特開 2022-183174 嫌気性血液貯蔵および病原体不活性化方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022183174

(43)【公開日】2022-12-08

(54)【発明の名称】嫌気性血液貯蔵および病原体不活性化方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/14 20150101AFI20221201BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20221201BHJP

   A61K 31/473 20060101ALI20221201BHJP

   A61K 38/06 20060101ALI20221201BHJP

【ＦＩ】

A61K35/14 Z

A61P7/00

A61K31/473

A61K38/06

【審査請求】有

【請求項の数】16

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2022151317

(22)【出願日】2022-09-22

(62)【分割の表示】P 2019514187の分割

【原出願日】2017-05-25

(31)【優先権主張番号】62/342,756

(32)【優先日】2016-05-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/445,081

(32)【優先日】2017-01-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】507318956

【氏名又は名称】ヘマネクスト インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100123766

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 七重

(72)【発明者】

【氏名】ソウェミモ－コーカー サミュエル オー

(72)【発明者】

【氏名】サットン ジェフリー

(72)【発明者】

【氏名】吉田 達郎

(57)【要約】

【課題】新規な酸素低減化血液製品の提供。
【解決手段】最終濃度約０．２ミリモル濃度（ｍＭ）のアムスタリン（Ｓ－３０３）、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）、及び３７℃で９０ミリメートル水銀柱（ｍｍＨｇ）以下の二酸化炭素分圧（ｐＣＯ２）を有する、酸素低減化血液製品。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

溶血を低減化した血液病原体を低減化するための方法であって、
血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製することと、
前記血液製剤から血液病原体を低減化することと、
を含み、前記血液病原体の低減化が、
リボフラビンを最終濃度４０～６０μＭまで添加することと、
前記リボフラビン含有血液製剤を２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射することと、を含む、前記方法。

【請求項2】

前記酸素低減化病原体低減化血液製剤を嫌気性条件下で貯蔵することをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記血液製剤から二酸化炭素を低減化することをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

溶血が、１４日で０．２％未満であり、２１日で０．４％未満であり、２８日で０．５％未満であり、３５日で０．８％未満であり、または４２日で１．２％未満である、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記血液製剤が全血または白血球低減化全血である、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記リボフラビン含有血液製剤が、酸素低減化血液製剤である、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記血液製剤が、クエン酸リン酸デキストロース（ＣＰＤ）、クエン酸リン酸ダブルデキストロース（ＣＰ２Ｄ）、またはクエン酸リン酸デキストロースアデニン（ＣＰＤＡ１）の抗凝固溶液中で収集される、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記酸素低減化病原体低減化血液製剤が、全血、白血球低減化全血、または濃厚赤血球である、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

微小粒子形成を低減化した血液病原体低減化のための方法であって、
血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製することと、
前記血液製剤から血液病原体を低減化することと、
を含み、前記血液病原体の低減化が、
リボフラビンを４０～６０μＭの濃度まで添加することと、
前記リボフラビン含有血液製剤を２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射することと、を含む、前記方法。

【請求項10】

前記酸素低減化病原体低減化血液製剤を嫌気性条件下で貯蔵することをさらに含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記血液製剤から二酸化炭素を低減化することをさらに含む、請求項９に記載の方法。

【請求項12】

前記酸素低減化病原体低減化血液製剤を嫌気性および二酸化炭素低減化条件下で貯蔵することをさらに含む、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記微小粒子の数が、酸素存在下で処理された試料に対して、１４日で少なくとも２倍まで低減化され、２１日で少なくとも２倍まで低減化され、または４２日で少なくとも２倍まで低減化される、請求項９に記載の方法。

【請求項14】

前記微小粒子の数が、酸素存在下で処理された試料に対して、１４日で少なくとも５倍まで低減化され、２１日で少なくとも５倍まで低減化され、または４２日で少なくとも５倍まで低減化される、請求項９に記載の方法。

【請求項15】

前記リボフラビン濃度が約５０μＭである、請求項９に記載の方法。

【請求項16】

前記血液製剤が、クエン酸リン酸デキストロース（ＣＰＤ）、クエン酸リン酸ダブルデキストロース（ＣＰ２Ｄ）、およびクエン酸リン酸デキストロースアデニン（ＣＰＤＡ１）中で収集される、請求項９に記載の方法。

【請求項17】

前記血液製剤が全血または白血球低減化全血である、請求項９に記載の方法。

【請求項18】

前記酸素低減化病原体低減化血液製剤が、全血、白血球低減化全血、または濃厚赤血球である、請求項９に記載の方法。

【請求項19】

ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４００～６０μＭのリボフラビンを有し、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で９０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有する、酸素低減化全血であって、２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射された、酸素低減化全血。

【請求項20】

前記ｐＣＯ２が、３７℃で５～９０ｍｍＨｇである、請求項１９に記載の酸素低減化全血。

【請求項21】

前記ｐＣＯ２が、３７℃で７０ｍｍＨｇである、請求項１９に記載の酸素低減化全血。

【請求項22】

ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４００～６０μＭのリボフラビンを有し、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で２０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有する、酸素および二酸化炭素低減化全血であって、前記酸素低減化全血が２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射された、酸素および二酸化炭素低減化全血。

【請求項23】

前記ｐＣＯ２が、３７℃で５～２０ｍｍＨｇである、請求項１９に記載の酸素および二酸化炭素低減化全血。

【請求項24】

前記ｐＣＯ２が、３７℃で５ｍｍＨｇである、請求項１９に記載の酸素低減化全血。

【請求項25】

前記照射が、３．２～７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ線量を含む、請求項１９に記載の酸素低減化全血。

【請求項26】

溶血を低減化した血液病原体を低減化するための方法であって、
血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製することと、
前記酸素低減化血液製剤から血液病原体を低減化することと、
を含み、前記血液病原体の低減化が、
Ｓ－３０３を最終濃度０．２ｍＭまで添加することと、
ＧＳＨを最終濃度２～２０ｍＭまで添加することと、を含む、前記方法。

【請求項27】

前記酸素低減化病原体低減化血液製剤を嫌気性条件下で貯蔵することをさらに含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記血液製剤から二酸化炭素を低減化することをさらに含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項29】

前記血液製剤が、全血、白血球低減化全血、または濃厚赤血球である、請求項２６に記載の方法。

【請求項30】

前記Ｓ－３０３の添加後に、前記血液製剤を遠心分離することをさらに含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項31】

前記遠心分離の後に、酸性ｐＨを有する添加剤溶液中で混合することをさらに含む、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

微小粒子形成を低減化した血液病原体低減化のための方法であって、
血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製することと、
前記血液製剤から血液病原体を低減化することと、
を含み、前記血液病原体の低減化が、
Ｓ－３０３を最終濃度０．２ｍＭまで添加することと、
ＧＳＨを最終濃度２～２０ｍＭまで添加することと、を含む、前記方法。

【請求項33】

前記酸素低減化病原体低減化血液製剤を嫌気性条件下で貯蔵することをさらに含む、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記血液製剤から二酸化炭素を低減化することをさらに含む、請求項３２に記載の方法。

【請求項35】

前記血液製剤が、全血、白血球低減化全血、または濃厚赤血球である、請求項３２に記載の方法。

【請求項36】

前記Ｓ－３０３の添加後に、前記血液製剤を遠心分離することをさらに含む、請求項３２に記載の方法。

【請求項37】

前記遠心分離の後に、酸性ｐＨを有する添加剤溶液中で混合することをさらに含む、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

最終濃度約０．２ｍＭのＳ－３０３を有し、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で９０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有する、酸素低減化赤血球。

【請求項39】

最終濃度約２～２０ｍＭのＧＳＨをさらに含む、請求項３８に記載の酸素低減化赤血球。

【請求項40】

全血球数（ＣＢＣ）、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、ＳＯ２％、およびＳ－３０３の分解反応速度を含む群から選択される少なくとも２つのパラメータの改善をさらに含む、請求項３８に記載の酸素低減化赤血球。

【請求項41】

前記溶血パーセントが０．８％より低い、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記変形能が、病原体不活性化酸素化血液と比較して、１０％超増大される、請求項４０に記載の方法。

【請求項43】

前記ＡＴＰが、病原体不活性化酸素化血液と比較して、１０％超増大される、請求項４０に記載の方法。

【請求項44】

２，３－ＤＰＧが、病原体不活性化酸素化血液と比較して、少なくとも１週間の貯蔵後に、１０％超増大される、請求項４０に記載の方法。

【請求項45】

前記微小粒子の形成が、病原体不活性化酸素化血液と比較して、少なくとも１週間の貯蔵後に、４倍を超えて低減化される、請求項４０に記載の方法。

【請求項46】

赤血球におけるＳ－３０３の病原体不活性化の効力を改善するための方法であって、
赤血球から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製することと、
Ｓ－３０３を最終濃度０．２ｍＭまで添加することと、
ＧＳＨを最終濃度２～２０ｍＭまで添加することと、を含む、前記方法。

【請求項47】

前記血液製剤から二酸化炭素を低減化することをさらに含む、請求項４６に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、輸血医薬における使用のための血液および血液製剤の品質および安全性を改善する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

輸血のための血液および血液成分の使用は、現在の医薬品における一般的な慣行であるが、免疫原性および病原性汚染物質へ曝される可能性があるため、患者に対して危険性を示す。収集された血液および血液成分を最大数週間にわたって貯蔵するという慣行は、この危険性を悪化させる。全血は典型的に濾過によって処理され、白血球を除去され（白血球低減化）、次いで遠心分離し、３つの主要な血液成分である血漿、血小板、および赤血球に分離される。次いで、白血球低減化濃厚（packed）赤血球（ＬＲｐＲＢＣ）は、典型的には、米国でのＡＳ－１（Ａｄｓｏｌ（登録商標））、ＡＳ－３（Ｎｕｔｒｉｃｅｌ（登録商標））、ＡＳ－５（Ｏｐｔｉｓｏｌ（登録商標））、およびＡＳ－７（ＳＯＬＸ（登録商標））、ＥＵでのＳＡＧＧＭまたはＰＡＧＧＳＭなどの添加剤溶液（additive solution）中で懸濁され、最大４２日間の冷蔵貯蔵前に貯蔵寿命が延長される。血漿は、典型的には、瀉血および分離の２４時間以内に凍結される（「新鮮凍結血漿」－ＦＦＰまたはＦＰ２４）。ＦＦＰは、使用前に解凍され、解凍の５日以内に使用されなければならない。血小板（ＰＬＴ）は、アフェレーシスによって、または全血の複数ユニットから分離されたＰＬＴ分画をプールすることによって回収される。アフェレーシスによって収集されたＰＬＴは、典型的には、ＥＵの（ＵＳではまだない）ＰＡＳ－Ｃ（Ｉｎｔｅｒｓｏｌ（登録商標））またはＰＡＳ－Ｆ（Ｉｓｏｐｌａｔｅ（登録商標））などの添加剤溶液中に懸濁される。ＰＬＴは、ＰＬＴ活性化を阻害するために室温で絶えず振とうされ、また、収集の５～７日以内に使用されなければならない。貯蔵条件に起因して、全ての血液成分は、ドナーのウイルスおよび細菌汚染に影響を受けやすいが、ＰＬＴは、他の血液成分よりも、バクテリア汚染および増殖の影響を受けやすい。

【0003】

当該技術分野における近年の進歩により、貯蔵前に光増感剤を用いて（例えば、ソラレンに基づくＩＮＴＥＲＣＥＰＴ（登録商標）システム、リボフラビンに基づくＭＩＲＡＳＯＬ（登録商標）システムを参照のこと）、および光増感剤を用いることなく（ＴＨＥＲＡＦＬＥＸ（登録商標）ＵＶ－Ｐｌａｔｅｌｅｔシステム）、血液成分を照射するためにＵＶ光を利用することによる、細菌性およびウイルス性病原体の不活性化が提供された。これらのシステムは、病原性種においてＤＮＡを架橋および不活性化し、それによって、患者にもたらす危険性を低減する。ＩＮＴＥＲＣＥＰＴ（登録商標）システムは、アモトサレンＨＣｌ（合成ソラレン）、ならびに病原体ＤＮＡに架橋するために３Ｊ／ｃｍ²の放射露光量で送達されるＵＶ－Ａ光を使用し、処理後、残存するアモトサレンおよび光生成物を除去または低減する。Ｍｉｒａｓｏｌ（登録商標）システムは、リボフラビン、ならびに、リボフラビン－ヌクレオチド錯体による吸収を標的とするために３１３ｎｍ付近を中心とするＵＶ光を使用する。光増感剤を用いないシステムは、典型的には、２５４ｎｍのＵＶ－Ｃ光を使用する。これらのシステムにおけるいくつかの光増感剤および光生成物の長期的な効果は依然として確立中である。

【0004】

当該技術分野における他の進歩としては、Ｓ－３０３（Ｃｅｒｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｏｎｃｏｒｄ、ＣＡ）、核酸を架橋し、感染性細菌および他の病原体を不活性化するための、脆弱アンカー基を含むキナクリンマスタードに基づくアルキル化剤の使用が挙げられる（Ｈｅｎｓｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｓ－３０３ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ，” Ｔｒａｎｓｆｕｓ Ｍｅｄ Ｈｅｍｏｔｈｅｒ ３８：３３－４２（２０１１）（“Ｈｅｎｓｃｈｌｅｒ ２０１１”）を参照のこと）。理論に限定されないが、Ｓ－３０３病原体不活性化プロセスの基礎を形成する２つの反応が存在すると考えられる。第１の反応は、Ｓ－３０３分子との反応による、共有結合性ＤＮＡおよびＲＮＡ付加体の形成である。この第１の反応は、約３０分以内に完了する。第２の反応は、過剰なＳ－３０３の、低毒性副産物、Ｓ３００への分解である。この分解は、付加的反応と同時に起こり、１６～１８時間内に完了する。

【0005】

任意の特定の理論に限定されないが、Ｓ－３０３との、共有結合性ＤＮＡおよびＲＮＡ付加体の形成は、核酸ポリマー（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）と分子のインターカレーションに基づくものと考えられる。現在理解されるように、Ｓ－３０３がＲＢＣに添加されるとき、それは、その両親媒性特性に起因して、細胞およびウイルスエンベロープの膜を含む膜を急速に（数秒～数分以内）通過し、核酸のらせん領域にもぐり込む。分子上の脆弱アンカーの存在が、分子上の正電荷アミン基をＤＮＡまたはＲＮＡの核酸の負電荷に引き付けることにより、インターカレーションプロセスを助長すると、仮定される。Ｓ－３０３分子の近接により、Ｓ－３０３分子をＤＮＡまたはＲＮＡへ急速に共有結合させる、熱性環状付加反応が可能となる。共有結合が、複製または翻訳プロセスの発生を阻害し、さらなる病原体の産生を停止させると、考えられる。共有結合性付加体を形成するプロセス中、脆弱アンカーは、加水分解によって除去され、低毒性化合物Ｓ３００をもたらす。

【0006】

Ｓ－３０３の、低毒性Ｓ３００への自然分解は、病原体不活性化プロセスにおける第２の反応である。試料中のＤＮＡおよびＲＮＡの全てと完全に反応させるために十分な試薬を提供するために、通常、過剰なＳ－３０３（約０．２ｍＭ）がＲＢＣに添加される。しかしながら、Ｓ－３０３は、毒性化合物であるので、得られた生成物を安全に輸血するためには、残存するＳ－３０３は除去されなければならない。Ｃｅｒｕｓ病原体不活性化プロセスにおいて、これは、主に、Ｓ－３０３を有意に低毒性であるＳ－３００化合物に分解することにより、達成される。分解プロセスは、加水分解によって生じ、Ｓ－３０３試薬が最初にＲＢＣと混合されるとき、低～高のｐＨ変化により、Ｓ－３０３の加水分解が誘起される。残存するＳ－３０３の分解反応速度は、約２０分間の半減期を伴う、１０ｎｍ／Ｌを上回る濃度で、迅速である。

【0007】

現在理解されるように、Ｓ－３０３は、ＲＢＣユニットにおいて、ホスフェートなどの小分子、水、たんぱく質などの高分子を含む、他の求核剤と反応する可能性も有する。任意の特定の理論に限定されないが、タンパク質とのこれらの非特異的相互作用を低減するために、病原体不活性化プロセス中、２０ｍＭのグルタチオン（ＧＳＨ）がＲＢＣへ同時に添加される。（Ｈｅｎｓｃｈｌｅｒ ２０１１を参照のこと）。グルタチオン（ＧＳＨ）は、約５ｍＭの細胞内濃度でほとんどの細胞に存在する、天然に存在する抗酸化剤である。現在理解されるように、ＧＳＨは、細胞外形質空間内にのみ分配され、一方でＳ－３０３は、膜を横切って拡散し、細胞内外で平衡化する。これにより、ＧＳＨは、病原体不活性化に有意な影響を与えることなくＳ－３０３の細胞外反応を抑制することができる（Ｏｌｃｉｎａ ｅｔ ａｌ．Ｈｙｐｏｘｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｈｙｐｏｘｉａ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２０１４、Ｃｈａｐｔｅｒ ２：２１－３０、Ｍｅｌｉｌｌｏ Ｇ（ｅｄ）を参照のこと）。

【0008】

当該技術分野における近年の進歩としては、より古い血液の使用に一般的に関連する貯蔵損傷量を低減するために、添加剤溶液中で嫌気的に貯蔵された濃厚赤血球を使用することも、挙げられる（Ｂｉｔｅｎｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．米国特許第５，７８９，１５２号、Ｂｉｔｅｎｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．米国特許第６，１６２，３９６号、およびＢｉｔｅｎｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．米国特許第８，０７１，２８２号を参照のこと）。これらの貯蔵損傷は、循環系の正常な生理学的環境ではないところで血液を貯蔵することに起因する代謝プロセスおよび副生成物に由来すると考えられ、また、貯蔵血液中の利用可能な酸素の除去または低減が、貯蔵中の赤血球内で酸化種の損害を作り出すと、考えられる。

【0009】

溶血は、血液の品質および安全性の重要な指標として認識される。貯蔵中、溶血レベルは経時的に増加し、その遊離ヘモグロビンの存在は、血液がその貯蔵寿命を超えたという指標となる。このため、輸血に使用することができる血液製剤ユニットについて、許容可能な貯蔵期間を制限する規制およびガイドラインが開発されてきた。血液安全性のための溶血の重要性により、ヨーロッパでは、血液が廃棄されなければならない前に０．８％の上限が設定された。ＦＤＡは、溶血のレベルが１．０％を超えないことを推奨している。したがって、溶血を低減する方法は、血液の安全な貯蔵寿命を延長させ、費用を軽減し、血液利用率を増加させる。

【0010】

血液の健康度および安全性の別の指標は、微小粒子である。Ｃｏｇｎａｓｓｅ ｅｔ ａｌ．、“Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ： Ａ ｃｏｎｃｉｓｅ ｒｅｖｉｅｗ、”Ｔｒａｎｓｆｕｓ．Ａｐｈｅｒ．Ｓｃｉ．５３（２）：１５９－１６７（２０１５）を参照のこと。微小粒子（Ｍｐ）は、赤血球、白血球、血小板、および内皮細胞によって産生される。微小粒子は、正常な生理学、アポトーシス、または細胞損傷の結果として産生されると考えられる。一般に、それらは、１０００ｎｍ未満の粒子として記載される。より低い範囲が５０ｎｍにて示されることもあるが、下限に関しての明確な定義または規約はない。通常、蛍光表面抗体と併せてフローサイトメーターが定量化のために使用されるが、ＭＰ測定のために一般に認められた方法はなく、測定は使用される器具に依存し得る。Ｐｏｎｃｅｌｅｔ ｅｔ ａｌ．、“Ｔｉｐｓ ａｎｄ ｔｒｉｃｋｓ ｆｏｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ－ｂａｓｅｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｏｆ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，”Ｔｒａｎｓｆｕｓ．Ａｐｈｅｒ．Ｓｃｉ．５３（２）：１１０－１２６（２０１５）を参照のこと。ＭＰの組成は、それらが由来する親細胞を反映しているが、選択された分子のみが、結果として生じるＭＰの表面に含まれるか、または暴露される。ＭＰｓのいくつかは、高度に血栓形成性であると見なされる（特に、血小板由来のＭＰ）。一般に、貯蔵ＲＢＣ成分中のＭｐは、免疫調節、凝固亢進、一酸化窒素捕獲（乏しい血液潅流）、または同種免疫の発症のための源として、受容者に有害である。したがって、低減化レベルの微小粒子をもたらす方法は、改善された血液健康度および安全性をもたらす。

【0011】

ここで、本発明者らは、疾患原因ウイルス、細菌、および多細胞寄生虫を低減するため、ならびに白血球を低減化するために血液製剤を処理する際に、全血中の低減化酸素が、予想外にも、溶血および微小粒子形成の量においても低減化をもたらすことを、実証した。本明細書で提供される方法は、溶血を低減化することにより、病原体低減化血液製剤の使用可能な寿命の延長を提供する。

【0012】

血液および血液製剤の病原体不活性化は、それらの安全性を改善するために開発されてきた。様々な細菌、ウイルス、および寄生虫が、不活性化されることができるが、調査研究は、血液成分に対して負の影響を実証している。現在、血漿および血小板濃縮物は、病原体不活性化システムを用いて処理されることができるが、赤血球の処理は依然として開発中である。献血後の全血の病原体不活性化は、残存する白血球の破壊に加えて、由来する全ての生成物が病原体不活性化される、という利点を提供し得る。しかしながら、最近の研究は、リボフラビン／ＵＶ光技術（Ｍｉｒａｓｏｌ、ＴｅｒｕｍｏＢＣＴ）を使用する全血照射に由来する赤血球の品質が、未処理研究群と比較して、標準的な貯蔵条件下での貯蔵寿命を短縮せざるを得ない程度まで、有意に低減されることを実証した。これらの分析の特徴は、血液バンク貯蔵の約３０日目に現在容認されているレベルの０．８％に達する、溶血の促進である。ＵＶ照射中の反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成は、溶血の一因である。

【0013】

ここで、本発明者らは、Ｍｉｒａｓｏｌシステムを使用する病原体処理の前に全血から酸素を低減化することが、血液品質を改善する、ということを実証する。病原体低減化と組み合わせた、全血および赤血球濃縮物から酸素を除去するように設計された、Ｈｅｍａｎｅｘｔ（商標）システム（Ｎｅｗ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）は、非酸素低減化条件下での病原体低減化と比較して、改善された赤血球品質をもたらす。Ｍｉｒａｓｏｌ病原体低減化処理と組み合わされたＨｅｍａｎｅｘｔ（商標）処理は、酸素低減化条件下で、４２日後の血液溶血が０．８％未満である血液をもたらす。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0014】

本開示は、血液製剤から酸素を除去すること、４０～６０μＭの最終濃度までリボフラビンを添加すること、および２６５～４００ｎｍのＵＶ光でリボフラビン含有血液製剤を照射すること、による、貯蔵中の血液病原体の不活性化および溶血の低減化のための方法を提供する。

【0015】

本開示は、血液製剤から酸素を除去すること、４０～６０μＭの濃度までリボフラビンを添加すること、および２６５～４００ｎｍのＵＶ光でリボフラビン含有血液製剤を照射すること、による、微小粒子形成の低減化および血液病原体の不活性化の方法を提供する。

【0016】

本開示は、ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４０～６０μＭのリボフラビンを有し、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で９０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有し、２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射された、酸素低減化全血を提供する。

【0017】

本開示は、ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４００～６０μＭのリボフラビンを有し、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で２０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有する、酸素および二酸化炭素低減化全血であって、酸素低減化全血が２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射されたものである、酸素および二酸化炭素低減化全血を提供する。

【0018】

本開示は、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、による、血液病原体の不活性化および溶血の低減化のための方法を提供する。

【0019】

本開示は、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、による、血液病原体の不活性化および微小粒子形成の低減化のための方法を提供する。

【0020】

本開示は、約０．２ｍＭの最終濃度のＳ－３０３を有し、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、かつ３７℃で９０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有する、酸素低減化赤血球を提供する。

【0021】

本開示は、添付の図面を参照して開示される。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】図１は、本明細書の一態様に従う、血液バッグ収集および貯蔵システムを示すダイアグラムである。

【図2】図２は、本明細書の一態様に従う、不連続アフェレーシスシステムを示すダイアグラムである。

【図3】図３は、本明細書の一態様に従う、不連続アフェレーシスシステムを示す図ダイアグラムである。

【図4】図４は、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の平均溶血を比較している。

【図5】図５は、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の微小粒子の平均量を比較している。

【図6A】図６Ａ～６Ｇは、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の、浸透圧脆弱性（６Ａ）を比較している。

【図6B】図６Ａ～６Ｇは、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の、カリウム（６Ｂ）を比較している。

【図6C】図６Ａ～６Ｇは、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の、総ヘモグロビン（６Ｃ）を比較している。

【図6D】図６Ａ～６Ｇは、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の、酸素飽和度（６Ｄ）を比較している。

【図6E】図６Ａ～６Ｇは、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の、グルコース（６Ｅ）を比較している。

【図6F】図６Ａ～６Ｇは、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の、ラクテート（６Ｆ）を比較している。

【図6G】図６Ａ～６Ｇは、本開示に従った実験の結果を示すグラフであり、無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の、ｐＨ（６Ｇ）を比較している。

【発明を実施するための形態】

【0023】

複数の図面を通して、対応する参照符号は対応する部分を示す。本明細書に記載の実施例は、本明細書の態様を例示するが、本明細書の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。

【0024】

ここで、本発明者らは、ＵＶ光で血液試料を照射することの有害な副作用が、試料中に存在する酸素の量を低減することによって軽減され得ることを示す。理論に限定されるものではないが、酸素の低減が反応性酸素種（ＲＯＳ）の生成を減少させると考えられる。ＲＯＳの低減は、血液試料が全血あるいは任意の血液成分、例えば、血漿、血小板、または赤血球であっても、その血液試料中の病原体不活性化のためのＵＶ光照射の有益な側面を増大させると考えられる。

【0025】

本明細書の態様に従うと、血液処理および貯蔵システムは、貯蔵前の、血液成分の収集、分離、脱酸素化、およびＵＶ光照射であってもよい。血液処理システムは、一般に全血白血球低減化において用いられているような重力駆動バッグシステムであってもよい。いくつかの態様では、血液処理システムは、当該技術分野において一般に知られているように、連続または不連続フロータイプのいずれかのアフェレーシスシステムであってもよく、ここで、血液は、貯蔵前に、本明細書に従って、収集され、所望の成分に分離され、その後、脱酸素化され、照射される。いくつかの態様では、血液は、貯蔵前の所望の血液成分の分離およびＵＶ照射前に、収集および脱酸素化される。いくつかの態様では、血液は、貯蔵前の所望の血液成分の脱酸素化およびＵＶ照射前に、収集および分離される。いくつかの態様では、血液は、所望の血液成分の分離および貯蔵前に、収集、脱酸素化、およびＵＶ照射される。

【0026】

当業者は、以下の実施例および図面が例示のみを意図し、本発明の範囲を限定するものではないことを理解するであろう。本明細書および記載の目的のために、以下の定義および用語は、それらの一般的な意味を有するものと理解される。「ＵＶ」という用語は、約２２０ｎｍ～約４００ｎｍの波長を有し、一般に、４０５ｎｍの水銀アークランプからのピークを含む紫外線を意味する。「血液試料」という用語は、動物またはヒトからの血液の試料を意味し、全血、ならびに赤血球（ＲＢＣ）、血小板（ＰＬＴ）、血漿、白血球、血液中で一般に見出されるタンパク質、例えば、アルブミン、酵素、凝固因子を含む全血の成分を含み、また、血液中で一般に見出されるかかる成分の組み合わせ、例えば、全血の部分的に分離されたフラクション、予め分離された組み換え成分も含み、収集されたばかりの新鮮血液試料または貯蔵された血液試料を含む。「アフェレーシス」という用語は、当該技術分野におけるその一般的な意味を有することを意味し、当該技術分野において一般に知られているように、連続および不連続方法の両方による血液の収集および分離を含む。「アフェレーシスシステム」という用語は、当該技術分野におけるその一般的な意味を有することを意味し、当該技術分野において一般に知られているように、連続および不連続方法の両方による血液の収集および分離のためのデバイスおよびシステムを含む。「血液容器」という用語は、貯蔵期間にかかわらず、血液を貯蔵する目的のためのポリマー材料から作製される任意の容器を指すことを意味し、当該技術分野で一般に用いられているような「血液バッグ」という一般的用語を含む。「ＰＶＣ」という用語は、ポリ塩化ビニルに含まれるポリマーを指すことを意味し、任意の添加材料、例えば、可塑剤、安定剤、阻害剤、および当該技術分野において既知であり、ＰＶＣの製造において使用される他の添加材料を伴った、ＰＶＣを含む。

【0027】

図１は、血液収集バッグ１、血液処理バッグ４、ＵＶ照射チャンバ１０、および血液貯蔵バッグ１３を含む、本明細書の一態様を示す。血液収集バッグ１は、当該技術分野で一般に知られており、典型的には、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）などの可撓性プラスチックから作製されるが、ウレタン、シリコン、または他の生体適合性材料などの他のポリマー材料から作製されることもできる。血液収集バッグ１は、血液輸送ライン３を有する。血液輸送ライン３も、当該技術分野において一般に知られているように、可撓性プラスチックから作製され、典型的には、ＰＶＣから作製されるが、他の生体適合性ポリマー材料から作製されることもできる。血液輸送ライン３は、ピンチクランプ、ラチェットクランプ、または脆弱シールなどの流量制御デバイス２を装着しており、血液が収集バッグ１から輸送ライン３を通って処理バッグ４へ流れるのを、かかる血液の流れおよび輸送が所望されるまで、防止する。いくつかの態様では、流量制御デバイスは、流速を制御するように設計される。

【0028】

処理バッグ４は、外部バリアバッグ５および内部血液バッグ６で構成され、外部バリアバッグ５は、実質的に酸素不透過性である。バリアバッグ５の構築に好適な材料は、当該技術分野で一般に知られており、金属箔、例えば、アルミホイル、好適なバリア特性を有するポリマーフィルム、例えば、エチルビニルアルコール（ＥＶＡ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリアクリロニトリル（Ｂａｒｅｘ（登録商標））、環状ポリオレフィン、ポリクロロトリフルオロエチレン（ＰＣＴＦＥまたはＡｃｌａｒ（登録商標））、ポリ塩化ビニリデン（ＰＶＤＣ）、例えば、酸化ケイ素、酸化アルミニウムのコーティングでポリエチレンまたはナイロンフィルムをコーティングすることによる、好適なバリア特性を与えるためのコーティングを有するポリマーフィルム、あるいはポリマーフィルムおよび／または好適なバリア特性を与えるためのコーティングの組み合わせを含む多層フィルム、を含む。複数の態様では、バリアバッグは、ＲｏｌｌＰｒｉｎｔ ＣｌｅａｒＦｏｉｌ（登録商標）ＺフィルムまたはＲｅｎｏｌｉｔ Ｓｏｌｍｅｄ Ｗｒａｐｆｌｅｘ（登録商標）フィルムから作製される。処理バッグの作製のための例示的な方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１６年３月１０日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２１７９４号にて提供される。

【0029】

内部血液バッグ６は、当該技術分野で一般に知られている高い酸素輸送特性を有する可撓性ポリマー材料から作製され、ＰＶＣ、ウレタン、シリコン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエーテルスルホン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）を含む。一態様では、内部血液バッグ６は、シリコン、例えば、Ｗａｃｋｅｒ Ｓｉｌｐｕｒａｎ（登録商標）３０ｕｍ厚のシリコンフィルムから作製される。別の態様では、内部血液バッグ６は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＧＶＨＰ２９３２５ ＰＶＤＦメンブレンから作製される。酸素吸収吸着材料７は、外部バリアバッグ５と内部血液バッグ６との間に配置される。酸素吸収吸着材料７は、当該技術分野で一般に知られており、典型的には、酸素吸収剤のＭｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ａｇｅｌｅｓｓ（登録商標）シリーズなどの鉄に基づく吸着材料から構成され、あるいは他の酸素吸収材料またはシステム、例えば、アスコルビン酸塩／金属塩システム、プラチナなどの金属触媒、またはナイロンＭＸＤ６などの酸素吸収ポリマーから構成される。いくつかの態様では、外部バリアバッグ５および内部血液バッグ６は、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ａｇｅｌｅｓｓ（登録商標）ＯＭＡＣ（登録商標）フィルムなどの積層構造内に配置された酸素吸収材料７と一緒に積層加工されることができる。

【0030】

酸素吸収吸着材料７は、典型的には通気性サシェ中に配置され、外部バリアバッグ５と内部血液バッグ６との間のガスヘッドスペースの酸素を吸収するように適合される。いくつかの態様では、酸素吸収吸着材料７は、内部バッグと外部バッグとの間に間隔を生じるように、プラスチックメッシュ構造（図示せず）に取り付けられ、このため、ガスヘッドスペースにおいてガス輸送の増大をもたらす。いくつかの態様では、複数の酸素吸収サシェは、ガスヘッドスペース中に配置される。複数の態様では、酸素吸収吸着材料７は、迅速に作用し、高レベルの酸素をすばやく吸収するように、血液のフルユニットの全酸素量を吸収する容量で、配合される。複数の態様では、酸素吸収吸着材料７の酸素吸収容量は、少なくとも１００ｃｃの酸素であり、より好ましくは、少なくとも２００ｃｃである。いくつかの態様では、酸素インジケータタブ（図示せず）は、例えば、吸着システムＴｅｌｌ－Ｔａｂ（登録商標）などの、特定のレベルで酸素の存在または不在を色によって示すために、ガスヘッドスペース中に配置される。本明細書に好適な処理バッグ４および内部血液バッグ６のさらなる詳細は、２０１６年３月１０日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２１７９４号に提供される。

【0031】

内部血液バッグ６の流体経路は、ピンチクランプ、ラチェットクランプ、または脆弱シールなどの流量制御デバイス８を有する血液輸送ライン９によりＵＶ照射チャンバ１０に連結され、血液が内部血液バッグ６から輸送ライン９を通ってＵＶ照射チャンバ１０へ流れるのを、かかる血液の流れおよび輸送が所望されるまで、防止する。いくつかの態様では、流量制御デバイスは、流速を制御するように設計される。ＵＶ照射チャンバ１０は、ピンチクランプ、ラチェットクランプ、または脆弱シールなどの流量制御デバイス１１を有する血液輸送ライン１２により血液貯蔵バッグ１３にさらに流体連結され、血液がＵＶ照射チャンバ１０から輸送ライン１２を通って血液貯蔵バッグ１３へ流れるのを、かかる血液の流れおよび輸送が所望されるまで、防止する。いくつかの態様では、流量制御デバイス１１は、流速を制御するように設計され、いくつかの態様では、流量制御デバイスは、ＵＶ照射チャンバ内に収容された血液試料の制御された照射露光を提供するために、ＵＶランプと通信する。

【0032】

ＵＶ照射チャンバ１０は、電力源（図示せず）に動作可能に接続されたＵＶランプ（図示せず）をさらに含み、チャンバ内に収容された血液またはチャンバ内部を通過する血液のＵＶ照射を提供する（図示せず）。いくつかの態様では、ＵＶ照射チャンバは、血液輸送管９の一区分を受容し、その管を通してＵＶ光を照射するように、適合される。大部分のプラスチックは、より低い波長でＵＶ光を吸収し、それらは、２５４ｎｍでのＵＶ－Ｃ光などのように、より低い波長の処理用ＵＶ光の使用には適さないであろうが、ＵＶ－Ｂ（約２９０～３２０ｎｍ）またはＵＶ－Ａ（約３２０～４００ｎｍ）などのように、より高い波長で吸収する特定の光増感剤のためには、プラスチックの薄片が好適であってもよい、ということが、当業者には理解されるだろう。したがって、いくつかの態様では、血液輸送管９の一部は、プラスチック管を通過する血液試料への光透過を高めるように、ＵＶ照射チャンバ１０に適合されるべき壁厚を非常に薄いものとするように、適合される。いくつかの態様では、ＵＶ照射チャンバ内の輸送管部分の壁厚は、約０．１～約１．０ｍｍであり、複数の態様では、輸送管の壁厚は、約０．２～約０．５ｍｍ厚である。

【0033】

いくつかの態様では、ＵＶ照射チャンバ１０は、血液輸送管９および血液輸送管１２と流体連通する、石英（ＳｉＯ₂）またはサファイア（Ａｌ₂Ｏ₃）材料の断片などのＵＶ－Ｃ透過部分を有するように適合される。いくつかの態様では、血液輸送ライン９は、ＵＶ－Ｃ透過部分が容易にＵＶ照射チャンバ１０へ挿入されることができるように、血液輸送管９と血液輸送管１２との間に配置された、石英（ＳｉＯ₂）またはサファイア（Ａｌ₂Ｏ₃）管の断片などのＵＶ－Ｃ透過部分を有するように適合される。いくつかの態様では、ＵＶ照射チャンバ１０は、石英（ＳｉＯ₂）またはサファイア（Ａｌ₂Ｏ₃）などのＵＶ－Ｃ透過材料から組み立てられ、血液輸送管９および血液輸送管１２と内外で流体連通するように、連結的に適合される。いくつかの態様では、ＵＶ照射チャンバ１０は、ＵＶ－Ｃに対しては不透過性であるが、ＵＶ－ＡおよびまたはＵＶ－Ｂ波長に対しては透過性である材料、例えば、ガラスまたはポリマー、例えば、ポリカーボネート、アクリル、ＰＶＣ、ウレタンなどから組み立てられ、血液輸送管９および血液輸送管１２と内外で流体連通している。いくつかの態様では、ＵＶ照射チャンバ１０は、ＵＶ光を照射チャンバの内腔に送達するのに有効であるように、ＵＶ－Ｃ、ＵＶ－Ａ、およびＵＶ－Ｂ波長に対して十分に透過性である、シリコンなどのポリマー材料から組み立てられる。

【0034】

血液貯蔵バッグ１３は、外部バリアバッグ１４および内部血液バッグ１５で構成され、外部バリアバッグ１４は、実質的に酸素不透過性である。好適な血液貯蔵バッグ１３は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１６年４月２２日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２９０６９号にて提供される。簡潔にいうと、外部バリアバッグ１４の構築に好適な材料が提供され、外部バリアバッグ１４は、外部バリアバッグ５と実質的に同等である。内部血液バッグ１５は、それがスパイクポート１７をさらに含むことを除いて、上記の血液収集バッグ１と実質的に同等であり、このスパイクポート１７は、輸血医薬の技術分野で一般に知られているものであり、患者使用時に内部血液バッグ１５内に収容された血液を受け取るように、注入スパイクの無菌連結のために適合される。血液貯蔵バッグ１３は、外部バリアバッグ１４と内部血液バッグ１５との間に配置された酸素吸収材料１６をさらに含む。複数の態様では、酸素吸収材料１６は、長期間にわたって冷蔵温度で機能し、低レベルの酸素を吸収するように、配合される。

【0035】

図２は、不連続３ラインアフェレーシスシステムを示し、全血は、対象の腕に挿入されてもよい静脈アクセスデバイス１１０を通して対象から取り出される。血液引き込みライン１２０は、血液成分の分離のために、静脈アクセスデバイス１１０を血液成分分離デバイス１５０に流体連結する。引き込みライン１２０上に位置する引き込みポンプ１２２は、引き込みライン１２０を通る流れの方向、速度、および持続時間を制御する。

【0036】

全血が対象から取り出されているときに、抗凝固剤を全血に添加して、ライン内または血液成分分離デバイス１５０内で血液が凝固するのを防止することができる。そのために、システムは、一方の末端に、抗凝固剤ソース１３４（例えば、抗凝固剤のバッグ）に流体連結された抗凝固剤ライン１３０を含み、他方の末端に、静脈アクセスデバイス１１０（または引き込みライン１２０）を含む。抗凝固剤ライン１３０が内部を通過する抗凝固剤ポンプ１３２は、抗凝固剤ライン１３０を通過する流量および全血中に導入される抗凝固剤の量を制御する。抗凝固剤ポンプ１３２は、引き込みポンプ１２２に比例して動作して、適切な量の抗凝固剤が全血に添加されることを確実にする。抗凝固剤は、典型的には、静脈アクセスデバイス１１０に可能な限り近接して、全血中に導入される。ライン／導管は、典型的には、ライン内の流れを停止するためのクランプ弁１６４を含む。

【0037】

所望の量の抗凝固化された全血が対象から取り出され、血液成分分離デバイス１５０内に収容されると、血液成分分離デバイスは、全血をいくつかの血液成分、典型的には、血漿、血小板、赤血球、および任意に白血球へと分離する。

【0038】

血液処理システム１００のいくつかの態様は、輸送ポンプ２１０と、血漿バッグ１５８に連結された希釈／抽出ライン１６０と、を含む。輸送ポンプ２１０および希釈／抽出ライン１６０は、血液成分分離デバイスに導入された抗凝固化引き込み血液の希釈を含む、様々な目的のために使用されることができる。例えば、使用者がより高い血漿含有量を有する引き込み血液を望んだ場合、システムは、輸送ポンプのスイッチをオンとし、引き抜きライン１２０内の取り出された血液へ血漿バッグ１５８から血漿を導入することによって、引き込み血液を希釈することができる。追加的または代替的には、輸送ポンプは、血漿バッグ１５８からの血漿を血液成分分離デバイス１５０へ導入し、血小板（または他の血液成分）を抽出するために、サージ洗浄（ｓｕｒｇｅ ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ）の間に用いられてもよい。

【0039】

血液試料が血液成分分離デバイス１５０内で分離され、所望の成分が取り出され、適切な貯蔵容器１５６または１５８内で貯蔵された後、システムは、専用ラインを経由して、未抽出および／または不要な成分を対象に再び戻す。

【0040】

図３は、不連続３ラインアフェレーシスシステムと共に使用するための、本明細書の一態様を示し、改善された部分は破線内に示される。具体的には、アフェレーシス血液処理システム１００は、流体輸送ポンプ１７２、脱酸素化デバイス１７３、処理リザーバ１７４、およびＵＶ照射チャンバ１７７をさらに含み、それらは、輸送ライン１７０および再循環ライン１７５により流体連結される。輸送ライン１７０および再循環ライン１７５における流体流量の制御は、流体を所望のデバイスに導くように連携して作用する、流量制御弁１７１、１７６、１７８、および１７９での制御によって、維持される。

【0041】

血液分離デバイス１５０内の血液成分の分離が完了すると、所望の血液成分の流れは、本明細書の流量制御弁１７９を閉鎖し、流量制御弁１７１を開放することによって、本明細書の輸送ライン１７０に導かれる。したがって、所望の血液成分は、輸送ライン１５２および最終的な血漿バッグ１５８または血小板バッグ１５６ではなく、本明細書の輸送ポンプ１７２に導かれる。輸送ライン１７０中の流体流量は、輸送ポンプ１２２または輸送ポンプ２１０からの流体流量によってか、あるいは本明細書の輸送ポンプ１７２によってか、あるいはこれらの組み合わせにより、導かれることができる。

【0042】

輸送ライン１７０中の流体流量は、流量制御弁１７１によって制御され、輸送ポンプ１７２へと流入し、図中の矢印で示されるように、引き続き脱酸素化デバイス１７３および処理リザーバ１７４へと流入する。脱酸素化プロセスの間、流量制御弁１７８は、閉鎖されることもあり、再循環ライン１７５上に配置された流体制御弁１７６は、開放されることもあり、それによって、流体中に所望のレベルの酸素が達成されるまで、脱酸素化デバイス１７３、処理リザーバ１７４、および再循環ライン１７５を通じる輸送ポンプ１７２により、流体を再循環させることを可能にする。いくつかの態様では、脱酸素化デバイス１７３は、Ｍｅｍｂｒａｎａ Ｌｉｑｕｉ－Ｃｅｌ（登録商標）およびＭｉｎｉＭｏｄｕｌｅ（登録商標）デバイスなどの、流体脱気のために用いられる、ならびに、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ Ａｆｆｉｎｉｔｙ（登録商標）シリーズ人工肺およびＳｏｒｉｎ Ｉｎｓｐｉｒｅ（登録商標）シリーズ人工肺などの、心肺バイパス灌流における血液酸素化のために用いられる、当該技術分野で一般に知られている中空多孔繊維から構成される。いくつかの態様では、脱酸素化デバイス１７３は、窒素ガス供給源（図示せず）へ動作可能に連結されて、中空多孔性繊維へ窒素ガスを提供して、血液から酸素を除去する。いくつかの態様では、脱酸素化デバイス１７３は、その中に収容される流体の酸素含有量を測定する手段（図示せず）に動作可能に連結されて、流体試料が、約２５％以下の酸素、複数の態様では、約１０％以下の酸素まで脱酸素化されたかどうかを測定するための手段を提供する。いくつかの態様では、輸送ポンプは、処理される流体容量について効果的であると実験的に示されている所定時間の後にポンプをオフにするための制御手段に動作可能に連結される。

【0043】

流体試料が十分に脱酸素化された後、血液試料は、流量制御弁１７８を開放することにより、ポンプ１７２により、ＵＶ照射チャンバ１７７を通じて、ポンプで吸い上げられる。血液試料は、好適なＵＶ光源（図示せず）からのＵＶ光で照射される。ＵＶ光源は、ＵＶ照射チャンバ１７７内に収容されることができ、電源（図示せず）に動作可能に連結されることができ、あるいはＵＶ光源は、光パイプまたはミラー（図示せず）などにより、ＵＶ照射チャンバに動作可能に連結されることができる。ＵＶ光源は、当該技術分野で既知であり、所望のスペクトル出力、および血液成分の処理に関与する化学に基づいて選択され、水銀アークランプ、キセノンランプ、フラッシュランプ、重水素ランプ、ハロゲンランプ、タングステンランプ、蛍光ランプ、およびＵＶ発光ＬＥＤを含む群から選択されることができる。

【0044】

好ましくは、ＵＶ照射チャンバ内の流体流量は、ＵＶ照射チャンバ１７７内に収容された静的試料の経時ＵＶ照射によってか、またはＵＶ照射チャンバ１７７内部を通過する動的試料の流量制御のいずれかおよび流量弁１７８による制御によって、流体中でＵＶ光の標的放射露光量が達成されるように、制御される。いくつかの態様では、ＵＶ光の放射露光量は、約１～８Ｊ／ｃｍ²であり、複数の態様では、約３Ｊ／ｃｍ²である。次いで、脱酸素化およびＵＶ照射された血液成分は、収集および貯蔵のために、輸送ライン１８０を通過して、輸送ライン１５２へと流れる。本明細書に従って、病原体を低減化するよう処置し、および約２５％未満の酸素レベルまで脱酸素化されると、血液成分は、血液貯蔵バッグへと輸送される。いくつかの態様では、輸送ライン１８０は、過剰な光増感剤および光生成物の低減化をもたらすように、成分吸収デバイス（図示せず）を含み、これは、例えば、ソラレン光増感剤と共に使用され、当該技術分野で一般に知られている。

【0045】

本開示は、血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製すること、血液製剤から血液病原体を低減化することを含み、リボフラビンを４０～６０μＭの最終濃度まで添加すること、そのリボフラビン含有血液製剤を２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射することを含む、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法を提供する、およびその方法を含む。特定の態様では、本方法は、嫌気性条件下で、前述した酸素低減化病原体低減化血液製剤を貯蔵することをさらに含む。また、本明細書では、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去して、酸素低減化二酸化炭素低減化血液製剤を調製すること、血液製剤から血液病原体を低減化することを含み、リボフラビンを４０～６０μＭの最終濃度まで添加すること、そのリボフラビン含有血液製剤を２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射することを含む、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法が含まれる、およびその方法が提供される。本明細書で使用される場合、「嫌気性条件」は、二酸化炭素が枯渇した条件および二酸化炭素を含有する条件の両方を含む。ほとんどの態様では、嫌気性条件は、酸素および二酸化炭素が両方とも枯渇した貯蔵条件を意味する。

【0046】

本開示は、血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製すること、血液製剤から血液病原体を低減化することを含み、Ｓ－３０３を約０．１～０．５ｍＭの最終濃度まで添加すること、グルタチオン（ＧＳＨ）を２～２０ｍＭの最終濃度まで添加することを含む、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法を提供する、およびその方法を含む。ある特定の態様では、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法は、血液病原体を低減化する前に、血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製することを含む。他の態様では、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法は、血液病原体を低減化した後に、血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製することを含む。他の態様では、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法は、血液病原体の低減化と同時に、血液製剤から酸素を除去して、酸素低減化血液製剤を調製することを含む。また、本明細書では、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去して、酸素低減化二酸化炭素低減化血液製剤を調製すること、血液製剤から血液病原体を低減化することを含み、Ｓ－３０３を約０．２ｍＭの最終濃度まで添加すること、グルタチオン（ＧＳＨ）を５～２０ｍＭの最終濃度まで添加することを含む、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法が含まれる、およびその方法が提供される。他の態様では、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法は、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去して、酸素低減化二酸化炭素低減化血液製剤を調製すること、血液製剤から血液病原体を低減化することを含み、Ｓ－３０３を約０．１～０．５ｍＭの最終濃度まで添加すること、グルタチオン（ＧＳＨ）を２～２０ｍＭの最終濃度まで添加すること、を含む。別の態様では、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法は、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去して、酸素低減化二酸化炭素低減化血液製剤を調製すること、血液製剤から血液病原体を低減化することを含み、Ｓ－３０３を約０．１～０．４ｍＭの最終濃度まで添加すること、グルタチオン（ＧＳＨ）を５～２０ｍＭの最終濃度まで添加すること、を含む。さらなる別の態様では、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法は、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去して、酸素および二酸化炭素低減化血液製剤を調製すること、および血液製剤から血液病原体を低減化することを含み、Ｓ－３０３を約０．１～０．３ｍＭの最終濃度まで添加すること、グルタチオン（ＧＳＨ）を５～１０ｍＭの最終濃度まで添加すること、を含む。さらなる一態様では、溶血低減化を有する病原体低減化のための方法は、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去して、酸素および二酸化炭素低減化血液製剤を調製すること、血液製剤から血液病原体を低減化することを含み、Ｓ－３０３を約０．１～０．３ｍＭの最終濃度まで添加すること、グルタチオン（ＧＳＨ）を２～１０ｍＭの最終濃度まで添加すること、を含む。

【0047】

本明細書で使用される場合、病原体は、ウイルス、寄生虫、および細菌を含む。また、本明細書で使用される場合、白血球低減化後に残存する低レベルの白血球もまた、病原体と見なされる。したがって、病原体低減化の方法は、白血球低減化後に残存し得る白血球の低減化をさらに提供してもよい。

【0048】

本明細書で使用される場合、「低減化する」、「低減化」、または「低減化された」という用語は、最終量が初期量よりも少ないこと、または対照試料に対してより少ないことを意味する。低減化されたレベルの病原体とは、病原体レベルが、同様の未処理試料と比較して、少なくとも１桁分の大きさだけ、低減化されることを意味する。一般に、輸血医薬の目的のために、病原体のレベルは、少なくとも１．８ログだけ低減化される。本開示の一態様では、病原体のレベルは、少なくとも３ログだけ低減化される。別の態様では、病原体のレベルは、少なくとも４ログだけ低減化される。別の態様では、病原体のレベルは、３～１０ログだけ低減化される。別の態様では、病原体のレベルは、少なくとも７ログだけ低減化される。

【0049】

本明細書で使用される場合、「酸素を低減化する」または「酸素飽和度を低減化する」とは、赤血球の酸素飽和度を２５％以下まで低減化することを意味する。本明細書で使用される場合、「二酸化炭素を低減化する」とは、３７℃で測定された場合に、二酸化炭素を９０ｍｍＨｇ以下まで低減化することを意味する。酸素枯渇化血液製剤は、２５％未満、一般的には、１０％未満の酸素飽和度を有し、約５％のＳＯ２であり得る。二酸化炭素枯渇化血液製剤とは、３７℃で測定された場合に、２０ｍｍＨｇを下回るレベルの二酸化炭素を有する血液製剤である。

【0050】

本明細書で使用される場合、「血液製剤」は、全血、または赤血球、血小板、血小板、血漿、および白血球を含む全血に由来する任意の成分を含む。

【0051】

本明細書で使用される場合、「全血」は、血漿中に懸濁された白血球（ＷＢＣ）、血小板を含み、電解物、ホルモン、ビタミン、抗体等を含む。全血中、白血球は、通常、４．５～１１．０×１０⁹細胞／Ｌの範囲内で存在し、海面レベルでの通常のＲＢＣ範囲は、男性については４．６～６．２×１０¹²／Ｌ、女性については４．２～５．４×１０¹²／Ｌである。正常なヘマトクリット、または血中血球容積パーセントは、男性については約４０～５４％、女性については約３８～４７％である。血小板数は、男性および女性のいずれについても、通常、１５０～４５０×１０⁹／Ｌである。全血は、血液ドナーから収集され、通常は抗凝固剤と組み合わされる。収集される場合、全血は、はじめ約３７℃であり、収集中および収集直後に約３０℃まで急速に冷えるが、約６時間にわたって周囲温度まで徐々に冷える。全血は、本開示の方法に従って、収集時に、３０～３７℃で開始するか、または室温（典型的に約２５℃）にて、処理されてもよい。

【0052】

本明細書で使用される場合、「赤血球」（ＲＢＣ）、貯蔵赤血球、酸素低減化赤血球、ならびに酸素および二酸化炭素低減化赤血球は、全血、白血球低減化ＲＢＣ、血小板低減化ＲＢＣ、白血球および血小板低減化ＲＢＣ、および濃厚赤血球（ｐＲＢＣ）中に存在するＲＢＣを含む。インビボでのヒト赤血球は、動的状態にある。赤血球は、ヘモグロビン、すなわち、体中に酸素を運搬し、赤血球にその色を与える鉄含有たんぱく質を含有する。赤血球から構成される血球容積のパーセンテージは、ヘマトクリットと呼ばれる。本明細書で使用される場合、別途限定されない限り、ＲＢＣは、濃厚赤血球（ｐＲＢＣ）も含む。濃厚赤血球は、当該技術分野において一般に知られている遠心分離技法を使用して、全血から調製される。本明細書で使用される場合、別記されない限り、ｐＲＢＣのヘマトクリットは約７０％である。本明細書で使用される場合、酸素低減化ＲＢＣ（ＯＲ－ＲＢＣ）は、酸素および二酸化炭素低減化（ＯＣＲ－）ＲＢＣ（ＯＣＲ－ＲＢＣ）を含み得る。

【0053】

本明細書で使用される場合、「白血球低減化全血」（ＬＲＷＢ）は、通常、濾過または遠心分離により、白血球および血小板を除去するように処理された、抗凝固剤を有する全血を含む。白血球低減化全血は、少なくとも５ログまで低減化された白血球レベルを有する。

【0054】

本明細書で使用される場合、「酸素低減化白血球低減化全血」（ＯＲ－ＬＲＷＢ）は、酸素および二酸化炭素低減化白血球低減化全血（ＯＣＲ－ＬＲＷＢ）を含み得る。

【0055】

本明細書で使用される場合、「白血球低減化濃厚赤血球」（ＬＲｐＲＢＣ）は、白血球を除去するように処理された酸素低減化（ＯＲ－）全血を有する、濃厚赤血球を含む。本明細書で使用される場合、酸素低減化白血球低減化濃厚赤血球（ＯＲ－ＬＲｐＲＢＣ）は、酸素および二酸化炭素低減化白血球低減化濃厚赤血球（ＯＣＲ－ＬＲｐＲＢＣ）を含み得る。

【0056】

本明細書の態様によれば、ウイルスは、列挙された方法によって低減化されたエンベロープウイルスを含む。他の態様では、本方法は、非エンベロープウイルスの低減化を提供する。本明細書の複数の態様では、低減化されたウイルス病原体は、以下、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩおよびＩＩ（ＨＴＬＶ－１および－ＩＩ）、細胞関連サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ウシウイルス下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）、アヒルＢ型肝炎ウイルス（ＤＨＢＶ）、偽性狂犬病ウイルス（ＰＲＶ）、ウェストナイルウイルス、ヒトコロナウイルス、チクングニアウイルス、インフルエンザウイルス、ブタヘルペスウイルス（ＳｕＨＶ－１）、水泡性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、シンドビスウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ブタ偽性狂犬病ウイルス（ＰＰＲＶ）、偽性狂犬病（ＰＲＶ）、またはセムリキフォレストウイルス（ＳＬＦＶ）の１つまたは複数を含む。いくつかの態様では、不活性化ウイルスとしては、ブルータングウイルス、カリシウイルス、ヒトアデノウイルス－５、ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、コクサッキーウイルス、およびポリオウイルスを含む非エンベロープウイルスが挙げられる。ウイルス寄生虫低減化の方法は、全てのウイルスを含み、上記に列挙されたものに限定されないことが、理解されるであろう。当業者であれば、不活性化方法が、様々な病原体の遺伝子材料を対象とすること、一方で、酸素低減化が、例えば、血液製剤の赤血球成分の溶血を低減化すること、そうでなければ、血液の質を改善すること、を認識するであろう。

【0057】

本明細書に従う複数の態様では、本方法は、溶血低減化および寄生虫の不活性化を提供する。本明細書のいくつかの態様では、寄生虫は、プラスモジウム・ファルシパラム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）（マラリア）、トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）（シャガス病）、レイシュマニア・メキシカニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍｅｘｉｃａｎａ）、リーシュマニア・メジャー（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍａｊｏｒ）、リーシュマニア・インファンタム（ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｉｎｆａｎｔｕｍ）（リーシュマニア症）、バベシア・ミクロティ（Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ）、およびバベシア・ディバジェンズ（Ｂａｂｅｓｉａ ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）（バベシア症）を含む。いくつかの態様では、不活性化病原性細菌は、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・クロアエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、シュードモナス・アエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）、セラチア・マルセッシンズ（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・エピダーミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、リステリア・モノサイトジェネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ピオジーンズ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、およびアシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）を含み得る。

【0058】

本開示の方法は、病原体処理後の赤血球の溶血低減化を提供および包含する。酸素低減化血液または酸素および二酸化炭素低減化血液に適用される病原体低減化法は、有意に低減化したレベルの溶血をもたらす。酸素低減化血液または酸素および二酸化炭素低減化血液に適用される病原体低減化法は、有意に低減化したレベルの微小粒子をもたらす。病原体低減化法にさらなる酸素低減化工程を組み込むことにより、貯蔵寿命の改善に至る、貯蔵血液の質に改善をもたらす。重要なことに、病原体低減化の既存方法へ血液酸素低減化法を適用することは、有意な改善をもたらす。したがって、本明細書の方法は、当該技術分野で既知の病原体低減化方法に適用され得る。低減化酸素病原体不活性化と両立できる病原体除去のために好適な方法としては、Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、“Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｆｏｒ ＲＢＣ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ” ｉｎ Ｖｏｘ Ｓａｎｇｕｉｎｉｓ，１００：１１２－１２１（２０１１）、Ｐｉｄｃｏｋｅ ｅｔ ａｌ．、“Ｐｒｉｍａｒｙ ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ： ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｖｅｒ ｔｉｍｅ” ｉｎ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，５３：１３７－１４９（２０１３）、Ｈｅｎｓｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．、“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｓ－３０３ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ” ｉｎ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３８：３３－４２（２０１１）、Ｇｕｉｇｎａｒｄ ｅｔ ａｌ．、“Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｎｅｗ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ” ｉｎ Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖｉｅｗｓ、２８： ２３５－２４１（２０１４）、Ｐｉｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．、“Ｃｕｒｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｌｏｏｄ－ｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ： ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗ” ｉｎ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ、１１：３４３－３４８（２０１４）、Ｉｒｓｃｈ ｅｔ ａｌ．、“Ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｎｄ ｐｌａｓｍａ ｂｌｏｏｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＩＮＴＥＲＣＥＰＴ Ｂｌｏｏｄ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）” ｉｎ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３８：１９－３１（２０１０）、およびＫｉｎｇ，ｅｔ ａｌへの１９９２年６月９日発行の米国特許第５，１２０，６５９号 において議論されている方法が挙げられるが、これらに限定されない。

【0059】

この方法は、０．８％未満の、または特定の態様では、１．０％未満の、溶血レベルを維持することによって、病原体不活性化後の許容可能な貯蔵時間の延長をもたらす、溶血低減化を提供する。一態様では、溶血は、嫌気性条件下で１４日間の貯蔵後、０．２％以下である。一態様では、溶血は、嫌気性条件下で２１日間の貯蔵後、０．４％以下である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で２８日間の貯蔵後、０．５％以下である。さらなる一態様では、溶血は、嫌気性条件下で３５日間の貯蔵後、０．８％以下である。他の態様では、溶血は、嫌気性条件下で４２日間の貯蔵後、０．８％以下である。他の態様では、溶血は、嫌気性条件下で４９日間の貯蔵後、０．８％以下である。いくつかの態様では、溶血は、嫌気性条件下で３５日間の貯蔵後、１．０％以下である。他の態様では、溶血は、嫌気性条件下で４２日間の貯蔵後、１．０％以下である。他の態様では、溶血は、嫌気性条件下で４９日間の貯蔵後、１．０％以下である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で１４日間の貯蔵後、０．１％以下である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で１４日間の貯蔵後、０．０１～０．２％である。一態様では、溶血は、嫌気性条件下で２１日間の貯蔵後、０．２～０．４％である。一態様では、溶血は、嫌気性条件下で２１日間の貯蔵後、０．０５～０．４％である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で２８日間の貯蔵後、０．６％以下である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で２８日間の貯蔵後、０．１～０．４％である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で２８日間の貯蔵後、０．１～０．５％である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で３５日間の貯蔵後、０．４％以下である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で３５日間の貯蔵後、０．１～０．８％である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で３５日間の貯蔵後、０．２～１．０％である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で４２日間の貯蔵後、０．２～０．８％である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で４２日間の貯蔵後、０．２～１．０％である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で４９日間の貯蔵後、０．２～０．８％である。別の態様では、溶血は、嫌気性条件下で４９日間の貯蔵後、０．２～１．０％である。酸素および二酸化炭素低減化血液製剤を用いる病原体の低減化方法は、上記に提供されるような溶血の低減化を提供する。

【0060】

本明細書で提供されるように、本方法は、非酸素低減化赤血球と比較した場合に、病原体処理した酸素低減化赤血球における溶血レベルの低減化を提供する。一態様では、酸素低減条件下での病原体低減化は、非酸素低減化調製物中の病原体低減化において観察される溶血レベルの約３０％をもたらす。一態様では、少なくとも約３０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。一態様では、約３０％の溶血低減化が、嫌気性貯蔵の３５日目に観察される。さらなる一態様では、約３０％の低減化が、嫌気性貯蔵の４２日目に観察される。

【0061】

本明細書で提供されるように、本方法は、非酸素低減化白血球低減化全血（ＬＲＷＢ）と比較した場合に、病原体処理した酸素低減化白血球低減化全血（ＯＲ－ＬＲＷＢ）における溶血レベルの低減化を提供する。一態様では、酸素低減条件下での病原体低減化は、非酸素低減化調製物中の病原体低減化において観察される溶血レベルの約３０％をもたらす。一態様では、少なくとも約３０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。一態様では、約３０％の溶血低減化が、嫌気性貯蔵の３５日目に観察される。さらなる一態様では、約３０％の低減化が、嫌気性貯蔵の４２日目に観察される。

【0062】

いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも２０％である。一態様では、少なくとも約２０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。一態様では、少なくとも２０％の溶血低減化が、嫌気性貯蔵の３５日目に観察される。さらなる一態様では、少なくとも２０％の低減化が、嫌気性貯蔵の４２日目に観察される。いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも２５％である。一態様では、少なくとも２５％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも２５％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも２５％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも３５％である。一態様では、少なくとも３５％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも３５％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも３５％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも４０％である。一態様では、少なくとも４０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも４０％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも４０％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。

【0063】

いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも４５％である。一態様では、少なくとも４５％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも４５％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも４５％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも５０％である。一態様では、少なくとも５０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも５０％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも５０％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。

【0064】

本明細書で提供されるように、本方法は、非酸素低減化赤血球と比較した場合に、病原体処理した酸素および二酸化炭素低減化赤血球における溶血レベルの低減化を提供する。一態様では、酸素および二酸化炭素低減化条件下での病原体低減化は、非酸素および二酸化炭素低減化調製物中の病原体低減化において観察される溶血レベルの約３０％をもたらす。一態様では、少なくとも約３０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。一態様では、約３０％の溶血低減化が、嫌気性貯蔵の３５日目に観察される。さらなる一態様では、約３０％の低減化が、嫌気性貯蔵の４２日目に観察される。

【0065】

本明細書で提供されるように、本方法は、非酸素低減化白血球低減化全血（ＬＲＷＢ）と比較した場合に、病原体処理した酸素および二酸化炭素低減化白血球低減化全血（ＯＲ－ＬＲＷＢ）における溶血レベルの低減化を提供する。一態様では、酸素および二酸化炭素低減化条件下での病原体低減化は、非酸素低減化調製物中の病原体低減化において観察される溶血レベルの約３０％をもたらす。一態様では、少なくとも約３０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。一態様では、約３０％の溶血低減化が、嫌気性貯蔵の３５日目に観察される。さらなる一態様では、約３０％の低減化が、嫌気性貯蔵の４２日目に観察される。

【0066】

いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の、酸素および二酸化炭素枯渇化血液製剤における溶血低減化は、少なくとも２０％である。一態様では、少なくとも２０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。一態様では、少なくとも２０％の溶血低減化が、嫌気性貯蔵の３５日目に観察される。さらなる一態様では、少なくとも２０％の低減化が、嫌気性貯蔵の４２日目に観察される。いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも２５％である。一態様では、少なくとも２５％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも２５％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも２５％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも３５％である。一態様では、少なくとも３５％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも３５％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも３５％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも４０％である。一態様では、少なくとも４０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも４０％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも４０％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。

【0067】

いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の、酸素および二酸化炭素枯渇化血液製剤における溶血低減化は、少なくとも４５％である。一態様では、少なくとも４５％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも４５％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも４５％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。いくつかの態様では、従来の病原体低減化法と比較した場合の溶血低減化は、少なくとも５０％である。一態様では、少なくとも５０％の低減化が、２１日間の嫌気性貯蔵後に観察される。別の態様では、少なくとも５０％の低減化が、３５日間の嫌気性貯蔵後に観察される。さらなる一態様では、少なくとも５０％の低減化が、４２日間の嫌気性貯蔵後に観察される。

【0068】

溶血低減化によって示される赤血球の改善された健康度に起因して、病原体不活性化の前に血液中の酸素レベルを低減化することによって、病原体低減化血液製剤の安全な貯蔵期間（例えば、貯蔵寿命）を延長することができる。理論に限定されるものではないが、貯蔵血液製剤の安全性および有用性は、多数の測定可能なパラメータに反映されると考えられる。そのパラメータの中には、全体の溶血レベルおよび微小粒子レベルがある。したがって、本明細書の方法を使用して観察される溶血低減化および微小粒子形成の低減化は、特徴付けられていないかまたは未知の血液生理学に対して根本的な改善を反映してもよい。

【0069】

病原体処理の前に血液中の酸素を低減化することによって提供される赤血球の改善された初期健康度に起因して、本明細書は、病原体低減化血液製剤の安全な貯蔵期間（例えば、貯蔵寿命）の延長を提供および包含する。本明細書に提供されるように、病原体低減化血液製剤の貯蔵寿命は、１週間以上増大されることができる。一態様では、貯蔵寿命は、２週間まで増大されることができる。他の態様では、貯蔵寿命は、血液が０．８％未満の溶血レベルを保持したままで、３週間まで増大されることができる。

【0070】

上記で提供されるように、様々な病原体低減化法は、１つまたは複数の波長の光で照射する前に血液製剤に添加されるべきより多くの光増感剤の１つを提供する。表１は、多数の好適な光増感剤を示す。本明細書で使用される場合、光増感剤は、反応性生成物、ならびにそれ自体が反応性である光増感剤（例えば、ソラレン関連光増感剤）を含む。

【0071】

【表1】

【0072】

【表2】

【0073】

本明細書に従う複数の態様では、病原体低減化法は、１つまたは複数の光増感剤を含んでもよい。一態様では、光増感剤は、リボフラビンである。本開示の一態様では、リボフラビンの最終濃度は、４０～６０μＭである。別の態様では、リボフラビンの最終濃度は、少なくとも４０μＭである。別の態様では、リボフラビンの最終濃度は、多くても６０μＭである。別の態様では、リボフラビンの最終濃度は、４０～５５μＭである。別の態様では、リボフラビンの最終濃度は、４５～５５μＭである。さらなる一態様では、リボフラビンの最終濃度は、５０～６０μＭである。一態様では、リボフラビンの最終濃度は、５０μＭである。

【0074】

本開示は、病原体レベルを低減化させるために添加された光増感剤を有する、酸素低減化血液製剤の照射を提供、および包含する。本明細書で使用される場合、「照射」という用語は、可視および紫外線波長の両方を使用して血液を照らすことを意味する。

【0075】

本開示の一態様では、リボフラビンを有する酸素低減化血液製剤は、２６５～４００ｎｍで照射される。別の態様では、血液製剤は、３００～４００ｎｍで照射される。別の態様では、血液製剤は、２６５～３５０ｎｍで照射される。酸素低減化血液製剤の照射のために好適な波長は、例えば、表１に提供されるような光増感剤に基づいて、決定される。本明細書によって提供されるように、酸素レベルの低減化は、通常病原体低減化プロセスに起因し、病原体不活性化血液製剤中の赤血球の改善された健康度を反映する、溶血の減少および微小粒子形成の減少をもたらす。

【0076】

本明細書は、３．２～７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射露光量を用いて、リボフラビンを有する酸素低減化血液製剤を照射することを提供、および包含する。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、５～７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射露光量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、５～６．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射露光量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、４～７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射露光量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、少なくとも３．２Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射露光量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、少なくとも５Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射露光量で照射される。さらなる一態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、多くても７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射露光量で照射される。
本開示は、最大１００Ｊ／ｍＬの総放射線量を提供し、および包含した。一態様では、放射線量は、１０～１００Ｊ／ｍＬである。別の態様では、放射線量は、５０～１００Ｊ／ｍＬである。別の態様では、放射線量は、５０～８０Ｊ／ｍＬである。他の態様では、放射線量は、１５０Ｊ／ｍＬ未満である。一態様では、放射線量は、少なくとも２５Ｊ／ｍＬである。他の好適な放射線量は、決定されることができる。

【0077】

本明細書は、貯蔵血液中の微小粒子レベルを低減化させる病原体不活性化方法を提供、および包含する。本明細書に従う態様では、本方法は、酸素低減化血液製剤を得ることと、光増感剤を添加することと、その光増感剤含有酸素低減化血液製剤を照射することと、を含む。特定の態様では、本方法は、照射された光増感剤含有酸素低減化血液製剤をある貯蔵期間にわたって貯蔵することをさらに含む。他の態様では、照射された光増感剤含有酸素低減化血液製剤は、ある貯蔵期間にわたり嫌気性条件下で貯蔵される。

【0078】

本明細書に提供されるように、貯蔵期間は、好気性または嫌気性のいずれかの条件下で最大９週間であってもよく、微小粒子形成の低減化をもたらす。一態様では、好気性または嫌気性のいずれかの条件下での貯蔵期間は、２週間である。別の態様では、好気性または嫌気性のいずれかの条件下での貯蔵期間は、３週間である。さらなる一態様では、好気性または嫌気性のいずれかの条件下での貯蔵期間は、３週間である。本方法は、好気性または嫌気性のいずれかの条件下で４週間の貯蔵期間をさらに提供する。他の態様では、病原体不活性化後の貯蔵期間は、５週間であってもよい。さらに他の態様では、好気性または嫌気性での貯蔵期間は、６週間である。さらなる一態様では、好気性または嫌気性での貯蔵期間は、６週間である。特に、貯蔵期間が延長されるにつれて、血液細胞品質における観察された改善が増大する。理論に限定されるものではないが、微小粒子形成の低減化は、即時に赤血球品質が改善された結果であると考えられる。すなわち、赤血球の品質は、貯蔵前に改善され、微小粒子形成の減少は、その改善の証拠である。赤血球における他の特徴付けられていない変化が、観察された微小粒子低減化の根底にあるかもしれないと、考えられる。

【0079】

本明細書に従う態様では、微小粒子形成の低減化を提供する病原体低減化法は、１つまたは複数の光増感剤を含んでもよい。一態様では、光増感剤は、リボフラビンである。本開示の一態様では、リボフラビンの最終濃度は、４０～６０μＭである。別の態様では、リボフラビンの最終濃度は、少なくとも４０μＭである。別の態様では、リボフラビンの最終濃度は、多くても６０μＭである。別の態様では、リボフラビンの最終濃度は、４０～５５μＭである。別の態様では、リボフラビンの最終濃度は、４５～５５μＭである。さらなる一態様では、リボフラビンの最終濃度は、５０～６０μＭである。一態様では、リボフラビンの最終濃度は、５０μＭである。

【0080】

本開示は、病原体レベルを低減化させ、かつ微小粒子形成を低減化させるために添加された光増感剤を有する、酸素低減化血液製剤の照射を提供、および包含する。本明細書で使用される場合、「照射」という用語は、可視および紫外線波長の両方を使用して血液を照らすことを意味する。

【0081】

本開示の一態様では、リボフラビンを有する酸素低減化血液製剤は、２６５～４００ｎｍで照射され、微小粒子形成の低減化をもたらす。別の態様では、血液製剤は、３００～４００ｎｍで照射される。別の態様では、血液製剤は、２６５～３５０ｎｍで照射される。酸素低減化血液製剤の照射のために好適な波長は、例えば、表１に提供されるような光増感剤に基づいて、決定される。本明細書によって提供されるように、酸素レベルの低減化は、通常病原体低減化プロセスに起因し、病原体不活性化血液製剤中の赤血球の改善された健康度を反映する、微小粒子形成の減少をもたらす。

【0082】

微小粒子形成における低減化は、当該技術分野で既知の方法によって測定され得る。微小粒子形成のための好適な方法としては、Ｓｃｈｕｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｈｕｂｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．、“Ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｌｉｇｈｔ： Ｑｕａｌｉｔｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｌ ｂｌｏｏｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ ｍｅｔｈｏｄ，” Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ５５（４）：８１５－８２３（２０１５））が挙げられる。微小粒子の数の絶対値が決定され得るが、一般に、微小粒子の低減化は対照試料に対して決定される。本明細書において、対照は、非酸素低減化血液製剤を含む。絶対値は、標準値のセットを準備することにより、決定されてもよい。

【0083】

本明細書の方法は、貯蔵血液中の微小粒子形成の低減化を提供する。いくつかの態様では、貯蔵血液は、嫌気性条件下で貯蔵され、このようにして、病原体不活性化プロセスのために得られた酸素低減化状態を維持する。他の態様では、貯蔵血液は、従来の貯蔵条件下で維持される。従来の貯蔵条件では、経時的に酸素の進入が可能であり、ＡＴＰおよび２，３－ＤＰＧへの改善を減少させるが、例えば、従来の貯蔵は、費用を削減し、既存の血液バンク施設の途絶を減少させるかもしれない。しかしながら、ほとんどの態様では、貯蔵は、二酸化炭素を伴うかまたは伴わないかのいずれかの嫌気性条件下で行われ得ることが、望まれる。

【0084】

本明細書に提供されるように、微小粒子形成は、病原体不活性化法を完了する前に、酸素を２５％以下のＳＯ２に低減化することによって減少する。一態様では、微小粒子は、２日後に、同等に処理された好気性試料と比較して、酸素低減化試料において約２倍まで低減化される。本方法は、１週間後に、微小粒子の少なくとも２倍の低減化をさらに提供する。一態様では、微小粒子のレベルは、２週間の貯蔵後に、５倍超まで低減化される。一態様では、微小粒子は、３週間後に９倍まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子の数は、６週間の貯蔵後に、９倍まで低減化される。本方法は、嫌気性条件下での９週間の貯蔵後に、微小粒子形成の少なくとも２倍の低減化を提供する。他の態様では、本方法は、好気性条件下での９週間の貯蔵後に、微小粒子形成の少なくとも２倍の低減化を提供する。

【0085】

また、本方法により、酸素の存在下で実施される病原体低減化方法と比較して、少なくとも３倍の微小粒子形成の低減化も提供される。２～６週間で測定された場合に、微小粒子のレベルは、同様に処理された酸素含有試料と比較して、少なくとも３倍少ないままである。他の態様では、低減化された微小粒子形成は、２週間の貯蔵後に少なくとも５倍の低減化をもたらす。

【0086】

本明細書の態様では、微小粒子形成のレベルは、非病原体処理試料のレベルまで低減化される。したがって、本明細書の方法を使用して、病原体不活性化に起因する微小粒子形成の増加が逆転する。

【0087】

本明細書は、延長された貯蔵寿命を有する、改善された血液組成物を提供、および包含する。一態様では、本開示は、ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４０～６０μＭのリボフラビンを有し、１～２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で９０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有し、２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射された、酸素低減化全血を提供、および包含する。

【0088】

本明細書に従う複数の態様では、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有する全血を含む酸素低減化全血は、２０％未満のＳＯ２を有してもよい。他の態様では、リボフラビン含有病原体低減化血液は、１５％未満のＳＯ２を有してもよい。一態様では、リボフラビン含有酸素低減化血液製剤中のＳＯ２レベルは、１０％未満のＳＯ２を有してもよい。特定の態様では、リボフラビン含有病原体低減化血液は、５％のＳＯ２を有してもよい。本明細書は、５～２０％のＳＯ２を有する酸素低減化全血をさらに提供する。別の態様では、ＳＯ２は、５～２５％であってもよい。別の態様では、ＳＯ２は、５～１５％であってもよい。さらなる一態様では、ＳＯ２は、５～１０％に低減化される。

【0089】

本明細書に従う複数の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、３．２～７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射線量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、５～７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射線量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、５～６．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射線量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、４～７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射線量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、少なくとも３．２Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射線量で照射される。別の態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、少なくとも５Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射線量で照射される。さらなる一態様では、リボフラビンを含有する酸素低減化全血は、多くても７．０Ｊ／ｃｍ²のＵＶ放射線量で照射される。

【0090】

本明細書は、延長された貯蔵寿命を有する、改善された血液組成物を提供、および包含する。一態様では、本開示は、ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４０～６０μＭのリボフラビンを有し、１～２５％の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で２０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有する酸素および二酸化炭素低減化全血であって、その酸素低減化全血が２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射されたものである、酸素および二酸化炭素低減化全血を提供、および包含する。別の態様では、ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４０～６０μＭのリボフラビンを有し、１～２５％の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で２０～４０ｍｍＨｇのｐＣＯ２を有する、酸素および二酸化炭素低減化全血であり、ここで、その酸素低減化全血は、２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射されている。別の態様では、ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４０～６０μＭのリボフラビンを有し、１～２５％の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で４０～７０ｍｍＨｇのｐＣＯ２を有する、酸素および二酸化炭素低減化全血であり、ここで、その酸素低減化全血は、２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射されている。一態様では、ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４０～６０μＭのリボフラビンを有し、１～２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で１０～２０ｍｍＨｇのｐＣＯ２を有する、酸素および二酸化炭素低減化全血であり、ここで、その酸素低減化全血は、２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射されている。別の態様では、ＣＰＤ中で収集された全血を含み、４０～６０μＭのリボフラビンを有し、１～２５％の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で１５ｍｍＨｇ未満のｐＣＯ２を有する、酸素および二酸化炭素低減化全血であり、ここで、その酸素低減化全血は、２６５～４００ｎｍのＵＶ光で照射されている。

【0091】

本明細書の方法は、酸素存在下で行われる病原体低減化方法と比較して、貯蔵血液中の、全血球数（ＣＢＣ）、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上のホスファチジルセリン暴露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度、ならびにそれらの組み合わせを含む群から選択されるパラメータの改善を提供、および包含する。いくつかの態様では、貯蔵血液は、嫌気性条件下で貯蔵され、このようにして、病原体不活性化プロセスのために得られた酸素低減化状態を維持する。他の態様では、貯蔵血液は、従来の貯蔵条件下で維持される。従来の貯蔵条件では、経時的に酸素の進入が可能であり、ＡＴＰおよび２，３－ＤＰＧへの改善を減少させるが、例えば、従来の貯蔵は、費用を削減し、既存の血液バンク施設の途絶を減少させるかもしれない。しかしながら、ほとんどの態様では、貯蔵は、二酸化炭素を伴うかまたは伴わないかのいずれかの嫌気性条件下で行われ得ることが、望まれる。

【0092】

本明細書の方法は、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、を含む、血液製剤の溶血低減化のための方法を提供する。別の態様では、溶血低減化は、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および５～１０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、を含む。他の態様では、溶血低減化は、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、を含む。さらなる一態様では、溶血低減化は、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、および嫌気性条件下で貯蔵すること、を含む。さらなる別の態様では、血液製剤の溶血低減化は、添加剤溶液を血液製剤に混合すること、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、および嫌気性条件下で貯蔵すること、を含む。本明細書の方法はまた、１．０％未満の溶血レベルを維持することによって、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減血液製剤において溶血の低減化も提供する。一態様では、溶血は、０．８％未満である。別の態様では、溶血は、０．２％以下である。さらなる一態様では、溶血は、０．４％以下である。さらなる別の態様では、溶血は、０．６％以下である。別の態様では、溶血は、０．０１～０．２％である。特定の態様では、溶血は、０．２～０．８％である。別の態様では、溶血は、０．２～０．６％である。別の態様では、溶血は、０．５～１．０％である。

【0093】

本明細書の方法は、血液製剤から酸素を除去すること、Ｓ－３０３を０．２ｍＭの最終濃度まで添加すること、およびＧＳＨを２～２０ｍＭの最終濃度まで添加すること、を含む、血液製剤の微小粒子形成の低減化を提供する。別の態様では、微小粒子形成の低減化は、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～１０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、を含む。他の態様では、微小粒子形成の低減化は、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、を含む。さらなる一態様では、微小粒子形成の低減化は、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、および嫌気性条件下で貯蔵すること、を含む。さらなる別の態様では、血液製剤の微小粒子形成の低減化は、添加剤溶液を血液製剤に混合すること、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、および嫌気性条件下で貯蔵すること、を含む。さらなる別の態様では、血液製剤の微小粒子形成の低減化は、添加剤溶液を血液製剤に混合すること、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、血液製剤を遠心分離すること、および嫌気性条件下で貯蔵すること、を含む。本明細書の方法はまた、少なくとも１週間の貯蔵後に微小粒子のレベルを５倍超まで低減化させることによる、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化血液製剤における微小粒子形成の低減化も提供する。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、４倍超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、３倍超まで低減化される。さらなる別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、２倍超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、１０％超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、２５％超まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、１０～５０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に２０～６０％まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、６０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、６０～９０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の保存後に９０～１００％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、８０％超まで低減化される。本明細書の方法はまた、少なくとも３週間の貯蔵後に微小粒子のレベルを５倍超まで低減化させることによる、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化血液製剤における微小粒子形成の低減化も提供する。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、４倍超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、３倍超まで低減化される。さらなる別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、２倍超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、１０％超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、２５％超まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、１０～５０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に２０～６０％まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、６０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、６０～９０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に９０～１００％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、８０％超まで低減化される。本明細書の方法はまた、３週間の貯蔵後に微小粒子のレベルを５倍超まで低減化させることによる、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化血液製剤における微小粒子形成の低減化も提供する。一態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に、４倍超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に、３倍超まで低減化される。さらなる別の態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に、２倍超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に、１０％超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、２５％超まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に、１０～５０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に２０～６０％まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に、６０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に、６０～９０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、３週間の貯蔵後に９０～１００％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、８０％超まで低減化される。本明細書の方法はまた、少なくとも６週間の貯蔵後に微小粒子のレベルを５倍超まで低減化させることによる、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化血液製剤における微小粒子形成の低減化も提供する。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、４倍超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、３倍超まで低減化される。さらなる別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、２倍超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、１０％超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、２５％超まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、１０～５０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に２０～６０％まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、６０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、６０～９０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に９０～１００％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、８０％超まで低減化される。

【0094】

本明細書は、延長された貯蔵寿命を有する、改善された血液組成物を提供、および包含する。一態様では、本開示は、約０．２ｍＭの最終濃度のＳ－３０３を有し、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で９０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有する赤血球を含む酸素低減化赤血球を提供、および包含する。別の態様では、約０．２ｍＭの最終濃度のＳ－３０３および約５～２０ｍＭの最終濃度のＧＳＨを有する赤血球を含む酸素低減化赤血球である。一態様では、酸素低減化赤血球はまた、約０．２ｍＭの最終濃度のＳ－３０３を有し、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）を有し、３７℃で９０ｍｍＨｇ以下のｐＣＯ２を有する赤血球を含む二酸化炭素低減化赤血球である。別の態様では、酸素および二酸化炭素低減化赤血球は、約０．２ｍＭの最終濃度のＳ－３０３および約２～２０ｍＭの最終濃度のＧＳＨを有する赤血球を含む。本明細書はまた、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上へのホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度、からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのパラメータにおいて改善を有する、改善された血液組成物も提供、および包含する。一態様では、改善された血液組成物は、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上へのホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度、からなる群から選択される２つのパラメータにおいて改善を有する。別の態様では、改善された血液組成物は、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上へのホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度、からなる群から選択される３つのパラメータにおいて改善を有する。さらなる一態様では、改善された血液組成物は、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上へのホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度、からなる群から選択される３つのパラメータにおいて改善を有する。さらなる別の態様では、改善された血液組成物は、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上へのホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度、からなる群から選択される４つのパラメータにおいて改善を有する。別の態様では、改善された血液組成物は、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上へのホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度、からなる群から選択される５つのパラメータにおいて改善を有する。別の態様では、改善された血液組成物は、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上へのホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度、からなる群から選択される５～９つのパラメータにおいて改善を有する。

【0095】

本明細書は、病原体のレベルを１０％超まで低減化させることによって、改善された濃度の残存する病原体を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。特定の態様では、残存する病原体の濃度は、２０％超まで低減化される。他の態様では、残存する病原体の濃度は、３０％まで低減化される。別の態様では、残存する病原体の濃度は、４０％超まで低減化される。さらなる別の態様では、残存する病原体の濃度は、６０％超まで低減化される。さらなる一態様では、残存する病原体の濃度は、８０％超まで低減化される。特定の態様では、残存する病原体の濃度は、１０～５０％まで低減化される。他の態様では、残存する病原体の濃度は、５０～９５％まで低減化される。別の態様では、残存する病原体の濃度は、６０～１００％まで低減化される。いくつかの態様では、本明細書は、改善された濃度の残存する病原体を有し、さらにまた低減化された二酸化炭素を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。

【0096】

本明細書は、１．０％未満の溶血レベルを有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。一態様では、溶血は、０．８％未満である。別の態様では、溶血は、０．２％以下である。さらなる一態様では、溶血は、０．４％以下である。さらなる別の態様では、溶血は、０．６％以下である。別の態様では、溶血は、０．０１～０．２％である。特定の態様では、溶血は、０．２～０．８％である。別の態様では、溶血は、０．２～０．６％である。別の態様では、溶血は、０．５～１．０％である。いくつかの態様では、本明細書は、改善された溶血を有し、さらにまた低減化された二酸化炭素を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。

【0097】

本明細書は、改善された変形能を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。特定の態様では、変形能は、５％超だけ増大する。他の態様では、変形能は、１０％超だけ増大する。別の態様では、変形能は、１０～５０％増大する。他の態様では、変形能は、５０％超だけ増大する。いくつかの態様では、本明細書は、改善された変形能を有し、さらにまた低減化された二酸化炭素を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減された改善された血液組成物を提供する。

【0098】

本明細書は、増大されたレベルのＡＴＰを有することにより改善されたレベルのＡＴＰを有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。特定の態様では、ＡＴＰレベルは、１０％超だけ増大する。他の態様では、ＡＴＰレベルは、５～４０％増大する。別の態様では、ＡＴＰレベルは、１週間の貯蔵後に、増大する。他の態様では、ＡＴＰレベルは、２週間の貯蔵後に、増大する。別の態様では、ＡＴＰレベルは、４週間の貯蔵後に、増大する。さらなる別の態様では、ＡＴＰレベルは、５週間の貯蔵後に、増大する。さらなる一態様では、ＡＴＰレベルは、６週間の貯蔵後に、増大する。いくつかの態様では、本明細書は、改善されたＡＴＰレベルを有し、さらにまた低減化された二酸化炭素を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。

【0099】

本明細書は、増大されたレベルの２，３－ＤＰＧを有することにより改善されたレベルの２，３－ＤＰＧを有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。特定の態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、１０％超だけ増大する。他の態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、２０％超だけ増大する。さらなる態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、３０％超だけ増大する。他の態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、５～４０％増大する。別の態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、１週間の貯蔵後に、増大する。他の態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、２週間の貯蔵後に、増大する。別の態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、４週間の貯蔵後に、増大する。さらなる別の態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、５週間の貯蔵後に、増大する。さらなる一態様では、２，３－ＤＰＧのレベルは、６週間の貯蔵後に、増大する。いくつかの態様では、本明細書は、改善された２，３－ＤＰＧレベルを有し、さらにまた低減化された二酸化炭素を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。

【0100】

本明細書は、少なくとも１週間の貯蔵後に微小粒子のレベルを５倍だけ低減化することにより、改善されたレベルの微小粒子を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、４倍超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、３倍超まで低減化される。さらなる別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、２倍超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、１０％超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、２５％超まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、１０～５０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の保存後に２０～６０％まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、６０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、６０～９０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の保存後に９０～１００％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、８０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、１０％超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、２５％超まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、１０～５０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に２０～６０％まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、６０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、６０～９０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に９０～１００％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも３週間の貯蔵後に、８０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、１０％超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、２５％超まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、１０～５０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に２０～６０％まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、６０％超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、６０～９０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に９０～１００％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも６週間の貯蔵後に、８０％超まで低減化される。いくつかの態様では、本明細書は、改善された微小粒子レベルを有し、さらにまた低減化された二酸化炭素を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。

【0101】

本明細書はまた、細胞膜の細胞質ゾル表面に沿ってホスファチジルセリンの非対称分布を維持することによって、細胞膜表面上の改善されたホスファチジルセリン曝露を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。特定の態様では、ホスファチジルセリン発現は、細胞膜を蛍光アネキシン－Ｖで標識し、フローサイトメトリまたは顕微鏡法で定量化することにより、測定されることができる。いくつかの態様では、本明細書は、低減化された二酸化炭素も有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。

【0102】

本明細書は、３０％未満の％ＳＯ２を有することにより改善されたレベルの％ＳＯ２を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。一態様では、％ＳＯ２は、２５％未満である。別の態様では、％ＳＯ２は、２０％未満である。さらなる別の態様では、％ＳＯ２は、２０％未満である。さらなる一態様では、％ＳＯ２は、１０％未満である。別の態様では、％ＳＯ２は、５％未満である。特定の態様では、％ＳＯ２は、５～２０％である。他の態様では、％ＳＯ２は、３～１５％である。いくつかの態様では、本明細書は、低減化された二酸化炭素も有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。

【0103】

本明細書は、３時間の病原体不活性化プロセスの後に低減化されたレベルのＳ－３０３を有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。一態様では、Ｓ－３０３のレベルは、６時間の病原体不活性化プロセスの後に低減化される。別の態様では、Ｓ－３０３のレベルは、９時間の病原体不活性化プロセスの後に低減化される。さらなる別の態様では、Ｓ－３０３のレベルは、１２時間の病原体不活性化プロセスの後に低減化される。さらなる一態様では、Ｓ－３０３のレベルは、２４時間の病原体不活性化プロセスの後に低減化される。いくつかの態様では、本明細書は、低減化された二酸化炭素も有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化された改善された血液組成物を提供する。

【0104】

本明細書の方法は、赤血球から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、を含む、血液製剤中のＳ－３０３の病原体不活性化の効能の改善を提供する。別の態様では、Ｓ－３０３の病原体不活性化の効能に対する改善は、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～１０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、を含む。他の態様では、血液製剤中のＳ－３０３の病原体不活性化の効能に対する改善は、血液製剤から酸素および二酸化炭素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、および２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、を含む。さらなる一態様では、血液製剤中のＳ－３０３の病原体不活性化の効能に対する改善は、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、および嫌気性条件下で貯蔵すること、を含む。さらなる別の態様では、血液製剤中のＳ－３０３の病原体不活性化の効能に対する改善は、添加剤溶液を血液製剤に混合すること、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、および嫌気性条件下で貯蔵すること、を含む。特定の態様では、Ｓ－３０３の病原体不活性化の効能に対する改善は、残存する病原体の濃度を１０％超まで低減化することによる。特定の態様では、残存する病原体の濃度は、２０％超まで低減化される。他の態様では、残存する病原体の濃度は、３０％まで低減化される。別の態様では、残存する病原体の濃度は、４０％超まで低減化される。さらなる別の態様では、残存する病原体の濃度は、６０％超まで低減化される。さらなる一態様では、残存する病原体の濃度は、８０％超まで低減化される。特定の態様では、残存する病原体の濃度は、１０～５０％まで低減化される。他の態様では、残存する病原体の濃度は、５０～９５％まで低減化される。別の態様では、残存する病原体の濃度は、６０～１００％まで低減化される。

【0105】

さらなる別の態様では、血液製剤の微小粒子形成の低減化は、添加剤溶液を血液製剤に混合すること、血液製剤から酸素を除去すること、０．２ｍＭの最終濃度までＳ－３０３を添加すること、２～２０ｍＭの最終濃度までＧＳＨを添加すること、血液製剤を遠心分離すること、および嫌気性条件下で貯蔵すること、を含む。特定の態様では、血液製剤における微小粒子形成の低減化は、少なくとも１週間の貯蔵後に微小粒子のレベルを５倍まで低減化することを含む。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、４倍超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、３倍超まで低減化される。さらなる別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、２倍超まで低減化される。一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、１０％超まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、２５％超まで低減化される。さらなる一態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の貯蔵後に、１０～５０％まで低減化される。別の態様では、微小粒子のレベルは、少なくとも１週間の保存後に２０～６０％まで低減化される。

【0106】

本明細書は、プールされた血液試料と比較した場合に、貯蔵血液中の、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上のホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度からなる群から選択される改善されたパラメータを有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化血液組成物を提供する。特定の態様では、貯蔵血液中の、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上のホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度は、上述のとおりである。

【0107】

本明細書は、酸素存在下で実施される病原体低減化法を有する血液ユニットと比較した場合に、貯蔵血液中の、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、変形能、微小粒子形成、細胞膜表面上のホスファチジルセリン曝露、％ＳＯ２、およびＳ－３０３の分解反応速度を含む群から選択される改善されたパラメータを有する、Ｓ－３０３病原体不活性化および酸素低減化血液を提供する。

【0108】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「包含する（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「包含している（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する」という用語およびそれらの活用形は、「含むがこれらに限定されない」ということを意味する。

【0109】

「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語は、「含みかつそれらに限定される」ということを意味する。

【0110】

「から本質的になる」という用語は、さらなる成分、工程、および／または部品が、特許請求される組成物、方法、または構造の基本的および新規の特徴を実質的に改変しない場合にのみ、組成物、方法、または構造が、さらなる成分、工程、および／または部分を含んでもよいことを意味する。

【0111】

本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別段明確に指示しない限り、複数の参照を含む。例えば、「１つの化合物」または「少なくとも１つの化合物」という用語は、それらの混合物を含む、複数の混合物を含んでもよい。

【0112】

本開示は特定の態様を参照して説明されているが、本開示の範囲から逸脱することなく、様々な変更がなされてもよいこと、相当物はそれらの構成要素で代用されてもよいこと、が、当業者に理解されるであろう。加えて、本開示の範囲から逸脱することなく、特定の状況または材料を本開示の教示に適合させるために、多くの修正がなされてもよい。

【0113】

したがって、本開示は、本開示を実施するために熟慮される最良の形態として開示された特定の態様に限定されないことが意図されるが、本開示は、添付の特許請求の範囲内にある範囲および主旨の範囲内にある全ての態様を含み得ることが意図される。

【実施例0114】

実施例１：血液の収集および試料調製

【0115】

６つのＡＢＯ適合全血ユニットが、収集され、プールされ、表２に示されるように、３つの対で６つの試料に分割される。全血の６ユニット（４５０ｍＬ＋１０％）はＣＰＤ中で収集され、病原体不活性化処理まで冷却トレーに保持される。献血当日（Ｄ₀）、これら６つの全血ユニットがプールされ、分割される。全血の脱酸素化は、以下に記載されるように実施される。表２に示されるように、ユニットは、食塩水またはリボフラビンを用いて処理提供される。試料３および４は、病原体処置および成分の分離、ならびに濃厚赤血球の調製後に、酸素低減化される。試料５および６は、全血状態の時に酸素低減化され、成分の分離および濃厚赤血球の調製の前に、病原体低減化される。リボフラビン含有ユニットは、ＭＩＲＡＳＯＬ（登録商標）全血照射バッグに移され、全てのユニットは冷却トレー上に配置される。献血の２４時間以内に、全血ユニットは、バフィーコート法により処理され、ＳＡＧＭ添加剤溶液の添加後に、赤血球濃縮物が貯蔵される。酸素低減化された赤血球濃縮物は、実施例２に記載のように調製される。

【0116】

【表3】

【0117】

実施例２：全血の収集、白血球低減化、および気体枯渇

【0118】

ＣＰＤ中のプールされ、分割された赤血球ユニット（「血液ユニット」）は、Ｍｉｒａｓｏｌ処理および成分の分離後に、製造元の指示に従って白血球低減化される。

【0119】

各全血ユニット（試料５および６）は、９５％Ｎ₂および５％ＣＯ₂気体の混合物を用いて７００ｍｌ／分の流量で、Ｓｏｒｉｎ Ｄ１００メンブレン人工肺に連結された収集バッグ中の全血への輸送により、酸素枯渇のために処理され、３％未満の％ＳＯ２および７０ｍｍＨｇ（３７℃）のｐＣＯ₂の事前貯蔵を達成する。試料６については、Ｍｉｒａｓｏｌ（登録商標）ディスポーザブルからのＯ₂（リボフラビン溶液を含まない）は、処理前に酸素除去される。各試料の調製直後に、ＡＢＬ９０血液気体レベルは、製造元の指示に従って測定され、ベースラインＳＯ₂およびｐＣＯ₂レベル（例えば、Ｔ₀）を確立する。試料６については、酸素低減化血液は、次いで、Ｍｉｒａｓｏｌ処理バッグに輸送される。リボフラビンを添加した後、それをＭｉｒａｓｏｌ光増感デバイスに配置し、製造元の指示に従って、ＵＶに暴露させる。Ｍｉｒａｓｏｌ処理（試料６）の後、その内容物を元の血液収集バッグに戻し、次いで、標準的なトップボトムバフィーコート法に従って、成分を処理する。分離されたＲＢＣは、取り付けられた白血球低減化フィルタを用いて、白血球低減化され、嫌気性キャニスター中で貯蔵される。試料５については、Ｍｉｒａｓｏｌ処理工程は、上記から省略される。

【0120】

試料３および４については、分離され白血球低減化されたＲＢＣバッグは、９５％Ｎ₂および５％ＣＯ₂気体の混合物を用いて７００ｍｌ／分の流量で、Ｓｏｒｉｎ Ｄ１００メンブレン人工肺に連結され、３％未満の％ＳＯ２および７０ｍｍＨｇ（３７℃）のｐＣＯ₂の事前貯蔵を達成する。各試料の調製直後に、ＡＢＬ９０血液気体レベルは、製造元の指示に従って測定され、ベースラインＳＯ₂およびｐＣＯ₂レベル（例えば、Ｔ₀）を確立する。Ｏ２低減化されたＲＢＣを、元のＲＢＣ貯蔵バッグに戻し入れ、嫌気性キャニスター中で貯蔵する。

実施例３：ＭＩＲＡＳＯＬ（登録商標）病原体低減化

【0121】

試料は、製造元の指示に従って、Ｍｉｒａｓｏｌイルミネーターを用いて処理される。実験は、各データ点において合計ｎ＝５の試料のために、５回繰り返される。

実施例４：嫌気性試験製品の貯蔵

【0122】

輸送バッグ中の、酸素低減化、ならびに酸素および二酸化炭素低減化血液は、メッシュ中に包まれ、ゴムで固定され、かつ４つの吸着剤サシェを有する嫌気性キャニスター（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，ＳＳ－３００）中に置かれる。キャニスターは密封され、窒素ガスを使用して空気を除去する。嫌気性および好気性血液は、１～６℃の血液バンク冷蔵庫内に置かれる。キャニスターゲージは、５±１ｐｓｉの読み取りを確実にするため、毎日モニターされる。２ｐｓｉ未満に低下したキャニスターは、調整される。

実施例５：試料分析

【0123】

２日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日、および４２日目に、上記の実施例に従って調製した６つの試料の各々から、以下の測定が行われる。実験は、各データ点において合計ｎ＝５の試料のために、５回繰り返される。
ａ．試料調製

【0124】

これらの方法は当業者に既知である。赤血球上清は、Ｓｃｈｕｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｈｕｂｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．、“Ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｌｉｇｈｔ： Ｑｕａｌｉｔｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｌ ｂｌｏｏｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ ｍｅｔｈｏｄ”、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ５５（４）：８１５－８２３（２０１５））の方法を用いて、小胞ＭＶ計数のために調製される。個々の試料中の赤血球数、平均血球体積（ＭＣＶ）、および全ヘモグロビンは、ヘマトロジーアナライザー（ＡＤＶＩＡ１２０、Ｓｉｅｍｅｎｓ）にて測定される。ヘマトクリットは、製造元の指示に従って、Ｈｅｔｔｒｉｃｈ ＺｅｎｔｒｉｆｕｇｅｎからのＨＡＥＭＡＴＯＫＲＩＴ ２１０デバイスを使用して、測定される。代謝産物（グルコースおよびラクテート）およびカリウム（Ｋ⁺）は、Ｇｅｍ Ｐｒｅｍｉｅｒ ３０００血液ガスアナライザー（Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて定量化される。ｐＨは、Ｏｒｉｏｎ Ｒｏｓｓ Ｕｌｔｒａ Ｓｅｍｉ－Ｍｉｃｒｏ ｐＨプローブ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、測定される。１日目の測定後、ヘモグロビンおよび血液の気体状態は、Ｇｅｍ Ｐｒｅｍｉｅｒ ３０００血液ガスアナライザー（Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて、測定される（％ＳＯ２、ｐＣＯ２、ｐＨ、Ｋ⁺、グルコース、％Ｈｂ－Ｏ２、％Ｈｂ－ＣＯ、％ｍｅｔ－Ｈｂ、％Ｈｂ）。溶血度は、Ｈａｎ ｅｔ． ａｌ、（２０１０）Ｖｏｘ Ｓａｎｇ；９８：１１６－２３）のＨａｒｂｏｅ法によって測定される。赤血球中のＡＴＰレベルは、赤血球の過塩素酸抽出後にＨＰＬＣによって定量化される。細菌試験は、４２日目に、ＢａｃＴ／ＡＬＥＲＴシステム（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）を用いて実施される。

【0125】

溶血分析の結果は、４に提示される。図４に示されるように、病原体低減化前の酸素低減化は、全ての時点において溶血を大幅に低減化する。赤血球の貯蔵性に対する改善は、より早い時点で見られるが、その改善は１４日目に明白になり始める。

【0126】

微小粒子における相対的低減化を示す微小粒子分析の結果は、図５に提示される。図５に示されるように、病原体低減化前の酸素低減化は、全ての時点において微小粒子の形成を大幅に低減化する。赤血球の貯蔵性に対する改善は、より早い時点で見られるが、その改善は１４日目に明白になり始める。

【0127】

無菌食塩水を伴う対照全血（１平均）、リボフラビンを伴う対照全血（２平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化濃厚ＲＢＣ（３平均）、リボフラビンを伴う酸素低減化ｐＲＢＣ（４平均）、無菌食塩水を伴う酸素低減化全血（５平均）、およびリボフラビンを伴う酸素低減化全血（６平均）の、浸透圧脆弱性（６Ａ）、カリウム（６Ｂ）、総ヘモグロビン（６Ｃ）、酸素飽和度（６Ｄ）、グルコース（６Ｅ）、ラクテート（６Ｆ）およびｐＨ（６Ｇ）の結果。

実施例６：酸素低減化血液についての病原体不活性化方法

【0128】

病原体不活性化のために処理される血液の試料は、まず、Ｓｏｒｉｎ Ｄ１００ メンブレン人工肺（Ｓｏｒｉｎ Ｇｒｏｕｐ，Ａｒｖａｄａ，ＣＯ）に連結され、９５％ Ｎ２および５％ ＣＯ２気体の混合物を用いて７００ｍｌ／分の流速でポンプされる、全血収集バッグに輸送することによって、酸素枯渇のために処理され、２５％未満の％ＳＯ２および約２３℃での約７０ｍｍＨｇのｐＣＯ２の前処理が達成される。抗凝固剤を伴う全血（ＷＢ）の所望の血液成分のために、５００＋／－５０ｍＬの容量が用いられ、添加剤溶液を伴う白血球低減化濃厚赤血球（ＬＲｐＲＢＣ）の所望の血液成分のために、５００＋／－５０ｍＬの容量が用いられ、懸濁された血小板（ＰＬＴ）の所望の血液成分のために、試料は、４００＋／－５０ｍＬの総容量のために組み合わされ、血漿の所望の血液成分のために、各々約２００ｍＬの２ユニットが、４００＋／－５０ｍＬの総容量のために組み合わされる。血液試料は、ポリ塩化ビニル照射バッグ（ＴｅｒｕｍｏＢＣＴ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＣＯ）に輸送され、バッグは満たされ、計算された用量の架橋剤と混合される。次いで、照射バッグは、トレー上に配置され、架橋剤に従って適切な照射源で照射され、表に従って、所定の容量に必要とされる放射線量および所与の架橋剤に必要とされる用量に従って、照射時間が算出される。トレーは、照射中に穏やかに振とうされ、露光期間中、照射源への内容物の均一な露光をもたらす。照射サイクルが完了すると、血液試料は、冷蔵貯蔵のために、照射バッグから嫌気性貯蔵バッグに輸送される。全血試料は、遠心分離および別々の血液成分への分離によって、さらに処理されてもよい。本明細書の方法に好適な病原体不活性化方法としては、表１に提示される方法が挙げられる。

実施例７：血液成分のアフェレーシス収集およびＵＶ処理

【0129】

血液ドナーは、１７ゲージの皮下針を使用して静脈を穿刺することでアクセスされ、アフェレーシスシステムにつながれる。約４５０ｍＬの全血（ＷＢ）が、ドナーからアフェレーシスシステムに吸い出され、遠心分離および血液成分の分離の前に、抗凝固剤と混合される。次いで、分離された赤血球（ＲＢＣ）は、添加剤溶液およびリボフラビンと混合され、続いて、ＵＶ照射チャンバを通過させて、ＵＶ光を照射し、病原体を不活性化し、残存する任意の白血球も不活性化する。ＵＶ照射後、ＲＢＣは別個の貯蔵バッグ中に収集される。次いで、分離されたＰＬＴは、ＰＬＴ添加剤溶液およびリボフラビンと混合され、続いて、ＵＶ照射チャンバを通過させて、ＵＶ光を照射し、病原体を不活性化する。ＵＶ照射後、ＰＬＴは別個の貯蔵バッグ中に収集される。次いで、分離された血漿は、リボフラビンと混合され、続いて、ＵＶ照射チャンバを通過させて、ＵＶ光を照射し、病原体を不活性化する。ＵＶ照射後、血漿は別個の貯蔵バッグ中に収集される。交換液量の０．９％の生理食塩水および結晶質は、瀉血針を取り外す前に、ドナーに戻される。

実施例８：全血のアフェレーシス収集およびＵＶ処理

【0130】

血液ドナーは、１７ゲージの皮下針を使用して静脈を穿刺することでアクセスされ、アフェレーシスシステムにつながれる。約４５０ｍＬの全血（ＷＢ）は、ドナーからアフェレーシスシステムに吸い出され、抗凝固剤およびリボフラビンと混合され、その後、照射チャンバを通過させて、ＵＶ光を照射し、病原体を不活性化し、続いて、遠心分離および血液成分の分離を行う。遠心分離および血液成分の分離後、ＲＢＣは添加剤溶液と混合され、別個の貯蔵バッグ中に収集される。次いで、分離されたＰＬＴは、ＰＬＴ添加剤溶液と混合され、別個の貯蔵バッグ中で収集される。分離された血漿は、別個の貯蔵バッグ中に収集される。交換液量の０．９％の生理食塩水および結晶質は、瀉血針を取り外す前に、ドナーに戻される。

実施例９：病原体不活性化（Ｓ－３０３）処理ＲＢＣの品質の検査

【0131】

添加剤溶液（例えば、ＡＳ３）を伴う白血球低減化濃厚赤血球（ＬＲｐＲＢＣ）の５ユニットが、全血球数（ＣＢＣ）および酸素飽和度（％ＳＯ２）について測定される。５つのユニットは、一緒に２～３リットルの血液バッグ中にプールされて、均質プールを作製する。ＣＢＣおよび％ＳＯ２は、プールされたＬＲｐＲＢＣについて測定される。等量アリコートの３００ｍＬのＬＲｐＲＢＣは、５つの貯蔵容器内に置かれ、Ａ～Ｅとラベルされ、表３に概説されるように処理され、標準的な血液バンク冷蔵庫内で４２日間４℃で貯蔵される。

【0132】

実施例５に記載される方法を使用して、試料Ａ～Ｅのアリコートを、０日目（貯蔵前）、７日目、１４日目、２１日目、および４２日目に収集し、以下のパラメータ、ＣＢＣ、溶血パーセント、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、ＭＶＡを用いる変形能、微小粒子、細胞膜上のホスファチジルセリン（ＰＳ）暴露、％ＳＯ２、ＲＢＣ形態、およびＲＢＣ凝集、について試験する。Ｓ－３０３およびＳ－３００の濃度は、０、３、６、９、１２、および２４時間で収集された試料Ａ～Ｅのアリコートから、測定される。実験は、各データ点において合計ｎ＝５の試料のために、５回繰り返される。

【0133】

データの中心傾向は、平均値および中央値を用いて決定され、データの分散は標準偏差を用いて決定される。

【0134】

【表4】

実施例１０：嫌気性条件下でのＳ－３０３病原体不活性化の効能の検査

【0135】

ＡＳ３添加剤溶液を伴う白血球低減化濃厚赤血球（ＬＲｐＲＢＣ）の５ユニットが、全血球数（ＣＢＣ）および酸素飽和度（％ＳＯ２）について測定される。５つのユニットは、一緒に２～３リットルの血液バッグ中にプールされて、均質プールを作製する。ＣＢＣおよび％ＳＯ２は、プールされたＬＲｐＲＢＣについて測定される。プールされた血液は、製造元の指示に従って、選択された病原体またはモデルウイルスを用いてスパイクされる。等量アリコートの３００ｍＬのＬＲｐＲＢＣは、５つの貯蔵容器内に置かれ、Ａ～Ｅとラベルされ、表３に概説されるように処理される。試料Ｂは、好気性条件下にて、約０．２ｍＭのＳ－３０３および約２～２０ｍＭのグルタチオン（ＧＳＨ）で処理される。試料ＣおよびＤは、各々、酸素低減化の前および後に、約０．２ｍＭのＳ－３０３および約２～２０ｍＭのＧＳＨで処理される。試料Ｅは、ＯＲＢ中で一晩、約０．２ｍＭのＳ－３０３および約２～２０ｍＭのグルタチオン（ＧＳＨ）で処理される。概説される処理の後、全ての試料は、標準的な血液バンク冷蔵庫内に４℃で４２日間貯蔵される。代替的には、試料中のＳ－３００の残存量は、遠心分離および新鮮なＡＳ３の交換により、除去される。

【0136】

実施例５に記載される方法を使用して、試料Ａ～Ｅのアリコートを、０日目（貯蔵前）、７日目、１４日目、２１日目、および４２日目に収集し、以下のパラメータ、ＣＢＣ、残存する病原体の濃度、溶血パーセント、溶血、ＡＴＰ、２，３－ＤＰＧ、ＭＶＡを用いる変形能、赤血球膜上のホスファチジルセリン（ＰＳ）暴露、および％ＳＯ２、について試験する。Ｓ－３０３およびＳ－３００の濃度は、０、３、６、９、１２、および２４時間で収集された試料Ａ～Ｅのアリコートから、測定される。実験は、各データ点において合計ｎ＝５の試料のために、５回繰り返される。

【0137】

データの中心傾向は、平均値および中央値を用いて決定され、データの分散は標準偏差を用いて決定される。様々な試料条件間の差異は、Ｎｅｕｍａｎ－Ｋｅｕｌｓ多重比較試験での分散分析の繰り返し測定を用いて分析され、０．０５未満の確率レベルが有意であると見なされる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図6G】

【手続補正書】

【提出日】2022-10-20

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

最終濃度約０．２ミリモル濃度（ｍＭ）のアムスタリン（Ｓ－３０３）、２５％未満の酸素飽和度（ＳＯ２）、及び３７℃で９０ミリメートル水銀柱（ｍｍＨｇ）以下の二酸化炭素分圧（ｐＣＯ２）を有する、酸素低減化血液製品。

【請求項2】

最終濃度約２～２０ｍＭのグルタチオン（ＧＳＨ）をさらに含む、請求項１に記載の酸素低減化血液製品。

【請求項3】

改善した全血球数（ＣＢＣ）、低減した残存病原体濃度、低減した溶血パーセント、増大したアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）レベル、増大した２，３-ジホスホグリセリン酸（２，３－ＤＰＧ）レベル、改善した赤血球変形能、低減した微小粒子形成、増大したＳＯ２％、及び改善したＳ－３０３の分解反応速度を含む群から選択される少なくとも２つをさらに含む、請求項１に記載の酸素低減化血液製品。

【請求項4】

前記低減した溶血パーセントが０．８％未満である、請求項３に記載の酸素低減化血液製品。

【請求項5】

前記改善した赤血球変形能が、最終濃度約０．２ｍＭのＳ－３０３を含む非酸素低減化血液と比較して、少なくとも１０％大きい、請求項３に記載の酸素低減化血液製品。

【請求項6】

増大したＡＴＰレベルが、最終濃度約０．２ｍＭのＳ－３０３を含む非酸素低減化血液と比較して、少なくとも１０％高い、請求項３に記載の酸素低減化血液製品。

【請求項7】

少なくとも１週間貯蔵後の前記低減した微小粒子形成が、少なくとも１週間貯蔵後の最終濃度約０．２ｍＭのＳ－３０３を含む非酸素低減化血液と比較して、少なくとも４倍低い、請求項３に記載の酸素低減化血液製品。

【請求項8】

前記酸素低減化血液製品が、酸素低減化全血、酸素低減化白血球低減化全血、酸素低減化濃厚赤血球、又は酸素低減化白血球低減化濃厚赤血球である、請求項３に記載の酸素低減化血液製品。

【請求項9】

酸素飽和度（ＳＯ２）が１５％未満である、請求項１に記載の酸素低減化血液製品。

【請求項10】

酸素飽和度（ＳＯ２）が２５％未満であり、３７℃で９０ミリメートル水銀柱（ｍｍＨｇ）以下の二酸化炭素分圧（ｐＣＯ２）を有する、病原体フリー酸素低減化血液製品であって、約０．２ミリモル濃度（ｍＭ）のアムスタリン（Ｓ－３０３）及びＳ－３００を含有し、Ｓ－３００の濃度がＳ－３０３の濃度よりも高い、前記製品。

【請求項11】

Ｓ-３００が、Ｓ－３０３の加水分解物である低毒性副産物であり、Ｓ－３００が脆弱なリンカーを欠く、請求項１０に記載の病原体フリー酸素低減化血液製品。

【請求項12】

Ｓ－３０３の濃度が１０ナノモル濃度（ｎＭ）未満である、請求項１０に記載の病原体フリー酸素低減化血液製品。

【請求項13】

Ｓ－３０３の濃度が無毒性レベルである、請求項１０に記載の病原体フリー酸素低減化血液製品。

【請求項14】

病原体フリー酸素低減化血液製剤が、病原体フリー酸素低減化全血、病原体フリー酸素低減化白血球低減化全血、又は病原体フリー酸素低減化濃厚赤血球である、請求項１０に記載の病原体フリー酸素低減化血液製品。

【請求項15】

Ｓ－３０３を含む非酸素低減化血液製剤と比較して、少なくとも１週間貯蔵後の微小粒子形成が少なくとも４倍低減されていることをさらに含む、請求項１０に記載の病原体フリー酸素低減化血液製品。

【請求項16】

酸素飽和度（ＳＯ２）が１５％未満である、請求項１０に記載の病原体フリー酸素低減化血液製品。

【外国語明細書】