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特開2022-174194がんの処置のための抗ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２及び抗カドヘリン１７結合性二重特異的分子
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022174194
(43)【公開日】2022-11-22
(54)【発明の名称】がんの処置のための抗ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２及び抗カドヘリン１７結合性二重特異的分子
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20221115BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20221115BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20221115BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20221115BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20221115BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20221115BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20221115BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20221115BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20221115BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20221115BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20221115BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221115BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20221115BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C07K16/28
C07K16/46
C07K19/00
C12P21/08
C12N15/62 Z
A61P35/00
A61K39/395 T
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2022142331
(22)【出願日】2022-09-07
(62)【分割の表示】P 2019534104の分割
【原出願日】2017-12-21
(31)【優先権主張番号】62/437,770
(32)【優先日】2016-12-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】17155973.5
(32)【優先日】2017-02-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(71)【出願人】
【識別番号】503385923
【氏名又は名称】ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】キューンケル，クラウス－ペーター
(72)【発明者】
【氏名】エリルマズ，エルタン
(72)【発明者】
【氏名】フェン，ティモシー
(72)【発明者】
【氏名】ガネサン，ラクマー
(72)【発明者】
【氏名】ガルシア－マルティネス，フアン・マニュエル
(72)【発明者】
【氏名】ホ，ジェイソン
(72)【発明者】
【氏名】ケスル，クリスティアン
(72)【発明者】
【氏名】セン，サウラブ
(72)【発明者】
【氏名】シャアバン，アブドゥルサラム
(72)【発明者】
【氏名】ヴォイノフ，ウラジミール
(72)【発明者】
【氏名】ヴェルニッツニヒ，アンドレアス
(57)【要約】 （修正有）
【課題】改善された治療プロファイルを有するＴＲＡＩＬ受容体アゴニスト分子を提供する。
【解決手段】ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位とを含む、結合性分子、並びに医薬におけるそれらの使用、それを含有している医薬組成物、並びにがんの治療及び／又は予防のための薬剤としてそれを使用する方法を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位とを含む、結合性分子、並びに医薬におけるそれらの使用、それを含有している医薬組成物、並びにがんの治療及び／又は予防のための薬剤としてそれを使用する方法を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位とを含む、結合性分子。
【請求項2】
分子が二重特異的かつ四価である、請求項１記載の結合性分子。
【請求項3】
カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位が免疫グロブリン（Ｉｇ）分子であり、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合分子が１つ以上のｓｃＦｖ（群）を含む、請求項１又は２記載の結合性分子。
【請求項4】
１つ以上のｓｃＦｖ（群）がＮ末端からＣ末端に向かってＶＬ－ＶＨの配向を有する、請求項３記載の結合性分子。
【請求項5】
１つ以上のｓｃＦｖ（群）が、Ｉｇ分子の重鎖のＣ末端に融合している、請求項３又は４のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項6】
Ｉｇ分子がＩｇＧである、請求項３～５のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項7】
１つ以上のｓｃＦｖ（群）が、ペプチドリンカー、好ましくは約４～２０アミノ酸長を有するペプチドリンカーによって、Ｉｇ分子に融合している、請求項３～６のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項8】
ＴＲＡＩＬ２に特異的に結合する抗原結合部位が、抗原結合部位ｉ）からｘｉｉｉ）：
ｉ）配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖ）配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉ）配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉ）配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｘ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉ）配列番４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の結合性分子。
ｉ）配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖ）配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉ）配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉ）配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｘ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉ）配列番４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項9】
ＴＲＡＩＬ２に特異的に結合する抗原結合分子が、抗原結合部位ｉ）からｘｉｖ）：
ｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｘ）配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；及び
ｘｉｖ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の結合性分子。
ｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｘ）配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；及び
ｘｉｖ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項10】
ＣＤＨ１７に特異的に結合する抗原結合部位が、抗原結合部位ｉ）からｉｖ）：
ｉ）配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；及び
ｉｖ）配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の結合性分子。
ｉ）配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；及び
ｉｖ）配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項11】
ＣＤＨ１７に特異的に結合する抗原結合部位が、抗原結合部位ｉ）からｖ）：
ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；及び
ｖ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の結合性分子。
ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；及び
ｖ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項12】
（ｉ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子。
【請求項13】
（ｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子。
【請求項14】
（ｉ）配列番号１８９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子。
【請求項15】
（ｉ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１７のアミノ酸配列を含む重鎖と；（ｉｉ）配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子。
【請求項16】
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１４７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１４９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１５１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１５３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１５５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２３０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２３１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２３２のアミノ酸配列を含む重鎖と；（ｉｉ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子。
【請求項17】
（ｉ）配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ、（ｉｉ）配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ、（ｉｉｉ）配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ、又は（ｉｖ）配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ、を含む、ＣＤＨ１７に特異的に結合する抗体分子。
【請求項18】
（ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｉｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｉｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、又は（ｖ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、を含む、請求項１７記載の抗体分子。
【請求項19】
請求項８～１１のいずれか一項に記載の結合性分子又は請求項１７若しくは１８のいずれか一項に記載の抗体分子の重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメインをコードしている単離された核酸分子。
【請求項20】
請求項１２～１６のいずれか一項に記載の結合性分子の重鎖及び／又は軽鎖をコードしている単離された核酸分子。
【請求項21】
請求項１９又は２０記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項22】
請求項２１記載の発現ベクターを用いてトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項23】
（ａ）分子の発現を可能とする条件下で請求項２２記載の宿主細胞を培養する工程；及び
（ｂ）該分子を回収する工程；及び場合により
（ｃ）該分子をさらに精製及び／又は修飾及び／又は製剤化する工程
を含む、請求項８～１６のいずれか一項に記載の結合性分子又は請求項１７若しくは１８記載の抗体分子を製造する方法。
（ｂ）該分子を回収する工程；及び場合により
（ｃ）該分子をさらに精製及び／又は修飾及び／又は製剤化する工程
を含む、請求項８～１６のいずれか一項に記載の結合性分子又は請求項１７若しくは１８記載の抗体分子を製造する方法。
【請求項24】
医薬に使用するための請求項１～１６のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項25】
請求項１～１６のいずれか一項に記載の結合性分子と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項26】
治療有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の結合性分子をそれを必要とする患者に投与する工程を含む、がんの処置法。
【請求項27】
がんの処置用の医薬組成物を調製するための請求項１～１６のいずれか一項に記載の結合性分子の使用。
【請求項28】
がんの処置法に使用するための請求項１～１６のいずれか一項に記載の結合性分子。
【請求項29】
がんが、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃癌（ＧＣ）、膵臓癌（ＰＡＣ）、食道癌、又は神経内分泌腫瘍である、請求項２６記載の方法、請求項２７記載の使用、又は請求項２８記載の使用のための結合性分子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本発明は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）及びカドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に結合する結合性分子、並びに医薬におけるそれらの使用、それを含有している医薬組成物、並びにがんの治療及び／又は予防のための薬剤としてそれを使用する方法に関する。
本発明は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）及びカドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に結合する結合性分子、並びに医薬におけるそれらの使用、それを含有している医薬組成物、並びにがんの治療及び／又は予防のための薬剤としてそれを使用する方法に関する。
【0002】
発明の背景
がんは、異常な細胞増殖と、がん細胞が身体全体に侵襲又は蔓延できることに一般的に基づいた疾患群である。それは深刻な疾患であり、世界的に死亡の主要原因である。
がんは、異常な細胞増殖と、がん細胞が身体全体に侵襲又は蔓延できることに一般的に基づいた疾患群である。それは深刻な疾患であり、世界的に死亡の主要原因である。
【0003】
がんを管理又は場合によってはがんを処置する試みにおいて、手術、化学療法、放射線療法、及びホルモン療法をはじめとする様々な処置法が使用されている。近年では、特定のがんの処置において進歩が見られたが、依然としてこの疾患の処置には改善が必要とされる。
【0004】
抗体を基剤とした生物学的分子は、がんの処置のための強力な治療剤である可能性を与える。抗体は、細胞表面上の特定のタンパク質（それらの標的抗原）を認識して結合するように設計され、このようなタンパク質は特定のがん細胞の表面上又は免疫細胞上にしか存在していない場合がある。この結合は、それらの標的抗原タンパク質の機能及びまた抗体それ自体の構造に依存して、多くの異なる生物学的応答を惹起することができる。
【0005】
例えば、いくつかの抗体は、免疫細胞をがん細胞に誘引することによって、又は免疫系それ自体の活性に直接影響を及ぼすことによってのいずれかによって、免疫系をトリガーすることによりがん細胞を攻撃し死滅させる。さらに他の種類の抗体を基剤とした療法は、がん細胞に結合して、細胞分裂を停止又は減少させ、これにより、異常な細胞増殖を緩徐化又は妨げる。他の種類の抗体は、それらに付着した薬物又は放射性粒子を有し、これにより、これらの治療薬はがん細胞それ自体に送達される。
【0006】
アポトーシスは制御された細胞機序であり、ここでは生物は、正常な組織区画では細胞の恒常性を維持し、無秩序な細胞を排除する。
【0007】
哺乳動物細胞ではアポトーシスに至る２つの主要なシグナル伝達経路が存在する：内因性経路と外因性経路。内因性経路はミトコンドリアレベルで開始され、化学療法又は放射線療法により誘発された細胞死において実質的な役割を果たす。対照的に、外因性死滅経路は、細胞表面上での細胞死受容体により媒介されるシグナルを通して開始される。
【0008】
様々なメンバーの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーによって媒介されるシグナル後の、外因性経路を通して誘発された細胞死は十分に研究されている。ＴＮＦスーパーファミリーは、２～５つのシステインリッチな細胞外リピート配列によって特徴付けられる。ＴＮＦスーパーファミリーに属する細胞死受容体は、アポトーシスシグナルの伝達に必須である、約８０アミノ酸の相同な細胞内の細胞死ドメインを共有している。
【0009】
ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド（ＴＲＡＩＬ）は、２種類の受容体（ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスをトリガーする細胞死受容体及びＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスを抑制するデコイ受容体）と相互作用する天然タンパク質リガンドである。現在までに、ＴＲＡＩＬに特異的な４つのヒト受容体が同定されている：細胞死受容体であるＤＲ４（ＤＲ４／ＴＲＡＩＬ受容体１／ＴＲＡＩＬＲ１）及びＤＲ５（ＴＲＡＩＬ受容体２／ＴＲＡＩＬ－Ｒ２／ＫＩＬＬＥＲ）、並びにデコイ受容体であるＤｃＲ１／ＴＲＡＩＬ３／ＴＲＩＤ、及びＤｃＲ２／ＴＲＡＩＬ４。ＴＲＡＩＬはまた、可溶性デコイ受容体であるオステオプロテオグリカン（ＯＰＧ）にも低い親和性で結合することができる。
【0010】
ＴＲＡＩＬ受容体への標的化は、がん療法を開発する際の有用なアプローチであると考えられている。なぜなら、抗体を基剤とした分子、すなわちＴＲＡＩＬ受容体アゴニスト分子が、ＴＲＡＩＬ受容体に結合し活性化することができるならば、それは次いでがん細胞のアポトーシスを誘発することができるからである。多くの前臨床試験において示されているように、ＴＲＡＩＬシグナル伝達は、数多くの腫瘍細胞株においてアポトーシスを効率的に誘発するが、大半の正常細胞においては誘発しない。しかしながら、肝臓内の正常組織、特に肝細胞も、このアポトーシス誘発機序に影響されやすいことが報告されている。したがって、該経路をあまりにも効果的に活性化する分子が使用された場合には、がん以外の細胞においてもアポトーシスが誘発されることに因り重度の副作用が誘発される可能性がある。他方で、ほんの弱くしか活性化しない分子が使用されれば、これらは良好な耐容性を示すが、低い抗がん活性を有することが示されている。
【0011】
したがって、ＴＲＡＩＬ受容体アゴニスト分子として機能することができる治療に有効であるが安全な抗体を基剤とした生物学的分子を開発する必要がある。したがって、本発明の目的は、改善された治療プロファイルを有するＴＲＡＩＬ受容体アゴニスト分子を作製することであった。
【0012】
発明の要約
本発明は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）に特異的に結合する抗原結合部位と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する抗原結合分子とを単一の結合性分子内で組み合わせる概念に基づく。以下により詳細に考察しているように、本発明の分子の１つの利点は、アポトーシスが、その表面上にＴＲＡＩＬ２及びＣＤＨ１７を提示している細胞においてのみ促進されることである。
本発明は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）に特異的に結合する抗原結合部位と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する抗原結合分子とを単一の結合性分子内で組み合わせる概念に基づく。以下により詳細に考察しているように、本発明の分子の１つの利点は、アポトーシスが、その表面上にＴＲＡＩＬ２及びＣＤＨ１７を提示している細胞においてのみ促進されることである。
【0013】
したがって、本発明の第一の態様は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位（第一の抗原結合部位）と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位（第二の抗原結合部位）とを有する結合性分子を提供する。
【0014】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、該分子は二重特異的かつ四価である。
【0015】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位は免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（２本の軽鎖と２本の重鎖を有する慣用的なＹ字形構造の完全長抗体を有する）であり、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位は１つ以上のｓｃＦｖ（群）を含む。
【0016】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、１つ以上のｓｃＦｖ（群）はＮ末端からＣ末端に向かってＶＬ－ＶＨの配向を有する。
【0017】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、１つ以上のｓｃＦｖ（群）は、Ｉｇ分子の重鎖のＣ末端に融合している。例えば、１つのｓｃＦｖは、Ｉｇ分子の一方の重鎖のＣ末端に融合し、１つのｓｃＦｖはＩｇ分子の他方の重鎖のＣ末端に融合している。したがって、ＴＲＡＩＬ２に特異的なｓｃＦｖは、Ｉｇ分子の各重鎖に融合し、これにより対称的で二重特異的かつ四価の構造を形成する。
【0018】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、Ｉｇ分子はＩｇＧ１ＫＯである。本発明の結合性分子の別の好ましい実施態様では、Ｉｇ分子はＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔである。
【0019】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、１つ以上のｓｃＦｖ（群）は、ペプチドリンカー、好ましくは約４～２０アミノ酸長（例えば、６、９、１２、１５アミノ酸のいずれか１つ）を有するペプチドリンカーによってＩｇ分子に融合している。
【0020】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬ２に特異的に結合する抗原結合部位（第一の抗原結合部位）は、抗原結合部位（ｉ）から（ｘｉｉｉ）：
ｉ）配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖ）配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉ）配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉ）配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｘ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；及び
ｘｉｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される。
ｉ）配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖ）配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉ）配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉ）配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｘ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；及び
ｘｉｉｉ）配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される。
【0021】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬ２に特異的に結合する抗原結合部位（第一の抗原結合部位）は、抗原結合部位（ｉ）から（ｘｉｖ）：
ｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｘ）配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；及び
ｘｉｖ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される。
ｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｖｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｘ）配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｘｉｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；及び
ｘｉｖ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される。
【0022】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的に結合する抗原結合部位（第二の抗原結合部位）は、抗原結合部位（ｉ）から（ｉｖ）：
ｉ）配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；及び
ｉｖ）配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される。
ｉ）配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位；及び
ｉｖ）配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される。
【0023】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的に結合する抗原結合部位（第二の抗原結合部位）は、抗原結合部位（ｉ）から（ｖ）：
ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；及び
ｖ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される。
ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；
ｉｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位；及び
ｖ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む、抗原結合部位
からなる群より選択される。
【0024】
いくつかの実施態様では、配列番号２７２の重鎖ＣＤＲ３配列が、本発明の結合性分子の脈絡において配列番号７８の重鎖ＣＤＲ３配列の代わりに使用される。
【0025】
いくつかの実施態様では、その重鎖アミノ酸配列（例えば、Ｉｇ重鎖のＣ末端に融合したｓｃＦｖを有する改変された重鎖）並びにその軽鎖アミノ酸配列によって定義される、以下の様々な態様に提供される結合性分子は、２本の重鎖と２本の軽鎖を含み、これにより対称的で四価で二重特異的な構造を形成する。
【0026】
本発明のさらなる態様は、（ｉ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１６９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを有する、結合性分子を提供する。
【0027】
本発明のさらなる態様は、（ｉ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１７９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１８７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを有する、結合性分子を提供する。
【0028】
さらなる態様では、本明細書において、（ｉ）配列番号１８９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを有する、結合性分子が提供される。
【0029】
本発明のさらなる態様は、（ｉ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２０９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２７１のアミノ酸配列を含む重鎖と；（ｉｉ）配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを有する、結合性分子を提供する。
【0030】
さらなる態様では、本明細書において、（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１４７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１４９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１５１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１５３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１５５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２１９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２３のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２４のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２６のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２７のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２８のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２２９のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２３０のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２３１のアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号２３２のアミノ酸配列を含む重鎖と；（ｉｉ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを有する、結合性分子が提供される。
【0031】
本発明のさらなる態様は、本発明の結合性分子をコードしている核酸分子、又はこのような核酸分子を含有している発現ベクターを提供する。
【0032】
本発明のさらなる態様は、発現制御配列と機能的に結合した本発明の核酸分子を含む宿主細胞を提供する。本明細書においてさらに、本明細書に記載されているような結合性分子をコードしている核酸分子を含む発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。
【0033】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）該分子の発現を可能とする条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程；及び
（ｂ）該分子を回収する工程
を含む、本発明の結合性分子の生成法を提供する。
（ａ）該分子の発現を可能とする条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程；及び
（ｂ）該分子を回収する工程
を含む、本発明の結合性分子の生成法を提供する。
【0034】
本発明のさらなる態様は、医薬に使用するための本発明の結合性分子を提供する。
【0035】
本発明のさらなる態様は、がん、好ましくは結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃癌（ＧＣ）、膵臓癌（ＰＡＣ）、食道癌、又は神経内分泌腫瘍の治療法に使用するための本発明の結合性分子を提供する。
【0036】
本発明のさらなる態様は、本発明の結合性分子を薬学的に許容される担体及び場合により１つ以上のさらに他の活性成分と一緒に含む、医薬組成物を提供する。
【0037】
本発明のさらなる態様は、有効量の本発明の結合性分子をそれを必要とする患者に投与する工程を含む、がんの処置法を提供する。
【0038】
本明細書において、（ｉ）配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ、（ｉｉ）配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ、（ｉｉｉ）配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ、又は（ｉｖ）配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含む、ＣＤＨ１７に特異的に結合する抗体がさらに提供される。
【図面の簡単な説明】
【0039】
【図1】図１Ａ及びＢ：本発明の結合性分子の図示。ＣＤＨ１７に特異的に結合し、２本の重鎖と２本の軽鎖を含む、Ｉｇ分子と、（ｉｉ）ＴＲＡＩＬ２に特異的に結合する２つのｓｃＦｖ分子とを含む、本発明の結合性分子の一例が示されている。ｓｃＦｖのＮ末端は、Ｉｇ分子の各重鎖のＣ末端に融合し、これにより、対称的で二重特異的で四価の抗体様分子が形成される。
【図2】Ｃｏｌｏ－２０５細胞におけるＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲ２）及びＣＤＨ１７のタンパク質表面発現の分析。細胞のみを含有している対照試料と比較したフィコエリトリン（ＰＥ）の平均値として結果が示されている。データは、４回の独立した実験の代表である。
【図3】細胞生存率に対する抗体のインキュベーションの効果。Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々な濃度の（ｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体）単独、（ｉｉ）抗ＣＤＨ１７ｖ１抗体単独、（ｉｉｉ）ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７二重特異的分子（ＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１）、又は（ｉｖ）分離したＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体）及びＣＤＨ１７ｖ１抗体の等価な組み合わせを用いて２４時間処置した。データは、未処置対照と比較した相対的平均値＋標準偏差として表現される。２回の独立したアッセイが、各条件について２回実施された。
【図4】抗体のインキュベーション後のアポトーシス誘発の分析（カスパーゼ活性化アッセイ）。Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々な濃度の（ｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体）単独、（ｉｉ）抗ＣＤＨ１７ｖ１抗体単独、及び（ｉｉｉ）ＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１二重特異的分子を用いて（Ａ）２時間又は（Ｂ）６時間処置した。（Ａ）カスパーゼ－８又は（Ｂ）カスパーゼ－３の活性化を測定した。データは、未処置対照と比較した変化倍率の相対的平均値＋標準偏差として表現される。３回の独立したアッセイが、各条件について２回実施された。
【図5】ＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１二重特異的分子の特異性の分析。本発明者らは、ＣＤＨ１７の代わりにヒトＴＲ２及びトリニトロフェノール（ＴＮＰ）を認識する追加の二重特異的分子を作製した。Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々な濃度の（ｉ）ＴＮＰに対する抗体単独、（ｉｉ）抗ＣＤＨ１７ｖ１抗体単独、（ｉｉｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体）単独、（ｉｖ）ＴＮＰ／ＴＲ２ｖ１、又は（ｖ）ＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１二重特異的分子を用いて２４時間処置し、細胞生存率を測定した。データは、未処置対照と比較した相対的平均値＋標準偏差として表現される。２回の独立したアッセイが各条件について２回実施された。
【図6】ＣＤＨ１７陰性細胞に対する抗体のインキュベーションの効果。（Ａ）ＨｅｐＧ２細胞におけるＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲ２）及びＣＤＨ１７のタンパク質表面発現の分析。結果は、細胞のみを含有している対照試料と比較したフィコエリトリンの平均値として示される。データは、３回の独立した実験の代表である。（Ｂ）ＨｅｐＧ２細胞を、様々な濃度の（ｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体）単独、（ｉｉ）ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７二重特異的分子（ＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１）、又は（ｉｉｉ）架橋剤であるヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下における抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体（Ｆｃに架橋））を用いて７２時間処置した。データは、未処置対照と比較した相対的平均値＋標準偏差として表現される。５回の独立したアッセイが各条件について２回実施された。
【図7】細胞生存率に対する、異なるＩｇＧ骨格を含有している二重特異的分子の効果。Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々な濃度の抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体又は抗ＴＲ２ｖ２抗体）単独、並びにヒトＴＲＡＩＬＲ２と、異なるＩｇＧ１骨格（Ａ及びＣ）及びＩｇＧ４Ｐｒｏ骨格（Ｂ）を含有しているヒトＣＤＨ１７とを認識する様々な二重特異的で四価の分子を用いて２４時間処置した。データは未処置対照と比較した相対的平均値＋標準偏差として表現される。２回の独立したアッセイが各条件について２回実施された。
【図8】細胞生存率に対するｓｃＦｖ変異体の効果。Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々なｓｃＦｖ変異体を含有している様々な濃度の様々な二重特異的分子を用いて２４時間処置した。データは、未処置対照と比較した相対的平均値＋標準偏差として表現される。２回の独立したアッセイが各条件について２回実施された。
【図9】細胞生存率に対する、ヒトＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲ２）及びヒトＣＤＨ１７を認識する二重特異的で四価の分子の効果。（Ａ～Ｃ）Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々なＣＤＨ１７結合剤とｓｃＦｖ変異体とを含有している様々な濃度の様々な二重特異的分子を用いて２４時間処置した。（Ｄ）ＨｅｐＧ２細胞を、様々なＣＤＨ１７結合剤とｓｃＦｖ変異体とを含有している様々な濃度の様々な二重特異的分子を用いて７２時間処置した。抗ＴＲ２ｖ２抗体（Ａ～Ｄ）及び抗ＣＤＨ１７Ｈ２抗体（Ｃ～Ｄ）のみを対照として使用した。データは、未処置対照と比較した相対的平均値＋標準偏差として表現される。少なくとも２回の独立したアッセイが各条件について２回実施された。
【図10】細胞生存率に対する、ヒトＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲ２）及びヒトＣＤ４４ｖ６を認識する二重特異的分子の効果。（Ａ）Ｃｏｌｏ－２０５細胞におけるＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲ２）及びＣＤ４４ｖ６のタンパク質表面発現の分析。結果は、細胞のみを含有している対照試料と比較したフィコエリトリンの平均値として示される。どちらのタンパク質も、それぞれのＩｇＧ対照と比較して有意な発現を示した。データは、３回の独立した実験の代表である。（Ｂ）Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々な濃度の抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体）単独、抗ＣＤ４４ｖ６抗体単独、及びＣＤ４４ｖ６／ＴＲ２ｖ１二重特異的分子を用いて７２時間処置した。データは、未処置対照と比較した相対的平均値＋標準偏差として表現される。２回の独立したアッセイが各条件について２回実施された。
【図11】ＣＲＣ細胞生存率に対する、抗体のインキュベーションの効果。（Ａ及びＢ）ＣＬ－３４細胞（Ａ）及びＳＫ－ＣＯ－１細胞（Ｂ）におけるＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲ２）及びＣＤＨ１７のタンパク質表面発現の分析。結果は、細胞のみを含有している対照試料と比較したフィコエリトリンの平均値＋標準偏差として示される。データは、２回の独立した実験の代表である。ＣＬ－３４細胞（Ｃ）及びＳＫ－ＣＯ－１細胞（Ｄ）を、様々な濃度の（ｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（抗ＴＲ２ｖ１抗体）単独、（ｉｉ）抗ＣＤＨ１７ｖ１抗体単独、又は（ｉｉｉ）ＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１を用いてそれぞれ１２０時間及び９６時間処置した。データは、未処置対照と比較した相対的平均値＋標準偏差として表現される。２回の独立したアッセイが各条件について２回実施された。
【図12】ヒトＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲ２）及びヒトＣＤＨ１７を認識する四価分子の有効性：ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７二重特異的分子（黒丸）［ＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ２－（ＩｇＧ１ＫＯ）（Ａ及びＢ）又はＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ２－（ＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔ）（Ｃ及びＤ）］又はビヒクル対照（白丸）を、Ｃｏｌｏ２０５腫瘍細胞（Ａ及びＣ）又はＧｐ２ｄ腫瘍細胞（Ｂ及びＤ）を有するマウスに投与した。指定された日に投与した後に腫瘍体積（mm3）を測定し、データは腫瘍体積の中央値として表現される。８～１０匹の動物が各群に含まれた。
【図13】新規なＣＤＨ１７抗体分子を使用したＣｏｌｏ－２０５細胞におけるＣＤＨ１７のタンパク質表面発現の分析。結果は、細胞のみを含有している対照試料と比較したアロフィコシアニンの平均値として示される。２回の実験の代表的データ。
【図14】初期結腸直腸癌及び結腸直腸癌の肝転移におけるＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２タンパク質の発現。対応する一次抗体、続いて検出試薬、及びＤＡＢ溶液中でのインキュベーションを使用したＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７の代表的画像。
【0040】
発明の詳細な説明
上記のように、がんの処置に対する１つのアプローチは、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド（ＴＲＡＩＬ）受容体により媒介されるアポトーシス経路に特異的に結合し活性化する分子を使用することによって、がん細胞のアポトーシスを誘発することであった。多くの前臨床試験に示されているように、ＴＲＡＩＬシグナル伝達は、数多くの腫瘍細胞株においてアポトーシスを効果的に誘発するが、大半の正常細胞においては誘発しない。しかしながら、肝臓内の正常組織、特に肝細胞も、このアポトーシス誘発機序に影響を受けやすいことが報告されている。
上記のように、がんの処置に対する１つのアプローチは、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド（ＴＲＡＩＬ）受容体により媒介されるアポトーシス経路に特異的に結合し活性化する分子を使用することによって、がん細胞のアポトーシスを誘発することであった。多くの前臨床試験に示されているように、ＴＲＡＩＬシグナル伝達は、数多くの腫瘍細胞株においてアポトーシスを効果的に誘発するが、大半の正常細胞においては誘発しない。しかしながら、肝臓内の正常組織、特に肝細胞も、このアポトーシス誘発機序に影響を受けやすいことが報告されている。
【0041】
ＴＲＡＩＬは、高い親和性で４つの明確に異なる細胞表面受容体に結合する。そのうち２つのＴＲＡＩＬＲ１及びＴＲＡＩＬＲ２は、その細胞内細胞死ドメインと、様々なアダプタータンパク質及びプロ－カスパーゼ８との相互作用を介してＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスをトリガーすることができる。ＴＲＡＩＬリガンドを介したＴＲＡＩＬＲ１分子又はＴＲＡＩＬＲ２分子のクラスター化は、プロ－カスパーゼ８の自己触媒による切断及び活性化を促進し、これにより次いで、アポトーシスが誘発される。ＴＲＡＩＬＲ３及びＴＲＡＩＬＲ４はデコイ受容体であり、それらの細胞外ドメインはＴＲＡＩＬに結合することができるが、該受容体の細胞内部分は、ＴＲＡＩＬとの結合時にアポトーシスを誘発することのできるドメインを含有していない。
【0042】
デコイＴＲＡＩＬ受容体の過剰発現は、がん細胞がＴＲＡＩＬリガンドの存在に対して非感受性となることを引き起こす可能性がある。デコイではない細胞死を誘発するＴＲＡＩＬ受容体の特異的標的化はこの問題を回避し、それはより効果的な腫瘍の処置を示す。本発明は、ＴＲＡＩＬＲ２アゴニスト分子の開発に焦点を当てる。ＴＲＡＩＬＲ２は、広範囲のがんに幅広く発現されている。
【0043】
レクサツムマブ（ＨＧＳ－ＥＴＲ２）を含むいくつかのＴＲＡＩＬＲ２特異的アゴニスト抗体が、がんの処置のために開発されている。しかしながら、これらのアゴニスト抗体は、臨床では効力を欠いていた。これは、ＴＲＡＩＬＲ２受容体のクラスター化が十分ではなく、それによりがん細胞のアポトーシスを効果的に誘発することができないことに起因するようである。
【0044】
ＴＲＡＩＬＲ２により媒介されるがん細胞のアポトーシスを促進する様々な試みにおいて、新規な四量体のＴＲＡＩＬＲ２結合性ナノボディ、すなわちＴＡＳ２６６が開発された。前臨床実験において、それは、従来のＴＲＡＩＬＲ２を標的化する抗体より優れた抗腫瘍効力を実証した。しかしながら、肝臓内の肝細胞は、ＴＲＡＩＬＲ２により媒介されるアポトーシスに対して感受性である可能性があり、それ故、ＴＡＳ２６６によって促進されるような、標的化していないＴＲＡＩＬＲ２クラスカー化の増加は、毒性の可能性のリスクを有することが報告されている。実際に、ＴＡＳ２６６の第Ｉ相臨床試験は打ち切られている。
【0045】
したがって、該経路をあまりにも効果的にアゴニスト作用する分子が使用される場合には、がん以外の細胞においてもアポトーシスが誘発されるので、重度の副作用が誘発される可能性がある。他方で、ほんの弱くしかアゴニスト作用しない分子が使用された場合には、これらは良好な耐容性を示すが、低い抗がん活性を有することが示されている。
【0046】
過去に、ＴＲＡＩＬ受容体結合部位と、「アンカー標的」と呼ばれる、がん細胞に特異的な細胞表面分子に結合する部位からなる、二重特異的分子を設計する試みがなされている。理論的には、このような二重特異的分子は、アンカー標的を発現しているがん細胞に専ら結合し、それらのＴＲＡＩＬ受容体結合部位を通してアポトーシスを誘発する。
【0047】
多くの様々なアンカー標的が、ＴＲＡＩＬ受容体結合性分子にとって適した組合せ対であると提唱されている。
【0048】
例えば、ＣＥＡ（ＣＥＡＭ５＿ＨＵＭＡＮ）及びＣＲＩＰＴＯが、国際公開公報第２０１１０３９１２６Ａ１号において適切なアンカー標的として示唆されている。ＣＥＡ及びＣＲＩＰＴＯは、グルコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーによって細胞膜に連結されている。しかしながら、ＣＥＡ及びＣＲＩＰＴＯはどちらも細胞表面から容易に切断され、腫瘍から血流中に流れ出る。実際に、血清中ＣＥＡレベルは、がんのスクリーニングのためのバイオマーカーとして使用されている。理解され得るように、血清中ＣＥＡ及びＣＲＩＰＴＯは、ＴＲＡＩＬ受容体及びこれらのアンカー標的に対するデュアル結合を有する二重特異的分子に結合することができる。したがって、血清中ＣＥＡ及びＣＲＩＰＴＯは、膜に結合したアンカータンパク質と競合するだけでなく、ＣＥＡ又はＣＲＩＰＴＯを発現していない細胞におけるＴＲＡＩＬ受容体活性化の可能性も増加させる可能性があり、したがって、望ましくない副作用を引き起こす可能性がある。
【0049】
ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）もまたアンカー標的として提唱されている。しかしながら、ＦＡＰは、腫瘍間質内に局在する活性化線維芽細胞上にのみ発現している。ＦＡＰは、上皮がん細胞には発現されていない。したがって、ＦＡＰ二重特異的分子は単に、活性化線維芽細胞と物理的に密接に接触しているがん細胞のアポトーシスを促進するように機能するだけだろう（Brunker et al., Molecular Cancer Therapeutics (2016), 15(5):946-957）。活性化線維芽細胞と直接接触していない腫瘍細胞は、この処置によって影響を受けず、増殖し続けるだろう。したがって、がん細胞においてＴＲＡＩＬ受容体により誘発されるアポトーシスを媒介するためのアンカー標的としてＦＡＰを使用することには明らかな欠点がある。さらに、活性化線維芽細胞はまた、肝線維症、肺線維症、アテローム性動脈硬化症、及び関節炎をはじめとする組織修復部位にも見られるので、ＦＡＰ受容体とＴＲＡＩＬ受容体とを標的化する二重特異的分子は、活性化線維芽細胞の表面上にアンカーする可能性があり、肝臓又は他の臓器内の隣接する正常なＴＲＡＩＬ感受性細胞上でもアポトーシスを誘発する可能性がある。
【0050】
同様に、ＭＣＳＰ（黒色腫関連硫酸コンドロイチンプロテオグリカン）及びＲＯＢＯ４（roundabout homolog4）も、アンカー標的として提唱されている（He Yuan et al., The Journal of Investigative Dermatology (2016), 136(2):541-544；国際公開公報第２０１１０３９１２６Ａ１号）。黒色腫の細胞表面上におけるその発現とは別に、ＭＣＳＰは主に新生血管上に発現している。ＲＯＢＯ４は、内皮細胞に特異的に発現している。どちらも様々な腫瘍型の血管新生部位に記載されている。したがって、ＦＡＰと同様に、ＭＳＣＰを発現している黒色腫という唯一の例外を除いて、効果的であるためには、ＭＳＣＰ又はＲＯＢＯ４及びＴＲＡＩＬ受容体を標的化する二重特異的分子は、それらが内皮細胞と物理的に密接に接触している場合にのみ、がん細胞のアポトーシスを促進するように機能するだろう。このことは、腫瘍は成長するにつれてその血液供給量を上回る急速な成長をするので、常に可能であるとは限らないだろう。それ故、ここでも、アンカー標的としてこれらの分子を使用することには欠点がある。
【0051】
さらに、ＴＲＡＩＬ２及びＬＴβＲ（リンホトキシンβ受容体）を標的化する二重特異的抗体は、それぞれの親抗体の組み合わせと同等又はそれ以上のレベルで、マウス腫瘍異種移植片モデルにおける腫瘍増殖を抑制するのに有効であることが報告されている（Michaelson et al., mAbs (2009), 1(2):128-141）。マウスにおけるＬＴβＲシグナル伝達は、肝再生にとって重要であることが示され、ここでのＬＴβＲは、成熟肝細胞上に発現している（Anders R.A. et al. J Immunol (2005), 175(2):1295-1300）。ＦＡＰと同様に、ＬＴβＲシグナル伝達は、ウイルス性肝炎及び非ウイルス性肝炎、胆管炎、及び肝細胞癌を有する患者における慢性肝炎中に幅広く活性化されている。特に、肝細胞におけるその発現が記載されている（Haybaeck J. et al. Cancer Cell (2009), 16(4): 295-308）。ＬＴβＲ及びＴＲＡＩＬ受容体の標的化は、ＴＲＡＩＬＲ２活性化に対して感受性であるＬＴβＲ発現肝細胞表面上にアンカーされる可能性があり得、したがって肝毒性を引き起こす可能性があり得る。
【0052】
最後に、テネイシンＣもまた、有用なアンカー標的であることが示唆されている。テネイシンＣは、分泌タンパク質であり、したがって、細胞膜にアンカーされていない。これは、がん細胞のアポトーシスを誘発する間接的な機序の別の例を示す。ＭＣＳＰ又はＲＯＢＯ４のアンカー戦略と同様に、テネイシンＣ部分は、アポトーシスが起こるためにはがん細胞膜上のＴＲＡＩＬＲ２分子に対して正しい配向になければならない。さらに、テネイシンＣの発現はまた、慢性肝疾患においてもアップレギュレートされ、ＴＲＡＩＬアゴニストを含む二重特異的分子を用いての処置は、容態を悪化させると予想される。
【0053】
したがって、現在、ＴＲＡＩＬ受容体により媒介されるアポトーシス経路を特にがん細胞において治療的に調節することに問題がある。
【0054】
それ故、本発明者は、血清中に実質的な量で存在せず、ＴＲＡＩＬ２を共発現していたがん細胞に局在していたアンカータンパク質を同定することを決断した。重要なことには、本発明者らは、上記の肝毒性の可能性があるため肝臓において発現されていなかったアンカータンパク質を選択することを選ぶ。
【0055】
本発明者らは、ＴＲＡＩＬ受容体結合性分子と組み合わせて使用することのできる、適切なアンカー標的候補としてカドヘリン－１７を同定した。
【0056】
カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）は、カドヘリンスーパーファミリー、すなわちカルシウム依存性膜結合糖タンパク質をコードしている遺伝子の一員である。コードされているタンパク質は、７個のカドヘリンドメインを含有している細胞外領域及び膜貫通領域からなるが、カドヘリンスーパーファミリーの他のメンバー間で保存されている細胞質内ドメインを欠失している、カドヘリン様である。
【0057】
本発明者らは、腫瘍以外の組織におけるＣＤＨ１７の発現を分析した。免疫組織化学試験により、小腸及び大腸の粘膜上皮におけるＣＤＨ１７の均一な上皮染色が判明した。不均一な上皮染色がまた、膀胱、胃、及び膵内胆管上皮にも検出された。
【0058】
現在まで、腫瘍におけるＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７の共発現を明らかとした代表的な試験は公開されていない。結腸直腸癌においてＣＤＨ１７の発現（８８～１００％）並びにＴＲＡＩＬ２の発現（８７～１００％）について高い存在率が一貫して示された。胃癌では、ＣＤＨ１７もまた全症例の５６～９０％に実証され、びまん型と比較して腸型において有意により頻度が高く、一方、ＴＲＡＩＬＲ２は、原発性及び転移性胃癌に高いレベルで恒常的に発現されていることが示された。膵臓癌では、ＣＤＨ１７の発現は、全症例の５０～８２％に示され得、ＴＲＡＩＬＲ２は８１％に示され得る（Gallmeier et al., PLoS One. 2013;8(2):e56760; Ito et al., Virchows Arch. 2005 Oct;447(4):717-22; Koornstra et al., Eur J Cancer. 2005 May;41(8):1195-202; Koyama et al., J Cancer Res Clin Oncol. 2002 Feb;128(2):73-9; Luque-Garcia et al., Proteomics. 2010 Mar;10(5):940-52; Panarelli et al., Am J Clin Pathol. 2012 Aug;138(2):211-22; Su et al., Mod Pathol. 2008 Nov;21(11):1379-86; Takamura et al., Cancer Sci. 2003 May;94(5):425-30; van Geelen et al., J Clin Oncol. 2006 Nov 1;24(31):4998-5004）。
【0059】
したがって、本発明者らはこの試験を実施し、ＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７が様々な腫瘍（すなわち、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃癌（ＧＣ）、及び膵臓癌（ＰＡＣ））において共発現され、がん以外の細胞では殆ど又はまったく発現されていないことを示した。特に、ＣＤＨ１７は、ＴＲＡＩＬＲ２活性化に対する感受性が報告されている正常な肝臓組織又は肝細胞においては検出不可能であった。
【0060】
本発明までは、これらの２つの抗原を標的化する結合性分子の調製は開示されていなかったか又は少しも考えられてさえもいなかったことを指摘することは重要である。
【0061】
したがって、本発明者らは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位と、ＣＤＨ１７に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位とを含む、結合性分子を調製した。
【0062】
添付の実験データでは、このような分子は、ＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２の両方が発現されている細胞のアポトーシスをインビトロで、本発明の分子の治療的に許容される量で、誘発することができることが理解され得る。重要なことには、実施例に示されているように、同分子は、ＴＲＡＩＬＲ２を発現しているがＣＤＨ１７は発現していない細胞においてはアポトーシスを実質的にまったく誘発しない。したがって、本発明の結合性分子は、がん細胞がＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２の両方を発現しているがんに対して治療的に有効である可能性を有する。１つの態様では、本発明の結合性分子は、ＣＤＨ１７陰性肝細胞には影響を及ぼさず、これにより、肝毒性のリスクは減少する。さらに、本発明の結合性分子（例えば、（ｉ）ＣＤＨ１７に特異的な重鎖可変領域、定常ＩｇＧドメイン、及びＴＲＡＩＬＲ２に特異的なｓｃＦｖを各々が含む２本の重鎖と、（ｉｉ）ＣＤＨ１７に特異的な軽鎖可変領域を各々が含む２本の軽鎖とを有する結合性分子）は、９５％を超えるモノマー含量で安定であることが示され、このことは、その治療適用可能性をさらに支持する。
【0063】
したがって、本発明のＣＤＨ１７／ＴＲＡＩＬＲ２結合性分子は、当技術分野において公知であるそうした分子を上回る明白な利点を有し、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃癌（ＧＣ）、及び膵臓癌（ＰＡＣ）をはじめとするがんを処置する有用性を与える。
【0064】
さらに、ＴＲＡＩＬＲ２に対するＴＲＡＩＬ受容体結合性分子のアゴニスト作用を増強するＣＤＨ１７の能力は、全ての細胞表面タンパク質に対して共通であるわけではない。これは、本発明者らがＣＤ４４ｖ６もまた適切なアンカー標的であり得るかどうかを調べたので分かっている。ＣＤ４４ｖ６は、遍在的に発現されている表面糖タンパク質ＣＤ４４のスプライス変異体であり、正常組織よりも腫瘍組織において優先的な発現パターンを有する腫瘍関連抗原であることが知られている。しかしながら、添付の実施例に示されているように、ＣＤ４４ｖ６は、アンカータンパク質としては機能しない。なぜなら、それはＴＲＡＩＬ受容体結合性分子のアゴニスト作用を増強しないからである。それ故、アンカー標的としてのＣＤＨ１７の有用性は、単に該タンパク質の発現プロファイルに基づいて予測することはできない。
【0065】
本発明の第一の態様は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位（第一の抗原結合部位）と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位（第二の抗原結合部位）とを有する、結合性分子を提供する。
【0066】
上記のように、本発明までは、ＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７に特異的に結合することのできる結合性分子の調製は開示されていなかったか又は少しも考えられてさえもいなかった。それにも関わらず個々に各タンパク質及びそれらの関連遺伝子は当技術分野において公知であり、生物学的データベースにおいて適切に示されている。
【0067】
疑念を避けるために、「ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）」によって、本発明者らは、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｏ１４７６３http://www.uniprot.org/uniprot/O14763に提供されているヒトタンパク質、及びそのタンパク質をコードしている核酸配列を意味する。
【0068】
疑念を避けるために、「カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）」によって、本発明者らは、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ１２８６４http://www.uniprot.org/uniprot/Q12864に提供されているヒトタンパク質、及びそのタンパク質をコードしている核酸配列を意味する。
【0069】
本発明は、少なくとも２つの異なる標的に対して結合特異性を有する結合性分子に関する。本発明に関連して、結合性分子は、抗体から導かれる。結合性分子を作製するための技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖の対の組換え同時発現（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)、国際公開公報第９３/０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655（1991）参照）、及び「ノブ・イン・ホール」工学操作（例えば米国特許第５，７３１，１６８号参照）が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の結合性分子はまた、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製するために静電ステアリング効果を工学操作することによって（国際公開公報第２００９/０８９００４Ａ１号）；２つ以上の抗体又は断片を架橋することによって（例えば米国特許第４，６７６，９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)参照）；二重特異的抗体を作製するためにロイシンジッパーを使用することによって（例えば、Kostelny et al., Immunol., 148(5): 1547-1553（1992）参照）；二重特異的抗体断片を作製するために「ディアボディ」技術を使用することによって（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444- 6448（1993）参照）；並びに、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用することによって（例えば、Gruber et al., /. Immunol., 152:5368 (1994)参照）；並びに、例えばTutt et al. /. Immunol. 147: 60（1991）に記載のような三重特異的抗体を調製することによって作製され得る。
【0070】
本明細書において具体的に定義されていない用語は、開示及び内容に照らして当業者によって与えられるであろう意味を与えられるべきである。しかしながら、明細書に使用されているように、そうではないと明記されない限り、以下の用語は示された意味を有し、以下の規定を固守する。
【0071】
本明細書において使用する「抗原結合部位」という用語は、抗体に由来する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。このような場合、各可変ドメインは３つのＣＤＲを含む。１つの態様では、本発明による抗原結合部位又は該タンパク質のある部分は一般的に抗体に由来する。抗体又は免疫グロブリン分子の一般構造は、当業者には周知である。
【0072】
「抗体」又は「免疫グロブリン分子」（免疫グロブリンとしても知られる、略称Ｉｇ）は、脊椎動物の血中又は他の体液中に認められ得るガンマグロブリンタンパク質であり、細菌及びウイルスなどの異物を同定し中和するために免疫系によって使用される。それらは典型的には、各々が２本の大きな重鎖と２本の小さな軽鎖を有するという基本的な構造単位からなり、これにより例えば１つの単位を有する単量体、２つの単位を有する二量体、又は５つの単位を有する五量体を形成する。抗体は、非共有結合的相互作用によって、抗原として知られる他の分子又は構造に結合することができる。この結合は、抗体が高い親和性で特定の構造にしか結合しないという意味で特異的である。抗体によって認識される抗原の特有の部分は、エピトープ又は抗原決定基と呼ばれる。エピトープに結合する抗体の部分は時にパラトープと呼ばれ、いわゆる抗体の可変ドメイン又は可変領域（Ｆｖ）に存在する。可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって隔てられた３つのいわゆる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0073】
本発明の脈絡において、ＣＤＲへの言及は、ＩＭＧＴとも呼ばれるＣＣＧの定義に基づく（Lefranc MP, Pommie C, Ruiz M, Giudicelli V, Foulquier E, Truong L, Thouvenin-Contet V, Lefranc G. “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains.“ Dev Comp Immunol. 2003 Jan;27(1):55-77; Giudicelli V, Brochet X, Lefranc MP. “IMGT/V-QUEST: IMGT standardized analysis of the immunoglobulin (IG) and T cell receptor (TR) nucleotide sequences“. Cold Spring Harb Protoc. 2011;2011(6):695-715）。ＣＤＲの代替的な定義は、Ｋａｂａｔ（E.A. Kabat, T.T. Wu, H. Bilofsky, M. Reid-Miller and H. Perry, Sequence of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda (1983)）と共に、Ｃｈｏｔｈｉａ（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 1987, 196: 901-917）に基づく。
【0074】
本明細書において使用する「可変ドメイン」又は「可変領域」又はＦｖという表現は、抗原に対する抗体の結合に直接関与する軽鎖と重鎖の各対を示す。軽鎖の可変ドメインは「ＶＬ」と略称され、重鎖の可変ドメインは「ＶＨ」と略称される。軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインは同じ一般的な構造を有し、各ドメインは、３つのＨＶＲ（又はＣＤＲ）によって接続されその配列が幅広く保存されている４つのフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。フレームワーク領域はβ－シートコンフォメーションを採り、ＣＤＲは、β－シート構造を接続するループを形成し得る。各々の鎖におけるＣＤＲは、フレームワーク領域によってその３次元構造が保たれ、他の鎖に由来するＣＤＲと一緒に抗原結合部位を形成する。抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ３領域は、本発明に記載の抗体の結合特異性／親和性に特に重要な役割を果たし、それ故、本発明のさらなる目的を提供する。本出願内で使用される「定常ドメイン」又は「定常領域」という用語は、可変領域以外の抗体のドメインの合計を示す。このような定常ドメイン及び領域は当技術分野の最新技術において周知であり、例えばKabat et al.（“Sequence of proteins of immunological interest”, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91）によって記載されている。
【0075】
抗体の「Ｆｃ部分」は、抗原に対する抗体の結合に直接関与していないが、様々なエフェクター機能を示す。「抗体のＦｃ部分」は、当業者には周知の用語であり、抗体のパパインによる切断に基づいて定義される。その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体又は免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのクラスに分類される。重鎖定常領域によると、異なるクラスの免疫グロブリンはα、δ、ε、γ、及びμとそれぞれ呼ばれる。これらの中のいくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。抗体のＦｃ部分は、補体活性化、Ｃ１ｑへの結合、及びＦｃ受容体への結合に基づきＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞障害）及びＣＤＣ（補体依存性細胞障害）に直接関与している。補体活性化（ＣＤＣ）は、大半のＩｇＧ抗体サブクラスのＦｃ部分に対する補因子Ｃ１ｑの結合によって開始される。補体系に対する抗体の影響は、特定の条件に依存するが、Ｃ１ｑへの結合は、Ｆｃ部分内の規定された結合部位によって引き起こされる。このような結合部位は、当技術分野の最新技術において公知であり、例えばBoakle et al., Nature 282 (1975) 742-743, Lukas et al., J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560, Brunhouse and Cebra, Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917, Burton et al., Nature 288 (1980) 338-344, Thommesen et al., Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004, Idusogie et al., J. Immunol.164 (2000) 4178-4184, Hezareh et al., J. Virology 75 (2001) 12161- 12168, Morgan et al., Immunology 86 (1995) 319-324、欧州特許第０３０７４３４号によって記載されている。このような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１、及びＰ３２９（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付け、以下を参照）である。ＩｇＧ１におけるＣ１ｑ及びＦｃγ受容体の結合を媒介する際にこれらの残基の中で最も重要なのは、Ｌ２３４及びＬ２３５である（Hezareh et al., J. Virology 75 (2001) 12161- 12168）。サブクラスＩｇＧ１及びＩｇＧ３の抗体は通常、補体活性化並びにＣ１ｑ及びＣ３への結合を示すが、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４は補体系を活性化せず、Ｃ１ｑ及びＣ３には結合しない。
【0076】
当技術分野はさらに抗体を開発し、該抗体を医学及び工学における万能の道具とした。したがって、本発明の脈絡において、「抗体分子」又は「抗体」（本明細書では同義語として使用される）という用語は、例えば２本の軽鎖と２本の重鎖、又はラクダ種のようなたった２本の重鎖を含む、天然に見られ得るような抗体を含むだけでなく、抗原に対する結合特異性及び免疫グロブリンの可変ドメインに対する構造的類似性を有する少なくとも１つのパラトープを含む全ての分子を包含する。
【0077】
したがって、抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、抗体の断片、特にＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ’）２断片、一本鎖抗体、特に一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、ドメイン抗体、ナノボディ、ディアボディを含み得る。抗体は、通常、抗体のＦｃ部分（抗体定常領域）によって媒介される、ＡＤＣＣ又はＣＤＣなどのエフェクター機能を有していても、あるいは、それは、例えば、Ｆｃ部分を欠失しているか、又は、遮断され遮蔽されたＦｃ部分、実質的には、補体系のような免疫細胞若しくは免疫系成分によって認識されないか又は不十分にしか認識されないＦｃ部分を有することによって、エフェクター機能を全く有していなくてもよい。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、アミノ酸配列が同一である単一特異的抗体である。それらは、特定の抗体産生Ｂ細胞と骨髄腫（Ｂ細胞癌）細胞の融合クローンを示すハイブリッド細胞株（ハイブリドーマと呼ばれる）からハイブリドーマ技術によって作製され得る（Kohler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 1975;256:495-7）。あるいは、モノクローナル抗体は、宿主細胞における組換え発現によって産生されてもよい（Norderhaug L, Olafsen T, Michaelsen TE, Sandlie I. (May 1997). "Versatile vectors for transient and stable expression of recombinant antibody molecules in mammalian cells." J Immunol Methods 204 (1): 77-87；以下も参照）。「組換え抗体」又は「組換え結合性分子」は、組換え工学操作された宿主細胞によって作製された抗体又は結合性分子である。それは場合により単離又は精製されている。
【0078】
ヒトに適用するために、マウスのような他の種に本来は由来する抗体の免疫原性を減少させることが望ましいことが多い。これは、キメラ抗体の構築によって、又は「ヒト化」と呼ばれるプロセスによって行なうことができる。この文脈において、「キメラ抗体」は、異なる種（例えばヒト）に由来する配列部分（例えば定常ドメイン）と融合させたある種（例えばマウス）に由来する配列部分（例えば可変ドメイン）を含む抗体であると理解される。「ヒト化抗体」は非ヒト種に本来は由来する可変ドメインを含む抗体であって、その可変ドメインの全体的な配列がヒト可変ドメインの配列により近似するように、あるアミノ酸を突然変異させている。抗体をキメラ化及びヒト化する方法は当技術分野において周知である（Billetta R, Lobuglio AF. “Chimeric antibodies”. Int Rev Immunol. 1993;10(2-3):165-76; Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G (1988). "Reshaping human antibodies for therapy". Nature: 332:323）。
【0079】
「ヒト化」抗体は、非ヒト超可変領域（ＨＶＲ）に由来するアミノ酸残基及びヒトＦＲに由来するアミノ酸残基を含む、抗体を指す。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば相補性決定領域（ＣＤＲ））の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のそれに対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域（ＦＲ）がヒト抗体のそれに対応する。ヒト化抗体は場合により、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含み得る。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【0080】
さらに、例えば、ファージディスプレイによって、又はトランスジェニック動物を使用して、ヒトゲノムに由来する配列に基づき抗体を作り出すための技術が開発されている（国際公開公報第９０／０５１４４号; D. Marks, H.R. Hoogenboom, T.P. Bonnert, J. McCafferty, A.D. Griffiths and G. Winter (1991) 「By-passing immunisation. Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage」 J.Mol.Biol., 222, 581-597; Knappik et al., J. Mol. Biol. 296: 57-86, 2000; S. Carmen and L. Jermutus, 「Concepts in antibody phage display」. Briefings in Functional Genomics and Proteomics 2002 1(2):189-203; Lonberg N, Huszar D. 「Human antibodies from transgenic mice」 Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93.; Bruggemann M, Taussig MJ. 「Production of human antibody repertoires in transgenic mice」 Curr Opin Biotechnol. 1997 Aug;8(4):455-8）。このような抗体は本発明の文脈において「ヒト抗体」である。
【0081】
抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’ 、又はＦ（ａｂ’）２断片のような抗原結合特性を保持する免疫グロブリンの断片も含み得る。このような断片を、免疫グロブリンの断片化によって、例えばタンパク質消化によって、又はこのような断片の組換え発現によって得ることができる。例えば、免疫グロブリンの消化は、通常の技術によって、例えばパパイン若しくはペプシン（国際公開公報第９４／２９３４８号）を使用して達成することができる。パパインによる抗体の消化によって、典型的には、それぞれが単一の抗原結合部位を有する２つの同一の抗原結合断片（いわゆるＦａｂ断片）及び残余のＦｃ断片が生成される。ペプシン処理によってＦ（ａｂ’）２が生産される。Ｆａｂ分子では、可変ドメインは各々、免疫グロブリン定常ドメインに、好ましくはヒト起源の免疫グロブリン定常ドメインに融合している。したがって、重鎖可変ドメインはＣＨ１ドメイン（いわゆるＦｄ断片）に融合し得、軽鎖可変ドメインはＣＬドメインに融合し得る。Ｆａｂ分子は、宿主細胞におけるそれぞれの核酸の組換え発現によって生成され得、以下を参照されたい。
【0082】
免疫グロブリンの可変ドメイン又はこのような可変ドメインに由来する分子を異なる分子事情に配置するために、多くの技術が開発されている。それらも、本発明に従って「抗体」と考えられるべきである。一般的に、これらの抗体分子は、免疫グロブリンと比較してサイズが小さく、１本のアミノ酸鎖又は数本のアミノ酸鎖を含み得る。例えば、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、免疫グロブリンの重鎖可変領域と軽鎖可変領域が、短いリンカー、通常はセリン（Ｓ）又はグリシン（Ｇ）で互いに連結されている、融合体である（国際公開公報第８８／０１６４９号；国際公開公報第９１／１７２７１号；Huston et al; International Reviews of Immunology, Volume 10, 1993, 195 - 217）。「単一ドメイン抗体」又は「ナノボディーズ」は、単一のＩｇ様ドメイン内に抗原結合部位を有する（国際公開公報第９４／０４６７８号；国際公開公報第０３／０５０５３１号、Ward et al., Nature. 1989 Oct 12;341(6242):544-6; Revets et al., Expert Opin Biol Ther. 5(1):111-24, 2005）。同一抗原又は異なる抗原に対して結合特異性を有する１つ以上の単一ドメイン抗体を互いに連結させてもよい。ダイアボディーズは、２つの可変ドメインを含む２本のアミノ酸鎖からなる二価抗体分子である（国際公開公報第９４／１３８０４号, Holliger et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 1993 Jul 15;90(14):6444-8）。抗体様分子の他の例は、免疫グロブリンスーパーファミリー抗体である（ＩｇＳＦ；Srinivasan and Roeske, Current Protein Pept. Sci. 2005, 6(2): 185-96）。異なる概念により、定常ドメインＣＨ１を持たない一本鎖ヒンジドメイン及びエフェクタードメインに連結されたＦｖドメインを含む、いわゆる小モジュール免疫薬（ＳＭＩＰ）がもたらされる（国際公開公報第０２／０５６９１０号）。
【0083】
本発明に関して、本発明の第一の態様は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位とを含む、結合性分子を提供する。
【0084】
本明細書において使用する「結合している」又は「特異的に結合している」という用語は、インビトロアッセイにおいて抗原のエピトープに対する、抗体又は抗原結合部位（例えば本明細書に記載の結合性分子における）の結合を指す。親和性は、抗体分子上の単一の抗原結合部位と単一のエピトープとの間の相互作用である。それは、平衡会合定数Ｋａ＝ｋｏｎ/ｋｏｆｆ、又は平衡解離定数Ｋｄ＝ｋｏｆｆ/ｋｏｎによって表現される。
【0085】
エピトープは、抗体又は抗原結合部分と結合している抗原の領域である。「エピトープ」という用語は、抗体又は抗原結合部分と特異的に結合することのできる任意のポリペプチド決定基を含む。特定の実施態様では、エピトープ決定基は、アミノ酸、グリカン側鎖、ホスホリル、又はスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、特定の実施態様では、特定の３次元構造特徴及び／又は特定の荷電特徴を有し得る。コンフォメーションエピトープ及び非コンフォメーションエピトープは、前者への結合は、変性溶媒の存在下で失われるが、後者への結合は失われないという点から区別される。本明細書において使用する「結合している」及び「特異的に結合している」という用語は、精製された野生型抗原を用いたインビトロアッセイにおいて、好ましくはプラズモン共鳴アッセイ（ビアコア（登録商標）、ＧＥヘルスケア社、ウプサラ、スウェーデン）において、抗原のエピトープに対する抗体又は抗原結合部分の結合を指す。
【0086】
１つの態様では、本発明の結合性分子は、例えば表面プラズモン共鳴分析（Malmqvist M., "Surface plasmon resonance for detection and measurement of antibody-antigen affinity and kinetics.", Curr Opin Immunol. 1993 Apr;5(2):282-6）によって決定されるような、１pMから１００μM、好ましくは１pMから１μMの範囲のＫＤ値の親和性でＴＲＡＩＬＲ２又はＣＤＨ１７標的抗原に結合する。抗体の親和性はまた、結合平衡除外法（ＫｉｎＥｘＡ）技術（Darling, R.J., and Brault P-A., “Kinetic exclusion assay technology: Characterization of Molecular Interactions.” ASSAY and Drug Development Technologies. 2004, Dec 2(6): 647-657）を使用して測定することもできる。
【0087】
抗体分子の結合親和性は、親和性成熟として知られるプロセスによって増強され得る（Marks et al., 1992, Biotechnology 10:779-783; Barbas, et al., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813; Shier et al., 1995, Gene 169:147-155）。それ故、親和性成熟抗体も、本発明に包含される。
【0088】
本明細書において使用する「結合している」又は「特異的に結合している」という用語は、インビトロアッセイにおける、好ましくは表面プラズモン共鳴アッセイ（ＳＰＲ、ビアコア、ＧＥヘルスケア社、ウプサラ、スウェーデン）における抗原のエピトープに対する抗体の結合を指す。結合親和性は、ｋｏｎ（抗体／抗原複合体に由来する抗体の会合速度定数）、ｋｏｆｆ（解離定数）、及びＫＤ（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）という項によって定義される。特異的な結合は一般的に、受容体分子とそのリガンドとの間の複合体の形成を指す。抗体－抗原の結合の脈絡において、高親和性抗体は典型的には、それらの標的抗原に１０－９Ｍ以下の親和性で結合する。
【0089】
１つの実施態様では、本発明の結合性分子は、結腸直腸癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５などの１つ以上の癌細胞型において、ＴＲＡＩＬＲ２により媒介されるアポトーシスを誘発することができ、１nM以下、さらにより好ましくは０．０１nM未満の濃度で細胞生存率の５０％超の阻害を示す。
【0090】
さらなる実施態様では、本発明の結合性分子は、細胞株ＨｅｐＧ２などのＣＤＨ１７陰性肝由来細胞においてＴＲＡＩＬＲ２により媒介されるアポトーシスを誘発することができず、最大１nM、又はより好ましくは最大１０nM、さらにより好ましくは最大１００nMの濃度で細胞生存率の５０％未満の阻害を示す。
【0091】
さらに好ましい実施態様では、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位は免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（２本の重鎖と２本の軽鎖とを含む慣用的なＹ字形の完全長抗体の構造を有する）であり、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位は、１つ以上のｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ、又はＦｖ結合配列を含む。好ましくは、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）に特異的に結合する抗原結合部位は、１つ以上のｓｃＦｖ（群）を含む。
【0092】
「一本鎖Ｆｖ断片」（ｓｃＦｖ）は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、リンカーと、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含むポリペプチドであり、ここでの該抗体ドメイン及び該リンカーはＮ末端からＣ末端の方向に向かって以下の順序の１つを有し：ａ）ＶＨ－リンカー－ＶＬ、ｂ）ＶＬ－リンカー－ＶＨ；ここでの該リンカーは１５～２５アミノ酸長、好ましくは２０アミノ酸長のポリペプチドである。
【0093】
さらに、これらの一本鎖Ｆｖ断片は、システイン残基の取り込みを介して、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間、ＶＨドメイン内、又はＶＬドメイン内へのジスルフィド結合の取り込みによってさらに安定化され得る。Ｎ末端という用語は、ポリペプチド鎖の最初のアミノ酸を示し、一方、Ｃ末端は、ポリペプチド鎖のＣ末端の最後のアミノ酸を示す。したがって、本発明の実施態様では、１つ以上のｓｃＦｖ（群）が追加のシステイン残基を含んでジスルフィド結合を形成している。
【0094】
本発明の実施態様では、ｓｃＦｖ部分の安定性は、３次元的に非常に近接して２つのシステイン残基を取り込むことにより、ｓｃＦｖ（本明細書ではｓｃＦｖｓｓとも称される）内でジスルフィド結合を形成することによって高められ得る。ｓｃＦｖがＴＲｖ１（以下に考察されているような）のＶ領域配列に由来する場合、このような安定化ジスルフィド結合が工学操作され得る部位の候補の例としては、（ａ）ＶＬの９９位とＶＨの４５位の間、（ｂ）ＶＬの１０２位とＶＨの４４位の間、（ｃ）ＶＬの４位と１００位の間、及び（ｄ）ＶＨの６位と１１２位の間が挙げられる。工学操作されたジスルフィド結合を通した安定化を生じさせるために、これらの位置における残基は好ましくは、システイン残基を用いて置換されている。
【0095】
添付の実施例に実証されているように、本発明者らは、Ｎ末端からＣ末端に向かってＶＬ－ＶＨの配向を有するＴＲＡＩＬＲ２ｓｃＦｖが、本発明の結合性分子において標的細胞のアポトーシスを誘発するように機能することができることを示した。Ｎ末端からＣ末端に向かってＶＨ－ＶＬの配向を有するＴＲＡＩＬＲ２ｓｃＦｖもまた機能することができるが、この配向では活性は減少する場合がある。したがって、本発明の好ましい実施態様では、順序がＮ末端からＣ末端に向かってＶＬ－ＶＨである。
【0096】
本発明のさらに好ましい実施態様は、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的に結合する１つ以上のｓｃＦｖ（群）が、ペプチドリンカー、好ましくは約４～２０アミノ酸長（例えば６、９、１２、又は１５のいずれか１つ）を有するペプチドリンカーによって、ＣＤＨ１７に特異的に結合するＩｇ分子（例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ１（ＫＯ）、ＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔ、ＩｇＧＰｒｏ）に融合しているものである。好ましくは、ｓｃＦｖは、Ｉｇ分子の重鎖のＣ末端に融合している。好ましくはＩｇ分子はＩｇＧである。
【0097】
ＩｇＧ分子の重鎖のＣ末端にｓｃＦｖ分子を連結する方法又はｓｃＦｖ分子内の可変ドメインを連結する方法は当技術分野において周知である。典型的には、グリシンアミノ酸及びセリンアミノ酸の小さなリンカー配列（ＧＳミニリンカーと呼ばれる）が使用される。リンカー内のアミノ酸の数は、４（ＧＧＧＳ）（配列番号１４４）、６（ＧＧＳＧＧＳ）（配列番号１４１）、１０（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）（配列番号１４２）又はそれ以上まで変更されてもよい。実際に、通常、リンカーは、関心対象のＩｇＧをコードしている核酸分子（今回の場合、ＣＤＨ１７結合部位の重鎖の可変ドメイン及びＩｇＧ型の定常ドメインをコードしている核酸を含むだろう）を、リンカー配列（例えば、５、１０、１５、又は２０アミノ酸のいずれか１つのＧＳミニリンカー、好ましくは配列番号１４３のリンカー）をコードしている核酸分子によって間が置かれた、所望のｓｃＦｖをコードしている核酸（今回の場合、ＴＲＡＩＬＲ２結合部位についてのＶＬ－ＶＨ又はＶＨ－ＶＬの配向のいずれかの重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインをコードしている核酸を含むだろう）と組み合わせることによって形成される。それから、以下にさらに説明されているように、この完全なＨＣ－ｓｃＦｖをコードしている核酸分子は発現ベクター内に配置され、適切な宿主細胞に導入され、これにより、完全なＩｇＧ重鎖－ｓｃＦｖ単一ポリペプチドが形成される。
【0098】
好ましくは、ｓｃＦｖ分子とＩｇＧ分子の重鎖のＣ末端との間のＧＳミニリンカーは、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１４１）である。
【0099】
１つの実施態様では、本発明は、（ｉ）２本の重鎖及び２本の軽鎖を有する、ＣＤＨ１７に特異的に結合するＩｇ分子と、（ｉｉ）２つのｓｃＦｖ分子（ｓｃＦｖ（群））（各々がＴＲＡＩＬＲ２に特異的に結合する）とを含む、多重特異的結合性タンパク質である結合性分子を提供する。好ましくは、Ｉｇ分子の各重鎖は、そのＣ末端に融合した１つのｓｃＦｖを有し、これにより、二重特異的で四価の結合性タンパク質を形成する。
【0100】
１つの実施態様では、本発明は、
（ｉ）２本の重鎖（その各々が、Ｎ末端からＣ末端に向かって：
－ＣＤＨ１７に特異的な重鎖可変ドメイン（例えばマウス、ヒト化、又はヒトのＶＨドメイン）、
－ＩｇＧの定常ドメイン（例えばヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４）、
－ペプチドリンカー（例えばＧＳミニリンカー）、及び
－ＴＲＡＩＬＲ２に特異的なｓｃＦｖ（例えば、Ｎ末端からＣ末端に向かってＶＨドメイン（例えばマウス、ヒト化、又はヒトのＶＨドメイン）、リンカー、及びＶＬドメイン（例えばマウス、ヒト化、又はヒトのＶＬドメイン）、又はその逆であるＶＬドメイン、リンカー、及びＶＨドメインを含む、ｓｃＦｖ）
を含む）；及び
（ｉｉ）２本の軽鎖（その各々がＮ末端からＣ末端に向かって：
－ＣＤＨ１７に特異的な軽鎖可変ドメイン（例えばマウス、ヒト化、又はヒトのＶＬドメイン）、
－軽鎖定常ドメイン（例えばヒトκ鎖）
を含む）
を有する結合性分子（本明細書では多重特異的結合性タンパク質又は改変されたＩｇ分子とも称される）を提供する。
（ｉ）２本の重鎖（その各々が、Ｎ末端からＣ末端に向かって：
－ＣＤＨ１７に特異的な重鎖可変ドメイン（例えばマウス、ヒト化、又はヒトのＶＨドメイン）、
－ＩｇＧの定常ドメイン（例えばヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４）、
－ペプチドリンカー（例えばＧＳミニリンカー）、及び
－ＴＲＡＩＬＲ２に特異的なｓｃＦｖ（例えば、Ｎ末端からＣ末端に向かってＶＨドメイン（例えばマウス、ヒト化、又はヒトのＶＨドメイン）、リンカー、及びＶＬドメイン（例えばマウス、ヒト化、又はヒトのＶＬドメイン）、又はその逆であるＶＬドメイン、リンカー、及びＶＨドメインを含む、ｓｃＦｖ）
を含む）；及び
（ｉｉ）２本の軽鎖（その各々がＮ末端からＣ末端に向かって：
－ＣＤＨ１７に特異的な軽鎖可変ドメイン（例えばマウス、ヒト化、又はヒトのＶＬドメイン）、
－軽鎖定常ドメイン（例えばヒトκ鎖）
を含む）
を有する結合性分子（本明細書では多重特異的結合性タンパク質又は改変されたＩｇ分子とも称される）を提供する。
【0101】
本明細書に記載の抗体分子又は結合性分子は、抗体分子の特性に対する所望の影響を有する他の分子実体に融合していても（融合タンパク質として）、又は別様に（共有結合又は非共有結合によって）連結されていてもよい。例えば、本明細書に記載の抗体又は結合性分子の薬物動態特性、例えば血液などの体液中での安定性を、特に一本鎖抗体又はドメイン抗体の場合には改善させることが望ましくあり得る。これに関して、特に循環中のこのような抗体分子の半減期を延長させるために、ＰＥＧ化（国際公開公報第９８/２５９７１号；国際公開公報第９８/４８８３７号；国際公開公報第２００４０８１０２６号）、抗体分子を、アルブミンのような血清タンパク質に対する親和性を有する別の抗体分子に融合若しくは別様に共有結合で付着させること（国際公開公報第２００４０４１８６５号；国際公開公報第２００４００３０１９号）、又は、アルブミン若しくはトランスフェリンのような血清タンパク質の全部若しくは一部との融合タンパク質としての抗体分子の発現（国際公開公報第０１/７９２５８号）などの、多くの技術が開発されている。
【0102】
抗体のＦｃ領域は多くのＦｃ受容体と相互作用し、これにより多くの重要な機能的能力（「エフェクター機能」と称される）が生じるので、抗体は、特定の実施態様では、完全長抗体であるか又はＦｃ領域の一部を含有している抗体であり、後者の場合、抗体が、抗原の関連した部分と、Ｆｃ受容体及び補体との両方への特異的な結合を示す限りにおいてである。定常領域の種類及び長さの選択は、補体との結合又は抗体依存性細胞媒介性細胞障害のようなエフェクター機能が望ましい特色であるかどうか、及び抗体タンパク質の所望の薬理学的特性に依存する。
【0103】
本発明の１つの実施態様では、本発明における結合性分子による補体産物Ｃ１ｑ又はＦｃγ受容体への結合は、２３４位及び２３５位においてＬからＡへの突然変異誘発が指令された、ＩｇＧ４定常領域又はＩｇＧ１定常領域の利用によって消失する。
【0104】
本発明の１つの実施態様では、本発明の結合性分子は、可溶性Ｆｃγ受容体又は補体Ｃ１ｑによる意図しない架橋を避けるために工学操作されている、Ｆｃ領域又はその関連した区画を有し得る。１つの実施態様では、このような結合性分子又は抗体変異体は、Ｆｃγ受容体及び補体Ｃ１ｑに対して親抗体よりもはるかに低い親和性を有する。（以下に、特記されない限り、抗体分子の脈絡における又はＩｇＧ若しくはＦｃ領域の脈絡における「親」という用語は、突然変異した（工学操作された）分子の由来する、それぞれ、工学操作されていない抗体分子、Ｆｃ領域、又はＩｇＧを指す）。したがって、本発明の１つの実施態様は、Ｉｇ分子がＦｃγ受容体又は補体受容体又はその両方に対して、野生型Ｆｃ領域と比較して低減した親和性を有するＦｃ変異体を含む。このようなＩｇ分子は本明細書においてＩｇＧ１（ＫＯ）と称される。
【0105】
本発明のさらなる実施態様は、本発明の結合性分子が、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）とのその相互作用を最適化することによって、例えばＣＨ２ドメイン内のＨ３１０Ａ位における点突然変異によって、血清中レベル（半減期）を改変するように工学操作されている、Ｆｃ領域又はその関連した区画を含む。このようなＩｇ分子は本明細書においてＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔと称される。
【0106】
本発明のさらなる実施態様は、結合性分子が、他のＩｇＧ４分子との重鎖の交換を消失させるＩｇＧ４のヒンジ領域変異体を含む、Ｉｇ分子を含むものである。このようなＩｇ分子は本明細書においてＩｇＧ４Ｐｒｏと称される。
【0107】
本発明は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位と、カドヘリン－１７（ＣＤＨ１７）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位とを有する結合性分子を提供する。
【0108】
特定の標的抗原に結合する結合部位を調製する方法は当技術分野において周知である。当業者は、これらの方法を容易に使用して、ＴＲＡＩＬＲ２又はＣＤＨ１７標的抗原に対する必要な特異性を有する抗原結合部位を考案することができる。
【0109】
抗体及び抗体断片を作製する方法は当技術分野において周知である。例えば、抗体は、インビボにおける抗体分子の生成の誘発、免疫グロブリンライブラリーのスクリーニング（Orlandi et al, 1989. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:3833-3837; Winter et al 1991, Nature 349:293-299）、又は培養液中の細胞株によるモノクローナル抗体分子の作製を利用したいくつかの方法のいずれか１つを介して作製され得る。これらとしては、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、及びエプシュタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）ハイブリドーマ技術（Kohler et al 1975. Nature 256:4950497; Kozbor et al 1985. J. Immunol. Methods 81 :31 -42; Cote et al 1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2026-2030; Cole et al 1984. Mol. Cell. Biol. 62:109-120）が挙げられるがこれらに限定されない。
【0110】
当技術分野において公知であり本明細書に記載されている方法を使用して、ＴＲＡＩＬＲ２及び／又はＣＤＨ１７標的抗原に対する必要な特異性を有する結合部位を有する抗体、並びに、本明細書に記載の結合性分子を調製することは当業者にとっておきまりの手順であろう。このような抗体からの結合性ドメインの単離は、おきまりの慣行であり、実際に本明細書に記載のような抗体及び結合性分子を作製するために使用され得る方法に関するさらなる情報が添付の実施例に提供されている。
【0111】
本発明者らは、添付の実施例で考察されている本発明の特定のＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子を調製した。
【0112】
本発明者らは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な多くの抗原結合部位を調製し、これらをＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、及びＴＲ２ｖ７と称した。本発明者らはまた、ＣＤＨ１７に特異的な多くの抗原結合部位を調製し、これらをＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、ＣＤＨ１７Ｅ９、及びＣＤＨ１７ｖ１と称した。以下に提供された実施態様のいずれかにおいて、結合性分子は、ＣＤＨ１７（ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、ＣＤＨ１７Ｅ９、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つ）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位、及びＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、及びＴＲ２ｖ７のいずれか１つ）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位を含む。好ましくは、ＣＤＨ１７に特異的な少なくとも１つの抗原結合部位はＩｇ分子（２本の重鎖と２本の軽鎖を含む）であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位は、２つのｓｃＦｖ（群）を含み、ここでの１つのｓｃＦｖは一方の重鎖のＣ末端に結合し、１つのｓｃＦｖはＩｇ分子の他方の重鎖のＣ末端に結合し、二重特異的かつ四価の結合性タンパク質を形成している。
【0113】
いくつかの実施態様では、抗原結合部位（ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、ＴＲ２ｖ７、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、ＣＤＨ１７Ｅ９、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つ）は、非ヒト超可変領域（ＨＶＲ；例えば相補性決定領域（ＣＤＲ））由来のアミノ酸残基と、ヒトフレームワーク配列由来のアミノ酸残基を含む、「ヒト化」抗原結合部位（例えば、ヒト化ＶＨ／ＶＬドメインを含む）である。いくつかの実施態様では、抗原結合部位（ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、ＴＲ２ｖ７、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、ＣＤＨ１７Ｅ９、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つ）は、両方共がヒトゲノム配列に由来する、ＣＤＲ配列及びＦＲ配列を含む、ヒト抗原結合部位（例えばヒトＶＨ／ＶＬドメインを含む）である。
【0114】
特定の抗原結合部位のアミノ酸配列は、明細書（表３）及び配列表に提供されている。
【0115】
以下には、ＴＲＡＩＬＲ２及び／又はＣＤＨ１７に対して特異的な抗原結合部位を含む、本発明の好ましい実施態様の詳細が提供されている。
【0116】
疑念を回避するために、本発明の第一の態様についての以下に列挙された具体的な実施態様の各々はまたそれぞれ、本発明の独立した態様であると考えられ得る。
【0117】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１である。
【0118】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ＃１である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３４のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0119】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２である。
【0120】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３５のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0121】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３である。
【0122】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ＃３である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３６のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0123】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７である。
【0124】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ＃７である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３７のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0125】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８である。
【0126】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ＃８である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３８のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0127】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０である。
【0128】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ＃１０である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３９のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0129】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２である。
【0130】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ＃１２である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１４０のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0131】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ２ｖ１又はＴＲ２ｖ２である。
【0132】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ２ｖ１である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１２４（ＶＬ－ＶＨの配向）、配列番号１３１（ＶＨ－ＶＬの配向）、配列番号１３２（ＶＨ－ＶＬの配向でジスルフィド結合を有する、ｓｃＦｖｓｓ）、又は配列番号１３３（ＶＬ－ＶＨの配向でジスルフィド結合を有する、ｓｃＦＶ）のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0133】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ２ｖ２である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１２５のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0134】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ２ｖ３である。
【0135】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ２ｖ３である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１２６のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0136】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ２ｖ４である。
【0137】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ２ｖ４である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１２７のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0138】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ２ｖ５である。
【0139】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ２ｖ５である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１２８のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0140】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ２ｖ６である。
【0141】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ２ｖ６である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１２９のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0142】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ２ｖ７である。
【0143】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、ＴＲ２ｖ７である。例えば、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３０のアミノ酸配列（ＶＬ－ＶＨの配向）を含むｓｃＦｖ分子を含む。
【0144】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0145】
好ましくは、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0146】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0147】
好ましくは、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤＨ１７Ａ６である。
【0148】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0149】
好ましくは、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0150】
好ましくは、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0151】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲを含み、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを有する。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0152】
好ましくは、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤＨ１７ｖ１である。
【0153】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0154】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１（例えば配列番号１３４のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0155】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0156】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１（例えば配列番号１３４のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0157】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0158】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１（例えば配列番号１３４のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0159】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１（例えば配列番号１３４のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0160】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１（ＣＤＲ１）、配列番号２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0161】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１（例えば配列番号１３４のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0162】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0163】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２（例えば配列番号１３５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0164】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0165】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２（例えば配列番号１３５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0166】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0167】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２（例えば配列番号１３５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0168】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２（例えば配列番号１３５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0169】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、及び配列番号９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１０（ＣＤＲ１）、配列番号１１（ＣＤＲ２）、及び配列番号１２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0170】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２（例えば配列番号１３５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0171】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0172】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３（例えば配列番号１３６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0173】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0174】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３（例えば配列番号１３６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0175】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0176】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３（例えば配列番号１３６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0177】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３（例えば配列番号１３６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0178】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１３（ＣＤＲ１）、配列番号１４（ＣＤＲ２）、及び配列番号１５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号１６（ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＣＤＲ２）、及び配列番号１８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0179】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３（例えば配列番号１３６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0180】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0181】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７（例えば配列番号１３７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0182】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0183】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７（例えば配列番号１３７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0184】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0185】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７（例えば配列番号１３７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0186】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７（例えば配列番号１３７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0187】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１９（ＣＤＲ１）、配列番号２０（ＣＤＲ２）、及び配列番号２１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２２（ＣＤＲ１）、配列番号２３（ＣＤＲ２）、及び配列番号２４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0188】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７（例えば配列番号１３７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0189】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0190】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８（例えば配列番号１３８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0191】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0192】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８（例えば配列番号１３８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0193】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0194】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８（例えば配列番号１３８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0195】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８（例えば配列番号１３８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0196】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号２５（ＣＤＲ１）、配列番号２６（ＣＤＲ２）、及び配列番号２７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号２８（ＣＤＲ１）、配列番号２９（ＣＤＲ２）、及び配列番号３０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0197】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８（例えば配列番号１３８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0198】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0199】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０（例えば配列番号１３９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0200】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0201】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０（例えば配列番号１３９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0202】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0203】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０（例えば配列番号１３９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0204】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０（例えば配列番号１３９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0205】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３１（ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＣＤＲ２）、及び配列番号３３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号３４（ＣＤＲ１）、配列番号３５（ＣＤＲ２）、及び配列番号３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0206】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０（例えば配列番号１３９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0207】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0208】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２（例えば配列番号１４０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0209】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0210】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２（例えば配列番号１４０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0211】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７１Ｅ２又はＣＤＨ１７１Ｈ２である。
【0212】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２（例えば配列番号１４０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0213】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２（例えば配列番号１４０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0214】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号３７（ＣＤＲ１）、配列番号３８（ＣＤＲ２）、及び配列番号３９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４０（ＣＤＲ１）、配列番号４１（ＣＤＲ２）、及び配列番号４２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0215】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２（例えば配列番号１４０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0216】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１又はＴＲｖ２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0217】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１（例えば配列番号１２４、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0218】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２（例えば配列番号１２５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0219】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１又はＴＲｖ２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0220】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１（例えば配列番号１２４、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0221】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２（例えば配列番号１２５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0222】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１又はＴＲｖ２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0223】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１（例えば配列番号１２４、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0224】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２（例えば配列番号１２５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0225】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１（例えば配列番号１２４、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0226】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２（例えば配列番号１２５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0227】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４４（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１又はＴＲｖ２であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0228】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１（例えば配列番号１２４、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0229】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２（例えば配列番号１２５のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0230】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0231】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３（例えば配列番号１２６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0232】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0233】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３（例えば配列番号１２６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0234】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0235】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３（例えば配列番号１２６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0236】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３（例えば配列番号１２６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0237】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0238】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３（例えば配列番号１２６のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0239】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0240】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４（例えば配列番号１２７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0241】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0242】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４（例えば配列番号１２７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0243】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0244】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４（例えば配列番号１２７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0245】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４（例えば配列番号１２７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0246】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５２（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0247】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４（例えば配列番号１２７のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0248】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0249】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５（例えば配列番号１２８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0250】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0251】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５（例えば配列番号１２８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0252】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0253】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５（例えば配列番号１２８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0254】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５（例えば配列番号１２８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0255】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４５（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５０（ＣＤＲ２）、及び配列番号５６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0256】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５（例えば配列番号１２８のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0257】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0258】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６（例えば配列番号１２９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0259】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0260】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６（例えば配列番号１２９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0261】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0262】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６（例えば配列番号１２９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0263】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６（例えば配列番号１２９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0264】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４６（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５１（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0265】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６（例えば配列番号１２９のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0266】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0267】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７（例えば配列番号１３０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９である。
【0268】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0269】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７（例えば配列番号１３０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６である。
【0270】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２又はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0271】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７（例えば配列番号１３０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２である。
【0272】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７（例えば配列番号１３０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２である。
【0273】
本発明の結合性分子の好ましい実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号４３（ＣＤＲ１）、配列番号４７（ＣＤＲ２）、及び配列番号４８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号４９（ＣＤＲ１）、配列番号５３（ＣＤＲ２）、及び配列番号５７（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0274】
好ましくは、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。この実施態様では、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７（例えば配列番号１３０のｓｃＦｖ）であり、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１である。
【0275】
上記に示されているのは、本発明の結合性分子（例えば二重特異的かつ四価の結合性分子）に使用され得るＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位の具体的な組み合わせ（例えば、ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つのＣＤＨ１７結合部位と組み合わせた、ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、及びＴＲ２ｖ７のいずれか１つのＴＲＡＩＬＲ２結合部位）である。
【0276】
上記の組み合わせのいくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７の抗原結合部位は、ＣＤＨ１７に特異的な重鎖可変ドメイン（例えば、抗原結合部位ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、又はＣＤＨ１７ｖ１のＶＨ）を含み、ヒト重鎖定常領域、例えば定常領域ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、又はＩｇＭに融合している。好ましくは、ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が使用される。
【0277】
本発明のさらなる実施態様は、ＣＤＨ１７の抗原結合部位がさらに、ＣＤＨ１７に特異的な軽鎖可変ドメイン（例えば抗原結合部位ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、又はＣＤＨ１７ｖ１のＶＬ）を含み、ヒト軽鎖定常領域κ又はλに融合している。好ましくは、ヒト軽鎖定常領域κが使用される。
【0278】
いくつかの実施態様では、結合性分子は、ＣＤＨ１７特異的抗原結合部位のいずれか（ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、又はＣＤＨ１７ｖ１）を含むＩｇ分子（２つのＶＨドメイン（それらの各々は重鎖定常領域、例えば定常ＩｇＧ１領域に融合している）と２つのＶＬドメイン（それらの各々は軽鎖定常領域に融合している）を含む）、及びＴＲＡＩＬＲ２特異的抗原結合部位のいずれか（ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、又はＴＲ２ｖ７）を含む２つのｓｃＦｖを含み、ｓｃＦｖ（群）の各々はＩｇＧ分子のＣ末端に（例えば、一方のｓｃＦｖは一方の重鎖に、他方のｓｃＦｖは他方の重鎖に、各々ペプチドリンカーを介して）融合し、これにより、二重特異的かつ四価の結合性分子が形成される。
【0279】
ヒトＩｇＧ１野生型の重鎖定常領域の配列の例は、配列番号１２０に提供され、ＩｇＧ１ＫＯは配列番号１２１に提供され、ＩｇＧ４Ｐｒｏ野生型は配列番号１２２に提供されている。ＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔは配列番号２７０に提供されている。好ましくは、重鎖定常領域は、配列番号１２１に提供されているようなＩｇＧ１ＫＯ、又は配列番号２７０に提供されているようなＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔである。
【0280】
ヒト軽鎖定常領域κ配列の例が配列番号１２３に提供されている。
【0281】
以下に提供されているのは、本発明の結合性分子（本明細書においては多重特異的結合性タンパク質とも称される）である。本発明の特異的分子／タンパク質の各々は、（ｉ）免疫グロブリン重鎖が、ＣＤＨ１７に特異的に結合する重鎖可変ドメイン（例えば、ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つのＶＨ）と、免疫グロブリン重鎖定常領域と、及びまた、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的に結合する、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（例えば、ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、及びＴＲ２ｖ７のいずれか１つのＶＬ及びＶＨ）を含むｓｃＦｖのアミノ酸配列も含み、このｓｃＦｖはＩｇ定常ドメインのＣ末端に連結されている、並びに（ｉｉ）免疫グロブリン軽鎖が、ＣＤＨ１７に特異的に結合する軽鎖可変ドメイン（例えば、ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つのＶＬ）及び軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列を含む、改変された免疫グロブリン分子を含む。好ましくは、改変された免疫グロブリン分子は、２本の免疫グロブリン重鎖（例えば改変された重鎖）及び２本の免疫グロブリン軽鎖を含む。
【0282】
いくつかの実施態様では、その重鎖アミノ酸配列（例えば、Ｉｇ重鎖のＣ末端に融合したｓｃＦｖを有する改変された重鎖）並びにその軽鎖アミノ酸配列によって定義される、以下の様々な態様で提供される結合性分子は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含み、これにより、対称的な四価かつ二重特異的な構造が形成される。
【0283】
本発明のさらなる態様は、配列番号１５９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１である。
【0284】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２である。
【0285】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３である。
【0286】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７である。
【0287】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８である。
【0288】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０である。
【0289】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２である。
【0290】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１である。
【0291】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２である。
【0292】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３である。
【0293】
本発明のさらなる態様は、配列番号１６９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４である。
【0294】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５である。
【0295】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６である。
【0296】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ９であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７である。
【0297】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１である。
【0298】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２である。
【0299】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３である。
【0300】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７である。
【0301】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８である。
【0302】
本発明のさらなる態様は、配列番号１７９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０である。
【0303】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２である。
【0304】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１である。
【0305】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２である。
【0306】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３である。
【0307】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４である。
【0308】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５である。
【0309】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６である。
【0310】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ａ６であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７である。
【0311】
本発明のさらなる態様は、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１である。
【0312】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２である。
【0313】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３である。
【0314】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７である。
【0315】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８である。
【0316】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０である。
【0317】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２である。
【0318】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１である。
【0319】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２である。
【0320】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３である。
【0321】
本発明のさらなる態様は、配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４である。
【0322】
本発明のさらなる態様は、配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５である。
【0323】
本発明のさらなる態様は、配列番号２０１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６である。
【0324】
本発明のさらなる態様は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｅ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７である。
【0325】
本発明のさらなる態様は、配列番号２０４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１である。
【0326】
本発明のさらなる態様は、配列番号２０５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２である。
【0327】
本発明のさらなる態様は、配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３である。
【0328】
本発明のさらなる態様は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７である。
【0329】
本発明のさらなる態様は、配列番号２０８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８である。
【0330】
本発明のさらなる態様は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０である。
【0331】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２である。
【0332】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１である。
【0333】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２である。
【0334】
本発明のさらなる態様は、配列番号２７１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２である。
【0335】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３である。
【0336】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４である。
【0337】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５である。
【0338】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６である。
【0339】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７Ｈ２であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７である。
【0340】
本発明のさらなる態様は、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１である。
【0341】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃２である。
【0342】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃３である。
【0343】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃７である。
【0344】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃８である。
【0345】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１０である。
【0346】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲ＃１２である。
【0347】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１である。
【0348】
本発明のさらなる態様は、（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｉｉｉ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｉｖ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖；又は（ｖ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ１である。
【0349】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２である。
【0350】
本発明のさらなる態様は、（ｉ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は（ｉｉ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ２である。
【0351】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ３である。
【0352】
本発明のさらなる態様は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ４である。
【0353】
本発明のさらなる態様は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ５である。
【0354】
本発明のさらなる態様は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ６である。
【0355】
本発明のさらなる態様は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、結合性分子を提供する。この態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗原結合部位はＣＤＨ１７ｖ１であり、ＴＲＡＩＬＲ２に特異的な抗原結合部位はＴＲｖ７である。
【0356】
本明細書においてＣＤＨ１７に特異的に結合する抗体分子（例えば、２本の重鎖と２本の軽鎖を有するＹ字形構造を有する完全長抗体／免疫グロブリン分子、又はその断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ’）２断片、一本鎖抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ））がさらに提供される。いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、組換えモノクローナル抗体、キメラ抗体分子、ヒト化抗体分子、又はヒト抗体分子である。
【0357】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号５８（ＣＤＲ１）、配列番号５９（ＣＤＲ２）、及び配列番号６０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６１（ＣＤＲ１）、配列番号６２（ＣＤＲ２）、及び配列番号６３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。
【0358】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【0359】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号６７（ＣＤＲ１）、配列番号６８（ＣＤＲ２）、及び配列番号６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。
【0360】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【0361】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号７０（ＣＤＲ１）、配列番号７１（ＣＤＲ２）、及び配列番号７２（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７３（ＣＤＲ１）、配列番号７４（ＣＤＲ２）、及び配列番号７５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。
【0362】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【0363】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【0364】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲと、配列番号７９（ＣＤＲ１）、配列番号８０（ＣＤＲ２）、及び配列番号８１（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲとを含む。
【0365】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７に特異的な抗体分子は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。
【0366】
いくつかの実施態様では、上記に定義されているようなＣＤＨ１７特異的抗体はさらに、ヒト重鎖定常ドメイン（例えばＩｇＧ定常ドメイン）及びヒト軽鎖定常ドメイン（例えばκ又はλ軽鎖定常ドメイン）を含む。いくつかの実施態様では、重鎖定常ドメインはヒトＩｇＧ１野生型（例えば配列番号１２０に提供されているような）、ＩｇＧ１ＫＯ（例えば配列番号１２１に提供されているような）、ＩｇＧ４Ｐｒｏ野生型（例えば配列番号１２２に提供されているような）、又はＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔ（例えば配列番号２７０に提供されているような）である。いくつかの実施態様では、ヒト軽鎖定常ドメインはヒトκ（例えば配列番号１２３に提供されているような）である。
【0367】
いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７特異的抗体は、配列番号１２０、１２１、１２２、又は２７０のいずれか１つの配列に融合した配列番号１１０、１１２、１１４、１１６、又は１１８のいずれか１つの配列を含む重鎖と、配列番号１２３の配列に融合した配列番号１１１、１１３、１１５、１１７、又は１１９のいずれか１つの配列を含む軽鎖（例えば、配列番号１７３、１８８、２０３、２１８、又は２３３のいずれか１つの配列を含む軽鎖）とを有する。
【0368】
本明細書において提供されるＣＤＨ１７特異的抗体は、異なる抗原に対する結合特異性を有する色素、薬物、又は別の分子に付着させることによって、ＣＤＨ１７を発現している細胞を標識、局在決定、同定、又は標的化するために使用され得る（例えばＥＬＩＳＡアッセイ、ＦＡＣＳ分析、免疫組織化学法、又は同等な方法において）。本明細書に記載のＣＤＨ１７特異的抗体は単独では、ＣＤＨ１７を発現している細胞の細胞生存率に対しいて影響を及ぼさない。いくつかの実施態様では、ＣＤＨ１７特異的抗体はＣＤＨ１７発現細胞の表面に特異的に結合し、このような細胞の局在決定及び／又は同定のために使用される。いくつかの実施態様では、本明細書において提供されるＣＤＨ１７抗体は、ＣＤＨ１７を発現している細胞（例えば腫瘍細胞）を同定するために使用される。いくつかの実施態様では、本明細書において提供されるＣＤＨ１７抗体は、このような薬物又は細胞障害性薬剤を該ＣＤＨ１７抗体に付着させることによって、標的細胞（例えばＣＤＨ１７を発現している腫瘍細胞）に薬物又は細胞障害性薬剤を送達し、これにより、例えば、該標的細胞を死滅させるために使用される。
【0369】
本発明のさらなる態様は、本発明の結合性分子若しくは本発明の抗体分子をコードしている単離された核酸分子、又はこのような核酸分子（群）を含む発現ベクターを提供する。
【0370】
いくつかの実施態様では、本発明の結合性分子又は本発明の抗体分子は、抗体の重鎖及び／又は軽鎖のポリペプチドを含む。当業者には理解され得るように、重鎖ポリペプチド、軽鎖ポリペプチド、又は重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドをコードしている、核酸分子は容易に調製され得る。
【0371】
軽鎖及び重鎖をコードしている核酸分子は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって標準的な方法を使用して化学的に及び酵素的に合成され得る。まず、適切なオリゴヌクレオチドを、当技術分野において公知である方法（例えばGait, 1984）を用いて合成することができ、これを使用して、合成遺伝子を作製することができる。オリゴヌクレオチドから合成遺伝子を作製するための方法は当技術分野において公知である（例えば、Stemmer et al., 1995; Ye et al., 1992; Hayden et Mandecki, 1988; Frank et al., 1987）。
【0372】
本発明の核酸分子としては、配列表に示されるポリペプチド配列をコードしているＤＮＡ分子が挙げられるがこれらに限定されない。また、本発明はまた、国際公開公報第２００７／０４２３０９号に定義されているような高ストリンジェンシー結合条件下及び洗浄条件下で、配列表に示されているポリペプチド配列をコードしているＤＮＡ分子にハイブリダイズする核酸分子にも関する。好ましい分子（ｍＲＮＡの観点から）は、本明細書に記載のＤＮＡ分子の１つに対して少なくとも７５％又は８０％（好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％）の相同率又は配列同一率を有するものである。例えば、真核細胞において抗体を発現させる観点から、配列表に示されているＤＮＡ配列は、真核細胞におけるコドン使用頻度に適合するように設計されている。Ｅ．ｃｏｌｉにおいて抗体を発現させることを望む場合、これらの配列を、Ｅ．ｃｏｌｉコドン使用頻度と適合するように変化させることができる。本発明のＤＮＡ分子の変異体は、例えば国際公開公報第２００７／０４２３０９号に記載のように、いくつかの異なる方法で構築することができる。
【0373】
本明細書において２つ以上の核酸配列又はポリペプチド配列の脈絡において使用する「同一である」又は「同一率」という用語は、最大の対応率となるように比較しアラインさせた場合に、同じであるか又は特定の比率の同じであるヌクレオチド若しくはアミノ酸残基を有する、２つ以上の配列又はサブ配列を指す。同一率を決定するために、配列を最適に比較する目的でアラインさせる（例えば、第二のアミノ酸配列又は核酸配列と最適にアラインさせるために、第一のアミノ酸配列又は核酸配列にギャップを導入することができる）。次いで、対応するアミノ酸の位置又はヌクレオチドの位置におけるアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第一の配列内の位置が、第二の配列内の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占有されている場合、分子はその位置において同一である。２つの配列間の同一率は配列によって共有される同一な位置の数の関数である（すなわち、同一率％＝同一な位置の数／位置（例えば重複している位置）の総数×１００）。いくつかの実施態様では、比較される２つの配列は、適宜（例えば、比較される配列を超えて伸長した追加の配列を除外する）、ギャップが配列内に導入された後に、同じ長さである。例えば、可変領域配列を比較する場合、リーダー配列及び／又は定常ドメイン配列は考慮されない。２つの配列間の配列比較のために、「対応する」ＣＤＲは、両方の配列内の同じ位置のＣＤＲを指す（例えば各配列のＣＤＲ－Ｈ１）。
【0374】
２つの配列間の同一率又は類似率の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。２つの配列の比較のために使用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877のように改変された、Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに取り込まれる。ＢＬＡＳＴによるヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施され得、これにより関心対象のタンパク質をコードしている核酸に対して相同であるヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴによるタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長３を用いて実施され得、これにより関心対象のタンパク質に対して相同であるアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためにギャップを入れたアラインメントを得るために、ギャップを入れたＢＬＡＳＴを、Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402に記載のように利用することができる。あるいは、ＰＳＩ－Ｂｌａｓｔを使用することにより、分子間の遠隔関係を検出する反復検索を実施することができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップを入れたＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ－Ｂｌａｓｔプログラムを使用する場合、それぞれのプログラム（例えばＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォールトパラメーターが使用され得る。配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Myers and Miller, CABIOS（1989）のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部である、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれる。アミノ酸配列の比較のためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用することができる。配列分析のための追加のアルゴリズムは当技術分野において公知であり、これには、Torellis and Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5に記載のようなＡＤＶＡＮＣＥ及びＡＤＡＭ；並びにPearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8に記載のＦＡＳＴＡが挙げられる。ＦＡＳＴＡでは、ｋｔｕｐは、検索の感度及び速度を設定する制御オプションである。ｋｔｕｐ＝２である場合、比較される２つの配列内の類似の領域は、アラインさせた残基対を調べることによって発見され；ｋｔｕｐ＝１である場合、単一のアラインさせたアミノ酸を調べる。タンパク質配列ではｋｔｕｐを２若しくは１に設定し得、又はＤＮＡ配列では１～６に設定し得る。ｋｔｕｐが明記されない場合には、タンパク質ではデフォールトは２であり、ＤＮＡでは６である。あるいは、タンパク質配列アラインメントは、Higgins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402によって記載のように、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアルゴリズムを使用して実施され得る。
【0375】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）分子の発現を可能とする条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程；並びに
（ｂ）該分子を回収する工程；並びに場合により
（ｃ）該分子をさらに精製及び／又は改変及び／又は製剤化する工程
を含む、本明細書に記載の結合性分子又は抗体分子の生成法を提供する。
（ａ）分子の発現を可能とする条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程；並びに
（ｂ）該分子を回収する工程；並びに場合により
（ｃ）該分子をさらに精製及び／又は改変及び／又は製剤化する工程
を含む、本明細書に記載の結合性分子又は抗体分子の生成法を提供する。
【0376】
本発明のこの態様の１つの実施態様は、生成法がさらに（ｃ）本発明の結合性分子をさらに精製及び／又は改変及び／又は製剤化する工程を含むものである。
【0377】
本発明の結合性分子又は抗体を生成するために、完全長軽鎖及び／又は重鎖又はその断片をコードしているＤＮＡ分子を発現ベクターに挿入し、これにより配列は、転写制御配列及び翻訳制御配列に作動可能に連結される。
【0378】
本発明の結合性分子又は抗体を製造するために、当業者は、当技術分野において周知である多種多様な発現系、例えばKipriyanov and Le Gall, Curr Opin Drug Discov Devel. 2004 Mar;7(2):233-42によって論評されているものから選択し得る。
【0379】
発現ベクターとしては、プラスミド、レトロウイルス、コスミド、ＥＢＶ由来エピソームなどが挙げられる。発現ベクター及び発現制御配列は、宿主細胞と適合性であるように選択される。抗体の軽鎖遺伝子及び抗体の重鎖遺伝子、又は本明細書に記載の結合性分子の重鎖の遺伝子（例えば、そのＣ末端を用いてｓｃＦｖ配列に付着している免疫グロブリン重鎖配列を含む遺伝子）を別々のベクターに挿入してもよい。特定の実施態様では、両方のＤＮＡ配列、すなわち軽鎖配列及び重鎖配列を同じ発現ベクターに挿入する。簡便なベクターは、任意のＶＨ配列又はＶＬ配列を上記のように容易に挿入及び発現させることができるように工学操作された適切な制限酵素部位と共に、機能的に完全なヒトＣＨ又はＣＬ免疫グロブリン配列をコードしているものである。定常鎖は通常、抗体軽鎖についてはκ又はλであり、抗体重鎖については、それは、任意のＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）又は他の免疫グロブリン（対立遺伝子変異体を含む）であり得るがこれらに限定されない。
【0380】
組換え発現ベクターはまた、宿主細胞からの抗体鎖（例えば、本明細書に記載の結合性分子又は抗体の重鎖及び軽鎖）の分泌を促進するシグナルペプチドをコードしていてもよい。抗体鎖をコードしているＤＮＡを、シグナルペプチドが、成熟抗体鎖ＤＮＡのアミノ末端にインフレームで連結されるようにベクターにクローニングしてもよい。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドであっても、又は非免疫グロブリンタンパク質由来の異種ペプチドであってもよい。あるいは、抗体鎖をコードしているＤＮＡ配列（例えば、本明細書に記載の結合性分子又は抗体の重鎖及び軽鎖）はすでにシグナルペプチド配列を含有していてもよい。
【0381】
抗体鎖（例えば、本明細書に記載の結合性分子又は抗体の重鎖及び軽鎖）をコードしているＤＮＡ配列に加えて、組換え発現ベクターは、調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、終結シグナル及びポリアデニル化シグナル、並びに宿主細胞における抗体鎖の発現を制御する他の発現制御配列を有する。（哺乳動物細胞における発現のために例示されている）プロモーター配列の例は、（ＣＭＶ）由来のプロモーター及び／又はエンハンサー（例えばＣＭＶサルウイルス４０（ＳＶ４０））（例えばＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス（例えばアデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ポリオーマプロモーター、及び強力な哺乳動物プロモーター、例えば天然免疫グロブリンプロモーター及びアクチンプロモーターである。ポリアデニル化シグナルの例は、ＢＧＨポリＡ、ＳＶ４０後期又は初期ポリＡであり；代替的には、免疫グロブリン遺伝子の３’ＵＴＲなどを使用してもよい。
【0382】
組換え発現ベクターはまた、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば複製起点）及び選択マーカー遺伝子も有し得る。本明細書に記載の結合性分子又は抗体の重鎖若しくはその抗原結合部分及び／又は軽鎖若しくはその抗原結合部分をコードしている核酸分子、並びに、これらのＤＮＡ分子を含むベクターを、宿主細胞、例えば細菌細胞又は高等真核細胞、例えば哺乳動物細胞に、当技術分野において周知であるトランスフェクション法、例えばリポソームにより媒介されるトランスフェクション、ポリカチオンにより媒介されるトランスフェクション、プロトプラスト融合、マイクロインジェクション、リン酸カルシウム沈降法、電気穿孔法、又はウイルスベクターによる導入に従って導入することができる。
【0383】
好ましくは、本明細書に記載の結合性分子又は抗体の重鎖及び軽鎖をコードしている核酸分子は、２つのベクター上に存在し、これを宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞に同時トランスフェクトする。
【0384】
したがって、さらなる態様は、重鎖をコードしている核酸分子を含む発現ベクターと、本明細書に記載の結合性分子又は抗体の軽鎖をコードしている核酸分子を含む発現ベクターとを含む、宿主細胞を提供する。
【0385】
発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は当技術分野において周知であり、これにはとりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ、ＣＨＯ－ＤＧ４４）細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト癌細胞（例えばＨｅｐＧ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、又は任意のこのような細胞株の誘導体／後代が挙げられる。ヒト、マウス、ラット、サル、及びげっ歯類の細胞株を含むがこれらに限定されない他の哺乳動物細胞、又は、酵母細胞、昆虫細胞、及び植物細胞を含むがこれらに限定されない他の真核細胞、又は細菌などの原核細胞が使用され得る。本発明の結合性分子は、宿主細胞における結合性分子の発現を可能とするに十分な時間をかけて宿主細胞を培養することによって生成される。
【0386】
本明細書に記載のような結合性分子及び抗体分子は好ましくは、培養培地から分泌されたポリペプチドとして回収されるか、又は、例えば分泌シグナルの非存在下で発現される場合には宿主細胞溶解液から回収されてもよい。組換えタンパク質及び宿主細胞タンパク質のために使用される標準的なタンパク質精製法を使用して、実質的に均一な本明細書に記載のような結合性分子又は抗体の調製物が得られるような方法で、本明細書に記載の結合性分子又は抗体分子を精製する必要がある。例えば、本発明の結合性分子及び抗体を得るのに有用な最先端の精製法は、第一工程として、培養培地又は溶解液からの細胞及び／又は粒子状細胞片の除去を含む。次いで、結合性分子又は抗体を、混入している可溶性タンパク質、ポリペプチド及び核酸から、例えば、イムノアフィニティカラム又はイオン交換カラムでの分画、エタノール沈降、逆相ＨＰＬＣ、セファデックスクロマトグラフィー、シリカクロマトグラフィー又は陽イオン交換樹脂クロマトグラフィーによって精製する。本明細書に記載のようなＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７結合性分子又はＣＤＨ１７抗体を得るためのプロセスにおける最終工程として、精製された結合性分子又は抗体を、治療適用のために以下に記載されているように、乾燥、例えば凍結乾燥させ得る。
【0387】
本発明のさらなる態様は、医薬に使用するための本発明の結合性分子又は抗体を提供する。
【0388】
本発明のさらなる態様は、がんの治療法に使用するための本発明の結合性分子（ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、及びＴＲ２ｖ７のいずれか１つのＴＲＡＩＬＲ２結合部位と、ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つのＣＤＨ１７結合部位とを有する結合性分子）又はＣＤＨ１７に特異的な抗体（例えば細胞障害性薬物に融合している）を提供する。がんは結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃癌（ＧＣ）、膵臓癌（ＰＡＣ）、肝臓癌（胆管癌を含む）、又は神経内分泌腫瘍であることが好ましい。
【0389】
上記したように、本発明者らは、本明細書に記載の結合性分子が、がん細胞のアポトーシスを誘発するのに大いなる有用性を有し、それ故、ＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７の両方を発現するがんの治療法に使用され得ることを同定した。特定の腫瘍がＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７を発現しているかどうかを同定する方法は当技術分野において周知である。例えば、免疫組織化学法を使用して、腫瘍組織がＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７を発現しているかどうか（例えば、本明細書に記載のようなＣＤＨ１７抗体を使用して）、したがって、本発明の結合性分子を用いた処置に適しているであろうかを決定することができる。
【0390】
特に、本発明の結合性分子は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）の処置に有用性を有する。
【0391】
ＣＲＣは、ＩＣＤ－１０に列挙されている明確な悪性疾患であり、世界のがん罹患率及び死亡率の主因の１つである。明白な転移及び転移性疾患を呈するＣＲＣ患者の約２５％は、新規に診断された患者の４０～５０％に発症する。近年の化学療法の改良は、転移ＣＲＣの生存期間を延長しているが、大半の患者はその疾患に倒れるだろう。したがって、この疾患を処置するためのさらに他の治療剤が非常に必要とされる。
【0392】
結腸直腸癌の約３０～５０％は、突然変異した（異常な）ＫＲＡＳ遺伝子を有することが知られている。腫瘍に頻繁に見られるＫＲＡＳ突然変異は、エキソン２（コドン１２及び１３）及びエキソン３（コドン６１）における突然変異を含み、これは腫瘍生検材料から分析することができる。それは、細胞の成長、増殖、浸潤、及び転移に関与する下流シグナル伝達経路を刺激する、連続的なシグナル伝達をもたらす、活性化突然変異を含む。発癌性Ｋ－Ｒａｓは、ＴＲＡＩＬによって誘発されるアポトーシスに対する抵抗性を与えることができることが示唆されている（Hoogwater et al., Gastroenterology. 2010 Jun;138(7):2357-67）。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の結合性分子（ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、ＴＲ２ｖ７のいずれか１つのＴＲＡＩＬＲ２結合部位と、ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つのＣＤＨ１７結合部位とを有する結合性分子）は、ＫＲＡＳ野生型結腸直腸癌（すなわち、ＫＲＡＳ野生型腫瘍を有する患者）の処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の結合性分子（ＴＲ＃１、ＴＲ＃２、ＴＲ＃３、ＴＲ＃７、ＴＲ＃８、ＴＲ＃１０、ＴＲ＃１２、ＴＲ２ｖ１、ＴＲ２ｖ２、ＴＲ２ｖ３、ＴＲ２ｖ４、ＴＲ２ｖ５、ＴＲ２ｖ６、ＴＲ２ｖ７のいずれか１つのＴＲＡＩＬＲ２結合部位と、ＣＤＨ１７Ｅ９、ＣＤＨ１７Ａ６、ＣＤＨ１７Ｅ２、ＣＤＨ１７Ｈ２、及びＣＤＨ１７ｖ１のいずれか１つのＣＤＨ１７結合部位とを有する結合性分子）は、ＫＲＡＳ突然変異体結腸直腸癌（すなわちＫＲＡＳ突然変異体腫瘍を有する患者）の処置に使用するためのものである。
【0393】
さらなる態様では、本発明は、がんの治療又は予防のための方法に関し、該方法は、有効量の本発明の結合性分子をヒト（例えば、がんを患っているか又はがんを発症するリスクのある個体）に投与する工程を含む。
【0394】
好ましい適用様式は、注入又は注射（静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、皮内）による非経口であるが、吸入、経皮、鼻腔内、頬側、口腔内によるなどの他の適用様式も適用可能であり得る。
【0395】
さらなる態様では、本発明の結合性分子は、シリンジ、ペン型注射器、マイクロポンプ、又は他の器具などの結合性分子の投与に有用な器具と組み合わせて使用される。さらなる態様では、本発明の結合性分子は、例えば、結合性分子の使用説明書と共に添付文書も含む、パーツ一式に含まれる。
【0396】
投与される予定の「治療有効量」の分子は、がんの臨床症状を予防、軽減、又は治療するのに必要とされる最少量、特にこれらの障害に対して有効な最少量である。
【0397】
１日あたりに適用可能な本発明の結合性分子の用量範囲は通常、１μg/kgから１００mg/kg、好ましくは０．１mg/kgから２０mg/kgである。
【0398】
一般的に、本明細書に記載の疾患、障害、及び容態の治療及び／又は軽減のために、処置される予定の具体的な疾患、障害、又は容態、使用される予定の本発明の具体的な結合性分子の効力、具体的な投与経路、及び使用される具体的な医薬製剤又は医薬組成物に応じて、本発明の抗体分子は一般的に、体重１kgあたり０．００５～２０．０mgの量で、好ましくは０．０５～１０．０mg/kg/用量、より好ましくは０．５～１０mg/kg/用量の用量で、連続的に（例えば点滴によって）又はより好ましくは一回量としてのいずれかで投与されるだろう。投与間隔は例えば、週２回、週１回、又は月１回の用量であり得るが、特に前記のパラメーターに応じてかなり変更してもよい。したがって、上記に示された最少用量よりも少ないものを使用することで十分である場合もあり、一方、上限を超えなければならない場合もある。大量を投与する場合には、１日にわたり多数のより少ない用量に分割することが賢明であり得る。
【0399】
本発明の具体的な結合性分子並びにその具体的な薬物動態特性及び他の特性に応じて、１日１回、２日間毎、３日間毎、４日間毎、５日間毎、又は６日間毎、週１回、月１回などに投与され得る。投与処方計画は、長期の週１回の処置を含み得る。「長期」によって少なくとも２週間、好ましくは数か月間又は数年間の期間を意味する。
【0400】
本発明の結合性分子及びそれを含む組成物の有効性は、任意の適切なインビトロアッセイ、細胞アッセイ、インビボアッセイ、及び／又はそれ自体公知の動物モデル、又はその任意の組み合わせを使用して、発症した具体的な疾患に応じて試験することができる。適切なアッセイ及び動物モデルは当業者には明らかであり、例えば、以下の実施例に使用されるアッセイ及び動物モデルが挙げられる。
【0401】
実際の薬学的に有効な量又は治療用量は勿論、患者の年齢及び体重、投与経路、及び疾患の重症度などの、当業者には公知の要因に依存するだろう。いずれの場合にも本発明の結合性分子は、患者特有の容態に基づいて薬学的に有効な量が送達されることを可能とする用量及び方法で投与されるだろう。
【0402】
本発明の結合性分子は、単独で、又は他の薬理学的に活性な成分、例えば最先端の若しくは標準的な化合物、例えば細胞静止性物質若しくは細胞障害性物質、細胞増殖阻害剤、血管新生抑制物質、ステロイド、免疫調節剤／チェックポイント阻害剤などと組み合わせて使用され得る。
【0403】
したがって、本発明のさらなる態様は、薬学的に許容される担体及び場合により１つ以上のさらに他の活性成分と一緒に、本発明の結合性分子を含む医薬組成物を提供する。
【0404】
本発明のさらなる態様は、がんの治療法に使用するための本発明の結合性分子を提供し（例えば、がんを患っているか又はがんを発症するリスクのある個体）、ここでの該療法は１つ以上の薬理学的に活性な物質を含む。
【0405】
本発明のさらなる態様は、がん及び／又は腫瘍の治療用医薬品の製造における１つ以上の活性成分の使用を提供し（例えばがんを患っているか又はがんを発症するリスクのある個体）、ここでの該医薬品は本発明の結合性分子を含む。
【0406】
本発明の結合性分子と組み合わせて投与され得る細胞静止性物質及び／又は細胞障害性物質としては、ホルモン、ホルモン類似体、及び抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、ＬＨＲＨアゴニスト及びアンタゴニスト、増殖因子阻害剤（例えば血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、表皮増殖因子（ＥＧＦ）、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）、ヒト表皮増殖因子（ＨＥＲ、例えばＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４）、及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）などの増殖因子）、阻害剤は例えば（抗）増殖因子抗体、（抗）増殖因子受容体抗体、及びチロシンキナーゼ阻害剤、例えばセツキシマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ニンテダニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ボスチニブ、及びトラスツズマブである；代謝拮抗剤（例えば、抗葉酸剤、例えばメトトレキサート、ラルチトレキセド、ピリミジン類似体、例えば５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ゲムシタビン、イリノテカン、ドキソルビシン、ＴＡＳ－１０２、カペシタビン、及びゲムシタビン、プリン及びアデノシン類似体、例えばメルカプトプリン、チオグアニン、クラドリビン及びペントスタチン、シタラビン（ａｒａＣ）、フルダラビン）；抗腫瘍性抗生物質（例えば、アントラサイクリン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）；アルキル化剤（例えばエストラムスチン、メクロレタミン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ダカルバジン、シクロホスファミド、イフォスファミド、テモゾロミド、ニトロソウレア、例えばカルムスチン及びロムスチン、チオテパ）；有糸分裂阻害剤（例えばビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、及びビンクリスチン；並びに、タキサン、例えばパクリタキセル、ドセタキセル）；血管新生阻害剤、例えば、ベバシズマブ、ラムシルマブ、及びアフリベルセプト、チューブリン阻害剤；ＤＮＡ合成阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロトキシン、例えばエトポシド及びエトポフォス、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、ミトキサントロン）、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、Ａ－Ｒａｆ阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、Ｃ－Ｒａｆ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ｍＴＲＯＣ１／Ｃ２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋα阻害剤、デュアルｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＳＴＫ３３阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＰＬＫ１阻害剤（例えばボラセルチブ）、ＣＤＫ阻害剤、例えばＣＤＫ９阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えばＰＴＫ２／ＦＡＫ阻害剤）、タンパク質間相互作用阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＢＲＤ４阻害剤、ＩＧＦ－１Ｒ阻害剤、Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、Ｂｃｌ－２／Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤、ＥｒｂＢ受容体阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、Ｓｒｃ阻害剤、ラパマイシン類似体（例えばエベロリムス、テムシロリムス、リダフォロリムス、シロリムス）、アンドロゲン合成阻害剤、アンドロゲン受容体阻害剤、ＤＮＭＴ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＡＮＧ１/２阻害剤、ＣＹＰ１７阻害剤、放射性医薬品、免疫治療剤、例えば免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３の結合性分子／免疫グロブリン、例えばイピリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ）、並びに様々な化学療法剤、例えばアミホスチン、アナグレリド、クロドロン酸、フィルグラスチム、インターフェロン、インターフェロンα、ロイコボリン、リツキシマブ、プロカルバジン、レバミソール、メスナ、ミトタン、パミドロン酸、及びポルフィマー；プロテアーゼ阻害剤（例えばボルテゾミブ）；Ｓｍａｃ及びＢＨ３模倣薬；ｐ５３の機能を回復させる薬剤、例えばｍｄｍ２－ｐ５３アンタゴニスト；Ｗｎｔ／β－カテニンシグナル伝達経路阻害剤；並びに／又はサイクリン依存性キナーゼ９阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【0407】
特に好ましいのは、以下から選択された薬物と組み合わせた本発明の結合性分子を用いての処置である：
（ｉ）乳癌患者における化学療法（術前補助化学療法の状況における、ドキソルビシン／シクロホスファミドの組み合わせ、及び／又はカペシタビン／ドセタキセルの組み合わせ；一次処置及び二次以降の処置のためのタキサン／白金処方計画）と組み合わせた又は組み合わせない抗ＶＥＧＦ抗体（ベバシズマブ及び他の血管新生抑制物質）；
（ｉｉ）ＣＲＣの処置に使用される化学療法剤（５－フルオロウラシル、イリノテカン、ドキソルビシン、及びＴＡＳ－１０２を含む）；
（ｉｉｉ）例えばＣＲＣ患者の処置のための、化学療法（イリノテカンを含む）と組み合わせた又は組み合わせない、抗ＶＥＧＦ抗体（ベバシズマブ及び他の血管新生抑制物質）と組み合わせた、又はレゴラフェニブと組み合わせた、抗ＥＧＦＲ抗体（ＫＲＡＳ野生型腫瘍におけるセツキシマブ及びパニツムマブ）；
（ｉｖ）例えばＣＲＣ患者の処置のための、抗ＰＤ－１抗体薬剤及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体薬剤並びに抗ＬＡＧ３抗体薬剤、例えばペンブロリズマブ及びニボルマブ並びに国際公開公報第２０１７／１９８７４１号に開示されているような抗体をはじめとする、免疫療法剤。
（ｉ）乳癌患者における化学療法（術前補助化学療法の状況における、ドキソルビシン／シクロホスファミドの組み合わせ、及び／又はカペシタビン／ドセタキセルの組み合わせ；一次処置及び二次以降の処置のためのタキサン／白金処方計画）と組み合わせた又は組み合わせない抗ＶＥＧＦ抗体（ベバシズマブ及び他の血管新生抑制物質）；
（ｉｉ）ＣＲＣの処置に使用される化学療法剤（５－フルオロウラシル、イリノテカン、ドキソルビシン、及びＴＡＳ－１０２を含む）；
（ｉｉｉ）例えばＣＲＣ患者の処置のための、化学療法（イリノテカンを含む）と組み合わせた又は組み合わせない、抗ＶＥＧＦ抗体（ベバシズマブ及び他の血管新生抑制物質）と組み合わせた、又はレゴラフェニブと組み合わせた、抗ＥＧＦＲ抗体（ＫＲＡＳ野生型腫瘍におけるセツキシマブ及びパニツムマブ）；
（ｉｖ）例えばＣＲＣ患者の処置のための、抗ＰＤ－１抗体薬剤及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体薬剤並びに抗ＬＡＧ３抗体薬剤、例えばペンブロリズマブ及びニボルマブ並びに国際公開公報第２０１７／１９８７４１号に開示されているような抗体をはじめとする、免疫療法剤。
【0408】
治療法に使用するためには、本発明の結合性分子又は抗体は、動物又はヒトへの投与を容易にするのに適した医薬組成物へと製剤化される。本明細書に記載の結合性分子又は抗体分子の典型的な製剤は、結合性分子又は抗体分子を生理学的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤と混合することによって、凍結乾燥製剤若しくは別様に乾燥させた製剤、あるいは水性液剤又は水性若しくは非水性懸濁剤の剤形で調製され得る。担体、賦形剤、改変剤、又は安定化剤は、使用される用量及び濃度では無毒性である。それらは、リン酸、クエン酸、酢酸、及び他の無機酸又は有機酸、並びにその塩などの緩衝系；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン；保存剤、例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコール、又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルパラベン又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン；単糖、二糖、オリゴ糖、又は多糖、及び他の糖質、例えばブドウ糖、マンノース、ショ糖、トレハロース、デキストリン、又はデキストラン；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトール又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えばＺｎ－タンパク質錯体）；及び／又はイオン性若しくは非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）（ポリソルベート）、プルロニック（商標）又は脂肪酸エステル、脂肪酸エーテル若しくは糖エステルを含む。また、エタノール又はイソプロパノールなどの有機溶媒も、抗体製剤に含有させてもよい。賦形剤はまた、放出改変機能又は吸収改変機能を有していてもよい。
【0409】
通常、水性液剤又は懸濁剤が好ましいだろう。一般的には、本発明の結合性分子などの治療用タンパク質に適した製剤は、緩衝化されたタンパク質溶液、例えば適切な濃度（例えば０．００１～４００mg/ml、好ましくは０．００５～２００mg/ml、より好ましくは０．０１～２００mg/ml、より好ましくは１．０～１００mg/ml、例えば１．０～１０．０mg/ml（静脈内投与）又は１００mg/ml（皮下投与））のタンパク質と、水性緩衝液、例えば：
－リン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）、
－他のリン酸緩衝液（ｐＨ６．２～８．２）、
－酢酸緩衝液（ｐＨ３．２～７．５、好ましくはｐＨ４．８～５．５）、
－ヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．５～７．０）、
－コハク酸緩衝液（ｐＨ３．２～６．６）、及び
－クエン酸緩衝液（ｐＨ２．１～６．２）、
並びに場合により、溶液の等張性を与えるための塩（例えばＮａＣｌ）及び／又は安定化剤（例えばショ糖、トレハロース、リジン）及び／又は他のポリアルコール（例えばマンニトール及びグリセロール）、並びに場合により、例えば凝集を防ぐための洗浄剤（例えば０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０又はＴｗｅｅｎ－８０）とを含む溶液である。
－リン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）、
－他のリン酸緩衝液（ｐＨ６．２～８．２）、
－酢酸緩衝液（ｐＨ３．２～７．５、好ましくはｐＨ４．８～５．５）、
－ヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．５～７．０）、
－コハク酸緩衝液（ｐＨ３．２～６．６）、及び
－クエン酸緩衝液（ｐＨ２．１～６．２）、
並びに場合により、溶液の等張性を与えるための塩（例えばＮａＣｌ）及び／又は安定化剤（例えばショ糖、トレハロース、リジン）及び／又は他のポリアルコール（例えばマンニトール及びグリセロール）、並びに場合により、例えば凝集を防ぐための洗浄剤（例えば０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０又はＴｗｅｅｎ－８０）とを含む溶液である。
【0410】
静脈内投与用の好ましい緩衝化タンパク質溶液は、１０mMのクエン酸緩衝液（ｐＨ５．５）、２０７mMのショ糖、２５mMのリジン塩酸塩、及び０．０２％のポリソルベート２０に溶かした約１０mg/mlの本発明の結合性分子を含んでいる溶液である。皮下適用のための製剤は、有意により高い濃度の、例えば最大で１００mg/mlの又はさらには約１００mg/mlを超える濃度などの本発明の抗体を含み得る。しかしながら、上記に示されているような成分及びその量は１つの好ましい選択肢を示したにすぎないことが当業者には明らかであろう。代替選択肢及びその変更形は当業者には即座に明らかであるか、又は上記の開示から出発して容易に思いつくことができる。
【0411】
本発明はこれから、以下の非限定的な実施例を用いて説明される。
【0412】
実施例１Ａ：原発性及び転移性結腸直腸癌（ＣＲＣ）並びに原発性胃癌（ＧＣ）及び膵臓癌（ＰＡＣ）におけるＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２の両方の存在率
様々な腫瘍型におけるＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７のタンパク質発現を評価するための試験を実施した。
様々な腫瘍型におけるＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７のタンパク質発現を評価するための試験を実施した。
【0413】
原発性ＣＲＣに関するＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７の免疫組織化学的検査を、新鮮な凍結試料及びＯＣＴ包埋試料に実施した。５μm厚の切片を凍結切片作製装置で調製し、スライドガラス上に載せ、その後、室温で４％ＰＦＡ及びブロッキング溶液（ＰＢＳ／２％ウシ血清アルブミン）で固定した。切片を、一次抗体（アディポジェン社製の抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体クローンＴＲ２．２１、ＡＧ－２０Ｂ－００２８番、Ｃ＝１０μg/ml；Ｒ＆Ｄシステムズ社製の抗ＣＤＨ１７抗体（ｍｕＩｇＧ１）クローン１４１７１３、ＭＡＢ１０３２番、Ｃ＝１μg/ml）と共に、次いで検出試薬（ＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７；Envision+、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、マウス、ダコ社、４０００番）と共にインキュベートし、ＤＡＢ溶液中でインキュベーションした。対比染色を、ヘマトキシリンを使用して実施した。ＰＢＳ中での洗浄工程は適宜実施された。ＣＲＣ転移に関するＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７の免疫組織化学的検査を、ホルマリン固定試料及びパラフィン包埋試料に対して実施した。２μm厚の切片を切片作製装置で調製し、スライドガラス上に載せ、脱脂した。脱マスキング溶液（ＴＲＡＩＬＲ２：ｐＨ９、ベクターラボラトリーズ社、Ｈ３３０１番；ＣＤＨ１７：ｐＨ６、ベクターラボラトリーズ社、Ｈ３３００番）を１２１℃/１気圧で適用し、次いで、３％のＨ２Ｏ２、続いてＰＢＳ／２％ＢＳＡ中の正常なヤギ血清（ベクターラボラトリーズ社、Ｓ－１０００番）を使用してブロッキング工程を適用した。切片を一次抗体（セルシグナリング社製の抗ＴＲＡＩＬＲ２（Ｄ４Ｅ９）ＸＰ（登録商標）ウサギｍＡｂ、８０７４番、希釈率１：２０；Ｒ＆Ｄシステムズ社製の抗ＣＤＨ１７抗体（ｍｕＩｇＧ１）クローン１４１７１３、ＭＡＢ１０３２番、Ｃ＝１μg/ml）と共に室温で１時間インキュベートし、次いで検出試薬（ＴＲＡＩＬＲ２：EnVision+、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ウサギ、ダコ社、Ｋ４００３番；ＣＤＨ１７：EnVision+、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、マウス、ダコ社、４０００番）と共にインキュベートし、その後、ＤＡＢ溶液中でインキュベートした。対比染色は、ヘマトキシリンを使用して実施された。ＰＢＳ中での洗浄工程は、適宜、実施された。
【0414】
図１４では、原発性ＣＲＣ及びＣＲＣ肝転移における、ＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７の両方についての代表的な免疫組織化学検査画像が示されている。原発性ＣＲＣ（ｎ＝２６）では、ＣＤＨ１７の発現は全症例の１００％に、ＴＲＡＩＬＲ２との共発現は８８％に観察され；転移性ＣＲＣ（ｎ＝３９；肝臓及び肺）では、ＣＤＨ１７の発現は全症例の１００％に、ＴＲＡＩＬＲ２との共発現は１００％に観察され；原発性ＧＣ（ｎ＝４９）では、ＣＤＨ１７の発現は全症例の９５％に、ＴＲＡＩＬＲ２との共発現は６０％に；原発性ＰａＣ（ｎ＝３２）では、ＣＤＨ１７の発現は全症例の８０％に、ＴＲＡＩＬＲ２との共発現は２０％に観察された。この研究は、ＣＲＣ、ＧＣ、及びＰＡＣの大きなサブセットにおけるＣＤＨ１７とＴＲＡＩＬＲ２の共発現を支持する。
【0415】
実施例１Ｂ：ヒトＴＲＡＩＬＲ受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）及びヒトカドヘリン１７（ＣＤＨ１７）を認識する結合性分子の設計
本発明者らは、ＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２に結合し、ＣＤＨ１７とＴＲＡＩＬＲ２の両方を発現しているがん細胞のアポトーシスを誘発する、結合性分子を開発した。使用される分子設計は、１つの標的抗原に対して特異性を有し、重鎖のＣ末端に異なる特異性を示すｓｃＦｖが結合した、ＩｇＧ抗体（「マスター抗体」と呼ばれる）を有する。設計の図を図１に示す。
本発明者らは、ＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２に結合し、ＣＤＨ１７とＴＲＡＩＬＲ２の両方を発現しているがん細胞のアポトーシスを誘発する、結合性分子を開発した。使用される分子設計は、１つの標的抗原に対して特異性を有し、重鎖のＣ末端に異なる特異性を示すｓｃＦｖが結合した、ＩｇＧ抗体（「マスター抗体」と呼ばれる）を有する。設計の図を図１に示す。
【0416】
好ましくは、結合性分子は二重特異的かつ四価である。
【0417】
二重特異的分子は、ｓｃＦｖの重鎖可変（ＶＨ）ドメインと軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとの間に可動性のペプチド配列を含有し、ｓｃＦｖドメインは、さらなる一連のリンカーを介してマスターＩｇＧ抗体に連結されている。１つの立体配置では、ｓｃＦｖは、ＶＬドメインがｓｃＦｖの「Ｎ末端」を形成するように配向し、したがって、マスター抗体の重鎖のＣ末端に融合しているが、ＶＨはｓｃＦｖのＣ末端及び実際には全重鎖ポリペプチドを形成している。しかしながら、この「Ｎ－ＶＬ－ＶＨ－Ｃ」構造は逆転していてもよく、すなわち「Ｎ－ＶＨ－ＶＬ－Ｃ」でもよいことが理解され得る。
【0418】
この概念の実現可能性を試験するために、図１に示されたフォーマットに基づいた多くの異なる二重特異的分子が調製された。
【0419】
以下の実施例は、ＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２に結合する二重特異的分子、並びに、これらの分子のフォーマット及び生物学的活性の変化形を作製するために使用される方法を説明する。
【0420】
実施例２：ハイブリドーマ及び培養された単一Ｂ細胞からのハイスループットＶ遺伝子回収を使用した、ＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２を認識する結合性ドメインの調製
理解され得るように、ヒトＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２に結合する二重特異的分子を調製するために、個々の標的抗原に結合する可変ドメインを得ることが必要である。
理解され得るように、ヒトＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２に結合する二重特異的分子を調製するために、個々の標的抗原に結合する可変ドメインを得ることが必要である。
【0421】
これを達成するために、ＣＤＨ１７又はＴＲＡＩＬＲ２免疫化マウスから得られたクローン性ハイブリドーマ又は単一Ｂ細胞をインビトロで培養した。上清を、ヒトＣＤＨ１７又はＴＲＡＩＬＲ２に対する反応性についてスクリーニングした。次いで、免疫グロブリン（Ｉｇ）のＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子を、同定された陽性クローンから増幅した。
【0422】
ハイブリドーマからＲＮＡを単離するために、単一クローンからの約２×１０６個の細胞をペレット化し、材料源として使用した。単一Ｂ細胞については、単一の単離されたＢ細胞から増幅させた１００～５００個の細胞を材料源として使用した。ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ（キアゲン社、ヒルデン、ドイツ）を使用して単離した。次いで、ｃＤＮＡを、Ｓｍａｒｔｅｒ ｃＤＮＡ合成キット（クロンテック社、マウンテンビュー、ＣＡ州）を使用して製造業者の説明書に従って合成した。
【0423】
ＩｇのＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子を、表１に列挙されたプライマーを使用して増幅した。各５０μlのＰＣＲ反応液は、２０μMの正方向プライマーと逆方向プライマーのミックス、２５μlのＰｆｕプレミックス（アジレント・テクノロジーズ社）、２μlの未精製ｃＤＮＡ、及び２１μlの再蒸留水からなっていた。ＰＣＲ反応は、９４℃の工程を３分間から開始し、その後、１５回のＰＣＲサイクル（９２℃で１分間、５５℃で１分間、６８℃で１分間）、次いで２５回のＰＣＲサイクル（９４℃で１分間、５０℃で１分間、７２℃で１分間）が続き、７２℃の工程を７分間で終了する。
【0424】
次いで、２回目のＰＣＲを、４５４次世代シークエンスのためのバーコードの付いたプライマーセットを用いて実施した。反応を９４℃で３分間で開始し、次いで９２℃で１分間、５３℃で１分間、及び６８℃で１分間のサイクルを３５回行なった。ＶＬ及びＶＨのＰＣＲ産物を一緒に集め、ゲル精製し、次いで、４５４ＤＮＡシークエンス（ロシュ社ＧＳ－ＦＬＸ、ＳｅｑＷｒｉｇｈｔ、米国）に提出した。
【0425】
この方法を使用して、ＣＤＨ１７又はＴＲＡＩＬＲ２に対して特異性を有する結合性ドメインをコードしているＩｇのＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子の対を数多く調製した。ＶＨ配列及びＶＬ配列のいくつかはさらに、当技術分野において公知の方法を使用してヒト化された。
【0426】
【表1】
【0427】
実施例３：ＣＤＨ１７及びＴＲＡＩＬＲ２に結合する二重特異的分子のハイスループット構築
ＴＲＡＩＬＲ２ ｓｃＦｖをコードしている遺伝子セグメントを構築するために、実施例２で調製されたか又は当技術分野において公知であるＴＲＡＩＬＲ２結合性可変ドメインをコードしているＶＬ遺伝子とＶＨ遺伝子の対を、ペプチド配列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS（配列番号１４３）の可動性リンカーをコードしている遺伝子セグメントによって接続した。結果として得られたｓｃＦｖコード遺伝子セグメントは次いで、ヒトＩｇＧ抗体の重鎖をコードしている遺伝子の３’末端にインフレームでクローニングされた。これらのコーディングセグメントをオーバーラップＰＣＲ法によって合成し、発現ベクターｐＴＴ５にクローニングした。
ＴＲＡＩＬＲ２ ｓｃＦｖをコードしている遺伝子セグメントを構築するために、実施例２で調製されたか又は当技術分野において公知であるＴＲＡＩＬＲ２結合性可変ドメインをコードしているＶＬ遺伝子とＶＨ遺伝子の対を、ペプチド配列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS（配列番号１４３）の可動性リンカーをコードしている遺伝子セグメントによって接続した。結果として得られたｓｃＦｖコード遺伝子セグメントは次いで、ヒトＩｇＧ抗体の重鎖をコードしている遺伝子の３’末端にインフレームでクローニングされた。これらのコーディングセグメントをオーバーラップＰＣＲ法によって合成し、発現ベクターｐＴＴ５にクローニングした。
【0428】
次いで、実施例２で調製されたＣＤＨ１７結合性可変ドメインをコードしているＶＬ遺伝子とＶＨ遺伝子の対を、実施例１で概略が示されている二重特異的フォーマットにフォーマット化した。ＶＨ遺伝子を、ヒトＩｇγをコードしている遺伝子の５’末端におけるインフレーム融合物として、ｐＴＴ５発現ベクターにクローニングした。ＴＲＡＩＬＲ２結合性ｓｃＦｖをコードしている遺伝子を、同じＩｇγをコードしているセグメントの３’末端にインフレームでクローニングした。同様に、ＶＬ遺伝子を、ヒトＩｇＧκ軽鎖をコードしている遺伝子とのインフレーム融合物として、ｐＴＴ５発現ベクターにクローニングした。
【0429】
実施例２において調製されたか又は当技術分野において公知であるＴＲＡＩＬＲ２結合性可変ドメインをコードしているＶＬ遺伝子とＶＨ遺伝子の対をさらに使用して、ＴＲＡＩＬＲ２（例えば、抗原結合部位ＴＲ２ｖ１又はＴＲｖ２を含む）に特異的に結合する抗体分子（２本の軽鎖と２本の重鎖を含む完全長抗体分子）を、当技術分野において公知の方法を使用して調製し、以下に記載の実施例における細胞を検出／標識するために又は対照抗体として使用した。このような抗体は、ヒトＩｇＧ１ＷＴ定常ドメイン又はＩｇＧ１（ＫＯ）定常ドメインのいずれかを含む。
【0430】
同様に、実施例２において調製されたか又は当技術分野において公知であるＣＤＨ１７結合性可変ドメインをコードしているＶＬ遺伝子とＶＨ遺伝子の対をさらに使用して、ＣＤＨ１７（例えば、抗原結合部位ＣＤＨ１７ｖ１又はＣＤＨ１７Ｈ２を含む）に特異的に結合する抗体分子（２本の軽鎖と２本の重鎖を含む完全長抗体分子）を、当技術分野において公知の方法を使用して調製し、以下に記載の実施例における細胞を検出／標識するために又は対照抗体として使用した。このような抗体は、ヒトＩｇＧ１ＷＴ定常ドメイン又はＩｇＧ１（ＫＯ）定常ドメインのいずれかを含む。
【0431】
上記され対照抗体として以下の実施例において使用されるＴＲＡＩＬＲ２又はＣＤＨ１７のいずれかに対して特異的である抗体は、２本の重鎖と２本の軽鎖を有する慣用的な完全長抗体である。このような対照抗体の結合部位は、それらが比較される二重特異的結合性タンパク質と同じ可変ドメインによって定義される。例えば、図３では、ＣＤＨ１７特異的結合部位であるＣＤＨ１７ｖ１とＴＲＡＩＬＲ２特異的結合部であるＴＲ２ｖ１とを有する結合性分子（結合性分子ＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１と称される）は、ＣＤＨ１７に対して特異的な配列番号１１８のＶＨ配列とＣＤＨ１７に対して特異的な配列番号１１９のＶＬ配列、及びＴＲＡＩＬＲ２に対して特異的な配列番号９６のＶＨ配列とＴＲＡＩＬＲ２に対して特異的な配列番号９７のＶＬ配列を含む（表２参照）。したがって、この実施例において使用される対照抗体である抗ＣＤＨ１７ｖ１抗体は、ＣＤＨ１７に対して特異的な配列番号１１８のＶＨ配列と、ＣＤＨ１７に対して特異的な配列番号１１９のＶＬを含み、対照抗体である抗ＴＲｖ１抗体は、ＴＲＡＩＬＲ２に対して特異的な配列番号９６の配列と、ＴＲＡＩＬＲ２に対して特異的な配列番号９７のＶＬ配列を含む（図３参照）。
【0432】
Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤクローニングキット（クロンテック社、米国）を、ＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子の定方向クローニングのための上記手順において使用した。鎖状ベクターの末端に対して相補的な１５ｂｐの伸長部分を有するＶＬ／ＶＨのＰＣＲプライマーを合成した。ＰＣＲを製造業者の標準的なプロトコールを使用して実施し、アンプリコンをクローニングエンハンサーを用いて精製又は処理し、次いで、適切なベクターにクローニングした。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉを製造業者の説明書（クロンテック社、米国）に従って形質転換した。ＤＮＡの小規模精製物をシークエンスした。
【0433】
各発現ベクターは、鎖をコードしている遺伝子のための真核生物プロモーター配列、シグナル配列と重鎖又は軽鎖をコードしている遺伝子、アンピシリンなどの原核生物選択マーカー遺伝子のための発現カセット、及び複製起点を含有している。これらのＤＮＡプラスミドをアンピシリン耐性Ｅ．ｃｏｌｉコロニーで増幅させ、精製した。
【0434】
実施例４：ヒトＴＲＡＩＬＲ２及びヒトＣＤＨ１７を認識する二重特異的で四価の分子の発現及び精製
実施例３において調製された発現ベクターをＣＨＯ－Ｅ細胞にトランスフェクトした。
実施例３において調製された発現ベクターをＣＨＯ－Ｅ細胞にトランスフェクトした。
【0435】
無血清培地の懸濁液中で増殖させているトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｅ細胞を振盪フラスコ中で１４０rpmの撹拌、３７℃及び５％ＣＯ２の下で培養し、指数関数的増殖条件に保った。トランスフェクション日に、細胞を、軽鎖プラスミド １mg及び重鎖プラスミド ０．５mgを用いて化学的にトランスフェクトした。次いで、それらを１Ｌのギブコ社（登録商標）ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ発現培地（ライフテクノロジーズ社、ＮＹ、米国）中１～２×１０６個の細胞/mlで播種した。次いで、細胞を、タンパク質の発現を可能とするために１５０mlの市販のフィード溶液を１回だけフィードして、回転振盪下で１０～１２日間インキュベートした。細胞培養上清中の抗体／結合性分子の力価を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）機器（Pall ForteBio、ＣＡ州、米国）及びプロテインＡバイオセンサーチップを使用して製造業者の説明書に従って決定した。
【0436】
組換え結合性分子又は抗体は、培養上清からプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーによってＭａｂＳｅｌｅｃｔ（商標）（アメルシャム・バイオサイエンシーズ社）を使用して精製され、６０mM ＮａＯＡｃ緩衝液（ｐＨ５．０）中に保存した。試料の純度及び不均一度を質量分析及び分析用超遠心分離によって評価した。全ての試料が、機能試験の前に、９０％以上のモノマー含量を有し、１０％未満の不純物を含有していることが確認された。
【0437】
実施例５：調製されたヒトＴＲＡＩＬＲ２分子とヒトＣＤＨ１７分子とを認識する二重特異的分子の詳細
以下の実施例では、本発明の多くの異なる二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７抗体分子を調製した。混乱を避けるために、これらの分子の特徴及び配列を以下に提供する。
以下の実施例では、本発明の多くの異なる二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７抗体分子を調製した。混乱を避けるために、これらの分子の特徴及び配列を以下に提供する。
【0438】
【表2】
【0439】
【表3】
【0440】
実施例６：ヒトＴＲＡＩＬＲ２とヒトＣＤＨ１７とを認識する二重特異的分子の高まったアポトーシス効果
序論
上記に示された実施例は、ＴＲＡＩＬＲ２及びヒトＣＤＨ１７を認識する二重特異的分子の調製を示す。アポトーシス誘発におけるこれらの分子の効果を決定するために、本発明者らは、該分子が細胞生存率の減少を引き起こすことができるかどうか、あらゆるこのような減少がアポトーシスによって引き起こされたかどうか、あらゆるアポトーシス効果は二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ヒトＣＤＨ１７結合性分子によって特異的に媒介されたかどうかを調べることを決断した。
序論
上記に示された実施例は、ＴＲＡＩＬＲ２及びヒトＣＤＨ１７を認識する二重特異的分子の調製を示す。アポトーシス誘発におけるこれらの分子の効果を決定するために、本発明者らは、該分子が細胞生存率の減少を引き起こすことができるかどうか、あらゆるこのような減少がアポトーシスによって引き起こされたかどうか、あらゆるアポトーシス効果は二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ヒトＣＤＨ１７結合性分子によって特異的に媒介されたかどうかを調べることを決断した。
【0441】
細胞アッセイの開発
まず、細胞表面上にＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７を有するがん細胞株を同定することが必要であった。Ｃｏｌｏ－２０５細胞株は、白人結腸腺癌に由来する。それは周知の実験細胞培養ツールである。本発明者らは、これを、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の機能を評価するための細胞株候補として選択する。
まず、細胞表面上にＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７を有するがん細胞株を同定することが必要であった。Ｃｏｌｏ－２０５細胞株は、白人結腸腺癌に由来する。それは周知の実験細胞培養ツールである。本発明者らは、これを、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の機能を評価するための細胞株候補として選択する。
【0442】
Ｃｏｌｏ－２０５細胞上におけるＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７タンパク質の表面発現を以下のように分析した。細胞を、アキュターゼ（シグマ社Ａ６９６４）を使用して剥がし、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、ギブコ社１４１９０；３％ＦＣＳ、ギブコ社２６１４０；及び０．０９％ＮａＮ３、シグマアルドリッチ社Ｓ２００２）で２回洗浄した。細胞をＶｉＣｅｌｌ（ベックマンコールターライフサイエンシーズ社）を使用して計数し、細胞数を２～５×１０６個の細胞/mlに調整した。１００μl/ウェルの細胞懸濁液を、９６ウェル丸底プレートに播種した。
【0443】
細胞を接種した後、プレートを１２００rpmで５分間遠心分離にかけ、上清を廃棄した。次いで、細胞を、１００μl/ウェルの一次抗体の適切な希釈液と共に、４℃で６０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、１００μl/ウェルの適切な二次抗体／コンジュゲート抗体の希釈液を加えた。二次抗体を含む細胞を、暗闇で４℃で４５分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞を、１ウェルあたり１００μlのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ（ＢＤバイオサイエンシーズ社）で分析した。
【0444】
ＴＲＡＩＬＲ２の検出のために、コンジュゲートさせた抗ヒトＣＤ２６２抗体（ＤＲ５）フィコエリトリン（イーバイオサイエンス社、１２－９９０８－４２）を使用した。ＣＤＨ１７については、抗ＣＤＨ１７抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ社、ＭＡＢ１０３２）を使用し、続いて、二次抗体ウサギ抗マウスＩｇＧ フィコエリトリン（ダコ社、Ｒ０４３９）を使用した。対照として、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照フィコエリトリン（イーバイオサイエンス社、１２－４７１４－１２）及びマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＡｂＤセロテック社、ＭＣＡ９２８ＥＬ）をそれぞれ使用した。
【0445】
図２では、Ｃｏｌｏ－２０５細胞におけるＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７のタンパク質表面発現が示され、どちらのタンパク質も有意な発現を与える。
【0446】
Ｃｏｌｏ－２０５細胞に対する二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７分子の効果
二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の機能を評価するために適切ながん細胞株としてＣｏｌｏ－２０５細胞を同定したので、本発明者らは以下のアッセイを考案した。
二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の機能を評価するために適切ながん細胞株としてＣｏｌｏ－２０５細胞を同定したので、本発明者らは以下のアッセイを考案した。
【0447】
Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、培養培地（ＲＰＭＩ１６４０／グルタマックス、ギブコ社６１８７０－０１０；それに加えて１０％ＦＣＳ、ギブコ社２６１４０）に蒔いた。３７℃及び５％ＣＯ２で一晩休ませた後、細胞を、所望の濃度の５０μlの様々な抗体又は結合性分子の希釈液と共に２４時間インキュベートした。次いで、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ細胞生存率アッセイ（プロメガ社Ｇ７５７１）を使用することによって製造業者によって提供された説明書に従って評価した。最後に、発光を、パーキンエルマー社製のＶＩＣＴＯＲ Ｘ４ ２０３０マルチラベルプレートリーダーを使用して記録した。
【0448】
細胞生存率に対する二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の効果を図３に示す。Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、（ｉ）二重特異的分子、（ｉｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独、（ｉｉｉ）抗ＣＤＨ１７抗体単独、又は（ｉｖ）ＴＲＡＩＬＲ２抗体とＣＤＨ１７抗体の等価な自由な組合せと共に２４時間インキュベートした。
【0449】
図３に示されているように、抗ＣＤＨ１７抗体は、７×１０－４から７０nMの濃度範囲で使用された場合には、Ｃｏｌｏ－２０５細胞の生存率に効果は全くなかった。ＴＲＡＩＬＲ２抗体は、７から７０nMの間で使用された場合に細胞生存率を有意に減少させることができ、自由な組合せでの抗ＣＤＨ１７抗体の添加は、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独で観察された効果に対して変化がなかった。最後に、Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、本明細書に記載されているような二重特異的ＴＲＡＩＬ－Ｒ２／ＣＤＨ１７結合性分子（配列番号１４５の重鎖配列と配列番号１４６の軽鎖配列とを含む、ＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１）とインキュベートすることにより、抗ＴＲＡＩＬ－Ｒ２抗体（それぞれ配列番号９６及び配列番号９７のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗原結合部位ＴＲｖ１を含む）単独、及び抗ＣＤＨ１７抗体と組み合わせた抗ＴＲＡＩＬ－Ｒ２抗体（それぞれ配列番号１１８及び配列番号１１９のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗原結合部位ＣＤＨ１７ｖ１を含む）の両方と比較して、１０００倍を超える改善された効力がもたらされた。
【0450】
ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７分子は、Ｃｏｌｏ－２０５細胞のアポトーシスを誘発する
次に、図３に示されているような細胞生存率の減少が、アポトーシスの誘発によって引き起こされたかどうかを調べた。ＴＲＡＩＬにより誘発されたアポトーシスは、カスパーゼ－８の補充及び活性化によって媒介され、このカスパーゼ－８は次いで、エフェクターのカスパーゼ－３を活性化し、その結果、アポトーシスが起こる。したがって、本明細書で調製された抗体及び結合性分子が、アポトーシス経路を特異的に活性化することができるかどうかを決定するために、本発明者らは、標的細胞株におけるカスパーゼ－８及びカスパーゼ－３の両方の活性を測定した。
次に、図３に示されているような細胞生存率の減少が、アポトーシスの誘発によって引き起こされたかどうかを調べた。ＴＲＡＩＬにより誘発されたアポトーシスは、カスパーゼ－８の補充及び活性化によって媒介され、このカスパーゼ－８は次いで、エフェクターのカスパーゼ－３を活性化し、その結果、アポトーシスが起こる。したがって、本明細書で調製された抗体及び結合性分子が、アポトーシス経路を特異的に活性化することができるかどうかを決定するために、本発明者らは、標的細胞株におけるカスパーゼ－８及びカスパーゼ－３の両方の活性を測定した。
【0451】
カスパーゼ－３及びカスパーゼ－８の活性は、プロメガ社のＡｐｏ－ＯＮＥホモジニアスカスパーゼ－３/７アッセイ（製造番号Ｇ７７９０）及びプロメガ社のカスパーゼ－Ｇｌｏ８アッセイ（製造番号Ｇ８２０１）をそれぞれ使用して測定された。３７℃及び５％ＣＯ２で一晩休ませた後、細胞を、所望の濃度を達成するために５０μlの様々な抗体又は結合性分子の希釈液と共に様々な時点においてインキュベートした。次いで、カスパーゼ－３及びカスパーゼ－８の活性を、製造業者によって提供された説明書に従って評価した。次いで、各試料の発光を、パーキンエルマー社製のＶＩＣＴＯＲ Ｘ４ ２０３０マルチラベルプレートリーダーを使用して測定した。
【0452】
このアッセイの結果を図４に示す。ここで、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（それぞれ配列番号９６及び配列番号９７のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗原結合部位ＴＲｖ１を含む）単独、及び二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子（配列番号１４５の重鎖配列と配列番号１４６の軽鎖配列とを含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１）のどちらも、カスパーゼ８（Ａ）及び３（Ｂ）の両方を効率的に活性化することができたことが分かる。未処置対照と比較した場合、抗ＣＤＨ１７抗体（それぞれ配列番号１１８及び配列番号１１９のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む抗原結合部位ＣＤＨ１７ｖ１を含む）のインキュベーション後には効果は全く観察されなかった。このデータは、図３に観察された細胞生存率の減少が、いずれかの非特異的な機序に起因するのではなく、どちらの分子も標的細胞のアポトーシスを効率的かつ特異的に誘発することができることを実証する。細胞生存率のデータと一致して、本発明者らは、Ｃｏｌｏ－２０５細胞を二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子とインキュベーショすることにより明らかに、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独と比較して優れたカスパーゼ－８及びカスパーゼ－３の活性化（３ｌｏｇを超える効力の移動）がもたらされたことを観察した。
【0453】
Ｃｏｌｏ－２０５細胞のアポトーシスは、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７分子によって特異的に誘発される
本発明者らはまた、本発明の二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子によって調節されるアポトーシスの増加が、Ｃｏｌｏ－２０５細胞表面上に存在するＣＤＨ１７によって特異的に媒介されることを確認したかった。これを実証するために、本発明者らは、ヒトＴＲＡＩＬＲ２及びトリニトロフェノール（ＴＮＰ）を認識する追加の二重特異的で四価の分子を作製し、ここではＩｇＧマスター抗ＣＤＨ１７抗体は、ＴＮＰを認識するものに置き換えられていた。ＴＮＰへの結合領域は、分子の非特異的対照として作用する。なぜなら、ＴＮＰ抗原は細胞表面上には容易に発見されることはできないからである。
本発明者らはまた、本発明の二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子によって調節されるアポトーシスの増加が、Ｃｏｌｏ－２０５細胞表面上に存在するＣＤＨ１７によって特異的に媒介されることを確認したかった。これを実証するために、本発明者らは、ヒトＴＲＡＩＬＲ２及びトリニトロフェノール（ＴＮＰ）を認識する追加の二重特異的で四価の分子を作製し、ここではＩｇＧマスター抗ＣＤＨ１７抗体は、ＴＮＰを認識するものに置き換えられていた。ＴＮＰへの結合領域は、分子の非特異的対照として作用する。なぜなら、ＴＮＰ抗原は細胞表面上には容易に発見されることはできないからである。
【0454】
Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々な濃度の（ｉ）ＴＮＰに対する抗体単独、（ｉｉ）抗ＣＤＨ１７抗体単独、（ｉｉｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独、（ｉｖ）二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＰ結合性分子、（ｖ）二重特異的ＴＲＡＩＬ２／ＣＤＨ１７分子を用いて２４時間処置し、細胞生存率を測定した。得られたデータを図５に示す。
【0455】
図５に示されているように、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子（配列番号１４５の重鎖配列と配列番号１４６の軽鎖配列を含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１）は、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（それぞれ配列番号９６及び配列番９７のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む抗原結合部位ＴＲｖ１を含む）と比較して、細胞生存率の減少において明確に優れた効果を誘発することができた。この効果は、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＰ結合性分子には見られない。したがって、ＣＤＨ１７をＴＮＰで置換することにより、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の優れたアポトーシス効果は消失し、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＰ結合性分子は、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独と同等な効果を有する。
【0456】
ＨｅｐＧ２細胞に対する二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７分子の効果
肝臓に由来するＣＤＨ１７陰性でＴＲＡＩＬＲ２感受性の細胞における、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の効果を研究するために、上記のような類似の実験を、ＨｅｐＧ２細胞を使用して実施した。この細胞株は元来、１５歳の白人男性の肝細胞癌に由来していた。
肝臓に由来するＣＤＨ１７陰性でＴＲＡＩＬＲ２感受性の細胞における、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の効果を研究するために、上記のような類似の実験を、ＨｅｐＧ２細胞を使用して実施した。この細胞株は元来、１５歳の白人男性の肝細胞癌に由来していた。
【0457】
ＨｅｐＧ２細胞を、ＤＭＥＭ（ロンザ社、ＢＥ１２－６０４Ｆ）と１０％ＦＣＳ（ギブコ社２６１４０）中、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。
【0458】
Ｃｏｌｏ－２０５について記載されているように、タンパク質表面発現及び細胞生存率を、実施例３に記載のように分析した。図６Ａには、ＨｅｐＧ２細胞におけるＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７のタンパク質表面発現が示され、ＴＲＡＩＬＲ２のみが有意な発現を与えた。
【0459】
ＨｅｐＧ２細胞を、（ｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（それぞれ配列番号９６及び配列番号９７のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗原結合部位ＴＲｖ１を含む抗ＴＲ２ｖ１）単独、（ｉｉ）ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７二重特異的結合性分子（配列番号１４５の重鎖配列及び配列番号１４６の軽鎖配列を含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１）と共にインキュベートした。さらに、様々なアゴニスト作用を有するヒトＴＲＡＩＬＲ１抗体及びＴＲＡＩＬＲ２抗体について文献（Ichikawa et al., 2001. Nat Med. Aug;7(8):954-60; Li et al., 2008 BMC Cancer. Nov 7;8:325; Natoni et al., 2007, British journal of haematology 2007 Nov;139(4):568-77; Pukac et al., 2005 Br J Cancer. 2005 Apr 25;92(8):1430-41; Yada et al., 2008 Ann Oncol. 2008 Jun;19(6):1060-70 ; Zhang et al., 2007a Cancer Lett. 2007 Jun 18;251(1):146-57）に記載されているような抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体の最大のアポトーシス誘発シグナル伝達の対照として、ＨｅｐＧ２細胞もまた、（ｉｉｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（それぞれ配列番号９６及び配列番号９７のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗原結合部位ＴＲｖ１を含む）と共に、架橋リンカーであるヤギ抗ヒトＩｇＧ（抗ＴＲ２ｖ１抗体（Ｆｃに架橋））の存在下でインキュベートした。図６Ｂに示されているように、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独及びＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７二重特異的分子のどちらも、生存率に対して効果を全く及ぼさない。ＴＲＡＩＬＲ２抗体の人工Ｆｃ架橋のみが、細胞生存率を有意に減少させることができた。
【0460】
追加のＣＲＣ細胞に対する二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７分子の効果
Ｃｏｌｏ－２０５において観察される効果を、他のＣＲＣ細胞株に適用することができるかどうかを試験するために、上記のような類似の実験を、２つの追加のＣＲＣ細胞株であるＣＬ－３４細胞（ＫＲＡＳ野生型）及びＳＫ－ＣＯ－１細胞（ＫＲＡＳｐ．Ｇ１２Ｖ）を使用して実施した。
Ｃｏｌｏ－２０５において観察される効果を、他のＣＲＣ細胞株に適用することができるかどうかを試験するために、上記のような類似の実験を、２つの追加のＣＲＣ細胞株であるＣＬ－３４細胞（ＫＲＡＳ野生型）及びＳＫ－ＣＯ－１細胞（ＫＲＡＳｐ．Ｇ１２Ｖ）を使用して実施した。
【0461】
ＣＬ－３４細胞及びＳＫ－ＣＯ－１細胞を、それぞれＤＭＥＭ／Ｆ－１２（ＡＴＣＣ３０－２００６）＋２０％ＦＣＳ（ギブコ社２６１４０）、及びＥＭＥＭ（ロンザ社ＢＥ１２－６６２Ｆ）＋１０％ＦＣＳ（ギブコ社２６１４０）中で３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。
【0462】
実施例６に記載のように、タンパク質表面発現及び細胞生存率を分析した。図１１Ａ及び１１Ｂでは、ＣＬ－３４細胞（Ａ）及びＳＫ－ＣＯ－１細胞（Ｂ）におけるＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７のタンパク質表面発現が示され、どちらのタンパク質も有意な発現を与える。
【0463】
ＣＬ－３４細胞及びＳＫ－ＣＯ－１細胞を、（ｉ）二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子（配列番号１４５の重鎖と配列番号１４６の軽鎖を含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２ｖ１）、（ｉｉ）抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（それぞれ配列番号９６及び配列番号９７のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む抗原結合部位ＴＲｖ１を含む）単独、又は（ｉｉｉ）抗ＣＤＨ１７抗体（それぞれ配列番号１１８及び配列番号１１９のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗原結合部位ＣＤＨ１７ｖ１を含む）単独と共にインキュベートした。図１１に示されているように、抗ＣＤＨ１７抗体は、生存率に対して全く効果を及ぼさないが、ＴＲＡＩＬＲ２抗体は、７から７０nMで使用した場合に細胞生存率を有意に減少させることができた。Ｃｏｌｏ－２０５細胞について記載されているように、ＣＬ－３４細胞及びＳＫ－ＣＯ－１細胞の両方を、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子とインキュベートすることにより、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独と比較して、細胞生存率に対して３ｌｏｇを超える明らかな効力の移動がもたらされた。
【0464】
ＣＬ－３４細胞及びＳＫ－ＣＯ－１細胞において観察された類似の応答と一致して、ＫＲＡＳｍｕｔ細胞株とＫＲＡＳｗｔ細胞株の間の感度の有意差は、拡大された一団の１９個のＣＲＣ細胞株においては全く検出されなかった（ウィルコクソンの順位和検定、データは示されていない）。
【0465】
考察
本発明者らは、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子がＣＲＣ細胞株のアポトーシスを誘発することを上記において実証した。このアポトーシス効果は、ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独よりも三桁以上低い濃度を使用して達成され、これは治療的に有用な用量レベルである。また、この効果は、二重特異的分子のＣＤＨ１７部分によって特異的にトリガーされ、最大効果濃度では、肝臓由来のＣＤＨ１７陰性でＴＲＡＩＬＲ２感受性のＨｅｐＧ２細胞の細胞生存率に対して検出可能な効果は全くなかったことが実証された。
本発明者らは、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子がＣＲＣ細胞株のアポトーシスを誘発することを上記において実証した。このアポトーシス効果は、ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独よりも三桁以上低い濃度を使用して達成され、これは治療的に有用な用量レベルである。また、この効果は、二重特異的分子のＣＤＨ１７部分によって特異的にトリガーされ、最大効果濃度では、肝臓由来のＣＤＨ１７陰性でＴＲＡＩＬＲ２感受性のＨｅｐＧ２細胞の細胞生存率に対して検出可能な効果は全くなかったことが実証された。
【0466】
実施例７：二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７分子における様々なＩｇＧ骨格の使用
本発明者らはまた、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７分子のマスター抗体配列に使用されるＩｇＧ骨格を変化させることにより、アポトーシスの誘発が変化するかどうかを調べた。
本発明者らはまた、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７分子のマスター抗体配列に使用されるＩｇＧ骨格を変化させることにより、アポトーシスの誘発が変化するかどうかを調べた。
【0467】
Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々な濃度の抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独、及びＩｇＧ１定常領域（Ａ及びＣ）又はＩｇＧ４Ｐｒｏ定常領域（Ｂ）を含む二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子を用いて２４時間処置した。抗体のインキュベーション後、細胞の生存率を測定した（図７）。
【0468】
図７に示されているように、以前に使用されていたＩｇＧ１骨格を、２つの追加の突然変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）を有する第二の形式（ＩｇＧ１ ＫＯ；配列番号１２１）又は１つの追加の突然変異（Ｈ３１０Ａ）を有する第三の形式（ＦｃＲｎｍｕｔ）（配列番号２７０）に置き換えることによって、Ｃｏｌｏ－２０５細胞生存率の低減に対する効果は変化しなかった。
【0469】
野生型形式と同じように、新規に作製された二重特異的結合性分子（配列番号１４７の重鎖と配列番号１４８の軽鎖を含むＴＲｖ１／ＣＤＨ１７ｖ１ ＩｇＧ１（ＫＯ））は、１０－２nMという低い濃度で使用された場合に細胞生存率を有意に減少させることができ、一方、親ＴＲＡＩＬＲ２抗体（それぞれ配列番号９６及び配列番号９７のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗原結合部位ＴＲｖ１を含む）は全く効果を示さなかった。これはまた、ＴＲＡＩＬＲ２結合性ドメインが、僅かに改変された配列（それぞれ配列番号９８及び配列番号９９のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する抗ＴＲ２ｖ２抗体と比較して、配列番号１４９の重鎖と配列番号１５０の軽鎖を含む、ＴＲＡＩＬＲ２ｖ２）で置き換えられていた、第二の二重特異的結合性分子においても該当していた。さらに、二重特異的骨格のマスター抗体配列に使用されるＩｇＧ骨格が、ＩｇＧ４Ｐｒｏアイソフォーム（配列番号１５１の重鎖配列と配列番号１５２の軽鎖配列とを含む）又はＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔ（ＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ２）（配列番号２７１の重鎖配列と配列番号２１８の軽鎖配列を含む）で完全に置き換えられた、様々な二重特異的分子が調製された。図７に示されているように、分子のこの変化は、Ｃｏｌｏ－２０５細胞生存率の低減におけるその効力を変化させなかった。
【0470】
実施例８：細胞生存率の低減におけるｓｃＦｖ変異体の効果
次いで、ｓｃＦｖ二次抗体成分への変化が、本発明の分子によるアポトーシスの誘発に影響を及ぼすかどうかが調べられた。
次いで、ｓｃＦｖ二次抗体成分への変化が、本発明の分子によるアポトーシスの誘発に影響を及ぼすかどうかが調べられた。
【0471】
実施例６に使用される分子では、ｓｃＦｖは、ＶＬが結合部分のＮ末端を形成するように配向し、したがって、マスター抗体の重鎖のＣ末端にリンカーを介して融合し、一方、ｓｃＦｖのＶＨは、完全重鎖分子のＣ末端を形成している。
【0472】
それ故、可変ドメインと同一であるが異なる配向及び／又はさらなる該ドメインの改変（ｓｃＦｖ形式１～４）によって定義される結合性部位を含む、多くの異なる二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子を作製した。
【0473】
１．二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７ ｓｃＦｖ１分子はＶＨ－ＶＬの配向を有し、すなわち、ｓｃＦｖのＶＨは、抗体のＣ末端にリンカーを介して融合し、ｓｃＦｖのＶＬは重鎖完全分子（配列番号１３１のｓｃＦｖ配列を有するＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲｖ１）のＣ末端を形成する。
【0474】
２．二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７ ｓｃＦｖ２分子もＶＨ－ＶＬの配向を有し、すなわち、ｓｃＦｖのＶＨは、抗体のＣ末端にリンカーを介して融合し、ｓｃＦｖのＶＬは重鎖完全分子のＣ末端を形成し、ｓｃＦｖ結合性ドメイン（配列番号１３２のｓｃＦｖ配列を有するＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲｖ１）を安定化させるための追加のジスルフィド結合を有する。
【0475】
３．二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７ ｓｃＦｖ３分子は図７に使用されているものであり、よってそれはＶＬ－ＶＨの配向を有し、すなわち、ｓｃＦｖのＶＬは、抗体のＣ末端にリンカーを介して融合し、ｓｃＦｖのＶＨは重鎖完全分子（配列番号１２４のｓｃＦｖ配列を有するＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲｖ１）のＣ末端を形成している。
【0476】
４．二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７ ｓｃＦｖ４分子はＶＬ－ＶＨの配向を有し、すなわち、ｓｃＦｖのＶＬは、抗体のＣ末端にリンカーを介して融合し、ｓｃＦｖのＶＨは重鎖完全分子のＣ末端を形成し、ｓｃＦｖ結合性ドメイン（配列番号１３３のｓｃＦｖ配列を有するＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲｖ１）を安定化させるための追加のジスルフィド結合を有する。
【0477】
次いで、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子のこれらの変異体の機能を、実施例６に記載のＣｏｌｏ－２０５細胞アポトーシスアッセイにおいて調べた。結合性分子とインキュベートした後、細胞生存率を測定した。
【0478】
図８に提示されたデータは、二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子が、ｓｃＦｖ抗体ドメイン内のＶＨドメイン及びＶＬドメインの配向に関係なくＣｏｌｏ－２０５細胞アポトーシスを誘発することができるが、しかしながら、ＶＬ－ＶＨは、ＶＨ－ＶＬの配向よりも大きなアポトーシス効果を有することを示す。追加のジスルフィド結合を有する分子は、これらの外部の結合を有さない対応する親分子と比較した場合、有意な効果を全く示さない。
【0479】
したがって、実施例１に概略が示された二重特異的抗体フォーマットの構造への変化は耐容性を示し得るが、ＶＬ－ＶＨは、驚くべき程により大きなアポトーシス効果を有する。
【0480】
実施例９：Ｃｏｌｏ－２０５細胞生存率の低減における、代替的な結合配列を使用した二重特異的分子ＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７ ｂｉ－ｓｃＦｖの効果
異なる結合ドメインを有する二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の変異体を調製した。使用される具体的な結合性分子の詳細が、実施例５の表に示されている。次いで、実施例６に記載されているようなＣｏｌｏ－２０５細胞アポトーシスアッセイに使用される結合性ドメインを変化させる効果を調べた。
異なる結合ドメインを有する二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子の変異体を調製した。使用される具体的な結合性分子の詳細が、実施例５の表に示されている。次いで、実施例６に記載されているようなＣｏｌｏ－２０５細胞アポトーシスアッセイに使用される結合性ドメインを変化させる効果を調べた。
【0481】
Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、様々な濃度の、様々な新規に同定されたＣＤＨ１７結合性配列（Ａ）とＴＲＡＩＬＲ２結合性配列（Ｂ及びＣ）とを含有している様々な二重特異的分子を用いて２４時間処置した。抗体のインキュベート後、細胞生存率を測定した。
【0482】
図９（Ａ～Ｃ）に提示されるデータは、様々なＴＲＡＩＬＲ２結合性配列及びＣＤＨ１７結合性配列を有する二重特異的結合性分子（配列番号１８２の重鎖と配列番号１８８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ａ６／ＴＲ２ｖ２；配列番号１９７の重鎖と配列番号２０３の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｅ２／ＴＲ２ｖ２；配列番号１６７の重鎖と配列番号１７３の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｅ９／ＴＲ２ｖ２；配列番号２１９の重鎖と配列番号２３３の軽鎖を含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２＃１；配列番号２２０の重鎖と配列番号２３３の軽鎖を含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２＃２；配列番号２２１の重鎖と配列番号２３３の軽鎖を含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２＃３；配列番号２２３の重鎖と配列番号２３３の軽鎖を含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２＃８；配列番号２２４の重鎖と配列番号２３３の軽鎖を含むＣＤＨ１７ｖ１／ＴＲ２＃１０；配列番号２１２の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ２；配列番号２１３の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ３；配列番号２１４の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ４；配列番号２１５の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ５；配列番号２１６の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ６；配列番号２１７の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ７）は、１０－２nMという低い濃度で使用された場合に細胞生存率を有意に減少させることができ、一方、親ＴＲＡＩＬＲ２抗体（配列番号９８のＶＨと配列番号９９のＶＬを含むＴＲ２ｖ２）は、同濃度で効果を全く示さなかった。図９Ｄでは、これらの分子（配列番号２１２の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ２；配列番号２１３の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ３；配列番号２１４の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ４；配列番号２１５の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ５；配列番号２１６の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ６；配列番号２１７の重鎖と配列番号２１８の軽鎖を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ７）のいくつかを、上記の肝臓に由来するＣＤＨ１７陰性でＴＲＡＩＬＲ２感受性のＨｅｐＧ２細胞において試験した。図に示されているように、１nMまでの濃度は、試験されたいずれの分子においてもＨｅｐＧ２細胞生存率に検出可能な効果を全く示さない。図９Ｃ～Ｄでは、また、親ＣＤＨ１７抗体（配列番号１１６のＶＨと配列番号１１７のＶＬを含むＣＤＨ１７Ｈ２）は、試験された濃度範囲内ではＣｏｌｏ－２０５の細胞生存率を減少させる作用もＨｅｐＧ２の細胞生存率を減少させる作用も全く示さなかった。
【0483】
ここで、様々なＴＲＡＩＬＲ２結合性配列及びＣＤＨ１７結合性配列を、本発明の二重特異的ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤＨ１７結合性分子に使用することができる。
【0484】
実施例１０：ＴＲＡＩＬＲ２とＣＤ４４ｖ６とを認識する二重特異的分子は、Ｃｏｌｏ－２０５細胞生存率の減少において相加作用を全く有さない
代替的なアンカー標的を、ＣＤＨ１７の代わりに使用することができるかどうかも調べた。したがって、ＴＲＡＩＬＲ２とＣＤ４４ｖ６とを認識する二重特異的分子を調製した。
代替的なアンカー標的を、ＣＤＨ１７の代わりに使用することができるかどうかも調べた。したがって、ＴＲＡＩＬＲ２とＣＤ４４ｖ６とを認識する二重特異的分子を調製した。
【0485】
実施例６と同様に、本発明者らはまず、ＦＡＣＳによってＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤ４４ｖ６タンパク質の表面発現を測定した。ＣＤ４４ｖ６の検出については、ＢＩＷＡ１抗体、次いで二次抗体のヤギ抗マウスＩｇＧフィコエリトリン（ダコ社、Ｒ０４８０）を使用した。対照として、マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＡｂＤセロテック社、ＭＣＡ９２８ＥＬ）を使用した。
【0486】
図１０Ａでは、Ｃｏｌｏ－２０５細胞におけるＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤ４４ｖ６のタンパク質表面発現が示され、どちらのタンパク質も有意な発現を示す。
【0487】
次いで、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイを使用して測定した。Ｃｏｌｏ－２０５細胞を、ＴＲＡＩＬＲ２／ＣＤ４４ｖ６二重特異的結合性分子、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独、又は抗ＣＤ４４ｖ６抗体単独のいずれかと共にインキュベートした。データを図１０Ｂに提示する。
【0488】
１０－２ng/mlから１０mg/mlnMの濃度範囲にわたる抗ＣＤ４４ｖ６抗体のインキュベーションは、Ｃｏｌｏ－２０５細胞の生存率において全く効果を及ぼさない。抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体（配列番号９６のＶＨと配列番号９７のＶＬを含むＴＲ２ｖ１）とのインキュベーションは、０．１μg/mlから１０μg/mlで使用された場合に細胞生存率を有意に減少させることができ、Ｃｏｌｏ－２０５細胞と、ヒトＴＲＡＩＬＲ２及びヒトＣＤ４４ｖ６を認識する等価量の二重特異的で四価の分子とのインキュベーションは、抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体単独で観察された効果と差はなかった。
【0489】
したがって、ＣＤ４４ｖ６は、Ｃｏｌｏ－２０５細胞におけるＴＲＡＩＬＲ２誘発アポトーシスを調節するためのアンカー標的として使用することはできない。
【0490】
実施例１１：ＣＲＣ異種移植片モデルにおける二重特異的分子のインビボにおける効力
ＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７を認識する結合性分子のインビボでの効力も調べた。この目的のために、ＴＲＡＩＬＲ２とＣＤＨ１７との両方を発現しているヒトＣＲＣがん細胞株である、Ｃｏｌｏ２０５（ＫＲＡＳ野生型）及びＧｐ２ｄ（ＫＲＡＳｐ．Ｇ１２Ｄ）を免疫不全マウスに移植し、腫瘍体積に対する本発明の分子の投与効果を測定した。
ＴＲＡＩＬＲ２及びＣＤＨ１７を認識する結合性分子のインビボでの効力も調べた。この目的のために、ＴＲＡＩＬＲ２とＣＤＨ１７との両方を発現しているヒトＣＲＣがん細胞株である、Ｃｏｌｏ２０５（ＫＲＡＳ野生型）及びＧｐ２ｄ（ＫＲＡＳｐ．Ｇ１２Ｄ）を免疫不全マウスに移植し、腫瘍体積に対する本発明の分子の投与効果を測定した。
【0491】
続いて、雌ＢｏｍＴａｃ：ＮＭＲＩ－Ｆｏｘｎ１ｎｕホモ接合体マウスに、５．０×１０６個のＣｏｌｏ２０５細胞（０．１mL ＰＢＳ＋５％ＦＣＳ）又は５．０×１０６個のＧｐ２ｄ細胞（細胞：マトリゲルの比が１：１（ｖ/ｖ）である０．１mL）を移植し、腫瘍が１８０～２００mm3に達するまで腫瘍の成長をモニタリングした。マウスを２つの群に無作為化し、１回のビヒクル対照又は本発明の結合性分子－Ｃｏｌｏ２０５については５mg/Kg及びＧｐ２ｄについては１．６７mg/Kg［配列番号２１２の重鎖配列と配列番号２１８の軽鎖配列を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ２－（ＩｇＧ１ＫＯ）］；Ｃｏｌｏ２０５及びＧｐ２ｄについては５mg/Kg［配列番号２７１の重鎖配列と配列番号２１８の軽鎖配列を含むＣＤＨ１７Ｈ２／ＴＲ２ｖ２－（ＩｇＧ１ＦｃＲｎｍｕｔ）］－を投与した。
【0492】
図１２に提示されるデータは、本発明の結合性分子が、対照群と比較した場合に腫瘍体積の有意かつ長期の減少を誘発することができることを実証する。
【0493】
実施例１２：新規に作製されたＣＤＨ１７抗体を使用したＣＤＨ１７表面発現の検出
図１３には、新規に作製された抗ＣＤＨ１７Ｈ２抗体（配列番号１１６のＶＨと配列番号１１７のＶＬ及び配列番号１２１のＩｇＧ１配列を含む）がどのようにＣＤＨ１７タンパク質表面発現を検出することができるのかが示されている。ＦＡＣＳ分析は、実施例６に記載のように実施された。新規に作製された抗ＣＤＨ１７Ｈ２抗体は、検出用の一次抗体として使用され、その後、二次抗体ウサギ抗マウスＩｇＧフィコエリトリン（ダコ社、Ｒ０４３９）として使用された。対照として、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照アロフィコシアニン（バイオレジェンド社、４０９３０６）を使用した。
図１３には、新規に作製された抗ＣＤＨ１７Ｈ２抗体（配列番号１１６のＶＨと配列番号１１７のＶＬ及び配列番号１２１のＩｇＧ１配列を含む）がどのようにＣＤＨ１７タンパク質表面発現を検出することができるのかが示されている。ＦＡＣＳ分析は、実施例６に記載のように実施された。新規に作製された抗ＣＤＨ１７Ｈ２抗体は、検出用の一次抗体として使用され、その後、二次抗体ウサギ抗マウスＩｇＧフィコエリトリン（ダコ社、Ｒ０４３９）として使用された。対照として、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照アロフィコシアニン（バイオレジェンド社、４０９３０６）を使用した。
【0494】
実施例１３：静脈内投与用の医薬製剤
本発明の上記の結合性分子のいずれかを、静脈内適用のための医薬製剤の製造のために選択することができる。本発明の抗体のために適した医薬製剤の一例は以下の通りである。
本発明の上記の結合性分子のいずれかを、静脈内適用のための医薬製剤の製造のために選択することができる。本発明の抗体のために適した医薬製剤の一例は以下の通りである。
【0495】
１０mLのバイアルは、１０mMのクエン酸（ｐＨ５．５）、２０７mMのショ糖、２５mMのリジン塩酸塩、及び０．０２％のポリソルベート２０、及び注射用水（ＷＦＩ）からなる緩衝液中に１０mg/mLの本発明の結合性分子を含有している。
【0496】
実施例１４：プロテインＡのアフィニティクロマトグラフィー及び分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によるモノマー含量の決定
本明細書に記載の様々な結合性分子の試料を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ樹脂（ＧＥヘルスケア社）を使用した組換えプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーによって、収集した細胞培養液から捕捉した。試料を、３０mMの酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）を使用して均一溶媒モードで溶出し、溶出した試料を１％の３Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ９．０）を使用してｐＨ５．０へと中和した。
本明細書に記載の様々な結合性分子の試料を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ樹脂（ＧＥヘルスケア社）を使用した組換えプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーによって、収集した細胞培養液から捕捉した。試料を、３０mMの酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）を使用して均一溶媒モードで溶出し、溶出した試料を１％の３Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ９．０）を使用してｐＨ５．０へと中和した。
【0497】
ａＳＥＣを、ウォーターズ社ＵＨＰＬＣシステムでウォーターズ社ＢＥＨ２００カラムを用いて実施した。移動相の緩衝液は、５０mMのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、２００mMのアルギニン、０．０５％のアジ化ナトリウムであった。各操作のために、５～１０μgの試料を、０．５ml/分の操作流速で注入した。モノマー含量の比率を決定し、様々な結合性分子の結果を表４に示す。
【0498】
【表4】
【図1a】
【図1b】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7-1】
【図7-2】
【図8】
【図9-1】
【図9-2】
【図10】
【図11-1】
【図11-2】
【図12-1】
【図12-2】
【図13】
【図14】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-10-06
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
本願明細書に記載の発明。
【手続補正書】
【提出日】2022-10-27
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
【外国語明細書】