特開 2022-184554 変形性関節症予防用食品組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022184554

(43)【公開日】2022-12-13

(54)【発明の名称】変形性関節症予防用食品組成物

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/10 20160101AFI20221206BHJP

   A61K 35/644 20150101ALI20221206BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20221206BHJP

【ＦＩ】

A23L33/10 ZNA

A61K35/644

A61P19/02

【審査請求】未請求

【請求項の数】3

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021092481

(22)【出願日】2021-06-01

(71)【出願人】

【識別番号】521236483

【氏名又は名称】檜井 栄一

(71)【出願人】

【識別番号】398062998

【氏名又は名称】株式会社秋田屋本店

(71)【出願人】

【識別番号】592207809

【氏名又は名称】森川健康堂株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 博宣

(72)【発明者】

【氏名】檜井 栄一

(72)【発明者】

【氏名】池野 久美子

(72)【発明者】

【氏名】永松 剛

【テーマコード（参考）】

4B018

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B018MD76

4B018ME14

4B018MF01

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB22

4C087NA14

4C087ZA96

(57)【要約】

【課題】変形性関節症を好適に予防する。
【解決手段】変形性関節症予防用食品組成物は、ローヤルゼリー又はその抽出物を有効成分とする。
【選択図】図４

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ローヤルゼリー又はその抽出物を有効成分とすることを特徴とする変形性関節症予防用食品組成物。

【請求項2】

炎症性サイトカインの発現を抑制する請求項１に記載の変形性関節症予防用食品組成物。

【請求項3】

軟骨破壊酵素の産生を抑制する請求項１又は２に記載の変形性関節症予防用食品組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、変形性関節症予防用食品組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

特許文献１は、ローヤルゼリー又はその処理物を有効成分として含有する関節痛及び腰痛改善剤について記載している。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】特開２０１６－１１３４１２号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

加齢に伴い、関節の軟骨とその周囲の組織の損傷による関節炎が発生しやすくなることが知られている。近年、単なる老化に伴う関節痛や腰痛とは異なり、若年層でも発症することのある変形性関節症に対する関心が高まっている。

【0005】

変形性関節症は、股関節や膝関節等を構成する骨や関節軟骨に不具合が生じることで、関節軟骨の減少、骨の変形を来す病気である。病状の進行に伴い関節の痛みや動きに制限が生じ、日常生活にも支障が出る場合がある。加齢や体重増加などをきっかけに関節自体が変性する一次性のものと、他の病気や先天的な要因による二次性のものとに分けられる。変形性関節症の予防に効果を奏する食品組成物を提供することが課題として挙げられる。

【課題を解決するための手段】

【0006】

上記課題を解決するための変形性関節症予防用食品組成物は、ローヤルゼリー又はその抽出物を有効成分とすることを要旨とする。
上記変形性関節症予防用食品組成物について、炎症性サイトカインの発現を抑制することが好ましい。

【0007】

上記変形性関節症予防用食品組成物について、軟骨破壊酵素の産生を抑制することが好ましい。

【発明の効果】

【0008】

本発明の変形性関節症予防用食品組成物によれば、変形性関節症を好適に予防することができる。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】変形性関節症と炎症性サイトカインによる炎症反応との関連を示す模式図。

【図2】変形性関節症モデルマウスの膝関節の顕微鏡写真。

【図3】実施例１のローヤルゼリーと、比較例１の組成物を投与した変形性関節症モデルマウスの膝関節の顕微鏡写真。

【図4】ＯＡＲＳＩスコアによる摩耗状態の評価結果を示す棒グラフ。

【図5】遺伝子発現解析の結果を示す棒グラフ。

【発明を実施するための形態】

【0010】

本発明の変形性関節症予防用食品組成物を具体化した一実施形態を説明する。
本実施形態の変形性関節症予防用食品組成物（以下、単に「食品組成物」ともいう。）は、ローヤルゼリー（以下、「ＲＪ」ともいう。）又はその抽出物を有効成分とする。なお、以下では、変形性関節症を、単にＯＡともいうものとする。

【0011】

＜ＲＪについて＞
ＲＪは、ミツバチの若い働き蜂が花粉や蜂蜜を食べ、体内で分解し、合成して、上顎と下顎の咽頭腺や大腮腺から分泌する乳白色のクリーム状の物質である。女王蜂となる幼虫や、成虫となった女王蜂に給餌される食物であり、広義には、働き蜂となる若齢幼虫に給餌される食物であるワーカーゼリーを含む。

【0012】

ＲＪの種類は、特に制限されない。例えば、ＲＪを採取した後、不純物を濾過した生ＲＪ、生ＲＪを乾燥させて粉末化したＲＪ粉末、溶媒を用いて抽出したＲＪの抽出物、酵素を利用してＲＪに含まれるたんぱく質を分解した酵素分解ＲＪ等が挙げられる。

【0013】

ＲＪの抽出物の作製に用いられる溶媒としては、特に制限されず、例えば水や有機溶媒を挙げることができる。有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、アセトン等が挙げられる。さらに、ＲＪやＲＪの抽出物を、公知の分離、精製手段で精製したものであってもよい。

【0014】

ＲＪには、タンパク質、フルクトースやグルコース等の単糖類、ポリサッカライド等の多糖類、脂質、ビタミン、ミネラル等が広く含まれている。
ＲＪに含まれる上記各成分の含有量は特に制限されない。例えば生ＲＪは、タンパク質を１０質量％以上２０質量％以下含有することが好ましく、１２質量％以上１６質量％以下含有することがより好ましい。

【0015】

また、上記単糖類や多糖類等の糖類を、合計で１１質量％以上２０質量％以下含有することが好ましく、１４質量％以上１７質量％以下含有することがより好ましい。
また、単糖類として、グルコースを３質量％以上１０質量％以下含有することが好ましく、４質量％以上８質量％以下含有することがより好ましい。

【0016】

また、フルクトースを４質量％以上１２質量％以下含有することが好ましく、６質量％以上９質量％以下含有することがより好ましい。
また、脂質を２質量％以上６質量％以下含有することが好ましく、３質量％以上５質量％以下含有することがより好ましい。なお、生ＲＪは、一般に、水分を６０質量％以上７０質量％以下程度含有している。

【0017】

食品組成物は、本発明による効果を妨げない限り、他の成分を更に含有していてもよい。他の成分としては、食品として許容される成分が挙げられる。
食品として許容される成分の具体例としては、例えば溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、酸味料、甘味料、苦味料、ｐＨ調整剤、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、固着剤、分散剤、流動性改善剤、湿潤剤、香科、調味料、風味調整剤等が挙げられる。

【0018】

食品組成物の形態としては特に制限されず、例えば、液状、粉末状、フレーク状、顆粒状、ペースト状、打錠状等が挙げられる。上記液状としては、飲料、スープ、カレー等が挙げられる。上記粉末状としては、粉末飲料、粉末スープ等が挙げられる。

【0019】

食品組成物の形態としては、より具体的には、調味料（甘味料、食塩代替組成物、醤油、酢、味噌、ソース、ケチャップ、ドレッシング、スパイス、ハーブ、フレーク（ふりかけ、炊飯添加剤等）、焼き肉のたれ、ルーペースト（カレールーペースト等））、食材プレミックス品等が挙げられる。

【0020】

さらに、食品組成物の形態としては、タブレット菓子、ゼリー類、スナック類、焼き菓子、揚げ菓子、ケーキ類、チョコレート、ガム、飴、グミ等の菓子類、麺類、ハム・ソーセージ、アイスクリーム、豆腐、チーズ、ヨーグルト等も挙げられる。

【0021】

＜変形性関節症と炎症反応との関連について＞
本実施形態の食品組成物は、炎症性サイトカインの発現を抑制するものであることが好ましい。

【0022】

図１に示すように、ＯＡを発症すると、関節内にＩＬ－１β等の炎症性サイトカインが大量に発生することが知られている。炎症性サイトカインは、生理活性物質であるサイトカインの一種である。炎症性サイトカインは、体内の炎症反応を促進する働きを有している。そのため、関節内に炎症性サイトカインが大量に発生すると、関節内の細胞に炎症反応が生じて軟骨の破壊が引き起こされる。これに伴い、ＯＡが進展する。

【0023】

本実施形態の食品組成物が、炎症性サイトカインの発現を抑制するものであることにより、関節内の炎症反応を抑制することができる。これにより、ＯＡの進展を抑制することができる。さらに、炎症性サイトカインの発現を抑制することによって、ＯＡ自体の発症を予防することも可能になる。

【0024】

炎症性サイトカインの具体例としては、例えばＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＴＧＦ－β、ＴＨＦ－α等が挙げられる。なお、図１は、Ｚｓｕｚｓａ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｉｇｎａｌ．（２０１９）から抜粋した。

【0025】

＜変形性関節症と軟骨破壊酵素との関連について＞
本実施形態の食品組成物は、軟骨破壊酵素の産生を抑制するものであることが好ましい。軟骨破壊酵素は、タンパク質のペプチド結合を切断する酵素である。軟骨の主成分であるコラーゲンやプロテオグリカン等を分解することが知られている。関節内に軟骨破壊酵素が産生すると、関節内の軟骨が破壊されてＯＡを発症しやすくなる。

【0026】

本実施形態の食品組成物が、軟骨破壊酵素の産生を抑制するものであることにより、軟骨破壊酵素による軟骨の破壊を抑制することができる。これにより、ＯＡを予防することが可能になる。仮にＯＡを発症したとしても、ＯＡの進展を抑制することができる。

【0027】

軟骨破壊酵素の具体例としては、例えばＡｄａｍｔｓ－５、Ａｄａｍｔｓ－１３等のＡｄａｍｔｓファミリータンパク質や、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－３等のＭＭＰファミリータンパク質等が挙げられる。

【0028】

＜食品組成物の分類、用途について＞
食品組成物の分類としては、特に制限されず、一般食品や保健機能食品、特別用途食品等に使用することができる。また、保健機能食品としては、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品等に使用することができる。

【0029】

食品組成物の用途を付す場合、各種法律、施行規則、ガイドライン等によって定められた表示が挙げられる。用途の表示には、例えば包装、容器等のパッケージへの表示の他、パンフレット等の広告媒体への表示も含まれる。

【0030】

本実施形態の用途の表示としては、例えば、「変形性関節症の予防」、「変形性関節症の改善」、「膝が痛くなりにくい」、「膝の痛みを和らげる」等の表示や、これらを示唆する表示が挙げられる。

【0031】

本実施形態の作用及び効果について説明する。
（１）本実施形態の食品組成物は、ローヤルゼリー又はその抽出物を有効成分とする。したがって、ＯＡを好適に予防することができる。

【0032】

（２）食品組成物は、炎症性サイトカインの発現を抑制するものである。予め、本実施形態の食品組成物を摂取することにより、ＯＡの要因となる炎症反応を抑制することができる。したがって、ＯＡの予防に貢献することができる。また、仮にＯＡを発症したとしても、ＯＡの進展を抑制することができる。

【0033】

（３）食品組成物は、軟骨破壊酵素の産生を抑制するものである。予め、本実施形態の食品組成物を摂取することにより、ＯＡの要因となる軟骨の減少を抑制することができる。したがって、ＯＡの予防に貢献することができる。また、仮にＯＡを発症したとしても、ＯＡの進展を抑制することができる。

【0034】

本実施形態は、以下のように変更して実施することができる。本実施形態及び以下の変更例は、技術的に矛盾しない範囲で互いに組み合わせて実施することができる。
本実施形態の食品組成物の用途は、食品に限定されない。例えば、医薬品、医薬部外品、化粧品としても使用することができる。

【実施例0035】

以下に実施例を挙げ、本実施形態をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）
実施例１として、表１に示す組成を有するＲＪを用いた。ＲＪの水分量は、６７質量％であった。

【0036】

【表1】

（比較例１）
比較例１として、表２に示す組成を有する組成物（以下、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」ともいう。）を用いた。Ｃｏｎｔｒｏｌは、市販の各成分を用いて、表２の含有量となるように混合して調製した。Ｃｏｎｔｒｏｌの水分量は、６７質量％であった。

【0037】

【表2】

＜ＯＡ進展度の評価＞
（手順）
モデルマウス（７週齢の雄、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊ）に、実施例１のＲＪを経口投与した。同様に、別のモデルマウス（７週齢の雄、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊ）に、比較例１のＣｏｎｔｒｏｌを経口投与した。具体的には、マウスの体重当たり２ｇ／ｋｇの量を毎日投与し、８週間継続した。実施例１は、モデルマウスのｎ数を１１とした。比較例１は、モデルマウスのｎ数を１２とした。

【0038】

経口投与の開始から１週間後に、モデルマウスの右膝の半月板を切り、ＯＡモデルマウスを作製した。ＯＡモデルマウスの作製方法は、特に制限されないが、例えば以下の論文（Ｉｅｚａｋｉ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．（２０１６））に記載された方法に基づいて行うことができる。なお、モデルマウスの左膝を参考（以下、「Ｓｈａｍ」ともいうものとする。）とした。

【0039】

図２に、ＯＡモデルマウスの膝関節の顕微鏡写真を示す。上側が大腿骨、下側が脛骨である。大腿骨は、図２では下側が凸となる半球状に示されており、下端部の破線で囲まれた箇所に軟骨を有する。脛骨は、上側が凸となる半球状に示されており、上端部に軟骨を有している。大腿骨と脛骨の周囲に半月板が位置する。

【0040】

図２に示すように、半月板の一部が切られて、大腿骨の軟骨が脛骨の軟骨に接触している。これにより、メカニカルストレスが付与されるため、疑似的にＯＡを再現することができる。

【0041】

経口投与開始から９週間後、言い換えれば、ＯＡモデルマウスの作製から８週間後に、ＯＡモデルマウスの膝関節を解剖した。サフラニンＯ染色を行って膝関節の顕微鏡写真を撮影した。

【0042】

（評価）
図３に、実施例１のＲＪ、比較例１のＣｏｎｔｒｏｌを投与したＯＡモデルマウスの膝関節の顕微鏡写真を示す。

【0043】

図３に示すように、比較例１のＣｏｎｔｒｏｌを投与したＯＡモデルマウスでは、Ｓｈａｍの軟骨の厚さ（Ｈ１、Ｈ２）に比べてＯＡモデルマウスの軟骨の厚さ（Ｈ３、Ｈ４）が薄くなっており、軟骨が摩耗していることが確認された。また、大腿骨の軟骨に相対的に大きな凹部（矢印Ａ参照）が観察された。

【0044】

これに対し、実施例１のＲＪを投与したＯＡモデルマウスでは、Ｓｈａｍの軟骨の厚さ（Ｓ１、Ｓ２）に比べてＯＡモデルマウスの軟骨の厚さ（Ｓ３、Ｓ４）は若干薄くなっているものの、比較例１の厚さ（Ｈ３、Ｈ４）よりも厚いことが確認された。また、大腿骨と脛骨の両方において、大きな凹凸は観察されず、軟骨は、比較的滑らかな半球状を維持していた。これらより、実施例１では軟骨の摩耗が抑制されている、もしくは軟骨の再生が促されていることが確認された。

【0045】

次に、実施例１、比較例１の顕微鏡写真を用いて、大腿骨と脛骨の摩耗状態を点数化した。具体的には、国際変形性関節症学会提唱の基準であるＯＡＲＳＩスコアに基づいて摩耗状態を点数化した。ＯＡＲＳＩスコアでは、０、０．５、１、２、３、４、５、６の合計８段階で摩耗状態を評価する。点数が最も小さい０は、摩耗が見られない状態を意味し、点数が大きくなるにつれて摩耗状態が進行していることを意味する。結果を図４に示す。なお、図４の各棒グラフの点数は、各棒グラフの下に示すｎ数のモデルマウスにおけるＯＡＲＳＩスコアの平均値を意味する。

【0046】

図４に示すように、大腿骨と脛骨の両方において、ＯＡモデルマウスでは、比較例１のＣｏｎｔｒｏｌの点数が１を超えていた。これに対し、実施例１のＲＪでは、Ｓｈａｍよりは高い点数であるものの、１未満に抑えられていた。以上のように、ＯＡＲＳＩスコアからも、ＯＡによる軟骨の摩耗が抑制されていること、もしくは軟骨の再生が促されていることが確認された。

【0047】

なお、Ｓｈａｍでは、大腿骨と脛骨の両方において、比較例１と実施例１との間に有意差は無かった。
＜各種サイトカインに対するＲＪの効果の評価＞
（試験例１）
マウス軟骨前駆体細胞（以下、「ＡＴＤＣ５」ともいうものとする。）として、ＲＩＫＥＮ細胞バンクより分譲されたものを用いた。細胞は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２ １：１培地（富士フィルム和光純薬株式会社製）にウシ胎児血清（オーストラリア産、Ｂｉｏｗｅｓｔ社製）（以下、「ＦＢＳ」ともいう。）を５％添加した培地を用いた。２．５×１０^５個の細胞を播種して、３７℃、ＣＯ_２濃度５％の条件下で培養した。

【0048】

培養開始から２４時間経過後に、軟骨細胞分化誘導用試薬であるＩＴＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を１％添加して、軟骨細胞への分化誘導を行った。２～３日に一度、培地交換を行った。なお、ＩＴＳは、インスリン：１０００ｍｇ／Ｌ、トランスフェリン：５５０ｍｇ／Ｌ、亜セレン酸ナトリウム：０．６７ｍｇ／Ｌを含有したものを使用した。

【0049】

培養開始から７日後に、ＤＭＥＭ／Ｆ１２ １：１培地にＦＢＳを１％添加した培地とした。その後、実施例１のＲＪを培地の体積当たり２．５ｍｇ／ｍＬ加えた。
実施例１のＲＪを加えてから１４時間経過後、サイトカイン（ＩＬ－１β：Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、ＴＧＦ－β：富士フィルム和光純薬株式会社製、ＴＮＦ－α：Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社製）を培地の体積当たり１０ｎｇ／ｍＬ加えた。なお、サイトカインは、ＩＬ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－αをそれぞれ個別に使用した。

【0050】

サイトカインを培地に加えてから所定時間経過後（ＩＬ－１β：６時間後、ＴＧＦ－β：４時間後、ＴＮＦ－α：９時間後）、日本ジェネティクス株式会社製のリアルタイムＰＣＲ検査キットを用いて、遺伝子発現解析を行った。なお、遺伝子発現解析では、炎症性サイトカインであるＩＬ－６と、軟骨基質分解酵素であるＡｄａｍｔｓ－５の発現量を評価した。

【0051】

ＰＣＲのプライマーは以下のものを使用した。
（プライマーの配列）
ＩＬ－６遺伝子増幅用のプライマーは以下の配列を有するものを用いた。

【0052】

ＩＬ－６（フォワード）：ＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＧＡＴＡＧＴＣＡＡＴＴＣＣＡ
ＩＬ－６（リバース）：ＴＣＡＣＣＡＧＣＡＴＣＡＧＴＣＣＣＡＡＧ
Ａｄａｍｔｓ－５遺伝子増幅用のプライマーは以下の配列を有するものを用いた。

【0053】

Ａｄａｍｔｓ－５（フォワード）：ＧＣＡＡＡＡＧＡＧＣＣＣＡＧＡＧＴＧＡＡ
Ａｄａｍｔｓ－５（リバース）：ＴＣＣＡＣＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＴＡＧＡＴＧ
（試験例２）
上記試験例１において、培養開始から７日後に、ＤＭＥＭ／Ｆ１２ １：１培地にＦＢＳを１％添加した培地にはせず、且つ、実施例１のＲＪを加えなかったこと以外は、試験例１と同様の手順により軟骨細胞分化誘導を行った。また、試験例１と同様の手順でサイトカインを培地に加えてから、遺伝子発現解析を行った。

【0054】

（評価）
遺伝子発現解析の結果を図５に示す。
図５において、試験例１による結果をＲＪ、試験例２による結果をＶｅｈｉｃｌｅとして示す。

【0055】

図５では、試験例２のＶｅｈｉｃｌｅに、ＩＬ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－αを個別に加えた際の、ＩＬ－６、又はＡｄａｍｔｓ－５の遺伝子発現の強さを１００として示す。そして、試験例１のＲＪを加えた軟骨細胞に、上記３種類の炎症性サイトカインを個別に加えた際の、ＩＬ－６、又はＡｄａｍｔｓ－５の遺伝子発現の強さを相対的に示している。

【0056】

図５より、試験例１のＲＪを加えた軟骨細胞では、上記３種類の炎症性サイトカインを加えた全ての場合において、ＩＬ－６とＡｄａｍｔｓ－５の遺伝子発現の強さが、試験例２よりも抑制されていることが確認された。試験例１のＲＪを加えた軟骨細胞では、ＩＬ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α等の炎症性サイトカインの炎症反応を抑制することによって、ＩＬ－６の発現や、Ａｄａｍｔｓ－５の産生を抑制できることが確認された。関節における炎症反応や、軟骨の減少を抑制することにより、ＯＡを好適に予防できることが確認された。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】