特開 2022-184911 胎盤幹細胞を使用する糖尿病性足部潰瘍の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022184911

(43)【公開日】2022-12-13

(54)【発明の名称】胎盤幹細胞を使用する糖尿病性足部潰瘍の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/50 20150101AFI20221206BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20221206BHJP

【ＦＩ】

A61K35/50

A61P17/02

【審査請求】有

【請求項の数】1

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2022143365

(22)【出願日】2022-09-09

(62)【分割の表示】P 2020143608の分割

【原出願日】2015-09-25

(31)【優先権主張番号】62/170,757

(32)【優先日】2015-06-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/220,620

(32)【優先日】2015-09-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/056,008

(32)【優先日】2014-09-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/151,726

(32)【優先日】2015-04-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/145,551

(32)【優先日】2015-04-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ジップロック

２．ＭＡＴＬＡＢ

(71)【出願人】

【識別番号】520169074

【氏名又は名称】セルラリティ インク．

(74)【代理人】

【識別番号】100097456

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 徹

(72)【発明者】

【氏名】スティーブン エー．フィスクコフ

(72)【発明者】

【氏名】デネシュ チトカラ

(72)【発明者】

【氏名】ウリ ヘルツベルグ

(72)【発明者】

【氏名】ウラジミール ジャンコビク

(57)【要約】      （修正有）

【課題】糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）の治療方法を提供する。
【解決手段】糖尿病性足部潰瘍を有する対象を治療する方法であって、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞を含む組成物を、前記対象に投与することを含む、方法である。前記対象が、１つより多い糖尿病性足部潰瘍を有することが好ましく、前記対象が、末梢動脈疾患を有することがさらに好ましい。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

糖尿病性足部潰瘍を有する対象を治療する方法であって、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、Ｃ
Ｄ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞を含む組成物を、前記対象に投与することを含む、
前記方法。

【請求項2】

前記対象が、１つより多い糖尿病性足部潰瘍を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記対象が、末梢動脈疾患を有する、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

胎盤幹細胞を含む前記組成物が、筋肉内投与される、請求項１～３のいずれか１項に記
載の方法。

【請求項5】

前記組成物が、１×１０^５～１×１０^６、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６～５×
１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１０^７、
５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～３×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５×１０
^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、または５×１０^９～１×１０^１０の胎盤幹細
胞を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記組成物が、約１×１０^５、３×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、３×１０^６、５
×１０^６、１×１０^７、３×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、３×１０^８、５×１０^８
、１×１０^９、５×１０^９、または１×１０^１０の胎盤幹細胞を含む、請求項１～４のい
ずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記組成物が、約３×１０^６の胎盤幹細胞を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記組成物が、約１×１０^７の胎盤幹細胞を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記組成物が、約３×１０^７の胎盤幹細胞を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項10】

前記治療が、前記糖尿病性足部潰瘍のサイズの低減をもたらす、請求項１～９のいずれ
か１項に記載の方法。

【請求項11】

前記治療が、前記糖尿病性足部潰瘍の閉鎖をもたらす、請求項１～９のいずれか１項に
記載の方法。

【請求項12】

前記治療が、前記糖尿病性足部潰瘍の１つ以上の症状の改善をもたらす、請求項１～９
のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記１つ以上の症状が、前記対象の足及び／または下腿の傷、潰瘍、または水疱；前記
対象の足（複数可）及び／または下腿の疼痛；歩行困難；前記対象の足（複数可）の変色
；ならびに／または、前記対象の足（複数可）の感染、である、請求項１２に記載の方法
。

【請求項14】

前記治療が、前記糖尿病性足部潰瘍の閉鎖までの時間の増加、前記対象の足関節上腕血
圧比（ＡＢＩ）の改善、前記対象の足趾上腕血圧比（ＴＢＩ）の改善、前記対象の経皮酸
素レベルの改善、前記対象の脈容量記録の改善、主要の切断までの時間の低減、Ｗａｇｎ
ｅｒの評価尺度の改善、Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄの基準の改善、及び／または、前記対象の
脚の安静時疼痛スコアの改善、をもたらす、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

治療の必要な対象のＤＦＵを治療するための方法であって、（ａ）前記対象の血流中を
循環する内皮細胞の数を測定すること；（ｂ）前記対象に、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、Ｃ
Ｄ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞を含む組成物を投与すること；及び、（ｃ）前記胎
盤幹細胞の投与後の、前記対象の血流中を循環する内皮細胞の数を測定すること、を含み
、胎盤幹細胞の投与前の循環内皮細胞の数と比較した、胎盤幹細胞の投与後の循環内皮細
胞の数の減少が、前記対象のＤＦＵの治療が有効であることを示す、前記方法。

【請求項16】

治療の必要な対象のＤＦＵを治療するための方法であって、（ａ）前記対象に、ＣＤ１
０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞を含む組成物を投与すること
；（ｂ）前記胎盤幹細胞の投与後の第１の時点で、前記対象の血流中を循環する内皮細胞
の数を測定すること；及び、（ｃ）前記胎盤幹細胞の投与後の第２の時点で、前記対象の
血流中を循環する内皮細胞の数を測定すること、を含み、前記第１の時点で測定された循
環内皮細胞の数と比較した、前記第２の時点で測定された循環内皮細胞の数の減少が、前
記対象のＤＦＵの治療が有効であることを示す、前記方法。

【請求項17】

前記対象が、前記対象のＤＦＵの治療が有効である場合、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、Ｃ
Ｄ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞を含む組成物の後続の用量を投与される、請求項１
５または１６に記載の方法。

【請求項18】

前記組成物が、１×１０^５～１×１０^６、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６～５×
１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１０^７、
５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～３×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５×１０
^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、または５×１０^９～１×１０^１０の胎盤幹細
胞を含む、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記組成物が、約１×１０^５、３×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、３×１０^６、５
×１０^６、１×１０^７、３×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、３×１０^８、５×１０^８
、１×１０^９、５×１０^９、または１×１０^１０の胎盤幹細胞を含む、請求項１５～１７
のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１４年９月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／０５６，００８
号、２０１５年４月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／１４５，５５１号、２０
１５年４月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／１５１，７２６号、２０１５年６
月４日に出願された米国仮特許出願第６２／１７０，７５７号、及び、２０１５年９月１
８日に出願された米国仮特許出願第６２／２２０，６２０号、に対する優先権を主張し、
これらのそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

１．分野
糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）の治療における、組織培養プラスチック接着性胎盤細胞、
例えば、胎盤幹細胞を使用する方法が、本明細書で提供される。

【背景技術】

【0003】

２．背景
胎盤は特に、魅力的な幹細胞の供給源である。哺乳動物胎盤は、豊富であり、通常は医
療廃棄物として廃棄されるので、医学的に有用な幹細胞の特有の供給源である。

【発明の概要】

【0004】

３．概要
糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）を治療することを、それを必要とする対象において行う方
法が提供され、該方法は、治療的有効量の組織培養プラスチック接着性胎盤細胞、例えば
、胎盤幹細胞、例えば、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細
胞を、対象に投与することを含む。具体的な実施形態では、該胎盤細胞は、医薬組成物と
して製剤化される。

【0005】

具体的な実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療されるＤＦＵを有する
対象は、Ｉ型糖尿病に罹患している。別の具体的な実施形態では、本明細書で提供される
方法に従って治療されるＤＦＵを有する対象は、ＩＩ型糖尿病に罹患している。ある特定
の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される対象は、１つより多いＤ
ＦＵを有し、例えば、対象は、片足に１つより多いＤＦＵ、または各足に少なくとも１つ
のＤＦＵを有する。具体的な実施形態では、対象は、片足または両足の裏に１つ以上のＤ
ＦＵを有する。

【0006】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される対象は、末梢
ニューロパチー、例えば、脚及び／または足の神経のうちの１つ以上への損傷、を有する
。

【0007】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される対象は、対象
の末梢血管系に血液の流れの中断を引き起こす状態のＤＦＵを有する。具体的な実施形態
では、対象は、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）を有する。ある特定の実施形態では、該ＤＦＵが
、ＰＡＤに起因及び／または関連する。具体的な実施形態では、対象は、末梢動脈疾患Ｐ
ＡＤを有しない。

【0008】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法は、本明細書で提供される方法に
従って治療された対象において、ＤＦＵの１つ以上の症状を検出可能に改善することをも
たらす。ＤＦＵの例示的症状としては、脚及び／または下腿の傷、潰瘍、または水疱；脚
（若しくは足）及び／または下腿疼痛；歩行困難；足（または両足）の変色、例えば、足
（または両足）が黒く、青く、及び／または赤く見える：ならびに感染の徴候（例えば、
熱、皮膚の赤み、及び／または腫れ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0009】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法は、改善の１つ以上の徴候におけ
る検出可能な改善のために十分な量及び時間で、ＤＦＵを有する対象に、胎盤幹細胞（例
えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）を投与することを含み、改善の該徴候は、（ｉ）潰
瘍サイズの低減；（ｉｉ）潰瘍閉鎖：ドレナージまたはドレッシングの必要性のない１つ
以上の潰瘍の皮膚閉鎖；（ｉｉｉ）閉鎖後の特定の期間、例えば、閉鎖後２週間、３週間
、４週間、５週間、または６週間、の潰瘍閉鎖の保持；（ｉｖ）潰瘍閉鎖時間の増加；（
ｖ）、対象が静止している間に足首及び腕の血圧を測定し、次に、対象が動いている（例
えば、トレッドミルで歩く）間に繰り返される、ＰＡＤの重症度を予測／評価するために
使用することができる検査である足関節上腕血圧比（ＡＢＩ）の改善；（ｖｉ）足首血圧
ではなく足趾血圧を使用するＡＢＩに類似した検査である足趾上腕血圧比（ＴＢＩ）の改
善；（ｖｉｉ）経皮酸素レベル、すなわち、潰瘍に近い皮膚の下の組織の酸素レベルの改
善（例えば、Ｒｕａｎｇｓｅｔａｋｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ，
２０１０， １９（５）：２０２－６を参照のこと）；（ｖｉｉｉ）血液測定用カフ及
び手持ち式超音波装置が、腕及び脚の動脈血流量についての情報を得るために使用される
非侵襲的血管検査である、脈容量記録の改善；（ｉｘ）大切断、例えば、足首の上での切
断の時間；（ｘ）評価システム：グレード０（潰瘍性病変の前または後）、グレード１（
部分／全層潰瘍）、グレード２（腱または被膜に達する）、グレード３（骨髄炎を伴う深
部）、グレード４（部分的な足の壊疽）、及びグレード５（全足壊疽）、を使用して、潰
瘍の深さ及び骨髄炎または壊疽の存在を評価するＷａｇｎｅｒの評価尺度の改善；（ｘｉ
）７つの分類ステージ、すなわちステージ０：無症状、ステージ１：軽度跛行、ステージ
２：中等度跛行、ステージ３：高度跛行、ステージ４：安静時疼痛、ステージ５：足指の
壊疽を超えない虚血性潰瘍形成、及びステージ６：高度虚血性潰瘍または明らかな壊疽、
を有する、末梢動脈疾患のステージングのために使用されるＲｕｔｈｅｒｆｏｒｄの基準
の改善：ならびに、（ｘｉｉ）脚の安静時疼痛スコア、すなわち０が無痛であり、１０が
最大の疼痛を表す疼痛の０～１０尺度の改善、を含む。

【0010】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法は、例えば、（ｉ）３６項目簡易
健康調査（ＳＦ－３６）（例えば、Ｗａｒｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃａｒ
ｅ ３０（６）：４７３－４８３を参照のこと）；（ｉｉ）糖尿病性足部潰瘍の、生活の
質への影響を測定する糖尿病性足部潰瘍尺度簡易版（ＤＦＳ－ＳＦ）（例えば、Ｂａｎｎ
ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ， ２００３， ２１（１７）
：１２７７－９０を参照のこと）；（ｉｉｉ）経時的なニューロパチーの変化を評価する
ための、変化尺度の患者の全体的印象（例えば、Ｋａｍｐｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．
Ｍａｎ． Ｍａｎｉｐ． Ｔｈｅｒ．， ２００９， １７（３）：１６３－１７０を参
照のこと）；ならびに／または、（ｉｖ）患者の健康状態に対する記述的プロファイル及
び単一の指標値を得るために使用される健康質問票であるＥｕｒｏＱｏｌ５Ｄ（ＥＱ－５
Ｄ（商標））尺度、で評価される場合の対象の生活の質における検出可能な改善のために
十分な量及び時間で、ＤＦＵを有する対象に、胎盤幹細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医
薬組成物）を投与することを含む。

【0011】

本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤
幹細胞を含む医薬組成物）は、注射で投与される。本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の
別の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、治療
されている対象に、胎盤細胞を含むマトリックスまたは足場の該対象への移植により投与
される。

【0012】

本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤
幹細胞を含む医薬組成物）は、筋肉内投与される。本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の
別の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、静脈
内投与される。本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の別の具体的な実施形態では、胎盤細
胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、皮下投与される。本明細書に記載のＤＦ
Ｕの治療方法の別の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組
成物）は、局所投与される。本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の別の具体的な実施形態
では、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、全身投与される。

【0013】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、（例えば、胎盤幹細
胞を含む医薬組成物の一部として）約１×１０^３、３×１０^３、５×１０^３、１×１０^４
、３×１０^４、５×１０^４、１×１０^５、３×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、３×１
０^６、５×１０^６、１×１０^７、３×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、３×１０^８、５
×１０^８、１×１０^９、５×１０^９、または１×１０^１０の胎盤細胞の投与を含む。ある
特定の実施形態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、（例えば、胎盤幹細胞を含
む医薬組成物の一部として）約１×１０^３～３×１０^３、３×１０^３～５×１０^３、５×
１０^３～１×１０^４、１×１０^４～３×１０^４、３×１０^４～５×１０^４、５×１０^４～
１×１０^５、１×１０^５～３×１０^５、３×１０^５～５×１０^５、５×１０^５～１×１０
^６、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×
１０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～
３×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０
^９、または５×１０^９～１×１０^１０の胎盤細胞の投与を含む。具体的な実施形態では、
本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、約３×１０^６の胎盤細胞の投与を含む。別の具体
的な実施形態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、約１×１０^７の胎盤細胞の投
与を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、約３×１
０^７の胎盤細胞の投与を含む。

【0014】

本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の具体的な実施形態では、胎盤幹細胞（例えば、胎
盤幹細胞を含む医薬組成物）は、１週間の投与間隔で１回より多く、対象に筋肉内投与さ
れ、例えば、胎盤細胞は１日目（投与の最初の日）に投与され、胎盤幹細胞（例えば、胎
盤幹細胞を含む医薬組成物）の２回目投与が、１週間後（すなわち、８日目）に投与され
る。別の具体的な実施形態では、方法は、投与のそれぞれの日（すなわち、１日目及び８
日目）の、約３×１０^６の胎盤幹細胞の投与を含む。別の具体的な実施形態では、方法は
、投与のそれぞれの日（すなわち、１日目及び８日目）の、約１×１０^７の胎盤細胞の投
与を含む。別の具体的な実施形態では、方法は、投与のそれぞれの日（すなわち、３日目
及び８日目）の、約３×１０^７の胎盤細胞の投与を含む。別の具体的な実施形態では、胎
盤細胞は、約１週間の投与間隔で少なくとも３つの異なる機会に、対象に投与される。別
の具体的な実施形態では、胎盤幹細胞が投与される対象は、ＰＡＤを有する。

【0015】

本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の別の具体的な実施形態では、胎盤幹細胞（例えば
、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、１ヶ月の投与間隔で１回より多く、対象に投与され
、例えば、胎盤細胞は１日目（投与の最初の日）に投与され、胎盤幹細胞（例えば、胎盤
幹細胞を含む医薬組成物）の２回目投与が、約１ヶ月後（例えば、２７、２８、２９、３
０、３１、３２、または３３日目）に投与される。具体的な実施形態では、方法は、投与
のそれぞれの日における約３×１０^６の胎盤幹細胞の投与を含む（例えば、３×１０^６胎
盤幹細胞が１日目に投与され、約３×１０^６胎盤幹細胞が１日目から１ヶ月後に、例えば
、２７、２８、２９、３０、３１、３２、または３３日目に投与される）。別の具体的な
実施形態では、方法は、投与のそれぞれの日における約３×１０^７の胎盤細胞の投与を含
む（例えば、３×１０^７胎盤幹細胞が１日目に投与され、約３×１０^７胎盤幹細胞が１日
目から１ヶ月後に、例えば、２７、２８、２９、３０、３１、３２、または３３日目に投
与される）。別の具体的な実施形態では、胎盤細胞は、約１ヶ月の投与間隔で少なくとも
３つの異なる機会に、対象に投与される。別の具体的な実施形態では、胎盤幹細胞が投与
される対象は、ＰＡＤを有する。

【0016】

ある特定の実施形態では、対象の治療の有効性を評価するための手段として、本明細書
に記載のＤＦＵを治療する方法に従って治療される対象の循環内皮細胞の数が測定される
。本明細書で提供される方法に従って治療される対象の循環内皮細胞の数は、治療中の任
意の時、または治療開始前に測定することができる。例えば、ある特定の実施形態では、
本明細書で提供される方法に従って治療される対象の循環内皮細胞の数は、（ｉ）治療開
始前に（すなわち、胎盤幹細胞が、ＤＦＵを有する対象に投与される前に）、例えば、胎
盤幹細胞の投与の日（であるが、投与前）に、治療の開始の１、２、３、４、５、６、７
、８、９、若しくは１０日前に、または治療開始の１、２、３、４、若しくは５週後に、
または治療開始の１、２、３、４、５、若しくは６ヶ月後に、及び、（ｉｉ）治療中に、
例えば、治療開始の１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０日後に、治療開
始の１、２、３、４、若しくは５週後に、または治療開始の１、２、３、４、５、若しく
は６ヶ月後に少なくとも１回、測定される。治療開始後に、測定される循環内皮細胞の数
が、治療前に測定された循環内皮細胞の数よりも少ない場合、ＤＦＵを有する対象の治療
は、有効とみなすことができる。

【0017】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される対象の循環内
皮細胞の数は、（ｉ）治療開始後の第１の時点で（すなわち、胎盤幹細胞が、ＤＦＵを有
する対象に投与された後に）、例えば、胎盤幹細胞の投与の日（であるが、投与後）に、
治療開始の１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０日後に、または治療開始
の１、２、３、４、若しくは５週後に、または治療開始の１、２、３、４、５、若しくは
６ヶ月後に、及び、（ｉｉ）治療開始後の第２の時点で、例えば、治療開始の１、２、３
、４、５、６、７、８、９、若しくは１０日後に、治療開始の１、２、３、４、若しくは
５週後に、または治療開始の１、２、３、４、５、若しくは６ヶ月後に測定され、第２の
時点は、第１の時点よりも時間的に後にある。第２の時点の治療で測定された循環内皮細
胞の数は、第２の時点で測定された循環内皮細胞の数よりも少ない場合、ＤＦＵを有する
対象の治療は、有効とみなすことができる。

【0018】

具体的な実施形態では、治療の必要な対象のＤＦＵを治療するための方法が本明細書で
提供され、方法は、（ａ）対象の血流中を循環する内皮細胞の数を測定すること；（ｂ）
対象に、１つ以上の用量の胎盤幹細胞を投与すること；及び、（ｃ）胎盤幹細胞の投与後
の、対象の血流中を循環する内皮細胞の数を測定すること、を含み、胎盤幹細胞の投与前
の循環内皮細胞の数と比較した、胎盤幹細胞の投与後の循環内皮細胞の数の減少は、該対
象のＤＦＵの治療が有効であることを示す。ある特定の実施形態では、対象のＤＦＵの治
療が有効である場合、該対象に、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋
胎盤幹細胞を含む組成物の後続の用量が投与される。

【0019】

別の具体的な実施形態では、治療の必要な対象のＤＦＵを治療するための方法が本明細
書で提供され、方法は、（ａ）対象に、１つ以上の用量の胎盤幹細胞を投与すること；（
ｂ）胎盤幹細胞の投与後の第１の時点で、対象の血流中を循環する内皮細胞の数を測定す
ること；及び、（ｃ）胎盤幹細胞の投与後の第２の時点で、対象の血流中を循環する内皮
細胞の数を測定すること、を含み、第１の時点で測定された循環内皮細胞の数と比較した
、第２の時点で測定された循環内皮細胞の数の減少は、該対象のＤＦＵの治療が有効であ
ることを示し、対象のＤＦＵの治療が有効である場合、該対象に、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４
^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞を含む組成物の後続の用量が投与される。あ
る特定の実施形態では、対象のＤＦＵの治療が有効である場合、該対象に、ＣＤ１０^＋、
ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞を含む組成物の後続の用量が投与さ
れる。

【0020】

組織培養プラスチックに接着した、本明細書に記載される方法で使用される胎盤細胞は
、例えば、フローサイトメトリーで検出できるようなＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０
５^＋、及びＣＤ２００^＋である。本明細書で提供される方法で使用される胎盤細胞のさら
なる特徴は、セクション５．１に記載されている。本明細書で提供される方法で使用され
るべき組成物、例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物は、セクション５．３に記載されて
いる。

【0021】

３．１ 定義
本明細書で使用される場合、記載された数値に言及する時の「約」という用語は、記載
された数値の±１０％以内の値を示す。

【0022】

本明細書で使用される場合、本明細書に記載の胎盤由来接着細胞に関する「血管新生の
」という用語は、細胞が、血管若しくは血管様発芽を形成することができること、または
、細胞が、別の細胞の集団、例えば、内皮細胞、における血管新生（例えば、血管若しく
は血管様構造の形成）を促進することができることを意味する。

【0023】

本明細書で使用される場合、「由来する」という用語は、から単離されるまたは別途精
製される、を意味する。例えば、胎盤由来接着細胞は、胎盤から単離される。「由来する
」という用語は、組織、例えば、胎盤、から直接単離された細胞から培養される細胞、及
び初代分離株から培養された、または拡大した細胞を包含する。

【0024】

本明細書で使用される場合、「単離細胞」という用語、例えば、「単離胎盤細胞」、「
単離胎盤幹細胞」などは、幹細胞が由来する組織、例えば、胎盤、の他の異なる細胞から
実質的に分離される細胞を意味する。幹細胞が自然に結合する細胞、例えば、非幹細胞、
または異なるマーカープロファイルを示す幹細胞の少なくとも５０％、６０％、７０％、
８０％、９０％、９５％、または少なくとも９９％が、例えば、幹細胞の収集及び／また
は培養中に、幹細胞から除去される場合、細胞は単離される。

【0025】

本明細書で使用される場合、「単離細胞の集団」という用語は、細胞集団が誘導される
組織、例えば、胎盤、の他の細胞から実質的に分離される細胞集団を意味する。

【0026】

本明細書で使用される場合、「胎盤細胞」という用語は、初代培養後の継代数に関わら
ず、初代分離株または培養された細胞のいずれかとして、例えば、下記セクション５．１
に記載されるように、哺乳動物胎盤から単離される、または、哺乳動物胎盤から単離され
る細胞から培養される幹細胞若しくは前駆細胞を指す。しかし、ある特定の実施形態では
、本明細書で使用される「胎盤細胞」という用語は、栄養芽細胞、細胞性栄養膜細胞、合
胞体栄養膜細胞、アンジオブラスト、ヘマンジオブラスト、胚性生殖細胞、胚性幹細胞、
胚盤胞の内部細胞塊から得られる細胞、または後期胚の生殖巣堤から得られる細胞、例え
ば、胚性生殖細胞を指さない。

【0027】

本明細書で使用される場合、胎盤細胞は、特定のマーカーが、バックグラウンドを超え
て検出できる場合、マーカーに対して「陽性」である。特定のマーカーの検出は、例えば
、抗体の使用、または、マーカーをコードする遺伝子若しくはｍＲＮＡの配列に基づくオ
リゴヌクレオチドプローブ若しくはプライマーのいずれかにより達成することができる。
例えば、胎盤細胞は、例えば、ＣＤ７３が、（例えば、アイソタイプ対照と比較して）バ
ックグラウンドを検出可能に超える量で、胎盤細胞上に検出できるので、ＣＤ７３に対し
て「陽性」である。また、マーカーが、細胞により提示または発現される時に、少なくと
も１つの他の細胞型と識別するために使用することができる、または、細胞を選択若しく
は単離するために使用することができる場合、細胞は、そのマーカーに対しても陽性であ
る。例えば、抗体を介する検出との関連で、特定の細胞表面マーカーが存在する指標とし
ての「陽性」は、マーカーが、マーカーに特異的な抗体、例えば、蛍光標識抗体を使用し
て検出できることを意味し；「陽性」は、例えば、サイトメーターで、バックグラウンド
を超えて検出できるシグナルを発生させる量のマーカーを示す細胞も指す。例えば、細胞
が、ＣＤ２００に特異的な抗体で検出可能に標識され、かつ、抗体からのシグナルが、対
照（例えば、バックグラウンドまたはアイソタイプ対照）のシグナルよりも検出可能に高
い場合、細胞は、「ＣＤ２００^＋」である。逆に、同じ文脈における「陰性」は、細胞表
面マーカーが、対照（例えば、バックグラウンドまたはアイソタイプ対照）と比較して、
マーカーに特異的な抗体を使用して検出できないことを意味する。例えば、細胞が、対照
（例えば、バックグラウンドまたはアイソタイプ対照）よりも大きい程度に、ＣＤ３４に
特異的な抗体で、再現可能で検出可能に標識されない場合、細胞は、「ＣＤ３４^－」であ
る。抗体を使用して検出されない、または検出できないマーカーは、適切な対照を使用し
て、同様の仕方で陽性または陰性と判定される。例えば、細胞または細胞の集団由来のＲ
ＮＡで検出されるＯＣＴ－４ＲＮＡの量が、例えば、ＲＮＡを検出する方法、例えば、Ｒ
Ｔ－ＰＣＲ、スロットブロットなど、で測定される場合、バックグラウンドよりも検出可
能に多い時、細胞または細胞の集団は、ＯＣＴ－４^＋であると判定することができる。本
明細書において別途記載のない限り、分化抗原群（「ＣＤ」）マーカーは、抗体を使用し
て検出される。ある特定の実施形態では、ＯＣＴ－４が、ＲＴ－ＰＣＲを使用して検出で
きる場合、ＯＣＴ－４が存在すると判定され、細胞は「ＯＣＴ－４^＋」である。

【0028】

本明細書で使用される場合、用語「対象」、「患者」、及び「個体」は、本明細書に記
載の治療方法で治療される哺乳動物を指すために、同じ意味で使用され得る。具体的な実
施形態では、治療されるべき対象は、ヒトである。

【図面の簡単な説明】

【0029】

【図1】胎盤由来接着細胞による、選択された血管新生タンパク質の分泌を示す。

【0030】

【図2】ヒト内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）管腔形成に対する胎盤由来接着細胞馴化培地の血管新生効果を示す。

【0031】

【図3】ヒト内皮細胞遊走に対する胎盤由来接着細胞馴化培地の血管新生効果を示す。

【0032】

【図4】ヒト内皮細胞増殖に対する胎盤由来接着細胞馴化培地の効果を示す。

【0033】

【図5】ＨＵＶＥＣ及び胎盤由来接着細胞の管腔形成を示す。

【0034】

【図6】低酸素及び正常酸素条件下での、胎盤由来接着細胞による、ＶＥＧＦ及びＩＬ－８の分泌を示す。

【0035】

【図7】ニワトリ漿尿膜血管新生モデルにおける血管新生に対するＰＤＡＣの正の効果を示す。ｂＦＧＦ：塩基性線維芽細胞成長因子（陽性対照）ＭＤＡＭＢ２３１：血管新生乳癌細胞株（陽性対照）Ｙ軸：血管形成の程度。

【0036】

【図8】ニワトリ漿尿膜血管新生モデルにおける血管新生に対するＰＤＡＣ馴化培地（上清）の正の効果を示す。ｂＦＧＦ：塩基性線維芽細胞成長因子（陽性対照）ＭＤＡＭＢ２３１：血管新生乳癌細胞株（陽性対照）Ｙ軸：血管形成の程度。

【0037】

【図9】アストロサイトの培養物、またはアストロサイト及びＰＤＡＣの共培養物に存在する、過酸化水素から発生した活性酸素種。ＲＦＵ ＲＯＳ活性：活性酸素種に対する相対蛍光単位。

【0038】

【図10】後肢虚血の糖尿病モデルのマウスへの、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞投与後の、増加した血流（図１０Ａ）及び血管造影スコア（図１０Ｂ）を示す。

【0039】

【図11】ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞で処置されたマウスの後肢虚血手術後の、ＣＤ３１及びα平滑筋アクチン抗体の両方を使用した血管染色の増加を示す。２つのマーカーのレベルは、ビヒクル対照で処置された動物と比較して、蛍光イメージング（図１１Ａ及び１１Ｂ）を使用して分析され、定量化された（図１１Ｃ及び１１Ｄ）。

【0040】

【図12】ビヒクルまたは２投薬量のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞で処置されたｄｂ／ｄｂマウスにおける後肢虚血手術後の、マウス大腿四頭筋のヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を示す。

【0041】

【図13】Ｍ２マクロファージの２つのマーカーであるＡｒｇ１及びＣＤ２０６について、後肢虚血及びＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の投与後の脂肪組織の染色を示す。染色は、手術後の３日目及び１４日目に実施された。

【0042】

【図14】後肢虚血手術及びＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の投与後の、ＬＰＳ刺激を用いる及び用いない単離脂肪細胞におけるサイトカインレベルを示す。

【0043】

【図15】ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の投与後の、ＤＦＵを治癒している対象（１５Ａ）及びＤＦＵを治癒していない対象（１５Ｂ）における、循環内皮細胞の数の基準からの変化を示す。

【発明を実施するための形態】

【0044】

糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）を治療することを、それらを必要とする対象において行う
方法が本明細書で提供され、該方法は、治療的有効量の組織培養プラスチック接着性胎盤
細胞、例えば、胎盤幹細胞、例えば、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２０
０^＋胎盤幹細胞を、対象に投与することを含む。具体的な実施形態では、該胎盤細胞は、
医薬組成物として製剤化される。

【0045】

具体的な実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療されるＤＦＵを有する
対象は、Ｉ型糖尿病に罹患している。別の具体的な実施形態では、本明細書で提供される
方法に従って治療されるＤＦＵを有する対象は、ＩＩ型糖尿病に罹患している。ある特定
の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される対象は、１つより多いＤ
ＦＵを有し、すなわち、対象は、片足に１つより多いＤＦＵ、または各足に少なくとも１
つのＤＦＵを有する。具体的な実施形態では、対象は、片足または両足の裏に１つ以上の
ＤＦＵを有する。

【0046】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される対象は、末梢
ニューロパチー、例えば、脚及び／または足の神経のうちの１つ以上への損傷、を有する
。

【0047】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される対象は、対象
の末梢血管系に血液の流れの中断を引き起こす状態のＤＦＵを有する。具体的な実施形態
では、対象は、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）を有する。ある特定の実施形態では、該ＤＦＵが
、ＰＡＤに起因及び／または関連する。具体的な実施形態では、対象は、末梢動脈疾患（
ＰＡＤ）を有しない。

【0048】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法は、本明細書で提供される方法に
従って治療された対象において、ＤＦＵの１つ以上の症状を検出可能に改善することをも
たらす。ＤＦＵの例示的症状としては、脚及び／または下腿の傷、潰瘍、または水疱；脚
（若しくは足）及び／または下腿疼痛；歩行困難；足（または両足）の変色、例えば、足
（または両足）が黒く、青く、及び／または赤く見える：ならびに感染の徴候（例えば、
熱、皮膚の赤み、及び／または腫れ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0049】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法は、改善の１つ以上の徴候におけ
る検出可能な改善のために十分な量及び時間で、ＤＦＵを有する対象に、胎盤幹細胞（例
えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）を投与することを含み、改善の該徴候は、（ｉ）潰
瘍サイズの低減；（ｉｉ）潰瘍閉鎖：ドレナージまたはドレッシングの必要性のない１つ
以上の潰瘍の皮膚閉鎖；（ｉｉｉ）閉鎖後の特定の期間、例えば、閉鎖後２週間、３週間
、４週間、５週間、または６週間、の潰瘍閉鎖の保持；（ｉｖ）潰瘍閉鎖までの時間；（
ｖ）対象が静止している間に足首及び腕の血圧を測定し、次に、対象が動いている（例え
ば、トレッドミルで歩く）間に繰り返される、ＰＡＤの重症度を予測／評価するために使
用することができる検査である足関節上腕血圧比（ＡＢＩ）の改善；（ｖｉ）足首血圧で
はなく足趾血圧を使用するＡＢＩに類似した検査である足趾上腕血圧比（ＴＢＩ）の改善
；（ｖｉｉ）経皮酸素、すなわち、潰瘍に近い皮膚の下の組織の酸素レベルの改善（例え
ば、Ｒｕａｎｇｓｅｔａｋｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ， ２０１
０， １９（５）：２０２－６を参照のこと）；（ｖｉｉｉ）血液測定用カフ及び手持ち
式超音波装置が、腕及び脚の動脈血流量についての情報を得るために使用される非侵襲的
血管検査である脈容量記録の改善；（ｉｘ）大切断、例えば、足首の上での切断、までの
時間；（ｘ）評価システム：グレード０（潰瘍性病変の前または後）、グレード１（部分
／全層潰瘍）、グレード２（腱または被膜に達する）、グレード３（骨髄炎を伴う深部）
、グレード４（部分的な足の壊疽）、及びグレード５（全足壊疽）、を使用して、潰瘍の
深さ及び骨髄炎または壊疽の存在を評価するＷａｇｎｅｒの評価尺度の改善；（ｘｉ）７
つの分類ステージ：ステージ０：無症状、ステージ１：軽度跛行、ステージ２：中等度跛
行、ステージ３：高度跛行、ステージ４：安静時疼痛、ステージ５：足指の壊疽を超えな
い虚血性潰瘍形成、及びステージ６：高度虚血性潰瘍または明らかな壊疽、を有する、末
梢動脈疾患のステージングのために使用されるＲｕｔｈｅｒｆｏｒｄの基準の改善：なら
びに、（ｘｉｉ）脚の安静時疼痛スコア、０が無痛であり、１０が最大の疼痛を表す疼痛
の０～１０尺度の改善、を含む。

【0050】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法は、例えば、（ｉ）３６項目簡易
健康調査（ＳＦ－３６）（例えば、Ｗａｒｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃａｒ
ｅ ３０（６）：４７３－４８３を参照のこと）；（ｉｉ）糖尿病性足部潰瘍の、生活の
質への影響を測定する糖尿病性足部潰瘍尺度簡易版（ＤＦＳ－ＳＦ）（例えば、Ｂａｎｎ
ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ， ２００３， ２１（１７）
：１２７７－９０を参照のこと）；（ｉｉｉ）経時的なニューロパチーの変化を評価する
ための、変化尺度の患者の全体的印象（例えば、Ｋａｍｐｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．
Ｍａｎ． Ｍａｎｉｐ． Ｔｈｅｒ．， ２００９， １７（３）：１６３－１７０を参
照のこと）；ならびに／または、（ｉｖ）患者の健康状態に対する記述的プロファイル及
び単一の指標値を得るために使用される健康質問票であるＥｕｒｏＱｏｌ５Ｄ（ＥＱ－５
Ｄ（商標））尺度、で評価される場合の対象の生活の質における検出可能な改善のために
十分な量及び時間で、ＤＦＵを有する対象に、胎盤幹細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医
薬組成物）を投与することを含む。

【0051】

本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤
幹細胞を含む医薬組成物）は、注射で投与される。本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の
別の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、胎盤
細胞を含むマトリックスまたは足場の対象への移植により治療されている該対象に投与さ
れる。

【0052】

本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤
幹細胞を含む医薬組成物）は、筋肉内投与される。本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の
別の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、静脈
内投与される。本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の別の具体的な実施形態では、胎盤細
胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、皮下投与される。本明細書に記載のＤＦ
Ｕの治療方法の別の具体的な実施形態では、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組
成物）は、局所投与される。本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の別の具体的な実施形態
では、胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物）は、全身投与される。ある特定
の実施形態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、（例えば、胎盤幹細胞を含む医
薬組成物の一部として）約１×１０^３、３×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、３×１０
^４、５×１０^４、１×１０^５、３×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、３×１０^６、５×
１０^６、１×１０^７、３×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、３×１０^８、５×１０^８、
１×１０^９、５×１０^９、または１×１０^１０の胎盤細胞の投与を含む。ある特定の実施
形態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成
物の一部として）約１×１０^３～３×１０^３、３×１０^３～５×１０^３、５×１０^３～１
×１０^４、１×１０^４～３×１０^４、３×１０^４～５×１０^４、５×１０^４～１×１０^５
、１×１０^５～３×１０^５、３×１０^５～５×１０^５、５×１０^５～１×１０^６、１×１
０^６～３×１０^６、３×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～３
×１０^７、３×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～３×１０^８
、３×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、または
５×１０^９～１×１０^１０の胎盤細胞の投与を含む。具体的な実施形態では、本明細書に
記載のＤＦＵの治療方法は、約３×１０^３の胎盤細胞の投与を含む。別の具体的な実施形
態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、約３×１０^４の胎盤細胞の投与を含む。
別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、約３×１０^５の胎盤
細胞の投与を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、
約３×１０^６の胎盤細胞の投与を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のＤ
ＦＵの治療方法は、約１×１０^７の胎盤細胞の投与を含む。別の具体的な実施形態では、
本明細書に記載のＤＦＵの治療方法は、約３×１０^７の胎盤細胞の投与を含む。

【0053】

本明細書に記載のＤＦＵの治療方法の具体的な実施形態では、胎盤幹細胞（例えば、胎
盤幹細胞を含む医薬組成物）は、１週間の投与間隔で筋肉内投与され、例えば、胎盤細胞
は１日目（投与の最初の日）に投与され、胎盤幹細胞（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組
成物）の２回目投与が、１週間後（すなわち、８日目）に投与される。別の具体的な実施
形態では、方法は、投与のそれぞれの日（すなわち、１日目及び８日目）の、約３×１０
^６の胎盤幹細胞の投与を含む。別の具体的な実施形態では、方法は、投与のそれぞれの日
（すなわち、１日目及び８日目）の、約１×１０^７の胎盤細胞の投与を含む。別の具体的
な実施形態では、方法は、投与のそれぞれの日（すなわち、３日目及び８日目）の、約３
×１０^７の胎盤細胞の投与を含む。別の具体的な実施形態では、胎盤幹細胞が投与される
対象は、ＰＡＤを有する。

【0054】

組織培養プラスチックに接着した、本明細書に記載される方法で使用される胎盤細胞は
、例えば、フローサイトメトリーで検出できるようなＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０
５^＋、及びＣＤ２００^＋である。本明細書で提供される方法で使用される胎盤細胞のさら
なる特徴は、セクション５．１に記載されている。本明細書で提供される方法で使用され
るべき組成物、例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物は、セクション５．３に記載されて
いる。

【0055】

５．１ 単離胎盤細胞及び単離胎盤細胞集団
本明細書ではＰＤＡＣと称される場合がある、本明細書で提供されるＤＦＵの治療方法
に有用である単離胎盤細胞は、胎盤またはその一部から得ることができ、組織培養基質に
接着し、多分化能細胞または幹細胞の特徴を有するが、栄養芽細胞ではない。ある特定の
実施形態では、本明細書に開示の方法に有用である単離胎盤細胞は、非胎盤細胞型に分化
する能力を有する。

【0056】

本明細書に開示の方法に有用である単離胎盤細胞は、由来が胎児または母体のいずれか
であることができる（つまり、それぞれ、胎児または母親のいずれかの遺伝子型を有する
ことができる）。好ましくは、単離胎盤細胞及び単離胎盤細胞の集団は、由来が胎児であ
る。本明細書で使用される場合、「由来が胎児」または「由来が非母体」という表現は、
単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の集団が、胎児に関連する、すなわち、胎児遺伝子型を
有する、臍帯または胎盤構造から得られることを示す。本明細書で使用される場合、「由
来が母体」という表現は、細胞または細胞の集団が、母親と関連する、例えば、母体遺伝
子型を有する、胎盤構造体から得られることを示す。単離胎盤細胞、例えば、ＰＤＡＣま
たは単離胎盤細胞を含む細胞の集団は、胎児若しくは母体単独である単離胎盤細胞を含む
ことができる、または胎児由来及び母体由来の両方の単離胎盤細胞の混合集団を含むこと
ができる。単離胎盤細胞、及び単離胎盤細胞を含む細胞の集団は、以下で論じる形態的特
徴、マーカー特徴、及び培養特徴により特定及び選択することができる。ある特定の実施
形態では、本明細書に記載の胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞または胎盤多分化能細胞、の
いずれも、レシピエント、例えば、ＤＦＵを有する個体、にとって自己由来である。他の
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞または胎盤多
分化能細胞、のいずれも、レシピエント、例えば、ＤＦＵを有する個体、にとって異種で
ある。

【0057】

５．１．１ 物理的及び形態的特徴
本明細書に記載の単離胎盤細胞（ＰＤＡＣ）は、初代培養または細胞培養で培養される
時、組織培養基質、例えば、培養容器表面（例えば、組織培養プラスチック）に、または
、ラミニン、コラーゲン（例えば、天然若しくは変性）、ゼラチン、フィブロネクチン、
オルニチン、ビトロネクチン、及び細胞外膜タンパク質（例えば、ＭＡＴＲＩＧＥＬ（登
録商標）（ＢＤ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌａｂｗａｒｅ、マサチューセッツ州ベッドフォ
ード））などの細胞外マトリックス若しくはリガンドでコーティングされた組織培養表面
に、接着する。培養中の単離胎盤細胞は一般に、中心細胞体から延びる多くの細胞質突起
を有する、線維芽細胞様星状外観を呈する。しかし、単離胎盤細胞は、線維芽細胞よりも
多数のこのような突起を示すので、細胞は、同じ条件下で培養された線維芽細胞と形態学
的に識別できる。形態学的に、単離胎盤細胞はまた、培養中に、より丸みのある、または
丸石の形態を一般に呈する造血幹細胞と識別できる。

【0058】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法に有用である単離胎盤細胞は、成長培
地中で培養される時、胚様体様体を発達させる。胚様体様体は、増殖した単離胎盤細胞の
接着層の上部で成長することができる細胞の非連続的な塊である。細胞の塊が、胚性幹細
胞の培養物から成長する細胞の塊である胚様体に似ているので、「胚様体様」という用語
が、使用される。胚様体様体が、単離胎盤細胞の増殖培養物中で発生することができる成
長培地は、例えば、ＤＭＥＭ－ＬＧ（例えば、Ｇｉｂｃｏ製）；２％のウシ胎児血清（例
えば、Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｓ．製）；１×インスリン－トランスフェリン－セレン（
ＩＴＳ）；１×リノール酸－ウシ血清アルブミン（ＬＡ－ＢＳＡ）；１０^－９Ｍのデキサ
メタゾン（例えば、Ｓｉｇｍａ製）；１０^－４Ｍのアスコルビン酸２－ホスフェート（例
えば、Ｓｉｇｍａ製）；上皮成長因子１０ｎｇ／ｍＬ（例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ
製）；及び、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）１０ｎｇ／ｍＬ（例えば、Ｒ＆Ｄ
Ｓｙｓｔｅｍｓ製）、を含む培地を含む。

【0059】

５．１．２ 細胞表面マーカー、分子マーカー、及び遺伝子マーカー
本明細書の開示の方法、例えば、対象のＤＦＵの治療方法、に有用な単離胎盤細胞、例
えば、単離多分化能胎盤細胞または単離胎盤幹細胞、及びこのような単離胎盤細胞の集団
は、多分化能細胞または幹細胞の特徴を有する組織培養プラスチック接着ヒト胎盤細胞で
あり、幹細胞を含む細胞または細胞の集団を特定及び／または単離するために使用するこ
とができる複数のマーカーを発現する。ある特定の実施形態では、ＰＤＡＣは、例えば、
インビトロまたはインビボの血管新生性である。本明細書に記載の単離胎盤細胞、及び胎
盤細胞集団（つまり、２つ以上の単離胎盤細胞）は、胎盤またはそれらの任意の部分（例
えば、絨毛膜、胎盤絨毛叢など）から直接得られる胎盤細胞及び胎盤細胞含有細胞集団を
含む。単離胎盤細胞集団は、培養中の単離胎盤細胞の複数集団（つまり、２つ以上）、及
び容器、例えば、バッグ中の集団も含む。本明細書に記載の単離胎盤細胞は、臍帯血、胎
盤血、または末梢血から得られる骨髄由来間葉系細胞、脂肪由来間葉系幹細胞、または間
葉系細胞ではない。本明細書に記載の方法及び組成物に有用な胎盤細胞、例えば、胎盤多
分化能細胞及び胎盤細胞は、本明細書、及び例えば、米国特許第７，３１１，９０４号、
同第７，３１１，９０５号、及び同第７，４６８，２７６号、ならびに米国特許公開公報
第２００７／０２７５３６２号に記載されており、これらの開示は、その全体が本明細書
で参照により組み込まれる。

【0060】

ある特定の実施形態では、単離胎盤細胞は、単離胎盤幹細胞である。他のある特定の実
施形態では、単離胎盤細胞は、単離胎盤多分化能細胞である。一実施形態では、単離胎盤
細胞、例えば、ＰＤＡＣは、フローサイトメトリーで検出されるようなＣＤ３４^－、ＣＤ
１０^＋及びＣＤ１０５^＋である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４^－、ＣＤ１０
^＋、ＣＤ１０５^＋胎盤細胞は、神経表現型の細胞、骨形成表現型の細胞、及び／または軟
骨形成表現型の細胞に分化する可能性がある。別の具体的な実施形態は、単離ＣＤ３４^－
、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０５^＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ２００^＋である。別の具体的な実施
形態では、単離ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０５^＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ４５^－ま
たはＣＤ９０^＋である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ
１０５^＋胎盤細胞はさらに、フローサイトメトリーで検出されるようなＣＤ４５^－及びＣ
Ｄ９０^＋である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０５
^＋、ＣＤ２００^＋胎盤細胞はさらに、フローサイトメトリーで検出されるようなＣＤ９０
^＋またはＣＤ４５^－である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、
ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤細胞はさらに、フローサイトメトリーで検出されるよう
なＣＤ９０^＋及びＣＤ４５^－であり、すなわち、細胞は、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ
４５^－、ＣＤ９０^＋、ＣＤ１０５^＋及びＣＤ２００^＋である。別の具体的な実施形態は、
該ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ４５^－、ＣＤ９０^＋、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋細胞
はさらに、ＣＤ８０^－及びＣＤ８６^－である。

【0061】

ある特定の実施形態では、該胎盤細胞は、フローサイトメトリーで検出されるようなＣ
Ｄ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０５^＋、及びＣＤ２００^＋、ならびに、ＣＤ３８^－、ＣＤ
４５^－、ＣＤ８０^－、ＣＤ８６^－、ＣＤ１３３^－、ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ，ＤＱ^－、ＳＳＥ
Ａ３^－、ＳＳＥＡ４^－、ＣＤ２９^＋、ＣＤ４４^＋、ＣＤ７３^＋、ＣＤ９０^＋、ＣＤ１０５
^＋、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ^＋、ＰＤＬ１^＋、ＡＢＣ－ｐ^＋、及び／またはＯＣＴ－４^＋のう
ちの１つ以上である。他の実施形態では、上記ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０５^＋細
胞のいずれもさらに、ＣＤ２９^＋、ＣＤ３８^－、ＣＤ４４^＋、ＣＤ５４^＋、ＳＨ３^＋、ま
たはＳＨ４^＋のうちの１つ以上である。別の具体的な実施形態では、細胞はさらに、ＣＤ
４４^＋である。上記単離ＣＤ３４^－、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１０５^＋胎盤細胞のいずれの別の
具体的な実施形態でも、細胞はさらに、ＣＤ１１７^－、ＣＤ１３３^－、ＫＤＲ^－（ＶＥＧ
ＦＲ２^－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ^＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ^－、若しくはプログラム
死１リガンド（ＰＤＬ１）^＋のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組み合わせである
。

【0062】

別の実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋細胞はさらに、ＣＤ１３＋
、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ６
２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋
）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／Ｖ
ＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリンｌｏｗ、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４
－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ
－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，Ｄ
Ｒ－、ＨＬＡ－Ｇ－、若しくはプログラム死１リガンド（ＰＤＬ１）＋のうちの１つ以上
、またはそれらの任意の組み合わせである。他の実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋
、ＣＤ１０５＋細胞はさらに、ＣＤ１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ
４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ
－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ
９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４
４／ＶＥカドヘリンｌｏｗ、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、
ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－
）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－、及びプログラ
ム死１リガンド（ＰＤＬ１）＋である。

【0063】

別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の胎盤細胞のいずれも、さらに、フローサ
イトメトリーで検出されるようなＡＢＣ－ｐ＋、またはＲＴ－ＰＣＲで測定されるような
ＯＣＴ－４＋（ＰＯＵ５Ｆ１＋）であり、ＡＢＣ－ｐは、（乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲ
Ｐ）及びミトキサントロン耐性タンパク質（ＭＸＲ）としても知られている）胎盤特異的
ＡＢＣトランスポータータンパク質であり、ＯＣＴ－４は、オクタマー４タンパク質（Ｐ
ＯＵ５Ｆ１）である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の胎盤細胞のいずれも
、さらに、フローサイトメトリーで測定されるようなＳＳＥＡ３－またはＳＳＥＡ４－で
あり、ＳＳＥＡ３は、ステージ特異的胚抗原３であり、ＳＳＥＡ４は、ステージ特異的胚
抗原４である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の胎盤細胞のいずれも、さら
に、ＳＳＥＡ３－及びＳＳＥＡ４－である。

【0064】

別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の胎盤細胞のいずれも、さらに、ＭＨＣ－
Ｉ＋（例えば、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋）、ＭＨＣ－ＩＩ－（例えば、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ
，ＤＲ－）、またはＨＬＡ－Ｇ－のうちの１つ以上である。別の具体的な実施形態では、
本明細書に記載の胎盤細胞のいずれも、さらに、ＭＨＣ－Ｉ＋（例えば、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ
，Ｃ＋）、ＭＨＣ－ＩＩ－（例えば、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－）、及びＨＬＡ－Ｇ－
のうちの１つ以上である。

【0065】

本明細書に記載の方法及び組成物に有用な、単離胎盤細胞の集団、または、単離胎盤細
胞を含む、例えば、これらが豊富である、細胞の集団、例えば、胎盤細胞の集団、も本明
細書で提供される。単離胎盤細胞を含む細胞の集団が好ましく、細胞の集団が、例えば、
少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％
、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または
９８％の単離ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ３４－胎盤細胞を含む、つまり、該集
団中の細胞の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４
５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９
５％、または９８％が、単離ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ３４－胎盤細胞である
。具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに
、ＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ
１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞はさらに、フローサイトメトリーで検出されるようなＣ
Ｄ９０＋またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４－、ＣＤ１
０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞はさらに、フローサイトメトリーで検出され
るようなＣＤ９０＋及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、上記単離ＣＤ３
４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞のいずれも、さらに、ＣＤ２９＋、ＣＤ３８－
、ＣＤ４４＋、ＣＤ５４＋、ＳＨ３＋、またはＳＨ４＋のうちの１つ以上である。別の具
体的な実施形態では、単離ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞または単離Ｃ
Ｄ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ４４＋であ
る。上記単離ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞を含む細胞の集団のいずれ
の具体的な実施形態においても、単離胎盤細胞はさらに、ＣＤ１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ
３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ
－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）、ＣＤ８０－、Ｃ
Ｄ８６－、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１
７－、ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリンｌｏｗ、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、
ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（
ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－
、若しくはプログラム死１リガンド（ＰＤＬ１）＋のうちの１つ以上、またはそれらの任
意の組み合わせである。別の具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０
５＋細胞はさらに、ＣＤ１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、Ｃ
Ｄ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３
＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ９０＋、Ｓ
Ｈ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４４／ＶＥカ
ドヘリンｌｏｗ、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－４
＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ
－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－、及びプログラム死１リガ
ンド（ＰＤＬ１）＋である。

【0066】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、
ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４
＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＯＣＴ
－４＋、及びＡＢＣ－ｐ＋のうちの１つ以上、または全てであり、該単離胎盤細胞は、胎
盤組織の物理的及び／または酵素的破壊により得られる。具体的な実施形態では、単離胎
盤細胞は、ＯＣＴ－４＋及びＡＢＣ－ｐ＋である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤
細胞は、ＯＣＴ－４＋及びＣＤ３４－であり、該単離胎盤細胞は、次の特徴のうちの少な
くとも１つを有する：ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、
ＣＤ９０＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、及びＳＳＥＡ４－。別の具体的な実施
形態では、単離胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ
４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、及
びＳＳＥＡ４－である。別の実施形態では、単離胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－
、ＳＳＥＡ３－、及びＳＳＥＡ４－である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は
、ＯＣＴ－４＋及びＣＤ３４－であり、ＳＨ２＋またはＳＨ３＋のいずれかである。別の
具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＳＨ２＋、及びＳ
Ｈ３＋である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－
、ＳＳＥＡ３－、及びＳＳＥＡ４－であり、ＳＨ２＋またはＳＨ３＋のいずれかである。
別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋及びＣＤ３４－であり、ＳＨ
２＋またはＳＨ３＋のいずれかであり、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５
－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＳＥＡ３－、またはＳＳＥＡ４－のうちの少なくとも１
つである。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、Ｃ
Ｄ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＳＥＡ３
－、及びＳＳＥＡ４－であり、ＳＨ２＋またはＳＨ３＋のいずれかである。

【0067】

別の実施形態では、本明細書に開示の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＳＨ２
＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、及びＯＣＴ－４＋である。別の具体的な実施形態では、単離胎
盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ３４－
、ＣＤ４５－、ＳＳＥＡ３－、またはＳＳＥＡ４－である。別の実施形態では、単離胎盤
細胞は、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、及びＳＳＥＡ４－である。別の
具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－
、及びＳＳＥＡ４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、
ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、またはＣＤ４５－である。

【0068】

別の実施形態では、本明細書に開示の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＣＤ１
０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、Ｓ
Ｈ２＋、ＳＨ３＋、及びＳＨ４＋であり、該単離胎盤細胞はさらに、ＯＣＴ－４＋、ＳＳ
ＥＡ３－、またはＳＳＥＡ４－のうちの１つ以上である。

【0069】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、
ＣＤ２００＋またはＨＬＡ－Ｇ－である。具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ
２００＋及びＨＬＡ－Ｇ－である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞はさらに、
ＣＤ７３＋及びＣＤ１０５＋である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞はさらに
、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、単離
胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施
形態では、該幹細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、及びＣＤ１
０５＋である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋またはＨＬＡ－Ｇ－胎盤
細胞は、胚様体様体の形成を可能にする条件下で、単離胎盤細胞を含む胎盤細胞の集団中
での胚様体様体の形成を容易にする。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、幹細
胞または多分化能細胞でない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実施形態では、該単
離胎盤細胞は、これらのマーカーを示さない胎盤細胞から単離される。

【0070】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、ＣＤ２００
＋、ＨＬＡ－Ｇ－幹細胞を含む、例えば、これらが豊富である、細胞の集団である。具体
的な実施形態では、該集団は、胎盤細胞の集団である。種々の実施形態では、該細胞集団
中の細胞の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも
約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％は、単離ＣＤ２００＋、ＨＬ
Ａ－Ｇ－胎盤細胞である。好ましくは、該細胞集団中の細胞の少なくとも約７０％は、単
離ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞である。より好ましくは、該細胞の少なくとも約
９０％、９５％、または９９％は、単離ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞である。細
胞集団の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はまた、Ｃ
Ｄ７３＋及びＣＤ１０５＋である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋、Ｈ
ＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の具
体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、
ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、及びＣＤ１０５＋である。別の実施形態では、該
細胞集団は、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、１つ以上の胚様体様
体を生じる。別の具体的な実施形態では、該細胞集団は、幹細胞ではない胎盤細胞から単
離される。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、
これらのマーカーを示さない胎盤細胞から単離される。

【0071】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細
胞は、ＨＬＡ－Ｇ－である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ３４－、
ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、Ｃ
Ｄ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細
胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－Ｇ－である。別の具体的な実
施形態では、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ２００＋胎盤細胞は、単離胎盤細
胞を含む胎盤細胞の集団中で、集団が胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される
時、１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細
胞は、単離胎盤細胞でない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実施形態では、単離胎
盤細胞は、これらのマーカーを示さない胎盤細胞から単離される。

【0072】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、単離ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞を含む、例えば、これらが豊富である、細胞
の集団である。種々の実施形態では、該細胞集団中の細胞の少なくとも約１０％、少なく
とも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または
少なくとも約６０％は、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞である。
別の実施形態では、細胞の該集団中の該細胞の少なくとも約７０％は、単離ＣＤ７３＋、
ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞である。別の実施形態では、細胞の該集団中の細胞
の少なくとも約９０％、９５％、または９９％は、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ
２００＋胎盤細胞である。該集団の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＨＬＡ－Ｇ
－である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－
、またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞はさらに、ＣＤ３
４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は
さらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－Ｇ－である。別の具体的な
実施形態では、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、細胞の該集団は、
１つ以上の胚様体様体を生じる。別の具体的な実施形態では、胎盤細胞の該集団は、幹細
胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実施形態では、胎盤細胞の該集団は、
これらの特徴を示さない胎盤細胞から単離される。

【0073】

他のある特定の実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－
、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋
、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＯＣＴ－４＋、ＨＬＡ－Ｇ－、またはＡＢＣ
－ｐ＋のうちの１つ以上である。具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、
ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０
＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、及びＯＣＴ－４＋で
ある。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４
－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、及びＳＨ４＋である。
別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、Ｃ
Ｄ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、及びＯＣＴ－４＋
である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３
４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、ＨＬＡ－Ｇ－、
ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、Ｏ
ＣＴ－４＋及びＡＢＣ－ｐ＋である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＳＨ
２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、及びＯＣＴ－４＋である。別の実施形態では、単離胎盤細胞
は、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＳＳＥＡ３－、及びＳＳＥＡ４－である。具体的な実施
形態では、該単離ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＳＳＥＡ３－、及びＳＳＥＡ４－胎盤細胞
はさらに、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋
、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、及びＳＨ４＋である。別の実施形態では、単離胎盤
細胞は、ＯＣＴ－４＋及びＣＤ３４－、ならびにＳＨ３＋またはＳＨ４＋のいずれかであ
る。別の実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ３４－、及びＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、Ｃ
Ｄ４４＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ９０＋、またはＯＣＴ－４＋のいずれかである。

【0074】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＣＤ２
００＋及びＯＣＴ－４＋である。具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、ＣＤ７３＋及
びＣＤ１０５＋である。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、ＨＬＡ－Ｇ－で
ある。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、ＣＤ
３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ
２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。
別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、ＣＤ３４－
、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、及びＨＬＡ－Ｇ－である。別の
具体的な実施形態では、単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、単離細胞を含む胎
盤細胞の集団による１つ以上の胚様体様体の産生を、集団が、胚様体様体の形成を可能に
する条件下で培養される時、容易にする。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００
＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、幹細胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実
施形態では、該単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、これらの特徴を示さない胎
盤細胞から単離される。

【0075】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、ＣＤ２００
＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞を含む、例えば、これらが豊富である、細胞の集団である。種
々の実施形態では、該細胞集団中の細胞の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少
なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約６０
％は、単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞である。別の実施形態では、該細胞の少
なくとも約７０％は、該単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞である。別の実施形態
では、該細胞集団中の細胞の少なくとも約８０％、９０％、９５％、または９９％は、該
単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞である。単離集団の具体的な実施形態では、該
単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ７３＋及びＣＤ１０５＋である
。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、Ｈ
ＬＡ－Ｇ－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤
細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態
では、該単離ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、
ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、及びＨＬＡ－Ｇ－である。別の具体的な実施形
態では、細胞集団は、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、１つ以上の
胚様体様体を生じる。別の具体的な実施形態では、該細胞集団は、単離ＣＤ２００＋、Ｏ
ＣＴ－４＋胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実施形態では、該細
胞集団は、これらのマーカーを示さない胎盤細胞から単離される。

【0076】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋、及びＨＬＡ－Ｇ－である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋、及びＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ま
たはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、Ｈ
ＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の
具体的な実施形態では、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はさらに
、ＯＣＴ－４＋である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、Ｈ
ＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はさらに、ＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形態では、単離Ｃ
Ｄ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、Ｃ
Ｄ４５－、ＯＣＴ－４＋、及びＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形態では、単離Ｃ
Ｄ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞は、該細胞を含む胎盤細胞の集団での胚
様体様体の形成を、集団が胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、容易に
する。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤
細胞は、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞ではない胎盤細胞から単
離される。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－
胎盤細胞は、これらのマーカーを示さない胎盤細胞から単離される。

【0077】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、単離ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋、及びＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞を含む、例えば、これらが豊富である、
細胞の集団である。種々の実施形態では、細胞の該集団中の細胞の少なくとも約１０％、
少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、
または少なくとも約６０％は、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞で
ある。別の実施形態では、細胞の該集団中の細胞の少なくとも約７０％は、単離ＣＤ７３
＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞である。別の実施形態では、細胞の該集団中の
細胞の少なくとも約９０％、９５％、または９９％は、単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、
ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞である。上記集団の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、Ｃ
Ｄ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５
－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－
胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施
形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はさらに、ＯＣＴ－
４＋である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ
－胎盤細胞はさらに、ＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３
＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５
－、ＯＣＴ－４＋、及びＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形態では、該細胞集団は
、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。
別の具体的な実施形態では、該細胞集団は、これらのマーカーを示さない胎盤細胞から単
離される。

【0078】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＣＤ７
３＋及びＣＤ１０５＋であり、該ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋細胞を含む単離胎盤細胞の集
団での１つ以上の胚様体様体の形成を、該集団が胚様体様体の形成を可能にする条件下で
培養される時、容易にする。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５
＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の具体的な
実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３
８－、及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０
５＋胎盤細胞はさらに、ＯＣＴ－４＋である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣ
Ｄ４５－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞
は、該細胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、これらの特徴を示さない胎盤細胞から単離される。

【0079】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、ＣＤ７３＋
、ＣＤ１０５＋であり、該集団が、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時
、該細胞を含む単離胎盤細胞の集団での１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする単離胎
盤細胞を含む、例えば、これらが豊富である、細胞の集団である。種々の実施形態では、
細胞の該集団中の細胞の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％
、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％は、該単離ＣＤ
７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞である。別の実施形態では、細胞の該集団中の細胞の少な
くとも約７０％は、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞である。別の実施形態では
、細胞の該集団中の細胞の少なくとも約９０％、９５％、または９９％は、該単離ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞である。上記集団の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３
＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である
。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ
３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＯＣＴ－４＋である。別の具体的な実施形態では
、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ２００＋である。別の具体的
な実施形態では、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ
３８－、ＣＤ４５－、ＯＣＴ－４＋、及びＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形態で
は、該細胞集団は、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離
される。別の具体的な実施形態では、該細胞集団は、これらのマーカーを示さない胎盤細
胞から単離される。

【0080】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＯＣＴ
－４＋であり、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、該細胞を含む単離
胎盤細胞の集団での１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする。具体的な実施形態では、
該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ７３＋及びＣＤ１０５＋である。別の具体的
な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、また
はＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに
、ＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさら
に、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５
－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞は、ＯＣＴ－４＋胎
盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４
＋胎盤細胞は、これらの特徴を示さない胎盤細胞から単離される。

【0081】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、ＯＣＴ－４
＋であり、該集団が、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、該細胞を含
む単離胎盤細胞の集団での１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする単離胎盤細胞を含む
、例えば、これらが豊富である、細胞の集団である。種々の実施形態では、細胞の該集団
中の細胞の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも
約４０％、少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％は、該単離ＣＤ７３＋、ＣＤ
１０５＋胎盤細胞である。別の実施形態では、細胞の該集団中の細胞の少なくとも約７０
％は、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞である。別の実施形態では、細胞の該集団中の細胞の
少なくとも約８０％、９０％、９５％、または９９％は、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞で
ある。上記集団の具体的な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ３
４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、該単離ＯＣＴ
－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。別の具体的
な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ７３＋及びＣＤ１０５＋で
ある。別の具体的な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ２００＋
である。別の具体的な実施形態では、該単離ＯＣＴ－４＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ７３＋
、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である。別の
具体的な実施形態では、該細胞集団は、該細胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具
体的な実施形態では、該細胞集団は、これらのマーカーを示さない胎盤細胞から単離され
る。

【0082】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、単離Ｈ
ＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１３３－、及びＣＤ３４－胎盤細胞である。別の
実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、単離胎盤細胞を含
む細胞の集団であり、細胞の該単離集団中の細胞の少なくとも約７０％、少なくとも約８
０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％は、単離Ｈ
ＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１３３－、及びＣＤ３４－胎盤細胞である。具体
的な実施形態では、該単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の集団は、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋
、ＣＤ４５－、ＣＤ１３３－、及びＣＤ３４－胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される
。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、由来が非母体である。別の具体的な実
施形態では、胎盤細胞の該単離集団は、母体成分を実施的に含まない、例えば、胎盤細胞
の該単離集団での該細胞の少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５
％、７０％、７５％、９０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％は、由来
が非母体である。

【0083】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、単離Ｃ
Ｄ１０＋、ＣＤ１３＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１１７－、及びＣＤ１３３－胎盤
細胞である。別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、
単離胎盤細胞を含む細胞の集団であり、細胞の該集団中の細胞の少なくとも約７０％、少
なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９
％は、単離ＣＤ１０＋、ＣＤ１３＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１１７－、及びＣＤ
１３３－胎盤細胞である。具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の
集団は、該単離胎盤細胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実施形態では、
該単離ＣＤ１０＋、ＣＤ１３＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ４５－、ＣＤ１１７－、及びＣＤ１３
３－胎盤細胞は、由来が非母体であり、すなわち、胎児遺伝子型を有する。別の具体的な
実施形態では、胎盤細胞の該単離集団中の該細胞の少なくとも約４０％、４５％、５０％
、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、９０％、８５％、９０％、９５％、９８％
、または９９％は、由来が非母体である。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞ま
たは単離胎盤細胞の集団は、これらの特徴を示さない胎盤細胞から単離される。

【0084】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、単離Ｃ
Ｄ１０－、ＣＤ３３－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、及びＣＤ１１７－胎盤細胞である。別
の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、単離胎盤細胞を
含む、例えば、これらが豊富な、細胞の集団であり、細胞の該集団中の細胞の少なくとも
約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少な
くとも約９９％は、単離ＣＤ１０－、ＣＤ３３－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、及びＣＤ１
１７－胎盤細胞である。具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の集
団は、該細胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤
細胞は、由来が非母体である。別の具体的な実施形態では、該細胞集団中の該細胞の少な
くとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、９０％、
８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％は、由来が非母体である。別の具体的な
実施形態では、該単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の集団は、これらのマーカーを示さな
い胎盤細胞から単離される。

【0085】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、単離Ｃ
Ｄ１０－、ＣＤ１３－、ＣＤ３３－、ＣＤ４５－、及びＣＤ１１７－胎盤細胞である。別
の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、単離ＣＤ１０－
、ＣＤ１３－、ＣＤ３３－、ＣＤ４５－、及びＣＤ１１７－胎盤細胞を含む、例えば、こ
れらが豊富な、細胞の集団であり、該集団中の細胞の少なくとも約７０％、少なくとも約
８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％は、ＣＤ
１０－、ＣＤ１３－、ＣＤ３３－、ＣＤ４５－、及びＣＤ１１７－胎盤細胞である。具体
的な実施形態では、該単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の集団は、該細胞ではない胎盤細
胞から単離される。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、由来が非母体である
。別の具体的な実施形態では、該細胞集団中の該細胞の少なくとも約４０％、４５％、５
０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、９０％、８５％、９０％、９５％、９
８％、または９９％は、由来が非母体である。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細
胞または単離胎盤細胞の集団は、これらの特徴を示さない胎盤細胞から単離される。

【0086】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＨＬＡ
Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、及びＣＤ１３３－であり、さらに、ＣＤ１０
＋、ＣＤ１３＋、ＣＤ３８＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋及
び／若しくはＨＬＡ－Ｇ－であり、かつ／またはＣＤ１１７に対し陰性である。別の実施
形態では、本明細書に記載される方法に有用な細胞集団は、単離胎盤細胞を含む細胞の集
団であり、該集団中の細胞の少なくとも約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４
５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９
５％、９８％、または約９９％は、ＨＬＡ Ａ，Ｂ，Ｃ－、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、Ｃ
Ｄ１３３－であり、さらに、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ
１０５、ＣＤ２００に対して陽性であり、かつ／または、ＣＤ１１７及び／若しくはＨＬ
Ａ－Ｇに対して陰性である単離胎盤細胞である。具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞
または単離胎盤細胞の集団は、該細胞ではない胎盤細胞から単離される。別の具体的な実
施形態では、該単離胎盤細胞は、由来が非母体である。別の具体的な実施形態では、該細
胞集団中の該細胞の少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７
０％、７５％、９０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％は、由来が非母
体である。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の集団は、こ
れらのマーカーを示さない胎盤細胞から単離される。

【0087】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、抗体結
合で決定されるようなＣＤ２００＋及びＣＤ１０＋であり、抗体結合及びＲＴ－ＰＣＲの
両方で決定されるようなＣＤ１１７－である単離胎盤細胞である。別の実施形態では、本
明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９－、ＣＤ
５４＋、ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－、ＭＨＣクラスＩ＋、及びβ－２ミクログロブリン
＋である単離胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞または胎盤多分化能細胞である。別の実施形
態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、少なくとも１つの細
胞マーカーの発現が間葉系幹細胞（例えば、骨髄由来間葉系幹細胞）場合よりも少なくと
も２倍高い、胎盤細胞である。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、由来が非
母体である。別の具体的な実施形態では、該細胞集団中の該細胞の少なくとも約４０％、
４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、９０％、８５％、９０％、
９５％、９８％、または９９％は、由来が非母体である。

【0088】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細は、ＣＤ１０
＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ
６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ１０３－、ＣＤ１０４－、ＣＤ
１０５＋、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリンｌｏｗ、ＣＤ１８４／
ＣＸＣＲ４－、β２ミクログロブリンｌｏｗ、ＭＨＣ－Ｉｌｏｗ、ＭＨＣ－ＩＩ－、ＨＬ
Ａ－Ｇｌｏｗ、及び／またはＰＤＬ１ｌｏｗのうちの１つ以上である単離胎盤細胞、例え
ば、胎盤幹細胞または胎盤多分化能細胞である。具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は
、少なくともＣＤ２９＋及びＣＤ５４＋である。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細
胞は、少なくともＣＤ４４＋及びＣＤ１０６＋である。別の具体的な実施形態では、単離
胎盤細胞は、少なくともＣＤ２９＋である。

【0089】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞集団は、単離胎盤細
胞を含み、該細胞集団中の細胞の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、
９５％、９８％、または９９％は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、
ＣＤ５４／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６２－Ｅ－、ＣＤ６２－Ｌ－、ＣＤ６２－Ｐ－、ＣＤ８０－
、ＣＤ８６－、ＣＤ１０３－、ＣＤ１０４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、
ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリンｄｉｍ、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、β２ミクログロブリン
ｄｉｍ、ＨＬＡ－Ｉｄｉｍ、ＨＬＡ－ＩＩ－、ＨＬＡ－Ｇｄｉｍ、及び／またはＰＤＬ１
ｄｉｍのうちの１つ以上である単離胎盤細胞である。別の具体的な実施形態では、該細胞
集団中の細胞の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、
または９９％は、ＣＤ１０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４／ＩＣＡ
Ｍ＋、ＣＤ６２－Ｅ－、ＣＤ６２－Ｌ－、ＣＤ６２－Ｐ－、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、Ｃ
Ｄ１０３－、ＣＤ１０４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１４４／ＶＥ
カドヘリンｄｉｍ、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、β２ミクログロブリンｄｉｍ、ＭＨＣ－
Ｉｄｉｍ、ＭＨＣ－ＩＩ－、ＨＬＡ－Ｇｄｉｍ、及びＰＤＬ１ｄｉｍである。

【0090】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、ＣＤ１
０＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、Ｃ
Ｄ９０＋、ＳＨ２＋、ＳＨ３＋、ＳＨ４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＯＣＴ－４＋
、及びＡＢＣ－ｐ＋のうちの１つ以上または全てである単離胎盤細胞であり、ＡＢＣ－ｐ
は、胎盤特異的ＡＢＣトランスポータータンパク質（乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）及
びミトキサントロン耐性タンパク質（ＭＸＲ）としても知られている）であり、該単離胎
盤細胞は、残留血液を除去するために、臍帯血を排出され、灌流されている哺乳動物の胎
盤、例えば、ヒト胎盤、の灌流により得られる。

【0091】

上記特徴のいずれの別の具体的な実施形態でも、細胞マーカー（例えば、分化抗原群ま
たは免疫原性マーカー）の発現は、フローサイトメトリーで決定され；別の具体的な実施
形態では、マーカーの発現は、ＲＴ－ＰＣＲで決定される。

【0092】

遺伝子プロファイリングにより、単離胎盤細胞、及び単離胎盤細胞の集団は、他の細胞
、例えば、間葉系幹細胞、例えば、骨髄由来間葉系幹細胞、と識別できることが確認され
る。本明細書に記載の単離胎盤細胞は、例えば、１つ以上の遺伝子の発現を基準にして、
間葉系幹細胞と識別することができ、これらの発現は、骨髄由来間葉系幹細胞と比較して
、単離胎盤細胞において、またはある特定の単離臍帯幹細胞において有意に高い。特に、
本明細書で提供される治療の方法に有用な単離胎盤細胞は、１つ以上の遺伝子の発現を基
準にして、間葉系幹細胞と識別することができ、これらの発現は、細胞が、同等の条件で
成長する時、同等数の骨髄由来間葉系幹細胞よりも、単離胎盤細胞において有意に高く（
つまり、少なくとも２倍高く）、１つ以上の遺伝子は、ＡＣＴＧ２、ＡＤＡＲＢ１、ＡＭ
ＩＧＯ２、ＡＲＴＳ－１、Ｂ４ＧＡＬＴ６、ＢＣＨＥ、Ｃ１１ｏｒｆ９、ＣＤ２００、Ｃ
ＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＰＡ４、ＤＭＤ、ＤＳＣ３、ＤＳＧ２、ＥＬＯＶＬ２、Ｆ
２ＲＬ１、ＦＬＪ１０７８１、ＧＡＴＡ６、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＨＬＡ－Ｇ、
ＩＣＡＭ１、ＩＥＲ３、ＩＧＦＢＰ７、ＩＬ１Ａ、ＩＬ６、ＩＬ１８、ＫＲＴ１８、ＫＲ
Ｔ８、ＬＩＰＧ、ＬＲＡＰ、ＭＡＴＮ２、ＭＥＳＴ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＮＵＡＫ１、ＰＣＤ
Ｈ７、ＰＤＬＩＭ３、ＰＫＰ２、ＲＴＮ１、ＳＥＲＰＩＮＢ９、ＳＴ３ＧＡＬ６、ＳＴ６
ＧＡＬＮＡＣ５、ＳＬＣ１２Ａ８、ＴＣＦ２１、ＴＧＦＢ２、ＶＴＮ、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、
または上述のもののいずれかの組み合わせである。例えば、米国特許公開公報第２００７
／０２７５３６２号（この開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参
照のこと。ある特定の具体的な実施形態では、該１つ以上の遺伝子の該発現は、例えば、
ＲＴ－ＰＣＲまたは例えば、Ｕ１３３－Ａマイクロアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を使
用したマイクロアレイ分析で決定される。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は
、ＤＭＥＭ－ＬＧ（例えば、Ｇｉｂｃｏ製）；２％のウシ胎児血清（例えば、Ｈｙｃｌｏ
ｎｅ Ｌａｂｓ．製）；１×インスリン－トランスフェリン－セレン（ＩＴＳ）；１×リ
ノール酸－ウシ血清アルブミン（ＬＡ－ＢＳＡ）；１０－９Ｍのデキサメタゾン（例えば
、Ｓｉｇｍａ製）；１０－４Ｍのアスコルビン酸２－ホスフェート（例えば、Ｓｉｇｍａ
製）；上皮成長因子１０ｎｇ／ｍＬ（例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製）；及び、血小
板由来成長因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）１０ｎｇ／ｍＬ（例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製
）を含む培地で、多くの集団倍加、例えば、約３～約３５の範囲の集団倍加のために培養
される時、該１つ以上の遺伝子を発現する。別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞特
異的または単離臍帯細胞特異的遺伝子は、ＣＤ２００である。

【0093】

これらの遺伝子に対する特異的配列は、２００８年３月の時点で、ＧｅｎＢａｎｋのア
クセッション番号ＮＭ＿００１６１５（ＡＣＴＧ２）、ＢＣ０６５５４５（ＡＤＡＲＢ１
）、（ＮＭ＿１８１８４７（ＡＭＩＧＯ２）、ＡＹ３５８５９０（ＡＲＴＳ－１）、ＢＣ
０７４８８４（Ｂ４ＧＡＬＴ６）、ＢＣ００８３９６（ＢＣＨＥ）、ＢＣ０２０１９６（
Ｃ１１ｏｒｆ９）、ＢＣ０３１１０３（ＣＤ２００）、ＮＭ＿００１８４５（ＣＯＬ４Ａ
１）、ＮＭ＿００１８４６（ＣＯＬ４Ａ２）、ＢＣ０５２２８９（ＣＰＡ４）、ＢＣ０９
４７５８（ＤＭＤ）、ＡＦ２９３３５９（ＤＳＣ３）、ＮＭ＿００１９４３（ＤＳＧ２）
、ＡＦ３３８２４１（ＥＬＯＶＬ２）、ＡＹ３３６１０５（Ｆ２ＲＬ１）、ＮＭ＿０１８
２１５（ＦＬＪ１０７８１）、ＡＹ４１６７９９（ＧＡＴＡ６）、ＢＣ０７５７９８（Ｇ
ＰＲ１２６）、ＮＭ＿０１６２３５（ＧＰＲＣ５Ｂ）、ＡＦ３４００３８（ＩＣＡＭ１）
、ＢＣ０００８４４（ＩＥＲ３）、ＢＣ０６６３３９（ＩＧＦＢＰ７）、ＢＣ０１３１４
２（ＩＬ１Ａ）、ＢＴ０１９７４９（ＩＬ６）、ＢＣ００７４６１（ＩＬ１８）、（ＢＣ
０７２０１７）ＫＲＴ１８、ＢＣ０７５８３９（ＫＲＴ８）、ＢＣ０６０８２５（ＬＩＰ
Ｇ）、ＢＣ０６５２４０（ＬＲＡＰ）、ＢＣ０１０４４４（ＭＡＴＮ２）、ＢＣ０１１９
０８（ＭＥＳＴ）、ＢＣ０６８４５５（ＮＦＥ２Ｌ３）、ＮＭ＿０１４８４０（ＮＵＡＫ
１）、ＡＢ００６７５５（ＰＣＤＨ７）、ＮＭ＿０１４４７６（ＰＤＬＩＭ３）、ＢＣ１
２６１９９（ＰＫＰ－２）、ＢＣ０９０８６２（ＲＴＮ１）、ＢＣ００２５３８（ＳＥＲ
ＰＩＮＢ９）、ＢＣ０２３３１２（ＳＴ３ＧＡＬ６）、ＢＣ００１２０１（ＳＴ６ＧＡＬ
ＮＡＣ５）、ＢＣ１２６１６０またはＢＣ０６５３２８（ＳＬＣ１２Ａ８）、ＢＣ０２５
６９７（ＴＣＦ２１）、ＢＣ０９６２３５（ＴＧＦＢ２）、ＢＣ００５０４６（ＶＴＮ）
、及びＢＣ００５００１（ＺＣ３Ｈ１２Ａ）に見出すことができる。

【0094】

特定の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、細胞が、同等の条件で成長する時、
同等数の骨髄由来間葉系幹細胞よりも検出可能に高いレベルで、ＡＣＴＧ２、ＡＤＡＲＢ
１、ＡＭＩＧＯ２、ＡＲＴＳ－１、Ｂ４ＧＡＬＴ６、ＢＣＨＥ、Ｃ１１ｏｒｆ９、ＣＤ２
００、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＰＡ４、ＤＭＤ、ＤＳＣ３、ＤＳＧ２、ＥＬＯＶ
Ｌ２、Ｆ２ＲＬ１、ＦＬＪ１０７８１、ＧＡＴＡ６、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＨＬ
Ａ－Ｇ、ＩＣＡＭ１、ＩＥＲ３、ＩＧＦＢＰ７、ＩＬ１Ａ、ＩＬ６、ＩＬ１８、ＫＲＴ１
８、ＫＲＴ８、ＬＩＰＧ、ＬＲＡＰ、ＭＡＴＮ２、ＭＥＳＴ、ＮＦＥ２Ｌ３、ＮＵＡＫ１
、ＰＣＤＨ７、ＰＤＬＩＭ３、ＰＫＰ２、ＲＴＮ１、ＳＥＲＰＩＮＢ９、ＳＴ３ＧＡＬ６
、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ５、ＳＬＣ１２Ａ８、ＴＣＦ２１、ＴＧＦＢ２、ＶＴＮ、及びＺＣ
３Ｈ１２Ａのそれぞれを発現する。

【0095】

具体的な実施形態では、胎盤細胞は、同等数の骨髄由来間葉系幹細胞（ＢＭ－ＭＳＣ）
よりも検出可能に高いレベルで、ＣＤ２００及びＡＲＴＳ１（１型腫瘍壊死因子のアミノ
ペプチダーゼ制御因子）；ＡＲＴＳ－１及びＬＲＡＰ（白血球由来アルギニンアミノペプ
チダーゼ）；ＩＬ６（インターロイキン－６）及びＴＧＦＢ２（トランスフォーミング成
長因子－β２）；ＩＬ６及びＫＲＴ１８（ケラチン１８）；ＩＥＲ３（即時初期応答３）
、ＭＥＳＴ（中胚葉特異的転写ホモログ）及びＴＧＦＢ２；ＣＤ２００及びＩＥＲ３；Ｃ
Ｄ２００及びＩＬ６；ＣＤ２００及びＫＲＴ１８；ＣＤ２００及びＬＲＡＰ；ＣＤ２００
及びＭＥＳＴ；ＣＤ２００及びＮＦＥ２Ｌ３（核因子（赤血球由来２）様３）；またはＣ
Ｄ２００及びＴＧＦＢ２を発現する。該骨髄由来間葉系幹細胞は、該単離胎盤細胞が経て
いる継代数と同等の、培養での継代数を経ている。他の具体的な実施形態では、胎盤細胞
は、ＡＲＴＳ－１、ＣＤ２００、ＩＬ６及びＬＲＡＰ；ＡＲＴＳ－１、ＩＬ６、ＴＧＦＢ
２、ＩＥＲ３、ＫＲＴ１８、及びＭＥＳＴ；ＣＤ２００、ＩＥＲ３、ＩＬ６、ＫＲＴ１８
、ＬＲＡＰ、ＭＥＳＴ、ＮＦＥ２Ｌ３、及びＴＧＦＢ２；ＡＲＴＳ－１、ＣＤ２００、Ｉ
ＥＲ３、ＩＬ６、ＫＲＴ１８、ＬＲＡＰ、ＭＥＳＴ、ＮＦＥ２Ｌ３、及びＴＧＦＢ２；ま
たはＩＥＲ３、ＭＥＳＴ及びＴＧＦＢ２を発現する。同等数の骨髄由来間葉系幹細胞より
も検出可能に高いレベルＢＭ－ＭＳＣで、該骨髄由来間葉系幹細胞は、該単離胎盤細胞が
経ている継代数と同等の、培養での継代数を経ている。

【0096】

上記参照の遺伝子の発現は、標準的な技術で評価することができる。例えば、遺伝子（
複数可）の配列を基準にしたプローブは個別に、従来技術により選択及び構築することが
できる。遺伝子の発現は、例えば、遺伝子のうちの１つ以上に対するプローブを含むマイ
クロアレイ、例えば、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）Ｈｕｍａｎ
Ｇｅｎｏｍｅ Ｕ１３３Ａ ２．０ ａｒｒａｙ、またはＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧＥ
ＮＥＣＨＩＰ（登録商標）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｕ１３３ Ｐｌｕｓ ２．０（カ
リフォルニア州サンタクララ）で評価することができる。特定のＧｅｎＢａｎｋアクセッ
ション番号に対する配列が補正される場合でも、補正された配列に特異的なプローブが、
周知の標準的な技術を使用して、容易に生成することができるので、これらの遺伝子の発
現は評価することができる。

【0097】

これらの遺伝子の発現のレベルは、単離胎盤細胞の集団の識別を確認するため、少なく
とも複数の単離胎盤細胞を含む細胞の集団を特定するためなど、使用することができる。
識別が確認された単離胎盤細胞の集団は、クローン性、例えば、本明細書に記載されるよ
うな、単一の単離胎盤細胞から拡大した単離胎盤細胞の集団、または幹細胞の混合集団、
例えば、複数の単離胎盤細胞をから拡大した単独の単離胎盤細胞を含む細胞の集団、また
は単離胎盤細胞を含む細胞の集団、及び少なくとも１つの他の種類の細胞であることがで
きる。

【0098】

これらの遺伝子の発現のレベルは、単離胎盤細胞の集団を選択するために使用すること
ができる。例えば、細胞の集団、例えば、クローン拡大細胞は、上記遺伝子のうちの１つ
以上の発現が、間葉系幹細胞の同等の集団においてよりも、細胞の集団由来の試料におい
て有意に高い場合、選択されてもよい。このような選択は、複数の単離胎盤細胞集団由来
、複数の細胞集団（識別が不明）由来などの集団の選択とすることができる。

【0099】

単離胎盤細胞は、例えば、１つ以上のこのような遺伝子の発現の、間葉系幹細胞対照に
おける該１つ以上の遺伝子における発現のレベルと比較した、レベル、例えば、同等数の
骨髄由来間葉系幹細胞中の該１つ以上の遺伝子における発現のレベル、を基準にして選択
することができる。一実施形態では、同等数の間葉系幹細胞を含む試料における該１つ以
上の遺伝子の発現のレベルが、対照として使用される。別の実施形態では、特定の条件下
で試験される単離胎盤細胞に対する対照は、該条件下の間葉系幹細胞における該１つ以上
の遺伝子の発現のレベルを表す数値である。

【0100】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に有用な胎盤細胞（例えば、ＰＤ
ＡＣ）は、４～２１日間、１～１００ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦに曝露した後、免疫局在法で
検出されるようなＣＤ３４を発現しない。ある特定の実施形態では、該胎盤接着細胞は、
組織培養プラスチックに接着している。別の具体的な実施形態では、細胞の該集団は、例
えば、ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）などの基質上、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、上皮成
長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、または塩基性線維芽細胞成長因子
（ｂＦＧＦ）などの血管新生因子の存在下で培養される時、内皮細胞が新芽または管腔様
構造を形成するように誘導する。

【0101】

別の態様では、細胞の集団である本明細書で提供されるＰＤＡＣ、例えば、ＰＤＡＣの
集団、または細胞の該単離集団中の細胞の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％
、９０％、９５％、若しくは９８％がＰＤＡＣである細胞の集団は、細胞（複数可）が成
長する培地に、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＬ－８、ＭＣＰ－３、ＦＧＦ２、フォリスタチン、
Ｇ－ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＥＮＡ－７８、ＧＲＯ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＰＤＧＦ－ＢＢ、
ＴＩＭＰ－２、ｕＰＡＲ、またはガレクチン－１のうちの１つ以上または全てを分泌する
。別の実施形態では、ＰＤＡＣは、正常酸素条件下（例えば、約２０％または約２１％の
０２）と比較して、低酸素条件下（例えば、約５％未満のＯ２）で、増加したレベルのＣ
Ｄ２０２ｂ、ＩＬ－８、及び／またはＶＥＧＦを発現する。

【0102】

別の実施形態では、本明細書に記載のＰＤＡＣまたはＰＤＡＣを含む細胞の集団のいず
れも、該胎盤由来接着細胞と接触して、内皮細胞の集団における新芽または管腔様構造の
形成を引き起こすことができる。具体的な実施形態では、ＰＤＡＣは、例えば、少なくと
も４日間、胎盤コラーゲンまたはＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）などの基質中またはこれ上に
、例えば、Ｉ型及びＩＶ型コラーゲンなどの細胞外マトリックスタンパク質、ならびに／
または血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（
ＰＤＧＦ）、若しくは塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）などの血管新生因子の存在
下で培養された時、新芽若しくは管腔様構造を形成する、または内皮細胞の新芽の形成を
サポートするヒト内皮細胞と共培養される。別の実施形態では、本明細書に記載の胎盤由
来接着細胞を含む細胞の集団のいずれも、例えば、胎盤コラーゲンまたはＭＡＴＲＩＧＥ
Ｌ（商標）などの基質中またはこれ上に、Ｉ型及びＩＶ型コラーゲンなどの細胞外マトリ
ックスタンパク質の存在下で培養される時、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞成長
因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧ
Ｆ）、またはインターロイキン－８（ＩＬ－８）などの血管新生因子を分泌し、それによ
り、ヒト内皮細胞が新芽または管腔様構造を形成するように誘導することができる。

【0103】

別の実施形態では、胎盤由来接着細胞（ＰＤＡＣ）を含む細胞の上記集団のいずれかは
、血管新生因子を分泌する。具体的な実施形態では、細胞の集団は、血管内皮成長因子（
ＶＥＧＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、塩基性線維
芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、及び／またはインターロイキン－８（ＩＬ－８）を分泌す
る。他の具体的な実施形態では、ＰＤＡＣを含む細胞の集団は、１つ以上の血管新生因子
を分泌し、それにより、ヒト内皮細胞が、インビトロ創傷治癒アッセイにおいて、遊走す
るように誘導する。他の具体的な実施形態では、胎盤由来接着細胞を含む細胞の集団は、
ヒト内皮細胞、内皮前駆細胞、筋細胞、または筋芽細胞の成熟、分化、または増殖を誘導
する。

【0104】

本明細書に記載の単離胎盤細胞は、初代培養中に、または例えば、ＤＭＥＭ－ＬＧ（Ｇ
ｉｂｃｏ）；２％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｓ．）；１×イン
スリン－トランスフェリン－セレン（ＩＴＳ）；１×リノール酸－ウシ血清アルブミン（
ＬＡ－ＢＳＡ）；１０－９Ｍのデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ）；１０－４Ｍのアスコルビ
ン酸２－ホスフェート（Ｓｉｇｍａ）；上皮成長因子（ＥＧＦ）１０ｎｇ／ｍＬ（Ｒ＆Ｄ
Ｓｙｓｔｅｍｓ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）１０ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ
Ｓｙｓｔｅｍｓ）、及び１００Ｕのペニシリン／１０００Ｕのストレプトマイシンを含む
培地で増殖中に、上記特徴（例えば、細胞表面マーカー及び／または遺伝子発現プロファ
イルの組み合わせ）を示す。

【0105】

本明細書に開示の胎盤細胞のいずれかのある特定の実施形態では、細胞は、ヒトである
。本明細書に開示の胎盤細胞のいずれかのある特定の実施形態では、細胞マーカー特徴ま
たは遺伝子発現特徴は、ヒトマーカーまたはヒト遺伝子である。

【0106】

該単離胎盤細胞または単離胎盤細胞を含む細胞の集団の別の具体的な実施形態では、該
細胞または集団は、拡大しており、例えば、少なくとも、約、若しくは多くとも１、２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８
、１９、若しくは２０倍以上継代されている、または、少なくとも、約、若しくは多くと
も１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、
１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３
０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３
、４４、４５、４６、４７、４８、４９、若しくは５０の集団倍加のために増殖されてい
る。該単離胎盤細胞または単離胎盤細胞を含む細胞の集団の別の具体的な実施形態では、
該細胞または集団は、初代分離株である。本明細書に開示の単離胎盤細胞または単離胎盤
細胞を含む細胞の集団の別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、由来が胎児であ
る（つまり、胎児遺伝子型を有する）。

【0107】

ある特定の実施形態では、該単離胎盤細胞は、成長培地、すなわち、増殖を促進するた
めに製剤化された培地中での培養中に、例えば、成長培地での増殖中に、分化しない。別
の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、増殖するためにフィーダー層を必要としな
い。別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、フィーダー層の不存在下での培養中
に、分化しない。それは、単にフィーダー細胞層がないためである。

【0108】

別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用な細胞は、単離胎盤細胞で
あり、複数の該単離胎盤細胞は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性アッセイにより評価さ
れる場合、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）に対し陽性である。このようなアッ
セイは、当該技術分野で既知である（例えば、Ｂｏｓｔｉａｎ ａｎｄ Ｂｅｔｔｓ，
Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ．， １７３， ７８７， （１９７８）を参照のこと）。ある特
定の実施形態では、該アッセイは、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性のマーカーとして、
Ａｌｄｅｆｌｕｏｒ（登録商標）（Ａｌｄａｇｅｎ， Ｉｎｃ、オレゴン州アッシュラン
ド）を使用する。ある特定の実施形態では、該複数は、細胞の該集団中の細胞の約３％及
び２５％の間にある。別の実施形態では、単離臍帯細胞、例えば、多分化能単離臍帯細胞
、の集団が、本明細書で提供され、複数の該単離臍帯細胞は、アルデヒドデヒドロゲナー
ゼ活性の指標としてＡｌｄｅｆｌｕｏ（登録商標）を使用するアルデヒドデヒドロゲナー
ゼ活性アッセイにより評価される場合、アルデヒドデヒドロゲナーゼに対し陽性である。
具体的な実施形態では、該複数は、細胞の該集団中の細胞の約３％及び２５％の間にある
。別の実施形態では、単離胎盤細胞の該集団または単離臍帯細胞は、ほぼ同じ数の細胞を
有し、かつ同じ条件下で培養された骨髄由来間葉系幹細胞の集団よりも少なくとも３倍、
または少なくとも５倍高いＡＬＤＨ活性を示す。

【0109】

本明細書に記載の単離胎盤細胞を含む細胞の集団のいずれかのある特定の実施形態では
、細胞の該集団中の胎盤細胞は、母体遺伝子型を有する細胞を実質的に含まず、例えば、
該集団中の胎盤細胞の少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７
０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％は、胎児遺伝子
型を有する。本明細書に記載の単離胎盤細胞を含む細胞の集団のいずれかの他のある特定
の実施形態では、該胎盤細胞を含む細胞の集団は、母体遺伝子型を有する細胞を実施的に
含まず、例えば、該集団中の細胞の少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％
、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％は
、胎児遺伝子型を有する。

【0110】

上記単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の細胞集団のいずれかのある特定の実施形態では
、細胞または該集団の細胞の少なくとも約９５％または約９９％の核型は、正常である。
上記胎盤細胞または細胞集団のいずれかの別の具体的な実施形態では、細胞または細胞の
集団中の細胞は、由来が非母体である。

【0111】

マーカーの上記組み合わせのいずれかを持つ単離胎盤細胞または単離胎盤細胞の集団は
、任意の比率で組み合わせることができる。上記単離胎盤細胞集団のうちの任意の２つ以
上は、単離胎盤細胞集団を形成するために組み合わせることができる。例えば、単離胎盤
細胞の集団は、上記マーカーの組み合わせのうちの１つにより規定される単離胎盤細胞の
第１の集団、及びマーカーの組み合わせのうちの別のものにより規定される単離胎盤細胞
の第２の集団を含むことができ、該第１及び第２の集団は、約１：９９、２：９８、３：
９７、４：９６、５：９５、１０：９０、２０：８０、３０：７０、４０：６０、５０：
５０、６０：４０、７０：３０、８０：２０、９０：１０、９５：５、９６：４、９７：
３、９８：２、または約９９：１の比率で組み合わされる。同様に、上記単離胎盤細胞ま
たは単離胎盤細胞集団のうちの任意の３つ、４つ、５つ、またはそれ以上を、組み合わせ
ることができる。

【0112】

本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞は、例えば、酵素消化を用いる
または用いない胎盤組織の破壊（セクション５．２．３を参照のこと）、または灌流（セ
クション５．２．４を参照のこと）により得ることができる。例えば、単離胎盤細胞の集
団は、臍帯血を排出され、残りの血液を除去するために灌流されている哺乳動物胎盤を灌
流すること；該胎盤に灌流液を灌流すること；及び該灌流液を収集すること（灌流後の該
灌流液は、単離胎盤細胞を含む胎盤細胞の集団を含む）；ならびに、細胞の該集団から、
複数の該単離胎盤細胞を単離することを含む方法に従って産生することができる。具体的
な実施形態では、灌流液は、臍静脈及び臍動脈の両方を通過し、胎盤から滲出した後に収
集される。別の具体的な実施形態では、灌流液は、臍静脈を通過して、臍動脈から収集さ
れ、または臍動脈を通過して、臍静脈から収集される。

【0113】

種々の実施形態では、胎盤の灌流から得られる細胞の集団内に含有される単離胎盤細胞
は、胎盤細胞の該集団の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、
９９％、または少なくとも９９．５％である。別の具体的な実施形態では、灌流により収
集される単離胎盤細胞は、胎児及び母体細胞を含む。別の具体的な実施形態では、灌流に
より収集される単離胎盤細胞は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、
９５％、９９％、または少なくとも９９．５％の胎児細胞である。

【0114】

別の具体的な実施形態では、灌流により収集される本明細書に記載されるような単離胎
盤細胞の集団を含む組成物が、本明細書で提供され、該組成物は、単離胎盤細胞を収集す
るために使用される灌流液の少なくとも一部を含む。

【0115】

本明細書に記載の単離胎盤細胞の単離集団は、細胞を含む胎盤細胞の集団を得るために
、組織破壊酵素で胎盤細胞を消化すること、及び該胎盤細胞の残部から、複数の胎盤細胞
を単離すること、または実質的に単離すること、により産生することができる。胎盤全体
、またはその任意の部分を、本明細書に記載の単離胎盤細胞を得るために、消化すること
ができる。具体的な実施形態では、例えば、該胎盤組織は、胎盤全体、羊膜、絨毛膜、羊
膜及び絨毛膜の組み合わせ、または上述のもののいずれかの組み合わせであることができ
る。他の具体的な実施形態では、組織破壊酵素は、トリプシンまたはコラゲナーゼである
。種々の実施形態では、胎盤を消化することにより得られる細胞の集団内に含有される単
離胎盤細胞は、胎盤細胞の該集団の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％
、９５％、９９％、または少なくとも９９．５％である。
上記胎盤細胞の単離集団、及び単離胎盤細胞の集団は一般に、（例えば、胎盤幹細胞を含
む医薬組成物の一部として）約、少なくとも、若しくは多くとも１×１０^３、３×１０^３
、５×１０^３、１×１０^４、３×１０^４、５×１０^４、１×１０^５、３×１０^５、５×１
０^５、１×１０^６、３×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、３×１０^７、５×１０^７、１
×１０^８、３×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、５×１０^９、若しくは１×１０^１０単
離胎盤細胞、または（例えば、胎盤幹細胞を含む医薬組成物の一部として）約１×１０^３
～３×１０^３、３×１０^３～５×１０^３、５×１０^３～１×１０^４、１×１０^４～３×１
０^４、３×１０^４～５×１０^４、５×１０^４～１×１０^５、１×１０^５～３×１０^５、３
×１０^５～５×１０^５、５×１０^５～１×１０^６、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６
～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１
０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～３×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５
×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、若しくは５×１０^９～１×１０^１０の
単離胎盤細胞を含むことができる。本明細書に記載の治療方法に有用な単離胎盤細胞の集
団は、例えば、トリパンブルー排除法で、例えば、決定される場合、少なくとも５０％、
５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、
または９９％の生存可能な単離胎盤細胞を含む。

【0116】

５．２ 単離胎盤細胞を得る方法
５．２．１ 幹細胞収集組成物
胎盤細胞、例えば、上記セクション５．１に記載の単離胎盤細胞、を収集及び単離する
方法が、さらに本明細書で提供される。一般に、そのような細胞は、生理学的に許容され
る溶液、例えば、細胞収集組成物を使用して、哺乳動物胎盤から得られる。例示的細胞収
集組成物は、「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ Ｐｌ
ａｃｅｎｔａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ Ｏｒｇａｎｓ
」という名称の米国特許公開公報第２００７／０１９００４２号で詳細に記載されており
、この開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0117】

細胞収集組成物は、細胞、例えば、本明細書に記載の単離胎盤細胞、の収集及び／また
は培養に適する任意の生理学的に許容される溶液、例えば、食塩水（例えば、リン酸緩衝
食塩水、クレブス液、変性クレブス液、イーグル液、０．９％のＮａＣｌなど）、培地（
例えば、ＤＭＥＭ、Ｈ．ＤＭＥＭなど）、などを含むことができる。

【0118】

細胞収集組成物は、収集時から培養時まで、単離胎盤細胞を保存するのに役立つ、つま
り、単離胎盤細胞が死滅するのを防ぐ、または単離胎盤細胞の死滅を遅延させる、死滅す
る細胞の集団中の単離胎盤細胞の数を低減させるなどの傾向を有する、１つ以上の構成成
分を含むことができる。そのような構成成分は、例えば、アポトーシス阻害剤（例えば、
カスパーゼ阻害剤、若しくはＪＮＫ阻害剤）；血管拡張薬（例えば、硫酸マグネシウム、
抗高血圧薬薬物、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、副腎皮質刺激ホルモン、コ
ルチコトロピン放出ホルモン、ニトロプルシドナトリウム、ヒドララジン、アデノシン三
リン酸、アデノシン、インドメタシン、若しくは硫酸マグネシウム、ホスホジエステラー
ゼ阻害剤など）；壊死阻害剤（例えば、２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－３－ペン
チルアミノ－マレイミド、ピロリジンジチオカルバメート、若しくはクロナゼパム）；Ｔ
ＮＦ－α阻害剤；及び／または酸素含有ペルフルオロカーボン（例えば、ペルフルオロオ
クチルブロミド、ペルフルオロデシルブロミドなど）であることができる。

【0119】

細胞収集組成物は、１つ以上の組織分解酵素、例えば、メタロプロテアーゼ、セリンプ
ロテアーゼ、中性プロテアーゼ、ＲＮａｓｅ、またはＤＮａｓｅなどを含むことができる
。そのような酵素は、コラゲナーゼ（例えば、コラゲナーゼＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩ
Ｖ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ由来のコラゲナーゼなど）；デ
ィスパーゼ、サーモリシン、エラスターゼ、トリプシン、リベラーゼ、ヒアルロニダーゼ
などを含むが、これらに限定されない。

【0120】

細胞収集組成物は、殺菌的または静菌的有効量の抗生物質を含むことができる。ある特
定の非限定的実施形態では、抗生物質は、マクロライド（例えば、トブラマイシン）、セ
ファロスポリン（例えば、セファレキシン、セフラジン、セフロキシム、セフプロジル、
セファクロール、セフェキシム、またはセファドロキシル）、クラリスロマイシン、エリ
スロマイシン、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ）またはキノロン（例えば、オフロキ
サシン、シプロフロキサシン、若しくはノルフロキサシン）、テトラサイクリン、ストレ
プトマイシンなどである。特定の実施形態では、抗生物質は、グラム陽性及び／またはグ
ラム陰性細菌、例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓなどに対し活性がある。一実施形態では、抗生物質は、
ゲンタマイシン、例えば、培地中約０．００５％～約０．０１％（ｗ／ｖ）である。

【0121】

細胞収集組成物は、次の化合物のうちの１つ以上を含むこともできる：アデノシン（約
１ｍＭ～約５０ｍＭ）；Ｄ－グルコース（約２０ｍＭ～約１００ｍＭ）；マグネシウムイ
オン（約１ｍＭ～約５０ｍＭ）；一実施形態では、内皮完全性及び細胞生存率を維持する
のに十分な量で存在する２０，０００ダルトンを超える分子量の巨大分子（例えば、約２
５ｇ／ｌ～約１００ｇ／ｌ、または約４０ｇ／ｌ～約６０ｇ／ｌで存在する合成若しくは
天然コロイド、デキストランなどの多糖類、またはポリエチレングリコール）；酸化防止
剤（例えば、約２５μＭ～約１００μＭで存在するブチル化ヒドロキシアニソール、ブチ
ル化ヒドロキシトルエン、グルタチオン、ビタミンＣ、またはビタミンＥ）；還元剤（例
えば、約０．１ｍＭ～約５ｍＭで存在するＮ－アセチルシステイン）；カルシウムが細胞
に侵入するのを妨げる薬剤（例えば、約２μＭ～約２５μＭで存在するベラパミル）；ニ
トログリセリン（例えば、約０．０５ｇ／Ｌ～約０．２ｇ／Ｌ）；一実施形態では、抗は
、残留血液の凝固を防ぐことに役立つのに十分な量で存在する、抗凝固剤（例えば、約１
０００単位／ｌ～約１００，０００単位／ｌの濃度で存在するヘパリンまたはヒルジン）
；あるいは、アミロライド含有化合物（例えば、約１．０μＭ～約５μＭで存在するアミ
ロライド、エチルイソプロピルアミロライド、ヘキサメチレンアミロライド、ジメチルア
ミロライド、またはイソブチルアミロライド）。

【0122】

５．２．２ 胎盤の収集及び取り扱い
一般に、ヒト胎盤は、出生後のそれの娩出後に、すぐに回収される。好ましい実施形態
では、胎盤は、インフォームドコンセント後に、かつ患者の完全な病歴が取られ、胎盤に
関連づけられた後に、患者から回収される。好ましくは、病歴は、分娩後に継続する。そ
のような病歴は、胎盤またはそこから採取された単離胎盤細胞の後続の使用を調整するた
めに使用することができる。例えば、単離ヒト胎盤細胞は、胎盤と関連する幼児、または
幼児の親、兄弟、若しくは他の親族の個別化医療のために、病歴に照らして使用すること
ができる。

【0123】

単離胎盤細胞の回収に前に、臍帯血及び胎盤血は、好ましくは除去される。ある特定の
実施形態では、分娩後に、胎盤の臍帯血は、回収される。胎盤は、従来の臍帯血回収プロ
セスに付すことができる。通常は、胎盤を瀉血するために、重力を用いて、針またはカニ
ューレが使用される（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ、米国特許第５，３７２，５８１号；Ｈ
ｅｓｓｅｌら、米国特許第５，４１５，６６５号を参照のこと）。針またはカニューレは
通常、臍静脈中に入れられ、胎盤は、臍帯血を胎盤から排出させるのを助けるために、や
さしくマッサージすることができる。そのような臍帯血回収は、商業的に、例えばＬｉｆ
ｅＢａｎｋ ＵＳＡ、ニュージャージー州シーダーノールズで、実施されてもよい。好ま
しくは、胎盤は、臍帯血回収中の組織破壊を最小限に抑えるために、さらなる操作なしに
重力で排出される。

【0124】

通常、胎盤は、例えば、灌流または組織解離により、臍帯血の回収及び幹細胞の収集の
ために、分娩または出産室から別の場所、例えば、研究室に輸送される。胎盤は好ましく
は、例えば、滅菌ジップロックプラスチックバッグに、隣接する臍帯を固定して胎盤を入
れて、次に、断熱容器に入れることにより、（胎盤の温度を２０～２８℃に維持する）滅
菌断熱輸送装置中で輸送される。別の実施形態では、胎盤は、係属中の米国特許第７，１
４７，６２６号（この開示は、本明細書に参照により組み込まれる）に実質的に記載され
るような臍帯血収集キット中で、輸送される。好ましくは、胎盤は、分娩の４～２４時間
後に、研究室に送達される。ある特定の実施形態では、隣接する臍帯は、好ましくは、臍
帯血の回収前に、胎盤ディスクへの付着点の４～５ｃｍ（センチメートル）の範囲内に固
定される。他の実施形態では、隣接する臍帯は、臍帯血回収後であるが、胎盤のさらなる
処理前に、固定される。

【0125】

胎盤は、細胞収集前に、滅菌条件で、室温または５℃～２５℃の温度のいずれかで保存
することができる。胎盤は、任意の残留臍帯血を除去するために、胎盤を灌流する前に、
４～２４時間の間、多くとも４８時間、または４８時間を超えて保存されてもよい。一実
施形態では、胎盤は、娩出の約０時間後～約２時間後の間に採取される。胎盤は好ましく
は、５℃～２５℃の温度で、抗凝固剤溶液中で保存される。好適な抗凝固剤溶液は、当該
技術分野において周知である。例えば、ヘパリンまたはワルファリンナトリウムの溶液が
使用することができる。好ましい実施形態では、抗凝固剤溶液は、ヘパリンの溶液（例え
ば、１：１０００溶液中１％（ｗ／ｗ））を含む。瀉血された胎盤は好ましくは、胎盤細
胞を収集する前の多くとも３６時間の間保存される。

【0126】

一旦収集されて上記のように一般に調製された哺乳動物胎盤またはその部分は、単離胎
盤細胞を得るために、技術分野に既知の任意の仕方で処理することができ、例えば、灌流
または破壊でき、例えば、１つ以上の組織破壊酵素で消化することができる。

【0127】

５．２．３ 胎盤組織の物理的破壊及び酵素消化
一実施形態では、幹細胞は、器官の部分または全部の物理的破壊により、哺乳動物胎盤
から収集される。例えば、胎盤またはその部分は、例えば、粉砕、剪断、細かく刻む、ダ
イスカット、チョップ、細かく砕くなどしてもよい。次に、組織は、単離胎盤細胞の集団
を得るために培養することができる。通常、胎盤組織は、例えば、培地、食塩水、または
幹細胞収集を使用して破壊される。

【0128】

胎盤は、物理的破壊及び／または酵素消化ならびに幹細胞回収前に、構成部分に切るす
ることができる。単離胎盤細胞は、完全な胎盤からを含む、羊膜、絨毛膜、臍帯、胎盤絨
毛叢、またはそれらの任意の組み合わせの全部または一部から得ることができる。好まし
くは、単離胎盤細胞は、羊膜及び絨毛膜を含む胎盤組織から得られる。通常、単離胎盤細
胞は、胎盤組織の小さなブロックの破壊により得ることができ、例えば、胎盤組織のブロ
ックは、体積が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０
、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００
、８００、９００、または約１０００立方ミリメートルである。物理的破壊の任意の方法
を使用することができるが、但し、破壊方法は、例えば、トリパンブルー排除法で決定し
て、生存可能な該器官中の細胞の多数、より好ましくは大半、より好ましくは少なくとも
６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％を残すことを条件とす
る。

【0129】

単離接着胎盤細胞は一般に、娩出の最初の約３日後以内の任意の時であるが、好ましく
は、娩出の約８時間後及び約１８時間後の間に、胎盤またはその部分から収集することが
できる。

【0130】

特定の実施形態では、破壊された組織は、単離胎盤細胞の増殖に適する組織培地で培養
される。

【0131】

別の具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、胎盤組織の物理的破壊により収集され、
物理的破壊は、１つ以上の組織消化酵素の使用により達成することができる酵素消化を含
む。胎盤またはその部分はまた、物理的に破壊されて、１つ以上の酵素で消化されてもよ
く、次に、得られる材料は、細胞収集組成物に浸漬される、またはこれに混合される。

【0132】

好ましい細胞収集組成物は、１つ以上の組織破壊酵素（複数可）を含む。胎盤組織を破
壊するために使用することができる酵素は、パパイン；デオキシリボヌクレアーゼ；トリ
プシン、キモトリプシン、コラゲナーゼ、ディスパーゼ、またはエラスターゼなどのセリ
ンプロテアーゼ、を含む。セリンプロテアーゼは、血清中のα２ミクログロブリンにより
阻害され得る、それ故、消化に使用される培地は通常、無血清である。ＥＤＴＡ及びＤＮ
ａｓｅが一般に、細胞回収の効率を増加させるために、酵素消化手順で使用される。消化
液は好ましくは、粘性のある消化物内の細胞を捕捉するのを回避するために、希釈される
。

【0133】

組織消化酵素の任意の組み合わせが使用することができる。トリプシンを使用した消化
に対する代表的な濃度は、０．１％～約２％のトリプシン、例えば、約０．２５％のトリ
プシンを含む。プロテアーゼの組み合わせ、つまり、同じ消化反応において２つ以上のプ
ロテアーゼを使用することができる、または、胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞及び胎盤多
分化能細胞を遊離させるため順次使用することができる。例えば、一実施形態では、胎盤
またはその部分は、例えば、３０分間、約１～約２ｍｇ／ｍｌの適切な量のコラゲナーゼ
Ｉでまず消化され、続いて、例えば、３７℃で１０分間、約０．２５％の濃度のトリプシ
ンで消化される。セリンプロテアーゼは好ましくは、他の酵素の使用後に、連続して使用
される。

【0134】

別の実施形態では、組織は、幹細胞を含む幹細胞収集組成物に、または、幹細胞が幹細
胞収集組成物で単離される前に組織が破壊及び／若しくは消化される溶液に、キレート剤
、例えば、エチレングリコールビス（２－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'－
テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を添加することによ
り、さらに破壊することができる。

【0135】

消化後、消化物は、例えば、培地で３回洗浄され、洗浄された細胞は、培養フラスコに
播種される。次に、細胞は、特異な接着により単離され、例えば、生存率、細胞表面マー
カー、分化などに対し特徴付けられる。

【0136】

胎盤全体または胎盤の部分が、胎児及び母体細胞の両方を含む場合（例えば、胎盤の部
分が、絨毛膜または絨毛叢を含む場合）、単離された胎盤細胞は、胎児源及び母体源の両
方に由来する胎盤細胞の混合物を含み得ることが理解されるであろう。胎盤の部分（例え
ば、羊膜）が、母体細胞を含まない、またはこれを無視できる数を含む場合、そこから単
離された胎盤細胞は、ほとんど排他的に胎児胎盤細胞を含むことになる（つまり、胎盤細
胞は、胎児の遺伝子型を有する）。

【0137】

胎盤細胞、例えば、上記セクション５．１に記載されている胎盤細胞は、特異なトリプ
シン処理（下記セクション５．２．５を参照のこと）、続いて、新しい増殖培地の１つ以
上の新しい培養容器中での培養、任意に続いて、第２の特異なトリプシン処理により、破
壊された胎盤組織から単離することができる。

【0138】

５．２．４ 胎盤灌流
胎盤細胞、例えば、上記セクション５．１に記載されている胎盤細胞は、哺乳動物胎盤
の灌流により得ることもできる。胎盤細胞を得るために哺乳動物胎盤に灌流する方法は、
例えば、Ｈａｒｉｒｉ、米国特許第７，０４５，１４８号及び同第７，２５５，７２９号
、米国特許公開公報第２００７／０２７５３６２号及び同第２００７／０１９００４２号
に開示されており、これらのそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込
まれる。

【0139】

胎盤細胞は、例えば、灌流液として細胞収集組成物を使用する、例えば、胎盤脈管構造
中の灌流により収集することができる。一実施形態では、哺乳動物胎盤は、臍動脈及び臍
静脈の一方またはその両方を灌流液が通過することにより灌流される。灌流液の胎盤を通
る流れは、例えば、胎盤への重力流を使用して達成されてもよい。好ましくは、灌流液は
、ポンプ、例えば、蠕動ポンプを使用して、胎盤を強制的に通過させる。臍静脈は、例え
ば、滅菌チューブなどの滅菌接続器具に接続されているカニューレ、例えば、ＴＥＦＬＯ
Ｎ（登録商標）またはプラスチックカニューレ、をカニューレ挿入することができる。滅
菌接続器具は、灌流マニホールドに接続されている。

【0140】

灌流の準備では、胎盤は好ましくは、臍動脈及び臍静脈が、胎盤の最高点に位置するよ
うに配置される（例えば、吊される）。胎盤は、灌流液の、胎盤脈管構造及び周囲組織中
の通過により灌流することができる。胎盤は、灌流液の臍静脈への通過及び臍動脈からの
収集、または、灌流液の臍動脈への通過及び臍動脈からの収集により、灌流することもで
きる。

【0141】

一実施形態では、例えば、臍動脈及び臍静脈は、例えば、可撓性コネクタを介して灌流
液のリザーバに接続されているピペットに同時に接続される。灌流液は、臍静脈及び動脈
を通過する。灌流液は、胎盤の周囲の組織へ、血管の壁から滲出し、及び／またはこれら
を通過し、妊娠中の母親の子宮に付着していた胎盤の表面から好適な開放容器に収集され
る。灌流液はまた、臍帯開口部を通して導入されてもよく、母体の子宮壁と接続される胎
盤の壁の開口部から流出または浸出させてもよい。「ｐａｎ」法と称することができる本
方法により収集される胎盤細胞は通常は、胎児及び母体細胞の混合物である。

【0142】

別の実施形態では、灌流液は、臍静脈を通過して、臍動脈から収集される、または、臍
動脈を通過して、臍静脈から収集される。「閉回路」法と称することができる本方法によ
り収集される胎盤細胞は通常、ほとんど排他的に胎児である。

【0143】

ｐａｎ法を使用する灌流は、つまり、それにより、灌流液が、胎盤の母体側から滲出し
た後に、収集されるが、胎児及び母体細胞の混合物をもたらすことが理解されるであろう
。その結果、本方法により収集された細胞は、由来が胎児及び母体の両方の胎盤細胞の混
合集団、例えば、胎盤幹細胞または胎盤多分化能細胞を含むことができる。対照的に、閉
回路法における胎盤脈管構造単独での灌流は、それにより、灌流液が、１つまたは２つの
胎盤血管を通過し、残りの血管（複数可）単独で収集されるが、ほぼ排他的に胎児由来で
ある胎盤細胞の集団の収集をもたらす。

【0144】

一実施形態では、閉回路灌流法は、次の通り実施することができる。分娩後の胎盤は、
出生後の約４８時間内に得られる。臍帯は、固定され、クランプの上で切断される。臍帯
は、廃棄することができる、または、例えば、臍帯幹細胞を回収するために、及び／若し
くは生体材料の製造のために臍帯膜を処理するために、処理することができる。羊膜は、
灌流の間保持することができる、または例えば、指での鈍的切開を使用して、絨毛膜から
分離することができる。羊膜は、灌流前に絨毛膜から分離される場合、例えば、廃棄する
ことができ、または例えば、酵素消化により幹細胞を得るために、若しくは例えば、羊膜
生体材料、例えば、米国特許出願公開第２００４／００４８７９６号（この開示はその全
体が本明細書に参照により組み込まれる）に記載の生体材料を製造するために、処理する
ことができる。例えば、滅菌ガーゼを使用して、全ての目に見える凝血塊及び残留血液の
ある胎盤を清浄した後、臍帯血管は、例えば、臍帯の断面を露出させるために、臍帯膜を
部分的に切断することにより、露出する。血管は、識別され、例えば、各血管の切断端を
通って、閉じたアリゲータークランプを進めることにより開かれる。次に、器具、例えば
、灌流装置または蠕動ポンプに接続されているプラスチックチューブは、胎盤動脈のそれ
ぞれに挿入される。ポンプは、目的に適する任意のポンプ、例えば、蠕動ポンプであるこ
とができる。次に、滅菌収集リザーバ、例えば、２５０ｍＬの収集バッグなどの血液バッ
グに接続されているプラスチックチューブが、胎盤静脈に挿入される。あるいは、ポンプ
に接続されているチューブは、胎盤静脈に挿入され、収集リザーバ（複数可）へのチュー
ブは、胎盤動脈の一方または両方に挿入される。次に、胎盤は、ある体積の灌流液、例え
ば、約７５０ｍｌの灌流液、で灌流される。次に、灌流液中の細胞は、例えば、遠心分離
により収集される。ある特定の実施形態では、胎盤は、胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞及
び／または胎盤多分化能細胞、を収集するための灌流前に、残留血液を除去するために、
灌流液、例えば、１００～３００ｍＬの灌流液、で灌流される。別の実施形態では、胎盤
は、胎盤細胞を収集するための灌流前に、残留血液を除去するために灌流液で灌流されな
い。

【0145】

一実施形態では、隣接する臍帯は、灌流中固定され、より好ましくは、臍帯の胎盤ディ
スクへの付着点の４～５ｃｍ（センチメートル）以内に固定される。

【0146】

瀉血プロセス中の哺乳動物胎盤からの灌流液の最初の収集は一般に、臍帯血及び／また
は胎盤血の残留赤血球で色を帯びる。灌流液は、灌流プロセス時に無色になり、残留臍帯
血細胞は、胎盤から洗い流される。一般に、３０～１００ｍｌ（ミリリットル）の灌流液
は、胎盤を最初に瀉血するのに適切であるが、幾分灌流液は、観察された結果に応じて使
用されてもよい。

【0147】

胎盤細胞を単離するのに使用される灌流液の量は、収集されるべき細胞の数、胎盤のサ
イズ、単一の胎盤からなされるべき収集の数などに応じて変化し得る。種々の実施形態で
は、灌流液の体積は、５０ｍＬ～５０００ｍＬ、５０ｍＬ～４０００ｍＬ、５０ｍＬ～３
０００ｍＬ、１００ｍＬ～２０００ｍＬ、２５０ｍＬ～２０００ｍＬ、５００ｍＬ～２０
００ｍＬ、または７５０ｍＬ～２０００ｍＬであってよい。通常、胎盤は、瀉血後に、７
００～８００ｍＬの灌流液で灌流される。

【0148】

胎盤は、数時間または数日間にわたって複数回灌流することができる。胎盤が複数回灌
流される場合、胎盤は、容器または他の好適な容器中、無菌条件下で維持または培養され
て、細抗凝固剤（例えば、ヘパリン、ワルファリンナトリウム、クマリン、ビスヒドロキ
シクマリン）を用いてまたは用いずに、及び／または、抗菌剤（例えば、β－メルカプト
エタノール（０．１ｍＭ）；ストレプトマイシン（例えば、４０～１００μｇ／ｍｌで）
、ペニシリン（例えば、４０Ｕ／ｍｌ）、アンホテリシンＢ（例えば、０．５μｇ／ｍｌ
）などの抗生物質）を用いてまたは用いずに、胞収集組成物または標準的な灌流液（例え
ば、リン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）などの生理食塩水）で灌流されてもよい。一実
施形態では、胎盤が、灌流及び灌流液の収集の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３
、若しくは２４時間前、または、２若しくは３日間、またはそれ以上前に、維持または培
養されるように、単離胎盤は、灌流液を収集することなしに、しばらくの間維持または培
養される。灌流された胎盤は、１以上のさらなる時間（複数可）、例えば、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１
９、２０、２１、２２、２３、２４、またはそれ以上の時間で維持することができ、２回
目、例えば、７００～８００ｍＬの灌流液で灌流することができる。胎盤は、１、２、３
、４、５、またはそれ以上の回数、例えば、１、２、３、４、５、または６時間ごとに１
回、灌流することができる。好ましい実施形態では、胎盤の灌流及び灌流液、例えば、細
胞収集組成物の収集は、回収された有核細胞が１００細胞／ｍｌより低くなるまで繰り返
される。異なる時点での灌流液は、細胞、例えば、幹細胞、の時間依存的な集団を回収す
るために、個別にさらに処理することができる。異なる時点からの灌流液は、プールする
こともできる。好ましい実施形態では、胎盤細胞は、娩出後約８時間及び約１８時間の間
に１回または何回も、収集される。

【0149】

灌流は、好ましくは、該溶液で灌流されていない、かつ（例えば、組織破壊、例えば、
酵素消化により）胎盤細胞を得るために別途処理されていない哺乳動物胎盤から得ること
ができる数よりも有意に多い胎盤細胞の収集をもたらす。本文脈中、「有意に多い」は、
少なくとも１０％多いことを意味する。灌流は、例えば、胎盤またはその部分が培養され
ている培地から単離できる胎盤細胞の数よりも、有意に多い胎盤細胞を生じる。

【0150】

胎盤細胞は、１つ以上のプロテアーゼまたは他の組織破壊酵素を含む溶液で灌流により
胎盤から単離することができる。ある特定の実施形態では、胎盤若しくはその部分（例え
ば、羊膜、羊膜及び絨毛膜、胎盤小葉若しくは子葉、臍帯、または上述のいずれかの組み
合わせ）は、２５～３７℃にされ、３０分間、２００ｍＬの培地で、１つ以上の組織破壊
酵素とインキュベーションされる。灌流液からの細胞は、収集され、４℃にされ、５ｍＭ
のＥＤＴＡ、２ｍＭのジチオスレイトール、及び２ｍＭのβ－メルカプトエタノールを含
む冷阻害剤混合物で洗浄される。胎盤細胞は、冷（例えば、４℃）幹細胞収集組成物で数
分後に洗浄される。

【0151】

５．２．５ 胎盤細胞の単離、選別、及び特徴づけ
単離胎盤細胞、例えば、上記セクション５．１に記載されている細胞は、灌流または物
理的破壊、例えば、酵素消化により得られたものであれ、Ｆｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によ
り、他の細胞から最初に精製（すなわち、単離）することができる。そのような遠心分離
は、遠心分離速度などについて、任意の標準プロトコールに従うことができる。一実施形
態では、例えば、胎盤から収集された細胞は、例えば、汚染屑及び血小板から細胞を分離
する、１５分間５０００×ｇの遠心分離により、灌流液から回収される。別の実施形態で
は、胎盤灌流液は、約２００ｍｌまで濃縮され、Ｆｉｃｏｌｌ上に静かに層状にされ、２
２℃で２０分間約１１００×ｇで遠心分離され、細胞の低密度界面層は、さらなる処理の
ために収集される。

【0152】

細胞ペレットは、新しい幹細胞収集組成物または細胞維持、例えば、幹細胞維持、に適
した培地、例えば、２Ｕ／ｍｌのヘパリン及び２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＩＭＤＭ無血
清培地（ＧｉｂｃｏＢＲＬ、ニューヨーク）中に再懸濁することができる。全単核細胞画
分は、製造者の推奨手順に従って、例えば、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｎｙｃｏｍｅｄ Ｐ
ｈａｒｍａノルウェー・オスロ）を使用して単離することができる。

【0153】

灌流または消化により得られた胎盤細胞は、例えば、０．０５％のトリプシンの０．２
％のＥＤＴＡとの溶液（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）を使用して、例えば、さ
らにまたは最初に分別的トリプシン処理により単離することができる。分別的トリプシン
処理は、組織培養プラスチック接着性がある単離胎盤細胞は通常、約５分以内にプラスチ
ック表面から離れるので、可能であるが、他の接着集団は通常、２０～３０分を超えるの
インキュベーションを必要とする。離れた胎盤細胞は、例えば、トリプシン中和溶液（Ｔ
ＮＳ、Ｃａｍｂｒｅｘ）を使用して、トリプシン処理及びトリプシン中和後に、採取する
ことができる。接着細胞の単離の一実施形態では、例えば、約５～１０×１０^６細胞のア
リコートは、いくつかのＴ－７５フラスコ、好ましくは、フィブロネクチンでコーティン
グされたＴ７５フラスコ、のそれぞれに入れる。そのよう実施形態では、細胞は、市販の
Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＳＣＧ
Ｍ）（Ｃａｍｂｒｅｘ）と培養でき、組織培養インキュベーター（３７℃、５％のＣＯ２
）に入れることができる。１０～１５日後、非接着細胞は、ＰＢＳで洗浄することにより
、フラスコから除去される。次に、ＰＢＳは、ＭＳＣＧＭと交換される。フラスコは好ま
しくは、種々の接着細胞型の存在について、特に、線維芽細胞様細胞のクラスタの特定及
び拡大について、毎日試験される。

【0154】

哺乳動物胎盤から収集される細胞の数及び種類は、例えば、フローサイトメトリー、細
胞選別、免疫細胞化学（例えば、組織特異的または細胞マーカー特異的抗体で染色する）
、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）などの標準細胞検
出技術を使用して、形態及び細胞表面マーカーの変化を測定すること、光学若しくは共焦
点顕微鏡を使用した細胞の形態の試験により、ならびに／または、ＰＣＲ及び遺伝子発現
プロファイルなどの当該技術分野において周知の技術を使用して遺伝子発現の変化を測定
することにより、監視することができる。これらの技術は、１つ以上の特定のマーカーに
対して陽性である細胞を特定するために、使用することもできる。例えば、ＣＤ３４に対
する抗体を使用して、細胞が、検出可能な量のＣＤ３４を含むかどうかを、上記の技術を
使用して判定することができ、そうであれば、細胞は、ＣＤ３４＋である。同様に、細胞
が、ＲＴ－ＰＣＲにより検出できることに十分なＯＣＴ－４、または成体細胞よりも有意
に多いＯＣＴ－４を産生する場合、細胞は、ＯＣＴ－４＋である。細胞表面マーカーに対
する抗体（例えば、ＣＤ３４などのＣＤマーカー）及びＯＣＴ－４などの幹細胞特異的遺
伝子の配列は、当該技術分野で周知である。

【0155】

胎盤細胞、特に、Ｆｉｃｏｌｌ分離、分別的接着、または両方の組み合わせにより単離
されている細胞は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用して選別されてもよい。蛍光
活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）は、粒子の蛍光特性に基づいて、細胞を含む粒子を分離する
ための周知の方法である（Ｋａｍａｒｃｈ， １９８７， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌ， １５１：１５０－１６５）。個々の粒子における蛍光部分のレーザー励起は、混
合物からの正及び負の粒子の電磁気的分離を可能にする小さな電荷をもたらす。一実施形
態では、細胞表面マーカー特異的抗体またはリガンドは、明確な蛍光標識で標識される。
細胞は、使用される抗体に結合する能力に基づいて、細胞の分離を可能にする細胞選別機
により処理される。ＦＡＣＳで選別された粒子は、分離及びクローニングを容易にするた
めに、９６ウェルまたは３８４ウェルプレートの個々のウェルに直接沈着されてもよい。

【0156】

１つの選別スキームでは、胎盤からの細胞、例えば、ＰＤＡＣは、マーカーＣＤ３４、
ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＯＣＴ－４、及び／またはＨＬ
Ａ－Ｇのうちの１つ以上の発現に基づいて選別される。これは、培養中の接着特性に基づ
いて、このような細胞を選択するための手順に関連して達成することができる。例えば、
組織培養プラスチック接着選択は、マーカー発現に基づく選別の前後で達成することがで
きる。一実施形態では、例えば、細胞は、ＣＤ３４の発現に基づいて最初に選別され、Ｃ
Ｄ３４－細胞が保持され、さらにＣＤ２００＋及びＨＬＡ－Ｇ－であるＣＤ３４－が、他
の全てのＣＤ３４－細胞から分離される。別の実施形態では、胎盤からの細胞は、マーカ
ーＣＤ２００及び／またはＨＬＡ－Ｇの発現に基づいて選別され、例えば、ＣＤ２００を
示し、かつＨＬＡ－Ｇを欠損する細胞が、さらなる使用のために単離される。例えば、Ｃ
Ｄ２００を発現し、かつ／または例えば、ＨＬＡ－Ｇを欠損する細胞は、具体的な実施形
態では、ＣＤ７３及び／若しくはＣＤ１０５、または抗体ＳＨ２、ＳＨ３、若しくはＳＨ
４により認識されるエピトープの発現、あるいはＣＤ３４、ＣＤ３８、またはＣＤ４５の
発現の欠損に基づいてさらに選別することができる。例えば、別の実施形態では、胎盤細
胞は、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３４、ＣＤ３８、及びＣＤ
４５の発現またはその欠損により選別され、ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ－、ＣＤ７３＋、
ＣＤ１０５＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、及びＣＤ４５－である胎盤細胞は、さらなる使
用のために他の胎盤細胞から単離される。

【0157】

選別された胎盤細胞の上記実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、選別後に残る
細胞集団の細胞の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％は
、該単離胎盤細胞である。胎盤細胞は、上記セクション５．１に記載のマーカーのいずれ
かのうちの１つ以上により選別することができる。

【0158】

具体的な実施形態では、例えば、（１）組織培養プラスチックに接着し、（２）ＣＤ１
０＋、ＣＤ３４－、及びＣＤ１０５＋である胎盤細胞が、他の胎盤細胞から選別（すなわ
ち、単離）される。別の具体的な実施形態では、（１）組織培養プラスチックに接着し、
（２）ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ２００＋である胎盤細胞が、他
の胎盤細胞から選別（すなわち、単離）される。別の具体的な実施形態では、（１）組織
培養プラスチックに接着し、（２）ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、ＣＤ９０＋、
ＣＤ１０５＋、及びＣＤ２００＋である胎盤細胞が、他の胎盤細胞から選別（すなわち、
単離）される。

【0159】

胎盤細胞のヌクレオチド配列に基づく検出に関しては、本明細書に記載されているマー
カーに対する配列は、ＧｅｎＢａｎｋまたはＥＭＢＬなどの公的に利用可能なデータベー
スで容易に入手できる。

【0160】

抗体を介する検出、及び胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞または胎盤多分化能細胞の選別
に関しては、特定のマーカーに特異的な任意の抗体は、任意のフルオロフォアまたは細胞
の検出及び選別（例えば、蛍光活性化細胞選別）に適する他の標識と組み合わせて使用す
ることができる。マーカーに特異的な抗体／フルオロフォアの組み合わせとしては、ＨＬ
Ａ－Ｇに対するフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）コンジュゲートモノクロ
ーナル抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃ， Ｒａｌｅｉｇｈ、ノースカロライナ州から入手）、ＣＤ
１０（ＢＤ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州サン
ノゼから入手）、ＣＤ４４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、カ
リフォルニア州サンノゼから入手）、及びＣＤ１０５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ
、ミネソタ州ミネアポリスから入手）；ＣＤ４４、ＣＤ２００、ＣＤ１１７、及びＣＤ１
３に対するフィリコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲートモノクローナル抗体（ＢＤ Ｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；ＣＤ３３及びＣＤ１０に対するフィリコ
エリトリンＣｙ７（ＰＥ Ｃｙ７）コンジュゲートモノクローナル抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；アロフィコシアニン（ＡＰＣ）コンジュゲー
トストレプトアビジン及びＣＤ３８に対するモノクローナル抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；ならびに、ビオチン化ＣＤ９０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。使用す
ることができる他の抗体としては、ＣＤ１３３－ＡＰＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）、ＫＤＲ－
ビオチン（ＣＤ３０９、Ａｂｃａｍ）、サイトケラチンＫ－ＦＩＴＣ（Ｓｉｇｍａまたは
Ｄａｋｏ）、ＨＬＡ ＡＢＣ－Ｆｉｔｃ（ＢＤ）、ＨＬＡ ＤＲ，ＤＱ，ＤＰ－ＰＥ（Ｂ
Ｄ）、β－２ミクログロブリンＰＥ（ＢＤ）、ＣＤ８０－ＰＥ（ＢＤ）、及びＣＤ８６－
ＡＰＣ（ＢＤ）が挙げられるが、これらに限定されない。使用することができる他の抗体
／標識の組み合わせとしては、ＣＤ４５－ＰｅｒＣＰ（ペリジンクロロフィルタンパク質
）；ＣＤ４４－ＰＥ；ＣＤ１９－ＰＥ；ＣＤ１０－Ｆ（フルオレセイン）；ＨＬＡ－Ｇ－
Ｆ及び７－アミノ－アクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）；ＨＬＡ－ＡＢＣ－Ｆなどが挙げ
られるが、これらに限定されない。このリストは、網羅的でなく、他の供給元からの他の
抗体も市販されている。

【0161】

本明細書で提供される単離胎盤細胞は、例えば、フィリコエリトリン－Ｃｙ５（ＰＥ
Ｃｙ５）コンジュゲートストレプトアビジン及びＣＤ１１７またはＣＤ１３３に対するビ
オチンコンジュゲートモノクローナル抗体を使用してＣＤ１１７またはＣＤ１３３につい
てアッセイすることができ、しかし、この系を使用して、細胞は、比較的高いバックグラ
ウンドのために、ＣＤ１１７またはＣＤ１３３に対してそれぞれ陽性であるように見える
可能性がある。

【0162】

単離胎盤細胞は、単一マーカーに対する抗体で標識して、検出及び選別することができ
る。胎盤細胞は同時に、異なるマーカーに対する複数の抗体で標識することもできる。

【0163】

別の実施形態では、磁気ビーズは、細胞を分離するために使用することができる。細胞
は、磁気ビーズ（直径０．５～１００μｍ）に結合する能力に基づいて粒子を分離するた
めの方法である磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）技術を使用して選別されてもよい。特定
の細胞表面分子またはハプテンを特異的に認識する抗体の共有結合的付加を含む、種々の
有用な修飾を、磁気マイクロスフェア上に実施することができる。次に、ビーズは、結合
させるために、細胞と混合される。次に、細胞は、特異的な細胞表面マーカーを有する細
胞を分離するために、磁場を通過する。一実施形態では、次に、これらの細胞は、単離さ
れて、追加の細胞表面マーカーに対する抗体と結合された磁気ビーズと再混合することが
できる。細胞は再度、両方の抗体に結合された細胞を単離する磁場を通過する。次に、こ
のような細胞は、クローン単離のためのマイクロタイター皿などの別の皿に希釈すること
ができる。

【0164】

単離胎盤細胞は、細胞形態及び成長特徴に基づいて特徴付け、かつ／または選別するこ
ともできる。例えば、単離胎盤細胞は、例えば、培養中の線維芽細胞様外観を有するもの
として特徴付けることができ、及び／または、これに基づいて選択することができる。単
離胎盤細胞は、胚様体様体を形成する能力を有するものとして特徴付けることもでき、及
び／または、これに基づいて選択することもできる。一実施形態では、例えば、形状が線
維芽細胞様であり、ＣＤ７３及びＣＤ１０５を発現し、培養中に１つ以上の胚様体様体を
産生する胎盤細胞が、他の胎盤細胞から単離される。別の実施形態では、培養中に１つ以
上の胚様体様体を産生するＯＣＴ－４＋胎盤細胞が、他の胎盤細胞から単離される。

【0165】

別の実施形態では、単離胎盤細胞は、特定され、コロニー形成単位アッセイにより特徴
付けることができる。ＭｅｓｅｎＣｕｌｔ（商標）培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．、コロンビア州バンクーバーブリティッシュ）などのコロ
ニー形成単位アッセイは、当該技術分野で周知である。

【0166】

単離胎盤細胞は、トリパンブルー排除アッセイ、（生存率を評価するための）ヨウ化プ
ロピジウム取り込みアッセイ、及びチミジン取り込みアッセイ、（増殖をアッセイするた
めの）ＭＴＴ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテ
トラゾリウムブロミド）細胞増殖アッセイなどの当該技術分野において既知の標準的な技
術を使用して生存率、増殖力、及び寿命に対し評価することができる。寿命は、当該技術
分野において周知方法により、例えば、拡大した培養物中の集団倍加の最大数を測定する
ことにより、測定されてもよい。

【0167】

単離胎盤細胞、例えば、上記セクション５．１に記載の単離胎盤細胞は、当該技術分野
において既知の他の技術、例えば、所望の細胞の選択的成長（正の選択）、不要な細胞の
選択的破壊（負の選択）；例えば、大豆アグルチニンとしての混合集団における特異な細
胞凝集に基づく分離、凍結融解手順；濾過；従来の遠心分離及びゾーン遠心分離；遠心水
簸（カウンターストリーミング遠心分離）；単位重力分離；向流分配法；電気泳動などを
使用して、他の胎盤細胞から分離することもできる。

【0168】

５．２．６ 単離胎盤細胞の集団
本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞、例えば、上記セクション５，
１に記載の単離胎盤細胞、の集団も本明細書で提供される。単離胎盤細胞の集団は、１つ
以上の胎盤から直接単離することができ、つまり、細胞集団は、単離胎盤細胞を含む胎盤
細胞の集団であることができ、単離胎盤細胞は、灌流液から得られる、若しくはこの中に
含有される、または、破壊された胎盤細胞、例えば、胎盤組織消化物（つまり、胎盤若し
くはその部分の酵素消化により得られた細胞の収集）から得られる、若しくはこの中に含
有される。本明細書に記載の単離胎盤細胞は、単離胎盤細胞の集団を産生するために、培
養及び拡大することもできる。単離胎盤細胞を含む胎盤細胞の集団は、胎盤細胞集団を産
生するために、培養及び拡大することもできる。

【0169】

本明細書で提供される治療方法に有用な胎盤細胞集団は、単離胎盤細胞、例えば、本明
細書のセクション５．１に記載の単離胎盤細胞を含む。種々の実施形態では、胎盤細胞集
団中の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８
０％、９０％、９５％、または９９％は、単離胎盤細胞である。つまり、単離胎盤細胞の
集団は、例えば、単離胎盤細胞でない１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５
０％、６０％、７０％、８０％、９０％ほどの細胞を含むことができる。

【0170】

本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞集団は、例えば、酵素消化また
は灌流から誘導されるものであろうと、特定のマーカー及び／または特定の培養若しくは
形態学的特徴を発現する単離胎盤細胞を選択することにより産生することができる。一実
施形態では、例えば、（ａ）基質に接着し、（ｂ）ＣＤ２００を発現し、ＨＬＡ－Ｇの発
現を欠損する、胎盤細胞を選択すること、及び、細胞集団を形成するために、該細胞を他
の細胞から単離することにより細胞集団を産生する方法が、本明細書で提供される。別の
実施形態では、細胞集団は、ＣＤ２００を発現し、ＨＬＡ－Ｇの発現を欠損する胎盤細胞
を選択すること、及び、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離すること
により産生される。別の実施形態では、細胞集団は、（ａ）基質に接着し、（ｂ）ＣＤ７
３、ＣＤ１０５、及びＣＤ２００を発現する胎盤細胞を選択すること、ならびに、細胞集
団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。別の実施形
態では、細胞集団は、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、及びＣＤ２００を発現する胎盤細胞を特定
すること、ならびに、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することに
より産生される。別の実施形態では、細胞集団は、（ａ）基質に接着し、（ｂ）ＣＤ２０
０及びＯＣＴ－４を発現する胎盤細胞を選択すること、ならびに、細胞集団を形成するた
めに、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。別の実施形態では、細胞集
団は、ＣＤ２００及びＯＣＴ－４を発現する胎盤細胞を選択すること、ならびに、細胞集
団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。別の実施形
態では、細胞集団は、（ａ）基質に接着し、（ｂ）ＣＤ７３及びＣＤ１０５を発現し、（
ｃ）胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、該幹細胞を含む胎盤細胞の集
団において、該集団が、１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする胎盤細胞を選択するこ
と、ならびに、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産
生される。別の実施形態では、細胞集団は、ＣＤ７３及びＣＤ１０５を発現し、胚様体様
体の形成を可能にする条件下で培養される時、該幹細胞を含む胎盤細胞の集団において、
該集団が、１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする胎盤細胞を選択すること、ならびに
、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。別
の実施形態では、細胞集団は、（ａ）基質に接着し、（ｂ）ＣＤ７３及びＣＤ１０５を発
現し、ＨＬＡ－Ｇの発現を欠損する胎盤細胞を選択すること、ならびに、細胞集団を形成
するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。別の実施形態では、
細胞集団は、ＣＤ７３及びＣＤ１０５を発現し、ＨＬＡ－Ｇの発現を欠損する胎盤細胞を
選択すること、ならびに、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離するこ
とにより産生される。別の実施形態では、細胞集団を産生する方法は、（ａ）基質に接着
し、（ｂ）ＯＣＴ－４を発現し、（ｃ）胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養され
る時、該集団が、該幹細胞を含む胎盤細胞の集団において、１つ以上の胚様体様体の形成
を容易にする盤細胞を選択すること、及び、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細
胞から単離することを含む。別の実施形態では、細胞集団は、ＯＣＴ－４を発現し、胚様
体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、該幹細胞を含む胎盤細胞の集団におい
て、該集団が、１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする胎盤細胞を選択すること、及び
、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。

【0171】

別の実施形態では、細胞集団は、（ａ）基質に接着し、（ｂ）ＣＤ１０及びＣＤ１０５
を発現し、ＣＤ３４を発現しない胎盤細胞を選択すること、ならびに、細胞集団を形成す
るために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。別の実施形態では、細
胞集団は、ＣＤ１０及びＣＤ１０５を発現し、ＣＤ３４を発現しない胎盤細胞を選択する
こと、ならびに、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより
産生される。別の実施形態では、細胞集団は、（ａ）基質に接着し、（ｂ）ＣＤ１０、Ｃ
Ｄ１０５、及びＣＤ２００を発現し、ＣＤ３４を発現しない胎盤細胞を選択すること、な
らびに、細胞集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生され
る。別の実施形態では、細胞集団は、ＣＤ１０、ＣＤ１０５、及びＣＤ２００を発現し、
ＣＤ３４を発現しない胎盤細胞を選択すること、ならびに、細胞集団を形成するために、
該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。別の具体的な実施形態では、細胞
集団は、（ａ）基質に接着し、（ｂ）ＣＤ１０、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、及びＣＤ２００
を発現し、ＣＤ３４及びＣＤ４５を発現しない胎盤細胞を選択すること、ならびに、細胞
集団を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。別の具体
的な実施形態では、細胞集団は、ＣＤ１０、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、及びＣＤ２００を発
現し、ＣＤ３４及びＣＤ４５を発現しない胎盤細胞を選択すること、ならびに、細胞集団
を形成するために、該細胞を他の細胞から単離することにより産生される。

【0172】

上記セクション５．１に記載のマーカーの組み合わせのいずれかを有する胎盤細胞を含
む細胞集団の選択を、同様に、単離することができる、または得ることができる。

【0173】

上記実施形態のいずれにおいても、単離細胞集団の選択は、ＡＢＣ－ｐ（胎盤特異的Ａ
ＢＣトランスポータータンパク質、例えば、Ａｌｌｉｋｍｅｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５８（２３）：５３３７－９ （１９９８）を参照のこと）を発現
する胎盤細胞を選択することをさらに含むことができる。方法は、例えば、間葉系幹細胞
に特有の少なくとも１つの特徴、例えば、ＣＤ４４の発現、ＣＤ９０の発現、または上述
の組み合わせの発現を示す細胞を選択することを含むこともできる。

【0174】

上記実施形態では、基質は、細胞、例えば、単離胎盤細胞、の培養及び／または選択が
達成することができる任意の表面であることができる。通常、基質は、プラスチック、例
えば、組織培養皿またはマルチウェルプレートプラスチックである。組織培養プラスチッ
クは、生体分子、例えば、ラミニンまたはフィブロネクチンでコーティングすることがで
きる。

【0175】

細胞、例えば、単離胎盤細胞は、細胞選択の当該技術分野において公知の任意の手段に
より、胎盤細胞集団について選択することができる。例えば、細胞は、１つ以上の細胞表
面マーカーに対する抗体（複数可）を使用して、例えば、フローサイトメトリーまたはＦ
ＡＣＳで選択することができる。選択は、磁気ビーズと共に抗体を使用して達成すること
ができる。特定の幹細胞関連マーカー特異的である抗体は、当該技術分野で既知である。
例えば、ＯＣＴ－４（Ａｂｃａｍ、マサチューセッツ州ケンブリッジ）、ＣＤ２００（Ａ
ｂｃａｍ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ａｂｃａｍ）、ＣＤ７３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐ
ｈａｒｍｉｎｇｅｎ、カルフォルニア州サンディエゴ）、ＣＤ１０５（Ａｂｃａｍ；Ｂｉ
ｏＤｅｓｉｇｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、メイン州ソコー）に対する抗体などであ
る。他のマーカーに対する抗体もまた、市販されており、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３８、
及びＣＤ４５に対するものは、例えば、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓま
たはＢｉｏＤｅｓｉｇｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから入手可能である。

【0176】

単離胎盤細胞集団は、幹細胞ではない胎盤細胞、または胎盤細胞ではない細胞を含むこ
とができる。

【0177】

本明細書に記載の胎盤由来接着細胞を含む単離細胞集団は、第２の細胞型、例えば、胎
盤由来接着細胞ではない胎盤細胞、または、例えば、胎盤細胞ではない細胞、を含むこと
ができる。例えば、胎盤由来接着細胞の単離集団は、第２型の細胞の集団を含むことがで
き、例えば、これと組み合わせることができ、該第２型の細胞は、例えば、胚性幹細胞、
血液細胞（例えば、胎盤血、胎盤血細胞、臍帯血、臍帯血細胞、末梢血、末梢血細胞、胎
盤血由来の有核細胞、臍帯血、または末梢血など）、血液から単離された幹細胞（例えば
、胎盤血、臍帯血、または末梢血から単離された幹細胞）、胎盤灌流液由来の有核細胞、
例えば、胎盤灌流液の全有核細胞；臍帯幹細胞、血液由来有核細胞の集団、骨髄由来間葉
系間質細胞、骨髄由来間葉系幹細胞、骨髄由来造血幹細胞、粗骨髄、成体（体性）幹細胞
、組織内に含有される幹細胞の集団、培養細胞、例えば、培養幹細胞、完全分化細胞（例
えば、軟骨細胞、線維芽細胞、羊膜細胞、骨芽細胞、筋細胞、心臓細胞など）の集団、周
皮細胞などである。具体的な実施形態では、胎盤由来接着細胞を含む細胞の集団は、胎盤
幹細胞または臍帯由来の幹細胞を含む。第２型の細胞が、血液または血液細胞である、あ
る特定の実施形態では、赤血球が、細胞の集団から除去されている。

【0178】

具体的な実施形態では、第２型の細胞は、造血幹細胞である。このような造血幹細胞は
、例えば、未処理の胎盤、臍帯血、または末梢血内；胎盤血、臍帯血、または末梢血由来
の全有核細胞中；胎盤血、臍帯血、または末梢血由来のＣＤ３４＋細胞の単離集団中；未
処理の骨髄中；骨髄由来の全有核細胞中；骨髄由来のＣＤ３４＋細胞の単離集団中などに
含有される可能性がある。

【0179】

別の実施形態では、胎盤由来接着細胞の単離集団は、血管系由来の複数の成体または前
駆細胞と組み合わされる。種々の実施形態では、細胞は、内皮細胞、内皮前駆細胞、筋細
胞、心筋細胞、周皮細胞、血管芽細胞、筋芽細胞、または心筋芽細胞である。

【0180】

別の実施形態では、第２の細胞型は、胚性幹細胞と関連する多能性及び機能のマーカー
を発現するために、培養中操作された非胚性細胞型である。

【0181】

胎盤由来接着細胞の上記単離集団の具体的な実施形態では、胎盤由来接着細胞及び第２
型の細胞の一方またはその両方は、細胞の意図されるレシピエントに対し自己由来である
、または同種異系である。

【0182】

別の具体的な実施形態では、組成物は、胎盤由来接着細胞及び胚性幹細胞を含む。別の
具体的な実施形態では、組成物は、胎盤由来接着細胞及び間葉系間質または幹細胞、例え
ば、骨髄由来間葉系間質または幹細胞を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、骨
髄由来造血幹細胞を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、胎盤由来接着細胞及び
造血前駆細胞細胞、例えば、骨髄、胎児の血液、臍帯血、胎盤血及び／または末梢血由来
の造血前駆細胞細胞、を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、胎盤由来接着細胞
及び体性幹細胞を含む。より具体的な実施形態では、該体性幹細胞は、神経幹細胞、肝臓
幹細胞、膵臓幹細胞、内皮幹細胞、心臓幹細胞、または筋幹細胞である。

【0183】

他の具体的な実施形態では、第２型の細胞は、該集団中の細胞の約、少なくとも、また
は多くとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または
５０％を占める。他の具体的な実施形態では、該組成物中のＰＤＡＣは、該組成物中の細
胞の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％また
は９０％を占める。他の具体的な実施形態では、胎盤由来接着細胞は、該集団中の細胞の
約、少なくとも、または多くとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４
０％、または４５％を占める。

【0184】

胎盤由来接着細胞の単離集団中の細胞は、各集団中の全有核細胞の数を比較して、約１
００，０００，０００：１、５０，０００，０００：１、２０，０００，０００：１、１
０，０００，０００：１、５，０００，０００：１、２，０００，０００：１、１，００
０，０００：１、５００，０００：１、２００，０００：１、１００，０００：１、５０
，０００：１、２０，０００：１、１０，０００：１、５，０００：１、２，０００：１
、１，０００：１、５００：１、２００：１、１００：１、５０：１、２０：１、１０：
１、５：１、２：１、１：１；１：２；１：５；１：１０；１：１００；１：２００；１
：５００；１：１，０００；１：２，０００；１：５，０００；１：１０，０００；１：
２０，０００；１：５０，０００；１：１００，０００；１：５００，０００；１：１，
０００，０００；１：２，０００，０００；１：５，０００，０００；１：１０，０００
，０００；１：２０，０００，０００；１：５０，０００，０００；または約１：１００
，０００，０００の比率で、別の型の複数の細胞と、例えば、幹細胞の集団と、組み合わ
せることができる。胎盤由来接着細胞の単離集団中の細胞は、同様に、複数の細胞型の複
数の細胞と組み合わせることができる。

【0185】

他の実施形態では、本明細書に記載の胎盤細胞、例えば、上記ＰＤＡＣ、の集団は、骨
形成胎盤接着細胞（ＯＰＡＣ）、例えば、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔ
ｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｏｎｅ Ｄｅｆｅｃｔｓ Ｗｉｔｈ
Ｐｌａｃｅｎｔａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ」という名称の２００９年８月２４日に出願
された特許出願第１２／５４６，５５６号に記載のＯＰＡＣと組み合わされる、または羊
膜由来血管新生細胞（ＡＭＤＡＣ）、例えば、「Ａｍｎｉｏｎ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ａｎｇ
ｉｏｇｅｎｉｃ Ｃｅｌｌｓ」という名称の米国特許出願第１２／６２２，３５２号（こ
の開示は、その全体が本明細書で参照により組み込まれる）に記載のＡＭＤＡＣと組み合
わされる。

【0186】

５．３ 単離胎盤細胞を含む組成物
本明細書、例えば、セクション５．１、に記載の胎盤細胞は、本明細書に記載の方法及
び組成物に使用される、生理学的に許容されるまたは医学的に許容される化合物、組成物
、またはデバイスと組み合わせることができる。本明細書で提供される治療の方法に有用
な組成物は、本明細書に記載の胎盤細胞のうちの任意の１つ以上を含むことができる。あ
る特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される組成物、例えば、薬学的に許容さ
れる担体中の胎盤細胞を含む組成物、である。

【0187】

ある特定の実施形態では、単離胎盤細胞を含む組成物は、マトリックス、例えば、脱細
胞化マトリックスまたは合成マトリックス、をさらに含む。別の具体的な実施形態では、
該マトリックスは、三次元の足場である。別の具体的な実施形態では、該マトリックスは
、コラーゲン、ゼラチン、ラミニン、フィブロネクチン、ペクチン、オルニチン、または
ビトロネクチンを含む。別の具体的な一実施形態では、マトリックスは、羊膜または羊膜
由来生体材料である。別の具体的な実施形態では、該マトリックスは、細胞外膜タンパク
質を含む。別の具体的な実施形態では、該マトリックスは、合成化合物を含む。別の具体
的な実施形態では、該マトリックスは、生物活性化合物を含む。別の具体的な実施形態で
は、該生物活性化合物は、成長因子、サイトカイン、抗体、または５，０００ダルトン未
満の有機分子である。

【0188】

別の実施形態では、本明細書で提供される治療の方法に有用な組成物は、上述の胎盤細
胞のいずれか、または上述の胎盤細胞集団のいずれかにより馴化された培地を含む。

【0189】

５．３．１ 低温保存された単離胎盤細胞
本明細書に記載の方法及び組成物に有用な単離胎盤細胞集団は、保存、例えば、後で使
用するために低温保存することができる。幹細胞などの細胞の低温保存のための方法は、
当該技術分野において周知である。単離胎盤細胞集団は、個体に容易に投与することがで
きる形態、例えば、医療用途に適する容器に含有される単離胎盤細胞集団、に調製するこ
とができる。そのような容器は、例えば、シリンジ、滅菌プラスチックバッグ、フラスコ
、ジャー、または単離胎盤細胞集団が容易に出すことができる他の容器であることができ
る。例えば、容器は、血液バッグまたは液体のレシピエントに対する静脈内投与に適する
他のプラスチックの医学的に許容されるバッグであることができる。ある特定の実施形態
では、容器は、組み合わされた細胞集団の低温保存を可能にするものである。

【0190】

低温保存単離胎盤細胞集団は、単一のドナーまたは複数のドナーに由来する単離胎盤細
胞を含むことができる。単離胎盤細胞集団は、意図されるレシピエントに完全にＨＬＡ適
合である、または、部分的若しくは完全にＨＬＡ不適合である可能性がある。

【0191】

従って、一実施形態では、単離胎盤細胞は、方法に使用することができ、容器中に組織
培養プラスチック接着性胎盤細胞集団を含む組成物の形態で本明細書に記載することがで
きる。具体的な実施形態では、単離胎盤細胞は、低温保存される。別の具体的な実施形態
では、容器は、バッグ、フラスコ、または瓶である。別の具体的な実施形態では、該バッ
グは、滅菌プラスチックバッグである。別の具体的な実施形態では、該バッグは、例えば
、静脈内注入による、該単離胎盤細胞集団の静脈内投与に適する、可能にする、または容
易にする。バッグは、投与の前または間に、単離胎盤細胞及び１つ以上の他の溶液、例え
ば、薬物、の混合を可能にするために相互に連結される複数のルーメンまたはコンパート
メントを含むことができる。別の具体的な実施形態では、組成物は、組み合わされた細胞
集団の低温保存を容易にする１つ以上の化合物を含む。別の具体的な実施形態では、該単
離胎盤細胞集団は、生理学的に許容される水溶液内に含有される。別の具体的な実施形態
では、該生理学的に許容される水溶液は、０．９％のＮａＣｌ溶液である。別の具体的な
実施形態では、該単離胎盤細胞集団は、該細胞集団のレシピエントにＨＬＡ適合である胎
盤細胞を含む。別の具体的な実施形態では、該組み合わされた細胞集団は、該細胞集団の
レシピエントに少なくとも部分的にＨＬＡ不適合である胎盤細胞を含む。別の具体的な実
施形態では、該単離胎盤細胞は、複数のドナーに由来する。

【0192】

ある特定の実施形態では、容器中の単離胎盤細胞は、単離ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、Ｃ
Ｄ１０５＋胎盤細胞であり、該細胞は、低温保存されており、容器内に含有されている。
具体的な実施形態では、該ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はまた、ＣＤ
２００＋である。別の具体的な実施形態では、該ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋
、ＣＤ２００＋胎盤細胞はまた、ＣＤ４５－またはＣＤ９０＋である。別の具体的な実施
形態では、該ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞はまた、Ｃ
Ｄ４５－及びＣＤ９０＋である。別の具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、
ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、Ｃ
Ｄ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ
３＋（ＣＤ７３＋）、ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ９０＋、
ＳＨ２＋（ＣＤ１０５＋）、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４４／ＶＥ
カドヘリンｄｉｍ、ＣＤ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－
４＋、ＳＳＥＡ３－、ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬ
Ａ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－、若しくはプログラム死
１リガンド（ＰＤＬ１）＋のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組み合わせである。
別の具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、
ＣＤ１３＋、ＣＤ２９＋、ＣＤ３３＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ４５－、ＣＤ５４
／ＩＣＡＭ＋、ＣＤ６２Ｅ－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ６２Ｐ－、ＳＨ３＋（ＣＤ７３＋）、
ＳＨ４＋（ＣＤ７３＋）、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＣＤ９０＋、ＳＨ２＋（ＣＤ１０５
＋）、ＣＤ１０６／ＶＣＡＭ＋、ＣＤ１１７－、ＣＤ１４４／ＶＥカドヘリンｄｉｍ、Ｃ
Ｄ１８４／ＣＸＣＲ４－、ＣＤ２００＋、ＣＤ１３３－、ＯＣＴ－４＋、ＳＳＥＡ３－、
ＳＳＥＡ４－、ＡＢＣ－ｐ＋、ＫＤＲ－（ＶＥＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、Ｈ
ＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、ＨＬＡ－Ｇ－、及びプログラム死１リガンド（ＰＤＬ１）＋
である。

【0193】

他のある特定の実施形態では、上述の単離胎盤細胞は、単離ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ
－胎盤細胞であり、該細胞は、低温保存されており、容器内に含有されている。別の実施
形態では、単離胎盤細胞は、低温保存されており、容器内に含有されているＣＤ７３＋、
ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋細胞である。別の実施形態では、単離胎盤細胞は、低温保存
されており、容器内に含有されているＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋幹細胞である。別の実
施形態では、単離胎盤細胞は、低温保存されており、容器内に含有されているＣＤ７３＋
、ＣＤ１０５＋細胞であり、該単離胎盤細胞は、胚様体様体の形成を可能にする条件下で
胎盤細胞の集団と培養される時、１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする。別の実施形
態では、単離胎盤細胞は、低温保存されており、容器内に含有されているＣＤ７３＋、Ｃ
Ｄ１０５＋、ＨＬＡ－Ｇ－細胞である。別の実施形態では、単離胎盤細胞は、低温保存さ
れており、容器内に含有されているＯＣＴ－４＋胎盤細胞であり、該細胞は、胚様体様体
の形成を可能にする条件下で胎盤細胞の集団と培養される時、１つ以上の胚様体様体の形
成を容易にする。

【0194】

別の具体的な実施形態では、上述の単離胎盤細胞は、フローサイトメトリーで検出され
るようなＣＤ３４－、ＣＤ１０＋及びＣＤ１０５＋（例えば、ＰＤＡＣ）である胎盤幹細
胞または胎盤多分化能細胞である。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４－、ＣＤ１
０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、神経表現型の細胞、骨形成表現型の細胞、または軟骨形
成表現型の細胞に分化する可能性がある。別の具体的な実施形態では、単離ＣＤ３４－、
ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、ＣＤ２００＋である。別の具体的な実施形
態では、単離ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、フローサイトメ
トリーで検出されるようなＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態で
は、単離ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞はさらに、フローサイトメトリ
ーで検出されるようなＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態では、
ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤細胞はさらに、フローサイト
メトリーで検出されるようなＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態
では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋細胞はさらに、フローサイ
トメトリーで検出されるようなＣＤ９０＋及びＣＤ４５－である。別の具体的な実施形態
では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－
細胞はさらに、フローサイトメトリーで検出されるようなＣＤ８０－及びＣＤ８６－であ
る。別の具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋細胞はさらに、
ＣＤ２９＋、ＣＤ３８－、ＣＤ４４＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＳＨ３＋
、またはＳＨ４＋のうちの１つ以上である。別の具体的な実施形態では、細胞はさらに、
ＣＤ４４＋である。上記単離ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞のいずれか
の具体的な実施形態では、細胞はさらに、ＣＤ１１７－、ＣＤ１３３－、ＫＤＲ－（ＶＥ
ＧＦＲ２－）、ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－、及び／またはＰＤ
Ｌ１＋のうちの１つ以上である。

【0195】

上述の低温保存された単離胎盤細胞のいずれかの具体的な実施形態では、該容器は、バ
ッグである。種々の具体的な実施形態では、該容器は、約少なくともまたは多くとも１×
１０^６の該単離胎盤細胞、５×１０^６の該単離胎盤細胞、１×１０^７の該単離胎盤細胞、
５×１０^７の該単離胎盤細胞、１×１０^８の該単離胎盤細胞、５×１０^８の該単離胎盤細
胞、１×１０^９の該単離胎盤細胞、５×１０^９の該単離胎盤細胞、１×１０^１０の該単離
胎盤細胞、または１×１０^１０の該単離胎盤細胞を含む。上述の低温保存された集団のい
ずれかの他の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞は、約、少なくとも、または多くと
も５回、多くとも１０回、多くとも１５回、または多くとも２０回継代されている。上述
の低温保存された単離胎盤細胞のいずれかの別の具体的な実施形態では、該単離胎盤細胞
は、該容器内で拡大されている。
ある特定の実施形態では、胎盤由来接着細胞の単回単位用量は、種々の実施形態では、約
、少なくとも、または多くとも１×１０^３、３×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、３×
１０^４、５×１０^４、１×１０^５、３×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、３×１０^６、
５×１０^６、１×１０^７、３×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、３×１０^８、５×１０
^８、１×１０^９、５×１０^９、または１×１０^１０の胎盤細胞を含むことができる。ある
特定の実施形態では、胎盤由来接着細胞の単回単位用量は、１×１０^３～３×１０^３、３
×１０^３～５×１０^３、５×１０^３～１×１０^４、１×１０^４～３×１０^４、３×１０^４
～５×１０^４、５×１０^４～１×１０^５、１×１０^５～３×１０^５、３×１０^５～５×１
０^５、５×１０^５～１×１０^６、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６～５×１０^６、５
×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１０^７、５×１０^７
～１×１０^８、１×１０^８～３×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１
０^９、１×１０^９～５×１０^９、または５×１０^９～１×１０^１０の間の胎盤細胞を含む
ことができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、５０％以
上の生細胞を含む（つまり、集団中の細胞の少なくとも５０％は、機能しうる、または生
きている）胎盤由来接着細胞の集団を含む。好ましくは、集団中の細胞の少なくとも６０
％は、生存可能である。より好ましくは、医薬組成物中の集団中の細胞の少なくとも７０
％、８０％、９０％、９５％、または９９％は、生存可能である。

【0196】

５．３．２ 医薬組成物
単離胎盤細胞の集団、例えば、ＰＤＡＣ、または単離胎盤細胞を含む細胞の集団は、イ
ンビボで、例えば、本明細書で提供される治療方法で、使用される医薬組成物に製剤化す
ることができる。このような医薬組成物は、薬学的に許容される担体、例えば、食塩水、
または他の許容される、インビボ投与に対し生理学的に許容される溶液中に、単離胎盤細
胞の集団、または単離胎盤細胞を含む細胞の集団を含む。本明細書に記載の単離胎盤細胞
を含む医薬組成物は、本明細書の他の箇所に記載の、単離胎盤細胞集団、または単離胎盤
細胞のいずれか、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができる。医薬組成物は、
胎児、母体、または胎児及び母体両方の単離胎盤細胞を含むことができる。本明細書で提
供される医薬組成物は、単一の個体若しくは胎盤から、または、複数の個体若しくは胎盤
から得られた単離胎盤細胞をさらに含むことができる。

【0197】

本明細書で提供される医薬組成物は、任意の数の単離胎盤細胞を含むことができる。例
えば、単回単位用量の胎盤由来接着細胞は、約、少なくとも、若しくは多くとも１×１０
^３、３×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、３×１０^４、５×１０^４、１×１０^５、３×
１０^５、５×１０^５、１×１０^６、３×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、３×１０^７、
５×１０^７、１×１０^８、３×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、５×１０^９、若しくは
１×１０^１０の胎盤細胞、または、１×１０^３～３×１０^３、３×１０^３～５×１０^３、
５×１０^３～１×１０^４、１×１０^４～３×１０^４、３×１０^４～５×１０^４、５×１０
^４～１×１０^５、１×１０^５～３×１０^５、３×１０^５～５×１０^５、５×１０^５～１×
１０^６、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、
１×１０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０
^８～３×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×
１０^９、若しくは５×１０^９～１×１０^１０の胎盤細胞を含むことができる。

【0198】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、糖尿病性足部潰瘍を有
する対象に１回投与される。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物
は、糖尿病性足部潰瘍に罹患している対象に、複数回、例えば、２回、３回、４回、５回
、６回、７回、８回、９回、１０回、または１０回を超えて投与される。投薬間の間隔は
、毎週、隔週、毎月、隔月、または毎年であることができる。間隔は、不規則であること
もできる。このようなレジメンに従って投与される胎盤幹細胞の用量は、１×１０^３、３
×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、３×１０^４、５×１０^４、１×１０^５、３×１０^５
、５×１０^５、１×１０^６、３×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、３×１０^７、５×１
０^７、１×１０^８、３×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、５×１０^９、若しくは１×１
０^１０の胎盤細胞、または、１×１０^３～３×１０^３、３×１０^３～５×１０^３、５×１
０^３～１×１０^４、１×１０^４～３×１０^４、３×１０^４～５×１０^４、５×１０^４～１
×１０^５、１×１０^５～３×１０^５、３×１０^５～５×１０^５、５×１０^５～１×１０^６
、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１
０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～３
×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９
、若しくは５×１０^９～１×１０^１０の胎盤幹細胞を含むが、これらに制限されない。具
体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、１×１０^３の胎盤幹細胞であ
る。別の具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^３の胎盤
幹細胞である。別の具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１
０^４の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量
は、３×１０^５の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹
細胞の用量は、１×１０^６の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、医薬組成物
中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^６の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、
医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^７の胎盤幹細胞である。

【0199】

ある特定の実施形態では、胎盤幹細胞（例えば、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２０
０＋、ＣＤ３４－胎盤幹細胞）を含む医薬組成物は、単回投与として、糖尿病性足部潰瘍
に罹患している対象に１回投与される。ある特定の実施形態では、胎盤幹細胞（例えば、
ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－胎盤幹細胞）を含む医薬組成物は
、単回投与、続いて、約１週間後に２回目投与、として糖尿病性足部潰瘍を有する対象に
投与される。ある特定の実施形態では、胎盤幹細胞（例えば、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋
、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－胎盤幹細胞）を含む医薬組成物は、単回投与、続いて、約１
週間後に２回目投与及びその約１週間後（すなわち、最初の投与の約２週間後）に３回目
投与として糖尿病性足部潰瘍を有する対象に投与される。このようなレジメンに従って投
与される胎盤幹細胞の用量は、１×１０^３、３×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、３×
１０^４、５×１０^４、１×１０^５、３×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、３×１０^６、
５×１０^６、１×１０^７、３×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、３×１０^８、５×１０
^８、１×１０^９、５×１０^９、若しくは１×１０^１０の胎盤細胞、または、１×１０^３～
３×１０^３、３×１０^３～５×１０^３、５×１０^３～１×１０^４、１×１０^４～３×１０
^４、３×１０^４～５×１０^４、５×１０^４～１×１０^５、１×１０^５～３×１０^５、３×
１０^５～５×１０^５、５×１０^５～１×１０^６、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６～
５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１０
^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～３×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５×
１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、若しくは５×１０^９～１×１０^１０の胎
盤幹細胞を含むが、これらに制限されない。具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤
幹細胞の用量は、１×１０^３の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、医薬組成
物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^３の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では
、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^４の胎盤幹細胞である。別の具体的な実
施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^５の胎盤幹細胞である。別の
具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、１×１０^６の胎盤幹細胞で
ある。別の具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^６の胎
盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×
１０^７の胎盤幹細胞である。

【0200】

ある特定の実施形態では、胎盤幹細胞（例えば、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２０
０＋、ＣＤ３４－胎盤幹細胞）を含む医薬組成物は、単回投与、続いて、その約１ヶ月後
（例えば、最初の投与の約２７、２８、２９、３０、３１、３２、または３３日後）に２
回目投与、として糖尿病性足部潰瘍を有する対象に投与される。ある特定の実施形態では
、胎盤幹細胞（例えば、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－胎盤幹細
胞）を含む医薬組成物は、単回投与、続いて、約１ヶ月後に２回目投与及びその約１ヶ月
後（すなわち、最初の投与の約２ヶ月後、例えば、最初の投与後５５、５６、５７、５８
、５９、６０、６１、６２、６３、または６４日目またはその頃）に３回目投与として、
糖尿病性足部潰瘍を有する対象に投与される。このようなレジメンに従って投与される胎
盤幹細胞の用量は、１×１０^３、３×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、３×１０^４、５
×１０^４、１×１０^５、３×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、３×１０^６、５×１０^６
、１×１０^７、３×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、３×１０^８、５×１０^８、１×１
０^９、５×１０^９、若しくは１×１０^１０の胎盤細胞、または、１×１０^３～３×１０^３
、３×１０^３～５×１０^３、５×１０^３～１×１０^４、１×１０^４～３×１０^４、３×１
０^４～５×１０^４、５×１０^４～１×１０^５、１×１０^５～３×１０^５、３×１０^５～５
×１０^５、５×１０^５～１×１０^６、１×１０^６～３×１０^６、３×１０^６～５×１０^６
、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～３×１０^７、３×１０^７～５×１０^７、５×１
０^７～１×１０^８、１×１０^８～３×１０^８、３×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１
×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、若しくは５×１０^９～１×１０^１０の胎盤幹細胞を
含むが、これらに制限されない。具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用
量は、１×１０^３の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤
幹細胞の用量は、３×１０^３の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では、医薬組成
物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^４の胎盤幹細胞である。別の具体的な実施形態では
、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^５の胎盤幹細胞である。別の具体的な実
施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、１×１０^６の胎盤幹細胞である。別の
具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^６の胎盤幹細胞で
ある。別の具体的な実施形態では、医薬組成物中の胎盤幹細胞の用量は、３×１０^７の胎
盤幹細胞である。

【0201】

本明細書で提供される医薬組成物は、５０％以上の生細胞（つまり、集団中の細胞の少
なくとも５０％は、機能しうる、または生きている）を含む細胞の集団を含む。好ましく
は、集団中の細胞の少なくとも６０％は、生存可能である。より好ましくは、医薬組成物
中の集団中の細胞の少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％は、生存
可能である。

【0202】

本明細書で提供される医薬組成物は、例えば、移植を容易にする１つ以上の化合物（例
えば、抗Ｔ細胞受容体抗体、免疫抑制剤など）；アルブミン、デキストラン４０、ゼラチ
ン、ヒドロキシエチル、デンプン、プラズマライト（Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ）などの安定
剤を含むことができる。

【0203】

注射用溶液として製剤化される時、一実施形態では、医薬組成物は、約１％～１．５％
のＨＳＡ及び約２．５％のデキストランを含む。好ましい実施形態では、医薬組成物は、
５％のＨＳＡ及び１０％のデキストランを含む、任意に、免疫抑制剤、例えば、１０ｍｇ
／ｋｇの、例えば、シクロスポリンＡを含む溶液中、約５×１０^６細胞／ｍＬ～約２×１
０^７細胞／ｍＬを含む。

【0204】

他の実施形態では、医薬組成物、例えば溶液、は、複数の細胞、例えば、単離胎盤細胞
、例えば、胎盤幹細胞または胎盤多分化能細胞を含み、該医薬組成物は、約１．０±０．
３×１０^６細胞／ｍＬ～約５．０±１．５×１０^６細胞／ｍＬを含む。他の実施形態では
、医薬組成物は、約１．５×１０^６細胞／ｍＬ～約３．７５×１０^６細胞／ｍＬを含む。
他の実施形態では、医薬組成物は、約１×１０^６細胞／ｍＬ～約５０×１０^６細胞／ｍＬ
、約１×１０^６細胞／ｍＬ～約４０×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６細胞／ｍＬ～約３
０×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６細胞／ｍＬ～約２０×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１
０^６細胞／ｍＬ～約１５×１０^６細胞／ｍＬ、または約１×１０^６細胞／ｍＬ～約１０×
１０^６細胞／ｍＬを含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、目に見える細胞塊（
すなわち、マクロ細胞塊）を含まない、またはこのような目に見える塊を実質的に含まな
い。本明細書で使用される場合、「マクロ細胞塊」は、拡大なしで目に見える、例えば、
裸眼で見える、細胞の凝集を意味し、一般に、約１５０ミクロンよりも大きい細胞凝集を
指す。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２．５％、３．０％、３．５％、４．
０％、４．５％、５．０％、５．５％、６．０％、６．５％、７．０％、７．５％、８．
０％、８．５％、９．０％、９．５％、または１０％のデキストラン、例えば、デキスト
ラン４０を含む。具体的な実施形態では、該組成物は、約７．５％～約９％のデキストラ
ン４０を含む。具体的な実施形態では、該組成物は、約５．５％のデキストラン４０を含
む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約１％～約１５％のヒト血清アルブミン（
ＨＳＡ）を含む。具体的な実施形態では、医薬組成物は、約１％、２％、３％、４％、５
％、６５、７５、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、または１５％
のＨＳＡを含む。具体的な実施形態では、該細胞は、低温保存及び解凍されている。別の
具体的な実施形態では、該細胞は、７０μＭ～１００μＭのフィルタに通して濾過されて
いる。別の具体的な実施形態では、該組成物は、目に見える細胞塊を含まない。別の具体
的な実施形態では、該組成物は、１０^６の細胞当たり約２００未満の細胞塊を含み、該細
胞塊は、顕微鏡、例えば、光学顕微鏡、のみで見える。別の具体的な実施形態では、該組
成物は、１０^６細胞当たり約１５０未満の細胞塊を含み、該細胞塊は、顕微鏡、例えば、
光学顕微鏡、のみで見える。別の具体的な実施形態では、該組成物は、１０^６細胞当たり
約１００未満の細胞塊を含み、該細胞塊は、顕微鏡、例えば、光学顕微鏡、のみで見える
。

【0205】

ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約１．０±０．３×１０^６細胞／ｍＬ、約５
．５％のデキストラン４０（ｗ／ｖ）、約１０％のＨＳＡ（ｗ／ｖ）、及び約５％のＤＭ
ＳＯ（ｖ／ｖ）を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書で提供される胎盤幹細胞を
含む医薬組成物は、約５．７５％のデキストラン４０、約１０％のヒト血清アルブミン、
及び約２．５％のＤＭＳＯを含む。

【0206】

他の実施形態では、医薬組成物は、１０％のデキストラン４０を含む溶液に、複数の細
胞、例えば、複数の単離胎盤細胞を含み、医薬組成物は、約１．０±０．３×１０^６細胞
／ｍＬ及び～約５．０±１．５×１０^６細胞／ｍＬを含み、該組成物は、肉眼で目に見え
る細胞塊を含まない（すなわち、マクロ細胞塊を含まない）。いくつかの実施形態では、
医薬組成物は、約１．５×１０^６細胞／ｍＬ～約３．７５×１０^６細胞／ｍＬを含む。あ
る特定の実施形態では、該細胞は、低温保存及び解凍されている。別の具体的な実施形態
では、該細胞は、７０μＭ～１００μＭのフィルタに通して濾過されている。別の具体的
な実施形態では、該組成物は、１０^６の細胞当たり約２００マイクロ未満の細胞塊（つま
り、拡大でのみ見える細胞塊）を含む。別の具体的な実施形態では、医薬組成物は、１０
^６の細胞当たり約１５０マイクロ未満の細胞塊を含む。別の具体的な実施形態では、医薬
組成物は、１０^６の細胞当たり約１００マイクロ未満の細胞塊を含む。別の具体的な実施
形態では、医薬組成物は、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８
％、７％、６％、５％、４％、３％、若しくは２％未満のＤＭＳＯ、または１％、０．９
％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、若しく
は０．１％未満のＤＭＳＯを含む。

【0207】

細胞を含む組成物が、さらに本明細書で提供され、該組成物は、本明細書の開示の方法
の１つにより生成される。例えば、一実施形態では、医薬組成物は、細胞を含み、医薬組
成物は、濾過された細胞含有溶液を形成するために、胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞また
は胎盤多分化能細胞、を含む溶液を濾過すること；例えば、低温保存の前に、約１～５０
×１０^６、１～４０×１０^６、１～３０×１０^６、１～２０×１０^６、１～１５×１０^６
、または１～１０×１０^６細胞／ｍＬまで、第１の溶液で、濾過された細胞含有溶液を希
釈すること；及び、該組成物を生成するために、デキストランを含むが、ヒト血清アルブ
ミン（ＨＳＡ）を含まない第２の溶液で、得られた濾過された細胞含有溶液を希釈するこ
と、を含む方法により生成される。ある特定の実施形態では、該希釈は、多くとも約１５
×１０^６細胞／ｍＬまでである。ある特定の実施形態では、該希釈は、多くとも約１０±
３×１０^６細胞／ｍＬまでである。ある特定の実施形態では、該希釈は、多くとも約７．
５×１０^６細胞／ｍＬまでである。他のある特定の実施形態では、濾過された細胞含有溶
液が、希釈前に、約１５×１０^６細胞／ｍＬ未満を含む場合、濾過は、任意である。他の
ある特定の実施形態では、濾過された細胞含有溶液が、希釈前に、約１０±３×１０^６細
胞／ｍＬ未満を含む場合、濾過は、任意である。他のある特定の実施形態では、濾過され
た細胞含有溶液が、希釈前に、約７．５×１０^６細胞／ｍＬ未満を含む場合、濾過は、任
意である。

【0208】

具体的な実施形態では、細胞は、第１の希釈液での該希釈及び該第２の希釈液での該希
釈の間に、低温保存される。別の具体的な実施形態では、第１の希釈液は、デキストラン
及びＨＳＡを含む。第１の希釈液または第２の希釈液中のデキストランは、任意の分子量
のデキストラン、例えば、約１０ｋＤａ～約１５０ｋＤａの分子量を有するデキストラン
であることができる。いくつかの実施形態では、該第１の希釈液または該第２の溶液中の
該デキストランは、約２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％、
５．５％、６．０％、６．５％、７．０％、７．５％８．０％、８．５％、９．０％、９
．５％、または１０％のデキストランである。別の具体的な実施形態では、該第１の希釈
液または該第２の希釈液中のデキストランは、デキストラン４０である。別の具体的な実
施形態では、該第１の希釈液及び該第２の希釈液中のデキストランは、デキストラン４０
である。別の具体的な実施形態では、該第１の希釈液中の該デキストラン４０は、５．０
％のデキストラン４０である。別の具体的な実施形態では、該第１の希釈液中の該デキス
トラン４０は、５．５％のデキストラン４０である。別の具体的な実施形態では、該第２
の希釈液中の該デキストラン４０は、１０％のデキストラン４０である。別の具体的な実
施形態では、ＨＳＡを含む該溶液中の該ＨＳＡは、１～１５％のＨＳＡである。別の具体
的な実施形態では、ＨＳＡを含む該溶液中の該ＨＳＡは、約１％、２％、３％、４％、５
％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、または１５％
のＨＳＡである。別の具体的な実施形態では、ＨＳＡを含む該溶液中の該ＨＳＡは、１０
％のＨＳＡである。別の具体的な実施形態では、該第１の希釈液は、ＨＳＡを含む。別の
具体的な実施形態では、該第１の希釈液中の該ＨＳＡは、１０％のＨＳＡである。別の具
体的な実施形態では、該第１の希釈液は、凍結防止剤を含む。別の具体的な実施形態では
、該凍結防止剤は、ＤＭＳＯである。別の具体的な実施形態では、該第２の希釈液中の該
デキストラン４０は、約１０％のデキストラン４０である。別の具体的な実施形態では、
細胞を含む該組成物は、約７．５％～約９％のデキストランを含む。別の具体的な実施形
態では、医薬組成物は、約１．０±０．３×１０^６細胞／ｍＬ～約５．０±１．５×１０
^６細胞／ｍＬを含む。別の具体的な実施形態では、医薬組成物は、約１．５×１０^６細胞
／ｍＬ～約３．７５×１０^６細胞／ｍＬを含む。

【0209】

別の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）濾過された細胞含有溶液を生成するために、
低温保存前に、胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞または胎盤多分化能細胞、を含む細胞含有
溶液を濾過すること；（ｂ）約１～５０×１０^６、１～４０×１０^６、１～３０×１０^６
、１～２０×１０^６、１～１５×１０^６、または１～１０×１０^６細胞／ｍＬの、濾過さ
れた細胞含有溶液中の細胞を低温保存すること；（ｃ）細胞を解凍すること；及び、（ｄ
）デキストラン４０溶液で、約１：１～約１：１１（ｖ／ｖ）に、濾過された細胞含有溶
液を希釈すること、を含む方法により作製される。ある特定の実施形態では、細胞の数が
、ステップ（ａ）の前に、約１０±３×１０^６未満細胞／ｍＬである場合、濾過は任意で
ある。別の具体的な実施形態では、ステップ（ｂ）の細胞は、約１０±３×１０^６細胞／
ｍＬで低温保存される。別の具体的な実施形態では、ステップ（ｂ）の細胞は、約５％～
約１０％のデキストラン４０及びＨＳＡを含む溶液中で低温保存される。ある特定の実施
形態では、ステップ（ｂ）の該希釈は、多くとも約１５×１０^６細胞／ｍＬまでである。

【0210】

別の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）細胞含有溶液を形成するために、１０％のＨ
ＳＡを含む５．５％のデキストラン４０溶液に、胎盤細胞、例えば、胎盤幹細胞または胎
盤多分化能細胞、を懸濁すること；（ｂ）７０μＭのフィルタに通して、細胞含有溶液を
濾過すること；（ｃ）約１～５０×１０^６、１～４０×１０^６、１～３０×１０^６、１～
２０×１０^６、１～１５×１０^６、または１～１０×１０^６細胞／ｍＬまで、５．５％の
デキストラン４０、１０％のＨＳＡ、及び５％のＤＭＳＯを含む溶液で、細胞含有溶液を
希釈すること；（ｄ）細胞を低温保存すること；（ｅ）細胞を解凍すること；ならびに、
（ｆ）１０％のデキストラン４０で、１：１～１：１１（ｖ／ｖ）に、細胞含有溶液を希
釈すること、を含む方法により作製される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｃ）の
該希釈は、多くとも約１５×１０^６細胞／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ステッ
プ（ｃ）の該希釈は、多くとも約１０±３×１０^６細胞／ｍＬである。ある特定の実施形
態では、ステップ（ｃ）の該希釈は、多くとも約７．５×１０^６細胞／ｍＬである。

【0211】

別の実施形態では、細胞を含む組成物は、（ａ）細胞を収集するために、複数の細胞を
遠心分離すること；（ｂ）５．５％のデキストラン４０中に、細胞を再懸濁すること；（
ｃ）細胞を収集するために、細胞を遠心分離すること；（ｄ）１０％のＨＳＡを含む５．
５％のデキストラン４０溶液中に、細胞を再懸濁すること；（ｅ）７０μＭのフィルタに
通して、細胞を濾過すること；（ｆ）約１～５０×１０^６、１～４０×１０^６、１～３０
×１０^６、１～２０×１０^６、１～１５×１０^６、または１～１０×１０^６細胞／ｍＬま
で、５．５％のデキストラン４０、１０％のＨＳＡ、及び５％のＤＭＳＯ中に、細胞を希
釈すること；（ｇ）細胞を低温保存すること；（ｈ）細胞を解凍すること；ならびに、（
ｉ）１０％のデキストラン４０で、１：１～１：１１（ｖ／ｖ）に細胞を希釈すること、
を含む方法により作製される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｆ）の該希釈は、多
くとも約１５×１０^６細胞／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ステップ（ｆ）の該
希釈は、多くとも約１０±３×１０^６細胞／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ステ
ップ（ｆ）の該希釈は、多くとも約７．５×１０^６細胞／ｍＬである。他のある特定の実
施形態では、細胞の数が、約１０±３×１０^６未満細胞／ｍＬである場合、濾過は任意で
ある。

【0212】

本明細書に記載の組成物、例えば、単離胎盤細胞を含む医薬組成物は、本明細書に記載
の単離胎盤細胞のいずれかを含むことができる。

【0213】

細胞産生物の投与に適する他の注射製剤が使用されてもよい。

【0214】

一実施形態では、医薬組成物は、実質的または完全に由来が非母体である、つまり、胎
児遺伝子型を有する単離胎盤細胞を含み；例えば、少なくとも約９０％、９５％、９８％
、９９％、または約１００％は、由来が非母体である。例えば、一実施形態では、医薬組
成物は、ＣＤ２００＋及びＨＬＡ－Ｇ－；ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ２００＋
；ＣＤ２００＋及びＯＣＴ－４＋；ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋及びＨＬＡ－Ｇ－；ＣＤ７
３＋及びＣＤ１０５＋であり、単離胎盤細胞の該集団を含む胎盤細胞の集団において、胎
盤細胞の該集団が、胚様体様体の形成を可能にする条件下で培養される時、１つ以上の胚
様体様体の形成を容易にする；若しくは、ＯＣＴ－４＋であり、単離胎盤細胞の該集団を
含む胎盤細胞の集団において、胎盤細胞の該集団が、胚様体様体の形成を可能にする条件
下で培養される時、１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする；または、上述の組み合わ
せである単離胎盤細胞の集団を含み、該単離胎盤細胞の少なくとも７０％、８０％、９０
％、９５％、または９９％は、由来が非母体である。別の実施形態では、医薬組成物は、
ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ３４－；ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋
、及びＣＤ３４－；ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、及びＣＤ９
０＋若しくはＣＤ４５－のうちの少なくとも１つ；ＣＤ１０＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５
＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、及びＣＤ４５－；ＣＤ１０＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５
＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、及びＣＤ４５－；ＣＤ２００＋、及びＨＬＡ－Ｇ－；Ｃ
Ｄ７３＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ２００＋；ＣＤ２００＋、及びＯＣＴ－４＋；ＣＤ７
３＋、ＣＤ１０５＋、及びＨＬＡ－Ｇ－；ＣＤ７３＋及びＣＤ１０５＋であり、該単離胎
盤細胞を含む胎盤細胞の集団において、胎盤細胞の該集団が、胚様体様体の形成を可能に
する条件下で培養される時、１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする；ＯＣＴ－４＋で
あり、該単離胎盤細胞を含む胎盤細胞の集団において、胎盤細胞の該集団が、胚様体様体
の形成を可能にする条件下で培養される時、１つ以上の胚様体様体の形成を容易にする；
または、ＣＤ１１７－、ＣＤ１３３－、ＫＤＲ－、ＣＤ８０－、ＣＤ８６－、ＨＬＡ－Ａ
，Ｂ，Ｃ＋、ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＱ，ＤＲ－及び／若しくはＰＤＬ１＋のうちの１つ以上で
ある；あるいは、上述の組み合わせである単離胎盤細胞の集団を含み、該単離胎盤細胞の
少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％が、由来が非母体である。具
体的な実施形態では、医薬組成物はさらに、胎盤から得られない幹細胞を含む。

【0215】

本明細書で提供される組成物、例えば、医薬組成物、中の単離胎盤細胞は、単一のドナ
ーまたは複数のドナーに由来する胎盤細胞を含むことができる。単離胎盤細胞は、意図さ
れるレシピエントに完全にＨＬＡ適合である、または、部分的若しくは完全にＨＬＡ不適
合である可能性がある。

【0216】

５．３．３ 単離胎盤細胞を含むマトリックス
胎盤細胞、または単離胎盤細胞の集団を含むマトリックス、ヒドロゲル、足場などを含
む組成物がさらに、本明細書で提供される。そのような組成物は、懸濁液中の細胞の代わ
りに、またはそれに加えて使用することができる。

【0217】

本明細書に記載の単離胎盤細胞は、天然マトリックス、例えば、羊膜材料などの胎盤生
体材料上に播種することができる。そのような羊膜材料は、例えば、哺乳動物胎盤から直
接切除された羊膜；固定または熱処理された羊膜、実質的に乾燥した（すなわち、２０％
未満のＨ２Ｏ）羊膜、絨毛膜、実質的に乾燥した絨毛膜、実質的に乾燥した羊膜及び絨毛
膜などであることができる。単離胎盤細胞が播種することができる好ましい胎盤生体材料
は、Ｈａｒｉｒｉ、米国特許出願公開第２００４／００４８７９６号に記載されており、
この開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0218】

本明細書に記載の単離胎盤細胞は、例えば、注射に適するヒドロゲル溶液中に懸濁する
ことができる。そのような組成物に好適なヒドロゲルは、ＲＡＤ１６などの自己組織化ペ
プチドを含む。一実施形態では、細胞を含むヒドロゲル溶液は、移植のための、細胞がそ
の内部に分散したマトリックスを形成するために、例えば、鋳型内で、硬化させることが
できる。そのようなマトリックス中の単離胎盤細胞は、移植前に、細胞が有糸分裂的に拡
大するように培養することもできる。ヒドロゲルは、例えば、共有結合、イオン結合、ま
たは水素結合を介して架橋されて、ゲルを形成するために水分子を捕捉する３次元の開格
子構造を形成している、有機ポリマー（天然または合成）である。ヒドロゲル形成材料は
、イオン的に架橋される、アルギネート及びその塩などの多糖類、ペプチド、ポリホスフ
ァジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎｅｓ）、ならびにポリアクリレート、または、そ
れぞれ温度若しくはｐＨにより架橋されている、ポリエチレンオキシドポリプロピレング
リコールブロックコポリマーなどのブロックポリマーを含む。いくつかの実施形態では、
ヒドロゲルまたはマトリックスは、生分解性である。

【0219】

いくつかの実施形態では、製剤は、ｉｎ ｓｉｔｕの重合可能なゲルを含む（例えば、
米国特許公開公報第２００２／００２２６７６号（この開示は、全体が参照により本明細
書に組み込まれる）；Ａｎｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅ
ａｓｅ， ７８（１－３）：１９９－２０９ （２００２）；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，
Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ， ２４（２２）：３９６９－８０ （２００３）を参照の
こと）。

【0220】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、電荷を持つ側鎖基またはそれらの一価のイオン
性塩を有する、水、緩衝塩水溶液、またはアルコール水溶液などの水溶液に少なくとも部
分的に可溶性である。カチオンと反応することができる酸性側鎖基を有するポリマーの例
は、ポリ（ホスファゼン（ｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅｓ））、ポリ（アクリル酸）、ポリ（
メタクリル酸）、アクリル酸及びメタクリル酸のコポリマー、ポリ（酢酸ビニル）、なら
びにスルホン化ポリスチレンなどのスルホン化ポリマーである。アクリルまたはメタクリ
ル酸及びビニルエーテルモノマーまたはポリマーの反応により形成される酸性側鎖基を有
するコポリマーを、使用することもできる。酸性基の例は、カルボン酸基、スルホン酸基
、ハロゲン化（好ましくはフッ素化）アルコール基、フェノールＯＨ基、及び酸性ＯＨ基
である。

【0221】

具体的な実施形態では、マトリックスは、生体吸収材料、例えば、ＰＧＡ、ＰＬＡ、Ｐ
ＣＬコポリマー若しくはブレンド、またはヒアルロン酸、から作製されるマルチフィラメ
ントヤーンからなることができるフェルトである。ヤーンは、クリンピング、カッティン
グ、カーディング、及びニードリングからなる標準的な繊維加工技術を使用して、フェル
トに作製される。別の好ましい実施形態では、本発明の細胞は、コンポジット構造であり
得るフォーム足場上に播種される。加えて、３次元のフレームワークは、修復、交換、ま
たは向上されるべき、身体の特定の構造などの有用な形状に成形されてもよい。使用する
ことができる足場の他の例としては、不織布マット、多孔質フォーム、または自己組織化
ペプチドが挙げられる。不織布マットは、グリコール酸及び乳酸（例えば、ＰＧＡ／ＰＬ
Ａ）（ＶＩＣＲＹＬ、Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｉｎｃ．、ニュージャージー州サマヴィル）合成
吸収性コポリマーからなる繊維を使用して形成することができる。例えば、凍結乾燥、ま
たは真空凍結乾燥（例えば、米国特許第６，３５５，６９９号を参照のこと）などのプロ
セスにより形成されるポリ（ε－カプロラクトン）／ポリ（グリコール酸）（ＰＣＬ／Ｐ
ＧＡ）コポリマーからなるフォームも、足場として使用することもできる。

【0222】

本明細書に記載の単離胎盤細胞またはその共培養物は、３次元のフレームワークまたは
足場上に播種することができ、インビボで移植することができる。そのようなフレームワ
ークは、任意の１つ以上の成長因子、細胞、薬物、または他の構成成分、例えば、組織形
成を刺激する成分、と組み合わせて移植することができる。

【0223】

使用することができる足場の例としては、不織布マット、多孔質フォーム、または自己
組織化ペプチドが挙げられる。不織布マットは、グリコール酸及び乳酸（例えば、ＰＧＡ
／ＰＬＡ）（ＶＩＣＲＹＬ、Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｉｎｃ．、ニュージャージー州サマヴィル
）合成吸収性コポリマーからなる繊維を使用して形成することができる。例えば、凍結乾
燥、または真空凍結乾燥などのプロセスにより形成されるポリ（ε－カプロラクトン）／
ポリ（グリコール酸）（ＰＣＬ／ＰＧＡ）コポリマーからなるフォーム（例えば、米国特
許第６，３５５，６９９号を参照のこと）も、足場として使用することができる。

【0224】

別の実施形態では、単離胎盤細胞は、例えば、ＰＧＡ、ＰＬＡ、ＰＣＬコポリマー若し
くはブレンド、またはヒアルロン酸などの生体吸収材料から作製されるマルチフィラメン
トヤーンからなることができるフェルト上に播種することができる、または、これと接触
することができる。

【0225】

別の実施形態では、本明細書で提供される単離胎盤細胞は、コンポジット構造であり得
るフォーム足場上に播種することができる。このようなフォーム足場は、修復、交換、ま
たは向上されるべき、身体中の特定の構造の一部のものなどの有用な形状に形成すること
ができる。いくつかの実施形態では、フレームワークは、細胞付着を増強するために、細
胞の接種前に、例えば、０．１Ｍの酢酸で処理され、続いて、ポリリシン、ＰＢＳ、及び
／またはコラーゲン中でインキュベートされる。マトリックスの外部表面は、例えば、マ
トリックスを血漿コーティングすること、または、１つ以上のタンパク質（例えば、コラ
ーゲン、弾性繊維、網状繊維）、糖タンパク質、グリコサミノグリカン、（例えば、ヘパ
リンスルフェート、コンドロイチン－４－スルフェート、コンドロイチン－６－スルフェ
ート、デルマタンスルフェート、ケラチンスルフェートなど）、細胞マトリックス、及び
／またはゼラチン、アルギネート、アガー、アガロース、及びゴムなどのこれらに限定さ
れない他の材料の添加により、細胞の付着または成長及び組織の分化を改善するために修
飾されてもよい。

【0226】

いくつかの実施形態では、足場は、それを非血栓性にする材料を含む、またはそれらで
処理される。これらの処理及び材料は、内皮成長、遊走、及び細胞外マトリックス沈着を
促進及び持続することもある。これらの材料及び処理の例としては、ラミニン及びＩＶ型
コラーゲンなどの基底膜タンパク質などの天然材料、ＥＰＴＦＥならびにＰＵＲＳＰＡＮ
（商標）（Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ， Ｉｎｃ．、
カリフォルニア州バークレー）などのセグメント化ポリウレタン尿素シリコーンなどの合
成材料、が挙げられるが、これらに限定されない。足場は、ヘパリンなどの抗血栓剤を含
むこともでき、足場は、単離胎盤細胞を播種する前に、表面電荷を変えるために処理する
こと（例えば、血漿でコーティングすること）もできる。

【0227】

本明細書で提供される胎盤細胞（例えば、ＰＤＡＣ）は、リン酸一カルシウム、リン酸
二カルシウム、リン酸三カルシウム、α－リン酸三カルシウム、β－リン酸三カルシウム
、及びリン酸四カルシウム、ヒドロキシアパタイト、フルオロアパタイト、硫酸カルシウ
ム、フッ化カルシウム、酸化カルシウム、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムマグネシウ
ム、ＢＩＯＧＬＡＳＳ（登録商標）などの生物学的に活性なガラス、ならびにそれらの混
合物を含むが、これらに限定されない生理学的に許容されるセラミック材料上に播種する
こともできる、またはこれと接触できる。現在市販されている多孔性生体適合性セラミッ
ク材料は、ＵＲＧＩＢＯＮＥ（登録商標）（ＣａｎＭｅｄｉｃａ Ｃｏｒｐ．、カナダ）
、ＥＮＤＯＢＯＮ（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ Ｆｒａｎｃｅ、
フランス）、ＣＥＲＯＳ（登録商標）（Ｍａｔｈｙｓ，ＡＧ、スイス・ベットラッハ）、
ならびに、ＨＥＡＬＯＳ（商標）（ＤｅＰｕｙ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州レイナム
）及びＶＩＴＯＳＳ（登録商標）、ＲＨＡＫＯＳＳ（商標）、及びＣＯＲＴＯＳＳ（登録
商標）（Ｏｒｔｈｏｖｉｔａ、ペンシルベニア州モルバーン）などの石灰化コラーゲン骨
移植製品を含む。フレームワークは、天然及び／または合成材料の混合物、ブレンド、ま
たはコンポジットであることができる。

【0228】

一実施形態では、単離胎盤細胞は、約０．５×１０^６～約８×１０^６細胞／ｍＬで、好
適な足場上に播種される、またはこれと接触する。

【実施例0229】

６．１ 実施例１：胎盤由来接着細胞の表現型の特徴づけ
本実施例は、胎盤細胞（ＰＤＡＣとも呼ばれているＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０
５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞）による、血管新生因子の分泌を実証する。

【0230】

６．１．１ 胎盤由来接着細胞の血管新生能の評価のためのセクレトーム（Ｓｅｃｒｅｔ
ｏｍｅ）プロファイリング
マルチプレックスビーズアッセイ：継代６回の胎盤由来接着細胞を、成長培地に、等し
い細胞数でプレーティングし、馴化培地を、４８時間後に収集した。細胞馴化培地中の複
数の血管新生サイトカイン／成長因子の同時定性分析を、磁気ビーズをベースとするマル
チプレックスアッセイ（Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘ Ｐｒｏ（商標）、Ｂｉｏ－Ｒａｄ、カリフォ
ルニア州）を使用して実施した。アッセイは、血清、血漿、及び細胞／組織培養上清を含
む多様なマトリックス中の血管新生バイオマーカーの測定を可能にするものである。これ
らの９６ウェルプレートフォーマットのビーズをベースとするアッセイは、捕捉サンドイ
ッチイムノアッセイと類似している。所望の血管新生標的に対する抗体が、内部染色され
たビーズに共有結合的に結合される。結合されたビーズを、血管新生標的を含有する試料
と反応させる。結合していないタンパク質を除去するための一連の洗浄後に、異なるエピ
トープに特異的なビオチン化検出抗体を、反応物に添加する。結果は、血管新生標的の周
りの抗体のサンドイッチの形成である。次に、ビーズ表面上のビオチン化検出抗体に結合
するために、ストレプトアビジンＰＥを、添加する。要約すると、マルチプレックスアッ
セイを、製造者の使用説明書に従って実施し、馴化培地中のそれぞれの血管新生成長因子
の量を評価した。

【0231】

ＥＬＩＳＡ：Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ミネソタ州ミネアポリス）製の市販のキットを
使用して、細胞馴化培地中の単一の血管新生サイトカイン／成長因子の定量的分析を実施
した。要約すると、ＥＬＩＳＡアッセイを、製造者の使用説明書に従って実施し、馴化培
地中のそれぞれの血管新生成長因子の量を評価した。

【0232】

ＰＤＡＣによる種々の血管新生タンパク質の分泌のレベルを、図１に示す。
血管新生マーカーに対するマルチプレックス及びＥＬＩＳＡの結果

【表1】

【0233】

別の実験では、ＰＤＡＣは、アンジオポイエチン１、アンジオポイエチン２、ＰＥＣＡ
Ｍ－１（ＣＤ３１；血小板内皮細胞接着分子）、ラミニン、及びフィブロネクチンを分泌
することも確認された。

【0234】

６．２ 実施例２：胎盤細胞の機能的特徴づけ
本実施例は、血管新生及び分化能力と関連する胎盤細胞（ＰＤＡＣとも呼ばれる、ＣＤ
１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞）の異なる特徴を実証する
。

【0235】

６．２．１ ＰＤＡＣの血管新生能の評価のためのＨＵＶＥＣ管腔形成
ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、３日間、ＥＧＭ－２培地（Ｃａｍｂｒｅｘ、ニ
ュージャージー州イーストラザフォード）中、継代３回以下で継代培養し、約７０％～８
０％のコンフルエンシーで採取した。ＨＵＶＥＣを、基礎培地／抗生物質（ＤＭＥＭ／Ｆ
１２（Ｇｉｂｃｏ））で１回洗浄し、所望の濃度で、同じ培地中に再懸濁した。ＨＵＶＥ
Ｃを、調製から１時間以内に使用した。ヒト胎盤コラーゲン（ＨＰＣ）を、１０ｍＭのＨ
Ｃｌ（ｐＨ ２．２５）中で１．５ｍｇ／ｍＬの濃度にし、ｐＨ ７．２に緩衝液で中和
し、使用するまで氷上に保った。ＨＰＣを、４０００細胞／μｌの最終細胞濃度で、ＨＵ
ＶＥＣ懸濁液と組み合わせた。得られたＨＵＶＥＣ／ＨＰＣ懸濁液を、３μｌ／ウェルで
、９６ウェルプレートに直ちにピペッティングした（プレート周囲は、蒸発を避けるため
に、滅菌ＰＢＳで予め充填しなければならない、条件ごとにｎ＝５）。ＨＵＶＥＣ滴を、
培地添加なしに、７５～９０分、３７℃及び５％のＣＯ_２でインキュベートして、コラー
ゲンの重合を可能にした。「ドライ」インキュベーションの完了時に、各ウェルに、２０
０μｌの馴化ＰＤＡＣ培地（ｎ＝２細胞株）または対照培地（例えば、陰性対照としての
ＤＭＥＭ／Ｆ１２、及び陽性対照としてのＥＧＭ－２）を静かに充填し、２０時間、３７
℃及び５％のＣＯ_２でインキュベートした。４～６時間、成長培地中、継代６回のＰＤＡ
Ｃをインキュベートすることにより、馴化培地を調製し；付着させて広げた後、培地を、
２４時間、ＤＭＥＭ／Ｆ１２に変更した。インキュベーション後に、培地を、ＨＵＶＥＣ
滴を乱すことなく、ウェルから除去し、細胞をＰＢＳで１回洗浄した。次に、ＨＵＶＥＣ
滴を、Ｄｉｆｆ－Ｑｕｉｋ細胞染色キットを使用して、１０秒間固定して、１分間染色し
、続いて、滅菌水で３回すすいだ。染色した滴を空気乾燥させ、Ｚｅｉｓｓ ＳｔｅＲｅ
ｏ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｖ８顕微鏡を使用して、各ウェルの画像を得た。次に、コンピ
ュータソフトウエアパッケージＩｍａｇｅＪ及び／またはＭａｔＬａｂを使用して、画像
を分析した。画像を、カラーから８ビットグレースケール画像に変換し、閾値を決定して
、白黒画像に変換した。次に、粒子分析機能を使用して画像を分析し、分析は、アッセイ
における内皮管腔形成の量と同等である、カウント（個々の粒子の数）、総面積、（個々
の粒子の）平均サイズ、及び面積率を含む、ピクセル密度データを提供した。

【0236】

馴化培地は、管腔形成の誘導により実証されるように、内皮細胞に血管新生効果をもた
らす（図２を参照のこと）。

【0237】

６．２．２ ＨＵＶＥＣ遊走アッセイ
本実験は、胎盤由来接着細胞の血管新生能力を実証した。ＨＵＶＥＣを、フィブロネク
チン（ＦＮ）コーティングされた１２ウェルプレート中で、単一層コンフルエンスまで成
長させ、単一層を、１ｍＬのプラスチックピペットの先端で「傷つけ」て、ウェル全体に
、細胞のない線を作成した。「傷つけた」細胞を、成長の３日後に、ＰＤＡＣから得られ
た無血清馴化培地（ＥＢＭ２；Ｃａｍｂｒｅｘ）でインキュベートすることにより、ＨＵ
ＶＥＣの遊走を試験した。細胞を含まないＥＢＭ２培地を、対照として使用した。１５時
間後に、倒立顕微鏡を使用して、細胞のない部分への細胞遊走を記録した（ｎ＝３）。次
に、コンピュータソフトウエアパッケージＩｍａｇｅＪ及び／またはＭａｔＬａｂを使用
して、写真を分析した。画像を、カラーから８ビットグレースケール画像に変換し、閾値
を決定して、白黒画像に変換した。次に、粒子分析機能を使用して画像を分析し、分析は
、アッセイにおける内皮遊走の量に等しい、カウント（個々の粒子の数）、総面積、（個
々の粒子の）平均サイズ、及び面積率を含む、ピクセル密度データを提供した。細胞遊走
の程度を、最初に記録された創傷線のサイズに対しスコア化し、結果を１ｘ１０^６の細胞
に正規化した。

【0238】

胎盤由来接着細胞により分泌される栄養因子は、細胞遊走の誘導により実証されるよう
に、内皮細胞に血管新生効果をもたらした（図３）。

【0239】

別の実験では、ＨＵＶＥＣを、ＥＧＭ２中で、一晩確立させるために、２４ウェルプレ
ートの底部で培養し、続いて、ＥＢＭ中で半日飢餓にした。同時に培地で培養されたＰＤ
ＡＣを解凍し、一晩、トランスウェル（８μＭ）中で培養した。ＥＣ飢餓の後、トランス
ウェルと共に馴化無血清ＤＭＥＭを、一晩の増殖のために、ＥＣに移した。４回の反復を
、各実験に含め、２４時間後の増殖を、ＰｒｏｍｅｇａのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ
アッセイで評価した。ＥＢＭ－２培地を、陰性対照として使用し、ＥＧＭ－２を、陽性対
照として使用した。エラーバーは、分析的反復（ｎ＝３）の標準偏差を表す。

【0240】

ＰＤＡＣにより分泌される栄養因子は、ＨＵＶＥＣ細胞数の増加をもたらし、これはＨ
ＵＶＥＣ増殖を示す。図４を参照のこと。

【0241】

６．２．３ 胎盤由来接着細胞の血管新生能の評価のための管腔形成
一般に細胞の血管新生能及びＶＥＧＦの細胞の分化能における効果を評価するために、
ＶＥＧＦを含まない成長培地中、またはＶＥＧＦを含むＥＧＭ２－ＭＶ中のいずれかで、
ＰＤＡＣを成長させた。管腔形成に対する対照としてのＨＵＶＥＣを、ＥＧＭ２－ＭＶ中
で成長させた。細胞が７０～８０％のコンフルエンスに達するまで、細胞を、４～７日間
、各培地中で培養した。冷（４℃）ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）溶液（５０μＬ；ＢＤ Ｂ
ｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、１２ウェルプレートのウェルに分注し、プレートを、３７℃
で６０分間インキュベートして、溶液をゲル化させた。ＰＤＡＣ及びＨＵＶＥＣ細胞を、
トリプシン処理し、（ＶＥＧＦを含む及び含まない）適切な培地に再懸濁し、１００μｌ
の希釈された細胞（１～３×１０^４細胞）を、ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）含有ウェルのそ
れぞれに添加した。０．５～１００ｎｇのＶＥＧＦの存在下または不存在下での、重合さ
れたＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）上の細胞を、３７℃、５％のＣＯ２のインキュベーター内
に４～２４時間置いた。インキュベーション後に、標準的な光学顕微鏡を使用して、細胞
を管腔形成の徴候について評価した。

【0242】

ＰＤＡＣは、ＶＥＧＦの不存在下で最小限の管腔形成を示したが、ＶＥＧＦでの刺激を
通して、誘導／分化されて、管腔様構造を形成した。図５を参照のこと。

【0243】

６．２．４ 胎盤由来接着細胞の血管新生能の評価のための低酸素応答性
内皮細胞及び／または内皮前駆細胞の血管新生機能性を評価するために、細胞を、低酸
素及び正常酸素条件下での血管新生成長因子を分泌する能力に関して評価することができ
る。低酸素条件下での培養は通常、内皮細胞または内皮前駆細胞のいずれかによる血管新
生成長因子の分泌の増加を誘導し、これは、馴化培地中で測定できる。胎盤由来接着細胞
を、標準的な成長培地中、等しい細胞数でプレーティングし、成長させて約７０～８０％
のコンフルエンスに至らせた。続いて、細胞を、無血清培地（ＥＢＭ－２）に切り替え、
２４時間、正常酸素（２１％のＯ２）または低酸素（１％のＯ２）条件下でインキュベー
トした。馴化培地を収集し、市販のＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製ＥＬＩＳＡキットを使用し
て、血管新生成長因子の分泌を分析した。ＥＬＩＳＡアッセイを、製造者の使用説明書に
従って実施し、馴化培地中のそれぞれの血管新生成長因子（ＶＥＧＦ及びＩＬ－８）の量
を、１×１０^６の細胞に正規化した。

【0244】

胎盤由来接着細胞は、低酸素条件での種々の血管新生成長因子の分泌の上昇を示した。
図６を参照のこと。

【0245】

６．２．５ ＰＤＡＣ馴化培地に対するＨＵＶＥＣの応答
ＰＤＡＣを、６０％のＤＭＥＭ－ＬＧ（Ｇｉｂｃｏ）、４０％のＭＣＢＤ－２０１（Ｓ
ｉｇｍａ）、２％のＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｓ）、１×インスリン－トランスフ
ェリン－セレン（ＩＴＳ）、１０ｎｇ／ｍＬのリノール酸－ウシ血清アルブミン（ＬＡ－
ＢＳＡ）、１ｎのデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ）、１００μＭのアスコルビン酸２－ホス
フェート（Ｓｉｇｍａ）、１０ｎｇ／ｍＬの上皮成長因子（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、
及び１０ｎｇ／ｍＬの血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ
）を含有する成長培地で、４８時間培養し、次に、無血清培地で、さらに４８時間培養し
た。ＰＤＡＣ培養物由来の馴化培地を、収集し、使用して、５、１５、及び３０分間、血
清飢餓ＨＵＶＥＣを刺激した。続いて、ＨＵＶＥＣを、溶解させ、血管新生経路シグナル
伝達に関与することが知られているリンタンパク質について、ＢＤ（商標） ＣＢＡ（Ｃ
ｙｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｂｅａｄ Ａｓｓａｙ）Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｆｌｅｘ
Ｋｉｔ （ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。ＰＤＡＣは、ＨＵＶＥＣにお
ける、ＡＫＴ－１（アポトーシスプロセスを阻害する）、ＡＫＴ－２（インスリンシグナ
ル伝達経路における重要なシグナル伝達タンパク質である）、及びＥＲＫ １／２細胞増
殖経路の強いアクチベーターであることが判明した。これらの結果は、ＰＤＡＣの血管新
生能力をさらに実証する。

【0246】

６．３ 実施例３：ＰＤＡＣによる血管新生の誘導
本実施例は、上記実施例１に記載されるようなＰＤＡＣが、ニワトリ漿尿膜（ＣＡＭ）
を使用して、インビボアッセイで血管新生を促進することを実証する。

【0247】

２つの別々のＣＡＭアッセイを行った。第１のＣＡＭアッセイでは、ＰＤＡＣの異なる
調製物由来のインタクトな細胞ペレットを評価した。第２のＣＡＭアッセイでは、異なる
ＰＤＡＣ調製物の上清を評価した。線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を、陽性対照として
使用し、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞を参照として、ビヒクル、及び培地対照を陰
性対照として使用した。試験のエンドポイントは、全ての治療及び対照群の血管密度を測
定することであった。

【0248】

６．３．１ ＰＤＡＣを使用したＣＡＭアッセイ
上記のように調製され、低温保存されたＰＤＡＣを使用した。ＰＤＡＣを、投与のため
に解凍し、ＣＡＭ上に投与される細胞の数を決定した。

【0249】

試験デザイン：試験は、各群に１０の胚を含む５群を含んでいた。試験のデザインを、
表２に記載する。
試験群：ニワトリ漿尿膜血管新生試験

【表2】

【0250】

ＣＡＭアッセイ手順：新しい受精能力のある卵を、３日間、３７℃の標準的な卵インキ
ュベーター内で、３日間インキュベートした。３日目に、卵を無菌条件下で割り、胚を、
２０枚の１００ｍｍプラスチック皿に置き、一番下の棚上に貯水器を有する胚インキュベ
ーター内で、３７℃で培養した。インキュベーター内の湿度を一定に保つように、小型ポ
ンプを使用して、空気を貯水器に連続的にバブリングした。６日目、滅菌シリコン「Ｏ」
リングを、各ＣＡＭ上に置き、次に、７．６９×１０５細胞／４０μＬの培地／ＭＡＴＲ
ＩＧＥＬ（商標）混合物（１：１）の密度のＰＤＡＣを、滅菌フード内の各「Ｏ」リング
に供給した。表２Ａ及び２Ｂは、使用された細胞の数及び投与のための各細胞調製物に添
加された培地の量を表す。ビヒクル対照胚は、４０μＬのビヒクル（ＰＢＳ／ＭＡＴＲＩ
ＧＥＬ（商標）、１：１）を与えられ、陽性対照は、４０μｌのＤＭＥＭ培地／ＭＡＴＲ
ＩＧＥＬ（商標）混合物（１：１）中の１００ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦを与えられ、培地対
照は、４０μｌのＤＭＥＭ培地単独を与えられた。各投与を完了した後に、胚をインキュ
ベーターに戻した。８日目に、胚をインキュベーターから取り出し、１００倍の倍率で画
像キャプチャーシステムを使用して、血管密度を、各「Ｏ」リングの下で決定する間、室
温に保った。

【0251】

血管密度を、ＣＡＭ上の処置部位に存在する血管の数を示すために、算術数０～５、ま
たは指数の数１～３２を使用した血管新生スコアリングシステムにより測定した。高いス
コア数は、高い血管密度を表したのに対し、０は、血管新生が無かったことを示した。各
個々の実験について対照試料から得られた平均スコアで割ったその部位で記録されたスコ
アを使用して、各投与部位での阻害のパーセントを計算した。８～１０の胚からその投与
ついて得られた全ての結果をプールすることにより、所与の化合物の各投与に対する阻害
のパーセントを計算した。
投与のための最終細胞懸濁液の正規化のために、各細胞調製物に添加された培地の量

【表3】

継代６回のＰＤＡＣを使用した。

【0252】

結果
血管密度スコアの結果を、図７に提示する。結果は、ＰＤＡＣ細胞懸濁液、または１０
０ｎｇ／ｍＬのｂＦＧＦ、またはＭＤＡＭＢ２３１乳癌細胞懸濁液で処理されたニワトリ
漿尿膜の血管密度スコアは、ビヒクル対照ＣＡＭのものと比較して統計的に有意に高かっ
たことを明確に示す（Ｐ＜０．００１、スチューデントの「ｔ」検定）。ＰＤＡＣを培養
するために使用される培地（陰性対照）は、血管密度に何ら影響を及ぼさなかった。さら
に、ＰＤＡＣ調製物の血管密度の誘導は、多少の変動を示したが、変動は、統計的に有意
ではなかった。

【0253】

６．３．２ ＰＤＡＣ上清を使用したＣＡＭアッセイ
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞及びＰＤＡＣからの上清試料を、上記のように第２のＣＡＭ
アッセイで使用した。ｂＦＧＦ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１上清を、陽性対照として使用し
、培地及びビヒクルを、陰性対照として使用した。

【0254】

試験デザイン：試験は、各群に１０の胚を含む５群を含んでいた。試験のデザインを、
表４に記載する。
試験デザイン－細胞上清を使用したＣＡＭアッセイ

【表4】

ＰＤＡＣ上清を、継代６回の細胞から得た。

【0255】

ＣＡＭアッセイ手順：アッセイ手順は、上記セクション６．３．１に記載されたものと
同じものであった。唯一の違いは、各幹細胞調製物またはＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞から
の上清が試験材料として使用されたことであった。投与のために、各上清をＭＡＴＲＩＧ
ＥＬ（商標）（容量で１：１）と混合し、４０μＬの混合物を、各胚に投与した。

【0256】

結果：血管密度スコア（図８を参照のこと）は、各幹細胞調製物の上清による血管形成
の誘導が異なったことを示す。ＰＤＡＣからの上清試料は、それぞれ、Ｐ＜０．０１、Ｐ
＜０．００１、及びＰ＜０．０２（スチューデントの「ｔ」検定）の血管誘導に有意な効
果を示した。予想通り、陽性対照ｂＦＧＦも、上記ＣＡＭアッセイ番号１（Ｐ＜０．００
１、スチューデントの「ｔ」検定）に示されるように血管形成の強力な誘導を示した。し
かし、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞からの上清は、ビヒクル対照と比較して、血管
形成に有意な誘導を示さなかった。先に示したように、培地単独は、何ら影響を及ぼさな
かった。

【0257】

６．４ 実施例４：ＰＤＡＣは、ニューロン保護効果を示す
本実施例は、ＰＤＡＣが、酸素－グルコース欠乏（ＯＧＤ）侵襲アッセイを使用して、
低酸素及び低グルコース条件で、ニューロン保護効果を有し、活性酸素種を低減させるこ
とを実証する。したがって、これらの結果は、ＰＤＡＣが、脳卒中または末梢血管疾患な
どの虚血状態の治療に有用であろうこと示す。

【0258】

ヒトニューロン（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ、カタログ＃１５２０）を、製造業者の推奨によ
り培養した。要約すると、培養容器を、３７℃で１時間、滅菌蒸留水中のポリ－Ｌ－リシ
ン（２μｇ／ｍＬ）でコーティングした。容器を、２回蒸留したＨ_２Ｏで３回洗浄した。
ニューロン培地（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ）を、容器に添加し、インキュベーター内で３７℃
に平衡化した。ニューロンを解凍し、遠心分離なしに容器に直接添加した。後続の培養中
に、培地を、培養開始の翌日、及びその後１日おきに交換した。ニューロンは通常、４日
目までに侵襲の準備ができていた。

【0259】

ＯＧＤ培地（ダルベッコ改変イーグル培地－グルコース不含）を、水浴中で培地を最初
に温めることにより調製し、部分的に、液体培地中の酸素の溶解性を低減させた。溶存酸
素を除去するために、０．５μｍの拡散石を使用して、１００％の窒素を、培地に３０分
間バブリングした。ＨＥＰＥＳ緩衝液を、１ｍＭの終濃度で添加した。培地を、スパージ
の終わりに、直接ニューロンに添加した。ディップ式酸素センサを使用して酸素レベルの
確認のために、培地の少量試料を等分した。酸素レベルは通常、０．９％～約５．０％の
酸素に低減した。

【0260】

ガス処理の前に、低酸素チャンバを、少なくとも４時間（好ましくは一晩）３７℃のイ
ンキュベーター内にチャンバを置くことにより準備した。培養容器中の培地を除去し、脱
気された培地と交換し、培養容器を、低酸素チャンバ内に置いた。次に、低酸素チャンバ
を、少なくとも５分間、２０～２５Ｌｐｍの速度で系を通した９５％のＮ２／５％のＣＯ
２ガスでフラッシュした。系を、４時間、３７℃のインキュベーター内でインキュベーシ
ョンし、１位時間後にもう一度チャンバを脱気した。

【0261】

侵襲手順の終わりに、ＯＧＤ培地を吸引し、温かい培地を、ニューロンに添加した。２
４～２８時間後に、ニューロン培地中に懸濁されたＰＤＡＣ及びニューロンを、６ウェル
プレートの１ウェル当たりそれぞれ１００，０００細胞の同等の数でプレーティングし、
ニューロンに添加し、６日間共培養した。

【0262】

各条件について６ウェルプレート中の無作為な場所の顕微鏡写真を撮った。代表的なニ
ューロン形態を有する細胞を、特定し、神経突起の長さを記録した。神経突起の平均長は
、ニューロンの健康状態と正相関し、ニューロン及びＰＤＡＣの共培養において、より長
く、ＰＤＡＣが細胞を侵襲から保護していたことを示している。

【0263】

活性酸素種アッセイ
ＰＤＡＣは、低酸素時に、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、及びヘムオキ
シゲナーゼ遺伝子を発現することが見出された。活性酸素種発生剤としての過酸化水素を
使用するアッセイにおいて、ＰＤＡＣの、活性酸素種を除去する及び細胞をこのような種
から保護する能力を決定した。

【0264】

アッセイの説明：標的細胞（アストロサイト、ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、６０００／ｃｍ２で、ポリ－Ｌ－リシンでプレコーテ
ィングされた９６ウェル黒ウェルプレートに播種した。アストロサイトを、５％の二酸化
炭素と共に、３７℃で成長培地中に一晩付着させる。翌日、培地を除去し、細胞を、蛍光
発生プローブである細胞透過性色素ＤＣＦＨ－ＤＡ（ジクロロフルオレシンジアセタート
）とインキュベートした。過剰な染料を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水またはハンク
の緩衝塩溶液で洗浄することにより除去した。次に、細胞を、３０～６０分間、１０００
μＭの過酸化水素の添加により、活性酸素種で侵襲した。次に、過酸化水素含有培地を除
去し、無血清グルコース不含成長培地と交換した。ＰＤＡＣを、６０００／ｃｍ２で添加
し、細胞を、さらに２４時間培養した。次に、細胞を、４８０Ｅｘ及び５３０Ｅｍの標準
蛍光プレートリーダーで、読み取った。培地の活性酸素種含有量は、細胞サイトゾル中の
ＤＣＦＨ－ＤＡのレベルに正比例した。予め決定されたＤＣＦ標準曲線との比較により、
活性酸素種含有量を測定した。全ての実験を、Ｎ＝２４で行った。

【0265】

アッセイのために、ウシ胎児血清を含まない細胞培地中で、２０×ＤＣＦＨ－ＤＡのス
トック溶液を１×に希釈すること及び均質に撹拌することにより、使用する直前に、１×
ＤＣＦＨ－ＤＡを、調製した。過酸化水素（Ｈ２０２）希釈物を、必要に応じてＤＭＥＭ
またはＤＰＢＳ中で調製した。細胞培地中で、細胞培地中で、１ｍＭのＤＣＦ標準液を希
釈すること、１００μｌのＤＣＦ標準液を、蛍光測定に適する９６ウェルプレートに移す
こと、及び、１００μｌの細胞溶解緩衝液を加えることにより、標準的な曲線を、０μＭ
～１０μＭの範囲の濃度の１：１０の希釈系列として、調製した。蛍光を、４８０Ｅｘ及
び５３０Ｅｍで読み取った。

【0266】

結果：ＰＤＡＣは、アストロサイト共培養物中の活性酸素種の濃度を有意に低減させた
。図９を参照のこと。

【0267】

６．５ 実施例５：治療方法
６．５．１ 胎盤幹細胞を使用した糖尿病性足部潰瘍の治療
Ｉ型糖尿病の５２歳男性は、左足に潰瘍を有する。糖尿病性足部潰瘍の診断を行う。診
断後に、対象を、次のレジメンに従ってＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２
００＋胎盤幹細胞で治療する：１×１０^６～３×１０^７のＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ
１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞を、筋肉内投与する。該個人を、特に、ＤＦＵが、サ
イズが低減しているか、または閉鎖されているかを判定するために、ＤＦＵの任意の症状
における改善の徴候について次の２４時間にわたって監視する。ＤＦＵの症状のいずれか
が、監視期間中に改善する場合、治療的効果が確立される。

【0268】

６．６ 実施例６：ＤＦＵ治療プロトコール
１８～８０歳の、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）を伴う糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）を有する
対象を、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞で治療する。
胎盤幹細胞を、次の用量１日目（治療の初日）及び８日目に筋肉内投与する：（ｉ）３×
１０^６のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞；（ｉｉ）１
×１０^７のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞；または、
（ｉｉｉ）３×１０^７のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細
胞。

【0269】

臨床のエンドポイント
ＤＦＵを治療するためのＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹
細胞の有効性に対する主要臨床エンドポイントは、治療されているＤＦＵ（複数可）の閉
鎖とすることができる。潰瘍閉鎖は、ドレナージまたはドレッシングの必要性のない皮膚
閉鎖により表すことができる。完全閉鎖は、閉鎖の判定後少なくとも４週間の、潰瘍閉鎖
の保持により表すことができる。潰瘍閉鎖は、胎盤幹細胞で処理した後３ヶ月で評価する
ことができる。

【0270】

ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞の、ＤＦＵの治療に
ついての有効性に対する他の臨床エンドポイントは、（ｉ）治療後２４時間まで評価する
ことができる有害事象の頻度及び重症度の低減；（ｉｉ）治療後６ヶ月で評価することが
できる潰瘍閉鎖までの時間；（ｉｉ）治療後６ヶ月で評価することができる足関節上腕血
圧比（ＡＢＩ）の改善；（ｉｉｉ）治療後６ヶ月で評価することができる足趾上腕血圧比
（ＴＢＩ）の改善；（ｉｖ）治療後２４ヶ月まで評価することができるＤＦＵのサイズ及
び数の低減；（ｖ）治療後６ヶ月で評価することができる経皮酸素レベルの改善；（ｖｉ
）治療後６ヶ月で評価することができる脈容量記録の改善；（ｖｉｉ）治療後２４時間ま
で評価することができる大切断までの時間；（ｖｉｉｉ）治療後２４時間まで評価するこ
とができるＷａｇｎｅｒの評価尺度の改善；（ｉｘ）治療後６ヶ月で評価することができ
るＲｕｔｈｅｒｆｏｒｄの基準の改善；ならびに、（ｘ）治療後２４時間まで評価するこ
とができる脚の安静時疼痛スコアの改善；ならびに、（ｘｉ）（ｉ）３６項目簡易健康調
査（ＳＦ－３６）（例えば、Ｗａｒｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃａｒｅ ３
０（６）：４７３－４８３を参照のこと）；（ｉｉ）糖尿病性足部潰瘍尺度簡易版（ＤＦ
Ｓ－ＳＦ）（例えば、Ｂａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ
， ２００３， ２１（１７）：１２７７－９０を参照のこと）；（ｉｉｉ）変化尺度の
患者の全体的印象（例えば、Ｋａｍｐｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍａｎ． Ｍａｎｉ
ｐ． Ｔｈｅｒ．， ２００９， １７（３）：１６３－１７０を参照のこと）；及び／
または、（ｉｖ）ＥｕｒｏＱｏｌ５Ｄ（ＥＱ－５Ｄ（商標））尺度、で評価される、対象
の生活の質の改善、を含むことができる。

【0271】

対象選択
次の適格基準が、ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞で
の治療が適切と考えられる対象を選択するために使用されてもよい。この治療プロトコー
ルが特定の対象に適するかどうかを決定する時、全ての関連する病状及び非病状を、考慮
に入れる。

【0272】

対象は、治療プロトコールに適格となるために、次の条件を満たすべきである。
少なくとも１８歳以上の男性及び女性。
・関連する任意の試験の前に、インフォームドコンセント文書を理解して、自発的に署名
する。
・試験訪問スケジュール及び他のプロトコール要件を厳守できる。
・１型または２型真性糖尿病。
・足趾上に存在する場合を除いて、少なくとも１ｃｍ^２のサイズの従来の潰瘍治療に適切
に応答していない１ヶ月間を超えるＷａｇｎｅｒの評価尺度のグレード１（全層のみ）ま
たはグレード２の重症度の糖尿病性足部潰瘍。指標潰瘍の最大病変サイズは、≦６．２５
ｃｍ^２である。指標潰瘍の測定は、スクリーニング訪問時の（必要に応じて）デブリード
マン後に、評価及び測定することになる。
・指標潰瘍を有する足における動脈循環不全の次の基準のうちの１つ以上を満たす対象。
ａ．ＡＢＩ≧０．４及び≦０．８またはＴＢＩ＞０．３０及び≦０．６５の末梢動脈疾患
。
ｂ．２０～４０ｍｍＨｇの間での経皮酸素（ＴｃＰＯ２）測定値。ＴｃＰＯ２で測定され
たエリアは、浮腫及び肥厚した皮膚があってはならない。
・スクリーニング訪問後の次の３ヶ月にわたって、血管再生または切断を計画しない。
・スクリーニングは、失敗した再灌流介入の少なくとも１４日後及び成功した再灌流介入
の少なくとも３０日後までは、始めてはならない。
・対象は、高血圧及び糖尿病ならびに継続的なケアを必要とする他の任意の慢性の病状に
対し、適切な医学療法を受けているべきである。
・妊娠可能性のある女性（ＦＣＢＰ）は、スクリーニング時に血清妊娠検査で陰性で、か
つ試験療法で治療する前に尿妊娠検査で陰性でなければならない。加えて、性的に活発な
ＦＣＢＰは、試験期間及びフォローアップ期間に、同時に、次の適切な形態の避妊方法、
例えば、経口、注射用、または移植用ホルモン避妊；卵管結紮；ＩＵＤ；殺精子剤を有す
るバリア避妊具；または精管切除されたパートナー、のうちの２つを使用することに同意
しなければならない。
・男性（精管切除術を受けている者を含む）は、試験期間及びフォローアップ期間に、Ｆ
ＣＢＰとの生殖性の性行為において、避妊（ラテックスコンドーム）をする時、バリア避
妊（ラテックスコンドーム）を使用することに同意しなければならない。

【0273】

次の状態のうちの１つ以上を有する対象は、治療プロトコールから除外することができ
る。
・対象が試験に参加することを妨げることになる任意の重大な病状、検査異常、または精
神病。
・対象が、試験に参加しなければならなかった場合の、対象を容認できない危険にさらす
検査異常の存在を含む任意の状態。
・試験からのデータを解釈する能力を混乱させる任意の状態。
・ヒト免疫不全ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、またはＢ型肝炎ウイルスでの活動性感染に
ついて陽性であることが知られている。
・妊娠中または授乳中の女性。
・スクリーニング時において肥満度指数＞４０の対象。
・スクリーニング時における、ＡＳＴ（ＳＧＯＴ）またはＡＬＴ（ＳＧＰＴ）＞２．５×
正常上限（ＵＬＮ）。
・腎疾患食事療法試験式（Ｌｅｖｅｙ、２００６）を使用して計算された、スクリーニン
グ時における推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２、または過去
１年以内に、ｅＧＦＲ低下＞１５ｍＬ／分／１．７３ｍ^２の病歴。
・スクリーニング時における、アルカリホスファターゼ＞２．５×ＵＬＮ。
・スクリーニング時における、ビリルビンレベル＞２ｍｇ／ｄＬ（対象が、既知のギルバ
ート病有しない限り）。
・未治療の慢性感染症または全身性抗生物質での、潰瘍部位を含む任意の感染症の治療は
、腹腔内投与の前に１週間以内に、抗生物質を含んではならない。
・指標潰瘍に、またはこれに隣接した活動性骨髄炎、感染症、または蜂巣炎。
・スクリーニング／ランイン期間中に、≧３０％サイズが減少した、または増加した指標
潰瘍。
・四肢虚血に起因する安静時疼痛。
・指標潰瘍を有する足における経皮酸素測定値≦２０ｍｍＨｇ。
・踵潰瘍。
・非管理高血圧（対象が少なくとも５分間座る及び安静にする間に取られた２回の独立し
た測定の、スクリーニング時の拡張期血圧＞１００ｍｍＨｇまたは収縮期血圧＞１８０ｍ
ｍＨｇとして定義される）。
・管理不良の真性糖尿病（ヘモグロビンＡ１ｃ＞１２％または血清グルコースのスクリー
ニング≧３００ｍｇ／ｄｌ）。
・未治療の増殖性網膜症。
・インフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）に署名する前の過去６ヶ月間の、悪性心
室性不整脈、ＣＣＳクラスＩＩＩ－ＩＶ狭心症、心筋梗塞／経皮的冠動脈介入（ＰＣＩ）
／冠状動脈バイパス移植片（ＣＡＢＧ）の病歴、次の３ヶ月間の保留中の冠動脈血行再建
、ＩＣＦに署名する前の過去６ヶ月間の、一過性虚血発作／脳血管障害、及び／またはニ
ューヨーク心臓協会［ＮＹＨＡ］のステージＩＩＩ若しくはＩＶうっ血性心不全。
・異常なＥＣＧ：ＩＣＦに署名する前の３ヶ月間の新しい右脚ブロック（ＢＢＢ）≧１２
０ミリ秒。
・非管理の凝固亢進。
・付随する病気に起因する、ＩＣＦに署名した時の、２年未満の平均余命。
・責任医師の意見で、対象は、細胞療法には適していない。
・皮膚の基底細胞若しくは扁平上皮癌を除く、ＩＣＦに署名する前の５年以内の悪性腫瘍
の病歴、または治癒されていると目下みなされる癌の既往歴、または後続の陰性経過観察
を伴う陽性の子宮頸部細胞診。
・（ウシまたはブタ産生物、デキストラン４０、及びジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］
を含む）製品の製剤の構成成分のいずれかに過敏症の病歴。
・対象は、試験療法での治療前の９０日以内（若しくは５半減期のどちらか長い方）に、
治験薬－任意の適応症における市販の使用のために米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承
認されていない薬剤若しくはデバイス－を与えられている、またはこの試験の完了前に、
別の治療試験への参加が計画されている。
・対象は、以前の試験遺伝子療法または細胞療法を受けている。

【0274】

臨床結果
１つ以上の臨床エンドポイントの改善が実証される場合、ＤＦＵの治療におけるＣＤ１
０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の有効性が確認される。

【0275】

６．７ 実施例７：代替ＤＦＵ治療プロトコール
少なくとも１８歳の、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）を伴う糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）を有
する対象を、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞で治療す
る。対象群Ｉ：３×１０^６のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤
幹細胞を、１日目（治療の初日）、２９日目、及び５７日目に筋肉内投与する。対象群Ｉ
Ｉ：３×１０^７のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞を、
１日目（治療の初日）、２９日目、及び５７日目に筋肉内投与する。対象群ＩＩＩ：プラ
シーボを、１日目（治療の初日）、２９日目、及び５７日目に筋肉内投与する。

【0276】

臨床のエンドポイント
ＤＦＵを治療するための、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤
幹細胞の有効性の主要な臨床エンドポイントは、足関節上腕血圧比（ＡＢＩ）；経皮酸素
測定（ＴＣＯＭ）、近赤外線分光法、フルデオキシグルコース陽電子放出断層撮影／コン
ピュータ断層撮影（ＦＧＤ ＰＥＴ／ＣＴ）、ドップラー超音波、磁気共鳴映像法（ＭＲ
Ｉ）、血管造影法、及び／または酸素測定の測定により評価する場合、四肢の血管機能の
改善とすることができる。四肢の血管機能の改善は、治療後約１年で評価することができ
る。

【0277】

ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞の、ＤＦＵの治療に
ついての有効性に対する他の臨床エンドポイントは、（ｉ）治療後約１年で評価すること
ができる、指標潰瘍の潰瘍閉鎖及び完全な創傷閉鎖（潰瘍閉鎖は、ドレナージまたはドレ
ッシングの必要性のない皮膚閉鎖により表すことができ；完全閉鎖は、閉鎖の判定後少な
くとも４週間は、潰瘍閉鎖の保持により表すことができる）。（ｉｉ）治療後約１年で評
価することができる有害事象の頻度及び重症度の低減；（ｉｉｉ）治療後約１年で評価す
ることができる、全ての潰瘍の数、サイズの低減及び指標潰瘍の５０％の閉鎖；（ｉｖ）
治療後約１年で評価することができる治療された足の大切断までの時間の低減；（ｖ）治
療後約１年で評価することができるＷａｇｎｅｒの評価尺度の改善；（ｖｉ）治療後約１
年で評価することができるＲｕｔｈｅｒｆｏｒｄの基準の改善；（ｖｉｉ）治療後約１年
で評価することができる脚の安静時疼痛スコアの改善；ならびに、（ｖｉｉｉ）ニューロ
パチーの変化の患者の全体的印象（ＰＧＩＣＮ）を使用して評価される場合の対象の生活
の質の改善、を含むことができる。

【0278】

対象選択
次の適格基準が、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞で
の治療が適切と考えられる対象を選択するために使用されてもよい。この治療プロトコー
ルが特定の対象に適するかどうかを決定する時、全ての関連する病状及び非病状を、考慮
に入れる。

【0279】

対象は、治療プロトコールに適格となるために、次の条件を満たすべきである。
・少なくとも１８歳以上の男性及び女性。
・１型または２型真性糖尿病。
従来の潰瘍治療に適切に応答していない１ヶ月間を超えるＷａｇｎｅｒの評価尺度のグ
レード１（全層のみ）またはグレード２の重症度の糖尿病性足部潰瘍。
・指標潰瘍を有する足における動脈循環不全の次の基準のうちの１つ以上を満たす対象。
ａ．ＡＢＩ≧０．４及び≦０．８またはＴＢＩ＞０．３０及び≦０．６５の末梢動脈疾
患。
ｂ．２０～４０ｍｍＨｇの間での経皮酸素（ＴｃＰＯ２）測定。
・スクリーニング訪問後の次の３ヶ月にわたって、血管再生または切断を計画しない。
・投与は、失敗した再灌流治療の少なくとも１４日後及び成功した再灌流治療の少なくと
も３０日後までは、始めてはならない。

【0280】

次の状態のうちの１つ以上を有する対象は、治療プロトコールから除外することができ
る。
・対象が試験に参加することを妨げることになる任意の重大な病状、検査異常、または精
神病。
・対象が、試験に参加しなければならなかった場合の、対象を容認できない危険にさらす
検査異常の存在を含む任意の状態。
・妊娠中または授乳中の女性。
スクリーニング時において肥満度指数＞４０の対象。
・腎疾患食事療法試験式（Ｌｅｖｅｙ、２００６）を使用して計算された、スクリーニン
グ時に推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２、または過去１年以
内に、ｅＧＦＲ低下＞１５ｍＬ／分／１．７３ｍ^２の病歴。
・未治療の慢性感染症または全身性抗生物質での、潰瘍部位を含む任意の感染症の治療は
、腹腔内投与前の１週間以内に、抗生物質を含んではならない。
・指数潰瘍に、またはこれに隣接した既知の骨髄炎、感染症、または蜂巣炎。
・四肢虚血に起因する安静時の四肢疼痛。
・非管理高血圧（対象が少なくとも５分間座る及び安静にする間に取られた２回の独立し
た測定の、スクリーニング時の拡張期血圧＞１００ｍｍＨｇまたは収縮期血圧＞１８０ｍ
ｍＨｇとして定義される）。
・管理不良の真性糖尿病（ヘモグロビンＡ１ｃ＞１２％または血清グルコースのスクリー
ニング≧３００ｍｇ／ｄｌ）。
・未治療の増殖性網膜症。
・インフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）に署名する前の過去６ヶ月間の、悪性心
室性不整脈、ＣＣＳクラスＩＩＩ－ＩＶ狭心症、心筋梗塞／経皮的冠動脈介入（ＰＣＩ）
／冠状動脈バイパス移植片（ＣＡＢＧ）の病歴、次の３ヶ月間の保留中の冠動脈血行再建
、ＩＣＦに署名する前の過去６ヶ月間の、一過性虚血発作／脳血管障害、及び／またはニ
ューヨーク心臓協会［ＮＹＨＡ］のステージＩＩＩ若しくはＩＶうっ血性心不全。
・異常なＥＣＧ：ＩＣＦに署名する前の３ヶ月間の新しい右脚ブロック（ＢＢＢ）≧１２
０ミリ秒。
・非管理の凝固亢進。
・付随する病気に起因する、ＩＣＦに署名した時の、２年未満の平均余命。
・責任医師の意見で、対象は、細胞療法には適していない。
・皮膚の基底細胞若しくは扁平上皮癌を除く、ＩＣＦに署名する前の５年以内の悪性腫瘍
の病歴、または治癒されていると目下みなされる癌の既往歴、または後続の陰性経過観察
を伴う陽性の子宮頸部細胞診。
・（ウシまたはブタ産生物、デキストラン４０、及びジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］
を含む）製品の製剤の構成成分のいずれかに過敏症の病歴。
・対象は、試験療法での治療前の９０日以内（若しくは５半減期のどちらか長い方）に、
治験薬－任意の適応症における市販の使用のために米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承
認されていない薬剤若しくはデバイス－を与えられている、またはこの試験の完了前に、
別の治療試験への参加が計画されている。
・対象は、以前の試験遺伝子療法または細胞療法を受けている。

【0281】

臨床結果
１つ以上の臨床エンドポイントの改善が実証される場合、ＤＦＵの治療におけるＣＤ１
０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の有効性が確認される。

【0282】

６．８ 実施例８：ＤＦＵ治療プロトコールの結果
糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）を有する対象を、上記実施例６で概説したものと同様の第
Ｉ相臨床試験において、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細
胞で治療した。

【0283】

１５人の対象を登録した。胎盤幹細胞を、次のレジメンに従って投与した。（ｉ）３×
１０^６のＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞を、３人の対
象に筋肉内投与した；（ｉｉ）１×１０^７のＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、Ｃ
Ｄ２００＋胎盤幹細胞を、３人の対象に筋肉内投与した；（ｉｉｉ）３×１０^７のＣＤ１
０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞を、３人の対象に筋肉内投与
した；及び、（ｉｖ）１×１０^８のＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００
＋胎盤幹細胞を、６人の対象に筋肉内投与した；

【0284】

治療に関連する重篤な有害事象（ＳＡＥ）または治療に関連する死亡は、記録されなか
った。

【0285】

治療された対象のうちの７人が、胎盤幹細胞の投与の３ヶ月以内に陽性結果を示した。
５人の対象が、潰瘍閉鎖を示した：２人の対象が、部分的（約５０％）潰瘍治癒を示した
。足関節上腕血圧比（ＡＢＩ）の増加傾向が、治療された患者で観察された。さらに、Ａ
ＢＩの増加が、ＤＦＵが治癒しなかった患者と比較して、ＤＦＵが治癒した患者で観察さ
れた。

【0286】

結果は、糖尿病性足部潰瘍を有するヒト対象への、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０
５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の筋肉内投与が安全で、良好な認容されたことを示す。さ
らに、結果は、糖尿病性足部潰瘍を有するヒト対象の、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１
０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞での治療が、糖尿病性足部潰瘍の症状の改善、及び糖尿
病性足部潰瘍の完全閉鎖をもたらすことができること示す。

【0287】

６．９ 実施例９：胎盤幹細胞は、末梢動脈疾患の動物モデルにおける創傷治癒を促進す
る
６．９．１ ＰＤＡＣは、虚血マウスの血流量及び血管造影スコアを促進する
血管再生及び創傷治癒におけるＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋
胎盤幹細胞の有効性を評価するために、糖尿病性四肢虚血の外科マウスモデルを使用した
。糖尿病性四肢虚血の効果をモデリングするために、ｄｂ／ｄｂ糖尿病マウスに、後肢虚
血（ＨＬＩ）手術を受けさせ、後続のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２０
０^＋胎盤幹細胞の投与あり、なしで、創傷修復、炎症、及び血管再生の種々のレベルにつ
いて監視した。

【0288】

後肢虚血（ＨＬＩ）手術を、記載されているように実施した。例えば、Ｇｏｔｏ ｅｔ
ａｌ．， Ｔｏｋａｉ Ｊ． Ｅｘｐ． Ｃｌｉｎ． Ｍｅｄ． ３１（３）：１２８
－１３２ （２００６）を参照のこと。

【0289】

ＨＬＩ手術の１日後、低温保存された胎盤幹細胞を、３７℃で解凍した。解凍後２時間
以内に、５０μｌの胎盤幹細胞または５０μｌのビヒクル対照のいずれかを、外科的創傷
の部位の近くに筋肉内投与した。胎盤幹細胞を、３，０００細胞、３０，０００細胞、ま
たは３００，０００細胞の投薬量で投与し、血流量及び血管造影スコアを、手術後１日目
、１４日目、２８日目、４２日目、及び４９日目に決定した。非接触レーザードップラー
を使用して、血流量を測定し、対応する手術をしない四肢の血流量に正規化した。血管造
影スコアを、Ｂｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，
１９８１， ３８（３－４）：３３９－４６に従って測定した。

【0290】

図１０Ａに示されるように、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎
盤幹細胞の投与は、手術の２８日後に、ＨＬＩの開始後の血流量の増加及び観察期間の終
わりまで持続することをもたらした。投与された胎盤幹細胞の全投薬量は、２８日目に有
効であり、１投与当たり３０，０００細胞の投薬量は、ビヒクル対照で処置された動物と
比較して、測定された全ての時点で有効であった。同様に、図１０Ｂに示されるように、
３，０００または３０，０００のいずれかの胎盤幹細胞は、ビヒクル対照で処置された動
物と比較して、血管造影スコアを改善するのに有効であった。これらのデータは、ＣＤ１
０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の投与が、末梢動脈疾患及び
２型糖尿病の動物モデルにおける虚血性創傷の治癒の臨床手段を改善することができるこ
とを示す。

【0291】

６．９．２ ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞は、虚血
マウスの毛管密度及び血管成熟を促進する
ＨＬＩ手術を実施し、続いて、上記セクション６．９．１のようにＣＤ１０^＋、ＣＤ３
４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の筋肉内投与を実施した。（ｉ）ビヒクル
対照、（ｉｉ）３，０００のＰＤＡＣ、または（ｉｉｉ）３０，０００のＰＤＡＣ、のい
ずれかの投与後に、大腿四頭筋を取り出し、ＨＯＰＥ固定剤で固定し、パラフィンに包理
した。組織を、標準的な手順に従って切片化及び染色した。各処置群の３つの代表的な動
物からの３つの切片部分を、デジタル画像化及び定量化した。図１１に示されるように、
いずれの投薬量のＰＤＡＣで処置された動物も、ビヒクル対照で処置された動物と比較し
て、血管のＣＤ３１染色の増加（図１１Ａ及び１１Ｃ）ならびに血管壁のα平滑筋アクチ
ンの増加（図１１Ｂ及び１１Ｄ）を示した。これらのデータは、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－
、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞での虚血四肢の処置が、急性虚血傷害後の新し
い血管の成長及び成熟を促進することができることを示した。

【0292】

６．９．３ ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞は、虚血
組織において、筋肉修復を促進し、脂肪浸潤を低減する
ＨＬＩ手術及びＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞での
処置、続いて、大腿四頭筋の分離及び切片化を、上記セクション６．９．１及び６．９．
２のように実施した。切片化された組織を、標準的な手順に従ってＨ＆Ｅで染色した。図
１２に示されるように、胎盤幹細胞で処置された虚血動物は、ビヒクル対照で処置された
動物と比較して、中心核を有する筋線維の数が多く、脂肪組織の浸潤が少なかった（矢印
を参照のこと）。有核筋繊維は、筋肉再生に関連している一方、筋肉組織の脂肪組織浸潤
は、筋肉の弱化及び変性に寄与すると考えられる前炎症性免疫応答に関連している（Ｄｏ
ｎａｔｈ ＆ Ｓｈｏｅｌｓｏｎ， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１１ Ｆ
ｅｂ；１１（２）：９８－１０７）。合わせると、これらのデータは、ＣＤ１０^＋、ＣＤ
３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞が、虚血動物の筋肉再生を促進し、急性
虚血傷害後の炎症性シグナル伝達を防ぎ得ることを示唆する。

【0293】

６．９．４ ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の投与は
、後肢虚血後に、脂肪組織において、マクロファージ分化をＭ２表現型にシフトさせる
ＨＬＩ手術及びＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞での
処置を、上記セクション６．９．１のように実施した。手術の３日後及び１４日後の鼠径
部脂肪パッドを、マクロファージの表現型を判定するために、単離し、ＤＡＰＩ及びＡｒ
ｇ１またはＣＤ２０６のいずれかに対する抗体（Ｍ２マクロファージのマーカー）で染色
した。図１３に示されるように、ＰＤＡＣで処置した動物は、ビヒクル対照で処置された
動物と比較して、手術の３日後及び１４日後の両方で、抗炎症性Ｍ２マクロファージのレ
ベルが高いことを示した。これらのデータは、Ｍ２マクロファージが、虚血傷害後に、ビ
ヒクル対照で処置された動物と比較して、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ
２００^＋胎盤幹細胞で処置された動物において非常に高いレベルを呈することを示す。

【0294】

６．９．５ ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の投与は
、脂肪組織中のアディポカイン（ａｄｉｐｏｋｉｎｅ）産生を調節する
ＨＬＩ手術及びＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞での
処置、続いて、上記セクション６．９．４のような鼠径部脂肪パッドの分離後に、鼠径部
脂肪パッドを、単一細胞懸濁液に解離させ、いくつかのサイトカインの分泌について分析
した。要約すると、胎盤幹細胞で処置された及びビヒクル対照で処置された動物からの１
×１０^１５の脂肪細胞を、９６ウェルプレートにプレーティングし、ウェルの半分を、２
４時間、１μｇ／ｍｌのリポ多糖体（ＬＰＳ）で刺激した。次に、刺激及び非刺激細胞か
らの上清を、単離し、ＭＡＰサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズパネル（Ｍｉｌｌｉｐ
ｏｒｅ）を使用して、サイトカインレベルを測定した。図１４に示されるように、前炎症
性サイトカインＩＬ－６及びＴＮＦαは、ビヒクル対照で治療された動物と比較して、Ｌ
ＰＳ刺激後の胎盤幹細胞で処置された細胞懸濁液中で低減した一方、抗炎症性サイトカイ
ンＩＬ－１０は、ビヒクル対照で処置された動物と比較して、ＬＰＳ刺激後の胎盤幹細胞
で処置された細胞懸濁液中で増加した。結果は、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋
、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞が、前炎症性サイトカインを阻害すること及び同時に抗炎症性
サイトカインを促進することの両方により、脂肪細胞の炎症状態を調節することができる
こと示す。

【0295】

６．１０ 実施例１０：ＤＦＵ治療プロトコール
１８～８０歳の、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）を伴うまたは伴わない糖尿病性足部潰瘍（Ｄ
ＦＵ）を有する対象を、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細
胞で治療する。胎盤幹細胞を、次の用量で、１日目（治療の初日）及び８日目に筋肉内投
与する：（ｉ）３×１０^６のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤
幹細胞；（ｉｉ）１×１０^７のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎
盤幹細胞；または、（ｉｉｉ）３×１０^７のＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、Ｃ
Ｄ２００^＋胎盤幹細胞。

【0296】

臨床のエンドポイント
ＤＦＵを治療するためのＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹
細胞の有効性に対する主要臨床エンドポイントは、治療されているＤＦＵ（複数可）の閉
鎖とすることができる。潰瘍閉鎖は、ドレナージまたはドレッシングの必要性のない皮膚
閉鎖により表すことができる。完全閉鎖は、閉鎖の判定後少なくとも４週間の、潰瘍閉鎖
の保持により表すことができる。潰瘍閉鎖は、胎盤幹細胞で治療した後３ヶ月で評価する
ことができる。

【0297】

ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞の、ＤＦＵの治療に
ついての有効性に対する他の臨床エンドポイントは、以下を含むことができる：（ｉ）治
療後２４時間まで評価することができる有害事象の頻度及び重症度の低減；（ｉｉ）治療
後６ヶ月で評価することができる潰瘍閉鎖までの時間；（ｉｉ）治療後６ヶ月で評価する
ことができる足関節上腕血圧比（ＡＢＩ）の改善；（ｉｉｉ）治療後６ヶ月で評価するこ
とができる足趾上腕血圧比（ＴＢＩ）の改善；（ｉｖ）治療後２４ヶ月まで評価すること
ができるＤＦＵのサイズ及び数の低減；（ｖ）治療後６ヶ月で評価することができる経皮
酸素レベルの改善；（ｖｉ）治療後２４時間まで評価することができる大切断までの時間
；（ｖｉｉ）治療後２４時間まで評価することができるＷａｇｎｅｒの評価尺度の改善；
（ｖｉｉｉ）治療後６ヶ月で評価することができるＲｕｔｈｅｒｆｏｒｄの基準の改善；
（ｉｘ）治療後２４時間まで評価することができる脚の安静時疼痛スコアの改善；ならび
に、（ｘ）（ａ）３６項目簡易健康調査（ＳＦ－３６）（例えば、Ｗａｒｅ ｅｔ ａｌ
．， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃａｒｅ ３０（６）：４７３－４８３を参照のこと）；（ｂ）
糖尿病性足部潰瘍尺度簡易版（ＤＦＳ－ＳＦ）（例えば、Ｂａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐ
ｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ， ２００３， ２１（１７）：１２７７－９０を参
照のこと）；及び／若しくは（ｃ）変化尺度の患者の全体的印象（例えば、Ｋａｍｐｅｒ
ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍａｎ． Ｍａｎｉｐ． Ｔｈｅｒ．， ２００９， １７（
３）：１６３－１７０を参照のこと）；ならびに／または（ｉｖ）ＥｕｒｏＱｏｌ５Ｄ（
ＥＱ－５Ｄ（商標）尺度で評価される場合の対象の生活の質の改善。

【0298】

対象選択
次の適格基準が、ＣＤ１０＋、ＣＤ３４－、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋胎盤幹細胞で
の治療が適切と考えられる対象を選択するために使用されてもよい。この治療プロトコー
ルが特定の対象に適するかどうかを決定する時、全ての関連する病状及び非病状を、考慮
に入れる。

【0299】

対象は、治療プロトコールに適格となるために、次の条件を満たすべきである。
・少なくとも１８歳以上の男性及び女性。
・関連する任意の試験の前に、インフォームドコンセント文書を理解して、自発的に署名
する。
・試験訪問スケジュール及び他のプロトコール要件を厳守できる。
・１型または２型真性糖尿病。
・足趾上に存在する場合を除いて、少なくとも１ｃｍ^２のサイズの従来の潰瘍治療に適切
に応答していない１ヶ月間を超えるＷａｇｎｅｒの評価尺度のグレード１（全層のみ）ま
たはグレード２の重症度の糖尿病性足部潰瘍。指標潰瘍の最大病変サイズは、≦１０ｃｍ
^２である。指標潰瘍の測定は、スクリーニング訪問時の（必要に応じて）デブリードマン
後に、評価及び測定することになる。
・スクリーニング訪問後の次の３ヶ月にわたって、血管再生または切断を計画しない。
・スクリーニングは、失敗した再灌流介入の少なくとも１４日後及び成功した再灌流介入
の少なくとも３０日後までは、始めてはならない。
・対象は、高血圧及び糖尿病ならびに継続的なケアを必要とする他の任意の慢性の病状に
対し、適切な医学療法を受けているべきである。
・妊娠可能性のある女性（ＦＣＢＰ）は、スクリーニング時に血清妊娠検査で陰性で、か
つ試験療法で治療する前に尿妊娠検査で陰性でなければならない。加えて、性的に活発な
ＦＣＢＰは、試験期間及びフォローアップ期間に、同時に、次の適切な形態の避妊方法、
例えば、経口、注射用、または移植用ホルモン避妊；卵管結紮；ＩＵＤ；殺精子剤を有す
るバリア避妊具；または精管切除されたパートナー、のうちの２つを使用することに同意
しなければならない。
・男性（精管切除術を受けている者を含む）は、試験期間及びフォローアップ期間に、Ｆ
ＣＢＰとの生殖性の性行為において、避妊（ラテックスコンドーム）をする時、バリア避
妊（ラテックスコンドーム）を使用することに同意しなければならない。

【0300】

次の状態のうちの１つ以上を有する対象は、治療プロトコールから除外することができ
る。
・対象が試験に参加することを妨げることになる任意の重大な病状、検査異常、または精
神病。
・対象が、試験に参加しなければならなかった場合の、対象を容認できない危険にさらす
検査異常の存在を含む任意の状態。
・試験からのデータを解釈する能力を混乱させる任意の状態。
・ヒト免疫不全ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、またはＢ型肝炎ウイルスでの活動性感染に
ついて陽性であることが知られている。
・妊娠中または授乳中の女性。
・スクリーニング時において肥満度指数＞４５の対象。
・スクリーニング時における、ＡＳＴ（ＳＧＯＴ）またはＡＬＴ（ＳＧＰＴ）＞２．５×
正常上限（ＵＬＮ）。
・異常な腎機能のための腎臓透析。
・指標潰瘍を有する脚において、ＡＢＩ＜０．４及び／またはＴＢＩ＜０．３。
・スクリーニング時における、アルカリホスファターゼ＞２．５×ＵＬＮ。
・スクリーニング時における、ビリルビンレベル＞２ｍｇ／ｄＬ（対象が、既知のギルバ
ート病有しない限り）。
・未治療の慢性感染症または全身性抗生物質での、潰瘍部位を含む任意の感染症の治療は
、腹腔内投与の前に１週間以内に、抗生物質を含んではならない。
・指標潰瘍に、またはこれに隣接した活動性骨髄炎、感染症、または蜂巣炎。
・スクリーニング／ランイン期間中に、≧３０％サイズが減少した、または増加した指標
潰瘍。
・四肢虚血に起因する安静時疼痛。
・指標潰瘍を有する足における経皮酸素測定値≦２０ｍｍＨｇ。
・踵潰瘍。
・非管理高血圧（対象が少なくとも５分間座る及び安静にする間に取られた２回の独立し
た測定の、スクリーニング時の拡張期血圧＞１００ｍｍＨｇまたは収縮期血圧＞１８０ｍ
ｍＨｇとして定義される）。
・管理不良の真性糖尿病（ヘモグロビンＡ１ｃ＞１２％または血清グルコースのスクリー
ニング≧３００ｍｇ／ｄｌ）。
・未治療の増殖性網膜症。
・インフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）に署名する前の過去６ヶ月間の、悪性心
室性不整脈、ＣＣＳクラスＩＩＩ－ＩＶ狭心症、心筋梗塞／経皮的冠動脈介入（ＰＣＩ）
／冠状動脈バイパス移植片（ＣＡＢＧ）の病歴、次の３ヶ月間の保留中の冠動脈血行再建
、ＩＣＦに署名する前の過去６ヶ月間の、一過性虚血発作／脳血管障害、及び／またはニ
ューヨーク心臓協会［ＮＹＨＡ］のステージＩＩＩ若しくはＩＶうっ血性心不全。
・異常なＥＣＧ：ＩＣＦに署名する前の３ヶ月間の新しい右脚ブロック（ＢＢＢ）≧１２
０ミリ秒。
・非管理の凝固亢進。
・付随する病気に起因する、ＩＣＦに署名した時の、２年未満の平均余命。
・責任医師の意見で、対象は、細胞療法には適していない。
・皮膚の基底細胞若しくは扁平上皮癌を除く、ＩＣＦに署名する前の５年以内の悪性腫瘍
の病歴、または治癒されていると目下みなされる癌の既往歴、または後続の陰性経過観察
を伴う陽性の子宮頸部細胞診。
・（ウシまたはブタ産生物、デキストラン４０、及びジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］
を含む）製品の製剤の構成成分のいずれかに過敏症の病歴。
・対象は、試験療法での治療前の９０日以内（若しくは５半減期のどちらか長い方）に、
治験薬－任意の適応症における市販の使用のために米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承
認されていない薬剤若しくはデバイス－を与えられている、またはこの試験の完了前に、
別の治療試験への参加が計画されている。
・対象は、以前の試験遺伝子療法または細胞療法を受けている。

【0301】

臨床結果
１つ以上の臨床エンドポイントの改善が実証される場合、ＤＦＵの治療におけるＣＤ１
０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２００^＋胎盤幹細胞の有効性が確認される。

【0302】

６．１１ 実施例１１：治療有効性のためのバイオマーカーとしての循環内皮細胞
Ｖｅｒｉｄｅｘ ｐｌａｔｆｏｒｍ（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使
用して、上記実施例８に記載された対象の循環内皮細胞の数を、試験期間の１日目、８日
目、１４日目、及び２９日目に評価した。試験８日目～試験２９日目の全体にわたって、
治癒したＤＦＵ（ｎ＝５）を有する対象において、循環内皮細胞の統計的に有意な減少を
観察した。図１５Ａを参照のこと；中央値の位置のノンパラメトリック検定を使用して、
ベースライン（１日目、投与前）からの変化に対するＰ値を計算した。そのような減少は
、非治癒のＤＦＵを有する対象では観察されたなかった。図１５Ｂを参照のこと。

【0303】

本実施例は、循環内皮細胞の数が、ＣＤ１０^＋、ＣＤ３４^－、ＣＤ１０５^＋、ＣＤ２０
０^＋胎盤幹細胞でのＤＦＵの治療効果を評価するためのバイオマーカーとして使用できる
ことを実証する。

【0304】

均等物：
本開示は、本明細書に記載の具体的な実施形態による範囲に限定されない。実に、本明
細書で提供される主題の種々の修正は、記載されているものに加えて、上述の記載及び添
付の図から、当業者らには明らかになるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の
範囲の範囲内に入ることが意図される。

【0305】

種々の刊行物、特許、及び特許出願は、本明細書で引用され、それらの開示は、その全
体が参照により組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A-B】

【図11C-D】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【手続補正書】

【提出日】2022-10-06

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

本願明細書に実質的に記載された、新規な物、方法及び製造方法。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１２８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0128】

胎盤は、物理的破壊及び／または酵素消化ならびに幹細胞回収前に、構成部分に切るこ
とができる。単離胎盤細胞は、完全な胎盤からを含む、羊膜、絨毛膜、臍帯、胎盤絨毛叢
、またはそれらの任意の組み合わせの全部または一部から得ることができる。好ましくは
、単離胎盤細胞は、羊膜及び絨毛膜を含む胎盤組織から得られる。通常、単離胎盤細胞は
、胎盤組織の小さなブロックの破壊により得ることができ、例えば、胎盤組織のブロック
は、体積が約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６
０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８
００、９００、または約１０００立方ミリメートルである。物理的破壊の任意の方法を使
用することができるが、但し、破壊方法は、例えば、トリパンブルー排除法で決定して、
生存可能な該器官中の細胞の多数、より好ましくは大半、より好ましくは少なくとも６０
％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％を残すことを条件とする。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１５３

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0153】

灌流または消化により得られた胎盤細胞は、例えば、０．０５％のトリプシンの０．２
％のＥＤＴＡとの溶液（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）を使用して、例えば、さ
らにまたは最初に分別的トリプシン処理により単離することができる。分別的トリプシン
処理は、組織培養プラスチック接着性がある単離胎盤細胞は通常、約５分以内にプラスチ
ック表面から離れるので、可能であるが、他の接着集団は通常、２０～３０分を超えるイ
ンキュベーションを必要とする。離れた胎盤細胞は、例えば、トリプシン中和溶液（ＴＮ
Ｓ、Ｃａｍｂｒｅｘ）を使用して、トリプシン処理及びトリプシン中和後に、採取するこ
とができる。接着細胞の単離の一実施形態では、例えば、約５～１０×１０^６細胞のアリ
コートは、いくつかのＴ－７５フラスコ、好ましくは、フィブロネクチンでコーティング
されたＴ７５フラスコ、のそれぞれに入れる。そのよう実施形態では、細胞は、市販のＭ
ｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＳＣＧＭ
）（Ｃａｍｂｒｅｘ）と培養でき、組織培養インキュベーター（３７℃、５％のＣＯ２）
に入れることができる。１０～１５日後、非接着細胞は、ＰＢＳで洗浄することにより、
フラスコから除去される。次に、ＰＢＳは、ＭＳＣＧＭと交換される。フラスコは好まし
くは、種々の接着細胞型の存在について、特に、線維芽細胞様細胞のクラスタの特定及び
拡大について、毎日試験される。

【手続補正4】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１８２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0182】

別の具体的な実施形態では、組成物は、胎盤由来接着細胞及び胚性幹細胞を含む。別の
具体的な実施形態では、組成物は、胎盤由来接着細胞及び間葉系間質または幹細胞、例え
ば、骨髄由来間葉系間質または幹細胞を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、骨
髄由来造血幹細胞を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、胎盤由来接着細胞及び
造血前駆細胞、例えば、骨髄、胎児の血液、臍帯血、胎盤血及び／または末梢血由来の造
血前駆細胞、を含む。別の具体的な実施形態では、組成物は、胎盤由来接着細胞及び体性
幹細胞を含む。より具体的な実施形態では、該体性幹細胞は、神経幹細胞、肝臓幹細胞、
膵臓幹細胞、内皮幹細胞、心臓幹細胞、または筋幹細胞である。

【手続補正5】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２２７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0227】

本明細書で提供される胎盤細胞（例えば、ＰＤＡＣ）は、リン酸一カルシウム、リン酸
二カルシウム、リン酸三カルシウム、α－リン酸三カルシウム、β－リン酸三カルシウム
、及びリン酸四カルシウム、ヒドロキシアパタイト、フルオロアパタイト、硫酸カルシウ
ム、フッ化カルシウム、酸化カルシウム、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムマグネシウ
ム、ＢＩＯＧＬＡＳＳ（登録商標）などの生物学的に活性なガラス、ならびにそれらの混
合物を含むが、これらに限定されない生理学的に許容されるセラミック材料上に播種する
こともできる、またはこれと接触できる。現在市販されている多孔性生体適合性セラミッ
ク材料は、ＳＵＲＧＩＢＯＮＥ（登録商標）（ＣａｎＭｅｄｉｃａ Ｃｏｒｐ．、カナダ
）、ＥＮＤＯＢＯＮ（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ Ｆｒａｎｃｅ
、フランス）、ＣＥＲＯＳ（登録商標）（Ｍａｔｈｙｓ，ＡＧ、スイス・ベットラッハ）
、ならびに、ＨＥＡＬＯＳ（商標）（ＤｅＰｕｙ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州レイナ
ム）及びＶＩＴＯＳＳ（登録商標）、ＲＨＡＫＯＳＳ（商標）、及びＣＯＲＴＯＳＳ（登
録商標）（Ｏｒｔｈｏｖｉｔａ、ペンシルベニア州モルバーン）などの石灰化コラーゲン
骨移植製品を含む。フレームワークは、天然及び／または合成材料の混合物、ブレンド、
またはコンポジットであることができる。

【手続補正6】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２５４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0254】

試験デザイン：試験は、各群に１０の胚を含む５群を含んでいた。試験のデザインを、
表４に記載する。
試験デザイン－細胞上清を使用したＣＡＭアッセイ

【表4】

ＰＤＡＣ上清を、継代６回の細胞から得た。

【手続補正7】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０３０２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0302】

６．１１ 実施例１１：治療有効性のためのバイオマーカーとしての循環内皮細胞
Ｖｅｒｉｄｅｘ ｐｌａｔｆｏｒｍ（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使
用して、上記実施例８に記載された対象の循環内皮細胞の数を、試験期間の１日目、８日
目、１４日目、及び２９日目に評価した。試験８日目～試験２９日目の全体にわたって、
治癒したＤＦＵ（ｎ＝５）を有する対象において、循環内皮細胞の統計的に有意な減少を
観察した。図１５Ａを参照のこと；中央値の位置のノンパラメトリック検定を使用して、
ベースライン（１日目、投与前）からの変化に対するＰ値を計算した。そのような減少は
、非治癒のＤＦＵを有する対象では観察されなかった。図１５Ｂを参照のこと。

【外国語明細書】