特開 2022-17258 血液脳関門を通過する新規な抗ヒトトランスフェリン受容体抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022017258

(43)【公開日】2022-01-25

(54)【発明の名称】血液脳関門を通過する新規な抗ヒトトランスフェリン受容体抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20220118BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20220118BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20220118BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 9/24 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 9/14 20060101ALI20220118BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 15/56 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 15/55 20060101ALI20220118BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20220118BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20220118BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20220118BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220118BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/62 Z

C07K16/46

C07K19/00

C12N9/24

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N9/14

C07K16/28

C12N15/56

C12N15/55

C12N15/12

A61P25/00

A61K31/711

A61K48/00

【審査請求】有

【請求項の数】42

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021164252

(22)【出願日】2021-10-05

(62)【分割の表示】P 2018559537の分割

【原出願日】2017-12-26

(31)【優先権主張番号】P 2016252148

(32)【優先日】2016-12-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】000228545

【氏名又は名称】ＪＣＲファーマ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100176773

【弁理士】

【氏名又は名称】坂西 俊明

(74)【代理人】

【識別番号】100128897

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 佳希

(72)【発明者】

【氏名】薗田 啓之

(72)【発明者】

【氏名】高橋 健一

【テーマコード（参考）】

4B050

4B065

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B050CC03

4B050DD11

4B050LL01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA27

4B065CA44

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZA021

4C084ZA022

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA02

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA40

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA89

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】      （修正有）

【課題】血中に投与して中枢神経系において機能させるべき化合物（蛋白質，低分子化合物等）が血液脳関門を通過できるようにするために，それらの化合物と結合させて用いることのできる抗トランスフェリン受容体抗体を提供する。
【解決手段】抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体が重鎖の可変領域において，（ａ）ＣＤＲ１が特定のアミノ酸配列を含んでなり，（ｂ）ＣＤＲ２が特定のアミノ酸配列を含んでなり，且つ，（ｃ）ＣＤＲ３が特定のアミノ酸配列を含んでなる，抗体。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖のアミノ酸配列をコードする遺伝子と，該抗体の軽鎖のアミノ酸配列をコードする遺伝子を含み，
該抗体は，該重鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６２又は配列番号６３のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号１３又は配列番号１４のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１５又は配列番号１６のアミノ酸配列を含んでなり，
該抗体は，該軽鎖の可変領域において、
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなるものである，ＤＮＡ断片。

【請求項2】

該重鎖の可変領域のフレームワーク領域３が配列番号６４のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項１のＤＮＡ断片。

【請求項3】

該重鎖の可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項２のＤＮＡ断片。

【請求項4】

該重鎖が，配列番号６６又は配列番号６８のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項３のＤＮＡ断片。

【請求項5】

該抗体の軽鎖の可変領域が，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１又は配列番号２２のアミノ酸配列に対し８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり，且つ
該抗体の軽鎖の可変領域において、
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項１のＤＮＡ断片。

【請求項6】

該抗体の軽鎖の可変領域が，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１又は配列番号２２のアミノ酸配列に対し９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり，且つ
該抗体の軽鎖の可変領域において、
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項１のＤＮＡ断片。

【請求項7】

該抗体の軽鎖が，配列番号２３，配列番号２５，配列番号２７又は配列番号２９のアミノ酸配列に対し８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり，且つ
該抗体の軽鎖の可変領域において、
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項１のＤＮＡ断片。

【請求項8】

該抗体の軽鎖が，配列番号２３，配列番号２５，配列番号２７又は配列番号２９のアミノ酸配列に対し９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり，且つ
該抗体の軽鎖の可変領域において、
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号８のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項１のＤＮＡ断片。

【請求項9】

該抗体がヒトトランスフェリン受容体の細胞外領域及びサルトランスフェリン受容体の細胞外領域の双方に対して親和性を有するものである，請求項１～８の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項10】

該抗体がヒトトランスフェリン受容体の細胞外領域との解離定数が１×１０^－１０Ｍ以下のものであり，サルトランスフェリン受容体の細胞外領域との解離定数が１×１０^－９Ｍ以下のものである，請求項９のＤＮＡ断片。

【請求項11】

該抗体が、Ｆａｂ抗体，Ｆ（ａｂ’）_２抗体，又はＦ（ａｂ’）抗体である，請求項１～１０の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項12】

該抗体が、ｓｃＦａｂ，ｓｃＦ（ａｂ’），ｓｃＦ（ａｂ’）_２及びｓｃＦｖからなる群から選ばれる一本鎖抗体である，請求項１～１０の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項13】

該一本鎖抗体が，その軽鎖と重鎖とがリンカー配列を介して結合しているものである，請求項１２のＤＮＡ断片。

【請求項14】

該一本鎖抗体が，該軽鎖のＣ末端側において，リンカー配列を介して該重鎖が結合しているものである，請求項１３のＤＮＡ断片。

【請求項15】

該一本鎖抗体が，該重鎖のＣ末端側において，リンカー配列を介して該軽鎖が結合しているものである，請求項１３のＤＮＡ断片。

【請求項16】

該リンカー配列が，２～５０個のアミノ酸残基からなるものである，請求項１３～１５の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項17】

該リンカー配列が，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ，配列番号３，配列番号４，配列番号５の各アミノ酸配列，配列番号３のアミノ酸配列の３個が連続してなるアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が２～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるものである，請求項１３～１６の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項18】

抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片であって、
該融合蛋白質は，該蛋白質（Ａ）が，該抗体の軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に結合しているものであり，
請求項１～１７の何れかに記載の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖のアミノ酸配列をコードする遺伝子、及び請求項１～１７の何れかに記載の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖のアミノ酸配列をコードする遺伝子を含む，ＤＮＡ断片。

【請求項19】

該蛋白質（Ａ）が，該軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に，直接又はリンカーを介して結合しているものである，請求項１８のＤＮＡ断片。

【請求項20】

該蛋白質（Ａ）が，該軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側においてリンカーを介して結合しているものである，請求項１８のＤＮＡ断片。

【請求項21】

該リンカーが，１～５０個のアミノ酸残基からなるペプチドである，請求項２０のＤＮＡ断片。

【請求項22】

該リンカーが，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸列が２～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含んでなるペプチドである，請求項２１のＤＮＡ断片。

【請求項23】

抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片であって、
該融合蛋白質は，該蛋白質（Ａ）が，該抗体の重鎖のＣ末端側又はＮ末端側に結合しているものであり，
請求項１～１７の何れかに記載の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖のアミノ酸配列をコードする遺伝子、及び請求項１～１７の何れかに記載の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖のアミノ酸配列をコードする遺伝子を含む，ＤＮＡ断片。

【請求項24】

該蛋白質（Ａ）が，該重鎖のＣ末端側又はＮ末端側に，直接又はリンカーを介して結合しているものである，請求項２３のＤＮＡ断片。

【請求項25】

該蛋白質（Ａ）が，該重鎖のＣ末端側又はＮ末端側においてリンカーを介して結合しているものである，請求項２３のＤＮＡ断片。

【請求項26】

該リンカーが，１～５０個のアミノ酸残基からなるペプチドである，請求項２５のＤＮＡ断片。

【請求項27】

該リンカーが，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が２～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含んでなるペプチドである，請求項２６のＤＮＡ断片。

【請求項28】

該蛋白質（Ａ）が，ヒト由来の蛋白質である，請求項１８～２７の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項29】

該蛋白質（Ａ）が，神経成長因子（ＮＧＦ），リソソーム酵素，毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ），グリア細胞株神経栄養因子（ＧＤＮＦ），ニューロトロフィン３，ニューロトロフィン４／５，ニューロトロフィン６，ニューレグリン１，エリスロポエチン，ダルベポエチン，アクチビン，塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ），線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ２），上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ），血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ），インターフェロンα，インターフェロンβ，インターフェロンγ，インターロイキン６，顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ），顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ），マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ），各種サイトカイン，腫瘍壊死因子α受容体（ＴＮＦ－α受容体），ＰＤ－１リガンド，ＰＤ－Ｌ１，ＰＤ－Ｌ２，ベータアミロイドを分解する活性を有する酵素，抗ベータアミロイド抗体，抗ＢＡＣＥ抗体，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＰＤ－１抗体，抗ＰＤ－Ｌ１抗体，抗ＰＤ－Ｌ２抗体，抗ＨＥＲ２抗体，抗ＴＮＦ－α抗体，及び抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択されるものである，請求項１８～２８の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項30】

該蛋白質（Ａ）がリソソーム酵素であり，該リソソーム酵素が，α－Ｌ－イズロニダーゼ，イズロン酸－２－スルファターゼ，ヒト酸性α－グルコシダーゼ，グルコセレブロシダーゼ，β－ガラクトシダーゼ，ＧＭ２活性化蛋白質，β－ヘキソサミニダーゼＡ，β－ヘキソサミニダーゼＢ，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼ，α－マンノシダーゼ，β－マンノシダーゼ，ガラクトシルセラミダーゼ，サポシンＣ，アリールスルファターゼＡ，α－Ｌ－フコシダーゼ，アスパルチルグルコサミニダーゼ，α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ，酸性スフィンゴミエリナーゼ，α－ガラクトシダーゼ Ａ，β－グルクロニダーゼ，ヘパランＮ－スルファターゼ，α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ，アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ，Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ，酸性セラミダーゼ，アミロ－１，６－グルコシダーゼ，シアリダーゼ，パルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１，トリペプチジルペプチダーゼ－１，ヒアルロニダーゼ－１，ＣＬＮ１及びＣＬＮ２からなる群より選択されるものである，請求項１８～２８の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項31】

該蛋白質（Ａ）が，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ、ヒト酸性α－グルコシダーゼ、又はヒトα－Ｌ－イズロニダーゼの何れかである，請求項１８～２８の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項32】

該融合蛋白質は，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域又はその一部が，該蛋白質（Ａ）と該抗体との間に導入されてなるものである，請求項１８～３１の何れかのＤＮＡ断片。

【請求項33】

該融合蛋白質は，該蛋白質（Ａ）のＣ末端側に，直接又はリンカー配列を介して，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が結合してなり，且つ，該ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣ末端側に直接又はリンカー配列を介して該抗体の重鎖又は軽鎖が結合してなるものである，請求項３２のＤＮＡ断片。

【請求項34】

ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が配列番号７０のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項３２又は３３のＤＮＡ断片。

【請求項35】

該融合蛋白質は，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域がリンカー配列を介して配列番号６１のアミノ酸配列からなるＦａｂ重鎖と結合し，それにより形成される配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなるものである，請求項３４のＤＮＡ断片。

【請求項36】

請求項１～３５のＤＮＡ断片を組み込んでなる，発現ベクター。

【請求項37】

請求項３６の発現ベクターで形質転換された哺乳動物細胞。

【請求項38】

中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，請求項２９～３１の何れかのＤＮＡ断片の使用。

【請求項39】

リソソーム病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，請求項２９～３１の何れかのＤＮＡ断片の使用。

【請求項40】

ポンペ病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，請求項３１のＤＮＡ断片の使用。

【請求項41】

ハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，請求項３１のＤＮＡ断片の使用。

【請求項42】

ハンター症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，請求項３１のＤＮＡ断片の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は，血中に投与して中枢神経系（ＣＮＳ）において機能させるべき化合物（蛋白質，低分子化合物等）が血液脳関門を通過できるようにするために，それらの化合物と結合させて用いる抗ヒトトランスフェリン受容体抗体，その製造法及びその使用法に関する。

【背景技術】

【0002】

脳室周囲器官（松果体，脳下垂体，最後野等）を含む幾つかの領域を除き脳の大半の組織に血液を供給する毛細血管は，筋肉等その他の組織に存在する毛細血管と異なり，その内皮を形成している内皮細胞同士が強固な細胞間接合によって密着し合っている。そのため，血液から脳への物質の受動輸送が妨げられ，例外はあるものの，脂溶性の高い物質，又は分子量が小さく（２００～５００ダルトン以下）且つ生理ｐＨ付近において電気的に中性な物質以外，毛細血管から脳へ移行しにくい。このような，脳内の毛細血管内皮を介した，血液と脳の組織液との間での物質交換を制限する機構は，血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ－Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ，ＢＢＢ）と呼ばれている。また，血液脳関門は，脳のみならず，脳及び脊髄を含む中枢神経系の組織液と血液との間の物質交換をも制限している。

【0003】

血液脳関門の存在により，中枢神経系の細胞の大半は，血中のホルモン，リンホカイン等の物質の濃度変動の影響を受けることなく，その生化学的な恒常性が保たれる。

【0004】

しかしながら，血液脳関門の存在は，薬剤開発の上で問題を提起する。例えば，α－Ｌ－イズロニダーゼの欠損に起因する遺伝性代謝疾患であるムコ多糖症Ｉ型（ハーラー症候群）に対しては，組換えα－Ｌ－イズロニダーゼを静脈内補充する酵素補充療法が，その治療法として行われているが，ハーラー症候群において認められる顕著な中枢神経系（ＣＮＳ）の異常に対しては，酵素が血液脳関門を通過できないことから有効でない。

【0005】

中枢神経系において作用させるべきそのような蛋白質等の高分子物質に血液脳関門を通過させるための方法が，種々開発されている。例えば，神経成長因子の場合，これを内包させたリポソームを脳内毛細血管の内皮細胞の細胞膜と融合させることにより，血液脳関門を通過させる方法が試みられているが，実用化に至っていない（非特許文献１）。α－Ｌ－イズロニダーゼの場合，１回当たりに投与される酵素の量を増加させてその血中濃度を高めることにより，血液脳関門における酵素の受動輸送を高める試みが行われ，ハーラー症候群の動物モデルを用いて，この手法により中枢神経系（ＣＮＳ）の異常が緩解することが示されている（非特許文献２）。

【0006】

また，血液脳関門を回避し，高分子物質を髄腔内又は脳内に直接投与する試みも行われている。例えば，ハーラー症候群（ムコ多糖症Ｉ型）の患者の髄腔内にヒトα－Ｌ－イズロニダーゼを投与する方法（特許文献１），ニーマン－ピック病の患者の脳室内にヒト酸スフィンゴミエリナーゼを投与する方法（特許文献２），ハンター症候群のモデル動物の脳室内にイズロン酸２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）を投与する方法（特許文献３）が報告されている。このような手法によれば，確実に中枢神経系に薬剤を作用させることができると考えられる一方，侵襲性が極度に高いという問題がある。

【0007】

血液脳関門を通して高分子物質を脳内に到達させる方法として，脳内毛細血管の内皮細胞上に存在する膜蛋白質と親和性を持つように高分子物質を修飾する方法が種々報告されている。脳内毛細血管の内皮細胞上に存在する膜蛋白質としては，インスリン，トランスフェリン，インスリン様成長因子（ＩＧＦ－Ｉ，ＩＧＦ－ＩＩ），ＬＤＬ，レプチン等の化合物に対する受容体が挙げられる。

【0008】

例えば，神経成長因子（ＮＧＦ）をインスリンとの融合蛋白質の形で合成し，インスリン受容体との結合を介してこの融合蛋白質に血液脳関門を通過させる技術が報告されている（特許文献４～６）。また，神経成長因子（ＮＧＦ）を抗インスリン受容体抗体との融合蛋白質の形で合成し，インスリン受容体との結合を介してこの融合蛋白質に血液脳関門を通過させる技術が報告されている（特許文献４及び７）。また，神経成長因子（ＮＧＦ）をトランスフェリンとの融合蛋白質の形で合成し，トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）との結合を介してこの融合蛋白質に血液脳関門を通過させる技術が報告されている（特許文献８）。また，神経成長因子（ＮＧＦ）を抗トランスフェリン受容体抗体（抗ＴｆＲ抗体）との融合蛋白質の形で合成し，ＴｆＲとの結合を介してこの融合蛋白質に血液脳関門を通過させる技術が報告されている（特許文献４及び９）。

【0009】

抗ＴｆＲ抗体を用いた技術について更にみると，抗ＴｆＲ抗体と結合させることにより薬剤に血液脳関門を通過させる技術において，一本鎖抗体を使用できることが報告されている（非特許文献３）。また，ｈＴｆＲとの解離定数が比較的大きい抗ｈＴｆＲ抗体（低親和性抗ｈＴｆＲ抗体）が，薬剤をして血液脳関門を通過させる技術において，好適に利用できることが報告されている（特許文献１０及び１１，非特許文献４）。更には，ｈＴｆＲとの親和性がｐＨ依存的に変化する抗ＴｆＲ抗体が，薬剤に血液脳関門を通過させるためキャリアとして使用できることが報告されている（特許文献１２，非特許文献５）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【特許文献1】特表２００７－５０４１６６号公報

【特許文献2】特表２００９－５２５９６３号公報

【特許文献3】特開２０１２－６２３１２号公報

【特許文献4】米国特許５１５４９２４号公報

【特許文献5】特開２０１１－１４４１７８号公報

【特許文献6】米国特許２００４／０１０１９０４号公報

【特許文献7】特表２００６－５１１５１６号公報

【特許文献8】特開Ｈ０６－２２８１９９号公報

【特許文献9】米国特許５９７７３０７号公報

【特許文献10】ＷＯ２０１２／０７５０３７

【特許文献11】ＷＯ２０１３／１７７０６２

【特許文献12】ＷＯ２０１２／１４３３７９

【非特許文献】

【0011】

【非特許文献1】Ｘｉｅ Ｙ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ． １０５． １０６－１９ （２００５）

【非特許文献2】Ｏｕ Ｌ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ． １１１． １１６－２２ （２０１４）

【非特許文献3】Ｌｉ ＪＹ． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ． １２． ７８７－９６ （１９９９）

【非特許文献4】Ｂｉｅｎ－Ｌｙ Ｎ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． ２１１． ２３３－４４ （２０１４）

【非特許文献5】Ｓａｄａ Ｈ． ＰＬｏＳ ＯＮＥ． ９． Ｅ９６３４０ （２０１４）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

上記背景の下で，本発明の目的は，血中に投与して中枢神経系において機能させるべき化合物（蛋白質，低分子化合物等）が血液脳関門を通過できるようにするために，それらの化合物と結合させて用いることのできる抗ＴｆＲ抗体，その製造法及び使用法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0013】

上記目的に向けた研究において，本発明者らは，鋭意検討を重ねた結果，本明細書において詳述する抗体作製法により得た，ｈＴｆＲの細胞外領域を認識する抗ヒトトランスフェリン受容体抗体（抗ｈＴｆＲ抗体）が，これを生体内に投与したとき効率よく血液脳関門を通過することを見出し，本発明を完成した。すなわち，本発明は以下を提供する。

【0014】

１．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体であって，該抗体が重鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６２又は配列番号６３のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号１３又は配列番号１４のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１５又は配列番号１６のアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２．上記１の抗体であって，重鎖のフレームワーク領域３が配列番号６４のアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
３．上記１又は２の抗体であって，但し該重鎖の可変領域において，
ＣＤＲ２の配列番号１３又は配列番号１４のアミノ酸配列に代えてこれに対し８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなり，且つ
ＣＤＲ３の配列番号１５又は配列番号１６のアミノ酸配列に代えてこれに対し８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
４．上記１又は２の抗体であって，但し該重鎖の可変領域において，
ＣＤＲ２の配列番号１３又は配列番号１４のアミノ酸配列に代えてこれに対し９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなり，且つ
ＣＤＲ３の配列番号１５又は配列番号１６のアミノ酸配列に代えてこれに対し９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
５．上記１又は２の抗体であって，但し該重鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１については配列番号６２又は配列番号６３，
（ｂ）ＣＤＲ２については配列番号１３又は配列番号１４，
（ｃ）ＣＤＲ３については配列番号１５又は配列番号１６，及び
（ｄ）フレームワーク領域３については配列番号６４，
のうち少なくとも１つのアミノ酸配列に代えてこれに対し１～５個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものであり，
ここに，ＣＤＲ１については，配列番号６２又は配列番号６３のアミノ酸配列のＮ末端側から５番目に位置するメチオニンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあり，且つ
フレームワーク領域３については，配列番号６４のＮ末端側から１７番目に位置するロイシンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあるものである，抗体。
６．上記１又は２の抗体であって，但し該重鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１については配列番号６２又は配列番号６３，
（ｂ）ＣＤＲ２については配列番号１３又は配列番号１４，
（ｃ）ＣＤＲ３については配列番号１５又は配列番号１６，及び
（ｄ）フレームワーク領域３については配列番号６４，
のうち少なくとも１つのアミノ酸配列に代えてこれに対し１～３個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものであり，
ここに，ＣＤＲ１については，配列番号６２又は配列番号６３のアミノ酸配列のＮ末端側から５番目に位置するメチオニンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあり，且つ
フレームワーク領域３については，配列番号６４のＮ末端側から１７番目に位置するロイシンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあるものである，抗体。
７．上記２の抗体であって，該重鎖の可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
８．上記７の抗体であって，但し該重鎖の可変領域のうち，ＣＤＲ１の配列番号６２又は配列番号６３及びフレームワーク領域３の配列番号６４の各アミノ酸配列以外の部分において，該部分に代えて該部分と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
９．上記７の抗体であって，但し該重鎖の可変領域のうち，ＣＤＲ１の配列番号６２又は配列番号６３及びフレームワーク領域３の配列番号６４の各アミノ酸配列以外の部分において，該部分に代えて該部分と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
１０．上記７の抗体であって，但し該重鎖の可変領域を構成するアミノ酸配列に代えてこれに対し１～５個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものであり，
ここに，ＣＤＲ１については，配列番号６３のアミノ酸配列のＮ末端から５番目に位置するメチオニンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあり，且つフレームワーク領域３については，配列番号６４のＮ末端側から１７番目に位置するロイシンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあるものである，抗体。
１１．上記７の抗体であって，但し該重鎖の可変領域を構成するアミノ酸配列に代えてこれに対し１～３個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものであり，
ここに，ＣＤＲ１については，配列番号６３のアミノ酸配列のＮ末端から５番目に位置するメチオニンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあり，且つフレームワーク領域３については，配列番号６４のＮ末端側から１７番目に位置するロイシンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあるものである，抗体。
１２．上記７の抗体であって，該重鎖が，配列番号６６又は配列番号６８のアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
１３．上記１２の抗体であって，但し該重鎖のうち，ＣＤＲ１の配列番号６２又は配列番号６３及びフレームワーク領域３の配列番号６４の各アミノ酸配列以外の部分に代えて該部分に対し８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
１４．上記１２の抗体であって，但し該重鎖のうち，ＣＤＲ１の配列番号６２又は配列番号６３及びフレームワーク領域３の配列番号６４の各アミノ酸配列以外の部分に代えて該部分に対し９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
１５．上記１２の抗体であって，但し該重鎖を構成するアミノ酸配列に代えてこれに対し１～５個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものであり，
ここに，ＣＤＲ１については，配列番号６３のアミノ酸配列のＮ末端から５番目に位置するメチオニンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあり，且つフレームワーク領域３については，配列番号６４のＮ末端側から１７番目に位置するロイシンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあるものである，抗体。
１６．上記１２の抗体であって，但し該重鎖を構成するアミノ酸配列に代えてこれに対し１～３個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものであり，
ここに，ＣＤＲ１については，配列番号６３のアミノ酸配列のＮ末端から５番目に位置するメチオニンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあり，且つフレームワーク領域３については，配列番号６４のＮ末端側から１７番目に位置するロイシンが，改変後のアミノ酸配列においても同じ位置にあるものである，抗体。
１７．上記１～１６の何れかの抗体であって，該抗体の軽鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒを含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなるものである，
抗体。
１８．上記１７の抗体であって，但し，該軽鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１の配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列に代えてこれに対し８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２の配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒに代えてこれに対し８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなり，
且つ
（ｃ）ＣＤＲ３の配列番号１０のアミノ酸配列に代えてこれに対し８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，
抗体。
１９．上記１７の抗体であって，但し，該軽鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１の配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列に代えてこれに対し９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２の配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒに代えてこれに対し９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなり，
且つ
（ｃ）ＣＤＲ３の配列番号１０のアミノ酸配列に代えてこれに対し９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，
抗体。
２０．上記１７の抗体であって，但し，該軽鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１については配列番号６又は配列番号７，
（ｂ）ＣＤＲ２については配列番号８若しくは配列番号９，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ，及び
（ｃ）ＣＤＲ３については配列番号１０，
のうち少なくとも１つのアミノ酸配列に代えてこれに対し１～５個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものである，
抗体。
２１．上記１７の抗体であって，但し，該軽鎖の可変領域において，
（ａ）ＣＤＲ１については配列番号６又は配列番号７，
（ｂ）ＣＤＲ２については配列番号８若しくは配列番号９，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ，及び
（ｃ）ＣＤＲ３については配列番号１０，
のうち少なくとも１つのアミノ酸配列に代えてこれに対し１～３個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものである，
抗体。
２２．上記１～１６の何れかの抗体であって，
該抗体の軽鎖の可変領域が，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１又は配列番号２２のアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２３．上記２２の抗体であって，但し該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列に代えてこれに対し８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２４．上記２２の抗体であって，但し該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列に代えてこれに対し９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２５．上記２２の抗体であって，但し該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列に代えてこれに対し１～５個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２６．上記２２の抗体であって，但し該軽鎖の可変領域のアミノ酸配列に代えてこれに対し１～３個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２７．上記１～１６の何れかの抗体であって，該抗体の軽鎖が，配列番号２３，配列番号２５，配列番号２７又は配列番号２９のアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２８．上記２７の抗体であって，但し該軽鎖のアミノ酸配列に代えてこれに対し８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
２９．上記２７の抗体であって，但し該軽鎖のアミノ酸配列に代えてこれに対し９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
３０．上記２７の抗体であって，但し該軽鎖のアミノ酸配列に代えてこれに対し１～５個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
３１．上記２７の抗体であって，但し該軽鎖のアミノ酸配列に代えてこれに対し１～３個のアミノ酸の置換，欠失又は付加による改変がなされたアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体。
３２．上記１～３１の何れかの抗体であって，ヒトトランスフェリン受容体の細胞外領域及びサルトランスフェリン受容体の細胞外領域の双方に対して親和性を有するものである，抗体。
３３．上記３２の抗体であって，ヒトトランスフェリン受容体の細胞外領域との解離定数が１Ｘ１０^－１０Ｍ以下のものであり，サルトランスフェリン受容体の細胞外領域との解離定数が１Ｘ１０^－９Ｍ以下のものである，抗体。
３４．Ｆａｂ抗体，Ｆ（ａｂ’）_２抗体，又はＦ（ａｂ’）抗体である，上記１～３３の何れかの抗体。
３５．ｓｃＦａｂ，ｓｃＦ（ａｂ’），ｓｃＦ（ａｂ’）_２及びｓｃＦｖからなる群から選ばれる一本鎖抗体である，上記１～３３の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体。
３６．上記３５の抗体であって，その軽鎖と重鎖とがリンカー配列を介して結合しているものである，抗体。
３７．上記３６の抗体であって，該軽鎖のＣ末端側において，リンカー配列を介して該重鎖が結合しているものである，抗体。
３８．上記３５の抗体であって，該重鎖のＣ末端側において，リンカー配列を介して該軽鎖が結合しているものである，抗体。
３９．上記３６～３８の何れかの抗体であって，該リンカー配列が，８～５０個のアミノ酸残基からなるものである，抗体。
４０．上記３９の抗体であって，該リンカー配列が，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ，配列番号３，配列番号４，配列番号５の各アミノ酸配列，配列番号３のアミノ酸配列の３個が連続してなるアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるものである，抗体。
４１．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質であって，
該抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が上記１～４０の何れかの抗体であり，
該蛋白質（Ａ）が，該抗体の軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に結合しているものである，融合蛋白質。
４２．上記４１の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）が，該軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に，直接又はリンカーを介して，結合しているものである，融合蛋白質。
４３．上記４１又は４２の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）が，該軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側においてリンカーを介して結合しているものである，融合蛋白質。
４４．該リンカーが，１～５０個のアミノ酸残基からなるペプチドである，上記４３の融合蛋白質。
４５．上記４４の融合蛋白質であって，該リンカーが，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含んでなるペプチドである，融合蛋白質。
４６．抗ヒトトランスフェリン受容体抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質であって，
該抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が上記１～４０の何れかの抗体であり，
該蛋白質（Ａ）が，該抗体の重鎖のＣ末端側又はＮ末端側に結合しているものである，融合蛋白質。
４７．上記４６の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）が，該重鎖のＣ末端側又はＮ末端側に，直接又はリンカーを介して，結合しているものである，融合蛋白質。
４８．上記４６又は４７の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）が，該重鎖のＣ末端側又はＮ末端側においてリンカーを介して結合しているものである，融合蛋白質。
４９．該リンカー配列が，１～５０個のアミノ酸残基からなるペプチドである，上記４８の融合蛋白質。
５０．上記４９の融合蛋白質であって，該リンカーが，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含んでなるペプチドである，融合蛋白質。
５１．該蛋白質（Ａ）が，ヒト由来の蛋白質である，上記４１～５０の何れかの融合蛋白質。
５２．上記４１～５１の何れかの融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）が，神経成長因子（ＮＧＦ），リソソーム酵素，毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ），グリア細胞株神経栄養因子（ＧＤＮＦ），ニューロトロフィン３，ニューロトロフィン４／５，ニューロトロフィン６，ニューレグリン１，エリスロポエチン，ダルベポエチン，アクチビン，塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ），線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ２），上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ），血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ），インターフェロンα，インターフェロンβ，インターフェロンγ，インターロイキン６，顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ），顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ），マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ），各種サイトカイン，腫瘍壊死因子α受容体（ＴＮＦ－α受容体），ＰＤ－１リガンド，ＰＤ－Ｌ１，ＰＤ－Ｌ２，ベータアミロイドを分解する活性を有する酵素，抗ベータアミロイド抗体，抗ＢＡＣＥ抗体，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＰＤ－１抗体，抗ＰＤ－Ｌ１抗体，抗ＰＤ－Ｌ２抗体，抗ＨＥＲ２抗体，抗ＴＮＦ－α抗体，抗ＣＴＬＡ－４抗体，及びその他の抗体医薬からなる群から選択されるものである，上記３９～４９の何れかの融合蛋白質。
５３．該蛋白質（Ａ）がリソソーム酵素であり，該リソソーム酵素が，α－Ｌ－イズロニダーゼ，イズロン酸－２－スルファターゼ，ヒト酸性α－グルコシダーゼ，グルコセレブロシダーゼ，β－ガラクトシダーゼ，ＧＭ２活性化蛋白質，β－ヘキソサミニダーゼＡ，β－ヘキソサミニダーゼＢ，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼ，α－マンノシダーゼ，β－マンノシダーゼ，ガラクトシルセラミダーゼ，サポシンＣ，アリルスルファターゼＡ，α－Ｌ－フコシダーゼ，アスパルチルグルコサミニダーゼ，α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ，酸性スフィンゴミエリナーゼ，α－ガラクトシダーゼ Ａ，β－グルクロニダーゼ，ヘパランＮ－スルファターゼ，α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ，アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ，Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ，酸性セラミダーゼ，アミロ－１，６－グルコシダーゼ，シアリダーゼ，パルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１，トリペプチジルペプチダーゼ－１，ヒアルロニダーゼ－１，ＣＬＮ１及びＣＬＮ２からなる群より選択されるものである，融合蛋白質。
５４．該蛋白質（Ａ）が，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ，ヒト酸性α－グルコシダーゼ，又はヒトα－Ｌ－イズロニダーゼの何れかである，上記４１～５１の何れかの融合蛋白質。
５５．上記５１の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼであり，
（１）該抗体の軽鎖が，配列番号２３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（２）該抗体の重鎖が，そのＣ末端側で，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，ヒト酸性α－グルコシダーゼと結合し，それにより配列番号５７又は配列番号５８のアミノ酸配列を形成しているものである，
融合蛋白質。
５６．上記５１の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼであり，
（１）該抗体の軽鎖が，配列番号２３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（２）該抗体の重鎖が配列番号６６又は配列番号６８のアミノ酸配列を含んでなり，該重鎖が，そのＣ末端側で，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して，配列番号５５又は配列番号５６のアミノ酸配列を有するヒト酸性α－グルコシダーゼと結合しているものである，
融合蛋白質。
５７．上記５１の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼであり，該抗体がＦａｂ抗体であり，
（１）該抗体の軽鎖が，配列番号２３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（２）該抗体の重鎖が，そのＣ末端側で，配列番号３のアミノ酸配列の３個が連続してなるアミノ酸配列を介して，ヒト酸性α－グルコシダーゼと結合し，それにより配列番号８９のアミノ酸配列を形成しているものである，
融合蛋白質。
５８．上記５１の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼであり，該抗体がＦａｂ抗体であり，
（１）該抗体の軽鎖が，配列番号２３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（２）該抗体の重鎖が配列番号６１のアミノ酸配列を含んでなり，該重鎖が，そのＣ末端側で，配列番号３のアミノ酸配列の３個が連続してなるアミノ酸配列を介して，配列番号５５又は配列番号５６のアミノ酸配列を有するヒト酸性α－グルコシダーゼと結合しているものである，
融合蛋白質。
５９．上記５１の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）がヒトα－Ｌ－イズロニダーゼであり，該抗体がＦａｂ抗体であり，
（１）該抗体の軽鎖が，配列番号２３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（２）該抗体の重鎖が，そのＣ末端側で，配列番号３のアミノ酸配列の３個が連続してなるアミノ酸配列を介して，ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼと結合し，それにより配列番号９３のアミノ酸配列を形成しているものである，
融合蛋白質。
６０．上記５１の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）がヒトα－Ｌ－イズロニダーゼであり，該抗体がＦａｂ抗体であり，
（１）該抗体の軽鎖が，配列番号２３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（２）該抗体の重鎖が配列番号６１のアミノ酸配列を含んでなり，該重鎖が，そのＣ末端側で，配列番号３のアミノ酸配列の３個が連続してなるアミノ酸配列を介して，配列番号７５又は配列番号７６のアミノ酸配列を有するヒトα－Ｌ－イズロニダーゼと結合しているものである，
融合蛋白質。
６１．上記４１の融合蛋白質であって，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域又はその一部が，該蛋白質（Ａ）と該抗体との間に導入されてなるものである，融合蛋白質。
６２．上記６１の融合蛋白質であって，該蛋白質（Ａ）のＣ末端側に，直接又はリンカー配列を介して，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が結合してなり，且つ，該ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣ末端側に直接又はリンカー配列を介して該抗体の重鎖又は軽鎖が結合してなるものである，融合蛋白質。
６３．上記６１又は６２の融合蛋白質であって，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が配列番号７０のアミノ酸配列を含んでなるものである，融合蛋白質。
６４．上記６３の融合蛋白質であって，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域がリンカー配列を介して配列番号６１のアミノ酸配列からなるＦａｂ重鎖と結合し，それにより形成される配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなるものである，融合蛋白質。
６５．上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体のアミノ酸配列をコードする，ＤＮＡ断片。
６６．上記４１～６４の何れかの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする，ＤＮＡ断片。
６７．上記６５又は６６のＤＮＡ断片を組み込んでなる，発現ベクター。
６８．上記６７の発現ベクターで形質転換された哺乳動物細胞。
６９．上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖及び／又は重鎖の何れかに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させるべき低分子量の薬理活性物質を結合させたものである，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体－薬理活性物質複合体。
７０．該薬理活性物質が，抗ガン剤，アルツハイマー病治療剤，パーキンソン病治療剤，ハンチントン病治療剤，統合失調症治療剤，うつ症治療剤，多発性硬化症治療剤，筋委縮性側索硬化症治療剤，脳腫瘍を含む中枢神経系の腫瘍の治療剤，脳障害を伴うリソソーム病の治療剤，糖原病治療剤，筋ジストロフィー治療剤，脳虚血治療剤，プリオン病治療剤，外傷性の中枢神経系障害の治療剤，ウィルス性及び細菌性の中枢神経系疾患に対する治療剤，脳外科手術後の回復に用いる薬剤，脊椎外科手術後の回復に用いる薬剤，ｓｉＲＮＡ，アンチセンスＤＮＡ，及びペプチドからなる群から選択される何れかのものである，上記６９の抗ヒトトランスフェリン受容体抗体－薬理活性物質複合体。
７１．蛋白質（Ａ）又は低分子量の薬理活性物質に血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させるための，上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の使用。
７２．中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，該疾患状態に対する生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の分子と結合させることによる上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の使用。
７３．中枢神経系の疾患の治療方法であって，該疾患に対する生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の治療上有効量を，上記１～４０の何れかの抗ヒトトランスフェリン受容体抗体分子との結合体の形態で当該疾患を有する患者に血中投与することを含む，治療方法。
７４．ヒト酸性α－グルコシダーゼに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させるための，上記５２～５８の何れかの融合蛋白質の使用。
７５．ポンペ病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，上記５２～５８の何れかの融合蛋白質の使用。
７６．ポンペ病に伴う中枢神経系の疾患の治療方法であって，上記５２～５８の何れかの融合蛋白質の治療上有効量を，当該疾患を有する患者に血中投与することを含む，治療方法。
７７．ヒト酸性α－Ｌ－イズロニダーゼに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させるための，上記５２～５４，５９，又は６０の何れかの融合蛋白質の使用。
７８．ハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のための，上記５２～５４，５９，又は６０の何れかの融合蛋白質の使用。
７９．ハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群に伴う中枢神経系の疾患の治療方法であって，上記５２～５４，５９，又は６０の何れかの融合蛋白質の治療上有効量を，当該疾患を有する患者に血中投与することを含む，治療方法。

【発明の効果】

【0015】

本発明は，生理活性や薬理活性を有する蛋白質や低分子量の物質でありながら，血液脳関門を殆ど又は全く通過できないため，従来は血中投与では利用できなかった諸々の物質について，それらを血液脳関門通過可能な形態にすることができ，従って，中枢神経系の疾患状態の治療のための，血中投与用の新たな薬剤とすることを可能にする。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】抗ｈＴｆＲ抗体を単回静脈内投与した後の，カニクイザルの大脳皮質の，抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真。（ａ）抗ｈＴｆＲ抗体を非投与，（ｂ）抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与。各写真の右下のバーは５０μｍを表すゲージである。

【図2】抗ｈＴｆＲ抗体を単回静脈内投与した後の，カニクイザルの海馬の，抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）抗ｈＴｆＲ抗体を非投与，（ｂ）抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与。各写真の右下のバーは５０μｍを表すゲージである。

【図3】抗ｈＴｆＲ抗体を単回静脈内投与した後の，カニクイザルの小脳の，抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真。（ａ）抗ｈＴｆＲ抗体を非投与，（ｂ）抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与。各写真の右下のバーは５０μｍを表すゲージである。

【図4】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの脳以外の各種臓器へのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の蓄積量を示す図。縦軸は，各臓器の湿重量当たりのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の量（μｇ／ｇ湿重量）を示す。白バーは左から順に，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４），及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を，それぞれ投与，黒バーは，トラスツズマブ（ハーセプチン^ＴＭ）を投与したサルの各臓器での蓄積量を示す。ＮＤは未測定を意味する。

【図5】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの大脳皮質の，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図面代用写真。（ａ）ハーセプチンを投与，（ｂ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与，（ｃ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与，（ｄ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）を投与，（ｅ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図6】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの海馬の，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）ハーセプチンを投与，（ｂ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与，（ｃ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与，（ｄ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）を投与，（ｅ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図7】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの小脳のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）ハーセプチンを投与，（ｂ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与，（ｃ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与，（ｄ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）を投与，（ｅ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図8】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの延髄の，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）ハーセプチンを投与，（ｂ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与，（ｃ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与，（ｄ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）を投与，（ｅ）ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図9】単回静脈内投与した後の，カニクイザルの小脳の，ｈＧＡＡに対する免疫組織化学染色の結果を示す図。（ａ）ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）を投与，（ｂ）ｈＧＡＡを投与。各写真の右下のバーは２０μｍを表すゲージである。

【図10】ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）のマウスを用いた薬効評価の結果を示す図。（ａ）右脳，（ｂ）脊髄頚部，（ｃ）心臓，（ｄ）横隔膜，（ｅ）肝臓，（ｆ）脾臓におけるグリコーゲン濃度を示す。各図中，１は正常対照群，２は病態対照群，３はｈＧＡＡの２０ｍｇ／ｋｇ投与群，４～７はそれぞれｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５ｍｇ／ｋｇ，５．０ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ，２０ｍｇ／ｋｇ投与群を示す。縦軸はグリコーゲン濃度（ｍｇ／ｇ湿重量）を示す。縦バーはＳＤ，♯は病態対照群との比較でｐ＜０．０１，♯♯は病態対照群との比較でｐ＜０．０５，＄はｈＧＡＡ投与群との比較でｐ＜０．０１，＄＄はｈＧＡＡ投与群との比較でｐ＜０．０５（いずれもＴｕｋｅｙ ＨＳＤ ｔｅｓｔ）を示す。

【図11】ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）のマウスを用いた薬効評価の結果を示す図。（ａ）大腿四頭筋，（ｂ）腓腹筋，（ｃ）ヒラメ筋，（ｄ）前脛骨筋，（ｅ）長趾伸筋腓腹におけるグリコーゲン濃度を示す。各図中，１は正常対照群，２は病態対照群，３はｈＧＡＡ投与群，４～７はそれぞれｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５ｍｇ／ｋｇ，５．０ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ，２０ｍｇ／ｋｇ投与群を示す。縦軸はグリコーゲン濃度（ｍｇ／ｇ湿重量）を示す。縦バーはＳＤ，♯は病態対照群との比較でｐ＜０．０１，♯♯は病態対照群との比較でｐ＜０．０５，＄はｈＧＡＡ投与群との比較でｐ＜０．０１，＄＄はｈＧＡＡ投与群との比較でｐ＜０．０５（いずれもＴｕｋｅｙ ＨＳＤ ｔｅｓｔ）を示す。

【図12】Ｆａｂ ＧＳ－ＧＡＡのマウスを用いた薬効評価の結果を示す図。（ａ）右脳，（ｂ）心臓，（ｃ）横隔膜，（ｄ）大腿四頭筋，（ｅ）ヒラメ筋，（ｆ）前脛骨筋におけるグリコーゲン濃度を示す。各図中，１は正常対照群，２は病態対照群，３はｈＧＡＡ投与群，４及び５はそれぞれＦａｂ ＧＳ－ＧＡＡの５．０ｍｇ／ｋｇ，２０ｍｇ／ｋｇ投与群を示す。縦軸はグリコーゲン濃度（ｍｇ／ｇ湿重量）を示す。縦バーはＳＤを示す。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本発明において，「抗体」の語は，主としてヒト抗体，マウス抗体，ヒト化抗体，ヒト抗体と他の哺乳動物の抗体とのキメラ抗体，及びマウス抗体と他の哺乳動物の抗体とのキメラ抗体のことをいうが，特定の抗原に特異的に結合する性質を有するものである限り，これらに限定されるものではなく，また，抗体の動物種にも特に制限はない。但し，好ましいのは，ヒト化抗体である。

【0018】

本発明において，「ヒト抗体」の語は，その蛋白質全体がヒト由来の遺伝子にコードされている抗体のことをいう。遺伝子の発現効率を上昇させる等の目的で，元のヒトの遺伝子に，元のアミノ酸配列に変化を与えることなく変異を加えた遺伝子にコードされる抗体も，「ヒト抗体」に含まれる。また，ヒト抗体をコードする２つ以上の遺伝子を組み合わせて，あるヒト抗体の一部を他のヒト抗体の一部に置き換えて作製した抗体も，「ヒト抗体」である。ヒト抗体は，免疫グロブリン軽鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）と免疫グロブリン重鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。免疫グロブリン軽鎖の３箇所のＣＤＲは，Ｎ末端側にあるものから順にＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３という。免疫グロブリン重鎖の３箇所のＣＤＲも，Ｎ末端側にあるものから順にＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３という。あるヒト抗体のＣＤＲを，その他のヒト抗体のＣＤＲに置き換えることにより，ヒト抗体の抗原特異性，親和性等を改変した抗体も，ヒト抗体に含まれる。

【0019】

本発明において，元のヒト抗体の遺伝子を改変することにより，元の抗体のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えた抗体も，「ヒト抗体」に含まれる。元の抗体のアミノ酸配列中のアミノ酸を他のアミノ酸で置換する場合，置換するアミノ酸の個数は，好ましくは１～２０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個である。元の抗体のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～２０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えた抗体も，ヒト抗体である。アミノ酸を付加する場合，元の抗体のアミノ酸配列中若しくはＮ末端又はＣ末端に，好ましくは１～２０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個のアミノ酸を付加する。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えた抗体も，ヒト抗体である。変異を加えた抗体のアミノ酸配列は，元の抗体のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を示し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示し，更により好ましくは９８％以上の相同性を示す。即ち，本発明において「ヒト由来の遺伝子」というときは，ヒト由来の元の遺伝子に加えて，これに改変を加えることにより得られる遺伝子も含まれる。

【0020】

元の抗体のアミノ酸配列と変異を加えた抗体のアミノ酸配列との相同性は，周知の相同性計算アルゴリズムを用いて容易に算出することができる。例えば，そのようなアルゴリズムとして，ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦ． Ｊ Ｍｏｌ ．Ｂｉｏｌ． ２１５． ４０３－１０， （１９９０）），Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎの類似性検索法（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ． ８５． ２４４４ （１９８８）），Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズム（Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ． ２． ４８２－９（１９８１））等がある。

【0021】

本発明において，「マウス抗体」というときは，その蛋白質全体がマウス由来の遺伝子にコードされる抗体と同一のアミノ酸配列からなる抗体をいう。従って，遺伝子の発現効率を上昇させる等の目的で，元のマウスの遺伝子に，元のアミノ酸配列に変化を与えることなく変異を加えた遺伝子にコードされる抗体も，「マウス抗体」に含まれる。また，マウス抗体をコードする２つ以上の遺伝子を組み合わせて，あるマウス抗体の一部を他のマウス抗体の一部に置き換えた抗体も，マウス抗体に含まれる。マウス抗体は，免疫グロブリン軽鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）と免疫グロブリン重鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。免疫グロブリン軽鎖の３箇所のＣＤＲは，Ｎ末端側にあるものから順にＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３という。免疫グロブリン重鎖の３箇所のＣＤＲは，Ｎ末端側にあるものから順にＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３という。例えば，あるマウス抗体のＣＤＲを，他のマウス抗体のＣＤＲに置き換えることにより，マウス抗体の抗原特異性，親和性等を改変した抗体も，マウス抗体に含まれる。

【0022】

本発明において，元のマウス抗体の遺伝子を改変することにより，元の抗体のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えた抗体も，「マウス抗体」に含まれる。元の抗体のアミノ酸配列中のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換する場合，置換するアミノ酸の個数は，好ましくは１～２０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個である。元の抗体のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～２０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えた抗体も，「マウス抗体」に含まれる。アミノ酸を付加する場合，元の抗体のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～２０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個のアミノ酸を付加する。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えた抗体も，「マウス抗体」に含まれる。変異を加えた抗体のアミノ酸配列は，元の抗体のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を示し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示し，更により好ましくは９８％以上の相同性を示す。即ち，本発明において「マウス由来の遺伝子」というときは，マウス由来の元の遺伝子に加えて，これに改変を加えることにより得られる遺伝子も含まれる。

【0023】

本発明において，「ヒト化抗体」の語は，可変領域の一部（例えば，特にＣＤＲの全部又は一部）のアミノ酸配列がヒト以外の哺乳動物由来であり，それ以外の領域がヒト由来である抗体のことをいう。例えば，ヒト化抗体として，ヒト抗体を構成する免疫グロブリン軽鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）と免疫グロブリン重鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）を，他の哺乳動物のＣＤＲに置き換えることによって作製された抗体が挙げられる。ヒト抗体の適切な位置に移植されるＣＤＲの由来となる他の哺乳動物の生物種は，ヒト以外の哺乳動物である限り特に限定はないが，好ましくは，マウス，ラット，ウサギ，ウマ，又はヒト以外の霊長類であり，より好ましくはマウス及びラットであり，更に好ましくはマウスである。

【0024】

本発明において，「キメラ抗体」の語は，２つ以上の異なる種に由来する，２つ以上の異なる抗体の断片が連結されてなる抗体のことをいう。

【0025】

ヒト抗体と他の哺乳動物の抗体とのキメラ抗体とは，ヒト抗体の一部がヒト以外の哺乳動物の抗体の一部によって置き換えられた抗体である。抗体は，以下に説明するＦｃ領域，Ｆａｂ領域及びヒンジ部とからなる。このようなキメラ抗体の具体例として，Ｆｃ領域がヒト抗体に由来する一方でＦａｂ領域が他の哺乳動物の抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。ヒンジ部は，ヒト抗体又は他の哺乳動物の抗体のいずれかに由来する。逆に，Ｆｃ領域が他の哺乳動物に由来する一方でＦａｂ領域がヒト抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。ヒンジ部は，ヒト抗体又は他の哺乳動物の抗体のいずれに由来する。

【0026】

また，抗体は，可変領域と定常領域とからなるということもできる。キメラ抗体の他の具体例として，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ）と軽鎖の定常領域（Ｃ_Ｌ）がヒト抗体に由来する一方で，重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）が他の哺乳動物の抗体に由来するもの，逆に，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ）と軽鎖の定常領域（Ｃ_Ｌ）が他の哺乳動物の抗体に由来する一方で，重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）がヒト抗体に由来するものも挙げられる。ここで，他の哺乳動物の生物種は，ヒト以外の哺乳動物である限り特に限定はないが，好ましくは，マウス，ラット，ウサギ，ウマ，又はヒト以外の霊長類であり，より好ましくはマウスである。

【0027】

マウス抗体と他の哺乳動物の抗体とのキメラ抗体とは，マウス抗体の一部がマウス以外の哺乳動物の抗体の一部に置き換えられた抗体である。このようなキメラ抗体の具体例として，Ｆｃ領域がマウス抗体に由来する一方でＦａｂ領域が他の哺乳動物の抗体に由来するキメラ抗体や，逆に，Ｆｃ領域が他の哺乳動物に由来する一方でＦａｂ領域がマウス抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。ここで，他の哺乳動物の生物種は，マウス以外の哺乳動物である限り特に限定はないが，好ましくは，ラット，ウサギ，ウマ，ヒト以外の霊長類であり，より好ましくはヒトである。

【0028】

ヒト抗体とマウス抗体のキメラ抗体は，特に，「ヒト／マウスキメラ抗体」という。ヒト／マウスキメラ抗体には，Ｆｃ領域がヒト抗体に由来する一方でＦａｂ領域がマウス抗体に由来するキメラ抗体や，逆に，Ｆｃ領域がマウス抗体に由来する一方でＦａｂ領域がヒト抗体に由来するキメラ抗体が挙げられる。ヒンジ部は，ヒト抗体又はマウス抗体のいずれかに由来する。ヒト／マウスキメラ抗体の他の具体例として，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ）と軽鎖の定常領域（Ｃ_Ｌ）がヒト抗体に由来する一方で，重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）がマウス抗体に由来するもの，逆に，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ）と軽鎖の定常領域（Ｃ_Ｌ）がマウス抗体に由来する一方で，重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）がヒト抗体に由来するものも挙げられる。

【0029】

抗体は，本来，２本の免疫グロブリン軽鎖と２本の免疫グロブリン重鎖の計４本のポリペプチド鎖からなる基本構造を有する。但し，本発明において，「抗体」というときは，この基本構造を有するものに加え，
（１）１本の免疫グロブリン軽鎖と１本の免疫グロブリン重鎖の計２本のポリペプチド鎖からなるものや，以下に詳述するように，
（２）免疫グロブリン軽鎖のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に免疫グロブリン重鎖を結合させてなるものである一本鎖抗体，及び
（３）免疫グロブリン重鎖のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に免疫グロブリン軽鎖を結合させてなるものである一本鎖抗体も含まれる。また，
（４）本来の意味での抗体の基本構造からＦｃ領域が欠失したものであるＦａｂ領域からなるもの及びＦａｂ領域とヒンジ部の全部若しくは一部とからなるもの（Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）及びＦ（ａｂ’）_２を含む）も，本発明における「抗体」に含まれる。

【0030】

ここでＦａｂとは，可変領域とＣ_Ｌ領域（軽鎖の定常領域）を含む１本の軽鎖と，可変領域とＣ_Ｈ１領域（重鎖の定常領域の部分１）を含む１本の重鎖が，それぞれに存在するシステイン残基同士でジスルフィド結合により結合した分子のことをいう。Ｆａｂにおいて，重鎖は，可変領域とＣ_Ｈ１領域（重鎖の定常領域の部分１）に加えて，更にヒンジ部の一部を含んでもよいが，この場合のヒンジ部は，ヒンジ部に存在して抗体の重鎖どうしを結合するシステイン残基を欠くものである。Ｆａｂにおいて，軽鎖と重鎖とは，軽鎖の定常領域（Ｃ_Ｌ領域）に存在するシステイン残基と，重鎖の定常領域（Ｃ_Ｈ１領域）又はヒンジ部に存在するシステイン残基との間で形成されるジスルフィド結合により結合する。Ｆａｂを形成する重鎖のことをＦａｂ重鎖という。Ｆａｂは，ヒンジ部に存在して抗体の重鎖どうしを結合するシステイン残基を欠いているので，１本の軽鎖と１本の重鎖とからなる。Ｆａｂを構成する軽鎖は，可変領域とＣ_Ｌ領域を含む。Ｆａｂを構成する重鎖は，可変領域とＣ_Ｈ１領域からなるものであってもよく，可変領域，Ｃ_Ｈ１領域に加えてヒンジ部の一部を含むものであってもよい。但しこの場合，ヒンジ部で２本の重鎖の間でジスルフィド結合が形成されないように，ヒンジ部は重鎖間を結合するシステイン残基を含まないように選択される。Ｆ（ａｂ’）においては，その重鎖は可変領域とＣ_Ｈ１領域に加えて，重鎖どうしを結合するシステイン残基を含むヒンジ部の全部又は一部を含む。Ｆ（ａｂ’）_２は２つのＦ（ａｂ’）が互いのヒンジ部に存在するシステイン残基どうしでジスルフィド結合により結合した分子のことをいう。Ｆ（ａｂ’）又はＦ（ａｂ’）_２を形成する重鎖のことをＦａｂ’重鎖という。また，複数の抗体が直接又はリンカーを介して結合してなるニ量体，三量体等の重合体も，抗体である。更に，これらに限らず，免疫グロブリン分子の一部を含み，且つ，抗原に特異的に結合する性質を有するものは何れも，本発明でいう「抗体」に含まれる。即ち，本発明において免疫グロブリン軽鎖というときは，免疫グロブリン軽鎖に由来し，その可変領域の全て又は一部のアミノ酸配列を有するものが含まれる。また，免疫グロブリン重鎖というときは，免疫グロブリン重鎖に由来し，その可変領域の全て又は一部のアミノ酸配列を有するものが含まれる。従って，可変領域の全て又は一部のアミノ酸配列を有する限り，例えば，Ｆｃ領域が欠失したものも，免疫グロブリン重鎖である。

【0031】

また，ここでＦｃ又はＦｃ領域とは，抗体分子中の，Ｃ_Ｈ２領域（重鎖の定常領域の部分２），及びＣ_Ｈ３領域（重鎖の定常領域の部分３）からなる断片を含む領域のことをいう。

【0032】

更には，本発明において，「抗体」というときは，
（５）上記（４）で示したＦａｂ，Ｆ（ａｂ’）又はＦ（ａｂ’）_２を構成する軽鎖と重鎖を，リンカー配列を介して結合させて，それぞれ一本鎖抗体としたｓｃＦａｂ，ｓｃＦ（ａｂ’），及びｓｃＦ（ａｂ’）_２も含まれる。ここで，ｓｃＦａｂ，ｓｃＦ（ａｂ’），及びｓｃＦ（ａｂ’）_２にあっては，軽鎖のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に重鎖を結合させてなるものでもよく，また，重鎖のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に軽鎖を結合させてなるものでもよい。更には，軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域をリンカー配列を介して結合させて一本鎖抗体としたｓｃＦｖも，本発明における抗体に含まれる。ｓｃＦｖにあっては，軽鎖の可変領域のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に重鎖の可変領域を結合させてなるものでもよく，また，重鎖の可変領域のＣ末端側にリンカー配列を，そして更にそのＣ末端側に軽鎖の可変領域を結合させてなるものでもよい。

【0033】

更には，本明細書でいう「抗体」には，完全長抗体，上記（１）～（５）に示されるものに加えて，上記（４）及び（５）を含むより広い概念である，完全長抗体の一部が欠損したものである抗原結合性断片（抗体フラグメント）のいずれの形態も含まれる。

【0034】

「抗原結合性断片」の語は，抗原との特異的結合活性の少なくとも一部を保持している抗体の断片のことをいう。結合性断片の例としては，例えば上記（４）及び（５）に示されるものに加えて，Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）_２，可変領域（Ｆｖ），重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを適当なリンカーで連結させた一本鎖抗体（ｓｃＦｖ），重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含むポリペプチドの二量体であるダイアボディ，ｓｃＦｖの重鎖（Ｈ鎖）に定常領域の一部（Ｃ_Ｈ３）が結合したものの二量体であるミニボディ，その他の低分子化抗体等を包含する。但し，抗原との結合能を有している限りこれらの分子に限定されない。また，これらの結合性断片には，抗体蛋白質の全長分子を適当な酵素で処理したもののみならず，遺伝子工学的に改変された抗体遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された蛋白質も含まれる。

【0035】

本発明において，「一本鎖抗体」というときは，免疫グロブリン軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列のＣ末端側にリンカー配列が結合し，更にそのＣ末端側に免疫グロブリン重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列が結合してなり，特定の抗原に特異的に結合することのできる蛋白質をいう。例えば，上記（２），（３）及び（５）に示されるものは一本鎖抗体に含まれる。また，免疫グロブリン重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列のＣ末端側にリンカー配列が結合し，更にそのＣ末端側に免疫グロブリン軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列が結合してなり，特定の抗原に特異的に結合することのできる蛋白質も，本発明における「一本鎖抗体」である。免疫グロブリン重鎖のＣ末端側にリンカー配列を介して免疫グロブリン軽鎖が結合した一本鎖抗体にあっては，通常，免疫グロブリン重鎖は，Ｆｃ領域が欠失している。免疫グロブリン軽鎖の可変領域は，抗体の抗原特異性に関与する相補性決定領域（ＣＤＲ）を３つ有している。同様に，免疫グロブリン重鎖の可変領域も，ＣＤＲを３つ有している。これらのＣＤＲは，抗体の抗原特異性を決定する主たる領域である。従って，一本鎖抗体には，免疫グロブリン重鎖の３つのＣＤＲが全てと，免疫グロブリン軽鎖の３つのＣＤＲの全てとが含まれることが好ましい。但し，抗体の抗原特異的な親和性が維持される限り，ＣＤＲの１個又は複数個を欠失させた一本鎖抗体とすることもできる。

【0036】

一本鎖抗体において，免疫グロブリンの軽鎖と重鎖の間に配置されるリンカー配列は，好ましくは２～５０個，より好ましくは８～５０個，更に好ましくは１０～３０個，更により好ましくは１２～１８個又は１５～２５個，例えば１５個若しくは２５個のアミノ酸残基から構成されるペプチド鎖である。そのようなリンカー配列は，これにより両鎖が連結されてなる抗ｈＴｆＲ抗体がｈＴｆＲに対する親和性を保持する限り，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンのみ又はグリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が２～１０回，あるいは２～５回繰り返された配列を含むものである。例えば，免疫グロブリン重鎖の可変領域の全領域からなるアミノ酸配列のＣ末端側に，リンカー配列を介して免疫グロブリン軽鎖の可変領域を結合させる場合，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）の３個が連続したものに相当する計１５個のアミノ酸を含むリンカー配列が好適である。

【0037】

本発明において，「ヒトトランスフェリン受容体」又は「ｈＴｆＲ」の語は，配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する膜蛋白質をいう。本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，その一実施態様において，配列番号１で示されるアミノ酸配列中Ｎ末端側から８９番目のシステイン残基からＣ末端のフェニルアラニンまでの部分（ｈＴｆＲの細胞外領域）に対して特異的に結合するものであるが，これに限定されない。また，本発明において「サルトランスフェリン受容体」又は「サルＴｆＲ」の語は，特に，カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）由来の配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する膜蛋白質である。本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，その一実施態様において，配列番号２で示されるアミノ酸配列の中Ｎ末端側から８９番目のシステイン残基からＣ末端のフェニルアラニンまでの部分（サルＴｆＲの細胞外領域）に対しても結合するものであるが，これに限定されない。

【0038】

ｈＴｆＲに対する抗体の作製方法としては，ｈＴｆＲ遺伝子を組み込んだ発現ベクターを導入した細胞を用いて，組換えヒトトランスフェリン受容体（ｒｈＴｆＲ）を作製し，このｒｈＴｆＲを用いてマウス等の動物を免疫して得る方法が一般的である。免疫後の動物からｈＴｆＲに対する抗体産生細胞を取り出し，これとミエローマ細胞とを融合させることにより，抗ｈＴｆＲ抗体産生能を有するハイブリドーマ細胞を作製することができる。

【0039】

また，マウス等の動物より得た免疫系細胞を体外免疫法によりｒｈＴｆＲで免疫することによっても，ｈＴｆＲに対する抗体を産生する細胞を取得できる。体外免疫法を用いる場合，その免疫系細胞が由来する動物種に特に限定はないが，好ましくは，マウス，ラット，ウサギ，モルモット，イヌ，ネコ，ウマ，及びヒトを含む霊長類であり，より好ましくは，マウス，ラット及びヒトであり，更に好ましくはマウス及びヒトである。マウスの免疫系細胞としては，例えば，マウスの脾臓から調製した脾細胞を用いることができる。ヒトの免疫系細胞としては，ヒトの末梢血，骨髄，脾臓等から調製した細胞を用いることができる。ヒトの免疫系細胞を体外免疫法により免疫した場合，ｈＴｆＲに対するヒト抗体を得ることができる。

【0040】

体外免疫法により免疫系細胞を免疫した後，細胞をミエローマ細胞と融合させることにより，抗体産生能を有するハイブリドーマ細胞を作製することができる。また，免疫後の細胞からｍＲＮＡを抽出してｃＤＮＡを合成し，このｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲ反応により免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を増幅し，これらを用いて人工的に抗体遺伝子を再構築することもできる。

【0041】

上記方法により得られたままのハイブリドーマ細胞には，ｈＴｆＲ以外の蛋白質を抗原として認識する抗体を産生する細胞も含まれる。また，抗ｈＴｆＲ抗体を産生するハイブリドーマ細胞の全てが，ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗ｈＴｆＲ抗体を産生するとも限らない。

【0042】

同様に，人工的に再構築した抗体遺伝子には，ｈＴｆＲ以外の蛋白質を抗原として認識する抗体をコードする遺伝子も含まれる。また，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子の全てが，ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗ｈＴｆＲ抗体をコードする等の所望の特性を備えるとも限らない。

【0043】

従って，上記で得られたままのハイブリドーマ細胞から，所望の特性（ｈＴｆＲに対する高親和性等）を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選択するステップが必要となる。また，人工的に再構築した抗体遺伝子にあっては，当該抗体遺伝子から，所望の特性（ｈＴｆＲに対する高親和性等）を有する抗体をコードする遺伝子を選択するステップが必要となる。ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗体（高親和性抗体）を産生するハイブリドーマ細胞，又は高親和性抗体をコードする遺伝子を選択する方法として，以下に詳述する方法が有効である。なお，ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗体とは，実施例７に記載の方法により測定されるｈＴｆＲとの解離定数（Ｋ_Ｄ）が，好ましくは１Ｘ１０^－８Ｍ以下のものであり，より好ましくは１Ｘ１０^－９Ｍ以下のものであり，更に好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下のものであり，尚も更に好ましくは１Ｘ１０^－１１Ｍ以下のものである。例えば好適なものとして，解離定数が１Ｘ１０^－１３Ｍ～１Ｘ１０^－９Ｍであるもの，１Ｘ１０^－１３Ｍ～１Ｘ１０^－１０Ｍであるものを挙げることができる。

【0044】

例えば，抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選択する場合，組換えｈＴｆＲをプレートに添加してこれに保持させた後，ハイブリドーマ細胞の培養上清を添加し，次いで組換えｈＴｆＲと結合していない抗体をプレートから除去し，プレートに保持された抗体の量を測定する方法が用いられる。この方法によれば，プレートに添加したハイブリドーマ細胞の培養上清に含まれる抗体のｈＴｆＲに対する親和性が高いほど，プレートに保持される抗体の量が多くなる。従って，プレートに保持された抗体の量を測定し，より多くの抗体が保持されたプレートに対応するハイブリドーマ細胞を，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生する細胞株として選択することができる。この様にして選択された細胞株から，ｍＲＮＡを抽出してｃＤＮＡを合成し，このｃＤＮＡを鋳型として，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片をＰＣＲ法を用いて増幅することにより，高親和性抗体をコードする遺伝子を単離することもできる。

【0045】

上記の人工的に再構築した抗体遺伝子から，高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択する場合は，一旦，人工的に再構築した抗体遺伝子を発現ベクターに組み込み，この発現ベクターをホスト細胞に導入する。このとき，ホスト細胞として用いる細胞としては，人工的に再構築した抗体遺伝子を組み込んだ発現ベクターを導入することにより抗体遺伝子を発現させることのできる細胞であれば原核細胞，真核細胞を問わず特に限定はないが，ヒト，マウス，チャイニーズハムスター等の哺乳動物由来の細胞が好ましく，特にチャイニーズハムスター卵巣由来のＣＨＯ細胞，又はマウス骨髄腫に由来するＮＳ／０細胞が好ましい。また，抗体遺伝子をコードする遺伝子を組み込んで発現させるために用いる発現ベクターは，哺乳動物細胞内に導入させたときに，該遺伝子を発現させるものであれば特に限定なく用いることができる。発現ベクターに組み込まれた該遺伝子は，哺乳動物細胞内で遺伝子の転写の頻度を調節することができるＤＮＡ配列（遺伝子発現制御部位）の下流に配置される。本発明において用いることのできる遺伝子発現制御部位としては，例えば，サイトメガロウイルス由来のプロモーター，ＳＶ４０初期プロモーター，ヒト伸長因子－１アルファ（ＥＦ－１α）プロモーター，ヒトユビキチンＣプロモーター等が挙げられる。

【0046】

このような発現ベクターが導入された哺乳動物細胞は，発現ベクターに組み込まれた上述の人工的に再構築した抗体を発現するようになる。このようにして得た，人工的に再構築した抗体を発現する細胞から，抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性を有する抗体を産生する細胞を選択する場合，組換えｈＴｆＲをプレートに添加してこれに保持させた後，組換えｈＴｆＲに細胞の培養上清を接触させ，次いで，組換えｈＴｆＲと結合していない抗体をプレートから除去し，プレートに保持された抗体の量を測定する方法が用いられる。この方法によれば，細胞の培養上清に含まれる抗体のｈＴｆＲに対する親和性が高いほど，プレートに保持された抗体の量が多くなる。従って，プレートに保持された抗体の量を測定し，より多くの抗体が保持されたプレートに対応する細胞を，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生する細胞株として選択することができ，ひいては，ｈＴｆＲに対して高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択できる。このようにして選択された細胞株から，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を，ＰＣＲ法を用いて増幅することにより，高親和性抗体をコードする遺伝子を単離することができる。

【0047】

上記の人工的に再構築した抗体遺伝子からの，高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子の選択は，人工的に再構築した抗体遺伝子を発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを大腸菌に導入し，この大腸菌を培養して得た培養上清又は大腸菌を溶解させて得た抗体を含む溶液を用いて，上述のハイブリドーマ細胞を選択する場合と同様の方法で，所望の遺伝子を有する大腸菌を選択することによってもできる。選択された大腸菌株は，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を発現するものである。この細胞株から，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択できる。大腸菌の培養上清中に抗体を分泌させる場合には，Ｎ末端側に分泌シグナル配列が結合するように抗体遺伝子を発現ベクターに組み込めばよい。

【0048】

高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択する他の方法として，上述の人工的に再構築した抗体遺伝子にコードされた抗体をファージ粒子上に保持させて発現させる方法がある。このとき，抗体遺伝子は，一本鎖抗体をコードする遺伝子として再構築される。抗体をファージ粒子上に保持する方法は，国際公開公報（ＷＯ１９９７／０９４３６，ＷＯ１９９５／１１３１７）等に記載されており，周知である。人工的に再構築した抗体遺伝子にコードされた抗体を保持するファージから，抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性を有する抗体を保持するファージを選択する場合，組換えｈＴｆＲを，プレートに添加して保持させた後，ファージを接触させ，次いでプレートから組換えｈＴｆＲと結合していないファージを除去し，プレートに保持されたファージの量を測定する方法が用いられる。この方法によれば，ファージ粒子上に保持された抗体のｈＴｆＲに対する親和性が高いほど，プレートに保持されたファージの量が多くなる。従って，プレートに保持されたファージの量を測定し，より多くのファージが保持されたプレートに対応するファージ粒子を，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生するファージ粒子として選択することができ，ひいては，ｈＴｆＲに対して高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を選択できる。このようにして選択されたファージ粒子から，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を，ＰＣＲ法を用いて増幅することにより，高親和性抗体をコードする遺伝子を単離することができる。

【0049】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞等の細胞，又は，抗ｈＴｆＲ抗体に対して高親和性を有する抗体を有するファージ粒子からｃＤＮＡ又はファージＤＮＡを調製し，これを鋳型として，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖，又は抗ｈＴｆＲ抗体である一本鎖抗体の，全て又はその一部をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を，ＰＣＲ法等により増幅して単離することができる。同様にして，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖の可変領域の全て又はその一部をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖の可変領域の全て又はその一部をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を，ＰＣＲ法等により増幅して単離することもできる。

【0050】

この高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖をコードする遺伝子の全て又はその一部を発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを用いて哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換し，得られた形質転換細胞を培養することにより，高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生させることができる。単離された抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子の塩基配列から抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列を翻訳し，このアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を人工的に合成することもできる。ＤＮＡ断片を人工的に合成する場合，適切なコドンを選択することにより，ホスト細胞における抗ｈＴｆＲ抗体の発現量を増加させることができる。

【0051】

元の抗ｈＴｆＲ抗体にアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えるために，単離されたＤＮＡ断片に含まれる抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子に，適宜変異を加えることもできる。変異を加えた後の抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子は，元の遺伝子と，好ましくは８０％以上の相同性を有するものであり，より好ましくは９０％以上の相同性を有するものであるが，相同性に特に制限はない。アミノ酸配列に変異を加えることにより，抗ｈＴｆＲ抗体と結合する糖鎖の数，糖鎖の種類を改変し，生体内における抗ｈＴｆＲ抗体の安定性を増加させること等もできる。

【0052】

抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖の可変領域の全て又はその一部をコードする遺伝子に変異を加える場合にあっては，変異を加えた後の遺伝子は，元の遺伝子と，好ましくは８０％以上の相同性を有するものであり，より好ましくは９０％以上の相同性を有するものであるが，相同性に特に制限はない。軽鎖の可変領域のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。軽鎖の可変領域にアミノ酸を付加させる場合，軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は，元の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。特に，ＣＤＲのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個である。ＣＤＲのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。アミノ酸を付加させる場合，当該アミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～５個，より好ましくは１～３個，更に好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列は，元の各ＣＤＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0053】

抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖の可変領域の全て又はその一部をコードする遺伝子に変異を加える場合にあっては，変異を加えた後の遺伝子は，元の遺伝子と，好ましくは８０％以上の相同性を有するものであり，より好ましくは９０％以上の相同性を有するものであるが，相同性に特に制限はない。重鎖の可変領域のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。重鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。重鎖の可変領域にアミノ酸を付加させる場合，重鎖の可変領域のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた重鎖の可変領域のアミノ酸配列は，元の重鎖の可変領域のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。特に，ＣＤＲのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個である。ＣＤＲのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。アミノ酸を付加させる場合，当該アミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～５個，より好ましくは１～３個，更に好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列は，元の各ＣＤＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0054】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖の可変領域への変異と，上記の抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖の可変領域への変異とを組み合わせて，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と重鎖の可変領域の両方に変異を加えることもできる。

【0055】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列中のアミノ酸の他のアミノ酸による置換としては，例えば，芳香族アミノ酸（Ｐｈｅ，Ｔｒｐ，Ｔｙｒ），脂肪族アミノ酸（Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ），極性アミノ酸（Ｇｌｎ，Ａｓｎ），塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ），酸性アミノ酸（Ｇｌｕ，Ａｓｐ），水酸基を有するアミノ酸（Ｓｅｒ，Ｔｈｒ）などの同じグループに分類されるアミノ酸が挙げられる。このような類似アミノ酸による置換は，蛋白質の表現型に変化をもたらさない（即ち，保存的アミノ酸置換である）ことが予測される。但し，本発明者が先に見出し本願発明と同種の効果を有することを確認している抗体番号３（本願出願時点において未公開）のｈＴｆＲのフレームワーク領域３のアミノ酸配列である配列番号８３は，その第１７番目がＴｒｐであり，これに対し本願発明における抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖のフレームワーク領域３は配列番号６８のアミノ酸配列を有し，そのＮ末端側から第１７番目がＬｅｕに置換されたものである。また，ＣＤＲ１のアミノ酸配列においては，配列番号１２の第５番目のＴｈｒが，配列番号６６で示されるようにＭｅｔに置換されたものである。ＴｒｐとＬｅｕとは上記の類似関係にはなく，そしてＴｈｒとＭｅｔも上記の類似関係にはない。ところが後述するように，当該置換を含む抗体番号３Ｎは，予想外にも，抗体番号３と効果の点で同種であり，しかも一層優れた効果を示す。

【0056】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体に変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合において，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体を他の蛋白質（Ａ）と融合させたときに抗ｈＴｆＲ抗体と蛋白質（Ａ）との間に位置することとなった場合，当該付加したアミノ酸は，リンカーの一部を構成する。抗ｈＴｆＲ抗体と蛋白質（Ａ）との融合蛋白質において，抗ｈＴｆＲ抗体と蛋白質（Ａ）との間に配置されるリンカーについては後に詳述する。

【0057】

上記の方法等によって選択されたｈＴｆＲに対して比較的高い親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体を産生する細胞を培養して得られる抗ｈＴｆＲ抗体，及び，高親和性を有する抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を発現させて得られる抗ｈＴｆＲ抗体は，そのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を導入することにより所望の特性を有する抗体に改変させることもできる。抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列への変異の導入は，そのアミノ酸配列に対応する遺伝子に変異を加えることによって行われる。

【0058】

抗ｈＴｆＲ抗体は，その抗体の可変領域のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えることにより，抗体のｈＴｆＲに対する親和性を適宜調整することができる。例えば，抗体と抗原との親和性が高く，水性液中での解離定数が著しく低い場合，これを生体内に投与したときに，抗体が抗原と解離せず，その結果，機能上の不都合が生じる可能性がある。このような場合に，抗体の可変領域に変異を導入することにより，解離定数を，元の抗体の２～５倍，５～１０倍，１０～１００倍等と段階的に調整し，目的に合致した最も好ましい抗体を獲得し得る。逆に，当該変異の導入により，解離定数を，元の抗体の１／２～１／５倍，１／５～１／１０倍，１／１０～１／１００倍等と段階的に調整することもできる。

【0059】

抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列への置換，欠失，付加等の変異の導入は，例えば，抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子を鋳型にして，ＰＣＲ等の方法により，遺伝子の塩基配列の特定の部位に変異を導入するか，又はランダムに変異を導入することにより行うことができる。

【0060】

抗体とｈＴｆＲとの親和性の調整を目的とした，抗ｈＴｆＲ抗体のアミノ酸配列への変異の導入は，例えば，一本鎖抗体である抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子をファージミドに組み込み，このファージミドを用いてカプシド表面上に一本鎖抗体を発現させたファージを作製し，変異原等を作用させることにより一本鎖抗体をコードする遺伝子上に変異を導入させながらファージを増殖させ，増殖させたファージから，所望の解離定数を有する一本鎖抗体を発現するファージを，上述の方法により選択するか，又は一定条件下で抗原カラムを用いて精製することにより，得ることができる。

【0061】

上記の高親和性抗体を産生する細胞を選択する方法により得られる，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗体は，好ましくは，実施例７に記載の方法により測定されるｈＴｆＲとの解離定数（Ｋ_Ｄ）が，好ましくは１Ｘ１０^－８Ｍ以下であるものであり，より好ましくは１Ｘ１０^－９Ｍ以下であるものであり，更に好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下のものであり，尚も更に好ましくは１Ｘ１０^－１１Ｍ以下のものである。例えば好適なものとして，解離定数が１Ｘ１０^－１３Ｍ～１Ｘ１０^－９Ｍであるもの，１Ｘ１０^－１３Ｍ～１Ｘ１０^－１０Ｍであるものを挙げることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。一旦得られた抗体は，変異を導入する等して，所望の特性を有するように適宜改変することができる。

【0062】

上記のようにして得られる抗ｈＴｆＲ抗体から，サルＴｆＲに対する親和性を有する抗体を選択することにより，ヒト及びサルのＴｆＲの何れにも親和性を有する抗体を得ることができる。サルＴｆＲに対する親和性を有する抗体は，例えば，遺伝子組換え技術を用いて作製した組換えサルＴｆＲを用いたＥＬＩＳＡ法等により選択することができる。このＥＬＩＳＡ法では，組換えサルＴｆＲをプレートに添加してこれに保持させた後，抗ｈＴｆＲ抗体を接触させ，次いで組換えサルＴｆＲと結合していない抗体をプレートから除去し，プレートに保持された抗体の量を測定する。組換えサルＴｆＲに対する親和性が高いほどプレートに保持される抗体の量が多くなるので，より多くの抗体が保持されたプレートに対応する抗体を，サルＴｆＲに親和性を有する抗体として選択することができる。なお，ここでいう「サル」とは，好ましくはヒトを除く真猿類に分類されるものであり，より好ましくはオナガザル科に分類されるものであり，更に好ましくはマカク属に分類されるものであり，例えば，カニクイザル又はアカゲザルであり，特にカニクイザルは，評価に用いる上で都合が良い。

【0063】

ヒト及びサルのｈＴｆＲのいずれにも親和性を有する抗体は，この抗体を投与したときの生体内での動態を，サルを用いて観察できるという有利な効果を有する。例えば，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体を利用して医薬を開発する場合，当該医薬の薬物動態試験をサルを用いて実施できるため，当該医薬の開発を著しく促進することができる。

【0064】

本発明において，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有し且つサルＴｆＲに対しても親和性を有する抗体は，特に，実施例７に記載の方法により測定したとき，ヒト及びサルのＴｆＲとの解離定数が次のものである：
（ａ）ｈＴｆＲとの解離定数：好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，より好ましくは２．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，更に好ましくは５Ｘ１０^－１２Ｍ以下，更により好ましくは１Ｘ１０^－１２Ｍ以下，
（ｂ）サルＴｆＲとの解離定数：好ましくは１Ｘ１０^－９Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－１０Ｍ以下，更に好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，例えば７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下。

【0065】

例えば，ｈＴｆＲ及びサルＴｆＲとの解離定数が，それぞれ，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－９Ｍ以下，１Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び５Ｘ１０^－１０Ｍ以下，５Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，５Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，１Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，１Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，であるものが挙げられる。ここにおいて，ヒトのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，５Ｘ１０^－１３Ｍ，１Ｘ１０^－１３Ｍ等とすることができる。また，サルのＴｆＲとの解離定数にも特段明確な下限はないが，例えば，１Ｘ１０^－１１Ｍ，１Ｘ１０^－１２Ｍ等とすることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0066】

上記の高親和性抗体を産生する細胞を選択する方法により得られた，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗体は，ヒト以外の動物の抗体である場合，ヒト化抗体とすることができる。ヒト化抗体とは，抗原に対する特異性を維持しつつ，ヒト以外の動物の抗体の可変領域の一部（例えば，特にＣＤＲの全部又は一部）のアミノ酸配列を用い，ヒト抗体の適切な領域を，当該配列で置き換えること（ヒト抗体への当該配列の移植）により得られる抗体のことである。例えば，ヒト化抗体として，ヒト抗体を構成する免疫グロブリン軽鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）と免疫グロブリン重鎖の３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ）を，他の哺乳動物のＣＤＲで置き換えた抗体が挙げられる。ヒト抗体に組み込まれるＣＤＲが由来する生物種は，ヒト以外の哺乳動物である限り特に限定はないが，好ましくは，マウス，ラット，ウサギ，ウマ，ヒト以外の霊長類であり，より好ましくはマウス及びラットであり，更に好ましくはマウスである。但し，ヒト抗体の一部を他のヒト抗体の一部で置き換えた抗体とすることもできる。

【0067】

ヒト化抗体の作製法は，当該技術分野で周知であり，ウインター（Ｗｉｎｔｅｒ）らが考案した，ヒト抗体の可変領域にある相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を，非ヒト哺乳動物の抗体のＣＤＲで置き換える方法（Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ Ｍ． Ｓｃｉｅｎｃｅ． ２３９． １５３４－１５３６ （１９８８））に基づくものが，最も一般的である。ここで，非ヒト哺乳動物の抗体のＣＤＲのみならず，ＣＤＲの構造保持あるいは抗原との結合に関与しているＣＤＲ外の領域のアミノ酸配列により，アクセプターとなるヒト抗体の対応する箇所を置き換えることが，ドナー抗体の持つ本来の活性を再現するために必要である場合があることも周知である（Ｑｕｅｅｎ Ｃ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ． ８６． １００２９－１００３３ （１９８９）。ここで，ＣＤＲ外の領域は，フレームワーク領域（ＦＲ）ともいう。

【0068】

抗体の重鎖と軽鎖の可変領域はいずれも，４個のフレームワーク領域１～４（ＦＲ１～４）を含む。ＦＲ１は，ＣＤＲ１にそのＮ末端側で隣接する領域であり，重鎖及び軽鎖を構成する各ペプチドにおいて，そのＮ末端からＣＤＲ１のＮ末端に隣接するアミノ酸までのアミノ酸配列からなる。ＦＲ２は，重鎖及び軽鎖を構成する各ペプチドにおいて，ＣＤＲ１とＣＤＲ２との間のアミノ酸配列からなる。ＦＲ３は，重鎖及び軽鎖を構成する各ペプチドにおいて，ＣＤＲ２とＣＤＲ３との間のアミノ酸配列からなる。ＦＲ４は，ＣＤＲ３のＣ末端に隣接するアミノ酸から可変領域のＣ末端までのアミノ酸配列からなる。但し，これに限らず，本発明においては，上記の各ＦＲ領域において，そのＮ末端側の１～５個のアミノ酸及び／又はＣ末端側の１～５個のアミノ酸を除いた領域を，フレームワーク領域とすることもできる。

【0069】

ヒト化抗体の作製は，ヒト抗体の可変領域のＣＤＲ（と場合によりその周辺のＦＲ）に代えて，非ヒト哺乳動物の抗体のＣＤＲ（と場合によりその周辺のＦＲ）を移植する作業を含む。この作業において，元となるヒト抗体の可変領域のフレームワーク領域は，生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベース等から得ることができる。例えば，ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は，「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベース（インターネットにおいてｗｗｗ．ｍｒｃｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅで入手可能）から選択することができる。この他，公表された文献，例えば「Ｋａｂａｔ ＥＡ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， 第５版， 米国保健福祉省， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ９１－３２４２ （１９９１）」，「Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ＩＭ． Ｊ． ｆｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７． ７７６－９８ （１９９２）」，「Ｃｏｘ ＪＰＬ． Ｅｕｒ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２４：８２７－８３６ （１９９４）」等に記載されたＤＮＡ配列及びアミノ酸配列から選択することもできる。

【0070】

以上のように，ヒト化抗体において，元のヒト抗体の可変領域に移植される非ヒト哺乳動物の抗体の領域は，一般に，ＣＤＲそれ自体，又はＣＤＲとの周辺のＦＲを含む。但し，ＣＤＲとともに移植されるＦＲも，ＣＤＲの構造保持あるいは抗原との結合に関与しており，実質的に抗体の相補性を決定する機能を有すると考えられることから，本発明において「ＣＤＲ」の語は，ヒト化抗体を作製する場合に，非ヒト哺乳動物の抗体からヒト化抗体に移植される領域，又は移植され得る領域のことをいう。即ち，ＣＤＲには，一般にＦＲとされる領域であっても，それがＣＤＲの構造保持あるいは抗原との結合に関与しており，実質的に抗体の相補性を決定する機能を有していると考えられるものである限り，本発明においてはＣＤＲに含まれる。

【0071】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，これを静脈注射等により生体内に投与した場合，脳内の毛細血管の内皮細胞上に存在するｈＴｆＲに効率良く結合することができる。ｈＴｆＲと結合した抗体は，エンドサイトーシス，トランスサイトーシス等の機構により血液脳関門を通過して脳内に取り込まれる。従って，脳内で機能させるべき蛋白質，低分子化合物等を，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と結合させることにより，これらの物質に効率良く血液脳関門を通過させて脳内に到達させることができる。また，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，血液脳関門を通過した後に，大脳の脳実質，海馬の神経様細胞，小脳のプルキンエ細胞等に，又は少なくともこれらのいずれかに到達できる。そして，大脳の線条体の神経様細胞及び中脳の黒質の神経様細胞へ到達することも予想される。従って，これら組織又は細胞に作用する蛋白質，低分子化合物等を，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と結合させることにより，これら組織又は細胞に到達させることができる。

【0072】

通常であれば血液脳関門を通過することができず，そのため静脈内投与では脳内で生理的，薬理的な作用を殆ど又は全く発揮できない物質（蛋白質，低分子化合物等）を，血中から脳内に到達させそこで作用を発揮させる上で，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，有効な手段となり得る。特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は血液脳関門を通過した後に，大脳の脳実質，海馬の神経様細胞，小脳のプルキンエ細胞等に，又は少なくともこれらのいずれかに到達する。そして，大脳の線条体の神経様細胞及び中脳の黒質の神経様細胞へ到達することも予想される。従って，それらの物質を本発明の抗ｈＴｆＲ抗体分子と結合した形として静脈内投与等により血中投与することにより，これら脳の組織又は細胞においてそれらの作用を発揮させ又は強化することが可能となる。

【0073】

抗ｈＴｆＲ抗体とそのような物質（蛋白質，低分子化合物等）とを結合させる方法としては，非ペプチドリンカー又はペプチドリンカーを介して結合させる方法がある。非ペプチドリンカーとしては，ポリエチレングリコール，ポリプロピレングリコール，エチレングリコールとプロピレングリコールとの共重合体，ポリオキシエチル化ポリオール，ポリビニルアルコール，多糖類，デキストラン，ポリビニルエーテル，生分解性高分子，脂質重合体，キチン類，及びヒアルロン酸，又はこれらの誘導体，若しくはこれらを組み合わせたものを用いることができる。ペプチドリンカーは，ペプチド結合した１～５０個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖若しくはその誘導体であって，そのＮ末端とＣ末端が，それぞれ抗ｈＴｆＲ抗体又は蛋白質，低分子化合物等のいずれかと共有結合を形成することにより，抗ｈＴｆＲ抗体と蛋白質，低分子化合物等とを結合させるものである。

【0074】

非ペプチドリンカーとしてＰＥＧを用いて本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と所望の他の蛋白質（Ａ）とを結合させたものは，特に，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質という。抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質は，抗ｈＴｆＲ抗体とＰＥＧを結合させて抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧを作製し，次いで抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧと他の蛋白質（Ａ）とを結合させることにより製造することができる。又は，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質は，他の蛋白質（Ａ）とＰＥＧとを結合させて蛋白質－ＰＥＧを作製し，次いで蛋白質－ＰＥＧと抗ｈＴｆＲ抗体を結合させることによっても製造することができる。ＰＥＧを抗ｈＴｆＲ抗体及び他の蛋白質（Ａ）と結合させる際には，カーボネート，カルボニルイミダゾール，カルボン酸の活性エステル，アズラクトン，環状イミドチオン，イソシアネート，イソチオシアネート，イミデート，又はアルデヒド等の官能基で修飾されたＰＥＧが用いられる。これらＰＥＧに導入された官能基が，主に抗ｈＴｆＲ抗体及び他の蛋白質（Ａ）分子内のアミノ基と反応することにより，ＰＥＧとｈＴｆＲ抗体及び他の蛋白質（Ａ）が共有結合する。このとき用いられるＰＥＧの分子量及び形状に特に限定はないが，その平均分子量（ＭＷ）は，好ましくはＭＷ＝５００～６００００であり，より好ましくはＭＷ＝５００～２００００である。例えば，平均分子量が約３００，約５００，約１０００，約２０００，約４０００，約１００００，約２００００等であるＰＥＧは，非ペプチドリンカーとして好適に使用することができる。抗ｈＴｆＲ抗体と所望の低分子化合物を結合させる場合も同様である。

【0075】

例えば，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧは，抗ｈＴｆＲ抗体とアルデヒド基を官能基として有するポリエチレングリコール（ＡＬＤ－ＰＥＧ－ＡＬＤ）とを，該抗体に対するＡＬＤ－ＰＥＧ－ＡＬＤのモル比が１１，１２．５，１５，１１０，１２０等になるように混合し，これにＮａＣＮＢＨ３等の還元剤を添加して反応させることにより得られる。次いで，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧを，ＮａＣＮＢＨ３等の還元剤の存在下で，他の蛋白質（Ａ）と反応させることにより，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質が得られる。逆に，先に他の蛋白質（Ａ）とＡＬＤ－ＰＥＧ－ＡＬＤとを結合させて蛋白質－ＰＥＧを作製し，次いで蛋白質－ＰＥＧと抗ｈＴｆＲ抗体を結合させることによっても，抗ｈＴｆＲ抗体－ＰＥＧ－蛋白質を得ることができる。

【0076】

抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）とは，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖又は軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に，リンカー配列を介して又は直接に，それぞれ他の蛋白質（Ａ）のＮ末端又はＣ末端をペプチド結合により結合させることもできる。このように抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）とを結合させてなる融合蛋白質は，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖又は軽鎖をコードするｃＤＮＡの３’末端側又は５’末端側に，直接又はリンカー配列をコードするＤＮＡ断片を挟んで，他の蛋白質（Ａ）をコードするｃＤＮＡがインフレームで配置されたＤＮＡ断片を，哺乳動物細胞用の発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを導入した哺乳動物細胞を培養することにより，得ることができる。この哺乳動物細胞には，他の蛋白質（Ａ）をコードするＤＮＡ断片を重鎖と結合させる場合にあっては，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖をコードするｃＤＮＡ断片を組み込んだ哺乳動物細胞用の発現ベクターも，同じホスト細胞に導入され，また，他の蛋白質（Ａ）をコードするＤＮＡ断片を軽鎖と結合させる場合にあっては，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖をコードするｃＤＮＡ断片を組み込んだ哺乳動物細胞用の発現ベクターも，同じホスト細胞に導入される。抗ｈＴｆＲ抗体が一本鎖抗体である場合，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）とを結合させた融合蛋白質は，他の蛋白質（Ａ）をコードするｃＤＮＡの５’末端側又は３’末端側に，直接，又はリンカー配列をコードするＤＮＡ断片を挟んで，１本鎖抗ｈＴｆＲ抗体をコードするｃＤＮＡを連結したＤＮＡ断片を，（哺乳動物細胞，酵母等の真核生物又は大腸菌等の原核生物細胞用の）発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを導入したこれらの細胞中で発現させることにより，得ることができる。

【0077】

抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＣ末端側に他の蛋白質（Ａ）を結合させたタイプの融合蛋白質は，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものであり，他の蛋白質（Ａ）が，この抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖のＣ末端側に結合したものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と他の蛋白質（Ａ）とは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0078】

抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側に他の蛋白質（Ａ）を結合させたタイプの融合蛋白質は，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものであり，他の蛋白質（Ａ）が，この抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖のＣ末端側に結合したものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖と他の蛋白質（Ａ）とは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0079】

抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＮ末端側に他の蛋白質（Ａ）を結合させたタイプの融合蛋白質は，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものであり，他の蛋白質（Ａ）が，この抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の軽鎖のＮ末端側に結合したものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と他の蛋白質（Ａ）とは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0080】

抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＮ末端側に他の蛋白質（Ａ）を結合させたタイプの融合蛋白質は，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体が，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものであり，他の蛋白質（Ａ）が，この抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖のＮ末端側に結合したものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖と他の蛋白質（Ａ）とは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0081】

このとき抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との間に配置されるリンカー配列は，好ましくは１～５０個，より好ましくは１～１７個，更に好ましくは１～１０個，更により好ましくは１～５個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖であるが，抗ｈＴｆＲ抗体に結合させるべき他の蛋白質（Ａ）によって，リンカー配列を構成するアミノ酸の個数は，１個，２個，３個，１～１７個，１～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，２７個等と適宜調整できる。そのようなリンカー配列は，これにより連結された抗ｈＴｆＲ抗体がｈＴｆＲとの親和性を保持し，且つ当該リンカー配列により連結された他の蛋白質（Ａ）が，生理的条件下で当該蛋白質の生理活性を発揮できる限り，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものである。例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる配列を含むものが挙げられる。１～５０個のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２７個のアミノ酸からなる配列等を有するものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。また，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものはリンカー配列として好適に用いることができる。更には，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２５個のアミノ酸配列を含むものもリンカー配列として好適に用いることができる。

【0082】

抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質において，抗ｈＴｆＲ抗体が一本鎖抗体である場合，免疫グロブリン軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と免疫グロブリン重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とは，一般にリンカー配列を介して，結合される。このとき，ｈＴｆＲに対する抗ｈＴｆＲ抗体の親和性が保持される限り，軽鎖由来のアミノ酸配列のＣ末端側にリンカー配列が結合し，更にそのＣ末端側に重鎖由来のアミノ酸配列が結合してもよく，またこれとは逆に，重鎖由来のアミノ酸配列のＣ末端側にリンカー配列が結合し，更にそのＣ末端側に軽鎖由来のアミノ酸配列が結合してもよい。

【0083】

免疫グロブリンの軽鎖と重鎖の間に配置されるリンカー配列は，好ましくは２～５０個，より好ましくは８～５０個，更に好ましくは１０～３０個，更により好ましくは１２～１８個又は１５～２５個，例えば１５個若しくは２５個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖である。そのようなリンカー配列は，これにより両鎖が連結されてなる抗ｈＴｆＲ抗体がｈＴｆＲと親和性を保持し且つ当該抗体に結合した他の蛋白質（Ａ）が，生理的条件下でその生理活性を発揮できる限り，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンから又はグリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が２～１０個，あるいは２～５個連続してなる配列を含むものである。リンカー配列の好ましい一態様として，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が３個連続してなる１５個のアミノ酸からなる配列を含むものが挙げられる。

【0084】

抗ｈＴｆＲ抗体が一本鎖抗体である場合における，本発明のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，他の蛋白質（Ａ）のＣ末端側に，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸からなる第１のリンカー配列を介して，一本鎖抗体が結合したものが例示できる。ここで用いられる，一本鎖抗体の好ましい一態様として，配列番号６５に記載のアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖の可変領域のＣ末端に，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が３個連続してなる計１５個のアミノ酸からなる第１のリンカー配列を介して，配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖の可変領域が結合したものである，配列番号６０に記載のアミノ酸配列を有するもの，配列番号６１に記載のアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖のＣ末端側に，配列番号３で示されるアミノ酸配列が６回連続するアミノ酸配列にアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙが続く３２個のアミノ酸からなるリンカーを介して，配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖が結合したものである，配列番号９８に記載のアミノ酸配列を有するものが挙げられる。

【0085】

抗ｈＴｆＲ抗体が一本鎖抗体である場合におけるこのような融合蛋白質は，例えば，融合蛋白質をコードする塩基配列を有するＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターで哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。

【0086】

なお，本発明において，１つのペプチド鎖に複数のリンカー配列が含まれる場合，便宜上，各リンカー配列はＮ末端側から順に，第１のリンカー配列，第２のリンカー配列というように命名する。

【0087】

抗ｈＴｆＲ抗体がＦａｂである場合における，本発明のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，他の蛋白質（Ａ）のＣ末端側に，Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸からなるリンカー配列を介して，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖の可変領域とＣ_Ｈ１領域を含む領域を融合させたものが挙げられる。このときＣ_Ｈ１領域に加えてヒンジ部の一部が含まれてもよいが，当該ヒンジ部は重鎖間のジスフィルド結合を形成するシステイン残基を含まない。

【0088】

抗ｈＴｆＲ抗体がＦａｂである場合おける好適な重鎖の一例として，配列番号６１に記載のアミノ酸配列を有するものが挙げられる。配列番号６１のアミノ酸配列は，配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖のＦａｂであり，配列番号６６のアミノ酸配列のＮ末端側から１番目～２２６番目の部分に相当する。なお，配列番号６１のＮ末端から１番目～１１８番目の部分が，可変領域（配列番号６５）に相当し，１１９番目～２１６番目の部分がＣ_Ｈ１領域に相当し，２１７番目～２２６番目の部分がヒンジ部に相当する。

【0089】

抗ｈＴｆＲ抗体がＦａｂである場合において，別のＩｇＧのＦｃ領域を融合蛋白質に更に導入することもできる。Ｆｃ領域を融合蛋白質に導入することにより，融合蛋白質の血中等の生体内での安定性を高めることができる。かかるＦｃ領域を導入した融合蛋白質としては，例えば，他の蛋白質（Ａ）のＣ末端側に直接又はリンカー配列を介してヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が結合してなり，且つ，該ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣ末端側に直接又はリンカー配列を介して抗ヒトトランスフェリン受容体抗体のＦａｂ重鎖が結合してなるものがある。

【0090】

他の蛋白質（Ａ）とヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の間のリンカー配列は，好ましくは１～５０個のアミノ酸から構成される。ここに，アミノ酸の個数は，１～１７個，１～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，２７個等と適宜調整される。このようなリンカー配列は，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものである。例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連結してなる，５０個以下のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２５個のアミノ酸からなる配列等を含むものが挙げられる。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２５個のアミノ酸配列を含むものは，リンカー配列として好適に用いることができる。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域とＦａｂ重鎖との間のリンカー配列についても同様である。

【0091】

なお，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を導入する場合，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は抗ヒトトランスフェリン受容体抗体の重鎖と軽鎖の何れに結合させてもよい。また，抗体はＦ（ａｂ’）_２，Ｆ（ａｂ’），一本鎖抗体を含むその他の抗原結合性断片であってもよい。

【0092】

導入されるヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＩｇＧのタイプには特に限定はなく，ＩｇＧ１～ＩｇＧ５のいずれであってもよい。また，導入されるヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は，Ｆｃ領域の全体でもよくその一部であってもよい。斯かるヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の好ましい一実施形態として，ヒトＩｇＧ１のＦｃの全領域である，配列番号７０で示されるアミノ酸配列を有するものが挙げられる。また，ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を導入したＦａｂ重鎖のアミノ酸配列として，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体３ＮのＦａｂ重鎖のアミノ酸配列（配列番号６１）のＮ末端側に，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２５個のアミノ酸配列を含むリンカー配列を介して，配列番号７０で示されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を結合させた，配列番号７１で示されるアミノ酸配列を有するものが挙げられる。

【0093】

抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質を，アルブミンに対する親和性を有するように改変することもできる。アルブミンに対する親和性は，融合蛋白質に，アルブミンに対して親和性を有する化合物，ペプチド，蛋白質等を結合させることにより達成できる。アルブミンに対する親和性を導入した融合蛋白質は，少なくともその一部がアルブミンと結合して血中を循環する。アルブミンは，これと結合した蛋白質を安定化させる機能を有する。従って，アルブミンに対する親和性を導入することにより，生体内に投与した融合蛋白質の血中での半減期を長期化することができるので，その薬効を強化できる。アルブミンに対する親和性の導入は，抗ｈＴｆＲ抗体が，抗体の安定性に寄与するＦｃ領域を欠くもの，例えば，Ｆａｂである場合により効果的である。

【0094】

また，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質が，生体内に投与したときに，免疫原性を示すような場合にも，アルブミンに対する親和性を導入することは効果的である。融合蛋白質の免疫原性を示す部位が，融合蛋白質がアルブミンと結合することにより，免疫細胞に提示されることが阻害されるので，免疫原性が軽減される。

【0095】

抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質に，アルブミンに対する親和性を導入する場合，かかる親和性を導入する部分は，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖，他の蛋白質（Ａ），及びリンカー部分の何れであってもよく，これらの２以上の部分に導入してもよい。

【0096】

アルブミンに対して親和性を有するペプチド又は蛋白質として，例えば，配列番号７４で示されるアミノ酸配列を有する，Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｔｒａｉｎ Ｇ４１８由来の蛋白質のアルブミン結合ドメイン（Ａｌｍ Ｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｊ． ５． ６０５－１７ （２０１０））を，アルカリ耐性を示すように改変したペプチドを用いることができるが，これに限定されるものではない。アルブミンに対して親和性を有するペプチド又は蛋白質（アルブミン親和性ペプチド）と，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質（抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質）を結合させる方法としては，非ペプチドリンカー又はペプチドリンカーを介して結合させる方法がある。非ペプチドリンカーとしては，ポリエチレングリコール，ポリプロピレングリコール，エチレングリコールとプロピレングリコールとの共重合体，ポリオキシエチル化ポリオール，ポリビニルアルコール，多糖類，デキストラン，ポリビニルエーテル，生分解性高分子，脂質重合体，キチン類，及びヒアルロン酸，又はこれらの誘導体，若しくはこれらを組み合わせたものを用いることができる。ペプチドリンカーは，ペプチド結合した１～５０個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖若しくはその誘導体であって，そのＮ末端とＣ末端が，それぞれアルブミン親和性ペプチド又は融合蛋白質の何れかと共有結合を形成することにより，アルブミン親和性ペプチドと融合蛋白質とを結合させるものである。

【0097】

非ペプチドリンカーとしてＰＥＧを用いてアルブミン親和性ペプチドと抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質とを結合させたものは，特に，アルブミン親和性ペプチド－ＰＥＧ－蛋白質（Ａ）融合蛋白質という。アルブミン親和性ペプチド－抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質は，アルブミン親和性ペプチドとＰＥＧを結合させてアルブミン親和性ペプチド－ＰＥＧを作製し，次いでアルブミン親和性ペプチド－ＰＥＧと抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質とを結合させることにより製造することができる。又は，アルブミン親和性ペプチド－抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質は，抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質とＰＥＧとを結合させて抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質を作製し，次いで抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質－ＰＥＧとアルブミン親和性ペプチドを結合させることによっても製造することができる。ＰＥＧをアルブミン親和性ペプチド及び抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質と結合させる際には，カーボネート，カルボニルイミダゾール，カルボン酸の活性エステル，アズラクトン，環状イミドチオン，イソシアネート，イソチオシアネート，イミデート，又はアルデヒド等の官能基で修飾されたＰＥＧが用いられる。これらＰＥＧに導入された官能基が，主にアルブミン親和性ペプチド及び抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質分子内のアミノ基と反応することにより，ＰＥＧとアルブミン親和性ペプチド及び抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質が共有結合する。このとき用いられるＰＥＧの分子量及び形状に特に限定はないが，その平均分子量（ＭＷ）は，好ましくはＭＷ＝５００～６００００であり，より好ましくはＭＷ＝５００～２００００である。例えば，平均分子量が約３００，約５００，約１０００，約２０００，約４０００，約１００００，約２００００等であるＰＥＧは，非ペプチドリンカーとして好適に使用することができる。

【0098】

例えば，アルブミン親和性ペプチド－ＰＥＧは，アルブミン親和性ペプチドとアルデヒド基変性ＰＥＧ（ＡＬＤ－ＰＥＧ－ＡＬＤ）とを，該アルブミン親和性ペプチドに対する該変性ＰＥＧのモル比が１１，１２．５，１５，１１０，１２０等になるように混合し，これにＮａＣＮＢＨ_３等の還元剤を添加して反応させることにより得られる。次いで，アルブミン親和性ペプチド－ＰＥＧを，ＮａＣＮＢＨ_３等の還元剤の存在下で，抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質と反応させることにより，アルブミン親和性ペプチド－ＰＥＧ－抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質が得られる。逆に，先に抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質とＡＬＤ－ＰＥＧ－ＡＬＤとを結合させて抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質－ＰＥＧを作製し，次いで融合蛋白質－ＰＥＧとアルブミン親和性ペプチドを結合させることによっても，アルブミン親和性ペプチド－ＰＥＧ－抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質を得ることができる。

【0099】

抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質を，アルブミン親和性ペプチドと融合させることもできる。かかる融合蛋白質（抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質－アルブミン親和性ペプチド）は，抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質の重鎖（重鎖と蛋白質（Ａ）の融合蛋白質を含む）又は軽鎖（軽鎖と蛋白質（Ａ）の融合蛋白質を含む）をコードするｃＤＮＡの３’末端側又は５’末端側に，直接に又はリンカー配列をコードするＤＮＡ断片を介して，アルブミン親和性ペプチドをコードするｃＤＮＡがインフレームで配置されてなるＤＮＡ断片を，哺乳動物細胞用発現ベクターに組み込み，この発現ベクターを導入した哺乳動物細胞を培養することにより得ることができる。アルブミン親和性ペプチドをコードするＤＮＡ断片を重鎖（又は重鎖と蛋白質（Ａ）の融合蛋白質）と結合させる場合にあっては，抗ｈＴｆＲ抗体を構成している軽鎖と蛋白質（Ａ）の融合蛋白質（又は軽鎖）をコードするｃＤＮＡ断片を組み込んだ哺乳動物細胞用発現ベクターも同じホスト細胞に併せて導入され，またアルブミン親和性ペプチドをコードするＤＮＡ断片を軽鎖（又は軽鎖と蛋白質（Ａ）の融合蛋白質）と結合させる場合にあっては，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖と蛋白質（Ａ）の融合蛋白質（又は重鎖）をコードするｃＤＮＡ断片を組み込んだ哺乳動物細胞用の発現ベクターも同じホスト細胞に併せて導入される。つまり，アルブミン親和性ペプチドは，抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質の重鎖（重鎖と蛋白質（Ａ）の融合蛋白質を含む）又は軽鎖（軽鎖と蛋白質（Ａ）の融合蛋白質を含む）のＮ末端側又はＣ末端側の何れに結合させてもよいが，蛋白質（Ａ）を抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＮ末端側に結合させる場合にあっては，抗ｈＴｆＲ抗体のＣ末端側に結合させることが好ましく，特に重鎖のＣ末端側に結合させることが好ましい。

【0100】

抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質をアルブミン親和性ペプチドと融合させる場合，直接又はリンカー配列を介して融合させることができる。ここでリンカー配列は，好ましくは１～５０個のアミノ酸から構成される。ここに，アミノ酸の個数は，１～１７個，１～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，２７個等と適宜調整される。このようなリンカー配列は，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものである。例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連結してなる，５０個以下のアミノ酸からなる配列，２～１７個，２～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個，又は２５個のアミノ酸からなる配列等を含むものが挙げられる。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が３個連続してなる計１５個のアミノ酸配列を含むものは，リンカー配列として好適に用いることができる。

【0101】

アルブミン親和性ペプチドを導入した抗ｈＴｆＲ抗体－蛋白質（Ａ）融合蛋白質のアルブミンとの結合親和性は，実施例７に記載のバイオレイヤー干渉法により測定したとき，好ましくは１Ｘ１０^－７Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－７Ｍ以下，更に好ましくは１Ｘ１０^－８Ｍ以下，更により好ましくは１Ｘ１０^－９Ｍ以下である。

【0102】

Ｆａｂ抗体は，Ｆｃ領域又はアルブミン親和性ペプチドの導入以外の方法でも血中で安定化させることができる。例えば，Ｆａｂ抗体は，Ｆａｂ抗体自体，又はＦａｂ抗体と他の蛋白質の融合体をＰＥＧ修飾させることにより安定化させることができる。かかる手法は，蛋白質医薬の分野で一般的に実施されており，ＰＥＧ化されたエリスロポエチン，インターフェロン等が医薬品として実用化されている。また，Ｆａｂ抗体は，これに変異を導入することによっても安定化させることができる。例えば，軽鎖のＮ末端側から４番目のメチオニンをロイシンに置換することによりＦａｂ抗体を安定化させることができる。但し，変異の導入方法はこれに限定されず，重鎖に変異を導入してもよい。また，Ｆａｂ抗体の安定化方法はこれらのものに限られず，周知の手法は全て利用可能である。

【0103】

抗ｈＴｆＲ抗体と結合させるべき他の蛋白質（Ａ）に特に限定はないが，生体内において生理活性を発揮し得るものであり，特に，脳内に到達させてその機能を発揮させるべきものであるにも拘らず，そのままでは血液脳関門を通過することができないため，静脈内投与では脳内で機能させることが期待できない蛋白質である。そのような蛋白質としては，例えば，神経成長因子（ＮＧＦ）や，α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ），イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ），グルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ），β－ガラクトシダーゼ，ＧＭ２活性化蛋白質，β－ヘキソサミニダーゼＡ，β－ヘキソサミニダーゼＢ，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼ，α－マンノシダーゼ（ＬＡＭＡＮ），β－マンノシダーゼ，ガラクトシルセラミダーゼ（ＧＡＬＣ），サポシンＣ，アリルスルファターゼＡ（ＡＲＳＡ），α－Ｌ－フコシダーゼ（ＦＵＣＡ１），アスパルチルグルコサミニダーゼ，α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ，酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ），α－ガラクトシダーゼＡ，β－グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ），ヘパランＮ－スルファターゼ（ＳＧＳＨ），α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ＮＡＧＬＵ），アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ，Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ，酸性セラミダーゼ（ＡＣ），アミロ－１，６－グルコシダーゼ，シアリダーゼ，アスパルチルグルコサミニダーゼ，パルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１（ＰＰＴ－１），トリペプチジルペプチダーゼ－１（ＴＰＰ－１），ヒアルロニダーゼ－１，酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ），ＣＬＮ１，ＣＬＮ２等のリソソーム酵素が挙げられる。

【0104】

抗ｈＴｆＲ抗体と結合させた神経成長因子（ＮＧＦ）は，アルツハイマー病の痴ほう症治療薬として，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）はハーラー症候群又はハーラー・シャイエ症候群における中枢神経障害治療剤として，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）はハンター症候群における中枢神経障害治療剤として，グルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）はゴーシェ病における中枢神経障害治療剤として，βガラクトシダーゼはＧＭ１－ガングリオシドーシス１～３型における中枢神経障害治療剤として，ＧＭ２活性化蛋白質はＧＭ２－ガングリオシドーシスＡＢ異型における中枢神経障害治療剤として，β－ヘキソサミニダーゼＡはサンドホフ病及びティサックス病における中枢神経障害治療剤として，β－ヘキソサミニダーゼＢはサンドホフ病における中枢神経障害治療剤として，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼはＩ－細胞病における中枢神経障害治療剤として，α－マンノシダーゼ（ＬＡＭＡＮ）はα－マンノシドーシスにおける中枢神経障害治療剤として，β－マンノシダーゼはβ－マンノシドーシスにおける中枢神経障害治療剤として，ガラクトシルセラミダーゼ（ＧＡＬＣ）はクラッベ病における中枢神経障害治療剤として，サポシンＣはゴーシェ病様蓄積症における中枢神経障害治療剤として，アリルスルファターゼＡ（ＡＲＳＡ）は異染性白質変性症（異染性白質ジストロフィー）における中枢神経障害治療剤として，α－Ｌ－フコシダーゼ（ＦＵＣＡ１）はフコシドーシスにおける中枢神経障害治療剤として，アスパルチルグルコサミニダーゼはアスパルチルグルコサミン尿症における中枢神経障害治療剤として，α－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼはシンドラー病及び川崎病における中枢神経障害治療剤として，酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）はニーマン・ピック病における中枢神経障害治療剤として，α－ガラクトシダーゼＡはファブリー病における中枢神経障害治療剤として，β－グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）はスライ症候群における中枢神経障害治療剤として，ヘパランＮ－スルファターゼ（ＳＧＳＨ），α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ＮＡＧＬＵ），アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ及びＮ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼはサンフィリッポ症候群における中枢神経障害治療剤として，酸性セラミダーゼ（ＡＣ）はファーバー病における中枢神経障害治療剤として，アミロ－１，６－グルコシダーゼはコリ病（フォーブス・コリ病）における中枢神経障害治療剤として，シアリダーゼはシアリダーゼ欠損症における中枢神経障害治療剤として，パルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１（ＰＰＴ－１）は，神経セロイドリポフスチン症又はＳａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病における中枢神経障害治療剤として，トリペプチジルペプチダーゼ－１（ＴＰＰ－１）は，神経セロイドリポフスチン症又はＪａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病における中枢神経障害治療剤として，ヒアルロニダーゼ－１はヒアルロニダーゼ欠損症における中枢神経障害治療剤として，酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）はポンペ病における中枢神経障害治療剤として，ＣＬＮ１及び２はバッテン病における中枢神経障害治療剤として使用できる。特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，血液脳関門を通過した後に，大脳の脳実質，海馬の神経様細胞，小脳のプルキンエ細胞等に到達し，又大脳の線条体の神経様細胞及び中脳の黒質の神経様細胞にも到達すると予想されるので，これら組織又は細胞において薬効を機能させるべき蛋白質と融合させることにより，その蛋白質の薬効を強化し得る。但し，医薬用途はこれらの疾患に限られるものではない。

【0105】

なお，本発明において治療剤として用いられるものは，疾患の発症を予防するために用いることもできる。

【0106】

その他，抗ｈＴｆＲ抗体と結合させて薬効を発揮できる蛋白質としては，リソソーム酵素，毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ），グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ），ニューロトロフィン３，ニューロトロフィン４／５，ニューロトロフィン６，ニューレグリン１，エリスロポエチン，ダルベポエチン，アクチビン，塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ），線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ２），上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ），血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ），インターフェロンα，インターフェロンβ，インターフェロンγ，インターロイキン６，顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ），顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ），マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ），各種サイトカイン，腫瘍壊死因子α受容体（ＴＮＦ－α受容体），ＰＤ－１リガンド，ＰＤ－Ｌ１，ＰＤ－Ｌ２，ベータアミロイドを分解する活性を有する酵素，抗ベータアミロイド抗体，抗ＢＡＣＥ抗体，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＰＤ－１抗体，抗ＰＤ－Ｌ１抗体，抗ＰＤ－Ｌ２抗体，抗ＨＥＲ２抗体，抗ＴＮＦ－α抗体，抗ＣＴＬＡ－４抗体，及びその他の抗体医薬等が挙げられる。

【0107】

抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたリソソーム酵素はリソソーム病における中枢神経障害治療剤として，ＣＮＴＦは筋委縮性側索硬化症の治療剤として，ＧＤＮＦ，ニューロトロフィン３及びニューロトロフィン４／５は脳虚血の治療剤として，ＧＤＮＦはパーキンソン病の治療剤として，ニューレグリン１は統合失調症の治療剤として，エリスロポエチン及びダルベポエチンは脳虚血の治療剤として，ｂＦＧＦ及びＦＧＦ２は外傷性の中枢神経系障害の治療剤，脳外科手術，脊椎外科手術後の回復に，ベータアミロイドを分解する活性を有する酵素，抗ベータアミロイド抗体及び抗ＢＡＣＥ抗体はアルツハイマー病の治療剤として，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＰＤ－１抗体，抗ＰＤ－Ｌ１抗体，抗ＰＤ－Ｌ２抗体，抗ＨＥＲ２抗体，及び抗ＣＴＬＡ－４抗体は脳腫瘍を含む中枢神経系の腫瘍の治療剤として，ＴＮＦαＲ－抗ｈＴｆＲ抗体は脳虚血及び脳炎症性疾患の治療剤として使用できる。

【0108】

アルツハイマー病，パーキンソン病，ハンチントン病等の神経変性疾患，統合失調症，うつ症等の精神障害，多発性硬化症，筋委縮性側索硬化症，脳腫瘍を含む中枢神経系の腫瘍，脳障害を伴うリソソーム病，糖原病，筋ジストロフィー，脳虚血，脳炎症性疾患，プリオン病，外傷性の中枢神経系障害等の疾患に対する治療剤は，概ね抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき他の蛋白質（Ａ）となり得る。また，ウィルス性及び細菌性の中枢神経系疾患に対する治療剤も，概ね抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき他の蛋白質（Ａ）となり得る。更には，脳外科手術，脊椎外科手術後の回復にも用いることができる薬剤も，概ね抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき他の蛋白質（Ａ）となり得る。

【0109】

抗ｈＴｆＲ抗体と結合させるべき他の蛋白質（Ａ）として，上記の蛋白質の天然型（野生型）のものに加えて，天然型（野生型）のこれら蛋白質の１個又は複数個のアミノ酸が，他のアミノ酸へ置換，欠失等された類似物も，これら蛋白質としての機能を完全に又は部分的に有する限り，これら蛋白質に含まれる。アミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。アミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせて，所望の類似物とすることもできる。更には，天然型（野生型）の蛋白質又はその類似物のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，１個又は複数個のアミノ酸が付加されたものも，これら蛋白質としての機能を完全に又は部分的に有する限り，これら蛋白質に含まれる。このとき付加されるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個である。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせて，所望のこれら蛋白質の類似物とすることもできる。

【0110】

なお，これら他の蛋白質（Ａ）に変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，これら蛋白質を抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，これら蛋白質と抗ｈＴｆＲ抗体との間に位置することとなった場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0111】

天然型のヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ）は，配列番号５５で示される８８３個のアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。但し，配列番号５５で示されるアミノ酸配列のＮ末端側に更に１３個のアミノ酸が付加した配列番号５６で示される８９６個のアミノ酸から構成されるものも天然型のｈＧＡＡに含まれる。

【0112】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＧＡＡを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＧＡＡが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。配列番号６６のアミノ酸配列を有するものをコードする塩基配列としては配列番号６７で示されるものが，配列番号６８のアミノ酸配列を有するものをコードする塩基配列としては配列番号６９で示されるものが例示できる。

【0113】

ヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ）は，α－１，４－グルコシダーゼ又は酸性マルターゼとも称される。ｈＧＡＡは，ライソゾーム中グリコーゲンのα－１，４－及びα－１，６－グリコシド結合を加水分解することにより，グリコーゲンを分解する活性を有する。ポンペ病はＩＩ型糖原病（ＧＳＤ ＩＩ； ｇｌｙｃｏｇｅｎ ｓｔｏｒａｇｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅ ＩＩ）ともいい，リソソーム内の酸性α－グルコシダーゼ（酸性マルターゼ）活性の欠損に伴う細胞内のグリコーゲン蓄積により引き起こされる疾患である。ポンペ病患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＧＡＡはポンペ病に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0114】

本発明において，「ヒトＧＡＡ」又は「ｈＧＡＡ」の語は，特に天然型のｈＧＡＡと同一のアミノ酸配列を有するｈＧＡＡをいうが，これに限らず，ｈＧＡＡ活性を有するものである限り，天然型のｈＧＡＡのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＧＡＡに含まれる。ｈＧＡＡのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＧＡＡのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＧＡＡにアミノ酸を付加させる場合，ｈＧＡＡのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＧＡＡのアミノ酸配列は，元のｈＧＡＡのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0115】

なおここで，ｈＧＡＡがｈＧＡＡ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＧＡＡが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＧＡＡが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＧＡＡが変異を加えたものである場合も同様である。

【0116】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＡＡの融合蛋白質は，例えば，配列番号５８で示されるアミノ酸配列をコードする配列番号５９で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードする配列番号２４で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はポンペ病の治療剤，特にポンペ病における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＡＡの融合蛋白質である。

【0117】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＧＡＡに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＡＡとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0118】

天然型のヒトＩ２Ｓ（ｈＩ２Ｓ）は，配列番号５０で示される５２５個のアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のヒトＩ２Ｓを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖がそのＣ末端側で，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒからなるリンカーを介して，ペプチド結合によりヒトＩ２Ｓが結合して配列番号５３のアミノ酸配列を形成しているもの，が例示できる。配列番号５３のアミノ酸配列を有するものは，ＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖とｈＩ２Ｓが融合したものであり，当該重鎖の部分は配列番号６６のアミノ酸配列を有する。この重鎖部分を配列番号６８のアミノ酸配列に置き換えることにより，ＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体とｈＩ２Ｓの融合したものとすることもできる。

【0119】

ヒトＩ２Ｓ（ｈＩ２Ｓ）は，グリコサミノグリカンに属するヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸の硫酸エステル結合を加水分解する活性を有する。本酵素に遺伝的に異常を有するハンター症候群の患者は，ヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸の代謝異常のため，これらの部分分解物が肝臓や脾臓等の組織内に蓄積し，骨格異常等の症状をきたす。また，ハンター症候群の患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＩ２Ｓはハンター症候群に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0120】

本発明において，「ヒトＩ２Ｓ」又は「ｈＩ２Ｓ」の語は，特に天然型のｈＩ２Ｓと同一のアミノ酸配列を有するｈＩ２Ｓをいうが，これに限らず，Ｉ２Ｓ活性を有するものである限り，天然型のｈＩ２Ｓのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＩ２Ｓに含まれる。ｈＩ２Ｓのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＩ２Ｓのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＩ２Ｓにアミノ酸を付加させる場合，ｈＩ２Ｓのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＩ２Ｓのアミノ酸配列は，元のｈＩ２Ｓのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0121】

なおここで，ｈＩ２ＳがＩ２Ｓ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＩ２Ｓが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＩ２Ｓが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＩ２Ｓが変異を加えたものである場合も同様である。

【0122】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＡＡの融合蛋白質は，例えば，配列番号５３のアミノ酸配列をコードする配列番号５４の塩基配列を有するＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３のアミノ酸配列（抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖）をコードする配列番号２４の塩基配列を有するＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はポンペ病の治療剤，特にポンペ病における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ１タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＡＡの融合蛋白質である。

【0123】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はヒトＩ２Ｓに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＩ２Ｓとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸は，リンカーの一部を構成する。

【0124】

天然型のヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ）は，配列番号７５又は７６で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。配列番号７６で示されるｈＩＤＵＡは，配列番号７５で示されるもののＮ末端側に，Ａｌａ－Ｐｒｏが付加したタイプのものである。

【0125】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＩＤＵＡを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＩＤＵＡが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0126】

ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ）は，デルマタン硫酸，ヘパラン硫酸分子中に存在するイズロン酸結合を加水分解するリソソーム酵素である。ハーラー症候群はムコ多糖症Ｉ型ともいい，リソソーム内のα－Ｌ－イズロニダーゼ活性の欠損に伴う細胞内のデルマタン硫酸等の蓄積により引き起こされる疾患である。ハーラー症候群患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＩＤＵＡはハーラー症候群に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0127】

本発明において，「ヒトＩＤＵＡ」又は「ｈＩＤＵＡ」の語は，特に天然型のｈＩＤＵＡと同一のアミノ酸配列を有するｈＩＤＵＡをいうが，これに限らず，ｈＩＤＵＡ活性を有するものである限り，天然型のｈＩＤＵＡのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＩＤＵＡに含まれる。ｈＩＤＵＡのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＩＤＵＡのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＩＤＵＡにアミノ酸を付加させる場合，ｈＩＤＵＡのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＩＤＵＡのアミノ酸配列は，元のｈＩＤＵＡのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0128】

なおここで，ｈＩＤＵＡがｈＩＤＵＡ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＩＤＵＡが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＩＤＵＡが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＩＤＵＡが変異を加えたものである場合も同様である。

【0129】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＩＤＵＡの融合蛋白質は，例えば，配列番号９０で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はハーラー症候群の治療剤，特にハーラー症候群における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＩＤＵＡの融合蛋白質である。

【0130】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＩＤＵＡに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＩＤＵＡとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0131】

天然型のヒトパルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１（ｈＰＰＴ－１）は，配列番号７７で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0132】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＰＰＴ－１を融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＰＰＴ－１が結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0133】

神経セロイドリポフスチン症（Ｓａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病を含む）は，リソソーム内のパルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１活性の欠損に伴う細胞内のセロイドリポフスチンの蓄積により引き起こされる疾患である。神経セロイドリポフスチン症患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＰＰＴ－１は神経セロイドリポフスチン症に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0134】

本発明において，「ヒトＰＰＴ－１」又は「ｈＰＰＴ－１」の語は，特に天然型のｈＰＰＴ－１と同一のアミノ酸配列を有するｈＰＰＴ－１をいうが，これに限らず，ｈＰＰＴ－１活性を有するものである限り，天然型のｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＰＰＴ－１に含まれる。ｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＰＰＴ－１にアミノ酸を付加させる場合，ｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列は，元のｈＰＰＴ－１のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0135】

なおここで，ｈＰＰＴ－１がｈＰＰＴ－１活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＰＰＴ－１が本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＰＰＴ－１が本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＰＰＴ－１が変異を加えたものである場合も同様である。

【0136】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＰＰＴ－１の融合蛋白質は，例えば，配列番号１００で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質は神経セロイドリポフスチン症の治療剤，特に神経セロイドリポフスチン症における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＰＰＴ－１の融合蛋白質である。

【0137】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＰＰＴ－１に変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＰＰＴ－１との間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0138】

天然型のヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｈＡＳＭ）は，配列番号７８で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0139】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＡＳＭを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＡＳＭが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0140】

ヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｈＡＳＭ）は，スフィンゴミエリンをコリンリン酸とセラミドに加水分解するリソソーム酵素である。ニーマン・ピック病は，その病因及び症状の違いによりＡ～Ｆ型にまで分類される。この中で，Ａ型とＢ型の病因となるのが酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）の遺伝的欠損である。ニーマン・ピック病は，リソソーム内の酸性スフィンゴミエリナーゼ活性の欠損に伴う細胞内の，スフィンゴミエリンの蓄積により引き起こされる疾患である。ニーマン・ピック病患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＡＳＭはニーマン・ピック病に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0141】

本発明において，「ヒトＡＳＭ」又は「ｈＡＳＭ」の語は，特に天然型のｈＡＳＭと同一のアミノ酸配列を有するｈＡＳＭをいうが，これに限らず，ｈＡＳＭ活性を有するものである限り，天然型のｈＡＳＭのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＡＳＭに含まれる。ｈＡＳＭのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＡＳＭのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＡＳＭにアミノ酸を付加させる場合，ｈＡＳＭのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＡＳＭのアミノ酸配列は，元のｈＡＳＭのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0142】

なおここで，ｈＡＳＭがｈＡＳＭ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＡＳＭが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＡＳＭが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＡＳＭが変異を加えたものである場合も同様である。

【0143】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＳＭの融合蛋白質は，例えば，配列番号１０６で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はニーマン・ピック病の治療剤，特にニーマン・ピック病における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＳＭの融合蛋白質である。

【0144】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＡＳＭに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＳＭとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0145】

天然型のヒトアリルスルファターゼＡ（ｈＡＲＳＡ）は，配列番号７９で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0146】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＡＲＳＡを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＡＲＳＡが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0147】

異染性白質変性症（異染性白質ジストロフィー）は，リソソーム内のアリルスルファターゼＡ活性の欠損に伴う細胞内のスルファチド等の蓄積により引き起こされる疾患である。異染性白質変性症患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＡＲＳＡは異染性白質変性症に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0148】

本発明において，「ヒトＡＲＳＡ」又は「ｈＡＲＳＡ」の語は，特に天然型のｈＡＲＳＡと同一のアミノ酸配列を有するｈＡＲＳＡをいうが，これに限らず，ｈＡＲＳＡ活性を有するものである限り，天然型のｈＡＲＳＡのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＡＲＳＡに含まれる。ｈＡＲＳＡのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＡＲＳＡのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＡＲＳＡにアミノ酸を付加させる場合，ｈＡＲＳＡのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＡＲＳＡのアミノ酸配列は，元のｈＡＲＳＡのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0149】

なおここで，ｈＡＲＳＡがｈＡＲＳＡ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＡＲＳＡが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＡＲＳＡが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＡＲＳＡが変異を加えたものである場合も同様である。

【0150】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＲＳＡの融合蛋白質は，例えば，配列番号１１５で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質は異染性白質変性症の治療剤，特に異染性白質変性症における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＲＳＡの融合蛋白質である。

【0151】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＡＲＳＡに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＲＳＡとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0152】

天然型のヒトヘパランＮ－スルファターゼ（ｈＳＧＳＨ）は，配列番号８０で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0153】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＳＧＳＨを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＳＧＳＨが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0154】

サンフィリッポ症候群はムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩＩ型）ともいい，リソソーム内のヘパランＮ－スルファターゼ活性の欠損に伴う細胞内のヘパラン硫酸の蓄積により引き起こされる疾患である。但し，α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ等の他の酵素の欠損も病因となることもある。サンフィリッポ症候群患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＳＧＳＨはサンフィリッポ症候群に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0155】

本発明において，「ヒトＳＧＳＨ」又は「ｈＳＧＳＨ」の語は，特に天然型のｈＳＧＳＨと同一のアミノ酸配列を有するｈＳＧＳＨをいうが，これに限らず，ｈＳＧＳＨ活性を有するものである限り，天然型のｈＳＧＳＨのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＳＧＳＨに含まれる。ｈＳＧＳＨのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＳＧＳＨのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＳＧＳＨにアミノ酸を付加させる場合，ｈＳＧＳＨのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＳＧＳＨのアミノ酸配列は，元のｈＳＧＳＨのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0156】

なおここで，ｈＳＧＳＨがｈＳＧＳＨ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＳＧＳＨが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＳＧＳＨが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＳＧＳＨが変異を加えたものである場合も同様である。

【0157】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＳＧＳＨの融合蛋白質は，例えば，配列番号１２４で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はサンフィリッポ症候群の治療剤，特にサンフィリッポ症候群における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＳＧＳＨの融合蛋白質である。

【0158】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＳＧＳＨに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＳＧＳＨとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0159】

天然型のヒトグルコセレブロシダーゼ（ｈＧＢＡ）は，配列番号８１で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0160】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＧＢＡを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＧＢＡが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0161】

ヒトグルコセレブロシダーゼ（ｈＧＢＡ）は，糖脂質グルコセレブシド（又はグルコシルセラミド）を加水分解するリソソーム酵素である。ゴーシェ病は，リソソーム内のグルコセレブロシダーゼ活性の欠損に伴う細胞内のグルコセレブシドの蓄積により引き起こされる疾患である。ゴーシェ病患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＧＢＡはゴーシェ病に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0162】

本発明において，「ヒトＧＢＡ」又は「ｈＧＢＡ」の語は，特に天然型のｈＧＢＡと同一のアミノ酸配列を有するｈＧＢＡをいうが，これに限らず，ｈＧＢＡ活性を有するものである限り，天然型のｈＧＢＡのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＧＢＡに含まれる。ｈＧＢＡのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＧＢＡのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＧＢＡにアミノ酸を付加させる場合，ｈＧＢＡのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＧＢＡのアミノ酸配列は，元のｈＧＢＡのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0163】

なおここで，ｈＧＢＡがｈＧＢＡ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＧＢＡが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＧＢＡが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＧＢＡが変異を加えたものである場合も同様である。

【0164】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＢＡの融合蛋白質は，例えば，配列番号１３０で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はゴーシェ病の治療剤，特にゴーシェ病における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＢＡの融合蛋白質である。

【0165】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＧＢＡに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＢＡとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0166】

天然型のヒトトリペプチジルペプチダーゼ－１（ｈＴＰＰ－１）は，配列番号８２で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0167】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＴＰＰ－１を融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴＰＰ－１が結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0168】

神経セロイドリポフスチン症（Ｓａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病を含む）はリソソーム内のトリペプチジルペプチダーゼ－１活性の欠損に伴う細胞内のリポフスチンの蓄積により引き起こされる疾患である。神経セロイドリポフスチン症者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＴＰＰ－１は神経セロイドリポフスチン症に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0169】

本発明において，「ヒトＴＰＰ－１」又は「ｈＴＰＰ－１」の語は，特に天然型のｈＴＰＰ－１と同一のアミノ酸配列を有するｈＴＰＰ－１をいうが，これに限らず，ｈＴＰＰ－１活性を有するものである限り，天然型のｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＴＰＰ－１に含まれる。ｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＴＰＰ－１にアミノ酸を付加させる場合，ｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列は，元のｈＴＰＰ－１のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0170】

なおここで，ｈＴＰＰ－１がｈＴＰＰ－１活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＴＰＰ－１が本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＴＰＰ－１が本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＴＰＰ－１が変異を加えたものである場合も同様である。

【0171】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＴＰＰ－１の融合蛋白質は，例えば，配列番号１３６で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質は神経セロイドリポフスチン症治療剤，特に神経セロイドリポフスチン症における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＴＰＰ－１の融合蛋白質である。

【0172】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＴＰＰ－１に変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＴＰＰ－１との間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0173】

天然型のヒトα－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ｈＮＡＧＬＵ）は，配列番号８３で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0174】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＮＡＧＬＵを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＮＡＧＬＵが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0175】

サンフィリッポ症候群は，リソソーム内のα－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ活性の欠損に伴う細胞内のヘパラン硫酸の蓄積により引き起こされる疾患である。サンフィリッポ症候群患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＮＡＧＬＵはサンフィリッポ症候群に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0176】

本発明において，「ヒトＮＡＧＬＵ」又は「ｈＮＡＧＬＵ」の語は，特に天然型のｈＮＡＧＬＵと同一のアミノ酸配列を有するｈＮＡＧＬＵをいうが，これに限らず，ｈＮＡＧＬＵ活性を有するものである限り，天然型のｈＮＡＧＬＵのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＮＡＧＬＵに含まれる。ｈＮＡＧＬＵのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＮＡＧＬＵのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＮＡＧＬＵにアミノ酸を付加させる場合，ｈＮＡＧＬＵのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＮＡＧＬＵのアミノ酸配列は，元のｈＮＡＧＬＵのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0177】

なおここで，ｈＮＡＧＬＵがｈＮＡＧＬＵ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＮＡＧＬＵが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＮＡＧＬＵが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＮＡＧＬＵが変異を加えたものである場合も同様である。

【0178】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質は，例えば，配列番号１４２で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はサンフィリッポ症候群の治療剤，特にサンフィリッポ症候群における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質である。

【0179】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＮＡＧＬＵに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＮＡＧＬＵとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0180】

天然型のヒトβ－グルクロニダーゼ（ｈＧＵＳＢ）は，配列番号８４で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0181】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＧＵＳＢを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＧＵＳＢが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0182】

スライ症候群はムコ多糖症ＶＩＩ型（ＭＰＳ ＶＩＩ型）ともいい，リソソーム内のβ－グルクロニダーゼ活性の欠損に伴う細胞内のムコ多糖の蓄積により引き起こされる疾患である。スライ症候群患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＧＵＳＢはスライ症候群に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0183】

本発明において，「ヒトＧＵＳＢ」又は「ｈＧＵＳＢ」の語は，特に天然型のｈＧＵＳＢと同一のアミノ酸配列を有するｈＧＵＳＢをいうが，これに限らず，ｈＧＵＳＢ活性を有するものである限り，天然型のｈＧＵＳＢのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＧＵＳＢに含まれる。ｈＧＵＳＢのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＧＵＳＢのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＧＵＳＢにアミノ酸を付加させる場合，ｈＧＵＳＢのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＧＵＳＢのアミノ酸配列は，元のｈＧＵＳＢのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0184】

なおここで，ｈＧＵＳＢがｈＧＵＳＢ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＧＵＳＢが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＧＵＳＢが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＧＵＳＢが変異を加えたものである場合も同様である。

【0185】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＵＳＢの融合蛋白質は，例えば，配列番号１５０で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＵＳＢの融合蛋白質である。製造された融合蛋白質はスライ症候群の治療剤，特にスライ症候群における中枢神経障害治療剤として使用し得る。

【0186】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＧＵＳＢに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＵＳＢとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0187】

天然型のヒトガラクトシルセラミダーゼ（ｈＧＡＬＣ）は，配列番号８５で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0188】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＧＡＬＣを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＧＡＬＣが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0189】

クラッベ病は，ガラクトシルセラミダーゼ活性の欠損により引き起こされる疾患である。クラッベ病患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＧＡＬＣはクラッベ病に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0190】

本発明において，「ヒトＧＡＬＣ」又は「ｈＧＡＬＣ」の語は，特に天然型のｈＧＡＬＣと同一のアミノ酸配列を有するｈＧＡＬＣをいうが，これに限らず，ｈＧＡＬＣ活性を有するものである限り，天然型のｈＧＡＬＣのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＧＡＬＣに含まれる。ｈＧＡＬＣのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＧＡＬＣのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＧＡＬＣにアミノ酸を付加させる場合，ｈＧＡＬＣのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＧＡＬＣのアミノ酸配列は，元のｈＧＡＬＣのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0191】

なおここで，ｈＧＡＬＣがｈＧＡＬＣ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＧＡＬＣが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＧＡＬＣが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＧＡＬＣが変異を加えたものである場合も同様である。

【0192】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＡＬＣの融合蛋白質は，例えば，配列番号１５８で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はクラッベ病の治療剤，特にクラッベ病における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＡＬＣの融合蛋白質である。

【0193】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＧＡＬＣに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＧＡＬＣとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0194】

天然型のヒト酸性セラミダーゼ（ｈＡＣ）は，配列番号８６で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0195】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＡＣを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＡＣが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0196】

ファーバー病はリソソーム内の酸性セラミダーゼ活性の欠損に伴う細胞内のセラミドの蓄積により引き起こされる疾患である。ファーバー病患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＡＣはファーバー病に伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0197】

本発明において，「ヒトＡＣ」又は「ｈＡＣ」の語は，特に天然型のｈＡＣと同一のアミノ酸配列を有するｈＡＣをいうが，これに限らず，ｈＡＣ活性を有するものである限り，天然型のｈＡＣのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＡＣに含まれる。ｈＡＣのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＡＣのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＡＣにアミノ酸を付加させる場合，ｈＡＣのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＡＣのアミノ酸配列は，元のｈＡＣのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0198】

なおここで，ｈＡＣがｈＡＣ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＡＣが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＡＣが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＡＣが変異を加えたものである場合も同様である。

【0199】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＣの融合蛋白質は，例えば，配列番号１６６で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はファーバー病の治療剤，特にファーバー病における中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＣの融合蛋白質である。

【0200】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＡＣに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＡＣとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0201】

天然型のヒトα－Ｌ－フコシダーゼ（ｈＦＵＣＡ１）は，配列番号８７で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0202】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＦＵＣＡ１を融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＦＵＣＡ１が結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0203】

フコシドーシスはリソソーム内のα－Ｌ－フコシダーゼ活性の欠損に伴う細胞内のフコース含有オリゴ糖の蓄積により引き起こされる疾患である。フコシドーシス患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＦＵＣＡ１はフコシドーシスに伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0204】

本発明において，「ヒトＦＵＣＡ１」又は「ｈＦＵＣＡ１」の語は，特に天然型のｈＦＵＣＡ１と同一のアミノ酸配列を有するｈＦＵＣＡ１をいうが，これに限らず，ｈＦＵＣＡ１活性を有するものである限り，天然型のｈＦＵＣＡ１のアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＦＵＣＡ１に含まれる。ｈＦＵＣＡ１のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＦＵＣＡ１のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＦＵＣＡ１にアミノ酸を付加させる場合，ｈＦＵＣＡ１のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＦＵＣＡ１のアミノ酸配列は，元のｈＦＵＣＡ１のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0205】

なおここで，ｈＦＵＣＡ１がｈＦＵＣＡ１活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＦＵＣＡ１が本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＦＵＣＡ１が本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＦＵＣＡ１が変異を加えたものである場合も同様である。

【0206】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質は，例えば，配列番号１７４で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はフコシドーシスの治療剤，特にフコシドーシスにおける中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質である。

【0207】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＦＵＣＡ１に変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＦＵＣＡ１との間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0208】

天然型のヒトα－マンノシダーゼ（ｈＬＡＭＡＮ）は，配列番号８８で示されるアミノ酸配列から構成されるリソソーム酵素の一種である。

【0209】

本発明における，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端にリンカー配列としてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介して天然型のｈＬＡＭＡＮを融合させたタイプのものが挙げられる。このような融合蛋白質として，軽鎖が配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなり，且つ重鎖が配列番号６６又は６８に記載のアミノ酸配列からなり，そのＣ末端側にペプチド結合によりリンカー配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＬＡＭＡＮが結合してなるものが例示できる。配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ１タイプの抗ｈＴｆＲ抗体であり，配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するものはＩｇＧ４タイプの抗ｈＴｆＲ抗体である。

【0210】

ヒトα－マンノシダーゼ（ｈＬＡＭＡＮ）は，α型のマンノースを加水分解するリソソーム酵素である。α－マンノシドーシスは，リソソーム内のα－マンノシダーゼ活性の欠損に伴う細胞内のマンノース含有オリゴ糖の蓄積により引き起こされる疾患である。α－マンノシドーシス患者は中枢神経障害を伴うことがある。抗ｈＴｆＲ抗体と結合させたｈＬＡＭＡＮはα－マンノシドーシスに伴う中枢神経障害の治療剤として用いることができる。

【0211】

本発明において，「ヒトＬＡＭＡＮ」又は「ｈＬＡＭＡＮ」の語は，特に天然型のｈＬＡＭＡＮと同一のアミノ酸配列を有するｈＬＡＭＡＮをいうが，これに限らず，ｈＬＡＭＡＮ活性を有するものである限り，天然型のｈＬＡＭＡＮのアミノ酸配列に置換，欠失，付加等の変異を加えたものもｈＬＡＭＡＮに含まれる。ｈＬＡＭＡＮのアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。ｈＬＡＭＡＮのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。ｈＬＡＭＡＮにアミノ酸を付加させる場合，ｈＬＡＭＡＮのアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えたｈＬＡＭＡＮのアミノ酸配列は，元のｈＬＡＭＡＮのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0212】

なおここで，ｈＬＡＭＡＮがｈＬＡＭＡＮ活性を有するというときは，抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたときに，天然型のｈＬＡＭＡＮが本来有する活性に対して，３％以上の活性を有していることをいう。但し，その活性は，天然型のｈＬＡＭＡＮが本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させたｈＬＡＭＡＮが変異を加えたものである場合も同様である。

【0213】

抗ｈＴｆＲ抗体とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質は，例えば，配列番号１８２で示されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターと，配列番号２３で示されるアミノ酸配列を有する抗ｈＴｆＲ抗体軽鎖をコードするＤＮＡ断片を組み込んだ発現ベクターとにより，哺乳動物細胞等のホスト細胞を形質転換させ，このホスト細胞を培養することにより製造することができる。製造された融合蛋白質はα－マンノシドーシスの治療剤，特にα－マンノシドーシスにおける中枢神経障害治療剤として使用し得る。このようにして得られる融合蛋白質は，ＩｇＧ４タイプのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質である。

【0214】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体又はｈＬＡＭＡＮに変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＬＡＭＡＮとの間に配置された場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0215】

上記のごとく抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）の融合蛋白質について，他の蛋白質（Ａ）がｈＧＡＡ，ｈＩ２Ｓ，ｈＩＤＵＡ，ｈＰＰＴ－１，ｈＡＳＭ，ｈＡＲＳＡ，ｈＳＧＳＨ，ｈＧＢＡ，ｈＴＴＰ－１，ｈＮＡＧＬＵ，ｈＧＵＳＢ，ｈＡＣ，ｈＦＵｃａ１，及びｈＬＡＭＡＮである融合蛋白質をそれぞれ例示したが，抗ｈＴｆＲ抗体とこれらを含む他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の好ましい実施形態において，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲのアミノ酸配列は，抗体がｈＴｆＲに対する特異的な親和性を有するものである限り，特に制限はない。
但し，ここで用いられる抗ＴｆＲ抗体は，特に，実施例７に記載の方法により測定したときに，
ヒトのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，より好ましくは１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，更に好ましくは５Ｘ１０^－１２Ｍ以下，更により好ましくは１Ｘ１０^－１２Ｍ以下であるものであり，
サルのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－９Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－１０Ｍ以下，更に好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，例えば７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下であるものである。
例えば，ヒトのＴｆＲ及びサルのＴｆＲとの解離定数が，それぞれ，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－９Ｍ以下，１Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び５Ｘ１０^－１０Ｍ以下，５Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，５Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，１Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，１Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，であるものが挙げられる。ここにおいて，ヒトのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，５Ｘ１０^－１３Ｍ，１Ｘ１０^－１３Ｍ等とすることができる。また，サルのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，１Ｘ１０^－１１Ｍ，１Ｘ１０^－１２Ｍ等とすることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0216】

抗ｈＴｆＲ抗体には，抗ｈＴｆＲ抗体に他の蛋白質（Ａ）を結合させるのと同じ手法により，比較的短いペプチド鎖を結合させることもできる。抗ｈＴｆＲ抗体に結合させるべきペプチド鎖は，そのペプチド鎖が所望の生理活性を有するものである限り限定はなく，例えば，各種蛋白質の生理活性を発揮する領域のアミノ酸配列を有するペプチド鎖が挙げられる。ペプチド鎖の鎖長は特に限定はないが，好ましくは２～２００個のアミノ酸から構成されるものであり，例えば５～５０個のアミノ酸から構成されるものである。

【0217】

抗ｈＴｆＲ抗体に低分子物質を結合させる場合，候補となる低分子物質に特に限定はないが，脳内に到達させてその機能を発揮させるべきものであるにも拘わらず，そのままでは血液脳関門を通過できないため，静脈内投与では脳内で機能させることが期待できない低分子物質である。例えば，斯かる低分子物質として，シクロフォスファミド，イホスファミド，メルファラン，ブスルファン，チオテバ，ニムスチン，ラニムスチン，ダカルバシン，プロカルバシン，テモゾロマイド，カルムスチン，ストレプトゾトシン，ペンダムスチン，シスプラチン，カルボプラチン，オキサリプラチン，ネダプラチン，５－フルオロウラシル，スルファジアジン，スルファメトキサゾール，メトトレキセート，トリメトプリム，ピリメタミン，フルオロウラシル，フルシトシン，アザチオプリン，ペントスタチン，ヒドロキシウレア，フルダラビン，シタラビン，ゲムシタビン，イリノテカン，ドキソルビシン，エトポシド，レポフロキサシン，シプロフロキサシン，ビンブラスチン，ビンクリスチン，パクリタキセル，ドデタキセル，マイトマイシンＣ，ドキソルビシン，エピルビシン等の抗ガン剤を挙げることができる。その他，抗ｈＴｆＲ抗体と結合させるべき低分子物質としてｓｉＲＮＡ，アンチセンスＤＮＡ，短いペプチドが挙げられる。

【0218】

抗ｈＴｆＲ抗体と低分子物質を結合させる場合，低分子物質は軽鎖又は重鎖の何れか一方のみに結合させてもよく，また，軽鎖と重鎖の各々に結合させてもよい。また，抗ｈＴｆＲ抗体は，ｈＴｆＲに対する親和性を有するものである限り，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列，及び／又は重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列を含むものであってよい。

【0219】

アルツハイマー病，パーキンソン病，ハンチントン病等の神経変性疾患，統合失調症，うつ症等の精神障害，多発性硬化症，筋委縮性側索硬化症，脳腫瘍を含む中枢神経系の腫瘍，脳障害を伴うリソソーム病，糖原病，筋ジストロフィー，脳虚血，脳炎症性疾患，プリオン病，外傷性の中枢神経系障害等の疾患に対する治療剤は，一般に抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき低分子物質候補たり得る。また，ウィルス性及び細菌性の中枢神経系疾患に対する治療剤も，一般に抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき低分子物質候補たり得る。更には，脳外科手術，脊椎外科手術後の回復にも用いることができる薬剤も，一般に抗ｈＴｆＲ抗体と融合させるべき低分子物質候補たり得る。

【0220】

抗ｈＴｆＲ抗体が，ヒト以外の動物のものである場合，これをヒトに投与したときに，当該抗体に対する抗原抗体反応を惹起し，好ましくない副作用が生じるおそれが高い。ヒト以外の動物の抗体は，ヒト化抗体とすることでそのような抗原性を減少でき，ヒトに投与したときの抗原抗体反応に起因する副作用の発生を抑制できる。また，サルを用いた実験によれば，ヒト化抗体は，マウス抗体と比較して，血中でより安定であることが報告されており，治療効果をそれだけ長期間持続させることができると考えられる。抗原抗体反応に起因する副作用の発生は，抗ｈＴｆＲ抗体としてヒト抗体を用いることによっても抑制することができる。

【0221】

抗ｈＴｆＲ抗体が，ヒト化抗体又はヒト抗体である場合について，以下に更に詳しく説明する。ヒト抗体の軽鎖には，λ鎖とκ鎖がある。抗ｈＴｆＲ抗体を構成する軽鎖は，λ鎖とκ鎖のいずれであってもよい。また，ヒトの重鎖には，γ鎖，μ鎖，α鎖，σ鎖及びε鎖があり，それぞれ，ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇＥに対応している。抗ｈＴｆＲ抗体を構成する重鎖は，γ鎖，μ鎖，α鎖，σ鎖及びε鎖のいずれであってもよいが，好ましくはγ鎖である。更に，ヒトの重鎖のγ鎖には，γ１鎖，γ２鎖，γ３鎖及びγ４鎖があり，それぞれ，ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３及びＩｇＧ４に対応している。抗ｈＴｆＲ抗体を構成する重鎖がγ鎖である場合，そのγ鎖は，γ１鎖，γ２鎖，γ３鎖及びγ４鎖のいずれであってもよいが，好ましくは，γ１鎖又はγ４鎖である。抗ｈＴｆＲ抗体が，ヒト化抗体又はヒト抗体であり，且つＩｇＧである場合，ヒト抗体の軽鎖はλ鎖とκ鎖のいずれでもあってもよく，ヒト抗体の重鎖は，γ１鎖，γ２鎖，γ３鎖及びγ４鎖のいずれであってもよいが，好ましくは，γ１鎖又はγ４鎖である。例えば，好ましい抗ｈＴｆＲ抗体の一つの態様として，軽鎖がλ鎖であり重鎖がγ１鎖であるものが挙げられる。

【0222】

抗ｈＴｆＲ抗体がヒト化抗体又はヒト抗体である場合，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）とは，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖又は軽鎖のＮ末端（又はＣ末端）に，リンカー配列を介して又は直接に，他の蛋白質（Ａ）のＣ末端（又はＮ末端）を，それぞれペプチド結合により結合させることができる。他の蛋白質（Ａ）を抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＮ末端側（又はＣ末端側）に結合させる場合，抗ｈＴｆＲ抗体のγ鎖，μ鎖，α鎖，σ鎖又はε鎖のＮ末端（又はＣ末端）に，リンカー配列を介し又は直接に，他の蛋白質（Ａ）のＣ末端（又はＮ末端）が，ペプチド結合によりそれぞれ結合される。抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＮ末端側（又はＣ末端側）に他の蛋白質（Ａ）を結合させる場合，抗ｈＴｆＲ抗体のλ鎖又はκ鎖のＮ末端（又はＣ末端）に，リンカー配列を介し又は直接に，他の蛋白質（Ａ）のＣ末端（又はＮ末端）が，ペプチド結合によりそれぞれ結合される。但し，抗ｈＴｆＲ抗体が，Ｆａｂ領域からなるもの又はＦａｂ領域とヒンジ部の全部若しくは一部とからなるもの（Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）_２及びＦ（ａｂ’））の場合，他の蛋白質（Ａ）は，Ｆａｂ，Ｆ（ａｂ’）_２及びＦ（ａｂ’）を構成する重鎖又は軽鎖のＮ末端（又はＣ末端）に，リンカー配列を介して又は直接に，そのＣ末端（又はＮ末端）をペプチド結合によりそれぞれ結合させることができる。

【0223】

ヒト化抗体又はヒト抗体である抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖のＣ末端側又はＮ末端側に他の蛋白質（Ａ）を結合させた融合蛋白質において，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体は，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と他の蛋白質（Ａ）とは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0224】

ヒト化抗体又はヒト抗体である抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖のＣ末端側又はＮ末端側に他の蛋白質（Ａ）を結合させた融合蛋白質において，抗ヒトトランスフェリン受容体抗体は，軽鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列と，重鎖の可変領域の全て又は一部を含むアミノ酸配列とを含むものである。ここで抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖と他の蛋白質（Ａ）とは，直接結合してもよく，リンカーを介して結合してもよい。

【0225】

抗ｈＴｆＲ抗体又はヒト抗体と他の蛋白質（Ａ）との間にリンカー配列を配置する場合，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との間に配置されるリンカー配列は，好ましくは１～５０個のアミノ酸から構成されるペプチド鎖であるが，抗ｈＴｆＲ抗体に結合させるべき他の蛋白質（Ａ）によって，リンカー配列を構成するアミノ酸の個数は，１～１７個，１～１０個，１０～４０個，２０～３４個，２３～３１個，２５～２９個等と適宜調整される。そのようなリンカー配列は，当該リンカー配列により連結された抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）とが，それぞれの機能（ｈＴｆＲに対する親和性，及び生理的条件下での活性又は機能）を保持している限り，そのアミノ酸配列に限定はないが，好ましくは，グリシンとセリンから構成されるものであり，例えば，グリシン又はセリンのいずれか１個のアミノ酸からなるもの，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３），アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４），アミノ酸配列Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号５），又はこれらのアミノ酸配列が１～１０個，あるいは２～５個連続してなる配列を含むものである。例えば，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸配列を含むものが，リンカー配列として好適に用いることができる。又，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２５個のアミノ酸配列を含むものも，リンカー配列として好適に用いることができる。

【0226】

なおここで，抗ｈＴｆＲ抗体又はヒト抗体と融合させた他の蛋白質（Ａ）が，当該他の蛋白質（Ａ）の生理的条件下での活性又は機能を保持しているというとき又は単に活性を有するというときは，天然型である他の蛋白質（Ａ）が本来有する活性に対して，３％以上の活性又は機能を保持していることをいう。但し，その活性又は機能は，天然型の他の蛋白質（Ａ）が本来有する活性に対して，１０％以上であることが好ましく，２０％以上であることがより好ましく，５０％以上であることが更に好ましく，８０％以上であることが更により好ましい。抗ｈＴｆＲ抗体と融合させた他の蛋白質（Ａ）が変異を加えたものである場合も同様である。

【0227】

本発明における，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体又はヒト抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の更なる具体的な態様の一例として，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖のＣ末端側に，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いてアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２７個のアミノ酸からなるリンカー配列を介して，他の蛋白質（Ａ）を融合させたものが挙げられる。

【0228】

抗ｈＴｆＲ抗体がＦａｂである場合における，本発明のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体又はヒト抗体と他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な態様の一例として，他の蛋白質（Ａ）のＣ末端側に，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２５個のアミノ酸からなるリンカー配列を介して，抗ｈＴｆＲ抗体重鎖の可変領域とＣ_Ｈ１領域を含む領域を融合させたものが挙げられる。このときＣ_Ｈ１領域に加えてヒンジ部の一部が含まれてもよいが，当該ヒンジ部は，重鎖間のジスフィルド結合を形成するシステイン残基を含まない。

【0229】

抗ｈＴｆＲ抗体のｈＴｆＲに対する特異的親和性は，主に抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲのアミノ酸配列に依存する。それらＣＤＲのアミノ酸配列は，抗ｈＴｆＲ抗体がｈＴｆＲに加えてサルｈＴｆＲに対する特異的な親和性を有するものである限り，特に制限はない。
但し，本発明にあっては，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗体であって，ヒト及びサルのＴｆＲのいずれにも親和性を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体又はヒト抗体は，特に，実施例７に記載の方法により測定したときに，
ヒトのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，より好ましくは２．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，更に好ましくは５Ｘ１０^－１２Ｍ以下，更により好ましくは１Ｘ１０^－１２Ｍ以下であるものであり，
サルのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－９Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－１０Ｍ以下，更に好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，例えば７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下であるものである。
例えば，ヒトのＴｆＲ及びサルのＴｆＲとの解離定数が，それぞれ，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－９Ｍ以下，１Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び５Ｘ１０^－１０Ｍ以下，５Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，５Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，１Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，１Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，であるものが挙げられる。ここにおいて，ヒトのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，５Ｘ１０^－１３Ｍ，１Ｘ１０^－１３Ｍ等とすることができる。また，サルのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，１Ｘ１０^－１１Ｍ，１Ｘ１０^－１２Ｍ等とすることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0230】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい実施形態として，重鎖の可変領域において：
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６２又は配列番号６３のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号１３又は配列番号１４のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１５又は配列番号１６のアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体が例示できる。

【0231】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体のより具体的な実施形態として，重鎖の可変領域において：
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６２のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列のアミノ酸配列を含んでなるものである，抗体が例示できる。

【0232】

上記のｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい実施形態，及びｈＴｆＲに親和性を有する抗体のより具体的な実施形態において，抗体の重鎖のフレームワーク領域３のアミノ酸配列として好適なものに，配列番号６４のアミノ酸配列を含んでなるものが挙げられる。

【0233】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい軽鎖と重鎖の組み合わせとしては，可変領域において以下に示すアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６又は配列番号７のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列，又はアミノ酸配列Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｓｅｒを含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなる
ものである軽鎖と，
（ｄ）ＣＤＲ１が配列番号６２又は配列番号６３のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｅ）ＣＤＲ２が配列番号１３又は配列番号１４のアミノ酸配列含んでなり，且つ
（ｆ）ＣＤＲ３が配列番号１５又は配列番号１６のアミノ酸配列含んでなるものである
重鎖のとの組み合わせ。

【0234】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の軽鎖と重鎖の組み合わせの具体的態様としては，可変領域において以下に示すアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
ＣＤＲ１として配列番号６，ＣＤＲ２として配列番号８，及びＣＤＲ３として配列番号１０のアミノ酸配列をそれぞれ含んでなるものである軽鎖と，ＣＤＲ１として配列番号６２，ＣＤＲ２として配列番号１３，及びＣＤＲ３として配列番号１５のアミノ酸配列をそれぞれ含んでなるものである重鎖の組み合わせ。

【0235】

上記のｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい軽鎖と重鎖の組み合わせ，及びｈＴｆＲに親和性を有する抗体の軽鎖と重鎖の組み合わせの具体的態様において，抗体の重鎖のフレームワーク領域３のアミノ酸配列として好適なものに，配列番号６４のアミノ酸配列を有するものが挙げられる。

【0236】

ｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体の好ましい実施形態としては，以下に示すアミノ酸配列を有するものが例示できる。すなわち：
抗ｈＴｆＲ抗体であって，軽鎖の可変領域が，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１，又は配列番号２２のアミノ酸配列を含んでなり，重鎖の可変領域が，配列番号６５のアミノ酸配列を含んでなる，抗ｈＴｆＲ抗体。

【0237】

配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１，及び配列番号２２で示される，軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は，ＣＤＲ１が配列番号６又は７，ＣＤＲ２が配列番号８又は９，及びＣＤＲ３が配列番号１０のアミノ酸配列を含むものである。但し，配列番号１７～２２に記載の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列において，ＣＤＲというときは，ＣＤＲの配列はこれらに限定されるものではなく，これらＣＤＲのアミノ酸配列を含む領域，これらＣＤＲのアミノ酸配列の任意の連続した３個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列もＣＤＲとし得る。

【0238】

配列番号６５で示される重鎖の可変領域のアミノ酸配列は，
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号６２又は６３のアミノ酸配列を含んでなり，
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号１３又は１４のアミノ酸配列を含んでなり，且つ
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号１５又は１６のアミノ酸配列を含んでなるものであり，更に，フレームワーク領域３として配列番号６４のアミノ酸配列を含むものである。但し，配列番号６５で示される重鎖の可変領域のアミノ酸配列において，ＣＤＲというときは，ＣＤＲの配列はこれらに限定されるものではなく，これらＣＤＲのアミノ酸配列を含む領域，これらＣＤＲのアミノ酸配列の任意の連続した３個以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列もＣＤＲとし得る。フレームワーク領域についても同様である。

【0239】

ｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体のより具体的な実施形態としては，
軽鎖の可変領域が配列番号１８のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖の可変領域が配列番号２０のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖の可変領域が配列番号２１のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含むもの，及び
軽鎖の可変領域が配列番号２２のアミノ酸配列を含み且つ重鎖の可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含むもの
が挙げられる。

【0240】

ｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体のより具体的な実施形態としては，
軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６６のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２５のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６６のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２７のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６６のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２９のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６６のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２５のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２７のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むもの，及び
軽鎖が配列番号２９のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むもの
が挙げられる。なお，上記の具体的な実施形態において，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖が配列番号６６のアミノ酸配列を含むものはＩｇＧ１タイプの抗体であり，配列番号６８のアミノ酸配列を含むものはＩｇＧ４タイプの抗体である。いずれも可変領域として配列番号６５のアミノ酸配列を含む。

【0241】

また，ｈＴｆＲに親和性を有するＦａｂであるヒト化抗体のより具体的な実施形態としては，
軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つＦａｂ重鎖が配列番号６１のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２５のアミノ酸配列を含み且つＦａｂ重鎖が配列番号６１のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２７のアミノ酸配列を含み且つＦａｂ重鎖が配列番号６１のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２９のアミノ酸配列を含み且つＦａｂ重鎖が配列番号６１のアミノ酸配列を含むもの，
が挙げられる。

【0242】

抗ｈＴｆＲ抗体がＦａｂである場合において，別のＦｃ領域をＦａｂ重鎖に導入したものの具体的実施例としては，
軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つＦｃ領域を導入したＦａｂ重鎖が配列番号７１のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２５のアミノ酸配列を含み且つＦｃ領域を導入したＦａｂ重鎖が配列番号７１のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２７のアミノ酸配列を含み且つＦｃ領域を導入したＦａｂ重鎖が配列番号７１のアミノ酸配列を含むもの，
軽鎖が配列番号２９のアミノ酸配列を含み且つＦｃ領域を導入したＦａｂ重鎖が配列番号７１のアミノ酸配列を含むものが挙げられる。

【0243】

上記の別のＦｃ領域をＦａｂ重鎖に導入する場合において，例えば，他の蛋白質（Ａ）のＣ末端側に直接又はリンカー配列を介してＦｃ領域を導入したＦａｂ重鎖を結合させることができる。なお，配列番号７１で示されるアミノ酸配列を有するものは，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体３ＮのＦａｂ重鎖のアミノ酸配列（アミノ酸配列６１）のＮ末端側に，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）が５個連続してなる計２５個のアミノ酸配列を含むリンカー配列を介して，配列番号７０で示されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を結合させたものである。

【0244】

ｈＴｆＲに親和性を有する抗体の好ましい実施形態を上記のごとく例示した。これらの抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖は，その可変領域のアミノ酸配列に，抗ｈＴｆＲ抗体とｈＴｆＲの親和性を所望なものに調整等する目的で，適宜，置換，欠失，付加等の変異を加えることができる。

【0245】

軽鎖の可変領域のアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個である。軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。

【0246】

軽鎖の可変領域にアミノ酸を付加する場合，軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は，元の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0247】

特に，軽鎖の各ＣＤＲ又は各フレームワーク領域のそれぞれのアミノ酸配列中のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個であり，更により好ましくは１個である。各ＣＤＲ又は各フレームワーク領域のそれぞれのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個であり，更により好ましくは１個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。

【0248】

軽鎖の各ＣＤＲ又は各フレームワーク領域のそれぞれのアミノ酸配列中にアミノ酸を付加させる場合，当該アミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～５個，より好ましくは１～３個，更に好ましくは１～２個，更により好ましくは１個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた各ＣＤＲ又は各フレームワーク領域のそれぞれのアミノ酸配列は，元の各ＣＤＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0249】

重鎖の可変領域である配列番号６５で示されるアミノ酸配列のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個である。重鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～１０個であり，より好ましくは１～５個であり，更に好ましくは１～３個であり，更により好ましくは１～２個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。

【0250】

重鎖の可変領域である配列番号６５で示されるアミノ酸配列にアミノ酸を付加させる場合，重鎖の可変領域のアミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～１０個，より好ましくは１～５個，更に好ましくは１～３個，更により好ましくは１～２個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた重鎖の可変領域のアミノ酸配列は，元の重鎖の可変領域のアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0251】

特に，配列番号６５で示されるアミノ酸配列中の，各ＣＤＲ又は各フレームワーク領域のそれぞれのアミノ酸配列中のアミノ酸を他のアミノ酸へ置換させる場合，置換させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個であり，更により好ましくは１個である。各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列中のアミノ酸を欠失させる場合，欠失させるアミノ酸の個数は，好ましくは１～５個であり，より好ましくは１～３個であり，更に好ましくは１～２個であり，更により好ましくは１個である。また，これらアミノ酸の置換と欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。

【0252】

配列番号６５で示されるアミノ酸配列中の，各ＣＤＲ又は各フレームワーク領域のそれぞれのアミノ酸配列中にアミノ酸を付加させる場合，当該アミノ酸配列中若しくはＮ末端側又はＣ末端側に，好ましくは１～５個，より好ましくは１～３個，更に好ましくは１～２個，更により好ましくは１個のアミノ酸が付加される。これらアミノ酸の付加，置換及び欠失を組み合わせた変異を加えることもできる。変異を加えた各ＣＤＲのそれぞれのアミノ酸配列は，元の各ＣＤＲのアミノ酸配列と，好ましくは８０％以上の相同性を有し，より好ましくは９０％以上の相同性を示し，更に好ましくは，９５％以上の相同性を示す。

【0253】

なお，上記のごとく抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖の可変領域である配列番号６５で示されるアミノ酸配列に，置換，欠失，付加等の変異を加える場合において，元となる配列番号６２又は６３で示されるＣＤＲ１のＮ末端側から５番目のアミノ酸であるメチオニンと，配列番号６４で示されるフレームワーク領域３のＮ末端側から１７番目のアミノ酸であるロイシンは元と同一の位置に保存されることが好ましい。また，重鎖のＣＤＲ１及びフレームワーク領域３のアミノ酸配列も元と同一の位置に保存されることが好ましい。

【0254】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖の可変領域への変異と，上記の抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖の可変領域への変異とを組み合わせて，抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖と重鎖の可変領域の両方に変異を加えることもできる。

【0255】

上記の抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域のアミノ酸配列中のアミノ酸の他のアミノ酸への置換としては，例えば，芳香族アミノ酸（Ｐｈｅ， Ｔｒｐ，Ｔｙｒ），脂肪族アミノ酸（Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ），極性アミノ酸（Ｇｌｎ，Ａｓｎ），塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ），酸性アミノ酸（Ｇｌｕ，Ａｓｐ），水酸基を有するアミノ酸（Ｓｅｒ， Ｔｈｒ）などの同じグループに分類されるアミノ酸が挙げられる。

【0256】

なお，抗ｈＴｆＲ抗体に変異を加えてＣ末端又はＮ末端にアミノ酸を付加した場合，その付加したアミノ酸が，抗ｈＴｆＲ抗体を他の蛋白質（Ａ）と融合させたときに，抗ｈＴｆＲ抗体と他の蛋白質（Ａ）との間に位置することとなった場合，当該付加したアミノ酸はリンカーの一部を構成する。

【0257】

上記に例示したｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体を含む抗体の好ましい実施形態において，抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲのアミノ酸配列は，抗体がｈＴｆＲ及びサルＴｆＲに対して特異的な親和性を有するものである限り，特に制限はない。
但し，本発明にあっては，ｈＴｆＲに対して相対的に高い親和性を有する抗体であって，ヒト及びサルのＴｆＲのいずれにも親和性を有するヒト化抗体は，特に，実施例７に記載の方法により測定したときに，
ヒトのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，より好ましくは２．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，更に好ましくは５Ｘ１０^－１２Ｍ以下，更により好ましくは１Ｘ１０^－１２Ｍ以下であるものであり，
サルのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－９Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－１０Ｍ以下，更に好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，例えば７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下であるものである。
例えば，ヒトのＴｆＲ及びサルのＴｆＲとの解離定数が，それぞれ，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－９Ｍ以下，１Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び５Ｘ１０^－１０Ｍ以下，５Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，５Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，１Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，１Ｘ１０^－１２Ｍ以下及び７．５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，であるものが挙げられる。ここにおいて，ヒトのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，５Ｘ１０^－１３Ｍ，１Ｘ１０^－１３Ｍ等とすることができる。また，サルのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，５Ｘ１０^－１１Ｍ，１Ｘ１０^－１１Ｍ，１Ｘ１０^－１２Ｍ等とすることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0258】

上記の具体的な実施形態として示したｈＴｆＲに親和性を有するヒト化抗体と，他の蛋白質（Ａ）との融合蛋白質の具体的な実施形態としては，他の蛋白質（Ａ）が，ヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ），ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩ２Ｓ），ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ），ヒトパルミトイル蛋白質チオエステラーゼ－１（ｈＰＰＴ－１），ヒト酸性スフィンゴミエリナーゼ（ｈＡＳＭ），ヒトアリルスルファターゼＡ（ｈＡＲＳＡ），ヒトヘパランＮ－スルファターゼ（ｈＳＧＳＨ），ヒトグルコセレブロシダーゼ（ｈＧＢＡ），ヒトトリペプチジルペプチダーゼ－１（ｈＴＰＰ－１），ヒトα－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ｈＮＡＧＬＵ），ヒトβ－グルクロニダーゼ（ｈＧＵＳＢ），ヒト酸性セラミダーゼ（ｈＡＣ），ヒトα－Ｌ－フコシダーゼ（ｈＦＵＣＡ１），及びα－マンノシダーゼ（ｈＬＡＭＡＮ）であるものが挙げられる。

【0259】

他の蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＡＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＡＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＧＡＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＧＡＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＧＡＡは配列番号５５又は５６のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0260】

他の蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＡＡがアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号５７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＡＡがアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号５８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，が例示できる。（１）は抗体がＩｇＧ１タイプ，（２）は抗体がＩｇＧ４タイプのものとなる。また，ｈＧＡＡは配列番号５５のアミノ酸配列を有するものである。

【0261】

ここで，上記（１）において配列番号５７に含まれるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６６で示されるものである。つまり，上記（１）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６６のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（２）において配列番号５８に含まれるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（２）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。

【0262】

他の蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ）でありヒト化抗体がＦａｂ抗体である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＡＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＡＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＧＡＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＧＡＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。

【0263】

他の蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ）でありヒト化抗体がＦａｂ抗体である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，ｈＧＡＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号８９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，が挙げられる。

【0264】

他の蛋白質（Ａ）がヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ）である融合蛋白質はヒト及びサルのＴｆＲのいずれにも親和性を有するものであり，実施例７に記載の方法により測定したときに，
サルのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－１１Ｍ以下であるものであり，
ヒトのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，更に好ましくは１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，更により好ましくは１Ｘ１０^－１２Ｍ以下であるものである。
例えば，サルのＴｆＲ及びヒトのＴｆＲとの解離定数が，それぞれ，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１２Ｍ以下，５Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，５Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，５Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１２Ｍ以下，であるものが挙げられる。ここにおいて，サルのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，１Ｘ１０^－１１Ｍ，１Ｘ１０^－１２Ｍ，１Ｘ１０^－１３Ｍ等とすることができる。ヒトのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，１Ｘ１０^－１２Ｍ，５Ｘ１０^－１３Ｍ，１Ｘ１０^－１３Ｍ等とすることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0265】

他の蛋白質（Ａ）がヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩ２Ｓ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＩ２Ｓがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＩ２Ｓがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＩ２Ｓがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＩ２Ｓがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。

【0266】

他の蛋白質（Ａ）がヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩ２Ｓ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
ｈＩ２Ｓがアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号５３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，が例示できる。この場合，抗体はＩｇＧ１タイプである。配列番号５３に含まれるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は配列番号６６で示されるものである。つまり，この融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６６のアミノ酸配列を含むものである。抗体をＩｇＧ４タイプとすることも可能であり，この場合は，重鎖を配列番号６６のアミノ酸配列を含むものから配列番号６８のアミノ酸配列を含むものに置き換えればよい。

【0267】

他の蛋白質（Ａ）がヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩ２Ｓ）でありヒト化抗体がＦａｂ抗体である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＩ２Ｓがリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＩ２Ｓがリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＩ２Ｓがリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＩ２Ｓがリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。

【0268】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＩＤＵＡ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＩＤＵＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＩＤＵＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＩＤＵＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＩＤＵＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＩＤＵＡは配列番号７５又は７６のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0269】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＩＤＵＡ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＩＤＵＡが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号９０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＩＤＵＡが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒに続いて配列番号３で示されるアミノ酸配列が８回連続する計４２個のアミノ酸からなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号９１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＩＤＵＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号９２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＩＤＵＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号９３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＩＤＵＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号９４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＩＤＵＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号９５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＩＤＵＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号９６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）配列番号３で示されるアミノ酸配列が６回連続してなるリンカーをＣ末端側に有するｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）が，２回連続してなるアミノ酸配列のＣ末端側に，ｈＩＤＵＡが結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号９７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（９）配列番号９８で示される一本鎖ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎ（２）のＣ末端側で，配列番号３で示されるアミノ酸配列にアミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙが続く７個のアミノ酸からなるリンカーを介して，ｈＩＤＵＡが結合するものである，配列番号９９で示されるもの，が例示できる。
（１）～（３）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（４）～（９）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0270】

ここで，上記（１）～（３）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（３）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（４）～（９）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（４）～（９）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0271】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＰＰＴ－１）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＰＰＴ－１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＰＰＴ－１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＰＰＴ－１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＰＰＴ－１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＰＰＴ－１は配列番号７７のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0272】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＰＰＴ－１）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＰＰＴ－１が，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１００で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＰＰＴ－１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＰＰＴ－１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＰＰＴ－１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＰＰＴ－１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）配列番号３で示されるアミノ酸配列が６回連続してなるリンカーをＣ末端側に有するｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）が，２回連続してなるアミノ酸配列のＣ末端側に，ｈＰＰＴ－１が結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（６）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0273】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）及び（６）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）及び（６）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0274】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＡＳＭ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＡＳＭがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＡＳＭがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＡＳＭがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＡＳＭがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＡＳＭは配列番号７８のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0275】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＡＳＭ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＡＳＭが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＡＳＭが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＡＳＭが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＡＳＭが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１０９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＡＳＭが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＡＳＭが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＡＳＭが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）ｈＡＳＭが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（９）配列番号３で示されるアミノ酸配列が６回連続してなるリンカーをＣ末端側に有するｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）が，２回連続してなるアミノ酸配列のＣ末端側に，ｈＡＳＭが結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（９）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0276】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）及び（６）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）及び（６）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0277】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＡＲＳＡ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＡＲＳＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＡＲＳＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＡＲＳＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＡＲＳＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＡＲＳＡは配列番号７９のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0278】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＡＲＳＡ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＡＲＳＡが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＡＲＳＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＡＲＳＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＡＲＳＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＡＲＳＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１１９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＡＲＳＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＡＲＳＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）ｈＡＲＳＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（９）配列番号３で示されるアミノ酸配列が６回連続してなるリンカーをＣ末端側に有するｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）が，２回連続してなるアミノ酸配列のＣ末端側に，ｈＡＲＳＡが結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（９）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0279】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）～（９）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）～（９）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0280】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＳＧＳＨ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＳＧＳＨがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＳＧＳＨがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＳＧＳＨがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＳＧＳＨがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＳＧＳＨは配列番号８０のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0281】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＳＧＳＨ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＳＧＳＨが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＳＧＳＨが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＳＧＳＨが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＳＧＳＨが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＳＧＳＨが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）配列番号３で示されるアミノ酸配列が６回連続してなるリンカーをＣ末端側に有するｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）が，２回連続してなるアミノ酸配列のＣ末端側に，ｈＳＧＳＨが結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１２９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）及び（６）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0282】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）及び（６）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）及び（６）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0283】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＧＢＡ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＢＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＢＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＧＢＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＧＢＡがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＧＢＡは配列番号８１のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0284】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＧＢＡ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＢＡが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＢＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＧＢＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＧＢＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＧＢＡが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）配列番号３で示されるアミノ酸配列が６回連続してなるリンカーをＣ末端側に有するｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）が，２回連続してなるアミノ酸配列のＣ末端側に，ｈＧＢＡが結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）及び（６）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0285】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）及び（６）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）及び（６）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0286】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＴＰＰ－１）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＴＰＰ－１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＴＰＰ－１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＴＰＰ－１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＴＰＰ－１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＴＰＰ－１は配列番号８２のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0287】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＴＰＰ－１）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＴＰＰ－１が，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＴＰＰ－１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＴＰＰ－１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＴＰＰ－１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１３９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＴＰＰ－１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）配列番号３で示されるアミノ酸配列が６回連続してなるリンカーをＣ末端側に有するｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）が，２回連続してなるアミノ酸配列のＣ末端側に，ｈＴＰＰ－１が結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）及び（６）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0288】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）及び（６）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）及び（６）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0289】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＮＡＧＬＵ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＮＡＧＬＵがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＮＡＧＬＵがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＮＡＧＬＵがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＮＡＧＬＵがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＮＡＧＬＵは配列番号８３のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0290】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＮＡＧＬＵ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＮＡＧＬＵが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＮＡＧＬＵが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＮＡＧＬＵが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＮＡＧＬＵが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＮＡＧＬＵが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＮＡＧＬＵが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＮＡＧＬＵが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）ｈＮＡＧＬＵが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１４９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（８）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0291】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）～（８）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）～（８）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0292】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＧＵＳＢ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＵＳＢがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＵＳＢがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＧＵＳＢがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＧＵＳＢがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＧＵＳＢは配列番号８４のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0293】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＧＵＳＢ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＵＳＢが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＵＳＢが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＧＵＳＢが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＧＵＳＢが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＧＵＳＢが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＧＵＳＢが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＧＵＳＢが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）ｈＧＵＳＢが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（８）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0294】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）～（８）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）～（８）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0295】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＧＡＬＣ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＡＬＣがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＡＬＣがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＧＡＬＣがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＧＡＬＣがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＧＡＬＣは配列番号８５のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0296】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＧＡＬＣ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＧＡＬＣが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＧＡＬＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１５９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＧＡＬＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＧＡＬＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＧＡＬＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＧＡＬＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＧＡＬＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）ｈＧＡＬＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（８）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0297】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）～（８）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）～（８）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0298】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＡＣ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＡＣがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＡＣがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＡＣがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＡＣがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＡＣは配列番８６のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0299】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＡＣ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＡＣが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＡＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＡＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＡＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１６９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＡＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＡＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＡＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）ｈＡＣが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（８）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0300】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）～（８）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）～（８）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0301】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＦＵＣＡ１）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＦＵＣＡ１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＦＵＣＡ１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＦＵＣＡ１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＦＵＣＡ１がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＦＵＣＡ１は配列番号８７のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0302】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＦＵＣＡ１）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＦＵＣＡ１が，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＦＵＣＡ１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＦＵＣＡ１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＦＵＣＡ１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＦＵＣＡ１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＦＵＣＡ１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１７９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＦＵＣＡ１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８０で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）ｈＦＵＣＡ１が，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８１で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（８）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0303】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）～（８）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）～（８）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0304】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＬＡＭＡＮ）である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ｈＬＡＭＡＮがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＬＡＭＡＮがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ｈＬＡＭＡＮがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ｈＬＡＭＡＮがリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続，又は１～２０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。また，ｈＬＡＭＡＮは配列番号８８のアミノ酸配列を有するもの，又はその変異体である。

【0305】

他の蛋白質（Ａ）が（ｈＬＡＭＡＮ）である融合蛋白質のより具体的な実施例としては，
（１）ｈＬＡＭＡＮが，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８２で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ｈＬＡＭＡＮが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８３で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（３）ｈＬＡＭＡＮが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８４で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（４）ｈＬＡＭＡＮが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８５で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（５）ｈＬＡＭＡＮが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が３回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８６で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（６）ｈＬＡＭＡＮが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が５回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８７で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（７）ｈＬＡＭＡＮが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が１０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８８で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（８）ｈＬＡＭＡＮが，配列番号３で示されるアミノ酸配列が２０回連続してなるリンカーを介してｈＴｆＲの重鎖（Ｆａｂ）のＣ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，前者のアミノ酸配列が配列番号１８９で示されるものであり，後者のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（１）～（４）は抗体がＩｇＧ１タイプのもの，（５）～（８）は抗体がＦａｂタイプのものとなる。

【0306】

ここで，上記（１）～（４）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６８で示されるものである。つまり，上記（１）～（４）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖が配列番号６８のアミノ酸配列を含むものである。また，上記（５）～（８）におけるｈＴｆＲの重鎖のアミノ酸配列は，配列番号６１で示されるものである。つまり，上記（５）～（８）の融合蛋白質は，ヒト化抗体として，軽鎖が配列番号２３のアミノ酸配列を含み且つ重鎖（Ｆａｂ）が配列番号６１のアミノ酸配列を含むものである。

【0307】

他の蛋白質（Ａ）がヒトリソソーム酵素である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ヒトリソソーム酵素がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ヒトリソソーム酵素がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ヒトリソソーム酵素がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ヒトリソソーム酵素がリンカー配列を介してｈＴｆＲの重鎖のＣ末端側又はＮ末端側で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，重鎖のアミノ酸配列が配列番号６６又は６８で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。
ここで重鎖が配列番号６６を有するものである場合の抗体はＩｇＧ１タイプのものであり，配列番号６８である場合はＩｇＧ４タイプのものである。

【0308】

他の蛋白質（Ａ）がヒトリソソーム酵素でありヒト化抗体がＦａｂ抗体である融合蛋白質の具体的な実施例としては，
（１）ヒトリソソーム酵素がリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２３で示されるもの，
（２）ヒトリソソーム酵素がリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２５で示されるもの，
（３）ヒトリソソーム酵素がリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２７で示されるもの，
（４）ヒトリソソーム酵素がリンカー配列を介してｈＴｆＲのＦａｂ重鎖のＣ末端側又はＮ末端で結合してなるものと，ｈＴｆＲの軽鎖とからなり，Ｆａｂ重鎖のアミノ酸配列が配列番号６１で示されるものであり，軽鎖のアミノ酸配列が配列番号２９で示されるもの，が挙げられる。ここで，リンカー配列は，１個のグリシン，１個のセリン，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，アミノ酸配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ，配列番号３のアミノ酸配列，配列番号４のアミノ酸配列，配列番号５のアミノ酸配列，及びこれらのアミノ酸配列が１～１０個連続してなるアミノ酸配列からなるものが好適である。

【0309】

上記以外のヒトリソソーム酵素も，ｈＧＡＡ及びｈＩ２Ｓで示したものと同様の態様で，ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質とすることができる。ヒトリソソーム酵素としては，β－ガラクトシダーゼ，ＧＭ２活性化蛋白質，β－ヘキソサミニダーゼＡ，β－ヘキソサミニダーゼＢ，Ｎ－アセチルグルコサミン－１－フォスフォトランスフェラーゼ，β－マンノシダーゼ，ガラクトシルセラミダーゼ，サポシンＣ，アスパルチルグルコサミニダーゼ，α－ガラクトシダーゼ Ａ，α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ，アセチルＣｏＡα－グルコサミニドＮ－アセチルトランスフェラーゼ，Ｎ－アセチルグルコサミン－６－硫酸スルファターゼ，アミロ－１，６－グルコシダーゼ，シアリダーゼ，ヒアルロニダーゼ－１，ＣＬＮ１及びＣＬＮ２が挙げられるが，これらに限られるものではない。また，リソソーム以外の蛋白質を融合させる場合も同様に融合蛋白質を構築し得る。

【0310】

他の蛋白質（Ａ）が上記のヒトリソソーム酵素である融合蛋白質はヒト及びサルのＴｆＲのいずれにも親和性を有するものであり，実施例７に記載の方法により測定したときに，
サルのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－１１Ｍ以下であるものであり，
ヒトのＴｆＲとの解離定数が，好ましくは１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，より好ましくは５Ｘ１０^－１１Ｍ以下，更に好ましくは１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，更により好ましくは１Ｘ１０^－１２Ｍ以下であるものである。
例えば，サルのＴｆＲ及びヒトのＴｆＲとの解離定数が，それぞれ，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１０Ｍ以下，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，１Ｘ１０^－１０Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１２Ｍ以下，５Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，５Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１１Ｍ以下，５Ｘ１０^－１１Ｍ以下及び１Ｘ１０^－１２Ｍ以下，であるものが挙げられる。ここにおいて，サルのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，１Ｘ１０^－１１Ｍ，１Ｘ１０^－１２Ｍ，１Ｘ１０^－１３Ｍ等とすることができる。ヒトのＴｆＲとの解離定数に特段明確な下限はないが，例えば，１Ｘ１０^－１２Ｍ，５Ｘ１０^－１３Ｍ，１Ｘ１０^－１３Ｍ等とすることができる。抗体が一本鎖抗体であっても同様である。

【0311】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の分子と結合させることにより，中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の分子と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の治療上有効量を，中枢神経系の疾患の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与された生理活性蛋白質又は薬理活性低分子化合物の分子と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。また，当該薬剤は，疾患の発症を予防するために用いることもできる。

【0312】

特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒト酸性α－グルコシダーゼ（ｈＧＡＡ）と結合させることにより，ｈＧＡＡに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，ポンペ病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＧＡＡと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，ポンペ病に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，ポンペ病の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＧＡＡと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。また，当該薬剤は，当該疾患状態の発症を予防するために用いることもできる。

【0313】

また特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩ２Ｓ）と結合させることにより，ｈＩ２Ｓに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，ハンター症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＩ２Ｓと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，ハンター症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，ハンター症候群の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＩ２Ｓと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＴｆＲを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。また，当該薬剤は，当該疾患状態の発症を予防するために用いることもできる。

【0314】

また特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ｈＩＤＵＡ）と結合させることにより，ｈＩＤＵＡに血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，ハーラー症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ｈＩＤＵＡと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，ハーラー症候群に伴う中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，ハーラー症候群の患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたｈＩＤＵＡと結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ｈＩＤＵＡを発現する他の臓器・器官にも到達することができる。また，当該薬剤は，当該疾患状態の発症を予防するために用いることもできる。

【0315】

また特に，本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトリソソーム酵素と結合させることにより，ヒトリソソーム酵素に血液脳関門を通過させて脳内で機能を発揮させることができるので，ヒトリソソーム酵素の欠損を原因とする中枢神経系の疾患状態の治療のための血中投与用薬剤の製造のために使用することができる。また，ヒトリソソーム酵素と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，ヒトリソソーム酵素の欠損を原因とする中枢神経系の疾患状態の治療上有効量を，該当する患者に血中投与（点滴静注等の静脈注射を含む）することを含む，治療方法において使用することができる。血中投与されたヒトリソソーム酵素と結合させた抗ｈＴｆＲ抗体は，脳内に到達する他，ヒトリソソーム酵素を発現する他の臓器・器官にも到達することができる。また，当該薬剤は，当該疾患状態の発症を予防するために用いることもできる。

【0316】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と結合させた蛋白質，低分子化合物等は，血中に投与して中枢神経系（ＣＮＳ）において薬効を発揮させるべき薬剤として使用することができる。かかる薬剤は，一般に点滴静脈注射等による静脈注射，皮下注射，筋肉注射により患者に投与されるが，投与経路には特に限定はない。

【0317】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体と結合させた蛋白質，低分子化合物等は，薬剤として，凍結乾燥品，又は水性液剤等の形態で医療機関に供給することができる。水性液剤の場合，薬剤を，安定化剤，緩衝剤，等張化剤を含有する溶液に予め溶解したものを，バイアル又は注射器に封入した製剤として供給できる。注射器に封入された製剤は，一般にプレフィルドシリンジ製剤と呼称される。プレフィルドシリンジ製剤とすることにより，患者自身による薬剤の投与を簡易にすることができる。

【0318】

水性液剤として供給される場合，水性液剤に含有される抗ｈＴｆＲ抗体と結合させた蛋白質，低分子化合物等の濃度は，用法用量によって適宜調整されるべきものであるが，例えば１～４ｍｇ／ｍＬである。また，水性液剤に含有される安定化剤は，薬剤学的に許容し得るものである限り特に限定はないが，非イオン性界面活性剤が好適に使用できる。このような非イオン性界面活性剤としては，ポリソルベート，ポロキサマー等を単独で又はこれらを組合せて使用できる。ポリソルベートとしてはポリソルベート２０，ポリソルベート８０が，ポロキサマーとしてはポロキサマー１８８（ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール）が特に好適である。また，水性液剤に含有される非イオン性界面活性剤の濃度は，０．０１～１ｍｇ／ｍＬであることが好ましく，０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬであることがより好ましく，０．１～０．５ｍｇ／ｍＬであることが更に好ましい。安定化剤として，ヒスチジン，アルギニン，メチオニン，グリシン等のアミノ酸を使用することもできる。安定化剤として使用する場合の，水性液剤に含有されるアミノ酸の濃度は，０．１～４０ｍｇ／ｍＬであることが好ましく，０．２～５ｍｇ／ｍＬであることがより好ましく，０．５～４ｍｇ／ｍＬであることが更に好ましい。水性液剤に含有される緩衝剤は，薬剤学的に許容し得るものである限り特に限定はないが，リン酸塩緩衝剤が好ましく，特にリン酸ナトリウム緩衝剤が好ましい。緩衝剤としてリン酸ナトリウム緩衝剤を使用する場合の，リン酸ナトリウムの濃度は，好ましくは０．０１～０．０４Ｍである。また，緩衝剤によって調整される水性液剤のｐＨは，好ましくは５．５～７．２である。水性液剤に含有される等張化剤は，薬剤学的に許容し得るものである限り特に限定はないが，塩化ナトリウム，マンニトールを単独で又は組み合わせて等張化剤として好適に使用できる。

【実施例0319】

以下，実施例を参照して本発明を更に詳細に説明するが，本発明が実施例に限定されることは意図しない。なお，実施例１～１５は，参考例（抗体番号３）についてのものである。

【0320】

〔実施例１〕ｈＴｆＲ発現用ベクターの構築
ヒト脾臓Ｑｕｉｃｋ Ｃｌｏｎｅ ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社）を鋳型として，プライマーｈＴｆＲ５’（配列番号４１）及びプライマーｈＴｆＲ３’（配列番号４２）を用いて，ＰＣＲによりヒトトランスフェリン受容体（ｈＴｆＲ）をコードする遺伝子断片を増幅させた。増幅させたｈＴｆＲをコードする遺伝子断片を，ＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＣＩ－ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社）のＭｌｕＩとＮｏｔＩ間に挿入した。得られたベクターを，ｐＣＩ－ｎｅｏ（ｈＴｆＲ）と名付けた。次いで，このベクターを，ＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化して，ｈＴｆＲをコードする遺伝子断片を切り出し，国際公開公報（ＷＯ２０１２／０６３７９９）に記載された発現ベクターであるｐＥ－ｍＩＲＥＳ－ＧＳ－ｐｕｒｏのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込むことにより，ｈＴｆＲ発現用ベクターであるｐＥ－ｍＩＲＥＳ－ＧＳ－ｐｕｒｏ（ｈＴｆＲ）を構築した。

【0321】

〔実施例２〕組換えｈＴｆＲの作製
エレクトロポレーション法により，ＣＨＯ－Ｋ１細胞にｐＥ－ｍＩＲＥＳ－ＧＳ－ｐｕｒｏ（ｈＴｆＲ）を導入した後，メチオニンスルホキシミン（ＭＳＸ）及びピューロマイシンを含むＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて細胞の選択培養を行い，組換えｈＴｆＲ発現細胞を得た。この組換えｈＴｆＲ発現細胞を培養して，組換えｈＴｆＲを調製した。

【0322】

〔実施例３〕組換えｈＴｆＲを用いたマウスの免疫
実施例２で調製した組換えｈＴｆＲを抗原として用いてマウスを免疫した。免疫は，マウスに抗原を静脈内投与又は腹腔投与内して行った。

【0323】

〔実施例４〕ハイブリドーマの作製
最後に細胞を投与した日の約１週間後にマウスの脾臓を摘出してホモジナイズし，脾細胞を分離した。得られた脾細胞をマウスミエローマ細胞株（Ｐ３．Ｘ６３．Ａｇ８．６５３）とポリエチレングリコール法を用いて細胞融合させた。細胞融合終了後，（１Ｘ）ＨＡＴサプリメント（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）及び１０％ Ｕｌｔｒａ ｌｏｗ ＩｇＧウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を含むＲＰＭＩ１６４０培地に細胞を懸濁させ，細胞懸濁液を９６ウェルプレート２０枚に２００ μＬ／ウェルずつ分注した。炭酸ガス培養器（３７℃，５％ ＣＯ_２）で細胞を１０日間培養した後，各ウェルを顕微鏡下で観察し，単一のコロニーが存在するウェルを選択した。

【0324】

各ウェルの細胞がほぼコンフルエントになった時点で培養上清を回収し，これをハイブリドーマの培養上清として，以下のスクリーニングに供した。

【0325】

〔実施例５〕高親和性抗体産生細胞株のスクリーニング
組換えｈＴｆＲ溶液（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）を５０ ｍＭ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５～９．６）で希釈して５μｇ／ｍＬの濃度に調整し，これを固相溶液とした。固相溶液を，Ｎｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐ^ＴＭ ｆｌａｔ－ｂｏｔｔｏｍ ９６ウェルプレート（基材：ポリスチレン，Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに５０μＬずつ添加した後，プレートを室温で１時間静置し，組換えｈＴｆＲをプレートに吸着させて固定した。固相溶液を捨て，各ウェルを２５０μＬの洗浄液（ＰＢＳ－Ｔ： ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）で３回洗浄した後，各ウェルにブロッキング液（１％ ＢＳＡを含有するＰＢＳ）を２００μＬずつ添加し，プレートを室温で１時間静置した。

【0326】

ブロッキング液を捨て，各ウェルを２５０μＬのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後，各ウェルにハイブリドーマの培養上清を５０μＬずつ添加し，プレートを室温で１時間静置し，培養上清に含まれるマウス抗ｈＴｆＲ抗体を組換えｈＴｆＲに結合させた。このとき，コントロールとして，マウス抗ｈＴｆＲ抗体を産生しないハイブリドーマの培養上清をウェルに５０μＬ添加したものを置いた。また，各培養上清を加えたウェルの横のウェルに，ハイブリドーマの培養用培地を５０μＬ添加したものを置き，これをモックウェルとした。測定はｎ＝２で実施した。次いで，溶液を捨て，各ウェルを２５０μＬのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した。

【0327】

上記の各ウェルに１００μＬのＨＲＰ標識ヤギ抗マウスイムノグロブリン抗体溶液（プロメガ社）を添加し，プレートを室温で３０分間静置した。次いで，溶液を捨て，各ウェルを２５０μＬのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した。次いで，各ウェルに５０μＬの発色用基質液ＴＭＢ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（プロメガ社）を添加し，室温で１０～２０分間静置した。次いで，各ウェルに１００μＬの停止液（２Ｎ硫酸）を添加した後，プレートリーダーを用いて各ウェルの４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。各培養上清及びコントロールの２つのウェルの平均値をとり，これらの平均値から，各培養上清及びコントロール毎に置いた２つのモックウェルの平均値をそれぞれ減じたものを測定値とした。

【0328】

高い測定値を示したウェルに添加した培養上清に対応する１４種類のハイブリドーマ細胞を，ｈＴｆＲに対して高親和性を示す抗体（高親和性抗ｈＴｆＲ抗体）を産生する細胞株（高親和性抗体産生細胞株）として選択した。これら１４種の細胞株を，クローン１株～クローン１４株と番号付けた。これら細胞株からクローン３株を選択し，以下の実験に用いた。また，クローン３株が産生する抗ｈＴｆＲ抗体を，抗ｈＴｆＲ抗体番号３とした。

【0329】

〔実施例６〕高親和性抗ｈＴｆＲ抗体の可変領域のアミノ酸配列の解析
実施例５で選択したクローン３株からｃＤＮＡを調製し，このｃＤＮＡを鋳型として抗体の軽鎖及び重鎖をコードする遺伝子を増幅させた。増幅させた遺伝子の塩基配列を翻訳し，この細胞株の産生する抗ｈＴｆＲ抗体番号３の抗体について，軽鎖及び重鎖の可変領域のアミノ酸配列を決定した。

【0330】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３は，軽鎖の可変領域に配列番号４８に記載のアミノ酸配列と，重鎖の可変領域に配列番号４９に記載のアミノ酸配列とを含むものであった。また，その軽鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号６又は７，ＣＤＲ２に配列番号８又は９，及びＣＤＲ３に配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含んでなり，その重鎖の可変領域は，ＣＤＲ１に配列番号１１又は１２，ＣＤＲ２に配列番号１３又は１４，及びＣＤＲ３に配列番号１５又は１６に記載のアミノ酸配列を含んでなるものであった。但し，ＣＤＲは上記のアミノ酸配列に限られず，これらのアミノ酸配列を含む領域，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとすることができると考えられた。

【0331】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，軽鎖の可変領域のＣＤＲ１～３と重鎖の可変領域のＣＤＲ１～３に含まれるアミノ酸配列の配列番号を，表１にまとめて示す。但し，表１は各ＣＤＲのアミノ酸配列を例示するものであり，各ＣＤＲのアミノ酸配列は表１に記載のアミノ酸配列に限られるものではなく，これらのアミノ酸配列を含む領域のアミノ酸配列，これらのアミノ酸配列の一部を含む連続した３個以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列もＣＤＲとし得ると考えられる。

【0332】

【表1】

【0333】

〔実施例７〕抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定
抗ｈＴｆＲ抗体とヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定は，バイオレイヤー干渉法（ＢｉｏＬａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ：ＢＬＩ）を用いた生体分子相互作用解析システムであるＯｃｔｅｔＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ社，ａ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて実施した。バイオレイヤー干渉法の基本原理について，簡単に説明する。センサーチップ表面に固定された生体分子の層（レイヤー）に特定波長の光を投射したとき，生体分子のレイヤーと内部の参照となるレイヤーの二つの表面から光が反射され，光の干渉波が生じる。測定試料中の分子がセンサーチップ表面の生体分子に結合することにより，センサー先端のレイヤーの厚みが増加し，干渉波に波長シフトが生じる。この波長シフトの変化を測定することにより，センサーチップ表面に固定された生体分子に結合する分子数の定量及び速度論的解析をリアルタイムで行うことができる。測定は，概ねＯｃｔｅｔＲＥＤ９６に添付の操作マニュアルに従って実施した。ヒトＴｆＲとしては，Ｎ末端にヒスチジンタグが付加した，配列番号１に示されるアミノ酸配列の中でＮ末端側から８９番目のシステイン残基からＣ末端のフェニルアラニンまでの，ｈＴｆＲの細胞外領域のアミノ酸配列を有する組換えヒトＴｆＲ（ｒヒトＴｆＲ：Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社）を用いた。サルＴｆＲとしては，Ｎ末端にヒスチジンタグが付加した，配列番号２に示されるアミノ酸配列の中でＮ末端側から８９番目のシステイン残基からＣ末端のフェニルアラニンまでの，カニクイザルのＴｆＲの細胞外領域のアミノ酸配列を有する組換えサルＴｆＲ（ｒサルＴｆＲ：Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社）を用いた。

【0334】

実施例５で選択したクローン３株を，細胞濃度が約２Ｘ１０^５ 個／ｍＬとなるように，（１Ｘ）ＨＡＴサプリメント（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）及び１０％ Ｕｌｔｒａ ｌｏｗ ＩｇＧウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を含むＲＰＭＩ１６４０培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養液を遠心操作した後に，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清を回収した。回収した培養上清を，予め１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の３倍容の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎ Ｇカラム（カラム体積：１ｍＬ，ＧＥヘルスケア社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液によりカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着した抗体を溶出させ，溶出画分を採取した。溶出画分に１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整した。これを抗ｈＴｆＲ抗体番号３の精製品としてとして以下の実験に用いた。

【0335】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３の精製品を，ＨＢＳ－Ｐ＋（１５０ｍＭ ＮａＣｌ，５０μＭ ＥＤＴＡ及び０．０５％ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ）で２段階希釈し，０．７８１２５～５０ｎＭ（０．１１７～７．５μｇ／ｍＬ）の７段階の濃度の抗体溶液を調製した。この抗体溶液をサンプル溶液とした。ｒヒトＴｆＲとｒサルＴｆＲとを，それぞれＨＢＳ－Ｐ＋で希釈し，２５μｇ／ｍＬの溶液を調製し，それぞれｒヒトＴｆＲ－ＥＣＤ（Ｈｉｓｔａｇ）溶液及びｒサルＴｆＲ－ＥＣＤ（Ｈｉｓｔａｇ）溶液とした。

【0336】

上記２段階希釈して調製したサンプル溶液を，９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ， ｂｌａｃｋ（ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ－ｏｎｅ社）に２００μＬ／ウェルずつ添加した。また，上記調製したｒヒトＴｆＲ－ＥＣＤ（Ｈｉｓｔａｇ）溶液及びｒサルＴｆＲ－ＥＣＤ（Ｈｉｓｔａｇ）溶液を，所定のウェルにそれぞれ２００μＬ／ウェルずつ添加した。ベースライン，解離用及び洗浄用のウェルには，ＨＢＳ－Ｐ＋を２００μＬ／ウェルずつ添加した。再生用のウェルには，１０ｍＭ Ｇｌｙｃｉｎｅ－ＨＣｌ（ｐＨ１．７）を２００μＬ／ウェルずつ添加した。活性化用のウェルには，０．５ｍＭ ＮｉＣｌ_２溶液を２００μＬ／ウェルずつ添加した。このプレートと，バイオセンサー（Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ／Ｎｉ－ＮＴＡ：ＦｏｒｔｅＢｉｏ社，ａ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を，ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６の所定の位置に設置した。

【0337】

ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６を下記の表２に示す条件で作動させてデータを取得後，ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６付属の解析ソフトウェアを用いて，結合反応曲線を１：１結合モデルあるいは２：１結合モデルにフィッティングし，抗ｈＴｆＲ抗体と，ｒヒトＴｆＲ及びｒサルＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）を測定し，解離定数（Ｋ_Ｄ）を算出した。なお，測定は２５～３０℃の温度下で実施した。

【0338】

【表2】

【0339】

表３に抗ｈＴｆＲ抗体番号３のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（Ｋ_Ｄ）を示す。

【0340】

【表3】

【0341】

抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲへの親和性の測定の結果，抗ｈＴｆＲ抗体番号３のヒトＴｆＲとの解離定数は１Ｘ１０^－１２Ｍ以下であり，サルＴｆＲとの解離定数も１Ｘ１０^－１２Ｍ以下であった。これらの結果は，抗ｈＴｆＲ抗体番号３がヒトＴｆＲのみならずサルＴｆＲとも高い親和性を有する抗体であることを示す。

【0342】

〔実施例７－２〕抗ｈＴｆＲ抗体のマウスを用いた脳移行評価
次いで，抗ｈＴｆＲ抗体番号３について，抗体がＢＢＢを通過して脳内に移行することを，マウストランスフェリン受容体の細胞外領域をコードする遺伝子をヒトトランスフェリン受容体遺伝子の細胞外領域をコードする遺伝子に置換したｈＴｆＲノックインマウス（ｈＴｆＲ－ＫＩマウス）を用いて評価した。ｈＴｆＲ－ＫＩマウスは，概ね下記の方法で作製した。また，抗ｈＴｆＲ抗体番号３としては，実施例７で調製した精製品を用いた。

【0343】

細胞内領域がマウスｈＴｆＲのアミノ酸配列であり，細胞外領域がヒトｈＴｆＲのアミノ酸配列であるキメラｈＴｆＲをコードするｃＤＮＡの３’側に，ｌｏｘＰ配列で挟み込んだネオマイシン耐性遺伝子を配置した，配列番号４５で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を化学的に合成した。このＤＮＡ断片を，５’アーム配列として配列番号４６で示される塩基配列，３’アーム配列として配列番号４７で示される塩基配列を有するターゲッティングベクターに，常法により組み込み，これをマウスＥＳ細胞にエレクトロポレーション法により導入した。遺伝子導入後のマウスＥＳ細胞を，ネオマイシン存在下で選択培養し，ターゲッティングベクターが相同組換えにより染色体に組み込まれたマウスＥＳ細胞を選択した。得られた遺伝子組換えマウスＥＳ細胞を，ＩＣＲマウスの８細胞期胚（宿主胚）へ注入し，精管結紮を行ったマウスとの交配によって得られた偽妊娠マウス（レシピエントマウス）に移植した。得られた産仔（キメラマウス）について毛色判定を行い，ＥＳ細胞が生体の形成に高効率で寄与した個体，すなわち全体毛に対する白色毛の占める比率の高い個体を選別した。このキメラマウス個体をＩＣＲマウスと掛け合わせてＦ１マウスを得た。白色のＦ１マウスを選別し，尻尾の組織より抽出したＤＮＡを解析し，染色体上でマウストランスフェリン受容体遺伝子がキメラｈＴｆＲに置き換わっているマウスをｈＴｆＲ－ＫＩマウスとした。

【0344】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３の精製品を，Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ－ＮＨ_２（同仁化学研究所）を用いて，添付の操作マニュアルに従ってフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）により蛍光標識した。このＦＩＴＣ蛍光標識した抗体を含むＰＢＳ溶液を調製した。この抗体溶液を，投与される抗ｈＴｆＲ抗体の用量が３ｍｇ／ｋｇとなるように，１匹のｈＴｆＲ－ＫＩマウス（雄，１０～１２週齢）に静脈注射した。また，コントロールとして，同様にして調製したＦＩＴＣ蛍光標識したマウスＩｇＧ１（シグマ社）を含むＰＢＳ溶液を，３ｍｇ／ｋｇの用量で１匹のｈＴｆＲ－ＫＩマウス（雄，１０～１２週齢）に静脈注射した。静脈注射してから約８時間後に生理食塩液で全身灌流し，脳（大脳と小脳を含む部分）を採取した。摘出した脳の重量（湿重量）を測定した後，Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（シグマ社）を含むＴ－ＰＥＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加して脳組織をホモジネートした。ホモジネートを遠心して上清を回収し，上清中に含まれるＦＩＴＣ蛍光標識した抗体の量を以下の方法で測定した。まず，抗ＦＩＴＣ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｔｈｙｌ社）をＨｉｇｈ Ｂｉｎｄ Ｐｌａｔｅ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに１０μＬずつ添加し，１時間静置してプレートに固定させた。次いで，各ウェルにＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を１５０μＬずつ添加し，１時間振盪してプレートをブロッキングした。次いで，各ウェルに脳組織のホモジネートの上清を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ Ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｏａｔ）（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＲｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を１５０μＬずつ添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００ ｒｅａｄｅｒを用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知のＦＩＴＣ蛍光標識した抗ｈＴｆＲ抗体の標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各検体の測定値を内挿することにより，脳のグラム重量（湿重量）当たりに含まれる抗ｈＴｆＲ抗体の量（脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度）を算出した。その結果を表４に示す。

【0345】

コントロールと比較して，抗ｈＴｆＲ抗体番号３の脳組織中の濃度は，約２７．８倍であった。この結果は，抗ｈＴｆＲ抗体番号３が，ＢＢＢを積極的に通過して脳内に移行する性質を有することを示すものである。

【0346】

【表4】

【0347】

〔実施例８〕抗ｈＴｆＲ抗体のサルを用いた薬物動態解析
抗ｈＴｆＲ抗体番号３を，５．０ｍｇ／ｋｇの用量で雄性カニクイザルに単回静脈内投与し，投与８時間後に生理食塩液で全身潅流を実施した。また，陰性対照として，抗ｈＴｆＲ抗体を非投与の１匹の個体を同様に全身潅流した。潅流後，延髄を含む脳組織を摘出した。この脳組織を用いて，以下の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定及び免疫組織化学染色を行った。抗ｈＴｆＲ抗体番号３としては，実施例７に記載の抗体の精製品を用いた。

【0348】

脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定は，概ね以下の手順で行った。採取した組織を，脳組織を大脳，小脳，海馬及び延髄に分けてから，それぞれＰｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）を含むＲＩＰＡ Ｂｕｆｆｅｒ（和光純薬工業株式会社）でホモジネートし遠心して上清を回収した。Ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｆｃγ ｐＡｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社）をＨｉｇｈ Ｂｉｎｄ Ｐｌａｔｅ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに１０μＬずつ添加し，１時間静置してプレートに固定した。次いで，各ウェルにＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を１５０μＬずつ添加し，１時間振盪し，プレートをブロッキングした。次いで，各ウェルに脳組織のホモジネートの上清を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｆａｂ－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社）を２５μＬずつ添加し，１時間振盪した。次いで，各ウェルにＳＵＬＦＯ－Ｔａｇ－Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を２５μＬずつ添加し，３０分振盪した。各ウェルにＲｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を１５０μＬずつ添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００ ｒｅａｄｅｒ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知の抗ｈＴｆＲ抗体の標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各検体の測定値を内挿することにより，各脳組織のグラム重量（湿重量）当たりに含まれる抗ｈＴｆＲ抗体の量（脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度）を算出した。

【0349】

脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を表５に示す。大脳，小脳，海馬及び延髄のすべてにおいて，抗ｈＴｆＲ抗体番号３の蓄積が認められた。これらの結果は，抗ｈＴｆＲ抗体番号３が血液脳関門を通過して脳組織に蓄積する性質を有することを示すものであり，脳組織内で機能させるべき薬剤をこれらの抗体と結合させることにより，その薬剤を効率良く脳組織に蓄積させることができること示すものである。

【0350】

【表5】

【0351】

脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色は，概ね以下の手順で行った。ティシューテッククライオ３ＤＭ（サクラファインテック株式会社）を用いて，採取した組織を－８０℃にまで急速冷凍し，組織の凍結ブロックを作製した。この凍結ブロックを４μｍに薄切後，ＭＡＳコートスライドガラス（松浪ガラス株式会社）に貼り付けた。組織薄片に４％パラホルムアルデヒド（和光純薬工業株式会社）を４℃で５分間反応させ，組織薄片をスライドガラス上に固定した。続いて，組織薄片に０．３％過酸化水素水を含むメタノール溶液（和光純薬工業株式会社）を３０分間反応させ，内因性ペルオキシダーゼを失活させた。次いでスライドガラスをＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳに３０分間室温で反応させてブロッキングした。次いで，組織薄片にＭｏｕｓｅ ＩｇＧ－ｈｅａｖｙ ａｎｄ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を１時間室温で反応させた。組織薄片を，ＤＡＢ基質（３，３’－ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）で発色させ，マイヤー・ヘマトキシリン（Ｍｅｒｃｋ社）で対比染色を行い，脱水，透徹した後に封入し，光学顕微鏡で観察した。

【0352】

図１に大脳皮質の抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの大脳皮質では，血管の特異的な染色が確認された（図１ｂ）。更に，脳血管外の脳実質領域にも広範に特異的な染色が確認された。一方，コントロールとしておいた抗ｈＴｆＲ抗体を非投与のサルの大脳皮質では染色は認められず，バックグラウンドの染色は殆どないことが示された（図１ａ）。

【0353】

図２に海馬の抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの大脳皮質では，血管の特異的な染色が確認された（図２ｂ）。更に，神経様細胞にも特異的な染色が確認され，また，脳血管外の脳実質領域にも広範に特異的な染色が確認された。一方，コントロールとしておいた抗ｈＴｆＲ抗体を非投与のサルの海馬では染色は認められず，バックグラウンドの染色は殆どないことが示された（図２ａ）。

【0354】

図３に小脳の抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。抗ｈＴｆＲ抗体番号３を投与したサルの大脳皮質では，血管の特異的な染色が確認された（図３ｂ）。更に，プルキンエ細胞にも特異的な染色が確認された。一方，コントロールとしておいた抗ｈＴｆＲ抗体を非投与のサルの小脳では染色は認められず，バックグラウンドの染色は殆どないことが示された（図３ａ）。

【0355】

以上の大脳，海馬及び小脳の免疫組織化学染色の結果から，抗ｈＴｆＲ抗体番号３は，脳血管内皮表面に存在するｈＴｆＲへ結合することができ，且つ，ｈＴｆＲへの結合後，血液脳関門を通過して脳実質内へ移行し，さらに海馬においては脳実質内から神経様細胞にまで，小脳においてはプルキンエ細胞にまで取り込まれることがわかった。

【0356】

〔実施例９〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の作製
抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖及び重鎖の可変領域に含まれるアミノ酸配列のヒト化を試みた。そうして，配列番号１７～配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有するヒト化された軽鎖の可変領域と，配列番号３１～配列番号３６に示されるアミノ酸配列を有するヒト化された重鎖の可変領域を得た。

【0357】

〔実施例１０〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体をコードする遺伝子の構築
上記の抗ｈＴｆＲ抗体番号３について，それぞれヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域を含む，軽鎖及び重鎖の全長をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を人工的に合成した。このとき，軽鎖の全長をコードする遺伝子の５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列とリーダーペプチドをコードする配列とを，３’側にはＮｏｔＩ配列を導入した。また，重鎖の全長をコードする遺伝子の５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列とリーダーペプチドをコードする配列とを，３’側にはＮｏｔＩ配列を導入した。なお，ここで導入したリーダーペプチドは，ヒト化抗体の軽鎖及び重鎖をホスト細胞である哺乳動物細胞で発現させたときに，軽鎖及び重鎖が細胞外に分泌されるように，分泌シグナルとして機能するものである。

【0358】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖については，可変領域に配列番号１８で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号２３で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号２４）を合成した。

【0359】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖については，可変領域に配列番号２０で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号２５で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の軽鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号２６）と，可変領域に配列番号２１で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号２７で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３の軽鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号２８）と，可変領域に配列番号２２で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号２９で示されるアミノ酸配列の軽鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４の軽鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号３０）も合成した。

【0360】

抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖については，可変領域に配列番号３２で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号３７で示されるアミノ酸配列の重鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号３８）を合成した。配列番号３８で示されるＤＮＡ断片にコードされるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖はＩｇＧ１である。

【0361】

更に，抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖については，可変領域に配列番号３２で示されるアミノ酸配列を有する，配列番号３９で示されるアミノ酸配列の重鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＩｇＧ４）の全長をコードするＤＮＡ断片（配列番号４０）を合成した。この配列番号４０で示されるＤＮＡ断片にコードされるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖はＩｇＧ４である。

【0362】

〔実施例１１〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体発現ベクターの構築
ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｎｕｃベクター（インビトロジェン社）を，ＫｐｎＩとＮｃｏＩで消化し，ＥＦ－１αプロモーター及びその第一イントロンを含む領域を切り出し，これをＴ４ ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端化処理した。ｐＣＩ－ｎｅｏ（インビトロジェン社）を，ＢｇｌＩＩ及びＥｃｏＲＩで消化して，ＣＭＶのエンハンサー／プロモーター及びイントロンを含む領域を切除した後に，Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端化処理した。これに，上記のＥＦ－１αプロモーター及びその第一イントロンを含む領域を挿入して，ｐＥ－ｎｅｏベクターを構築した。ｐＥ－ｎｅｏベクターを，ＳｆｉＩ及びＢｓｔＸＩで消化し，ネオマイシン耐性遺伝子を含む約１ｋｂｐの領域を切除した。ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋）（インビトロジェン社）を鋳型にしてプライマーＨｙｇ－Ｓｆｉ５’（配列番号４３）及びプライマーＨｙｇ－ＢｓｔＸ３’（配列番号４４）を用いて，ＰＣＲ反応によりハイグロマイシン遺伝子を増幅した。増幅したハイグロマイシン遺伝子を，ＳｆｉＩ及びＢｓｔＸＩで消化し，上記のネオマイシン耐性遺伝子を切除したｐＥ－ｎｅｏベクターに挿入して，ｐＥ－ｈｙｇｒベクターを構築した。

【0363】

ｐＥ－ｈｙｇｒベクター及びｐＥ－ｎｅｏベクターをそれぞれＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化した。実施例１０で合成したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号２４）と重鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号３８）をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，それぞれｐＥ－ｈｙｇｒベクターとｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩ－ＮｏｔＩ間に挿入した。得られたベクターを，それぞれヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３），ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖発現用ベクターのｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）として以下の実験に用いた。

【0364】

更に，抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖については，実施例１０で合成したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号２６），ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号２８），及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４の軽鎖をコードするＤＮＡ断片（配列番号３０）をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｈｙｇｒベクターのＭｌｕＩ－ＮｏｔＩ間に挿入し，それぞれヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－２），ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－３），及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４の軽鎖発現用ベクターのｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－４）を構築した。

【0365】

更に同様に，抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖については，実施例１０で合成したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＩｇＧ４をコードするＤＮＡ断片（配列番号４０）をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩ－ＮｏｔＩ間に挿入し，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＩｇＧ４発現用ベクターのｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３－ＩｇＧ４）を構築した。

【0366】

〔実施例１２〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体発現用細胞の構築
ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｋ１：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）を，下記の方法により，ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）を用いて，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）で形質転換した。細胞の形質転換は概ね以下の方法で行った。５Ｘ１０^５個のＣＨＯ－Ｋ１細胞をＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地（ライフテクノロジー社）を添加した３．５ｃｍ培養ディッシュに播種し，３７℃，５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培地をＯｐｔｉ－ＭＥＭ^ＴＭ Ｉ培地（ライフテクノロジー社）に交換し，細胞を５Ｘ１０^６細胞／ｍＬの密度となるように懸濁した。細胞懸濁液１００μＬを採取し，これにＯｐｔｉ－ＭＥＭ^ＴＭ Ｉ培地で１００μｇ／ｍＬに希釈したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）及びｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）プラスミドＤＮＡ溶液を５μＬずつ添加した。ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）を用いて，エレクトロポレーションを実施し，細胞にプラスミドを導入した。細胞を，３７℃，５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した後，０．５ｍｇ／ｍＬのハイグロマイシン及び０．８ｍｇ／ｍＬのＧ４１８を添加したＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で選択培養した。

【0367】

次いで，限界希釈法により，１ウェルあたり１個以下の細胞が播種されるように，９６ウェルプレート上に選択培養で選択された細胞を播種し，各細胞が単クローンコロニーを形成するように約１０日間培養した。単クローンコロニーが形成されたウェルの培養上清を採取し，培養上清中のヒト化抗体含量をＥＬＩＳＡ法にて調べ，ヒト化抗体高発現細胞株を選択した。

【0368】

このときのＥＬＩＳＡ法は概ね以下の方法で実施した。９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに，ヤギ抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体溶液を０．０５Ｍ炭酸水素塩緩衝液（ｐＨ９．６）で４μｇ／ｍＬに希釈したしたものを１００μＬずつ加え，室温で少なくとも１時間静置して抗体をプレートに吸着させた。次いで，ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄後，Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｂｌｏｃｋ （ＰＢＳ）Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を各ウェルに２００μＬずつ加えてプレートを室温で３０分静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後，ＰＢＳに０．５％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加したもの（ＰＢＳ－ＢＴ）で適当な濃度に希釈した培養上清又はヒトＩｇＧ標準品を，各ウェルに１００μＬずつ加え，プレートを室温で少なくとも１時間静置した。プレートをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後，ＰＢＳ－ＢＴで希釈したＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧポリクロ－ナル抗体溶液を，各ウェルに１００μＬずつ加え，プレートを室温で少なくとも１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄後，リン酸－クエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）を含む０．４ｍｇ／ｍＬ ｏ－フェニレンジアミンを１００μＬずつ各ウェルに加え，室温で８～２０分間静置した。次いで，１ｍｏｌ／Ｌ硫酸を１００μＬずつ各ウェルに加えて反応を停止させ，９６ウェルプレートリーダーを用いて，各ウェルの４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。高い測定値を示したウェルに対応する細胞を，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号１の高発現細胞株とした。これを抗体番号３発現株とした。

【0369】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－２）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３－２発現株とした。

【0370】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－３）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３－３発現株とした。

【0371】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－４）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３－４発現株とした。

【0372】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３－ＩｇＧ４）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３（ＩｇＧ４）発現株とした。

【0373】

更に同様にして，実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３－２）及び重鎖発現用ベクターｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３－ＩｇＧ４）を用いてＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）の高発現細胞株を得た。これを抗体番号３－２（ＩｇＧ４）発現株とした。

【0374】

〔実施例１３〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の精製
実施例１２で得られた抗体番号３発現株，抗体番号３－２発現株，抗体番号３－３発現株及び抗体番号３－４発現株を，それぞれ細胞濃度が約２Ｘ１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養上清を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む５倍容の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，予め１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の３倍容の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（カラム体積：１ｍＬ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液によりカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したヒト化抗体を溶出させ，溶出画分を採取した。溶出画分に１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加して中和して，これを抗体の精製品とした。

【0375】

ここで，抗体番号３発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３とした。抗体番号３－２発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２とした。抗体番号３－３発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－３とした。また，抗体番号３－４発現株の培養上清から精製された抗体は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－４とした。

【0376】

また，実施例１２で得られた抗体番号３（ＩｇＧ４）発現株，及び抗体番号３－２（ＩｇＧ４）発現株についても上記と同様に培養して，その培養上清から，それぞれ精製されたヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を得た。これら２種の抗体は，実施例１５に記載のサルを用いた薬物動態解析に用いた。

【0377】

〔実施例１４〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定
実施例１３で得たヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性を，実施例７に記載の方法で測定した。表６にヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３～３－４（表中，Ｎｏ．３～３－４にそれぞれ対応）のヒトＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（Ｋ_Ｄ）を示す。

【0378】

【表6】

【0379】

表７にヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３～３－４（表中，抗体番号３～３－４にそれぞれ対応）のサルＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（Ｋ_Ｄ）を示す。

【0380】

【表7】

【0381】

ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３～３－４のヒトＴｆＲへの親和性の測定の結果，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３及び３－４抗体で，ヒトＴｆＲとの解離定数は１Ｘ１０^－１２Ｍ未満であった（表６）。また，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２及び３－３のヒトＴｆＲとの解離定数は，それぞれ２．３９Ｘ１０^－１１Ｍと２．０９Ｘ１０^－１１Ｍであった。一方，これら抗体に対応するヒト化前の抗ｈＴｆＲ抗体（抗体番号３）のヒトＴｆＲとの解離定数は，１Ｘ１０^－１２Ｍ未満であった（表３）。これらの結果は，抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲへの高い親和性が，抗体をヒト化する前後で維持されることを示すものである。

【0382】

次いで，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のサルＴｆＲへの親和性の測定の結果をみると，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３～３－４は，ヒト化前のこれら抗体に対応する抗ｈＴｆＲ抗体番号３のサルＴｆＲとの解離定数が１Ｘ１０^－１２Ｍ未満であったものが，ヒト化後は２．６０Ｘ１０^－１０Ｍ～１．９１Ｘ１０^－９Ｍと，サルＴｆＲへの親和性の低下が観察された。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３では，サルＴｆＲへの親和性の低下が観察されたものの，これらの結果は，抗ｈＴｆＲ抗体のサルＴｆＲへの高い親和性は，抗体をヒト化する前後で喪失することなく概ね維持されることを示すものである。

【0383】

〔実施例１５〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のサルを用いた薬物動態解析
ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）の４種の抗体を用いて，サルを用いた薬物動態解析を行った。なお，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３は重鎖がＩｇＧ１であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）はヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖を可変領域はそのままにしてＩｇＧ４としたものである。また，ヒト化抗ｈｆＲ抗体番号３－２は重鎖がＩｇＧ１であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）はヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２の重鎖を可変領域はそのままにしてＩｇＧ４としたものである。これら４種の抗体を，それぞれ，５．０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ雄性カニクイザルに単回静脈内投与し，投与前，投与後２分，３０分，２時間，４時間及び８時間後に末梢血を採取し，採血後に全身潅流を実施した。また，陰性対照として，ＨＥＲ２蛋白質に対するヒト化抗体であるトラスツズマブ（ハーセプチン^ＴＭ，中外製薬）を，同様にして一匹の個体に投与し，投与前，投与後２分，３０分，２時間，４時間及び８時間後に末梢血を採取し，採血後に全身潅流を実施した。潅流後，延髄を含む脳組織，脊髄組織及びその他の組織（肝臓，心臓，脾臓及び骨髄を含む）を摘出した。この脳組織，脊髄組織及びその他の組織を用いて，以下のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定及び免疫組織化学染色を行った。

【0384】

組織中及び末梢血中のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定は，概ね以下の手順で行った。なお，脳については採取した組織を，大脳皮質，小脳，海馬及び延髄に分けてからヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定を行った。採取した組織を，それぞれＰｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）を含むＲＩＰＡ Ｂｕｆｆｅｒ（和光純薬工業株式会社）でホモジネートし遠心して上清を回収した。末梢血については血清を分離した。Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ Ｋａｐｐａ Ｌｉｇｈｔ Ｃｈａｉｎ Ｇｏａｔ ＩｇＧ Ｂｉｏｔｉｎ（株式会社免疫生物研究所），Ｓｕｌｆｏ－ ｔａｇ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ （Ｈ＋Ｌ） ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｔｈｙｌ社）及び脳組織ホモジネートをＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）でブロッキングを実施したストレプトアビジンプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）に添加し，１時間振盪してプレートに固定した。次いで，各ウェルにＲｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を１５０μＬずつ添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００ ｒｅａｄｅｒを用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知の抗ｈＴｆＲ抗体の標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各検体の測定値を内挿することにより，各組織中及び末梢血中に含まれる抗体の量を算出した。濃度の測定は各サンプルにつき３回繰り返し行った。

【0385】

脳組織及び脊髄組織中のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を表８に示す。

【0386】

【表8】

【0387】

ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）の抗体ともに，大脳皮質，小脳，海馬，延髄及び脊髄での蓄積が認められた（表８）。その量は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３では，陰性対照のトラスツズマブ（ハーセプチン^ＴＭ）と比較して，大脳皮質で約８２倍，小脳で約６８倍，海馬で約９２倍，延髄で約５４倍，脊髄で約３．１倍であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２では，陰性対照のトラスツズマブと比較して，大脳皮質で約１２８倍，小脳で約８０倍，海馬で約１３６倍，延髄で約６３倍，脊髄で約３．１倍であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）では，陰性対照のトラスツズマブと比較して，大脳皮質で約７９倍，小脳で約６６倍，海馬で約１０６倍，延髄で約５４倍，脊髄で約３．１倍であり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）では，陰性対照のトラスツズマブと比較して，大脳皮質で約９３倍，小脳で約６３倍，海馬で約１１７倍，延髄で約６６倍，脊髄で約３．２倍であった（表９）。これらの結果は，これら４種のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が，血液脳関門を通過して脳組織に蓄積する性質を有することを示すものであり，脳組織内で機能させるべき薬剤をこれらの抗体と結合させることにより，その薬剤を効率良く脳組織に蓄積させることができること示すものである。

【0388】

【表9】

【0389】

次いで，肝臓，心臓，脾臓及び骨髄の各組織中のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を図４に示す。肝臓，及び脾臓では，４種類のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体及び陰性対照のトラスツズマブのいずれにおいても蓄積が認められたが，その量はヒト化抗ｈＴｆＲ抗体とトラスツズマブで同等であった。心臓では，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が陰性対照のトラスツズマブと比較して，蓄積量が多い傾向にあったが，その量は陰性対照の１．５倍～２．８倍程度に留まった。骨髄では，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が，陰性対照のトラスツズマブと比較して，顕著に蓄積量が多い傾向にあり，その量は陰性対照の３．５～１６倍であった。骨髄へのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の蓄積は，造血器官である骨髄ではＴｆＲの発現量が多く，ＴｆＲと結合することにより多くのヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が陰性対照と比較して蓄積したためと考えられる。これらのデータは，これら４種のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体が，中枢神経系である大脳，小脳，海馬及び延髄に特異的に蓄積する性質を有することを示すものであり，脳組織内で機能させるべき薬剤をこれらの抗体と結合させることにより，その薬剤を効率良く脳組織に蓄積させることができること示すものである。

【0390】

次いで，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の血中動態の測定結果を表９－２に示す。４種類のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体は，陰性対照のトラスツズマブと同様に，投与後８時間においても血中濃度が６０μｇ／ｍＬ以上の高値を示し，血中で安定であることが示された（表９－２）。

【0391】

【表9-2】

【0392】

脳組織中のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色は，実施例８に記載の方法で行った。但し，このとき，Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ－ｈｅａｖｙ ａｎｄ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）に替えてＨｕｍａｎ ＩｇＧ－ｈｅａｖｙ ａｎｄ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いた。

【0393】

図５に大脳皮質のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与したサルの大脳皮質では，血管及び神経様細胞の特異的な染色が確認された（それぞれ図５ｂ～ｅ）。特に，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２を投与したサルの大脳皮質（図５ｃ）では，脳血管外の脳実質領域にも広範に特異的な染色が確認された。なお，コントロールとしておいたハーセプチンを投与したサルの大脳皮質では染色は認められず，図５ｂ～ｅで観察された組織染色が，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に特異的なものであることが示された（図５ａ）。

【0394】

図６に海馬のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与したサルの海馬では，血管及び神経様細胞の特異的な染色が確認された（それぞれ図６ｂ～ｅ）。なお，コントロールとしておいたハーセプチンを投与したサルの海馬では染色は認められず，図６ｂ～ｅで観察された組織染色が，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に特異的なものであることが示された（図６ａ）。

【0395】

図７に小脳のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与したサルの小脳では，血管及びプルキンエ細胞の特異的な染色が確認された（それぞれ図７ｂ～ｅ）。なお，コントロールとしておいたハーセプチンを投与したサルの小脳では染色は認められず，図７ｂ～ｅで観察された組織染色が，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に特異的なものであることが示された（図７ａ）。

【0396】

図８に延髄のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の免疫組織化学染色の結果を示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３（ＩｇＧ４）及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３－２（ＩｇＧ４）を投与したサルの延髄では，血管及び神経様細胞の特異的な染色が確認された（それぞれ図８ｂ～ｅ）。なお，コントロールとしておいたハーセプチンを投与したサルの延髄では染色は認められず，図８ｂ～ｅで観察された組織染色が，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体に特異的なものであることが示された（図８ａ）。

【0397】

上記実施例８の大脳及び小脳の免疫組織化学染色の結果からは，ヒト化前のマウス抗体である抗ｈＴｆＲ抗体番号３は，脳血管内皮表面に存在するｈＴｆＲへ結合することができ，且つ，ｈＴｆＲへの結合後，血液脳関門を通過して脳実質内へ移行し，さらに海馬においては脳実質内から神経様細胞にまで，小脳においてはプルキンエ細胞にまで，取り込まれることを示すものであった。

【0398】

実施例１５の大脳，海馬，小脳及び延髄の免疫組織化学染色の結果からは，実験に供した抗ｈＴｆＲ抗体番号３をヒト化して得られた４種類のヒト化抗ｈＴｆＲ抗体は，脳血管内皮表面に存在するｈＴｆＲへ結合し，且つ，ｈＴｆＲへの結合後，血液脳関門を通過して脳実質内へ移行し，さらに大脳皮質においては神経様細胞にまで，海馬においては脳実質内から神経様細胞にまで，小脳においてはプルキンエ細胞にまで，延髄においては神経様細胞に取り込まれることがわかった。

【0399】

〔実施例１６〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖への変異導入
配列番号３７で示されるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域において，ＣＤＲ１を配列番号１２で示されるものとしたときの，当該ＣＤＲ１のアミノ酸配列を１個置換するとともに，フレームワーク領域３のアミノ酸配列を１個置換するヒト化抗体の重鎖を作成した。この新たな抗体の重鎖は，ＣＤＲ１に配列番号６２又は６３のアミノ酸配列を含み，フレームワーク領域３に配列番号６４のアミノ酸配列を含むものであり，配列番号３７で示されるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖のアミノ酸配列を構成するアミノ酸を２個置換したものである。この新たな抗体の重鎖（ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖）は，配列番号６６で示されるアミノ酸配列を含み，そのアミノ酸配列の可変領域は配列番号６５で示されるアミノ酸配列を含んでなる。

【0400】

表１０にヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖における配列番号１２のＣＤＲ１とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖における配列番号６２のＣＤＲ１とのアラインメントを示した。当該アラインメントにおいて，Ｎ末端側から５番目のアミノ酸が，トレオニンからメチオニンに置換されている。

【0401】

表１１には，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖におけるフレームワーク領域３（配列番号７３）とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖におけるフレームワーク領域３（配列番号６４）のアミノ酸配列のアラインメントを示した。当該アラインメントにおいて，Ｎ末端側から１７番目のアミノ酸が，トリプトファンからロイシンに置換されている。

【0402】

【表10】

【0403】

【表11】

【0404】

〔実施例１７〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎ発現用細胞の構築
配列番号６６で示されるアミノ酸配列からなる抗体の重鎖をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片（配列番号６７）を人工的に合成した。このＤＮＡ断片の５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列とリーダーペプチドをコードする配列とを，３’側にはＮｏｔＩ配列を導入した。こうして合成したＤＮＡを実施例１１に記載の方法でｐＥ－ｎｅｏベクターに組み込み，得られたベクターを，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖発現用ベクターのｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）Ｎとした。このｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ３）Ｎと実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）とを用いて，実施例１２に記載の方法でＣＨＯ細胞を形質転換させて，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎ発現株を得た。

【0405】

〔実施例１８〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの精製
実施例１７で得られたヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎ発現株を用いて，実施例１３に記載の方法で，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの精製品を得た。なお，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎは，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖のアミノ酸配列中，表１０及び表１１で示される２箇所のアミノ酸を置換したものである。一方，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖のアミノ酸配列は同一である。

【0406】

〔実施例１９〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の比較
実施例１３で得たヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３と実施例１７で得たヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのヒトＴｆＲ及びヒトＴｆＲへの親和性を，実施例７に記載の方法で測定した。表１２にそれぞれの抗体のヒトＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（Ｋ_Ｄ）を示す。なお，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３のヒトＴｆＲへの親和性を示す測定値は，表６に示されたものと異なるが，実験誤差である。

【0407】

【表12】

【0408】

実施例１３で得たヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３と実施例１７で得たヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性を，実施例７に記載の方法で測定した。表１３にそれぞれの抗体のサルＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（Ｋ_Ｄ）を示す。なお，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３のサルＴｆＲへの親和性を示す測定値は，表７に示されたものと異なるが，実験誤差である。

【0409】

【表13】

【0410】

ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎ及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３のサルＴｆＲとのＫ_Ｄ値を比較すると，前者が５．０７Ｘ１０^－１１Ｍであり後者が１．３２Ｘ１０^－９Ｍであり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮとサルＴｆＲとのＫ_Ｄ値は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３のそれと比較して，約３０分の１であった。一方，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎ及びヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３のヒトＴｆＲとのＫｄ値を比較すると，いずれも１Ｘ１０^－１２Ｍ未満であり，いずれの抗体もヒトＴｆＲに高い親和性を有するものであった。また，いずれの抗体もサルＴｆＲへの親和性よりもヒトＴｆＲに高い親和性を有する。

【0411】

ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体を薬剤として開発する際に実施する非臨床試験の一環として，サルを用いた薬理試験を実施する場合が多い。ここで，サルを用いた薬理試験の結果は，ヒトを用いた臨床試験を実施する妥当性を判断するために用いられるので，サル体内での挙動が，ヒトに投与したときの挙動とより近似するものであることが好ましい。上記の結果のとおり，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎは，サルＴｆＲへの親和性がヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の約３０倍の高値を示すことから，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎのサル体内での挙動は，ヒトに投与したときの挙動とより近似するといえる。従って，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎを用いることにより，サルを用いた試験で，よりヒトに投与したときの挙動を反映した結果が得られる。従って，サルを用いた試験により，ヒトを用いた臨床試験を実施する際の判断材料として，より有益な結果が得られることになる。

【0412】

〔実施例２０〕ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎのサルを用いた脳組織への移行性の比較
実施例１３で得たヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３と実施例１７で得たヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎを，それぞれ，５．０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ雄性カニクイザルに単回静脈内投与し，投与８時間後に全身潅流を実施した。潅流後，延髄を含む脳組織及び脊髄組織を摘出した。脳組織については，摘出後に大脳皮質，小脳，海馬及び延髄に分けた。

【0413】

各組織に含まれるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定は，実施例１５に記載の測定法に準じて行った。

【0414】

脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を表１４に示す。ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の大脳，小脳，海馬における濃度を比較すると，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの濃度は，大脳においては約１．４２倍，小脳においては約１．５６倍，海馬においては約１．２９倍と，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３よりも高い値を示した。延髄においては両者の濃度はほぼ同等だった。頸椎においても，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの濃度は，約１．４７倍と，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３よりも高い値を示した。これらの結果は，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎがヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３と比較して，より効率よく血液脳関門を通過して大脳，小脳，海馬等の脳組織に蓄積する性質を有することを示すものである。すなわち，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎは，脳組織内で機能させるべき薬剤をこれらの抗体と結合させることにより，その薬剤を効率良く脳組織に蓄積させることができる性質を有することを示すものである。

【0415】

【表14】

【0416】

〔実施例２０－２〕ｈＦｃ－ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体発現用細胞の作製
配列番号７１で示されるアミノ酸配列からなるヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を導入したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体３ＮのＦａｂ重鎖のアミノ酸配列をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片（配列番号７２）を人工的に合成した。このＤＮＡ断片の５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列とリーダーペプチドをコードする配列とを，３’側にはＮｏｔＩ配列を導入する。こうして合成したＤＮＡを実施例１１に記載の方法でｐＥ－ｎｅｏベクターに組み込み，得られたベクターをｐＥ－ｎｅｏ（Ｆｃ－Ｆａｂ ＨＣ（３Ｎ））とした。このｐＥ－ｎｅｏ（Ｆｃ－Ｆａｂ ＨＣ（３Ｎ））と実施例１１で構築した軽鎖発現用ベクターｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）とを用いて，実施例１２に記載の方法でＣＨＯ細胞を形質転換させて，Ｆｃ－Ｆａｂ（３Ｎ）発現株を得た。

【0417】

〔実施例２０－３〕ｈＦｃ－ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の作製
Ｆｃ－Ｆａｂ（３Ｎ）発現株を用いて，実施例１３に記載の方法で，Ｆｃ－Ｆａｂ（３Ｎ）の精製品を得た。

【0418】

〔実施例２０－４〕ｈＦｃ－ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の比較
実施例２０－３で得られたＦｃ－Ｆａｂ（３Ｎ）の精製品のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性を，実施例７に記載の方法で測定した。結果を表１４－２に示す。Ｆｃ－Ｆａｂ（３Ｎ）はヒトＴｆＲに高い親和性を示した（Ｋ_Ｄ＜１．０Ｘ１０^－１２）。この結果は，Ｆｃ－Ｆａｂ（３Ｎ）は，脳組織内で機能させるべき薬剤をこれらの抗体と結合させることにより，その薬剤を効率良く脳組織に蓄積させることができる性質を有することを示すものである。

【0419】

【表14-2】

【0420】

〔実施例２０－５〕ｈＦｃ－ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のサルを用いた脳組織への移行性の測定
実施例２０－３で得られたＦｃ－Ｆａｂ（３Ｎ）を，５．０ｍｇ／ｋｇの用量で雄性カニクイザルに単回静脈内投与し，投与８時間後に全身潅流を実施した。潅流後，延髄を含む脳組織及び脊髄組織を摘出した。脳組織については，摘出後に大脳皮質，小脳，海馬及び延髄に分けた。

【0421】

各組織に含まれるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定は，実施例１５に記載の測定法に準じて行った。

【0422】

脳組織中の抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を表１４－３に示す。Ｆｃ－Ｆａｂ（３Ｎ）の大脳，小脳，海馬における濃度は，それぞれ，０．８０μｇ／ｇ湿重量，０．８０μｇ／ｇ湿重量，及び１．０５μｇ／ｇであった。また，延髄及び脊髄における濃度は，それぞれ，０．６８μｇ／ｇ湿重量，０．６７μｇ／ｇ湿重量であった。これらの結果は，Ｆａｂであるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のＮ末端側にＦｃ領域を結合させた場合であっても，抗ｈＴｆＲ抗体がＢＢＢを通過できることを示すものである。Ｆａｂに所望の物質（蛋白質，生理活性物質）を結合させた結合体が，生体内に投与したときに不安定である場合に，ＦａｂのＮ末端側にＦｃ領域に結合させることにより，ＢＢＢを通過する特性を維持させつつ，かかる結合体を生体内で安定化，例えば，当該結合体の血中半減期を増加，させることができる。

【0423】

【表14-3】

【0424】

〔実施例２１〕ｈＩ２Ｓ－ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体融合蛋白質発現用細胞の作製
配列番号３７で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖のＣ末端側にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介して配列番号５０で示されるアミノ酸配列を有するｈＩ２Ｓを結合させた蛋白質をコードする遺伝子を含む，配列番号５２で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号５１で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介してｈＩ２Ｓが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－３）を構築した。

【0425】

また，配列番号６６で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖のＣ末端側にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介して配列番号５０で示されるアミノ酸配列を有するｈＩ２Ｓを結合させた蛋白質をコードする遺伝子を含む，配列番号５４で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号５３で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介してｈＩ２Ｓが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－３Ｎ）を構築した。

【0426】

ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｋ１：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）を，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－３）と実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株３とした。この細胞株が発現するｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３とした。

【0427】

また，ＣＨＯ細胞を，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－Ｉ２Ｓ－３Ｎ）とｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株３Ｎとした。この細胞株が発現するｈＩ２Ｓとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎとした。

【0428】

〔実施例２２〕Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の製造
Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を，以下の方法で製造した。実施例２１で得たｈＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株３及び３Ｎを，それぞれ細胞濃度が約２Ｘ１０^５個／ｍＬとなるように，ＣＤ ＯｐｔｉＣＨＯ^ＴＭ培地で希釈し，１Ｌの三角フラスコに２００ｍＬの細胞懸濁液を加え，３７℃で，５％ＣＯ_２と９５％空気からなる湿潤環境で約７０ｒｐｍの撹拌速度で６～７日間培養した。培養上清を遠心操作により回収し，０．２２μｍフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過して，培養上清とした。回収した培養上清に，カラム体積の５倍容の１５０ｍＬ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加し，カラム体積の３倍容の１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）で予め平衡化しておいたＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（カラム体積：１ｍＬ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）に負荷した。次いで，カラム体積の５倍容の同緩衝液を供給してカラムを洗浄した後，１５０ｍＭ ＮａＣｌを含むカラム体積の４倍容の５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で，吸着したＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を溶出させた。このＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体を含む溶出液のｐＨを１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を添加してｐＨ７．０に調整し，次いでアミコンウルトラ３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いてＰＢＳにバッファー交換した。こうして得られものをＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３及びＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎの精製品とした。

【0429】

〔実施例２３〕Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定
実施例２２で得たＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性を，実施例７に記載の方法に準じて測定した。表１５にＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３及びＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３ＮのヒトＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（Ｋ_Ｄ）を示す。また，表１６にＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３及びＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３ＮのサルＴｆＲに対する会合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）の測定結果，及び解離定数（Ｋ_Ｄ）を示す。

【0430】

Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎは，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体と比較して，約５倍のヒトＴｆＲに対する親和性を示した（表１５）。また，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎは，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体と比較して，非常に高いサルＴｆＲに対する親和性を示した（表１６）。Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎは，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３よりも，ヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲに対し高い親和性を示した。

【0431】

【表15】

【0432】

【表16】

【0433】

〔実施例２４〕Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３とＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎのサルを用いた脳組織への移行性の比較
実施例２２で得たＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３及びＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎを，それぞれ，５．０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ雄性カニクイザルに単回静脈内投与し，投与８時間後に全身潅流を実施した。潅流後，延髄を含む脳組織及び脊髄組織を摘出した。脳組織については，摘出後に大脳皮質，小脳，海馬及び延髄に分けた。

【0434】

各組織に含まれるＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定は，概ね実施例２０に記載の手順で行った。脳組織中のＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体の濃度測定の結果を表１７に示す。Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３ＮとＩ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３の大脳，小脳，海馬，延髄，及び頸椎における濃度を比較すると，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎの濃度は，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３の濃度と比較して，大脳においては約２．１２倍，小脳においては約１．９７倍，海馬においては約２．４１倍，延髄においては１．９４倍，及び頸椎においては１．６３倍と，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３よりも高い値を示した。この結果は，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎが，Ｉ２Ｓ－抗ｈＴｆＲ抗体３と比較して，より効率よく血液脳関門を通過できることを示すものである。

【0435】

【表17】

【0436】

〔実施例２５〕ｈＧＡＡ－ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体融合蛋白質発現用細胞の作製
配列番号６８で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）のＣ末端側にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介して配列番号５５で示されるアミノ酸配列を有するｈＧＡＡを結合させた蛋白質をコードする遺伝子を含む，配列番号５９で示される塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成した。このＤＮＡ断片は，配列番号５８で示されるアミノ酸配列を有するヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）にリンカー配列（Ｇｌｙ Ｓｅｒ）を介してｈＧＡＡが結合した蛋白質をコードする。また，このＤＮＡ断片は，５’側には，５’端から順にＭｌｕＩ配列と，分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする配列とを有し，３’側にはＮｏｔＩ配列を有する。このＤＮＡ断片をＭｌｕＩとＮｏｔＩで消化し，ｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ＧＡＡ－３Ｎ（ＩｇＧ４））を構築した。

【0437】

ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｋ１：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）を，ｐＥ－ｎｅｏ（ＨＣ－ＧＡＡ－３Ｎ（ＩｇＧ４））と実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で形質転換し，ｈＧＡＡとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この細胞株を，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株３Ｎ（ＩｇＧ４）とした。この細胞株が発現するｈＧＡＡとヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質をＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）とした。

【0438】

〔実施例２６〕ＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の製造
ＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）は，実施例２５で得たｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体発現株３Ｎ（ＩｇＧ４）を用いて，概ね実施例２２に記載の方法で製造した。

【0439】

〔実施例２７〕ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定
実施例２６で得たｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性を，実施例２３に記載の方法に準じて測定した。また，下記の実施例３１で作製したＦａｂ ＧＳ－ＧＡＡのヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性の測定結果についてもここに記載する。

【0440】

ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）は，ヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲの何れにも，非常に高い親和性を示した。結果を表１７－２に示す。Ｆａｂ ＧＳ－ＧＡＡもヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲの何れにも，高い親和性を示すものの，その親和性はｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）と比較して低かった。

【0441】

【表17-2】

【0442】

〔実施例２８〕ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）のサルを用いた脳組織への移行性評価
実施例２６で得たｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の脳組織への移行性は，実施例２４に記載の方法に準じて評価することができる。具体的には，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）を，５．０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの用量で雄性カニクイザルに単回静脈内投与した。また，対象薬として，ポンペ病治療薬として市販されているｈＧＡＡを，５．０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇの用量で雄性カニクイザルに単回静脈内投与した。また，２０ｍｇ／ｋｇの用量のｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）は３匹のサルに投与し，その他のものは１匹のサルに投与した。２０ｍｇ／ｋｇの用量のｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）を投与したサルについては，投与４時間，８時間，及び２４時間後に，それぞれ１匹ずつ生理食塩液（大塚製薬工場社）を用いて全身潅流を実施した。その他のサルについては，投与８時間後に全身潅流を実施した。

【0443】

潅流後，延髄を含む脳組織，脊髄組織，及び骨格筋組織を摘出した。脳組織については，摘出後に大脳皮質，小脳，海馬，延髄，及び橋に分けた。また，骨格筋組織については，大腿直筋，長趾伸筋，ヒラメ筋，上腕三頭筋，大腰筋，横隔膜，及び舌筋を摘出した。また，薬剤を非投与の１匹の雄性カニクイザルを，生理食塩液（大塚製薬工場社）を用いて全身潅流し，大脳皮質及び大腿直筋を摘出した。摘出した各組織をＰｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（シグマ社）を含むＴ－ＰＥＲ （Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）でホモジネートし，遠心後の上清を回収した。調製した上清を用いて，以下のＥＣＬ法によるｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）及びｈＧＡＡの濃度測定及び免疫組織化学染色を実施した。

【0444】

ＥＣＬ法による蛋白質の濃度測定：
ウサギ抗ｈＧＡＡポリクロ―ナル抗体をＭＳＤ ＧＯＬＤ Ｓｕｌｆｏ－ＴＡＧ ＮＨＳ Ｅｓｔｅｒ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ社）を用いてＳＵＬＦＯ標識し，ＳＵＬＦＯ標識抗ｈＧＡＡ抗体を調製した。また，ウサギ抗ｈＧＡＡポリクロ―ナル抗体をＥＺ－Ｌｉｎｋ ＮＨＳ－ＰＥＧ_４－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いてＢｉｏｔｉｎ標識し，Ｂｉｏｔｉｎ標識抗ｈＧＡＡ抗体を調製した。ＳＵＬＦＯ標識抗ｈＧＡＡ抗体とＢｉｏｔｉｎ標識抗ｈＧＡＡ抗体とを等量混合した溶液を調製し，これに，上記で得られた上清を添加して，室温で１時間インキュベートし，これを抗体反応試料とした。ストレプトアビジンでコートされたプレートであるＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｇｏｌｄ Ｐｌａｔｅ ９６ｗｅｌｌ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）の各ウェルに１％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液を添加して１時間静置し，プレートをブロッキングした。

【0445】

ブロッキング後のプレートの各ウェルを，２００μＬのＰＢＳ－Ｔ（シグマ社）で洗浄した後，各ウェルに抗体反応試料を添加し，室温で１時間インキュベートした。インキュベート後，プレートの各ウェルをＰＢＳ－Ｔで洗浄し，次いで，４Ｘ Ｒｅａｄ ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）と注射用水（大塚製薬工場社）の等量混合液を添加し，Ｓｅｃｔｏｒ^ＴＭ Ｉｍａｇｅｒ ６０００（Ｍｅｓｏ ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を用いて各ウェルからの発光量を測定した。濃度既知のｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）又はｈＧＡＡの標準試料の測定値から検量線を作成し，これに各試料の測定値を内挿することによりｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）及びｈＧＡＡを定量し，脳のグラム重量（ｇ湿重量）当たりに含まれる量を算出した。

【0446】

ＥＣＬ法による濃度測定結果を表１８に示す。まず，脳組織の結果について見る。ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）を投与したサルでは，投与８時間後の大脳皮質におけるｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の濃度が，５ｍｇ／ｋｇと２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与したもので，それぞれ０．７４０μｇ／ｇ湿重量，１．４２μｇ／ｇ湿重量と濃度依存的に増加した。小脳，海馬，延髄，及び橋においても同様の結果であった。一方，ｈＧＡＡを投与したサルでは，投与８時間後の大脳皮質におけるｈＧＡＡの濃度が，５ｍｇ／ｋｇと２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与したもので，それぞれ０．４１４μｇ／ｇ湿重量，０．４３５μｇ／ｇ湿重量とほぼ同じ値であった。小脳，海馬，延髄，及び橋においても同様の結果であった。薬剤を非投与のサルのｈＧＡＡを定量した大脳皮質における内在性ＧＡＡの値が０．４２５μｇ／ｇ湿重量であることから，静脈内投与したｈＧＡＡは，ほとんど脳内に取り込まれないことがわかる。一方，静脈内投与したｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）は，ＢＢＢを通過して脳内に取り込まれることがわかる。

【0447】

次いで，骨格筋組織の結果について見る。５ｍｇ／ｋｇの用量で，それぞれｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）とｈＧＡＡを投与したサルでは，投与８時間後の大腿直筋におけるｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）とｈＧＡＡの濃度が，前者は０．３１１μｇ／ｇ湿重量であり後者は０．２５１μｇ／ｇ湿重量と，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）がｈＧＡＡと比較して約１．２３倍の定量値を示した。２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与したものについても同様の結果であった。また，長趾伸筋，ヒラメ筋，上腕三頭筋，大腰筋，横隔膜，及び舌筋についても同様の結果であった。すなわち，静脈内投与したｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）は，静脈内投与したｈＧＡＡと比較して，骨格筋組織に取り込まれる量が多いことがわかる。

【0448】

【表18】

【0449】

免疫組織化学染色：
脳組織中のｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）及びｈＧＡＡの免疫組織化学染色は，概ね以下の手順で行った。ティシューテッククライオ３ＤＭ（サクラファインテック株式会社）を用いて，上記で得られた脳組織を－８０℃にまで急速冷凍し，この凍結ブロックをＬＥＩＣＡ ＣＭ１８６０ ＵＶクリオスタット（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｎｕｓｓｌｏｃｈ社）を用いて４μｍに薄切後，ＭＡＳコートスライドガラス（松浪ガラス株式会社）に貼り付けた。組織薄片に４％パラホルムアルデヒド（和光純薬工業株式会社）を４℃で５分間反応させ，組織薄片をスライドガラス上に固定した。続いて，組織薄片に０．３％過酸化水素水を含むメタノール溶液（和光純薬工業株式会社）を３０分間反応させ，内因性ペルオキシダーゼを失活させた。次いでスライドガラスをＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ ｉｎ ＰＢＳに３０分間室温で反応させブロッキングした。次いで，組織薄片に一次抗体としてウサギ抗ｈＧＡＡポリクロ―ナル抗体を１６時間，４℃で反応させた。次いで，組織薄片をＣＳＡＩＩ Ｒａｂｂｉｔ Ｌｉｎｋ（Ａｇｉｌｅｎｔ社），及びＣＳＡＩＩ Ｂｉｏｔｉｎ－ｆｒｅｅ Ｔｙｒａｍｉｄｅ Ｓｉｇｎａｌ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍキット（Ａｇｉｌｅｎｔ社）で処理した。次いで，組織薄片にＡｎｔｉ－Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ＨＲＰを１５分間，室温を反応させた。次いで，ＤＡＢ基質（３，３’－ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）で発色させ，マイヤー・ヘマトキシリン（Ｍｅｒｃｋ社）で対比染色を行い，脱水，透徹した後に封入し，光学顕微鏡で観察した。なお，免疫組織化学染色は，２０ｍｇ／ｋｇの用量でｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）を投与したものと，２０ｍｇ／ｋｇの用量でｈＧＡＡを投与したサルの小脳についてのみ実施した。従って，投与後経過時間はいずれも８時間である。

【0450】

図９に小脳のｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）及びｈＧＡＡの免疫組織化学染色結果を示す。ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）を投与したサルの小脳では，血管及びプルキンエ細胞の特異的な染色が確認された（図９ａ）。一方，ｈＧＡＡを投与したサルの小脳では，かかる染色は認められなかった（図９ｂ）。これらの結果は，通常では血液脳関門を通過することのないｈＧＧＡを，抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）と融合させることにより，血液脳関門を通過させて，小脳においてはプルキンエ細胞にまで，取り込ませることができることを示すものである。

【0451】

〔実施例２９〕ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）のマウスを用いた薬効評価－グリコーゲンの濃度の定量（１）
ポンペ病の病態モデルである酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）遺伝子を破壊したノックアウトマウスを元にして，実施例７－２に記載の方法でマウスＴｆＲの細胞外領域をコードする遺伝子をヒトＴｆＲ受容体遺伝子の細胞外領域をコードする遺伝子に置換し，ＧＡＡ遺伝子をホモで欠損し且つキメラＴｆＲ遺伝子をヘテロで有するマウス（ＧＡＡ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウス）を作製した。マウスを７群に分けて，表１９に示す用法，用量で，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）又はｈＧＡＡを静脈内投与した。なお，薬剤非投与の正常マウスを正常対照（第１群），薬剤非投与のＧＡＡ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスを病態対照（第２群）とした。各群ともマウスは５匹とした。また，マウスは雄性及び雌性の９～１４週齢（投与開始時）を用いた。

【0452】

【表19】

【0453】

第２回目と第３回目の試験物質投与時には，投与１０～２０分前に，ジフェンヒドラミンを１０ｍＬ／ｋｇの用量でマウスに投与した。これは試験物質の投与により実験動物にアナフィラキシーショック等の免疫反応が生じることを防止するための措置である。最後の投与から１３日後に，イソフルラン麻酔下，マウスを断頭し右脳及び脊髄頚部を速やかに摘出した後，素早く液体窒素に浸漬し急速凍結した。凍結後，各組織の湿重量を測定した。心臓，横隔膜，肝臓，脾臓，大腿四頭筋，ヒラメ筋，前脛骨筋，長趾伸筋，腓腹筋（採取した骨格筋：右脚）については，放血により十分に血液を覗いた後，組織を採取し，生理食塩液で洗浄後，各組織の湿重量を測定した。測定後の臓器は１．５ｍＬチューブに封入し，液体窒素で瞬間凍結した。

【0454】

各組織の湿重量に対して２０倍量の注射用水を添加し，ビーズ破砕機を用いて組織をホモジネートした。組織のホモジネートを遠心チューブに移し，１００℃で５分間加熱処理を行い，氷上に静置した。続いて，１３０００ｒｐｍ，４℃で５分間遠心分離し，上清を回収した。上清は－７０℃以下の温度で凍結保存した。

【0455】

上記の上清中に含まれるグリコーゲンの濃度を，Ｇｌｙｃｏｇｅｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ｖｉｏｖｉｓｉｏｎ社）によって測定した。測定結果を図１０及び図１１に示す。図１０は，右脳，脊髄頚部，心臓，横隔膜，肝臓及び脾臓におけるグリコーゲンの濃度を示す（それぞれ，図１０ａ～ｆ）。また，図１１は，大腿四頭筋，ヒラメ筋，前脛骨筋，長趾伸筋，腓腹筋におけるグリコーゲンの濃度を示す（それぞれ，図１１ａ～ｅ）。但し，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群は，最終投与後５日後に死亡したので，これを除外した。

【0456】

以下に結果の図１０及び図１１の結果を考察する。
脳：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，並びにｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の脳組織中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．０８１５，３．０８，２．３６，２．０７，１．００，０．８９１及び０．５９２ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１０（ａ））。ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の投与量が５．０ｍｇ／ｋｇ以上の群において，病態対照群及び２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。また，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）によるグリコーゲンの減少は用量依存性を示した。

【0457】

脊髄頚部：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の頸髄組織中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．０４５９，３．１０，２．６８，２．２６，１．７７，１．０６及び０．７９５ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１０（ｂ））。ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の全てにおいて，病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。また，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の投与量が５．０ｍｇ／ｋｇ以上の群において，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群と比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。また，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）によるグリコーゲンの減少は用量依存性を示した。

【0458】

心臓：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の心臓中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．０８１６，３２．４，４．５４，１２．３，３．４５，１．１０及び０．２０５ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１０（ｃ））。ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の全てにおいて，病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群と比較すると，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与量で有意な減少を示した。

【0459】

横隔膜：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の横隔膜組織中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．０８２４，１４．１，６．９６，１２．４，５．５７，２．６８及び０．５６４ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１０（ｄ））。ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の投与量が５．０ｍｇ／ｋｇ以上の群において，病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群と比較すると，１０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与量で有意な減少を示した。

【0460】

肝臓：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の肝臓中のグリコーゲン濃度は，それぞれ１．１６，２２．５，２．６５，８．８８，２．９５，３．０１及び１．４６ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１０（ｅ））。ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の全てにおいて，病態対照群に比較して，２０ｍｇ／ｋｇ投与群のｈＧＡＡ投与群と同等の有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。

【0461】

脾臓：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の脾臓中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．０２９５，３．１５，０．１８２，０．３６８，０．１６５，０．１２２及び０．０９９０ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１０（ｆ））。ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の全てにおいて，病態対照群に比較して，２０ｍｇ／ｋｇ投与群のｈＧＡＡ投与群と同等の有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。

【0462】

大腿四頭筋：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の大腿四頭筋組織中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．０５２９，８．６６，７．４１，６．４０，２．６８，１．７１及び０．２８２ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１１（ａ））。ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の投与量が５．０ｍｇ／ｋｇ以上の群において，病態対照群及び２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群に比較して，有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。なお，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群は病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少は示さなかった。

【0463】

腓腹筋：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の腓腹筋組織中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．１７３，７．６８，５．０９，５．２３，２．４０，１．５８及び０．２２１ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１１（ｂ））。ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の投与量が５．０ｍｇ／ｋｇ以上の群において，病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。なお，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群は病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少は示さなかった。

【0464】

ヒラメ筋：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群のヒラメ筋組織中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．１１６，１２．０８，２．２３３，７．２０，２．７４，１．０７及び０．３７８ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１１（ｃ））。ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の全てにおいて，病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少を示した。また，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の投与量が５．０ｍｇ／ｋｇ以上の群において，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群と同等の有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。

【0465】

前脛骨筋：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の前脛骨筋組織中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．０４１９，９．６８，８．２３，４．１３，２．５６，０．８９５及び０．２７７ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１１（ｄ））。ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の全てにおいて，病態対照群及び２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。なお，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群は病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少は示さなかった。

【0466】

長趾伸筋：
正常対照群，病態対照群，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）の２．５，５．０，１０及び２０ｍｇ／ｋｇ投与群の長趾伸筋組織中のグリコーゲン濃度は，それぞれ０．０９５０，１０．４，９．１１，４．７９，２．５９，１．３４及び０．１８８ｍｇ／ｇ湿重量であった（図１１（ｅ））。ｈＧＡＡ－抗ＨＴＦＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の全てにおいて，病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。また，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群の投与量が５．０ｍｇ／ｋｇ以上の群において，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群と比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少が認められた。なお，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群は病態対照群に比較して有意な組織中のグリコーゲンの減少は示さなかった。

【0467】

〔実施例３０〕ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）のマウスを用いた薬効評価－病理組織学的評価（２）
実施例２９で採取した左脳，脊髄頚部，大腿四頭筋，ヒラメ筋，長趾伸筋を，十分量の１０％中性緩衝ホルマリン液に浸漬した。約２４時間後に１０％中性緩衝ホルマリン液を交換した。組織採取日から３日後に，８０％エタノールに浸漬し，４８時間ディレイタイマーを設定して自動固定包埋装置（サクラロータリー）によりエタノールからトルエンに置換し，最終的にパラフィンに浸漬後，包埋した。これをＰＡＳ染色及びＨＥ染色に供した。

【0468】

以下にＰＡＳ染色の結果を考察する。
大脳皮質：
細胞内のＰＡＳ染色性は，病態対照群及び２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群では全例が中等度であったが，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）２．５～２０ｍｇ／ｋｇ投与群では染色性の低下がみられた。血管のＰＡＳ染色性については，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群で染色性の低下がみられた。

【0469】

海馬・歯状回，及び基底核：
病態対照群と比較して，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）２０ｍｇ／ｋｇ投与群では，細胞内及び血管のＰＡＳ染色性の低下がみられた。基底核では，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）２．５ｍｇ／ｋｇ投与群及びｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）５．０ｍｇ／ｋｇ投与群でも，ＰＡＳ染色性の低下がみられた。

【0470】

間脳（視床・視床下部）：
病態対照群と比較して，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）２．５～２０ｍｇ／ｋｇ投与群でＰＡＳ染色性の低下がみられた。

【0471】

中脳～橋：
ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）５．０～２０ｍｇ／ｋｇ投与群でＰＡＳ染色性の低下がみられた。

【0472】

延髄：
病態対照群と比較して，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群でＰＡＳ染色性の低下がみられた。

【0473】

小脳：
プルキンエ細胞層・顆粒層では，病態対照群と比較して，２．５～２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群では，プルキンエ細胞周囲の細胞内のＰＡＳ染色性の低下傾向がみられた。白質では，２．５ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群でＰＡＳ染色性の低下傾向がみられた。

【0474】

大腿四頭筋：
病態対照群と比較して，５．０ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群で，ＰＡＳ染色性の低下傾向がみられ，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）では，染色性の著しい減少が認められた。

【0475】

ヒラメ筋：
病態対照群と比較して，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，及び１０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群でＰＡＳ染色性低下がみられ，さらに，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群では，染色性の著しい減少が認められた。

【0476】

次いで，以下にＨＥ染色の結果を考察する。
大脳皮質：
大脳皮質：病態対照群と比較して，５．０～２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群では細胞腫大の軽減化傾向がみられた。大脳白質（脳梁，海馬采，前交連）及び脳室：病態対照群と比較して，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，５．０～２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群で白質の空胞の減少が認められた。
延髄病態対照群と比較して，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群のみで細胞腫大の軽減化傾向がみられた。

【0477】

小脳：
白質の細胞腫大について，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群で軽減化傾向がみられた。

【0478】

大腿四頭筋：
病態対照群と比較して，１０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群で筋線維の空胞・空隙形成の軽減化傾向がみられ，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群では，さらなる軽減化が認められた。

【0479】

ヒラメ筋：
病態対照群と比較して，２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ投与群，５．０～１０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群で筋線維の空胞・空隙形成の軽減化がみられ，さらに２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群では同所見は殆どみられなかった。

【0480】

長趾伸筋：
病態対照群と比較して，５．０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群で筋線維の空胞・空隙形成の軽減化がみられ，１０～２０ｍｇ／ｋｇのｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）投与群では，さらなる軽減化が認められた。

【0481】

以上のｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）のマウスを用いた薬効評価の結果は，ｈＧＡＡ－抗ｈＴｆＲ抗体３Ｎ（ＩｇＧ４）が５ｍｇ／ｋｇ以上の用量で投与することにより，市販のｈＧＡＡを２０ｍｇ／ｋｇ投与の用量で投与した場合よりも，病理組織学的にもポンペ病の治療薬として効果的であることを示すものであり，その効果は，中枢神経系及び骨格筋組織において極めて顕著であることを示すものである。

【0482】

〔実施例３１〕Ｆａｂ抗ｈＴｆＲ抗体３ＮとｈＧＡＡの融合蛋白質（Ｆａｂ ＧＳ－ＧＡＡ）の作製
配列番号８９で示されるヒト化抗ｈＴｆＲ抗体のＦａｂ重鎖とｈＧＡＡの融合蛋白質をコードする遺伝子を含む塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成し，これをｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，発現ベクターｐＥ－ｎｅｏ（Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ－ＧＡＡ）を構築した。このとき融合蛋白質をコードする遺伝子の５’末端側には分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする塩基配列を導入した。ｐＥ－ｎｅｏ（Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ－ＧＡＡ）と実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で，ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｋ１：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）を形質転換し，Ｆａｂである抗ｈＴｆＲ抗体３ＮとｈＧＡＡの融合蛋白質（Ｆａｂ ＧＳ－ＧＡＡ）を発現する細胞株を得た。この発現株を，実施例２２に記載方法に準じて培養し，培養上清を得た。培養上清を，カラム体積の５倍容の１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化した，ＣＨ１アフィニティーカラムであるＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ－ＣＨ１カラム （カラム体積：約１．０ｍＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社）に負荷し，融合蛋白質をＣＨ１アフィニティーカラムに吸着させた。次いで，カラム体積の５倍容の１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）を供給してカラムを洗浄した。次いで，カラム体積の５倍容の５０ｍＭ ＮａＣｌを含有する１００ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ３．０）で，ＣＨ１アフィニティーカラムに吸着した融合蛋白質を溶出させた。溶出液は，予め１Ｍ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．５）を入れておいた容器に受けて，直ちに中和した。こうして得られたものをＦａｂ ＧＳ－ＧＡＡの精製品として以下の実験に用いた。

【0483】

〔実施例３２〕Ｆａｂ ＧＳ－ＧＡＡのマウスを用いた薬効評価
実施例２８に記載のあるマウス（ＧＡＡ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウス）に，表１９－２に示す用法，用量で，実施例３１で得たＦａｂ ＧＳ－ＧＡＡ，又はｈＧＡＡを静脈内投与した。なお，薬剤非投与の正常マウスを正常対照（第１群），薬剤非投与のＧＡＡ－ＫＯ／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスを病態対照（第２群）とした。各群ともマウスは３～４匹とした。また，マウスは雄性及び雌性の９～１４週齢（投与開始時）を用いた。投与１週間後に，実施例２９に記載の方法で，右脳，心臓，横隔膜，大腿四頭筋，ヒラメ筋，前脛骨筋を採取し，これら組織に含まれるグリコーゲンの濃度を測定した。測定結果を図１２に示す。Ｆａｂ ＧＳ－ＧＡＡ投与群では，グリコーゲンの濃度を測定した全ての臓器において，ｈＧＡＡよりも顕著にグリコーゲンが減少した。特に，その減少傾向は，右脳及び心臓において顕著であった。また，５．０ｍｇ／ｋｇの用量のＦａｂ ＧＳ－ＧＡＡ投与群においても，２０ｍｇ／ｋｇの用量のｈＧＡＡ投与群と比較して，右脳及び心臓において顕著なグリコーゲンの減少が認められた。これらの結果は，Ｆａｂ ＧＳ－ＧＡＡが，ポンペ病の治療薬として，特に脳及び／又は心臓の機能障害を伴うポンペ病の治療薬として，使用し得ることを示す。

【0484】

【表19-2】

【0485】

〔実施例３３〕各種ヒトリソソーム酵素とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質の作製
表２０－Ａ～表２０－Ｃに示される配列番号のアミノ酸配列を有する表２０－Ａ～表２０－Ｃで「融合蛋白質名」として示される名称の，ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の重鎖（但し，ｓｃＦａｂ－ＩＤＵＡについては一本鎖ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体）と，各種ヒトリソソーム酵素との融合蛋白質をコードする遺伝子を含む塩基配列を有するＤＮＡ断片を人工的に合成し，これをｐＥ－ｎｅｏベクターのＭｌｕＩとＮｏｔＩの間に組み込み，発現ベクターを構築した。このとき融合蛋白質をコードする遺伝子の５’末端側には分泌シグナルとして機能するリーダーペプチドをコードする塩基配列を導入した。それぞれの発現ベクターの名称を表２０－Ａ～表２０－Ｃに示す。得られた各発現ベクターと実施例１１で構築したｐＥ－ｈｙｇｒ（ＬＣ３）で，ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｋ１：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）を形質転換し，各種リソソーム酵素とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を発現する細胞株を得た。この発現株を，実施例２２に記載方法に準じて培養し，培養上清を得た。

【0486】

培養上清に含まれるリソソーム酵素とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質を，抗体がＦａｂであるものについては下記の精製法１で，抗体が重鎖の全長を含むものについては下記の精製法２により生成した。

【0487】

精製法１：培養上清を，カラム体積の５倍容の１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化した，ＣＨ１アフィニティーカラムであるＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ－ＣＨ１カラム（カラム体積：約１．０ｍＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社）に負荷し，融合蛋白質をＣＨ１アフィニティーカラムに吸着させた。次いで，カラム体積の５倍容の１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）を供給してカラムを洗浄した。次いで，カラム体積の５倍容の５０ｍＭ ＮａＣｌを含有する１００ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ３．０）で，ＣＨ１アフィニティーカラムに吸着した融合蛋白質を溶出させた。溶出液は，予め１Ｍ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．５）を入れておいた容器に受けて，直ちに中和した。

【0488】

精製法２：
培養上清を，カラム体積の５倍容の１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化した，プロテインＡアフィニティーカラムであるＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ＬＸカラム（カラム体積：約１．０ｍＬ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）に負荷し，融合蛋白質をプロテインＡに吸着させた。次いで，カラム体積の５倍容の１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．０）を供給してカラムを洗浄した。次いで，カラム体積の５倍容の５０ｍＭ ＮａＣｌを含有する１００ｍＭ グリシン緩衝液（ｐＨ３．０）で，プロテインＡに吸着した融合蛋白質を溶出させた。溶出液は，予め１Ｍ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７．５）を入れておいた容器に受けて，直ちに中和した。

【0489】

こうして得られた融合蛋白質の精製品を用いて，下記の実験を実施した。また，こうして得られたリソソーム酵素とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の融合蛋白質を，表２０－Ａ～表２０－Ｃの最右列に示すように名付けた。

【0490】

【表20-A】

【0491】

【表20-B】

【0492】

【表20-C】

【0493】

〔実施例３４〕各種ヒトリソソーム酵素とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性及び酵素活性の測定
ヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性は実施例７に記載の方法で測定した。ヒトリソソーム酵素の活性は，下記の方法で測定した。但し，ｈＡＣ及びｈＬＡＭＡＮの酵素活性は測定していない。

【0494】

ｈＩＤＵＡの活性測定：
精製したｈＩＤＵＡの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，０．１％ ＢＳＡを含む５０ｍＭ クエン酸緩衝液（ｐＨ３．５）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６ （Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ α－Ｌ－Ｉｄｕｒｏｎｉｄｅ（ｇｌｙｃｏｓｙｎｔｈ社）を同緩衝液で１ｍＭに希釈したものを，各ウェルに６０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，各ウェルに０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ酸緩衝（ｐＨ１０．６）を２００μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／分，３７℃と定義し，蛋白質単位重量（ｍｇ）当たりの比活性を求めた。以下の融合蛋白質についても比活性を求めた。

【0495】

ｈＰＰＴ－１の活性測定：
β－Ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ （オリエンタル酵母社）を０．２％ＢＳＡ及び０．００６２５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含む０．４Ｍ Ｎａ_２ＨＰＯ_４／０．２Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ ４．０）で０．２５ｍｇ／ｍＬに希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。次に，精製したｈＰＰＴ－１の抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，同緩衝液で適当な濃度に希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ ６－Ｔｈｉｏ－ｐａｌｍｉｔａｔｅ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ （Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を同緩衝液で０．２５ｍＭに希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止し，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／分，３７℃と定義した。

【0496】

ｈＡＳＭの活性測定：
精製したｈＡＳＭの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，０．１ｍＭ 酢酸亜鉛，０．２５ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ，及び０．１５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として６－Ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｙｌａｍｉｎｏ－４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ社）を同緩衝液で１ｍＭに希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに２００μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／分，３７℃と定義し，蛋白質単位重量（ｍｇ）当たりの比活性を求めた。

【0497】

ｈＡＲＳＡの活性測定：
精製したｈＡＲＳＡの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，０．５％ ＢＳＡ及び１．０％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ １００を含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ （４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓａｌｔ（ＳＩＧＭＡ社）を同緩衝液で５ｍＭに希釈し，各ウェルに１００μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／分，３７℃と定義した。

【0498】

ｈＳＧＳＨの活性測定：
精製したｈＳＧＳＨの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，０．２％ＢＳＡを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ ２－ｄｅｏｘｙ－２－ｓｕｌｆａｍｉｎｏ－α－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ社）を同緩衝液で５ｍＭに希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で２時間反応させた。反応後，同緩衝液で希釈した０．５ｍｇ／ｍＬ α－Ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ（オリエンタル酵母社）を，各ウェルに２０μＬずつ加え，３７℃で１７時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／分，３７℃と定義した。

【0499】

ｈＧＢＡの活性測定：
精製したｈＧＢＡの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，０．１％ ＢＳＡ，０．１５％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ １００，及び０．１２５％タウロコール酸ナトリウムを含む１００ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ （ＳＩＧＭＡ社）を同緩衝液で３．５ｍＭに希釈し，各ウェルに７０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／分，３７℃と定義した。

【0500】

ｈＴＰＰ－１の活性測定：
精製したｈＴＰＰ－１の抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，１５０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ １００を含む５０ｍＭ ギ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．５）で適当な濃度に希釈し，３７℃で１時間プレインキュベーションした。スタンダードには７－Ａｍｉｎｏ－４－ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｉｎ （ＡＭＣ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用し，同様に処理した。１時間後，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。次に，基質としてＡｌａ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－７－ａｍｉｄｏ－４－ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｉｎ （ＳＩＧＭＡ社），１５０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ １００を含む１００ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で２５ｍＭに希釈し，各ウェルに４０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，１００ｍＭ モノクロロ酢酸／１３０ｍＭ ＮａＯＨ／１００ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ４．３）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１ＵｎｉｔをＡＭＣμｍｏｌ／分，３７℃と定義した。

【0501】

ｈＧＡＡの活性測定：
精製したｈＧＡＡの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，０．５％ ＢＳＡを含むＰＢＳ（－）（ｐＨ７．２）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ （４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ－ａ－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ＳＩＧＭＡ社）を２００ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ４．３）で２．２ｍＭに希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに２００μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／ｍｉｎ，３７℃と定義した。

【0502】

ｈＮＡＧＬＵの活性測定：
精製したｈＮＡＧＬＵの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，０．１％ ＢＳＡを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ４．３）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ－Ｎ－ａｃｅｔｙｌ－α－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）を同緩衝液で１ｍＭに希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／ｍｉｎ，３７℃と定義した。

【0503】

ｈＧＵＳＢの活性測定：
精製したｈＧＵＳＢの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２５ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ ｈｙｄｒａｔｅ（ＳＩＧＭＡ社）を同緩衝液で２ｍＭに希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／ｍｉｎ，３７℃と定義した。

【0504】

ｈＧＡＬＣの活性測定：
精製したＧＡＬＣの抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，１２５ｍＭ ＮａＣｌ及び０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ－β－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ＳＩＧＭＡ社）を同緩衝液で１ｍＭに希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／ｍｉｎ，３７℃と定義した。

【0505】

ｈＦＵＣＡ１の活性測定：
精製したＦＵＣＡ１の抗ＴｆＲ抗体融合蛋白質を，０．２％ＢＳＡｌを含む１００ｍＭ クエン酸緩衝液（ｐＨ５．５）で適当な濃度に希釈し，フルオロヌンクプレート Ｆ９６（Ｎｕｎｃ社）の各ウェルに２０μＬずつ加えた。スタンダードには４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４ＭＵ）（ＳＩＧＭＡ社）を使用した。次に，基質として４ＭＵ－α－Ｌ－ｆｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ＳＩＧＭＡ社）を同緩衝液で２ｍＭに希釈し，各ウェルに２０μＬずつ加えた。プレートミキサーで撹拌後，３７℃で１時間反応させた。反応後，０．０５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０．６）を各ウェルに１５０μＬずつ加えて反応を停止させ，プレートリーダーで励起波長３６５ｎｍ，検出波長４６０ｎｍを測定した。なお，酵素活性は，１Ｕｎｉｔを４ＭＵμｍｏｌ／ｍｉｎ，３７℃と定義した。

【0506】

表２１に，各種ヒトリソソーム酵素とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体との融合蛋白質のヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性及び酵素活性の測定を示す。なお，親和性及び酵素活性の測定は，実施例３３で得たリソソーム酵素とヒト化抗ｈＴｆＲ抗体の融合蛋白質の一部についてのみ実施した。すなわち，ヒトＴｆＲ及びサルＴｆＲへの親和性測定は２４種類，酵素活性測定は２０種類の融合蛋白質についてのみ実施した。

【0507】

酵素活性を測定した融合蛋白質は，いずれもリソソーム酵素としての酵素活性を有するものであった。また，ヒトＴｆＲとの親和性を測定した融合蛋白質は，いずれもヒトＴｆＲと高い親和性を有するものであり，最も親和性の低いものでも，そのＫ_Ｄ値は２．０９ｘ１０^－１０であり，１９種類の融合蛋白質は，そのＫ_Ｄ値が１．００ｘ１０^－１２未満であった。また，サルＴｆＲとの親和性を測定した融合蛋白質は，いずれもサルＴｆＲと高い親和性を有するものであり，最も親和性の低いものでも，そのＫ_Ｄ値は３．０５ｘ１０^－８であり，１２種類の融合蛋白質は，そのＫ_Ｄ値が１．００ｘ１０^－１２未満であった。

【0508】

ここで用いた抗ｈＴｆＲ抗体は，重鎖が，可変領域として配列番号６５で示されるアミノ酸配列を有するものである重鎖（ＩｇＧ）又はＦａｂ重鎖であり，軽鎖が，可変領域として配列番号１８で示されるアミノ酸配列を有するものである。これらの結果は，リソソーム酵素を，可変領域としてこれらのアミノ酸配列を含むものとの融合蛋白質とすることにより，ヒトＴｆＲを介してＢＢＢを通過させ，且つ，脳内で酵素活性を発揮させることができることを示すものである。

【0509】

【表21】

【産業上の利用可能性】

【0510】

本発明の抗ｈＴｆＲ抗体は，これと融合させることにより，所望の生理活性蛋白質，低分子物質等を血液脳関門を通過させることができるので，中枢神経系において作用させるべき生理活性蛋白質，低分子物質等を脳内に送達する手段を提供するものとして有用性が高い。

【符号の説明】

【0511】

１ 血管
２ 脳実質
３ 神経様細胞
４ プルキンエ細胞

【配列表フリーテキスト】

【0512】

配列番号３：リンカー例１のアミノ酸配列
配列番号４：リンカー例２のアミノ酸配列
配列番号５：リンカー例３のアミノ酸配列
配列番号６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号７：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１０：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号１１：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号１２：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号１３：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列１
配列番号１４：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列２
配列番号１５：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列１
配列番号１６：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列２
配列番号１７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列１
配列番号１８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列２
配列番号１９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列３
配列番号２０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列４
配列番号２１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列５
配列番号２２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列６
配列番号２３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域のアミノ酸配列２を含む軽鎖のアミノ酸配列
配列番号２４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列４を含む軽鎖のアミノ酸配列
配列番号２６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列４を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列５を含む軽鎖のアミノ酸配列
配列番号２８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列５を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号２９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む軽鎖のアミノ酸配列
配列番号３０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列６を含む軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号３１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列１
配列番号３２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列２
配列番号３３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列３
配列番号３４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列４
配列番号３５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列５
配列番号３６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列６
配列番号３７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む重鎖のアミノ酸配列
配列番号３８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む重鎖のアミノ酸配列コードする塩基配列，合成配列
配列番号３９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む重鎖（ＩｇＧ４）のアミノ酸配列
配列番号４０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の，可変領域としてアミノ酸配列２を含む重鎖（ＩｇＧ４）のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号４１：プライマーｈＴｆＲ５’，合成配列
配列番号４２：プライマーｈＴｆＲ３’，合成配列
配列番号４３：プライマーＨｙｇ－Ｓｆｉ５’，合成配列
配列番号４４：プライマーＨｙｇ－ＢｓｔＸ３’，合成配列
配列番号４５：キメラｈＴｆＲをコードするｃＤＮＡの３’側にｌｏｘＰ配列で挟み込んだネオマイシン耐性遺伝子を配置したＤＮＡの塩基配列，合成配列
配列番号４６：ターゲッティングベクターの５’アーム配列，合成配列
配列番号４７：ターゲッティングベクターの３’アーム配列，合成配列
配列番号４８：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号４９：マウス抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号５１：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号５２：抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖（ヒト化２）とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号５３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号５４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖とｈＩ２Ｓの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号５７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖とｈＧＡＡの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号５８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＡＡの融合蛋白質のアミノ酸配列
配列番号５９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＡＡの融合蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号６０：１本鎖ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎのアミノ酸配列
配列番号６１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖のアミノ酸配列
配列番号６２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列１
配列番号６３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列２
配列番号６４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖フレームワーク領域３のアミノ酸配列
配列番号６５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖の可変領域のアミノ酸配列
配列番号６６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖のアミノ酸配列
配列番号６７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号６８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）のアミノ酸配列
配列番号６９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号７０：ヒトＩｇＧのＦｃ領域のアミノ酸配列の一例
配列番号７１：ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を導入したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体３ＮのＦａｂ重鎖のアミノ酸配列
配列番号７２：ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を導入したヒト化抗ｈＴｆＲ抗体３ＮのＦａｂ重鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列，合成配列
配列番号７３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３の重鎖フレームワーク領域３のアミノ酸配列
配列番号７４：アルブミン結合ドメインのアミノ酸配列
配列番号７５：ヒトＩＤＵＡのアミノ酸配列１
配列番号７６：ヒトＩＤＵＡのアミノ酸配列２
配列番号７７：ヒトＰＰＴ－１のアミノ酸配列
配列番号７８：ヒトＡＳＭのアミノ酸配列
配列番号７９：ヒトＡＲＳＡのアミノ酸配列
配列番号８０：ヒトＳＧＳＨのアミノ酸配列
配列番号８１：ヒトＧＢＡのアミノ酸配列
配列番号８２：ヒトＴＰＰ－１のアミノ酸配列
配列番号８３：ヒトＮＡＧＬＵのアミノ酸配列
配列番号８４：ヒトＧＵＳＢのアミノ酸配列
配列番号８５：ヒトＧＡＬＣのアミノ酸配列
配列番号８６：ヒトＡＣのアミノ酸配列
配列番号８７：ヒトＦＵＣＡ１のアミノ酸配列
配列番号８８：ヒトＬＡＭＡＮのアミノ酸配列
配列番号８９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＡＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＧＡＡ
配列番号９０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＩＤＵＡ
配列番号９１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ８－ＩＤＵＡ
配列番号９２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＩＤＵＡ
配列番号９３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＩＤＵＡ
配列番号９４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＩＤＵＡ
配列番号９５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＩＤＵＡ
配列番号９６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＩＤＵＡ
配列番号９７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｔａｎｄｅｍ Ｆａｂ ＨＣ－ＩＤＵＡ
配列番号９８：１本鎖ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎ（２）のアミノ酸配列
配列番号９９：１本鎖ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮとＩＤＵＡの融合蛋白質のアミノ酸配列，ｓｃＦａｂ－ＩＤＵＡ
配列番号１００：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＰＰＴ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＰＰＴ１
配列番号１０１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＰＰＴ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＰＰＴ１
配列番号１０２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＰＰＴ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＰＰＴ１
配列番号１０３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＰＰＴ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＰＰＴ１
配列番号１０４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＰＰＴ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＰＰＴ１
配列番号１０５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＰＰＴ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｔａｎｄｅｍ Ｆａｂ ＨＣ－ＰＰＴ１
配列番号１０６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＡＳＭ
配列番号１０７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＡＳＭ
配列番号１０８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＡＳＭ
配列番号１０９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＡＳＭ
配列番号１１０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＡＳＭ
配列番号１１１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＡＳＭ
配列番号１１２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＡＳＭ
配列番号１１３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＡＳＭ
配列番号１１４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＳＭの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｔａｎｄｅｍ Ｆａｂ ＨＣ－ＡＳＭ
配列番号１１５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＡＲＳＡ
配列番号１１６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＡＲＳＡ
配列番号１１７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＡＲＳＡ
配列番号１１８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＡＲＳＡ
配列番号１１９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＡＲＳＡ
配列番号１２０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＡＲＳＡ
配列番号１２１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＡＲＳＡ
配列番号１２２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＡＲＳＡ
配列番号１２３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＲＳＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｔａｎｄｅｍ Ｆａｂ ＨＣ－ＡＲＳＡ
配列番号１２４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＳＧＳＨの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＳＧＳＨ
配列番号１２５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＳＧＳＨの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＳＧＳＨ
配列番号１２６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＳＧＳＨの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＳＧＳＨ
配列番号１２７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＳＧＳＨの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＳＧＳＨ
配列番号１２８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＳＧＳＨの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＳＧＳＨ
配列番号１２９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＳＧＳＨの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｔａｎｄｅｍ Ｆａｂ ＨＣ－ＳＧＳＨ
配列番号１３０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＢＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＢＡ
配列番号１３１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＢＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＧＢＡ
配列番号１３２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＢＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＧＢＡ
配列番号１３３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＢＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＧＢＡ
配列番号１３４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＢＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＧＢＡ
配列番号１３５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＢＡの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｔａｎｄｅｍ Ｆａｂ ＨＣ－ＧＢＡ
配列番号１３６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＴＰＰ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＴＰＰ１
配列番号１３７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＴＰＰ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＴＰＰ１
配列番号１３８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＴＰＰ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＴＰＰ１
配列番号１３９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＴＰＰ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＴＰＰ１
配列番号１４０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＴＰＰ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＴＰＰ１
配列番号１４１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＴＰＰ－１の融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｔａｎｄｅｍ Ｆａｂ ＨＣ－ＴＰＰ１
配列番号１４２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＮＡＧＬＵ
配列番号１４３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＮＡＧＬＵ
配列番号１４４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＮＡＧＬＵ
配列番号１４５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＮＡＧＬＵ
配列番号１４６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＮＡＧＬＵ
配列番号１４７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＮＡＧＬＵ
配列番号１４８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＮＡＧＬＵ
配列番号１４９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＮＡＧＬＵの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＮＡＧＬＵ
配列番号１５０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＵＳＢの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＵＳＢ
配列番号１５１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＵＳＢの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＧＵＳＢ
配列番号１５２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＵＳＢの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＧＵＳＢ
配列番号１５３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＵＳＢの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＧＵＳＢ
配列番号１５４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＵＳＢの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＧＵＳＢ
配列番号１５５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＵＳＢの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＧＵＳＢ
配列番号１５６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＵＳＢの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＧＵＳＢ
配列番号１５７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＵＳＢの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＧＵＳＢ
配列番号１５８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＡＬＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＡＬＣ
配列番号１５９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＡＬＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＧＡＬＣ
配列番号１６０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＡＬＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＧＡＬＣ
配列番号１６１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＧＡＬＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＧＡＬＣ
配列番号１６２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＡＬＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＧＡＬＣ
配列番号１６３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＡＬＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＧＡＬＣ
配列番号１６４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＡＬＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＧＡＬＣ
配列番号１６５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＧＡＬＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＧＡＬＣ
配列番号１６６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＡＣ
配列番号１６７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＡＣ
配列番号１６８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＡＣ
配列番号１６９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＡＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＡＣ
配列番号１７０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＡＣ
配列番号１７１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＡＣ
配列番号１７２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＡＣ
配列番号１７３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＡＣの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＡＣ
配列番号１７４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＦＵＣＡ１
配列番号１７５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＦＵＣＡ１
配列番号１７６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＦＵＣＡ１
配列番号１７７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＦＵＣＡ１
配列番号１７８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＦＵＣＡ１
配列番号１７９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＦＵＣＡ１
配列番号１８０：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＦＵＣＡ１
配列番号１８１：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＦＵＣＡ１の融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＦＵＣＡ１
配列番号１８２：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＬＡＭＡＮ
配列番号１８３：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ５－ＬＡＭＡＮ
配列番号１８４：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ１０－ＬＡＭＡＮ
配列番号１８５：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３Ｎの重鎖（ＩｇＧ４）とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質のアミノ酸配列， ＩｇＧ４ ＨＣ－ＧＳ２０－ＬＡＭＡＮ
配列番号１８６：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ３－ＬＡＭＡＮ
配列番号１８７：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ５－ＬＡＭＡＮ
配列番号１８８：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ１０－ＬＡＭＡＮ
配列番号１８９：ヒト化抗ｈＴｆＲ抗体番号３ＮのＦａｂ重鎖とｈＬＡＭＡＮの融合蛋白質のアミノ酸配列， Ｆａｂ ＨＣ－ＧＳ２０－ＬＡＭＡＮ

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【配列表】

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