特開 2022-162670 カルボニル化タンパク質分解剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022162670

(43)【公開日】2022-10-25

(54)【発明の名称】カルボニル化タンパク質分解剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/9789 20170101AFI20221018BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20221018BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20221018BHJP

   A61Q 19/02 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 36/539 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 36/30 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 36/44 20060101ALI20221018BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221018BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 8/60 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 8/35 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 8/37 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 8/49 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 31/7048 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 31/122 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 31/222 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 31/353 20060101ALI20221018BHJP

   A61K 125/00 20060101ALN20221018BHJP

   A61K 127/00 20060101ALN20221018BHJP

【ＦＩ】

A61K8/9789

A61Q19/00

A61Q19/08

A61Q19/02

A61K36/539

A61K36/30

A61K36/44

A61P43/00 105

A61P17/00

A61K8/60

A61K8/35

A61K8/37

A61K8/49

A61K31/7048

A61K31/122

A61K31/222

A61K31/353

A61K125:00

A61K127:00

【審査請求】未請求

【請求項の数】11

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021067589

(22)【出願日】2021-04-13

(71)【出願人】

【識別番号】391045554

【氏名又は名称】株式会社クラブコスメチックス

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】重山 佳太

(72)【発明者】

【氏名】近藤 亜弥

(72)【発明者】

【氏名】坂口 育代

【テーマコード（参考）】

4C083

4C086

4C088

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C083AA111

4C083AA112

4C083AC491

4C083AC492

4C083AC841

4C083AC842

4C083AD391

4C083AD392

4C083CC02

4C083EE12

4C083EE16

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA08

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4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA89

4C086ZB21

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4C088AB38

4C088AC05

4C088AC11

4C088BA10

4C088BA11

4C088BA14

4C088CA08

4C088NA14

4C088ZA89

4C088ZB21

4C206AA01

4C206AA02

4C206CB28

4C206DB03

4C206DB04

4C206DB52

4C206KA04

4C206MA01

4C206MA04

4C206NA14

4C206ZA89

4C206ZB21

(57)【要約】

【課題】カルボニル化タンパク質を分解する新規なカルボニル化タンパク質分解剤を提供する。
【解決手段】シソ科のコガネバナの根、ムラサキ科のムラサキの根またはカキノキ科の柿の葉から抽出された抽出物を有効成分として含む、カルボニル化タンパク質分解剤、ならびに、バイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートおよびエピガロカテキンの少なくともいずれかを有効成分として含む、カルボニル化タンパク質分解剤。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

シソ科のコガネバナの根、ムラサキ科のムラサキの根またはカキノキ科の柿の葉から抽出された抽出物を有効成分として含む、カルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項2】

シソ科のコガネバナの根から抽出された抽出物を１．０Ｅ＋００～５．０Ｅ＋０２ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、請求項１に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項3】

抽出溶媒が水と１，３－ブチレングリコールとの混合物である、請求項２に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項4】

ムラサキ科のムラサキの根から抽出された抽出物を１．０Ｅ－０１～５．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、請求項１に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項5】

抽出溶媒がエタノールと１，３－ブチレングリコールとの混合物である、請求項４に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項6】

柿の葉から抽出された抽出物を１．０Ｅ＋００～１．０Ｅ＋０２ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、請求項１に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項7】

抽出溶媒が水と１，３－ブチレングリコールとの混合物である、請求項６に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項8】

バイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートおよびエピガロカテキンの少なくともいずれかを有効成分として含む、カルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項9】

バイカレインを１．０Ｅ－０２～１．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、請求項８に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項10】

シコニン、アセチルシコニンまたはβ－ヒドロキシイソバレリルシコニンを５．０Ｅ－０５～５．０Ｅ－０２ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、請求項８に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【請求項11】

カテキン、エピガロカテキンガレートまたはエピガロカテキンを１．０Ｅ－０２～１．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、請求項８に記載のカルボニル化タンパク質分解剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、シソ科のコガネバナの根、ムラサキ科のムラサキの根またはカキノキ科の柿の葉から抽出された抽出物、または、バイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートおよびエピガロカテキンの少なくともいずれかを有効成分として含む、カルボニル化タンパク質分解剤に関する。

【背景技術】

【0002】

タンパク質のカルボニル化とは、生体内で発生した活性酸素種によって生じるタンパク質の酸化修飾である。カルボニル化タンパク質は生体内で発生した活性酸素種によってタンパク質中のＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｐｒｏといったアミノ酸残基のＮＨ_２基が直接酸化されてカルボニル基となることで生成されるものと、脂質が酸化して過酸化脂質が生成され、過酸化脂質の分解によって反応性の高いアクロレインなどのアルデヒドが生成され、アルデヒドがタンパク質と結合することで生成されるものとがある（たとえば、特開２００４－３４０９３５号公報（特許文献１）を参照）。

【0003】

皮膚の最表層である角層は角質細胞からなり、その約８５％がタンパク質であるケラチンから構成されている。近年、このケラチンが、日常的に皮膚が受ける紫外線などによる酸化的ストレスによってカルボニル化されることが知られている（たとえば、Ｊｅｎｓ Ｊ． Ｔｈｉｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｔｒａｔｕｍ Ｃｏｒｎｅｕｍ： Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｋｅｒａｔｉｎｓ ｔｏ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ａ Ｋｅｒａｔｉｎ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｉｎ Ｖｉｖｏ」，ＴＨＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＶＥ ＤＥＲＭＡＴＯＬＯＧＹ，１１３（３），３３５－３３９，１９９９（非特許文献１）を参照）。このような外界の影響による角層タンパク質のカルボニル化が、潤い、はり、明るさなどの皮膚機能を低下させ、肌の透明感を低下させる一因と考えられている（たとえば、岩井一郎ら、「角層タンパク質のカルボニル化による肌透明感の低下」、日本化粧品技術者会誌，４２（１），１６－２１，２００８（非特許文献２）を参照）。

【0004】

肌の透明感の低下は、シミ、くすみなどの変化によって生じる。肌のくすみは、ある特定の現象であり、顔全体又は眼のまわりや頬等の部位に生じ、肌の赤みが減少して黄みが増し、肌の「つや」や透明感が減少し、皮膚表面の凹凸などによる影によって明度が低下して暗く見える状態などとされている。また、くすみの発生要因は、血行不良による肌色の赤みの低下、メラニンの沈着、皮膚の弾力が低下することにより生じる皮膚表面の凹凸による影、皮膚の肥厚などによる光透過性の低下、皮膚表面での乱反射によるつやの低下、加齢に伴う皮膚の黄色化などとされている（たとえば、長沼雅子、「香粧品の有効性の歴史的変遷」、日本香粧品学会誌、３９（４）、２７５－２８５、２０１５（非特許文献３）を参照）。

【0005】

特に皮膚の黄みの増加によるくすみは、黄ぐすみとして知られ、透明感低下に伴う特徴的な皮膚の色調変化である。黄ぐすみの主な原因は、表皮や真皮中に存在するタンパク質の糖化物（たとえば、特開２０１３－１３３３０３号公報（特許文献２）を参照）やタンパク質のカルボニル化物（たとえば、特開２０１２－３２２８７号公報（特許文献３）を参照）であると考えられている。

【0006】

そのため、カルボニル化タンパク生成に伴う皮膚を改善するため、カルボニル化タンパクの生成を抑制する成分の提案がされている（たとえば、伊賀和宏ら、「コウジ酸の顔面黄ぐすみに対する改善効果」、西日本皮膚科、７７（３）、２２４－２４９、２０１５（非特許文献４）を参照）。しかしながら、非特許文献４には、既に生成されてしまったカルボニル化タンパクに対しての提案はなく、カルボニル化タンパク生成に伴う皮膚の機能低下の根本的な解決に至っていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特開２００４－３４０９３５号公報

【特許文献2】特開２０１３－１３３３０３号公報

【特許文献3】特開２０１２－３２２８７号公報

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Ｊｅｎｓ Ｊ． Ｔｈｉｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｔｒａｔｕｍ Ｃｏｒｎｅｕｍ： Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｋｅｒａｔｉｎｓ ｔｏ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ａ Ｋｅｒａｔｉｎ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｉｎ Ｖｉｖｏ」，ＴＨＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＶＥ ＤＥＲＭＡＴＯＬＯＧＹ，１１３（３），３３５－３３９，１９９９

【非特許文献2】岩井一郎ら、「角層タンパク質のカルボニル化による肌透明感の低下」、日本化粧品技術者会誌，４２（１），１６－２１，２００８

【非特許文献3】長沼雅子、「香粧品の有効性の歴史的変遷」、日本香粧品学会誌、３９（４）、２７５－２８５、２０１５

【非特許文献4】伊賀和宏ら、「コウジ酸の顔面黄ぐすみに対する改善効果」、西日本皮膚科、７７（３）、２２４－２４９、２０１５

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本発明は、上記課題を解決するためになされたものであって、その目的とするところは、カルボニル化タンパク質を分解する新規なカルボニル化タンパク質分解剤を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明のカルボニル化タンパク質分解剤は、シソ科のコガネバナの根、ムラサキ科のムラサキの根またはカキノキ科の柿の葉から抽出された抽出物を有効成分として含むことを特徴とする（以下、シソ科のコガネバナの根、ムラサキ科のムラサキの根またはカキノキ科の柿の葉から抽出された抽出物を含むカルボニル化タンパク質分解剤を「第１のカルボニル化タンパク質分解剤」と呼称する。）。

【0011】

本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤は、シソ科のコガネバナの根から抽出された抽出物を１．０Ｅ＋００～５．０Ｅ＋０２ｍｇ／ｍＬの濃度で含むことが好ましい。この場合、抽出溶媒は水と１，３－ブチレングリコールとの混合物を抽出溶媒として用いることが好ましい。

【0012】

また本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤は、ムラサキ科のムラサキの根から抽出された抽出物を１．０Ｅ－０１～５．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの濃度で含むことが好ましい。この場合、抽出溶媒はエタノールと１，３－ブチレングリコールとの混合物を抽出溶媒として用いることが好ましい。

【0013】

また、本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤は、柿の葉から抽出された抽出物を１．０Ｅ＋００～１．０Ｅ＋０２ｍｇ／ｍＬの濃度で含むことが好ましい。この場合、抽出溶媒は水と１，３－ブチレングリコールとの混合物を抽出溶媒として用いることが好ましい。

【0014】

本発明はまた、バイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートおよびエピガロカテキンの少なくともいずれかを有効成分として含むカルボニル化タンパク質分解剤についても提供する（以下、バイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートおよびエピガロカテキンの少なくともいずれかを含むカルボニル化タンパク質分解剤を「第２のカルボニル化タンパク質分解剤」と呼称する。）。

【0015】

本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤は、バイカレインを１．０Ｅ－０２～１．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの濃度で含むことが好ましい。

【0016】

また本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤は、シコニン、アセチルシコニンまたはβ－ヒドロキシイソバレリルシコニンを５．０Ｅ－０５～５．０Ｅ－０２ｍｇ／ｍＬの濃度で含むことが好ましい。

【0017】

また、本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤は、カテキン、エピガロカテキンガレートまたはエピガロカテキンを１．０Ｅ－０２～１．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの濃度で含むことが好ましい。

【発明の効果】

【0018】

本発明によれば、カルボニル化タンパク質を分解する新規なカルボニル化タンパク質分解剤、化粧品および皮膚外用剤を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】実験例１の結果を示すグラフである。

【図2】実験例２の結果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0020】

（第１のカルボニル化タンパク質分解剤）
本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤は、シソ科のコガネバナ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）（オウゴン）の根の抽出物（オウゴン根抽出物）、ムラサキ科のムラサキ（Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ ｅｒｙｔｈｒｏｒｈｉｚｏｎ）の根（シコン）の抽出物（シコン抽出物）、またはカキノキ科の柿（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ ｋａｋｉ）の葉の抽出物（カキ葉抽出物）を有効成分とする。

【0021】

＜オウゴン根抽出物、シコン抽出物、カキ葉抽出物＞
本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤において、オウゴン根抽出物、シコン抽出物、カキ葉抽出物は、一般的な抽出方法により得ることができ、たとえばそれぞれを抽出溶媒と共に浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮して得ることができる。

【0022】

抽出溶媒としては一般的に抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、極性溶剤、非極性溶剤のいずれも使用することができる。たとえば、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコールなどのアルコール類（多価アルコール類を含む）、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、酢酸メチル、酢酸エチルなどのエステル類、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどの鎖状および環状エーテル類、ポリエチレングリコールなどのポリエーテル類、スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテルなどの炭化水素類および超臨界二酸化炭素、ピリジン類、油脂、ワックスなどその他オイル類などの有機溶剤、ならびにこれらの混合物が挙げられる。好ましくは、水、アルコール類、アルコール類と水との混合物、炭化水素類が挙げられ、アルコール類と水との混合物、炭化水素類がより好ましい。アルコール類として好ましくは１，３－ブチレングリコールまたはエタノールが挙げられる。

【0023】

オウゴン根から抽出する場合、残留した場合の問題を考慮し、上述した中でも、水単独、アルコール単独、多価アルコール単独、水と多価アルコールとの混合物、水とアルコールと多価アルコールとの混合物から選ばれるいずれかを抽出溶媒として用いることが好ましく、アルコール単独、水と多価アルコールとの混合物を抽出溶媒として用いることがより好ましく、有効成分の抽出効率を高めるという理由からは、抽出溶媒としてエタノールを用いて抽出し、溶媒を除去したものに、水と１，３－ブチレングリコールの混合物（水：１，３－ブチレングリコール＝１：１）を用いて溶解させることが特に好ましい。

【0024】

シコンから抽出する場合、残留した場合の問題を考慮し、上述した中でも、アルコール類単独、多価アルコール類単独、ならびに、アルコール類と多価アルコール類との混合物から選ばれるいずれかを抽出溶媒として用いることが好ましく、アルコール類と多価アルコール類との混合物を抽出溶媒として用いることがより好ましく、エタノールと１，３－ブチレングリコールとの混合物（好適にはエタノール：１，３－ブチレングリコール＝７：３～８：２の混合物）を抽出溶媒として用いることが特に好ましい。

【0025】

カキの葉から抽出する場合、残留した場合の問題を考慮し、上述した中でも、水単独、多価アルコール単独、ならびに、水と多価アルコールとの混合物から選ばれるいずれかを抽出溶媒として用いることが好ましく、水と多価アルコールとの混合物を抽出溶媒として用いることがより好ましく、水と１，３－ブチレングリコールとの混合物（好適には水：１，３－ブチレングリコール＝１：１の混合物）を抽出溶媒として用いることが特に好ましい。

【0026】

本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤において、オウゴン根抽出物を有効成分とする場合、オウゴン根抽出物の濃度は特に制限されないが、より顕著にカルボニル化タンパク質分解作用を奏することから、１．０Ｅ＋００～５．０Ｅ＋０２ｍｇ／ｍＬの範囲内であることが好ましい。

【0027】

本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤において、シコン抽出物を有効成分とする場合、シコン抽出物の濃度は特に制限されないが、より顕著にカルボニル化タンパク質分解作用を奏することから、１．０Ｅ－０１～５．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの範囲内であることが好ましい。

【0028】

本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤において、カキ葉抽出物を有効成分とする場合、カキ葉抽出物の濃度は特に制限されないが、より顕著にカルボニル化タンパク質分解作用を奏することから、１．０Ｅ＋００～１．０Ｅ＋０２ｍｇ／ｍＬの範囲内であることが好ましい。

【0029】

本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤は、オウゴン根抽出物、シコン抽出物、カキ葉抽出物をそのまま用いることもできるが、通例、各種の担体などとともに組成物として用いられ、化粧品、皮膚外用剤（医薬品、医薬部外品）として提供できる。本発明はこのように、本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤を含む化粧品、皮膚外用剤についても提供する。本発明の化粧品、皮膚外用剤において、その剤形も制限されるものではなく、皮膚に適用可能な剤形であればよく、液剤、軟膏剤、硬膏剤、乳液、ローション剤、パック剤などが例示される。その配合量は、オウゴン根抽出物の場合には、通常、製剤中０．０１％（ｗ／ｗ）以上、好ましくは０．１～２０％（ｗ／ｗ）、シコン抽出物の場合には、通常、製剤中０．００１％（ｗ／ｗ）以上、好ましくは０．０１～１％（ｗ／ｗ）、カキ葉抽出物の場合には、通常、製剤中０．０１％（ｗ／ｗ）以上、好ましくは０．１～１０％（ｗ／ｗ）である。また、本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤は、他の効果をもつ原料、たとえば保湿剤、美白剤、紫外線防御剤などと併用することが可能である。

【0030】

（第２のカルボニル化タンパク質分解剤）
上述の第１のカルボニル化タンパク質分解剤において有効成分として含まれるオウゴン根抽出物には、その成分としてフラボノイドの一種であるバイカレイン、バイカリン、オウゴニン、オウゴノシドなどが含まれ、またシコン抽出物にはその成分としてナフトキノン誘導体である、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、イソブチルシコニン、β－ジメチルアクリルシコニン、イソバレリルシコニン、α－メチル－ｎ－ブチルシコニン、デオキシシコニン、テラクリルシコニンなどの成分やフェニルプロパノイドであるロスマリン酸などが含まれ、カキ葉抽出物にはその成分としてフラボノイドの一種であるカテキン、エピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキン、プロシアニジンや没食子酸、クロロゲン酸などの成分が含まれると考えられる。後述する実験例で立証するように、本発明者らは、バイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートまたは、エピガロカテキンがカルボニル化タンパク質分解作用を示すことを見出した。すなわち、本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤は、バイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートおよびエピガロカテキンの少なくともいずれかを有効成分として含むことを特徴とする。

【0031】

本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤において、バイカレインの濃度は特に制限されないが、より顕著にカルボニル化タンパク質分解作用を奏することから、１．０Ｅ－０２～１．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの範囲内であることが好ましい。

【0032】

本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤において、シコニン、アセチルシコニンまたはβ－ヒドロキシイソバレリルシコニンの濃度は特に制限されないが、より顕著にカルボニル化タンパク質分解作用を奏することから、５．０Ｅ－０５～５．０Ｅ－０２ｍｇ／ｍＬの範囲内であることが好ましい。

【0033】

本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤において、カテキン、エピガロカテキンガレートまたはエピガロカテキンの濃度は特に制限されないが、より顕著にカルボニル化タンパク質分解作用を奏することから、１．０Ｅ－０２～１．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬの範囲内であることが好ましい。

【0034】

本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤において、有効成分であるバイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートおよびエピガロカテキンの少なくともいずれかは、上述した第１のカルボニル化タンパク質分解剤におけるオウゴン根抽出物、シコン抽出物、カキ葉抽出物と同様にそのまま用いることもできるが、通例、各種の担体などとともに組成物として用いられ、化粧品、皮膚外用剤（医薬品、医薬部外品）として提供できる。本発明はこのように、本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤を含む化粧品、皮膚外用剤についても提供する。この場合も、上述した本発明の第１のカルボニル化タンパク質分解剤を用いた化粧品、皮膚外用剤と同様に、その剤形も制限されるものではなく、皮膚に適用可能な剤形であればよく、他の効果をもつ原料、たとえば保湿剤、美白剤、紫外線防御剤などと併用してもよい。

【0035】

以下に実験例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【0036】

＜実験例１＞
（試料の調製）
採取したシソ科のコガネバナ（オウゴン）の根から、抽出溶媒としてエタノールを用いて抽出し、溶媒を除去したものに、水と１，３－ブチレングリコールの混合物（水：１，３－ブチレングリコール＝１：１）を用いて溶解したものを用いた。オウゴン抽出物は、リン酸緩衝液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ：ＰＢＳ）を用いて調整し、１．０Ｅ＋０１ｍｇ／ｍＬのオウゴン根抽出物（実施例１）、１．０Ｅ＋０２ｍｇ／ｍＬのオウゴン根抽出物（実施例２）を得た。

【0037】

また、採取したムラサキ科のムラサキの根（シコン）から、抽出溶媒としてエタノールと１，３－ブチレングリコールとの混合物（エタノール：１，３－ブチレングリコール＝７：３）を用いて抽出したものを用いた。抽出したシコン抽出物は、ＰＢＳを用いて調整し、５．０Ｅ－０１ｍｇ／ｍＬのシコン抽出物（実施例３）、１．０Ｅ＋００ｍｇ／ｍＬのシコン抽出物（実施例４）、３．０Ｅ＋００ｍｇ／ｍＬのシコン抽出物（実施例５）を得た。

【0038】

また、採取したカキノキ科の柿の葉から、抽出溶媒として水と１，３－ブチレングリコールとの混合物（水：１，３－ブチレングリコール＝１：１）を用いて抽出したものを用いた。抽出したカキ葉抽出物は、ＰＢＳを用いて調整し、１．０Ｅ＋００ｍｇ／ｍＬのカキ葉抽出物（実施例６）を得た。

【0039】

（カルボニル化タンパク質分解効果の評価法）
試験は、セロハンテープ（ニチバン社製）を用いて、肌表面(前腕内側部または顔の頬部)から採取した角層を使用して実施した。採取した角層はプレートに転写し、転写した角層に０．１ｍＭアクロレイン（東京化成社製）を添加して角層タンパク質のカルボニル化処理をした。その後、カルボニル化処理をした角層にサンプルを塗布し、３７℃でインキュベートした。インキュベート後、０．１ｍＭの２－Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅ ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ｐＨ５．５）緩衝溶液で５０μＭの濃度になるように調整したＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－５－ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ（サーモフィッシャー社製）に上記角層を浸漬させて、カルボニル化された角層タンパク質をラベル化した。なお、カルボニル化処理を行っていない角層も同様にラベル化した。

【0040】

ラベル化した角層は蛍光顕微鏡を用いて撮像し、得られた観察画像を解析して、角層面積あたりの蛍光輝度をカルボニル化タンパク質量とした。

【0041】

（結果）
結果を図１に示す。ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で表す。図１に示すようにオウゴン根抽出物、シコン抽出物、およびカキ葉抽出物は、カルボニル化タンパク質量が減少しており、優れたカルボニル化タンパク質分解作用を示した。

【0042】

＜実験例２＞
（試料の調製）
本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤であるバイカレインは、市販されているものを用いた（バイカレイン、和光純薬工業社製）。バイカレインは、ＰＢＳで終濃度０．１％に調整したジメチルスルホキシドを用いて調整し、１．０Ｅ－０１ｍｇ／ｍＬのバイカレイン（実施例７）、１．０Ｅ＋００ｍｇ／ｍＬのバイカレイン（実施例８）を得た。

【0043】

また、本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤であるシコニン（シコニン、和光純薬工業社製）、アセチルシコニン（アセチルシコニン、長良サイエンス社製）またはβ－ヒドロキシイソバレリルシコニン（β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、長良サイエンス社製）は、市販されているものを用いた。シコニンは、ＰＢＳで終濃度０．１％に調整したジメチルスルホキシドを用いて調整し、５．０Ｅ－０４ｍｇ／ｍＬのシコニン（実施例９）、５．０Ｅ－０３ｍｇ／ｍＬのシコニン（実施例１０）を得た。また、アセチルシコニンは、ＰＢＳで終濃度０．１％に調整したジメチルスルホキシドを用いて調整し、５．０Ｅ－０４ｍｇ／ｍＬのアセチルシコニン（実施例１１）、５．０Ｅ－０３ｍｇ／ｍＬのアセチルシコニン（実施例１２）を得た。さらに、β－ヒドロキシイソバレリルシコニンは、ＰＢＳで終濃度０．１％に調整したジメチルスルホキシドを用いて調整し、５．０Ｅ－０４ｍｇ／ｍＬのβ－ヒドロキシイソバレリルシコニン（実施例１３）、５．０Ｅ－０３ｍｇ／ｍＬのβ－ヒドロキシイソバレリルシコニン（実施例１４）を得た。

【0044】

また、本発明の第２のカルボニル化タンパク質分解剤であるカテキン（（＋）－カテキン、東京化成工業社製）、エピガロカテキンガレート（（－）－エピガロカテキンガレート、和光純薬工業社製）およびエピガロカテキン（（－）－エピガロカテキン，緑茶由来、和光純薬工業社製）は、市販されているものを用いた。カテキンは、ＰＢＳで終濃度０．１％に調整したジメチルスルホキシドを用いて調整し、１．０Ｅ＋００ｍｇ／ｍＬのカテキン（実施例１５）を得た。また、エピガロカテキンがレートは、ＰＢＳで終濃度０．１％に調整したジメチルスルホキシドを用いて調整し、１．０Ｅ＋００ｍｇ／ｍＬのエピガロカテキンガレート（実施例１６）を得た。さらに、エピガロカテキンは、ＰＢＳで終濃度０．１％に調整したジメチルスルホキシドを用いて調整し、１．０Ｅ＋００ｍｇ／ｍＬのエピガロカテキン（実施例１７）を得た。

【0045】

（カルボニル化タンパク質分解効果の評価法）
試験は、実験例１と同様の方法を用いて評価した。

【0046】

（結果）
結果を図２に示す。ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で表す。図２に示すようにバイカレイン、シコニン、アセチルシコニン、β－ヒドロキシイソバレリルシコニン、カテキン、エピガロカテキンガレートおよびエピガロカテキンは、カルボニル化タンパク質量が減少しており、優れたカルボニル化タンパク質分解作用を示した。

【図1】

【図2】