特開2022-24205ビリルビンオキシダーゼの保存方法、ビリルビンオキシダーゼ製品、および染毛剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022024205
(43)【公開日】2022-02-09
(54)【発明の名称】ビリルビンオキシダーゼの保存方法、ビリルビンオキシダーゼ製品、および染毛剤
(51)【国際特許分類】
C12N 9/06 20060101AFI20220202BHJP
A61Q 5/10 20060101ALI20220202BHJP
A61K 8/66 20060101ALI20220202BHJP
A61K 8/98 20060101ALI20220202BHJP
A61K 8/9728 20170101ALI20220202BHJP
A61K 8/49 20060101ALI20220202BHJP
A61K 8/9794 20170101ALI20220202BHJP
A61K 8/9789 20170101ALI20220202BHJP
A61K 8/64 20060101ALI20220202BHJP
【ＦＩ】
C12N9/06
A61Q5/10
A61K8/66
A61K8/98
A61K8/9728
A61K8/49
A61K8/9794
A61K8/9789
A61K8/64
【審査請求】未請求
【請求項の数】4
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2018228206
(22)【出願日】2018-12-05
(71)【出願人】
【識別番号】000204686
【氏名又は名称】大関株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000338
【氏名又は名称】特許業務法人ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ
(72)【発明者】
【氏名】加戸 悠
(72)【発明者】
【氏名】山田 浩之
(72)【発明者】
【氏名】坪井 宏和
(72)【発明者】
【氏名】坊垣 隆之
(72)【発明者】
【氏名】仙波 弘雅
(72)【発明者】
【氏名】幸田 明生
(72)【発明者】
【氏名】橋本 一俊
(72)【発明者】
【氏名】植田 萌
(72)【発明者】
【氏名】辻野 義雄
【テーマコード（参考）】
4B050
4C083
【Ｆターム（参考）】
4B050CC03
4B050DD02
4B050DD03
4B050DD05
4B050KK01
4B050KK03
4B050KK07
4B050KK11
4B050KK12
4B050KK14
4B050KK15
4B050KK18
4B050KK20
4B050LL03
4C083AA031
4C083AA032
4C083AA071
4C083AA072
4C083AA111
4C083AA112
4C083AC851
4C083AC852
4C083AD471
4C083AD472
4C083BB60
4C083CC36
4C083DD23
4C083DD27
4C083EE26
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ビリルビンオキシダーゼ（ＢＯＤ）による酸化反応を阻害することがなく、かつ、ＢＯＤを安定的に保存することができる、新規のＢＯＤの保存方法を提供すること。
【解決手段】本発明のＢＯＤの保存方法は、ＢＯＤおよび特定の安定化剤を含むＢＯＤ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存する方法であって、安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である。
【選択図】図１
【解決手段】本発明のＢＯＤの保存方法は、ＢＯＤおよび特定の安定化剤を含むＢＯＤ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存する方法であって、安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤を含むビリルビンオキシダーゼ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存することを特徴とする、ビリルビンオキシダーゼの保存方法：
ここで、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である。
ここで、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である。
【請求項2】
容器内にビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤が含まれ、
上記容器内は脱酸素雰囲気であり、
上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下であることを特徴とする、ビリルビンオキシダーゼ製品。
上記容器内は脱酸素雰囲気であり、
上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下であることを特徴とする、ビリルビンオキシダーゼ製品。
【請求項3】
上記ビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤は溶液状態である、請求項２に記載のビリルビンオキシダーゼ製品。
【請求項4】
請求項２または３に記載のビリルビンオキシダーゼ製品を含むことを特徴とする、染毛剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ビリルビンオキシダーゼの安定的な保存方法に関する。また本発明は、長期間安定で、かつビリルビンオキシダーゼの酸化反応を阻害しないビリルビンオキシダーゼ製品、および当該ビリルビンオキシダーゼ製品を含む染毛剤に関する。
【背景技術】
【0002】
ビリルビンオキシダーゼ（以下、適宜「ＢＯＤ」と略記する。）は、ビリルビンをビリベルジンに酸化させる反応を触媒する酵素であり、例えば、臨床検査の分野において、生体試料中のビリルビンの濃度を測定するために用いられている。またＢＯＤは、インドール類縁体を酸化する性質から、染毛剤への応用が期待されている。
【0003】
現在商業的に供給されているＢＯＤ製品は、酵素反応に好適なｐＨを与える緩衝剤、必要に応じて界面活性剤等の反応条件を制御する成分を含み、糖類や不活性タンパク質などの一般的な賦形剤などとともに凍結乾燥させた状態で流通されている。乾燥状態のＢＯＤは、使用時に界面活性剤や緩衝剤を含む指定の溶媒に溶解して使用される。製品に含まれるＢＯＤは乾燥状態では比較的安定であるが、いったん溶解した溶液状態では失活しやすいという問題点がある。たとえば、市販されているＢＯＤ試薬を、Ｔｒｉｓ－Ｈ２ＳＯ４(ｐＨ８．５)緩衝液中、５℃で保存した場合、９６時間安定であるに過ぎない。
【0004】
また乾燥状態のＢＯＤは、使用の度に必要量を溶解する操作が必要であるため、使用時の工程数の増加、および、使用時にＢＯＤの粉体が飛散することによる作業者へのＢＯＤの暴露、などの問題点もある。またＢＯＤ製品は、流通コストの観点から常温で流通されることが望ましい。
【0005】
上記の事情に鑑み、ＢＯＤ製品（特に溶液状態）のＢＯＤを安定的に保存する方法が検討されている。例えば、特許文献１では、還元剤（チオ硫酸ナトリウム）を用いたＢＯＤの安定化方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】特開平１０－４２８６９号公報（１９９８年２月１７日公開）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
しかしながら、上述のような従来技術は、用いた還元剤（チオ硫酸ナトリウム）がＢＯＤによる酸化反応を阻害する、という問題があった。本発明の一実施形態は、上記問題点に鑑みなされたものであり、その目的は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがなく、ＢＯＤを安定的に保存することができる、新規のＢＯＤの保存方法を提供することである。
【0008】
また本発明は、長期間安定で、かつＢＯＤの酸化反応を阻害しないＢＯＤ製品、および当該ＢＯＤ製品を含む染毛剤を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者らは、前記課題を解決するため鋭意検討した結果、ＢＯＤおよび特定の物質（後述する「安定化剤」）を含むＢＯＤ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存することによって、上述した課題を解決し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0010】
即ち、本発明の一実施形態は、以下の構成を含むものである。
〔１〕ビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤を含むビリルビンオキシダーゼ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存することを特徴とする、ビリルビンオキシダーゼの保存方法：ここで、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である。
〔２〕容器内にビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤が含まれ、上記容器内は脱酸素雰囲気であり、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下であることを特徴とする、ビリルビンオキシダーゼ製品。
〔３〕上記ビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤は溶液状態である、〔２〕に記載のビリルビンオキシダーゼ製品。
〔４〕上記〔２〕または〔３〕に記載のビリルビンオキシダーゼ製品を含むことを特徴とする、染毛剤。
〔１〕ビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤を含むビリルビンオキシダーゼ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存することを特徴とする、ビリルビンオキシダーゼの保存方法：ここで、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である。
〔２〕容器内にビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤が含まれ、上記容器内は脱酸素雰囲気であり、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下であることを特徴とする、ビリルビンオキシダーゼ製品。
〔３〕上記ビリルビンオキシダーゼおよび安定化剤は溶液状態である、〔２〕に記載のビリルビンオキシダーゼ製品。
〔４〕上記〔２〕または〔３〕に記載のビリルビンオキシダーゼ製品を含むことを特徴とする、染毛剤。
【発明の効果】
【0011】
本発明の一実施形態によれば、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがなく、ＢＯＤを安定的に保存することができるという効果を奏する。
【0012】
さらに驚くべきことに本発明の一実施形態によれば、ＢＯＤの比活性が保存前よりも向上するという効果が得られた。これは本発明による、当業者が予期せぬ有利な効果に他ならない。
【0013】
また、本発明の一実施形態に係るＢＯＤ製品によれば、長期間安定で、かつＢＯＤの酸化反応を阻害しないため、当該ＢＯＤ製品を含む染毛剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】（ａ）および（ｂ）は、本発明の範囲外の保存方法、または本発明の一実施形態に係る保存方法を用いてＢＯＤを保存した場合の、ＢＯＤの残存活性をコントロールに対する相対値として示すグラフであり、（ｃ）は、本発明の一実施形態に係る保存方法、または本発明の範囲外の保存方法を用いてＢＯＤを保存した場合のＢＯＤの残存活性を示す表である。
【図2】本発明の一実施形態に係る安定化剤または比較物質によるＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）を示す図である。
【図3】本発明の一実施形態に係る安定化剤または比較物質によるＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）を示す図である。
【図4】本発明の一実施形態に係る染毛剤、または本発明の範囲外の染毛剤、による染毛試験を行った結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0015】
本発明の一実施形態について以下に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。本発明は、以下に説明する各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能である。即ち、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された特許文献の全てが、本明細書中において参考文献として援用される。また、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「Ａ～Ｂ」は、「Ａ以上（Ａを含みかつＡより大きい）Ｂ以下（Ｂを含みかつＢより小さい）」を意味する。
【0016】
本明細書中において、本発明の一実施形態に係るＸ（Ｘは任意の固有名詞、例えば保存方法、酵素溶液、ＢＯＤ、安定化剤、など）を、単に「本Ｘ」と称する場合もある。
【0017】
〔１．本発明の概要〕
従来、ＢＯＤの失活の原因は酸化に因るものと考えられており、ＢＯＤを安定的に保存するためには還元剤が用いられていた。そして還元剤としては、還元力の比較的強い還元剤が好ましく用いられる傾向にあった。
従来、ＢＯＤの失活の原因は酸化に因るものと考えられており、ＢＯＤを安定的に保存するためには還元剤が用いられていた。そして還元剤としては、還元力の比較的強い還元剤が好ましく用いられる傾向にあった。
【0018】
ＢＯＤはビリルビンの濃度測定の用途以外にも種々の用途に用いられ得る。ＢＯＤの用途の一例には、毛髪などのケラチン繊維を染色するための酸化染料に含まれる酸化触媒、としての用途が挙げられ、これは、ＢＯＤがインドール類縁体を酸化する性質を利用している。本発明者らは、従来の方法によって保存されたＢＯＤ（すなわち還元剤を含んでいるＢＯＤ）を上記酸化触媒として用いた場合には、酸化染料にＢＯＤと共に添加された還元剤によって、ＢＯＤのインドール類縁体に対する酸化が阻害され、その結果当該酸化染料の染毛性が阻害される、という問題点があることを初めて見出した。本発明者らは、かかる問題点を解決するために鋭意検討した。その結果、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）およびＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が特定の範囲内である物質を使用し、かつ、脱酸素雰囲気下にすることによって、ＢＯＤを安定的に保存できるという新知見を見出し、本発明を完成させた。
【0019】
〔２．保存方法〕
本保存方法は、ＢＯＤおよび安定化剤を含むＢＯＤ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存する方法である。ここで、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である。
本保存方法は、ＢＯＤおよび安定化剤を含むＢＯＤ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存する方法である。ここで、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である。
【0020】
本保存方法は上記構成を有することにより、ＢＯＤが触媒する酸化反応を阻害することなく、溶液状態のＢＯＤを安定的に保存することが可能である。すなわち、本保存方法は、本保存方法で保存されたＢＯＤ溶液を様々な用途に使用した場合であっても、ＢＯＤによる酸化反応は阻害されないという利点を有する。
【0021】
本明細書において特に言及しない限り「ＢＯＤ溶液」は、少なくともＢＯＤおよび安定化剤を含んでいる溶液を意図する。なお、ＢＯＤ溶液には、ＢＯＤおよび安定化剤以外の物質が含まれていてもよい。
【0022】
本明細書において、「ＢＯＤを安定的に保存する」とは、ＢＯＤおよび特定の物質を含むＢＯＤ溶液の脱酸素雰囲気下の保存において、特定の物質を含まないＢＯＤ溶液を脱酸素雰囲気下にて保存したときと比較して、ＢＯＤの活性をより高く維持した状態でＢＯＤを保存することをいう。本明細書において、上記特定の物質を、「安定化剤」という。なお、ＢＯＤの活性は、当該ＢＯＤを含む組成物の質量に対する活性（活性／質量）で表されることが多く、それ故に、活性を「比活性」と称する場合もある。
【0023】
本保存方法では、ＢＯＤを長期間、安定的に保存することが好ましい。本保存方法では、安定化剤を含まないＢＯＤ溶液を保存したときと比較して、ＢＯＤの活性をより高く維持した状態で、１４日以上ＢＯＤを保存することが好ましく、１８日以上ＢＯＤを保存することがより好ましく、２１日以上ＢＯＤを保存することがより好ましく、３３日以上ＢＯＤを保存することがさらに好ましく、３５日以上ＢＯＤを保存することが特に好ましい。
【0024】
本保存方法において、ＢＯＤを保存するときの温度は、特に限定されるものではないが、好ましくは４０℃以下、より好ましくは３０℃以下、さらに好ましくは２０℃以下、特に好ましくは１０℃以下である。
【0025】
本明細書において、ＢＯＤの活性は、簡潔には、以下のように評価する。ＡＢＴＳ基質を含む溶液に対してＢＯＤを添加した後、３７℃で反応させる。当該反応中、当該溶液の波長４３６ｎｍにおける吸光度の増加量を経時的に測定することによって、評価する。具体的な測定および評価方法は後述する試験例において説明する。
【0026】
（２－１）ＢＯＤ
本保存方法を適用可能なＢＯＤとしては、（１）任意の生物から得られる、公知のすべてのＢＯＤ（非組換えＢＯＤ）、（２）任意のＢＯＤをコードする遺伝子を生物体内または試験管内で発現させて得ることができる組換えＢＯＤ、（３）任意のＢＯＤのアミノ酸配列の置換、挿入および欠失等の変異によって得られる変異ＢＯＤ、ならびに（４）ＢＯＤの安定化およびＢＯＤの酵素活性の向上を目的とした、任意の担体で修飾したＢＯＤ、などを挙げることができる。上記生物としては、例えば、ミロセシウム属（例えばミロセシウム・ベルカリア）、ペニシリウム・ジャンシネラム、バチルス・リフェニフォルミス、コリネバクテリウム・グルタミカム、エシェリヒア・コリ、アガリカスビスポラス菌茸、スエヒロタケ、エビタケ、キク科植物、アルファルファ、シゾサッカロミセス・ポンベ、ピキア・パストリス、およびアスペルギルス属、などが挙げられるが、これらに限定されない。また、ＢＯＤをコードする遺伝子の由来となる生物と、ＢＯＤを得るために当該遺伝子を導入し、発現させる生物とは、同一であってもよく異なっていてもよい。
本保存方法を適用可能なＢＯＤとしては、（１）任意の生物から得られる、公知のすべてのＢＯＤ（非組換えＢＯＤ）、（２）任意のＢＯＤをコードする遺伝子を生物体内または試験管内で発現させて得ることができる組換えＢＯＤ、（３）任意のＢＯＤのアミノ酸配列の置換、挿入および欠失等の変異によって得られる変異ＢＯＤ、ならびに（４）ＢＯＤの安定化およびＢＯＤの酵素活性の向上を目的とした、任意の担体で修飾したＢＯＤ、などを挙げることができる。上記生物としては、例えば、ミロセシウム属（例えばミロセシウム・ベルカリア）、ペニシリウム・ジャンシネラム、バチルス・リフェニフォルミス、コリネバクテリウム・グルタミカム、エシェリヒア・コリ、アガリカスビスポラス菌茸、スエヒロタケ、エビタケ、キク科植物、アルファルファ、シゾサッカロミセス・ポンベ、ピキア・パストリス、およびアスペルギルス属、などが挙げられるが、これらに限定されない。また、ＢＯＤをコードする遺伝子の由来となる生物と、ＢＯＤを得るために当該遺伝子を導入し、発現させる生物とは、同一であってもよく異なっていてもよい。
【0027】
ＢＯＤは、ミロセシウム属に由来するＢＯＤをコードする遺伝子を、生物体内または試験管内で発現させて得られた組換えＢＯＤであってもよい。例えば、組換えＢＯＤは、任意のＢＯＤをコードする遺伝子をアスペルギルス属に導入し、アスペルギルス属にて発現させて得られたＢＯＤであってもよい。より具体的には、組換えＢＯＤは、ミロセシウム属に由来するＢＯＤをコードする遺伝子を、アスペルギルス属に導入し、アスペルギルス属にて、発現させて得られたＢＯＤであることが好ましい。
【0028】
本保存方法において用いられるＢＯＤの濃度は、特に限定されず、当該ＢＯＤの用途に応じて適宜設定され得る。
【0029】
（２－２）安定化剤
本安定化剤は、脱酸素雰囲気下にてＢＯＤを安定的に保存するために用いられる物質であり、安定化助剤ともいえる。本安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％＝波長４３６ｎｍの吸光度の１分間あたりの減少率）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である物質である限り、特に限定されるものではなく、任意の化合物、混合物、または組成物などを使用可能である。
本安定化剤は、脱酸素雰囲気下にてＢＯＤを安定的に保存するために用いられる物質であり、安定化助剤ともいえる。本安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％＝波長４３６ｎｍの吸光度の１分間あたりの減少率）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である物質である限り、特に限定されるものではなく、任意の化合物、混合物、または組成物などを使用可能である。
【0030】
本安定化剤としては、天然由来の、無機塩類、炭水化物、アミノ酸、脂肪酸、脂質、タンパク質、およびペプチドなどからなる群から選択される少なくとも一つ以上の物質であることが好ましい。また、本安定化剤は、上述した群に列挙された物質の任意の組み合わせであってもよい。
【0031】
このような安定化剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、（ａ）尿酸、グリオキシル酸などの無機物、および（ｂ）ペプトン類（カゼインペプトン、獣肉ペプトン、心筋ペプトン、ゼラチンペプトン、および大豆ペプトンなど）、エキス類（肉エキス、魚エキス、植物エキス、麦芽エキス、および酵母エキス）、オリゴペプチド、コーンスティープリカー、大豆粉、小麦ふすまなどの有機物、からなる群から選択される少なくとも一つ以上の物質が挙げられる。
【0032】
上記無機物としては、例えば和光純薬社などから入手したものを使用できる。また、上記有機物としては、例えば、極東製薬工業社製麦芽エキス、極東製薬工業社製魚粉末エキス、極東製薬工業社製粉末酵母エキス、極東製薬工業社製極東ペプトン、極東製薬工業社製ペプトンＡ、極東製薬工業社製パティケース、極東製薬工業製ポテトペプトンＣＰ、アサヒグループ食品社製の酵母エキス（例えばミーストＰ１ＧおよびイーストックＳ－Ｐｄ）、オリエンタル酵母工業社製のコーンスティープリカー（略して「ＣＳＬ」ともいう。）、日本製薬社製のＨｉｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎ、不二製油社製の大豆オリゴペプチドであるハイニュートＡＭ、昭和産業社製の大豆粉８８、日本ＢＤ社製のＴｒｙｐｔｏｎｅ、および日本ＢＤ社製Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ、などからなる群から選択される少なくとも一つ以上の物質が挙げられるが、これらに限定されない。本安定化剤が上記群から選択される少なくとも一つである場合には、当該安定化剤は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがなく、かつ、本保存方法は、ＢＯＤを長期間安定的に保存することができる。本明細書中で列挙した種々の安定化剤は、単独で使用してもよく、複数種を組み合わせて使用してもよい。
【0033】
また、本保存方法において、ＢＯＤ溶液に含まれる安定化剤の最適な濃度は、ＢＯＤ溶液中のＢＯＤの濃度、安定化剤の種類等によって変動し得る。このため、ＢＯＤ溶液に含まれる安定化剤の最終濃度は、本発明の効果が得られる範囲で適宜設定すればよい。
【0034】
（２－３）脱酸素雰囲気
本保存方法においては、ＢＯＤの酸化を防止する為に、ＢＯＤが存在する雰囲気中にできるだけ酸素が存在しない状態（すなわち脱酸素雰囲気）であることが好ましい。このため、本保存方法においては、ＢＯＤおよび安定化剤を含むＢＯＤ溶液が「脱酸素雰囲気」で保存される。本保存方法において「脱酸素雰囲気」とは、ＢＯＤ溶液が保存される雰囲気における酸素濃度が、自然状態（換言すれば常温および常圧）で存在する酸素濃度よりも低い状態を意図する。
本保存方法においては、ＢＯＤの酸化を防止する為に、ＢＯＤが存在する雰囲気中にできるだけ酸素が存在しない状態（すなわち脱酸素雰囲気）であることが好ましい。このため、本保存方法においては、ＢＯＤおよび安定化剤を含むＢＯＤ溶液が「脱酸素雰囲気」で保存される。本保存方法において「脱酸素雰囲気」とは、ＢＯＤ溶液が保存される雰囲気における酸素濃度が、自然状態（換言すれば常温および常圧）で存在する酸素濃度よりも低い状態を意図する。
【0035】
本保存方法では、脱酸素雰囲気下においてＢＯＤ溶液を保存することによって、ＢＯＤの酸化（すなわち酵素失活）を防ぐことができ、そのため、ＢＯＤを安定的に保存することができるという利点を有する。
【0036】
本保存方法では、ＢＯＤを安定的に保存する観点から、ＢＯＤ溶液が保存される雰囲気における酸素濃度が、０．５体積％未満であることが好ましく、０．１体積％未満が特に好ましい。
【0037】
本保存方法では、脱酸素雰囲気を達成するための方法は特に限定されない。例えば、本保存方法では、（１）ＢＯＤ溶液を保存する容器に脱酸素剤を設置することによって脱酸素雰囲気を達成してもよいし、（２）脱酸素剤の成分を有する材質から作製された容器中にＢＯＤ溶液を保存することによって脱酸素雰囲気を達成してもよいし、（３）容器中の酸素を不活性気体（窒素ガスや、アルゴン等の希ガス）で置換することによって脱酸素雰囲気を達成してもよいし、（４）真空または減圧条件下でＢＯＤ溶液を保存することにより脱酸素雰囲気を達成してもよい。これら脱酸素雰囲気を達成するための方法は、単独で使用してもよく、複数の方法を組み合わせて使用してもよい。
【0038】
簡便さの観点からは上記（１）の方法が好ましい。上記（１）で用いられる脱酸素剤としては、例えば、三菱ガス化学社製エージレス（登録商標）、三菱ガス化学社製エージレスオーマック（登録商標）、三菱ガス化学社製アネロパック（登録商標）、鳥繁産業社製エバーフレッシュ、パウダーテック社製ワンダーキープ（登録商標）等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0039】
なお、本保存方法では、ＢＯＤをさらに安定的に保存する観点から、ＢＯＤを含むＢＯＤ溶液を脱酸素雰囲気下で保存することに加え、ＢＯＤ溶液中の溶存酸素濃度を低溶存酸素状態（好ましくは０．２ｍｇ／Ｌ未満であり、特に好ましくは０．０４ｍｇ／Ｌ未満）にすることが好ましい。ＢＯＤ溶液中の溶存酸素濃度は、ＢＯＤ溶液が保存される雰囲気における上述した好ましい酸素濃度下での、溶液における飽和酸素濃度以下であることがより好ましい。なお、溶液における飽和酸素濃度は溶液の温度に依存して変動し得る。例えば、空気雰囲気の酸素濃度が０．５体積％の場合、溶液における飽和酸素濃度は、２５℃で０．２ｍｇ／Ｌであり、０℃で０．３５ｍｇ／Ｌである。ＢＯＤ溶液中の溶存酸素濃度の好ましい態様（低溶存酸素状態）は、ＢＯＤ溶液に対して公知の脱気操作を行うことにより達成される。
【0040】
（２－４）ＡＢＴＳ初発吸光度減少率
本明細書において、ＡＢＴＳを含む溶液（ＡＢＴＳ溶液）の波長４３６ｎｍにおける吸光度を、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）とする。本明細書において、安定化剤のＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）とは、上記ＡＢＴＳ溶液および上記安定化剤を含む混合液の波長４３６ｎｍにおける吸光度の、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）（１００％）に対する１分間当たりの減少率（％）と定義する。なお、上記ＡＢＴＳ溶液は、光路長１．０ｃｍにて、波長４３６ｎｍにおける吸光度（Ａ４３６）が約１．３となるように、ＡＢＴＳの濃度が調整された溶液とする。ここで、「約１．３」とは、小数点以下第２位を四捨五入して得られた値が１．３となる範囲の値を意図する。具体的な測定方法は後述する試験例において説明する。ＡＢＴＳは、２，２’－アジノビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）の略称である。
本明細書において、ＡＢＴＳを含む溶液（ＡＢＴＳ溶液）の波長４３６ｎｍにおける吸光度を、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）とする。本明細書において、安定化剤のＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）とは、上記ＡＢＴＳ溶液および上記安定化剤を含む混合液の波長４３６ｎｍにおける吸光度の、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）（１００％）に対する１分間当たりの減少率（％）と定義する。なお、上記ＡＢＴＳ溶液は、光路長１．０ｃｍにて、波長４３６ｎｍにおける吸光度（Ａ４３６）が約１．３となるように、ＡＢＴＳの濃度が調整された溶液とする。ここで、「約１．３」とは、小数点以下第２位を四捨五入して得られた値が１．３となる範囲の値を意図する。具体的な測定方法は後述する試験例において説明する。ＡＢＴＳは、２，２’－アジノビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）の略称である。
【0041】
本保存方法において、上記安定化剤のＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）を測定する際の、測定用のＡＢＴＳ溶液中の安定化剤の濃度は、（ａ）安定化剤が単一の化合物からなるような、安定化剤の分子量が明らかである場合、１ｍＭとし、（ｂ）安定化剤が、分子量が不明の組成物からなるような物質である場合、窒素元素含有量を基準とし、測定用のＡＢＴＳ溶液１００ｍＬ中における安定化剤由来の窒素元素量が０．０１１ｇとなる濃度とする。なお、上記（ｂ）において安定化剤の窒素含有量は、ケルダール法により算定した値とする。
【0042】
本安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が、０．１０％以上であればよい。上記ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）は、０．２５％以上であることが好ましく、０．５０％以上であることがより好ましく、１．００％以上であることがさらに好ましく、３．００％以上であることが特に好ましい。上記構成によれば、ＢＯＤをより安定的に、より長期間保存できるという利点を有する。
【0043】
（２－５）ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率
本明細書において、ＤＭＢＱを含む溶液（ＤＭＢＱ溶液）に安定化剤を添加直後の混合液の波長２５６ｎｍにおける吸光度を、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）とする。本明細書において、安定化剤のＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）とは、上記ＤＭＢＱ溶液および上記安定化剤を含む混合液の波長２５６ｎｍにおける吸光度の、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）（１００％）に対する１分間当たりの減少率（％）と定義する。なお、上記ＤＭＢＱ溶液は、光路長１．０ｃｍにて、波長２５６ｎｍにおける吸光度（Ａ２５６）が約１．８となるように、ＤＭＢＱの濃度が調整された溶液とする。ここで、「約１．８」とは、小数点以下第２位を四捨五入して得られた値が１．８となる範囲の値を意図する。具体的な測定方法は後述する試験例において説明する。ＤＭＢＱは、２，５－ジメチル－１，４－ベンゾキノンの略称である。
本明細書において、ＤＭＢＱを含む溶液（ＤＭＢＱ溶液）に安定化剤を添加直後の混合液の波長２５６ｎｍにおける吸光度を、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）とする。本明細書において、安定化剤のＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）とは、上記ＤＭＢＱ溶液および上記安定化剤を含む混合液の波長２５６ｎｍにおける吸光度の、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）（１００％）に対する１分間当たりの減少率（％）と定義する。なお、上記ＤＭＢＱ溶液は、光路長１．０ｃｍにて、波長２５６ｎｍにおける吸光度（Ａ２５６）が約１．８となるように、ＤＭＢＱの濃度が調整された溶液とする。ここで、「約１．８」とは、小数点以下第２位を四捨五入して得られた値が１．８となる範囲の値を意図する。具体的な測定方法は後述する試験例において説明する。ＤＭＢＱは、２，５－ジメチル－１，４－ベンゾキノンの略称である。
【0044】
本保存方法において、上記安定化剤のＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）を測定する際の、測定用のＤＭＢＱ溶液中の安定化剤の濃度は、（ａ）安定化剤が単一の化合物からなるような、安定化剤の分子量が明らかである場合、０．１ｍＭとし、（ｂ）安定化剤が、分子量が不明の組成物からなるような物質である場合、窒素元素含有量を基準とし、測定用のＤＭＢＱ溶液１００ｍＬ中における安定化剤由来の窒素元素量が０．００１１ｇとなる濃度とする。なお、上記（ｂ）において安定化剤の窒素含有量は、上記（２－４）の項と同様の方法で算定した値とする。
【0045】
本安定化剤は、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が、０．８０％以下であればよい。上記ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）は、０．７０％以下であることが好ましく、０．５０％以下であることがより好ましく、０．２０％以下であることがさらに好ましく、本明細書における測定方法において０．００％以下、すなわち検出限界以下であることが特に好ましい。
【0046】
（２－６）溶媒
本保存方法では、ＢＯＤは安定化剤とともに溶液中に含まれる。ＢＯＤ溶液を形成するための溶媒としては、本ＢＯＤおよび本安定化剤を溶解できるものであれば特に限定されず、従来公知の溶媒を使用することができる。本溶媒は、本ＢＯＤおよび本安定化剤を容易に溶解できる点から好ましくは水（例えば蒸留水）である。
本保存方法では、ＢＯＤは安定化剤とともに溶液中に含まれる。ＢＯＤ溶液を形成するための溶媒としては、本ＢＯＤおよび本安定化剤を溶解できるものであれば特に限定されず、従来公知の溶媒を使用することができる。本溶媒は、本ＢＯＤおよび本安定化剤を容易に溶解できる点から好ましくは水（例えば蒸留水）である。
【0047】
本ＢＯＤ溶液は、本ＢＯＤ溶液を用いる用途に合わせて、任意のｐＨを有してもよいが、本ＢＯＤ溶液は、当該ＢＯＤ溶液中に含有されるＢＯＤの立体構造を安定に保つために、ｐＨ６～１０のｐＨを有することが好ましい。本ＢＯＤ溶液は、所望のｐＨを有するために、緩衝剤を含むことが好ましい。上記緩衝剤としては、従来公知の緩衝剤を使用可能である。また、本ＢＯＤ溶液は、所望のｐＨを有するために、従来公知の酸またはアルカリを用いて従来公知の方法でｐＨが調整され得る。
【0048】
（２－７）その他
本ＢＯＤ溶液は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがなく、かつ、ＢＯＤを安定的に保存することができる限り、ＢＯＤ、安定化剤、および溶媒以外の任意の物質を含んでいてもよく、例えば、緩衝剤、酸、塩基、無機塩、有機塩、金属塩、糖類、アミノ酸、不活性タンパク質、ペプチド、脂肪酸、脂質、界面活性剤、および樹脂などを含んでいてもよい。
本ＢＯＤ溶液は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがなく、かつ、ＢＯＤを安定的に保存することができる限り、ＢＯＤ、安定化剤、および溶媒以外の任意の物質を含んでいてもよく、例えば、緩衝剤、酸、塩基、無機塩、有機塩、金属塩、糖類、アミノ酸、不活性タンパク質、ペプチド、脂肪酸、脂質、界面活性剤、および樹脂などを含んでいてもよい。
【0049】
（２－８）用途
本保存方法によって保存されたＢＯＤ溶液は、任意の用途に用いられ得る。例えば、染毛、生体試料中のビリルビンの濃度の測定、生体試料中のビリルビンの除去、化粧品、食品加工、酵素燃料電池（例えば、酵素バイオ電池、酵素電池、等）、およびタンパク質の架橋などに用いることができる。本保存方法に用いられる安定化剤は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがないため、本保存方法によって保存されたＢＯＤ溶液は、上述した用途の中でも、染毛に好適に使用できる。
本保存方法によって保存されたＢＯＤ溶液は、任意の用途に用いられ得る。例えば、染毛、生体試料中のビリルビンの濃度の測定、生体試料中のビリルビンの除去、化粧品、食品加工、酵素燃料電池（例えば、酵素バイオ電池、酵素電池、等）、およびタンパク質の架橋などに用いることができる。本保存方法に用いられる安定化剤は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがないため、本保存方法によって保存されたＢＯＤ溶液は、上述した用途の中でも、染毛に好適に使用できる。
【0050】
〔３．ＢＯＤ製品〕
本発明の別の一実施形態は、容器内にＢＯＤおよび安定化剤が含まれ、上記容器内は脱酸素雰囲気であり、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である、ＢＯＤ製品を提供する。
本発明の別の一実施形態は、容器内にＢＯＤおよび安定化剤が含まれ、上記容器内は脱酸素雰囲気であり、上記安定化剤は、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）が０．１０％以上であり、かつ、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）が０．８０％以下である、ＢＯＤ製品を提供する。
【0051】
本ＢＯＤ製品に含まれる、ＢＯＤおよび安定化剤は粉末等の固体状であってもよいが、適切な溶媒によって溶解された溶液（つまりＢＯＤ溶液）であることが好ましい。ＢＯＤは溶液の状態で不安定であるが、本ＢＯＤ製品によればＢＯＤが溶液状態であっても安定的に保存することができる。
【0052】
なお、本ＢＯＤ製品に含まれる、ＢＯＤ、安定化剤、および溶媒等の説明は上記〔２．保存方法〕の項の説明を援用することができる。また、本ＢＯＤ製品は、上記（２－７）その他の項で説明した任意の物質をさらに含んでいてもよい。また、本ＢＯＤ製品において、容器内の脱酸素雰囲気は、上記（２－３）脱酸素雰囲気の項で説明した脱酸素雰囲気を形成するための方法によって達成され得る。
【0053】
（３－１）容器
本ＢＯＤ製品において用いられ得る容器は、少なくともＢＯＤおよび安定化剤を格納することができ、その容器内を脱酸素雰囲気にすることができる容器であれば、容器の材質、形状、大きさ等は限定されるものではない。容器の材質はガラス製であっても、樹脂製であってもよい。また瓶状であっても、袋状であってもよい。袋状の容器としてはファスナー付き樹脂製袋（例えばジップロック（登録商標）等）が利用可能である。容器の大きさは、格納されるＢＯＤ溶液の体積に応じて適宜、設計すればよい。
本ＢＯＤ製品において用いられ得る容器は、少なくともＢＯＤおよび安定化剤を格納することができ、その容器内を脱酸素雰囲気にすることができる容器であれば、容器の材質、形状、大きさ等は限定されるものではない。容器の材質はガラス製であっても、樹脂製であってもよい。また瓶状であっても、袋状であってもよい。袋状の容器としてはファスナー付き樹脂製袋（例えばジップロック（登録商標）等）が利用可能である。容器の大きさは、格納されるＢＯＤ溶液の体積に応じて適宜、設計すればよい。
【0054】
本容器は、脱酸素状態を容易に保つために、酸素を透過しない材料（または透過しにくい材料）から構成された容器であることが好ましい。また、本容器は、脱酸素剤の性質を有する成分を含む材料から構成されていてもよい。また、本容器は、ＢＯＤを安定的に保存することを可能とするために、半密閉容器であることが好ましく、あらゆる物質を透過させることがない密閉容器であることがより好ましい。
【0055】
本ＢＯＤ製品では、ＢＯＤおよび安定化剤を含む容器に、溶媒を加えることにより、ＢＯＤおよび安定化剤を溶解して、ＢＯＤ溶液としてもよい。それ故に、本ＢＯＤ製品における容器は、上記溶媒に対して耐性を有する容器であることが好ましい。
【0056】
（３－２）本ＢＯＤ製品の具体的態様の一例
本ＢＯＤ製品の態様は特に限定されるものではないが、例えば容器が開閉可能な蓋を有する瓶形状であり、蓋部の内側にパッケージングされた脱酸素剤を備えており、容器内部にＢＯＤおよび安定化剤が格納されているという態様（態様Ａ）であり得る。態様Ａの場合、保存されるＢＯＤは液体状であってもよく、固体状であってもよい。固体状のＢＯＤが態様Ａで保存される場合には、容器に溶媒を加えてＢＯＤおよび安定化剤を溶解することによりＢＯＤ溶液とした後であっても、ＢＯＤの保存に用いた容器と同じ容器を用いて、引き続きＢＯＤ溶液を脱酸素雰囲気下で安定的に保存できる。
本ＢＯＤ製品の態様は特に限定されるものではないが、例えば容器が開閉可能な蓋を有する瓶形状であり、蓋部の内側にパッケージングされた脱酸素剤を備えており、容器内部にＢＯＤおよび安定化剤が格納されているという態様（態様Ａ）であり得る。態様Ａの場合、保存されるＢＯＤは液体状であってもよく、固体状であってもよい。固体状のＢＯＤが態様Ａで保存される場合には、容器に溶媒を加えてＢＯＤおよび安定化剤を溶解することによりＢＯＤ溶液とした後であっても、ＢＯＤの保存に用いた容器と同じ容器を用いて、引き続きＢＯＤ溶液を脱酸素雰囲気下で安定的に保存できる。
【0057】
ＢＯＤおよび安定化剤が粉末等の固体状の場合は、パッケージングされた脱酸素剤は蓋部に備えられている必要はなく、ＢＯＤおよび安定化剤と共に容器内に同封されていればよい。容器内の脱酸素剤によって、容器内部が脱酸素雰囲気となる。さらに、容器内の空気は窒素等の不活性気体に置換されていてもよい。
【0058】
またファスナー付き樹脂製袋内に、ＢＯＤ、安定化剤、パッケージングされた脱酸素剤が格納される態様であってもよい。
【0059】
（３－３）用途
本ＢＯＤ製品は、任意の用途に用いられ得る。例えば、染毛、生体試料中のビリルビンの濃度の測定、生体試料中のビリルビンの除去、化粧品、食品加工、酵素燃料電池（例えば、酵素バイオ電池、酵素電池、等）、およびタンパク質の架橋などに用いることができる。本ＢＯＤ製品に含まれる安定化剤は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがないため、本ＢＯＤ製品は上述した各種用途に好適に使用できる。
本ＢＯＤ製品は、任意の用途に用いられ得る。例えば、染毛、生体試料中のビリルビンの濃度の測定、生体試料中のビリルビンの除去、化粧品、食品加工、酵素燃料電池（例えば、酵素バイオ電池、酵素電池、等）、およびタンパク質の架橋などに用いることができる。本ＢＯＤ製品に含まれる安定化剤は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがないため、本ＢＯＤ製品は上述した各種用途に好適に使用できる。
【0060】
〔４．染毛剤〕
本発明の別の一実施形態は、上記〔３．ＢＯＤ製品〕の項で説明したＢＯＤ製品を含む、染毛剤を提供する。
本発明の別の一実施形態は、上記〔３．ＢＯＤ製品〕の項で説明したＢＯＤ製品を含む、染毛剤を提供する。
【0061】
本染毛剤に含まれる、ＢＯＤ、安定化剤、溶媒、容器、具体的態様は、上記〔２．保存方法〕および〔３．ＢＯＤ製品〕の項の説明が援用され得る。
【0062】
（４－１）染毛性
本染毛剤に含まれるＢＯＤ製品に含まれている安定化剤は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがないため、本染毛剤は染毛性が良好である。
本染毛剤に含まれるＢＯＤ製品に含まれている安定化剤は、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがないため、本染毛剤は染毛性が良好である。
【0063】
本明細書において、「染毛性が良好である」とは、ＢＯＤを含みかつ安定化剤を含まない染毛剤を用いた染毛試験後の白髪の色差（ΔＥ＊ａｂ）に対する、本ＢＯＤ製品を含む染毛剤を用いた染毛試験後の白髪の色差（ΔＥ＊ａｂ）の差、すなわち色差の減少率（％）が５．０％以下であることを指す。すなわち、ＢＯＤを含みかつ安定化剤を含まない染毛剤を用いた染毛試験後の白髪の色差（ΔＥ＊ａｂ）を１００％とした場合の、本ＢＯＤ製品を含む染毛剤を用いた染毛試験後の白髪の色差（ΔＥ＊ａｂ）の相対値（％）が、９５．０％以上であることを指す。
【0064】
ここで、上記色差（ΔＥ＊ａｂ）は、無処理の白髪と染毛試験後の白髪との色の差をＬ＊ａ＊ｂ＊表色系を用いて表したものである。ここで、Ｌ＊は明度を表す。０から１００の数値があり、数値が高いほど明るいことを示す。また、ａ＊は色彩を示す。－６０～＋６０の数値があり、－であるほど緑を示し、＋であるほど赤を示す。また、ｂ＊は色彩を示す。－６０～＋６０の数値があり、－であるほど青を示し、＋であるほど黄色を示す。色差、ΔＥ＊ａｂは［（ΔＬ）２＋（Δａ）２＋（Δｂ）２］１／２で算出される値であり、ヘアカラーの評価において一般的に使用される単位である。染毛試験については、後述する試験例で説明する。
【0065】
本発明の一実施形態では、上記色差の減少率（％）が５．０％以下であることが好ましく、４．０％以下であることがより好ましく、３．０％以下であることがさらに好ましく、２．０％以下であることが特に好ましい。
【実施例0066】
以下、実施例によって本発明の一実施形態を具体的に説明するが、本発明はこれらの試験例に限定されるものではない。
【0067】
本実施例で使用した本安定化剤、およびその他の物質（以下、比較物質と称する。）は以下の通りである。なお、グリオキシル酸のみ、水酸化カリウム溶液を用いて、ｐＨ７．０に調整し、本実施例にて使用した。
（安定化剤）
・尿酸（和光純薬社製）
・グリオキシル酸（和光純薬社製）
・粉末麦芽エキス（極東製薬工業社製）
・粉末魚エキス（極東製薬工業社製）
・粉末酵母エキス（極東製薬工業社製）
・ＣＳＬ ソルリス０９５Ｅ（オリエンタル酵母工業社製）（表１～４、並びに図１、２および４ではＣＳＬと表記）
・ミーストＰ１Ｇ（アサヒグループ食品社製）
・ペプトンＡ（極東製薬工業社製）
・大豆粉８８（昭和産業社製）
・Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ（日本ＢＤ社製）
・パティケース（極東製薬工業社製）
・Ｈｉｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎ（日本製薬社製）
・ペプトン（極東製薬工業社製）
・ハイニュートＡＭ（不二製油社製）
（比較物質）
・尿素（和光純薬社製）
・硫酸アンモニウム（ナカライテスク社製）
・ジチオスレイトール（ＤＴＴ）（和光純薬社製）
・チオグリコール酸アンモニウム（佐々木化学社製）
・システアミン塩酸塩（佐々木化学社製）
・グリセリルモノチオグリコレート（表１～３および図１～３ではＧＭＴと表記）（佐々木化学社製）
・亜硫酸ナトリウム（和光純薬社製）
・グルタチオン（還元型）（和光純薬社製）
・Ｌ－システイン－塩酸塩（和光純薬社製）
・Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン（和光純薬社製）
・Ｌ－アスコルビン酸（和光純薬社製）
（試験例１）本保存方法によるＢＯＤの保存
ＢＯＤと、本安定化剤または比較物質と、を含むＢＯＤ溶液を一定期間、非脱酸素雰囲気下かつ５℃にて、または脱酸素雰囲気下かつ３０℃にて、保存した。保存中、任意の時点でＢＯＤの残存活性を測定することにより、本保存方法によるＢＯＤの安定的な保存について評価した。
（安定化剤）
・尿酸（和光純薬社製）
・グリオキシル酸（和光純薬社製）
・粉末麦芽エキス（極東製薬工業社製）
・粉末魚エキス（極東製薬工業社製）
・粉末酵母エキス（極東製薬工業社製）
・ＣＳＬ ソルリス０９５Ｅ（オリエンタル酵母工業社製）（表１～４、並びに図１、２および４ではＣＳＬと表記）
・ミーストＰ１Ｇ（アサヒグループ食品社製）
・ペプトンＡ（極東製薬工業社製）
・大豆粉８８（昭和産業社製）
・Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ（日本ＢＤ社製）
・パティケース（極東製薬工業社製）
・Ｈｉｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎ（日本製薬社製）
・ペプトン（極東製薬工業社製）
・ハイニュートＡＭ（不二製油社製）
（比較物質）
・尿素（和光純薬社製）
・硫酸アンモニウム（ナカライテスク社製）
・ジチオスレイトール（ＤＴＴ）（和光純薬社製）
・チオグリコール酸アンモニウム（佐々木化学社製）
・システアミン塩酸塩（佐々木化学社製）
・グリセリルモノチオグリコレート（表１～３および図１～３ではＧＭＴと表記）（佐々木化学社製）
・亜硫酸ナトリウム（和光純薬社製）
・グルタチオン（還元型）（和光純薬社製）
・Ｌ－システイン－塩酸塩（和光純薬社製）
・Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン（和光純薬社製）
・Ｌ－アスコルビン酸（和光純薬社製）
（試験例１）本保存方法によるＢＯＤの保存
ＢＯＤと、本安定化剤または比較物質と、を含むＢＯＤ溶液を一定期間、非脱酸素雰囲気下かつ５℃にて、または脱酸素雰囲気下かつ３０℃にて、保存した。保存中、任意の時点でＢＯＤの残存活性を測定することにより、本保存方法によるＢＯＤの安定的な保存について評価した。
【0068】
試験例１では、ＢＯＤとして、ミロセシウム・ベルカリアＭＴ－１由来のＢＯＤ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバー：Ｄ１２５７９．１）をアスペルギルス属に導入した後、当該アスペルギルス属で発現させた遺伝子組換えＢＯＤ（以下、単にＢＯＤとも称する）を、公知の技術を用いて精製した後、使用した。ミロセシウム・ベルカリアＭＴ－１由来のＢＯＤ遺伝子は、アスペルギルス属の遺伝子配列に合わせてコドンの最適化を行った後、アスペルギルス属に導入した。また、ＢＯＤは、当該ＢＯＤの濃度が１．０ｍｇ／ｍLとなるように５０ｍＭグリシン－ＫＯＨ（ｐＨ８．５）緩衝液に溶解し、ＢＯＤ酵素溶液として使用した。
【0069】
ＢＯＤの酵素活性は以下のように測定した。５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）１７８０μLに２０ｍＭのＡＢＴＳ基質溶液２００μLを加えて混合溶液を作製し、当該混合溶液を３７℃で１分間インキュベートした。その後、混合溶液にＢＯＤを含む溶液（具体的には後述する評価用ＢＯＤ保存溶液）を２０μL添加して３７℃でインキュベートするとともに、評価用ＢＯＤ保存溶液の添加直後（０秒）を含めて２０秒間ごとに、当該混合溶液の波長４３６ｎｍにおける吸光度を測定した。評価用ＢＯＤ保存溶液の添加直後の混合溶液の波長４３６ｎｍにおける吸光度、および評価用ＢＯＤ保存溶液の添加から１分間経過後の混合溶液の波長４３６ｎｍにおける吸光度から、評価用ＢＯＤ保存溶液の添加後１分間あたりの、混合溶液の波長４３６ｎｍにおける吸光度の増加率を算定した。当該増加率から、評価用ＢＯＤ保存溶液におけるＢＯＤの活性を算出した。本明細書において、１分間あたり１μｍｏｌのＡＢＴＳを酸化する酵素量を１ユニットと定義した。
【0070】
試験例１の具体的な試験方法は以下の通りである。ＢＯＤを含むＢＯＤ酵素溶液に、上述した本安定化剤のうち１種を添加し、ＢＯＤ保存溶液（本発明の一実施形態に係るＢＯＤ溶液である）を作製した。また、上記ＢＯＤ酵素溶液に、上述した比較物質のうち１種を添加し、ＢＯＤ保存溶液を作製した。さらに、上記ＢＯＤ酵素溶液に安定化剤または比較物質の代わりに蒸留水を添加したＢＯＤ保存溶液を作製し、コントロール（表１および図１では無添加と表記）とした。なお、ＢＯＤ保存溶液中の安定化剤または比較物質の量は、（ａ）安定化剤もしくは比較物質が単一の化合物からなるような、安定化剤もしくは比較物質の分子量が明らかである場合、ＢＯＤ保存溶液中、安定化剤もしくは比較物質が４０ｍＭとなる量とし、（ｂ）安定化剤もしくは比較物質が、分子量が不明の組成物からなるような物質である場合、ＢＯＤ保存溶液１００ｍＬ中、安定化剤もしくは比較物質由来の窒素元素量が０．４４ｇとなる量とした。各ＢＯＤ保存溶液における安定化剤または比較物質の最終濃度を、「ｍＭ」または「百分率（％）」（ＢＯＤ保存溶液１００ｍＬに対する安定化剤または比較物質の量（ｇ））として表１に示した。
【0071】
【表1】
【0072】
その後、これらＢＯＤ保存溶液の各々と脱酸素剤（三菱ガス化学社製アネロパック）とを一つの容器内に封入した後、容器を密閉し、ＢＯＤ保存容器を作製した。非脱酸素雰囲気下かつ５℃にて、または脱酸素雰囲気下かつ３０℃にて、当該ＢＯＤ保存容器の保存を開始した。保存期間中、（ａ）保存開始から０、１４、２１および３５日目に、または（ｂ）保存開始から０、７、１８および３３日目に、同一のＢＯＤ保存容器からＢＯＤ保存溶液を採取し、評価用ＢＯＤ保存溶液とした。ここで、評価用ＢＯＤ保存溶液の採取のためにＢＯＤ保存容器を開封した後、再びＢＯＤ保存容器を密閉するとき、それまで使用していた脱酸素剤に代えて、新規の脱酸素剤をＢＯＤ保存溶液とともに封入した。
【0073】
評価用ＢＯＤ保存溶液におけるＢＯＤの活性を上述する方法で測定した。ＢＯＤの活性について、保存開始時（０日目）のＢＯＤの活性を１００％としたときの、保存開始から所定の日数経過後のＢＯＤの活性の相対値を残存活性（％）として算出した。当該残存活性について、コントロールの評価用ＢＯＤ保存溶液における残存活性を１００％としたときの、その他の評価用ＢＯＤ保存溶液における相対値（％）を図１の（ａ）および（ｂ）に示した。また、保存開始時（０日目）のＢＯＤの活性（１００％）、および保存開始から１４日経過後のＢＯＤの残存活性（％）を、図１の（ｃ）に示した。
【0074】
図１の（ａ）は、本発明の範囲外の保存方法にてＢＯＤを保存した場合、すなわち、非脱酸素雰囲気下かつ５℃においてＢＯＤ溶液を保存した場合の、ＢＯＤの残存活性をコントロール（１００％）に対する相対値（％）として示すグラフである。図１の（ｂ）は、本発明の一実施形態に係る保存方法にてＢＯＤを保存した場合、すなわち、脱酸素雰囲気下かつ３０℃においてＢＯＤ溶液を保存した場合の、ＢＯＤの残存活性をコントロール（１００％）に対する相対値（％）として示すグラフである。図１の（ｃ）は、本発明の一実施形態に係る保存方法、または本発明の範囲外の保存方法を用いてＢＯＤを保存した場合の、ＢＯＤの残存活性を示す表であり、保存開始時（０日目）および保存開始から１４日経過後のＢＯＤの残存活性を示している。
【0075】
図１の（ａ）および（ｂ）から、本安定化剤を含むＢＯＤ溶液を脱酸素雰囲気下にて保存した場合には、ＢＯＤ溶液中のＢＯＤは、コントロール（無添加）と比較して、より高い酵素活性（残存活性）を有していることが分かった。すなわち、本保存方法は、ＢＯＤを安定的に保存することができることが分かった。さらに驚くべきことに、図１の（ｃ）に示すように、本保存方法によれば、ＢＯＤの活性が保存前よりも向上することが分かった。一方、尿素、および硫酸アンモニウム、ＤＴＴおよびＧＭＴを含むＢＯＤ溶液は、たとえ脱酸素雰囲気下で保存した場合であっても、無添加のＢＯＤ溶液とほぼ同じ残存活性を示すことが分かった。すなわち、これら尿素、および硫酸アンモニウム、ＤＴＴおよびＧＭＴは、ＢＯＤを安定的に保存できないことが分かった。
【0076】
（試験例２）安定化剤のＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率の評価
試験例１で用いた本安定化剤および比較物質について、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）を評価した。
試験例１で用いた本安定化剤および比較物質について、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）を評価した。
【0077】
具体的な評価方法は、以下の通りである。ＡＢＴＳとしてはロシュ・ダイアグノティックス社製ＡＢＴＳを用いた。ＡＢＴＳの濃度が２０ｍＭとなるように、ＡＢＴＳを５０ｍＭグリシン－ＫＯＨ緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解し、ＡＢＴＳ溶液を調製した。ＡＢＴＳ溶液の波長４３６ｎｍにおける吸光度（ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６））を、分子吸光度計SpectraMax Plus384（日本モレキュラーデバイス社製）を用いて、光路長１．０ｃｍにて測定したところ、吸光度は約１．３であった。次に、安定化剤溶液または比較物質溶液５μLを、ＡＢＴＳ溶液１９５μLに対して添加し、ＡＢＴＳ評価用反応溶液（以下、「反応溶液Ａ」という。）を作製した。ここで、反応溶液Ａ中の各安定化剤または比較物質の量は、（ａ）安定化剤もしくは比較物質が単一の化合物からなるような、安定化剤もしくは比較物質の分子量が明らかである場合、反応溶液Ａ中、安定化剤もしくは比較物質が１ｍＭとなる量とし、（ｂ）安定化剤もしくは比較物質が、分子量が不明の組成物からなるような物質である場合、反応溶液Ａ１００ｍＬ中、安定化剤もしくは比較物質由来の窒素元素量が０．０１１ｇとなる量とした。反応溶液Ａにおける安定化剤または比較物質の最終濃度を、「ｍＭ」または「百分率（％）」（反応溶液Ａ１００ｍＬに対する安定化剤または比較物質の量（ｇ））として表２に示した。
【0078】
続いて、反応溶液Ａを２５℃で１分間反応させた後に、反応溶液Ａの波長４３６ｎｍにおける吸光度を、ＡＢＴＳ溶液について使用した際と同型の分子吸光度計を用いて測定した。また、安定化剤溶液または比較物質溶液の代わりに蒸留水５μLを、ＡＢＴＳ溶液１９５μLに対して添加し、安定化剤または比較物質を含まない反応溶液Ａを作製し、コントロール（表２および図２では無添加と表記）とした。以上のようにして得られた、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）と、反応溶液Ａの波長４３６ｎｍにおける吸光度とを比較した。ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）（１００％）に対する、反応溶液Ａの安定化剤または比較物質を添加後の１分間当たりの吸光度減少率（％）を算定し、ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）とした。結果を表２および図２に示した。
【0079】
【表2】
【0080】
表２は、ＡＢＴＳ溶液の波長４３６ｎｍにおける吸光度に対する、本発明の一実施形態に係る安定化剤または比較物質を添加後の反応溶液Ａの波長４３６ｎｍにおける吸光度の１分間当たりの減少率（ＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％））を示している。図２は、本発明の一実施形態に係る安定化剤または比較物質によるＡＢＴＳ初発吸光度（Ａ４３６）減少率（％）、を示す図であり、具体的には、表２の結果をグラフとして示している。
【0081】
図２において、比較物質を含む反応溶液Ａ、または安定化剤を無添加の反応溶液Ａでは、ＡＢＴＳ初発吸光度が変化しないことが分かった。一方、本安定化剤を含む反応溶液Ａは、ＡＢＴＳ初発吸光度減少率が０．１０％以上であることが分かった。
【0082】
（試験例３）安定化剤のＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率の評価
試験例１で用いた本安定化剤、および比較物質について、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）を評価した。
試験例１で用いた本安定化剤、および比較物質について、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）を評価した。
【0083】
試験例３で用いた比較物質は、後述する表３および図３に記載の、安定化剤以外の物質である。試験例３で用いた、安定化剤は、尿酸、粉末麦芽エキス、粉末魚エキス、粉末酵母エキス、ＣＳＬ、ミーストＰ１Ｇ、ペプトンＡ、大豆粉８８、Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ、パティケース、Ｈｉｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎ、ペプトンおよびハイニュートＡＭである。表３および図３において、試験例３で用いた安定化剤の各々は、「安定化剤」としてまとめて表記した。
【0084】
具体的な評価方法は、以下の通りである。ＤＭＢＱとしては東京化成工業社製ＤＭＢＱを用いた。まず、１ｍＭのＤＭＢＱ溶液を作製した。１ｍＭのＤＭＢＱ溶液の波長２５６ｎｍにおける吸光度（Ａ２５６）を、紫外可視分光光度計ＵＶ－１６０Ａ（島津製作所社製）を用いて、光路長１．０ｃｍにて測定したところ、吸光度は約１．８であった。次に、蒸留水８９０μLに、１ｍＭのＤＭＢＱ溶液を１００μL、および、安定化剤溶液または比較物質溶液を１０μL添加し、ＤＭＢＱ評価用反応溶液（以下、反応溶液Ｄとも称する）を作製した。ここで、反応溶液Ｄ中の各安定化剤または比較物質の量は、（ａ）安定化剤もしくは比較物質が単一の化合物からなるような、安定化剤もしくは比較物質の分子量が明らかである場合、反応溶液Ｄ中、安定化剤もしくは比較物質が０．１ｍＭとなる量とし、（ｂ）安定化剤もしくは比較物質が、分子量が不明の組成物からなるような物質である場合、反応溶液Ｄ１００ｍＬ中、安定化剤もしくは比較物質由来の窒素元素量が０．００１１ｇとなる量とした。反応溶液Ｄにおける安定化剤または比較物質の最終濃度を、「ｍＭ」または「百分率（％）」（反応溶液Ｄ１００ｍＬに対する安定化剤または比較物質の量（ｇ））として表３に示した。また、安定化剤溶液または比較物質溶液の代わりに、蒸留水を１０μL用いた反応溶液Ｄを作製し、コントロール（図３では無添加と表記）とした。
【0085】
【表3】
【0086】
反応溶液Ｄの波長２５６ｎｍにおける吸光度を、（ａ）反応溶液Ｄの作製直後（すなわち、試験開始直後であり、図３の（ａ）では０分と表記）、および（ｂ）反応溶液Ｄを２５℃に放置した後１０秒経過ごと、に紫外可視分光光度計ＵＶ－１６０Ａを用いて、測定した。ここで、作製直後の反応溶液Ｄの波長２５６ｎｍにおける吸光度をＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）とした。測定結果から、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）（１００％）に対する、反応溶液Ｄの安定化剤または比較物質の添加後（試験開始後）の１分間当たりの吸光度減少率（％）を算定し、ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）とした。結果を図３に示した。
【0087】
図３は、本発明の一実施形態に係る安定化剤または比較物質によるＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％）、を示す図である。具体的には、図３の（ａ）は、反応溶液Ｄの波長２５６ｎｍにおける吸光度について、試験開始直後（０分）の吸光度を１００％とした場合の、本発明の一実施形態に係る安定化剤または比較物質の添加後（試験開始後）の吸光度の相対的減少率（％）、を示す図である。図３の（ｂ）は、反応溶液Ｄの波長２５６ｎｍにおける吸光度について、試験開始直後（０分）の吸光度に対する、本発明の一実施形態に係る安定化剤または比較物質の添加後（試験開始後）の１分間当たりの吸光度減少率（％）（ＤＭＢＱ初発吸光度（Ａ２５６）減少率（％））、を示す図である。
【0088】
【0089】
（試験例４）
本発明の一実施形態に係る染毛剤を染毛に使用した場合の、染毛剤に含まれる安定化剤が染毛性に与える影響について、人毛白髪を用いた染毛試験を実施して評価した。対照試験として、本発明の一実施形態に係る染毛剤に代えて、Ｌ－アスコルビン酸およびＢＯＤを含む染毛剤を用いて同様の評価を行った。
本発明の一実施形態に係る染毛剤を染毛に使用した場合の、染毛剤に含まれる安定化剤が染毛性に与える影響について、人毛白髪を用いた染毛試験を実施して評価した。対照試験として、本発明の一実施形態に係る染毛剤に代えて、Ｌ－アスコルビン酸およびＢＯＤを含む染毛剤を用いて同様の評価を行った。
【0090】
（染毛剤の調製）
ＰＯＥ（２０）硬化ヒマシ油、乳酸、および酸化染料パラフェニレンジアミン（以下、ＰＰＤとも称する）をそれぞれ所定量の蒸留水に溶解した後、それらを混合することにより混合液を作製し、その後モノエタノールアミンを用いて当該混合液のｐＨをｐＨ８．５に調整した。次に、上記混合液にＬ－アスコルビン酸または安定化剤、ＢＯＤ酵素液、および蒸留水を加えることにより、染毛剤を調製した。また、Ｌ－アスコルビン酸または安定化剤を添加することなく染毛剤を調製し、コントロール（図４では無添加と表記）とした。
ＰＯＥ（２０）硬化ヒマシ油、乳酸、および酸化染料パラフェニレンジアミン（以下、ＰＰＤとも称する）をそれぞれ所定量の蒸留水に溶解した後、それらを混合することにより混合液を作製し、その後モノエタノールアミンを用いて当該混合液のｐＨをｐＨ８．５に調整した。次に、上記混合液にＬ－アスコルビン酸または安定化剤、ＢＯＤ酵素液、および蒸留水を加えることにより、染毛剤を調製した。また、Ｌ－アスコルビン酸または安定化剤を添加することなく染毛剤を調製し、コントロール（図４では無添加と表記）とした。
【0091】
ここで、Ｌ－アスコルビン酸は、染毛剤におけるＬ－アスコルビン酸の濃度が８ｍＭとなるように、混合液に添加した。安定化剤としては、尿酸、粉末魚エキス、ＣＳＬ、ミーストＰ１Ｇ、Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ、Ｈｉｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎおよび粉末麦芽エキスを使用した。安定化剤は、染毛剤における安定化剤の濃度（染毛剤１００ｇ中の安定化剤の量（ｇ））が表４に記載の濃度となるように、混合液に添加した。また、ＰＯＥ（２０）硬化ヒマシ油、乳酸およびＰＰＤは、染毛剤におけるＰＯＥ（２０）硬化ヒマシ油、乳酸およびＰＰＤの濃度が、染毛剤の１００重量％に対して、それぞれ２．０重量％、１．０重量％、および０．３重量％となるように混合して用いた。
【0092】
（染毛試験）
人毛白髪（１０ｃｍ、１ｇ、ビューラックス製）（以下、毛髪ともいう）１本につき、上述のように作製した染毛剤２ｇを、当該毛髪に塗布した。塗布後、毛髪を３０℃で１０分間放置した後、毛髪を裏返して、さらに１０分間毛髪を放置した。その後、毛髪を流水で水洗いし、１％ＳＤＳで洗浄したのち、流水で毛髪の１％ＳＤＳを洗い流した。洗浄後の毛髪の水分をタオルでふき取り、さらに毛髪を一晩風乾した。
人毛白髪（１０ｃｍ、１ｇ、ビューラックス製）（以下、毛髪ともいう）１本につき、上述のように作製した染毛剤２ｇを、当該毛髪に塗布した。塗布後、毛髪を３０℃で１０分間放置した後、毛髪を裏返して、さらに１０分間毛髪を放置した。その後、毛髪を流水で水洗いし、１％ＳＤＳで洗浄したのち、流水で毛髪の１％ＳＤＳを洗い流した。洗浄後の毛髪の水分をタオルでふき取り、さらに毛髪を一晩風乾した。
【0093】
（色相評価）
色彩色差計ＣＲ－４００（コニカミノルタ株式会社製）を使用し、２°視野にて、Ｃ光源を用いて測定した。測定結果に基づき、Ｌ＊ａ＊ｂ＊表色系を用いて無処理の白髪と染毛試験後の白髪との色差（ΔＥ＊ａｂ）を算定した。結果を図４および表４に示した。
色彩色差計ＣＲ－４００（コニカミノルタ株式会社製）を使用し、２°視野にて、Ｃ光源を用いて測定した。測定結果に基づき、Ｌ＊ａ＊ｂ＊表色系を用いて無処理の白髪と染毛試験後の白髪との色差（ΔＥ＊ａｂ）を算定した。結果を図４および表４に示した。
【0094】
【表4】
【0095】
表４は、無添加の染毛剤を用いた場合の色差（ΔＥ＊ａｂ）を１００（％）とした場合の、Ｌ－アスコルビン酸または本安定化剤を含む染毛剤を用いた場合の色差（ΔＥ＊ａｂ）の相対値（％）を示している。図４は、Ｌ－アスコルビン酸を含む染毛剤、または本安定化剤を含む染毛剤（すなわち本染毛剤）を用いた場合の染毛試験の結果を示している。具体的には、図４の（ａ）は、各種染毛剤による染毛後のサンプルの写真図である。無処理は、染毛試験が行われていない白髪である。図４の（ｂ）は、染毛後の白髪の色相評価の結果（色差（ΔＥ＊ａｂ））を示している。
【0096】
図４および表４から、以下のことが分かった。無添加の染毛剤を用いた場合の色差（ΔＥ＊ａｂ）を１００（％）とした場合の、本安定化剤を含む染毛剤を用いた場合の色差（ΔＥ＊ａｂ）の相対値（％）は９５．０％以上であった。すなわち、本安定化剤を含む染毛剤は、染毛性をほとんど阻害しなかった。一方、無添加の染毛剤を用いた場合の色差（ΔＥ＊ａｂ）を１００（％）とした場合の、Ｌ－アスコルビン酸を含む染毛剤を用いた場合の色差（ΔＥ＊ａｂ）の相対値（％）は７６．０％であった。すなわち、Ｌ－アスコルビン酸は染毛阻害性が高いことが分かった。
【0097】
以上の結果より、本保存方法は、ＢＯＤとともに、本発明の一実施形態に係る安定化剤を含むＢＯＤ溶液を、脱酸素雰囲気下において保存することによって、ＢＯＤを安定的に保存することができる、ということが示された。また、本安定化剤を染毛剤に使用した場合、換言すれば、本ＢＯＤ製品を含む本染毛剤を使用した場合、無添加の染毛剤を用いた場合と比較して、染毛試験後の白髪の色差の減少率が５％以下であった。従って、本染毛剤に含まれる本安定化剤は、染毛に影響を与えないことが示された。
【産業上の利用可能性】
【0098】
本発明の一実施形態によれば、ＢＯＤによる酸化反応を阻害することがなく、かつ、ＢＯＤを安定的に保存することができる。従って、本発明は、染毛の分野、臨床検査の分野、化粧品の分野、酵素燃料電池（例えば、酵素バイオ電池、酵素電池、等）分野、および食品加工分野等ＢＯＤを利用する広範な分野において好適に利用することができる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
