特開 2022-58085 ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２阻害剤とアセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤との組合せ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022058085

(43)【公開日】2022-04-11

(54)【発明の名称】ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２阻害剤とアセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤との組合せ

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/506 20060101AFI20220404BHJP

   A61K 31/438 20060101ALI20220404BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20220404BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20220404BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20220404BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20220404BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20220404BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20220404BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20220404BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220404BHJP

【ＦＩ】

A61K31/506

A61K31/438

A61P1/16

A61P3/06

A61P3/10

A61P9/00

A61P9/04

A61P9/10

A61P3/04

A61P43/00 121

A61P43/00 111

【審査請求】未請求

【請求項の数】37

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2021023813

(22)【出願日】2021-02-18

(31)【優先権主張番号】62/980845

(32)【優先日】2020-02-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(74)【代理人】

【識別番号】100185960

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 理愛

(72)【発明者】

【氏名】ニータ バークリシャン エーミン

(72)【発明者】

【氏名】アーサー ジェイムズ バーグマン

(72)【発明者】

【氏名】ロバート アーノルド カル

(72)【発明者】

【氏名】ロバート グレゴリー デュリア

(72)【発明者】

【氏名】デイビッド ジェームズ エドモンズ

(72)【発明者】

【氏名】ウィリアム ポール エズラー

(72)【発明者】

【氏名】ケヴィン ジェイムズ フィリプスキ

(72)【発明者】

【氏名】ジェイムズ リチャード ゴセット

(72)【発明者】

【氏名】アルバート ミュン キム

(72)【発明者】

【氏名】ジェフリー アレン フェファーコーン

(72)【発明者】

【氏名】パトリック ロバート ヴァーホスト

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC42

4C086CB05

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA14

4C086GA15

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA36

4C086ZA37

4C086ZA45

4C086ZA70

4C086ZA75

4C086ZC20

4C086ZC33

4C086ZC35

4C086ZC75

(57)【要約】

【課題】ＤＧＡＴ２阻害活性を有し、病気の処置、予防またはその兆候の削減において有用な医薬作用物質を提供すること。
【解決手段】本明細書において記述されるのは、肝疾患およびそれに関連する疾患の処置のための、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を含む医薬組成物である。肝疾患およびそれに関連する疾患の処置のための、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む組成物も記述される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

治療有効量の約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤とを含む医薬組成物。

【請求項2】

前記２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の前記治療有効量が、約１０ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

前記２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の前記治療有効量が、約２０ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項4】

前記２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の前記治療有効量が、約４０ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項5】

前記２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の前記治療有効量が、約８０ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項6】

２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む医薬組成物。

【請求項7】

治療有効量約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、治療有効量の約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む医薬組成物。

【請求項8】

１日に１回投与される、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

１日に２回投与される、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

前記２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドが、構造：

【化1】

を有する結晶または薬学的に許容できるその塩である、請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項11】

前記結晶が、前記化合物のｐ－トルエンスルホン酸塩を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項12】

（ＣｕＫα放射線、１．５４０５６Åの波長）７．２±０．２、１４．５±０．２、１５．８±０．２および２７．７±０．２の２シータ値を含む粉末ｘ線回折パターンを有する、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項13】

（ＣｕＫα放射線、１．５４０５６Åの波長）３．８±０．２、７．７±０．２、８．８±０．２、２２．４±０．２および２４．６±０．２の２シータ値を含む粉末ｘ線回折パターンを有する、請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸が、構造：

【化2】

の結晶性固体または薬学的に許容できるその塩である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項15】

前記結晶性固体が、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸の２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール塩である、請求項１４に記載の医薬組成物。

【請求項16】

脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎または肝硬変および肝細胞癌を伴う非アルコール性脂肪性肝炎を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の請求項１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項17】

非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活性スコア（ＮＡＳ）の重症度におけるベースラインからの少なくとも１ポイントの低減のための方法であって、ヒトにおけるベースラインＮＡＳを測定するステップと、前記ヒトに治療有効量の請求項１に記載の組成物を投与するステップと、前記ヒトの前記ＮＡＳを測定するステップとを含む方法。

【請求項18】

非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活性スコア（ＮＡＳ）の重症度におけるベースラインからの少なくとも２ポイントの低減のための方法であって、ヒトにおけるベースラインＮＡＳを測定するステップと、前記ヒトに治療有効量の請求項１に記載の組成物を投与するステップと、前記ヒトの前記ＮＡＳを測定するステップとを含む方法。

【請求項19】

アテローム性動脈硬化、脳卒中、心筋梗塞、大動脈血管疾患、脳血管疾患、腎臓血管疾患、心不全、心房細動または冠状動脈性心疾患から選択される心血管疾患または状態を処置する方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量の、請求項１に記載の組成物と、約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項20】

肥満、脂質異常症、２型真性糖尿病、２型真性糖尿病患者における血糖コントロール、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、インスリン抵抗性またはグルコース代謝異常から選択される代謝性疾患または状態を処置するための方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の請求項１に記載の組成物を投与するステップと、前記ヒトのＮＡＳを測定するステップとを含む方法。

【請求項21】

脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、ならびに肝硬変および肝細胞癌または代謝関連疾患を伴う非アルコール性脂肪性肝炎から選択される疾患または状態を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量の、請求項１に記載の組成物と、約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項22】

脂肪肝、アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴うアルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴うアルコール性脂肪性肝炎、ならびに肝硬変および肝細胞癌または代謝関連疾患を伴うアルコール性脂肪性肝炎から選択される疾患または状態を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量の、請求項１に記載の組成物と、約５ｍｇから約４０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項23】

アテローム性動脈硬化、脳卒中、心筋梗塞、大動脈血管疾患、脳血管疾患、腎臓血管疾患、心不全、心房細動または冠状動脈性心疾患から選択される心血管疾患または状態を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量の、請求項１に記載の組成物と、約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項24】

肥満、脂質異常症、２型真性糖尿病、２型真性糖尿病患者における血糖コントロール、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、インスリン抵抗性またはグルコース代謝異常から選択される代謝性疾患または状態を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量の、請求項１に記載の組成物と、約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む組成物を投与するステップを含む方法。

【請求項25】

２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の前記治療有効量が、約８０ｍｇである、請求項１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記組成物が、１日に１回投与される、請求項１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記組成物が、１日に２回投与される、請求項１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドが、構造：

【化3】

を有する結晶または薬学的に許容できるその塩である、請求項１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記結晶が、前記化合物のｐ－トルエンスルホン酸塩を含む、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記結晶が、（ＣｕＫα放射線、１．５４０５６Åの波長）７．２±０．２、１４．５±０．２、１５．８±０．２および２７．７±０．２の２シータ値を含む粉末ｘ線回折パターンを有する、請求項２８に記載の方法。

【請求項31】

前記結晶が、（ＣｕＫα放射線、１．５４０５６Åの波長）３．８±０．２、７．７±０．２、８．８±０．２、２２．４±０．２および２４．６±０．２の２シータ値を含む粉末ｘ線回折パターンを有する、請求項２９に記載の方法。

【請求項32】

前記４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸が、構造：

【化4】

の結晶性固体または薬学的に許容できるその塩である、請求項１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０または３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記結晶性固体が、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸の２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール塩である、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎または肝硬変および肝細胞癌を伴う非アルコール性脂肪性肝炎を処置するための方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を含む第１の組成物を、治療有効量の４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩を含む第２の組成物と組み合わせて投与するステップを含む方法。

【請求項35】

前記第１および第２の組成物が、同時に投与される、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記第１および第２の組成物が、順次に投与される、請求項３４に記載の方法。

【請求項37】

高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、脂質異常症、冠状動脈性心疾患、高アポＢリポタンパク質血症、虚血性脳卒中、２型真性糖尿病、２型真性糖尿病患者における血糖コントロール、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝異常を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の請求項１に記載の組成物を投与するステップを含む方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、肝疾患およびそれに関連する疾患の処置のための、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を含む新たな医薬組成物に関する。本発明は、肝疾患およびそれに関連する疾患の処置のための、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む、新たな医薬組成物にも関する。

【背景技術】

【0002】

非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、全死因死亡率、肝硬変および末期肝疾患の増大、心血管死亡率の増大、ならびに肝臓関連および非肝臓関連がん両方の発生率の増大に関連する、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ、５％以上の肝臓脂肪症の存在として定義される）の臨床的および組織学的サブセットである（Ｓａｎｙａｌら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２０１５；６１（４）：１３９２～１４０５）。ＮＡＦＬＤは、代謝症候群の肝臓の兆候であり、脂肪症、ＮＡＳＨ、線維症、肝硬変および最終的に肝細胞癌を包含する一連の肝臓の状態である。ＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨは、肝臓の脂質の上昇がある個体の最も大きな割合を占めることから、原発性脂肪肝疾患とみなされる。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの重症度は、脂質、炎症性細胞浸潤、肝細胞風船化の存在、および線維症の程度に基づく。現時点では、処置の選択肢は関連状態の管理に限定される（ＥＡＳＬ－ＥＡＳＤ－ＥＡＳＯ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．２０１６；６４（６）：１３８８～１４０２）。

【0003】

脂質代謝の変化が、ＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨの分子病因に寄与すると仮定されてきた。脂肪症は、ＮＡＳＨの病因の、必要だが十分ではない構成要素である（Ｄａｙ ＣおよびＪａｍｅｓ Ｏ．、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．１９９８；２７（６）：１４６３～６）。これと一致して、複数の研究が、脂肪症の重症度により、併発する脂肪性肝炎のリスクおよび肝硬変への進行のリスクが予測されることを実証している（Ｓｏｒｅｎｓｅｎら、Ｌａｎｃｅｔ．１９８４；２（８３９７）：２４１～４；Ｗａｎｌｅｓｓ ＩおよびＬｅｎｔｚ Ｊ、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １９９０；１２（５）：１１０６～１０；Ｒｅｅｖｅｓ Ｈら、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９６；２５（５）：６７７～８３）。肝臓脂肪症は、トリグリセリド生成／肝臓への取り込みおよびクリアランス／除去における不均衡の結果である（Ｃｏｈｅｎ ＪＣら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１１；３３２（６０３７）：１５１９～１５２３）。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの発生を支持する代謝原動力である脂肪症を低減させることは、肝臓炎症および線維症におけるその後の改善をもたらすであろうという仮説が立てられている。

【0004】

アセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）およびジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）は、脂質代謝を調節する２つの主要な酵素である。ＡＣＣは、デノボ脂質生成（ＤＮＬ）のプロセスにおける必須かつ律速なステップを触媒する（Ｓａｇｇｅｒｓｏｎ Ｄ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ．２００８；２８：２５３～７２）。さらに、ＡＣＣは、酵素カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１（ＣＰＴ１）のアロステリック調節により、脂肪酸のミトコンドリアベータ酸化も調節する（Ｓａｇｇｅｒｓｏｎ、２００８；Ｗａｉｔｅ ＭおよびＷａｋｉｌ ＳＪ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９６２；２３７：２７５０～２７５７）。新たに出現したデータは、ＡＣＣ阻害によるＤＮＬの抑制が、Ｔヘルパー１７系統の炎症性インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）分泌Ｔ細胞（Ｔｈ１７細胞）の形成を制限し、抗炎症ＦｏｘＰ３（＋）調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の発生を有利にすることによって、炎症を直接低減させ得ることも示唆する（Ｂｅｒｏｄ Ｌら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２０１４；２０（１１）：１３２７～３３）。

【0005】

ＡＣＣ活性の阻害は、少なくとも２つの独立した機序により、ＮＡＳＨ患者にとって有益であると仮定される。上記でまとめた通り、ＮＡＦＬＤを持つヒトは、肝臓のＤＮＬの著しい上昇を示し、薬理学的な肝臓ＡＣＣ阻害によるこのフラックス増大の正常化は、脂肪症を低減させると仮定される。加えて、脂肪酸酸化を増大させるＡＣＣ阻害剤の効果は、肝臓脂肪含有量を低減させることにも寄与し得る。これと一致して、ＡＣＣ阻害剤は、ＤＮＬを阻害することが示されている。Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ＤＡら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４；５７（２４）：１０５１２～１０５２６；Ｋｉｍ ＣＷら、Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ．２０１７；２６、３９４～４０６；Ｓｔｉｅｄｅ Ｋら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２０１７；６６（２）：３２４～３３４；Ｌａｗｉｔｚ ＥＪら、Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．２０１８（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｇｈ．２０１８．０４．０４２）を参照されたい。加えて、ＩＬ－１７分泌Ｔ細胞におけるＤＮＬの阻害は、ＮＡＳＨ病因において重要となり得る経路である（Ｒａｕ Ｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６；１９６（１）：９７～１０５）炎症性Ｔｈ１７細胞の形成を制限し（Ｂｅｒｏｄら、２０１４）、抗炎症Ｔｒｅｇ細胞の発生を有利にすることによって、肝臓炎症を抑制することが期待されている。さらに、ＡＣＣ阻害は、星状細胞活性化および線維症を低減させ得る（Ｒｏｓｓら、２０１９）。

【0006】

トリグリセリドまたはトリアシルグリセロール（ＴＧ）は、哺乳動物におけるエネルギー貯蔵の主要な形態を表す。ＴＧは、グリセロールと、様々な鎖長および飽和度の３つの脂肪酸との順次エステル化によって形成される（Ｃｏｌｅｍａｎ，Ｒ．Ａ．およびＭａｓｈｅｋ，Ｄ．Ｇ．２０１１．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１１１：６３５９～６３８６）。腸または肝臓において合成されたＴＧは、カイロミクロンまたは超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）にそれぞれ包まれ、末梢組織に移出され、そこで、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）によって、それらの構成要素である脂肪酸およびグリセロールに加水分解される。結果として生じた非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）は、さらに代謝されてエネルギーを生成するか、または再エステル化され、貯蔵されるかのいずれかであり得る。

【0007】

正常な生理的条件下では、エネルギー密度の高いＴＧは、それを放出する需要があるまで、種々の脂肪蓄積部内に隔離されたままであり、需要があるとすぐに、グリセロールおよび遊離脂肪酸に加水分解され、次いで、これが血流中に放出される。このプロセスは、種々の生理的条件下でＴＧ貯蔵の沈着および動員を促進する、インスリン、およびカテコールアミン等のホルモンの反対作用によって、厳密に調節される。食後の状況では、インスリンが脂肪分解を阻害する作用をし、それにより、ＮＥＦＡの形態でのエネルギーの放出を制限し、脂肪蓄積部における食事中の脂質の適切な貯蔵を確実にする。しかしながら、２型糖尿病患者では、脂肪分解を抑制するインスリンの能力が向上し、脂肪細胞からのＮＥＦＡフラックスが不適切に上昇する。これが今度は、筋肉および肝臓等の組織への脂質の送達の増大をもたらす。エネルギー需要の非存在下では、ＴＧおよびジアシルグリセロール（ＤＡＧ）等の他の脂質代謝物が蓄積し、インスリン感受性の喪失を引き起こし得る（Ｅｒｉｏｎ，Ｄ．Ｍ．およびＳｈｕｌｍａｎ，Ｇ．Ｉ．２０１０．Ｎａｔ Ｍｅｄ １６：４００～４０２）。筋肉におけるインスリン抵抗性は、グルコース取り込みおよびグリコーゲン貯蔵の低減を特徴とするのに対し、肝臓では、インスリンシグナル伝達の喪失が、グルコース生産量の調節不全、および２型糖尿病の特質であるＴＧリッチＶＬＤＬの過剰生成を生み出す（Ｃｈｏｉ，Ｓ．Ｈ．およびＧｉｎｓｂｅｒｇ，Ｈ．Ｎ．２０１１．Ｔｒｅｎｄｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２２：３５３～３６３）。ＴＧが豊富なＶＬＤＬ、いわゆるＶＬＤＬ１粒子の分泌の上昇は、冠状動脈性心疾患のリスク上昇に関連するＬＤＬのアテローム生成促進的な亜画分であるスモールデンス低比重リポタンパク質（ｓｄＬＤＬ）の生成を刺激すると考えられる（Ｓｔ－Ｐｉｅｒｒｅ，Ａ．Ｃ．ら、２００５．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２５：５５３～５５９）。

【0008】

ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）は、トリアシルグリセリド（ＴＡＧ）合成における最終ステップ、具体的には、ジアシルグリセロールによる脂肪酸のエステル化を触媒して、ＴＡＧの形成をもたらす。哺乳動物では、２つのＤＧＡＴ酵素（ＤＧＡＴ１およびＤＧＡＴ２）が特徴付けられている。これらの酵素は、同じ酵素反応を触媒するが、それらのそれぞれのアミノ酸配列は無関係であり、異なった遺伝子ファミリーを占有する。ＤＧＡＴ２は、肝臓および脂肪において高度に発現され、ＤＧＡＴ１とは異なり、ジアシルグリセリド（ＤＡＧ）に対する申し分ない基質特異性を呈する。げっ歯類におけるＤＧＡＴ２遺伝子の欠失は、子宮内発育不良、重度の脂肪血症、皮膚バリア機能異常および出生後早期死亡をもたらす。ＤＧＡＴ２の抑制は、ステロール応答エレメント結合タンパク質１ｃ（ＳＲＥＢＰ１ｃ）およびステアロイルＣｏＡ－デサチュラーゼ１（ＳＣＤ１）を含む、脂質生成（ｌｉｐｏｇｅｎｓｉｓ）に関与するタンパク質をコードする複数の遺伝子の発現の下方調節をもたらすことが明らかである。並行して、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１（ＣＰＴ１）等の遺伝子の発現増大から明らかなように、酸化的経路が誘導される。これらの変化の最終結果は、肝臓ＤＡＧおよびＴＡＧ脂質のレベルを減少させることであり、これが今度は、肝臓におけるインスリン応答性の改善につながる。さらに、ＤＧＡＴ２阻害は、肝臓ＶＬＤＬ ＴＡＧ分泌を抑制し、循環コレステロールレベルの低減につながる。最後に、おそらく新たに合成されたＡＰＯＢタンパク質の脂質化のためのＴＡＧの供給の減少により、血漿アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）レベルが抑制される。血糖コントロールおよび血漿コレステロールプロファイルの両方に対するＤＧＡＴ２阻害の有益な効果は、この標的が代謝性疾患の処置において貴重であることを示唆している（Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、２００７．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８２：２２６７８～２２６８８）。

【0009】

加えて、ＤＧＡＴ２活性の抑制が肝臓の脂質蓄積の低減をもたらすという観察は、この酵素の阻害剤が、肝臓における過剰な脂肪の沈着を特徴とする高度にまん延している肝疾患である非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の処置において有用性を有するかもしれないことを示唆している。

【0010】

近年では、ＤＧＡＴ２のいくつかの低分子阻害剤（ｉｎｈｂｉｔｏｒｓ）が、文献および特許出願（ＷＯ２０１３１５０４１６、ＷＯ２０１３１３７６２８、ＵＳ２０１５０２５９３２３、ＷＯ２０１５０７７２９９、ＷＯ２０１６０３６６３３、ＷＯ２０１６０３６６３８、ＷＯ２０１６０３６６３６）において報告されている。最近、同一出願人によるＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５４８６２が、２０１８年２月２２日にＷＯ２０１８／０３３８３２として公開され、ＤＧＡＴ２の低分子阻害剤を開示している。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0011】

【特許文献1】ＷＯ２０１３１５０４１６

【特許文献2】ＷＯ２０１３１３７６２８

【特許文献3】ＵＳ２０１５０２５９３２３

【特許文献4】ＷＯ２０１５０７７２９９

【特許文献5】ＷＯ２０１６０３６６３３

【特許文献6】ＷＯ２０１６０３６６３８

【特許文献7】ＷＯ２０１６０３６６３６

【特許文献8】ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５４８６２

【特許文献9】ＷＯ２０１８／０３３８３２

【特許文献10】国際出願公開第ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４１１９号

【特許文献11】ＵＳ８，８５９，５７７

【特許文献12】ＷＯ２０１９／１０２３１１

【特許文献13】国際特許出願公開第ＰＣＴ／ＩＢ２０１８／０５８９６６号

【特許文献14】ＷＯ２０１６／１１２３０５

【特許文献15】ＷＯ２０１００２３５９４

【特許文献16】ＷＯ２０１８１０９６０７

【特許文献17】ＰＣＴ／ＩＢ２０１９／０５４８６７

【特許文献18】ＰＣＴ／ＩＢ２０１９／０５４９６１

【特許文献19】米国特許出願第６２／８６８，０５７号

【特許文献20】米国特許出願第６２／８６８，５４２号

【特許文献21】ＷＯ２００５１１６０１４

【特許文献22】ＷＯ２０１０１０３４３７

【特許文献23】ＷＯ２０１０１０３４３８

【特許文献24】ＷＯ２０１００１３１６１

【特許文献25】ＷＯ２００７１２２４８２

【特許文献26】ＷＯ２０１０１４００９２

【特許文献27】ＷＯ２０１０１２８４２５

【特許文献28】ＷＯ２０１０１２８４１４

【特許文献29】ＷＯ２０１０１０６４５７

【特許文献30】ＷＯ２０１１００５６１１

【特許文献31】米国特許第５，６１２，３５９号

【特許文献32】米国特許第６，０４３，２６５号

【特許文献33】ＷＯ００／０１３８９

【特許文献34】欧州特許出願公開第０９０１７８６Ａ２号

【特許文献35】米国特許第５，４５６，９２３号

【特許文献36】米国特許第５，９３９，０９９号

【特許文献37】米国特許第５，３４０，５９１号

【特許文献38】米国特許第４，６７３，５６４号

【特許文献39】米国特許第５，７０７，６４６号

【特許文献40】米国特許第４，８９４，２３５号

【特許文献41】米国特許第４，４８５，０４５号

【特許文献42】米国特許第４，５４４，５４５号

【特許文献43】米国特許第５，０１３，５５６号

【特許文献44】米国特許第３，７７３，９１９号

【特許文献45】米国特許第９，８０９，５７９号

【特許文献46】米国特許第１０，０７１，９９２号

【特許文献47】米国仮特許出願第６２／３７７，１３７号

【特許文献48】ＷＯ２００９０１６４６２

【特許文献49】ＷＯ１９９９／５７１２５

【非特許文献】

【0012】

【非特許文献1】Ｓａｎｙａｌら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２０１５；６１（４）：１３９２～１４０５

【非特許文献2】ＥＡＳＬ－ＥＡＳＤ－ＥＡＳＯ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．２０１６；６４（６）：１３８８～１４０２

【非特許文献3】Ｄａｙ ＣおよびＪａｍｅｓ Ｏ．、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．１９９８；２７（６）：１４６３～６

【非特許文献4】Ｓｏｒｅｎｓｅｎら、Ｌａｎｃｅｔ．１９８４；２（８３９７）：２４１～４

【非特許文献5】Ｗａｎｌｅｓｓ ＩおよびＬｅｎｔｚ Ｊ、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １９９０；１２（５）：１１０６～１０

【非特許文献6】Ｒｅｅｖｅｓ Ｈら、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９６；２５（５）：６７７～８３

【非特許文献7】Ｃｏｈｅｎ ＪＣら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１１；３３２（６０３７）：１５１９～１５２３

【非特許文献8】Ｓａｇｇｅｒｓｏｎ Ｄ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ．２００８；２８：２５３～７２

【非特許文献9】Ｗａｉｔｅ ＭおよびＷａｋｉｌ ＳＪ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９６２；２３７：２７５０～２７５７

【非特許文献10】Ｂｅｒｏｄ Ｌら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２０１４；２０（１１）：１３２７～３３

【非特許文献11】Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ＤＡら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４；５７（２４）：１０５１２～１０５２６

【非特許文献12】Ｋｉｍ ＣＷら、Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ．２０１７；２６、３９４～４０６

【非特許文献13】Ｓｔｉｅｄｅ Ｋら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２０１７；６６（２）：３２４～３３４

【非特許文献14】Ｌａｗｉｔｚ ＥＪら、Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．２０１８（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｇｈ．２０１８．０４．０４２）

【非特許文献15】Ｒａｕ Ｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６；１９６（１）：９７～１０５

【非特許文献16】Ｒｏｓｓら、２０１９

【非特許文献17】Ｃｏｌｅｍａｎ，Ｒ．Ａ．およびＭａｓｈｅｋ，Ｄ．Ｇ．２０１１．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１１１：６３５９～６３８６

【非特許文献18】Ｅｒｉｏｎ，Ｄ．Ｍ．およびＳｈｕｌｍａｎ，Ｇ．Ｉ．２０１０．Ｎａｔ Ｍｅｄ １６：４００～４０２

【非特許文献19】Ｃｈｏｉ，Ｓ．Ｈ．およびＧｉｎｓｂｅｒｇ，Ｈ．Ｎ．２０１１．Ｔｒｅｎｄｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２２：３５３～３６３

【非特許文献20】Ｓｔ－Ｐｉｅｒｒｅ，Ａ．Ｃ．ら、２００５．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２５：５５３～５５９

【非特許文献21】Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、２００７．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８２：２２６７８～２２６８８

【非特許文献22】Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６、１～１９（１９７７）

【非特許文献23】Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈ著（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００２）

【非特許文献24】Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｌｉｄｓ、Ｋ．Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓ著（Ｈ．Ｇ．Ｂｒｉｔｔａｉｎ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、１９９５）

【非特許文献25】Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ、１７、１８８９～１８９６、Ｏ．ＡｌｍａｒｓｓｏｎおよびＭ．Ｊ．Ｚａｗｏｒｏｔｋｏ著（２００４）

【非特許文献26】Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ、６４（８）、１２６９～１２８８、Ｈａｌｅｂｌｉａｎ著（１９７５年８月）

【非特許文献27】Ｐｒｏ－ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第１４巻、ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ（Ｔ ＨｉｇｕｃｈｉおよびＷ Ｓｔｅｌｌａ）

【非特許文献28】「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ」、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、１９８７（Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）

【非特許文献29】「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ著（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５）

【非特許文献30】Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１

【非特許文献31】Ｌｏｕｉｓ Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第１～１９巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９６７～１９９９年版）

【非特許文献32】Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎｓ Ｈａｎｄｂｕｃｈ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ、第４版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ編、Ｂｅｒｌｉｎ

【非特許文献33】Ｂｅｒｇｍａｎら、（２０１８）Ｊ．ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、第６８巻、Ｓ５８２

【非特許文献34】Ｄｒｅｓｃｈｅｒ，Ｈ．ら（「Ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｔｅｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＡＦＬＤ）ａｎｄ ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ （ＮＡＳＨ）、Ｃｅｌｌｓ ２０１９、８、８４５）

【非特許文献35】Ｒａｔｚｉｕ、Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ ｆｏｒ ｎｏｎ－ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ ＮＡＳＨ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒｉａｌｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、２０１８、６８．３５３～３６１

【非特許文献36】Ｚｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３～３８１（２００７）

【非特許文献37】Ｄｅｍｏｎｇ，Ｄ．Ｅ．ら、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００８、４３、１１９～１３７

【非特許文献38】Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００９、４４、１４９～１７０

【非特許文献39】Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ，Ａ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇｓ ２００９、１０（４）３５９～３６４

【非特許文献40】Ｚｈｏｎｇ，Ｍ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１０、１０（４）、３８６～３９６

【非特許文献41】Ｍｅｄｉｎａ，Ｊ．Ｃ．、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、４３、７５～８５

【非特許文献42】Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｐ．Ａ．、Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｂ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔ、２０１０、２０（１２）、１６２７～５１

【非特許文献43】Ｃｏｈｅｎ Ｊ．Ｃ．ら、２０１１、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３３２、１５１９～１５２３

【非特許文献44】Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｆ．Ｗ．Ｂ．およびＧｒｉｆｆｉｎ Ｊ．Ｌ．、２０１６、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．、９１、４５２～４６８

【非特許文献45】Ｌａｍｂｅｒｔ Ｊ．Ｅ．およびＲａｍｏｓ－Ｒｏｍａｎ，Ｍ．Ａ．、２０１４、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１４６、７２６～７３５

【非特許文献46】Ｙｅｎ，Ｃ．Ｌ．ら、２００８、Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、４９、２２８３～２３０１

【非特許文献47】Ｂｕｈｍａｎ，Ｋ．Ｋ．ら、２００２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７、２５４７４～２５４７９

【非特許文献48】Ｃａｓｅｓ，Ｓ．ら、２００１、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７６、３８８７０～３８８７６

【非特許文献49】Ｙｕ，Ｘ．Ｘ．ら、２００５、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、４２、３６２～３７１

【非特許文献50】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ Ｍｄ、第２０版、２０００

【非特許文献51】Ｓｈａｌａｅｖａ，Ｍ．ら、２００８、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、９７、２５８１～２６０６

【非特許文献52】Ｏｂａｃｈ，Ｒ．Ｓ．ら、２００９、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．、３６、１３８５～１４０５

【非特許文献53】Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ａ．ら、２０１５、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５８．５６９１～５６９８

【非特許文献54】Ｄｉ，Ｌ．ら、２０１２、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．、４０、１８６０～１８６５

【非特許文献55】Ｄｉ，Ｌ．ら、２０１３、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．、４１、２０１８～２０２３

【非特許文献56】Ｄｉ，Ｌ．ら、２０１２、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５７、４４１～４４８

【非特許文献57】Ｋｌｅｉｎ，Ｓ．２０１０、Ｔｈｅ ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ、１２、３９７～４０６

【非特許文献58】Ｄｉ，Ｌ．ら、２０１２、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．Ｔｏｄａｙ、１７．４８６～４９５

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0013】

それにもかかわらず、ＤＧＡＴ２阻害活性を有し、本明細書において記述される病気の処置、予防またはその兆候の削減において有用な医薬作用物質が依然として必要である。その上、本明細書において記述されるＤＧＡＴ２化合物（ＤＧＡＴ２阻害剤）の組合せを含有し、同じまたは別個の組成物中に、ＡＣＣ阻害剤４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩を含む医薬、例えば経口医薬が依然として必要である。本明細書において記述される具体的な組合せは、既存のニーズを満たす。

【課題を解決するための手段】

【0014】

本発明は、治療有効量の約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤とを含む医薬組成物を対象とする。

【0015】

本発明は、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む医薬組成物も対象とする。

【0016】

本発明は、治療有効量約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、治療有効量の約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む医薬組成物も対象とする。

【0017】

本発明は、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎または肝硬変および肝細胞癌を伴う非アルコール性脂肪性肝炎を処置するための方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を含む第１の組成物を、治療有効量の４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩を含む第２の組成物と組み合わせて投与するステップを含む方法も対象とする。

【0018】

先述の概要および下記の詳細な記述はいずれも、例示的かつ説明的なものにすぎず、特許請求される通りの本発明の制限ではないことを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】Ｃｕ放射線源が装備されたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ４エンデバー回折計で行われた実施例２６（化合物Ａ）の形態１の例証的なＰＸＲＤパターンを示す図である。

【図2】ＦＴ－ＩＲベンチに取り付けられたＮｉｃｏｌｅｔ ＮＸＲ ＦＴ－ラマンアクセサリーを使用して収集した実施例２６（化合物Ａ）の形態１の例証的なラマンスペクトルを示す図である。

【図3】ＢｒｕｋｅｒバイオスピンアバンセＩＩＩ ５００ＭＨｚ（^１Ｈ周波数）ＮＭＲ分光計内に位置付けられたＢｒｕｋｅｒバイオスピンＣＰＭＡＳプローブで行われた実施例２６（化合物Ａ）の形態１の例証的な^１３Ｃ ｓｓＮＭＲパターンを示す図である。

【図4】Ｃｕ放射線源が装備されたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ４エンデバー回折計で行われた実施例２６（化合物Ａ）の形態２の例証的なＰＸＲＤパターンを示す図である。

【図5】ＦＴ－ＩＲベンチに取り付けられたＮｉｃｏｌｅｔ ＮＸＲＦＴ－ラマンアクセサリーを使用して収集した実施例２６（化合物Ａ）の形態２の例証的なラマンスペクトルを示す図である。

【図6】ＢｒｕｋｅｒバイオスピンアバンセＩＩＩ ５００ＭＨｚ（^１Ｈ周波数）ＮＭＲ分光計内に位置付けられたＢｒｕｋｅｒバイオスピンＣＰＭＡＳプローブを使用して行われた実施例２６（化合物Ａ）の形態２の例証的な^１３Ｃ ｓｓＮＭＲパターンを示す図である。

【図7】実施例２６（化合物Ａ）の形態２の例証的な単結晶構造を示す図である。

【図8】給餌状態で測定された、西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける血漿トリグリセリドレベルに対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図9】絶食状態で測定された、西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける血漿トリグリセリドレベルに対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図10】西洋食給餌ラットにおけるＳＲＥＢＰ－１核局在化に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図11】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的にはアセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ１）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図12】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的には脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳＮ）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図13】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的にはステロール－ＣｏＡデサチュラーゼ（ＳＣＤ１）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図14】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的にはステロール応答エレメント結合タンパク質１ｃ（ＳＲＥＢＰ－１ｃ）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図15】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的にはプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図16】西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける肝臓トリグリセリドレベルに対する化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図17】コリン欠乏および高脂肪食（ＣＤＡＨＦＤ）給餌雄ウィスターハンラットにおける肝臓炎症および線維症のマーカーである肝臓の弾性に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図18】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおける筋線維芽細胞活性化および線維形成のマーカーである肝臓のアルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）免疫組織化学に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた、経口投与の効果をまとめた図である。

【図19】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおける肝臓のピクロシリウス（Ｐｉｃｏｓｉｒｉｕｓ）レッド染色に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図20】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおける肝臓のアルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）遺伝子発現に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図21】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおける肝臓のコラーゲン１Ａ１遺伝子発現に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図22】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおけるイオン化カルシウム結合アダプター分子１染色に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図23a】本明細書において記述される第２Ａ相研究のための処置アーム（ａｒｍ）によるＷＬＦデータの箱ひげ図を示す図である。

【図23b】３０％以上の肝臓脂肪の低減がある対象の％を示す図である。

【図23c】５０％以上の肝臓脂肪の低減がある対象の％を示す図である。

【図24】本明細書において記述される第２Ａ相研究のための血清トリグリセリドにおけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図25a】本明細書において記述される第２Ａ相研究のためのアラニン（ａｌａｎｉｎｉｎｅ）アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）におけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図25b】本明細書において記述される第２Ａ相研究のためのアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）におけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図25c】本明細書において記述される第２Ａ相研究のためのアルカリフォスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｔａｓｅ）におけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図25d】本明細書において記述される第２Ａ相研究のためのガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）におけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図26】実施例４、形態１を示す特徴的なｘ線粉末回折パターンの図である（縦軸：強度（ＣＰＳ）；横軸：２シータ（度））。

【図27】実施例４、塩酸塩形態１を示す特徴的なｘ線粉末回折パターンの図である（縦軸：強度（ＣＰＳ）；横軸：２シータ（度））。

【図28】実施例４、ｐ－トルエンスルホン酸塩、無水物、形態１を示す特徴的なｘ線粉末回折パターンの図である（縦軸：強度（ＣＰＳ）；横軸：２シータ（度））。

【図29】西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける血漿トリグリセリドに対する実施例４の複数回用量効果をプロットした図である（縦軸：血漿トリグリセリド（ｍｇ／ｄＬ）、横軸：西洋食ＢＩＤ投薬（ｍｇ／ｋｇ））。

【図30】西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける肝臓トリグリセリドに対する実施例４の複数回用量効果をプロットした図である（縦軸：肝臓トリグリセリド（μｇ／ｍｇ）、横軸：西洋食ＢＩＤ投薬（ｍｇ／ｋｇ））。

【図31】調製Ｐ１、形態１を示す特徴的なｘ線粉末回折パターンの図である（縦軸：強度（ＣＰＳ）；横軸：２シータ（度））。

【発明を実施するための形態】

【0020】

本発明は、本発明の例示的な実施形態の下記の詳細な記述およびその中に含まれる例を参照することにより、より容易に理解され得る。

【0021】

本発明は、作製のための具体的な合成方法に限定されず、それらは当然変動し得ることを理解されたい。本明細書において使用される術語は、特定の実施形態を記述することのみを目的とし、限定的であることを意図したものではないことも理解されたい。本明細書においておよびこの後の請求項において、若干数の用語を参照することになり、これらは下記の意味を有すると定義されるものとする。

【0022】

本明細書において使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は、１つまたは複数を意味し得る。請求項において使用される場合、語「を含む」と併せて使用される際は、語「ａ」または「ａｎ」は、１つまたは１つ超を意味し得る。本明細書において使用される場合、「別の」は、少なくとも第２またはそれ以上を意味し得る。

【0023】

用語「約」は、それが表す公称値のプラスまたはマイナス１０％の近似を表示する相対的な用語を指す。本開示の分野では、このレベルの近似は、該値がより狭い範囲を必要とするように具体的に述べられているのでない限り、適切である。

【0024】

「化合物」は、本明細書において使用される場合、本明細書において記述される化合物、または、配座異性体（例えば、シスおよびトランス異性体）およびすべての光学異性体（例えば、鏡像異性体およびジアステレオマー）、そのような異性体のラセミ、ジアステレオマーおよび他の混合物、ならびに溶媒和物、水和物、同形体、多形体、互変異性体、エステル、塩形態およびプロドラッグを含む、任意の薬学的に許容できる誘導体もしくは変化物を含む。表現「プロドラッグ」は、投与後に何らかの化学的または生理的プロセスを介してインビボで薬物を放出する薬物前駆体である化合物を指す（例えば、プロドラッグが生理的ｐＨにされてまたは酵素作用を介して所望の薬物形態に変換される）。例示的なプロドラッグは、開裂時に対応する遊離酸を放出し、本発明の化合物のそのような加水分解性エステル形成残基は、カルボキシル部分を有するものを含むがこれらに限定されず、ここで、遊離水素は、（Ｃ_１～Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_２～Ｃ_７）アルカノイルオキシメチル、４から９個までの炭素原子を有する１－（アルカノイルオキシ）エチル、５から１０個までの炭素原子を有する１－メチル－１－（アルカノイルオキシ）－エチル、３から６個までの炭素原子を有するアルコキシカルボニルオキシメチル、４から７個までの炭素原子を有する１－（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、５から８個までの炭素原子を有する１－メチル－１－（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、３から９個までの炭素原子を有するＮ－（アルコキシカルボニル）アミノメチル、４から１０個までの炭素原子を有する１－（Ｎ－（アルコキシカルボニル）アミノ）エチル、３－フタリジル、４－クロトノラクトニル、ガンマ－ブチロラクトン－４－イル、ジ－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～Ｃ_２）アルキルアミノ（Ｃ_２～Ｃ_３）アルキル（β－ジメチルアミノエチル等）、カルバモイル－（Ｃ_１～Ｃ_２）アルキル、Ｎ，Ｎ－ジ（Ｃ_１～Ｃ_２）アルキルカルバモイル－（Ｃ_１～Ｃ_２）アルキルおよびピペリジノ－、ピロリジノ－またはモルホリノ（Ｃ_２～Ｃ_３）アルキルによって置きかえられている。

【0025】

用語「アルキル」は、単独でまたは組み合わせて、直鎖状または分枝鎖状であってよい、式ＣｎＨ２ｎ＋１の非環式飽和炭化水素基を意味する。そのような基の例は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチルおよびｔ－ブチルを含むがこれらに限定されない。アルキルおよび種々の他の炭化水素含有部分からなる炭素原子は、該部分における炭素原子の下限および上限の数字を指定する接頭辞によって指し示される、すなわち、接頭辞Ｃｉ～Ｃｊは、境界も含めて整数「ｉ」から整数「ｊ」炭素原子の部分を指し示す。故に、例えば、Ｃ_１～Ｃ_３アルキルは、境界も含めて１から３個の炭素原子のアルキルを指す。

【0026】

「フルオロアルキル」は、１、２または３個のフルオロ原子で置換されている、本明細書で定義されている通りのアルキルを意味する。例示的な（Ｃ_１）フルオロアルキル化合物は、フルオロメチル、ジフルオロメチルおよびトリフルオロメチルを含み、例示的な（Ｃ_２）フルオロアルキル化合物は、１－フルオロエチル、２－フルオロエチル、１，１－ジフルオロエチル、１，２－ジフルオロエチル、１，１，１－トリフルオロエチル、１，１，２－トリフルオロエチル等を含む。

【0027】

「ヒドロキシアルキル」は、１個の原子で置換されている、本明細書で定義されている通りのアルキルを意味する。例示的なヒドロキシアルキル化合物は、ヒドロキシメチル、１－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシエチル等を含む。

【0028】

「アルコキシ」が意味するのは、オキシを介して結合している直鎖飽和アルキルまたは分枝鎖飽和アルキルである。そのようなアルコキシ基（指定された長さは特定の例を包含すると仮定する）の例示は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、第三級ブトキシ、ペントキシ、イソペントキシ、ネオペントキシ、第三級ペントキシ、ヘキソキシ、イソヘキソキシ、ヘプトキシおよびオクトキシである。

【0029】

「フルオロアルコキシ」が意味するのは、１、２または３個のフルオロ原子で置換されている、本明細書で定義されている通りのアルコキシである。例示的な（Ｃ_１）フルオロアルコキシ化合物は、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシおよびトリフルオロメトキシを含み、例示的な（Ｃ_２）フルオロアルキル化合物は、１－フルオロエトキシ、２－フルオロエトキシ、１，１－ジフルオロエトキシ、１，２－ジフルオロエトキシ、１，１，１－トリフルオロエトキシ、１，１，２－トリフルオロエトキシ等を含む。

【0030】

「患者」は、例えば、モルモット、マウス、ラット、スナネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、サル、チンパンジーおよびヒト等の温血動物を指す。

【0031】

用語「薬学的に許容できる」は、患者への投与に好適である、物質（例えば、本発明の化合物）およびその任意の塩、または本発明の物質もしくは塩を含有する組成物を意味する。

【0032】

本明細書において使用される場合、表現「反応不活性溶媒」および「不活性溶媒」は、所望生成物の収量に悪影響を及ぼす方式で、出発材料、試薬、中間体または生成物と相互作用しない、溶媒またはその混合物を指す。

【0033】

本明細書において使用される場合、下記の用語は、医薬作用物質の投与のための一般的な意味を有する：ＱＤは１日１回を意味し、ＢＩＤは１日２回を意味する。

【0034】

本明細書において使用される場合、用語「選択性」または「選択的」は、第２のアッセイにおける同じ化合物の効果と比較した、第１のアッセイにおける化合物のより優れた効果を指す。例えば、「消化管選択的」化合物では、第１のアッセイは腸における化合物の半減期についてのものであり、第２のアッセイは肝臓における化合物の半減期についてのものである。

【0035】

「治療有効量」は、（ｉ）特定の疾患、状態もしくは障害を処置するもしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状を減衰させる、向上させるもしくは排除する、または（ｉｉｉ）本明細書において記述される特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状の発症を予防するもしくは遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。

【0036】

用語「処置すること」、「処置する」または「処置」は、本明細書において使用される場合、予防的、すなわち、防護的；緩和的処置、すなわち、患者の疾患（または状態）または疾患（または状態）に関連する任意の組織損傷の進行を、和らげる、緩和するまたは減速させる；処置が開始されたら患者の疾患（または状態）が緩和されるだけでなく疾患（または状態）に関連する任意の組織損傷がより良好な状態になる好転を内包する。この後者は、例えば、限定ではないが、下記のいずれか１つまたは複数から起こり得る：肝生検に基づくＮＡＳＨ消散のおよび／もしくは線維症スコアにおける改善からの実証；肝硬変、肝細胞癌および／もしくは他の肝臓関連の転帰への進行の発生率が低いこと；非アルコール性脂肪性肝炎活性の血清もしくは撮像ベースのマーカーのレベルの低減もしくは改善；非アルコール性脂肪性肝炎疾患活動性の低減もしくは改善；または非アルコール性脂肪性肝炎の医学的結果における低減。

【0037】

組成物
第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物

【0038】

【化1】

［式中、
Ｒ^１は、Ｈまたはフルオロであり、
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびＲ^５は、Ｈ、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_３）フルオロアルキル、（Ｃ_１～Ｃ_３）ヒドロキシアルキルおよび－（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキル－（Ｃ_１～Ｃ_２）アルコキシからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は、Ｈ、フルオロ、ヒドロキシル、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_３）フルオロアルキル、（Ｃ_１～Ｃ_３）ヒドロキシアルキル、（Ｃ_１～Ｃ_２）アルコキシ、（Ｃ_１～Ｃ_２）フルオロアルコキシおよび－（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキル－（Ｃ_１～Ｃ_２）アルコキシからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９のうちの０、１または２つは、Ｈ以外である］
または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を対象とする。

【0039】

第２の態様では、本発明は、式（ＩＩ）の化合物

【0040】

【化2】

［式中、
Ｒ^１は、Ｈまたはフルオロであり、
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびＲ^５は、Ｈ、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_３）フルオロアルキル、（Ｃ_１～Ｃ_３）ヒドロキシアルキルおよび－（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキル－（Ｃ_１～Ｃ_２）アルコキシからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は、Ｈ、フルオロ、ヒドロキシル、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１～Ｃ_３）フルオロアルキル、（Ｃ_１～Ｃ_３）ヒドロキシアルキル、（Ｃ_１～Ｃ_２）アルコキシ、（Ｃ_１～Ｃ_２）フルオロアルコキシおよび－（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキル－（Ｃ_１～Ｃ_２）アルコキシからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、Ｈおよび重水素からそれぞれ独立して選択され、
Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９のうちの０、１または２つは、Ｈ以外である］
または薬学的に許容できるその塩を含む組成物にさらを対象とする。

【0041】

本発明の第１および第２の態様の一実施形態は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物［式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびＲ^５は、Ｈおよび（Ｃ_１）フルオロアルキルからそれぞれ独立して選択され、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９は、Ｈ、（Ｃ_１）フルオロアルキルおよびフルオロからそれぞれ独立して選択され、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８およびＲ^９のうちの０、１または２つは、Ｈ以外である］または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を含む。

【0042】

本発明の別の実施形態は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物［式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は、Ｈであり、Ｒ^８およびＲ^９は、Ｈ、（Ｃ_１）フルオロアルキルおよびフルオロから独立して選択され、Ｒ^８およびＲ^９のうちの少なくとも一方は、（Ｃ_１）フルオロアルキルまたはフルオロである］または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を含む。

【0043】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物［式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^８およびＲ^９は、Ｈであり、Ｒ^６およびＲ^７は、Ｈ、（Ｃ_１）フルオロアルキルおよびフルオロからそれぞれ独立して選択され、Ｒ^６およびＲ^７のうちの少なくとも一方は、（Ｃ_１）フルオロアルキルまたはフルオロである］または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を含む。

【0044】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物［式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^９は、Ｈであり、Ｒ^７およびＲ^８は、Ｈ、（Ｃ_１）フルオロアルキルおよびフルオロからそれぞれ独立して選択され、Ｒ^７およびＲ^８のうちの少なくとも一方は、（Ｃ_１）フルオロアルキルまたはフルオロである］または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を含む。

【0045】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物［式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^８およびＲ^９は、Ｈであり、Ｒ^７は、（Ｃ_１）フルオロアルキルまたはフルオロである］または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を含む。

【0046】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物［式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^８およびＲ^９は、Ｈであり、Ｒ^７は、フルオロである］または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を含む。

【0047】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、
２－（５－（（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミド；
２－（５－（（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミド；
２－（５－（（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミド；
２－（５－（（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミド；
２－（５－（（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミド；および
２－（５－（（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミド；
から選択される化合物または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を含む。

【0048】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、構造：

【0049】

【化3】

を有する化合物または薬学的に許容できるその塩を含む組成物と、前記化合物または薬学的に許容できるその塩を含む結晶とを含む。

【0050】

別の実施形態では、組成物は、２－（５－（（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（５－フルオロピペリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミドである化合物を含む。

【0051】

あらゆる例または薬学的に許容できるその塩は、個々に、または、任意の数の本明細書において記述されるありとあらゆる実施形態と任意の組合せで一緒に群分けされて、特許請求され得る。

【0052】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、医薬として使用するための、特に、前記医薬が、そのような処置を必要とするヒト等の哺乳動物に、治療有効量を投与することを含む、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎または肝硬変および肝細胞癌を伴う非アルコール性脂肪性肝炎の処置における使用のためのものである、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を含む組成物の使用を含む。

【0053】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、そのような処置を必要とするヒト等の哺乳動物に、治療有効量を投与することを含む、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎または肝硬変および肝細胞癌を伴う非アルコール性脂肪性肝炎を処置する際の医薬の製造のための、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を含む組成物の使用を含む。

【0054】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、医薬として使用するための、特に、前記医薬が、そのような処置を必要とするヒト等の哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を投与することを含む、心不全、うっ血性心不全、冠状動脈性心疾患、末梢血管疾患、腎血管疾患、肺高血圧症、血管炎、急性冠症候群および心血管リスクの修正の処置における使用のためのものである、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を含む組成物の使用を含む。

【0055】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、そのような処置を必要とするヒト等の哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を投与することを含む、心不全、うっ血性心不全、冠状動脈性心疾患、末梢血管疾患、腎血管疾患、肺高血圧症、血管炎、急性冠症候群および心血管リスクの修正を処置する際の医薬の製造のための、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を含む組成物の使用を含む。

【0056】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、医薬として使用するための、特に、前記医薬が、そのような処置を必要とするヒト等の哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を投与することを含む、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早期発症型２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年発症型非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発生成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠性糖尿病、冠状動脈性心疾患、虚血性脳卒中、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞、脂質異常症、食後脂肪血症、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝性アシドーシス、ケトン症、関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性神経障害、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝異常、皮膚および結合組織障害、足潰瘍および潰瘍性結腸炎、内皮機能不全および血管コンプライアンス異常、高アポＢリポタンパク質血症、ならびにメープルシロップ尿症の処置における使用のためのものである、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を含む組成物の使用を含む。

【0057】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、そのような処置を必要とするヒト等の哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を投与することを含む、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早期発症型２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年発症型非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発生成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠性糖尿病、冠状動脈性心疾患、虚血性脳卒中、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞、脂質異常症、食後脂肪血症、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝性アシドーシス、ケトン症、関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性神経障害、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝異常、皮膚および結合組織障害、足潰瘍および潰瘍性結腸炎、内皮機能不全および血管コンプライアンス異常、高アポＢリポタンパク質血症、ならびにメープルシロップ尿症を処置する際の医薬の製造のための、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を含む組成物の使用を含む。

【0058】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、医薬として使用するための、特に、前記医薬が、そのような処置を必要とするヒト等の哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を投与することを含む、肝細胞癌、腎臓腎明細胞癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、結腸直腸腺癌、中皮腫、胃腺癌、副腎皮質癌、乳頭状腎細胞癌、頸部および子宮頚管内の癌（ｃｅｒｖｉｃａｌ ａｎｄ ｅｎｄｏｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膀胱尿路上皮癌、または肺腺癌の処置における使用のためのものである、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を含む組成物の使用を含む。

【0059】

本発明の第１および第２の態様の別の実施形態は、そのような処置を必要とするヒト等の哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を投与することを含む、肝細胞癌、腎臓腎明細胞癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、結腸直腸腺癌、中皮腫、胃腺癌、副腎皮質癌、乳頭状腎細胞癌、頸部および子宮頚管内の癌、膀胱尿路上皮癌、または肺腺癌を処置する際の医薬の製造のための、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩を含む組成物の使用を含む。

【0060】

本発明の組成物は、不斉またはキラル中心に本明細書において記述される化合物を含有してよく、したがって、異なる立体異性形態で存在し得る。別段の定めがない限り、本発明の化合物のすべての立体異性形態およびラセミ混合物を含むそれらの混合物は、本発明の一部を形成することが意図されている。加えて、本発明は、すべての幾何および位置異性体を内包する。例えば、本発明の化合物が二重結合または縮合環を組み込む場合、シスおよびトランス形態の両方ならびに混合物は、本発明の範囲内に内包される。

【0061】

キラル化合物（およびそのキラル前駆体）は、不斉固定相を持つ、ならびに、０から５０％までのイソプロパノール、典型的には２から２０％まで、および０から５％までのアルキルアミン、典型的には０．１％のジエチルアミン（ＤＥＡ）またはイソプロピルアミンを含有する炭化水素、典型的にはヘプタンまたはヘキサンからなる移動相を持つ樹脂上で、クロマトグラフィー、典型的には高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）を使用して、鏡像異性的に富化された形態で取得され得る。溶離液の濃縮は、富化混合物をもたらす。ＳＦＣが使用される場合、移動相は、２～５０％のアルコール、例を挙げると、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールを含有する、超臨界流体、典型的には二酸化炭素からなっていてよい。

【0062】

ジアステレオマー混合物は、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶によって等、当業者に周知の方法によって、それらの物理化学的差異に基づいてそれらの個々のジアステレオ異性体に分離され得る。鏡像異性体は、適切な光学活性化合物（例えば、キラルアルコールまたはモーシェル酸クロリド等のキラル補助基）との反応によって鏡像異性混合物をジアステレオマー混合物に変換し、ジアステレオ異性体を分離し、個々のジアステレオ異性体を対応する純粋な鏡像異性体に変換する（例えば、加水分解する）ことによって、分離することができる。鏡像異性体は、キラルＨＰＬＣカラムの使用によって分離することもできる。代替として、特異的な立体異性体は、光学活性出発材料を使用することによって、光学活性試薬、基質、触媒もしくは溶媒を使用する不斉合成によって、または１つの立体異性体を不斉転換によって他のものに変換することによって、合成されてよい。

【0063】

本発明の組成物が、２つ以上の立体中心を保有し絶対または相対立体化学が名称に記されている化合物を含有する場合、呼称ＲおよびＳは、各分子について従来のＩＵＰＡＣ番号スキームに従う番号の昇順（１、２、３等）の各立体中心をそれぞれ指す。本発明の化合物が、１つまたは複数の立体中心を保有し、立体化学が名称にも構造にも記されていない場合、該名称または構造は、ラセミ形態を含む化合物のすべての形態を包含するように意図されていることが理解される。

【0064】

本発明の組成物に含有される化合物は、オレフィン様二重結合を含有してよい。そのような結合が存在する場合、本発明の化合物は、シスおよびトランス配置としてならびにそれらの混合物として存在する。用語「シス」は、２つの置換基の互いおよび環平面に対する配向（両方「上」または両方「下」のいずれか）を指す。同様に、用語「トランス」は、２つの置換基の互いおよび環平面に対する配向（置換基は環の反対側にある）を指す。

【0065】

本明細書において記述される中間体および化合物は、異なる互変異性形態で存在し得ることも可能であり、すべてのそのような形態は本発明の範囲内に内包される。用語「互変異性体」または「互変異性形態」は、低エネルギー障壁を介して相互交換可能である異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピック互変異性体としても公知）は、ケト－エノールおよびイミン－エナミン異性化等のプロトンの移動を介する相互変換を含む。

【0066】

原子価互変異性体は、結合性電子のいくつかの再編成による相互変換を含む。

【0067】

本明細書において記述されるすべての化合物の範囲内に含まれ、本発明の組成物に含有されるものは、複数種の異性を呈する化合物およびその１つまたは複数の混合物を含む、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物のすべての立体異性体、幾何異性体および互変異性形態を含む。対イオンが光学活性である酸付加もしくは塩基塩、例えば、Ｄ－乳酸もしくはＬ－リジン、またはラセミである該塩、例えば、ＤＬ－酒石酸またはＤＬ－アルギニンも含まれる。

【0068】

本発明の組成物は、１個または複数の原子が、同じ原子数であるが自然界において通常見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置きかえられている、式（Ｉ）または（ＩＩ）のすべての薬学的に許容できる同位体標識化合物を含む。

【0069】

本発明の化合物への包含に好適な同位体の例は、^２Ｈおよび^３Ｈ等の水素、^１１Ｃ、^１３Ｃおよび^１４Ｃ等の炭素、^３６Ｃｌ等の塩素、^１８Ｆ等のフッ素、^１２３Ｉ、^１２４Ｉおよび^１２５Ｉ等のヨウ素、^１３Ｎおよび^１５Ｎ等の窒素、^１５Ｏ、^１７Ｏおよび^１８Ｏ等の酸素、^３２Ｐ等のリン、ならびに^３５Ｓ等の硫黄の同位体を含む。

【0070】

式（Ｉ）または（ＩＩ）のある特定の同位体標識化合物、例えば、放射性同位体を組み込んだものは、薬物および／または基質組織分布研究において有用である。放射性同位体トリチウム、すなわち^３Ｈ、および炭素－１４、すなわち^１４Ｃは、それらの組み込みの容易性および即時の検出手段を考慮すると、この目的のために特に有用である。

【0071】

重水素、すなわち^２Ｈ等のより重い同位体による置換は、より優れた代謝安定性から生じるある特定の治療上の利点、例えば、インビボ半減期の増大または必要投薬量の低減をもたらし得、故にいくつかの状況において好ましい場合がある。

【0072】

^１１Ｃ、^１８Ｆ、^１５Ｏおよび^１３Ｎ等の陽電子放出同位体による置換は、基質受容体占有率を検査するための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において有用となり得る。

【0073】

式（Ｉ）または（ＩＩ）の同位体標識化合物は、概して、当業者に公知である従来の技術によって、または添付の実施例および調製において記述されているものに類似のプロセスによって、先に用いた非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して調製することができる。

【0074】

本発明の組成物に含有される化合物は、単離され、それ自体、または可能な場合その薬学的に許容できる塩の形態で使用され得る。用語「塩」は、本発明の化合物の無機および有機塩を指す。これらの塩は、化合物の最終単離および精製中にインサイチュで、または化合物を好適な有機もしくは無機酸で別個に処理し、このように形成された塩を単離することによって、調製することができる。

【0075】

用語「薬学的に許容できる塩」内に包含される塩は、概して、遊離塩基を好適な有機または無機酸と反応させて、患者への投与に好適な本発明の化合物の塩を提供することによって調製される、本発明の化合物を指す。好適な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。例は、酢酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、べシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、シクラミン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グロクロン酸塩、六フッ化リン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２－ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ピログルタミン酸塩、糖酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩およびキシナホ酸塩（ｘｉｎｏｆｏａｔｅ）を含む。例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６、１～１９（１９７７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈ著（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００２）を参照されたい。

【0076】

本発明の組成物に含有される式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物および薬学的に許容できるその塩は、非溶媒和および溶媒和形態で存在し得る。用語「溶媒和物」は、本明細書において、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と、１つまたは複数の薬学的に許容できる溶媒分子、例えばエタノールを含む分子錯体を記述するために使用される。用語「水和物」は、前記溶媒が水である場合に用いられる。

【0077】

有機水和物のための現在認可されている分類システムは、単離された部位、チャネルまたは金属イオン配位水和物を定義するものである。Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｌｉｄｓ、Ｋ．Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓ著（Ｈ．Ｇ．Ｂｒｉｔｔａｉｎ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、１９９５）を参照されたい。単離部位水和物は、有機分子を介在させることによって水分子が互いの直接接触から単離されているものである。チャネル水和物では、水分子が格子チャネルにあり、ここで水分子は他の水分子に隣接している。金属イオン配位水和物では、水分子は金属イオンと結合している。

【0078】

溶媒または水が密接に結合している場合、錯体は、湿度とは無関係な明確に定義された化学量論を有し得る。しかしながら、溶媒または水がチャネル溶媒和物および吸湿性化合物のように弱く結合している場合、水／溶媒含有量は、湿度および乾燥条件に依存し得る。そのような場合は、非化学量論が標準となる。

【0079】

本発明の範囲内には、薬物および少なくとも１つの他の成分が化学量論または非化学量論量で存在する、組成物における多成分錯体（塩および溶媒和物以外）の使用も含まれる。この種類の錯体は、クラスレート（薬物宿主包接錯体）および共結晶を含む。後者は、典型的には、非共有相互作用を介して互いに結合した中性分子構成要素の結晶性錯体として定義されるが、中性分子と塩との錯体であってもよい。共結晶は、融解結晶化によって、溶媒からの再結晶によって、または成分を一緒に物理的に細砕することによって調製され得る。Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ、１７、１８８９～１８９６、Ｏ．ＡｌｍａｒｓｓｏｎおよびＭ．Ｊ．Ｚａｗｏｒｏｔｋｏ著（２００４）を参照されたい。多成分錯体の一般的総説については、Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ、６４（８）、１２６９～１２８８、Ｈａｌｅｂｌｉａｎ著（１９７５年８月）を参照されたい。

【0080】

本発明の組成物は、上記で定義されている通りの式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物、下記で定義する通りの多形体およびそれらの異性体（光学、幾何および互変異性異性体を含む）、ならびに式（Ｉ）または（ＩＩ）の同位体標識化合物を含む。

【0081】

本発明の組成物に含有される化合物は、プロドラッグとして投与され得る。故に、それら自体は薬理活性をほとんどまたは全く有さない場合がある式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物のある特定の誘導体は、体内または体表に投与されると、例えば加水分解開裂によって、所望の活性を有する式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物に変換され得る。そのような誘導体を、「プロドラッグ」と称する。［プロドラッグの使用についてのさらなる情報は、「Ｐｒｏ－ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第１４巻、ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ（Ｔ ＨｉｇｕｃｈｉおよびＷ Ｓｔｅｌｌａ）ならびに「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ」、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、１９８７（Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）において見ることができる。］

【0082】

プロドラッグは、例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物中に存在する適切な官能基を、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ著（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５）において記述されている通りの「プロ部分」として当業者に公知のある特定の部分で置きかえることによって、生成することができる。

【0083】

そのようなプロドラッグのいくつかの例は、
（ｉ）式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物がアルコール官能基（－ＯＨ）、そのエステルを含有する場合、例えば、水素の（Ｃ_１～Ｃ_６）アルカノイルオキシメチルによる置きかえ、またはリン酸エステル（ＰＯ_３Ｈ_２）もしくは薬学的に許容できるその塩、および
（ｉｉ）アミノＮＨ基の水素が（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルカノイルまたは（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルコキシカルボニルでそれぞれ置きかえられている、式（Ｉ）または（ＩＩ）中に存在するアミノ官能基のアミドまたはカルバメート
を含む。

【0084】

式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物（プロドラッグを含む）、すなわち、薬物の投与時に、多くの場合、酸化または脱アルキル化によってインビボで形成される化合物の活性代謝物を含有する組成物も、本発明の範囲内に含まれる。本発明に従う代謝物のいくつかの例は、
（ｉ）式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物がメチル基を含有する場合、そのヒドロキシメチル誘導体（－ＣＨ_３→－ＣＨ_２ＯＨ）、および
（ｉｉ）式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物がアルコキシ基を含有する場合、そのヒドロキシ誘導体（－ＯＲ→－ＯＨ）
を含む。

【0085】

本発明の組成物は、１つまたは複数の結晶形態の化合物（概して「多形体」と称する）を含有してよい。多形体は、種々の条件下、例えば、再結晶のための異なる溶媒もしくは異なる溶媒混合物を使用する結晶化；異なる温度での結晶化；ならびに／または結晶化中の非常に速いから非常に遅い冷却に及ぶ種々の冷却モードによって調製され得る。多形体は、本発明の化合物を加熱または融解すること、続いて、徐または急速冷却によって取得してもよい。多形体の存在は、固体プローブＮＭＲスペクトル法、ＩＲスペクトル法、示差走査熱量測定、粉末Ｘ線回折またはそのような他の技術によって決定され得る。

【0086】

概して、本発明の組成物に含有される化合物は、化学分野で公知のものに類似のプロセスを含むプロセスによって、特に本明細書に含有される記述を踏まえて、作製することができる。本発明の化合物の製造のためのある特定のプロセスは、本発明のさらなる特色として提供され、下記の反応スキームによって例証される。他のプロセスは、実験の項において記述され得る。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の調製のための具体的な合成スキームは、以下で概説する。テトラゾールは概して高エネルギー官能基であり、テトラゾール含有分子の合成および取り扱いにおいては注意を払うべきであることに留意されたい。

【0087】

式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物の調製における最初の注記として、本明細書において記述される化合物の調製に有用な調製方法のいくつかは、遠隔官能基（例えば、式（Ｉ）または（ＩＩ）前駆体中の第一級アミン、第二級アミン、カルボキシル）の保護を必要とし得ることに留意されたい。そのような保護の必要性は、遠隔官能基の性質および調製方法の条件に応じて変動することになる。そのような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。そのような保護／脱保護方法の使用も、当業者が備える技能の範囲内である。保護基の概要およびそれらの使用については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１を参照されたい。

【0088】

例えば、ある特定の化合物は、保護しないまま放置すると、分子の他の部位における反応に干渉し得る第一級アミンまたはカルボン酸官能基を含有する。したがって、そのような官能基は、その後のステップで除去され得る適切な保護基によって保護されてよい。アミンおよびカルボン酸保護のための好適な保護基は、ペプチド合成において一般的に使用される保護基（アミンにはＮ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルおよび９－フルオレニルメチレンオキシカルボニル（ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｅｎｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）、ならびにカルボン酸には低級アルキルまたはベンジルエステル等）を含み、これらは概して、記述されている反応条件下では化学的に反応性でなく、典型的には、式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物中の他の官能基を化学的に変化させることなく除去され得る。

【0089】

本発明の組成物に含有される化合物は、化学分野で周知のものに類似のプロセスを含む合成ルートによって、特に本明細書に含有される記述を踏まえて、合成され得る。出発材料は、概して、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）等の商業的供給源から入手可能であるか、または当業者に周知の方法を使用して容易に調製される（例えば、Ｌｏｕｉｓ Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第１～１９巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９６７～１９９９年版）、またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ Ｈａｎｄｂｕｃｈ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ、第４版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ編、Ｂｅｒｌｉｎ、付録を含む（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースを介しても利用可能）に概して記述されている方法によって調製される）。本明細書において使用される化合物の多くは、大きな科学的関心および実需がある化合物に関連するまたはそれに由来し、したがって、多くのそのような化合物が、市販されているか、または文献において報告されているか、または文献において報告されている方法によって他の市販されている物質から簡単に調製される。

【0090】

個々の反応ステップの詳細な記述は、以下の実施例の項において提供される。当業者ならば、他の合成ルートを使用して化合物を合成してよいことが分かるであろう。具体的な出発材料および試薬について以下で論じるが、様々な誘導体および／または反応条件を提供するために他の出発材料および試薬で簡単に代用することができる。加えて、後述する方法によって調製される化合物の多くは、本開示を踏まえ、当業者に周知である従来の化学を使用して、さらに修飾することができる。

【0091】

本発明の第３の態様は、治療有効量の約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤とを含む医薬組成物を対象とする。ある特定の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の治療有効量は、約１０ｍｇである。ある特定の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の治療有効量は、約２０ｍｇである。ある特定の他の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の治療有効量は、約４０ｍｇである。ある特定の他の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の治療有効量は、約８０ｍｇである。

【0092】

本発明の第４の態様は、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む医薬組成物を対象とする。

【0093】

本発明の第５の態様は、治療有効量約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、治療有効量の約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む医薬組成物を対象とする。ある特定の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩は、約１０ｍｇから、約２０ｍｇから、約４０ｍｇから、または約８０ｍｇからの量で投与される。ある特定の他の実施形態では、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩は、約５ｍｇから、約１０ｍｇから、約１５ｍｇから、または約２０ｍｇからの量で投与される。ある特定の他の実施形態では、医薬組成物は、１日に１回投与される。ある特定の他の実施形態では、医薬組成物は、１日に２回投与される。

【0094】

本発明の上記で言及した態様のいずれか１つでは、医薬組成物は、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドを、構造：

【0095】

【化4】

を有する結晶または薬学的に許容できるその塩として含有してよい。ある特定の実施形態では、上記の結晶構造は、（ＣｕＫα放射線、１．５４０５６Åの波長）７．２±０．２、１４．５±０．２、１５．８±０．２および２７．７±０．２の２シータ値を含む粉末ｘ線回折パターンを有する。ある特定の実施形態では、結晶は、化合物のｐ－トルエンスルホン酸塩を含む。ある特定の他の実施形態では、結晶は、（ＣｕＫα放射線、１．５４０５６Åの波長）３．８±０．２、７．７±０．２、８．８±０．２、２２．４±０．２および２４．６±０．２の２シータ値を含む粉末ｘ線回折パターンを有する。

【0096】

本発明の上記で言及した態様のいずれか１つでは、医薬組成物は、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸を、構造：

【0097】

【化5】

の結晶性固体または薬学的に許容できるその塩としてさらに含む。ある特定の実施形態では、結晶性固体は、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸の２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール塩である。

【0098】

４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸（「化合物Ａ」とも称される）は、選択的ＡＣＣ阻害剤であり、国際出願公開第ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４１１９号の米国国内移行であるＵＳ８，８５９，５７７の実施例９において遊離酸として調製され、これらのすべては、あらゆる目的のための参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。該化合物の結晶形態は、２０１９年５月３１日にＷＯ２０１９／１０２３１１として公開された国際特許出願公開第ＰＣＴ／ＩＢ２０１８／０５８９６６号において記述されている。

【0099】

ＡＣＣ阻害剤の投与は、肝臓のトリグリセリドを低下させるプラス効果およびＮＡＳＨの処置に対する潜在的に他の有益な効果を有し得るように思われる。循環トリグリセリドレベルの増大は、肝臓ＡＣＣ阻害の機械的な結果であると報告されているが（Ｋｉｍら、２０１７）、ＤＮＬを部分的にしか阻害しないＡＣＣ阻害剤の用量は、循環トリグリセリドの上昇を生成しないことがある（Ｂｅｒｇｍａｎら、（２０１８）Ｊ．ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、第６８巻、Ｓ５８２）。ＷＯ２０１６／１１２３０５は、ＡＣＣ阻害剤を単独でまたは１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて使用して、非アルコール性脂肪肝疾患を処置する、安定させるまたはその重症度もしくは進行を減らす方法を提供する。薬学的に許容できる塩として投与されていてもよい４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸の投与は、ヒト対象で観察されたように、西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおいて循環トリグリセリドの上昇（概して血漿から測定される）をもたらす潜在性を有することが発見された。加えて、血小板の減少が４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸の投与で報告されている（Ｂｅｒｇｍａｎ，Ａ．ら、「Ｓａｆｅｔｙ， ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ， ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ａ ｌｉｖｅｒ－ｔａｒｇｅｒｔｉｎｇ ＡＣＣ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｓｉｎｇｌｅ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒａｌ ｄｏｓｅｓ」、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、２０１８年４月、第６８巻、付録１、Ｓ５８２頁。

【0100】

処置方法
肝生検は、依然としてＮＡＳＨ患者の同定のための標準であるが、炎症性肝疾患患者を同定するための非侵襲的方法が、Ｄｒｅｓｃｈｅｒ，Ｈ．ら（「Ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｔｅｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＡＦＬＤ）ａｎｄ ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ （ＮＡＳＨ）、Ｃｅｌｌｓ ２０１９、８、８４５）によって記述されている。これらの非侵襲的代理マーカーは、炎症性肝疾患（肝臓脂肪症、脂肪性肝炎および線維症）を同定するための手段および特異的療法の効能の尺度として信頼を得ることに成功している、血液検査、肝機能検査および撮像を含む。

【0101】

肝臓脂肪症（脂肪症）は、ＮＡＦＬＤにおける主要な要因である。現在存在する特異的な血清マーカーはないが、脂肪症を評価するために利用され得るいくつかの血液バイオマーカーパネルがある。これらの血液バイオマーカーは、ｉ）ＮＡＦＬＤリッジスコア（パラメーターは、ＡＬＴ、ＨＤＬ、コレステロール、トリグリセリド、ＨｂＡ１ｃ、白血球数高血圧症を含む）；ｉｉ）ＮＡＦＬＤ肝臓脂肪スコア（ＮＬＦＳ）（パラメーターは、肝臓脂肪含有量、代謝症候群、２型糖尿病、ＡＳＴ、ＡＳＴ：ＡＬＴ、空腹時インスリンを含む）；ｉｉｉ）肝臓脂肪症指数（ＨＩＳ）（パラメーターは、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＢＭＩ、糖尿病、性別を含む）；ｉｖ）脂肪肝指数（ＦＬＩ）（パラメーターは、ＢＭＩ、胴囲、トリグリセリド、γ－グルタミルトランスフェラーゼを含む）；ｖ）脂肪蓄積量指数（ＬＡＰ）（パラメーターは、性別、トリグリセリド、重量周囲を含む）；ｖｉ）脂肪肝の進行阻害（ＦＬＩＰ）アルゴリズム（パラメーターは、組織学的脂肪症、疾患活動性、線維症スコアを含む）；ｖｉｉ）ＣＨｅｋスコア（パラメーターは、年齢、ＨｂＡ１ｃ、γ－グルタミルトランスフェラーゼ、アディポネクチン、Ｍ３０を含む）；ｖｉｉｉ）ＮＡＦＬＤ線維症スコア（ＮＦＳ）（パラメーターは、ＡＳＴ：ＡＬＴ、アルブミン、血小板数、年齢、ＢＭＩ、高血糖症を含む）；ｉｘ）線維症－４－スコア（ＦＩＢ－４）（パラメーターは、ＡＳＴ、ＡＬＴ、血小板数、年齢を含む）；ｘ）ＡＳＴ対血小板比指数（ＡＰＲＩ）（パラメーターは、ＡＳＴ、血小板数を含む）；ｘｉ）ＢＡＲＤスコア（パラメーターは、ＢＭＩ、ＡＳＴ：ＡＬＴ、糖尿病を含む）；ｘｉｉ）強化された肝線維症パネル（ＥＬＦ）（パラメーターは、年齢、ＴＩＭＰ－１、ＰＩＩＩＮＰ、ヒアルロン酸を含む）；ｘｉｉｉ）Ｈｅｐａスコア（パラメーターは、ビリルビン、γ－グルタミルトランスフェラーゼ、ヒアルロン酸、α_２マクログロブリン（ｍａｃｒｏｇｌｏｂｉｌｉｎ）、年齢、ジェンダーを含む）；ｘｉｖ）フィブロテスト－フィブロＳＵＲＥ／アクチテスト（パラメーターは、α_２マクログロブリン、ハプトグロビン、γ－グルタミルトランスフェラーゼ、総ビリルビン、アポリポタンパク質Ａ１、ＡＬＴ、年齢、ジェンダーを含む）；ならびに、ｘｖ）フィブロメーターＮＡＦＬＤ指数（パラメーターは、血小板数、プロトロンビン指数、フェリチン、ＡＳＴ、ＡＬＴ、体重、年齢、バイブレーションコントロールドトランジエントエラストグラフィによって決定される肝臓剛性を含む）を含み得るがこれらに限定されない。各バイオマーカーについて同定されたパラメーターは、肝臓損傷／機能不全（例えば、ＡＳＴ、ＡＬＴ、γ－ＧＴ、血小板数、ハプトグロビン）、脂質代謝障害（例えば、コレステロール、トリグリセリド）、糖尿病（例えば、ＨｂＡ１ｃ、空腹時（ｆａｓｔｉｎ）インスリンレベル）、炎症（例えば、α_２マクログロブリン、フェリチン）の評価を援助する。

【0102】

撮像技術は、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ患者を同定するために生検および血液バイオマーカーと併せて使用することもできる。撮像技術は、超音波（例えば、造影超音波（ＣＥＵＳ））；超音波ベースのエラストグラフィ（例えば、バイブレーションコントロールドトランジエントエラストグラフィ（ＶＣＴＥ；フィブロスキャン）、リアルタイムせん断波エラストグラフィ（ＳＷＥ）、音響放射力インパルスエラストグラフィ（ＡＲＦＩ）、超音速せん断撮像（ＳＳＩ））；制御減衰パラメーター；ＭＲＩプロトン密度脂肪率（ＭＲＩ－ＰＤＦＦ）等の磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）；ならびに磁気共鳴エラストグラフィ（ＭＲＥ）を含むがこれらに限定されない。

【0103】

患者において炎症性肝疾患を同定するための上記で言及した方法および手段に加えて、ＮＡＳＨにおける第ＩＩＩ相研究のための規制当局に認められた条件付承認は、肝生検によって取得される組織学的代理マーカーに基づく。これらの一般に許容されている代理は、ｉ）線維症の悪化（すなわち、線維症段階における数値的増大）のないＮＡＳＨの消散；ｉｉ）ＮＡＳＨの悪化のない線維症における１つまたは複数の段階低減である。詳細は、Ｒａｔｚｉｕ、Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ ｆｏｒ ｎｏｎ－ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ ＮＡＳＨ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒｉａｌｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、２０１８、６８．３５３～３６１およびその中の参考文献において見られ得る。

【0104】

加えて、規制当局は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活性スコア（ＮＡＳ）におけるベースラインからの変化に目を向けている。ＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）は、肝生検の一元化された病理学者スコアリングからの、脂肪症グレード（０～３）、小葉炎症グレード（０～３）および肝細胞風船化グレード（０～２）の和に等しい複合スコアである。ＮＡＳの全体的な規模は０～８であり、より高いスコアはより重度の疾患を指し示す。転帰尺度、ＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）におけるベースラインからの変化は、－８から＋８までの可能な範囲を有し、負の値はより良好な転帰（改善）を指し示し、正の値はより悪い転帰を指し示す。ＮＡＳの構成要素は、次の通りにスコア付けされる：脂肪症グレード０＝５％未満脂肪症、１＝５～３３％脂肪症、２＝３４～６６％脂肪症、３＝６６％超脂肪症。小葉炎症グレード＝小葉炎症の量（単核、脂肪肉芽腫および多形核（ｐｍｎ）病巣を合わせたもの）：０＝０、１＝２０倍の倍率で２未満、２＝２０倍の倍率で２～４、３＝２０倍の倍率で４超。肝細胞風船化０＝なし、１＝軽度、２＝軽度を超える。

【0105】

ある特定の実施形態では、本発明は、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎または肝硬変および肝細胞癌を伴う非アルコール性脂肪性肝炎を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の、上記の態様１～５において記述されている組成物のいずれかを投与するステップを含む方法を対象とする。

【0106】

ある特定の実施形態では、本発明は、脂肪肝、アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴うアルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴うアルコール性脂肪性肝炎または肝硬変および肝細胞癌を伴うアルコール性脂肪性肝炎を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の、上記の態様１～５において記述されている組成物のいずれかを投与するステップを含む方法を対象とする。

【0107】

ある特定の実施形態では、本発明は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活性スコア（ＮＡＳ）の重症度におけるベースラインからの少なくとも１ポイントの低減のための方法であって、ヒトにおけるベースラインＮＡＳを測定するステップと、前記ヒトに、治療有効量の、上記の態様１～５において記述されている組成物のいずれかを投与するステップと、前記ヒトのＮＡＳを測定するステップとを含む方法を対象とする。

【0108】

ある特定の実施形態では、本発明は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活性スコア（ＮＡＳ）の重症度におけるベースラインからの少なくとも２ポイントの低減のための方法であって、ヒトにおけるベースラインＮＡＳを測定するステップと、前記ヒトに、治療有効量の、上記の態様１～５において記述されている組成物のいずれかを投与するステップと、前記ヒトのＮＡＳを測定するステップとを含む方法を対象とする。

【0109】

ある特定の実施形態では、本発明は、アテローム性動脈硬化、脳卒中、心筋梗塞、大動脈血管疾患、脳血管疾患、腎臓血管疾患、心不全、心房細動または冠状動脈性心疾患から選択される心血管疾患または状態を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の、上記の態様１～５において記述されている組成物を投与するステップと、前記ヒトのＮＡＳを測定するステップとを含む方法を対象とする。

【0110】

ある特定の実施形態では、本発明は、肥満、脂質異常症、２型真性糖尿病、２型真性糖尿病患者における血糖コントロール、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、インスリン抵抗性またはグルコース代謝異常から選択される代謝性疾患または状態を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の、上記の態様１～５において記述されている組成物を投与するステップと、前記ヒトのＮＡＳを測定するステップとを含む方法を対象とする。

【0111】

ある特定の実施形態では、本発明は、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、脂質異常症、冠状動脈性心疾患、高アポＢリポタンパク質血症、虚血性脳卒中、２型真性糖尿病、２型真性糖尿病患者における血糖コントロール、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝異常を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の、上記の態様１～５において記述されている組成物を投与するステップと、前記ヒトのＮＡＳを測定するステップとを含む方法を対象とする。

【0112】

固定用量組合せによる処置
第６の態様では、本発明は、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、ならびに肝硬変および肝細胞癌または代謝関連疾患を伴う非アルコール性脂肪性肝炎から選択される疾患または状態を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む、治療有効量の組成物を投与するステップを含む方法を対象とする。

【0113】

第７の態様では、本発明は、脂肪肝、アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴うアルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴うアルコール性脂肪性肝炎、ならびに肝硬変および肝細胞癌または代謝関連疾患を伴うアルコール性脂肪性肝炎から選択される疾患または状態を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む、治療有効量の組成物を投与するステップを含む方法を対象とする。

【0114】

第８の態様では、本発明は、アテローム性動脈硬化、脳卒中、心筋梗塞、大動脈血管疾患、脳血管疾患、腎臓血管疾患、心不全、心房細動または冠状動脈性心疾患から選択される心血管疾患または状態を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む、治療有効量の組成物を投与するステップを含む方法を対象とする。

【0115】

第９の態様では、本発明は、肥満、脂質異常症、２型真性糖尿病、２型真性糖尿病患者における血糖コントロール、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、インスリン抵抗性またはグルコース代謝異常から選択される代謝性疾患または状態を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに、治療有効量約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、約５ｍｇから約６０ｍｇまでの４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩とを含む、治療有効量の組成物を投与するステップを含む方法を対象とする。

【0116】

態様６から９のいずれか１つにおけるある特定の実施形態では、組成物は、１日に１回投与される。ある特定の他の実施形態では、組成物は、１日に２回投与される。

【0117】

態様６から９のいずれか１つにおけるある特定の実施形態では、医薬組成物は、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドを、構造：

【0118】

【化6】

を有する結晶または薬学的に許容できるその塩として含有する。ある特定の実施形態では、上記の結晶構造は、（ＣｕＫα放射線、１．５４０５６Åの波長）７．２±０．２、１４．５±０．２、１５．８±０．２および２７．７±０．２の２シータ値を含む粉末ｘ線回折パターンを有する。

【0119】

ある特定の実施形態では、結晶は、化合物のｐ－トルエンスルホン酸塩を含む。ある特定の他の実施形態では、結晶は、（ＣｕＫα放射線、１．５４０５６Åの波長）３．８±０．２、７．７±０．２、８．８±０．２、２２．４±０．２および２４．６±０．２の２シータ値を含む粉末ｘ線回折パターンを有する。

【0120】

態様６から９のいずれか１つにおけるある特定の実施形態では、医薬組成物は、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸を、構造：

【0121】

【化7】

の結晶性固体または薬学的に許容できるその塩として含有する。ある特定の実施形態では、結晶性固体は、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸の２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール塩である。

【0122】

態様６から９のいずれか１つにおけるある特定の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の治療有効量は、約１０ｍｇである。ある特定の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の治療有効量は、約２０ｍｇである。ある特定の他の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の治療有効量は、約４０ｍｇである。ある特定の他の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩の治療有効量は、約８０ｍｇである。

【0123】

組合せによる処置
第１０の態様では、本発明は、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎または肝硬変および肝細胞癌を伴う非アルコール性脂肪性肝炎を処置するための方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を含む第１の組成物を、治療有効量の４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩を含む第２の組成物と組み合わせて投与するステップを含む方法も対象とする。ある特定の実施形態では、第１および第２の組成物は、同時に投与される。ある特定の他の実施形態では、第１および第２の組成物は、順次に投与される。

【0124】

第１１の態様では、本発明は、ヒトにおける、非アルコール性脂肪肝疾患もしくは非アルコール性脂肪性肝炎等級付けスコアリングシステムの重症度における少なくとも１ポイントの低減、非アルコール性脂肪性肝炎活性の血清マーカーのレベルの低減、非アルコール性脂肪性肝炎疾患活動性の低減または非アルコール性脂肪性肝炎の医学的結果における低減のための方法であって、そのような低減を必要とする患者に、治療有効量の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を、少なくとも治療有効量の４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩と組み合わせて投与するステップを含む方法も対象とする。

【0125】

第１２の態様では、本発明は、ヒトにおける、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変を伴う非アルコール性脂肪性肝炎、または肝硬変および肝細胞癌を伴う非アルコール性脂肪性肝炎を処置するための方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の第１および第２の組成物を投与し、第３の組成物を投与してもよいステップを含み、ここで、
ｉ．第１の組成物は、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤とを含み、
ｉｉ．第２の組成物は、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤とを含み、
ｉｉｉ．第３の組成物は、抗炎症剤、抗糖尿病剤、抗線維化剤、抗脂肪症剤、コレステロール／脂質修飾剤および抗糖尿病剤からなる群から選択される医薬作用物質と、薬学的に許容できる添加剤とを含む、
方法も対象とする。

【0126】

第１３の態様では、本発明は、心不全、うっ血性心不全、冠状動脈性心疾患、末梢血管疾患、腎血管疾患、肺高血圧症、血管炎、急性冠症候群および心血管リスクの修正を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を、少なくとも治療有効量の４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩と組み合わせて投与するステップを含む方法も対象とする。

【0127】

第１４の態様では、本発明は、肥満、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早期発症型２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年発症型非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発生成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠性糖尿病、冠状動脈性心疾患、虚血性脳卒中、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞、脂質異常症、食後脂肪血症、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝性アシドーシス、ケトン症、関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性神経障害、代謝症候群、症候群Ｘ、高血糖症、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝異常、皮膚および結合組織障害、足潰瘍および潰瘍性結腸炎、内皮機能不全および血管コンプライアンス異常、高アポＢリポタンパク質血症ならびにメープルシロップ尿症を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を、少なくとも治療有効量の４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩と組み合わせて投与するステップを含む方法も対象とする。

【0128】

第１５の態様では、本発明は、肝細胞癌、腎臓腎明細胞癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、結腸直腸腺癌、中皮腫、胃腺癌、副腎皮質癌、乳頭状腎細胞癌、頸部および子宮頚管内の癌、膀胱尿路上皮癌、肺腺癌を処置する方法であって、そのような処置を必要とするヒトに、治療有効量の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩を、少なくとも治療有効量の４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩と組み合わせて投与するステップを含む方法も対象とする。

【0129】

態様１０から１５のいずれか１つにおけるある特定の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩および４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩は、１日に１回投与される。

【0130】

態様１０から１５のいずれか１つにおける別の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩および４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩は、１日に２回投与される。

【0131】

態様１０から１５のいずれか１つにおける別の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩および４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩は、同時に（ｓｉｍｕｌａｔａｎｅｏｕｓｌｙ）投与される。ある特定の実施形態では、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩および４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩は、順次におよび任意の順序で投与される。

【0132】

上記で言及した態様６から１５のいずれかでは、組合せの投与は、全肝臓脂肪におけるベースラインから約３０％以上の変化を実現する。他の事例では、組合せの投与は、全肝臓脂肪におけるベースラインから約５０％以上の変化を実現する。

【0133】

上記で言及した態様６から１５のいずれかでは、患者の同定は、１つまたは複数の血液マーカーパネルの使用によるものであってよい。好適な血液マーカーパネルは、ＮＡＦＬＤリッジスコア、ＮＡＦＬＤ肝臓脂肪スコア（ＮＬＦＳ）、肝臓脂肪症指数（ＨＩＳ）、脂肪肝指数（ＦＬＩ）、脂肪蓄積量指数（ＬＡＰ）、脂肪肝の進行阻害（ＦＬＩＰ）アルゴリズム、ＣＨｅＫスコア、ＮＡＬＦＤ線維症スコア（ＮＦＳ）、線維症－４スコア（Ｆｉｂ－４）、ＡＳＴ対血小板比指数（ＡＰＲＩ）、ＢＡＲＤスコア、強化された肝線維症パネル（ＥＬＦ）、Ｈｅｐａスコア、フィブロテスト－フィブロＳＵＲＥ／アクチテスト、フィブロメーターＮＡＦＬＤ指数、および先述の任意の組合せからなる群を含むがこれらに限定されない。

【0134】

ある特定の実施形態では、患者が肝臓脂肪症を有すると同定される場合、利用される血液マーカーパネルは、ＮＡＦＬＤリッジスコアである。別の実施形態では、血液マーカーパネルは、ＮＡＦＬＤ肝臓脂肪スコア（ＮＬＦＳ）である。別の実施形態では、血液マーカーパネルは、脂肪肝指数（ＦＬＩ）である。

【0135】

ある特定の実施形態では、患者が脂肪性肝炎を有すると同定される場合、利用される血液マーカーパネルは、脂肪肝の進行阻害（ＦＬＩＰ）アルゴリズムである。別の実施形態では、血液マーカーパネルは、ＣＨｅＫスコアである。

【0136】

ある特定の実施形態では、患者が線維症を有すると同定される場合、利用される血液マーカーパネルは、ＮＡＦＬＤ線維症スコア（ＮＦＳ）である。別の実施形態では、血液マーカーパネルは、線維症－４スコア（Ｆｉｂ－４）である。別の実施形態では、血液マーカーパネルは、ＡＳＴ対血小板比指数（ＡＰＲＩ）である。別の実施形態では、血液マーカーパネルは、ＢＡＲＤスコアである。

【0137】

上述した方法におけるある特定の他の実施形態では、肝臓脂肪症、脂肪性肝炎または両方を持つ患者を同定するステップは、撮像の使用をさらに含む。撮像は、超音波、超音波ベースのエラストグラフィ、制御減衰パラメーター（ＣＡＰ）、磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）、磁気共鳴エラストグラフィ、または先述の組合せを含み得るがこれらに限定されない。一実施形態では、撮像は、造影超音波（ＣＥＵＳ）である。別の実施形態では、撮像は、超音波ベースのエラストグラフィであり、バイブレーションコントロールドトランジエントエラストグラフィ（ＶＣＴＥ）、音響放射力インパルスエラストグラフィ（ＡＲＦＩ）、超音速せん断撮像（ＳＳＩ）、または先述の組合せから選択される。別の実施形態では、撮像は、磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）であり、ＭＲＩプロトン密度脂肪率（ＭＲＩ－ＰＤＦＦ）である。別の実施形態では、撮像は、磁気共鳴エラストグラフィである。

【0138】

上記で言及した態様のいずれかでは、方法は、抗炎症剤、抗糖尿病剤およびコレステロール／脂質修飾剤からなる群から選択される少なくとも１つの追加の医薬作用物質の投与をさらに含む。

【0139】

組合せ剤
本発明の組成物は、単独でまたは１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与され得る。「組み合わせて投与される」または「併用療法」が意味するのは、本発明の組成物および１つまたは複数の追加の治療剤が、処置されている哺乳動物に同時発生的に投与されることである。組み合わせて投与される場合、各成分は、同時にまたは異なる時点にて任意の順序で順次に投与されてよい。故に、各成分は、所望の治療効果を提供するように、別個にではあるが時間的に十分に近くなるように投与されてよい。語句「同時発生的投与」、「共投与」、「同時投与」および「同時に投与される」は、化合物が組み合わせて投与されることを意味する。故に、本明細書において記述される予防および処置の方法は、組合せ剤の使用を含む。

【0140】

組合せ剤は、哺乳動物に治療有効量で投与される。「治療有効量」が意味するのは、単独でまたは追加の治療剤と組み合わせて哺乳動物に投与される場合に、所望の疾患／状態（例えば、ＮＡＳＨ、心不全または糖尿病）を処置するために有効な、本発明の化合物の量である。

【0141】

本発明の組成物のＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤ活性を考慮すると、それらは、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および／または非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）ならびに関連疾患／状態の処置のための他の作用物質、例を挙げると、オルリスタット、ＴＺＤおよび他のインスリン感作剤、ＦＧＦ２１類似体、メトホルミン、オメガ－３－酸エチルエステル（例えば、ロバザ）、フィブレート、ＨＭＧ ＣｏＡ－レダクターゼ阻害剤、エゼチミブ、プロブコール、ウルソデオキシコール酸、ＴＧＲ５アゴニスト、ＦＸＲアゴニスト、ビタミンＥ、ベタイン、ペントキシフィリン、ＣＢ１アンタゴニスト、カルニチン、Ｎ－アセチルシステイン、還元グルタチオン、ロルカセリン、ナルトレキソンとブプロピオン（ｂｕｐｒｏｐｒｉｏｎ）との組合せ、ＳＧＬＴ２阻害剤（ダパグリフロジン、カナグリフロジン、エンパグリフロジン、トフォグリフロジン、エルツグリフロジン、ＡＳＰ－１９４１、ＴＨＲ１４７４、ＴＳ－０７１、ＩＳＩＳ３８８６２６およびＬＸ４２１１ならびにＷＯ２０１００２３５９４におけるものを含む）、フェンテルミン、トピラメート、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、ＧＩＰ受容体アゴニスト、デュアルＧＬＰ－１受容体／グルカゴン受容体アゴニスト（例えば、ＯＰＫ８８００３、ＭＥＤＩ０３８２、ＪＮＪ－６４５６５１１１、ＮＮ９２７７、ＢＩ４５６９０６）、デュアルＧＬＰ－１受容体／ＧＩＰ受容体アゴニスト（例えば、チルゼパチド（ＬＹ３２９８１７６）、ＮＮ９４２３）、アンジオテンシン受容体遮断薬アセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤、ＢＣＫＤＫ阻害剤、ケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）阻害剤、ＡＳＫ１阻害剤、分枝鎖アルファケト酸デヒドロゲナーゼキナーゼ阻害剤（ＢＣＫＤＫ阻害剤）、ＣＣＲ２および／もしくはＣＣＲ５の阻害剤、ＰＮＰＬＡ３阻害剤、ＤＧＡＴ１阻害剤、ＦＧＦ２１類似体、ＦＧＦ１９類似体、ＰＰＡＲアゴニスト、ＦＸＲアゴニスト、ＡＭＰＫ活性化因子（例えば、ＥＴＣ－１００２（ベンペド酸））、ＳＣＤ１阻害剤またはＭＰＯ阻害剤と共投与されてよい。

【0142】

例示的なＧＬＰ－１受容体アゴニストは、リラグルチド、アルビグルチド、エキセナチド、アルビグルチド、リキシセナチド、デュラグルチド、セマグルチド、ＨＭ１５２１１、ＬＹ３２９８１７６、Ｍｅｄｉ－０３８２、ＮＮ－９９２４、ＴＴＰ－０５４、ＴＴＰ－２７３、エフェグレナタイド、下記を含む、ＷＯ２０１８１０９６０７において記述されているもの、２０１９年６月１１日に出願されたＰＣＴ／ＩＢ２０１９／０５４８６７において記述されているもの、および２０１９年６月１３日に出願されたＰＣＴ／ＩＢ２０１９／０５４９６１において記述されているもの：
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－７－フルオロ－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－７－フルオロ－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（５－クロロピリジン－２－イル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－３－（１，３－オキサゾール－２－イルメチル）－３Ｈ－イミダゾ［４，５－ｂ］ピリジン－５－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（１－エチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）メチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－（１，３－オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－（ピリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－（１，３－オキサゾール－５－イルメチル）－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（１－エチル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－５－イル）メチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－（１，３－オキサゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－７－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（４－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－（１，３－オキサゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－７－フルオロ－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－７－フルオロ－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（４－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（５－クロロピリジン－２－イル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（１－エチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）メチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｒ）－２－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（１－エチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）メチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（５－クロロピリジン－２－イル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｓ）－２－（５－クロロピリジン－２－イル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［（２Ｒ）－２－（５－クロロピリジン－２－イル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（｛４－［２－（５－クロロピリジン－２－イル）－２－メチル－１，３－ベンゾジオキソール－４－イル］ピペリジン－１－イル｝メチル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸、ＤＩＡＳＴ－Ｘ２；
２－［（４－｛２－［（４－クロロ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピペリジン－１－イル）メチル］－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－［（４－｛２－［（４－クロロ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピペリジン－１－イル）メチル］－１－（１，３－オキサゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－［（４－｛２－［（４－シアノ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピペリジン－１－イル）メチル］－１－（１，３－オキサゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－［（４－｛２－［（４－シアノ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピペリジン－１－イル）メチル］－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－［（４－｛３－［（４－クロロ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピラジン－２－イル｝ピペリジン－１－イル）メチル］－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（６－｛６－［（４－シアノ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピリジン－２－イル｝－６－アザスピロ［２．５］オクタ－１－イル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（６－｛２－［（４－クロロ－２－フルオロベンジル）オキシ］－５－フルオロピリミジン－４－イル｝－６－アザスピロ［２．５］オクタ－１－イル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（６－｛２－［（４－クロロ－２－フルオロベンジル）オキシ］－５－フルオロピリミジン－４－イル｝－６－アザスピロ［２．５］オクタ－１－イル）－１－（１，３－オキサゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（６－｛６－［（４－シアノ－２－フルオロベンジル）オキシ］－５－フルオロピリジン－２－イル｝－６－アザスピロ［２．５］オクタ－１－イル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－（６－｛６－［（４－シアノ－２－フルオロベンジル）オキシ］－３－フルオロピリジン－２－イル｝－６－アザスピロ［２．５］オクタ－１－イル）－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－［（４－｛２－［（４－クロロ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピリミジン－４－イル｝ピペリジン－１－イル）メチル］－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－｛［（２Ｓ）－４－｛２－［（４－クロロ－２－フルオロベンジル）オキシ］－５－フルオロピリミジン－４－イル｝－２－メチルピペラジン－１－イル］メチル｝－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；
２－｛［（２Ｓ）－４－｛２－［（４－クロロ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピリミジン－４－イル｝－２－メチルピペラジン－１－イル］メチル｝－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸；および
２－［（４－｛６－［（４－シアノ－２－フルオロベンジル）オキシ］ピリジン－２－イル｝ピペリジン－１－イル）メチル］－１－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－６－カルボン酸、ならびに薬学的に許容できるその塩を含む。

【0143】

例示的なＡＣＣ阻害剤は、４－（４－［（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロ－１’Ｈ－スピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－イル）カルボニル］－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸、ゲムカベンおよびフィルソコスタット（ＧＳ－０９７６）ならびに薬学的に許容できるその塩を含む。

【0144】

例示的なＦＸＲアゴニストは、トロピフェクサー（ｔｒｏｐｉｆｅｘｏｒ）（２－［（１Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－３－（｛５－シクロプロピル－３－［２－（トリフルオロメトキシ）フェニル］－１，２－オキサゾール－４－イル｝メトキシ）－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル］－４－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－６－カルボン酸）、シロフェクサール（ｃｉｌｏｆｅｘｏｒ）（ＧＳ－９６７４）、オベチコール酸、ＬＹ２５６２１７５、Ｍｅｔ４０９、ＴＥＲＮ－１０１およびＥＤＰ－３０５ならびに薬学的に許容できるその塩を含む。

【0145】

例示的なＫＨＫ阻害剤は、［（１Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）－３－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝－３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサ－６－イル］酢酸および薬学的に許容できるその塩を含む。

【0146】

例示的なＢＣＫＤＫ阻害剤は、下記を含む、２０１９年６月２８日に出願された米国特許出願第６２／８６８，０５７号および２０１９年６月２８日に出願された米国特許出願第６２／８６８，５４２号において記述されているもの：
５－（５－クロロ－４－フルオロ３－メチルチオフェン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール；
５－（５－クロロ－３－ジフルオロメチルチオフェン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール；
５－（５－フルオロ－３－メチルチオフェン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール；
５－（５－クロロ－３－メチルチオフェン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール；
５－（３，５－ジクロロチオフェン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール；
５－（４－ブロモ－３－メチルチオフェン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール；
５－（４－ブロモ－３－エチルチオフェン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール；
５－（４－クロロ－３－エチルチオフェン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール；
３－クロロ－５－フルオロチエノ［３，２－ｂ］チオフェン－２－カルボン酸；
３－ブロモ－５－フルオロチエノ［３，２－ｂ］チオフェン－２－カルボン酸；
３－（ジフルオロメチル）－５－フルオロチエノ［３，２－ｂ］チオフェン－２－カルボン酸；
５，６－ジフルオロチエノ［３，２－ｂ］チオフェン－２－カルボン酸；および
３，５－ジフルオロチエノ［３，２－ｂ］チオフェン－２－カルボン酸；
または薬学的に許容できるその塩を含む。

【0147】

本発明の組成物の抗糖尿病活性を考慮すると、それらは、他の抗糖尿病剤と共投与されてよい。好適な抗糖尿病剤は、インスリン、メトホルミン、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト（本明細書で上述したもの）、アセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤（本明細書で上述したもの）、ＳＧＬＴ２阻害剤（本明細書で上述したもの）、モノアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）－１０阻害剤、ＡＭＰＫ活性化因子（例えば、ＥＴＣ－１００２（ベンペド酸））、スルホニル尿素（例えば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ダイアビニーズ、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド（ｇｌｉｓｏｌａｍｉｄｅ）、トラザミドおよびトルブタミド）、メグリチニド、α－アミラーゼ阻害剤（例えば、テンダミスタット、トレスタチンおよびＡＬ－３６８８）、α－グルコシドヒドロラーゼ阻害剤（例えば、アカルボース）、α－グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アジポシン（ａｄｉｐｏｓｉｎｅ）、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラディマイシン－Ｑおよびサルボスタチン）、ＰＰＡＲγアゴニスト（例えば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾンおよびロシグリタゾン）、ＰＰＡＲα／γアゴニスト（例えば、ＣＬＸ－０９４０、ＧＷ－１５３６、ＧＷ－１９２９、ＧＷ－２４３３、ＫＲＰ－２９７、Ｌ－７９６４４９、ＬＲ－９０、ＭＫ－０７６７およびＳＢ－２１９９９４）、タンパク質チロシンホスファターゼ－１Ｂ（ＰＴＰ－１Ｂ）阻害剤（例えば、トロズスクエミン、ヒルチオサール（ｈｙｒｔｉｏｓａｌ）抽出物、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３～３８１（２００７）によって開示されている化合物）、ＳＩＲＴ－１活性化因子（例えば、レスベラトロル、ＧＳＫ２２４５８４０またはＧＳＫ１８４０７２）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）阻害剤（例えば、ＷＯ２００５１１６０１４におけるもの、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、デュトグリプチン、リナグリプチンおよびサクサグリプチン）、インスリン分泌促進剤（ｓｅｃｒｅａｔａｇｏｇｕｅｓ）、脂肪酸酸化阻害剤、Ａ２アンタゴニスト、ｃ－ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤（ｉｎｈｉｂｉｔｏｓｒ）、グルコキナーゼ活性化因子（ＧＫａ）、例を挙げると、ＷＯ２０１０１０３４３７、ＷＯ２０１０１０３４３８、ＷＯ２０１００１３１６１、ＷＯ２００７１２２４８２において記述されているもの、ＴＴＰ－３９９、ＴＴＰ－３５５、ＴＴＰ－５４７、ＡＺＤ１６５６、ＡＲＲＹ４０３、ＭＫ－０５９９、ＴＡＫ－３２９、ＡＺＤ５６５８またはＧＫＭ－００１、インスリン、インスリン模倣物質、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤（例えば、ＧＳＫ１３６２８８５）、ＶＰＡＣ２受容体アゴニスト、グルカゴン受容体モジュレーター、例を挙げると、Ｄｅｍｏｎｇ，Ｄ．Ｅ．ら、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００８、４３、１１９～１３７において記述されているもの、ＧＰＲ１１９モジュレーター、特にアゴニスト、例を挙げると、ＷＯ２０１０１４００９２、ＷＯ２０１０１２８４２５、ＷＯ２０１０１２８４１４、ＷＯ２０１０１０６４５７、Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００９、４４、１４９～１７０において記述されているもの（例えば、ＭＢＸ－２９８２、ＧＳＫ１２９２２６３、ＡＰＤ５９７およびＰＳＮ８２１）、ＦＧＦ２１誘導体または類似体、例を挙げると、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ，Ａ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇｓ ２００９、１０（４）３５９～３６４において記述されているもの、ＴＧＲ５（ＧＰＢＡＲ１とも称される）受容体モジュレーター、特にアゴニスト、例を挙げると、Ｚｈｏｎｇ，Ｍ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１０、１０（４）、３８６～３９６において記述されているものおよびＩＮＴ７７７、ＧＰＲ４０アゴニスト、例を挙げると、ＴＡＫ－８７５を含むがこれに限定されない、Ｍｅｄｉｎａ，Ｊ．Ｃ．、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、４３、７５～８５において記述されているもの、ＧＰＲ１２０モジュレーター、特にアゴニスト、高親和性ニコチン酸受容体（ＨＭ７４Ａ）活性化因子、およびＳＧＬＴ１阻害剤、例を挙げるとＧＳＫ１６１４２３５を含む。本発明の化合物と組み合わせることができる抗糖尿病剤のさらなる代表的な一覧は、例えば、ＷＯ２０１１００５６１１の２８頁３５行から３０頁１９行において見ることができる。

【0148】

他の抗糖尿病剤は、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ酵素の阻害剤またはモジュレーター、フルクトース１，６－ジホスファターゼの阻害剤、アルドースレダクターゼの阻害剤、ミネラルコルチコイド受容体阻害剤、ＴＯＲＣ２の阻害剤、ＣＣＲ２および／またはＣＣＲ５の阻害剤、ＰＫＣアイソフォーム（例えば、ＰＫＣα、ＰＫＣβ、ＰＫＣγ）の阻害剤、脂肪酸シンターゼの阻害剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼの阻害剤、ＧＰＲ８１、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ１０５、Ｋｖ１．３、レチノール結合タンパク質４、グルココルチコイド受容体、ソマトスタチン（ｓｏｍａｔｏｓｔａｉｎ）受容体（例えば、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３およびＳＳＴＲ５）のモジュレーター、ＰＤＨＫ２またはＰＤＨＫ４の阻害剤またはモジュレーター、ＭＡＰ４Ｋ４の阻害剤、ＩＬ１ベータを含むＩＬ１ファミリーのモジュレーター、ＲＸＲアルファのモジュレーターを含み得る。加えて、好適な抗糖尿病剤は、Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｐ．Ａ．、Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｂ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔ、２０１０、２０（１２）、１６２７～５１によって収載されている機序を含む。

【0149】

本発明の組成物は、ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、トランドラプリル）、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（例えば、カンデサルタン、ロサルタン、バルサルタン）、アンジオテンシン受容体－ネプリライシン阻害剤（サクビトリル／バルサルタン）、Ｉ_ｆチャネル遮断薬イバブラジン、ベータ－アドレナリン遮断剤（例えば、ビソプロロール、コハク酸メトプロロール、カルベジロール）、アルドステロンアンタゴニスト（例えば、スピロノラクトン、エプレレノン）、ヒドララジンおよび二硝酸イソソルビド、利尿薬（例えば、フロセミド、ブメタニド、トルセミド、クロロチアジド、アミロライド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、メトラゾン、トリアムテレン）、またはジゴキシン等の抗心不全剤と共投与されてよい。

【0150】

本発明の組成物は、下記の例示的な作用物質を含むコレステロールまたは脂質低下剤と共投与されてもよい：ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（例えば、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、ＮＫ－１０４（別名イタバスタチン、またはニスバスタチン（ｎｉｓｖａｓｔａｔｉｎ）もしくはニスバスタチン（ｎｉｓｂａｓｔａｔｉｎ））およびＺＤ－４５２２（別名ロスバスタチン、またはアタバスタチンもしくはビサスタチン（ｖｉｓａｓｔａｔｉｎ））；スクアレンシンターゼ阻害剤；フィブレート（例えば、ゲムフィブロジル、ペマフィブレート、フェノフィブレート、クロフィブレート）；胆汁酸捕捉剤（クエストラン、コレスチポール、コレセベラム等）；ＡＣＡＴ阻害剤；ＭＴＰ阻害剤；リポオキシゲナーゼ阻害剤；コレステロール吸収阻害剤（例えば、エゼチミブ）；ニコチン酸剤（例えば、ナイアシン、ナイアコール、スロナイアシン）；オメガ３脂肪酸（例えば、エパノバ（ｅｐａｎｏｖａ）、魚油、エイコサペンタエン酸）；コレステリルエステル輸送タンパク質阻害剤（例えば、オビセトラピブ（ｏｂｉｃｅｔｒａｐｉｂ））ならびにＰＣＳＫ９モジュレーター（例えば、アリロクマブ、エボロクマブ、ボコシズマブ、ＡＬＮ－ＰＣＳ（インクリシラン））。

【0151】

本発明の組成物は、抗高血圧剤と組み合わせて使用されてもよく、そのような抗高血圧活性は、標準的なアッセイ（例えば、血圧測定）に従って、当業者により容易に決定される。好適な抗高血圧剤の例は、アルファアドレナリン作動性遮断薬；ベータアドレナリン作動性遮断薬；カルシウムチャネル遮断薬（例えば、ジルチアゼム、ベラパミル、ニフェジピンおよびアムロジピン）；血管拡張剤（例えば、ヒドララジン）、利尿薬（ｄｉｒｕｅｔｉｃｓ）（例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、フルメチアジド、ヒドロフルメチアジド、ベンドロフルメチアジド、メチルクロロチアジド、トリクロロメチアジド、ポリチアジド、ベンズチアジド、エタクリン酸チクリナフェン（ｔｒｉｃｒｙｎａｆｅｎ）、クロルタリドン、トルセミド、フロセミド、ムソリミン（ｍｕｓｏｌｉｍｉｎｅ）、ブメタニド、トリアムテレン（ｔｒｉａｍｔｒｅｎｅｎｅ）、アミロライド、スピロノラクトン）；レニン阻害剤；ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトプリル、ゾフェノプリル、フォシノプリル、エナラプリル、セラノプリル、シラザプリル（ｃｉｌａｚｏｐｒｉｌ）、デラプリル、ペントプリル、キナプリル、ラミプリル、リシノプリル）；ＡＴ－１受容体アンタゴニスト（例えば、ロサルタン、イルベサルタン、バルサルタン）；ＥＴ受容体アンタゴニスト（例えば、シタクスセンタン、アトラセンタン（ａｔｒｓｅｎｔａｎ）ならびに米国特許第５，６１２，３５９号および同第６，０４３，２６５号で開示されている化合物）；デュアルＥＴ／ＡＩＩアンタゴニスト（例えば、ＷＯ００／０１３８９で開示されている化合物）；中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤；バソペプチダーゼ（ｖａｓｏｐｅｐｓｉｄａｓｅ）阻害剤（デュアルＮＥＰ－ＡＣＥ阻害剤）（例えば、ゲモパトリラトおよびニトレート）を含む。例示的な抗狭心症剤は、イバブラジンである。

【0152】

好適なカルシウムチャネル遮断薬（Ｌ型またはＴ型）の例は、ジルチアゼム、ベラパミル、ニフェジピンおよびアムロジピンならびにミベフラジル（ｍｙｂｅｆｒａｄｉｌ）を含む。

【0153】

好適な強心配糖体の例は、ジギタリスおよびウアバインを含む。

【0154】

一実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物を含有する組成物は、１つまたは複数の利尿薬と共投与されてよい。好適な利尿薬の例は、（ａ）ループ利尿薬、例を挙げると、フロセミド（ＬＡＳＩＸ（商標）等）、トルセミド（ＤＥＭＡＤＥＸ（商標）等）、ブメタニド（ｂｅｍｅｔａｎｉｄｅ）（ＢＵＭＥＸ（商標）等）およびエタクリン酸（ＥＤＥＣＲＩＮ（商標）等）；（ｂ）チアジド系利尿薬、例を挙げると、クロロチアジド（ＤＩＵＲＩＬ（商標）、ＥＳＩＤＲＩＸ（商標）またはＨＹＤＲＯＤＩＵＲＩＬ（商標）等）、ヒドロクロロチアジド（ＭＩＣＲＯＺＩＤＥ（商標）またはＯＲＥＴＩＣ（商標）等）、ベンズチアジド、ヒドロフルメチアジド（ＳＡＬＵＲＯＮ（商標）等）、ベンドロフルメチアジド、メチクロルチアジド（ｍｅｔｈｙｃｈｌｏｒｔｈｉａｚｉｄｅ）、ポリチアジド、トリクロルメチアジドおよびインダパミド（ＬＯＺＯＬ（商標）等）；（ｃ）フタルイミジン系利尿薬、例を挙げると、クロルタリドン（ＨＹＧＲＯＴＯＮ（商標）等）およびメトラゾン（ＺＡＲＯＸＯＬＹＮ（商標）等）；（ｄ）キナゾリン系利尿薬、例を挙げると、キネタゾン；ならびに（ｅ）カリウム保持性利尿薬、例を挙げると、トリアムテレン（ＤＹＲＥＮＩＵＭ（商標）等）およびアミロライド（ＭＩＤＡＭＯＲ（商標）またはＭＯＤＵＲＥＴＩＣ（商標）等）を含む。

【0155】

別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を含有する組成物は、ループ利尿薬と共投与されてよい。また別の実施形態では、ループ利尿薬は、フロセミドおよびトルセミドから選択される。また別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の１つまたは複数の化合物は、フロセミドと共投与されてよい。また別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の１つまたは複数の化合物は、トルセミドと共投与されてよく、これは、トルセミドの制御または調節放出形態であってもよい。

【0156】

別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を含有する組成物は、チアジド系利尿薬と共投与されてよい。また別の実施形態では、チアジド系利尿薬は、クロロチアジドおよびヒドロクロロチアジドからなる群から選択される。また別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の１つまたは複数の化合物は、クロロチアジドと共投与されてよい。また別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の１つまたは複数の化合物は、ヒドロクロロチアジドと共投与されてよい。

【0157】

別の実施形態では、式（Ｉ）または（ＩＩ）の１つまたは複数の化合物を含有する組成物は、フタルイミジン系利尿薬と共投与されてよい。また別の実施形態では、フタルイミジン系利尿薬は、クロルタリドンである。

【0158】

好適なミネラルコルチコイド受容体アンタゴニストの例は、スピロノラクトン（ｓｐｒｉｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ）およびエプレレノンを含む。

【0159】

好適なホスホジエステラーゼ阻害剤の例は、ＰＤＥ ＩＩＩ阻害剤（シロスタゾール等）およびＰＤＥ Ｖ阻害剤（シルデナフィル等）を含む。

【0160】

当業者ならば、本発明の化合物を含有する組成物が、ＰＣＩ、ステント留置術、薬剤溶出ステント、幹細胞療法および植え込み型ペースメーカー、除細動器等の医療機器、または心臓再同期療法を含む、他の心血管または脳血管処置と併せて使用されてもよいことを認識するであろう。

【0161】

特に、単一の投薬量単位として提供される場合、組み合わさった活性原料間に化学的相互作用の潜在性が存在する。この理由から、式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物および第２の治療剤を含有する組成物を単一の投薬量単位中で組み合わせる場合、それらは、活性原料を単一の投薬量単位中で組み合わせても、活性原料間の物理的接触が最小化される（すなわち、低減される）ように製剤化される。例えば、１つの活性原料は、腸溶コーティングされてよい。活性原料の１つを腸溶コーティングすることにより、組み合わさった活性原料間の接触を最小化することが可能なだけでなく、これらの成分が胃では放出されず腸で放出されるように、胃腸管内のこれらの成分のうちの１つの放出を制御することも可能である。活性原料のうちの１つを、胃腸管全体を通して持続放出を達成し、組み合わさった活性原料間の物理的接触を最小化する働きもする材料でコーティングしてもよい。さらに、この成分の放出が腸でのみ起こるように、持続放出成分を追加で腸溶コーティングすることもできる。また別のアプローチは、活性成分をさらに分離するために、１つの成分が、持続および／または腸溶放出ポリマーでコーティングされ、他の成分も、低粘度グレードのヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）等のポリマーまたは当技術分野で公知の通りの他の適切な材料でコーティングされている、組合せ製品の製剤化を伴うであろう。ポリマーコーティングは、他の成分との相互作用に対する追加の障壁を形成する働きをする。

【0162】

本発明の組合せ製品の成分間の接触を最小化するこれらおよび他の手法は、単一剤形で投与されるか、別個の形態であるが同じ方式によって同時に投与されるかにかかわらず、本開示を理解すれば、当業者には容易に明らかとなるであろう。

【0163】

併用療法処置では、本発明の化合物および他の薬物療法の両方が、従来の方法によって哺乳動物（例えば、ヒト、男性または女性）に投与される。式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物およびその塩はいずれも、哺乳動物、特にヒトにおいてジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２を阻害する作用物質としての治療的使用に適応しており、故に、そのような作用が関係する種々の状態（例えば、本明細書において記述されるもの）の処置に有用である。

【0164】

本発明に従って処置され得る疾患／状態は、心血管状態、糖尿病（例えば、ＩＩ型）および糖尿病性合併症、血管状態、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎（ｓｔｅａｔａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ））、ＮＡＦＬＤ（非アルコール性脂肪肝疾患）ならびに腎疾患を含むがこれらに限定されない。

【0165】

ＤＧＡＴ２阻害は、血糖コントロールおよび血漿コレステロールプロファイルの両方に対して有益な効果を呈し、そのため、この標的は代謝性疾患の処置において貴重であると考えられる（Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、２００７．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８２：２２６７８～２２６８８）。ＤＧＡＴ２の阻害と代謝性および関連疾患／状態との間の正の相関を考慮すると、式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物を含有する組成物は、薬理作用のおかげで、代謝性および関連病状（例えば、ＩＩ型糖尿病、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤ）の予防、停止および／または退縮に有用である。

【0166】

肝臓トリグリセリド（ＴＧ）は、３つの主要供給源：デノボ脂質生成（ＤＮＬ）、脂肪によって供給される脂肪酸（ＦＡ）からの再エステル化、および食事摂取に由来する（Ｃｏｈｅｎ Ｊ．Ｃ．ら、２０１１、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３３２、１５１９～１５２３）。肝臓ＴＧプールへの最大の寄与は、脂肪細胞に起因する脂肪分解生成物に由来するように思われるが、脂質生成経路は、ＮＡＦＬＤの発生およびＮＡＳＨへの進行において重要な役割を果たす。ＮＡＦＬＤにおける疾患進行へのＤＮＬの寄与は、ＮＡＦＬＤありおよびなしの対象におけるＴＧのＦＡ組成を分析することによって裏付けられる。データは、ＮＡＦＬＤありの対象における飽和ＦＡのレベル増大を実証し、飽和ＦＡがＤＮＬの一次生成物を代表することから、肝臓脂肪症への重要な寄与因子としてのＤＮＬ経路を暗示している。これらの所見は、ＮＡＦＬＤのＶＬＤＬ粒子におけるＤＮＬ由来ＴＧの包含増大と一致し、典型的な西洋食を消費している健常対象においてはわずか２から５％であったのと比較して、ＴＧの１５％がＤＮＬに起因して生成された（Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｆ．Ｗ．Ｂ．およびＧｒｉｆｆｉｎ Ｊ．Ｌ．、２０１６、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．、９１、４５２～４６８）。加えて、肝臓ＤＮＬ率の上昇は、ＮＡＦＬＤの顕著な特徴であることが報告されている。肝臓脂肪が上昇しているヒト対象は、正常な肝臓脂肪を持つ対象と比べて肝臓ＤＮＬ率における３倍超の増大を示したが、脂肪遊離脂肪酸（ａｄｉｐｏｓｅ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ）（ＦＦＡ）フラックスにおいてもＦＦＡからのＶＬＤＬの生成においても、群間の差異は検出されなかった。その結果として、ＶＬＤＬ ＴＧに組み込まれたＦＡの絶対的供給源を比較すると、肝臓ＤＮＬの上昇は、高い肝臓脂肪を持つ対象において有意に上昇した唯一の供給源であった（Ｌａｍｂｅｒｔ Ｊ．Ｅ．およびＲａｍｏｓ－Ｒｏｍａｎ，Ｍ．Ａ．、２０１４、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１４６、７２６～７３５）。

【0167】

ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）は、ＴＧ合成における最終ステップ、具体的にはジアシルグリセロール（ＤＡＧ）による脂肪酸（ＦＡ）のエステル化を触媒し、ＴＧの形成をもたらす（Ｙｅｎ，Ｃ．Ｌ．ら、２００８、Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．、４９、２２８３～２３０１）。哺乳動物では、２つの構造的に無関係なＤＧＡＴ酵素（ＤＧＡＴ１およびＤＧＡＴ２）が特徴付けられている。ＤＧＡＴ１は、腸において高度に発現され、脂肪吸収において中心的役割を果たす（Ｂｕｈｍａｎ，Ｋ．Ｋ．ら、２００２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７、２５４７４～２５４７９）。ＤＧＡＴ２は、肝臓および脂肪において高度に発現される（Ｃａｓｅｓ，Ｓ．ら、２００１、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７６、３８８７０～３８８７６）。前臨床モデルでは、アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する肝臓ＤＧＡＴ２の遮断は、脂質生成に関与するタンパク質をコードする複数の遺伝子の発現の下方調節および酸化的経路における並行誘導の両方をもたらす。これらの変化の最終結果は、肝臓ＤＡＧおよびＴＧ脂質のレベルの減少であり、これが今度は、肝細胞脂質負荷を低減させ、肝臓の超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）ＴＧ分泌を減少させる（Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、２００７．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８２：２２６７８～２２６８８およびＹｕ，Ｘ．Ｘ．ら、２００５、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、４２、３６２～３７１）。故に、ＤＧＡＴ２の薬理学的阻害は、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨならびに血糖コントロールおよび血漿コレステロールを含む他の代謝性疾患の処置に有益な効果を呈するであろうと考えられる。

【0168】

特に、ＤＧＡＴ２の阻害とＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤおよび関連疾患／状態との間の正の相関を考慮すると、式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物を含有する組成物は、薬理作用のおかげで、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤおよび関連病状の予防、停止および／または退縮に有用である。

【0169】

さらに、ＮＡＳＨにおける第ＩＩＩ相研究のための規制当局に認められた条件付承認は、肝生検によって取得される組織学的代理マーカーに基づく。これらの一般に許容されている代理は、ｉ）線維症の悪化（すなわち、線維症段階における数値的増大）のないＮＡＳＨの消散；ｉｉ）ＮＡＳＨの悪化のない線維症における１つまたは複数の段階低減である。詳細は、Ｒａｔｚｉｕ、Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ ｆｏｒ ｎｏｎ－ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ ＮＡＳＨ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒｉａｌｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、２０１８、６８．３５３～３６１およびその中の参考文献において見られ得る。

【0170】

加えて、規制当局は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活性スコア（ＮＡＳ）におけるベースラインからの変化に目を向けている。ＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）は、肝生検の一元化された病理学者スコアリングからの、脂肪症グレード（０～３）、小葉炎症グレード（０～３）および肝細胞風船化グレード（０～２）の和に等しい複合スコアである。ＮＡＳの全体的な規模は０～８であり、より高いスコアはより重度の疾患を指し示す。転帰尺度、ＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）におけるベースラインからの変化は、－８から＋８までの可能な範囲を有し、負の値はより良好な転帰（改善）を指し示し、正の値はより悪い転帰を指し示す。ＮＡＳの構成要素は、次の通りにスコア付けされる：脂肪症グレード０＝５％未満脂肪症、１＝５～３３％脂肪症、２＝３４～６６％脂肪症、３＝６６％超脂肪症。小葉炎症グレード＝小葉炎症の量（単核、脂肪肉芽腫および多形核（ｐｍｎ）病巣を合わせたもの）：０＝０、１＝２０倍の倍率で２未満、２＝２０倍の倍率で２～４、３＝２０倍の倍率で４超。肝細胞風船化０＝なし、１＝軽度、２＝軽度を超える。

【0171】

その薬理作用により、式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物を含有する組成物は、高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早期発症型２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年発症型非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発生成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠性糖尿病、冠状動脈性心疾患、虚血性脳卒中、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞、脂質異常症、食後脂肪血症、耐糖能異常（ＩＧＴ）の状態、空腹時血漿グルコース異常の状態、代謝性アシドーシス、ケトン症、関節炎、肥満、骨粗しょう症、高血圧症、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性神経障害、代謝症候群、症候群Ｘ、月経前症候群、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化、一過性虚血発作、脳卒中、血管再狭窄、高血糖症、高インスリン血症、高トリグリセリド血症（ｈｙｐｅｒｔｒｙｇｌｉｃｅｒｉｄｅｍｉａ）、インスリン抵抗性、グルコース代謝異常、勃起不全、皮膚および結合組織障害、足潰瘍および潰瘍性結腸炎、内皮機能不全および血管コンプライアンス異常、高アポＢリポタンパク質血症、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病および過敏性腸症候群、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）または非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を処置するために有用である。

【0172】

本発明の組成物の投与は、本発明の化合物を全身におよび／または局部的に送達する任意の方法を介することができる。これらの方法は、経口ルート、非経口、十二指腸内ルート、口腔、鼻腔内等を含む。概して、本発明の組成物は、経口的に投与されるが、例えば、経口投与が標的に不適切である場合または患者が薬物を摂取することができない場合には、非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、皮下または髄内）が利用され得る。

【0173】

ヒト患者への投与では、本明細書における組成物の経口１日用量は、当然ながら、投与のモードおよび頻度、病状、ならびに患者の年齢および状態等に応じて、１ｍｇから５０００ｍｇの範囲内であってよい。経口１日用量は、使用され得る３ｍｇから２０００ｍｇの範囲内である。さらなる経口１日用量は、５ｍｇから１０００ｍｇの範囲内である。便宜上、本発明の組成物は、単位剤形で投与され得る。所望ならば、１日当たり複数回用量の組成物を使用して、総１日用量を増大させることができる。組成物は、例えば、約０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、５００または１０００ｍｇの本発明の組成物を含有する、錠剤またはカプセル剤であってよい。総１日用量は、単回または分割用量で投与されてよく、内科医の裁量で、本明細書で記される典型的な範囲外となり得る。

【0174】

ヒト患者への投与では、本明細書における組成物の注入１日用量は、当然ながら、投与のモードおよび頻度、病状、ならびに患者の年齢および状態等に応じて、１ｍｇから２０００ｍｇの範囲内であってよい。さらなる注入１日用量は、５ｍｇから１０００ｍｇの範囲内である。総１日用量は、単回または分割用量で投与されてよく、内科医の裁量で、本明細書で記される典型的な範囲外となり得る。

【0175】

各治療剤、例えば、化合物Ａ、化合物Ｄおよび実施例４の化合物、ならびに任意の追加の治療剤の投薬量は、概して、処置されている対象の健康、所望される処置の程度、もしあれば、併用療法の性質および種類、ならびに所望される処置の頻度および効果の性質を含む若干数の要因に依存する。概して、各治療剤の投薬量範囲は、１日当たり個体の体重１キログラムにつき約０．００１ｍｇから約１００ｍｇまで、好ましくは１日当たり個体の体重１キログラムにつき約０．１ｍｇから約１０ｍｇまでの範囲内である。しかしながら、処置されている対象の年齢および体重、意図されている投与ルート、投与されている特定の抗肥満剤等に応じて、一般的な投薬量範囲におけるいくらかの可変性が必要とされることもある。特定の患者のための投薬量範囲および最適投薬量の決定も、十分に本開示の利益を有する当業者の能力の範囲内である。

【0176】

本発明の処置方法によれば、本発明の組成物または本発明の組成物と少なくとも１つの追加の医薬作用物質との組合せ（本明細書では「組合せ」と称される）は、そのような処置を必要とする対象に、好ましくは医薬組成物の形態で投与される。本発明の組合せ態様では、本発明の組成物および少なくとも１つの他の医薬作用物質（例えば、別の抗肥満剤）は、別個にまたは両方を含む医薬組成物でのいずれかで投与されてよい。そのような投与は経口であることが概して好ましい。

【0177】

本発明の組成物と少なくとも１つの他の医薬作用物質との組合せが一緒に投与される場合、そのような投与は、時間的に順次であっても同時であってもよい。薬物組合せの同時投与が概して好ましい。順次投与では、本発明の組成物および追加の医薬作用物質は、任意の順序で投与されてよい。そのような投与は経口であることが概して好ましい。そのような投与は経口かつ同時であることがとりわけ好ましい。本発明の組成物および追加の医薬作用物質が順次に投与される場合、それぞれの投与は、同じまたは異なる方法によるものであってよい。

【0178】

本発明の方法によれば、本発明の組成物は、好ましくは、医薬組成物の形態で投与される。したがって、本発明の化合物または組合せは、任意の従来の経口、直腸、経皮、非経口（例えば、静脈内、筋肉内または皮下）、大槽内、膣内、腹腔内、局所（例えば、散剤、軟膏剤、クリーム剤、スプレー剤またはローション剤）、口腔または鼻腔内剤形（例えば、スプレー剤、液滴剤または吸入剤）で、別個にまたは一緒に、患者に投与され得る。

【0179】

本発明の組成物または組合せに含有される化合物は、単独で投与され得るが、概して、当技術分野において公知である１つまたは複数の好適な医薬添加剤、アジュバント、賦形剤または担体との混和物で投与され、意図されている投与ルートおよび標準的な医薬実務に関して選択されることになる。本発明の組成物または組合せは、治療必要性に見合った、所望の投与ルートおよび放出プロファイルの特異性に応じて、即時、遅延、調節、持続、パルスまたは制御放出剤形を提供するように製剤化されてよい。

【0180】

医薬組成物は、本発明の化合物または組合せを、概して組成物の約１％から約７５％、８０％、８５％、９０％またはさらには９５％（重量で）の範囲内、通常は約１％、２％または３％から約５０％、６０％または７０％の範囲内、より頻繁には約１％、２％または３％から５０％未満、例を挙げると約２５％、３０％または３５％の範囲内の量で含む。

【0181】

具体的な量の活性化合物を用いて種々の医薬組成物を調製する方法は、当業者に公知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ Ｍｄ、第２０版、２０００を参照されたい。

【0182】

非経口注射に好適な組成物は、概して、薬学的に許容できる滅菌水溶液もしくは非水溶液、分散体、懸濁液、または乳剤、および滅菌注射用溶液または分散体への復元のための滅菌粉末を含む。好適な水性および非水性担体または賦形剤（溶媒およびビヒクルを含む）の例は、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、それらの好適な混合物、オリーブ油等の植物油を含むトリグリセリド、およびオレイン酸エチル等の注射用有機エステルを含む。好ましい担体は、Ｃｏｎｄｅａ Ｖｉｓｔａ Ｃｏ．、Ｃｒａｎｆｏｒｄ、Ｎ．Ｊ．から入手可能な、グリセリンまたはプロピレングリコールを加えたＭｉｇｌｙｏｌ（登録商標）ブランドカプリル／カプリン酸エステル（例えば、Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８１２、Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８２９、Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８４０）である。妥当な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散体の場合には必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。

【0183】

非経口注射のためのこれらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤等の添加剤も含有してよい。組成物の微生物汚染の予防は、種々の抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等を用いて遂行することができる。等張剤、例えば、砂糖、塩化ナトリウム等を含むことも望ましい場合がある。吸収を遅延させることができる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によって、注射用医薬組成物の持続的吸収を起こすことができる。

【0184】

経口投与のための固体剤形は、カプセル剤、錠剤、チュアブル錠、キャンディー剤、丸剤、散剤およびマルチ微粒子調製物（顆粒剤）を含む。そのような固体剤形では、本発明の化合物または組合せは、少なくとも１つの不活性添加剤、賦形剤または担体と混和される。好適な添加剤、賦形剤または担体は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム等の材料、ならびに／または（ａ）１つもしくは複数の充填剤もしくは増量剤（例えば、微結晶性セルロース（ＦＭＣ Ｃｏｒｐ．からＡｖｉｃｅｌ（商標）として入手可能）デンプン、ラクトース、スクロース、マンニトール、ケイ酸、キシリトール、ソルビトール、デキストロース、リン酸水素カルシウム、デキストリン、アルファ－シクロデキストリン、ベータ－シクロデキストリン、ポリエチレングリコール、中鎖脂肪酸、酸化チタン、酸化マグネシウム、酸化アルミニウム等）；（ｂ）１つもしくは複数の結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、プルラン、アルファ化デンプン、寒天、トラガカント、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、アカシア等）；（ｃ）１つもしくは複数の保湿剤（例えば、グリセロール等）；（ｄ）１つもしくは複数の崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、バレイショもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定の複合ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム（Ｅｄｗａｒｄ Ｍｅｎｄｅｌｌ Ｃｏ．からＥｘｐｌｏｔａｂ（商標）として入手可能）、架橋ポリビニルピロリドン、クロスカルメロースナトリウムＡ型（Ａｃ－ｄｉ－ｓｏｌ（商標）として入手可能）、ポリアクリリンカリウム（ｐｏｌｙａｃｒｉｌｉｎ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）（イオン交換樹脂）等）；（ｅ）１つもしくは複数の溶液緩染剤（例えば、パラフィン等）；（ｆ）１つもしくは複数の吸収加速剤（例えば、第四級アンモニウム化合物等）；（ｇ）１つもしくは複数の湿潤剤（例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール等）；（ｈ）１つもしくは複数の吸着剤（例えば、カオリン、ベントナイト等）；ならびに／または（ｉ）１つもしくは複数の滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、水素化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、微結晶性ワックス、黄蝋、白蝋、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム等）を含む。カプセル剤および錠剤の場合には、剤形は緩衝剤も含み得る。

【0185】

同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖等の添加剤および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟質または硬質充填ゼラチンカプセル剤における充填剤としても使用され得る。

【0186】

錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤および顆粒剤等の固体剤形は、腸溶コーティングおよび当技術分野において周知である他のもの等のコーティングおよび外殻を用いて調製され得る。それらは、乳白剤を含有してもよく、本発明の化合物および／または追加の医薬作用物質を遅延方式で放出するような組成のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質およびワックスである。薬物は、適切な場合、上記で言及した添加剤の１つまたは複数を加えた、マイクロカプセル形態であってもよい。

【0187】

錠剤では、活性剤は、典型的には、製剤の５０％未満（重量で）、例えば、重量で５％または２．５％等の約１０％未満を構成することになる。製剤の主部は、充填剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤を含み、香味剤を含んでいてもよい。これらの添加剤の組成は、当技術分野において周知である。高頻度で、充填剤／賦形剤は、下記の成分：微結晶性セルロース、マンニトール、ラクトース（全種類）、デンプンおよびリン酸二カルシウムのうちの２つ以上の混合物を含むことになる。充填剤／賦形剤混合物は、典型的には、製剤の９８％未満、好ましくは９５％未満、例えば９３．５％を構成する。好ましい崩壊剤は、Ａｃ－ｄｉ－ｓｏｌ（商標）、Ｅｘｐｌｏｔａｂ（商標）、デンプンおよびラウリル硫酸ナトリウムを含む。存在する場合、崩壊剤は、通常、製剤の１０％未満または５％未満、例えば約３％を構成することになる。好ましい滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムである。存在する場合、滑沢剤は、通常、製剤の５％未満または３％未満、例えば約１％を構成することになる。

【0188】

錠剤は、標準的な錠剤化プロセス、例えば、直接圧縮または湿式、乾式もしくは融解造粒、融解凝固プロセスおよび押出によって製造され得る。錠剤核は、単または多層であってよく、当技術分野において公知の適切な保護膜でコーティングされ得る。

【0189】

経口投与のための液体剤形は、薬学的に許容できる乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を含む。本発明の化合物または組合せに加えて、液体剤形は、当技術分野において一般的に使用される不活性賦形剤、例を挙げると、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（例えば、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ種子油等）、Ｍｉｇｌｙｏｌｅ（登録商標）（ＣＯＮＤＥＡ Ｖｉｓｔａ Ｃｏ．、Ｃｒａｎｆｏｒｄ、Ｎ．Ｊ．から入手可能）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタン脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物等を含有してよい。

【0190】

そのような不活性賦形剤のほかに、組成物は、湿潤剤、乳化および懸濁化剤、甘味、香味および着香剤等の添加剤も含み得る。

【0191】

本発明の組成物または組合せの経口液体形態は、活性化合物が完全に溶解する溶液を含む。溶媒の例は、経口投与に好適なすべての薬学的に先例のある溶媒、特に、本発明の化合物が良好な溶解度を示すもの、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、食用油ならびにグリセリルおよびグリセリドベースの系を含む。グリセリルおよびグリセリドベースの系は、例えば、下記のブランド製品（および対応するジェネリック製品）：Ｃａｐｔｅｘ（商標）３５５ＥＰ（トリカプリル酸／カプリン酸グリセリル、Ａｂｉｔｅｃ製、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｏｈｉｏ）、Ｃｒｏｄａｍｏｌ（商標）ＧＴＣ／Ｃ（中鎖トリグリセリド、Ｃｒｏｄａ製、Ｃｏｗｉｃｋ Ｈａｌｌ、ＵＫ）またはＬａｂｒａｆａｃ（商標）ＣＣ（中鎖トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｉｄｅｓ）、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ製）、Ｃａｐｔｅｘ（商標）５００Ｐ（三酢酸グリセリル、すなわちトリアセチン、Ａｂｉｔｅｃ製）、Ｃａｐｍｕｌ（商標）ＭＣＭ（中鎖モノおよびジグリセリド、Ａｂｉｔｅｃ製）、Ｍｉｇｙｏｌ（商標）８１２（カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、Ｃｏｎｄｅａ製、Ｃｒａｎｆｏｒｄ Ｎ．Ｊ．）、Ｍｉｇｙｏｌ（商標）８２９（カプリル酸／カプリン酸／コハク酸トリグリセリド、Ｃｏｎｄｅａ製）、Ｍｉｇｙｏｌ（商標）８４０（ジカプリル酸／ジカプリン酸プロピレングリコール、Ｃｏｎｄｅａ製）、Ｌａｂｒａｆｉｌ（商標）Ｍ１９４４ＣＳ（オレオイルマクロゴール－６グリセリド、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ製）、Ｐｅｃｅｏｌ（商標）（モノオレイン酸グリセリル、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ製）およびＭａｉｓｉｎｅ（商標）３５－１（モノオレイン酸グリセリル、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ製）を含み得る。特に興味深いのは、中鎖（約Ｃ．ｓｕｂ．８からＣ．ｓｕｂ．１０）トリグリセリド油である。これらの溶媒は、高頻度で、組成物の主部、すなわち、約５０％超、通常は、約８０％、例えば約９５％または９９％超を構成する。アジュバントおよび添加物が、溶媒とともに、主に矯味剤、嗜好性および香味剤、酸化防止剤、安定剤、質感および粘度調整剤ならびに可溶化剤として含まれていてもよい。

【0192】

懸濁剤は、本発明の化合物または組合せに加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタ水酸化物、ベントナイト、寒天、ならびにトラガカント、またはこれらの物質の混合物等の担体をさらに含んでよい。

【0193】

直腸または膣内投与のための組成物は、好ましくは、坐剤を含み、これは、本発明の化合物または組合せを、通常の室温では固体であるが体温では液体であり、したがって、直腸または膣腔内で融解し、それにより、活性成分を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ワックス等の好適な非刺激性添加剤または担体と混合することによって調製され得る。

【0194】

本発明の組成物または組合せの局所投与のための剤形は、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、散剤およびスプレー剤を含む。薬物は、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体、および、必要とされ得る任意の保存剤、緩衝液または噴射剤と混和される。

【0195】

本発明の組成物に含有される本発明の化合物のいくつかは、水への溶解度が乏しい、例えば約１μｇ／ｍＬ未満であってよい。したがって、上記で論じた中鎖トリグリセリド油等の可溶化非水性溶媒中の液体組成物は、これらの化合物のための好ましい剤形である。

【0196】

スプレー乾燥プロセスによって形成された分散体を含む固体非晶質分散体も、本発明の組成物に含有される溶解度が乏しい化合物のための好ましい剤形である。「固体非晶質分散体」が意味するのは、溶解度が乏しい化合物の少なくとも一部が非晶質形態であり、水溶性ポリマー中に分散されている、固体材料である。「非晶質」が意味するのは、溶解度が乏しい化合物が結晶性ではないことである。「結晶性」が意味するのは、化合物が各次元において少なくとも１００の繰り返し単位の三次元の長距離秩序を呈することである。故に、非晶質という用語は、本質的に秩序を有さない材料だけでなく、わずかな程度の秩序を有し得るがその秩序が三次元未満であるおよび／または短距離しかない材料も含むように意図されている。非晶質材料は、当技術分野において公知の技術、例を挙げると、粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）結晶学、固体状態ＮＭＲ、または示差走査熱量測定（ＤＳＣ）等の熱的技術によって特徴付けられ得る。

【0197】

好ましくは、固体非晶質分散体中の溶解度が乏しい化合物の少なくとも大部分（すなわち、少なくとも約６０ｗｔ％）が非晶質である。化合物は、比較的純粋な非晶質ドメインまたは領域中の固体非晶質分散体内に、ポリマー全体に均質に分布している化合物の固溶体またはこれらの状態もしくはそれらの間の中間にある状態の任意の組合せとして、存在することができる。好ましくは、固体非晶質分散体は実質的に均質であり、そのため、非晶質化合物はポリマー全体に可能な限り均質に分散されている。本明細書において使用される場合、「実質的に均質」は、固体非晶質分散体内の比較的純粋な非晶質ドメインまたは領域中に存在する化合物の割合が比較的小さく、薬物の総量のおよそ２０ｗｔ％未満、好ましくは１０ｗｔ％未満であることを意味する。

【0198】

固体非晶質分散体における使用に好適な水溶性ポリマーは、溶解度が乏しい化合物と有害な方式で化学的に反応せず、薬学的に許容できるものであり、生理的に関連するｐＨ（例えば、１～８）で水溶液への少なくともいくらかの溶解度を有するという意味で、不活性であるべきである。ポリマーは、中性またはイオン化可能であることができ、１～８のｐＨ範囲の少なくとも一部を上回る、少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬの水溶解度を有するべきである。

【0199】

本発明での使用に好適な水溶性ポリマーは、セルロースであっても非セルロースであってもよい。ポリマーは、水溶液中で中性またはイオン化可能であってよい。これらのうち、イオン化可能およびセルロースポリマーが好ましく、イオン化可能セルロースポリマーがより好ましい。

【0200】

例示的な水溶性ポリマーは、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＡＳ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＰ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、トリメリト酸酢酸セルロース（ＣＡＴ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのブロックコポリマー（ＰＥＯ／ＰＰＯ、ポロキサマーとしても公知である）、ならびにそれらの混合物を含む。とりわけ好ましいポリマーは、ＨＰＭＣＡＳ、ＨＰＭＣ、ＨＰＭＣＰ、ＣＭＥＣ、ＣＡＰ、ＣＡＴ、ＰＶＰ、ポロキサマー、およびそれらの混合物を含む。最も好ましいのは、ＨＰＭＣＡＳである。欧州特許出願公開第０９０１７８６Ａ２号を参照されたく、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0201】

固体非晶質分散体は、溶解度が乏しい化合物の少なくとも大部分（少なくとも６０％）が非晶質状態であるという結果をもたらす固体非晶質分散体を形成するための任意のプロセスに従って調製され得る。そのようなプロセスは、機械的、熱的および溶媒プロセスを含む。例示的な機械的プロセスは、製粉および押出；高温溶融、溶媒修飾溶融（ｓｏｌｖｅｎｔ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｆｕｓｉｏｎ）および融解凝固プロセスを含む融解プロセス；ならびに非溶媒沈殿、スプレーコーティングおよびスプレー乾燥を含む溶媒プロセスを含む。例えば、下記の米国特許を参照されたく、その関連する開示は、参照により本明細書に組み込まれる：押出プロセスにより分散体を形成することを記述する第５，４５６，９２３号および第５，９３９，０９９号；製粉プロセスにより分散体を形成することを記述する第５，３４０，５９１号および第４，６７３，５６４号；ならびに融解凝固プロセスにより分散体を形成することを記述する第５，７０７，６４６号および第４，８９４，２３５号。好ましいプロセスでは、固体非晶質分散体は、欧州特許出願公開第０９０１７８６Ａ２号で開示される通り、スプレー乾燥によって形成される。このプロセスでは、化合物およびポリマーが、アセトンまたはメタノール等の溶媒に溶解され、次いで、スプレー乾燥によって溶媒が溶液から迅速に除去されて、固体非晶質分散体を形成する。固体非晶質分散体は、化合物の最大約９９ｗｔ％、例えば、所望される通りに１ｗｔ％、５ｗｔ％、１０ｗｔ％、２５ｗｔ％、５０ｗｔ％、７５ｗｔ％、９５ｗｔ％、または９８ｗｔ％を含有するように調製され得る。

【0202】

固体分散体は、それ自体が剤形として使用されてもよいし、またはカプセル剤、錠剤、液剤もしくは懸濁剤等の他の剤形の調製において製造使用製品（ＭＵＰ）としての働きをしてもよい。水性懸濁剤の例は、２％ポリソルベート－８０中に２．５ｍｇ／ｍＬの化合物を含有する１：１（ｗ／ｗ）化合物／ＨＰＭＣＡＳ－ＨＦスプレー乾燥分散体の水性懸濁剤である。錠剤またはカプセル剤において使用するための固体分散体は、概して、典型的にはそのような剤形において見られる他の添加剤またはアジュバントと混合されることになる。例えば、カプセル剤のための例示的な充填剤は、２：１（ｗ／ｗ）化合物／ＨＰＭＣＡＳ－ＭＦスプレー乾燥分散体（６０％）、ラクトース（高速流）（１５％）、微結晶性セルロース（例えば、アビセル．ｓｕｐ．（Ｒ０－１０２）（１５．８％）、ナトリウムデンプン（７％）、ラウリル硫酸ナトリウム（２％）およびステアリン酸マグネシウム（１％）を含有する。

【0203】

ＨＰＭＣＡＳポリマーは、日本、東京の信越化学工業株式会社からそれぞれＡｑｏａ（登録商標）－ＬＦ、Ａｑｏａｔ（登録商標）－ＭＦおよびＡｑｏａｔ（登録商標）－ＨＦとして、低、中および高グレードで入手可能である。より高いＭＦおよびＨＦグレードが概して好ましい。

【0204】

下記の段落は、非ヒト動物に有用な、例示的な製剤、投薬量等について記述するものである。化合物Ａまたは薬学的に許容できるその塩の、化合物Ｄまたは薬学的に許容できるその塩と組み合わせた、２つの作用物質としてのまたは別の作用物質と組み合わせた投与は、経口的にまたは非経口的に達成され得る。

【0205】

有効用量が受けられるような量の、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩が、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩とともに、一緒にまたは別の作用物質と組み合わせて投与される。概して、動物に経口的に投与される１日用量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１から約１，０００ｍｇの間、例えば、約０．０１から約３００ｍｇ／ｋｇの間、または約０．０１から約１００ｍｇ／ｋｇの間、または体重１ｋｇ当たり約０．０１から約５０ｍｇの間、または約０．０１から約２５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１から約１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１から約５ｍｇ／ｋｇの間である。投与される４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸または薬学的に許容できるその塩（化合物Ａ）の１日用量は、２ｍｇ、３ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、または５０ｍｇであってよい。１日用量は、１日に２回（例えば、「ＢＩＤ」または「ｑ１２」時間投薬間隔）等の複数回用量に分割されてよい。例えば、ある特定の事例では、化合物Ａの１日用量は、１５ｍｇを１日に２回（例えば、ｑ１２時間）として投与されてよい。投与される２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドまたは薬学的に許容できるその塩（実施例４の化合物）の１日用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、または８０ｍｇであってよい。１日用量は、１日に２回（例えば、「ＢＩＤ」または「ｑ１２時間投薬間隔」等の複数回用量に分割されてよい。例えば、ある特定の事例では、化合物Ｄの１日用量は、３００ｍｇを１日に２回（例えば、ｑ１２時間）として投与されてよい。

【0206】

好都合なことに、本発明の組成物（または組合せ）は、治療投薬量の化合物が日常の給水とともに摂取されるように、飲用水中に担持され得る。組成物は、好ましくは液体の水溶性濃縮物（水溶性塩の水溶液等）の形態で、飲用水に直接計り入れることができる。

【0207】

これらの組成物を、例えば上記で詳述した適応症のために、ヒト以外の動物に投与してもよい。各活性原料の投与される正確な投薬量は、処置されている動物の種類および病状の種類、動物の年齢、ならびに投与ルートを含むがこれらに限定されない任意の数の要因に応じて変動することになる。

【0208】

処置されている適応症に有効である、式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物を含有する組成物の投薬量が使用される。そのような投薬量は、上記で参照したおよび本明細書で提供されるもの等の標準的なアッセイによって決定することができる。

【0209】

これらの投薬量は、約６０ｋｇから７０ｋｇの重量を有する平均的なヒト対象に基づく。内科医は、乳児および高齢者等、その重量がこの範囲外となる対象のための用量を決定することが容易にできるであろう。

【0210】

投薬量レジメンは、最適な所望の応答を提供するように調整され得る。例えば、単回ボーラスが投与されてよく、数回の分割用量が経時的に投与されてよく、または、用量が、治療状況の緊急事態によって指し示されるように比例的に低減もしくは増大されてよい。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために投薬量単位形態で非経口組成物を製剤化することがとりわけ有利である。投薬量単位形態は、本明細書において使用される場合、処置される哺乳動物対象のための単位投薬量として適した物理的に不連続な単位を指し、所定分量の活性化合物を含有する各単位は、所望の治療効果を、必要とされる医薬担体と一緒に生成するように算出した。本発明の投薬量単位形態についての仕様は、（ａ）化学療法剤の独自の特徴および実現される特定の治療または予防効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の処置のためにそのような活性化合物を化合物化する技術分野に固有の限定によって決定付けられ、それらに直接依存する。

【0211】

故に、当業者ならば、本明細書で提供される開示に基づき、用量および投薬レジメンが治療技術分野において周知の方法に従って調整されることが分かるであろう。すなわち、最大耐量を容易に確立することができ、検出可能な治療的利益を患者に提供するために各作用物質を投与する一次的な要求と同様に、患者に検出可能な治療的利益を提供する有効量も決定され得る。したがって、ある特定の用量および投与レジメンが本明細書において例示されているが、これらの例は、本発明を実践する際に患者に提供され得る用量および投与レジメンを何ら限定するものではない。

【0212】

用量値は、緩和すべき状態の種類および重症度とともに変動し得、単回または複数回用量を含み得ることに留意されたい。任意の特定の対象では、個々の必要性および組成物を投与するまたはその投与を監督する人物の専門的判定に従って、具体的な投薬量レジメンが経時的に調整されるべきであること、ならびに、本明細書において明記されている投薬量範囲は例示的なものにすぎず、特許請求されている組成物の範囲も実践も制限することを意図していないことを、さらに理解されたい。例えば、用量は、薬物動態または薬力学的パラメーターに基づいて調整されてよく、該パラメーターは、毒性効果および／または検査値等の臨床効果を含み得る。故に、本発明は、当業者によって決定される通りの患者内の用量漸増を包含する。化学療法剤の投与のための適切な投薬量およびレジメン（ｒｅｇｉｍｅｎｔｓ）を決定することは、関連技術分野において周知であり、本明細書において開示される教示が提供されれば、当業者により、包含されると理解されるであろう。

【0213】

本発明はさらに、医薬（単位投薬量錠剤または単位投薬量カプセル剤等）として使用するための式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の使用を含む。別の実施形態では、本発明は、処置方法について論じた上記の項において先に同定された状態の１つまたは複数を処置するための医薬（単位投薬量錠剤または単位投薬量カプセル剤等）の製造のための、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の使用を含む。

【0214】

本発明の医薬組成物は、単回単位用量として、または複数の単回単位用量として、調製、包装またはバルク販売されてよい。本明細書において使用される場合、「単位用量」は、所定量の活性原料を含む医薬組成物の不連続な量である。活性原料の量は、概して、対象に投与されるであろう活性原料の投薬量、または、例えばそのような投薬量の２分の１もしくは３分の１等、そのような投薬量の好都合な割合に等しい。

【0215】

これらの作用物質および本発明の化合物を、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液等の薬学的に許容できるビヒクルと組み合わせることができる。特定の投薬量レジメン、すなわち、用量、タイミングおよび繰り返しは、特定の個体およびその個体の病歴によって決まることになる。

【0216】

許容できる担体、添加剤または安定剤は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントに非毒性であり、緩衝液、例を挙げると、ホスフェート、シトレートおよび他の有機酸；塩、例を挙げると、塩化ナトリウム；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例を挙げると、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例を挙げると、血清アルブミン、ゼラチンまたはＩｇ；親水性ポリマー、例を挙げると、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例を挙げると、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；単糖、二糖、およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート化剤、例を挙げると、ＥＤＴＡ；糖、例を挙げると、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩を形成する対イオン、例を挙げると、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例を挙げると、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含んでよい。

【0217】

これらの作用物質および／または本発明の化合物を含有するリポソームは、米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号において記述されているもの等、当技術分野において公知の方法によって調製される。循環時間が強化されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号において開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いる逆相蒸発法によって産生され得る。リポソームは、定義された細孔径のフィルターを通して押出されて、所望の直径を持つリポソームを産出する。

【0218】

これらの作用物質および／または本発明の化合物は、例えば、コアセルベーション技術によって、または、界面重合、例えば、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセルによって、それぞれコロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）もしくはマクロエマルション中に調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）で開示されている。

【0219】

持続放出調製物が使用され得る。持続放出調製物の好適な例は、本発明の化合物を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを含み、このマトリックスは、造形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）または’ポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸およびＬ－グルタミン酸エチルのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、例を挙げると、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドで構成される注射用マイクロスフェア）で使用されているもの、イソ酪酸酢酸スクロース、ならびにポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含む。

【0220】

静脈内投与に使用される製剤は、無菌でなくてはならない。これは、例えば、滅菌濾過膜に通す濾過によって容易に遂行される。本発明の化合物は、概して、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈注射溶液バッグまたはバイアルに入れられる。

【0221】

好適な乳剤は、市販されている脂肪乳剤、例を挙げると、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）を使用して調製され得る。活性原料は、予め混合されたエマルション組成物に溶解されるか、または代替として、油（例えば、大豆油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、コーン油またはアーモンド油）およびリン脂質（例えば、卵リン脂質、大豆リン脂質または大豆レシチン）と水との混合時に形成されたエマルションに溶解されるかのいずれかであってよい。乳剤の等張性を調整するために、他の原料、例えば、グリセロールまたはグルコースを添加してよいことが分かるであろう。好適な乳剤は、典型的には、最大２０％、例えば、５から２０％の間の油を含有することになる。脂肪乳剤は、０．１から１．０μｍ、特に０．１から０．５μｍの間の脂肪小滴を含み、５．５から８．０の範囲内のｐＨを有することができる。

【0222】

エマルション組成物は、本発明の化合物を、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその成分（大豆油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することによって調製されるものであることができる。

【0223】

吸入または吹送のための組成物は、薬学的に許容できる、水性もしくは有機溶媒またはそれらの混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は、上記で明記した通りの好適な薬学的に許容できる添加剤を含有してよい。一部の実施形態では、組成物は、局部的または全身的効果のために経口または鼻呼吸ルートによって投与される。好ましくは無菌の薬学的に許容できる溶媒中の組成物は、ガスの使用によって噴霧され得る。噴霧溶液は、噴霧デバイスから直接吸い込まれ得るか、または、噴霧デバイスを、フェイスマスク、テントもしくは間欠陽圧呼吸器に取り付けてよい。溶液、懸濁液または粉末組成物は、製剤を適切な方式で送達するデバイスから、好ましくは経口的にまたは鼻内に投与され得る。

【0224】

本明細書における組成物は、経口、口腔、鼻腔内、非経口（例えば、静脈内、筋肉内または皮下）もしくは直腸投与のために、または吸入による投与に好適な形態で、製剤化され得る。本発明の組成物は、持続送達のために製剤化されてもよい。

【0225】

ある特定の量の活性原料を用いて種々の医薬組成物を調製する方法は、公知であるか、または、本開示を踏まえて、当業者には明らかとなるであろう。医薬組成物を調製する方法の例については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、２０００）を参照されたい。

【0226】

本発明に従う医薬組成物は、０．１％～９５％、好ましくは１％～７０％の本発明の化合物を含有してよい。いずれにせよ、投与される組成物は、ある分量の本発明に従う化合物を、処置されている対象の疾患／状態を処置するために有効な量で含有することになる。

【0227】

本発明は、別個に投与され得る活性原料の組成物を用いる本明細書において記述される疾患／状態の処置に関する態様を有することから、本発明は、別個の医薬組成物をキット形態で組み合わせることにも関する。キットは、２つの別個の医薬組成物：式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物、そのプロドラッグまたはそのような化合物もしくはプロドラッグの塩と、上述した通りの第２の化合物とを含む。キットは、容器、分割されたボトルまたは分割されたホイル小包等の別個の組成物を含有するための手段を含む。典型的には、キットは、別個の成分の投与指示書を含む。キット形態は、別個の成分が好ましくは異なる剤形（例えば、経口および非経口）で投与され、異なる投薬間隔で投与される場合、または、組合せの個々の成分の滴定が処方医師によって所望される場合に、特に有利である。

【0228】

そのようなキットの例は、いわゆるブリスターパックである。ブリスターパックは、包装業界において周知であり、医薬単位剤形（錠剤、カプセル剤等）の包装に広く使用されている。ブリスターパックは、概して、好ましくは透明なプラスチック材料のホイルで覆われた比較的剛性の材料のシートからなる。包装プロセス中に、陥凹がプラスチックホイル中に形成される。陥凹は、錠剤またはカプセル剤が梱包されるサイズおよび形状を有する。次に、錠剤またはカプセル剤が陥凹に入れられ、比較的剛性の材料のシートが、陥凹が形成された方向とは反対のホイルの面で、プラスチックホイルに対して密封される。結果として、錠剤またはカプセル剤は、プラスチックホイルとシートとの間の陥凹内に密封される。好ましくは、シートの強さは、陥凹に圧力を手動で印加することによって錠剤またはカプセル剤をブリスターパックから除去することができ、それにより、シート内の陥凹の場所に開口部が形成されるようなものである。次いで、錠剤またはカプセル剤を、前記開口部を介して除去することができる。

【0229】

キットへの記憶補助を、例えば、錠剤またはカプセル剤の隣に、そのように指定されている錠剤またはカプセル剤を摂取すべきレジメンの日数の数字と一致する数字の形態で提供することが望ましい場合がある。そのような記憶補助の別の例は、例えば、例えば次の通りにカードに印刷されたカレンダーである：「第一週、月曜日、火曜日等・・・第二週、月曜日、火曜日、・・・」等。記憶補助の他の変形形態は容易に明らかとなるであろう。「１日用量」は、所与の日に服用される単一の錠剤もしくはカプセル剤または数個の丸剤もしくはカプセル剤であることができる。また、式（Ｉ）または（ＩＩ）化合物の１日用量は、１個の錠剤またはカプセル剤からなっていてもよく、一方、第２の化合物の１日用量は、数個の錠剤またはカプセル剤からなっていてもよく、逆も然りである。記憶補助はこれを反映すべきである。

【0230】

本発明の別の具体的な実施形態では、１日用量を一度に１回分ずつそれらの意図された使用順序で分注するように設計されたディスペンサーが提供される。好ましくは、ディスペンサーは、レジメンへのコンプライアンスをさらに容易にするように、記憶補助を装備している。そのような記憶補助の例は、分注された１日用量の数を指し示す機械的計数器である。そのような記憶補助の別の例は、液晶表示器と、または、例えば、前回の１日用量が服用された日付を読み出し、かつ／または次の用量を服用すべき日付を思い出させる、可聴リマインダーシグナルと連結された、電池式マイクロチップメモリである。

【0231】

また、本発明は、一緒に投与され得る活性原料の組成物を用いる、本明細書において記述される疾患／状態の処置に関する態様を有するため、本発明は、別個の医薬組成物を、単一の錠剤もしくはカプセル剤、二重層もしくは多層の錠剤もしくはカプセル剤等の（であるがこれらに限定されない）単一剤形で、または、錠剤もしくはカプセル剤内の隔離された成分もしくは区画の使用によって組み合わせることにも関する。

【0232】

活性原料は、薬学的に許容できる賦形剤、添加剤、ビヒクルまたは担体から選択される追加の溶媒、共溶媒、添加剤または錯体形成剤を加えてまたは加えずに、水性または非水性ビヒクル中の溶液として送達され得る。

【0233】

活性原料は、薬学的に許容できる添加剤を加えて、固体分散体としてまたは自己乳化薬物送達系（ＳＥＤＤＳ）として製剤化され得る。

【0234】

活性原料は、即時放出または徐放出の錠剤またはカプセル剤として製剤化され得る。代替として、活性原料は、追加の添加剤を加えずに、カプセル殻内の活性原料として単独で送達され得る。

【実施例0235】

実験手順
別段の定めがない限り、出発材料は、概して、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｄｈａｍ、ＮＨ）、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｆａｉｒｌａｗｎ、ＮＪ）、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．（Ｃｏｒｎｗａｌｌ、Ｅｎｇｌａｎｄ）およびＴｙｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）等の商業的供給源から入手可能である。ある特定の一般的な略語および頭字語が用いられており、それらは、ＡｃＯＨ（酢酸）、ＤＢＵ（１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン）、ＣＤＩ（１，１’－カルボニルジイミダゾール）、ＤＣＭ（ジクロロメタン）、ＤＥＡ（ジエチルアミン）、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＭＡＰ（４－ジメチルアミノピリジン）、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＥＤＣＩ（１－［３－（ジメチルアミノ）プロピル］－３－エチルカルボジイミド塩酸塩）、Ｅｔ_２Ｏ（ジエチルエーテル）、ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）、ＥｔＯＨ（エタノール）、Ｇまたはｇ（グラム）、ＨＡＴＵ（Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢＴＵ（Ｏ－ベンゾトリアゾール－１－イル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＯＢＴ（１－ヒドロキシベンゾトリアゾール）、Ｈまたはｈ（時間）、ＩＰＡ（イソプロピルアルコール）、ｉＰｒＯＨ（２－プロパノール）、ＫＨＭＤＳ（カリウムビス（トリメチルシリル）アミド）、ＭｅＯＨ（メタノール）、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）_３（トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム）、ＮａＨＭＤＳ（ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド）、ＮＭＰ（Ｎ－メチルピロリドン）、ＲＨ（相対湿度）、ＲＴまたはｒｔ（周囲温度（約２０から２５℃）と同じである室温）、ＳＥＭ（［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル）、ＴＥＡ（トリエチルアミン）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、およびＴ_３Ｐ（プロパンホスホン酸無水物；２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスフィナン２，４，６－トリオキシド）を含み得る。

【0236】

^１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、いずれの場合も、推定構造と一致していた。特徴的な化学シフト（δ）は、重水素化溶媒中の残留プロトンシグナル（７．２７ｐｐｍのＣＨＣｌ_３、３．３１ｐｐｍのＣＤ_２ＨＯＤ）に対するパーツパーミリオン（ｐｐｍ）で記され、主要ピークの呼称を表す従来の略語：例えば、ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｍ、多重線；ｂｒ、広域を使用して報告される。

【0237】

ｓｓＮＭＲは、固体状態ＮＭＲを意味する。

【0238】

ＰＸＲＤは、粉末Ｘ線回折を意味する。

【0239】

用語「実質的に同じ」は、Ｘ線粉末回折パターンについて記述するために使用される場合、そのピークが＋／－０．２°２θの標準偏差内であるパターンを含むことを意味する。

【0240】

本明細書において使用される場合、特定の結晶形態に対する用語「実質的に純粋な」は、該結晶形態が、重量で１０％未満、好ましくは５％未満、好ましくは３％未満、好ましくは１％未満の、化合物Ａまたは化合物Ｄの任意の他の物理的形態を含むことを意味する。

【0241】

反応は、空気中で、または、酸素もしくは水分に感受性の試薬もしくは中間体を用いる場合には、不活性雰囲気（窒素またはアルゴン）下で、実施した。適切な場合、反応装置は、ヒートガンを使用して動的真空下で乾燥させ、無水溶媒（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷｉｓｃｏｎｓｉｎのＳｕｒｅ－Ｓｅａｌ（商標）製品、またはＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ、ＮＪのＤｒｉＳｏｌｖ（商標）製品）を用いた。一部の場合には、下記の水のＱＣ基準に到達するまで、４Å分子篩を詰めたカラムに市販の溶媒を通過させた：ａ）ジクロロメタン、トルエン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドおよびテトラヒドロフランについては１００ｐｐｍ未満；ｂ）メタノール、エタノール、１，４－ジオキサンおよびジイソプロピルアミンについては１８０ｐｐｍ未満。非常に感受性が高い反応では、溶媒を、金属ナトリウム、水素化カルシウムまたは分子篩でさらに処理し、使用直前に蒸留した。他の市販の溶媒および試薬は、さらに精製することなく使用した。他の実施例または方法における手順を参照する合成では、反応条件（反応時間および温度）は変動し得る。生成物は、概して、真空下で乾燥させた後、さらなる反応に持ち越すか、または生物学的検査に送った。

【0242】

指示されている場合、ＢｉｏｔａｇｅイニシエーターまたはＰｅｒｓｏｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙエムリーズオプティマイザーマイクロ波を使用するマイクロ波照射によって、反応物を加熱した。反応進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣＭＳ）および／または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用してモニターした。ＴＬＣは、蛍光指示薬（２５４ｎｍ励起波長）を用いるプレコートシリカゲルプレートで実施し、ＵＶ光下でならびに／またはＩ_２、ＫＭｎＯ_４、ＣｏＣｌ_２、リンモリブデン酸および／もしくはモリブデン酸セリウムアンモニウム染色を用いて可視化した。ＬＣＭＳデータは、Ｌｅａｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓオートサンプラー、ジェミニＣ１８カラム、ＭｅＣＮ／水勾配、および、ＴＦＡ、ギ酸または水酸化アンモニウム調整剤のいずれかを用いて、アジレント１１００シリーズ機器で獲得した。カラム溶離液は、Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ質量分析計走査を、１００から１２００Ｄａまでの正および負イオンモード両方で使用して分析した。他の同様の機器も使用した。ＨＰＬＣデータは、ジェミニまたはクロスブリッジＣ１８カラム、ＭｅＣＮ／水勾配、および、ＴＦＡまたは水酸化アンモニウム調整剤のいずれかを使用して、アジレント１１００シリーズ機器で獲得した。試料は、電子イオン化を使用して、５０から５５０ＤａまでＨＰ５９７３質量選択検出器走査で分析した。精製は、Ｉｓｃｏコンビフラッシュコンパニオン、ＡｎａＬｏｇｉｘインテリフラッシュ２８０、Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＰ１、またはＢｉｏｔａｇｅアイソレラワン機器およびプレパックＩｓｃｏレディセップもしくはＢｉｏｔａｇｅスナップシリカカートリッジを使用する中速液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）によって実施した。キラル精製は、ＢｅｒｇｅｒまたはＴｈａｒ機器；キラルパック－ＡＤ、－ＡＳ、－ＩＣ、キラルセル－ＯＤまたは－ＯＪカラム；および、単独のまたはＴＦＡもしくはｉＰｒＮＨ_２を使用して修飾された、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、ｉＰｒＯＨまたはＭｅＣＮを加えたＣＯ_２混合物を使用する、キラル超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によって実施した。ＵＶ検出を使用して、分別捕集を誘引した。他の実施例または方法における手順を参照する合成では、精製は変動し得、概して、溶離液／勾配に使用する溶媒および溶媒比は、適切なＲ_ｆまたは保持時間を提供するように選択した。

【0243】

質量分析データは、ＬＣＭＳ分析により報告される。質量分析（ＭＳ）は、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）、電子衝撃イオン化（ＥＩ）または電子散乱（ＥＳ）イオン化源を介して実施した。プロトン磁気共鳴スペクトル法（^１Ｈ ＮＭＲ）化学シフトは、テトラメチルシランから低磁場のパーツパーミリオンで記され、３００、４００、５００または６００ＭＨｚのＶａｒｉａｎ、ＢｒｕｋｅｒまたはＪｅｏｌ分析計で記録した。化学シフトは、重水素化溶媒残留ピーク（クロロホルム、７．２６ｐｐｍ；ＣＤ_２ＨＯＤ、３．３１ｐｐｍ；アセトニトリル－ｄ_２、１．９４ｐｐｍ；ジメチルスルホキシド－ｄ_５、２．５０ｐｐｍ；ＤＨＯ、４．７９ｐｐｍ）を参照して、パーツパーミリオン（ｐｐｍ、δ）で表現される。ピーク形状は、次の通りに記述される：ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｑｕｉｎ、五重線；ｍ、多重線；ｂｒｓ、広域一重線；ａｐｐ、見掛け。分析的ＳＦＣデータは、上述した通りにＢｅｒｇｅｒ分析機器で獲得した。旋光度データは、１ｄｍセルを使用してＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒモデル３４３偏光計で獲得した。シリカゲルクロマトグラフィーは、ＢｉｏｔａｇｅおよびＩＳＣＯを含む種々の商業的供給業者によって予め包装されたカラムを使用して、中圧ＢｉｏｔａｇｅまたはＩＳＣＯシステムを主として使用し実施した。微量分析は、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．によって実施され、算出された値の０．４％以内であった。

【0244】

別段の注記がない限り、化学反応は、室温（摂氏約２３度）で実施した。

【0245】

別段の注記がない限り、すべての反応物質は、さらに精製することなく商業的に入手した、または文献において公知の方法を使用して調製した。

【0246】

用語「濃縮した」、「蒸発させた」および「真空で濃縮した」は、６０℃未満の浴温度を持つロータリーエバポレーターにおける、減圧での溶媒の除去を指す。略語「ｍｉｎ」および「ｈ」は、それぞれ「分」および「時間」を表す。用語「ＴＬＣ」は薄層クロマトグラフィーを指し、「室温または周囲温度」は、１８から２５℃の間の温度を意味し、「ＬＣＭＳ」は、液体クロマトグラフィー－質量分析を指し、「ＵＰＬＣ」は、超高速液体クロマトグラフィーを指し、「ＨＰＬＣ」は、高速液体クロマトグラフィーを指し、「ＳＦＣ」は、超臨界流体クロマトグラフィーを指す。

【0247】

水素化は、加圧水素ガス下、Ｐａｒｒシェーカー内で、または、完全水素および１～２ｍＬ／分の間の流速で、指定された温度にて、Ｔｈａｌｅｓ－ｎａｎｏ Ｈキューブフロー式水素化装置内で、実施され得る。

【0248】

ＨＰＬＣ、ＵＰＬＣ、ＬＣＭＳおよびＳＦＣ保持時間は、手順において注記されている方法を使用して測定した。

【0249】

いくつかの例では、キラル分離を行って、本発明のある特定の化合物の鏡像異性体を分離した（いくつかの例では、分離された鏡像異性体は、それらの溶離の順序に従って、ＥＮＴ－１およびＥＮＴ－２と指定され、同様に、分離されたジアステレオマーは、それらの溶離の順序に従って、ＤＩＡＳＴ－１およびＤＩＡＳＴ－２と指定される）。いくつかの例では、鏡像異性体の旋光度は、偏光計を使用して測定した。その観察された回転データ（またはその比旋光度データ）に従って、時計回りの回転を持つ鏡像異性体を（＋）－鏡像異性体と指定し、反時計回りの回転を持つ鏡像異性体を（－）－鏡像異性体と指定した。ラセミ化合物は、描かれたもしくは記述された立体化学の非存在によって、または構造に隣接する（＋／－）の存在によってのいずれかで指し示され、この後者の場合、指し示された立体化学は、ラセミ混合物を構成する２つの鏡像異性体のうちの一方のみを表す。

【0250】

下記は、本発明の種々の化合物の合成を例証するものである。本発明の範囲内の追加の化合物は、これらの実施例において例証される方法を使用して、単独でまたは当技術分野において概して公知である技術と組み合わせてのいずれかで調製され得る。これらの調製および実施例におけるすべての出発材料は、市販されているか、または当技術分野において公知のもしくは本明細書において記述される通りの方法によって調製できるかのいずれかである。

【0251】

後述する化合物および中間体は、ＡＣＤ／ケムスケッチ２０１７．２．１、ファイルバージョンＣ４０Ｈ４１、ビルド９９５３５（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）が提供する命名規則を使用して命名した。ＡＣＤ／ケムスケッチ２０１７．２．１が提供する命名規則は、当業者に周知であり、ＡＣＤ／ケムスケッチ２０１７．２．１が提供する命名規則は、概して、有機化合物の命名法におけるＩＵＰＡＣ（国際純正応用化学連合）勧告およびＣＡＳインデックスルールに適合すると考えられる。

【0252】

調製Ｐ１
２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－カルボン酸（Ｐ１）

【0253】

【化8】

ステップ１． ２－［（５－ブロモピリジン－３－イル）オキシ］－３－エトキシピリジン（Ｃ１）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５．４Ｌ）中の２－ブロモ－３－エトキシピリジン（８４１ｇ、４．１６ｍｏｌ）の溶液に、臭化銅（Ｉ）（５３８ｇ、３．７５ｍｏｌ）、続いて、炭酸カリウム（１．０４ｋｇ、７．５２ｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２５℃で撹拌し、５－ブロモピリジン－３－オール（６５２ｇ、３．７５ｍｏｌ）を一度に添加し、その後すぐに、反応混合物を１２０℃で１６時間にわたって加熱した。次いでこれを３０℃に冷却し、クラッシュアイス（９．０ｋｇ）および水中アンモニアの１０％溶液（７．０Ｌ）の混合物にゆっくりと注ぎ入れた。得られた懸濁液を１時間にわたって撹拌した後、沈殿物を濾過によって収集し、濾過ケーキを水（３×５Ｌ）で洗浄した。次いでこれを酢酸エチル（８Ｌ）中で１時間にわたって撹拌し、濾過し、濾液を飽和塩化ナトリウム水溶液（５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残留物を石油エーテル（２Ｌ）中で撹拌し、固体を濾過によって収集して、Ｃ１を提供した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を石油エーテル（２００ｍＬ）で粉砕して、追加のＣ１を得た。２つのバッチを合わせて、Ｃ１を黄色固体として提供した。収量：８３５ｇ、２．８３ｍｏｌ、７５％。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 8.48 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.71 (dd, J =
4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 2.2, 2.1 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz,
1H), 7.03 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.14 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.47 (t, J = 7.0
Hz, 3H).

【0254】

ステップ２． ５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－カルボニトリル（Ｃ２）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３．０Ｌ）中のＣ１（３２４ｇ、１．１０ｍｏｌ）の溶液に、フェロシアン化カリウム（ＩＩ）三水和物（６９７ｇ、１．６５ｍｏｌ）を一度に、続いて、水（３００ｍＬ）を添加した。得られた懸濁液を真空下で脱気し、次いで、窒素でパージし、この排気－パージサイクルを合計４回行った。次いで、酢酸パラジウム（ＩＩ）（４．９４ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）および２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニル（ＸＰｈｏｓ；１８．７ｇ、３９．２ｍｍｏｌ）を添加し、排気－パージサイクルを５回行い、反応混合物を１０５℃で１８時間にわたって加熱した。反応混合物を５０℃に冷却した後、これを濾過し、濾液を氷水（３Ｌ）に注ぎ入れ、次いで、およそ１時間にわたって撹拌した。得られた固体を濾過によって収集し、酢酸エチル（１．５Ｌ）に溶解し、飽和塩化ナトリウム水溶液（１Ｌ）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、Ｃ２（２０９ｇ）を黄色固体として提供した。上記からの水性濾液をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（２×３Ｌ）で抽出し、合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（０．５Ｌ）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、追加のＣ２（２０ｇ）を提供した。合わせた収量：２２９ｇ、０．９４９ｍｏｌ、８６％。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 8.71 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.80 (dd, J =
2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.29 - 7.25 (m, 1H, 推定; 溶媒ピークにより一部不明確), 7.08 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.49
(t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0255】

ステップ３． ５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－カルボキシミドアミド、塩酸塩（Ｃ３）の合成。
メタノール（１．３Ｌ）中のＣ２（１８０ｇ、０．７４６ｍｏｌ）の０℃から５℃懸濁液に、メタノール中ナトリウムメトキシドの溶液（５Ｍ；３０ｍＬ、１５０ｍｍｏｌ）を添加した。メタノール（５００ｍＬ）を添加して撹拌を容易にし、その後すぐに、反応混合物を室温（１８℃）に加温させ、２０時間にわたって撹拌した。次いでこれを－４０℃に冷却し、塩化アンモニウム（４８．０ｇ、８９７ｍｍｏｌ）で一度に処理し、その後すぐに、混合物を室温（１８℃）に加温し、４０時間にわたって撹拌した。真空で濃縮してメタノールのおよそ半分を除去した後、得られた白色沈殿物（無機塩）を、濾過を介して除去した。濾液を酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、減圧下で濃縮して、およそ４００ｍＬの体積とした。この酢酸エチル希釈－濃縮手順を２回繰り返して、メタノールの酢酸エチルとの交換を達成した。得られた懸濁液の濾過により、Ｃ３を白色固体として得た。収量：１７５ｇ、０．５９４ｍｏｌ、８０％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.82 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 2.6
Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 2, 2 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd,
J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.17 (q, J = 7.0 Hz, 2H),
1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0256】

ステップ４． メチル２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－カルボキシレート（Ｃ４）の合成。
ナトリウム２－（ジメトキシメチル）－３－メトキシ－３－オキソプロパ－１－エン－１－オレート（２０１ｇ、１．０１ｍｏｌ）を、メタノール（１．７５Ｌ）中のＣ３（２４９ｇ、０．８４５ｍｏｌ）の溶液に一度に添加した。反応混合物である濃厚懸濁液を、１８℃で２０時間にわたって撹拌し、その後すぐに、沈殿物を濾過によって収集して、Ｃ４を白色固体として得た。収量：２５９ｇ、０．７３５ｍｏｌ、８７％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.40 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.35 (s, 2H),
8.67 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.8, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 4.8,
1.5 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H),
4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0257】

ステップ５． ２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－カルボン酸（Ｐ１）の合成。
この反応は、２つの並列バッチで行った：Ｃ４（３２１ｇ、０．９１１ｍｏｌ）をメタノール（１．６Ｌ）に懸濁し、氷水の浴中で冷却し、滴下方式にて水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ；６８４ｍＬ、１．３７ｍｏｌ）で処理した。添加の完了後、反応混合物を１４℃で１６時間にわたって撹拌し、その後すぐに、２つのバッチを合わせた。得られた懸濁液を水（３．２Ｌ）で希釈し、氷水浴で冷却し（およそ５℃から１０℃）、１Ｍ塩酸の滴下添加によってｐＨ３から４に調整した。混合物を１４℃で２時間にわたって撹拌し、次いで濾過し、濾過ケーキを水（２×１Ｌ）および酢酸エチル（１Ｌ）で順次に洗浄して、Ｐ１を白色固体として得た。合わせた収量：５５７ｇ、１．６５ｍｏｌ、９１％。LCMS m/z 338.9 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 9.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H),
9.31 (s, 2H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.36 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68
(dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 8.0,
4.8 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0258】

上述したものに類似の手順を使用して作製された調製Ｐ１材料を、Ｃｕ放射線源（Ｋ－α平均）が装備されたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ８エンデバー回折計で行われる粉末Ｘ線回折分析を使用して、さらに分析した。発散スリットを、１５ｍｍ連続照明に設定した。回折される放射線をＰＳＤ－リンクスアイ検出器によって検出し、検出器ＰＳＤ開口部は３．００度に設定した。Ｘ線管電圧およびアンペア数は、それぞれ４０ｋＶおよび４０ｍＡに設定した。データは、０．０１度のステップ幅および１．０秒のステップ時間を使用し、３．０から４０．０度２シータまでのＣｕ波長で、シータ－シータゴニオメーターに収集した。散乱線除去スクリーンは、１．５ｍｍの固定距離に設定した。収集中、試料を１５／分で回転させた。試料は、それらをシリコン低バックグラウンド試料ホルダーに入れ、収集中に回転させることによって調製した。

【0259】

データはＢｒｕｋｅｒ ＤＩＦＦＲＡＣプラスソフトウェアを使用して収集し、分析はＥＶＡディフラクトプラスソフトウェアによって実施した。ＰＸＲＤデータファイルは、ピーク検索前には加工しなかった。ＥＶＡソフトウェアにおけるピーク検索アルゴリズムを使用して、１の閾値を持つ選択されたピークを使用して、予備的なピーク割り当てを行った。妥当性を確実にするために、調整を手動で行い、自動割り当ての出力を視覚的に確認し、ピーク位置をピーク最大値に調整した。３％以上の相対強度を持つピークを概して選択した。分離されなかったまたはノイズと一致するピークは選択しなかった。ＵＳＰにおいて述べられているＰＸＲＤからのピーク位置に関連する典型的な誤差は、最大０．２°２θである（ＵＳＰ－９４１）。相対的なピークの高さにおけるいくらかの変動は、結晶サイズおよび形態学に伴う変化に基づいて予想される。特徴的なｘ線粉末回折パターンを、図３１で提供する。この図からのＰＸＲＤデータについて、さらに後述する。

【0260】

【表1】

【0261】

【表2】

【0262】

Ｃ２の代替合成
５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－カルボニトリル（Ｃ２）

【0263】

【化9】

１，４－ジオキサン（２５０ｍＬ）中の２－ブロモ－３－エトキシピリジン（１０．０ｇ、４９．５ｍｍｏｌ）の溶液を、２分間にわたって窒素でフラッシュした。次いで、５－ヒドロキシピリジン－３－カルボニトリル（６．５４ｇ、５４．４ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（５５６ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）、１，１’－ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）フェロセン（１．４１ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（３２．３ｇ、９９．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１０５℃で１６時間にわたって撹拌し、その後すぐに、２－ブロモ－３－エトキシピリジン（７．００ｇ、３４．６ｍｍｏｌ）を使用して行った同様の反応と合わせ、室温に冷却した。酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈後、合わせた反応混合物を珪藻土に通して濾過し、真空で濃縮乾固した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル中０％から３５％酢酸エチル）により、Ｃ２を黄色固体として得た。合わせた収量：１８．０ｇ、７４．６ｍｍｏｌ、８９％。LCMS m/z 242.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 8.70 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.79 (dd, J =
2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz,
1H), 7.07 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.15 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.47 (t, J = 7.0
Hz, 3H).

【0264】

調製Ｐ２
２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－カルボン酸（Ｐ２）

【0265】

【化10】

ステップ１． ２－ブロモ－３－エトキシ－５－フルオロピリジン（Ｃ５）の合成。
炭酸カリウム（６９７ｇ、５．０４ｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４Ｌ）中の２－ブロモ－５－フルオロピリジン－３－オール（７４５ｇ、３．８８ｍｏｌ）の溶液に添加し、その後すぐに、反応ベッセルを排気し、窒素を投入した。この排気サイクルを２回繰り返し、次いで、反応混合物を３５℃に加熱した。ヨードエタン（３７２ｍＬ、４．６５ｍｏｌ）を３０分間かけて滴下添加し、反応混合物を３５℃で１６時間にわたって撹拌した後、これを２５℃に冷却し、水（６Ｌ）で希釈した。撹拌を２５℃で１５分間にわたって続け、得られた固体を、濾過を介して収集し、濾液をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（３×１．５Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残留物を、１回目の濾過から取得された固体と合わせて、Ｃ５を褐色固体として得た。収量：７５６ｇ、３．４４ｍｏｌ、８９％。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 7.88 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 9.5, 2.5 Hz, 1H), 4.10 (q,
J = 7.0 Hz, 2H), 1.51 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0266】

ステップ２． ５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－カルボニトリル（Ｃ６）の合成。
この反応は、４つの並列バッチで行った。５－ヒドロキシピリジン－３－カルボニトリル（１１２．６ｇ、９３７．５ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（３８９ｇ、１．１９ｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（２．５Ｌ）中のＣ５（１８７．５ｇ、８５２．１ｍｍｏｌ）の溶液に一度に添加した。反応ベッセルを排気し、窒素を投入した。この排気サイクルを２回繰り返し、その後すぐに、酢酸パラジウム（ＩＩ）（９．５７ｇ、４２．６ｍｍｏｌ）および１，１’－ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）フェロセン（２０．２ｇ、４２．６ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。排気－窒素サイクルを上記の通りに繰り返し、次いで、反応混合物を８５℃で１６時間にわたって撹拌した。１６時間後に完了していなかったあらゆる反応物を、追加の酢酸パラジウム（ＩＩ）（９．５７ｇ、４２．６ｍｍｏｌ）および１，１’－ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）フェロセン（２０．２ｇ、４２．６ｍｍｏｌ）で処理し、８５℃で追加で１６時間にわたって撹拌した。この時点で、４つの反応混合物を合わせ、濾過し、濾液を真空で濃縮し、残留物を酢酸エチル（３Ｌ）に溶解し、次いで、水（６Ｌ）で希釈した。得られた混合物を２５℃で１５分間にわたって撹拌し、その後すぐに、層を分離し、水性層を酢酸エチル（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（２×３Ｌ）で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残留物を、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（１Ｌ）および石油エーテル（２Ｌ）の混合物中、２５℃で２０分間にわたって撹拌し、得られた固体を、濾過を介して収集して、Ｃ６（８１３ｇ）を固体として得た。濾液を真空で濃縮し、シリカゲル上でのクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル中０から３０％酢酸エチル）に供して、追加のＣ６（５２ｇ）を褐色固体として提供した。合わせた収量：８６５ｇ、３．３４ｍｏｌ、９８％。LCMS m/z 259.8 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 8.73 - 8.64 (m, 2H), 7.77 (br s, 1H), 7.56 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.06
(dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 4.14 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0267】

ステップ３． ５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－カルボキシミドアミド、塩酸塩（Ｃ７）の合成。
酢酸エチル（３Ｌ）中のＣ６（９１９ｇ、３．５４ｍｏｌ）の溶液を、活性炭（およそ２００ｇ）で処理し、次いで、７７℃で３時間にわたって撹拌した。得られた混合物を濾過した後、濾液を真空で濃縮して、Ｃ６（８９４ｇ、３．４５ｍｏｌ）を提供した。次いで、下記の反応を３つの並列バッチで行った。ナトリウムメトキシド（１２．４ｇ、２３０ｍｍｏｌ）を、メタノール（２Ｌ）中のＣ６（２９８ｇ、１．１５ｍｏｌ）の０℃溶液に添加した。反応混合物を２５℃に加温させ、次いで、２５℃で２０時間にわたって撹拌した後、－４０℃に冷却し、塩化アンモニウム（６７．６ｇ、１．２６ｍｏｌ）で処理した。この時点で、反応混合物を２５℃に加温させ、２５℃で４０時間にわたって撹拌し、その後すぐに、３つのバッチを合わせ、真空で濃縮して、Ｃ７を褐色ガム状物（１．１５ｋｇ）として得た。この材料を後続のステップにおいて直接使用した。LCMS m/z 276.8 [M+H]⁺.

【0268】

ステップ４． メチル２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－カルボキシレート（Ｃ８）の合成。
この反応は、３つの並列バッチで行った。ナトリウム２－（ジメトキシメチル）－３－メトキシ－３－オキソプロパ－１－エン－１－オレート（３５７ｇ、１．８０ｍｏｌ）を、メタノール（２．５Ｌ）中のＣ７（前ステップから；３８３ｇ、１．１５ｍｏｌ以下）の２５℃溶液に一度に添加した。２５℃で１６時間にわたって撹拌した後、ＬＣＭＳ分析によって評価される通り、３つの反応物のうち２つが完了した。第３の（不完全な）反応物を追加のナトリウム２－（ジメトキシメチル）－３－メトキシ－３－オキソプロパ－１－エン－１－オレート（５４．９ｇ、２７７ｍｍｏｌ）で処理し、撹拌を２５℃で６時間にわたって続けた。この時点で、３つのバッチを合わせ、水（８Ｌ）で希釈し、濾過した。濾過ケーキを水（２×２Ｌ）で洗浄した後、これを、メタノール（１Ｌ）およびｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（１Ｌ）の混合物中、２５℃で３時間にわたって撹拌し、その後すぐに、懸濁液を濾過して、Ｃ８を褐色固体として提供した。収量：２ステップにわたって１．０ｋｇ、２．７ｍｏｌ、７８％。LCMS m/z 370.8 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 9.54 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.32 (s, 2H), 8.63 (d, J = 2.7 Hz, 1H),
8.55 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 9.2,
2.5 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.00 (s, 3H), 1.51 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0269】

ステップ５． ２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－カルボン酸（Ｐ２）の合成。
メタノール（２Ｌ）中のＣ８（５００ｇ、１．３５ｍｏｌ）の懸濁液を、滴下方式にて水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ；１．０１Ｌ、２．０２ｍｏｌ）で処理した。添加の完了後、反応混合物を２５℃で１６時間にわたって撹拌し、その後すぐに、これを水（２Ｌ）で希釈した。次いで、塩酸（１Ｍ；およそ１．５Ｌ）の滴下添加によってｐＨを３から４に調整し、得られた混合物を２５℃で１時間にわたって撹拌し、固体を濾過によって収集した。濾過ケーキを水（２×１Ｌ）で洗浄して、Ｐ２をオフホワイトの固体として提供した。収量：４０５ｇ、１．１４ｍｏｌ、８４％。LCMS m/z 356.8 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 9.39 (d, J = 1.7 Hz, 1H),
9.31 (s, 2H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 - 8.34 (m, 1H), 7.71 (d, AB四重線の成分, J = 2.6 Hz, 1H), 7.68 (dd, ABX系の成分, J = 9.8, 2.6 Hz, 1H), 4.19 (q, J = 7.0
Hz, 2H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0270】

調製Ｐ３
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－５－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｐ３）

【0271】

【化11】

このシーケンス全体は、大スケールで行った。概して、反応前および試薬の添加後に、反応器を－０．０７ＭＰａ以下に排気し、次いで、窒素で充填して、常圧とした。このプロセスは、概して３回繰り返し、次いで、酸素含有量を評価して、それが１．０％以下であることを確実にした。クエンチング、抽出、および有機層の洗浄のプロセスのために、混合物を概して１５から６０分間にわたって撹拌し、次いで、１５から６０分間にわたって沈降させた後、層の分離を行った。

【0272】

ステップ１． メチル（２Ｓ，４Ｒ）－１－ベンジル－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキシレート（Ｄ１）の合成。
トリエチルアミン（９３．５５ｋｇ、９２４．５ｍｏｌ）を、ジクロロメタン（９６８ｋｇ）およびメチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキシレート、塩酸塩（５６．０５ｋｇ、３０８．６ｍｏｌ）の１５℃から２５℃混合物に、８０から１２０ｋｇ／時の基準速度で投入した。混合物を１０から２０分間にわたって撹拌した後、臭化ベンジル（７９．００ｋｇ、４６１．９ｍｏｌ）を２０から３０ｋｇ／時の基準速度で添加した。反応混合物を１５℃から２５℃で撹拌し、１２時間後、これを、ＨＰＬＣを介する分析のために、出発材料の面積パーセントが２％未満になるまで２から６時間ごとに試料採取した（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：０．１％ヘプタフルオロ酪酸を含有する水；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：３分間にわたって１０％Ｂ、次いで、１０分間かけて１０％から４０％Ｂ、次いで、５分間かけて４０％から９０％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。メチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキシレートの典型的な保持時間：３．８分。

【0273】

次いで、水（２８０ｋｇ）を反応器に、１００から１５０ｋｇ／時の基準速度および１５℃から２５℃で添加した。水性層をジクロロメタン（３７２ｋｇ、２８１Ｌ、５体積）で１回抽出し、合わせた有機層を水（２８０ｋｇ）中の塩化ナトリウム（９３．０ｋｇ）の溶液で洗浄し、次いで、温度を３５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａで１００から１５０Ｌの体積に濃縮した。テトラヒドロフラン（４９７ｋｇ）を得られた混合物に２回に分けて投入した。混合物を再度、温度を３５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａで１００から１５０Ｌの体積に濃縮した。残留ジクロロメタンについてカール・フィッシャー分析および試料採取を行って、含水量が０．３０％以下であり、残留ジクロロメタンが４％以下であることを確実にした。得られた溶液を１５℃から３０℃に調整して、Ｄ１を含有する黄色溶液を得た。収量：Ｄ１（６９．１４ｋｇ、２９３．９ｍｏｌ、９５％）を含有する１３６．８ｋｇの溶液。ＨＰＬＣ純度：９０％（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ１の保持時間：４．７２分。¹H NMR (401 MHz, クロロホルム-d) δ 7.34 - 7.21 (m, 5H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 3.90 (d, J = 12.9 Hz,
1H), 3.65 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.59 (dd, J = 7.9, 7.8 Hz, 1H),
3.32 (dd, J = 10.1, 5.7 Hz, 1H), 2.57 (br s, 1H), 2.45 (dd, J = 10.2, 4.1 Hz,
1H), 2.24 (ddd, J = 13.2, 7.7, 6.9 Hz, 1H), 2.07 (ddd, J = 13.3, 8.0, 3.2 Hz,
1H).

【0274】

ステップ２． メチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－ベンジル－４－フルオロピロリジン－２－カルボキシレート（Ｄ２）の合成。
テトラヒドロフラン中Ｄ１の溶液（１２８．４ｋｇ、６４．９０ｋｇ、２７５．８ｍｏｌのＤ１を含有する）を、テトラヒドロフラン（５７５ｋｇ）を含有する反応器に１５℃から２５℃で添加した。次いで、トリエチルアミン（１１４．２ｋｇ、１１２９ｍｏｌ）を３５から４５ｋｇ／時の基準添加速度で添加した。混合物に、トリエチルアミントリヒドロフルオリド（６６．７０ｋｇ、４１３．７ｍｏｌ）、続いて、ノナフルオロブタン－１－スルホニルフルオリド（１２８．０ｋｇ、４２３．７ｍｏｌ）を６０から８０ｋｇ／時の基準速度で投入し、反応を１５℃から２５℃で進行させた。４時間後、反応混合物を、ＨＰＬＣを介する分析のために、Ｄ１の面積パーセントが１％未満になるまで２から６時間ごとに試料採取した（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ１の典型的な保持時間：５．０分。

【0275】

次いで、混合物を１０℃から１５℃に冷却し、水（３２５ｋｇ）を１００から１２０ｋｇ／時の基準速度で、続いて、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（２４０．５ｋｇ）を１５℃から２５℃で添加した。有機相を水（１９８ｋｇ）中の重炭酸ナトリウム（１８．２ｋｇ、２１７ｍｏｌ）の溶液で２回洗浄し、次いで、水（１３０ｋｇ）中の塩化ナトリウム（４７．２ｋｇ）の溶液で２回洗浄した。次いでこれを、温度を４５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａ以下で１５０から２００Ｌの体積に濃縮した。得られた混合物を２０℃から３０℃に調整した後、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（１２３ｋｇ、１６６Ｌ、２．５体積）およびｎ－ヘプタン（１１２ｋｇ、１６３Ｌ、２．５体積）を添加した。得られた混合物を、材料のほぼすべてが濾過されるまで、シリカゲルカラム（１１２ｋｇのシリカゲル）に通して濾過した。次いで、反応器をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（４８１ｋｇ、１０体積）およびｎ－ヘプタン（４４４ｋｇ、１０体積）により２０℃から３０℃ですすぎ、このすすぎ液もシリカゲルカラムに通して濾過した。合わせた濾液を、シリカゲル（４０ｋｇ）を含有する新しいカラムに通して溶離し、溶離液を、温度を４５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａ以下で８０から１００Ｌの体積に濃縮した。得られた溶液を２０℃から３０℃に調整して、Ｄ２を含有する黄色溶液を得た。収量：Ｄ２（５２．６４ｋｇ、２２１．８ｍｏｌ、８０％）を含有する１０４．３ｋｇの溶液。ＨＰＬＣ純度：８３％（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ２の保持時間：７．３４分。¹H NMR (401 MHz, クロロホルム-d) δ 7.37 - 7.22 (m, 5H), 5.10 (br ddd, J = 54.8, 5, 5 Hz, 1H), 4.03 (d,
J = 13.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.59 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.34 - 3.21 (m, 2H),
2.65 - 2.42 (m, 2H), 2.29 (br ddd, J = 29.8, 14.8, 6.3 Hz, 1H).

【0276】

ステップ３． ［（２Ｓ，４Ｓ）－１－ベンジル－４－フルオロピロリジン－２－イル］メタノール（Ｄ３）の合成。
テトラヒドロフラン（３５２ｋｇ）を、水素化アルミニウムリチウム（８．２０ｋｇ、２１６ｍｏｌ）に、窒素下、１５℃から２５℃で添加した。添加の完了後、混合物を１０から１５分間にわたって撹拌し、反応器の下部ポートから窒素を３から５分間にわたって吹き込んで発泡させた。混合物を８℃から１５℃に調整し、次いで、テトラヒドロフラン中Ｄ２の溶液（９９．１０ｋｇ、５０．０２ｋｇ、２１０．８ｍｏｌのＤ２を含有する）を、小分けにして３５から４５ｋｇ／時の基準速度にて８℃から１５℃で添加した。基質の３分の１を添加した後、反応混合物を０．５から１時間にわたって撹拌し、次いで、分析のために試料採取した。投入したＤ２の残量が１０％以下になるまで、追加の材料は添加しなかった。全Ｄ２の添加が完了したら、反応を８℃から１５℃で進行させ、１時間後、これを、ＨＰＬＣ分析のために、２％以下のＤ２が観察されるまで１から３時間ごとに試料採取した（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ２の典型的な保持時間：７．５分。

【0277】

次いで、反応物を、水（８．００ｋｇ）およびテトラヒドロフラン（４４．５ｋｇ）の混合物の添加を介してクエンチし、これを、０℃から２０℃で、６から８ｋｇ／時の基準速度にて添加した。次いで、水（３０．０ｋｇ）中の水酸化ナトリウム（１．４０ｋｇ、３５ｍｏｌ）の溶液を、混合物に、１０℃から２５℃で、１０から２０ｋｇ／時の基準速度にて投入した。この添加後、混合物を０．５から１時間にわたって撹拌した。次いで、反応器の下部ポートから窒素を混合物に１５℃から２５℃で４から６時間にわたって吹き込んで発泡させた。混合物を濾過し、収集した固体をテトラヒドロフラン（３１７ｋｇ）とともに１５℃から２５℃で１から２時間にわたって撹拌し、次いで、この混合物を濾過した。合わせた濾液を、温度を４５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａ以下で１から１．２体積に濃縮した。温度を４５℃未満に維持しながら、２－メチルテトラヒドロフラン（３８８ｋｇ）を小分けにして混合物に投入した。各添加後、混合物を５から１０分間にわたって撹拌し、次いで、上記の通りに１から１．２体積に濃縮した。試料採取を行って、残留テトラヒドロフランが２％以下であり、含水量（カール・フィッシャー分析によって）が０．１％以下であることを確実にした。得られた混合物を１５℃から２５℃に調整し、２－メチルテトラヒドロフラン（４３．０ｋｇ）で処理し、撹拌して、Ｄ３を含有する黄色溶液を提供した。収量：Ｄ３（４１．０５ｋｇ、１９６．２ｍｍｏｌ、９３％）を含有する１０２．７ｋｇの溶液。ＨＰＬＣ純度：９０％（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ３の保持時間：５．３８分。¹H NMR (401 MHz, クロロホルム-d), 特徴的ピーク: δ 7.37 - 7.23 (m,
5H), 5.05 (br ddd, J = 54.5, 4.7, 4.5 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.54
- 3.45 (m, 1H), 3.33 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.23 (br dd, J = 18.5, 11.7 Hz, 1H),
2.83 - 2.75 (m, 1H), 2.63 (br d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.49 - 2.10 (m, 3H).

【0278】

ステップ４． （３Ｒ，５Ｓ）－１－ベンジル－５－フルオロピペリジン－３－オール（Ｄ４）の合成。
２－メチルテトラヒドロフラン中Ｄ３の溶液（１０２．６ｋｇ、４１．０３ｋｇ、１９６．１ｍｏｌのＤ３を含有する）を、２－メチルテトラヒドロフラン（１６０ｋｇ）に１５℃から２５℃で添加した。次いで、トリフルオロ酢酸無水物（４２．２０ｋｇ、２００．９ｍｏｌ）を３５から４５ｋｇ／時の基準速度で、続いて、トリエチルアミン（６１．１ｋｇ、６０４ｍｏｌ）を３５から４５ｋｇ／時の基準速度で添加した。反応混合物を１５℃から２５℃で１時間にわたって維持し、次いで、７７℃から８２℃に加熱した。１２時間後、反応物を、ＨＰＬＣ分析のために、Ｄ３の面積パーセントが３％以下になるまで１から１２時間ごとに試料採取した（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ３の典型的な保持時間：５．８分。

【0279】

そのときに、反応混合物を１０℃から２０℃に冷却し、温度を１０℃から３０℃の間に維持しながら、水（４１．１ｋｇ）中の水酸化ナトリウム（３．３０ｋｇ、８２ｍｏｌ）の溶液で、３４から４５ｋｇ／時の基準速度にて処理した。添加の完了後、混合物を１時間にわたって撹拌し、その後すぐに、これを１５℃から３０℃の水（８２．２ｋｇ）中の塩化ナトリウム（２３．１ｋｇ）の溶液で洗浄した。水性層を１５℃から３０℃のｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（１５０ｋｇ、２０３Ｌ、５体積）で１回抽出し、合わせた有機層を、温度を４５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａ以下で１から１．２体積に濃縮した。混合物を１５℃から３０℃の水（１６２ｋｇ）で２回洗浄し、トリエチルアミンについて有機相を試料採取して、トリエチルアミンレベルが３％以下であることを確実にした。次いでこれを、温度を４５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａ以下で１の体積から１．２体積に濃縮した。テトラヒドロフラン（１１０ｋｇ）を添加し、得られた混合物を再度、温度を４５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａ以下で１の体積から１．２体積に濃縮した。得られた材料を２０℃から３０℃に冷却して、Ｄ４を含有する暗褐色溶液を得た。収量：Ｄ４（３６．５０ｋｇ、１７４．４ｍｍｏｌ、８９％）を含有する１５３．５ｋｇの溶液。ＨＰＬＣ純度：８５％（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ４の保持時間：５．８８分。¹H NMR (401 MHz, クロロホルム-d) δ 7.36 - 7.23 (m, 5H), 4.84 - 4.66 (m, 1H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.62
- 3.59 (m, 2H), 2.92 - 2.76 (m, 2H), 2.69 (dd, J = 11.5, 5.0 Hz, 1H), 2.54 -
2.39 (m, 2H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.95 - 1.78 (m, 1H).

【0280】

ステップ５． ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，５Ｒ）－３－フルオロ－５－ヒドロキシピペリジン－１－カルボキシレート（Ｄ５）の合成。
１５℃から３０℃の、テトラヒドロフラン中Ｄ４（３０．０３ｋｇ、１４３．５ｍｏｌのＤ４を含有する）、テトラヒドロフラン（２１８ｋｇ）および二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４７．１０ｋｇ、２１５．８ｍｏｌ）の混合物を、地下パイプを介して窒素で０．２から０．３ＭＰａまでパージし、次いで、０．０２から０．０５ＭＰａまで通気した。このパージおよび通気手順を５から８回の間繰り返した。パラジウム炭（１０％、３．００ｋｇ）を反応器に１５℃から３０℃で投入し、次いで、固体添加漏斗を水（０．２６ｋｇ）ですすいだ。反応混合物を、地下パイプを介して窒素で０．１から０．２ＭＰａまでパージし、次いで、１５℃から３０℃で０．０２から０．０５ＭＰａまで通気し、このパージおよび通気手順を５から８回の間繰り返した。次いで、同一のパージ－通気プロトコールを、水素を使用して行った。最終水素交換の後、圧力を水素で０．１から０．２ＭＰａに増大させた。次いで、反応混合物を１から３時間ごとに２回窒素と交換し、地下パイプを介して水素で０．１から０．２ＭＰａまでパージし、続いて、０．０２から０．０５ＭＰａまで通気した。交換後、水素圧を０．１から０．２ＭＰａに増大させ、反応混合物を２０℃から３０℃で維持した。８時間後、反応物を、ＨＰＬＣ分析のために、Ｄ４のレベルが１．０％以下になるまで１から１２時間ごとに試料採取した（ＨＰＬＣ条件。カラム：Ｗａｔｅｒｓエクセレクトフェニル－ヘキシル、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を含有する水；移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル；勾配：１５分間かけて５％から３５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。

【0281】

次いで、混合物を、地下パイプを介して窒素で０．２から０．３ＭＰａまでパージし、１５℃から３０℃で０．０２から０．０５ＭＰａまで通気し、このサイクルを９回以上繰り返した。反応混合物をステンレス鋼ヌッチェフィルターに２０℃から３０℃で通過させ、濾過ケーキをテトラヒドロフラン（２６．６ｋｇ、２９．９Ｌ、１体積）ですすぎ、合わせた濾液を、シリカゲル（１５．１ｋｇ）をロードしたフィルターに通過させ、シリカ濾過ケーキをテトラヒドロフラン（５２．７ｋｇ、５９．３Ｌ、２体積）ですすいだ。これらの合わせた濾液をインラインフィルターに１５℃から３０℃で通過させ、温度を４５℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａ以下で１．１の体積から１．４体積に濃縮した。得られた混合物をｎ－ヘプタン（１０２ｋｇ）で１５℃から４５℃にて処理し、１０分間にわたって撹拌し、その後すぐに、混合物を試料採取して、残留テトラヒドロフランが８％未満であることを確実にした。テトラヒドロフラン（６．９０ｋｇ）およびｎ－ヘプタン（１０１ｋｇ）を１５℃から４５℃で添加し、混合物を５０℃から５５℃に加熱し、次いで、１８℃から２５℃に冷却し、１時間にわたって撹拌した。Ｄ５の種晶（０．０６ｋｇ；以下の起源を参照）を混合物に投入し、次いでこれを、温度を１８℃から２５℃に維持しながら、１から２時間にわたって撹拌した。結晶化のために撹拌を１５℃から２０℃で８から１２時間にわたって続けた。反応器の下部ポートから窒素を２から３時間ごとに吹き込んで発泡させて、濃縮を達成した。次いで、ステンレス鋼ヌッチェフィルターを使用して混合物を濾過し、濾過ケーキをｎ－ヘプタン（２０．４ｋｇ）およびテトラヒドロフラン（０．８１ｋｇ）の混合物ですすぎ、次いで、試料採取が７２０ｐｐｍ以下の残留テトラヒドロフランおよび５０００ｐｐｍ以下の残留ｎ－ヘプタンを指し示すまで、２０℃から３０℃で乾燥させた。生成物Ｄ５がオフホワイトの固体として取得された。収量：アッセイにより１２．１５ｋｇ、９７．５％；正量：１１．８４ｋｇ、５４．００ｍｏｌ。母液回収による追加の材料：５．１７ｋｇ、２３．６ｍｍｏｌ。合わせた収量：５４％。ＨＰＬＣ純度：９４％（ＨＰＬＣ条件。カラム：Ｗａｔｅｒｓエクセレクトフェニル－ヘキシル、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を含有する水；移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル；勾配：１５分間かけて５％から３５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ５の保持時間：１２．５８分。¹H NMR (401 MHz, クロロホルム-d) δ 4.69 (br d, J_HF = 47.2 Hz, 1H), 3.86 - 3.76 (m, 1H),
3.62 - 3.35 (m, 3H), 2.64 - 2.44 (m, 1H), 2.18 - 1.92 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).

【0282】

Ｄ５の種晶の調製：Ｄ４のより小さいスケールの水素化反応を、上記の通りに行い、パラジウム炭素の除去後、テトラヒドロフラン中のＤ５の得られた溶液を、およそ１から１．２体積に濃縮した（使用したＤ４の分量に基づいて）。得られた混合物をテトラヒドロフラン（０．２体積）およびｎ－ヘプタン（１５体積）で処理し、５０℃から５５℃に加熱し、次いで、１５℃から２０℃に冷却させた。懸濁液を６から８時間にわたって撹拌した後、これを濾過してＤ５を固体として得、この材料を種晶として使用した。

【0283】

ステップ６． ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，５Ｒ）－３－フルオロ－５－［（メチルスルホニル）オキシ］ピペリジン－１－カルボキシレート（Ｄ６）の合成。
ジクロロメタン（２２９ｋｇ）を反応器に１５℃から２５℃で、続いて、Ｄ５（１７．４０ｋｇ；アッセイ結果から補正したもの：１６．９６ｋｇ、７７．３５ｍｏｌ）を添加し、次いで、下部ポートを経由して窒素を吹き込んで発泡させた。トリエチルアミン（９．８０ｋｇ、９６．８ｍｏｌ）を１５℃から２５℃で添加し、その後すぐに、反応混合物を０℃から５℃に冷却した。混合物を０℃から１０℃に維持しながら、塩化メタンスルホニル（１０．１８ｋｇ、８８．８８ｍｏｌ）を添加し、反応を０℃から１０℃で進行させた。１時間後、これを、Ｄ５の面積パーセントが１％未満になるまで１から３時間ごとに試料採取した（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて３０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ５の典型的な保持時間：４．３１分。

【0284】

その時点で、水（５２．０ｋｇ）を混合物に、０℃から５℃で、２０から３８ｋｇ／時の基準速度にて投入した。得られた混合物の水性相を０℃から１０℃のジクロロメタン（７０．４ｋｇ、５３．１Ｌ、３体積）で抽出し、合わせた有機層を、０℃から１５℃の水（１７．４ｋｇ）中の塩化ナトリウム（４．３０ｋｇ）の溶液で洗浄し、その後、温度を３０℃未満に維持しながら、－０．０９ＭＰａ以下で２から３体積に濃縮した。残留物をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（１２８ｋｇ）で、小分けにして０℃から３０℃で希釈し、次いで、混合物を、温度を３０℃未満に維持しながら、－０．０９ＭＰａ以下で２から３体積に濃縮した。ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（６５．０ｋｇ）を再度、混合物に小分けにして０℃から３０℃で投入し、混合物を再度、温度を３０℃未満に維持しながら、－０．０９ＭＰａ以下で２から３体積に濃縮した。ジクロロメタンについての分析が２％以下の残留ジクロロメタンレベルを提供するまで、このプロトコールを繰り返した。次いで、混合物を３５℃から４０℃に加熱し、ｎ－ヘプタン（１１６ｋｇ）を４０から６０ｋｇ／時の基準速度で添加し、その後すぐに、混合物を、０℃から１０℃に１０℃から１５℃／時の基準速度でゆっくりと冷却した。次いでこれを、０℃から１０℃で２時間にわたって撹拌した。濾過により濾過ケーキを提供し、これをｎ－ヘプタン（２２．５ｋｇ）ですすぎ、次いで、窒素流下、３５℃から４０℃で乾燥させた。得られた固体をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（５９．４ｋｇ）と１５℃から３０℃で混合し、次いで、３５℃から４０℃に加熱した。ｎ－ヘプタン（１１９ｋｇ）を３５℃から４０℃で、４０から６０ｋｇ／時の基準速度にて添加し、得られた混合物を０℃から１０℃に、１０℃から１５℃／時の基準速度でゆっくりと冷却した。混合物を０℃から１０℃で２時間にわたって撹拌した後、これを濾過し、濾過ケーキをｎ－ヘプタン（２３．６ｋｇ）ですすいだ。収集した固体を、残留ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルが５０００ｐｐｍ以下となり、残留ｎ－ヘプタンが５０００ｐｐｍ以下となり、カール・フィッシャー分析が０．１％以下の含水量を明らかにするまで、３５℃から４０℃で乾燥させた。得られた材料を１５℃から３０℃に冷却して、Ｄ６を白色固体として得た。収量：アッセイにより１９．３５ｋｇ、９８．３％；正量：１９．０２ｋｇ、６３．９７ｍｏｌ、８３％。ＨＰＬＣ純度：９９％（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：水中１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて３０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ６の保持時間：４．９８分。¹H NMR (401 MHz, クロロホルム-d) δ 4.79 - 4.52 (m, 2H), 3.72 - 3.53 (m, 4H), 3.06 (s, 3H), 2.36 - 2.11
(m, 2H), 1.46 (s, 9H).

【0285】

ステップ７． ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，５Ｓ）－３－アジド－５－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｄ７）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１７４ｋｇ）およびＤ６（１８．４５ｋｇ；アッセイのために補正したもの１８．１４ｋｇ、６１．０１ｍｏｌ）を反応器に投入し、溶液が取得されるまで１５℃から３０℃で撹拌し、その後すぐに、アジ化ナトリウム（６．０５ｋｇ、９３．１ｍｏｌ）を１５℃から３０℃で添加した。反応混合物を７８℃から８８℃に、２０℃から３５℃／時の基準速度で加熱し、次いで、７８℃から８８℃で反応させた。６から１２時間後、反応混合物を、ＨＰＬＣ分析のために、Ｄ６の面積パーセントが０．５％未満になるまで２から８時間ごとに試料採取した（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：０．１％酢酸アンモニウムを含有する水；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ６の典型的な保持時間：６．４分。

【0286】

混合物を１０℃から２０℃に冷却した後、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（６８．７ｋｇ）および水（１８５ｋｇ）を３５から８５ｋｇ／時の基準速度で添加し、撹拌を１０から２０分間にわたって続けた。混合物を濾過し、濾液の水性層をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（２×６９ｋｇ、９３Ｌ、５体積）で抽出した。合わせた有機層を水（２×５６ｋｇ、５６Ｌ、３体積）で洗浄して、Ｄ７をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル中の薄黄色溶液として得た。収量：１８５．４ｋｇ；１４．９０ｋｇ、６１．０１ｍｏｌのＤ７を含有すると推定されるｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル中溶液、１００％。ＨＰＬＣ純度：８０％（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：０．１％酢酸アンモニウムを含有する水；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ７の保持時間：８．３７分。

【0287】

ステップ８． ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－５－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｐ３）の合成。
メタノール（３０．２ｋｇ）およびＤ７（１８５．４ｋｇの前ステップからのｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル溶液；６１．０１ｍｍｏｌのＤ７を含有すると推定される）を、反応器に１５℃から３０℃で投入した。混合物を、地下パイプを介して窒素で０．２から０．３ＭＰａまでパージし、次いで、０．０２から０．０５ＭＰａまで通気し、このパージ／通気操作を、酸素含有量が１．０％未満になるまで５から８回行った。パラジウム炭（１０％、０．９５ｋｇ）を１５℃から３０℃で添加し、その後すぐに、添加漏斗を水（０．１５ｋｇ）ですすいだ。得られた混合物を、地下パイプを介して窒素で０．２から０．３ＭＰａまでパージし、次いで、１５℃から３０℃で０．０２から０．０５ＭＰａまで通気した。このパージ／通気手順を９回以上繰り返した。次いで、窒素の代わりに水素を使用したことを除き、同じ手順を５から８回行った。次いで、反応混合物を、地下パイプを介して水素で０．１から０．２ＭＰａまでパージし、２０℃から３０℃で反応させた。水素を１から３時間ごとに２回、下記の方式にて交換した：混合物を、地下パイプを介して水素で０．１から０．２ＭＰａまでパージし、次いで、０．０２～０．０５ＭＰａまで通気し、最後に、水素で０．１から０．２ＭＰａまでパージした。２０℃から３０℃で６から１２時間後、反応混合物を、ＨＰＬＣ分析のために、Ｄ７の面積パーセントが１．０％以下になるまで３から１２時間ごとに試料採取した（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：０．１％酢酸アンモニウムを含有する水；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｄ７の典型的な保持時間：８．６分。

【0288】

次いで、反応混合物を窒素で０．２から０．３ＭＰａまでパージし、１５℃から３０℃で０．０２から０．０５ＭＰａまで通気した。このパージ／通気手順を９回以上行った。２０℃から３０℃での濾過、続いて、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（３０．０ｋｇ、４０．５Ｌ、Ｄ６に対して２体積）による濾過ケーキのすすぎにより、濾液を提供し、これを、温度を４０℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａで２０から３０Ｌの体積に濃縮した。ｎ－ヘプタン（２５．０ｋｇ）を１５℃から３０℃で添加し、得られた混合物を同じ方式にて１９から３０Ｌの体積に濃縮した。ｎ－ヘプタン（２５．０ｋｇ）を再度添加し、濃縮を同じ方式にて行って、３５から４０Ｌの体積とし、これを４０℃から５０℃に加熱し、その温度で１から２時間にわたって撹拌し、４８℃から５３℃で濾過した。収集した固体を、窒素流下、３５℃から４５℃で乾燥させた。６から１２時間後、材料を、分析のために、残留ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルが５０００ｐｐｍ以下、残留ｎ－ヘプタンが５０００ｐｐｍ以下、残留メタノールが３０００ｐｐｍ以下になるまで２から１２時間ごとに試料採取した。次いで、固体を１５℃から３０℃に冷却し、生成物の外観が均一になるまで篩過し、２０℃から３０℃のジクロロメタン（１８７ｋｇ）に溶解した。これを１から２時間にわたって撹拌した後、これを濾過し、有機層を、温度を４０℃未満に維持しながら、－０．０８ＭＰａで２５から３５Ｌの体積に濃縮した。得られた混合物をｎ－ヘプタン（３体積）で希釈し、１８から２２Ｌの体積（およそ３体積）に濃縮し、この操作を合計３回繰り返して、ｎ－ヘプタンのジクロロメタンへの交換を達成した。得られた混合物を、２０℃から３０℃で撹拌および結晶化させ、次いでこれを濾過して、Ｐ３をオフホワイトの固体として単離した。収量：アッセイにより５．６０ｋｇ、９８％；正量：２ステップにわたって５．４８ｋｇ、２５．１ｍｏｌ、４１％。ＨＰＬＣ純度：９９％（ＨＰＬＣ条件。カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＢＥＨ Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相Ａ：０．１％酢酸アンモニウムを含有する水；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１０分間かけて２０％から９５％Ｂ；流速：１．０ｍＬ／分）。Ｐ３の保持時間：４．９３分。¹H NMR (401 MHz, クロロホルム-d), 特徴的ピーク: δ 4.78 (br d, J_HF
= 46.7 Hz, 1H), 4.27 - 3.91 (m, 2H), 3.21 - 3.11 (m, 1H), 3.02 - 2.84 (m, 1H),
2.62 - 2.35 (m, 1H), 2.29 - 2.17 (m, 1H), 1.44 (s, 9H).

【0289】

調製Ｐ４
２－（５－（（３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボン酸（Ｐ４）

【0290】

【化12】

ステップ１． ３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジンの合成
反応は、２つの並列バッチで行った；バッチ調製例は次の通りである：トリ－ｎ－ブチルホスフィン（８．４０ｍＬ、３３．６ｍｍｏｌ、２．０当量）を、２５℃のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）中の３－ヒドロキシピリジン（１６００ｍｇ、１６．８ｍｍｏｌ、１．０当量）およびエタノール－ｄ_６（１．１８ｍＬ、２０．２ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液に添加した。次いで、１，１’－（アゾジカルボニル）ジピペリジン（８４９０ｍｇ、３３．６ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加し、黄色溶液を４０℃で１６時間にわたって撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液に水（５０ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ８０ｇ、石油エーテル中３％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、表題化合物を黄色油として得た。合わせたバッチは、３．７０ｇ（８６％）を産出した。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.29 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 4.0
Hz, 1H), 7.12-7.24 (m, 2H).

【0291】

ステップ２． ３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－１－オキシドの合成
ｍ－クロロ過安息香酸（７６２０ｍｇ、３７．５ｍｍｏｌ、１．３当量）を、０℃のジクロロメタン（１５０ｍＬ）中の３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン（３７００ｍｇ、２８．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を１５℃で３日間にわたって撹拌した。チオ硫酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を添加した。反応混合物を１５℃で０．５時間にわたって撹拌した。混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン－１０：１ ジクロロメタン：メタノール）によって精製して、表題化合物（２５００．０ｍｇ、６０．１％）を赤色固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.93-8.00 (m, 1H), 7.86-7.92 (m, 1H),
7.15 (dd, J = 8.6, 6.4 Hz, 1H), 6.87 (ddd, J = 8.6, 2.2, 0.7 Hz, 1H).

【0292】

ステップ３． ２－（（５－ブロモピリジン－３－イル）オキシ）－３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジンの合成
ジイソプロピルエチルアミン（１１．３ｍＬ、６５．０ｍｍｏｌ、３．７５当量）およびブロモトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１０．５ｇ、２２．５ｍｍｏｌ、（１．３当量）を、０℃のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）中の、３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－１－オキシド（２５００ｍｇ、１７．３ｍｍｏｌ、１．０当量）および３－ブロモ－５－ヒドロキシピリジン（３０２０ｍｇ、１７．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に添加した。反応混合物を１５℃で１８時間にわたって撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）に溶解した。有機層を、１Ｎ水酸化ナトリウム（１５０ｍＬ）、水（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、油を得た。粗製油をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－８０：２０ 石油エーテル：酢酸エチル）によって精製して、生成物（３６００．０ｍｇ、６９．２％）を白色固体として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 8.48 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.44 (d, J =
2.3 Hz, 1H), 7.65-7.74 (m, 2H), 7.19-7.29 (m, 1H), 7.03 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz,
1H).

【0293】

ステップ４． （５－（（３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）ボロン酸の合成
ビス（ピナコラト）ジボロン（３８００ｍｇ、１５．０ｍｍｏｌ、１．２当量）、酢酸カリウム（３６７０ｍｇ、３７．４ｍｍｏｌ、３．０当量）および［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２；４５６ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ、０．０５当量）を、ジオキサン（１２０ｍＬ）中の２－（（５－ブロモピリジン－３－イル）オキシ）－３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン（３７４０ｍｇ、１２．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に添加した。得られた混合物を脱気し、窒素で３回パージし、次いで、Ｎ_２下、１００℃で２時間にわたって撹拌した。得られた混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、粗生成物（７０００．０ｍｇ）を褐色油として得、これを次のステップに直接使用した。MS (ES+) 265.8 (M+H).

【0294】

ステップ５． エチル２－（５－（（３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキシレートの合成
反応は、２つの並列バッチで行った；バッチ調製例は次の通りである：エチル２－クロロピリミジン－５－カルボキシレート（１０００ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ、１．５当量）、炭酸カリウム（９８０ｍｇ、７．１ｍｍｏｌ、２．０当量）および［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタン錯体（１３０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、０．０５当量）を、ジオキサン（２５ｍＬ）および水（２．５ｍＬ）中の（５－（（３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）ボロン酸（１８８０ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に添加した。得られた混合物を窒素でフラッシュし、次いで、９０℃で２時間にわたって撹拌した。反応物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。粗材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル；７０：３０）によって精製して、生成物を黄色固体として得た。合わせたバッチは、２．３ｇ（５０％）を産出した。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 9.57 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.34 (s,
2H), 8.68 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.61 (dd, J = 2.6, 1.8 Hz, 1H), 7.73 (dd, J =
4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.28-7.28 (m, 1H), 7.04 (dd, J = 8.1, 4.9 Hz, 1H), 7.00-7.08
(m, 1H), 4.48 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.46 (t, J = 7.1 Hz, 4H). MS (ES+) 372.1
(M+H).

【0295】

ステップ６：２－（５－（（３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボン酸（Ｐ４）
反応は、２つの並列バッチで行った；バッチ調製例は次の通りである：水酸化ナトリウム（１０８０ｍｇ、２６．９ｍｍｏｌ、５．０当量）を、１５℃のテトラヒドロフラン（７０ｍＬ）および水（３５ｍＬ）中のエチル２－（５－（（３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキシレート（２０００ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に添加した。得られた溶液を１５℃で１時間にわたって撹拌した。混合物を濃縮して、テトラヒドロフランを除去した。水性混合物を４Ｍ塩酸で４のｐＨに酸性化し、水（５０ｍＬ）で希釈し、１５℃で２０分間にわたって撹拌した。固体を濾過し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、２－（５－（（３－（エトキシ－ｄ_５）ピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）ピリミジン－５－カルボン酸を緑色固体として産出した。合わせたバッチは、１．２８ｇ（６０％）を産出した。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 9.41 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.33 (s, 2H)
8.67 (d, J = 2.7 Hz, 1 H), 8.33-8.41 (m, 1H) 7.70 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H),
7.58 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 7.8, 4.9 Hz, 1H). HRMS (TOF)
344.1402 (M+H).

【0296】

（実施例１）
２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ビス（トリフルオロ酢酸）塩（１）

【0297】

【化13】

ステップ１． ベンジル（３Ｒ，４Ｓ）－３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－４－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｃ９）の合成。
クロロギ酸ベンジル（０．１１６ｍＬ、０．８１３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］カルバメート（１５０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（１４６ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）の０℃混合物に添加し、反応混合物を２５℃で３日間にわたって撹拌した。次いでこれを、水（２０ｍＬ）で処理し、酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、Ｃ９を無色油（２９０ｍｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ分析により、この材料は不純物を含有していたが、さらに精製することなく次のステップにおいて使用した。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d), 特徴的ピーク: δ 4.95 - 4.76 (m,
2H), 3.87 - 3.68 (m, 1H), 3.12 - 2.99 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 1H), 1.45 (s,
9H).

【0298】

ステップ２． ベンジル（３Ｒ，４Ｓ）－３－アミノ－４－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート、塩酸塩（Ｃ１０）の合成。
Ｃ９（前ステップから；２９０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ以下）および塩化水素（１，４－ジオキサン中４Ｍ溶液；６．０ｍＬ）の混合物を、１５℃で１時間にわたって撹拌し、その後すぐに、これを真空で濃縮して、Ｃ１０を白色固体として得た。収量：２００ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、２ステップにわたって定量的。¹H NMR (400 MHz, 重水) δ 7.48 - 7.33 (m, 5H), 5.14 (s, 2H), 5.11 (br d, J_HF = 48
Hz, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 1H), 3.88 - 3.28 (m, 4H), 2.14 - 2.01 (m, 1H), 2.01 -
1.81 (m, 1H).

【0299】

ステップ３． ベンジル（３Ｒ，４Ｓ）－３－｛［（２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－イル）カルボニル］アミノ｝－４－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｃ１１）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（３．０ｍＬ）中のＰ２（５０．０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）の２５℃溶液に、Ｃ１０（４８．６ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５８．７μＬ、０．４２１ｍｍｏｌ）および２－クロロ－１，３－ジメチル－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－３－イウムクロリド（７１．２ｍｇ、０．４２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃で１時間にわたって撹拌した後、これを水（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。シリカゲル上でのクロマトグラフィー（溶離液：９：１ 酢酸エチル／石油エーテル）により、Ｃ１１を黄色固体として提供した。収量：８０．０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ、９６％。LCMS m/z 591.2 [M+H]⁺.

【0300】

ステップ４． ２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ビス（トリフルオロ酢酸）塩（１）の合成。
１０％パラジウム炭素（６０．０ｍｇ）を、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のＣ１１（６０．０ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、その後すぐに、混合物を真空下で脱気し、次いで、水素でパージし、この排気－パージサイクルを合計３回行った。次いで、反応混合物を、水素バルーン下、２５℃で２時間にわたって撹拌し、このとき、Ｃ１１（２０．０ｍｇ、３３．９μｍｏｌ）を使用して行った同様の反応と合わせ、濾過した。濾液を真空で濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＡｇｅｌａデュラシェルＣ１８、５μｍ；移動相Ａ：水中０．１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：１４％から４４％Ｂ）を使用して精製して、２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ビス（トリフルオロ酢酸）塩を黄色ガム状物として得た。合わせた収量：２８．１ｍｇ、４１．１μｍｏｌ、３０％。LCMS m/z 457.4 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d), 特徴的ピーク: δ 9.52 (br s, 1H),
9.16 (br s, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.78 - 8.57 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.06 (dd, J =
9.2, 2.3 Hz, 1H), 4.99 (br d, J_HF = 50 Hz, 1H), 4.91 - 4.70 (m, 1H),
4.12 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 2.41 - 2.09 (m, 2H), 1.48 (t, J = 6.9 Hz, 3H).

【0301】

（実施例２）
２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（２）

【0302】

【化14】

ステップ１． ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［（２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－イル）カルボニル］アミノ｝－５－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｃ１２）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．７９ｍＬ、１６．０ｍｍｏｌ）およびＰ３（５００ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中のＰ２（８１６ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）の室温溶液に添加した。得られた溶液を０℃に冷却した後、２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスフィナン２，４，６－トリオキシド（Ｔ３Ｐ；酢酸エチル中５０％溶液；１．６ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間にわたって撹拌させた。この時点でのＬＣＭＳ分析は、Ｃ１２の存在を指し示した：LCMS m/z 557.4 [M+H]⁺. 反応混合物を水と酢酸エチルとの間に分配し、水性層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を、水で２回、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で１回および飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、Ｃ１２を黄色固体として提供した。収量：１．００ｇ、１．８０ｍｍｏｌ、７９％。

【0303】

ステップ２． ２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（２）の合成。
ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（６８４ｍｇ、３．６０ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１０ｍＬ）中のＣ１２（１．００ｇ、１．８０ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、混合物を、溶液が取得されるまで室温で撹拌させた。反応混合物を、還流で２時間にわたって、次いで室温で２時間にわたって撹拌した後、得られたガム状物の溶媒をデカントして除き、ガム状物を、酢酸エチルで４回およびヘプタンで２回粉砕した。取得した固体を酢酸エチルと１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液との間に分配し、水性層を酢酸エチルで４回抽出し、合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。得られた材料を酢酸エチル（およそ７０ｍＬ）に還流で溶解し、混合物がわずかに濁るまで、ヘプタン（３００ｍＬ）で処理し、その後すぐに、混合物を室温に冷却させ、終夜撹拌させた。濾過、続いて、濾過ケーキの１：１ 酢酸エチル／ヘプタンによる洗浄により、２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドを白色固体として得た。収量：５８０ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ、７１％。LCMS m/z 457.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 9.38 (d, J = 1.7 Hz, 1H),
9.26 (s, 2H), 8.63 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.59 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.35 (dd,
J = 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.71 (d, AB四重線の半分, J = 2.7 Hz, 1H), 7.68 (dd, ABX系の成分, J = 9.8, 2.7 Hz, 1H), 4.82 (br d, J_HF = 48 Hz, 1H),
4.20 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.18 - 4.08 (m, 1H), 3.02 - 2.86 (m, 2H), 2.77 - 2.62
(m, 1H), 2.5 - 2.43 (m, 1H, 推定;
溶媒ピークにより一部不明確), 2.19 - 2.08 (m,
1H), 1.91 - 1.72 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0304】

（実施例３）
２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ビス（トリフルオロ酢酸）塩（３）

【0305】

【化15】

ステップ１． ベンジル（３Ｒ，４Ｓ）－３－｛［（２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－イル）カルボニル］アミノ｝－４－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｃ１３）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（３．０ｍＬ）中のＰ１（５０．０ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）の２５℃溶液に、Ｃ１０（５１．２ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）、２－クロロ－１，３－ジメチル－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－３－イウムクロリド（７５．０ｍｇ、０．４４４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６１．８μＬ、０．４４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃で１時間にわたって撹拌し、その後すぐに、水（２０ｍＬ）を添加し、得られた混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：４：１ 酢酸エチル／石油エーテル）に供して、Ｃ１３を黄色固体として得た。収量：８０．０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ、９５％。LCMS m/z 573.2 [M+H]⁺.

【0306】

ステップ２． ２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ビス（トリフルオロ酢酸）塩（３）の合成。
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のＣ１３（６０．０ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％パラジウム炭素（６０．０ｍｇ）を添加し、その後すぐに、混合物を真空下で脱気し、次いで、水素でパージし、この排気－パージサイクルを合計３回行った。反応混合物を、水素バルーン下、２５℃で５時間にわたって撹拌し、次いで、Ｃ１３（２０．０ｍｇ、３４．９μｍｏｌ）を使用して行った同様の反応と合わせた。この混合物を濾過した後、濾液を真空で濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ－アクタストライアートＣ１８、５μｍ；移動相Ａ：０．０５％水酸化アンモニウムを含有する水；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：２４％から６４％Ｂ）を使用して精製した。遊離塩基２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドが、白色固体として取得された。遊離塩基２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドの合わせた収量：１２ｍｇ、２７μｍｏｌ、１９％。LCMS m/z 439.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 9.52 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.17 (s, 2H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H),
8.58 - 8.54 (m, 1H), 7.70 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.27 - 7.23 (m, 1H, 推定; 溶媒ピークにより一部不明確), 7.02 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 6.68 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.93
(br d, J_HF = 49 Hz, 1H), 4.48 - 4.31 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz,
2H), 3.10 (dd, J = 12.1, 4.5 Hz, 1H), 3.00 - 2.80 (m, 3H), 2.15 - 2.01 (m, 1H),
1.97 - 1.77 (m, 1H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0307】

遊離塩基２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（１２ｍｇ、２７μｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸の水溶液（水中０．１％トリフルオロ酢酸；１２ｍＬ）に溶解し、次いで、１６時間にわたって凍結乾燥して、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ビス（トリフルオロ酢酸）塩を黄色ガム状物として提供した。２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ビス（トリフルオロ酢酸）塩の合わせた収量：１２．９ｍｇ、１９．４μｍｏｌ、１４％。LCMS m/z 439.4 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 10.56 - 10.28 (br s, 1H), 9.80 - 9.55 (br s, 1H), 9.71 (s, 1H),
9.24 (s, 2H), 9.09 (br s, 1H), 8.86 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 2.5
Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.14
(dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.97 (br d, J_HF = 49 Hz, 1H), 4.96 - 4.78
(m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.83 - 3.72 (m, 1H), 3.5 - 3.2 (m, 3H), 2.42
- 2.11 (m, 2H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0308】

（実施例４）
２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（４）

【0309】

【化16】

ステップ１． ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，５Ｓ）－３－｛［（２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－イル）カルボニル］アミノ｝－５－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｃ１４）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５３．１ｍＬ、３０５ｍｍｏｌ）およびＰ３（９．５０ｇ、４３．５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（２１０ｍＬ）中のＰ１（１４．７ｇ、４３．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を０℃に冷却し、次いで、２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスフィナン２，４，６－トリオキシド（Ｔ３Ｐ；酢酸エチル中５０％溶液；３０．５ｍＬ、５１．２ｍｍｏｌ）を、およそ４分間かけてシリンジを介して添加した。反応混合物を０℃で４５分間にわたって撹拌した後、氷浴を除去し、反応混合物を室温にさせ、１７時間にわたって撹拌させた。次いでこれを、真空で濃縮し、残留物を水と酢酸エチルとの間に分配し、水性層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で順次に洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液洗浄中に出現した沈殿物を、濾過を介して除去し、廃棄した。飽和塩化ナトリウム水溶液層を酢酸エチルで１回抽出し、合わせた有機層を真空で濃縮した。残留物を塩化メチレンおよびメタノールの混合物に溶解し、シリカゲルに事前吸着させた。シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：ヘプタン中３０％から１００％酢酸エチル）を行い、生成物は酢酸エチル／ヘプタン溶離液への溶解度が限られていることが観察された。この精製により、Ｃ１４をオフホワイトの固体として得た。収量：１９．１ｇ、３５．５ｍｍｏｌ、８２％。LCMS m/z 539.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 9.48 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.12 (s, 2H), 8.63 (d, J = 2.6 Hz, 1H),
8.55 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.26 (dd, J =
7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 6.97 - 6.37 (v br m, 1H),
4.78 (br d, J_HF = 46.7 Hz, 1H), 4.46 - 4.33 (m, 1H), 4.18 (q, J =
7.0 Hz, 2H), 4.08 - 3.05 (v br m, 4H), 2.41 - 2.11 (m, 1H), 2.02 - 1.79 (m,
1H), 1.49 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.49 (s, 9H).

【0310】

ステップ２． ２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（４）の合成。
１，４－ジオキサン中塩化水素の溶液（４Ｍ；５２０ｍＬ、２．１ｍｏｌ）を、１０分間かけて、テトラヒドロフラン（８５０ｍＬ）中のＣ１４（１５９ｇ、２９５ｍｍｏｌ）の室温溶液に添加し、反応温度を３５℃から４０℃に増大させ、加熱マントルを使用してこの温度を維持した。添加が完了した後、反応混合物を３５℃から４０℃で３時間にわたって撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、出発材料の２０％が残っていることを指し示したため、１，４－ジオキサン中塩化水素の溶液（４Ｍ；１５０ｍＬ、６００ｍｍｏｌ）を反応混合物に再度添加し、撹拌を３５℃から４０℃で３０分間にわたって続けた。この時点で、ＬＣＭＳ分析を介して出発材料の５％が残っており、反応混合物を１，４－ジオキサン中塩化水素の溶液（４Ｍ；６０ｍＬ、２４０ｍｍｏｌ）で処理した。３５℃から４０℃でさらに４５分後、反応混合物を真空で濃縮し、得られた固体を水（１Ｌ）に溶解した。この溶液を水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ；９００ｍＬ、９００ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、水（４００ｍＬ）で希釈して、撹拌を容易にし、室温で１５分後、濾過を介して沈殿物を収集し、水（４×２５０ｍＬ）で洗浄した。この固体を、水の添加によって総体積８００ｍＬにし、次いで、オーバーヘッドスターラー下、室温で２時間にわたってメタノール（８００ｍＬ）によりスラリー化した。スラリーを濾過し、濾過ケーキをメタノールおよび水の混合物（１：１、１Ｌ）で洗浄した。この固体を、Ｃ１４（９４６ｍｍｏｌ以下）を使用して行ったいくつかの同様の反応からの生成物と合わせ、合わせたバッチを酢酸エチル（１．１Ｌ）に懸濁し、機械的撹拌子を使用して室温で１時間にわたって撹拌した。固体を濾過によって収集した後、これを酢酸エチルで洗浄して、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドをオフホワイトの固体として得た。収量：２ステップにわたって３３０ｇ、７５３ｍｍｏｌ、６１％。LCMS m/z 439.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 9.38 (d, J = 1.8 Hz, 1H),
9.26 (s, 2H), 8.64 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.60 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.36 (dd,
J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.1, 1.5
Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 4.81 (br d, J_HF = 48.3 Hz,
1H), 4.22 - 4.07 (m, 1H), 4.17 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.02 - 2.86 (m, 2H), 2.69
(br dd, J = 35.1, 14.2 Hz, 1H), 2.5 - 2.38 (m, 2H, 推定; 溶媒ピークにより一部不明確),
2.19 - 2.07 (m, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0311】

粉末Ｘ線回折分析を、この例の固体に対し、Ｃｕ放射線源（Ｋ－α平均）が装備されたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ８エンデバー回折計を使用して行った。発散スリットを、１５ｍｍ連続照明に設定した。回折される放射線をＰＳＤ－リンクスアイ検出器によって検出し、検出器ＰＳＤ開口部は３．００度に設定した。Ｘ線管電圧およびアンペア数は、それぞれ４０ｋＶおよび４０ｍＡに設定した。データは、０．０１度のステップ幅および１．０秒のステップ時間を使用し、３．０から４０．０度２シータまでのＣｕ波長で、シータ－シータゴニオメーターに収集した。散乱線除去スクリーンは、１．５ｍｍの固定距離に設定した。収集中、試料を１５／分で回転させた。試料は、それらをシリコン低バックグラウンド試料ホルダーに入れ、収集中に回転させることによって調製した。

【0312】

データはＢｒｕｋｅｒ ＤＩＦＦＲＡＣプラスソフトウェアを使用して収集し、分析はＥＶＡディフラクトプラスソフトウェアによって実施した。ＰＸＲＤデータファイルは、ピーク検索前には加工しなかった。ＥＶＡソフトウェアにおけるピーク検索アルゴリズムを使用して、１の閾値を持つ選択されたピークを使用して、予備的なピーク割り当てを行った。妥当性を確実にするために、調整を手動で行い、自動割り当ての出力を視覚的に確認し、ピーク位置をピーク最大値に調整した。３％以上の相対強度を持つピークを概して選択した。分離されなかったまたはノイズと一致するピークは選択しなかった。ＵＳＰにおいて述べられているＰＸＲＤからのピーク位置に関連する典型的な誤差は、最大０．２°２θである（ＵＳＰ－９４１）。相対的なピークの高さにおけるいくらかの変動は、結晶サイズおよび形態学に伴う変化に基づいて予想される。特徴的なｘ線粉末回折パターンを、図２６で提供する。この図からのＰＸＲＤデータについて、さらに後述する。

【0313】

【表3】

【0314】

【表4】

【0315】

実施例４、塩酸塩
２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、塩酸塩（４、塩酸塩）

【0316】

【化17】

酢酸エチル（４０ｍＬ）中の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（４．０ｇ、９．１ｍｍｏｌ）の懸濁液を、およそ５０℃に加温し、その後すぐに、１，４－ジオキサン中塩化水素の溶液（４Ｍ；２．５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で４日間にわたって撹拌した。次いでこれを濾過し、濾過ケーキを温酢酸エチルで２回洗浄して、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、塩酸塩を白色固体として得た。収量：４．１ｇ、８．６ｍｍｏｌ、９４％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.90 (br d, J = 11 Hz, 1H), 9.39 (d, J =
1.8 Hz, 1H), 9.35 (s, 2H), 9.26 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 9.24 - 9.10 (m, 1H),
8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 4.8,
1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H),
5.23 (br d, J_HF = 45.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.40 (m, 1H), 4.18 (q, J =
7.0 Hz, 2H), 3.53 - 3.41 (m, 1H), 3.39 - 3.15 (m, 2H), 3.03 - 2.88 (m, 1H),
2.35 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 1.90 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0317】

粉末Ｘ線回折分析を、この実験の固体に対し、Ｃｕ放射線源が装備されたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ４エンデバー回折計を使用して行った。発散スリットを０．６ｍｍに設定し、一方、二次光学系は可変スリットを使用した。回折される放射線をＰＳＤ－リンクスアイ検出器によって検出した。Ｘ線管電圧およびアンペア数は、それぞれ４０ｋＶおよび４０ｍＡに設定した。データは、０．０２０度のステップ幅および０．３秒のステップ時間を使用し、３．０から４０．０度２シータまでのＣｕ波長で、シータ－２シータゴニオメーターに収集した。試料は、それらをシリコン低バックグラウンド試料ホルダーに入れ、収集中に回転させることによって調製した。データはＢｒｕｋｅｒ ＤＩＦＦＲＡＣプラスソフトウェアを使用して収集し、分析はＥＶＡディフラクトプラスソフトウェアによって実施した。特徴的なｘ線粉末回折パターンを、図２７で提供する。

【0318】

実施例４、ｐ－トルエンスルホン酸塩
２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ｐ－トルエンスルホン酸塩（４、ｐ－トルエンスルホン酸塩）

【0319】

【化18】

酢酸エチル（４０ｍＬ）中の２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（４．０ｇ、９．１ｍｍｏｌ）の懸濁液を、およそ５０℃に加温し、その後すぐに、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３日間にわたって撹拌した。得られた塊状の固体をスパチュラで破壊し、懸濁固体を室温で１日間にわたって激しく撹拌した。濾過により濾過ケーキを提供し、これを温酢酸エチルで２回洗浄して、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ｐ－トルエンスルホン酸塩を白色固体として提供した。収量：５．３ｇ、８．７ｍｍｏｌ、９６％。LCMS m/z 439.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 9.40 (d, J = 1.8 Hz, 1H),
9.28 (s, 2H), 9.24 - 9.03 (br m, 2H), 8.98 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d, J =
2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H),
7.57 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 8.0,
4.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.24 (br d, J_HF = 45.1 Hz, 1H),
4.51 - 4.38 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.43 - 3.17
(m, 2H), 2.98 - 2.85 (m, 1H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.06 - 1.85
(m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0320】

実施例４、ｐ－トルエンスルホン酸塩の結晶化
２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ｐ－トルエンスルホン酸塩（４、ｐ－トルエンスルホン酸塩）

【0321】

【化19】

実施例４、ｐ－トルエンスルホン酸塩（１９．１ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）の、水およびエタノールの混合物（９：１、３００ｍＬ）による処理、続いて、ヒートガンによる最小限の加温を、溶液が取得されるまで行った。これを室温に終夜冷却させ、次いで、追加で２４時間にわたって撹拌し、その後すぐに、エタノール（３５ｍＬ）の添加により、溶媒比をおよそ４：１ 水／エタノールに調整した。得られた混合物を８５℃に加熱して溶液を得、これを３時間かけて室温に冷却し、次いで、室温で終夜撹拌した。濾過を介する沈殿物の収集により固体を得、これを、窒素ブリードが装備され４０℃に予熱した真空オーブン内で乾燥させた。２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ｐ－トルエンスルホン酸塩が白色粉末として取得された。収量：１１．８ｇ、１９．３ｍｍｏｌ、６２％。LCMS m/z 439.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)
δ 9.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H),
9.27 (s, 2H), 9.13 (br s, 2H), 8.99 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 2.7
Hz, 1H), 8.37 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.8, 1.5 Hz, 1H), 7.57
(dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.49 (br d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 8.0, 4.8
Hz, 1H), 7.11 (br d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.24 (br d, J_HF = 45.1 Hz,
1H), 4.52 - 4.38 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.44 -
3.18 (m, 2H), 2.92 (dd, J = 11.9, 11.8 Hz, 1H), 2.37 - 2.22 (m, 1H), 2.27 (s,
3H), 2.08 - 1.84 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0322】

この材料のほとんど（１１．６ｇ）を、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ｐ－トルエンスルホン酸塩（７．４ｇ）の別の試料と合わせ、個々の試料は、粉末Ｘ線回折分析により同じ回折パターンを呈していた。２つの試料の混合により、綿毛状白色固体（１９．０ｇ）を提供した。

【0323】

粉末Ｘ線回折分析を、この例の固体に対し、Ｃｕ放射線源（Ｋ－α平均）が装備されたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ８エンデバー回折計を使用して行った。発散スリットを、１５ｍｍ連続照明に設定した。回折される放射線をＰＳＤ－リンクスアイ検出器によって検出し、検出器ＰＳＤ開口部は３．００度に設定した。Ｘ線管電圧およびアンペア数は、それぞれ４０ｋＶおよび４０ｍＡに設定した。データは、０．０１度のステップ幅および１．０秒のステップ時間を使用し、３．０から４０．０度２シータまでのＣｕ波長で、シータ－シータゴニオメーターに収集した。散乱線除去スクリーンは、１．５ｍｍの固定距離に設定した。収集中、試料を１５／分で回転させた。試料は、それらをシリコン低バックグラウンド試料ホルダーに入れ、収集中に回転させることによって調製した。

【0324】

データはＢｒｕｋｅｒ ＤＩＦＦＲＡＣプラスソフトウェアを使用して収集し、分析はＥＶＡディフラクトプラスソフトウェアによって実施した。ＰＸＲＤデータファイルは、ピーク検索前には加工しなかった。ＥＶＡソフトウェアにおけるピーク検索アルゴリズムを使用して、１の閾値を持つ選択されたピークを使用して、予備的なピーク割り当てを行った。妥当性を確実にするために、調整を手動で行い、自動割り当ての出力を視覚的に確認し、ピーク位置をピーク最大値に調整した。３％以上の相対強度を持つピークを概して選択した。分離されなかったまたはノイズと一致するピークは選択しなかった。ＵＳＰにおいて述べられているＰＸＲＤからのピーク位置に関連する典型的な誤差は、最大０．２°２θである（ＵＳＰ－９４１）。相対的なピークの高さにおけるいくらかの変動は、結晶サイズおよび形態学に伴う変化に基づいて予想される。特徴的なｘ線粉末回折パターンを、図２８で提供する。この図からのＰＸＲＤデータについて、さらに後述する。

【0325】

【表5】

【0326】

【表6】

【0327】

実施例４、ｐ－トルエンスルホン酸塩の代替合成
２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ｐ－トルエンスルホン酸塩（４、ｐ－トルエンスルホン酸塩）

【0328】

【化20】

アセトニトリル（９０．０ｍＬ）中の、Ｃ１４（９．４７ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（９８％、３．５８ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）および水（４．７４ｍＬ、２６３ｍｍｏｌ）の溶液を、１０分間かけて９０℃に加熱した（内部反応温度７６℃）。１２時間後、反応混合物を１０分間かけて２５℃に冷却し、終夜２５℃で保持した。次いでこれを１０℃に冷却し、濾過した。濾過ケーキを、１０℃に冷却した１体積の９５：５ アセトニトリル／水混合物で２回すすいで、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド、ｐ－トルエンスルホン酸塩を黄色固体として得た。収量：８．３０ｇ、１３．６ｍｍｏｌ、７７％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.40 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.27 (s, 2H),
9.17 - 9.07 (br s, 2H), 8.97 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 2.7 Hz, 1H),
8.37 (dd, J = 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J =
8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.47 (br d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H),
7.11 (br d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.24 (br d, J_HF = 45.1 Hz, 1H), 4.52 -
4.38 (m, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.44 - 3.19 (m,
2H), 2.90 (dd, J = 11.8, 11.8 Hz, 1H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.06
- 1.84 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0329】

（実施例５）
２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（５）

【0330】

【化21】

ステップ１． ベンジル（３Ｒ，４Ｒ）－３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－４－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｃ１５）の合成。
クロロギ酸ベンジル（２５８ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）および炭酸ナトリウム水溶液（１Ｍ；２．７５ｍＬ、２．７５ｍｍｏｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］カルバメート（３００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の０℃混合物に添加した。反応混合物を１５℃で１６時間にわたって撹拌した後、水（２０ｍＬ）を添加し、得られた混合物を酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、Ｃ１５を白色固体として提供した。収量：４８５ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ、定量的。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 7.43 - 7.28 (m, 5H), 5.14 (AB四重線, J_AB = 12.3 Hz, Δν_AB = 14.2 Hz, 2H; 低磁場二重線が広がっている), 4.83 - 4.53 (m, 2H), 3.87 -
3.33 (m, 4H), 2.06 - 1.75 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).

【0331】

ステップ２． ベンジル（３Ｒ，４Ｒ）－３－アミノ－４－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート、塩酸塩（Ｃ１６）の合成。
メタノール（６ｍＬ）中のＣ１５（４８５ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）の溶液を、塩化水素（酢酸エチル中溶液；１２ｍＬ）で処理した。反応混合物を２０℃で１時間にわたって撹拌した後、これを真空で濃縮して、Ｃ１６を白色固体として得た。収量：３７０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、９３％。¹H NMR (400 MHz, 重水) δ 7.50 - 7.39 (m, 5H), 5.17 (s, 2H), 4.93 - 4.71 (m, 1H, 推定; 溶媒ピークにより一部不明確), 4.42 - 4.27 (m, 1H), 4.24 - 3.98 (m, 1H), 3.51 - 3.39 (m, 1H),
3.21 - 2.99 (m, 2H), 2.29 - 2.16 (m, 1H), 1.86 - 1.71 (m, 1H).

【0332】

ステップ３． ベンジル（３Ｒ，４Ｒ）－３－｛［（２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－イル）カルボニル］アミノ｝－４－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｃ１７）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）中の、Ｐ１（１７０ｍｇ、０．５０２ｍｍｏｌ）、Ｃ１６（１４５ｍｇ、０．５０２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２６３ｍＬ、１．５１ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ；２８７ｍｇ、０．７５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８℃で２時間にわたって撹拌し、その後すぐに、これを、Ｃ１６（４２．７ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌおよび１７１ｍｇ、０．５９２ｍｍｏｌ）を使用して行った２つの同様の反応と合わせ、水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル中０％から１００％酢酸エチル）時に、Ｃ１７が黄色固体として取得された。合わせた収量：５４０ｍｇ、０．９４３ｍｍｏｌ、７６％。LCMS m/z 573.1 [M+H]⁺.

【0333】

ステップ４． ２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（５）の合成。
エタノール（２０ｍＬ）中のＣ１７（３００ｍｇ、０．５２４ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム炭素（３００ｍｇ）の混合物を、水素バルーン下、１５℃で２時間にわたって撹拌した。反応混合物を、Ｃ１７（２００ｍｇ、０．３４９ｍｍｏｌおよび４０ｍｇ、７０μｍｏｌ）を使用して行った２つの同様の反応と合わせた後、珪藻土のパッドに通して濾過した。濾液を濃縮し、残留物を、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＡｇｅｌａデュラシェルＣ１８、５μｍ；移動相Ａ：水中０．０５％水酸化アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：３０％から５０％Ｂ）を使用して精製して、２－｛５－［（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドを白色固体として得た。合わせた収量：１７４ｍｇ、０．３９７ｍｍｏｌ、４２％。LCMS m/z 439.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 9.52 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.65 (d, J = 2.8 Hz, 1H),
8.56 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.28 - 7.23 (m,
1H, 推定; 溶媒ピークにより一部不明確), 7.17 (br d, J = 8 Hz, 1H),
7.02 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.86 - 4.66 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 1H), 4.18
(q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.36 (ddd, J = 12.3, 3.4, 3.4 Hz, 1H), 3.09 - 2.99 (m,
1H), 2.86 - 2.75 (m, 2H), 2.11 - 1.81 (m, 2H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0334】

（実施例６）
２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（６）

【0335】

【化22】

ステップ１． ベンジル（３Ｒ，４Ｒ）－３－｛［（２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝ピリミジン－５－イル）カルボニル］アミノ｝－４－フルオロピペリジン－１－カルボキシレート（Ｃ１８）の合成。
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の、Ｐ２（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、Ｃ１６（４０．５ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７３．３μＬ、０．４２１ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ；８０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８℃で２時間にわたって撹拌した後、これを、Ｃ１６（２４．３ｍｇ、８４．２μｍｏｌ）を使用して行った同様の反応と合わせ、次いで、水（２０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。分取薄層クロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル）を介する残留物の精製により、Ｃ１８を黄色固体として得た。合わせた収量：９０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ、６８％。LCMS m/z 591.1 [M+H]⁺.

【0336】

ステップ２． ２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミド（６）の合成。
エタノール（２０ｍＬ）中のＣ１８（７０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム炭素（１００ｍｇ）の混合物を、水素バルーン下、１５℃で２時間にわたって撹拌し、その後すぐに、これを、Ｃ１８（２０ｍｇ、３４μｍｏｌ）を使用して行った同様の反応と合わせ、珪藻土のパッドに通して濾過した。濾液を真空で濃縮した後、残留物を、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＡｇｅｌａデュラシェルＣ１８、５μｍ；移動相Ａ：水中０．０５％水酸化アンモニウム；移動相Ｂ：アセトニトリル；勾配：３０％から５０％Ｂ）を使用して精製し、これにより、２－｛５－［（３－エトキシ－５－フルオロピリジン－２－イル）オキシ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロピペリジン－３－イル］ピリミジン－５－カルボキサミドを白色固体として得た。収量：１４．２ｍｇ、３１．１μｍｏｌ、２０％。LCMS m/z 457.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 9.52 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.63 (d, J = 2.7 Hz, 1H),
8.53 (dd, J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.16 - 7.09 (br m,
1H), 7.06 (dd, J = 9.2, 2.6 Hz, 1H), 4.86 - 4.68 (m, J_HF = 47.2 Hz,
1H), 4.37 - 4.27 (m, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.36 (ddd, J = 12.2, 3.5,
3.4 Hz, 1H), 3.09 - 2.99 (m, 1H), 2.87 - 2.76 (m, 2H), 2.11 - 1.82 (m, 2H),
1.51 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

【0337】

（実施例７～２５）

【0338】

【表7-1】

【0339】

【表7-2】

【0340】

【表7-3】

【0341】

【表7-4】

【0342】

【表7-5】

【0343】

【表7-6】

【0344】

【表8-1】

【0345】

【表8-2】

【0346】

【表8-3】

【0347】

【表8-4】

【0348】

【表8-5】

【0349】

【表8-6】

【0350】

【表8-7】

【0351】

（実施例Ｄ１～Ｄ３）
表３は、重水素化エチル基を組み込んだ３つの机上の実験例を含む。これらの化合物の調製は、当業者が備える通常の技量を使用する上述した方法の変形形態を用いるであろう。実施例Ｄ１は、中間体Ｐ３およびＰ４から、実施例４について記述されているものに類似の方式で調製され得る。実施例Ｄ２およびＤ３は、Ｐ２の重水素化バージョンから、それぞれ実施例２および１に用いられた方法を介して調製され得る。

【0352】

【表9】

【0353】

（実施例２６）
４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸、化合物Ａ（ＡＣＣｉ化合物）の調製：
４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸の調製は、あらゆる目的のための参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＵＳ８，８５９，５７７の実施例９にある。［（１Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）－３－｛２－［（２Ｓ）－２－メチルアゼチジン－１－イル］－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル｝－３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサ－６－イル］酢酸（その結晶性遊離酸形態を含む）の調製は、米国特許第９，８０９，５７９号の実施例４において記述されている。

【0354】

化合物Ａの調製では、本明細書において記述される調製方法のいくつかは、遠隔官能基（例えば、式Ｉ前駆体中の第一級アミン、第二級アミン、カルボキシル）の保護を必要とし得ることに留意されたい。そのような保護の必要性は、遠隔官能基の性質および調製方法の条件に応じて変動することになる。そのような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。そのような保護／脱保護方法の使用も、当業者が備える技能の範囲内である。保護基の概要およびそれらの使用については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１を参照されたい。さらに、本発明は、本明細書で提供される具体的な合成方法に限定されず、それらは変動し得る。

【0355】

中間体Ａ１：１－イソプロピル－４，６－ジヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン（ｐｉｐｅｒｌｄｉｎ）］－７（１Ｈ）－オン、塩酸塩。

【0356】

【化23】

ステップ１． ｔｅｒｔ－ブチル９－オキソ－３－アザスピロ［５．５］ウンデカ－７－エン－３－カルボキシレート。

【0357】

【化24】

乾燥した反応器に、ｔｅｒｔ－ブチル４－ホルミルピペリジン－１－カルボキシレート（１０８Ｋｇ）、シクロヘキサン（１０８０Ｌ）およびピロリジン（６４．８Ｋｇ）を２５～３０℃で投入した。混合物を５～１０分間撹拌し、次いで、ディーン・スタークトラップを使用して水を収集しながら、１２～１６時間にわたって還流まで加熱した。次いで、反応混合物を５０～６０℃に冷却し、この温度で真空を印加して過剰なピロリジンおよびシクロヘキサンを蒸留した。次いで、反応混合物を２５～３０℃に冷却し、シクロヘキサン（６４８Ｌ）、続いて、メチルビニルケトン（４９．６３Ｋｇ）を投入した。混合物を１２～１６時間にわたって撹拌し、次いで濾過し、濾液を清潔で乾燥した反応器に投入した。溶液を１０～１５℃に冷却し、次いで、温度を１５℃未満に維持しながら、水（５４Ｌ）中の酢酸（５４．７５Ｋｇ）の溶液をゆっくりと添加した。添加の終わりに、混合物を２５～３０℃まで加温し、１２～１６時間にわたって撹拌した。層を分離し、水性物を酢酸エチル（３２４Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を、水（３２４Ｌ）中の重炭酸ナトリウム（３２．３４Ｋｇ）の溶液で洗浄し、次いで、硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を酢酸エチル（５４Ｌ）で洗浄し、合わせた濾液を、減圧下、４０℃未満で濃縮した。ｎ－ヘプタン（２１６Ｌ）を反応器に投入し、減圧下、４０℃未満で、乾固するまで蒸留を続行した。混合物を２５～３０℃に冷却し、ｎ－ヘプタン（２１６Ｌ）を反応器に投入した。固体の形成後、混合物を１～２時間にわたって撹拌した。次いで、固体を濾過し、ｎ－ヘプタン（５４Ｌ）で洗浄し、４０～５０℃で１０～１２時間にわたって乾燥させて、所望の材料（９０．１Ｋｇ、６７％収率）を産生した。

【0358】

ステップ２． （Ｅ）－ｔｅｒｔ－ブチル１０－（（ジメチルアミノ）メチレン）－９－オキソ－３－アザスピロ［５．５］ウンデカ－７－エン－３－カルボキシレート。

【0359】

【化25】

清潔で乾燥した反応器に、ｔｅｒｔ－ブチル９－オキソ－３－アザスピロ［５．５］ウンデカ－７－エン－３－カルボキシレート（５０Ｋｇ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５００Ｌ）およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（１３５Ｋｇ）を、窒素雰囲気下、２５～３０℃で投入した。反応混合物を５～１０分間撹拌し、次いで、１２０～１３０℃に２０時間にわたって加熱した。次いで、混合物を５０～６０℃に冷却し、溶媒を、高真空下、６０℃未満で蒸留した。混合キシレン（２００Ｌ）を４５℃未満で投入し、溶媒を、高真空下、６０℃未満で蒸留した。この操作を、別ロットの混合キシレン（２００Ｌ）を用いて繰り返した。次いで、トルエン（２００Ｌ）を反応器に投入し、溶媒を、高真空下、６０℃未満で蒸留した。この操作を、第２のロットのトルエン（２００Ｌ）を用いて繰り返した。次いで、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１００Ｌ）を３０℃未満で投入し、溶媒を、高真空下、４０℃未満で蒸留した。混合物を１５～２０℃まで冷却し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１００Ｌ）を２０℃未満で投入した。混合物を２０～３０分間にわたって撹拌し、固体を濾過し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（５０Ｌ）で洗浄し、真空なし、５０～５５℃で１０時間にわたって乾燥させて、所望の化合物（５２．１Ｋｇ、８７％収率）を提供した。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.48 (s, 1H), 6.57 (d, J=9.97 Hz, 1H),
5.99 (d, J=10.16 Hz, 1H), 3.32-3.51 (m, 4H), 3.06 (s, 6H), 2.72 (s, 2H),
1.57-1.66 (m, 2H), 1.41-1.53 (m, 11H).

【0360】

ステップ３． ｔｅｒｔ－ブチル１－イソプロピル－１，４－ジヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボキシレート。

【0361】

【化26】

清潔で乾燥した反応器に、（Ｅ）－ｔｅｒｔ－ブチル１０－（（ジメチルアミノ）メチレン）－９－オキソ－３－アザスピロ［５．５］ウンデカ－７－エン－３－カルボキシレート（８０Ｋｇ）、トルエン（７０４Ｌ）およびトリメチルアミン（１６Ｌ）を２５～３０℃で投入した。反応混合物を７０～８０℃まで加温し、メタノール中イソプロピルヒドラジン塩酸塩の溶液（１．２５当量、合計１４１Ｋｇ）を４～５時間かけて添加した。次いで、反応混合物を７０～８０℃で８～１０時間にわたって撹拌した後、１５～２５℃に冷却した。次いで、内部温度を２５℃未満に維持しながら、水（４８０Ｌ）中のクエン酸（４８Ｋｇ）の溶液をゆっくりと添加した。酢酸エチル（２０８Ｌ）を添加し、混合物を１０分間にわたって撹拌した。層を分離し、有機層を、水（４８０Ｌ）中のクエン酸（４８Ｋｇ）の溶液、次いで、水のみ（３２０Ｌ）で連続的に洗浄した。合わせた水性層を酢酸エチル（３２０Ｌ）で抽出した。次いで、合わせた有機層を硫酸ナトリウム（８Ｋｇ）で乾燥させ、溶媒を、減圧下、４０℃未満で蒸発乾固させた。ジクロロメタン（２４０Ｌ）を反応器に投入し、混合物を２５～３０℃で透明になるまで撹拌した。活性炭（１．８４Ｋｇ）、ケイ酸マグネシウム（１．８４Ｋｇ）およびシリカゲル（３２Ｋｇ、１００～２００メッシュ）を２５～３０℃で連続的に投入し、不均質混合物を１時間にわたって撹拌した。次いで、スラリーを、ハイフロスーパーセル（８Ｋｇ）およびジクロロメタン（４０Ｌ）を混合することによって調製されたハイフロベッド上で濾過した。ケーキをジクロロメタン（３回１２０Ｌ）で洗浄した。合わせた濾液を反応器に戻し入れ、溶媒を、減圧下、４０℃未満で蒸発させた。次いで、ｎ－ヘプタン（１６０Ｌ）を投入し、減圧下、４０℃未満で蒸留した。ｎ－ヘプタン（２００Ｌ）を反応器に投入し、混合物を０～５℃まで冷却した。１２～１５時間にわたって撹拌した後、固体を０℃で濾過し、冷やした（０～５℃）ｎ－ヘプタン（１６０Ｌ）で洗浄し、真空下、４０～５０℃で乾燥させて、表題化合物（８２．４Ｋｇ、７５％）を提供した。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.25 (s, 1H), 6.42 (dd, J=10.05, 0.49
Hz, 1H) 5.84 (d, J=9.95 Hz, 1H), 4.42-4.52 (m, 1H), 3.36-3.53 (m, 4H), 2.62 (s,
2H) 1.56-1.68 (m, 2H) 1.45-1.55 (m, 17H).

【0362】

ステップ４． １－イソプロピル－４，６－ジヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－７（１Ｈ）－オン、塩酸塩。

【0363】

【化27】

清潔で乾燥した反応器に、ｔｅｒｔ－ブチル１－イソプロピル－１，４－ジヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボキシレート（６０Ｋｇ）およびメタノール（６００Ｌ）を２５～３０℃で投入した。Ｎ－ブロモコハク酸イミド（３２．４Ｋｇ）を５回に分けて２５～３０℃で３０～４０分間かけて添加し、撹拌を３０～６０分間にわたって続けた。内部温度を３０℃未満に維持しながら、水（１０２Ｌ）中のチオ硫酸ナトリウム五水和物（５．４Ｋｇ）の溶液をゆっくりと添加した。混合物を２０～３０分間にわたって撹拌し、次いで、溶媒を、減圧下、４５℃未満で蒸発させた。残留物を２５～３０℃まで冷却し、２－メチルテトラヒドロフラン（ｍｅｔｈｙｌｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕａｎ）（４２０Ｌ）を水（９０Ｌ）とともに反応器に投入した。混合物を１５～２０分間にわたって撹拌し、次いで、層を分離し、水性層を２－メチルテトラヒドロフラン（１２０Ｌ）でさらに抽出した。合わせた有機抽出物を、水（１２０Ｌ）中の水酸化ナトリウム（４．８Ｋｇ）の溶液により、２５～３０℃で１５～２０分間にわたって処理した。層を分離し、有機層を、水（１２０Ｌ）、続いて、水（１２０Ｌ）中の塩化ナトリウム（１２Ｋｇ）の溶液で洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム（６Ｋｇ）で乾燥させた。濾過後、ケーキを２－メチルテトラヒドロフラン（３０Ｌ）で洗浄し、合わせた濾液を反応器に戻し入れた。溶媒を、減圧下、４５℃未満で完全に蒸留し、残留物を、テトラヒドロフラン（２０１Ｌ）中で可溶化した。別の清潔で乾燥した反応器に、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（６０．６Ｋｇ）およびテトラヒドロフラン（３６０Ｌ）を２５～３０℃で投入した。その混合物に、温度を３０℃未満に維持しながら、テトラヒドロフラン中の残留物の溶液をゆっくりと添加した。次いで、反応混合物を６０～６５℃まで加温し、１～２時間にわたってこの温度に保った。完了したら、混合物を０～１０℃に冷却し、内部温度を１０℃未満に維持しながら、塩酸の溶液（１Ｎ、１９６Ｌ）でゆっくりとクエンチした。反応混合物を２５～３０℃まで加温させ、酢酸エチル（７９８Ｌ）を投入した。１５～２０分間にわたって撹拌した後、層を分離し、水性層を酢酸エチル（１６０Ｌ）でさらに抽出した。合わせた有機層を水（１６０Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（８Ｋｇ）で乾燥させ、濾過し、ケーキを酢酸エチル（３００Ｌ）で洗浄した。溶媒を、減圧下、４５℃未満で全面的に蒸留し、酢酸エチル（５４０Ｌ）を反応器に２５～３０℃で、続いて、メタノール（１５６Ｌ）を投入した。混合物を０～５℃に冷却し、この時点で、温度を指定された範囲内に維持しながら、塩化アセチル（７９．８Ｋｇ）をゆっくりと添加した。次いで、混合物を２０～２５℃まで加温させ、撹拌しながら４～５時間にわたってこの温度に保った。得られたスラリーを濾過し、固体を酢酸エチル（１２０Ｌ）で洗浄し、次いで、４０～４５℃で８～１０時間にわたって乾燥させて、所望の粗生成物（３３．５Ｋｇ、６５％）を得た。

【0364】

最終精製ステップは、この粗固体（５６．８Ｋｇ）を、２５～３０℃の清潔で乾燥させた反応器内のメタノール（４５４．４Ｌ）中で可溶化することによって実施した。溶液を３０～４５分間にわたって撹拌し、次いで、０．２ミクロンのカートリッジフィルターに通過させて、２５～３０℃の清潔で乾燥した反応器に入れた。メタノールを、約１体積の溶媒が残るまで、減圧下、５０℃未満で蒸留した。反応混合物を２５～３０℃に冷却し、０．２ミクロンのカートリッジフィルターを経由して新しいアセトニトリル（１１３．６Ｌ）を投入した。溶媒を、約１体積の溶媒が残るまで、減圧下、５０℃未満で蒸留した。反応混合物を２５～３０℃に冷却し、０．２ミクロンのカートリッジフィルターを経由して、新しいアセトニトリル（１９０Ｌ）を反応器に投入した。混合物を６５～７０℃まで加温し、４５分間にわたって撹拌し、次いで、２５～３０℃まで冷却し、１時間にわたって撹拌し、得られたスラリーを濾過し、ケーキを、冷やした（１５℃）アセトニトリル（５６．８Ｌ）で洗浄した。固体を、減圧下、４０～５０℃で８時間にわたって乾燥させて、中間体Ａ１（３６．４Ｋｇ、６４％）を得た。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ ppm 7.43 (s, 1H), 5.32-5.42 (m, 1H),
3.15-3.25 (m, 4H), 2.89 (s, 2H), 2.64 (s, 2H), 1.69-1.90 (m, 4H), 1.37-1.45 (m,
6H); ESI [M+H]⁺ =248.

【0365】

中間体Ａ２：２－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）－６－メトキシイソニコチン酸。

【0366】

【化28】

清潔で乾燥させた反応器に、２，６－ジクロロイソニコチン酸（３０Ｋｇ）およびメタノール（１２０Ｌ）を２０～２５℃で投入した。スラリーを５分間にわたって撹拌し、次いで、６５℃（還流）まで加熱した。次いで、メタノール中ナトリウムメトキシドの溶液（３０％、８７．２Ｋｇ）を、添加漏斗を介して、少なくとも４時間かけてゆっくりと投入した。漏斗をメタノール（１５Ｌ）ですすぎ、撹拌を６５℃で少なくとも１５時間にわたって続行した。次いで、混合物を４５℃まで冷却し、約９０Ｌの残留体積になるまで減圧下で蒸留した。次いで、水（１８０Ｌ）中の重炭酸カリウム（２８．２Ｋｇ）および炭酸カリウム（２１．６Ｋｇ）の溶液を、反応器に４０～４５℃で投入した。水溶液を含有する反応器を、水（２１Ｌ）ですすぎ、洗浄液を反応混合物に投入した。混合物を、約２４０Ｌの残留体積になるまで、減圧下、８０℃未満で蒸留し、次いで、２０～２５℃まで冷却した。

【0367】

別の清潔で乾燥した反応器に、ｔｅｒｔ－ブチル４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキソボロラン（ｄｉｏｘｏｂｏｒｏｌａｎ）－２－イル）ベンゾエート（５２．３Ｋｇ）およびジオキサン（３４０Ｋｇ）を投入し、完全に溶解するまで２～２５℃で撹拌した。次いで、前者の反応器の内容物を４０℃で加熱して、完全溶解度を確実にし、この新たな反応器に移した。反応混合物を２０～２５℃まで冷却し、真空／窒素サイクルを介して脱酸素ステップを実施した。混合物を０～１０℃までさらに冷却し、反応器に、酢酸パラジウム（０．６５Ｋｇ）、続いて、トリフェニルホスフィン（２．４６Ｋｇ）を窒素流下で投入した。混合物を２０～２５℃まで加温し、真空／窒素サイクルを介して別の脱酸素ステップを実施した。次いで、混合物を８０℃に加熱し、少なくとも１８時間にわたってこの温度に維持した。混合物を２０～２５℃まで冷却し、次いで、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１３３．２Ｋｇ）および水（３０Ｌ）を反応器に連続的に投入した。層を分離し、水性物を水（１１０Ｌ）で希釈し、次いで、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１１０Ｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水（８４Ｌ）中のクエン酸（５２Ｋｇ）の溶液で洗浄し、層を分離した。水性層をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（８８．８Ｋｇ）でさらに抽出し、有機層を合わせ、次いで、水（８０Ｌ）中の塩化ナトリウム（４３Ｋｇ）の溶液の３分の１で３回洗浄した。最終層分離後、有機層を、チャコールカートリッジを含有するポールフィルターに通して濾過し、ケーキをメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１１．２Ｋｇ）で洗浄した。濾液を、減圧下、５０℃未満で約９０Ｌまで蒸留し、次いで、５０℃未満で約１２０Ｌまで、ヘプタン（１２０Ｌ）と連続的に共蒸留した。次いで、混合物を２０～２５℃まで１時間かけて冷却し、次いで、この温度でもう１時間にわたって撹拌した。スラリーを濾過し、ケーキを、ヘプタン（３×１８Ｌ）で３回、次いで、アセトニトリル（３×１８Ｌ）で３回洗浄した。得られた湿った固体を、真空および窒素流下、４５℃未満で少なくとも１５時間にわたって乾燥させて、中間体Ａ２（４４．６Ｋｇ、８７％収率）を得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 8.13 (s, 2H), 8.09 (s, 2H), 7.97 (d,
J=1.17 Hz, 1H), 7.34 (d, J=0.98 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 1.61 (s, 9H); ESI [M+H]⁺
=330.

【0368】

中間体Ａ３：ｔｅｒｔ－ブチル４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）ベンゾエート。

【0369】

【化29】

丸底フラスコに、２－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）－６－メトキシイソニコチン酸（中間体Ａ２、１５．２ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）および酢酸エチル（１４０ｍＬ）を投入した。１，１’－カルボニルジイミダゾール（８．９８ｇ、５５．４ｍｍｏｌ）を一度に添加し、室温で１時間にわたって撹拌した。１－イソプロピル－４，６－ジヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－７（１Ｈ）－オン塩酸塩（中間体Ａ１、１４．８ｇ、５２．２ｍｍｏｌ）、続いて、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９．１ｍＬ、５２．２ｍＬ）を添加し、反応物を室温で１８時間にわたって撹拌した。２Ｍ ＨＣｌ水溶液（４０ｍＬ）、続いて、１Ｍ硫酸水素カリウム（４０ｍＬ）および５０ｍＬのヘプタンを添加した。取得した混合物を室温で１時間にわたって撹拌した。混合物を分液漏斗に移した。有機相を分離し、水（２０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（３０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で連続的に洗浄し、２０ｇの硫酸マグネシウムおよび１０ｇのシリカゲルで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。濃縮の終わり頃に、固体が形成し始めた。残留物を、４０ｍＬの酢酸エチル中、８０℃で撹拌し、ヘプタン（１２０ｍＬ）をゆっくりと滴下添加した。混合物を８０℃で１時間にわたって撹拌し、次いで、１時間にわたって撹拌しながら室温にゆっくりと冷却し、室温で１８時間にわたって撹拌した。濾過を介して固体を収集し、水および酢酸エチル－ヘプタン（１：３）で洗浄し、真空下、５０℃で１８時間にわたって乾燥させて、中間体Ａ３（１９．６４ｇ、７６％収率）を取得した。

【0370】

中間体Ａ３の代替調製：
清潔で乾燥した反応器に、アセトニトリル（２１９Ｋｇ）および２－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）－６－メトキシイソニコチン酸（中間体Ａ２、３４．８Ｋｇ）を２０～２５℃で投入した。混合物を５分間にわたって撹拌し、次いで、１，１－カルボジイミダゾール（１８．９Ｋｇ）を３回に分けて連続で投入した。スラリーを２０～２５℃で少なくとも１時間にわたってさらに撹拌し、次いで、１－イソプロピル－４，６－ジヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－７（１Ｈ）－オン塩酸塩（中間体Ａ１、３３．０Ｋｇ）を反応器に、続いて、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２０．５Ｋｇ）をポンプを介して投入した。試薬ポンプおよび反応器の壁をアセトニトリル（１３．７Ｋｇ）で洗浄し、撹拌を２０～２５℃で少なくとも２時間にわたって続行した。完了したら、混合物にｔｅｒｔ－ブチル４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）ベンゾエート（中間体Ａ３、２０９ｇ）を播種し、少なくとも３０分間にわたって撹拌した。結晶化開始の確認後、水（２５７Ｌ）中のクエン酸一水和物（５８．５Ｋｇ）の溶液を１時間かけて投入した。得られたスラリーを２０～２５℃で少なくとも２時間にわたってさらに撹拌し、次いで濾過し、ケーキをアセトニトリル（６８．４Ｋｇ）および水（８７Ｌ）の混合物で洗浄した。この洗浄液を使用して、反応器もすすいだ。固体を、減圧下、５５℃未満で乾燥させて、中間体Ａ３（４３．４４Ｋｇ、７３％収率）を得た。

【0371】

化合物Ａ（遊離酸として）：４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸。

【0372】

【化30】

丸底フラスコに、ｔｅｒｔ－ブチル４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）ベンゾエート（３．７ｇ、６．６ｍｍｏｌ）およびトルエン（２５ｍＬ）を投入した。撹拌しながら８５％リン酸（３．０ｍＬ）を滴下添加し、反応物を６０℃に４時間にわたって加熱した。無色濃厚ガム状物が形成された。反応物を室温に冷却し、水を添加した。白色固体が観察された。トルエン有機層を廃棄し、水性層および固体を保存した。酢酸エチルを添加し（６０ｍＬ）、４Ｎ ＮａＯＨ溶液を添加してｐＨを約７に調整した。層を分離し、水性物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、白色固体を提供した。これらを酢酸エチル（８０ｍＬ）に５０℃で溶解し、ヘプタン（９０ｍＬ）をゆっくりと添加した。熱を除去し、混合物を室温に冷却し、１６時間にわたって撹拌した。結果として生じた固体を濾過を介して収集し、母液ですすぎ、乾燥させて、表題化合物（化合物Ａ遊離形態、２．１５ｇ、６５％収率）を白色固体として提供した。

【0373】

化合物Ａ（遊離酸として）の代替調製：
清潔で乾燥した反応器に、アセトニトリル（１３０．４Ｋｇ）およびｔｅｒｔ－ブチル４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）ベンゾエート（中間体Ａ３、２０．７２Ｋｇ）を２０～２５℃で投入した。混合物を５分間にわたって撹拌し、次いで、ｐ－トルエンスルホン酸（８．５Ｋｇ）を、穏やかな窒素掃引下で投入した。反応混合物を７０℃まで加温し、少なくとも６．５時間にわたってこの温度に維持した。完了したら、混合物を４０℃まで冷却し、化合物Ａ（１０４ｇ）を播種し、水（８３Ｌ）を少なくとも１時間かけてゆっくりと投入した。混合物を４０℃で最低４時間にわたってさらに撹拌し、次いで、２０～２５℃まで２時間かけて冷却した。少なくとも２時間にわたるさらなる撹拌、続いて、濾過を行い、ケーキをアセトニトリル（３３Ｋｇ）および水（４１Ｌ）の溶液ですすいだ。この洗浄液を使用して、反応器もすすいだ。得られた固体を、減圧下、５５℃未満で乾燥させて、化合物Ａ（１６．５Ｋｇ、８９％収率）を得た。

【0374】

化合物Ａの形態１の調製 － 化合物Ａの無水モノ－トリス：

【0375】

【化31】

バイアルに、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸（１５１ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）および３ｍＬのエタノールを投入した。混合物を８０℃に５分間にわたって加熱して、固体を溶解し、次いで、室温に冷却した。トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（３９ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。ヘプタン（２．２５ｍＬ）を滴下添加してスラリーを生成し、これを５０℃に加熱して、透明溶液を生成した。混合物を撹拌しながら室温に終夜冷却した。白色固体が観察され、混合物を追加で３日間にわたって撹拌した。材料を濾過し、５０℃の真空オーブン内で終夜乾燥させて、形態１（１５１ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ、８１％収率）を生成した。

【0376】

化合物Ａの形態１の代替調製：化合物Ａの無水モノ－トリス：
清潔で乾燥した反応器に、エタノール（８３Ｌ）を投入し、続いて、混合物を２０～２５℃の温度に維持しながら、化合物Ａ（９．４３Ｋｇ）およびトリス（２．５５ｋｇ）を添加した。タンク壁をエタノール（２Ｌ）ですすぎ、得られた混合物を６５～７０℃で加熱し、すべての固体が溶解するまで少なくとも３０分間にわたってこの温度に維持し、次いで、４５～５０℃まで冷却した。１０μｍのインラインポリプロピレンフィルターに通す温濾過を実施し、反応器およびフィルターをエタノール（９Ｌ）で洗浄した。ｎ－ヘプタン（２４Ｌ）を同じインラインフィルターに通して温溶液に投入し、混合物に、４５～５０℃のエタノール（０．５Ｌ）中、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸無水トリス塩（１００ｇ）を播種した。温度を少なくとも２時間にわたって保持した後、少なくとも２時間かけて２０～２５℃まで冷却した。撹拌を少なくとも５日間にわたって続行した。次いで、スラリーを濾過し、ケーキをエタノール（１３Ｌ）およびｎ－ヘプタン（６Ｌ）の混合物で洗浄した。固体を、減圧下、４５℃未満で少なくとも１２時間にわたって乾燥させて、実施例２６（１１．７Ｋｇ、７７％）を得た。

【0377】

化合物Ａの形態２の調製 － 化合物Ａのモノ－トリス塩の三水和物：

【0378】

【化32】

化合物Ａの形態２は、化合物Ａの形態１からの変換により取得した。５０ｍＬのイージーマックス反応器に、形態１（１．７２１４ｇ、２．７６０ｍｍｏｌ）、イソプロパノール（１６．５０ｍＬ、２１５．８ｍｍｏｌ）および水（６８８μＬ、３８．１９０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、２５℃の反応器ジャケット温度で、約７２時間にわたって撹拌（３００ｒｐｍ）した。次いで、反応混合物を４０℃に１５分間かけて加温し、４０℃で約２４時間にわたって保持し、２０℃に一度冷却して、試験のために試料を除去した。ＰＸＲＤにより形態の混合物が見られ、したがって、追加の水（６８８μＬ、３８．１９０ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌速度を４００ｒｐｍまで増大させ、スラリーを６時間にわたって撹拌させ、次いで、１５℃に冷却した。固体を６０ｍＬ／４０Ｍフィルターで単離し、９６／４ イソプロパノール／水で洗浄した。得られた材料は、ＰＸＲＤにより、化合物Ａの形態２と一致していた。

【0379】

化合物Ａの形態２の代替調製 － 化合物Ａのモノ－トリス塩の三水和物：
清潔で乾燥した反応器に、イソプロパノール（６０．４Ｋｇ）を投入し、混合物を２０～２５℃の温度に維持しながら、化合物Ａ（１６．６８Ｋｇ）およびトリス（４．４２ｋｇ）を添加した。混合物を５分間にわたって撹拌し、次いで、水（６．７Ｋｇ）を投入し、スラリーを５５℃まで加温した。ここで、透明溶液を、事前に加温した清潔で乾燥した反応器（５０～５５℃）中に、インライン１０μｍポリプロピレンフィルターに通して濾過した。次いで、溶液に、化合物Ａのモノ－トリス塩を三水和物（１６７ｇ）として播種した。播種が持続したことを確認後、混合物を少なくとも２時間かけて１５℃まで冷却し、次いで、１５℃で最低１６時間にわたって維持した。スラリーを濾過し、ケーキを、冷やしたイソプロパノール（１３．１Ｋｇ）で洗浄した。次いで、固体を、減圧下、２５℃未満で乾燥させて、化合物Ａの形態２（２２．１Ｋｇ、９８％収率）のみを得た。

【0380】

化合物Ａの形態１は無水物であり、周囲温度にて、約０．２（２０％ＲＨ）の水分活性未満で熱力学的に安定である。化合物Ａの形態１は、化合物Ａの図３に示されているものと実質的に同じＰＸＲＤパターンを有する。２θ±０．２°２θとして表現される化合物Ａの形態１の特徴的なＰＸＲＤピークは、９．６、１０．７および１１．３である。図１におけるＰＸＲＤパターンについてのピーク場所および強度を、表４で提供する。

【0381】

【表10】

【0382】

化合物Ａの形態１は、図２に示されているものと実質的に同じラマンスペクトルを有する。化合物Ａの形態１は、５６８、６９８、９８９、１２１８、１５１１、１５６１および１６１５、±２ｃｍ^－１で、ｃｍ^－１として表現される特徴的なラマンピークシフトを有する。図２における化合物Ａの形態１のピーク位置（±２ｃｍ^－１）および正規化された強度（Ｗ＝弱、Ｍ＝中、Ｓ＝強）を表５に収載する。

【0383】

【表11】

【0384】

化合物Ａの形態１は、図３に示されているものと実質的に同じ^１３Ｃ ｓｓＮＭＲスペクトルを有する。化合物Ａの形態１は、２２．９、１４６．２、１５７．９、１６１．９および１７２．９、±０．２ｐｐｍで、ｐｐｍとして表現される特徴的な^１３Ｃ ｓｓＮＭＲ化学シフトを有する。図３に示す通りの化合物Ａの形態１の^１３Ｃ化学シフト（±０．２ｐｐｍ）を、表６に収載する。

【0385】

【表12】

【0386】

化合物Ａの形態２は、三水和物であり、周囲温度および２０％ＲＨにて、約０．２の水分活性超で熱力学的に安定である。化合物Ａの形態２は、図４に示されているものと実質的に同じＰＸＲＤパターンを有する。２θ±０．２°２θとして表現される化合物Ａの形態２の特徴的なＰＸＲＤピークは、８．４、９．０、１０．５、１５．０および２４．７である。図４におけるＰＸＲＤパターンについてのピーク場所および強度を、表７で提供する。

【0387】

【表13】

【0388】

化合物Ａの形態２は、図５に示されているものと実質的に同じラマンスペクトルを有する。化合物Ａの形態２は、５６２、６９２、９８４、１２２５、１５０７、１５５７および１６１０±２ｃｍ^－１で、ｃｍ^－１として表現される特徴的なラマンピークシフトを有する。図５における化合物Ａの形態２のピーク位置（±２ｃｍ^－１）および正規化された強度（Ｗ＝弱、Ｍ＝中、Ｓ＝強）を、表８に収載する。

【0389】

【表14】

【0390】

化合物Ａの形態２は、図６に示されているものと実質的に同じ^１３Ｃ ｓｓＮＭＲスペクトルを有する。化合物Ａの形態２は、１９．２、１４９．５、１５５．６、１６３．８および１８８．３、±０．２ｐｐｍで、ｐｐｍとして表現される特徴的な^１３Ｃ ｓｓＮＭＲ化学シフトを有する。図６に示されている通りの化合物Ａの形態２の^１３Ｃ化学シフト（±０．２ｐｐｍ）を、表９に収載する。

【0391】

【表15】

【0392】

本明細書で提供される開示に基づき、当業者は、化合物Ａの各形態１および形態２が、様々な組合せにおけるいくつかの異なるスペクトルピークまたはパターンによって一意的に同定され得ることが分かるであろう。化合物Ａの形態１および形態２を別個に同定するために使用され得る特徴的なピーク値の例示的な組合せについて後述するが、これらの例示的な組合せを、決して本明細書において開示される他のピーク値組合せを限定するものとみなすべきではない。

【0393】

化合物Ａの形態２における３個の水分子の存在を確認するために、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ベンチャー回折計を使用し、室温でデータを収集した。図７を参照されたい。単斜晶系クラスの空間群Ｐ２_１／ｃにおいてＳＨＥＬＸソフトウェアスイートを使用する固有位相決定法によって、構造を解明した（バージョン５．１、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ、１９９７）。その後、全行列最小二乗法によって構造を精緻化した。異方性変位パラメーターを使用して、すべての非水素原子を発見し、精緻化した。

【0394】

窒素および酸素に位置する水素原子を、フーリエ差分マップから発見し、距離を制限して精緻化した。残りの水素原子を算出された位置に置き、それらの担体原子に乗せた。

【0395】

最終Ｒ指数は、７．２％であった。最終差分フーリエは、欠損も誤入電子密度（ｍｉｓｐｌａｃｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｄｅｎｓｉｔｙ）もないことを明らかにした。

【0396】

表１０は、化合物Ａの形態２に関して収集されたデータを提供する：

【0397】

【表16】

【0398】

４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸の結晶性２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール塩。この結晶性塩は、概して、化合物Ａのトリス塩と称される。

【0399】

４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸対塩の比が、１：１である、化合物Ａの結晶性トリス塩。

【0400】

結晶性塩が、無水結晶性塩である、化合物Ａの結晶性トリス塩。

【0401】

前記無水結晶性塩が、９．６、１０．７および１１．３ ２θ、±０．２°２θの回折角にピークを含むＰＸＲＤパターンを有する、化合物Ａの無水結晶性トリス塩。

【0402】

前記無水結晶性塩が、１５１１、１５６１および１６１５ｃｍ^－１、±２ｃｍ^－１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、化合物Ａの無水結晶性トリス塩。

【0403】

前記無水結晶性塩が、２２．９、１４６．２および１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍの化学シフトを含む^１３Ｃ ｓｓＮＭＲスペクトルを有する、化合物Ａの無水結晶性トリス塩。

【0404】

前記無水結晶性塩が、１５１１および１６１５ｃｍ^－１、±２ｃｍ^－１にピークシフトを含むラマンスペクトル、ならびに２２．９、１４６．２または１６１．９ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍの少なくとも１つの化学シフトを含む^１３Ｃ ｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメーターを有する、化合物Ａの無水結晶性トリス塩。

【0405】

前記無水結晶性塩が、実質的に純粋である、化合物Ａの無水結晶性トリス塩。

【0406】

結晶性塩が、三水和物結晶性塩である、化合物Ａの結晶性トリス塩。

【0407】

前記三水和物結晶性塩が、８．４、９．０および１０．５ ２θ、±０．２°２θの回折角にピークを含むＰＸＲＤパターンを有する、化合物Ａの三水和物結晶性トリス塩。

【0408】

前記三水和物結晶性塩が、１５０７、１５５７および１６１０ｃｍ^－１、±２ｃｍ^－１にピークシフトを含むラマンスペクトルを有する、化合物Ａの三水和物結晶性トリス塩。

【0409】

前記三水和物結晶性塩が、１９．２、１４９．５および１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍの化学シフトを含む^１３Ｃ ｓｓＮＭＲスペクトルを有する、化合物Ａの三水和物結晶性トリス塩。

【0410】

前記三水和物結晶性塩が、
８．４および９．０ ２θ、±０．２°２θの回折角にピークを含むＰＸＲＤパターン、
１５５７および１６１０ｃｍ^－１、±２ｃｍ^－１にピークシフトを含むラマンスペクトル、ならびに
１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍの少なくとも１つの化学シフトを含む^１３Ｃ ｓｓＮＭＲスペクトル
からなる群から選択される分析パラメーターを有する、化合物Ａの三水和物結晶性トリス塩。

【0411】

前記三水和物結晶性塩が、８．４および９．０ ２θ、±０．２°２θの回折角にピークを含むＰＸＲＤパターン、ならびに１５０７、１５５７または１６１０ｃｍ^－１、±２ｃｍ^－１に少なくとも１つのピークシフトを含むラマンスペクトルからなる群から選択される分析パラメーターを有する、化合物Ａの三水和物結晶性トリス塩。

【0412】

前記三水和物結晶性塩が、８．４および９．０ ２θ、±０．２°２θの回折角にピークを含むＰＸＲＤパターン、ならびに１９．２、１４９．５または１６３．８ｐｐｍ、±０．２ｐｐｍの少なくとも１つの化学シフトを含む^１３Ｃ ｓｓＮＭＲスペクトルからなる群から選択される分析パラメーターを有する、化合物Ａの三水和物結晶性トリス塩。

【0413】

（実施例２７）
（ＤＧＡＴ２ｉ化合物／化合物Ｄ）：（Ｓ）－２－（５－（（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（テトラヒドロフラン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミド

【0414】

【化33】

その結晶形態を含む実施例２７の化合物（化合物Ｄ）およびその調製方法は、２０１８年９月１１日に発行された米国特許第１０，０７１，９９２号の実施例１において開示されたものであり、２０１６年８月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／３７７，１３７号の優先権を主張するものであり、これらはいずれも、あらゆる目的のための参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0415】

薬理学的データ
下記のプロトコールは、当然ながら、当業者によって変動し得る。

【0416】

ヒトＤＧＡＴ２（ｈＤＧＡＴ２）コンストラクトの産生
ｈＤＧＡＴ２のためのコンストラクトを、Ｎ末端ＦＬＡＧタグ（ＡｓｐＴｙｒＬｙｓＡｓｐＡｓｐＡｓｐＡｓｐＬｙｓのアミノ酸配列を持つオクタペプチド）を用いて産生した。ＦＬＡＧタグ付きｈＤＧＡＴ２コンストラクトでは、ｈＤＧＡＴ２のためのｃＤＮＡをＧｅｎｓｃｒｉｐｔでカスタム合成し、ＢａｍＨＩ／ＸｈｏＩ制限酵素を使用してｐＦａｓｔＢａｃ１ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にクローン化することによって、Ｎ末端にＦＬＡＧタグ付きｐＦａｓｔＢａｃ１－ＦＬＡＧ－ｈＤＧＡＴ２コンストラクト（アミノ酸１～３８８）を産生した。コンストラクトは、両方向での配列決定によって確認した。

【0417】

ＤＧＡＴ２発現およびＤＧＡＴ２膜画分の調製
ＦＬＡＧタグ付きｈＤＧＡＴ２のための組換えバキュロウイルスを、ＳＦ９昆虫細胞において、Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃバキュロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用し、製造業者のプロトコールに従って産生した。ｈＤＧＡＴ２の発現のために、Ｓｆ９００ＩＩ培地中で成長させたＳＦ９細胞（２０Ｌ）に、ウェーブバイオリアクターシステム２０／５０Ｐウェーブバッグ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）内、ｈＤＧＡＴ２バキュロウイルスを１の感染多重度で感染させた。感染の４０時間後、次いで、細胞を５，０００×ｇでの遠心分離によって収穫した。細胞ペレットをリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）に再懸濁することによって洗浄し、５，０００×ｇでの遠心分離によって収集した。細胞ペーストを液体Ｎ_２中で急速冷凍し、必要になるまで－８０℃で貯蔵した。以下のすべての操作は、別段の注記がない限り、４℃で行った。細胞を、１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）およびコンプリートプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含む溶解緩衝液（５０ｍＭのトリス－ＨＣｌ、ｐＨ８．０、２５０ｍＭのスクロース）に、１ｇの細胞ペースト当たり３ｍＬの緩衝液の比で再懸濁した。細胞をダウンス型ホモジナイザーによって溶解させた。細胞残屑を、１，０００×ｇで２０分間にわたる遠心分離によって除去し、上清を、１００，０００×ｇで１時間にわたって遠心分離した。得られたペレットを、遠心管の縁まで氷冷ＰＢＳを注ぐことによって３回すすいだ後、デカントした。洗浄したペレットを、８ｍＭの３－［（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）を含有する溶解緩衝液に、１ｇの元の細胞ペースト当たり１ｍＬの緩衝液の比で、穏やかに撹拌しながら１時間にわたって再懸濁し、再度１００，０００×ｇで１時間にわたって遠心分離した。得られた上清をアリコートし、液体Ｎ_２中で急速冷凍し、使用するまで－８０℃で貯蔵した。

【0418】

インビトロＤＧＡＴ２アッセイおよびＤＧＡＴ２阻害剤についてのＩＣ_５０値の決定
ＩＣ_５０値の決定のために、反応を、３８４ウェル白色ポリプロピレンプレート（Ｎｕｎｃ）中、総体積２０μＬで行った。１００％ＤＭＳＯに溶解し、各ウェルの底部にスポットした１μＬの化合物に、５μＬの０．０４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（脂肪酸不含、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加し、混合物を室温で１５分間にわたってインキュベートした。ｈＤＧＡＴ２膜画分を、１００ｍＭのＨｅｐｅｓ－ＮａＯＨ、ｐＨ７．４、２００ｎＭのメチルアラキドニルフルオロホスホネート（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ；アルゴンガス下で、酢酸エチルストック溶液から乾燥させ、５ｍＭのストックとしてＤＭＳＯに溶解したもの）を含有する２０ｍＭのＭｇＣｌ_２中で希釈した。１０μＬのこの酵素ワーキング溶液をプレートに添加し、インキュベーションを室温で２時間にわたって続けた。１２．５％アセトンに溶解した３０μＭの［１－^１４Ｃ］デカノイル－ＣｏＡ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒによってカスタム合成されたもの、５０ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）および１２５μＭの１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロール（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ）を含有する４μＬの基質の添加により、ＤＧＡＴ２反応を開始した。反応混合物を室温で４０分間にわたってインキュベートし、５μＬの１％Ｈ_３ＰＯ_４の添加によって反応を停止した。４５μＬのマイクロシント－Ｅ（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）の添加後、プレートをトップシールＡカバー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）で密封し、ＨＴ－９１１００マイクロプレートオービタルシェーカー（Ｂｉｇ Ｂｅａｒ Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を使用して、基質および生成物の相分配を実現した。プレートを、アレグラ６Ｒ遠心分離機（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）内、２，０００×ｇで１分間にわたって遠心分離し、次いで、新しいカバーで再度密封した後、１４５０マイクロベータワラックトリラックスシンチレーションカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。上部有機相中の産生された生成物［^１４Ｃ］トリデカノイルグリセロールを定量化することにより、ＤＧＡＴ２活性を測定した。

【0419】

ＤＧＡＴ２の完全阻害のために、５０μＭの（（Ｒ）－１－（２－（（Ｓ）－１－（４－クロロ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）エチル）－３Ｈ－イミダゾ［４，５－ｂ］ピリジン－５－イル）ピペリジン－３－イル）（ピロリジン－１－イル）メタノン（ＷＯ２０１３１５０４１６、実施例１９６－Ａ）を使用して取得したバックグラウンド活性を、すべての反応から引いた。阻害剤を１１の異なる濃度で試験して、各化合物についてＩＣ_５０値を生成した。用いた１１の阻害剤濃度は、典型的には、５０、１５．８、５、１．５８、０．５０、０．１６、０．０５、０．０１６、０．００５、０．００１６および０．０００５μＭを含んでいた。データを、阻害剤濃度に対する阻害のパーセンテージとしてプロットし、方程式ｙ＝１００／［１＋（ｘ／ＩＣ_５０）^ｚ］に当てはめた［式中、ＩＣ_５０は、５０％阻害における阻害剤濃度であり、ｚは、ヒル傾斜（その変曲点における曲線の傾斜）である］。

【0420】

以下の表１１は、上述のアッセイに従うＤＧＡＴ２の阻害についての実施例のＩＣ_５０値を提供する。結果を幾何平均ＩＣ_５０値として報告し、反復の数（ｎ）を示す。

【0421】

【表17】

【0422】

ヒト肝細胞におけるＤＧＡＴ２阻害剤についてのＩＣ_５０値の決定
細胞ベースの設定におけるＤＧＡＴ２阻害剤の効果の評価のために、凍結保存されたヒト肝細胞（Ｌｏｔ ＤＯＯ、Ｃｅｌｓｉｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ）を解凍し、Ｉ型コラーゲンでコーティングしたプレート上で製造業者の指示に従って平板培養した。１８時間一晩の回復期間後、細胞に、２５０μｇ／ｍＬのゲルトレックス基底膜マトリックス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を含有する培地をかぶせた。翌日、培地を吸引し、４００μＭのドデカン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）および２ｍＭのグルタマックス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を含有する無血清ウィリアム培地Ｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で置きかえた。４５分後、選択的ＤＧＡＴ１阻害剤（実施例２、ＷＯ２００９０１６４６２、２５％ＤＭＳＯ、７５％ＰＢＳ中１００倍ストックとして調製したもの）を、すべてのウェルに、内因性ＤＧＡＴ１活性を完全に抑制した最終濃度（３μＭ）で添加した。次いで、ＤＧＡＴ２阻害剤を所望の最終濃度まで添加した。１５分間のプレインキュベーション後、０．２μＣｉ［^１４Ｃ（Ｕ）］－グリセロール（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、続いて、３時間インキュベーションした。この時点で、培地を除去し、イソプロピルアルコール：テトラヒドロフラン（９：１）中での１５分間にわたる軌道振とうを介して細胞を溶解させた後、３０００ｒｐｍで１０分間にわたって遠心分離した。薄層クロマトグラフィーにより溶媒系を使用して放射性標識脂質を展開し、ここで、溶媒はヘキサン：ジエチルエーテル：氷酢酸（７５：２３：２、ｖ／ｖ／ｖ）からなっていた。分離後、タイフーン９５００ホスホイメージングシステム（ＧＥ）を使用して放射性標識脂質を可視化した。グラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用する％阻害用量応答曲線の非線形回帰分析によって、半最大阻害濃度（ＩＣ_５０値）を決定した。

【0423】

以下の表１２は、上述のアッセイに従うヒト肝細胞におけるＤＧＡＴ２の阻害についての選択された実施例のＩＣ_５０値を提供する。結果を幾何平均ＩＣ_５０値として報告し、反復の数（ｎ）を示す。

【0424】

【表18】

【0425】

血漿および肝臓トリグリセリドレベルに対するＤＧＡＴ２阻害剤のインビボ効果
ラット西洋食モデルを利用して、血漿トリグリセリド生成および肝臓トリグリセリド含有量に対するＤＧＡＴ２阻害剤処置の効果をインビボで評価した。雄スプラーグドーリーラットを、標準的な実験室条件下、１２時間明、１２時間暗サイクル（６：００に点灯）で収容した。研究開始の２週間前に、動物に、高脂肪、高ショ糖、高コレステロール食（Ｄ１２０７９ｂ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ、Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪによって提供されるもの）を摂らせた。この食事は、炭水化物から約４３％のキロカロリーおよび脂肪から約４１％のキロカロリーを提供する。実施例４を、脱イオン水中０．５％メチルセルロース中の溶液（１０ｍＬ／ｋｇ投薬体積）、ｐＨ７．０～７．５として経口的に投与した（メチルセルロースは、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから取得した）。ビヒクル処置動物には、脱イオン水中０．５％メチルセルロースの水溶液単独、ｐＨ７．０～７．５を受けさせた。各処置は、３、１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇで０８：００および１６：００に１日２回、６、２０、６０および２００ｍｇ／ｋｇ／日の総１日用量で、７日間にわたって経口的に投与した。８日目に、動物にビヒクルまたは実施例４を１０：００に投薬し、投薬２時間後に屠殺した。ラットを二酸化炭素窒息によって屠殺し、側面尾静脈を介して血液を収集した。Ｒｏｃｈｅ日立化学分析装置を製造業者の指示（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）に従って使用して血漿ＴＧレベルを決定し、グラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用してデータを分析した。屠殺時に肝臓トリグリセリドの決定のために肝臓を収集し、組織を液体窒素中で直ちに冷凍し、分析まで－８０℃で保持した。肝臓トリグリセリドレベルの評価のために、アルミホイルで包んだ肝臓の切片を、液体窒素浴中のアルミ加熱ブロック上、ハンマーで細砕した。肝臓組織の細砕により、均質な粉末を生成した。均質化緩衝液、トリスｐＨ７．４、９８．９ミリリットルの０．９％ＮａＣｌおよび１００マイクロリットルのトリトンＸ１００を、使用前に撹拌プレート上で１０分間にわたって混合した。およそ１００ミリグラムの試料重量の均質な肝臓組織を秤量し、１ｍＬの均質化緩衝液とともにライシングマトリックスＤチューブ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、カタログ番号６９１３－１００）に入れた。次いで、すべての試料をファストプレップＦＰ１２０（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、カタログ番号６００１－１２０）に２分間にわたってまたは組織が均質化されるまで入れた。次いで、すべての試料を１０，０００ｇで３０秒間にわたってスピンさせて、均質化により透明な泡状物とした。５０マイクロリットルの試料を滅菌混合プレートに、４５０マイクロリットルのダルベッコリン酸緩衝溶液（ＤＰＢＳ）とともに移して、１：１０希釈を作成した。新たな試料の再懸濁時に、すべての試料を、ＳｉｅｍｅｎｓアドヴィアＸＰＴ臨床分析装置用の試料採取管に移した。吸光度によりトリグリセリドアッセイを実施し、１デシリットル当たりのミリグラムとして報告した。次いで、トリグリセリドをＭｉｃｒｏｓｏｆｔエクセルにて組織１グラム当たりで正規化した。図２９および３０においてまとめられている通り、実施例４を投与したラットでは、血漿（最大約７０％）および肝臓（最大４８％）トリグリセリドにおける用量依存的低減があった。循環トリグリセリド応答の事例では、実施例４で観察された、得られたレベルは、チャウ（ｃｈｏｗ）給餌ビヒクル動物のものに接近した。

【0426】

図２９は、西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける血漿トリグリセリドに対する実施例４の複数回用量効果をプロットしたものであり、ここで、血漿トリグリセリドレベルは、実施例４の最終用量の２時間後に側面尾静脈から抜き取られた血液から決定した。データは、平均±標準偏差として提示され、ここで、個々の点は独自の動物を表す。正規性を検定した後、データを対数変換し、ダネットのポストホック検定による不等分散を考慮してＡＮＯＶＡを実施し、次いで、西洋食ビヒクル処置群に対する多重比較を調整するために適用した。^＊＊＝西洋食ビヒクル処置動物に対して０．０１未満のｐ；^＊＝西洋食ビヒクル処置動物に対して０．０５未満のｐ。

【0427】

図３０は、西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける肝臓トリグリセリドに対する実施例４の複数回用量効果をプロットしたものであり、ここで、肝臓トリグリセリドレベルは、実施例４の最終用量の２時間後に側面尾静脈から抜き取られた血液から決定した。データは、平均±標準偏差として提示され、ここで、個々の点は独自の動物を表す。正規性を検定した後、データを対数変換し、ダネットのポストホック検定による不等分散を考慮してＡＮＯＶＡを実施し、次いで、西洋食ビヒクル処置群に対する多重比較を調整するために適用した。^＊＊＊＊＝西洋食ビヒクル処置動物に対して０．０００１未満のｐおよび^＊＊＊＝西洋食ビヒクル処置動物に対して０．００１未満のｐ。

【0428】

ｐＫａの決定
例示される化合物は、ＤＧＡＴ２の塩基性阻害剤であるように設計された。選択された例のｐＫａは、Ｓｈａｌａｅｖａ，Ｍ．ら、２００８、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、９７、２５８１～２６０６において記述されているキャピラリー電気泳動法に従って、Ａｎａｌｉｚａ，Ｉｎｃ．（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨ）によって決定された。以下の表６は、例について決定された最も塩基性のｐＫａを示し、反復の数（ｎ）とともに平均として提示される。塩基性化合物は、インビボでより高い分布容積に関連する（Ｏｂａｃｈ，Ｒ．Ｓ．ら、２００９、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．、３６、１３８５～１４０５；Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ａ．ら、２０１５、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５８．５６９１～５６９８）。

【0429】

【表19】

【0430】

ヒト肝細胞における固有クリアランスの決定（リレー法）
固有クリアランス（ＣＬ_ｉｎｔ）測定には、肝細胞リレー法を使用した（Ｄｉ，Ｌ．ら、２０１２、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．、４０、１８６０～１８６５およびＤｉ，Ｌ．ら、２０１３、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．、４１、２０１８～２０２３）。凍結保存されたヒト肝細胞（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ製のＬｏｔ ＤＣＭ）を使用した。解凍したら、肝細胞を、ＨｅｐｅｓおよびＮａ_２ＣＯ_３を補充したウィリアム培地Ｅ（カスタム式番号９１－５２３３ＥＡ；Ｇｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）に再懸濁した。トリパンブルー排除法を使用して細胞をカウントし、５０万個の細胞／ｍＬを含有する２４ウェル肝細胞プレートを、０．５０ｍＬの最終インキュベーション体積にて、１μＭの最終濃度の試験化合物（ジメチルスルホキシド、最終濃度０．０２５％；メタノール、最終濃度０．１１２５％）でスパイクした。プレートを、加湿インキュベーター内、１５０ｒｐｍにて、３７℃、９５％空気／５％ＣＯ_２、７５％相対湿度で４時間にわたってインキュベートした。時間０および４時間で、２５μＬの肝細胞懸濁液をインキュベーションから除去し、５０μＬの氷冷アセトニトリル（メトプロロール、インドメタシンおよびテルフェナジンを内部標準として含有する）に添加して、反応をクエンチした。試料を、室温で１０分間にわたって３０００ｒｐｍ（１４３９×ｇ）にて遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｕｐｐａｕｇｅ、ＮＹ）し、５０μＬの上清を清潔なプレートに移し、完全に乾燥させ、復元した後、液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析を行った。インキュベーションプレート内に残った肝細胞懸濁液を遠心分離した（３０００ｒｐｍ、１４３９×ｇ、１０分、室温）。３００μＬの上清を清潔な２４ウェルプレートに移し、次のリレー実験まで－８０℃で貯蔵した。第２のリレー実験では、上清プレートを最初に室温に３０分間にわたって、次いで、３７℃に３０分間にわたって加温し、肝細胞を試料に添加して、５０万個の細胞／ｍＬの最終細胞密度を得た。プレートを３７℃で４時間にわたってインキュベートし、試料採取し、上述した通りに加工した。５つのリレーを実施して、（０、４、８、１２、１６および２０時間）の試料採取点で２０時間の総インキュベーション時間を得た。各時点でＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析によって決定された試験化合物の濃度を使用して、固有クリアランスを算出した。

【0431】

以下の表１４は、上述した方法によって決定された際の選択された実施例についての固有クリアランスを示す。データを平均＋／－標準偏差として提示し、反復の数（ｎ）を示す。

【0432】

【表20】

【0433】

ヒト肝細胞における固有クリアランスのハイスループット決定
ハイスループットヒト肝細胞安定性アッセイは、３８４ウェルフォーマットで実施した（Ｄｉ，Ｌ．ら、２０１２、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５７、４４１～４４８）。１０人のドナーのプールした凍結保存されたヒト肝細胞を、ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、Ｌｏｔ ＤＣＭ）から購入した。凍結保存されたヒト肝細胞を解凍し、ＨＥＰＥＳおよびＮａ_２ＣＯ_３を補充したウィリアムＥ培地（ＷＥＭ ＧＩＢＣＯ、カスタム式番号Ａ２８８５９ＥＡ）に再懸濁した。トリパンブルー排除法を使用して細胞をカウントした。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ（登録商標）液体ディスペンサー（Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ ＤＷ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用して、肝細胞懸濁液を３８４ウェルプレートに添加した。細胞プレートを覆い、２つの６ポジションＭｅｃｏｕｒ熱交換器が装備されたＳｃｉｃｌｏｎｅ（登録商標）ＡＬＨ３０００ワークステーション（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ）に移した。試験化合物をＳｃｉｃｌｏｎｅ（登録商標）にて緩衝液で希釈し、肝細胞に添加した。最終インキュベーションは、５０万個の細胞／ｍＬおよび１μＭの試験化合物を、０．０１％ＤＭＳＯを加えて総体積１５μＬで含有していた。インキュベーションは、３７℃で行った。種々の時点（０、３、１０、３０、６０、１２０、２４０分）において、反応物を、内部標準（実施例３９Ａ、ＷＯ１９９９／５７１２５）を含有する冷アセトニトリルでクエンチした。試料を、３０００ｒｐｍにて、４℃で５分間にわたって遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｕｐｐａｕｇｅ、ＮＹ）した。上清を、ＢｉｏＭｅｋ（登録商標）ＦＸ液体ハンドラー（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．Ｄａｎｖｅｒｓ ＭＡ）を使用して、水を加えた新たなプレートに移し、これを密封した後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行った。以下の表１５は、上述したハイスループットヒト肝細胞アッセイにおいて決定された際の選択された実施例についての固有クリアランスを示す。データを平均＋／－標準偏差として提示し、反復の数（ｎ）を示す。

【0434】

【表21】

【0435】

ヒト肝ミクロソームにおける固有クリアランスの決定
ハイスループットヒトミクロソーム安定性アッセイは、３８４ウェルフォーマットで実施した（Ｄｉ，Ｌ．ら、２０１２、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５７、４４１～４４８）。すべての液体取り扱いおよびインキュベーションは、１つの３ポジションＭｅｃｏｕｒ加熱デッキポジションが装備されたバイオメックＦＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）で行った。５０人のドナーのプールしたヒト肝ミクロソーム（ロット：ＨＬＭ－１０３）を、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）から購入した。各インキュベーションは、試験化合物（１μＭ）、ヒト肝ミクロソーム（０．８０６ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度に相当する０．２５μＭのＣＹＰタンパク質）、ＮＡＤＰＨ ２０．９ｍＭ、ＭｇＣｌ_２（３．３ｍＭ）およびリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４で１００ｍＭ）を含有していた。最終反応体積は、０．１％ＤＭＳＯを含有する４５μＬであった。インキュベーションは、３７℃で行った。種々の時点（例えば、１、４、７、１２、２０、２５、４５および６０分）において、冷アセトニトリルを質量分析（ＭＳ）内部標準（実施例３９Ａ、ＷＯ１９９９／５７１２５）とともに添加して、反応物をクエンチした。プレートを、３０００ｒｐｍにて、４℃で１分間にわたって遠心分離した（ソルバールＲＣ ３Ｃプラス、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）。プレートを密封し、その後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを使用して分析した。ＮＡＤＰＨ補因子を添加することなく同じ方式で対照プレートを調製して、あらゆる非ＣＹＰ／ＦＭＯ触媒による低下をモニターした。以下の表１６は、上述したヒト肝ミクロソームアッセイにおいて決定された際の選択された実施例についての固有クリアランスを示す。データを平均＋／－標準偏差として提示し、反復の数（ｎ）を示す。

【0436】

【表22】

【0437】

種々の培地における熱力学的溶解度の決定
医薬品有効成分の溶解度は、薬物開発中の生物学的性能および製剤化の容易性を決定する際に重要な特徴であり、高い溶解度が好ましい（Ｋｌｅｉｎ，Ｓ．２０１０、Ｔｈｅ ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ、１２、３９７～４０６；Ｄｉ，Ｌ．ら、２０１２、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．Ｔｏｄａｙ、１７．４８６～４９５）。熱力学的溶解度は、表１７に示す通り、種々の生体関連培地中で測定した。結晶性固体の試験試料（約７ｍｇ）を、１ｍＬの関連緩衝溶液を加えたバイアル中で合わせ、混合物をボルテックスして合わせた。固体が完全に溶解したら、飽和溶液が取得されるまでボルテックスしながら、追加の固体を添加した。飽和溶液／固体混合物に蓋をし、次の通りの温度サイクリングに供した：２５℃で１分；４０℃で８時間；１５℃で５時間および２５℃で１２時間。混合物を、遠心濾過デバイス（０．２２μｍのＰＶＤＦフィルター、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）内、１３，０００ｒｐｍにて濾過し、濾液中の試験化合物の濃度を、ＨＰＬＣ／ＵＰＬＣにより、３点標準曲線を参照して決定した。リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ、ｐＨ６．８、５０ｍＭのリン酸緩衝液、２５０ｍＭのＮａＣｌ）。疑似胃酸（ＳＧＮ ｐＨ１．２、ＵＳＰ処方箋）。絶食状態疑似腸液（ＦａＳＳＩＦ、３ｍＭのタウロコール酸ナトリウム、０．７５ｍＭの大豆レシチン由来リン脂質、５０ｍＭのリン酸緩衝液、ＮａＣｌで２５０ｍＭに調整されたイオン強度、ｐＨ６．８）および給餌状態疑似腸液（ＦｅＳＳＩＦ、１５ｍＭのタウロコール酸ナトリウム、３．７５ｍＭの大豆レシチン由来リン脂質、１４４ｍＭの酢酸、５０ｍＭのリン酸緩衝液、ＮａＣｌで２５０ｍＭに調整されたイオン強度、ｐＨ６．８）。

【0438】

【表23】

【0439】

前臨床データ
無作為化、ビヒクル対照、並行８アーム間比較研究を、雄スプラーグドーリーラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ））において行って、循環および肝臓ＴＧレベルを取得した。標準的な実験室条件を使用して９６匹のラット（約２００ｇ）を収容し、それらを二重収容し、１２：１２時間反転明暗スケジュール（８：００ＡＭに消灯）下に保った。ラットを、到着次第、チャウまたは西洋食群および用量群に無作為化し、研究の開始前に、標準的なラットチャウまたは西洋食のいずれかで１４日間の導入期間を与えた。標準的な実験室げっ歯類チャウ食５０５３は、ＬａｂＤｉｅｔ（ＰＭＩ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）製であった。西洋食Ｄ１２０７９Ｂｉは、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ（Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）製であった。

【0440】

これらの研究のために、ビヒクルを調製して、脱イオン水中０．５％（ｗｔ／体積）のメチルセルロース（ＭＣ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ；２７４４２９）を作製した。化合物Ａ（トリス塩から調製したもの）または化合物Ｄのいずれかを加えたストック溶液を、それぞれの化合物で調製して、１０ｍｌの溶液が所望のｍｇ／ｋｇ投薬量を送達するような濃度を提供し、ここで、使用したラットの平均重量は約２００ｇであった。

【0441】

研究の１日目に開始して、ラットに、ビヒクル対照（脱イオン（ｄｉｏｎｉｚｅｄ）水中０．５％ＭＣ（ｗｔ／体積％））、低もしくは高用量の化合物Ａ（それぞれ１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ ＱＤ）、低もしくは高用量の化合物Ｄ（それぞれ５ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤ）、または低用量の共投与（１ｍｇ／ｋｇ ＱＤの化合物Ａおよび５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤの化合物Ｄ）、または高用量の共投与（１０ｍｇ／ｋｇ ＱＤの化合物Ａおよび３０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤの化合物Ｄ）のいずれかを、経口的に投薬した（１０ｍＬ／ｋｇ）。

【0442】

給餌血漿分析物：給餌血漿ＴＧ濃度を決定するための血液を、投薬２時間後に（暗サイクルが始まって２時間）側面尾静脈を介して収集し、エチレンジアミン四酢酸二カリウム（Ｋ_２ＥＤＴＡ）（ＰＮ３６５９７４）でコーティングされたＢＤマイクロティナチューブに移し、４℃で遠心分離した。次いで、得られた血漿試料を、Ｓｉｅｍｅｎｓトリグリセリド＿２アッセイ試薬（参照１０３３５８９２）を使用してＳｉｅｍｅｎｓ化学ＸＰＴ臨床分析装置（Ｍａｌｖｅｎ、ＰＡ）で分析した。

【0443】

絶食血漿分析物：絶食血漿ＴＧを決定するための血液を、４時間の絶食後、投薬２時間後に（暗サイクルが始まって２時間）側面尾静脈を介して収集し、Ｋ_２ＥＤＴＡ（ＰＮ３６５９７４）でコーティングされたＢＤマイクロティナチューブに移し、４℃で遠心分離した。次いで、得られた血漿試料を、Ｓｉｅｍｅｎｓトリグリセリド２アッセイ試薬（参照１０３３５８９２）を使用してＳｉｅｍｅｎｓ化学ＸＰＴ臨床分析装置（Ｍａｌｖｅｎ、ＰＡ）で分析した。

【0444】

研究の最後の日（２８日目）、４時間絶食後、投薬２時間後に、組織収集のためにラットを屠殺した：投薬２時間後、血漿分析物を決定するための血液を、側面尾静脈を介して収集し、次いで、動物をＣＯ_２窒息によって屠殺した。血液を、Ｋ_２ＥＤＴＡ（ＰＮ３６５９７４）でコーティングされたＢＤマイクロティナチューブに移し、４℃で遠心分離し、血漿を９６ウェルマイクロタイタープレートに移し、－２０℃で貯蔵した。肝臓を迅速に除去し、アルミホイルで個々に包んだ液体Ｎ_２中で予冷したウォーレンベルグクランプ内でフリーズクランプし、その後、－８０℃で貯蔵した。

【0445】

組織細砕：冷凍された肝臓を、液体Ｎ_２中で冷却したアルミブロック上で迅速に細砕して、細砕全体を通して組織が冷凍されたままであることを確実にした。細砕された組織を、７ｍＬのポリプロピレン円錐管に移し、分析まで－８０℃で貯蔵した。

【0446】

肝臓トリグリセリドの抽出：およそ５０から１００ｍｇの細砕された組織を、８００μＬの氷冷１：１ ＣＨＣｌ_３：ＭＥＯＨを含有する２ｍＬのライシングマトリックスＤチューブ（ＭＰ Ｂｉｏ）に添加した。試料を、ＱｉａｇｅｎティシューライザーＩＩ（Ｑｉａｇｅｎカタログ番号８５３００）を３０Ｈｚで４分間にわたって使用して、４℃で直ちに抽出した。次いで、ホモジネートを１３×１００ｍｍのガラス管に移し、氷の上に置いた。次いで、溶解管を８００μＬの１：１ ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨですすぎ、３０秒間にわたってボルテックスし、１３×１００ｍｍのガラス管に添加した。氷の上にある間に、２．４ｍｌの１００％ＣＨＣｌ_３をすべてのガラスバイアルに添加して、ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨの比を４：２にした。次いで、試料を－２０℃の冷凍庫に終夜入れた。翌日、１．７５ｍＬの１Ｍ ＫＣｌ Ｈ_２Ｏを添加して、比を４：２：１．７５比のＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏにした。次いで、試料を３０秒間にわたってボルテックスし、１５００ｒｐｍ×１５分にて４℃で遠心分離した。遠心分離後、有機相を新しい１３×１００ｍｍの抽出管に移し、Ｎ_２下、３７℃で乾燥させ、７５０μＬのＣＨＣｌ_３に再懸濁した。アミノプロピル固相抽出（ＳＰＥ）カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓカタログ番号０５４５６０、６ｍＬ、５００ｍｇ）を湿らせ、５ｍＬのヘキサンで洗浄した。洗浄後、ＣＨＣｌ_３中２００μＬの試料抽出物をカートリッジに塗布し、カラムを乾燥させることなく真空によって除去した。次いで、中性脂質を、５ｍｌの２：１ ＣＨＣｌ_３：イソプロパノール／５０μＭのブチル化ヒドロキシトルエンで溶離した。次いで、試料を、Ｎ_２下、３７℃で乾燥させ、１．７５ｍｌの９８：２ イソオクタン：イソプロパノールに再懸濁した。試料を０．２μＭのシリンジフィルターに通して濾過した後、ＨＰＬＣシアノプロピル（Ｃｙａｎｏｐｒｏｐｙ）カラム（３．５μＭの粒径－４．６×１５０ｍｍカラムＡｇｉｌｅｎｔゾルバックスエクリプスＸＢＤ－ＣＮ）に注入した。実行方法は、溶媒Ａ（１０００：１：２、イソオクタン：イソプロパノール：酢酸）および溶媒Ｂ（５０：５０ イソプロパノール：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル）を使用する２７分の実行時間での４μＬ注入であった。０～３分まで、溶媒組成を１００％溶媒Ａに保持した。３～８分まで、溶媒組成を１００％溶媒Ａから９５％溶媒Ａおよび５％溶媒Ｂに変化させた。８～１８分まで、溶媒組成を５０：５０比に変化させた。１８～１９分まで、溶媒組成を１００％溶媒Ａに戻し、その組成を１９～２７分まで保持した。

【0447】

核および膜画分は、処置群ごとにプールされた細砕された肝臓試料の一部から、標準的な方法を使用する超遠心分離によって調製した。核抽出物および膜画分由来の試料を、ウエスタンブロッティングによってＳＲＥＢＰ１について分析した。カルネキシンについてのウエスタンブロットを膜画分についてのマーカーとして、アクチンを全試料ローディングについてのマーカーとして、およびヒストン２Ｂを核画分についてのマーカーとして使用した。核ＳＲＥＢＰ１レベルは相対単位を使用して定量化し、ヒストン２Ｂに対して正規化して、核分別およびゲルローディング中の試料喪失を制御した。

【0448】

細砕された肝臓の別の一部を加工し、脂質生成遺伝子発現について分析した。ＡＣＣ１、ＦＡＳＮ、ＳＣＤ１、ＰＣＳＫ９およびＳＲＥＢＰ－１ｃに対するラットタックマンプローブはすべて、Ａｃｔｂをハウスキーピング遺伝子として使用して、ｑＰＣＲで評価した。

【0449】

（Ｓ）－２－（５－（（３－エトキシピリジン－２－イル）オキシ）ピリジン－３－イル）－Ｎ－（テトラヒドロフラン－３－イル）ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物Ｄ）または薬学的に許容できるその塩の、４－（４－（１－イソプロピル－７－オキソ－１，４，６，７－テトラヒドロスピロ［インダゾール－５，４’－ピペリジン］－１’－カルボニル）－６－メトキシピリジン－２－イル）安息香酸（化合物Ａ）または薬学的に許容できるその塩と組み合わせた投与は、化合物Ａを単剤療法として投与した場合の血漿および肝臓ＴＧレベルと比較して、有意に減少した血漿（図８、９）および肝臓ＴＧ（図１６）レベルをもたらした。

【0450】

西洋食給餌は、チャウ給餌ラットと比べて、給餌状態血漿ＴＧにおける２．２倍の増大をもたらした（図８）。低用量（１ｍｇ／ｋｇ ＱＤ）または高用量（１０ｍｇ／ｋｇ ＱＤ）いずれかの化合物Ａのみ（単剤療法）の経口投与は、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットと比べて、給餌状態での血漿ＴＧにおけるそれぞれ１．７倍および１．３倍の増大をもたらした。逆に、低用量（５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤ）または高用量（３０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤ）いずれかの化合物Ｄのみ（単剤療法）の経口投与は、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットと比べて、給餌状態における血漿ＴＧをそれぞれ５５％および６３％低減させた。化合物Ａおよび化合物Ｄの共投与は、給餌状態での血漿ＴＧにおける化合物Ａ媒介性増大の完全遮断をもたらした。両方低用量または両方高用量のいずれかの、化合物Ａおよび化合物Ｄの経口共投与は、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットと比べて、給餌状態血漿ＴＧレベルを３７％および６４％低減させた。

【0451】

西洋食給餌は、チャウ給餌ラットと比べて、絶食血漿ＴＧにおける１．６倍の増大をもたらした（図９）。単剤療法としての低および高用量の化合物Ａの経口投与は、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットと比べて、絶食血漿ＴＧにおけるそれぞれ２．４倍および１．７倍の増大をもたらした。逆に、単剤療法としての低および高用量の化合物Ｄの経口投与は、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットに比べて、絶食血漿ＴＧをそれぞれ２０％および３５％低減させた。両方低用量のそれぞれまたは高用量のそれぞれの、化合物Ａおよび化合物Ｄの経口共投与は、化合物Ａのみを投与した場合に観察される絶食血漿ＴＧにおける化合物Ａ媒介性増大を、完全に軽減した。共投与された化合物Ａおよび化合物Ｄの低用量群（１０９ｍｇ／ｄｌ）および高用量群（８１ｍｇ／ｄｌ）両方についての絶食血漿ＴＧレベルは、ビヒクル投与された西洋食給餌ラット（９６ｍｇ／ｄｌ）と同様であった。

【0452】

ビヒクル、高用量化合物Ａ単剤療法、高用量化合物Ｄ単剤療法、または共投与された高用量化合物Ａおよび高用量化合物Ｄを投与した西洋食給餌ラット由来の試料において、核ＳＲＥＢＰ－１局在化を比較した（図１０）。ビヒクル処置西洋食給餌ラットと比べて、化合物Ａの投与は、ＳＲＥＢＰ－１活性化の増大を指し示すＳＲＥＢＰ－１の核局在化の増大を生成した。逆に、化合物Ｄの投与は、ＳＲＥＢＰ－１核局在化およびＳＲＥＢＰ－１活性化を低減させた。化合物Ａおよび化合物Ｄの共投与は核ＳＲＥＢＰ－１局在化における化合物Ａ媒介性増大を遮断し、化合物Ａのみの単剤療法と比較して５０％減少を生成した。

【0453】

チャウ給餌ビヒクル処置ラットと比べて、西洋食を給餌およびビヒクルで処置した動物は、脂質生成遺伝子：ＡＣＣ１（図１１）、ＦＡＳＮ（図１２）、ＳＣＤ１（図１３）およびＳＲＥＢＰ１（図１４）の発現の増大を示す傾向があったが、ＰＣＳＫ９（図１５）はなく、これは西洋食給餌ラットよりも低かった。化合物Ａの投与は、西洋食給餌およびビヒクル処置動物と比べて、ＡＣＣ１、ＦＡＳＮ（化合物Ａ高用量のみ）、ＳＣＤの発現をさらに増大させる傾向があったが、ＰＣＳＫ９およびＳＲＥＢＰ１はなかった。逆に、化合物Ｄの投与は、脂質生成遺伝子のすべての発現を減少させた。化合物Ａおよび化合物Ｄの共投与は、ビヒクル処置西洋食給餌ラットにおいて観察されたものと同等のまたはそれよりも低い発現レベルをもたらした。

【0454】

チャウ給餌ラットと比べて、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットは、肝臓トリグリセリド蓄積における約２．７倍の増大を示した（図１６）。低用量および高用量の化合物Ａの経口投与は、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットと比べて、脂肪症におけるそれぞれ３６％および５３％の低減を生成した。同様に、低用量および高用量の化合物Ｄの経口投与は、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットと比べて、脂肪症をそれぞれ２５％および３０％低減させた。低または高用量いずれかの化合物Ａおよび化合物Ｄ両方の経口共投与は、ビヒクル投与された西洋食給餌ラットと比べて、脂肪症をそれぞれ５０％および７３％低減させた。低用量または高用量いずれかの化合物Ａおよび化合物Ｄの組合せの経口投与は、同じ用量レベルの単剤療法としての化合物Ａまたは化合物Ｄいずれかの投与で観察されるものよりも、脂肪症におけるより大きい低減を生成した。

【0455】

無作為化、ビヒクル対照、並行５アーム間比較研究を、コリン欠乏および高脂肪食（ＣＤＡＨＦＤ）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｄｉｅｔｓ；Ａ１６０９２００３）を給餌した雄ウィスターハンラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ））において行って、化合物Ａまたは化合物Ｄのいずれかを、単剤療法として単独でまたは組み合わせて投与した場合の、肝臓炎症および線維症のマーカーの改善における差異を同定した。標準的な実験室条件を使用して６０匹のラット（約２００ｇ）を収容し、それらを二重収容し、１２：１２時間反転明暗スケジュール（８：００ＡＭに消灯）下に保った。ラットに、研究開始の６週間前から始めて、コリン欠乏および高脂肪食（ＣＤＡＨＦＤ）を給餌した。ラットを、４つの投薬群（ｎ＝１２／群）に無作為化し、ビヒクル、化合物Ａ（５ｍｇ／ｋｇ）単剤療法、化合物Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）単剤療法、または共投与化合物Ａ（５ｍｇ／ｋｇ）および化合物Ｄ（３０ｍｇ／ｋｇ）の１日２回投与を、６週間の期間にわたって受けさせた。研究全体を通して正常なチャウを続け、１日２回ビヒクルを投与した動物（ｎ＝１２）を、対照群として使用した。循環マーカーの評価のために、化合物投与開始前ならびに化合物投与３および６週間後に、血液試料を収集した。せん断波エラストグラフィ（エクスプローラーアルティメット撮像装置、Ｓｕｐｅｒｓｏｎｉｃ ｉｍａｇｉｎｅ）測定を、－３週目、０週目（第１回用量の前）、３週目および６週目に行って、炎症および線維症進行を経時的に評価した。ＣＤＡＨＦＤでの１２週間に対応する薬物投与の６週間後、組織学を評価した。結果は、各投薬群ごとの動物の平均として提供される。

【0456】

ＣＤＡＨＦＤでの１２週間後、動物をＣＯ_２窒息によって屠殺した。肝臓の、右外側、内側および左外側葉を収穫した。切片を、左外側、内側右および右外側葉から採取し、ホルマリン中で固定し、動物ごとにパラフィンブロックに加工した。動物１匹当たり左外側葉の１切片を、最適切削温度（ＯＣＴ）化合物中で凍結保存した。各動物からの肝臓の残りを冷凍し、液体Ｎ_２中で冷却したアルミブロック上で迅速に細砕して、細砕全体を通して組織が冷凍されたままであることを確実にした。細砕された組織を移し、分析まで－８０℃で貯蔵した。各動物由来の細砕された肝臓試料の一部を加工し、線維形成の遺伝子発現マーカーについて分析した。αＳＭＡおよびＣＯＬ１Ａ１に対するラットタックマンプローブはすべて、Ａｃｔｂをハウスキーピング遺伝子として使用して、ｑＰＣＲで評価した。

【0457】

下記のエンドポイントを、専門医師会認定の獣医病理学者による定性的組織学的評価および定量的組織形態計測（ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙ）によって評価した：αＳＭＡ免疫組織化学（ＩＨＣ）による肝星細胞活性化および筋線維芽細胞への分化；ピクロシリウスレッド染色による線維症の相関としてのコラーゲン。画像は、Ｖｉｓｉｏｐｈａｒｍソフトウェアを使用して分析した。閾値パラメーター付きのＶｉｓｉｏｐｈａｒｍアプリケーションを一様に適用して、組織切片を同定し、各ＩＨＣ（ＤＡＢ（３，３’－ジアミノベンジジン）陽性）または組織化学的に染色されたスライド上の標的をパーセント面積として定量化した：目的の染色面積／全組織ＲＯＩ－空白部分）×１００％。ノンパラメトリック統計を使用して、この研究からのデータを分析した。群の値を、平均＋／－平均の標準誤差として報告した。

【0458】

チャウ食を給餌しビヒクルを投与した対照動物と比べて、ＣＤＡＨＦＤを受けビヒクルを投与した動物は、研究期間中にわたり、肝臓剛性における著しい増大（せん断波エラストグラフィ（ＳＷＥ）を使用して評価、キロパスカル（ｋＰａ）で測定）を示し、進行性肝臓炎症および線維症を指し示した（図１７）。化合物Ａまたは化合物Ｄの単剤療法としての投与はそれぞれ、肝臓剛性を低減させ、肝臓炎症および／または線維症の低減を示唆した。化合物Ａおよび化合物Ｄの共投与は、単剤療法としてのいずれの作用物質よりも、肝臓剛性において大きい低減を生成した（図１７）。

【0459】

チャウ食を給餌しビヒクルを投与した対照動物と比べて、ＣＤＡＨＦＤを受けビヒクルを投与した動物は、肝臓アルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）染色における著しい増大を示し、筋線維芽細胞活性化および線維形成を指し示した（図１８）。化合物Ａまたは化合物Ｄの単剤療法としての投与はそれぞれ、αＳＭＡ染色をそれぞれ４１％および２３％低減させ、肝臓の筋線維芽細胞活性化および線維形成の低減を示唆した。化合物Ａおよび化合物Ｄの共投与は、単剤療法としてのいずれの作用物質よりも、αＳＭＡ染色において大きい低減を生成し、染色を７２％低減させた（図１８）。

【0460】

チャウ食を給餌しビヒクルを投与した対照動物と比べて、ＣＤＡＨＦＤを受けビヒクルを投与した動物は、ピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）染色における著しい増大を示し、コラーゲン沈着および線維症を指し示した（図１９）。化合物Ａまたは化合物Ｄの単剤療法としての投与はそれぞれ、ＰＳＲ染色をそれぞれ２６％および２０％低減させ、コラーゲン沈着および線維症の低減を示唆した。化合物Ａおよび化合物Ｄの共投与は、単剤療法としてのいずれの作用物質よりも、ＰＳＲ染色において大きい低減を生成し、染色を５６％低減させた（図１９）。

【0461】

チャウ食を給餌しビヒクルを投与した対照動物と比べて、ＣＤＡＨＦＤを受けビヒクルを投与した動物は、イオン化カルシウム結合アダプター分子１（Ｉｂａ１）染色における著しい増大を示し、肝マクロファージ活性化を指し示した（図２２）。化合物Ａの単剤療法としての投与は、Ｉｂａ１染色を１５％低減させ、肝臓の炎症トーンの低減を示唆した。一方、Ｄの単剤療法としての投与は、Ｉｂａ１染色を変化させず、ＡおよびＤの共投与は、単剤療法として投与された化合物Ａよりも、Ｉｂａ１染色において大きい低減を生成し、染色を３３％減少させた（図２２）。

【0462】

チャウ食を給餌しビヒクルを投与した対照動物と比べて、ＣＤＡＨＦＤを受けビヒクルを投与した動物は、肝臓アルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）（図２０）およびコラーゲンＡ１Ａ（ＣＯＬ１Ａ１）（図２１）遺伝子発現における著しい増大を示し、筋線維芽細胞活性化および線維形成を指し示した。化合物Ａまたは化合物Ｄの単剤療法としての投与はそれぞれ、肝臓のαＳＭＡおよびＣＯＬ１Ａ１遺伝子発現を低減させ、肝臓の筋線維芽細胞活性化および線維形成の低減を示唆した。化合物Ａおよび化合物Ｄの共投与は、単剤療法としてのいずれの作用物質よりも、肝臓のαＳＭＡ（図２０）およびＣＯＬ１Ａ１（図２１）遺伝子発現において大きい低減を生成した。

【0463】

化合物Ｄ（実施例２７および実施例４の化合物についての効力データを、以下の表１８に示す：

【0464】

【表24】

【0465】

第ＩＩ相薬力学、安全性および忍容性研究
第２Ａ相、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、並行群間比較研究を行って、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を持つ成人において６週間にわたって共投与された実施例２６の化合物（化合物Ａ）および実施例２７の化合物（化合物Ｄ）の、薬力学、安全性および忍容性を評価した。化合物の共投与は、１２時間ごとに３００ｍｇ用量（１００ｍｇずつ３個の錠剤）としての化合物Ｄの経口投与および１２時間ごとに１５ｍｇ用量（５ｍｇずつ３個の錠剤）として投与される化合物Ａの経口投与を含んだ。

【0466】

化合物Ａによるアセチル－ＣｏＡ（補酵素Ａ）カルボキシラーゼ１および２の阻害ならびに化合物Ｄによるジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２の阻害は、脂質代謝を異なった補完的な手法でモジュレートするであろうと仮定され、２つの化合物の共投与が、単独で投与されたいずれかの作用物質と比較して改善されたベネフィット・リスクプロファイルにつながり得ることを示唆していた。全肝臓脂肪（ＷＬＦ）の一次ＰＤエンドポイント、安全性（血小板）および忍容性に関する主要な二次エンドポイント、ならびに脂質（例えば、トリグリセリド、ＴＧ）および肝機能検査（ＬＦＴ）を含む主要な三次／診査ＰＤおよびバイオマーカーエンドポイントについての結果を、以下の表１９にまとめる：

【0467】

【表25】

【0468】

４２日目における全肝臓脂肪（ＷＬＦ）およびトリグリセリドについての主要な所見は、ｉ）すべての処置アームが、ＷＬＦについての予め指定された決定基準（すなわち、処置アームがプラセボよりも良好であり；観察されたプラセボ調整低減が３０％の目標値よりも大きいという９５％以上の信頼）を満たしたこと；ｉｉ）化合物Ａによる単剤療法が著しいトリグリセリド上昇を誘導し、化合物Ｄによる単剤療法がトリグリセリドにおける適度の減少につながったこと；ならびに、ｉｉｉ）化合物Ａおよび化合物（Ｃｏｍｏｕｎｄ）Ｄの共投与が、プラセボと比較して最小限変化したトリグリセリド値につながり、化合物Ａ単剤療法で見られるトリグリセリド上昇の強力な軽減をもたらしたことを示す。

【0469】

主要な安全性および忍容性所見は、ｉ）すべての処置アームが概して安全であり、研究過程にわたって忍容性良好であったこと；およびｉｉ）いかなる処置アームにおいても血小板における臨床的に意味のある変化が観察されなかったことを示す。プラセボと比較して、化合物Ａ単剤療法アームでは血小板における減少が観察された。これは、化合物Ｄでは明らかではなかった。驚くべきことに、血小板における減少が、化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームにおいて向上した。

【0470】

まとめると、化合物Ａ／化合物Ｄの共投与は、概して安全であり、忍容性良好であり、化合物Ｄ単独の投与よりも大きいＷＬＦ低減を提供し、化合物Ａによる単剤療法に関連して誘導されるトリグリセリド上昇を実質的に軽減した。

【0471】

ベースライン特徴
以下の表２０は、研究個体群の主要な人口統計学およびベースライン特徴についての情報を提供する。

【0472】

【表26】

【0473】

ＭＲＩ－ＰＤＦＦによる一次全肝臓脂肪
ＭＲＩ－ＰＤＦＦによるＷＬＦにおけるベースラインから４２日目までの対数変換された相対変化は、共分散分析法（ＡＮＣＯＶＡ）を使用して分析した。モデルは、ＭＲＩ－ＰＤＦＦによる対数変換されたベースラインＷＬＦを共変量として含んでいた。モデルから導出された推定を対数スケールから逆変換し、パーセント変化に変換した。図２３ａは、処置アームによるＷＬＦデータの箱ひげ図を示し、表２１は、ＡＮＣＯＶＡモデルからの結果を提供する。

【0474】

【表27】

【0475】

すべての処置アームは、数値的増大を示したプラセボと比較して、４２日目におけるベースラインからのＷＬＦにおける低減につながる。各処置アームは、プラセボに対するＷＬＦについての予め指定された決定基準（すなわち、処置アームがプラセボよりも良好であり；観察されたプラセボ調整低減が３０％の目標値よりも大きいという９５％以上の信頼）を満たした。さらに、アーム間でのＷＬＦにおける低減の規模の比較は、化合物Ａおよび化合物Ｄ共投与が、化合物Ｄによる単剤療法よりも数値的に大きい低減および化合物Ａによる単剤療法と同等の低減につながるという証拠を示した［－０．２１％（５０％ＣＩ－６．８２、６．８７）］（表２１を参照）。

【0476】

図２３ｂおよび２３ｃは、肝臓脂肪における３０％以上または５０％以上相対的低減の肝臓脂肪の低減閾値を満たす参加者の割合を実証する。

【0477】

血清トリグリセリド
血清トリグリセリドにおけるベースラインからの対数変換された相対変化は、反復測定の混合モデル（ＭＭＲＭ）を使用して分析した。モデルは、対数変換されたベースラインＴＧおよびベースライン全肝臓脂肪を共変量として含んでいた。モデルから導出された推定を対数スケールから逆変換し、パーセント変化に変換した。表２２ａは、血清トリグリセリドにおけるベースラインからのパーセント変化 － ＦＡＳの統計的分析を提供する。図２４は、血清トリグリセリドにおけるベースラインからのパーセント変化 － ＦＡＳを表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットである。

【0478】

【表28】

【0479】

表２２ａは、各時点におけるＭＭＲＭモデルからの結果を示す。データは、ＡＣＣｉ誘導トリグリセリド上昇が化合物Ａによる単剤療法投与で観察されたことを示す。しかしながら、研究仮説と一致して、化合物Ａ／化合物Ｄの共投与は、トリグリセリド上昇の軽減につながった。４２日目のトリグリセリドにおけるプラセボ調整増大は、化合物Ａ処置アームにおいては４７．３０％（２１．７７％、７８．１９％）であったが、化合物Ａ／化合物Ｄ組合せアームにおいてはわずか６．００％（－１２．２１％、２７．９９％）であった。これは、化合物Ａ単剤療法アームと比べて、組合せアームのトリグリセリドレベルにおける２８．０３％（２３．４０％、３２．３９％）の統計学的に有意な低減に等しい。組合せアームにおける５日目および１４日目のトリグリセリド上昇は、化合物Ａ単剤療法アームにおいて見られたものよりも小さい規模であり、２８日目および４２日目の値はプラセボと同様であった（図２４を参照）。

【0480】

加えて、表２２ｂは、ＮＡＦＬＤ患者におけるトリグリセリド異常のまとめを提供する。データは、トリグリセリド閾値を超える対象の総数（％）として提示される。データセットは、４００ｍｇ／ｄｌ超、６００ｍｇ／ｄｌ超および８００ｍｇ／ｄｌ超の化合物Ａ媒介性トリグリセリド異常の軽減を示す。具体的には、データは、化合物Ａおよび化合物Ｄの共投与（ｃｏ－ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｏｎ）による、化合物Ａ媒介性トリグリセリド異常（６００ｍｇ／ｄｌ超および８００ｍｇ／ｄｌ超）の完全遮断を示す。

【0481】

【表29】

【0482】

他の脂質およびアポリポタンパク質
４２日目における他の空腹時血清脂質パラメーターにおけるベースラインからのパーセント変化 － ＦＡＳの統計的分析のまとめを、表２３で提供する。

【0483】

【表30】

【0484】

３つの処置アーム（化合物Ａ単剤療法、化合物Ｄ単剤療法および化合物Ａ／化合物Ｄ共投与）の、主要な脂質パラメーター（総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、非ＨＤＬコレステロール）に対する影響を、４２日目について上記表１３に示し、各アームをプラセボと、および化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームを各単剤療法アームと比較する。総コレステロールについて、すべての処置アームは、プラセボよりも低い傾向があり、化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームにおいて統計学的に有意な減少が見られた［－９．５８％（－１６．２６、－２．３８）］。各単剤療法アームを各組合せアームと比較した場合、統計学的に有意な差異は観察されなかった。ＨＤＬコレステロールは、すべての処置アームにおいて、プラセボと比較して同様の規模で減少した。化合物Ａ／化合物Ｄの共投与は、ＨＤＬコレステロールを有意に各単剤療法よりも低く減少させなかった。ＬＤＬコレステロールは、化合物Ａ単剤療法アームにおいて統計学的に有意に減少し、化合物Ｄ単剤療法および化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームにおいて、統計学的に有意ではない、数値的に低下する傾向があった。非ＨＤＬコレステロールは、いずれの処置アームにおいてもプラセボと有意に異なっていなかった。

【0485】

３つの処置アーム（化合物Ａ、化合物Ｄおよび化合物Ａ／化合物Ｄ共投与）の、ＡｐｏＡ１、ＡｐｏＢおよびＡｐｏＣ３に対する影響を測定した。４２日目のアポリポタンパク質Ｃ３（ＡｐｏＣ３）におけるベースラインからのパーセント変化 － ＦＡＳの統計的分析の結果を、表２４に示し、各アームをプラセボと、および化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームを各単剤療法アームと比較する。４２日目におけるプラセボからのＬＳ平均（および９０％ＣＩ）パーセント変化が記される。

【0486】

【表31】

【0487】

ＡｐｏＣ３は、化合物Ａ単剤療法アームにおいて統計学的に有意な方式で増大した［４２．７１％（２２．８６、６５．７７）］。驚くべきことに、ＡｐｏＣ３は、化合物Ｄ単剤療法アームでは増大せず［－８．１９％（－２０．７５、６．３６）］、ここではプラセボと同様のままであった。また驚くべきこと（Ｓｕｒｐｓｉｎｇｌｙ）に、化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームにおいては、ＡｐｏＣ３レベルもプラセボと同様であり［７．５２％（－６．９６、２４．２６）］、故に、ＡｐｏＣ３における化合物Ａ誘導上昇は、化合物Ｄとの共投与によって軽減された。

【0488】

他の目的のエンドポイント － 肝機能検査
他の目的のエンドポイントのまとめを、表２５で提供する。４２日目におけるプラセボからのＬＳ平均（および９０％ＣＩ）パーセント変化が記される。表２５は、４２日目の肝機能検査におけるベースラインからのパーセント変化 － ＦＡＳの統計的分析を提供する。図２５ａ～２５ｄは、肝機能検査におけるベースラインからのパーセント変化 － ＦＡＳについての最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを提供する。図２５ａは、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）についてのプロットを提供し、図２５ｂは、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）についてのプロットを提供し、図２５ｃは、アルカリホスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｔａｔｅ）についてのプロットを提供し、図２５ｄは、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）についてのプロットを提供する。

【0489】

【表32】

【0490】

すべての処置アームで、最初の４週間にわたって、プラセボと比較してＡＬＴおよびＡＳＴにおける一過性増大が観察された。４２日目までに、いずれもベースライン値未満になった。アルカリホスファターゼについては、プラセボアームにおいて適度の増大が認められ、化合物Ａ単剤療法アームにおいて明確で統計学的に有意な上昇があった。驚くべきことに、アルカリホスファターゼにおける明確で統計学的に有意な減少が、化合物Ｄ処置アームにおいて認められた。化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームでは、アルカリホスファターゼ値はベースライン値前後で推移し、研究全体を通して統計学的に有意な変化はなかった。ＧＧＴは、プラセボにおいても化合物Ｄ単剤療法（ｍｏｎｏｔｈｅｒｐａｙ）アームにおいてもベースラインからの有意な変化を示さず、一方、驚くべきことに、化合物Ａ単剤療法アームおよび化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームにおいては増大が観察された。共投与アームにおいて観察されたＧＧＴの増大は、４２日目のみ化合物Ａ単剤療法アームよりも有意に低かった。

【0491】

安全性および忍容性
表２６は、安全性解析対象集団における対象について、有害事象（すべての因果関係）の数を示す。具体的には、表２６は、処置中に発生した有害事象（ＡＥ）（すべての因果関係） － 安全性解析対象集団を示す。

【0492】

【表33】

【0493】

ＡＥの発生率は、化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームと両方の単剤療法処置アームとの間で同様であった。「下顎膿瘍（Ａｂｃｅｓｓ）」の１つのＳＡＥは、化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームにおいて報告された（処置に関連するとはみなされなかった）。２人の対象がＡＥにより治験薬を中断した。化合物Ａ単剤療法アームにおける１人の対象が、ＴＧ上昇の重度のＡＥにより中断し（処置に関連するとみなされた）、該対象は無症候性のままであった。化合物Ｄ単剤療法アームにおける別の対象は、クレアチンキナーゼおよびＡＳＴ上昇の軽度のＡＥにより治験薬を中断した（処置に関連するとはみなされなかった）。上記したＴＧ、ＣＫおよびＡＳＴ上昇を除いて、主要な検査所見の異常は認められなかった。全体として、すべての処置は安全であり、忍容性良好であった。

【0494】

他の目的の安全性エンドポイント
表２７は、４２日目の血小板におけるベースラインからのパーセント変化 － ＦＡＳの統計的分析を提供する。

【0495】

【表34】

【0496】

プラセボと比較して、血小板における経時的な減少の数値的な傾向が、化合物Ａ単剤療法処置アームにおいて観察された。化合物Ｄ単剤療法アームでは、血小板における減少は認められなかった。驚くべきことに、化合物Ａ／化合物Ｄ共投与アームでも、プラセボと比べて、血小板における減少は観察されないことが発見された。

【0497】

本出願全体を通して、種々の刊行物が参照される。これらの刊行物の開示は、あらゆる目的のための参照によりその全体が本出願に組み込まれる。

【0498】

本発明の範囲または趣旨から逸脱することなく、本発明において種々の修正および変形が為され得ることが、当業者には明らかであろう。本発明の他の実施形態は、本明細書の考察および本明細書において開示される発明の実践から、当業者に明らかであろう。本明細書および例は、例示的なものにすぎないとみなされ、本発明の真の範囲および趣旨は、下記の特許請求の範囲によって指し示されることが意図されている。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25-1】

【図25-2】

【図25-3】

【図25-4】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【手続補正書】

【提出日】2022-03-30

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0019】

【図1】Ｃｕ放射線源が装備されたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ４エンデバー回折計で行われた実施例２６（化合物Ａ）の形態１の例証的なＰＸＲＤパターンを示す図である。

【図2】ＦＴ－ＩＲベンチに取り付けられたＮｉｃｏｌｅｔ ＮＸＲ ＦＴ－ラマンアクセサリーを使用して収集した実施例２６（化合物Ａ）の形態１の例証的なラマンスペクトルを示す図である。

【図3】ＢｒｕｋｅｒバイオスピンアバンセＩＩＩ ５００ＭＨｚ（^１Ｈ周波数）ＮＭＲ分光計内に位置付けられたＢｒｕｋｅｒバイオスピンＣＰＭＡＳプローブで行われた実施例２６（化合物Ａ）の形態１の例証的な^１３Ｃ ｓｓＮＭＲパターンを示す図である。

【図4】Ｃｕ放射線源が装備されたＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ４エンデバー回折計で行われた実施例２６（化合物Ａ）の形態２の例証的なＰＸＲＤパターンを示す図である。

【図5】ＦＴ－ＩＲベンチに取り付けられたＮｉｃｏｌｅｔ ＮＸＲＦＴ－ラマンアクセサリーを使用して収集した実施例２６（化合物Ａ）の形態２の例証的なラマンスペクトルを示す図である。

【図6】ＢｒｕｋｅｒバイオスピンアバンセＩＩＩ ５００ＭＨｚ（^１Ｈ周波数）ＮＭＲ分光計内に位置付けられたＢｒｕｋｅｒバイオスピンＣＰＭＡＳプローブを使用して行われた実施例２６（化合物Ａ）の形態２の例証的な^１３Ｃ ｓｓＮＭＲパターンを示す図である。

【図7】実施例２６（化合物Ａ）の形態２の例証的な単結晶構造を示す図である。

【図8】給餌状態で測定された、西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける血漿トリグリセリドレベルに対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図9】絶食状態で測定された、西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける血漿トリグリセリドレベルに対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図10】西洋食給餌ラットにおけるＳＲＥＢＰ－１核局在化に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図11】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的にはアセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ１）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図12】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的には脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳＮ）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図13】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的にはステロール－ＣｏＡデサチュラーゼ（ＳＣＤ１）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図14】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的にはステロール応答エレメント結合タンパク質１ｃ（ＳＲＥＢＰ－１ｃ）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図15】西洋食給餌ラットにおける肝臓の脂質生成遺伝子発現、具体的にはプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に対する、単剤療法としてのおよび組み合わせた化合物Ａおよび化合物Ｄの投与の効果をまとめた図である。

【図16】西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける肝臓トリグリセリドレベルに対する化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図17】コリン欠乏および高脂肪食（ＣＤＡＨＦＤ）給餌雄ウィスターハンラットにおける肝臓炎症および線維症のマーカーである肝臓の弾性に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図18】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおける筋線維芽細胞活性化および線維形成のマーカーである肝臓のアルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）免疫組織化学に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた、経口投与の効果をまとめた図である。

【図19】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおける肝臓のピクロシリウス（Ｐｉｃｏｓｉｒｉｕｓ）レッド染色に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図20】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおける肝臓のアルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）遺伝子発現に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図21】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおける肝臓のコラーゲン１Ａ１遺伝子発現に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図22】ＣＤＡＨＦＤ給餌雄ウィスターハンラットにおけるイオン化カルシウム結合アダプター分子１染色に対する、化合物Ａおよび化合物Ｄの単剤療法としてのおよび組み合わせた経口投与の効果をまとめた図である。

【図23a】本明細書において記述される第２Ａ相研究のための処置アーム（ａｒｍ）によるＷＬＦデータの箱ひげ図を示す図である。

【図23b】３０％以上の肝臓脂肪の低減がある対象の％を示す図である。

【図23c】５０％以上の肝臓脂肪の低減がある対象の％を示す図である。

【図24】本明細書において記述される第２Ａ相研究のための血清トリグリセリドにおけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図25-1】本明細書において記述される第２Ａ相研究のためのアラニン（ａｌａｎｉｎｉｎｅ）アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）におけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図25-2】本明細書において記述される第２Ａ相研究のためのアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）におけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図25-3】本明細書において記述される第２Ａ相研究のためのアルカリフォスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｔａｓｅ）におけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図25-4】本明細書において記述される第２Ａ相研究のためのガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）におけるベースラインからのパーセント変化を表す最小二乗平均値および９０％ＣＩのプロットを示す図である。

【図26】実施例４、形態１を示す特徴的なｘ線粉末回折パターンの図である（縦軸：強度（ＣＰＳ）；横軸：２シータ（度））。

【図27】実施例４、塩酸塩形態１を示す特徴的なｘ線粉末回折パターンの図である（縦軸：強度（ＣＰＳ）；横軸：２シータ（度））。

【図28】実施例４、ｐ－トルエンスルホン酸塩、無水物、形態１を示す特徴的なｘ線粉末回折パターンの図である（縦軸：強度（ＣＰＳ）；横軸：２シータ（度））。

【図29】西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける血漿トリグリセリドに対する実施例４の複数回用量効果をプロットした図である（縦軸：血漿トリグリセリド（ｍｇ／ｄＬ）、横軸：西洋食ＢＩＤ投薬（ｍｇ／ｋｇ））。

【図30】西洋食給餌スプラーグドーリーラットにおける肝臓トリグリセリドに対する実施例４の複数回用量効果をプロットした図である（縦軸：肝臓トリグリセリド（μｇ／ｍｇ）、横軸：西洋食ＢＩＤ投薬（ｍｇ／ｋｇ））。

【図31】調製Ｐ１、形態１を示す特徴的なｘ線粉末回折パターンの図である（縦軸：強度（ＣＰＳ）；横軸：２シータ（度））。

【外国語明細書】