【図1A】 図１は、ＥｒｂＢ２およびＥｒｂＢ３レセプターを発現するマウスＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞を示す。図１Ａは、磁性活性化前（左パネル）および後（右パネル）のセルソーティングの、心臓前駆細胞の単離された亜集団の純度を示す代表的フローサイトメトリーヒストグラムを示す。図１Ｂは、心臓前駆細胞におけるＥｒｂＢレセプターのｍＲＮＡ発現のプロフィールを示す。図１Ｃは、Ｓｃａ－１ｐｏｓ／ＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞上の細胞表面マーカーの代表的フローサイトメトリーヒストグラムを示す。影付きの領域は、相当するアイソタイプマッチ抗体コントロールで処理した細胞の蛍光を表す。

【図1B】 図１は、ＥｒｂＢ２およびＥｒｂＢ３レセプターを発現するマウスＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞を示す。図１Ａは、磁性活性化前（左パネル）および後（右パネル）のセルソーティングの、心臓前駆細胞の単離された亜集団の純度を示す代表的フローサイトメトリーヒストグラムを示す。図１Ｂは、心臓前駆細胞におけるＥｒｂＢレセプターのｍＲＮＡ発現のプロフィールを示す。図１Ｃは、Ｓｃａ－１ｐｏｓ／ＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞上の細胞表面マーカーの代表的フローサイトメトリーヒストグラムを示す。影付きの領域は、相当するアイソタイプマッチ抗体コントロールで処理した細胞の蛍光を表す。

【図1C】 図１は、ＥｒｂＢ２およびＥｒｂＢ３レセプターを発現するマウスＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞を示す。図１Ａは、磁性活性化前（左パネル）および後（右パネル）のセルソーティングの、心臓前駆細胞の単離された亜集団の純度を示す代表的フローサイトメトリーヒストグラムを示す。図１Ｂは、心臓前駆細胞におけるＥｒｂＢレセプターのｍＲＮＡ発現のプロフィールを示す。図１Ｃは、Ｓｃａ－１ｐｏｓ／ＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞上の細胞表面マーカーの代表的フローサイトメトリーヒストグラムを示す。影付きの領域は、相当するアイソタイプマッチ抗体コントロールで処理した細胞の蛍光を表す。

【図2A】 図２は、マウスＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞が、インビトロで内皮細胞および心筋細胞に向かって分化することを示す。図２Ａは、増殖培地（左パネル）もしくは内皮細胞（ＥＣ）分化培地（中央パネル）中での心臓前駆細胞のインキュベーション後の、毛細管様構造の形成の例示的な顕微鏡視野心を示す。ＣＤ３１ｐｏｓ心臓内皮細胞を、陽性コントロールとして使用した（右パネル）。図２Ｂは、増殖培地（コントロール、左のバー）中で、または内皮細胞分化培地（ｄｉｆｆ、中央のバー）中でインキュベートした心臓前駆細胞、および心臓内皮細胞（ＥＣ、右のバー）の形態発生活性（ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）のグラフ表示を示す。毛細管形成を、それらの全長を測定することによって評価した。図２Ｃは、通常増殖培地（Ｃｏｎ）中でまたは心筋細胞分化培地（Ｄｉｆｆ）中で１週間または３週間（ｗ）にわたって培養した心臓Ｓｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ細胞の心臓特異的遺伝子発現の例示的リアルタイムＰＣＲ分析を図示する。その値は、３回の実験の平均である。ｃＴｎＴ、心臓トロポニンＴ；－ＭＨＣ、－ミオシン重鎖。

【図2B】 図２は、マウスＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞が、インビトロで内皮細胞および心筋細胞に向かって分化することを示す。図２Ａは、増殖培地（左パネル）もしくは内皮細胞（ＥＣ）分化培地（中央パネル）中での心臓前駆細胞のインキュベーション後の、毛細管様構造の形成の例示的な顕微鏡視野心を示す。ＣＤ３１ｐｏｓ心臓内皮細胞を、陽性コントロールとして使用した（右パネル）。図２Ｂは、増殖培地（コントロール、左のバー）中で、または内皮細胞分化培地（ｄｉｆｆ、中央のバー）中でインキュベートした心臓前駆細胞、および心臓内皮細胞（ＥＣ、右のバー）の形態発生活性（ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）のグラフ表示を示す。毛細管形成を、それらの全長を測定することによって評価した。図２Ｃは、通常増殖培地（Ｃｏｎ）中でまたは心筋細胞分化培地（Ｄｉｆｆ）中で１週間または３週間（ｗ）にわたって培養した心臓Ｓｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ細胞の心臓特異的遺伝子発現の例示的リアルタイムＰＣＲ分析を図示する。その値は、３回の実験の平均である。ｃＴｎＴ、心臓トロポニンＴ；－ＭＨＣ、－ミオシン重鎖。

【図2C】 図２は、マウスＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞が、インビトロで内皮細胞および心筋細胞に向かって分化することを示す。図２Ａは、増殖培地（左パネル）もしくは内皮細胞（ＥＣ）分化培地（中央パネル）中での心臓前駆細胞のインキュベーション後の、毛細管様構造の形成の例示的な顕微鏡視野心を示す。ＣＤ３１ｐｏｓ心臓内皮細胞を、陽性コントロールとして使用した（右パネル）。図２Ｂは、増殖培地（コントロール、左のバー）中で、または内皮細胞分化培地（ｄｉｆｆ、中央のバー）中でインキュベートした心臓前駆細胞、および心臓内皮細胞（ＥＣ、右のバー）の形態発生活性（ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）のグラフ表示を示す。毛細管形成を、それらの全長を測定することによって評価した。図２Ｃは、通常増殖培地（Ｃｏｎ）中でまたは心筋細胞分化培地（Ｄｉｆｆ）中で１週間または３週間（ｗ）にわたって培養した心臓Ｓｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ細胞の心臓特異的遺伝子発現の例示的リアルタイムＰＣＲ分析を図示する。その値は、３回の実験の平均である。ｃＴｎＴ、心臓トロポニンＴ；－ＭＨＣ、－ミオシン重鎖。

【図3A】 図３は、ＮＲＧ－１が、筋線維芽細胞へのマウス心臓前駆細胞の移行を防止することを示す。図３Ａは、マウスにおける実験的心筋梗塞後７日目（Ｄ７、ＭＩ）に、インビボでαＳＭＡ陽性およびコラーゲン１生成筋線維芽細胞に向かう心臓前駆細胞の蓄積が存在することを示す、代表的なフローサイトメトリードットブロットを示す。図３Ｂは、αＳＭＡ陽性（左）およびコラーゲン１α陽性（右）のＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞のフローサイトメトリー分析からのデータのグラフ表示を示す。Ｐ値が示される（対応のないｔ検定）。図３Ｃは、ＴＧＦβ単独（ＴＧＦβ）とともに、または３０ｎｇ／ｍｌ ＮＲＧ－１と組み合わせて（ＴＧＦβ＋ＮＲＧ－１）、４８時間インキュベートした心臓前駆細胞におけるαＳＭＡタンパク質の発現を示す、代表的な細胞蛍光グラフィックドットプロットを示す。図３Ｄは、フローサイトメトリーによって評価されるように、心臓Ｓｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ前駆細胞におけるαＳＭＡ発現の平均蛍光強度を示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＥＭを表す。Ｐ値は、ｔ検定によって計算された有意レベルを示す。

【図3B】 図３は、ＮＲＧ－１が、筋線維芽細胞へのマウス心臓前駆細胞の移行を防止することを示す。図３Ａは、マウスにおける実験的心筋梗塞後７日目（Ｄ７、ＭＩ）に、インビボでαＳＭＡ陽性およびコラーゲン１生成筋線維芽細胞に向かう心臓前駆細胞の蓄積が存在することを示す、代表的なフローサイトメトリードットブロットを示す。図３Ｂは、αＳＭＡ陽性（左）およびコラーゲン１α陽性（右）のＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞のフローサイトメトリー分析からのデータのグラフ表示を示す。Ｐ値が示される（対応のないｔ検定）。図３Ｃは、ＴＧＦβ単独（ＴＧＦβ）とともに、または３０ｎｇ／ｍｌ ＮＲＧ－１と組み合わせて（ＴＧＦβ＋ＮＲＧ－１）、４８時間インキュベートした心臓前駆細胞におけるαＳＭＡタンパク質の発現を示す、代表的な細胞蛍光グラフィックドットプロットを示す。図３Ｄは、フローサイトメトリーによって評価されるように、心臓Ｓｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ前駆細胞におけるαＳＭＡ発現の平均蛍光強度を示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＥＭを表す。Ｐ値は、ｔ検定によって計算された有意レベルを示す。

【図3C】 図３は、ＮＲＧ－１が、筋線維芽細胞へのマウス心臓前駆細胞の移行を防止することを示す。図３Ａは、マウスにおける実験的心筋梗塞後７日目（Ｄ７、ＭＩ）に、インビボでαＳＭＡ陽性およびコラーゲン１生成筋線維芽細胞に向かう心臓前駆細胞の蓄積が存在することを示す、代表的なフローサイトメトリードットブロットを示す。図３Ｂは、αＳＭＡ陽性（左）およびコラーゲン１α陽性（右）のＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞のフローサイトメトリー分析からのデータのグラフ表示を示す。Ｐ値が示される（対応のないｔ検定）。図３Ｃは、ＴＧＦβ単独（ＴＧＦβ）とともに、または３０ｎｇ／ｍｌ ＮＲＧ－１と組み合わせて（ＴＧＦβ＋ＮＲＧ－１）、４８時間インキュベートした心臓前駆細胞におけるαＳＭＡタンパク質の発現を示す、代表的な細胞蛍光グラフィックドットプロットを示す。図３Ｄは、フローサイトメトリーによって評価されるように、心臓Ｓｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ前駆細胞におけるαＳＭＡ発現の平均蛍光強度を示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＥＭを表す。Ｐ値は、ｔ検定によって計算された有意レベルを示す。

【図3D】 図３は、ＮＲＧ－１が、筋線維芽細胞へのマウス心臓前駆細胞の移行を防止することを示す。図３Ａは、マウスにおける実験的心筋梗塞後７日目（Ｄ７、ＭＩ）に、インビボでαＳＭＡ陽性およびコラーゲン１生成筋線維芽細胞に向かう心臓前駆細胞の蓄積が存在することを示す、代表的なフローサイトメトリードットブロットを示す。図３Ｂは、αＳＭＡ陽性（左）およびコラーゲン１α陽性（右）のＳｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ心臓前駆細胞のフローサイトメトリー分析からのデータのグラフ表示を示す。Ｐ値が示される（対応のないｔ検定）。図３Ｃは、ＴＧＦβ単独（ＴＧＦβ）とともに、または３０ｎｇ／ｍｌ ＮＲＧ－１と組み合わせて（ＴＧＦβ＋ＮＲＧ－１）、４８時間インキュベートした心臓前駆細胞におけるαＳＭＡタンパク質の発現を示す、代表的な細胞蛍光グラフィックドットプロットを示す。図３Ｄは、フローサイトメトリーによって評価されるように、心臓Ｓｃａ－１ｐｏｓＣＤ３１ｎｅｇ前駆細胞におけるαＳＭＡ発現の平均蛍光強度を示す。データは、３回の独立した実験の平均±ＳＥＭを表す。Ｐ値は、ｔ検定によって計算された有意レベルを示す。

【図4】 図４は、ＥｒｂＢ２およびＥｒｂＢ３レセプターが、ヒト心臓における血管／血管周囲領域に位置することを示す。緑：ＥｒｂＢ２（左パネル）およびＥｒｂＢ３（右パネル）に関する染色（それぞれ、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎおよびＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ ＢｉｏｔｅｃｈのＡｂ）；赤：ファロイジン；青：ＴＯ－ＰＲＯ－３（核染色）；黄色の矢印は、血管周囲染色を示す。

【図5A】 図５は、ＮＲＧ－１が筋線維芽細胞へのヒト心臓前駆細胞の移行を防止することを示す。図５Ａは、単一細胞由来クローンを再プレートした直後（ｄ０、上パネル）および３日後（ｄ３、下パネル）のヒト心臓前駆細胞の位相差顕微鏡写真を示す。スケールバー＝１００μｍ。図５Ｂは、１週間または２週間（ｗ）にわたって、分化培地中で培養する前（Ｃ）および後のヒト心臓前駆細胞における心臓特異的遺伝子発現のリアルタイムＰＣＲ分析を示す。値は、３回の実験の平均である（対応のないｔ検定）。図５Ｃは、ヒト心臓前駆細胞上の細胞表面マーカーのフローサイトメトリーヒストグラムを示す。影付きの領域は、相当するアイソタイプマッチ抗体コントロールで処理した細胞の蛍光を表す。

【図5B】 図５は、ＮＲＧ－１が筋線維芽細胞へのヒト心臓前駆細胞の移行を防止することを示す。図５Ａは、単一細胞由来クローンを再プレートした直後（ｄ０、上パネル）および３日後（ｄ３、下パネル）のヒト心臓前駆細胞の位相差顕微鏡写真を示す。スケールバー＝１００μｍ。図５Ｂは、１週間または２週間（ｗ）にわたって、分化培地中で培養する前（Ｃ）および後のヒト心臓前駆細胞における心臓特異的遺伝子発現のリアルタイムＰＣＲ分析を示す。値は、３回の実験の平均である（対応のないｔ検定）。図５Ｃは、ヒト心臓前駆細胞上の細胞表面マーカーのフローサイトメトリーヒストグラムを示す。影付きの領域は、相当するアイソタイプマッチ抗体コントロールで処理した細胞の蛍光を表す。

【図5C】 図５は、ＮＲＧ－１が筋線維芽細胞へのヒト心臓前駆細胞の移行を防止することを示す。図５Ａは、単一細胞由来クローンを再プレートした直後（ｄ０、上パネル）および３日後（ｄ３、下パネル）のヒト心臓前駆細胞の位相差顕微鏡写真を示す。スケールバー＝１００μｍ。図５Ｂは、１週間または２週間（ｗ）にわたって、分化培地中で培養する前（Ｃ）および後のヒト心臓前駆細胞における心臓特異的遺伝子発現のリアルタイムＰＣＲ分析を示す。値は、３回の実験の平均である（対応のないｔ検定）。図５Ｃは、ヒト心臓前駆細胞上の細胞表面マーカーのフローサイトメトリーヒストグラムを示す。影付きの領域は、相当するアイソタイプマッチ抗体コントロールで処理した細胞の蛍光を表す。