(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022191398
(43)【公開日】2022-12-27
(54)【発明の名称】アシル化ＧＬＰ－１誘導体
(51)【国際特許分類】
C07K 14/605 20060101AFI20221220BHJP
A61K 38/22 20060101ALI20221220BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20221220BHJP
A61K 47/54 20170101ALI20221220BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20221220BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20221220BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20221220BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20221220BHJP
【ＦＩ】
C07K14/605
A61K38/22
A61K45/00
A61K47/54
A61P1/18
A61P3/10
A61P13/12
A61P43/00 107
【審査請求】有
【請求項の数】14
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022164849
(22)【出願日】2022-10-13
(62)【分割の表示】P 2021506033の分割
【原出願日】2019-04-19
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2018/083789
(32)【優先日】2018-04-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520404791
【氏名又は名称】杭州先▲為▼▲達▼生物科技有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】110000578
【氏名又は名称】名古屋国際弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】▲許▼▲ジャン▼
(72)【発明者】
【氏名】李峰
(72)【発明者】
【氏名】宋瑞
(72)【発明者】
【氏名】郭万▲軍▼
(72)【発明者】
【氏名】潘海
(72)【発明者】
【氏名】▲馮▼静
(57)【要約】 （修正有）
【課題】生体内の作用時間を延長したＧＬＰ－１類似体を提供する。
【解決手段】特定の配列からなるＧＬＰ－１（７－３７）ポリペプチド類似体であって、リジン残基を含み、リジン残基に連結した脂肪酸修飾誘導体、及び本誘導体を含む薬物を提供する。さらに、本誘導体の調製方法、及び薬物の調製における当該誘導体の使用も提供される。
【選択図】なし
【解決手段】特定の配列からなるＧＬＰ－１（７－３７）ポリペプチド類似体であって、リジン残基を含み、リジン残基に連結した脂肪酸修飾誘導体、及び本誘導体を含む薬物を提供する。さらに、本誘導体の調製方法、及び薬物の調製における当該誘導体の使用も提供される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩であって、ＧＬ
Ｐ－１（７－３７）類似体は、式
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
［式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり
、Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34は
ＲまたはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ19、Ｘ23、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基
である。］で表されるアミノ酸配列を含み、
前記誘導体は、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み
、
前記延長部分は、
であり、
ｘは４～３８の整数である、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上
許容される塩。
Ｐ－１（７－３７）類似体は、式
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
［式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり
、Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34は
ＲまたはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ19、Ｘ23、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基
である。］で表されるアミノ酸配列を含み、
前記誘導体は、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み
、
前記延長部分は、
【化1】
ｘは４～３８の整数である、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上
許容される塩。
【請求項2】
前記延長部分は、
ＨＯＯＣ（ＣＨ2）14ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）15ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）16ＣＯ
－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）17ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）18ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）19Ｃ
Ｏ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）20ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）21ＣＯ－、及びＨＯＯＣ（ＣＨ2
）22ＣＯ－からなる群より選択される、請求項１に記載の誘導体またはその薬学上許容さ
れる塩。
ＨＯＯＣ（ＣＨ2）14ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）15ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）16ＣＯ
－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）17ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）18ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）19Ｃ
Ｏ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）20ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）21ＣＯ－、及びＨＯＯＣ（ＣＨ2
）22ＣＯ－からなる群より選択される、請求項１に記載の誘導体またはその薬学上許容さ
れる塩。
【請求項3】
前記延長部分は、リンカーを介してＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結され
ている、請求項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
ている、請求項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項4】
前記リンカーは、
であり、式中、ｍは０、１、２または３であり；ｎは１、２または３であり；ｓは０～
６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数であり、
好ましくは、リンカーは、
であり、
式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である
、請求項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【化2】
６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数であり、
好ましくは、リンカーは、
【化3】
式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である
、請求項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項5】
前記リンカーは、
であり、式中、ｍは１であり、ｎは１または２である、請求項４に記載の誘導体または
その薬学上許容される塩。
【化4】
その薬学上許容される塩。
【請求項6】
Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデ
カノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセト
アミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬ
Ｐ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（
２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリ
ルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａ
ｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、Ｎ－ε
34－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイル
アミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）
エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26Ｌｙｓ34－ＧＬＰ－１（７
－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε37－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－
（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］
エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ2
2Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ37－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε23－［２－
（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－
４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］
エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）
）ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－
カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ
）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ3
0Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε30－［２－（２－
［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ
）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキ
シ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプ
チド（Ｍ１４）からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学上許容さ
れる塩である、請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される
塩。
カノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセト
アミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬ
Ｐ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（
２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリ
ルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａ
ｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、Ｎ－ε
34－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイル
アミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）
エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26Ｌｙｓ34－ＧＬＰ－１（７
－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε37－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－
（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］
エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ2
2Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ37－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε23－［２－
（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－
４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］
エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）
）ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－
カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ
）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ3
0Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε30－［２－（２－
［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ
）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキ
シ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプ
チド（Ｍ１４）からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学上許容さ
れる塩である、請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される
塩。
【請求項7】
（１）上記請求項のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液と、
上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液とを混合すること；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を
採取すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調
製する方法。
上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液とを混合すること；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を
採取すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調
製する方法。
【請求項8】
上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液と混合する前に、Ｇ
ＬＰ－１類似体が溶解されている溶液にトリエチルアミンを加えることをさらに含む、請
求項７に記載の方法。
ＬＰ－１類似体が溶解されている溶液にトリエチルアミンを加えることをさらに含む、請
求項７に記載の方法。
【請求項9】
上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分の溶液が、アセトニトリルで溶解されたも
のである、請求項７または８に記載の方法。
のである、請求項７または８に記載の方法。
【請求項10】
請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩、及び薬学
上許容される補助材料を含む、薬物組成物。
上許容される補助材料を含む、薬物組成物。
【請求項11】
糖尿病または糖尿病合併症を予防及び／または治療するための薬物の調製における、請
求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩の使用。
求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩の使用。
【請求項12】
前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、請求項１１に記載の使用。
【請求項13】
血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増
強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための
薬物の調製における、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容
される塩の使用。
強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための
薬物の調製における、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容
される塩の使用。
【請求項14】
前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、請求項
１３に記載の使用。
１３に記載の使用。
【請求項15】
被験者に予防または治療有効量の請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはそ
の薬学上許容される塩を投与することを含む、糖尿病または糖尿病合併症を予防及び／ま
たは治療するための方法。
の薬学上許容される塩を投与することを含む、糖尿病または糖尿病合併症を予防及び／ま
たは治療するための方法。
【請求項16】
前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
被験者に治療有効量の請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許
容される塩を投与することを含む、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシ
スの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞の
グルコース感受性の回復のための方法。
容される塩を投与することを含む、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシ
スの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞の
グルコース感受性の回復のための方法。
【請求項18】
前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、請求項
１７に記載の方法。
１７に記載の方法。
【請求項19】
式： ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ3
6Ｘ37
［式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり
、Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34は
ＲまたはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、しかも、Ｘ19、
Ｘ23、Ｘ26、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基である。］
で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体。
6Ｘ37
［式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり
、Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34は
ＲまたはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、しかも、Ｘ19、
Ｘ23、Ｘ26、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基である。］
で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体。
【請求項20】
請求項１９の類似体を含む薬物組成物。
【請求項21】
糖尿病、糖尿病合併症を予防及び／または治療するための薬物の調製における、請求項
１９に記載の類似体の使用。
１９に記載の類似体の使用。
【請求項22】
請求項１０または請求項２０に記載の薬物組成物を含む容器と、前記薬物組成物のプロ
トコルを含む添付文書とを含む、製品。
トコルを含む添付文書とを含む、製品。
【請求項23】
１つ以上の他の薬物を含む容器をさらに含む、請求項２２に記載の製品。
【請求項24】
前記１つ以上の他の薬物が、糖尿病または糖尿病合併症を治療するための他の薬物であ
る、請求項２３に記載の製品。
る、請求項２３に記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ポリペプチドの技術分野に属する。具体的には、本発明は、ＧＬＰ－１（７
－３７）ポリペプチド類似体の脂肪酸修飾誘導体に関する。また、本発明はさらに、ペプ
チド誘導体の調製方法、ペプチド誘導体を含む薬物、及び薬物の調製における使用などに
関する。
－３７）ポリペプチド類似体の脂肪酸修飾誘導体に関する。また、本発明はさらに、ペプ
チド誘導体の調製方法、ペプチド誘導体を含む薬物、及び薬物の調製における使用などに
関する。
【背景技術】
【0002】
糖尿病は、遺伝学や環境などの複数の要因によって引き起こされる糖代謝の障害であり
、腫瘍、心脳血管疾患に続いて人の健康や命を脅かす３番目の重大な疾患になっている。
糖尿病自体は必ずしも害を及ぼすわけではないが、長期的に血糖値が増加すると、大きな
血管や毛細血管が損傷し、心臓、脳、腎臓、末梢神経、目、足などに危険をもたらす。世
界保健機関の統計によると、糖尿病の合併症は１００件余りに達しており、今まで知られ
ている合併症の最も多い疾患である。糖尿病による死亡の半分以上は心脳血管疾患が原因
であり、１０％は腎症が原因である。糖尿病による切断は、非糖尿病の１０～２０倍であ
る。このため、糖尿病の治療およびその合併症の予防は極めて重要な社会問題である。
、腫瘍、心脳血管疾患に続いて人の健康や命を脅かす３番目の重大な疾患になっている。
糖尿病自体は必ずしも害を及ぼすわけではないが、長期的に血糖値が増加すると、大きな
血管や毛細血管が損傷し、心臓、脳、腎臓、末梢神経、目、足などに危険をもたらす。世
界保健機関の統計によると、糖尿病の合併症は１００件余りに達しており、今まで知られ
ている合併症の最も多い疾患である。糖尿病による死亡の半分以上は心脳血管疾患が原因
であり、１０％は腎症が原因である。糖尿病による切断は、非糖尿病の１０～２０倍であ
る。このため、糖尿病の治療およびその合併症の予防は極めて重要な社会問題である。
【0003】
糖尿病は病因が異なるため、いくつかのタイプに分けることができる。その中のほとん
どは２型糖尿病（約９０％）に属し、主にオーバーウェイトと運動不足によるものである
。２型糖尿病患者には、インスリン抵抗と不足なインスリン分泌との２つ以上が存在する
のが多く、膵島β細胞アポトーシスがよく発症の中期と後期に現れる。現在、臨床的に使
用されている経口血糖降下剤の作用メカニズムはほとんど、インスリン感受性を増強する
こと、またはインスリン分泌を促進して血糖を安定させることであるが、これらはいずれ
もβ細胞アポトーシスという難問を解決できない。グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－
１）及びその類似体の薬物は、β細胞アポトーシスを遅らせ、その再生を促進し、膵島β
細胞の分化と増殖を促進する作用があるため、２型糖尿病の治療に関する研究の焦点とな
っている。
どは２型糖尿病（約９０％）に属し、主にオーバーウェイトと運動不足によるものである
。２型糖尿病患者には、インスリン抵抗と不足なインスリン分泌との２つ以上が存在する
のが多く、膵島β細胞アポトーシスがよく発症の中期と後期に現れる。現在、臨床的に使
用されている経口血糖降下剤の作用メカニズムはほとんど、インスリン感受性を増強する
こと、またはインスリン分泌を促進して血糖を安定させることであるが、これらはいずれ
もβ細胞アポトーシスという難問を解決できない。グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－
１）及びその類似体の薬物は、β細胞アポトーシスを遅らせ、その再生を促進し、膵島β
細胞の分化と増殖を促進する作用があるため、２型糖尿病の治療に関する研究の焦点とな
っている。
【0004】
１９８３年に、ＢＥＬＬらは、プログルカゴン（ｐｒｏｇｌｕｃａｇｏｎ，ＰＧ）の遺
伝子配列を分析したところ、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ
ｐｅｐｔｉｄｅ－１）、すなわち、ＧＬＰ－１を発見した（ＢＥＬＬ Ｇ Ｉ，ＳＡＮＣ
ＨＥＺ－ＰＥＳＣＡＤＯＲ Ｒ，ＬＡＹＢＯＵＲＮ Ｐ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｏｎ ｄ
ｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐ
ｒｅｐｒｏｇｌｕｃａｇｏｎ ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９８３，３０４（５９
２４）：３６８－３７１）。ＰＧ遺伝子配列は６つのエクソンと５つのイントロンで構成
され、３つの主要ドメイン、すなわち、グルカゴン（３３～６１）、ＧＬＰ－１（７２～
１０８）、及びＧＬＰ－２（１２６～１５８）を含む。ＰＧのｍＲＮＡは膵臓Ａ細胞、腸
管Ｌ細胞、および脳において発現され、これらの組織細胞で特異的に翻訳修飾が行われ、
最終的に異なる最終産物が形成される。
伝子配列を分析したところ、グルカゴン様ペプチド－１（ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ
ｐｅｐｔｉｄｅ－１）、すなわち、ＧＬＰ－１を発見した（ＢＥＬＬ Ｇ Ｉ，ＳＡＮＣ
ＨＥＺ－ＰＥＳＣＡＤＯＲ Ｒ，ＬＡＹＢＯＵＲＮ Ｐ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｏｎ ｄ
ｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐ
ｒｅｐｒｏｇｌｕｃａｇｏｎ ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９８３，３０４（５９
２４）：３６８－３７１）。ＰＧ遺伝子配列は６つのエクソンと５つのイントロンで構成
され、３つの主要ドメイン、すなわち、グルカゴン（３３～６１）、ＧＬＰ－１（７２～
１０８）、及びＧＬＰ－２（１２６～１５８）を含む。ＰＧのｍＲＮＡは膵臓Ａ細胞、腸
管Ｌ細胞、および脳において発現され、これらの組織細胞で特異的に翻訳修飾が行われ、
最終的に異なる最終産物が形成される。
【0005】
ＧＬＰには、ＧＬＰ－１類似体とＧＬＰ－２類似体の２つのサブタイプがあり、グルカ
ゴンとほぼ半分のアミノ酸配列が同じであり、両者間も約３５％の相同性がある。ＧＬＰ
－１類似体は、終末空腸、回腸及び結腸のランゲルハンス細胞（Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ‘
ｃｅｌｌ）から分泌されるポリペプチドホルモンであり、グルコース依存性インスリン
分泌及び生物合成を促進し、グルカゴン分泌を阻害し、胃内容排出を阻害するなど、多く
の機能を有する。ＧＬＰ－２類似体は、腸組織と中枢神経系の脳幹と視床下部の神経細胞
で合成され、主に正常な小腸の成長と腸粘膜の損傷の修復を促進する（付 剛、▲キョウ
▼ ▲ミン▼、徐 為人、グルカゴン様ペプチド１及びその受容体アゴニストについての
研究の進展［Ｊ］、天津医薬、２０１２、４０（２）：１８１－１８４）。
ゴンとほぼ半分のアミノ酸配列が同じであり、両者間も約３５％の相同性がある。ＧＬＰ
－１類似体は、終末空腸、回腸及び結腸のランゲルハンス細胞（Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ‘
ｃｅｌｌ）から分泌されるポリペプチドホルモンであり、グルコース依存性インスリン
分泌及び生物合成を促進し、グルカゴン分泌を阻害し、胃内容排出を阻害するなど、多く
の機能を有する。ＧＬＰ－２類似体は、腸組織と中枢神経系の脳幹と視床下部の神経細胞
で合成され、主に正常な小腸の成長と腸粘膜の損傷の修復を促進する（付 剛、▲キョウ
▼ ▲ミン▼、徐 為人、グルカゴン様ペプチド１及びその受容体アゴニストについての
研究の進展［Ｊ］、天津医薬、２０１２、４０（２）：１８１－１８４）。
【0006】
ＧＬＰ－１は、インスリン分泌を促進する内因性ホルモンであり、主に腸内のＬ－細胞
から分泌され、インスリンとグルコースレベルのバランスを取る役割を果たす。
から分泌され、インスリンとグルコースレベルのバランスを取る役割を果たす。
【0007】
ＧＬＰ－１の一次構造は次の通りである：ヒスチジン（Ｈｉｓ）－アラニン（Ａｌａ）
－グルタミン酸（Ｇｌｕ）－フェニルアラニン（Ｐｈｅ）－グルタミン酸（Ｇｌｕ）－ア
ルギニン（Ａｒｇ）－ヒスチジン（Ｈｉｓ）－アラニン（Ａｌａ）－グルタミン酸（Ｇｌ
ｕ）－グリシン（Ｇｌｙ）－トレオニン（Ｔｈｒ）－フェニルアラニン（Ｐｈｅ）－トレ
オニン（Ｔｈｒ）－セリン（Ｓｅｒ）－アスパラギン酸（Ａｓｐ）－バリン（Ｖａｌ）－
セリン（Ｓｅｒ）－セリン（Ｓｅｒ）－チロシン（Ｔｙｒ）－ロイシン（Ｌｅｕ）－グル
タミン酸（Ｇｌｕ）－グリシン（Ｇｌｙ）－グルタミン（Ｇｌｎ）－アラニン（Ａｌａ）
－アラニン（Ａｌａ）－リジン（Ｌｙｓ）－グルタミン酸（Ｇｌｕ）－フェニルアラニン
（Ｐｈｅ）－イソロイシン（Ｉｌｅ）－アラニン（Ａｌａ）－トリプトファン（Ｔｒｐ）
－ロイシン（Ｌｅｕ）－バリン（Ｖａｌ）－リジン（Ｌｙｓ）－アルギニン（Ａｒｇ）－
グリシン（Ｇｌｙ）。ＤＤＰ－ＩＶは、Ｎ末端の７～８位のヒスチジン（Ｈ）－アラニン
（Ａ）を迅速に分解でき、ＤＤＰ－ＩＶは主にペプチド鎖末端加水分解酵素として機能し
、８位ではアラニンまたはプロリンである場合、当該酵素は分解の機能を果たしてＧＬＰ
－１が迅速に活性を失う（ＡＥＲＴＧＥＥＲＴＳ Ｋ，ＹＥ Ｓ， ＴＥＮＮＡＮＴ Ｍ Ｇ
， ｅｔ ａｌ．Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｉｐｅｐｔｉｄ
ｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ａ ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ
ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ｒｅｖｅａｌｓ ｄｅｔａｉｌｓ ｏｎ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅ
ｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｔｅｔｒａｈｅｄｒａｌ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ［Ｊ]．
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ，２００４，１３（２）：４１２－４２１）。ＳＡＲＲＡＵＳＴ
Ｅ ＤＥ ＭＥＮＴＨＩＥＲＥらはＧＬＰ－１モデルを構築し、アミノ酸置換後ＧＬＰ－
１類似体と受容体の親和性と固有活性の変化を観察した結果、７位のヒスチジンが親和性
と固有活性の決定要因であり、その芳香環はトリプトファンよりも小さく、極性置換基は
ない；８位のアラニンの側鎖には極性基があるとＧＬＰ－１の活性に影響を与え、側鎖の
体積は大きすぎてはならず、一定の制限を超えると、活性が低下する；９位のグルタミン
酸が、酸性、極性、及び疎水性アミノ酸などの特定のアミノ酸に置き換えられる場合、活
性は変化せず、塩基性アミノ酸に置き換えられると活性が低下し、さらに不活性になるこ
ともある；ＧＬＰ－１は受容体との結合状態にあり、その中のアミノ酸残基がイオン結合
作用を持っている場合、７～１５位のアミノ酸の間に発生して環構造を形成し、Ａｌａ８
－Ｇｌｕ９－Ｇｌｙ１０－Ｔｈｒ１１はβターンを形成して７位のヒスチジン、１２位の
フェニルアラニン、及び１９位のチロシンなどの３つの芳香核が互いに作用し、受容体上
の芳香族疎水性ポケットに対応し、それらが受容体を活性化する役割を果たすと推定され
る；２２位のグリシンは柔軟なアミノ酸であり、柔軟に連結する役割を果たし、らせん状
のコイル形状を維持する。グリシンを破壊すると、すべての芳香族アミノ酸がクラスター
化するが、受容体との親和性が１／４０減少する（ＳＡＲＡＵＳＴＥ ＤＥ ＭＥＮＴＨＩ
ＥＲＥＣ，ＣＨＡＶＡＮＩＥＵＡ，ＧＲＡＳＳＹＧ，ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ
ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ＧＬ
Ｐ－１－［７－３７］－ＮＨ2 ｆｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ａｎ
ｄ ｃＡＭＰ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００４，３
９（６）：４７３－４８０）。
－グルタミン酸（Ｇｌｕ）－フェニルアラニン（Ｐｈｅ）－グルタミン酸（Ｇｌｕ）－ア
ルギニン（Ａｒｇ）－ヒスチジン（Ｈｉｓ）－アラニン（Ａｌａ）－グルタミン酸（Ｇｌ
ｕ）－グリシン（Ｇｌｙ）－トレオニン（Ｔｈｒ）－フェニルアラニン（Ｐｈｅ）－トレ
オニン（Ｔｈｒ）－セリン（Ｓｅｒ）－アスパラギン酸（Ａｓｐ）－バリン（Ｖａｌ）－
セリン（Ｓｅｒ）－セリン（Ｓｅｒ）－チロシン（Ｔｙｒ）－ロイシン（Ｌｅｕ）－グル
タミン酸（Ｇｌｕ）－グリシン（Ｇｌｙ）－グルタミン（Ｇｌｎ）－アラニン（Ａｌａ）
－アラニン（Ａｌａ）－リジン（Ｌｙｓ）－グルタミン酸（Ｇｌｕ）－フェニルアラニン
（Ｐｈｅ）－イソロイシン（Ｉｌｅ）－アラニン（Ａｌａ）－トリプトファン（Ｔｒｐ）
－ロイシン（Ｌｅｕ）－バリン（Ｖａｌ）－リジン（Ｌｙｓ）－アルギニン（Ａｒｇ）－
グリシン（Ｇｌｙ）。ＤＤＰ－ＩＶは、Ｎ末端の７～８位のヒスチジン（Ｈ）－アラニン
（Ａ）を迅速に分解でき、ＤＤＰ－ＩＶは主にペプチド鎖末端加水分解酵素として機能し
、８位ではアラニンまたはプロリンである場合、当該酵素は分解の機能を果たしてＧＬＰ
－１が迅速に活性を失う（ＡＥＲＴＧＥＥＲＴＳ Ｋ，ＹＥ Ｓ， ＴＥＮＮＡＮＴ Ｍ Ｇ
， ｅｔ ａｌ．Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｉｐｅｐｔｉｄ
ｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ａ ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ
ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ｒｅｖｅａｌｓ ｄｅｔａｉｌｓ ｏｎ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅ
ｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｔｅｔｒａｈｅｄｒａｌ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ［Ｊ]．
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ，２００４，１３（２）：４１２－４２１）。ＳＡＲＲＡＵＳＴ
Ｅ ＤＥ ＭＥＮＴＨＩＥＲＥらはＧＬＰ－１モデルを構築し、アミノ酸置換後ＧＬＰ－
１類似体と受容体の親和性と固有活性の変化を観察した結果、７位のヒスチジンが親和性
と固有活性の決定要因であり、その芳香環はトリプトファンよりも小さく、極性置換基は
ない；８位のアラニンの側鎖には極性基があるとＧＬＰ－１の活性に影響を与え、側鎖の
体積は大きすぎてはならず、一定の制限を超えると、活性が低下する；９位のグルタミン
酸が、酸性、極性、及び疎水性アミノ酸などの特定のアミノ酸に置き換えられる場合、活
性は変化せず、塩基性アミノ酸に置き換えられると活性が低下し、さらに不活性になるこ
ともある；ＧＬＰ－１は受容体との結合状態にあり、その中のアミノ酸残基がイオン結合
作用を持っている場合、７～１５位のアミノ酸の間に発生して環構造を形成し、Ａｌａ８
－Ｇｌｕ９－Ｇｌｙ１０－Ｔｈｒ１１はβターンを形成して７位のヒスチジン、１２位の
フェニルアラニン、及び１９位のチロシンなどの３つの芳香核が互いに作用し、受容体上
の芳香族疎水性ポケットに対応し、それらが受容体を活性化する役割を果たすと推定され
る；２２位のグリシンは柔軟なアミノ酸であり、柔軟に連結する役割を果たし、らせん状
のコイル形状を維持する。グリシンを破壊すると、すべての芳香族アミノ酸がクラスター
化するが、受容体との親和性が１／４０減少する（ＳＡＲＡＵＳＴＥ ＤＥ ＭＥＮＴＨＩ
ＥＲＥＣ，ＣＨＡＶＡＮＩＥＵＡ，ＧＲＡＳＳＹＧ，ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ
ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ＧＬ
Ｐ－１－［７－３７］－ＮＨ2 ｆｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ａｎ
ｄ ｃＡＭＰ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００４，３
９（６）：４７３－４８０）。
【0008】
ＧＬＰ－１は、ＧＬＰ－１（１－３７）、ＧＬＰ－１（１－３６）、ＧＬＰ－１（７－
３７）グリシン誘導体およびＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ2などの分子形態を含む。後者
の２つが同じ生物学的活性を有すると一般に考えられている。腸粘膜Ｌ細胞から分泌され
るＧＬＰ－１（１－３７）は不活性であり、活性なＧＬＰ－１（７－３７）になるにはＮ
末端の６つのアミノ酸をさらに加水分解により切除する必要がある。ＧＬＰ－１（７－３
７）は体内に存在する時間が短く、すぐに分解される。したがって、抗ＤＰＰ ＩＶを有
するＧＬＰ－１類似体について様々な研究が行われている。例えば、米国特許第５５４５
６１８号には、アルキル基またはアシル基でのＮ末端の修飾が記載され、また、Ｇａｌｌ
ｗｉｔｚらは、ＤＰＰ－ＩＶへの耐性を高めて生理学的活性を維持するために、７位のＨ
ｉｓのＮ－メチル化またはαメチル化し、またはＨｉｓ全体をイミダゾールで置き換える
ことについて記載した。
３７）グリシン誘導体およびＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ2などの分子形態を含む。後者
の２つが同じ生物学的活性を有すると一般に考えられている。腸粘膜Ｌ細胞から分泌され
るＧＬＰ－１（１－３７）は不活性であり、活性なＧＬＰ－１（７－３７）になるにはＮ
末端の６つのアミノ酸をさらに加水分解により切除する必要がある。ＧＬＰ－１（７－３
７）は体内に存在する時間が短く、すぐに分解される。したがって、抗ＤＰＰ ＩＶを有
するＧＬＰ－１類似体について様々な研究が行われている。例えば、米国特許第５５４５
６１８号には、アルキル基またはアシル基でのＮ末端の修飾が記載され、また、Ｇａｌｌ
ｗｉｔｚらは、ＤＰＰ－ＩＶへの耐性を高めて生理学的活性を維持するために、７位のＨ
ｉｓのＮ－メチル化またはαメチル化し、またはＨｉｓ全体をイミダゾールで置き換える
ことについて記載した。
【0009】
これらの修飾に加え、ヒラトカゲの唾液腺から精製されたＧＬＰ－１類似体エキセンデ
ィン（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）（米国特許第５４２４６８６号）は、ＤＰＰ ＩＶに耐性が
あり、しかもＧＬＰ－１よりも高い生理学的活性を有する。そのため、ＧＬＰ－１の半減
期よりも長い、２～４時間のインビボ半減期を持っている。しかしながら、ＤＰＰ ＩＶ
耐性を高める方法のみを適用した場合、生理学的活性を十分に維持できず、市販のエクセ
ナチド－４（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）を使用する場合、１日２回患者に注射する必要があり
、それでも患者にとって非常に苦しい。
ィン（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）（米国特許第５４２４６８６号）は、ＤＰＰ ＩＶに耐性が
あり、しかもＧＬＰ－１よりも高い生理学的活性を有する。そのため、ＧＬＰ－１の半減
期よりも長い、２～４時間のインビボ半減期を持っている。しかしながら、ＤＰＰ ＩＶ
耐性を高める方法のみを適用した場合、生理学的活性を十分に維持できず、市販のエクセ
ナチド－４（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）を使用する場合、１日２回患者に注射する必要があり
、それでも患者にとって非常に苦しい。
【0010】
これらのインスリン分泌刺激ペプチドは分子量が小さいため、腎臓からすぐに体外に排
泄される。ある科学者は、化学的方法を使用して、ポリエチレングリコールなどの高溶解
性ポリマーをペプチドの表面に追加して腎臓での損失を抑制している。例えば、米国特許
第６９２４６４号には、ＰＥＧがエキセンディン（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）のリジン残基に
結合して体内での滞留時間を増加させることが記載されている。この方法は、体内でのペ
プチド薬物の滞留時間を増加させるが、分子量の増加につれて、ペプチド薬物の濃度が大
幅に低下し、ペプチドへの反応性も低下する。
泄される。ある科学者は、化学的方法を使用して、ポリエチレングリコールなどの高溶解
性ポリマーをペプチドの表面に追加して腎臓での損失を抑制している。例えば、米国特許
第６９２４６４号には、ＰＥＧがエキセンディン（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）のリジン残基に
結合して体内での滞留時間を増加させることが記載されている。この方法は、体内でのペ
プチド薬物の滞留時間を増加させるが、分子量の増加につれて、ペプチド薬物の濃度が大
幅に低下し、ペプチドへの反応性も低下する。
【0011】
また、グルカゴン様ペプチド－１化合物の構造を修飾してその作用の持続時間を延長し
ようとする一連の他の方法がある。例えば、ＷＯ９６／２９３４２には、親ペプチドホル
モンのＣ末端アミノ酸残基またはＮ末端アミノ酸残基に親油性置換物を導入することによ
り修飾されたペプチドホルモン誘導体が開示されている。ＷＯ９８／０８８７１には、親
ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基に親油性置換物が連結されているＧＬＰ－１誘
導体（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）が開示されている。ＷＯ９９／４３７０８には、Ｃ末端
アミノ酸残基に連結している親油性置換物を有するＧＬＰ－１（７－３５）とＧＬＰ－１
（７－３６）誘導体が開示されている。ＷＯ００／３４３３１には、ジアシル化ＧＬＰ－
１類似体が記載されている。ＷＯ００／６９９１１には、注射用の活性化インスリン分泌
刺激ペプチドが開示され、患者の体内では、血液成分と反応して複合体を形成、生体内で
効果の持続時間が延長されたと考えられている。
ようとする一連の他の方法がある。例えば、ＷＯ９６／２９３４２には、親ペプチドホル
モンのＣ末端アミノ酸残基またはＮ末端アミノ酸残基に親油性置換物を導入することによ
り修飾されたペプチドホルモン誘導体が開示されている。ＷＯ９８／０８８７１には、親
ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基に親油性置換物が連結されているＧＬＰ－１誘
導体（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）が開示されている。ＷＯ９９／４３７０８には、Ｃ末端
アミノ酸残基に連結している親油性置換物を有するＧＬＰ－１（７－３５）とＧＬＰ－１
（７－３６）誘導体が開示されている。ＷＯ００／３４３３１には、ジアシル化ＧＬＰ－
１類似体が記載されている。ＷＯ００／６９９１１には、注射用の活性化インスリン分泌
刺激ペプチドが開示され、患者の体内では、血液成分と反応して複合体を形成、生体内で
効果の持続時間が延長されたと考えられている。
【0012】
ＷＯ２００６／０９７５３７には、別のアシル化ＧＬＰ－１類似体（ｓｅｍａｇｌｕｔ
ｉｄｅ）が開示され、８位のアミノ酸を非天然アミノ酸に変異させることにより、ＷＯ９
８／０８８７１に記載のアシル化ＧＬＰ－１（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）より長い半減期
を有する。
ｉｄｅ）が開示され、８位のアミノ酸を非天然アミノ酸に変異させることにより、ＷＯ９
８／０８８７１に記載のアシル化ＧＬＰ－１（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）より長い半減期
を有する。
【0013】
ＷＯ０２／０４６２２７には、遺伝子組み換え技術を使用して、ＧＬＰ－１、エクセナ
チド－４またはその類似体をヒト血清アルブミンまたは免疫グロブリン領域（Ｆｃ）と組
み合わせることにより融合タンパク質を調製することが開示され、これによって、ポリエ
チレングリコール化の低収率や非特異性などの問題を解決できるが、血中半減期を延長す
る効果は、期待したほど大きくなく、総合的な血糖降下効果から、予期の効果に達成せず
、さらにセマグルチドにも及ばない。血中半減期を伸ばす効果を最大化するために、さま
ざまなペプチドリンカーが試されたが、この方法の問題は、免疫反応を引き起こす可能性
があることである。
チド－４またはその類似体をヒト血清アルブミンまたは免疫グロブリン領域（Ｆｃ）と組
み合わせることにより融合タンパク質を調製することが開示され、これによって、ポリエ
チレングリコール化の低収率や非特異性などの問題を解決できるが、血中半減期を延長す
る効果は、期待したほど大きくなく、総合的な血糖降下効果から、予期の効果に達成せず
、さらにセマグルチドにも及ばない。血中半減期を伸ばす効果を最大化するために、さま
ざまなペプチドリンカーが試されたが、この方法の問題は、免疫反応を引き起こす可能性
があることである。
【0014】
ＣＮ１０７０３３２３４Ａには、ＧＬＰ－１類似体の脂肪酸による修飾した複合体が開
示され、脂肪酸修飾部位はＬｙｓ26にあり、初期の動物実験から、血糖降下作用において
セマグルチドより優れていることが示されている。この方法は、ＧＬＰ－１類似体の生体
内の作用時間を適切に延ばすことができるが、延ばした時間はまだ理想的ではない。
示され、脂肪酸修飾部位はＬｙｓ26にあり、初期の動物実験から、血糖降下作用において
セマグルチドより優れていることが示されている。この方法は、ＧＬＰ－１類似体の生体
内の作用時間を適切に延ばすことができるが、延ばした時間はまだ理想的ではない。
【0015】
現在市場で承認されているＧＬＰ－１薬には、主にトカゲの唾液から分離されたエクセ
ナチド－４（Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ－４）；及び脂肪酸、抗体Ｆｃセグメント、または血清
アルブミンで修飾されたヒトＧＬＰ－１類似体がある。エクセナチド－４は半減期が短く
、２～４時間しかないため、１日に少なくとも２回の注射が必要である。ノボノルディス
ク社の脂肪酸修飾のリラグルチドは、ヘモグロビンのグリコシル化を減少させるのに最も
効果的であり、副作用が少ないが、その欠点として、生体内での半減期はわずか１３時間
であり、毎日の投与が必要である。生体内の半減期をさらに延ばして投与頻度を減らすた
めに、アミノ酸配列変異体とＦＣ、脂肪酸、またはアルブミンなどで修飾された長時間作
用型ＧＬＰ－１類似体が近年来開発されている。例えば、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ社のデュラ
グルチドやノボノルディスク社のセマグルチド（Ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）などがある。
これらの長時間作用型ＧＬＰ－１類似体は、人体における半減期が異なる程度で延ばされ
ることができ、長くとも週に１回の投与頻度を実現できる。
ナチド－４（Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ－４）；及び脂肪酸、抗体Ｆｃセグメント、または血清
アルブミンで修飾されたヒトＧＬＰ－１類似体がある。エクセナチド－４は半減期が短く
、２～４時間しかないため、１日に少なくとも２回の注射が必要である。ノボノルディス
ク社の脂肪酸修飾のリラグルチドは、ヘモグロビンのグリコシル化を減少させるのに最も
効果的であり、副作用が少ないが、その欠点として、生体内での半減期はわずか１３時間
であり、毎日の投与が必要である。生体内の半減期をさらに延ばして投与頻度を減らすた
めに、アミノ酸配列変異体とＦＣ、脂肪酸、またはアルブミンなどで修飾された長時間作
用型ＧＬＰ－１類似体が近年来開発されている。例えば、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ社のデュラ
グルチドやノボノルディスク社のセマグルチド（Ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）などがある。
これらの長時間作用型ＧＬＰ－１類似体は、人体における半減期が異なる程度で延ばされ
ることができ、長くとも週に１回の投与頻度を実現できる。
【0016】
本願の発明者らは長期間の研究を亘り、新しいＧＬＰ－１類似体及びその誘導体を開発
した。同じ実験条件下で、現在公認されている最も良い薬物セマグルチドと比較して、そ
のインビトロ活性はセマグルチドと同等である；正常なマウス及び糖尿病のマウスモデル
では、インビボでの血糖降下活性の持続時間は約１倍長くなることができる。これは、人
体内で少なくとも、１週間おきで投与する、さらに２週間おきでまたはより長い間隔で投
与するという投与頻度を達成できることを意味する。そして、投与量がセマグルチドの量
の１／１０である時でも、その血糖降下作用はセマグルチドのそれより低くなく、よりよ
い適用の見通しがある。
した。同じ実験条件下で、現在公認されている最も良い薬物セマグルチドと比較して、そ
のインビトロ活性はセマグルチドと同等である；正常なマウス及び糖尿病のマウスモデル
では、インビボでの血糖降下活性の持続時間は約１倍長くなることができる。これは、人
体内で少なくとも、１週間おきで投与する、さらに２週間おきでまたはより長い間隔で投
与するという投与頻度を達成できることを意味する。そして、投与量がセマグルチドの量
の１／１０である時でも、その血糖降下作用はセマグルチドのそれより低くなく、よりよ
い適用の見通しがある。
【発明の概要】
【0017】
本発明の目的は、新しいＧＬＰ－１（７－３７）類似体、その類似体のアシル化誘導体
を提供することにある。また、本発明はさらに、その類似体または誘導体の調製方法、そ
の類似体または誘導体を含む薬物組成物、製品、及び疾患の予防と治療におけるそれらの
使用を提供する。
を提供することにある。また、本発明はさらに、その類似体または誘導体の調製方法、そ
の類似体または誘導体を含む薬物組成物、製品、及び疾患の予防と治療におけるそれらの
使用を提供する。
【0018】
具体的には、一態様では、本発明はＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその
薬学上許容される塩を提供し、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、下記式で表される
アミノ酸配列を含み、
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり、
Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34はＲ
またはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ19、Ｘ23、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基
であり、
前記誘導体は、前記Ｋ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
であり、
ｘは４～３８の整数である。
薬学上許容される塩を提供し、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、下記式で表される
アミノ酸配列を含み、
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり、
Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34はＲ
またはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ19、Ｘ23、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基
であり、
前記誘導体は、前記Ｋ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
【化1】
ｘは４～３８の整数である。
【0019】
延長部分は好ましくは、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）14ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）15ＣＯ－、Ｈ
ＯＯＣ（ＣＨ2）16ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）17ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）18ＣＯ－、
ＨＯＯＣ（ＣＨ2）19ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）20ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）21ＣＯ－
、及びＨＯＯＣ（ＣＨ2）22ＣＯ－からなる群より選択され、より好ましくはＨＯＯＣ（
ＣＨ2）16ＣＯ－である。
ＯＯＣ（ＣＨ2）16ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）17ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）18ＣＯ－、
ＨＯＯＣ（ＣＨ2）19ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）20ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）21ＣＯ－
、及びＨＯＯＣ（ＣＨ2）22ＣＯ－からなる群より選択され、より好ましくはＨＯＯＣ（
ＣＨ2）16ＣＯ－である。
【0020】
好ましい実施形態では、本発明に記載のＧＬＰ－１類似体の誘導体またはその薬学上許
容される塩の延長部分は、リンカーを介してＧＬＰ－１のＫ残基に連結されている。前記
リンカーは、下記の構造であってもよい：
であり、式中、ｍは０、１、２または３であり；ｎは１、２または３であり；ｓは０～
６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である。
容される塩の延長部分は、リンカーを介してＧＬＰ－１のＫ残基に連結されている。前記
リンカーは、下記の構造であってもよい：
【化2】
６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である。
【0021】
好ましくは、リンカーは、
であり、
式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である
。
【化3】
式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である
。
【0022】
より好ましくは、前記リンカーは、
であり、式中、ｍは１であり、ｎは１または２である。
【化4】
【0023】
本発明はまた、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体にも係り、この類似体は、
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
配列を含み、この配列は、８位、１９位、２３位、２７位、３０位、３４位、３６位、及
び３７位からなる群より選択される１つ以上の部位の変異を含む。１つの好ましい実施形
態では、８位のアミノ酸残基は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、１９位のア
ミノ酸残基はＹまたはＫであり、２３位のアミノ酸残基はＱまたはＫであり、２７位のア
ミノ酸残基はＥまたはＫであり、３０位のアミノ酸残基はＡまたはＫであり、３４位のア
ミノ酸残基はＲまたはＫであり、３６位のアミノ酸残基はＲまたはＫであり、３７位のア
ミノ酸残基はＧまたはＫであり、ただし、１９位、２３位、２７位、３０位、３４位、３
６位または３７位のうちの１つのみがＫ残基である。
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
配列を含み、この配列は、８位、１９位、２３位、２７位、３０位、３４位、３６位、及
び３７位からなる群より選択される１つ以上の部位の変異を含む。１つの好ましい実施形
態では、８位のアミノ酸残基は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、１９位のア
ミノ酸残基はＹまたはＫであり、２３位のアミノ酸残基はＱまたはＫであり、２７位のア
ミノ酸残基はＥまたはＫであり、３０位のアミノ酸残基はＡまたはＫであり、３４位のア
ミノ酸残基はＲまたはＫであり、３６位のアミノ酸残基はＲまたはＫであり、３７位のア
ミノ酸残基はＧまたはＫであり、ただし、１９位、２３位、２７位、３０位、３４位、３
６位または３７位のうちの１つのみがＫ残基である。
【0024】
上記のＧＬＰ－１類似体のアシル化後の誘導体のインビトロ結合活性から明らかに、Ｇ
ＬＰ－１Ｒ受容体への結合親和性はセマグルチドまたはＭ０（２６位はＬｙｓであり、Ｃ
Ｎ１０７０３３２３４Ａに開示されている）のそれより大きいことが分かった。インビボ
血糖降下実験によっても、同じアシル化ＧＬＰ－１製品セマグルチドと比較して、上記の
ＧＬＰ－１類似体のアシル化後の誘導体は正常なマウスの体内でより長い血糖降下活性の
持続時間を得ることができる；糖尿病マウスの体内で、上記誘導体の血糖降下及び耐糖能
の改善における効果はセマグルチドよりも有意に優れており、しかも、投与量がセマグル
チドまたはＭ０の量の１／１０である時でも、その血糖降下作用もセマグルチドまたはＭ
０のそれより低くはないことを証明した。同時に、本発明の研究は、市販のセマグルチド
と比較して、上記のＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体のほうが酵素分解に対してよ
り優れた耐性を有することを証明している。
ＬＰ－１Ｒ受容体への結合親和性はセマグルチドまたはＭ０（２６位はＬｙｓであり、Ｃ
Ｎ１０７０３３２３４Ａに開示されている）のそれより大きいことが分かった。インビボ
血糖降下実験によっても、同じアシル化ＧＬＰ－１製品セマグルチドと比較して、上記の
ＧＬＰ－１類似体のアシル化後の誘導体は正常なマウスの体内でより長い血糖降下活性の
持続時間を得ることができる；糖尿病マウスの体内で、上記誘導体の血糖降下及び耐糖能
の改善における効果はセマグルチドよりも有意に優れており、しかも、投与量がセマグル
チドまたはＭ０の量の１／１０である時でも、その血糖降下作用もセマグルチドまたはＭ
０のそれより低くはないことを証明した。同時に、本発明の研究は、市販のセマグルチド
と比較して、上記のＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体のほうが酵素分解に対してよ
り優れた耐性を有することを証明している。
【0025】
具体的には、本発明は以下に係る：
１、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩であって、
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、下記式で表されるアミノ酸配列を含み、
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
、
式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり、
Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34はＲ
またはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ19、Ｘ23、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基
であり、
前記誘導体は、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み
、
前記延長部分は、
であり、
ｘは４～３８の整数である、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上
許容される塩。
２、前記延長部分は、
ＨＯＯＣ（ＣＨ2）14ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）15ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）16ＣＯ
－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）17ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）18ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）19Ｃ
Ｏ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）20ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）21ＣＯ－、及びＨＯＯＣ（ＣＨ2
）22ＣＯ－からなる群より選択される、請求項１に記載の誘導体またはその薬学上許容さ
れる塩。
３、前記延長部分は、リンカーを介してＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結
されている、請求項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
４、前記リンカーは、
であり、式中、ｍは０、１、２または３であり；ｎは１、２または３であり；ｓは０～
６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である。
好ましくは、リンカーは、
であり、
式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である
、請求項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
５、前記リンカーは、
であり、式中、ｍは１であり、ｎは１または２である、請求項４に記載の誘導体または
その薬学上許容される塩。
６、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプ
タデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］ア
セトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－
ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２
－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブ
チリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（
Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、Ｎ
－ε34－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノ
イルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミ
ド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26Ｌｙｓ34－ＧＬＰ－１
（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε37－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［
４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミ
ノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇ
ｌｕ22Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ37－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε23－
［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミ
ノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エト
キシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－
３７））ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（
１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エ
トキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22
Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε30－［２
－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）
－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ
］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７
））ペプチド（Ｍ１４）からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学
上許容される塩である、請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許
容される塩。
７、（１）上記請求項のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液
と、上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液とを混合すること
；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を
採取すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調
製する方法。
８、上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液と混合する前に
、ＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液にトリエチルアミンを加えることをさらに含む
、請求項７に記載の方法。
９、上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分の溶液が、アセトニトリルで溶解され
たものである、請求項７または８に記載の方法。
１０、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩、及
び薬学上許容される補助材料を含む、薬物組成物。
１１、糖尿病（１型糖尿病と２型糖尿病を含む）または糖尿病合併症を予防及び／また
は治療するための薬物の調製における、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体また
はその薬学上許容される塩の使用。
１２、前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、請求項１１に記載の使用。
１３、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機
能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復の
ための薬物の調製における、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学
上許容される塩の使用。
１４、前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、
請求項１３に記載の使用。
１５、被験者に予防または治療有効量の請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体ま
たはその薬学上許容される塩を投与することを含む、糖尿病（１型糖尿病と２型糖尿病を
含む）または糖尿病合併症を予防及び／または治療するための方法。
１６、前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、請求項１５に記載の方法。
１７、被験者に治療有効量の請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬
学上許容される塩を投与することを含む、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポ
トーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－
細胞のグルコース感受性の回復のための方法。
１８、前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、
請求項１７に記載の方法。
１９、下記式で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－
３７）類似体。
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり、
Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34はＲ
またはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、しかも、Ｘ19、Ｘ
23、Ｘ26、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基である。
２０、請求項１９の類似体を含む薬物組成物。
２１、糖尿病、糖尿病合併症を予防及び／または治療するための薬物の調製における、
請求項１９に記載の類似体の使用。
２２、請求項１０または請求項２０に記載の薬物組成物を含む容器と、前記薬物組成物
のプロトコルを含む添付文書とを含む、製品。
２３、１つ以上の他の薬物を含む容器をさらに含む、請求項２２に記載の製品。
２４、前記１つ以上の他の薬物が、糖尿病または糖尿病合併症を治療するための他の薬
物である、請求項２３に記載の製品。
１、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩であって、
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、下記式で表されるアミノ酸配列を含み、
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
、
式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり、
Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34はＲ
またはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ19、Ｘ23、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基
であり、
前記誘導体は、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み
、
前記延長部分は、
【化5】
ｘは４～３８の整数である、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上
許容される塩。
２、前記延長部分は、
ＨＯＯＣ（ＣＨ2）14ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）15ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）16ＣＯ
－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）17ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）18ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）19Ｃ
Ｏ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）20ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ2）21ＣＯ－、及びＨＯＯＣ（ＣＨ2
）22ＣＯ－からなる群より選択される、請求項１に記載の誘導体またはその薬学上許容さ
れる塩。
３、前記延長部分は、リンカーを介してＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結
されている、請求項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
４、前記リンカーは、
【化6】
６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である。
好ましくは、リンカーは、
【化7】
式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である
、請求項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
５、前記リンカーは、
【化8】
その薬学上許容される塩。
６、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプ
タデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］ア
セトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－
ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２
－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブ
チリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（
Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、Ｎ
－ε34－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノ
イルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミ
ド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26Ｌｙｓ34－ＧＬＰ－１
（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε37－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［
４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミ
ノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇ
ｌｕ22Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ37－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε23－
［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミ
ノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エト
キシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－
３７））ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（
１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エ
トキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22
Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε30－［２
－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）
－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ
］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７
））ペプチド（Ｍ１４）からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学
上許容される塩である、請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許
容される塩。
７、（１）上記請求項のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液
と、上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液とを混合すること
；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を
採取すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調
製する方法。
８、上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液と混合する前に
、ＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液にトリエチルアミンを加えることをさらに含む
、請求項７に記載の方法。
９、上記請求項のいずれか一項に記載の延長部分の溶液が、アセトニトリルで溶解され
たものである、請求項７または８に記載の方法。
１０、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩、及
び薬学上許容される補助材料を含む、薬物組成物。
１１、糖尿病（１型糖尿病と２型糖尿病を含む）または糖尿病合併症を予防及び／また
は治療するための薬物の調製における、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体また
はその薬学上許容される塩の使用。
１２、前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、請求項１１に記載の使用。
１３、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機
能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復の
ための薬物の調製における、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学
上許容される塩の使用。
１４、前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、
請求項１３に記載の使用。
１５、被験者に予防または治療有効量の請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体ま
たはその薬学上許容される塩を投与することを含む、糖尿病（１型糖尿病と２型糖尿病を
含む）または糖尿病合併症を予防及び／または治療するための方法。
１６、前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、請求項１５に記載の方法。
１７、被験者に治療有効量の請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬
学上許容される塩を投与することを含む、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポ
トーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－
細胞のグルコース感受性の回復のための方法。
１８、前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、
請求項１７に記載の方法。
１９、下記式で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－
３７）類似体。
ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬＶＸ34ＧＸ36Ｘ37
式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり、
Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫであり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34はＲ
またはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、Ｘ37はＧまたはＫであり、しかも、Ｘ19、Ｘ
23、Ｘ26、Ｘ27、Ｘ30、Ｘ34、Ｘ36、またはＸ37のうちの１つのみがＫ残基である。
２０、請求項１９の類似体を含む薬物組成物。
２１、糖尿病、糖尿病合併症を予防及び／または治療するための薬物の調製における、
請求項１９に記載の類似体の使用。
２２、請求項１０または請求項２０に記載の薬物組成物を含む容器と、前記薬物組成物
のプロトコルを含む添付文書とを含む、製品。
２３、１つ以上の他の薬物を含む容器をさらに含む、請求項２２に記載の製品。
２４、前記１つ以上の他の薬物が、糖尿病または糖尿病合併症を治療するための他の薬
物である、請求項２３に記載の製品。
【0026】
「空腹時血糖」とは、被験者（例えば、ヒト）が空腹時で測定された血糖値をいい、例
えば、一晩の空腹、６～８時間、８～１０時間など、少なくとも６時間の禁食（飲料水以
外は何も食べず）後に測定された血糖値をいう。
えば、一晩の空腹、６～８時間、８～１０時間など、少なくとも６時間の禁食（飲料水以
外は何も食べず）後に測定された血糖値をいう。
【0027】
「食後血糖」とは、食事後に測定された血糖値をいい、例えば、食事後１５分間から２
時間、３０分間から２時間、１時間から２時間、２時間に測定された血糖値をいう。
時間、３０分間から２時間、１時間から２時間、２時間に測定された血糖値をいう。
【0028】
本発明の一態様は、ペプチド発現を可能にする条件下で宿主細胞においてポリペプチド
をコードするＤＮＡ配列を発現させ、生じたペプチドを回収することを含む、ＧＬＰ－１
（７－３７）類似体の調製方法に係る。
をコードするＤＮＡ配列を発現させ、生じたペプチドを回収することを含む、ＧＬＰ－１
（７－３７）類似体の調製方法に係る。
【0029】
細胞を培養するために使用される培地は、宿主細胞を培養するために使用される任意の
従来の培地、例えば、最小培地または適切な添加剤を含む複合培地であってもよい。適切
な培地は、商業的に入手するか、或いは開示された調製方法に従って調製することができ
る。そして、宿主細胞によって生じたポリペプチドを従来の方法で培地から回収でき、例
えば、硫酸アンモニウムなどの塩を使用して上清または濾液中のタンパク質成分を沈澱さ
せ、目的のペプチドの種類に応じて、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマト
グラフィー、アフィニティークロマトグラフィーなど、さまざまなクロマトグラフィーを
選択できる。
従来の培地、例えば、最小培地または適切な添加剤を含む複合培地であってもよい。適切
な培地は、商業的に入手するか、或いは開示された調製方法に従って調製することができ
る。そして、宿主細胞によって生じたポリペプチドを従来の方法で培地から回収でき、例
えば、硫酸アンモニウムなどの塩を使用して上清または濾液中のタンパク質成分を沈澱さ
せ、目的のペプチドの種類に応じて、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマト
グラフィー、アフィニティークロマトグラフィーなど、さまざまなクロマトグラフィーを
選択できる。
【0030】
上記のコーディングＤＮＡ配列を任意の適切なベクターに挿入することができる。一般
に、ベクターの選択は、ベクターが導入される宿主細胞によって決められることが多いた
め、ベクターは、その複製がプラスミドなどの染色体複製に依存しない自律複製ベクター
、すなわち、染色体外実体として存在するベクターであってもよい。あるいは、ベクター
は、宿主細胞に導入されると、宿主細胞ゲノムに組み込まれ、それが組み込まれた染色体
と共に複製されるようなタイプであってもよい。
に、ベクターの選択は、ベクターが導入される宿主細胞によって決められることが多いた
め、ベクターは、その複製がプラスミドなどの染色体複製に依存しない自律複製ベクター
、すなわち、染色体外実体として存在するベクターであってもよい。あるいは、ベクター
は、宿主細胞に導入されると、宿主細胞ゲノムに組み込まれ、それが組み込まれた染色体
と共に複製されるようなタイプであってもよい。
【0031】
ベクターは好ましくは、前記ペプチドをコードするＤＮＡ配列が当該ＤＮＡの転写に必
要な他のセグメント（例えば、プロモーター）に効果的に連結されている発現ベクターで
ある。複数の宿主細胞において本発明のペプチドをコードするＤＮＡの転写を指導するの
に適するプロモーターの例は、本分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ，Ｆ
ｒｉｔｓｃｈ，ＥＦとＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照できる。
要な他のセグメント（例えば、プロモーター）に効果的に連結されている発現ベクターで
ある。複数の宿主細胞において本発明のペプチドをコードするＤＮＡの転写を指導するの
に適するプロモーターの例は、本分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ，Ｆ
ｒｉｔｓｃｈ，ＥＦとＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照できる。
【0032】
ベクターはまた、その遺伝子産物が宿主細胞内の欠損を補う、または、アンピシリン、
ドキソルビシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ストレプト
マイシン、またはメトトレキサートなどの薬物への耐性を付与できるような遺伝子である
選択マーカーを含んでもよい。
ドキソルビシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ストレプト
マイシン、またはメトトレキサートなどの薬物への耐性を付与できるような遺伝子である
選択マーカーを含んでもよい。
【0033】
本発明により発現されるペプチドを宿主細胞の分泌経路に導入するために、分泌シグナ
ル配列（リーダー配列とも呼ばれる）を組換えベクターに提供することができる。分泌シ
グナル配列は、正しいリーディングフレームで当該ペプチドをコードするＤＮＡ配列に連
結される。分泌シグナル配列は通常、当該ペプチドをコードするＤＮＡ配列の５’側にあ
る。分泌シグナル配列は、ペプチドに正常に連結する分泌シグナル配列であってもよく、
または、別の分泌タンパク質をコードする遺伝子に由来してもよい。
ル配列（リーダー配列とも呼ばれる）を組換えベクターに提供することができる。分泌シ
グナル配列は、正しいリーディングフレームで当該ペプチドをコードするＤＮＡ配列に連
結される。分泌シグナル配列は通常、当該ペプチドをコードするＤＮＡ配列の５’側にあ
る。分泌シグナル配列は、ペプチドに正常に連結する分泌シグナル配列であってもよく、
または、別の分泌タンパク質をコードする遺伝子に由来してもよい。
【0034】
本発明のペプチドをコードするＤＮＡ配列、プロモーター、及び選択してもよいターミ
ネーターおよび／または分泌シグナル配列をそれぞれに連結し、複製に必要な情報を含む
適切なベクターに挿入する方法は、当業者にとって既知である。
ネーターおよび／または分泌シグナル配列をそれぞれに連結し、複製に必要な情報を含む
適切なベクターに挿入する方法は、当業者にとって既知である。
【0035】
ＤＮＡ配列または組換えベクターが導入された宿主細胞は、細菌、酵母、真菌、および
高等真核細胞を含む、本発明のペプチドを産生できる任意の細胞であってもよい。当業者
に知られており、しかも使用されている適切な宿主細胞の例として、大腸菌、サッカロミ
セス・セレビシエ、または哺乳動物のＢＨＫまたはＣＨＯ細胞株が含まれるが、これらに
限られていない。
高等真核細胞を含む、本発明のペプチドを産生できる任意の細胞であってもよい。当業者
に知られており、しかも使用されている適切な宿主細胞の例として、大腸菌、サッカロミ
セス・セレビシエ、または哺乳動物のＢＨＫまたはＣＨＯ細胞株が含まれるが、これらに
限られていない。
【0036】
本発明は、上記のＧＬＰ－１（７－３７）類似体を含む薬物または薬物組成物に係り、
また、薬物の調製における当該類似体の使用、例えば、糖尿病（好ましくは２型糖尿病）
、糖尿病合併症（例えば、糖尿病腎症、糖尿病性心疾患）の予防または治療、血糖降下ま
たは耐糖能を改善するための薬物の調製における使用に係る。
また、薬物の調製における当該類似体の使用、例えば、糖尿病（好ましくは２型糖尿病）
、糖尿病合併症（例えば、糖尿病腎症、糖尿病性心疾患）の予防または治療、血糖降下ま
たは耐糖能を改善するための薬物の調製における使用に係る。
【0037】
別の態様において、本発明はまた、上記のＧＬＰ－１（７－３７）類似体または上記Ｇ
ＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体を被験者に投与することによって糖尿病（例えば、
Ｉ型およびＩＩ型糖尿病）、糖尿病合併症（例えば、糖尿病性血管疾患、糖尿病性神経障
害、糖尿病性眼疾患、糖尿病腎症、糖尿病性心疾患）を予防または治療する、血糖降下（
例えば、空腹時血糖や食後血糖値）または耐糖能を改善する方法にも係る。さらに別の態
様において、本発明は、糖尿病（例えば、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病）、糖尿病合併症（例
えば、糖尿病性血管疾患、糖尿病性神経障害、糖尿病性眼疾患、糖尿病腎症、糖尿病性心
疾患）を予防または治療する、血糖降下または耐糖能を改善するための薬物の調製におけ
る、上記のＧＬＰ－１（７－３７）類似体または上記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘
導体の使用にも係る。
ＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体を被験者に投与することによって糖尿病（例えば、
Ｉ型およびＩＩ型糖尿病）、糖尿病合併症（例えば、糖尿病性血管疾患、糖尿病性神経障
害、糖尿病性眼疾患、糖尿病腎症、糖尿病性心疾患）を予防または治療する、血糖降下（
例えば、空腹時血糖や食後血糖値）または耐糖能を改善する方法にも係る。さらに別の態
様において、本発明は、糖尿病（例えば、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病）、糖尿病合併症（例
えば、糖尿病性血管疾患、糖尿病性神経障害、糖尿病性眼疾患、糖尿病腎症、糖尿病性心
疾患）を予防または治療する、血糖降下または耐糖能を改善するための薬物の調製におけ
る、上記のＧＬＰ－１（７－３７）類似体または上記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘
導体の使用にも係る。
【0038】
別の態様において、本発明は、上記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体を含む薬物組成物、
製品またはキットに係る。
製品またはキットに係る。
【0039】
本発明はさらに、上記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体を含む薬物組成物、製品
またはキットに係る。
またはキットに係る。
【0040】
本発明に記載の薬物組成物は、活性成分ＧＬＰ－１（７－３７）類似体またはＧＬＰ－
１（７－３７）類似体の誘導体またはその塩を含む他、その薬学上許容される補助材料を
も含む。当業者に知られている薬学上許容される補助材料として、例えば、非毒性の充填
剤、安定剤、希釈剤、担体、溶媒または他の調製補助材料が挙げられる。例えば、微結晶
性セルロース、マンニトールなどの希釈剤や賦形剤；デンプン、スクロースなどの充填剤
；デンプン、セルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチンおよび／またはポリビニルピロ
リドンなどの結合剤；炭酸カルシウムおよび／または重炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；第
四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；セチルアルコールなどの界面活性剤；水、生
理食塩水、カオリン、ベントナイトなどの担体や溶媒；タルク、ステアリン酸カルシウム
／マグネシウム、ポリエチレングリコールなどの滑剤が挙げられる。また、本発明の薬物
組成物は注射剤であることが好ましい。
１（７－３７）類似体の誘導体またはその塩を含む他、その薬学上許容される補助材料を
も含む。当業者に知られている薬学上許容される補助材料として、例えば、非毒性の充填
剤、安定剤、希釈剤、担体、溶媒または他の調製補助材料が挙げられる。例えば、微結晶
性セルロース、マンニトールなどの希釈剤や賦形剤；デンプン、スクロースなどの充填剤
；デンプン、セルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチンおよび／またはポリビニルピロ
リドンなどの結合剤；炭酸カルシウムおよび／または重炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；第
四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；セチルアルコールなどの界面活性剤；水、生
理食塩水、カオリン、ベントナイトなどの担体や溶媒；タルク、ステアリン酸カルシウム
／マグネシウム、ポリエチレングリコールなどの滑剤が挙げられる。また、本発明の薬物
組成物は注射剤であることが好ましい。
【0041】
本発明はまた、上記の類似体、誘導体、または薬物、薬物組成物を、それを必要とする
被験者に投与することを含む、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増
強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための
方法に係る。
被験者に投与することを含む、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増
強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための
方法に係る。
【0042】
本発明はさらに、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β
－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための薬物の調製
における、上記の類似体、誘導体、または薬物、薬物組成物の使用に係る。
－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための薬物の調製
における、上記の類似体、誘導体、または薬物、薬物組成物の使用に係る。
【0043】
本発明において、ＧＬＰ－１（７－３７）ポリペプチド、ＧＬＰ－１（７－３７）ポリ
ペプチド類似体、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は置き換えて使用することができ、いず
れもアミノ酸配列：ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬ
ＶＸ34ＧＸ36Ｘ37を含むポリペプチドを表し、式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、Ｇまたは
Ｓから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり、Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫ
であり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34はＲまたはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、
Ｘ37はＧまたはＫである。このＧＬＰ－１（７－３７）ポリペプチド類似体は、延長部分
と連結することによって、ＧＬＰ－１（７－３７）ポリペプチド類似体の誘導体を形成す
る。具体的には、本発明は、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のアシル化誘導体に係る。こ
のアシル化誘導体は顕著な治療効果を有するだけではなく、現在公認されている最も良い
薬物セマグルチドと比較して、そのインビボでの活性の持続時間は約１倍長くなることが
できる。これは、人体内で少なくとも、１週間おきで投与する、さらに２週間おきでまた
はより長い間隔で投与するという投与頻度を達成できることを意味する。
ペプチド類似体、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は置き換えて使用することができ、いず
れもアミノ酸配列：ＨＸ8ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ19ＬＥＥＸ23ＡＡＲＸ27ＦＩＸ30ＷＬ
ＶＸ34ＧＸ36Ｘ37を含むポリペプチドを表し、式中、Ｘ8は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、Ｇまたは
Ｓから選択され、Ｘ19はＹまたはＫであり、Ｘ23はＱまたはＫであり、Ｘ27はＥまたはＫ
であり、Ｘ30はＡまたはＫであり、Ｘ34はＲまたはＫであり、Ｘ36はＲまたはＫであり、
Ｘ37はＧまたはＫである。このＧＬＰ－１（７－３７）ポリペプチド類似体は、延長部分
と連結することによって、ＧＬＰ－１（７－３７）ポリペプチド類似体の誘導体を形成す
る。具体的には、本発明は、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のアシル化誘導体に係る。こ
のアシル化誘導体は顕著な治療効果を有するだけではなく、現在公認されている最も良い
薬物セマグルチドと比較して、そのインビボでの活性の持続時間は約１倍長くなることが
できる。これは、人体内で少なくとも、１週間おきで投与する、さらに２週間おきでまた
はより長い間隔で投与するという投与頻度を達成できることを意味する。
【0044】
本発明のＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のア
シル化誘導体、ＧＬＰ－１（７－３７）誘導体、ＧＬＰ－１誘導体は置き換えて使用する
ことができる。
シル化誘導体、ＧＬＰ－１（７－３７）誘導体、ＧＬＰ－１誘導体は置き換えて使用する
ことができる。
【0045】
別の態様において、本発明は、
（１）上記のＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液と、延長部分（例えば、脂肪酸）
が溶解されている溶液とを混合すること；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を
採取すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、上記の誘導体またはその薬学上許容される塩を調製する方法に係る。
（１）上記のＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液と、延長部分（例えば、脂肪酸）
が溶解されている溶液とを混合すること；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を
採取すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、上記の誘導体またはその薬学上許容される塩を調製する方法に係る。
【0046】
一つの好ましい実施形態では、上記方法は、ＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液に
トリエチルアミンを加えることを含む。
トリエチルアミンを加えることを含む。
【0047】
一つの好ましい実施形態では、上記延長部分（例えば、脂肪酸）の溶液が、アセトニト
リルで溶解されたものである。
リルで溶解されたものである。
【0048】
本発明の例示的な調製方法は、（１）ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の溶液を提供し、
ｐＨを９～１２に調整すること；
（２）そして、工程（１）で得られた溶液にトリエチルアミンを添加すること；
（３）下記構造を有する脂肪酸を、ＧＬＰ－１類似体の量（モル比）の２倍以上、好ま
しくはＧＬＰ－１類似体の量の３倍以上の量を量り、アセトニトリルに溶解すること；
（４）工程（２）で得られたＧＬＰ－１類似体溶液を工程（３）で得られた脂肪酸溶液
と混合し、低温で静置し、例えば、１時間静置すること；
（５）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、低温で静置して沈殿を起こさせて沈殿
を採取すること；
（６）ポリペプチドの最終濃度が５～１５ｍｇ／ｍｌになるように、工程（５）で得ら
れた酸沈澱サンプルにＴＦＡを加え、０．５～２時間静置した後、ＮａＯＨなどのアルカ
リ性溶液を反応液に滴加し、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること；
（７）得られた生成物を分離精製することを含む。
ｐＨを９～１２に調整すること；
（２）そして、工程（１）で得られた溶液にトリエチルアミンを添加すること；
（３）下記構造を有する脂肪酸を、ＧＬＰ－１類似体の量（モル比）の２倍以上、好ま
しくはＧＬＰ－１類似体の量の３倍以上の量を量り、アセトニトリルに溶解すること；
【化9】
と混合し、低温で静置し、例えば、１時間静置すること；
（５）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、低温で静置して沈殿を起こさせて沈殿
を採取すること；
（６）ポリペプチドの最終濃度が５～１５ｍｇ／ｍｌになるように、工程（５）で得ら
れた酸沈澱サンプルにＴＦＡを加え、０．５～２時間静置した後、ＮａＯＨなどのアルカ
リ性溶液を反応液に滴加し、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること；
（７）得られた生成物を分離精製することを含む。
【0049】
本発明は、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩を含
む薬物組成物の製剤に係る。一部の実施形態では、本発明のＧＬＰ－１（７－３７）類似
体の誘導体またはその薬学上許容される塩は、０．１ｍｇ／ｍｌ～２５ｍｇ／ｍｌの濃度
で存在し、好ましくは０．１ｍｇ／ｍｌ～１０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。好まし
い実施形態では、前記薬物組成物は３．０～９．０のｐＨを有する。好ましい実施形態で
は、前記薬物組成物はさらに、緩衝系、防腐剤、表面張力剤、キレート剤、安定剤、及び
界面活性剤を含んでもよい。一部の実施形態では、本発明に記載の薬物または製剤は、水
性薬物または製剤であり、例えば、通常は溶液または懸濁液であり得る。本発明の具体的
な実施形態では、薬物または製剤は安定した含水溶液である。本発明の別の一部の具体的
な実施形態では、薬物または製剤は凍結乾燥製剤であり、使用前に溶媒および／または希
釈剤が添加される。
む薬物組成物の製剤に係る。一部の実施形態では、本発明のＧＬＰ－１（７－３７）類似
体の誘導体またはその薬学上許容される塩は、０．１ｍｇ／ｍｌ～２５ｍｇ／ｍｌの濃度
で存在し、好ましくは０．１ｍｇ／ｍｌ～１０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。好まし
い実施形態では、前記薬物組成物は３．０～９．０のｐＨを有する。好ましい実施形態で
は、前記薬物組成物はさらに、緩衝系、防腐剤、表面張力剤、キレート剤、安定剤、及び
界面活性剤を含んでもよい。一部の実施形態では、本発明に記載の薬物または製剤は、水
性薬物または製剤であり、例えば、通常は溶液または懸濁液であり得る。本発明の具体的
な実施形態では、薬物または製剤は安定した含水溶液である。本発明の別の一部の具体的
な実施形態では、薬物または製剤は凍結乾燥製剤であり、使用前に溶媒および／または希
釈剤が添加される。
【0050】
本発明はまた、上記の薬物組成物、製剤、薬物を含むキットまたは試薬キットに係る。
そのキットまたは試薬キットには、上記の薬物または製剤が含まれる他、薬物組成物、製
剤、薬物と組み合わせて使用する他の薬物、薬物化合物または組成物が含まれてもよく、
例えば、前記その他の薬物、薬物化合物または組成物は、抗糖尿病薬、糖尿病によって引
き起こされるまたは糖尿病に関連する合併症を治療および／または予防するための薬物か
ら選択することができる。これらの薬物の実例として、インスリン、スルホニル尿素、ビ
グアナイド、メグリチニド、グルコシダーゼ阻害剤、グルカゴン拮抗剤、糖新生および/
またはグリコーゲン分解の刺激に係る肝酵素の阻害剤、グルコース摂取調節剤、ＮＰＹア
ンタゴニスト、ＰＹＹアゴニスト、ＰＹＹ２アゴニスト、ＰＹＹ４アゴニスト、ＴＮＦア
ゴニスト、コルチコトロピン放出因子アゴニスト、５ＨＴ、ボンベシンアゴニスト、ガン
グリオインアンタゴニスト、成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニスト
、ＴＲβアゴニスト、ヒスタミンＨ３アンタゴニスト、リパーゼ/アミラーゼ阻害剤、胃
抑制性ポリペプチドアゴニストまたはアンタゴニスト、ガストリンおよびガストリン類似
体などが挙げられる。一部の実施形態では、本発明に記載の薬物組成物、製剤、薬物と、
その他の薬物、薬物化合物または組成物とは、それぞれ異なる容器に入れられる。
そのキットまたは試薬キットには、上記の薬物または製剤が含まれる他、薬物組成物、製
剤、薬物と組み合わせて使用する他の薬物、薬物化合物または組成物が含まれてもよく、
例えば、前記その他の薬物、薬物化合物または組成物は、抗糖尿病薬、糖尿病によって引
き起こされるまたは糖尿病に関連する合併症を治療および／または予防するための薬物か
ら選択することができる。これらの薬物の実例として、インスリン、スルホニル尿素、ビ
グアナイド、メグリチニド、グルコシダーゼ阻害剤、グルカゴン拮抗剤、糖新生および/
またはグリコーゲン分解の刺激に係る肝酵素の阻害剤、グルコース摂取調節剤、ＮＰＹア
ンタゴニスト、ＰＹＹアゴニスト、ＰＹＹ２アゴニスト、ＰＹＹ４アゴニスト、ＴＮＦア
ゴニスト、コルチコトロピン放出因子アゴニスト、５ＨＴ、ボンベシンアゴニスト、ガン
グリオインアンタゴニスト、成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニスト
、ＴＲβアゴニスト、ヒスタミンＨ３アンタゴニスト、リパーゼ/アミラーゼ阻害剤、胃
抑制性ポリペプチドアゴニストまたはアンタゴニスト、ガストリンおよびガストリン類似
体などが挙げられる。一部の実施形態では、本発明に記載の薬物組成物、製剤、薬物と、
その他の薬物、薬物化合物または組成物とは、それぞれ異なる容器に入れられる。
【0051】
本発明はまた、上記の類似体、誘導体、または薬物、薬物組成物をそれを必要とする被
験者に投与することを含む、糖尿病（例えば、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病）、糖尿病合併症
（例えば、糖尿病性血管疾患、糖尿病性神経障害、糖尿病性眼疾患、糖尿病腎症、糖尿病
性心疾患）を予防または治療する、血糖（例えば、空腹時血糖や食後血糖値）を降下する
方法にも係り、前記類似体、誘導体、または薬物、薬物組成物は、その他の薬物、薬物化
合物または組成物と組み合わせて使用し、例えば、その他の薬物、薬物化合物または組成
物は、抗糖尿病薬、糖尿病によって引き起こされるまたは糖尿病に関連する合併症を治療
および／または予防するための薬物から選択することができる。これらの薬物の実例とし
て、インスリン、スルホニル尿素、ビグアナイド、メグリチニド、グルコシダーゼ阻害剤
、グルカゴン拮抗剤、糖新生および/またはグリコーゲン分解の刺激に係る肝酵素の阻害
剤、グルコース摂取調節剤、ＣＡＲＴアゴニスト、ＮＰＹアンタゴニスト、ＰＹＹアゴニ
スト、ＰＹＹ２アゴニスト、ＰＹＹ４アゴニスト、ＴＮＦアゴニスト、コルチコトロピン
放出因子アゴニスト、５ＨＴ、ボンベシンアゴニスト、ガングリオインアンタゴニスト、
成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニスト、ＴＲβアゴニスト、ヒスタ
ミンＨ３アンタゴニスト、リパーゼ/アミラーゼ阻害剤、胃抑制性ポリペプチドアゴニス
トまたはアンタゴニスト、ガストリンおよびガストリン類似体などが挙げられる。好まし
い実施形態では、前記糖尿病は２型糖尿病または糖尿病腎症である。
験者に投与することを含む、糖尿病（例えば、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病）、糖尿病合併症
（例えば、糖尿病性血管疾患、糖尿病性神経障害、糖尿病性眼疾患、糖尿病腎症、糖尿病
性心疾患）を予防または治療する、血糖（例えば、空腹時血糖や食後血糖値）を降下する
方法にも係り、前記類似体、誘導体、または薬物、薬物組成物は、その他の薬物、薬物化
合物または組成物と組み合わせて使用し、例えば、その他の薬物、薬物化合物または組成
物は、抗糖尿病薬、糖尿病によって引き起こされるまたは糖尿病に関連する合併症を治療
および／または予防するための薬物から選択することができる。これらの薬物の実例とし
て、インスリン、スルホニル尿素、ビグアナイド、メグリチニド、グルコシダーゼ阻害剤
、グルカゴン拮抗剤、糖新生および/またはグリコーゲン分解の刺激に係る肝酵素の阻害
剤、グルコース摂取調節剤、ＣＡＲＴアゴニスト、ＮＰＹアンタゴニスト、ＰＹＹアゴニ
スト、ＰＹＹ２アゴニスト、ＰＹＹ４アゴニスト、ＴＮＦアゴニスト、コルチコトロピン
放出因子アゴニスト、５ＨＴ、ボンベシンアゴニスト、ガングリオインアンタゴニスト、
成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニスト、ＴＲβアゴニスト、ヒスタ
ミンＨ３アンタゴニスト、リパーゼ/アミラーゼ阻害剤、胃抑制性ポリペプチドアゴニス
トまたはアンタゴニスト、ガストリンおよびガストリン類似体などが挙げられる。好まし
い実施形態では、前記糖尿病は２型糖尿病または糖尿病腎症である。
【0052】
本発明でいう「糖尿病合併症」とは、肝臓、腎臓、心臓、網膜、神経系の損傷や機能障
害などを含む、糖尿病時の血糖コントロール不良により引き起こされる体の他の臓器や組
織の損傷または機能障害性疾患をいう。糖尿病の合併症は次の５つに分けられる：１、心
血管疾患：糖尿病患者の主な主因である、心臓および大血管上の微小血管疾患、心筋症、
心臓自律神経障害を含む。２、脳血管疾患：主に脳動脈硬化症、虚血性脳血管疾患、脳出
血、脳萎縮などとして現れる、糖尿病によって引き起こされる頭蓋内大血管および微小血
管疾患を指す。３、腎血管疾患：主に糖尿病腎症として現れ、糖尿病患者の最も重要な合
併症の一つである。４、下肢動脈疾患：主に糖尿病足として現れる。５、眼底微小血管疾
患：主に糖尿病性網膜症として現れる。
害などを含む、糖尿病時の血糖コントロール不良により引き起こされる体の他の臓器や組
織の損傷または機能障害性疾患をいう。糖尿病の合併症は次の５つに分けられる：１、心
血管疾患：糖尿病患者の主な主因である、心臓および大血管上の微小血管疾患、心筋症、
心臓自律神経障害を含む。２、脳血管疾患：主に脳動脈硬化症、虚血性脳血管疾患、脳出
血、脳萎縮などとして現れる、糖尿病によって引き起こされる頭蓋内大血管および微小血
管疾患を指す。３、腎血管疾患：主に糖尿病腎症として現れ、糖尿病患者の最も重要な合
併症の一つである。４、下肢動脈疾患：主に糖尿病足として現れる。５、眼底微小血管疾
患：主に糖尿病性網膜症として現れる。
【0053】
本発明について以下の実施例を用いてさらに説明するが、下記の実施例は、本特許の保
護範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。上記の説明および以下の実施例に
開示された特徴（個々におよびそれらの任意の組み合わせ）は、本発明を基本的に異なる
形態で実施するために用いられる材料であってもよく、任意に組み合わせることができる
。また、本発明は公開文献を引用しているが、これらの文献は、本発明をより明確に説明
するためのものであり、それらの全文内容は、本文で繰り返して説明したように、参照と
して本文に組み込まれる。
護範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。上記の説明および以下の実施例に
開示された特徴（個々におよびそれらの任意の組み合わせ）は、本発明を基本的に異なる
形態で実施するために用いられる材料であってもよく、任意に組み合わせることができる
。また、本発明は公開文献を引用しているが、これらの文献は、本発明をより明確に説明
するためのものであり、それらの全文内容は、本文で繰り返して説明したように、参照と
して本文に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【0054】
【図1】ＩＩ型糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスに対する異なるアシル化ＧＬＰ－１誘導体分子の血糖降下作用を示す図である。
【図2】糖尿病マウスの空腹時血糖に対する、異なる用量のＭ０、Ｍ４およびセマグルチドの影響を示す傾向グラフである。
【図3】糖尿病マウスのランダムな血糖に対する、異なる用量のＭ０、Ｍ４およびセマグルチドの影響を示す図である。
【図4】糖尿病マウスの血糖曲線下面積に対する、異なる用量のＭ０、Ｍ４およびセマグルチドの影響を示す図である。
【図5】ペプシン分解に対するＭ４およびセマグルチド分子の耐性を示す傾向グラフである。
【図6】トリプシン分解に対するＭ４およびセマグルチド分子の耐性を示す傾向グラフである。
【0055】
［実施例］
以下、具体的な実施例を使用して本発明を説明する。特に明記しない限り、当業者によ
く知られている『Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍ
ａｎｕａｌ』、『Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ』などの実験マ
ニュアルおよびＣＦＤＡの実験ガイドラインなどに記載されている方法に従って実施する
ことができる。その中で使用される試薬原料はすべて市販品であり、オープンチャネルで
購入できる。
以下、具体的な実施例を使用して本発明を説明する。特に明記しない限り、当業者によ
く知られている『Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍ
ａｎｕａｌ』、『Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ』などの実験マ
ニュアルおよびＣＦＤＡの実験ガイドラインなどに記載されている方法に従って実施する
ことができる。その中で使用される試薬原料はすべて市販品であり、オープンチャネルで
購入できる。
【0056】
実施例１ ＧＬＰ－１類似体発現プラスミドの構築
Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）のＤＮＡの構築
６－Ｈｉｓタグ、ＳＵＭＯタグ、およびＶａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ
－１（７－３７）をコードする遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）を順に融合し、化
学合成により遺伝子断片（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）を得た。ＢａｍＨＩとＸｈｏＩ部
位を介して、上記断片を原核生物発現プラスミドｐＥＴ－２４（＋）に挿入してシーケン
シングによって検証した。得られた形質転換アッセイのための発現プラスミドは、ｐＥＴ
－２４（＋）－Ｈｉｓ－ＳＵＭＯ－Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（
７－３７）と呼ばれる。
上記の方法に従って、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ26Ａｒｇ34－ＧＬＰ－１（７－３７）（
コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬ
Ｐ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌ
ｙｓ19Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ27Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ34Ａｒｇ26－ＧＬＰ－１（７－３７）
（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ36－
ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ2
2Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ37－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
１７）、Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子
はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７
－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｌｅｕ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒ
ｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｇｌ
ｙ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２６）、Ｓｅｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コ
ード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬ
Ｐ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌ
ｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
２）、Ｌｅｕ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子は
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、Ｇｌｙ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－
３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、Ｓｅｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ2
6,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）の対応する
発現プラスミドを順に構築した。
Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）のＤＮＡの構築
６－Ｈｉｓタグ、ＳＵＭＯタグ、およびＶａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ
－１（７－３７）をコードする遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）を順に融合し、化
学合成により遺伝子断片（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）を得た。ＢａｍＨＩとＸｈｏＩ部
位を介して、上記断片を原核生物発現プラスミドｐＥＴ－２４（＋）に挿入してシーケン
シングによって検証した。得られた形質転換アッセイのための発現プラスミドは、ｐＥＴ
－２４（＋）－Ｈｉｓ－ＳＵＭＯ－Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（
７－３７）と呼ばれる。
上記の方法に従って、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ26Ａｒｇ34－ＧＬＰ－１（７－３７）（
コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬ
Ｐ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌ
ｙｓ19Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ27Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ34Ａｒｇ26－ＧＬＰ－１（７－３７）
（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ36－
ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｖａｌ8Ｇｌｕ2
2Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ37－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
１７）、Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子
はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７
－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、Ｌｅｕ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒ
ｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、Ｇｌ
ｙ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２６）、Ｓｅｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コ
ード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬ
Ｐ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌ
ｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
２）、Ｌｅｕ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子は
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、Ｇｌｙ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－
３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、Ｓｅｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ2
6,34－ＧＬＰ－１（７－３７）（コード遺伝子はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）の対応する
発現プラスミドを順に構築した。
【0057】
実施例２ 融合タンパク質の発現
実施例１に記載のＤＮＡ構築物を使用して融合タンパク質を発現させ、細胞ＢＬ２１（
ＴｒａｂｓＧｅｎＢｉｏｔｅｃｈ．，ｃａｔａｌｏｇ＃ＣＤ６０１）を発現させることに
よって標的タンパク質を得た。ＢＬ２１コンピテントセル５０μｌを氷浴に入れて溶かし
、標的ＤＮＡを加えて軽く均一に振り、氷浴に３０分間放置した。続いて、４２℃水浴で
３０秒間熱ショックを与えた後、遠心管を振らないように遠心管を迅速に氷浴に移して２
分間放置した。５００μｌの滅菌ＬＢ培地（抗生物質を含まない）を遠心管に加え、均一
に混合した後に３７℃に置き、１８０ｒｐｍで１時間培養して細菌を蘇らせた。２００μ
ｌの形質転換されたコンピテントセルをピペットで取り、カナマイシン耐性を有するＬＢ
寒天培地プレート上に加え、細胞を均一に広げた。液体が吸収されるまでプレートを３７
℃に置き、そしてプレートを反転させて３７℃で一晩培養した。翌日、播種ループを使用
して形質転換プレート内のモノクローナルコロニーを取り出し、１５ｍｌの滅菌ＬＢ培地
（抗生物質を含む）に播種し、３０℃で一晩培養した。
実施例１に記載のＤＮＡ構築物を使用して融合タンパク質を発現させ、細胞ＢＬ２１（
ＴｒａｂｓＧｅｎＢｉｏｔｅｃｈ．，ｃａｔａｌｏｇ＃ＣＤ６０１）を発現させることに
よって標的タンパク質を得た。ＢＬ２１コンピテントセル５０μｌを氷浴に入れて溶かし
、標的ＤＮＡを加えて軽く均一に振り、氷浴に３０分間放置した。続いて、４２℃水浴で
３０秒間熱ショックを与えた後、遠心管を振らないように遠心管を迅速に氷浴に移して２
分間放置した。５００μｌの滅菌ＬＢ培地（抗生物質を含まない）を遠心管に加え、均一
に混合した後に３７℃に置き、１８０ｒｐｍで１時間培養して細菌を蘇らせた。２００μ
ｌの形質転換されたコンピテントセルをピペットで取り、カナマイシン耐性を有するＬＢ
寒天培地プレート上に加え、細胞を均一に広げた。液体が吸収されるまでプレートを３７
℃に置き、そしてプレートを反転させて３７℃で一晩培養した。翌日、播種ループを使用
して形質転換プレート内のモノクローナルコロニーを取り出し、１５ｍｌの滅菌ＬＢ培地
（抗生物質を含む）に播種し、３０℃で一晩培養した。
【0058】
実施例３ 組換えＧＬＰ－１類似体の発酵
５０μｌの細菌溶液（ＧＬＰ－１発現細菌溶液）を５０ｍｌのＬＢ培地に加えると共に
、５０μｌのカナマイシンを加え、よく混合してから３０℃の恒温シェーカーに入れて播
種して一晩置いた。一晩播種した細菌溶液１０ｍｌを取り、１０００ｍｌのＬＢ培地に加
えると同時に、１０００μｌのカナマイシンを加えた。均一に振った後、３７℃のシェー
カーに入れて２００ｒｐｍで、播種して４時間後に、最終濃度０．１ｍоｌ／ＬのＩＰＴ
Ｇを培地に加え、よく振った後、３０℃のシェーカーに入れて１８０ｒｐｍで一晩置き、
発現を誘導した。一晩発現した細菌溶液を１３０００ｇで６０分間遠心分離した。細胞収
量は約４ｇ菌体／Ｌ発酵液であり、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって測定されたタンパク質発現
量は約４０％に達することができる。
５０μｌの細菌溶液（ＧＬＰ－１発現細菌溶液）を５０ｍｌのＬＢ培地に加えると共に
、５０μｌのカナマイシンを加え、よく混合してから３０℃の恒温シェーカーに入れて播
種して一晩置いた。一晩播種した細菌溶液１０ｍｌを取り、１０００ｍｌのＬＢ培地に加
えると同時に、１０００μｌのカナマイシンを加えた。均一に振った後、３７℃のシェー
カーに入れて２００ｒｐｍで、播種して４時間後に、最終濃度０．１ｍоｌ／ＬのＩＰＴ
Ｇを培地に加え、よく振った後、３０℃のシェーカーに入れて１８０ｒｐｍで一晩置き、
発現を誘導した。一晩発現した細菌溶液を１３０００ｇで６０分間遠心分離した。細胞収
量は約４ｇ菌体／Ｌ発酵液であり、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって測定されたタンパク質発現
量は約４０％に達することができる。
【0059】
実施例４ 組換えＧＬＰ－１類似体の精製
１００ｇの細胞スラリーを計量し、５００ｍｌの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８
．０、５０ｍＭ ＮａＣｌに再懸濁し、細胞が破砕するように超音波細胞粉砕機で３０分
間超音波処理した。ホモジネートを４℃で１３０００ｇで６０分間遠心分離し、遠心分離
後に収集した上澄はＮｉカラムクロマトグラフィーサンプルであった。
得られた上澄を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５００ｍＭ ＮａＣｌ、
および１０ｍＭイミダゾール（平衡化溶液１）で予め平衡化したＣｈｅｌａｔｉｎｇ Ｓ
ｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦで濃縮した。平衡液１で洗浄した後、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣ
ｌ、ｐＨ８．０、５００ｍＭ ＮａＣｌ、および０．３Ｍイミダゾール（溶出液）で溶出
した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によれば、上記の精製プロセスで生成されたＧＬＰ－１中間
生成物の純度は７０％より高かった。
ＵＬＰ酵素を使用してＳｕｍｏタグ配列を切除した。２０ｍＭ ＰＢ、ｐＨ７．４緩衝
液を中間生成物に加えて３倍に希釈し、４℃条件下でＵＬＰ酵素：中間生成物が１：１５
０でＵＬＰを加えて混合し、一晩消化した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によると、消化率はほ
ぼ１００％であった。
ＧＬＰ－１類似体の精製：消化後に得られた生成物を、２０ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、０．
７Ｍ ＮａＣｌ（平衡液２）で予め平衡化したＴｏｓｏｈ Ｂｕｔｙｌ ５５０Ｃ媒質で
濃縮した。平衡液２で洗浄した後、２０％エタノールで溶出し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析に
よる純度は約９０％であった。
溶出したサンプルに０．２Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4を加えて最終濃度を２０ｍＭ Ｎａ2ＨＰ
Ｏ4にし、１Ｍクエン酸でｐＨを４．８～５．０に調整し、４℃で一晩沈殿させた。ＳＤ
Ｓ－ＰＡＧＥによって検出された収率は９０％以上であった。４℃で１３０００ｇで３０
分間遠心分離し、沈殿物を収集して－２０℃で保存した。
１００ｇの細胞スラリーを計量し、５００ｍｌの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８
．０、５０ｍＭ ＮａＣｌに再懸濁し、細胞が破砕するように超音波細胞粉砕機で３０分
間超音波処理した。ホモジネートを４℃で１３０００ｇで６０分間遠心分離し、遠心分離
後に収集した上澄はＮｉカラムクロマトグラフィーサンプルであった。
得られた上澄を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５００ｍＭ ＮａＣｌ、
および１０ｍＭイミダゾール（平衡化溶液１）で予め平衡化したＣｈｅｌａｔｉｎｇ Ｓ
ｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦで濃縮した。平衡液１で洗浄した後、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣ
ｌ、ｐＨ８．０、５００ｍＭ ＮａＣｌ、および０．３Ｍイミダゾール（溶出液）で溶出
した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によれば、上記の精製プロセスで生成されたＧＬＰ－１中間
生成物の純度は７０％より高かった。
ＵＬＰ酵素を使用してＳｕｍｏタグ配列を切除した。２０ｍＭ ＰＢ、ｐＨ７．４緩衝
液を中間生成物に加えて３倍に希釈し、４℃条件下でＵＬＰ酵素：中間生成物が１：１５
０でＵＬＰを加えて混合し、一晩消化した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によると、消化率はほ
ぼ１００％であった。
ＧＬＰ－１類似体の精製：消化後に得られた生成物を、２０ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、０．
７Ｍ ＮａＣｌ（平衡液２）で予め平衡化したＴｏｓｏｈ Ｂｕｔｙｌ ５５０Ｃ媒質で
濃縮した。平衡液２で洗浄した後、２０％エタノールで溶出し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析に
よる純度は約９０％であった。
溶出したサンプルに０．２Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4を加えて最終濃度を２０ｍＭ Ｎａ2ＨＰ
Ｏ4にし、１Ｍクエン酸でｐＨを４．８～５．０に調整し、４℃で一晩沈殿させた。ＳＤ
Ｓ－ＰＡＧＥによって検出された収率は９０％以上であった。４℃で１３０００ｇで３０
分間遠心分離し、沈殿物を収集して－２０℃で保存した。
【0060】
実施例５ ＧＬＰ－１類似体の誘導体の調製
下記式に表されるＧＬＰ－１類似体の誘導体、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［
２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシ
ブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］
（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２と略
称する）の調製
１、脂肪酸による修飾：上記実施例で調製、収集されたＶａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒ
ｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）沈澱に水を加えて４～６ｍｇ／ｍｌ溶液を調製し、１
Ｍ水酸化ナトリウムを加えてｐＨを１１．０～１１．５に調整し、タンパク質が完全に溶
解するように均一に振り、ＨＰＬＣでポリペプチド濃度を定量した。ポリペプチドと脂肪
酸（構造は下記通りである）とのモル比が１：４となるように脂肪酸粉末を取ってアセト
ニトリルに溶かした。体積が１０００分の２のトリエチルアミンをポリペプチド溶液に加
え、脂肪酸溶液と混合し、混合液を４℃で１時間静置した。
サンプルを水で５倍に希釈し、１Ｍクエン酸（または１０％酢酸）でｐＨを４．８に調
整して反応を停止し、４℃で１０分間置いて沈殿（酸沈殿）させた後、１３０００ｇ、４
℃で３０分間遠心分離し、沈殿物を－８０℃で保存した。
２、脂肪酸の脱保護と精製：ポリペプチドの最終濃度が約１０ｍｇ／ｍｌになるように
ＴＦＡを酸沈殿したサンプルに加え、振とうして沈澱を溶解し、室温で３０分間静置して
脱保護し、４Ｍ ＮａＯＨを反応液に滴加してｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停
止した。
分取液体分析装置（島津ＬＣ－８Ａ）を使用して、停止した反応液を流速４ｍｌ／ｍｉ
ｎで、１０ｍＭ酢酸アンモニウム、２０％エタノール（平衡液３）で予め平衡化したＵｎ
ｉＳｉｌ １０－１２０Ｃ１８（Suzhou Nano-Micro Technology CO., LTD.から購入）に
ポンプして濃縮した。平衡液３で洗浄した後、０～１００％溶出液（１０ｍＭ酢酸アンモ
ニウム、８０％エタノール）で段階的に溶出し、溶出ピークを収集してＲＰ－ＨＰＬＣで
検出した結果、純度は約９０％であった。
溶出ピークを水で３倍に希釈し、酸沈殿によりｐＨを４．８０に調整し、４℃で３０分
間酸沈殿させた。遠心分離後、ＰＢＳＴ緩衝液（ｐＨ７．０）を沈殿物に加えて再溶解し
、－８０℃で保存した。
上記の方法に従って、Ｎ－ε26－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７
－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキ
シ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙ
ｓ26Ａｒｇ34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ０）、Ｎ－ε30－［２－（２－［
２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）
－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ
）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチ
ド（Ｍ４）、Ｎ－ε19－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキ
シヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキ
シ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｌｙｓ19Ｇｌｕ22Ａｒｇ2
6,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１）、Ｎ－ε27－［２－（２－［２－（２
－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボ
キシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチ
ル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ27Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ３
）、Ｎ－ε34－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタ
デカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセ
トアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26Ｌｙｓ34－ＧＬ
Ｐ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε36－［２－（２－［２－（２－［２－（
２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリ
ルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａ
ｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ36－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ６）、Ｎ－ε
37－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイル
アミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）
エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ37－ＧＬＰ－１（
７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４
－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ
］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ8Ｇｌ
ｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ８）、Ｎ－ε23－［
２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ
）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキ
シ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３
７））ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１
７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エト
キシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｌｅｕ8Ｇｌｕ22Ｌ
ｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１０）、Ｎ－ε23－［２－
（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－
４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］
エトキシ）アセチル］（Ｇｌｙ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）
）ペプチド（Ｍ１１）、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７
－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキ
シ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｓｅｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙ
ｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１２）、Ｎ－ε30－［２－（
２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４
（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エ
トキシ）アセチル］（Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））
ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－
カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ
）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ3
0Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）、Ｎ－ε30－［２－（２－
［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ
）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキ
シ）アセチル］（Ｌｅｕ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプ
チド（Ｍ１５）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カル
ボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エ
トキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｇｌｙ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａ
ｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１６）、Ｎ－ε30－［２－（２－［
２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）
－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ
）アセチル］（Ｓｅｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチ
ド（Ｍ１７）を順に調製した。
下記式に表されるＧＬＰ－１類似体の誘導体、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［
２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシ
ブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］
（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２と略
称する）の調製
【化10】
ｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）沈澱に水を加えて４～６ｍｇ／ｍｌ溶液を調製し、１
Ｍ水酸化ナトリウムを加えてｐＨを１１．０～１１．５に調整し、タンパク質が完全に溶
解するように均一に振り、ＨＰＬＣでポリペプチド濃度を定量した。ポリペプチドと脂肪
酸（構造は下記通りである）とのモル比が１：４となるように脂肪酸粉末を取ってアセト
ニトリルに溶かした。体積が１０００分の２のトリエチルアミンをポリペプチド溶液に加
え、脂肪酸溶液と混合し、混合液を４℃で１時間静置した。
【化11】
整して反応を停止し、４℃で１０分間置いて沈殿（酸沈殿）させた後、１３０００ｇ、４
℃で３０分間遠心分離し、沈殿物を－８０℃で保存した。
２、脂肪酸の脱保護と精製：ポリペプチドの最終濃度が約１０ｍｇ／ｍｌになるように
ＴＦＡを酸沈殿したサンプルに加え、振とうして沈澱を溶解し、室温で３０分間静置して
脱保護し、４Ｍ ＮａＯＨを反応液に滴加してｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停
止した。
分取液体分析装置（島津ＬＣ－８Ａ）を使用して、停止した反応液を流速４ｍｌ／ｍｉ
ｎで、１０ｍＭ酢酸アンモニウム、２０％エタノール（平衡液３）で予め平衡化したＵｎ
ｉＳｉｌ １０－１２０Ｃ１８（Suzhou Nano-Micro Technology CO., LTD.から購入）に
ポンプして濃縮した。平衡液３で洗浄した後、０～１００％溶出液（１０ｍＭ酢酸アンモ
ニウム、８０％エタノール）で段階的に溶出し、溶出ピークを収集してＲＰ－ＨＰＬＣで
検出した結果、純度は約９０％であった。
溶出ピークを水で３倍に希釈し、酸沈殿によりｐＨを４．８０に調整し、４℃で３０分
間酸沈殿させた。遠心分離後、ＰＢＳＴ緩衝液（ｐＨ７．０）を沈殿物に加えて再溶解し
、－８０℃で保存した。
上記の方法に従って、Ｎ－ε26－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７
－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキ
シ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙ
ｓ26Ａｒｇ34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ０）、Ｎ－ε30－［２－（２－［
２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）
－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ
）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチ
ド（Ｍ４）、Ｎ－ε19－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキ
シヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキ
シ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｌｙｓ19Ｇｌｕ22Ａｒｇ2
6,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１）、Ｎ－ε27－［２－（２－［２－（２
－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボ
キシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチ
ル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ27Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ３
）、Ｎ－ε34－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタ
デカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセ
トアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26Ｌｙｓ34－ＧＬ
Ｐ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε36－［２－（２－［２－（２－［２－（
２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリ
ルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａ
ｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ36－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ６）、Ｎ－ε
37－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイル
アミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）
エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ8Ｇｌｕ22Ａｒｇ26,34Ｌｙｓ37－ＧＬＰ－１（
７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４
－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ
］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ8Ｇｌ
ｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ８）、Ｎ－ε23－［
２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ
）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキ
シ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３
７））ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１
７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エト
キシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｌｅｕ8Ｇｌｕ22Ｌ
ｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１０）、Ｎ－ε23－［２－
（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－
４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］
エトキシ）アセチル］（Ｇｌｙ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７）
）ペプチド（Ｍ１１）、Ｎ－ε23－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７
－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキ
シ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｓｅｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙ
ｓ23Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１２）、Ｎ－ε30－［２－（
２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４
（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エ
トキシ）アセチル］（Ｔｈｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））
ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－
カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ
）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ3
0Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）、Ｎ－ε30－［２－（２－
［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ
）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキ
シ）アセチル］（Ｌｅｕ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプ
チド（Ｍ１５）、Ｎ－ε30－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カル
ボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エ
トキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｇｌｙ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａ
ｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１６）、Ｎ－ε30－［２－（２－［
２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）
－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ
）アセチル］（Ｓｅｒ8Ｇｌｕ22Ｌｙｓ30Ａｒｇ26,34－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチ
ド（Ｍ１７）を順に調製した。
【表1】
【0061】
実施例６ ＲＩＮ－ｍ５Ｆ細胞におけるＧＬＰ－１類似体の誘導体のインビトロ活性測
定
培養状態の良いＲＩＮ－ｍ５Ｆ細胞を選択した。細胞を収集して計数し、ＲＰＭＩ１６
４０基礎培養液で１×１０5細胞／ｍｌの細胞懸濁液にした。ウェルあたり１００μｌで
細胞懸濁液を９６ウェル細胞培養プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で一晩培
養した。ｃＡＭＰ検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＧＬＰ－１類似体の誘導体の
インビトロ活性を検出した；アッセイ培養液を調製してサンプル（Ａｉｂ、Ｍ０、Ｍ１、
Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７）を３００ｎｇ／ｍｌに希釈した後、９６ウェルプ
レートで３倍段階的に希釈し、合計で８つの濃度にし、各希釈度で２つの複製孔を作り、
Ｍ０、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７を上記のように調製した。Ａｉｂは、
Ｎ－ε26－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカ
ノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトア
ミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］［Ａｉｂ8，Ａｒｇ34］ＧＬＰ－１（７－３７）
ペプチドであり（ＣＮ１０１１３３０８２Ｂの実施例４参照）、商品名はセマグルチドで
あり、特許ＣＮ１０１１３３０８２Ｂに開示された方法に従って調製された。
用意した細胞プレートを取り出し、培地を捨て、ろ紙で吸い取って乾かした。それに応
じてサンプル溶液を細胞プレートに移し、４０μｌ／ウェルにした。３７℃、５％ＣＯ2
の条件下で蓋を開けて１５分間処理した。インキュベーターから細胞培養プレートを取り
出し、１０μｌのＣＤ溶液（ｃＡＭＰ検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ））を各ウェルに加え
、細胞プレートを２２℃～２５℃で５００ｒｐｍで水平に振とうして２０分間放置した。
５０μｌのＫＧ溶液（ｃＡＭＰ検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ））を各ウェルに加え、２２
℃～２５℃、５００ｒｐｍで水平に振って暗所に１０分間放置した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｌ化学発光メーターを使用して化学発光値を
読み取り、３０分間以内に検出を完了した。サンプルのＥＣ５０を、ｓоｆｔｍａｘ Ｐ
ｒｏ ｓоｆｔｗａｒｅの４パラメータ回帰によって計算した。
ＲＩＮ－ｍ５Ｆ細胞のインビトロ薬力学から、セマグルチド、Ｍ２、Ｍ４、Ｍ５、及び
Ｍ７のインビトロ活性がほぼ同じであり、全体的にはＭ０、Ｍ１、Ｍ３、およびＭ６より
やや高いことが示された。
定
培養状態の良いＲＩＮ－ｍ５Ｆ細胞を選択した。細胞を収集して計数し、ＲＰＭＩ１６
４０基礎培養液で１×１０5細胞／ｍｌの細胞懸濁液にした。ウェルあたり１００μｌで
細胞懸濁液を９６ウェル細胞培養プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で一晩培
養した。ｃＡＭＰ検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＧＬＰ－１類似体の誘導体の
インビトロ活性を検出した；アッセイ培養液を調製してサンプル（Ａｉｂ、Ｍ０、Ｍ１、
Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７）を３００ｎｇ／ｍｌに希釈した後、９６ウェルプ
レートで３倍段階的に希釈し、合計で８つの濃度にし、各希釈度で２つの複製孔を作り、
Ｍ０、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７を上記のように調製した。Ａｉｂは、
Ｎ－ε26－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカ
ノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトア
ミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］［Ａｉｂ8，Ａｒｇ34］ＧＬＰ－１（７－３７）
ペプチドであり（ＣＮ１０１１３３０８２Ｂの実施例４参照）、商品名はセマグルチドで
あり、特許ＣＮ１０１１３３０８２Ｂに開示された方法に従って調製された。
用意した細胞プレートを取り出し、培地を捨て、ろ紙で吸い取って乾かした。それに応
じてサンプル溶液を細胞プレートに移し、４０μｌ／ウェルにした。３７℃、５％ＣＯ2
の条件下で蓋を開けて１５分間処理した。インキュベーターから細胞培養プレートを取り
出し、１０μｌのＣＤ溶液（ｃＡＭＰ検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ））を各ウェルに加え
、細胞プレートを２２℃～２５℃で５００ｒｐｍで水平に振とうして２０分間放置した。
５０μｌのＫＧ溶液（ｃＡＭＰ検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ））を各ウェルに加え、２２
℃～２５℃、５００ｒｐｍで水平に振って暗所に１０分間放置した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｌ化学発光メーターを使用して化学発光値を
読み取り、３０分間以内に検出を完了した。サンプルのＥＣ５０を、ｓоｆｔｍａｘ Ｐ
ｒｏ ｓоｆｔｗａｒｅの４パラメータ回帰によって計算した。
【表2】
Ｍ７のインビトロ活性がほぼ同じであり、全体的にはＭ０、Ｍ１、Ｍ３、およびＭ６より
やや高いことが示された。
【0062】
実施例７ ＨＥＫ２９３／ＣＲＥ－Ｌｕｃ／ＧＬＰ１Ｒ細胞におけるＧＬＰ－１類似体
の誘導体のインビトロ活性測定
ＧＬＰ－１が細胞膜上の受容体と結合できることに応じて、ＨＥＫ２９３／ＣＲＥ－Ｌ
ｕｃ／ＧＬＰ１Ｒ細胞株を構築し、一連のシグナル伝達を通してｃＡＭＰ応答エレメント
（ＣＲＥ）を活性化し、下流のルシフェラーゼ発現を開始させた。発現量は、ＧＬＰ－１
の生物学的活性と正の相関があり、ルシフェラーゼ基質を加えた後、化学発光検出を行い
、その発光強度を測定し、これによってＧＬＰ－１生物学的活性を測定した。
実験材料
９６ウェル細胞培養プレート（白色不透明）、ＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ）、０．０５
％ＴＲＹＰＳＩＮ－ＥＤＴＡ（ＧＩＢＣＯ）、ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ）、Ｇ４１８、
ハイグロマイシンＢ、Ｂｒｉｇｈｔ－ＧｌｏＴＭ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ
Ｓｙｓｔｅｍキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）、ＨＥＫ２９３／ＣＲＥ－ｌｕｃ／ＧＬＰ１Ｒ細
胞。
実験操作
（１）細胞の調製：細胞を活発な生長状態、且つ十分な量まで培養した。培養瓶内の培
養液を捨て、３ｍｌのＶｅｒｓｅｎｅ液を加えて１回振って、２ｍｌの０．０５％ＴＲＹ
ＰＳＩＮ－ＥＤＴＡ消化液を加え、蓋をして１分間平らに静置してから、６ｍｌのアッセ
イ培養液を加えて消化を停止し、１０００ｒ／ｍｉｎで３分間遠心分離した後、上澄を捨
て、細胞を５ｍｌアッセイ培地に再懸濁し、血球計算盤でカウントした。ＤＭＥＭアッセ
イ培養液を使用して細胞の密度を適切な範囲に調整して後ほどの使用のために放置した。
（２）サンプルの調製：表１の様々なＧＬＰ－１類似体の誘導体をアッセイ培養液で２
０ｎｇ／ｍｌに希釈した後、９６ウェルプレートに段階的に８つの濃度を希釈し、サンプ
ルの代わりにアッセイ培養液を細胞ブランク対照として使用し、各希釈濃度で２つの複製
孔を作製した。
（３）サンプル添加培養：調製した対照品と試験品溶液を９６ウェル細胞培養プレート
（ホワイトボード）に移し、各ウェルに５０μｌを加え、そして調製した細胞懸濁液を各
ウェルに５０μｌを加え、３７℃、５％ＣＯ2条件下で一定期間培養した。
（４）化学発光検出：基質を加え、９６ウェル細胞培養プレートを取り出し、各ウェル
に１００μｌのＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ試薬を加え、暗所に３分間放置した。
（５）読み取り：化学発光マイクロプレートリーダーＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｌで測定
し、３０分間以内にプレートを読み取り、測定結果を記録した。
ＨＥＫ２９３／ＣＲＥ－Ｌｕｃ／ＧＬＰ１Ｒ細胞の薬力学から、セマグルチド、Ｍ２、
Ｍ４、Ｍ９、Ｍ１１、Ｍ１４、Ｍ１６、およびＭ１７のインビトロ活性がほぼ同じであり
、全体的にはＭ１３よりやや高いことは示された。
の誘導体のインビトロ活性測定
ＧＬＰ－１が細胞膜上の受容体と結合できることに応じて、ＨＥＫ２９３／ＣＲＥ－Ｌ
ｕｃ／ＧＬＰ１Ｒ細胞株を構築し、一連のシグナル伝達を通してｃＡＭＰ応答エレメント
（ＣＲＥ）を活性化し、下流のルシフェラーゼ発現を開始させた。発現量は、ＧＬＰ－１
の生物学的活性と正の相関があり、ルシフェラーゼ基質を加えた後、化学発光検出を行い
、その発光強度を測定し、これによってＧＬＰ－１生物学的活性を測定した。
実験材料
９６ウェル細胞培養プレート（白色不透明）、ＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ）、０．０５
％ＴＲＹＰＳＩＮ－ＥＤＴＡ（ＧＩＢＣＯ）、ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ）、Ｇ４１８、
ハイグロマイシンＢ、Ｂｒｉｇｈｔ－ＧｌｏＴＭ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ
Ｓｙｓｔｅｍキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）、ＨＥＫ２９３／ＣＲＥ－ｌｕｃ／ＧＬＰ１Ｒ細
胞。
実験操作
（１）細胞の調製：細胞を活発な生長状態、且つ十分な量まで培養した。培養瓶内の培
養液を捨て、３ｍｌのＶｅｒｓｅｎｅ液を加えて１回振って、２ｍｌの０．０５％ＴＲＹ
ＰＳＩＮ－ＥＤＴＡ消化液を加え、蓋をして１分間平らに静置してから、６ｍｌのアッセ
イ培養液を加えて消化を停止し、１０００ｒ／ｍｉｎで３分間遠心分離した後、上澄を捨
て、細胞を５ｍｌアッセイ培地に再懸濁し、血球計算盤でカウントした。ＤＭＥＭアッセ
イ培養液を使用して細胞の密度を適切な範囲に調整して後ほどの使用のために放置した。
（２）サンプルの調製：表１の様々なＧＬＰ－１類似体の誘導体をアッセイ培養液で２
０ｎｇ／ｍｌに希釈した後、９６ウェルプレートに段階的に８つの濃度を希釈し、サンプ
ルの代わりにアッセイ培養液を細胞ブランク対照として使用し、各希釈濃度で２つの複製
孔を作製した。
（３）サンプル添加培養：調製した対照品と試験品溶液を９６ウェル細胞培養プレート
（ホワイトボード）に移し、各ウェルに５０μｌを加え、そして調製した細胞懸濁液を各
ウェルに５０μｌを加え、３７℃、５％ＣＯ2条件下で一定期間培養した。
（４）化学発光検出：基質を加え、９６ウェル細胞培養プレートを取り出し、各ウェル
に１００μｌのＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ試薬を加え、暗所に３分間放置した。
（５）読み取り：化学発光マイクロプレートリーダーＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｌで測定
し、３０分間以内にプレートを読み取り、測定結果を記録した。
【表3】
Ｍ４、Ｍ９、Ｍ１１、Ｍ１４、Ｍ１６、およびＭ１７のインビトロ活性がほぼ同じであり
、全体的にはＭ１３よりやや高いことは示された。
【0063】
実施例８ 正常なマウスにおけるＧＬＰ－１類似体の脂肪酸修飾誘導体の血糖降下作用
に関する研究
４～６週齢の健康なＣＤ－１メスマウス２８匹を選択し、４つの群に分け、それぞれＭ
２、Ｍ４、Ｍ０及びセマグルチド（Ａｉｂ）を０．１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で皮下注射
により投与した。投与前、投与後６時間、１日、２日、３日、４日の間隔で、２ｇ／ｋｇ
体重の用量で２０％ブドウ糖を強制投与し、投与前に６時間禁食し、投与後の０、０．５
、１、２時間にそれぞれ尾先端から血液を採取し、Ｒｏｃｈｅ血糖テストストリップを使
用してリアルタイムで血糖を検出し、０～１２０分間以内の血糖ＡＵＣ（血糖～時間曲線
下の面積）を計算して血糖抑制率を算出した（表４）。
表４から分かるように、正常マウスにおけるセマグルチドの血糖降下活性は約２日間持
続し、正常マウスにおけるＭ０の血糖降下活性は約３日間持続し、正常マウスにおけるＭ
２およびＭ４の血糖降下活性は４日目でも明らかな活性を示し、インビボで継続的な血糖
降下活性を維持した時間は、セマグルチドまたはＭ０より有意に長く、しかも投与３日後
の各時点で、Ｍ２とＭ４の血糖降下作用もセマグルチドまたはＭ０より有意に強かった。
４～６週齢の健康なＣＤ－１メスマウス２８匹を選択し、４つの群に分け、それぞれＭ
４、Ｍ５、Ｍ７及びＭ０を０．１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で皮下注射により投与した。投
与前、投与後６時間、１日、２日、３日、４日の間隔で、２ｇ／ｋｇ体重の用量で２０％
ブドウ糖を強制投与し、２０％ブドウ糖の強制投与前に６時間禁食し、投与後の０、０．
５、１、２時間にそれぞれ尾先端から血液を採取し、Ｒｏｃｈｅ血糖テストストリップを
使用してリアルタイムで血糖を検出し、０～１２０分間以内の血糖ＡＵＣ（血糖～時間曲
線下の面積）を計算して血糖抑制率を算出した（表５）。
表４と表５の結果から見て、Ｍ２とＭ４の効果は、Ｍ０とセマグルチドの効果よりも優
れており、Ｍ２、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ７の効果はほぼ同じであり、有意な差はない。
に関する研究
４～６週齢の健康なＣＤ－１メスマウス２８匹を選択し、４つの群に分け、それぞれＭ
２、Ｍ４、Ｍ０及びセマグルチド（Ａｉｂ）を０．１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で皮下注射
により投与した。投与前、投与後６時間、１日、２日、３日、４日の間隔で、２ｇ／ｋｇ
体重の用量で２０％ブドウ糖を強制投与し、投与前に６時間禁食し、投与後の０、０．５
、１、２時間にそれぞれ尾先端から血液を採取し、Ｒｏｃｈｅ血糖テストストリップを使
用してリアルタイムで血糖を検出し、０～１２０分間以内の血糖ＡＵＣ（血糖～時間曲線
下の面積）を計算して血糖抑制率を算出した（表４）。
【数1】
【表4】
続し、正常マウスにおけるＭ０の血糖降下活性は約３日間持続し、正常マウスにおけるＭ
２およびＭ４の血糖降下活性は４日目でも明らかな活性を示し、インビボで継続的な血糖
降下活性を維持した時間は、セマグルチドまたはＭ０より有意に長く、しかも投与３日後
の各時点で、Ｍ２とＭ４の血糖降下作用もセマグルチドまたはＭ０より有意に強かった。
４～６週齢の健康なＣＤ－１メスマウス２８匹を選択し、４つの群に分け、それぞれＭ
４、Ｍ５、Ｍ７及びＭ０を０．１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で皮下注射により投与した。投
与前、投与後６時間、１日、２日、３日、４日の間隔で、２ｇ／ｋｇ体重の用量で２０％
ブドウ糖を強制投与し、２０％ブドウ糖の強制投与前に６時間禁食し、投与後の０、０．
５、１、２時間にそれぞれ尾先端から血液を採取し、Ｒｏｃｈｅ血糖テストストリップを
使用してリアルタイムで血糖を検出し、０～１２０分間以内の血糖ＡＵＣ（血糖～時間曲
線下の面積）を計算して血糖抑制率を算出した（表５）。
【数2】
【表5】
れており、Ｍ２、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ７の効果はほぼ同じであり、有意な差はない。
【0064】
実施例９ ＩＣＲマウスを使用した血糖降下作用に関する研究
ＩＣＲマウスＯＧＴＴ試験：４～６週齢のＩＣＲマウス３０匹を選択し、６つの群に分
け、各群５匹ずつとし、それぞれＭ０、セマグルチド、Ｍ２、Ｍ４、Ｍ５およびＭ７を０
．１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で皮下注射により単回投与した。４時間、１日、２日、３日
、４日、５日の時間に応じて、２ｇ／ｋｇ体重の用量で毎日２０％ブドウ糖を強制投与し
、投与前に６時間禁食し、２０％ブドウ糖の強制投与後の０、０．５、１、２時間にそれ
ぞれ尾先端から血液を採取し、Ｒｏｃｈｅ血糖テストストリップを使用してリアルタイム
で血糖を検出し、０～１２０分間以内の血糖ＡＵＣ（血糖～時間曲線下の面積）を計算し
て血糖抑制率を算出した（表６）。
表６の結果から分かるように、血糖降下作用の維持では、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ２、Ｍ７の血
糖降下作用はいずれも少なくとも４日間維持でき、Ｍ０（３日間のみ維持した）とセマグ
ルチド（２日間のみ維持した）よりもはるかに優れており、統計学的に有意である。
ＩＣＲマウスＯＧＴＴ試験：４～６週齢のＩＣＲマウス３０匹を選択し、６つの群に分
け、各群５匹ずつとし、それぞれＭ０、セマグルチド、Ｍ２、Ｍ４、Ｍ５およびＭ７を０
．１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で皮下注射により単回投与した。４時間、１日、２日、３日
、４日、５日の時間に応じて、２ｇ／ｋｇ体重の用量で毎日２０％ブドウ糖を強制投与し
、投与前に６時間禁食し、２０％ブドウ糖の強制投与後の０、０．５、１、２時間にそれ
ぞれ尾先端から血液を採取し、Ｒｏｃｈｅ血糖テストストリップを使用してリアルタイム
で血糖を検出し、０～１２０分間以内の血糖ＡＵＣ（血糖～時間曲線下の面積）を計算し
て血糖抑制率を算出した（表６）。
【数3】
【表6】
糖降下作用はいずれも少なくとも４日間維持でき、Ｍ０（３日間のみ維持した）とセマグ
ルチド（２日間のみ維持した）よりもはるかに優れており、統計学的に有意である。
【0065】
実施例１０ ＩＩ型糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスに対する血糖降下作用の試験
８～９週齢のｄｂ／ｄｂメスマウス５０匹を選択し、投与前の体重、空腹血糖値（ＦＢ
Ｇ）によって平均的に１０つの群に分け、各群５匹ずつとし、それぞれ溶媒、Ｍ２、Ｍ４
、セマグルチド、Ｍ９、Ｍ１１、Ｍ１３、Ｍ１４、Ｍ１６およびＭ１７を１０ｍｌ／ｋｇ
で皮下注射により単回投与し、投与量がいずれも０．０５ｍｇ／ｋｇであり、投与時間を
０時間とした。各試験群の動物の空腹時血糖が投与前のものに回復するまで、毎日マウス
を６～８時間禁食させた後に空腹血糖を検出し、投与後に毎日空腹血糖を検出した。投与
前に測定した血糖値を基礎血糖値といい、０に設定した。
空腹血糖変化値（Δ：ｄｅｌｔａ）＝投与後の血糖値－投与前の基礎血糖値。
その結果を図１に示し、４日目と５日目から分かるように、Ｍ９、Ｍ１３、Ｍ１４の血
糖降下作用はセマグルチドより優れており、Ｍ２と比べても低くなく、Ｍ１１、Ｍ１６お
よびＭ１７は２日目に、セマグルチドより低い血糖降下作用を示した。
８～９週齢のｄｂ／ｄｂメスマウス５０匹を選択し、投与前の体重、空腹血糖値（ＦＢ
Ｇ）によって平均的に１０つの群に分け、各群５匹ずつとし、それぞれ溶媒、Ｍ２、Ｍ４
、セマグルチド、Ｍ９、Ｍ１１、Ｍ１３、Ｍ１４、Ｍ１６およびＭ１７を１０ｍｌ／ｋｇ
で皮下注射により単回投与し、投与量がいずれも０．０５ｍｇ／ｋｇであり、投与時間を
０時間とした。各試験群の動物の空腹時血糖が投与前のものに回復するまで、毎日マウス
を６～８時間禁食させた後に空腹血糖を検出し、投与後に毎日空腹血糖を検出した。投与
前に測定した血糖値を基礎血糖値といい、０に設定した。
空腹血糖変化値（Δ：ｄｅｌｔａ）＝投与後の血糖値－投与前の基礎血糖値。
その結果を図１に示し、４日目と５日目から分かるように、Ｍ９、Ｍ１３、Ｍ１４の血
糖降下作用はセマグルチドより優れており、Ｍ２と比べても低くなく、Ｍ１１、Ｍ１６お
よびＭ１７は２日目に、セマグルチドより低い血糖降下作用を示した。
【0066】
実施例１１ ＩＩ型糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスに対する異なる用量のセマグルチド、Ｍ０
およびＭ４の血糖降下作用
８～９週齢のｄｂ／ｄｂメスマウス３５匹を選択し、投与前の体重、血糖曲線下面積（
Ｇ－ＡＵＣ）によって平均的に７つの群に分け、各群５匹ずつとし、それぞれ溶媒、Ｍ４
（０．１５、０．０１５ｍｇ／ｋｇ）、セマグルチド（０．１５、０．０１５ｍｇ／ｋｇ
）、およびＭ０（０．１５、０．０１５ｍｇ／ｋｇ）を１０ｍｌ／ｋｇで皮下注射により
単回投与した。投与時間を０時間とした。毎日マウスを７～８時間禁食させた後に空腹血
糖とＯＧＴＴ（経口糖負荷試験）を測定し、１ｇ／ｋｇ体重の用量で１０％ブドウ糖を強
制投与し、糖負荷後の０、０．５、１、２時間にそれぞれ尾先端から血液を採取してリア
ルタイムで血糖を検出した。投与後、各試験群の動物の血糖が投与前のレベルに回復する
まで、毎日禁食する前に血糖を測定し、ランダム血糖とした。投与前に測定した基礎血糖
値、ランダム血糖値、および血糖曲線下面積（Ｇ－ＡＵＣ）値はいずれも薬効を測定する
ためのベースであり、いずれも０に設定した。
血糖変化量（Δ：ｄｅｌｔａ）＝投与後の血糖値－投与前の基礎血糖値；
血糖曲線下面積変化量（Δ：ｄｅｌｔａ）＝投与後の血糖曲線下面積－投与前の血糖曲
線下面積。
結果を表７、８、９および図２、３、４に示す。
表７～９および図２～４の結果は、以下のことを示した。
空腹時血糖：Ｍ４ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後１２３時間に投与前の基礎血糖
ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後９９時間に投与前の基礎血糖ベ
ース値に回復した；セマグルチド ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後５１時間に投与前
の基礎血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後２７時間に投与前の
基礎血糖ベース値に回復した；Ｍ０ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後７５時間に投与
前の基礎血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後５１時間に投与前
の基礎血糖ベース値に回復した；その中で、Ｍ４の０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群の各検出
時点の空腹時血糖降下値はいずれも、セマグルチドまたはＭ０の０．１５ｍｇ／ｋｇ用量
群よりも低くはなかった。
ランダム血糖：Ｍ４ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後１１５時間に投与前のランダ
ム血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後１１５時間に投与前のラ
ンダム血糖ベース値に回復した；セマグルチド ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後６７
時間に投与前のランダム血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後６
７時間に投与前のランダム血糖ベース値に回復した；Ｍ０ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は
投与後６７時間に投与前のランダム血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群
は投与後６７時間に投与前のランダム血糖ベース値に回復した；その中で、Ｍ４の０．０
１５ｍｇ／ｋｇ用量群の各検出時点のランダム血糖に対する抑制作用はいずれも、セマグ
ルチドまたはＭ０の０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群よりも低くはなかった。
血糖曲線下面積（Ｇ－ＡＵＣ）：Ｍ４ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後９９時間に
投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後９９時
間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復した；セマグルチド ０．１５ｍｇ／ｋｇ用
量群は投与後５１時間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋ
ｇ用量群は投与後５１時間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復した；Ｍ０ ０．１
５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後５１時間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復し、０．
０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後２７時間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復した
；その中で、Ｍ４の０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群の各検出時点の血糖曲線下面積はいずれ
も、セマグルチドまたはＭ０の０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群よりも低くはなかった。
これらの血糖降下の結果から明らかに、Ｍ４またはセマグルチドまたはＭ０を単回皮下
注射後、各群は明らかな血糖降下作用を示したが、Ｍ４の血糖降下効果は最も良かった。
Ｍ４の０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量の血糖降下効果は、セマグルチドの０．１５ｍｇ／ｋｇ
用量またはＭ０の０．１５ｍｇ／ｋｇ用量の血糖降下効果とほぼ同じであった。
およびＭ４の血糖降下作用
８～９週齢のｄｂ／ｄｂメスマウス３５匹を選択し、投与前の体重、血糖曲線下面積（
Ｇ－ＡＵＣ）によって平均的に７つの群に分け、各群５匹ずつとし、それぞれ溶媒、Ｍ４
（０．１５、０．０１５ｍｇ／ｋｇ）、セマグルチド（０．１５、０．０１５ｍｇ／ｋｇ
）、およびＭ０（０．１５、０．０１５ｍｇ／ｋｇ）を１０ｍｌ／ｋｇで皮下注射により
単回投与した。投与時間を０時間とした。毎日マウスを７～８時間禁食させた後に空腹血
糖とＯＧＴＴ（経口糖負荷試験）を測定し、１ｇ／ｋｇ体重の用量で１０％ブドウ糖を強
制投与し、糖負荷後の０、０．５、１、２時間にそれぞれ尾先端から血液を採取してリア
ルタイムで血糖を検出した。投与後、各試験群の動物の血糖が投与前のレベルに回復する
まで、毎日禁食する前に血糖を測定し、ランダム血糖とした。投与前に測定した基礎血糖
値、ランダム血糖値、および血糖曲線下面積（Ｇ－ＡＵＣ）値はいずれも薬効を測定する
ためのベースであり、いずれも０に設定した。
血糖変化量（Δ：ｄｅｌｔａ）＝投与後の血糖値－投与前の基礎血糖値；
血糖曲線下面積変化量（Δ：ｄｅｌｔａ）＝投与後の血糖曲線下面積－投与前の血糖曲
線下面積。
結果を表７、８、９および図２、３、４に示す。
【表7】
【表8】
【表9】
空腹時血糖：Ｍ４ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後１２３時間に投与前の基礎血糖
ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後９９時間に投与前の基礎血糖ベ
ース値に回復した；セマグルチド ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後５１時間に投与前
の基礎血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後２７時間に投与前の
基礎血糖ベース値に回復した；Ｍ０ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後７５時間に投与
前の基礎血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後５１時間に投与前
の基礎血糖ベース値に回復した；その中で、Ｍ４の０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群の各検出
時点の空腹時血糖降下値はいずれも、セマグルチドまたはＭ０の０．１５ｍｇ／ｋｇ用量
群よりも低くはなかった。
ランダム血糖：Ｍ４ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後１１５時間に投与前のランダ
ム血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後１１５時間に投与前のラ
ンダム血糖ベース値に回復した；セマグルチド ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後６７
時間に投与前のランダム血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後６
７時間に投与前のランダム血糖ベース値に回復した；Ｍ０ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は
投与後６７時間に投与前のランダム血糖ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群
は投与後６７時間に投与前のランダム血糖ベース値に回復した；その中で、Ｍ４の０．０
１５ｍｇ／ｋｇ用量群の各検出時点のランダム血糖に対する抑制作用はいずれも、セマグ
ルチドまたはＭ０の０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群よりも低くはなかった。
血糖曲線下面積（Ｇ－ＡＵＣ）：Ｍ４ ０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後９９時間に
投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後９９時
間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復した；セマグルチド ０．１５ｍｇ／ｋｇ用
量群は投与後５１時間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復し、０．０１５ｍｇ／ｋ
ｇ用量群は投与後５１時間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復した；Ｍ０ ０．１
５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後５１時間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復し、０．
０１５ｍｇ／ｋｇ用量群は投与後２７時間に投与前の血糖曲線下面積ベース値に回復した
；その中で、Ｍ４の０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量群の各検出時点の血糖曲線下面積はいずれ
も、セマグルチドまたはＭ０の０．１５ｍｇ／ｋｇ用量群よりも低くはなかった。
これらの血糖降下の結果から明らかに、Ｍ４またはセマグルチドまたはＭ０を単回皮下
注射後、各群は明らかな血糖降下作用を示したが、Ｍ４の血糖降下効果は最も良かった。
Ｍ４の０．０１５ｍｇ／ｋｇ用量の血糖降下効果は、セマグルチドの０．１５ｍｇ／ｋｇ
用量またはＭ０の０．１５ｍｇ／ｋｇ用量の血糖降下効果とほぼ同じであった。
【0067】
実施例１２ 酵素分解に対するＭ４およびセマグルチドの安定性に関する研究
ペプシン（３２００～４５００Ｕ／ｍｇタンパク質、ｓｉｇｍａから由来、ロット番号
Ｐ６８８７）、トリプシン（約１００００ＡＥＥ Ｕ／ｍｇタンパク質、ｓｉｇｍａから
由来、ロット番号Ｔ８００３）。
（１）反応溶液
Ａ：ペプシン反応緩衝液：３つの異なるｐＨ（２．６、４．０、７．４）の２０ｍＭク
エン酸－リン酸緩衝液を調製し、０．００５％Ｔｗｅｅｎ ２０および０．００１％ＢＳ
Ａを加えてペプシン反応緩衝液とした。
Ｂ：トリプシン反応緩衝液：３つの異なるｐＨ（４．０、６．８、８．０）の２０ｍＭ
クエン酸－リン酸緩衝液を調製し、０．００５％Ｔｗｅｅｎ ２０および０．００１％Ｂ
ＳＡを加えてトリプシン反応緩衝液とした。
Ｃ：ペプシン含有模擬胃液（ＳＧＦ）：０．１Ｍ塩酸５ｍｌを取り、０．０１９ｇペプ
シンを加えて溶解させて得た。
Ｄ：トリプシン含有模擬腸液（ＳＩＦ）：リン酸二水素カリウム０．０６８４ｇを取り
、水２．５ｍｌを加えて溶解させ、０．２Ｍ水酸化ナトリウム溶液０．７７ｍｌと水５ｍ
ｌを加え、トリプシン０．１００１ｇを加えて溶解させ、ｐＨを６．８２に測定した後、
水を加えて１０ｍｌに希釈して得た。
（２）サンプル調製
Ｍ４とセマグルチドのサンプルを取り、ｐＨ７．４のＰＢ緩衝液を使用して１．３３ｍ
ｇ／ｍｌに希釈して試験用母液とした。
（３）ペプシン分解試験
試験用母液を適量取り、異なるｐＨのペプシン反応緩衝液で０．０６ｍｇ／ｍｌに希釈
し、各群の反応溶液を１ｍｌ／チューブ、合計７本のチューブに分け、よく混合してから
３７℃の水浴に置いて３０分間インキュベーションした。そのうちの１本のチューブを取
り出してＳＧＦを加えずに非酵素反応０点（－５ｍｉｎ点と表記）とし、そして６本のチ
ューブを取り出してそれぞれＳＧＦを加えてよく混合し、その中の１本のチューブに適切
な体積の１Ｍ ＮａＯＨを直ちに加えて反応を終止させ、酵素添加後の０点（０ｍｉｎ点
と表記）とし、残りの５本のチューブを引き続き３７℃に置いて反応させ、５ｍｉｎ、１
０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３５ｍｉｎ、５０ｍｉｎでそれぞれ１つの群を取り出して適切な
体積の１Ｍ ＮａＯＨを加えて反応を終止させた。すべての実験群の各チューブについて
、反応終了後の総体積が一致することを確保した。
（４）トリプシン分解試験
試験用母液を適量取り、異なるｐＨのトリプシン反応緩衝液で０．０６ｍｇ／ｍｌに希
釈し、各群の反応溶液を１ｍｌ／チューブ、合計７本のチューブに分け、よく混合してか
ら３７℃の水浴に置いて３０分間インキュベーションした。そのうちの１本のチューブを
取り出してＳＩＦを加えずに非酵素反応０点（－５ｍｉｎ点と表記）とし、そして６本の
チューブを取り出してそれぞれＳＩＦを加えてよく混合し、その中の１本のチューブに適
切な体積の６Ｍ ＨＣｌを直ちに加えて反応を終止させ、酵素添加後の０点（０ｍｉｎ点
と表記）とし、残りの５本のチューブを引き続き３７℃に置いて反応させ、５ｍｉｎ、１
０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３５ｍｉｎ、５０ｍｉｎでそれぞれ１つの群を取り出して適切な
体積の６Ｍ ＨＣｌを加えて反応を終止させた。すべての実験群の各チューブについて、
反応終了後の総体積が一致することを確保した。
酵素分解試験についてサンプリングしてＨＰＬＣ検出を行い、非酵素反応０点（－５ｍ
ｉｎ点と表記）のサンプルのメインピークエリアをベースピークエリアとし、酵素添加後
に得られた異なる時点でのメインピークエリアの残りのパーセンテージを計算した。
ペプシン分解の実験データ（ｎ＝３）（図５）には、Ｍ４とセマグルチド分子の酸性条
件下（ｐＨ２．６）での分解速度がほぼ同じであることは示されており、これは、ペプシ
ンがこのｐＨでの活性が最も高いからである；中性ｐＨ７．４では、両方の分子は基本的
に分解されず、この時点で胃タンパク質の活性が最も低い；ｐＨ４．０では、セマグルチ
ドの分解速度はＭ４より有意に高く、前者のｔ１／２は約１０ｍｉｎであり、後者のｔ１
／２は約４５ｍｉｎである。これは、ペプシン分解に対するＭ４の耐性能力がセマグルチ
ドよりも有意に優れていることを示した。
トリプシン分解の実験データ（ｎ＝４）（図６）には、ｐＨ６．８および８．０では両
方の分解速度が基本的に一致していることは示されており、これは、このｐＨ範囲がトリ
プシンの最も高い活性範囲であるからである；ｐＨ４．０では、Ｍ４とセマグルチドもト
リプシン分解に対する耐性能力を示し、両方の間は基本的に差がなかった。
ペプシン（３２００～４５００Ｕ／ｍｇタンパク質、ｓｉｇｍａから由来、ロット番号
Ｐ６８８７）、トリプシン（約１００００ＡＥＥ Ｕ／ｍｇタンパク質、ｓｉｇｍａから
由来、ロット番号Ｔ８００３）。
（１）反応溶液
Ａ：ペプシン反応緩衝液：３つの異なるｐＨ（２．６、４．０、７．４）の２０ｍＭク
エン酸－リン酸緩衝液を調製し、０．００５％Ｔｗｅｅｎ ２０および０．００１％ＢＳ
Ａを加えてペプシン反応緩衝液とした。
Ｂ：トリプシン反応緩衝液：３つの異なるｐＨ（４．０、６．８、８．０）の２０ｍＭ
クエン酸－リン酸緩衝液を調製し、０．００５％Ｔｗｅｅｎ ２０および０．００１％Ｂ
ＳＡを加えてトリプシン反応緩衝液とした。
Ｃ：ペプシン含有模擬胃液（ＳＧＦ）：０．１Ｍ塩酸５ｍｌを取り、０．０１９ｇペプ
シンを加えて溶解させて得た。
Ｄ：トリプシン含有模擬腸液（ＳＩＦ）：リン酸二水素カリウム０．０６８４ｇを取り
、水２．５ｍｌを加えて溶解させ、０．２Ｍ水酸化ナトリウム溶液０．７７ｍｌと水５ｍ
ｌを加え、トリプシン０．１００１ｇを加えて溶解させ、ｐＨを６．８２に測定した後、
水を加えて１０ｍｌに希釈して得た。
（２）サンプル調製
Ｍ４とセマグルチドのサンプルを取り、ｐＨ７．４のＰＢ緩衝液を使用して１．３３ｍ
ｇ／ｍｌに希釈して試験用母液とした。
（３）ペプシン分解試験
試験用母液を適量取り、異なるｐＨのペプシン反応緩衝液で０．０６ｍｇ／ｍｌに希釈
し、各群の反応溶液を１ｍｌ／チューブ、合計７本のチューブに分け、よく混合してから
３７℃の水浴に置いて３０分間インキュベーションした。そのうちの１本のチューブを取
り出してＳＧＦを加えずに非酵素反応０点（－５ｍｉｎ点と表記）とし、そして６本のチ
ューブを取り出してそれぞれＳＧＦを加えてよく混合し、その中の１本のチューブに適切
な体積の１Ｍ ＮａＯＨを直ちに加えて反応を終止させ、酵素添加後の０点（０ｍｉｎ点
と表記）とし、残りの５本のチューブを引き続き３７℃に置いて反応させ、５ｍｉｎ、１
０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３５ｍｉｎ、５０ｍｉｎでそれぞれ１つの群を取り出して適切な
体積の１Ｍ ＮａＯＨを加えて反応を終止させた。すべての実験群の各チューブについて
、反応終了後の総体積が一致することを確保した。
（４）トリプシン分解試験
試験用母液を適量取り、異なるｐＨのトリプシン反応緩衝液で０．０６ｍｇ／ｍｌに希
釈し、各群の反応溶液を１ｍｌ／チューブ、合計７本のチューブに分け、よく混合してか
ら３７℃の水浴に置いて３０分間インキュベーションした。そのうちの１本のチューブを
取り出してＳＩＦを加えずに非酵素反応０点（－５ｍｉｎ点と表記）とし、そして６本の
チューブを取り出してそれぞれＳＩＦを加えてよく混合し、その中の１本のチューブに適
切な体積の６Ｍ ＨＣｌを直ちに加えて反応を終止させ、酵素添加後の０点（０ｍｉｎ点
と表記）とし、残りの５本のチューブを引き続き３７℃に置いて反応させ、５ｍｉｎ、１
０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３５ｍｉｎ、５０ｍｉｎでそれぞれ１つの群を取り出して適切な
体積の６Ｍ ＨＣｌを加えて反応を終止させた。すべての実験群の各チューブについて、
反応終了後の総体積が一致することを確保した。
酵素分解試験についてサンプリングしてＨＰＬＣ検出を行い、非酵素反応０点（－５ｍ
ｉｎ点と表記）のサンプルのメインピークエリアをベースピークエリアとし、酵素添加後
に得られた異なる時点でのメインピークエリアの残りのパーセンテージを計算した。
ペプシン分解の実験データ（ｎ＝３）（図５）には、Ｍ４とセマグルチド分子の酸性条
件下（ｐＨ２．６）での分解速度がほぼ同じであることは示されており、これは、ペプシ
ンがこのｐＨでの活性が最も高いからである；中性ｐＨ７．４では、両方の分子は基本的
に分解されず、この時点で胃タンパク質の活性が最も低い；ｐＨ４．０では、セマグルチ
ドの分解速度はＭ４より有意に高く、前者のｔ１／２は約１０ｍｉｎであり、後者のｔ１
／２は約４５ｍｉｎである。これは、ペプシン分解に対するＭ４の耐性能力がセマグルチ
ドよりも有意に優れていることを示した。
トリプシン分解の実験データ（ｎ＝４）（図６）には、ｐＨ６．８および８．０では両
方の分解速度が基本的に一致していることは示されており、これは、このｐＨ範囲がトリ
プシンの最も高い活性範囲であるからである；ｐＨ４．０では、Ｍ４とセマグルチドもト
リプシン分解に対する耐性能力を示し、両方の間は基本的に差がなかった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-11-10
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩であって、
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、式
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７
［式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、及びＸ３７のうちの１つのみがＫ残基である。］で表されるアミノ酸配列を含み、
前記誘導体は、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
［式中、ｘは４～３８の整数である］で表される、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩。
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、式
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７
［式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、及びＸ３７のうちの１つのみがＫ残基である。］で表されるアミノ酸配列を含み、
前記誘導体は、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
【化1】
［式中、ｘは４～３８の整数である］で表される、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項2】
前記延長部分が、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１９ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２０ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２１ＣＯ－、及びＨＯＯＣ（ＣＨ２）２２ＣＯ－からなる群より選択される、請求項１に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項3】
前記延長部分が、リンカーを介してＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結されている、請求項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項4】
前記リンカーが、
［式中、ｍは０、１、２、または３であり；ｎは１、２、または３であり；ｓは０～６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である］で表され、
好ましくは、前記リンカーが、
［式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である］で表される、請求項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【化2】
［式中、ｍは０、１、２、または３であり；ｎは１、２、または３であり；ｓは０～６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である］で表され、
好ましくは、前記リンカーが、
【化3】
［式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である］で表される、請求項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項5】
前記リンカーが、
［式中、ｍは１であり、ｎは１または２である］で表される、請求項４に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【化4】
［式中、ｍは１であり、ｎは１または２である］で表される、請求項４に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項6】
Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２）、
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、
Ｎ－ε３４－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、
Ｎ－ε３７－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３７－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、
Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ９）、
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、及び
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）
からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学上許容される塩である、請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、
Ｎ－ε３４－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、
Ｎ－ε３７－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３７－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、
Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ９）、
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、及び
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）
からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学上許容される塩である、請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項7】
（１）前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体が溶解されている溶液と、前記延長部分が溶解されている溶液とを混合すること；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を回収すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調製する方法。
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を回収すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調製する方法。
【請求項8】
前記延長部分が溶解されている溶液と混合する前に、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体が溶解されている溶液にトリエチルアミンを加えることをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記延長部分の溶液が、アセトニトリルで溶解されたものである、請求項７または８に記載の方法。
【請求項10】
請求項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩、及び薬学上許容される補助材料を含む、医薬組成物。
【請求項11】
糖尿病または糖尿病合併症の予防薬または治療薬である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加、及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための請求項１１又は１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖の低下を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
式： ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７
［式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、しかも、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、またはＸ３７のうちの１つのみがＫ残基である。］で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体。
［式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、しかも、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、またはＸ３７のうちの１つのみがＫ残基である。］で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0018】
具体的には、一態様では、本発明はＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩を提供し、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、下記式で表されるアミノ酸配列を含み、
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９）
式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、またはＸ３７のうちの１つのみがＫ残基であり、
前記誘導体は、前記Ｋ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
であり、
ｘは４～３８の整数である。
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９）
式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、またはＸ３７のうちの１つのみがＫ残基であり、
前記誘導体は、前記Ｋ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
【化5】
であり、
ｘは４～３８の整数である。
【手続補正3】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0023】
本発明はまた、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体にも係り、この類似体は、
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９）配列を含み、この配列は、８位、１９位、２３位、２７位、３０位、３４位、３６位、及び３７位からなる群より選択される１つ以上の部位の変異を含む。１つの好ましい実施形態では、８位のアミノ酸残基は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、１９位のアミノ酸残基はＹまたはＫであり、２３位のアミノ酸残基はＱまたはＫであり、２７位のアミノ酸残基はＥまたはＫであり、３０位のアミノ酸残基はＡまたはＫであり、３４位のアミノ酸残基はＲまたはＫであり、３６位のアミノ酸残基はＲまたはＫであり、３７位のアミノ酸残基はＧまたはＫであり、ただし、１９位、２３位、２７位、３０位、３４位、３６位または３７位のうちの１つのみがＫ残基である。
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９）配列を含み、この配列は、８位、１９位、２３位、２７位、３０位、３４位、３６位、及び３７位からなる群より選択される１つ以上の部位の変異を含む。１つの好ましい実施形態では、８位のアミノ酸残基は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、１９位のアミノ酸残基はＹまたはＫであり、２３位のアミノ酸残基はＱまたはＫであり、２７位のアミノ酸残基はＥまたはＫであり、３０位のアミノ酸残基はＡまたはＫであり、３４位のアミノ酸残基はＲまたはＫであり、３６位のアミノ酸残基はＲまたはＫであり、３７位のアミノ酸残基はＧまたはＫであり、ただし、１９位、２３位、２７位、３０位、３４位、３６位または３７位のうちの１つのみがＫ残基である。
【手続補正4】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0025】
具体的には、本発明は以下に係る：
１、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩であって、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、下記式で表されるアミノ酸配列を含み、
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９）、
式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、またはＸ３７のうちの１つのみがＫ残基であり、
前記誘導体は、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
であり、
ｘは４～３８の整数である、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩。
２、前記延長部分は、
ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１９ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２０ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２１ＣＯ－、及びＨＯＯＣ（ＣＨ２）２２ＣＯ－からなる群より選択される、項１に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
３、前記延長部分は、リンカーを介してＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結されている、項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
４、前記リンカーは、
であり、式中、ｍは０、１、２または３であり；ｎは１、２または３であり；ｓは０～６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である。
好ましくは、リンカーは、
であり、
式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である、項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
５、前記リンカーは、
であり、式中、ｍは１であり、ｎは１または２である、項４に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
６、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、Ｎ－ε３４－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε３７－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３７－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学上許容される塩である、項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
７、（１）上記項のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液と、上記項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液とを混合すること；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を採取すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調製する方法。
８、上記項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液と混合する前に、ＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液にトリエチルアミンを加えることをさらに含む、項７に記載の方法。
９、上記項のいずれか一項に記載の延長部分の溶液が、アセトニトリルで溶解されたものである、項７または８に記載の方法。
１０、項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩、及び薬学上許容される補助材料を含む、薬物組成物。
１１、糖尿病（１型糖尿病と２型糖尿病を含む）または糖尿病合併症を予防及び／または治療するための薬物の調製における、項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩の使用。
１２、前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、項１１に記載の使用。
１３、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための薬物の調製における、項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩の使用。
１４、前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、項１３に記載の使用。
１５、被験者に予防または治療有効量の項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を投与することを含む、糖尿病（１型糖尿病と２型糖尿病を含む）または糖尿病合併症を予防及び／または治療するための方法。
１６、前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、項１５に記載の方法。
１７、被験者に治療有効量の項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を投与することを含む、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための方法。
１８、前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、項１７に記載の方法。
１９、下記式で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体。
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９）
式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、しかも、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、またはＸ３７のうちの１つのみがＫ残基である。
２０、項１９の類似体を含む薬物組成物。
２１、糖尿病、糖尿病合併症を予防及び／または治療するための薬物の調製における、項１９に記載の類似体の使用。
２２、項１０または項２０に記載の薬物組成物を含む容器と、前記薬物組成物のプロトコルを含む添付文書とを含む、製品。
２３、１つ以上の他の薬物を含む容器をさらに含む、項２２に記載の製品。
２４、前記１つ以上の他の薬物が、糖尿病または糖尿病合併症を治療するための他の薬物である、項２３に記載の製品。
１、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩であって、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、下記式で表されるアミノ酸配列を含み、
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９）、
式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、
ただし、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、またはＸ３７のうちの１つのみがＫ残基であり、
前記誘導体は、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
【化6】
であり、
ｘは４～３８の整数である、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩。
２、前記延長部分は、
ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１９ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２０ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２１ＣＯ－、及びＨＯＯＣ（ＣＨ２）２２ＣＯ－からなる群より選択される、項１に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
３、前記延長部分は、リンカーを介してＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結されている、項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
４、前記リンカーは、
【化7】
であり、式中、ｍは０、１、２または３であり；ｎは１、２または３であり；ｓは０～６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である。
好ましくは、リンカーは、
【化8】
であり、
式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である、項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
５、前記リンカーは、
【化9】
であり、式中、ｍは１であり、ｎは１または２である、項４に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
６、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、Ｎ－ε３４－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε３７－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３７－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学上許容される塩である、項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
７、（１）上記項のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液と、上記項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液とを混合すること；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を採取すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調製する方法。
８、上記項のいずれか一項に記載の延長部分が溶解されている溶液と混合する前に、ＧＬＰ－１類似体が溶解されている溶液にトリエチルアミンを加えることをさらに含む、項７に記載の方法。
９、上記項のいずれか一項に記載の延長部分の溶液が、アセトニトリルで溶解されたものである、項７または８に記載の方法。
１０、項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩、及び薬学上許容される補助材料を含む、薬物組成物。
１１、糖尿病（１型糖尿病と２型糖尿病を含む）または糖尿病合併症を予防及び／または治療するための薬物の調製における、項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩の使用。
１２、前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、項１１に記載の使用。
１３、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための薬物の調製における、項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩の使用。
１４、前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、項１３に記載の使用。
１５、被験者に予防または治療有効量の項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を投与することを含む、糖尿病（１型糖尿病と２型糖尿病を含む）または糖尿病合併症を予防及び／または治療するための方法。
１６、前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、項１５に記載の方法。
１７、被験者に治療有効量の項１～６のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を投与することを含む、血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための方法。
１８、前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖を低下させることを含む、項１７に記載の方法。
１９、下記式で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体。
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＸ１９ＬＥＥＸ２３ＡＡＲＸ２７ＦＩＸ３０ＷＬＶＸ３４ＧＸ３６Ｘ３７ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９）
式中、Ｘ８は、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌ、ＧまたはＳから選択され、Ｘ１９はＹまたはＫであり、Ｘ２３はＱまたはＫであり、Ｘ２７はＥまたはＫであり、Ｘ３０はＡまたはＫであり、Ｘ３４はＲまたはＫであり、Ｘ３６はＲまたはＫであり、Ｘ３７はＧまたはＫであり、しかも、Ｘ１９、Ｘ２３、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ３０、Ｘ３４、Ｘ３６、またはＸ３７のうちの１つのみがＫ残基である。
２０、項１９の類似体を含む薬物組成物。
２１、糖尿病、糖尿病合併症を予防及び／または治療するための薬物の調製における、項１９に記載の類似体の使用。
２２、項１０または項２０に記載の薬物組成物を含む容器と、前記薬物組成物のプロトコルを含む添付文書とを含む、製品。
２３、１つ以上の他の薬物を含む容器をさらに含む、項２２に記載の製品。
２４、前記１つ以上の他の薬物が、糖尿病または糖尿病合併症を治療するための他の薬物である、項２３に記載の製品。
【手続補正5】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0060】
実施例５ ＧＬＰ－１類似体の誘導体の調製
下記式に表されるＧＬＰ－１類似体の誘導体、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２と略称する）の調製
１、脂肪酸による修飾：上記実施例で調製、収集されたＶａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７）沈澱に水を加えて４～６ｍｇ／ｍｌ溶液を調製し、１Ｍ水酸化ナトリウムを加えてｐＨを１１．０～１１．５に調整し、タンパク質が完全に溶解するように均一に振り、ＨＰＬＣでポリペプチド濃度を定量した。ポリペプチドと脂肪酸（構造は下記通りである）とのモル比が１：４となるように脂肪酸粉末を取ってアセトニトリルに溶かした。体積が１０００分の２のトリエチルアミンをポリペプチド溶液に加え、脂肪酸溶液と混合し、混合液を４℃で１時間静置した。
サンプルを水で５倍に希釈し、１Ｍクエン酸（または１０％酢酸）でｐＨを４．８に調整して反応を停止し、４℃で１０分間置いて沈殿（酸沈殿）させた後、１３０００ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、沈殿物を－８０℃で保存した。
２、脂肪酸の脱保護と精製：ポリペプチドの最終濃度が約１０ｍｇ／ｍｌになるようにＴＦＡを酸沈殿したサンプルに加え、振とうして沈澱を溶解し、室温で３０分間静置して脱保護し、４Ｍ ＮａＯＨを反応液に滴加してｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止した。
分取液体分析装置（島津ＬＣ－８Ａ）を使用して、停止した反応液を流速４ｍｌ／ｍｉｎで、１０ｍＭ酢酸アンモニウム、２０％エタノール（平衡液３）で予め平衡化したＵｎｉＳｉｌ １０－１２０Ｃ１８（Suzhou Nano-Micro Technology CO., LTD.から購入）にポンプして濃縮した。平衡液３で洗浄した後、０～１００％溶出液（１０ｍＭ酢酸アンモニウム、８０％エタノール）で段階的に溶出し、溶出ピークを収集してＲＰ－ＨＰＬＣで検出した結果、純度は約９０％であった。
溶出ピークを水で３倍に希釈し、酸沈殿によりｐＨを４．８０に調整し、４℃で３０分間酸沈殿させた。遠心分離後、ＰＢＳＴ緩衝液（ｐＨ７．０）を沈殿物に加えて再溶解し、－８０℃で保存した。
上記の方法に従って、Ｎ－ε２６－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２６Ａｒｇ３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ０）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、Ｎ－ε１９－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｌｙｓ１９Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１）、Ｎ－ε２７－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２７Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ３）、Ｎ－ε３４－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε３６－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３６－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ６）、Ｎ－ε３７－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３７－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ８）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｌｅｕ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１０）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｇｌｙ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１１）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｓｅｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１２）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｌｅｕ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１５）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｇｌｙ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１６）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｓｅｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１７）を順に調製した。
下記式に表されるＧＬＰ－１類似体の誘導体、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ２と略称する）の調製
【化10】
１、脂肪酸による修飾：上記実施例で調製、収集されたＶａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７）沈澱に水を加えて４～６ｍｇ／ｍｌ溶液を調製し、１Ｍ水酸化ナトリウムを加えてｐＨを１１．０～１１．５に調整し、タンパク質が完全に溶解するように均一に振り、ＨＰＬＣでポリペプチド濃度を定量した。ポリペプチドと脂肪酸（構造は下記通りである）とのモル比が１：４となるように脂肪酸粉末を取ってアセトニトリルに溶かした。体積が１０００分の２のトリエチルアミンをポリペプチド溶液に加え、脂肪酸溶液と混合し、混合液を４℃で１時間静置した。
【化11】
サンプルを水で５倍に希釈し、１Ｍクエン酸（または１０％酢酸）でｐＨを４．８に調整して反応を停止し、４℃で１０分間置いて沈殿（酸沈殿）させた後、１３０００ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、沈殿物を－８０℃で保存した。
２、脂肪酸の脱保護と精製：ポリペプチドの最終濃度が約１０ｍｇ／ｍｌになるようにＴＦＡを酸沈殿したサンプルに加え、振とうして沈澱を溶解し、室温で３０分間静置して脱保護し、４Ｍ ＮａＯＨを反応液に滴加してｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止した。
分取液体分析装置（島津ＬＣ－８Ａ）を使用して、停止した反応液を流速４ｍｌ／ｍｉｎで、１０ｍＭ酢酸アンモニウム、２０％エタノール（平衡液３）で予め平衡化したＵｎｉＳｉｌ １０－１２０Ｃ１８（Suzhou Nano-Micro Technology CO., LTD.から購入）にポンプして濃縮した。平衡液３で洗浄した後、０～１００％溶出液（１０ｍＭ酢酸アンモニウム、８０％エタノール）で段階的に溶出し、溶出ピークを収集してＲＰ－ＨＰＬＣで検出した結果、純度は約９０％であった。
溶出ピークを水で３倍に希釈し、酸沈殿によりｐＨを４．８０に調整し、４℃で３０分間酸沈殿させた。遠心分離後、ＰＢＳＴ緩衝液（ｐＨ７．０）を沈殿物に加えて再溶解し、－８０℃で保存した。
上記の方法に従って、Ｎ－ε２６－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２６Ａｒｇ３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ０）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ４）、Ｎ－ε１９－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｌｙｓ１９Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１）、Ｎ－ε２７－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２７Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ３）、Ｎ－ε３４－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ５）、Ｎ－ε３６－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３６－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ６）、Ｎ－ε３７－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｖａｌ８Ｇｌｕ２２Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３７－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ７）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ８）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ９）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｌｅｕ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１０）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｇｌｙ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１１）、Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｓｅｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１２）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｌｅｕ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１５）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｇｌｙ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１６）、Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｓｅｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１７）を順に調製した。
【表1】
【手続補正6】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-11-11
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩であって、
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、式
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＸ２３ＡＡＲＥＦＩＸ３０ＷＬＶＲＧＲＧ
［式中、Ｘ８ がＩ、Ｘ ２３ がＫ、Ｘ ３０ がＡである；または、Ｘ ８ がＴもしくはＩ、Ｘ ２３ がＱ、Ｘ ３０ がＫである。］で表されるアミノ酸配列を含み、
前記誘導体は、リンカーを介して前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
［式中、ｘは４～３８の整数である］で表され、
前記リンカーは、
［式中、ｍは０、１、２、または３であり；ｎは１、２、または３であり；ｓは０～６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である］で表される、
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩。
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体は、式
ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＸ２３ＡＡＲＥＦＩＸ３０ＷＬＶＲＧＲＧ
［式中、Ｘ８ がＩ、Ｘ ２３ がＫ、Ｘ ３０ がＡである；または、Ｘ ８ がＴもしくはＩ、Ｘ ２３ がＱ、Ｘ ３０ がＫである。］で表されるアミノ酸配列を含み、
前記誘導体は、リンカーを介して前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体のＫ残基に連結する延長部分を含み、
前記延長部分は、
【化1】
［式中、ｘは４～３８の整数である］で表され、
前記リンカーは、
【化2】
［式中、ｍは０、１、２、または３であり；ｎは１、２、または３であり；ｓは０～６の任意の整数であり；ｐは１～８の任意の整数である］で表される、
ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項2】
前記延長部分が、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１９ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２０ＣＯ－、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）２１ＣＯ－、及びＨＯＯＣ（ＣＨ２）２２ＣＯ－からなる群より選択される、請求項１に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項3】
前記リンカーが、
［式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である］で表される、請求項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【化3】
［式中、ｍは１または２であり；ｎは１または２であり；ｐは１～５の任意の整数である］で表される、請求項１または２に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項4】
前記リンカーが、
［式中、ｍは１であり、ｎは１または２である］で表される、請求項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【化4】
［式中、ｍは１であり、ｎは１または２である］で表される、請求項３に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項5】
Ｎ－ε２３－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ２３Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ９）、
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、及び
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）
からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学上許容される塩である、請求項１～４のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｔｈｒ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１３）、及び
Ｎ－ε３０－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）－４（ｓ）－カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセトアミド）エトキシ］エトキシ）アセチル］（Ｉｌｅ８Ｇｌｕ２２Ｌｙｓ３０Ａｒｇ２６，３４－ＧＬＰ－１（７－３７））ペプチド（Ｍ１４）
からなる群より選択されるいずれか一つの誘導体またはその薬学上許容される塩である、請求項１～４のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩。
【請求項6】
（１）前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体が溶解されている溶液と、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体の誘導体において前記延長部分及び前記リンカーとなる構造を含む脂肪酸が溶解されている溶液とを混合すること；
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を回収すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調製する方法。
（２）ｐＨを４～５に調整して反応を停止させ、沈殿が生じるまで静置した後、沈殿を回収すること；及び
（３）ＴＦＡを沈澱に加え、ｐＨを７．５～８．５に調整して反応を停止すること
を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩を調製する方法。
【請求項7】
前記脂肪酸が溶解されている溶液と混合する前に、前記ＧＬＰ－１（７－３７）類似体が溶解されている溶液にトリエチルアミンを加えることをさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記脂肪酸が溶解されている溶液が、アセトニトリルで溶解されたものである、請求項６または７に記載の方法。
【請求項9】
請求項１～５のいずれか一項に記載の誘導体またはその薬学上許容される塩、及び薬学上許容される補助材料を含む、医薬組成物。
【請求項10】
糖尿病または糖尿病合併症の予防薬または治療薬である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記糖尿病合併症が糖尿病性腎症である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
血糖の低減、耐糖能の改善、膵島β－細胞アポトーシスの減少、膵島β－細胞機能の増強、膵島β－細胞数の増加、及び／または膵島β－細胞のグルコース感受性の回復のための請求項１０又は１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記血糖の低減は、空腹時血糖及び／または食後血糖の低下を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
式： ＨＸ８ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＸ２３ＡＡＲＥＦＩＸ３０ＷＬＶＲＧＲＧ
［式中、Ｘ８ がＩ、Ｘ ２３ がＫ、Ｘ ３０ がＡである；または、Ｘ ８ がＴもしくはＩ、Ｘ ２３ がＱ、Ｘ ３０ がＫである。］で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体。
［式中、Ｘ８ がＩ、Ｘ ２３ がＫ、Ｘ ３０ がＡである；または、Ｘ ８ がＴもしくはＩ、Ｘ ２３ がＱ、Ｘ ３０ がＫである。］で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体。