特開 2022-169543 改善された養子Ｔ細胞療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022169543

(43)【公開日】2022-11-09

(54)【発明の名称】改善された養子Ｔ細胞療法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20221101BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20221101BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20221101BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20221101BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20221101BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20221101BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20221101BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20221101BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20221101BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221101BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221101BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221101BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20221101BHJP

   A61K 35/14 20150101ALI20221101BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20221101BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20221101BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20221101BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C07K19/00

C07K16/30

C07K16/46

C07K16/18

C12P21/08

C12N5/10

A61K39/395 T

A61P43/00 121

A61P35/00

A61P35/02

A61K35/14 Z

A61P37/04

A61K47/68

C07K14/705

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2022121294

(22)【出願日】2022-07-29

(62)【分割の表示】P 2018568679の分割

【原出願日】2017-06-30

(31)【優先権主張番号】16177203.3

(32)【優先日】2016-06-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】306021192

【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト

(71)【出願人】

【識別番号】514196857

【氏名又は名称】ルードヴィッヒ－マクシミリアン－ユニヴェルシタート ミュンヘン

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】クライン， クリスティアン

(72)【発明者】

【氏名】サストマン， クラウディオ

(72)【発明者】

【氏名】ニーダーフェルナー， ゲルハルト

(72)【発明者】

【氏名】ガイガー， マルティナ

(72)【発明者】

【氏名】エンドレス， シュテファン

(72)【発明者】

【氏名】コボルト， ゼバスティアン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】改善された養子Ｔ細胞療法を提供する。
【解決手段】本発明は、概して、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞であって、融合タンパク質の細胞外ドメインに特異的に結合する／これと相互作用する三価の二重特異性抗体分子の使用により動員される融合タンパク質をトランスフェクト／形質導入されたＴ細胞に関する。より正確に述べると、本発明は、本発明の核酸分子、ベクター、及び／又は融合タンパク質、ならびに本発明の、三価の二重特異性抗体分子を含むキットに関する。本発明のさらなる態様は、融合タンパク質のほか、三価の二重特異性抗体分子もコードする核酸分子を含む発現ベクターである。さらに、本発明の三価の二重特異性抗体分子、及び前記三価の二重特異性抗体分子を含む医薬／薬学的組成物を作製するためのプロセスについても記載する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（Ａ）処置される対象から得られたＴ細胞に形質導入するための、融合タンパク質をコードする核酸分子であって、以下のドメイン：
（１）前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、
（２）膜貫通アンカリングドメイン、及び
（３）シグナル伝達刺激ドメイン
を有する核酸分子と、
（Ｂ）三価の二重特異性抗体分子であって、
（ｉ）（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む三価の二重特異性抗体分子と
を含むキット。

【請求項2】

前記融合タンパク質が、少なくとも１つのシグナル伝達共刺激ドメインをさらに含む、請求項１に記載のキット。

【請求項3】

医薬としての使用のための、
（ｉ）請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む三価の二重特異性抗体分子であって、請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子。

【請求項4】

（ｉ）請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含み、請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞と組み合わせて投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子を含む薬学的組成物。

【請求項5】

悪性疾患を処置するための方法における使用のための、
（ｉ）請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む、三価の二重特異性抗体分子であって、請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子。

【請求項6】

前記悪性疾患が、上皮由来、内皮由来、又は中皮由来のがん、及び血液がんから選択される、請求項５に記載の三価の二重特異性抗体分子。

【請求項7】

腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記抗原が、ＥｐＣＡＭ、ＭＳＬＮ、ＭＣＳＰ、ＨＥＲ－１、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ－３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＦＬＴ－３、ＦＯＬＲ１、Ｔｒｏｐ－２、ＣＡ－１２－５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＭＵＣ－１（ムチン１）、Ａ３３抗原、ＰＳＭＡ、（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ、トランスフェリン受容体、テネイシン、及びＣＡ－ＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）からなる群から選択される、請求項１又は請求項２に記載のキット、請求項４に記載の薬学的組成物、請求項３又は５に記載の三価の二重特異性抗体分子。

【請求項8】

前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の前記細胞外ドメインが、Ｃｒｉｐｔｏ（ｃｒｙｐｔｉｃファミリーのタンパク質）、ＣＤ（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）ファミリー（非Ｔ細胞）のメンバー、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、及びＴＳＨ－Ｒからなる群から選択される、請求項１、請求項２、又は請求項７に記載のキット、請求項４又は請求項７に記載の薬学的組成物、請求項３、５、又は７に記載の三価の二重特異性抗体分子。

【請求項9】

前記形質導入されたＴ細胞が、前記Ｔ細胞上に天然に存在するＴ細胞受容体、及び／又は前記Ｔ細胞に遺伝子導入されたＴ細胞受容体をさらに含む、請求項１、２、７、又は８のいずれか一項に記載のキット、請求項４、７、又は８のいずれか一項に記載の薬学的組成物、請求項３、５、７、又は８のいずれか一項に記載の三価の二重特異性抗体分子。

【請求項10】

請求項１（Ｂ）及び３から５のいずれか一項に記載の三価の二重特異性抗体分子をコードする核酸配列を含む発現ベクター。

【請求項11】

ポリシストロニックである、請求項１０に記載のベクター。

【請求項12】

請求項１０に記載の前記核酸配列に動作可能に連結された調節配列をさらに含む、請求項１０又は請求項１１に記載のベクター。

【請求項13】

請求項１０から１２のいずれか一項に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。

【請求項14】

請求項１（Ｂ）及び３から５のいずれか一項に記載の三価の二重特異性抗体分子を作製するための方法であって、
（ａ）請求項１３において規定された宿主細胞を、請求項１（Ｂ）及び３から５のいずれか一項に記載の三価の二重特異性抗体分子の発現を可能とする条件下で培養することと、
（ｂ）作製された三価の二重特異性抗体分子を培養物から回収することと
を含む方法。

【請求項15】

（ｉ）請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）請求項１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含み、
請求項１４に記載の方法により得ることができる、
請求項１（Ｂ）及び３から５のいずれか一項に記載の三価の二重特異性抗体分子。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、概して、融合タンパク質をトランスフェクト／形質導入された、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞であって、融合タンパク質の細胞外ドメインに特異的に結合する／これと相互作用する三価の二重特異性抗体分子の使用により動員されるＴ細胞に関する。より正確に述べると、本発明は、本発明の核酸分子、ベクター、及び／又は融合タンパク質、ならびに本発明の、三価の二重特異性抗体分子を含むキットに関する。本発明のさらなる態様は、融合タンパク質のほか、三価の二重特異性抗体分子もコードする核酸分子を含む発現ベクターである。さらに、本発明の、三価の二重特異性抗体分子、及び前記三価の二重特異性抗体分子を含む医薬／薬学的組成物を作製するためのプロセスについても記載する。本発明はまた、特定の疾患を処置するための方法における前記三価の二重特異性抗体分子の使用、ならびに本発明の融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞と組み合わせて投与される、前記三価の二重特異性抗体分子を含む薬学的組成物／医薬も提供する。本発明はまた、特定の疾患を処置するための方法も提供する。

【背景技術】

【0002】

養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）は、がん特異的Ｔ細胞を使用する、強力な処置法である（Rosenberg及びRestifo、Science、348 (6230) (2015)、62-68）。ＡＣＴは、Ｔ細胞受容体又はキメラ抗原受容体を使用する遺伝子操作により特異的とされた、天然に存在する腫瘍特異的細胞又はＴ細胞を使用しうる（Rosenberg及びRestifo、Science、348 (6230) (2015)、62-68）。ＡＣＴは、急性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、又はメラノーマなど、進行性疾患及び他の形で処置不応性の疾患を患う患者であってもなお処置し、これらの患者において寛解を誘導することに成功しうる（Dudleyら、J Clin Oncol、26 (32) (2008)、5233-5239；Gruppら、N Engl J Med、368 (16) (2013)、1509-1518；Kochenderferら、J Clin Oncol.、(2015) 33 (6): 540-549、doi:10.1200/JCO.2014.56.2025.、Epub、2014年8月25日）。しかし、長期にわたる利益が、患者の小さなサブセットに限られる一方で、大半の患者は、再発し、それらの不応性疾患に屈するであろう。

【0003】

ＡＣＴの成功には、Ｔ細胞の、腫瘍細胞又は腫瘍組織へのアクセスが必須であると考えられている。したがって、Ｔ細胞の侵入を可能とする方法を、開発及び実施することが必要である（Gattinoniら、Nat Rev Immunol、6 (5) (2006)、383-393）。現在、Ｔ細胞浸潤の増強を達成するのに最も有効な方法は、腫瘍組織を透過化し、血管系をリモデリングし、抑制性細胞を枯渇させる、全身照射である（Dudleyら、J Clin Oncol、23 (10) (2005)、2346-2357）。この方法は、臨床治験において、有効性を示しているが、その非特異的性格は、重度の副作用を誘導することから、その適応可能性は制限され、より特異的な方法が求められている（Dudleyら、J Clin Oncol、23 (10) (2005)、2346-2357）。

【0004】

加えて、メラノーマ治療のための、抗ＣＴＬＡ－４又は抗ＰＤ１抗体などの阻害剤の承認は、処置環境及び転移性疾患を伴う患者の転帰を一変させた（Hodiら、N Engl J Med、363 (8) (2010)、711-723；Robertら、N Engl J Med、372 (4) (2015)、320-330）。これらのモダリティーの両方の組合せは、無進行生存率及び全生存の潜在的な延長により例示される通り、より画期的な応答の見込みを有する（Larkinら、N Engl J Med、373 (1) (2015)、23-34）。しかし、大半ではないにせよ、実質量の患者は、利益を得ないか、又は再発することから、さらなる処置選択肢が求められる。

【0005】

メラノーマ治療のためのＴ細胞の価値は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の使用により、さらに裏付けられており、全身照射と組み合わせた場合、処置される患者のうちの７７％という、比類のない奏功率を誘導する（Dudleyら、J Clin Oncol、26 (32) (2008)、5233-5239；Rosenbergら、Clin Cancer Res、17 (13) (2011)、4550-4557）。多数の患者が、治癒したと考えられるが、大半は、再発し、それらの疾患に屈することから、大半のメラノーマの、Ｔ細胞の攻撃に対する、主要な感受性は指し示されるが、抗腫瘍応答を持続させ、再発を防止するための、さらなる方法も求められる。

【0006】

近年、マーカー抗原を形質導入された抗原特異的Ｔ細胞と、四価の二重特異性抗体分子との組合せは、腫瘍認識を増強し、腫瘍コントロールの延長を媒介するが、局所的な免疫抑制及びＴ細胞の枯渇に、潜在的に起因して、腫瘍の根絶には失敗することが示された（国際公開第２０１３／１１３６１５号；Koboldら、J Natl Cancer Inst、107 (1) (2015)、364；Koboldら、J Natl Cancer Inst、107 (8) (2015)、1-10；Koboldら、Journal for ImmunoTherapy of Cancer、2 (増刊2号): p42 (2014)）。しかし、Ｋｏｂｏｌｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、２（増刊２号）：ｐ４２（２０１４）において記載されている二重特異性抗体分子は、完全に構造的特徴を明らかにされているわけでも、寄託されているわけでもない。国際公開第２０１３／１１３６１５号；Ｋｏｂｏｌｄら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ、１０７（１）（２０１５）、３６４；Ｋｏｂｏｌｄら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ、１０７（８）（２０１５）１－１０；Ｋｏｂｏｌｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、２（増刊２号）：ｐ４２（２０１４）において記載されている方法もまた、Ｔ細胞療法が、ＭＨＣ拘束に依存し、さらなるＴ細胞刺激を可能としないという不都合を有する。さらに、米国特許出願第２０１０／０２５６３４０号は、三価の二重特異性抗体分子の構築についても開示している。しかし、米国特許出願第２０１０／０２５６３４０号は、いずれの箇所でも、三価の二重特異性抗体分子の、融合タンパク質を形質導入したＴ細胞を、がん細胞に特異的に動員するためのツールとしての使用について記載していない。さらに、二重特異性抗体分子の、融合タンパク質を形質導入されたＴ細胞との組合せについても、記載されている（Urbanskaら、Journal of Translational Medicine、12 (347) (2014)、doi:10.1186/12967-014-0347-2）。しかし、Ｕｒｂａｎｓｋａらによる刊行物において記載された実験手順の、唯一の目的は、２つのモノクローナル抗体分子の架橋により得られた抗体分子であって、ＣＤ８、ＣＤ２８、及びＣＤ３ｚに融合させた葉酸受容体と、腫瘍関連抗原（ＣＤ２０及びＨＥＲ２）とをターゲティングする抗体分子であれば、Ｔ細胞を、がん細胞に対してリダイレクトすると実証することであった。しかし、Ｕｒｂａｎｓｋａらによるデータは、以下の理由：１）Ｔ細胞刺激ドメインに融合させた、異なる細胞外ドメインから構成される融合タンパク質をターゲティングする抗体分子であれば、Ｔ細胞を活性化させることが可能であるというデータが提示されていないこと；２）腫瘍細胞の非存在下における、Ｔ細胞の活性化に対する、四価の影響についての解析が提示されていないこと；３）三価の二重特異性抗体分子であれば、同様であるか、なお又はより強力なＴ細胞活性化能をもたらすことが可能であるというデータが提示されていないことのために、概念のさらなる一般化を排除できない。さらに、Ｕｒｂａｎｓｋａらによる刊行物で示されたデータは、Ｔ細胞の活性化には、ＣＤ８ドメインが必須となるという形で解釈しうるであろう。

【発明の概要】

【0007】

したがって、がん患者の必要を満たすために、ターゲティングされた腫瘍治療、特に、養子Ｔ細胞療法は、改善を必要とする。したがって、ＡＣＴの安全性及び有効性を改善し、上記の欠点を克服する潜在的可能性を有する、改善された手段を提供することが、依然として必要とされている。

【0008】

本発明は、特許請求の範囲で規定される実施態様を提供することにより、この必要に対処する。

【0009】

本発明は、（Ａ）処置される対象から得られたＴ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、膜貫通アンカリングドメイン、及びシグナル伝達刺激ドメインを含む融合タンパク質と、（Ｂ）融合タンパク質の細胞外ドメイン（すなわち、Ｔ細胞内又はＴ細胞上に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン）と、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原とに結合する、三価の二重特異性抗体分子とを含むキットに関する。より好ましい実施態様では、本発明は、（Ａ）処置される対象から得られたＴ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、膜貫通アンカリングドメイン、少なくとも１つのシグナル伝達共刺激ドメイン、及びシグナル伝達刺激ドメインを含む融合タンパク質と、（Ｂ）融合タンパク質の細胞外ドメイン（すなわち、Ｔ細胞内又はＴ細胞上に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン）と、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原とに結合する、三価の二重特異性抗体分子とを含むキットに関する。

【0010】

本発明は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞への、本明細書で記載される融合タンパク質の形質導入と、三価の二重特異性抗体分子による、それらの腫瘍への動員のターゲティングとに関する。国際公開第２０１３／１１３６１５号の例において記載されている、四価の二重特異性抗体であって、Ｔ細胞に導入されたマーカー抗原に対する、２つの結合ドメインと、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に対する、２つの結合ドメインとを有する、四価の二重特異性抗体とは対照的に、本発明は、融合タンパク質の細胞外ドメインに対する１つだけの結合ドメインと、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に対する２つの結合ドメインとを有する、三価の二重特異性抗体分子、又は、代替的に、融合タンパク質の細胞外ドメインに対する２つの結合ドメインと、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に対する１つだけの結合ドメインとを有する、三価の二重特異性抗体分子の使用に基づく。添付の実施例に、本発明の概念実証として示されるように、三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」（配列番号２１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる配列番号２２）、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」（配列番号２４（タンパク質）及び２３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」（配列番号２６（タンパク質）及び２５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」（配列番号２８（タンパク質）及び２７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３３；また、図９ならびに表１及び２も参照されたい）であって、第２の結合ドメイン、すなわち、１つの結合ドメインが、（ヒト）ＥＧＦＲｖＩＩＩ（前記Ｔ細胞内及び／又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインを表す）と相互作用する／これに結合し、第１の結合ドメイン及び第３の結合ドメイン、すなわち、２つの結合ドメインが、マウスＥｐＣＡＭ（腫瘍細胞の表面上で天然に存在する、腫瘍特異的抗原を表す）と相互作用する／これに結合する、三価の二重特異性抗体を構築した。さらに、三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」（配列番号１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる配列番号２）、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」（配列番号４（タンパク質）及び３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＭＳＬＮ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１５４４３」（配列番号６（タンパク質）及び５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ＭＳＬＮ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１５６６７」（配列番号８（タンパク質）及び７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３５；また、図１０ならびに表３及び４も参照されたい）であって、第２の結合ドメイン、すなわち、１つの結合ドメインが、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ（前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインを表す）と相互作用する／これに結合し、第１の結合ドメイン及び第３の結合ドメイン、すなわち、２つの結合ドメインが、ヒトメソテリン（ヒトメソテリンのＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号は、Ｑ１３４２１（バージョン番号１３２、配列ナンバー２；配列番号１４９（ＤＮＡ）及び１５０（タンパク質）である）と相互作用する／これに結合する、三価の二重特異性抗体を構築した。さらに、三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」（プラスミド／ベクターである、「ＭＲ１．１ ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＶＨ－Ｃｋ－（Ｇ４Ｓ）２ ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１６６２１」（配列番号２０８（タンパク質）及び２０７（ＤＮＡ））、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」（配列番号２１０（タンパク質）及び２０９（ＤＮＡ））、「ＭＣＳＰ ＭＬ２ ＶＬ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１６６１９」（配列番号２１２（タンパク質）及び２１１（ＤＮＡ））、及び「ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＹＲＦ，ｐＥＴＲ１６６１８」（配列番号２１４（タンパク質）及び２１３（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３４；また、図１１ならびに表５及び６も参照されたい）であって、第２の結合ドメイン、すなわち、１つの結合ドメインが、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ（前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインを表す）と相互作用する／これに結合し、第１の結合ドメイン及び第３の結合ドメイン、すなわち、２つの結合ドメインが、ヒトＭＣＳＰ（メラノーマコンドロイチン硫酸プロテオグリカン；ヒトＭＣＳＰのＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号は、Ｑ６ＵＶＫ１（バージョン番号１１８、配列バージョン２；配列番号２３７（タンパク質）及び２３６（ＤＮＡ）である）と相互作用する／これに結合する、三価の二重特異性抗体を構築した。プラスミド／ベクターである「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」（配列番号２１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる配列番号２２）、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」（配列番号２４（タンパク質）及び２３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」（配列番号２６（タンパク質）及び２５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」（配列番号２８（タンパク質）及び２７（ＤＮＡ））；また、図９ならびに表１及び２も参照されたい）を含む／これらからなる三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（配列番号２３３）と、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４１（ＤＮＡ）及び４２（タンパク質）を発現させる、形質導入された腫瘍特異的Ｔ細胞（好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞）との組合せによる腫瘍の処置は、驚くべきことに、非特異的細胞傷害を、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ（前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインを表す）と相互作用する／これに結合する、２つの結合ドメインと、マウスＥｐＣＡＭ（前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインを表す）と相互作用する／これに結合する、２つの結合ドメインとを有する、四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））を使用する実験と比較して消失させる。図６及び７を参照されたい。さらに、三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；表３及び４も参照されたい）の機能性はまた、ヒト腫瘍系においても示された。例えば、図１７を参照されたい。したがって、驚くべきことに、かつ、予測外に、本発明の融合タンパク質を形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞は、三価の二重特異性抗体分子を使用することにより特異的に刺激することができ、前記三価の二重特異性抗体分子により、腫瘍細胞に動員しうることが見出された。したがって、本発明では、驚くべきことに、かつ、予測外に、三価の二重特異性抗体分子の、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、膜貫通アンカリングドメイン、Ｔ細胞シグナル伝達刺激ドメイン（及び、任意選択で、少なくとも１つのシグナル伝達共刺激ドメイン）を含む／これらからなる融合タンパク質を形質導入されたＴ細胞とのペアリングは、特異的活性化と、腫瘍細胞のＭＨＣ非依存性溶解とを結果としてもたらすことが示された。Ｔ細胞は、三価の二重特異性抗体分子の非存在下で、不活性であるので、この手法はまた、従来のＴ細胞ベースの手法を上回る、著明な安全性の利点も保有し、それらのアベイラビリティーは、選び出された抗体分子フォーマットにより制御することができる（すなわち、半減期を短くするための低分子、及びこの逆）。

【0011】

したがって、本発明は、（Ａ）処置される対象から得られた、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞に形質導入するための、融合タンパク質をコードする核酸分子であって、以下のドメイン：（１）前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、（２）膜貫通アンカリングドメイン、（３）任意選択で、少なくとも１つのシグナル伝達共刺激ドメイン、及び（４）シグナル伝達刺激ドメインとを有する核酸分子と、（Ｂ）三価の二重特異性抗体分子であって、（ｉ）（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び（ｉｉｉ）（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）、すなわち、前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメインを含む三価の二重特異性抗体分子とを含むキットに関する。

【0012】

本発明の文脈では、「融合タンパク質」は、異なる供給源に由来するポリペプチド部分から作られたタンパク質に関する。したがって、「融合タンパク質」はまた、「キメラタンパク質」としても理解されうる。通例、融合タンパク質は、元来、別個のタンパク質をコードした、２つ又はこれを超える遺伝子（又は好ましくは、ｃＤＮＡ）の接合を介して創出されたタンパク質である。この融合遺伝子（又は融合ｃＤＮＡ）の翻訳は、好ましくは、元のタンパク質の各々に由来する機能的特性を伴う、単一のポリペプチドを結果としてもたらす。組換え融合タンパク質は、生物学的研究又は生物学的治療剤における使用のための、組換えＤＮＡ技術により、人工的に創出される。本発明の融合タンパク質の作製についてのさらなる詳細については、本明細書の下記で記載する。

【0013】

本発明の文脈では、「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語を、アミノ酸残基のポリマーを指すように、互換的に使用する。用語はまた、１又は複数のアミノ酸残基が、人工的な化学的模倣物、又は対応する、天然に存在するアミノ酸であるアミノ酸ポリマーのほか、天然に存在するアミノ酸ポリマーにも適用される。したがって、本発明の文脈では、「ポリペプチド」という用語は、ペプチド（アミド）結合により連結されたアミノ酸モノマーの鎖を含むか又はこれからなる分子に関する。ペプチド結合とは、１つのアミノ酸のカルボキシル基が、別のアミノ酸のアミノ基と反応する場合に形成される、共有結合的な化学結合である。本明細書の「ポリペプチド」は、長さが規定された分子に制約されない。したがって、本明細書の「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸残基が共有結合的なペプチド結合により連結されたアミノ酸鎖を包摂する、ペプチド、オリゴペプチド、タンパク質、又はポリペプチドに関する。しかし、本明細書の「ポリペプチド」という用語はまた、アミノ酸及び／又はペプチド結合を、機能的なアナログで置きかえた、このようなタンパク質／ポリペプチドのペプチド模倣物も包摂する。ポリペプチドという用語はまた、ポリペプチドの修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化なども指し、これらを除外しない。当該技術分野では、このような修飾について、十分に記載されている。

【0014】

「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸及び合成アミノ酸のほか、天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸アナログ及びアミノ酸模倣物を指す。天然に存在するアミノ酸とは、遺伝子コードによりコードされるアミノ酸のほか、後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート、及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸アナログとは、天然に存在するアミノ酸と同じ塩基性化学的構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチルメチオニンスルホニウム結合したα－炭素を有する化合物を指す。このようなアナログは、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）、又は修飾ペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ、基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なるが、天然に存在するアミノ酸と同様の形で機能する構造を有する化合物を指す。本明細書では、それらの、一般に公知の３文字記号によりアミノ酸に言及することもでき、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨されている、１文字記号によりアミノ酸に言及することもできる。

【0015】

本発明の文脈では、融合タンパク質は、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインの断片／ポリペプチド部分を含みうる。したがって、本明細書で提示される融合タンパク質内に含まれる、「Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン」は、本明細書で規定される、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の、完全長の細胞外ドメインの断片／ポリペプチド部分である。本発明の文脈では、かつ、本明細書の上記で説明した通り、本発明の、三価の二重特異性抗体分子は、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに結合する／これと相互作用する。

【0016】

本発明の、概念実証としての、例示的な実施態様では、本明細書で、配列番号１５１（ＤＮＡ）及び１５２（タンパク質）として示される、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩのＮＣＢＩ参照配列は、ＮＭ＿２０１２８３．１（バージョン：ＮＭ＿２０１２８３．１；ＧＩ：４１３２７７３３）である）の断片／ポリペプチド部分を含むか、又は本明細書で、配列番号１５３（ＤＮＡ）及び１５４（タンパク質）として示される、ヒトＣｒｉｐｔｏ（ヒトＣｒｉｐｔｏのＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号は、Ｐ１３３８５（バージョン番号１５１及び配列のバージョン１）である）の断片／ポリペプチド部分を含む融合タンパク質が提供される。したがって、本発明の文脈では、本明細書で記載される融合タンパク質は、配列番号１５２（配列番号１５１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）に示される、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩのアミノ酸配列を含みうる／これからなりうる。代替的に、本発明の文脈では、融合タンパク質は、配列番号２３２（配列番号２３１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）に示される、ヒトｄｅｌ－ｈＥＧＦＲｖＩＩＩのアミノ酸配列を含みうる／これからなりうる。さらに、本発明の文脈では、本明細書で記載される融合タンパク質は、配列番号１５４（配列番号１５３に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）に示される、ヒトＣｒｉｐｔｏのアミノ酸配列を含みうる／これからなりうる。したがって、より好ましくは、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインは、配列番号５２に示されるアミノ酸配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ）（配列番号５１に示されたＤＮＡ配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ）によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。本発明の、代替的な好ましい実施態様では、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインは、配列番号２３２に示されるアミノ酸配列（配列番号２３１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。代替的に、本発明の文脈では、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインは、配列番号７６又は７８に示されるアミノ酸配列（配列番号７５又は７７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。本発明の文脈では、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインは、配列番号６２に示されるアミノ酸配列（ヒトＣｒｉｐｔｏ）（配列番号６１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。本発明の文脈ではまた、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＣｒｉｐｔｏの、小型の断片／短い断片も使用することができる。したがって、本発明の文脈では、配列番号５２、２３２、７６、若しくは７８に描示されるＥＧＦＲｖＩＩＩ、又は配列番号６２に描示されるＣｒｉｐｔｏの、小型の断片／短い断片を使用することができる。特に、前記細胞外ドメイン（すなわち、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＣｒｉｐｔｏ）の、任意の小片を、この小片に、本明細書で規定される二重特異性抗体が結合するという条件で、本発明の融合タンパク質内で使用することができる。このような断片ならば、本発明の融合タンパク質を介して、Ｔ細胞の活性化、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を誘発することが可能であろう。好ましくは、本発明の融合タンパク質の細胞外ドメインは、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ又はヒトＣｒｉｐｔｏに由来する。このような細胞外部分の例は、例えば、配列番号５２に示されるアミノ酸配列（配列番号５１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）、配列番号２３２（配列番号２３１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）、又は配列番号７６（配列番号７５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を有する、ＥＧＦＲｖＩＩＩの細胞外ドメインである。さらに、本発明の文脈では、Ｃｒｉｐｔｏの細胞外ドメインは、配列番号６２に示されるアミノ酸配列（配列番号６１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含みうる／これからなりうる。

【0017】

本発明の文脈では、本発明の融合タンパク質の膜貫通アンカリングドメインは、哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さないことにより特徴を明らかにされうる。本発明の文脈では、プロテアーゼは、本発明の融合タンパク質の膜貫通アンカリングドメインのアミノ酸配列を加水分解することが可能なタンパク質分解酵素を指す。プロテアーゼという用語は、エンドペプチダーゼ及びエクソペプチダーゼの両方を含む。本発明の文脈では、とりわけ、ＣＤ命名法により定められる膜貫通ドメインの、任意の細胞外部分を使用して、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体に結合すると、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化させる、本発明の融合タンパク質を作出することができる。このような膜貫通アンカリングドメインの例は、例えば、本明細書の配列番号５４（配列番号５３に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）に示されるアミノ酸配列を有する、ＣＤ２８の膜貫通ドメインである。しかし、本発明の文脈では、ヒト配列が、最も好ましいため、融合タンパク質の膜貫通アンカリングドメインは、配列番号６６に示されるアミノ酸配列（配列番号６５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。本発明の文脈では、本発明の融合タンパク質の膜貫通ドメインは、配列番号８０に示されるアミノ酸配列（配列番号７９に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含みうる／これからなりうる。本明細書で提示される融合タンパク質が、配列番号８０に示される、ＥＧＦＲｖＩＩＩの膜貫通ドメインを含む場合、融合タンパク質は、配列番号８２（配列番号８１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）に示されるアンカリングドメインを含みうる。本発明の、概念実証としての、例示的な実施態様では、本明細書の配列番号５２（配列番号５１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）、配列番号２３２（配列番号２３１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）、配列番号７６（配列番号７５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）、又は配列番号７８（配列番号７７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）に示される、ＥＧＦＲｖＩＩＩの断片／ポリペプチド部分を含むか又はこれからなり、本明細書の配列番号１５６（配列番号１５５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）に示される、ＣＤ２８（ヒトＣＤ２８のＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号は、Ｐ１０７４７（バージョン番号１７３及び配列のバージョン１）である）の断片／ポリペプチド部分を含む融合タンパク質が提供される。本発明の文脈では、ＣＤ２８の、任意の部分／断片を、膜貫通アンカリングドメインとして使用することができる。代替的に、とりわけ、ＣＤ命名法により提示される膜貫通ドメインを有する、任意のタンパク質を、本発明の融合タンパク質のアンカリングドメインとして使用することができる。本発明に従い、このような哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さない、膜貫通アンカリングドメインを使用して、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）の活性化を誘発することができる。本発明のさらなる実施態様では、融合タンパク質の、哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さない、膜貫通アンカリングドメインは、配列番号５４に示されるアミノ酸配列（配列番号５３に示されたＤＮＡ配列（マウス）によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。しかし、より好ましくは、本発明の融合タンパク質は、ヒト由来のポリペプチドを含む。したがって、より好ましくは、本発明の融合タンパク質内に含まれるポリペプチドは、配列番号６６に示されるアミノ酸配列（配列番号６５に示されたＤＮＡ配列（ヒト）によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。

【0018】

上記で記載した通り、本明細書で提示される融合タンパク質は、配列番号１５６に示されるヒト完全長のＣＤ２８タンパク質（配列番号１５５に示されたｃＤＮＡ配列）によりコードされる）のアミノ酸１５３－１７９、１５４－１７９、１５５－１７９、１５６－１７９、１５７－１７９、１５８－１７９、１５９－１７９、１６０－１７９、１６１－１７９、１６２－１７９、１６３－１７９、１６４－１７９、１６５－１７９、１６６－１７９、１６７－１７９、１６８－１７９、１６９－１７９、１７０－１７９、１７１－１７９、１７２－１７９、１７３－１７９、１７４－１７９、１７５－１７９、１７６－１７９、１７７－１７９、又は１７８－１７９に位置する、ＣＤ２８の膜貫通アンカリングドメインを含みうる。したがって、本発明の文脈では、膜貫通アンカリングドメインは、配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むか又はこれからなりうる。

【0019】

上記で記載した通り、本明細書で提示される融合タンパク質は、任意選択で、Ｔ細胞に、さらなる活性をもたらす、少なくとも１つの共刺激ドメイン（下記を参照されたい）を含む。本明細書で提示される融合タンパク質は、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）又はヒトの、ＣＤ２８（ヒトＣＤ２８のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ１０７４７（バージョン番号１７３、配列ナンバー１）であり、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＣＤ２８のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ３１０４１（バージョン番号１３４、配列ナンバー２）である）、ＣＤ１３７（ヒトＣＤ１３７のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｑ０７０１１（バージョン番号１４５、配列ナンバー１）であり、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＣＤ１３７のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ２０３３４（バージョン番号１３９、配列ナンバー１）である）、ＯＸ４０（ヒトＯＸ４０のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ２３５１０（バージョン番号１３８、配列ナンバー１）であり、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＯＸ４０のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ４３４８８（バージョン番号１１９、配列ナンバー１）である）、ＩＣＯＳ（ヒトＩＣＯＳのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｑ９Ｙ６Ｗ８（バージョン番号１２６、配列ナンバー１）である）；マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＩＣＯＳのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｑ９ＷＶ４０（主要引用寄託番号）又はＱ９ＪＬ１７（副次的引用寄託番号）、バージョン番号１０２及び配列バージョン２である）、ＣＤ２７（ヒトＣＤ２７のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ２６８４２（バージョン番号１６０、配列ナンバー２）であり、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＣＤ２７のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ４１２７２（バージョン番号１３７、配列バージョン１）である）、４－１－ＢＢ（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）４－１－ＢＢのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ２０３３４（バージョン番号１４０、配列バージョン１）であり、ヒト４－１－ＢＢのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｑ０７０１１（バージョン番号１４６、配列バージョン）である）、又はＤＡＰ１０（ヒトＤＡＰ１０のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｑ９ＵＢＪ５（バージョン番号２５、配列バージョン１）であり、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＤＡＰ１０のＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｑ９ＱＵＪ０（主要引用寄託番号）又はＱ９Ｒ１Ｅ７（副次的引用寄託番号）、バージョン番号１０１及び配列ナンバー１である）の断片／ポリペプチド部分であるシグナル伝達共刺激ドメインを含みうる。本発明のさらなる実施態様では、本発明の融合タンパク質は、本明細書で規定されるシグナル伝達共刺激ドメインのうちの１又は複数、すなわち、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は７つを含みうる。したがって、本発明の文脈では、本発明の融合タンパク質は、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＣＤ２８、又は、好ましくは、ヒトＣＤ２８の断片／ポリペプチド部分を、第１のシグナル伝達共刺激ドメインとして含むことが可能であり、第２のシグナル伝達共刺激ドメインは、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）、又は、好ましくは、ヒトのＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１－ＢＢ、及びＤＡＰ１０からなる群から選択される。添付の実施例に例示されるように、本発明の融合タンパク質内に含まれるシグナル伝達共刺激ドメインは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列（配列番号５５に示されたＤＮＡ配列（マウス）によりコードされる）、及び／又は配列番号６０に示されるアミノ酸配列（配列番号５９に示されたＤＮＡ配列（マウス）によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。しかし、より好ましくは、本発明の融合タンパク質は、ヒト由来のポリペプチドを含む。したがって、より好ましくは、本発明の融合タンパク質は、ヒト由来のポリペプチドを含む。したがって、より好ましくは、本発明の融合タンパク質内に含まれるシグナル伝達共刺激ドメインは、配列番号６８に示されるアミノ酸配列（配列番号６７に示されたＤＮＡ配列（ヒト）によりコードされる）、及び／又は配列番号７２に示されるアミノ酸配列（配列番号７１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。

【0020】

したがって、任意選択で、本明細書で提示される融合タンパク質内に含まれうるシグナル伝達共刺激ドメインは、完全長のＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１－ＢＢ、又はＤＡＰ１０の断片／ポリペプチド部分である。本明細書では、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）完全長のＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１－ＢＢ、又はＤＡＰ１０のアミノ酸配列は、配列番号１５８（ＣＤ２８）、１６２（ＣＤ１３７）、１６６（ＯＸ４０）、１７０（ＩＣＯＳ）、１７４（ＣＤ２７）、２０３（４－１－ＢＢ）、又は１７８（ＤＡＰ１０）（配列番号１５７（ＣＤ２８）、１６１（ＣＤ１３７）、１６５（ＯＸ４０）、１６９（ＩＣＯＳ）、１７３（ＣＤ２７）、２２７（４－１－ＢＢ）、又は１７７（ＤＡＰ１０）に示されたＤＮＡ配列によりコードされるマウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）配列）として示される。しかし、本発明の文脈では、ヒト配列が、最も好ましいため、任意選択で、本明細書で提示される融合タンパク質内に含まれうるシグナル伝達共刺激ドメインは、ヒト完全長のＣＤ２９、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１－ＢＢ、又はＤＡＰ１０の断片／ポリペプチド部分である。本明細書では、ヒト完全長のＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１－ＢＢ、又はＤＡＰ１０のアミノ酸配列は、配列番号１５６（ＣＤ２８）、１６０（ＣＤ１３７）、１６４（ＯＸ４０）、１６８（ＩＣＯＳ）、１７２（ＣＤ２７）、２０４（４－１－ＢＢ）、又は１７６（ＤＡＰ１０）（配列番号１５５（ＣＤ２８）、１５９（ＣＤ１３７）、１６３（ＯＸ４０）、１６７（ＩＣＯＳ）、１７１（ＣＤ２７）、２２８（４－１－ＢＢ）、又は１７５（ＤＡＰ１０）に示されたＤＮＡ配列によりコードされるヒト配列）として示される。

【0021】

本明細書で提示される融合タンパク質は、ＣＤ２８の、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが含まれるという条件で、共刺激ドメインとしてのＣＤ２８の断片を含みうる。特に、ＣＤ２８の、任意の部分／断片は、ＣＤ２８のシグナル伝達モチーフのうちの少なくとも１つが含まれる限りにおいて、本発明の融合タンパク質に適する。例えば、本発明の融合タンパク質内に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列（配列番号５５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。本発明では、共刺激ドメインとして機能する、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドの細胞内ドメインに由来する配列であって、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を有する配列を含みうる。しかし、より好ましくは、本発明の融合タンパク質は、ヒト由来のポリペプチドを含む。例えば、本発明の融合タンパク質内に含まれ得る、ヒトＣＤ２８の断片／ポリペプチド部分は、配列番号６８に示されるアミノ酸配列（配列番号６７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。したがって、本発明の文脈では、融合タンパク質は、配列番号６８に示される配列、又は配列番号６８と比較して、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０カ所の置換、欠失、若しくは挿入を有し、シグナル伝達共刺激活性を有することにより特徴を明らかにされる配列を含む。シグナル伝達共刺激活性は、例えば、ＥＬＩＳＡ（ＩＬ－２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）により測定される、サイトカイン放出の増強、増殖活性の増強（細胞数の増大により測定される）、又はＬＤＨ放出アッセイにより測定される、溶解活性の増強により決定することができる。

【0022】

上述の通り、本発明の実施態様では、融合タンパク質の共刺激ドメインは、ヒトＣＤ２８遺伝子（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１０７４７（寄託番号、エントリーバージョン１７３及び配列のバージョン１））から導出することができ、形質導入されたＴ細胞など、本明細書で記載される形質導入細胞の、サイトカイン産生、増殖、及び溶解活性として規定されるＣＤ２８活性をもたらす。ＣＤ２８活性は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）又はインターロイキン２（ＩＬ－２）などのサイトカインについてのＥＬＩＳＡ又はフローサイトメトリーを介する、サイトカインの放出、例えば、ｋｉ６７の測定により測定されるＴ細胞の増殖、フローサイトメトリーによる細胞の定量化（下記の添付の実施例で記載される）、又は標的細胞のリアルタイムの立体障害測定（例えば、Thakurら、Biosens Bioelectron.、35 (1) (2012)、503-506；Krutzikら、Methods Mol Biol.、699(2011)、179-202；Ekkensら、Infect Immun.、75 (5) (2007)、2291-2296；Geら、Proc Natl Acad Sci U S A.、99 (5) (2002)、2983-2988；Duewellら、Cell Death Differ.、21 (12) (2014)、1825-1837、Cell Death Differ.、21 (12) (2014)、161における正誤表において記載されている、例えば、ＩＣＥＬＬｌｉｇｅｎｃｅ測定器を使用することによる）により評価される溶解活性により測定することができる。シグナル伝達共刺激ドメインであるＰＹＡＰ（配列番号１５６（配列番号１５５に示されたＤＮＡ配列によりコードされるアミノ酸（ＡＡ）２０８－２１１）及びＹＭＮＭ（配列番号１５６のＡＡ１９１－１９４）は、ＣＤ２８ポリペプチドの機能、及び上記で列挙した機能的な効果に有益である。ＹＭＮＭドメインのアミノ酸配列を、配列番号１２２に示し、ＰＹＡＰドメインのアミノ酸配列を、配列番号１２１に示す。したがって、本発明の融合タンパク質内で、ＣＤ２８ポリペプチドは、好ましくは、ＣＤ２８ポリペプチドの細胞内ドメインに由来する配列であって、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を有する配列を含む。本発明の文脈では、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を有する、ＣＤ２８ポリペプチドの細胞内ドメインは、例えば、形質導入されたＴ細胞など、本明細書で記載される形質導入細胞の、サイトカイン産生、増殖、及び溶解活性として規定されるＣＤ２８活性により特徴を明らかにされる。したがって、本発明の文脈では、本発明の融合タンパク質のシグナル伝達共刺激ドメインは、配列番号６８（ヒト）（配列番号６７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）、又は配列番号５６（マウス（ｍｏｕｓｅ／ｍｕｒｉｎｅ））（配列番号５５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）のアミノ酸配列を有する。しかし、本発明の融合タンパク質内で、これらのドメインの一方又は両方を、それぞれ、ＦＭＮＭ（配列番号１２３）及び／又はＡＹＡＡ（配列番号１２４）に突然変異させることができる。これらの突然変異のうちのいずれかは、増殖するその能力に影響を及ぼさずに、サイトカインを放出する融合タンパク質の能力を低減し、形質導入細胞の生存を延長し、したがって、治療可能性を延長するのに使用しうるので有利である。又は、言い換えれば、このような非機能的な突然変異は、本明細書で提示される融合タンパク質を形質導入した細胞の存続を、インビボにおいて増強することが好ましい。しかし、これらのシグナル伝達モチーフは、本明細書で提示される融合タンパク質の細胞内ドメイン内の任意の部位において存在しうる。

【0023】

したがって、上述の通り、本発明の融合タンパク質は、ＣＤ２８の、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが含まれるという条件で、共刺激ドメインとしてのＣＤ２８の断片を含みうる。特に、ＣＤ２８の、任意の部分／断片は、ＣＤ２８のシグナル伝達モチーフ、すなわち、ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）のうちの少なくとも１つが含まれる限りにおいて、共刺激ドメインとして適する。例えば、共刺激ドメインとして使用されるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号６６に示されるアミノ酸配列（配列番号６５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。本発明では、共刺激ドメインとして機能する、ＣＤ２８の細胞内ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドの細胞内ドメインに由来する配列であって、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を有する配列を含みうる。本発明の文脈では、ＣＤ２８ポリペプチドのシグナル伝達共刺激ドメインは、本発明の融合タンパク質の共刺激ドメインが、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を含むという条件で、任意の長さでありうる。したがって、本発明の文脈では、融合タンパク質のＣＤ２８のシグナル伝達共刺激ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する配列であって、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を有する配列を含みうる。例えば、本発明の融合タンパク質内に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号５６に示されるアミノ酸配列（配列番号５５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。前述の通り、融合タンパク質は、好ましくは、ヒト由来のポリペプチドを含む。例えば、本発明の融合タンパク質内に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号６６に示されるアミノ酸配列（配列番号６５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。本発明の文脈では、ＣＤ２８ポリペプチドに由来するシグナル伝達共刺激ドメインは、本発明の融合タンパク質のシグナル伝達共刺激ドメインが、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を含むという条件で、任意の長さでありうる。したがって、本発明の文脈では、融合タンパク質のＣＤ２８の共刺激ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する配列であって、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を有する配列を含みうる。例えば、本発明の融合タンパク質内に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号５６（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ））又は６６（ヒト）に示されるアミノ酸配列を含むか又はこれからなりうる。本発明の文脈では、融合タンパク質のＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号６６（ヒト）のアミノ酸配列を有する。本発明の文脈では、融合タンパク質は、配列ＹＭＮＭ（配列番号１２２）及び／又はＰＹＡＰ（配列番号１２１）を有する、ＣＤ２８ポリペプチドの細胞内ドメインを含む。したがって、本発明の文脈では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号６６（ヒト）のアミノ酸配列を有する。

【0024】

上記で記載した通り、本明細書で提示される融合タンパク質は、Ｔ細胞の活性化と同じ手段により測定される、Ｔ細胞の活性化をもたらすシグナル伝達刺激ドメインを含む。本明細書で提示される融合タンパク質は、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）又はヒトの、ＣＤ３ｚ（ヒトＣＤ３ｚのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ２０９６３（バージョン番号１７７、配列ナンバー２であり、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＣＤ３ｚのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ２４１６１（主要引用寄託番号）又はＱ９Ｄ３Ｇ３（副次的引用寄託番号）、バージョン番号１４３及び配列ナンバー１である）、ＦＣＧＲ３Ａ（ヒトＦＣＧＲ３ＡのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ０８６３７（バージョン番号１７８、配列ナンバー２）である）、又はＮＫＧ２Ｄ（ヒトＮＫＧ２ＤのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｐ２６７１８（バージョン番号１５１、配列ナンバー１）であり、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＮＫＧ２ＤのＵｎｉＰｒｏｔエントリーは、Ｏ５４７０９（バージョン番号１３２、配列ナンバー２）である）の断片／ポリペプチド部分であるシグナル伝達刺激ドメインを含みうる。

【0025】

したがって、本明細書で提示される融合タンパク質内に含まれるシグナル伝達刺激ドメインは、完全長の、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、又はＮＫＧ２Ｄの断片／ポリペプチド部分でありうる。本明細書では、マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）完全長の、ＣＤ３ｚ又はＮＫＧ２Ｄのアミノ酸配列は、配列番号１８０（ＣＤ３ｚ）又は１８２（ＮＫＧ２Ｄ）（配列番号１７９（ＣＤ３ｚ）又は１８１（ＮＫＧ２Ｄ）に示されたＤＮＡ配列によりコードされるマウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）配列）として示される。本明細書では、ヒト完全長の、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、又はＮＫＧ２Ｄのアミノ酸配列は、配列番号１８４（ＣＤ３ｚ）、１８６（ＦＣＧＲ３Ａ）又は１８８（ＮＫＧ２Ｄ）（配列番号１８３（ＣＤ３ｚ）、１８５（ＦＣＧＲ３Ａ）又は１８７（ＮＫＧ２Ｄ）に示されたＤＮＡ配列によりコードされるヒト配列）として示される。本発明の融合タンパク質は、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが含まれるという条件で、刺激ドメインとしてのＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、又はＮＫＧ２Ｄの断片を含みうる。特に、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、又はＮＫＧ２Ｄの、任意の部分／断片は、少なくとも１つのシグナル伝達モチーフが含まれる限りにおいて、刺激ドメインとして適する。しかし、より好ましくは、本発明の融合タンパク質は、ヒト由来のポリペプチドを含む。したがって、より好ましくは、本明細書で提示される融合タンパク質は、本明細書の配列番号１８４（ＣＤ３ｚ）、１８６（ＦＣＧＲ３Ａ）又は１８８（ＮＫＧ２Ｄ）に示されるアミノ酸配列（配列番号１８３（ＣＤ３ｚ）、１８５（ＦＣＧＲ３Ａ）又は１８７（ＮＫＧ２Ｄ）に示されたＤＮＡ配列によりコードされるヒト配列）を含む。例えば、本発明の融合タンパク質内に含まれうる、ヒトＣＤ３ｚの断片／ポリペプチド部分は、配列番号７０に示されるアミノ酸配列（配列番号６９に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。したがって、本発明の文脈では、融合タンパク質は、配列番号７０に示される配列、又は配列番号７０と比較して、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、若しくは３０カ所の置換、欠失、若しくは挿入を有し、シグナル伝達刺激活性を有することにより特徴を明らかにされる配列を含む。シグナル伝達刺激活性は、例えば、ＥＬＩＳＡ（ＩＬ－２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）により測定される、サイトカイン放出の増強、増殖活性の増強（細胞数の増大により測定される）、又はＬＤＨ放出アッセイにより測定される、溶解活性の増強により決定することができる。

【0026】

さらに、本明細書で提示される融合タンパク質は、リンカー（又は「スペーサー」）を含みうる。リンカーは、通例、最大で２０アミノ酸の長さを有するペプチドである。したがって、本発明の文脈では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０アミノ酸の長さを有しうる。例えば、本明細書で提示される融合タンパク質は、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さない、膜貫通アンカリングドメイン、シグナル伝達共刺激ドメイン、及び／又は刺激ドメインの間のリンカーを含みうる。このようなリンカーは、融合タンパク質の異なるポリペプチド（すなわち、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さない、膜貫通アンカリングドメイン、シグナル伝達共刺激ドメイン、及び／又は刺激ドメイン）が、独立してフォールドし、予測される通りに挙動する可能性を大きくしうるという利点を有する。したがって、本発明の文脈では、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さない、膜貫通アンカリングドメイン、シグナル伝達共刺激ドメイン、及び刺激ドメインは、単一鎖の多重機能性ポリペプチド内に含まれうる。単一鎖の融合コンストラクトは、例えば、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さない、膜貫通アンカリングドメイン、シグナル伝達共刺激ドメイン、及び／又は刺激ドメインを含むポリペプチドからなりうる。

【0027】

さらに、本明細書で提示される融合タンパク質は、抗体により認識される部分と、膜貫通ドメインとの間のスペーサーとして作用するヒンジドメインを含有しうる。ヒンジドメインは、任意の長さであることが可能であり、融合タンパク質上の、三価の二重特異性抗体分子により認識される抗原の、同じ細胞外部分に属する場合もあり、異なる細胞外部分に属する場合もある。本発明の文脈では、細胞外タンパク質の、任意の細胞外部分を、膜貫通ドメインと、抗体の結合部位との間のヒンジドメインとして使用しうるであろう。候補ヒンジドメインは、ＣＤ命名法による任意のメンバーを含む。したがって、本発明の文脈では、とりわけ、ＣＤ命名法により提示される、細胞外ドメインの細胞外部分を有する、任意のタンパク質を、本発明の融合タンパク質内のヒンジドメインとして使用することができる。このようなヒンジドメインの例は、例えば、本明細書の配列番号６４（配列番号６３に示されたＤＮＡ配列（マウス）によりコードされる）に示されるアミノ酸配列を有する、ＣＤ８の細胞外部分でありうる。しかし、本発明の文脈では、ヒト配列が、最も好ましいため、融合タンパク質のヒンジドメインは、配列番号７４に示されるアミノ酸配列（配列番号７３に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を含むか又はこれからなりうる。本明細書で提示される融合タンパク質が、配列番号６４（マウス）又は７４（ヒト）に描示されたヒンジドメインを含むか、又はこれらからなる場合、本発明の融合タンパク質は、膜貫通アンカリングドメインを有さない。したがって、本明細書で提示される融合タンパク質が、配列番号６４又は７４に描示されたヒンジドメインを含むか、又はこれらからなる場合、融合タンパク質は、以下のドメイン：（１）前記Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインと、（２）配列番号６４又は７４に描示されるヒンジドメインと、（３）任意選択で、少なくとも１つのシグナル伝達共刺激ドメインと、（４）シグナル伝達刺激ドメインとを含む。例示的に述べると、配列番号４６（配列番号４５に示されたＤＮＡ配列によりコードされるマウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）Ｃｒｉｐｔｏ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）で描示される融合タンパク質は、配列番号６４で描示されるヒンジドメインを含む。さらに、配列番号１２０（配列番号１１９に示されたＤＮＡ配列によりコードされるヒトＣｒｉｐｔｏ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）で描示される融合タンパク質は、配列番号７４で描示されるヒンジドメインを含む。本発明の別の実施態様では、本発明の融合タンパク質は、ヒンジドメインを有さないことにより特徴を明らかにされる。例示的に述べると、配列番号４２（配列番号４１に示されたＤＮＡ配列によりコードされるマウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）、配列番号４４（配列番号４３に示されたＤＮＡ配列によりコードされるマウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ）、配列番号４８（配列番号４７に示されたＤＮＡ配列によりコードされるヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）、配列番号５０（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号４９に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））で描示される融合タンパク質は、ヒンジドメインを有さないことにより特徴を明らかにされる。

【0028】

本明細書で提示される融合タンパク質は、配列番号４２に示されるアミノ酸配列（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））、配列番号４４（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号４３に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））、又は配列番号４６（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）Ｃｒｉｐｔｏ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。最も好ましくは、本明細書で提示される融合タンパク質は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））、配列番号５０（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号４９に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））、又は配列番号１２０（ヒトＣｒｉｐｔｏ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号１１９に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか、又はこれらからなる。したがって、好ましい実施態様では、本発明は、配列番号４８、配列番号５０、又は配列番号１２０のアミノ酸配列を有しうる融合タンパク質に関する。

【0029】

本明細書で提示される融合タンパク質が、Ｃｒｉｐｔｏの断片を含む場合、融合タンパク質は、リーダー配列を含みうる。このようなリーダー配列は、タンパク質を、Ｔ細胞膜の表面にもたらす。例えば、本明細書で提示される融合タンパク質内で、リーダー配列は、配列番号２０６に示されるアミノ酸配列（配列番号２０５に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）を有しうる。

【0030】

したがって、本発明の文脈では、キットは、配列番号２３５に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４２に示されるアミノ酸配列（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。代替的に、キットは、配列番号２３３に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４２に示されるアミノ酸配列（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。さらに、本発明の文脈では、キットは、配列番号２３４に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むか又はこれからなりうる。さらに、本発明の文脈では、キットは、配列番号２３５に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４４に示されるアミノ酸配列（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号４３に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。代替的に、キットは、配列番号２３３に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４４に示されるアミノ酸配列（マウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号４３に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。さらに、キットは、配列番号２３４に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むか又はこれからなりうる。しかし、本発明の文脈では、ヒト配列が、最も好ましいため、本発明のキットは、配列番号２３５に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４８に示されるアミノ酸配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。代替的に、本発明の文脈では、本発明のキットは、配列番号２３５に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号５０に示されるアミノ酸配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号４９に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。さらに、本発明のキットは、配列番号２３３に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４８に示されるアミノ酸配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。代替的に、本発明のキットは、配列番号２３３に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号５０に示されるアミノ酸配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号４９に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。さらに、本発明のキットは、配列番号２３４に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号５０に示されるアミノ酸配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ）を含むか又はこれからなりうる。さらに、本発明のキットは、配列番号２３４に示される、三価の二重特異性抗体分子と組み合わされた、配列番号４８に示されるアミノ酸配列（ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））を含むか又はこれからなりうる。

【0031】

さらに、本発明のキットの部分は、バイアル内又はボトル内に、個別に包装することもでき、又はコンテナ内若しくはマルチコンテナユニット内に、組合せで包装することもできる。さらに、本発明のキットは、患者細胞、好ましくは、本明細書で記載されるＴ細胞に形質導入し、ＧＭＰ（欧州委員会により、http://ec.europa.eu/health/documents/eudralex/index_en.htm下で公表されている「医薬品及び医薬部外品の製造管理及び品質管理の基準」のためのガイドラインにおいて記載されている、「医薬品及び医薬部外品の製造管理及び品質管理の基準」）条件下でインキュベートしうる、（閉止）バッグによる細胞インキュベーション系を含む。さらに、本発明のキットは、単離された／得られた患者Ｔ細胞に形質導入し、ＧＭＰ下でインキュベートしうる、（閉止）バッグによる細胞インキュベーション系を含む。さらに、本発明の文脈では、キットはまた、本明細書で記載される融合タンパク質をコードするベクター、及び／又は本明細書の上記で記載したＴ細胞受容体をコードする核酸分子も含みうる。本発明のキットは、特に、本発明の方法を実行するために使用しうると有利であり、本明細書で言及される、様々な適用であって、例えば、研究ツール又は医学的ツールとしての適用において援用しうるであろう。キットの製造は、当業者に公知の、標準的な手順に従うことが好ましい。

【0032】

この文脈では、本明細書で使用される「三価の二重特異性抗体分子」という用語は、１つ又は２つの結合ドメインを介して、本明細書で記載される融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、前記Ｔ細胞内及び／又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに結合することが可能であり、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する（内因的に発現する）腫瘍特異的抗原に対する、残りの結合ドメインを介して、標的細胞の消失／溶解を誘導することが可能な二重特異性抗体分子に関する。本明細書で記載される融合タンパク質の細胞外ドメインの結合は、このＴ細胞を活性化させ、それらを、三価で二重特異性の結合性コンストラクトを介して、腫瘍細胞と、物理的に接触させる。形質導入されていないＴ細胞又は内因性のＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）は、三価で二重特異性の結合性コンストラクトの影響を受けないままである。したがって、本発明の、三価の二重特異性抗体分子は、インビボ及び／又はインビトロにおいて、標的細胞（腫瘍細胞）を溶解させる能力を有する。対応する標的細胞は、本発明の、三価の二重特異性抗体分子の、少なくとも１つ、好ましくは、２つの結合ドメインにより認識される、表面分子、すなわち、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原を発現させる細胞を含む。本発明の文脈では、このような表面分子の特徴を明らかにする。したがって、本発明の文脈では、三価の二重特異性抗体分子は、３つの結合ドメインだけを有する。これは、本発明の文脈では、「－を含むこと」という用語が、３つを超える結合ドメインを有する、二重特異性抗体分子を対象としないことを意味する。

【0033】

標的細胞の溶解は、当該技術分野で公知の方法により検出することができる。したがって、このような方法は、特に、生理的インビトロアッセイを含む。このような生理学的アッセイは、例えば、細胞膜完全性の喪失により、細胞死をモニタリングしうる（例えば、ＦＡＣＳベースのヨウ化プロピジウムアッセイ、トリパンブルーインフラックスアッセイ、光度測定酵素放出アッセイ（ＬＤＨ）、放射測定５１Ｃｒ放出アッセイ、蛍光測定ユーロピウム放出、及びカルセインＡＭ放出アッセイ）。さらなるアッセイは、例えば、光度測定ＭＴＴ、ＸＴＴ、ＷＳＴ－１、及びａｌａｍａｒＢｌｕｅアッセイ、放射測定３Ｈ－Ｔｈｄ組込みアッセイ、細胞分裂活性を測定する、コロニー形成アッセイ、及びミトコンドリア膜貫通勾配を測定する蛍光測定ローダミン１２３アッセイによる、細胞生存のモニタリングを含む。加えて、アポトーシスは、例えば、ＦＡＣＳベースのホスファチジルセリン曝露アッセイ、ＥＬＩＳＡベースのＴＵＮＥＬ試験、カスパーゼ活性アッセイ（光度測定ベース、蛍光測定ベース、又はＥＬＩＳＡベースの）、又は細胞形態の変化（収縮、膜ブレブ形成）の解析によりモニタリングすることもできる。

【0034】

本発明の文脈で使用される「に結合すること」という用語は、少なくとも２つの「抗原相互作用部位」の、互いとの結合（相互作用）を規定する。本発明に従う、「抗原相互作用部位」という用語は、特異的抗原又は抗原の特異的基との、特異的相互作用の能力を示す、ポリペプチドのモチーフを規定する。前記結合／相互作用はまた、「特異的認識」を規定するようにも理解される。本発明に従う、「特異的認識」という用語は、抗体コンストラクトが、本明細書で規定されるヒト標的分子の各々の、少なくとも２つのアミノ酸と、特異的に相互作用し、かつ／又はこれに結合することが可能であることを意味する。抗体は、同じ標的分子上の、異なるエピトープを認識し、これと相互作用し、かつ／又はこれに結合することが可能である。この用語は、抗体分子の特異性、すなわち、本明細書で規定されるヒト標的分子の特異的領域の間を弁別する、その能力に関する。抗原相互作用部位の、その特異的抗原との特異的相互作用は、例えば、抗原のコンフォメーションの変化の誘導、抗原のオリゴマー化などに起因する、シグナルの誘発を結果としてもたらしうる。したがって、抗原相互作用部位のアミノ酸配列内の特異的モチーフと、抗原とは、それらの一次構造、二次構造、又は三次構造の結果のほか、前記構造の二次的修飾の結果として、互いに結合する。

【0035】

本発明に従い使用される「特異的相互作用」という用語は、本発明の、三価で二重特異性の結合性コンストラクト（三価の二重特異性抗体分子）が、類似の構造の（ポリ）ペプチドと交差反応しないか、又は本質的に交差反応しないことを意味する。したがって、本発明の、三価の二重特異性抗体分子は、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在せず、腫瘍細胞の表面上に天然で存在する、特異的な、選択された、他の化合物、抗原、細胞表面マーカー、腫瘍マーカーなどと相互作用することが可能な、腫瘍マーカー、細胞表面マーカー、抗原に特異的に結合する／これらと相互作用する。本明細書の下記では、このような三価の二重特異性抗体分子の具体例を挙げる。

【0036】

被験コンストラクトのパネルの交差反応性は、例えば、従来の条件（例えば、Harlow及びLane、「Antibodies: A Laboratory Manual」、Cold Spring Harbor Laboratory Press、(1988)；及び「Using Antibodies: A Laboratory Manual」、Cold Spring Harbor Laboratory Press、(1999)を参照されたい）下における、二重特異性抗体コンストラクトの前記パネルの、目的の（ポリ）ペプチドのほか、多数の、多少とも（構造的及び／又は機能的に）近縁の（ポリ）ペプチドへの結合について評価することにより、調べることができる。目的の（ポリ）ペプチド／タンパク質には結合するが、目的の（ポリ）ペプチドと同じ組織、例えば、腫瘍組織の細胞が発現させる他の（ポリ）ペプチドのいずれにも結合しないか、又は本質的に結合しないコンストラクト（すなわち、抗体、（二重特異性）ｓｃＦｖｓなど）だけを、目的の（ポリ）ペプチド／タンパク質に特異的であると考え、本明細書で提示される方法に従う、さらなる研究のために選択する。これらの方法は、特に、構造的及び／又は機能的に近縁の分子による結合研究、ブロッキング研究、及び競合研究を含みうる。これらの結合研究はまた、ＦＡＣＳ解析、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）による）、分析的超遠心、等温滴定熱量測定、蛍光異方性、蛍光分光法、又は放射性標識リガンド結合アッセイも含む。さらに、細胞傷害性アッセイ及び上述のアッセイなどの生理学的アッセイも、実施することができる。したがって、抗原相互作用部位の、特異的抗原との特異的相互作用の例は、リガンドの、その受容体に対する特異性を含みうる。前記定義は、特に、その特異的受容体に結合すると、シグナルを誘導する、リガンドの相互作用を含む。対応するリガンドの例は、その特異的サイトカイン受容体と相互作用する／これに結合するサイトカインを含む。前記定義には、特に、抗原相互作用部位の、セレクチンファミリー、インテグリン、及びＥＧＦなどの増殖因子のファミリーの抗原などの抗原への結合もまた含まれる。これもまた、前記定義に特に含まれる、前記相互作用の別の例は、抗原決定基（エピトープ）の、抗体の抗原結合部位との相互作用である。

【0037】

「に結合すること」という用語は、直鎖状エピトープに関するだけでなく、また、ヒト標的分子又はこの部分の２つの領域からなる、コンフォメーションエピトープ、構造的エピトープ、又は不連続エピトープにも関しうる。本発明の文脈では、コンフォメーションエピトープは、ポリペプチドが、天然タンパク質にフォールドする場合に、分子の表面上で一体となる一次配列内で隔てられた、２つ又はこれを超える、個別のアミノ酸配列により規定される（Sela、Science、166 (1969)、1365；及びLaver、Cell、61 (1990)、553-536）。さらに、本発明の文脈では、「に結合すること」という用語は、「と相互作用すること」という用語とも互換的に使用される。

【0038】

したがって、特異性は、当該技術分野で公知の方法、及び本明細書で記載される方法により、実験的に決定することができる。このような方法は、ウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ試験、ＲＩＡ試験、ＥＣＬ試験、ＩＲＭＡ試験、及びペプチドスキャンを含むがこれらに限定されない。

【0039】

（Ｉｇ由来の）「第１の結合ドメイン」、（Ｉｇ由来の）「第２の結合ドメイン」、又は（Ｉｇ由来の）「第３の結合ドメイン」という用語は、「免疫グロブリン由来のドメイン」に関し、具体的には、抗体分子又はこの断片、単鎖抗体、合成抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ２）’、Ｆｖ、若しくはｓｃＦｖ断片など、又はこれらのうちのいずれかの化学修飾された誘導体などの抗体断片に関する。これらの抗体分子は、異なる種に由来する場合もあり、キメラ由来の場合もある。本発明の文脈では（添付の実施例に例示される通り）、本発明の二重特異性抗体分子内に含まれる、前記（Ｉｇ由来の）第１のドメイン及び第３のドメインは、第３の（Ｉｇ由来の）「結合ドメイン」を融合させた（モノクローナル）抗体でありうる。

【0040】

本発明の「抗体」は、３つの結合ドメインを有し、二重特異性である。抗体は、単一の種に由来する完全長抗体の場合もあり、キメラ化抗体の場合もあり、ヒト化抗体の場合もある。２つを超える抗原結合ドメインを伴う抗体について、タンパク質が、２つの異なる抗原の結合ドメインを有する限りにおいて、一部の結合ドメインは、同一でありうる。

【0041】

本出願内で使用される「三価」という用語は、抗体分子内の、指定された数の結合ドメインの存在を表す。それ自体、「三価」という用語は、二重特異性抗体分子内の、３つの結合ドメインの存在を表す。三価の二重特異性抗体分子は、例えば、Bacacら、Clin. Cancer Res、1-12（DOI:10.1158/1078-0432.CCR-15-1696）、国際公開第２０１３／０２６８３３号、国際公開第２０１４／１３１７１２号、及び国際公開第２０１６／０２０３０９号において記載されている。図９、１０、及び１１に例示される通り、本発明の、三価の二重特異性抗体分子は、第１の抗原に特異的に結合する完全長抗体を含むことが可能であり、第２の抗原に特異的に結合するＦａｂ断片を含む／これらからなる。「完全長抗体」という用語は、２つの「完全長抗体重鎖」と、２つの「完全長抗体軽鎖」とからなる抗体を表す。「完全長の抗体重鎖」とは、Ｎ末端－Ｃ末端の方向において、ＶＨ－ＣＨ１－ＨＲ－ＣＨ２－ＣＨ３として略記される、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常重鎖ドメイン１（ＣＨ１）、抗体ヒンジ領域（ＨＲ）、抗体重鎖定常ドメイン２（ＣＨ２）、及び抗体重鎖定常ドメイン３（ＣＨ３）と、任意選択で、サブクラスであるＩｇＥの抗体の場合には、抗体重鎖定常ドメイン４（ＣＨ４）とからなるポリペプチドである。好ましくは、「完全長の抗体重鎖」は、Ｎ末端－Ｃ末端の方向において、ＶＨ、ＣＨ１、ＨＲ、ＣＨ２、及びＣＨ３からなるポリペプチドである。「完全長の抗体軽鎖」は、Ｎ末端－Ｃ末端の方向において、ＶＬ－ＣＬとして略記される、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）からなるポリペプチドである。抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）は、κ（カッパ）ドメイン又はλ（ラムダ）ドメインでありうる。２つの完全長抗体鎖は、ＣＬドメインと、ＣＨ１ドメインとの間、及び完全長の抗体重鎖のヒンジ領域の間の、ポリペプチド間ジスルフィド結合を介して、併せて連結される。典型的な完全長抗体の例は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）など、天然の抗体である。本発明に従う完全長抗体は、単一の種、例えば、ヒトに由来する場合もあり、キメラ化抗体又はヒト化抗体の場合もある。本発明に従う完全長抗体は、それらの両方が、同じ抗原に特異的に結合する、ＶＨ及びＶＬのペアにより、各々が形成された、２つの抗原結合部位を含む。前記完全長抗体の重鎖又は軽鎖のＣ末端とは、前記重鎖又は軽鎖のＣ末端における、最後のアミノ酸を表す。本明細書で使用される「Ｆａｂ断片」は、１つの軽鎖と、ＣＨ１と、１つの重鎖の可変領域とを含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子と共に、ジスルフィド結合を形成しえない。したがって、本発明の、三価の二重特異性抗体は、１又は複数のペプチド－リンカーを介して、さらなる抗原結合ドメイン、例えば、単鎖Ｆｖ、ＶＨドメイン、及び／若しくはＶＬドメイン、又はＦａｂを連結した、完全長抗体の定常ドメイン構造を有する抗体を含む。本発明の好ましい実施態様では、前記完全長抗体分子のＣＨ３ドメインは、例えば、国際公開第９６／０２７０１１号、Ｒｉｄｇｗａｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、９（１９９６）、６１７－６２１において、いくつかの例を伴い、詳細に記載されている「ノブ・イントゥー・ホール」技術により変更することができる。「ノブ・イントゥー・ホール」技術では、２つのＣＨ３ドメイン（完全長抗体分子の２つの重鎖の）の相互作用表面が「ノブ」でありうるのに対し、他方は、「ホール」である。ジスルフィド架橋の導入は、ヘテロダイマーをさらに安定化させ（Merchantら、Nature Biotech 16 (1998)、667-681、Atwellら、J. Mol. Biol. 270 (1997)、26-35）、収量を増大させる。

【0042】

したがって、本発明の一態様では、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子は、完全長抗体分子の、１つの重鎖のＣＨ３ドメイン、及び完全長抗体分子の、他の重鎖のＣＨ３ドメインの各々が、抗体のＣＨ３ドメインの間の元の接触面を含む接触面において遭遇するという点で、さらなる特徴を明らかにされるが、この場合、変更は、（ｉ）三価の二重特異性抗体内の、他の重鎖のＣＨ３ドメインの元の接触面に遭遇する、１つの重鎖のＣＨ３ドメインの元の接触面内で、アミノ酸残基を、大きな側鎖容積を有するアミノ酸残基で置きかえ、これにより、他の重鎖のＣＨ３ドメインの接触面内の空隙に配置させうる、１つの重鎖のＣＨ３ドメインの接触面内の突出を作出するように、１つの重鎖のＣＨ３ドメインが置換されている点と、（ｉｉ）三価の二重特異性抗体内の、第１のＣＨ３ドメインの元の接触面に遭遇する、第２のＣＨ３ドメインの元の接触面内で、アミノ酸残基を、小さな側鎖容積を有するアミノ酸残基で置きかえ、これにより、第１のＣＨ３ドメインの接触面内の突出を配置させうる、第２のＣＨ３ドメインの接触面内の空隙を作出するように、他の重鎖のＣＨ３ドメインが置換されている点において、特徴を明らかにされる。

【0043】

好ましくは、大きな側鎖容積を有する、前記アミノ酸残基は、グリシン（Ｇ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、小さな側鎖容積を有する、前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）からなる群から選択される。本発明の一態様では、両方のＣＨ３ドメインの間に、ジスルフィド架橋を形成しうるように、両方のＣＨ３ドメインを、各ＣＨ３ドメインの対応する位置におけるアミノ酸としての、システイン（Ｃ）の導入により、さらに変更する。

【0044】

本発明の好ましい実施態様では、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子は、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメイン内のＰ３２９Ｇ突然変異と、「ホール鎖」のＣＨ３ドメイン内のＰ３２９Ｇ突然変異とを含む。例えば、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインに、Ｙ３４９Ｃ突然変異を導入し、「ホール鎖」のＣＨ３ドメインに、「Ｅ３５６Ｃ」突然変異又は「Ｓ３５４Ｃ」突然変異を導入することにより、ＣＨ３ドメインの間の、さらなる鎖間ジスルフィド架橋もまた、使用することができる（Merchantら、Nature Biotech 16 (1998)、667-681、Atwellら、J. Mol. Biol. 270 (1997)、26-35）。

【0045】

本発明の代替的な実施態様では、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子は、ＣＨ３ドメイン内の静電相補性会合を介して会合する。静電相補性会合技術は、例えば、Ｋｌｅｉｎら、ＬａｎｄｅｓＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ４ （６）（２０１２）、６５３－６６３、Ｋｉｔａｚａｗａら、Ｎａｔ Ｍｅｄ．１８（１０）（２０１２）、１５７０－１５７４、及びＧｕｎａｓｅｋｅｒａｎ Ｋ．ら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８５（２５）（２０１０）、１９６３７－１９６４６において記載されている。

【0046】

本発明に従い援用される、三価の二重特異性抗体分子、抗体断片、抗体誘導体（全てＩｇ由来である）は、当該技術分野で公知の従来の技法を使用して、例えば、アミノ酸の欠失、挿入、置換、添加、及び／若しくは組換え、ならびに／又は当該技術分野で公知である、他の任意の修飾を、単独で若しくは組合せで使用することにより、さらに修飾することができる。当業者には、免疫グロブリン鎖のアミノ酸配列の根底をなすＤＮＡ配列内に、このような修飾を導入するための方法が周知である（例えば、Sambrook(1989)、前出を参照されたい）。「Ｉｇ由来のドメイン」という用語は、特に、少なくとも１つのＣＤＲを含む（ポリ）ペプチドコンストラクトに関する。列挙されたＩｇ由来ドメインの断片又は誘導体は、上記の抗体分子の部分であり、かつ／又は化学的／生化学的方法若しくは分子生物学的方法により修飾された（ポリ）ペプチドを規定する。当該技術分野では、対応する方法が公知であり、特に、実験室マニュアルにおいて記載されている（Sambrookら、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」、Cold Spring Harbor Laboratory Press、2版(1989)及び3版(2001)；Gerhardtら、「Methods for General and Molecular Bacteriology」、ASM Press (1994)；Lefkovits、「Immunology Methods Manual: Comprehensive Sourcebook of Techniques」、Academic Press (1997)；Golemis、「Protein-Protein Interactions: Molecular Cloning Manual」、Cold Spring Harbor Laboratory Press (2002)を参照されたい）。

【0047】

本明細書で援用される「ＣＤＲ」という用語は、当該技術分野で周知の「相補性決定領域」に関する。ＣＤＲとは、前記分子の特異性を決定し、特異的リガンドと接触する、免疫グロブリンの部分である。ＣＤＲは、分子内の最も可変性の部分であり、これらの分子の多様性に寄与する。各Ｖドメイン内には、３つのＣＤＲ領域である、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３が存在する。ＣＤＲ－Ｈは、可変重鎖のＣＤＲ領域について描示し、ＣＤＲ－Ｌは、可変軽鎖のＣＤＲ領域に関する。ＶＨとは、可変重鎖を意味し、ＶＬとは、可変軽鎖を意味する。Ｉｇ由来領域のＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５版、ＮＩＨ刊行物第９１－３２４２号、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６（１９８７）、９０１－９１７；又はＣｈｏｔｈｉａ、Ｎａｔｕｒｅ、３４２（１９８９）、８７７－８８３において記載されている通りに決定することができる。

【0048】

したがって、本発明の文脈では、「抗体」という用語は、完全長免疫グロブリン分子のほか、このような免疫グロブリン分子の部分に関する。さらに、用語は、上記で論じた通り、修飾及び／又は変更された抗体分子にも関する。用語はまた、組換え又は合成により作出された抗体／合成された抗体にも関する。

【0049】

本発明の、三価の二重特異性抗体分子が、本明細書で規定される第１の（Ｉｇ由来の）ドメイン、第２の（Ｉｇ由来の）ドメイン、及び第３の（Ｉｇ由来の）ドメインに加えて、例えば、組換えにより作製されたコンストラクトを単離及び／又は調製するための、さらなるドメインも含みうることは、注目に値する。

【0050】

本発明に従い、上記で記載したドメインであって、本明細書で記載される融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、前記Ｔ細胞内及び／又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインと特異的に相互作用する／これに特異的に結合するドメインだけを修飾しうるわけではないことは、注目に値する。また、例えば、ヒト化抗体、ＣＤＲグラフト抗体、又は完全ヒト抗体のために、（Ｉｇ由来の）第１のドメイン、（Ｉｇ由来の）第２のドメイン、（Ｉｇ由来の）第３のドメイン、及び／又は接続するリンカー領域を修飾することも想定される。

【0051】

当該技術分野では、「ヒト化法」が周知であり、特に、抗体分子、例えば、（Ｉｇ由来の）分子について記載されている。「ヒト化」という用語は、非ヒト抗体に由来する配列の一部を含有する、非ヒト（例えば、マウス）抗体又はこの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖｓ、又は抗体の、他の抗原結合部分の配列など）のヒト化形態を指す。ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリンの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基を、所望される結合特異性、結合アフィニティー、及び結合能を有する、マウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種のＣＤＲに由来する残基で置きかえたヒト免疫グロブリンを含む。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つであり、一般に、２つの可変ドメインであって、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である可変ドメインのうちの実質的に全てを含むであろう。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことが最適であろう。特に、Jonesら、Nature、321 (1986)、522-525、Presta、Curr. Op. Struct. Biol.、2 (1992)、593-596を参照されたい。当該技術分野では、非ヒト抗体をヒト化するための方法が周知である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト供給源から導入された、１又は複数のアミノ酸を有し、抗体の、元の結合活性を保持する。抗体／抗体分子をヒト化するための方法については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１（１９８６）、５２２－５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２（１９８８）、３２３－３２７；及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９（１９８８）、１５３４－１５３６において、さらに詳述されている。当該技術分野では、ヒト化抗体の具体例、例えば、ＥｐＣＡＭに対する抗体が公知である（例えば、LoBuglio、「Proceedings of American Society of Clinical Oncology Abstract」(1997)、1562；及びKhor、「Proceedings of American Society of Clinical Oncology Abstract」(1997)、847を参照されたい）。

【0052】

したがって、本発明の文脈では、特に、ヒト化され、薬学的組成物中の援用に成功する、三価の二重特異性抗体分子が提供される。本発明の文脈では、本明細書で記載される（ヒト化された）三価の二重特異性抗体分子を、本明細書で規定されるキット内で援用することができる。

【0053】

本発明の文脈では、三価の二重特異性抗体分子（Ｉｇ由来の）結合ドメインは、前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに対する特異性を伴う、抗原相互作用部位を含む。

【0054】

本明細書で使用される「前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン」という用語は、Ｔ細胞に組み込まれ、天然では、Ｔ細胞の表面内及び／又はＴ細胞の表面上に提示されず、正常（非形質導入）Ｔ細胞内又は正常（非形質導入）Ｔ細胞上では、（内因的に）発現しない分子に関する。したがって、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない抗原／マーカーを、Ｔ細胞に人工的に導入する。本発明の文脈では、前記Ｔ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、本明細書で規定される、処置される対象から単離する／得る。したがって、人工的に導入され、その後、前記Ｔ細胞の表面内及び／又はＴ細胞の表面上に提示される、これらの分子は、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、（Ｉｇ由来の）結合ドメイン、好ましくは、抗体、抗体断片、又は抗体誘導体にアクセス可能な（インビトロ又はインビボにおいて）ドメイン又はエピトープを含む。本発明の文脈では、これらの、人工的に導入された分子は、本明細書の下記で記載される（レトロウイルスによる）形質導入の後で、前記Ｔ細胞の表面内及び／又はＴ細胞の表面上に提示される。

【0055】

本発明の文脈では、「前記Ｔ細胞内及び／又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン」という用語は、Ｔ細胞１個当たりの抗原分子が、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、又は１０００個を超える、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で、天然に存在しない／内因的に発現しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインを指す。したがって、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で、天然に存在しない／内因的に発現しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインは、正常（非形質導入）Ｔ細胞の集団のうちの、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、又は２．０‰（パーミル）を超える細胞内で発現しない。Ｔ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞内及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞上で、天然に存在する、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインの存在及び量は、ＦＡＣＳ解析、ＥＬＩＳＡ、共焦点顕微鏡法、解析用ＨＰＬＣなど、当該技術分野で公知の方法によりモニタリングすることができる。

【0056】

これらの分子の例は、好ましくは、ヒト由来の、非免疫原性タンパク質を含む。代替的に、前記分子は、それ自体、機能的に不活性のタンパク質分子でありうるか、又は当該技術分野で公知の遺伝子組換え法により、機能的に不活性とされる（例は、ヒトＥＧＦＲの突然変異バージョン、例えば、配列番号１５２、２３２、５２、７６、又は７８に描示されるＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号１５１、２３１、５１、７５、又は７７によりコードされる）であろう）。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、膠芽細胞腫内、ならびに乳癌内、卵巣癌内、及び肺癌内で見出される、ヒト上皮増殖因子受容体の突然変異体である。突然変異体受容体は、その細胞外ドメイン内に欠失を有する（Lorimerら、Proc. Natl. Acad. Sci USA、93 (1996)、14815-14820）。突然変異していないヒトＥＧＦＲバージョンを、配列番号１９８（配列番号１９７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）に描示する。

【0057】

これらの上述の基準を満たすマーカーの例を、本明細書の下記に示すが、これらは、Ｃｒｉｐｔｏ（ｃｒｙｐｔｉｃファミリーのタンパク質）、ＣＤ（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）ファミリー（非Ｔ細胞）のメンバー、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＮＧＦＲ、又はＴＳＨ－Ｒを含むがこれらに限定されない。

【0058】

本発明の文脈では、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子は、本明細書で記載される融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに結合する。本発明の文脈では、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインは、Ｃｒｉｐｔｏ（ｃｒｙｐｔｉｃファミリーのタンパク質）、ＣＤ（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）ファミリー（非Ｔ細胞）のメンバー、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＮＧＦＲ、及びＴＳＨ－Ｒからなる群から選択される。したがって、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子は、（もっぱら）Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在するわけではない、ＣＤファミリーのメンバー（「非Ｔ細胞」という用語で言及される）、Ｃｒｉｐｔｏ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＮＧＦＲ、又はＴＳＨ－Ｒと相互作用する／これに結合する。本発明の文脈では、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子は、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で内因的に発現しない、ＣＤファミリーのメンバー（「非Ｔ細胞」という用語で言及される）、Ｃｒｉｐｔｏ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＮＧＦＲ、又はＴＳＨ－Ｒと相互作用する／これに結合する。

【0059】

Ｃｒｉｐｔｏ（ｃｒｙｐｔｉｃファミリーのタンパク質）、ＣＤ（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）ファミリー（非Ｔ細胞）のメンバー、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＮＧＦＲ、又はＴＳＨ－Ｒの（ヒト）メンバーの配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔデータベースで利用可能であり、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／？ｑｕｅｒｙ＝ｒｅｖｉｅｗｅｄ％３Ａｙｅｓから検索することができる。これらの（タンパク質）配列はまた、注釈された修飾配列にも関する。本発明はまた、本明細書で提示されるコンサイス配列の同種配列を使用し、また、対立遺伝子変異体なども使用する技法及び方法も提供する。本明細書のコンサイス配列の、このような「変異体」などを使用することが好ましい。好ましくは、このような「変異体」は、遺伝子変異体である。当業者は、ゲノムＤＮＡのほか、ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡのエントリーもまた含みうる、これらのデータバンクエントリー内の、これらの（タンパク質）配列の関与性のコード化領域を、容易に推定することができる。例示的に述べると、ＮＧＦＲのマウス（ｍｕｒｉｎｅ／ｍｏｕｓｅ）配列は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｚ０Ｗ１（エントリーバージョン１３２、配列バージョン１）から得ることができる。ＮＧＦＲのヒト配列は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８１３８（エントリーバージョン１８２、配列バージョン１）から得ることができる。

【0060】

「Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない／内因的に発現しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン」との関連において、本明細書で使用される「ＣＤ（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔｉｏｎ）ファミリー（非Ｔ細胞）」という用語は、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１、ＣＤ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４３、ＣＤ４６、ＣＤ４８、ＣＤ４９、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５９、ＣＤ６１、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６６、ＣＤ６７、ＣＤ６８、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７９、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１０、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２１、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５１、ＣＤ１５３、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８、ＣＤ１５９、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７、ＣＤ１６８、ＣＤ１６９、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２、ＣＤ１７７、ＣＤ１７８、ＣＤ１７９、ＣＤ１８０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１８６、ＣＤ１９１、ＣＤ１９２、ＣＤ１９３、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ２０７、ＣＤ２０８、ＣＤ２０９、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２３、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２８、ＣＤ２３０、ＣＤ２３１、ＣＤ２３２、ＣＤ２３３、ＣＤ２３４、ＣＤ２３６、ＣＤ２３８、ＣＤ２３９、ＣＤ２４１、ＣＤ２４２、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４６、ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５４、ＣＤ２５６、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６５、ＣＤ２６６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７０、ＣＤ２７１、ＣＤ２７６、ＣＤ２７７、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８６、ＣＤ２８８、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９２、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９６、ＣＤ２９７、ＣＤ２９８、ＣＤ２９９、ＣＤ３００、ＣＤ３０１、ＣＤ３０２、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０９、ＣＤ３１２、ＣＤ３１４、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３１９、ＣＤ３２０、ＣＤ３２１、ＣＤ３２２、ＣＤ３２４、ＣＤ３２５、ＣＤ３２６、ＣＤ３２７、ＣＤ３２８、ＣＤ３２９、ＣＤ３３１、ＣＤ３３２、ＣＤ３３３、ＣＤ３３４、ＣＤ３３５、ＣＤ３３６、ＣＤ３３７、ＣＤ３３８、ＣＤ３３９、ＣＤ３４０、ＣＤ３４４、ＣＤ３４９、ＣＤ３５０、ＣＤ３５１、ＣＤ３５２、ＣＤ３５３、ＣＤ３５４、ＣＤ３５５、ＣＤ３５７、ＣＤ３５８、ＣＤ３６０、ＣＤ３６１、ＣＤ３６２及びＣＤ３６３からなる群から選択されるＣＤ配列のうちのいずれか１つを指す。

【0061】

（ヒト）ＣＤ９（ＣＤ９抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２１９２６（エントリーバージョン１２３、配列バージョン４）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０（ネプリライシン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８４７３（エントリーバージョン１５１、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１（インテグリンアルファＤ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１３３４９（エントリーバージョン１１０、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３（アミノペプチダーゼＮ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５１４４（エントリーバージョン１４５、配列バージョン４）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４（単球分化抗原であるＣＤ１４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８５７１（エントリーバージョン１３１、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６（Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩｂ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＬＶ２（エントリーバージョン５１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１８（インテグリンベータ２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０５１０７（エントリーバージョン１６２、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１９（Ｂリンパ球抗原であるＣＤ１９）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５３９１（エントリーバージョン１２８、配列バージョン６）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原であるＣＤ２０）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１８３６（エントリーバージョン１１８、
配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２１（２型補体受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２００２３（エントリーバージョン１２８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２０２７３（エントリーバージョン１３６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３（低アフィニティー免疫グロブリンエプシロンＦｃ受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０６７３４（エントリーバージョン１３３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２４（シグナル伝達物質ＣＤ２４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２５０６３（エントリーバージョン１０６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６（ジペプチジルペプチダーゼ４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２７４８７（エントリーバージョン１４０、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２７（ＣＤ２７抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２６８４２（エントリーバージョン１１９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９（インテグリンベータ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０５５５６（エントリーバージョン１５４、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３０（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２８９０８（エントリーバージョン１２９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３１（血小板内皮細胞接着分子）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１６２８４（エントリーバージョン１４６、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２（低アフィニティー免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ－ｂ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３１９９４（エントリーバージョン１３８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３（骨髄細胞表面抗原であるＣＤ３３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２０１３８（エントリーバージョン１３０、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３４（造血系前駆細胞抗原であるＣＤ３４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２８９０６（エントリーバージョン１０８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５（１型補体受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１７９２７（エントリーバージョン１３１、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３６（血小板糖タンパク質４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１６６７１（エントリーバージョン１３３、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３８（ＡＤＰリボシルシクラーゼ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２８９０７（エントリーバージョン１２６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３９（エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４９９６１（エントリーバージョン１１４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ４０（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２５９４２（エントリーバージョン１４７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ４１（インテグリンアルファＩＩｂ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８５１４（エントリーバージョン１５８、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ４３（ロイコシアリン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１６１５０（エントリーバージョン１１０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ４６（膜補助因子タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５５２９（エントリーバージョン１４５、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ４８（ＣＤ４８抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０９３２６（エントリーバージョン１３７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ４９（インテグリンアルファ４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１３６１２（エントリーバージョン１２８、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ５０（細胞間接着分子３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３２９４２（エントリーバージョン１２８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ５１（インテグリンアルファＶ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０６７５６（エントリーバージョン１４９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ５４（細胞間接着分子１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０５３６２（エントリーバージョン１６０、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ５５（補体崩壊促進因子）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８１７４（エントリーバージョン１４３、配列バージョン４）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ５６（神経細胞接着分子１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１３５９１（エントリーバージョン１３２、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ５７（キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＧメンバー１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９６Ｅ９３（エントリーバージョン７２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ５９（ＣＤ５９糖タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１３９８７（エントリーバージョン１３９、配列情報１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ６１（インテグリンベータ３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０５１０６（エントリーバージョン１７５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ６３（ＣＤ６３抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８９６２（エントリーバージョン１２２、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ６４（高アフィニティー免疫グロブリンガンマＦｃ受容体Ｉ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１２３１４（エントリーバージョン１２８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ６６（がん胎児性抗原関連細胞接着分子１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１３６８８（エントリーバージョン１３３、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ６７（がん胎児性抗原関連細胞接着分子８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３１９９７（エントリーバージョン１１５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ６８（マクロシアリン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３４８１０（エントリーバージョン１０６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ７０（ＣＤ７０抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３２９７０（エントリーバージョン１０１、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原であるＣＤ７２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２１８５４（バージョンエントリー１１３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ７４（ＨＬＡクラスＩＩ組織適合抗原ガンマ鎖）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０４２３３（エントリーバージョン１４１、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ７５（ベータ－ガラクトシドアルファ－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５９０７（エントリーバージョン１３０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ７７（ラクトシルセラミド４－アルファ－ガラクトシルトランスフェラーゼ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＰＣ４（エントリーバージョン１００、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ７９（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質アルファ鎖）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１９１２（エントリーバージョン１２０、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ８１（ＣＤ８１抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ６００３３（エントリーバージョン８２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ８２（ＣＤ８２抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２７７０１（エントリーバージョン９８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ８３（ＣＤ８３抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０１１５１（エントリーバージョン１１３、配列バージョン１）から得ることもでき、
（ヒト）ＣＤ８４（ＳＬＡＭファミリーメンバー５）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＩＢ８（エントリーバージョン８７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ８７（ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子表面受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０３４０５（エントリーバージョン１２９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ８８（Ｃ５ａアナフィラトキシン走化性受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２１７３０（エントリーバージョン１１６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ８９（免疫グロブリンアルファＦｃ受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２４０７１（エントリーバージョン１２１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９０（Ｔｈｙ－１膜糖タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０４２１６（エントリーバージョン１２８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９１（プロ低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０７９５４（エントリーバージョン１３３、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９２（コリントランスポーター様タンパク質１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８ＷＷＩ５（エントリーバージョン７９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９３（補体成分Ｃ１ｑ受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＰＹ３（エントリーバージョン１１５、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９４（ナチュラルキラー細胞抗原であるＣＤ９４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１３２４１（エントリーバージョン１０７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９５（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー６）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４８０２３（エントリーバージョン１３４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９７（ＣＤ９７抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４８９６０（エントリーバージョン１２５、配列バージョン４）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９８（４Ｆ２細胞表面抗原重鎖）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８１９５（エントリーバージョン１４０、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ９９（ＣＤ９９抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１４２０９（エントリーバージョン１１７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１００（セマフォリン４Ｄ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９２８５４（エントリーバージョン１２５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０１（免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９３０３３（エントリーバージョン８９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０２（細胞間接着分子２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１３５９８（エントリーバージョン１３１、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０３（インテグリンアルファＥ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３８５７０（エントリーバージョン１１８、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０４（インテグリンベータ４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１６１４４（エントリーバージョン１６０、配列バージョン５）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０５（エンドグリン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１７８１３（エントリーバージョン１３３、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０６（血管細胞接着タンパク質１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１９３２０（エントリーバージョン１５８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０７（リソソーム関連膜糖タンパク質１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１２７９（エントリーバージョン１１７、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０８（セマフォリン７Ａ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ７５３２６（エントリーバージョン１０７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１０９（ＣＤ１０９抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ６ＹＨＫ３（エントリーバージョン６４、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１０（トロンボポエチン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４０２３８（エントリーバージョン１２２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１１（ポリオウイルス受容体関連タンパク質１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１５２２３（エントリーバージョン１１４、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１２（ポリオウイルス受容体関連タンパク質２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９２６９２（エントリーバージョン１２３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１３（ポリオウイルス受容体関連タンパク質３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＱＳ３（エントリーバージョン７８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１４（顆粒球コロニー刺激因子受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９９０６２（エントリーバージョン１２９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１５（マクロファージコロニー刺激因子１受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０７３３３（エントリーバージョン１４５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１６（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体サブユニットアルファ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５５０９（エントリーバージョン１２８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１７（マスト細胞／幹細胞増殖因子受容体であるＫｉｔ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１０７２１（エントリーバージョン１５０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１８（白血病阻害因子受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４２７０２（エントリーバージョン１１５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１１９（インターフェロンガンマ受容体１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５２６０（エントリーバージョン１４０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１２１（１型インターロイキン１受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１４７７８（エントリーバージョン１５１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１２３（インターロイキン３受容体サブユニットアルファ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２６９５１（エントリーバージョン１１０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１２４（インターロイキン４受容体サブユニットアルファ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２４３９４（エントリーバージョン１４４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１２５（インターロイキン５受容体サブユニットアルファ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０１３４４（エントリーバージョン１２０、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１２６（インターロイキン６受容体サブユニットアルファ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８８８７（エントリーバージョン１４３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３０（インターロイキン６受容体サブユニットベータ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４０１８９（エントリーバージョン１４２、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３１（サイトカイン受容体共通サブユニットベータ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３２９２７（エントリーバージョン１２８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３３（プロミニン１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ４３４９０（エントリーバージョン１１０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３４（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４３４８９（エントリーバージョン１０６、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３５（受容体型チロシンプロテインキナーゼＦＬＴ－３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３６８８８（エントリーバージョン１１９、配列バージョン２）
から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３６（マクロファージ刺激タンパク質受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０４９１２（エントリーバージョン１２９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３７（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０７０１１（エントリーバージョン１０９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１３８（シンデカン１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１８８２７（エントリーバージョン１１４、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４０（血小板由来増殖因子受容体ベータ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０９６１９（エントリーバージョン１５４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４１（トロンボモジュリン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０７２０４（エントリーバージョン１６２、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４２（組織因子）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１３７２６（エントリーバージョン１３７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４３（アンジオテンシン転換酵素）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１２８２１（エントリーバージョン１５７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４４（カドヘリン５）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３３１５１（エントリーバージョン１０８、配列バージョン５）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４６（細胞表面糖タンパク質ＭＵＣ１８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４３１２１（エントリーバージョン１０９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４７（ベイシジン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３５６１３（エントリーバージョン１３４、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１４８（受容体型チロシンタンパク質ホスファターゼエータ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１２９１３（エントリーバージョン１２４、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１５１（ＣＤ１５１抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４８５０９（エントリーバージョン１０８、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１５３（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３２９７１（エントリーバージョン９０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１５５（ポリオウイルス受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５１５１（エントリーバージョン１３２、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１５６（ディスインテグリン／メタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ７８３２５（エントリーバージョン１１５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１５７（ＡＤＰリボシルシクラーゼ２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１０５８８（エントリーバージョン１１６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１５８（キラー細胞免疫グロブリン様受容体３ＤＬ３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８Ｎ７４３（エントリーバージョン９１、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１５９（ＩＩ型ＮＫＧ２－Ａ／ＮＫＧ２－Ｂ内在性膜タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２６７１５（エントリーバージョン１１６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６０（ＣＤ１６０抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ９５９７１（エントリーバージョン９８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６１（キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＢメンバー１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１２９１８（エントリーバージョン８１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６２（Ｐセレクチン糖タンパク質リガンド１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１４２４２（エントリーバージョン１０３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６３（１型スカベンジャー受容体システインリッチタンパク質Ｍ１３０）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８６ＶＢ７（エントリーバージョン７７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６４（シアロムチンコアタンパク質２４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０４９００（エントリーバージョン８９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６６（ＣＤ１６６抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１３７４０（エントリーバージョン１１１、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６７（ディスコイジンドメイン含有受容体２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１６８３２（エントリーバージョン１２０、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６８（ＨＭＭＲ（ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ））の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ７５３３０（エントリーバージョン９９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１６９（シアロアドヘシン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＢＺＺ２（エントリーバージョン１０３、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１７０（シアル酸結合Ｉｇ様レクチン５）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ１５３８９（エントリーバージョン１０６、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１７１（神経細胞接着分子Ｌ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３２００４（エントリーバージョン１３９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１７２（シグナル制御タンパク質ベータ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ００２４１（エントリーバージョン１１２、配列バージョン５）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１７７（ＣＤ１７７抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８Ｎ６Ｑ３（エントリーバージョン６５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１７８（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー６）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４８０２３（エントリーバージョン１３４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１７９（免疫グロブリンイオタ鎖）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１２０１８（エントリーバージョン１１５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１８０（ＣＤ１８０抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９９４６７（エントリーバージョン１０１、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１８１（１型Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２５０２４（エントリーバージョン１２５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１８２（２型Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２５０２５（エントリーバージョン１２３、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１８３（３型Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４９６８２（エントリーバージョン１１８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１８４（４型Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ６１０７３（エントリーバージョン９５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１８５（５型Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３２３０２（エントリーバージョン１０９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１８６（６型Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ００５７４（エントリーバージョン１０４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１９１（１型Ｃ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３２２４６（エントリーバージョン１０６、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１９２（２型Ｃ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４１５９７（エントリーバージョン１２８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ１９３（３型Ｃ－Ｃケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ５１６７７（エントリーバージョン１１２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２００（ＯＸ－２膜糖タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４１２１７（エントリーバージョン１１０、配列バージョン４）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２０１（内皮タンパク質Ｃ受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＮＮ８（エントリーバージョン１１０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２０４（Ｉ型及びＩＩ型マクロファージスカベンジャー受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２１７５７（エントリーバージョン１２２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２０６（マクロファージマンノース受容体１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２２８９７（エントリーバージョン１３８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２０７（Ｃ型レクチンドメインファミリー４メンバーＫ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＪ７１（エントリーバージョン８５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２０８（リソソーム関連膜糖タンパク質３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＱＶ４（エントリーバージョン６９、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２０９（ＣＤ２０９抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＮＸ６（エントリーバージョン１０３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２１７（インターロイキン１７受容体Ａ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９６Ｆ４６（エントリーバージョン９４、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２１８（インターロイキン１８受容体１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１３４７８（エントリーバージョン１０４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２０（インスリン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０６２１３（エントリーバージョン１７５、配列バージョン４）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２１（インスリン様増殖因子１受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８０６９（エントリーバージョン１４５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２２（カチオン非依存性マンノース６リン酸受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１７１７（エントリーバージョン１３７、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２３（リンパ球活性化遺伝子
３タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１８６２７（エントリーバージョン１０８、配列バージョン５）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２４（ガンマ－グルタミルトランスペプチダーゼ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１９４４０（エントリーバージョン１３７、配列バージョン２）
から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２５（インターフェロン誘導性膜貫通タンパク質１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１３１６４（エントリーバージョン１０１、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２６（ＣＤ２２６抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１５７６２（エントリーバージョン８９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２７（ムチン１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５９４１（エントリーバージョン１３６、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２８（メラノトランスフェリン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８５８２（エントリーバージョン１２４、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３０（プリオンタンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０４１５６（エントリーバージョン１６１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３１（テトラスパニン７）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４１７３２（エントリーバージョン１１５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３２（プレクシンＣ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ６０４８６（エントリーバージョン８０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３３（バンド３アニオン輸送タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０２７３０（エントリーバージョン１６７、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３４（ダフィー抗原／ケモカイン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１６５７０（エントリーバージョン１１４、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３６（グリコホリンＣ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０４９２１（エントリーバージョン１１６、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３８（Ｋｅｌｌ血液群糖タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２３２７６（エントリーバージョン１２４、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２３９（基底細胞接着分子）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ５０８９５（エントリーバージョン１１７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２４１（Ｒｈ Ａ型アンモニウムトランスポーター）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０２０９４（エントリーバージョン９８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２４２（細胞間接着分子４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１４７７３（エントリーバージョン１０６、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２４３（多剤耐性タンパク質１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８１８３（エントリーバージョン１４６、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２４４（ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＢＺＷ８（エントリーバージョン９４、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２４６（ＡＬＫチロシンキナーゼ受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＭ７３（エントリーバージョン１２０、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２４８（エンドシアリン）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＨＣＵ０（エントリーバージョン８７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２４９（グルタミルアミノペプチダーゼ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０７０７５（エントリーバージョン１２１、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２５２（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー４）の配列を、
Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２３５１０（エントリーバージョン１０１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２５３（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１０）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ５０５９１（エントリーバージョン１１８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２５４（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ１４７８８（エントリーバージョン１１０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２５６（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ７５８８８（エントリーバージョン１１１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２５７（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１３Ｂ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｙ２７５（エントリーバージョン１２７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２５８（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ４３５５７（エントリーバージョン１１７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６１（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０Ａ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ００２２０（エントリーバージョン１１２、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６２（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０Ｂ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ１４７６３（エントリーバージョン１３３、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６３（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０Ｃ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ１４７９８（エントリーバージョン９９、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６４（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０Ｄ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＢＮ６（エントリーバージョン１０９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６５（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１１Ａ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｙ６Ｑ６（エントリーバージョン１００、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６６（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１２Ａ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＰ８４（エントリーバージョン８９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６７（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｂ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ１４８３６（エントリーバージョン１０２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６８（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９６ＲＪ３（エントリーバージョン９１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２６９（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１７）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０２２２３（エントリーバージョン１２５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２７０（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９２９５６（エントリーバージョン１３４、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２７１（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１６）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０８１３８（エントリーバージョン１３５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２７６（ＣＤ２７６抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ５ＺＰＲ３（エントリーバージョン７１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２７７（ブチロフィリンサブファミリー３メンバーＡ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ００４８１（エントリーバージョン１０２、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２８０（Ｃ型マンノース受容体２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＢＧ０（エントリーバージョン７９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２８１（Ｔｏｌｌ様受容体１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１５３９９（エントリーバージョン１２５、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２８２（Ｔｏｌｌ様受容体２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ６０６０３（エントリーバージョン１２９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２８３（Ｔｏｌｌ様受容体３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ１５４５５（エントリーバージョン１２０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２８４（Ｔｏｌｌ様受容体４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ００２０６（エントリーバージョン１２５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２８６（Ｔｏｌｌ様受容体６）
の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｙ２Ｃ９（エントリーバージョン１０８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２８８（Ｔｏｌｌ様受容体８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＲ９７（エントリーバージョン１０３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＲ９６（エントリーバージョン１０７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９０（Ｔｏｌｌ様受容体１０）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＢＸＲ５（エントリーバージョン１０５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９２（１Ａ型骨形成タンパク質受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３６８９４（エントリーバージョン１４６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９４（推定Ｇタンパク質共役受容体４４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｙ５Ｙ４（エントリーバージョン９１、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９５（レプチン受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ４８３５７（エントリーバージョン１３２、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９６（ＧＰＩ結合型ＮＡＤ（Ｐ）（＋）－Ｌ－アルギニンＡＤＰリボシルトランスフェラーゼ１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ５２９６１（エントリーバージョン９６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９７（エクトＡＤＰリボシルトランスフェラーゼ４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９３０７０（エントリーバージョン１０６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９８（ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットベータ３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ５４７０９（エントリーバージョン１０２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２９９（Ｃ型レクチンドメインファミリー４メンバーＭ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｈ２Ｘ３（エントリーバージョン１０８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３００（ＣＭＲＦ３５様分子９）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ６ＵＸＧ３（エントリーバージョン６７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３０１（Ｃ型レクチンドメインファミリー１０メンバーＡ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８ＩＵＮ９（エントリーバージョン８０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３０２（ＣＤ３０２抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８ＩＸ０５（エントリーバージョン６４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３０３（Ｃ型レクチンドメインファミリー４メンバーＣ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８ＷＴＴ０（エントリーバージョン８２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３０４（ニューロピリン１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ１４７８６（エントリーバージョン１２９、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３０５（白血球関連免疫グロブリン様受容体１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ６ＧＴＸ８（エントリーバージョン７０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３０６（白血球関連免疫グロブリン様受容体２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ６ＩＳＳ４（エントリーバージョン６３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３０９（血管内皮増殖因子受容体２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３５９６８（エントリーバージョン１３８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３１２（ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＨＸ３（エントリーバージョン１１３、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３１４（ＩＩ型ＮＫＧ２－Ｄ内在性膜タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２６７１８（エントリーバージョン１１７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３１５（プロスタグランジンＦ２受容体負調節因子）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｐ２Ｂ２（エントリーバージョン９８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３１６（免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９６９Ｐ０（エントリーバージョン８１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３１７（骨髄間質抗原２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１０５８９（エントリーバージョン９５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３１８（ＣＵＢドメイン含有タンパク質１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｈ５Ｖ８（エントリーバージョン７８、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３１９（ＳＬＡＭファミリーメンバー７）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＱ２５（エントリーバージョン９２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２０（ＣＤ３２０抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＰＦ０（エントリーバージョン８６、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２１（接合部接着分子Ａ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｙ６２４（エントリーバージョン１２４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２２（接合部接着分子Ｂ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ５７０８７（エントリーバージョン１０７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２４（カドヘリン１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１２８３０（エントリーバージョン１５７、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２５（カドヘリン２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１９０２２（エントリーバージョン１１８、配列バージョン４）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２６（上皮細胞接着分子）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１６４２２（エントリーバージョン１１８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２７（シアル酸結合Ｉｇ様レクチン６）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ４３６９９（エントリーバージョン１０７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２８（シアル酸結合Ｉｇ様レクチン７）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｙ２８６（エントリーバージョン１１１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３２９（シアル酸結合Ｉｇ様レクチン８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＹＺ４（エントリーバージョン１００、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３１（線維芽細胞増殖因子受容体１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１３６２（エントリーバージョン１６９、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３２（線維芽細胞増殖因子受容体２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２１８０２（エントリーバージョン１６５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３３（線維芽細胞増殖因子受容体３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２２６０７（エントリーバージョン１６１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３４（線維芽細胞増殖因子受容体４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２２４５５（エントリーバージョン１３６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３５（ＮＣＲ１（ｎａｔｕｒａｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １））の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ７６０３６（エントリーバージョン９８、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３６（ＮＣＲ２（ｎａｔｕｒａｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２））の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ９５９４４（エントリーバージョン８６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３７（ＮＣＲ３（ｎａｔｕｒａｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３））の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ１４９３１（エントリーバージョン１０３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３８（ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＧメンバー２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＮＱ０（エントリーバージョン１２０、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３９（ｊａｇｇｅｄ－１タンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ７８５０４（エントリーバージョン１２９、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３４０（受容体型チロシンタンパク質キナーゼｅｒｂＢ－２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０４６２６（エントリーバージョン１６２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３４４（Ｆｒｉｚｚｌｅｄ－４）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＬＶ１（エントリーバージョン１０７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３４９（Ｆｒｉｚｚｌｅｄ－９）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ００１４４（エントリーバージョン１０３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５０（Ｆｒｉｚｚｌｅｄ－１０）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＬＷ２（エントリーバージョン１００、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５１（高アフィニティー免疫グロブリンアルファＦｃ受容体及び高アフィニティー免疫グロブリンミューＦｃ受容体）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８ＷＷＶ６（エントリーバージョン６５、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５２（ＳＬＡＭファミリーメンバー６）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９６ＤＵ３（エントリーバージョン９３、
配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５３（ＳＬＡＭファミリーメンバー８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｐ０Ｖ８（エントリーバージョン８０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５４（ＴＲＥＭ１（ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌ １））の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＮＰ９９（エントリーバージョン９３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５５（細胞傷害性／調節性Ｔ細胞分子）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ９５７２７（エントリーバージョン８１、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５７（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１８）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９Ｙ５Ｕ５（エントリーバージョン１０３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３５８（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー２１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＯ７５５０９（エントリーバージョン１１０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３６０（インターロイキン２１受容体）の配列を、
Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＨＢＥ５（エントリーバージョン１０４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３６１（ＥＶＩ２Ｂタンパク質）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３４９１０（エントリーバージョン８７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３６２（シンデカン２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３４７４１（エントリーバージョン１０５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３６３（スフィンゴシン１リン酸受容体１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２１４５３（エントリーバージョン１１６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）Ｃｒｉｐｔｉｃファミリータンパク質（Ｃｒｉｐｔｉｃファミリータンパク質１－Ｂ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０ＣＧ３６（エントリーバージョン１２、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）サイロトロピン受容体（ＴＳＨ－Ｒ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１６４７３（エントリーバージョン１５２、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ００５３３（エントリーバージョン１７８、配列バージョン２；（配列番号１９８（タンパク質）及び１９７（ＤＮＡ）））から得ることもできる。

【0062】

上述の通り、上記で記載した三価の二重特異性抗体分子の（Ｉｇ由来の）ドメインは、腫瘍細胞の表面上に天然で存在する細胞表面分子、すなわち、腫瘍特異的抗原に対する特異性を伴う、抗原相互作用部位を含みうる。

【0063】

本明細書で使用される「腫瘍細胞の表面上に天然で存在する細胞表面分子」／「腫瘍細胞の表面上に天然で存在する腫瘍特異的抗原」という用語はまた、腫瘍細胞の表面上に提示された分子も表す。「天然に存在する」という用語は、腫瘍細胞の表面上に、内因的に発現する分子に関する。「細胞表面分子」という用語は、細胞の表面上に（天然で／内因的に）発現し／提示され、本明細書で記載される（Ｉｇ由来の）三価の二重特異性抗体のドメインに、（インビトロ又はインビボにおいて）アクセス可能なドメイン又はエピトープを含む分子に関する。前記細胞表面分子の例は、膜タンパク質及び膜貫通タンパク質、前記タンパク質又は細胞表面に適合させた分子などである。したがって、本発明の文脈では、前記細胞表面分子は、腫瘍特異的マーカーである。本発明の文脈では、前記腫瘍特異的マーカーは、通例、腫瘍細胞の表面上で内因的に発現するマーカーに関する。

【0064】

本発明の文脈では、「腫瘍特異的マーカー」という用語は、腫瘍細胞の表面上に、天然に／内因的に提示され、かつ／若しくは位置し、又は遍在的に発現するが、腫瘍細胞の表面上の、三価の二重特異性抗体分子、抗体断片、又は抗体誘導体の結合だけにアクセス可能である分子に関する。本明細書で言及される「腫瘍特異的マーカー」は、腫瘍細胞上で優先的に、又は専一的に発現するタンパク質について記載する。「優先的に」が、正常体細胞上より、腫瘍細胞上における、比較的高度な発現を意味するのに対し、「専一的に」とは、専門家に公知の、タンパク質検出の標準的な手段により、体細胞上では見出されない、腫瘍細胞上のタンパク質の発現を意味する。これらの基準を満たすタンパク質は、例えば、当該技術分野で周知の、控除的発現スクリーン又は示差的発現スクリーンにより同定することができる。本発明の治療法により利用するのに、腫瘍細胞特異的な発現がどの程度要請されるのかは、目的の抗原を発現させる細胞と、この抗原に特異的なＴ細胞とを、併せてインキュベートし、誘導的殺滅の特異性を決定する細胞アッセイにより評価することができる。

【0065】

「優先的発現」とは、遺伝子増幅、転写の上方調節、若しくはｍＲＮＡ安定化に媒介されるタンパク質の過剰発現、又はこのようなタンパク質の代謝回転に影響を及ぼす突然変異に起因して、正常細胞と比較して、腫瘍細胞上で高度に発現するタンパク質を指す。優先的とはまた、腫瘍細胞上で発現し、また、正常細胞上でも発現するが、ヒト体内の免疫特権領域など、正常細胞が、通例、Ｔ細胞又は抗体にアクセス可能ではない場合のタンパク質も規定する。加えて、胎児性発生時に、専一的に発現するタンパク質など、処置の範囲内で、腫瘍細胞上では発現するが、正常細胞上では発現しないタンパク質も、この定義下に収まる。

【0066】

「専一的発現」とは、処置コース中に、腫瘍細胞上だけで見出されるタンパク質を指す。このようなタンパク質は、細胞表面上に提示され、それらの細胞外部分内に、正常細胞上では見出されない、点突然変異又は欠失を保有することが好ましい。同様に、シェダーゼの腫瘍特異的活性から生じるネオエピトープは、この類型に属する。専一的発現はまた、腫瘍上で専一的に見出され、正常細胞上では見出されない、異常な糖構造体も含む。

【0067】

腫瘍細胞の表面上に天然で存在する腫瘍マーカーの例を、本明細書の下記に示すが、これらは、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＣＳＰ（メラノーマコンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、ＨＥＲ－１（ヒト上皮増殖因子受容体１）、ＨＥＲ－２（ヒト上皮増殖因子受容体２）、ＨＥＲ－３（ヒト上皮増殖因子受容体３）、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３）、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）、ヒト栄養膜細胞表面抗原２（Ｔｒｏｐ－２）、がん抗原１２－５（ＣＡ－１２－５）、ヒト白血球抗原（抗原Ｄ）関連（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＵＣ－１（ムチン１）、Ａ３３抗原、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、トランスフェリン受容体、テネイシン、又は炭素脱水酵素ＩＸ（ＣＡ－ＩＸ）を含むがこれらに限定されない。

【0068】

したがって、本発明の文脈では、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子は、腫瘍細胞の表面上に天然で存在する抗原／マーカーであって、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＣＳＰ（メラノーマコンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、ＨＥＲ－１（ヒト上皮増殖因子受容体１）、ＨＥＲ－２（ヒト上皮増殖因子受容体２）、ＨＥＲ－３（ヒト上皮増殖因子受容体３）、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３）、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）、ヒト栄養膜細胞表面抗原２（Ｔｒｏｐ－２）、がん抗原１２－５（ＣＡ－１２－５）、ヒト白血球抗原（抗原Ｄ）関連（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＵＣ－１（ムチン１）、Ａ３３抗原、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、トランスフェリン受容体、テネイシン、又はＣＡ－ＩＸ（炭素脱水酵素ＩＸ）からなる群から選択される抗原／マーカーに結合する。

【0069】

ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＣＳＰ（メラノーマコンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、ＨＥＲ－１（ヒト上皮増殖因子受容体１）、ＨＥＲ－２（ヒト上皮増殖因子受容体２）、ＨＥＲ－３（ヒト上皮増殖因子受容体３）、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３）、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）、ヒト栄養膜細胞表面抗原２（Ｔｒｏｐ－２）、がん抗原１２－５（ＣＡ－１２－５）、ヒト白血球抗原（抗原Ｄ）関連（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＵＣ－１（ムチン１）、Ａ３３抗原、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、トランスフェリン受容体、テネイシン、又はＣＡ－ＩＸ（炭素脱水酵素ＩＸ）の（ヒト）メンバーの配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔデータベースで利用可能であり、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／？ｑｕｅｒｙ＝ｒｅｖｉｅｗｅｄ％３Ａｙｅｓから検索することができる。これらの（タンパク質）配列はまた、注釈された修飾配列にも関する。本発明はまた、本明細書で提示されるコンサイス配列の同種配列を使用し、また、対立遺伝子変異体なども使用する技法及び方法も提供する。本明細書のコンサイス配列の、このような「変異体」などを使用することが好ましい。好ましくは、このような「変異体」は、遺伝子変異体である。当業者は、ゲノムＤＮＡのほか、ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡのエントリーもまた含みうる、これらのデータバンクエントリー内の、これらの（タンパク質）配列の関与性のコード化領域を、容易に推定することができる。

【0070】

（ヒト）ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１６４２２（エントリーバージョン１１７、配列バージョン２）から得ることもでき；（ヒト）ＭＳＬＮ（メソテリン）の配列を、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｑ１３４２１（バージョン番号１３２、配列ナンバー２；配列番号１４９（ＤＮＡ）及び１５０（タンパク質））から得ることもでき、（ヒト）ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３６８８８（主要引用寄託番号）又はＱ１３４１４（副次的寄託番号）、バージョン番号１６５及び配列バージョン２から得ることもでき、（ヒト）ＭＣＳＰ（メラノーマコンドロイチン硫酸プロテオグリカン）の配列を、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｑ６ＵＶＫ１（バージョン番号１１８、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）の配列を、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ１５３２８（主要引用寄託番号）又はＱ５３ＥＷ２（副次的寄託番号）、バージョン番号１５３及び配列バージョン３から得ることもでき、（ヒト）栄養膜細胞表面抗原２（Ｔｒｏｐ－２）の配列を、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ０９７５８（主要引用寄託番号）又はＱ１５６５８（副次的寄託番号）、バージョン番号１７２及び配列バージョン３から得ることもでき、（ヒト）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）の配列を、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｏ４３６５３（主要引用寄託番号）又はＱ６ＵＷ９２（副次的寄託番号）、バージョン番号１３４及び配列バージョン１から得ることもでき、（ヒト）ＨＥＲ－１（上皮増殖因子受容体１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ００５３３（エントリーバージョン１７７、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＨＥＲ－２（上皮増殖因子受容体２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０４６２６（エントリーバージョン１６１、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＨＥＲ－３（上皮増殖因子受容体３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２１８６０（エントリーバージョン１４０、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原であるＣＤ２０）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１８３６（エントリーバージョン１１７、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ２２（Ｂリンパ球抗原であるＣＤ２２）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２０２７３（エントリーバージョン１３５、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＤ３３（Ｂリンパ球抗原であるＣＤ３３）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２０１３８（エントリーバージョン１２９、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＣＡ－１２－５（ムチン１６）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８ＷＸＩ７（エントリーバージョン６６、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）ＨＬＡ－ＤＲの配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ２９９００（エントリーバージョン５９、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＭＵＣ－１（ムチン１）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５９４１（エントリーバージョン１３５、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）Ａ３３（細胞 表面 Ａ３３抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９９７９５（エントリーバージョン１０４、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０４６０９（エントリーバージョン１３３、配列バージョン１）から得ることもでき、（ヒト）トランスフェリン受容体の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＰ５２（エントリーバージョン９９、配列バージョン１）及びＰ０２７８６（エントリーバージョン１５２、配列バージョン２）から得ることもでき、（ヒト）テネイシンの配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２４８２１（エントリーバージョン１４１、配列バージョン３）から得ることもでき、（ヒト）ＣＡ－ＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）の配列を、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１６７９０（エントリーバージョン１１５、配列バージョン２）から得ることもできる。

【0071】

本明細書で提示される分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）は、医療現場において、特に、有用である。例えば、悪性疾患は、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子により処置することができる。本発明の文脈では、悪性疾患は、上皮由来、内皮由来、若しくは中皮由来のがん／癌腫、又は血液がんでありうる。本発明の文脈では、がん／癌腫は、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、口腔がん、胃がん、子宮頸がん、Ｂリンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、骨髄性白血病、卵巣がん、白血病、リンパ性白血病、鼻咽頭癌、結腸がん、前立腺がん、腎細胞がん、頭頸部がん、皮膚がん（メラノーマ）、泌尿生殖器がん、例えば、精巣がん、卵巣がん、内皮がん、子宮頸がん、及び腎臓がん、胆管がん、食道がん、唾液腺がん、及び甲状腺がん、又は血液腫瘍、神経膠腫、肉腫、若しくは骨肉腫など、他の腫瘍性疾患からなる群から選択される。

【0072】

本明細書で提示される分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される二重特異性抗体分子）は、医療現場において、特に、有用である。例えば、腫瘍性疾患及び／又はリンパ腫は、これらの医学的適応を指向する二重特異性コンストラクトにより処置することができる。三価の二重特異性抗体／分子の適応は、腫瘍抗原の発現によりもたらされる。実態内で発現する腫瘍抗原を、上述のＴ細胞マーカー（天然に存在する／腫瘍細胞の表面上に内因的に発現する抗原を表す）のうちのいずれかと、実質的に結びつけることができる。例えば、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんは、（ヒト）ＥｐＣＡＭ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、１つ又はＴ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）で処置することができる。したがって、本発明の文脈では、ＥｐＣＡＭ、好ましくは、ヒトＥｐＣＡＭを指向し、Ｃｒｉｐｔｏを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインをさらに含む、三価の二重特異性抗体コンストラクトを、胃腸がん、例えば、胃腸由来の腺癌の処置において使用することができる。したがって、本発明の文脈では、三価の二重特異性抗体コンストラクト／分子は、１つの結合ドメインを介して、ＥｐＣＡＭ、好ましくは、ヒトＥｐＣＡＭを指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、２つの結合ドメインを含む。本発明の代替的な実施態様では、三価の二重特異性抗体分子はまた、２つの結合ドメインを介して、ＥｐＣＡＭ、好ましくは、ヒトＥｐＣＡＭを指向し、１つの結合ドメインが、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向するようにデザインすることもできる。

【0073】

胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＨＥＲ１、好ましくは、ヒトＨＥＲ１（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。これは、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんは、２つの結合ドメインを介して、ＨＥＲ１、好ましくは、ヒトＨＥＲ１（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する１つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置しうることを意味する。代替的に、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんは、１つの結合ドメインを介して、ＨＥＲ１、好ましくは、ヒトＨＥＲ１（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。さらに、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽細胞腫、及び／又は口腔がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＭＣＳＰ、好ましくは、ヒトＭＣＳＰ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽細胞腫、及び／又は口腔がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＦＯＬＲ１、好ましくは、ヒトＦＯＬＲ１（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽細胞腫、及び／又は口腔がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、Ｔｒｏｐ－２、好ましくは、ヒトＴｒｏｐ－２（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽細胞腫、及び／又は口腔がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＰＳＣＡ、好ましくは、ヒトＰＳＣＡ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽細胞腫、及び／又は口腔がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、好ましくは、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽細胞腫、及び／又は口腔がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＭＳＬＮ、好ましくは、ヒトＭＳＬＮ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＨＥＲ２、好ましくは、ヒトＨＥＲ２（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃がん及び／又は肺がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＨＥＲ３、好ましくは、ヒトＨＥＲ３（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。Ｂ細胞リンパ腫及び／又はＴ細胞リンパ腫は、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＣＤ２０、好ましくは、ヒトＣＤ２０（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。Ｂ細胞リンパ腫及び／又はＴ細胞リンパ腫は、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＣＤ２２、好ましくは、ヒトＣＤ２２（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。骨髄性白血病は、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＣＤ３３、好ましくは、ヒトＣＤ３３（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価の二重特異性コンストラクトにより処置することができる。卵巣がん、肺がん、乳がん、及び／又は胃腸がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＣＡ１２－５、好ましくは、ヒトＣＡ１２－５（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃腸がん、白血病、及び／又は鼻咽頭癌は、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＨＬＡ－ＤＲ、好ましくは、ヒトＨＬＡ－ＤＲ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。結腸がん、乳がん、卵巣がん、肺がん、及び／又は膵臓がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＭＵＣ－１、好ましくは、ヒトＭＵＣ－１（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。結腸がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、Ａ３３、好ましくは、ヒトＡ３３（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、
すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。前立腺がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＰＳＭＡ、好ましくは、ヒトＰＳＭＡ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、トランスフェリン受容体、好ましくは、ヒトトランスフェリン受容体（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。膵臓がん、肺がん、及び／又は乳がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、トランスフェリン受容体、好ましくは、ヒトトランスフェリン受容体（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。腎がんは、１つ又は２つの結合ドメインを介して、ＣＡ－ＩＸ、好ましくは、ヒトＣＡ－ＩＸ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向し、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価で二重特異性の分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）により処置することができる。

【0074】

また、添付の実施例でも、本発明の概念実証として、例示的に示されるように、本発明の、特異的な、三価の二重特異性抗体分子は、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、上記で規定された第１の（Ｉｇ由来の）ドメイン及び第２の（Ｉｇ由来の）ドメインと、マウスＥｐＣＡＭに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、第２の（Ｉｇ由来の）ドメインとを含む（図９を参照されたい）。さらに、図１０は、本発明の、特異的な、三価の二重特異性抗体分子は、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、上記で規定された第１の（Ｉｇ由来の）ドメイン及び第２の（Ｉｇ由来の）ドメインと、ヒトＭＳＬＮに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、第２の（Ｉｇ由来の）ドメインとを含むことを例示する。さらに、図１１は、本発明の、特異的な、三価の二重特異性抗体分子は、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、上記で規定された第１の（Ｉｇ由来の）ドメイン及び第２の（Ｉｇ由来の）ドメインと、ヒトＭＣＳＰに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、第２の（Ｉｇ由来の）ドメインとを含むことを例示する。ＥＧＦＲｖＩＩＩ及びＥｐＣＡＭに対する、三価の二重特異性抗体を使用するか、ＥＧＦＲｖＩＩＩ及びＭＳＬＮに対する、三価の二重特異性抗体を使用するか、又はＥＧＦＲｖＩＩＩ及びＭＣＳＰを指向する、三価の二重特異性抗体を使用することにより処置しうる疾患は、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽細胞腫、及び／又は口腔がんを含む。

【0075】

上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ；また、１７－１Ａ抗原、ＫＳＡ、ＥＧＰ４０、ＧＡ７３３－２、ｋｓ１－４、又はｅｓａとも呼ばれる）は、ある特定の上皮内及び多くのヒト癌腫上の特異的発現を伴う、３１４アミノ酸で、４０ｋＤａの膜貫通糖タンパク質である（Balzar、J. Mol. Med. (1999)、77、699-712に概説がある）。ＥｐＣＡＭは、発見され、その後、マウスモノクローナル抗体である１７－１Ａ／エドレコロマブによるその認識を介してクローニングされた（Goettlinger、Int J Cancer、38 (1986)、47-53；及びSimon、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、87 (1990)、2755-2759）。ＥｐＣＡＭは、方向付けられ、高度に順序付けられた形で、上皮細胞に接着するように働く（Litvinov、J Cell Biol.、139 (1997)、1337-1348）。上皮細胞が悪性形質転換すると、急速に増殖する腫瘍細胞は、上皮の高度な細胞秩序を放棄する。結果として、ＥｐＣＡＭの表面分布の拘束は低下し、腫瘍細胞上の分子の露出はより大きくなり、腫瘍細胞の表面上の、抗体、抗体断片、又は抗体誘導体の結合にアクセス可能となる。それらの上皮細胞由来のために、大半の癌腫に由来する腫瘍細胞はやはり、それらの表面上に、ＥｐＣＡＭを発現させる。

【0076】

インビボにおけるＥｐＣＡＭの発現は、上皮の増殖の増大に関し、細胞の分化と負に相関する（概説については、Balzar、J. Mol. Med.、77 (1999)、699-712を参照されたい）。ＥｐＣＡＭの発現は、全ての主要な癌腫に本質的にみられる（Balzar、J. Mol. Med.、77 (1999)、699-712に概説があるか、又は、特に、De Bree、Nucl Med Commun.、15 (1994)、613-27；Zhang、Clin Cancer Res.、4 (1998)、295-302に記録されている）。その広範な発現のために、ＥｐＣＡＭを、「汎癌」抗原と称する。多くの症例では、腫瘍細胞は、それらの親上皮又は前記がんの侵襲性の小さな形態よりはるかに高度に、ＥｐＣＡＭを発現させることが観察された。例えば、ＥｐＣＡＭ発現の増大は、前立腺がんの発生における早期イベントを表す（Poczatek、J. Urol.、162 (1999)、1462-1644）。加えて、頸部の扁平上皮癌及び腺癌のいずれの大半でも、強いＥｐＣＡＭの発現は、増殖の増大、及び終末分化についてのマーカーの消滅と相関する（Litvinov、Am. J. Pathol.、148 (1996)、865-75）。乳がんでは、腫瘍細胞上の、ＥｐＣＡＭの過剰発現は、生存率の予測因子である（Gastl、Lancet、356 (2000)、1981-1982）。ＥｐＣＡＭは、頭部、頸部、及び肺の扁平上皮癌を患う患者における、播種性腫瘍細胞の検出のためのマーカーである（Chaubal、Anticaner Res.、19 (1999)、2237-2242；及びPiyathilake、Hum. Pathol.、31 (2000)、482-487）。表皮、口腔、喉頭蓋、咽頭、喉頭、及び食道において見出される、正常な扁平上皮は、ＥｐＣＡＭを、著明に発現させなかった（Quak、Hybridoma、9 (1990)、377-387）。ＥｐＣＡＭは、原発性ＮＳＣＬＣ、転移性ＮＳＣＬＣ、及び播種性ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん細胞（Passlick、Int J Cancer、87 (2000)、548-552））の大半の上、胃腺癌及び胃－食道接合点腺癌（Martin、J. Clin. Pathol.、52 (1999)、701-4）の上、ならびに結腸直腸癌、膵臓癌、及び乳癌に由来する細胞株内（Szala、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、87 (1990)、3542-6；及びPackeisen、Hybridoma、18 (1999)、37-40）で発現することが示されている。

【0077】

添付の実施例で、本発明の概念実証として、例示的に示されるように、三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０を含む／これらからなる配列番号２３３）であって、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、１つのドメインと、マウスＥｐＣＡＭに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、２つのドメインとを含む、三価の二重特異性抗体分子を構築した。三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」の配列（アミノ酸及びＤＮＡ）を、下記の表１及び２に示す。
表1:

表2:

【0078】

さらに、本発明の概念実証として、図１０で例示される通り、三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＣＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＶＬ ＭＳＬＮ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１５４４３」、及び「ＶＨ ＭＳＬＮ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１５６６７」を含む／これらからなる配列番号２３５）であって、ヒトＭＳＬＮに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、２つのドメインと、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、１つのドメインとを含む、三価の二重特異性抗体分子を構築した。三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」の配列（アミノ酸及びＤＮＡ）を、表３及び４に示す。
表3:

表4:

【0079】

さらに、本発明の概念実証として、図１１で例示される通り、三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」（プラスミドである、「ＭＲ１．１ ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＶＨ－Ｃｋ－（Ｇ４Ｓ）２ ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１６６２１」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＭＣＳＰ ＭＬ２ ＶＬ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１６６１９」、及び「ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＹＲＦ，ｐＥＴＲ１６６１８」を含む／これらからなる配列番号２３４）であって、ヒトＭＣＳＰに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、２つのドメインと、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する／これを指向する／これと相互作用するか又はこれ上で相互作用する、１つのドメインとを含む、三価の二重特異性抗体分子を構築した。三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」の配列（アミノ酸及びＤＮＡ）を、表５及び６に示す。
表5:

表6

【0080】

本発明はまた、本発明の、三価の二重特異性抗体分子をコードする核酸分子も提供する。本発明にはまた、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子も包摂される。

【0081】

「核酸分子」という用語は、ポリヌクレオチドにより構成される、プリン塩基及びピリミジン塩基を含む塩基であって、核酸分子の一次構造を表す塩基の配列に関する。本明細書の「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムのＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡの合成型、及びこれらの分子のうちの２つ又はこれを超える分子を含む混合型ポリマーを含む。加えて、「核酸分子」という用語は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方を含む。さらに、本明細書で記載される「核酸分子」は、当業者によりたやすく察知される通り、非天然ヌクレオチド塩基又は誘導体化ヌクレオチド塩基を含有しうる。本発明の融合タンパク質をコードする、例示的核酸分子を、配列番号４１、４３、４５、４７、４９、又は１１９に示す。さらに、例示的に述べると、本発明の、三価の二重特異性抗体分子の、重鎖及び／又は軽鎖の領域をコードする核酸分子を、配列番号１、３、５、７（表１及び２を参照されたい）、配列番号２１、２３、２５、２７（表３及び４を参照されたい）、ならびに配列番号２０７、２０９、２１１、及び２１３（表５及び６を参照されたい）に示す。

【0082】

本発明の核酸分子は、調節配列の制御下にありうる。例えば、プロモーター、転写エンハンサー、及び／又は本発明の融合タンパク質の誘導的発現を可能とする配列を援用することができる。本発明の文脈では、核酸分子を、構成的プロモーター又は誘導的プロモーターの制御下で発現させる。適切なプロモーターは、例えば、ＣＭＶプロモーター（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、ＵＢＣプロモーター（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、ＰＧＫ（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、EF１Ａプロモーター（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、ＣＡＧＧプロモーター（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、ＳＶ４０プロモーター（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、ＣＯＰＩＡプロモーター（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、ＡＣＴ５Ｃプロモーター（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、ＴＲＥプロモーター（Qinら、PLoS One、5 (5) (2010)、e10611）、Ｏｃｔ３／４プロモーター（Changら、Molecular Therapy、9(2004)、S367 (doi: 10.1016/j.ymthe.2004.06.904)）、又はＮａｎｏｇプロモーター（Wuら、Cell Res.、15 (5) (2005)、317-24）である。

【0083】

「調節配列」という用語は、それらがライゲーションされたコード配列の発現を行うのに必要なＤＮＡ配列を指す。このような制御配列の性格は、宿主生物に応じて異なる。原核生物では、制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、及びターミネーターを含む。真核生物では、一般に、制御配列は、プロモーター、ターミネーターを含み、場合によって、エンハンサー、トランス活性化因子、又は転写因子を含む。「制御配列」という用語は、最低限で、それらの存在が発現に必要な、全ての構成要素を含むことを意図し、また、さらなる有利な構成要素も含みうる。

【0084】

前記核酸分子は、前述の核酸分子のうちのいずれかを、単独で、又は組合せで含む、組換えにより作製されたキメラ核酸分子でありうる。本発明の文脈では、核酸分子は、ベクターの一部である。

【0085】

したがって、本発明はまた、本発明で記載される核酸分子を含むベクターにも関する。本明細書における「ベクター」という用語は、それが導入された宿主細胞（すなわち、形質導入細胞）内で自律的に複製されうる、環状又は直鎖状の核酸分子に関する。当業者には、多くの適切なベクターが公知であり、分子生物学では、それらの選択は、所望される機能に依存し、遺伝子操作において、従来使用されている、プラスミド、コスミド、ウイルス及びバクテリオファージ、及び他のベクターを含む。当業者に周知の方法を使用して、多様なプラスミド及びベクターを構築することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）；及びＡｕｓｕｂｅｌ、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）、（１９９４）において記載されている技法を参照されたい。代替的に、本発明のポリヌクレオチド及びベクターを、標的細胞への送達のためのリポソームに再構築することができる。下記でさらに詳細に論じる通り、クローニングベクターを使用して、ＤＮＡの個別の配列を単離する。関与性の配列を、特定のポリペプチドの発現が要請される発現ベクターに導入することができる。典型的なクローニングベクターは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ、ｐＧＥＭ、ｐＵＣ９、ｐＢＲ３２２、ｐＧＡ１８、及びｐＧＢＴ９を含む。典型的な発現ベクターは、ｐＴＲＥ、ｐＣＡＬ－ｎ－ＥＫ、ｐＥＳＰ－１、ｐＯＰ１３ＣＡＴを含む。

【0086】

本発明はまた、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体コンストラクト（分子）をコードする前記核酸分子に動作可能に連結された調節配列である核酸分子を含むベクターにも関する。本発明の文脈では、ベクターは、ポリシストロニックでありうる。添付の実施例に示されるように、三価の二重特異性抗体分子は、各核酸分子が、調節配列に動作可能に連結された、少なくとも３つの異なる核酸分子上で発現させることができる。

【0087】

当業者には、このような調節配列（制御エレメント）が公知であり、プロモーター、スプライスカセット、翻訳開始コドン、翻訳部位、及びインサートを、ベクターに導入するための挿入部位を含みうる。本発明の文脈では、前記核酸分子を、真核細胞内又は原核細胞内の発現を可能とする前記発現制御配列に、動作的に連結する。

【0088】

前記ベクターは、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体コンストラクト（分子）をコードする核酸分子を含む発現ベクターであることが想定される。

【0089】

「調節配列」という用語は、それらがライゲーションされたコード配列の発現を行うのに必要なＤＮＡ配列を指す。このような制御配列の性格は、宿主生物に応じて異なる。原核生物では、制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、及びターミネーターを含む。真核生物では、一般に、制御配列は、プロモーター、ターミネーターを含み、場合によって、エンハンサー、トランス活性化因子、又は転写因子を含む。「制御配列」という用語は、最低限で、それらの存在が発現に必要な、全ての構成要素を含むことを意図し、また、さらなる有利な構成要素も含みうる。

【0090】

「動作可能に連結された」という用語は、そのように記載された構成要素を、それらが、それらの目的の形で機能することを可能とする関係に置く並置を指す。コード配列に「動作可能に連結された」制御配列は、制御配列と適合的な条件下で、コード配列の発現が達成されるような形でライゲーションされている。制御配列がプロモーターである場合、当業者には、二本鎖核酸を使用することが好ましいことが明らかである。

【0091】

本発明の文脈では、列挙されたベクターは、発現ベクターである。「発現ベクター」は、選択された宿主を形質転換するのに使用することが可能であり、選択された宿主において、コード配列の発現をもたらすコンストラクトである。例えば、発現ベクターは、クローニングベクター、二元ベクター、又は組込みベクターでありうる。発現は、核酸分子の、好ましくは、翻訳可能なｍＲＮＡへの転写を含む。当業者には、原核生物及び／又は真核細胞における発現を確保する調節エレメントが周知である。真核細胞の場合、調節エレメントは、通常、転写の開始を確保するプロモーターを含み、任意選択で、転写の終結及び転写物の安定化を確保するポリＡシグナルを含む。原核宿主細胞内の発現を可能とする、可能な調節エレメントは、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）内のＰＬプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、又はｔａｃプロモーターを含み、真核生物の宿主細胞内の発現を可能とする調節エレメントの例は、酵母におけるＡＯＸ１プロモーター若しくはＧＡＬ１プロモーター、又は哺乳動物及び他の動物細胞における、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター（ラウス肉腫ウイルス）、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサー、又はグロビンイントロンである。

【0092】

転写の開始の一因となるエレメントのほか、このような調節エレメントはまた、ポリヌクレオチドの下流において、ＳＶ４０－ｐｏｌｙ－Ａ部位又はｔｋ－ｐｏｌｙ－Ａ部位などの転写終結シグナルも含みうる。さらに、使用される発現系に応じて、ポリペプチドを、細胞コンパートメントに方向付けるか、又は培地に分泌することが可能なリーダー配列を、列挙された核酸配列のコード配列に添加することもでき、当該技術分野では、これらが周知である（例えば、また、添付の実施例も参照されたい）。

【0093】

リーダー配列は、適切な段階で、翻訳配列、開始配列、及び終止配列、ならびに、好ましくは、翻訳されたタンパク質又はこの部分の、細胞周辺腔又は細胞外培地への分泌を方向付けることが可能なリーダー配列と共にアセンブルされる。任意選択で、異種配列は、所望の特性、例えば、発現させた組換え産物の安定化又は精製の簡略化を付与するＮ末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードしうる（前出を参照されたい）。この文脈では、当該技術分野では、岡山－バーグによるｃＤＮＡ発現ベクターｐｃＤＶ１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＣＤＭ８、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐｃＤＮＡ１、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎ－ｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）、ｐＥＦ－ＤＨＦＲ、ｐＥＦ－ＡＤＡ若しくはｐＥＦ－ｎｅｏ（Raumら、Cancer Immunol Immunother、50 (2001)、141-150）、又はｐＳＰＯＲＴ１（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ）など、適切な発現ベクターが公知である。

【0094】

本発明の文脈では、発現制御配列は、真核生物の宿主細胞を形質転換するか、又はこれにトランスフェクトすることが可能なベクター内の、真核性プロモーター系であるが、原核生物宿主の制御配列もまた使用することができる。ベクターを、適切な宿主に組み込んだら、宿主を、ヌクレオチド配列の高レベルの発現に適する条件下で維持する。所望に応じ、本発明のポリペプチドの回収及び精製が後続する。例えば、添付の実施例を参照されたい。

【0095】

細胞周期相互作用型タンパク質を発現させるのに使用されうる、代替的な発現系は、昆虫系である。１つのこのような系では、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）を、ヨトウガ細胞又はＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ属幼虫において、外来の遺伝子を発現させるベクターとして使用する。列挙された核酸分子のコード配列は、ポリヘドリン遺伝子など、ウイルスの非必須領域にクローニングし、ポリヘドリンプロモーターの制御下に置くことができる。前記コード配列の挿入の成功は、ポリヘドリン遺伝子を不活性とし、コートタンパク質のコートを欠く組換えウイルスをもたらす。次いで、組換えウイルスを使用して、ヨトウガ細胞又はＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ属幼虫に感染させ、これらの中で、本発明のタンパク質を発現させる（Smith、J. Virol.、46 (1983)、584；Engelhard、Proc. Nat. Acad. Sci. USA、91 (1994)、3224-3227）。

【0096】

さらなる調節エレメントは、転写エンハンサーのほか、翻訳エンハンサーを含みうる。上記で記載された、本発明のベクターは、選択マーカー及び／又はスコア付け用マーカーを含むと有利である。

【0097】

当業者には、形質転換細胞の選択に有用であり、例えば、形質転換された植物組織及び形質転換植物の選択に有用な選択マーカー遺伝子が周知であり、例えば、メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Reiss、Plant Physiol. (Life Sci. Adv.)、13 (1994)、143-149）、アミノグリコシドである、ネオマイシン、カナマイシン、及びパロマイシンに対する耐性を付与するｎｐｔ（Herrera-Estrella、EMBO J.、2 (1983)、987-995）、及びハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Marsh、Gene 32 (1984)、481-485）についての選択のベースとしての代謝拮抗剤耐性を含む。さらなる選択遺伝子、すなわち、細胞が、トリプトファンの代わりにインドールを活用することを可能とするｔｒｐＢ；細胞が、ヒスチジンの代わりにヒスチノールを活用することを可能とするｈｉｓＤ（Hartman、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、85 (1988)、8047）；細胞が、マンノースを活用することを可能とするマンノース－６－リン酸イソメラーゼ（国際公開第９４／２０６２７号）、及びオルニチンデカルボキシラーゼ阻害剤に対する耐性を付与するＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼ）、２－（ジフルオロメチル）－ＤＬ－オルニチン、ＤＦＭＯ（McConlogue、1987、「Current Communications in Molecular Biology」、Cold Spring Harbor Laboratory刊）、又はブラストサイジンＳに対する耐性を付与するＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓに由来するデアミナーゼ（Tamura、Biosci. Biotechnol. Biochem.、59 (1995)、2336-2338）についても記載されている。

【0098】

当業者には、有用なスコア付けマーカーもまた公知であり、市販されている。前記マーカーが、ルシフェラーゼ（Giacomin、Pl. Sci.、116 (1996)、59-72；Scikantha、J. Bact.、178 (1996)、121）、緑色蛍光タンパク質（Gerdes、FEBS Lett.、389 (1996)、44-47）、又はβ－グルクロニダーゼ（Jefferson、EMBO J.、6 (1987)、3901-3907）をコードする遺伝子であると有利である。この実施態様は、列挙されたベクターを含有する、細胞、組織、及び生物体の、簡略及び迅速なスクリーニングに、特に、有用である。

【0099】

上記で記載した通り、列挙された核酸分子を、単独で使用することもでき、コードされる、三価の二重特異性コンストラクトを、例えば、精製を目的に、また、遺伝子治療も目的に、細胞内で発現させるベクターの一部として、好ましくは、形質導入されたＴ細胞と組み合わせて使用することもできる。上記で記載した、三価の二重特異性抗体分子のうちのいずれか１つをコードするＤＮＡ配列を含有する核酸分子又はベクターを、細胞に導入すると、これにより、目的のポリペプチドが産生される。エクスビボ法又はインビボ法により、治療用遺伝子を、細胞に導入することに基づく遺伝子治療は、遺伝子導入の、最も重要な適用のうちの１つである。インビトロ又はインビボにおける遺伝子治療に適するベクター、方法、又は遺伝子送達系は、文献において記載されており、当業者にも公知である。例えば、Giordano、Nature Medicine、2 (1996)、534-539；Schaper、Circ. Res.、79 (1996)、911-919；Anderson、Science、256 (1992)、808-813；Verma、Nature、389 (1994)、239；Isner、Lancet、348 (1996)、370-374；Muhlhauser、Circ. Res.、77 (1995)、1077-1086；Onodera、Blood、91 (1998)、30-36；Verma、Gene Ther.、5 (1998)、692-699；Nabel、Ann. N.Y. Acad. Sci.、811 (1997)、289-292；Verzeletti、Hum. Gene Ther.、9 (1998)、2243-51；Wang、Nature Medicine、2 (1996)、714-716；国際公開第９４／２９４６９号；国際公開第９７／００９５７号；米国特許第５５８０８５９号；米国特許第５５８９４６６号；又はSchaper、Current Opinion in Biotechnology、7 (1996)、635-640.を参照されたい。列挙された核酸分子及びベクターは、細胞への直接的導入のためにデザインすることもでき、細胞への、リポソーム又はウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス）を介した導入のためにデザインすることもできる。本発明の文脈では、前記細胞は、生殖系列細胞、胚細胞、若しくは卵母細胞であるか、又はこれ由来し、最も好ましくは、前記細胞は、幹細胞である。胚性幹細胞の例は、特に、Ｎａｇｙ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０（１９９３）、８４２４－８４２８において記載されている幹細胞でありうる。

【0100】

上記に従い、本発明は、本明細書で規定される二重特異性抗体コンストラクトのポリペプチド配列をコードする核酸分子を含む遺伝子操作において、従来使用されている、ベクター、特に、プラスミド、コスミド、及びバクテリオファージを導出する方法に関する。本発明の文脈では、前記ベクターは、発現ベクター及び／又は遺伝子導入ベクター若しくはターゲティングベクターである。レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、又はウシパピローマウイルスなどのウイルスに由来する発現ベクターを、列挙されたポリヌクレオチド又はベクターの、標的細胞集団への送達に使用することができる。

【0101】

当業者に周知の方法を使用して、組換えベクターを構築することができる。例えば、Sambrookら(前出)、Ausubel(1989、前出)、又は他の標準的な教科書において記載されている技法を参照されたい。代替的に、列挙された核酸分子及びベクターを、標的細胞への送達のためのリポソームに再構築することができる。本発明の核酸分子を含有するベクターは、細胞宿主の種類に応じて変動する、周知の方法により、宿主細胞に導入することができる。例えば、原核細胞には、塩化カルシウムトランスフェクションを一般に活用するのに対し、他の細胞宿主には、リン酸カルシウム処置又はエレクトロポレーションを使用することができる（Sambrook、前出を参照されたい）。列挙されるベクターは、特に、ｐＥＦ－ＤＨＦＲ、ｐＥＦ－ＡＤＡ、又はｐＥＦ－ｎｅｏでありうる。ベクターである、ｐＥＦ－ＤＨＦＲ、ｐＥＦ－ＡＤＡ、及びｐＥＦ－ｎｅｏについては、当該技術分野で、例えば、Ｍａｃｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９２ （１９９５）、７０２１－７０２５；及びＲａｕｍら、Ｃａｎｃｅｒ ＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、５０（２００１）、１４１－１５０において記載されている。

【0102】

本発明はまた、本明細書で記載されるベクターで形質転換されるか、又はこれをトランスフェクトされた宿主も提供する。前記宿主は、上記で記載されたベクターのうちの少なくとも１つ、又は上記で記載された核酸分子のうちの少なくとも１つを、宿主に導入することにより作製することができる。宿主内の、前記少なくとも１つのベクター、又は少なくとも１つの核酸分子の存在は、上記で記載された、三価の二重特異性抗体分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）をコードする遺伝子の発現を媒介しうる。本発明のベクターは、ポリシストロニックでありうる。

【0103】

本発明の、三価の二重特異性抗体分子の発現の場合、軽鎖の重複は、完全な、三価の二重特異性抗体分子のアセンブリー及び／又は発現の、軽鎖のコード化領域が、宿主細胞内に、重鎖のコード化領域と、１：１の比で存在する状況を上回る改善を可能としうる。したがって、本発明は、コンストラクト及び方法を提供するが、この場合、軽鎖成分の、重鎖成分に対するコード化領域の比は、１：１又は１：１を超える。例えば、ある実施態様では、軽鎖成分の、重鎖成分に対する比は、２：１又は２：１を超える、例えば、３：１、３：２、４：１、又は４：１を超える。本発明の、三価の二重特異性抗体分子が、ＣＨ３ドメインの変更を含む場合、細胞に、対応する発現ベクターを、１：２：１：１の比（「ベクター重鎖ホール（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「軽鎖（ＬＣ）」：「ベクター重鎖ノブ（ＶＨ－ＣＫ－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「交差軽鎖（ＶＬ－ＣＨ１）」）でトランスフェクトすることができる。

【0104】

宿主内に導入された、記載の核酸分子又はベクターは、宿主のゲノムに組み込まれる場合もあり、染色体外に維持される場合もある。

【0105】

宿主は、任意の原核細胞又は真核細胞でありうる。

【0106】

「原核生物」という用語は、本発明のタンパク質を発現させるために、ＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子で形質転換されるか、これらを形質導入されるか、又はトランスフェクトされうる全ての細菌を含むことを意味する。原核生物宿主は、グラム陰性菌のほか、例えば、大腸菌、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、及び枯草菌（Ｂａｃｉｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などのグラム陽性菌を含みうる。「真核生物」という用語は、酵母細胞、高等植物細胞、昆虫細胞と、好ましくは、哺乳動物細胞とを含むことを意味する。組換え作製手順において援用される宿主に応じて、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるタンパク質は、グリコシル化される場合もあり、グリコシル化されない場合もある。とりわけ、本発明のポリペプチドのコード配列と、これに遺伝子的に融合させた、Ｎ末端のＦＬＡＧタグ及び／又はＣ末端のＨｉｓタグとを含有するプラスミド又はウイルスの使用が好ましい。好ましくは、前記ＦＬＡＧタグの長さは、約４－８アミノ酸、最も好ましくは、８アミノ酸である。当業者に一般に公知の技法のうちのいずれかを使用して、宿主を形質転換するか、又はこれにトランスフェクトするのに、上記で記載したポリヌクレオチドを使用することができる。さらに、当該技術分野では、融合させた、動作可能に連結された遺伝子を調製し、それらを、例えば、哺乳動物細胞内及び細菌内で発現させる方法が周知である（Sambrook、前出）。

【0107】

本発明の文脈では、宿主（細胞）は、細菌細胞、昆虫細胞、真菌細胞、植物細胞、又は動物細胞である。

【0108】

特に、列挙された宿主は、哺乳動物細胞、より好ましくは、ヒト細胞又はヒト細胞株でありうることが想定される。

【0109】

特に好ましい宿主細胞は、ＨＥＫ２９３、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＳＰ２／０又はＮＳ／０などの骨髄腫細胞株を含む。添付の実施例に例示されるように、宿主としては、ＨＥＫ２９３細胞及びＣＨＯ細胞が、特に、好ましい。

【0110】

したがって、本発明は、上記で記載した、三価の二重特異性抗体分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を作製するための方法であって、本発明の細胞及び／又は宿主細胞を、三価の二重特異性抗体分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）の発現を可能とする条件下で培養すること（ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ））と、分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、細胞及び／又は培地から回収することとを含む方法に関する。

【0111】

形質転換宿主は、発酵槽内で増殖させ、当該技術分野で公知の技法に従い培養して、最適の細胞増殖を達成することができる。次いで、本発明のポリペプチドを、増殖培地から単離することができる。本発明のポリペプチド、例えば、微生物により発現させた本発明のポリペプチドの単離及び精製は、例えば、例えば、本発明のポリペプチド又は添付の実施例で記載されるポリペプチドのタグを指向する、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体の使用を伴う分離など、調製用クロマトグラフィーによる分離及び免疫学的分離など、任意の従来の手段による単離及び精製でありうる。

【0112】

さらに、本発明は、本明細書で規定される三価の二重特異性（モノクローナル）抗体分子又は上記で開示した方法により作製される、三価の二重特異性（ヒト）抗体分子、本発明の三価の二重特異性抗体分子をコードする核酸分子、ベクター又は本明細書で記載される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞を含む組成物（医薬）を提供する。本発明の文脈では、前記組成物は、任意選択で、担体、安定剤、及び／又は賦形剤による、適切な製剤をさらに含む薬学的組成物である。

【0113】

さらに、本発明は、医薬としての使用のための、本明細書の上記で規定した、三価の二重特異性抗体分子であって、本明細書で記載される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子を提供する。

【0114】

本発明の文脈では、本明細書で記載される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞と組み合わせて投与される、本明細書の上記で規定した三価の二重特異性抗体分子であって、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない抗原を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られた、三価の二重特異性抗体分子を含む薬学的組成物／医薬が提供される。

【0115】

本発明の文脈では、Ｔ細胞に、本明細書の上記で規定した融合タンパク質をコードする核酸分子、及び／又はこのような核酸分子を含むベクターを形質導入する。Ｔ細胞への、本明細書で規定される融合タンパク質のトランスフェクションの文脈では、「ベクター」という用語は、それが導入された宿主細胞（すなわち、形質導入細胞）内で自律的に複製されうる、環状又は直鎖状の核酸分子に関する。本明細書で使用される「ベクター」は、特に、プラスミド、コスミド、ウイルス、バクテリオファージ、及び遺伝子操作において一般に使用される、他のベクターを指す。好ましい実施態様では、本発明のベクターは、細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、最も好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の形質転換に適する。したがって、本発明の一態様では、本明細書で提示されるベクターは、発現ベクターである。発現ベクターについては、文献において、広範にわたり記載されている。特に、本明細書で提示されるベクターは、好ましくは、組換えポリヌクレオチド（すなわち、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子）のほか、発現させるヌクレオチド配列に動作可能に連結された発現制御配列を含む。本明細書で提示されるベクターは、好ましくは、プロモーターをさらに含む。Ｔ細胞への形質導入のための、本明細書で記載されるベクターはまた、宿主（すなわち、形質導入細胞）内の複製を確保する、選択マーカー遺伝子及び複製起点も含みうる。さらに、Ｔ細胞への形質導入のための、本明細書で提示されるベクターはまた、転写終結シグナルも含みうる。プロモーターと、終結シグナルとの間には、好ましくは、発現させることが所望される核酸分子（例えば、融合タンパク質をコードする本発明の核酸分子）の挿入を可能とする、少なくとも１つの制限部位又はポリリンカーが存在する。当業者には、このような挿入をどのようにして実施しうるのかが公知である。当該技術分野では、Ｔ細胞のトランスフェクションのための本発明のベクターを形成するように、本発明の核酸分子を含むのに適するベクターの例が公知である。例えば、本発明の文脈では、適切なベクターは、コスミド、プラスミド（例えば、ネイキッドのプラスミド、又はリポソーム内に含有されたプラスミド）と、本発明の核酸分子（すなわち、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子）を組み込むウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）とを含む。好ましくは、本発明のベクターは、ウイルスベクターである。より好ましくは、本発明のベクターは、レンチウイルスベクターであり、なおより好ましくは、本発明のベクターは、レトロウイルスベクター（例えば、ｐＭＰ７１ベクター）である。したがって、本発明の文脈では、ベクターは、レンチウイルスベクター又はレトロウイルスベクターである。本発明のベクターは、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子の、構成的発現又は条件的発現を可能とする。この文脈では、当該技術分野では、本発明の融合タンパク質を発現させるのに適するレトロウイルスベクターであって、ＳＡＭＥＮ ＣＭＶ／ＳＲａ（Clayら、J. Immunol.、163 (1999)、507-513）、ＬＺＲＳ－ｉｄ３－ＩＨＲＥＳ（Heemskerkら、J. Exp. Med.、186 (1997)、1597-1602）、ＦｅＬＶ（Neilら、Nature、308 (1984)、814-820）、ＳＡＸ（Kantoffら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、83 (1986)、6563-6567）、ｐＤＯＬ（Desiderio、J. Exp. Med.、167 (1988)、372-388）、Ｎ２（Kasidら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、87 (1990)、473-477）、ＬＮＬ６（Tiberghienら、Blood、84 (1994)、1333-1341）、ｐＺｉｐＮＥＯ（Chenら、J. Immunol.、153 (1994)、3630-3638）、ＬＡＳＮ（Mullenら、Hum. Gene Ther.、7 (1996)、1123-1129）、ｐＧ１ＸｓＮａ（Taylorら、J. Exp. Med.、184 (1996)、2031-2036）、ＬＣＮＸ（Sunら、Hum. Gene Ther.、8 (1997)、1041-1048）、ＬＸＳＮ（Sunら、Hum. Gene Ther.、8 (1997)、1041-1048）、ＳＦＧ（Gallardoら、Blood、90 (1997)、952-957）、ＨＭＢ－Ｈｂ－Ｈｕ（Vieillardら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、94 (1997)、11595-11600）、ｐＭＶ７（Cochloviusら、Cancer Immunol. Immunother.、46 (1998)、61-66）、ｐＳＴＩＴＣＨ（Weitjensら、Gene Ther、5 (1998)、1195-1203）、ｐＬＺＲ（Yangら、Hum. Gene Ther.、10 (1999)、123-132）、ｐＢＡＧ（Wuら、Hum. Gene Ther.、10 (1999)、977-982）、ｒＫａｔ．４３．２６７ｂｎ（Gilhamら、J. Immunother.、25 (2002)、139-151）、ｐＬＧＳＮ（Engelsら、Hum. Gene Ther.、14 (2003)、1155-1168）、ｐＭＰ７１（Engelsら、Hum. Gene Ther.、14 (2003)、1155-1168）、ｐＧＣＳＡＭ（Morganら、J. Immunol.、171 (2003)、3287-3295）、ｐＭＳＧＶ（Zhaoら、J. Immunol.、174 (2005)、4415-4423）、又はｐＭＸ（de Witteら、J. Immunol.、181 (2008)、5128-5136などのベクターが公知である。さらに、本発明の文脈では、本発明の融合タンパク質を発現させるのに適するレンチウイルスベクターは、例えば、ＰＬ－ＳＩＮレンチウイルスベクター（Hottaら、Nat Methods.、6 (5) (2009)、370-376）、ｐ１５６ＲＲＬ－ｓｉｎＰＰＴ－ＣＭＶ－ＧＦＰ－ＰＲＥ／ＮｈｅＩ（Campeauら、PLoS One、4 (8) (2009)、e6529）、ｐＣＭＶＲ８．７４（Ａｄｄｇｅｎｅ型番２２０３６）、ＦＵＧＷ（Loisら、Science、295 (5556) (2002)、868-872）、ｐＬＶＸ－ＥＦ１（Ａｄｄｇｅｎｅ型番６４３６８）、ｐＬＶＥ（Brungerら、Proc Natl Acad Sci U S A、111 (9) (2014)、E798-806）、ｐＣＤＨ１－ＭＣＳ１－ＥＦ１（Huら、Mol Cancer Res.、7 (11) (2009)、1756-1770）、ｐＳＬＩＫ（Wangら、Nat Cell Biol.、16 (4) (2014)、345-356）、ｐＬＪＭ１（Solomonら、Nat Genet.、45 (12) (2013)、1428-30）、ｐＬＸ３０２（Kangら、Sci Signal.、6 (287) (2013)、rs13）、ｐＨＲ－ＩＧ（Xieら、J Cereb Blood Flow Metab.、33 (12) (2013)、1875-85）、ｐＲＲＬＳＩＮ（Ａｄｄｇｅｎｅ型番６２０５３）、ｐＬＳ（Miyoshiら、J Virol.、72 (10) (1998)、8150-8157）、ｐＬＬ３．７（Lazebnikら、J Biol Chem.、283 (7) (2008)、11078-82）、ＦＲＩＧ（Raissiら、Mol Cell Neurosci.、57(2013)、23-32）、ｐＷＰＴ（Ritz-Laserら、Diabetologia.、46 (6) (2003)、810-821）、ｐＢＯＢ（Marrら、J Mol Neurosci.、22(1-2)(2004)、5-11）、又はｐＬＥＸ（Ａｄｄｇｅｎｅ型番２７９７６）である。

【0116】

本発明はまた、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子によりコードされる融合タンパク質を発現させる、形質導入された、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞にも関する。したがって、本発明の文脈では、形質導入細胞は、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子、又は本発明の融合タンパク質を発現させる、本発明のベクターを含みうる。

【0117】

本発明の文脈では、「形質導入細胞」という用語は、遺伝子改変細胞（すなわち、核酸分子を、意図的に導入した細胞）に関する。本明細書で提示される形質導入細胞は、本発明のベクターを含みうる。好ましくは、本明細書で提示される形質導入細胞は、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子及び／又は本発明のベクターを含む。本発明の形質導入細胞は、外来のＤＮＡ（すなわち、細胞に導入された核酸分子）を、一過性又は安定的に発現させる細胞でありうる。特に、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子は、レトロウイルス又はレンチウイルスによる形質導入を使用することにより、細胞のゲノムに、安定的に組み込むことができる。ｍＲＮＡトランスフェクションを使用することにより、本発明の融合タンパク質をコードする核酸分子を、一過性に発現させることができる。好ましくは、本明細書で提示される形質導入細胞は、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクター）を介して、細胞内に核酸分子を導入することにより、遺伝子改変されている。したがって、融合タンパク質の発現は、構成的であることが可能であり、融合タンパク質の細胞外ドメインは、細胞表面上で検出可能でありうる。この融合タンパク質の細胞外ドメインは、本明細書で規定される、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の、完全な細胞外ドメインを含みうるが、また、その部分も含みうる。要請される最小のサイズは、融合タンパク質の側の、三価の二重特異性抗体分子が結合するエピトープである。

【0118】

誘導的プロモーター又は抑制的プロモーターの制御下で、融合タンパク質を、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞に導入する場合、発現はまた、条件的な場合もあり、誘導的な場合もある。このような誘導的プロモーター又は抑制的プロモーターの例は、アルコールデヒドロゲナーゼＩ（ａｌｃＡ）遺伝子のプロモーターと、トランス活性化因子タンパク質であるａｌｃＲとを含有する転写系でありうる。ａｌｃＡプロモーターに連結された、目的の遺伝子の発現を制御するのに、異なる農業用アルコールベースの製剤が使用される。さらに、テトラサイクリン応答性プロモーター系は、テトラサイクリンの存在下で、遺伝子発現系を活性化させるように機能する場合もあり、これを抑制するように機能する場合もある。系のエレメントの一部は、テトラサイクリンリプレッサータンパク質（ＴｅｔＲ）、テトラサイクリンオペレーター配列（ｔｅｔＯ）、及びＴｅｔＲと、単純ヘルペスウイルスタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化配列との融合体である、テトラサイクリントランス活性化因子融合タンパク質（ｔＴＡ）を含む。さらに、ステロイド応答性プロモーター、金属関連プロモーター、又は感染特異的（ＰＲ）タンパク質関連プロモーターも使用することができる。

【0119】

発現は、使用される系に応じて、構成的（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ又はｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ）でありうる。本発明の融合タンパク質は、本明細書で提示される形質導入細胞の表面上で発現させることができる。融合タンパク質の細胞外部分（すなわち、Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン）が、細胞表面上で検出しうるのに対し、細胞内部分（すなわち、融合タンパク質の膜貫通アンカリングドメイン、シグナル伝達共刺激ドメイン及びシグナル伝達刺激ドメイン）は、膜に結合するが、細胞表面上で検出可能ではない。融合タンパク質の細胞外ドメインの検出は、この細胞外ドメインに特異的に結合する抗体を使用することにより実行することができる。細胞外ドメインは、これらの抗体を使用して、フローサイトメトリーにより検出することもでき、顕微鏡法により検出することもできる。本発明の形質導入細胞は、任意の免疫細胞でありうる。これらは、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ－（ＮＫ）Ｔ細胞、γδＴ細胞、生得的リンパ系細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、又は好中球を含むがこれらに限定されない。優先的には、前記免疫細胞は、リンパ球であり、優先的には、ＮＫ又はＴ細胞であろう。前記Ｔ細胞は、ＣＤ４Ｔ細胞及びＣＤ８Ｔ細胞、最も好ましくは、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。白血球の表面上の、本発明の融合タンパク質の誘発は、細胞が由来する系統に関わらず、細胞を、その標的細胞に対して、細胞傷害性とするであろう。細胞傷害性は、融合タンパク質のために選び出された、シグナル伝達刺激ドメイン又はシグナル伝達共刺激ドメインに関わらず生じ、さらなるサイトカインの外因性供給に依存しない。したがって、本発明の形質導入細胞は、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄細胞、又は間葉系幹細胞でありうる。好ましくは、本明細書で提示される形質導入細胞は、Ｔ細胞（例えば、自家Ｔ細胞）であり、より好ましくは、形質導入細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。したがって、本発明の文脈では、形質導入細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。さらに、本発明の文脈では、形質導入細胞は、自家Ｔ細胞である。したがって、本発明の文脈では、形質導入細胞は、好ましくは、自家ＣＤ８＋Ｔ細胞である。対象から単離された自家細胞（例えば、Ｔ細胞）の使用に加えて、本発明はまた、同種異系細胞の使用も包含する。したがって、本発明の文脈では、形質導入細胞はまた、同種異系ＣＤ８＋Ｔ細胞などの同種異系細胞でもありうる。同種異系細胞の使用は、細胞、好ましくは、Ｔ細胞が、ＡＰＣが、Ｔ細胞により認識される抗原エピトープと共に、特異的に応答する細胞集団、すなわち、Ｔ細胞集団が拘束される、クラスＩ又はクラスＩＩのＭＨＣ分子を発現させるという条件で、外来の抗原提示細胞（ＡＰＣ）により提示される特異的抗原エピトープを認識しうるという事実に基づく。したがって、同種異系という用語は、非類縁のドナー個体／ドナー対象に由来する細胞であって、例えば、本明細書で記載される融合タンパク質を発現させる形質導入細胞により処置される個体／対象と、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）が適合性である細胞を指す。自家細胞は、本明細書で記載される形質導入細胞で処置される対象から、本明細書の上記で記載される通りに単離された／得られた細胞を指す。

【0120】

上記で記載した通り、本発明の形質導入細胞に、本明細書で提示される融合タンパク質を発現させる核酸分子を形質導入する。腫瘍浸潤リンパ球など、天然の抗腫瘍特異性を保有する細胞（ＴＩＬ；Dudleyら、J Clin Oncol.、31 (17) (2013)、2152-2159 (doi:10.1200/JCO.2012.46.6441)）、又はフローサイトメトリーにより、患者の末梢血から、それらの腫瘍特異性について分取された抗原特異性細胞（Hunsuckerら、Cancer Immunol Res.、3 (3) (2015)、228-235 (doi:10.1158/2326-6066.CIR-14-0001)）の場合、本明細書で記載される細胞には、本発明の融合タンパク質だけが形質導入されるであろう。しかし、本発明の形質導入細胞には、さらなる核酸分子、例えば、Ｔ細胞受容体又はキメラ抗原受容体をコードする核酸分子も共形質導入することができる。さらに、本発明の文脈では、本発明の形質導入細胞には、さらなる核酸分子、例えば、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）をコードする核酸分子も共形質導入することができる。ＦａｓＬは、Ｆａｓと相互作用することが公知である（Nagataら、Science、267 (5203) (1995)、1449-1456；Walkerら、J Immunol.、158 (10) (1997)、4521-4524）。Ｆａｓ及びそのリガンドであるＦａｓＬは、Ｉ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質であり、それぞれ、腫瘍壊死因子／神経増殖因子受容体及び腫瘍壊死因子ファミリータンパク質のメンバーである（ヒトＦＡＳは、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ２５４４５（エントリーバージョン２１８、配列バージョン１；配列番号２４１（タンパク質）及び２４０（ＤＮＡ））下で入手可能であり；ヒトＦａｓＬは、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ４８０２３（エントリーバージョン１９０、配列バージョン１；配列番号２４５（タンパク質）及び２４４（ＤＮＡ））を有し；マウスＦＡＳは、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ４１０４７（エントリーバージョン１６９、配列バージョン１；配列番号２３９（タンパク質）及び２３８（ＤＮＡ））を有し；マウスＦａｓＬは、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ４１０４７（エントリーバージョン１６９、配列バージョン１；配列番号２４３（タンパク質）及び２４２（ＤＮＡ））を有する）。本発明の文脈では、驚くべきことに、かつ、予測外に、ＦａｓＬが、作用方式に重要であることが見出されている。特に、本明細書で記載される融合タンパク質をトランスフェクト／形質導入された、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞の殺滅能は、ＦａｓＬ－Ｆａｓ間相互作用をブロックすることにより損いうることが示された（図１３を参照されたい）。したがって、驚くべきことに、Ｆａｓを（過剰）発現させる細胞を有する腫瘍細胞を有することにより特徴を明らかにされる疾患を処置するために、ＦａｓＬを（過剰）発現させる形質導入細胞を使用しうることが見出された。

【0121】

本発明に従い、「Ｔ細胞受容体」という用語は、当該技術分野で一般に公知である。特に、本明細書にでは、「Ｔ細胞受容体」という用語は、以下の３つの基準：（ｉ）腫瘍特異性、（ｉｉ）（大半の）腫瘍細胞の認識であって、抗原又は標的が、（大半の）腫瘍細胞内で発現すべきことを意味する認識、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲが、処置される対象のＨＬＡ型にマッチすることを満たすという条件で、任意のＴ細胞受容体を指す。この文脈では、当該技術分野では、ＷＴ１（ウィルムス腫瘍特異的抗原１；配列情報については、例えば、Sugiyama、Japanese Journal of Clinical Oncology、40 (2010)、377-87を参照されたい）、ＭＡＧＥ（配列については、例えば、国際公開第２００７／０３２２５５号（Ａ１）及びＰＣＴ／米国出願第２０１１／５７２７２号を参照されたい）、ＳＳＸ（米国仮出願第６１／３８８９８３号）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（配列情報については、例えば、ＰＣＴ／英国出願第２００５／００１９２４号を参照されたい）、及び／又はＨＥＲ２ｎｅｕ（配列情報については、国際公開第２０１１／０２８０８９４号（Ａ１）を参照されたい）を認識する受容体など、上述の３つの基準を満たす、適切なＴ細胞受容体が公知である。

【0122】

当該技術分野では、「キメラ抗原受容体」又は「キメラ受容体」という用語が公知であり、スペーサー配列により、ＣＤ３ｚ及びＣＤ２８のシグナルドメインに融合させた、単鎖抗体ドメインの細胞外部分から構成された受容体を指す。このキメラ抗原受容体もまた、腫瘍特異性をもたらし、大半の腫瘍細胞の認識を可能とするものとする。適切なキメラ受容体は、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＡＲ（配列については、国際公開第２０１２／１３８４７５号（Ａ１）を参照されたい）、抗ＣＤ２２－ＣＡＲ（国際公開第２０１３／０５９５９３号（Ａ１）を参照されたい）、抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ（国際公開第２０１３／１５４７６０号（Ａ１）を参照されたい）、抗ＣＤ１９－ＣＡＲ（国際公開第２０１２／０７９０００号（Ａ１）又は米国特許出願第２０１４／０２７１６３５号（Ａ１）を参照されたい）、抗ＣＤ１２３－ＣＡＲ（米国特許出願第２０１４／０２７１５８２号（Ａ１）を参照されたい）、抗ＣＤ３０－ＣＡＲ（国際公開第２０１５／０２８４４４号（Ａ１）を参照されたい）、又は抗メソテリン－ＣＡＲ（国際公開第２０１３／１４２０３４号（Ａ１）を参照されたい）を含む。

【0123】

本発明はまた、本発明の融合タンパク質を発現させる、形質導入された細胞を作製するための方法であって、細胞に、本発明のベクターを形質導入する工程と、形質導入された細胞を、前記形質導入された細胞内又は細胞上で、融合タンパク質の発現を可能とする条件下で培養する工程と、前記形質導入された細胞を回収する工程とを含む方法にも関する。

【0124】

本発明の文脈では、本発明の形質導入細胞は、以下のプロセスにより作製することが好ましい：細胞（例えば、Ｔ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞）は、対象（好ましくは、ヒト患者）から単離する／得る。当該技術分野では、細胞（例えば、Ｔ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を、患者又はドナーから単離する／得るための方法が周知であり、本発明の文脈では、患者又はドナーに由来する細胞（例えば、Ｔ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞）は、採血又は骨髄の摘出により単離することができる。患者の試料としての細胞を単離した／得た後で、細胞（例えば、Ｔ細胞）を、試料の他の成分から分離する。試料から細胞（例えば、Ｔ細胞）を分離するための、いくつかの方法が公知であり、限定せずに述べると、例えば、患者又はドナーに由来する末梢血試料から、細胞を得るためのリューカフェレーシス、ＦＡＣＳｏｒｔ装置を使用することにより、細胞を単離する／得る方法、手作業により、又は極微操作装置を使用することにより、生細胞を保有する、新鮮な生検標本から、生細胞又は死細胞を採取する方法を含む（例えば、Dudley、Immunother.、26 (2003)、332-342；Robbins、Clin. Oncol.、29 (2011)、917-924；又はLeisegang、J. Mol. Med.、86 (2008)、573-58を参照されたい）。本明細書の「新鮮な患者生検」という用語は、外科的手段又は他の任意の公知の手段により、対象から摘出された組織（好ましくは、腫瘍組織）のほか、腫瘍細胞株、又は腫瘍組織／腫瘍細胞に由来する（単離）細胞を指す。その後、Ｔ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、単離された／得られた細胞を、例えば、抗ＣＤ３抗体を使用することにより、抗ＣＤ３モノクローナル抗体及び抗ＣＤ２８モノクローナル抗体を使用することにより、培養及び拡大することもでき、かつ／又は抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、及びインターロイキン２（ＩＬ－２）を使用することにより、培養及び拡大することもできる（例えば、Dudley、Immunother.、26 (2003)、332-342又はDudley、Clin. Oncol.、26 (2008)、5233-5239を参照されたい）。

【0125】

後続の工程では、当該技術分野で公知の方法により、細胞（例えば、Ｔ細胞）を、人工的に改変する／遺伝子改変する／これに形質導入する（例えば、Lemoine、J Gene Med、6 (2004)、374-386を参照されたい）。当該技術分野では、細胞（例えば、Ｔ細胞）に形質導入するための方法が公知であり、限定せずに述べると、核酸又は組換え核酸を形質導入する場合、例えば、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム法、カチオン性脂質法、又はリポソーム法を含む。形質導入される核酸は、市販のトランスフェクション試薬、例えば、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製；型番１１６６８０２７）を使用することにより、従来通り、高度に効率的に形質導入することができる。ベクターを使用する場合、ベクターは、プラスミドベクター（すなわち、ウイルスベクターではないベクター）である限りにおいて、上述の核酸と同じ形で形質導入することができる。本発明の文脈では、細胞（例えば、Ｔ細胞）に形質導入するための方法は、レトロウイルス又はレンチウイルスによるＴ細胞への形質導入のほか、ｍＲＮＡトランスフェクションを含む。「ｍＲＮＡトランスフェクション」は、この場合、本発明の融合タンパク質など、目的のタンパク質を、形質導入される細胞内で、一過性に発現させることが、当業者に周知である方法を指す。略述すると、細胞を、エレクトロポレーションシステム（例えば、ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ、Ｂｉｏ－Ｒａｄなど）を使用することにより、本発明の融合タンパク質をコードするｍＲＮＡをエレクトロポレーションすることができ、その後、上記で記載した、標準的な細胞（例えば、Ｔ細胞）培養プロトコール（Zhaoら、Mol Ther.、13 (1) (2006)、151-159を参照されたい）により培養することができる。本発明の形質導入細胞は、Ｔ細胞、最も好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞であり、レンチウイルス、又は、最も好ましくは、レトロウイルスによる、Ｔ細胞への形質導入により作出される。

【0126】

この文脈では、当該技術分野では、ＳＡＭＥＮ ＣＭＶ／ＳＲａ（Clayら、J. Immunol.、163 (1999)、507-513）、ＬＺＲＳ－ｉｄ３－ＩＨＲＥＳ（Heemskerkら、J. Exp. Med.、186 (1997)、1597-1602）、ＦｅＬＶ（Neilら、Nature、308 (1984)、814-820）、ＳＡＸ（Kantoffら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、83 (1986)、6563-6567）、ｐＤＯＬ（Desiderio、J. Exp. Med.、167 (1988)、372-388）、Ｎ２（Kasidら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、87 (1990)、473-477）、ＬＮＬ６（Tiberghienら、Blood、84 (1994)、1333-1341）、ｐＺｉｐＮＥＯ（Chenら、J. Immunol.、153 (1994)、3630-3638）、ＬＡＳＮ（Mullenら、Hum. Gene Ther.、7 (1996)、1123-1129）、ｐＧ１ＸｓＮａ（Taylorら、J. Exp. Med.、184 (1996)、2031-2036）、ＬＣＮＸ（Sunら、Hum. Gene Ther.、8 (1997)、1041-1048）、ＬＸＳＮ（Sunら、Hum. Gene Ther.、8 (1997)、1041-1048）、ＳＦＧ（Gallardoら、Blood、90 (1997)、952-957）、ＨＭＢ－Ｈｂ－Ｈｕ（Vieillardら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、94 (1997)、11595-11600）、ｐＭＶ７（Cochloviusら、Cancer Immunol. Immunother.、46 (1998)、61-66）、ｐＳＴＩＴＣＨ（Weitjensら、Gene Ther、5 (1998)、1195-1203）、ｐＬＺＲ（Yangら、Hum. Gene Ther.、10 (1999)、123-132）、ｐＢＡＧ（Wuら、Hum. Gene Ther.、10 (1999)、977-982）、ｒＫａｔ．４３．２６７ｂｎ（Gilhamら、J. Immunother.、25 (2002)、139-151）、ｐＬＧＳＮ（Engelsら、Hum. Gene Ther.、14 (2003)、1155-1168）、ｐＭＰ７１（Engelsら、Hum. Gene Ther.、14 (2003)、1155-1168）、ｐＧＣＳＡＭ（Morganら、J. Immunol.、171 (2003)、3287-3295）、ｐＭＳＧＶ（Zhaoら、J. Immunol.、174 (2005)、4415-4423）、又はｐＭＸ（de Witteら、J. Immunol.、181 (2008)、5128-5136）など、Ｔ細胞に形質導入するのに適するレトロウイルスベクターが公知である。本発明の文脈では、細胞（例えば、Ｔ細胞）に形質導入するのに適するレンチウイルスベクターは、例えば、ＰＬ－ＳＩＮレンチウイルスベクター（Hottaら、Nat Methods.、6 (5) (2009)、370-376）、ｐ１５６ＲＲＬ－ｓｉｎＰＰＴ－ＣＭＶ－ＧＦＰ－ＰＲＥ／ＮｈｅＩ（Campeauら、PLoS One、4 (8) (2009)、e6529）、ｐＣＭＶＲ８．７４（Ａｄｄｇｅｎｅ型番２２０３６）、ＦＵＧＷ（Loisら、Science、295 (5556) (2002)、868-872）、ｐＬＶＸ－ＥＦ１（Ａｄｄｇｅｎｅ型番６４３６８）、ｐＬＶＥ（Brungerら、Proc Natl Acad Sci U S A、111 (9) (2014)、E798-806）、ｐＣＤＨ１－ＭＣＳ１－ＥＦ１（Huら、Mol Cancer Res.、7 (11) (2009)、1756-1770）、ｐＳＬＩＫ（Wangら、Nat Cell Biol.、16 (4) (2014)、345-356）、ｐＬＪＭ１（Solomonら、Nat Genet.、45 (12) (2013)、1428-30）、ｐＬＸ３０２（Kangら、Sci Signal.、6 (287) (2013)、rs13）、ｐＨＲ－ＩＧ（Xieら、J Cereb Blood Flow Metab.、33 (12) (2013)、1875-85）、ｐＲＲＬＳＩＮ（Ａｄｄｇｅｎｅ型番６２０５３）、ｐＬＳ（Miyoshiら、J Virol.、72 (10) (1998)、8150-8157）、ｐＬＬ３．７（Lazebnikら、J Biol Chem.、283 (7) (2008)、11078-82）、ＦＲＩＧ（Raissiら、Mol Cell Neurosci.、57(2013)、23-32）、ｐＷＰＴ（Ritz-Laserら、Diabetologia.、46 (6) (2003)、810-821）、ｐＢＯＢ（Marrら、J Mol Neurosci.、22(1-2)(2004)、5-11）、又はｐＬＥＸ（Ａｄｄｇｅｎｅ型番２７９７６）である。

【0127】

本発明の、形質導入されたＴ細胞／Ｔ細胞は、それらの天然の環境外の、制御された条件下で増殖させることが好ましい。特に、「－を培養すること」という用語は、多細胞の真核生物に由来する（好ましくは、ヒト患者に由来する）細胞（例えば、本発明の形質導入細胞）を、インビトロにおいて増殖させることを意味する。細胞の培養とは、細胞を、それらの元の組織供給源から隔てて、生存状態に保つ実験室法である。本明細書に、本発明の形質導入細胞は、前記形質導入された細胞内又は細胞上における、本発明の融合タンパク質の発現を可能とする条件下で培養する。当該技術分野では、導入遺伝子（すなわち、本発明の融合タンパク質）の発現を可能とする条件が一般に公知であり、例えば、アゴニスト性の抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体ならびにインターロイキン２（ＩＬ－２）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）、及び／又はインターロイキン１５（ＩＬ－１５）などのサイトカインの添加を含む。培養された形質導入細胞内の、本発明の融合タンパク質の発現の後、形質導入細胞を、培養物（すなわち、培地）から回収する（すなわち、再抽出する）。

【0128】

本発明にはまた、本発明の方法により得ることができる、本発明の核酸分子によりコードされる融合タンパク質を発現させる、形質導入細胞も包摂される。

【0129】

さらに、本発明は、本発明の、三価の二重特異性抗体分子、又は上記で開示した方法により得られる／作製される、三価の二重特異性抗体分子を含む薬学的組成物／医薬を提供する。本発明の文脈では、前記組成物は、任意選択で、担体、安定剤、及び／又は賦形剤による、適切な製剤をさらに含む薬学的組成物である。

【0130】

本発明に従い、「医薬」という用語は、「薬学的組成物」という用語と互換的に使用され、患者、好ましくは、ヒト患者への投与のための組成物に関する。本発明の文脈では、この医薬／薬学的組成物は、Ｔ細胞、最も好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を単離した／得た患者に投与されるものとする。本発明の文脈では、患者とは、ヒト患者を指す。さらに、本発明の文脈では、この患者は、疾患を患い、この場合、前記疾患は、悪性疾患、とりわけ、上皮由来、内皮由来、若しくは中皮由来のがん／癌腫、又は血液がんである。本発明の文脈では、がん／癌腫は、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、口腔がん、胃がん、子宮頸がん、Ｂリンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、骨髄性白血病、卵巣がん、白血病、リンパ性白血病、鼻咽頭癌、結腸がん、前立腺がん、腎細胞がん、頭頸部がん、皮膚がん（メラノーマ）、泌尿生殖器がん、例えば、精巣がん、内皮がん、子宮頸がん、及び腎臓がん、胆管がん、食道がん、唾液腺がん、及び甲状腺がん、又は血液腫瘍、神経膠腫、肉腫、若しくは骨肉腫など、他の腫瘍性疾患からなる群から選択される。

【0131】

好ましい実施態様では、薬学的組成物／医薬は、非経口投与、経皮投与、管腔内投与、動脈内投与、髄腔内投与、又は組織若しくは腫瘍への直接的注射のための、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子を含む。本発明の文脈では、組成物／医薬は、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子であって、本明細書で規定される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与される、三価の二重特異性抗体分子を含む。本発明の文脈では、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子を含む薬学的組成物／医薬は、本明細書で規定される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞と組み合わせて投与され、この場合、前記Ｔ細胞は、処置される対象から得られた。

【0132】

「組合せで」という用語の使用は、治療レジメンの成分を、対象に投与する順序を制約するものではない。したがって、本明細書で記載される薬学的組成物／医薬は、本発明の融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の投与の前、これと同時、又はこの後における、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子の投与を包摂する。本明細書で使用される「組合せで」はまた、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子の投与と、本明細書で規定される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与とのタイミングも制約するものではない。したがって、２つの成分を、同時に／共時的に投与しない場合、投与は、１分間、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、若しくは７２時間、又は当業者によりたやすく決定され、かつ／又は本明細書で記載される、任意の適する時間差だけ隔てることができる。

【0133】

本発明の文脈では、「組合せで」という用語はまた、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子と、融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞とを、対象への投与の前に、併せてプレインキュベートする状況も包摂する。したがって、２つの成分は、投与の前に、例えば、１分間、５分間、１０分間、１５分間、３０分間、４５分間、若しくは１時間にわたり、又は当業者によりたやすく決定される、任意の適切な時間にわたりプレインキュベートすることができる。別の好ましい実施態様では、本発明は、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子と、本明細書で規定される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞とを投与された同時に／共時的に投与する治療レジメンに関する。本発明の文脈では、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子は、融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞を投与した後で投与することができる。

【0134】

さらに、本明細書で使用される「組合せで」は、開示される治療レジメンを、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子及び融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の、間を置かない連続的な投与（すなわち、２つの成分のうちの一方の投与の後、間に他のいかなる処置プロトコールの投与及び／又は実施も伴わずに、他方の投与を行う（一定の時間間隔の後に））に制約するものではない。したがって、本治療レジメンはまた、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子及び融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞との、別個の投与であって、疾患又はこの症候の処置又は防止に必要であり、かつ／又は適する、１又は複数の処置プロトコールで隔てられた投与も包摂する。このような介在する処置プロトコールの例は、疼痛用医薬の投与、化学療法の投与、疾患又はこの症候の手術による対処を含むがこれらに限定されない。したがって、本明細書で開示される治療レジメンは、疾患又はこの症候の処置又は防止に適する処置プロトコールを伴わずに、１つの処置プロトコール、又は１つを超える処置プロトコールと併せて、本明細書で規定される三価の二重特異性抗体分子、及び本明細書で規定される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の投与を包摂する。

【0135】

前記薬学的組成物／医薬を、点滴又は注射を介して、患者に投与することが、特に想定される。本発明の文脈では、規定された融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞を、点滴又は注射を介して、患者に投与するものとする。適切な組成物／医薬の投与は、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、局所投与、又は皮内投与という、異なる形で行うことができる。

【0136】

本発明の薬学的組成物／医薬は、薬学的に許容される担体をさらに含みうる。当該技術分野では、適切な薬学的担体の例が周知であり、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、多様な種類の湿潤剤、滅菌溶液などを含む。このような担体を含む組成物は、周知の従来の方法により製剤化することができる。これらの薬学的組成物は、対象に、適切な用量で投与することができる。投与量レジメンは、主治医及び臨床因子により決定されるであろう。医療技術分野で周知の通り、任意の１人の患者の投与量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与回数及び投与経路、全般的な健康状態、及び共時的に投与される他の薬物を含む、多くの因子に依存する。一般に、薬学的組成物の定期的な投与としてのレジメンは、１日当たり１μｇ－５ｇの単位の範囲内にあるものとする。しかし、連続注入により好ましい投与量は、１時間当たり体重１キログラム当たり、０．０１μｇ－２ｍｇ、好ましくは、０．０１μｇ－１ｍｇ、より好ましくは、０．０１μｇ－１００μｇ、なおより好ましくは、０．０１μｇ－５０μｇの範囲であることが可能であり、最も好ましくは、０．０１μｇ－１０μｇの単位でありうるであろう。本明細書では、特に好ましい投与量を列挙する。進行は、定期的な評価によりモニタリングすることができる。投与量は、変動するであろうが、ＤＮＡの静脈内投与に好ましい投与量は、約１０^６－１０^１２コピーのＤＮＡ分子である。本発明の組成物は、局所投与することもでき、全身投与することもできる。投与は一般に、非経口投与、例えば、静脈内投与であるが、ＤＮＡはまた、例えば、内部又は外部の標的部位への微粒子銃送達により、標的部位に方向付けて投与することもでき、動脈内の部位に、カテーテルにより、標的部位に方向付けて投与することもできる。非経口投与のための調製物は、滅菌水溶液又は滅菌非水溶液、懸濁液、及びエマルジョンを含む。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなど、注射用の有機エステルである。水性担体は、水、アルコール溶液／水溶液、エマルジョン、又は生理食塩水／食塩水及び緩衝媒を含む懸濁液を含む。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、及び塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液、又は不揮発性油を含む。静脈内ビヒクルは、補液及び栄養補充物、電解質補充液（リンゲルデキストロースに基づく電解質補充液など）などを含む。防腐剤、及び、例えば、抗微生物剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガスなど、他の添加剤もまた存在しうる。加えて、本発明の薬学的組成物は、好ましくは、ヒト由来の、例えば、血清アルブミン又は免疫グロブリンなどの、タンパク質性担体を含みうるであろう。薬学的本発明の組成物は、タンパク質性二重特異性抗体コンストラクト、又はこれをコードする核酸分子又はベクター（本明細書で記載される）に加えて、薬学的組成物の、目的の使用に応じて、さらなる、生物学的に活性の薬剤も含みうることが想定される。このような薬剤は、消化器系に作用する薬物、細胞分裂抑制剤として作用する薬物、高尿酸血症を防止する薬物、免疫反応を阻害する薬物（例えば、コルチコステロイド）、循環系に作用する薬物、及び／又は当該技術分野で公知のＴ細胞共刺激分子又はサイトカインなどの薬剤でありうるであろう。

【0137】

本発明の組成物／医薬の投与に可能な適応は、悪性疾患、とりわけ、乳がん、結腸がん、前立腺がん、頭頸部がん、皮膚がん（メラノーマ）、泌尿生殖器がん、例えば、卵巣がん、精巣がん、内皮がん、子宮頸がん、及び腎臓がんなどの上皮がん／上皮癌、肺がん、胃がん、胆管がん、食道がん、唾液腺がん、及び甲状腺がん、又は血液腫瘍、神経膠腫、肉腫、若しくは骨肉腫など、他の腫瘍性疾患である。

【0138】

本発明は、さらに、他の化合物、例えば、細胞増殖又は細胞刺激のために、免疫エフェクター細胞に、活性化シグナルを提供することが可能な分子を伴う、共投与プロトコールを想定する。前記分子は、例えば、Ｔ細胞の、さらなる一次活性化シグナル（例えば、さらなる共刺激分子：Ｂ７ファミリーの分子、Ｏｘ４０Ｌ、４．１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１）、又はインターロイキン（例えば、ＩＬ－２）など、さらなるサイトカインでありうる。

【0139】

上記で記載した、本発明の組成物はまた、任意選択で、検出のための手段及び方法をさらに含む、診断用組成物でもありうる。

【0140】

本明細書で提示される、三価で二重特異性の結合性分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）はまた、それらを、液体相でも活用することができ、固体相担体に結合させることもできる、イムノアッセイにおける使用にも適する。本発明のポリペプチドを活用しうるイムノアッセイの例は、直接的フォーマット又は間接的フォーマットの、競合的イムノアッセイ又は非競合的イムノアッセイである。このようなイムノアッセイの例は、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、サンドイッチ（免疫測定アッセイ）、及びウェスタンブロットアッセイである。

【0141】

本発明の、三価で二重特異性の結合性分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）は、多くの異なる担体に結合することが可能であり、前記ポリペプチドに特異的に結合した細胞を単離するのに使用することができる。周知の担体の例は、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然セルロース及び改変セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびにマグネタイトを含む。本発明の目的では、担体の性質は、可溶型の場合もあり、不溶型の場合もあり、例えば、ビーズでありうる。

【0142】

当業者に公知の、多くの異なる標識及び標識付けする方法が存在する。本発明で使用しうる標識の種類の例は、酵素、放射性同位元素、コロイド状金属、蛍光性化合物、化学発光化合物、及び生物発光化合物を含む。

【0143】

本発明の最も好ましい実施態様では、医薬としての使用のための、本発明の、三価で二重特異性の抗体コンストラクト／分子が想定される。本発明の文脈では、医薬としての使用のための三価の二重特異性抗体分子であって、本明細書で規定される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子が記載される。前記医薬は、悪性疾患、とりわけ、上皮由来、内皮由来、若しくは中皮由来のがん／癌腫、又は血液のがん／癌腫を処置するための方法において援用することができる。本発明の文脈では、がん／癌腫は、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、口腔がん、胃がん、子宮頸がん、Ｂリンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、骨髄性白血病、卵巣がん、白血病、リンパ性白血病、鼻咽頭癌、結腸がん、前立腺がん、腎細胞がん、頭頸部がん、皮膚がん（メラノーマ）、泌尿生殖器がん、例えば、精巣がん、卵巣がん、内皮がん、子宮頸がん、及び腎臓がん、胆管がん、食道がん、唾液腺がん、及び甲状腺がん、又は血液腫瘍、神経膠腫、肉腫、若しくは骨肉腫など、他の腫瘍性疾患からなる群から選択される。

【0144】

さらに、本発明の文脈では、悪性疾患を処置するための方法における使用のための、（ｉ）Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに結合する、第１の結合ドメイン、（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び（ｉｉｉ）Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメインを含む、本明細書で記載される三価の二重特異性抗体分子であって、本明細書で規定される融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子が想定される。

【0145】

さらに、本発明の文脈では、悪性疾患を処置するための方法であって、（ｉ）Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに結合する、第１の結合ドメイン、（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び（ｉｉｉ）Ｔ細胞内又はＴ細胞上で天然に存在しない、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインに結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメインを含む、本発明の、三価の二重特異性抗体分子の、それを必要とする対象への投与を含み、前記三価の二重特異性抗体分子が、前記対象に由来する、形質導入されたＴ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞であり、本明細書で規定される融合タンパク質を含むＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与される方法が想定される。本発明の文脈では、がん／癌腫は、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、口腔がん、胃がん、子宮頸がん、Ｂリンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、骨髄性白血病、卵巣がん、白血病、リンパ性白血病、鼻咽頭癌、結腸がん、前立腺がん、腎細胞がん、頭頸部がん、皮膚がん（メラノーマ）、泌尿生殖器がん、例えば、精巣がん、卵巣がん、内皮がん、子宮頸がん、及び腎臓がん、胆管がん、食道がん、唾液腺がん、及び甲状腺がん、又は血液腫瘍、神経膠腫、肉腫、若しくは骨肉腫など、他の腫瘍性疾患からなる群から選択される。

【0146】

さらに、本発明に従い、ＥｐＣＡＭ、好ましくは、ヒトＥｐＣＡＭ（腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原としての）を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんを処置するための方法において使用することができる。したがって、本発明の文脈では、ＥｐＣＡＭ、好ましくは、ヒトＥｐＣＡＭを指向する／これに結合する／これと相互作用する２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つの結合ドメインを含む、三価の二重特異性抗体分子を、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんを処置するための方法において使用することができる。本発明の代替的な実施態様では、ＥｐＣＡＭ、好ましくは、ヒトＥｐＣＡＭを指向する／これに結合する／これと相互作用する１つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、２つの結合ドメインを含む、三価の二重特異性抗体分子を、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんを処置するための方法において使用することができる。本発明の文脈では、ＥｐＣＡＭ、好ましくは、ヒトＥｐＣＡＭに対する、１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｃｒｉｐｔｏを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む、三価の二重特異性抗体分子を、胃腸がん、例えば、胃腸由来の腺癌の処置において使用することができる。本明細書で記載される、ＨＥＲ１、好ましくは、ヒトＨＥＲ１を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインと、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインとを含む、三価の二重特異性抗体分子を、胃腸がん、膵臓がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、及び／又は口腔がんを処置するための方法において使用することができる。ＨＥＲ２、好ましくは、ヒトＨＥＲ２を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＨＥＲ３、好ましくは、ヒトＨＥＲ３を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＣＤ２０、好ましくは、ヒトＣＤ２０を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＣＤ２２、好ましくは、ヒトＣＤ２２を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＣＤ３３、好ましくは、ヒトＣＤ３３を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＣＡ１２－５、好ましくは、ヒトＣＡ１２－５を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＨＬＡ－ＤＲ、好ましくは、ヒトＨＬＡ－ＤＲを指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＭＵＣ－１、好ましくは、ヒトＭＵＣ－１を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。Ａ３３、好ましくは、ヒトＡ３３を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＰＳＭＡ、好ましくは、ヒトＰＳＭＡを指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。トランスフェリン受容体、好ましくは、ヒトトランスフェリン受容体を指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。ＣＡ－ＩＸ、好ましくは、ヒトＣＡ－ＩＸを指向する／これに結合する／これと相互作用する１つ又は２つの結合ドメインを含み、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない、本明細書で規定される、融合タンパク質の細胞外ドメイン、すなわち、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインのうちの１つを指向する／これに結合する／これと相互作用する、１つ又は２つの結合ドメインを含む分子又はコンストラクト（すなわち、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体分子）を、胃がん、乳がん、及び／又は子宮頸がんを処置するための方法において使用することができる。

【0147】

本発明はまた、疾患、上皮由来、内皮由来、若しくは中皮由来のがん、及び／又は血液がんなどの悪性疾患を処置するための方法にも関する。このような疾患は、とりわけ、食道がん、胃がん、結腸がん、小腸がん、肝臓がん、膵臓がん、乳がん、肺がん、脳のがん、腎臓がん、精巣がん、皮膚がん、白血病、及び／又はリンパ腫であり、
方法は、形質導入されたＴ細胞の、対象への投与を含む。本発明の文脈では、前記対象は、ヒトである。

【0148】

本発明の文脈では、疾患を処置するための方法であって、
（ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を、対象から単離する工程と；
（ｂ）前記単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞に、本明細書の上記で記載した融合タンパク質を形質導入する工程と；
（ｃ）形質導入された、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を、前記対象に投与する工程と
を含む方法が記載される。

【0149】

本発明の文脈では、前記形質導入されたＴ細胞、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、前記対象に、静脈内注入により投与する。

【0150】

さらに、本発明は、疾患を処置するための方法であって、
（ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を、対象から単離する工程と；
（ｂ）前記単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞に、本明細書の上記で記載した融合タンパク質を形質導入する工程と；
（ｃ）前記単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞に、Ｔ細胞受容体を共形質導入する工程と；
（ｄ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体により拡大する工程と；
（ｅ）形質導入された、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞などのＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を、前記対象に投与する工程と
を含む方法を提供する。

【0151】

本発明は、単離されたＴ細胞上に天然に存在する（腫瘍）抗原が、本明細書で記載される、三価の二重特異性抗体が、１つ又は２つの結合ドメインを介して結合する腫瘍抗原と同一であることを確認するための方法により解析される単離Ｔ細胞に関する。本発明の文脈では、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上で天然に存在しない／天然に発現しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメインを含む融合タンパク質を導入することにより、本明細書で規定される融合タンパク質を含む、単離された／得られたＴ細胞を、人工的に改変する。本発明の文脈では、単離された／得られたＴ細胞の人工的な改変は、本明細書で記載される形質導入法に関する。したがって、本発明の文脈では、処置される対象は、本明細書の上記で記載される、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原を有することにより特徴を明らかにされる疾患を患うことにより特徴を明らかにされる対象に関する。本発明の文脈では、処置される対象から得られた／単離された、形質導入されたＴ細胞の投与は、静脈内注入により実施されるであろう。

【0152】

さらなる実施態様では、本発明は、疾患を処置するための方法であって、
（ａ）患者から切除された腫瘍から、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する工程と；
（ｂ）ＴＩＬを培養し、これらに、本明細書の上記で記載した融合タンパク質を形質導入する工程と；
（ｃ）機能的な腫瘍認識アッセイに基づき、ＴＩＬ培養物を選択する工程と；
（ｄ）抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体により、ＴＩＬを拡大する工程と；
（ｅ）形質導入されたＴＩＬを、前記対象に投与する工程と
を含む方法に関する。

【0153】

「機能的な腫瘍認識」アッセイという用語は、ＴＩＬの、自家腫瘍細胞、例えば、患者の腫瘍細胞、又はＨＬＡ型が同一な細胞株との共培養を意味する。リードアウトは、腫瘍細胞に対する細胞傷害活性（ＬＤＨ、カルセインの放出）である。さらなるリードアウトは、サイトカイン分泌、細胞内サイトカインの存在についてのＴ細胞フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイでありうるであろう。

【0154】

上述の工程（ｄ）（抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体による、ＴＩＬなど、Ｔ細胞の拡大工程）はまた、インターロイキン２（ＩＬ－２）及び／又はインターロイキン１５（ＩＬ－１５）など、（刺激性）サイトカインの存在下で実施することもできる。本発明の文脈では、上述の工程（ｄ）（抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体による、ＴＩＬなど、Ｔ細胞の拡大工程）はまた、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン７（ＩＬ－７）及び／又はインターロイキン２１（ＩＬ－２１）の存在下で実施することもできる。

【0155】

加えて、処置のための方法はまた、本発明の、三価の二重特異性抗体の投与も含みうる。前記三価の二重特異性抗体は、形質導入されたＴ細胞を、投与する前に、これと同時に、又はこの後で投与することができる。本発明の文脈では、形質導入されたＴ細胞の投与は、静脈内注入により実施されるであろう。本発明の文脈では、この形質導入されたＴ細胞を、処置される対象から単離する／得る。

【0156】

これらの実施態様及び他の実施態様は、本発明の記載及び実施例により開示及び包摂される。本発明に従い援用される抗体、方法、使用、及び化合物のうちのいずれか１つに関するさらなる文献は、例えば、電子デバイスを使用して、公開のライブラリー及びデータベースから検索することができる。例えば、インターネット上で利用可能な公開データベースである「Ｍｅｄｌｉｎｅ」は、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＰｕｂＭｅｄ／ｍｅｄｌｉｎｅ．ｈｔｍｌ下で活用することができる。当業者には、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｆｏｂｉｏｇｅｎ．ｆｒ／、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｍｉ．ｃｈ／ｂｉｏｌｏｇｙ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｉｇｒ．ｏｒｇ／など、さらなるデータベース及びアドレスが公知であり、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌｙｃｏｓ．ｃｏｍを使用して、もまた得ることができる。

【図面の簡単な説明】

【0157】

【図1A】形質導入されたＴ細胞と、腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させる（ＥｐＣＡＭ＋）か、又は腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させない（ＥｐＣＡＭ－）、マウス膵臓がん腫瘍細胞（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）との共培養 融合タンパク質であるＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４２（配列番号４１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））の活性化を介する、形質導入されたＴ細胞の活性化を実証するために、Ｔ細胞に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質を形質導入した（本明細書の以下では、「Ｅ３ Ｔ細胞」と称する）。形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））を伴うか、又は伴わずに、腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させる（ＥｐＣＡＭ＋）膵臓がん（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）細胞、又は腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させない（ＥｐＣＡＭ－）膵臓がん（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）細胞と共に、１０：１の比で、１２時間にわたりインキュベートした。加えて、それぞれの濃度の、四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」を伴うＥ３ Ｔ細胞を、３７℃で、ＰＢＳ中に２０％のＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＵＳＡ）により、３０分間にわたり前処理して、非特異的結合をブロックした。当業者には、本明細書では、ＦＣＳである、過剰量のポリクローナルタンパク質の添加により、本明細書では、抗体である、施されるタンパク質の非特異的結合を防止する手段として、ブロッキングの概念が周知である。ネガティブコントロールとして、非シグナル伝達マーカー抗原を形質導入したＴ細胞を使用した。Ｔ細胞の活性化を、ＥＬＩＳＡを使用するＩＮＦ－γ分泌として測定した。結果は、抗原陰性腫瘍細胞を上回る、抗原陽性（ＥｐＣＡＭ＋）細胞に対する、腫瘍細胞の認識の増強を示す。四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」は、Ｅ３ Ｔ細胞を、膵臓がん（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）細胞に動員し、ＥｐＣＡＭを発現させる腫瘍細胞に対して、特異的にリダイレクトされたＴ細胞の活性化を誘導する。ＥＧＦＲを形質導入されたＴ細胞内では、活性化を検出できなかった。これらの結果は、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質を使用して、四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」を介する、Ｔ細胞の活性化を誘発しうることを指し示す。しかし、四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」の存在下におけるＴ細胞の活性化はまた、四価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」の腫瘍標的の非存在下でも生じることから、Ｔ細胞の非特異的活性化が指し示される。図１における「ブロッキングされた」という用語は、非特異的Ｔ細胞の活性化の程度について評価するために、ＦＣＳでブロッキングされたプレート上で、形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体と共に、共インキュベートする条件を指す。この条件下で、活性化が存在するならば、方向付けられていないＴ細胞の架橋から生じているはずである。「Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ」という用語は、非特異的な（腫瘍を指向しない）活性化及び溶解について評価するために、形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体及びＥｐＣＡＭ－腫瘍細胞と共に共インキュベートする条件を指す。「Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ－ＥｐＣＡＭ」という用語は、特異的（腫瘍上の）活性化及び溶解について評価するために、形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体及びＥｐＣＡＭ＋腫瘍細胞と共に共インキュベートする条件を指す。

【図1B】形質導入されたＴ細胞と、腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させる（ＥｐＣＡＭ＋）か、又は腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させない（ＥｐＣＡＭ－）、マウス膵臓がん腫瘍細胞（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）との共培養 融合タンパク質であるＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４２（配列番号４１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））の活性化を介する、形質導入されたＴ細胞の活性化を実証するために、Ｔ細胞に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質を形質導入した（本明細書の以下では、「Ｅ３ Ｔ細胞」と称する）。形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））を伴うか、又は伴わずに、腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させる（ＥｐＣＡＭ＋）膵臓がん（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）細胞、又は腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させない（ＥｐＣＡＭ－）膵臓がん（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）細胞と共に、１０：１の比で、１２時間にわたりインキュベートした。加えて、それぞれの濃度の、四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」を伴うＥ３ Ｔ細胞を、３７℃で、ＰＢＳ中に２０％のＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＵＳＡ）により、３０分間にわたり前処理して、非特異的結合をブロックした。当業者には、本明細書では、ＦＣＳである、過剰量のポリクローナルタンパク質の添加により、本明細書では、抗体である、施されるタンパク質の非特異的結合を防止する手段として、ブロッキングの概念が周知である。ネガティブコントロールとして、非シグナル伝達マーカー抗原を形質導入したＴ細胞を使用した。Ｔ細胞の活性化を、ＥＬＩＳＡを使用するＩＮＦ－γ分泌として測定した。結果は、抗原陰性腫瘍細胞を上回る、抗原陽性（ＥｐＣＡＭ＋）細胞に対する、腫瘍細胞の認識の増強を示す。四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」は、Ｅ３ Ｔ細胞を、膵臓がん（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）細胞に動員し、ＥｐＣＡＭを発現させる腫瘍細胞に対して、特異的にリダイレクトされたＴ細胞の活性化を誘導する。ＥＧＦＲを形質導入されたＴ細胞内では、活性化を検出できなかった。これらの結果は、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質を使用して、四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」を介する、Ｔ細胞の活性化を誘発しうることを指し示す。しかし、四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」の存在下におけるＴ細胞の活性化はまた、四価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」の腫瘍標的の非存在下でも生じることから、Ｔ細胞の非特異的活性化が指し示される。図１における「ブロッキングされた」という用語は、非特異的Ｔ細胞の活性化の程度について評価するために、ＦＣＳでブロッキングされたプレート上で、形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体と共に、共インキュベートする条件を指す。この条件下で、活性化が存在するならば、方向付けられていないＴ細胞の架橋から生じているはずである。「Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ」という用語は、非特異的な（腫瘍を指向しない）活性化及び溶解について評価するために、形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体及びＥｐＣＡＭ－腫瘍細胞と共に共インキュベートする条件を指す。「Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ－ＥｐＣＡＭ」という用語は、特異的（腫瘍上の）活性化及び溶解について評価するために、形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体及びＥｐＣＡＭ－腫瘍細胞と共に共インキュベートする条件を指す。

【図2】形質導入されたＴ細胞と、腫瘍細胞との共培養における、二重特異性抗体のタイトレーション 図１に関して上記で記載した実験の設定に基づき、四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））の濃度を変動させる実験を実施した。二重特異性抗体分子（ｂｓＡｂ）を、１ｎｇ／ｍＬ－１μｇ／ｍＬでタイトレーションすることにより、ＥＬＩＳＡにより測定される、ＩＦＮ－γの分泌量の増大を見ることができた。ＥｐＣＡＭ特異的Ｔ細胞の活性化及び非特異的Ｔ細胞の活性化のいずれも、用量依存的であることが見出された。

【図3】プレートに結合した三価の二重特異性抗体によるＴ細胞の活性化の、四価の二重特異性抗体と対比した比較 ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ））；本明細書の以下では、「Ｅ３ Ｔ細胞」と称する）を形質導入されたＴ細胞、又は野生型（ＷＴ）Ｔ細胞を、漸増濃度で、プレート上のコーティングに使用されるか、又はＴ細胞培養物に添加される、（ｉ）四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））、（ｉｉ）三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」（配列番号２２（タンパク質）及び２１（ＤＮＡ））、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」（配列番号２４（タンパク質）及び２３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」（配列番号２６（タンパク質）及び２５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」（配列番号２８（タンパク質）及び２７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３３；また、図９ならびに表１及び２も参照されたい）、又は（ｉｉｉ）ポジティブコントロールとしてのセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により、４８時間にわたり刺激した。第１の条件では、アッセイプレートを、抗体でコーティングし、第２の条件では、抗体を、可溶性形態で、Ｔ細胞に添加した。ＩＦＮ－γの放出は、ＥＬＩＳＡにより決定した。結果は、コーティング条件下にある、全ての抗体による、Ｅ３を形質導入されたＴ細胞の、同等な活性化を示す。図３における「ブロッキングされた」という用語は、非特異的Ｔ細胞の活性化の程度について評価するために、ＦＣＳでブロッキングされたプレート上で、形質導入されたＴ細胞を、四価の二重特異性抗体と共に、共インキュベートする条件を指す。この条件下で、活性化が存在するならば、方向付けられていないＴ細胞の架橋から生じているはずである。

【図4】可溶型で三価の二重特異性抗体と共にインキュベートされた、形質導入Ｔ細胞の活性化の、可溶型で四価の二重特異性抗体と対比した比較 可溶性条件下で、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ））；本明細書の以下では、「Ｅ３ Ｔ細胞」と称する）を形質導入されたＴ細胞の非特異的活性化について探索するために、図３で記載される試料を、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡにおいて、希釈せずに使用した。四価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））は、Ｔ細胞に対する、２つの結合部位に潜在的に起因して、Ｔ細胞の非特異的活性化を示す。これは、２つのＴ細胞の間の架橋をもたらすことが可能であり、これにより、細胞によるＩＦＮ－γの分泌をもたらしうる。逆に、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」（配列番号２２（タンパク質）及び２１（ＤＮＡ））、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」（配列番号２４（タンパク質）及び２３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」（配列番号２６（タンパク質）及び２５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」（配列番号２８（タンパク質）及び２７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３３；また、図９ならびに表１及び２も参照されたい）により、この非特異的活性化は、１つのＥＧＦＲへの結合部位の喪失を介して消失する。

【図5】抗体濃度の関数としての、表面抗原への結合の用量依存性についての解析 四価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））、及び三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」（配列番号２２（タンパク質）及び２１（ＤＮＡ））、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」（配列番号２４（タンパク質）及び２３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」（配列番号２６（タンパク質）及び２５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」（配列番号２８（タンパク質）及び２７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３３；また、図９ならびに表１及び２も参照されたい）により、抗体価数の、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ）））を形質導入されたＴ細胞の表面飽和に対する影響に対処するため、細胞を、漸増濃度の、四価又は三価のｂｓＡｂ（１０ｎｇ／ｍＬ；１００ｎｇ／ｍＬ；５００ｎｇ／ｍＬ；１μｇ／ｍＬ；５μｇ／ｍＬ；１０μｇ／ｍＬ；２０μｇ／ｍＬ；２５μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートし、フローサイトメトリーを介する二次抗体（ＦＩＴＣ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）_２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ：１０９－０９６－０９７）染色により、表面飽和を決定した。四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）は、ＥＧＦＲに対する、さらなる結合部位に好適な、低濃度における高度な飽和（三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）と比較した、曲線の左方シフト）を示す。

【図6】抗体濃度の関数としての、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）により媒介される、形質導入されたＴ細胞による、ＥｐＣＡＭ＋腫瘍細胞に対する、リダイレクトされた溶解能の、四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）と対比した比較 両方の抗体の細胞傷害性の潜在力を比較するために、ｂｓＡｂを（それぞれ、三価又は四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）を）プレロードされたＴ細胞であって、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ）））；本明細書の以下では、「Ｅ３ Ｔ細胞」と称する）を形質導入されたＴ細胞を、腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させる膵臓がん細胞（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）と共に、９時間にわたり共培養した。殺滅の有効性を、腫瘍細胞のＬＤＨ放出により測定した。抗体（濃度を、２５０ｎｇ／ｍｌ、１２５ｎｇ／ｍｌ、又は６２．５ｎｇ／ｍｌとする）は、ＥｐＣＡＭを発現させる（ＥｐＣＡＭ＋）膵臓がん細胞に対する、ほぼ同一な溶解能を有する。しかし、低濃度（すなわち、３１．２５ｎｇ／ｍｌ又は１５．６３ｎｇ／ｍｌの濃度）では、三価ｂｓＡｂは、ＥｐＣＡＭ＋がん細胞に対する細胞傷害効果の、四価の二重特異性抗体分子と比較した増大により特徴を明らかにされる。

【図7】抗体濃度の関数としての、三価の二重特異性抗体により媒介される、形質導入されたＴ細胞による、ＥｐＣＡＭ－腫瘍細胞に対する、非特異的溶解能の、四価の二重特異性抗体と対比した比較 ＥｐＣＡＭを発現させない（ＥｐＣＡＭ－）膵臓がん細胞（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ）を、ｂｓＡｂ（三価又は四価の二重特異性抗体）をプレロードされたＴ細胞と共に、９時間にわたり共培養した。溶解能は、ＬＤＨ放出により決定した。高抗体濃度では（すなわち、２５０ｎｇ／ｍｌ又は６２．５ｎｇ／ｍｌの抗体濃度では）、四価二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」は、低抗体濃度と共に低下する、バックグラウンドの非特異的溶解を示す。逆に、各被験濃度の、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」（配列番号２２（タンパク質）及び２１（ＤＮＡ））、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」（配列番号２４（タンパク質）及び２３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」（配列番号２６（タンパク質）及び２５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」（配列番号２８（タンパク質）及び２７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３３；また、図９ならびに表１及び２も参照されたい）は、バックグラウンドの非特異的溶解を示さない。四価ｂｓＡｂについて示される、非特異的な標的細胞の溶解は、三価ｂｓＡｂにより消失する。したがって、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（配列番号２３３）と、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ））；「Ｅ３ Ｔ細胞」と称する）を形質導入されたＴ細胞との組合せは、ＥｐＣＡＭを発現させる（ＥｐＣＡＭ＋）膵臓がん細胞を、特異的に溶解させる。

【図8】融合タンパク質の概観 Ｉｇリーダー配列（配列番号２０６）、Ｃｒｉｐｔｏの細胞外ドメイン（配列番号６２）、ＣＤ８のヒンジドメイン（配列番号６４（マウス）及び７４（ヒト））、ならびにＣＤ２８（配列番号５６（マウス）及び６８（ヒト））及びＣＤ３ｚ（配列番号５８（マウス）及び７０（ヒト））のシグナル伝達共刺激ドメインから構成される、Ｃｒｉｐｔｏ融合タンパク質（配列番号４６（マウス）及び１２０（ヒト））。ＥＧＦＲｖＩＩＩの細胞外ドメイン（配列番号７６）、ＣＤ２８の膜貫通アンカリングドメイン（配列番号５４（マウス）及び６６（ヒト））、ＣＤ２８（配列番号５６（マウス）及び６８（ヒト））及びＣＤ３ｚ（配列番号５８（マウス）及び７０（ヒト））のシグナル伝達共刺激ドメインから構成される、ＥＧＦＲｖＩＩＩの細胞外ドメイン（配列番号７６）、ＣＤ２８の膜貫通アンカリングドメイン（配列番号５４（マウス）及び６６（ヒト））、ＣＤ２８（配列番号５６（マウス）及び６８（ヒト））及びＣＤ３ｚ（配列番号５８（マウス）及び７０（ヒト））のシグナル伝達共刺激ドメイン、ならびにＣＤ３ｚのシグナル伝達刺激ドメイン（配列番号５８（マウス）又は７０（ヒト））から構成される、ＥＧＦＲｖＩＩＩ融合タンパク質（配列番号４２（マウス）及び４８（ヒト））。代替的に、ＥＧＦＲｖＩＩＩの細胞外ドメイン（配列番号７６）、ＣＤ２８の膜貫通アンカリングドメイン（配列番号５４（マウス）及び６６（ヒト））、ＣＤ２８シグナル伝達共刺激ドメイン（配列番号５６（マウス）及び６６（ヒト））及び４－１－ＢＢ（配列番号６０（マウス）又は７２（ヒト））及びＣＤ３ｚのシグナル伝達共刺激ドメイン（配列番号５８（マウス）又は７０（ヒト））から構成される、ＥＧＦＲｖＩＩＩ融合タンパク質（配列番号４４（マウス）及び５０（ヒト））。

【図9】三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」の概括的構造 三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」を含む／これらからなる配列番号２３３；また、表１及び２も参照されたい）の概括的構造。ｍｕＥｐＣＡＭ／ＥＧＦＲｖＩＩＩの可変ドメインを、それぞれのレシピエント哺乳動物用の発現ベクターにあらかじめ挿入された定常鎖とインフレームでサブクローニングした。タンパク質の発現を、ＣＭＶプロモーターにより駆動し、合成のポリＡシグナル配列を、コード配列（ＣＤＳ）の３’端に置く。加えて、各ベクターは、ＥＢＶ ＯｒｉＰ配列を含有する。分子は、懸濁液中で増殖するＣＨＯ細胞に、哺乳動物用の発現ベクターをコトランスフェクトすることにより作製した。一過性のトランスフェクションは、Ｅｖｉｔｒｉａ ＡＧ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）において行った。細胞に、対応する発現ベクターを、１：２：１：１（「ベクター重鎖ホール（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「軽鎖（ＬＣ）」：「ベクター重鎖ノブ（ＶＨ－ＣＫ－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「交差軽鎖（ＶＬ－ＣＨ１）」）の比でトランスフェクトした。濾過された上清を、精製まで、４℃に保った。分泌タンパク質を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用するアフィニティークロマトグラフィーに続く、１つ－２つのサイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）工程により、細胞培養物上清から精製した。精製されたタンパク質試料のタンパク質濃度は、アミノ酸配列に基づき計算されたモル吸光係数で除した、２８０ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）を測定することにより決定した。

【図9A】最終的な精製工程の後における、分子の純度及び分子量は、還元剤の存在下及び非存在下におけるＣＥ－ＳＤＳ解析により解析した（右）。Ｃａｌｉｐｅｒ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）を、製造元の指示書に従い使用した。分子の凝集物含有量は、ＴＳＫゲルＧ３０００ ＳＷ ＸＬ解析用サイズ排除カラム（東ソー株式会社）を、２５℃の、２５ｍＭのＫ２ＨＰＯ４、１２５ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩、０．０２％（ｗ／ｖ）のＮａＮ３、ｐＨ６．７のランニングバッファー中で使用して解析した。全ての分子の、最終的な品質は、良好であり、モノマーの含有量は、≧９６％であった。分子１及び２は、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」（配列番号２２（タンパク質）及び２１（ＤＮＡ））、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」（配列番号２４（タンパク質）及び２３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」（配列番号２６（タンパク質）及び２５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」（配列番号２８（タンパク質）及び２７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３３；また、表１及び２も参照されたい）であって、インビトロバッチ（分子１）内で作製されるか、又はインビボバッチ（分子２）内で作製された、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子を指す。ｍｕＥｐＣＡＭ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ分子の作製及び精製についての概要：

【図9B】最終的な精製工程の後における、分子の純度及び分子量は、還元剤の存在下及び非存在下におけるＣＥ－ＳＤＳ解析により解析した（右）。Ｃａｌｉｐｅｒ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）を、製造元の指示書に従い使用した。分子の凝集物含有量は、ＴＳＫゲルＧ３０００ ＳＷ ＸＬ解析用サイズ排除カラム（東ソー株式会社）を、２５℃の、２５ｍＭのＫ２ＨＰＯ４、１２５ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩、０．０２％（ｗ／ｖ）のＮａＮ３、ｐＨ６．７のランニングバッファー中で使用して解析した。全ての分子の、最終的な品質は、良好であり、モノマーの含有量は、≧９６％であった。分子１及び２は、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」（配列番号２２（タンパク質）及び２１（ＤＮＡ））、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」（配列番号２４（タンパク質）及び２３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」（配列番号２６（タンパク質）及び２５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」（配列番号２８（タンパク質）及び２７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３３；また、表１及び２も参照されたい）であって、インビトロバッチ（分子１）内で作製されるか、又はインビボバッチ（分子２）内で作製された、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子を指す。ｍｕＥｐＣＡＭ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ分子の作製及び精製についての概要：

【表1】

【図10】三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」の概括的構造 三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＶＬ ＭＳＬＮ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１５４４３」、及び「ＶＨ ＭＳＬＮ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１５６６７」を含む／これらからなる配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）の概括的構造。ＭＳＬＮ／ＥＧＦＲｖＩＩＩの可変ドメインを、それぞれのレシピエント哺乳動物用の発現ベクターにあらかじめ挿入された定常鎖とインフレームでサブクローニングした。タンパク質の発現を、ＭＰＳＶプロモーターにより駆動し、合成のポリＡシグナル配列を、ＣＤＳの３’端に置く。加えて、各ベクターは、ＥＢＶ ＯｒｉＰ配列を含有する。分子は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、懸濁液中で増殖するＨＥＫ２９３－ＥＢＮＡ細胞に、哺乳動物用の発現ベクターをコトランスフェクトすることにより作製した。細胞に、対応する発現ベクターを、１：２：１：１（「ベクター重鎖ホール（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「軽鎖（ＬＣ）」：「ベクター重鎖ノブ（ＶＨ－ＣＫ－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「交差軽鎖（ＶＬ－ＣＨ１）」）の比でトランスフェクトした。溶液を滅菌濾過し（０．２２μｍのフィルター）、０．０１％ｗ／ｖの最終濃度で、アジ化ナトリウムを添加した。溶液を、精製まで、４℃に保った。分泌タンパク質を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用するアフィニティークロマトグラフィーに続く、１つ－２つのサイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）工程により、細胞培養物上清から精製した。

【図10A】最終的な精製工程の後における、分子の純度及び分子量は、還元剤の存在下及び非存在下におけるＣＥ－ＳＤＳ解析により解析した（右）。Ｃａｌｉｐｅｒ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）を、製造元の指示書に従い使用した。分子の凝集物含有量は、ＴＳＫゲルＧ３０００ ＳＷ ＸＬ解析用サイズ排除カラム（東ソー株式会社）を、２５℃の、２５ｍＭのＫ２ＨＰＯ４、１２５ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩、０．０２％（ｗ／ｖ）のＮａＮ３、ｐＨ６．７のランニングバッファー中で使用して解析した。全ての分子の、最終的な品質は、良好であり、モノマーの含有量は、≧９６％であった。分子１は、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」（配列番号２（タンパク質）及び１（ＤＮＡ））、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」（配列番号４（タンパク質）及び３（ＤＮＡ））、「ＶＬ ＭＳＬＮ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１５４４３」（配列番号６（タンパク質）及び５（ＤＮＡ））、及び「ＶＨ ＭＳＬＮ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１５６６７」（配列番号８（タンパク質）及び７（ＤＮＡ））を含む／これらからなる配列番号２３５；また、図１０ならびに表３及び４も参照されたい）を指す。ＭＳＬＮ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ分子の作製及び精製についての概要：

【表2】

三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＶＬ ＭＳＬＮ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１５４４３」、及び「ＶＨ ＭＳＬＮ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１５６６７」を含む／これらからなる配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）についてのＣＥ－ＳＤＳ解析：ゲル電気泳動について、タンパク質標準物質、非還元条件下のタンパク質、及び還元条件下のタンパク質を示す。右側のグラフは、非還元条件下及び還元条件下のタンパク質の蛍光を示す。

【図10B】純度を決定するための、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）についての解析的サイズ排除クロマトグラフィー解析。

【図11】三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」の概括的構造 三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」（プラスミド／ベクターである、「ＭＲ１．１ ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＶＨ－Ｃｋ－（Ｇ４Ｓ）２ ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１６６２１」（配列番号２０７に示されたＤＮＡ配列によりコードされる配列番号２０８）、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」（配列番号２１０（タンパク質）及び２０９（ＤＮＡ））、「ＭＣＳＰ ＭＬ２ ＶＬ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１６６１９」（配列番号２１２（タンパク質）及び２１１（ＤＮＡ））、及び「ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＹＲＦ，ｐＥＴＲ１６６１８」（配列番号２１４（タンパク質）及び２１３（ＤＮＡ）））を含む／これらからなる配列番号２３４；また、表５及び６も参照されたい）の概括的構造。

【図11A】三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」（配列番号２３４；また、表５及び６も参照されたい）についてのＣＥ－ＳＤＳ解析：ゲル電気泳動について、タンパク質標準物質、非還元条件下のタンパク質、及び還元条件下のタンパク質を示す。

【図12】腫瘍抗原であるＥｐＣＡＭを発現させる（ＥｐＣＡＭ＋）マウスがん腫瘍細胞（Ｂ１６ＥｐＣＡＭ腫瘍モデル及び４Ｔ１腫瘍モデル）の、四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））、及び三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（配列番号２３３；また、表１及び２も参照されたい）との共培養 二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）についての用量反応曲線を決定するために、四価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない））、及び三価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（配列番号２３３；また、表１及び２も参照されたい）の両方を、一対一でタイトレーションし、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出により、細胞傷害性を測定した。

【図12A】こうして、Ｂ１６ＥｐＣＡＭ腫瘍モデルでは、それぞれの抗体の用量の低下と共に、細胞傷害性の低下を観察することができる。さらに、いずれの抗体フォーマットも、十分かつ同等な腫瘍細胞の殺滅を示す。

【図12B】こうして、４Ｔ１腫瘍モデルでは、それぞれの抗体の用量の低下と共に、細胞傷害性の低下を観察することができる。さらに、いずれの抗体フォーマットも、十分かつ同等な腫瘍細胞の殺滅を示す。

【図13】Ｐａｎｃ０２－ＥｐＣＡＭ腫瘍細胞に対する、Ｅ３を形質導入されたマウスＴ細胞による、殺滅機構を決定する、リアルタイム細胞傷害アッセイ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ）））（「Ｅ３」と称する）を形質導入されたＴ細胞の殺滅能は、ＦａｓＬブロッキング抗体（ＣＤ１７８（Ｆａｓリガンド）モノクローナル抗体、クローンＭＦＬ３（型番１６－５９１１－８５（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標））で、腫瘍細胞とＴ細胞との間の、ＦａｓＬ－Ｆａｓ間相互作用をブロックすることにより損われうる。ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製のｉＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ測定器を使用することにより、この知見を、図１３に示す。デバイスは、接着性細胞の数に依存する、時間経過にわたる、妨害の大きさの変化を測定する。融合タンパク質であるＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ）））の活性化とは対照的に、ＥｐＣＡＭ特異的キメラ抗原受容体（ＣＡＲＥｐｃａｍ；配列番号２４９（タンパク質）及び２４８（ＤＮＡ））を形質導入されたＴ細胞は、ＦａｓＬブロッキング抗体の存在下でもなお、腫瘍細胞の溶解を誘導することが可能である。ＰａｎｃＯＶＡＥｐＣＡＭ条件とは、腫瘍細胞だけを伴う条件を指す。Ｔ細胞条件とは、Ｔ細胞だけを伴う条件を指す。ＣＡＲＥｐＣＡＭを伴う条件とは、ＣＡＲＥｐＣＡＭ（配列番号２４９（タンパク質）及び２４８（ＤＮＡ）））を形質導入されたＴ細胞の、ＰａｎｃＯＶＡ－ＥｐＣＡＭとの共培養を指す。

【図14】濃度を変動させる、三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）を使用する抗体結合アッセイ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４７（ＤＮＡ）によりコードされる配列番号４８（タンパク質））（本明細書の以下では、「Ｅ３ Ｔ細胞」と称する）のヒトバージョンを形質導入されたＴ細胞を、ｂｓＡｂ濃度を１．０ｇ／ｍｌとする、三価の二重特異性抗体である「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）により、４８時間にわたり刺激した。「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂは、Ｅ３を形質導入されたＴ細胞を、特異的に刺激するが、完全長Ｅ３コンストラクトを欠くＴ細胞（Ｅ３ｄｅｌ（配列番号２４７（タンパク質）及び２４６（ＤＮＡ）））及びＵＴ）は、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂの存在下で刺激されない。このＴ細胞の刺激は、そのＦｃ様部分を介する、Ｅ３－ｂｓＡｂの、プレートへの結合に条件付けられるので、可溶型Ｅ３－ｂｓＡｂは、Ｅ３を形質導入されたＴ細胞を刺激しない。Ｅ３ｄｅｌが、細胞内ドメインを欠く、Ｅ３の切除型であるのに対し、ＵＴは、非形質導入Ｔ細胞を指す。

【図15】組換えメソテリン（ＭＳＬＮ）による刺激：組換えメソテリンの存在下における、形質導入されたＴ細胞と、三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）との共培養 ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４７（ＤＮＡ）によりコードされる配列番号４８（タンパク質））（「Ｅ３ Ｔ細胞」又は「Ｅ３」と称する）のヒトバージョンを形質導入されたＴ細胞を、ｂｓＡｂ濃度を１．０ｇ／ｍｌとする、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）により、４８時間にわたり刺激した。「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂは、Ｅ３ Ｔ細胞を、特異的に刺激するが、完全長Ｅ３コンストラクトを欠くＴ細胞（Ｅ３ｄｅｌ（配列番号２４７（タンパク質）及び２４６（ＤＮＡ）））及びＵＴ）は、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂ（可溶型）及び組換えメソテリン（５μｇ／ｍｌの濃度まで、ウェルをコーティングする）の存在下で刺激されない。コントロールは、Ｔ細胞（Ｅ３ Ｔ細胞対非形質導入Ｔ細胞対Ｅ３ｄｅｌコンストラクトを形質導入したＴ細胞）であった。Ｅ３ｄｅｌが、細胞内ドメインを欠く、Ｅ３の切除型であるのに対し、ＵＴは、非形質導入Ｔ細胞を指す。

【図16】ＨＥＫ２９３－ＦＬＩＰｉｎ－ＭＳＬＮ Ｅ３を形質導入されたヒトＴ細胞の共培養 ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４７（ＤＮＡ）によりコードされる配列番号４８（タンパク質））（「Ｅ３ Ｔ細胞」又は「Ｅ３」と称する）のヒトバージョンを形質導入されたＴ細胞を、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂの濃度を１．０ｇ／ｍｌとする、三価の二重特異性抗体である「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）により、４８時間にわたり刺激した。「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂは、Ｅ３ Ｔ細胞を、特異的に刺激するが、完全長Ｅ３コンストラクトを欠くＴ細胞（Ｅ３ｄｅｌ（配列番号２４７（タンパク質）及び２４６（ＤＮＡ）））及びＵＴ）は、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂ（可溶型）及びＨＥＫ２９３－ＦＬＰｉｎ－ＭＳＬＮ細胞（ＨＥＫ２９３）の存在下で刺激されない。これは、アッセイを、単一クローン（Ｃ１２）により設定した場合のほか、ポリクローナル設定の場合にも観察された。ＵＴは、非形質導入Ｔ細胞を指す。ＢｓＡｂは、二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）だけを伴う条件を指す。共培養は、エフェクター対標的比を、１０：１として、４８時間にわたり行った。腫瘍細胞は、共培養の６時間前に播種し、Ｔ細胞には、共培養の３０分前に、ｂｓＡｂを、プレロードした（ｂｓＡｂ濃度：１μｇ／ｍｌ）。Ｅ３ｄｅｌが、細胞内ドメインを欠く、Ｅ３の切除型であるのに対し、ＵＴは、非形質導入Ｔ細胞を指す。

【図17】Ｓｕｉｔ－ＯＥ－ＭＳＬＮ刺激アッセイ：ＭＳＬＮを過剰発現させる膵臓細胞株を使用して、前記腫瘍細胞の存在下又は非存在下におけるＴ細胞の条件的刺激について、三価の二重特異性抗体である「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）の効率を調べた メソテリン（ＭＳＬＮ）を過剰発現させる膵臓細胞株（図中では、「Ｓｕｉｔｓ００７ＯＥ」と称する）の存在下又は非存在下において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ３８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４７（ＤＮＡ）によりコードされる配列番号４８（タンパク質））（本明細書の以下では、「Ｅ３ Ｔ細胞」又は「Ｅ３」と称する）のヒトバージョンを形質導入したＴ細胞を、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂの濃度を１．０ｇ／ｍｌとする、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）により、４８時間にわたり刺激した。「Ｓｕｉｔｓ００７ＯＥ」という用語は、膵臓細胞株を指す。「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂは、Ｅ３ Ｔ細胞を、特異的に刺激するが、完全長Ｅ３コンストラクトを欠くＴ細胞（Ｅ３ｄｅｌ（配列番号２４７（タンパク質）及び２４６（ＤＮＡ）））及びＵＴ）は、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂ（可溶型）及びＳｕｉｔｓ００７ＯＥの存在下で刺激されない。アッセイは、腫瘍細胞に対するエフェクター対標的比を、１９：１として実施した。腫瘍細胞は、共培養の６時間前に播種し、Ｔ細胞には、共培養の３０分前に、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」ｂｓＡｂを、プレロードした（ｂｓＡｂ濃度：１μｇ／ｍｌ）。結果は、がん細胞を認識し、活性化させる、方法の能力を裏付ける。Ｅ３ｄｅｌが、細胞内ドメインを欠く、Ｅ３の切除型であるのに対し、ＵＴは、非形質導入Ｔ細胞を指す。

【実施例0158】

以下の実施例により、本発明を例示する。

【0159】

実施例１： 四価の二重特異性抗体である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない）））の調製
四価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖（リーダー配列を伴わない）及び配列番号２３０（重鎖（リーダー配列を伴わない）））を、国際公開第２０１３／１１３６１５号の実施例１、２、及び４で記載されているクローニング方法により調製した。以下の実施例では、概念実証として、例示的に、一方のアーム上の、ｄｅｌ－ｈＥＧＦＲｖＩＩＩ（配列番号２３２（タンパク質）及び２３１（核酸（ＤＮＡ）））に対する２つの抗原結合部位／抗原結合ドメインと、他方のアーム上の、（マウス）ＥｐＣＡＭ（配列番号８３（核酸（ＤＮＡ））及び８４（タンパク質））に対する２つの抗原結合部位／抗原結合ドメインとを伴う、四価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９及び２３０）を、国際公開第２０１３／１１３６１５号（参照により本明細書に組み込まれる）の実施例４に沿って構築した。

【0160】

実施例２： 三価の二重特異性抗体の調製
２．１ 三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、プラスミド／ベクターである「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」を含む／これらからなる配列番号２３３；また、表１及び２も参照されたい）の調製
本実施例では、三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、プラスミド／ベクターである「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」を含む／これらからなる配列番号２３３；表１及び２も参照されたい）を調製した。その概略的例示を、図９に示す；古典的フォーマットである、ｍｕＥｐＣＡＭ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ ２＋１ ＩｇＧ（配列番号２３３；表１及び２も参照されたい）。ｍｕＥｐＣＡＭ／ＥＧＦＲｖＩＩＩの可変ドメインを、それぞれのレシピエント哺乳動物用の発現ベクターにあらかじめ挿入された定常鎖とインフレームでサブクローニングした。タンパク質の発現を、ＣＭＶプロモーターにより駆動し、合成のポリＡシグナル配列を、ＣＤＳの３’端に置く。加えて、各ベクターは、ＥＢＶ ＯｒｉＰ配列を含有する。分子は、懸濁液中で増殖するＣＨＯ細胞に、哺乳動物用の発現ベクターをコトランスフェクトすることにより作製した。一過性のトランスフェクションは、Ｅｖｉｔｒｉａ ＡＧ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）において行った。細胞に、対応する発現ベクターを、１：２：１：１（「ベクター重鎖ホール（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「軽鎖（ＬＣ）」：「ベクター重鎖ノブ（ＶＨ－ＣＫ－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「交差軽鎖（ＶＬ－ＣＨ１）」）の比でトランスフェクトした。濾過された上清を、精製まで、４℃に保った。分泌タンパク質を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用するアフィニティークロマトグラフィーに続く、１つ－２つのサイズ除外クロマトグラフィー工程により、細胞培養物上清から精製した。アフィニティークロマトグラフィーのために、上清を、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、０．５Ｍの塩化ナトリウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０ ｐＨ７．５ ２５ｍｌで平衡化させたＨｉＴｒａｐ ＰｒｏｔｅｉｎＡ ＦＦカラム（ＣＶ＝５ｍＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にロードした。２０ｍＭのリン酸ナトリウム、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、０．５Ｍの塩化ナトリウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０ ｐＨ７．５、少なくとも１０カラム容積で洗浄することにより、結合しなかったタンパク質を除去し、標的タンパク質を、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、０．５Ｍの塩化ナトリウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０ ｐＨ２．５ ２０カラム容積（勾配０％－１００％）中で溶出させた。１０分の１濃度の２ＭのトリスｐＨ １０．５を添加することにより、タンパク質溶液を中和した。２０ｍＭのヒスチジン、１４０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６．０、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０で平衡化させたＨｉＬｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にロードする前に、標的タンパク質を、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５ Ｕｌｔｒａｃｅｌ ３０Ｋ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｌｔｄ．）で、４ｍｌの最大容積に濃縮した。サイズ排除クロマトグラフィー後の解析作業のために、単一の画分内の分子の純度及び分子量は、還元剤の非存在下におけるＳＤＳ－ＰＡＧＥと、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ（ＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅ（商標）、Ｅｘｐｅｄｅｏｎ）を伴う染色とにより解析した。ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｐｒｅ－Ｃａｓｔゲルシステム（４－１２％のビス－トリス、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、又は３－８％のトリス酢酸塩、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、製造元の指示書に従い使用した。精製されたタンパク質試料のタンパク質濃度は、アミノ酸配列に基づき計算されたモル吸光係数で除した、２８０ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）を測定することにより決定した。最終的な精製工程の後における、分子の純度及び分子量は、還元剤の存在下及び非存在下におけるＣＥ－ＳＤＳ解析により解析した。Ｃａｌｉｐｅｒ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）を、製造元の指示書に従い使用した（図９Ａ、９Ｂ）。分子の凝集物含有量は、ＴＳＫゲルＧ３０００ ＳＷ ＸＬ解析用サイズ排除カラム（東ソー株式会社）を、２５℃の、２５ｍＭのＫ２ＨＰＯ４、１２５ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩、０．０２％（ｗ／ｖ）のＮａＮ３、ｐＨ６．７のランニングバッファー中で使用して解析した（図９Ｂ）。全ての分子の、最終的な品質は、良好であり、モノマーの含有量は、≧９６％であった。以下の表７は、ｍｕＥｐＣＡＭ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ分子の作製及び精製についてまとめる。表７中の分子１及び２は、三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＥｐＣＡＭ」（プラスミド／ベクターである、プラスミド／ベクターである「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ｍｕＥｐＣＡＭ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１４９５３」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１４９５１」、「ＶＬ ＥｐＣＡＭ Ｇ．８．８ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１４８８２」、及び「ＶＨ ｍｕＥｐＣＡＭ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１４９４０」を含む／これらからなる配列番号２３３；また、表１及び２も参照されたい）であって、インビトロバッチ（分子１）内で作製されるか、又はインビボバッチ（分子２）内で作製された、三価の二重特異性抗体分子を指す。
表7:

【0161】

２．２ 三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＣＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＶＬ ＭＳＬＮ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１５４４３」、及び「ＶＨ ＭＳＬＮ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１５６６７」を含む／これらからなる配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）の調製
本実施例では、三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＣＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＶＬ ＭＳＬＮ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１５４４３」、及び「ＶＨ ＭＳＬＮ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１５６６７」を含む／これらからなる配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）を調製した（その概略的例示を、図１０に示す；古典的フォーマットである、ＭＳＬＮ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ ２＋１ ＩｇＧ（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい））。ＭＳＬＮ／ＥＧＦＲｖＩＩＩの可変ドメインを、それぞれのレシピエント哺乳動物用の発現ベクターにあらかじめ挿入された定常鎖とインフレームでサブクローニングした。タンパク質の発現を、ＭＰＳＶプロモーターにより駆動し、合成のポリＡシグナル配列を、ＣＤＳの３’端に置く。加えて、各ベクターは、ＥＢＶ ＯｒｉＰ配列を含有する。分子は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、懸濁液中で増殖するＨＥＫ２９３－ＥＢＮＡ細胞に、哺乳動物用の発現ベクターをコトランスフェクトすることにより作製した。細胞に、対応する発現ベクターを、１：２：１：１（「ベクター重鎖ホール（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「軽鎖（ＬＣ）」：「ベクター重鎖ノブ（ＶＨ－ＣＫ－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「交差軽鎖（ＶＬ－ＣＨ１）」）の比でトランスフェクトした。濾過された上清を、精製まで、４℃に保った。トランスフェクションのために、ＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ細胞を、６ｍＭのＬ－グルタミン及び２５０ｍｇ／ｌのＧ４１８を含有する無血清ＥｘＣｅｌｌ培地中で培養した。６００ｍｌのＴｕｂｅ Ｓｐｉｎフラスコ（最大作業容積：４００ｍＬ）内の作製のために、ＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ細胞８億個を、Ｇ４１８を伴わないトランスフェクションの２４時間前に播種した。トランスフェクションのために、細胞８億個を、２１０×ｇで、５分間にわたり遠心分離した。上清を、６ｍＭのＬ－グルタミンを含有する、４０ｍｌの、あらかじめ加温されたＣＤ－ＣＨＯ培地により置きかえた。発現ベクターを、４００μｇのＤＮＡ総量まで、６ｍＭのＬ－グルタミンを含有する、４０ｍｌのＣＤ－ＣＨＯ培地と混合した。１０８０μのｌＰＥＩ溶液（２．７μｇ／ｍｌ）を添加した後で、混合物を、１５秒間にわたりボルテックスし、その後、室温で１０分間にわたりインキュベートした。その後、細胞を、ＤＮＡ／ＰＥＩ溶液と混合し、６００ｍｌのＴｕｂｅ Ｓｐｉｎフラスコに移し、５％のＣＯ_２雰囲気を伴うインキュベーター内、３７℃で、３時間にわたりインキュベートした。インキュベーション後、３２０ｍｌのＥｘＣｅｌｌ＋６ｍＭのＬ－グルタミン＋５ｇ／ＬのＰｅｐｓｏｙ＋１．０ｍＭのＶＰＡ＋３ｇ／ｌのグルコース培地を添加し、細胞を、７％のＦｅｅｄ７をフィードする前に、２４時間にわたり培養した。６－７日間後、培養上清を、２１０×ｇ（Ｓｉｇｍａ ８Ｋ遠心分離機）で、２０－３０分間にわたる遠心分離による精製のために回収した。溶液を滅菌濾過し（０．２２μｍのフィルター）、０．０１％ｗ／ｖの最終濃度で、アジ化ナトリウムを添加した。溶液を、精製まで、４℃に保った。分泌タンパク質を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用するアフィニティークロマトグラフィーに続く、１つ－２つのサイズ除外クロマトグラフィー工程により、細胞培養物上清から精製した。アフィニティークロマトグラフィーのために、上清を、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、０．５Ｍの塩化ナトリウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０ ｐＨ７．５ ２５ｍｌで平衡化させたＨｉＴｒａｐ ＰｒｏｔｅｉｎＡ ＦＦカラム（ＣＶ＝５ｍＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にロードした。２０ｍＭのリン酸ナトリウム、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、０．５Ｍの塩化ナトリウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０ ｐＨ７．５、少なくとも１０カラム容積で洗浄することにより、結合しなかったタンパク質を除去し、標的タンパク質を、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、０．５Ｍの塩化ナトリウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ－２０ ｐＨ２．５ ２０カラム容積（勾配０％－１００％）中で溶出させた。１０分の１濃度の２ＭのトリスｐＨ １０．５を添加することにより、タンパク質溶液を中和した。２０ｍＭのヒスチジン、１４０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６．０で０．０１％のＴｗｅｅｎ２０で平衡化させたＨｉＬｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にロードする前に、標的タンパク質を、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５ Ｕｌｔｒａｃｅｌ ３０Ｋ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｌｔｄ．）で、４ｍｌの最大容積に濃縮した。最終的な精製工程の後における、分子の純度及び分子量は、還元剤の存在下及び非存在下におけるＣＥ－ＳＤＳ解析により解析した。Ｃａｌｉｐｅｒ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）を、製造元の指示書に従い使用した（図１０Ｂ）。分子の凝集物含有量（ＨＭＷ）は、ＴＳＫゲルＧ３０００ ＳＷ ＸＬ解析用サイズ排除カラム（東ソー株式会社）を、２５℃の、２５ｍＭのＫ２ＨＰＯ４、１２５ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩、０．０２％（ｗ／ｖ）のＮａＮ３、ｐＨ６．７のランニングバッファー中で使用して解析した（図１０Ａ）。表８中の分子１は、三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（プラスミド／ベクターである、「ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＣＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＶＬ ＭＳＬＮ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１５４４３」、及び「ＶＨ ＭＳＬＮ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＲＹＦ，ｐＥＴＲ１５６６７」を含む／これらからなる配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）であって、上記で記載した三価の二重特異性抗体分子を指す。全ての分子の、最終的な品質は、良好であり、モノマーの含有量は、≧９６％であった。以下の表８は、ＭＳＬＮ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ分子の作製及び精製についてまとめる。
表8:

【0162】

２．３ 三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」（プラスミド／ベクターである、「ＭＲ１．１ ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＶＨ－Ｃｋ－（Ｇ４Ｓ）２ ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１６６２１」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＭＣＳＰ ＭＬ２ ＶＬ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１６６１９」、及び「ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＹＲＦ，ｐＥＴＲ１６６１８」を含む／これらからなる配列番号２３４；また、表５及び６も参照されたい）の調製
本実施例では、三価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」（プラスミド／ベクターである、「ＭＲ１．１ ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＶＨ－Ｃｋ－（Ｇ４Ｓ）２ ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１６６２１」、「ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＬ ＣＨ１，ｐＥＴＲ１５６５６」、「ＭＣＳＰ ＭＬ２ ＶＬ Ｃｋ ＲＫ，ｐＥＴＲ１６６１９」、及び「ＭＣＳＰ Ｍ４－３ ＶＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｈｏｌｅ ＰＧ ＬＡＬＡ ＨＹＲＦ，ｐＥＴＲ１６６１８」を含む／これらからなる配列番号２３４；また、表５及び６も参照されたい）を調製した（その概略的例示を、図１１に示す；古典的フォーマットである、ＭＣＳＰ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ ２＋１ ＩｇＧ（配列番号２３４；また、表５及び６も参照されたい））。ＭＣＳＰ／ＥＧＦＲｖＩＩＩの可変ドメインを、それぞれのレシピエント哺乳動物用の発現ベクターにあらかじめ挿入された定常鎖とインフレームでサブクローニングした。タンパク質の発現を、ＭＰＳＶプロモーターにより駆動し、合成のポリＡシグナル配列を、ＣＤＳの３’端に置く。加えて、各ベクターは、ＥＢＶ ＯｒｉＰ配列を含有する。分子は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、懸濁液中で増殖するＨＥＫ２９３－ＥＢ細胞に、哺乳動物用の発現ベクターをコトランスフェクトすることにより作製した。細胞に、対応する発現ベクターを、１：２：１：１（「ベクター重鎖ホール（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「軽鎖（ＬＣ）」：「ベクター重鎖ノブ（ＶＨ－ＣＫ－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）」：「交差軽鎖（ＶＬ－ＣＨ１）」）の比でトランスフェクトした。濾過された上清を、精製まで、４℃に保った。トランスフェクションのために、ＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ細胞を、６ｍＭのＬ－グルタミンと、２５０ｍｇ／ｌＧ４１８とを含有する無血清ＥｘＣｅｌｌ培地中で培養した。６００ｍｌのＴｕｂｅ Ｓｐｉｎフラスコ（最大作業容積：４００ｍＬ）内の作製のために、ＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ細胞８億個を、Ｇ４１８を伴わないトランスフェクションの２４時間前に播種した。トランスフェクションのために、８億細胞を、２１０×ｇで、５分間にわたり遠心分離した。上清を、６ｍＭのＬ－グルタミンを含有する、４０ｍｌの、あらかじめ加温されたＣＤ ＣＨＯ培地により置きかえた。発現ベクターを、４００μｇのＤＮＡ総量まで、６ｍＭのＬ－グルタミンを含有する、４０ｍｌのＣＤ ＣＨＯ培地と混合した。１０８０μｌのＰＥＩ溶液（２．７μｇ／ｍｌ）を添加した後で、混合物を、１５秒間にわたりボルテックスし、その後、室温で１０分間にわたりインキュベートした。その後、細胞を、ＤＮＡ／ＰＥＩ溶液と混合し、６００ｍｌのＴｕｂｅ Ｓｐｉｎフラスコに移し、５％のＣＯ_２雰囲気を伴うインキュベーター内、３７℃で、３時間にわたりインキュベートした。インキュベーション後、３２０ｍｌのＥｘＣｅｌｌ＋６ｍＭのＬ－グルタミン＋５ｇ／ＬのＰｅｐｓｏｙ＋１．２５ｍＭのＶＰＡ＋３ｇ／ｌのグルコース培地を添加し、細胞を、１２％のＦｅｅｄ７をフィードする前に、２４時間にわたり培養した。６－７日間後、培養上清を、２１０×ｇ（Ｓｉｇｍａ ８Ｋ遠心分離機）で、２０－３０分間にわたる遠心分離による精製のために回収した。溶液を滅菌濾過し（０．２２μｍのフィルター）、０．０１％ｗ／ｖの最終濃度で、アジ化ナトリウムを添加した。溶液を、精製まで、４℃に保った。分泌タンパク質を、アフィニティークロマトグラフィーに続く、１つ－２つのサイズ除外クロマトグラフィー工程により、細胞培養物上清から精製した。アフィニティークロマトグラフィーのために、上清を、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５ ２５ｍｌで平衡化させたプロテインＡ ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（ＣＶ＝５ｍＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にロードした。２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５、少なくとも１０カラム容積で洗浄することにより、結合しなかったタンパク質を除去し、標的タンパク質を、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、１００ｍＭの塩化ナトリウム、１００ｍＭのグリシン、ｐＨ３．０ ２０カラム容積（勾配０％－１００％）中で溶出させた。０．５ＭのＮａ２ＨＰＯ４ ｐＨ８．０（１：１０）を添加することにより、タンパク質溶液を中和した。２０ｍＭのヒスチジン、１４０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴｗｅｅｎ ｐＨ ６．０で平衡化させたＨｉＬｏａｄ １６／６００ Ｓ２００、１２０ｍｌカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にロードする前に、標的タンパク質を、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－１５ Ｕｌｔｒａｃｅｌ ３０Ｋ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｌｔｄ．）で、４ｍｌの最大容積に濃縮した。最終的な精製工程の後における、分子の純度及び分子量は、還元剤の存在下及び非存在下におけるＣＥ－ＳＤＳ解析により解析した。Ｃａｌｉｐｅｒ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）を、製造元の指示書に従い使用した。分子の凝集物含有量は、ＴＳＫゲルＧ３０００ ＳＷ ＸＬ解析用サイズ排除カラム（東ソー株式会社）を、２５℃の、２５ｍＭのＫ２ＨＰＯ４、１２５ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩、０．０２％（ｗ／ｖ）のＮａＮ３、ｐＨ６．７のランニングバッファー中で使用して解析した。全ての分子の、最終的な品質は、良好であり、モノマーの含有量は、≧９８％であった。以下の表９は、三価二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）「ＢｓＡｂ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＣＳＰ」（配列番号２３４）分子の作製及び精製についてまとめる。
表9:

【0163】

実施例３： 融合タンパク質のクローニング及び発現
３．１ 融合タンパク質である、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ）））、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号４４（タンパク質）及び４３（ＤＮＡ）））、及びＣｒｉｐｔｏ－ＣＤ２８－４－ＣＤ３ｚ（配列番号４６（タンパク質）及び４５（ＤＮＡ）））のクローニング
ＥＧＦＲｖＩＩＩ融合タンパク質及びＣｒｉｐｔｏ融合タンパク質を、重複伸長ＰＣＲ及びレトロウイルスｐＭＰ７１ベクターへの組換え発現クローニングにより作出した（Schambachら、Mol Ther 2 (5) (2000)、435-45；欧州特許第０９５５３７４号（Ｂ１））。ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（配列番号４１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる））の構築は、ＰＣＲ増幅により行った。増幅は、４つの工程で行った：まず、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩの細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインを、以下のプライマー：５’－ＡＧＣＴＴＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＧＡＣＣＣＴＣＣＧ－３’（配列番号１０３；ＥＧＦＲｖＩＩＩＮｏｔＩｆｗｄ）と、５’－ＴＣＴＧＴＴＣＣＴＴＣＴＡＣＴＡＴＴＣＡＴＧＡＡＧＡＧＧＣＣＧＡＴＣＣＣ－３’（配列番号１０４；ＥＧＦＲｔｍ ＣＤ２８ｉｚ ｒｅｖ）を使用することにより、ＣＤ２８細胞内ドメインについての部分的な重複と共に増幅した。同時に、マウスＣＤ２８の細胞内ドメインを、以下のプライマー：５’－ＧＧＧＡＴＣＧＧＣＣＴＣＴＴＣＡＴＧＡＡＴＡＧＴＡＧＡＡＧＧＡＡＣＡＧＡ－３’（配列番号１０５；ＥＧＦＲｔｍ ＣＤ２８ｉｚ ｆｗｄ）と、５’－ＣＴＧＣＴＧＡＡＴＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＧＧＴＡＣＧＣＴＧＣＡＡ－３’（配列番号１０６；ＣＤ２８ｉｎ／ＣＤ３ゼータ ｒｅｖ）とを使用することにより、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ膜貫通ドメイン及びマウスＣＤ３ｚドメインについての部分的な重複と共に増幅した。第３の反応工程では、マウスＣＤ３ｚを、以下のプライマー：５’－ＴＴＧＣＡＧＣＧＴＡＣＣＧＣＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＡＡＴＴＣＡＧＣＡＧ－３’（配列番号１０７；ＣＤ３ゼータ／ＣＤ２８ｆｗｄ）と、５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＣ－３’（配列番号１０８；ＣＤ３ゼータＥｃｏＲＩｒｅｖ）を使用することにより、マウスＣＤ２８細胞内ドメインについての部分的な重複と共に増幅した。第４の最終工程では、全ての産物を、ＥＧＦＲｖＩＩＩプライマー（５’－ＡＧＣＴＴＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＧＡＣＣＣＴＣＣＧ－３’；配列番号１０３；ＥＧＦＲｖＩＩＩＮｏｔＩｆｗｄ）と、ＣＤ３ｚプライマー（５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＣ－３’；ＣＤ３ゼータＥｃｏＲＩｒｅｖ（配列番号１０８））とを使用する増幅鋳型として使用した。

【0164】

Ｃｒｉｐｔｏ融合タンパク質では、クローニングを、以下の通り、５つの工程で行った：まず、ヒト融合タンパク質を、以下のプライマー：５’－ＡＴＴＡＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＴＡＣＡＣ－３’（配列番号１０９；Ｌｅａｄｅｒ＿ＮｏｔＩ＿ｆｗｄ）と、５’－ＡＡＡＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＣＣＣＡＧＧＣＴＴＣＴＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＧＣ－３’（配列番号１１０；ＬｅａｄｅｒＣｒｉｐｔｏＩｓｏｒｅｖ）により増幅した。ＩｇＫリーダー配列と、ヒトＣｒｉｐｔｏとの重複は、以下のプライマー：５’－ＧＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＣＣＡＴＣＡＧＧＡＡＴＴＴ－３’（配列番号１１１；ＬｅａｄｅｒＣｒｉｐｔｏＩｓｏｆｗｄ）と、５’－ＣＡＧＣＡＣＴＧＧＣＴＴＧＧＴＡＧＴＡＴＣＡＣＡＧＣＣＧＧＧＴＡＧＡＡＡ－３’（配列番号１１２；Ｃｒｉｐｔｏ ＣＤ８ａｅｘ ｒｅｖ）により行った。その後、ヒトＣｒｉｐｔｏと、マウスＣＤ８との重複は、以下のプライマー：５’－ＴＴＴＣＴＡＣＣＣＧＧＣＴＧＴＧＡＴＡＣＴＡＣＣＡＡＧＣＣＡＧＴＧＣＴＧ－３’（配列番号１１３；ＣｒｉｐｔｏＣＤ８ａｅｘ ｆｗｄ）と、５’－ＴＣＴＧＴＴＣＣＴＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＡＴＧＡＧＡＧＴＧＡＴＧＡＴＣＡＡ－３’（配列番号１１４；ＣＤ８ｔｍ－ＣＤ２８ｉｚ ｒｅｖ）により行った。その後マウスＣＤ８と、マウスＣＤ２８との重複は、以下のプライマー：５’－ＴＴＧＡＴＣＡＴＣＡＣＴＣＴＣＡＴＣＡＡＴＡＧＴＡＧＡＡＧＧＡＡＣＡＧＡ－３’（配列番号１１５；ＣＤ８ｔｍ－ＣＤ２８ｉｚｆｗｄ）と、５’－ＣＴＧＣＴＧＡＡＴＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＧＧＴＡＣＧＣＴＧＣＡＡ－３’（配列番号１１６；ＣＤ２８ｉｎ／ＣＤ３ゼータｒｅｖ）により行った。マウスＣＤ２８と、マウスＣＤ３ｚとの重複は、以下のプライマー：５’－ＴＴＧＣＡＧＣＧＴＡＣＣＧＣＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＡＡＴＴＣＡＧＣＡＧ－３’（配列番号１１７；ＣＤ３ゼータ／ＣＤ２８ｆｗｄ）と、５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＣ－３’（配列番号１１８；ＣＤ３ゼータＥｃｏＲＩｒｅ）により行った。第５の最終反応では、全ての産物を、以下のプライマー：５’－ＡＴＴＡＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＴＡＣＡＣ－３’（配列番号１０９；Ｌｅａｄｅｒ＿ＮｏｔＩ＿ｆｗｄ）と、５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＣ－３’（配列番号１１８；ＣＤ３ゼータＥｃｏＲ１ｒｅｖ）と併せて、鋳型として使用した。

【0165】

増幅の後、ＥｃｏＲＩ制限酵素及びＮｏｔＩ制限酵素による切断、ならびにＤＮＡのライゲーションを使用して、インサートを、ｐＭＰ７１ベクターにライゲーションした。

【0166】

３．２ 融合タンパク質である、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４８（タンパク質）及び４７（ＤＮＡ）））及びＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号５０（タンパク質）及び４９（ＤＮＡ）））のクローニング
３．２．１ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ（配列番号４８（タンパク質）及び４７（ＤＮＡ）））
第１の反応では、以下のプライマー：ＥＧＦＲｖＩＩＩ ｆｗｄ（５’－ＡＧＣＴＴＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＧＡＣＣＣ－３’（配列番号１２５））と、プライマーであるＥＧＦＲｖＩＩＩ（－ヒトＣＤ２８）ｒｅｖ（５’－ＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＡＣＧＧＧＡＴＣＴＴＡＧＧＣＣＣＡ－３’（配列番号１２６））とを使用することにより、ＣＤ２８についての３’重複を創出した。第２の反応では、プライマー：（ＥＧＦＲｖＩＩＩ－）ヒトＣＤ２８ｆｗｄ（５’－ＴＧＧＧＣＣＴＡＡＧＡＴＣＣＣＧＴＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧ－３’（配列番号１２７））と、ヒトＣＤ３ｚ ｒｅｖ（５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＧＣＡＧＧ－３’（配列番号１２８））とを使用することにより、ＣＤ２８についての５’重複と、ＣＤ３Ｚについての３’重複とを行った。上記の産物を使用する第３の反応は、プライマーであるＥＧＦＲｖＩＩＩ ｆｗｄ（５’－ＡＧＣＴＴＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＧＡＣＣＣ－３’（配列番号１２９））と、ヒトＣＤ３ｚ ｒｅｖ（５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＧＣＡＧＧ－３’（配列番号１３０））とを含んだ。

【0167】

増幅の後、ＥｃｏＲＩ制限酵素及びＮｏｔＩ制限酵素による切断、ならびにＤＮＡのライゲーションを使用して、インサートを、ｐＭＰ７１ベクターにライゲーションした。

【0168】

３．２．２ ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－４－１－ＢＢ－ＣＤ３ｚ（配列番号５０（タンパク質）及び４９（ＤＮＡ）））
第１の反応では、以下のプライマー：５’－ＡＧＣＴＴＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＧＡＣＣＣ－３’（配列番号１３１；ＥＧＦＲｖＩＩＩ）と、５’－ＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＣＡＡＡＡＧＧＡＣＧＧＧＡＴＣＴＴＡＧＧＣＣＣＡ－３’（配列番号１３２；ヒトＣＤ２８ ｒｅｖ）とを使用することにより、ＣＤ２８についての３’重複を行った。第２の反応では、プライマーである、（ＥＧＦＲｖＩＩＩ－）ヒトＣＤ２８ ｆｗｄ（５’－ＴＧＧＧＣＣＴＡＡＧＡＴＣＣＣＧＴＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧ－３’（配列番号１３３）と、プライマーである、ヒトＣＤ２８（－ヒト４－１－ＢＢ）ｒｅｖ（５’－ＣＴＴＴＣＴＧＣＣＣＣＧＴＴＴＧＧＡＧＣＧＡＴＡＧＧＣＴＧＣＧＡ－３’（配列番号１３４））とを使用することにより、ＥＧＦＲｖ３についての５’重複と、４－１－ＢＢについての３’重複とを、行った。第３の反応では、ＣＤ２８についての５’重複と、ＣＤ３ｚについての３’重複とを、以下のプライマー：（ヒトＣＤ２８－）ヒト４－１－ＢＢ ｆｗｄ（５’－ＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧ－３’（配列番号１３５））と、ヒト４－１－ＢＢ（－ヒトＣＤ３ｚ）ｒｅｖ（５’－ＴＧＣＴＧＡＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＧＴＴＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＴ－３’（配列番号１３６））とにより行った。第４の反応では、以下のプライマー：（ヒト４－１－ＢＢ－）ヒトＣＤ３ｚ ｆｗｄ（５’－ＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡ－３’（配列番号１３７））と、プライマーである、ヒトＣＤ３ｚ ｒｅｖ（５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＧＣＡＧＧ－３’（配列番号１３８））とを使用することにより、４－１－ＢＢについての５’重複と、ＣＤ３ｚについての３’重複とを、行った。第４の最終反応では、全ての産物を、５’側リーダープライマーである、ＥＧＦＲｖＩＩＩ ｆｗｄ（５’－ＡＧＣＴＴＧＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＧＡＣＣＣ－３’（配列番号１３９））及びヒトＣＤ３ｚ ｒｅｖ（５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＧＣＡＧＧ－３’（配列番号１４０））と併せて、鋳型として使用した。

【0169】

増幅の後、ＥｃｏＲＩ制限酵素及びＮｏｔＩ制限酵素による切断、ならびにＤＮＡのライゲーションを使用して、インサートを、ｐＭＰ７１ベクターにライゲーションした。

【0170】

３．２．３ ＣＡＲ１ヒト（Ｃｒｉｐｔｏ－ＣＤ８ａｅｘ／ｔｍ－ＣＤ２８ｉｚ－ＣＤ３ｚ）（配列番号１２０（タンパク質）及び１１９（ＤＮＡ）））
第１の反応では、以下のプライマー：Ｃｒｉｐｔｏ ｆｗｄ（５’－ＡＴＴＡＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＴＡＣＡＣ－３’（配列番号１４１））と、Ｃｒｉｐｔｏ（－ヒトＣＤ８ａ）ｒｅｖ（５’－ＡＣＡＣＣＣＧＧＡＡＣＴＧＧＣＴＡＴＣＡＣＡＧＣＣＧＧＧＴＡＧＡ－３’（配列番号１４２））とを使用することにより、ＣＤ８についての３’重複を行った。第２の反応では、プライマーである、（Ｃｒｉｐｔｏ－） ヒトＣＤ８ａ ｆｗｄ（５’－ＴＣＴＡＣＣＣＧＧＣＴＧＴＧＡＴＡＧＣＣＡＧＴＴＣＣＧＧＧＴＧ－３’（配列番号１４３））と、ヒトＣＤ８ａ（－ヒトＣＤ２８）ｒｅｖ（５’－ＣＴＣＣＴＣＴＴＡＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＴＡＡＣＣＡＧＴＧＡＣＡＧＧ－３’（配列番号１４４））とを使用することにより、Ｃｒｉｐｔｏについての５’重複及びＣＤ２８についての３’重複を行った。第３の反応では、以下のプライマーである、（ヒトＣＤ８ａ－）ヒトＣＤ２８ ｆｗｄ（５’－ＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧ－３’（配列番号１４５））と、ヒトＣＤ３ｚ ｒｅｖ（５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＧＣＡＧＧ－３’（配列番号１４６））とを使用することにより、ＣＤ８についての５’重複及びＣＤ３ｚについての３’重複を増幅した。第４の最終反応では、以下のプライマー：Ｃｒｉｐｔｏ ｆｗｄ（５’－ＡＴＴＡＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＴＡＣＡ－３’（配列番号１４７））と、ヒトＣＤ３ｚ ｒｅｖ（５’－ＴＡＡＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＣＧＡＧＧＧＧＧＣＡＧＧ－３’（配列番号１４８））とを使用することにより、全ての産物を、５’側リーダープライマーと併せて、鋳型として使用した。

【0171】

増幅の後、ＥｃｏＲＩ制限酵素及びＮｏｔＩ制限酵素による切断、ならびにＤＮＡのライゲーションを使用して、インサートを、ｐＭＰ７１ベクターにライゲーションした。

【0172】

３．２．４ コンストラクトである、Ｅ３ｄｅｌ（配列番号２４７（タンパク質）及び２４６（ＤＮＡ）））を、重複伸長ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により作出し、レトロウイルスｐＭＰ７１ベクターにクローニングした。ＥＧＦＲｖＩＩＩ配列に従い、特異的重複プライマーを、ＳｎａｐＧｅｎｅ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅによりデザインした。アニーリング部分の融点は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ（ＮＥＢ）製の、オンラインＴｍ Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ Ｖ １．８．１により計算した。全てのＰＣＲ反応はもっぱら、ＮＥＢ製のＱ５ポリメラーゼにより実行した。コンストラクトであるＥ３ｄｅｌは、細胞膜内のＥ３ｄｅｌのアンカリングを改善するように、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ、ヒトＥＧＦＲｖＩＩＩ膜貫通ドメイン、及び１０細胞内アミノ酸からなる。

【0173】

実施例４： Ｔ細胞の形質導入及び細胞傷害性殺滅アッセイ
４．１ 細胞培養物
４．１．１ マウスがん細胞株
マウス膵臓がん細胞株であるＰａｎｃ０２と、オボアルブミンをトランスフェクトされたその対応物である、Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡについては、既に記載されている（Jacobsら、Int J Cancer、128 (4) (2011)、897-907）。Ｐａｎｃ０２細胞株は、発がん物質であるＭｅｔｈｙｃｈｏｌａｎｔｒｅｎ Ａの、野生型Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの膵臓への注射であって、発がん性を誘導する注射を介して作出した。Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ－ＥｐＣＡＭは、完全長マウスＥｐＣＡＭ（配列番号８３（核酸（ＤＮＡ））及び８４（タンパク質））を含有するｐＭＸ－ｐｕｒｏ（Kitamuraら、Exp. Hematol.、31 (2003)、1007-1014）の形質導入と、最終濃度を１０μｇ／ｍｌとするピューロマイシンによる選択とにより作出した。パッキング細胞株であるＰｌａｔ－Ｅについては、Ｍｏｒｉｔａら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ、７（２０００）、１０６３－６により既に記載されている。全ての細胞を、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）、１％のペニシリン及びストレプトマイシン（ＰＳ）、ならびに１％のＬ－グルタミン（全て、ＰＡＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ製）を伴うＤＭＥＭ中で培養した。１０μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１μｇ／ｍｌのブラスチシジン（Ｓｉｇｍａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、Ｐｌａｔ－Ｅ培地に添加した。初代マウスＴ細胞（下記の、培養についての２．５節を参照されたい）を、１０％のＦＢＳ、１％のＰＳ、及び１％のＬ－グルタミンを伴うＲＰＭＩ １６４０中で培養した。１％のピルビン酸ナトリウム、１ｍＭのＨＥＰＥＳ、及び５０μＭのβ－メルカプトエタノールを、Ｔ細胞培地に添加した。

【0174】

４．１．２ ヒトがん細胞株
ヒト膵臓がん細胞株であるＳＵＩＴ－２については、既に記載されている（Iwamoraら、Jpn J Cancer Res.、78 (1) (1987)、54-62）。ＳＵＩＴ－２細胞株は、ヒト膵臓癌の転移性肝臓腫瘍から導出した。ＳＵＩＴ－２－ＯＥ－ＭＳＬＮは、完全長ヒトＭＳＬＮ（配列番号８３（核酸（ＤＮＡ））及び８４（タンパク質））を含有するｐＭＰ７１－ａｍｐ（Kitamuraら、Exp. Hematol.、31(2003)、1007-1014）の形質導入と、最終濃度を１０μｇ／ｍｌとするアンピシリンによる選択とにより作出した。Ｆｌｐ－ＨＥＫ２９３ヒト胎児性腎臓上皮細胞については、既に記載されている（Thankamonyら、Journal of Biological Chemistry、281 (45) (2006)、34601-34609）。細胞株であるＨＥＫ２９３－ＦＬＰｉｎ－ＭＳＬＮは、完全長ヒトＭＳＬＮ（配列番号８３（核酸（ＤＮＡ））及び８４（タンパク質））を含有するｐＭＰ７１－ａｍｐ（Kitamuraら、Exp. Hematol.、31 (2003)、1007-1014）の形質導入と、最終濃度を１０μｇ／ｍｌとするアンピシリンによる選択とにより作出した。パッキング細胞株であるＰｌａｔ－Ａについては、Ｗｕら、Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２００９（２００９）、９０１０７９により既に記載されている。全ての細胞を、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）、１％のペニシリン及びストレプトマイシン（ＰＳ）、ならびに１％のＬ－グルタミン（全て、ＰＡＡ、Ｇｅｒｍａｎｙ製）を伴うＤＭＥＭ中で培養した。１０μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１μｇ／ｍｌのブラスチシジン（Ｓｉｇｍａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、Ｐｌａｔ－Ａ培地に添加した。初代ヒトＴ細胞（下記の、培養についての２．５節を参照されたい）を、２．５％のヒト血清、１％のＰＳ、１％のＬ－グルタミン、１％のピルビン酸ナトリウム、及び１％の非必須アミノ酸を伴うＶＬＥ ＲＰＭＩ １６４０中で培養した。

【0175】

４．１．３ ヒト膵臓がん細胞株であるＳＵＩＴ－２については、既に記載されている（Iwamoraら、Jpn J Cancer Res. 78 (1) (1987)、54-62）。細胞株は、ＣｅｌｌＢａｎｋ Ａｕｓｔｒａｌｉａ（ＣＯＤＥ：ＪＣＲＢ１０９４）など、異なるリポジトリーを介して入手可能である。ＳＵＩＴ－２細胞株は、ヒト膵臓癌の転移性肝臓腫瘍から導出した。ＳＵＩＴ－２－ＯＥ－ＭＳＬＮは、完全長ヒトＭＳＬＮ／ＣＡＫ１／ＭＰＦ（ＨＧＮＣＩＤ：ＨＧＮＣ：７３７１（Changら、PNAS.、93 (1) (1996)、136-40）を含有するｐＭＸｓ－ａｍｐ（Kitamuraら、Exp. Hematol.、31(2003)、1007-1014）の形質導入により作出した。ヒトＭＳＬＮは、ＨｅＬａ細胞のｃＤＮＡから導出した（Macvilleら、Cancer Res.、59 (1) (1999)、141-50）。ＭＳＬＮ遺伝子は、７１ｋＤａの前駆体タンパク質をコードし、メソテリンと呼ばれる、４０ｋＤａの、グリコシルホスファチジルイノシトールによりアンカリングされた細胞表面タンパク質、及び細胞から放出される、巨核球増強因子と称する、ＮＨ２末端の、３１ｋＤａ断片にさらにプロセシングされる（Hoら、Clin Cancer Res.、13 (5) (2007)、1571-75）。

【0176】

４．２ Ｔ細胞への形質導入
４．２．１ マウスＴ細胞への形質導入
レトロウイルスベクターであるｐＭＰ７１（Schambachら、Mol Ther 2 (5) (2000)、435-45；欧州特許第０９５５３７４号（Ｂ１））を、同種指向性のパッキング細胞株であるＰｌａｔ－Ｅへのトランスフェクションのために使用した。形質導入は、Ｌｅｉｓｅｇａｎｇら、Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ、８６（２００８）、５７３－８３；Ｍｕｅｌｌｅｒら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．、８６（２０１２）、１０８６６－１０８６９；印刷中のＫｏｂｏｌｄら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ（２０１４）により記載されている方法に従い実施した。略述すると、パッキング細胞株であるＰｌａｔ Ｅ（Moritaら、Gene Ther、7 (2000)、1063-6により記載されている）を、６ウェルプレート内に播種し、一晩にわたり、７０－８０％のコンフルエンシーまで増殖させた。１日目に、１６μｇのＤＮＡを、１００ｍＭのＣａＣｌ２（Ｍｅｒｃｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）及び１２６．７μＭのクロロキン（Ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ）と併せて混合した。Ｐｌａｔ－Ｅ細胞を、低血清培地（３％）中で、３０分間にわたり飢餓下に置き、次いで、沈殿したＤＮＡと共に、６時間にわたりインキュベートした。次いで、培地を除去し、培養培地と交換した。２日目に、初代脾細胞を、Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から採取した。脾細胞の単一細胞懸濁液を、Ｔ細胞培地中、抗ＣＤ３（クローン１４５－２ｃ１１；ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ＵＳＡ）、抗ＣＤ２８（クローン３７．５１；ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ＵＳＡ）、及び組換えマウスＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により、一晩にわたり刺激した。３日目に、２４ウェルプレートを、１２．５μｇ／ｍｌの組換えレトロネクチン（日本、タカラバイオ株式会社）により、室温で、２時間にわたりコーティングし、２％のウシ血清アルブミン（Ｒｏｔｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により、３７℃で、３０分間にわたりブロッキングし、ＰＢＳで洗浄した。Ｐｌａｔ Ｅの上清を採取し、フィルター（４０μｍ、Ｍｉｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）を流過させた。次いで、新鮮なＴ細胞培地を、Ｐｌａｔ Ｅ細胞に添加した。１ｍｌの、濾過された上清を、各ウェル内に分配し、４℃で、２時間にわたり、スピノキュレートした。次いで、上清を、２４ウェルプレートから除去した。Ｔ細胞１０^６個を、ウェル１つ当たり１０ＵのＩＬ－２及び４０００００個の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を補充したＴ細胞培地１ｍｌ中に播種し、８００ｇ、３２℃で、３０分間にわたりスピノキュレートした。４日目に、Ｐｌａｔ Ｅ上清を、再度採取し、濾過した。１ｍｌを、２４ウェルプレートの各ウェルに添加し、８００ｇ、３２℃で、９０分間にわたりスピノキュレートした。その後、細胞を、３７℃で、さらに６時間にわたりインキュベートした。１ｍｌの上清を、ＩＬ－２を伴うＴ細胞培地により置きかえた。５日目に、細胞を、採取し、カウントし、１ｍｌ当たり１０ｎｇのＩＬ－１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を補充したＴ細胞培地中の密度を、１ｍｌ当たりの細胞１０^６個として、再播種した。Ｔ細胞を、細胞解析又は機能アッセイを実施する、１０日目まで、この密度で保った。

【0177】

４．２．２ ヒトＴ細胞への形質導入
レトロウイルスベクターであるｐＭＰ７１（Schambachら、Mol Ther 2 (5) (2000)、435-45；欧州特許第０９５５３７４号（Ｂ１））を、同種指向性のパッキング細胞株であるＰｌａｔ－Ａへのトランスフェクションのために使用した。形質導入は、Ｌｅｉｓｅｇａｎｇら、Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ、８６（２００８）、５７３－８３；Ｍｕｅｌｌｅｒら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．、８６（２０１２）、１０８６６－１０８６９；Ｋｏｂｏｌｄら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ（２０１４）により記載されている方法に従い実施した。略述すると、パッキング細胞株であるＰｌａｔ Ａ（Moritaら、Gene Ther、7 (2000)、1063-6により記載されている）を、６ウェルプレート内に播種し、一晩にわたり、７０－８０％のコンフルエンシーまで増殖させた。１日目に、１８μｇのＤＮＡを、１００ｍＭのＣａＣｌ_２（Ｍｅｒｃｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と併せて混合した。Ｐｌａｔ－Ａ細胞を、低血清培地（３％）中で、３０分間にわたり飢餓下に置き、次いで、沈殿したＤＮＡと共に、６時間にわたりインキュベートした。次いで、培地を除去し、培養培地と交換した。加えて、２日目に、それらを、抗ヒトＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体（それぞれ、クローンＨＩＴ３ａ及びＣＤ２８．２）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）でコーティングすることにより、６ウェルプレートを、Ｔ細胞用に調製した。２日目に、全血を、健常ドナーから採取した。次いで、密度勾配遠心分離を使用して、ＰＢＭＣを単離した。ＣＤ３^＋細胞の単離は、ヒトＣＤ３マイクロビーズを伴うインキュベーション後に、ＭＡＣＳ ＣＤ３陽性選択キットＬＳカラムプロトコール（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に従い実行した。次いで、ＣＤ３＋Ｔ細胞を、４．１節で記載されている通り、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びβ－メルカプトエタノール（全て、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と、Ｔ細胞培地中に、細胞１０^６個当たり８．２５μｌのヒトＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓとを添加して、一晩にわたり培養した。３日目に、２４ウェルプレートを、１２．５μｇ／ｍｌの組換えレトロネクチン（日本、タカラバイオ株式会社）でコーティングし、４℃で一晩にわたりインキュベートした。４日目に、プレートを、２％のウシ血清アルブミン（Ｒｏｔｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により、３７℃で、３０分間にわたりブロッキングし、ＰＢＳ中に２．５％のＨＥＰＥＳで洗浄した。Ｐｌａｔ Ａの上清を採取し、フィルター（４０μｍ、Ｍｉｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）を流過させた。次いで、新鮮なＤＭＥＭ培地を、Ｐｌａｔ Ａ細胞に添加した。１ｍｌの、濾過されたウイルス上清を、各ウェル内に添加し、その後、３２℃で、１時間３０分にわたり、遠心分離した。次いで、上清を、２４ウェルプレートから除去した。関与性のウイルス上清が存在する場合、Ｔ細胞１０^６個を、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びβ－メルカプトエタノールを補充したＴ細胞培地１ｍｌ中に播種した。５日目に、Ｔ細胞に、第２のヒット及び最終的な形質導入ヒット施しながら、４日目のプロトコールを、反復する。６日目に、細胞を、採取し、カウントし、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びβ－メルカプトエタノール（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を補充したＴ細胞培地中の密度を、１ｍｌ当たりの細胞１０^６個として、再播種した。次いで、ＦＡＣＳ解析を使用して、Ｔ細胞を、それらの形質導入効率について点検する。形質導入に成功したら、Ｔ細胞を、隔日で、再培養し、１ｍｌ当たりの細胞１０^６個の濃度で維持する。

【0178】

４．３ 殺滅アッセイ
オボアルブミン（配列番号２００（タンパク質）及び１９９（ＤＮＡ）））を、安定的に発現させ、ＥｐＣＡＭ（配列番号２０２（タンパク質）及び２０１（ＤＮＡ）））を形質導入された、ＰａｎｃＯＶＡＥｐＣＡＭマウス膵臓がん細胞２０，０００個を、９６ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）上に播種した。ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ）））を形質導入されたＴ細胞１００，０００個に、ｂｓＡｂ（三価の二重特異性抗体分子である「ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＣＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」（配列番号２（配列番号１に示されたＤＮＡ配列によりコードされる）、又は四価の二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」（配列番号２２９（軽鎖アミノ酸配列）及び２３０（重鎖アミノ酸配列））を、３０分間にわたりプレロードし、腫瘍細胞（Ｐａｎｃ０２－ＯＶＡ－ＥｐＣＡＭ又はＰａｎｃ０２－ＯＶＡ）と共に、８－１２時間（Ｅ：Ｔ＝５：１）にわたり共培養した。製造元の指示書（ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）Ｎｏｎ－Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ａｓｓａｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ）に従い、上清中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）レベルを定量化した。略述すると、ＬＤＨは、乳酸塩の、ピルビン酸塩への酸化により、ＮＡＤ^＋の、ＮＡＤＨ及びＨ^＋への還元を触媒する。次に、ジアホラーゼが、ＮＡＤＨ及びＨ^＋と反応して、４９０ｎｍで吸収するホルマザンへの、テトラゾリウム塩（ＩＮＴ）の還元を触媒する。比溶解（％）は、以下の式：
（ＬＤＨ^{ｏｆ ｉｎｔｅｒｅｓｔ}－ＬＤＨ^{ｏｆ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ}－ＬＤＨ^{ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｏｎｌｙ}）／（ＬＤＨ^{ｔｏｔａｌ ｌｙｓｉｓ}－ＬＤＨ^{ｍｉｎｉｍａｌ ｌｙｓｉｓ}－ＬＤＨ^{ｏｆ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ}）×１００％
に従い計算した。

【0179】

４．４ インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）放出アッセイ
９６ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を、４℃で、漸増濃度（０μｇ／ｍＬ；０．１μｇ／ｍＬ；１μｇ／ｍＬ；１０μｇ／ｍＬ）の、四価二重特異性抗体分子である「ＢｓＡｂ ＥｐＣＡＭ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ，ＭＲ１．１」、三価二重特異性抗体分子である「ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＭＲ１．１ ＶＨ Ｃｋ ＭＳＬＮ ＣＨ ＣＨ１ ＥＥ Ｆｃ ｋｎｏｂ ＰＧ ＬＡＬＡ，ｐＥＴＲ１５６５５」（配列番号２（タンパク質）及び１（ＤＮＡ）））、又はセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ）により、１２時間にわたりコーティングした。ウェルを、３７℃で、２０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）により、３０分間にわたりブロッキングし、ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ））（本明細書の以下では、Ｅ３細胞と称する）を伴うＴ細胞０．２５×１０^６個、又は野生型（ＷＴ）Ｔ細胞を、それぞれ、添加した。４８時間後、上清を回収し、ＩＦＮ－γの放出を、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ；ＢＤ）により定量化した。吸光度を、Ｍｉｔｈｒａｓ ＬＢ ９４０ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅリーダー（Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＭｉｃｒｏＷｉｎ ２０００）により測定した。

【0180】

４．５ ｉＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅによる殺滅アッセイ
ＰａｎｃＯＶＡＥｐＣＡＭ腫瘍細胞５０，０００個を、Ｅ－Ｐｌａｔｅ Ｌ８（ＯＬＳ）上に播種し、腫瘍細胞の増殖を、２０時間の時間枠にわたり、２０分間ごとに測定した。ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ））又はＥｐＣａｍ ｓｃＶｆ－ＣＤ３ｚキメラ抗原受容体（ＣＡＲＥｐＣＡＭ；配列番号２４９（タンパク質）及び２４８（ＤＮＡ））を形質導入した、Ｃ５７Ｂｌ６野生型Ｔ細胞５００，０００個を、それぞれ、腫瘍細胞に添加した。ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ））を形質導入したＴ細胞に、既に記載した通り、１μｇ／ｍＬのｂｓＡｂをプレロードした。ＦａｓＬブロッキング条件のために、１０μｇ／ｍＬのＣＤ１７８（Ｆａｓリガンド）モノクローナル抗体（クローン：ＭＦＬ３；型番１６－５９１１－８５（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）））、Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒａｄｅ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、ウェルに、速やかに添加した。Ｔ細胞の殺滅を、２４時間にわたり、６分ごとに測定した。

【0181】

４．６ 抗体結合アッセイ
ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ融合タンパク質（配列番号４２（タンパク質）及び４１（ＤＮＡ））を形質導入したＴ細胞、１５０μＬ当たりに０．２５×１０^６個を、漸増濃度（１０ｎｇ／ｍＬ；１００ｎｇ／ｍＬ；５００ｎｇ／ｍＬ；１μｇ／ｍＬ；５μｇ／ｍＬ；１０μｇ／ｍＬ；２０μｇ／ｍＬ；２５μｇ／ｍＬ）の、ｂｓＡｂ（ＰＢＳ ５０μＬ中の三重特異性ｂｓＡｂ又は四重特異性ｂｓＡｂ）と共に、３７℃で、３０分間にわたりインキュベートした。１μＬの二次抗体ＦＩＴＣコンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）_２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；ＦＩＴＣ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）_２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ：１０９－０９６－０９７）、又はＣｙ２コンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｃｙ２ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ：１１５－２２５－００６）を、添加し、４℃で、３０分間にわたりインキュベートした。ＦＩＴＣ平均蛍光発光強度（ＦＩＴＣ ＭＦＩ）を、フローサイトメトリーにより定量化した。染色は、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して解析した。表面飽和は、最大値に対する百分率（ＦＩＴＣ ＭＦＩ^{ｏｆ ｉｎｔｅｒｅｓｔ}／ ＦＩＴＣ ＭＦＩ^{ｈｉｇｈｓｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ}）×１００％として計算した。データ解析は、ＦｌｏｗＪｏ ７．６．１により実施した。

【0182】

４．７ 統計学的解析
統計解析には、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアｖｅｒｓｉｏｎ ５．０ｂを使用した。報告される全ての変数は、連続である。実験条件間の差違は、対応のないＳｔｕｄｅｎｔの両側ｔ検定を使用して解析した。個別のマウスについての実験条件を比較するために、マン－ホイットニー検定を使用した。ｐ値＜０．０５を、有意であると考えた。

【0183】

４．８ Ｔ細胞刺激アッセイ
Ｓｕｉｔ－ＯＥ－ＭＳＬＮ腫瘍細胞を、９６ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内のＴ細胞培地中に、６時間にわたり播種した。５．５時間後、Ｔ細胞を、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）と共に、３０分間にわたり共インキュベートした。この後、Ｔ細胞／二重特異性抗体コンジュゲートを、腫瘍細胞に添加し、３７℃、５％のＣＯ_２で、４８時間にわたりインキュベートした。この時間の後、上清を回収し、ＩＦＮ－γの放出を、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ；ＢＤ）により定量化した。吸光度を、Ｍｉｔｈｒａｓ ＬＢ ９４０ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅリーダー（Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＭｉｃｒｏＷｉｎ ２０００）により測定した。

【0184】

４．９ 組換えメソテリンによるＴ細胞刺激アッセイ
９６ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を、ヒト組換えメソテリンタンパク質（５μｇ／ｍｌ）（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、Ｇｅｒｍａｎｙ）でコーティングし、４℃で一晩にわたりインキュベートした。プレートを、ＰＢＳ中に１０％のＦＢＳでブロッキングした。Ｔ細胞を、三価の二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）分子である「ＢｓＡｂＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＭＳＬＮ」（配列番号２３５；また、表３及び４も参照されたい）と共に、３０分間にわたり共インキュベートした。この後、Ｔ細胞／二重特異性抗体コンジュゲートを、組換えメソテリンでコーティングされたウェルに添加し、３７℃、５％のＣＯ_２で、４８時間にわたりインキュベートした。この時間の後、上清を回収し、ＩＦＮ－γの放出を、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ；ＢＤ）により定量化した。吸光度を、Ｍｉｔｈｒａｓ ＬＢ ９４０ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅリーダー（Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＭｉｃｒｏＷｉｎ ２０００）により測定した。

【0185】

実施例５： 特定の実施態様の例
本開示の、ある特定の、非限定的な実施態様の例を、以下に列挙する。特に、本発明は、以下の項目に関する。
１．
（Ａ）処置される対象から得られたＴ細胞に形質導入するための、融合タンパク質をコードする核酸分子であって、以下のドメイン：
（１）前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、
（２）膜貫通アンカリングドメイン、及び
（３）シグナル伝達刺激ドメイン
を有する核酸分子と、
（Ｂ）三価の二重特異性抗体分子であって、
（ｉ）（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む三価の二重特異性抗体分子と
を含むキット。
２．前記融合タンパク質が、少なくとも１つのシグナル伝達共刺激ドメインをさらに含む、項目１のキット。
３．前記膜貫通アンカリングドメインが、哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さない、項目１又は項目２のキット。
４．前記融合タンパク質が、ヒンジドメインをさらに含む、項目１から３のいずれか一項のキット。
５．医薬としての使用のための、
（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む、三価の二重特異性抗体分子であって、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子。
６．（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含み、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞と組み合わせて投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子を含む薬学的組成物。
７．悪性疾患を処置するための方法における使用のための、
（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む、三価の二重特異性抗体分子であって、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子。
８．悪性疾患を処置するための方法であって、
（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む、三価の二重特異性抗体分子の、それを必要とする対象への投与を含み、
前記三価の二重特異性抗体分子が、前記対象に由来する、形質導入されたＴ細胞であり、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含むＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与される方法。
９．前記悪性疾患が、上皮由来、内皮由来、又は中皮由来のがん、及び血液がんから選択される、項目７の、三価の二重特異性抗体分子、又は項目８による、悪性疾患を処置するための方法。
１０．腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記抗原が、ＥｐＣＡＭ、ＭＳＬＮ、ＭＣＳＰ、ＨＥＲ－１、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ－３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＦＬＴ－３、ＦＯＬＲ１、Ｔｒｏｐ－２、ＣＡ－１２－５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＭＵＣ－１（ムチン１）、Ａ３３抗原、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ、トランスフェリン受容体、テネイシン、及びＣＡ－ＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）からなる群から選択される、項目１から４のいずれか一項のキット、項目６の薬学的組成物、項目５若しくは７の、三価の二重特異性抗体分子、又は項目８若しくは９の方法。
１１． 前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の前記細胞外ドメインが、Ｃｒｉｐｔｏ（ｃｒｙｐｔｉｃファミリーのタンパク質）、ＣＤ（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）ファミリー（非Ｔ細胞）のメンバー、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、及びＴＳＨ－Ｒからなる群から選択される、項目１から４、又は１０のいずれか一項のキット、項目６又は項目１０の薬学的組成物、項目５、７、又は１０のいずれか一項の、三価の二重特異性抗体分子、項目８、９、又は１０のいずれか一項の方法。
１２． 前記形質導入されたＴ細胞が、前記Ｔ細胞上に天然に存在するＴ細胞受容体、及び／又は前記Ｔ細胞に遺伝子導入されたＴ細胞受容体をさらに含む、項目１から４、１０、又は１１のいずれか一項のキット、項目６、１０、又は１１のいずれか一項の薬学的組成物、項目５、７、１０、又は１１のいずれか一項の、三価の二重特異性抗体分子、又は項目８から１１のいずれか一項の方法。
１３． 項目１（Ｂ）及び５から８のいずれか一項において規定された、三価の二重特異性抗体をコードする核酸配列を含む発現ベクター。
１４． ポリシストロニックである、項目１３のベクター。
１５． 項目１３の前記核酸配列に動作可能に連結された調節配列をさらに含む、項目１３又は項目１４のベクター。
１６． 項目１３から１５のいずれか一項において規定されたベクターで形質転換された宿主細胞。
１７． 項目１（Ｂ）及び５から８のいずれか一項において規定された、三価の二重特異性抗体分子を作製するための方法であって、
（ａ）項目１６において規定された宿主細胞を、項目１（Ｂ）及び５から８のいずれか一項において規定された、三価の二重特異性抗体分子の発現を可能とする条件下で培養することと、
（ｂ）作製された三価の二重特異性抗体分子を培養物から回収することと
を含む方法。
１８．（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含み、
項目１７の方法により得ることができる、
項目１（Ｂ）及び５から８のいずれか一項の三価の二重特異性抗体分子。
１９． 対象における疾患を処置するための方法であって、
（ａ）Ｔ細胞を、対象から単離する工程と、
（ｂ）前記単離されたＴ細胞に、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を形質導入する工程と、
（ｃ）前記形質導入されたＴ細胞を、前記対象に投与する工程と
を含む方法。
２０． 前記形質導入されたＴ細胞を、前記対象に、静脈内注入により投与する、項目１９の方法。
２１． 形質導入されたＴ細胞に、Ｔ細胞受容体を共形質導入する、項目１９又は項目２０の方法。
２２． 前記形質導入されたＴ細胞を、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体により拡大する、項目１９から２１のいずれか一項の方法。
２３． 形質導入されたＴ細胞の拡大を、サイトカイン、好ましくは、インターロイキン２（ＩＬ－２）及び／又はインターロイキン１５（ＩＬ－１５）の存在下で実施する、項目１９から２２のいずれか一項の方法。
２４． （ｄ）項目１（Ｂ）及び５から８又は１８のいずれか一項において規定された、三価の二重特異性抗体を投与すること
をさらに含む、項目１９から２３のいずれか一項の方法。
２５． 前記三価の二重特異性抗体分子が、形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与される、項目１９から２４のいずれか一項の、疾患を処置するための方法。
２６． 前記疾患が、悪性疾患である、項目１９から２５のいずれか一項の方法。
２７． 前記悪性疾患が、上皮由来、内皮由来、又は中皮由来のがん、及び血液がんから選択される、項目１９から２６のいずれか一項の方法。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図9A】

【図9B】

【図10】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【図11A】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【配列表】

2022169543000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2022-08-29

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

明細書に記載された一発明。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１８５

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0185】

実施例５： 特定の実施態様の例
本開示の、ある特定の、非限定的な実施態様の例を、以下に列挙する。特に、本発明は、以下の項目に関する。
１．
（Ａ）処置される対象から得られたＴ細胞に形質導入するための、融合タンパク質をコードする核酸分子であって、以下のドメイン：
（１）前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の細胞外ドメイン、
（２）膜貫通アンカリングドメイン、及び
（３）シグナル伝達刺激ドメイン
を有する核酸分子と、
（Ｂ）三価の二重特異性抗体分子であって、
（ｉ）（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む三価の二重特異性抗体分子と
を含むキット。
２．前記融合タンパク質が、少なくとも１つのシグナル伝達共刺激ドメインをさらに含む、項目１のキット。
３．前記膜貫通アンカリングドメインが、哺乳動物プロテアーゼの切断部位を有さない、項目１又は項目２のキット。
４．前記融合タンパク質が、ヒンジドメインをさらに含む、項目１から３のいずれか一項のキット。
５．医薬としての使用のための、
（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む、三価の二重特異性抗体分子であって、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子。
６．（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含み、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞と組み合わせて投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子を含む薬学的組成物。
７．悪性疾患を処置するための方法における使用のための、
（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む、三価の二重特異性抗体分子であって、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含む形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与され、前記Ｔ細胞が、処置される対象から得られたものである、三価の二重特異性抗体分子。
８．悪性疾患を処置するための方法であって、
（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含む、三価の二重特異性抗体分子の、それを必要とする対象への投与を含み、
前記三価の二重特異性抗体分子が、前記対象に由来する、形質導入されたＴ細胞であり、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を含むＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与される方法。
９．前記悪性疾患が、上皮由来、内皮由来、又は中皮由来のがん、及び血液がんから選択される、項目７の、三価の二重特異性抗体分子、又は項目８による、悪性疾患を処置するための方法。
１０．腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記抗原が、ＥｐＣＡＭ、ＭＳＬＮ、ＭＣＳＰ、ＨＥＲ－１、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ－３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＦＬＴ－３、ＦＯＬＲ１、Ｔｒｏｐ－２、ＣＡ－１２－５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＭＵＣ－１（ムチン１）、Ａ３３抗原、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ、トランスフェリン受容体、テネイシン、及びＣＡ－ＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）からなる群から選択される、項目１から４のいずれか一項のキット、項目６の薬学的組成物、項目５若しくは７の、三価の二重特異性抗体分子、又は項目８若しくは９の方法。
１１． 前記Ｔ細胞内又は前記Ｔ細胞上で天然に存在しない、シグナル伝達受容体の前記細胞外ドメインが、Ｃｒｉｐｔｏ（ｃｒｙｐｔｉｃファミリーのタンパク質）、ＣＤ（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）ファミリー（非Ｔ細胞）のメンバー、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、及びＴＳＨ－Ｒからなる群から選択される、項目１から４、又は１０のいずれか一項のキット、項目６又は項目１０の薬学的組成物、項目５、７、又は１０のいずれか一項の、三価の二重特異性抗体分子、項目８、９、又は１０のいずれか一項の方法。
１２． 前記形質導入されたＴ細胞が、前記Ｔ細胞上に天然に存在するＴ細胞受容体、及び／又は前記Ｔ細胞に遺伝子導入されたＴ細胞受容体をさらに含む、項目１から４、１０、又は１１のいずれか一項のキット、項目６、１０、又は１１のいずれか一項の薬学的組成物、項目５、７、１０、又は１１のいずれか一項の、三価の二重特異性抗体分子、又は項目８から１１のいずれか一項の方法。
１３． 項目１（Ｂ）及び５から８のいずれか一項において規定された、三価の二重特異性抗体をコードする核酸配列を含む発現ベクター。
１４． ポリシストロニックである、項目１３のベクター。
１５． 項目１３の前記核酸配列に動作可能に連結された調節配列をさらに含む、項目１３又は項目１４のベクター。
１６． 項目１３から１５のいずれか一項において規定されたベクターで形質転換された宿主細胞。
１７． 項目１（Ｂ）及び５から８のいずれか一項において規定された、三価の二重特異性抗体分子を作製するための方法であって、
（ａ）項目１６において規定された宿主細胞を、項目１（Ｂ）及び５から８のいずれか一項において規定された、三価の二重特異性抗体分子の発現を可能とする条件下で培養することと、
（ｂ）作製された三価の二重特異性抗体分子を培養物から回収することと
を含む方法。
１８．（ｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合する、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）腫瘍細胞の表面上に天然に存在する腫瘍特異的抗原に結合する、第２の結合ドメイン、及び
（ｉｉｉ）項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質の細胞外ドメイン（１）に結合するか、又は腫瘍細胞の表面上に天然に存在する前記腫瘍特異的抗原に結合する、第３の結合ドメイン
を含み、
項目１７の方法により得ることができる、
項目１（Ｂ）及び５から８のいずれか一項の三価の二重特異性抗体分子。
１９． 対象における疾患を処置するための方法であって、
（ａ）Ｔ細胞を、対象から単離する工程と、
（ｂ）前記単離されたＴ細胞に、項目１（Ａ）を特徴とする融合タンパク質を形質導入する工程と、
（ｃ）前記形質導入されたＴ細胞を、前記対象に投与する工程と
を含む方法。
２０． 前記形質導入されたＴ細胞を、前記対象に、静脈内注入により投与する、項目１９の方法。
２１． 形質導入されたＴ細胞に、Ｔ細胞受容体を共形質導入する、項目１９又は項目２０の方法。
２２． 前記形質導入されたＴ細胞を、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体により拡大する、項目１９から２１のいずれか一項の方法。
２３． 形質導入されたＴ細胞の拡大を、サイトカイン、好ましくは、インターロイキン２（ＩＬ－２）及び／又はインターロイキン１５（ＩＬ－１５）の存在下で実施する、項目１９から２２のいずれか一項の方法。
２４． （ｄ）項目１（Ｂ）及び５から８又は１８のいずれか一項において規定された、三価の二重特異性抗体を投与すること
をさらに含む、項目１９から２３のいずれか一項の方法。
２５． 前記三価の二重特異性抗体分子が、形質導入されたＴ細胞の投与の前に、これと同時に、又はこの後で投与される、項目１９から２４のいずれか一項の、疾患を処置するための方法。
２６． 前記疾患が、悪性疾患である、項目１９から２５のいずれか一項の方法。
２７． 前記悪性疾患が、上皮由来、内皮由来、又は中皮由来のがん、及び血液がんから選択される、項目１９から２６のいずれか一項の方法。

＜配列表＞
SEQUENCE LISTING
<110> F. Hoffmann-La Roche AG
Hoffmann-La Roche Inc.
LMU Munchen

<120> Improved adoptive T-cell therapy

<130> X3673 PCT S3

<150> EP 16 17 7203.3
<151> 2016-06-30

<160> 249

<170> BiSSAP 1.3

<210> 1
<211> 2061
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFR vIII MR1.1 VH Ck MSLN VH CH1 EE Fc knob PG LALA, pETR15655

<220>
<221> CDS
<222> 1..2061
<223> /transl_table=1

<400> 1
caa gtg aag ctg cag cag agt ggg ggc gga ctc gtg aaa cct ggc gcc 48
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15

tct ctg aag ctg agc tgc gtg acc agc ggc ttc acc ttc aga aag ttc 96
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe
20 25 30

ggc atg agc tgg gtg cgc cag acc agc gac aag cgg ctg gaa tgg gtg 144
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45

gcc agc atc agc acc ggc ggc tac aac acc tac tac agc gac aac gtg 192
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60

aag ggc cgg ttc acc atc agc aga gag aac gcc aag aac acc ctg tac 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80

ctg cag atg agc agc ctg aag tcc gag gac acc gcc ctg tac tac tgc 288
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95

acc aga ggc tac agc ccc tac agc tac gcc atg gac tat tgg ggc cag 336
Thr Arg Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110

ggc acc acc gtg acc gtg tca tct gct agc gtg gcc gct ccc tcc gtg 384
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125

ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc acc gct tct 432
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140

gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac ccc cgc gag gcc aag gtg cag 480
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160

tgg aag gtg gac aac gcc ctg cag tcc ggc aac agc cag gaa tcc gtg 528
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175

acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac tcc ctg tcc tcc acc ctg 576
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190

acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gaa 624
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205

gtg acc cac cag ggc ctg tct agc ccc gtg acc aag tct ttc aac cgg 672
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220

ggc gag tgc ggt ggc gga ggt tcc gga ggc gga gga tcc cag gtg cag 720
Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln
225 230 235 240

ctg gtg cag tct ggc gcc gaa gtg aag aaa cca ggc gcc agc gtg aag 768
Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys
245 250 255

gtg tcc tgc aag gcc agc ggc tac agc ttc acc ggc tac acc atg aac 816
Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn
260 265 270

tgg gtg cgc cag gct cct gga cag ggc ctg gaa tgg atg ggc ctg atc 864
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Leu Ile
275 280 285

acc ccc tac aac ggc gcc agc agc tac aac cag aag ttc cgg ggc aag 912
Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Arg Gly Lys
290 295 300

gcc acc atg acc gtg gac acc agc acc tcc acc gtg tat atg gaa ctg 960
Ala Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu
305 310 315 320

agc agc ctg cgg agc gag gac acc gcc gtg tac tat tgt gcc aga ggc 1008
Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly
325 330 335

ggc tac gac ggc aga ggc ttc gat tat tgg ggc cag ggc acc ctc gtg 1056
Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
340 345 350

acc gtg tcc agc gct agc acc aag ggc ccc tcc gtg ttc ccc ctg gcc 1104
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
355 360 365

ccc agc agc aag agc acc agc ggc ggc aca gcc gct ctg ggc tgc ctg 1152
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
370 375 380

gtc gag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg tcc tgg aac agc gga 1200
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
385 390 395 400

gcc ctg acc tcc ggc gtg cac acc ttc ccc gcc gtg ctg cag agt tct 1248
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
405 410 415

ggc ctg tat agc ctg agc agc gtg gtc acc gtg cct tct agc agc ctg 1296
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
420 425 430

ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aac cac aag ccc agc aac acc 1344
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
435 440 445

aag gtg gac gag aag gtg gag ccc aag agc tgc gac aaa act cac aca 1392
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
450 455 460

tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa gct gca ggg gga ccg tca gtc ttc 1440
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
465 470 475 480

ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct 1488
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
485 490 495

gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc 1536
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
500 505 510

aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca 1584
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
515 520 525

aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc 1632
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
530 535 540

ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc 1680
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
545 550 555 560

aag gtc tcc aac aaa gcc ctc ggc gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc 1728
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
565 570 575

aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca 1776
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
580 585 590

tgc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg tgg tgc ctg gtc 1824
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
595 600 605

aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg 1872
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
610 615 620

cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac 1920
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
625 630 635 640

ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg 1968
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
645 650 655

cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac 2016
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
660 665 670

aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 2061
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680 685

<210> 2
<211> 686
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..2061 from SEQ ID NO 1

<400> 2
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220
Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln
225 230 235 240
Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys
245 250 255
Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn
260 265 270
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Leu Ile
275 280 285
Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Arg Gly Lys
290 295 300
Ala Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu
305 310 315 320
Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly
325 330 335
Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
340 345 350
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
355 360 365
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
370 375 380
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
385 390 395 400
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
405 410 415
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
420 425 430
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
435 440 445
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
450 455 460
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
465 470 475 480
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
485 490 495
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
500 505 510
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
515 520 525
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
530 535 540
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
545 550 555 560
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
565 570 575
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
580 585 590
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
595 600 605
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
610 615 620
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
625 630 635 640
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
645 650 655
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
660 665 670
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680 685

<210> 3
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFR vIII MR1.1 VL CH1, pETR15656

<220>
<221> CDS
<222> 1..639
<223> /transl_table=1

<400> 3
gat atc gag ctg aca cag agc ccc gcc agc ctg tct gtg gcc acc ggc 48
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ala Thr Gly
1 5 10 15

gag aaa gtg acc atc cgg tgc atg acc agc acc gac atc gac gac gac 96
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30

atg aac tgg tat cag cag aag ccc ggc gag ccc ccc aag ttc ctg atc 144
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45

agc gag ggc aac aca ctg cgg cct ggc gtg cca agc aga ttc agc agc 192
Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
50 55 60

tct ggc acc ggc acc gac ttc gtg ttt acc atc gag aat acc ctg agc 240
Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80

gag gac gtg ggc gac tac tac tgc ctg cag agc tgg aac gtg ccc ctg 288
Glu Asp Val Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu
85 90 95

acc ttt ggc gac ggc acc aag ctg gaa atc aag agc agc gct agc acc 336
Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110

aaa ggc cct tcc gtg ttt cct ctg gct cct agc tcc aag tcc acc tct 384
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125

gga ggc acc gct gct ctc gga tgc ctc gtg aag gat tat ttt cct gag 432
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140

cct gtg aca gtg tcc tgg aat agc gga gca ctg acc tct gga gtg cat 480
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160

act ttc ccc gct gtg ctg cag tcc tct gga ctg tac agc ctg agc agc 528
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175

gtg gtg aca gtg ccc agc agc agc ctg ggc acc cag acc tac atc tgc 576
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190

aac gtg aac cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa 624
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205

ccc aag tct tgt tga 639
Pro Lys Ser Cys
210

<210> 4
<211> 212
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..639 from SEQ ID NO 3

<400> 4
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ala Thr Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
50 55 60
Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15

gac aga gtg acc atc acc tgt agc gcc agc agc agc gtg tcc tac atg 96
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30

cac tgg tat cag cag aag tcc ggc aag gcc ccc aag ctg ctg atc tac 144
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45

gac acc agc aag ctg gcc tcc ggc gtg ccc agc aga ttt tct ggc agc 192
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60

ggc tcc ggc acc gac ttc acc ctg aca atc agc tcc ctc cag ccc gag 240
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80

gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag tgg tcc aag cac ccc ctg acc 288
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
85 90 95

ttt ggc cag ggc acc aag ctg gaa atc aag cgt acg gtg gct gca cca 336
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110

tct gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat cgg aag ttg aaa tct gga act 384
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125

gcc tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gcc aaa 432
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140

gta cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac tcc cag gag 480
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160

agt gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc agc agc 528
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175

acc ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc tac gcc 576
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190

tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca aag agc ttc 624
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205

aac agg gga gag tgt tag 642
Asn Arg Gly Glu Cys
210

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<212> PRT
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15

agc gtg aag gtg tcc tgc aag gcc agc ggc tac agc ttc acc ggc tac 96
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30

acc atg aac tgg gtg cgc cag gct cct gga cag ggc ctg gaa tgg atg 144
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45

ggc ctg atc acc ccc tac aac ggc gcc agc agc tac aac cag aag ttc 192
Gly Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60

cgg ggc aag gcc acc atg acc gtg gac acc agc acc tcc acc gtg tat 240
Arg Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80

atg gaa ctg agc agc ctg cgg agc gag gac acc gcc gtg tac tat tgt 288
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95

gcc aga ggc ggc tac gac ggc aga ggc ttc gat tat tgg ggc cag ggc 336
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110

acc ctc gtg acc gtg tcc tct gct agc acc aag ggc ccc tcc gtg ttc 384
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125

ccc ctg gcc ccc agc agc aag agc acc agc ggc ggc aca gcc gct ctg 432
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140

ggc tgc ctg gtc gag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg tcc tgg 480
Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160

aac agc gga gcc ctg acc tcc ggc gtg cac acc ttc ccc gcc gtg ctg 528
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175

cag agt tct ggc ctg tat agc ctg agc agc gtg gtc acc gtg cct tct 576
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190

agc agc ctg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aac cac aag ccc 624
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205

agc aac acc aag gtg gac gag aag gtg gag ccc aag agc tgc gac aaa 672
Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220

act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa gct gca ggg gga ccg 720
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240

tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc 768
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255

cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac 816
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270

cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat 864
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285

gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg 912
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300

gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag 960
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320

tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc ggc gcc ccc atc gag aaa 1008
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335

acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tgc acc 1056
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350

ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctc tcg 1104
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365

tgc gca gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag 1152
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380

agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg 1200
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400

gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc gtg agc aag ctc acc gtg gac aag 1248
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415

agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag 1296
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430

gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt 1344
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445

aaa tga 1350
Lys


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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
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Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
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340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
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Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys


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Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys
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Gly


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<212> PRT
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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<223> EGFRvIII MR1.1 CDR1 L1 Kabat

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Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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<223> EGFRvIII MR1.1 CDR L2 Kabat

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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu Thr
1 5

<210> 15
<211> 5
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<223> aMSLN CDR H1 Kabat

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Gly


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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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<223> aMSLN CDR H3 Kabat

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Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr
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<211> 10
<212> PRT
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<223> aMSLN CDR1 L1 Kabat

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Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
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<211> 7
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<213> Artificial Sequence

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<223> aMSLN CDR L2 Kabat

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Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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<223> aMSLN CDR L3 Kabat

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Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
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<211> 2067
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFR vIII MR1.1 VH Ck muEpCAM VH CH1 EE Fc knob PG LALA,
pETR14953

<220>
<221> CDS
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<223> /transl_table=1

<400> 21
caa gtg aag ctg cag cag agt ggg ggc gga ctc gtg aaa cct ggc gcc 48
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15

tct ctg aag ctg agc tgc gtg acc agc ggc ttc acc ttc aga aag ttc 96
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe
20 25 30

ggc atg agc tgg gtg cgc cag acc agc gac aag cgg ctg gaa tgg gtg 144
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45

gcc agc atc agc acc ggc ggc tac aac acc tac tac agc gac aac gtg 192
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60

aag ggc cgg ttc acc atc agc aga gag aac gcc aag aac acc ctg tac 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80

ctg cag atg agc agc ctg aag tcc gag gac acc gcc ctg tac tac tgc 288
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95

acc aga ggc tac agc ccc tac agc tac gcc atg gac tat tgg ggc cag 336
Thr Arg Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110

ggc acc acc gtg acc gtg tca tct gct agc gtg gcc gct ccc tcc gtg 384
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125

ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc acc gct tct 432
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140

gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac ccc cgc gag gcc aag gtg cag 480
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160

tgg aag gtg gac aac gcc ctg cag tcc ggc aac agc cag gaa tcc gtg 528
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175

acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac tcc ctg tcc tcc acc ctg 576
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190

acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gaa 624
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
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gtg acc cac cag ggc ctg tct agc ccc gtg acc aag tct ttc aac cgg 672
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220

ggc gag tgc ggt ggc gga ggt tcc gga ggc gga gga tcc gaa gtg cag 720
Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
225 230 235 240

ctg gcc gag agc ggc gga ggc ctg gtg cag cct ggc aga tcc atg aag 768
Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Met Lys
245 250 255

ctg agc tgc gcc gcc agc ggc ttc acc ttc agc aac ttc ccc atg gcc 816
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Pro Met Ala
260 265 270

tgg gtc cga cag gcc ccc acc aag tgc ctg gaa tgg gtg gcc acc atc 864
Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Cys Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile
275 280 285

agc acc agc ggc ggc agc acc tac tac cgg gac agc gtg aag ggc cgg 912
Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg
290 295 300

ttc acc atc agc cgg gac aac gcc aag agc acc ctg tac ctg cag atg 960
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met
305 310 315 320

aac agc ctg cgg agc gag gac acc gcc acc tac tac tgc acc cgg acc 1008
Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Arg Thr
325 330 335

ctg tat atc ctg cgg gtg ttc tac ttc gac tac tgg ggc cag ggc gtg 1056
Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val
340 345 350

atg gtc acc gtg tct agc gct agc acc aag ggc ccc tcc gtg ttt cct 1104
Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
355 360 365

ctg gcc cct tcc agc aag tcc acc tct ggc gga act gcc gct ctg ggc 1152
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
370 375 380

tgc ctg gtg gaa gat tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg tcc tgg aat 1200
Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
385 390 395 400

tct ggc gct ctg acc tcc ggc gtg cac acc ttt cca gct gtg ctg cag 1248
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
405 410 415

tcc tcc ggc ctg tac tcc ctg tcc tcc gtc gtg aca gtg ccc tcc agc 1296
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
420 425 430

tct ctg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aac cac aag ccc tcc 1344
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
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aac acc aag gtg gac gag aag gtg gaa ccc aag tcc tgc gac aag acc 1392
Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
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cac acc tgt ccc ccc tgc cct gct cct gaa gct gct ggt ggc cct agc 1440
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
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gtg ttc ctg ttc ccc cca aag ccc aag gac acc ctg atg atc tcc cgg 1488
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
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acc ccc gaa gtg acc tgc gtg gtg gtg gat gtg tcc cac gag gac cct 1536
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
500 505 510

gaa gtg aag ttc aat tgg tac gtg gac ggc gtg gaa gtg cac aac gcc 1584
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
515 520 525

aag acc aag cct aga gag gaa cag tac aac tcc acc tac cgg gtg gtg 1632
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
530 535 540

tcc gtg ctg aca gtg ctg cac cag gac tgg ctg aac ggc aaa gag tac 1680
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
545 550 555 560

aag tgc aag gtg tcc aac aag gcc ctg ggc gct ccc atc gaa aag acc 1728
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr
565 570 575

atc tcc aag gcc aag ggc cag ccc cgg gaa ccc cag gtg tac acc ctg 1776
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
580 585 590

ccc cca tgc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg tgg tgc 1824
Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
595 600 605

ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc 1872
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
610 615 620

aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac 1920
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
625 630 635 640

tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc 1968
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
645 650 655

agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct 2016
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
660 665 670

ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa 2064
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680 685

tga 2067

<210> 22
<211> 688
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..2067 from SEQ ID NO 21

<400> 22
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220
Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
225 230 235 240
Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Met Lys
245 250 255
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Pro Met Ala
260 265 270
Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Cys Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile
275 280 285
Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg
290 295 300
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met
305 310 315 320
Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Arg Thr
325 330 335
Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val
340 345 350
Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
355 360 365
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
370 375 380
Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
385 390 395 400
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
405 410 415
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
420 425 430
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
435 440 445
Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
450 455 460
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
465 470 475 480
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
485 490 495
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
500 505 510
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
515 520 525
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
530 535 540
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
545 550 555 560
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr
565 570 575
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
580 585 590
Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
595 600 605
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
610 615 620
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
625 630 635 640
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
645 650 655
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
660 665 670
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680 685



<210> 23
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFR vIII MR1.1 VL CH1, pETR14951

<220>
<221> CDS
<222> 1..639
<223> /transl_table=1

<400> 23
gat atc gag ctg aca cag agc ccc gcc agc ctg tct gtg gcc acc ggc 48
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ala Thr Gly
1 5 10 15

gag aaa gtg acc atc cgg tgc atg acc agc acc gac atc gac gac gac 96
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30

atg aac tgg tat cag cag aag ccc ggc gag ccc ccc aag ttc ctg atc 144
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45

agc gag ggc aac aca ctg cgg cct ggc gtg cca agc aga ttc agc agc 192
Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
50 55 60

tct ggc acc ggc acc gac ttc gtg ttt acc atc gag aat acc ctg agc 240
Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80

gag gac gtg ggc gac tac tac tgc ctg cag agc tgg aac gtg ccc ctg 288
Glu Asp Val Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu
85 90 95

acc ttt ggc gac ggc acc aag ctg gaa atc aag agc agc gct agc acc 336
Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110

aaa ggc cct tcc gtg ttt cct ctg gct cct agc tcc aag tcc acc tct 384
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125

gga ggc acc gct gct ctc gga tgc ctc gtg aag gat tat ttt cct gag 432
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140

cct gtg aca gtg tcc tgg aat agc gga gca ctg acc tct gga gtg cat 480
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160

act ttc ccc gct gtg ctg cag tcc tct gga ctg tac agc ctg agc agc 528
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175

gtg gtg aca gtg ccc agc agc agc ctg ggc acc cag acc tac atc tgc 576
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190

aac gtg aac cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa 624
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205

ccc aag tct tgt tga 639
Pro Lys Ser Cys
210

<210> 24
<211> 212
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..639 from SEQ ID NO 23

<400> 24
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ala Thr Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
50 55 60
Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys
210

<210> 25
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VL EpCAM G8.8 Ck RK, pETR14882

<220>
<221> CDS
<222> 1..645
<223> /transl_table=1

<400> 25
gac atc cag atg aca cag agc ccc gcc agc ctg agc gcc tct ctg ggc 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15

gag aca gtg tcc atc gag tgc ctg gcc agc gag ggc atc agc aac gac 96
Glu Thr Val Ser Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Gly Ile Ser Asn Asp
20 25 30

ctg gcc tgg tat cag cag aag tcc ggc aag agc ccc cag ctg ctg atc 144
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45

tac gcc acc agc aga ctg cag gac ggc gtg ccc agc aga ttc agc ggc 192
Tyr Ala Thr Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60

agc ggc tcc ggc acc cgg tac agc ctg aag atc agc ggc atg cag ccc 240
Ser Gly Ser Gly Thr Arg Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Gly Met Gln Pro
65 70 75 80

gag gac gag gcc gac tac ttc tgc cag cag agc tac aag tac ccc tgg 288
Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Tyr Pro Trp
85 90 95

acc ttc ggc tgc ggc acc aag ctg gaa ctg aag cgt acg gtg gct gca 336
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110

cca tct gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat cgg aag ttg aaa tct gga 384
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly
115 120 125

act gcc tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gcc 432
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140

aaa gta cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac tcc cag 480
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160

gag agt gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc agc 528
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175

agc acc ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc tac 576
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190

gcc tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca aag agc 624
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205

ttc aac agg gga gag tgt tag 645
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

<210> 26
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..645 from SEQ ID NO 25

<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Ser Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Gly Ile Ser Asn Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Arg Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Gly Met Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

<210> 27
<211> 1356
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> VH muEpCAM CH1 EE Fc hole PG LALA HRYF, pETR14940

<220>
<221> CDS
<222> 1..1356
<223> /transl_table=1

<400> 27
gaa gtg cag ctg gcc gag agc ggc gga ggc ctg gtg cag cct ggc aga 48
Glu Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15

tcc atg aag ctg agc tgc gcc gcc agc ggc ttc acc ttc agc aac ttc 96
Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30

ccc atg gcc tgg gtc cga cag gcc ccc acc aag tgc ctg gaa tgg gtg 144
Pro Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45

gcc acc atc agc acc agc ggc ggc agc acc tac tac cgg gac agc gtg 192
Ala Thr Ile Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60

aag ggc cgg ttc acc atc agc cgg gac aac gcc aag agc acc ctg tac 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80

ctg cag atg aac agc ctg cgg agc gag gac acc gcc acc tac tac tgc 288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95

acc cgg acc ctg tat atc ctg cgg gtg ttc tac ttc gac tac tgg ggc 336
Thr Arg Thr Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110

cag ggc gtg atg gtc acc gtg tct agc gct agc acc aag ggc ccc tcc 384
Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125

gtg ttc ccc ctg gcc ccc agc agc aag agc acc agc ggc ggc aca gcc 432
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140

gct ctg ggc tgc ctg gtc gag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg 480
Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160

tcc tgg aac agc gga gcc ctg acc tcc ggc gtg cac acc ttc ccc gcc 528
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175

gtg ctg cag agt tct ggc ctg tat agc ctg agc agc gtg gtc acc gtg 576
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190

cct tct agc agc ctg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aac cac 624
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205

aag ccc agc aac acc aag gtg gac gag aag gtg gag ccc aag agc tgc 672
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220

gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa gct gca ggg 720
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240

gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg 768
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255

atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac 816
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270

gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg 864
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285

cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg tac 912
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300

cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc 960
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320

aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc ggc gcc ccc atc 1008
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335

gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg 1056
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350

tgc acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc 1104
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365

ctc tcg tgc gca gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag 1152
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380

tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc 1200
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400

gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc gtg agc aag ctc acc gtg 1248
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415

gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg 1296
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430

cat gag gct ctg cac aac cgc ttc acg cag aag agc ctc tcc ctg tct 1344
His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445

ccg ggt aaa tga 1356
Pro Gly Lys
450

<210> 28
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..1356 from SEQ ID NO 27

<400> 28
Glu Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Pro Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Thr Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450

<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR H1 Kabat

<400> 29
Lys Phe Gly Met Ser
1 5

<210> 30
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR H2 Kabat

<400> 30
Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys
1 5 10 15
Gly


<210> 31
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR H3 Kabat

<400> 31
Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10

<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR1 L1 Kabat

<400> 32
Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
1 5 10

<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR L2 Kabat

<400> 33
Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro
1 5

<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR L3 Kabat

<400> 34
Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu Thr
1 5

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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> muEpCAM CDR H1 Kabat

<400> 35
Asn Phe Pro Met Ala
1 5

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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<400> 36
Thr Ile Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly


<210> 37
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> muEpCAM CDR H3 Kabat

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<213> Artificial Sequence

<220>
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Leu Ala Ser Glu Gly Ile Ser Asn Asp Leu Ala
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> muEpCAM CDR L2 Kabat

<400> 39
Ala Thr Ser Arg Leu Gln Asp Gly
1 5

<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> muEpCAM CDR L3 Kabat

<400> 40
Gln Gln Ser Tyr Lys Tyr Pro Trp Thr
1 5

<210> 41
<211> 1713
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E3 murin (EGFRex-CD28tm/iz-CD3z)

<400> 41
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cgctgctggc tgcgctctgc ccggcgagtc gggctctgga ggaaaagaaa ggtaattatg 120

tggtgacaga tcacggctcg tgcgtccgag cctgtggggc cgacagctat gagatggagg 180

aagacggcgt ccgcaagtgt aagaagtgcg aagggccttg ccgcaaagtg tgtaacggaa 240

taggtattgg tgaatttaaa gactcactct ccataaatgc tacgaatatt aaacacttca 300

aaaactgcac ctccatcagt ggcgatctcc acatcctgcc ggtggcattt aggggtgact 360

ccttcacaca tactcctcct ctggatccac aggaactgga tattctgaaa accgtaaagg 420

aaatcacagg gtttttgctg attcaggctt ggcctgaaaa caggacggac ctccatgcct 480

ttgagaacct agaaatcata cgcggcagga ccaagcaaca tggtcagttt tctcttgcag 540

tcgtcagcct gaacataaca tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag 600

atgtgataat ttcaggaaac aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac 660

tgtttgggac ctccggtcag aaaaccaaaa ttataagcaa cagaggtgaa aacagctgca 720

aggccacagg ccaggtctgc catgccttgt gctcccccga gggctgctgg ggcccggagc 780

ccagggactg cgtctcttgc cggaatgtca gccgaggcag ggaatgcgtg gacaagtgca 840

accttctgga gggtgagcca agggagtttg tggagaactc tgagtgcata cagtgccacc 900

cagagtgcct gcctcaggcc atgaacatca cctgcacagg acggggacca gacaactgta 960

tccagtgtgc ccactacatt gacggccccc actgcgtcaa gacctgcccg gcaggagtca 1020

tgggagaaaa caacaccctg gtctggaagt acgcagacgc cggccatgtg tgccacctgt 1080

gccatccaaa ctgcacctac ggatgcactg ggccaggtct tgaaggctgt ccaacgaatg 1140

ggcctaagat cccgtccttt tgggcactgg tcgtggttgc tggagtcctg ttttgttatg 1200

gcttgctagt gacagtggct ctttgtgtta tctggacaaa tagtagaagg aacagactcc 1260

ttcaaagtga ctacatgaac atgactcccc ggaggcctgg gctcactcga aagccttacc 1320

agccctacgc ccctgccaga gactttgcag cgtaccgccc cagagcaaaa ttcagcagga 1380

gtgcagagac tgctgccaac ctgcaggacc ccaaccagct ctacaatgag ctcaatctag 1440

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gcaaacagca gaggaggagg aacccccagg aaggcgtata caatgcactg cagaaagaca 1560

agatggcaga agcctacagt gagatcggca caaaaggcga gaggcggaga ggcaaggggc 1620

acgatggcct ttaccagggt ctcagcactg ccaccaagga cacctatgat gccctgcata 1680

tgcagaccct ggcccctcgc taagaattca tta 1713


<210> 42
<211> 566
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E3 murin (EGFRex-CD28tm/iz-CD3z)

<400> 42
Leu Ala Arg Gly Arg Ala Thr Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala
1 5 10 15
Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu
20 25 30
Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val
35 40 45
Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg
50 55 60
Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile
65 70 75 80
Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile
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Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu
100 105 110
Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp
115 120 125
Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe
130 135 140
Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe
145 150 155 160
Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe
165 170 175
Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser
180 185 190
Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn
195 200 205
Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser
210 215 220
Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys
225 230 235 240
Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp
245 250 255
Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly
260 265 270
Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu
275 280 285
Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro
290 295 300
Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile
305 310 315 320
Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro
325 330 335
Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp
340 345 350
Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys
355 360 365
Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro
370 375 380
Ser Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly
385 390 395 400
Leu Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr Asn Ser Arg Arg
405 410 415
Asn Arg Leu Leu Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro
420 425 430
Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe
435 440 445
Ala Ala Tyr Arg Pro Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala
450 455 460
Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
465 470 475 480
Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro
485 490 495
Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val
500 505 510
Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
515 520 525
Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
530 535 540
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
545 550 555 560
Gln Thr Leu Ala Pro Arg
565

<210> 43
<211> 1857
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E4 murin (EGFRex-CD28tm/iz-4-1BB-CD3z)

<400> 43
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cctccgggac ggccggggca gcgctcctgg 60

cgctgctggc tgcgctctgc ccggcgagtc gggctctgga ggaaaagaaa ggtaattatg 120

tggtgacaga tcacggctcg tgcgtccgag cctgtggggc cgacagctat gagatggagg 180

aagacggcgt ccgcaagtgt aagaagtgcg aagggccttg ccgcaaagtg tgtaacggaa 240

taggtattgg tgaatttaaa gactcactct ccataaatgc tacgaatatt aaacacttca 300

aaaactgcac ctccatcagt ggcgatctcc acatcctgcc ggtggcattt aggggtgact 360

ccttcacaca tactcctcct ctggatccac aggaactgga tattctgaaa accgtaaagg 420

aaatcacagg gtttttgctg attcaggctt ggcctgaaaa caggacggac ctccatgcct 480

ttgagaacct agaaatcata cgcggcagga ccaagcaaca tggtcagttt tctcttgcag 540

tcgtcagcct gaacataaca tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag 600

atgtgataat ttcaggaaac aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac 660

tgtttgggac ctccggtcag aaaaccaaaa ttataagcaa cagaggtgaa aacagctgca 720

aggccacagg ccaggtctgc catgccttgt gctcccccga gggctgctgg ggcccggagc 780

ccagggactg cgtctcttgc cggaatgtca gccgaggcag ggaatgcgtg gacaagtgca 840

accttctgga gggtgagcca agggagtttg tggagaactc tgagtgcata cagtgccacc 900

cagagtgcct gcctcaggcc atgaacatca cctgcacagg acggggacca gacaactgta 960

tccagtgtgc ccactacatt gacggccccc actgcgtcaa gacctgcccg gcaggagtca 1020

tgggagaaaa caacaccctg gtctggaagt acgcagacgc cggccatgtg tgccacctgt 1080

gccatccaaa ctgcacctac ggatgcactg ggccaggtct tgaaggctgt ccaacgaatg 1140

ggcctaagat cccgtccttt tgggcactgg tcgtggttgc tggagtcctg ttttgttatg 1200

gcttgctagt gacagtggct ctttgtgtta tctggacaaa tagtagaagg aacagactcc 1260

ttcaaagtga ctacatgaac atgactcccc ggaggcctgg gctcactcga aagccttacc 1320

agccctacgc ccctgccaga gactttgcag cgtaccgccc ctctgtgctc aaatggatca 1380

ggaaaaaatt cccccacata ttcaagcaac catttaagaa gaccactgga gcagctcaag 1440

aggaagatgc ttgtagctgc cgatgtccac aggaagaaga aggaggagga ggaggctatg 1500

agctgagagc aaaattcagc aggagtgcag agactgctgc caacctgcag gaccccaacc 1560

agctctacaa tgagctcaat ctagggcgaa gagaggaata tgacgtcttg gagaagaagc 1620

gggctcggga tccagagatg ggaggcaaac agcagaggag gaggaacccc caggaaggcg 1680

tatacaatgc actgcagaaa gacaagatgg cagaagccta cagtgagatc ggcacaaaag 1740

gcgagaggcg gagaggcaag gggcacgatg gcctttacca gggtctcagc actgccacca 1800

aggacaccta tgatgccctg catatgcaga ccctggcccc tcgctaagaa ttcatta 1857


<210> 44
<211> 614
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E4 murin (EGFRex-CD28tm/iz-4-1BB-CD3z)

<400> 44
Leu Ala Arg Gly Arg Ala Thr Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala
1 5 10 15
Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu
20 25 30
Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val
35 40 45
Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg
50 55 60
Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile
65 70 75 80
Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile
85 90 95
Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu
100 105 110
Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp
115 120 125
Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe
130 135 140
Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe
145 150 155 160
Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe
165 170 175
Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser
180 185 190
Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn
195 200 205
Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser
210 215 220
Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys
225 230 235 240
Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp
245 250 255
Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly
260 265 270
Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu
275 280 285
Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro
290 295 300
Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile
305 310 315 320
Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro
325 330 335
Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp
340 345 350
Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys
355 360 365
Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro
370 375 380
Ser Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly
385 390 395 400
Leu Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr Asn Ser Arg Arg
405 410 415
Asn Arg Leu Leu Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro
420 425 430
Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe
435 440 445
Ala Ala Tyr Arg Pro Ser Val Leu Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro
450 455 460
His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu
465 470 475 480
Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly
485 490 495
Gly Gly Tyr Glu Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala
500 505 510
Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
515 520 525
Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro
530 535 540
Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val
545 550 555 560
Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
565 570 575
Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
580 585 590
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
595 600 605
Gln Thr Leu Ala Pro Arg
610

<210> 45
<211> 1132
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CAR1 murin (Cripto-CD8aex/tm-CD28iz-CD3z)

<400> 45
attagcggcc gcgccaccat ggaaacagat acactgctgc tgtgggtgct gctgctgtgg 60

gtgccaggat ctacagggga tggcgcccag cctgctagaa gcctgggcca tcaggaattt 120

gctcgtccat ctcggggata cctggccttc agagatgaca gcatttggcc ccaggaggag 180

cctgcaattc ggcctcggtc ttcccagcgt gtgccgccca tggggataca gcacagtaag 240

gagctaaaca gaacctgctg cctgaatggg ggaacctgca tgctggggtc cttttgtgcc 300

tgccctccct ccttctacgg acggaactgt gagcacgatg tgcgcaaaga gaactgtggg 360

tctgtgcccc atgacacctg gctgcccaag aagtgttccc tgtgtaaatg ctggcacggt 420

cagctccgct gctttcctca ggcatttcta cccggctgtg atactaccaa gccagtgctg 480

cgaactccct cacctgtgca ccctaccggg acatctcagc cccagagacc agaagattgt 540

cggccccgtg gctcagtgaa ggggaccgga ttggacttcg cctgtgatat ttacatctgg 600

gcacccttgg ccggaatctg cgtggccctt ctgctgtcct tgatcatcac tctcatcaat 660

agtagaagga acagactcct tcaaagtgac tacatgaaca tgactccccg gaggcctggg 720

ctcactcgaa agccttacca gccctacgcc cctgccagag actttgcagc gtaccgcccc 780

agagcaaaat tcagcaggag tgcagagact gctgccaacc tgcaggaccc caaccagctc 840

tacaatgagc tcaatctagg gcgaagagag gaatatgacg tcttggagaa gaagcgggct 900

cgggatccag agatgggagg caaacagcag aggaggagga acccccagga aggcgtatac 960

aatgcactgc agaaagacaa gatggcagaa gcctacagtg agatcggcac aaaaggcgag 1020

aggcggagag gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagcactgc caccaaggac 1080

acctatgatg ccctgcatat gcagaccctg gcccctcgct aagaattcat ta 1132


<210> 46
<211> 373
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CAR1 murin (Cripto-CD8aex/tm-CD28iz-CD3z)

<400> 46
Ile Ser Gly Arg Ala Thr Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val
1 5 10 15
Leu Leu Leu Trp Val Pro Gly Ser Thr Gly Asp Gly Ala Gln Pro Ala
20 25 30
Arg Ser Leu Gly His Gln Glu Phe Ala Arg Pro Ser Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Ala Phe Arg Asp Asp Ser Ile Trp Pro Gln Glu Glu Pro Ala Ile Arg
50 55 60
Pro Arg Ser Ser Gln Arg Val Pro Pro Met Gly Ile Gln His Ser Lys
65 70 75 80
Glu Leu Asn Arg Thr Cys Cys Leu Asn Gly Gly Thr Cys Met Leu Gly
85 90 95
Ser Phe Cys Ala Cys Pro Pro Ser Phe Tyr Gly Arg Asn Cys Glu His
100 105 110
Asp Val Arg Lys Glu Asn Cys Gly Ser Val Pro His Asp Thr Trp Leu
115 120 125
Pro Lys Lys Cys Ser Leu Cys Lys Cys Trp His Gly Gln Leu Arg Cys
130 135 140
Phe Pro Gln Ala Phe Leu Pro Gly Cys Asp Thr Thr Lys Pro Val Leu
145 150 155 160
Arg Thr Pro Ser Pro Val His Pro Thr Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg
165 170 175
Pro Glu Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp
180 185 190
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val
195 200 205
Ala Leu Leu Leu Ser Leu Ile Ile Thr Leu Ile Asn Ser Arg Arg Asn
210 215 220
Arg Leu Leu Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly
225 230 235 240
Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Ala Arg Asp Phe Ala
245 250 255
Ala Tyr Arg Pro Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala
260 265 270
Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
275 280 285
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu
290 295 300
Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr
305 310 315 320
Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
325 330 335
Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
340 345 350
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
355 360 365
Thr Leu Ala Pro Arg
370

<210> 47
<211> 1700
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E3 human (EGFRex-CD28tm/iz-CD3z)

<400> 47
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cctccgggac ggccggggca gcgctcctgg 60

cgctgctggc tgcgctctgc ccggcgagtc gggctctgga ggaaaagaaa ggtaattatg 120

tggtgacaga tcacggctcg tgcgtccgag cctgtggggc cgacagctat gagatggagg 180

aagacggcgt ccgcaagtgt aagaagtgcg aagggccttg ccgcaaagtg tgtaacggaa 240

taggtattgg tgaatttaaa gactcactct ccataaatgc tacgaatatt aaacacttca 300

aaaactgcac ctccatcagt ggcgatctcc acatcctgcc ggtggcattt aggggtgact 360

ccttcacaca tactcctcct ctggatccac aggaactgga tattctgaaa accgtaaagg 420

aaatcacagg gtttttgctg attcaggctt ggcctgaaaa caggacggac ctccatgcct 480

ttgagaacct agaaatcata cgcggcagga ccaagcaaca tggtcagttt tctcttgcag 540

tcgtcagcct gaacataaca tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag 600

atgtgataat ttcaggaaac aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac 660

tgtttgggac ctccggtcag aaaaccaaaa ttataagcaa cagaggtgaa aacagctgca 720

aggccacagg ccaggtctgc catgccttgt gctcccccga gggctgctgg ggcccggagc 780

ccagggactg cgtctcttgc cggaatgtca gccgaggcag ggaatgcgtg gacaagtgca 840

accttctgga gggtgagcca agggagtttg tggagaactc tgagtgcata cagtgccacc 900

cagagtgcct gcctcaggcc atgaacatca cctgcacagg acggggacca gacaactgta 960

tccagtgtgc ccactacatt gacggccccc actgcgtcaa gacctgcccg gcaggagtca 1020

tgggagaaaa caacaccctg gtctggaagt acgcagacgc cggccatgtg tgccacctgt 1080

gccatccaaa ctgcacctac ggatgcactg ggccaggtct tgaaggctgt ccaacgaatg 1140

ggcctaagat cccgtccttt tgggtgctgg tggtggttgg tggagtcctg gcttgctata 1200

gcttgctagt aacagtggcc tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc 1260

tgcacagtga ctacatgaac atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc aagcattacc 1320

agccctatgc cccaccacgc gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag ttcagcagga 1380

gcgcagacgc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct ctataacgag ctcaatctag 1440

gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct gagatggggg 1500

gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag aaagataaga 1560

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atggccttta ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc cttcacatgc 1680

aggccctgcc ccctcgctaa 1700


<210> 48
<211> 565
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E3 human (EGFRex-CD28tm/iz-CD3z)

<400> 48
Leu Ala Arg Gly Arg Ala Thr Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala
1 5 10 15
Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu
20 25 30
Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val
35 40 45
Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg
50 55 60
Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile
65 70 75 80
Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile
85 90 95
Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu
100 105 110
Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp
115 120 125
Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe
130 135 140
Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe
145 150 155 160
Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe
165 170 175
Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser
180 185 190
Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn
195 200 205
Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser
210 215 220
Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys
225 230 235 240
Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp
245 250 255
Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly
260 265 270
Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu
275 280 285
Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro
290 295 300
Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile
305 310 315 320
Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro
325 330 335
Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp
340 345 350
Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys
355 360 365
Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro
370 375 380
Ser Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
385 390 395 400
Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg
405 410 415
Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro
420 425 430
Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe
435 440 445
Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro
450 455 460
Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
465 470 475 480
Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro
485 490 495
Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr
500 505 510
Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
515 520 525
Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
530 535 540
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
545 550 555 560
Ala Leu Pro Pro Arg
565

<210> 49
<211> 1826
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E4 human (EGFRex-CD28tm/iz-4-1BB-CD3z)

<400> 49
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cctccgggac ggccggggca gcgctcctgg 60

cgctgctggc tgcgctctgc ccggcgagtc gggctctgga ggaaaagaaa ggtaattatg 120

tggtgacaga tcacggctcg tgcgtccgag cctgtggggc cgacagctat gagatggagg 180

aagacggcgt ccgcaagtgt aagaagtgcg aagggccttg ccgcaaagtg tgtaacggaa 240

taggtattgg tgaatttaaa gactcactct ccataaatgc tacgaatatt aaacacttca 300

aaaactgcac ctccatcagt ggcgatctcc acatcctgcc ggtggcattt aggggtgact 360

ccttcacaca tactcctcct ctggatccac aggaactgga tattctgaaa accgtaaagg 420

aaatcacagg gtttttgctg attcaggctt ggcctgaaaa caggacggac ctccatgcct 480

ttgagaacct agaaatcata cgcggcagga ccaagcaaca tggtcagttt tctcttgcag 540

tcgtcagcct gaacataaca tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag 600

atgtgataat ttcaggaaac aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac 660

tgtttgggac ctccggtcag aaaaccaaaa ttataagcaa cagaggtgaa aacagctgca 720

aggccacagg ccaggtctgc catgccttgt gctcccccga gggctgctgg ggcccggagc 780

ccagggactg cgtctcttgc cggaatgtca gccgaggcag ggaatgcgtg gacaagtgca 840

accttctgga gggtgagcca agggagtttg tggagaactc tgagtgcata cagtgccacc 900

cagagtgcct gcctcaggcc atgaacatca cctgcacagg acggggacca gacaactgta 960

tccagtgtgc ccactacatt gacggccccc actgcgtcaa gacctgcccg gcaggagtca 1020

tgggagaaaa caacaccctg gtctggaagt acgcagacgc cggccatgtg tgccacctgt 1080

gccatccaaa ctgcacctac ggatgcactg ggccaggtct tgaaggctgt ccaacgaatg 1140

ggcctaagat cccgtccttt tgggtgctgg tggtggttgg tggagtcctg gcttgctata 1200

gcttgctagt aacagtggcc tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc 1260

tgcacagtga ctacatgaac atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc aagcattacc 1320

agccctatgc cccaccacgc gacttcgcag cctatcgctc caaacggggc agaaagaaac 1380

tcctgtatat attcaaacaa ccatttatga gaccagtaca aactactcaa gaggaagatg 1440

gctgtagctg ccgatttcca gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga gtgaagttca 1500

gcaggagcgc agacgccccc gcgtaccagc agggccagaa ccagctctat aacgagctca 1560

atctaggacg aagagaggag tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg gaccctgaga 1620

tggggggaaa gccgagaagg aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa ctgcagaaag 1680

ataagatggc ggaggcctac agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg aggggcaagg 1740

ggcacgatgg cctttaccag ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac gacgcccttc 1800

acatgcaggc cctgccccct cgctaa 1826


<210> 50
<211> 607
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E4 human (EGFRex-CD28tm/iz-4-1BB-CD3z)

<400> 50
Leu Ala Arg Gly Arg Ala Thr Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala
1 5 10 15
Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu
20 25 30
Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val
35 40 45
Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg
50 55 60
Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile
65 70 75 80
Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile
85 90 95
Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu
100 105 110
Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp
115 120 125
Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe
130 135 140
Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe
145 150 155 160
Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe
165 170 175
Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser
180 185 190
Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn
195 200 205
Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser
210 215 220
Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys
225 230 235 240
Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp
245 250 255
Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly
260 265 270
Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu
275 280 285
Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro
290 295 300
Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile
305 310 315 320
Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro
325 330 335
Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp
340 345 350
Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys
355 360 365
Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro
370 375 380
Ser Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
385 390 395 400
Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg
405 410 415
Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro
420 425 430
Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe
435 440 445
Ala Ala Tyr Arg Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
450 455 460
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
465 470 475 480
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg
485 490 495
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
500 505 510
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
515 520 525
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
530 535 540
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
545 550 555 560
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
565 570 575
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
580 585 590
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
595 600 605

<210> 51
<211> 1134
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII ex

<220>
<221> CDS
<222> 1..1134
<223> /transl_table=1

<400> 51
atg cga ccc tcc ggg acg gcc ggg gca gcg ctc ctg gcg ctg ctg gct 48
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15

gcg ctc tgc ccg gcg agt cgg gct ctg gag gaa aag aaa ggt aat tat 96
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr
20 25 30

gtg gtg aca gat cac ggc tcg tgc gtc cga gcc tgt ggg gcc gac agc 144
Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser
35 40 45

tat gag atg gag gaa gac ggc gtc cgc aag tgt aag aag tgc gaa ggg 192
Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly
50 55 60

cct tgc cgc aaa gtg tgt aac gga ata ggt att ggt gaa ttt aaa gac 240
Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp
65 70 75 80

tca ctc tcc ata aat gct acg aat att aaa cac ttc aaa aac tgc acc 288
Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr
85 90 95

tcc atc agt ggc gat ctc cac atc ctg ccg gtg gca ttt agg ggt gac 336
Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp
100 105 110

tcc ttc aca cat act cct cct ctg gat cca cag gaa ctg gat att ctg 384
Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu
115 120 125

aaa acc gta aag gaa atc aca ggg ttt ttg ctg att cag gct tgg cct 432
Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro
130 135 140

gaa aac agg acg gac ctc cat gcc ttt gag aac cta gaa atc ata cgc 480
Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg
145 150 155 160

ggc agg acc aag caa cat ggt cag ttt tct ctt gca gtc gtc agc ctg 528
Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu
165 170 175

aac ata aca tcc ttg gga tta cgc tcc ctc aag gag ata agt gat gga 576
Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly
180 185 190

gat gtg ata att tca gga aac aaa aat ttg tgc tat gca aat aca ata 624
Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile
195 200 205

aac tgg aaa aaa ctg ttt ggg acc tcc ggt cag aaa acc aaa att ata 672
Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile
210 215 220

agc aac aga ggt gaa aac agc tgc aag gcc aca ggc cag gtc tgc cat 720
Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His
225 230 235 240

gcc ttg tgc tcc ccc gag ggc tgc tgg ggc ccg gag ccc agg gac tgc 768
Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys
245 250 255

gtc tct tgc cgg aat gtc agc cga ggc agg gaa tgc gtg gac aag tgc 816
Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys
260 265 270

aac ctt ctg gag ggt gag cca agg gag ttt gtg gag aac tct gag tgc 864
Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys
275 280 285

ata cag tgc cac cca gag tgc ctg cct cag gcc atg aac atc acc tgc 912
Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys
290 295 300

aca gga cgg gga cca gac aac tgt atc cag tgt gcc cac tac att gac 960
Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp
305 310 315 320

ggc ccc cac tgc gtc aag acc tgc ccg gca gga gtc atg gga gaa aac 1008
Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn
325 330 335

aac acc ctg gtc tgg aag tac gca gac gcc ggc cat gtg tgc cac ctg 1056
Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu
340 345 350

tgc cat cca aac tgc acc tac gga tgc act ggg cca ggt ctt gaa ggc 1104
Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly
355 360 365

tgt cca acg aat ggg cct aag atc ccg tcc 1134
Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser
370 375

<210> 52
<211> 378
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..1134 from SEQ ID NO 51

<400> 52
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser
35 40 45
Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly
50 55 60
Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp
65 70 75 80
Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr
85 90 95
Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp
100 105 110
Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu
115 120 125
Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro
130 135 140
Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg
145 150 155 160
Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu
165 170 175
Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly
180 185 190
Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile
195 200 205
Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile
210 215 220
Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His
225 230 235 240
Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys
245 250 255
Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys
260 265 270
Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys
275 280 285
Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys
290 295 300
Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp
305 310 315 320
Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn
325 330 335
Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu
340 345 350
Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly
355 360 365
Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser
370 375

<210> 53
<211> 81
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD28TM (MOUSE)

<220>
<221> CDS
<222> 1..81
<223> /transl_table=1

<400> 53
ttt tgg gca ctg gtc gtg gtt gct gga gtc ctg ttt tgt tat ggc ttg 48
Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu
1 5 10 15

cta gtg aca gtg gct ctt tgt gtt atc tgg aca 81
Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr
20 25

<210> 54
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..81 from SEQ ID NO 53

<400> 54
Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val Leu Phe Cys Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp Thr
20 25

<210> 55
<211> 123
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD28IC (MOUSE)

<220>
<221> CDS
<222> 1..123
<223> /transl_table=1

<400> 55
aat agt aga agg aac aga ctc ctt caa agt gac tac atg aac atg act 48
Asn Ser Arg Arg Asn Arg Leu Leu Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15

ccc cgg agg cct ggg ctc act cga aag cct tac cag ccc tac gcc cct 96
Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30

gcc aga gac ttt gca gcg tac cgc ccc 123
Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro
35 40

<210> 56
<211> 41
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..123 from SEQ ID NO 55

<400> 56
Asn Ser Arg Arg Asn Arg Leu Leu Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro
35 40

<210> 57
<211> 342
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD3Z (MOUSE)

<220>
<221> CDS
<222> 1..342
<223> /transl_table=1

<400> 57
aga gca aaa ttc agc agg agt gca gag act gct gcc aac ctg cag gac 48
Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp
1 5 10 15

ccc aac cag ctc tac aat gag ctc aat cta ggg cga aga gag gaa tat 96
Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30

gac gtc ttg gag aag aag cgg gct cgg gat cca gag atg gga ggc aaa 144
Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45

cag cag agg agg agg aac ccc cag gaa ggc gta tac aat gca ctg cag 192
Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln
50 55 60

aaa gac aag atg gca gaa gcc tac agt gag atc ggc aca aaa ggc gag 240
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu
65 70 75 80

agg cgg aga ggc aag ggg cac gat ggc ctt tac cag ggt ctc agc act 288
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
85 90 95

gcc acc aag gac acc tat gat gcc ctg cat atg cag acc ctg gcc cct 336
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro
100 105 110

cgc taa 342
Arg


<210> 58
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..342 from SEQ ID NO 57

<400> 58
Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp
1 5 10 15
Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln
50 55 60
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu
65 70 75 80
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
85 90 95
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro
100 105 110
Arg


<210> 59
<211> 144
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> 41BB (MOUSE)

<220>
<221> CDS
<222> 1..144
<223> /transl_table=1

<400> 59
tct gtg ctc aaa tgg atc agg aaa aaa ttc ccc cac ata ttc aag caa 48
Ser Val Leu Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln
1 5 10 15

cca ttt aag aag acc act gga gca gct caa gag gaa gat gct tgt agc 96
Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser
20 25 30

tgc cga tgt cca cag gaa gaa gaa gga gga gga gga ggc tat gag ctg 144
Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu
35 40 45

<210> 60
<211> 48
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..144 from SEQ ID NO 59

<400> 60
Ser Val Leu Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln
1 5 10 15
Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser
20 25 30
Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu
35 40 45



<210> 61
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CRIPTO (HUMAN)

<220>
<221> CDS
<222> 1..360
<223> /transl_table=1

<400> 61
ctg ggc cat cag gaa ttt gct cgt cca tct cgg gga tac ctg gcc ttc 48
Leu Gly His Gln Glu Phe Ala Arg Pro Ser Arg Gly Tyr Leu Ala Phe
1 5 10 15

aga gat gac agc att tgg ccc cag gag gag cct gca att cgg cct cgg 96
Arg Asp Asp Ser Ile Trp Pro Gln Glu Glu Pro Ala Ile Arg Pro Arg
20 25 30

tct tcc cag cgt gtg ccg ccc atg ggg ata cag cac agt aag gag cta 144
Ser Ser Gln Arg Val Pro Pro Met Gly Ile Gln His Ser Lys Glu Leu
35 40 45

aac aga acc tgc tgc ctg aat ggg gga acc tgc atg ctg ggg tcc ttt 192
Asn Arg Thr Cys Cys Leu Asn Gly Gly Thr Cys Met Leu Gly Ser Phe
50 55 60

tgt gcc tgc cct ccc tcc ttc tac gga cgg aac tgt gag cac gat gtg 240
Cys Ala Cys Pro Pro Ser Phe Tyr Gly Arg Asn Cys Glu His Asp Val
65 70 75 80

cgc aaa gag aac tgt ggg tct gtg ccc cat gac acc tgg ctg ccc aag 288
Arg Lys Glu Asn Cys Gly Ser Val Pro His Asp Thr Trp Leu Pro Lys
85 90 95

aag tgt tcc ctg tgt aaa tgc tgg cac ggt cag ctc cgc tgc ttt cct 336
Lys Cys Ser Leu Cys Lys Cys Trp His Gly Gln Leu Arg Cys Phe Pro
100 105 110

cag gca ttt cta ccc ggc tgt gat 360
Gln Ala Phe Leu Pro Gly Cys Asp
115 120

<210> 62
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..360 from SEQ ID NO 61

<400> 62
Leu Gly His Gln Glu Phe Ala Arg Pro Ser Arg Gly Tyr Leu Ala Phe
1 5 10 15
Arg Asp Asp Ser Ile Trp Pro Gln Glu Glu Pro Ala Ile Arg Pro Arg
20 25 30
Ser Ser Gln Arg Val Pro Pro Met Gly Ile Gln His Ser Lys Glu Leu
35 40 45
Asn Arg Thr Cys Cys Leu Asn Gly Gly Thr Cys Met Leu Gly Ser Phe
50 55 60
Cys Ala Cys Pro Pro Ser Phe Tyr Gly Arg Asn Cys Glu His Asp Val
65 70 75 80
Arg Lys Glu Asn Cys Gly Ser Val Pro His Asp Thr Trp Leu Pro Lys
85 90 95
Lys Cys Ser Leu Cys Lys Cys Trp His Gly Gln Leu Arg Cys Phe Pro
100 105 110
Gln Ala Phe Leu Pro Gly Cys Asp
115 120

<210> 63
<211> 195
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD8 (MURINE)

<220>
<221> CDS
<222> 1..195
<223> /transl_table=1

<400> 63
act acc aag cca gtg ctg cga act ccc tca cct gtg cac cct acc ggg 48
Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val His Pro Thr Gly
1 5 10 15

aca tct cag ccc cag aga cca gaa gat tgt cgg ccc cgt ggc tca gtg 96
Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser Val
20 25 30

aag ggg acc gga ttg gac ttc gcc tgt gat att tac atc tgg gca ccc 144
Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
35 40 45

ttg gcc gga atc tgc gtg gcc ctt ctg ctg tcc ttg atc atc act ctc 192
Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu Ile Ile Thr Leu
50 55 60

atc 195
Ile
65

<210> 64
<211> 65
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..195 from SEQ ID NO 63

<400> 64
Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val His Pro Thr Gly
1 5 10 15
Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser Val
20 25 30
Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
35 40 45
Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu Ile Ile Thr Leu
50 55 60
Ile
65

<210> 65
<211> 81
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD28TM (HUMAN)

<220>
<221> CDS
<222> 1..81
<223> /transl_table=1

<400> 65
ttt tgg gtg ctg gtg gtg gtt ggt gga gtc ctg gct tgc tat agc ttg 48
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15

cta gta aca gtg gcc ttt att att ttc tgg gtg 81
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25

<210> 66
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..81 from SEQ ID NO 65

<400> 66
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25

<210> 67
<211> 123
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD28IC (HUMAN)

<220>
<221> CDS
<222> 1..123
<223> /transl_table=1

<400> 67
agg agt aag agg agc agg ctc ctg cac agt gac tac atg aac atg act 48
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15

ccc cgc cgc ccc ggg ccc acc cgc aag cat tac cag ccc tat gcc cca 96
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30

cca cgc gac ttc gca gcc tat cgc tcc 123
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40

<210> 68
<211> 41
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..123 from SEQ ID NO 67

<400> 68
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40

<210> 69
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD3Z (HUMAN)

<220>
<221> CDS
<222> 1..336
<223> /transl_table=1

<400> 69
aga gtg aag ttc agc agg agc gca gac gcc ccc gcg tac cag cag ggc 48
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15

cag aac cag ctc tat aac gag ctc aat cta gga cga aga gag gag tac 96
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30

gat gtt ttg gac aag aga cgt ggc cgg gac cct gag atg ggg gga aag 144
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45

ccg aga agg aag aac cct cag gaa ggc ctg tac aat gaa ctg cag aaa 192
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60

gat aag atg gcg gag gcc tac agt gag att ggg atg aaa ggc gag cgc 240
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80

cgg agg ggc aag ggg cac gat ggc ctt tac cag ggt ctc agt aca gcc 288
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95

acc aag gac acc tac gac gcc ctt cac atg cag gcc ctg ccc cct cgc 336
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110

<210> 70
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..336 from SEQ ID NO 69

<400> 70
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110



<210> 71
<211> 126
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> 41BB (HUMAN)

<220>
<221> CDS
<222> 1..126
<223> /transl_table=1

<400> 71
aaa cgg ggc aga aag aaa ctc ctg tat ata ttc aaa caa cca ttt atg 48
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15

aga cca gta caa act act caa gag gaa gat ggc tgt agc tgc cga ttt 96
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30

cca gaa gaa gaa gaa gga gga tgt gaa ctg 126
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40

<210> 72
<211> 42
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..126 from SEQ ID NO 71

<400> 72
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40

<210> 73
<211> 546
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD8 (HUMAN)

<220>
<221> CDS
<222> 1..546
<223> /transl_table=1

<400> 73
agc cag ttc cgg gtg tcg ccg ctg gat cgg acc tgg aac ctg ggc gag 48
Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr Trp Asn Leu Gly Glu
1 5 10 15

aca gtg gag ctg aag tgc cag gtg ctg ctg tcc aac ccg acg tcg ggc 96
Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser Asn Pro Thr Ser Gly
20 25 30

tgc tcg tgg ctc ttc cag ccg cgc ggc gcc gcc gcc agt ccc acc ttc 144
Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala Ala Ser Pro Thr Phe
35 40 45

ctc cta tac ctc tcc caa aac aag ccc aag gcg gcc gag ggg ctg gac 192
Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala Ala Glu Gly Leu Asp
50 55 60

acc cag cgg ttc tcg ggc aag agg ttg ggg gac acc ttc gtc ctc acc 240
Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp Thr Phe Val Leu Thr
65 70 75 80

ctg agc gac ttc cgc cga gag aac gag ggc tac tat ttc tgc tcg gcc 288
Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr Tyr Phe Cys Ser Ala
85 90 95

ctg agc aac tcc atc atg tac ttc agc cac ttc gtg ccg gtc ttc ctg 336
Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu
100 105 110

cca gcg aag ccc acc acg acg cca gcg ccg cga cca cca aca ccg gcg 384
Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala
115 120 125

ccc acc atc gcg tcg cag ccc ctg tcc ctg cgc cca gag gcg tgc cgg 432
Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg
130 135 140

cca gcg gcg ggg ggc gca gtg cac acg agg ggg ctg gac ttc gcc tgt 480
Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys
145 150 155 160

gat atc tac atc tgg gcg ccc ctg gcc ggg act tgt ggg gtc ctt ctc 528
Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu
165 170 175

ctg tca ctg gtt atc acc 546
Leu Ser Leu Val Ile Thr
180

<210> 74
<211> 182
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..546 from SEQ ID NO 73

<400> 74
Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr Trp Asn Leu Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser Asn Pro Thr Ser Gly
20 25 30
Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala Ala Ser Pro Thr Phe
35 40 45
Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala Ala Glu Gly Leu Asp
50 55 60
Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp Thr Phe Val Leu Thr
65 70 75 80
Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr Tyr Phe Cys Ser Ala
85 90 95
Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu
100 105 110
Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala
115 120 125
Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg
130 135 140
Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys
145 150 155 160
Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu
165 170 175
Leu Ser Leu Val Ile Thr
180

<210> 75
<211> 1260
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII (human)

<400> 75
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cctccgggac ggccggggca gcgctcctgg 60

cgctgctggc tgcgctctgc ccggcgagtc gggctctgga ggaaaagaaa ggtaattatg 120

tggtgacaga tcacggctcg tgcgtccgag cctgtggggc cgacagctat gagatggagg 180

aagacggcgt ccgcaagtgt aagaagtgcg aagggccttg ccgcaaagtg tgtaacggaa 240

taggtattgg tgaatttaaa gactcactct ccataaatgc tacgaatatt aaacacttca 300

aaaactgcac ctccatcagt ggcgatctcc acatcctgcc ggtggcattt aggggtgact 360

ccttcacaca tactcctcct ctggatccac aggaactgga tattctgaaa accgtaaagg 420

aaatcacagg gtttttgctg attcaggctt ggcctgaaaa caggacggac ctccatgcct 480

ttgagaacct agaaatcata cgcggcagga ccaagcaaca tggtcagttt tctcttgcag 540

tcgtcagcct gaacataaca tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag 600

atgtgataat ttcaggaaac aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac 660

tgtttgggac ctccggtcag aaaaccaaaa ttataagcaa cagaggtgaa aacagctgca 720

aggccacagg ccaggtctgc catgccttgt gctcccccga gggctgctgg ggcccggagc 780

ccagggactg cgtctcttgc cggaatgtca gccgaggcag ggaatgcgtg gacaagtgca 840

accttctgga gggtgagcca agggagtttg tggagaactc tgagtgcata cagtgccacc 900

cagagtgcct gcctcaggcc atgaacatca cctgcacagg acggggacca gacaactgta 960

tccagtgtgc ccactacatt gacggccccc actgcgtcaa gacctgcccg gcaggagtca 1020

tgggagaaaa caacaccctg gtctggaagt acgcagacgc cggccatgtg tgccacctgt 1080

gccatccaaa ctgcacctac ggatgcactg ggccaggtct tgaaggctgt ccaacgaatg 1140

ggcctaagat cccgtccatc gccactggga tggtgggggc cctcctcttg ctgctggtgg 1200

tggccctggg gatcggcctc ttcatgcgaa ggcgccacat cgttcggaag cgctgagaat 1260


<210> 76
<211> 417
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII (human)

<400> 76
Leu Ala Arg Gly Arg Ala Thr Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala
1 5 10 15
Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu
20 25 30
Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val
35 40 45
Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg
50 55 60
Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile
65 70 75 80
Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile
85 90 95
Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu
100 105 110
Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp
115 120 125
Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe
130 135 140
Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe
145 150 155 160
Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe
165 170 175
Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser
180 185 190
Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn
195 200 205
Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser
210 215 220
Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys
225 230 235 240
Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp
245 250 255
Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly
260 265 270
Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu
275 280 285
Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro
290 295 300
Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile
305 310 315 320
Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro
325 330 335
Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp
340 345 350
Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys
355 360 365
Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro
370 375 380
Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val
385 390 395 400
Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His Ile Val Arg Lys
405 410 415
Arg


<210> 77
<211> 1134
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII EXTRACELLULAR

<220>
<221> CDS
<222> 1..1134
<223> /transl_table=1

<400> 77
atg cga ccc tcc ggg acg gcc ggg gca gcg ctc ctg gcg ctg ctg gct 48
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15

gcg ctc tgc ccg gcg agt cgg gct ctg gag gaa aag aaa ggt aat tat 96
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr
20 25 30

gtg gtg aca gat cac ggc tcg tgc gtc cga gcc tgt ggg gcc gac agc 144
Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser
35 40 45

tat gag atg gag gaa gac ggc gtc cgc aag tgt aag aag tgc gaa ggg 192
Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly
50 55 60

cct tgc cgc aaa gtg tgt aac gga ata ggt att ggt gaa ttt aaa gac 240
Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp
65 70 75 80

tca ctc tcc ata aat gct acg aat att aaa cac ttc aaa aac tgc acc 288
Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr
85 90 95

tcc atc agt ggc gat ctc cac atc ctg ccg gtg gca ttt agg ggt gac 336
Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp
100 105 110

tcc ttc aca cat act cct cct ctg gat cca cag gaa ctg gat att ctg 384
Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu
115 120 125

aaa acc gta aag gaa atc aca ggg ttt ttg ctg att cag gct tgg cct 432
Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro
130 135 140

gaa aac agg acg gac ctc cat gcc ttt gag aac cta gaa atc ata cgc 480
Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg
145 150 155 160

ggc agg acc aag caa cat ggt cag ttt tct ctt gca gtc gtc agc ctg 528
Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu
165 170 175

aac ata aca tcc ttg gga tta cgc tcc ctc aag gag ata agt gat gga 576
Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly
180 185 190

gat gtg ata att tca gga aac aaa aat ttg tgc tat gca aat aca ata 624
Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile
195 200 205

aac tgg aaa aaa ctg ttt ggg acc tcc ggt cag aaa acc aaa att ata 672
Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile
210 215 220

agc aac aga ggt gaa aac agc tgc aag gcc aca ggc cag gtc tgc cat 720
Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His
225 230 235 240

gcc ttg tgc tcc ccc gag ggc tgc tgg ggc ccg gag ccc agg gac tgc 768
Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys
245 250 255

gtc tct tgc cgg aat gtc agc cga ggc agg gaa tgc gtg gac aag tgc 816
Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys
260 265 270

aac ctt ctg gag ggt gag cca agg gag ttt gtg gag aac tct gag tgc 864
Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys
275 280 285

ata cag tgc cac cca gag tgc ctg cct cag gcc atg aac atc acc tgc 912
Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys
290 295 300

aca gga cgg gga cca gac aac tgt atc cag tgt gcc cac tac att gac 960
Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp
305 310 315 320

ggc ccc cac tgc gtc aag acc tgc ccg gca gga gtc atg gga gaa aac 1008
Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn
325 330 335

aac acc ctg gtc tgg aag tac gca gac gcc ggc cat gtg tgc cac ctg 1056
Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu
340 345 350

tgc cat cca aac tgc acc tac gga tgc act ggg cca ggt ctt gaa ggc 1104
Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly
355 360 365

tgt cca acg aat ggg cct aag atc ccg tcc 1134
Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser
370 375

<210> 78
<211> 378
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..1134 from SEQ ID NO 77

<400> 78
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser
35 40 45
Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly
50 55 60
Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp
65 70 75 80
Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr
85 90 95
Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp
100 105 110
Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu
115 120 125
Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro
130 135 140
Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg
145 150 155 160
Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu
165 170 175
Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly
180 185 190
Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile
195 200 205
Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile
210 215 220
Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His
225 230 235 240
Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys
245 250 255
Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys
260 265 270
Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys
275 280 285
Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys
290 295 300
Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp
305 310 315 320
Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn
325 330 335
Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu
340 345 350
Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly
355 360 365
Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser
370 375

<210> 79
<211> 69
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII TM

<220>
<221> CDS
<222> 1..69
<223> /transl_table=1

<400> 79
atc gcc act ggg atg gtg ggg gcc ctc ctc ttg ctg ctg gtg gtg gcc 48
Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala
1 5 10 15

ctg ggg atc ggc ctc ttc atg 69
Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
20

<210> 80
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..69 from SEQ ID NO 79

<400> 80
Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala
1 5 10 15
Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
20

<210> 81
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII IZ ANCHOR

<220>
<221> CDS
<222> 1..27
<223> /transl_table=1

<400> 81
cga agg cgc cac atc gtt cgg aag cgc 27
Arg Arg Arg His Ile Val Arg Lys Arg
1 5

<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..27 from SEQ ID NO 81

<400> 82
Arg Arg Arg His Ile Val Arg Lys Arg
1 5

<210> 83
<211> 945
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Epcam (mouse)

<220>
<221> CDS
<222> 1..945
<223> /transl_table=1

<400> 83
atg gcg ggc ccg cag gcg ctg gcg ttt ggc ctg ctg ctg gcg gtg gtg 48
Met Ala Gly Pro Gln Ala Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Ala Val Val
1 5 10 15

acc gcg acc ctg gcg gcg gcg cag cgc gat tgc gtg tgc gat aac tat 96
Thr Ala Thr Leu Ala Ala Ala Gln Arg Asp Cys Val Cys Asp Asn Tyr
20 25 30

aaa ctg gcg acc agc tgc agc ctg aac gaa tat ggc gaa tgc cag tgc 144
Lys Leu Ala Thr Ser Cys Ser Leu Asn Glu Tyr Gly Glu Cys Gln Cys
35 40 45

acc agc tat ggc acc cag aac acc gtg att tgc agc aaa ctg gcg agc 192
Thr Ser Tyr Gly Thr Gln Asn Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ser
50 55 60

aaa tgc ctg gcg atg aaa gcg gaa atg acc cat agc aaa agc ggc cgc 240
Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly Arg
65 70 75 80

cgc att aaa ccg gaa ggc gcg att cag aac aac gat ggc ctg tat gat 288
Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp
85 90 95

ccg gat tgc gat gaa cag ggc ctg ttt aaa gcg aaa cag tgc aac ggc 336
Pro Asp Cys Asp Glu Gln Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn Gly
100 105 110

acc gcg acc tgc tgg tgc gtg aac acc gcg ggc gtg cgc cgc acc gat 384
Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp
115 120 125

aaa gat acc gaa att acc tgc agc gaa cgc gtg cgc acc tat tgg att 432
Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp Ile
130 135 140

att att gaa ctg aaa cat aaa gaa cgc gaa agc ccg tat gat cat cag 480
Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Glu Arg Glu Ser Pro Tyr Asp His Gln
145 150 155 160

agc ctg cag acc gcg ctg cag gaa gcg ttt acc agc cgc tat aaa ctg 528
Ser Leu Gln Thr Ala Leu Gln Glu Ala Phe Thr Ser Arg Tyr Lys Leu
165 170 175

aac cag aaa ttt att aaa aac att atg tat gaa aac aac gtg att acc 576
Asn Gln Lys Phe Ile Lys Asn Ile Met Tyr Glu Asn Asn Val Ile Thr
180 185 190

att gat ctg atg cag aac agc agc cag aaa acc cag gat gat gtg gat 624
Ile Asp Leu Met Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asp Asp Val Asp
195 200 205

att gcg gat gtg gcg tat tat ttt gaa aaa gat gtg aaa ggc gaa agc 672
Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu Ser
210 215 220

ctg ttt cat agc agc aaa agc atg gat ctg cgc gtg aac ggc gaa ccg 720
Leu Phe His Ser Ser Lys Ser Met Asp Leu Arg Val Asn Gly Glu Pro
225 230 235 240

ctg gat ctg gat ccg ggc cag acc ctg att tat tat gtg gat gaa aaa 768
Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys
245 250 255

gcg ccg gaa ttt agc atg cag ggc ctg acc gcg ggc att att gcg gtg 816
Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Thr Ala Gly Ile Ile Ala Val
260 265 270

att gtg gtg gtg agc ctg gcg gtg att gcg ggc att gtg gtg ctg gtg 864
Ile Val Val Val Ser Leu Ala Val Ile Ala Gly Ile Val Val Leu Val
275 280 285

att agc acc cgc aaa aaa agc gcg aaa tat gaa aaa gcg gaa att aaa 912
Ile Ser Thr Arg Lys Lys Ser Ala Lys Tyr Glu Lys Ala Glu Ile Lys
290 295 300

gaa atg ggc gaa att cat cgc gaa ctg aac gcg 945
Glu Met Gly Glu Ile His Arg Glu Leu Asn Ala
305 310 315

<210> 84
<211> 315
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..945 from SEQ ID NO 83

<400> 84
Met Ala Gly Pro Gln Ala Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Ala Val Val
1 5 10 15
Thr Ala Thr Leu Ala Ala Ala Gln Arg Asp Cys Val Cys Asp Asn Tyr
20 25 30
Lys Leu Ala Thr Ser Cys Ser Leu Asn Glu Tyr Gly Glu Cys Gln Cys
35 40 45
Thr Ser Tyr Gly Thr Gln Asn Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ser
50 55 60
Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly Arg
65 70 75 80
Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp
85 90 95
Pro Asp Cys Asp Glu Gln Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn Gly
100 105 110
Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp
115 120 125
Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp Ile
130 135 140
Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Glu Arg Glu Ser Pro Tyr Asp His Gln
145 150 155 160
Ser Leu Gln Thr Ala Leu Gln Glu Ala Phe Thr Ser Arg Tyr Lys Leu
165 170 175
Asn Gln Lys Phe Ile Lys Asn Ile Met Tyr Glu Asn Asn Val Ile Thr
180 185 190
Ile Asp Leu Met Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asp Asp Val Asp
195 200 205
Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu Ser
210 215 220
Leu Phe His Ser Ser Lys Ser Met Asp Leu Arg Val Asn Gly Glu Pro
225 230 235 240
Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys
245 250 255
Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Thr Ala Gly Ile Ile Ala Val
260 265 270
Ile Val Val Val Ser Leu Ala Val Ile Ala Gly Ile Val Val Leu Val
275 280 285
Ile Ser Thr Arg Lys Lys Ser Ala Lys Tyr Glu Lys Ala Glu Ile Lys
290 295 300
Glu Met Gly Glu Ile His Arg Glu Leu Asn Ala
305 310 315

<210> 85
<211> 339
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD3Z UniProtKB - P20963

<220>
<221> CDS
<222> 1..339
<223> /transl_table=1

<400> 85
cgc gtg aaa ttt agc cgc agc gcg gat gcg ccg gcg tat cag cag ggc 48
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15

cag aac cag ctg tat aac gaa ctg aac ctg ggc cgc cgc gaa gaa tat 96
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30

gat gtg ctg gat aaa cgc cgc ggc cgc gat ccg gaa atg ggc ggc aaa 144
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45

ccg cag cgc cgc aaa aac ccg cag gaa ggc ctg tat aac gaa ctg cag 192
Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
50 55 60

aaa gat aaa atg gcg gaa gcg tat agc gaa att ggc atg aaa ggc gaa 240
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
65 70 75 80

cgc cgc cgc ggc aaa ggc cat gat ggc ctg tat cag ggc ctg agc acc 288
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
85 90 95

gcg acc aaa gat acc tat gat gcg ctg cat atg cag gcg ctg ccg ccg 336
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
100 105 110

cgc 339
Arg


<210> 86
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..339 from SEQ ID NO 85

<400> 86
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
50 55 60
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
65 70 75 80
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
85 90 95
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
100 105 110
Arg


<210> 87
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Fcgr3a: UniProtKB - P08637

<220>
<221> CDS
<222> 1..75
<223> /transl_table=1

<400> 87
aaa acc aac att cgc agc agc acc cgc gat tgg aaa gat cat aaa ttt 48
Lys Thr Asn Ile Arg Ser Ser Thr Arg Asp Trp Lys Asp His Lys Phe
1 5 10 15

aaa tgg cgc aaa gat ccg cag gat aaa 75
Lys Trp Arg Lys Asp Pro Gln Asp Lys
20 25

<210> 88
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..75 from SEQ ID NO 87

<400> 88
Lys Thr Asn Ile Arg Ser Ser Thr Arg Asp Trp Lys Asp His Lys Phe
1 5 10 15
Lys Trp Arg Lys Asp Pro Gln Asp Lys
20 25

<210> 89
<211> 153
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> NKG2D UniProtKB - P26718

<220>
<221> CDS
<222> 1..153
<223> /transl_table=1

<400> 89
atg ggc tgg att cgc ggc cgc cgc agc cgc cat agc tgg gaa atg agc 48
Met Gly Trp Ile Arg Gly Arg Arg Ser Arg His Ser Trp Glu Met Ser
1 5 10 15

gaa ttt cat aac tat aac ctg gat ctg aaa aaa agc gat ttt agc acc 96
Glu Phe His Asn Tyr Asn Leu Asp Leu Lys Lys Ser Asp Phe Ser Thr
20 25 30

cgc tgg cag aaa cag cgc tgc ccg gtg gtg aaa agc aaa tgc cgc gaa 144
Arg Trp Gln Lys Gln Arg Cys Pro Val Val Lys Ser Lys Cys Arg Glu
35 40 45

aac gcg agc 153
Asn Ala Ser
50

<210> 90
<211> 51
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..153 from SEQ ID NO 89

<400> 90
Met Gly Trp Ile Arg Gly Arg Arg Ser Arg His Ser Trp Glu Met Ser
1 5 10 15
Glu Phe His Asn Tyr Asn Leu Asp Leu Lys Lys Ser Asp Phe Ser Thr
20 25 30
Arg Trp Gln Lys Gln Arg Cys Pro Val Val Lys Ser Lys Cys Arg Glu
35 40 45
Asn Ala Ser
50

<210> 91
<211> 123
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> UniProtKB - P10747 CD28

<220>
<221> CDS
<222> 1..123
<223> /transl_table=1

<400> 91
cgc agc aaa cgc agc cgc ctg ctg cat agc gat tat atg aac atg acc 48
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15

ccg cgc cgc ccg ggc ccg acc cgc aaa cat tat cag ccg tat gcg ccg 96
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30

ccg cgc gat ttt gcg gcg tat cgc agc 123
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40

<210> 92
<211> 41
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..123 from SEQ ID NO 91

<400> 92
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40

<210> 93
<211> 126
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> UniProtKB - Q07011 CD137

<220>
<221> CDS
<222> 1..126
<223> /transl_table=1

<400> 93
aaa cgc ggc cgc aaa aaa ctg ctg tat att ttt aaa cag ccg ttt atg 48
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15

cgc ccg gtg cag acc acc cag gaa gaa gat ggc tgc agc tgc cgc ttt 96
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30

ccg gaa gaa gaa gaa ggc ggc tgc gaa ctg 126
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40

<210> 94
<211> 42
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..126 from SEQ ID NO 93

<400> 94
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40

<210> 95
<211> 129
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> UniProtKB - P23510 OX40

<220>
<221> CDS
<222> 1..129
<223> /transl_table=1

<400> 95
cag gtg agc cat cgc tat ccg cgc att cag agc att aaa gtg cag ttt 48
Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe
1 5 10 15

acc gaa tat aaa atg gaa cgc gtg cag ccg ctg gaa gaa aac gtg ggc 96
Thr Glu Tyr Lys Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly
20 25 30

aac gcg gcg cgc ccg cgc ttt gaa cgc aac aaa 129
Asn Ala Ala Arg Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys
35 40

<210> 96
<211> 43
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..129 from SEQ ID NO 95

<400> 96
Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe
1 5 10 15
Thr Glu Tyr Lys Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly
20 25 30
Asn Ala Ala Arg Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys
35 40

<210> 97
<211> 114
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> UniProtKB - Q9Y6W8 ICOS

<220>
<221> CDS
<222> 1..114
<223> /transl_table=1

<400> 97
tgc tgg ctg acc aaa aaa aaa tat agc agc agc gtg cat gat ccg aac 48
Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn
1 5 10 15

ggc gaa tat atg ttt atg cgc gcg gtg aac acc gcg aaa aaa agc cgc 96
Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg
20 25 30

ctg acc gat gtg acc ctg 114
Leu Thr Asp Val Thr Leu
35

<210> 98
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..114 from SEQ ID NO 97

<400> 98
Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn
1 5 10 15
Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg
20 25 30
Leu Thr Asp Val Thr Leu
35

<210> 99
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> UniProtKB - P26842 CD27

<220>
<221> CDS
<222> 1..144
<223> /transl_table=1

<400> 99
cag cgc cgc aaa tat cgc agc aac aaa ggc gaa agc ccg gtg gaa ccg 48
Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro
1 5 10 15

gcg gaa ccg tgc cat tat agc tgc ccg cgc gaa gaa gaa ggc agc acc 96
Ala Glu Pro Cys His Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr
20 25 30

att ccg att cag gaa gat tat cgc aaa ccg gaa ccg gcg tgc agc ccg 144
Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro
35 40 45

<210> 100
<211> 48
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..144 from SEQ ID NO 99

<400> 100
Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro
1 5 10 15
Ala Glu Pro Cys His Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr
20 25 30
Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro
35 40 45



<210> 101
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> UniProtKB - Q9UBK5 DAP10

<220>
<221> CDS
<222> 1..72
<223> /transl_table=1

<400> 101
ctg tgc gcg cgc ccg cgc cgc agc ccg gcg cag gaa gat ggc aaa gtg 48
Leu Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln Glu Asp Gly Lys Val
1 5 10 15

tat att aac atg ccg ggc cgc ggc 72
Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly
20

<210> 102
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..72 from SEQ ID NO 101

<400> 102
Leu Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln Glu Asp Gly Lys Val
1 5 10 15
Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly
20

<210> 103
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="EGFRvIIINot1fwd"
/note="Primer"

<400> 103
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cctccg 36


<210> 104
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="EGFRtm CD28iz rev"

<400> 104
tctgttcctt ctactattca tgaagaggcc gatccc 36


<210> 105
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="EGFRtm CD28iz fwd"

<400> 105
gggatcggcc tcttcatgaa tagtagaagg aacaga 36


<210> 106
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="CD28in/CD3zeta rev"

<400> 106
ctgctgaatt ttgctctggg gcggtacgct gcaa 34


<210> 107
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="CD3zeta/CD28fwd"

<400> 107
ttgcagcgta ccgccccaga gcaaaattca gcag 34


<210> 108
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="CD3zetaEcoR1rev"
/note="Primer"

<400> 108
taatgaattc ttagcgaggg gccagggtc 29


<210> 109
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="Leader_Not1_fwd"

<400> 109
attagcggcc gcgccaccat ggaaacagat acac 34


<210> 110
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> LeaderCriptoIsorev

<400> 110
aaattcctga tggcccaggc ttctagcagg ctgggc 36


<210> 111
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="LeaderCriptoIsofwd"

<400> 111
gcccagcctg ctagaagcct gggccatcag gaattt 36


<210> 112
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Cripto CD8aex rev"
/note="Primer"

<400> 112
cagcactggc ttggtagtat cacagccggg tagaaa 36


<210> 113
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="CriptoCD8aex fwd"
/note="Primer"

<400> 113
tttctacccg gctgtgatac taccaagcca gtgctg 36


<210> 114
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="CD8tm-CD28iz rev"

<400> 114
tctgttcctt ctactattga tgagagtgat gatcaa 36


<210> 115
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="CD8tm-CD28izfwd"
/note="Primer"

<400> 115
ttgatcatca ctctcatcaa tagtagaagg aacaga 36


<210> 116
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="CD28in/CD3zeta rev"

<400> 116
ctgctgaatt ttgctctggg gcggtacgct gcaa 34


<210> 117
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="CD3zeta/CD28fwd"

<400> 117
ttgcagcgta ccgccccaga gcaaaattca gcag 34


<210> 118
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="CD3zetaEcoR1rev"

<400> 118
taatgaattc ttagcgaggg gccagggtc 29


<210> 119
<211> 1470
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CAR1 murin (Cripto-CD8aex/tm-CD28iz-CD3z

<400> 119
attagcggcc gcgccaccat ggaaacagat acactgctgc tgtgggtgct gctgctgtgg 60

gtgccaggat ctacagggga tggcgcccag cctgctagaa gcctgggcca tcaggaattt 120

gctcgtccat ctcggggata cctggccttc agagatgaca gcatttggcc ccaggaggag 180

cctgcaattc ggcctcggtc ttcccagcgt gtgccgccca tggggataca gcacagtaag 240

gagctaaaca gaacctgctg cctgaatggg ggaacctgca tgctggggtc cttttgtgcc 300

tgccctccct ccttctacgg acggaactgt gagcacgatg tgcgcaaaga gaactgtggg 360

tctgtgcccc atgacacctg gctgcccaag aagtgttccc tgtgtaaatg ctggcacggt 420

cagctccgct gctttcctca ggcatttcta cccggctgtg atagccagtt ccgggtgtcg 480

ccgctggatc ggacctggaa cctgggcgag acagtggagc tgaagtgcca ggtgctgctg 540

tccaacccga cgtcgggctg ctcgtggctc ttccagccgc gcggcgccgc cgccagtccc 600

accttcctcc tatacctctc ccaaaacaag cccaaggcgg ccgaggggct ggacacccag 660

cggttctcgg gcaagaggtt gggggacacc ttcgtcctca ccctgagcga cttccgccga 720

gagaacgagg gctactattt ctgctcggcc ctgagcaact ccatcatgta cttcagccac 780

ttcgtgccgg tcttcctgcc agcgaagccc accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca 840

ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg 900

gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg gacttcgcct gtgatatcta catctgggcg 960

cccctggccg ggacttgtgg ggtccttctc ctgtcactgg ttatcaccag gagtaagagg 1020

agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc 1080

aagcattacc agccctatgc cccaccacgc gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag 1140

ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct ctataacgag 1200

ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct 1260

gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag 1320

aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc 1380

aaggggcacg atggccttta ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc 1440

cttcacatgc aggccctgcc ccctcgctaa 1470


<210> 120
<211> 489
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CAR1 murin (Cripto-CD8aex/tm-CD28iz-CD3z

<400> 120
Ile Ser Gly Arg Ala Thr Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val
1 5 10 15
Leu Leu Leu Trp Val Pro Gly Ser Thr Gly Asp Gly Ala Gln Pro Ala
20 25 30
Arg Ser Leu Gly His Gln Glu Phe Ala Arg Pro Ser Arg Gly Tyr Leu
35 40 45
Ala Phe Arg Asp Asp Ser Ile Trp Pro Gln Glu Glu Pro Ala Ile Arg
50 55 60
Pro Arg Ser Ser Gln Arg Val Pro Pro Met Gly Ile Gln His Ser Lys
65 70 75 80
Glu Leu Asn Arg Thr Cys Cys Leu Asn Gly Gly Thr Cys Met Leu Gly
85 90 95
Ser Phe Cys Ala Cys Pro Pro Ser Phe Tyr Gly Arg Asn Cys Glu His
100 105 110
Asp Val Arg Lys Glu Asn Cys Gly Ser Val Pro His Asp Thr Trp Leu
115 120 125
Pro Lys Lys Cys Ser Leu Cys Lys Cys Trp His Gly Gln Leu Arg Cys
130 135 140
Phe Pro Gln Ala Phe Leu Pro Gly Cys Asp Ser Gln Phe Arg Val Ser
145 150 155 160
Pro Leu Asp Arg Thr Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys
165 170 175
Gln Val Leu Leu Ser Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln
180 185 190
Pro Arg Gly Ala Ala Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln
195 200 205
Asn Lys Pro Lys Ala Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly
210 215 220
Lys Arg Leu Gly Asp Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg
225 230 235 240
Glu Asn Glu Gly Tyr Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met
245 250 255
Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr
260 265 270
Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln
275 280 285
Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala
290 295 300
Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala
305 310 315 320
Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
325 330 335
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
340 345 350
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
355 360 365
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
370 375 380
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
385 390 395 400
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
405 410 415
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
420 425 430
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
435 440 445
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
450 455 460
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
465 470 475 480
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485

<210> 121
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD28 domain (not mutated)

<400> 121
Pro Tyr Ala Pro
1

<210> 122
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD28 domain (not mutated)

<400> 122
Tyr Met Asn Met
1

<210> 123
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD28 domain (mutated)

<400> 123
Phe Met Asn Met
1

<210> 124
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD28 domain (mutated)

<400> 124
Ala Tyr Ala Ala
1

<210> 125
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="EGFRvIII fwd"
/note="Primer"

<400> 125
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cc 32


<210> 126
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="EGFRvIII (-human CD28) rev"

<400> 126
ccaccagcac ccaaaaggac gggatcttag gccca 35


<210> 127
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="(EGFRvIII-) human CD28 fwd"
/note="Primer"

<400> 127
tgggcctaag atcccgtcct tttgggtgct ggtgg 35


<210> 128
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="human CD3z rev"

<400> 128
taatgaattc ttagcgaggg ggcagg 26


<210> 129
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="EGFRvIII fwd"

<400> 129
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cc 32


<210> 130
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="human CD3z rev"
/note="Primer"

<400> 130
taatgaattc ttagcgaggg ggcagg 26


<210> 131
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="EGFRvIII fwd"
/note="Primer"

<400> 131
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cc 32


<210> 132
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="EGFRvIII (-human CD28) rev"

<400> 132
ccaccagcac ccaaaaggac gggatcttag gccca 35


<210> 133
<211> 35
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="(EGFRvIII-) human CD28 fwd"
/note="Primer"

<400> 133
tgggcctaag atcccgtcct tttgggtgct ggtgg 35


<210> 134
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="human CD28 (-human 41BB) rev"
/note="Primer"

<400> 134
ctttctgccc cgtttggagc gataggctgc ga 32


<210> 135
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="(human CD28-) human 41BB fwd"
/note="Primer"

<400> 135
tcgcagccta tcgctccaaa cggggcagaa ag 32


<210> 136
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="human 41BB (-human CD3z) rev"
/note="Primer"

<400> 136
tgctgaactt cactctcagt tcacatcctc ct 32


<210> 137
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="(human 41BB-) human CD3z fwd"
/note="Primer"

<400> 137
ggaggatgtg aactgagagt gaagttcagc agga 34


<210> 138
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="human CD3z rev"

<400> 138
taatgaattc ttagcgaggg ggcagg 26


<210> 139
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="EGFRvIII fwd "

<400> 139
agcttgctcg cggccgcgcc accatgcgac cc 32


<210> 140
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="human CD3z rev"

<400> 140
taatgaattc ttagcgaggg ggcagg 26


<210> 141
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="Cripto fwd"

<400> 141
attagcggcc gcgccaccat ggaaacagat acac 34


<210> 142
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Cripto (-human CD8a) rev"
/note="Primer"

<400> 142
acacccggaa ctggctatca cagccgggta ga 32


<210> 143
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="(Cripto-) human CD8a fwd"
/note="Primer"

<400> 143
tctacccggc tgtgatagcc agttccgggt g 31


<210> 144
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="human CD8a (-human CD28) rev"
/note="Primer"

<400> 144
ctcctcttac tcctggtgat aaccagtgac agg 33


<210> 145
<211> 37
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="(human CD8a-) human CD28 fwd"

<400> 145
cctgtcactg gttatcacca ggagtaagag gagcagg 37


<210> 146
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="human CD3z rev"
/note="Primer"

<400> 146
taatgaattc ttagcgaggg ggcagg 26


<210> 147
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Cripto fwd "
/note="Primer"

<400> 147
attagcggcc gcgccaccat ggaaacagat acac 34


<210> 148
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> /note="Primer"
/note="human CD3z rev"

<400> 148
taatgaattc ttagcgaggg ggcagg 26


<210> 149
<211> 1890
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> human mesothelin

<220>
<221> CDS
<222> 1..1890
<223> /transl_table=1

<400> 149
atg gcg ctg ccg acc gcg cgc ccg ctg ctg ggc agc tgc ggc acc ccg 48
Met Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr Pro
1 5 10 15

gcg ctg ggc agc ctg ctg ttt ctg ctg ttt agc ctg ggc tgg gtg cag 96
Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu Gly Trp Val Gln
20 25 30

ccg agc cgc acc ctg gcg ggc gaa acc ggc cag gaa gcg gcg ccg ctg 144
Pro Ser Arg Thr Leu Ala Gly Glu Thr Gly Gln Glu Ala Ala Pro Leu
35 40 45

gat ggc gtg ctg gcg aac ccg ccg aac att agc agc ctg agc ccg cgc 192
Asp Gly Val Leu Ala Asn Pro Pro Asn Ile Ser Ser Leu Ser Pro Arg
50 55 60

cag ctg ctg ggc ttt ccg tgc gcg gaa gtg agc ggc ctg agc acc gaa 240
Gln Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala Glu Val Ser Gly Leu Ser Thr Glu
65 70 75 80

cgc gtg cgc gaa ctg gcg gtg gcg ctg gcg cag aaa aac gtg aaa ctg 288
Arg Val Arg Glu Leu Ala Val Ala Leu Ala Gln Lys Asn Val Lys Leu
85 90 95

agc acc gaa cag ctg cgc tgc ctg gcg cat cgc ctg agc gaa ccg ccg 336
Ser Thr Glu Gln Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro
100 105 110

gaa gat ctg gat gcg ctg ccg ctg gat ctg ctg ctg ttt ctg aac ccg 384
Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro
115 120 125

gat gcg ttt agc ggc ccg cag gcg tgc acc cgc ttt ttt agc cgc att 432
Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gln Ala Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg Ile
130 135 140

acc aaa gcg aac gtg gat ctg ctg ccg cgc ggc gcg ccg gaa cgc cag 480
Thr Lys Ala Asn Val Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg Gln
145 150 155 160

cgc ctg ctg ccg gcg gcg ctg gcg tgc tgg ggc gtg cgc ggc agc ctg 528
Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala Cys Trp Gly Val Arg Gly Ser Leu
165 170 175

ctg agc gaa gcg gat gtg cgc gcg ctg ggc ggc ctg gcg tgc gat ctg 576
Leu Ser Glu Ala Asp Val Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu
180 185 190

ccg ggc cgc ttt gtg gcg gaa agc gcg gaa gtg ctg ctg ccg cgc ctg 624
Pro Gly Arg Phe Val Ala Glu Ser Ala Glu Val Leu Leu Pro Arg Leu
195 200 205

gtg agc tgc ccg ggc ccg ctg gat cag gat cag cag gaa gcg gcg cgc 672
Val Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gln Asp Gln Gln Glu Ala Ala Arg
210 215 220

gcg gcg ctg cag ggc ggc ggc ccg ccg tat ggc ccg ccg agc acc tgg 720
Ala Ala Leu Gln Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr Trp
225 230 235 240

agc gtg agc acc atg gat gcg ctg cgc ggc ctg ctg ccg gtg ctg ggc 768
Ser Val Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Val Leu Gly
245 250 255

cag ccg att att cgc agc att ccg cag ggc att gtg gcg gcg tgg cgc 816
Gln Pro Ile Ile Arg Ser Ile Pro Gln Gly Ile Val Ala Ala Trp Arg
260 265 270

cag cgc agc agc cgc gat ccg agc tgg cgc cag ccg gaa cgc acc att 864
Gln Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gln Pro Glu Arg Thr Ile
275 280 285

ctg cgc ccg cgc ttt cgc cgc gaa gtg gaa aaa acc gcg tgc ccg agc 912
Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Val Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser
290 295 300

ggc aaa aaa gcg cgc gaa att gat gaa agc ctg att ttt tat aaa aaa 960
Gly Lys Lys Ala Arg Glu Ile Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys
305 310 315 320

tgg gaa ctg gaa gcg tgc gtg gat gcg gcg ctg ctg gcg acc cag atg 1008
Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gln Met
325 330 335

gat cgc gtg aac gcg att ccg ttt acc tat gaa cag ctg gat gtg ctg 1056
Asp Arg Val Asn Ala Ile Pro Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu
340 345 350

aaa cat aaa ctg gat gaa ctg tat ccg cag ggc tat ccg gaa agc gtg 1104
Lys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val
355 360 365

att cag cat ctg ggc tat ctg ttt ctg aaa atg agc ccg gaa gat att 1152
Ile Gln His Leu Gly Tyr Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile
370 375 380

cgc aaa tgg aac gtg acc agc ctg gaa acc ctg aaa gcg ctg ctg gaa 1200
Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Glu
385 390 395 400

gtg aac aaa ggc cat gaa atg agc ccg cag gcg ccg cgc cgc ccg ctg 1248
Val Asn Lys Gly His Glu Met Ser Pro Gln Ala Pro Arg Arg Pro Leu
405 410 415

ccg cag gtg gcg acc ctg att gat cgc ttt gtg aaa ggc cgc ggc cag 1296
Pro Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp Arg Phe Val Lys Gly Arg Gly Gln
420 425 430

ctg gat aaa gat acc ctg gat acc ctg acc gcg ttt tat ccg ggc tat 1344
Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr
435 440 445

ctg tgc agc ctg agc ccg gaa gaa ctg agc agc gtg ccg ccg agc agc 1392
Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser Ser
450 455 460

att tgg gcg gtg cgc ccg cag gat ctg gat acc tgc gat ccg cgc cag 1440
Ile Trp Ala Val Arg Pro Gln Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg Gln
465 470 475 480

ctg gat gtg ctg tat ccg aaa gcg cgc ctg gcg ttt cag aac atg aac 1488
Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met Asn
485 490 495

ggc agc gaa tat ttt gtg aaa att cag agc ttt ctg ggc ggc gcg ccg 1536
Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile Gln Ser Phe Leu Gly Gly Ala Pro
500 505 510

acc gaa gat ctg aaa gcg ctg agc cag cag aac gtg agc atg gat ctg 1584
Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gln Gln Asn Val Ser Met Asp Leu
515 520 525

gcg acc ttt atg aaa ctg cgc acc gat gcg gtg ctg ccg ctg acc gtg 1632
Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr Asp Ala Val Leu Pro Leu Thr Val
530 535 540

gcg gaa gtg cag aaa ctg ctg ggc ccg cat gtg gaa ggc ctg aaa gcg 1680
Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly Pro His Val Glu Gly Leu Lys Ala
545 550 555 560

gaa gaa cgc cat cgc ccg gtg cgc gat tgg att ctg cgc cag cgc cag 1728
Glu Glu Arg His Arg Pro Val Arg Asp Trp Ile Leu Arg Gln Arg Gln
565 570 575

gat gat ctg gat acc ctg ggc ctg ggc ctg cag ggc ggc att ccg aac 1776
Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro Asn
580 585 590

ggc tat ctg gtg ctg gat ctg agc atg cag gaa gcg ctg agc ggc acc 1824
Gly Tyr Leu Val Leu Asp Leu Ser Met Gln Glu Ala Leu Ser Gly Thr
595 600 605

ccg tgc ctg ctg ggc ccg ggc ccg gtg ctg acc gtg ctg gcg ctg ctg 1872
Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro Val Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu
610 615 620

ctg gcg agc acc ctg gcg 1890
Leu Ala Ser Thr Leu Ala
625 630

<210> 150
<211> 630
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..1890 from SEQ ID NO 149

<400> 150
Met Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr Pro
1 5 10 15
Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu Gly Trp Val Gln
20 25 30
Pro Ser Arg Thr Leu Ala Gly Glu Thr Gly Gln Glu Ala Ala Pro Leu
35 40 45
Asp Gly Val Leu Ala Asn Pro Pro Asn Ile Ser Ser Leu Ser Pro Arg
50 55 60
Gln Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala Glu Val Ser Gly Leu Ser Thr Glu
65 70 75 80
Arg Val Arg Glu Leu Ala Val Ala Leu Ala Gln Lys Asn Val Lys Leu
85 90 95
Ser Thr Glu Gln Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro
100 105 110
Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro
115 120 125
Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gln Ala Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg Ile
130 135 140
Thr Lys Ala Asn Val Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg Gln
145 150 155 160
Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala Cys Trp Gly Val Arg Gly Ser Leu
165 170 175
Leu Ser Glu Ala Asp Val Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu
180 185 190
Pro Gly Arg Phe Val Ala Glu Ser Ala Glu Val Leu Leu Pro Arg Leu
195 200 205
Val Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gln Asp Gln Gln Glu Ala Ala Arg
210 215 220
Ala Ala Leu Gln Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr Trp
225 230 235 240
Ser Val Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Val Leu Gly
245 250 255
Gln Pro Ile Ile Arg Ser Ile Pro Gln Gly Ile Val Ala Ala Trp Arg
260 265 270
Gln Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gln Pro Glu Arg Thr Ile
275 280 285
Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Val Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser
290 295 300
Gly Lys Lys Ala Arg Glu Ile Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys
305 310 315 320
Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gln Met
325 330 335
Asp Arg Val Asn Ala Ile Pro Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu
340 345 350
Lys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val
355 360 365
Ile Gln His Leu Gly Tyr Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile
370 375 380
Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Glu
385 390 395 400
Val Asn Lys Gly His Glu Met Ser Pro Gln Ala Pro Arg Arg Pro Leu
405 410 415
Pro Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp Arg Phe Val Lys Gly Arg Gly Gln
420 425 430
Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr
435 440 445
Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser Ser
450 455 460
Ile Trp Ala Val Arg Pro Gln Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg Gln
465 470 475 480
Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met Asn
485 490 495
Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile Gln Ser Phe Leu Gly Gly Ala Pro
500 505 510
Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gln Gln Asn Val Ser Met Asp Leu
515 520 525
Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr Asp Ala Val Leu Pro Leu Thr Val
530 535 540
Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly Pro His Val Glu Gly Leu Lys Ala
545 550 555 560
Glu Glu Arg His Arg Pro Val Arg Asp Trp Ile Leu Arg Gln Arg Gln
565 570 575
Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro Asn
580 585 590
Gly Tyr Leu Val Leu Asp Leu Ser Met Gln Glu Ala Leu Ser Gly Thr
595 600 605
Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro Val Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu
610 615 620
Leu Ala Ser Thr Leu Ala
625 630

<210> 151
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> human EGFRvIII

<400> 151
ccccggcgca gcgcggccgc agcagcctcc gccccccgca cggtgtgagc gcccgacgcg 60

gccgaggcgg ccggagtccc gagctagccc cggcggccgc cgccgcccag accggacgac 120

aggccacctc gtcggcgtcc gcccgagtcc ccgcctcgcc gccaacgcca caaccaccgc 180

gcacggcccc ctgactccgt ccagtattga tcgggagagc cggagcgagc tcttcgggga 240

gcagcgatgc gaccctccgg gacggccggg gcagcgctcc tggcgctgct ggctgcgctc 300

tgcccggcga gtcgggctct ggaggaaaag aaagtttgcc aaggcacgag taacaagctc 360

acgcagttgg gcacttttga agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt caataactgt 420

gaggtggtcc ttgggaattt ggaaattacc tatgtgcaga ggaattatga tctttccttc 480

ttaaagacca tccaggaggt ggctggttat gtcctcattg ccctcaacac agtggagcga 540

attcctttgg aaaacctgca gatcatcaga ggaaatatgt actacgaaaa ttcctatgcc 600

ttagcagtct tatctaacta tgatgcaaat aaaaccggac tgaaggagct gcccatgaga 660

aatttacagg aaatcctgca tggcgccgtg cggttcagca acaaccctgc cctgtgcaac 720

gtggagagca tccagtggcg ggacatagtc agcagtgact ttctcagcaa catgtcgatg 780

gacttccaga accacctggg cagctgccaa aagtgtgatc caagctgtcc caatgggagc 840

tgctggggtg caggagagga gaactgccag aaactgacca aaatcatctg tgcccagcag 900

tgctccgggc gctgccgtgg caagtccccc agtgactgct gccacaacca gtgtgctgca 960

ggctgcacag gcccccggga gagcgactgc ctggtctgcc gcaaattccg agacgaagcc 1020

acgtgcaagg acacctgccc cccactcatg ctctacaacc ccaccacgta ccagatggat 1080

gtgaaccccg agggcaaata cagctttggt gccacctgcg tgaagaagtg tccccgtaat 1140

tatgtggtga cagatcacgg ctcgtgcgtc cgagcctgtg gggccgacag ctatgagatg 1200

gaggaagacg gcgtccgcaa gtgtaagaag tgcgaagggc cttgccgcaa agtgtgtaac 1260

ggaataggta ttggtgaatt taaagactca ctctccataa atgctacgaa tattaaacac 1320

ttcaaaaact gcacctccat cagtggcgat ctccacatcc tgccggtggc atttaggggt 1380

gactccttca cacatactcc tcctctggat ccacaggaac tggatattct gaaaaccgta 1440

aaggaaatca caggtttgag ctgaattatc acatgaatat aaatgggaaa tcagtgtttt 1500

agagagagaa cttttcgaca tatttcctgt tcccttggaa taaaaacatt tcttctgaaa 1560

ttttaccgtt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1595


<210> 152
<211> 405
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> human EGFRvIII

<400> 152
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln
20 25 30
Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe
35 40 45
Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn
50 55 60
Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys
65 70 75 80
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Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr
100 105 110
Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn
115 120 125
Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu
130 135 140
His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu
145 150 155 160
Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met
165 170 175
Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro
180 185 190
Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln
195 200 205
Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg
210 215 220
Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys
225 230 235 240
Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp
245 250 255
Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro
260 265 270
Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly
275 280 285
Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His
290 295 300
Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu
305 310 315 320
Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val
325 330 335
Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn
340 345 350
Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp
355 360 365
Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr
370 375 380
Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu
385 390 395 400
Ile Thr Gly Leu Ser
405

<210> 153
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence

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<223> human Cripto

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<221> CDS
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<400> 153
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Met Asp Cys Arg Lys Met Ala Arg Phe Ser Tyr Ser Val Ile Trp Ile
1 5 10 15

atg gcg att agc aaa gtg ttt gaa ctg ggc ctg gtg gcg ggc ctg ggc 96
Met Ala Ile Ser Lys Val Phe Glu Leu Gly Leu Val Ala Gly Leu Gly
20 25 30

cat cag gaa ttt gcg cgc ccg agc cgc ggc tat ctg gcg ttt cgc gat 144
His Gln Glu Phe Ala Arg Pro Ser Arg Gly Tyr Leu Ala Phe Arg Asp
35 40 45

gat agc att tgg ccg cag gaa gaa ccg gcg att cgc ccg cgc agc agc 192
Asp Ser Ile Trp Pro Gln Glu Glu Pro Ala Ile Arg Pro Arg Ser Ser
50 55 60

cag cgc gtg ccg ccg atg ggc att cag cat agc aaa gaa ctg aac cgc 240
Gln Arg Val Pro Pro Met Gly Ile Gln His Ser Lys Glu Leu Asn Arg
65 70 75 80

acc tgc tgc ctg aac ggc ggc acc tgc atg ctg ggc agc ttt tgc gcg 288
Thr Cys Cys Leu Asn Gly Gly Thr Cys Met Leu Gly Ser Phe Cys Ala
85 90 95

tgc ccg ccg agc ttt tat ggc cgc aac tgc gaa cat gat gtg cgc aaa 336
Cys Pro Pro Ser Phe Tyr Gly Arg Asn Cys Glu His Asp Val Arg Lys
100 105 110

gaa aac tgc ggc agc gtg ccg cat gat acc tgg ctg ccg aaa aaa tgc 384
Glu Asn Cys Gly Ser Val Pro His Asp Thr Trp Leu Pro Lys Lys Cys
115 120 125

agc ctg tgc aaa tgc tgg cat ggc cag ctg cgc tgc ttt ccg cag gcg 432
Ser Leu Cys Lys Cys Trp His Gly Gln Leu Arg Cys Phe Pro Gln Ala
130 135 140

ttt ctg ccg ggc tgc gat ggc ctg gtg atg gat gaa cat ctg gtg gcg 480
Phe Leu Pro Gly Cys Asp Gly Leu Val Met Asp Glu His Leu Val Ala
145 150 155 160

agc cgc acc ccg gaa ctg ccg ccg agc gcg cgc acc acc acc ttt atg 528
Ser Arg Thr Pro Glu Leu Pro Pro Ser Ala Arg Thr Thr Thr Phe Met
165 170 175

ctg gtg ggc att tgc ctg agc att cag agc tat tat 564
Leu Val Gly Ile Cys Leu Ser Ile Gln Ser Tyr Tyr
180 185

<210> 154
<211> 188
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..564 from SEQ ID NO 153

<400> 154
Met Asp Cys Arg Lys Met Ala Arg Phe Ser Tyr Ser Val Ile Trp Ile
1 5 10 15
Met Ala Ile Ser Lys Val Phe Glu Leu Gly Leu Val Ala Gly Leu Gly
20 25 30
His Gln Glu Phe Ala Arg Pro Ser Arg Gly Tyr Leu Ala Phe Arg Asp
35 40 45
Asp Ser Ile Trp Pro Gln Glu Glu Pro Ala Ile Arg Pro Arg Ser Ser
50 55 60
Gln Arg Val Pro Pro Met Gly Ile Gln His Ser Lys Glu Leu Asn Arg
65 70 75 80
Thr Cys Cys Leu Asn Gly Gly Thr Cys Met Leu Gly Ser Phe Cys Ala
85 90 95
Cys Pro Pro Ser Phe Tyr Gly Arg Asn Cys Glu His Asp Val Arg Lys
100 105 110
Glu Asn Cys Gly Ser Val Pro His Asp Thr Trp Leu Pro Lys Lys Cys
115 120 125
Ser Leu Cys Lys Cys Trp His Gly Gln Leu Arg Cys Phe Pro Gln Ala
130 135 140
Phe Leu Pro Gly Cys Asp Gly Leu Val Met Asp Glu His Leu Val Ala
145 150 155 160
Ser Arg Thr Pro Glu Leu Pro Pro Ser Ala Arg Thr Thr Thr Phe Met
165 170 175
Leu Val Gly Ile Cys Leu Ser Ile Gln Ser Tyr Tyr
180 185

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<212> DNA
<213> Artificial Sequence

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<223> human CD28

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atg ctg cgc ctg ctg ctg gcg ctg aac ctg ttt ccg agc att cag gtg 48
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15

acc ggc aac aaa att ctg gtg aaa cag agc ccg atg ctg gtg gcg tat 96
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30

gat aac gcg gtg aac ctg agc tgc aaa tat agc tat aac ctg ttt agc 144
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45

cgc gaa ttt cgc gcg agc ctg cat aaa ggc ctg gat agc gcg gtg gaa 192
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60

gtg tgc gtg gtg tat ggc aac tat agc cag cag ctg cag gtg tat agc 240
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80

aaa acc ggc ttt aac tgc gat ggc aaa ctg ggc aac gaa agc gtg acc 288
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95

ttt tat ctg cag aac ctg tat gtg aac cag acc gat att tat ttt tgc 336
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110

aaa att gaa gtg atg tat ccg ccg ccg tat ctg gat aac gaa aaa agc 384
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125

aac ggc acc att att cat gtg aaa ggc aaa cat ctg tgc ccg agc ccg 432
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140

ctg ttt ccg ggc ccg agc aaa ccg ttt tgg gtg ctg gtg gtg gtg ggc 480
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160

ggc gtg ctg gcg tgc tat agc ctg ctg gtg acc gtg gcg ttt att att 528
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175

ttt tgg gtg cgc agc aaa cgc agc cgc ctg ctg cat agc gat tat atg 576
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190

aac atg acc ccg cgc cgc ccg ggc ccg acc cgc aaa cat tat cag ccg 624
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
195 200 205

tat gcg ccg ccg cgc gat ttt gcg gcg tat cgc agc 660
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220

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<211> 220
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..660 from SEQ ID NO 155

<400> 156
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220

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<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> murine CD28

<220>
<221> CDS
<222> 1..654
<223> /transl_table=1

<400> 157
atg acc ctg cgc ctg ctg ttt ctg gcg ctg aac ttt ttt agc gtg cag 48
Met Thr Leu Arg Leu Leu Phe Leu Ala Leu Asn Phe Phe Ser Val Gln
1 5 10 15

gtg acc gaa aac aaa att ctg gtg aaa cag agc ccg ctg ctg gtg gtg 96
Val Thr Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Leu Leu Val Val
20 25 30

gat agc aac gaa gtg agc ctg agc tgc cgc tat agc tat aac ctg ctg 144
Asp Ser Asn Glu Val Ser Leu Ser Cys Arg Tyr Ser Tyr Asn Leu Leu
35 40 45

gcg aaa gaa ttt cgc gcg agc ctg tat aaa ggc gtg aac agc gat gtg 192
Ala Lys Glu Phe Arg Ala Ser Leu Tyr Lys Gly Val Asn Ser Asp Val
50 55 60

gaa gtg tgc gtg ggc aac ggc aac ttt acc tat cag ccg cag ttt cgc 240
Glu Val Cys Val Gly Asn Gly Asn Phe Thr Tyr Gln Pro Gln Phe Arg
65 70 75 80

agc aac gcg gaa ttt aac tgc gat ggc gat ttt gat aac gaa acc gtg 288
Ser Asn Ala Glu Phe Asn Cys Asp Gly Asp Phe Asp Asn Glu Thr Val
85 90 95

acc ttt cgc ctg tgg aac ctg cat gtg aac cat acc gat att tat ttt 336
Thr Phe Arg Leu Trp Asn Leu His Val Asn His Thr Asp Ile Tyr Phe
100 105 110

tgc aaa att gaa ttt atg tat ccg ccg ccg tat ctg gat aac gaa cgc 384
Cys Lys Ile Glu Phe Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Arg
115 120 125

agc aac ggc acc att att cat att aaa gaa aaa cat ctg tgc cat acc 432
Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Ile Lys Glu Lys His Leu Cys His Thr
130 135 140

cag agc agc ccg aaa ctg ttt tgg gcg ctg gtg gtg gtg gcg ggc gtg 480
Gln Ser Ser Pro Lys Leu Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val
145 150 155 160

ctg ttt tgc tat ggc ctg ctg gtg acc gtg gcg ctg tgc gtg att tgg 528
Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp
165 170 175

acc aac agc cgc cgc aac cgc ctg ctg cag agc gat tat atg aac atg 576
Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg Leu Leu Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met
180 185 190

acc ccg cgc cgc ccg ggc ctg acc cgc aaa ccg tat cag ccg tat gcg 624
Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala
195 200 205

ccg gcg cgc gat ttt gcg gcg tat cgc ccg 654
Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro
210 215

<210> 158
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..654 from SEQ ID NO 157

<400> 158
Met Thr Leu Arg Leu Leu Phe Leu Ala Leu Asn Phe Phe Ser Val Gln
1 5 10 15
Val Thr Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Leu Leu Val Val
20 25 30
Asp Ser Asn Glu Val Ser Leu Ser Cys Arg Tyr Ser Tyr Asn Leu Leu
35 40 45
Ala Lys Glu Phe Arg Ala Ser Leu Tyr Lys Gly Val Asn Ser Asp Val
50 55 60
Glu Val Cys Val Gly Asn Gly Asn Phe Thr Tyr Gln Pro Gln Phe Arg
65 70 75 80
Ser Asn Ala Glu Phe Asn Cys Asp Gly Asp Phe Asp Asn Glu Thr Val
85 90 95
Thr Phe Arg Leu Trp Asn Leu His Val Asn His Thr Asp Ile Tyr Phe
100 105 110
Cys Lys Ile Glu Phe Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Arg
115 120 125
Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Ile Lys Glu Lys His Leu Cys His Thr
130 135 140
Gln Ser Ser Pro Lys Leu Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val
145 150 155 160
Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp
165 170 175
Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg Leu Leu Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met
180 185 190
Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala
195 200 205
Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro
210 215

<210> 159
<211> 765
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> human CD137

<220>
<221> CDS
<222> 1..765
<223> /transl_table=1

<400> 159
atg ggc aac agc tgc tat aac att gtg gcg acc ctg ctg ctg gtg ctg 48
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15

aac ttt gaa cgc acc cgc agc ctg cag gat ccg tgc agc aac tgc ccg 96
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30

gcg ggc acc ttt tgc gat aac aac cgc aac cag att tgc agc ccg tgc 144
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45

ccg ccg aac agc ttt agc agc gcg ggc ggc cag cgc acc tgc gat att 192
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
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tgc cgc cag tgc aaa ggc gtg ttt cgc acc cgc aaa gaa tgc agc agc 240
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80

acc agc aac gcg gaa tgc gat tgc acc ccg ggc ttt cat tgc ctg ggc 288
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95

gcg ggc tgc agc atg tgc gaa cag gat tgc aaa cag ggc cag gaa ctg 336
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110

acc aaa aaa ggc tgc aaa gat tgc tgc ttt ggc acc ttt aac gat cag 384
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aaa cgc ggc att tgc cgc ccg tgg acc aac tgc agc ctg gat ggc aaa 432
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
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agc gtg ctg gtg aac ggc acc aaa gaa cgc gat gtg gtg tgc ggc ccg 480
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
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agc ccg gcg gat ctg agc ccg ggc gcg agc agc gtg acc ccg ccg gcg 528
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
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ccg gcg cgc gaa ccg ggc cat agc ccg cag att att agc ttt ttt ctg 576
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
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aaa cag ccg ttt atg cgc ccg gtg cag acc acc cag gaa gaa gat ggc 720
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tgc agc tgc cgc ttt ccg gaa gaa gaa gaa ggc ggc tgc gaa ctg 765
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Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
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Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
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Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
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Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
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Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
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Pro Ser Thr Phe Ser Ser Ile Gly Gly Gln Pro Asn Cys Asn Ile Cys
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cgc gtg tgc gcg ggc tat ttt cgc ttt aaa aaa ttt tgc agc agc acc 240
Arg Val Cys Ala Gly Tyr Phe Arg Phe Lys Lys Phe Cys Ser Ser Thr
65 70 75 80

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100 105 110

aaa cag ggc tgc aaa acc tgc agc ctg ggc acc ttt aac gat cag aac 384
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115 120 125

ggc acc ggc gtg tgc cgc ccg tgg acc aac tgc agc ctg gat ggc cgc 432
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ccg gtg gtg agc ttt agc ccg agc acc acc att agc gtg acc ccg gaa 528
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Gly Gly Pro Gly Gly His Ser Leu Gln Val Leu Thr Leu Phe Leu Ala
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ccg ttt aaa aaa acc acc ggc gcg gcg cag gaa gaa gat gcg tgc agc 720
Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser
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tgc cgc tgc ccg cag gaa gaa gaa ggc ggc ggc ggc ggc tat gaa ctg 768
Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu
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ctg ggc ctg ctg ggc ccg ctg gcg att ctg ctg gcg ctg tat ctg ctg 720
Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu
225 230 235 240

cgc cgc gat cag cgc ctg ccg ccg gat gcg cat aaa ccg ccg ggc ggc 768
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acc ggc ttt tat aac gaa gcg gtg aac tat gat acc tgc aaa cag tgc 240
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65 70 75 80

acc cag tgc aac cat cgc agc ggc agc gaa ctg aaa cag aac tgc acc 288
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ccg acc cag gat acc gtg tgc cgc tgc cgc ccg ggc acc cag ccg cgc 336
Pro Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Pro Gly Thr Gln Pro Arg
100 105 110

cag gat agc ggc tat aaa ctg ggc gtg gat tgc gtg ccg tgc ccg ccg 384
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ggc cat ttt agc ccg ggc aac aac cag gcg tgc aaa ccg tgg acc aac 432
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130 135 140

tgc acc ctg agc ggc aaa cag acc cgc cat ccg gcg agc gat agc ctg 480
Cys Thr Leu Ser Gly Lys Gln Thr Arg His Pro Ala Ser Asp Ser Leu
145 150 155 160

gat gcg gtg tgc gaa gat cgc agc ctg ctg gcg acc ctg ctg tgg gaa 528
Asp Ala Val Cys Glu Asp Arg Ser Leu Leu Ala Thr Leu Leu Trp Glu
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acc cag cgc ccg acc ttt cgc ccg acc acc gtg cag agc acc acc gtg 576
Thr Gln Arg Pro Thr Phe Arg Pro Thr Thr Val Gln Ser Thr Thr Val
180 185 190

tgg ccg cgc acc agc gaa ctg ccg agc ccg ccg acc ctg gtg acc ccg 624
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gaa ggc ccg gcg ttt gcg gtg ctg ctg ggc ctg ggc ctg ggc ctg ctg 672
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210 215 220

gcg ccg ctg acc gtg ctg ctg gcg ctg tat ctg ctg cgc aaa gcg tgg 720
Ala Pro Leu Thr Val Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Lys Ala Trp
225 230 235 240

cgc ctg ccg aac acc ccg aaa ccg tgc tgg ggc aac agc ttt cgc acc 768
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ccg att cag gaa gaa cat acc gat gcg cat ttt acc ctg gcg aaa att 816
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<223> [CDS]:1..816 from SEQ ID NO 165

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50 55 60

ctg acc aaa acc aaa ggc agc ggc aac acc gtg agc att aaa agc ctg 240
Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu
65 70 75 80

aaa ttt tgc cat agc cag ctg agc aac aac agc gtg agc ttt ttt ctg 288
Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu
85 90 95

tat aac ctg gat cat agc cat gcg aac tat tat ttt tgc aac ctg agc 336
Tyr Asn Leu Asp His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn Leu Ser
100 105 110

att ttt gat ccg ccg ccg ttt aaa gtg acc ctg acc ggc ggc tat ctg 384
Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu
115 120 125

cat att tat gaa agc cag ctg tgc tgc cag ctg aaa ttt tgg ctg ccg 432
His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro
130 135 140

att ggc tgc gcg gcg ttt gtg gtg gtg tgc att ctg ggc tgc att ctg 480
Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu
145 150 155 160

att tgc tgg ctg acc aaa aaa aaa tat agc agc agc gtg cat gat ccg 528
Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro
165 170 175

aac ggc gaa tat atg ttt atg cgc gcg gtg aac acc gcg aaa aaa agc 576
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180 185 190

cgc ctg acc gat gtg acc ctg 597
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<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..597 from SEQ ID NO 167

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Asn Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser
180 185 190
Arg Leu Thr Asp Val Thr Leu
195

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<223> murine ICOS

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<221> CDS
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<223> /transl_table=1

<400> 169
atg aaa ccg tat ttt tgc cgc gtg ttt gtg ttt tgc ttt ctg att cgc 48
Met Lys Pro Tyr Phe Cys Arg Val Phe Val Phe Cys Phe Leu Ile Arg
1 5 10 15

ctg ctg acc ggc gaa att aac ggc agc gcg gat cat cgc atg ttt agc 96
Leu Leu Thr Gly Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asp His Arg Met Phe Ser
20 25 30

ttt cat aac ggc ggc gtg cag att agc tgc aaa tat ccg gaa acc gtg 144
Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile Ser Cys Lys Tyr Pro Glu Thr Val
35 40 45

cag cag ctg aaa atg cgc ctg ttt cgc gaa cgc gaa gtg ctg tgc gaa 192
Gln Gln Leu Lys Met Arg Leu Phe Arg Glu Arg Glu Val Leu Cys Glu
50 55 60

ctg acc aaa acc aaa ggc agc ggc aac gcg gtg agc att aaa aac ccg 240
Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Ala Val Ser Ile Lys Asn Pro
65 70 75 80

atg ctg tgc ctg tat cat ctg agc aac aac agc gtg agc ttt ttt ctg 288
Met Leu Cys Leu Tyr His Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu
85 90 95

aac aac ccg gat agc agc cag ggc agc tat tat ttt tgc agc ctg agc 336
Asn Asn Pro Asp Ser Ser Gln Gly Ser Tyr Tyr Phe Cys Ser Leu Ser
100 105 110

att ttt gat ccg ccg ccg ttt cag gaa cgc aac ctg agc ggc ggc tat 384
Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Gln Glu Arg Asn Leu Ser Gly Gly Tyr
115 120 125

ctg cat att tat gaa agc cag ctg tgc tgc cag ctg aaa ctg tgg ctg 432
Leu His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Leu Trp Leu
130 135 140

ccg gtg ggc tgc gcg gcg ttt gtg gtg gtg ctg ctg ttt ggc tgc att 480
Pro Val Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Leu Leu Phe Gly Cys Ile
145 150 155 160

ctg att att tgg ttt agc aaa aaa aaa tat ggc agc agc gtg cat gat 528
Leu Ile Ile Trp Phe Ser Lys Lys Lys Tyr Gly Ser Ser Val His Asp
165 170 175

ccg aac agc gaa tat atg ttt atg gcg gcg gtg aac acc aac aaa aaa 576
Pro Asn Ser Glu Tyr Met Phe Met Ala Ala Val Asn Thr Asn Lys Lys
180 185 190

agc cgc ctg gcg ggc gtg acc agc 600
Ser Arg Leu Ala Gly Val Thr Ser
195 200

<210> 170
<211> 200
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..600 from SEQ ID NO 169

<400> 170
Met Lys Pro Tyr Phe Cys Arg Val Phe Val Phe Cys Phe Leu Ile Arg
1 5 10 15
Leu Leu Thr Gly Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asp His Arg Met Phe Ser
20 25 30
Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile Ser Cys Lys Tyr Pro Glu Thr Val
35 40 45
Gln Gln Leu Lys Met Arg Leu Phe Arg Glu Arg Glu Val Leu Cys Glu
50 55 60
Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Ala Val Ser Ile Lys Asn Pro
65 70 75 80
Met Leu Cys Leu Tyr His Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu
85 90 95
Asn Asn Pro Asp Ser Ser Gln Gly Ser Tyr Tyr Phe Cys Ser Leu Ser
100 105 110
Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Gln Glu Arg Asn Leu Ser Gly Gly Tyr
115 120 125
Leu His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Leu Trp Leu
130 135 140
Pro Val Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Leu Leu Phe Gly Cys Ile
145 150 155 160
Leu Ile Ile Trp Phe Ser Lys Lys Lys Tyr Gly Ser Ser Val His Asp
165 170 175
Pro Asn Ser Glu Tyr Met Phe Met Ala Ala Val Asn Thr Asn Lys Lys
180 185 190
Ser Arg Leu Ala Gly Val Thr Ser
195 200

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<212> DNA
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Met Ala Arg Pro His Pro Trp Trp Leu Cys Val Leu Gly Thr Leu Val
1 5 10 15

ggc ctg agc gcg acc ccg gcg ccg aaa agc tgc ccg gaa cgc cat tat 96
Gly Leu Ser Ala Thr Pro Ala Pro Lys Ser Cys Pro Glu Arg His Tyr
20 25 30

tgg gcg cag ggc aaa ctg tgc tgc cag atg tgc gaa ccg ggc acc ttt 144
Trp Ala Gln Gly Lys Leu Cys Cys Gln Met Cys Glu Pro Gly Thr Phe
35 40 45

ctg gtg aaa gat tgc gat cag cat cgc aaa gcg gcg cag tgc gat ccg 192
Leu Val Lys Asp Cys Asp Gln His Arg Lys Ala Ala Gln Cys Asp Pro
50 55 60

tgc att ccg ggc gtg agc ttt agc ccg gat cat cat acc cgc ccg cat 240
Cys Ile Pro Gly Val Ser Phe Ser Pro Asp His His Thr Arg Pro His
65 70 75 80

tgc gaa agc tgc cgc cat tgc aac agc ggc ctg ctg gtg cgc aac tgc 288
Cys Glu Ser Cys Arg His Cys Asn Ser Gly Leu Leu Val Arg Asn Cys
85 90 95

acc att acc gcg aac gcg gaa tgc gcg tgc cgc aac ggc tgg cag tgc 336
Thr Ile Thr Ala Asn Ala Glu Cys Ala Cys Arg Asn Gly Trp Gln Cys
100 105 110

cgc gat aaa gaa tgc acc gaa tgc gat ccg ctg ccg aac ccg agc ctg 384
Arg Asp Lys Glu Cys Thr Glu Cys Asp Pro Leu Pro Asn Pro Ser Leu
115 120 125

acc gcg cgc agc agc cag gcg ctg agc ccg cat ccg cag ccg acc cat 432
Thr Ala Arg Ser Ser Gln Ala Leu Ser Pro His Pro Gln Pro Thr His
130 135 140

ctg ccg tat gtg agc gaa atg ctg gaa gcg cgc acc gcg ggc cat atg 480
Leu Pro Tyr Val Ser Glu Met Leu Glu Ala Arg Thr Ala Gly His Met
145 150 155 160

cag acc ctg gcg gat ttt cgc cag ctg ccg gcg cgc acc ctg agc acc 528
Gln Thr Leu Ala Asp Phe Arg Gln Leu Pro Ala Arg Thr Leu Ser Thr
165 170 175

cat tgg ccg ccg cag cgc agc ctg tgc agc agc gat ttt att cgc att 576
His Trp Pro Pro Gln Arg Ser Leu Cys Ser Ser Asp Phe Ile Arg Ile
180 185 190

ctg gtg att ttt agc ggc atg ttt ctg gtg ttt acc ctg gcg ggc gcg 624
Leu Val Ile Phe Ser Gly Met Phe Leu Val Phe Thr Leu Ala Gly Ala
195 200 205

ctg ttt ctg cat cag cgc cgc aaa tat cgc agc aac aaa ggc gaa agc 672
Leu Phe Leu His Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser
210 215 220

ccg gtg gaa ccg gcg gaa ccg tgc cat tat agc tgc ccg cgc gaa gaa 720
Pro Val Glu Pro Ala Glu Pro Cys His Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu
225 230 235 240

gaa ggc agc acc att ccg att cag gaa gat tat cgc aaa ccg gaa ccg 768
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245 250 255

gcg tgc agc ccg 780
Ala Cys Ser Pro
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..780 from SEQ ID NO 171

<400> 172
Met Ala Arg Pro His Pro Trp Trp Leu Cys Val Leu Gly Thr Leu Val
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Gly Leu Ser Ala Thr Pro Ala Pro Lys Ser Cys Pro Glu Arg His Tyr
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Trp Ala Gln Gly Lys Leu Cys Cys Gln Met Cys Glu Pro Gly Thr Phe
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Leu Val Lys Asp Cys Asp Gln His Arg Lys Ala Ala Gln Cys Asp Pro
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Cys Ile Pro Gly Val Ser Phe Ser Pro Asp His His Thr Arg Pro His
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Cys Glu Ser Cys Arg His Cys Asn Ser Gly Leu Leu Val Arg Asn Cys
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Thr Ile Thr Ala Asn Ala Glu Cys Ala Cys Arg Asn Gly Trp Gln Cys
100 105 110
Arg Asp Lys Glu Cys Thr Glu Cys Asp Pro Leu Pro Asn Pro Ser Leu
115 120 125
Thr Ala Arg Ser Ser Gln Ala Leu Ser Pro His Pro Gln Pro Thr His
130 135 140
Leu Pro Tyr Val Ser Glu Met Leu Glu Ala Arg Thr Ala Gly His Met
145 150 155 160
Gln Thr Leu Ala Asp Phe Arg Gln Leu Pro Ala Arg Thr Leu Ser Thr
165 170 175
His Trp Pro Pro Gln Arg Ser Leu Cys Ser Ser Asp Phe Ile Arg Ile
180 185 190
Leu Val Ile Phe Ser Gly Met Phe Leu Val Phe Thr Leu Ala Gly Ala
195 200 205
Leu Phe Leu His Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser
210 215 220
Pro Val Glu Pro Ala Glu Pro Cys His Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu
225 230 235 240
Glu Gly Ser Thr Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro
245 250 255
Ala Cys Ser Pro
260

<210> 173
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> murine CD27

<220>
<221> CDS
<222> 1..750
<223> /transl_table=1

<400> 173
atg gcg tgg ccg ccg ccg tat tgg ctg tgc atg ctg ggc acc ctg gtg 48
Met Ala Trp Pro Pro Pro Tyr Trp Leu Cys Met Leu Gly Thr Leu Val
1 5 10 15

ggc ctg agc gcg acc ctg gcg ccg aac agc tgc ccg gat aaa cat tat 96
Gly Leu Ser Ala Thr Leu Ala Pro Asn Ser Cys Pro Asp Lys His Tyr
20 25 30

tgg acc ggc ggc ggc ctg tgc tgc cgc atg tgc gaa ccg ggc acc ttt 144
Trp Thr Gly Gly Gly Leu Cys Cys Arg Met Cys Glu Pro Gly Thr Phe
35 40 45

ttt gtg aaa gat tgc gaa cag gat cgc acc gcg gcg cag tgc gat ccg 192
Phe Val Lys Asp Cys Glu Gln Asp Arg Thr Ala Ala Gln Cys Asp Pro
50 55 60

tgc att ccg ggc acc agc ttt agc ccg gat tat cat acc cgc ccg cat 240
Cys Ile Pro Gly Thr Ser Phe Ser Pro Asp Tyr His Thr Arg Pro His
65 70 75 80

tgc gaa agc tgc cgc cat tgc aac agc ggc ttt ctg att cgc aac tgc 288
Cys Glu Ser Cys Arg His Cys Asn Ser Gly Phe Leu Ile Arg Asn Cys
85 90 95

acc gtg acc gcg aac gcg gaa tgc agc tgc agc aaa aac tgg cag tgc 336
Thr Val Thr Ala Asn Ala Glu Cys Ser Cys Ser Lys Asn Trp Gln Cys
100 105 110

cgc gat cag gaa tgc acc gaa tgc gat ccg ccg ctg aac ccg gcg ctg 384
Arg Asp Gln Glu Cys Thr Glu Cys Asp Pro Pro Leu Asn Pro Ala Leu
115 120 125

acc cgc cag ccg agc gaa acc ccg agc ccg cag ccg ccg ccg acc cat 432
Thr Arg Gln Pro Ser Glu Thr Pro Ser Pro Gln Pro Pro Pro Thr His
130 135 140

ctg ccg cat ggc acc gaa aaa ccg agc tgg ccg ctg cat cgc cag ctg 480
Leu Pro His Gly Thr Glu Lys Pro Ser Trp Pro Leu His Arg Gln Leu
145 150 155 160

ccg aac agc acc gtg tat agc cag cgc agc agc cat cgc ccg ctg tgc 528
Pro Asn Ser Thr Val Tyr Ser Gln Arg Ser Ser His Arg Pro Leu Cys
165 170 175

agc agc gat tgc att cgc att ttt gtg acc ttt agc agc atg ttt ctg 576
Ser Ser Asp Cys Ile Arg Ile Phe Val Thr Phe Ser Ser Met Phe Leu
180 185 190

att ttt gtg ctg ggc gcg att ctg ttt ttt cat cag cgc cgc aac cat 624
Ile Phe Val Leu Gly Ala Ile Leu Phe Phe His Gln Arg Arg Asn His
195 200 205

ggc ccg aac gaa gat cgc cag gcg gtg ccg gaa gaa ccg tgc ccg tat 672
Gly Pro Asn Glu Asp Arg Gln Ala Val Pro Glu Glu Pro Cys Pro Tyr
210 215 220

agc tgc ccg cgc gaa gaa gaa ggc agc gcg att ccg att cag gaa gat 720
Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Ala Ile Pro Ile Gln Glu Asp
225 230 235 240

tat cgc aaa ccg gaa ccg gcg ttt tat ccg 750
Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Phe Tyr Pro
245 250

<210> 174
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..750 from SEQ ID NO 173

<400> 174
Met Ala Trp Pro Pro Pro Tyr Trp Leu Cys Met Leu Gly Thr Leu Val
1 5 10 15
Gly Leu Ser Ala Thr Leu Ala Pro Asn Ser Cys Pro Asp Lys His Tyr
20 25 30
Trp Thr Gly Gly Gly Leu Cys Cys Arg Met Cys Glu Pro Gly Thr Phe
35 40 45
Phe Val Lys Asp Cys Glu Gln Asp Arg Thr Ala Ala Gln Cys Asp Pro
50 55 60
Cys Ile Pro Gly Thr Ser Phe Ser Pro Asp Tyr His Thr Arg Pro His
65 70 75 80
Cys Glu Ser Cys Arg His Cys Asn Ser Gly Phe Leu Ile Arg Asn Cys
85 90 95
Thr Val Thr Ala Asn Ala Glu Cys Ser Cys Ser Lys Asn Trp Gln Cys
100 105 110
Arg Asp Gln Glu Cys Thr Glu Cys Asp Pro Pro Leu Asn Pro Ala Leu
115 120 125
Thr Arg Gln Pro Ser Glu Thr Pro Ser Pro Gln Pro Pro Pro Thr His
130 135 140
Leu Pro His Gly Thr Glu Lys Pro Ser Trp Pro Leu His Arg Gln Leu
145 150 155 160
Pro Asn Ser Thr Val Tyr Ser Gln Arg Ser Ser His Arg Pro Leu Cys
165 170 175
Ser Ser Asp Cys Ile Arg Ile Phe Val Thr Phe Ser Ser Met Phe Leu
180 185 190
Ile Phe Val Leu Gly Ala Ile Leu Phe Phe His Gln Arg Arg Asn His
195 200 205
Gly Pro Asn Glu Asp Arg Gln Ala Val Pro Glu Glu Pro Cys Pro Tyr
210 215 220
Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Ala Ile Pro Ile Gln Glu Asp
225 230 235 240
Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Phe Tyr Pro
245 250

<210> 175
<211> 279
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> human DAP10

<220>
<221> CDS
<222> 1..279
<223> /transl_table=1

<400> 175
atg att cat ctg ggc cat att ctg ttt ctg ctg ctg ctg ccg gtg gcg 48
Met Ile His Leu Gly His Ile Leu Phe Leu Leu Leu Leu Pro Val Ala
1 5 10 15

gcg gcg cag acc acc ccg ggc gaa cgc agc agc ctg ccg gcg ttt tat 96
Ala Ala Gln Thr Thr Pro Gly Glu Arg Ser Ser Leu Pro Ala Phe Tyr
20 25 30

ccg ggc acc agc ggc agc tgc agc ggc tgc ggc agc ctg agc ctg ccg 144
Pro Gly Thr Ser Gly Ser Cys Ser Gly Cys Gly Ser Leu Ser Leu Pro
35 40 45

ctg ctg gcg ggc ctg gtg gcg gcg gat gcg gtg gcg agc ctg ctg att 192
Leu Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Asp Ala Val Ala Ser Leu Leu Ile
50 55 60

gtg ggc gcg gtg ttt ctg tgc gcg cgc ccg cgc cgc agc ccg gcg cag 240
Val Gly Ala Val Phe Leu Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln
65 70 75 80

gaa gat ggc aaa gtg tat att aac atg ccg ggc cgc ggc 279
Glu Asp Gly Lys Val Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly
85 90

<210> 176
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..279 from SEQ ID NO 175

<400> 176
Met Ile His Leu Gly His Ile Leu Phe Leu Leu Leu Leu Pro Val Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gln Thr Thr Pro Gly Glu Arg Ser Ser Leu Pro Ala Phe Tyr
20 25 30
Pro Gly Thr Ser Gly Ser Cys Ser Gly Cys Gly Ser Leu Ser Leu Pro
35 40 45
Leu Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Asp Ala Val Ala Ser Leu Leu Ile
50 55 60
Val Gly Ala Val Phe Leu Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln
65 70 75 80
Glu Asp Gly Lys Val Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly
85 90

<210> 177
<211> 237
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> murine DAP10

<220>
<221> CDS
<222> 1..237
<223> /transl_table=1

<400> 177
atg gat ccg ccg ggc tat ctg ctg ttt ctg ctg ctg ctg ccg gtg gcg 48
Met Asp Pro Pro Gly Tyr Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Pro Val Ala
1 5 10 15

gcg agc cag acc agc gcg ggc agc tgc agc ggc tgc ggc acc ctg agc 96
Ala Ser Gln Thr Ser Ala Gly Ser Cys Ser Gly Cys Gly Thr Leu Ser
20 25 30

ctg ccg ctg ctg gcg ggc ctg gtg gcg gcg gat gcg gtg atg agc ctg 144
Leu Pro Leu Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Asp Ala Val Met Ser Leu
35 40 45

ctg att gtg ggc gtg gtg ttt gtg tgc atg cgc ccg cat ggc cgc ccg 192
Leu Ile Val Gly Val Val Phe Val Cys Met Arg Pro His Gly Arg Pro
50 55 60

gcg cag gaa gat ggc cgc gtg tat att aac atg ccg ggc cgc ggc 237
Ala Gln Glu Asp Gly Arg Val Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly
65 70 75

<210> 178
<211> 79
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..237 from SEQ ID NO 177

<400> 178
Met Asp Pro Pro Gly Tyr Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Pro Val Ala
1 5 10 15
Ala Ser Gln Thr Ser Ala Gly Ser Cys Ser Gly Cys Gly Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Pro Leu Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Asp Ala Val Met Ser Leu
35 40 45
Leu Ile Val Gly Val Val Phe Val Cys Met Arg Pro His Gly Arg Pro
50 55 60
Ala Gln Glu Asp Gly Arg Val Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly
65 70 75

<210> 179
<211> 492
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD3z mouse

<220>
<221> CDS
<222> 1..492
<223> /transl_table=1

<400> 179
atg aaa tgg aaa gtg agc gtg ctg gcg tgc att ctg cat gtg cgc ttt 48
Met Lys Trp Lys Val Ser Val Leu Ala Cys Ile Leu His Val Arg Phe
1 5 10 15

ccg ggc gcg gaa gcg cag agc ttt ggc ctg ctg gat ccg aaa ctg tgc 96
Pro Gly Ala Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30

tat ctg ctg gat ggc att ctg ttt att tat ggc gtg att att acc gcg 144
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Ile Thr Ala
35 40 45

ctg tat ctg cgc gcg aaa ttt agc cgc agc gcg gaa acc gcg gcg aac 192
Leu Tyr Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn
50 55 60

ctg cag gat ccg aac cag ctg tat aac gaa ctg aac ctg ggc cgc cgc 240
Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80

gaa gaa tat gat gtg ctg gaa aaa aaa cgc gcg cgc gat ccg gaa atg 288
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95

ggc ggc aaa cag cag cgc cgc cgc aac ccg cag gaa ggc gtg tat aac 336
Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn
100 105 110

gcg ctg cag aaa gat aaa atg gcg gaa gcg tat agc gaa att ggc acc 384
Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr
115 120 125

aaa ggc gaa cgc cgc cgc ggc aaa ggc cat gat ggc ctg tat cag ggc 432
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140

ctg agc acc gcg acc aaa gat acc tat gat gcg ctg cat atg cag acc 480
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr
145 150 155 160

ctg gcg ccg cgc 492
Leu Ala Pro Arg


<210> 180
<211> 164
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..492 from SEQ ID NO 179

<400> 180
Met Lys Trp Lys Val Ser Val Leu Ala Cys Ile Leu His Val Arg Phe
1 5 10 15
Pro Gly Ala Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Ile Thr Ala
35 40 45
Leu Tyr Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn
50 55 60
Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95
Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn
100 105 110
Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr
115 120 125
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr
145 150 155 160
Leu Ala Pro Arg


<210> 181
<211> 696
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> NKG2d mouse

<220>
<221> CDS
<222> 1..696
<223> /transl_table=1

<400> 181
atg gcg ctg att cgc gat cgc aaa agc cat cat agc gaa atg agc aaa 48
Met Ala Leu Ile Arg Asp Arg Lys Ser His His Ser Glu Met Ser Lys
1 5 10 15

tgc cat aac tat gat ctg aaa ccg gcg aaa tgg gat acc agc cag gaa 96
Cys His Asn Tyr Asp Leu Lys Pro Ala Lys Trp Asp Thr Ser Gln Glu
20 25 30

cag cag aaa cag cgc ctg gcg ctg acc acc agc cag ccg ggc gaa aac 144
Gln Gln Lys Gln Arg Leu Ala Leu Thr Thr Ser Gln Pro Gly Glu Asn
35 40 45

ggc att att cgc ggc cgc tat ccg att gaa aaa ctg aaa att agc ccg 192
Gly Ile Ile Arg Gly Arg Tyr Pro Ile Glu Lys Leu Lys Ile Ser Pro
50 55 60

atg ttt gtg gtg cgc gtg ctg gcg att gcg ctg gcg att cgc ttt acc 240
Met Phe Val Val Arg Val Leu Ala Ile Ala Leu Ala Ile Arg Phe Thr
65 70 75 80

ctg aac acc ctg atg tgg ctg gcg att ttt aaa gaa acc ttt cag ccg 288
Leu Asn Thr Leu Met Trp Leu Ala Ile Phe Lys Glu Thr Phe Gln Pro
85 90 95

gtg ctg tgc aac aaa gaa gtg ccg gtg agc agc cgc gaa ggc tat tgc 336
Val Leu Cys Asn Lys Glu Val Pro Val Ser Ser Arg Glu Gly Tyr Cys
100 105 110

ggc ccg tgc ccg aac aac tgg att tgc cat cgc aac aac tgc tat cag 384
Gly Pro Cys Pro Asn Asn Trp Ile Cys His Arg Asn Asn Cys Tyr Gln
115 120 125

ttt ttt aac gaa gaa aaa acc tgg aac cag agc cag gcg agc tgc ctg 432
Phe Phe Asn Glu Glu Lys Thr Trp Asn Gln Ser Gln Ala Ser Cys Leu
130 135 140

agc cag aac agc agc ctg ctg aaa att tat agc aaa gaa gaa cag gat 480
Ser Gln Asn Ser Ser Leu Leu Lys Ile Tyr Ser Lys Glu Glu Gln Asp
145 150 155 160

ttt ctg aaa ctg gtg aaa agc tat cat tgg atg ggc ctg gtg cag att 528
Phe Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val Gln Ile
165 170 175

ccg gcg aac ggc agc tgg cag tgg gaa gat ggc agc agc ctg agc tat 576
Pro Ala Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ser Leu Ser Tyr
180 185 190

aac cag ctg acc ctg gtg gaa att ccg aaa ggc agc tgc gcg gtg tat 624
Asn Gln Leu Thr Leu Val Glu Ile Pro Lys Gly Ser Cys Ala Val Tyr
195 200 205

ggc agc agc ttt aaa gcg tat acc gaa gat tgc gcg aac ctg aac acc 672
Gly Ser Ser Phe Lys Ala Tyr Thr Glu Asp Cys Ala Asn Leu Asn Thr
210 215 220

tat att tgc atg aaa cgc gcg gtg 696
Tyr Ile Cys Met Lys Arg Ala Val
225 230

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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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Met Ala Leu Ile Arg Asp Arg Lys Ser His His Ser Glu Met Ser Lys
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Cys His Asn Tyr Asp Leu Lys Pro Ala Lys Trp Asp Thr Ser Gln Glu
20 25 30
Gln Gln Lys Gln Arg Leu Ala Leu Thr Thr Ser Gln Pro Gly Glu Asn
35 40 45
Gly Ile Ile Arg Gly Arg Tyr Pro Ile Glu Lys Leu Lys Ile Ser Pro
50 55 60
Met Phe Val Val Arg Val Leu Ala Ile Ala Leu Ala Ile Arg Phe Thr
65 70 75 80
Leu Asn Thr Leu Met Trp Leu Ala Ile Phe Lys Glu Thr Phe Gln Pro
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Val Leu Cys Asn Lys Glu Val Pro Val Ser Ser Arg Glu Gly Tyr Cys
100 105 110
Gly Pro Cys Pro Asn Asn Trp Ile Cys His Arg Asn Asn Cys Tyr Gln
115 120 125
Phe Phe Asn Glu Glu Lys Thr Trp Asn Gln Ser Gln Ala Ser Cys Leu
130 135 140
Ser Gln Asn Ser Ser Leu Leu Lys Ile Tyr Ser Lys Glu Glu Gln Asp
145 150 155 160
Phe Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val Gln Ile
165 170 175
Pro Ala Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ser Leu Ser Tyr
180 185 190
Asn Gln Leu Thr Leu Val Glu Ile Pro Lys Gly Ser Cys Ala Val Tyr
195 200 205
Gly Ser Ser Phe Lys Ala Tyr Thr Glu Asp Cys Ala Asn Leu Asn Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Met Lys Arg Ala Val
225 230

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Met Lys Trp Lys Val Ser Val Leu Ala Cys Ile Leu His Val Arg Phe
1 5 10 15

ccg ggc gcg gaa gcg cag agc ttt ggc ctg ctg gat ccg aaa ctg tgc 96
Pro Gly Ala Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30

tat ctg ctg gat ggc att ctg ttt att tat ggc gtg att att acc gcg 144
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Ile Thr Ala
35 40 45

ctg tat ctg cgc gcg aaa ttt agc cgc agc gcg gaa acc gcg gcg aac 192
Leu Tyr Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn
50 55 60

ctg cag gat ccg aac cag ctg tat aac gaa ctg aac ctg ggc cgc cgc 240
Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80

gaa gaa tat gat gtg ctg gaa aaa aaa cgc gcg cgc gat ccg gaa atg 288
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95

ggc ggc aaa cag cag cgc cgc cgc aac ccg cag gaa ggc gtg tat aac 336
Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn
100 105 110

gcg ctg cag aaa gat aaa atg gcg gaa gcg tat agc gaa att ggc acc 384
Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr
115 120 125

aaa ggc gaa cgc cgc cgc ggc aaa ggc cat gat ggc ctg tat cag ggc 432
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140

ctg agc acc gcg acc aaa gat acc tat gat gcg ctg cat atg cag acc 480
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr
145 150 155 160

ctg gcg ccg cgc 492
Leu Ala Pro Arg


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<213> Artificial Sequence

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Pro Gly Ala Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
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Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Ile Thr Ala
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Leu Tyr Leu Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn
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Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
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Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met
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Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn
100 105 110
Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr
115 120 125
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr
145 150 155 160
Leu Ala Pro Arg


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<213> Artificial Sequence

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Met Trp Gln Leu Leu Leu Pro Thr Ala Leu Leu Leu Leu Val Ser Ala
1 5 10 15

ggc atg cgc acc gaa gat ctg ccg aaa gcg gtg gtg ttt ctg gaa ccg 96
Gly Met Arg Thr Glu Asp Leu Pro Lys Ala Val Val Phe Leu Glu Pro
20 25 30

cag tgg tat cgc gtg ctg gaa aaa gat agc gtg acc ctg aaa tgc cag 144
Gln Trp Tyr Arg Val Leu Glu Lys Asp Ser Val Thr Leu Lys Cys Gln
35 40 45

ggc gcg tat agc ccg gaa gat aac agc acc cag tgg ttt cat aac gaa 192
Gly Ala Tyr Ser Pro Glu Asp Asn Ser Thr Gln Trp Phe His Asn Glu
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agc ctg att agc agc cag gcg agc agc tat ttt att gat gcg gcg acc 240
Ser Leu Ile Ser Ser Gln Ala Ser Ser Tyr Phe Ile Asp Ala Ala Thr
65 70 75 80

gtg gat gat agc ggc gaa tat cgc tgc cag acc aac ctg agc acc ctg 288
Val Asp Asp Ser Gly Glu Tyr Arg Cys Gln Thr Asn Leu Ser Thr Leu
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agc gat ccg gtg cag ctg gaa gtg cat att ggc tgg ctg ctg ctg cag 336
Ser Asp Pro Val Gln Leu Glu Val His Ile Gly Trp Leu Leu Leu Gln
100 105 110

gcg ccg cgc tgg gtg ttt aaa gaa gaa gat ccg att cat ctg cgc tgc 384
Ala Pro Arg Trp Val Phe Lys Glu Glu Asp Pro Ile His Leu Arg Cys
115 120 125

cat agc tgg aaa aac acc gcg ctg cat aaa gtg acc tat ctg cag aac 432
His Ser Trp Lys Asn Thr Ala Leu His Lys Val Thr Tyr Leu Gln Asn
130 135 140

ggc aaa ggc cgc aaa tat ttt cat cat aac agc gat ttt tat att ccg 480
Gly Lys Gly Arg Lys Tyr Phe His His Asn Ser Asp Phe Tyr Ile Pro
145 150 155 160

aaa gcg acc ctg aaa gat agc ggc agc tat ttt tgc cgc ggc ctg ttt 528
Lys Ala Thr Leu Lys Asp Ser Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Phe
165 170 175

ggc agc aaa aac gtg agc agc gaa acc gtg aac att acc att acc cag 576
Gly Ser Lys Asn Val Ser Ser Glu Thr Val Asn Ile Thr Ile Thr Gln
180 185 190

ggc ctg gcg gtg agc acc att agc agc ttt ttt ccg ccg ggc tat cag 624
Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln
195 200 205

gtg agc ttt tgc ctg gtg atg gtg ctg ctg ttt gcg gtg gat acc ggc 672
Val Ser Phe Cys Leu Val Met Val Leu Leu Phe Ala Val Asp Thr Gly
210 215 220

ctg tat ttt agc gtg aaa acc aac att cgc agc agc acc cgc gat tgg 720
Leu Tyr Phe Ser Val Lys Thr Asn Ile Arg Ser Ser Thr Arg Asp Trp
225 230 235 240

aaa gat cat aaa ttt aaa tgg cgc aaa gat ccg cag gat aaa 762
Lys Asp His Lys Phe Lys Trp Arg Lys Asp Pro Gln Asp Lys
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<213> Artificial Sequence

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<223> [CDS]:1..762 from SEQ ID NO 185

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Gln Trp Tyr Arg Val Leu Glu Lys Asp Ser Val Thr Leu Lys Cys Gln
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Gly Lys Gly Arg Lys Tyr Phe His His Asn Ser Asp Phe Tyr Ile Pro
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Lys Ala Thr Leu Lys Asp Ser Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Phe
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Gly Ser Lys Asn Val Ser Ser Glu Thr Val Asn Ile Thr Ile Thr Gln
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Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln
195 200 205
Val Ser Phe Cys Leu Val Met Val Leu Leu Phe Ala Val Asp Thr Gly
210 215 220
Leu Tyr Phe Ser Val Lys Thr Asn Ile Arg Ser Ser Thr Arg Asp Trp
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gaa ttt cat aac tat aac ctg gat ctg aaa aaa agc gat ttt agc acc 96
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20 25 30

cgc tgg cag aaa cag cgc tgc ccg gtg gtg aaa agc aaa tgc cgc gaa 144
Arg Trp Gln Lys Gln Arg Cys Pro Val Val Lys Ser Lys Cys Arg Glu
35 40 45

aac gcg agc ccg ttt ttt ttt tgc tgc ttt att gcg gtg gcg atg ggc 192
Asn Ala Ser Pro Phe Phe Phe Cys Cys Phe Ile Ala Val Ala Met Gly
50 55 60

att cgc ttt att att atg gtg gcg att tgg agc gcg gtg ttt ctg aac 240
Ile Arg Phe Ile Ile Met Val Ala Ile Trp Ser Ala Val Phe Leu Asn
65 70 75 80

agc ctg ttt aac cag gaa gtg cag att ccg ctg acc gaa agc tat tgc 288
Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys
85 90 95

ggc ccg tgc ccg aaa aac tgg att tgc tat aaa aac aac tgc tat cag 336
Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln
100 105 110

ttt ttt gat gaa agc aaa aac tgg tat gaa agc cag gcg agc tgc atg 384
Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met
115 120 125

agc cag aac gcg agc ctg ctg aaa gtg tat agc aaa gaa gat cag gat 432
Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp
130 135 140

ctg ctg aaa ctg gtg aaa agc tat cat tgg atg ggc ctg gtg cat att 480
Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile
145 150 155 160

ccg acc aac ggc agc tgg cag tgg gaa gat ggc agc att ctg agc ccg 528
Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro
165 170 175

aac ctg ctg acc att att gaa atg cag aaa ggc gat tgc gcg ctg tat 576
Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr
180 185 190

gcg agc agc ttt aaa ggc tat att gaa aac tgc agc acc ccg aac acc 624
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195 200 205

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<223> [CDS]:1..648 from SEQ ID NO 187

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Arg Trp Gln Lys Gln Arg Cys Pro Val Val Lys Ser Lys Cys Arg Glu
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Asn Ala Ser Pro Phe Phe Phe Cys Cys Phe Ile Ala Val Ala Met Gly
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Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp
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<223> human Flt3

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Met Pro Ala Leu Ala Arg Asp Gly Gly Gln Leu Pro Leu Leu Val Val
1 5 10 15

ttt agc gcg atg att ttt ggc acc att acc aac cag gat ctg ccg gtg 96
Phe Ser Ala Met Ile Phe Gly Thr Ile Thr Asn Gln Asp Leu Pro Val
20 25 30

att aaa tgc gtg ctg att aac cat aaa aac aac gat agc agc gtg ggc 144
Ile Lys Cys Val Leu Ile Asn His Lys Asn Asn Asp Ser Ser Val Gly
35 40 45

aaa agc agc agc tat ccg atg gtg agc gaa agc ccg gaa gat ctg ggc 192
Lys Ser Ser Ser Tyr Pro Met Val Ser Glu Ser Pro Glu Asp Leu Gly
50 55 60

tgc gcg ctg cgc ccg cag agc agc ggc acc gtg tat gaa gcg gcg gcg 240
Cys Ala Leu Arg Pro Gln Ser Ser Gly Thr Val Tyr Glu Ala Ala Ala
65 70 75 80

gtg gaa gtg gat gtg agc gcg agc att acc ctg cag gtg ctg gtg gat 288
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85 90 95

gcg ccg ggc aac att agc tgc ctg tgg gtg ttt aaa cat agc agc ctg 336
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100 105 110

aac tgc cag ccg cat ttt gat ctg cag aac cgc ggc gtg gtg agc atg 384
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115 120 125

gtg att ctg aaa atg acc gaa acc cag gcg ggc gaa tat ctg ctg ttt 432
Val Ile Leu Lys Met Thr Glu Thr Gln Ala Gly Glu Tyr Leu Leu Phe
130 135 140

att cag agc gaa gcg acc aac tat acc att ctg ttt acc gtg agc att 480
Ile Gln Ser Glu Ala Thr Asn Tyr Thr Ile Leu Phe Thr Val Ser Ile
145 150 155 160

cgc aac acc ctg ctg tat acc ctg cgc cgc ccg tat ttt cgc aaa atg 528
Arg Asn Thr Leu Leu Tyr Thr Leu Arg Arg Pro Tyr Phe Arg Lys Met
165 170 175

gaa aac cag gat gcg ctg gtg tgc att agc gaa agc gtg ccg gaa ccg 576
Glu Asn Gln Asp Ala Leu Val Cys Ile Ser Glu Ser Val Pro Glu Pro
180 185 190

att gtg gaa tgg gtg ctg tgc gat agc cag ggc gaa agc tgc aaa gaa 624
Ile Val Glu Trp Val Leu Cys Asp Ser Gln Gly Glu Ser Cys Lys Glu
195 200 205

gaa agc ccg gcg gtg gtg aaa aaa gaa gaa aaa gtg ctg cat gaa ctg 672
Glu Ser Pro Ala Val Val Lys Lys Glu Glu Lys Val Leu His Glu Leu
210 215 220

ttt ggc acc gat att cgc tgc tgc gcg cgc aac gaa ctg ggc cgc gaa 720
Phe Gly Thr Asp Ile Arg Cys Cys Ala Arg Asn Glu Leu Gly Arg Glu
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tgc acc cgc ctg ttt acc att gat ctg aac cag acc ccg cag acc acc 768
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ctg ccg cag ctg ttt ctg aaa gtg ggc gaa ccg ctg tgg att cgc tgc 816
Leu Pro Gln Leu Phe Leu Lys Val Gly Glu Pro Leu Trp Ile Arg Cys
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aaa gcg gtg cat gtg aac cat ggc ttt ggc ctg acc tgg gaa ctg gaa 864
Lys Ala Val His Val Asn His Gly Phe Gly Leu Thr Trp Glu Leu Glu
275 280 285

aac aaa gcg ctg gaa gaa ggc aac tat ttt gaa atg agc acc tat agc 912
Asn Lys Ala Leu Glu Glu Gly Asn Tyr Phe Glu Met Ser Thr Tyr Ser
290 295 300

acc aac cgc acc atg att cgc att ctg ttt gcg ttt gtg agc agc gtg 960
Thr Asn Arg Thr Met Ile Arg Ile Leu Phe Ala Phe Val Ser Ser Val
305 310 315 320

gcg cgc aac gat acc ggc tat tat acc tgc agc agc agc aaa cat ccg 1008
Ala Arg Asn Asp Thr Gly Tyr Tyr Thr Cys Ser Ser Ser Lys His Pro
325 330 335

agc cag agc gcg ctg gtg acc att gtg gaa aaa ggc ttt att aac gcg 1056
Ser Gln Ser Ala Leu Val Thr Ile Val Glu Lys Gly Phe Ile Asn Ala
340 345 350

acc aac agc agc gaa gat tat gaa att gat cag tat gaa gaa ttt tgc 1104
Thr Asn Ser Ser Glu Asp Tyr Glu Ile Asp Gln Tyr Glu Glu Phe Cys
355 360 365

ttt agc gtg cgc ttt aaa gcg tat ccg cag att cgc tgc acc tgg acc 1152
Phe Ser Val Arg Phe Lys Ala Tyr Pro Gln Ile Arg Cys Thr Trp Thr
370 375 380

ttt agc cgc aaa agc ttt ccg tgc gaa cag aaa ggc ctg gat aac ggc 1200
Phe Ser Arg Lys Ser Phe Pro Cys Glu Gln Lys Gly Leu Asp Asn Gly
385 390 395 400

tat agc att agc aaa ttt tgc aac cat aaa cat cag ccg ggc gaa tat 1248
Tyr Ser Ile Ser Lys Phe Cys Asn His Lys His Gln Pro Gly Glu Tyr
405 410 415

att ttt cat gcg gaa aac gat gat gcg cag ttt acc aaa atg ttt acc 1296
Ile Phe His Ala Glu Asn Asp Asp Ala Gln Phe Thr Lys Met Phe Thr
420 425 430

ctg aac att cgc cgc aaa ccg cag gtg ctg gcg gaa gcg agc gcg agc 1344
Leu Asn Ile Arg Arg Lys Pro Gln Val Leu Ala Glu Ala Ser Ala Ser
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cag gcg agc tgc ttt agc gat ggc tat ccg ctg ccg agc tgg acc tgg 1392
Gln Ala Ser Cys Phe Ser Asp Gly Tyr Pro Leu Pro Ser Trp Thr Trp
450 455 460

aaa aaa tgc agc gat aaa agc ccg aac tgc acc gaa gaa att acc gaa 1440
Lys Lys Cys Ser Asp Lys Ser Pro Asn Cys Thr Glu Glu Ile Thr Glu
465 470 475 480

ggc gtg tgg aac cgc aaa gcg aac cgc aaa gtg ttt ggc cag tgg gtg 1488
Gly Val Trp Asn Arg Lys Ala Asn Arg Lys Val Phe Gly Gln Trp Val
485 490 495

agc agc agc acc ctg aac atg agc gaa gcg att aaa ggc ttt ctg gtg 1536
Ser Ser Ser Thr Leu Asn Met Ser Glu Ala Ile Lys Gly Phe Leu Val
500 505 510

aaa tgc tgc gcg tat aac agc ctg ggc acc agc tgc gaa acc att ctg 1584
Lys Cys Cys Ala Tyr Asn Ser Leu Gly Thr Ser Cys Glu Thr Ile Leu
515 520 525

ctg aac agc ccg ggc ccg ttt ccg ttt att cag gat aac att agc ttt 1632
Leu Asn Ser Pro Gly Pro Phe Pro Phe Ile Gln Asp Asn Ile Ser Phe
530 535 540

tat gcg acc att ggc gtg tgc ctg ctg ttt att gtg gtg ctg acc ctg 1680
Tyr Ala Thr Ile Gly Val Cys Leu Leu Phe Ile Val Val Leu Thr Leu
545 550 555 560

ctg att tgc cat aaa tat aaa aaa cag ttt cgc tat gaa agc cag ctg 1728
Leu Ile Cys His Lys Tyr Lys Lys Gln Phe Arg Tyr Glu Ser Gln Leu
565 570 575

cag atg gtg cag gtg acc ggc agc agc gat aac gaa tat ttt tat gtg 1776
Gln Met Val Gln Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Glu Tyr Phe Tyr Val
580 585 590

gat ttt cgc gaa tat gaa tat gat ctg aaa tgg gaa ttt ccg cgc gaa 1824
Asp Phe Arg Glu Tyr Glu Tyr Asp Leu Lys Trp Glu Phe Pro Arg Glu
595 600 605

aac ctg gaa ttt ggc aaa gtg ctg ggc agc ggc gcg ttt ggc aaa gtg 1872
Asn Leu Glu Phe Gly Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Lys Val
610 615 620

atg aac gcg acc gcg tat ggc att agc aaa acc ggc gtg agc att cag 1920
Met Asn Ala Thr Ala Tyr Gly Ile Ser Lys Thr Gly Val Ser Ile Gln
625 630 635 640

gtg gcg gtg aaa atg ctg aaa gaa aaa gcg gat agc agc gaa cgc gaa 1968
Val Ala Val Lys Met Leu Lys Glu Lys Ala Asp Ser Ser Glu Arg Glu
645 650 655

gcg ctg atg agc gaa ctg aaa atg atg acc cag ctg ggc agc cat gaa 2016
Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Met Met Thr Gln Leu Gly Ser His Glu
660 665 670

aac att gtg aac ctg ctg ggc gcg tgc acc ctg agc ggc ccg att tat 2064
Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Leu Ser Gly Pro Ile Tyr
675 680 685

ctg att ttt gaa tat tgc tgc tat ggc gat ctg ctg aac tat ctg cgc 2112
Leu Ile Phe Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Tyr Leu Arg
690 695 700

agc aaa cgc gaa aaa ttt cat cgc acc tgg acc gaa att ttt aaa gaa 2160
Ser Lys Arg Glu Lys Phe His Arg Thr Trp Thr Glu Ile Phe Lys Glu
705 710 715 720

cat aac ttt agc ttt tat ccg acc ttt cag agc cat ccg aac agc agc 2208
His Asn Phe Ser Phe Tyr Pro Thr Phe Gln Ser His Pro Asn Ser Ser
725 730 735

atg ccg ggc agc cgc gaa gtg cag att cat ccg gat agc gat cag att 2256
Met Pro Gly Ser Arg Glu Val Gln Ile His Pro Asp Ser Asp Gln Ile
740 745 750

agc ggc ctg cat ggc aac agc ttt cat agc gaa gat gaa att gaa tat 2304
Ser Gly Leu His Gly Asn Ser Phe His Ser Glu Asp Glu Ile Glu Tyr
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gaa aac cag aaa cgc ctg gaa gaa gaa gaa gat ctg aac gtg ctg acc 2352
Glu Asn Gln Lys Arg Leu Glu Glu Glu Glu Asp Leu Asn Val Leu Thr
770 775 780

ttt gaa gat ctg ctg tgc ttt gcg tat cag gtg gcg aaa ggc atg gaa 2400
Phe Glu Asp Leu Leu Cys Phe Ala Tyr Gln Val Ala Lys Gly Met Glu
785 790 795 800

ttt ctg gaa ttt aaa agc tgc gtg cat cgc gat ctg gcg gcg cgc aac 2448
Phe Leu Glu Phe Lys Ser Cys Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn
805 810 815

gtg ctg gtg acc cat ggc aaa gtg gtg aaa att tgc gat ttt ggc ctg 2496
Val Leu Val Thr His Gly Lys Val Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu
820 825 830

gcg cgc gat att atg agc gat agc aac tat gtg gtg cgc ggc aac gcg 2544
Ala Arg Asp Ile Met Ser Asp Ser Asn Tyr Val Val Arg Gly Asn Ala
835 840 845

cgc ctg ccg gtg aaa tgg atg gcg ccg gaa agc ctg ttt gaa ggc att 2592
Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Leu Phe Glu Gly Ile
850 855 860

tat acc att aaa agc gat gtg tgg agc tat ggc att ctg ctg tgg gaa 2640
Tyr Thr Ile Lys Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu
865 870 875 880

att ttt agc ctg ggc gtg aac ccg tat ccg ggc att ccg gtg gat gcg 2688
Ile Phe Ser Leu Gly Val Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Asp Ala
885 890 895

aac ttt tat aaa ctg att cag aac ggc ttt aaa atg gat cag ccg ttt 2736
Asn Phe Tyr Lys Leu Ile Gln Asn Gly Phe Lys Met Asp Gln Pro Phe
900 905 910

tat gcg acc gaa gaa att tat att att atg cag agc tgc tgg gcg ttt 2784
Tyr Ala Thr Glu Glu Ile Tyr Ile Ile Met Gln Ser Cys Trp Ala Phe
915 920 925

gat agc cgc aaa cgc ccg agc ttt ccg aac ctg acc agc ttt ctg ggc 2832
Asp Ser Arg Lys Arg Pro Ser Phe Pro Asn Leu Thr Ser Phe Leu Gly
930 935 940

tgc cag ctg gcg gat gcg gaa gaa gcg atg tat cag aac gtg gat ggc 2880
Cys Gln Leu Ala Asp Ala Glu Glu Ala Met Tyr Gln Asn Val Asp Gly
945 950 955 960

cgc gtg agc gaa tgc ccg cat acc tat cag aac cgc cgc ccg ttt agc 2928
Arg Val Ser Glu Cys Pro His Thr Tyr Gln Asn Arg Arg Pro Phe Ser
965 970 975

cgc gaa atg gat ctg ggc ctg ctg agc ccg cag gcg cag gtg gaa gat 2976
Arg Glu Met Asp Leu Gly Leu Leu Ser Pro Gln Ala Gln Val Glu Asp
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agc 2979
Ser


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<213> Artificial Sequence

<220>
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Ile Phe His Ala Glu Asn Asp Asp Ala Gln Phe Thr Lys Met Phe Thr
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Ile Phe Ser Leu Gly Val Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Asp Ala
885 890 895
Asn Phe Tyr Lys Leu Ile Gln Asn Gly Phe Lys Met Asp Gln Pro Phe
900 905 910
Tyr Ala Thr Glu Glu Ile Tyr Ile Ile Met Gln Ser Cys Trp Ala Phe
915 920 925
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Cys Gln Leu Ala Asp Ala Glu Glu Ala Met Tyr Gln Asn Val Asp Gly
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980 985 990
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ctg tat cgc ttt aac tgg aac cat tgc ggc gaa atg gcg ccg gcg tgc 288
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aaa cgc cat ttt att cag gat acc tgc ctg tat gaa tgc agc ccg aac 336
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gcg tgg ccg ttt ctg ctg agc ctg gcg ctg atg ctg ctg tgg ctg ctg 768
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65 70 75 80

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ctg gtg gat aac gat ggc ctg tat gat ccg gat tgc gat ccg gaa ggc 336
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100 105 110

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115 120 125

aac agc gtg ggc gtg cgc cgc acc gat aaa ggc gat ctg agc ctg cgc 432
Asn Ser Val Gly Val Arg Arg Thr Asp Lys Gly Asp Leu Ser Leu Arg
130 135 140

tgc gat gaa ctg gtg cgc acc cat cat att ctg att gat ctg cgc cat 480
Cys Asp Glu Leu Val Arg Thr His His Ile Leu Ile Asp Leu Arg His
145 150 155 160

cgc ccg acc gcg ggc gcg ttt aac cat agc gat ctg gat gcg gaa ctg 528
Arg Pro Thr Ala Gly Ala Phe Asn His Ser Asp Leu Asp Ala Glu Leu
165 170 175

cgc cgc ctg ttt cgc gaa cgc tat cgc ctg cat ccg aaa ttt gtg gcg 576
Arg Arg Leu Phe Arg Glu Arg Tyr Arg Leu His Pro Lys Phe Val Ala
180 185 190

gcg gtg cat tat gaa cag ccg acc att cag att gaa ctg cgc cag aac 624
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195 200 205

acc agc cag aaa gcg gcg ggc gat gtg gat att ggc gat gcg gcg tat 672
Thr Ser Gln Lys Ala Ala Gly Asp Val Asp Ile Gly Asp Ala Ala Tyr
210 215 220

tat ttt gaa cgc gat att aaa ggc gaa agc ctg ttt cag ggc cgc ggc 720
Tyr Phe Glu Arg Asp Ile Lys Gly Glu Ser Leu Phe Gln Gly Arg Gly
225 230 235 240

ggc ctg gat ctg cgc gtg cgc ggc gaa ccg ctg cag gtg gaa cgc acc 768
Gly Leu Asp Leu Arg Val Arg Gly Glu Pro Leu Gln Val Glu Arg Thr
245 250 255

ctg att tat tat ctg gat gaa att ccg ccg aaa ttt agc atg aaa cgc 816
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ctg acc gcg ggc ctg att gcg gtg att gtg gtg gtg gtg gtg gcg ctg 864
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ccg agc ctg 969
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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<223> [CDS]:1..969 from SEQ ID NO 193

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Asn Ser Val Gly Val Arg Arg Thr Asp Lys Gly Asp Leu Ser Leu Arg
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145 150 155 160
Arg Pro Thr Ala Gly Ala Phe Asn His Ser Asp Leu Asp Ala Glu Leu
165 170 175
Arg Arg Leu Phe Arg Glu Arg Tyr Arg Leu His Pro Lys Phe Val Ala
180 185 190
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Gly Leu Asp Leu Arg Val Arg Gly Glu Pro Leu Gln Val Glu Arg Thr
245 250 255
Leu Ile Tyr Tyr Leu Asp Glu Ile Pro Pro Lys Phe Ser Met Lys Arg
260 265 270
Leu Thr Ala Gly Leu Ile Ala Val Ile Val Val Val Val Val Ala Leu
275 280 285
Val Ala Gly Met Ala Val Leu Val Ile Thr Asn Arg Arg Lys Ser Gly
290 295 300
Lys Tyr Lys Lys Val Glu Ile Lys Glu Leu Gly Glu Leu Arg Lys Glu
305 310 315 320
Pro Ser Leu


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ccg ggc acc gcg ctg ctg tgc tat agc tgc aaa gcg cag gtg agc aac 96
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ggc tgc agc ctg aac tgc gtg gat gat agc cag gat tat tat gtg ggc 240
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aaa aaa aac att acc tgc tgc gat acc gat ctg tgc aac gcg agc ggc 288
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gcg cat gcg ctg cag ccg gcg gcg gcg att ctg gcg ctg ctg ccg gcg 336
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..369 from SEQ ID NO 195

<400> 196
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1 5 10 15
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65 70 75 80
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Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15

gcg ctg tgc ccg gcg agc cgc gcg ctg gaa gaa aaa aaa gtg tgc cag 96
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln
20 25 30

ggc acc agc aac aaa ctg acc cag ctg ggc acc ttt gaa gat cat ttt 144
Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe
35 40 45

ctg agc ctg cag cgc atg ttt aac aac tgc gaa gtg gtg ctg ggc aac 192
Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn
50 55 60

ctg gaa att acc tat gtg cag cgc aac tat gat ctg agc ttt ctg aaa 240
Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys
65 70 75 80

acc att cag gaa gtg gcg ggc tat gtg ctg att gcg ctg aac acc gtg 288
Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val
85 90 95

gaa cgc att ccg ctg gaa aac ctg cag att att cgc ggc aac atg tat 336
Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr
100 105 110

tat gaa aac agc tat gcg ctg gcg gtg ctg agc aac tat gat gcg aac 384
Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn
115 120 125

aaa acc ggc ctg aaa gaa ctg ccg atg cgc aac ctg cag gaa att ctg 432
Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu
130 135 140

cat ggc gcg gtg cgc ttt agc aac aac ccg gcg ctg tgc aac gtg gaa 480
His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu
145 150 155 160

agc att cag tgg cgc gat att gtg agc agc gat ttt ctg agc aac atg 528
Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met
165 170 175

agc atg gat ttt cag aac cat ctg ggc agc tgc cag aaa tgc gat ccg 576
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agc tgc ccg aac ggc agc tgc tgg ggc gcg ggc gaa gaa aac tgc cag 624
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aaa ctg acc aaa att att tgc gcg cag cag tgc agc ggc cgc tgc cgc 672
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210 215 220

ggc aaa agc ccg agc gat tgc tgc cat aac cag tgc gcg gcg ggc tgc 720
Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys
225 230 235 240

acc ggc ccg cgc gaa agc gat tgc ctg gtg tgc cgc aaa ttt cgc gat 768
Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp
245 250 255

gaa gcg acc tgc aaa gat acc tgc ccg ccg ctg atg ctg tat aac ccg 816
Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro
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acc acc tat cag atg gat gtg aac ccg gaa ggc aaa tat agc ttt ggc 864
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275 280 285

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Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His
290 295 300

ggc agc tgc gtg cgc gcg tgc ggc gcg gat agc tat gaa atg gaa gaa 960
Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu
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gat ggc gtg cgc aaa tgc aaa aaa tgc gaa ggc ccg tgc cgc aaa gtg 1008
Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val
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tgc aac ggc att ggc att ggc gaa ttt aaa gat agc ctg agc att aac 1056
Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn
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gcg acc aac att aaa cat ttt aaa aac tgc acc agc att agc ggc gat 1104
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Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr
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ccg ccg ctg gat ccg cag gaa ctg gat att ctg aaa acc gtg aaa gaa 1200
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att acc ggc ttt ctg ctg att cag gcg tgg ccg gaa aac cgc acc gat 1248
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ctg cat gcg ttt gaa aac ctg gaa att att cgc ggc cgc acc aaa cag 1296
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cat ggc cag ttt agc ctg gcg gtg gtg agc ctg aac att acc agc ctg 1344
His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu
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ggc ctg cgc agc ctg aaa gaa att agc gat ggc gat gtg att att agc 1392
Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser
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Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu
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ttt ggc acc agc ggc cag aaa acc aaa att att agc aac cgc ggc gaa 1488
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Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp
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Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln
420 425 430
His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu
435 440 445
Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser
450 455 460
Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu
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cat agc agc ctg cgc gat att ctg aac cag att acc aaa ccg aac gat 288
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gtg tat agc ttt agc ctg gcg agc cgc ctg tat gcg gaa gaa cgc tat 336
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100 105 110

ccg att ctg ccg gaa tat ctg cag tgc gtg aaa gaa ctg tat cgc ggc 384
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115 120 125

ggc ctg gaa ccg att aac ttt cag acc gcg gcg gat cag gcg cgc gaa 432
Gly Leu Glu Pro Ile Asn Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Glu
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ctg att aac agc tgg gtg gaa agc cag acc aac ggc att att cgc aac 480
Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile Ile Arg Asn
145 150 155 160

gtg ctg cag ccg agc agc gtg gat agc cag acc gcg atg gtg ctg gtg 528
Val Leu Gln Pro Ser Ser Val Asp Ser Gln Thr Ala Met Val Leu Val
165 170 175

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agc gaa aaa atg aaa att ctg gaa ctg ccg ttt gcg agc ggc acc atg 720
Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Phe Ala Ser Gly Thr Met
225 230 235 240

agc atg ctg gtg ctg ctg ccg gat gaa gtg agc ggc ctg gaa cag ctg 768
Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255

gaa agc att att aac ttt gaa aaa ctg acc gaa tgg acc agc agc aac 816
Glu Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr Ser Ser Asn
260 265 270

gtg atg gaa gaa cgc aaa att aaa gtg tat ctg ccg cgc atg aaa atg 864
Val Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Met
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gaa gaa aaa tat aac ctg acc agc gtg ctg atg gcg atg ggc att acc 912
Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Met Ala Met Gly Ile Thr
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gat gtg ttt agc agc agc gcg aac ctg agc ggc att agc agc gcg gaa 960
Asp Val Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu
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agc ctg aaa att agc cag gcg gtg cat gcg gcg cat gcg gaa att aac 1008
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gcg agc gtg agc gaa gaa ttt cgc gcg gat cat ccg ttt ctg ttt tgc 1104
Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe Leu Phe Cys
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acc gcg acc ctg gcg gcg gcg cag cgc gat tgc gtg tgc gat aac tat 96
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aaa ctg gcg acc agc tgc agc ctg aac gaa tat ggc gaa tgc cag tgc 144
Lys Leu Ala Thr Ser Cys Ser Leu Asn Glu Tyr Gly Glu Cys Gln Cys
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acc agc tat ggc acc cag aac acc gtg att tgc agc aaa ctg gcg agc 192
Thr Ser Tyr Gly Thr Gln Asn Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ser
50 55 60

aaa tgc ctg gcg atg aaa gcg gaa atg acc cat agc aaa agc ggc cgc 240
Lys Cys Leu Ala Met Lys Ala Glu Met Thr His Ser Lys Ser Gly Arg
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cgc att aaa ccg gaa ggc gcg att cag aac aac gat ggc ctg tat gat 288
Arg Ile Lys Pro Glu Gly Ala Ile Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp
85 90 95

ccg gat tgc gat gaa cag ggc ctg ttt aaa gcg aaa cag tgc aac ggc 336
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acc gcg acc tgc tgg tgc gtg aac acc gcg ggc gtg cgc cgc acc gat 384
Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp
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aaa gat acc gaa att acc tgc agc gaa cgc gtg cgc acc tat tgg att 432
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att att gaa ctg aaa cat aaa gaa cgc gaa agc ccg tat gat cat cag 480
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agc ctg cag acc gcg ctg cag gaa gcg ttt acc agc cgc tat aaa ctg 528
Ser Leu Gln Thr Ala Leu Gln Glu Ala Phe Thr Ser Arg Tyr Lys Leu
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aac cag aaa ttt att aaa aac att atg tat gaa aac aac gtg att acc 576
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ctg ttt cat agc agc aaa agc atg gat ctg cgc gtg aac ggc gaa ccg 720
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ctg gat ctg gat ccg ggc cag acc ctg att tat tat gtg gat gaa aaa 768
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att gtg gtg gtg agc ctg gcg gtg att gcg ggc att gtg gtg ctg gtg 864
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att agc acc cgc aaa aaa agc gcg aaa tat gaa aaa gcg gaa att aaa 912
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<212> PRT
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<223> [CDS]:1..945 from SEQ ID NO 201

<400> 202
Met Ala Gly Pro Gln Ala Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Ala Val Val
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100 105 110
Thr Ala Thr Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp
115 120 125
Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp Ile
130 135 140
Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Glu Arg Glu Ser Pro Tyr Asp His Gln
145 150 155 160
Ser Leu Gln Thr Ala Leu Gln Glu Ala Phe Thr Ser Arg Tyr Lys Leu
165 170 175
Asn Gln Lys Phe Ile Lys Asn Ile Met Tyr Glu Asn Asn Val Ile Thr
180 185 190
Ile Asp Leu Met Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asp Asp Val Asp
195 200 205
Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu Ser
210 215 220
Leu Phe His Ser Ser Lys Ser Met Asp Leu Arg Val Asn Gly Glu Pro
225 230 235 240
Leu Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys
245 250 255
Ala Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Thr Ala Gly Ile Ile Ala Val
260 265 270
Ile Val Val Val Ser Leu Ala Val Ile Ala Gly Ile Val Val Leu Val
275 280 285
Ile Ser Thr Arg Lys Lys Ser Ala Lys Tyr Glu Lys Ala Glu Ile Lys
290 295 300
Glu Met Gly Glu Ile His Arg Glu Leu Asn Ala
305 310 315

<210> 203
<211> 255
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<220>
<223> Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 (4-1-BB)

<400> 203
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255

<210> 204
<211> 256
<212> PRT
<213> Mus musculus

<220>
<223> Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 (4-1-BB)

<400> 204
Met Gly Asn Asn Cys Tyr Asn Val Val Val Ile Val Leu Leu Leu Val
1 5 10 15
Gly Cys Glu Lys Val Gly Ala Val Gln Asn Ser Cys Asp Asn Cys Gln
20 25 30
Pro Gly Thr Phe Cys Arg Lys Tyr Asn Pro Val Cys Lys Ser Cys Pro
35 40 45
Pro Ser Thr Phe Ser Ser Ile Gly Gly Gln Pro Asn Cys Asn Ile Cys
50 55 60
Arg Val Cys Ala Gly Tyr Phe Arg Phe Lys Lys Phe Cys Ser Ser Thr
65 70 75 80
His Asn Ala Glu Cys Glu Cys Ile Glu Gly Phe His Cys Leu Gly Pro
85 90 95
Gln Cys Thr Arg Cys Glu Lys Asp Cys Arg Pro Gly Gln Glu Leu Thr
100 105 110
Lys Gln Gly Cys Lys Thr Cys Ser Leu Gly Thr Phe Asn Asp Gln Asn
115 120 125
Gly Thr Gly Val Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Arg
130 135 140
Ser Val Leu Lys Thr Gly Thr Thr Glu Lys Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Pro Val Val Ser Phe Ser Pro Ser Thr Thr Ile Ser Val Thr Pro Glu
165 170 175
Gly Gly Pro Gly Gly His Ser Leu Gln Val Leu Thr Leu Phe Leu Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Ala Leu Leu Leu Ala Leu Ile Phe Ile Thr Leu Leu Phe
195 200 205
Ser Val Leu Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln
210 215 220
Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser
225 230 235 240
Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu
245 250 255



<210> 205
<211> 84
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> IgK leader sequence

<220>
<221> CDS
<222> 1..84
<223> /transl_table=1

<400> 205
atg gaa aca gat aca ctg ctg ctg tgg gtg ctg ctg ctg tgg gtg cca 48
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15

gga tct aca ggg gat ggc gcc cag cct gct aga agc 84
Gly Ser Thr Gly Asp Gly Ala Gln Pro Ala Arg Ser
20 25

<210> 206
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..84 from SEQ ID NO 205

<400> 206
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Gly Ala Gln Pro Ala Arg Ser
20 25

<210> 207
<211> 2055
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MR1.1 EGFRvIII VH-Ck-(G4S)2 MCSP M4-3 VH CH1 EE Fc knob PG LALA,
pETR16621

<220>
<221> CDS
<222> 1..2055
<223> /transl_table=1

<400> 207
caa gtg aag ctg cag cag agt ggg ggc gga ctc gtg aaa cct ggc gcc 48
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15

tct ctg aag ctg agc tgc gtg acc agc ggc ttc acc ttc aga aag ttc 96
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe
20 25 30

ggc atg agc tgg gtg cgc cag acc agc gac aag cgg ctg gaa tgg gtg 144
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45

gcc agc atc agc acc ggc ggc tac aac acc tac tac agc gac aac gtg 192
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60

aag ggc cgg ttc acc atc agc aga gag aac gcc aag aac acc ctg tac 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80

ctg cag atg agc agc ctg aag tcc gag gac acc gcc ctg tac tac tgc 288
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95

acc aga ggc tac agc ccc tac agc tac gcc atg gac tat tgg ggc cag 336
Thr Arg Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110

ggc acc acc gtg acc gtg tca tct gct agc gtg gcc gct ccc tcc gtg 384
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125

ttc atc ttc cca cct tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc acc gct tct 432
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140

gtc gtg tgc ctg ctg aac aac ttc tac ccc cgc gag gcc aag gtg cag 480
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160

tgg aag gtg gac aac gcc ctg cag tcc ggc aac agc cag gaa tcc gtg 528
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175

acc gag cag gac tcc aag gac agc acc tac tcc ctg tcc tcc acc ctg 576
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190

acc ctg tcc aag gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gaa 624
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205

gtg acc cac cag ggc ctg tct agc ccc gtg acc aag tct ttc aac cgg 672
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220

ggc gag tgc ggt ggc gga ggt tcc gga ggc gga gga tcc gga gga ggg 720
Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240

gga tct cag gtg caa ttg cag gaa agc ggc cct ggc ctg gtc aag ccc 768
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro
245 250 255

agc cag acc ctg agc ctg acc tgc acc gtg tcc ggc ggc agc atc acc 816
Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr
260 265 270

agc ggc tat tat tgg aac tgg att cgg cag cac ccc ggc aag ggc ctg 864
Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu
275 280 285

gaa tgg atc ggc tac atc act ttc gac ggc tct aac aac tac aac ccc 912
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Thr Phe Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro
290 295 300

agc ctg aag tcc aga gtg acc atc agc cgg gac acc agc aag aac cag 960
Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln
305 310 315 320

ttc agc ctg aag ctg tcc agc gtg aca gcc gcc gac acc gcc gtg tac 1008
Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
325 330 335

tac tgc gcc gac ttc gac tac tgg ggc cag ggc acc ctg gtc acc gtg 1056
Tyr Cys Ala Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
340 345 350

tcc agc gct agc acc aag ggc ccc tcc gtg ttc ccc ctg gcc ccc agc 1104
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
355 360 365

agc aag agc acc agc ggc ggc aca gcc gct ctg ggc tgc ctg gtc gag 1152
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu
370 375 380

gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg tcc tgg aac agc gga gcc ctg 1200
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
385 390 395 400

acc tcc ggc gtg cac acc ttc ccc gcc gtg ctg cag agt tct ggc ctg 1248
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
405 410 415

tat agc ctg agc agc gtg gtc acc gtg cct tct agc agc ctg ggc acc 1296
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
420 425 430

cag acc tac atc tgc aac gtg aac cac aag ccc agc aac acc aag gtg 1344
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
435 440 445

gac gag aag gtg gag ccc aag agc tgc gac aaa act cac aca tgc cca 1392
Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
450 455 460

ccg tgc cca gca cct gaa gct gca ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc 1440
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
465 470 475 480

ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc 1488
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
485 490 495

aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc 1536
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
500 505 510

aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg 1584
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
515 520 525

cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc 1632
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
530 535 540

gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc 1680
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
545 550 555 560

tcc aac aaa gcc ctc ggc gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc 1728
Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
565 570 575

aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tgc cgg 1776
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg
580 585 590

gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg tgg tgc ctg gtc aaa ggc 1824
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly
595 600 605

ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg 1872
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
610 615 620

gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc 1920
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
625 630 635 640

ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag 1968
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
645 650 655

ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac 2016
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
660 665 670

tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 2055
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680

<210> 208
<211> 684
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..2055 from SEQ ID NO 207

<400> 208
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220
Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro
245 250 255
Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr
260 265 270
Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu
275 280 285
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Thr Phe Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro
290 295 300
Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln
305 310 315 320
Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
325 330 335
Tyr Cys Ala Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
340 345 350
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
355 360 365
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu
370 375 380
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
385 390 395 400
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
405 410 415
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
420 425 430
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
435 440 445
Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
450 455 460
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
465 470 475 480
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
485 490 495
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
500 505 510
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
515 520 525
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
530 535 540
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
545 550 555 560
Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
565 570 575
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg
580 585 590
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly
595 600 605
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
610 615 620
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
625 630 635 640
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
645 650 655
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
660 665 670
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680

<210> 209
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFR vIII MR1.1 VL CH1, pETR15656

<220>
<221> CDS
<222> 1..639
<223> /transl_table=1

<400> 209
gat atc gag ctg aca cag agc ccc gcc agc ctg tct gtg gcc acc ggc 48
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ala Thr Gly
1 5 10 15

gag aaa gtg acc atc cgg tgc atg acc agc acc gac atc gac gac gac 96
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30

atg aac tgg tat cag cag aag ccc ggc gag ccc ccc aag ttc ctg atc 144
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45

agc gag ggc aac aca ctg cgg cct ggc gtg cca agc aga ttc agc agc 192
Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
50 55 60

tct ggc acc ggc acc gac ttc gtg ttt acc atc gag aat acc ctg agc 240
Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80

gag gac gtg ggc gac tac tac tgc ctg cag agc tgg aac gtg ccc ctg 288
Glu Asp Val Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu
85 90 95

acc ttt ggc gac ggc acc aag ctg gaa atc aag agc agc gct agc acc 336
Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110

aaa ggc cct tcc gtg ttt cct ctg gct cct agc tcc aag tcc acc tct 384
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125

gga ggc acc gct gct ctc gga tgc ctc gtg aag gat tat ttt cct gag 432
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140

cct gtg aca gtg tcc tgg aat agc gga gca ctg acc tct gga gtg cat 480
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160

act ttc ccc gct gtg ctg cag tcc tct gga ctg tac agc ctg agc agc 528
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175

gtg gtg aca gtg ccc agc agc agc ctg ggc acc cag acc tac atc tgc 576
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190

aac gtg aac cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aag gtg gaa 624
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205

ccc aag tct tgt tga 639
Pro Lys Ser Cys
210

<210> 210
<211> 212
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..639 from SEQ ID NO 209

<400> 210
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ala Thr Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
50 55 60
Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys
210

<210> 211
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MCSP ML2 VL Ck RK, pETR16619

<220>
<221> CDS
<222> 1..645
<223> /transl_table=1

<400> 211
gac atc cag atg acc cag agc ccc agc agc ctg agc gcc agc gtg ggc 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15

gac aga gtg acc atc acc tgc cgg gcc agc cag ggc atc cgg aac tac 96
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30

ctg aac tgg tat cag cag aag ccc ggc aag gcc ccc aag ctg ctg atc 144
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45

tac tac acc agc agc ctg cac agc ggc gtg cct agc cgg ttt agc ggc 192
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60

agc ggc tcc ggc acc gac tac acc ctg acc att agc tcc ctg cag ccc 240
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80

gag gac ttc gcc acc tac tac tgc cag cag tac tct gct ctg ccg tgg 288
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ala Leu Pro Trp
85 90 95

acc ttc ggc cag gga aca aag gtg gag atc aag cgt acg gtg gct gca 336
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110

cca tct gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat cgg aag ttg aaa tct gga 384
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly
115 120 125

act gcc tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gcc 432
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140

aaa gta cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac tcc cag 480
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160

gag agt gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc agc 528
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175

agc acc ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc tac 576
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190

gcc tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca aag agc 624
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205

ttc aac agg gga gag tgt tag 645
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

<210> 212
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..645 from SEQ ID NO 211

<400> 212
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ala Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

<210> 213
<211> 1329
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MCSP M4-3 VH CH1 EE Fc hole PG LALA HYRF, pETR16618

<220>
<221> CDS
<222> 1..1329
<223> /transl_table=1

<400> 213
cag gtg caa ttg cag gaa agc ggc cct ggc ctg gtc aag ccc agc cag 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15

acc ctg agc ctg acc tgc acc gtg tcc ggc ggc agc atc acc agc ggc 96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30

tat tat tgg aac tgg att cgg cag cac ccc ggc aag ggc ctg gaa tgg 144
Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45

atc ggc tac atc act ttc gac ggc tct aac aac tac aac ccc agc ctg 192
Ile Gly Tyr Ile Thr Phe Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60

aag tcc aga gtg acc atc agc cgg gac acc agc aag aac cag ttc agc 240
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80

ctg aag ctg tcc agc gtg aca gcc gcc gac acc gcc gtg tac tac tgc 288
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95

gcc gac ttc gac tac tgg ggc cag ggc acc ctg gtc acc gtg tcc agc 336
Ala Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110

gct agc acc aag ggc ccc tcc gtg ttc ccc ctg gcc ccc agc agc aag 384
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
115 120 125

agc acc agc ggc ggc aca gcc gct ctg ggc tgc ctg gtc gag gac tac 432
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
130 135 140

ttc ccc gag ccc gtg acc gtg tcc tgg aac agc gga gcc ctg acc tcc 480
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160

ggc gtg cac acc ttc ccc gcc gtg ctg cag agt tct ggc ctg tat agc 528
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175

ctg agc agc gtg gtc acc gtg cct tct agc agc ctg ggc acc cag acc 576
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
180 185 190

tac atc tgc aac gtg aac cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac gag 624
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
195 200 205

aag gtg gag ccc aag agc tgc gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc 672
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
210 215 220

cca gca cct gaa gct gca ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca 720
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225 230 235 240

aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc 768
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255

gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg 816
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
260 265 270

tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag 864
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275 280 285

gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg 912
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
290 295 300

cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac 960
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305 310 315 320

aaa gcc ctc ggc gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg 1008
Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
325 330 335

cag ccc cga gaa cca cag gtg tgc acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag 1056
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
340 345 350

ctg acc aag aac cag gtc agc ctc tcg tgc gca gtc aaa ggc ttc tat 1104
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
355 360 365

ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac 1152
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370 375 380

aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc 1200
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385 390 395 400

ctc gtg agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac 1248
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
405 410 415

gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cgc ttc acg 1296
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr
420 425 430

cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1329
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440

<210> 214
<211> 442
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..1329 from SEQ ID NO 213

<400> 214
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Thr Phe Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
180 185 190
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
195 200 205
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
260 265 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275 280 285
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305 310 315 320
Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
325 330 335
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
340 345 350
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
355 360 365
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370 375 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385 390 395 400
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
405 410 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr
420 425 430
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440

<210> 215
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR H1 Kabat

<400> 215
Lys Phe Gly Met Ser
1 5

<210> 216
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR H2 Kabat

<400> 216
Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys
1 5 10 15
Gly


<210> 217
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR H3 Kabat

<400> 217
Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10

<210> 218
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR1 L1 Kabat

<400> 218
Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
1 5 10

<210> 219
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR L2 Kabat

<400> 219
Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro
1 5

<210> 220
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> EGFRvIII MR1.1 CDR L3 Kabat

<400> 220
Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu Thr
1 5

<210> 221
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MCSP CDR H1 Kabat

<400> 221
Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn
1 5

<210> 222
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MCSP CDR H2 Kabat

<400> 222
Tyr Ile Thr Phe Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15



<210> 223
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MCSP CDR H3 Kabat

<400> 223
Phe Asp Tyr Tyr
1

<210> 224
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MCSP CDR1 L1 Kabat

<400> 224
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Asn
1 5 10

<210> 225
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MCSP CDR L2 Kabat

<400> 225
Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser
1 5

<210> 226
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> MCSP CDR L3 Kabat

<400> 226
Gln Gln Tyr Ser Ala Leu Pro Trp Thr
1 5

<210> 227
<211> 768
<212> DNA
<213> Homo sapiens

<220>
<223> Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 (4-1-BB)

<400> 227
atgggcaaca actgctataa cgtggtggtg attgtgctgc tgctggtggg ctgcgaaaaa 60

gtgggcgcgg tgcagaacag ctgcgataac tgccagccgg gcaccttttg ccgcaaatat 120

aacccggtgt gcaaaagctg cccgccgagc acctttagca gcattggcgg ccagccgaac 180

tgcaacattt gccgcgtgtg cgcgggctat tttcgcttta aaaaattttg cagcagcacc 240

cataacgcgg aatgcgaatg cattgaaggc tttcattgcc tgggcccgca gtgcacccgc 300

tgcgaaaaag attgccgccc gggccaggaa ctgaccaaac agggctgcaa aacctgcagc 360

ctgggcacct ttaacgatca gaacggcacc ggcgtgtgcc gcccgtggac caactgcagc 420

ctggatggcc gcagcgtgct gaaaaccggc accaccgaaa aagatgtggt gtgcggcccg 480

ccggtggtga gctttagccc gagcaccacc attagcgtga ccccggaagg cggcccgggc 540

ggccatagcc tgcaggtgct gaccctgttt ctggcgctga ccagcgcgct gctgctggcg 600

ctgattttta ttaccctgct gtttagcgtg ctgaaatgga ttcgcaaaaa atttccgcat 660

atttttaaac agccgtttaa aaaaaccacc ggcgcggcgc aggaagaaga tgcgtgcagc 720

tgccgctgcc cgcaggaaga agaaggcggc ggcggcggct atgaactg 768


<210> 228
<211> 765
<212> DNA
<213> Mus musculus

<220>
<223> Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 (4-1-BB)

<400> 228
atgggcaaca gctgctataa cattgtggcg accctgctgc tggtgctgaa ctttgaacgc 60

acccgcagcc tgcaggatcc gtgcagcaac tgcccggcgg gcaccttttg cgataacaac 120

cgcaaccaga tttgcagccc gtgcccgccg aacagcttta gcagcgcggg cggccagcgc 180

acctgcgata tttgccgcca gtgcaaaggc gtgtttcgca cccgcaaaga atgcagcagc 240

accagcaacg cggaatgcga ttgcaccccg ggctttcatt gcctgggcgc gggctgcagc 300

atgtgcgaac aggattgcaa acagggccag gaactgacca aaaaaggctg caaagattgc 360

tgctttggca cctttaacga tcagaaacgc ggcatttgcc gcccgtggac caactgcagc 420

ctggatggca aaagcgtgct ggtgaacggc accaaagaac gcgatgtggt gtgcggcccg 480

agcccggcgg atctgagccc gggcgcgagc agcgtgaccc cgccggcgcc ggcgcgcgaa 540

ccgggccata gcccgcagat tattagcttt tttctggcgc tgaccagcac cgcgctgctg 600

tttctgctgt tttttctgac cctgcgcttt agcgtggtga aacgcggccg caaaaaactg 660

ctgtatattt ttaaacagcc gtttatgcgc ccggtgcaga ccacccagga agaagatggc 720

tgcagctgcc gctttccgga agaagaagaa ggcggctgcg aactg 765


<210> 229
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Light chain without leader sequence

<400> 229
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Ser Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Gly Ile Ser Asn Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Arg Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Gly Met Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210

<210> 230
<211> 703
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Heavy chain without leader sequence

<400> 230
Glu Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Pro Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Thr Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser
115 120 125
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val
130 135 140
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu
145 150 155 160
Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr
180 185 190
Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro
195 200 205
Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr
210 215 220
Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met
245 250 255
Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu
260 265 270
Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val
275 280 285
His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu
290 295 300
Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly
305 310 315 320
Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr
355 360 365
Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu
370 375 380
Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val
405 410 415
Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val
420 425 430
His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr
435 440 445
Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys
450 455 460
Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Leu Lys
465 470 475 480
Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe Gly Met Ser
485 490 495
Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile
500 505 510
Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys Gly Arg
515 520 525
Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
530 535 540
Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Thr Arg Gly
545 550 555 560
Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
565 570 575
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
580 585 590
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser
595 600 605
Val Ala Thr Gly Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met Thr Ser Thr Asp
610 615 620
Ile Asp Asp Asp Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro
625 630 635 640
Lys Phe Leu Ile Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser
645 650 655
Arg Phe Ser Ser Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu
660 665 670
Asn Thr Leu Ser Glu Asp Val Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Trp
675 680 685
Asn Val Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
690 695 700

<210> 231
<211> 1253
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> DNA sequence of del-hEGFRvIII

<400> 231
gcggccgcgc caccatgcga ccctccggga cggccggggc agcgctcctg gcgctgctgg 60

ctgcgctctg cccggcgagt cgggctctgg aggaaaagaa aggtaattat gtggtgacag 120

atcacggctc gtgcgtccga gcctgtgggg ccgacagcta tgagatggag gaagacggcg 180

tccgcaagtg taagaagtgc gaagggcctt gccgcaaagt gtgtaacgga ataggtattg 240

gtgaatttaa agactcactc tccataaatg ctacgaatat taaacacttc aaaaactgca 300

cctccatcag tggcgatctc cacatcctgc cggtggcatt taggggtgac tccttcacac 360

atactcctcc tctggatcca caggaactgg atattctgaa aaccgtaaag gaaatcacag 420

ggtttttgct gattcaggct tggcctgaaa acaggacgga cctccatgcc tttgagaacc 480

tagaaatcat acgcggcagg accaagcaac atggtcagtt ttctcttgca gtcgtcagcc 540

tgaacataac atccttggga ttacgctccc tcaaggagat aagtgatgga gatgtgataa 600

tttcaggaaa caaaaatttg tgctatgcaa atacaataaa ctggaaaaaa ctgtttggga 660

cctccggtca gaaaaccaaa attataagca acagaggtga aaacagctgc aaggccacag 720

gccaggtctg ccatgccttg tgctcccccg agggctgctg gggcccggag cccagggact 780

gcgtctcttg ccggaatgtc agccgaggca gggaatgcgt ggacaagtgc aaccttctgg 840

agggtgagcc aagggagttt gtggagaact ctgagtgcat acagtgccac ccagagtgcc 900

tgcctcaggc catgaacatc acctgcacag gacggggacc agacaactgt atccagtgtg 960

cccactacat tgacggcccc cactgcgtca agacctgccc ggcaggagtc atgggagaaa 1020

acaacaccct ggtctggaag tacgcagacg ccggccatgt gtgccacctg tgccatccaa 1080

actgcaccta cggatgcact gggccaggtc ttgaaggctg tccaacgaat gggcctaaga 1140

tcccgtccat cgccactggg atggtggggg ccctcctctt gctgctggtg gtggccctgg 1200

ggatcggcct cttcatgcga aggcgccaca tcgttcggaa gcgctgagaa ttc 1253


<210> 232
<211> 420
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Protein sequence of del-hEGFRvIII

<400> 232
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser
35 40 45
Tyr Glu Met Glu Thr Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys
50 55 60
Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe
65 70 75 80
Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn
85 90 95
Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg
100 105 110
Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp
115 120 125
Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala
130 135 140
Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile
145 150 155 160
Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val
165 170 175
Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser
180 185 190
Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn
195 200 205
Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys
210 215 220
Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val
225 230 235 240
Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg
245 250 255
Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp
260 265 270
Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser
275 280 285
Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Glu Thr
290 295 300
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
305 310 315 320
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
325 330 335
Met Glu Thr Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala
340 345 350
Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr
355 360 365
Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser
370 375 380
Ile Ala Thr Gly Met Glu Thr Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val
385 390 395 400
Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Glu Thr Arg Arg Arg His Ile
405 410 415
Val Arg Lys Arg
420

<210> 233
<211> 1779
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> BsAB EGFRvIII-EpCAM

<400> 233
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
180 185 190
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220
Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
225 230 235 240
Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Met Lys
245 250 255
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Pro Met Ala
260 265 270
Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Cys Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile
275 280 285
Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg
290 295 300
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met
305 310 315 320
Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Arg Thr
325 330 335
Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val
340 345 350
Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
355 360 365
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
370 375 380
Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
385 390 395 400
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
405 410 415
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
420 425 430
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
435 440 445
Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
450 455 460
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
465 470 475 480
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
485 490 495
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
500 505 510
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
515 520 525
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
530 535 540
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
545 550 555 560
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr
565 570 575
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
580 585 590
Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
595 600 605
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
610 615 620
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
625 630 635 640
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
645 650 655
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
660 665 670
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
675 680 685
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ala Thr Gly
690 695 700
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
705 710 715 720
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Phe Leu Ile
725 730 735
Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
740 745 750
Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Thr Leu Ser
755 760 765
Glu Asp Val Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu
770 775 780
Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr
785 790 795 800
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
805 810 815
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
820 825 830
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
835 840 845
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
850 855 860
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
865 870 875 880
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
885 890 895
Pro Lys Ser Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser
900 905 910
Ala Ser Leu Gly Glu Thr Val Ser Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Gly
915 920 925
Ile Ser Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ser Pro
930 935 940
Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser
945 950 955 960
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Arg Tyr Ser Leu Lys Ile Ser
965 970 975
Gly Met Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr
980 985 990
Lys Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
995 1000 1005
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys
1010 1015 1020
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
1025 1030 1035 1040
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
1045 1050 1055
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
1060 1065 1070
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
1075 1080 1085
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
1090 1095 1100
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln
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Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Thr Val Ser Ile Glu
1125 1130 1135
Cys Leu Ala Ser Glu Gly Ile Ser Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln
1140 1145 1150
Lys Ser Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Arg Leu
1155 1160 1165
Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Arg
1170 1175 1180
Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Gly Met Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
1185 1190 1195 1200
Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr
1205 1210 1215
Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
1220 1225 1230
Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
1235 1240 1245
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
1250 1255 1260
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
1265 1270 1275 1280
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
1285 1290 1295
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
1300 1305 1310
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
1315 1320 1325
Glu Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1330 1335 1340
Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
1345 1350 1355 1360
Pro Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Cys Leu Glu Trp Val
1365 1370 1375
Ala Thr Ile Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
1380 1385 1390
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
1395 1400 1405
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
1410 1415 1420
Thr Arg Thr Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
1425 1430 1435 1440
Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
1445 1450 1455
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
1460 1465 1470
Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
1475 1480 1485
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
1490 1495 1500
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
1505 1510 1515 1520
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
1525 1530 1535
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
1540 1545 1550
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1555 1560 1565
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
1570 1575 1580
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
1585 1590 1595 1600
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
1605 1610 1615
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
1620 1625 1630
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
1635 1640 1645
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
1650 1655 1660
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
1665 1670 1675 1680
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
1685 1690 1695
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
1700 1705 1710
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
1715 1720 1725
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
1730 1735 1740
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
1745 1750 1755 1760
His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
1765 1770 1775
Pro Gly Lys


<210> 234
<211> 1766
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> BsAB EGFRvIII-MCSP

<400> 234
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Lys Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Ser Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Ser Pro Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
115 120 125
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135 140
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
145 150 155 160
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
165 170 175
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
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Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
195 200 205
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210 215 220
Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro
245 250 255
Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr
260 265 270
Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu
275 280 285
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Thr Phe Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro
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Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln
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Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
325 330 335
Tyr Cys Ala Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
340 345 350
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
355 360 365
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu
370 375 380
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
385 390 395 400
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
405 410 415
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
420 425 430
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
435 440 445
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450 455 460
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
485 490 495
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
500 505 510
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
515 520 525
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530 535 540
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545 550 555 560
Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
565 570 575
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg
580 585 590
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595 600 605
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
610 615 620
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625 630 635 640
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
645 650 655
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
660 665 670
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Asp Ile Gln Met
675 680 685
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
690 695 700
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr
705 710 715 720
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser
725 730 735
Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
740 745 750
Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
755 760 765
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ala Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln
770 775 780
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
785 790 795 800
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
805 810 815
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
820 825 830
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
835 840 845
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
850 855 860
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
865 870 875 880
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
885 890 895
Glu Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
900 905 910
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg
915 920 925
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930 935 940
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945 950 955 960
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
965 970 975
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ala Leu
980 985 990
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
995 1000 1005
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1010 1015 1020
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
1025 1030 1035 1040
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
1045 1050 1055
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1060 1065 1070
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1075 1080 1085
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1105 1110 1115 1120
Ala Ser Leu Ser Val Ala Thr Gly Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Met
1125 1130 1135
Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
1140 1145 1150
Gly Glu Pro Pro Lys Phe Leu Ile Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro
1155 1160 1165
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Val
1170 1175 1180
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1185 1190 1195 1200
Leu Gln Ser Trp Asn Val Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu
1205 1210 1215
Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
1220 1225 1230
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
1235 1240 1245
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
1250 1255 1260
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
1265 1270 1275 1280
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
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Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
1300 1305 1310
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gln Val Gln Leu
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Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu
1330 1335 1340
Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn
1345 1350 1355 1360
Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile
1365 1370 1375
Thr Phe Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val
1380 1385 1390
Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser
1395 1400 1405
Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Asp Phe Asp
1410 1415 1420
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
1425 1430 1435 1440
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
1445 1450 1455
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
1460 1465 1470
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
1475 1480 1485
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
1490 1495 1500
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
1505 1510 1515 1520
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro
1525 1530 1535
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
1540 1545 1550
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
1555 1560 1565
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
1570 1575 1580
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
1585 1590 1595 1600
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
1605 1610 1615
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
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Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly
1635 1640 1645
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
1650 1655 1660
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Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
1685 1690 1695
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1700 1705 1710
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys
1715 1720 1725
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
1730 1735 1740
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu
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Leu Leu Ala Ala Gly Pro Ala Asp His Leu Leu Leu Gln Leu Tyr Ser
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100 105 110

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ctg aac gcg agc agc gcg gtg ccg ggc gcg ccg ctg gaa gtg ccg tat 432
Leu Asn Ala Ser Ser Ala Val Pro Gly Ala Pro Leu Glu Val Pro Tyr
130 135 140

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Gly Leu Phe Val Gly Gly Thr Gly Thr Leu Gly Leu Pro Tyr Leu Arg
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ggc acc agc cgc ccg ctg cgc ggc tgc ctg cat gcg gcg acc ctg aac 528
Gly Thr Ser Arg Pro Leu Arg Gly Cys Leu His Ala Ala Thr Leu Asn
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ggc cgc agc ctg ctg cgc ccg ctg acc ccg gat gtg cat gaa ggc tgc 576
Gly Arg Ser Leu Leu Arg Pro Leu Thr Pro Asp Val His Glu Gly Cys
180 185 190

gcg gaa gaa ttt agc gcg agc gat gat gtg gcg ctg ggc ttt agc ggc 624
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195 200 205

ccg cat agc ctg gcg gcg ttt ccg gcg tgg ggc acc cag gat gaa ggc 672
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210 215 220

acc ctg gaa ttt acc ctg acc acc cag agc cgc cag gcg ccg ctg gcg 720
Thr Leu Glu Phe Thr Leu Thr Thr Gln Ser Arg Gln Ala Pro Leu Ala
225 230 235 240

ttt cag gcg ggc ggc cgc cgc ggc gat ttt att tat gtg gat att ttt 768
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245 250 255

gaa ggc cat ctg cgc gcg gtg gtg gaa aaa ggc cag ggc acc gtg ctg 816
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260 265 270

ctg cat aac agc gtg ccg gtg gcg gat ggc cag ccg cat gaa gtg agc 864
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gtg cat att aac gcg cat cgc ctg gaa att agc gtg gat cag tat ccg 912
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290 295 300

acc cat acc agc aac cgc ggc gtg ctg agc tat ctg gaa ccg cgc ggc 960
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agc ctg ctg ctg ggc ggc ctg gat gcg gaa gcg agc cgc cat ctg cag 1008
Ser Leu Leu Leu Gly Gly Leu Asp Ala Glu Ala Ser Arg His Leu Gln
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ggc tgc atg gaa gat ctg agc gtg aac ggc cag cgc cgc ggc ctg cgc 1104
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gaa gcg ctg ctg acc cgc aac atg gcg gcg ggc tgc cgc ctg gaa gaa 1152
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gaa gaa tat gaa gat gat gcg tat ggc cat tat gaa gcg ttt agc acc 1200
Glu Glu Tyr Glu Asp Asp Ala Tyr Gly His Tyr Glu Ala Phe Ser Thr
385 390 395 400

ctg gcg ccg gaa gcg tgg ccg gcg atg gaa ctg ccg gaa ccg tgc gtg 1248
Leu Ala Pro Glu Ala Trp Pro Ala Met Glu Leu Pro Glu Pro Cys Val
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ccg gaa ccg ggc ctg ccg ccg gtg ttt gcg aac ttt acc cag ctg ctg 1296
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acc att agc ccg ctg gtg gtg gcg gaa ggc ggc acc gcg tgg ctg gaa 1344
Thr Ile Ser Pro Leu Val Val Ala Glu Gly Gly Thr Ala Trp Leu Glu
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tgg cgc cat gtg cag ccg acc ctg gat ctg atg gaa gcg gaa ctg cgc 1392
Trp Arg His Val Gln Pro Thr Leu Asp Leu Met Glu Ala Glu Leu Arg
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aaa agc cag gtg ctg ttt agc gtg acc cgc ggc gcg cgc cat ggc gaa 1440
Lys Ser Gln Val Leu Phe Ser Val Thr Arg Gly Ala Arg His Gly Glu
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ctg gaa ctg gat att ccg ggc gcg cag gcg cgc aaa atg ttt acc ctg 1488
Leu Glu Leu Asp Ile Pro Gly Ala Gln Ala Arg Lys Met Phe Thr Leu
485 490 495

ctg gat gtg gtg aac cgc aaa gcg cgc ttt att cat gat ggc agc gaa 1536
Leu Asp Val Val Asn Arg Lys Ala Arg Phe Ile His Asp Gly Ser Glu
500 505 510

gat acc agc gat cag ctg gtg ctg gaa gtg agc gtg acc gcg cgc gtg 1584
Asp Thr Ser Asp Gln Leu Val Leu Glu Val Ser Val Thr Ala Arg Val
515 520 525

ccg atg ccg agc tgc ctg cgc cgc ggc cag acc tat ctg ctg ccg att 1632
Pro Met Pro Ser Cys Leu Arg Arg Gly Gln Thr Tyr Leu Leu Pro Ile
530 535 540

cag gtg aac ccg gtg aac gat ccg ccg cat att att ttt ccg cat ggc 1680
Gln Val Asn Pro Val Asn Asp Pro Pro His Ile Ile Phe Pro His Gly
545 550 555 560

agc ctg atg gtg att ctg gaa cat acc cag aaa ccg ctg ggc ccg gaa 1728
Ser Leu Met Val Ile Leu Glu His Thr Gln Lys Pro Leu Gly Pro Glu
565 570 575

gtg ttt cag gcg tat gat ccg gat agc gcg tgc gaa ggc ctg acc ttt 1776
Val Phe Gln Ala Tyr Asp Pro Asp Ser Ala Cys Glu Gly Leu Thr Phe
580 585 590

cag gtg ctg ggc acc agc agc ggc ctg ccg gtg gaa cgc cgc gat cag 1824
Gln Val Leu Gly Thr Ser Ser Gly Leu Pro Val Glu Arg Arg Asp Gln
595 600 605

ccg ggc gaa ccg gcg acc gaa ttt agc tgc cgc gaa ctg gaa gcg ggc 1872
Pro Gly Glu Pro Ala Thr Glu Phe Ser Cys Arg Glu Leu Glu Ala Gly
610 615 620

agc ctg gtg tat gtg cat cgc ggc ggc ccg gcg cag gat ctg acc ttt 1920
Ser Leu Val Tyr Val His Arg Gly Gly Pro Ala Gln Asp Leu Thr Phe
625 630 635 640

cgc gtg agc gat ggc ctg cag gcg agc ccg ccg gcg acc ctg aaa gtg 1968
Arg Val Ser Asp Gly Leu Gln Ala Ser Pro Pro Ala Thr Leu Lys Val
645 650 655

gtg gcg att cgc ccg gcg att cag att cat cgc agc acc ggc ctg cgc 2016
Val Ala Ile Arg Pro Ala Ile Gln Ile His Arg Ser Thr Gly Leu Arg
660 665 670

ctg gcg cag ggc agc gcg atg ccg att ctg ccg gcg aac ctg agc gtg 2064
Leu Ala Gln Gly Ser Ala Met Pro Ile Leu Pro Ala Asn Leu Ser Val
675 680 685

gaa acc aac gcg gtg ggc cag gat gtg agc gtg ctg ttt cgc gtg acc 2112
Glu Thr Asn Ala Val Gly Gln Asp Val Ser Val Leu Phe Arg Val Thr
690 695 700

ggc gcg ctg cag ttt ggc gaa ctg cag aaa cag ggc gcg ggc ggc gtg 2160
Gly Ala Leu Gln Phe Gly Glu Leu Gln Lys Gln Gly Ala Gly Gly Val
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gaa ggc gcg gaa tgg tgg gcg acc cag gcg ttt cat cag cgc gat gtg 2208
Glu Gly Ala Glu Trp Trp Ala Thr Gln Ala Phe His Gln Arg Asp Val
725 730 735

gaa cag ggc cgc gtg cgc tat ctg agc acc gat ccg cag cat cat gcg 2256
Glu Gln Gly Arg Val Arg Tyr Leu Ser Thr Asp Pro Gln His His Ala
740 745 750

tat gat acc gtg gaa aac ctg gcg ctg gaa gtg cag gtg ggc cag gaa 2304
Tyr Asp Thr Val Glu Asn Leu Ala Leu Glu Val Gln Val Gly Gln Glu
755 760 765

att ctg agc aac ctg agc ttt ccg gtg acc att cag cgc gcg acc gtg 2352
Ile Leu Ser Asn Leu Ser Phe Pro Val Thr Ile Gln Arg Ala Thr Val
770 775 780

tgg atg ctg cgc ctg gaa ccg ctg cat acc cag aac acc cag cag gaa 2400
Trp Met Leu Arg Leu Glu Pro Leu His Thr Gln Asn Thr Gln Gln Glu
785 790 795 800

acc ctg acc acc gcg cat ctg gaa gcg acc ctg gaa gaa gcg ggc ccg 2448
Thr Leu Thr Thr Ala His Leu Glu Ala Thr Leu Glu Glu Ala Gly Pro
805 810 815

agc ccg ccg acc ttt cat tat gaa gtg gtg cag gcg ccg cgc aaa ggc 2496
Ser Pro Pro Thr Phe His Tyr Glu Val Val Gln Ala Pro Arg Lys Gly
820 825 830

aac ctg cag ctg cag ggc acc cgc ctg agc gat ggc cag ggc ttt acc 2544
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gcg agc gaa gcg gtg gaa gat acc ttt cgc ttt cgc gtg acc gcg ccg 2640
Ala Ser Glu Ala Val Glu Asp Thr Phe Arg Phe Arg Val Thr Ala Pro
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ccg tat ttt agc ccg ctg tat acc ttt ccg att cat att ggc ggc gat 2688
Pro Tyr Phe Ser Pro Leu Tyr Thr Phe Pro Ile His Ile Gly Gly Asp
885 890 895

ccg gat gcg ccg gtg ctg acc aac gtg ctg ctg gtg gtg ccg gaa ggc 2736
Pro Asp Ala Pro Val Leu Thr Asn Val Leu Leu Val Val Pro Glu Gly
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ggc gaa ggc gtg ctg agc gcg gat cat ctg ttt gtg aaa agc ctg aac 2784
Gly Glu Gly Val Leu Ser Ala Asp His Leu Phe Val Lys Ser Leu Asn
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agc gcg agc tat ctg tat gaa gtg atg gaa cgc ccg cgc cat ggc cgc 2832
Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Glu Val Met Glu Arg Pro Arg His Gly Arg
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ctg gcg tgg cgc ggc acc cag gat aaa acc acc atg gtg acc agc ttt 2880
Leu Ala Trp Arg Gly Thr Gln Asp Lys Thr Thr Met Val Thr Ser Phe
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acc aac gaa gat ctg ctg cgc ggc cgc ctg gtg tat cag cat gat gat 2928
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agc gaa acc acc gaa gat gat att ccg ttt gtg gcg acc cgc cag ggc 2976
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980 985 990

gaa agc agc ggc gat atg gcg tgg gaa gaa gtg cgc ggc gtg ttt cgc 3024
Glu Ser Ser Gly Asp Met Ala Trp Glu Glu Val Arg Gly Val Phe Arg
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gtg gcg att cag ccg gtg aac gat cat gcg ccg gtg cag acc att agc 3072
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gat gtg gcg ttt agc gat gcg gat agc ggc ttt gcg gat gcg cag ctg 3168
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gtg ctg acc cgc aaa gat ctg ctg ttt ggc agc att gtg gcg gtg gat 3216
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cgc cgc gtg ctg ttt gtg cat agc ggc gcg gat cgc ggc tgg att cag 3312
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gat acc aac ctg gat att cgc agc ggc gat gaa gtg cat tat cat gtg 3504
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acc gcg ggc ccg cgc tgg ggc cag ctg gtg cgc gcg ggc cag ccg gcg 3552
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acc gcg ttt agc cag cag gat ctg ctg gat ggc gcg gtg ctg tat agc 3600
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cat aac ggc agc ctg agc ccg cgc gat acc atg gcg ttt agc gtg gaa 3648
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gcg ggc ccg gtg cat acc gat gcg acc ctg cag gtg acc att gcg ctg 3696
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1220 1225 1230

gaa ggc ccg ctg gcg ccg ctg aaa ctg gtg cgc cat aaa aaa att tat 3744
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gtg ttt cag ggc gaa gcg gcg gaa att cgc cgc gat cag ctg gaa gcg 3792
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1250 1255 1260

gcg cag gaa gcg gtg ccg ccg gcg gat att gtg ttt agc gtg aaa agc 3840
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ccg ccg agc gcg ggc tat ctg gtg atg gtg agc cgc ggc gcg ctg gcg 3888
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gtg gat acc ggc cgc gtg ctg tat ctg cat agc cgc ccg gaa gcg tgg 3984
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agc gat gcg ttt agc ctg gat gtg gcg agc ggc ctg ggc gcg ccg ctg 4032
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gaa ggc gtg ctg gtg gaa ctg gaa gtg ctg ccg gcg gcg att ccg ctg 4080
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ccg ccg ctg ctg cgc gtg agc ggc ccg tat ttt ccg acc ctg ctg ggc 4176
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ctg agc ctg cag gtg ctg gaa ccg ccg cag cat ggc gcg ctg cag aaa 4224
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gtg gaa gaa cag ctg att cgc tat gtg cat gat ggc agc gaa acc ctg 4320
Val Glu Glu Gln Leu Ile Arg Tyr Val His Asp Gly Ser Glu Thr Leu
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acc gat agc ttt gtg ctg atg gcg aac gcg agc gaa atg gat cgc cag 4368
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agc cat ccg gtg gcg ttt acc gtg acc gtg ctg ccg gtg aac gat cag 4416
Ser His Pro Val Ala Phe Thr Val Thr Val Leu Pro Val Asn Asp Gln
1460 1465 1470

ccg ccg att ctg acc acc aac acc ggc ctg cag atg tgg gaa ggc gcg 4464
Pro Pro Ile Leu Thr Thr Asn Thr Gly Leu Gln Met Trp Glu Gly Ala
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acc gcg ccg att ccg gcg gaa gcg ctg cgc agc acc gat ggc gat agc 4512
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ggc agc gaa gat ctg gtg tat acc att gaa cag ccg agc aac ggc cgc 4560
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gat ggc ggc ttt cgc ttt cgc ctg agc gat ggc gaa cat acc agc ccg 4704
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gcg gaa gtg tat gcg ggc aac att ctg tat gaa cat gaa atg ccg ccg 4992
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gaa gcg gcg tgc ccg cag cgc ccg agc cat ctg tgg aaa aac aaa ggc 5136
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cat gat gtg ctg ttt cag gtg acc cag ttt ccg agc cgc ggc cag ctg 5280
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agc cag ctg gcg gcg ggc cag ctg gtg tat gcg cat ggc ggc ggc ggc 5376
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atg agc gat ggc gcg agc ccg ccg ctg ccg atg agc ctg gcg gtg gat 5808
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Pro Gln Ala Leu Gly Arg Ser Ser Leu Ser Gln Gln Gln Leu Arg Val
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Val Ser Asp Arg Glu Glu Pro Glu Ala Ala Tyr Arg Leu Ile Gln Gly
1970 1975 1980

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Pro Gln Tyr Gly His Leu Leu Val Gly Gly Arg Pro Thr Ser Ala Phe
1985 1990 1995 2000

agc cag ttt cag att gat cag ggc gaa gtg gtg ttt gcg ttt acc aac 6048
Ser Gln Phe Gln Ile Asp Gln Gly Glu Val Val Phe Ala Phe Thr Asn
2005 2010 2015

ttt agc agc agc cat gat cat ttt cgc gtg ctg gcg ctg gcg cgc ggc 6096
Phe Ser Ser Ser His Asp His Phe Arg Val Leu Ala Leu Ala Arg Gly
2020 2025 2030

gtg aac gcg agc gcg gtg gtg aac gtg acc gtg cgc gcg ctg ctg cat 6144
Val Asn Ala Ser Ala Val Val Asn Val Thr Val Arg Ala Leu Leu His
2035 2040 2045

gtg tgg gcg ggc ggc ccg tgg ccg cag ggc gcg acc ctg cgc ctg gat 6192
Val Trp Ala Gly Gly Pro Trp Pro Gln Gly Ala Thr Leu Arg Leu Asp
2050 2055 2060

ccg acc gtg ctg gat gcg ggc gaa ctg gcg aac cgc acc ggc agc gtg 6240
Pro Thr Val Leu Asp Ala Gly Glu Leu Ala Asn Arg Thr Gly Ser Val
2065 2070 2075 2080

ccg cgc ttt cgc ctg ctg gaa ggc ccg cgc cat ggc cgc gtg gtg cgc 6288
Pro Arg Phe Arg Leu Leu Glu Gly Pro Arg His Gly Arg Val Val Arg
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gtg ccg cgc gcg cgc acc gaa ccg ggc ggc agc cag ctg gtg gaa cag 6336
Val Pro Arg Ala Arg Thr Glu Pro Gly Gly Ser Gln Leu Val Glu Gln
2100 2105 2110

ttt acc cag cag gat ctg gaa gat ggc cgc ctg ggc ctg gaa gtg ggc 6384
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cgc ccg gaa ggc cgc gcg ccg ggc ccg gcg ggc gat agc ctg acc ctg 6432
Arg Pro Glu Gly Arg Ala Pro Gly Pro Ala Gly Asp Ser Leu Thr Leu
2130 2135 2140

gaa ctg tgg gcg cag ggc gtg ccg ccg gcg gtg gcg agc ctg gat ttt 6480
Glu Leu Trp Ala Gln Gly Val Pro Pro Ala Val Ala Ser Leu Asp Phe
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gcg acc gaa ccg tat aac gcg gcg cgc ccg tat agc gtg gcg ctg ctg 6528
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agc gtg ccg gaa gcg gcg cgc acc gaa gcg ggc aaa ccg gaa agc agc 6576
Ser Val Pro Glu Ala Ala Arg Thr Glu Ala Gly Lys Pro Glu Ser Ser
2180 2185 2190

acc ccg acc ggc gaa ccg ggc ccg atg gcg agc agc ccg gaa ccg gcg 6624
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2195 2200 2205

gtg gcg aaa ggc ggc ttt ctg agc ttt ctg gaa gcg aac atg ttt agc 6672
Val Ala Lys Gly Gly Phe Leu Ser Phe Leu Glu Ala Asn Met Phe Ser
2210 2215 2220

gtg att att ccg atg tgc ctg gtg ctg ctg ctg ctg gcg ctg att ctg 6720
Val Ile Ile Pro Met Cys Leu Val Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Leu
2225 2230 2235 2240

ccg ctg ctg ttt tat ctg cgc aaa cgc aac aaa acc ggc aaa cat gat 6768
Pro Leu Leu Phe Tyr Leu Arg Lys Arg Asn Lys Thr Gly Lys His Asp
2245 2250 2255

gtg cag gtg ctg acc gcg aaa ccg cgc aac ggc ctg gcg ggc gat acc 6816
Val Gln Val Leu Thr Ala Lys Pro Arg Asn Gly Leu Ala Gly Asp Thr
2260 2265 2270

gaa acc ttt cgc aaa gtg gaa ccg ggc cag gcg att ccg ctg acc gcg 6864
Glu Thr Phe Arg Lys Val Glu Pro Gly Gln Ala Ile Pro Leu Thr Ala
2275 2280 2285

gtg ccg ggc cag ggc ccg ccg ccg ggc ggc cag ccg gat ccg gaa ctg 6912
Val Pro Gly Gln Gly Pro Pro Pro Gly Gly Gln Pro Asp Pro Glu Leu
2290 2295 2300

ctg cag ttt tgc cgc acc ccg aac ccg gcg ctg aaa aac ggc cag tat 6960
Leu Gln Phe Cys Arg Thr Pro Asn Pro Ala Leu Lys Asn Gly Gln Tyr
2305 2310 2315 2320

tgg gtg 6966
Trp Val


<210> 237
<211> 2322
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<220>
<223> [CDS]:1..6966 from SEQ ID NO 236

<400> 237
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1 5 10 15
Ala Leu Thr Leu Thr Met Leu Ala Arg Leu Ala Ser Ala Ala Ser Phe
20 25 30
Phe Gly Glu Asn His Leu Glu Val Pro Val Ala Thr Ala Leu Thr Asp
35 40 45
Ile Asp Leu Gln Leu Gln Phe Ser Thr Ser Gln Pro Glu Ala Leu Leu
50 55 60
Leu Leu Ala Ala Gly Pro Ala Asp His Leu Leu Leu Gln Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Gly Arg Leu Gln Val Arg Leu Val Leu Gly Gln Glu Glu Leu Arg Leu
85 90 95
Gln Thr Pro Ala Glu Thr Leu Leu Ser Asp Ser Ile Pro His Thr Val
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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420 425 430
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515 520 525
Pro Met Pro Ser Cys Leu Arg Arg Gly Gln Thr Tyr Leu Leu Pro Ile
530 535 540
Gln Val Asn Pro Val Asn Asp Pro Pro His Ile Ile Phe Pro His Gly
545 550 555 560
Ser Leu Met Val Ile Leu Glu His Thr Gln Lys Pro Leu Gly Pro Glu
565 570 575
Val Phe Gln Ala Tyr Asp Pro Asp Ser Ala Cys Glu Gly Leu Thr Phe
580 585 590
Gln Val Leu Gly Thr Ser Ser Gly Leu Pro Val Glu Arg Arg Asp Gln
595 600 605
Pro Gly Glu Pro Ala Thr Glu Phe Ser Cys Arg Glu Leu Glu Ala Gly
610 615 620
Ser Leu Val Tyr Val His Arg Gly Gly Pro Ala Gln Asp Leu Thr Phe
625 630 635 640
Arg Val Ser Asp Gly Leu Gln Ala Ser Pro Pro Ala Thr Leu Lys Val
645 650 655
Val Ala Ile Arg Pro Ala Ile Gln Ile His Arg Ser Thr Gly Leu Arg
660 665 670
Leu Ala Gln Gly Ser Ala Met Pro Ile Leu Pro Ala Asn Leu Ser Val
675 680 685
Glu Thr Asn Ala Val Gly Gln Asp Val Ser Val Leu Phe Arg Val Thr
690 695 700
Gly Ala Leu Gln Phe Gly Glu Leu Gln Lys Gln Gly Ala Gly Gly Val
705 710 715 720
Glu Gly Ala Glu Trp Trp Ala Thr Gln Ala Phe His Gln Arg Asp Val
725 730 735
Glu Gln Gly Arg Val Arg Tyr Leu Ser Thr Asp Pro Gln His His Ala
740 745 750
Tyr Asp Thr Val Glu Asn Leu Ala Leu Glu Val Gln Val Gly Gln Glu
755 760 765
Ile Leu Ser Asn Leu Ser Phe Pro Val Thr Ile Gln Arg Ala Thr Val
770 775 780
Trp Met Leu Arg Leu Glu Pro Leu His Thr Gln Asn Thr Gln Gln Glu
785 790 795 800
Thr Leu Thr Thr Ala His Leu Glu Ala Thr Leu Glu Glu Ala Gly Pro
805 810 815
Ser Pro Pro Thr Phe His Tyr Glu Val Val Gln Ala Pro Arg Lys Gly
820 825 830
Asn Leu Gln Leu Gln Gly Thr Arg Leu Ser Asp Gly Gln Gly Phe Thr
835 840 845
Gln Asp Asp Ile Gln Ala Gly Arg Val Thr Tyr Gly Ala Thr Ala Arg
850 855 860
Ala Ser Glu Ala Val Glu Asp Thr Phe Arg Phe Arg Val Thr Ala Pro
865 870 875 880
Pro Tyr Phe Ser Pro Leu Tyr Thr Phe Pro Ile His Ile Gly Gly Asp
885 890 895
Pro Asp Ala Pro Val Leu Thr Asn Val Leu Leu Val Val Pro Glu Gly
900 905 910
Gly Glu Gly Val Leu Ser Ala Asp His Leu Phe Val Lys Ser Leu Asn
915 920 925
Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Glu Val Met Glu Arg Pro Arg His Gly Arg
930 935 940
Leu Ala Trp Arg Gly Thr Gln Asp Lys Thr Thr Met Val Thr Ser Phe
945 950 955 960
Thr Asn Glu Asp Leu Leu Arg Gly Arg Leu Val Tyr Gln His Asp Asp
965 970 975
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980 985 990
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1010 1015 1020
Arg Ile Phe His Val Ala Arg Gly Gly Arg Arg Leu Leu Thr Thr Asp
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Asp Val Ala Phe Ser Asp Ala Asp Ser Gly Phe Ala Asp Ala Gln Leu
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Arg Arg Val Leu Phe Val His Ser Gly Ala Asp Arg Gly Trp Ile Gln
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Val Pro Gln Gly Gly Gln Gly Thr Ile Asp Thr Ala Val Leu His Leu
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Thr Ala Gly Pro Arg Trp Gly Gln Leu Val Arg Ala Gly Gln Pro Ala
1170 1175 1180
Thr Ala Phe Ser Gln Gln Asp Leu Leu Asp Gly Ala Val Leu Tyr Ser
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His Asn Gly Ser Leu Ser Pro Arg Asp Thr Met Ala Phe Ser Val Glu
1205 1210 1215
Ala Gly Pro Val His Thr Asp Ala Thr Leu Gln Val Thr Ile Ala Leu
1220 1225 1230
Glu Gly Pro Leu Ala Pro Leu Lys Leu Val Arg His Lys Lys Ile Tyr
1235 1240 1245
Val Phe Gln Gly Glu Ala Ala Glu Ile Arg Arg Asp Gln Leu Glu Ala
1250 1255 1260
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Pro Pro Ser Ala Gly Tyr Leu Val Met Val Ser Arg Gly Ala Leu Ala
1285 1290 1295
Asp Glu Pro Pro Ser Leu Asp Pro Val Gln Ser Phe Ser Gln Glu Ala
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Val Asp Thr Gly Arg Val Leu Tyr Leu His Ser Arg Pro Glu Ala Trp
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Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ala Ser Gly Leu Gly Ala Pro Leu
1330 1335 1340
Glu Gly Val Leu Val Glu Leu Glu Val Leu Pro Ala Ala Ile Pro Leu
1345 1350 1355 1360
Glu Ala Gln Asn Phe Ser Val Pro Glu Gly Gly Ser Leu Thr Leu Ala
1365 1370 1375
Pro Pro Leu Leu Arg Val Ser Gly Pro Tyr Phe Pro Thr Leu Leu Gly
1380 1385 1390
Leu Ser Leu Gln Val Leu Glu Pro Pro Gln His Gly Ala Leu Gln Lys
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Glu Asp Gly Pro Gln Ala Arg Thr Leu Ser Ala Phe Ser Trp Arg Met
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Val Glu Glu Gln Leu Ile Arg Tyr Val His Asp Gly Ser Glu Thr Leu
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Thr Asp Ser Phe Val Leu Met Ala Asn Ala Ser Glu Met Asp Arg Gln
1445 1450 1455
Ser His Pro Val Ala Phe Thr Val Thr Val Leu Pro Val Asn Asp Gln
1460 1465 1470
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Thr Ala Pro Ile Pro Ala Glu Ala Leu Arg Ser Thr Asp Gly Asp Ser
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Val Val Leu Arg Gly Ala Pro Gly Thr Glu Val Arg Ser Phe Thr Gln
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Ala Gln Leu Asp Gly Gly Leu Val Leu Phe Ser His Arg Gly Thr Leu
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Leu Leu Leu Tyr Arg Val Val Arg Gly Pro Gln Leu Gly Arg Leu Phe
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1650 1655 1660
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Pro Pro Ala Arg Asp Val Ala Ala Thr Leu Ala Val Ala Val Ser Phe
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1700 1705 1710
Leu Trp Val Pro Glu Gly Gln Arg Ala Arg Ile Thr Val Ala Ala Leu
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Asp Ala Ser Asn Leu Leu Ala Ser Val Pro Ser Pro Gln Arg Ser Glu
1730 1735 1740
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1745 1750 1755 1760
Leu Val Ser Glu Glu Pro Leu His Ala Gly Gln Pro His Phe Leu Gln
1765 1770 1775
Ser Gln Leu Ala Ala Gly Gln Leu Val Tyr Ala His Gly Gly Gly Gly
1780 1785 1790
Thr Gln Gln Asp Gly Phe His Phe Arg Ala His Leu Gln Gly Pro Ala
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Gly Ala Ser Val Ala Gly Pro Gln Thr Ser Glu Ala Phe Ala Ile Thr
1810 1815 1820
Val Arg Asp Val Asn Glu Arg Pro Pro Gln Pro Gln Ala Ser Val Pro
1825 1830 1835 1840
Leu Arg Leu Thr Arg Gly Ser Arg Ala Pro Ile Ser Arg Ala Gln Leu
1845 1850 1855
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Ala Phe Val Ala Asn Gly Ser Ser Val Ala Gly Ile Phe Gln Leu Ser
1905 1910 1915 1920
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Val Ser Asp Arg Glu Glu Pro Glu Ala Ala Tyr Arg Leu Ile Gln Gly
1970 1975 1980
Pro Gln Tyr Gly His Leu Leu Val Gly Gly Arg Pro Thr Ser Ala Phe
1985 1990 1995 2000
Ser Gln Phe Gln Ile Asp Gln Gly Glu Val Val Phe Ala Phe Thr Asn
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Pro Thr Val Leu Asp Ala Gly Glu Leu Ala Asn Arg Thr Gly Ser Val
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Pro Arg Phe Arg Leu Leu Glu Gly Pro Arg His Gly Arg Val Val Arg
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Val Pro Arg Ala Arg Thr Glu Pro Gly Gly Ser Gln Leu Val Glu Gln
2100 2105 2110
Phe Thr Gln Gln Asp Leu Glu Asp Gly Arg Leu Gly Leu Glu Val Gly
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Arg Pro Glu Gly Arg Ala Pro Gly Pro Ala Gly Asp Ser Leu Thr Leu
2130 2135 2140
Glu Leu Trp Ala Gln Gly Val Pro Pro Ala Val Ala Ser Leu Asp Phe
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Ala Thr Glu Pro Tyr Asn Ala Ala Arg Pro Tyr Ser Val Ala Leu Leu
2165 2170 2175
Ser Val Pro Glu Ala Ala Arg Thr Glu Ala Gly Lys Pro Glu Ser Ser
2180 2185 2190
Thr Pro Thr Gly Glu Pro Gly Pro Met Ala Ser Ser Pro Glu Pro Ala
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Val Ala Lys Gly Gly Phe Leu Ser Phe Leu Glu Ala Asn Met Phe Ser
2210 2215 2220
Val Ile Ile Pro Met Cys Leu Val Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Leu
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Pro Leu Leu Phe Tyr Leu Arg Lys Arg Asn Lys Thr Gly Lys His Asp
2245 2250 2255
Val Gln Val Leu Thr Ala Lys Pro Arg Asn Gly Leu Ala Gly Asp Thr
2260 2265 2270
Glu Thr Phe Arg Lys Val Glu Pro Gly Gln Ala Ile Pro Leu Thr Ala
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Met Leu Trp Ile Trp Ala Val Leu Pro Leu Val Leu Ala Gly Ser Gln
1 5 10 15

ctg cgc gtg cat acc cag ggc acc aac agc att agc gaa agc ctg aaa 96
Leu Arg Val His Thr Gln Gly Thr Asn Ser Ile Ser Glu Ser Leu Lys
20 25 30

ctg cgc cgc cgc gtg cgc gaa acc gat aaa aac tgc agc gaa ggc ctg 144
Leu Arg Arg Arg Val Arg Glu Thr Asp Lys Asn Cys Ser Glu Gly Leu
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tat cag ggc ggc ccg ttt tgc tgc cag ccg tgc cag ccg ggc aaa aaa 192
Tyr Gln Gly Gly Pro Phe Cys Cys Gln Pro Cys Gln Pro Gly Lys Lys
50 55 60

aaa gtg gaa gat tgc aaa atg aac ggc ggc acc ccg acc tgc gcg ccg 240
Lys Val Glu Asp Cys Lys Met Asn Gly Gly Thr Pro Thr Cys Ala Pro
65 70 75 80

tgc acc gaa ggc aaa gaa tat atg gat aaa aac cat tat gcg gat aaa 288
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85 90 95

tgc cgc cgc tgc acc ctg tgc gat gaa gaa cat ggc ctg gaa gtg gaa 336
Cys Arg Arg Cys Thr Leu Cys Asp Glu Glu His Gly Leu Glu Val Glu
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acc aac tgc acc ctg acc cag aac acc aaa tgc aaa tgc aaa ccg gat 384
Thr Asn Cys Thr Leu Thr Gln Asn Thr Lys Cys Lys Cys Lys Pro Asp
115 120 125

ttt tat tgc gat agc ccg ggc tgc gaa cat tgc gtg cgc tgc gcg agc 432
Phe Tyr Cys Asp Ser Pro Gly Cys Glu His Cys Val Arg Cys Ala Ser
130 135 140

tgc gaa cat ggc acc ctg gaa ccg tgc acc gcg acc agc aac acc aac 480
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145 150 155 160

tgc cgc aaa cag agc ccg cgc aac cgc ctg tgg ctg ctg acc att ctg 528
Cys Arg Lys Gln Ser Pro Arg Asn Arg Leu Trp Leu Leu Thr Ile Leu
165 170 175

gtg ctg ctg att ccg ctg gtg ttt att tat cgc aaa tat cgc aaa cgc 576
Val Leu Leu Ile Pro Leu Val Phe Ile Tyr Arg Lys Tyr Arg Lys Arg
180 185 190

aaa tgc tgg aaa cgc cgc cag gat gat ccg gaa agc cgc acc agc agc 624
Lys Cys Trp Lys Arg Arg Gln Asp Asp Pro Glu Ser Arg Thr Ser Ser
195 200 205

cgc gaa acc att ccg atg aac gcg agc aac ctg agc ctg agc aaa tat 672
Arg Glu Thr Ile Pro Met Asn Ala Ser Asn Leu Ser Leu Ser Lys Tyr
210 215 220

att ccg cgc att gcg gaa gat atg acc att cag gaa gcg aaa aaa ttt 720
Ile Pro Arg Ile Ala Glu Asp Met Thr Ile Gln Glu Ala Lys Lys Phe
225 230 235 240

gcg cgc gaa aac aac att aaa gaa ggc aaa att gat gaa att atg cat 768
Ala Arg Glu Asn Asn Ile Lys Glu Gly Lys Ile Asp Glu Ile Met His
245 250 255

gat agc att cag gat acc gcg gaa cag aaa gtg cag ctg ctg ctg tgc 816
Asp Ser Ile Gln Asp Thr Ala Glu Gln Lys Val Gln Leu Leu Leu Cys
260 265 270

tgg tat cag agc cat ggc aaa agc gat gcg tat cag gat ctg att aaa 864
Trp Tyr Gln Ser His Gly Lys Ser Asp Ala Tyr Gln Asp Leu Ile Lys
275 280 285

ggc ctg aaa aaa gcg gaa tgc cgc cgc acc ctg gat aaa ttt cag gat 912
Gly Leu Lys Lys Ala Glu Cys Arg Arg Thr Leu Asp Lys Phe Gln Asp
290 295 300

atg gtg cag aaa gat ctg ggc aaa agc acc ccg gat acc ggc aac gaa 960
Met Val Gln Lys Asp Leu Gly Lys Ser Thr Pro Asp Thr Gly Asn Glu
305 310 315 320

aac gaa ggc cag tgc ctg gaa 981
Asn Glu Gly Gln Cys Leu Glu
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<213> Mus musculus

<220>
<223> [CDS]:1..981 from SEQ ID NO 238

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Leu Arg Arg Arg Val Arg Glu Thr Asp Lys Asn Cys Ser Glu Gly Leu
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Tyr Gln Gly Gly Pro Phe Cys Cys Gln Pro Cys Gln Pro Gly Lys Lys
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Lys Val Glu Asp Cys Lys Met Asn Gly Gly Thr Pro Thr Cys Ala Pro
65 70 75 80
Cys Thr Glu Gly Lys Glu Tyr Met Asp Lys Asn His Tyr Ala Asp Lys
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Cys Arg Arg Cys Thr Leu Cys Asp Glu Glu His Gly Leu Glu Val Glu
100 105 110
Thr Asn Cys Thr Leu Thr Gln Asn Thr Lys Cys Lys Cys Lys Pro Asp
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Phe Tyr Cys Asp Ser Pro Gly Cys Glu His Cys Val Arg Cys Ala Ser
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Cys Arg Lys Gln Ser Pro Arg Asn Arg Leu Trp Leu Leu Thr Ile Leu
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Val Leu Leu Ile Pro Leu Val Phe Ile Tyr Arg Lys Tyr Arg Lys Arg
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Lys Cys Trp Lys Arg Arg Gln Asp Asp Pro Glu Ser Arg Thr Ser Ser
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Ile Pro Arg Ile Ala Glu Asp Met Thr Ile Gln Glu Ala Lys Lys Phe
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Ala Arg Glu Asn Asn Ile Lys Glu Gly Lys Ile Asp Glu Ile Met His
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Asp Ser Ile Gln Asp Thr Ala Glu Gln Lys Val Gln Leu Leu Leu Cys
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Trp Tyr Gln Ser His Gly Lys Ser Asp Ala Tyr Gln Asp Leu Ile Lys
275 280 285
Gly Leu Lys Lys Ala Glu Cys Arg Arg Thr Leu Asp Lys Phe Gln Asp
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cgc ctg agc agc aaa agc gtg aac gcg cag gtg acc gat att aac agc 96
Arg Leu Ser Ser Lys Ser Val Asn Ala Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser
20 25 30

aaa ggc ctg gaa ctg cgc aaa acc gtg acc acc gtg gaa acc cag aac 144
Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn
35 40 45

ctg gaa ggc ctg cat cat gat ggc cag ttt tgc cat aaa ccg tgc ccg 192
Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro
50 55 60

ccg ggc gaa cgc aaa gcg cgc gat tgc acc gtg aac ggc gat gaa ccg 240
Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro
65 70 75 80

gat tgc gtg ccg tgc cag gaa ggc aaa gaa tat acc gat aaa gcg cat 288
Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His
85 90 95

ttt agc agc aaa tgc cgc cgc tgc cgc ctg tgc gat gaa ggc cat ggc 336
Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly
100 105 110

ctg gaa gtg gaa att aac tgc acc cgc acc cag aac acc aaa tgc cgc 384
Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg
115 120 125

tgc aaa ccg aac ttt ttt tgc aac agc acc gtg tgc gaa cat tgc gat 432
Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp
130 135 140

ccg tgc acc aaa tgc gaa cat ggc att att aaa gaa tgc acc ctg acc 480
Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr
145 150 155 160

agc aac acc aaa tgc aaa gaa gaa ggc agc cgc agc aac ctg ggc tgg 528
Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp
165 170 175

ctg tgc ctg ctg ctg ctg ccg att ccg ctg att gtg tgg gtg aaa cgc 576
Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys Arg
180 185 190

aaa gaa gtg cag aaa acc tgc cgc aaa cat cgc aaa gaa aac cag ggc 624
Lys Glu Val Gln Lys Thr Cys Arg Lys His Arg Lys Glu Asn Gln Gly
195 200 205

agc cat gaa agc ccg acc ctg aac ccg gaa acc gtg gcg att aac ctg 672
Ser His Glu Ser Pro Thr Leu Asn Pro Glu Thr Val Ala Ile Asn Leu
210 215 220

agc gat gtg gat ctg agc aaa tat att acc acc att gcg ggc gtg atg 720
Ser Asp Val Asp Leu Ser Lys Tyr Ile Thr Thr Ile Ala Gly Val Met
225 230 235 240

acc ctg agc cag gtg aaa ggc ttt gtg cgc aaa aac ggc gtg aac gaa 768
Thr Leu Ser Gln Val Lys Gly Phe Val Arg Lys Asn Gly Val Asn Glu
245 250 255

gcg aaa att gat gaa att aaa aac gat aac gtg cag gat acc gcg gaa 816
Ala Lys Ile Asp Glu Ile Lys Asn Asp Asn Val Gln Asp Thr Ala Glu
260 265 270

cag aaa gtg cag ctg ctg cgc aac tgg cat cag ctg cat ggc aaa aaa 864
Gln Lys Val Gln Leu Leu Arg Asn Trp His Gln Leu His Gly Lys Lys
275 280 285

gaa gcg tat gat acc ctg att aaa gat ctg aaa aaa gcg aac ctg tgc 912
Glu Ala Tyr Asp Thr Leu Ile Lys Asp Leu Lys Lys Ala Asn Leu Cys
290 295 300

acc ctg gcg gaa aaa att cag acc att att ctg aaa gat att acc agc 960
Thr Leu Ala Glu Lys Ile Gln Thr Ile Ile Leu Lys Asp Ile Thr Ser
305 310 315 320

gat agc gaa aac agc aac ttt cgc aac gaa att cag agc ctg gtg 1005
Asp Ser Glu Asn Ser Asn Phe Arg Asn Glu Ile Gln Ser Leu Val
325 330 335

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<212> PRT
<213> Homo sapiens

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<223> [CDS]:1..1005 from SEQ ID NO 240

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Met Leu Gly Ile Trp Thr Leu Leu Pro Leu Val Leu Thr Ser Val Ala
1 5 10 15
Arg Leu Ser Ser Lys Ser Val Asn Ala Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser
20 25 30
Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn
35 40 45
Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro
50 55 60
Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro
65 70 75 80
Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His
85 90 95
Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly
100 105 110
Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg
115 120 125
Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp
130 135 140
Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr
145 150 155 160
Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp
165 170 175
Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys Arg
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Lys Glu Val Gln Lys Thr Cys Arg Lys His Arg Lys Glu Asn Gln Gly
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Ser Asp Val Asp Leu Ser Lys Tyr Ile Thr Thr Ile Ala Gly Val Met
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Thr Leu Ser Gln Val Lys Gly Phe Val Arg Lys Asn Gly Val Asn Glu
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260 265 270
Gln Lys Val Gln Leu Leu Arg Asn Trp His Gln Leu His Gly Lys Lys
275 280 285
Glu Ala Tyr Asp Thr Leu Ile Lys Asp Leu Lys Lys Ala Asn Leu Cys
290 295 300
Thr Leu Ala Glu Lys Ile Gln Thr Ile Ile Leu Lys Asp Ile Thr Ser
305 310 315 320
Asp Ser Glu Asn Ser Asn Phe Arg Asn Glu Ile Gln Ser Leu Val
325 330 335

<210> 242
<211> 837
<212> DNA
<213> Mus <mouse, genus>

<220>
<223> FASL

<220>
<221> CDS
<222> 1..837
<223> /transl_table=1

<400> 242
atg cag cag ccg atg aac tat ccg tgc ccg cag att ttt tgg gtg gat 48
Met Gln Gln Pro Met Asn Tyr Pro Cys Pro Gln Ile Phe Trp Val Asp
1 5 10 15

agc agc gcg acc agc agc tgg gcg ccg ccg ggc agc gtg ttt ccg tgc 96
Ser Ser Ala Thr Ser Ser Trp Ala Pro Pro Gly Ser Val Phe Pro Cys
20 25 30

ccg agc tgc ggc ccg cgc ggc ccg gat cag cgc cgc ccg ccg ccg ccg 144
Pro Ser Cys Gly Pro Arg Gly Pro Asp Gln Arg Arg Pro Pro Pro Pro
35 40 45

ccg ccg ccg gtg agc ccg ctg ccg ccg ccg agc cag ccg ctg ccg ctg 192
Pro Pro Pro Val Ser Pro Leu Pro Pro Pro Ser Gln Pro Leu Pro Leu
50 55 60

ccg ccg ctg acc ccg ctg aaa aaa aaa gat cat aac acc aac ctg tgg 240
Pro Pro Leu Thr Pro Leu Lys Lys Lys Asp His Asn Thr Asn Leu Trp
65 70 75 80

ctg ccg gtg gtg ttt ttt atg gtg ctg gtg gcg ctg gtg ggc atg ggc 288
Leu Pro Val Val Phe Phe Met Val Leu Val Ala Leu Val Gly Met Gly
85 90 95

ctg ggc atg tat cag ctg ttt cat ctg cag aaa gaa ctg gcg gaa ctg 336
Leu Gly Met Tyr Gln Leu Phe His Leu Gln Lys Glu Leu Ala Glu Leu
100 105 110

cgc gaa ttt acc aac cag agc ctg aaa gtg agc agc ttt gaa aaa cag 384
Arg Glu Phe Thr Asn Gln Ser Leu Lys Val Ser Ser Phe Glu Lys Gln
115 120 125

att gcg aac ccg agc acc ccg agc gaa aaa aaa gaa ccg cgc agc gtg 432
Ile Ala Asn Pro Ser Thr Pro Ser Glu Lys Lys Glu Pro Arg Ser Val
130 135 140

gcg cat ctg acc ggc aac ccg cat agc cgc agc att ccg ctg gaa tgg 480
Ala His Leu Thr Gly Asn Pro His Ser Arg Ser Ile Pro Leu Glu Trp
145 150 155 160

gaa gat acc tat ggc acc gcg ctg att agc ggc gtg aaa tat aaa aaa 528
Glu Asp Thr Tyr Gly Thr Ala Leu Ile Ser Gly Val Lys Tyr Lys Lys
165 170 175

ggc ggc ctg gtg att aac gaa acc ggc ctg tat ttt gtg tat agc aaa 576
Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr Ser Lys
180 185 190

gtg tat ttt cgc ggc cag agc tgc aac aac cag ccg ctg aac cat aaa 624
Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Gln Pro Leu Asn His Lys
195 200 205

gtg tat atg cgc aac agc aaa tat ccg gaa gat ctg gtg ctg atg gaa 672
Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Glu Asp Leu Val Leu Met Glu
210 215 220

gaa aaa cgc ctg aac tat tgc acc acc ggc cag att tgg gcg cat agc 720
Glu Lys Arg Leu Asn Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Ile Trp Ala His Ser
225 230 235 240

agc tat ctg ggc gcg gtg ttt aac ctg acc agc gcg gat cat ctg tat 768
Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His Leu Tyr
245 250 255

gtg aac att agc cag ctg agc ctg att aac ttt gaa gaa agc aaa acc 816
Val Asn Ile Ser Gln Leu Ser Leu Ile Asn Phe Glu Glu Ser Lys Thr
260 265 270

ttt ttt ggc ctg tat aaa ctg 837
Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
275

<210> 243
<211> 279
<212> PRT
<213> Mus <mouse, genus>

<220>
<223> [CDS]:1..837 from SEQ ID NO 242

<400> 243
Met Gln Gln Pro Met Asn Tyr Pro Cys Pro Gln Ile Phe Trp Val Asp
1 5 10 15
Ser Ser Ala Thr Ser Ser Trp Ala Pro Pro Gly Ser Val Phe Pro Cys
20 25 30
Pro Ser Cys Gly Pro Arg Gly Pro Asp Gln Arg Arg Pro Pro Pro Pro
35 40 45
Pro Pro Pro Val Ser Pro Leu Pro Pro Pro Ser Gln Pro Leu Pro Leu
50 55 60
Pro Pro Leu Thr Pro Leu Lys Lys Lys Asp His Asn Thr Asn Leu Trp
65 70 75 80
Leu Pro Val Val Phe Phe Met Val Leu Val Ala Leu Val Gly Met Gly
85 90 95
Leu Gly Met Tyr Gln Leu Phe His Leu Gln Lys Glu Leu Ala Glu Leu
100 105 110
Arg Glu Phe Thr Asn Gln Ser Leu Lys Val Ser Ser Phe Glu Lys Gln
115 120 125
Ile Ala Asn Pro Ser Thr Pro Ser Glu Lys Lys Glu Pro Arg Ser Val
130 135 140
Ala His Leu Thr Gly Asn Pro His Ser Arg Ser Ile Pro Leu Glu Trp
145 150 155 160
Glu Asp Thr Tyr Gly Thr Ala Leu Ile Ser Gly Val Lys Tyr Lys Lys
165 170 175
Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr Ser Lys
180 185 190
Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Gln Pro Leu Asn His Lys
195 200 205
Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Glu Asp Leu Val Leu Met Glu
210 215 220
Glu Lys Arg Leu Asn Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Ile Trp Ala His Ser
225 230 235 240
Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His Leu Tyr
245 250 255
Val Asn Ile Ser Gln Leu Ser Leu Ile Asn Phe Glu Glu Ser Lys Thr
260 265 270
Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
275

<210> 244
<211> 843
<212> DNA
<213> Homo sapiens

<220>
<223> FASL

<220>
<221> CDS
<222> 1..843
<223> /transl_table=1

<400> 244
atg cag cag ccg ttt aac tat ccg tat ccg cag att tat tgg gtg gat 48
Met Gln Gln Pro Phe Asn Tyr Pro Tyr Pro Gln Ile Tyr Trp Val Asp
1 5 10 15

agc agc gcg agc agc ccg tgg gcg ccg ccg ggc acc gtg ctg ccg tgc 96
Ser Ser Ala Ser Ser Pro Trp Ala Pro Pro Gly Thr Val Leu Pro Cys
20 25 30

ccg acc agc gtg ccg cgc cgc ccg ggc cag cgc cgc ccg ccg ccg ccg 144
Pro Thr Ser Val Pro Arg Arg Pro Gly Gln Arg Arg Pro Pro Pro Pro
35 40 45

ccg ccg ccg ccg ccg ctg ccg ccg ccg ccg ccg ccg ccg ccg ctg ccg 192
Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro
50 55 60

ccg ctg ccg ctg ccg ccg ctg aaa aaa cgc ggc aac cat agc acc ggc 240
Pro Leu Pro Leu Pro Pro Leu Lys Lys Arg Gly Asn His Ser Thr Gly
65 70 75 80

ctg tgc ctg ctg gtg atg ttt ttt atg gtg ctg gtg gcg ctg gtg ggc 288
Leu Cys Leu Leu Val Met Phe Phe Met Val Leu Val Ala Leu Val Gly
85 90 95

ctg ggc ctg ggc atg ttt cag ctg ttt cat ctg cag aaa gaa ctg gcg 336
Leu Gly Leu Gly Met Phe Gln Leu Phe His Leu Gln Lys Glu Leu Ala
100 105 110

gaa ctg cgc gaa agc acc agc cag atg cat acc gcg agc agc ctg gaa 384
Glu Leu Arg Glu Ser Thr Ser Gln Met His Thr Ala Ser Ser Leu Glu
115 120 125

aaa cag att ggc cat ccg agc ccg ccg ccg gaa aaa aaa gaa ctg cgc 432
Lys Gln Ile Gly His Pro Ser Pro Pro Pro Glu Lys Lys Glu Leu Arg
130 135 140

aaa gtg gcg cat ctg acc ggc aaa agc aac agc cgc agc atg ccg ctg 480
Lys Val Ala His Leu Thr Gly Lys Ser Asn Ser Arg Ser Met Pro Leu
145 150 155 160

gaa tgg gaa gat acc tat ggc att gtg ctg ctg agc ggc gtg aaa tat 528
Glu Trp Glu Asp Thr Tyr Gly Ile Val Leu Leu Ser Gly Val Lys Tyr
165 170 175

aaa aaa ggc ggc ctg gtg att aac gaa acc ggc ctg tat ttt gtg tat 576
Lys Lys Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr
180 185 190

agc aaa gtg tat ttt cgc ggc cag agc tgc aac aac ctg ccg ctg agc 624
Ser Lys Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Leu Pro Leu Ser
195 200 205

cat aaa gtg tat atg cgc aac agc aaa tat ccg cag gat ctg gtg atg 672
His Lys Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Gln Asp Leu Val Met
210 215 220

atg gaa ggc aaa atg atg agc tat tgc acc acc ggc cag atg tgg gcg 720
Met Glu Gly Lys Met Met Ser Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Met Trp Ala
225 230 235 240

cgc agc agc tat ctg ggc gcg gtg ttt aac ctg acc agc gcg gat cat 768
Arg Ser Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His
245 250 255

ctg tat gtg aac gtg agc gaa ctg agc ctg gtg aac ttt gaa gaa agc 816
Leu Tyr Val Asn Val Ser Glu Leu Ser Leu Val Asn Phe Glu Glu Ser
260 265 270

cag acc ttt ttt ggc ctg tat aaa ctg 843
Gln Thr Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
275 280

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<212> PRT
<213> Homo sapiens

<220>
<223> [CDS]:1..843 from SEQ ID NO 244

<400> 245
Met Gln Gln Pro Phe Asn Tyr Pro Tyr Pro Gln Ile Tyr Trp Val Asp
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Ser Ser Ala Ser Ser Pro Trp Ala Pro Pro Gly Thr Val Leu Pro Cys
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Pro Thr Ser Val Pro Arg Arg Pro Gly Gln Arg Arg Pro Pro Pro Pro
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Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro
50 55 60
Pro Leu Pro Leu Pro Pro Leu Lys Lys Arg Gly Asn His Ser Thr Gly
65 70 75 80
Leu Cys Leu Leu Val Met Phe Phe Met Val Leu Val Ala Leu Val Gly
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Leu Gly Leu Gly Met Phe Gln Leu Phe His Leu Gln Lys Glu Leu Ala
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Glu Leu Arg Glu Ser Thr Ser Gln Met His Thr Ala Ser Ser Leu Glu
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Lys Gln Ile Gly His Pro Ser Pro Pro Pro Glu Lys Lys Glu Leu Arg
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Lys Val Ala His Leu Thr Gly Lys Ser Asn Ser Arg Ser Met Pro Leu
145 150 155 160
Glu Trp Glu Asp Thr Tyr Gly Ile Val Leu Leu Ser Gly Val Lys Tyr
165 170 175
Lys Lys Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr
180 185 190
Ser Lys Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Leu Pro Leu Ser
195 200 205
His Lys Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Gln Asp Leu Val Met
210 215 220
Met Glu Gly Lys Met Met Ser Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Met Trp Ala
225 230 235 240
Arg Ser Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His
245 250 255
Leu Tyr Val Asn Val Ser Glu Leu Ser Leu Val Asn Phe Glu Glu Ser
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Gln Thr Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> E3del

<220>
<221> CDS
<222> 1..1233
<223> /transl_table=1

<400> 246
atg cga ccc tcc ggg acg gcc ggg gca gcg ctc ctg gcg ctg ctg gct 48
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15

gcg ctc tgc ccg gcg agt cgg gct ctg gag gaa aag aaa ggt aat tat 96
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr
20 25 30

gtg gtg aca gat cac ggc tcg tgc gtc cga gcc tgt ggg gcc gac agc 144
Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser
35 40 45

tat gag atg gag gaa gac ggc gtc cgc aag tgt aag aag tgc gaa ggg 192
Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly
50 55 60

cct tgc cgc aaa gtg tgt aac gga ata ggt att ggt gaa ttt aaa gac 240
Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp
65 70 75 80

tca ctc tcc ata aat gct acg aat att aaa cac ttc aaa aac tgc acc 288
Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr
85 90 95

tcc atc agt ggc gat ctc cac atc ctg ccg gtg gca ttt agg ggt gac 336
Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp
100 105 110

tcc ttc aca cat act cct cct ctg gat cca cag gaa ctg gat att ctg 384
Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu
115 120 125

aaa acc gta aag gaa atc aca ggg ttt ttg ctg att cag gct tgg cct 432
Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro
130 135 140

gaa aac agg acg gac ctc cat gcc ttt gag aac cta gaa atc ata cgc 480
Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg
145 150 155 160

ggc agg acc aag caa cat ggt cag ttt tct ctt gca gtc gtc agc ctg 528
Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu
165 170 175

aac ata aca tcc ttg gga tta cgc tcc ctc aag gag ata agt gat gga 576
Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly
180 185 190

gat gtg ata att tca gga aac aaa aat ttg tgc tat gca aat aca ata 624
Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile
195 200 205

aac tgg aaa aaa ctg ttt ggg acc tcc ggt cag aaa acc aaa att ata 672
Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile
210 215 220

agc aac aga ggt gaa aac agc tgc aag gcc aca ggc cag gtc tgc cat 720
Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His
225 230 235 240

gcc ttg tgc tcc ccc gag ggc tgc tgg ggc ccg gag ccc agg gac tgc 768
Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys
245 250 255

gtc tct tgc cgg aat gtc agc cga ggc agg gaa tgc gtg gac aag tgc 816
Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys
260 265 270

aac ctt ctg gag ggt gag cca agg gag ttt gtg gag aac tct gag tgc 864
Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys
275 280 285

ata cag tgc cac cca gag tgc ctg cct cag gcc atg aac atc acc tgc 912
Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys
290 295 300

aca gga cgg gga cca gac aac tgt atc cag tgt gcc cac tac att gac 960
Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp
305 310 315 320

ggc ccc cac tgc gtc aag acc tgc ccg gca gga gtc atg gga gaa aac 1008
Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn
325 330 335

aac acc ctg gtc tgg aag tac gca gac gcc ggc cat gtg tgc cac ctg 1056
Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu
340 345 350

tgc cat cca aac tgc acc tac gga tgc act ggg cca ggt ctt gaa ggc 1104
Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly
355 360 365

tgt cca acg aat ggg cct aag atc ccg tcc atc gcc act ggg atg gtg 1152
Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val
370 375 380

ggg gcc ctc ctc ttg ctg ctg gtg gtg gcc ctg ggg atc ggc ctc ttc 1200
Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe
385 390 395 400

atg cga agg cgc cac atc gtt cgg aag cgc tga 1233
Met Arg Arg Arg His Ile Val Arg Lys Arg
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<211> 410
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..1233 from SEQ ID NO 246

<400> 247
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser
35 40 45
Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly
50 55 60
Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp
65 70 75 80
Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr
85 90 95
Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp
100 105 110
Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu
115 120 125
Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro
130 135 140
Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg
145 150 155 160
Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu
165 170 175
Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly
180 185 190
Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile
195 200 205
Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile
210 215 220
Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His
225 230 235 240
Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys
245 250 255
Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys
260 265 270
Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys
275 280 285
Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys
290 295 300
Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp
305 310 315 320
Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn
325 330 335
Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu
340 345 350
Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly
355 360 365
Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val
370 375 380
Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe
385 390 395 400
Met Arg Arg Arg His Ile Val Arg Lys Arg
405 410

<210> 248
<211> 1410
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CAREpCam

<220>
<221> CDS
<222> 1..1410
<223> /transl_table=1

<400> 248
atg gac atc aga ctg agc ctg gcc ttc ctg gtg ctg ttc atc aag ggc 48
Met Asp Ile Arg Leu Ser Leu Ala Phe Leu Val Leu Phe Ile Lys Gly
1 5 10 15

gtg cag tgc gag gtg cag ctg gcc gaa tct ggc ggc gga ctg gtg cag 96
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30

ccc ggc aga tcc atg aag ctg agc tgc gct gcc agc ggc ttc acc ttc 144
Pro Gly Arg Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45

agc aac ttc ccc atg gcc tgg gtg cgc cag gcc ccc acc aag tgt ctg 192
Ser Asn Phe Pro Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Cys Leu
50 55 60

gaa tgg gtg gcc acc atc agc acc agc ggc ggc agc acc tac tac cgg 240
Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg
65 70 75 80

gac agc gtg aag ggc cgg ttc acc atc agc cgg gac aac gcc aag agc 288
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser
85 90 95

acc ctg tac ctg cag atg aac agc ctg cgg agc gag gac acc gcc acc 336
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr
100 105 110

tac tac tgc acc cgg acc ctg tac atc ctg cgg gtg ttc tac ttc gac 384
Tyr Tyr Cys Thr Arg Thr Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp
115 120 125

tac tgg ggc cag ggc gtg atg gtg aca gtg tct agc ggc gga ggc ggc 432
Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140

agc gga ggt gga gga agt ggc ggc gga gga tcc gac atc cag atg acc 480
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
145 150 155 160

cag tct ccc gcc agc ctg agc gcc tct ctg ggc gag aca gtg tcc atc 528
Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Thr Val Ser Ile
165 170 175

gag tgc ctg gcc agc gag ggc atc agc aac gac ctg gcc tgg tat cag 576
Glu Cys Leu Ala Ser Glu Gly Ile Ser Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln
180 185 190

cag aag tcc ggc aag agc ccc cag ctg ctg atc tac gcc acc agc aga 624
Gln Lys Ser Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Arg
195 200 205

ctg cag gac ggc gtg ccc agc aga ttc agc ggc agc ggc tcc ggc acc 672
Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
210 215 220

cgg tac agc ctg aag atc agc ggc atg cag ccc gag gac gag gcc gac 720
Arg Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Gly Met Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp
225 230 235 240

tac ttc tgc cag cag agc tac aag tac ccc tgg acc ttc ggc tgc ggc 768
Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly
245 250 255

aca aag ctg gaa ctg aag ggc gga ggg ggc tct ggg gga ggc gga tct 816
Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
260 265 270

ctc gag gaa cag aag ctg atc agc gaa gag gac ctg act act acc aag 864
Leu Glu Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr Thr Thr Lys
275 280 285

cca gtg ctg cga act ccc tca cct gtg cac cct acc ggg aca tct cag 912
Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val His Pro Thr Gly Thr Ser Gln
290 295 300

ccc cag aga cca gaa gat tgt cgg ccc cgt ggc tca gtg aag ggg acc 960
Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr
305 310 315 320

gga ttg gac ttc gcc tgt gat att tac atc tgg gca ccc ttg gcc gga 1008
Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
325 330 335

atc tgc gtg gcc ctt ctg ctg tcc ttg atc atc act ctc atc tgc tac 1056
Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Tyr
340 345 350

cac agg agc cga aga gca aaa ttc agc agg agt gca gag act gct gcc 1104
His Arg Ser Arg Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala
355 360 365

aac ctg cag gac ccc aac cag ctc tac aat gag ctc aat cta ggg cga 1152
Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
370 375 380

aga gag gaa tat gac gtc ttg gag aag aag cgg gct cgg gat cca gag 1200
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu
385 390 395 400

atg gga ggc aaa cag cag agg agg agg aac ccc cag gaa ggc gta tac 1248
Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr
405 410 415

aat gca ctg cag aaa gac aag atg gca gaa gcc tac agt gag atc ggc 1296
Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
420 425 430

aca aaa ggc gag agg cgg aga ggc aag ggg cac gat ggc ctt tac cag 1344
Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
435 440 445

ggt ctc agc act gcc acc aag gac acc tat gat gcc ctg cat atg cag 1392
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
450 455 460

acc ctg gcc cct cgc taa 1410
Thr Leu Ala Pro Arg
465

<210> 249
<211> 469
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> [CDS]:1..1410 from SEQ ID NO 248

<400> 249
Met Asp Ile Arg Leu Ser Leu Ala Phe Leu Val Leu Phe Ile Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asn Phe Pro Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Cys Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr
100 105 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Thr Leu Tyr Ile Leu Arg Val Phe Tyr Phe Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
145 150 155 160
Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Thr Val Ser Ile
165 170 175
Glu Cys Leu Ala Ser Glu Gly Ile Ser Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln
180 185 190
Gln Lys Ser Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Arg
195 200 205
Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
210 215 220
Arg Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Gly Met Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp
225 230 235 240
Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly
245 250 255
Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
260 265 270
Leu Glu Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Thr Thr Thr Lys
275 280 285
Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val His Pro Thr Gly Thr Ser Gln
290 295 300
Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr
305 310 315 320
Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
325 330 335
Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Tyr
340 345 350
His Arg Ser Arg Arg Ala Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala
355 360 365
Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
370 375 380
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu
385 390 395 400
Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr
405 410 415
Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
420 425 430
Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
435 440 445
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
450 455 460
Thr Leu Ala Pro Arg
465

【外国語明細書】