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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022050586
(43)【公開日】2022-03-30
(54)【発明の名称】パラミクソウイルスおよび使用方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/45 20060101AFI20220323BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20220323BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20220323BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20220323BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20220323BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220323BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20220323BHJP
C07K 14/115 20060101ALI20220323BHJP
C07K 16/10 20060101ALI20220323BHJP
C12Q 1/6813 20180101ALI20220323BHJP
C12Q 1/686 20180101ALI20220323BHJP
C12N 7/01 20060101ALI20220323BHJP
C12N 15/86 20060101ALI20220323BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20220323BHJP
A61K 39/155 20060101ALI20220323BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220323BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20220323BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20220323BHJP
【ＦＩ】
C12N15/45 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/02 Z
C07K14/115
C07K16/10
C12Q1/6813 Z
C12Q1/686 Z
C12N7/01
C12N15/86 Z
A61K48/00
A61K39/155
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K39/395 S
A61K35/76
A61P31/14
【審査請求】有
【請求項の数】8
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2022002835
(22)【出願日】2022-01-12
(62)【分割の表示】P 2019149331の分割
【原出願日】2013-07-02
(31)【優先権主張番号】61/667,194
(32)【優先日】2012-07-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】501051125
【氏名又は名称】ザ ヘンリー エム． ジャクソン ファウンデーション フォー ザ アドヴァンスメント オブ ミリタリー メディシン インコーポレイテッド
(71)【出願人】
【識別番号】590003283
【氏名又は名称】コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガナイゼーション
(71)【出願人】
【識別番号】515000719
【氏名又は名称】ザ ステイト オブ クイーンズランド
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】特許業務法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ワン リンファ
(72)【発明者】
【氏名】マーシュ グレン エー．
(72)【発明者】
【氏名】フィールド ヒューム
(72)【発明者】
【氏名】ブロダー クリストファー
(57)【要約】 （修正有）
【課題】シダーウイルスと呼ばれる新規のウイルス、及びその使用方法を提供する。
【解決手段】パラミクソウイルス亜科の新規なへニパウイルス属であるシダーウイルス（ＣｅｄＰＶ）を単離し、その全ゲノム配列を明らかした。ゲノム配列から予想されるウイルスタンパク質、組換えウイルスタンパク質の生産方法、ウイルスタンパク質に特異的に結合する抗体、抗体又はその断片を含むワクチン、ゲノム配列を基にしたウイルスポリヌクレオチドの検出方法、さらにポリヌクレオチドを含む組換えウイルスを提供する。
【選択図】なし
【解決手段】パラミクソウイルス亜科の新規なへニパウイルス属であるシダーウイルス（ＣｅｄＰＶ）を単離し、その全ゲノム配列を明らかした。ゲノム配列から予想されるウイルスタンパク質、組換えウイルスタンパク質の生産方法、ウイルスタンパク質に特異的に結合する抗体、抗体又はその断片を含むワクチン、ゲノム配列を基にしたウイルスポリヌクレオチドの検出方法、さらにポリヌクレオチドを含む組換えウイルスを提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号１のヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項2】
配列番号１のヌクレオチド配列の少なくとも５０、１００、１５０、２００、２５０、
３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、
８００、８５０、９００、９５０、１，０００、１，０５０、１，１００、１，１５０、
１，２００、１，２５０、１，３００、１，３５０、１，４００、１，４５０、１，５０
０、１，５５０、１，６００、１，６５０、１，７００、１，７５０、１，８００、１，
８５０、１，９００、１，９５０、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、
４，０００、４，５００、５，０００、５，５００、６，０００、６，５００、７，００
０、７，５００、８，０００、８，５００、９，０００、９，５００、１０，０００、１
０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，０００、１２，５００、１３，０００
、１３，５００、１４，０００、１４，５００、１５，０００、１５，５００、１６，０
００、１６，５００、１７，０００、１７，５００、または１８，０００個の連続したヌ
クレオチドまたはその相補体のヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド配
列。
３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、
８００、８５０、９００、９５０、１，０００、１，０５０、１，１００、１，１５０、
１，２００、１，２５０、１，３００、１，３５０、１，４００、１，４５０、１，５０
０、１，５５０、１，６００、１，６５０、１，７００、１，７５０、１，８００、１，
８５０、１，９００、１，９５０、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、
４，０００、４，５００、５，０００、５，５００、６，０００、６，５００、７，００
０、７，５００、８，０００、８，５００、９，０００、９，５００、１０，０００、１
０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，０００、１２，５００、１３，０００
、１３，５００、１４，０００、１４，５００、１５，０００、１５，５００、１６，０
００、１６，５００、１７，０００、１７，５００、または１８，０００個の連続したヌ
クレオチドまたはその相補体のヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド配
列。
【請求項3】
ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項１または２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項4】
分子がＤＮＡである、請求項１または２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項5】
請求項４に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項6】
請求項５に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項7】
宿主細胞が原核細胞である、請求項６に記載の宿主細胞。
【請求項8】
前記宿主細胞が真核細胞である、請求項６に記載の宿主細胞。
【請求項9】
前記宿主細胞が哺乳類細胞である、請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項10】
ポリペプチドを産生するための方法であって、タンパク質産生を促進する条件下で請求
項６に記載の宿主細胞を培養することと、培養物から前記ポリペプチドを単離することと
、を含む、方法。
項６に記載の宿主細胞を培養することと、培養物から前記ポリペプチドを単離することと
、を含む、方法。
【請求項11】
請求項１または２に記載の核酸分子と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
【請求項12】
単離されたポリペプチドであって、
ａ．配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｃ．配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｅ．配列番号３のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｆ．配列番号３のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｇ．配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｈ．配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｊ．配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｋ．配列番号５のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｌ．配列番号５のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｍ．配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｎ．配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｏ．配列番号６のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｐ．配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｑ．配列番号７のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｒ．配列番号７のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｓ．配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｔ．配列番号８のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および、
ｕ．配列番号８のアミノ酸配列からなるポリペプチドからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
ａ．配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｃ．配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｅ．配列番号３のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｆ．配列番号３のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｇ．配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｈ．配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｊ．配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｋ．配列番号５のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｌ．配列番号５のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｍ．配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｎ．配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｏ．配列番号６のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｐ．配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｑ．配列番号７のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｒ．配列番号７のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
ｓ．配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、
ｔ．配列番号８のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および、
ｕ．配列番号８のアミノ酸配列からなるポリペプチドからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項13】
請求項１２に記載のポリペプチドまたはその相補体をコードする単離されたポリヌクレ
オチド。
オチド。
【請求項14】
前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項１３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項15】
前記分子がＤＮＡである、請求項１４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項16】
請求項１５に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項17】
請求項１６に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項18】
前記宿主細胞が原核細胞である、請求項１７に記載の宿主細胞。
【請求項19】
前記宿主細胞が真核細胞である、請求項１７に記載の宿主細胞。
【請求項20】
前記宿主細胞が哺乳類細胞である、請求項１９に記載の宿主細胞。
【請求項21】
ポリペプチドを産生するための方法であって、タンパク質産生を促進する条件下で請求
項１７に記載の宿主細胞を培養することと、培養物から前記ポリペプチドを単離すること
と、を含む、方法。
項１７に記載の宿主細胞を培養することと、培養物から前記ポリペプチドを単離すること
と、を含む、方法。
【請求項22】
請求項１２に記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片。
【請求項23】
前記抗体が、モノクローナル抗体もしくはその断片、ポリクローナル抗体もしくはその
断片、ヒト化抗体もしくはその断片、組換えにより産生された抗体もしくはその断片、ま
たはキメラ抗体もしくはその断片である、請求項２２に記載の抗体。
断片、ヒト化抗体もしくはその断片、組換えにより産生された抗体もしくはその断片、ま
たはキメラ抗体もしくはその断片である、請求項２２に記載の抗体。
【請求項24】
請求項２２に記載の抗体またはその断片を含むワクチン。
【請求項25】
対象におけるヘンドラウイルス、ニパウイルス、シダーウイルス、または他のパラミク
ソウイルスの感染を治療または予防する方法であって、必要時、またはその治療もしくは
予防において対象に請求項２４に記載のワクチンを投与することを含む、方法。
ソウイルスの感染を治療または予防する方法であって、必要時、またはその治療もしくは
予防において対象に請求項２４に記載のワクチンを投与することを含む、方法。
【請求項26】
試料中の第１のポリヌクレオチドの存在を検出する方法であって、前記第１のポリヌク
レオチドが、配列番号１の少なくとも１００個の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配
列を含み、前記方法が、前記試料を、前記第１のポリヌクレオチドの少なくとも一部分ま
たはその相補体に選択的に結合する結合分子と接触させることと、前記第１のポリヌクレ
オチドへの前記結合分子の結合を検出することと、を含む、方法。
レオチドが、配列番号１の少なくとも１００個の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配
列を含み、前記方法が、前記試料を、前記第１のポリヌクレオチドの少なくとも一部分ま
たはその相補体に選択的に結合する結合分子と接触させることと、前記第１のポリヌクレ
オチドへの前記結合分子の結合を検出することと、を含む、方法。
【請求項27】
前記第１のポリヌクレオチドが、配列番号１の少なくとも２００、３００、４００、５
００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５
０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１１０００、１２００
０、１３０００、１４０００、１５０００、１６０００、１７０００、または１８０００
個の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。
００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５
０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１１０００、１２００
０、１３０００、１４０００、１５０００、１６０００、１７０００、または１８０００
個の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記結合分子が、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１０
０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１００
０ヌクレオチド長を含む第２のポリヌクレオチドである、請求項２６または２７に記載の
方法。
０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１００
０ヌクレオチド長を含む第２のポリヌクレオチドである、請求項２６または２７に記載の
方法。
【請求項29】
前記第１のポリヌクレオチドが、検出前にＰＣＲまたはＲＴ－ＰＣＲを使用して増幅さ
れる、請求項２６または２７に記載の方法。
れる、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項30】
請求項１～４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む組換えウイルス。
【請求項31】
前記ウイルスが弱毒化ウイルスである、請求項３０に記載の組換えウイルス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の背景
本発明は、シダーウイルスと呼ばれる新規のウイルス、およびその使用方法に関する。
本発明は、シダーウイルスと呼ばれる新規のウイルス、およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ヘニパウイルスは、オーストラリアおよびマレーシアでの家畜およびヒトにおける病気
の発生で１９９０年代に最初に発見された（１、２）。これらのウイルスは、パラミクソ
ウイルス科の唯一の既知のバイオセーフティレベル４（ＢＳＬ４）剤を含み（３）、死亡
率は、ウイルス、動物種、および発生の地理的位置に応じて、ヒトおよび動物の両方とも
に４０％～１００％である（４、５）。パラミクソウイルス亜科のヘニパウイルス属は、
現在、これら両ウイルスの主な天然リザーバーと特定されている、一般にフオオコウモリ
として知られているフルーツコウモリのヘンドラウイルス（ＨｅＶ）およびニパウイルス
（ＮｉＶ）の２員のメンバーを含む。しかしながら、血清学的証拠は、ヘニパウイルスが
他のタイプのコウモリ（７～１０）においても循環し得ることを示唆する。
の発生で１９９０年代に最初に発見された（１、２）。これらのウイルスは、パラミクソ
ウイルス科の唯一の既知のバイオセーフティレベル４（ＢＳＬ４）剤を含み（３）、死亡
率は、ウイルス、動物種、および発生の地理的位置に応じて、ヒトおよび動物の両方とも
に４０％～１００％である（４、５）。パラミクソウイルス亜科のヘニパウイルス属は、
現在、これら両ウイルスの主な天然リザーバーと特定されている、一般にフオオコウモリ
として知られているフルーツコウモリのヘンドラウイルス（ＨｅＶ）およびニパウイルス
（ＮｉＶ）の２員のメンバーを含む。しかしながら、血清学的証拠は、ヘニパウイルスが
他のタイプのコウモリ（７～１０）においても循環し得ることを示唆する。
【0003】
ヘニパウイルスの発見は、我々のパラミクソウイルスの総合的な理解に大きな影響を及
ぼしている。実際、麻疹ウイルスおよびイヌジステンパーウイルスなどのパラミクソウイ
ルスは、狭い宿主範囲を有し、パラミクソウイルスの全てのメンバーによって共有される
均一なゲノムサイズに近く、遺伝的に安定していることで知られている（３）。しかしな
がら、ヘニパウイルスは、これらのウイルスがはるかに広い宿主範囲および著しく大きい
ゲノムを有するため、これらのパラダイムをシフトさせた（６）。
ぼしている。実際、麻疹ウイルスおよびイヌジステンパーウイルスなどのパラミクソウイ
ルスは、狭い宿主範囲を有し、パラミクソウイルスの全てのメンバーによって共有される
均一なゲノムサイズに近く、遺伝的に安定していることで知られている（３）。しかしな
がら、ヘニパウイルスは、これらのウイルスがはるかに広い宿主範囲および著しく大きい
ゲノムを有するため、これらのパラダイムをシフトさせた（６）。
【0004】
近年、ヘニパウイルスの研究で、機能細胞受容体を識別することに成功し、新しい診断
、ワクチン、および治療法の開発を推進してきた（１５～２５）。しかしながら、一つに
は生の感染症研究を行うために必要な高いセキュリティ（ＢＳＬ４）の施設の必要性によ
り、また一つには現在の動物モデルで使用される利用可能な研究手段の限られた数により
、これらの非常に致死的なウイルスの病因についてはほとんど理解されていない。ヘニパ
ウイルス病因の機構の研究はまた、比較病原研究に用いることができる、関連する非病原
性または低病原性のウイルスの欠如によって妨げられている。
、ワクチン、および治療法の開発を推進してきた（１５～２５）。しかしながら、一つに
は生の感染症研究を行うために必要な高いセキュリティ（ＢＳＬ４）の施設の必要性によ
り、また一つには現在の動物モデルで使用される利用可能な研究手段の限られた数により
、これらの非常に致死的なウイルスの病因についてはほとんど理解されていない。ヘニパ
ウイルス病因の機構の研究はまた、比較病原研究に用いることができる、関連する非病原
性または低病原性のウイルスの欠如によって妨げられている。
【0005】
中国や他の地域における最近の血清学的調査は、異種のコウモリにおけるヘニパウイル
スへの、交差反応性だが必ずしも相互中和性でない抗体の存在を示した（８）。アフリカ
のコウモリにおけるヘニパウイルスのようなゲノム配列の検出は、血清学的調査から取得
された結果を更に裏付ける（２６）。
スへの、交差反応性だが必ずしも相互中和性でない抗体の存在を示した（８）。アフリカ
のコウモリにおけるヘニパウイルスのようなゲノム配列の検出は、血清学的調査から取得
された結果を更に裏付ける（２６）。
【0006】
本明細書に開示された本発明は、新たに発見されたヘニパウイルスの単離および特徴付
けを対象とする。
けを対象とする。
【発明の概要】
【0007】
本発明は、シダーウイルスと呼ばれる新規のウイルス（「ＣｅｄＰＶ」）、およびその
使用方法を対象とする。
使用方法を対象とする。
【0008】
本発明はまた、個々のタンパク質およびその断片、ならびにＣｅｄＰＶを構成する個々
のタンパク質のコード配列を対象とする。
のタンパク質のコード配列を対象とする。
【0009】
本発明はまた、ＣｅｄＰＶに特異的に結合する抗体または断片を対象とする。
【0010】
本発明はまた、ＣｅｄＰＶの少なくとも一部を含むワクチンおよび／または他の治療用
組成物を対象とする。
組成物を対象とする。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】パラミクソウイルス亜科において既存の５種類の模範ウイルスのものと比較した、ＣｅｄＰＶのゲノムサイズおよび組織を示している。コーディングおよび非コーディング領域の各々は、一定の縮尺で描かれている。全てのパラミクソウイルスのゲノムに存在する６個の主要な遺伝子が、以下のように示される：影付き＝ＲＮＡポリメラーゼおよびヌクレオカプシド遺伝子（Ｎ、Ｐ、およびＬ）、斜線＝包絡膜タンパク質遺伝子（Ｆおよび付着タンパク質）、点線＝マトリックスタンパク質（Ｍ）。ムンプスウイルスのゲノムにおける小さなものは、遺伝子（ＳＨ）が通常、亜科のメンバー間で共有されていないことを表す。
【図2】異なるヘニパウイルス間のゲノムの特徴の比較を示している。（Ａ）リーダおよびトレーラ配列の整列（アンチゲノム配列を示す）。（Ｂ）遺伝子間領域（ＩＧＲ）の配列、ならびにＨｅＶおよびｎｉＶのものと比較した、ＣｅｄＰＶの転写開始および停止部位。
【図3】選択したパラミクソウイルスの系統樹を示している。２Ａ：樹は、Ｎタンパク質配列のウイルス名（略称）に基づき、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号は以下の通りである：トリパラミクソウイルス６（ＡＰＭＶ６）ＡＹ０２９２９９、大西洋サーモンパラミクソウイルス（ＡｓａＰＶ）ＥＵ１５６１７１、Ｂｅｉｌｏｎｇウイルス（ＢｅｉＰＶ）ＤＱ１００４６１、ウシパラインフルエンザウイルス３（ｂＰＩＶ３）ＡＦ１７８６５４、イヌジステンパーウイルス（ＣＤＶ）ＡＦ０１４９５３、シダーウイルス（ＣｅｄＰＶ）ＪＱ００１７７６、Ｆｅｒドランスウイルス（ＦｄｌＰＶ）ＡＹ１４１７６０、ヘンドラウイルス（ＨｅＶ）ＡＦ０１７１４９、ヒトパラインフルエンザウイルス２（ｈＰＩＶ２）ＡＦ５３３０１０、ヒトパラインフルエンザウイルス３（ｈＰＩＶ３）Ｚ１１５７５、ヒトパラインフルエンザウイルス４ａ（ｈＰＩＶ４ａ）ＡＢ５４３３３６、ヒトパラインフルエンザウイルス４ｂ（ｈＰＩＶ４ｂ）ＥＵ６２７５９１、Ｊウイルス（ＪＰＶ）ＡＹ９００００１、メナングルウイルス（ＭｅｎＰＶ）ＡＦ３２６１１４、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）ＡＢ０１６１６２、モスマンウイルス（ＭｏｓＰＶ）ＡＹ２８６４０９、Ｍａｐｅｕｒａウイルス（ＭｐｒＰＶ）ＥＦ０９５４９０、ムンプスウイルス（ＭｕＶ）ＡＢ０００３８８、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）ＡＦ０７７７６１、ニパウイルス、バングラデシュ菌株（ＮｉＶ－Ｂ）ＡＹ９８８６０１、ニパウイルス、マレーシア菌株（ＮｉＶ－Ｍ）ＡＪ６２７１９６、パラインフルエンザウイルス５（ＰＩＶ５）ＡＦ０５２７５５、小反芻獣疫（ＰＰＲＶ）Ｘ７４４４３、ブタルブラウイルス（ＰｏｒＰＶ）ＢＫ００５９１８、牛疫ウイルス（ＲＰＶ）Ｚ３０６９７、セーラムウイルス（ＳａｌＰＶ）ＡＦ２３７８８１、センダイウイルス（ＳｅＶ）Ｍ１９６６１、シミアンウイルス４１（ＳＶ４１）Ｘ６４２７５、ティオマンウイルス（ＴｉｏＰＶ）ＡＦ２９８８９５、Ｔｕｐａｉａパラミクソウイルス（ＴｕｐＰＶ）ＡＦ０７９７８０。（Ｂ）樹は、全ゲノム配列に基づく。（Ｃ）樹は、Ｌ遺伝子の５５０ヌクレオチドの領域に基づく。
【図4】ＣｅｄＰＶ Ｐ遺伝子の編集部位と比較した、ＨｅＶおよびＮｉＶ用のＰ遺伝子の編集部位のための配列決定トレースファイルを示している。トレースファイルは、感染細胞中のＨｅＶおよびＮｉＶ Ｐ遺伝子（＊印で示される）の編集とＣｅｄＰＶ Ｐ遺伝子のｍＲＮＡにおける編集の欠如とを示している。ＣｅｄＰＶのＰ遺伝子の全部の潜在的な編集部位に及ぶＰＣＲ産物の配列決定は、いかなるＲＮＡ編集活性も明らかにしなかった。ＣｅｄＰＶ Ｐ遺伝子の代表的な潜在的編集部位が示されている。
【図5】ＣｅｄＰＶおよびＨｅＶの間の抗原交差反応性を示している。ＣｅｄＰＶおよびＨｅＶに感染したベロ細胞はそれぞれ、各ウイルスの組換えＮタンパク質に対して惹起されたウサギ血清で染色された。
【図6】他のパラミクソウイルスとのＣｅｄＰＶの抗原交差反応性を示している。それぞれのＪパラミクソウイルス（ＪＰＶ）、牛疫ウイルス（ＲＰＶ）、センダイウイルス（ＳｅＶ）、メナングルウイルス（ＭｅｎＰＶ）およびＣｅｄＰＶに感染ベロ細胞上の抗ＣｅｄＰＶ血清で実行される間接蛍光抗体（ＩＦＡＴ）アッセイ。偽感染細胞単層は、陰性制御として含められた。反応性を示す唯一のパネルは、ＣｅｄＰＶパネルである。
【図7】ＣｅｄＰＶのエントリ受容体としてエフリンＢ２およびＢ３の機能テストを示している。エフリン遺伝子産物の存在下および非存在下でのＨｅＬａ－ＵＳＵ細胞中へのＣｅｄＰＶの感染が示されている。受容体機能の間接的測定としての感染の感受性は、合胞体細胞変性効果（ＣＰＥ）の形成によって証明される。
【図8】ＣｅｄＰＶ感染フェレットの気管支リンパ節の免疫組織化学的分析を示している。６日目に安楽死させられたフェレット＃２の気管支リンパ節はそれぞれ、ＣｅｄＰＶ（Ｂ）およびＮｉＶ（Ｄ）の組換えＮタンパク質に対するウサギ抗血清で染色された。（別の実験からのインフルエンザＨ５Ｎ１に感染した）無関係なフェレットの気管支リンパ節は、陰性制御として使用され、同一の条件下で同じ抗ＣｅｄＰＶ（Ａ）および抗ＮｉＶ（Ｃ）抗血清で染色された。
【図9】ＨｅＶおよびＮｉＶ糖タンパク質とのＣｅｄＰＶ糖タンパク質媒介性細胞－細胞融合およびヘテロ型混合の結果を示している。種々の標的細胞集団が凡例に示されている。
【図10】沈殿し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびクマシーによって分析した、単独でまたはＣｅｄＰＶ－ｓＧと予備混合された精製された可溶性エフリン－ＦＣタンパク質を示している。分離ｓＧがマークされ、異なるエフリンタンパク質パターンが言及される。ＣｅｄＰＶ－ｓＧおよびエフリンＢ２は、レーン３で共に近接で実行される。
【図11】エフリン受容体構築物にトランスフェクトすることにより調製され、次いで、ＣｅｄＰＶ、Ｈｅｖ、ＮｉＶ ＦおよびＧ糖タンパク質のいずれかを発現するエフェクタ細胞を用いた細胞－細胞融合アッセイで使用されるＨｅｌａ－ＵＳＵ標的細胞集団の結果、および標準的な融合レポータ遺伝子アッセイが行われたことを示している。
【発明を実施するための形態】
【0012】
本発明は、シダーウイルスと呼ばれる新規のウイルス（「ＣｅｄＰＶ」）、およびその
使用方法を対象とする。本発明はまた、個々のタンパク質およびその断片、ならびにＣｅ
ｄＰＶを構成する個々のタンパク質のコード配列を対象とする。
使用方法を対象とする。本発明はまた、個々のタンパク質およびその断片、ならびにＣｅ
ｄＰＶを構成する個々のタンパク質のコード配列を対象とする。
【0013】
本発明者らは、特定のヘニパウイルス中で新規のパラミクソウイルスを単離した。十分
に確立されているように、ヘニパウイルス属は、パラミクソウイルス科のウイルスに属し
、ヘンドラウイルス（ＨｅＶ）およびニパウイルス（ＮｉＶ）の両方を含む。十中八九、
新たに単離されたＣｅｄＰＶは、系統発生の研究に基づいたヘニパウイルス属に属するで
あろう（図３を参照されたい）。その分類に関わらず、本発明者らは、数ある特性の中で
も、ＣｅｄＰＶがヘンドラウイルスと抗原特性を共有する新型ウイルスであることを本明
細書で確立する。新たに発見されたＣｅｄＰＶは、ＲＮＡの一本鎖を含有するＲＮＡウイ
ルスである。
に確立されているように、ヘニパウイルス属は、パラミクソウイルス科のウイルスに属し
、ヘンドラウイルス（ＨｅＶ）およびニパウイルス（ＮｉＶ）の両方を含む。十中八九、
新たに単離されたＣｅｄＰＶは、系統発生の研究に基づいたヘニパウイルス属に属するで
あろう（図３を参照されたい）。その分類に関わらず、本発明者らは、数ある特性の中で
も、ＣｅｄＰＶがヘンドラウイルスと抗原特性を共有する新型ウイルスであることを本明
細書で確立する。新たに発見されたＣｅｄＰＶは、ＲＮＡの一本鎖を含有するＲＮＡウイ
ルスである。
【0014】
ウイルスのゲノムは、配列番号１として本明細書に示される。
【0015】
【表1】
【0016】
【0017】
【0018】
【0019】
【0020】
【0021】
本発明は、ＣｅｄＰＶゲノムに関連する核酸を提供する。具体的には、本発明は、配列
番号１のポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％
、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％
、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリヌクレオチド配列を有する
核酸を提供する。
番号１のポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％
、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％
、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリヌクレオチド配列を有する
核酸を提供する。
【0022】
本発明はまた、配列番号１のポリヌクレオチドの断片（例えば、プライマーおよびプロ
ーブ）を提供する。
ーブ）を提供する。
【0023】
本発明はまた、本明細書に開示された核酸のいずれかを含有するベクターを含む。本明
細書で使用する「ベクター」は、多数の核酸のいずれかであり得、該核酸中で、所望の配
列が、異なる遺伝子環境間の輸送のためのまたは宿主細胞における発現のための制限およ
び連結により挿入され得る。ＲＮＡベクターもまた利用可能であるが、ベクターは、典型
的には、ＤＮＡで構成される。ベクターとしては、プラスミドおよびファージミドが挙げ
られるが、これらに限定されない。クローニングベクターは、宿主細胞中で複製すること
ができ、１個以上のエンドヌクレアーゼ制限部位によって更に特徴づけられ、該部位でベ
クターを判定可能な方法で切ることができ、該部位中に、新しい組換えベクターが宿主細
胞中で複製する能力を保持するように所望のＤＮＡ配列を連結することができる。プラス
ミドの場合、所望の配列の複製は、宿主細菌内でプラスミドの複製数が増加するにつれ何
度も発生し得る、または宿主が有糸分裂によって繁殖する前に宿主毎に１回のみ発生し得
る。ファージの場合、複製は溶菌相の間に能動的に、または溶原性相の間に受動的に発生
し得る。発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列が、それが調節配列に作動可能に結合されて
ＲＮＡ転写物として発現され得るように、制限および連結により挿入され得るものである
。ベクターは、ベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞の識別および選択
での使用に好適な１個以上のマーカー配列を更に含み得る。マーカーとしては、例えば、
抗生物質または他の化合物に対して耐性または感受性のいずれかを増加または減少させる
タンパク質をコードする遺伝子、活性が当該技術分野で公知の標準的なアッセイにより検
出される酵素をコードする遺伝子（例えば、β－ガラクトシダーゼまたはアルカリホスフ
ァターゼ）、ならびに形質転換またはトランスフェクトされた細胞、宿主、コロニー、ま
たはプラークの表現型に可視的に影響を与える遺伝子が挙げられる。ベクターの例として
は、動作可能に結合されているＤＮＡセグメント中に存在する構造的遺伝子産物の自律複
製および発現が可能なものが挙げられるが、これらに限定されない。
細書で使用する「ベクター」は、多数の核酸のいずれかであり得、該核酸中で、所望の配
列が、異なる遺伝子環境間の輸送のためのまたは宿主細胞における発現のための制限およ
び連結により挿入され得る。ＲＮＡベクターもまた利用可能であるが、ベクターは、典型
的には、ＤＮＡで構成される。ベクターとしては、プラスミドおよびファージミドが挙げ
られるが、これらに限定されない。クローニングベクターは、宿主細胞中で複製すること
ができ、１個以上のエンドヌクレアーゼ制限部位によって更に特徴づけられ、該部位でベ
クターを判定可能な方法で切ることができ、該部位中に、新しい組換えベクターが宿主細
胞中で複製する能力を保持するように所望のＤＮＡ配列を連結することができる。プラス
ミドの場合、所望の配列の複製は、宿主細菌内でプラスミドの複製数が増加するにつれ何
度も発生し得る、または宿主が有糸分裂によって繁殖する前に宿主毎に１回のみ発生し得
る。ファージの場合、複製は溶菌相の間に能動的に、または溶原性相の間に受動的に発生
し得る。発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列が、それが調節配列に作動可能に結合されて
ＲＮＡ転写物として発現され得るように、制限および連結により挿入され得るものである
。ベクターは、ベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞の識別および選択
での使用に好適な１個以上のマーカー配列を更に含み得る。マーカーとしては、例えば、
抗生物質または他の化合物に対して耐性または感受性のいずれかを増加または減少させる
タンパク質をコードする遺伝子、活性が当該技術分野で公知の標準的なアッセイにより検
出される酵素をコードする遺伝子（例えば、β－ガラクトシダーゼまたはアルカリホスフ
ァターゼ）、ならびに形質転換またはトランスフェクトされた細胞、宿主、コロニー、ま
たはプラークの表現型に可視的に影響を与える遺伝子が挙げられる。ベクターの例として
は、動作可能に結合されているＤＮＡセグメント中に存在する構造的遺伝子産物の自律複
製および発現が可能なものが挙げられるが、これらに限定されない。
【0024】
上記の配列番号１のゲノム配列は、ＣｅｄＰＶのヌクレプラスミド（ｎｕｃｌｅｐｌａ
ｓｍｉｄ）タンパク質（「Ｎタンパク質」）、リンタンパク質（「Ｐタンパク質」）、マ
トリックスタンパク質（「Ｍタンパク質」）、融合タンパク質（「Ｆタンパク質」）、糖
タンパク質または付着タンパク質（「Ｇタンパク質」）、および大型タンパク質（「Ｌタ
ンパク質」）をコードする。加えて、Ｐ遺伝子もまた、ＣｅｄＰＶのＣタンパク質をコー
ドする。「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、本明細書において同義的
にアミノ酸のポリマーを指す。
ｓｍｉｄ）タンパク質（「Ｎタンパク質」）、リンタンパク質（「Ｐタンパク質」）、マ
トリックスタンパク質（「Ｍタンパク質」）、融合タンパク質（「Ｆタンパク質」）、糖
タンパク質または付着タンパク質（「Ｇタンパク質」）、および大型タンパク質（「Ｌタ
ンパク質」）をコードする。加えて、Ｐ遺伝子もまた、ＣｅｄＰＶのＣタンパク質をコー
ドする。「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、本明細書において同義的
にアミノ酸のポリマーを指す。
【0025】
ポリペプチドに関して本明細書で使用されるとき、「実質的に純粋な」という用語は、
ポリペプチドが、それの意図された使用のために実用的かつ適切な程度に自然またはイン
ビボ系において見出され得る他の物質を本質的に含まないことを意味する。具体的には、
ポリペプチドは十分に純粋であり、その宿主細胞の他の生体成分を十分な程度に含まず、
例えば、抗体を産生する、配列決定する、または医薬調製物を産生するのに有用である。
当該技術分野で周知の技術によって、実質的に純粋なポリペプチドは、本明細書に開示さ
れた核酸およびアミノ酸配列に照らして産生され得る。本発明の実質的に精製されたポリ
ペプチドが、医薬調製物中の薬学的に許容される担体と混合され得るので、ポリペプチド
は、調製物の重量の一定割合のみを含み得る。それでもなお、ポリペプチドは、それが生
物系において関連し得る物質から実質的に分離されているという点で実質的に純粋である
。
ポリペプチドが、それの意図された使用のために実用的かつ適切な程度に自然またはイン
ビボ系において見出され得る他の物質を本質的に含まないことを意味する。具体的には、
ポリペプチドは十分に純粋であり、その宿主細胞の他の生体成分を十分な程度に含まず、
例えば、抗体を産生する、配列決定する、または医薬調製物を産生するのに有用である。
当該技術分野で周知の技術によって、実質的に純粋なポリペプチドは、本明細書に開示さ
れた核酸およびアミノ酸配列に照らして産生され得る。本発明の実質的に精製されたポリ
ペプチドが、医薬調製物中の薬学的に許容される担体と混合され得るので、ポリペプチド
は、調製物の重量の一定割合のみを含み得る。それでもなお、ポリペプチドは、それが生
物系において関連し得る物質から実質的に分離されているという点で実質的に純粋である
。
【0026】
核酸およびタンパク質に関して本明細書で使用されるとき、「単離された」という用語
は、その天然環境で見出されないことを意味し、これらの状況を含むが、これらに限定さ
れない：（ｉ）例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってインビトロで増幅され
る（ｉｉ）クローニングするおよび／または培養することによって組換え的に産生される
（ｉｉｉ）開裂およびゲル分離によって精製される（ｉｖ）調製されたプラスミドまたは
発現ベクターの一部である、または（ｖ）例えば、化学合成などによって合成される。単
離された核酸は、当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術によって容易に操作可能なもの
である。したがって、ベクターに含まれるヌクレオチド配列であって、５’および３’制
限部位がそれで知られているか、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマー配列
がそれに関して開示されている、ベクターに含まれるヌクレオチド配列は、単離されてい
ると考えられるが、その自然宿主中にその天然状態で存在する核酸配列はそうではない。
単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製されてもよいが、そうである必要はな
い。例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター内で単離された核酸は、それが常
駐する細胞内物質の微小な割合のみを含み得るという点で純粋ではない。しかしながら、
それは当業者に公知の標準的な技術により容易に操作されるため、この用語が本明細書で
使用されるとき、このような核酸は単離されている。
は、その天然環境で見出されないことを意味し、これらの状況を含むが、これらに限定さ
れない：（ｉ）例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってインビトロで増幅され
る（ｉｉ）クローニングするおよび／または培養することによって組換え的に産生される
（ｉｉｉ）開裂およびゲル分離によって精製される（ｉｖ）調製されたプラスミドまたは
発現ベクターの一部である、または（ｖ）例えば、化学合成などによって合成される。単
離された核酸は、当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術によって容易に操作可能なもの
である。したがって、ベクターに含まれるヌクレオチド配列であって、５’および３’制
限部位がそれで知られているか、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマー配列
がそれに関して開示されている、ベクターに含まれるヌクレオチド配列は、単離されてい
ると考えられるが、その自然宿主中にその天然状態で存在する核酸配列はそうではない。
単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製されてもよいが、そうである必要はな
い。例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター内で単離された核酸は、それが常
駐する細胞内物質の微小な割合のみを含み得るという点で純粋ではない。しかしながら、
それは当業者に公知の標準的な技術により容易に操作されるため、この用語が本明細書で
使用されるとき、このような核酸は単離されている。
【0027】
上記の配列番号１のヌクレオチド配列を参照すると、Ｎタンパク質のコード配列は、位
置１４４で始まり、１６７６で終了し、配列番号２に開示されているように５１０アミノ
酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列をコ
ードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置１４４～１６７３に
あるヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％
、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％
、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％
、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を有す
る核酸を提供する。
置１４４で始まり、１６７６で終了し、配列番号２に開示されているように５１０アミノ
酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列をコ
ードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置１４４～１６７３に
あるヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％
、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％
、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％
、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配列を有す
る核酸を提供する。
【0028】
本発明はまた、ポリペプチド、ＣｅｄＰＶ Ｎ－タンパク質の誘導体および断片を提供
する。特に、本発明は、配列番号２のポリペプチドと少なくとも約６０％、６１％、６２
％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２
％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２
％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の
ポリペプチドを提供する。本明細書で使用されるとき、参照ポリペプチドの「誘導体」は
、参照ポリペプチドと１００％未満のアミノ酸同一性を有するポリペプチドである。例え
ば、本発明は、本明細書に記載のＣｅｄＰＶ Ｎタンパク質の誘導体を提供する。本発明
はまた、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供す
る。
する。特に、本発明は、配列番号２のポリペプチドと少なくとも約６０％、６１％、６２
％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２
％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２
％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の
ポリペプチドを提供する。本明細書で使用されるとき、参照ポリペプチドの「誘導体」は
、参照ポリペプチドと１００％未満のアミノ酸同一性を有するポリペプチドである。例え
ば、本発明は、本明細書に記載のＣｅｄＰＶ Ｎタンパク質の誘導体を提供する。本発明
はまた、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供す
る。
【0029】
本発明はまた、配列番号２のポリペプチドの断片を提供する。本明細書で使用されると
き、参照ポリペプチドの断片は、参照ポリペプチドの長さ未満の長さを有するポリペプチ
ドである。この断片は、断片を含有する分子の全長が参照タンパク質を超えるように、キ
メラタンパク質などのより大きな分子内にあってもよい。配列番号２のポリペプチド断片
は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５
、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１
２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１
７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２
２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２
７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３
２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３
７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４
２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４
７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０５、５０６、５０７、５０８、ま
たは５０９アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示された
断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示すため
に使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番号２のポリペプチド断片は
、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によって、
断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であり得る
などを意味する。配列番号２のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも約．．．４４０
、４４５．．．アミノ酸長」）として、４４０～４４５アミノ酸長であるポリペプチド断
片が挙げられることを当業者は認識するであろう。
き、参照ポリペプチドの断片は、参照ポリペプチドの長さ未満の長さを有するポリペプチ
ドである。この断片は、断片を含有する分子の全長が参照タンパク質を超えるように、キ
メラタンパク質などのより大きな分子内にあってもよい。配列番号２のポリペプチド断片
は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５
、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１
２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１
７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２
２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２
７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３
２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３
７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４
２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４
７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０５、５０６、５０７、５０８、ま
たは５０９アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示された
断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示すため
に使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番号２のポリペプチド断片は
、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によって、
断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であり得る
などを意味する。配列番号２のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも約．．．４４０
、４４５．．．アミノ酸長」）として、４４０～４４５アミノ酸長であるポリペプチド断
片が挙げられることを当業者は認識するであろう。
【0030】
【表2】
【0031】
上記の配列番号１のヌクレオチド配列を参照すると、Ｐタンパク質のコード配列は、位
置２１１２で始まり、４３２５で終了し、配列番号３に開示されているように７３７アミ
ノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号３のアミノ酸配列を
コードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置２１１２～４３２
５にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％
、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％
、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配
列を有する核酸を提供する。
置２１１２で始まり、４３２５で終了し、配列番号３に開示されているように７３７アミ
ノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号３のアミノ酸配列を
コードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置２１１２～４３２
５にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％
、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％
、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配
列を有する核酸を提供する。
【0032】
本発明はまた、ポリペプチド、ＣｅｄＰＶ Ｐ－タンパク質の誘導体および断片をコー
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号３のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号３のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号３のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号３のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
【0033】
配列番号３のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０
５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５
５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０
５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５
５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０
５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５
５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０
５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３
５、または７３６アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示
された断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示
すために使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番号３のポリペプチド
断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によ
って、断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であ
り得るなどを意味する。配列番号３のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも．．．約
７２０、７２５．．．アミノ酸長」）として、７２０～７２５アミノ酸長であるポリペプ
チド断片が挙げられることを当業者は認識するであろう。
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０
５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５
５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０
５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５
５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０
５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５
５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０
５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３
５、または７３６アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示
された断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示
すために使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番号３のポリペプチド
断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によ
って、断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であ
り得るなどを意味する。配列番号３のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも．．．約
７２０、７２５．．．アミノ酸長」）として、７２０～７２５アミノ酸長であるポリペプ
チド断片が挙げられることを当業者は認識するであろう。
【0034】
【表3】
【0035】
Ｃタンパク質のコード配列は、Ｐタンパク質をコードする配列内にあり、（配列番号１
の）位置２１３７から始まり、位置２６７０で終了し、配列番号４に開示されているよう
に１７７アミノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号４のア
ミノ酸配列をコードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置２１
３７～２６７０にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６
３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７
３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８
３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌ
クレオチド配列を有する核酸を提供する。
の）位置２１３７から始まり、位置２６７０で終了し、配列番号４に開示されているよう
に１７７アミノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号４のア
ミノ酸配列をコードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置２１
３７～２６７０にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６
３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７
３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８
３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌ
クレオチド配列を有する核酸を提供する。
【0036】
本発明はまた、ポリペプチド、ＣｅｄＰＶ Ｃ－タンパク質の誘導体および断片をコー
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号４のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号４のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号４のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号４のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
【0037】
配列番号４のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１６６、１６７ｍ １６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１
７３、１７４、１７５、または１７６アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用され
るとき、上記で開示された断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有す
るポリペプチドを示すために使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番
号４のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断
片であり得る」によって、断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～
２５アミノ酸長であり得るなどを意味する。配列番号４のポリペプチド断片（例えば、「
少なくとも．．．約１４０、１４５．．．アミノ酸長」）として、１４０～１４５アミノ
酸長であるポリペプチド断片が挙げられることを当業者は認識するであろう。
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１６６、１６７ｍ １６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１
７３、１７４、１７５、または１７６アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用され
るとき、上記で開示された断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有す
るポリペプチドを示すために使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番
号４のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断
片であり得る」によって、断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～
２５アミノ酸長であり得るなどを意味する。配列番号４のポリペプチド断片（例えば、「
少なくとも．．．約１４０、１４５．．．アミノ酸長」）として、１４０～１４５アミノ
酸長であるポリペプチド断片が挙げられることを当業者は認識するであろう。
【0038】
【表4】
【0039】
上記の配列番号１のヌクレオチド配列を参照すると、Ｍタンパク質のコード配列は、位
置４６３５で始まり、５７１７で終了し、配列番号５に開示されているように３６０アミ
ノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号５のアミノ酸配列を
コードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置４６３５～５７１
７にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％
、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％
、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配
列を有する核酸を提供する。
置４６３５で始まり、５７１７で終了し、配列番号５に開示されているように３６０アミ
ノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号５のアミノ酸配列を
コードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置４６３５～５７１
７にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％
、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％
、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配
列を有する核酸を提供する。
【0040】
本発明はまた、ポリペプチド、ＣｅｄＰＶ Ｍ－タンパク質の誘導体および断片をコー
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号５のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号５のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号５のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号５のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
【0041】
配列番号５のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、または３５９アミノ酸
長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示された断片の長さはまた、
一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示すために使用される。例え
ば、本明細書で使用されるとき、「配列番号５のポリペプチド断片は、少なくとも約１５
、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によって、断片が１５～２０ア
ミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であり得るなどを意味する。配
列番号５のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも．．．約２８０、２８５．．．アミ
ノ酸長」）として、２８０～２８５アミノ酸長であるポリペプチド断片が挙げられること
を当業者は認識するであろう。
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、または３５９アミノ酸
長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示された断片の長さはまた、
一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示すために使用される。例え
ば、本明細書で使用されるとき、「配列番号５のポリペプチド断片は、少なくとも約１５
、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によって、断片が１５～２０ア
ミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であり得るなどを意味する。配
列番号５のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも．．．約２８０、２８５．．．アミ
ノ酸長」）として、２８０～２８５アミノ酸長であるポリペプチド断片が挙げられること
を当業者は認識するであろう。
【0042】
【表5】
【0043】
上記の配列番号１のヌクレオチド配列を参照すると、Ｆタンパク質のコード配列は、位
置６４０５で始まり、８０７８で終了し、配列番号６に開示されているように５５７アミ
ノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号６のアミノ酸配列を
コードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置６４０５～８０７
８にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％
、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％
、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配
列を有する核酸を提供する。
置６４０５で始まり、８０７８で終了し、配列番号６に開示されているように５５７アミ
ノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号６のアミノ酸配列を
コードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置６４０５～８０７
８にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％
、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％
、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチド配
列を有する核酸を提供する。
【0044】
本発明はまた、ポリペプチド、ＣｅｄＰＶ Ｆ－タンパク質の誘導体および断片をコー
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号６のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号６のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号６のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号６のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
【0045】
配列番号６のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０
５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５
５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０
５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５４６、５４
７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、または５５６
アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示された断片の長さ
はまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示すために使用され
る。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番号６のポリペプチド断片は、少なくと
も約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によって、断片が１５
～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であり得るなどを意味
する。配列番号６のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも．．．約５１５、５２０．
．．アミノ酸長」）として、５１５～５２０アミノ酸長であるポリペプチド断片が挙げら
れることを当業者は認識するであろう。
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０
５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５
５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０
５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５４６、５４
７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、または５５６
アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示された断片の長さ
はまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示すために使用され
る。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番号６のポリペプチド断片は、少なくと
も約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によって、断片が１５
～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であり得るなどを意味
する。配列番号６のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも．．．約５１５、５２０．
．．アミノ酸長」）として、５１５～５２０アミノ酸長であるポリペプチド断片が挙げら
れることを当業者は認識するであろう。
【0046】
【表6】
【0047】
Ｆタンパク質の断片の一例は、ＣｅｄＰＶのＦ糖タンパク質の細胞外ドメインの全部ま
たは一部を含む可溶性ＣｅｄＰＶ Ｆ糖タンパク質である。Ｆ糖タンパク質の可溶性形態
は、Ｆ糖タンパク質の膜貫通および／または細胞質尾部ドメインの全部または一部を欠失
することによって産生され得る。例を挙げると、可溶性Ｆ糖タンパク質は、ＣｅＰＶ Ｆ
糖タンパク質の完全な細胞外領域を含み得る。いくつかの実施形態において、可溶性Ｆ糖
タンパク質は、配列番号６においてＫ４９０の後で切り捨てられ得る。また、例を挙げる
と、可溶性Ｆ糖タンパク質は、細胞外領域の全部または一部とＣｅｄＰＶ Ｆ糖タンパク
質の膜貫通ドメインの一部とを含み得る。更に例を挙げると、可溶性Ｆ（ｓＦ）糖タンパ
ク質のいくつかのバージョンは、主にタンパク質を固定する細胞質尾部および／または膜
貫通ドメインを除去することを介して、構築され得る。本明細書で使用されるとき、「可
溶性Ｆ糖タンパク質」または「Ｆ糖タンパク質の可溶性形態」または「ｓＦ糖タンパク質
」は、細胞外ドメインまたはその一部分を含有する天然Ｆ糖タンパク質の断片または一部
のためのアミノ酸配列を指す。ｓＦ糖タンパク質は、天然ウイルスＦ糖タンパク質と構造
的に類似している。
たは一部を含む可溶性ＣｅｄＰＶ Ｆ糖タンパク質である。Ｆ糖タンパク質の可溶性形態
は、Ｆ糖タンパク質の膜貫通および／または細胞質尾部ドメインの全部または一部を欠失
することによって産生され得る。例を挙げると、可溶性Ｆ糖タンパク質は、ＣｅＰＶ Ｆ
糖タンパク質の完全な細胞外領域を含み得る。いくつかの実施形態において、可溶性Ｆ糖
タンパク質は、配列番号６においてＫ４９０の後で切り捨てられ得る。また、例を挙げる
と、可溶性Ｆ糖タンパク質は、細胞外領域の全部または一部とＣｅｄＰＶ Ｆ糖タンパク
質の膜貫通ドメインの一部とを含み得る。更に例を挙げると、可溶性Ｆ（ｓＦ）糖タンパ
ク質のいくつかのバージョンは、主にタンパク質を固定する細胞質尾部および／または膜
貫通ドメインを除去することを介して、構築され得る。本明細書で使用されるとき、「可
溶性Ｆ糖タンパク質」または「Ｆ糖タンパク質の可溶性形態」または「ｓＦ糖タンパク質
」は、細胞外ドメインまたはその一部分を含有する天然Ｆ糖タンパク質の断片または一部
のためのアミノ酸配列を指す。ｓＦ糖タンパク質は、天然ウイルスＦ糖タンパク質と構造
的に類似している。
【0048】
本発明のｓＦ糖タンパク質は、天然ウイルスＦ糖タンパク質と構造的に類似している。
例を挙げると、本発明のｓＦ糖タンパク質は、ＣｅｄＰＶを対象とするポリクローナル抗
体によって認識され得る。例を挙げると、本発明のｓＦ糖タンパク質は、天然ＣｅｄＰＶ
Ｆ糖タンパク質に匹敵する（三量体などの）オリゴマー形態（複数可）で組み立て得る
。
例を挙げると、本発明のｓＦ糖タンパク質は、ＣｅｄＰＶを対象とするポリクローナル抗
体によって認識され得る。例を挙げると、本発明のｓＦ糖タンパク質は、天然ＣｅｄＰＶ
Ｆ糖タンパク質に匹敵する（三量体などの）オリゴマー形態（複数可）で組み立て得る
。
【0049】
本発明のｓＦまたはｓＧ糖タンパク質は、例えば、ワクチン開発と、ワクチンとしてま
たは組換えモノクローナル抗体の単離に使用されるときに抗ウイルス抗体を生成するため
に抗原として作用することとに好適である。ｓＦまたはｓＧ糖タンパク質は、天然のＦま
たはＧ糖タンパク質を認識し得る抗体を生成するのに好適である。モノマーまたは三量体
などのオリゴマー形態で組み立てられる本発明のｓＦまたはｓＧ糖タンパク質は、例えば
、構造に基づく抗ウイルス調査を支援するように更なる情報を提供するために結晶化およ
び構造決定のためなどに更に有用であり得る。本発明のｓＦまたはｓＧ糖タンパク質のオ
リゴマー形態はまた、天然のＦまたはＧ糖タンパク質およびその天然オリゴマー形態を認
識し得る抗体を更に生成し得る。「可溶性」という用語は、水性または非水性溶媒中で溶
解するタンパク質の能力に関係がない。
たは組換えモノクローナル抗体の単離に使用されるときに抗ウイルス抗体を生成するため
に抗原として作用することとに好適である。ｓＦまたはｓＧ糖タンパク質は、天然のＦま
たはＧ糖タンパク質を認識し得る抗体を生成するのに好適である。モノマーまたは三量体
などのオリゴマー形態で組み立てられる本発明のｓＦまたはｓＧ糖タンパク質は、例えば
、構造に基づく抗ウイルス調査を支援するように更なる情報を提供するために結晶化およ
び構造決定のためなどに更に有用であり得る。本発明のｓＦまたはｓＧ糖タンパク質のオ
リゴマー形態はまた、天然のＦまたはＧ糖タンパク質およびその天然オリゴマー形態を認
識し得る抗体を更に生成し得る。「可溶性」という用語は、水性または非水性溶媒中で溶
解するタンパク質の能力に関係がない。
【0050】
上記の配列番号１のヌクレオチド配列を参照すると、Ｇタンパク質のコード配列は、位
置８２６８で始まり、１０１３６で終了し、配列番号７に開示されているように６２２ア
ミノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号７のアミノ酸配列
をコードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置８２６８～１０
１３６にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６
４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７
４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８
４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチ
ド配列を有する核酸を提供する。
置８２６８で始まり、１０１３６で終了し、配列番号７に開示されているように６２２ア
ミノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号７のアミノ酸配列
をコードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置８２６８～１０
１３６にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６
４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７
４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８
４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌクレオチ
ド配列を有する核酸を提供する。
【0051】
本発明はまた、ポリペプチド、ＣｅｄＰＶ Ｇ－タンパク質の誘導体および断片をコー
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号７のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号７のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号７のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号７のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
【0052】
配列番号７のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０
５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５
５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０
５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５
５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０
５、６１０、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６１９、６２
０、または６２１アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示
された断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示
すために使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番号７のポリペプチド
断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によ
って、断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であ
り得るなどを意味する。配列番号７のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも．．．約
３００、３０５．．．アミノ酸長」）として、３００～３０５アミノ酸長であるポリペプ
チド断片が挙げられることを当業者は認識するであろう。
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０
５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５
５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０
５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５
５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０
５、６１０、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６１９、６２
０、または６２１アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で使用されるとき、上記で開示
された断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ酸を有するポリペプチドを示
すために使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、「配列番号７のポリペプチド
断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ酸長の断片であり得る」によ
って、断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片が２０～２５アミノ酸長であ
り得るなどを意味する。配列番号７のポリペプチド断片（例えば、「少なくとも．．．約
３００、３０５．．．アミノ酸長」）として、３００～３０５アミノ酸長であるポリペプ
チド断片が挙げられることを当業者は認識するであろう。
【0053】
【表7】
【0054】
Ｇタンパク質ＣｅｄＰＶの断片の例としては、ワクチン、診断、およびスクリーニング
の迅速な高処理量産生を可能にする天然ウイルスＧ糖タンパク質の特徴を保持するＣｅｄ
ＰＶ Ｇタンパク質の可溶性形態が挙げられる。
の迅速な高処理量産生を可能にする天然ウイルスＧ糖タンパク質の特徴を保持するＣｅｄ
ＰＶ Ｇタンパク質の可溶性形態が挙げられる。
【0055】
ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質の可溶性形態は、Ｇ糖タンパク質の外部ドメイン（例えば
、細胞外）の少なくとも一部を含む。選択された実施形態において、ＣｅｄＰＶは一般に
、Ｇ糖タンパク質の膜貫通ドメインの全部または一部と、Ｇ糖タンパク質の細胞質尾部の
全部または一部とを欠失することによって産生される。一実施形態において、ＣｅｄＰＶ
の可溶性Ｇタンパク質は、完全長のＧタンパク質の細胞質領域の任意の部分を含まない。
別の実施形態において、ＣｅｄＰＶの可溶性Ｇタンパク質は、膜貫通ドメインの任意の部
分を含まない。更に別の実施形態において、ＣｅｄＰＶの可溶性Ｇタンパク質は、膜貫通
ドメインおよび細胞質ドメインの一部分を含まない。本明細書で使用されるとき、「可溶
性」という用語は単に、Ｇタンパク質が、その細胞質尾部の一部または全部を欠落してい
ること、またはＧタンパク質が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠落していること、
またはその両方を意味する。いくつかの実施形態において、可溶性Ｇ糖タンパク質は、配
列番号７においてＫ８７の後で切り捨てられる。「可溶性」という用語は、水性または非
水性溶媒中で溶解するタンパク質の能力に関係がない。
、細胞外）の少なくとも一部を含む。選択された実施形態において、ＣｅｄＰＶは一般に
、Ｇ糖タンパク質の膜貫通ドメインの全部または一部と、Ｇ糖タンパク質の細胞質尾部の
全部または一部とを欠失することによって産生される。一実施形態において、ＣｅｄＰＶ
の可溶性Ｇタンパク質は、完全長のＧタンパク質の細胞質領域の任意の部分を含まない。
別の実施形態において、ＣｅｄＰＶの可溶性Ｇタンパク質は、膜貫通ドメインの任意の部
分を含まない。更に別の実施形態において、ＣｅｄＰＶの可溶性Ｇタンパク質は、膜貫通
ドメインおよび細胞質ドメインの一部分を含まない。本明細書で使用されるとき、「可溶
性」という用語は単に、Ｇタンパク質が、その細胞質尾部の一部または全部を欠落してい
ること、またはＧタンパク質が、膜貫通ドメインの全部または一部を欠落していること、
またはその両方を意味する。いくつかの実施形態において、可溶性Ｇ糖タンパク質は、配
列番号７においてＫ８７の後で切り捨てられる。「可溶性」という用語は、水性または非
水性溶媒中で溶解するタンパク質の能力に関係がない。
【0056】
本発明の可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質は、一般に、対応している天然ウイルス糖
タンパク質の１個以上の特徴（ウイルス宿主細胞受容体と相互作用するまたはそれに結合
する能力など）を保持し、モノマーおよび／またはオリゴマー形態（複数可）で産生され
得るか、または抗体（ウイルス中和抗体を含むが、これに限定されない）を誘発する能力
により、天然Ｇ糖タンパク質を認識することができる。付加的な特徴の例としては、宿主
細胞の感染を阻止または防止する能力が挙げられるが、これに限定されない。従来の方法
を用いて、１個以上の特徴について可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質を評価し得る。使
用され得る方法の例としては、本明細書の実施例に記載のアッセイが挙げられるが、これ
に限定されない。
タンパク質の１個以上の特徴（ウイルス宿主細胞受容体と相互作用するまたはそれに結合
する能力など）を保持し、モノマーおよび／またはオリゴマー形態（複数可）で産生され
得るか、または抗体（ウイルス中和抗体を含むが、これに限定されない）を誘発する能力
により、天然Ｇ糖タンパク質を認識することができる。付加的な特徴の例としては、宿主
細胞の感染を阻止または防止する能力が挙げられるが、これに限定されない。従来の方法
を用いて、１個以上の特徴について可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質を評価し得る。使
用され得る方法の例としては、本明細書の実施例に記載のアッセイが挙げられるが、これ
に限定されない。
【0057】
上記の配列番号１のヌクレオチド配列を参照すると、Ｌタンパク質のコード配列は、位
置１０５７２で始まり、１８０７７で終了し、配列番号８に開示されているように２５０
１アミノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号８のアミノ酸
配列をコードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置１０５７２
～１８０７７にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３
％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３
％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３
％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３
％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌク
レオチド配列を有する核酸を提供する。
置１０５７２で始まり、１８０７７で終了し、配列番号８に開示されているように２５０
１アミノ酸長のポリペプチドをもたらす。したがって、本発明は、配列番号８のアミノ酸
配列をコードする核酸を提供する。加えて、本発明はまた、配列番号１の位置１０５７２
～１８０７７にあるポリヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３
％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３
％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３
％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３
％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のポリヌク
レオチド配列を有する核酸を提供する。
【0058】
本発明はまた、ポリペプチド、ＣｅｄＰＶ Ｌ－タンパク質の誘導体および断片をコー
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号８のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号８のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
ドする核酸分子を提供する。特に、本発明は、配列番号８のポリペプチドと少なくとも約
６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、
７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、
８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％同一のポリペプチドを提供する。本発明はまた、配列番号８のアミノ酸配
列を含むか、またはそれからなるポリペプチドを提供する。
【0059】
配列番号８のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０
５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５
５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０
５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５
５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０
５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５
５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０
５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５
５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０
５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５
５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０
５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５
５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、１０００、１
００５、１０１０、１０１５、１０２０、１０２５、１０３０、１０３５、１０４０、１
０４５、１０５０、１０５５、１０６０、１０６５、１０７０、１０７５、１０８０、１
０８５、１０９０、１０９５、１１００、１１０５、１１１０、１１１５、１１２０、１
１２５、１１３０、１１３５、１１４０、１１４５、１１５０、１１５５、１１６０、１
１６５、１１７０、１１７５、１１８０、１１８５、１１９０、１１９５、１２００、１
２０５、１２１０、１２１５、１２２０、１２２５、１２３０、１２３５、１２４０、１
２４５、１２５０、１２５５、１２６０、１２６５、１２７０、１２７５、１２８０、１
２８５、１２９０、１２９５、１３００、１３０５、１３１０、１３１５、１３２０、１
３２５、１３３０、１３３５、１３４０、１３４５、１３５０、１３５５、１３６０、１
３６５、１３７０、１３７５、１３８０、１３８５、１３９０、１３９５、１４００、１
４０５、１４１０、１４１５、１４２０、１４２５、１４３０、１４３５、１４４０、１
４４５、１４５０、１４５５、１４６０、１４６５、１４７０、１４７５、１４８０、１
４８５、１４９０、１４９５、１５００、１５０５、１５１０、１５１５、１５２０、１
５２５、１５３０、１５３５、１５４０、１５４５、１５５０、１５５５、１５６０、１
５６５、１５７０、１５７５、１５８０、１５８５、１５９０、１５９５、１６００、１
６０５、１６１０、１６１５、１６２０、１６２５、１６３０、１６３５、１６４０、１
６４５、１６５０、１６５５、１６６０、１６６５、１６７０、１６７５、１６８０、１
６８５、１６９０、１６９５、１７００、１７０５、１７１０、１７１５、１７２０、１
７２５、１７３０、１７３５、１７４０、１７４５、１７５０、１７５５、１７６０、１
７６５、１７７０、１７７５、１７８０、１７８５、１７９０、１７９５、１８００、１
８０５、１８１０、１８１５、１８２０、１８２５、１８３０、１８３５、１８４０、１
８４５、１８５０、１８５５、１８６０、１８６５、１８７０、１８７５、１８８０、１
８８５、１８９０、１８９５、１９００、１９０５、１９１０、１９１５、１９２０、１
９２５、１９３０、１９３５、１９４０、１９４５、１９５０、１９５５、１９６０、１
９６５、１９７０、１９７５、１９８０、１９８５、１９９０、１９９５、２０００、２
００５、２０１０、２０１５、２０２０、２０２５、２０３０、２０３５、２０４０、２
０４５、２０５０、２０５５、２０６０、２０６５、２０７０、２０７５、２０８０、２
０８５、２０９０、２０９５、２１００、２１０５、２１１０、２１１５、２１２０、２
１２５、２１３０、２１３５、２１４０、２１４５、２１５０、２１５５、２１６０、２
１６５、２１７０、２１７５、２１８０、２１８５、２１９０、２１９５、２２００、２
２０５、２２１０、２２１５、２２２０、２２２５、２２３０、２２３５、２２４０、２
２４５、２２５０、２２５５、２２６０、２２６５、２２７０、２２７５、２２８０、２
２８５、２２９０、２２９５、２３００、２３０５、２３１０、２３１５、２３２０、２
３２５、２３３０、２３３５、２３４０、２３４５、２３５０、２３５５、２３６０、２
３６５、２３７０、２３７５、２３８０、２３８５、２３９０、２３９５、２４００、２
４０５、２４１０、２４１５、２４２０、２４２５、２４３０、２４３５、２４４０、２
４４５、２４５０、２４５５、２４６０、２４６５、２４７０、２４７５、２４８０、２
４８５、２４９０、２４９１、２４９２、２５９３、２４９４、２４９５、２４９６、２
４９７、２４９８、２４９９、または２５００アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で
使用されるとき、上記で開示された断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ
酸を有するポリペプチドを示すために使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、
「配列番号８のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ
酸長の断片であり得る」によって、断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片
が２０～２５アミノ酸長であり得るなどを意味する。配列番号８のポリペプチド断片（例
えば、「少なくとも．．．約２０５０、２０５５．．．アミノ酸長」）として、２０５０
～２０５５アミノ酸長であるポリペプチド断片が挙げられることを当業者は認識するであ
ろう。
、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０
５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５
５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０
５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５
５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０
５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５
５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０
５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５
５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０
５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５
５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０
５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５
５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０
５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５
５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０
５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５
５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０
５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５
５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、１０００、１
００５、１０１０、１０１５、１０２０、１０２５、１０３０、１０３５、１０４０、１
０４５、１０５０、１０５５、１０６０、１０６５、１０７０、１０７５、１０８０、１
０８５、１０９０、１０９５、１１００、１１０５、１１１０、１１１５、１１２０、１
１２５、１１３０、１１３５、１１４０、１１４５、１１５０、１１５５、１１６０、１
１６５、１１７０、１１７５、１１８０、１１８５、１１９０、１１９５、１２００、１
２０５、１２１０、１２１５、１２２０、１２２５、１２３０、１２３５、１２４０、１
２４５、１２５０、１２５５、１２６０、１２６５、１２７０、１２７５、１２８０、１
２８５、１２９０、１２９５、１３００、１３０５、１３１０、１３１５、１３２０、１
３２５、１３３０、１３３５、１３４０、１３４５、１３５０、１３５５、１３６０、１
３６５、１３７０、１３７５、１３８０、１３８５、１３９０、１３９５、１４００、１
４０５、１４１０、１４１５、１４２０、１４２５、１４３０、１４３５、１４４０、１
４４５、１４５０、１４５５、１４６０、１４６５、１４７０、１４７５、１４８０、１
４８５、１４９０、１４９５、１５００、１５０５、１５１０、１５１５、１５２０、１
５２５、１５３０、１５３５、１５４０、１５４５、１５５０、１５５５、１５６０、１
５６５、１５７０、１５７５、１５８０、１５８５、１５９０、１５９５、１６００、１
６０５、１６１０、１６１５、１６２０、１６２５、１６３０、１６３５、１６４０、１
６４５、１６５０、１６５５、１６６０、１６６５、１６７０、１６７５、１６８０、１
６８５、１６９０、１６９５、１７００、１７０５、１７１０、１７１５、１７２０、１
７２５、１７３０、１７３５、１７４０、１７４５、１７５０、１７５５、１７６０、１
７６５、１７７０、１７７５、１７８０、１７８５、１７９０、１７９５、１８００、１
８０５、１８１０、１８１５、１８２０、１８２５、１８３０、１８３５、１８４０、１
８４５、１８５０、１８５５、１８６０、１８６５、１８７０、１８７５、１８８０、１
８８５、１８９０、１８９５、１９００、１９０５、１９１０、１９１５、１９２０、１
９２５、１９３０、１９３５、１９４０、１９４５、１９５０、１９５５、１９６０、１
９６５、１９７０、１９７５、１９８０、１９８５、１９９０、１９９５、２０００、２
００５、２０１０、２０１５、２０２０、２０２５、２０３０、２０３５、２０４０、２
０４５、２０５０、２０５５、２０６０、２０６５、２０７０、２０７５、２０８０、２
０８５、２０９０、２０９５、２１００、２１０５、２１１０、２１１５、２１２０、２
１２５、２１３０、２１３５、２１４０、２１４５、２１５０、２１５５、２１６０、２
１６５、２１７０、２１７５、２１８０、２１８５、２１９０、２１９５、２２００、２
２０５、２２１０、２２１５、２２２０、２２２５、２２３０、２２３５、２２４０、２
２４５、２２５０、２２５５、２２６０、２２６５、２２７０、２２７５、２２８０、２
２８５、２２９０、２２９５、２３００、２３０５、２３１０、２３１５、２３２０、２
３２５、２３３０、２３３５、２３４０、２３４５、２３５０、２３５５、２３６０、２
３６５、２３７０、２３７５、２３８０、２３８５、２３９０、２３９５、２４００、２
４０５、２４１０、２４１５、２４２０、２４２５、２４３０、２４３５、２４４０、２
４４５、２４５０、２４５５、２４６０、２４６５、２４７０、２４７５、２４８０、２
４８５、２４９０、２４９１、２４９２、２５９３、２４９４、２４９５、２４９６、２
４９７、２４９８、２４９９、または２５００アミノ酸長の断片であり得る。本明細書で
使用されるとき、上記で開示された断片の長さはまた、一定の範囲内のいくつかのアミノ
酸を有するポリペプチドを示すために使用される。例えば、本明細書で使用されるとき、
「配列番号８のポリペプチド断片は、少なくとも約１５、２０、２５、３０．．．アミノ
酸長の断片であり得る」によって、断片が１５～２０アミノ酸長であり得る、および断片
が２０～２５アミノ酸長であり得るなどを意味する。配列番号８のポリペプチド断片（例
えば、「少なくとも．．．約２０５０、２０５５．．．アミノ酸長」）として、２０５０
～２０５５アミノ酸長であるポリペプチド断片が挙げられることを当業者は認識するであ
ろう。
【0060】
【表8】
【0061】
参照アミノ酸配列（例えば、配列番号７）に対して少なくとも、例えば、約９５％「同
一」であるアミノ酸配列を有するポリペプチドは、アミノ酸配列が参照アミノ酸配列の各
１００アミノ酸当たり最大約５個の修飾を含み得ることを除いて、ポリペプチドのアミノ
酸配列が参照配列と同一であることを意味すると理解される。換言すれば、参照アミノ酸
配列と少なくとも約９５％同一のアミノ酸配列を有するペプチドを得るために、参照配列
のアミノ酸残基の最大約５％が欠失し得るもしくは別のアミノ酸で置換され得る、または
参照配列中の全アミノ酸の最大約５％のいくらかのアミノ酸が、参照配列中に挿入され得
る。参照配列のこれらの修飾は、参照アミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端の位置またはそ
れらの末端位置の間のどこかで発生し得、参照配列中のアミノ酸の間で個別に、または参
照配列内の１個以上の連続した基中のいずれかにおいて散在する。
一」であるアミノ酸配列を有するポリペプチドは、アミノ酸配列が参照アミノ酸配列の各
１００アミノ酸当たり最大約５個の修飾を含み得ることを除いて、ポリペプチドのアミノ
酸配列が参照配列と同一であることを意味すると理解される。換言すれば、参照アミノ酸
配列と少なくとも約９５％同一のアミノ酸配列を有するペプチドを得るために、参照配列
のアミノ酸残基の最大約５％が欠失し得るもしくは別のアミノ酸で置換され得る、または
参照配列中の全アミノ酸の最大約５％のいくらかのアミノ酸が、参照配列中に挿入され得
る。参照配列のこれらの修飾は、参照アミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端の位置またはそ
れらの末端位置の間のどこかで発生し得、参照配列中のアミノ酸の間で個別に、または参
照配列内の１個以上の連続した基中のいずれかにおいて散在する。
【0062】
本明細書で使用されるとき、「同一性」は、参照ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列
と比較して、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の同一性の尺度である。一般的に、配
列は、最上位の一致が取得されるように整列される。「同一性」それ自体は、当技術分野
で認識された意味を有し、公表された技術を用いて計算することができる。（例えば、Ｃ
ｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ
．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１
９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ
Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉ
ｎ，Ｈ．Ｇ．， ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９
４）；ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｉｎ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；ａｎｄ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ
Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ（１９９１）を参照されたい）。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列
間の同一性を測定するためのいくつかの方法があるが、「同一性」という用語は、当業者
に周知である（Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．＆Ｌｉｐｔｏｎ，Ｄ．，Ｓｉａｍ Ｊ Ａｐｐｌｉ
ｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３（１９８８））。２個の配列間の同一性または類似性を
判定するために一般的に使用される方法としては、Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｈｕｇｅ Ｃｏｍ
ｐｕｔｅｒｓ，Ｍａｒｔｉｎ Ｊ．Ｂｉｓｈｏｐ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ（１９９４）ａｎｄ Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．＆Ｌｉｐｔｏｎ，Ｄ
．，Ｓｉａｍ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３（１９８８）に開示され
ているものが挙げられるが、これらに限定されない。コンピュータプログラムはまた、同
一性および類似性を計算する方法およびアルゴリズムを含み得る。２つの配列間の同一性
および類似性を判定するコンピュータプログラム法の例としては、ＧＣＧプログラムパッ
ケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ １２（ｉ）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＥｘＰＡＳｙ、ＢＬＡ
ＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌｅｃ Ｂｉ
ｏｌ ２１５：４０３（１９９０））、およびＦＡＳＴＤＢが挙げられるが、これらに限
定されない。同一性および類似性を判定するための方法の例が、参照により組み込まれる
Ｍｉｃｈａｅｌｓ，Ｇ．ａｎｄ Ｇａｒｉａｎ，Ｒ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ １，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓ
ｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２０００）において議論されている。
と比較して、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の同一性の尺度である。一般的に、配
列は、最上位の一致が取得されるように整列される。「同一性」それ自体は、当技術分野
で認識された意味を有し、公表された技術を用いて計算することができる。（例えば、Ｃ
ｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ
．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１
９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ
Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉ
ｎ，Ｈ．Ｇ．， ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９
４）；ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｉｎ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；ａｎｄ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ
Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ（１９９１）を参照されたい）。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列
間の同一性を測定するためのいくつかの方法があるが、「同一性」という用語は、当業者
に周知である（Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．＆Ｌｉｐｔｏｎ，Ｄ．，Ｓｉａｍ Ｊ Ａｐｐｌｉ
ｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３（１９８８））。２個の配列間の同一性または類似性を
判定するために一般的に使用される方法としては、Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｈｕｇｅ Ｃｏｍ
ｐｕｔｅｒｓ，Ｍａｒｔｉｎ Ｊ．Ｂｉｓｈｏｐ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ（１９９４）ａｎｄ Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．＆Ｌｉｐｔｏｎ，Ｄ
．，Ｓｉａｍ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３（１９８８）に開示され
ているものが挙げられるが、これらに限定されない。コンピュータプログラムはまた、同
一性および類似性を計算する方法およびアルゴリズムを含み得る。２つの配列間の同一性
および類似性を判定するコンピュータプログラム法の例としては、ＧＣＧプログラムパッ
ケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ １２（ｉ）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＥｘＰＡＳｙ、ＢＬＡ
ＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌｅｃ Ｂｉ
ｏｌ ２１５：４０３（１９９０））、およびＦＡＳＴＤＢが挙げられるが、これらに限
定されない。同一性および類似性を判定するための方法の例が、参照により組み込まれる
Ｍｉｃｈａｅｌｓ，Ｇ．ａｎｄ Ｇａｒｉａｎ，Ｒ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ １，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓ
ｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２０００）において議論されている。
【0063】
本発明の一実施形態において、２個以上のポリペプチド間の同一性を判定するために使
用されるアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴＰである。本発明の別の実施形態において、２個以
上のポリペプチド間の同一性を判定するために使用されるアルゴリズムはＦＡＳＴＤＢで
あり、これはＢｒｕｔｌａｇらのアルゴリズムに基づいている（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉ
ｏｓｃｉ．６：２３７－２４５（１９９０）、参照により組み込まれる）。ＦＡＳＴＤＢ
配列整列において、クエリ配列および参照配列は、アミノ酸配列である。配列整列の結果
は、パーセント同一性による。一実施形態では、同一性パーセントを計算するためにアミ
ノ酸配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用され得るパラメータとしては、以下が挙げられ
るが、これらに限定されない：マトリックス＝ＰＡＭ、Ｋ－タプル＝２、不一致ペナルテ
ィ＝１、結合ペナルティ＝２０、無作為化グループ長＝０、カットオフ得点＝１、隙間ペ
ナルティ＝５、隙間サイズペナルティ０．０５、ウィンドウサイズ＝５００または対象ア
ミノ配列の長さのうちのいずれか短い方。
用されるアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴＰである。本発明の別の実施形態において、２個以
上のポリペプチド間の同一性を判定するために使用されるアルゴリズムはＦＡＳＴＤＢで
あり、これはＢｒｕｔｌａｇらのアルゴリズムに基づいている（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉ
ｏｓｃｉ．６：２３７－２４５（１９９０）、参照により組み込まれる）。ＦＡＳＴＤＢ
配列整列において、クエリ配列および参照配列は、アミノ酸配列である。配列整列の結果
は、パーセント同一性による。一実施形態では、同一性パーセントを計算するためにアミ
ノ酸配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用され得るパラメータとしては、以下が挙げられ
るが、これらに限定されない：マトリックス＝ＰＡＭ、Ｋ－タプル＝２、不一致ペナルテ
ィ＝１、結合ペナルティ＝２０、無作為化グループ長＝０、カットオフ得点＝１、隙間ペ
ナルティ＝５、隙間サイズペナルティ０．０５、ウィンドウサイズ＝５００または対象ア
ミノ配列の長さのうちのいずれか短い方。
【0064】
内部付加または欠失のためではなくＮ末端またはＣ末端の付加または欠失のために、参
照配列がクエリ配列よりも短いまたは長い場合、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、同一性パー
セントを計算するときにＮ末端およびＣ末端の切断または参照配列の付加を考慮しないた
めに、手動で補正を行うことができる。参照配列に対してＮ末端またはＣ末端で切断され
たクエリ配列について、同一性パーセントは、クエリ配列の全塩基のパーセントとして、
一致／整列していない参照配列に対して、Ｎ末端およびＣ末端であるクエリ配列の残基数
を計算することによって補正される。ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果により、一致／整列を
判定する。整列パーセンテージは、次いで、同一性パーセントから減算され、最終同一性
パーセントの得点に到達するために、指定されたパラメータを用いて上記のＦＡＳＴＤＢ
プログラムによって計算される。この補正された得点は、整列が互いにどれだけ「対応す
る」か、ならびに同一性パーセンテージを判定する目的のために使用され得る。クエリ配
列のＮ末端またはＣ末端を越えて延在する参照配列の残基は、同一性パーセントの得点を
手動で調整する目的のためのものと考えられ得る。すなわち、比較配列のＮ末端またはＣ
末端と一致／整列しない残基は、同一性パーセント得点または整列番号付けを手動で調整
するとき、数えられる。
照配列がクエリ配列よりも短いまたは長い場合、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、同一性パー
セントを計算するときにＮ末端およびＣ末端の切断または参照配列の付加を考慮しないた
めに、手動で補正を行うことができる。参照配列に対してＮ末端またはＣ末端で切断され
たクエリ配列について、同一性パーセントは、クエリ配列の全塩基のパーセントとして、
一致／整列していない参照配列に対して、Ｎ末端およびＣ末端であるクエリ配列の残基数
を計算することによって補正される。ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果により、一致／整列を
判定する。整列パーセンテージは、次いで、同一性パーセントから減算され、最終同一性
パーセントの得点に到達するために、指定されたパラメータを用いて上記のＦＡＳＴＤＢ
プログラムによって計算される。この補正された得点は、整列が互いにどれだけ「対応す
る」か、ならびに同一性パーセンテージを判定する目的のために使用され得る。クエリ配
列のＮ末端またはＣ末端を越えて延在する参照配列の残基は、同一性パーセントの得点を
手動で調整する目的のためのものと考えられ得る。すなわち、比較配列のＮ末端またはＣ
末端と一致／整列しない残基は、同一性パーセント得点または整列番号付けを手動で調整
するとき、数えられる。
【0065】
例えば、９０アミノ酸残基のクエリ配列は、同一性パーセントを判定するために１００
残基の参照配列と整列される。欠失がクエリ配列のＮ末端で起こり、ゆえにＦＡＳＴＤＢ
整列は、Ｎ末端の最初の１０残基の一致／整列を示さない。１０個の不対残基は、参照配
列の１０％を表し（Ｎ末端およびＣ末端における残基の数は一致しない／参照配列中の残
基の総数）、したがって、１０％がＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算された同一性パ
ーセント得点から減算される。残りの９０個の残基が完全に一致した（１００％整列）場
合には、最終的な同一性パーセントは、９０％（１００％整列、１０％不一致の突出）で
あろう。別の例では、欠失が内部欠失であることを除いて、９０残基のクエリ配列は、１
００参照配列と比較される。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって計算された同一性パーセン
トは、クエリと整合／整列されない対象配列のＮ末端またはＣ末端で残基が存在しないた
め、手動で補正されない。更に別の実施例において、１１０アミノ酸のクエリ配列は、同
一性パーセントを判定するために１００残基の参照配列と整列される。クエリの付加がク
エリ配列のＮ末端で起こり、ゆえにＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端の最初の１０残基の一致
／整列を示さない場合もある。クエリ配列の残りの１００個のアミノ酸残基が、参照配列
の全長に対して９５％の同一性を有する場合、クエリのＮ末端付加は無視され、参照配列
に対するクエリの同一性パーセントは９５％となるであろう。
残基の参照配列と整列される。欠失がクエリ配列のＮ末端で起こり、ゆえにＦＡＳＴＤＢ
整列は、Ｎ末端の最初の１０残基の一致／整列を示さない。１０個の不対残基は、参照配
列の１０％を表し（Ｎ末端およびＣ末端における残基の数は一致しない／参照配列中の残
基の総数）、したがって、１０％がＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算された同一性パ
ーセント得点から減算される。残りの９０個の残基が完全に一致した（１００％整列）場
合には、最終的な同一性パーセントは、９０％（１００％整列、１０％不一致の突出）で
あろう。別の例では、欠失が内部欠失であることを除いて、９０残基のクエリ配列は、１
００参照配列と比較される。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって計算された同一性パーセン
トは、クエリと整合／整列されない対象配列のＮ末端またはＣ末端で残基が存在しないた
め、手動で補正されない。更に別の実施例において、１１０アミノ酸のクエリ配列は、同
一性パーセントを判定するために１００残基の参照配列と整列される。クエリの付加がク
エリ配列のＮ末端で起こり、ゆえにＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端の最初の１０残基の一致
／整列を示さない場合もある。クエリ配列の残りの１００個のアミノ酸残基が、参照配列
の全長に対して９５％の同一性を有する場合、クエリのＮ末端付加は無視され、参照配列
に対するクエリの同一性パーセントは９５％となるであろう。
【0066】
本明細書で使用されるとき、「に対応する（三人称含）」および「に対応している」と
いう用語は、それらが整列配列に関連するとき、参照タンパク質内の列挙された位置を意
味することが意図される（例えば、ＣｅｄＰＶ Ｇタンパク質、および参照タンパク質上
の位置と整列する修飾されるＣｅｄＰＶ Ｇタンパク質におけるそれらの位置）。このよ
うに、対象ＣｅｄＰＶ Ｇタンパク質のアミノ酸配列が、参照ＣｅｄＰＶ Ｇタンパク質
のアミノ酸配列（例えば、配列番号７）と整列するとき、参照配列の一定の列挙された位
置「に対応する」対象配列中のアミノ酸は、参照配列（例えば、配列番号７）のこれらの
位置で整列するものであるが、参照配列のこれらの正確な数値位置にある必要は必ずしも
ない。配列間の対応しているアミノ酸を判定するために配列を整列するための方法が、本
明細書に記載されている。したがって、本発明は、配列が配列番号７の配列に対応する新
規のペプチドを提供する。
いう用語は、それらが整列配列に関連するとき、参照タンパク質内の列挙された位置を意
味することが意図される（例えば、ＣｅｄＰＶ Ｇタンパク質、および参照タンパク質上
の位置と整列する修飾されるＣｅｄＰＶ Ｇタンパク質におけるそれらの位置）。このよ
うに、対象ＣｅｄＰＶ Ｇタンパク質のアミノ酸配列が、参照ＣｅｄＰＶ Ｇタンパク質
のアミノ酸配列（例えば、配列番号７）と整列するとき、参照配列の一定の列挙された位
置「に対応する」対象配列中のアミノ酸は、参照配列（例えば、配列番号７）のこれらの
位置で整列するものであるが、参照配列のこれらの正確な数値位置にある必要は必ずしも
ない。配列間の対応しているアミノ酸を判定するために配列を整列するための方法が、本
明細書に記載されている。したがって、本発明は、配列が配列番号７の配列に対応する新
規のペプチドを提供する。
【0067】
発現ベクター系中へ本明細書に開示されたタンパク質をコードするポリヌクレオチドの
挿入から生じる変異体もまた、企図される。例えば、変異体は（通常、挿入）、修飾され
たタンパク質のアミノ末端および／またはカルボキシ末端は、別のポリペプチドに融合さ
れたときから生じ得る。
挿入から生じる変異体もまた、企図される。例えば、変異体は（通常、挿入）、修飾され
たタンパク質のアミノ末端および／またはカルボキシ末端は、別のポリペプチドに融合さ
れたときから生じ得る。
【0068】
別の態様において、本発明は、修飾されたタンパク質中の１つ以上のアミノ酸残基が、
除去される欠失変異体を提供する。欠失は、修飾されたタンパク質の一方または両方の末
端で、または修飾されたタンパク質の１つ以上の非末端アミノ酸残基の除去により、もた
らされ得る。欠失変異体は、したがって、修飾されたタンパク質の全ての断片を含む。
除去される欠失変異体を提供する。欠失は、修飾されたタンパク質の一方または両方の末
端で、または修飾されたタンパク質の１つ以上の非末端アミノ酸残基の除去により、もた
らされ得る。欠失変異体は、したがって、修飾されたタンパク質の全ての断片を含む。
【0069】
開示された同一性パーセントの制限内で、本発明はまた、本発明の開示されたポリペプ
チドの置換変異体に関する。置換変異体は、修飾されたタンパク質の１つ以上のアミノ酸
残基が除去され、代替の残基と置換されるそれらのポリペプチドを含む。一態様では、置
換は本来保存的であるが、しかしながら、本発明はまた、非保存的である置換を包含する
。以下の表に記載のように、この目的のための保存的置換が定義され得る。アミノ酸は、
物理的特性および二次および三次タンパク質構造に対する寄与に応じて分類され得る。保
存的置換は、類似の特性を有する別のアミノ酸のための１個のアミノ酸の置換として、当
該技術分野で認識されている。例示的な保存的置換は、以下の通りである。
チドの置換変異体に関する。置換変異体は、修飾されたタンパク質の１つ以上のアミノ酸
残基が除去され、代替の残基と置換されるそれらのポリペプチドを含む。一態様では、置
換は本来保存的であるが、しかしながら、本発明はまた、非保存的である置換を包含する
。以下の表に記載のように、この目的のための保存的置換が定義され得る。アミノ酸は、
物理的特性および二次および三次タンパク質構造に対する寄与に応じて分類され得る。保
存的置換は、類似の特性を有する別のアミノ酸のための１個のアミノ酸の置換として、当
該技術分野で認識されている。例示的な保存的置換は、以下の通りである。
【0070】
【表9】
【0071】
代替的に、保存的アミノ酸は、以下の通り、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，［Ｂｉｏｃｈｅｍｓ
ｉｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ
．ＮＹ、Ｎ．Ｙ．（１９７５），ｐｐ．７１ ７７］に説明されるようにグループ化され
得る。
ｉｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ
．ＮＹ、Ｎ．Ｙ．（１９７５），ｐｐ．７１ ７７］に説明されるようにグループ化され
得る。
【0072】
【表10】
【0073】
更に他の代替的で例示的な保存的置換は、以下の通りである。
【0074】
【表11】
【0075】
本発明のペプチドまたはペプチドの定義は、アミノ酸残基の挿入、欠失、または置換以
外の修飾を有するポリペプチドを含むことが意図されていることを理解すべきである。例
を挙げると、修飾は本来共有結合性であり、例えば、ポリマー、脂質、他の有機および無
機部分との化学結合を含み得る。このような誘導体は、ポリペプチドの循環半減期を増加
させるように調製され得るか、または、所望の細胞、組織、または器官のためのポリペプ
チドの標的化能力を改善するように設計され得る。同様に、本発明は、ポリエチレングリ
コール、ポリオキシエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールのような１つ以
上の水溶性ポリマー付着を含むように共有結合的に修飾された修飾ペプチドを更に包含す
る。
外の修飾を有するポリペプチドを含むことが意図されていることを理解すべきである。例
を挙げると、修飾は本来共有結合性であり、例えば、ポリマー、脂質、他の有機および無
機部分との化学結合を含み得る。このような誘導体は、ポリペプチドの循環半減期を増加
させるように調製され得るか、または、所望の細胞、組織、または器官のためのポリペプ
チドの標的化能力を改善するように設計され得る。同様に、本発明は、ポリエチレングリ
コール、ポリオキシエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールのような１つ以
上の水溶性ポリマー付着を含むように共有結合的に修飾された修飾ペプチドを更に包含す
る。
【0076】
本発明はまた、特に、ＣｅｄＰＶまたは本明細書で開示された任意のＣｅｄＰＶタンパ
ク質の断片に結合する抗体またはその断片を対象とする。
ク質の断片に結合する抗体またはその断片を対象とする。
【0077】
具体的には、本発明は、シダーウイルスのＧ糖タンパク質の頭部の４個の疎水性ポケッ
トに結合する抗体または抗体断片を提供する。抗体は、モノクローナルまたはポリクロー
ナルであり得る。シダーウイルスは恐らく、とりわけ、少なくとも内皮細胞上に存在する
エフリンＢ２の膜貫通タンパク質に結合することによって、感染過程を開始する。特に、
エフリンＢ２タンパク質は、シダーウイルスのＧ糖タンパク質の頭部上の４個の疎水性結
合ポケット中に挿入する「ＧＨ－ループ領域」を含み、したがって、ウイルスが、細胞表
面タンパク質に特異的に結合し、感染プロセスを開始することを可能にする。エフリンＢ
２と結合するシダーウイルスの接触残基は、Ｖ５０７、Ｆ４５８、およびＩ４０１であり
、文字は標準的なアミノ酸の標準一文字略号を指し、番号は本明細書に開示された配列に
従って、配列番号７のアミノ酸番号を指す。このように、抗体または抗体断片であり、抗
体が、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／０４
００５０号および同第ＰＣＴ／ＵＳ１２／３５８０６号に開示されている抗体のいずれで
もないのであれば、本発明は、Ｖ５０７／Ｆ４５８／Ｉ４０１で定義されたシダーウイル
スの非直線エピトープに結合する抗体または抗体断片を提供する。
トに結合する抗体または抗体断片を提供する。抗体は、モノクローナルまたはポリクロー
ナルであり得る。シダーウイルスは恐らく、とりわけ、少なくとも内皮細胞上に存在する
エフリンＢ２の膜貫通タンパク質に結合することによって、感染過程を開始する。特に、
エフリンＢ２タンパク質は、シダーウイルスのＧ糖タンパク質の頭部上の４個の疎水性結
合ポケット中に挿入する「ＧＨ－ループ領域」を含み、したがって、ウイルスが、細胞表
面タンパク質に特異的に結合し、感染プロセスを開始することを可能にする。エフリンＢ
２と結合するシダーウイルスの接触残基は、Ｖ５０７、Ｆ４５８、およびＩ４０１であり
、文字は標準的なアミノ酸の標準一文字略号を指し、番号は本明細書に開示された配列に
従って、配列番号７のアミノ酸番号を指す。このように、抗体または抗体断片であり、抗
体が、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／０４
００５０号および同第ＰＣＴ／ＵＳ１２／３５８０６号に開示されている抗体のいずれで
もないのであれば、本発明は、Ｖ５０７／Ｆ４５８／Ｉ４０１で定義されたシダーウイル
スの非直線エピトープに結合する抗体または抗体断片を提供する。
【0078】
例えば、本発明に包含される抗体としては、ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質に特異的な抗
体、ヘンドラウイルスＧ糖タンパク質と交差反応する抗体、および／またはニパウイルス
Ｇ糖タンパク質および中和抗体が挙げられるが、これらに限定されない。例を挙げると、
中和抗体の特徴としては、宿主細胞の感染を阻止または防止する能力が挙げられるが、こ
れに限定されない。本発明の抗体はまた、当該技術分野で公知の方法を使用して特徴付け
され得る。
体、ヘンドラウイルスＧ糖タンパク質と交差反応する抗体、および／またはニパウイルス
Ｇ糖タンパク質および中和抗体が挙げられるが、これらに限定されない。例を挙げると、
中和抗体の特徴としては、宿主細胞の感染を阻止または防止する能力が挙げられるが、こ
れに限定されない。本発明の抗体はまた、当該技術分野で公知の方法を使用して特徴付け
され得る。
【0079】
本発明において有用な抗体は、抗体のグリコシル化変異体、抗体のアミノ酸配列変異体
、および共有結合的に修飾された抗体を含め、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体
、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗
体、二重特異性抗体、ヘテロ接合抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの変異体、抗体部分を
含む融合タンパク質、ヒト化抗体、および必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブ
リン分子のあらゆる他の修正された構成を包含することができる。抗体の例は、マウス、
ラット、ヒト、霊長類、または（キメラ抗体またはヒト化抗体を含む）他の任意の起源か
ら派生する。
、および共有結合的に修飾された抗体を含め、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体
、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗
体、二重特異性抗体、ヘテロ接合抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの変異体、抗体部分を
含む融合タンパク質、ヒト化抗体、および必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブ
リン分子のあらゆる他の修正された構成を包含することができる。抗体の例は、マウス、
ラット、ヒト、霊長類、または（キメラ抗体またはヒト化抗体を含む）他の任意の起源か
ら派生する。
【0080】
モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を調製する方法は、当該技術分野におい
て周知である。ポリクローナル抗体は、例えば、免疫剤、必要に応じて、補助剤、の１回
以上の注射により、哺乳類において高められ得る。補助剤の例としては、キーホールリン
ペット、ヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、大豆トリプシン阻害剤、
フロインド完全補助剤、およびＭＰＬ－ＴＤＭ補助剤が挙げられるが、これらに限定され
ない。免疫化プロトコルは、当業者によって判定され得る。
て周知である。ポリクローナル抗体は、例えば、免疫剤、必要に応じて、補助剤、の１回
以上の注射により、哺乳類において高められ得る。補助剤の例としては、キーホールリン
ペット、ヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、大豆トリプシン阻害剤、
フロインド完全補助剤、およびＭＰＬ－ＴＤＭ補助剤が挙げられるが、これらに限定され
ない。免疫化プロトコルは、当業者によって判定され得る。
【0081】
抗体は、代替的に、モノクローナル抗体であり得る。モノクローナル抗体は、ハイブリ
ドーマ法を用いて産生され得る（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
，Ｃ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７を、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ
．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７－３８１（１９８２）による修正と
して参照されたい）。
ドーマ法を用いて産生され得る（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
，Ｃ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７を、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ
．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７－３８１（１９８２）による修正と
して参照されたい）。
【0082】
所望の場合、目的の抗体が配列決定され得、次いで、ポリヌクレオチド配列が、発現ま
たは増殖のためにベクター中にクローニングされ得る。目的の抗体をコードする配列は、
宿主細胞中のベクター中に維持され得、次いで、宿主細胞が拡大し、将来の使用のために
凍結され得る。代替的な方法では、ポリヌクレオチド配列は、抗体の「ヒト化」または親
和性、抗体もしくは他の特徴を改善するように遺伝子操作のために使用され得る（例えば
、Ｇ糖タンパク質に対してより大きな親和性、および／または宿主細胞受容体に対してシ
ダーウイルス、ヘンドラ、またはニパウイルスの融合を阻害するより大きな効力を得るよ
うに抗体配列を遺伝的に操作する）。
たは増殖のためにベクター中にクローニングされ得る。目的の抗体をコードする配列は、
宿主細胞中のベクター中に維持され得、次いで、宿主細胞が拡大し、将来の使用のために
凍結され得る。代替的な方法では、ポリヌクレオチド配列は、抗体の「ヒト化」または親
和性、抗体もしくは他の特徴を改善するように遺伝子操作のために使用され得る（例えば
、Ｇ糖タンパク質に対してより大きな親和性、および／または宿主細胞受容体に対してシ
ダーウイルス、ヘンドラ、またはニパウイルスの融合を阻害するより大きな効力を得るよ
うに抗体配列を遺伝的に操作する）。
【0083】
抗体はまた、当該技術分野で既知の方法によってヒト化され得る。例えば、参照により
組み込まれる米国特許第４，８１６，５６７号、同第５，８０７，７１５号、同第５，８
６６，６９２号、同第６，３３１，４１５号、同第５，５３０，１０１号、同第５，６９
３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５８５，０８９号、および同第６，
１８０，３７０号を参照されたい。更に別の実施形態において、完全なヒト抗体は、特定
のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスを使用するこ
とによって取得され得る。
組み込まれる米国特許第４，８１６，５６７号、同第５，８０７，７１５号、同第５，８
６６，６９２号、同第６，３３１，４１５号、同第５，５３０，１０１号、同第５，６９
３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５８５，０８９号、および同第６，
１８０，３７０号を参照されたい。更に別の実施形態において、完全なヒト抗体は、特定
のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスを使用するこ
とによって取得され得る。
【0084】
別の実施形態において、抗体は、組換え的に生成され、当該技術分野で既知の任意の方
法を用いて発現させることができる。例を挙げると、抗体は、ファージディスプレイ技術
により組換え的に生成され得る。例えば、参照により組み込まれる米国特許第５，５６５
，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号、および同第６，２
６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１２：４３３－４５５（１９９４）を参照されたい。代替的に、ファージディスプ
レイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５
３（１９９０））を使用して、インビトロでヒト抗体および抗体断片を産生することがで
きる。ファージディスプレイは多様な形式で実施され得る（審査には、例えば、Ｊｏｈｎ
ｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ Ｓ，ａｎｄ Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎ
ｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５６４－５７
１（１９９３）を参照されたい）。例を挙げると、本明細書中に記載の可溶性Ｇ糖タンパ
ク質は、これらの技術によって組換え抗体を単離する目的のための抗原として使用するこ
とができる。
法を用いて発現させることができる。例を挙げると、抗体は、ファージディスプレイ技術
により組換え的に生成され得る。例えば、参照により組み込まれる米国特許第５，５６５
，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号、および同第６，２
６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１２：４３３－４５５（１９９４）を参照されたい。代替的に、ファージディスプ
レイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５
３（１９９０））を使用して、インビトロでヒト抗体および抗体断片を産生することがで
きる。ファージディスプレイは多様な形式で実施され得る（審査には、例えば、Ｊｏｈｎ
ｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ Ｓ，ａｎｄ Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎ
ｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５６４－５７
１（１９９３）を参照されたい）。例を挙げると、本明細書中に記載の可溶性Ｇ糖タンパ
ク質は、これらの技術によって組換え抗体を単離する目的のための抗原として使用するこ
とができる。
【0085】
抗体は、宿主動物から抗体および抗体産生細胞を最初に単離し、遺伝子配列を得て、宿
主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）において組換え的に抗体を発現させる遺伝子配列を用いる
ことによって、組換え的に生成され得る。使用され得る別の方法は、植物（例えば、タバ
コ）における抗体配列またはトランスジェニックミルクを発現させることである。植物ま
たは牛乳中で組換え的に抗体を発現させるための方法が開示されている。例えば、参照に
より組み込まれるＰｅｅｔｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２７５６（２０
０１）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ １３：６５（１９９５）、およびＰｏｌｌｏｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１４７（１９９９）を参照されたい。抗体の誘導体（例
えば、ヒト化された単鎖など）を作るための方法は、当技術分野で既知である。
主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）において組換え的に抗体を発現させる遺伝子配列を用いる
ことによって、組換え的に生成され得る。使用され得る別の方法は、植物（例えば、タバ
コ）における抗体配列またはトランスジェニックミルクを発現させることである。植物ま
たは牛乳中で組換え的に抗体を発現させるための方法が開示されている。例えば、参照に
より組み込まれるＰｅｅｔｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２７５６（２０
０１）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ １３：６５（１９９５）、およびＰｏｌｌｏｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１４７（１９９９）を参照されたい。抗体の誘導体（例
えば、ヒト化された単鎖など）を作るための方法は、当技術分野で既知である。
【0086】
本発明の抗体は、例えば、生体試料もしくは検体中で、ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質を
単離もしくは精製する、またはヘンドラもしくはニパＧ糖タンパク質を検出するために使
用する従来の方法によって担体に結合され得る。代替的に、例を挙げると、本発明の中和
抗体は、感染したか、またはヘンドラ、ニパ、および／またはシダーウイルスに感染して
いる疑いのある対象に受動的免疫療法として投与され得る。「対象」および「患者」とい
う用語は同義的に使用され、ヒト、サル、家畜、競技用動物、およびペットを含むが、こ
れらに限定されない。獣医学的使用もまた、本発明によって包含される。
単離もしくは精製する、またはヘンドラもしくはニパＧ糖タンパク質を検出するために使
用する従来の方法によって担体に結合され得る。代替的に、例を挙げると、本発明の中和
抗体は、感染したか、またはヘンドラ、ニパ、および／またはシダーウイルスに感染して
いる疑いのある対象に受動的免疫療法として投与され得る。「対象」および「患者」とい
う用語は同義的に使用され、ヒト、サル、家畜、競技用動物、およびペットを含むが、こ
れらに限定されない。獣医学的使用もまた、本発明によって包含される。
【0087】
診断
【0088】
本発明のタンパク質、タンパク質断片、および／または抗体は、シダーウイルスについ
て様々な免疫アッセイで使用され得る。本発明の発現された組換えタンパク質の断片は、
高品質管理により産生され得、生体試料中の抗体を検出する目的のための抗原として好適
である。例を挙げれば、限定ではなく、可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質は、対象の生
体試料中で抗体を検出するためにＥＬＩＳＡアッセイにおいて抗原として使用することが
できる。
て様々な免疫アッセイで使用され得る。本発明の発現された組換えタンパク質の断片は、
高品質管理により産生され得、生体試料中の抗体を検出する目的のための抗原として好適
である。例を挙げれば、限定ではなく、可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質は、対象の生
体試料中で抗体を検出するためにＥＬＩＳＡアッセイにおいて抗原として使用することが
できる。
【0089】
本発明のプライマーおよびプローブを含む核酸はまた、シダーウイルスのための様々な
アッセイで使用される。本発明のプライマーおよびプローブを使用して、対象におけるシ
ダーウイルスをコードするリボ核酸の存在を検出する。本発明はまた、核酸増幅技術（例
えば、逆転写酵素ＰＣＲ法）を利用するシダーウイルスの存在を検出するための方法を含
み、該方法は、ＤＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔａｑポリメラーゼ）を用いて行われる変
性、プライマーアニーリング、および拡張の繰り返し周期を利用し、由来する核酸におけ
る指数関数的な増加につながり、ウイルスの存在の検出を容易にする。
アッセイで使用される。本発明のプライマーおよびプローブを使用して、対象におけるシ
ダーウイルスをコードするリボ核酸の存在を検出する。本発明はまた、核酸増幅技術（例
えば、逆転写酵素ＰＣＲ法）を利用するシダーウイルスの存在を検出するための方法を含
み、該方法は、ＤＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔａｑポリメラーゼ）を用いて行われる変
性、プライマーアニーリング、および拡張の繰り返し周期を利用し、由来する核酸におけ
る指数関数的な増加につながり、ウイルスの存在の検出を容易にする。
【0090】
ワクチン
【0091】
本発明はまた、シダーウイルスのためのワクチンに関する。一態様において、ワクチン
は、ワクチンに基づくＤＮＡである。当業者は、インビボでの外因性タンパク質の発現を
得るために発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８
号、同第６，４１３，９４２号、および同第６，３７６，４７１号を参照されたい。所望
のポリヌクレオチドの送達および所望の細胞内での発現のためのウイルスに基づくベクタ
ーは当該技術分野で周知であり、非限定的な実施例が本明細書に記載されている。別の態
様において、ワクチンは、タンパク質に基づき、本発明のタンパク質の１つ以上の断片、
またはタンパク質の断片を含む。タンパク質断片の例としては、外部ドメイン、トランス
膜ドメイン、細胞質ドメイン、それらの機能部分、ならびに中和抗体に特異的に反応する
部分が挙げられるが、それらに限定されない。ワクチンはまた、感染に対するより迅速な
処置ならびに予防のための抗体に基づくワクチンであり得る。
は、ワクチンに基づくＤＮＡである。当業者は、インビボでの外因性タンパク質の発現を
得るために発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８
号、同第６，４１３，９４２号、および同第６，３７６，４７１号を参照されたい。所望
のポリヌクレオチドの送達および所望の細胞内での発現のためのウイルスに基づくベクタ
ーは当該技術分野で周知であり、非限定的な実施例が本明細書に記載されている。別の態
様において、ワクチンは、タンパク質に基づき、本発明のタンパク質の１つ以上の断片、
またはタンパク質の断片を含む。タンパク質断片の例としては、外部ドメイン、トランス
膜ドメイン、細胞質ドメイン、それらの機能部分、ならびに中和抗体に特異的に反応する
部分が挙げられるが、それらに限定されない。ワクチンはまた、感染に対するより迅速な
処置ならびに予防のための抗体に基づくワクチンであり得る。
【0092】
発現ベクターの投与としては、注射、経口投与、粒子銃、またはカテーテル挿入投与、
および局所投与を含む、局所投与または全身投与が挙げられるが、これらに限定されない
。発現ベクターまたはサブゲノムのポリヌクレオチドを含有する治療用組成物の標的送達
もまた、使用することができる。受容体媒介性ＤＮＡ送達技術については、例えば、Ｆｉ
ｎｄｅｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３）１１：
２０２；Ｃｈｉｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｏｆ Ｄｉｒｅｃｔ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓ
ｆｅｒ（Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ，ｅｄ．）（１９９４）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８８）２６３：６２１；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．（１９９４）２６９：５４２；Ｚｅｎｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９０）８７：３６５５；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１）２６６：３３８に記載されている。
および局所投与を含む、局所投与または全身投与が挙げられるが、これらに限定されない
。発現ベクターまたはサブゲノムのポリヌクレオチドを含有する治療用組成物の標的送達
もまた、使用することができる。受容体媒介性ＤＮＡ送達技術については、例えば、Ｆｉ
ｎｄｅｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３）１１：
２０２；Ｃｈｉｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｏｆ Ｄｉｒｅｃｔ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓ
ｆｅｒ（Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ，ｅｄ．）（１９９４）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８８）２６３：６２１；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．（１９９４）２６９：５４２；Ｚｅｎｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９０）８７：３６５５；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１）２６６：３３８に記載されている。
【0093】
非ウイルス送達ビヒクルおよび方法はまた、死滅したアデノウイルスに単独で連結され
ているまたは連結されていないポリイーショニック（ｐｏｌｙｅａｔｉｏｎｉｃ）濃縮Ｄ
ＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７を
参照されたい）、リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９
８９）２６４：１６９８５を参照されたい）、真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国
特許第５，８１４，４８２号、ＰＣＴ国際公開特許第ＷＯ９５／０７９９４号、同第ＷＯ
９６／１７０７２号、同第ＷＯ９５／３０７６３号、および同第ＷＯ９７／４２３３８号
を参照されたい）（これらの全てが参照により組み込まれる）、および細胞膜を有する核
電荷中和または融合に対して採用され得るが、これらに限定されない。裸のＤＮＡもまた
採用され得る。例示的な裸のＤＮＡ導入方法は、参照により組み込まれるＰＣＴ国際公開
特許第ＷＯ９０／１１０９２号および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている
。遺伝子送達ビヒクルとして作用し得るリポソームは、参照により組み込まれる米国特許
第５，４２２，１２０号、ＰＣＴ国際公開特許第ＷＯ９５／１３７９６号、同第ＷＯ９４
／２３６９７号、同第ＷＯ９１／１４４４５号、および欧州公開特許第ＥＰ０５２４９６
８号に記載されている。更なる手法が、参照により組み込まれるＰｈｉｌｉｐ，Ｍｏｌ．
Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９４）１４：２４１１、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４）９１：１５８１に記載されている。
ているまたは連結されていないポリイーショニック（ｐｏｌｙｅａｔｉｏｎｉｃ）濃縮Ｄ
ＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７を
参照されたい）、リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９
８９）２６４：１６９８５を参照されたい）、真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国
特許第５，８１４，４８２号、ＰＣＴ国際公開特許第ＷＯ９５／０７９９４号、同第ＷＯ
９６／１７０７２号、同第ＷＯ９５／３０７６３号、および同第ＷＯ９７／４２３３８号
を参照されたい）（これらの全てが参照により組み込まれる）、および細胞膜を有する核
電荷中和または融合に対して採用され得るが、これらに限定されない。裸のＤＮＡもまた
採用され得る。例示的な裸のＤＮＡ導入方法は、参照により組み込まれるＰＣＴ国際公開
特許第ＷＯ９０／１１０９２号および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている
。遺伝子送達ビヒクルとして作用し得るリポソームは、参照により組み込まれる米国特許
第５，４２２，１２０号、ＰＣＴ国際公開特許第ＷＯ９５／１３７９６号、同第ＷＯ９４
／２３６９７号、同第ＷＯ９１／１４４４５号、および欧州公開特許第ＥＰ０５２４９６
８号に記載されている。更なる手法が、参照により組み込まれるＰｈｉｌｉｐ，Ｍｏｌ．
Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９４）１４：２４１１、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４）９１：１５８１に記載されている。
【0094】
ヒトへの投与のために、タンパク質またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含
むコドンが、ヒトへの使用のために最適化され得る。
むコドンが、ヒトへの使用のために最適化され得る。
【0095】
本発明の別の態様において、可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質は、サブユニットのワ
クチンとして使用される。可溶性ＣｅｄＰＶ糖タンパク質またはそれらの組み合わせは、
それら自体で、または補助剤と組み合わせて投与され得る。補助剤の例としては、アルミ
ニウム塩、水中土壌乳剤、水中油型乳剤、サポニン、ＱｕｉｌＡおよびその誘導体、イス
コム、リポソーム、ガンマインターフェロンまたはインターロイキン１２を含むサイトカ
イン、ＤＮＡ、固体または半固体粒子でのマイクロカプセル化、フロインド完全および不
完全補助剤またはムラミルジペプチドおよび類似体を含むその活性成分、ＤＥＡＥデキス
トラン／鉱物油、アルヒドロゲル、アウスファーム（Ａｕｓｐｈａｒｍ）補助剤、および
アルガムリン（Ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。
クチンとして使用される。可溶性ＣｅｄＰＶ糖タンパク質またはそれらの組み合わせは、
それら自体で、または補助剤と組み合わせて投与され得る。補助剤の例としては、アルミ
ニウム塩、水中土壌乳剤、水中油型乳剤、サポニン、ＱｕｉｌＡおよびその誘導体、イス
コム、リポソーム、ガンマインターフェロンまたはインターロイキン１２を含むサイトカ
イン、ＤＮＡ、固体または半固体粒子でのマイクロカプセル化、フロインド完全および不
完全補助剤またはムラミルジペプチドおよび類似体を含むその活性成分、ＤＥＡＥデキス
トラン／鉱物油、アルヒドロゲル、アウスファーム（Ａｕｓｐｈａｒｍ）補助剤、および
アルガムリン（Ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0096】
可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質またはそれらの組み合わせを含むサブユニットのワ
クチンは、経口投与、静脈内投与、皮下投与、動脈内投与、筋肉内投与、心臓内投与、脊
髄内投与、胸腔内投与、腹腔内投与、脳室内投与、舌下投与、および／または経皮的に投
与することができる。
クチンは、経口投与、静脈内投与、皮下投与、動脈内投与、筋肉内投与、心臓内投与、脊
髄内投与、胸腔内投与、腹腔内投与、脳室内投与、舌下投与、および／または経皮的に投
与することができる。
【0097】
用量および投与のスケジュールは、当該分野で既知の方法によって決定することができ
る。可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質、またはシダー、ヘンドラ、ニパウイルス、また
は関連ヘニパウイルスウイルスのためのワクチンとしてのそれらの組み合わせの有効性は
また、当技術分野で既知の方法によって評価され得る。
る。可溶性ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質、またはシダー、ヘンドラ、ニパウイルス、また
は関連ヘニパウイルスウイルスのためのワクチンとしてのそれらの組み合わせの有効性は
また、当技術分野で既知の方法によって評価され得る。
【0098】
実施例
実施例１
尿（約０．５～１ｍｌ）を、オーストラリア南東クイーンズランドのシダーグローブで
オオコウモリのコロニーの下に配置されたプラスチックシートから収集した（主に、混合
された集団におけるいくらかのペトロパスポリオセファラス（Ｐｔｅｒｏｐｕｓ ｐｏｌ
ｉｏｃｅｐｈａｌｕｓ）を有するオオコウモリ属アレクト）０．５ｍｌのウイルス輸送培
地（ＳＰＧＡ：スクロース、リン酸塩、グルタミン酸塩、およびアルブミン、ならびにペ
ニシリン、ストレプトマイシン、およびファンギゾンの混合物）を含有する２ｍｌの管中
にプールした。管を、収集後、一時的に氷上で保存し、クイーンズランドの実験室に輸送
し、－８０℃で凍結した。試料を４℃で解凍し、破片をペレット化し、１分間１６，００
０×ｇで遠心分離した。上清（約０．５～１ｍｌ）中の尿を、細胞培養培地中で１：１０
に希釈した。
実施例１
尿（約０．５～１ｍｌ）を、オーストラリア南東クイーンズランドのシダーグローブで
オオコウモリのコロニーの下に配置されたプラスチックシートから収集した（主に、混合
された集団におけるいくらかのペトロパスポリオセファラス（Ｐｔｅｒｏｐｕｓ ｐｏｌ
ｉｏｃｅｐｈａｌｕｓ）を有するオオコウモリ属アレクト）０．５ｍｌのウイルス輸送培
地（ＳＰＧＡ：スクロース、リン酸塩、グルタミン酸塩、およびアルブミン、ならびにペ
ニシリン、ストレプトマイシン、およびファンギゾンの混合物）を含有する２ｍｌの管中
にプールした。管を、収集後、一時的に氷上で保存し、クイーンズランドの実験室に輸送
し、－８０℃で凍結した。試料を４℃で解凍し、破片をペレット化し、１分間１６，００
０×ｇで遠心分離した。上清（約０．５～１ｍｌ）中の尿を、細胞培養培地中で１：１０
に希釈した。
【0099】
希釈された尿を、５分間１，２００×ｇで遠心分離し、７５ｃｍ２の組織培養フラスコ
中でベロ、パキ、ＰａＢｒ、ＰａＳｐ、およびＰａＰｌ細胞単層の上に均等に分割した。
この研究で使用された細胞株は、ベロ（ＡＴＣＣ）、ＨｅＬａ－ＵＳＵ（２２）、および
腎臓（パキ）、脳（ＰａＢｒ）、（脾臓）ＰａＳｐ、および胎盤（ＰａＰｌ）から派生し
たオオコウモリ属アレクトの一次細胞株であった。細胞は、３７℃で５％のＣＯ２の存在
下で、二重強度の抗生物質－抗真菌剤（インビトロゲン）、１０μｇ／ｍｌのシプロフロ
キサシン（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）、および１０％のウシ胎児血清で補充された
Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ Ｎｕｔｒｉ
ｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ－１２ Ｈａｍ中で増殖した。フラスコを３７℃で２時間揺
動し、１４ｍｌの新鮮な細胞培養培地を添加し、次いで、３７℃で７日間インキュベート
した。毒性、汚染、またはウイルス細胞変性効果（ＣＰＥ）について、フラスコを毎日観
察した。
中でベロ、パキ、ＰａＢｒ、ＰａＳｐ、およびＰａＰｌ細胞単層の上に均等に分割した。
この研究で使用された細胞株は、ベロ（ＡＴＣＣ）、ＨｅＬａ－ＵＳＵ（２２）、および
腎臓（パキ）、脳（ＰａＢｒ）、（脾臓）ＰａＳｐ、および胎盤（ＰａＰｌ）から派生し
たオオコウモリ属アレクトの一次細胞株であった。細胞は、３７℃で５％のＣＯ２の存在
下で、二重強度の抗生物質－抗真菌剤（インビトロゲン）、１０μｇ／ｍｌのシプロフロ
キサシン（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）、および１０％のウシ胎児血清で補充された
Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ Ｎｕｔｒｉ
ｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ－１２ Ｈａｍ中で増殖した。フラスコを３７℃で２時間揺
動し、１４ｍｌの新鮮な細胞培養培地を添加し、次いで、３７℃で７日間インキュベート
した。毒性、汚染、またはウイルス細胞変性効果（ＣＰＥ）について、フラスコを毎日観
察した。
【0100】
多核体ＣＰＥが、２個の異なる尿試料の接種の５日後（ｄｐｉ）、腎細胞（パキ）単層
において観察された。ＣＰＥは、４個の他の細胞株のいずれにおいても観察されなかった
。上清収穫６ｄｐｉを使用して、新鮮なパキ細胞単層に接種した。パキ細胞内の２回の通
過後、ウイルスはベロ細胞中で感染し、ＣＰＥを引き起こすことが可能であった。しかし
ながら、ベロ細胞におけるウイルスのＣＰＥの形態は、ＨｅＶ感染のものとは異なってい
た。ＨｅＶ特異的ＰＣＲプライマーを用いた更なる分析は、新規コウモリウイルスがＨｅ
Ｖの分離株ではないことが示された。
において観察された。ＣＰＥは、４個の他の細胞株のいずれにおいても観察されなかった
。上清収穫６ｄｐｉを使用して、新鮮なパキ細胞単層に接種した。パキ細胞内の２回の通
過後、ウイルスはベロ細胞中で感染し、ＣＰＥを引き起こすことが可能であった。しかし
ながら、ベロ細胞におけるウイルスのＣＰＥの形態は、ＨｅＶ感染のものとは異なってい
た。ＨｅＶ特異的ＰＣＲプライマーを用いた更なる分析は、新規コウモリウイルスがＨｅ
Ｖの分離株ではないことが示された。
【0101】
実施例２
多核体ＣＰＥを示す実施例１の細胞を、全ての既知のパラミクソウイルスおよびパラミ
クソウイルスのサブセットのための広く公開されている反応性プライマー（３１）を使用
してスクリーニングした。ＰＣＲ産物をゲル抽出し、Ｍ１３プライマーを使用して、配列
決定を容易にするようにｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）中にクローニングさ
れた。配列を取得し、初期分類を可能にする既知のパラミクソウイルス配列と整列させた
。
多核体ＣＰＥを示す実施例１の細胞を、全ての既知のパラミクソウイルスおよびパラミ
クソウイルスのサブセットのための広く公開されている反応性プライマー（３１）を使用
してスクリーニングした。ＰＣＲ産物をゲル抽出し、Ｍ１３プライマーを使用して、配列
決定を容易にするようにｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）中にクローニングさ
れた。配列を取得し、初期分類を可能にする既知のパラミクソウイルス配列と整列させた
。
【0102】
全体のゲノム配列を、４５４個の配列決定（４３）と、従来のサンガー配列決定の組み
合わせを使用して分析した。組織培養上清からのビリオンを、３０，０００×ｇで６０分
間の遠心分離により回収し、１４０μｌのＰＢＳ中に再懸濁させ、ＱＩＡａｍｐ Ｖｉｒ
ａｌ ＲＮＡミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡ抽出のための５６０μｌの
新たに作られたＡＶＬと混合した。ｃＤＮＡおよび無作為増幅の合成を、公開された手順
（４４）の改変を用いて実行した。簡潔に述べると、ｃＤＮＡ合成を、１７マー定義プラ
イマー配列に連結する無作為オクトマ（ｏｃｔｏｍｅｒ）を使用して実施した：（５’－
ＧＴＴＴＣＣＣＡＧＴＡＧＧＴＣＴＣＮＮＮ ＮＮＮＮＮ－３’）およびＳｕｐｅｒｓｃ
ｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ）。８μｌのｄｓ－ｃＤＮＡを、２００μｌのＰＣＲ反応物中でホット
スタートＴａｑポリメラーゼ酵素（Ｐｒｏｍｅｇａ）および５’－Ａ＊Ｇ＊Ｃ＊Ａ＊Ｃ
ＴＧＴＡＧＧＴＴＴＣＣＣＡＧＴＡＧＧＴＣＴＣ－３’（＊はチオール修飾を意味する）
を用いて、５分間９５℃での初期変性ステップの後、９５℃／１分間、４８℃／１分間、
７２℃／１分間の４０周期、増幅プライマーとして増幅し、その後、ＱＩＡｑｕｉｃｋ
ＰＣＲ精製キット（Ｑｉａｇｅｎ）で精製した。ロシュ４５４配列決定のための試料調製
（４５４ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｂｒａｎｆｏｒｄ、コネチカット州、アメリカ
）を、製造業者が示唆するプロトコル（Ｒａｐｉｄ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐａｒａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ ｅｍＰＣＲ Ｌｉｂ－Ｌ ＳＶ）に従って実施した。
合わせを使用して分析した。組織培養上清からのビリオンを、３０，０００×ｇで６０分
間の遠心分離により回収し、１４０μｌのＰＢＳ中に再懸濁させ、ＱＩＡａｍｐ Ｖｉｒ
ａｌ ＲＮＡミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡ抽出のための５６０μｌの
新たに作られたＡＶＬと混合した。ｃＤＮＡおよび無作為増幅の合成を、公開された手順
（４４）の改変を用いて実行した。簡潔に述べると、ｃＤＮＡ合成を、１７マー定義プラ
イマー配列に連結する無作為オクトマ（ｏｃｔｏｍｅｒ）を使用して実施した：（５’－
ＧＴＴＴＣＣＣＡＧＴＡＧＧＴＣＴＣＮＮＮ ＮＮＮＮＮ－３’）およびＳｕｐｅｒｓｃ
ｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ）。８μｌのｄｓ－ｃＤＮＡを、２００μｌのＰＣＲ反応物中でホット
スタートＴａｑポリメラーゼ酵素（Ｐｒｏｍｅｇａ）および５’－Ａ＊Ｇ＊Ｃ＊Ａ＊Ｃ
ＴＧＴＡＧＧＴＴＴＣＣＣＡＧＴＡＧＧＴＣＴＣ－３’（＊はチオール修飾を意味する）
を用いて、５分間９５℃での初期変性ステップの後、９５℃／１分間、４８℃／１分間、
７２℃／１分間の４０周期、増幅プライマーとして増幅し、その後、ＱＩＡｑｕｉｃｋ
ＰＣＲ精製キット（Ｑｉａｇｅｎ）で精製した。ロシュ４５４配列決定のための試料調製
（４５４ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｂｒａｎｆｏｒｄ、コネチカット州、アメリカ
）を、製造業者が示唆するプロトコル（Ｒａｐｉｄ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐａｒａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ ｅｍＰＣＲ Ｌｉｂ－Ｌ ＳＶ）に従って実施した。
【0103】
正確なＣｅｄＰＶのゲノム配列を取得するため、（低品質で曖昧なアダプタ配列を除去
した後の）４５４個の生成されたデータが、サンガー配列決定から派生したＣｅｄＰＶド
ラフトのゲノム配列上への未加工の読み取り値の新規アセンブリおよびマッピングの両方
によって分析された。４５４個の読み取りマッピングのため、ＣＬＣソフトウェアで生成
されたＳＮＰおよびＤＩＰが、マップされた未加工の読み取り値を視覚化することによっ
て精度について手動で評価された（無作為のＰＣＲの誤りは、特に読み取り値範囲が深い
ときに実際のＳＮＰおよびＤＩＰと比較して明らかである）。４５４個の新規および読み
取りマッピングアセンブリ方法の両方のためのコンセンサス配列が、次いで、低カバレッ
ジ領域内での競合を解決するためにおよび４５４個のホモポリマーの誤りを解決するため
に、使用された後者を有するサンガー配列と比較された。
した後の）４５４個の生成されたデータが、サンガー配列決定から派生したＣｅｄＰＶド
ラフトのゲノム配列上への未加工の読み取り値の新規アセンブリおよびマッピングの両方
によって分析された。４５４個の読み取りマッピングのため、ＣＬＣソフトウェアで生成
されたＳＮＰおよびＤＩＰが、マップされた未加工の読み取り値を視覚化することによっ
て精度について手動で評価された（無作為のＰＣＲの誤りは、特に読み取り値範囲が深い
ときに実際のＳＮＰおよびＤＩＰと比較して明らかである）。４５４個の新規および読み
取りマッピングアセンブリ方法の両方のためのコンセンサス配列が、次いで、低カバレッ
ジ領域内での競合を解決するためにおよび４５４個のホモポリマーの誤りを解決するため
に、使用された後者を有するサンガー配列と比較された。
【0104】
ゲノム末端の配列を、以前に公開されたプロトコル（４５）を使用して、３’および５
’－ＲＡＣＥによって判定した。簡潔に述べると、約１００ｎｇのＲＮＡを、Ｔ４ ＲＮ
Ａリガーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてアダプタＤＴ８８（配列情報についての参考文献
を参照されたい）と連結し、その後、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ ＲＴキット（Ｌ
ｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびアダプタ特異的プライマー、ＤＴ８９を用い
たｃＤＮＡ合成を行う。次いで、ＰＣＲ増幅を、ＤＴ８９および１つ以上のゲノム特異的
プライマーを使用して行った。ＰＣＲ産物を、ＡＢＩシーケンサー３１００上で組織内の
サービス基によってＤＴ８９またはゲノム特異的プライマーのいずれかを使用して直接配
列決定した。
’－ＲＡＣＥによって判定した。簡潔に述べると、約１００ｎｇのＲＮＡを、Ｔ４ ＲＮ
Ａリガーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてアダプタＤＴ８８（配列情報についての参考文献
を参照されたい）と連結し、その後、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ ＲＴキット（Ｌ
ｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびアダプタ特異的プライマー、ＤＴ８９を用い
たｃＤＮＡ合成を行う。次いで、ＰＣＲ増幅を、ＤＴ８９および１つ以上のゲノム特異的
プライマーを使用して行った。ＰＣＲ産物を、ＡＢＩシーケンサー３１００上で組織内の
サービス基によってＤＴ８９またはゲノム特異的プライマーのいずれかを使用して直接配
列決定した。
【0105】
ＣＬＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ ｖ４．５．１（ＣＬＣ Ｉｎｃ、オ
ーフス、デンマーク）を使用して４５４個のアダプタおよびｃＤＮＡ／ＰＣＲプライマー
配列を整え、低品質の曖昧で小さな読み取り値（＜１５ｂｐ）を除去して、全て既定の
パラメータで、新規および読み取りマッピングアセンブリを実施する。Ｃｌｏｎｅ Ｍａ
ｎａｇｅｒ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌバージョン９．１１（科学教育ソフトウェア、米
国ノースカロライナ州ケアリー）を使用して、新規のアセンブリによって生成された重複
するコンティグを結合した。系統樹を、ＭＥＧＡ４ソフトウェアパッケージ（４６）中で
の１０００回の反復によって判定されたブートストラップ値を有する近隣結合アルゴリズ
ムを使用して構築した。
ーフス、デンマーク）を使用して４５４個のアダプタおよびｃＤＮＡ／ＰＣＲプライマー
配列を整え、低品質の曖昧で小さな読み取り値（＜１５ｂｐ）を除去して、全て既定の
パラメータで、新規および読み取りマッピングアセンブリを実施する。Ｃｌｏｎｅ Ｍａ
ｎａｇｅｒ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌバージョン９．１１（科学教育ソフトウェア、米
国ノースカロライナ州ケアリー）を使用して、新規のアセンブリによって生成された重複
するコンティグを結合した。系統樹を、ＭＥＧＡ４ソフトウェアパッケージ（４６）中で
の１０００回の反復によって判定されたブートストラップ値を有する近隣結合アルゴリズ
ムを使用して構築した。
【0106】
この新しいウイルスによる多核体ＣＰＥの形成とコウモリの尿からパラミクソウイルス
を単離することにおける以前の成功とを考慮しながら、パラミクソウイルス科特異的およ
び属特異的プライマーが、この新しいウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーである
かを判定するために使用された。予想されるサイズの陽性ＰＣＲ断片を、Ｔｏｎｇらによ
って開発されたパラミクソウイルス、レスピロウイルス（Ｒｅｓｐｉｒｏｖｉｒｕｓ）／
モルビリウイルス／ヘニパウイルスプライマーセットから取得した（３１）。
を単離することにおける以前の成功とを考慮しながら、パラミクソウイルス科特異的およ
び属特異的プライマーが、この新しいウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーである
かを判定するために使用された。予想されるサイズの陽性ＰＣＲ断片を、Ｔｏｎｇらによ
って開発されたパラミクソウイルス、レスピロウイルス（Ｒｅｓｐｉｒｏｖｉｒｕｓ）／
モルビリウイルス／ヘニパウイルスプライマーセットから取得した（３１）。
【0107】
ＰＣＲ産物の配列決定は、それが、ＨｅＶおよびＮｉＶと最も密接に関連する新しいパ
ラミクソウイルスであることを示した。これらの予備的データに基づいて、ウイルスは、
コウモリのコロニー採取された場所に因んで、シダーウイルス（ＣｅｄＰＶ）と命名され
た。
ラミクソウイルスであることを示した。これらの予備的データに基づいて、ウイルスは、
コウモリのコロニー採取された場所に因んで、シダーウイルス（ＣｅｄＰＶ）と命名され
た。
【0108】
図１に示されるように、ＣｅｄＰＶのゲノムは１８，１６２ヌクレオチド長であり、科
におけるＨｅＶのものに最も類似している。完全なゲノム配列が、ＧｅｎＢａｎｋ（受託
番号ＪＱ００１７７６）に堆積された。ゲノムサイズは６の倍数であり、これは、パラミ
クソウイルス亜科の既知の全メンバーについて観察された６の法則と完全に一致する（３
）。ＣｅｄＰＶのゲノムは、７箇所の全ての位置で完全に保存されたＣＴＴの３ヌクレオ
チド遺伝子間配列、ならびにＨｅＶおよびＮｉＶ中に存在するものと類似する高度に保存
された遺伝子の開始および停止信号を有する（図２）。
におけるＨｅＶのものに最も類似している。完全なゲノム配列が、ＧｅｎＢａｎｋ（受託
番号ＪＱ００１７７６）に堆積された。ゲノムサイズは６の倍数であり、これは、パラミ
クソウイルス亜科の既知の全メンバーについて観察された６の法則と完全に一致する（３
）。ＣｅｄＰＶのゲノムは、７箇所の全ての位置で完全に保存されたＣＴＴの３ヌクレオ
チド遺伝子間配列、ならびにＨｅＶおよびＮｉＶ中に存在するものと類似する高度に保存
された遺伝子の開始および停止信号を有する（図２）。
【0109】
また、ＨｅＶゲノムと同様に、ＣｅｄＰＶゲノムに比較的大きな非コード領域が存在す
る。（図１および第１表）。ＣｅｄＰＶゲノムの全体的なタンパク質コード容量は、Ｈｅ
Ｖより８２．１２％高い８７．４１％である。ＣｅｄＰＶおよびＨｅＶのゲノムサイズが
非常に類似しているとき、ＣｅｄＰＶの増大したコード能力は、６個の主要なタンパク質
のうちの５個についてのタンパク質サイズの増大に起因し、Ｌタンパク質は、更に２５７
アミノ酸大きい（第１表）。２，５０１アミノ酸では、ＣｅｄＰＶ Ｌタンパク質は、パ
ラミクソウイルス科の中でのみならず、モノネガウイルスの順番においても既知の全ウイ
ルスについて最大である。
る。（図１および第１表）。ＣｅｄＰＶゲノムの全体的なタンパク質コード容量は、Ｈｅ
Ｖより８２．１２％高い８７．４１％である。ＣｅｄＰＶおよびＨｅＶのゲノムサイズが
非常に類似しているとき、ＣｅｄＰＶの増大したコード能力は、６個の主要なタンパク質
のうちの５個についてのタンパク質サイズの増大に起因し、Ｌタンパク質は、更に２５７
アミノ酸大きい（第１表）。２，５０１アミノ酸では、ＣｅｄＰＶ Ｌタンパク質は、パ
ラミクソウイルス科の中でのみならず、モノネガウイルスの順番においても既知の全ウイ
ルスについて最大である。
【0110】
【表12】
【0111】
完全長のゲノム配列に基づく系統分析および各構造的タンパク質の推定されるアミノ酸
配列は、ＣｅｄＰＶが科の中でヘニパウイルスに最も密接に関連しているという初期考察
を確認した。ヌクレオカプシドタンパク質（Ｎ）の推定される配列に基づく系統樹が、図
３Ａに示されている。全ゲノム配列に基づいた系統樹分析により同様の結果を得た（図３
Ｂ）。実際に、ＣｅｄＰＶは、５５０ヌクレオチドのＬ遺伝子断片（図３Ｃ）の利用可能
な唯一の配列に基づいた系統樹に示されるように、アフリカのコウモリ（２６、３２）に
検出されたヘニパウイルス様配列よりもＨｅＶおよびＮｉＶにより密接に関連している。
配列は、ＣｅｄＰＶが科の中でヘニパウイルスに最も密接に関連しているという初期考察
を確認した。ヌクレオカプシドタンパク質（Ｎ）の推定される配列に基づく系統樹が、図
３Ａに示されている。全ゲノム配列に基づいた系統樹分析により同様の結果を得た（図３
Ｂ）。実際に、ＣｅｄＰＶは、５５０ヌクレオチドのＬ遺伝子断片（図３Ｃ）の利用可能
な唯一の配列に基づいた系統樹に示されるように、アフリカのコウモリ（２６、３２）に
検出されたヘニパウイルス様配列よりもＨｅＶおよびＮｉＶにより密接に関連している。
【0112】
実施例３
パラインフルエンザウイルス５のために最初に発見され（シミアンウイルス５として以
前から既知であるＰＩＶ５）、パラミクソウイルスのほぼ全てのメンバーがＰ遺伝子を有
し、該Ｐ遺伝子は、編集部位（３、３３）から下向へ流れる異なる読み取り枠からＮ末端
共直線タンパク質の産生へ導く非鋳型Ｇ残基の添加によって、ＲＮＡ編集機構を介して複
数のタンパク質を産生する。これらの複数の遺伝子産物は、感受性宿主の生得的反応に拮
抗する上で重要な役割を果たしていることが知られている（３）。
パラインフルエンザウイルス５のために最初に発見され（シミアンウイルス５として以
前から既知であるＰＩＶ５）、パラミクソウイルスのほぼ全てのメンバーがＰ遺伝子を有
し、該Ｐ遺伝子は、編集部位（３、３３）から下向へ流れる異なる読み取り枠からＮ末端
共直線タンパク質の産生へ導く非鋳型Ｇ残基の添加によって、ＲＮＡ編集機構を介して複
数のタンパク質を産生する。これらの複数の遺伝子産物は、感受性宿主の生得的反応に拮
抗する上で重要な役割を果たしていることが知られている（３）。
【0113】
ＣｅｄＰＶゲノムは、７３７アミノ酸のＰタンパク質および１７７アミノ酸のＣタンパ
ク質をコードする。しかしながら、ＰＣＲ分析は、ほとんどの他のパラミクソウイルスに
存在する高度に保存された、システインに富んだＶタンパク質ＯＲＦを見つけることに失
敗した。Ｖタンパク質ＯＲＦの不在はＲＮＡ編集部位に起因し、現在までに発見された分
離株全ての他の既知のＨｅＶおよびＮｉＶの分離株中に保存されているＡＡＡＡＧＧＧの
配列は、ＣｅｄＰＶ Ｐ遺伝子配列から欠落している。
ク質をコードする。しかしながら、ＰＣＲ分析は、ほとんどの他のパラミクソウイルスに
存在する高度に保存された、システインに富んだＶタンパク質ＯＲＦを見つけることに失
敗した。Ｖタンパク質ＯＲＦの不在はＲＮＡ編集部位に起因し、現在までに発見された分
離株全ての他の既知のＨｅＶおよびＮｉＶの分離株中に保存されているＡＡＡＡＧＧＧの
配列は、ＣｅｄＰＶ Ｐ遺伝子配列から欠落している。
【0114】
ＣｅｄＰＶ Ｐ遺伝子から産生される複数のｍＲＮＡｓが存在していないことを確認す
るために、Ｐ遺伝子転写の直接配列決定を、Ｐ遺伝子のコード領域全体をカバーする重複
断片を生成するプライマーの複数のセットを使用して、ＣｅｄＰＶ感染ベロ細胞から実行
した。簡潔に述べると、定量的ＰＣＲアッセイ（ｑＰＣＲ）を、高スループット配列決定
から取得されたＣｅｄＰＶ特異的配列に基づいて確立した。Ｐ遺伝子のＴａｑＭａｎアッ
セイが開発され、全てのその後の研究に使用された。プライマー／プローブの配列は、次
の通りである：順方向プライマー、５’－ＴＧＣＡＴ ＴＧＡＧＣ ＧＡＡＣＣ ＣＡＴ
ＡＴ ＡＣ；逆方向プライマー、５’－ＧＣＡＣＧ ＣＴＴＣＴ ＴＧＡＣＡ ＧＡＧＴ
Ｔ ＧＴ；プローブ、５’－ＴＣＣＣＧ ＡＧＡＡＡ ＣＣＣＴＣ ＴＧＴＧＴ ＴＴＧ
Ａ－ＭＧＢ。
るために、Ｐ遺伝子転写の直接配列決定を、Ｐ遺伝子のコード領域全体をカバーする重複
断片を生成するプライマーの複数のセットを使用して、ＣｅｄＰＶ感染ベロ細胞から実行
した。簡潔に述べると、定量的ＰＣＲアッセイ（ｑＰＣＲ）を、高スループット配列決定
から取得されたＣｅｄＰＶ特異的配列に基づいて確立した。Ｐ遺伝子のＴａｑＭａｎアッ
セイが開発され、全てのその後の研究に使用された。プライマー／プローブの配列は、次
の通りである：順方向プライマー、５’－ＴＧＣＡＴ ＴＧＡＧＣ ＧＡＡＣＣ ＣＡＴ
ＡＴ ＡＣ；逆方向プライマー、５’－ＧＣＡＣＧ ＣＴＴＣＴ ＴＧＡＣＡ ＧＡＧＴ
Ｔ ＧＴ；プローブ、５’－ＴＣＣＣＧ ＡＧＡＡＡ ＣＣＣＴＣ ＴＧＴＧＴ ＴＴＧ
Ａ－ＭＧＢ。
【0115】
ＲＮＡ編集活性の欠如を示す各産生される均一なトレースファイル、これは、編集部位
の直後にＨｅＶおよびＮｉＶによって生成された混合ピークから非常に異なる（図４）。
ＣｅｄＰＶが、そのＰ遺伝子中のＲＮＡ編集および任意のＶ関連コード配列の両方が欠如
しているパラミクソウイルスの最初に識別されたメンバーであると思われる。
の直後にＨｅＶおよびＮｉＶによって生成された混合ピークから非常に異なる（図４）。
ＣｅｄＰＶが、そのＰ遺伝子中のＲＮＡ編集および任意のＶ関連コード配列の両方が欠如
しているパラミクソウイルスの最初に識別されたメンバーであると思われる。
【0116】
実施例４
ゲノムサイズと組織との顕著な類似性と、ＣｅｄＰＶとヘニパウイルスとの間のＮ、Ｍ
、およびＬタンパク質の間の高度に保存されたタンパク質ドメインの存在とは、ＣｅｄＰ
Ｖが、ＨｅＶおよび／またはＮｉＶに抗原的に関連し得ることを示すであろう。ＣｅｄＰ
Ｖを対象とした抗体を調製するために、ＣｅｄＰＶ Ｎタンパク質のためのコード領域を
、前述したＧＳＴ融合発現ベクター中へのクローニングのために、ＡｓｃＩ（５’端部）
およびＮｏｔＩ（３’端部）部位によって隣接する一対のプライマーでＰＣＲによって増
幅した（４７）。前に説明されたように、ゲル溶出による発現および精製を実行した（４
８）。抗体産生のために、精製タンパク質を、０および２７日目に２匹の大人の雌のニュ
ージーランド白兎の４箇所の異なる部位に（動物１匹あたり１００マイクログラムの用量
で）皮下注射した。以前に公開された三重補助剤（４９）を免疫化のために使用した。動
物は、５および４２日後に特異的抗体を調べ、最終的な血液採取のために６９日で安楽死
させた。
ゲノムサイズと組織との顕著な類似性と、ＣｅｄＰＶとヘニパウイルスとの間のＮ、Ｍ
、およびＬタンパク質の間の高度に保存されたタンパク質ドメインの存在とは、ＣｅｄＰ
Ｖが、ＨｅＶおよび／またはＮｉＶに抗原的に関連し得ることを示すであろう。ＣｅｄＰ
Ｖを対象とした抗体を調製するために、ＣｅｄＰＶ Ｎタンパク質のためのコード領域を
、前述したＧＳＴ融合発現ベクター中へのクローニングのために、ＡｓｃＩ（５’端部）
およびＮｏｔＩ（３’端部）部位によって隣接する一対のプライマーでＰＣＲによって増
幅した（４７）。前に説明されたように、ゲル溶出による発現および精製を実行した（４
８）。抗体産生のために、精製タンパク質を、０および２７日目に２匹の大人の雌のニュ
ージーランド白兎の４箇所の異なる部位に（動物１匹あたり１００マイクログラムの用量
で）皮下注射した。以前に公開された三重補助剤（４９）を免疫化のために使用した。動
物は、５および４２日後に特異的抗体を調べ、最終的な血液採取のために６９日で安楽死
させた。
【0117】
免疫蛍光抗体試験のため、３００μｌの細胞培地中で３０，０００細胞／ウェルの濃度
で播種して、３７℃で一晩インキュベートすることで、ベロ細胞単層を８ウェルのチャン
バースライド中で調製した。細胞単層をＣｅｄＰＶ、ＨｅＶ、またはＮｉＶの０．０１の
ＭＯＩで感染させ、感染後２４時間１００％氷冷メタノールで固定した。チャンバースラ
イドを、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡの１００μｌ／ウェルを用いて３０分間３７℃で遮断した
後、１：１０００で希釈されたＣｅｄＰＶ ＮまたはＮｉＶ Ｎに対して５０μｌ／ウェ
ルのウサギ血清を添加した。３０分間３７℃でインキュベートした後、スライドを、ＰＢ
Ｓ－Ｔで３回洗浄し、１：１０００で希釈された５０μｌ／ウェルの抗ウサギ４８８アレ
クサフオレ（Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒｅ）接合体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）
と共に３０分間３７℃でインキュベートした。次いで、スライドをＰＢＳ－Ｔ中で３回洗
浄し、蛍光顕微鏡下での観察のために５０％グリセロール／ＰＢＳ中に装着した。
で播種して、３７℃で一晩インキュベートすることで、ベロ細胞単層を８ウェルのチャン
バースライド中で調製した。細胞単層をＣｅｄＰＶ、ＨｅＶ、またはＮｉＶの０．０１の
ＭＯＩで感染させ、感染後２４時間１００％氷冷メタノールで固定した。チャンバースラ
イドを、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡの１００μｌ／ウェルを用いて３０分間３７℃で遮断した
後、１：１０００で希釈されたＣｅｄＰＶ ＮまたはＮｉＶ Ｎに対して５０μｌ／ウェ
ルのウサギ血清を添加した。３０分間３７℃でインキュベートした後、スライドを、ＰＢ
Ｓ－Ｔで３回洗浄し、１：１０００で希釈された５０μｌ／ウェルの抗ウサギ４８８アレ
クサフオレ（Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒｅ）接合体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）
と共に３０分間３７℃でインキュベートした。次いで、スライドをＰＢＳ－Ｔ中で３回洗
浄し、蛍光顕微鏡下での観察のために５０％グリセロール／ＰＢＳ中に装着した。
【0118】
ウイルス中和試験のために、血清の連続２倍希釈液を、５０μｌの細胞培地（アール塩
を含有し、２ｍＭのグルタミン、抗生物質－抗真菌剤、および１０％のウシ胎児血清で補
充された最小必須培地）中で９６ウェル組織培養プレートに二連で調製した。標的ウイル
スの２００ ＴＣＩＤ５０を含有する等量を添加し、ウイルス血清混合物を加湿された５
％のＣＯ２インキュベーター中で、３７℃で３０分間インキュベートした。２×１０５細
胞／ｍｌを含有するベロ細胞懸濁液１００μｌを添加し、プレートを加湿された５％のＣ
Ｏ２インキュベーター中で、３７℃でインキュベートした。４日後、プレートをウイルス
ＣＰＥについて検査した。ＣＰＥの完全な阻害を生成する最高血清希釈を、最終的な中和
力価として定義した。
を含有し、２ｍＭのグルタミン、抗生物質－抗真菌剤、および１０％のウシ胎児血清で補
充された最小必須培地）中で９６ウェル組織培養プレートに二連で調製した。標的ウイル
スの２００ ＴＣＩＤ５０を含有する等量を添加し、ウイルス血清混合物を加湿された５
％のＣＯ２インキュベーター中で、３７℃で３０分間インキュベートした。２×１０５細
胞／ｍｌを含有するベロ細胞懸濁液１００μｌを添加し、プレートを加湿された５％のＣ
Ｏ２インキュベーター中で、３７℃でインキュベートした。４日後、プレートをウイルス
ＣＰＥについて検査した。ＣＰＥの完全な阻害を生成する最高血清希釈を、最終的な中和
力価として定義した。
【0119】
ウサギ抗ヘニパウイルス抗体を用いてベロ細胞に感染させたＣｅｄＰＶ－の染色は、交
差反応性の存在を示した。この交差反応性は、組換えＣｅｄＰＶ Ｎタンパク質に対して
惹起されたウサギ血清を用いたＨｅＶ感染ベロ細胞を染色することによって逆に、更に確
認された（図５）。しかしながら、ウイルス中和試験による分析は、ヘニパウイルス中和
抗体がＣｅｄＰＶを中和することができなかったこと、その逆も同様であることを見出し
た。Ｊパラミクソウイルス（ＪＰＶ）、牛疫ウイルス（ＲＰＶ）、センダイウイルス（Ｓ
ｅＶ）、メナングルウイルス（ＭｅｎＰＶ）およびＣｅｄＰＶにそれぞれ感染したベロ細
胞上の抗ＣｅｄＰＶ血清で実行されたＩＦＡＴを示す図６もまた参照されたい。偽感染細
胞単層は、陰性制御として含められた。
差反応性の存在を示した。この交差反応性は、組換えＣｅｄＰＶ Ｎタンパク質に対して
惹起されたウサギ血清を用いたＨｅＶ感染ベロ細胞を染色することによって逆に、更に確
認された（図５）。しかしながら、ウイルス中和試験による分析は、ヘニパウイルス中和
抗体がＣｅｄＰＶを中和することができなかったこと、その逆も同様であることを見出し
た。Ｊパラミクソウイルス（ＪＰＶ）、牛疫ウイルス（ＲＰＶ）、センダイウイルス（Ｓ
ｅＶ）、メナングルウイルス（ＭｅｎＰＶ）およびＣｅｄＰＶにそれぞれ感染したベロ細
胞上の抗ＣｅｄＰＶ血清で実行されたＩＦＡＴを示す図６もまた参照されたい。偽感染細
胞単層は、陰性制御として含められた。
【0120】
実施例 ５
ＣｅｄＰＶと認識されたヘニパウイルスとの間の関係を更に調べるために、エフリンＢ
２およびＢ３宿主細胞タンパク質のＣｅｄＰＶの使用を検査した。典型的には、ＨｅＶお
よびＮｉＶは、ＣｅｄＰＶ感染に対する感染についてのエントリのポイントとしてエフリ
ンＢ２受容体を使用する（２２、３４）。ヒトのエフリンＢ２およびＢ３遺伝子をｐＱＣ
ＸＩＨ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中にクローニングし、結果として得られたプラスミドを、Ｇ
Ｐ２－２９３パッケージ細胞株（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中のレトロウイルス粒子中にパッケ
ージし、製造業者の指示に従って水疱性口内炎ウイルスＧ糖タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）で
シュードタイプした。ＨｅＬａ－ＵＳＵ細胞株（２２）を、１μｇ／ｍｌのポリブレン（
Ｓｉｇｍａ）の存在下でＶＳＶ－Ｇシュードタイプレトロウイルス粒子で感染させた。感
染の８時間後、培地を交換して、細胞を２４時間置いて再生させた（これは、細胞ゲノム
へのレトロウイルスの挿入の完了のための、かつハイグロマイシン耐性遺伝子の発現のた
めの時間を与える）。
ＣｅｄＰＶと認識されたヘニパウイルスとの間の関係を更に調べるために、エフリンＢ
２およびＢ３宿主細胞タンパク質のＣｅｄＰＶの使用を検査した。典型的には、ＨｅＶお
よびＮｉＶは、ＣｅｄＰＶ感染に対する感染についてのエントリのポイントとしてエフリ
ンＢ２受容体を使用する（２２、３４）。ヒトのエフリンＢ２およびＢ３遺伝子をｐＱＣ
ＸＩＨ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中にクローニングし、結果として得られたプラスミドを、Ｇ
Ｐ２－２９３パッケージ細胞株（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中のレトロウイルス粒子中にパッケ
ージし、製造業者の指示に従って水疱性口内炎ウイルスＧ糖タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）で
シュードタイプした。ＨｅＬａ－ＵＳＵ細胞株（２２）を、１μｇ／ｍｌのポリブレン（
Ｓｉｇｍａ）の存在下でＶＳＶ－Ｇシュードタイプレトロウイルス粒子で感染させた。感
染の８時間後、培地を交換して、細胞を２４時間置いて再生させた（これは、細胞ゲノム
へのレトロウイルスの挿入の完了のための、かつハイグロマイシン耐性遺伝子の発現のた
めの時間を与える）。
【0121】
感染から２４時間後、レトロウイルスによって形質転換された細胞を、培地中で２００
μｇ／ｍｌのハイグロマイシンを添加することによって選択した。ハイグロに耐性であっ
た細胞の株を調製し、凍結した。ＨｅＬａ－ＵＳＵ細胞およびエフリン発現ＨｅＬａ－Ｕ
ＳＵ細胞を、６－ウェル組織培養プレート中で２５０，０００細胞／ウェルの密度で一晩
播種した。ウイルス（ＨｅＶおよびＣｅｄＰＶ）を０．０１のＭＯＩを得るために希釈し
、ウェルに接種した。細胞単層を多核体ＣＰＥについて毎日検査した。
μｇ／ｍｌのハイグロマイシンを添加することによって選択した。ハイグロに耐性であっ
た細胞の株を調製し、凍結した。ＨｅＬａ－ＵＳＵ細胞およびエフリン発現ＨｅＬａ－Ｕ
ＳＵ細胞を、６－ウェル組織培養プレート中で２５０，０００細胞／ウェルの密度で一晩
播種した。ウイルス（ＨｅＶおよびＣｅｄＰＶ）を０．０１のＭＯＩを得るために希釈し
、ウェルに接種した。細胞単層を多核体ＣＰＥについて毎日検査した。
【0122】
ＣｅｄＰＶについて、同様の観察をエフリンＢ２受容体に関して行った。図７に示され
るように、ＣｅｄＰＶは、ＨｅＬａ－ＵＳＵを感染させることに失敗したが、ヒトエフリ
ンＢ２遺伝子が発現したとき、感染させ、多核体ＣＰＥを引き起こすことが可能であった
。対照的に、エフリンＢ３分子を導入したとき、感染の証拠はなかった。
るように、ＣｅｄＰＶは、ＨｅＬａ－ＵＳＵを感染させることに失敗したが、ヒトエフリ
ンＢ２遺伝子が発現したとき、感染させ、多核体ＣＰＥを引き起こすことが可能であった
。対照的に、エフリンＢ３分子を導入したとき、感染の証拠はなかった。
【0123】
実施例 ６
フェレット、モルモット、およびマウスは、ＨｅＶおよびＮｉＶ感染に対する異なる応
答を呈し、フェレットおよびモルモットは、全身性血管炎に特徴付けられる重度の疾患を
発症したが、マウスは発症しなかった（２０，３５，３６，３７，３８）。コウモリのパ
キ細胞内を２回通過したＣｅｄＰＶ（２×１０６ ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）を２匹の雄のフ
ェレット（１ｍｌ、口腔鼻に）、４匹の雌のモルモット（１ｍｌ、腹腔内に）、および５
匹の雌のＢａｌｂ－Ｃマウス（５０μｌ、口腔鼻に）に投与した。モルモットおよびマウ
スに温度感知マイクロチップ（ＬｉｆｅＣｈｉｐ Ｂｉｏ－ｔｈｅｒｍｏ（登録商標）、
Ｄｅｓｔｒｏｎ Ｆｅａｒｉｎｇ）を移植し、毎日計量した。フェレットの直腸温度およ
び体重を試料時間で記録した。動物は、病気の臨床徴候を毎日観察し、接種後２１日目に
安楽死させた。ＣｅｄＰＶに対する中和抗体について試験するために１０、１５、および
２１日目に血清を収集した。
フェレット、モルモット、およびマウスは、ＨｅＶおよびＮｉＶ感染に対する異なる応
答を呈し、フェレットおよびモルモットは、全身性血管炎に特徴付けられる重度の疾患を
発症したが、マウスは発症しなかった（２０，３５，３６，３７，３８）。コウモリのパ
キ細胞内を２回通過したＣｅｄＰＶ（２×１０６ ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）を２匹の雄のフ
ェレット（１ｍｌ、口腔鼻に）、４匹の雌のモルモット（１ｍｌ、腹腔内に）、および５
匹の雌のＢａｌｂ－Ｃマウス（５０μｌ、口腔鼻に）に投与した。モルモットおよびマウ
スに温度感知マイクロチップ（ＬｉｆｅＣｈｉｐ Ｂｉｏ－ｔｈｅｒｍｏ（登録商標）、
Ｄｅｓｔｒｏｎ Ｆｅａｒｉｎｇ）を移植し、毎日計量した。フェレットの直腸温度およ
び体重を試料時間で記録した。動物は、病気の臨床徴候を毎日観察し、接種後２１日目に
安楽死させた。ＣｅｄＰＶに対する中和抗体について試験するために１０、１５、および
２１日目に血清を収集した。
【0124】
フェレットにおいて言及されたＣｅｄＰＶへの無症候性セロコンバージョンに基づいて
、７匹の追加の雌フェレットを、３×１０３ ＴＣＩＤ５０の低用量で口腔鼻経路によっ
て暴露した。２匹の動物を、接種後６、８、および１０日目の各日、１匹は２０日目に安
楽死させた。鼻洗浄物、口腔スワブ、直腸スワブを２、４、６、８、および１０日目に収
集し、尿を安楽死の日に採取した。各採取した検体をＣｅｄＰＶゲノムについて評価した
。広い範囲の組織試料が、死後の検査で収集され、ルーチン組織学、免疫組織化学（それ
ぞれ、組換えＣｅｄＰＶおよびはＮｉＶ Ｎタンパク質に対して惹起されたウサギ抗体を
用いた）、ｑＰＣＲ（上記参照）、ならびに試薬および以前に確立された手順を用いたウ
イルス分離によって評価された（１６）。
、７匹の追加の雌フェレットを、３×１０３ ＴＣＩＤ５０の低用量で口腔鼻経路によっ
て暴露した。２匹の動物を、接種後６、８、および１０日目の各日、１匹は２０日目に安
楽死させた。鼻洗浄物、口腔スワブ、直腸スワブを２、４、６、８、および１０日目に収
集し、尿を安楽死の日に採取した。各採取した検体をＣｅｄＰＶゲノムについて評価した
。広い範囲の組織試料が、死後の検査で収集され、ルーチン組織学、免疫組織化学（それ
ぞれ、組換えＣｅｄＰＶおよびはＮｉＶ Ｎタンパク質に対して惹起されたウサギ抗体を
用いた）、ｑＰＣＲ（上記参照）、ならびに試薬および以前に確立された手順を用いたウ
イルス分離によって評価された（１６）。
【0125】
ＮｉＶおよびＨｅＶへの暴露からの応答とは対照的に、ＣｅｄＰＶに曝露されたフェレ
ットおよびモルモットは、中和抗体が１０～２１日の間に血清中に検出されたが、臨床的
に健康なままであった（第２表）。ＣｅｄＰＶに暴露されるＢａｌｂ－Ｃマウスもまた臨
床的に健康なままであったが、２１日目までに血清中に中和抗体を発症しなかった。選択
的にそれ以前の時点で安楽死させたフェレットにおいて、浮腫および赤血球増加を伴う、
扁桃リンパ組織、咽頭後気管支リンパ節の反応性過形成が存在した。ＣｅｄＰＶ抗原が、
６日目に安楽死させられた１匹の動物の気管支リンパ節で検出され、その組織におけるウ
イルス複製と一致した。抗ＮｉＶ Ｎタンパク質抗体に対する交差反応免疫染色にも言及
した（図８）。他の有意な組織学的病変は確認されなかった。
ットおよびモルモットは、中和抗体が１０～２１日の間に血清中に検出されたが、臨床的
に健康なままであった（第２表）。ＣｅｄＰＶに暴露されるＢａｌｂ－Ｃマウスもまた臨
床的に健康なままであったが、２１日目までに血清中に中和抗体を発症しなかった。選択
的にそれ以前の時点で安楽死させたフェレットにおいて、浮腫および赤血球増加を伴う、
扁桃リンパ組織、咽頭後気管支リンパ節の反応性過形成が存在した。ＣｅｄＰＶ抗原が、
６日目に安楽死させられた１匹の動物の気管支リンパ節で検出され、その組織におけるウ
イルス複製と一致した。抗ＮｉＶ Ｎタンパク質抗体に対する交差反応免疫染色にも言及
した（図８）。他の有意な組織学的病変は確認されなかった。
【0126】
【表13】
【0127】
ウイルスＲＮＡは、６～８日目に試料として採取された３～４匹の雌フェレットの、咽
頭、脾臓、および咽頭後気管支リンパ節を含めた選択されたリンパ組織内、ならびに２０
日目に安楽死させたフェレットの顎下リンパ節に検出された。ＣｅｄＰＶゲノムは、影響
を受けた動物の鼻洗浄物、口腔スワブ、咽頭、または肺組織から回収されなかったが、リ
ンパ性関与のパターンは、上下気道に過渡的複製が存在し得ることを示唆している。
頭、脾臓、および咽頭後気管支リンパ節を含めた選択されたリンパ組織内、ならびに２０
日目に安楽死させたフェレットの顎下リンパ節に検出された。ＣｅｄＰＶゲノムは、影響
を受けた動物の鼻洗浄物、口腔スワブ、咽頭、または肺組織から回収されなかったが、リ
ンパ性関与のパターンは、上下気道に過渡的複製が存在し得ることを示唆している。
【0128】
実施例７
オーストラリアのクイーンズランド州から２００３～２００５年の間に収集された１０
０匹のオオコウモリの血清を、ＣｅｄＰＶに対する中和抗体についてスクリーニングした
。上で説明されるように（抗体試験）、ウイルス中和試験を実行した。全ての血清試料を
１：２０の希釈で試験した。上で説明されたＨｅＶおよびＣｅｄＰＶの間で観察される抗
原の交差反応性のために、ウイルス中和試験を、各ウイルスについてより正確な感染デー
タを取得するために実行した。全体的に、血清の２３％がＣｅｄＰＶ陽性、３７％ＨｅＶ
陽性であった。同時感染が試験された血清の８％に反映されていた。
オーストラリアのクイーンズランド州から２００３～２００５年の間に収集された１０
０匹のオオコウモリの血清を、ＣｅｄＰＶに対する中和抗体についてスクリーニングした
。上で説明されるように（抗体試験）、ウイルス中和試験を実行した。全ての血清試料を
１：２０の希釈で試験した。上で説明されたＨｅＶおよびＣｅｄＰＶの間で観察される抗
原の交差反応性のために、ウイルス中和試験を、各ウイルスについてより正確な感染デー
タを取得するために実行した。全体的に、血清の２３％がＣｅｄＰＶ陽性、３７％ＨｅＶ
陽性であった。同時感染が試験された血清の８％に反映されていた。
【0129】
実施例８
ＣｅｄＰＶ－ＧおよびＦ糖タンパク質はまた、ヘニパウイルスＧおよびＦ機能ドメイン
のマッピングを探索する重要な体系を代表する。ＣｅｄＰＶ－Ｆは、ＨｅＶ－ＦおよびＮ
ｉＶ－Ｆとそれぞれ４２％および４３％同一であり、ＣｅｄＰＶ－Ｇは、ＨｅＶ－Ｇおよ
びＮｉＶ－Ｇと２９％および３０％同一である。ＣｅｄＰＶ機能エフリン受容体の使用量
は、ＣｅｄＰＶ、ＨｅＶ、およびＮｉＶの組み合わせを使用して、ヘテロ型ＦおよびＧ共
発現および融合アッセイと共に特徴付けられた。コドン最適化クローンをｐＣＤＮＡベク
ター中で調製し、Ｓ－ペプチドタグで検出のためにタグ付けした。両方の構築物を発現し
、検出し、我々のレポータ遺伝子の細胞－細胞融合アッセイにおいて機能的であることが
見出された。パイロットアッセイ（図９）は、この手法のこの実現可能性を示している。
エフリンＢ２およびＢ３陰性ＨｅＬａ－ＵＳＵ細胞は、細胞株Ｈｅｌａ－Ｂ３を発現する
エフリンＢ３を有する陰性ＣｅｄＰＶ細胞－細胞融合である。
ＣｅｄＰＶ－ＧおよびＦ糖タンパク質はまた、ヘニパウイルスＧおよびＦ機能ドメイン
のマッピングを探索する重要な体系を代表する。ＣｅｄＰＶ－Ｆは、ＨｅＶ－ＦおよびＮ
ｉＶ－Ｆとそれぞれ４２％および４３％同一であり、ＣｅｄＰＶ－Ｇは、ＨｅＶ－Ｇおよ
びＮｉＶ－Ｇと２９％および３０％同一である。ＣｅｄＰＶ機能エフリン受容体の使用量
は、ＣｅｄＰＶ、ＨｅＶ、およびＮｉＶの組み合わせを使用して、ヘテロ型ＦおよびＧ共
発現および融合アッセイと共に特徴付けられた。コドン最適化クローンをｐＣＤＮＡベク
ター中で調製し、Ｓ－ペプチドタグで検出のためにタグ付けした。両方の構築物を発現し
、検出し、我々のレポータ遺伝子の細胞－細胞融合アッセイにおいて機能的であることが
見出された。パイロットアッセイ（図９）は、この手法のこの実現可能性を示している。
エフリンＢ２およびＢ３陰性ＨｅＬａ－ＵＳＵ細胞は、細胞株Ｈｅｌａ－Ｂ３を発現する
エフリンＢ３を有する陰性ＣｅｄＰＶ細胞－細胞融合である。
【0130】
融合は、２９３Ｔ標的細胞およびＨｅＬａ－Ｂ２細胞株を発現するエフリンＢ２と共に
観察される。重要なことには、ＣｅｄＰＶ－Ｆは、ＨｅＶ－ＧおよびＮｉＶ－Ｇの両方を
伴うヘテロ型機能を有するが、更に、ＣｅｄＰＶ－Ｇは、ＨｅＶ－Ｆのみを伴うヘテロ型
機能を有し、ＮｉＶ－Ｆ（図９）は伴わず、エフリン使用とも相関する。
観察される。重要なことには、ＣｅｄＰＶ－Ｆは、ＨｅＶ－ＧおよびＮｉＶ－Ｇの両方を
伴うヘテロ型機能を有するが、更に、ＣｅｄＰＶ－Ｇは、ＨｅＶ－Ｆのみを伴うヘテロ型
機能を有し、ＮｉＶ－Ｆ（図９）は伴わず、エフリン使用とも相関する。
【0131】
実施例 ９
有意な詳細は、ＨｅＶとＮｉＶ－Ｇとの間の結合について利用可能であり、Ｇのエフリ
ンＢ２またはＢ３変異のうちのいずれかは、茎または球状頭部内の位置でエフリン受容体
結合能力を保持したまま、それを融合促進活性およびウイルス感染性において非機能的に
することができる。一連のエフリン受容体と共に３ｓＧタンパク質（ＨｅＶ、ＮｉＶ、お
よびＣｅｄＰＶ）を用いる共同ＩＰアッセイにおいて、ＣｅｄＰＶ－ｓＧが、Ｂ１、Ｂ２
、Ｂ３－弱、Ａ１、Ａ２、Ａ４－弱、およびＡ５を含む複数のエフリン亜型に結合するこ
とが可能であることが観察された（図１０）。この著しく広い受容体結合プロファイルは
、エフリンＢ２およびＢ３のみと結合するＮｉＶおよびＨｅＶ－Ｇに対して明らかに対照
的である。
有意な詳細は、ＨｅＶとＮｉＶ－Ｇとの間の結合について利用可能であり、Ｇのエフリ
ンＢ２またはＢ３変異のうちのいずれかは、茎または球状頭部内の位置でエフリン受容体
結合能力を保持したまま、それを融合促進活性およびウイルス感染性において非機能的に
することができる。一連のエフリン受容体と共に３ｓＧタンパク質（ＨｅＶ、ＮｉＶ、お
よびＣｅｄＰＶ）を用いる共同ＩＰアッセイにおいて、ＣｅｄＰＶ－ｓＧが、Ｂ１、Ｂ２
、Ｂ３－弱、Ａ１、Ａ２、Ａ４－弱、およびＡ５を含む複数のエフリン亜型に結合するこ
とが可能であることが観察された（図１０）。この著しく広い受容体結合プロファイルは
、エフリンＢ２およびＢ３のみと結合するＮｉＶおよびＨｅＶ－Ｇに対して明らかに対照
的である。
【0132】
実施例１０
ＨｅＬａ－ＵＳＵ標的細胞意志を使用したパイロット細胞－細胞融合実験、トランスフ
ェクトされ、発現された様々なエフリン受容体構築物が、図１１に示されている。Ｈｅｌ
ａ－ＵＳＵ標的細胞集団が、示されるエフリン受容体構築物にトランスフェクトすること
により調製され、次いで、ＣｅｄＰＶ、Ｈｅｖ、ＮｉＶ ＦおよびＧ糖タンパク質のいず
れかを発現するエフェクタ細胞を用いて細胞－細胞融合アッセイで使用され、標準的な融
合レポータ遺伝子アッセイが行われた。ＨｅＶおよびＮｉＶがエフリンＢ２およびＢ３の
みを利用することを我々は知っているが、ＣｅｄＰＶ ＧおよびＦ媒介性融合は、エフリ
ンＡ１またはＡ２のいずれかであるとき（またはエフリンＢ１またはＢ２が利用された）
、非常に寛容であった。
ＨｅＬａ－ＵＳＵ標的細胞意志を使用したパイロット細胞－細胞融合実験、トランスフ
ェクトされ、発現された様々なエフリン受容体構築物が、図１１に示されている。Ｈｅｌ
ａ－ＵＳＵ標的細胞集団が、示されるエフリン受容体構築物にトランスフェクトすること
により調製され、次いで、ＣｅｄＰＶ、Ｈｅｖ、ＮｉＶ ＦおよびＧ糖タンパク質のいず
れかを発現するエフェクタ細胞を用いて細胞－細胞融合アッセイで使用され、標準的な融
合レポータ遺伝子アッセイが行われた。ＨｅＶおよびＮｉＶがエフリンＢ２およびＢ３の
みを利用することを我々は知っているが、ＣｅｄＰＶ ＧおよびＦ媒介性融合は、エフリ
ンＡ１またはＡ２のいずれかであるとき（またはエフリンＢ１またはＢ２が利用された）
、非常に寛容であった。
【0133】
更に、Ｈｅｌａ－ＵＳＵ細胞における（遺伝子配列データに基づく）エフリンＡ１の背
景内因性レベルは、非トランスフェクト細胞中の融合シグナルの原因である。この実験の
結果は、ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質（図１０）を有するエフリン受容体結合データが、
インビトロで行われるＣｅｄＰＶ受容体結合および機能的細胞－細胞融合と良好に相関す
ることを示している。これまでに得られたエフリン受容体結合および融合データの要約が
以下の表３に示される。
景内因性レベルは、非トランスフェクト細胞中の融合シグナルの原因である。この実験の
結果は、ＣｅｄＰＶ Ｇ糖タンパク質（図１０）を有するエフリン受容体結合データが、
インビトロで行われるＣｅｄＰＶ受容体結合および機能的細胞－細胞融合と良好に相関す
ることを示している。これまでに得られたエフリン受容体結合および融合データの要約が
以下の表３に示される。
【0134】
【表14】
【0135】
以下の参考文献は、本明細書で番号により参照され、その全体が参照により組み込まれ
る。
る。
【0136】
１． Ｍｕｒｒａｙ Ｋ，Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｐ，Ｈｏｏｐｅｒ Ｐ，Ｈｙａｔｔ Ａ，
Ｇｏｕｌｄ Ａ， ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａ ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ ｔｈａ
ｔ ｃａｕｓｅｄ ｆａｔａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｈｏｒｓｅｓ ａｎｄ ｈｕｍ
ａｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８：９４－９７．
Ｇｏｕｌｄ Ａ， ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａ ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ ｔｈａ
ｔ ｃａｕｓｅｄ ｆａｔａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｈｏｒｓｅｓ ａｎｄ ｈｕｍ
ａｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８：９４－９７．
【0137】
２． Ｃｈｕａ ＫＢ，Ｂｅｌｌｉｎｉ ＷＪ，Ｒｏｔａ ＰＡ，Ｈａｒｃｏｕｒｔ
ＢＨ，Ｔａｍｉｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ：ａ ｒｅｃ
ｅｎｔｌｙ ｅｍｅｒｇｅｎｔ ｄｅａｄｌｙ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ．Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２８８：１４３２－１４３５．
ＢＨ，Ｔａｍｉｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ：ａ ｒｅｃ
ｅｎｔｌｙ ｅｍｅｒｇｅｎｔ ｄｅａｄｌｙ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ．Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２８８：１４３２－１４３５．
【0138】
３． Ｌａｍｂ ＲＡ，Ｐａｒｋｓ ＧＤ（２００７）Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａ
ｅ：Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｉｎ：Ｋ
ｎｉｐｅ ＤＭ，Ｇｒｉｆｆｉｎ ＤＥ，Ｌａｍｂ ＲＡ，Ｓｔｒａｕｓ ＳＥ，Ｈｏｗ
ｌｅｙ ＰＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．Ｐｈ
ｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ．ｐ
ｐ．１４４９－１４９６．
ｅ：Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｉｎ：Ｋ
ｎｉｐｅ ＤＭ，Ｇｒｉｆｆｉｎ ＤＥ，Ｌａｍｂ ＲＡ，Ｓｔｒａｕｓ ＳＥ，Ｈｏｗ
ｌｅｙ ＰＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．Ｐｈ
ｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ．ｐ
ｐ．１４４９－１４９６．
【0139】
４． Ｅａｔｏｎ ＢＴ，Ｂｒｏｄｅｒ ＣＣ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｄ，Ｗａｎｇ
ＬＦ（２００６）Ｈｅｎｄｒａ ａｎｄ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓｅｓ：ｄｉｆｆｅｒｅ
ｎｔ ａｎｄ ｄａｎｇｅｒｏｕｓ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４：２３－
３５．
ＬＦ（２００６）Ｈｅｎｄｒａ ａｎｄ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓｅｓ：ｄｉｆｆｅｒｅ
ｎｔ ａｎｄ ｄａｎｇｅｒｏｕｓ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４：２３－
３５．
【0140】
５． Ｐａｌｌｉｓｔｅｒ Ｊ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｄ，Ｂｒｏｄｅｒ ＣＣ，Ｗａ
ｎｇ Ｌ－Ｆ（２０１１）Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓ ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍ
ｅｎｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｒｒｏｒｉｓｍ ａｎｄ Ｂｉｏｄｅｆｅｎ
ｓｅ：Ｓ１：００５．
ｎｇ Ｌ－Ｆ（２０１１）Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓ ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍ
ｅｎｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｒｒｏｒｉｓｍ ａｎｄ Ｂｉｏｄｅｆｅｎ
ｓｅ：Ｓ１：００５．
【0141】
６． Ｅａｔｏｎ ＢＴ，Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ ＪＳ，Ｗａｎｇ Ｌ－Ｆ（２００７）
Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓｅｓ．Ｉｎ：Ｋｎｉｐｅ ＤＭ，Ｇｒｉｆｆｉｎ ＤＥ，Ｌａｍ
ｂ ＲＡ，Ｓｔｒａｕｓ ＳＥ，Ｈｏｗｌｅｙ ＰＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ．
Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ
Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ．ｐｐ．１５８７－１６００．
Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓｅｓ．Ｉｎ：Ｋｎｉｐｅ ＤＭ，Ｇｒｉｆｆｉｎ ＤＥ，Ｌａｍ
ｂ ＲＡ，Ｓｔｒａｕｓ ＳＥ，Ｈｏｗｌｅｙ ＰＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ．
Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ
Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ．ｐｐ．１５８７－１６００．
【0142】
７． Ｙｏｂ ＪＭ，Ｆｉｅｌｄ Ｈ，Ｒａｓｈｄｉ ＡＭ，Ｍｏｒｒｉｓｓｙ Ｃ，
ｖａｎ ｄｅｒ Ｈｅｉｄｅ Ｂ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｂａｔｓ（ｏｒｄｅｒ Ｃｈｉｒｏｐｔｅｒａ）ｉｎ ｐｅ
ｎｉｎｓｕｌａｒ Ｍａｌａｙｓｉａ．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ７：４３９
－４４１．
ｖａｎ ｄｅｒ Ｈｅｉｄｅ Ｂ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｂａｔｓ（ｏｒｄｅｒ Ｃｈｉｒｏｐｔｅｒａ）ｉｎ ｐｅ
ｎｉｎｓｕｌａｒ Ｍａｌａｙｓｉａ．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ７：４３９
－４４１．
【0143】
８． Ｌｉ Ｙ，Ｗａｎｇ Ｊ，Ｈｉｃｋｅｙ ＡＣ，Ｚｈａｎｇ Ｙ，Ｌｉ Ｙ，ｅ
ｔ ａｌ．（２００８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｎｉｐａｈ ｏｒ Ｎｉｐａｈ－
ｌｉｋｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｂａｔｓ，Ｃｈｉｎａ．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ
Ｄｉｓ １４： １９７４－１９７６．
ｔ ａｌ．（２００８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｎｉｐａｈ ｏｒ Ｎｉｐａｈ－
ｌｉｋｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｂａｔｓ，Ｃｈｉｎａ．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ
Ｄｉｓ １４： １９７４－１９７６．
【0144】
９． Ｈａｙｍａｎ ＤＴ，Ｓｕｕ－Ｉｒｅ Ｒ，Ｂｒｅｅｄ ＡＣ，ＭｃＥａｃｈｅ
ｒｎ ＪＡ，Ｗａｎｇ Ｌ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｈｅｎ
ｉｐａｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｗｅｓｔ Ａｆｒｉｃａｎ ｆｒｕｉｔ
ｂａｔｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ３：ｅ２７３９．
ｒｎ ＪＡ，Ｗａｎｇ Ｌ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｈｅｎ
ｉｐａｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｗｅｓｔ Ａｆｒｉｃａｎ ｆｒｕｉｔ
ｂａｔｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ３：ｅ２７３９．
【0145】
１０． Ｈａｌｐｉｎ Ｋ，Ｈｙａｔｔ ＡＤ，Ｆｏｇａｒｔｙ Ｒ，Ｍｉｄｄｌｅｔ
ｏｎ Ｄ，Ｂｉｎｇｈａｍ Ｊ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｐｔｅｒｏｐｉｄ Ｂａｔｓ
ａｒｅ Ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ａｓ ｔｈｅ Ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ Ｈｏｓｔｓ ｏｆ
Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓｅｓ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔａｌ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓ Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｔｒｏ
ｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ８５：９４６－９５１．
ｏｎ Ｄ，Ｂｉｎｇｈａｍ Ｊ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｐｔｅｒｏｐｉｄ Ｂａｔｓ
ａｒｅ Ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ａｓ ｔｈｅ Ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ Ｈｏｓｔｓ ｏｆ
Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓｅｓ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔａｌ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓ Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｔｒｏ
ｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ ８５：９４６－９５１．
【0146】
１１． Ｌｅｒｏｙ ＥＭ，Ｋｕｍｕｌｕｎｇｕｉ Ｂ，Ｐｏｕｒｒｕｔ Ｘ，Ｒｏｕ
ｑｕｅｔ Ｐ，Ｈａｓｓａｎｉｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｆｒｕｉｔ ｂａｔｓ
ａｓ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒｓ ｏｆ Ｅｂｏｌａ ｖｉｒｕｓ．Ｎａｔｕｒｅ ４３８
：５７５－５７６．
ｑｕｅｔ Ｐ，Ｈａｓｓａｎｉｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｆｒｕｉｔ ｂａｔｓ
ａｓ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒｓ ｏｆ Ｅｂｏｌａ ｖｉｒｕｓ．Ｎａｔｕｒｅ ４３８
：５７５－５７６．
【0147】
１２． Ｔｏｗｎｅｒ ＪＳ，Ｐｏｕｒｒｕｔ Ｘ，Ａｌｂａｒｉｎｏ ＣＧ，Ｎｋｏ
ｇｕｅ ＣＮ，Ｂｉｒｄ ＢＨ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｍａｒｂｕｒｇ ｖｉｒｕｓ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ａ ｃｏｍｍｏｎ Ａｆｒｉｃａｎ
ｂａｔ．ＰＬｏＳ ＯＮ Ｅ ２：ｅ７６４．
ｇｕｅ ＣＮ，Ｂｉｒｄ ＢＨ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｍａｒｂｕｒｇ ｖｉｒｕｓ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ａ ｃｏｍｍｏｎ Ａｆｒｉｃａｎ
ｂａｔ．ＰＬｏＳ ＯＮ Ｅ ２：ｅ７６４．
【0148】
１３． Ｌｉ Ｗ，Ｓｈｉ Ｚ，Ｙｕ Ｍ，Ｒｅｎ Ｗ，Ｓｍｉｔｈ Ｃ，ｅｔ ａｌ
．（２００５）Ｂａｔｓ ａｒｅ ｎａｔｕｒａｌ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒｓ ｏｆ ＳＡ
ＲＳ－ｌｉｋｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１０：６７６－６７
９．
．（２００５）Ｂａｔｓ ａｒｅ ｎａｔｕｒａｌ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒｓ ｏｆ ＳＡ
ＲＳ－ｌｉｋｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１０：６７６－６７
９．
【0149】
１４． Ｃｈｕａ ＫＢ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｈｙａｔｔ Ａ，Ｙｕ Ｍ，Ｔｏｍｐ
ａｎｇ Ｍ Ｒ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ａ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｕｎｋｎｏｗｎ
ｒｅｏｖｉｒｕｓ ｏｆ ｂａｔ ｏｒｉｇｉｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉ
ｔｈ ａｎ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ
ｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０４：１１４２４－１１４
２９．
ａｎｇ Ｍ Ｒ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ａ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｕｎｋｎｏｗｎ
ｒｅｏｖｉｒｕｓ ｏｆ ｂａｔ ｏｒｉｇｉｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉ
ｔｈ ａｎ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ
ｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０４：１１４２４－１１４
２９．
【0150】
１５． Ｗｅｉｎｇａｒｔｌ Ｈ Ｍ， Ｂｅｒｈａｎｅ Ｙ，Ｃａｓｗｅｌｌ Ｊ
Ｌ，Ｌｏｏｓｍｏｒｅ Ｓ，Ａｕｄｏｎｎｅｔ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｒｅｃ
ｏｍｂｉｎａｎｔ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｐｒｏｔｅｃｔ ｐｉ
ｇｓ ａｇａｉｎｓｔ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８０：７９２９－７９３
８．
Ｌ，Ｌｏｏｓｍｏｒｅ Ｓ，Ａｕｄｏｎｎｅｔ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｒｅｃ
ｏｍｂｉｎａｎｔ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｐｒｏｔｅｃｔ ｐｉ
ｇｓ ａｇａｉｎｓｔ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８０：７９２９－７９３
８．
【0151】
１６． Ｍｕｎｇａｌｌ ＢＡ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｄ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｂｉ
ｎｇｈａｍ Ｊ，Ｈａｌｐｉｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｆｅｌｉｎｅ ｍｏｄｅ
ｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏ
ｔｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｓｏｌｕｂｌｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－ｂａｓｅ
ｄ ｓｕｂｕｎｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８０：１２２９３－１２３０２
．
ｎｇｈａｍ Ｊ，Ｈａｌｐｉｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｆｅｌｉｎｅ ｍｏｄｅ
ｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏ
ｔｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｓｏｌｕｂｌｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－ｂａｓｅ
ｄ ｓｕｂｕｎｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８０：１２２９３－１２３０２
．
【0152】
１７． ＭｃＥａｃｈｅｒｎ ＪＡ，Ｂｉｎｇｈａｍ Ｊ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｇｒ
ｅｅｎ ＤＪ，Ｈａｎｃｏｃｋ ＴＪ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎ
ａｎｔ ｓｕｂｕｎｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｃｔｓ
ａｇａｉｎｓｔ ｌｅｔｈａｌ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｉｎ
ｃａｔｓ． Ｖａｃｃｉｎｅ ２６：３８４２－３８５２．
ｅｅｎ ＤＪ，Ｈａｎｃｏｃｋ ＴＪ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎ
ａｎｔ ｓｕｂｕｎｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｃｔｓ
ａｇａｉｎｓｔ ｌｅｔｈａｌ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｉｎ
ｃａｔｓ． Ｖａｃｃｉｎｅ ２６：３８４２－３８５２．
【0153】
１８． Ｐａｌｌｉｓｔｅｒ Ｊ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｄ，Ｗａｎｇ ＬＦ，Ｋｌｅ
ｉｎ Ｒ，Ｈａｉｎｉｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
Ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ Ｇ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－ｂａｓｅｄ ｓｕｂｕｎ
ｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｆｅｒｒｅｔｓ ｆｒｏｍ ｌｅｔｈａｌ
Ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ． Ｖａｃｃｉｎｅ ２９：５６２３－
５６３０．
ｉｎ Ｒ，Ｈａｉｎｉｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
Ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ Ｇ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－ｂａｓｅｄ ｓｕｂｕｎ
ｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｆｅｒｒｅｔｓ ｆｒｏｍ ｌｅｔｈａｌ
Ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ． Ｖａｃｃｉｎｅ ２９：５６２３－
５６３０．
【0154】
１９． Ｂｏｓｓａｒｔ ＫＮ，Ｇｅｉｓｂｅｒｔ ＴＷ，Ｆｅｌｄｍａｎｎ Ｈ，Ｚ
ｈｕ Ｚ，Ｆｅｌｄｍａｎｎ Ｆ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉ
ｎｇ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｆ
ｒｉｃａｎ ｇｒｅｅｎ ｍｏｎｋｅｙｓ ｆｒｏｍ ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ ｃｈ
ａｌｌｅｎｇｅ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ３：１０５ｒａ１０３．
ｈｕ Ｚ，Ｆｅｌｄｍａｎｎ Ｆ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉ
ｎｇ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｆ
ｒｉｃａｎ ｇｒｅｅｎ ｍｏｎｋｅｙｓ ｆｒｏｍ ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ ｃｈ
ａｌｌｅｎｇｅ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ３：１０５ｒａ１０３．
【0155】
２０． Ｂｏｓｓａｒｔ ＫＮ，Ｚｈｕ Ｚ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｄ，Ｋｌｉｐｐｅ
ｌ Ｊ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ａ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ
ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉ
ｎｓｔ ｌｅｔｈａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ａ ｎｅｗ ｆｅｒｒｅｔ ｍｏｄｅｌ
ｏｆ ａｃｕｔｅ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ Ｐａｔ
ｈｏｇ ５：ｅ１０００６４２．
ｌ Ｊ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ａ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ
ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉ
ｎｓｔ ｌｅｔｈａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ａ ｎｅｗ ｆｅｒｒｅｔ ｍｏｄｅｌ
ｏｆ ａｃｕｔｅ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ Ｐａｔ
ｈｏｇ ５：ｅ１０００６４２．
【0156】
２１． Ｂｏｓｓａｒｔ ＫＮ，ＭｃＥａｃｈｅｒｎ ＪＡ，Ｈｉｃｋｅｙ ＡＣ，Ｃ
ｈｏｕｄｈｒｙ Ｖ，Ｄｉｍｉｔｒｏｖ ＤＳ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｅｕｔｒａ
ｌｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｈｅｎｉｐａｖ
ｉｒｕｓ ｓｅｒｏｌｏｇｙ ｕｓｉｎｇ Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｒｒ
ａｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ １４２：２９－４０．
ｈｏｕｄｈｒｙ Ｖ，Ｄｉｍｉｔｒｏｖ ＤＳ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｅｕｔｒａ
ｌｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｈｅｎｉｐａｖ
ｉｒｕｓ ｓｅｒｏｌｏｇｙ ｕｓｉｎｇ Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｒｒ
ａｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ １４２：２９－４０．
【0157】
２２． Ｂｏｎａｐａｒｔｅ ＭＩ，Ｄｉｍｉｔｒｏｖ ＡＳ，Ｂｏｓｓａｒｔ ＫＮ
，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｍｕｎｇａｌｌ ＢＡ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｅｐｈｒｉｎ
－Ｂ２ ｌｉｇａｎｄ ｉｓ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ
Ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０２：１０６５２－１０６５７．
，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｍｕｎｇａｌｌ ＢＡ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｅｐｈｒｉｎ
－Ｂ２ ｌｉｇａｎｄ ｉｓ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ
Ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０２：１０６５２－１０６５７．
【0158】
２３． Ｎｅｇｒｅｔｅ ＯＡ，Ｌｅｖｒｏｎｅｙ ＥＬ，Ａｇｕｉｌａｒ ＨＣ，Ｂ
ｅｒｔｏｌｏｔｔｉ－Ｃｉａｒｌｅｔ Ａ，Ｎａｚａｒｉａｎ Ｒ，ｅｔ ａｌ． （２
００５） ＥｐｈｒｉｎＢ２ ｉｓ ｔｈｅ ｅｎｔｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ
Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ， ａｎ ｅｍｅｒｇｅｎｔ ｄｅａｄｌｙ ｐａｒａｍｙｘｏ
ｖｉｒｕｓ．Ｎａｔｕｒｅ ４３６：４０１－４０５．
ｅｒｔｏｌｏｔｔｉ－Ｃｉａｒｌｅｔ Ａ，Ｎａｚａｒｉａｎ Ｒ，ｅｔ ａｌ． （２
００５） ＥｐｈｒｉｎＢ２ ｉｓ ｔｈｅ ｅｎｔｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ
Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ， ａｎ ｅｍｅｒｇｅｎｔ ｄｅａｄｌｙ ｐａｒａｍｙｘｏ
ｖｉｒｕｓ．Ｎａｔｕｒｅ ４３６：４０１－４０５．
【0159】
２４． Ｎｅｇｒｅｔｅ ＯＡ，Ｗｏｌｆ ＭＣ，Ａｇｕｉｌａｒ ＨＣ，Ｅｎｔｅｒ
ｌｅｉｎ Ｓ，Ｗａｎｇ Ｗ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｔｗｏ ｋｅｙ ｒｅｓｉｄｕ
ｅｓ ｉｎ ｅｐｈｒｉｎＢ３ ａｒｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｉｔｓ ｕｓｅ
ａｓ ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒ
ｕｓ．ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ ２：ｅ７．
ｌｅｉｎ Ｓ，Ｗａｎｇ Ｗ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｔｗｏ ｋｅｙ ｒｅｓｉｄｕ
ｅｓ ｉｎ ｅｐｈｒｉｎＢ３ ａｒｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｉｔｓ ｕｓｅ
ａｓ ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒ
ｕｓ．ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ ２：ｅ７．
【0160】
２５． Ｇｕｉｌｌａｕｍｅ Ｖ，Ｃｏｎｔａｍｉｎ Ｈ，Ｌｏｔｈ Ｐ，Ｇｅｏｒｇ
ｅｓ－Ｃｏｕｒｂｏｔ ＭＣ，Ｌｅｆｅｕｖｒｅ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎｉｐ
ａｈ ｖｉｒｕｓ：ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｓｓｉｖｅ ｐｒｏｔｅｃｔ
ｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ ａ ｈａｍｓｔｅｒ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７
８：８３４－８４０．
ｅｓ－Ｃｏｕｒｂｏｔ ＭＣ，Ｌｅｆｅｕｖｒｅ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎｉｐ
ａｈ ｖｉｒｕｓ：ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｓｓｉｖｅ ｐｒｏｔｅｃｔ
ｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ ａ ｈａｍｓｔｅｒ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７
８：８３４－８４０．
【0161】
２６． Ｄｒｅｘｌｅｒ ＪＦ，Ｃｏｒｍａｎ ＶＭ，Ｇｌｏｚａ－Ｒａｕｓｃｈ Ｆ
，Ｓｅｅｂｅｎｓ Ａ，Ａｎｎａｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｈｅｎｉｐａｖｉｒ
ｕｓ ＲＮＡ ｉｎ Ａｆｒｉｃａｎ ｂａｔｓ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ４：ｅ６３６７．
，Ｓｅｅｂｅｎｓ Ａ，Ａｎｎａｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｈｅｎｉｐａｖｉｒ
ｕｓ ＲＮＡ ｉｎ Ａｆｒｉｃａｎ ｂａｔｓ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ４：ｅ６３６７．
【0162】
２７． Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｔｏｄｄ Ｓ，Ｇｒｉｍｌｅｙ Ｓ，ＭｃＥａｃｈｅｒ
ｎ ＪＡ，Ｍａｒｓｈ ＧＡ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ，
ｉｍｍｏｒｔａｌｉｓａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ
ｐｔｅｒｏｐｉｄ ｂａｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ４：ｅ８２６６
．
ｎ ＪＡ，Ｍａｒｓｈ ＧＡ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ，
ｉｍｍｏｒｔａｌｉｓａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ
ｐｔｅｒｏｐｉｄ ｂａｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ４：ｅ８２６６
．
【0163】
２８． Ｃｈｕａ ＫＢ，Ｗａｎｇ ＬＦ，Ｌａｍ ＳＫ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｙｕ
Ｍ， ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｔｉｏｍａｎ ｖｉｒｕｓ， ａ ｎｏｖｅｌ ｐａ
ｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｆｒｕｉｔ ｂａｔｓ ｉｎ
ｍａｌａｙｓｉａ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２８３：２１５－２２９．
Ｍ， ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｔｉｏｍａｎ ｖｉｒｕｓ， ａ ｎｏｖｅｌ ｐａ
ｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｆｒｕｉｔ ｂａｔｓ ｉｎ
ｍａｌａｙｓｉａ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２８３：２１５－２２９．
【0164】
２９． Ｃｈｕａ ＫＢ，Ｌｅｋ Ｋｏｈ Ｃ，Ｈｏｏｉ ＰＳ，Ｗｅｅ ＫＦ，Ｋｈ
ｏｎｇ Ｊ Ｈ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｉｐａｈ ｖ
ｉｒｕｓ ｆｒｏｍ Ｍａｌａｙｓｉａｎ Ｉｓｌａｎｄ ｆｌｙｉｎｇ－ｆｏｘｅｓ．
Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ ４：１４５－１５１．
ｏｎｇ Ｊ Ｈ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｉｐａｈ ｖ
ｉｒｕｓ ｆｒｏｍ Ｍａｌａｙｓｉａｎ Ｉｓｌａｎｄ ｆｌｙｉｎｇ－ｆｏｘｅｓ．
Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ ４：１４５－１５１．
【0165】
３０． Ｃｈｕａ ＫＢ （２００３） Ａ ｎｏｖｅｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ
ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ｆｒｕｉｔ ｂａｔｓ ｆｏｒ
ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｍｉｃｒｏｂｅｓ
Ｉｎｆｅｃｔ ５：４８７－４９０．
ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ｆｒｕｉｔ ｂａｔｓ ｆｏｒ
ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｍｉｃｒｏｂｅｓ
Ｉｎｆｅｃｔ ５：４８７－４９０．
【0166】
３１． Ｔｏｎｇ Ｓ，Ｃｈｅｒｎ ＳＷ，Ｌｉ Ｙ，Ｐａｌｌａｎｓｃｈ ＭＡ，Ａ
ｎｄｅｒｓｏｎ ＬＩ（２００８）Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｂｒｏａｄｌｙ ｒｅ
ａｃｔｉｖｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ ａｓｓａｙｓ
ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｎｏｖｅｌ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４６：２６５２－２６５８．
ｎｄｅｒｓｏｎ ＬＩ（２００８）Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｂｒｏａｄｌｙ ｒｅ
ａｃｔｉｖｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ ａｓｓａｙｓ
ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｎｏｖｅｌ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４６：２６５２－２６５８．
【0167】
３２． Ｂａｋｅｒ ＫＳ，Ｔｏｄｄ Ｓ，Ｍａｒｓｈ Ｇ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｌ
ｏｒａｓ Ａ，Ｓｕｕ－ｌｒｅ Ｒ，ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃｏ－ｃｉｒｃｕｌａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｄｉｖｅｒｓｅ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ａｎ ｕｒｂ
ａｎ Ａｆｒｉｃａｎ ｆｒｕｉｔ ｂａｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉ
ｒｏｌ ９３：８５０－８５６．
ｏｒａｓ Ａ，Ｓｕｕ－ｌｒｅ Ｒ，ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃｏ－ｃｉｒｃｕｌａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｄｉｖｅｒｓｅ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ａｎ ｕｒｂ
ａｎ Ａｆｒｉｃａｎ ｆｒｕｉｔ ｂａｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉ
ｒｏｌ ９３：８５０－８５６．
【0168】
３３． Ｔｈｏｍａｓ ＳＭ，Ｌａｍｂ ＲＡ，Ｐａｔｅｒｓｏｎ ＲＧ（１９８８）
Ｔｗｏ ｍＲＮＡｓ ｔｈａｔ ｄｉｆｆｅｒ ｂｙ ｔｗｏ ｎｏｎｔｅｍｐｌａｔｅ
ｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｅｎｃｏｄｅ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ｃｏｔｅｒｍｉｎａ
ｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｐ ａｎｄ Ｖ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ
ＳＶ５．細胞 ５４：８９１－９０２．
Ｔｗｏ ｍＲＮＡｓ ｔｈａｔ ｄｉｆｆｅｒ ｂｙ ｔｗｏ ｎｏｎｔｅｍｐｌａｔｅ
ｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｅｎｃｏｄｅ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ｃｏｔｅｒｍｉｎａ
ｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｐ ａｎｄ Ｖ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ
ＳＶ５．細胞 ５４：８９１－９０２．
【0169】
３４． Ｂｏｓｓａｒｔ ＫＮ，Ｔａｃｈｅｄｊｉａｎ Ｍ，ＭｃＥａｃｈｅｒｎ Ｊ
Ａ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｚｈｕ Ｚ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｈｏｓｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｐｈｒｉｎ－Ｂ ｌｉｇａｎ
ｄｓ ａｓ Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３７２
：３５７－３７１．
Ａ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｚｈｕ Ｚ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｈｏｓｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｐｈｒｉｎ－Ｂ ｌｉｇａｎ
ｄｓ ａｓ Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３７２
：３５７－３７１．
【0170】
３５． Ｐａｌｌｉｓｔｅｒ Ｊ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｄ，Ｃｒａｍｅｒｉ Ｇ，Ｙ
ａｍａｄａ Ｍ，Ｋｌｅｉｎ Ｒ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ
ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｒｅｖｅｎｔ Ｎｉｐａｈ ｖｉ
ｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｆｅｒｒｅｔｓ．Ｊ Ｖ
ｉｒｏｌ ８３：１１９７９－１１９８２．
ａｍａｄａ Ｍ，Ｋｌｅｉｎ Ｒ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ
ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｒｅｖｅｎｔ Ｎｉｐａｈ ｖｉ
ｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｆｅｒｒｅｔｓ．Ｊ Ｖ
ｉｒｏｌ ８３：１１９７９－１１９８２．
【0171】
３６． Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ ＭＭ，Ｈｏｏｐｅｒ ＰＴ，Ｓｅｌｌｅｃｋ ＰＷ，
Ｗｅｓｔｂｕｒｙ ＨＡ，Ｓｌｏｃｏｍｂｅ ＲＦ（２０００）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎ ｐｒｅｇｎａｎｔ ｇｕｉｎ
ｅａ－ｐｉｇｓ ａｎｄ ｆｒｕｉｔ Ｂａｔｓ （Ｐｔｅｒｏｐｕｓ ｐｏｌｉｏｃｅ
ｐｈａｌｕｓ）．Ｊ Ｃｏｍｐ Ｐａｔｈｏｌ １２２：２０１－２０７．
Ｗｅｓｔｂｕｒｙ ＨＡ，Ｓｌｏｃｏｍｂｅ ＲＦ（２０００）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎ ｐｒｅｇｎａｎｔ ｇｕｉｎ
ｅａ－ｐｉｇｓ ａｎｄ ｆｒｕｉｔ Ｂａｔｓ （Ｐｔｅｒｏｐｕｓ ｐｏｌｉｏｃｅ
ｐｈａｌｕｓ）．Ｊ Ｃｏｍｐ Ｐａｔｈｏｌ １２２：２０１－２０７．
【0172】
３７． Ｗｅｓｔｂｕｒｙ ＨＡ，Ｈｏｏｐｅｒ ＰＴ，Ｓｅｌｌｅｃｋ ＰＷ，Ｍｕ
ｒｒａｙ ＰＫ（１９９５）Ｅｑｕｉｎｅ ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａ：ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｉｍａｌｓ
ｔｏ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ．Ａｕｓｔ Ｖｅｔ Ｊ ７２：２７８－２７９．
ｒｒａｙ ＰＫ（１９９５）Ｅｑｕｉｎｅ ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａ：ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｉｍａｌｓ
ｔｏ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ．Ａｕｓｔ Ｖｅｔ Ｊ ７２：２７８－２７９．
【0173】
３８． Ｗｏｎｇ ＫＴ， Ｇｒｏｓｊｅａｎ Ｉ，Ｂｒｉｓｓｏｎ Ｃ，Ｂｌａｎｑ
ｕｉｅｒ Ｂ，Ｆｅｖｒｅ－Ｍｏｎｔａｎｇｅ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ａ ｇｏ
ｌｄｅｎ ｈａｍｓｔｅｒ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ Ｎｉｐａｈ
ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １６３：２１２７－２１
３７．
ｕｉｅｒ Ｂ，Ｆｅｖｒｅ－Ｍｏｎｔａｎｇｅ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ａ ｇｏ
ｌｄｅｎ ｈａｍｓｔｅｒ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ Ｎｉｐａｈ
ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １６３：２１２７－２１
３７．
【0174】
３９． Ｎｅｇｒｅｄｏ Ａ（２０１１）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ａｎ ｅｂｏｌ
ａｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ ｆｉｌｏｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｅｕｒｏｐｅ． ＰＬｏＳ Ｐａ
ｔｈｏｇｅｎｓ ７：ｅ１００２３０４．
ａｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ ｆｉｌｏｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｅｕｒｏｐｅ． ＰＬｏＳ Ｐａ
ｔｈｏｇｅｎｓ ７：ｅ１００２３０４．
【0175】
４０． Ｌａｍｂ ＲＡ，Ｃｏｌｌｉｎｓ ＰＬ，Ｋｏｌａｋｏｆｓｋｙ Ｄ，Ｍｅｌ
ｅｒｏ ＪＡ，Ｎａｇａｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｆａｍｉｌｙ Ｐａｒａｍｙ
ｘｏｖｉｒｉｄａｅ．．Ｉｎ：Ｆａｕｑｕｅｔ ＣＭ，Ｍａｙｏ Ｊ，Ｍａｎｉｌｏｆｆ
Ｊ，Ｄｅｓｓｅｌｂｅｒｇｅｒ Ｕ，Ｂａｌｌ ＬＡ，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｖｉｒｕｓ
Ｔａｘｏｎｏｍｙ：８ｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｃｏｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．ｐｐ．６５５－６６８．
ｅｒｏ ＪＡ，Ｎａｇａｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｆａｍｉｌｙ Ｐａｒａｍｙ
ｘｏｖｉｒｉｄａｅ．．Ｉｎ：Ｆａｕｑｕｅｔ ＣＭ，Ｍａｙｏ Ｊ，Ｍａｎｉｌｏｆｆ
Ｊ，Ｄｅｓｓｅｌｂｅｒｇｅｒ Ｕ，Ｂａｌｌ ＬＡ，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｖｉｒｕｓ
Ｔａｘｏｎｏｍｙ：８ｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｃｏｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．ｐｐ．６５５－６６８．
【0176】
４１． Ｃｈａｍｂｅｒｓ Ｒ，Ｔａｋｉｍｏｔｏ Ｔ（２００９）Ａｎｔａｇｏｎｉ
ｓｍ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ａ
ｃｃｅｓｓｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｖｉｒｕｓｅｓ １：５７４－５９３．
ｓｍ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ａ
ｃｃｅｓｓｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｖｉｒｕｓｅｓ １：５７４－５９３．
【0177】
４２． Ｍａｔｓｕｏｋａ Ｙ， Ｃｕｒｒａｎ Ｊ，Ｐｅｌｅｔ Ｔ，Ｋｏｌａｋｏ
ｆｓｋｙ Ｄ，Ｒａｙ Ｒ， ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｔｈｅ Ｐ ｇｅｎｅ ｏｆ
ｈｕｍａｎ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｅｎｃｏｄｅｓ
Ｐ ａｎｄ Ｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂｕｔ ｎｏｔ ａ ｃｙｓｔｅｉｎｅ－ｒｉｃ
ｈ Ｖ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６５：３４０６－３４１０．
ｆｓｋｙ Ｄ，Ｒａｙ Ｒ， ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｔｈｅ Ｐ ｇｅｎｅ ｏｆ
ｈｕｍａｎ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｅｎｃｏｄｅｓ
Ｐ ａｎｄ Ｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂｕｔ ｎｏｔ ａ ｃｙｓｔｅｉｎｅ－ｒｉｃ
ｈ Ｖ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６５：３４０６－３４１０．
【0178】
４３． Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ Ｍ，Ｅｇｈｏｌｍ Ｍ，Ａｌｔｍａｎ ＷＥ，Ａｔｔｉ
ｙａ Ｓ，Ｂａｄｅｒ ＪＳ， ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎ
ｃｉｎｇ ｉｎ ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｅｄ ｈｉｇｈ－ｄｅｎｓｉｔｙ ｐｉｃ
ｏｌｉｔｒｅ ｒｅａｃｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ ４３７：３７６－３８０．
ｙａ Ｓ，Ｂａｄｅｒ ＪＳ， ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎ
ｃｉｎｇ ｉｎ ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｅｄ ｈｉｇｈ－ｄｅｎｓｉｔｙ ｐｉｃ
ｏｌｉｔｒｅ ｒｅａｃｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ ４３７：３７６－３８０．
【0179】
４４． Ｐａｌａｃｉｏｓ Ｇ，Ｑｕａｎ ＰＬ，Ｊａｂａｄｏ ＯＪ，Ｃｏｎｌａｎ
Ｓ，Ｈｉｒｓｃｈｂｅｒｇ ＤＬ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｐａｎｍｉｃｒｏｂｉａ
ｌ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｒｒａｙ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ １３
：７３－８１．
Ｓ，Ｈｉｒｓｃｈｂｅｒｇ ＤＬ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｐａｎｍｉｃｒｏｂｉａ
ｌ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｒｒａｙ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ １３
：７３－８１．
【0180】
４５． Ｌｉ Ｚ，Ｙｕ Ｍ，Ｚｈａｎｇ Ｈ，Ｗａｎｇ ＨＹ，Ｗａｎｇ ＬＦ（２
００５）Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ
ｅｎｄｓ（ＲＡＣＥ）ｆｏｒ ｍａｐｐｉｎｇ ｂｏｔｈ ｔｈｅ ５’ ａｎｄ ３’
ｔｅｒｍｉｎａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ｇｅｎ
ｏｍｅｓ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １３０：１５４－１５６．
００５）Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ
ｅｎｄｓ（ＲＡＣＥ）ｆｏｒ ｍａｐｐｉｎｇ ｂｏｔｈ ｔｈｅ ５’ ａｎｄ ３’
ｔｅｒｍｉｎａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ｇｅｎ
ｏｍｅｓ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １３０：１５４－１５６．
【0181】
４６． Ｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｄｕｄｌｅｙ Ｊ，Ｎｅｉ Ｍ，Ｋｕｍａｒ Ｓ（２００
７）ＭＥＧＡ４：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＭＥＧＡ）ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．Ｍｏｌ Ｂ
ｉｏｌ Ｅｖｏｌ ２４：１５９６－１５９９．
７）ＭＥＧＡ４：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＭＥＧＡ）ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．Ｍｏｌ Ｂ
ｉｏｌ Ｅｖｏｌ ２４：１５９６－１５９９．
【0182】
４７． Ｗａｎｇ ＬＦ，Ｙｕ Ｍ，Ｗｈｉｔｅ ＪＲ，Ｅａｔｏｎ ＢＴ（１９９６
）ＢＴａｇ：ａ ｎｏｖｅｌ ｓｉｘ－ｒｅｓｉｄｕｅ ｅｐｉｔｏｐｅ ｔａｇ ｆｏ
ｒ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍ
ｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｇｅｎｅ １６９：５３－５８．
）ＢＴａｇ：ａ ｎｏｖｅｌ ｓｉｘ－ｒｅｓｉｄｕｅ ｅｐｉｔｏｐｅ ｔａｇ ｆｏ
ｒ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍ
ｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｇｅｎｅ １６９：５３－５８．
【0183】
４８． Ｗａｎｇ ＬＦ，Ｇｏｕｌｄ ＡＲ，Ｓｅｌｌｅｃｋ ＰＷ（１９９７）Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｑｕｉｎｅ ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ（ＥＭＶ）ｍａｔ
ｒｉｘ ａｎｄ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｅｖａｌｕａ
ｔｉｏｎ ａｓ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｒｅａｇｅｎｔｓ． Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ
１４２：２２６９－２２７９．
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｑｕｉｎｅ ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ（ＥＭＶ）ｍａｔ
ｒｉｘ ａｎｄ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｅｖａｌｕａ
ｔｉｏｎ ａｓ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｒｅａｇｅｎｔｓ． Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ
１４２：２２６９－２２７９．
【0184】
４９． Ｐｒｏｗｓｅ Ｓ（２０００）Ａ ｎｅｗ ａｄｊｕｖａｎｔ．ＡＮＺＣＣＡ
ＲＴ Ｎｅｗｓ １３：７．
ＲＴ Ｎｅｗｓ １３：７．
【0185】
連邦政府支援の研究または開発に関する記述
【0186】
本発明の開発中に実施された作業の一部は、国立衛生研究所の助成金番号ＡＩ０５４７
１５のもとで米国政府の資金を利用した。米国政府は、本発明においてある特定の権利を
有する。
ＥＦＳ－Ｗｅｂ経由での配列表の提出
１５のもとで米国政府の資金を利用した。米国政府は、本発明においてある特定の権利を
有する。
ＥＦＳ－Ｗｅｂ経由での配列表の提出
【0187】
２０１３年７月２日またはその前後に作成された「０４４５０８－５０４５－ＷＯ－Ｓ
ｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と題される約７０キロバイトのコンピュータ可
読テキストファイルは、本出願用の配列表を含み、その全体が参照より本明細書に組み込
まれる。
ｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と題される約７０キロバイトのコンピュータ可
読テキストファイルは、本出願用の配列表を含み、その全体が参照より本明細書に組み込
まれる。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図9】
【図10】
【図11】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-02-08
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
パラミクソウイルス感染を阻害するための候補薬剤を同定する方法であって、
（ａ）in vitro細胞群を、シダーウイルス（ＣｅｄＶ）及び薬剤で処理すること、及び
（ｂ）前記処理された細胞の生育応答を測定すること
を含み、
前記薬剤で処理された細胞の増殖が、処理されていないＣｅｄＶ感染細胞の増殖と比較して増大するとき、前記薬剤はパラミクソウイルス感染を阻害するための候補薬剤と同定され、
前記in vitro細胞群がエフリンＢ２遺伝子を発現する、
前記方法。
（ａ）in vitro細胞群を、シダーウイルス（ＣｅｄＶ）及び薬剤で処理すること、及び
（ｂ）前記処理された細胞の生育応答を測定すること
を含み、
前記薬剤で処理された細胞の増殖が、処理されていないＣｅｄＶ感染細胞の増殖と比較して増大するとき、前記薬剤はパラミクソウイルス感染を阻害するための候補薬剤と同定され、
前記in vitro細胞群がエフリンＢ２遺伝子を発現する、
前記方法。
【請求項2】
前記薬剤がタンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記薬剤が抗体である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記in vitro細胞群がエフリンＢ２遺伝子を発現するように遺伝子改変されている、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
パラミクソウイルス感染を阻害するための候補薬剤を同定する方法であって、
（ａ）in vitro細胞群を、シダーウイルス（ＣｅｄＶ）及び薬剤で処理すること、及び
（ｂ）前記処理された細胞の細胞変性効果（ＣＰＥ）を測定すること、
を含み、
感染細胞におけるＣＰＥの欠如が、被検体がパラミクソウイルスに曝露した際に前記薬剤がパラミクソウイルスの被検体に感染する能力を低減し得ることを示し、
前記in vitro細胞群がエフリンＢ２遺伝子を発現する、
前記方法。
（ａ）in vitro細胞群を、シダーウイルス（ＣｅｄＶ）及び薬剤で処理すること、及び
（ｂ）前記処理された細胞の細胞変性効果（ＣＰＥ）を測定すること、
を含み、
感染細胞におけるＣＰＥの欠如が、被検体がパラミクソウイルスに曝露した際に前記薬剤がパラミクソウイルスの被検体に感染する能力を低減し得ることを示し、
前記in vitro細胞群がエフリンＢ２遺伝子を発現する、
前記方法。
【請求項6】
前記薬剤がタンパク質である、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記薬剤が抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記in vitro細胞群がエフリンＢ２遺伝子を発現するように遺伝子改変されている、請求項５に記載の方法。
【外国語明細書】