0005】
ウィルソン病（ＷＤ）は、出現が３万人に約１人の稀な遺伝子疾患であり、これには治療法がなく、したがって、生涯にわたる処置を要する。ＷＤは、肝臓の、神経学的、および／または精神医学的症候を呈し得る、銅の代謝および蓄積の障害である（ＡｇｇａｒｗａｌおよびＢｈａｔｔ（２０１３）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１１０：３１３～３４８；ＭｏｈｒおよびＷｅｉｓｓ（２０１９）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．４０（２）：５９～７７；Ｗｅｉｓｓ，Ｋ．Ｈ．Ｇｅｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ１５１２／）。ＷＤを有する患者における症候の発病は、１０代または青年期で典型的には生じ、患者は、黄疸、肝炎、肝不全、および慢性肝疾患を呈し得る。神経学的症候としては、運動障害および／またはジストニアが含まれる。体内の銅レベルが高いと、ＷＤ患者は眼にカイザー・フライシャー輪を呈する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】ＵＳ６，４９１，９０７
【特許文献2】ＷＯ２００６／０６６０６６
【特許文献3】ＷＯ２０１０／０９３７８４
【特許文献4】ＷＯ２０１４／１４４２２９
【特許文献5】ＷＯ２０１３／０２９０３０
【特許文献6】ＷＯ２０１５／０１３３１３
【特許文献7】ＷＯ２００７／１２０５４２
【特許文献8】ＷＯ２０１６／０９７２１８
【特許文献9】ＷＯ２０１６／０９７２１９
【特許文献10】米国特許第７，９０６，１１１号
【特許文献11】ＷＯ２０１６／２１０１７０
【特許文献12】ＷＯ２０１３／０６３３７９
【特許文献13】ＷＯ２０１４／１９４１３２
【特許文献14】ＷＯ２０１５／１２１５０１
【特許文献15】国際特許公開第ＷＯ００／２８０６１号
【特許文献16】ＷＯ９９／６１６０１
【特許文献17】ＷＯ９８／１１２４４
【特許文献18】米国特許第６，１５６，３０３号
【特許文献19】米国特許第７，１７２，８９３号
【特許文献20】ＷＯ２０１５／０５４６５３
【特許文献21】米国特許第６，５６６，１１８号
【特許文献22】ＷＯ９８／０９６５７
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｗａｎｇら（２０１９）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ １８：３５８～３７８
【非特許文献2】Ｈｏｇｇａｎら（１９６６）ＰＮＡＳ ５５：１４６７～１４７４
【非特許文献3】Ｍｕｒａｍａｔｓｕら（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２１：２８～２１７
【非特許文献4】Ｒｕｔｌｅｄｇｅら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７２：３０９～３１９
【非特許文献5】Ｌｉら（２０１５）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２３（１２）：１８６７～１８７６
【非特許文献6】ＡｇｇａｒｗａｌおよびＢｈａｔｔ（２０１３）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１１０：３１３～３４８
【非特許文献7】ＭｏｈｒおよびＷｅｉｓｓ（２０１９）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．４０（２）：５９～７７
【非特許文献8】Ｗｅｉｓｓ，Ｋ．Ｈ．Ｇｅｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ１５１２／
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【非特許文献11】Ｖｅｎｋａｔａｋｒｉｓｈｎａｎら（２０１３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８７．９：４９７４～４９８４
【非特許文献12】ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／
【非特許文献13】Ｍｅｔｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第２６６巻：Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（１９９６）、Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．
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【非特許文献15】Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３～４５３（１９７０）
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【非特許文献17】Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１２７～１４９、１９８８、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．
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【非特許文献19】Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）
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【非特許文献21】Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献22】Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）
【非特許文献23】Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献24】Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ
【非特許文献25】Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）
【非特許文献26】Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）
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【非特許文献28】Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）
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【非特許文献30】Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）
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【非特許文献32】Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）
【非特許文献33】Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）
【非特許文献34】Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）
【非特許文献35】Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）
【非特許文献36】Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）
【非特許文献37】Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）
【非特許文献38】Ｂｅｒｎｓら（１９８７）Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２：２４３～３０７
【非特許文献39】Ｇｒｉｅｇｅｒら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７９（１５）：９９３３～９９４４
【非特許文献40】Ｓｏｎｎｔａｇら（２０１１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８５（２３）：１２６８６～１２６９７
【非特許文献41】Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚら、（２００２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７６（２）：７９１～８０１
【非特許文献42】Ｆｉｅｌｄｓら「Ｖｉｒｏｌｏｇｙ」第２巻、第６９章（第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）
【非特許文献43】Ｇａｏら（２００４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６３８１
【非特許文献44】Ｍｏｒｒｉｓら（２００４）Ｖｉｒｏｌ．３３：３７５
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【非特許文献46】Ｍａｒｓｉｃら（２０１４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２２（１１）：１９００～１９０９
【非特許文献47】Ｓｒｉｖｉｓｔａｖａら（１９８３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４５：５５５
【非特許文献48】Ｃｈｉｏｒｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１：６８２３
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【非特許文献50】Ｂａｎｔｅｌ－Ｓｃｈａａｌら（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：９３９
【非特許文献51】Ｘｉａｏら（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：３９９４
【非特許文献52】Ｍｕｒａｍａｔｓｕら（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２１：２０８
【非特許文献53】Ｓｈａｄｅら（１９８６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５８：９２１
【非特許文献54】Ｇａｏら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：１１８５４
【非特許文献55】Ｍｏｒｉｓら（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３：３７５～３８３
【非特許文献56】Ｌｙｋｋｅｎら（２０１８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｄｅｖ．Ｄｉｓｏｒｄ．１０：１６
【非特許文献57】Ｃｌａｒｋら（１９９９）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １０（６）：１０３１～１０３９
【非特許文献58】Ｓｃｈｅｎｐｐら（２００２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．６９：４２７～４４３
【非特許文献59】Ｓｏｍｍｅｒら（２００３）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７（１）：１２２～１２８
【非特許文献60】Ｓｔｅｔｅｆｅｌｄら（２０１６）、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｖ．８（４）：４０９～４２７
【非特許文献61】Ｈｕｂｅｒｔら（２０２０）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０９：８３０～８４４
【非特許文献62】Ｒｉｅｓｅｒら（２０２０）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０９（１）：８５４～８６２
【非特許文献63】Ｒａｙａｐｒｏｌｕら（２０１３）、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８７（２４）：１３１５０～１３１６０
【非特許文献64】Ｂｅｎｎｅｔｔら（２０１７）、Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．６：１７１～１８２
【非特許文献65】Ｈｏｒｏｗｉｔｚら（２０１３）、８７（６）：２９９４～３００２
【非特許文献66】Ｈｕｂｅｒｔら（２０２０）、Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．１０９：８３０～８４４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
ＷＤは、常染色体劣性疾患として遺伝し、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５６７０）をコードするＡＴＰ７Ｂ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００００５３．４）における突然変異（約５００の突然変異が同定されている）に起因する。食品由来の銅を代謝する部位である肝臓において、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２は、（ｉ）過剰な銅を胆管経路を介して便中に排出することによる肝細胞銅濃度の調節、および（ｉｉ）循環セルロプラスミンを含む銅依存性酵素への銅の移動、という２重の役割に関与する。現在のＷＤ処置は、生涯にわたるキレート化法、食品由来の銅の制限、および医療に応答しないまたは副作用を理由に処置を許容し得ない患者では肝臓移植に、主に依存している。現在の治療に伴う疾病率を理由に、遺伝子療法は、ＷＤのための有望な処置および治療法をもたらす。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本開示は、臨床投与に適した安定なｒＡＡＶベクター調合物を提供する。ｒＡＡＶベクター、特にＡＡＶ３Ｂポリペプチドを含むｒＡＡＶベクター、ならびに長期保存の間におよびストレス条件下でベクターの安定性を維持し得る賦形剤を含む組成物が、提供される。一態様において、本開示は、ｐＨが約７．３から約７．９であり、非経口投与に適した、ｒＡＡＶベクター、バッファー（例えばＴｒｉｓ）、塩（例えば塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２））、凍結保護物質（例えばスクロース）、およびポリオキサマー（例えばポリオキサマー１８８）を含む医薬組成物を提供する。
【0010】
別の態様において、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、バッファー、塩、凍結保護物質、および界面活性剤を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、バッファーの濃度は約１ｍＭから約１００ｍＭである。一部の実施形態において、バッファーの濃度は約２０ｍＭである。一部の実施形態において、バッファーはＴｒｉｓである。一部の実施形態において、Ｔｒｉｓは、Ｔｒｉｓ塩基、Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、またはＴｒｉｓ塩基とＴｒｉｓ ＨＣｌとの組み合わせである。一部の実施形態において、塩の濃度は約１０ｍＭから約２００ｍＭである。一部の実施形態において、塩の濃度は約１００ｍＭである。一部の実施形態において、塩は塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）である。一部の実施形態において、凍結保護物質の濃度は、約１％（ｗ／ｖ）から約１０％（ｗ／ｖ）である。一部の実施形態において、凍結保護物質の濃度は、約４％（ｗ／ｖ）である。一部の実施形態において、凍結保護物質はスクロースである。一部の実施形態において、界面活性剤の濃度は、約０．００２％（ｗ／ｖ）から約０．２％（ｗ／ｖ）である。一部の実施形態において、界面活性剤の濃度は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である。一部の実施形態において、界面活性剤はポリオキサマーである。一部の実施形態において、ポリオキサマーはポリオキサマー１８８である。
【0011】
一部の実施形態において、医薬組成物は、約１Ｅ＋１１ベクターゲノム（ｖｇ）／ｍＬから約１Ｅ＋１５ｖｇ／ｍＬ、または約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、約０．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約０．６Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約０．７Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約０．８Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約０．９Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、１．３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、１．４Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．６Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．７Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．８Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．９Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．４３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．６Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．７Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．８Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．９Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、約４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む。
【0012】
一部の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、約７．３から約７．９であり、場合により約７．６である。
【0013】
一部の実施形態において、医薬組成物の粘度は、約０．５ｍＰａから約５ｍＰａである。一部の実施形態において、医薬組成物の粘度は、約１ｍＰａから約１．５ｍＰａであり、場合により約１．１９ｍＰａである。
【0014】
一部の実施形態において、医薬組成物の密度は、約０．５ｇ／ｃｍ３から約５ｇ／ｃｍ３である。一部の実施形態において、医薬組成物の密度は、約１ｇ／ｃｍ３から約１．５ｇ／ｃｍ３であり、場合により約１．０３ｇ／ｃｍ３である。
【0015】
一部の実施形態において、医薬組成物の伝導性は、約１ｍＳ／ｃｍから約４０ｍＳ／ｃｍである。一部の実施形態において、医薬組成物の伝導性は、約１０ｍＳ／ｃｍから約２０ｍＳ／ｃｍであり、場合により約１６．９ｍＳ／ｃｍである。
【0016】
一部の実施形態において、医薬組成物のｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ２ｉ８、ＮＰ４、ＮＰ２２、ＮＰ６６、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶＤＪ／８、ＡＡＶＤＪ／９、ＡＡＶＬＫ０３、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＲＨＭ４－１、ＲＨＭ１５－１、ＲＨＭ１５－２、ＲＨＭ１５－３／ＲＨＭ１５－５、ＲＨＭ１５－４、ＲＨＭ１５－６、ＡＡＶ ｈｕ．２６、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２９Ｇ、ＡＡＶ２．８Ｇ９、ＡＶＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ２－ＴＴ、ＡＡＶ２－ＴＴ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶ３Ｂ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶＨＳＣ１、ＡＡＶＨＳＣ２、ＡＡＶＨＳＣ３、ＡＡＶＨＳＣ４、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ６、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ８、ＡＡＶＨＳＣ９、ＡＡＶＨＳＣ１０、ＡＡＶＨＳＣ１１、ＡＡＶＨＳＣ１２、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１４、およびＡＡＶＨＳＣ１５からなる群から選択されるＡＡＶ血清型のカプシドポリペプチドを含み、場合により、カプシドポリペプチドはＡＡＶ３Ｂ血清型のものである。一部の実施形態において、ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる。
【0017】
一部の実施形態において、医薬組成物のｒＡＡＶベクターは、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子またはその断片を含むベクターゲノムを含む。一部の実施形態において、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子は、ｉ）配列番号２の核酸配列を含むかもしくはこれからなる、ｉｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、またはｉｖ）これらの組み合わせである。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターゲノムは、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子の発現のための１つまたは複数のエレメントをさらに含む。一部の実施形態において、１つまたは複数のエレメントとしては、ＡＡＴプロモーター、ポリＡシグナル配列、ならびに隣接する５’および３’ＩＴＲ配列が含まれる。一部の実施形態において、ＩＴＲ配列は、ＡＡＶ２血清型のものである。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、配列番号９の核酸配列を含むかまたはこれからなるベクターゲノムを含む。
【0018】
別の態様において、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、約２０ｍＭのＴｒｉｓ、約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、および約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、組成物は、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態において、組成物は、約４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態において、医薬組成物のｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ３Ｂ血清型のポリペプチドを含み、当該ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなっていてもよい。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、導入遺伝子および１つまたは複数のエレメントを含むベクターゲノムを含み、当該導入遺伝子はＡＴＰ７Ｂまたはその断片であってもよく、また、当該ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子は、金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸を含んでいてもよいか、配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸を含んでいてもよいか、またはその両方であってもよい。一部の実施形態において、１つまたは複数のエレメントとしては、ＡＡＴプロモーター、ポリＡシグナル配列、ならびに隣接する５’および３’ＩＴＲ配列が含まれる。一部の実施形態において、ＩＴＲ配列は、ＡＡＶ２血清型のものである。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含むプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡシグナル配列、ならびに配列番号５～８のいずれか一つの配列を含んでいてもよい５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲを含む核酸を含むかまたはこれからなるベクターゲノムを含む。
【0019】
別の態様において、本開示は、ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、約１４ｍＭから約２６ｍＭ、場合により約２０ｍＭのＴｒｉｓ、約７０ｍＭから約１３０ｍＭ、場合により約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、約２．８％（ｗ／ｖ）から約５．２％（ｗ／ｖ）、場合により約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、および約０．０１４％（ｗ／ｖ）から約０．２６％（ｗ／ｖ）、場合により約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、医薬組成物のｒＡＡＶベクターは、導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む。一部の実施形態において、導入遺伝子は、ｉ）配列番号２の核酸配列を含むかもしくはこれからなる、ｉｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、またはｉｖ）これらの組み合わせである。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、プロモーター、ポリＡシグナル配列、少なくとも１つのＩＴＲ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つのエレメントを含む。一部の実施形態において、プロモーターは、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、ポリＡシグナル配列は、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、ＩＴＲ配列は、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含むプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡシグナル配列、ならびに配列番号５～８のいずれか一つの配列を含んでいてもよい５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲを含む核酸を含むかまたはこれからなる。
【0020】
別の態様において、本開示は、ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチド、および銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２タンパク質またはその断片をコードする導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、約２０ｍＭのＴｒｉｓ、約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、導入遺伝子は、ｉ）配列番号２の核酸配列を含むかもしくはこれからなる、ｉｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、またはｉｖ）これらの組み合わせである。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、プロモーター、ポリＡシグナル配列、少なくとも１つのＩＴＲ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つのエレメントを含む。一部の実施形態において、プロモーターは、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、ポリＡシグナル配列は、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、ＩＴＲ配列は、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含むプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡシグナル配列、ならびに配列番号５～８のいずれか一つの配列を含んでいてもよい５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲを含む核酸を含むかまたはこれからなる。
【0021】
別の態様において、本開示は、ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチド、および配列番号１のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、約２０ｍＭのＴｒｉｓ、約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなるプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなるポリＡシグナル配列、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含むかまたはこれからなる少なくとも１つのＩＴＲ配列、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つのさらなるエレメントを含む。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含むプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡシグナル配列、ならびに配列番号５～８のいずれか一つの配列を含んでいてもよい５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲを含む核酸を含むかまたはこれからなる。
【0022】
一部の態様において、本開示は、凍結乾燥されているまたは凍結乾燥されていない医薬組成物を提供する。一部の態様において、本開示は、０．５ｍＬから１０ｍＬの本明細書において開示されている医薬組成物を含むバイアルを提供する。一部の実施形態において、バイアルは、環状オレフィンコポリマー製である。一部の実施形態において、バイアルは、適所の熱可塑性エラストマーストッパーを有する。
【0023】
一部の態様において、本開示は、有効量の本明細書において開示されている医薬組成物を、疾患を有するヒト対象に投与することを含む、疾患を処置する方法を提供する。一部の実施形態において、医薬組成物は、約４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内に投与される。一部の実施形態において、医薬組成物の有効量は、約５Ｅ＋１１ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１４ｖｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、医薬組成物の有効量は、約１Ｅ＋１２ｖｇ／ｋｇまたは約１＋Ｅ１３ｖｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、疾患は、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または機能障害に起因する。一部の実施形態において、疾患はウィルソン病である。
【0024】
一部の態様において、本開示は、本明細書において開示されている医薬組成物、または本明細書において開示されている医薬組成物を含むバイアルの内容物を、ヒト対象に静脈内投与することを含む、それを必要とするヒト対象における肝銅を低減させる方法を提供する。一部の実施形態において、ヒト対象は、ウィルソン病を有する。
【0025】
一部の態様において、本開示は、本明細書において開示されている医薬組成物、または本明細書において開示されている医薬組成物を含むバイアルの内容物を、ヒト対象に静脈内投与することを含む、それを必要とするヒト対象におけるウィルソン病を処置する方法を提供する。
【0026】
一部の態様において、本開示は、疾患の処置のための薬品の製造における、本明細書において開示されている医薬組成物の使用を提供する。実施形態において、疾患はウィルソン病である。
【0027】
一部の態様において、本開示は、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または調節異常に起因する疾患の処置のための薬品の製造における、本明細書において開示されている医薬組成物の使用を提供する。一部の実施形態において、疾患はウィルソン病である。
【0028】
一部の態様において、本開示は、ヒト対象を処置する方法において使用するための、本明細書において開示されている医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、疾患はウィルソン病である。
【0029】
一部の態様において、本開示は、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または調節異常に起因する疾患を有するヒト対象を処置する方法において使用するための、本明細書において開示されている医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、疾患はウィルソン病である。
【0030】
一部の態様において、本開示は、本明細書において開示されている医薬組成物、または本明細書において開示されている医薬組成物を含む少なくとも１つのバイアル、および使用のための指示を含むキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【0031】
【図1】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後、ｑＰＣＲによって測定した、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の例示的な導入遺伝子力価（ｖｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図2】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって測定した、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の例示的なウイルス粒子力価（ｖｐ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図3】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後、ＳＥ－ＨＰＬＣによって測定した、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の高分子質量種（ＨＭＭＳ）の例示的な百分率を示すグラフである。
【図4】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後、ＳＥ－ＨＰＬＣ Ａ２６０／Ａ２８０によって測定した、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の、例示的な空カプシドの完全カプシドに対する比を示すグラフである。
【図5】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後、ＳＥ－ＨＰＬＣによって測定した、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の例示的なベクター純度（％単量体）を示すグラフである。
【図6】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後、５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ５０）として測定された、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物のベクター感染力を示すグラフである。
【図7】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後の、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の例示的なｐＨを示すグラフである。
【図8】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後、還元条件でのキャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）によって測定した、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の例示的なカプシドパーセント純度を示すグラフである。
【図9】医薬組成物を５℃、－２０℃、および－７０℃で６カ月までの間保管した後、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって測定した、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の例示的なＺ平均（ｎｍ）を示すグラフである。
【図10】医薬組成物を５℃で６カ月までの間保管した後、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定された、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物の例示的な非可視粒子カウントを示すグラフである。
【図11】種々の緩衝溶液中の相対的空ｒＡＡＶ３Ｂカプシド（上のパネル）および相対的完全ｒＡＡＶ３Ｂカプシド（下のパネル）についての、５℃で０時間目（Ｔ０）および２週間時（Ｔ２ｗｋ）における、例示的なカプシド力価（ＶＰ／ｍＬ）および収率（％）を示すグラフである。
【図12】種々の緩衝溶液中の相対的空および相対的完全ｒＡＡＶ３Ｂカプシドについての、０時間目（Ｔ０）における例示的なカプシド収率（％）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0032】
本開示は、ＡＡＶベクターおよび１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本ＡＡＶベクター組成物は、目的のタンパク質（例えば治療用タンパク質）の発現のための組換え核酸をそのベクターゲノムが有するｒＡＡＶを含み得る。本発明者らは、バッファー、塩、凍結保護物質、および界面活性剤を含む、ＡＡＶベクターの調合物を開発した。有利には、これらの調合物は、調合物中のｒＡＡＶベクターを長期間にわたりおよびストレス条件（例えば、せん断（ｓｈｅｅｒ）、凍結／解凍）下で安定化させる。本発明者らはまた、ｒＡＡＶベクター、特に、ＡＡＶ３Ｂカプシドポリペプチドを含むｒＡＡＶベクターを含む、このような調合物が、長期保存（例えば６カ月）の間、およびストレス条件（例えばせん断（ｓｈｅｅｒ）、凍結／解凍）下で、外見、導入遺伝子力価、ウイルス粒子力価、高分子量種のパーセンテージ、０から１００のカプシド率、ウイルス純度、感染力、カプシド純度、凝集、およびｐＨを含む、製品の品質特性を、許容できるレベルで維持することも発見した。
【0033】
Ｉ．定義
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味を有する。本明細書において使用される専門用語は、特定の実施形態のみを記載する目的のものであり、本発明を限定することを意図したものではない。本発明および添付の特許請求の範囲の記載において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈から別段のことが明らかに示されていない限り、複数形も含むものである。数値範囲は、その範囲を規定する数値を含む。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、包含的であることを意図しており、列挙された要素以外の追加の要素も存在し得ることを意味する。実施形態が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という表現を用いて本明細書において記載される場合は常に、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「から基本的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載されている他の類似の実施形態もまた提供されることが理解される。以下の用語は、以下に示す意味を有する。
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味を有する。本明細書において使用される専門用語は、特定の実施形態のみを記載する目的のものであり、本発明を限定することを意図したものではない。本発明および添付の特許請求の範囲の記載において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈から別段のことが明らかに示されていない限り、複数形も含むものである。数値範囲は、その範囲を規定する数値を含む。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、包含的であることを意図しており、列挙された要素以外の追加の要素も存在し得ることを意味する。実施形態が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という表現を用いて本明細書において記載される場合は常に、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「から基本的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載されている他の類似の実施形態もまた提供されることが理解される。以下の用語は、以下に示す意味を有する。
【0034】
本明細書において使用される場合、用語「Ａ２６０／Ａ２８０」または「Ａ２６０／Ａ２８０比」は、２６０ｎｍで測定された吸光度と２８０ｎｍで測定された吸光度との比率を指す。ｒＡＡＶカプシド（例えば調合される原薬）を含む溶液のＡ２６０／Ａ２８０比は、溶液中に存在する、ＤＮＡがパッケージングされたカプシド（すなわち、完全カプシドおよび中間カプシド）とＤＮＡがパッケージングされていないカプシド（すなわち空カプシド）との相対量の推定を提供する。例えば、その値が高いほど、医薬調合物などの溶液中に存在する完全カプシドおよび中間カプシドのパーセンテージは大きい。溶液間のＡ２６０／Ａ２８０比を比較することによって、カプシド種の相対的推定が可能となり、その結果、Ａ２６０／Ａ２８０が高い方の溶液は、Ａ２６０／Ａ２８０比が低い方の溶液よりも、完全カプシドおよび中間カプシドのパーセンテージが大きい。一部の実施形態において、吸光度は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）系の分析的なサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して測定され、吸光度の測定は、１つまたは複数の波長（例えば２６０ｎｍおよび／または２８０ｎｍ）で行われ得る。
【0035】
本明細書において使用される場合、用語「約」または「およそ」は、値が、その値を決定するために利用されている装置または方法の誤差の標準偏差を含むことを示すために、使用される。一部の実施形態において、用語「約」は、数字が、測定した際の誤差の標準偏差を有する範囲において、本明細書において記述されるあらゆる数字に加えることができる。
【0036】
本明細書において使用される場合、用語「および／または」は、関連する列挙事項の１つまたは複数の任意のおよび全ての考えられる組み合わせ、ならびに代替で解釈される場合（「または」）には組み合わせの欠如を、指すおよび包含する。
【0037】
本明細書において使用される場合、用語「キメラ」は、その開示全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚら、ＵＳ６，４９１，９０７において記載されているように、異なるパルボウイルス、好ましくは異なるＡＡＶ血清型に由来するカプシド配列または粒子配列を有する、ウイルスカプシドまたはウイルス粒子を指す。また、Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚら（２００４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８（９）：４４２１～４４３２も参照されたい。一部の実施形態において、キメラウイルスカプシドは、以下の突然変異を有するＡＡＶ２カプシドの配列を有するＡＡＶ２．５カプシドである：２６３のＱからＡ、２６５の挿入Ｔ、７０５のＮからＡ、７０８のＶからＡ、および７１６のＴからＮ。このようなカプシドをコードするヌクレオチド配列は、ＷＯ２００６／０６６０６６において記載されているように、配列番号１５と規定される。他の好ましいキメラＡＡＶカプシドとしては、限定はしないが、ＷＯ２０１０／０９３７８４において記載されているＡＡＶ２ｉ８、ＷＯ２０１４／１４４２２９において記載されているＡＡＶ２Ｇ９およびＡＡＶ８Ｇ９、ならびに、ＡＡＶ９．４５（Ｐｕｌｉｃｈｅｒｌａら（２０１１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １９（６）：１０７０～１０７８）、ＷＯ２０１３／０２９０３０において記載されているＡＡＶ－ＮＰ４、ＮＰ２２、およびＮＰ６６、ＡＡＶ－ＬＫ０からＡＡＶ－ＬＫ０１９、ＷＯ２０１５／０１３３１３において記載されているＲＨＭ４－１、およびＲＨＭ１５＿１からＲＨＭ５＿６、ＷＯ２００７／１２０５４２において記載されているＡＡＶＤＪ、ＡＡＶＤＪ／８、ＡＡＶＤＪ／９が含まれる。
【0038】
本明細書において使用される場合、薬剤、化合物、または医薬組成物の「有効投与量」または「有効量」は、何らかの１つまたは複数の有利なまたは所望の結果をもたらすために十分な量である。より具体的な態様において、有効量は、疾患の症候を予防する、軽減する、もしくは改善する、および／または処置される対象の生存を延ばす。予防的使用では、有利なまたは所望の結果としては、リスクを無くすもしくは低減させること、重症度を下げること、または、疾患の生化学的、組織学的、および／もしくは行動的症候、その合併症、ならびに疾患の発症の際に現れる中間の病理学的表現型を含む疾患の発生を遅らせることが含まれる。治療的使用では、有利なまたは所望の結果としては、疾患の１つまたは複数の症候の低減などの臨床結果が含まれる。用語「治療有効量」は、それが投与されるものに対して所望の治療効果をもたらす量を指す。一部の実施形態において、当該用語は、治療用投薬レジメンに従って、疾患、障害、または状態に罹患しているまたは罹患しやすい集団に投与された場合に、疾患、障害、または状態を処置するために十分な量を指す。一部の実施形態において、治療有効量は、疾患、障害、および／もしくは状態の１つもしくは複数の症候の出現および／もしくは重症度を低減させる、ならびに／または前記症候の発病を遅らせる量である。当業者なら、用語「治療有効量」が、特定の個体において処置が成功裏に達成されることを実際には要さないことを理解するであろう。むしろ、治療有効量は、このような処置を必要とする患者に投与された場合に、有意な数の対象において特定の所望の薬理学的応答をもたらす量であり得る。
【0039】
本明細書において使用される場合、用語「調合物」または「組成物」は、ｒＡＡＶベクターに関連する場合、ｐＨが定義された通りの、少なくとも１つのバッファー、少なくとも１つの塩（好ましくは、二価陽イオンを供給するもの）、少なくとも１つの凍結保護物質、および少なくとも１つの界面活性剤を含む薬学的に許容できる賦形剤と組み合わせたｒＡＡＶベクターを記載することを目的としている。「医薬調合物」または「医薬組成物」は、活性成分の生物学的活性が効果的となる形態の調製物を指す。
【0040】
本明細書において使用される場合、用語「断片」は、その構造が、完全体の個別の一部分を含むが、完全体で見られる１つまたは複数の部分を欠いている、材料または実体を指す。一部の実施形態において、断片は、個別の一部分からなる。一部の実施形態において、断片は、完全体において見られる特徴的な構造要素または構造部分からなるかまたはそれを含む。一部の実施形態において、ポリマー断片は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００の、またはそれを超える（この中に収まる範囲を含む）、完全体ポリマーで見られるモノマー単位（例えば、アミノ酸残基、ヌクレオチド）を含むかまたはそれからなる。
【0041】
一部の実施形態において、断片は、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２ポリペプチドの断片である。一部の実施形態において、断片は、約４２０のアミノ酸から約４４０のアミノ酸（例えば約４３０のアミノ酸）が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２ポリペプチドである。一部の実施形態において、断片は、約１０２０のアミノ酸から約１０５０のアミノ酸（例えば約１０３５のアミノ酸）を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２ポリペプチド断片である。一部の実施形態において、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２ポリペプチドの断片は、金属結合部位（ＭＢＳ）の部位ＭＢＳ１、ＭＢＳ２、ＭＢＳ３、およびＭＢＳ４を含まない。一部の実施形態において、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２ポリペプチドの断片は、少なくとも１つのＭＢＳ領域が欠失しているが、ＭＢＳ５およびＭＢＳ６を保持している。
【0042】
一部の実施形態において、断片は、ＡＰＴ７Ｂ遺伝子の断片である。一部の実施形態において、断片は、約１２８０のヌクレオチドから約１３００のヌクレオチド（例えば約１２９０のヌクレオチド）が欠失したＡＴＰ７Ｂ遺伝子である。一部の実施形態において、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子の断片は、約３０９０のヌクレオチドから約３２００のヌクレオチド（例えば約３１０５のヌクレオチド）を含む。
【0043】
カプシドが、導入遺伝子を含む完全なベクターゲノムを有する場合、ｒＡＡＶベクターは、「完全」、「完全カプシド」、「完全ベクター」、または「完全にパッケージングされたベクター」と呼ばれる。宿主細胞によるｒＡＡＶベクターの産生の際、完全カプシドほどには核酸がパッケージングされておらず、また、例えば部分的なまたはトランケートされたベクターゲノムを含有するベクターが、産生され得る。これらのベクターは、「中間体」、「中間カプシド」、「部分的」、または「部分的にパッケージングされたベクター」と呼ばれる。中間カプシドはまた、分析的な超遠心分離によって分析すると、完全カプシドの沈降率と空カプシドの沈降率との間の沈降率である中間沈降率を有するカプシドでもあり得る。宿主細胞はまた、いかなる検出可能な核酸材料も含有しないウイルスカプシドも産生し得る。これらカプシドは、「空」または「空カプシド」と呼ばれる。完全カプシドは、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって決定されるＡ２６０／Ａ２８０比に基づいて空カプシドから区別され得、ＳＥＣ－ＨＰＬＣでは、Ａ２６０／Ａ２８０比は、分析的な超遠心分離によって分析されたカプシド（すなわち、完全、中間体、および空）に対して事前に較正されている。カプシドを特徴付けするための当技術分野において公知の他の方法としては、ＣｒｙｏＴＥＭ、キャピラリー等電点電気泳動、および電荷検出質量分析が含まれる。空および完全ＡＡＶ９カプシドでは、約６．２および約５．８の計算された等電点がそれぞれ報告されている（Ｖｅｎｋａｔａｋｒｉｓｈｎａｎら（２０１３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８７．９：４９７４～４９８４）。
【0044】
本明細書において使用される場合、用語「遺伝子」は、転写および翻訳された後の特定のポリペプチドまたはタンパク質をコードし得る少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有するポリヌクレオチドを指す。「遺伝子移入」または「遺伝子送達」は、外来ＤＮＡを宿主細胞に確実に挿入するための方法または系を指す。このような方法は、組み込まれていない移入ＤＮＡの一過性発現、移入されたレプリコン（例えばエピソーム）染色体外での複製および発現、ならびに／または宿主細胞のゲノムＤＮＡへの移入遺伝物質の組み込みを生じさせ得る。
【0045】
本明細書において使用される場合、用語「同一性」または「～に同一」は、ポリマー分子間、例えば核酸分子（例えばＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）間、ならびに／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。「同一性」は、コンピュータプログラムの特定の数学モデル（すなわち「アルゴリズム」）によって行われるギャップアラインメントでの、２つ以上の配列の間の同一マッチのパーセントの尺度である。
【0046】
一部の実施形態において、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であれば、互いに「実質的に同一」であると見なされる。
【0047】
２つの核酸配列またはポリペプチド配列のパーセント同一性の計算は、例えば、最適比較の目的で２つの配列をアラインすることによって行うことができる（例えば、最適なアラインメントのためにギャップを第１および第２の配列の一方または両方に導入することができ、また、同一でない配列は比較目的では無視してよい）。ある種の実施形態において、比較目的でアラインされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。対応する位置にあるヌクレオチドが次いで比較される。第１の配列における位置に、第２の配列における対応する位置と同じ残基（例えばヌクレオチドまたはアミノ酸）が存在する場合、分子はその位置で同一である。２つの配列の間のパーセント同一性は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、配列が共有する同一の位置の数の関数である。２つの配列の間の配列比較およびパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して行うことができる。
【0048】
パーセント同一性を決定するために、配列を、ワールドワイドウェブのｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／で入手可能なＢＬＡＳＴを含む方法およびコンピュータプログラムを使用してアラインすることができる。他のアラインメントプログラムとしては、バイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ（登録商標），Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）のＬａｓｅｒｇｅｎｅ（登録商標）スイートのＭｅｇＡｌｉｇｎ（登録商標）プログラムが含まれる。別のアラインメントアルゴリズムは、マディソン、ウィスコンシン州、ＵＳＡのＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージで入手可能なＦＡＳＴＡである。アラインメントのための他の技術は、Ｍｅｔｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第２６６巻：Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（１９９６）、Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．において記載されている。特に興味深いものは、配列内のギャップを可能にするアラインメントプログラムである。Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎは、配列アラインメントにおけるギャップを可能にする１つのタイプのアルゴリズムである。Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７０：１７３～１８７（１９９７）を参照されたい。また、配列をアラインするために、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈアラインメント法を使用するＧＡＰプログラムを利用することができる。Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３～４５３（１９７０）を参照されたい。
【0049】
また、配列同一性を決定するために、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２～４８９）の局所的相同性アルゴリズムを使用するＢｅｓｔＦｉｔプログラムも有意義である。ギャップ生成ペナルティは一般に１から５の範囲、通常は２から４の範囲であり、一部の実施形態においては３である。ギャップ伸長ペナルティは一般に約０．０１から０．２０の範囲であり、一部の場合において０．１０である。プログラムは、比較するためにインプットされる配列によって決定されるデフォルトパラメーターを有する。好ましくは、配列同一性は、プログラムによって決定されるデフォルトパラメーターを使用して決定される。このプログラムは、マディソン、ウィスコンシン州、ＵＳＡのＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージからも入手可能である。別の有意義なプログラムは、ＦａｓｔＤＢアルゴリズムである。ＦａｓｔＤＢは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１２７～１４９、１９８８、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．において記載されている。
【0050】
本明細書において使用される場合、用語「感染力比（ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ ｒａｔｉｏ）」または「ＩＲ」は、細胞を感染させるために必要なｒＡＡＶベクター粒子の数を指す。一部の実施形態において、細胞はインビトロ系にある。一部の実施形態において、細胞は、ｒＡＡＶベクターでの処置が必要な対象内のまたは当該対象から採取された細胞である。感染力比は、細胞ベースのｑＰＣＲアッセイを含む当技術分野において公知のあらゆる方法によって測定することができる。感染力は、５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ５０）として測定することができる。感染力は、容積当たりの感染力単位（ＩＵ）、すなわちＩＵ／ｍＬ、またはｖｇ単位の存在量に対する感染力単位（ＩＵ）、すなわちＩＵ／ｖｇとして表すことができる。
【0051】
本明細書において使用される場合、用語「逆方向末端反復」、「ＩＴＲ」、「末端反復」、および「ＴＲ」は、最も相補的な対称的に配置された配列を含む、ＡＡＶウイルスゲノムの末端にあるまたは末端の近傍のパリンドローム末端反復配列を指す。これらＩＴＲはフォールディングして、ＤＮＡ複製の開始の際にプライマーとして機能するＴ状のヘアピン構造を形成し得る。これらはまた、宿主ゲノムから逃れるための、宿主ゲノムへのウイルスゲノムの組み込みに、および成熟ビリオン内へのウイルス核酸のカプシド形成に必要である。ＩＴＲは、ベクターゲノムの複製およびウイルス粒子へのそのパッケージングのためには、シスである必要がある。「５’ＩＴＲ」は、ＡＡＶゲノムの５’末端にあるおよび／または組換え導入遺伝子に対して５’側のＩＴＲを指す。「３’ＩＴＲ」は、ＡＡＶゲノムの３’末端にあるおよび／または組換え導入遺伝子に対して３’側のＩＴＲを指す。野生型ＩＴＲは、およそ１４５ｂｐの長さである。修飾ＩＴＲまたは組換えＩＴＲは、野生型ＡＡＶ ＩＴＲ配列の断片または一部分を含み得る。当業者なら、連続的なＤＮＡ複製ラウンドの際にＩＴＲ配列がスワップして、その結果５’ＩＴＲが３’ＩＴＲになり得ること、および逆の場合も同様であることを理解するであろう。一部の実施形態において、少なくとも１つのＩＴＲが組換えベクターゲノムの５’および／または３’末端に存在し、その結果、ベクターゲノムがカプシドにパッケージングされて、ベクターゲノムを含むｒＡＡＶベクター（本明細書において、「ｒＡＡＶベクター粒子」または「ｒＡＡＶウイルス粒子」とも呼ばれる）が産生され得る。
【0052】
本明細書において使用される場合、用語「核酸構築物」は、組換えＤＮＡ技術の使用の結果生じる非天然の核酸分子（例えば組換え核酸）を指す。核酸構築物は、天然では見られない様式で組み合わされ配置されている核酸配列のセグメントを含有するように修飾されている、一本鎖または二本鎖の核酸分子である。核酸構築物は、「ベクター」（例えば、プラスミド、ｒＡＡＶベクターゲノム、発現ベクターなど）、すなわち、外因的に生成されたＤＮＡを宿主細胞に送達するように設計された核酸分子であり得る。
【0053】
本明細書において使用される場合、用語「純度パーセント」、「純度％」は、無傷のカプシド、すなわち完全カプシド、空カプシド、および中間カプシドを含む溶液の純度を指す。純度パーセントは、逆相ＨＰＬＣ、非還元条件（ＲＰ－ＨＰＬＣ、ＮＲ）を含む、当技術分野において公知の方法によって決定される。溶液中に存在するカプシドに因る、ＲＰ－ＨＰＬＣ、ＮＲによって作成されたクロマトグラム吸光度曲線下面積は、吸光度曲線下面積全体に対するパーセンテージとして表される。純度パーセントはまた、ＳＤＳ－ＰＡＧＥまたはキャピラリー電気泳動によっても測定され得る。
【0054】
本明細書において使用される場合、用語「カプシド純度パーセント」または「カプシド純度％」は、個々のカプシドポリペプチド、すなわち、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３の純度の評価を指す。一部の実施形態において、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３の各々の純度は、ＣＧＥによって還元条件下で評価される。一部の実施形態において、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３の各々の純度は、ＲＰ－ＨＰＬＣによって還元条件下で評価される。
【0055】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容できる」および「生理学的に許容できる」は、１つもしくは複数の投与経路、インビボ送達、または接触に適した、生物学的に許容できる調合物、気体、液体、もしくは固体、またはこれらの混合物に言及したものである。「薬学的に許容できる賦形剤」（媒体、添加物）は、有効用量の採用された活性成分を提供するために対象に安全に投与され得るものである。本明細書において使用される用語「賦形剤」または「担体」は、薬剤のための希釈剤、媒体、防腐剤、結合剤、または安定剤として一般に使用される、不活性物質を指す。本明細書において使用される場合、用語「希釈剤」は、薬学的に許容できる（ヒトへの投与に安全かつ無毒な）溶媒を指し、本明細書における液体調合物の調製に有用である。典型的な希釈剤としては、限定はしないが、注射用の滅菌水および静菌水（ＢＷＦＩ）が含まれる。
【0056】
本明細書において使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、ポリマー形態の、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかであるヌクレオチド、または、修飾形態のいずれかのタイプのヌクレオチドを指し、また、一本鎖または二本鎖形態であり得る。「ポリヌクレオチド」配列または「核酸」配列は、別段の特定がない限り、その相補体を包含する。本明細書において使用される場合、用語「単離されたポリヌクレオチド」、「単離された核酸」、または「単離された組換え核酸」は、その由来源または派生源に基づいて以下の１つから３つのことを有する、ゲノム由来、ｃＤＮＡ由来、もしくは合成由来のポリヌクレオチド、または一部のこれらの組み合わせを意味する：（１）天然で「単離されたポリヌクレオチド」と共に見られるポリヌクレオチドを、全くもしくはその一部分も伴わない、（２）それが天然で連結していないポリヌクレオチドに、作動可能に連結している、または（３）天然では、より大きな配列の一部としては存在しない。
【0057】
本明細書において使用される場合、用語「組換え」は、クローニングステップ、制限ステップ、もしくはライゲーションステップの様々な組み合わせ（例えば、それに含まれるポリヌクレオチドもしくはポリペプチドに関する）、および／または天然で見られる生成物と異なる構築物を生じさせる他の手順の産物である、ベクター、ポリヌクレオチド（例えば組換え核酸）、ポリペプチド、または細胞に言及したものである。組換えウイルスまたはベクター（例えばｒＡＡＶベクター）は、組換え核酸（例えば、導入遺伝子および導入遺伝子の発現のための１つまたは複数の調節エレメントを含む核酸）を含むベクターゲノムを含む。これらの用語はそれぞれ、オリジナルのポリヌクレオチド構築物の複製物、およびオリジナルのウイルス構築物の子孫を含む。
【0058】
本明細書において使用される場合、用語「対象」は、生物、例えば哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト哺乳動物、非ヒト霊長類、霊長類、実験動物、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、ネコ、イヌ）を指す。一部の実施形態において、ヒト対象は、成人、青年期、または小児の対象である。一部の実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態、例えば、本明細書において提供されているように処置され得る疾患、障害、または状態に罹患している。一部の実施形態において、対象は、欠損または機能障害のある銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２に伴う疾患、障害、または状態、例えばウィルソン病に罹患している。一部の実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態に罹患しやすい。一部の実施形態において、罹患しやすい対象は、疾患、障害、または状態を発症するリスクの増大を示す傾向があるおよび／または示す（参照対象または参照集団で見られる平均リスクと比較して）。一部の実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態の１つまたは複数の症候を提示する。一部の実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態の特定の症候（例えば疾患の臨床的兆候）も特徴も提示しない。一部の実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態のいかなる症候も特徴も提示しない。一部の実施形態において、対象は、ヒト患者である。一部の実施形態において、対象は、診断および／または治療が行われているおよび／または行われた（例えば、ウィルソン病のための遺伝子療法）個体である。一部の実施形態において、対象は、ウィルソン病を有するヒト患者である。
【0059】
本明細書において使用される場合、用語「実質的な」または「実質的に」は、目的の特徴または特性の完全なまたはほぼ完全な範囲または程度の表示の質的条件を指す。当業者なら、生物学的および化学的現象が完了することおよび／または完全性もしくは達成もしくは絶対的結果まで進むことは仮にあっても稀であることを理解するであろう。用語「実質的な」または「実質的に」は、それ故、多くの生物学的および化学的現象に固有の完全性の潜在的欠如を表すために、本明細書において使用される。
【0060】
本明細書において使用される場合、用語「治療用ポリペプチド」は、標的細胞（例えば単離細胞）または生物（例えば対象）におけるタンパク質の不在または欠陥の結果生じる症候を軽減し得るまたは低減させ得る、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質（例えば、酵素、構造タンパク質、膜貫通タンパク質、輸送タンパク質）である。導入遺伝子によってコードされる治療用ポリペプチドまたはタンパク質は、対象に、例えば、遺伝的欠陥を正常化するため、発現または機能に関連する遺伝子の欠乏を正常化するための利益を付与するものである。同様に、「治療用導入遺伝子」は、治療用ポリペプチドをコードする導入遺伝子である。一部の実施形態において、宿主細胞において発現される治療用ポリペプチドは、導入遺伝子（すなわち、宿主細胞に導入されている外因性核酸）から発現される酵素である。一部の実施形態において、治療用ポリペプチドは、肝細胞に形質導入された治療用導入遺伝子から発現される銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２タンパク質またはその断片である。
【0061】
本明細書において使用される場合、用語「導入遺伝子」は、宿主細胞、標的細胞、または生物（例えば対象）への送達および／またはこれらにおける発現のための、あらゆる異種ポリヌクレオチドを意味するために使用される。このような「導入遺伝子」は、ベクター（例えばｒＡＡＶベクター）を使用して宿主細胞、標的細胞、または生物に送達され得る。導入遺伝子は、プロモーターなどの制御配列に作動可能に連結している場合がある。当業者なら、発現制御配列が、宿主細胞、標的細胞、または生物における導入遺伝子の発現を促進する能力に基づいて選択され得ることを理解するであろう。一般に、導入遺伝子は、天然で導入遺伝子に伴う内因性プロモーターに作動可能に連結している場合があるが、より典型的には、導入遺伝子は、導入遺伝子が天然では伴わないプロモーターに作動可能に連結している。導入遺伝子の例は、治療用ポリペプチド、例えば銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２ポリペプチド、またはその断片をコードする核酸であり、典型的なプロモーターは、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２ポリペプチドをコードするヌクレオチドに天然では作動可能に連結していないものである。このような非内因性プロモーターとしては、当技術分野において公知の多くの他のものの中でも、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーター、ＡＡＴプロモーターの一部分、または肝臓特異的なプロモーターが含まれ得る。一部の実施形態において、ＡＡＴプロモーターの一部分は、共に参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／０９７２１８およびＷＯ２０１６／０９７２１９において開示されている最小のＡＡＴプロモーターである。
【0062】
本明細書において使用される場合、用語「処置」は、有利なまたは望ましい臨床結果を得るためのアプローチを指す。本開示の目的では、有利なまたは望ましい臨床結果としては、限定はしないが、以下の１つまたは複数が含まれる：銅代謝の回復（例えば、便および腎臓での銅の排出の増大、血清中の銅の減少、ならびに肝銅の減少によって測定される）、血清中セルロプラスミンレベルの増大、尿中の銅の減少、肝銅の減少、肝臓損傷の好転（例えば、肝機能および酵素パラメーターの正常化）、亜鉛塩での処置および／またはキレート化療法が低減することまたは不要であること、正常上限より低い／正常上限に等しい血清中アラニントランスアミナーゼレベル、正常上限より低い／正常上限に等しい血清中アスパラギン酸トランスアミナーゼレベル、ならびに神経学的症候の減少。
【0063】
本明細書において使用される場合、用語「ベクター」は、プラスミド、ウイルス（例えばｒＡＡＶ）、コスミド、または、核酸（例えば組換え核酸）の挿入もしくは組み込みによって操作され得る他の媒体を指す。ベクターは、例えば、細胞に核酸を導入／移入するため、挿入された核酸を細胞内で転写または翻訳するための遺伝子操作（例えばクローニングベクター）を含む、様々な目的で使用することができる。一部の実施形態において、ベクターの核酸配列は、少なくとも、細胞内で増殖するための複製起点を含有する。一部の実施形態において、ベクターの核酸は、異種核酸配列、発現制御エレメント（例えばプロモーター、エンハンサー）、選択マーカー（例えば抗生物質耐性）、ポリアデノシン（ポリＡ）シグナル配列、および／またはＩＴＲを含む。一部の実施形態において、宿主細胞に送達されると、核酸配列は増殖する。一部の実施形態において、インビトロまたはインビボで宿主細胞に送達されると、細胞は、異種核酸配列（例えば導入遺伝子）によってコードされるポリペプチドを発現する。一部の実施形態において、宿主細胞に送達されると、核酸配列または核酸配列の一部分は、カプシドにパッケージングされる。宿主細胞は、単離細胞または宿主生物内の細胞であり得る。ポリペプチドまたはタンパク質をコードする核酸配列（例えば導入遺伝子）に加えて、さらなる配列（例えば調節配列）が同じベクター内に（すなわち、遺伝子に対してシスで）存在し得、遺伝子に隣接し得る。一部の実施形態において、調節配列は別の（例えば第２の）ベクター上に存在し得、当該ベクターは、遺伝子の発現を調節するためにトランスで作用する。プラスミドベクターは、本明細書において、「発現ベクター」と呼ばれ得る。
【0064】
本明細書において使用される場合、用語「ベクターゲノム」は、ｒＡＡＶベクターを形成するためにＡＡＶカプシドにパッケージング／カプシド形成され得る核酸を指すが、必ずしもパッケージング／カプシド形成されなくてよい。典型的には、ベクターゲノムは、異種ポリヌクレオチド配列（例えば、導入遺伝子、調節エレメントなど）および少なくとも１つのＩＴＲを含む。組換えベクター（例えばｒＡＡＶベクター）を構築または製造するために組換えプラスミドが使用されるケースでは、ベクターゲノムは、プラスミド全体は含まず、むしろ、ウイルスベクターによる送達のための配列のみを含む。組換えプラスミドのこの非ベクターゲノム部分は「プラスミド骨格」と呼ばれ、これは、組換えウイルスベクター産生の広がりに必要なプロセスであるプラスミドのクローニング、選択、および増幅に重要であるが、これ自体は、ｒＡＡＶベクターにパッケージングもカプシド形成もされない。典型的には、カプシドにパッケージングされる異種配列には、プラスミド骨格から切断されると異種配列がカプシドにパッケージングされるように、ＩＴＲが隣接している。
【0065】
本明細書において使用される場合、用語「ウイルス粒子／ｍＬ」または「ｖｐ／ｍＬ」は、医薬調合物などの溶液中の無傷のＡＡＶカプシドの数、量、またはレベルを指す。無傷のＡＡＶカプシドとしては、完全カプシド、空カプシド、および中間カプシドが含まれる。ｖｐ／ｍＬは、医薬調合物の品質特性として用いられる場合、力価として表され得る。
【0066】
本明細書において使用される場合、用語「ウイルスベクター」は一般に、核酸送達媒体として機能し、その中に（すなわちカプシド内に）ベクターゲノム（例えば、野生型ｒｅｐおよびｃａｐに代わる導入遺伝子を含む）がパッケージングされている、ウイルス粒子を指し、これとしては、ＡＡＶ血清型およびバリアント（例えばｒＡＡＶベクター）を含む、例えばレンチウイルスおよびパルボウイルスが含まれる。本明細書の他の箇所で指摘されているように、組換えウイルスベクターは、ｒｅｐおよび／またはｃａｐ遺伝子を有するウイルスゲノムは含まず、むしろ、これらの配列は除去されて、目的の導入遺伝子を有する能力がベクターゲノムにもたらされる。
【0067】
本明細書において使用される場合、用語「粘度」は、「絶対粘度」または「動粘度」であり得る。「絶対粘度」は時として動的粘度または単純粘度と呼ばれるが、流体の流れ抵抗を表現する量である。「動粘度」は、絶対粘度と流体密度との商である。動粘度は、キャピラリー粘度計を使用して流体の抵抗の流れを特徴付ける場合に報告されることが多い。等容積の２つの流体が同一のキャピラリー粘度計内に置かれ、重力によって流れるようにされる場合、粘性流体は、キャピラリーの中を流れるために、より粘性ではない流体よりも長い時間を要する。一方の流体が流れ終わるまでに２００秒かかり、別の流体が４００秒かかる場合、第２の流体は第１の流体よりも動粘度スケールで２倍粘性である。両流体が同じ密度を有する場合、第２の流体は第１の流体よりも絶対粘度スケールで２倍粘性である。動粘度の大きさはＬ２／Ｔであり、式中、Ｌは長さを表し、Ｔは時間を表す。動粘度のＳＩ単位はｍ２／ｓである。一般に、動粘度はセンチストーク、ｃＳｔで表され、これはｍｍ２／ｓに等しい。絶対粘度の大きさはＭ／Ｌ／Ｔであり、式中、Ｍは質量を表し、ＬおよびＴは長さおよび時間をそれぞれ表す。絶対粘度のＳＩ単位はＰａ・ｓであり、これはｋｇ／ｍ／ｓに等しい。絶対粘度はセンチポイズ、ｃＰという単位で一般に表され、これはミリパスカル・秒、ｍＰａ・ｓに等しい。
【0068】
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【0069】
本発明の態様または実施形態がマーカッシュグループまたは他の代替的なグルーピングの表現で記載されている場合、本発明は、列挙されたグループ全体を丸ごと包含するだけではなく、グループの各メンバーを個別に、またメイングループの全ての考えられるサブグループも包含し、また、グループメンバーの１つまたは複数が不在のメイングループも包含する。本発明はまた、特許請求の範囲に記載の発明においてグループメンバーのいずれかの１つまたは複数を明確に排除することを想定する。
【0070】
本開示は、ｒＡＡＶベクターおよび賦形剤を含む医薬組成物を提供する。特に、本開示は、長期保存（例えば６カ月）の間およびストレス条件（例えばせん断（ｓｈｅｅｒ）および凍結／解凍）下で安定な、ｒＡＡＶベクター、バッファー、塩、凍結保護物質、および界面活性剤を含む医薬組成物を提供する。本開示のこれらの態様の各々は、次の節でさらに論じられる。
【0071】
ＩＩ．一般的な技術
本発明の実施は、別段の指示がない限り、当技術分野の技術の範囲内である、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来の技術を利用する。このような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献において十分に説明されている。
本発明の実施は、別段の指示がない限り、当技術分野の技術の範囲内である、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来の技術を利用する。このような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献において十分に説明されている。
【0072】
ＩＩＩ．ＡＡＶおよびｒＡＡＶ
Ａ．ＡＡＶ
「アデノ随伴ウイルス」および／または「ＡＡＶ」は、直鎖状の一本鎖ＤＮＡゲノムおよびそのバリアントを有するパルボウイルスを指す。この用語は、別段のことが必要とされる場合を除き、全てのサブタイプ、ならびに天然形態および組換え形態の両方を網羅する。ＡＡＶを含むパルボウイルスは、細胞に侵入し、核酸（例えば導入遺伝子）を核に導入することができるため、遺伝子療法ベクターとして有用である。一部の実施形態において、導入された核酸（例えばｒＡＡＶベクターゲノム）は環状コンカテマーを形成し、これは、形質導入された細胞の核においてエピソームとして存続する。一部の実施形態において、導入遺伝子は、宿主細胞ゲノム内の特異的部位に、例えばヒト１９番染色体上のある部位に挿入される。部位特異的な組み込みは、ランダムな組み込みとは対照的に、予測可能な長期の発現プロファイルをもたらす可能性が高いと考えられている。ヒトゲノムへのＡＡＶの挿入部位は、ＡＡＶＳ１と呼ばれる。細胞に導入されると、核酸によってコードされるポリペプチドは、細胞によって発現され得る。ＡＡＶはヒトにおいていかなる病原性疾患にも伴わないため、ＡＡＶによって送達される核酸は、ヒト対象における疾患、障害および／または状態を処置するための治療用ポリペプチドを発現させるために使用することができる。
Ａ．ＡＡＶ
「アデノ随伴ウイルス」および／または「ＡＡＶ」は、直鎖状の一本鎖ＤＮＡゲノムおよびそのバリアントを有するパルボウイルスを指す。この用語は、別段のことが必要とされる場合を除き、全てのサブタイプ、ならびに天然形態および組換え形態の両方を網羅する。ＡＡＶを含むパルボウイルスは、細胞に侵入し、核酸（例えば導入遺伝子）を核に導入することができるため、遺伝子療法ベクターとして有用である。一部の実施形態において、導入された核酸（例えばｒＡＡＶベクターゲノム）は環状コンカテマーを形成し、これは、形質導入された細胞の核においてエピソームとして存続する。一部の実施形態において、導入遺伝子は、宿主細胞ゲノム内の特異的部位に、例えばヒト１９番染色体上のある部位に挿入される。部位特異的な組み込みは、ランダムな組み込みとは対照的に、予測可能な長期の発現プロファイルをもたらす可能性が高いと考えられている。ヒトゲノムへのＡＡＶの挿入部位は、ＡＡＶＳ１と呼ばれる。細胞に導入されると、核酸によってコードされるポリペプチドは、細胞によって発現され得る。ＡＡＶはヒトにおいていかなる病原性疾患にも伴わないため、ＡＡＶによって送達される核酸は、ヒト対象における疾患、障害および／または状態を処置するための治療用ポリペプチドを発現させるために使用することができる。
【0073】
標準的なＡＡＶ野生型ゲノムは４６８１塩基を含み（Ｂｅｒｎｓら（１９８７）Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２：２４３～３０７）、また、各末端に、ウイルスのＤＮＡ複製起点としておよびパッケージングシグナルとしてシスで機能する末端反復配列（例えば逆方向末端反復（ＩＴＲ））を含む。ゲノムは、ＡＡＶ複製（「ＡＡＶ ｒｅｐ」または「ｒｅｐ」）遺伝子およびカプシド（「ＡＡＶ ｃａｐ」または「ｃａｐ」）遺伝子としてそれぞれ公知の２つの大きなオープンリーディングフレームを含む。ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐはまた、本明細書において、ＡＡＶの「パッケージング遺伝子」とも呼ばれる。これらの遺伝子は、ウイルスゲノムの複製およびパッケージングに関与するウイルスタンパク質をコードする。
【0074】
野生型ＡＡＶは、３つのタンパク質、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３からなる小さな（２０～２５ｎｍ）正二十面体のウイルスカプシドと、当該カプシドを含む６０のカプシドタンパク質とを含む。３つのカプシド遺伝子、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３は、単一のオープンリーディングフレーム内で互いにオーバーラップしており、選択的スプライシングによってＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３が産生される（Ｇｒｉｅｇｅｒら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７９（１５）：９９３３～９９４４）。単一のＰ４０プロモーターによって、３つ全てのカプシドタンパク質がＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３についてそれぞれ約１：１：１０の比率で発現され、これが、ＡＡＶカプシドの産生を補う。さらに具体的には、ＶＰ１は完全長タンパク質であり、ＶＰ２およびＶＰ３は、Ｎ末端のトランケーションの増大に起因して次第に短くなっている。周知の例は、米国特許第７，９０６，１１１号において記載されているＡＡＶ９のカプシドであり、当該カプシドにおいて、ＶＰ１は、番号１２３と同定されている配列のアミノ酸残基１から７３６を含み、ＶＰ２は、番号１２３と同定されている配列のアミノ酸残基１３８から７３６を含み、そしてＶＰ３は、番号１２３と同定されている配列のアミノ酸残基２０３から７３６を含む。ＡＡＶ２カプシドタンパク質配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ：ＶＰ１（７３５アミノ酸、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＡＣ０３７８０）、ＶＰ２（５９８アミノ酸、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＡＣ０３７７８）、およびＶＰ３（５３３アミノ酸、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＡＣ０３７７９）で入手可能である。本明細書において使用される場合、用語「ＡＡＶ Ｃａｐ」または「ｃａｐ」は、ＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３、ならびにこれらのバリアントおよび類似体を指す。
【0075】
カプシド遺伝子の第２のオープンリーディングフレームは、カプシドアセンブリープロセスに必須の、アセンブリー活性化タンパク質（ＡＡＰ）と呼ばれるアセンブリー因子をコードする（Ｓｏｎｎｔａｇら（２０１１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８５（２３）：１２６８６～１２６９７）。
【0076】
少なくとも４つのウイルスタンパク質、すなわち、それらの見かけの分子量に従って名付けられたＲｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２、およびＲｅｐ４０が、ＡＡＶ ｒｅｐ遺伝子から合成される。本明細書において使用される場合、「ＡＡＶ ｒｅｐ」または「ｒｅｐ」は、ＡＡＶ複製タンパク質Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２、および／またはＲｅｐ４０、ならびにこれらのバリアントおよび類似体を意味する。本明細書において使用される場合、ｒｅｐおよびｃａｐは、野生型および組換え（例えば修飾されたキメラなど）の両方のｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、ならびにこれらがコードするポリペプチドを指す。一部の実施形態において、ｒｅｐをコードする核酸は、２つ以上のＡＡＶ血清型のヌクレオチドを含む。例えば、ｒｅｐタンパク質をコードする核酸は、ＡＡＶ２血清型のヌクレオチドおよびＡＡＶ３血清型のヌクレオチドを含み得る（Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚら（２００２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７６（２）：７９１～８０１）。
【0077】
複数のＡＡＶ血清型が天然で存在し、少なくとも１５の野生型血清型（すなわち、ＡＡＶ１～ＡＡＶ１５）がこれまでヒトから同定されている。天然血清型およびバリアント血清型は、他のＡＡＶ血清型と血清学的に異なるタンパク質カプシドを有することによって区別される。天然のおよび非天然のＡＡＶ血清型としては、とりわけ、ＡＡＶタイプ１（ＡＡＶ１）、ＡＡＶタイプ２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶタイプ３Ａ（ＡＡＶ３Ａ）およびＡＡＶタイプ３Ｂ（ＡＡＶ３Ｂ）を含むＡＡＶタイプ３（ＡＡＶ３）、ＡＡＶタイプ４（ＡＡＶ４）、ＡＡＶタイプ５（ＡＡＶ５）、ＡＡＶタイプ６（ＡＡＶ６）、ＡＡＶタイプ７（ＡＡＶ７）、ＡＡＶタイプ８（ＡＡＶ８）、ＡＡＶタイプ９（ＡＡＶ９）、ＡＡＶタイプ１０（ＡＡＶ１０）、ＡＡＶタイプ１２（ＡＡＶ１２）、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ７４（ＷＯ２０１６／２１０１７０を参照されたい）、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＲＨＭ４－１（ＷＯ２０１５／０１３３１３の配列番号５）、ＲＨＭ１５－１、ＲＨＭ１５－２、ＲＨＭ１５－３／ＲＨＭ１５－５、ＲＨＭ１５－４、ＲＨＭ１５－６、ＡＡＶ ｈｕ．２６、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２９Ｇ、ＡＡＶ２．８Ｇ９、ＡＡＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ２－ＴＴ、ＡＡＶ２－ＴＴ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶ３Ｂ－Ｓ３１２Ｎ、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、およびヒツジＡＡＶ、ＡＡＶタイプ２ｉ８（ＡＡＶ２ｉ８）、ＮＰ４、ＮＰ２２、ＮＰ６６、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶＤＪ／８、ＡＡＶＤＪ／９が含まれる（例えば、全て参照によって本明細書に組み込まれる、Ｆｉｅｌｄｓら「Ｖｉｒｏｌｏｇｙ」第２巻、第６９章（第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）；米国特許第７，９０６，１１１号；Ｇａｏら（２００４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６３８１；Ｍｏｒｒｉｓら（２００４）Ｖｉｒｏｌ．３３：３７５；ＷＯ２０１３／０６３３７９；ＷＯ２０１４／１９４１３２；ＷＯ２０１５／１２１５０１；ＷＯ２０１５／０１３３１３を参照されたい）。ヒトＣＤ３４＋細胞から単離されたＡＡＶバリアントとしては、ＡＡＶＨＳＣ１、ＡＡＶＨＳＣ２、ＡＡＶＨＳＣ３、ＡＡＶＨＳＣ４、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ６、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ８、ＡＡＶＨＳＣ９、ＡＡＶＨＳＣ１０、ＡＡＶＨＳＣ１１、ＡＡＶＨＳＣ１２、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１４、およびＡＡＶＨＳＣ１５が含まれる（参照によって本明細書に組み込まれる、Ｓｍｉｔｈら（２０１４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２２（９）：１６２５～１６３４）。
【0078】
血清型の特殊性は、別のＡＡＶと比較した、１つのＡＡＶに対する抗体間の交差反応性の欠如に基づいて決定される。このような交差反応性の違いは通常、カプシドタンパク質配列および抗原決定基の違いに起因する（例えば、ＡＡＶ血清型の、ＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３配列の違いに起因する）。しかし、一部の天然ＡＡＶまたは人工的なＡＡＶ突然変異体（例えば組換えＡＡＶ）は、現在公知の血清型のいずれとも血清学的な違いを示さない場合がある。これらウイルスはしたがって、対応するタイプのサブグループ、またはより単純にはバリアントＡＡＶであると見なされ得る。したがって、本明細書において使用される場合、用語「血清型」は、血清学的に異なるウイルス、例えばＡＡＶと、血清学的には異ならないが所与の血清型のサブグループまたはバリアントに含まれ得るウイルス、例えばＡＡＶとの両方を指す。
【0079】
公知のＡＡＶ血清型のカプシドのアミノ酸配列の包括的なリストおよびアラインメントは、刊行物全体が参照によってここで組み込まれる、Ｍａｒｓｉｃら（２０１４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２２（１１）：１９００～１９０９、特に補足の図１によって提供されている。
【0080】
様々な血清型のＡＡＶのゲノム配列、ならびに、ネイティブな逆方向末端反復（ＩＴＲ）、ｒｅｐタンパク質、およびカプシドサブユニットの配列は、当技術分野において公知である。このような配列は、文献またはＧｅｎＢａｎｋなどの公共のデータベースで見ることができる。例えば、その開示が参照によって本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００２０７７（ＡＡＶ１）、ＡＦ０６３４９７（ＡＡＶ１）、ＮＣ＿００１４０１（ＡＡＶ２）、ＡＦ０４３３０３（ＡＡＶ２）、ＮＣ＿００１７２９（ＡＡＶ３）、ＡＦ０２８７０５．１（ＡＡＶ３Ｂ）、ＮＣ＿００１８２９（ＡＡＶ４）、Ｕ８９７９０（ＡＡＶ４）、ＮＣ＿００６１５２（ＡＡＶ５）、ＡＦ０２８７０４（ＡＡＶ６）、ＡＦ５１３８５１（ＡＡＶ７）、ＡＦ５１３８５２（ＡＡＶ８）、ＮＣ＿００６２６１（ＡＡＶ８）、ＡＹ５３０５７９（ＡＡＶ９）、ＡＹ６３１９６５（ＡＡＶ１０）、ＡＹ６３１９６６（ＡＡＶ１１）、およびＤＱ８１３６４７（ＡＡＶ１２）を参照されたい。また、例えば、これら全てが参照によってここで本明細書に組み込まれる、Ｓｒｉｖｉｓｔａｖａら（１９８３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４５：５５５；Ｃｈｉｏｒｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１：６８２３；Ｃｈｉｏｒｉｎｉら（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：１３０９；Ｂａｎｔｅｌ－Ｓｃｈａａｌら（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：９３９；Ｘｉａｏら（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：３９９４；Ｍｕｒａｍａｔｓｕら（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２１：２０８；Ｓｈａｄｅら（１９８６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５８：９２１；Ｇａｏら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：１１８５４；Ｍｏｒｉｓら（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３：３７５～３８３；国際特許公開ＷＯ００／２８０６１、ＷＯ９９／６１６０１、ＷＯ９８／１１２４４、ＷＯ２０１３／０６３３７９、ＷＯ２０１４／１９４１３２、ＷＯ２０１５／１２１５０１、ならびに米国特許第６，１５６，３０３号および米国特許第７，９０６，１１１号を参照されたい。
【0081】
本明細書において開示されている医薬組成物の一実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＡＡＶ３Ｂ ＶＰ１ポリペプチド（本明細書において「カプシドタンパク質」とも呼ばれる）を含む。ＡＡＶ３Ｂ ＶＰ２およびＶＰ３は、配列番号１０（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＢ９５４５２．１）のアミノ酸１３８から７３６辺りおよびアミノ酸２０３から７３６辺りを包含する。本明細書において開示されている医薬組成物の一実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、配列番号１１の核酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０２８７０５．１のヌクレオチド２２０８～４４１８）によってコードされるＡＡＶ３Ｂ ＶＰ１ポリペプチド（本明細書において「カプシドタンパク質」とも呼ばれる）を含む。
【0082】
Ｂ．組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）
「組換えアデノ随伴ウイルス」または「ｒＡＡＶ」（本明細書において「ｒＡＡＶベクター」、「ｒＡＡＶウイルス粒子」、および／または「ｒＡＡＶベクター粒子」とも呼ばれる）は、別段の具体的な指摘がない限り、ベクターゲノムを含むＡＡＶカプシドを指す。ベクターゲノムは、天然のＡＡＶに少なくとも部分的に由来していないポリヌクレオチド配列（例えば、野生型ＡＡＶには存在しない異種ポリヌクレオチド）を含み、当該ベクターゲノムにおいて、野生型ＡＡＶゲノムのｒｅｐおよび／またはｃａｐ遺伝子がベクターゲノムから除去されている。ＡＡＶ由来のＩＴＲがベクターゲノムに付加されているか、またはベクターゲノムにおいて維持されている。それ故、ｒＡＡＶベクターという用語は、カプシドを含むが完全なＡＡＶゲノムは含まないｒＡＡＶウイルス粒子を包含し、代わりに組換えウイルス粒子は、異種の、すなわちカプシド内に元々は存在しない、核酸、ベクターゲノムを含み得る。したがって、「ｒＡＡＶベクターゲノム」（または「ベクターゲノム」）は、必ずではないがＡＡＶカプシド内に含有され得る、異種ポリヌクレオチド配列（少なくとも１つのＩＴＲを含む）を指す。ｒＡＡＶベクターゲノムは、二本鎖（ｄｓＡＡＶ）、一本鎖（ｓｓＡＡＶ）、または自己相補的（ｓｃＡＡＶ）であり得る。典型的には、ベクターゲノムは、治療用導入遺伝子、例えば、配列番号２で示されるＡＴＰ７Ｂ遺伝子、またはその断片をコードすることが多い、異種核酸を含む。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、配列番号１で示される銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２タンパク質またはその断片をコードする異種核酸を含む。
「組換えアデノ随伴ウイルス」または「ｒＡＡＶ」（本明細書において「ｒＡＡＶベクター」、「ｒＡＡＶウイルス粒子」、および／または「ｒＡＡＶベクター粒子」とも呼ばれる）は、別段の具体的な指摘がない限り、ベクターゲノムを含むＡＡＶカプシドを指す。ベクターゲノムは、天然のＡＡＶに少なくとも部分的に由来していないポリヌクレオチド配列（例えば、野生型ＡＡＶには存在しない異種ポリヌクレオチド）を含み、当該ベクターゲノムにおいて、野生型ＡＡＶゲノムのｒｅｐおよび／またはｃａｐ遺伝子がベクターゲノムから除去されている。ＡＡＶ由来のＩＴＲがベクターゲノムに付加されているか、またはベクターゲノムにおいて維持されている。それ故、ｒＡＡＶベクターという用語は、カプシドを含むが完全なＡＡＶゲノムは含まないｒＡＡＶウイルス粒子を包含し、代わりに組換えウイルス粒子は、異種の、すなわちカプシド内に元々は存在しない、核酸、ベクターゲノムを含み得る。したがって、「ｒＡＡＶベクターゲノム」（または「ベクターゲノム」）は、必ずではないがＡＡＶカプシド内に含有され得る、異種ポリヌクレオチド配列（少なくとも１つのＩＴＲを含む）を指す。ｒＡＡＶベクターゲノムは、二本鎖（ｄｓＡＡＶ）、一本鎖（ｓｓＡＡＶ）、または自己相補的（ｓｃＡＡＶ）であり得る。典型的には、ベクターゲノムは、治療用導入遺伝子、例えば、配列番号２で示されるＡＴＰ７Ｂ遺伝子、またはその断片をコードすることが多い、異種核酸を含む。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、配列番号１で示される銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２タンパク質またはその断片をコードする異種核酸を含む。
【0083】
ｒＡＡＶベクターおよび上記で示した用語は、組換えではない「ＡＡＶウイルス粒子」または「ＡＡＶウイルス」から区別され、ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードするウイルスゲノムを含有し、また、ＡＡＶウイルスは、アデノウイルスおよび／もしくは単純ヘルペスウイルスなどのヘルパーウイルスならびに／またはこれらに由来する所要のヘルパー遺伝子も含む細胞内に存在する場合に、複製し得る。したがって、ｒＡＡＶベクターの産生は必ず、組換えＤＮＡ技術を使用する組換えベクターゲノムの産生を含み、この場合、組換えベクターゲノムはＡＡＶカプシド内に含有されて、ｒＡＡＶベクターが形成される。
【0084】
本開示は、ｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物、およびそれを使用する方法を提供する。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターはＡＡＶ３Ｂカプシドを含み、場合により、治療的処置の標的であるポリペプチドをコードする導入遺伝子（例えば、ウィルソン病を処置するための銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２またはその断片をコードする核酸、例えば配列番号２）を含む。対象（例えば患者）へのｒＡＡＶベクターの送達または投与によって、コードされるタンパク質およびペプチドが対象に提供される。こうして、ｒＡＡＶベクターは、疾患、障害、および／または状態の処置のために発現させるための異種ポリヌクレオチドを移入／送達するために使用することができる。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＴＰ７Ｂのコピーまたはその断片（例えば、ＭＢＳ１～４のコード領域が欠失したＡＴＰ７Ｂ）を肝細胞に移入し、これが、ウィルソン病を処置するための短縮された銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２として発現される。
【0085】
ｒＡＡＶベクターゲノムは通常、ウイルスのｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子に代わる異種核酸配列に対してシスの、１３０から１４５塩基のＩＴＲを保持している。このようなＩＴＲは、ＡＡＶゲノムの複製およびパッケージングを仲介するため、組換えＡＡＶベクターの産生に必要である。しかし、修飾ＡＡＶ ＩＴＲ、および部分的にまたは完全に合成の配列を含む非ＡＡＶ末端反復もまた、この目的を果たし得る。ＩＴＲはヘアピン構造を形成し、感染後の相補的ＤＮＡ鎖の宿主細胞介在性の合成のためのプライマーとして例えば働くように機能する。ＩＴＲはまた、ウイルスのパッケージング、組み込みなどにおいても役割を演じる。ＩＴＲは、ＡＡＶゲノムの複製およびｒＡＡＶベクターへのパッケージングのためにシスで必要な唯一のＡＡＶウイルスエレメントである。ｒＡＡＶベクターゲノムは、異種配列（例えば、目的の遺伝子をコードする導入遺伝子）を含むベクターゲノムの５’および３’末端に通常ある、２つのＩＴＲを含んでいてもよい。５’および３’ＩＴＲは共に同じ配列を含み得るか、または各々が、異なる配列（例えば、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８）を含み得る。一部の実施形態において、本開示のｒＡＡＶベクターゲノムは、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含むかまたはこれからなるＩＴＲを含む。一部の実施形態において、本開示のｒＡＡＶベクターゲノムは、配列番号５～８のいずれか一つに８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、ＩＴＲを含む。ＡＡＶ ＩＴＲは、限定はしないが、血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１、またはあらゆる他のＡＡＶを含む、あらゆるＡＡＶに由来し得る。
【0086】
本開示のｒＡＡＶベクターゲノムは、カプシドの血清型（例えばＡＡＶ３Ｂまたはその他）と異なるＡＡＶ血清型（例えば、野生型ＡＡＶ２、その断片またはバリアント）に由来するＩＴＲを含み得る。１つの血清型に由来する少なくとも１つのＩＴＲを含むが異なる血清型に由来するカプシドを含む、このようなｒＡＡＶベクターゲノムは、ハイブリッドウイルスベクターと呼ぶことができる（米国特許第７，１７２，８９３号を参照されたい）。ｒＡＡＶ ＩＴＲは、野生型ＩＴＲ配列全体を含み得るか、または、そのバリアント、断片、もしくは修飾物であり得るが、機能性は保持している。
【0087】
導入遺伝子および少なくとも１つのＩＴＲに加えて、ベクターゲノムはまた、様々な調節エレメントまたは制御エレメントも含み得る。典型的には、調節エレメントは、作動可能に連結しているポリヌクレオチド（例えば導入遺伝子）の発現に影響する核酸配列である。遺伝子発現に有用な調節エレメントの正確な性質は、生物ごとおよび細胞型ごとに異なり、これとしては例えば、異種ポリヌクレオチドの適切な転写および翻訳を促進することを目的とした、プロモーター、エンハンサー、イントロンなどが含まれる。調節性の制御は、転写、翻訳、スプライシング、メッセージの安定性などのレベルで行われ得る。
【0088】
一部の実施形態において、本開示の医薬組成物は、少なくとも１つのＩＴＲ、導入遺伝子、プロモーター、およびポリアデニル化シグナル（ポリＡ）配列を含む組換え核酸を含むｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態において、導入遺伝子は、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２またはその断片をコードする。一部の実施形態において、導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２またはその断片をコードする。一部の実施形態において、導入遺伝子は、配列番号１に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸を含む、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２またはその断片をコードする。
【0089】
一部の実施形態において、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子は、ＷＯ２０１６／０９７２１９（配列番号６のヌクレオチド４７３～３５８０；参照によって本明細書に組み込まれる）において開示されている。一部の実施形態において、導入遺伝子は、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２またはその断片をコードする配列番号２の核酸を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、導入遺伝子は、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子またはその断片（例えば配列番号２）である。一部の実施形態において、導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む。
【0090】
一部の実施形態において、プロモーターは、最小のＡＡＴプロモーターである。一部の実施形態において、最小のＡＡＴプロモーターは、ＷＯ２０１６／０９７２１９（配列番号１のヌクレオチド１５６～４６０；参照によって本明細書に組み込まれる）において開示されている。一部の実施形態において、プロモーターは、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、プロモーターは、配列番号３の核酸配列に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む。
【0091】
一部の実施形態において、ポリＡシグナル配列は、ウサギβ－グロビン遺伝子に由来する。一部の実施形態において、ポリＡシグナル配列は、ＷＯ２０１６／０９７２１９（配列番号１のヌクレオチド４８７７～４９３２；参照によって本明細書に組み込まれる）において開示されている。一部の実施形態において、ポリＡシグナル配列は、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなる。一部の実施形態において、ポリＡシグナル配列は、配列番号４の核酸配列に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む。
【0092】
一部の実施形態において、典型的なベクターゲノムは、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、最小のＡＡＴプロモーター、ポリＡ配列、および２つのＩＴＲ配列を含む。一部の実施形態において、ベクターゲノムは、金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、および／または配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含む最小のＡＡＴプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡ、ならびに２つのＡＡＶ２ ＩＴＲ配列を含む。一部の実施形態において、ＩＴＲ配列は、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含む。
【0093】
ｒＡＡＶベクターのウイルスカプシドは、限定はしないが、上記の野生型ＡＡＶおよびバリアントＡＡＶのいずれかであり得る。一部の実施形態において、ウイルスカプシドポリペプチドは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ２ｉ８、ＮＰ４、ＮＰ２２、ＮＰ６６、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶＤＪ／８、ＡＡＶＤＪ／９、ＡＡＶＬＫ０３、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＲＨＭ４－１、ＲＨＭ１５－１、ＲＨＭ１５－２、ＲＨＭ１５－３／ＲＨＭ１５－５、ＲＨＭ１５－４、ＲＨＭ１５－６、ＡＡＶ ｈｕ．２６、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２９Ｇ、ＡＡＶ２．８Ｇ９、ＡＶＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ２－ＴＴ、ＡＡＶ２－ＴＴ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶ３Ｂ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶＨＳＣ１、ＡＡＶＨＳＣ２、ＡＡＶＨＳＣ３、ＡＡＶＨＳＣ４、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ６、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ８、ＡＡＶＨＳＣ９、ＡＡＶＨＳＣ１０、ＡＡＶＨＳＣ１１、ＡＡＶＨＳＣ１２、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１４、およびＡＡＶＨＳＣ１５からなる群から選択される、ＡＡＶ血清型のものである。
【0094】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターのウイルスカプシドは、ＡＡＶ３Ｂカプシドである。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターのウイルスカプシドは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０２８７０５．１の配列の少なくとも一部分（例えばヌクレオチド２２０８～４４１８）によってコードされるポリペプチドを含む。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターのウイルスカプシドは、配列番号１１を含むかまたはこれからなる核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターのウイルスカプシドは、配列番号１０の核酸配列に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列によってコードされるポリペプチドを含む。
【0095】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターのウイルスカプシドは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＢ９５４５２．１のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターのウイルスカプシドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターのウイルスカプシドは、配列番号１０のアミノ酸配列に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一なポリペプチドである。
【0096】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードするおよび／または配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含む最小のＡＡＴプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡ、ならびに、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含んでいてもよい２つのＡＡＶ２ ＩＴＲ配列を含むベクターゲノムと、ｉｉ）ＡＡＶ３Ｂカプシド（例えば配列番号１０のアミノ酸配列）を含むカプシドとを含む。
【0097】
一部の実施形態において、本開示は、インビボ遺伝子療法のための、ｒＡＡＶベクターにおいて使用するための祖先ＡＡＶベクターの使用を提供する。具体的には、インシリコ由来の配列をデノボ合成し、生物学的活性について特徴付けすることができる。祖先配列の予測および合成は、ｒＡＡＶベクター内へのアセンブリーに加えて、その内容が参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／０５４６５３において記載されている方法を使用して行うことができる。特に、祖先ウイルスの配列からアセンブリーされたｒＡＡＶベクターは、現代のウイルスまたはその一部分と比較して、ヒト集団における既存の免疫性に対する感受性の低減を示し得る。
【0098】
一部の実施形態において、２つ以上のＡＡＶ血清型（例えば、野生型ＡＡＶ血清型、バリアントＡＡＶ血清型）に由来するヌクレオチド配列によってコードされるカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶベクターは、「キメラベクター」または「キメラカプシド」と呼ばれる（その開示全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第６，４９１，９０７号を参照されたい）。一部の実施形態において、キメラカプシドタンパク質は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超えるＡＡＶ血清型に由来する核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、組換えＡＡＶベクターは、例えばＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ２ｉ８、またはこれらのバリアントに由来するカプシド配列を含み、前述のＡＡＶ血清型のいずれかのアミノ酸の組み合わせを含むキメラカプシドタンパク質を生じさせる（Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚら（２００２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７６（２）：７９１～８０１を参照されたい）。あるいは、キメラカプシドは、１つの血清型のＶＰ１、異なる血清型のＶＰ２、さらに異なる血清型のＶＰ３、およびこれらの組み合わせの混合物を含み得る。例えばキメラウイルスカプシドは、ＡＡＶ１ ｃａｐタンパク質またはサブユニット、および少なくとも１つのＡＡＶ２ ｃａｐタンパク質またはサブユニットを含み得る。キメラカプシドは、１つまたは複数のＢ１９ ｃａｐサブユニットを有するＡＡＶカプシドを例えば含み得、例えば、ＡＡＶ ｃａｐタンパク質またはサブユニットが、Ｂ１９ ｃａｐタンパク質またはサブユニットによって置き換えられていてもよい。例えば、一実施形態において、ＡＡＶカプシドのＶＰ３サブユニットは、Ｂ１９のＶＰ２サブユニットによって置き換えられていてよい。
【0099】
一部の実施形態において、キメラベクターは、改変された向性または特定の組織型もしくは細胞型に対する向性を示すように変更されている。用語「向性」は、ある種の細胞型もしくは組織型へのウイルスの優先的な侵入、および／または、ある種の細胞型もしくは組織型への侵入を促進する細胞表面との優先的な相互作用を指す。ＡＡＶの向性は一般に、異なるウイルスカプシドタンパク質とそれらの同族細胞受容体との間の特異的相互作用によって決定される（Ｌｙｋｋｅｎら（２０１８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｄｅｖ．Ｄｉｓｏｒｄ．１０：１６）。好ましくは、ウイルスまたはウイルスベクターが細胞に侵入すると、ベクターゲノム（例えばｒＡＡＶベクターゲノム）が有する配列（例えば、導入遺伝子などの異種配列）が発現する。
【0100】
「向性プロファイル」は、１つまたは複数の標的細胞、標的組織、および／または標的器官への形質導入のパターンを指す。例えば、ＡＡＶカプシドは、筋肉細胞への効率的な形質導入を特徴とする向性プロファイルを有し得、例えば脳細胞への形質導入はわずかにすぎない。
【0101】
本明細書において記載されるｒＡＡＶベクターは、哺乳動物細胞ＡＡＶ産生系（例えば、２９３ＴまたはＨＥＫ２９３細胞に基づくもの）ならびに昆虫細胞ＡＡＶ産生系（例えば、ｓｆ９昆虫細胞に基づくものおよび／またはバキュロウイルスヘルパーベクターを使用するもの）などの任意の公知の産生系によって得ることができる。
【0102】
ｒＡＡＶベクターは、当技術分野における標準的な方法によって、例えば、任意の数のカラムクロマトグラフィー方法（例えばアフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー）または塩化セシウム勾配によって、精製することができる。ｒＡＡＶベクターを精製するための方法は当技術分野において公知であり、当該方法としては、Ｃｌａｒｋら（１９９９）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １０（６）：１０３１～１０３９；Ｓｃｈｅｎｐｐら（２００２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．６９：４２７～４４３、米国特許第６，５６６，１１８号、およびＷＯ９８／０９６５７において記載されている方法が含まれる。
【0103】
ｒＡＡＶベクターが産生および精製された後、これらは、ウィルソン病を有するヒト対象などの対象に投与するための組成物を調製するために力価測定され得る（例えば、サンプル中のｒＡＡＶベクターの量が定量され得る）。ｒＡＡＶベクターの力価測定は、当技術分野において公知の方法を使用して行うことができる。
【0104】
Ｃ．典型的な組換えＡＡＶ
典型的な実施形態において、本開示は、例えば正常胆管および／または銅の便排出の回復、ならびにセルロプラスミンへの銅の積載の正常化のための、ウィルソン病（ＷＤ）を処置するための、ｒＡＡＶベクターを含む改良された医薬組成物を提供する。ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ３Ｂカプシド、ならびに、ＡＡＴプロモーターに隣接するＡＡＶ２ ＩＴＲを有するベクターゲノム、ＭＢＳ１～４が欠失したＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子、およびポリＡシグナル配列を含む（例えば、各々が参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／０９７２１９およびＷＯ２０１６／０９７２１８を参照されたい）。
典型的な実施形態において、本開示は、例えば正常胆管および／または銅の便排出の回復、ならびにセルロプラスミンへの銅の積載の正常化のための、ウィルソン病（ＷＤ）を処置するための、ｒＡＡＶベクターを含む改良された医薬組成物を提供する。ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ３Ｂカプシド、ならびに、ＡＡＴプロモーターに隣接するＡＡＶ２ ＩＴＲを有するベクターゲノム、ＭＢＳ１～４が欠失したＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子、およびポリＡシグナル配列を含む（例えば、各々が参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／０９７２１９およびＷＯ２０１６／０９７２１８を参照されたい）。
【0105】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードするおよび／または配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸、配列番号３の核酸配列を含む最小のＡＡＴプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡ、ならびに、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含んでいてもよい２つのＡＡＶ２ ＩＴＲ配列を含むベクターゲノムと、ｉｉ）ＡＡＶ３Ｂカプシドを含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ３Ｂカプシドポリペプチドは、配列番号１０で明記され、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＢ９５４５２．１で、かつ／または、配列番号１１で明記され、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０２８７０５．１のヌクレオチド２２０８～４４１８のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
【0106】
ＩＶ．ｒＡＡＶベクターの調合物
精製されると、ＡＡＶ調製物は、所望の成分を含む組成物となるように、本明細書において記載される通りに、例えば、タンジェンシャルフロー濾過、撹拌セルを使用するノーマルフロー濾過、ゲル濾過、透析、カラムクロマトグラフィー、および／または脱塩カラムによるバッファー交換によって調合することができる。実例として、精製されたウイルス調製物は、まず限外濾過（ＵＦ）によって、次いでダイアフィルトレーションによって濃縮することができる。
精製されると、ＡＡＶ調製物は、所望の成分を含む組成物となるように、本明細書において記載される通りに、例えば、タンジェンシャルフロー濾過、撹拌セルを使用するノーマルフロー濾過、ゲル濾過、透析、カラムクロマトグラフィー、および／または脱塩カラムによるバッファー交換によって調合することができる。実例として、精製されたウイルス調製物は、まず限外濾過（ＵＦ）によって、次いでダイアフィルトレーションによって濃縮することができる。
【0107】
調合物は、緩衝剤、二価陽イオンを生じさせる塩、抗凍結剤、および界面活性剤を含み得る。本明細書において使用される場合、「バッファー」は、典型的にはその酸－塩基コンジュゲート成分の作用によって液体のｒＡＡＶベクター調合物をｐＨの変化に耐えるようにする、添加される組成物を指す。バッファーの濃度に言及がある場合、記述された濃度は、バッファーの遊離酸または遊離塩基形態のモル濃度を表すことを意図する。ＡＡＶのｐＩはおよそ６．３であり、したがって、それより高いｐＨが、ｒＡＡＶベクターを含む調合物に最適である。ｒＡＡＶベクター、特にｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物のｐＨが低下していくと、ベクターにおける立体構造の変化が生じ得、これによって、品質特性パラメーターの変化によって示されるように、その安定性が低減する。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などの一部のバッファーのｐＨは凍結すると低下していくことが当技術分野において公知である。他のバッファーのｐＨは凍結した場合にこのような変化を示さず、そのため、このようなバッファー（例えばＴｒｉｓ）は、保存の際に凍結されるであろう、ｒＡＡＶベクターを含む調合物に好ましい。
【0108】
緩衝剤としては、例えば、酢酸塩、コハク酸塩（例えばコハク酸二ナトリウム六水和物）、コハク酸、グルコン酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、酢酸、リン酸塩、リン酸、アスコルビン酸塩、アスコルビン酸、酒石酸、リンゴ酸塩、マレイン酸、グリシン、乳酸塩、乳酸、重炭酸塩、炭酸、安息香酸ナトリウム、安息香酸、エデト酸塩、イミダゾール、Ｔｒｉｓ（例えば、Ｔｒｉｓ塩基、Ｔｒｉｓ ＨＣＬ、またはその両方）、およびこれらの混合物が含まれ得る。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む組成物は、Ｔｒｉｓを含む。
【0109】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物中のバッファー（例えばＴｒｉｓ）の濃度は、約１ｍＭから約５００ｍＭのＴｒｉｓ、例えば、約１ｍＭから約４５０ｍＭ、約１ｍＭから約４００ｍＭ、約１ｍＭから約３５０ｍＭ、約１ｍＭから約３００ｍＭ、約１ｍＭから約２５０ｍＭ、約１ｍＭから約２００ｍＭ、約１ｍＭから約１５０ｍＭ、約１ｍＭから約１００ｍＭ、約１ｍＭから７５ｍＭ、約１ｍＭから５０ｍＭ、約１ｍＭから２５ｍＭ、約５ｍＭから約３０ｍＭ、約１０ｍＭから約３０ｍＭ、または約１４ｍＭから約２６ｍＭである。
【0110】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物中のバッファー（例えばＴｒｉｓ）の濃度は、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１７５ｍＭ、約２００ｍＭ、約２２５ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２７５ｍＭ、約３００ｍＭ、約３２５ｍＭ、約３５０ｍＭ、約３７５ｍＭ、約４００ｍＭ、約４２５ｍＭ、約４５０ｍＭ、約４７５ｍＭ、または約５００ｍＭである。一部の実施形態において、ｒＡＡＶ（例えばＡＡＶ３Ｂ）ベクターを含む調合物中のＴｒｉｓの濃度は、約２０ｍＭである。
【0111】
本明細書において使用される場合、用語「二価陽イオン」は、原子価が＋２の陽イオンを指す。このタイプのイオンは、陰イオンと２つの化学結合を形成し得る。二価陽イオンは、例えばＭｇＣｌ２、ＭｇＳＯ４、およびＣａＣｌ２を含む塩として調合物中に供給され得る。ｒＡＡＶベクター、特にｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物における二価陽イオンによって、調合物が顕著に高張になることなく高いイオン強度を有することが可能となる。いかなる特定の理論にも拘束されることは望まないが、調合物中のＭｇＣｌ２などの塩は、ＡＡＶカプシド上の正の電荷パッチ、特に、ＡＡＶ３ＢカプシドのＶＰ３電荷パッチを安定化させる。一部の実施形態において、一価陽イオンは、例えばＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４、または酢酸ナトリウムを含む塩として調合物中に供給され得る。
【0112】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物中の二価陽イオンを供給する塩（例えばＭｇＣｌ２）の濃度は、約１ｍＭから約５００ｍＭ、例えば、約１ｍＭから約４５０ｍＭ、約１ｍＭから約４００ｍＭ、約１ｍＭから約３５０ｍＭ、約１ｍＭから約３００ｍＭ、約１ｍＭから約２５０ｍＭ、約１ｍＭから約２００ｍＭ、約１ｍＭから約１５０ｍＭ、約１ｍＭから約１００ｍＭ、約１０ｍＭから約４５０ｍＭ、約１０ｍＭから約４００ｍＭ、約１０ｍＭから約３５０ｍＭ、約１０ｍＭから約３００ｍＭ、約１０ｍＭから約２５０ｍＭ、約１０ｍＭから約２００ｍＭ、約１０ｍＭから約１７５ｍＭ、約１０ｍＭから約１５０ｍＭ、約１０ｍＭから約１２５ｍＭ、約５０ｍＭから約４５０ｍＭ、約５０ｍＭから約４００ｍＭ、約５０ｍＭから約３５０ｍＭ、約５０ｍＭから約３００ｍＭ、約５０ｍＭから約２５０ｍＭ、約５０ｍＭから約２００ｍＭ、約５０ｍＭから約１５０ｍＭまたは約７５ｍＭから約４５０ｍＭ、約７５ｍＭから約４００ｍＭ、約７５ｍＭから約３５０ｍＭ、約７５ｍＭから約３００ｍＭ、約７５ｍＭから約２５０ｍＭ、約７５ｍＭから約２００ｍＭ、約７５ｍＭから約１５０ｍＭ、約７５ｍＭから約１２５ｍＭ、または約７０ｍＭから約１３０ｍＭである。
【0113】
一部の実施形態において、調合物中の塩（例えばＭｇＣｌ２）の濃度は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約９１ｍＭ、約９２ｍＭ、約９３ｍＭ、約９４ｍＭ、約９５ｍＭ、約９６ｍＭ、約９７ｍＭ、約９８ｍＭ、約９９ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０１ｍＭ、約１０２ｍＭ、約１０３ｍＭ、約１０４ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１０６ｍＭ、約１０７ｍＭ、約１０８ｍＭ、約１０９ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２２５ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２７５ｍＭ、約３００ｍＭ、約３２５ｍＭ、約３５０ｍＭ、約３７５ｍＭ、約４００ｍＭ、約４２５ｍＭ、約４５０ｍＭ、約４７５ｍＭ、または約５００ｍＭである。一部の実施形態において、ｒＡＡＶ（例えばｒＡＡＶ３Ｂ）ベクターを含む調合物中のＭｇＣｌ２の濃度は、約１００ｍＭである。
【0114】
本明細書において使用される場合、用語「凍結保護物質」は、タンパク質（例えばｒＡＡＶベクター）と組み合わされると、凍結およびその後の保存の際のタンパク質の生理化学的不安定性およびタンパク質の分解を顕著に予防するまたは低減させる分子を指す。一部の実施形態において、凍結保護物質は、液体組成物の凍結の際の氷晶の形成を予防するように機能する。調合物中の凍結保護物質はまた、浸透圧調整剤または凍結乾燥保護物質としても機能し得る。一部の実施形態において、凍結保護物質は、ｒＡＡＶベクターのガラス転移温度（Ｔｇ’）を低減させ得、その結果、ｒＡＡＶベクターは約－７０℃ではなく約－４０℃で保存され得る。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターのガラス転移温度（Ｔｇ’）は、変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）によって測定される。凍結保護物質は、例えば、糖（例えば、デキストロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、マルトース、マンノース、ソルボース、スクロース、トレハロース、キシロース）、糖アルコール（例えば、エリスリトール、エチレングリコール、グリセロール、イソマルト、イノシトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、キシリトール）、アミノ酸（例えば、グリシン、ヒスチジン、アルギニン）、ポリペプチド、タンパク質（例えば、アルブミン、ゼラチン）、ポリマー（例えば、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、水溶性グルカン、またはこのような分子の任意の組み合わせであり得る。
【0115】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約０．１％から約２０％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．１％から約１９％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１８％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１７％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１６％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１５％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１４％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１３％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１２％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１１％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１０％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約９％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約８％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約７％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約６％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約５％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約４％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約３％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約２％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１％（ｗ／ｖ）、約１％から約１９％（ｗ／ｖ）、約１％から約１８％（ｗ／ｖ）、約１％から約１７％（ｗ／ｖ）、約１％から約１６％（ｗ／ｖ）、約１％から約１５％（ｗ／ｖ）、約１％から約１４％（ｗ／ｖ）、約１％から約１３％（ｗ／ｖ）、約１％から約１２％（ｗ／ｖ）、約１％から約１１％（ｗ／ｖ）、約１％から約１０％（ｗ／ｖ）、約１％から約８％（ｗ／ｖ）、約１％から約６％（ｗ／ｖ）、約２％から約６％（ｗ／ｖ）、または約２．８％から約５．２％（ｗ／ｖ）の凍結保護物質（例えばスクロース）を含む。
【0116】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約１％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）、約２．５％（ｗ／ｖ）、約２．６％（ｗ／ｖ）、約２．７％（ｗ／ｖ）、約２．８％（ｗ／ｖ）、約２．９％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約３．１％（ｗ／ｖ）、約３．２％（ｗ／ｖ）、約３．３％（ｗ／ｖ）、約３．４％（ｗ／ｖ）、約３．５％（ｗ／ｖ）、約３．６％（ｗ／ｖ）、約３．７％（ｗ／ｖ）、約３．８％（ｗ／ｖ）、約３．９％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、約４．１％（ｗ／ｖ）、約４．２％（ｗ／ｖ）、約４．３％（ｗ／ｖ）、約４．４％（ｗ／ｖ）、約４．６％（ｗ／ｖ）、約４．７％（ｗ／ｖ）、約４．８％（ｗ／ｖ）、約４．９％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約５．１％（ｗ／ｖ）、約５．２％（ｗ／ｖ）、約５．３％（ｗ／ｖ）、約５．４％（ｗ／ｖ）、約５．５％（ｗ／ｖ）、約６％（ｗ／ｖ）、約７％（ｗ／ｖ）、約８％（ｗ／ｖ）、約９％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１１％（ｗ／ｖ）、約１２％（ｗ／ｖ）、約１３％（ｗ／ｖ）、約１４％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約１６％（ｗ／ｖ）、約１７％（ｗ／ｖ）、約１８％（ｗ／ｖ）、約１９％（ｗ／ｖ）、または約２０％（ｗ／ｖ）の凍結保護物質（例えばスクロース）を含む。一部の実施形態において、ｒＡＡＶ（例えばｒＡＡＶ３Ｂ）ベクターを含む調合物は、約４％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む。
【0117】
本明細書において使用される場合、用語「界面活性剤」は、液体ｒＡＡＶベクター調合物の表面張力を改変し得る賦形剤を指す。界面活性剤は、ｒＡＡＶベクターと共に調合された場合に、製造の際のせん断応力からのベクターの保護を含む、１つまたは複数の機能をもたらし得る。一部の実施形態において、界面活性剤は、液体ｒＡＡＶベクター調合物の表面張力を低減させる。さらに他の実施形態において、「界面活性剤」は、調合物中のｒＡＡＶベクターの安定性の向上に寄与し得る。界面活性剤は、調合されたｒＡＡＶベクターの凝集を低減させ得る、および／または調合物中の微粒子の形成を最小化し得る、および／または吸着を低減させ得る。界面活性剤はまた、凍結／解凍サイクルの間および後のｒＡＡＶベクターの安定性を向上させ得る。
【0118】
界面活性剤は、例えば、ポリソルベート、ポリオキサマー（ポリオキサマー１８８を含む）、トリトン、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル－スルホベタイン、ミリスチル－スルホベタイン、リノレイル－スルホベタイン、ステアリル－スルホベタイン、ラウリル－サルコシン、ミリスチル－サルコシン、リノレイル－サルコシン、ステアリル－サルコシン、リノレイル－ベタイン、ミリスチル－ベタイン、セチル－ベタイン、ラウラミドプロピル－ベタイン、コカミドプロピル－ベタイン、リノールアミドプロピル－ベタイン、ミリスタミドプロピル－ベタイン、パルミドプロピル－ベタイン、イソステアラミドプロピル－ベタイン、ミリスタミドプロピル－ジメチルアミン、パルミドプロピル－ジメチルアミン、イソステアラミドプロピル－ジメチルアミン、ココイルメチルタウリンナトリウム、オレイルメチルタウリン二ナトリウム、ジヒドロキシプロピルＰＥＧ５リノールアンモニウムクロリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはこのような分子の任意の組み合わせであり得る。界面活性剤は、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート２１、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６１、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、ポリソルベート８５、ＰＥＧ３３５０、またはこのような分子の任意の組み合わせであり得る。一部の実施形態において、界面活性剤は、ポリオキサマー１８８である。
【0119】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約０．００１％（ｗ／ｖ）から約０．５％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．００１％から約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．００１％から約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．００１％から約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００１％から約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．１５％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．１５％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．０３％（ｗ／ｖ）、または約０．０１４％から約０．０３％（ｗ／ｖ）の界面活性剤（例えばポリオキサマー１８８）を含む。
【0120】
一部の実施形態において、調合物は、約０．００５％（ｗ／ｖ）、約０．００６％（ｗ／ｖ）、約０．００７％（ｗ／ｖ）、約０．００８％（ｗ／ｖ）、約０．００９％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．０１４％、約０．０１５％（ｗ／ｖ）、０．０１６％（ｗ／ｖ）、０．０１７％（ｗ／ｖ）、約０．０１８％（ｗ／ｖ）、約０．０１９％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０２１％（ｗ／ｖ）、約０．０２２％（ｗ／ｖ）、０．０２３％（ｗ／ｖ）、０．０２４％（ｗ／ｖ）、約０．０２５％（ｗ／ｖ）、約０．０２６％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、または約１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤（例えばポリオキサマー１８８）を含む。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８を含む。
【0121】
本明細書において使用される場合、用語「凍結乾燥保護物質」は、目的のタンパク質と組み合わされると、凍結乾燥およびその後の保存の際のタンパク質の物理化学的不安定性を顕著に予防するまたは低減させる分子を指す。典型的な凍結乾燥保護物質としては、糖類およびこれらの対応する糖アルコール；グルタミン酸ナトリウムまたはヒスチジンなどのアミノ酸；ベタインなどのメチルアミン；硫酸マグネシウムなどのリオトロピック塩；三価のまたは高分子量の糖アルコールなどのポリオール、例えばグリセリン、デキストラン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）；ならびにこれらの組み合わせが含まれる。さらなる典型的な凍結乾燥保護物質としては、グリセリンおよびゼラチン、ならびに糖類であるメリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、およびスタキオースが含まれる。還元糖の例としては、グルコース、マルトース、ラクトース、マルツロース、イソマルツロース、およびラクツロースが含まれる。非還元糖の例としては、糖アルコールおよび他の直鎖状ポリアルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが含まれる。好ましい糖アルコールは、モノグリコシド、特に、ラクトース、マルトース、ラクツロース、およびマルツロースなどの二糖の還元によって得られる化合物である。グリコシドの側基は、グルコシド性またはガラクトシド性のいずれかであり得る。糖アルコールのさらなる例は、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、およびイソマルツロースである。好ましい凍結乾燥保護物質は、非還元糖であるトレハロースまたはスクロースである。
【0122】
凍結乾燥保護物質は、「凍結乾燥保護をする量」で凍結乾燥前の調合物に添加されるが、この量は、凍結乾燥保護をする量の凍結乾燥保護物質の存在下でタンパク質を凍結乾燥した後、タンパク質が凍結乾燥および保存の際にその物理化学的安定性を基本的に保持することを意味する。
【0123】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約０．１％（ｗ／ｖ）から約１０％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．１％から約９％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約８％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約７％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約６％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約５％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約４％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約３％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約２％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約１０％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約９％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約８％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約７％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約６％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約５％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約４％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約３％（ｗ／ｖ）、約０．５％から約２．５％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）から約２．６％、または約１％から２％の凍結乾燥保護物質（例えばソルビトール）を含む。
【0124】
本開示の一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物のｐＨは、約７から約８．５、例えば約７．１から約８．１の範囲であり得る。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物のｐＨは、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８．０、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、または約８．５であり得る。さらに、一部の実施形態において、ｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物のｐＨは、約７．６である。
【0125】
一部の実施形態において、本開示は、粘度が約０．５ｍＰａから約５ｍＰａの間、例えば、約０．５ｍＰａから約４ｍＰａ、約０．５ｍＰａから約３ｍＰａ、約０．５ｍＰａから約２ｍＰａ、約０．５ｍＰａから約１．５ｍＰａ、約１ｍＰａから約４ｍＰａ、約１ｍＰａから約３ｍＰａ、約１ｍＰａから約２ｍＰａ、または約１ｍＰａから約１．５ｍＰａの間の、ｒＡＡＶベクターを含む調合物を提供する。一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約０．５ｍＰａ、約０．６ｍＰａ、約０．７ｍＰａ、約０．８ｍＰａ、約０．９ｍＰａ、約１．０ｍＰａ、約１．１ｍＰａ、約１．２ｍＰａ、約１．３ｍＰａ、約１．４ｍＰａ、約１．５ｍＰａ、約１．６ｍＰａ、約１．７ｍＰａ、約１．８ｍＰａ、約１．９ｍＰａ、約２．０ｍＰａ、約２．５ｍＰａ、約３．０ｍＰａ、約３．５ｍＰａ、約４．０ｍＰａ、約４．５ｍＰａ、または約５．０ｍＰａの粘度を有する。一部の実施形態において、ｒＡＡＶ（例えばｒＡＡＶ３Ｂ）ベクターを含む調合物は、２１℃で測定すると、約１．１９ｍＰａまたは約１．１９３ｍＰａの粘度を有する。
【0126】
一部の実施形態において、本開示は、密度が約０．５ｇ／ｃｍ３から約５ｇ／ｃｍ３の間、例えば、約０．５ｇ／ｃｍ３から約４ｇ／ｃｍ３、約０．５ｇ／ｃｍ３から約３ｇ／ｃｍ３、約０．５ｇ／ｃｍ３から約２ｇ／ｃｍ３、約０．５ｇ／ｃｍ３から約１．５ｇ／ｃｍ３、約１ｇ／ｃｍ３から約４ｇ／ｃｍ３、約１ｇ／ｃｍ３から約３ｇ／ｃｍ３、約１ｇ／ｃｍ３から約２ｇ／ｃｍ３、または約１ｇ／ｃｍ３から約１．５ｇ／ｃｍ３の間の、ｒＡＡＶベクターを含む調合物を提供する。
【0127】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約０．５ｇ／ｃｍ３、約０．６ｇ／ｃｍ３、約０．７ｇ／ｃｍ３、約０．８ｇ／ｃｍ３、約０．９ｇ／ｃｍ３、約１．０ｇ／ｃｍ３、約１．１ｇ／ｃｍ３、約１．２ｇ／ｃｍ３、約１．３ｇ／ｃｍ３、約１．４ｇ／ｃｍ３、約１．５ｇ／ｃｍ３、約１．６ｇ／ｃｍ３、約１．７ｇ／ｃｍ３、約１．８ｇ／ｃｍ３、約１．９ｇ／ｃｍ３、約２．０ｇ／ｃｍ３、約２．５ｇ／ｃｍ３、約３．０ｇ／ｃｍ３、約３．５ｇ／ｃｍ３、約４．０ｇ／ｃｍ３、約４．５ｇ／ｃｍ３、または約５．０ｇ／ｃｍ３の密度を有する。一部の実施形態において、ｒＡＡＶ（例えばｒＡＡＶ３Ｂ）ベクターを含む調合物は、約１．０３ｇ／ｃｍ３または約１．０２５ｇ／ｃｍ３の密度を有する。
【0128】
一部の実施形態において、本開示は、伝導性が約１ｍＳ／ｃｍから約４０ｍＳ／ｃｍの間、例えば、約１ｍＳ／ｃｍから約３５ｍＳ／ｃｍ、約１ｍＳ／ｃｍから約３０ｍＳ／ｃｍ、約１ｍＳ／ｃｍから約２５ｍＳ／ｃｍ、約１ｍＳ／ｃｍから約２０ｍＳ／ｃｍ、約１ｍＳ／ｃｍから約１５ｍＳ／ｃｍ、約１ｍＳ／ｃｍから約１０ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍから約４０ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍから約３５ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍから約３０ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍから約２５ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍから約２０ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍから約１５ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍから約１０ｍＳ／ｃｍ、約１０ｍＳ／ｃｍから約４０ｍＳ／ｃｍ、約１０ｍＳ／ｃｍから約３５ｍＳ／ｃｍ、約１０ｍＳ／ｃｍから約３０ｍＳ／ｃｍ、約１０ｍＳ／ｃｍから約２５ｍＳ／ｃｍ、約１０ｍＳ／ｃｍから約２０ｍＳ／ｃｍ、または約１０ｍＳ／ｃｍから約１５ｍＳ／ｃｍの間の、ｒＡＡＶベクターを含む調合物を提供する。
【0129】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約１ｍＳ／ｃｍ、約２ｍＳ／ｃｍ、約３ｍＳ／ｃｍ、約４ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍ、約６ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ、約９ｍＳ／ｃｍ、約１０ｍＳ／ｃｍ、約１０．５ｍＳ／ｃｍ、約１１ｍＳ／ｃｍ、約１１．５ｍＳ／ｃｍ、約１２ｍＳ／ｃｍ、約１２．５ｍＳ／ｃｍ、約１３ｍＳ／ｃｍ、約１３．５ｍＳ／ｃｍ、約１４ｍＳ／ｃｍ、約１４．５ｍＳ／ｃｍ、約１５ｍＳ／ｃｍ、約１５．５ｍＳ／ｃｍ、約１６．１ｍＳ／ｃｍ、約１６．２ｍＳ／ｃｍ、約１６．３ｍＳ／ｃｍ、約１６．４ｍＳ／ｃｍ、約１６．５ｍＳ／ｃｍ、約１６．６ｍＳ／ｃｍ、約１６．７ｍＳ／ｃｍ、約１６．８ｍＳ／ｃｍ、約１６．９ｍＳ／ｃｍ、約１７ｍＳ／ｃｍ、約１７．１ｍＳ／ｃｍ、約１７．２ｍＳ／ｃｍ、約１７．３ｍＳ／ｃｍ、約１７．４ｍＳ／ｃｍ、約１７．５ｍＳ／ｃｍ、約１７．６ｍＳ／ｃｍ、約１７．７ｍＳ／ｃｍ、約１７．８ｍＳ／ｃｍ、約１７．９ｍＳ／ｃｍ、約１８ｍＳ／ｃｍ、約１８．５ｍＳ／ｃｍ、約１９ｍＳ／ｃｍ、約１９．５ｍＳ／ｃｍ、約２０ｍＳ／ｃｍ、約２５ｍＳ／ｃｍ、約３０ｍＳ／ｃｍ、約３５ｍＳ／ｃｍ、または約４０ｍＳ／ｃｍの伝導性を有する。一部の実施形態において、ｒＡＡＶ（例えばｒＡＡＶ３Ｂ）ベクターを含む調合物は、約１６．９４ｍＳ／ｃｍの伝導性を有する。
【0130】
医薬組成物は、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、亜硫酸塩、ソルビン酸塩、ベンゾエート、フェノール、ｍ－クレゾール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、および／またはパラベン（例えばメチルパラベン）などの１つまたは複数の防腐剤をさらに含み得る。一部の実施形態において、医薬組成物は、いずれの防腐剤も添加されていない。
【0131】
本開示は、ｒＡＡＶベクター、ならびに、バッファー、塩、凍結保護物質、界面活性剤、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つの他の成分を含む医薬組成物を提供し、場合によりベクターはｒＡＡＶ３Ｂベクターである。一部の実施形態において、医薬組成物は、ｒＡＡＶベクター、ならびに、Ｔｒｉｓ、ＭｇＣｌ２、スクロース、ポリオキサマー１８８、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つの他の成分を含み、場合によりベクターはｒＡＡＶ３Ｂベクターである。一部の実施形態において、医薬組成物は、ｒＡＡＶベクター、ならびに、ｐＨ７．６で、２０ｍＭのＴｒｉｓ、約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、および約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８を含み、場合によりベクターはｒＡＡＶ３Ｂベクターである。
【0132】
一部の実施形態において、調合物は、約１Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１Ｅ＋１５ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む。一部の実施形態において、調合物は、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約４．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、例えば、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約２．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約、３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約５．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約４．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約２．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約５．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約５．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約４．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約５．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを、場合によりｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む。
【0133】
一部の実施形態において、調合物は、約３．５Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約４．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約６．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約７．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約８．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約９．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約２．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約４．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約６．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約７．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約８．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．１Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．３Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．４Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．５Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．６Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．７Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．８Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、１．３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．４Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．６Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．７Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．８Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．９Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．４Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約３．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを、場合によりｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む。
【0134】
一部の実施形態において、ｒＡＡＶベクターを含む調合物は、約４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含み、場合によりｒＡＡＶベクターはｒＡＡＶ３Ｂベクターである。
【0135】
医薬組成物はまた、医薬組成物の有効性を増強させる他の試薬を含み得る。医薬組成物は、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフェア、脂質粒子、および小胞などの送達媒体を含有し得る。
【0136】
一部の典型的な実施形態において、本開示は、約７．３から約７．９のｐＨの、約３Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬの濃度のｒＡＡＶベクター、約１０ｍＭから約３０ｍＭの濃度のバッファー、約５０ｍＭから約１５０ｍＭの濃度の塩、約１．０％（ｗ／ｖ）から約１０％（ｗ／ｖ）の濃度の凍結保護物質、および約０．０１％（ｗ／ｖ）から約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度の界面活性剤を含む、改良された医薬組成物を提供し、ここで、ｒＡＡＶベクターは、配列番号１のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなるポリペプチドを場合によりコードする、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子またはその断片を含むベクターゲノムを含んでいてもよく、また、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ３Ｂカプシドポリペプチドを含んでいてもよい。
【0137】
一部の典型的な実施形態において、本開示は、約７．３から約７．９（例えば約７．６）のｐＨの、約３Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬの濃度のｒＡＡＶベクター、約１０ｍＭから約３０ｍＭ（例えば約２０ｍＭ）の濃度のＴｒｉｓ、約５０ｍＭから約１５０ｍＭ（例えば約１００ｍＭ）の濃度のＭｇＣｌ２、約１．０％（ｗ／ｖ）から約１０％（ｗ／ｖ）（例えば約４％）の濃度のスクロース、および約０．０１％（ｗ／ｖ）から約０．１％（ｗ／ｖ）（例えば約０．０２％）の濃度のポリオキサマー１８８を含む、改良された医薬組成物を提供し、ここで、ｒＡＡＶベクターは、配列番号１のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなるポリペプチドを場合によりコードする、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子またはその断片を含むかまたはこれからなるベクターゲノム、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなるＡＡＴプロモーター、ＡＡＶ２ ＩＴＲ配列が隣接する、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなるポリＡシグナル配列を含み、また、ｒＡＡＶベクターはＡＡＶ３Ｂカプシドポリペプチドを含んでいてもよい。
【0138】
Ｖ．組換えＡＡＶ調合物の使用
本開示の医薬組成物は、ＡＰＴ７Ｂ遺伝子における突然変異に起因する、稀な、消耗性の、命に関わる銅ホメオスタシス障害であるウィルソン病（ＷＤ）を処置するために使用することができる。一部の実施形態において、ＷＤを有する対象への、本明細書において開示されているｒＡＡＶベクター（例えば、金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードするおよび／または配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸を含むベクターゲノムを有するｒＡＡＶ３Ｂベクター）を含む医薬組成物の投与は、銅代謝の回復（例えば、便および腎臓での銅の排出の増大、血清中の銅の減少、ならびに肝銅の減少によって測定される）、血清中セルロプラスミンレベルの増大、尿中の銅の減少、肝銅の減少、肝臓損傷の好転（例えば、肝機能および酵素パラメーターの正常化）、亜鉛塩での処置および／またはキレート化療法が低減することまたは不要であること、正常上限より低い／正常上限に等しい血清中アラニントランスアミナーゼレベル、正常上限より低い／正常上限に等しい血清中アスパラギン酸トランスアミナーゼレベル、ならびに神経学的症候の減少を含む、１つまたは複数の処置効果を生じさせ得る。
本開示の医薬組成物は、ＡＰＴ７Ｂ遺伝子における突然変異に起因する、稀な、消耗性の、命に関わる銅ホメオスタシス障害であるウィルソン病（ＷＤ）を処置するために使用することができる。一部の実施形態において、ＷＤを有する対象への、本明細書において開示されているｒＡＡＶベクター（例えば、金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードするおよび／または配列番号１のアミノ酸配列を含む銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする核酸を含むベクターゲノムを有するｒＡＡＶ３Ｂベクター）を含む医薬組成物の投与は、銅代謝の回復（例えば、便および腎臓での銅の排出の増大、血清中の銅の減少、ならびに肝銅の減少によって測定される）、血清中セルロプラスミンレベルの増大、尿中の銅の減少、肝銅の減少、肝臓損傷の好転（例えば、肝機能および酵素パラメーターの正常化）、亜鉛塩での処置および／またはキレート化療法が低減することまたは不要であること、正常上限より低い／正常上限に等しい血清中アラニントランスアミナーゼレベル、正常上限より低い／正常上限に等しい血清中アスパラギン酸トランスアミナーゼレベル、ならびに神経学的症候の減少を含む、１つまたは複数の処置効果を生じさせ得る。
【0139】
本発明の医薬組成物は、本明細書において記載される組成物を保有するための容器および使用のための指示を含む製品（例えばキット）において供給され得る。一部の実施形態において、組成物を保有するための容器は、バイアルである。一部の実施形態において、バイアルは、環状オレフィンコポリマーバイアルである。一部の実施形態において、バイアルは、無菌の高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）バイアルである。一部の実施形態において、バイアルは、０．５～５０ｍＬ（例えば１～１０ｍＬ）中に約１Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１Ｅ＋１５ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含有する。
【0140】
一部の実施形態において、本開示の医薬組成物は、約１ｍＬから約５０ｍＬ、例えば約１ｍＬから約５ｍＬ、約１ｍＬから約１０ｍＬ、約１ｍＬから約１５ｍＬ、約１ｍＬから約２０ｍＬ、約１ｍＬから約２５ｍＬ、約１ｍＬから約３０ｍＬ、約１ｍＬから約３５ｍＬ、約１ｍＬから約４０ｍＬ、または約１ｍＬから約４５ｍＬの投与容積で投与される。
【0141】
一部の実施形態において、本開示の医薬組成物は、約１ｍＬ、約１．５ｍＬ、約２ｍＬ、約２．５ｍＬ、約３ｍＬ、約３．５ｍＬ、約４ｍＬ、約４．１ｍＬ、約４．２ｍＬ、約４．３ｍＬ、約４．４ｍＬ、約４．５ｍＬ、約４．６ｍＬ、約４．７ｍＬ、約４．８ｍＬ、約４．９ｍＬ、約５．０ｍＬ、約５．１ｍＬ、約５．２ｍＬ、約５．３ｍＬ、約５．４ｍＬ、約５．５ｍＬ、約５．６ｍＬ、約５．７ｍＬ、約５．８ｍＬ、約５．９ｍＬ、約６．０ｍＬ、約６．１ｍＬ、約６．２ｍＬ、約６．３ｍＬ、約６．４ｍＬ、約６．５ｍＬ、約６．６ｍＬ、約６．７ｍＬ、約６．８ｍＬ、約６．９ｍＬ、約７．０ｍＬ、約７．１ｍＬ、約７．２ｍＬ、約７．３ｍＬ、約７．４ｍＬ、約７．５ｍＬ、約７．６ｍＬ、約７．７ｍＬ、約７．８ｍＬ、約７．９ｍＬ、約８．０ｍＬ、約８．１ｍＬ、約８．２ｍＬ、約８．３ｍＬ、約８．４ｍＬ、約８．５ｍＬ、約８．６ｍＬ、約８．７ｍＬ、約８．９ｍＬ、約９．０ｍＬ、約９．１ｍＬ、約９．２ｍＬ、約９．３ｍＬ、約９．４ｍＬ、約９．５ｍＬ、約９．６ｍＬ、約９．７ｍＬ、約９．８ｍＬ、約９．９ｍＬ、約１０．０ｍＬ、約１０．５ｍＬ、約１５ｍＬ、約２０ｍＬ、約２５ｍＬ、約３０ｍＬ、約３５ｍＬ、約４０ｍＬ、約４５ｍＬ、または約５０ｍＬの投与容積で投与される。
【0142】
本開示の医薬組成物は、１回、または２回以上、患者に投与され得る。例えば、組成物は、１カ月未満、３カ月未満、６カ月未満、９カ月未満、または１年未満の間隔で患者に投与され得る。一部の実施形態において、組成物は、２年未満、５年未満、７年未満、１０年未満、または１５年未満の間隔で患者に投与され得る。医薬組成物は、処置されるべき疾患に適した経路を介して、それを必要とする患者に提供され得る。例えば、組成物は、静脈内注射、動脈内注射、頭蓋内注射、腹腔内注射、門脈注射、筋肉内注射、髄腔内投与、または皮下注射によるものを含む、非経口投与をされ得る。例えば、治療用導入遺伝子の発現のためのｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物は、約５Ｅ＋１１ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１４ｖｇ／ｋｇの用量で、例えば約１Ｅ＋１２ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｋｇなどの用量で、それを必要とする患者に静脈内で提供され得る。一部の実施形態において、本開示の医薬組成物は、一定期間にわたり、例えば３０分から５時間の期間にわたり、静脈内注入によって患者に投与される。
【0143】
一部の実施形態において、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子の発現のためのｒＡＡＶ３Ｂを含む医薬組成物は、約５Ｅ＋１１ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１４ｖｇ／ｋｇまたは約１Ｅ＋１２ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ウィルソン病患者に静脈内で提供される。
【0144】
一部の実施形態において、本開示の医薬組成物は、１２歳を超えるＷＤを有する患者に投与される。一部の実施形態において、本開示の医薬組成物は、１８～６０歳の、場合により標準治療法、例えばキレート化療法を受けている、ＷＤを有する対象に投与される。
【0145】
一部の実施形態において、本開示の組成物は、凍結乾燥されているおよび／または凍結乾燥にかけられたものである。一部の実施形態において、本開示の組成物は凍結乾燥されておらず、また、凍結乾燥にかけられていない。
【0146】
一部の態様において、ｒＡＡＶベクターを含む組成物は、本明細書において記載される、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子の発現の喪失または低減に伴う疾患（例えばウィルソン病）の処置のための薬品の製造に提供される。
【0147】
一部の態様において、ｒＡＡＶベクターを含む組成物は、本明細書において記載される、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子の発現の喪失または低減に伴う疾患（例えばウィルソン病）を処置する方法において使用するために提供される。
【0148】
本明細書において別段の定義がない限り、本開示に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有する。本明細書において言及される全ての刊行物および他の参考文献は、参照によってその全体が組み込まれる。多くの文献が本明細書において引用されているが、この引用は、これらの文献のいずれかが当技術分野における共通の一般知識の一部を形成するものであることの承認を構成するものではない。
【0149】
実施形態
当業者であれば、通常の試験を使用すれば、本明細書において記載される発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識するかまたはそれを確認することができる。このような均等物は、以下の実施形態（Ｅ）に包含されるものとする。
当業者であれば、通常の試験を使用すれば、本明細書において記載される発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識するかまたはそれを確認することができる。このような均等物は、以下の実施形態（Ｅ）に包含されるものとする。
【0150】
Ｅ１． 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
バッファー、
塩、
凍結保護物質、および
界面活性剤
を含み、ｐＨが約７．０から約８．５である医薬組成物。
バッファー、
塩、
凍結保護物質、および
界面活性剤
を含み、ｐＨが約７．０から約８．５である医薬組成物。
【0151】
Ｅ２．バッファーの濃度が、約１ｍＭから５００ｍＭのＴｒｉｓ、例えば、約１ｍＭから約４５０ｍＭ、約１ｍＭから約４００ｍＭ、約１ｍＭから約３５０ｍＭ、約１ｍＭから約３００ｍＭ、約１ｍＭから約２５０ｍＭ、約１ｍＭから約２００ｍＭ、約１ｍＭから約１５０ｍＭ、約１ｍＭから約１００ｍＭ、約１ｍＭから７５ｍＭ、約１ｍＭから５０ｍＭ、約１ｍＭから２５ｍＭ、約５ｍＭから約３０ｍＭ、約１０ｍＭから約３０ｍＭ、または約１４ｍＭから約２６ｍＭである、Ｅ１に記載の組成物。
【0152】
Ｅ３．バッファーの濃度が、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１７５ｍＭ、約２００ｍＭ、約２２５ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２７５ｍＭ、約３００ｍＭ、約３２５ｍＭ、約３５０ｍＭ、約３７５ｍＭ、約４００ｍＭ、約４２５ｍＭ、約４５０ｍＭ、約４７５ｍＭ、または約５００ｍＭである、Ｅ１またはＥ２に記載の組成物。
【0153】
Ｅ４．バッファーの濃度が約２０ｍＭである、Ｅ１～Ｅ３のいずれか一つに記載の組成物。
【0154】
Ｅ５．バッファーが、酢酸塩、コハク酸塩（例えばコハク酸二ナトリウム六水和物）、コハク酸、グルコン酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、酢酸、リン酸塩、リン酸、アスコルビン酸塩、アスコルビン酸、酒石酸、リンゴ酸塩、マレイン酸、グリシン、乳酸塩、乳酸、重炭酸塩、炭酸、安息香酸ナトリウム、安息香酸、エデト酸塩、イミダゾール、Ｔｒｉｓ（例えば、Ｔｒｉｓ塩基、Ｔｒｉｓ ＨＣＬ、または両方）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅ１～Ｅ４のいずれか一つに記載の組成物。
【0155】
Ｅ６．バッファーがＴｒｉｓである、Ｅ１～Ｅ５のいずれか一つに記載の組成物。
【0156】
Ｅ７． Ｔｒｉｓが、Ｔｒｉｓ塩基、Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、またはＴｒｉｓ塩基とＴｒｉｓ ＨＣｌとの組み合わせである、Ｅ１～Ｅ６のいずれか一つに記載の組成物。
【0157】
Ｅ８．塩の濃度が、約１ｍＭから約５００ｍＭ、例えば、約１ｍＭから約４５０ｍＭ、約１ｍＭから約４００ｍＭ、約１ｍＭから約３５０ｍＭ、約１ｍＭから約３００ｍＭ、約１ｍＭから約２５０ｍＭ、約１ｍＭから約２００ｍＭ、約１ｍＭから約１５０ｍＭ、約１ｍＭから約１００ｍＭ、約１０ｍＭから約４５０ｍＭ、約１０ｍＭから約４００ｍＭ、約１０ｍＭから約３５０ｍＭ、約１０ｍＭから約３００ｍＭ、約１０ｍＭから約２５０ｍＭ、約１０ｍＭから約２００ｍＭ、約１０ｍＭから１７５ｍＭ、約１０ｍＭから１５０ｍＭ、約１０ｍＭから１２５ｍＭ、約５０ｍＭから約４５０ｍＭ、約５０ｍＭから約４００ｍＭ、約５０ｍＭから約３５０ｍＭ、約５０ｍＭから約３００ｍＭ、約５０ｍＭから約２５０ｍＭ、約５０ｍＭから約２００ｍＭ、約５０ｍＭから約１５０ｍＭまたは約７５ｍＭから約４５０ｍＭ、約７５ｍＭから約４００ｍＭ、約７５ｍＭから約３５０ｍＭ、約７５ｍＭから約３００ｍＭ、約７５ｍＭから約２５０ｍＭ、約７５ｍＭから約２００ｍＭ、約７５ｍＭから約１５０ｍＭ、約７５ｍＭから約１２５ｍＭ、または約７０ｍＭから約１３０ｍＭである、Ｅ１～Ｅ７のいずれか一つに記載の組成物。
【0158】
Ｅ９．塩の濃度が、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約９１ｍＭ、約９２ｍＭ、約９３ｍＭ、約９４ｍＭ、約９５ｍＭ、約９６ｍＭ、約９７ｍＭ、約９８ｍＭ、約９９ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０１ｍＭ、約１０２ｍＭ、約１０３ｍＭ、約１０４ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１０６ｍＭ、約１０７ｍＭ、約１０８ｍＭ、約１０９ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２２５ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２７５ｍＭ、約３００ｍＭ、約３２５ｍＭ、約３５０ｍＭ、約３７５ｍＭ、約４００ｍＭ、約４２５ｍＭ、約４５０ｍＭ、約４７５ｍＭ、または約５００ｍＭである、Ｅ１～Ｅ８のいずれか一つに記載の組成物。
【0159】
Ｅ１０．塩の濃度が約１００ｍＭである、Ｅ１～Ｅ９のいずれか一つに記載の組成物。
【0160】
Ｅ１１．塩が、ＭｇＣｌ２、ＭｇＳＯ４、ＣａＣｌ２、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅ１～１０のいずれか一つに記載の組成物。
【0161】
Ｅ１２．塩がＭｇＣｌ２である、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか一つに記載の組成物。
【0162】
Ｅ１３．凍結保護物質の濃度が、約０．１％から約２０％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．１％から約１９％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１８％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１７％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１６％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１５％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１４％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１３％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１２％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１１％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１０％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約９％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約８％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約７％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約６％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約５％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約４％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約３％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約２％（ｗ／ｖ）、約０．１％から約１％（ｗ／ｖ）、約１％から約１９％（ｗ／ｖ）、約１％から約１８％（ｗ／ｖ）、約１％から約１７％（ｗ／ｖ）、約１％から約１６％（ｗ／ｖ）、約１％から約１５％（ｗ／ｖ）、約１％から約１４％（ｗ／ｖ）、約１％から約１３％（ｗ／ｖ）、約１％から約１２％（ｗ／ｖ）、約１％から約１１％（ｗ／ｖ）、約１％から約１０％（ｗ／ｖ）、約１％から約８％（ｗ／ｖ）、約１％から約６％（ｗ／ｖ）、約２％から約６％（ｗ／ｖ）、または約２．８％から約５．２％（ｗ／ｖ）である、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか一つに記載の組成物。
【0163】
Ｅ１４．凍結保護物質の濃度が、約１％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）、約２．５％（ｗ／ｖ）、約２．６％（ｗ／ｖ）、約２．７％（ｗ／ｖ）、約２．８％（ｗ／ｖ）、約２．９％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約３．１％（ｗ／ｖ）、約３．２％（ｗ／ｖ）、約３．３％（ｗ／ｖ）、約３．４％（ｗ／ｖ）、約３．５％（ｗ／ｖ）、約３．６％（ｗ／ｖ）、約３．７％（ｗ／ｖ）、約３．８％（ｗ／ｖ）、約３．９％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、約４．１％（ｗ／ｖ）、約４．２％（ｗ／ｖ）、約４．３％（ｗ／ｖ）、約４．４％（ｗ／ｖ）、約４．６％（ｗ／ｖ）、約４．７％（ｗ／ｖ）、約４．８％（ｗ／ｖ）、約４．９％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約５．１％（ｗ／ｖ）、約５．２％（ｗ／ｖ）、約５．３％（ｗ／ｖ）、約５．４％、約５．５％（ｗ／ｖ）、約６％（ｗ／ｖ）、約７％（ｗ／ｖ）、約８％（ｗ／ｖ）、約９％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１１％（ｗ／ｖ）、約１２％（ｗ／ｖ）、約１３％（ｗ／ｖ）、約１４％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約１６％（ｗ／ｖ）、約１７％（ｗ／ｖ）、約１８％（ｗ／ｖ）、約１９％（ｗ／ｖ）、または約２０％（ｗ／ｖ）である、Ｅ１～Ｅ１３のいずれか一つに記載の組成物。
【0164】
Ｅ１５．凍結保護物質の濃度が約４％（ｗ／ｖ）である、Ｅ１～Ｅ１４のいずれか一つに記載の組成物。
【0165】
Ｅ１６．凍結保護物質が、糖（例えば、デキストロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、マルトース、マンノース、ソルボース、スクロース、トレハロース、キシロース）、糖アルコール（例えば、エリスリトール、エチレングリコール、グリセロール、イソマルト、イノシトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、キシリトール）、アミノ酸（例えば、グリシン、ヒスチジン、アルギニン）、ポリペプチド、タンパク質（例えば、アルブミン、ゼラチン）、ポリマー（例えば、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、水溶性グルカン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅ１～Ｅ１５のいずれか一つに記載の組成物。
【0166】
Ｅ１７．凍結保護物質がスクロースである、Ｅ１～Ｅ１６のいずれか一つに記載の組成物。
【0167】
Ｅ１８．界面活性剤の濃度が、約０．００１％（ｗ／ｖ）から約０．５％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．００１％から約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．００１％から約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．００１％から約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００１％から約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．１５％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．００２％から約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．１５％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％から約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％から約０．０３％（ｗ／ｖ）、または約０．０１４％から約０．０２６％である、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか一つに記載の組成物。
【0168】
Ｅ１９．界面活性剤の濃度が、約０．００５％（ｗ／ｖ）、約０．００６％（ｗ／ｖ）、約０．００７％（ｗ／ｖ）、約０．００８％（ｗ／ｖ）、約０．００９％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．０１４％（ｗ／ｖ）、約０．０１５％（ｗ／ｖ）、約０．０１６％（ｗ／ｖ）、約０．０１７％（ｗ／ｖ）、約０．０１８％（ｗ／ｖ）、約０．０１９％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０２１％（ｗ／ｖ）、約０．０２２％（ｗ／ｖ）、約０．０２３％（ｗ／ｖ）、約０．０２４％（ｗ／ｖ）、約０．０２５％（ｗ／ｖ）、約０．０２６％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、または約０．５％（ｗ／ｖ）である、Ｅ１～１８のいずれかに記載の組成物。
【0169】
Ｅ２０．界面活性剤の濃度が約０．０２％（ｗ／ｖ）である、Ｅ１～Ｅ１９のいずれか一つに記載の組成物。
【0170】
Ｅ２１．界面活性剤が、ポリソルベート、ポリオキサマー、トリトン、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル－スルホベタイン、ミリスチル－スルホベタイン、リノレイル－スルホベタイン、ステアリル－スルホベタイン、ラウリル－サルコシン、ミリスチル－サルコシン、リノレイル－サルコシン、ステアリル－サルコシン、リノレイル－ベタイン、ミリスチル－ベタイン、セチル－ベタイン、ラウラミドプロピル－ベタイン、コカミドプロピル－ベタイン、リノールアミドプロピル－ベタイン、ミリスタミドプロピル－ベタイン、パルミドプロピル－ベタイン、イソステアラミドプロピル－ベタイン、ミリスタミドプロピル－ジメチルアミン、パルミドプロピル－ジメチルアミン、イソステアラミドプロピル－ジメチルアミン、ココイルメチルタウリンナトリウム、オレイルメチルタウリン二ナトリウム、ジヒドロキシプロピルＰＥＧ５リノールアンモニウムクロリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅ１～Ｅ２０のいずれか一つに記載の組成物。
【0171】
Ｅ２２．界面活性剤がポリオキサマー１８８である、Ｅ１～Ｅ２１のいずれか一つに記載の組成物。
【0172】
Ｅ２３． ｐＨが約７．０から約８．５、例えば約７．１から約８．１である、Ｅ１～Ｅ２２のいずれか一つに記載の組成物。
【0173】
Ｅ２４． ｐＨが、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８．０、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、または約８．５である、Ｅ１～Ｅ２３のいずれか一つに記載の組成物。
【0174】
Ｅ２５． ｐＨが約７．６＋／－０．５である、Ｅ１～Ｅ２４のいずれか一つに記載の組成物。
【0175】
Ｅ２６．粘度が約０．５ｍＰａから約５ｍＰａである、Ｅ１～Ｅ２５のいずれか一つに記載の組成物。
【0176】
Ｅ２７．粘度が、約０．５ｍＰａ、約０．６ｍＰａ、約０．７ｍＰａ、約０．８ｍＰａ、約０．９ｍＰａ、約１．０ｍＰａ、約１．１ｍＰａ、約１．２ｍＰａ、約１．３ｍＰａ、約１．４ｍＰａ、約１．５ｍＰａ、約１．６ｍＰａ、約１．７ｍＰａ、約１．８ｍＰａ、約１．９ｍＰａ、約２．０ｍＰａ、約２．５ｍＰａ、約３．０ｍＰａ、約３．５ｍＰａ、約４．０ｍＰａ、約４．５ｍＰａ、または約５．０ｍＰａである、Ｅ１～２６のいずれかに記載の組成物。
【0177】
Ｅ２８．粘度が、約１ｍＰａから約１．５ｍＰａ、場合により約１．１９ｍＰａまたは約１．９３ｍＰａである、Ｅ１～Ｅ２７のいずれか一つに記載の組成物。
【0178】
Ｅ２９．密度が約０．５ｇ／ｃｍ３から約５ｇ／ｃｍ３である、Ｅ１～Ｅ２８のいずれか一つに記載の組成物。
【0179】
Ｅ３０．密度が、約０．５ｇ／ｃｍ３、約０．６ｇ／ｃｍ３、約０．７ｇ／ｃｍ３、約０．８ｇ／ｃｍ３、約０．９ｇ／ｃｍ３、約１．０ｇ／ｃｍ３、約１．１ｇ／ｃｍ３、約１．２ｇ／ｃｍ３、約１．３ｇ／ｃｍ３、約１．４ｇ／ｃｍ３、約１．５ｇ／ｃｍ３、約１．６ｇ／ｃｍ３、約１．７ｇ／ｃｍ３、約１．８ｇ／ｃｍ３、約１．９ｇ／ｃｍ３、約２．０ｇ／ｃｍ３、約２．５ｇ／ｃｍ３、約３．０ｇ／ｃｍ３、約３．５ｇ／ｃｍ３、約４．０ｇ／ｃｍ３、約４．５ｇ／ｃｍ３、または約５．０ｇ／ｃｍ３である、Ｅ１～Ｅ２９のいずれか一つに記載の組成物。
【0180】
Ｅ３１．密度が、約１ｇ／ｃｍ３から約１．５ｇ／ｃｍ３、場合により約１．０３ｇ／ｃｍ３または約１．０２５ｇ／ｃｍ３である、Ｅ１～Ｅ３０のいずれか一つに記載の組成物。
【0181】
Ｅ３２．伝導性が約１ｍＳ／ｃｍから約４０ｍＳ／ｃｍである、Ｅ１～Ｅ３１のいずれか一つに記載の組成物。
【0182】
Ｅ３３．伝導性が、約１ｍＳ／ｃｍ、約２ｍＳ／ｃｍ、約３ｍＳ／ｃｍ、約４ｍＳ／ｃｍ、約５ｍＳ／ｃｍ、約６ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ、約９ｍＳ／ｃｍ、約１０ｍＳ／ｃｍ、約１０．５ｍＳ／ｃｍ、約１１ｍＳ／ｃｍ、約１１．５ｍＳ／ｃｍ、約１２ｍＳ／ｃｍ、約１２．５ｍＳ／ｃｍ、約１３ｍＳ／ｃｍ、約１３．５ｍＳ／ｃｍ、約１４ｍＳ／ｃｍ、約１４．５ｍＳ／ｃｍ、約１５ｍＳ／ｃｍ、約１５．５ｍＳ／ｃｍ、約１６．１ｍＳ／ｃｍ、約１６．２ｍＳ／ｃｍ、約１６．３ｍＳ／ｃｍ、約１６．４ｍＳ／ｃｍ、約１６．５ｍＳ／ｃｍ、約１６．６ｍＳ／ｃｍ、約１６．７ｍＳ／ｃｍ、約１６．８ｍＳ／ｃｍ、約１６．９ｍＳ／ｃｍ、約１７ｍＳ／ｃｍ、約１７．１ｍＳ／ｃｍ、約１７．２ｍＳ／ｃｍ、約１７．３ｍＳ／ｃｍ、約１７．４ｍＳ／ｃｍ、約１７．５ｍＳ／ｃｍ、約１７．６ｍＳ／ｃｍ、約１７．７ｍＳ／ｃｍ、約１７．８ｍＳ／ｃｍ、約１７．９ｍＳ／ｃｍ、約１８ｍＳ／ｃｍ、約１８．５ｍＳ／ｃｍ、約１９ｍＳ／ｃｍ、約１９．５ｍＳ／ｃｍ、約２０ｍＳ／ｃｍ、約２５ｍＳ／ｃｍ、約３０ｍＳ／ｃｍ、約３５ｍＳ／ｃｍ、または約４０ｍＳ／ｃｍである、Ｅ１～Ｅ３２のいずれか一つに記載の組成物。
【0183】
Ｅ３４．伝導性が、約１０ｍＳ／ｃｍから約２０ｍＳ／ｃｍ、場合により約１６．９ｍＳ／ｃｍまたは約１６．９４ｍＳ／ｃｍである、Ｅ１～Ｅ３３のいずれか一つに記載の組成物。
【0184】
Ｅ３５． ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ２ｉ８、ＮＰ４、ＮＰ２２、ＮＰ６６、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶＤＪ／８、ＡＡＶＤＪ／９、ＡＡＶＬＫ０３、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＲＨＭ４－１、ＲＨＭ１５－１、ＲＨＭ１５－２、ＲＨＭ１５－３／ＲＨＭ１５－５、ＲＨＭ１５－４、ＲＨＭ１５－６、ＡＡＶ ｈｕ．２６、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２９Ｇ、ＡＡＶ２．８Ｇ９、ＡＶＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ２－ＴＴ、ＡＡＶ２－ＴＴ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶ３Ｂ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶＨＳＣ１、ＡＡＶＨＳＣ２、ＡＡＶＨＳＣ３、ＡＡＶＨＳＣ４、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ６、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ８、ＡＡＶＨＳＣ９、ＡＡＶＨＳＣ１０、ＡＡＶＨＳＣ１１、ＡＡＶＨＳＣ１２、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１４、およびＡＡＶＨＳＣ１５からなる群から選択されるＡＡＶ血清型のカプシドポリペプチドを含む、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか一つに記載の組成物。
【0185】
Ｅ３６． ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドを含む、Ｅ１～Ｅ３５のいずれか一つに記載の組成物。
【0186】
Ｅ３７． ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる、Ｅ３６に記載の組成物。
【0187】
Ｅ３８． ＡＶＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドが、配列番号１１の核酸配列によってコードされる、Ｅ３６またはＥ３７に記載の組成物。
【0188】
Ｅ３９． ｒＡＡＶベクターが、ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む、Ｅ１～Ｅ３８のいずれか一つに記載の組成物。
【0189】
Ｅ４０． ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子が、ｉ）配列番号２の核酸配列を含むかもしくはこれからなる、ｉｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、および／またはｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、Ｅ３９に記載の組成物。
【0190】
Ｅ４１． ｒＡＡＶベクターゲノムが、ＡＡＶのプロモーターの核酸配列、ポリＡシグナル配列、および少なくとも１つのＩＴＲ配列をさらに含む、Ｅ３９またはＥ４０に記載の組成物。
【0191】
Ｅ４２． ｒＡＡＶベクターゲノムが、ＡＡＴプロモーターの核酸配列、ウサギβ－グロビン遺伝子のポリＡシグナル配列、およびＡＡＶ２血清型の少なくとも１つのＩＴＲ配列をさらに含む、Ｅ３９～Ｅ４０に記載の組成物。
【0192】
Ｅ４３．少なくとも１つのＩＴＲ配列が５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲである、Ｅ４１またはＥ４２に記載の組成物。
【0193】
Ｅ４４．プロモーターが、配列番号３に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ４１～Ｅ４３のいずれか一つに記載の組成物。
【0194】
Ｅ４５．ポリＡシグナル配列が、配列番号４に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ４１～Ｅ４４のいずれか一つに記載の組成物。
【0195】
Ｅ４６．少なくとも１つのＩＴＲが、配列番号５～８からなる群から選択される核酸配列に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列、およびこれらの組み合わせを含む、Ｅ４１～Ｅ４５のいずれか一つに記載の組成物。
【0196】
Ｅ４７．組成物が約１Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１Ｅ＋１５ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含み、ｒＡＡＶベクターがｒＡＡＶ３Ｂベクターであってもよい、Ｅ１～Ｅ４６のいずれか一つに記載の組成物。
【0197】
Ｅ４８．組成物が約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含み、ｒＡＡＶベクターがｒＡＡＶ３Ｂベクターであってもよい、Ｅ１～Ｅ４７のいずれか一つに記載の組成物。
【0198】
Ｅ４９．約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約２．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約、３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約５．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約４．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約２．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約１．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約５．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約５．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約４．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約５．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬから約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む、Ｅ１～Ｅ４８のいずれか一つに記載の組成物。
【0199】
Ｅ５０．組成物が、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約３．５Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約４．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約６．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約７．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約８．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約９．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約２．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約４．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約５．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約６．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約７．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約８．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．０Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．１Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．３Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．４Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．５Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．６Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．７Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．８Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約９．５Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．４Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．６Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．７Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．８Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約１．９Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．３Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．４Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約２．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、約３．５Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約４．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含み、ｒＡＡＶベクターがｒＡＡＶ３Ｂベクターであってもよい、Ｅ１～Ｅ４９のいずれか一つに記載の組成物。
【0200】
Ｅ５１．組成物が、約４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含み、ｒＡＡＶベクターがｒＡＡＶ３Ｂベクターであってもよい、Ｅ１～Ｅ５０のいずれか一つに記載の組成物。
【0201】
Ｅ５２． 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約１ｍＭから約５００ｍＭのＴｒｉｓ、場合により約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１ｍＭから約５００ｍＭのＭｇＣｌ２、場合により約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約０．１％から約２０％（ｗ／ｖ）のスクロース、場合により約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、および
約０．００１％から約０．５％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８、場合により約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約１ｍＭから約５００ｍＭのＴｒｉｓ、場合により約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１ｍＭから約５００ｍＭのＭｇＣｌ２、場合により約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約０．１％から約２０％（ｗ／ｖ）のスクロース、場合により約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、および
約０．００１％から約０．５％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８、場合により約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【0202】
Ｅ５３． 組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約１４ｍＭから約２６ｍＭのＴｒｉｓ、
約７０ｍＭから約１３０ｍＭのＭｇＣｌ２、
約２．８％から約５．２％（ｗ／ｖ）のスクロース、および
約０．０１４％から約０．０２６％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８、
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約１４ｍＭから約２６ｍＭのＴｒｉｓ、
約７０ｍＭから約１３０ｍＭのＭｇＣｌ２、
約２．８％から約５．２％（ｗ／ｖ）のスクロース、および
約０．０１４％から約０．０２６％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８、
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【0203】
Ｅ５４．約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む、Ｅ５２またはＥ５３に記載の組成物。
【0204】
Ｅ５５．約４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む、Ｅ５２～Ｅ５４のいずれか一つに記載の組成物。
【0205】
Ｅ５６． ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ａ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ２ｉ８、ＮＰ４、ＮＰ２２、ＮＰ６６、ＡＡＶＤＪ、ＡＡＶＤＪ／８、ＡＡＶＤＪ／９、ＡＡＶＬＫ０３、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＲＨＭ４－１、ＲＨＭ１５－１、ＲＨＭ１５－２、ＲＨＭ１５－３／ＲＨＭ１５－５、ＲＨＭ１５－４、ＲＨＭ１５－６、ＡＡＶ ｈｕ．２６、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２９Ｇ、ＡＡＶ２．８Ｇ９、ＡＶＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ２－ＴＴ、ＡＡＶ２－ＴＴ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶ３Ｂ－Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶＨＳＣ１、ＡＡＶＨＳＣ２、ＡＡＶＨＳＣ３、ＡＡＶＨＳＣ４、ＡＡＶＨＳＣ５、ＡＡＶＨＳＣ６、ＡＡＶＨＳＣ７、ＡＡＶＨＳＣ８、ＡＡＶＨＳＣ９、ＡＡＶＨＳＣ１０、ＡＡＶＨＳＣ１１、ＡＡＶＨＳＣ１２、ＡＡＶＨＳＣ１３、ＡＡＶＨＳＣ１４、およびＡＡＶＨＳＣ１５からなる群から選択されるＡＡＶ血清型のポリペプチドを含む、Ｅ５２～Ｅ５５のいずれか一つに記載の組成物。
【0206】
Ｅ５７． ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドを含む、Ｅ５２～Ｅ５６のいずれか一つに記載の組成物。
【0207】
Ｅ５８． ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる、Ｅ５７に記載の組成物。
【0208】
Ｅ５９． ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチドが、配列番号１１の核酸配列によってコードされる、Ｅ５７またはＥ５８に記載の組成物。
【0209】
Ｅ６０． ｒＡＡＶベクターが、導入遺伝子を含むベクターゲノムおよび導入遺伝子の発現のための１つまたは複数の調節エレメントを含み、導入遺伝子がＡＴＰ７Ｂまたはその断片であってもよい、Ｅ５２～Ｅ５９のいずれか一つに記載の組成物。
【0210】
Ｅ６１． ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子が、ｉ）配列番号２の核酸配列を含むかもしくはこれからなる、ｉｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、および／またはｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、Ｅ６０に記載の組成物。
【0211】
Ｅ６２． １つまたは複数の調節エレメントが、プロモーター、ポリＡシグナル配列、少なくとも１つのＩＴＲ配列、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅ６０またはＥ６１に記載の組成物。
【0212】
Ｅ６３． １つまたは複数の調節エレメントが、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーター、ウサギβ－グロビン遺伝子のポリＡシグナル配列、少なくとも１つのＩＴＲ配列、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅ６０またはＥ６２に記載の組成物。
【0213】
Ｅ６４．少なくとも１つのＩＴＲ配列がＡＡＶ２血清型のものである、Ｅ６２またはＥ６３に記載の組成物。
【0214】
Ｅ６５．少なくとも１つのＩＴＲ配列が５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲである、Ｅ６２からＥ６４のいずれか一つに記載の組成物。
【0215】
Ｅ６６．プロモーターが、配列番号３に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ６２～Ｅ６５のいずれか一つに記載の組成物。
【0216】
Ｅ６７．ポリＡシグナル配列が、配列番号４に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ６２～Ｅ６６のいずれか一つに記載の組成物。
【0217】
Ｅ６８．少なくとも１つのＩＴＲが、配列番号５～８からなる群から選択される核酸配列に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列、およびこれらの組み合わせを含む、Ｅ６２～Ｅ６７のいずれか一つに記載の組成物。
【0218】
Ｅ６９． ｒＡＡＶベクターが、配列番号９に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一なベクターゲノムを含む、Ｅ５２～Ｅ６８のいずれか一つに記載の組成物。
【0219】
Ｅ７０． ｒＡＡＶベクターが、配列番号９の核酸配列を含むかまたはこれからなるベクターゲノムを含む、Ｅ５２～Ｅ６９のいずれか一つに記載の組成物。
【0220】
Ｅ７１． ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチド、および導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約１４ｍＭから約２６ｍＭ、場合により約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約７０ｍＭから約１３０ｍＭ、場合により約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約２．８％（ｗ／ｖ）から約５．２％（ｗ／ｖ）、場合により約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．１４％（ｗ／ｖ）から約０．０２６％（ｗ／ｖ）、場合により約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約１４ｍＭから約２６ｍＭ、場合により約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約７０ｍＭから約１３０ｍＭ、場合により約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約２．８％（ｗ／ｖ）から約５．２％（ｗ／ｖ）、場合により約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．１４％（ｗ／ｖ）から約０．０２６％（ｗ／ｖ）、場合により約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【0221】
Ｅ７２． ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチド、および銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２タンパク質またはその断片をコードする導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約１４ｍＭから約２６ｍＭ、場合により約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約７０ｍＭから約１３０ｍＭ、場合により約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約２．８％（ｗ／ｖ）から約５．２％（ｗ／ｖ）、場合により約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．１４％（ｗ／ｖ）から約０．０２６％（ｗ／ｖ）、場合により約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約１４ｍＭから約２６ｍＭ、場合により約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約７０ｍＭから約１３０ｍＭ、場合により約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約２．８％（ｗ／ｖ）から約５．２％（ｗ／ｖ）、場合により約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．１４％（ｗ／ｖ）から約０．０２６％（ｗ／ｖ）、場合により約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【0222】
Ｅ７３． ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチド、および銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２タンパク質またはその断片をコードする導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【0223】
Ｅ７４．導入遺伝子が、ｉ）配列番号２の核酸配列を含むかもしくはこれからなる、ｉｉ）金属結合部位（ＭＢＳ）１～４が欠失した銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、および／またはｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むかもしくはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする、Ｅ７１～Ｅ７３のいずれか一つに記載の組成物。
【0224】
Ｅ７５．導入遺伝子が、配列番号２に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ７１～Ｅ７４のいずれか一つに記載の組成物。
【0225】
Ｅ７６．ベクターゲノムが、プロモーター、ポリＡシグナル配列、少なくとも１つのＩＴＲ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、少なくとも１つのエレメントをさらに含む、Ｅ７１～Ｅ７５のいずれか一つに記載の組成物。
【0226】
Ｅ７７．プロモーターが、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーター、ＡＡＴプロモーターの一部分、または肝臓特異的なプロモーターである、Ｅ７６に記載の組成物。
【0227】
Ｅ７８．プロモーターが、配列番号３に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ７６またはＥ７７に記載の組成物。
【0228】
Ｅ７９．プロモーターが、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなる、Ｅ７６～Ｅ７８のいずれか一つに記載の組成物。
【0229】
Ｅ８０．ポリＡシグナル配列が、ウサギβ－グロビン遺伝子に由来する、Ｅ７６～Ｅ７９のいずれか一つに記載の組成物。
【0230】
Ｅ８１．ポリＡシグナル配列が、配列番号４に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ７６～Ｅ８０のいずれか一つに記載の組成物。
【0231】
Ｅ８２．ポリＡシグナル配列が、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなる、Ｅ７６～Ｅ８２のいずれか一つに記載の組成物。
【0232】
Ｅ８３．少なくとも１つのＩＴＲ配列がＡＡＶ２ ＩＴＲである、Ｅ７６～Ｅ８２のいずれか一つに記載の組成物。
【0233】
Ｅ８４．少なくとも１つのＩＴＲ配列が５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲである、Ｅ７６～Ｅ８３のいずれか一つに記載の組成物。
【0234】
Ｅ８５．少なくとも１つのＩＴＲが、配列番号５～８のいずれか一つに８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ７６～Ｅ８４のいずれか一つに記載の組成物。
【0235】
Ｅ８６．少なくとも１つのＩＴＲ配列が、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含むかまたはこれからなる、Ｅ７６～Ｅ８５のいずれか一つに記載の組成物。
【0236】
Ｅ８７．ベクターゲノムが、配列番号９に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な、または最大で少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、もしくは１００％同一な核酸配列を含む、Ｅ７１～Ｅ８６のいずれか一つに記載の組成物。
【0237】
Ｅ８８．ベクターゲノムが、配列番号９の核酸を含むかまたはこれからなる、Ｅ７２～Ｅ８７のいずれか一つに記載の組成物。
【0238】
Ｅ８９． ＡＡＶ３Ｂ血清型のカプシドポリペプチド、および配列番号１のアミノ酸配列を含むかまたはこれからなる銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする導入遺伝子を含むベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター、
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
約２０ｍＭのＴｒｉｓ、
約１００ｍＭのＭｇＣｌ２、
約４％（ｗ／ｖ）のスクロース、ならびに
約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリオキサマー１８８
を含み、ｐＨが約７．１から約８．１である医薬組成物。
【0239】
Ｅ９０．ベクターゲノムが、配列番号３の核酸配列を含むかまたはこれからなるプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むかまたはこれからなるポリＡシグナル配列、ならびに５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲ配列をさらに含む、Ｅ８９に記載の組成物。
【0240】
Ｅ９１． ５’ＩＴＲおよび／または３’ＩＴＲ配列が、配列番号５～８のいずれか一つの核酸配列を含むかまたはこれからなる、Ｅ９０に記載の組成物。
【0241】
Ｅ９２．ベクターゲノムが、配列番号９の核酸配列を含むかまたはこれからなる、Ｅ８９またはＥ９０に記載の組成物。
【0242】
Ｅ９３．凍結乾燥されているまたは凍結乾燥されていない、Ｅ１～Ｅ９２のいずれか一つに記載の組成物。
【0243】
Ｅ９４． １ｍＬから１０ｍＬのＥ１～Ｅ９２のいずれか一つに記載の組成物を含むバイアル。
【0244】
Ｅ９５．環状オレフィンコポリマー製である、Ｅ９４に記載のバイアル。
【0245】
Ｅ９６．無菌の高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）製である、Ｅ９４に記載のバイアル。
【0246】
Ｅ９７．適所の熱可塑性エラストマーストッパーを有する、Ｅ９４～Ｅ９６のいずれか一つに記載のバイアル。
【0247】
Ｅ９８．有効量のＥ１～Ｅ９３およびＥ９４～Ｅ９７のいずれか一つに記載の医薬組成物を、疾患を有するヒト対象に投与することを含む、疾患を処置する方法。
【0248】
Ｅ９９．組成物が、約３．０Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬから約３．０Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む、Ｅ９８に記載の方法。
【0249】
Ｅ１００．医薬組成物が、約４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、約２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ、または約２Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶベクターを含む、Ｅ９８またはＥ９９に記載の方法。
【0250】
Ｅ１０１．医薬組成物が非経口投与される、Ｅ９８～Ｅ１００のいずれか一つに記載の方法。
【0251】
Ｅ１０２．医薬組成物が、静脈内注射、動脈内注射、頭蓋内注射、腹腔内注射、門脈注射、筋肉内注射、髄腔内投与、または皮下注射によって投与される、Ｅ９８～Ｅ１０１のいずれか一つに記載の方法。
【0252】
Ｅ１０３．医薬組成物が静脈内投与される、Ｅ９８～Ｅ１０２のいずれか一つに記載の方法。
【0253】
Ｅ１０４．医薬組成物が、約５Ｅ＋１１ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１４ｖｇ／ｋｇの用量で投与される、Ｅ９８～Ｅ１０３のいずれか一つに記載の方法。
【0254】
Ｅ１０５．医薬組成物が、約１Ｅ＋１２ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｋｇの用量で投与される、Ｅ９８～Ｅ１０４のいずれか一つに記載の方法。
【0255】
Ｅ１０６．疾患が、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または機能障害に起因する、Ｅ９８～Ｅ１０５のいずれか一つに記載の方法。
【0256】
Ｅ１０７．疾患がウィルソン病である、Ｅ９８～Ｅ１０６のいずれか一つに記載の方法。
【0257】
Ｅ１０８． ＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子を含むｒＡＡＶ３Ｂベクターを、約５Ｅ＋１１ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１４ｖｇ／ｋｇの用量で、ウィルソン病を有する患者に静脈内投与することを含む、Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物を投与する方法。
【0258】
Ｅ１０９． Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物を、約１Ｅ＋１２ｖｇ／ｋｇから約１Ｅ＋１３ｖｇ／ｋｇの用量で、ウィルソン病を有する患者に投与する方法。
【0259】
Ｅ１１０． Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物、またはＥ９４～Ｅ９７のいずれか一つに記載のバイアルの内容物を、ヒト対象に静脈内投与することを含む、それを必要とするヒト対象における肝銅を低減させる方法。
【0260】
Ｅ１１１．ヒト対象がウィルソン病を有する、Ｅ１１０に記載の方法。
【0261】
Ｅ１１２． Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物、またはＥ９４～Ｅ９７のいずれか一つに記載のバイアルの内容物を、ヒト対象に静脈内投与することを含む、それを必要とするヒト対象におけるウィルソン病を処置する方法。
【0262】
Ｅ１１３．疾患の処置のための薬品の製造における、Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物の使用。
【0263】
Ｅ１１４．疾患がウィルソン病である、Ｅ１１３に記載の使用。
【0264】
Ｅ１１５．銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または調節異常に起因する疾患の処置のための薬品の製造における、Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物の使用。
【0265】
Ｅ１１６．疾患がウィルソン病である、Ｅ１１５に記載の使用。
【0266】
Ｅ１１７．処置が、Ｅ９７からＥ１０６のいずれか一つに定義される通りである、Ｅ１１３～Ｅ１１６のいずれか一つに記載の使用。
【0267】
Ｅ１１８．疾患を処置する方法における使用のための、Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【0268】
Ｅ１１９．銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の欠乏または調節異常に起因する疾患を有するヒト対象を処置する方法における使用のための、Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【0269】
Ｅ１２０．疾患がウィルソン病である、Ｅ１１８またはＥ１１９に従った使用のための、医薬組成物。
【0270】
Ｅ１２１．処置する方法が、Ｅ９８からＥ１０７のいずれか一つにおいて定義される通りである、Ｅ１１８からＥ１２０のいずれか一つに従った使用のための、医薬組成物。
【0271】
Ｅ１２２． Ｅ１～Ｅ９３のいずれか一つに記載の医薬組成物、またはＥ９４～Ｅ９７のいずれか一つに記載のバイアルの内容物、および使用のための指示を含むキット。
【実施例0272】
本発明について、以下の実験実施例を参照することにより、さらに詳述する。こうした実施例は、例証の目的で提供するに過ぎず、別段指定しない限り、限定する意図はない。したがって、本発明は、一切、以下の実施例に限定されると解釈すべきでなく、むしろ、本明細書で示した教示の結果として明白になる、ありとあらゆる変形形態を包含すると解釈すべきである。
【0273】
以下の実施例では、本発明者らが、凍結－解凍サイクルの間、撹拌ストレスをかけられながら、時間を経てもかなりの程度の安定性を示す一方、品質属性が、許容できるレベル内で維持され、熱および撹拌ストレス試験より前のｒＡＡＶベクターと比較して保たれる、ｒＡＡＶベクターのための調合物を発見した研究について記載する。一部の実施形態では、かなりの程度のベクター安定性を示すｒＡＡＶは、少なくとも１種のＡＡＶ３Ｂカプシドタンパク質（たとえば、ＶＰ３）を含む。
【0274】
（実施例１）
ｒＡＡＶ３Ｂベクターの熱および凍結－解凍安定性
ウィルソン病処置のためのｒＡＡＶ遺伝子療法ベクターの化学的および物理的安定性を評価した。ｒＡＡＶベクターは、肝臓特異的ヒトα－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーターの制御下にあるヒトＡＴＰ７Ｂ遺伝子の短縮版、ポリＡシグナル配列、および隣接するＩＴＲを有する一本鎖ベクターゲノムを収容するＡＡＶ３Ｂカプシドを含むものであった。導入遺伝子カセットのヌクレオチド配列は、配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子、配列番号３の核酸配列を含むＡＡＴプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡシグナル配列、および隣接するＡＡＶ２ ＩＴＲ配列を含むものであった。ＡＴＰ７Ｂ遺伝子は、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする。銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の機能喪失によって、特に肝臓内の組織における銅の蓄積を特徴とするウィルソン病が引き起こされる。
ｒＡＡＶ３Ｂベクターの熱および凍結－解凍安定性
ウィルソン病処置のためのｒＡＡＶ遺伝子療法ベクターの化学的および物理的安定性を評価した。ｒＡＡＶベクターは、肝臓特異的ヒトα－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）プロモーターの制御下にあるヒトＡＴＰ７Ｂ遺伝子の短縮版、ポリＡシグナル配列、および隣接するＩＴＲを有する一本鎖ベクターゲノムを収容するＡＡＶ３Ｂカプシドを含むものであった。導入遺伝子カセットのヌクレオチド配列は、配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするＡＴＰ７Ｂ導入遺伝子、配列番号３の核酸配列を含むＡＡＴプロモーター、配列番号４の核酸配列を含むポリＡシグナル配列、および隣接するＡＡＶ２ ＩＴＲ配列を含むものであった。ＡＴＰ７Ｂ遺伝子は、銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２をコードする。銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２の機能喪失によって、特に肝臓内の組織における銅の蓄積を特徴とするウィルソン病が引き起こされる。
【0275】
１．材料および方法
ｒＡＡＶベクターを、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８中に原薬として調合した。ｒＡＡＶベクター原薬は、３つの異なる濃度（４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、および１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ）で調製し、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）滅菌バイアル（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に入れて－６５℃以下で保管した。
ｒＡＡＶベクターを、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８中に原薬として調合した。ｒＡＡＶベクター原薬は、３つの異なる濃度（４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ、２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬ、および１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬ）で調製し、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）滅菌バイアル（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に入れて－６５℃以下で保管した。
【0276】
－６５℃以下の冷凍保管庫から取り出した後、バルク原薬を２℃～８℃で解凍し、解凍が完了した後、穏やかに４回反転させた。１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬの濃度であった、解凍されたバルク原薬を、数回穏やかにかき回すことによって、同じ調合物で２５倍に希釈することにより、４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬの原薬を調製した。解凍されたバルク原薬を、数回穏やかにかき回すことによって、同じ調合物で５倍に希釈することにより、２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬの原薬を調製した。
【0277】
層流フード下で、希釈および無希釈の原薬サンプルをシリンジに抜き取り、０．２２μｍのポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）シリンジフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を介してＨＤＰＥバイアルに濾過した。７ｍＬのＨＤＰＥバイアル中に１ｍＬの容れ目体積を使用して、最悪の場合の表面積対体積比の代わりとした。
【0278】
１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬの濃度で調合された原薬の品質属性を、０時間目の時点、ならびに１）－６５℃より低温で７日間および１カ月間保管後、２）２℃～８℃で１日および７日間保管後、３）２５℃で８時間および２４時間保管後、４）－６５℃以下で１２時間を超える保管に続く２５℃で８時間の保管からなる凍結／解凍（Ｆ／Ｔ）サイクルを３回経た後、および５）制御された室温条件下、バイアルを横にして３００ｒｐｍで２４時間撹拌後に評価した。各Ｆ／Ｔサイクル後は、バイアルを穏やかに４回反転させた。
【0279】
２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬの濃度で調合された原薬の品質属性を、０時間目の時点、ならびに１）２℃～８℃で５日間保管後、および２）２５℃で２４時間保管後に評価した。４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬの濃度で調合された原薬の品質属性を、０時間目の時点、ならびに１）２℃～８℃で１日および７日間保管後、２）２５℃で８時間および２４時間保管後、３）－６５℃以下で１２時間を超える保管に続く２５℃で８時間の保管からなる凍結／解凍（Ｆ／Ｔ）サイクルを３回経た後、および４）制御された室温条件下、バイアルを横にして３００ｒｐｍで２４時間撹拌後に評価した。各Ｆ／Ｔサイクル後は、バイアルを穏やかに４回反転させた。
【0280】
品質属性には、外観（色、澄明度、可視微粒子を含む）、カプシドの百分率ならびにＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３それぞれの百分率（還元条件でのＣＧＥによって測定）、ｖｇ力価（ｖｇ／ｍＬ、導入遺伝子のｑＰＣＲ分析によって測定）、ウイルス感染力価（ＩＵ／ｍＬ、ＴＣＩＤ５０によって測定）、非可視粒子（ＭＦＩによって測定）、ｐＨ、ウイルス粒子（完全、空、および中間のカプシドを含む）、力価（ｖｐ／ｍＬ、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定）、％単量体（ＳＥＣによって測定）、％高分子質量種（ＨＭＭＳ、ＳＥＣによって測定、１を超えるカプシドの徴候）、および完全カプシドに対する空の尺度としてのＡ２６０／Ａ２８０を含めた。可視微粒子の観察、非可視粒子の測定、および％ＨＭＭＳ種によって、凝集を評価した。張性の尺度としてのオスモル濃度を、０時間目の時点で測定した。
【0281】
２．結果
１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬで調合された原薬の熱安定性研究の結果を表１に示す。試験したすべての品質属性において、６５℃以下で１カ月、２℃～８℃で７日、および２５℃で２４時間後に、有意な変化は示されなかった。試験したすべての品質属性において、－６５℃以下で１２時間以上に続いて２５℃の制御された室温で８時間の、凍結－解凍サイクルを３回経た後、有意な変化は示されなかった。試験したすべての品質属性が、有意な変化を示さず、方法の変動性の範囲内にあった。原薬のオスモル濃度は、０時間目の時点で４３６ｍＯｓｍ／Ｈ２０ ｋｇであった。原薬は、０時間目の時点で、密度が１．０２５ｇ／ｃｍ３、粘度が１．１９３ｍＰａ、伝導率が１６．９４ｍＳ／ｃｍであった。
１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬで調合された原薬の熱安定性研究の結果を表１に示す。試験したすべての品質属性において、６５℃以下で１カ月、２℃～８℃で７日、および２５℃で２４時間後に、有意な変化は示されなかった。試験したすべての品質属性において、－６５℃以下で１２時間以上に続いて２５℃の制御された室温で８時間の、凍結－解凍サイクルを３回経た後、有意な変化は示されなかった。試験したすべての品質属性が、有意な変化を示さず、方法の変動性の範囲内にあった。原薬のオスモル濃度は、０時間目の時点で４３６ｍＯｓｍ／Ｈ２０ ｋｇであった。原薬は、０時間目の時点で、密度が１．０２５ｇ／ｃｍ３、粘度が１．１９３ｍＰａ、伝導率が１６．９４ｍＳ／ｃｍであった。
【0282】
【表1】
【0283】
２Ｅ＋１２ｖｇ／ｍＬで調合された原薬の熱安定性研究の結果を表２に示す。試験したすべての品質属性において、２℃～８℃で５日、および２５℃で２４時間後に、有意な変化は示されなかった。原薬のオスモル濃度は、０時間目の時点で４３６ｍＯｓｍ／ｋｇであった。
【0284】
【表2】
【0285】
４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬで調合された原薬の熱安定性試験の結果を表３に示す。外観、ｐＨ、ウイルスゲノム力価、感染力価、非可視粒子、ウイルス粒子力価、およびカプシド比は、２℃～８℃で７日および２５℃で２４時間後に、有意な変化を示さなかった。２５℃の制御された室温で２４時間後に、凝集がわずかに増加していた。原薬の濃度は、純度について、許容される最低のレベルにあった（ＣＧＥ法によって測定）。試験したすべての品質属性において、－６５℃以下で１２時間以上に続いて２５℃の制御された室温で８時間の、凍結サイクルを３回経た後、有意な変化は示されなかった。３００ｒｐｍで２４時間の極度のせん断応力がかけられた後、凝集が増加していた。試験した他のすべての品質属性は、有意な変化を示さず、すべてが方法の変動性の範囲内にあった。原薬のオスモル濃度は、０時間目の時点で４３６ｍｇＯｓｍ／ｋｇであった。
【0286】
【表3】
【0287】
この研究によって、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４．０％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８中に４Ｅ＋１１ｖｇ／ｍＬ～１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬであるｒＡＡＶ３Ｂベクターが、－６５℃以下で１カ月までの間、２℃～８℃で７日間、および２５℃で２４時間、安定していたことが証明された。加えて、調合物は、－６５℃以下～２５℃の間での凍結－解凍サイクルに３回まで曝されても安定していた。
【0288】
（実施例２）
凍結／解凍循環および撹拌試験
１．ｒＡＡＶ３Ｂベクターの供給源および調合物の調製
実施例１に記載したとおりの銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２導入遺伝子（ＡＴＰ７Ｂ）を含むｒＡＡＶ３Ｂベクターの多数のロットを、このような研究において使用した。すべてのロットが、限外濾過／ダイアフィルトレーションにかけられて、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２中に１．１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬの目標濃度に到達した。この材料を賦形剤緩衝液に加えることによって調合して、最終濃度を、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８中に１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ３Ｂベクターとした。調合緩衝液またはｎ－食塩水で希釈することにより、より低い濃度を調製した。
凍結／解凍循環および撹拌試験
１．ｒＡＡＶ３Ｂベクターの供給源および調合物の調製
実施例１に記載したとおりの銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２導入遺伝子（ＡＴＰ７Ｂ）を含むｒＡＡＶ３Ｂベクターの多数のロットを、このような研究において使用した。すべてのロットが、限外濾過／ダイアフィルトレーションにかけられて、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２中に１．１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬの目標濃度に到達した。この材料を賦形剤緩衝液に加えることによって調合して、最終濃度を、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８中に１Ｅ＋１３ｖｇ／ｍＬのｒＡＡＶ３Ｂベクターとした。調合緩衝液またはｎ－食塩水で希釈することにより、より低い濃度を調製した。
【0289】
２．長期保管、加速ストレス法、および投与溶液安定性
充填されたバイアルを、制御された安定性チャンバーにおいて保管して、保管試験の間、一定の温度を維持した。チャンバーは、相対湿度（ＲＨ）６５％で、－９０℃～－６０℃（結果では－７０℃として報告する）、２℃～８℃（結果では５℃として報告する）、および２３℃～２７℃に保った。長期保管研究については、バイアルをまっすぐに立てて、１カ月、３カ月、および６カ月間保管した。
充填されたバイアルを、制御された安定性チャンバーにおいて保管して、保管試験の間、一定の温度を維持した。チャンバーは、相対湿度（ＲＨ）６５％で、－９０℃～－６０℃（結果では－７０℃として報告する）、２℃～８℃（結果では５℃として報告する）、および２３℃～２７℃に保った。長期保管研究については、バイアルをまっすぐに立てて、１カ月、３カ月、および６カ月間保管した。
【0290】
加速ストレス法では、制御されない凍結－解凍サイクルを使用した。制御されない凍結－解凍は、－９０℃～－６０℃のチャンバーにおいてバイアルを凍結させた後、２℃～８℃で解凍することによって行った。
【0291】
バイアルをオービタルシェーカーにおいて３００ｒｐｍで２４時間、卓上で震盪することにより、撹拌ストレスを評価した。
【0292】
３．実験方法
色および乳白光を標準と比較することに加え、可視微粒子を調べることにより、目視検査を行った。ウイルス粒子含有量、空／完全カプシド比、ウイルス純度、および凝集を、サイズ排除－高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によってモニターした。導入遺伝子含有量を定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によってモニターした。感染力を、活性についてのＴＣＩＤ５０によってモニターした。カプシド純度を、還元キャピラリーゲルＣＧＥ（ｒＣＧＥ）によってモニターした。平均蛍光強度（ＭＦＩ）を使用して、非可視粒子カウントを評価した。ｐＨもモニターした。
色および乳白光を標準と比較することに加え、可視微粒子を調べることにより、目視検査を行った。ウイルス粒子含有量、空／完全カプシド比、ウイルス純度、および凝集を、サイズ排除－高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によってモニターした。導入遺伝子含有量を定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によってモニターした。感染力を、活性についてのＴＣＩＤ５０によってモニターした。カプシド純度を、還元キャピラリーゲルＣＧＥ（ｒＣＧＥ）によってモニターした。平均蛍光強度（ＭＦＩ）を使用して、非可視粒子カウントを評価した。ｐＨもモニターした。
【0293】
４．結果
長期および加速安定性研究を実施して、調合物の適格性を検証した。安定性研究では、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４％のスクロース、０．０２％のポロキサマー１８８を含む調合物にしたｒＡＡＶ３Ｂベクターの長期および加速安定性を、環状オレフィン一次容器バイアルにおいて調査した。図１～１０は、長期を企図した－７０℃の保管条件ならびに－２０℃および５℃の加速保管条件下での、一次容器における、６カ月までのｒＡＡＶ３Ｂベクターの安定性を示す。すべての時点において、外観が評価され、澄明、無色であり、可視微粒子は本質的に存在しなかった。
長期および加速安定性研究を実施して、調合物の適格性を検証した。安定性研究では、ｐＨ７．６の、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４％のスクロース、０．０２％のポロキサマー１８８を含む調合物にしたｒＡＡＶ３Ｂベクターの長期および加速安定性を、環状オレフィン一次容器バイアルにおいて調査した。図１～１０は、長期を企図した－７０℃の保管条件ならびに－２０℃および５℃の加速保管条件下での、一次容器における、６カ月までのｒＡＡＶ３Ｂベクターの安定性を示す。すべての時点において、外観が評価され、澄明、無色であり、可視微粒子は本質的に存在しなかった。
【0294】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管された、ｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物の導入遺伝子力価（ｖｇ／ｍＬ）を、０時間目、１カ月、３カ月、および６カ月の時点で、ｑＰＣＲによって測定した。時点間または保管条件間に、導入遺伝子力価の有意差は認められなかった（図１）。
【0295】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管された、ｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物のウイルス粒子力価（ｖｇ／ｍＬ）を、０時間目、１カ月、３カ月、および６カ月の時点で、ＳＥ－ＨＰＬＣによって測定した。時点間または保管条件間に、ウイルス粒子力価の有意差は認められなかった（図２）。
【0296】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管された、ｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物のＨＭＭＳの百分率を、０時間目、１カ月、３カ月、および６カ月の時点で、ＳＥ－ＨＰＬＣによって測定した。時点間または保管条件間に、ＨＭＭＳの百分率の有意差は認められなかった（図３）。
【0297】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管された、ｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物における、完全カプシドに対する空の比を、０時間目、１カ月、３カ月、および６カ月の時点で、ＳＥ－ＨＰＬＣによってＡ２６０／Ａ２８０で測定した。時点間または保管条件間に、完全カプシドに対する空の比の有意差は認められなかった（図４）。
【0298】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管された、ｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物のウイルス純度（％単量体）を、０時間目、１カ月、３カ月、および６カ月の時点で、ＳＥ－ＨＰＬＣによって測定した。５℃で６カ月まで保管された組成物について、純度のわずかな低下が認められたが、予め決められた８５％の許容閾値は超えなかった（図５）。
【0299】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管されたｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物のベクター感染力を、０時間目、１カ月、３カ月、および６カ月の時点で、５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ５０）によって測定した。ＴＣＩＤ５０は、すべての保管条件下で６カ月までに増加し、したがって、許容性の最低限のレベルを下回らなかった（図６）。
【0300】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管された、ｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物のｐＨを、０時間目、１カ月、３カ月、および６カ月の時点で測定した。時点間または保管条件間に、ｐＨの有意差は認められなかった（図７）。
【0301】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管されたｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物におけるカプシドのパーセント純度を、０時間目、１カ月、３カ月、および６カ月の時点で、還元条件でのキャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）によって測定した。時点間または保管条件間に、カプシドパーセント純度の有意差は認められなかった（図８）。
【0302】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管されたｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物のＺ平均（ｎｍ）を、０時間目、１カ月、および６カ月の時点で、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって測定した。Ｚ平均は、溶液中に存在するｒＡＡＶカプシドの凝集のレベルの尺度である。時点間または保管条件間に、Ｚ平均の有意差は認められなかった（図９）。
【0303】
－７０℃、－２０℃、および５℃で保管されたｒＡＡＶベクターを含む調合物中に存在する、１０μｍおよび２５μｍの範囲にある非可視粒子の数を、０時間目および６カ月の時点で、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定した。１０μＭの範囲にある粒子の数が、６カ月の時点では、０時間目の時点における数に比べてわずかに増加していた。また、０時間目の時点では、２５μｍの範囲にある粒子が観察されなかったが、６カ月の時点では、この範囲にある１００個未満の粒子が観察された（図１０）。６カ月の時点で観察された非可視粒子の増加はいずれも、１０μｍでは６０００粒子、２５μｍでは６００粒子である、予め決められた許容性の閾値を超えなかった。
【0304】
ｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物を、もとのバイアルにおいて、－９０℃～－６０℃で１２時間の凍結および２℃～８℃で８時間の解凍からそれぞれがなる、５回の制御されない凍結－解凍サイクルである加速ストレス法によって試験した。０時間目の時点、および５回の凍結解凍サイクルの後に、外観についてバイアルを評価し、澄明、無色であり、可視微粒子が本質的に存在しないことが観察された。
【0305】
０時間目の時点、および５回の凍結－解凍サイクル後のｒＡＡＶ３Ｂベクターを含む調合物間に、測定された品質属性の有意差は存在しなかった。
【0306】
【表4】
【0307】
ｒＡＡＶベクター調合物を含有するバイアルを、室温において、オービタルシェーカーの上に横にして置き、３００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、撹拌ストレスを評価した。両方の時点において、外観が評価され、澄明、無色であり、可視微粒子は本質的に存在しなかった。
【0308】
【表5】
【0309】
凍結解凍循環および撹拌という追加のストレスと組み合わせた長期および加速保管の結果、研究した調合物中のｒＡＡＶベクターは、観察された劣化が最小限からゼロに抑えられ、安定していたことが示された。
【0310】
（実施例３）
単塩の存在下または非存在下でのＡＡＶ３Ｂカプシドの凝集しやすさの評価
実施例１に記載したとおりの銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２導入遺伝子（ＡＴＰ７Ｂ）を含むｒＡＡＶ３Ｂベクターを、このような研究において使用した。相対的完全（Ｆ）および相対的空（Ｅ）ｒＡＡＶ３Ｂベクターについて、５０ｋＤａの膜を使用して、緩衝液を、１）試験調合物（２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４％ｗ／ｖのスクロース、０．０２％のポロキサマー１８８、ｐＨ７．６）、２）１５０ｍＭのＮａＣｌを含有するＰＢＳ、３）１０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．４、４）ＮａＣｌが添加されたＴｒｉｓ緩衝液、５）ＭｇＣｌ２が添加されたＴｒｉｓ緩衝液、または６）ＣａＣｌ２が添加されたＴｒｉｓ緩衝液に交換した。
単塩の存在下または非存在下でのＡＡＶ３Ｂカプシドの凝集しやすさの評価
実施例１に記載したとおりの銅輸送ＡＴＰａｓｅ ２導入遺伝子（ＡＴＰ７Ｂ）を含むｒＡＡＶ３Ｂベクターを、このような研究において使用した。相対的完全（Ｆ）および相対的空（Ｅ）ｒＡＡＶ３Ｂベクターについて、５０ｋＤａの膜を使用して、緩衝液を、１）試験調合物（２０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、４％ｗ／ｖのスクロース、０．０２％のポロキサマー１８８、ｐＨ７．６）、２）１５０ｍＭのＮａＣｌを含有するＰＢＳ、３）１０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．４、４）ＮａＣｌが添加されたＴｒｉｓ緩衝液、５）ＭｇＣｌ２が添加されたＴｒｉｓ緩衝液、または６）ＣａＣｌ２が添加されたＴｒｉｓ緩衝液に交換した。
【0311】
動的光散乱法（ＤＬＳ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、視覚的外観、平均蛍光強度（ＭＦＩ）、光学顕微鏡観察、およびＮＴＡ（ナノ粒子トラッキング解析）データを、すべてのサンプルについて収集し、分析して、緩衝液交換の際、および５℃で２週間保管後のベクター凝集の抑制に塩が寄与する効果を明らかにした。
【0312】
１．材料
ｒＡＡＶ３Ｂベクター原薬は、ｐＨ７．６の、３０ｍＭのクエン酸ナトリウム、８５ｍＭのＴｒｉｓ、２００ｍＭの酢酸ナトリウム、０．００８５％のＰ１８８中に供給された。相対的空（Ｅ）ｒＡＡＶ３Ｂベクターのサンプルは、濃度が６．４３Ｅ＋１３ウイルス粒子（ＶＰ）／ｍＬであり、Ｒ＝０．６１であった。相対的完全（Ｆ）ｒＡＡＶ３Ｂのサンプルは、濃度が５．８９Ｅ＋１３ＶＰ／ｍＬであり、Ｒ＝０．８６であった。
ｒＡＡＶ３Ｂベクター原薬は、ｐＨ７．６の、３０ｍＭのクエン酸ナトリウム、８５ｍＭのＴｒｉｓ、２００ｍＭの酢酸ナトリウム、０．００８５％のＰ１８８中に供給された。相対的空（Ｅ）ｒＡＡＶ３Ｂベクターのサンプルは、濃度が６．４３Ｅ＋１３ウイルス粒子（ＶＰ）／ｍＬであり、Ｒ＝０．６１であった。相対的完全（Ｆ）ｒＡＡＶ３Ｂのサンプルは、濃度が５．８９Ｅ＋１３ＶＰ／ｍＬであり、Ｒ＝０．８６であった。
【0313】
２．１方法－緩衝液交換スクリーニング
相対的空および相対的完全ｒＡＡＶ３Ｂベクターサンプルを、ｐＨ７．６の、３０ｍＭのクエン酸ナトリウム、８５ｍＭのＴｒｉｓ、２００ｍＭの酢酸ナトリウム、０．００８５％のＰ１８８から、５０ｋＤａの膜およびローター遠心分離によって、試験調合物、１×ＰＢＳ、およびｐＨ７．４の２０ｍＭのＴｒｉｓ（塩なし）のそれぞれへの交換にかけた。膜を水および緩衝液（２回）で洗浄した。交換は、それぞれ３体積の緩衝液を用いて３０００ＲＣＦで行った。交換後、各サンプルに、２０μＬの１％Ｐ１８８を添加した。最終サンプル体積は、１００μＬに正規化した。
相対的空および相対的完全ｒＡＡＶ３Ｂベクターサンプルを、ｐＨ７．６の、３０ｍＭのクエン酸ナトリウム、８５ｍＭのＴｒｉｓ、２００ｍＭの酢酸ナトリウム、０．００８５％のＰ１８８から、５０ｋＤａの膜およびローター遠心分離によって、試験調合物、１×ＰＢＳ、およびｐＨ７．４の２０ｍＭのＴｒｉｓ（塩なし）のそれぞれへの交換にかけた。膜を水および緩衝液（２回）で洗浄した。交換は、それぞれ３体積の緩衝液を用いて３０００ＲＣＦで行った。交換後、各サンプルに、２０μＬの１％Ｐ１８８を添加した。最終サンプル体積は、１００μＬに正規化した。
【0314】
各サンプル５０μＬを０．８μｍの金フィルターで濾過し、水ですすいだ。サンプルを、光学顕微鏡観察およびフーリエ変換赤外分光法－減衰全反射（ＦＴＩＲ－ＡＴＲ）によって評価した。Ｔｒｉｓ中の相対的完全サンプルは、濁りを帯びており、濁りは、Ｔｒｉｓ中の相対的空サンプルでは、それほど明白でなかった。ＰＢＳ中の相対的空サンプルは、環様の濁りを帯び、ＰＢＳ中の相対的完全サンプルは、輝く微粒子を伴った。試験調合物中の相対的空および相対的完全サンプルは、比較的すっきりしていた。Ｔｒｉｓ中のｒＡＡＶ３Ｂベクターサンプルは、ＦＴＩＲ－顕微鏡観察によって、反射率モードで分析した。
【0315】
２．２方法－ ５℃での２週間安定性
各緩衝液４０ｍＬを調製し、８０μＬの０．１％Ｐ１８８を添加した。膜を水および緩衝液（２回）で洗浄した。相対的空および相対的完全ｒＡＡＶ３Ｂベクターサンプルを、ｐＨ７．６の、３０ｍＭのクエン酸ナトリウム、８５ｍＭのＴｒｉｓ、２００ｍＭの酢酸ナトリウム、０．００８５％のＰ１８８から、表６に示す各緩衝液３体積への、３０００ＲＣＦでの交換にかけた。各サンプルの最終体積は、２０００μＬに正規化した。０．２２μｍのＰＶＤＦ膜を使用して、サンプルを滅菌濾過した。
各緩衝液４０ｍＬを調製し、８０μＬの０．１％Ｐ１８８を添加した。膜を水および緩衝液（２回）で洗浄した。相対的空および相対的完全ｒＡＡＶ３Ｂベクターサンプルを、ｐＨ７．６の、３０ｍＭのクエン酸ナトリウム、８５ｍＭのＴｒｉｓ、２００ｍＭの酢酸ナトリウム、０．００８５％のＰ１８８から、表６に示す各緩衝液３体積への、３０００ＲＣＦでの交換にかけた。各サンプルの最終体積は、２０００μＬに正規化した。０．２２μｍのＰＶＤＦ膜を使用して、サンプルを滅菌濾過した。
【0316】
【表6-1】
【0317】
【表6-2】
【0318】
２．３分析方法
サイズ排除クロマトグラフィー：これを使用して、ウイルス粒子濃度（ＶＰ／ｍＬ）、％高分子質量種（ＨＭＭＳ）、２１４ｎｍにおけるＡＡＶ単量体純度、および２６０ｎｍ／２８０ｎｍにおけるＡＡＶ単量体ピークの比を算出した。核酸は、２６０ｎｍにおいて吸光度極大を示し、タンパク質は、２８０ｎｍ前後において吸光度極大を示すことがわかっている。溶液中の完全対空カプシドの相対的変化を推定するために、２６０ｎｍ／２８０ｎｍ比が報告されている（Ｓｏｍｍｅｒら（２００３）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７（１）：１２２～１２８）。比の低下によって、ＤＮＡで満たされたカプシド（たとえば、完全カプシド）の減少が示され、比の上昇によって、空カプシドの減少が示された。注入体積を様々に変えて、サンプル面積が検量線範囲内に確実に収まるようにした。
サイズ排除クロマトグラフィー：これを使用して、ウイルス粒子濃度（ＶＰ／ｍＬ）、％高分子質量種（ＨＭＭＳ）、２１４ｎｍにおけるＡＡＶ単量体純度、および２６０ｎｍ／２８０ｎｍにおけるＡＡＶ単量体ピークの比を算出した。核酸は、２６０ｎｍにおいて吸光度極大を示し、タンパク質は、２８０ｎｍ前後において吸光度極大を示すことがわかっている。溶液中の完全対空カプシドの相対的変化を推定するために、２６０ｎｍ／２８０ｎｍ比が報告されている（Ｓｏｍｍｅｒら（２００３）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７（１）：１２２～１２８）。比の低下によって、ＤＮＡで満たされたカプシド（たとえば、完全カプシド）の減少が示され、比の上昇によって、空カプシドの減少が示された。注入体積を様々に変えて、サンプル面積が検量線範囲内に確実に収まるようにした。
【0319】
動的光散乱法：ＤｙｎａＰｒｏプレートリーダーを使用して、すべてのサンプルの流体力学的半径、多分散性、および正規化強度を測定した。加えて、Ｄｙｎａｍｉｃｓソフトウェアを使用して、最も小さいピークの％質量および半径を推定し、報告した。測定は二通りに行い、平均を報告した。このアッセイにおいて使用したパラメーターは、少なくとも一部は、Ｓｔｅｔｅｆｅｌｄら（２０１６）、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｖ．８（４）：４０９～４２７から得たものである。
【0320】
Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ（ＮＴＡ）：Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ機器を使用して、ＮＴＡデータを収集した。カメラは、レベル１２に設定したが、使用者によって選択されるいくつかのパラメーターに高感度である。このアッセイにおいて使用したパラメーターは、少なくとも一部は、Ｈｕｂｅｒｔら（２０２０）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０９：８３０～８４４から得たものである。
【0321】
この実施例では、５０～５００ｎｍの範囲の粒子をモニターするために、検出閾値は、２０という控えめな値に設定した。２０ｎｍの閾値では、５０ｎｍより小さい粒子が検出される見込みは低い。視覚的データ分析に基づき、１００ｎｍ未満の粒子の量とＨＭＭＳとには、相関関係が存在した。したがって、１００ｎｍ未満のカウントを報告した。分布傾向を調べ、それをＭＦＩと比較するために、１００ｎｍ以上および５００ｎｍ以上のカウントも報告した。ＤＬＳおよびＮＴＡの両方において、Ｓｔｏｋｅｓ－Ｅｉｎｓｔｅｉｎ式を使用して、粒子拡散係数を粒径に変換した。式の分母には粘度が使用された。したがって、データを粘度について正規化し、粘度は、この実施例において測定および報告した。
【0322】
平均蛍光強度（ＭＦＩ）：これを収集し、１μｍ以上、２μｍ以上、５μｍ以上、８μｍ以上、１０μｍ以上、２５μｍ以上のサイズのビンについてのカウント／ｍＬを報告し、１μｍ以上をＮａｎｏｓｉｇｈｔの５００μｍ以上と比較した。
【0323】
固有示差走査熱量測定（ＤＳＦ）および静的光散乱法（ＳＬＳ）：これらは、Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ機器によって、２０℃～９５℃において１℃／分でモニターした。ソフトウェアにおいて自動で積分を行った。
【0324】
色素系示差走査熱量測定（ＤＳＦ）：これを、Ｂｉｏｒａｄ ＣＦＸ９６ ｔｈｅｒｍｏ－ｃｙｃｌｅｒを使用して行って、サンプルにＤＮＡ特異的色素ＳＹＢＲゴールドおよびタンパク質特異的色素ＳＹＰＲＯオレンジを添加した後の色素特異的な蛍光バンドをモニターした。色素系ＤＮＡ検出法では、ＡＡＶ材料を加熱する間にいくつものピークが分解されることが知られている。データ解釈を簡潔にするために、初期蛍光および最初のピーク出現を報告した。同じ実験にのせた種々のサンプルについてのデータを、定性的にも比較した。Ｌｕｍｅｔｉｃｓ ＬＩＮＫソフトウェアにおいて自動で積分を行った。
【0325】
３．結果
ウイルスカプシド力価：ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって測定されたｒＡＡＶ力価（ＶＰ／ｍＬ）を、表７（０時間目）、表８（５℃で２週間時）、および図１１に示す。Ｔｒｉｓ、１２ｍＭ ＮａＣｌ、および１２ｍＭ ＭｇＣｌ２緩衝液中のサンプルでは、ＡＡＶ単量体ウイルスカプシド力価回収率が非常に低かった（１２％未満）。ＰＢＳ、１２ｍＭ ＣａＣｌ２、および１００ｍＭ ＮａＣｌ中のサンプルでは、ウイルスカプシド力価回収率が中程度であった（２５％を超えるが４０％未満）。試験調合物、１００ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ ＣａＣｌ２、２Ｍ ＮａＣｌ、および２Ｍ ＭｇＣｌ２緩衝液中のサンプルでは、約８０％という良好な回収率が認められた。クロマトグラフィーの際にリン酸移動相におけるカルシウム沈殿が懸念されるため、２Ｍ ＣａＣｌ２中にはサンプルを調製しなかった。
ウイルスカプシド力価：ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって測定されたｒＡＡＶ力価（ＶＰ／ｍＬ）を、表７（０時間目）、表８（５℃で２週間時）、および図１１に示す。Ｔｒｉｓ、１２ｍＭ ＮａＣｌ、および１２ｍＭ ＭｇＣｌ２緩衝液中のサンプルでは、ＡＡＶ単量体ウイルスカプシド力価回収率が非常に低かった（１２％未満）。ＰＢＳ、１２ｍＭ ＣａＣｌ２、および１００ｍＭ ＮａＣｌ中のサンプルでは、ウイルスカプシド力価回収率が中程度であった（２５％を超えるが４０％未満）。試験調合物、１００ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ ＣａＣｌ２、２Ｍ ＮａＣｌ、および２Ｍ ＭｇＣｌ２緩衝液中のサンプルでは、約８０％という良好な回収率が認められた。クロマトグラフィーの際にリン酸移動相におけるカルシウム沈殿が懸念されるため、２Ｍ ＣａＣｌ２中にはサンプルを調製しなかった。
【0326】
緩衝液交換を行うと、すべてのサンプルにおいて、遠心分離せん断のために力価低下が認められた。表６に示すとおり、出発材料におけるウイルスカプシド力価は、５．８９Ｅ＋１３ＶＰ／ｍＬ（相対的完全）および６．４３Ｅ＋１３ＶＰ／ｍＬ（相対的空）であったが、１．４Ｅ＋１３ＶＰ／ｍＬ未満に低下した。対照的に、５℃で２週間経過後、試験したサンプルのいずれにおいても、ウイルス粒子の有意な減少は認められなかった（図１１）。
【0327】
試験調合物、Ｔｒｉｓ、および２Ｍ ＭｇＣｌ２中のサンプルを除いては、相対的空カプシドについての回収率が、相対的完全カプシドに比べてわずかに良好であった（図１２）。試験調合物は、Ｔ０における緩衝液交換の後、示されたウイルス力価の、相対的完全カプシドサンプルと相対的空カプシドサンプル間の変動量が最も小さかったため、最もロバストであった。完全および空両方のｒＡＡＶベクターの一貫した安定性を維持する能力は、ＡＡＶベクター試験調合物の有益な特徴である。
【0328】
これらのデータによって、ウイルス粒子力価を維持し、カプシドの凝集を制限するのに、塩（たとえば、二価カチオン、たとえばＭｇＣｌ２、ＣａＣｌ２）の濃度が１００ｍＭ以上である必要があることも実証された。０時間目および２週間時の１００ｍＭ ＭｇＣｌ２または１００ｍＭ ＣａＣｌ２緩衝液において、相対的空および相対的完全両方のカプシドサンプルについてのＶＰ／ｍＬは同様であったが、いくつかの理由で、ＣａＣｌ２よりも、ＭｇＣｌ２を含む調合物が好ましい。カルシウムイオンは、（たとえば、アッセイ試薬がリン酸塩を含有するとき）粒子を形成して品質属性の分析を困難にすることにより、分析方法の妨げとなることが知られている。また、カルシウムは、長期間保管される間に、薬物製品および／または原薬における粒子形成の一因になりかねない。したがって、ＭｇＣｌ２が、緩衝液調合物に好ましい二価カチオンになる。
【0329】
ＨＭＭＳ、ＤＬＳ、ＮＴＡ、およびＭＦＩ： サンプルは、交換の後に濾過されたため、Ｔ０の時点で約０．２μｍの凝集塊が濾別されたことが考えられる。５℃で２週間経過後、Ｔｒｉｓ、１２ｍＭ ＮａＣｌ、および１２ｍＭ ＭｇＣｌ２サンプルにおいて、有意な量の粒子状物質がＭＦＩによって検出された（表９）。ＰＢＳサンプルでは、ＮＴＡによって異常に高いカウントが検出された（表９）。
【0330】
有意な力価低下および非可視粒子生成は、％ＨＭＭＳの増大と相関関係になかった。ＨＭＭＳが、ＡＡＶ単量体ピーク減少に対して線形または比例的に変化しなかったことも注目された。たとえば、Ｔ０の時点において２１４ｎｍで測定された、１２ｍＭ ＭｇＣｌ２相対的空サンプルからのＡＡＶ単量体ピーク（５００Ｋ ＡＵ未満）は、１２ｍＭ ＣａＣｌ２相対的空サンプルからのＡＡＶ単量体ピーク（１３００Ｋ ＡＵ超）よりかなり小さく、それにもかかわらず、２１４ｎｍで測定されたＨＭＭＳピーク面積は、これらのサンプルについてほぼ同じままであった（すなわち、それぞれ、２，７９９ＡＵおよび２，２９２ＡＵ）。したがって、ＭｇＣｌ２サンプルにおける％ＨＭＭＳを算出すると、ＣａＣｌ２サンプルにおける％ＨＭＭＳの３倍の高さになった（０．６％対０．２％）。この現象は、Ｔ０時点のＰＢＳ相対的完全サンプル（すなわち、ＨＭＭＳ面積が約１１Ｋ ＡＵ、ＡＡＶ単量体面積が１，２８７Ｋ ＡＵ）を、Ｔ０時点のＴｒｉｓ相対的完全サンプル（すなわち、ＨＭＭＳ面積が約１０Ｋ ＡＵ、ＡＡＶ単量体面積が約５００Ｋ ＡＵ）と比較した場合において、より顕著であった。すなわち、ＨＭＭＳ面積には有意差がないが（それぞれ、約１１Ｋ ＡＵ対約１０Ｋ ＡＵ）、算出された％ＨＭＭＳは、（それぞれ、０．９％対２．２％）であった（表１０）。
【0331】
粒子半径の有意な増大（凝集の指標）を示したＤＬＳ結果は、力価低下が最も大きいサンプルと相関した（表７および８）。これは、Ｔ０の時点（すなわち、濾過直後）および２週間後に認められた。たとえば、ＤＬＳによる１２ｍＭ ＮａＣｌサンプルの平均粒子半径は、２４２．９ｎｍであり、ＡＡＶ力価は、５．１３Ｅ＋１１ＶＰ／ｍＬであった（Ｔ０時点の相対的完全）。対照的に、ＤＬＳによる試験調合物の平均粒子半径は、２０．１ｎｍであり、ＡＡＶ力価は、９．２６Ｅ＋１２ＶＰ／ｍＬであった（Ｔ０時点の相対的完全サンプル）。２週間時点では、ＤＬＳによる１２ｍＭ ＮａＣｌサンプルの平均粒子半径は、２４２．９ｎｍであり、ＡＡＶ力価は、５．１３Ｅ＋１１ＶＰ／ｍＬであった（Ｔ２週時点の相対的完全）。対照的に、ＤＬＳによる試験調合物の平均粒子半径は、１４．３ｎｍであり、ＡＡＶ力価は、９．４５Ｅ＋１２ＶＰ／ｍＬであった（Ｔ２週時点の相対的完全サンプル）。したがって、ＤＬＳ測定値には、ＡＡＶ力価の低下が大いに影響する場合がある。
【0332】
Ｔｒｉｓ、１２ｍＭ ＮａＣｌ、および１２ｍＭ ＭｇＣｌ２における高レベルのＡＡＶ３Ｂ凝集が、ＭＦＩによって確認された（表９）。たとえば、Ｔｒｉｓ中の相対的完全サンプル（Ｔ２週）は、ＭＦＩが１μｍで４６９，０９０カウント／ｍＬであったのに対し、凝集がほとんどない試験調合物中の相対的完全サンプル（Ｔ２週）は、ＭＦＩが１μｍで６，７０８カウント／ｍＬであった。Ｎａｎｏｓｉｇｈｔによって、ＰＢＳ中でのＡＡＶ３Ｂ凝集が確認された。１２ｍＭ ＮａＣｌおよびＴｒｉｓ単独に比べて少ないカウントを示した１２ｍＭ ＭｇＣｌ２サンプルを除いては、同じ相対的空サンプルが、澄明度の向上も示した。
【0333】
ＨＭＭＳピーク面積に対して、１００ｎｍ未満のＮＴＡカウントは正の相関を示し、Ｄ１０は負の相関を示したが、しかし、これは、すべてのサンプルについて一貫してはいない。
【0334】
２６０ｎｍでの％ＨＭＭＳシグナル（表１０）は、材料がどれだけの完全カプシドを含有していたかに関係なく、調合物タイプごとに一定であった。２６０ｎｍで最大吸光度を示すのはＤＮＡであったが、タンパク質も２６０ｎｍでシグナルを生じる。このデータに基づくと、ＡＡＶ３Ｂの％ＨＭＭＳは、タンパク質に関連するものと思われる。ＨＭＭＳシグナルは、相対的空カプシドサンプルに比べて、相対的完全カプシドにおいてより高度であった。試験調合物中のサンプルでは、全体としてのＨＭＭＳ面積がより高度であった。これには、ＡＡＶ調製物において％ＨＭＭＳを増大させることがわかっている、試験調合物中のスクロースの存在によるものと考えられた。％ＨＭＭＳは、ＡＡＶ調合物の効力に影響を及ぼすと考えられておらず、微粒子が生成する恐れがより低いことと相関がある。
【0335】
ＤＳＦ：ＤＳＦのＡＡＶ安定性との相互関係は、まだ十分に理解されていない。ＡＡＶ安定性とＤＳＦ結果を相関付けるいくつかの報告があるものの（Ｒｉｅｓｅｒら（２０２０）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０９（１）：８５４～８６２；Ｒａｙａｐｒｏｌｕら（２０１３）、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８７（２４）：１３１５０～１３１６０；Ｂｅｎｎｅｔｔら（２０１７）、Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．６：１７１～１８２；Ｈｏｒｏｗｉｔｚら（２０１３）、８７（６）：２９９４～３００２）、効力とＤＳＦ結果の相関関係は確立されていない。しかし、以下の知見を得ることができた（表８）。色素に基づくＤＮＡ漏出最高ピーク温度（ＳＹＢＲゴールドを使用している）は、３３０／３５０の固有ＤＳＦ比と申し分なく相関した。最も高い初期ＤＮＡ蛍光は、相対的完全Ｔｒｉｓサンプルにおいて観察され、これは、濁り度の上昇および最も高いＭＦＩカウントと相関した。ＤＮＡ漏出の出現は、報告された値より高いまたはそれに近いＡＡＶ材料の熱安定性と相関することが予想される。この実験では熱安定性を実施しなかったため、このパラメーターを評価することはできなかった。最良の熱安定性は、高レベルのＮａＣｌまたはＭｇＣｌ２の存在下にあると予想される。
【0336】
ＳＬＳ：静的光散乱の出現によって、固有ＤＳＦ（３３０ｎｍ／３５０ｎｍ）または色素系（ＳＹＰＲＯオレンジ）ＤＳＦとは異なるカプシド融解についての情報が得られる。８μｍ以上での粒子カウントが最も高い相対的空サンプル（Ｔｒｉｓ、１２ｍＭ ＮａＣｌ、１２ｍＭ ＭｇＣｌ２）では、２０℃から９５℃に加熱する間、ＳＬＳシグナルの検出可能な変化はなかった（表８）。ウイルス粒子力価が４０％未満である、すべての相対的完全サンプルについて、粒子凝集にもかかわらず、ＳＬＳシグナルは検出されなかった。
【0337】
４．結論
塩の非存在下（すなわち、塩なしのＴｒｉｓ）では、５０ｋＤａの膜を用いた３０００ＲＣＦでの緩衝液交換の後、有意なＡＡＶ３Ｂウイルス粒子力価低下が観察された（表７）。塩濃度が２Ｍもの高さになっても（すなわち、ＮａＣｌまたはＭｇＣｌ２）、マイナスの影響は認められなかった。
塩の非存在下（すなわち、塩なしのＴｒｉｓ）では、５０ｋＤａの膜を用いた３０００ＲＣＦでの緩衝液交換の後、有意なＡＡＶ３Ｂウイルス粒子力価低下が観察された（表７）。塩濃度が２Ｍもの高さになっても（すなわち、ＮａＣｌまたはＭｇＣｌ２）、マイナスの影響は認められなかった。
【0338】
より低い濃度（すなわち、１２ｍＭ）のＣａＣｌ２は、同等の濃度のＮａＣｌまたはＭｇＣｌ２より安定性を付与した。
【0339】
ＭｇＣｌ２に比べるとＮａＣｌのイオン強度は３分の１であるが、ＭｇＣｌ２の方が、同じモル濃度（すなわち、１００ｍＭ）でＮａＣｌより安定性を付与した。
【0340】
ＨＭＭＳピーク面積に対して、１００ｎｍ未満のＮＴＡカウントは正の相関を示し、Ｄ１０は負の相関を示すが、しかし、すべてのサンプルについて一貫してはいない。
【0341】
【表7-1】
【0342】
【表7-2】
【0343】
ＤＬＳは、粘度に対して正規化したものであり、５７．１は、当該機器によって報告することができる最大の多分散性値であり、ＨＭＭＳについての検出閾値は１％である。ＮＤ＝検出されず、ＮＳＡ＝分析に不適
＃調合物中のスクロースの存在のために、賦形剤ピークからの散乱光強度が、試験サンプルについてピーク２と報告されたＡＡＶカプシドからの散乱光強度（データは示さず）より強くなった。
＃調合物中のスクロースの存在のために、賦形剤ピークからの散乱光強度が、試験サンプルについてピーク２と報告されたＡＡＶカプシドからの散乱光強度（データは示さず）より強くなった。
【0344】
【表8-1】
【0345】
【表8-2】
【0346】
【表8-3】
【0347】
ＤＬＳは、粘度に対して正規化したものであり、５７．１は、当該機器によって報告することができる最大の多分散性値であり、ＨＭＭＳについての検出閾値は１％である。ＮＤ＝検出されず、ＮＳＡ＝分析に不適
＃調合物中のスクロースの存在のために、賦形剤ピークからの散乱光強度が、試験サンプルについてピーク２と報告されたＡＡＶカプシドからの散乱光強度（データは示さず）より強くなった。
＃調合物中のスクロースの存在のために、賦形剤ピークからの散乱光強度が、試験サンプルについてピーク２と報告されたＡＡＶカプシドからの散乱光強度（データは示さず）より強くなった。
【0348】
【表9-1】
【0349】
【表9-2】
【0350】
【表9-3】
【0351】
ＮＤ＝検出されず。ＤＬＳは、粘度に対して正規化したものであり、ＨＭＭＳについての検出閾値は１％である。Ｄ１０、Ｄ５０、およびＤ９０は、Ｈｕｂｅｒｔら（２０２０）、Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．１０９：８３０～８４４において規定されているとおりの、第１０、第５０、および第９０パーセンタイルにおける粒径値を表す。
【0352】
【表10-1】
【0353】
【表10-2】
【0354】
ＮＤ＝検出されず。ＨＭＭＳについての検出閾値は１％である。
【0355】
均等物
前述の書面による明細は、当業者による本開示の実施を可能にするのに十分であるとみなされる。前述の説明および実施例では、本開示のある特定の例示的な実施形態を詳述している。しかし、前述の事項が本文中でどれだけ詳細であるように思われることがあろうと、本開示は、多くのやり方で実施することができ、また本開示は、添付の請求項およびそのいずれかの均等物に従って解釈されるべきであると認識される。
前述の書面による明細は、当業者による本開示の実施を可能にするのに十分であるとみなされる。前述の説明および実施例では、本開示のある特定の例示的な実施形態を詳述している。しかし、前述の事項が本文中でどれだけ詳細であるように思われることがあろうと、本開示は、多くのやり方で実施することができ、また本開示は、添付の請求項およびそのいずれかの均等物に従って解釈されるべきであると認識される。
【0356】
特許、特許出願、論文、教本などを始めとする、本文書で引用したすべての参考文献、およびその中で引用されている参考文献は、すでに援用されていない限り、その全体が参照により本明細書に援用される。
【0357】
【表11-1】
【0358】
【表11-2】
【0359】
【表11-3】
【0360】
【表11-4】
【0361】
【表11-5】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【配列表】
【外国語明細書】