特開 2022-62143 腎臓病の処置のための組成物と方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022062143

(43)【公開日】2022-04-19

(54)【発明の名称】腎臓病の処置のための組成物と方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 48/00 20060101AFI20220412BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20220412BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20220412BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20220412BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220412BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20220412BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220412BHJP

【ＦＩ】

A61K48/00

A61P13/12 ZNA

A61K31/7088

A61K38/17

A61P43/00 105

C12N15/113 Z

C12N15/113 130Z

C12N15/113 140Z

C12N5/10

【審査請求】有

【請求項の数】15

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2022013876

(22)【出願日】2022-02-01

(62)【分割の表示】P 2018529237の分割

【原出願日】2016-12-14

(31)【優先権主張番号】62/267,242

(32)【優先日】2015-12-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】504278156

【氏名又は名称】コールド スプリング ハーバー ラボラトリー

(71)【出願人】

【識別番号】518195690

【氏名又は名称】ストーク セラピューティクス，インク．

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100122644

【弁理士】

【氏名又は名称】寺地 拓己

(72)【発明者】

【氏名】アズナレズ，イザベル

(72)【発明者】

【氏名】ナッシュ，ヒュー エム．

(72)【発明者】

【氏名】クライナー，エイドリアン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】タンパク質の発現を増加させるため、かつ、その必要のある被験体、例えばタンパク質の発現が不足している被験体または腎臓病を抱えている被験体を処置するための、方法および組成物を提供する。
【解決手段】被験体の細胞を、標的タンパク質又は機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質又は機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、標的タンパク質又は機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、被験体の細胞内で、標的タンパク質又は機能的ＲＮＡの発現を増加させる、方法である。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

被験体の細胞により標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させることによっ
て被験体の腎臓病を処置する方法であって、ここで、前記細胞は、保持されたイントロン
含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）を有し、該ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、
保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプラ
イス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、標的タン
パク質または機能的ＲＮＡをコードし、前記方法は、被験体の細胞を、標的タンパク質ま
たは機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセン
スオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロン
は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から構成的
にスプライシングされ、それにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍ
ＲＮＡのレベルを増加させ、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発
現を増加させる、方法。

【請求項2】

腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積症、巣状分節性糸球体硬
化症７、乳頭腎症候群、あるいは幼児の高カルシウム血症である、請求項１に記載の方法
。

【請求項3】

保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）を有している細
胞によって、標的タンパク質の発現を増加させる方法であって、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接している
エクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを
含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は標的タンパク質をコードし、前記方法は、細胞
を、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセ
ンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロ
ンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシング
され、それにより、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、細胞内で
標的タンパク質の発現を増加させ、ここで、標的タンパク質は、シスチノシン、タンパク
質ペアードボックス遺伝子２タンパク質、タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４
、サブファミリーＡ、ポリペプチド１、あるいはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体
δである、方法。

【請求項4】

標的タンパク質は、シスチノシン、タンパク質ペアードボックス遺伝子２タンパク質、
タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１、あ
るいはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである、請求項１または２に記載の方法
。

【請求項5】

標的タンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足している
標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補
償タンパク質あるいは補償機能的ＲＮＡである、請求項１または２に記載の方法。

【請求項6】

細胞は、標的タンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被
験体内にあるか、または被験体に由来する、請求項３に記載の方法。

【請求項7】

標的タンパク質の量の不足は、標的タンパク質のハプロ不全によって引き起こされ、こ
こで被験体は、機能的な標的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子、標的タンパク質
が産生されない第２の対立遺伝子、または非機能的な標的タンパク質をコードする第２の
対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合する、請求項１－６のいずれか１つに記載の方法。

【請求項8】

被験体は、標的タンパク質の量または機能の不足に起因する障害により引き起こされた
疾病を抱えており、ここで、被験体は、
（ａ）（ｉ）標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベ
ルで生成され、
（ｉｉ）標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して機能が低下した形
態で生成され、あるいは、
（ｉｉｉ）標的タンパク質が生成されない、第１の変異対立遺伝子と、
（ｂ）（ｉ）標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベ
ルで生成され、
（ｉｉ）標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した
形態で生成され、あるいは、
（ｉｉｉ）標的タンパク質が生成されない、第２の変異対立遺伝子と、を有し、
ここで、被験体が第１の変異対立遺伝子（ａ）（ｉｉｉ）を有するとき、第２の変異対
立遺伝子は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）であり、被験体が第２の変異対立遺伝子
（ｂ）（ｉｉｉ）を有するとき、第１の変異対立遺伝子は（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（
ｉｉ）であり、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）である
第１の変異対立遺伝子、および／または、（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）である第
２の変異対立遺伝子から転写される、請求項１－６のいずれか１つに記載の方法。

【請求項9】

標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成さ
れる、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、十分に機能的な形態で生成さ
れる、請求項８に記載の方法。

【請求項11】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋６～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－１６までの領域内の
保持されたイントロンにある、請求項１－１０のいずれか１つに記載の方法。

【請求項12】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋６９～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－７９までの領域内
の保持されたイントロンにある、請求項１－１０のいずれか１つに記載の方法。

【請求項13】

標的タンパク質はシスチノシンである、請求項１－１２のいずれか１つに記載の方法。

【請求項14】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－５００までの領
域内の保持されたイントロンにある、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む、請求項１３または１４に記載の
方法。

【請求項16】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８またはＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０７３４の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に少なくとも８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配
列同一性を備えた配列を含む、請求項１３－１５のいずれか１つに記載の方法。

【請求項17】

ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８のいずれか１つに対して少なく
とも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１
００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１３－１６のいずれか１つに記載の方法
。

【請求項18】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
７に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１３－１７のいずれか
１つに記載の方法。

【請求項19】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、請求項１３－１８のいずれか１つに記載の方法
。

【請求項20】

標的タンパク質はペアードボックス遺伝子２タンパク質である、請求項１－１２のいず
れか１つに記載の方法。

【請求項21】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－５００までの領
域内の保持されたイントロンにある、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８６２３のい
ずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む、請求項２０または２１に記載の方
法。

【請求項23】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３８またはＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０７４０の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に少なくとも８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配
列同一性を備えた配列を含む、請求項２０－２２のいずれか１つに記載の方法。

【請求項24】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８６２３のいずれか１つ
に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項２０－２３のいずれか１
つに記載の方法。

【請求項25】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１５のいずれか１つに対して
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、ある
いは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項２０－２４のいずれか１つに記載
の方法。

【請求項26】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する遺伝子配列によってコードされる、請求項２０－２５のいずれか１つに記載の
方法。

【請求項27】

標的タンパク質はタンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ、
ポリペプチド１である、請求項１－１２のいずれか１つに記載の方法。

【請求項28】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－５００までの領
域内の保持されたイントロンにある、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む、請求項２７または２８に記載の
方法。

【請求項30】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１０７３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７
４５、あるいはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４１の少なくとも８つの隣接する核酸を含む
領域に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項２７－２９のいずれか１つに
記載の方法。

【請求項31】

ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３のいずれか１つに対して少なく
とも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１
００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項２７－３０のいずれか１つに記載の方法
。

【請求項32】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６－１９のいずれか１つに対して
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、ある
いは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項２７－３１のいずれか１つに記載
の方法。

【請求項33】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する遺伝子配列によってコードされる、請求項２７－３２のいずれか１つに記載の
方法。

【請求項34】

標的タンパク質はペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである、請求項１－１２の
いずれか１つに記載の方法。

【請求項35】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－５００までの領
域内の保持されたイントロンにある、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいずれ
か１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む、請求項３４または３５に記載の方法。

【請求項37】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３６、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１０７４７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７
４３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３７、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１０７３５、あるいはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４４の少なくとも８つの隣
接する核酸を含む領域に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項３４
－３６のいずれか１つに記載の方法。

【請求項38】

ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいずれか１つに対して少なくとも約
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％
の配列同一性を備えた配列を含む、請求項３４－３７のいずれか１つに記載の方法。

【請求項39】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－９のいずれか１つに対して少な
くとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは
１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項３４－３８のいずれか１つに記載の方
法。

【請求項40】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する遺伝子配列によってコードされる、請求項３４－３９のいずれか１つに記載の
方法。

【請求項41】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域
、あるいは、
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する－１６から－１００の領域
、
の内部の保持されたイントロンにある、請求項１－１０および１３－４０のいずれか１
つに記載の方法。

【請求項42】

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス
部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’ス
プライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の
一部を標的とする、請求項１－１０および１３－４０のいずれか１つに記載の方法。

【請求項43】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ～－
４ｅの領域、あるいは、
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ～－
４ｅの領域、
の内部にある、請求項１－１０および１３－４０のいずれか１つに記載の方法。

【請求項44】

アンチセンスオリゴマーは、機能的ＲＮＡまたは標的タンパク質をコードする遺伝子か
ら転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより、標的タンパ
ク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項１－４３のいずれか１つに記載の方
法。

【請求項45】

アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の
突然変異に起因する異常スプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機
能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項１－４４のいずれか１つに記載の方法。

【請求項46】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシング、または野
生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって生成された、請求項１－４５のい
ずれか１つに記載の方法。

【請求項47】

標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あ
るいは野生型の成熟ｍＲＮＡである、請求項１－４６のいずれか１つに記載の方法。

【請求項48】

生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である、請
求項１－４７のいずれか１つに記載の方法。

【請求項49】

アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞において生成された標的タンパク質または機
能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量は、対照細胞において生成された標的タンパク質
または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量と比較して、約１．１～約１０倍、約１
．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍
、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～
約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約
３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍
、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．
５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍
、あるいは少なくとも約１０倍増加する、請求項１－４８のいずれか１つに記載の方法。

【請求項50】

アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞によって生成された標的タンパク質の総量は
、対照細胞によって生成された標的タンパク質の総量と比較して、約１．１～約１０倍、
約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約
５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約
２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍
、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約
９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約
２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約
５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する、請求項１－４９のいずれか１つに記載の方
法。

【請求項51】

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合
を含む骨格修飾を含む、請求項１－５０のいずれか１つに記載の方法。

【請求項52】

アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド
核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、あるいは２’－Ｏ－メトキシエチル部分を含
む、請求項１－５１のいずれか１つに記載の方法。

【請求項53】

アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項１－５２の
いずれか１つに記載の方法。

【請求項54】

それぞれの糖部は修飾された糖部である、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～４０の核酸塩基、８～３５の核
酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～２０の核酸塩基、８～１５の核
酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～３５の核酸塩基、９～３０の核
酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～１５の核酸塩基、１０～５０の
核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基、１０～３０の核酸塩基、１０
～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の核酸塩基、１１～５０の核酸塩
基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１～３０の核酸塩基、１１～２５
の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩基、１２～５０の核酸塩基、１
２～４０の核酸塩基、１２～３５の核酸塩基、１２～３０の核酸塩基、１２～２５の核酸
塩基、１２～２０の核酸塩基、あるいは１２～１５の核酸塩基からなる、請求項１－５４
のいずれか１つに記載の方法。

【請求項56】

アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部
分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少な
くとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である、請求項１－５５のい
ずれか１つに記載の方法。

【請求項57】

細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保
持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の集団で最も豊富な保持されたイントロンに結合する、請求項１－５６のいず
れか１つに記載の方法。

【請求項58】

最も豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タン
パク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するためにＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆
体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、請
求項５７に記載の方法。

【請求項59】

細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保
持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の集団で２番目に豊富な保持されたイントロンに結合する、請求項１－５６の
いずれか１つに記載の方法。

【請求項60】

２番目に豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的
タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するためにＲＩＣ ｍＲＮＡ
前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する
、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

疾病は、疾患または障害である、請求項６－６０のいずれか１つに記載の方法。

【請求項62】

疾患または障害は腎臓病である、請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積症、巣状分節性糸球体硬
化症７、乳頭腎症候群、あるいは幼児の高カルシウム血症である、請求項６２に記載の方
法。

【請求項64】

標的タンパク質とＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、遺伝子によってコードされ、ここで、遺
伝子はＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１、あるいはＰＰＡＲＤである、請求項６３に
記載の方法。

【請求項65】

前記方法はタンパク質発現を評価する工程をさらに含む、請求項１－６４のいずれか１
つに記載の方法。

【請求項66】

被験体はヒトである、請求項１－６５のいずれか１つに記載の方法。

【請求項67】

被験体はヒト以外の動物である、請求項１－６５のいずれか１つに記載の方法。

【請求項68】

被験体は胎児、胚、あるいは子供である、請求項１－６６のいずれか１つに記載の方法
。

【請求項69】

細胞はエクスビボである、請求項１－６７のいずれか１つに記載の方法。

【請求項70】

アンチセンスオリゴマーは、被験体の腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静
脈内注射によって投与される、請求項１－６７のいずれか１つに記載の方法。

【請求項71】

５’スプライス部位に隣接するエクソンの－３ｅ～－１ｅと、保持されたイントロンの
＋１～＋６にある９つのヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である、請求項１－
７０のいずれか１つに記載の方法。

【請求項72】

保持されたイントロンの－１５～－１と３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋１
ｅにある１６のヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である、請求項１－７１のい
ずれか１つに記載の方法。

【請求項73】

請求項１－７２のいずれか１つの方法で使用されるアンチセンスオリゴマー。

【請求項74】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７３３のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、
８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同
一性を備えた配列を含むアンチセンスオリゴマー。

【請求項75】

請求項７３または７４のアンチセンスオリゴマーと賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項76】

腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって請求項７５に記載の
医薬組成物を投与することにより被験体を処置する方法。

【請求項77】

不足しているタンパク質または不足している機能的なＲＮＡに関連している被験体の腎
臓病を処置するために、細胞によって標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡの発現を増加
させる方法で使用されるアンチセンスオリゴマーを含む組成物であって、ここで、不足し
ているタンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足しており
、ここで、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする
、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）の構成的スプラ
イシングを増強し、ここで、標的タンパク質は、
（ａ）不足しているタンパク質、あるいは、
（ｂ）被験体において不足しているタンパク質を機能的に増大させるか、これに取って
代わる、補償タンパク質であり、
ここで、機能的ＲＮＡは、
（ａ）不足しているＲＮＡ、あるいは、
（ｂ）被験体の不足している機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わ
る、補償機能的ＲＮＡであり、
ここでＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接
しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、保持され
たイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆
体からスプライシングされ、それによって、被験体において標的タンパク質または機能的
ＲＮＡの産生または活性を増加させる、組成物。

【請求項78】

腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積症、巣状分節性糸球体硬
化症７、乳頭腎症候群、あるいは幼児の高カルシウム血症である、請求項７７に記載の組
成物。

【請求項79】

被験体において標的タンパク質に関係する疾病を処置する方法に使用するためのアンチ
センスオリゴマーを含む組成物であって、前記方法は、被験体の細胞によって標的タンパ
ク質の発現を増加させる工程であって、細胞が保持されたイントロン、保持されたイント
ロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’
スプライス部位に隣接しているエクソンを含む、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆
体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）を有し、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質をコ
ードする、工程と、細胞をアンチセンスオリゴマーと接触させる工程であって、それによ
って、保持されたイントロンが、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の
転写産物から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパ
ク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発
現を増加させる、工程とを含む、組成物。

【請求項80】

標的タンパク質は、シスチノシン、タンパク質ペアードボックス遺伝子２タンパク質、
タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１、あ
るいはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである、請求項７７－７９のいずれか１
つに記載の組成物。

【請求項81】

疾病は、疾患または障害である、請求項７９に記載の組成物。

【請求項82】

疾患または障害は腎臓病である、請求項８０に記載の組成物。

【請求項83】

腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積症、巣状分節性糸球体硬
化症７、乳頭腎症候群、または幼児の高カルシウム血症である請求項８２に記載の組成物
。

【請求項84】

標的タンパク質およびＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、遺伝子によってコードされ、ここで
遺伝子は、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤである、請求項８２ま
たは８３に記載の組成物。

【請求項85】

アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンにおいて、保持されたイントロンの
５’スプライス部位に対する＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対
する－１６の領域内にある、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項７７－
８４のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項86】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋６９から、保持されたイントロンの３’スプラ
イス部位に対する－７９の領域内にある、請求項７７－８４のいずれか１つに記載の組成
物。

【請求項87】

標的タンパク質はシスチノシンである、請求項７７－８６のいずれか１つに記載の組成
物。

【請求項88】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に対する－５００の領域内にある、請求項８７に記載の組成物。

【請求項89】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、または１００％相補的な配列を含む、請求項８７または８８に記載の組
成物。

【請求項90】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８または１０７
３４の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を備えた
配列を含む、請求項８７－８９のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項91】

ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８のいずれか１つに対して少なく
とも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００
％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項８７－９０のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項92】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７に対して少なくとも
約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の
配列同一性を備えた配列を含む、請求項８７－９１のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項93】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、請求項８７－９２のいずれか１つに記載の組成
物。

【請求項94】

標的タンパク質は、ペアードボックス遺伝子２タンパク質である、請求項７７－８６の
いずれか１つに記載の組成物。

【請求項95】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に対する－５００の領域内にある、請求項９４に記載の組成物。

【請求項96】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８６２３のい
ずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％または１００％相補的である配列を含む、請求項９４または９５に記載の組
成物。

【請求項97】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３８または１０７
４０の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を備えた
配列を含む、請求項９４－９６のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項98】

ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８６２３のいずれか１つに対して少なくと
も約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％
の配列同一性を備えた配列を含む、請求項９４－９７のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項99】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１５のいずれか１つに対して
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項９４－９８のいずれか１つに記載の組
成物。

【請求項100】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、請求項９４－９９のいずれか１つに記載の組成
物。

【請求項101】

標的タンパク質は、タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ
、ポリペプチド１である、請求項７７－８６のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項102】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に対する－５００の領域内にある、請求項１０１に記載の組成物。

【請求項103】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％または１００％相補的である配列を含む、請求項１０１または１０２に記
載の組成物。

【請求項104】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８、１０７３４
、１０７４６、１０７４５または１０７４１の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域
に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１０１－１０３のいずれか１
つに記載の組成物。

【請求項105】

ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３のいずれか１つに対して少なく
とも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００
％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１０１－１０４のいずれか１つに記載の組成
物。

【請求項106】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６－１９のいずれか１つに対して
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１０１－１０５のいずれか１つに記載
の組成物。

【請求項107】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、請求項１０１－１０６のいずれか１つに記載の
組成物。

【請求項108】

標的タンパク質は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである、請求項７７－８
６のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項109】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に対する－５００の領域内にある、請求項１０８に記載の組成物。

【請求項110】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいずれ
か１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％または１００％相補的である配列を含む、請求項１０８または１０９に記載の組
成物。

【請求項111】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３６、１０７４７
、１０７３９、１０７４３、１０７４２、１０７３７、１０７３５、または１０７４４の
少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を備えた配列を
含む、請求項１０８－１１０のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項112】

ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいずれか１つに対して少なくとも約
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配
列同一性を備えた配列を含む、請求項１０８－１１１のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項113】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－９のいずれか１つに対して少な
くとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１０
０％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１０８－１１２のいずれか１つに記載の組
成物。

【請求項114】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、請求項１０８－１１３のいずれか１つに記載の
組成物。

【請求項115】

アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンにおいて、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋６から＋１００の領域、
または、
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する－１６から－１００の領域
、
の内部にある、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項７７－８４、およ
び、８７－１１４のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項116】

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス
部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’ス
プライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にある、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の一部を標的とする、請求項７７－８４、および、８７－１１４のいずれか１つに記載の
組成物。

【請求項117】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋
２ｅから－４ｅの領域、または、
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋
２ｅから－４ｅの領域、
の内部にある、請求項７７－８４、および、８７－１１４のいずれか１つに記載の組成
物。

【請求項118】

アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能ＲＮＡをコードする遺伝子から
転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより標的タンパク質
または機能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項７７－１１７のいずれか１つに記載の組
成物。

【請求項119】

アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の
突然変異から結果として生じる異常スプライシングを調節することにより機能的ＲＮＡま
たは機能的タンパク質の量を増加させない、請求項７７－１１８のいずれか１つに記載の
組成物。

【請求項120】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、全長ｍＲＮＡ前駆体または野生型ｍＲＮＡ前駆体からの部
分的スプライシングによって生成された、請求項７７－１１９のいずれか１つに記載の組
成物。

【請求項121】

標的タンパク質または機能ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長成熟ｍＲＮＡまたは野
生型成熟ｍＲＮＡである、請求項７７－１２０のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項122】

生成される標的タンパク質は、全長タンパク質または野生型タンパク質である、請求項
７７－１２１のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項123】

保持されたイントロンは律速イントロンである、請求項７７－１２２のいずれか１つに
記載の組成物。

【請求項124】

前記保持されたイントロンは、前記ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体で最も豊富な保持されたイ
ントロンである、請求項７７－１２３のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項125】

保持されたイントロンは、前記ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体で２番目に豊富な保持されたイ
ントロンである、請求項７７－１２３のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項126】

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合
を含む骨格修飾を含む、請求項７７－１２５のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項127】

前記アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項７７
－１２６のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項128】

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチ
ド核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、または２’－Ｏ－メトキシエチル部分を含
む、請求項７７－１２７のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項129】

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項７７－１
２８のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項130】

各糖部は、修飾された糖部である、請求項１２９に記載の組成物。

【請求項131】

アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～４０の核酸塩基、８～３５の核
酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～２０の核酸塩基、８～１５の核
酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～３５の核酸塩基、９～３０の核
酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～１５の核酸塩基、１０～５０の
核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基、１０～３０の核酸塩基、１０
～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の核酸塩基、１１～５０の核酸塩
基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１～３０の核酸塩基、１１～２５
の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩基、１２～５０の核酸塩基、１
２～４０核酸塩基、１２～３５核酸塩基、１２～３０の核酸塩基、１２～２５の核酸塩基
、１２～２０の核酸塩基、または１２～１５の核酸塩基から成る、請求項７７－１３０の
いずれか１つに記載の組成物。

【請求項132】

アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部
分に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５
％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、請求項７７－
１３１のいずれか１つに記載の組成物。

【請求項133】

請求項７７－１３２の組成物のいずれかのアンチセンスオリゴマー、および賦形剤を含
む、医薬組成物。

【請求項134】

腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または静脈内注射により請求項１３３に記載の医
薬組成物を投与することによって、被験体を処置する方法。

【請求項135】

不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物の
標的配列にハイブリダイズするアンチセンスオリゴマーであって、不足したＣＴＮＳ、Ｐ
ＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物が保持されたイントロンを
含み、アンチセンスオリゴマーが、不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１または
ＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘
発する、アンチセンスオリゴマーと、
薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む、医薬組成物。

【請求項136】

不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物は
、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物である、請求項１３５に記載の医薬組成物。

【請求項137】

ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標
的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイントロンの５’スプライス部位
に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する－５００の
領域内にある、請求項１３５または１３６に記載の医薬組成物。

【請求項138】

ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１－４のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、
８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性
を有する遺伝子配列によってコードされる、請求項１３５または１３６に記載の医薬組成
物。

【請求項139】

ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－１９のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％
、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一
性を備えた配列を含む、請求項１３５または１３６に記載の医薬組成物。

【請求項140】

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合
を含む骨格修飾を含む、請求項１３５に記載の医薬組成物。

【請求項141】

アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１３５に
記載の医薬組成物。

【請求項142】

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチ
ド核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、または２’－Ｏ－メトキシエチル部分を含
む、請求項１３５に記載の医薬組成物。

【請求項143】

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項１３５に
記載の医薬組成物。

【請求項144】

アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～４０の核酸塩基、８～３５の核
酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～２０の核酸塩基、８～１５の核
酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～３５の核酸塩基、９～３０の核
酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～１５の核酸塩基、１０～５０の
核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基、１０～３０の核酸塩基、１０
～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の核酸塩基、１１～５０の核酸塩
基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１～３０の核酸塩基、１１～２５
の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩基、１２～５０の核酸塩基、１
２～４０の核酸塩基、１２～３５核酸塩基、１２～３０核酸塩基、１２～２５の核酸塩基
、１２～２０の核酸塩基、または１２～１５の核酸塩基を含む、請求項１３５に記載の医
薬組成物。

【請求項145】

アンチセンスオリゴマーは、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤの
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に対して、少なくとも８０％、少なくとも
８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、
または１００％相補的である、請求項１３５または１３６に記載の医薬組成物。

【請求項146】

ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００３４－１０７４８から選択される配列
内にある、請求項１３５または１３６に記載の医薬組成物。

【請求項147】

アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７３３のいずれか１つに
対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性であるヌクレオチド配列を含む、
請求項１３５に記載の医薬組成物。

【請求項148】

アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７３３から選択されるヌ
クレオチド配列を含む、請求項１３５に記載の医薬組成物。

【請求項149】

医薬組成物は、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または
静脈内注射のために製剤される、請求項１３５－１４８のいずれか１つに記載の医薬組成
物。

【請求項150】

ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の機能形態をコー
ドする、十分に処理されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲ
ＮＡ転写産物を産生するために、保持されたイントロンの除去を促進する、ＣＴＮＳ、Ｐ
ＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物の処理を誘発する方法であ
って、前記方法は、
（ａ）アンチセンスオリゴマーを被験体の標的細胞に接触させる工程と、
（ｂ）アンチセンスオリゴマーを、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡ
ＲＤのｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする工程であって、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹ
Ｐ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物が、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ
１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の機能形態をコードすることができ、少なくとも１つの
保持されたイントロンを含む、工程と、
（ｃ）ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の機能形態
をコードする、十分に処理されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ
のｍＲＮＡ転写産物を産生するために、少なくとも１つの保持されたイントロンをＣＴＮ
Ｓ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物から除去する工程と
、
（ｄ）十分に処理されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲ
ＮＡ転写産物から、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質
の機能形態を翻訳する工程と、を含む、方法。

【請求項151】

保持されたイントロンは、保持されたイントロン全体である、請求項１５０に記載の方
法。

【請求項152】

ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物は、ＣＴＮ
Ｓ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物で
ある、請求項１５０または１５１に記載の方法。

【請求項153】

ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の量または活性の
不足によって引き起こされた疾病を有する被験体を処置する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２０－１０７３３のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の
配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴマーを被験体に投与する
工程を含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１５年１２月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／２６７，２４
２号の利益を主張し、該仮出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列リストへの言及
本出願は配列表を包含しており、これは、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマ
ットで提出され、その全体が引用により本明細書に組み込まれる。２０１６年１２月１２
日に作成されたＡＳＣＩＩのコピーは、４７９９１－７１５＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔのフ
ァイル名であり、４，３５１，０５９バイトのサイズである。前述のファイルは２０１６
年１２月１２日に作成され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

腎臓病は、腎臓の損傷に関連する疾病の衰弱性かつ潜在的には致命的な群である。腎臓
は、限定されないが、廃棄物と過剰な流体を取り除き、血液中の塩分と無機質の平衡を維
持し、および血圧を調節することによる血液の浄化を含む身体中の多くの機能に重要であ
る。腎臓病の発生率はしばしば流体や廃棄物の蓄積、嘔吐、脱力、浅眠、および息切れを
もたらし、最終的には死に至る危険さえあり得る。腎臓移植はしばしば死亡率を防ぐ一方
で、ドナーの腎臓を受け取る見込みは一般に低い。

【0004】

腎臓に関連する多くの疾患や疾病があるが、腎臓病の一部は、遺伝子の発現における欠
失と同様に遺伝子産物における欠失によって進行することが分かっている。例えば、ＣＴ
ＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１、およびＰＰＡＲＤ。

【発明の概要】

【0005】

１つの態様において、本明細書では、被験体の細胞により標的タンパク質または機能的
ＲＮＡの発現を増加させることによって被験体の腎臓病を処置する方法が開示され、ここ
で、該細胞は、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）を
有し、該ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接
しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードし、該方法は、
被験体の細胞を、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆
体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、そ
れによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内
で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的
タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる。

【0006】

いくつかの実施形態において、腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチ
ン蓄積症、巣状分節性糸球体硬化症７、乳頭腎（Ｐａｐｉｌｌｏｒｅｎａｌ）症候群、あ
るいは幼児の高カルシウム血症である。

【0007】

１つの態様において、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前
駆体）を有している細胞によって、標的タンパク質の発現を増加させる方法が本明細書で
提供され、該ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイントロン
の５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は標的タン
パク質をコードし、該方法は、細胞を、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前
駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、
それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ
前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、標的タンパク質をコードするｍＲ
ＮＡのレベルを増加させ、細胞内で標的タンパク質の発現を増加させ、ここで、標的タン
パク質は、シスチノシン（ｃｙｓｔｉｎｏｓｉｎ）、タンパク質ペアードボックス遺伝子
２タンパク質、タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ、ポリ
ペプチド１、あるいはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである。

【0008】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、シスチノシン（ｃｙｓｔｉｎｏｓｉｎ）
、タンパク質ペアードボックス遺伝子２タンパク質、タンパク質シトクロムＰ４５０ファ
ミリー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１、あるいはペルオキシソーム増殖因子活
性化受容体δである。

【0009】

いくつかの実施形態において、標的タンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において
量あるいは活性が不足している標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡを機能的に増大させ
るか、これに取って代わる、補償タンパク質あるいは補償機能的ＲＮＡである。

【0010】

いくつかの実施形態では、細胞は、標的タンパク質の量または活性の不足によって引き
起こされた疾病を有する被験体内にあるか、または被験体に由来する。

【0011】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質の量の不足は、標的タンパク質のハプロ不全
によって引き起こされ、ここで被験体は、機能的な標的タンパク質をコードする第１の対
立遺伝子、標的タンパク質が産生されない第２の対立遺伝子、または非機能的な標的タン
パク質をコードする第２の対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺
伝子から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合する。

【0012】

いくつかの実施形態において、被験体は、標的タンパク質の量または機能の不足に起因
する障害により引き起こされた疾病を抱えており、ここで、被験体は、標的タンパク質が
野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、標的タンパク質が
同等の野性型タンパク質と比較して機能が低下した形態で生成され、あるいは、標的タン
パク質が生成されない、第１の変異対立遺伝子と、および、標的タンパク質が野生型対立
遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、標的タンパク質が同等の野性
型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成され、あるいは、標的タンパク質が
生成されない、第２の変異対立遺伝子とを有し、ここで、被験体が第１の変異対立遺伝子
（ａ）（ｉｉｉ）を有するとき、第２の変異対立遺伝子は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（
ｉｉ）であり、ここで、被験体が第２の変異対立遺伝子（ｂ）（ｉｉｉ）を有するとき、
第１の変異対立遺伝子は（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）であり、ここで、ＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）である第１の変異対立遺伝子、
および／または、（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）である第２の変異対立遺伝子から
転写される。

【0013】

いくつかの実施形態において、標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して
、機能が低下した形態で生成される。

【0014】

いくつかの実施形態において、標的タンパク質は、同等な野性型タンパク質と比較して
、十分に機能的な形態で生成される。

【0015】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイン
トロンの５’スプライス部位に対して＋６～保持されたイントロンの３’スプライス部位
に対して－１６までの領域内の保持されたイントロンにある。

【0016】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイン
トロンの５’スプライス部位に対して＋６９～保持されたイントロンの３’スプライス部
位に対して－７９までの領域内の保持されたイントロンにある。

【0017】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質はシスチノシンである。

【0018】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイン
トロンの５’スプライス部位に対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス
部位に対して－５００までの領域内の保持されたイントロンにある。

【0019】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：８６２４－１００６８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０
％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む。

【0020】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０７４８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３４の少なくとも８つの隣接する核
酸を含む領域に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、
９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0021】

いくつかの実施形態において、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８
のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％
、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0022】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備
えた配列を含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対し
て少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％また
は１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0024】

いくつかの実施形態において、標的タンパク質はペアードボックス遺伝子２タンパク質
である。

【0025】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイン
トロンの５’スプライス部位に対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス
部位に対して－５００までの領域内の保持されたイントロンにある。

【0026】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６９５３－８６２３のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む。

【0027】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０７３８またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４０の少なくとも８つの隣接する核
酸を含む領域に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、
９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0028】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９
５３－８６２３のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、
９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－
１５のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0029】

いくつかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対し
て少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あ
るいは１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0030】

いくつかの実施形態において、標的タンパク質はタンパク質シトクロムＰ４５０ファミ
リー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１である。

【0031】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイン
トロンの５’スプライス部位に対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス
部位に対して－５００までの領域内の保持されたイントロンにある。

【0032】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：９５２０－１０７３３のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０
％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む。

【0033】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０７４８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４６
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４５、あるいはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４１の少なく
とも８つの隣接する核酸を含む領域に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0034】

いくつかの実施形態において、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３
のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％
、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0035】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
－１９のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、
９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0036】

いくつかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対し
て少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あ
るいは１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0037】

いくつかの実施形態において、標的タンパク質はペルオキシソーム増殖因子活性化受容
体δである。

【0038】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイン
トロンの５’スプライス部位に対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス
部位に対して－５００までの領域内の保持されたイントロンにある。

【0039】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２０－６９５２のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む。

【0040】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０７３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３９
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４２、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０７３７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３５、あるいはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０７４４の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して少なくとも８０％、８５％
、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を
備えた配列を含む。

【0041】

いくつかの実施形態において、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいず
れか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0042】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－
９のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７
％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む。

【0043】

いくつかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対し
て少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あ
るいは１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0044】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、以下の内部の保
持されたイントロンにある：保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６
から＋１００の領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する－
１６から－１００の領域。

【0045】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持され
たイントロンの５’スプライス部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの
保持されたイントロンの３’スプライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内に
あるＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。

【0046】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、以下の内部にあ
る：保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ～－４ｅ
の領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の
＋２ｅ～－４ｅの領域。

【0047】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、機能的ＲＮＡまたは標的タ
ンパク質をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調
節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない。

【0048】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能
的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節すること
により、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない。

【0049】

いくつかの実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部
分的なスプライシング、または野生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシングによっ
て生成された。

【0050】

いくつかの実施形態において、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮ
Ａは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あるいは野生型の成熟ｍＲＮＡである。

【0051】

いくつかの実施形態において、生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは
野生型のタンパク質である。

【0052】

いくつかの実施形態において、いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマー
と接触させた細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍ
ＲＮＡの総量は、対照細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコー
ドするｍＲＮＡの総量と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約
１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１
．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約
２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍
、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、
少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、
少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１
０倍増加する。

【0053】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞によって生成
された標的タンパク質の総量は、対照細胞によって生成された標的タンパク質の総量と比
較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、
約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～
約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍
、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約
７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少
なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少
なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する。

【0054】

いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合または
ホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む。

【0055】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホ
リノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、あるいは２’
－Ｏ－メトキシエチル部分を含む。

【0056】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された
糖部を含む。

【0057】

いくつかの実施形態において、それぞれの糖部は修飾された糖部である。

【0058】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～
４０の核酸塩基、８～３５の核酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～
２０の核酸塩基、８～１５の核酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～
３５の核酸塩基、９～３０の核酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～
１５の核酸塩基、１０～５０の核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基
、１０～３０の核酸塩基、１０～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の
核酸塩基、１１～５０の核酸塩基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１
～３０の核酸塩基、１１～２５の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩
基、１２～５０の核酸塩基、１２～４０の核酸塩基、１２～３５の核酸塩基、１２～３０
の核酸塩基、１２～２５の核酸塩基、１２～２０の核酸塩基、あるいは１２～１５の核酸
塩基からなる。

【0059】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲ
ＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９
０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補
的である。

【0060】

いくつかの実施形態において、細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードす
る遺伝子から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮ
Ａ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセン
スオリゴマーは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団で最も豊富な保持されたイントロンに結
合する。

【0061】

いくつかの実施形態において、最も豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンス
オリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成す
るためにＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプラ
イシングアウトを誘発する。

【0062】

いくつかの実施形態において、細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードす
る遺伝子から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮ
Ａ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセン
スオリゴマーは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団で２番目に豊富な保持されたイントロン
に結合する。

【0063】

いくつかの実施形態において、２番目に豊富な保持されたイントロンに対するアンチセ
ンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生
成するためにＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのス
プライシングアウトを誘発する。

【0064】

いくつかの実施形態では、疾病は、疾患また障害である。

【0065】

いくつかの実施形態において、疾患または障害は腎臓病である。

【0066】

いくつかの実施形態において、腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチ
ン蓄積症、巣状分節性糸球体硬化症７、乳頭腎症候群、あるいは幼児の高カルシウム血症
である。

【0067】

いくつかの実施形態において、標的タンパク質とＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、遺伝子に
よってコードされ、ここで、遺伝子はＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１、あるいはＰ
ＰＡＲＤである。

【0068】

いくつかの実施形態において、当該方法はタンパク質発現を評価する工程をさらに含む
。

【0069】

いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。

【0070】

いくつかの実施形態では、被験体はヒト以外の動物である。

【0071】

いくつかの実施形態において、被験体は胎児、胚、あるいは子供である。

【0072】

いくつかの実施形態では、細胞はエクスビボである。

【0073】

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、被験体の腹腔内注射、筋肉
内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって投与される。

【0074】

いくつかの実施形態において、５’スプライス部位に隣接するエクソンの－３ｅ～－１
ｅと、保持されたイントロンの＋１～＋６にある９つのヌクレオチドは、対応する野性型
配列と同一である。

【0075】

いくつかの実施形態において、保持されたイントロンの－１５～－１と３’スプライス
部位に隣接するエクソンの＋１ｅにある１６のヌクレオチドは、対応する野性型配列と同
一である。

【0076】

１つの態様では、本明細書に記載された方法で使用されるようなアンチセンスオリゴマ
ーが本明細書で提供される。

【0077】

１つの態様では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７３３のいずれか１つに対して少な
くとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは
１００％の配列同一性を備えた配列を含むアンチセンスオリゴマーが本明細書で提供され
る。

【0078】

１つの態様では、本明細書に記載されたアンチセンスオリゴマーと賦形剤を含む医薬組
成物が本明細書に提供される。

【0079】

１つの態様では、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって本
明細書に記載された医薬組成物を投与することにより、被験体を処置する方法が本明細書
に提供される。

【0080】

１つの態様において、不足しているタンパク質または不足している機能的ＲＮＡに関連
している被験体の腎臓病を処置するために、細胞によって標的タンパク質あるいは機能的
ＲＮＡの発現を増加させる方法で使用されるアンチセンスオリゴマーを含む組成物が本明
細書で提供され、ここで、不足しているタンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体におい
て量あるいは活性が不足しており、ここで、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質
または機能的ＲＮＡをコードする、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体）の構成的のスプライシングを増強し、ここで、標的タンパク質は：不足
しているタンパク質；あるいは、被験体において不足しているタンパク質を機能的に増大
させるか、これに取って代わる、補償タンパク質であり、ここで、機能的ＲＮＡは：不足
しているＲＮＡ；あるいは、被験体の不足している機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか
、これに取って代わる、補償機能的ＲＮＡであり、ここでＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、保
持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライ
ス部位に隣接しているエクソンを含み、保持されたイントロンは、標的タンパク質または
機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体からスプライシングされ、それによっ
て、被験体において標的タンパク質または機能的ＲＮＡの産生または活性を増加させる。

【0081】

いくつかの実施形態において、腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチ
ン蓄積症、巣状分節性糸球体硬化症７、乳頭腎症候群、あるいは幼児の高カルシウム血症
である。

【0082】

１つの態様において、被験体において標的タンパク質に関係する疾病を処置する方法に
使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物が本明細書で提供され、該方法は、
被験体の細胞によって標的タンパク質の発現を増加させる工程を含み、ここで、細胞は、
保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエク
ソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含む
、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）を有し、ＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質をコードし、該方法は、細胞をアンチセンスオリゴ
マーと接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質
をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物から構成的にスプライシングされ、それ
により、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの
レベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させる。

【0083】

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、シスチノシン（ｃｙｓｔｉｎｏｓｉｎ）
、タンパク質ペアードボックス遺伝子２タンパク質、タンパク質シトクロムＰ４５０ファ
ミリー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１、あるいはペルオキシソーム増殖因子活
性化受容体δである。

【0084】

幾つかの実施形態では、疾病は、疾患また障害である。

【0085】

幾つかの実施形態では、疾患または障害は腎臓病である。

【0086】

幾つかの実施形態では、腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積
症、巣状分節性糸球体硬化症７、乳頭腎症候群、または幼児の高カルシウム血症である。

【0087】

幾つかの実施形態では、標的タンパク質およびＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、遺伝子によ
ってコードされ、ここで遺伝子は、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲ
Ｄである。

【0088】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンにおいて、
保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋６から、保持されたイントロンの
３’スプライス部位に対する－１６の領域内にある、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の一部を標
的とする。

【0089】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロン
において、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋６９から、保持された
イントロンの３’スプライス部位に対する－７９の領域内にある。

【0090】

幾つかの実施形態では、標的タンパク質はシスチノシンである。

【0091】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロン
において、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持され
たイントロンの３’スプライス部位に対する－５００の領域内にある。

【0092】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８
６２４－１００６８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５
％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的である配列を含む。

【0093】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０７４８または１０７３４の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なく
とも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％
の配列同一性を有する配列を含む。

【0094】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１
００６８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％
、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0095】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１
７に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0096】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少
なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１
００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0097】

幾つかの実施形態では、標的タンパク質は、ペアードボックス遺伝子２タンパク質であ
る。

【0098】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロン
において、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持され
たイントロンの３’スプライス部位に対する－５００の領域内にある。

【0099】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
９５３－８６２３のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である配列を含む。

【0100】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０７３８または１０７４０の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なく
とも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％
の配列同一性を有する配列を含む。

【0101】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８
６２３に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0102】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１５の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0103】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少
なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１
００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0104】

幾つかの実施形態では、標的タンパク質は、タンパク質シトクロムＰ４５０のファミリ
ー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１である。

【0105】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロン
において、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持され
たイントロンの３’スプライス部位に対する－５００の領域内にある。

【0106】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９
５２０－１０７３３のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的である配列を含む。

【0107】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０７４８、１０７３４、１０７４６、１０７４５または１０７４１の少なくとも８つの隣
接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、
９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0108】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１
０７３３に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0109】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６－１９の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0110】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少
なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１
００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0111】

幾つかの実施形態では、標的タンパク質は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ
である。

【0112】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロン
において、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持され
たイントロンの３’スプライス部位に対する－５００の領域内にある。

【0113】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
０－６９５２のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９
７％、９８％、９９％または１００％相補的である配列を含む。

【0114】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０７３６、１０７４７、１０７３９、１０７４３、１０７４２、１０７３７、１０７３５
、または１０７４４の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８
０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列
同一性を有する配列を含む。

【0115】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５
２に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0116】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－９のいず
れか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0117】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少
なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１
００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0118】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンにおいて、
保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋６から＋１００の領域；または保
持されたイントロンの３’スプライス部位に対する－１６から－１００の領域内にある、
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。

【0119】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイン
トロンの５’スプライス部位の約１００のヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持
されたイントロンの３’スプライス部位の約１００のヌクレオチド上流までの領域内にあ
る、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。

【0120】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロン
の５’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋２ｅから－４ｅの領域；または
保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋２ｅから
－４ｅの領域内にある。

【0121】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能ＲＮＡ
をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節するこ
とにより標的タンパク質または機能ＲＮＡの量を増加させない。

【0122】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能ＲＮＡ
をコードする遺伝子の突然変異から結果として生じる異常スプライシングを調節すること
により標的タンパク質または機能ＲＮＡの量を増加させない。

【0123】

幾つかの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、全長ｍＲＮＡ前駆体または野生型
ｍＲＮＡ前駆体から部分的スプライシングによって産生された。

【0124】

幾つかの実施形態では、標的タンパク質または機能ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全
長成熟ｍＲＮＡまたは野生型成熟ｍＲＮＡである。

【0125】

幾つかの実施形態では、産生される標的タンパク質は、全長タンパク質または野生型タ
ンパク質である。

【0126】

幾つかの実施形態では、保持されたイントロンは、律速の（ｒａｔｅ－ｌｉｍｉｔｉｎ
ｇ）イントロンである。

【0127】

幾つかの実施形態では、前記保持されたイントロンは、前記ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体で
最も豊富な保持されたイントロンである。

【0128】

幾つかの実施形態では、保持されたイントロンは、前記ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体で２番
目に豊富な保持されたイントロンである。

【0129】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホ
スホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む。

【0130】

幾つかの実施形態では、前記アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオ
チドである。

【0131】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ
、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、または２’－Ｏ－
メトキシエチル部分を含む。

【0132】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部
を含む。

【0133】

幾つかの実施形態では、各糖部は、修飾された糖部である。

【0134】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～４０の
核酸塩基、８～３５の核酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～２０の
核酸塩基、８～１５の核酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～３５の
核酸塩基、９～３０の核酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～１５の
核酸塩基、１０～５０の核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基、１０
～３０の核酸塩基、１０～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の核酸塩
基、１１～５０の核酸塩基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１～３０
の核酸塩基、１１～２５の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩基、１
２～５０の核酸塩基、１２～４０核酸塩基、１２～３５核酸塩基、１２～３０の核酸塩基
、１２～２５の核酸塩基、１２～２０の核酸塩基、または１２から１５の核酸塩基から成
る。

【0135】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも
９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補
的である。

【0136】

一態様では、本明細書には、本明細書に記載されるアンチセンスオリゴマー、および賦
形剤を含む、医薬組成物が提供される。

【0137】

一態様において、本明細書には、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または静脈内注
射により本明細書に記載される医薬組成物を投与することによって、必要としている被験
体を処置する方法が提供される。

【0138】

一態様において、本明細書には医薬組成物が提供され、該医薬組成物は、不足したＣＴ
ＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイ
ブリダイズするアンチセンスオリゴマーであって、ここで不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、
ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物が、保持されたイントロンを含み、
アンチセンスオリゴマーが、不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡ
ＲＤのｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する
、アンチセンスオリゴマー；および薬学的に許容可能な賦形剤を含む。

【0139】

幾つかの実施形態では、不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲ
ＤのｍＲＮＡ転写産物は、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物である。

【0140】

幾つかの実施形態では、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲ
ＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイントロンの５’
スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対
する－５００の領域内にある。

【0141】

幾つかの実施形態では、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１－４のいずれか１つに対して、
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。

【0142】

幾つかの実施形態では、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ；５－１９のいずれか１つに対して
、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％また
は１００％の配列同一性を有する配列を含む。

【0143】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホ
スホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む。

【0144】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチド
である。

【0145】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ
、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、または２’－Ｏ－
メトキシエチル部分を含む。

【0146】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部
を含む。

【0147】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～４０の
核酸塩基、８～３５の核酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～２０の
核酸塩基、８～１５の核酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～３５の
核酸塩基、９～３０の核酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～１５の
核酸塩基、１０～５０の核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基、１０
～３０の核酸塩基、１０～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の核酸塩
基、１１～５０の核酸塩基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１～３０
の核酸塩基、１１～２５の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩基、１
２～５０の核酸塩基、１２～４０の核酸塩基、１２～３５核酸塩基、１２～３０核酸塩基
、１２～２５の核酸塩基、１２～２０の核酸塩基、または１２～１５の核酸塩基を含む。

【0148】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４
Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に対して、少なく
とも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８
％、少なくとも９９％、または１００％相補的である。

【0149】

幾つかの実施形態では、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００３４－１０７４
８から選択される配列内にある。

【0150】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７
３３のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性であるヌク
レオチド配列を含む。

【0151】

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７
３３から選択されるヌクレオチド配列を含む。

【0152】

幾つかの実施形態では、医薬組成物は、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内
注射、皮下注射、または静脈内注射のために製剤される。

【0153】

一態様において、本明細書には、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲ
Ｄのタンパク質（次のものを含む方法）の機能形態をコードする、十分に処理されたＣＴ
ＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物を産生するために
、不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物の
処理を誘発し、保持されたイントロンの除去を促進する方法が提供され、該方法は、アン
チセンスオリゴマーを被験体の標的細胞に接触させる工程；アンチセンスオリゴマーを、
不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物にハ
イブリダイズする工程であって、不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰ
ＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物が、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ
のタンパク質の機能形態をコードすることができ、少なくとも１つの保持されたイントロ
ンを含む、工程；ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の
機能形態をコードする、十分に処理されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰ
ＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物を産生するために、少なくとも１つの保持されたイントロン
を不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物か
ら除去する工程；および十分に処理されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰ
ＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物から、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲ
Ｄのタンパク質の機能形態を翻訳する工程を含む。

【0154】

幾つかの実施形態では、保持されたイントロンは、保持されたイントロン全体である。

【0155】

幾つかの実施形態では、不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲ
ＤのｍＲＮＡ転写産物は、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物である。

【0156】

一態様において、本明細書には、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲ
Ｄのタンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体を処置
する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７３３のいずれか１つに
対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列含むア
ンチセンスオリゴマーを被験体に投与する工程を含む。

【0157】

引用による組み込み
本明細書で言及されるすべての公報、特許、および特許出願は、個々の公報、特許、特
許出願が引用によって組み込まれるように具体的且つ個々に示される程度まで、引用によ
って本明細書に組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【0158】

本発明の新規な特徴は、特に添付の請求項に明記されている。本発明の原則が利用され
る例示の実施形態について説明する以下の詳細な記載と、添付の図面を参照することで、
本発明の特徴および利点についてのよりよい理解が得られるであろう。

【0159】

【図1】図１は、典型的な保持されたイントロン含有（ＲＩＣ）ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の概略図を示す。５’スプライス部位コンセンサス配列は、－３ｅから－１ｅおよび＋１から＋６（「ｅ」と標識された数字はエクソンであり、標識されていない数字はイントロンである）まで下線を引かれた文字（文字はヌクレオチドである；大文字：エクソン部分、および小文字：イントロン部分）で示されている。３’スプライス部位コンセンサス配列は、－１５から－１および＋１ｅ（「ｅ」と標識された数字はエクソンであり、標識されていない数字はイントロンである）まで下線を引かれた文字（文字はヌクレオチドである；大文字：エクソン部分、および小文字：イントロン部分）で示されている。ＡＳＯスクリ－ニングのためのイントロン標的領域は、保持されたイントロンの５’スプライス部位（左の矢印）に対するヌクレオチド＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位（右の矢印）に対するヌクレオチド－１６までを含む。実施形態では、ＡＳＯスクリ－ニングのためのイントロン標的領域は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド＋６から＋１００、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に対するヌクレオチド－１６から－１００を含む。エクソン標的部位は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋２ｅから－４ｅ、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋２ｅから－４ｅのヌクレオチドを含む。「ｎ」または「Ｎ」はヌクレオチドを表し、「ｙ」はピリミジンを表す。図示された配列は、哺乳動物のスプライス部位に対するコンセンサス配列を表わし、個々のイントロンおよびエクソンは、すべての位置でコンセンサス配列に一致する必要はなない。

【図2A】図２Ａは、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）の典型的な概略図を示す。図２Ａは、核と細胞質の区画に分割された細胞を示す。核内では、エクソン（長方形）およびイントロン（接続線）から成る標的遺伝子のｍＲＮＡ前駆体の転写産物が、ｍＲＮＡを生成するためにスプライシングを受け、このｍＲＮＡは、細胞質に輸送され、標的タンパク質に翻訳される。この標的遺伝子に関して、イントロン１のスプライシングは非効率的であり、保持されたイントロン含有（ＲＩＣ）ｍＲＮＡ前駆体は、主として核内に蓄積し、細胞質に輸送された場合は劣化し、標的タンパク質の産生にはつながらない。

【図2B】図２Ｂは、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）の典型的な概略図を示す。図２Ｂは、核と細胞質の区画に分割された図２Ａと同じ細胞の一例を示す。アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）での処置は、イントロン１のスプライシングを促進し、結果としてｍＲＮＡの増加をもたらし、これは順に、高レベルの標的タンパク質に翻訳される。

【図3A】図３Ａは、ＮＭ＿００４９３７およびＮＭ＿００１０３１６８１に対応するＣＴＮＳのためのＲｅＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される。

【図3B】図３Ｂは、ＮＭ＿００４９３７およびＮＭ＿００１０３１６８１に対応するＣＴＮＳのためのＲｅＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのＰＩＲが示される。

【図3C】図３Ｃは、偽処理した細胞と比較した、８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ－１９細胞におけるイントロン１０なしでのＣＴＮＳ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。

【図4A】図４Ａは、ＮＭ＿０００７８２およびＮＭ＿００１１２８９１５に対応するＣＹＰ２４Ａ１のためのＲｅＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのＰＩＲが示される。

【図4B】図４Ｂは、ＮＭ＿０００７８２およびＮＭ＿００１１２８９１５に対応するＣＹＰ２４Ａ１のためのＲｅＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのＰＩＲが示される。

【図4C】図４Ｃは、偽処理した細胞と比較した、８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ－１９細胞におけるイントロン１０なしでのＣＹＰ２４Ａ１ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。

【図5】図５は、ＮＭ＿００１３０４５６９、ＮＭ＿０００２７８、ＮＭ＿００３９９０、ＮＭ＿００３９８８、ＮＭ＿００３９８７およびＮＭ＿００３９８９に対応するＰＡＸ２のためのＲｅＳｅｑ遺伝子の概略を示す。

【図6A】図６Ａは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤのためのＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン３、ＮＭ＿００６２３８）。

【図6B】図６Ｂは、偽処理した細胞と比較した、８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ－１９細胞におけるイントロン１０なしでのＰＰＡＲＤ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。

【図6C】図６Ｃは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤのためのＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン４、ＮＭ＿００６２３８）。

【図6D】図６Ｄは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤのためのＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン５、ＮＭ＿００６２３８）。

【図6E】図６Ｅは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤのためのＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン６、ＮＭ＿００６２３８）。

【図6F】図６Ｆは、偽処理した細胞と比較した、８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ－１９細胞におけるイントロン１０なしでのＰＰＡＲＤ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。

【図6G】図６Ｇは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤのためのＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン７、ＮＭ＿００６２３８）。

【発明を実施するための形態】

【0160】

腎不全は、米国だけで６００，０００を超える人に影響を与えると推測される衰弱した
状態である。多くの場合、透析は寿命を延ばすことができ、２００９年の試験によると、
概算で４００，０００人の患者が腎透析を受けている。さらに、腎不全に苦しむ多数の患
者にとっての唯一の望みは腎臓移植であるが、ドナープールは、それを必要とする患者の
わずか少数の処置に十分であるだけである。それ故、移植を受ける確率は低く、移植を受
けることができない人の状態を改善することができる処置はほとんどない。それ故、腎臓
病を処置する組成物および方法が必要とされている。

【0161】

１つを超えるイントロンを有するタンパク質コード遺伝子の一次転写産物における個々
のイントロンは、異なる効率性を有する一次転写産物からスプライシングされる。ほとん
どの場合、完全にスプライシングされたｍＲＮＡだけが、続く細胞質での翻訳のために核
膜孔を通って輸送される。スプライシングされていない又は部分的にスプライシングされ
た転写産物は、核内で検出可能である。完全にスプライシングされていない転写産物の核
内蓄積が、タンパク質に翻訳され得る細胞質中の有害である可能性のあるｍＲＮＡの蓄積
を防ぐメカニズムであると一般的に考えられる。幾つかの遺伝子に関して、最も効率性の
低いイントロンのスプライシングは、細胞質中での翻訳に先立つ、遺伝子発現における転
写後の律速の工程である。

【0162】

腎臓病のサブセットにおいて不足しているタンパク質をコードする、かなりのレベルの
遺伝子の部分的にスプライシングされた転写産物が、ヒト細胞の核内で発見されてきた。
これらのｍＲＮＡ前駆体の種は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む。本発明
は、完全にスプライシングされた成熟ｍＲＮＡの安定した状態の産生を増加させる、およ
びそれ故、翻訳された－タンパク質レベルを増加させるために、遺伝子発現の核ステージ
に対して律速的である１つ以上の保持されたイントロンのスプライシングをアップレギュ
レートするための組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、核内に蓄
積する保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体のイントロンスプライス部位で構成的ス
プライシングを促進するアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）を活用する。したがって、実
施形態では、タンパク質不足によって引き起こされた疾病を処置するために本発明の方法
を使用して、タンパク質が増加される。

【0163】

本明細書に記載される本発明によって処置することができる腎臓病は、被験体において
遺伝子産物が不足している疾患であり、ここで遺伝子産物の不足は腎臓病を引き起こす。

【0164】

これらのＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１およびＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ前駆体の種
は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む。本発明は、完全にスプライシングさ
れた成熟ｍＲＮＡの安定した状態の産生を増加させる、およびそれ故、翻訳されたＣＴＮ
Ｓ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質レベルを増加させるために
、遺伝子発現の核ステージに対して律速的である１つ以上の保持されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ
２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのイントロンのスプライシングをアップレギュレー
トするための組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、核内に蓄積す
る保持されたイントロン含有ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍ
ＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）のイントロンスプライス部位で構成的スプライ
シングを促進するアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）を活用することができる。したがっ
て、実施形態では、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤの不足によっ
て引き起こされた疾病を処置するために本発明の方法を使用して、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、
ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質が増加される。

【0165】

他の実施形態では、本発明の方法は、必要としている被験体の症状を処置するために、
ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤの産生を増加させるために使用さ
れ得る。実施形態では、被験体は、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲ
Ｄが野生型と比較して必ずしも不足していない疾病を有し、その場合、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ
２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤの増加は、それにもかかわらず疾病を軽減する。実
施形態では、疾病は、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのハプロ不
全によって引き起こされ得る。

【0166】

腎障害シスチン蓄積症／遅発性シスチン蓄積症
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性腎障害
の幼児腎障害シスチン蓄積症を処置するために使用されうる。幼児腎障害シスチン蓄積症
は、リソソーム中のシスチンの蓄積によって特徴づけられる。幼児腎障害シスチン蓄積症
の臨床症状は、低血糖および電解質、尿中のタンパク質の過剰排泄、遅い身体発育、弱い
骨、甲状腺機能低下症、失明、筋力低下、肺機能障害および腎不全を含む。典型的には幼
児腎障害性シスチン蓄積症は幼児期に診断される。

【0167】

いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性腎障害
の遅発性シスチン蓄積症を処置するために使用されうる。遅発性シスチン蓄積症は幼児型
として類似の臨床症状を有するが、遅発型は、典型的には青年期後期または成人早期のい
ずれかにおいて現われる。

【0168】

タンパク質シスチノシン（ＣＴＮＳ）の不足は、幼児腎障害シスチン蓄積症および遅発
性シスチン蓄積症の両方において見られる臨床症状を結果としてもたらす。１７ｑ１３．
２に位置し、１２エクソンに及ぶＣＴＮＳ遺伝子は、ＣＴＮＳタンパク質をコードする。
不十分な量のＣＴＮＳタンパク質を結果としてもたらすＣＴＮＳ遺伝子の突然変異が、幼
児腎障害シスチン蓄積症および遅発性シスチン蓄積症の両方の進行の原因であることが示
されてきた。ある研究では、Ｇ１６９Ｄミスセンス変異が、幼児腎障害シスチン蓄積症の
患者において発見された。このミスセンス変異は結果としてＣＴＮＳのレベルを減少させ
、ＣＴＮＳの不足と、幼児腎障害シスチン蓄積症の進行との間の明確な関係を提供した。

【0169】

巣状分節性糸球体硬化症７／乳頭腎症候群
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性腎障害
巣状分節性糸球体硬化症７（ＦＳＧＳ７）を処置するために使用することができる。ＦＳ
ＧＳ７は成人における腎不全の主要原因のうち１つである。ＦＳＧＳ７は浮腫、低アルブ
ミン血症、高脂血症および高血圧症を特徴づけ、最終的に腎不全を結果としてもたらす。

【0170】

いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性腎障害
の乳頭腎症候群（ＰＡＰＲＳ）を処置するために使用することができる。ＰＡＰＲＳは、
低形成腎、低異形成、多嚢胞性異形性腎、寡巨大糸球体症、腎不全、および膀胱尿管逆流
によって特徴づけられる。

【0171】

タンパク質ペアードボックス遺伝子２（ＰＡＸ２）の欠失は、ＦＳＧＳ７およびＰＡＰ
ＲＳの両方において見られる臨床症状を結果としてもたらす。１０ｑ２４．３１に位置し
、１２エクソンに及ぶＰＡＸ２遺伝子は、ＰＡＸ２タンパク質をコードする。不十分な量
のＰＡＸ２タンパク質を結果としてもたらすＰＡＸ２遺伝子の突然変異が、ＦＳＧＳ７お
よびＰＡＰＲＳの両方の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、Ｇ７６Ｓ
のミスセンス変異がＰＡＰＲＳで苦しむ家族の５世代において発見された。このミスセン
ス変異は結果としてＰＡＸ２タンパク質のレベルを減少させ、ＰＡＸ２タンパク質の不足
と、ＰＡＰＲＳの進行との間の明確な関係を提供した。

【0172】

幼児高カルシウム血症
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性腎疾患
の幼児高カルシウム血症を処置するために使用されうる。幼児高カルシウム血症は、腎結
石、骨痛、腹痛症、吐き気、嘔吐、多尿症、ならびにうつ病、不安症、認知機能障害、不
眠症、および昏睡などの精神状態を結果としてもたらしうる、血液中の上昇したカルシウ
ムのレベルによって特徴づけられる。

【0173】

タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１（
ＣＹＰ２４Ａ１）の不足は、幼児高カルシウム血症において見られる臨床症状を結果とし
てもたらす。２０ｑ１３．２に位置し、２エクソンに及ぶＣＹＰ２４Ａ１遺伝子は、ＣＹ
Ｐ２４Ａ１タンパク質をコードする。不十分な量のＣＹＰ２４Ａ１タンパク質を結果とし
てもたらすＣＹＰ２４Ａ１遺伝子の突然変異が、幼児高カルシウム血症の進行の原因であ
ることが示されてきた。ある研究では、幼児高カルシウム血症と診断された多数の子供た
ちが調査された。Ｒ３９６ＷまたはＥ３２２Ｋのミスセンス変異を示す子供たちは、ＣＹ
Ｐ２４Ａ１活性の完全な破壊（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｂｌａｔｉｏｎ）を受けることが示
され、Ｌ４０９Ｓの突然変異を示す子供たちは、少ないが測定可能なレベルを保持した。
この発見により、減少したＣＹＰ２４Ａ１タンパク質と、幼児高カルシウム血症の臨床症
状との間の明確な関係が提供される。

【0174】

脂質代謝機能障害および慢性腎疾患
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明は、タンパク質ペルオキシソー
ム増殖剤応答性受容体δ（ＰＰＡＲＤ）の不足により引き起こされた、脂質代謝不全、慢
性腎臓病（ＣＫＤ）、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、または心血管疾患（ＣＶＤ）を治療する
ために使用される。染色体６に位置し、８エクソンに及ぶＰＰＡＲＤ遺伝子によりコード
されるＰＰＡＲＤタンパク質の量の欠失は、増大した脂質代謝の機能障害に関連づけられ
ることが示されてきた。

【0175】

保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）
実施形態では、本発明の方法は、遺伝子から転写され、かつ本明細書において記載され
る疾患において不足していることが分かるタンパク質をコードする保持されたイントロン
含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）の存在を、細胞核中で活用する。成熟し
、完全にスプライシングされたｍＲＮＡを産出するための、特定のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆
体の種のスプライシングは、保持されたイントロンのスプライシングアウトを刺激するＡ
ＳＯを用いて誘導される。結果としてもたらされる成熟ｍＲＮＡは、細胞質に輸送され翻
訳され、それによって被験体の細胞中のタンパク質量を増加させ、本明細書で記載される
疾患または疾病の症状を緩和する。実施形態では、本発明の方法は、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２
、ＣＹＰ２４Ａ１、またはＰＰＡＲＤ遺伝子から転写され、かつＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、Ｃ
ＹＰ２４Ａ１、またはＰＰＡＲＤタンパク質をコードする保持されたイントロン含有ｍＲ
ＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）の存在を、細胞核中で活用することができる。成
熟し、完全にスプライシングされたＣＴＮＳ， ＰＡＸ２， ＣＹＰ２４Ａ１、またはＰＰ
ＡＲＤのｍＲＮＡを産出するための、ＣＴＮＳ， ＰＡＸ２， ＣＹＰ２４Ａ１、またはＰ
ＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の種のスプライシングは、保持されたイントロンのス
プライシングアウトを刺激するＡＳＯを用いて誘導されうる。結果としてもたらされる成
熟したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１、またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡは、細胞質に
輸送されて翻訳され、それによって、患者の細胞内でＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ
１、またはＰＰＡＲＤのタンパク質の量を増大させ、かつＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２
４Ａ１、またはＰＰＡＲＤの不足により引き起こされるＣＮＳの疾患または疾病の症状の
緩和させることができる。この方法は以下でさらに詳述されるが、核内遺伝子出力の標的
化増大（ＴＡＮＧＯ）として知られる。

【0176】

実施形態では、保持されたイントロンは、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少
なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少
なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％あるいは少なくとも約５０
％の保定の保持率に基づき、保持されたイントロンとして特定されたイントロンである。
実施形態では、保持されたイントロンはすなわち、約５％から約１００％、約５％から約
９５％、約５％から約９０％、約５％から約８５％、約５％から約８０％、約５％から約
７５％、約５％から約７０％、約５％から約６５％、約５％から約６０％、約５％から約
６５％、約５％から約６０％、約５％から約５５％、約５％から約５０％、約５％から約
４５％、約５％から約４０％、約５％から約３５％、約５％から約３０％、約５％から約
２５％、約５％から約２０％、約５％から約１５％、約１０％から約１００％、約１０％
から約９５％、約１０％から約９０％、約１０％から約８５％、約１０％から約８０％、
約１０％から約７５％、約１０％から約７０％、約１０％から約６５％、約１０％から約
６０％、約１０％から約６５％、約１０％から約６０％、約１０％から約５５％、約１０
％から約５０％、約１０％から約４５％、約１０％から約４０％、約１０％から約３５％
、約１０％から約３０％、約１０％から約２５％、約１０％から約２０％、約１５％から
約１００％、約１５％から約９５％、約１５％から約９０％、約１５％から約８５％、約
１５％から約８０％、約１５％から約７５％、約１５％から約７０％、約１５％から約６
５％、約１５％から約６０％、約１５％から約６５％、約１５％から約６０％、約１５％
から約５５％、約１５％から約５０％、約１５％から約４５％、約１５％から約４０％、
約１５％から約３５％、約１５％から約３０％、約１５％から約２５％、約２０％から約
１００％、約２０％から約９５％、約２０％から約９０％、約２０％から約８５％、約２
０％から約８０％、約２０％から約７５％、約２０％から約７０％、約２０％から約６５
％、約２０％から約６０％、約２０％から約６５％、約２０％から約６０％、約２０％か
ら約５５％、約２０％から約５０％、約２０％から約４５％、約２０％から約４０％、約
２０％から約３５％、約２０％から約３０％、約２５％から約１００％、約２５％から約
９５％、約２５％から約９０％、約２５％から約８５％、約２５％から約８０％、約２５
％から約７５％、約２５％から約７０％、約２５％から約６５％、約２５％から約６０％
、約２５％から約６５％、約２５％から約６０％、約２５％から約５５％、約２５％から
約５０％、約２５％から約４５％、約２５％から約４０％、あるいは約２５％から約３５
％の保定の保持率に基づき、保持されたイントロンとして特定されたイントロンである。
複数の実施形態では、この目的に有用な他のＡＳＯは、例えば、本明細書に記載の方法を
用いて特定される。

【0177】

実施形態では、ＣＴＮＳ イントロンの番号付けは、ＮＭ＿００１０３１６８１または
ＮＭ＿００１０３１６８１におけるｍＲＮＡ配列に相当する。実施形態では、ＣＴＮＳ
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位はイントロン９および／または１０内にある。実施形
態では、ＣＴＮＳ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位はイントロン１０内にある。実施形
態では、保持されたイントロンのパーセントは１８％でありうる。実施形態では、ＣＴＮ
Ｓ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位はイントロン９内にある。実施形態では、保持され
たイントロンのパーセントは１０％でありうる。実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部位へのＡＳＯのハイブリダイゼーションは、結果として、保持されたイントロン
９および／または１０のスプライス部位（５’スプライス部位あるいは３’スプライス部
位）におけるスプライシングの増強と、その後のＣＴＮＳタンパク質産生の増大をもたら
した。異なるＣＴＮＳアイソフォーム配列を参照することで、イントロンの番号付けは変
化しうると解される。当業者であれば、本明細書で提供されるイントロン配列に基づき、
ＮＭ＿００１０３１６８１またはＮＭ＿００１０３１６８１におけるｍＲＮＡ配列を参照
して得られる番号を使用することで、任意のアイソフォームにおける対応する番号を判定
することができる。当業者はさらに、本明細書で提供されるイントロン配列に基づき、Ｎ
Ｍ＿００１０３１６８１またはＮＭ＿００１０３１６８１におけるｍＲＮＡ配列を参照し
て得られるイントロン番号を使用することで、本発明の方法を使用して標的化のための任
意のＣＴＮＳアイソフォームにおける隣接するエクソンの配列を判定することができる。

【0178】

実施形態では、ＰＡＸ２イントロンの番号付けは、ＮＭ＿００１３０４５６９、ＮＭ＿
０００２７８、ＮＭ＿００３９９０、ＮＭ＿００３９８８、ＮＭ＿００３９８７、または
ＮＭ＿００３９８９におけるｍＲＮＡ配列に相当する。実施形態では、ＰＡＸ２ ＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の標的部位はイントロン１または２内にある。実施形態では、ＲＩＣ ｍ
ＲＮＡ前駆体の標的部位へのＡＳＯのハイブリダイゼーションは、結果として、保持され
たイントロン１または２のスプライス部位（５’スプライス部位あるいは３’スプライス
部位）におけるスプライシングの増強と、その後のＰＡＸ２タンパク質産生の増大をもた
らした。異なるＰＡＸ２アイソフォーム配列を参照することで、イントロンの番号付けは
変化しうると解される。当業者は、本明細書において提供されるイントロン配列に基づく
か、またはＮＭ＿００１３０４５６９、ＮＭ＿０００２７８、ＮＭ＿００３９９０、ＮＭ
＿００３９８８、ＮＭ＿００３９８７、もしくはＮＭ＿００３９８９におけるｍＲＮＡ配
列に関して提供される番号を使用して、任意のアイソフォーム中の対応するイントロン番
号を判定することができる。当業者は、本明細書において提供されるイントロン配列に基
づくか、またはＮＭ＿００１３０４５６９、ＮＭ＿０００２７８、ＮＭ＿００３９９０、
ＮＭ＿００３９８８、ＮＭ＿００３９８７、もしくはＮＭ＿００３９８９におけるｍＲＮ
Ａ配列に関して提供されたイントロン番号を使用する本発明の方法を使用して、標的とす
るための任意のＰＡＸ２アイソフォーム中の隣接するエクソンの配列を判定することもで
きる。

【0179】

実施形態では、ＣＹＰ２４Ａ１イントロンの番号付けは、ＮＭ＿０００７８２またはＮ
Ｍ＿００１１２８９１５におけるｍＲＮＡ配列に相当する。実施形態では、ＣＹＰ２４Ａ
１ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位はイントロン１０および／もしくは９、またはイン
トロン１１内にある。実施形態では、ＣＹＰ２４Ａ１ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位
はイントロン９内にある。実施形態では、ＣＹＰ２４Ａ１ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的
部位はイントロン１１内にある。実施形態では、保持されたイントロンのパーセントは２
３％でありうる。実施形態では、ＣＹＰ２４Ａ１ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位はイ
ントロン１０内にある。実施形態では、保持されたイントロンのパーセントは５０％であ
りうる。実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位へのＡＳＯのハイブリダイゼ
ーションは、結果として、保持されたイントロン１０および／もしくは９、またはイント
ロン１１のスプライス部位（５’スプライス部位あるいは３’スプライス部位）における
スプライシングの増強と、その後のＣＹＰ２４Ａ１タンパク質産生の増大をもたらした。
異なるＣＹＰ２４Ａ１アイソフォーム配列を参照することで、イントロンの番号付けは変
化しうると解される。当業者であれば、本明細書で提供されるイントロン配列に基づき、
ＮＭ＿０００７８２またはＮＭ＿００１１２８９１５におけるｍＲＮＡ配列を参照して得
られる番号を使用することで、任意のアイソフォームにおける対応する番号を判定するこ
とができる。当業者はさらに、本明細書で提供されるイントロン配列に基づき、ＮＭ＿０
００７８２またはＮＭ＿００１１２８９１５におけるｍＲＮＡ配列を参照して得られるイ
ントロン番号を使用することで、本発明の方法を使用して標的化のための任意のＣＹＰ２
４Ａ１アイソフォームにおける隣接するエクソンの配列を判定することができる。

【0180】

実施形態では、ＰＰＡＲＤイントロンの番号付けは、ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７
７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９、またはＮＭ＿００１
１７１８２０におけるｍＲＮＡ配列に相当する。実施形態では、ＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の標的部分は、イントロン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしく
は７、および／またはイントロン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６
、もしくは７、もしくは８内にある。実施形態では、ＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部分はイントロン２内にある。実施形態では、ＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部分はイントロン３内にある。実施形態では、ＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部分はイントロン４内にある。実施形態では、ＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部分はイントロン５内にある。実施形態では、ＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部分はイントロン６内にある。実施形態では、ＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部分はイントロン７内にある。実施形態では、ＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部分はイントロン８内にある。実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分
に対するＡＳＯのハイブリダイゼーションは、保持されたイントロンのスプライス部位（
５’スプライス部位または３’スプライス部位）における増強されたスプライシングを結
果としてもたらし、その後ＰＰＡＲＤタンパク質産生を増大させる。異なるＰＰＡＲＤア
イソフォーム配列を参照することで、イントロンの番号付けは変化することもあると解さ
れる。当業者は、本明細書において提供されるイントロン配列に基づくか、またはＮＭ＿
００６２３８， ＮＭ＿１７７４３５， ＮＭ＿００１１７１８１８， ＮＭ＿００１１７
１８１９、もしくはＮＭ＿００１１７１８２０におけるｍＲＮＡ配列に関して提供される
番号を使用して、任意のアイソフォーム中の対応するイントロン番号を判定することがで
きる。当業者は、本明細書において提供されるイントロン配列に基づくか、またはＮＭ＿
００６２３８， ＮＭ＿１７７４３５， ＮＭ＿００１１７１８１８， ＮＭ＿００１１７
１８１９、もしくはＮＭ＿００１１７１８２０におけるｍＲＮＡ配列に関して提供された
イントロン番号を使用する本発明の方法を使用して、標的とするための任意のＰＰＡＲＤ
アイソフォーム中の隣接するエクソンの配列を判定することもできる。

【0181】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＣＴＮＳ， ＰＡＸ２， Ｃ
ＹＰ２４Ａ１、またはＰＰＡＲＤのゲノム配列から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体を
標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＣＴＮＳ， Ｐ
ＡＸ２， ＣＹＰ２４Ａ１、またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の配列を標的とす
る。

【0182】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＣＴＮＳゲノム配列によりコードされたＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保
持されたイントロン９および／または１０を含むＣＴＮＳのゲノム配列によりコードされ
たＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３によってコードされたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体を標的とする。い
くつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７のＲＩＣ ｍＲＮ
Ａ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイン
トロン９および／または１０を含むＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７のＲＩＣ ｍＲＮ
Ａ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書中に開示されるＡ
ＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８および／または１０７３４を標的とする。いくつ
かの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のうちいずれか１つの
配列を含む。

【0183】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＰＡＸ２のゲノム配列によりコードされたＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、
保持されたイントロン１および／または２を含むＰＡＸ２のゲノム配列によりコードされ
たＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２によってコードされたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的
とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１５のうち１つ
以上のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳ
Ｏは、保持されたイントロン１または２を含む、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１５のうち１
つ以上のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、本
明細書中に開示されるＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４０および／または１０７３
８を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８
６２３のうちいずれか１つの配列を含む。

【0184】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＣＹＰ２４Ａ１のゲノム配列によりコードされた
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳ
Ｏは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、またはイントロン１１を含むＣＹ
Ｐ２４Ａ１のゲノム配列によりコードされたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的と
する。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４によってコードされた
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８または１９のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、ま
たはイントロン１１を含むＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８または１９のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書中に開示されるＡＳＯは、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８、１０７３４、１０７４６、１０７４５、および／または
１０７４１を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５
２０－１０７３３のうちいずれか１つの配列を含む。

【0185】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＰＰＡＲＤのゲノム配列によりコードされたＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは
、保持されたイントロン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、および
／または保持されたイントロン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、
もしくは７、もしくは８を含むＰＰＡＲＤのゲノム配列によりコードされたＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１によってコードされたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつ
かの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－９のうち１つ以上のＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイ
ントロン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、および／または保持さ
れたイントロン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、も
しくは８を含むＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－９のうち１つ以上のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３
６、１０７４７、１０７３９、１０７４３、１０７４２、１０７３７、１０７３５、およ
び／または１０７４４を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２０－６９５２のうちいずれか１つの配列を含む。

【0186】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン９および／または１０を含
む、ＣＴＮＳのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体のエクソン９および／または１０を標的とする。
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン９および／または１０を含む
、ＣＴＮＳ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の５’スプライス部位よりも上流（あるいは５’）の
エクソン９および／または１０配列を標的とする。

【0187】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン９および／または１０を含
む、ＣＴＮＳのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体におけるイントロン９および／または１０を標的
とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン９および／または１
０を含む、ＣＴＮＳ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の５’スプライス部位よりも下流（あるいは
３’）のイントロン９および／または１０配列を標的とする。

【0188】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン９および／または１０を含
む、ＣＴＮＳ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の３’スプライス部位よりも上流（あるいは５’）
のイントロン９および／または１０配列を標的とする。

【0189】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン９および／または１０を含
む、ＣＴＮＳのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体におけるエクソン１０および／または１１を標的
とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン９および／または１
０を含む、ＣＴＮＳ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の３’スプライス部位よりも下流（あるいは
３’）のエクソン１０および／または１１配列を標的とする。

【0190】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１または２を含む、ＰＡＸ
２のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体のエクソン１または２を標的とする。いくつかの実施形態で
は、ＡＳＯは、保持されたイントロン１または２を含む、ＰＡＸ２のＲＩＣ ｍＲＮＡ前
駆体の５’スプライス部位よりも上流（あるいは５’）のエクソン１または２配列を標的
とする。

【0191】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１または２を含む、ＰＡＸ
２のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体におけるイントロン１または２を標的とする。いくつかの実
施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１または２を含む、ＰＡＸ２のＲＩＣ ｍ
ＲＮＡ前駆体の５’スプライス部位よりも下流（あるいは３’）のイントロン１または２
配列を標的とする。

【0192】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１または２を含む、ＰＡＸ
２のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の３’スプライス部位よりも上流（あるいは５’）のイント
ロン１または２配列を標的とする。

【0193】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１または２を含む、ＰＡＸ
２のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体におけるエクソン２または３を標的とする。いくつかの実施
形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１または２を含む、ＰＡＸ２のＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の３’スプライス部位よりも下流（あるいは３’）のエクソン２または３配列
を標的とする。

【0194】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、
またはイントロン１１を含む、ＣＹＰ２４Ａ１のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体のエクソン１０
および／もしくは９、またはエクソン１１を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳ
Ｏは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、またはイントロン１１を含む、Ｃ
ＹＰ２４Ａ１のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の５’スプライス部位よりも上流（あるいは５’
）のエクソン１０および／もしくは９、またはエクソン１１配列を標的とする。

【0195】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、
またはイントロン１１を含む、ＣＹＰ２４Ａ１のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体におけるイント
ロン１０および／もしくは９、またはイントロン１１を標的とする。いくつかの実施形態
では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、またはイントロン１１
を含む、ＣＹＰ２４Ａ１のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の５’スプライス部位よりも下流（あ
るいは３’）のイントロン１０および／もしくは９、またはイントロン１１配列を標的と
する。

【0196】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、
またはイントロン１１を含む、ＣＹＰ２４Ａ１のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の３’スプライ
ス部位よりも上流（あるいは５’）のイントロン１０および／もしくは９、またはイント
ロン１１配列を標的とする。

【0197】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、
またはイントロン１１を含む、ＣＹＰ２４Ａ１のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体におけるエクソ
ン１１および／もしくは１０、またはエクソン１２を標的とする。いくつかの実施形態で
は、ＡＳＯは、保持されたイントロン１０および／もしくは９、またはイントロン１１を
含む、ＣＹＰ２４Ａ１のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の３’スプライス部位よりも下流（ある
いは３’）のエクソン１１および／もしくは１０、またはエクソン１２配列を標的とする
。

【0198】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン３、もしくは４、もしくは
５、もしくは６、もしくは７、および／または保持されたイントロン２、もしくは３、も
しくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしくは８を含む、ＰＰＡＲＤのＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体のエクソン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、
および／またはエクソン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしく
は７、もしくは８を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイント
ロン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、および／または保持された
イントロン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしく
は８を含む、ＰＰＡＲＤの５’スプライス部位よりも上流（あるいは５’）のエクソン３
、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、および／またはエクソン２、もし
くは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしくは８の配列を標的と
する。

【0199】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン３、もしくは４、もしくは
５、もしくは６、もしくは７、および／または保持されたイントロン２、もしくは３、も
しくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしくは８を含むＰＰＡＲＤのＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体における、イントロン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もし
くは７、および／またはイントロン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは
６、もしくは７、もしくは８を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持さ
れたイントロン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、および／または
保持されたイントロン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは
７、もしくは８を含む、ＰＰＡＲＤの５’スプライス部位よりも下流（あるいは３’）の
イントロン３、もしくは４、もしくは３、もしくは６、もしくは７、および／またはイン
トロン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしくは８
の配列を標的とする。

【0200】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン３、もしくは４、もしくは
５、もしくは６、もしくは７、および／または保持されたイントロン２、もしくは３、も
しくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしくは８を含む、ＰＰＡＲＤの３’
スプライス部位よりも上流（あるいは５’）のイントロン３、もしくは４、もしくは５、
もしくは６、もしくは７、および／またはイントロン２、もしくは３、もしくは４、もし
くは５、もしくは６、もしくは７、もしくは８の配列を標的とする。

【0201】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロン３、もしくは４、もしくは
５、もしくは６、もしくは７、および／または保持されたイントロン２、もしくは３、も
しくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしくは８を含む、ＰＰＡＲＤのＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体におけるエクソン４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしく
は８、および／またはエクソン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、
もしくは８、もしくは９を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持された
イントロン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、および／または保持
されたイントロン２、もしくは３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、
もしくは８を含む、ＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の３’スプライス部位よりも下
流（あるいは３’）のエクソン４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしくは８、
および／またはエクソン３、もしくは４、もしくは５、もしくは６、もしくは７、もしく
は８、もしくは９の配列を標的とする。

【0202】

タンパク質発現
実施形態では、本明細書において記載される方法が、機能的タンパク質の産生を増加さ
せるために使用される。本明細書で使用されるように、用語「機能的な（ｆｕｎｃｔｉｏ
ｎａｌ）」は、処置される疾患の１つ以上の症状を除去するのに必要とされるタンパク質
の活性または機能の量を指す。実施形態では、部分的な機能的タンパク質の産生を増加さ
せるために、前記方法が使用される。本明細書において使用されるように、用語「部分的
な機能的」は、疾患または疾病の１つ以上の症状を除去または予防するために必要な活性
または機能の量よりも少ない、タンパク質の活性または機能の任意の量を指す。いくつか
の実施形態では、部分的な機能的タンパク質またはＲＮＡは、少なくとも１０％、少なく
とも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０
％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８５％、少なくとも９０
％、または少なくとも９５％の、完全な機能的タンパク質またはＲＮＡに比してより小さ
な活性を持つだろう。

【0203】

実施形態では、該方法は、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体を有する被
験体の細胞によって、タンパク質発現を増加させる方法であり、前記被験体は、本明細書
に記載されたタンパク質の活性量の欠失に起因する、本明細書に記載の疾患を有する。い
くつかの実施形態では、タンパク質量の欠失は、タンパク質のハプロ不全に起因する。そ
のような実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、
タンパク質を産生しない第２の対立遺伝子とを有する。別のそのような実施形態では、被
験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、非機能的タンパク質をコー
ドする第２の対立遺伝子を有する。別のそのような実施形態では、被験体は、機能的タン
パク質をコードする第１の対立遺伝子と、部分的な機能的タンパク質をコードする第２の
対立遺伝子を有する。これらの実施形態のいずれの場合でも、アンチセンスオリゴマーは
、第１の対立遺伝子（機能的タンパク質をコードする）から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ
前駆体の標的部位に結合し、それによって、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイ
ントロンの構成的スプライシングを誘導し、かつ、機能的タンパク質をコードする成熟ｍ
ＲＮＡ量の増加と、被検体の細胞中のタンパク質発現の増加をもたらす。

【0204】

実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、部分
的な機能的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは
、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位、あるいは第２の
対立遺伝子（部分的な機能的タンパク質をコードする）から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ
前駆体の標的部位に結合する。それによって、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体からの保持された
イントロンの構成的スプライシングを誘導し、タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡ量の
増加と、被検体の細胞中の機能的あるいは部分的な機能的タンパク質発現の増加をもたら
す。

【0205】

関連する実施形態では、前記方法は、タンパク質あるいは機能的ＲＮＡの発現を増大
させるためにＡＳＯを用いる方法である。実施形態では、タンパク質をコードするＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体を有する被験体の細胞中の、本明細書に記載のタンパク質発現を増加さ
せるために、ＡＳＯを用いる。その被験体は、タンパク質の量または機能の不足を有する
。

【0206】

実施形態では、疾患または疾病を引き起こすタンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ
前駆体の転写産物は、本明細書に記載されるＡＳＯによって標的化される。いくつかの実
施形態では、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＡＳＯの標
的とされる疾患の原因ではない。例えば、特定の経路における第１のタンパク質の突然変
異または不足がもたらす疾患は、第２のタンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
を標的とし、それによって第２のタンパク質産生が増加することで、改善しうる。いくつ
かの実施形態では、第２のタンパク質の機能は、第１のタンパク質の突然変異または不足
（それは疾患または疾病の原因である）を補うことができる。

【0207】

実施形態では、被験体は、
ａ．第１の変異対立遺伝子であって、そこから、
ｉ）タンパク質が、野生型対立遺伝子からの生成と比較して低下したレベルで生成され
、
ｉｉ）タンパク質が、同等の野生型タンパク質と比較して低下した機能を有する形態で
生成され、または
ｉｉｉ）タンパク質あるいは機能的ＲＮＡは生成されない、
第１の変異対立遺伝子；及び
ｂ．第２の変異対立遺伝子であって、そこから、
ｉ）タンパク質が、野生型対立遺伝子からの生成と比較して低下したレベルで生成され
、
ｉｉ）タンパク質が、同等の野生型タンパク質と比較して低下した機能を有する形態で
生成され、または
ｉｉｉ）タンパク質は生成されない、
第２の変異対立遺伝子を有し、
ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、第１の対立遺伝子および／または第２の対立遺伝子
から転写される。これらの実施形態では、ＡＳＯは、第１の対立遺伝子または第２の対立
遺伝子から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合することで、ＲＩＣ ｍ
ＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘導し、被験体の細
胞中でタンパク質をコードするｍＲＮＡ量の増加を引き起こし、標的タンパク質または機
能的ＲＮＡの発現の増加をもたらす。これらの実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体か
らの保持されたイントロンの構成的スプライシングによって、発現レベルの増加した標的
タンパク質あるいは機能的ＲＮＡは、同等の野性型タンパク質（部分的機能）と比較して
機能が低い、あるいは同等の野性型タンパク質（完全機能）と比較して十分な機能を有す
る、いずれかの形態である。

【0208】

実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルは、例
えば、アンチセンスオリゴマーで処置されない、あるいはＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的
部分と結合しないアンチセンスオリゴマーによって処置される、対照細胞中で生成された
タンパク質をコードするｍＲＮＡの量と比較した時、１．１から１０倍に増加する。

【0209】

実施形態では、タンパク質の量または活性の不足に起因する疾病は、ＡＳＯが標的とす
る保持されたイントロンの選択的または異常なスプライシングに起因する疾病ではない。
実施形態では、タンパク質の量または活性の不足に起因する疾病は、タンパク質をコード
するＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体中の保持されたイントロンの選択的または異常なスプライシ
ングに起因する疾病ではない。実施形態では、選択的または異常なスプライシングは、遺
伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体に生じ得るが、本発明の組成物および方法は、ｍＲＮ
Ａ前駆体中の選択的または異常なスプライシングを妨げず、または修正しない。

【0210】

実施形態では、本発明の方法を使用して処置された被験体は、１つの対立遺伝子から部
分的に機能的タンパク質を発現し、部分的に機能的タンパク質は、フレームシフト変異、
ナンセンス変異、ミスセンス変異、あるいは部分的な遺伝子欠失に起因する。実施形態で
は、本発明の方法を使用して処置された被験体は、１つの対立遺伝子から非機能的タンパ
ク質を発現し、非機能的タンパク質は、１つの対立遺伝子中のフレームシフト変異、ナン
センス変異、ミスセンス変異、あるいは部分的な遺伝子欠失に起因する。実施形態では、
本発明の方法を使用して処置された被験体は、１つの対立遺伝子に全体の遺伝子欠失を有
する。

【0211】

タンパク質発現を増加させるためのＴＡＮＧＯの使用
上述したように、実施形態では、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）は
、タンパク質の発現を増加させるために、本発明の方法において使用される。これらの実
施形態では、タンパク質をコードする保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体）は、細胞核に存在する。保持されたイントロンを含むＲＩＣ ｍＲＮ
Ａ前駆体を有する細胞、５’スプライス部位に隣接するエクソン、および３’スプライス
部位に隣接するエクソンは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位に対して相補的な、アン
チセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触する。ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部位とハイブ
リダイズするＡＳＯは、保持されたイントロンのスプライス部位（５’スプライス部位あ
るいは３’スプライス部位）のスプライシングを強化し、その後の標的タンパク質生成を
増加させる。

【0212】

「ｍＲＮＡ前駆体」と「ｍＲＮＡ前駆体の転写産物」の用語は、交換可能に使用され、
少なくとも１つのイントロンを含む任意のｍＲＮＡ前駆体種を指す。実施形態では、ｍＲ
ＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、５’－７－メチルグアノシン・キャップ
、および／またはポリＡ末端を含む。実施形態では、ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ前駆
体の転写産物は、５’－７－メチルグアノシン・キャップおよびポリＡ末端の両方を含む
。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、５’－７－メチルグアノシン・
キャップ、および／またはポリＡ末端を含まない。タンパク質に翻訳されない場合（ある
いは核から細胞質へと輸送された場合）、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は非増殖性のメッセ
ンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子である。

【0213】

本明細書で使用されるように、「保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体」（「ＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体」）は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含むｍＲＮＡ前駆
体の転写産物である。ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン、保持されたイントロンの３’スプラ
イス部位に隣接するエクソンを含み、標的タンパク質をコードする。「標的タンパク質を
コードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体」は、完全にスプライシングされた時、標的タンパク
質をコードすると解される。「保持されたイントロン」は、同じ遺伝子によってコードさ
れた、例えば隣接するイントロンのような１つ以上の他のイントロンが、同じｍＲＮＡ前
駆体の転写産物からスプライシングアウトされた時に、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物に存在
する任意のイントロンである。幾つかの実施形態では、保持されたイントロンは、標的タ
ンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体中で最も豊富なイントロンである。実施形
態では、保持されたイントロンは、細胞中の標的タンパク質をコードする遺伝子から転写
されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団中で最も豊富なイントロンであり、そのＲＩＣ ｍ
ＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含む。実施形態では、標的タン
パク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団中で最も豊富なイントロンに対し標的
とされるアンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマーが標的にする、あるいは結
合する保持されたイントロンを含む集団中で、２つ以上の保持されたイントロンのスプラ
イシングアウトを誘導する。実施形態では、それにより標的タンパク質をコードする成熟
ｍＲＮＡが生成される。「成熟ｍＲＮＡ」および「完全にスプライシングされたｍＲＮＡ
」の用語は、標的タンパク質をコードする完全にプロセシングされたｍＲＮＡ（例えば、
核から細胞質へと輸送され、標的タンパク質に翻訳されたｍＲＮＡ）、あるいは完全にプ
ロセシングされた機能的ＲＮＡを説明するために、本明細書で交換可能に使用される。「
増殖性ｍＲＮＡ」の用語も、標的タンパク質をコードする完全にプロセシングされたｍＲ
ＮＡを説明するために使用することができる。実施形態では、標的領域は、タンパク質を
コードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体に最も豊富に存在するイントロンである、保持された
イントロン中にある。

【0214】

本明細書で使用されるように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、あるいは「含む（
ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変化形は、
詳細に言及された特徴（例えば、アンチセンスオリゴマーの場合は、定義された核酸塩基
配列）を含むが、他のいかなる特徴をも排除するものではないと解される。したがって、
本明細書で使用されるように、用語「含んでいる」は包括的であり、詳細に言及されてい
ない追加の特徴（例えば、アンチセンスオリゴマーの場合、詳細に言及されていない追加
の核酸塩基の存在）を除外しない。

【0215】

本明細書で提供される組成物及び方法の何れかの実施形態において、「含んでいる」は
、「～から実質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」ま
たは「～から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」と置き換えられ得る。「～から実質
的に成る」という句は、請求項に係る発明の形質や機能に実質的に影響しない特徴と同様
、特定の特徴（例えば核酸塩基配列）を要するように本明細書において使用される。本明
細書で使用されるように、「成る」という用語は、詳細に言及された特徴（例えば核酸塩
基配列）のみの存在を示すために使用される（よって、特定の核酸塩基配列から成るアン
チセンスオリゴマーの場合には、詳細に言及されていない追加の核酸塩基の存在は除外さ
れる）。

【0216】

実施形態では、標的領域は、本明細書に記載されるタンパク質をコードするＲＩＣ ｍ
ＲＮＡ前駆体において２番目に豊富に存在するイントロンである、保持されたイントロン
中にある。例えば、２番目に豊富な保持されたイントロンのヌクレオチド配列の独自性、
特定のヌクレオチド配列を標的とするＡＳＯ設計の容易さ、及び／又はＡＳＯを持つイン
トロンの標的化から結果として生じるタンパク質生成の増加の量により、最も豊富な保持
されたイントロンではなく、２番目に豊富な保持されたイントロンが標的とされ得る。実
施形態では、保持されたイントロンは、細胞中の標的タンパク質をコードする遺伝子から
転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団中において２番目に豊富なイントロンであり、
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含む。実施形態では
、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団において２番目に豊富なア
ンチセンスオリゴマーに標的とされるアンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマ
ーが標的とされるまたは結合する保持されたイントロンを含む集団において、２つ以上の
保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導する。実施形態では、それにより標
的タンパク質をコードする完全にスプライシングされた（成熟）ＲＮＡが生成される。

【0217】

実施形態において、ＡＳＯは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体中の保持されていないイントロ
ン内にある、標的とされた領域に相補的である。実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の標的部分は、保持されていないイントロンの５’スプライス部位に対する＋６から＋１
００の領域；または保持されていないイントロンの３’スプライス部位に対する－１６～
－１００の領域内にある。実施形態において、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保
持されていないイントロンの５’スプライス部位に対して＋１００から、保持されていな
いイントロンの３’スプライス部位に対して－１００までの領域内にある。領域または配
列の場所を特定するために使用されるように、「内（ｗｉｔｈｉｎ）」は、列挙される位
置で残基を含むように理解される。例えば、＋６～＋１００の領域は、＋６および＋１０
０の位置で残基を含む。実施形態では、それにより標的タンパク質をコードする完全にス
プライシングされた（成熟）ＲＮＡが生成される。

【0218】

実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の保持されたイントロンは非効率的にスプライ
シングされたイントロンである。本明細書で使用されるように「非効率的にスプライシン
グされた」は、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体における別のスプライス部位でのスプライシング
の頻度と比較して、保持されたイントロンに隣接しているスプライス部位（５’スプライ
ス部位または３’スプライス部位）での比較的少ない頻度のスプライシングを指し得る。
用語「非効率的にスプライシングされた」はまた、スプライス部位でのスプライシングの
相対速度または動力学を指し、ここでは、「非効率的にスプライシングされた」イントロ
ンは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体における別のイントロンと比較して遅い速度でスプライシ
ングまたは除去され得る。

【0219】

実施形態において、５’スプライス部位、および保持されたイントロンの＋１～＋６に
隣接するエクソンの－３ｅ～－１ｅでの９つのヌクレオチド配列は、対応する野生型の配
列と同一である。実施形態において、保持されたイントロンの－１５～－１、及び３’ス
プライス部位に隣接するエクソンの＋１ｅでの１６のヌクレオチド配列は、対応する野生
型の配列と同一である。本明細書で使用されるように、「野生型の配列」は、生物学およ
び科学情報のＮＣＢＩリポジトリに寄託される公開された参照ゲノムにおける遺伝子のヌ
クレオチド配列を指す（全米バイオテクノロジー情報センター、国立医療図書館、８６０
０ Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ Ｐｉｋｅ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ ＵＳＡ ２０８９４によ
り操作される）。本明細書で使用されるように、「ｅ」で表わされたヌクレオチド位置は
、ヌクレオチドがエクソン（例えば５’スプライス部位に隣接するエクソンまたは３’ス
プライス部位に隣接するエクソン）の配列に存在することを示す。

【0220】

方法は、細胞を、本明細書に記載されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ前駆体の一部
に相補的なＡＳＯと接触させる工程を含み、その結果、タンパク質の発現の増加がもたら
される。本明細書で使用されるように、細胞に「接触させること」または投与することは
、ＡＳＯと細胞が相互に作用するように細胞に最も近づいた状態でＡＳＯを提供する方法
を指す。ＡＳＯと接触される細胞は、細胞を取り入れ、または細胞にＡＳＯを運ぶ。該方
法は、疾病または疾患に関係する又は疾病または疾患に関連する細胞を、ＡＳＯと接触さ
せる工程を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ＡＳＯを細胞型に対して標的とする
、ＡＳＯと疾病または疾患に関係する又は疾病または疾患に関連する細胞との間の接触を
増強する、またはＡＳＯの取り込みを増強するために、さらに修飾され得るか又は別の分
子に結合され得る（例えば、共有結合される）。

【0221】

本明細書で使用されるように、用語「タンパク質生成を増加する」または「標的タンパ
ク質の発現を増加する」は、細胞中のｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質の量を増強する
ことを意味する。「標的タンパク質」は発現／生成の増加が望まれる任意のタンパク質で
もよい。

【0222】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体を発現する細胞を、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写物の標的部
分に相補的なＡＳＯと接触させた結果、ｍＲＮＡ前駆体によりコードされるタンパク質（
例えば標的タンパク質）の量の測定可能な増加がもたらされる。タンパク質の生成を測定
または検出する方法は、当業者に明白であり、例えば、ウェスタンブロッティング、フロ
ーサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査、及びＥＬＩＳＡといった既知の方法を含む。

【0223】

実施形態では、細胞を、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に相補的なＡＳ
Ｏと接触させた結果、ＡＳＯの欠如／処置の欠如における細胞により生成されたタンパク
質の量と比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１
５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、または１０００％生
成されたタンパク質の量の増加がもたらされる。実施形態では、アンチセンスオリゴマー
が接触される細胞により生成されたタンパク質の総量は、対照の化合物により生成される
標的タンパク質の量と比較して、約１．１から約１０倍、約１．５から約１０倍、約２か
ら約１０倍、約３から約１０倍、約４から約１０倍、約１．１から約５倍、約１．１から
約６倍、約１．１から約７倍、約１．１から約８倍、約１．１から約９倍、約２から約５
倍、約２から約６倍、約２から約７倍、約２から約８倍、約２から約９倍、約３から約６
倍、約３から約７倍、約３から約８倍、約３から約９倍、約４から約７倍、４から約８倍
、約４から約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、
少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、
少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍、増加する。対照の化合物は、例えば、
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的でないオリゴヌクレオチドでもよい。

【0224】

幾つかの実施形態では、細胞を、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写物の標的部分に相補的
なＡＳＯと接触させた結果、標的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡを含む、タンパク
質をコード化するｍＲＮＡの量の増加がもたらされる。幾つかの実施形態では、タンパク
質をコードするｍＲＮＡの量、またはタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの量は、ＡＳ
Ｏの欠如／処置の欠如における細胞により生成されたタンパク質の量と比較して、少なく
とも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３
００、３５０、４００、４５０、５００、または１０００％増加される。実施形態では、
タンパク質をコードするｍＲＮＡの総量、またはアンチセンスオリゴマーが接触された細
胞において生成されたタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの総量は、未処置の細胞、例
えば未処置の細胞対照の化合物で処置した細胞において生成される成熟ＲＮＡの量と比較
して、約１．１から約１０倍、約１．５から約１０倍、約２から約１０倍、約３から約１
０倍、約４から約１０倍、約１．１から約５倍、約１．１から約６倍、約１．１から約７
倍、約１．１から約８倍、約１．１から約９倍、約２から約５倍、約２から約６倍、約２
から約７倍、約２から約８倍、約２から約９倍、約３から約６倍、約３から約７倍、約３
から約８倍、約３から約９倍、約４から約７倍、４から約８倍、約４から約９倍、少なく
とも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少
なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、または
少なくとも約１０倍、増加する。対照の化合物は、例えば、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標
的部分に相補的でないオリゴヌクレオチドでもよい。

【0225】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的なスプライシング
本明細書で提供される方法とアンチセンスオリゴヌクレオチドの組成物は、タンパク質
をコードするｍＲＮＡ、或いはタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡのレベルの増加によ
り、細胞、例えば、本明細書に記載されるタンパク質の量または活性の不足により引き起
こされる疾病を患う被験体において、タンパク質の発現を増加させるのに有用である。特
に、本明細書に記載されるような方法と組成物は、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の転写物からの保持されたイントロンの構成的なスプライシングを誘発し、そ
れにより、タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベル、或いはタンパク質をコードする成
熟ｍＲＮＡのレベルを増加させ、且つタンパク質の発現を増加させる。

【0226】

ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的なスプライシングは、Ｒ
ＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から保持されたイントロンを正確に取り除き、ここで、保持された
イントロンには野生型スプライス配列がある。本明細書で使用されるように、構成的なス
プライシングは、遺伝子または対立遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプラ
イシング或いは異常なスプライシングを引き起こす突然変異を伴う、遺伝子または対立遺
伝子から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体からの、保持されたイントロンのスプライシ
ングを包含しない。例えば、保持されたイントロンの構成的なスプライシングは、本明細
書で提供される方法とアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して誘発されるように、ｍ
ＲＮＡ前駆体の異常なスプライシングを調整せず、又はその選択的スプライシングに影響
せず、その結果、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現の増加がもたらされる。

【0227】

実施形態では、構成的なスプライシングは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から保持されたイ
ントロンを正確に取り除き、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、完全に機能的な標的タ
ンパク質または機能的ＲＮＡをコードする、野生型遺伝子または対立遺伝子、或いは多型
遺伝子または対立遺伝子から転写され、及び、遺伝子または対立遺伝子には、保持された
イントロンの選択的スプライシングまたは異常なスプライシングを引き起こす突然変異が
ない。

【0228】

幾つかの実施形態では、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体からの保持され
たイントロンの構成的なスプライシングは、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前
駆体から保持されたイントロンを正確に取り除き、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、
標的遺伝子または機能的ＲＮＡが野生型対立遺伝子からの生成と比較して低下したレベル
で生成される遺伝子または対立遺伝子から転写され、および、遺伝子または対立遺伝子に
は、保持されたイントロンの選択的スプライシングまたは異常なスプライシングを引き起
こす突然変異がない。これら実施形態では、構成的にスプライシングされた保持されたイ
ントロンの正確な除去の結果、同等の野生型タンパク質または機能的ＲＮＡと比較した時
に機能的である標的タンパク質または機能的ＲＮＡの生成がもたらされる。

【0229】

他の実施形態では、構成的なスプライシングは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から保持され
たイントロンを正確に取り除き、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、同等な野生型タン
パク質または機能的ＲＮＡと比較して機能が低下した形態で生成される、標的タンパク質
または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子または対立遺伝子から転写され、及び、遺伝子ま
たは対立遺伝子には、保持されたイントロンの選択的スプライシングまたは異常なスプラ
イシングを引き起こす突然変異がない。これら実施形態では、構成的にスプライシングさ
れた保持されたイントロンの正確な除去の結果、部分的に機能的な標的タンパク質、また
は、同等の野生型タンパク質または機能的ＲＮＡと比較した時に部分的に機能的である機
能的ＲＮＡの生成がもたらされる。

【0230】

構成的なスプライシングによる保持されたイントロンの「正確な除去」は、エクソンの
任意の部分の除去を行わない、イントロン全体の除去を指す。

【0231】

実施形態において、本明細書に記載されるような、または本明細書に記載される任意の
方法で使用されるアンチセンスオリゴマーは、遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選
択的スプライシングまたは異常なスプライシングの調節により、タンパク質をコードする
ｍＲＮＡの量、またはタンパク質の量を増加しない。選択的スプライシングまたは異常な
スプライシングの調節は、例えばＲＴ－ＰＣＲによりＲＮＡ種の配列と長さを分析する既
知の方法により、および本明細書と文献の中で別記された方法を使用して、測定され得る
。実施形態では、選択的または異常なスプライシングの調節は、少なくとも１０％または
１．１倍の対象のスプライシングされた種の量の増加或いは減少に基づいて決定される。
実施形態では、調節は、本発明の方法でタンパク質をコードするｍＲＮＡの増加の決定に
関して本明細書に記載されるように、少なくとも１０％から１００％または１．１から１
０倍であるレベルでの増加または減少に基づいて決定される。

【0232】

実施形態では、方法は、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体が、野生型ｍＲＮＡ前駆体の部分的ス
プライシングによって生成された方法である。実施形態では、方法は、ＲＩＣ ｍＲＮＡ
前駆体が、全長の野生型ｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって生成された方法
である。実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的スプ
ライシングによって生成された。これらの実施形態では、全長のｍＲＮＡ前駆体は、野生
型スプライス部位配列を有する保持されたイントロンのスプライシングと比較して、保持
されたイントロンの正しいスプライシングを損なわない保持されたイントロンのスプライ
ス部位に多型性を有し得る。

【0233】

実施形態では、タンパク質をコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡまたは野生型
成熟ｍＲＮＡである。これらの実施形態では、全長の成熟ｍＲＮＡは、野生型成熟ｍＲＮ
Ａによってコードされたタンパク質の活性と比較して、成熟ｍＲＮＡによってコードされ
た標的タンパク質または機能的ＲＮＡの活性に影響しない多型を有し得る。

【0234】

アンチセンスオリゴマー
本開示の一態様は、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合することによってスプラ
イシングを増強するアンチセンスオリゴマーを含む組成物である。本明細書で使用される
ように、用語「ＡＳＯ」および「アンチセンスオリゴマー」は、交換可能に使用され、ワ
トソン・クリック塩基対またはゆらぎ塩基対（Ｇ－Ｕ）によって標的核酸（例えば、ＲＩ
Ｃ ｍＲＮＡ前駆体）配列にハイブリダイズする、核酸塩基を含む、ポリヌクレオチドな
どのオリゴマーを指す。ＡＳＯは、標的配列に相補的な又はほぼ相補的（例えば、標的配
列に結合し、スプライス部位でスプライシングを増強させるのに十分な相補性）である正
確な配列を有し得る。ＡＳＯは、標的核酸（例えば、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部
分）に結合し（ハイブリダイズし）、生理学的条件下でハイブリダイズされたままである
ように設計されている。典型的に、ＡＳＯは、意図した（標的とされた）核酸配列以外の
部位にハイブリダイズする場合、標的核酸でない限られた数の配列に（標的核酸以外の少
数の部位に）ハイブリダイズする。ＡＳＯの設計は、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部
分の核酸配列、或いはゲノムまたは細胞のｍＲＮＡ前駆体またはトランスクリプトームに
おける他の場所での十分に類似した核酸配列の発生を考慮に入れることができ、その結果
、ＡＳＯが他の部位に結合し「オフターゲット」効果を引き起こす可能性は限定される。
例えば、発明の名称「Ｒｅｄｕｃｉｎｇ Ｎｏｎｓｅｎｓｅ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍＲＮ
Ａ Ｄｅｃａｙ」のＷＯ２０１５／０３５０９１として公開されたＰＣＴ国際出願番号Ｐ
ＣＴ／ＵＳ２０１４／０５４１５１におけるものなどの、当業者に既知のアンチセンスオ
リゴマーは、本明細書に記載される方法を実施するために使用され得る。

【0235】

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、標的核酸またはＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分
に「特異的にハイブリダイズする」または「特異的」である。典型的に、そのようなハイ
ブリダイゼーションは、３７℃より実質的に高い融解温度（Ｔｍ）で、好ましくは少なく
とも５０℃で、および典型的に６０℃からおよそ９０℃の間で生じる。そのようなハイブ
リダイゼーションは、好ましくは、厳しいハイブリダイゼーション条件に対応している。
与えられたイオン強度およびｐＨで、Ｔｍは、標的配列の５０％が相補的オリゴヌクレオ
チドにハイブリダイズする温度である。

【0236】

オリゴヌクレオチドなどのオリゴマーは、ハイブリダイゼーションが２つの一本鎖ポリ
ヌクレオチド間の逆平行構成で生じるときに、互いに「相補的」である。二本鎖ポリヌク
レオチドは、ハイブリダイゼーションが第１のポリヌクレオチドの鎖の１つと第２のポリ
ヌクレオチドの鎖の１つとの間に生じる場合に、別のポリヌクレオチドに「相補的」であ
り得る。相補性（１つのポリヌクレオチドが別のポリヌクレオチドと相補的である程度）
は、一般に容認された塩基対合則に従って、互いに水素結合を形成すると予期される対向
する鎖における塩基の割合（例えばパーセンテージ）の点から数量化できる。アンチセン
スオリゴマー（ＡＳＯ）の配列は、ハイブリダイズするその標的核酸の配列に１００％相
補的である必要はない。特定の実施形態では、ＡＳＯは、標的とされる標的核酸配列内の
標的部位に対する、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくと
も８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％
、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列相補性を含むことができる。例えば
、オリゴマー化合物の２０の核酸塩基のうちの１８が標的部位に相補的であり、それ故、
特異的にハイブリダイズするＡＳＯは、９０パーセントの相補性を表わす。この例におい
て、残りの相補的でない核酸塩基は、ともにクラスター化され得るか、または相補的な核
酸塩基と分散され（ｉｎｔｅｒｓｐｅｒｓｅｄ）、互いに又は相補的な核酸塩基に隣接し
ている必要はない。ＡＳＯの標的核酸の領域とのパーセント相補性は、ＢＬＡＳＴプログ
ラム（基礎的なローカルアライメント検索ツール）および当該技術分野で既知のＰｏｗｅ
ｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏ
ｌ．， １９９０， ２１５， ４０３－４１０； Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｍａｄｄｅｎ
， Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．， １９９７， ７， ６４９－６５６）を慣例的に使用し
て判定され得る。

【0237】

ＡＳＯは、標的配列におけるすべての核酸塩基にハイブリダイズする必要はなく、それ
がハイブリダイズする核酸塩基は、隣接しているか又は隣接していないかもしれない。Ａ
ＳＯは、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の１つ以上のセグメントにわたってハイブリダイズし
得、その結果、介在する又は隣接するセグメントは、ハイブリダイゼーション事象に関係
しない（例えば、ループ構造またはヘアピン構造が形成され得る）。特定の実施形態では
、ＡＳＯは、標的ｍＲＮＡ前駆体の転写産物において隣接していない核酸塩基にハイブリ
ダイズする。例えば、ＡＳＯは、ＡＳＯがハイブリダイズしない１つ以上の核酸塩基によ
って分離される、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物における核酸塩基にハイブリダイズすること
ができる。

【0238】

本明細書に記載されるＡＳＯは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に存在する核酸塩
基に相補的である核酸塩基を含む。用語「ＡＳＯ」は、オリゴヌクレオチド、および標的
ｍＲＮＡ上の相補的な核酸塩基にハイブリダイズすることができる核酸塩基を含むが、ペ
プチド核酸（ＰＮＡ）などの糖部を含まない、他のオリゴマー分子を具体化する。ＡＳＯ
は、自然発生のヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、修飾されたヌクレオチド、または
それらの２つ又は３つの任意の組み合わせを含み得る。用語「自然発生のヌクレオチド」
は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。用語「修飾されたヌクレ
オチド」は、修飾された又は置換された糖類及び／又は修飾された骨格を有するヌクレオ
チドを含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯのヌクレオチドのすべてが、修飾されたヌク
レオチドである。本明細書に記載される方法および組成物と適合性のあるＡＳＯの化学修
飾およびＡＳＯの成分は、当業者に明白であり、例えば、米国特許第８，２５８，１０９
号Ｂ２、米国特許第５，６５６，６１２号、米国特許公開番号２０１２／０１９０７２８
、およびＤｉａｓ ａｎｄ Ｓｔｅｉｎ，Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００２
，３４７－３５５で見ることができ、それら全体が引用によって本明細書に組み込まれる
。

【0239】

ＡＳＯの核酸塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルなどの自
然発生の未修飾の核酸塩基、または標的ｍＲＮＡ前駆体上に存在する核酸塩基との水素結
合が可能であるように未修飾の核酸塩基に十分に類似している合成または修飾された核酸
塩基であり得る。修飾された核酸塩基の例としては、限定されないが、ヒポキサンチン、
キサンチン、７－メチルグアニン、５，６－ジヒドロウラシル、５－メチルシトシン、お
よび５－ヒドロキシメチルシトシンが挙げられる。

【0240】

本明細書に記載されるＡＳＯはまた、オリゴマーの成分に結合する骨格構造を含む。用
語「骨格構造」および「オリゴマー結合」は、交換可能に使用され、ＡＳＯの単量体間の
結合を指し得る。自然発生のオリゴヌクレオチドでは、骨格は、オリゴマーの糖部を結合
する３’－５’ホスホジエステル結合を含む。本明細書に記載されるＡＳＯの骨格構造ま
たはオリゴマー結合は、（限定されないが）ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート
、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホ
ラニラデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホラミデート（ｐｈｏｓｐ
ｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）などを含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃ ｅｔ ａｌ
．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４），Ｓｔｅｉｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８），Ｚｏｎ
ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ６：５３９（１９９
１）；Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏ
ｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７－１０８（Ｆ．Ｅｃ
ｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒ
ｄ Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，１５１，
５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ ａｎｄ Ｐｅｙｍａｎ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ
９０：５４３（１９９０）を参照。幾つかの実施形態では、ＡＳＯの骨格構造は、亜リ
ン酸を含有していないが、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、またはカルバミン酸塩、ア
ミド、および直鎖および環式の炭化水素基を含む連結基において、ペプチド結合を含有し
ている。幾つかの実施形態では、骨格修飾は、ホスホロチオエート結合である。幾つかの
実施形態では、骨格修飾は、ホスホラミデート結合である。

【0241】

実施形態では、ＡＳＯ骨格のリンヌクレオチド間の結合の各々での立体化学は、ランダ
ムである。実施形態では、ＡＳＯ骨格のリンヌクレオチド間の結合の各々での立体化学は
、制御され、ランダムではない。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出
願公開番号２０１４／０１９４６１０，「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ」は、核
酸オリゴマーにおいて各リン原子でキラリティーの掌性（ｈａｎｄｅｄｎｅｓｓ）を独立
して選択する方法について記載している。実施形態では、本発明の方法において使用され
るＡＳＯは、ランダムではないリンヌクレオチド間の結合を有するＡＳＯを含む。実施形
態では、本発明の方法に使用される組成物は、純粋なジアステレオマーＡＳＯを含む。実
施形態では、本発明の方法に使用される組成物は、少なくとも約９０％、少なくとも約９
１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９
５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９
９％、約１００％、約９０％から約１００％、約９１％から約１００％、約９２％から約
１００％、約９３％から約１００％、約９４％から約１００％、約９５％から約１００％
、約９６％から約１００％、約９７％から約１００％、約９８％から約１００％、または
約９９％から約１００％のジアステレオマー純度を有するＡＳＯを含む。

【0242】

実施形態では、ＡＳＯは、そのリンヌクレオチド間の連鎖でＲｐおよびＳｐの構成のラ
ンダムでない混合物を有している。例えば、良好な活性とヌクレアーゼの安定性のバラン
スを達成するために、ＲｐとＳｐの混合がアンチセンスオリゴヌクレオチドに求められる
ことが示唆されてきた（Ｗａｎ，ｅｔ ａｌ．，２０１４，「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｂｉ
ｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉ
ｖｉｔｙ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇ
ｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｈｉｒａｌ ｐｈｏｓｐｈｏｒｏ
ｔｈｉｏａｔｅ ｌｉｎｋａｇｅｓ」Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
４２（２２）：１３４５６－１３４６８、参照により本明細書に組み込まれる）。実施形
態では、本発明の方法において使用されるＡＳＯは、約５～１００％のＲｐ、少なくとも
約５％のＲｐ、少なくとも約１０％のＲｐ、少なくとも約１５％のＲｐ、少なくとも約２
０％のＲｐ、少なくとも約２５％のＲｐ、少なくとも約３０％のＲｐ、少なくとも約３５
％のＲｐ、少なくとも約４０％のＲｐ、少なくとも約４５％のＲｐ、少なくとも約５５％
のＲｐ、少なくとも約６０％のＲｐ、少なくとも約６５％のＲｐ、少なくとも約７０％の
Ｒｐ、少なくとも約７５％のＲｐ、少なくとも約８０％のＲｐ、少なくとも約８５％のＲ
ｐ、少なくとも約９０％のＲｐ、または少なくとも約９５％のＲｐと、残りのＳｐ、ある
いは約１００％のＲｐを含む。実施形態では、本発明の方法において使用されるＡＳＯは
、約１０％から約１００％のＲｐ、約１５％から約１００％のＲｐ、約２０％から約１０
０％のＲｐ、約２５％から約１００％のＲｐ、約３０％から約１００％の、約３５％から
約１００％のＲｐ、約４０％から約１００％のＲｐ、約４５％から約１００％のＲｐ、約
５０％から約１００％のＲｐ、約５５％から約１００％のＲｐ、約６０％から約１００％
のＲｐ、約６５％から約１００％のＲｐ、約７０％から約１００％のＲｐ、約７５％から
約１００％のＲｐ、約８０％から約１００％のＲｐ、約８５％から約１００％のＲｐ、約
９０％から約１００％のＲｐ、あるいは約９５％から約１００％のＲｐ、約２０％から約
８０％のＲｐ、約２５％から約７５％のＲｐ、約３０％から約７０％のＲｐ、約４０％か
ら約６０％のＲｐ、あるいは約４５％から約５５％のＲｐと、残りのＳｐを含む。

【0243】

実施形態では、本発明の方法において使用されるＡＳＯは、約５～１００％のＳｐ、少
なくとも約５％のＳｐ、少なくとも約１０％のＳｐ、少なくとも約１５％のＳｐ、少なく
とも約２０％のＳｐ、少なくとも約２５％のＳｐ、少なくとも約３０％のＳｐ、少なくと
も約３５％のＳｐ、少なくとも約４０％のＳｐ、少なくとも約４５％のＳｐ、少なくとも
約５０％のＳｐ、少なくとも約５５％のＳｐ、少なくとも約６０％のＳｐ、少なくとも約
６５％のＳｐ、少なくとも約７０％のＳｐ、少なくとも約７５％のＳｐ、少なくとも約８
０％のＳｐ、少なくとも約８５％のＳｐ、少なくとも約９０％のＳｐ、あるいは少なくと
も約９５％のＳｐと、残りのＲｐ、あるいは約１００％のＳｐを含む。実施形態では、本
発明の方法において使用されるＡＳＯは、約１０％から約１００％のＳｐ、約１５％から
約１００％のＳｐ、約２０％から約１００％のＳｐ、約２５％から約１００％のＳｐ、約
３０％から約１００％のＳｐ、約３５％から約１００％のＳｐ、約４０％から約１００％
のＳｐ、約４５％から約１００％のＳｐ、約５０％から約１００％のＳｐ、約５５％から
約１００％のＳｐ、約６０％から約１００％のＳｐ、約６５％から約１００％のＳｐ、約
７０％から約１００％のＳｐ、約７５％から約１００％のＳｐ、約８０％から約１００％
のＳｐ、約８５％から約１００％のＳｐ、約９０％から約１００％のＳｐ、あるいは約９
５％から約１００％のＳｐ、約２０％から約８０％のＳｐ、約２５％から約７５％のＳｐ
、約３０％から約７０％のＳｐ、約４０％から約６０％のＳｐ、あるいは約４５％から約
５５％のＳｐと、残りのＲｐを含む。

【0244】

本明細書に記載されるＡＳＯのいずれかは、自然発生のヌクレオチド中に存在するよう
な、リボースまたはデオキシリボースを含む糖部、あるいはモルホリン環を含む、修飾さ
れた糖部または糖アナログを含有し得る。修飾された糖部の限定しない例は、２’－Ｏ－
メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミ
ノエチル、２’Ｆ；Ｎ３’－Ｐ５’ホスホラミデート、２’ジメチルアミノオキシエトキ
シ、２’ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’－グアニジニウム（ｇｕａｎｉｄｉｎｉ
ｄｉｕｍ）、２’－Ｏ－グアニジニウムエチル、カルバミン酸塩修飾した糖、および二環
式修飾した糖などの、２’置換基を含む。幾つかの実施形態では、糖部修飾は、２’－Ｏ
－Ｍｅ、２’Ｆ、および２’ＭＯＥから選択される。幾つかの実施形態では、糖部修飾は
、ロックド核酸（ＬＮＡ）におけるような追加の架橋結合である。幾つかの実施形態では
、糖アナログは、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）などのモルホリン環を含有
している。幾つかの実施形態では、糖部は、リボフラノシルまたは２’デオキシリボフラ
ノシルの修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、２’４’抑制された（ｃｏｎｓｔ
ｒａｉｎｅｄ）２’Ｏ－メチルオキシエチル（ｃＭＯＥ）修飾を含む。幾つかの実施形態
では、糖部は、ｃＥｔ ２’，４抑制された２’－ＯエチルＢＮＡ修飾を含む。幾つかの
実施形態では、糖部は、トリシクロＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）修飾を含む。幾つかの実施形態
では、糖部は、エチレン核酸（ＥＮＡ）修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、Ｍ
ＣＥ修飾を含む。修飾は当該技術分野で既知であり、文献、例えば、Ｊａｒｖｅｒ，ｅｔ
ａｌ．，２０１４，「Ａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｖｉｅｗ ｏｆ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ Ｅｘｏｎ Ｓｋｉｐｐｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｒｕ
ｇ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ
２４（１）：３７－４７に記載され、これは、この目的のための引用によって本明細書
に組み込まれる。

【0245】

幾つかの例では、ＡＳＯの各単量体は、同じ方法で修飾され、例えば、ＡＳＯの骨格の
各結合はホスホロチオエート結合を含み、または各リボース糖部は２’Ｏ－メチル修飾を
含む。ＡＳＯの単量体成分の各々の上に存在する、そのような修飾は、「均一な修飾」と
呼ばれる。幾つかの例では、異なる修飾の組み合わせが望まれ得、例えば、ＡＳＯは、ホ
スホロジアミデート結合とモルホリン環を含む糖部（モルホリノ）との組み合わせを含み
得る。ＡＳＯへの異なる修飾の組み合わせは、「混合修飾」または「混合化学作用」と呼
ばれる。

【0246】

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、１つ以上の骨格修飾を含む。幾つかの実施形態では
、ＡＳＯは、１つ以上の糖部修飾を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、１つ以上の
骨格修飾および１つ以上の糖部修飾を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、２’ＭＯ
Ｅ修飾およびホスホロチオエート骨格を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ホスホ
ロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ペプチ
ド核酸（ＰＮＡ）を含む。本明細書に記載されるＡＳＯのいずれか又はＡＳＯの成分（例
えば、核酸塩基、糖部、骨格）は、ＡＳＯの望ましい特性または活性を達成するために或
いはＡＳＯの望ましくない特性または活性を減少させるために修飾されてもよい。例えば
、ＡＳＯまたはＡＳＯの１つ以上の成分は、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物上の標的配列への
結合親和性を増強する；非標的配列への結合を減少させる；細胞のヌクレアーゼ（つまり
、ＲＮａｓｅ Ｈ）による分解を減少させる；細胞及び／又は細胞の核へのＡＳＯの取り
込みを改善する；ＡＳＯの薬物動態（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）または薬力（
ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ）を変更する；およびＡＳＯの半減期を調節するため
に修飾され得る。

【0247】

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（ＭＯＥ）ホ
スホロチオエート修飾されたヌクレオチドで構成される。そのようなヌクレオチドで構成
されたＡＳＯは、特に、本明細書で開示される方法によく適しており、そのような修飾を
有しているオリゴマーは、ヌクレアーゼ分解に対する著しく増強された耐性および増加し
たバイオアベイラビリティを有すると示されており、これによって、例えば、本明細書に
記載される幾つかの実施形態における経口送達に適するようになる。例えば、Ｇｅａｒｙ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．２００１；２９６（３）
：８９０－７；Ｇｅａｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ
．２００１；２９６（３）：８９８－９０４を参照。

【0248】

ＡＳＯを合成する方法は当業者に既知である。代替的に又は加えて、ＡＳＯは商用源か
ら得てもよい。

【0249】

他に明記されない限り、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物、オリゴヌク
レオチド、ＡＳＯなど）配列の左端は、５’末端であり、一本鎖または二本鎖の核酸配列
の左方向は、５’方向と呼ばれる。同様に、核酸配列（一本鎖または二本鎖）の右端また
は右方向は、３’末端または３’方向である。一般に、核酸中の基準点に対する５’にあ
る領域または配列は、「上流」として言及され、核酸中の基準点に対する３’にある領域
または配列は、「下流」として言及される。一般に、ｍＲＮＡの５’方向または５’末端
は、開始コドン（ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｏｒ ｓｔａｒｔ ｃｏｄｏｎ）が位置する場
所であり、一方で、３’末端または３’方向は、終止コドンが位置する場所である。幾つ
かの態様では、核酸中の基準点の上流にあるヌクレオチドは、負の数によって指定され、
基準点の下流にあるヌクレオチドは、正の数によって指定され得る。例えば、基準点（例
えば、ｍＲＮＡ中のエクソン－エクソン連結）は「ゼロ」部位として指定され得、基準点
に直接隣接し且つその上流にあるヌクレオチドは、「マイナス１」、例えば「－１」と指
定され、一方で、基準点に直接隣接し且つその下流にあるヌクレオチドは、「プラス１」
、例えば「＋１」と指定される。

【0250】

他の実施形態では、ＡＳＯは、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１、またはＰＰＡＲ
Ｄ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体において保持されたイントロンの５’スプライス部位の下流
（３’の方向）である、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１、またはＰＰＡＲＤ ｍＲ
ＮＡ前駆体の標的部分（例えば、５’スプライス部位に対して正の数で示された方向）に
対して相補的である（及び、標的部分に結合する）（図１）。いくつかの実施形態では、
ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して、１から＋４０００、１
から＋３５００、１から＋３０００、１から＋２５００、１から＋２０００、１から＋１
５００、１から＋１０００、１から＋５００、＋２から＋４０００、＋２から＋３５００
、＋２から＋３０００、＋２から＋２５００、＋２から＋２０００、＋２から＋１５００
、＋２から＋１０００、＋２から＋５００、＋２から＋４００、＋２から＋３００、＋２
から＋２００、＋６から＋４０００、＋６から＋３５００、＋６から＋３０００、＋６か
ら＋２５００、＋６から＋２０００、＋６から＋１５００、＋６から＋１０００、＋６か
ら＋５００、＋６から＋４００、＋６から＋３００、＋６から＋２００、または＋６から
＋１００の領域内である、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１、またはＰＰＡＲＤ Ｒ
ＩＣ ＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相補的である。いくつかの実施形態では、ＡＳＯ
は、５’スプライス部位に対して、＋１から＋５までのヌクレオチド（５’スプライス部
位の下流に位置付けられた最初の５つのヌクレオチド）に対して相補的ではない。
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対し
て、＋６から＋５０のヌクレオチドの領域内にあるＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１
、またはＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相補的であることも
ある。
いくつかの態様では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して
＋６から＋９０、＋６から＋８０、＋６から＋７０、＋６から＋６０、＋６から＋５０、
＋６から＋４０、＋６から＋３０、または＋６から＋２０の領域内にあるＣＴＮＳ、ＰＡ
Ｘ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相
補的である。

【0251】

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体において保持されたイント
ロンの３’スプライス部位の上流（５’の方向）にあるＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４
Ａ１またはＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的領域（例えば、負の数で指定され
た方向）に対して相補的である（図１）。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持された
イントロンの３’スプライス部位に対して－１６から－４０００、－１６から－３０００
、－１６から－２０００、－１６から－１０００、－１６から－５００、－１６から－４
００、－１６から－３００、－６から－２００、または－１６から－１００の領域内にあ
る、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の
標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、３’スプライス部位に対し
て、－１から－１５までのヌクレオチド（３’スプライス部位の上流に位置付けられた最
初の１５のヌクレオチド）には相補的ではない。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保
持されたイントロンの３’スプライス部位に対して、－１６から－５０の領域内にあるＣ
ＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部
分に対して相補的である。幾つかの態様では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’ス
プライス部位に対して、－１６から－９０、－１６から－８０、－１６から－７０、－１
６から－６０、－１６から－５０、－１６から－４０、または－１６から－３０の領域内
にある、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆
体の標的部分に相補的である。

【0252】

実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’ス
プライス部位に対する＋１００から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対す
る－１００までの領域内に存在する。

【0253】

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位（上流
）に隣接するエクソンにある、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である（図１）。幾つかの実施形態では、Ａ
ＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソンにおける＋２ｅ
から－４ｅの領域内にあるＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの
実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオ
チド－１ｅから－３ｅに相補的ではない。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持された
イントロンの５’スプライス部位に対して、－４ｅから－１００ｅ、－４ｅから－９０ｅ
、－４ｅから－８０ｅ、－４ｅから－７０ｅ、－４ｅから－６０ｅ、－４ｅから－５０ｅ
、－４ｅから－４０ｅ、－４ｅから－３０ｅ、または－４ｅから－２０ｅの領域内にある
、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の
標的部分に相補的である。

【0254】

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位（下流
）に隣接するエクソン内にあるＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である（図１）。幾つかの実施形態では、Ａ
ＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン内にある、＋２
ｅから－４ｅの領域内にあるＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ Ｒ
ＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保
持されたイントロンの３’スプライス部位に対するヌクレオチド＋１ｅに相補的ではない
。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対し
て、＋２ｅから＋１００ｅ、＋２ｅから＋９０ｅ、＋２ｅから＋８０ｅ、＋２ｅから＋７
０ｅ、＋２ｅから＋６０ｅ、＋２ｅから＋５０ｅ、＋２ｅから＋４０ｅ、＋２ｅから＋３
０ｅ、または＋２ｅから＋２０ｅの領域内にある、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１
またはＰＰＡＲＤ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。ＡＳＯは、ス
プライシングの特異的結合および効果的な増強作用に適する任意の長さでもよい。幾つか
の実施形態では、ＡＳＯは８から５０の核酸塩基から成る。例えば、ＡＳＯは、長さが８
、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２
２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５
、４５または５０の核酸塩基であってもよい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは５０より
も多い核酸塩基から成る。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、８から５０の核酸塩基、
８から４０の核酸塩基、８から３５の核酸塩基、８から３０の核酸塩基、８から２５の核
酸塩基、８から２０の核酸塩基、８から１５の核酸塩基、９から５０の核酸塩基、９から
４０の核酸塩基、９から３５の核酸塩基、９から３０の核酸塩基、９から２５の核酸塩基
、９から２０の核酸塩基、９から１５の核酸塩基、１０から５０の核酸塩基、１０から４
０の核酸塩基、１０から３５の核酸塩基、１０から３０の核酸塩基、１０から２５の核酸
塩基、１０から２０の核酸塩基、１０から１５の核酸塩基、１１から５０の核酸塩基、１
１から４０の核酸塩基、１１から３５の核酸塩基、１１から３０の核酸塩基、１１から２
５の核酸塩基、１１から２０の核酸塩基、１１から１５の核酸塩基、１２から５０の核酸
塩基、１２から４０の核酸塩基、１２から３５の核酸塩基、１２から３０の核酸塩基、１
２から２５の核酸塩基、１２から２０の核酸塩基、１２から１５の核酸塩基、１３から５
０の核酸塩基、１３から４０の核酸塩基、１３から３５の核酸塩基、１３から３０の核酸
塩基、１３から２５の核酸塩基、１３から２０の核酸塩基、１４から５０の核酸塩基、１
４から４０の核酸塩基、１４から３５の核酸塩基、１４から３０の核酸塩基、１４から２
５の核酸塩基、１４から２０の核酸塩基、１５から５０の核酸塩基、１５から４０の核酸
塩基、１５から３５の核酸塩基、１５から３０の核酸塩基、１５から２５の核酸塩基、１
５から２０の核酸塩基、２０から５０の核酸塩基、２０から４０の核酸塩基、２０から３
５の核酸塩基、２０から３０の核酸塩基、２０から２５の核酸塩基、２５から５０の核酸
塩基、２５から４０の核酸塩基、２５から３５の核酸塩基、または２５から３０の核酸塩
基の長さである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが３０のヌクレオチドである。幾
つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２９のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では
、ＡＳＯは長さが２８のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２
７のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２６のヌクレオチドで
ある。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２５のヌクレオチドである。幾つかの実施
形態では、ＡＳＯは長さが２４のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは
長さが２３のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２２のヌクレ
オチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２１のヌクレオチドである。幾つ
かの実施形態では、ＡＳＯは長さが２０のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、
ＡＳＯは長さが１９のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１８
のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１７のヌクレオチドであ
る。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１６のヌクレオチドである。幾つかの実施形
態では、ＡＳＯは長さが１５のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長
さが１４のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１３のヌクレオ
チドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１２のヌクレオチドである。幾つか
の実施形態では、ＡＳＯは長さが１１のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、Ａ
ＳＯは長さが１０のヌクレオチドである。

【0255】

幾つかの実施形態では、異なる化学的性質を有するが、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の同じ
標的部分に相補的である２つ以上のＡＳＯが使用される。幾つかの実施形態では、ＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の異なる標的部分に相補的である２つ以上のＡＳＯが使用される。

【0256】

実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の部分または抱
合体、例えば、オリゴヌクレオチドの活性または細胞取り込みを増強する標的部分または
他の抱合体に化学的に連結される。そのような部分には、限定されないが、例えば、コレ
ステロール部分、コレステリル部分、例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基など
の脂肪族鎖、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖、または、アダマンタン酢酸と
して、脂質部分が含まれる。親油性部分を含むオリゴヌクレオチドおよび調製方法は、公
開された文献に記載されている。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは
、限定されないが、脱塩基ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプ
チド、炭水化物、例えばＮ－アセチルガラクトサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、Ｎ－Ａｃグルコ
サミン（ＧａｌＮＡｃ）、もしくはマンノース（例えばマンノース－６－リン酸）、脂質
、またはポリ炭化水素化合物を含む部分で抱合される。抱合体は、当該技術分野で理解さ
れ文献に記載されるように、例えばリンカーを用いて、糖、塩基またはリン酸基上のいく
つかの位置のうちのいずれかでアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む任意のヌクレオチ
ドの１つ以上に連結されうる。リンカーは二価または三価の分枝リンカーを含みうる。実
施形態では、抱合体はアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端に結合している。オリ
ゴヌクレオチド抱合体を調製する方法は、例えば、米国特許第８，４５０，４６７号「Ｃ
ａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｓ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｇｅｎｔ
ｓ ｆｏｒ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」に記載され、参照により本明細書に組
み込まれる。

【0257】

幾つかの実施形態では、ＡＳＯによって標的とされる核酸は、真核細胞などの細胞内に
発現したＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体である。幾つかの実施形態では、用語「細胞」は、細胞
の集団を指すこともある。幾つかの実施形態では、細胞は被験体内に存在する。幾つかの
実施形態では、細胞は被験体から単離されている。幾つかの実施形態では、細胞はエクス
ビボである。幾つかの実施形態では、細胞は疾患または疾病に関連した細胞もしくは細胞
株である。幾つかの実施形態では、細胞はインビトロである（例えば細胞培養液中にある
）。

【0258】

医薬組成物
記載された組成物のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、上記方法のいずれかにお
いて使用するための医薬組成物または医薬製剤は、医薬品産業において周知の従来技術に
従って調製することができ、且つ公開文献においても記載されている。実施形態において
、被験体を処置するための医薬組成物または医薬製剤は、上記のような任意のアンチセン
スオリゴマー、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、水和物、またはエステルの
有効量、および薬学的に許容可能な希釈剤を含む。医薬製剤のアンチセンスオリゴマーは
さらに、薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体を含み得る。

【0259】

薬学的に許容可能な塩は、過度の毒性反応、刺激反応、アレルギー反応等を持たないヒ
トおよび下等動物の組織に接する使用に適しており、かつ適切なベネフィット・リスク比
に相応している（例えば、この目的のための参照によって本明細書に組み込まれる、Ｓ．
Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
，６６：１－１９（１９７７）を参照）。塩は、化合物の最終的な分離および精製中にイ
ンサイチュで、または遊離基機能を適切な有機酸と反応させることによって別々に調製さ
れうる。薬学的に許容可能で無毒な酸付加塩の例は、塩化水素、臭化水素酸、リン酸、硫
酸、および過塩素酸などの無機酸か、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、
コハク酸もしくはマロン酸などの有機酸か、またはイオン交換などの他の文書で立証され
た方法を用いることによって形成されたアミノ基の塩である。他の薬学的に許容可能な塩
は、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスル
ホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、ク
エン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンス
ルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸
塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタ
ンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸
塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニ
コチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン
酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、
プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸、チオシアン酸塩、ｐ－
トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などを含む。代表的なアルカリまたは
アルカリ土類金属の塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム
などを含む。さらに薬学的に許容可能な塩は、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カ
ルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルのスルホン酸塩、およびアリール
スルホン酸塩などの対イオンを使用して形成された、無毒なアンモニウム、第四級アンモ
ニウム、およびアミンのカチオンを含む。

【0260】

実施形態において、組成物は、限定されないが、錠剤、カプセル、ゲルカプセル、液体
シロップ、ソフトゲル、坐剤、および浣腸剤などの多くの考え得る剤形のいずれかに製剤
される。実施形態において、組成物は、水性培地、非水性培地、または混合培地状の懸濁
液として製剤される。水性懸濁液は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム（
ソルビトールおよび／またはデキストラン）を含む懸濁液の粘度を増加させる物質をさら
に含むこともある。その懸濁液は、安定化剤も含むこともある。実施形態において、本発
明の医薬製剤または医薬組成物は、限定されないが、溶液、エマルジョン、マイクロエマ
ルジョン、発泡体またはリポソーム含有製剤（例えばカチオンリポソームまたは非カチオ
ンリポソーム）を含む。

【0261】

本発明の医薬組成物または医薬製剤は、当業者にとって適当でありかつ周知である、ま
たは公開文献に記載されている、１つ以上の透過促進剤、担体、賦形剤、または他の活性
成分あるいは非活性成分を含むこともある。実施形態において、リポソームは立体的に安
定したリポソーム、例えば１つ以上の特定の脂質を含むリポソームも含む。これらの特定
の脂質は、循環寿命が増強されたリポソームを結果としてもたらす。実施形態では、立体
的に安定したリポソームは、１つ以上の糖脂質を含むか、またはポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）部分などの１つ以上の親油性ポリマーを用いて誘導体化される。実施形態では
、界面活性剤は医薬製剤または医薬組成物中に含まれる。薬物製品、製剤およびエマルジ
ョンにおける界面活性剤の使用は、当技術分野においてよく知られている。実施形態では
、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの効率的な送達を達成する、例えば、細胞
膜にわたる拡散を助ける及び／又は脂溶性薬物の浸透性を増強するために、浸透促進剤を
利用する。実施形態では、浸透促進剤は、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤、
または非キレート性の非界面活性剤である。

【0262】

実施形態において、医薬製剤は複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。実施形
態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは他の薬物または治療剤と組み合わせて投
与される。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、当技術分野において
既知の任意の方法によって、血液脳関門を介する対象のアンチセンスオリゴヌクレオチド
の浸透を促進することができる１つ以上の薬剤と共に投与される。例えば、筋組織内の運
動ニューロンへアデノウイルスベクターを投与することによる薬剤の送達は、引用によっ
て本明細書に組み込まれる米国特許第６，６３２，４２７号「Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ－ｖ
ｅｃｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｍｅｄｕｌｌ
ａｒｙ ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｎｓ」に記載されている。脳、例えば、線条体、視床、
海馬、または黒質への直接のベクターの送達は、例えば、引用によって本明細書に組み込
まれる米国特許第６，７５６，５２３号「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏ
ｒ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｆｏｒｅｉｇｎ ｇｅｎｅｓ ｉｎｔｏ ｃｅｌ
ｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｐａｒｔｉｃｕ
ｌａｒｌｙ ｉｎ ｂｒａｉｎ」に記載される。

【0263】

実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、望ましい薬理学的性質または
薬力学的性質を提供する薬剤に結合されるか抱合される。実施形態において、アンチセン
スオリゴヌクレオチドは、血液脳関門を介する浸透または輸送を促進すると当技術分野に
おいて知られている物質、例えばトランスフェリン受容体の抗体に結合される。実施形態
において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、アンチセンス化合物をより効果
的にするために、または血液脳関門を介する輸送を増加させるためにウイルスベクターに
結合される。実施形態において、浸透性の血液脳関門の破壊は、砂糖、例えばメソエリス
リトール、キシリトール、Ｄ（＋）ガラクトース、Ｄ（＋）ラクトース、Ｄ（＋）キシロ
ース、ズルシトール、ミオ－イノシトール、Ｌ（－）フルクトース、Ｄ（－）マンニトー
ル、Ｄ（＋）グルコース、Ｄ（＋）アラビノース、Ｄ（－）アラビノース、セロビオース
、Ｄ（＋）マルトース、Ｄ（＋）ラフィノース、Ｌ（＋）ラムノース、Ｄ（＋）メリビオ
ース、Ｄ（－） リボース、アドニトール、Ｄ（＋）アラビトール、Ｌ（－）アラビトー
ル、Ｄ（＋）フコース、Ｌ（－）フコース、Ｄ（－）リキソース、Ｌ（＋）リキソース、
およびＬ（－）リキソース、または アミノ酸、例えばグルタミン、リジン、アルギニン
、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、
ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、
バリン、およびタウリンを注入することにより促進される。血液脳関門浸透を増強する方
法および材料は、例えば、それぞれが引用により本明細書に組み込まれた、米国特許第４
，８６６，０４２号「Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｇｅｎ
ｅｔｉｃ ｍａｔｅｒｉａｌ ａｃｒｏｓｓ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ｂｒａｉｎ ｂａｒ
ｒｉｅｒ」、米国特許第６，２９４，５２０号「Ｍａｔｅｒｉａｌ ｆｏｒ ｐａｓｓａ
ｇｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ」、および米
国特許第６，９３６，５８９号「Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅ
ｍｓ」に記載されている。

【0264】

実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の部分または抱
合体、例えば、オリゴヌクレオチドの活性または細胞取り込みを増強する標的部分または
他の抱合体、に化学的に結合される。そのような部分は、限定されないが、例えばコレス
テロール部分、コレステリル部分のような脂質部分、例えばドデカンジオールもしくはウ
ンデシルの残基、ポリアミン鎖もしくはポリエチレングリコール鎖などの脂肪鎖、または
アダマンタン酢酸を含む。親油性部分を含むオリゴヌクレオチドおよび調製方法は、公開
された文献に記載されている。複数の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチ
ドは、限定されないが、脱塩基ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、
ペプチド、炭水化物、例えば、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、Ｎ－Ａｃ
グルコサミン（ＧａｌＮＡｃ）、もしくはマンノース（例えばマンノース－６－リン酸）
、脂質、またはポリ炭化水素化合物を含む部分で抱合される。当該技術分野で理解され文
献に記載されるように、例えばリンカーを用いて、抱合体は、糖、塩基またはリン酸基上
のいくつかの位置のうちのいずれかでアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む任意のヌク
レオチドの１つ以上に結合することができる。リンカーは二価または三価の分枝リンカー
を含むことができる。実施形態では、抱合体はアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末
端に結合されている。オリゴヌクレオチド抱合体を調製する方法は、例えば、米国特許第
８，４５０，４６７号「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｓ ｄｅ
ｌｉｖｅｒｙ ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」に記載され
、該文献は参照により本明細書に組み込まれる。

【0265】

被験体の処置
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかが個体に投与されうる。「個体」は、「被
験体」または「患者」と交換可能に使用されてもよい。個体は哺乳動物でもよく、例えば
人間、または、人類以外の霊長類、げっ歯類、ウサギ、ラット、マウス、馬、ロバ、ヤギ
、猫、犬、雌牛、ブタ、あるいは羊などの動物である。実施形態では、個体はヒトである
。実施形態では、個体は胎児、胚、または小児である。他の実施形態では、個体は植物な
どの別の真核生物であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合
物は細胞にエクスビボで投与される。

【0266】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組成物は、疾病または障害を処置する
方法として個体に投与される。いくつかの実施形態では、個体は、本明細書に記述された
疾病のいずれかなどの遺伝病を有する。いくつかの実施形態では、個体は、本明細書に記
述された疾病のいずれかなどの疾病を有するリスクがある。いくつかの実施形態では、個
体は、不十分な量のタンパク質または不十分な活性のタンパク質により引き起こされる疾
病または障害を有するリスクが増大している。個体が、不十分な量のタンパク質または不
十分な活性のタンパク質により引き起こされる疾病または障害を有するリスクが増大して
いる場合、方法は防止的または予防的な処置を含む。例えば、個体は、その疾病の家族健
康歴のために、そのような疾病または障害を有するリスクが増大している場合がある。典
型的には、そのような疾病または障害を有するリスクが増大している個体は、予防的処置
（例えば、疾病または障害の発症または悪化を予防するかまたは遅らせることによる）か
ら利益を受ける。

【0267】

本発明のＡＳＯの投与に適切な経路は、ＡＳＯの送達が所望される細胞型に応じて変わ
りうる。多数の組織および器官は本明細書に記載の症状に影響を受けることがあり、腎臓
が最も著しく影響を受ける組織である。本発明のＡＳＯは、例えば、腹腔内注射、筋肉内
注射、皮下注射または静脈内注射によって、患者に非経口的に投与されてもよい。複数の
実施形態では、送達は腎臓に行われる。実施形態では、胎児は、例えば胎児にＡＳＯ組成
物を直接的または間接的に（例えば母親を介して）投与することによって、子宮内で処置
される。

【0268】

スプライシングを増強する追加のＡＳＯを特定する方法
本発明の範囲内にはまた、特異的に標的イントロンでのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体のスプ
ライシングを増強する追加のＡＳＯを特定する（判定する）方法がある。ｍＲＮＡ前駆体
の標的領域内で様々なヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするＡＳＯは、標的イント
ロンのスプライシングの速度および／または程度を改善するＡＳＯを特定する（判定する
）ためにスクリーニングされてもよい。いくつかの実施形態では、ＡＳＯはスプライシン
グ抑制因子／サイレンサーの結合部位をブロックまたは妨害することがある。当該技術分
野において既知の任意の方法が、イントロンの標的領域にハイブリダイズされた時に所望
の効果（例えばスプライシング、タンパク質または機能的ＲＮＡ生産の向上）をもたらす
ＡＳＯを特定する（判定する）ために使用されてもよい。これらの方法はまた、保持され
たイントロンに隣接するエクソン中、または保持されていないイントロン中の標的領域へ
結合することにより、保持されたイントロンのスプライシングを増強するＡＳＯの特定の
ために使用することができる。使用されうる方法の一例が下記に提供される。

【0269】

ｍＲＮＡ前駆体の標的領域にハイブリダイズするように設計されたＡＳＯを用いて、Ａ
ＳＯ「ウォーク」（ｗａｌｋ）と呼ばれる、一ラウンドのスクリーニングを行いうる。例
えば、ＡＳＯウォークに使用されるＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部
位のおよそ１００ヌクレオチド上流（例えば、標的とされた／保持されたイントロンの上
流に位置するエクソンの配列の一部）から、標的とされた／保持されたイントロンの５’
スプライス部位のおよそ１００ヌクレオチド下流まで、および／または、保持されたイン
トロンの３’スプライス部位のおよそ１００ヌクレオチド上流から、標的とされた／保持
されたイントロンの３’スプライス部位のおよそ１００ヌクレオチド下流（例えば、標的
とされた／保持されたイントロンの下流に位置するエクソンの配列の一部）まで、５つの
ヌクレオチドごとに敷き詰められ得る。例えば、１５ヌクレオチドの長さの第１のＡＳＯ
は、標的とされた／保持されたイントロンの５’スプライス部位に対しヌクレオチド＋６
から＋２０に特異的にハイブリダイズするように設計され得る。第２のＡＳＯは、標的と
された／保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド＋１１から＋
２５に特異的にハイブリダイズするように設計されている。ＡＳＯは、ｍＲＮＡ前駆体の
標的領域に及ぶように設計されている。複数の実施形態では、ＡＳＯは、より密に、例え
ば、１、２、３、または４つのヌクレオチドごとに敷き詰められ得る。さらに、ＡＳＯは
、５’スプライス部位の１００ヌクレオチド下流から、３’スプライス部位の１００ヌク
レオチド上流まで敷き詰められ得る。

【0270】

１つ以上のＡＳＯ、または１つの対照ＡＳＯ（標的領域にハイブリダイズするとは予期
されていない配列である、スクランブル配列を有するＡＳＯ）は、例えばトランスフェク
ションによって、標的ｍＲＮＡ前駆体（例えば、本明細書で別記されるＲＩＣ ｍＲＮＡ
前駆体）を発現する疾患関連の細胞株へと送達される。ＡＳＯの各々のスプライシングを
誘発する効果は、本明細書で記載されるように、当該技術分野で既知の方法、例えば、ス
プライスジャンクションに及ぶプライマーを使用する逆転写酵素（ＲＴ）－ＰＣＲによっ
て評価され得る（「イントロン保持事象の特定」を参照）。対照ＡＳＯ処理された細胞と
比較して、ＡＳＯ処理された細胞におけるスプライスジャンクションに及ぶプライマーを
使用して生成されたＲＴ－ＰＣＲ産物が減少または欠如することは、標的イントロンのス
プライシングが増強されたことを示している。いくつかの実施形態では、スプライシング
効率、スプライシングされていないｍＲＮＡ前駆体に対するスプライシングされたｍＲＮ
Ａ前駆体の割合、スプライシングの速度、またはスプライシングの程度は、本明細書に記
載されるＡＳＯを使用して改善され得る。標的ｍＲＮＡ前駆体によってコードされるタン
パク質または機能的ＲＮＡの量も、各ＡＳＯが所望の効果（例えば、タンパク質産生の増
強）を達成したかどうかを判定するために評価され得る。ウェスタンブロッティング、フ
ローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、およびＥＬＩＳＡなどの、タンパク質産生
を評価し及び／又は定量するための、当該技術分野で既知の方法も使用することができる
。

【0271】

ＡＳＯ「ミクロウォーク」（ｍｉｃｒｏ－ｗａｌｋ）と呼ばれる第２ラウンドのスクリ
ーニングは、ｍＲＮＡ前駆体の標的領域にハイブリダイズするように設計されたＡＳＯを
使用して実行され得る。ＡＳＯミクロウォークに使用されるＡＳＯは、ＡＳＯでハイブリ
ダイズされたときに結果的にスプライシングを増強させるｍＲＮＡ前駆体のヌクレオチド
酸配列をさらに改良する（ｒｅｆｉｎｅ）ために、１つのヌクレオチドごとに敷き詰めら
れる。標的イントロンのスプライシングを促進するＡＳＯによって定義される領域は、１
－ｎｔステップ（１－ｎｔ ｓｔｅｐｓ）で配置されたＡＳＯ、ならびに、典型的には１
８－２５ｎｔである、より長いＡＳＯを含む、ＡＳＯ「ミクロウォーク」によって、より
詳細に調査される。上記でＡＳＯウォークに関して記載されたように、１つ以上のＡＳＯ
、または対照ＡＳＯ（標的領域にハイブリダイズすると予期されていない配列である、ス
クランブル配列を有するＡＳＯ）を、例えばトランスフェクションによって、標的ｍＲＮ
Ａ前駆体を発現する疾患関連細胞株へと送達することにより、ＡＳＯミクロウォークが実
行される。ＡＳＯの各々のスプライシングを誘発する効果は、本明細書で記載されるよう
に、当該技術分野で既知の方法、例えば、スプライスジャンクションに及ぶプライマーを
使用する逆転写酵素（ＲＴ）－ＰＣＲによって評価され得る（「イントロン保持事象の特
定」を参照）。対照ＡＳＯ処理された細胞と比較して、ＡＳＯ処理された細胞におけるス
プライスジャンクションに及ぶプライマーを使用して生成されたＲＴ－ＰＣＲ産物が減少
または欠如することは、標的イントロンのスプライシングが増強されたことを示している
。いくつかの実施形態では、スプライシング効率、比率、スプライシングされていないｍ
ＲＮＡ前駆体に対するスプライシングされたｍＲＮＡ前駆体の割合、スプライシングの速
度、またはスプライシングの程度は、本明細書に記載されるＡＳＯを使用して改善され得
る。標的ｍＲＮＡ前駆体によってコードされるタンパク質または機能的ＲＮＡの量も、各
ＡＳＯが所望の効果（例えば、タンパク質産生の増強）を達成したかどうかを判定するた
めに評価され得る。ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡
検査法、およびＥＬＩＳＡなどの、タンパク質産生を評価し及び／又は定量するための、
当該技術分野で既知の方法も使用することができる。

【0272】

ｍＲＮＡ前駆体の領域にハイブリダイズされたときに、結果的にスプライシングを増強
させ、タンパク質産生を増加させるＡＳＯは、動物モデル、例えば、全長ヒト遺伝子がノ
ックインされたトランスジェニックマウスモデルまたは疾患のヒト化マウスモデルを使用
して、インビボで試験され得る。ＡＳＯの投与に適した経路は、ＡＳＯの送達が望まれる
疾患及び／又は細胞型に応じて変化し得る。ＡＳＯは、例えば、腹腔内注射、筋肉注射、
皮下注射、または静脈注射によって投与され得る。投与後に、モデル動物の細胞、組織、
及び／又は臓器は、当該技術分野に既知の方法および本明細書に記載される方法によって
、例えば、スプライシング（効率、速度、程度）およびタンパク質産生を評価することに
より、ＡＳＯ処置の効果を判定するために評価され得る。動物モデルはまた、疾患または
疾患重症度の表現型の徴候または行動的な徴候であり得る。

【0273】

本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され記載された一方、そのような実施形態が
一例としてのみ提供されていることは当業者にとって明白である。多くの変更、変化およ
び置換が、本発明から逸脱することなく、当業者の心に思い浮かぶであろう。本明細書に
記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されるかもしれ
ないことを理解されたい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求
項とその均等物の範囲内の方法および構造体がそれによって包含されるものであるという
ことが意図されている。
本明細書は以下の発明の態様を包含する。
［１］
被験体の細胞により標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させることによっ
て被験体の腎臓病を処置する方法であって、ここで、前記細胞は、保持されたイントロン
含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）を有し、該ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、
保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプラ
イス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、標的タン
パク質または機能的ＲＮＡをコードし、前記方法は、被験体の細胞を、標的タンパク質ま
たは機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセン
スオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロン
は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から構成的
にスプライシングされ、それにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍ
ＲＮＡのレベルを増加させ、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発
現を増加させる、方法。
［２］
腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積症、巣状分節性糸球体硬
化症７、乳頭腎症候群、あるいは幼児の高カルシウム血症である、［１］に記載の方法。
［３］
保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）を有している細
胞によって、標的タンパク質の発現を増加させる方法であって、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接している
エクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを
含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は標的タンパク質をコードし、前記方法は、細胞
を、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセ
ンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロ
ンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシング
され、それにより、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、細胞内で
標的タンパク質の発現を増加させ、ここで、標的タンパク質は、シスチノシン、タンパク
質ペアードボックス遺伝子２タンパク質、タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４
、サブファミリーＡ、ポリペプチド１、あるいはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体
δである、方法。
［４］
標的タンパク質は、シスチノシン、タンパク質ペアードボックス遺伝子２タンパク質、
タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１、あ
るいはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである、［１］または［２］に記載の方
法。
［５］
標的タンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足している
標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補
償タンパク質あるいは補償機能的ＲＮＡである、［１］または［２］に記載の方法。
［６］
細胞は、標的タンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被
験体内にあるか、または被験体に由来する、［３］に記載の方法。
［７］
標的タンパク質の量の不足は、標的タンパク質のハプロ不全によって引き起こされ、こ
こで被験体は、機能的な標的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子、標的タンパク質
が産生されない第２の対立遺伝子、または非機能的な標的タンパク質をコードする第２の
対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合する、［１］－［６］のいずれか１つに記載の方法。
［８］
被験体は、標的タンパク質の量または機能の不足に起因する障害により引き起こされた
疾病を抱えており、ここで、被験体は、
（ａ）（ｉ）標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベ
ルで生成され、
（ｉｉ）標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して機能が低下した形
態で生成され、あるいは、
（ｉｉｉ）標的タンパク質が生成されない、第１の変異対立遺伝子と、
（ｂ）（ｉ）標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベ
ルで生成され、
（ｉｉ）標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した
形態で生成され、あるいは、
（ｉｉｉ）標的タンパク質が生成されない、第２の変異対立遺伝子と、を有し、
ここで、被験体が第１の変異対立遺伝子（ａ）（ｉｉｉ）を有するとき、第２の変異対
立遺伝子は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）であり、被験体が第２の変異対立遺伝子
（ｂ）（ｉｉｉ）を有するとき、第１の変異対立遺伝子は（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（
ｉｉ）であり、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）である
第１の変異対立遺伝子、および／または、（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）である第
２の変異対立遺伝子から転写される、［１］－［６］のいずれか１つに記載の方法。
［９］
標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成さ
れる、［８］に記載の方法。
［１０］
標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、十分に機能的な形態で生成さ
れる、［８］に記載の方法。
［１１］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋６～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－１６までの領域内の
保持されたイントロンにある、［１］－［１０］のいずれか１つに記載の方法。
［１２］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋６９～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－７９までの領域内
の保持されたイントロンにある、［１］－［１０］のいずれか１つに記載の方法。
［１３］
標的タンパク質はシスチノシンである、［１］－［１２］のいずれか１つに記載の方法
。
［１４］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－５００までの領
域内の保持されたイントロンにある、［１３］に記載の方法。
［１５］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む、［１３］または［１４］に記載
の方法。
［１６］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８またはＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０７３４の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に少なくとも８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配
列同一性を備えた配列を含む、［１３］－［１５］のいずれか１つに記載の方法。
［１７］
ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８のいずれか１つに対して少なく
とも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１
００％の配列同一性を備えた配列を含む、［１３］－［１６］のいずれか１つに記載の方
法。
［１８］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
７に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［１３］－［１７］のいずれ
か１つに記載の方法。
［１９］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、［１３］－［１８］のいずれか１つに記載の方
法。
［２０］
標的タンパク質はペアードボックス遺伝子２タンパク質である、［１］－［１２］のい
ずれか１つに記載の方法。
［２１］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－５００までの領
域内の保持されたイントロンにある、［２０］に記載の方法。
［２２］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８６２３のい
ずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む、［２０］または［２１］に記載の
方法。
［２３］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３８またはＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０７４０の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に少なくとも８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配
列同一性を備えた配列を含む、［２０］－［２２］のいずれか１つに記載の方法。
［２４］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８６２３のいずれか１つ
に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［２０］－［２３］のいずれか
１つに記載の方法。
［２５］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１５のいずれか１つに対して
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、ある
いは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［２０］－［２４］のいずれか１つに記
載の方法。
［２６］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する遺伝子配列によってコードされる、［２０］－［２５］のいずれか１つに記載
の方法。
［２７］
標的タンパク質はタンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ、
ポリペプチド１である、［１］－［１２］のいずれか１つに記載の方法。
［２８］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－５００までの領
域内の保持されたイントロンにある、［２７］に記載の方法。
［２９］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む、［２７］または［２８］に記載
の方法。
［３０］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１０７３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７
４５、あるいはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４１の少なくとも８つの隣接する核酸を含む
領域に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［２７］－［２９］のいずれか１つ
に記載の方法。
［３１］
ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３のいずれか１つに対して少なく
とも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１
００％の配列同一性を備えた配列を含む、［２７］－［３０］のいずれか１つに記載の方
法。
［３２］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６－１９のいずれか１つに対して
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、ある
いは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［２７］－［３１］のいずれか１つに記
載の方法。
［３３］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する遺伝子配列によってコードされる、［２７］－［３２］のいずれか１つに記載
の方法。
［３４］
標的タンパク質はペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである、［１］－［１２］
のいずれか１つに記載の方法。
［３５］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に
対して＋５００～保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して－５００までの領
域内の保持されたイントロンにある、［３４］に記載の方法。
［３６］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいずれ
か１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％、あるいは１００％相補的な配列を含む、［３４］または［３５］に記載の方法
。
［３７］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３６、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１０７４７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７
４３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３７、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１０７３５、あるいはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４４の少なくとも８つの隣
接する核酸を含む領域に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［３４］－
［３６］のいずれか１つに記載の方法。
［３８］
ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいずれか１つに対して少なくとも約
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％
の配列同一性を備えた配列を含む、［３４］－［３７］のいずれか１つに記載の方法。
［３９］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－９のいずれか１つに対して少な
くとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは
１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［３４］－［３８］のいずれか１つに記載の
方法。
［４０］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する遺伝子配列によってコードされる、［３４］－［３９］のいずれか１つに記載
の方法。
［４１］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域
、あるいは、
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する－１６から－１００の領域
、
の内部の保持されたイントロンにある、［１］－［１０］および［１３］－［４０］の
いずれか１つに記載の方法。
［４２］
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス
部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’ス
プライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の
一部を標的とする、［１］－［１０］および［１３］－［４０］のいずれか１つに記載の
方法。
［４３］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ～－
４ｅの領域、あるいは、
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ～－
４ｅの領域、
の内部にある、［１］－［１０］および［１３］－［４０］のいずれか１つに記載の方
法。
［４４］
アンチセンスオリゴマーは、機能的ＲＮＡまたは標的タンパク質をコードする遺伝子か
ら転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより、標的タンパ
ク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない、［１］－［４３］のいずれか１つに記載の
方法。
［４５］
アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の
突然変異に起因する異常スプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機
能的ＲＮＡの量を増加させない、［１］－［４４］のいずれか１つに記載の方法。
［４６］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシング、または野
生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって生成された、［１］－［４５］の
いずれか１つに記載の方法。
［４７］
標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あ
るいは野生型の成熟ｍＲＮＡである、［１］－［４６］のいずれか１つに記載の方法。
［４８］
生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である、［
１］－［４７］のいずれか１つに記載の方法。
［４９］
アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞において生成された標的タンパク質または機
能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量は、対照細胞において生成された標的タンパク質
または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量と比較して、約１．１～約１０倍、約１
．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍
、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～
約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約
３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍
、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．
５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍
、あるいは少なくとも約１０倍増加する、［１］－［４８］のいずれか１つに記載の方法
。
［５０］
アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞によって生成された標的タンパク質の総量は
、対照細胞によって生成された標的タンパク質の総量と比較して、約１．１～約１０倍、
約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約
５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約
２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍
、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約
９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約
２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約
５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する、［１］－［４９］のいずれか１つに記載の
方法。
［５１］
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合
を含む骨格修飾を含む、［１］－［５０］のいずれか１つに記載の方法。
［５２］
アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド
核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、あるいは２’－Ｏ－メトキシエチル部分を含
む、［１］－［５１］のいずれか１つに記載の方法。
［５３］
アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む、［１］－［５２］
のいずれか１つに記載の方法。
［５４］
それぞれの糖部は修飾された糖部である、［５３］に記載の方法。
［５５］
アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～４０の核酸塩基、８～３５の核
酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～２０の核酸塩基、８～１５の核
酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～３５の核酸塩基、９～３０の核
酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～１５の核酸塩基、１０～５０の
核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基、１０～３０の核酸塩基、１０
～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の核酸塩基、１１～５０の核酸塩
基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１～３０の核酸塩基、１１～２５
の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩基、１２～５０の核酸塩基、１
２～４０の核酸塩基、１２～３５の核酸塩基、１２～３０の核酸塩基、１２～２５の核酸
塩基、１２～２０の核酸塩基、あるいは１２～１５の核酸塩基からなる、［１］－［５４
］のいずれか１つに記載の方法。
［５６］
アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部
分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少な
くとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である、［１］－［５５］の
いずれか１つに記載の方法。
［５７］
細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保
持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の集団で最も豊富な保持されたイントロンに結合する、［１］－［５６］のい
ずれか１つに記載の方法。
［５８］
最も豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タン
パク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するためにＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆
体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、［
５７］に記載の方法。
［５９］
細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ
ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保
持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣ ｍＲ
ＮＡ前駆体の集団で２番目に豊富な保持されたイントロンに結合する、［１］－［５６］
のいずれか１つに記載の方法。
［６０］
２番目に豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的
タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するためにＲＩＣ ｍＲＮＡ
前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する
、［５９］に記載の方法。
［６１］
疾病は、疾患または障害である、［６］－［６０］のいずれか１つに記載の方法。
［６２］
疾患または障害は腎臓病である、［６１］に記載の方法。
［６３］
腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積症、巣状分節性糸球体硬
化症７、乳頭腎症候群、あるいは幼児の高カルシウム血症である、［６２］に記載の方法
。
［６４］
標的タンパク質とＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、遺伝子によってコードされ、ここで、遺
伝子はＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１、あるいはＰＰＡＲＤである、［６３］に記
載の方法。
［６５］
前記方法はタンパク質発現を評価する工程をさらに含む、［１］－［６４］のいずれか
１つに記載の方法。
［６６］
被験体はヒトである、［１］－［６５］のいずれか１つに記載の方法。
［６７］
被験体はヒト以外の動物である、［１］－［６５］のいずれか１つに記載の方法。
［６８］
被験体は胎児、胚、あるいは子供である、［１］－［６６］のいずれか１つに記載の方
法。
［６９］
細胞はエクスビボである、［１］－［６７］のいずれか１つに記載の方法。
［７０］
アンチセンスオリゴマーは、被験体の腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静
脈内注射によって投与される、［１］－［６７］のいずれか１つに記載の方法。
［７１］
５’スプライス部位に隣接するエクソンの－３ｅ～－１ｅと、保持されたイントロンの
＋１～＋６にある９つのヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である、［１］－［
７０］のいずれか１つに記載の方法。
［７２］
保持されたイントロンの－１５～－１と３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋１
ｅにある１６のヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である、［１］－［７１］の
いずれか１つに記載の方法。
［７３］
［１］－［７２］のいずれか１つの方法で使用されるアンチセンスオリゴマー。
［７４］
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７３３のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、
８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同
一性を備えた配列を含むアンチセンスオリゴマー。
［７５］
［７３］または［７４］のアンチセンスオリゴマーと賦形剤とを含む医薬組成物。
［７６］
腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって［７５］に記載の医
薬組成物を投与することにより被験体を処置する方法。
［７７］
不足しているタンパク質または不足している機能的なＲＮＡに関連している被験体の腎
臓病を処置するために、細胞によって標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡの発現を増加
させる方法で使用されるアンチセンスオリゴマーを含む組成物であって、ここで、不足し
ているタンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足しており
、ここで、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする
、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）の構成的スプラ
イシングを増強し、ここで、標的タンパク質は、
（ａ）不足しているタンパク質、あるいは、
（ｂ）被験体において不足しているタンパク質を機能的に増大させるか、これに取って
代わる、補償タンパク質であり、
ここで、機能的ＲＮＡは、
（ａ）不足しているＲＮＡ、あるいは、
（ｂ）被験体の不足している機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わ
る、補償機能的ＲＮＡであり、
ここでＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接
しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、保持され
たイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆
体からスプライシングされ、それによって、被験体において標的タンパク質または機能的
ＲＮＡの産生または活性を増加させる、組成物。
［７８］
腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積症、巣状分節性糸球体硬
化症７、乳頭腎症候群、あるいは幼児の高カルシウム血症である、［７７］に記載の組成
物。
［７９］
被験体において標的タンパク質に関係する疾病を処置する方法に使用するためのアンチ
センスオリゴマーを含む組成物であって、前記方法は、被験体の細胞によって標的タンパ
ク質の発現を増加させる工程であって、細胞が保持されたイントロン、保持されたイント
ロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’
スプライス部位に隣接しているエクソンを含む、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆
体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）を有し、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質をコ
ードする、工程と、細胞をアンチセンスオリゴマーと接触させる工程であって、それによ
って、保持されたイントロンが、標的タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の
転写産物から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパ
ク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発
現を増加させる、工程とを含む、組成物。
［８０］
標的タンパク質は、シスチノシン、タンパク質ペアードボックス遺伝子２タンパク質、
タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ、ポリペプチド１、あ
るいはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである、［７７］－［７９］のいずれか
１つに記載の組成物。
［８１］
疾病は、疾患または障害である、［７９］に記載の組成物。
［８２］
疾患または障害は腎臓病である、［８０］に記載の組成物。
［８３］
腎臓病は、幼児の腎症性シスチン蓄積症、遅発性シスチン蓄積症、巣状分節性糸球体硬
化症７、乳頭腎症候群、または幼児の高カルシウム血症である［８２］に記載の組成物。
［８４］
標的タンパク質およびＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、遺伝子によってコードされ、ここで
遺伝子は、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤである、［８２］また
は［８３］に記載の組成物。
［８５］
アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンにおいて、保持されたイントロンの
５’スプライス部位に対する＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対
する－１６の領域内にある、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、［７７］－［
８４］のいずれか１つに記載の組成物。
［８６］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋６９から、保持されたイントロンの３’スプラ
イス部位に対する－７９の領域内にある、［７７］－［８４］のいずれか１つに記載の組
成物。
［８７］
標的タンパク質はシスチノシンである、［７７］－［８６］のいずれか１つに記載の組
成物。
［８８］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に対する－５００の領域内にある、［８７］に記載の組成物。
［８９］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、または１００％相補的な配列を含む、［８７］または［８８］に記載の
組成物。
［９０］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８または１０７
３４の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を備えた
配列を含む、［８７］－［８９］のいずれか１つに記載の組成物。
［９１］
ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６２４－１００６８のいずれか１つに対して少なく
とも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００
％の配列同一性を備えた配列を含む、［８７］－［９０］のいずれか１つに記載の組成物
。
［９２］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７に対して少なくとも
約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の
配列同一性を備えた配列を含む、［８７］－［９１］のいずれか１つに記載の組成物。
［９３］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、［８７］－［９２］のいずれか１つに記載の組
成物。
［９４］
標的タンパク質は、ペアードボックス遺伝子２タンパク質である、［７７］－［８６］
のいずれか１つに記載の組成物。
［９５］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に対する－５００の領域内にある、［９４］に記載の組成物。
［９６］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８６２３のい
ずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９
８％、９９％または１００％相補的である配列を含む、［９４］または［９５］に記載の
組成物。
［９７］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３８または１０７
４０の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を備えた
配列を含む、［９４］－［９６］のいずれか１つに記載の組成物。
［９８］
ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９５３－８６２３のいずれか１つに対して少なくと
も約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％
の配列同一性を備えた配列を含む、［９４］－［９７］のいずれか１つに記載の組成物。
［９９］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０－１５のいずれか１つに対して
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［９４］－［９８］のいずれか１つに記載の
組成物。
［１００］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、［９４］－［９９］のいずれか１つに記載の組
成物。
［１０１］
標的タンパク質は、タンパク質シトクロムＰ４５０ファミリー２４、サブファミリーＡ
、ポリペプチド１である、［７７］－［８６］のいずれか１つに記載の組成物。
［１０２］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に対する－５００の領域内にある、［１０１］に記載の組成物。
［１０３］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３の
いずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％または１００％相補的である配列を含む、［１０１］または［１０２］に
記載の組成物。
［１０４］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７４８、１０７３４
、１０７４６、１０７４５または１０７４１の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域
に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［１０１］－［１０３］のいずれか
１つに記載の組成物。
［１０５］
ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２０－１０７３３のいずれか１つに対して少なく
とも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００
％の配列同一性を備えた配列を含む、［１０１］－［１０４］のいずれか１つに記載の組
成物。
［１０６］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６－１９のいずれか１つに対して
少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％の配列同一性を備えた配列を含む、［１０１］－［１０５］のいずれか１つに記
載の組成物。
［１０７］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、［１０１］－［１０６］のいずれか１つに記載
の組成物。
［１０８］
標的タンパク質は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δである、［７７］－［８
６］のいずれか１つに記載の組成物。
［１０９］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイ
ントロンの５’スプライス部位に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプ
ライス部位に対する－５００の領域内にある、［１０８］に記載の組成物。
［１１０］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいずれ
か１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％または１００％相補的である配列を含む、［１０８］または［１０９］に記載の
組成物。
［１１１］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３６、１０７４７
、１０７３９、１０７４３、１０７４２、１０７３７、１０７３５、または１０７４４の
少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を備えた配列を
含む、［１０８］－［１１０］のいずれか１つに記載の組成物。
［１１２］
ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－６９５２のいずれか１つに対して少なくとも約
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配
列同一性を備えた配列を含む、［１０８］－［１１１］のいずれか１つに記載の組成物。
［１１３］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－９のいずれか１つに対して少な
くとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１０
０％の配列同一性を備えた配列を含む、［１０８］－［１１２］のいずれか１つに記載の
組成物。
［１１４］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を
有する遺伝子配列によってコードされる、［１０８］－［１１３］のいずれか１つに記載
の組成物。
［１１５］
アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンにおいて、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する＋６から＋１００の領域、
または、
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する－１６から－１００の領域
、
の内部にある、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、［７７］－［８４］、お
よび、［８７］－［１１４］のいずれか１つに記載の組成物。
［１１６］
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス
部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’ス
プライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にある、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体
の一部を標的とする、［７７］－［８４］、および、［８７］－［１１４］のいずれか１
つに記載の組成物。
［１１７］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋
２ｅから－４ｅの領域、または、
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋
２ｅから－４ｅの領域、
の内部にある、［７７］－［８４］、および、［８７］－［１１４］のいずれか１つに
記載の組成物。
［１１８］
アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能ＲＮＡをコードする遺伝子から
転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより標的タンパク質
または機能的ＲＮＡの量を増加させない、［７７］－［１１７］のいずれか１つに記載の
組成物。
［１１９］
アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の
突然変異から結果として生じる異常スプライシングを調節することにより機能的ＲＮＡま
たは機能的タンパク質の量を増加させない、［７７］－［１１８］のいずれか１つに記載
の組成物。
［１２０］
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、全長ｍＲＮＡ前駆体または野生型ｍＲＮＡ前駆体からの部
分的スプライシングによって生成された、［７７］－［１１９］のいずれか１つに記載の
組成物。
［１２１］
標的タンパク質または機能ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長成熟ｍＲＮＡまたは野
生型成熟ｍＲＮＡである、［７７］－［１２０］のいずれか１つに記載の組成物。
［１２２］
生成される標的タンパク質は、全長タンパク質または野生型タンパク質である、［７７
］－［１２１］のいずれか１つに記載の組成物。
［１２３］
保持されたイントロンは律速イントロンである、［７７］－［１２２］のいずれか１つ
に記載の組成物。
［１２４］
前記保持されたイントロンは、前記ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体で最も豊富な保持されたイ
ントロンである、［７７］－［１２３］のいずれか１つに記載の組成物。
［１２５］
保持されたイントロンは、前記ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体で２番目に豊富な保持されたイ
ントロンである、［７７］－［１２３］のいずれか１つに記載の組成物。
［１２６］
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合
を含む骨格修飾を含む、［７７］－［１２５］のいずれか１つに記載の組成物。
［１２７］
前記アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、［７７］
－［１２６］のいずれか１つに記載の組成物。
［１２８］
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチ
ド核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、または２’－Ｏ－メトキシエチル部分を含
む、［７７］－［１２７］のいずれか１つに記載の組成物。
［１２９］
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部を含む、［７７］－［１
２８］のいずれか１つに記載の組成物。
［１３０］
各糖部は、修飾された糖部である、［１２９］に記載の組成物。
［１３１］
アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～４０の核酸塩基、８～３５の核
酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～２０の核酸塩基、８～１５の核
酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～３５の核酸塩基、９～３０の核
酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～１５の核酸塩基、１０～５０の
核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基、１０～３０の核酸塩基、１０
～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の核酸塩基、１１～５０の核酸塩
基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１～３０の核酸塩基、１１～２５
の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩基、１２～５０の核酸塩基、１
２～４０核酸塩基、１２～３５核酸塩基、１２～３０の核酸塩基、１２～２５の核酸塩基
、１２～２０の核酸塩基、または１２～１５の核酸塩基から成る、［７７］－［１３０］
のいずれか１つに記載の組成物。
［１３２］
アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部
分に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５
％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、［７７］－［
１３１］のいずれか１つに記載の組成物。
［１３３］
［７７］－［１３２］の組成物のいずれかのアンチセンスオリゴマー、および賦形剤を
含む、医薬組成物。
［１３４］
腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または静脈内注射により［１３３］に記載の医薬
組成物を投与することによって、被験体を処置する方法。
［１３５］
不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物の
標的配列にハイブリダイズするアンチセンスオリゴマーであって、不足したＣＴＮＳ、Ｐ
ＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物が保持されたイントロンを
含み、アンチセンスオリゴマーが、不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１または
ＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘
発する、アンチセンスオリゴマーと、
薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む、医薬組成物。
［１３６］
不足したＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物は
、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物である、［１３５］に記載の医薬組成物。
［１３７］
ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標
的部分は、保持されたイントロンにおいて、保持されたイントロンの５’スプライス部位
に対する＋５００から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する－５００の
領域内にある、［１３５］または［１３６］に記載の医薬組成物。
［１３８］
ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１－４のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、
８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性
を有する遺伝子配列によってコードされる、［１３５］または［１３６］に記載の医薬組
成物。
［１３９］
ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５－１９のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％
、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一
性を備えた配列を含む、［１３５］または［１３６］に記載の医薬組成物。
［１４０］
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合
を含む骨格修飾を含む、［１３５］に記載の医薬組成物。
［１４１］
アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、［１３５］に記
載の医薬組成物。
［１４２］
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチ
ド核酸、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、または２’－Ｏ－メトキシエチル部分を含
む、［１３５］に記載の医薬組成物。
［１４３］
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部を含む、［１３５］に記
載の医薬組成物。
［１４４］
アンチセンスオリゴマーは、８～５０の核酸塩基、８～４０の核酸塩基、８～３５の核
酸塩基、８～３０の核酸塩基、８～２５の核酸塩基、８～２０の核酸塩基、８～１５の核
酸塩基、９～５０の核酸塩基、９～４０の核酸塩基、９～３５の核酸塩基、９～３０の核
酸塩基、９～２５の核酸塩基、９～２０の核酸塩基、９～１５の核酸塩基、１０～５０の
核酸塩基、１０～４０の核酸塩基、１０～３５の核酸塩基、１０～３０の核酸塩基、１０
～２５の核酸塩基、１０～２０の核酸塩基、１０～１５の核酸塩基、１１～５０の核酸塩
基、１１～４０の核酸塩基、１１～３５の核酸塩基、１１～３０の核酸塩基、１１～２５
の核酸塩基、１１～２０の核酸塩基、１１～１５の核酸塩基、１２～５０の核酸塩基、１
２～４０の核酸塩基、１２～３５核酸塩基、１２～３０核酸塩基、１２～２５の核酸塩基
、１２～２０の核酸塩基、または１２～１５の核酸塩基を含む、［１３５］に記載の医薬
組成物。
［１４５］
アンチセンスオリゴマーは、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤの
ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に対して、少なくとも８０％、少なくとも
８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、
または１００％相補的である、［１３５］または［１３６］に記載の医薬組成物。
［１４６］
ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転
写産物の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００３４－１０７４８から選択される配列
内にある、［１３５］または［１３６］に記載の医薬組成物。
［１４７］
アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７３３のいずれか１つに
対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、または９９％配列同一性であるヌクレオチド配列を含む、
［１３５］に記載の医薬組成物。
［１４８］
アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０－１０７３３から選択されるヌ
クレオチド配列を含む、［１３５］に記載の医薬組成物。
［１４９］
医薬組成物は、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または
静脈内注射のために製剤される、［１３５］－［１４８］のいずれか１つに記載の医薬組
成物。
［１５０］
ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の機能形態をコー
ドする、十分に処理されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲ
ＮＡ転写産物を産生するために、保持されたイントロンの除去を促進する、ＣＴＮＳ、Ｐ
ＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物の処理を誘発する方法であ
って、前記方法は、
（ａ）アンチセンスオリゴマーを被験体の標的細胞に接触させる工程と、
（ｂ）アンチセンスオリゴマーを、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡ
ＲＤのｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする工程であって、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹ
Ｐ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物が、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ
１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の機能形態をコードすることができ、少なくとも１つの
保持されたイントロンを含む、工程と、
（ｃ）ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の機能形態
をコードする、十分に処理されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤ
のｍＲＮＡ転写産物を産生するために、少なくとも１つの保持されたイントロンをＣＴＮ
Ｓ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物から除去する工程と
、
（ｄ）十分に処理されたＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲ
ＮＡ転写産物から、ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質
の機能形態を翻訳する工程と、を含む、方法。
［１５１］
保持されたイントロンは、保持されたイントロン全体である、［１５０］に記載の方法
。
［１５２］
ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのｍＲＮＡ転写産物は、ＣＴＮ
Ｓ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物で
ある、［１５０］または［１５１］に記載の方法。
［１５３］
ＣＴＮＳ、ＰＡＸ２、ＣＹＰ２４Ａ１またはＰＰＡＲＤのタンパク質の量または活性の
不足によって引き起こされた疾病を有する被験体を処置する方法であって、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２０－１０７３３のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の
配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴマーを被験体に投与する
工程を含む、方法。

【0274】

実施例
本発明は、以下の実施例によってより具体的に例示されるだろう。しかしながら、本発
明がどんな方法でもこれらの実施例によって制限されていないことが理解されるべきであ
る。

【0275】

実施例１：次世代配列決定を用いたＲＮＡｓｅｑによる転写産物のイントロン保持事象の
特定
イントロン保持事象を特定するために本明細書で記載された遺伝子によって生成された
転写産物のスナップショットを明らかにするために、次世代配列決定を使用して、全トラ
ンスクリプトームのショットガン配列決定を実行した。このために、腎上皮細胞の核およ
び細胞質の分画からのｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを分離し、ＩｌｌｕｍｉｎａのＴｒｕＳｅｑ
Ｓｔｒａｎｄｅｄ ｍＲＮＡライブラリＰｒｅｐキットを用いてｃＤＮＡライブラリを
構築した。ライブラリを対末端配列決定（ｐａｉｒ－ｅｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ）し、
結果として、ヒトゲノム（２００９年２月、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９アセンブリ）にマッ
ピングされた１００ヌクレオチドの読み取りをもたらした。マッピングされた読み取りは
（ＵＣＳＣ Ｇｅｎｏｍｅ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｇｒｏｕｐ （Ｃｅｎｔｅｒ ｆ
ｏｒ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｕ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，１１５６
Ｈｉｇｈ Ｓｔｒｅｅｔ，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ ９５０６４）によって操作さ
れ、かつ、例えばＲｏｓｅｎｂｌｏｏｍ， ｅｔ ａｌ．，２０１５，“Ｔｈｅ ＵＣＳ
Ｃ Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｒｏｗｓｅｒ ｄａｔａｂａｓｅ： ２０１５ ｕｐｄａｔｅ，”
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４３，Ｄａｔａｂａｓｅ Ｉｓｓｕｅ
ｄｏｉ： １０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｕ１１７７に記載された）ＵＣＳＣゲノム
ブラウザを使用して視覚化され、読み取りの範囲および数はピーク信号によって推論され
る。ピークの高さは、特定の領域における読取密度によって与えられた発現のレベルを示
している。ピークをエクソン領域およびイントロン領域に一致させられるように、（読み
取りシグナルの下に）ＵＣＳＣゲノムブラウザによってＰ遺伝子の模式図（縮尺通りに描
かれている）が提供される。このディスプレイに基づいて、腎上皮細胞の核分画において
高い読み取り密度を有するが、これらの細胞の細胞質分画においては読み取りが非常に低
いかまたは全くないイントロンを特定した（本明細書に記載の遺伝子において特定された
イントロンについてのイントロン保持率（ＰＩＲ）データについては表１を参照）。これ
は、これらのイントロンが保持されたこと、および、イントロン含有転写産物が核内に残
っていることを示し、かつ、この保持されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体が、細胞質に排出さ
れないので、非生産的であることを示唆している。

【0276】

実施例２：未だ特定されていない保持されたイントロンのための次世代配列決定を用いた
ＲＮＡｓｅｑによる遺伝子転写産物でのイントロン保持事象の特定
未知のイントロン保持事象を特定するために、本明細書に記載された遺伝子によって生
成された転写産物のスナップショットを明らかにするために、次世代配列決定を使用して
、全トランスクリプトームのショットガン配列決定を実行した。このために、腎上皮細胞
の核および細胞質の分画からのｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを分離し、ＩｌｌｕｍｉｎａのＴ
ｒｕＳｅｑ Ｓｔｒａｎｄｅｄ ｍＲＮＡライブラリＰｒｅｐキットを用いてｃＤＮＡラ
イブラリを構築した。ライブラリを対末端配列決定（ｐａｉｒ－ｅｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅｄ）し、結果として、ヒトゲノム（２００９年２月、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９アセンブ
リ）にマッピングされた１００ヌクレオチドの読み取りがもたらされた。マッピングされ
た読み取りは（ＵＣＳＣ Ｇｅｎｏｍｅ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｇｒｏｕｐ （Ｃｅ
ｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｅｎｇｉｎｅｅｒ
ｉｎｇ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ， Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ
， １１５６ Ｈｉｇｈ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ， ＣＡ ９５０６４
）によって操作され、かつ、例えばＲｏｓｅｎｂｌｏｏｍ， ｅｔ ａｌ．， ２０１５
， “Ｔｈｅ ＵＣＳＣ Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｒｏｗｓｅｒ ｄａｔａｂａｓｅ：２０１５
ｕｐｄａｔｅ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４３， Ｄａｔａ
ｂａｓｅ Ｉｓｓｕｅ ｄｏｉ： １０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｕ１１７７に記載され
た）ＵＣＳＣゲノムブラウザを使用して視覚化され、読み取りの範囲および数はピーク信
号によって推論されうる。ピークの高さは、特定の領域における読取密度によって与えら
れた発現のレベルを示している。ピークをエクソン領域およびイントロン領域に一致させ
られるように、（読み取りシグナルの下に）ＵＣＳＣゲノムブラウザによって遺伝子の模
式図（縮尺通りに描かれている）が提供される。このディスプレイに基づいて、保持され
たイントロンは、腎臓の上皮細胞の核分画においては高い読取密度を有するが、これらの
細胞の細胞質分画においては読み取りが非常に低いかまたは無いものとして推論された。
これは、イントロンが保持されたこと、および、イントロン含有転写産物が核内に残った
ことを示し、かつ、これらの保持されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体が、細胞質に排出されな
いので、非生産的であることを示唆している。

【0277】

実施例３：保持されたイントロンを標的とするＡＳＯウォークの設計
ＡＳＯウォークは、本明細書に記述された方法を使用して、保持されたイントロンを標
的とするように設計された。例えばヌクレオチド＋６から＋６９に及ぶイントロン５’ス
プライス部位のすぐ下流の領域と、例えばイントロンのヌクレオチド－１６から－７９に
及ぶイントロン３’スプライス部位のすぐ上流の領域とが２’－Ｏ－Ｍｅ ＲＮＡ、ＰＳ
骨格、５ヌクレオチド間隔でシフトした１８ｍｅｒ ＡＳＯで標的とされた。表１は、設
計された例示的なＡＳＯおよびそれらの標的配列を列挙する。

【0278】

【表1-1】

【0279】

【表1-2】

【0280】

実施例４：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＣ
ＴＮＳ転写レベルを増加させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、
ＣＴＮＳの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方
法が使用されうる。ＡＲＰＥ－１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、
または、ＣＴＮＳ標的化ＡＳＯで、または非標的化ＡＳＯ対照で、トランスフェクトされ
た。実験は８０ｎＭ ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図３ＢおよびＣ）。Ｔａｑ
ｍａｎ ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが偽トランスフェクトされたものと
比較してＣＴＮＳ遺伝子転写レベルを増加させることを示した。ＣＴＮＳ標的化ＡＳＯト
ランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規
化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＣＴＮＳ標的化
ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増加させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる
遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘導が、遺伝子発現の増加をもたら
すことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いるＣＴＮＳ遺伝子中の律速イン
トロンのスプライシング効率を改善すると、ＣＴＮＳ遺伝子発現が増加することを示して
いる。

【0281】

実施例５：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＣ
ＹＰ２４Ａ１転写レベルを増加させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、
ＣＹＰ２４Ａ１の発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述さ
れた方法が使用されうる。ＡＲＰＥ－１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）
され、または、ＣＹＰ２４Ａ１標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェク
トされた。実験は８０ｎＭ ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図４ＢおよびＣ）。
Ｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが偽トランスフェクトされた
ものと比較してＣＹＰ２４Ａ１遺伝子転写レベルを増加させることを示した。ＣＹＰ２４
Ａ１標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽
処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつ
かのＣＹＰ２４Ａ１標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増加させることを示した。これら
の結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘導が、
遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いるＣ
ＹＰ２４Ａ１遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＣＹＰ２４
Ａ１遺伝子発現が増加することを示している。

【0282】

実施例６：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＰ
ＰＡＲＤ転写レベルを増加させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、
ＰＰＡＲＤの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された
方法が使用されうる。ＡＲＰＥ－１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され
、または、ＰＰＡＲＤ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた
。実験は８０ｎＭ ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図６ＡおよびＢ、図６Ｅおよ
びＦ）。Ｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが偽トランスフェク
トされたものと比較してＰＰＡＲＤ遺伝子転写レベルを増加させることを示した。ＰＰＡ
ＲＤ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽
処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつ
かのＰＰＡＲＤ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増加させることを示した。これらの結
果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘導が、遺伝
子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いるＰＰＡ
ＲＤ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＰＰＡＲＤ遺伝子発
現が増加することを示している。

【0283】

実施例７：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率は転
写レベルを増加させる
ＡＳＯでのイントロンスプライシング効率の改善により標的遺伝子の発現の増加を達成
しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法を使用した。ＡＲＰＥ－１
９細胞、すなわちヒトの網膜の上皮細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒ
ｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ）， ＵＳＡ）、またはＨｕｈ－７、すなわ
ちヒトの肝細胞腫細胞株（ＮＩＢＩＯＨＮ、Ｊａｐａｎ）、またはＳＫ－Ｎ－ＡＳ、すな
わちヒトの神経芽細胞腫細胞株（ＡＴＣＣ）は、図３－６および表１に記載の標的化ＡＳ
Ｏで、偽トランスフェクトされるか、またはトランスフェクトされる。細胞を、供給元の
仕様書に従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘトランスフェクション試
薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いてトランスフェクトする。簡潔に述べると、Ａ
ＳＯを９６ウェル組織培養プレートに播種し、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭで希釈したＲＮＡｉＭａ
ｘと組み合わせる。トリプシンを用いて細胞を剥離し、完全培地に再懸濁し、約２５，０
００個の細胞をＡＳＯトランスフェクション混合物に加える。トランスフェクション実験
は三通りのプレート複製において実行される。最終的なＡＳＯ濃度は８０ｎＭであった。
供給元の仕様書に従って、培地をトランスフェクションの６時間後に交換し、細胞をＣｅ
ｌｌｓ－ｔｏ－Ｃｔ溶解試薬を用い、ＤＮＡｓｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で試薬
を補充し、２４時間で採取する。供給元の仕様書に従い、ｃＤＮＡをＣｅｌｌｓ－ｔｏ－
Ｃｔ ＲＴ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で生成される。対象のイントロンでのス
プライシングの量を定量化するために、表１に列挙した、保持されたイントロンの対応す
るエクソン－エクソンジャンクション（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に及ぶプローブで
Ｔａｑｍａｎアッセイを用いて、定量ＰＣＲが実行される。Ｔａｑｍａｎアッセイは、Ｑ
ｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ７Ｆｌｅｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲシステム（Ｔｈｅｒ
ｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）上で、供給元の仕様書に従い実行される。標的遺伝子アッセイ値を
、ＲＰＬ３２（ｄｅｌｔａＣｔ）およびプレート一致偽トランスフェクションサンプル（
ｄｅｌｔａ－ｄｅｌｔａ Ｃｔ）に対して正規化し、モック定量（２ ＾－（ｄｅｌｔａ
－ｄｅｌｔａ Ｃｔ）に対して倍率変化を生成する。３つのプレート複製のモック（ｍｏ
ｃｋ）に対する平均倍率変化をプロットする（図３Ｃ、図４Ｃ、図６Ｂおよび図６Ｆ）。
標的遺伝子発現を増加させるいくつかのＡＳＯが特定され、その標的イントロンでのスプ
ライシングの増加が示唆された。標的イントロン（図３－６）の保持を示す全トランスク
リプトームデータと共に、これらの結果は、ＡＳＯが律速イントロンのスプライシング効
率を改善し得ることを確認する。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図6G】

【配列表】

2022062143000001.app

【手続補正書】

【提出日】2022-03-03

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）又はＡＳＯをコードするウイルスベクターを含む医薬組成物であって、ＡＳＯは、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δをコードする保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）の標的部分に相補的であり、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン、及び保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソンを含み、ＡＳＯとＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体との結合が、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体を発現する細胞内で、保持されたイントロンをＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングさせることにより、細胞内で、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δをコードする機能的ＲＮＡのレベルを増加させ、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６から３’スプライス部位に対して－１６までの領域内にある、前記医薬組成物。

【請求項2】

医薬として使用するための、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

腎疾患、好ましくは脂質代謝不全、慢性腎臓病（ＣＫＤ）、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、又は心血管疾患（ＣＶＤ）の処置に使用するための、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項4】

保持されたイントロンが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７３６、１０７４７、１０７３９、１０７４３、１０７４２、１０７３７、１０７３５、又は１０７４４に対して少なくとも９５％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項5】

ＡＳＯが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１～２７３、２７８～５１６、５２１～７６８、７７３～９２８、９３３～１６１９、１６２４～１８７６、１８８１～２１１９、２１２４～２３７１、２３７６～２６５２、２６５７～３３４３、３３４８～３６００、３６０５～３８４３、３８４８～４０９５、４１００～４２５５、４２６０～４４８５、４４９０～４７２８、４７３３～４９８０、４９８５～５１４０、５１４５～５８３１、５８３６～６０９８、６１０３～６２５８、６２６３～６９４９から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の同一性を備えた配列を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項6】

ＡＳＯが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１～２７３、２７８～５１６、５２１～７６８、７７３～９２８、９３３～１６１９、１６２４～１８７６、１８８１～２１１９、２１２４～２３７１、２３７６～２６５２、２６５７～３３４３、３３４８～３６００、３６０５～３８４３、３８４８～４０９５、４１００～４２５５、４２６０～４４８５、４４９０～４７２８、４７３３～４９８０、４９８５～５１４０、５１４５～５８３１、５８３６～６０９８、６１０３～６２５８、６２６３～６９４９から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を備えた配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項7】

ＡＳＯが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１～２７３、２７８～５１６、５２１～７６８、７７３～９２８、９３３～１６１９、１６２４～１８７６、１８８１～２１１９、２１２４～２３７１、２３７６～２６５２、２６５７～３３４３、３３４８～３６００、３６０５～３８４３、３８４８～４０９５、４１００～４２５５、４２６０～４４８５、４４９０～４７２８、４７３３～４９８０、４９８５～５１４０、５１４５～５８３１、５８３６～６０９８、６１０３～６２５８、６２６３～６９４９から選択される配列に対して少なくとも９７％の同一性を備えた配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項8】

ＡＳＯが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１～２７３、２７８～５１６、５２１～７６８、７７３～９２８、９３３～１６１９、１６２４～１８７６、１８８１～２１１９、２１２４～２３７１、２３７６～２６５２、２６５７～３３４３、３３４８～３６００、３６０５～３８４３、３８４８～４０９５、４１００～４２５５、４２６０～４４８５、４４９０～４７２８、４７３３～４９８０、４９８５～５１４０、５１４５～５８３１、５８３６～６０９８、６１０３～６２５８、６２６３～６９４９から選択される配列に対して１００％の同一性を備えた配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δが、
ｉ）同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態、又は
ｉｉ）同等の野性型タンパク質と比較して、十分に機能的な形態、
で生成される、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

ＡＳＯが、ホスホロチオエート結合又はホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾、又は修飾された糖部若しくは糖アナログを含み、該修飾された糖部若しくは糖アナログが、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’－Ｏ－メチル部分、２’－フルオロ部分、あるいは２’－Ｏ－メトキシエチル部分を含んでいてもよい、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項11】

ＡＳＯが、８～５０の核酸塩基からなる、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項12】

処置すべき被験体において、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δの量又は活性が不足している、請求項２～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項13】

処置すべき被験体において、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δの量又は活性が不足しており、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δの量の不足がペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δのハプロ不全によって引き起こされ、ここで被験体は、機能的なペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δをコードする第１の対立遺伝子、及びペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δが生成されない第２の対立遺伝子、又は非機能的なペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δをコードする第２の対立遺伝子を有し、ＡＳＯは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合する、請求項２～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項14】

処置すべき被験体において、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δの量又は活性が不足しており、被験体は、
（ａ）
（ｉ）ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δが、野生型対立遺伝子からの生成と比較して減少したレベルで生成されるか、
（ｉｉ）ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δが、同等の野性型ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δと比較して機能が低下した形態で生成されるか、あるいは、
（ｉｉｉ）ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δが生成されない、
第１の変異対立遺伝子と、
（ｂ）
（ｉ）ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δが、野生型対立遺伝子からの生成と比較して減少したレベルで生成されるか、
（ｉｉ）ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δが、同等の野性型ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δと比較して機能が低下した形態で生成されるか、あるいは、
（ｉｉｉ）ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δが生成されない、
第２の変異対立遺伝子とを有し、
ここで、被験体が第１の変異対立遺伝子（ａ）（ｉｉｉ）を有するとき、第２の変異対立遺伝子は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）であり、ここで、被験体が第２の変異対立遺伝子（ｂ）（ｉｉｉ）を有するとき、第１の変異対立遺伝子は（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）であり、ここで、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）である第１の変異対立遺伝子、又は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）である第２の変異対立遺伝子から転写される、請求項２～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項15】

ＡＳＯが、くも膜下腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、又は静脈内注射による投与用である、請求項２～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【外国語明細書】