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特開2022-173344ヒト脂肪性肝炎（ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ）の治療及び回復に対するピルフェニドンを含む持続放出性の組成物の薬学的使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022173344
(43)【公開日】2022-11-18
(54)【発明の名称】ヒト脂肪性肝炎（ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ）の治療及び回復に対するピルフェニドンを含む持続放出性の組成物の薬学的使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4418 20060101AFI20221111BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20221111BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20221111BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20221111BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221111BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20221111BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20221111BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4418
A61P1/16
A61P29/00
A61P3/06
A61P43/00 105
A61P43/00 111
A61P3/04
A61P37/02
【審査請求】有
【請求項の数】23
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022152261
(22)【出願日】2022-09-26
(62)【分割の表示】P 2019547064の分割
【原出願日】2017-11-09
(31)【優先権主張番号】MX/A/2016/014775
(32)【優先日】2016-11-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】MX
(71)【出願人】
【識別番号】519168561
【氏名又は名称】セル セラピー アンド テクノロジー，エス．エー． デーイー シー．ヴィ．
(74)【代理人】
【識別番号】100094112
【弁理士】
【氏名又は名称】岡部 讓
(74)【代理人】
【識別番号】100128668
【弁理士】
【氏名又は名称】齋藤 正巳
(72)【発明者】
【氏名】アルメンダリズ ボルンダ，ユアン ソコロ
(72)【発明者】
【氏名】マガニャ カストロ，ホセ アグスティン ロゲリオ
(72)【発明者】
【氏名】ヘルナンデス アルダナ，ナディエル
(57)【要約】
【課題】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ及び進行した肝線維症の回復をもたらすこと。
【解決手段】巨視的脂肪変性及び微視的脂肪変性の両方の形態において、血清コレステロール及びトリグリセリドの減少と並んで、肝臓の脂肪蓄積の量を減少させることによるＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ及び進行した肝線維症の治療に対する、ピルフェニドンを含む持続放出性錠剤の形態の医薬組成物の使用。さらに、肝臓の脂肪分解の代謝及び炎症に重要な分子である、ＰＰＡＲガンマ（ペルオキシソーム増殖因子受容体活性化ガンマ）、ＰＰＡＲアルファ（ペルオキシソーム増殖因子受容体活性化アルファ）、ＬＸＲ及びＣＰＴ１に対するアゴニストとしてのその使用。さらに、別の使用は、肝臓炎症過程因子の転写誘導因子であるＮＦｋＢマスター遺伝子の発現減少の誘導である。
【選択図】なし
【解決手段】巨視的脂肪変性及び微視的脂肪変性の両方の形態において、血清コレステロール及びトリグリセリドの減少と並んで、肝臓の脂肪蓄積の量を減少させることによるＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ及び進行した肝線維症の治療に対する、ピルフェニドンを含む持続放出性錠剤の形態の医薬組成物の使用。さらに、肝臓の脂肪分解の代謝及び炎症に重要な分子である、ＰＰＡＲガンマ（ペルオキシソーム増殖因子受容体活性化ガンマ）、ＰＰＡＲアルファ（ペルオキシソーム増殖因子受容体活性化アルファ）、ＬＸＲ及びＣＰＴ１に対するアゴニストとしてのその使用。さらに、別の使用は、肝臓炎症過程因子の転写誘導因子であるＮＦｋＢマスター遺伝子の発現減少の誘導である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療のための、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、又は６００ｍｇのピルフェニドンを含む持続放出性錠剤の形態の医薬組成物。
【請求項2】
血清コレステロールレベル及びトリグリセリドレベルを減少させるための、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの治療に対する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
肝臓の脂肪蓄積を減少させるための、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記肝臓の脂肪蓄積は、小滴性脂肪変性である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記肝臓の脂肪蓄積は、大滴性脂肪変性である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項6】
過剰な肝臓脂肪の排出を誘導するための、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
ＮＦκＢの発現の減少のための、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
肝臓の炎症の減少のための、請求項１～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－１β、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αから選ばれる１以上のサイトカインの血清レベルの減少のための、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
ＴＧＦ－β１の発現の減少のための、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項11】
ＣＤ１１ｂ及びＭＣＰ１の発現の減少のための、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
ＣＯＬ１Ａ１及びＴＮＦ－αの下方調節のための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
ＬＸＲ及びＰＰＡＲアルファのレベルの増加のための、請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
ＳＲＥＢＰ１、ＣＰＴ１Ａ、ＰＰＡＲアルファ及び／又はＰＰＡＲガンマの１つ以上の発現の増加のための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項15】
ＰＰＡＲガンマ、ＰＰＡＲアルファ、ＬＸＲ及び／又はＣＰＴ１の１つ以上の刺激のための、請求項１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項16】
前記持続放出性錠剤が１００ｍｇのピルフェニドンを含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項17】
前記持続放出性錠剤が４００ｍｇのピルフェニドンを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項18】
前記持続放出性錠剤が２００ｍｇのピルフェニドンを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項19】
前記持続放出性錠剤が３００ｍｇのピルフェニドンを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項20】
前記持続放出性錠剤が６００ｍｇのピルフェニドンを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項21】
前記治療が、少なくとも８週間に亘って前記持続放出性錠剤を投与することを含む、前記請求項１～２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項22】
前記治療が、少なくとも１３週間に亘って前記持続放出性錠剤を投与することを含む、前記請求項１～２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項23】
前記治療が、対象の体重を減少させる、前記請求項１～２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、肝臓の脂質蓄積又は脂肪変性の減少／排除を誘導するためのピルフェニドンを含む持続放出性錠剤（ＰＦＤ－ＬＰ）における医薬組成物の使用、並びに進行した肝線維症及び非アルコール性脂肪性肝疾患（nonalcoholic fatty liver disease）／非アルコール性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis）（ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ）の回復におけるその治療適用に関する。
【背景技術】
【0002】
肝硬変
肝硬変は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ：extracellular matrix）の過剰蓄積又は慢性的な肝障害の結果である間質性の瘢痕として定義される進行した肝線維症（ＡＬＦ：advanced liver fibrosis）の最終段階である。
肝硬変は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ：extracellular matrix）の過剰蓄積又は慢性的な肝障害の結果である間質性の瘢痕として定義される進行した肝線維症（ＡＬＦ：advanced liver fibrosis）の最終段階である。
【0003】
肝臓の再生能により、肝硬変はゆっくりと進行し得る病理過程である。さらに、肝硬変は遺伝的要因も関与するプロセスであることが知られている。
【0004】
進行した肝線維症に対する医学的処置は進歩し続けており、抗線維化療法及び予防療法の実施に結び付いて、現在、世界中の何百万人もの患者に希望を与えているようである。
【0005】
ＡＬＦは、ＥＣＭ合成の増加と並んでその組成の変化を特徴とし、肝臓組織の異常なリモデリング及びその結果として臓器の構造の歪みをもたらす。これは肝機能の低下に結びつく。
【0006】
生理病理学
この疾患の生理病理学は、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）等の炎症性サイトカインの発現が増加する、炎症過程によって与えられる。炎症には、とりわけ、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）及びカタラーゼ（ＣＡＴ）等の抗酸化酵素の発現減少、並びにスーパーオキシドアニオン、ヒドロキシルアニオン及び過酸化水素等のフリーラジカルの産生増加によって引き起こされる酸化ストレスが付随する。同様に、特にＥＣＭ（細胞外マトリックス）の主成分であるＩ型コラーゲン（ＣＯＬ－１）の発現増加を誘導するトランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦ－β１）によって媒介される線維化プロセスが存在し、ここでは、肝星細胞の増殖を支持する増殖因子、及び組織メタロプロテアーゼ阻害因子１（TIMP-1：Tissue Inhibitor of Metalloprotease 1）が増加される。上に言及される情報に加えて、ＥＣＭメタロプロテアーゼの発現減少がある。これはいずれも、ＥＣＭの合成と分解との間の不均衡をもたらし、それがＥＣＭを蓄積させる。
この疾患の生理病理学は、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）等の炎症性サイトカインの発現が増加する、炎症過程によって与えられる。炎症には、とりわけ、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）及びカタラーゼ（ＣＡＴ）等の抗酸化酵素の発現減少、並びにスーパーオキシドアニオン、ヒドロキシルアニオン及び過酸化水素等のフリーラジカルの産生増加によって引き起こされる酸化ストレスが付随する。同様に、特にＥＣＭ（細胞外マトリックス）の主成分であるＩ型コラーゲン（ＣＯＬ－１）の発現増加を誘導するトランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦ－β１）によって媒介される線維化プロセスが存在し、ここでは、肝星細胞の増殖を支持する増殖因子、及び組織メタロプロテアーゼ阻害因子１（TIMP-1：Tissue Inhibitor of Metalloprotease 1）が増加される。上に言及される情報に加えて、ＥＣＭメタロプロテアーゼの発現減少がある。これはいずれも、ＥＣＭの合成と分解との間の不均衡をもたらし、それがＥＣＭを蓄積させる。
【0007】
細胞外マトリックスの産生
ＥＣＭの細胞成分の明確化は、その疾患に対する医学療法の分野における進歩を可能とした。肝星細胞（ＨＳＣ：Hepatic stellate cells）は、肝硬変におけるＥＣＭの主な供給源である。これらの細胞は、ディッセ腔、すなわち肝類洞と肝細胞との間の部位に見られる。ＨＳＣは、ビタミンＡがレチノイドの形態で貯蔵される主な部位であり、このビタミンは、静止表現型（quiescent phenotype）においてＨＳＣを特徴づけるものである。
ＥＣＭの細胞成分の明確化は、その疾患に対する医学療法の分野における進歩を可能とした。肝星細胞（ＨＳＣ：Hepatic stellate cells）は、肝硬変におけるＥＣＭの主な供給源である。これらの細胞は、ディッセ腔、すなわち肝類洞と肝細胞との間の部位に見られる。ＨＳＣは、ビタミンＡがレチノイドの形態で貯蔵される主な部位であり、このビタミンは、静止表現型（quiescent phenotype）においてＨＳＣを特徴づけるものである。
【0008】
しかしながら、ＨＳＣは、走化性サイトカイン（ケモカイン）によって遊走することができる。ケモカインとして作用し得る様々な分子には、ＰＤＧＦ、ＭＣＰ－１及びＣＸＣＲ３がある。最近、ＰＤＧＦがこのプロセスに関与する機構が説明された。ＰＤＧＦは、他の細胞の細胞膜における拡散によって上記プロセスに関与し、ＨＳＣを他の部位へと引き込むことで移動させると言われている。
【0009】
線維化
ＨＳＣは、ＥＣＭ産生の増加によるのみならず、ＥＣＭ産生細胞の増殖によっても線維症を発生する。肝臓瘢痕の調査された主な成分はＩ型コラーゲン（ＣＯＬ－１）である。ＣＯＬ－１の発現は、刺激及び経路の数を増やすことで、転写と転写後の両方で調節される。最も強力な刺激は、ＴＧＦ－β１によって観察されるものであり、これはパラクリン剤とオートクリン剤の両方によって与えられる。ＴＧＦ－β１カスケードにおけるシグナル伝達の下流には、Ｓｍａｄとして知られる二官能分子のファミリーが関わる。ＴＧＦ－β１は、フィブロネクチン及びプロテオグリカン等のＥＣＭの他の成分の産生も刺激する。ＨＳＣに対するＴＧＦ－β１の刺激は、水素の過酸化及びＣ／ＥＢＰβの依存的機構によって媒介される。
ＨＳＣは、ＥＣＭ産生の増加によるのみならず、ＥＣＭ産生細胞の増殖によっても線維症を発生する。肝臓瘢痕の調査された主な成分はＩ型コラーゲン（ＣＯＬ－１）である。ＣＯＬ－１の発現は、刺激及び経路の数を増やすことで、転写と転写後の両方で調節される。最も強力な刺激は、ＴＧＦ－β１によって観察されるものであり、これはパラクリン剤とオートクリン剤の両方によって与えられる。ＴＧＦ－β１カスケードにおけるシグナル伝達の下流には、Ｓｍａｄとして知られる二官能分子のファミリーが関わる。ＴＧＦ－β１は、フィブロネクチン及びプロテオグリカン等のＥＣＭの他の成分の産生も刺激する。ＨＳＣに対するＴＧＦ－β１の刺激は、水素の過酸化及びＣ／ＥＢＰβの依存的機構によって媒介される。
【0010】
また、脂質の過酸化も、ＥＣＭの産生において刺激を発生させる重要な産物である。その効果は、ＨＳＣの抗酸化能の喪失によって増強される。
【0011】
結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ／ＣＣＮ２）も、ＥＣＭの産生に対するＨＳＣにおける重要な刺激とされている。また、ＣＴＧＦ／ＣＣＮ２は高血糖及び高インスリン血症のときにも活性化されている場合がある。ＣＴＧＦの刺激は、ＴＧＦ－β１に依存すると考えられている。
【0012】
収縮性
ＨＳＣの収縮性は、肝硬変において門脈抵抗の早期の又は後期の増加の主な決定因子となる場合がある。コラーゲンバンドは、類洞の狭窄及び硬変肝全体の収縮性に起因して門脈経路における血液の正常な流れを妨げる。
ＨＳＣの収縮性は、肝硬変において門脈抵抗の早期の又は後期の増加の主な決定因子となる場合がある。コラーゲンバンドは、類洞の狭窄及び硬変肝全体の収縮性に起因して門脈経路における血液の正常な流れを妨げる。
【0013】
エンドセリン－１及び一酸化窒素は、ＨＳＣにおける収縮性の主な調節因子である。同様にこの一覧に含まれるものは、多数あるなかで、アンギオテンシノゲンＩＩ、エイコサノイド、心房性ナトリウム利尿ペプチド、ソマトスタチン、一酸化炭素である。細胞骨格のα－ＳＭＡタンパク質の発現が増加され、これはＨＳＣに対して潜在的な収縮性を与える。
【0014】
発明の直接的な背景
先進国の公衆衛生上の主な問題は、過体重及び肥満である［非特許文献１］。そのため、非アルコール性脂肪性肝疾患／非アルコール性脂肪性肝炎（以下、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨとする）等のメタボリックシンドロームと関連する病態の罹患率は、世界中で増加し続けている。非アルコール性脂肪肝は、今後数十年に亘って肝臓に関連する罹患率及び死亡率の主な原因となることが予想されている。
先進国の公衆衛生上の主な問題は、過体重及び肥満である［非特許文献１］。そのため、非アルコール性脂肪性肝疾患／非アルコール性脂肪性肝炎（以下、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨとする）等のメタボリックシンドロームと関連する病態の罹患率は、世界中で増加し続けている。非アルコール性脂肪肝は、今後数十年に亘って肝臓に関連する罹患率及び死亡率の主な原因となることが予想されている。
【0015】
アルコールによる脂肪肝の発症機序、及び非アルコール性脂肪性肝炎等のアルコール摂取以外の原因によって誘導される発症機序は、トリグリセリドの蓄積に基づき、それが肝脂肪症に結び付く。慢性的な異常な脂質の貯蔵の後、炎症反応と細胞及びサイトカインの産生及び浸潤とからなる炎症によって二次的な損傷がもたらされる［非特許文献２］。非アルコール性脂肪肝の最も重篤な組織学的病態は、肝硬変の存在下又は不在下での、炎症細胞の浸潤及び肝損傷を特徴とする非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。
【0016】
西洋諸国の２０％～３０％の人々が非アルコール性脂肪肝を患っていると推測され、この状態を発生する傾向は、人種民族の起源と関連するようであり、ヒスパニック４５％、白人３３％及びアフリカ系アメリカ人２４％によって表すことができた。正常血糖の状態で正常又は中程度の体重の場合、ＮＡＦＬＤは、糖尿病及び肥満で観察されるものに類似する実験室レベル及び臨床データを特徴とすることが観察された［非特許文献１、非特許文献３］。
【0017】
最近の研究により、食事性コレステロールの量の増加が、より重篤な炎症、肝細胞障害及び線維症をもたらすことが示されている［非特許文献４］。一方、高炭水化物食は、トリグリセリドレベルの上昇に寄与するインスリンレベルの増加と関連付けられた［非特許文献５］。フルクトース及びスクロースには代謝障害の発症に一定の重要な役割がある。さらに、高フルクトース食が肝臓の炎症、ＮＡＳＨ及び確立された線維症の発症と関連することが研究により示された［非特許文献６］。慢性的なカロリー過剰に応じて、炎症誘発性軸の主な関与物質であるＩＬ－１７の上方調節が観察された。かかる事象は、肝細胞、内皮細胞又は好中球によってではなく、クッパー細胞及び肝星細胞（ＨＳＣ）のメディエータ放出に起因する肝損傷と関連付けられる［非特許文献７］。
【0018】
肥満に関して、脂肪生成は、ホルモン、脂質、糖代謝産物及びアディポカイン、並びに他の炎症性サイトカインによって複雑な方法で調節される。まとめると、肝臓の炎症に結び付くＴＧＦ－β１、ＩＬ－１β、ＩＬ－１６等の幾つかの炎症性サイトカインの分泌を促進するこれらの因子は、ＮＡＳＨの発症を悪化させる［非特許文献８］。さらに、ＩＬ－１７Ａは肝細胞によるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の産生を刺激することが観察された［非特許文献９］。最近の研究により、ＴＧＦ－β１及びＩＬ－６等の免疫調節サイトカインの組み合わせが調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の生成を阻害し、これによりＴｈ１７細胞の産生増加、そして結果的に或る種の炎症促進性のフィードバック反応を発生させるより高いレベルのＩＬ－１７Ａを誘発する免疫寛容の喪失が引き起こされることが示された［非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２］。
【0019】
脂肪酸の酸化及び合成を調節する転写因子は、抗炎症過程と並んで、非アルコール性脂肪肝の発症に関係があるとされている［非特許文献１３、非特許文献１４］。この意味で、核受容体ＰＰＡＲアルファ、ＰＰＡＲガンマ及びＬＸＲは、肝脂肪症及び炎症の改善を目的とする治療戦略の主なターゲットとなる。ＰＰＡＲアルファは、ＣＰＴ１Ａ等の遺伝子の発現を増加させることによって脂肪酸の酸化を調節し、次に脂質をミトコンドリアへ内部移行させることで、そこからエネルギーを得る［非特許文献１５］。一方、ＬＸＲは、ＳＲＥＢＰ１等の別のマスター転写因子の発現を促進することによってその脂質生合成速度を増加させる能力で長く知られている［非特許文献１６］。
【0020】
最後に、ＬＸＲアルファの活性化が炎症のメディエータをコードする遺伝子の発現を阻害することが示された［非特許文献１４、非特許文献１６］。
【0021】
ピルフェニドン
ピルフェニドンは、化学名が５－メチル－１－フェニル－２－（１Ｈ）ピリドンである低分子で構成された医薬である。ピルフェニドンは、１８５．２３ダルトンの分子量を有する非ペプチド合成分子である。ピルフェニドンの化学式はＣ１２Ｈ１１ＮＯであり、その構造が知られている。現在、ピルフェニドンは、広域スペクトルの抗線維化薬として臨床評価中である。ピルフェニドンは、ＴＧＦ－β１、ＴＮＦ－α、ＰＤＧＦの発現、また最も重要なことには、様々なタイプのコラーゲンの発現を減少させるその活性に反映される抗線維化特性及び抗炎症特性を有する。現在、肺線維症、腎糸球体硬化症に次ぐ慢性腎不全、肝硬変及び乳房莢膜拘縮（capsular breast contracture）に関して、ヒトで臨床研究が行われている。線維症を伴う病変の進行（progressive progress）をピルフェニドンが減少させることを示した基礎研究及び臨床研究が、既に公開されている又は公開手続き中である。最も重要なことには、ピルフェニドンは安全で無毒な方法でその細胞機能及び分子機能を発揮する。また、ピルフェニドンが特定の臓器、例えば肝臓、皮膚、腎臓等に対する損傷後の線維化病変の形成を予防することが知られている。
ピルフェニドンは、化学名が５－メチル－１－フェニル－２－（１Ｈ）ピリドンである低分子で構成された医薬である。ピルフェニドンは、１８５．２３ダルトンの分子量を有する非ペプチド合成分子である。ピルフェニドンの化学式はＣ１２Ｈ１１ＮＯであり、その構造が知られている。現在、ピルフェニドンは、広域スペクトルの抗線維化薬として臨床評価中である。ピルフェニドンは、ＴＧＦ－β１、ＴＮＦ－α、ＰＤＧＦの発現、また最も重要なことには、様々なタイプのコラーゲンの発現を減少させるその活性に反映される抗線維化特性及び抗炎症特性を有する。現在、肺線維症、腎糸球体硬化症に次ぐ慢性腎不全、肝硬変及び乳房莢膜拘縮（capsular breast contracture）に関して、ヒトで臨床研究が行われている。線維症を伴う病変の進行（progressive progress）をピルフェニドンが減少させることを示した基礎研究及び臨床研究が、既に公開されている又は公開手続き中である。最も重要なことには、ピルフェニドンは安全で無毒な方法でその細胞機能及び分子機能を発揮する。また、ピルフェニドンが特定の臓器、例えば肝臓、皮膚、腎臓等に対する損傷後の線維化病変の形成を予防することが知られている。
【0022】
ピルフェニドンがその治療効果を発揮する機構の１つが、幾つかのサイトカインの作用の調節によるものであることが知られている。ピルフェニドンは線維形成性サイトカイン及びＴＮＦ－αの強力な阻害剤である。
【0023】
持続放出性ピルフェニドン（ＰＦＤ－ＬＰ）の作用の新たな分子機構が発見され、該化合物が、本発明の目的である、アルコール性及び非アルコール性の両方の脂肪性肝炎の有害作用を減少させることにおいて活性であることを示した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0024】
【非特許文献1】Marra F, Lotersztajn S. Pathophysiology of NASH: perspectives for a targeted treatment. Curr Pharm Des 2013;19(29):5250-5269
【非特許文献2】Ferramosca A, Vincenzo Zara. Modulation of hepatic steatosis by dietary fatty acids. World J Gastroenterol 2014;20(7):1746-1755
【非特許文献3】Paschos P, Paletas K. Non alcoholic fatty liver disease and metabolic syndrome. Hippokratia 2009;13(1):9-19
【非特許文献4】Van Rooyen DM, Larter CZ, Haigh WG, Yeh MM, Ioannou G, Kuver R, et. al. Hepatic free cholesterol accumulates in obese, diabetic mice and causes nonalcoholic steatohepatitis. Gastroenterology 2011;141:1393-403
【非特許文献5】Kang H, Greenson JK, Omo JT, Guillot C, Peterman D, Anderson L, et. al. Metabolic syndrome is associated with greater histologic severity, higher carbohydrate, and lower fat diet in patients with NAFLD. Am J Gastroenterol 2006;101:2247-53
【非特許文献6】Lim JS, Mietus-Snyder M, Valente A, Schwarz JM, Lustig RH. The role of fructose in the pathogenesis of NAFLD and the metabolic syndrome. Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2010;7:251-64
【非特許文献7】Harley IT, Stankiewicz TE, Giles DA, Softic S, Flick LM, Cappelletti M, et al. IL-17 signaling accelerates the progression of nonalcoholic fatty liver disease in mice. Hepatology. 2014;59(5):1830-9
【非特許文献8】Zuniga LA, Shen W-J, Joyce-Shaikh B, Pyatnova EA, Richards AG, Thom C, et al. IL-17 Regulates Adipogenesis, Glucose Homeostasis, and Obesity. J Immunol. 2010 Dec 1;185(11):6947-59. Lafdil F, Miller AM, Ki SH, Gao B. Th17 cells and their associated cytokines in liver diseases. Cell Mol Immunol 2010;7(4):250-254
【非特許文献9】Weaver CT, Hatton RD. Interplay between the TH17 and Treg cell lineages: a co-evolutionary perspective. Nat Rev Immunol 2009;9:883-9
【非特許文献10】Korn T, Bettelli E, Oukka M, Kuchroo VK. IL-17 and Th17 Cells. Annu Rev Immunol 2009;27:485-517
【非特許文献11】Tang Y, Bian Z, Zhao L, Liu Y, Liang S, Wang Q, et. al. Interleukin-17 exacerbates hepatic steatosis and inflammation in non-alcoholic fatty liver disease. Clin Exp Immunol 2011;166(2):281-90
【非特許文献12】Wang Y-X. PPARs: diverse regulators in energy metabolism and metabolic diseases. Cell Res. 2010;20(2):124-37
【非特許文献13】Yan Xing, Tingting Zhao, Xiaoyan Gao, Yuzhang Wu. Liver X receptor α is essential for the capillarization of liver sinusoidal endothelial cells in liver injury
【非特許文献14】Yoshikawa T, Ide T, Shimano H, Yahagi N, Amemiya-Kudo M, Matsuzaka T, et al. Cross-Talk between Peroxisome Proliferator-Activated Receptor (PPAR) α and Liver X Receptor (LXR) in Nutritional Regulation of Fatty Acid Metabolism. I. PPARs Suppress Sterol Regulatory Element Binding Protein-1c Promoter through Inhibition of LXR Signaling. Mol Endocrinol. 2003;17(7):1240-54
【非特許文献15】Cui G, Qin X, Wu L, Zhang Y, Sheng X, Yu Q, Sheng H, Xi B, Zhang JZ, Zang YQ. Liver X receptor (LXR) mediates negative regulation of mouse and human Th17 differentiation. J Clin Invest. 2011;121(2):658-670
【非特許文献16】Ducheix S, Montagner A, Polizzi A, Lasserre F, Marmugi A, Bertrand-Michel J, et al. Essential fatty acids deficiency promotes lipogenic gene expression and hepatic steatosis through the liver X receptor. J Hepatol. 2013;58(5):984-92
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0025】
本発明の目的は、アルコール性脂肪性肝炎及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ）の回復及び治療に対する、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ又は６００ｍｇのピルフェニドンを含む持続放出性錠剤の形態の医薬組成物の使用である。
【0026】
本発明の更なる目的は、進行した肝線維症の軽減に対する、持続放出性錠剤の形態の医薬組成物の使用である。
【0027】
本発明の別の更なる目的は、血清コレステロール及びトリグリセリドを減少させることによって生じる、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの軽減に対する、持続放出性錠剤の形態の医薬組成物の使用である。
【0028】
本発明の別の更なる目的は、巨視的脂肪変性及び微視的脂肪変性の両方の形態における肝臓の脂肪蓄積の量を減少させることによって生じるＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの軽減及び治療に対する、持続放出性錠剤の形態の医薬組成物の使用である。
【0029】
さらに、本発明の更なる目的は、進行した肝線維症及びＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの回復及び治療に対する持続放出性医薬組成物におけるピルフェニドンの使用であり、その治療効果は、ＰＰＡＲガンマ（ペルオキシソーム増殖因子受容体活性化ガンマ）、ＰＰＡＲアルファ（ペルオキシソーム増殖因子受容体活性化アルファ）、ＬＸＲ及びＣＰＴ－１に対するアゴニストとして作用するピルフェニドンに起因する。これらの作用に付随して、ピルフェニドン－ＬＰは、肝臓炎症過程の誘導因子であるＮＦｋＢマスター遺伝子の発現減少を誘導する。
【課題を解決するための手段】
【0030】
本発明を解説するが、進行した肝線維症、並びにアルコール性及び非アルコール性の脂肪性肝炎（ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ）の治療又は軽減という前述の目的に限定されず、本発明は、ピルフェニドンを含む持続放出性錠剤の形態の医薬組成物が、現在の技術水準において先に開示されるピルフェニドンの肝毒性効果の減少に好都合であることを実証する。
【0031】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の目的の詳細な記載及び好ましい実施の形態、添付の特許請求の範囲、及び付随する図面から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【0032】
【図2】対照、ＨＦに含まれるマウス、及びＰＦＤ－ＬＰで治療されるマウスの肝臓組織の組織学的検査を示す図である。
【図4】線維化促進性及び炎症誘発性のマーカー遺伝子の発現を示す図である。
【図5】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨにおける脂肪代謝のメディエータのタンパク質発現によるウェスタンブロットを示す図であり、重要な代謝性転写因子であるＬＸＲ及びＰＰＡＲアルファを肝臓組織で評価した。
【図6】ＰＰＡＲガンマ及びＮＦｋＢ等の肝臓における炎症過程の調節に重要な転写因子のタンパク質発現によるウェスタンブロットを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0033】
実験で使用される動物
６週齢～８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６ＮＨｓｄ（Harlan、メキシコシティ）マウスを、１２時間の明／暗サイクルの２２±２℃の雰囲気で収容した。５匹～７匹のマウスを１６週間に亘り、標準飼料（standard Chow diet）（対照）又は高脂肪／高炭水化物（ＨＦ）飼料に無作為に割り当てた。対照群は、Harlan ＴＭ－２０１８（脂肪由来カロリーが１８％）の飼料を受け、純水に対して自由にアクセスさせたが、ＨＦ群はHarlan飼料ＴＤ－０６４１４（脂質由来カロリーが６０％）を受け、４２ｇ／Ｌ（５５％フルクトース及び４５％スクロースの割合）の濃度に濃縮した高フルクトースを含む水に自由にアクセスさせた。ＰＦＤマウス群（ＨＦ＋ＰＦＤ）は、ＨＦ飼料を８週間、続いてＨＦ飼料及び１００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＦＤ持続放出製剤を８週間に亘って受けた。全ての投薬計画でビヒクル０．１ｍｌを受けた。一晩絶食させた後、血液試料を分析した。開始から屠殺するまで、マウスの重量及びグルコースを毎週記録した。
６週齢～８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６ＮＨｓｄ（Harlan、メキシコシティ）マウスを、１２時間の明／暗サイクルの２２±２℃の雰囲気で収容した。５匹～７匹のマウスを１６週間に亘り、標準飼料（standard Chow diet）（対照）又は高脂肪／高炭水化物（ＨＦ）飼料に無作為に割り当てた。対照群は、Harlan ＴＭ－２０１８（脂肪由来カロリーが１８％）の飼料を受け、純水に対して自由にアクセスさせたが、ＨＦ群はHarlan飼料ＴＤ－０６４１４（脂質由来カロリーが６０％）を受け、４２ｇ／Ｌ（５５％フルクトース及び４５％スクロースの割合）の濃度に濃縮した高フルクトースを含む水に自由にアクセスさせた。ＰＦＤマウス群（ＨＦ＋ＰＦＤ）は、ＨＦ飼料を８週間、続いてＨＦ飼料及び１００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＦＤ持続放出製剤を８週間に亘って受けた。全ての投薬計画でビヒクル０．１ｍｌを受けた。一晩絶食させた後、血液試料を分析した。開始から屠殺するまで、マウスの重量及びグルコースを毎週記録した。
【0034】
体重、血糖、コレステロール、トリグリセリド、ＶＬＤＬコレステロール及びアミノトランスフェラーゼ
高脂肪飼料（ＦＨ）によって誘導される脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤ）を有するマウスの特徴を図１Ａ～図１Ｄに示す。最も多く体重が増加した（対照に対して最大３７％）ＨＦ群のマウスと、ＨＦ群よりも１１％体重が少ないＨＦ＋ＰＦＤ－ＬＰ群との間に顕著な差が見られた（図１Ａ）。血糖に関して、９週目～１３週目の有意差を伴って、対照群と比較してより高い血清グルコースレベルがＨＦ群で観察された。しかしながら、治療の終わりの５週間で、ＨＦ＋ＰＦＤ－ＬＰと対照群との間で有意差はなかった（図１Ｂ）。また、本発明者らは、ＨＦ＋ＰＦＤ群又は対照群と比較して、ＨＦ群においてより高いＡＳＴ（図１Ｃ）、ＡＬＴ（図１Ｄ）、並びにコレステロール、トリグリセリド及びＶＬＤＬ－コレステロール（表１）の血清レベルを見出した。
高脂肪飼料（ＦＨ）によって誘導される脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤ）を有するマウスの特徴を図１Ａ～図１Ｄに示す。最も多く体重が増加した（対照に対して最大３７％）ＨＦ群のマウスと、ＨＦ群よりも１１％体重が少ないＨＦ＋ＰＦＤ－ＬＰ群との間に顕著な差が見られた（図１Ａ）。血糖に関して、９週目～１３週目の有意差を伴って、対照群と比較してより高い血清グルコースレベルがＨＦ群で観察された。しかしながら、治療の終わりの５週間で、ＨＦ＋ＰＦＤ－ＬＰと対照群との間で有意差はなかった（図１Ｂ）。また、本発明者らは、ＨＦ＋ＰＦＤ群又は対照群と比較して、ＨＦ群においてより高いＡＳＴ（図１Ｃ）、ＡＬＴ（図１Ｄ）、並びにコレステロール、トリグリセリド及びＶＬＤＬ－コレステロール（表１）の血清レベルを見出した。
【0035】
【表1】
【0036】
組織学
ＨＦ群の肝臓組織の組織学的検査は、炎症性変化による相当量の小滴性脂肪変性及び大滴性脂肪変性を示した（図２）。ＨＦ群における脂肪変性は、主に大滴性であり、腺房ゾーン１で重篤であり、腺房ゾーン２では重篤な小滴性脂肪変性及び大滴性脂肪変性を伴った。重篤な小滴性脂肪変性の痕跡は腺房ゾーン３で見られ、その領域での肝細胞中の中程度の風船様変性、すなわち、炎症が好中球及び単核細胞を伴って主に門脈周囲にあり、またそれがスコア１（０～４）の門脈周囲の線維症を示し、かかる組織学的な変化はステージ１Ｃの肝線維症及びクラス３のＮＡＦＬＤと一致する。ＰＦＤ－ＬＰは、肝臓脂肪含量の劇的な減少を誘導した。これらの結果は、巨視的な肝臓の観察と相関する。中心及び周囲の脂肪に関して、ＨＦ＋ＰＦＤ－ＬＰは、ＨＦ群と比較して、より低い脂肪レベルを示した。
ＨＦ群の肝臓組織の組織学的検査は、炎症性変化による相当量の小滴性脂肪変性及び大滴性脂肪変性を示した（図２）。ＨＦ群における脂肪変性は、主に大滴性であり、腺房ゾーン１で重篤であり、腺房ゾーン２では重篤な小滴性脂肪変性及び大滴性脂肪変性を伴った。重篤な小滴性脂肪変性の痕跡は腺房ゾーン３で見られ、その領域での肝細胞中の中程度の風船様変性、すなわち、炎症が好中球及び単核細胞を伴って主に門脈周囲にあり、またそれがスコア１（０～４）の門脈周囲の線維症を示し、かかる組織学的な変化はステージ１Ｃの肝線維症及びクラス３のＮＡＦＬＤと一致する。ＰＦＤ－ＬＰは、肝臓脂肪含量の劇的な減少を誘導した。これらの結果は、巨視的な肝臓の観察と相関する。中心及び周囲の脂肪に関して、ＨＦ＋ＰＦＤ－ＬＰは、ＨＦ群と比較して、より低い脂肪レベルを示した。
【0037】
血清中のサイトカインの分析
組織学の結果を全身マーカーと関連付けるため、血清ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１β、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの炎症性サイトカインを分析した。血清ＩＬ－６レベル（図３Ａ）は、ＨＦ群（２１１±３０ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＨＦ＋ＰＦＤ群（１４５．８±１５．０ｎｇ／ｍｌ）で有意に減少された。ＩＬ－１βの血清レベル（図３Ｂ）は、ＨＦ群（１７７．４±２０．６ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＨＦ＋ＰＦＤ群（６９．３±１３ｎｇ／ｍｌ）において有意な減少を示す。ＩＦＮ－γは図３Ｃに示され、ＨＦ群（２２１．３±５０ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＰＦＤ－ＬＰ群（１８．２±８ｎｇ／ｍｌ）で有意に低かった。同様に、ＴＮＦ－α（図３Ｄ）は、ＨＦ群（２５４．６±７０ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＨＦ＋ＰＦＤ群（３２．９±２１．１ｎｇ／ｍｌ）において血清レベルの有意な減少を示す。ＩＬ－１７Ａのレベル（図３Ｆ）は、ＩＬ－１７Ａの血清レベルの有意な増加を示したＨＦ群（１９８３．５±４００ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＰＦＤ－ＬＰで治療したマウス（２７１．１±１４９．６ｎｇ／ｍｌ）で劇的な減少を示したことは言及するに値する。ＨＦ群で分析したサイトカインはいずれも、対照群と比較して非常に有意な増加を示した。最後に、抗炎症性サイトカインＩＬ－１０（図３Ｅ）の血清レベルは、ＨＦ群（１５．４±９．１ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＨＦ＋ＰＦＤ群（３７．８±１０．４ｎｇ／ｍｌ）で有意に高かったことが観察された。
組織学の結果を全身マーカーと関連付けるため、血清ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１β、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの炎症性サイトカインを分析した。血清ＩＬ－６レベル（図３Ａ）は、ＨＦ群（２１１±３０ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＨＦ＋ＰＦＤ群（１４５．８±１５．０ｎｇ／ｍｌ）で有意に減少された。ＩＬ－１βの血清レベル（図３Ｂ）は、ＨＦ群（１７７．４±２０．６ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＨＦ＋ＰＦＤ群（６９．３±１３ｎｇ／ｍｌ）において有意な減少を示す。ＩＦＮ－γは図３Ｃに示され、ＨＦ群（２２１．３±５０ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＰＦＤ－ＬＰ群（１８．２±８ｎｇ／ｍｌ）で有意に低かった。同様に、ＴＮＦ－α（図３Ｄ）は、ＨＦ群（２５４．６±７０ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＨＦ＋ＰＦＤ群（３２．９±２１．１ｎｇ／ｍｌ）において血清レベルの有意な減少を示す。ＩＬ－１７Ａのレベル（図３Ｆ）は、ＩＬ－１７Ａの血清レベルの有意な増加を示したＨＦ群（１９８３．５±４００ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＰＦＤ－ＬＰで治療したマウス（２７１．１±１４９．６ｎｇ／ｍｌ）で劇的な減少を示したことは言及するに値する。ＨＦ群で分析したサイトカインはいずれも、対照群と比較して非常に有意な増加を示した。最後に、抗炎症性サイトカインＩＬ－１０（図３Ｅ）の血清レベルは、ＨＦ群（１５．４±９．１ｎｇ／ｍｌ）と比較して、ＨＦ＋ＰＦＤ群（３７．８±１０．４ｎｇ／ｍｌ）で有意に高かったことが観察された。
【0038】
線維化促進性及び炎症誘発性のマーカー遺伝子の発現
肝臓メッセンジャーＲＮＡのレベルは、ＰＦＤ－ＬＰ＋ＨＦ群において、ＴＧＦ－β１の発現減少、並びにＣＯＬ１Ａ１及びＴＮＦ－αの有意な下方調節を示した。さらに、ＨＦ群と比較してＣＤ１１ｂ及びＭＣＰ１の遺伝子発現の有意な減少が観察された（図４）。
肝臓メッセンジャーＲＮＡのレベルは、ＰＦＤ－ＬＰ＋ＨＦ群において、ＴＧＦ－β１の発現減少、並びにＣＯＬ１Ａ１及びＴＮＦ－αの有意な下方調節を示した。さらに、ＨＦ群と比較してＣＤ１１ｂ及びＭＣＰ１の遺伝子発現の有意な減少が観察された（図４）。
【0039】
ＰＦＤ－ＬＰは、肝臓脂肪の代謝のメディエータを調節する
ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨにおける脂肪代謝メディエータの調節に対するＰＦＤの効果を分析するため、重要な代謝性転写因子であるＬＸＲ及びＰＰＡＲアルファを肝臓組織において評価した。図５に示されるように、ＰＦＤ＋ＨＦ群におけるＬＸＲ（８０８２±８４７）及びＰＰＡＲアルファ（１１５０６±１１６７）のタンパク質レベルは、対照（それぞれ２６３４±１０４２及び３８９０±１１３０）及びＨＦ群（それぞれ３３７５±８９８及び７３０８±１１１７）と比較して有意に増加した。また、ＬＸＲ及びＰＰＡＲによってそれぞれ標的とされるＳＲＥＢＰ１及びＣＰＴ１Ａ等のキータンパク質に対するＰＦＤ－ＬＰの効果をより良く理解するため、それらも評価した。図５に示されるように、ＰＦＤ－ＬＰは、対照（７８５±３９６）及びＨＦ群（２６２２±１１６１）と比較して、前駆タンパク質であるＳＲＥＢＰ１の増加（６０５７±８４７）を誘導した。一方で、その切断形態（活性形態）のＳＲＥＢＰ１は減少傾向を示したが、３つの群間、すなわち（４５６７±１６２０）、ＨＦ（１７７６±８９３）及びＰＦＤ＋ＨＦ（１６３８±３０３）で有意差は見られなかった。さらに、対照（４３０３±８２０）及びＨＦ群（６．１７２±１．３５６）と比較して、ＰＦＤ＋ＨＦ群においてＣＰＴ１Ａ（「燃焼」されるミトコンドリア中の肝臓脂肪の内部移行を担う酵素）発現において著しい増加（９３０３±８０９）が観察された。
ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨにおける脂肪代謝メディエータの調節に対するＰＦＤの効果を分析するため、重要な代謝性転写因子であるＬＸＲ及びＰＰＡＲアルファを肝臓組織において評価した。図５に示されるように、ＰＦＤ＋ＨＦ群におけるＬＸＲ（８０８２±８４７）及びＰＰＡＲアルファ（１１５０６±１１６７）のタンパク質レベルは、対照（それぞれ２６３４±１０４２及び３８９０±１１３０）及びＨＦ群（それぞれ３３７５±８９８及び７３０８±１１１７）と比較して有意に増加した。また、ＬＸＲ及びＰＰＡＲによってそれぞれ標的とされるＳＲＥＢＰ１及びＣＰＴ１Ａ等のキータンパク質に対するＰＦＤ－ＬＰの効果をより良く理解するため、それらも評価した。図５に示されるように、ＰＦＤ－ＬＰは、対照（７８５±３９６）及びＨＦ群（２６２２±１１６１）と比較して、前駆タンパク質であるＳＲＥＢＰ１の増加（６０５７±８４７）を誘導した。一方で、その切断形態（活性形態）のＳＲＥＢＰ１は減少傾向を示したが、３つの群間、すなわち（４５６７±１６２０）、ＨＦ（１７７６±８９３）及びＰＦＤ＋ＨＦ（１６３８±３０３）で有意差は見られなかった。さらに、対照（４３０３±８２０）及びＨＦ群（６．１７２±１．３５６）と比較して、ＰＦＤ＋ＨＦ群においてＣＰＴ１Ａ（「燃焼」されるミトコンドリア中の肝臓脂肪の内部移行を担う酵素）発現において著しい増加（９３０３±８０９）が観察された。
【0040】
最後に図６は、ＰＰＡＲガンマ及びＮＦｋＢ等の肝臓における炎症過程の調節に重要な転写因子が、結果的に肝臓の炎症の減少をもたらすように特異的に調節されることを示している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
