特開 2022-78072 ヒトのセレブロンを発現するトランスジェニックマウス

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022078072

(43)【公開日】2022-05-24

(54)【発明の名称】ヒトのセレブロンを発現するトランスジェニックマウス

(51)【国際特許分類】

   A01K 67/027 20060101AFI20220517BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220517BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20220517BHJP

   G01N 33/48 20060101ALI20220517BHJP

   G01N 33/68 20060101ALI20220517BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20220517BHJP

【ＦＩ】

A01K67/027 ZNA

C12N5/10

C12Q1/02

G01N33/48 N

G01N33/68

C12N15/12

【審査請求】有

【請求項の数】15

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2022020184

(22)【出願日】2022-02-14

(62)【分割の表示】P 2018555851の分割

【原出願日】2017-01-18

(31)【優先権主張番号】62/280,633

(32)【優先日】2016-01-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】509307635

【氏名又は名称】セルジーン コーポレイション

(74)【代理人】

【識別番号】100097456

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 徹

(72)【発明者】

【氏名】ラジェシュ チョプラ

(72)【発明者】

【氏名】アンケ クリッペル

(57)【要約】      （修正有）

【課題】ヒトセレブロン（ＣＲＢＮ）とＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ調節化合物（ＣＭＣ）との間の相互作用、ならびにそのような化合物の安全性及び有効性を研究するのに適した動物モデルを提供する。
【解決手段】トランスジェニックマウスであって、そのゲノムが、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含み、トランスジェニックマウスにおいて内因性マウスＣＲＢＮが発現しない、トランスジェニックマウスが提供される。また、トランスジェニックマウス由来の細胞、細胞株、組織及び器官、ならびにこのようなマウスを作製及び使用する方法もまた提供される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

トランスジェニックマウスであって、そのゲノムが、ヒトセレブロン（ＣＲＢＮ）また
はその断片をコードする核酸を含み、ここで内因性マウスＣＲＢＮが、前記トランスジェ
ニックマウスで発現されない、前記トランスジェニックマウス。

【請求項2】

前記核酸が全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする、請求項１に記載のトランスジェ
ニックマウス。

【請求項3】

全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする前記核酸が、配列番号５または配列番号６を
含む、請求項２に記載のトランスジェニックマウス。

【請求項4】

前記核酸が、マウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子を含む、請求項１に記載のトランスジ
ェニックマウス。

【請求項5】

前記核酸が、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒ
トＣＲＢＮアイソフォーム１の最終コドンで終わるポリペプチドを含む、ヒトＣＲＢＮタ
ンパク質の断片をコードする、請求項１または４に記載のトランスジェニックマウス。

【請求項6】

前記核酸が、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸で開始し、ヒ
トＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドを含む、ヒトＣＲＢＮタ
ンパク質の断片をコードする、請求項１または４に記載のトランスジェニックマウス。

【請求項7】

ヒトＣＲＢＮの断片をコードする前記核酸が配列番号７を含む、請求項１、４、５また
は６のいずれか１項に記載のトランスジェニックマウス。

【請求項8】

ヒトＣＲＢＮの発現が、相同なマウスプロモーターによって制御される、請求項１～７
のいずれか１項に記載のトランスジェニックマウス。

【請求項9】

前記核酸が、染色体に安定に組み込まれている、請求項１～８のいずれか１項に記載の
トランスジェニックマウス。

【請求項10】

ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１
項に記載のトランスジェニックマウスから得られた単離された細胞。

【請求項11】

ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１
項に記載のトランスジェニックマウスに由来する形質転換細胞株。

【請求項12】

ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１
項に記載のトランスジェニックマウスから得られた単離された組織。

【請求項13】

ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１
項に記載のトランスジェニックマウスから得られた単離器官。

【請求項14】

ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを作製する方法であって、
（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸を含むポリヌクレオチド構築物をマ
ウス卵、胚または胚性幹（ＥＳ）細胞に導入すること；及び
（ｂ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を有するマウス卵、胚またはＥ
Ｓ細胞を雌性マウスに移入することを包含する、前記方法。

【請求項15】

前記核酸が、請求項２～７のいずれか１項に記載のものである、請求項１４に記載の方
法。

【請求項16】

前記ポリヌクレオチド構築物が、配列番号８の核酸配列を含む、請求項１４または１５
に記載の方法。

【請求項17】

雌性マウスを育種すること、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫を選択するこ
とをさらに包含する、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫と遺伝的背景のマウスとを育種することを
さらに包含する、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記遺伝的背景のマウスが、ＮＳＧ／ＮＯＧマウスモデル、Ｖｋ＊ｍｙｃ多発性骨髄腫
マウスモデル、Ｅｕ－ｖ－ａｂｌ／Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデル、Ｅｕ－
ｃ－Ｍｙｃリンパ腫マウスモデル、ヒトＩＫＺＦ１トランスジェニックマウスモデル、及
びヒトＩＫＺＦ３トランスジェニックマウスモデルからなる群より選択される、請求項１
８に記載の方法。

【請求項20】

遺伝的背景においてヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを作製する方法
であって、請求項１～９のいずれか１項に記載のトランスジェニックマウスと前記遺伝的
背景のマウスとを育種することを包含する、前記方法。

【請求項21】

前記遺伝的背景のマウスが、ＮＳＧ／ＮＯＧマウスモデル、Ｖｋ＊ｍｙｃ多発性骨髄腫
マウスモデル、Ｅｕ－ｖ－ａｂｌ／Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデル、Ｅｕ－
ｃ－Ｍｙｃリンパ腫マウスモデル、ヒトＩＫＺＦ１トランスジェニックマウスモデル、及
びヒトＩＫＺＦ３トランスジェニックマウスモデルからなる群より選択される、請求項２
０に記載の方法。

【請求項22】

請求項１４～２１のいずれか１項に記載の方法によって作製されたトランスジェニック
マウス。

【請求項23】

ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスにおいて、化合物の
投与量及び／またはスケジュールを最適化する方法であって、
（ａ）前記化合物を前記トランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）前記トランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；ならびに
（ｄ）前記バイオマーカーのレベルに基づいて前記化合物の投与量及び／またはスケジュ
ールを調節すること；を包含し、
ここで、前記バイオマーカーはＣＲＢＮ関連タンパク質（ＣＡＰ）である、前記方法。

【請求項24】

前記トランスジェニックマウスが、請求項１～９または２２のいずれか１項に記載のト
ランスジェニックマウスである、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記バイオマーカーのレベルが前記バイオマーカーのベースレベルよりも高い場合、前
記化合物の投与量及び／またはスケジュールが調整される、請求項２３または２４に記載
の方法。

【請求項26】

前記バイオマーカーのレベルが前記バイオマーカーのベースレベルより低い場合、前記
化合物の投与量及び／またはスケジュールが調整される、請求項２３または２４に記載の
方法。

【請求項27】

前記バイオマーカーが、ｅＲＦ３ａ、ｅＲＦ３ｂ、ｅＲＦ３ｃ、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ
３、ＣＫ１ａ、ＰＡＢＰ１、ｅＲＦ１、ＢＩＰ、ｅＥＦ１α、ＰＥＲＫ、ＧＣＮ２、ｅＩ
Ｆ２ａ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、ＤＤＩＴ３、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、Ｇ
ＡＤＤ４５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＦＡＳ、ＦＡＤＤ、ＩＲＥ１、Ｘ
ＢＰ１、ＳＥＣ２４Ｄ、ＤＮＡＪＢ９、ＥＤＥＭ１、ＥＤＥＭ２、ＨＹＯＵ１、ＡＴＦ６
、ＨＳＰＡ５、カスパーゼ８、ＢＩＤ、カスパーゼ９、カスパーゼ７、カスパーゼ３、Ｐ
ＡＲＰ、Ｍｃｌ－１、ＢＡＤ、ＣＤＫＮ１Ａ、Ｍｙｃ、ＩＲＦ４、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴ１
、ＩＦＩＴ３、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＺＦＰ９１、ＺＮＦ１９
８、ＭＶＰ、Ｐａｒｐ４、Ｒｏｎ、ＰＤＥ６Ｄ、ＴＬＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、Ｓ
ＴＡＴ３、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩＴ２、ＩＳＧ１
５、ＩＳＧ２０、、ＩＦＩ２１、ＩＦＩ３５、ＩＦＩ６、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＩＴＭ２Ｗ
ＩＺ、ＧＢＰ２、ＧＢＰ４、ＳＥＬＬ、ＳＮＸ２０、ＫＬＦ１３、ＧＢＰ１、ＭＡＲＣＫ
Ｓ、ＳＬＡＭＦ１、及びＳＡＳＨ１からなる群より選択される、請求項２３～２６のいず
れか１項に記載の方法。

【請求項28】

ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスにおける化合物の効
果を評価するための方法であって、
（ａ）前記化合物を前記トランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）前記トランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；及び
（ｄ）前記バイオマーカーのレベルをバイオマーカーのベースレベルと比較すること；を
包含し、前記バイオマーカーはＣＡＰである、前記方法。

【請求項29】

前記トランスジェニックマウスが、請求項１～９または２２のいずれか１項に記載のト
ランスジェニックマウスである、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記バイオマーカーのベースレベルが、
（ｉ）化合物が前記トランスジェニックマウスに投与されていない場合；または（ｉｉ）
前記トランスジェニックマウスに対照化合物を投与する場合の前記バイオマーカーのレベ
ルである、請求項２８または２９に記載の方法。

【請求項31】

ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスにおける化合物の組
み合せの効果を評価するための方法であって：
（ａ）前記トランスジェニックマウスに第１の化合物及び第２の化合物を投与すること；
（ｂ）前記トランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；ならびに
（ｄ）前記バイオマーカーのレベルを前記バイオマーカーのベースレベルと比較すること
；
を包含し、ここで前記バイオマーカーはＣＡＰである、前記方法。

【請求項32】

前記トランスジェニックマウスが、請求項１～９または２２のいずれか１項に記載のト
ランスジェニックマウスである、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記バイオマーカーのベースレベルが、（ｉ）化合物が前記トランスジェニックマウス
に投与されていない場合；（ｉｉ）前記トランスジェニックマウスに前記第１の化合物の
みを投与する場合；（ｉｉｉ）前記トランスジェニックマウスに前記第２の化合物のみを
投与する場合；（ｉｖ）対照化合物を前記トランスジェニックマウスに投与する場合；（
ｖ）前記第１の化合物と別の化合物との組み合せを前記トランスジェニックマウスに投与
する場合；（ｖｉ）前記トランスジェニックマウスに前記第２の化合物と別の化合物との
組み合わせを投与する場合；または（ｖｉｉ）２種以上の他の化合物の組み合わせを前記
トランスジェニックマウスに投与する場合の前記バイオマーカーのレベルである、請求項
３１または３２に記載の方法。

【請求項34】

前記化合物が、同時または連続してのいずれかで投与される、請求項３１～３３のいず
れか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記化合物が免疫調節化合物である、請求項２３～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記免疫調節化合物が、サリドマイド、レナリドマイド及びポマリドマイドからなる群
より選択される、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記免疫調節化合物がサリドマイドである、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記免疫調節化合物がレナリドマイドである、請求項３６に記載の方法。

【請求項39】

前記免疫調節化合物がポマリドマイドである、請求項３６に記載の方法。

【請求項40】

前記化合物が、パターン認識受容体（ＰＲＲ）アゴニストである、請求項２３～３４の
いずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記ＰＲＲアゴニストが、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニ
スト、ＴＬＲ９アゴニスト、ＲＩＧ－１アゴニスト、ＭＤＡ５アゴニスト及びＡＩＭ２ア
ゴニストからなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記ＰＲＲアゴニストがＴＬＲ３アゴニストである、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記ＰＲＲアゴニストがＴＬＲ７アゴニストである、請求項４１に記載の方法。

【請求項44】

前記ＰＲＲアゴニストがＴＬＲ８アゴニストである、請求項４１に記載の方法。

【請求項45】

前記ＰＲＲアゴニストがＴＬＲ９アゴニストである、請求項４１に記載の方法。

【請求項46】

前記ＰＲＲアゴニストがＲＩＧ－１アゴニストである、請求項４１に記載の方法。

【請求項47】

前記ＰＲＲアゴニストがＭＤＡ５アゴニストである、請求項４１に記載の方法。

【請求項48】

前記ＰＲＲアゴニストがＡＩＭ２アゴニストである、請求項４１に記載の方法。

【請求項49】

前記化合物が抗体である、請求項２３～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記抗体が、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－Ｌ２抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、Ｃ
Ｄ３８抗体、及びＳＬＡＭＦ７抗体からなる群より選択される、請求項４９に記載の方法
。

【請求項51】

前記抗体がＰＤ－１抗体である、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記抗体がＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項５０に記載の方法。

【請求項53】

前記抗体がＰＤ－Ｌ２抗体である、請求項５０に記載の方法。

【請求項54】

前記抗体がＣＴＬＡ－４抗体である、請求項５０に記載の方法。

【請求項55】

前記抗体がＣＤ３８抗体である、請求項５０に記載の方法。

【請求項56】

前記抗体がＳＬＡＭＦ７抗体である、請求項５０に記載の方法。

【請求項57】

前記抗体が、ニボルマブ（すなわち、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮ
Ｏ－４５３８）、ＭＫ－３４７５（すなわち、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ）、
ピジリズマブ（すなわち、ＣＴ－０１１）、ＭＥＤＩ－０６８０（すなわち、ＡＭＰ－５
１４）、ＰＤＲ－００１、デュルバルマブ（すなわち、ＭＥＤＩ－４７３６）、ＢＭＳ－
９３６５５９（すなわち、ＭＤＸ－１１０５）、アベルマブ（すなわち、ＭＳＢ００１０
７１８Ｃ）、アテゾリズマブ（すなわち、ＭＰＤＬ－３２８０Ａ）、イピリムマブ、ダラ
ツムマブ、及びエロツズマブからなる群より選択される、請求項４９に記載の方法。

【請求項58】

前記抗体がニボルルマブである、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記抗体がデュルバルマブである、請求項５７に記載の方法。

【請求項60】

前記抗体がイピリムマブである、請求項５７に記載の方法。

【請求項61】

前記抗体がダラツムマブである、請求項５７に記載の方法。

【請求項62】

前記抗体がエロツズマブである、請求項５７に記載の方法。

【請求項63】

前記化合物が分子模倣物である、請求項２３～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記分子模倣物が、アザシチジン、ロミデプシン、ＡＴＲＡ、シクロホスファミド、及
びセレブレックス（登録商標）からなる群より選択される、請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

前記分子模倣物がアザシチジンである、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

分子模倣物がロミデプシンである、請求項６４に記載の方法。

【請求項67】

前記分子模倣物がＡＴＲＡである、請求項６４に記載の方法。

【請求項68】

前記分子模倣物がシクロホスファミドである、請求項６４に記載の方法。

【請求項69】

前記分子模倣物がＣｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）である、請求項６４に記載の方法。

【請求項70】

ステップ（ａ）が、前記トランスジェニックマウスに第３の化合物を投与することをさ
らに含む、請求項３１または３２に記載の方法。

【請求項71】

前記第１の化合物がデキサメタゾンである、請求項３１、３２、または７０のいずれか
１項に記載の方法。

【請求項72】

前記第２の化合物が、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ調節化合物（ＣＭＣ）または
免疫調節化合物である、請求項３１、３２、７０、または７１のいずれか１項に記載の方
法。

【請求項73】

前記免疫調節化合物が、サリドマイド、レナリドマイド及びポマリドマイドからなる群
より選択される、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

前記第３の化合物が、イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ
、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン
及びニボルマブからなる群より選択される、請求項７０～７３のいずれか１項に記載の方
法。

【請求項75】

前記化合物の組み合わせが、デキサメタゾン及びＣＭＣを含む、請求項３１または３２
に記載の方法。

【請求項76】

前記化合物の組み合わせが、デキサメタゾン及び免疫調節化合物を含む、請求項３１ま
たは３２に記載の方法。

【請求項77】

前記免疫調節化合物が、サリドマイド、レナリドマイド及びポマリドマイドからなる群
より選択される、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

前記化合物の組み合わせが、
（ａ）デキサメタゾン；
（ｂ）ＣＭＣ；ならびに
（ｃ）イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、
ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブか
らなる群より選択される化合物、を含む、請求項７０に記載の方法。

【請求項79】

前記化合物の組み合わせが、
（ａ）デキサメタゾン；
（ｂ）免疫調節化合物；ならびに
（ｃ）イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、
ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブか
らなる群より選択される化合物を含む、請求項７０に記載の方法。

【請求項80】

前記免疫調節化合物が、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドからなる
群より選択される、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

化合物または化合物の組み合わせの効果が、抗原特異的Ｔ細胞殺傷に対する効果である
、請求項２８～８０のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／２８０，６３３
号に対する優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
１．分野
本明細書において、そのゲノムがヒトセレブロン（ＣＲＢＮ）またはその断片をコード
する核酸配列を含むトランスジェニックマウスが提供される。このようなトランスジェニ
ックマウスを作製するための方法も本明細書で提供される。さらに、これらのトランスジ
ェニックマウスを、例えば、様々な疾患（がんなど）の治療における特定の化合物の有効
性、特異性、毒性、薬物動態、薬力学、作用機序の評価；これらの化合物の投与レジメン
の最適化；ならびに、そのような疾患のための他の治療薬との併用療法を研究することに
用いる方法が提供される。

【背景技術】

【0002】

２．背景
がんは、所与の正常組織に由来する異常細胞の数の増大、これらの異常細胞による隣接
組織の浸潤、またはリンパ管もしくは血液媒介性の悪性細胞の局所リンパ節及び遠隔部位
への伝播（転移）によって主に特徴付けられる。がん患者の治療に使用され得る新しい方
法、治療法、及び組成物には大きな需要がある。

【0003】

過去１０年間、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドを含む一群の免疫
調節化合物は、多発性骨髄腫、リンパ腫及び骨髄異形成症候群のような他の血液疾患を有
する患者において顕著な反応を引き出すことが示されている。Ｇａｌｕｓｔｉａｎ ｅｔ
ａｌ．、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．２００９、１０：１２
５－１３３を参照のこと。これらの処置化合物は、抗血管新生特性、炎症誘発性サイトカ
インの調節、Ｔ細胞の共刺激、ＮＫ細胞毒性の増大、直接的抗腫瘍効果、及び幹細胞分化
の調節を含む広範囲の活性を示す。

【0004】

最近、サリドマイドに結合することが確認された重要な分子標的はＣＲＢＮである。Ｉ
ｔｏ ｅｔ ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１０，３２７：１３４５－１３５０を参照の
こと。少なくとも２つのヒトＣＲＢＮアイソフォームである、アイソフォーム１（４４２
アミノ酸）及びアイソフォーム２（４４１アミノ酸）が同定されている。ヒトアイソフォ
ーム２は、アイソフォーム１との違いはアミノ酸２３アラニンがアイソフォーム１から欠
失しているだけである。ＣＲＢＮ及びその関連タンパク質は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ複
合体を形成し、これが標的タンパク質のユビキチン化及びその後のプロテアソーム分解を
媒介する。サリドマイドは、インビトロでＣＲＢＮの自己ユビキチン化を阻害することが
判明しており、これによって、サリドマイドがＥ３ユビキチンリガーゼ阻害剤であること
が示唆された（同上）。重要なことに、ＣＲＢＮの自己ユビキチン化は、野生型細胞にお
いてサリドマイドによって阻害されたが、サリドマイド結合を妨げるＣＲＢＮ突然変異を
有する細胞では阻害されなかった（同上）。サリドマイド結合部位は、ＣＲＢＮ中の高度
に保存されたＣ末端の１０４アミノ酸領域にマッピングされた（同上）。ＣＲＢＮアイソ
フォーム１、Ｙ３８４Ａ及びＷ３８６Ａの個々の点突然変異体は、サリドマイド結合に欠
陥があり、サリドマイド結合活性が最も低い二重変異体であった（同上）。

【0005】

これらの化合物とＣＲＢＮまたはＣＲＢＮ関連タンパク質との間の相互作用を理解する
ことは、薬物有効性及び／または毒性の分子機構を解明するのを容易にし、改善された有
効性及び毒性プロファイルを有する新薬の開発につながる可能性がある。

【0006】

ＣＲＢＮとＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ調節化合物（ＣＭＣ）との間の相互作用
ならびにそのような化合物の安全性及び有効性を研究するのに適した動物モデルが不可欠
である。本開示は、これら及び他の必要性を満たす。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

３．本発明の要旨
１つの態様では、そのゲノムが、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を
含み、内因性マウスＣＲＢＮがトランスジェニックマウスにおいて発現されないトランス
ジェニックマウスが本明細書において提供される。一実施形態では、トランスジェニック
マウスのゲノムは、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列を含む。特定の実施形態では、ヒ
トＣＲＢＮをコードする核酸配列は、安定に染色体に組み込まれる。別の実施形態では、
トランスジェニックマウスのゲノムは、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列を含む
。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、安定して染色体に
組み込まれる。いくつかの実施形態では、核酸は、マウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子を
含む。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４の
グルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の最終コドンで終わるポリペプチ
ドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。他の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢ
Ｎアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム
２の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。一実施形
態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号５を含む。別の
実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含む
。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片をコードする核酸配列は、配列番号７
を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を包含す
る標的化構築物は、配列番号８を含む。一実施形態では、トランスジェニックマウスは、
全長ヒトＣＲＢＮを発現する。さらに別の実施形態では、トランスジェニックマウスは、
ヒトＣＲＢＮの断片を発現する。

【0008】

別の態様では、本明細書で提供されるトランスジェニックマウスに由来する細胞が提供
され、ここでこの細胞は、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む。特
定の実施形態では、この細胞はトランスジェニックマウスから得られる。一実施形態では
、細胞は単離された細胞である。一実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮをコードす
る。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、トランスジェニックマ
ウスの染色体に安定に組み込まれる。別の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断
片をコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、ト
ランスジェニックマウスの染色体に安定に組み込まれる。いくつかの実施形態では、核酸
は、マウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子を含む。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒト
ＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフ
ォーム１の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。他
の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン
酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒ
トＣＲＢＮの断片をコードする。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコード
する核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質を
コードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の
断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまた
はその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。一実施
形態では、細胞は、全長ヒトＣＲＢＮを発現する。さらに別の実施形態では、細胞はヒト
ＣＲＢＮの断片を発現する。

【0009】

別の態様では、本明細書で提供されるトランスジェニックマウスに由来する細胞株であ
って、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、細胞株が提供される。
一実施形態では、細胞株は単離された細胞株である。一実施形態では、核酸配列は、ヒト
ＣＲＢＮをコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、ト
ランスジェニックマウスの染色体に安定に組み込まれる。別の実施形態では、核酸配列は
、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコード
する核酸配列は、トランスジェニックマウスの染色体に安定に組み込まれる。いくつかの
実施形態では、核酸は、マウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子を含む。特定の実施形態では
、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒ
トＣＲＢＮアイソフォーム１の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断
片をコードする。他の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコド
ン２３のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポ
リペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮ
タンパク質をコードする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣ
ＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣ
ＲＢＮタンパク質の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では
、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番
号８を含む。一実施形態では、細胞株は形質転換細胞株である。別の実施形態では、この
形質転換された細胞株は、全長ヒトＣＲＢＮを発現する。さらに別の実施形態では、形質
転換された細胞株は、ヒトＣＲＢＮの断片を発現する。

【0010】

別の態様では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、本明細書で
提供されるトランスジェニックマウスに由来する組織が提供される。特定の実施形態では
、組織はトランスジェニックマウスから得られる。一実施形態では、組織は単離された組
織である。一実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮをコードする。特定の実施形態で
は、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、トランスジェニックマウスの染色体に安定に
組み込まれる。別の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする。特定
の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、トランスジェニックマウ
スの染色体に安定に組み込まれる。いくつかの実施形態では、核酸は、マウス－ヒトキメ
ラＣＲＢＮ遺伝子を含む。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォー
ム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の最終コドン
で終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。他の実施形態では、核酸
配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲ
ＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコ
ードする。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列
番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は
、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片をコードする核酸
配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードす
る核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。一実施形態では、組織は全長
ヒトＣＲＢＮを発現する。さらに別の実施形態では、組織は、ヒトＣＲＢＮの断片を発現
する。

【0011】

別の態様では、本明細書で提供されるトランスジェニックマウスに由来する器官が提供
され、この器官は、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む。特定の実
施形態では、この器官はトランスジェニックマウスから得られる。一実施形態では、器官
は単離器官である。一実施形態では、核酸配列はヒトＣＲＢＮをコードする。特定の実施
形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、トランスジェニックマウスの染色体に
安定に組み込まれる。別の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする
。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、トランスジェニッ
クマウスの染色体に安定に組み込まれる。いくつかの実施形態では、この核酸は、マウス
－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子を含む。特定の実施形態では、この核酸配列は、ヒトＣＲＢ
Ｎアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム
１の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。他の実施
形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸で開
始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲ
ＢＮの断片をコードする。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核
酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコード
する核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片を
コードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまたはその
断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。一実施形態で
は、器官は全長ヒトＣＲＢＮを発現する。さらに別の実施形態では、器官はヒトＣＲＢＮ
の断片を発現する。

【0012】

特定の態様では、本明細書において、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランス
ジェニックマウスが提供される。特定の実施形態では、トランスジェニックマウスは全長
ヒトＣＲＢＮを発現する。他の実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢ
Ｎの断片を発現する。

【0013】

特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮは、マウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子から発現さ
れる。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４の
グルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の最終コドンで終わるポリペプチ
ドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。他の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢ
Ｎアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム
２の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。一実施形
態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号５を含む。別の
実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含む
。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片をコードする核酸配列は、配列番号７
を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を包含す
る標的化構築物は、配列番号８を含む。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、相
同なマウスプロモーターによって制御される。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現
は、相同マウスＣＲＢＮプロモーターによって制御される。

【0014】

別の態様では、本明細書で提供されるのは：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコー
ドする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス卵に導入すること；及び（ｂ）こ
のマウス卵を雌性マウスに移入することを包含する、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジ
ェニックマウスを産生する方法である。また本明細書では：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはそ
の断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス胚に導入すること；
及び（ｂ）このマウス胚を雌性マウスに移入することを包含する、ヒトＣＲＢＮを発現す
るトランスジェニックマウスを産生する方法も提供される。本明細書ではまた：（ａ）ヒ
トＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物を、マウ
ス胚性幹（ＥＳ）細胞に導入すること；及び（ｂ）このマウスＥＳ細胞を雌性マウスに移
入することを包含する、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを作製する方
法も提供する。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮをコードする。特定の実
施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、卵、胚またはＥＳ細胞の染色体に安
定に組み込まれる。他の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする。
特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、卵、胚またはＥＳ細
胞の染色体に安定に組み込まれる。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコー
ドする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質
をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質
の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮま
たはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。

【0015】

特定の実施形態では、本方法は、雌性マウスを育種することをさらに包含する。他の実
施形態では、この方法は、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を有する子
孫を選択することをさらに包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、雌性マウス
を育種し、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を有する子孫を選択するこ
とをさらに包含する。したがって、本明細書にさらに提供されるのは、（ａ）ヒトＣＲＢ
Ｎまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス卵に導入
すること；（ｂ）このマウス卵を雌性マウスに移入すること；及び（ｃ）この雌性マウス
を育種し、そしてヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫トランスジェニックマウス
を選択することを包含する、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを産生す
るための方法である。また本明細書では：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードす
る核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス胚に導入すること；（ｂ）このマウス
胚を雌性マウスに移入すること；及び（ｃ）この雌性マウスを育種し、そしてヒトＣＲＢ
Ｎまたはその断片を発現する子孫トランスジェニックマウスを選択すること、を包含する
ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを産生するための方法も提供される。
本明細書ではまた：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリ
ヌクレオチド構築物をマウスＥＳ細胞に導入すること；（ｂ）このマウスＥＳ細胞を雌性
マウスに移入すること；及び（ｃ）この雌性マウスを育種すること、及びヒトＣＲＢＮま
たはその断片を発現する子孫トランスジェニックマウスを選択することを包含する、ヒト
ＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを産生するための方法も提供される。

【0016】

さらに別の態様では、本明細書では：（ａ）、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードす
る核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物を、マウス卵に導入すること；及び（ｂ）この
マウス卵を雌性マウスに移入することを包含する方法によって産生される、ヒトＣＲＢＮ
またはその断片を発現するトランスジェニックマウスが提供される。本明細書ではまた：
（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物
をマウス胚に導入すること；及び（ｂ）このマウス胚を雌性マウスに移入すること包含す
る方法によって産生される、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニック
マウスも提供される。また本明細書では：（ａ）、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコード
する核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物を、マウスＥＳ細胞に導入すること；及び（
ｂ）このマウスＥＳ細胞を雌性マウスに移入することを包含する方法によって産生される
、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスが提供される。さら
に本明細書では：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌ
クレオチド構築物をマウス卵に導入すること；（ｂ）このマウス卵を雌性マウスに移入す
ること；及び（ｃ）この雌性マウスを育種し、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現する子
孫トランスジェニックマウスを選択することを包含する方法によって産生される、ヒトＣ
ＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスが提供される。また本明細書
では：（ａ）、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチ
ド構築物を、マウス胚に導入すること；（ｂ）このマウス胚を雌性マウスに移入すること
；ならびに（ｃ）この雌性マウスを育種すること、及びヒトＣＲＢＮまたはその断片を発
現する子孫トランスジェニックマウスを選択することを包含する方法によって産生される
、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスも提供される。また
本明細書では：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌク
レオチド構築物をマウスＥＳ細胞に導入すること；（ｂ）このマウスＥＳ細胞を雌性マウ
スに移入すること；ならびに（ｃ）この雌性マウスを育種すること、及びヒトＣＲＢＮま
たはその断片を発現する子孫トランスジェニックマウスを選択することを包含する方法に
よって産生される、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスも
提供される。特定の実施形態では、核酸配列はヒトＣＲＢＮをコードする。特定の実施形
態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、卵、胚またはＥＳ細胞の染色体に安定に
組み込まれる。他の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする。特定
の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、卵、胚またはＥＳ細胞の
染色体に安定に組み込まれる。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードす
る核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコ
ードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断
片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまたは
その断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。

【0017】

本明細書の特定の実施形態では、「ヒトＣＲＢＮ」への言及は、全長ヒトＣＲＢＮを指
す。

【0018】

さらに別の態様では、特定の遺伝的背景においてヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェ
ニックマウスを作製するための方法であって、本明細書で提供されるヒトＣＲＢＮまたは
その断片を発現するトランスジェニックマウスを、その遺伝的背景のマウスと育種するこ
とを包含する方法が提供される。本明細書ではまた、本明細書で提供されるヒトＣＲＢＮ
またはその断片を発現するトランスジェニックマウスを、その遺伝的背景のマウスと育種
することを包含する方法によって産生される、特定の遺伝的背景においてヒトＣＲＢＮを
発現するトランスジェニックマウスも提供される。特定の実施形態では、ある遺伝的背景
のマウスは、ＮＳＧ／ＮＯＧマウスモデルである。他の実施形態では、遺伝的背景のマウ
スは、Ｖｋ＊ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデルである。さらに他の実施形態では、遺伝的
背景のマウスは、Ｅｕ－ｖ－ａｂｌ／Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデルである
。さらに他の実施形態では、遺伝的背景のマウスは、Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃリンパ腫マウスモ
デルである。一実施形態では、遺伝的背景のマウスは、ヒトＩＫＺＦ１トランスジェニッ
クマウスモデルである。別の実施形態では、遺伝的背景のマウスは、ヒトＩＫＺＦ３トラ
ンスジェニックマウスモデルである。

【0019】

他の態様では、本明細書で提供されるヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランス
ジェニックマウスを使用するための方法が提供される。

【0020】

さらに別の態様では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウ
スにおける化合物の効果を評価するための方法であって、
（ａ）この化合物をトランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）このトランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）この試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；及び
（ｄ）このバイオマーカーのレベルをバイオマーカーのベースレベルと比較すること；
を包含し、ここで
このバイオマーカーはＣＲＢＮ関連タンパク質（ＣＡＰ）である方法が提供される。

【0021】

さらに別の態様では、本明細書では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランス
ジェニックマウスにおける化合物の組み合わせの効果を評価するための方法であって：
（ａ）このトランスジェニックマウスに第１の化合物及び第２の化合物を投与すること
；
（ｂ）このトランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）この試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；ならびに
（ｄ）このバイオマーカーのレベルをバイオマーカーのベースレベルと比較すること；
を包含し、ここでこのバイオマーカーはＣＡＰである方法が提供される。

【0022】

いくつかの実施形態では、化合物の組み合わせの効果を評価する方法は、第１の化合物
、第２の化合物、及び第３の化合物を組み合わせて投与することを包含する。他の実施形
態では、この方法は、４つ以上の化合物を組み合わせて投与することを包含する。特定の
実施形態では、この化合物は同時に投与される。他の実施形態では、化合物は連続的に投
与される。

【0023】

特定の実施形態では、本明細書で使用される様々なトランスジェニックマウスは、ヒト
ＣＲＢＮをコードする核酸配列を含む。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする
核酸配列は、マウス染色体に安定して組み込まれる。他の実施形態では、核酸配列は、ヒ
トＣＲＢＮの断片をコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする
核酸配列は、マウス染色体に安定に組み込まれる。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタ
ンパク質をコードする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲ
ＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲ
ＢＮタンパク質の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、
ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号
８を含む。

【0024】

特定の実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、化合物がトランスジェニック
マウスに投与されていない場合のバイオマーカーのレベルである。いくつかの実施形態で
は、バイオマーカーのベースレベルは、トランスジェニックマウスに１つの化合物のみが
投与された場合のバイオマーカーのレベルである。特定の実施形態では、唯一の化合物は
、第１の化合物である。他の実施形態では、唯一の化合物は、第２の化合物である。さら
に他の実施形態では、唯一の化合物は、第３の化合物である。さらに他の実施形態では、
唯一の化合物は、対照化合物である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーのベース
レベルは、２つの化合物の基準の組み合わせがトランスジェニックマウスに投与された場
合のバイオマーカーのレベルである。特定の実施形態では、基準の組み合わせは、第１の
化合物及び別の化合物を含む。他の実施形態では、基準の組み合わせは、第２の化合物と
別の化合物とを含む。さらに他の実施形態では、基準の組み合わせは、第３の化合物及び
別の化合物を含む。さらに他の実施形態では、基準の組み合わせは、第１の化合物及び第
２の化合物を含む。特定の実施形態では、基準の組み合わせは、２つ以上の他の化合物（
すなわち、第１の化合物または第２の化合物ではない）を含む。

【0025】

特定の実施形態では、化合物（または化合物の組み合せ）の効果は、抗原特異的Ｔ細胞
殺傷に対する効果である。

【0026】

別の態様では、本明細書においてヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェ
ニックマウスにおいて、化合物の投与量及び／またはスケジュールを最適化するための方
法であって：
（ａ）この化合物をトランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）このトランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）この試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；及び
（ｄ）このバイオマーカーのレベルに基づいて化合物の投与量及び／またはスケジュー
ルを調節すること；を包含し、
ここで、このバイオマーカーがＣＡＰである、方法が提供される。

【0027】

特定の実施形態では、この方法は、投与量を最適化するための方法である。他の実施形
態では、この方法は、投与スケジュールを最適化するための方法である。特定の実施形態
では、この方法は、投与スケジュール及び投与量を最適化するための方法である。特定の
実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列を含む
。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、マウス染色体に安定して
組み込まれる。他の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする。特定
の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、マウス染色体に安定に組
み込まれる。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配
列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列
は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片をコードする核
酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコード
する核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。

【0028】

本明細書で提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、バイオマーカーは、１つ
以上のバイオマーカーを含む。特定の実施形態では、化合物の投与量は、バイオマーカー
のレベルがバイオマーカーのベースレベルよりも高い場合に調整される。他の実施形態で
は、化合物の投与スケジュールは、バイオマーカーのレベルがバイオマーカーのベースレ
ベルよりも高い場合に調整される。他の実施形態では、バイオマーカーのレベルがバイオ
マーカーのベースレベルより高い場合、化合物の投与量及び投与スケジュールの両方が調
整される。特定の実施形態では、化合物の投与量は、バイオマーカーのレベルがバイオマ
ーカーのベースレベルよりも低い場合に調整される。他の実施形態では、化合物の投与ス
ケジュールは、バイオマーカーのレベルがバイオマーカーのベースレベルよりも低い場合
に調整される。他の実施形態では、バイオマーカーのレベルがバイオマーカーのベースレ
ベルより低い場合、化合物の投与量及び投与スケジュールの両方が調整される。

【0029】

本明細書で提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、バイオマーカーは、ｅＲ
Ｆ３ａ、ｅＲＦ３ｂ、ｅＲＦ３ｃ、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫ１ａ、ＰＡＢＰ１、ｅ
ＲＦ１、ＢＩＰ、ｅＥＦ１α、ＰＥＲＫ、ＧＣＮ２、ｅＩＦ２ａ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、
ＤＤＩＴ３、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１
Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＦＡＳ、ＦＡＤＤ、ＩＲＥ１、ＸＢＰ１、ＳＥＣ２４Ｄ、ＤＮＡ
ＪＢ９、ＥＤＥＭ１、ＥＤＥＭ２、ＨＹＯＵ１、ＡＴＦ６、ＨＳＰＡ５、カスパーゼ８、
ＢＩＤ、カスパーゼ９、カスパーゼ７、カスパーゼ３、ＰＡＲＰ、Ｍｃｌ－１、またはＢ
ＡＤである。本明細書で提供される様々な方法の他の実施形態では、バイオマーカーは、
ＣＤＫＮ１Ａ、Ｍｙｃ、ＩＲＦ４、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＲＩＧ－Ｉ、Ｍ
ＤＡ－５、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＺＦＰ９１、ＺＮＦ１９８、ＭＶＰ、Ｐａｒｐ４、Ｒｏ
ｎ、ＰＤＥ６Ｄ、ＴＬＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ
、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩＴ２、ＩＳＧ１５、ＩＳＧ２０、、ＩＦＩ２１
、ＩＦＩ３５、ＩＦＩ６、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＩＴＭ２ＷＩＺ、ＧＢＰ２、ＧＢＰ４、Ｓ
ＥＬＬ、ＳＮＸ２０、ＫＬＦ１３、ＧＢＰ１、ＭＡＲＣＫＳ、ＳＬＡＭＦ１、またはＳＡ
ＳＨ１である。本明細書で提供されるバイオマーカーの各々は、様々なアイソフォーム、
リン酸化形態、切断形態、修飾形態、及びそれらのスプライシングバリアントを含む。こ
れらのバイオマーカーの組み合わせも考えられる。

【0030】

本明細書で提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、化合物は免疫調節化合物
である。特定の実施形態では、免疫調節化合物は、サリドマイド、レナリドマイド、及び
ポマリドマイドからなる群より選択される。一実施形態では、免疫調節化合物はサリドマ
イドである。別の実施形態では、免疫調節化合物はレナリドマイドである。さらに別の実
施形態では、免疫調節化合物はポマリドマイドである。

【0031】

本明細書で提供される様々な方法の特定の実施形態では、化合物は、パターン認識受容
体（ＰＲＲ）アゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＲＲアゴニストは、ＴＬＲ
３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、ＲＩＧ
－１アゴニスト、ＭＤＡ５アゴニスト及びＡＩＭ２アゴニストからなる群より選択される
。一実施形態では、ＰＲＲアゴニストは、ＴＬＲ３アゴニストである。別の実施形態では
、ＰＲＲアゴニストは、ＴＬＲ７アゴニストである。さらに別の実施形態では、ＰＲＲア
ゴニストは、ＴＬＲ８アゴニストである。さらに別の実施形態では、ＰＲＲアゴニストは
、ＴＬＲ９アゴニストである。一実施形態では、ＰＲＲアゴニストは、ＲＩＧ－１アゴニ
ストである。別の実施形態では、ＰＲＲアゴニストは、ＭＤＡ５アゴニストである。さら
に別の実施形態では、ＰＲＲアゴニストはＡＩＭ２アゴニストである。

【0032】

本明細書で提供される様々な方法の他の実施形態では、化合物は抗体である。いくつか
の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－Ｌ２抗体、ＣＴＬＡ－
４抗体、ＣＤ３８抗体、及びＳＬＡＭＦ７抗体からなる群より選択される。一実施形態で
は、抗体は、ＰＤ－１抗体である。別の実施形態では、抗体はＰＤ－Ｌ１抗体である。さ
らに別の実施形態では、抗体は、ＰＤ－Ｌ２抗体である。さらに別の実施形態では、抗体
はＣＴＬＡ－４抗体である。一実施形態では、抗体はＣＤ３８抗体である。別の実施形態
では、抗体はＳＬＡＭＦ７抗体である。

【0033】

いくつかの実施形態では、抗体は、ニボルマブ（すなわち、ＢＭＳ－９３６５５８、Ｍ
ＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８）、ＭＫ－３４７５（すなわち、ペムブロリズマブ、
ランブロリズマブ）、ピジリズマブ（すなわち、ＣＴ－０１１）、ＭＥＤＩ－０６８０（
すなわちＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ－００１、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）、
ＢＭＳ－９３６５５９（すなわちＭＤＸ－１１０５）、アベルマブ（すなわち、ＭＳＢ０
０１０７１８Ｃ）、アテゾリズマブ（すなわち、ＭＰＤＬ－３２８０Ａ）、イピリムマブ
、ダラツムマブ、及びエロツズマブからなる群より選択される。一実施形態では、抗体は
ニボルマブである。別の実施形態では、抗体はＭＫ－３４７５である。さらに別の実施形
態では、抗体はピジリズマブである。さらに別の実施形態では、抗体は、ＭＥＤＩ－０６
８０である。一実施形態では、抗体は、ＰＤＲ－００１である。別の実施形態では、抗体
はデュルバルマブである。さらに別の実施形態では、抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９であ
る。さらに別の実施形態では、抗体は、アベルマブである。一実施形態では、抗体は、ア
テゾリズマブである。別の実施形態では、抗体はイピリムマブである。さらに別の実施形
態では、抗体は、ダラツムマブである。さらに別の実施形態では、抗体はエロツズマブで
ある。

【0034】

本明細書で提供される様々な方法のさらに他の実施形態では、化合物は分子模倣物であ
る。いくつかの実施形態では、分子模倣物は、アザシチジン、ロミデプシン、ＡＴＲＡ、
シクロホスファミド及びＣｅｌｅｂｒｅｘ（セレブレックス）（登録商標）からなる群よ
り選択される。一実施形態では、分子模倣体はアザシチジンである。別の実施形態では、
分子模倣物は、ロミデプシンである。さらに別の実施形態では、分子模倣物は、ＡＴＲＡ
である。さらに別の実施形態では、分子模倣物は、シクロホスファミドである。一実施形
態では、分子模倣物は、Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）である。

【0035】

本明細書で提供される様々な方法のさらに他の実施形態では、化合物は、酵素（例えば
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ））またはタンパク質分解系（例えばプロテアソーム
）の阻害剤である。いくつかの実施形態では、化合物はＨＤＡＣの阻害剤である。特定の
実施形態では、化合物は、ＨＡＤＣ６の阻害剤である。特定の実施形態では、化合物はＡ
ＣＹ－２４１である。他の実施形態では、化合物は、プロテアソームの阻害剤である。一
実施形態では、化合物はカルフィルゾミブである。別の実施形態では、化合物はイキサゾ
ミブである。

【0036】

いくつかの実施形態では、化合物は、抗がん化合物である。特定の実施形態では、化合
物はアントラサイクリンである。

【0037】

一実施形態では、組み合わせの化合物の１つはデキサメタゾンである。別の実施形態で
は、組み合わせの化合物の１つはＣＭＣである。さらに別の実施形態では、組み合わせの
化合物の１つは、免疫調節化合物である。さらに別の実施形態では、組み合わせの化合物
の１つは、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドからなる群より選択され
る免疫調節化合物である。一実施形態では、組み合わせの化合物の１つはサリドマイドで
ある。別の実施形態では、組み合わせの化合物の１つはレナリドマイドである。さらに別
の実施形態では、組み合わせの化合物の１つはポマリドマイドである。

【0038】

特定の実施形態では、組み合わせの化合物の１つは、イキサゾミブ、カルフィルゾミブ
、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、
デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群より選択される。一実施形態で
は、組み合わせの化合物の１つは、イキサゾミブである。別の実施形態では、組み合わせ
の化合物の１つは、カルフィルゾミブである。さらに別の実施形態では、組み合わせの化
合物の１つは、エロツズマブである。さらに別の実施形態では、組み合わせの化合物の１
つは、ダラツムマブである。一実施形態では、組み合わせの化合物の１つはアザシチジン
である。別の実施形態では、組み合わせの化合物の１つは、ＡＣＹ－２４１である。さら
に別の実施形態では、組み合わせの化合物の１つは、シクロホスファミドである。さらに
別の実施形態では、組み合わせの化合物の１つは、デュルバルマブである。一実施形態で
は、組み合わせの化合物の１つはアブラキサンである。別の実施形態では、組み合わせの
化合物の１つはニボルマブである。

【0039】

一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン及びＣＭＣを含む。別の実施
形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン及び免疫調節化合物を含む。さらに別
の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ならびにサリドマイド、レナ
リドマイド及びポマリドマイドからなる群より選択される免疫調節化合物を含む。一実施
形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン及びサリドマイドを含む。別の実施形
態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン及びレナリドマイドを含む。さらに別の
実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン及びポマリドマイドを含む。

【0040】

一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、ならびにイキサゾ
ミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１
、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群より選
択される化合物を含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免
疫調節化合物、ならびにイキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ
、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン
及びニボルマブからなる群より選択される化合物を含む。さらに別の実施形態では、化合
物の組み合わせは、デキサメタゾン、サリドマイド、ならびにイキサゾミブ、カルフィル
ゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファ
ミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群より選択される化合物を
含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマイ
ド、ならびにイキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチ
ジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボル
マブからなる群より選択される化合物を含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合
わせは、デキサメタゾン、ポマリドマイド、ならびにイキサゾミブ、カルフィルゾミブ、
エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デ
ュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群より選択される化合物を含む。

【0041】

一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びイザゾミブを
含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びカルフ
ィルゾミブを含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、
ＣＭＣ及びエロツズマブを含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキ
サメタゾン、ＣＭＣ、及びダラツムマブを含む。一実施形態では、化合物の組み合わせは
、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びアザシチジンを含む。別の実施形態では、化合物の組み
合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びＡＣＹ－２４１を含む。さらに別の実施形態で
は、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びシクロホスファミドを含む。
さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びデュル
バルマブを含む。一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及
びアブラキサンを含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、Ｃ
ＭＣ、及びニボルマブを含む。

【0042】

一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びイキ
サゾミブを含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免疫調節
化合物、及びカルフィルゾミブを含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは
、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びエロツズマブを含む。さらに別の実施形態では
、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びダラツムマブを含む。
一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びアザシ
チジンを含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免疫調節化
合物、及びＡＣＹ－２４１を含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デ
キサメタゾン、免疫調節化合物、及びシクロホスファミドを含む。さらに別の実施形態で
は、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びデュルバルマブを含
む。一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びア
ブラキサンを含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、免疫調
節化合物、及びニボルマブを含む。

【0043】

一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、サリドマイド及びイキサゾ
ミブを含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、サリドマイド
及びカルフィルゾミブを含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサ
メタゾン、サリドマイド及びエロツズマブを含む。さらに別の実施形態では、化合物の組
み合わせは、デキサメタゾン、サリドマイド及びダラツムマブを含む。一実施形態では、
化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、サリドマイド及びアザシチジンを含む。別の実
施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、サリドマイド、及びＡＣＹ－２４
１を含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、サリドマ
イド及びシクロホスファミドを含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、
デキサメタゾン、サリドマイド及びデュルバルマブを含む。一実施形態では、化合物の組
み合わせは、デキサメタゾン、サリドマイド及びアブラキサンを含む。別の実施形態では
、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、サリドマイド及びニボルマブを含む。

【0044】

一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマイド及びイキサ
ゾミブを含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマ
イド及びカルフィルゾミブを含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デ
キサメタゾン、レナリドマイド及びエロツズマブを含む。さらに別の実施形態では、化合
物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマイド、及びダラツムマブを含む。一実施
形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマイド及びアザシチジンを
含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマイド、及
びＡＣＹ－２４１を含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタ
ゾン、レナリドマイド、及びシクロホスファミドを含む。さらに別の実施形態では、化合
物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマイド及びデュルバルマブを含む。一実施
形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマイド及びアブラキサンを
含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、レナリドマイド及び
ニボルマブを含む。

【0045】

一実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ポマリドマイド、及びイキ
サゾミブを含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ポマリド
マイド、及びカルフィルゾミブを含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは
、デキサメタゾン、ポマリドマイド及びエロツズマブを含む。さらに別の実施形態では、
化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ポマリドマイド及びダラツムマブを含む。一実
施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ポマリドマイド及びアザシチジン
を含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ポマリドマイド、
及びＡＣＹ－２４１を含む。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメ
タゾン、ポマリドマイド、及びシクロホスファミドを含む。さらに別の実施形態では、化
合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ポマリドマイド及びデュルバルマブを含む。一実
施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ポマリドマイド、及びアブラキサ
ンを含む。別の実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ポマリドマイド
及びニボルマブを含む。

【図面の簡単な説明】

【0046】

【図1】図１は、ヒトＣＲＢＮノックイントランスジェニックマウスを作製するフローチャートを示す。

【0047】

【図2】図２は、マウスゲノム中のヒトＣＲＢＮにおけるノッキングの設計を示す：（Ａ）マウスゲノム中のマウスＣＲＢＮ遺伝子の一部（エキソン２及びエキソン３を含む）；（Ｂ）ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部（ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４から開始）、ｂＧＨ ｐＡ、及び２つのｌｏｘＰ部位が隣接するネオマイシン選択カセットを含む標的化構築物；（Ｃ）ヒトＣＲＢＮノックイン後の標的ゲノム；（Ｄ）ネオマイシン選択カセットのＣｒｅ切除後の標的ゲノム。

【0048】

【図3A-3C】図３Ａ～３Ｃは、ドナーベクターＣＲＢＮ ＫＩベクターＶ２－ｐＵＣの一例のクローニング戦略を示す。図３Ａは、ネオマイシン選択カセットを欠く、合成されたＣＲＢＮ ＫＩ標的化構築物を示す。Ｋｐｎ Ｉ及びＸｈｏ Ｉ制限部位は、ネオマイシン選択カセットの挿入部位である。図３Ｂは、ＰＢ－ＭＶ１Ｎｅｏのマップを示しているが、これは、Ｋｐｎ Ｉ及びＸｈｏ Ｉによって切り出され、次にＣＲＢＮ ＫＩ標的化構築物に挿入される１６３７ｂｐ断片であるネオマイシン選択カセットを含む。図３Ｃは、ＣＲＢＮ ＫＩベクターＶ２－ｐＵＣのマップを示しており、これは（１）ｐＵＣ５７－Ｓｉｍｐｌｅクローニングベクターの骨格、（２）ＣＲＢＮの断片をコードするヒトｃＤＮＡ配列（コドン２４、グルタミン酸から開始し、終止コドンで終わる）に続いて、組換えポリ（Ａ）配列（例えば、ｂＧＨｐＡ）及びネオマイシン選択カセット（ＰＧＫ－ＥＭ７プロモーターに制御され、２つのｌｏｘＰ部位が隣接する）、ならびに（３）５ｋｂの５’相同性アーム及び２．８ｋｂ ３’相動性アームを含む。

【0049】

【図4】図４は、３つのＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮの試薬活性試験を示す。Ｃｅｌ－１アッセイは、ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ２が最も活性が高いことを示す。

【0050】

【図5】図５は、正しい５’及び３’標的を有し、ＰＣＲによって確認された３つのマウスＥＳクローンのうちの２つ、Ｄ３及びＥ１を示す。

【0051】

【図6】図６は、５’標的化ＰＣＲによって確認された生殖系列伝達を有する３つのヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスを示す。

【0052】

【図7】図７は、ヒトｃＤＮＡ ＰＣＲによって確認された、生殖細胞系伝達を有する３つのヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスを示す。

【0053】

【図8A-8B】図８Ａ及び８Ｂは、野生型マウス、ヘテロ接合性ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスまたはホモ接合性ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスから単離された脾細胞におけるＡｉｏｌｏｓの分解を、化合物Ｂの１μＭまたは１０μＭで２４時間のエキソビボ処理後に示す。図８Ａはウエスタンブロットを示す。図８Ｂは、積分強度（Ａｉｏｌｏｓ対内部対照ＧＡＰＤＨ）の比を示す。

【0054】

【図9A-9B】図９Ａ及び９Ｂは、野生型マウス、ヘテロ接合性ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスまたはホモ接合性ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスから単離された脾細胞におけるＩｋａｒｏｓの分解を、化合物Ｂの１μＭまたは１０μＭで２４時間のエキソビボ処理後に示す。図９Ａはウエスタンブロットを示す。図９Ｂは、積分強度（Ｉｋａｒｏｓ対、内部対照ＧＡＰＤＨ）の比を示す。

【0055】

【図10A-10B】図１０Ａ及び１０Ｂによって、Ａｉｏｌｏｓの分解が、０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、または１μＭの化合物Ｂで６時間エキソビボ処理した後、野生型マウス、ヘテロ接合ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスまたはホモ接合ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスから単離された脾細胞における化合物Ｂの濃度に依存性であったことが示される。図１０Ａは、ウエスタンブロットを示す。図１０Ｂは、積分強度（Ａｉｏｌｏｓ対内部対照ＧＡＰＤＨ）の比を示す。

【0056】

【図11A-11B】図１１Ａ及び１１Ｂによって、Ｉｋａｒｏｓの分解が、０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、または１μＭの化合物Ｂで６時間エキソビボ処理した後、野生型マウス、ヘテロ接合性ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウス、またはホモ合性ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスから単離された、脾細胞における化合物Ｂの濃度に依存性であったことが示される。図１１Ａはウエスタンブロットを示す。図１１Ｂは、積分強度（Ｉｋａｒｏｓ対、内部対照ＧＡＰＤＨ）の比を示す。

【0057】

【図12A-12B】図１２Ａ及び図１２Ｂは、野生型マウスまたはホモ接合性ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスから単離した脾細胞におけるＧＳＰＴ１の分解を、１ｎＭまたは１００ｎＭでの化合物Ｃの４時間のエキソビボ処理後に示す。図１２Ａはウエスタンブロットを示す。図１２Ｂは、積分強度の比（ＧＳＰＴ１対内部対照ＧＡＰＤＨ）を示す。

【0058】

【図13A-13B】図１３Ａ及び１３Ｂは、野生型マウスまたはホモ接合性ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスから単離した脾細胞におけるＧＳＰＴ１の分解を、１００ｎＭまたは１０μＭでの化合物Ｅの４時間のエキソビボ処理後に示す。図１３Ａはウエスタンブロットを示す。図１３Ｂは、積分強度の比（ＧＳＰＴ１対内部対照ＧＡＰＤＨ）を示す。

【発明を実施するための形態】

【0059】

５．本発明の詳細な説明
本明細書で提供される方法は、部分的に、マウスＥ３ユビキチンリガーゼ複合体が、複
合体の他のヒト化サブユニットを必要とすることなくヒトＣＲＢＮによって活性化され得
るという発見に基づく。

【0060】

本明細書において、ヒトＣＲＢＮトランスジェニック動物、及びヒトＣＲＢＮを発現す
るそれらの動物からの細胞、細胞株、組織、または器官が提供される。また、ヒトＣＲＢ
Ｎトランスジェニック動物を作製するための方法及びそのようなトランスジェニック動物
を使用する方法も提供される。

【0061】

ＣＲＢＮとＣＭＣとの間の相互作用ならびにＣＭＣの安全性及び有効性を研究するのに
適した動物モデルを、本明細書で提供する。マウスは有用な動物モデルである；しかしな
がら、マウスＣＲＢＮは、ヒトＣＲＢＮに結合する特定の化合物（例えば、サリドマイド
）と適切に関与しない。結果として、そのような化合物に関する多くの本質的な疑問は、
マウスモデルでは適切に答えることができない。したがって、本明細書で提供されるヒト
ＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスは、有効性、毒性、特異性、作用機序など
のＣＲＢＮを標的とする新薬の開発に関する重要な問題に取り組む上で有用である。また
、このトランスジェニックマウスを、他の疾患モデルマウスと育種して、さらなる研究の
ためのより広いスペクトルの遺伝的背景を作製してもよい。

【0062】

本開示をさらに説明する前に、本開示は本明細書に記載の特定の実施形態に限定されず
、本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明する目的に過ぎず、これに限定され
るものではないことも理解されるべきである。

【0063】

５．１定義
「ヒトセレブロン」、「ヒトＣＲＢＮ」または「ｈＣＲＢＮ」という用語は、ポリペプ
チド（「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は本明細書では互換的に使用
される）であって、ヒトＣＲＢＮタンパク質のアミノ酸配列（例えば、以下のアミノ酸配
列を有するヒトＣＲＢＮアイソフォーム１、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０
５７３８６：ＭＡＧＥＧＤＱＱＤＡＡＨＮＭＧＮＨＬＰＬＬＰＡＥＳＥＥＥＤＥＭＥＶＥ
ＤＱＤＳＫＥＡＫＫＰＮＩＩＮＦＤＴＳＬＰＴＳＨＴＹＬＧＡＤＭＥＥＦＨＧＲＴＬＨＤ
ＤＤＳＣＱＶＩＰＶＬＰＱＶＭＭＩＬＩＰＧＱＴＬＰＬＱＬＦＨＰＱＥＶＳＭＶＲＮＬＩ
ＱＫＤＲＴＦＡＶＬＡＹＳＮＶＱＥＲＥＡＱＦＧＴＴＡＥＩＹＡＹＲＥＥＱＤＦＧＩＥＩ
ＶＫＶＫＡＩＧＲＱＲＦＫＶＬＥＬＲＴＱＳＤＧＩＱＱＡＫＶＱＩＬＰＥＣＶＬＰＳＴＭ
ＳＡＶＱＬＥＳＬＮＫＣＱＩＦＰＳＫＰＶＳＲＥＤＱＣＳＹＫＷＷＱＫＹＱＫＲＫＦＨＣ
ＡＮＬＴＳＷＰＲＷＬＹＳＬＹＤＡＥＴＬＭＤＲＩＫＫＱＬＲＥＷＤＥＮＬＫＤＤＳＬＰ
ＳＮＰＩＤＦＳＹＲＶＡＡＣＬＰＩＤＤＶＬＲＩＱＬＬＫＩＧＳＡＩＱＲＬＲＣＥＬＤＩ
ＭＮＫＣＴＳＬＣＣＫＱＣＱＥＴＥＩＴＴＫＮＥＩＦＳＬＳＬＣＧＰＭＡＡＹＶＮＰＨＧ
ＹＶＨＥＴＬＴＶＹＫＡＣＮＬＮＬＩＧＲＰＳＴＥＨＳＷＦＰＧＹＡＷＴＶＡＱＣＫＩＣ
ＡＳＨＩＧＷＫＦＴＡＴＫＫＤＭＳＰＱＫＦＷＧＬＴＲＳＡＬＬＰＴＩＰＤＴＥＤＥＩＳ
ＰＤＫＶＩＬＣＬ（配列番号１）；または以下のアミノ酸配列を有する、ヒトＣＲＢＮア
イソフォーム２、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１１６６９５３：ＭＡＧ
ＥＧＤＱＱＤＡＡＨＮＭＧＮＨＬＰＬＬＰＥＳＥＥＥＤＥＭＥＶＥＤＱＤＳＫＥＡＫＫＰ
ＮＩＩＮＦＤＴＳＬＰＴＳＨＴＹＬＧＡＤＭＥＥＦＨＧＲＴＬＨＤＤＤＳＣＱＶＩＰＶＬ
ＰＱＶＭＭＩＬＩＰＧＱＴＬＰＬＱＬＦＨＰＱＥＶＳＭＶＲＮＬＩＱＫＤＲＴＦＡＶＬＡ
ＹＳＮＶＱＥＲＥＡＱＦＧＴＴＡＥＩＹＡＹＲＥＥＱＤＦＧＩＥＩＶＫＶＫＡＩＧＲＱＲ
ＦＫＶＬＥＬＲＴＱＳＤＧＩＱＱＡＫＶＱＩＬＰＥＣＶＬＰＳＴＭＳＡＶＱＬＥＳＬＮＫ
ＣＱＩＦＰＳＫＰＶＳＲＥＤＱＣＳＹＫＷＷＱＫＹＱＫＲＫＦＨＣＡＮＬＴＳＷＰＲＷＬ
ＹＳＬＹＤＡＥＴＬＭＤＲＩＫＫＱＬＲＥＷＤＥＮＬＫＤＤＳＬＰＳＮＰＩＤＦＳＹＲＶ
ＡＡＣＬＰＩＤＤＶＬＲＩＱＬＬＫＩＧＳＡＩＱＲＬＲＣＥＬＤＩＭＮＫＣＴＳＬＣＣＫ
ＱＣＱＥＴＥＩＴＴＫＮＥＩＦＳＬＳＬＣＧＰＭＡＡＹＶＮＰＨＧＹＶＨＥＴＬＴＶＹＫ
ＡＣＮＬＮＬＩＧＲＰＳＴＥＨＳＷＦＰＧＹＡＷＴＶＡＱＣＫＩＣＡＳＨＩＧＷＫＦＴＡ
ＴＫＫＤＭＳＰＱＫＦＷＧＬＴＲＳＡＬＬＰＴＩＰＤＴＥＤＥＩＳＰＤＫＶＩＬＣＬ（配
列番号２）、その各々は、その全体が参照によって本明細書に援用される）、及び関連の
ポリペプチド、例としては、そのＳＮＰバリアントを含むポリペプチドを指す。関連のヒ
トＣＲＢＮポリペプチドとしては、対立遺伝子バリアント（例えば、ＳＮＰバリアント）
、スプライスバリアント、断片、誘導体、置換バリアント、欠失バリアント、挿入バリア
ント、融合ポリペプチド、及び種間相同体が挙げられ、これは特定の実施形態では、ヒト
ＣＲＢＮ活性を保持するか、及び／または抗ｈＣＲＢＮ免疫応答を生成するに十分である
。

【0064】

「マウスセレブロン」、「マウスＣＲＢＮ」または「ｍＣＲＢＮ」という用語は、ポリ
ペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は本明細書では互換的に
使用される）であって、マウスＣＲＢＮタンパク質のアミノ酸配列（例えば、以下のアミ
ノ酸配列を有するマウスＣＲＢＮアイソフォーム１、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号
ＮＰ＿０６７４２４．２：
ＭＡＧＥＧＤＱＱＤＡＡＨＮＭＧＮＨＬＰＬＬＰＤＳＥＤＥＤＤＥＩＥＭＥＶＥＤＱＤＳ
ＫＥＡＲＫＰＮＩＩＮＦＤＴＳＬＰＴＳＨＴＹＬＧＡＤＭＥＥＦＨＧＲＴＬＨＤＤＤＳＣ
ＱＶＩＰＶＬＰＥＶＬＭＩＬＩＰＧＱＴＬＰＬＱＬＳＨＰＱＥＶＳＭＶＲＮＬＩＱＫＤＲ
ＴＦＡＶＬＡＹＳＮＶＱＥＲＥＡＱＦＧＴＴＡＥＩＹＡＹＲＥＥＱＥＦＧＩＥＶＶＫＶＫ
ＡＩＧＲＱＲＦＫＶＬＥＬＲＴＱＳＤＧＩＱＱＡＫＶＱＩＬＰＥＣＶＬＰＳＴＭＳＡＶＱ
ＬＥＳＬＮＫＣＱＶＦＰＳＫＰＩＳＷＥＤＱＹＳＣＫＷＷＱＫＹＱＫＲＫＦＨＣＡＮＬＴ
ＳＷＰＲＷＬＹＳＬＹＤＡＥＴＬＭＤＲＩＫＫＱＬＲＥＷＤＥＮＬＫＤＤＳＬＰＥＮＰＩ
ＤＦＳＹＲＶＡＡＣＬＰＩＤＤＶＬＲＩＱＬＬＫＩＧＳＡＩＱＲＬＲＣＥＬＤＩＭＮＫＣ
ＴＳＬＣＣＫＱＣＱＥＴＥＩＴＴＫＮＥＩＦＳＬＳＬＣＧＰＭＡＡＹＶＮＰＨＧＹＶＨＥ
ＴＬＴＶＹＫＡＳＮＬＮＬＩＧＲＰＳＴＶＨＳＷＦＰＧＹＡＷＴＩＡＱＣＫＩＣＡＳＨＩ
ＧＷＫＦＴＡＴＫＫＤＭＳＰＱＫＦＷＧＬＴＲＳＡＬＬＰＴＩＰＥＴＥＤＥＩＳＰＤＫＶ
ＩＬＣＬ（配列番号３）；または以下のアミノ酸配列を有するマウスＣＲＢＮアイソフォ
ーム２、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿７８０５６６．１：ＭＡＧＥＧＤＱＱ
ＤＡＡＨＮＭＧＮＨＬＰＬＬＰＡＤＳＥＤＥＤＤＥＩＥＭＥＶＥＤＱＤＳＫＥＡＲＫＰＮ
ＩＩＮＦＤＴＳＬＰＴＳＨＴＹＬＧＡＤＭＥＥＦＨＧＲＴＬＨＤＤＤＳＣＱＶＩＰＶＬＰ
ＥＶＬＭＩＬＩＰＧＱＴＬＰＬＱＬＳＨＰＱＥＶＳＭＶＲＮＬＩＱＫＤＲＴＦＡＶＬＡＹ
ＳＮＶＱＥＲＥＡＱＦＧＴＴＡＥＩＹＡＹＲＥＥＱＥＦＧＩＥＶＶＫＶＫＡＩＧＲＱＲＦ
ＫＶＬＥＬＲＴＱＳＤＧＩＱＱＡＫＶＱＩＬＰＥＣＶＬＰＳＴＭＳＡＶＱＬＥＳＬＮＫＣ
ＱＶＦＰＳＫＰＩＳＷＥＤＱＹＳＣＫＷＷＱＫＹＱＫＲＫＦＨＣＡＮＬＴＳＷＰＲＷＬＹ
ＳＬＹＤＡＥＴＬＭＤＲＩＫＫＱＬＲＥＷＤＥＮＬＫＤＤＳＬＰＥＮＰＩＤＦＳＹＲＶＡ
ＡＣＬＰＩＤＤＶＬＲＩＱＬＬＫＩＧＳＡＩＱＲＬＲＣＥＬＤＩＭＮＫＣＴＳＬＣＣＫＱ
ＣＱＥＴＥＩＴＴＫＮＥＩＦＳＬＳＬＣＧＰＭＡＡＹＶＮＰＨＧＹＶＨＥＴＬＴＶＹＫＡ
ＳＮＬＮＬＩＧＲＰＳＴＶＨＳＷＦＰＧＹＡＷＴＩＡＱＣＫＩＣＡＳＨＩＧＷＫＦＴＡＴ
ＫＫＤＭＳＰＱＫＦＷＧＬＴＲＳＡＬＬＰＴＩＰＥＴＥＤＥＩＳＰＤＫＶＩＬＣＬ（配列
番号４）、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、及び関連
ポリペプチド（そのＳＮＰバリアントを含む）を含む、ポリペプチドを指す。関連するマ
ウスＣＲＢＮポリペプチドとしては、特定の実施形態では、マウスＣＲＢＮ活性を保持す
るか、及び／または抗ｍＣＲＢＮ免疫応答を生成するのに十分である、対立遺伝子バリア
ント（例えば、ＳＮＰバリアント）、スプライスバリアント、断片、誘導体、置換バリア
ント、欠失バリアント、挿入バリアント、融合ポリペプチド及び種間相同体が挙げられる
。

【0065】

本明細書中で使用される場合、「セレブロン関連タンパク質」、「ＣＲＢＮ関連タンパ
ク質」または「ＣＡＰ」という用語は、任意の種（例えば、ｈＣＲＢＮまたはｍＣＲＢＮ
）由来のＣＲＢＮタンパク質と、直接的または間接的に相互作用するか、または結合する
タンパク質を指す。例えば、この用語は、セレブロンに直接結合する任意のタンパク質、
ならびにセレブロン経路の間接的下流エフェクターである任意のタンパク質を指す。特定
の実施形態では、「ＣＡＰ」は、ＣＲＢＮの基質、例えば、ＣＲＢＮを含むＥ３ユビキチ
ンリガーゼ複合体のタンパク質基質、またはその下流の基質である。

【0066】

本明細書で使用する「動物」という用語には、ヒト以外の全ての脊椎動物及び無脊椎動
物が含まれる。また、胚及び胎児期を含む、発達の全ての段階における個々の動物も含ま
れる。

【0067】

「トランスジェニック動物」という用語は、その細胞の一部もしくは全部において染色
体外要素として非内因性（すなわち外因性）核酸配列を有するか、またはその生殖系列Ｄ
ＮＡ（すなわち、その細胞の大部分または全部のゲノム配列中に）安定して組み込まれて
いる、動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ブタ、ウシなど）を指す。異種核酸
は、例えば、宿主動物の卵、胚または胚性幹細胞の遺伝子操作、及び遺伝子操作された卵
、胚または胚性幹細胞から生成される子孫動物のその後の育種によって、そのようなトラ
ンスジェニック動物の生殖系列に導入される。

【0068】

「生殖系列伝達」を有するトランスジェニック動物とは、遺伝情報が生殖系列細胞に導
入され、それによって遺伝子情報を子孫に伝達する能力を付与するトランスジェニック動
物を指す。そのような子孫が実際にその遺伝情報の一部または全部を所有している場合、
その子孫もトランスジェニック動物である。

【0069】

「トランスフェクション」という用語は、細胞による非内因性（すなわち、外因性また
は外来性）ＤＮＡの取り込みを指す。トランスフェクションは、一過性トランスフェクシ
ョン（すなわち、導入されたＤＮＡは、染色体外に残っており、細胞分裂中に希釈される
）であっても、または安定なトランスフェクション（すなわち、導入されたＤＮＡが細胞
ゲノムに組み込まれるかまたは安定したエピソーム要素として維持される）であってもよ
い。

【0070】

本明細書においてヒトＣＲＢＮの修飾因子として使用される場合、「生物学的に活性な
」または「機能的」という用語は、天然のヒトＣＲＢＮに起因する機能的特徴の少なくと
も１つを示すポリペプチド、例えば、Ｅ３ユビキチン－リガーゼ複合体を形成し、標的タ
ンパク質のユビキチン化及びその後のプロテアソーム分解を媒介する能力を示すポリペプ
チドを指す。

【0071】

遺伝子の「ノックアウト」という用語は、標的遺伝子の発現及び／または機能の低下を
もたらす遺伝子配列の改変を意味し、好ましくは、標的遺伝子発現は、検出できないかま
たは有意ではない。内因性遺伝子のノックアウトとは、遺伝子の発現及び／または機能が
実質的に低下して、その結果、それが検出できないか、またはわずかしか存在しないこと
を意味する。「ノックアウト」トランスジェニックとは、遺伝子のヘテロ接合性ノックア
ウトまたは遺伝子のホモ接合性ノックアウトを有するトランスジェニック動物であり得る
。「ノックアウト」としてはまた、標的遺伝子の改変を促進する物質への動物の曝露、標
的遺伝子部位での組換えを促進する酵素の導入などの特定の条件が満たされたときに標的
遺伝子の改変が起こり得る、条件付きノックアウト（例えば、Ｃｒｅ－ｌｏｘ系のＣｒｅ
）、または標的遺伝子改変を出生後に指示する他の条件が挙げられる。

【0072】

標的遺伝子の「ノックイン」という用語は、例えば、標的遺伝子の１つ以上のコピーの
導入によって、または標的遺伝子の発現を増強する調節配列を機能的に挿入することによ
って、標的遺伝子の変化した（例えば、増大した（異所性を含む））発現をもたらす宿主
細胞ゲノムにおける改変を意味する。標的遺伝子は、内因性であっても非内因性でもよい
。本発明の目的の「ノックイン」トランスジェニック動物は、ヒトまたはヒト化ＣＲＢＮ
またはその断片のノックインを有するトランスジェニック動物である。そのようなトラン
スジェニック動物は、ヒトもしくはヒト化ＣＲＢＮ遺伝子のためのヘテロ接合性ノックイ
ンであってもよく、またはヒトもしくはヒト化ＣＲＢＮ遺伝子のノックインのためのホモ
接合性であってもよい。条件付き「ノックアウト」と同様に、「ノックイン」はまた、条
件付きノックインを包含し、ここで標的遺伝子の変化した発現は、特定の条件を満たすと
起こり得る。

【0073】

「構築物」という用語は、特定のヌクレオチド配列の発現の目的ために生成されるか、
または他の組換えヌクレオチド配列の構築に使用される、組換え核酸、一般に組換えＤＮ
Ａを指す。

【0074】

「ベクター」という用語は、遺伝子配列を標的細胞（例えば、ウイルスベクター、非ウ
イルスベクター、微粒子担体、及びリポソーム）に移すことができる核酸アセンブリを指
す。「発現ベクター」という用語は、細胞中の目的の配列または遺伝子の発現を指令し得
るプロモーターを含む核酸アセンブリを指す。本明細書において互換的に使用される場合
、「ベクター構築物」、「発現ベクター」、「発現構築物」及び「遺伝子導入ベクター」
は、遺伝子配列を標的細胞に移入し得、その標的細胞中で遺伝子の発現を指令し得る任意
の核酸構築物を指す。したがって、この用語は、クローニング及び発現ビヒクル、ならび
にウイルスベクターを包含する。

【0075】

本明細書において交換可能に使用される「プロモーターエレメント」及び「プロモータ
ー」という用語は、細胞内で（例えば、直接的にまたは他のプロモーターに結合したタン
パク質または物質を介して）ＲＮＡポリメラーゼに結合し得、コード配列の転写を開始し
得るＤＮＡ調節性配列を指す。プロモーターは、エンハンサー及びリプレッサー配列を含
む他の発現制御配列と機能的に関連していてもよい。

【0076】

「作動可能に連結された」という用語は、標的遺伝子をコードするＤＮＡ配列及びＤＮ
Ａ調節配列（例えば、プロモーター）が、適切な分子（例えば、転写因子）が調節配列に
結合するとき、標的遺伝子の発現を可能にするように接続されることを意味する。

【0077】

「～に相当する、～に対応する」または「～に相当している、～に対応している」とい
う用語は、指定された配列と相同、実質的に等価または機能的に等価であることを指す。

【0078】

「トランスジェニック構築物」、「トランスジェニック遺伝子構築物」または「標的化
構築物」という用語は、宿主細胞に導入され得、かつその宿主細胞中でポリヌクレオチド
を発現し得る、対象ポリヌクレオチド、例えばヒトＣＲＢＮポリヌクレオチドまたはその
断片を含有する核酸分子を指す。

【0079】

「核酸」、「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書
中で互換的に使用されて、ヌクレオチドからなる任意の長さのポリマー、例えば、デオキ
シリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、または合成的に生じる化合物（これは、
２つの天然に存在する核酸のものと類似の配列特異的方式で天然に存在する核酸とハイブ
リダイズし得、例えば、ワトソン－クリック塩基対形成相互作用に関与し得る）を述べる
。本明細書においてポリヌクレオチド配列の文脈で使用される場合、「塩基」（または「
塩基（複数）」）という用語は、「ヌクレオチド」（または「ヌクレオチド（複数）」）
、すなわち、ポリヌクレオチドのモノマーサブユニットと同義である。「ヌクレオシド」
及び「ヌクレオチド」という用語は、既知のプリン及びピリミジン塩基だけでなく、改変
された他の複素環塩基も含む部分も含むことが意図される。このような修飾には、メチル
化プリンまたはピリミジン、アシル化プリンまたはピリミジン、アルキル化リボースまた
は他の複素環が挙げられる。さらに、「ヌクレオシド」及び「ヌクレオチド」という用語
には、従来のリボース及びデオキシリボース糖だけでなく他の糖も含む部分が含まれる。
改変されたヌクレオシドまたはヌクレオチドはまた、例えば、ヒドロキシル基の１つ以上
がハロゲン原子もしくは脂肪族基で置換されているか、またはエーテル、アミンなどとし
て官能化されている糖部分の修飾を含む。「類似体」とは、模倣物、誘導体、類似の構造
または他の同様の用語であるとして文献で認識されている構造的特徴を有する分子を指し
、これには、例えば、非天然ヌクレオチドを組み込むポリヌクレオチド、ヌクレオチド模
倣物、例えば、２’－修飾ヌクレオシド、ペプチド核酸、オリゴマーヌクレオシドホスホ
ネート、及び保護基または連結部分のような置換基を付加した任意のポリヌクレオチドが
挙げられる。

【0080】

本明細書において交換可能に使用される「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパ
ク質」という用語は、ペプチド結合を介して連結された直列アレイ中の３つ以上のアミノ
酸のポリマーを指す。「ポリペプチド」という用語は、タンパク質、タンパク質断片、タ
ンパク質類似体、オリゴペプチドなどを包含する。本明細書で使用する「ポリペプチド」
という用語は、ペプチドを指す場合もある。ポリペプチドを構成するアミノ酸は、天然由
来であってもよいし、合成されていてもよい。ポリペプチドは、生物学的試料から精製し
てもよい。ポリペプチド、タンパク質、またはペプチドはまた、修飾ポリペプチド、タン
パク質、及びペプチド、例えば、グリコポリペプチド、糖タンパク質、もしくは糖ペプチ
ド；またはリポポリペプチド、リポタンパク質もしくはリポペプチドを包含する。

【0081】

「細胞」または「細胞（複数）」という用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのよう
な細胞（複数可）の子孫または可能性のある子孫をも指す。本明細書中で使用される用語
の範囲は、突然変異または環境の影響に起因して、後の世代において特定の改変が起こり
得るため、実際には親細胞と同一ではない場合もある子孫を包含する。

【0082】

本明細書中で使用される場合、「がん」及び「がん性」という用語は、典型的には調節
されていない細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、または記載
する。がんの例としては、限定するものではないが、血液媒介癌（例えば、多発性骨髄腫
、リンパ腫及び白血病）及び固形癌が挙げられる。「がん」という用語は、限定するもの
ではないが、膀胱、骨、血液、脳、乳房、子宮頸部、胸部、結腸、子宮内膜、食道、眼、
頭部、腎臓、肝臓、リンパ節、肺、口、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、皮膚、胃、精
巣、咽喉及び子宮のがんを含む組織または器官の疾患を指す。特定のがんとしては、限定
するものではないが、進行悪性腫瘍、アミロイドーシス、神経芽腫、髄膜腫、血管周囲細
胞腫、多形性脳芽細胞腫、多形膠芽腫、膠芽腫、脳幹神経膠腫、予後不良悪性脳腫瘍、悪
性神経膠腫、再発性悪性神経膠腫、未分化星状細胞腫、未分化希突起グリオーマ、神経内
分泌腫瘍、直腸腺癌、デュークスＣ＆Ｄ結腸直腸癌、切除不能結腸直腸癌、転移性肝細胞
癌、カポジ肉腫、カロトタイプ急性骨髄芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリ
ンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫、低
悪性度濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、悪性胸水浸潤中皮腫症候群、腹膜癌、
乳頭状漿液癌、婦人科肉腫、軟部組織肉腫、強皮症、皮膚血管炎、ランゲルハンス細胞組
織球症、平滑筋肉腫、進行性骨化性線維形成異常症、ホルモン抵抗性前立腺癌、切除高リ
スク軟部組織肉腫、切除不能肝細胞癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、くす
ぶり型骨髄腫、無痛性骨髄腫、卵管癌、アンドロゲン非依存性前立腺癌、アンドロゲン依
存性ステージＩＶ非転移性前立腺癌、ホルモン非感受性前立腺癌、化学療法非感受性前立
腺癌、乳頭状甲状腺癌、濾胞性甲状腺癌、髄様甲状腺癌及び平滑筋腫が挙げられる。

【0083】

本明細書中で使用されているように、他に特定しない限り、「治療する」、「治療する
こと」及び「治療」という用語は、患者が特定の疾患に罹患している間に起こる作用であ
って、その疾患の重篤度を低下するか、またはその疾患の進行を遅らせるか、もしくは遅
延させる作用を指す。

【0084】

本明細書において交換可能に使用される場合、「化合物」及び「処置化合物」という用
語は、任意の薬学的に許容可能な形態の分子を包含し、これにはその立体異性体または立
体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロ
ドラッグ、水和物、共結晶、包接体、または多形体を含む。特に、化合物が光学活性であ
る場合、化合物への言及は、化合物のエナンチオマーのそれぞれ、ならびにエナンチオマ
ーのラセミ混合物を包含し得る。

【0085】

「ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ調節化合物」または「ＣＭＣ」という用語は、Ｃ
ＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を直接または間接的に調節する分子を指す。いく
つかの実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮに直接結合し、ＣＲＢＮタンパク質の構造変化
を誘導し得る。他の実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体
の他のサブユニットに直接結合し得る。

【0086】

「免疫調節化合物」という用語は、インビトロ（例えば、単離された細胞、細胞株、組
織、または器官）またはインビボ（例えば、動物中）で免疫調節活性を有する、すなわち
、免疫または炎症性応答を調節する分子を指す。免疫調節化合物の非限定的な例としては
、サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイドが挙げられる。

【0087】

「生物学的マーカー」または「バイオマーカー」とは、その検出が特定の生物学的状態
、例えば、ある疾患の存在を示す物質である。いくつかの実施形態では、バイオマーカー
は個々に決定することができる。他の実施形態では、いくつかのバイオマーカーを同時に
測定することができる。いくつかの実施形態では、「バイオマーカー」は、疾患のリスク
もしくは進行、または所与の処置に対する疾患の感受性と相関し得るｍＲＮＡ発現のレベ
ルの変化を示す。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ
などの核酸である。核酸の相対的なレベルは、当該分野で公知の方法によって決定するこ
とができる。例えば、ノーザンブロット、ＲＴ－ＰＣＲ、または他の方法を用いてもよい
。さらなる実施形態では、「バイオマーカー」は、疾患のリスクもしくは進行または処置
に対する患者の感受性と相関し得る、ポリペプチドまたはタンパク質発現のレベルの変化
を示す。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、ポリペプチドもしくはタンパク質
、またはその断片であってもよい。特異的タンパク質の相対的レベルは、当技術分野で公
知の方法によって決定してもよい。例えば、抗体ベースの方法、例えば、イムノブロット
、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、または他の方法を使用してもよい。

【0088】

本明細書において交換可能に使用される「抗体」、「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」
という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する完全にアセンブルした抗体及び抗
体断片を包含する。本明細書に提供される抗体としては、限定するものではないが、合成
抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え産生抗体、多重特異性抗体（二
重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、イントラボディ、一本鎖Ｆ
ｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異的、二価特異的など）、ラクダ化抗体、Ｆａｂ断片、
Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗
体、及び上記のいずれかのエピトープ結合断片が挙げられる。具体的には、本明細書で提
供される抗体としては、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な
部分、すなわち、抗原結合ドメインまたはＣＲＢＮ抗原に免疫特異的に結合する抗原結合
部位を含む分子（例えば、抗ＣＲＢＮ抗体の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ））が挙
げられる。本明細書で提供される抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、
ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ
１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）であってもよい。いくつか
の実施形態では、抗ＣＲＢＮ抗体は、完全ヒト型モノクローナルＣＲＢＮ抗体などの完全
ヒト抗体である。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ抗体、また
はそのサブクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４）である。

【0089】

本明細書で使用される「発現する」または「発現」という用語は、遺伝子の２つの核酸
鎖のうちの１つの領域に対して、少なくとも部分的に相補的なメッセンジャーＲＮＡ（ｍ
ＲＮＡ）分子を産生する遺伝子（例えば、遺伝子をコードするＤＮＡ配列）からの転写を
指す。本明細書で使用する「発現した」または「発現」という用語はまた、タンパク質、
ポリペプチド、またはその一部を産生するｍＲＮＡ分子からの翻訳を指す。

【0090】

「レベル」という用語は、バイオマーカー分子の量、蓄積または速度を指す。レベルは
、例えば、ある遺伝子によってコードされるｍＲＮＡの量もしくは合成速度、ある遺伝子
によってコードされるポリペプチドもしくはタンパク質の量もしくは合成速度、またはあ
る細胞もしくは生物学的液体中に蓄積された生物学的分子の量もしくは合成速度によって
提示され得る。「レベル」という用語は、定常状態または非定常状態条件下で決定される
、試料中の分子の絶対量または分子の相対量を指す。

【0091】

本明細書で使用する「決定する」、「測定する」、「推定する」、「評価する」及び「
アッセイする」という用語は、一般に、任意の形態の測定を指し、ある要素が存在するか
否かを決定することを包含する。これらの用語には、定量的及び／または定性的な決定が
含まれる。評価は、相対的であっても、または絶対的なものであってもよい。「存在の評
価」は、存在するものの量を決定すること、及びそれが存在するか否かを決定することを
包含し得る。

【0092】

「相補的」という用語は、ポリヌクレオチドの配列に基づくポリヌクレオチド間の特異
的結合を指す。本明細書中で使用される場合、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌ
クレオチドは、それらがストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションアッセイに
おいて互いに結合する場合、例えば、ハイブリダイゼーションアッセイにおいて所定レベ
ルまたは検出可能なレベルのシグナルを生成する場合に、相補的である。ポリヌクレオチ
ドの部分は、ミスマッチ、挿入、または欠損した配列の小さな領域（例えば、約３塩基未
満）が存在してもよいが、ＡとＴ（またはＵ）との対及びＧとＣとの対のような従来の塩
基対形成規則に従う場合、互いに対して相補的である。
２つの核酸配列の文脈における「配列同一性」または「同一性」とは、特定の比較ウィ
ンドウにわたって最大の対応のために整列される場合に同じであり、付加、欠失及び置換
を考慮し得る２つの配列中の残基を指す。当業者は、比較される配列の全長にわたって最
大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させ
るための適切なパラメーターを決定し得る。

【0093】

ポリヌクレオチドの文脈におけるそれらの様々な文法的形態における「実質的同一性」
または「相同」という用語は、一般に、あるポリヌクレオチドが、所望の同一性、例えば
少なくとも６０％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少
なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９９％の同一性
を参照配列と比較して有する配列を含むことを意味する。ヌクレオチド配列が実質的に同
一であるという別の指標は、２つの分子がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダ
イズするかどうかである。

【0094】

「単離された」及び「精製された」という用語は、物質（例えば、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、
またはタンパク質）とともに使用される場合、その物質（例えば、ｍＲＮＡ、ＤＮＡまた
はタンパク質）の単離であって、それが存在する試料の実質的な部分、すなわち典型的に
は天然または非単離状態で見出される物質の部分よりも大きい部分をその物質が含むよう
な物質の単離を指す。典型的には、試料の実質的な部分は、例えば試料の１％以上、２％
以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、５０％以上、通常は、最大約９０％～１００
％を含む。例えば、単離されたｍＲＮＡの試料は、典型的には、少なくとも約１％の総ｍ
ＲＮＡを含んでもよい。ポリヌクレオチドを精製する技術は、当該技術分野において周知
であり、例えば、ゲル電気泳動、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマ
トグラフィー、フローソーティング、及び密度による沈降が挙げられる。

【0095】

本明細書中で使用される場合、「結合」という用語は、直接的または間接的な結合を示
す。化学構造の文脈において、「結合した」（または「結合された」）とは、２つの部分
を直接結合するか、または２つの部分を間接的に結合する（例えば、連結基または分子の
他の任意の介在部分を介する）化学結合の存在を指す場合がある。化学結合は、共有結合
、イオン結合、配位錯体、水素結合、ファンデルワールス相互作用、もしくは疎水性スタ
ッキングであってもよく、または複数のタイプの化学結合の特性を示す場合もある。特定
の例において、「結合された」には、その結合が直接的である実施形態及びその結合が間
接的である実施形態が含まれる。

【0096】

本明細書で使用される「試料」という用語は、典型的には必ずしもそうではないが、流
体型の材料または材料の混合物に関し、これには、目的の１つ以上の成分を含む。「試料
」とは、生物学的な組織または流体起源の試料を含む生物学的対象から得られた生物学的
試料であってもよく、インビボまたはインサイチュで得られても、到達されても、または
収集されてもよい。生物学的試料としてはまた、前がん細胞またはがん細胞または組織を
含有する生物学的対象の領域由来の試料も含む。そのような試料は、限定するものではな
いが、哺乳動物から単離された器官、組織、及び細胞であってもよい。例示的な生物学的
試料としては、限定するものではないが、細胞溶解物、細胞培養物、細胞株、組織、口腔
組織、胃腸組織、器官、オルガネラ、生物学的液体、血液試料、尿試料、皮膚試料などが
挙げられる。好ましい生物学的試料としては、限定するものではないが、全血、部分精製
血液、ＰＢＭＣ、組織生検などが挙げられる。

【0097】

本明細書中で使用される「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」という用語は、一
般に、例えば、米国特許第４，６８３，１９５号に記載されているように、少量の核酸、
ＲＮＡ及び／またはＤＮＡが増幅される手順を指す。一般には、オリゴヌクレオチドプラ
イマーを設計することができるように、目的の領域の末端または範囲外からの配列情報が
利用可能である必要がある；これらのプライマーは、増幅されるべき鋳型の反対側の鎖と
配列が同一または類似するであろう。２つのプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅
された物質の末端と一致し得る。ＰＣＲは、特定のＲＮＡ配列、全ゲノムＤＮＡ由来の特
定のＤＮＡ配列、及び全細胞ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ、バクテリオファージ、また
はプラスミド配列などを増幅するために使用され得る。一般的には、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ
ａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．
１９８７，５１：２６３－２７３；ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ
Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｅｒｌｉｃｈ，ｅｄ．，１９８９）を参照のこと。

【0098】

「互変異性体」は、本明細書中で使用される場合、互いの平衡状態にある化合物の異性
体型を指す。異性体型の濃度は、その化合物が見出される環境に依存し、例えば、その化
合物が固体であるか、または有機もしくは水溶液中にあるかによって異なる場合がある。
例えば、水溶液中で、ピラゾールは、互いの互変異性体と呼ばれる以下の異性体型を呈す
る場合がある：

【化1】

。

【0099】

本明細書中で使用され、かつ他に示されない限り、「薬学的に許容される塩」という用
語は、その用語が指す化合物の非毒性の酸及び塩基付加塩を包含する。許容される非毒性
酸付加塩としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、メタンスルホン酸、酢酸
、酒石酸、乳酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、マレイン酸、ソルビン酸、アコニット
酸、サリチル酸、フタル酸、エンボリック酸（ｅｍｂｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、エナント酸
などを含む当業界で公知の有機及び無機酸から誘導される塩が挙げられる。性質が酸性で
ある化合物は、様々な薬学的に許容される塩基と塩を形成し得る。このような酸性化合物
の薬学的に許容される塩基付加塩を製造するために使用することができる塩基は、非毒性
の塩基付加塩、すなわち薬理学的に許容されるカチオン、例えば、限定するものではない
が、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩（特に、カルシウム塩、マグネシウム塩、ナ
トリウム塩、またはカリウム塩）を含む塩を形成する塩基である。適切な有機塩基として
は、限定するものではないが、Ｎ，Ｎ－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン
、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルマイン（Ｎ－メチルグルカミ
ン）、リジン及びプロカインが挙げられる。

【0100】

本明細書中で使用される場合、他に示されない限り、「溶媒和物」という用語は、非共
有結合分子間力によって結合された化学量論量または非化学量論量の溶媒をさらに含む本
明細書に提供される化合物またはその塩を意味する。溶媒が水である場合、溶媒和物は水
和物である。

【0101】

本明細書中で使用される場合、他に示されない限り、用語「共結晶」は、結晶格子中に
２つ以上の化合物を含む結晶形を意味する。共結晶は、非イオン性相互作用を介して結晶
格子中に一緒に結合した２つ以上の不揮発性化合物の結晶性分子複合体を含む。本明細書
で使用される場合、共結晶は、治療用化合物及び１つ以上の追加の不揮発性化合物（複数
可）（本明細書では対抗分子（複数可）と呼ばれる）を含む結晶性分子複合体を含む医薬
用共結晶を含む。医薬用共結晶中の対向分子は、典型的には、例えば、食品添加物、防腐
剤、薬学的賦形剤、または他の活性医薬成分（ＡＰＩ）などの非毒性の薬学的に受容可能
な分子である。いくつかの実施形態では、医薬品共結晶は、ＡＰＩの化学構造的完全性を
損なうことなく、薬物製品の特定の物理化学的特性（例えば、溶解度、溶解速度、バイオ
アベイラビリティ及び／または安定性）を高める。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，
ＭＲＳ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ２００６，３１，８７５－８７９；Ｔｒａｓｋ，Ｍｏｌ．Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ２００７，４（３）：３０１－３０９；Ｓｃｈｕｌｔｈｅｉ
ｓｓ ＆ Ｎｅｗｍａｎ，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｅｓｉｇｎ ２００９
，９（６）：２９５０－２９６７；Ｓｈａｎ ＆ Ｚａｗｏｒｏｔｋｏ，Ｄｒｕｇ Ｄｉ
ｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ２００８，１３（９／１０）：４４０－４４６；ならびに
Ｖｉｓｈｗｅｓｈｗａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．２００６，９５（３
）：４９９－５１６を参照のこと。

【0102】

本明細書中で使用される場合、及び他に特定しない限り、「立体異性体」という用語は
、本発明の全ての鏡像異性／立体異性的に純粋で、及び鏡像異性／立体異性的に濃縮され
た化合物を包含する。

【0103】

本明細書中で使用される場合、他に示されない限り、「立体異性的に純粋な」という用
語は、化合物の１つの立体異性体を含み、その化合物の他の立体異性体を実質的に含まな
い組成物を意味する。例えば、１つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組
成物は、その化合物の反対のエナンチオマーを実質的に含まない。２つのキラル中心を有
する化合物の立体異性的に純粋な組成物は、その化合物の他のジアステレオマーを実質的
に含まない。典型的な立体異性的に純粋な化合物は、測定誤差内で、約８０重量％超の化
合物の１つの立体異性体、約２０重量％未満の化合物の他の立体異性体、より好ましくは
約９０重量％超の化合物の１つの立体異性体及び約１０重量％未満の化合物の他の立体異
性体、さらにより好ましくは約９５重量％超の化合物の１つの立体異性体、及び約５重量
％未満の化合物の他の立体異性体、さらにより好ましくは約９７重量％超の化合物の１つ
の立体異性体、及び約３重量％未満の化合物の他の立体異性体、さらにより好ましくは約
９９重量％超の化合物の１つの立体異性体、及び約１重量％未満の化合物の他の立体異性
体、さらにより好ましくは約９９．９重量％超の化合物の１つの立体異性体、及び約０．
１重量％未満の化合物の他の立体異性体、及び最も好ましくは約１００重量％の化合物の
１つの立体異性体及び約０重量％の化合物の他の立体異性体を含む。

【0104】

本明細書中で使用される場合、他に示されない限り、「立体異性的に濃縮された」とい
う用語は、約６０重量％超の化合物の１つの立体異性体、好ましくは約７０重量％超、さ
らに好ましくは８０重量％超の化合物の１つの立体異性体を含む組成物を意味する。本明
細書中で使用されるように、他に示されない限り、「エナンチオマー的に純粋な」という
用語は、１つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組成物を意味する。同様
に、「立体異性的に濃縮された」という用語は、１つのキラル中心を有する化合物の立体
的に濃縮された組成物を意味する。

【0105】

本明細書中で使用される場合、他に特定しない限り、「プロドラッグ」という用語は、
化合物を提供するために生物学的条件下（インビトロまたはインビボ）で加水分解、酸化
またはその他の方法で反応することができる化合物の誘導体を意味する。プロドラッグの
例としては、限定するものではないが、生加水分解性アミド、生加水分解性エステル、生
加水分解性カルバメート、生加水分解性カーボネート、生加水分解性ウレイド、及び生加
水分解性リン酸類似体などの生加水分解性部分を含む化合物が挙げられる。プロドラッグ
の他の例としては、－ＮＯ、－ＮＯ_２、－ＯＮＯまたは－ＯＮＯ_２部分を含む化合物が挙
げられる。プロドラッグは、典型的には、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，１７２－１７８，９４９－９
８２（Ｍａｎｆｒｅｄ Ｅ．Ｗｏｌｆｆ，ｅｄ．，５ｔｈ ｅｄ．１９９５）、及びＤｅ
ｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，ｅｄ．，Ｅｌｓｅｌｖｉ
ｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８５）に記載の方法などの周知の方法を用いて調製され得
る。

【0106】

化合物は、１つ以上の原子で原子同位体の自然でない部分を含んでもよいことも注目さ
れるべきである。例えば、この化合物は、例えば、トリチウム（^３Ｈ）、ヨウ素－１２５
（^１２５Ｉ）、イオウ－３５（^３５Ｓ）、もしくは炭素－１４（^１４Ｃ）などの放射性同
位体で放射性標識されてもよいし、または重水素（^２Ｈ）、炭素－１３（^１３Ｃ）、もし
くは窒素－１５（^１５Ｎ）などで同位体的に濃縮されてもよい。本明細書中で使用される
場合、「同位体置換体」は、同位体濃縮化合物である。「同位体的に濃縮された」という
用語は、その原子の天然の同位体組成以外の同位体組成を有する原子を指す。「同位体的
に濃縮された」とはまた、その原子の天然の同位体組成以外の同位体組成を有する少なく
とも１つの原子を含む化合物を指してもよい。「同位体組成物」という用語は、所与の原
子に存在する各同位体の量を指す。放射標識及び同位体濃縮化合物は、治療剤、例えばが
ん及び炎症治療薬、研究試薬、例えば結合アッセイ試薬、及び診断剤、例えばインビボ造
影剤として有用である。放射性であろうとなかろうと、本明細書に記載される化合物の全
ての同位体の変動は、本明細書で提供される実施形態の範囲内に包含されることが意図さ
れる。いくつかの実施形態では、化合物の同位体置換体が提供され、例えば、同位体置換
体は、重水素、炭素－１３、または窒素－１５濃縮化合物である。いくつかの実施形態で
は、本明細書で提供される同位体置換体は、重水素濃縮化合物である。いくつかの実施形
態において、本明細書で提供される同位体置換体は、重水素濃縮化合物であり、ここで重
水素化はキラル中心で生じる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、重
水素がキラル中心で生じる式Ｉの化合物の同位体置換体である。いくつかの実施形態では
、キラル中心で重水素化が起こる化合物Ｃの同位体置換体が本明細書で提供される。

【0107】

「約」または「およそ」という用語は、その値がどのように測定または決定されるかに
部分的に依存する、当業者によって決定されるような特定の値に対する許容誤差を意味す
る。特定の実施形態では、「約」または「およそ」という用語は、１、２、３または４標
準偏差以内を意味する。ある実施形態では、「約」または「およそ」という用語は、所定
の値または範囲の５０％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４
％、３％、２％、１％、０．５％、または０．０５％内を意味する。

【0108】

描写された構造とその構造に与えられた名称との間に相違がある場合、描写された構造
の方が重視されるべきであることに留意すべきである。さらに、構造または構造の一部の
立体化学が、例えば太線または点線で示されていない場合、構造または構造の部分は、そ
の全ての立体異性体を包含するものとして解釈されるべきである。

【0109】

本明細書で提供される実施形態の実施は、他に示されない限り、当業者の技術範囲内の
分子生物学、微生物学、及び免疫学の従来技術を採用する。このような技術は文献に十分
に説明されている。参照に特に適したテキストの例としては、以下が挙げられる：
Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．１９８９）；Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．，ＤＮＡ
Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（１９８５）；Ｇａｉｔ，ｅｄ．
，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９８４）；Ｈａｍｅｓ ＆
Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
（１９８４）；Ｈａｍｅｓ ＆ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏ
ｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（１９８４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，Ａｎｉ
ｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅ
ｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ
Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，２ｄ ｅｄ．１９８７）；及びＷｅｉｒ ＆ Ｂｌａｃｋｗｅ
ｌｌ，ｅｄｓ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ（１９８６）。

【0110】

５．２ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウス
特定の実施形態では、トランスジェニック動物は、トランスジェニック非ヒト哺乳動物
、例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマ、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、またはハムス
ター）などである。いくつかの実施形態では、トランスジェニック動物は、トランスジェ
ニック齧歯類、例えば、ラット、マウス、ハムスターなどである。特定の実施形態では、
トランスジェニック動物は、トランスジェニックマウスである。

【0111】

トランスジェニック動物は、染色体外要素として、またはその細胞の全部もしくは一部
（例えば、体細胞及び／または生殖細胞）に安定に組み込まれた外因性核酸配列を含む。
特定の実施形態では、外因性核酸配列は、トランスジェニック動物中の染色体外要素（例
えば、ミニ染色体、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ））として存在
する。他の実施形態では、外因性核酸配列は、トランスジェニック動物のゲノムに安定に
組み込まれる。いくつかの実施形態では、外因性核酸配列は、体細胞及び生殖細胞を含む
トランスジェニック動物の全ての細胞に存在する。他の実施形態では、外因性核酸配列は
、体細胞の一部及び／または生殖細胞の一部を含む、トランスジェニック動物の細胞の一
部に存在する。特定の実施形態では、トランスジェニック動物は、生殖系列配列、すなわ
ち生殖細胞のゲノムに安定に組み込まれた外因性核酸配列に対する安定な変化を含む。

【0112】

トランスジェニック動物の初期構築の間、細胞のサブセットのみが変化したゲノムを有
するトランスジェニック動物、「キメラ」または「キメラ動物」が生成される。キメラは
、生殖系列伝達を有するトランスジェニック動物、すなわち生殖細胞のゲノムに安定に組
み込まれた外因性核酸配列を有するトランスジェニック動物を作製するための育種のため
に主に使用される。生殖細胞系ヘテロ接合性変化を有する動物は、キメラの繁殖によって
産生される。次いで、生殖系列伝達を有する雄性及び雌性のヘテロ接合体を交配させて、
ホモ接合性トランスジェニック動物を産生する。ホモ接合性トランスジェニック動物は、
特定の遺伝的背景を有するトランスジェニック動物を作製するために、異なる遺伝的背景
の動物（例えば、異種移植動物モデル、様々な疾患動物モデル、または異なる導入遺伝子
を有するトランスジェニック動物）とさらに育種させてもよい。したがって、いくつかの
実施形態では、トランスジェニック動物は、キメラトランスジェニック動物である。特定
の実施形態では、トランスジェニック動物は、ヘテロ接合性トランスジェニック動物であ
る。他の実施形態では、トランスジェニック動物は、ホモ接合性トランスジェニック動物
である。さらに他の実施形態では、トランスジェニック動物は、特定の遺伝的背景を有す
るホモ接合性トランスジェニック動物（例えば、異種移植片動物モデル、種々の疾患動物
モデル、または異なる導入遺伝子を有するトランスジェニック動物）である。

【0113】

特定の実施形態では、トランスジェニック動物は、ヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断片
を非ヒト動物（例えば、マウス）の生殖系列に導入することによって産生される。いくつ
かの実施形態では、トランスジェニック動物は、マウスの生殖系列にヒトＣＲＢＮ遺伝子
またはその断片を導入することによって産生されるトランスジェニックマウスである。一
実施形態では、ヒトＣＲＢＮ遺伝子は、天然起源であっても、または人工起源であっても
よい。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮ遺伝子は、ゲノムＤＮＡ、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ
）、ハイブリッド配列、合成配列、または半合成配列であってもよい。

【0114】

特定の実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡまたはそ
の断片をマウスの生殖系列に導入することによって産生される。さらに他の実施形態では
、トランスジェニックマウスは、全長ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡ（例えば、ヒトＣＲＢＮア
イソフォーム１またはヒトＣＲＢＮアイソフォーム２）をトランスジェニックマウスの生
殖系列に導入することによって産生される。一実施形態では、トランスジェニックマウス
は、全長ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のｃＤＮＡをトランスジェニックマウスの生殖細
胞系に導入することによって産生され、ここで、この全長ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１
のｃＤＮＡは以下のような核酸配列を有する：
ａｔｇｇｃｃｇｇｃｇ ａａｇｇａｇａｔｃａ ｇｃａｇｇａｃｇｃｔ ｇｃｇｃａｃａ
ａｃａ ｔｇｇｇｃａａｃｃａ ｃｃｔｇｃｃｇｃｔｃ ｃｔｇｃｃｔｇｃａｇ ａｇａ
ｇｔｇａｇｇａ ａｇａａｇａｔｇａａ ａｔｇｇａａｇｔｔｇ ａａｇａｃｃａｇｇａ
ｔａｇｔａａａｇａａ ｇｃｃａａａａａａｃ ｃａａａｃａｔｃａｔ ａａａｔｔｔ
ｔｇａｃ ａｃｃａｇｔｃｔｇｃ ｃｇａｃａｔｃａｃａ ｔａｃａｔａｃｃｔａ ｇｇ
ｔｇｃｔｇａｔａ ｔｇｇａａｇａａｔｔ ｔｃａｔｇｇｃａｇｇ ａｃｔｔｔｇｃａｃ
ｇ ａｔｇａｃｇａｃａｇ ｃｔｇｔｃａｇｇｔｇ ａｔｔｃｃａｇｔｔｃ ｔｔｃｃａ
ｃａａｇｔ ｇａｔｇａｔｇａｔｃ ｃｔｇａｔｔｃｃｃｇ ｇａｃａｇａｃａｔｔ ａ
ｃｃｔｃｔｔｃａｇ ｃｔｔｔｔｔｃａｃｃ ｃｔｃａａｇａａｇｔ ｃａｇｔａｔｇｇ
ｔｇ ｃｇｇａａｔｔｔａａ ｔｔｃａｇａａａｇａ ｔａｇａａｃｃｔｔｔ ｇｃｔｇ
ｔｔｃｔｔｇ ｃａｔａｃａｇｃａａ ｔｇｔａｃａｇｇａａ ａｇｇｇａａｇｃａｃ
ａｇｔｔｔｇｇａａｃ ａａｃａｇｃａｇａｇ ａｔａｔａｔｇｃｃｔ ａｔｃｇａｇａ
ａｇａ ａｃａｇｇａｔｔｔｔ ｇｇａａｔｔｇａｇａ ｔａｇｔｇａａａｇｔ ｇａａ
ａｇｃａａｔｔ ｇｇａａｇａｃａａａ ｇｇｔｔｃａａａｇｔ ｃｃｔｔｇａｇｃｔａ
ａｇａａｃａｃａｇｔ ｃａｇａｔｇｇａａｔ ｃｃａｇｃａａｇｃｔ ａａａｇｔｇ
ｃａａａ ｔｔｃｔｔｃｃｃｇａ ａｔｇｔｇｔｇｔｔｇ ｃｃｔｔｃａａｃｃａ ｔｇ
ｔｃｔｇｃａｇｔ ｔｃａａｔｔａｇａａ ｔｃｃｃｔｃａａｔａ ａｇｔｇｃｃａｇａ
ｔ ａｔｔｔｃｃｔｔｃａ ａａａｃｃｔｇｔｃｔ ｃａａｇａｇａａｇａ ｃｃａａｔ
ｇｔｔｃａ ｔａｔａａａｔｇｇｔ ｇｇｃａｇａａａｔａ ｃｃａｇａａｇａｇａ ａ
ａｇｔｔｔｃａｔｔ ｇｔｇｃａａａｔｃｔ ａａｃｔｔｃａｔｇｇ ｃｃｔｃｇｃｔｇ
ｇｃ ｔｇｔａｔｔｃｃｔｔ ａｔａｔｇａｔｇｃｔ ｇａｇａｃｃｔｔａａ ｔｇｇａ
ｃａｇａａｔ ｃａａｇａａａｃａｇ ｃｔａｃｇｔｇａａｔ ｇｇｇａｔｇａａａａ
ｔｃｔａａａａｇａｔ ｇａｔｔｃｔｃｔｔｃ ｃｔｔｃａａａｔｃｃ ａａｔａｇａｔ
ｔｔｔ ｔｃｔｔａｃａｇａｇ ｔａｇｃｔｇｃｔｔｇ ｔｃｔｔｃｃｔａｔｔ ｇａｔ
ｇａｔｇｔａｔ ｔｇａｇａａｔｔｃａ ｇｃｔｃｃｔｔａａａ ａｔｔｇｇｃａｇｔｇ
ｃｔａｔｃｃａｇｃｇ ａｃｔｔｃｇｃｔｇｔ ｇａａｔｔａｇａｃａ ｔｔａｔｇａ
ａｔａａ ａｔｇｔａｃｔｔｃｃ ｃｔｔｔｇｃｔｇｔａ ａａｃａａｔｇｔｃａ ａｇ
ａａａｃａｇａａ ａｔａａｃａａｃｃａ ａａａａｔｇａａａｔ ａｔｔｃａｇｔｔｔ
ａ ｔｃｃｔｔａｔｇｔｇ ｇｇｃｃｇａｔｇｇｃ ａｇｃｔｔａｔｇｔｇ ａａｔｃｃ
ｔｃａｔｇ ｇａｔａｔｇｔｇｃａ ｔｇａｇａｃａｃｔｔ ａｃｔｇｔｇｔａｔａ ａ
ｇｇｃｔｔｇｃａａ ｃｔｔｇａａｔｃｔｇ ａｔａｇｇｃｃｇｇｃ ｃｔｔｃｔａｃａ
ｇａ ａｃａｃａｇｃｔｇｇ ｔｔｔｃｃｔｇｇｇｔ ａｔｇｃｃｔｇｇａｃ ｔｇｔｔ
ｇｃｃｃａｇ ｔｇｔａａｇａｔｃｔ ｇｔｇｃａａｇｃｃａ ｔａｔｔｇｇａｔｇｇ
ａａｇｔｔｔａｃｇｇ ｃｃａｃｃａａａａａ ａｇａｃａｔｇｔｃａ ｃｃｔｃａａａ
ａａｔ ｔｔｔｇｇｇｇｃｔｔ ａａｃｇｃｇａｔｃｔ ｇｃｔｃｔｇｔｔｇｃ ｃｃａ
ｃｇａｔｃｃｃ ａｇａｃａｃｔｇａａ ｇａｔｇａａａｔａａ ｇｔｃｃａｇａｃａａ
ａｇｔａａｔａｃｔｔ ｔｇｃｔｔｇｔａａ（配列番号５）。いくつかの実施形態では
、この全長ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のｃＤＮＡは、マウス染色体に安定に組み込ま
れる。

【0115】

別の実施形態では、トランスジェニックマウスは、全長ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２
のｃＤＮＡをトランスジェニックマウスの生殖細胞系に導入することにより産生され、こ
こで、この全長ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のｃＤＮＡは、以下のような核酸配列を有
する：
ａｔｇｇｃｃｇｇｃｇ ａａｇｇａｇａｔｃａ ｇｃａｇｇａｃｇｃｔ ｇｃｇｃａｃａ
ａｃａ ｔｇｇｇｃａａｃｃａ ｃｃｔｇｃｃｇｃｔｃ ｃｔｇｃｃｔｇａｇａ ｇｔｇ
ａｇｇａａｇａ ａｇａｔｇａａａｔｇ ｇａａｇｔｔｇａａｇ ａｃｃａｇｇａｔａｇ
ｔａａａｇａａｇｃｃ ａａａａａａｃｃａａ ａｃａｔｃａｔａａａ ｔｔｔｔｇａ
ｃａｃｃ ａｇｔｃｔｇｃｃｇａ ｃａｔｃａｃａｔａｃ ａｔａｃｃｔａｇｇｔ ｇｃ
ｔｇａｔａｔｇｇ ａａｇａａｔｔｔｃａ ｔｇｇｃａｇｇａｃｔ ｔｔｇｃａｃｇａｔ
ｇ ａｃｇａｃａｇｃｔｇ ｔｃａｇｇｔｇａｔｔ ｃｃａｇｔｔｃｔｔｃ ｃａｃａａ
ｇｔｇａｔ ｇａｔｇａｔｃｃｔｇ ａｔｔｃｃｃｇｇａｃ ａｇａｃａｔｔａｃｃ ｔ
ｃｔｔｃａｇｃｔｔ ｔｔｔｃａｃｃｃｔｃ ａａｇａａｇｔｃａｇ ｔａｔｇｇｔｇｃ
ｇｇ ａａｔｔｔａａｔｔｃ ａｇａａａｇａｔａｇ ａａｃｃｔｔｔｇｃｔ ｇｔｔｃ
ｔｔｇｃａｔ ａｃａｇｃａａｔｇｔ ａｃａｇｇａａａｇｇ ｇａａｇｃａｃａｇｔ
ｔｔｇｇａａｃａａｃ ａｇｃａｇａｇａｔａ ｔａｔｇｃｃｔａｔｃ ｇａｇａａｇａ
ａｃａ ｇｇａｔｔｔｔｇｇａ ａｔｔｇａｇａｔａｇ ｔｇａａａｇｔｇａａ ａｇｃ
ａａｔｔｇｇａ ａｇａｃａａａｇｇｔ ｔｃａａａｇｔｃｃｔ ｔｇａｇｃｔａａｇａ
ａｃａｃａｇｔｃａｇ ａｔｇｇａａｔｃｃａ ｇｃａａｇｃｔａａａ ｇｔｇｃａａ
ａｔｔｃ ｔｔｃｃｃｇａａｔｇ ｔｇｔｇｔｔｇｃｃｔ ｔｃａａｃｃａｔｇｔ ｃｔ
ｇｃａｇｔｔｃａ ａｔｔａｇａａｔｃｃ ｃｔｃａａｔａａｇｔ ｇｃｃａｇａｔａｔ
ｔ ｔｃｃｔｔｃａａａａ ｃｃｔｇｔｃｔｃａａ ｇａｇａａｇａｃｃａ ａｔｇｔｔ
ｃａｔａｔ ａａａｔｇｇｔｇｇｃ ａｇａａａｔａｃｃａ ｇａａｇａｇａａａｇ ｔ
ｔｔｃａｔｔｇｔｇ ｃａａａｔｃｔａａｃ ｔｔｃａｔｇｇｃｃｔ ｃｇｃｔｇｇｃｔ
ｇｔ ａｔｔｃｃｔｔａｔａ ｔｇａｔｇｃｔｇａｇ ａｃｃｔｔａａｔｇｇ ａｃａｇ
ａａｔｃａａ ｇａａａｃａｇｃｔａ ｃｇｔｇａａｔｇｇｇ ａｔｇａａａａｔｃｔ
ａａａａｇａｔｇａｔ ｔｃｔｃｔｔｃｃｔｔ ｃａａａｔｃｃａａｔ ａｇａｔｔｔｔ
ｔｃｔ ｔａｃａｇａｇｔａｇ ｃｔｇｃｔｔｇｔｃｔ ｔｃｃｔａｔｔｇａｔ ｇａｔ
ｇｔａｔｔｇａ ｇａａｔｔｃａｇｃｔ ｃｃｔｔａａａａｔｔ ｇｇｃａｇｔｇｃｔａ
ｔｃｃａｇｃｇａｃｔ ｔｃｇｃｔｇｔｇａａ ｔｔａｇａｃａｔｔａ ｔｇａａｔａ
ａａｔｇ ｔａｃｔｔｃｃｃｔｔ ｔｇｃｔｇｔａａａｃ ａａｔｇｔｃａａｇａ ａａ
ｃａｇａａａｔａ ａｃａａｃｃａａａａ ａｔｇａａａｔａｔｔ ｃａｇｔｔｔａｔｃ
ｃ ｔｔａｔｇｔｇｇｇｃ ｃｇａｔｇｇｃａｇｃ ｔｔａｔｇｔｇａａｔ ｃｃｔｃａ
ｔｇｇａｔ ａｔｇｔｇｃａｔｇａ ｇａｃａｃｔｔａｃｔ ｇｔｇｔａｔａａｇｇ ｃ
ｔｔｇｃａａｃｔｔ ｇａａｔｃｔｇａｔａ ｇｇｃｃｇｇｃｃｔｔ ｃｔａｃａｇａａ
ｃａ ｃａｇｃｔｇｇｔｔｔ ｃｃｔｇｇｇｔａｔｇ ｃｃｔｇｇａｃｔｇｔ ｔｇｃｃ
ｃａｇｔｇｔ ａａｇａｔｃｔｇｔｇ ｃａａｇｃｃａｔａｔ ｔｇｇａｔｇｇａａｇ
ｔｔｔａｃｇｇｃｃａ ｃｃａａａａａａｇａ ｃａｔｇｔｃａｃｃｔ ｃａａａａａｔ
ｔｔｔ ｇｇｇｇｃｔｔａａｃ ｇｃｇａｔｃｔｇｃｔ ｃｔｇｔｔｇｃｃｃａ ｃｇａ
ｔｃｃｃａｇａ ｃａｃｔｇａａｇａｔ ｇａａａｔａａｇｔｃ ｃａｇａｃａａａｇｔ
ａａｔａｃｔｔｔｇｃ ｔｔｇｔａａ（配列番号６）。いくつかの実施形態では、全長
ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のｃＤＮＡは、マウス染色体に安定に組み込まれる。

【0116】

他の実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの断片（例
えば、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の断片またはヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の断片
）を、トランスジェニックマウスの生殖系列に導入することによって産生される。特定の
実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のｃＤＮＡ
の断片を、トランスジェニックマウスの生殖細胞系に導入することによって産生される。
別の特定の実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２
のｃＤＮＡの断片を、トランスジェニックマウスの生殖系列に導入することによって産生
される。いくつかの実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮアイソフ
ォーム１の一部をコードする核酸配列を含むヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの断片を、トランス
ジェニックマウスの生殖系列に導入することによって産生される。別の実施形態では、ト
ランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の一部をコードする核酸配列
を含むヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの断片を、トランスジェニックマウスの生殖細胞系に導入
することによって産生される。他の実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣ
ＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４（グルタミン酸）をコードする核酸配列で始まり、
ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の終止コドンで終わる核酸配列を含むヒトＣＲＢＮアイソ
フォーム１のｃＤＮＡの断片を、トランスジェニックマウスの生殖系列に導入することに
よって産生される。さらに他の実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢ
Ｎアイソフォーム２のコドン２３（グルタミン酸）をコードする核酸配列で開始し、ヒト
ＣＲＢＮアイソフォーム２の終止コドンで終わる、核酸配列を含むヒトＣＲＢＮアイソフ
ォーム２のｃＤＮＡの断片を、トランスジェニックマウスの生殖細胞系に、導入すること
により産生される。さらに他の実施形態では、トランスジェニックマウスは、以下のよう
な核酸配列を含むヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの断片（例えば、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム
１の断片またはヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の断片）を、そのトランスジェニックマウ
スの生殖系列に導入することによって産生される：
ａｇ ａｇａｇｔｇａｇｇａ ａｇａａｇａｔｇａａ ａｔｇｇａａｇ
ｔｔｇ ａａｇａｃｃａｇｇａ ｔａｇｔａａａｇａａ ｇｃｃａａａａａａｃ ｃａａ
ａｃａｔｃａｔ ａａａｔｔｔｔｇａｃ ａｃｃａｇｔｃｔｇｃ ｃｇａｃａｔｃａｃａ
ｔａｃａｔａｃｃｔａ ｇｇｔｇｃｔｇａｔａ ｔｇｇａａｇａａｔｔ ｔｃａｔｇｇ
ｃａｇｇ ａｃｔｔｔｇｃａｃｇ ａｔｇａｃｇａｃａｇ ｃｔｇｔｃａｇｇｔｇ ａｔ
ｔｃｃａｇｔｔｃ ｔｔｃｃａｃａａｇｔ ｇａｔｇａｔｇａｔｃ ｃｔｇａｔｔｃｃｃ
ｇ ｇａｃａｇａｃａｔｔ ａｃｃｔｃｔｔｃａｇ ｃｔｔｔｔｔｃａｃｃ ｃｔｃａａ
ｇａａｇｔ ｃａｇｔａｔｇｇｔｇ ｃｇｇａａｔｔｔａａ ｔｔｃａｇａａａｇａ ｔ
ａｇａａｃｃｔｔｔ ｇｃｔｇｔｔｃｔｔｇ ｃａｔａｃａｇｃａａ ｔｇｔａｃａｇｇ
ａａ ａｇｇｇａａｇｃａｃ ａｇｔｔｔｇｇａａｃ ａａｃａｇｃａｇａｇ ａｔａｔ
ａｔｇｃｃｔ ａｔｃｇａｇａａｇａ ａｃａｇｇａｔｔｔｔ ｇｇａａｔｔｇａｇａ
ｔａｇｔｇａａａｇｔ ｇａａａｇｃａａｔｔ ｇｇａａｇａｃａａａ ｇｇｔｔｃａａ
ａｇｔ ｃｃｔｔｇａｇｃｔａ ａｇａａｃａｃａｇｔ ｃａｇａｔｇｇａａｔ ｃｃａ
ｇｃａａｇｃｔ ａａａｇｔｇｃａａａ ｔｔｃｔｔｃｃｃｇａ ａｔｇｔｇｔｇｔｔｇ
ｃｃｔｔｃａａｃｃａ ｔｇｔｃｔｇｃａｇｔ ｔｃａａｔｔａｇａａ ｔｃｃｃｔｃ
ａａｔａ ａｇｔｇｃｃａｇａｔ ａｔｔｔｃｃｔｔｃａ ａａａｃｃｔｇｔｃｔ ｃａ
ａｇａｇａａｇａ ｃｃａａｔｇｔｔｃａ ｔａｔａａａｔｇｇｔ ｇｇｃａｇａａａｔ
ａ ｃｃａｇａａｇａｇａ ａａｇｔｔｔｃａｔｔ ｇｔｇｃａａａｔｃｔ ａａｃｔｔ
ｃａｔｇｇ ｃｃｔｃｇｃｔｇｇｃ ｔｇｔａｔｔｃｃｔｔ ａｔａｔｇａｔｇｃｔ ｇ
ａｇａｃｃｔｔａａ ｔｇｇａｃａｇａａｔ ｃａａｇａａａｃａｇ ｃｔａｃｇｔｇａ
ａｔ ｇｇｇａｔｇａａａａ ｔｃｔａａａａｇａｔ ｇａｔｔｃｔｃｔｔｃ ｃｔｔｃ
ａａａｔｃｃ ａａｔａｇａｔｔｔｔ ｔｃｔｔａｃａｇａｇ ｔａｇｃｔｇｃｔｔｇ
ｔｃｔｔｃｃｔａｔｔ ｇａｔｇａｔｇｔａｔ ｔｇａｇａａｔｔｃａ ｇｃｔｃｃｔｔ
ａａａ ａｔｔｇｇｃａｇｔｇ ｃｔａｔｃｃａｇｃｇ ａｃｔｔｃｇｃｔｇｔ ｇａａ
ｔｔａｇａｃａ ｔｔａｔｇａａｔａａ ａｔｇｔａｃｔｔｃｃ ｃｔｔｔｇｃｔｇｔａ
ａａｃａａｔｇｔｃａ ａｇａａａｃａｇａａ ａｔａａｃａａｃｃａ ａａａａｔｇ
ａａａｔ ａｔｔｃａｇｔｔｔａ ｔｃｃｔｔａｔｇｔｇ ｇｇｃｃｇａｔｇｇｃ ａｇ
ｃｔｔａｔｇｔｇ ａａｔｃｃｔｃａｔｇ ｇａｔａｔｇｔｇｃａ ｔｇａｇａｃａｃｔ
ｔ ａｃｔｇｔｇｔａｔａ ａｇｇｃｔｔｇｃａａ ｃｔｔｇａａｔｃｔｇ ａｔａｇｇ
ｃｃｇｇｃ ｃｔｔｃｔａｃａｇａ ａｃａｃａｇｃｔｇｇ ｔｔｔｃｃｔｇｇｇｔ ａ
ｔｇｃｃｔｇｇａｃ ｔｇｔｔｇｃｃｃａｇ ｔｇｔａａｇａｔｃｔ ｇｔｇｃａａｇｃ
ｃａ ｔａｔｔｇｇａｔｇｇ ａａｇｔｔｔａｃｇｇ ｃｃａｃｃａａａａａ ａｇａｃ
ａｔｇｔｃａ ｃｃｔｃａａａａａｔ ｔｔｔｇｇｇｇｃｔｔ ａａｃｇｃｇａｔｃｔ
ｇｃｔｃｔｇｔｔｇｃ ｃｃａｃｇａｔｃｃｃ ａｇａｃａｃｔｇａａ ｇａｔｇａａａ
ｔａａ ｇｔｃｃａｇａｃａａ ａｇｔａａｔａｃｔｔ ｔｇｃｔｔｇｔａａ（配列番号
７）。いくつかの実施形態では、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のｃＤＮＡの断片は、マ
ウス染色体に安定に組み込まれる。他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の
ｃＤＮＡの断片は、マウス染色体に安定に組み込まれる。

【0117】

さらに別の実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの断
片（例えば、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の断片またはヒトＣＲＢＮアイソフォーム２
の断片）を、マウスＣＲＢＮゲノムＤＮＡと、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの断片（例えば、
ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の断片またはヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の断片）を含
む標的化構築物との間の相同組換えを通じて、トランスジェニックマウスの生殖系列に導
入することによって産生される。特定の実施形態では、標的化構築物は、以下のような核
酸配列を含む：
ａａｇａａｃａｇｃｔｃａｃａｃｔｔｇａｔａｇａａｔａｃｃａｃｔｔｃｔａｇａａａｇ
ｔａｇｃｇｔｔｇｔｇｔｔｔｔｇｔｔｔｃｔｔｃａｇａｃｔｔｔｃａｔｃｔｃｔｇｃｃｃ
ｔｔｇｇｃａｇｃａｔｃａｔｇｔｔａｔｃａｇｇｔｇｇａｔｃａｇｃｔｔａｇｃｔｔｔｃ
ａｔｔｔｃａｔｔｔｃａａａａａａａａａａｇｔｇｃａｇｇｔａｇａｇｔｔｃｔｔａａｇ
ａｔａｔｃｔｃｃｔｔｔｔｇｃｃａｇｇｃａｇｔｇｇｔｇｇｃｇｃａｃｔｃｃｔｔｔａａ
ｔｃｃｃａｇｃａｃｔｔｇｇｇａｇｇｃａｇａｇｇｃａｇｇｃａｇａｔｔｔｃｔｇａｇｔ
ｔｃｇａｇｇｃｃａｇｃｃｔｇｇｔｃｔａｃａｇａｇｔｇａｇｔｔｃｃａｇｇａｃａｇｃ
ｃａｇｇｇｃｔａｃａｔａｇａｇａａａｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃａａａａａｃｔｃｇａａａ
ａａｃａｇａａａａｇａａａａｇａａａａａａａａａａａａｇａｃａｔｃｔｃｃｔｔｔａ
ａａａｔｇｔａｔｔｔｔｃｔｔｔｇｇｇｃｃａａｃｔｔｔａｔｔｔｔｔａａａｔｔｇａｇ
ａａｔｇａｃａａａｇｃｇａｔｇｔｔｔｔａｔｇａａａａａｔａａｔｔｇｃａａａｃａｔ
ｔｔｃａｃｇｔｔｔａａａｔａｔｇａｃｇｇｔｇａｇｃｃａｇｇｔｔｔｔａａｔｇｇｔａ
ｔｔｔｔｔｔｔｔｃｃｃａｇｔｔｔｃａｔｔａａｃａｇａｃｃｔｔｔｃｔｔｇｃｃｔｇｃ
ｔｔｇｔｇｔｔｔｔｃｃｔｔｇｃｔｔｔｃｔｔｔｔｔｃａｃａｇａｇａａａｃｔｔｔｇｔ
ａｇｃｔａａａｇｔｃｔｇａａａｇａａｃｃｔｃａｔａｇａｔｔａｃｔｔｔｇｔｔｃａａ
ｇｃｃｔｔｃａｔｔｇｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｃａａａｔｇａａａａａａｃａｇｃｔｔｔａ
ａｔｃａａｔｔｇｇａａｔｔｃａｔｔｇｔｇｔａａｇｇｔｇｔｃａｇｇａｔｔａｇｔａｇ
ｔｇａｔｇｇａｇａａｇａｔａａｇａｃｔｃａｔｃｃａｔｇｃａｇｇａｇａｔｇｇｇｃｃ
ｔａａｔｔｃａｇｃｃａｃｇｔｃａｇｔｃｇｔｔａｇｇｃｔｇｇａｃｃｔａｇｔｇａｔｃ
ｔｇｃｔｔｔｃｃａａｃｃｇｔｇｔａｃｇｇｔｇｔａａｃｔｇｃｇｇｇｇｃａｇｇｇｇｃ
ｇａｇｇｇｇｇｔｔｔａｃａｇａｇａａｇｇａａｇｃｔｇｇｃｇｇｃｔｇｔｔｔｃｔｇａ
ｃｃａｇａａａｔｃａａｇｇｇｇａａｃａｔｃａｇｃｃｃｃｔｇｇｇｔｃａｇｇｃｔｇａ
ｃｔｇｔａｃｇｔａｃｃｃｔｔｇａｔｇｔｇｃｇｇｔｇａｇｇａａｔａｇｇｃｇｔｔｇｔ
ｃｃｃｔａｇｃａｇａａｃｔｃｔａａｔａｇａｇａａｔｇａｃａｔｃｔａｔｔｃｃｃｔａ
ｔｔｇａｇｇｇａｔｇｃｔｇｔｇｔａａａｇｔｃｃｔｇａｔａａｇｇａａｇａｃａｇａａ
ｃａｔｃｃａｇｃａｔｇｃｇｔｇｔａｃｃａｃａｇｇｃａｇｃａａａｇｇａｇｃｃａｔａ
ｃｃｔａａａｔａｔａｇｃａｔｇｇｔｇｔｃｃｔｇｇａｇｇｇｇｔａａｃａｇｇａａａｔ
ｇｇａｇａａｔａｇｃｔｇａａａａｔｃａａａｇｇｃａａｔｃｃａａａｔａａｇａｔａａ
ｇｇｃａｔｔｔａｇｔｔａａｃａｇｔａａｔｇｔｇｃｃａａｔａｔｃｇａｃｇａｃｔｔａ
ｇｔｔｇｔｃａｃａａｇａａｔａｃｃａｇａｔｇｃａｔｇｇａｃｃａｔｇｃｔａａｃａａ
ｔｇｇａｇｇａａｇａｔａｇｔｃｔｔｇｇｃａｔｇｃｔａｇａａｔｔｃｔａｔｔｔｔｔｃ
ｃａａｃａｔｔｃｃａｇｇａａａｔｃｔｔａａａｇｔｇｔｃｃｔａａｇａｔａｇｔｔｇａ
ｔｔｇｔｔａａａａａｃａｇｇｇａａａａａａｇａａａｇｇａａａｇｇａａａａｇａａａ
ｇｇａａａａｇｇｃｇｃｃａｔｇａｃａｇａａａｇａｇｃａｃａｇａｃｃｃａｇｃｃｔｃ
ｔｇｃｃｇｃｔｇｔｃｔｃｔｇｃａｃａｇｃｔｔｔｃｃｔｔｔｔａａｇａｇｔｇｔｃｔｔ
ｔｃｔｔｃａａｔｔｃａｇｇｇｔｇｔｇｔｇａａｔｇｇａａｃｃａｇａａｃｔｇａｃｔｔ
ｇｃｔｔｔｔｔｔｃｔｔｔｔｃｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔａａｔｇａａｔｃｔｃａ
ｔｔｔｔｔｔｃｃｃｔｃｔａｔｔａｔｔｃｔｃｃｔｔｃａｇｃａｇａｇａｇｔｇａｇｇａ
ａｇａａｇａｔｇａａａｔｇｇａａｇｔｔｇａａｇａｃｃａｇｇａｔａｇｔａａａｇａａ
ｇｃｃａａａａａａｃｃａａａｃａｔｃａｔａａａｔｔｔｔｇａｃａｃｃａｇｔｃｔｇｃ
ｃｇａｃａｔｃａｃａｔａｃａｔａｃｃｔａｇｇｔｇｃｔｇａｔａｔｇｇａａｇａａｔｔ
ｔｃａｔｇｇｃａｇｇａｃｔｔｔｇｃａｃｇａｔｇａｃｇａｃａｇｃｔｇｔｃａｇｇｔｇ
ａｔｔｃｃａｇｔｔｃｔｔｃｃａｃａａｇｔｇａｔｇａｔｇａｔｃｃｔｇａｔｔｃｃｃｇ
ｇａｃａｇａｃａｔｔａｃｃｔｃｔｔｃａｇｃｔｔｔｔｔｃａｃｃｃｔｃａａｇａａｇｔ
ｃａｇｔａｔｇｇｔｇｃｇｇａａｔｔｔａａｔｔｃａｇａａａｇａｔａｇａａｃｃｔｔｔ
ｇｃｔｇｔｔｃｔｔｇｃａｔａｃａｇｃａａｔｇｔａｃａｇｇａａａｇｇｇａａｇｃａｃ
ａｇｔｔｔｇｇａａｃａａｃａｇｃａｇａｇａｔａｔａｔｇｃｃｔａｔｃｇａｇａａｇａ
ａｃａｇｇａｔｔｔｔｇｇａａｔｔｇａｇａｔａｇｔｇａａａｇｔｇａａａｇｃａａｔｔ
ｇｇａａｇａｃａａａｇｇｔｔｃａａａｇｔｃｃｔｔｇａｇｃｔａａｇａａｃａｃａｇｔ
ｃａｇａｔｇｇａａｔｃｃａｇｃａａｇｃｔａａａｇｔｇｃａａａｔｔｃｔｔｃｃｃｇａ
ａｔｇｔｇｔｇｔｔｇｃｃｔｔｃａａｃｃａｔｇｔｃｔｇｃａｇｔｔｃａａｔｔａｇａａ
ｔｃｃｃｔｃａａｔａａｇｔｇｃｃａｇａｔａｔｔｔｃｃｔｔｃａａａａｃｃｔｇｔｃｔ
ｃａａｇａｇａａｇａｃｃａａｔｇｔｔｃａｔａｔａａａｔｇｇｔｇｇｃａｇａａａｔａ
ｃｃａｇａａｇａｇａａａｇｔｔｔｃａｔｔｇｔｇｃａａａｔｃｔａａｃｔｔｃａｔｇｇ
ｃｃｔｃｇｃｔｇｇｃｔｇｔａｔｔｃｃｔｔａｔａｔｇａｔｇｃｔｇａｇａｃｃｔｔａａ
ｔｇｇａｃａｇａａｔｃａａｇａａａｃａｇｃｔａｃｇｔｇａａｔｇｇｇａｔｇａａａａ
ｔｃｔａａａａｇａｔｇａｔｔｃｔｃｔｔｃｃｔｔｃａａａｔｃｃａａｔａｇａｔｔｔｔ
ｔｃｔｔａｃａｇａｇｔａｇｃｔｇｃｔｔｇｔｃｔｔｃｃｔａｔｔｇａｔｇａｔｇｔａｔ
ｔｇａｇａａｔｔｃａｇｃｔｃｃｔｔａａａａｔｔｇｇｃａｇｔｇｃｔａｔｃｃａｇｃｇ
ａｃｔｔｃｇｃｔｇｔｇａａｔｔａｇａｃａｔｔａｔｇａａｔａａａｔｇｔａｃｔｔｃｃ
ｃｔｔｔｇｃｔｇｔａａａｃａａｔｇｔｃａａｇａａａｃａｇａａａｔａａｃａａｃｃａ
ａａａａｔｇａａａｔａｔｔｃａｇｔｔｔａｔｃｃｔｔａｔｇｔｇｇｇｃｃｇａｔｇｇｃ
ａｇｃｔｔａｔｇｔｇａａｔｃｃｔｃａｔｇｇａｔａｔｇｔｇｃａｔｇａｇａｃａｃｔｔ
ａｃｔｇｔｇｔａｔａａｇｇｃｔｔｇｃａａｃｔｔｇａａｔｃｔｇａｔａｇｇｃｃｇｇｃ
ｃｔｔｃｔａｃａｇａａｃａｃａｇｃｔｇｇｔｔｔｃｃｔｇｇｇｔａｔｇｃｃｔｇｇａｃ
ｔｇｔｔｇｃｃｃａｇｔｇｔａａｇａｔｃｔｇｔｇｃａａｇｃｃａｔａｔｔｇｇａｔｇｇ
ａａｇｔｔｔａｃｇｇｃｃａｃｃａａａａａａｇａｃａｔｇｔｃａｃｃｔｃａａａａａｔ
ｔｔｔｇｇｇｇｃｔｔａａｃｇｃｇａｔｃｔｇｃｔｃｔｇｔｔｇｃｃｃａｃｇａｔｃｃｃ
ａｇａｃａｃｔｇａａｇａｔｇａａａｔａａｇｔｃｃａｇａｃａａａｇｔａａｔａｃｔｔ
ｔｇｃｔｔｇｔａａｇｔｇｃａｃｃｔａｇａｇｃｔｃｇｃｔｇａｔｃａｇｃｃｔｃｇａｃ
ｔｇｔｇｃｃｔｔｃｔａｇｔｔｇｃｃａｇｃｃａｔｃｔｇｔｔｇｔｔｔｇｃｃｃｃｔｃｃ
ｃｃｃｇｔｇｃｃｔｔｃｃｔｔｇａｃｃｃｔｇｇａａｇｇｔｇｃｃａｃｔｃｃｃａｃｔｇ
ｔｃｃｔｔｔｃｃｔａａｔａａａａｔｇａｇｇａａａｔｔｇｃａｔｃｇｃａｔｔｇｔｃｔ
ｇａｇｔａｇｇｔｇｔｃａｔｔｃｔａｔｔｃｔｇｇｇｇｇｇｔｇｇｇｇｔｇｇｇｇｃａｇ
ｇａｃａｇｃａａｇｇｇｇｇａｇｇａｔｔｇｇｇａａｇａｃａａｔａｇｃａｇｇｃａｔｇ
ｃｔｇｇｇｇａｔｇｃｇｇｔｇｇｇｃｔｃｔａｔｇｇｃｔｔｃｔｇａｇｇｃｇｇａａａｇ
ａａｃｃａｇｃｔｇｇｇｇｃｔｃｇａｃｔａｇａｇｃｔｔｇｃｇｇａａｃｃｃｔｔｃｇｔ
ａｔｇｔｇｇｔｔｔａｇｔｃａｔｔｇａｇｃａａａｔｇｃａｇｔａｔｇｃｇｇａｃｃｔｔ
ｔａｔｃｔａｔｇｇｃｔｇｇａａｔｔｔｇｇｔａｃｃｔｔｔｔｇｃｔａｇｃａｔａａｃｔ
ｔｃｇｔａｔａｇｃａｔａｃａｔｔａｔａｃｇａａｇｔｔａｔｃｃｔａｇｇｔａａｔｔｃ
ｔａｃｃｇｇｇｔａｇｇｇｇａｇｇｃｇｃｔｔｔｔｃｃｃａａｇｇｃａｇｔｃｔｇｇａｇ
ｃａｔｇｃｇｃｔｔｔａｇｃａｇｃｃｃｃｇｃｔｇｇｇｃａｃｔｔｇｇｃｇｃｔａｃａｃ
ａａｇｔｇｇｃｃｔｃｔｇｇｃｃｔｃｇｃａｃａｃａｔｔｃｃａｃａｔｃｃａｃｃｇｇｔ
ａｇｇｃｇｃｃａａｃｃｇｇｃｔｃｃｇｔｔｃｔｔｔｇｇｔｇｇｃｃｃｃｔｔｃｇｃｇｃ
ｃａｃｃｔｔｃｔａｃｔｃｃｔｃｃｃｃｔａｇｔｃａｇｇａａｇｔｔｃｃｃｃｃｃｃｇｃ
ｃｃｃｇｃａｇｃｔｃｇｃｇｔｃｇｔｇｃａｇｇａｃｇｔｇａｃａａａｔｇｇａａｇｔａ
ｇｃａｃｇｔｃｔｃａｃｔａｇｔｃｔｃｇｔｇｃａｇａｔｇｇａｃａｇｃａｃｃｇｃｔｇ
ａｇｃａａｔｇｇａａｇｃｇｇｇｔａｇｇｃｃｔｔｔｇｇｇｇｃａｇｃｇｇｃｃａａｔａ
ｇｃａｇｃｔｔｔｇｃｔｃｃｔｔｃｇｃｔｔｔｃｔｇｇｇｃｔｃａｇａｇｇｃｔｇｇｇａ
ａｇｇｇｇｔｇｇｇｔｃｃｇｇｇｇｇｃｇｇｇｃｔｃａｇｇｇｇｃｇｇｇｃｔｃａｇｇｇ
ｇｃｇｇｇｇｃｇｇｇｃｇｃｃｃｇａａｇｇｔｃｃｔｃｃｇｇａｇｇｃｃｃｇｇｃａｔｔ
ｃｔｇｃａｃｇｃｔｔｃａａａａｇｃｇｃａｃｇｔｃｔｇｃｃｇｃｇｃｔｇｔｔｃｔｃｃ
ｔｃｔｔｃｃｔｃａｔｃｔｃｃｇｇｇｃｃｔｔｔｃｇａｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇｔｔｇａ
ｃａａｔｔａａｔｃａｔｃｇｇｃａｔａｇｔａｔａｔｃｇｇｃａｔａｇｔａｔａａｔａｃ
ｇａｃａａｇｇｔｇａｇｇａａｃｔａａａｃｃａｇａｔｃｔｇｃｃａｃｃａｔｇａｔｔｇ
ａａｃａａｇａｔｇｇａｔｔｇｃａｃｇｃａｇｇｔｔｃｔｃｃｇｇｃｃｇｃｔｔｇｇｇｔ
ｇｇａｇａｇｇｃｔａｔｔｃｇｇｃｔａｔｇａｃｔｇｇｇｃａｃａａｃａｇａｃａａｔｃ
ｇｇｃｔｇｃｔｃｔｇａｔｇｃｃｇｃｃｇｔｇｔｔｃｃｇｇｃｔｇｔｃａｇｃｇｃａｇｇ
ｇｇｃｇｃｃｃｇｇｔｔｃｔｔｔｔｔｇｔｃａａｇａｃｃｇａｃｃｔｇｔｃｃｇｇｔｇｃ
ｃｃｔｇａａｔｇａａｃｔｇｃａｇｇａｃｇａｇｇｃａｇｃｇｃｇｇｃｔａｔｃｇｔｇｇ
ｃｔｇｇｃｃａｃｇａｃｇｇｇｃｇｔｔｃｃｔｔｇｃｇｃａｇｃｔｇｔｇｃｔｃｇａｃｇ
ｔｔｇｔｃａｃｔｇａａｇｃｇｇｇａａｇｇｇａｃｔｇｇｃｔｇｃｔａｔｔｇｇｇｃｇａ
ａｇｔｇｃｃｇｇｇｇｃａｇｇａｔｃｔｃｃｔｇｔｃａｔｃｔｃａｃｃｔｔｇｃｔｃｃｔ
ｇｃｃｇａｇａａａｇｔａｔｃｃａｔｃａｔｇｇｃｔｇａｔｇｃａａｔｇｃｇｇｃｇｇｃ
ｔｇｃａｔａｃｇｃｔｔｇａｔｃｃｇｇｃｔａｃｃｔｇｃｃｃａｔｔｃｇａｃｃａｃｃａ
ａｇｃｇａａａｃａｔｃｇｃａｔｃｇａｇｃｇａｇｃａｃｇｔａｃｔｃｇｇａｔｇｇａａ
ｇｃｃｇｇｔｃｔｔｇｔｃｇａｔｃａｇｇａｔｇａｔｃｔｇｇａｃｇａａｇａｇｃａｔｃ
ａｇｇｇｇｃｔｃｇｃｇｃｃａｇｃｃｇａａｃｔｇｔｔｃｇｃｃａｇｇｃｔｃａａｇｇｃ
ｇｃｇｃａｔｇｃｃｃｇａｃｇｇｃｇａｇｇａｔｃｔｃｇｔｃｇｔｇａｃｃｃａｔｇｇｃ
ｇａｔｇｃｃｔｇｃｔｔｇｃｃｇａａｔａｔｃａｔｇｇｔｇｇａａａａｔｇｇｃｃｇｃｔ
ｔｔｔｃｔｇｇａｔｔｃａｔｃｇａｃｔｇｔｇｇｃｃｇｇｃｔｇｇｇｔｇｔｇｇｃｇｇａ
ｃｃｇｃｔａｔｃａｇｇａｃａｔａｇｃｇｔｔｇｇｃｔａｃｃｃｇｔｇａｔａｔｔｇｃｔ
ｇａａｇａｇｃｔｔｇｇｃｇｇｃｇａａｔｇｇｇｃｔｇａｃｃｇｃｔｔｃｃｔｃｇｔｇｃ
ｔｔｔａｃｇｇｔａｔｃｇｃｃｇｃｔｃｃｃｇａｔｔｃｇｃａｇｃｇｃａｔｃｇｃｃｔｔ
ｃｔａｔｃｇｃｃｔｔｃｔｔｇａｃｇａｇｔｔｃｔｔｃｔｇａｃｔｔａａｇａａｃｔｔｇ
ｔｔｔａｔｔｇｃａｇｃｔｔａｔａａｔｇｇｔｔａｃａａａｔａａａｇｃａａｔａｇｃａ
ｔｃａｃａａａｔｔｔｃａｃａａａｔａａａｇｃａｔｔｔｔｔｔｔｃａｃｔｇｃａｔｔｃ
ｔａｇｔｔｇｔｇｇｔｔｔｇｔｃｃａａａｃｔｃａｔｃａａｔｇｔａｔｃｔｔａｔｃａｔ
ｇｔｃｔｇｃａａｔｔｇａｔａａｃｔｔｃｇｔａｔａｇｃａｔａｃａｔｔａｔａｃｇａａ
ｇｔｔａｔｇａａｔｔｃｔｔｔｔｃｔｃｇａｇｃｃｔａａｇｔｇｃａｇｇｇａｇｃｃａｃ
ａｃｔａｇｇｇｇａｃｔａｇｔｇｃａｇｇｇｇａｃｔｇａｃｔａｇａｇｇｇｔｔｃｃｔｇ
ｃａｔａｔｔｃｇｃｔｇａｃｃｃｔａｇａａｔｃｃｇｔｇｃａｔｇａｇａａｃａｇａｃｔ
ｔａｔｔｔｔｃｃａｇｔｇｃａｔａｇｃａｔｇｔａａｔｔｔｔａｇａａａｔｇｇａａｇｃ
ｃｇｔｇｔｃｇｔａｃｔａｔａｔｃｃｔｃａｔｇｔｇａｔｔｃｔｔｇａｃｔａｔｔｔｔｃ
ｔａａｔａｔｇｔａａｇｃｔｇａｔａｔｇｔａａａｃａｔｔａａａｇｃｔａａｃａｔａｔ
ａｇｃｔｔｔａｔｇｔｔｔａａａｃｔｔａｔｃｔｔｇｇｇａｇｇｇａｃｔｃｔｔｔｇａｇ
ｇａａｔｔｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｇａａｇｇｇｔｔｃｔｇｃｔａｇｔａａｃｔｇａｇｃｃ
ａｔｔａａｇｔｇｔｔｃｔｔａａｔｇｔｔｇｔｔｔｃａｇａａｃｔｇｃｔｇｇｇａｔｇｔ
ｇ
ｇｇｇｃｇｇｔａｔｔａｔａｇｇｔａｃｔａａａａｔｔｃｔｇｔｃｃｔａｔｇｃｔｔｔｇ
ｔｃａｇｔｔｔｔｇｇａｃａｔａｇａｇｇａｇｔｔｔｔｇｇｔｇａａａａｔａｔｔｔｔｇ
ａａｔｔａｃａａａａｔａａｔｇａｔｃｇａｔｔｃｔｔｇａｔａａａａａｔｔｇｇｇａｇ
ｔｔｃｔａａｔａｇｇａａａｔａｃｔａｇａｔｃａａａａａｔｔａｇａｇｔｔｔｇａｔｇ
ｇａｇｇｃａｔｇｃｔｔａｔａｔａａｃａｇａｔｔａｔｔｔａａａｔａａａｃａｔｇｔｇ
ｃｔｃｔｇｔｔｔａｇｔｇｔｔｔｔｃｃｔｃｔｇｃｔｔｔａｔｔｃｔｔｔａｇｔａｇｇｔ
ｔｇａｃｇｔｇｔａｇｔａａｇｔｇｔｇｔｇｔｃｔｔｇａｃｔｃｔｇｔｇｃｔｃｔｔｇａ
ｇｔａｇｔａｃｃｔｇｇｇａｇｃｔｇａｔａｔｇｇａｇｇａｇｔｔｃｃａｃｇｇｇａｇａ
ａｃｔｔｔｇｃａｔｇａｃｇａｃｇａｃａｇｃｔｇｃｃａｇｇｔｇａｔｃｃｃａｇｔｃｃ
ｔｔｃｃｔｇａｇｇｔｇｃｔｇａｔｇａｔｃｃｔｇａｔｔｃｃｔｇｇｇｃａｇａｃａｃｔ
ｃｃｃａｃｔｇｃａｇｃｔｃｔｃｔｃａｃｃｃａｃａｇｇａａｇｔｃａｇｃａｔｇｇｔｇ
ｃｇｇａａｃｔｔａａｔｃｃａｇａａａｇａｃａｇｇａｃｃｔｔｔｇｃａｇｔｃｃｔｔｇ
ｃａｔａｃａｇｇｔａａｇａｇａｔｔａｇａｃａｇａｔｃｔｇｃｔｔａｃｃａｃｃｃｔｇ
ｃｃａａａｇｔｃａｇｔｇｃｇａｃａｇｃｔａａａｇｃｃａａｃｇｇｇｇａｔｔｔｇｃａ
ｇａｔａｃｔｇｇａｃａｇｇａｇｔｇｔｇａａｇｃａａａｃｇｇｔｃｔｔｇｔｇｔｃａｃ
ａｔｔｔｔｃａｇｔｇｔｔｔｃｇｃｔｇｔｔｔｔｔａｃａｇｔｇｔａｇｃｔｇｔｇｔｔｔ
ｇｇｃｔｃｔｔｇａａａａａｃｔｔｃｃａｃｔｃａｃｔｔａａｔｇｇａａａａｃｃｔｃｃ
ｃｔｇｔｔｃａｇａａｃｔｇｔｃｔｔｔａｔｔｔａａａａａｔａｇｃｔａａｇｔｔｔｔａ
ａａａｔｔｔｔｃａａｔａａａｇｇｔｔａｃｔｔｔｔｃｔａａａｇｔｇａａｇｃｔｇｔｔ
ｃｔｔｃａｇｔａｇｃｃｔｇｔｇｇｃａａａｔｇａｇｇｇａａｃｃｇｔｇｇｔｇｇａｇｇ
ｃａｇｇａａａｔｇｇａａａｃａｇｇａａａｃｃｔｃｃｃａｔｃａｃｃｃｃｃｇｃｔｇａ
ｃｃｃｔｃｃｃｃｔｃａｇａｃａｇｔｃａｃａｇｔｇｃｔｇｃｃａｇｔｔａｇｔｇｃｇａ
ｃｃａｔｃａｔｔｇｃｃｔｇｃｃａａａｇｔｇａａａｇｇａｔｇｃｔｃａｔｔｔｔｇｔｇ
ａａａｔａａｃｇａｔｔｔａａａａｃｔｔｃｔｔａｇｃａｃｔｇｇｔｔａｔｃｔｃａｇｔ
ｇａａｇｃｃｔａａａａｇｔｃｔａｃｃｔｔｔａｔｔｃｔａａａａｔａｔｇｃｔｇｔｔｔ
ｇｃｃｔｔｃｃｇｇｇｇｃｃｔｔｇｔｇｔｇｔｃａｇｃｔｔｃｃｔａｇｔｇａｇｇｇｔｔ
ａｇｃｔｇｃｔｇｔａａｔｔｇｔｃａｃａｇｔｇｔｔｔｇｃｃｃｇａｔｃｔｇｔｇｔｃｇ
ｃｔｔｔｔｇｃｃａｃｃｔｔｔａｃａｔａａｔｔａｔｇａｇｃｃａｇａｇｃｔｇａａａａ
ｃｔｃｔｇｔｃｃａｔｔｔｔｔｇｔｃｔｔｔｇａａｇｔａａｔｇｔｇｃａａｇａａａｇｇ
ｇ（配列番号８）。いくつかの実施形態では、標的化構築物は、マウス染色体に安定に組
み込まれる。

【0118】

いくつかの実施形態では、トランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮ遺伝子またはそ
の断片のバリアント（例えば、突然変異、欠失または挿入）をマウスの生殖系列に導入す
ることによって産生される。一実施形態では、トランスジェニックマウスは、変異を含む
ヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断片を、マウスの生殖系列に導入することによって産生さ
れる。別の実施形態では、トランスジェニックマウスは、欠損を含むヒトＣＲＢＮ遺伝子
またはその断片を、マウスの生殖系列に導入することによって産生される。さらに別の実
施形態では、トランスジェニックマウスは、挿入を含むヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断
片を、マウスの生殖系列に導入することによって産生される。さらに別の実施形態では、
トランスジェニックマウスは、変異、欠失及び／または挿入を含むヒトＣＲＢＮ遺伝子ま
たはその断片を、マウスの生殖系列に導入することによって産生される。いくつかの実施
形態では、トランスジェニックマウスは、変異及び欠失を含むヒトＣＲＢＮ遺伝子または
その断片を、マウスの生殖系列に導入することによって産生される。特定の実施形態では
、トランスジェニックマウスは、変異及び挿入を含むヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断片
を、マウスの生殖細胞系に導入することによって産生される。他の実施形態では、トラン
スジェニックマウスは、欠失及び挿入を含むヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断片を、マウ
スの生殖系列に導入することによって産生される。さらに他の実施形態において、トラン
スジェニックマウスは、変異、欠失、及び挿入を含むヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断片
を、マウスの生殖細胞系に導入することによって産生される。

【0119】

特定の実施形態では、トランスジェニックマウスは、野生型ヒトＣＲＢＮ遺伝子と少な
くとも約５０、６０、７０、８０、９０、または９５％の同一性を有するヒトＣＲＢＮ遺
伝子またはその断片のバリアント（例えば、突然変異、欠失、または挿入）を、マウスの
生殖系列に導入することによって産生される。特定の実施形態では、トランスジェニック
マウスは、野生型ヒトＣＲＢＮ遺伝子と少なくとも約９０、９１、９２、９３、９４、９
５、９６、９７、９８または９９％の同一性を有するヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断片
のバリアント（例えば、突然変異、欠失、または挿入）を、マウスの生殖系列に導入する
ことによって産生される。特定の実施形態では、トランスジェニックマウスは、野生型ヒ
トＣＲＢＮ遺伝子と約９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９
９％の同一性を有するヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断片のバリアント（例えば、突然変
異、欠失、または挿入）を、マウスの生殖系列に導入することによって産生される。

【0120】

ヒトＣＲＢＮ遺伝子またはその断片のバリアントは、ｈＣＲＢＮの全長またはその断片
にまたがって配列同一性の必要なレベルが達成される限り、１つの以上の突然変異、欠失
、及び／または挿入を有する相同ｈＣＲＢＮのアミノ酸配列を含む。配列同一性は、標準
パラメーターを用いてＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、及びＣＬＵＳＴＡＬなどの既知のプログ
ラムを使用して決定してもよい。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．１９９０，２１５：４０３－４１０；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８９，８９：１０９１５；Ｋａｒｉ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９３，９０：
５８７３；Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １９８８，７３：２３７－２４４
を参照のこと。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃ
ｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通じて公
に入手可能である。ＦＡＳＴＡを使用してデータベースを検索してもよい。Ｐｅａｒｓｏ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８８，８５：
２４４４－２４４８を参照のこと。

【0121】

特定の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニック動物は、ヒトＣＲＢＮまたはその
断片をコードするヌクレオチド配列の１つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では
、ｈＣＲＢＮトランスジェニック動物は、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードするヌク
レオチド配列の約１超、約２超、約３超、約４超、約５超、約６超、約７超、約８超、約
９超、約１０超、約１１超、約１２超、約１３超、約１４超、または約１５超のコピーを
含む。他の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニック動物は、ヒトＣＲＢＮまたはそ
の断片をコードするヌクレオチド配列の約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約
８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、または約１５コピーを含む。例え
ば、本明細書で提供されるのは、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードするヌクレオチド
配列を含むトランスジェニック動物であって、ヒトＣＲＢＮがこのトランスジェニック動
物で発現され、ここでこのｈＣＲＢＮトランスジェニック動物が、ヒトＣＲＢＮをコード
するヌクレオチド配列の約１～約２コピーを含む、トランスジェニック動物である。

【0122】

特定の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニック動物は、異なるレベルのヒトＣＲ
ＢＮを発現する。いくつかの実施形態では、ヒトＣＲＢＮ発現のレベルは、ｈＣＲＢＮ遺
伝子のコピー数、ｈＣＲＢＮをコードする核酸配列が組み込まれているゲノム部位、なら
びに／またはｈＣＲＢＮをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーター及び
／もしくは調節領域によって直接的または間接的に決定される。特定の実施形態では、ｈ
ＣＲＢＮをコードする核酸配列は、内因性ＣＲＢＮ遺伝子が位置する染色体または座とは
異なる染色体または座に組み込まれる。他の実施形態では、ｈＣＲＢＮをコードする核酸
配列は、内因性ＣＲＢＮ遺伝子が位置するのと同じ染色体または同じ座である染色体また
は座に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ｈＣＲＢＮをコードする核酸配列は、内
因性ＣＲＢＮ遺伝子に組み込まれ、内因性ＣＲＢＮ遺伝子の発現を破壊する。

【0123】

特定の実施形態では、プロモーター及び／または調節領域は相同である（例えば、トラ
ンスジェニックマウスのマウスプロモーター及び／または調節領域）。一実施形態では、
プロモーターは相同である。別の実施形態では、調節領域は相同である。さらに別の実施
形態では、プロモーター及び調節領域は相同である。１つの特定の実施形態では、プロモ
ーターは、相同マウスＣＲＢＮプロモーターである。別の実施形態では、調節領域は、相
同マウスＣＲＢＮ調節領域である。さらに別の実施形態では、プロモーター及び調節領域
は、相同マウスＣＲＢＮプロモーター及び調節領域である。いくつかの実施形態では、プ
ロモーター及び／または調節領域は、異種（例えば、トランスジェニックマウスの非マウ
ス真核生物、細菌またはウイルスプロモーター及び／または調節領域）である。一実施形
態では、プロモーターは異種である。別の実施形態では、調節領域は、異種である。さら
に別の実施形態では、プロモーター及び調節領域は異種である。一般に使用されるウイル
スプロモーターの非限定的な例としては、アデノウイルスＥＩＡプロモーター、アデノウ
イルス主要後期プロモーター（ＭＬＰ）、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）プロモ
ーター、及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターなどが挙げられる。プロモータ
ーは、構成的であってもまたは調節性であってもよい（例えば、誘発されるか、または抑
制される）。調節領域は、ＣＲＢＮの発現レベルを調節する（例えば、増加または減少さ
せる）ために、または特定の組織もしくは発達の特定の段階に対するＣＲＢＮの発現を指
定するために使用され得る。いくつかの実施形態では、調節領域はＣＲＢＮの発現を増大
させる。他の実施形態では、調節領域はＣＲＢＮの発現を減少させる。さらに他の実施形
態では、調節領域は、ＣＲＢＮの発現を特定の組織または特定の発達段階に指定する。特
定の実施形態では、調節領域は、目的の遺伝子の機能的転写のための５’領域、ならびに
転写の終結のためのシグナル及びポリ（Ａ）部位を特定する目的遺伝子の３’に位置する
領域を含む。

【0124】

トランスジェニックマウスのいくつかの実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、異種（
例えば、非マウス真核生物、細菌またはウイルス）プロモーター及び／または調節領域に
よって制御される。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、異種プロモーターによって
制御される。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、異種調節領域によって制御される
。さらに一実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、異種のプロモーター及び調節領域によ
って制御される。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、非マウス真核生物（例え
ば、ヒト、サル、ラットなど）プロモーター及び／または調節領域によって制御される。
一実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、非マウス真核生物プロモーターによって制御さ
れる。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、非マウス真核生物調節領域によって制
御される。さらに別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、非マウス真核生物プロモー
ター及び調節領域によって制御される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は
、細菌プロモーター及び／または調節領域によって制御される。一実施形態では、ヒトＣ
ＲＢＮの発現は、細菌プロモーターによって制御される。別の実施形態では、ヒトＣＲＢ
Ｎの発現は、細菌の調節領域によって制御される。さらに別の実施形態では、ヒトＣＲＢ
Ｎの発現は、細菌プロモーター及び調節領域によって制御される。いくつかの実施形態で
は、ヒトＣＲＢＮの発現は、ウイルス（例えば、ＥＩＡ、ＭＬＰ、ＨＣＭＶ、ＲＳＶなど
）プロモーター及び／または調節領域によって制御される。一実施形態では、ヒトＣＲＢ
Ｎの発現は、ウイルスプロモーターによって制御される。別の実施形態では、ヒトＣＲＢ
Ｎの発現は、ウイルス調節領域によって制御される。さらに別の実施形態では、ヒトＣＲ
ＢＮの発現は、ウイルスプロモーター及び調節領域によって制御される。さらに他の実施
形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、相同な（例えば、マウス）プロモーター及び／または
調節領域によって制御される。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、マウスプロモー
ターによって制御される。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、マウス調節領域に
よって制御される。さらに別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、マウスプロモータ
ー及び調節領域によって制御される。トランスジェニックマウスの特定の実施形態では、
ヒトＣＲＢＮの発現は、マウスＣＲＢＮプロモーター及び／または調節領域によって制御
される。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、マウスＣＲＢＮプロモーターによって
制御される。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、マウスＣＲＢＮ調節領域によっ
て制御される。さらに別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの発現は、マウスＣＲＢＮプロモ
ーター及び調節領域によって制御される。

【0125】

別の実施形態では、テトラサイクリン誘導性の系を用いてトランスジェニックマウスを
作製してもよく、ここでは目的の遺伝子の発現をテトラサイクリンまたはその誘導体（例
えばドキシサイクリン）の存在または非存在によって制御してもよい。Ｈｉｃｋｍａｎ－
Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｒｅｖｉｅ
ｗｓ ２００６，７：４９を参照のこと。これらの系では、テトラサイクリン制御された
トランスアクチベーターが発現されるトランスアクチベーターマウス、及び目的の遺伝子
（例えば、ＣＲＢＮ）の発現が、テトラサイクリン依存性プロモーターの制御下にあるレ
スポンダーマウスという２つの別々のトランスジェニックマウス系統が生成される。トラ
ンスアクチベーターマウス及びレスポンダーマウスの繁殖によって、目的の遺伝子（例え
ば、ＣＲＢＮ）の発現がテトラサイクリンまたはその誘導体（例えば、ドキシサイクリン
）に応答する二重トランスジェニックマウスが産生される。いくつかの実施形態では、テ
トラサイクリンまたはその誘導体（例えば、ドキシサイクリン）の不在は導入遺伝子の転
写を可能にし、テトラサイクリンまたはその誘導体（例えばドキシサイクリン）の存在は
、転写のダウンレギュレーションを引き起こす（ｔｅｔ－ＯＦＦ）。他の実施形態におい
て、テトラサイクリンまたはその誘導体（例えばドキシサイクリン）の存在は、導入遺伝
子の転写を可能にし、テトラサイクリンまたはその誘導体（例えばドキシサイクリン）の
除去は、転写ダウンレギュレーション（ｔｅｔ－ＯＮ）を生じる。

【0126】

特定の実施形態では、マウスＣＲＢＮがマウスにおいて発現されるように、ヒトＣＲＢ
Ｎは、トランスジェニックマウスにおいて同様の発現パターンで発現される。他の実施形
態では、ヒトＣＲＢＮは、ヒトＣＲＢＮがヒトにおいて発現されるように、トランスジェ
ニックマウスにおいて同様の発現パターンで発現される。いくつかの実施形態では、トラ
ンスジェニックマウスにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルは、マウスにおけるマウスＣＲ
ＢＮの発現レベルと同様である。他の実施形態では、トランスジェニックマウスにおける
ヒトＣＲＢＮの発現レベルは、ヒトにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルと同様である。さ
らに他の実施形態では、トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルは
、マウスにおけるマウスＣＲＢＮの発現レベルとは異なる。さらに他の実施形態では、ト
ランスジェニックマウスにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルは、ヒトにおけるヒトＣＲＢ
Ｎの発現レベルとは異なる。一実施形態では、トランスジェニックマウスにおけるヒトＣ
ＲＢＮの発現レベルは、マウスにおけるマウスＣＲＢＮの発現レベルよりも高い。別の実
施形態では、トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルは、マウスに
おけるマウスＣＲＢＮの発現レベルよりも低い。さらに別の実施形態では、トランスジェ
ニックマウスにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルは、ヒトにおけるヒトＣＲＢＮの発現レ
ベルよりも高い。さらに別の実施形態では、トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＲ
ＢＮの発現レベルは、ヒトにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルよりも低い。特定の実施形
態では、トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルは、マウスにおけ
るマウスＣＲＢＮの発現レベルの約１倍、約２倍、約３倍、約４倍、または約５倍である
。特定の実施形態では、トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルは
、ヒトにおけるヒトＣＲＢＮの発現レベルの約１倍、約２倍、約３倍、約４倍または約５
倍である。

【0127】

ヒトＣＲＢＮまたはマウスＣＲＢＮの発現パターンは、限定するものではないが、イン
サイチュハイブリダイゼーション、免疫組織化学染色（ＩＨＭ）などを含む、当技術分野
で周知の方法によって測定され得る。ヒトＣＲＢＮまたはマウスＣＲＢＮの発現のレベル
は、限定するものではないが、ノーザンブロット、ウエスタンブロット、ＲＴ－ＰＣＲ、
または定量的ＲＴ－ＰＣＲを含む、当該分野で周知の方法によって測定してもよい。同様
の方法を用いて、種々のハウスキーピング遺伝子（例えば、ＧＡＤＰＨ、β－アクチン、
ユビキチン、またはｈｓｐ９０）の発現レベルを測定してもよい。同じ試料由来のハウス
キーピング遺伝子の発現レベルに基づいて標準化されている、ヒトＣＲＢＮまたはマウス
ＣＲＢＮの相対発現レベルを比較してもよい。

【0128】

特定の実施形態では、トランスジェニック動物は、導入された遺伝子改変（例えば、ヒ
トＣＲＢＮ遺伝子）と同様に、内因性遺伝子（例えば、マウスＣＲＢＮ遺伝子）に対する
改変を含む。例えば、宿主動物は、標的遺伝子（例えば、ＣＲＢＮ）について「ノックア
ウト」及び／または「ノックイン」のいずれであってもよい。すなわち、宿主動物の内因
性ＣＲＢＮ遺伝子（例えば、マウスＣＲＢＮ）を「ノックアウト」してもよいし、及び／
またはヒトＣＲＢＮ遺伝子を「ノックイン」してもよい。ノックアウトは、内因性遺伝子
（例えば、マウスＣＲＢＮ）の一方または両方の対立遺伝子において、機能の部分的また
は完全な喪失を有する。ノックインは、内因性遺伝子（例えば、マウスＣＲＢＮ）とは異
なる配列及び／または機能を有する導入された遺伝子改変（例えば、ヒトＣＲＢＮ）を有
する。ノックアウト及びノックインは、内因性遺伝子が無効にされ、変化した形態が導入
されるように組み合わせてもよい。例えば、特定の実施形態では、宿主動物の内因性ＣＲ
ＢＮ遺伝子をノックアウトし、一方でヒトＣＲＢＮ遺伝子を導入することが好ましい。一
実施形態では、マウスＣＲＢＮ遺伝子がノックアウトされ、一方、ヒトＣＲＢＮ遺伝子が
ノックインされる。

【0129】

特定の実施形態では、標的遺伝子発現は、ノックアウト動物において検出されないか、
または有意ではない。例えば、ＣＲＢＮ遺伝子のノックアウトは、ＣＲＢＮ遺伝子の発現
が検出できないか、または有意でないレベルでしか存在しないことを意味する；その結果
、ＣＲＢＮ遺伝子の機能は実質的に低下した。ノックアウトは、限定されるものではない
が、コード配列の破壊の導入、例えば、１つ以上の終止コドンの挿入、ＤＮＡ断片などの
挿入、コード配列の一部の欠失、コード配列の終止コドン置換などを含む当技術分野で周
知の様々な機構によって達成され得る。いくつかの実施形態では、標的遺伝子（例えば、
ＣＲＢＮ）の全部または一部の染色体欠失は、コード領域の全部もしくは一部の欠失によ
って達成されてもよいし、または非コード配列（プロモーター領域、３’調節配列、及び
／またはエンハンサーなどを含む）の欠失によって達成されてもよい。いくつかの実施形
態では、標的遺伝子（例えば、ＣＲＢＮ）のノックアウトは、標的遺伝子（例えば、ＣＲ
ＢＮ）の発現を活性化するために必要とされる遺伝子の欠失によって達成され得る。他の
実施形態では、機能的ノックアウトは、標的遺伝子（例えば、ＣＲＢＮ）の発現をブロッ
クするアンチセンス構築物を導入することによって達成され得る。Ｌｉ及びＣｏｈｅｎ、
Ｃｅｌｌ １９９６、８５：３１９－３２９を参照のこと。特定の実施形態では、「ノッ
クアウト」はまた、例えば、限定されるものではないが、標的遺伝子改変を促進する物質
への動物の曝露、標的遺伝子部位（例えばＣｒｅ－ｌｏｘ系のＣｒｅ）での組換えを促進
する酵素の導入、または標的遺伝子改変を出生後に指示するための他の方法を含む特定の
条件が満たされたときに標的遺伝子（例えば、ＣＲＢＮ）の改変が起こる条件付きノック
アウトも含む。

【0130】

遺伝子（例えば、ヒトＣＲＢＮ）の「ノックイン」とは、遺伝子（例えば、ヒトＣＲＢ
Ｎ）の発現及び／または機能をもたらす宿主（例えば、マウス）細胞ゲノムにおける改変
を意味する。特定の実施形態では、遺伝子（例えば、ヒトＣＲＢＮ）の増大（異所性を含
む）発現は、遺伝子（例えば、ヒトＣＲＢＮ）のさらなるコピーの導入によって、または
、遺伝子（例えば、ヒトＣＲＢＮ）の発現を増強する調節性配列を作動的に挿入すること
によって、達成され得る。いくつかの実施形態では、ノックインは構成的であり、すなわ
ち遺伝子（例えば、ヒトＣＲＢＮ）の発現は構成的である。他の実施形態では、ノックイ
ンは条件的であり、すなわち、遺伝子（例えば、ヒトＣＲＢＮ）の発現は、アクチベータ
ーまたはリプレッサーの存在に依存する。さらに他の実施形態では、遺伝子のノックイン
は、宿主（例えば、マウス）における内因性遺伝子（例えば、マウスＣＲＢＮ）のノック
インであってもよい。これは、内因性遺伝子（例えば、マウスＣＲＢＮ）の追加コピーの
導入によって、または内因性遺伝子（例えば、マウスＣＲＢＮ）の発現を増強する調節配
列を作動的に挿入することによって達成され得る。

【0131】

特定の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮ遺伝子（
全長、その断片、野生型、バリアントなどを含むが、これに限定されない）のノックイン
を有する。一実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、全長ヒトＣＲＢＮ
遺伝子のノックインを有する。別の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウス
は、ヒトＣＲＢＮ遺伝子の断片のノックインを有する。いくつかの実施形態では、ｈＣＲ
ＢＮトランスジェニックマウスは、マウスＣＲＢＮ遺伝子のノックアウトを有する。他の
実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮ遺伝子（全長、そ
の断片、野生型、バリアントなどを含むが、これらに限定されない）のノックイン及びマ
ウスＣＲＢＮ遺伝子のノックアウトを有する。一実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェ
ニックマウスは、全長ヒトＣＲＢＮ遺伝子のノックイン及びマウスＣＲＢＮ遺伝子のノッ
クアウトを有する。別の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒトＣ
ＲＢＮ遺伝子の断片のノックイン及びマウスＣＲＢＮ遺伝子のノックアウトを有する。

【0132】

特定の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮ（全長、
その断片、野生型、バリアントなどを含むが、これに限定されない）を発現する。一実施
形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、全長ヒトＣＲＢＮ遺伝子を発現する
。別の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮ遺伝子の断
片を発現する。いくつかの実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、内因
性マウスＣＲＢＮを発現しない。他の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウ
スは、ヒトＣＲＢＮ（全長、その断片、野生型、バリアントなどを含むが、これらに限定
されない）を発現するが、内因性マウスＣＲＢＮを発現しない。一実施形態では、ｈＣＲ
ＢＮトランスジェニックマウスは全長ヒトＣＲＢＮ遺伝子を発現するが、内因性マウスＣ
ＲＢＮを発現しない。別の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒト
ＣＲＢＮ遺伝子の断片を発現するが、内因性マウスＣＲＢＮを発現しない。

【0133】

いくつかの実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮアイ
ソフォーム１を発現する。他の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、
ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２を発現する。特定の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジ
ェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１及びアイソフォーム２を発現する。い
くつかの実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、全長ヒトＣＲＢＮアイ
ソフォーム１を発現する。他の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、
全長ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２を発現する。特定の実施形態では、ｈＣＲＢＮトラン
スジェニックマウスは、全長ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１及び全長アイソフォーム２を
発現する。いくつかの実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒトＣＲ
ＢＮアイソフォーム１の断片を発現する。他の実施形態では、ｈＣＲＢＮトランスジェニ
ックマウスは、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の断片を発現する。特定の実施形態では、
ｈＣＲＢＮトランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の断片及びアイ
ソフォーム２の断片を発現する。

【0134】

特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、全長ヒトＣＲＢＮ遺伝子から発現さ
れる。いくつかの実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、全長ヒトＣＲＢＮのｃＤＮ
Ａから発現される。他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、全長ヒトＣＲＢＮの
ｃＤＮＡから発現され、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡは、配列番号５の核酸配列を含む。さら
に他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、全長ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡから発現
され、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡは、配列番号６の核酸配列を含む。いくつかの実施形態で
は、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、マウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子から発現される。さ
らに他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、マウスＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部及
びヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部を含むマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子から発現され
る。さらに他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、マウスＣＲＢＮゲノムＤＮＡ
の一部及びヒトＣＲＢＮゲノムＤＮＡの一部を含むマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子か
ら発現される。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、マウスＣＲＢＮのｃＤＮＡ
の一部及びヒトＣＲＢＮゲノムＤＮＡの一部を含むマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子か
ら発現される。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、マウスＣＲＢＮゲノム
ＤＮＡの一部及びヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部を含むマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝
子から発現される。１つの特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、マウスＣＲ
ＢＮゲノムＤＮＡの一部及びヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部を含むマウス－ヒトキメラＣ
ＲＢＮ遺伝子から発現され、ここで、ヒトＣＲＢＮｃＤＮＡの一部は、配列番号７の核酸
配列を含む。別の特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質は、マウスＣＲＢＮゲノ
ムＤＮＡとヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部を含む標的化構築物との間の相同組換えによっ
て生成されるマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子から発現され、ここで標的化構築物は、
配列番号８の核酸配列を含む。

【0135】

特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、ヒトＣＲＢＮ遺伝子の断片か
ら発現される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、ヒトＣＲＢ
ＮのｃＤＮＡの断片から発現される。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は
、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のｃＤＮＡの断片から発現される。別の実施形態では、
ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のｃＤＮＡの断片から
発現される。いくつかの実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、ヒトＣＲＢＮ
のｃＤＮＡの断片から発現され、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡは配列番号５の核酸配列を含む
。他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの断片
から発現され、ここで、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡは、配列番号６の核酸配列を含む。いく
つかの実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、マウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺
伝子の断片から発現される。さらに他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は
、マウスＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部及びヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部を含むマウス－ヒ
トキメラＣＲＢＮ遺伝子の断片から発現される。さらに他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮ
タンパク質の断片は、マウスＣＲＢＮゲノムＤＮＡの一部及びヒトＣＲＢＮゲノムＤＮＡ
の一部を含むマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子の断片から発現される。一実施形態では
、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、マウスＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部及びヒトＣＲＢＮ
ゲノムＤＮＡの一部を含むマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子の断片から発現される。特
定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、マウスＣＲＢＮゲノムＤＮＡの一
部及びヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部を含むマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子の断片か
ら発現される。１つの特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、マウスＣ
ＲＢＮゲノムＤＮＡの一部及びヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部を含むマウス－ヒトキメラ
ＣＲＢＮ遺伝子の断片から発現され、ここで、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部は、配列番
号７の核酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片は、マ
ウスＣＲＢＮゲノムＤＮＡとヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡの一部を含む標的化構築物との間の
相同組換えによって生成されるマウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子の断片から発現され、
標的化構築物は、配列番号８の核酸配列を含む。

【0136】

本明細書ではまた、トランスジェニック動物から得られるか、またはトランスジェニッ
ク動物に由来する単離された細胞、細胞株、組織または器官も提供される。特定の実施形
態では、トランスジェニック動物から得られた単離細胞が提供される。いくつかの実施形
態では、トランスジェニック動物に由来する単離細胞株が提供される。他の実施形態では
、トランスジェニック動物から得られた単離された組織が提供される。さらに他の実施形
態では、トランスジェニック動物から得られた単離器官が提供される。

【0137】

一態様では、本明細書で提供されるトランスジェニックマウスに由来する細胞が提供さ
れ、この細胞は、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む。特定の実施
形態では、この細胞はトランスジェニックマウスから得られる。一実施形態では、この細
胞は単離された細胞である。一実施形態では、核酸配列はヒトＣＲＢＮをコードする。特
定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、トランスジェニックマウスの
染色体に安定に組み込まれる。別の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコ
ードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、トランス
ジェニックマウスの染色体に安定に組み込まれる。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒ
トＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソ
フォーム１の最終コドンで終わるポリペプチドを含む、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする
。特定の実施形態では、この核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３の
グルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチ
ドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。１つの実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタン
パク質をコードする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢ
Ｎタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢ
Ｎタンパク質の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒ
トＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８
を含む。いくつかの実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮが発現される。他の実施形態では、
ヒトＣＲＢＮの断片が発現される。さらに他の実施形態では、マウスＣＲＢＮは、発現さ
れない。さらに他の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮが発現されるが、マウスＣＲＢＮは
発現されない。さらに他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片が発現されるが、マウスＣ
ＲＢＮは発現されない。

【0138】

別の態様では、本明細書で提供されるトランスジェニックマウスに由来する細胞株であ
って、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むものが提供される。一実
施形態では、細胞株は単離された細胞株である。一実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲ
ＢＮをコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、トラン
スジェニックマウスの染色体に安定に組み込まれる。別の実施形態では、核酸配列は、ヒ
トＣＲＢＮの断片をコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする
核酸配列は、トランスジェニックマウスの染色体に安定に組み込まれる。特定の実施形態
では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し
、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮ
の断片をコードする。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２
のコドン２３のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終
わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。１つの実施形態では、全長ヒ
トＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、
全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態で
は、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実
施形態では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物
は、配列番号８を含む。特定の実施形態では、細胞株は形質転換細胞株である。いくつか
の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮが発現される。他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断
片が発現される。さらに他の実施形態では、マウスＣＲＢＮは発現されない。さらに他の
実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮが発現されるが、マウスＣＲＢＮは発現されない。さら
に他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片が発現されるが、マウスＣＲＢＮは発現されな
い。

【0139】

別の態様では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、本明細書で
提供されるトランスジェニックマウスに由来する組織が提供される。特定の実施形態では
、組織はトランスジェニックマウスから得られる。一実施形態では、組織は単離された組
織である。一実施形態では、核酸配列はヒトＣＲＢＮをコードする。特定の実施形態では
、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、トランスジェニックマウスの染色体に安定に組
み込まれる。別の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする。特定の
実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、トランスジェニックマウス
の染色体に安定に組み込まれる。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソ
フォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の最終
コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。特定の実施形態で
は、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸で開始し、
ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの
断片をコードする。１つの実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする核酸
配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードす
る核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の断片をコ
ードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまたはその断
片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。いくつかの実施
形態では、全長ヒトＣＲＢＮが発現される。他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片が発
現される。さらに他の実施形態では、マウスＣＲＢＮは発現されない。さらに他の実施形
態では、全長ヒトＣＲＢＮが発現されるが、マウスＣＲＢＮは発現されない。さらに他の
実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片が発現されるが、マウスＣＲＢＮは発現されない。

【0140】

別の態様では、本明細書で提供されるトランスジェニックマウスに由来する器官であっ
て、その器官がヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む器官が提供され
る。特定の実施形態では、この器官はトランスジェニックマウスから得られる。一実施形
態では、器官は単離器官である。一実施形態では、核酸配列はヒトＣＲＢＮをコードする
。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、トランスジェニックマウ
スの染色体に安定に組み込まれる。別の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片
をコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、トラ
ンスジェニックマウスの染色体に安定に組み込まれる。特定の実施形態では、核酸配列は
、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮア
イソフォーム１の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードす
る。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグ
ルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチド
を含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。１つの実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパ
ク質をコードする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮ
タンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮ
タンパク質の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒト
ＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を
含む。いくつかの実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮが発現される。他の実施形態では、ヒ
トＣＲＢＮの断片が発現される。さらに他の実施形態では、マウスＣＲＢＮは発現されな
い。さらに他の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮが発現されるが、マウスＣＲＢＮは発現
されない。さらに他の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片が発現されるが、マウスＣＲＢ
Ｎは発現されない。

【0141】

５．３ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスの作製方法
別の態様では、（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌ
クレオチド構築物をマウス卵に導入すること、及び；（ｂ）このマウス卵を雌性マウスに
移入することを包含する、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを作製する
ための方法が本明細書で提供される。本明細書では、また、（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはそ
の断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス胚に導入すること；
及び（ｂ）このマウス胚を雌性マウスに移入すること、を包含する、ヒトＣＲＢＮを発現
するトランスジェニックマウスを産生するための方法も提供される。本明細書ではまた、
（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物
をマウス胚性幹（ＥＳ）細胞に導入すること；及び（ｂ）このマウスＥＳ細胞を雌性マウ
スに移入することを包含する、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを作製
する方法も提供される。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮをコードする。
特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、卵、胚またはＥＳ細胞の染
色体に安定に組み込まれる。他の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコー
ドする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、卵、胚また
はＥＳ細胞の染色体に安定に組み込まれる。特定の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲ
ＢＮアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォー
ム１の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。特定の
実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸
で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒト
ＣＲＢＮの断片をコードする。１つの実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコー
ドする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質
をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質
の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮま
たはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。

【0142】

特定の実施形態では、本方法は、雌性マウスを育種することをさらに含む。他の実施形
態では、本方法は、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を有する子孫を選
択することをさらに包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、雌性マウスを育種
し、ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を有する子孫を選択することをさ
らに包含する。したがって、本明細書にさらに提供されるのは、（ａ）ヒトＣＲＢＮまた
はその断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス卵に導入するこ
と；（ｂ）マウス卵を雌性マウスに移入すること、ならびに（ｃ）この雌性マウスを育種
すること、及びヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫トランスジェニックマウスを
選択することを包含する、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを産生する
ための方法である。本明細書ではまた、（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする
核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス胚に導入すること；（ｂ）このマウス胚
を雌性マウスに移入すること、ならびに（ｃ）この雌性マウスを育種すること、及びヒト
ＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫トランスジェニックマウスを選択することを包含
する、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを産生するための方法も提供さ
れる。本明細書ではまた、（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含
むポリヌクレオチド構築物をマウスＥＳ細胞に導入すること；（ｂ）このマウスＥＳ細胞
を雌性マウスに移入すること、ならびに（ｃ）この雌性マウスを育種すること、及びヒト
ＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫トランスジェニックマウスを選択すること、を包
含する、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを産生するための方法も提供
される。

【0143】

さらに別の態様では、本明細書において、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトラ
ンスジェニックマウスであって：（ａ）ヒトＣＲＢＮ、またはその断片をコードする核酸
配列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス卵に導入すること；及び（ｂ）このマウス卵
を雌性マウスに移入すること、を包含する方法によって産生されるトランスジェニックマ
ウスが提供される。本明細書ではまた、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランス
ジェニックマウスであって：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を
含むポリヌクレオチド構築物をマウス胚に導入すること；及び（ｂ）このマウス胚を雌性
マウスに移入すること、を包含する方法によって産生されるトランスジェニックマウスが
提供される。本明細書ではまた、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニ
ックマウスであって：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポ
リヌクレオチド構築物をマウスＥＳ細胞に導入すること；及び（ｂ）このマウスＥＳ細胞
を雌性マウスに移入すること、を包含する方法によって産生されるトランスジェニックマ
ウスが提供される。さらに、本明細書では、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトラ
ンスジェニックマウスであって：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配
列を含むポリヌクレオチド構築物をマウス卵に導入すること；（ｂ）このマウス卵を雌性
マウスに移入すること；ならびに（ｃ）この雌性マウスを育種すること、及びヒトＣＲＢ
Ｎまたはその断片を発現する子孫トランスジェニックマウスを選択することを包含する、
方法によって産生されるトランスジェニックマウスが提供される。また、本明細書では：
（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド構築物
をマウス胚に導入すること；（ｂ）このマウス胚を雌性マウスに移入すること、ならびに
（ｃ）この雌性マウスを育種すること、及びヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫
トランスジェニックマウスを選択することを包含する、方法によって産生される、ヒトＣ
ＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスも提供される。また、本明細
書では：（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチ
ド構築物をマウスＥＳ細胞に導入すること；（ｂ）このマウスＥＳ細胞を雌性マウスに移
入すること、ならびに（ｃ）この雌性マウスを育種すること、及びヒトＣＲＢＮまたはそ
の断片を発現する子孫トランスジェニックマウスを選択することを包含する、方法によっ
て産生される、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスが提供
される。特定の実施形態では、この核酸配列は、ヒトＣＲＢＮをコードする。特定の実施
形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、卵、胚またはＥＳ細胞の染色体に安定
に組み込まれる。他の実施形態では、この核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする
。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、卵、胚またはＥＳ
細胞の染色体に安定に組み込まれる。特定の実施形態では、この核酸配列は、ヒトＣＲＢ
Ｎアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム
１の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣＲＢＮの断片をコードする。特定の実
施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸で
開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドを含むヒトＣ
ＲＢＮの断片をコードする。１つの実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコード
する核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質を
コードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質の
断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮまた
はその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。

【0144】

本明細書の特定の実施形態では、「ヒトＣＲＢＮ」への言及は全長ヒトＣＲＢＮを指す
。

【0145】

さらに別の態様では、特定の遺伝的背景においてヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェ
ニックマウスを産生するための方法であって、本明細書で提供されるヒトＣＲＢＮまたは
その断片を発現するトランスジェニックマウスを、遺伝的背景のマウスと育種することを
包含する方法が本明細書で提供される。また本明細書で提供されるヒトＣＲＢＮまたはそ
の断片を発現するトランスジェニックマウスを、遺伝的背景のマウスと育種することを包
含する、方法によって産生される、特定の遺伝的背景においてヒトＣＲＢＮを発現するト
ランスジェニックマウスも本明細書に提供される。特定の実施形態では、ある遺伝的背景
のマウスは、ＮＳＧ／ＮＯＧマウスモデルである。他の実施形態では、ある遺伝的背景の
マウスは、Ｖｋ＊ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデルである。さらに他の実施形態では、あ
る遺伝的背景のマウスは、Ｅｕ－ｖ－ａｂｌ／Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデ
ルである。さらに他の実施形態では、ある遺伝的背景のマウスは、Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃリン
パ腫マウスモデルである。一実施形態では、ある遺伝的背景のマウスは、ヒトＩＫＺＦ１
トランスジェニックマウスモデルである。別の実施形態では、ある遺伝的背景のマウスは
、ヒトＩＫＺＦ３トランスジェニックマウスモデルである。

【0146】

さらに別の態様では、特定の遺伝的背景においてヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェ
ニックマウスを作製するための方法であって、セクション５．２に示されるように、その
ゲノムがヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸を含むトランスジェニックマウス
を、遺伝的背景のあるマウスと育種することを包含する方法が本明細書において提供され
る。本明細書ではまた、セクション５．２に示されるように、そのゲノムがヒトＣＲＢＮ
またはその断片をコードする核酸を含むトランスジェニックマウスを、遺伝的背景のある
マウスと育種することを包含する方法によって産生される、特定の遺伝的背景においてヒ
トＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスも提供される。特定の実施形態では、あ
る遺伝的背景のマウスは、ＮＳＧ／ＮＯＧマウスモデルである。他の実施形態では、ある
遺伝的背景のマウスは、Ｖｋ＊ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデルである。さらに他の実施
形態では、ある遺伝的背景のマウスは、Ｅｕ－ｖ－ａｂｌ／Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃ多発性骨髄
腫マウスモデルである。さらに他の実施形態では、遺伝的背景のマウスは、Ｅｕ－ｃ－Ｍ
ｙｃリンパ腫マウスモデルである。一実施形態では、遺伝的背景のマウスは、ヒトＩＫＺ
Ｆ１トランスジェニックマウスモデルである。別の実施形態では、ある遺伝的背景のマウ
スは、ヒトＩＫＺＦ３トランスジェニックマウスモデルである。

【0147】

トランスジェニック動物を産生するための技術は当該分野で周知である。例えば、Ｈｏ
ｕｄｅｂｉｎｅ，Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｉｍａｌｓ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎ
ｄ Ｕｓｅ（Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ，１９９７）；Ｈｏｇａｎ ｅｔ ａｌ
．，Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ，２ｄ ｅｄ．，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，
１９９４）；Ｋｒｉｍｐｅｎｆｏｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
１９９１，９：８４４；Ｐａｌｍｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １９８５，４１：
３４３；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８５，３１５：６８０；米国
特許第号５，６０２，２９９号；同第５，１７５，３８４号；同第６，０６６，７７８号
；及び同第６，０３７，５２１号（その全体が本明細書において組み込まれる）を参照の
こと。トランスジェニック動物を生成するのに用いられる技術としては、限定するもので
はないが、前核注入（Ｇｏｒｄｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １
９８０，７７：７３８０－７３８４；米国特許第４，８７３，１９１号）、エレクトロポ
レーション（Ｌｏ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９８３，３：１８０３－１８１４）
、相同組換え（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １９８９，５６：３１３－
３２１；Ｈａｎｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９５，２６９：６７９－６８
２）生殖系列へのレトロウイルス遺伝子移入（Ｖａｎ ｄｅｒ Ｐｕｔｔｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８５，８２：６１４８－６１
５２）、及び精子による遺伝子移入（Ｌａｖｉｔｒａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １
９８９，５７：７１７－７２３）が挙げられる。

【0148】

特定の実施形態では、トランスジェニック動物は、前核注射によって産生される。接合
体は、通常、前核注射のための最良の標的である。例えば、雄性マウスの前核は、直径約
２０μｍであり、ＤＮＡ溶液１～２ｐＬを注入するのに適している。前核注射の標的とし
て接合体を用いることは大きな利点がある。注入されたＤＮＡは、ほとんどの場合、最初
の細胞分裂の前に宿主遺伝子に組み込まれる。結果として、トランスジェニック動物のほ
ぼ全ての細胞が、取り込まれた導入遺伝子を保持する。生殖細胞のほぼ５０％が導入遺伝
子を含むので、導入遺伝子の創始動物の子孫への伝達は非常に効率的である。特定の実施
形態では、目的の遺伝子を含むベクター（例えば、ｈＣＲＢＮ）を、前核（すなわち、前
核状態のマウス受精卵）に注入する。注入された前核は、その後、偽妊娠した雌性マウス
の子宮に植え付けられる。生成された子孫は、導入遺伝子の１つ以上のコピーを有する場
合がある。

【0149】

いくつかの実施形態では、トランスジェニック動物は、目的の遺伝子を胚性幹（ＥＳ）
細胞に導入することによって産生される。ＥＳ細胞は、適切な条件下で、インビトロで培
養された移植前の胚から得られる。Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８１
，２９２：１５４－１５６；Ｂｒａｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８４，
３０９：２５５－２５８；Ｇｏｓｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．１９８６，８３：９０６５－９０６９；Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８６，３２２：４４５－４４８を参照のこと。特定の
実施形態では、導入遺伝子は、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム共沈殿、プロ
トプラストまたはスフェロプラスト融合、リポフェクション及びＤＥＡＥ－デキストラン
媒介トランスフェクションを含むがこれらに限定されない当技術分野で公知の様々な方法
を用いたＤＮＡトランスフェクションによって、ＥＳ細胞中に効率的に導入される。いく
つかの実施形態では、導入遺伝子は、レトロウイルス媒介形質導入によってＥＳ細胞に導
入される。他の実施形態では、導入遺伝子は、マイクロインジェクションによってＥＳ細
胞に導入される。次いで、導入遺伝子を保持する形質転換されたＥＳ細胞は、非ヒト動物
（例えば、マウス）由来の胚盤胞と組み合わされる。その後、ＥＳ細胞は、胚をコロニー
形成し、得られたキメラ動物の生殖系列に寄与する。概説については、Ｊａｅｎｉｓｃｈ
、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８、２４０：１４６８－１４７４を参照のこと。形質転換され
たＥＳ細胞を胚軸に導入する前に、形質転換されたＥＳ細胞を様々な選択プロトコールに
供して、導入遺伝子を組み込んだＥＳ細胞を富化してもよい（もし導入遺伝子がそのよう
な選択のための手段を提供する（例えば、導入遺伝子構築物が、ネオマイシン選択カセッ
トを含む）場合）。得られた子孫は、ＥＳ及び宿主細胞に関してキメラである。排他的に
ＥＳ子孫を含む非キメラ株は、交配によって得てもよい。この技術は、例えばＷＯ９１／
１０７４１に記載されている。

【0150】

他の実施形態では、トランスジェニック動物は、レトロウイルス感染によって産生され
る。発生中の非ヒト（例えば、マウス）胚は、インビトロで胚盤胞期にまで培養すること
ができる。割球は、レトロウイルス感染の適切な標的である。感染の効率を高めるために
、透明帯を除去するための割球の酵素処理が好ましい。使用されるウイルスベクターは、
通常、導入遺伝子を保持する複製欠損レトロウイルスである。割球は、ウイルス産生細胞
の単層上で培養され、感染を容易かつ効率的に達成し得る。あるいは、後の段階で感染を
行ってもよく、例えばウイルスまたはウイルス産生細胞を、胞胚腔内に注入してもよい。
レトロウイルス感染によって産生される創始動物は、トランスジェニック動物を形成する
細胞の一部にのみ取り込みが起こるため、導入遺伝子についてはほとんどがキメラである
。いくつかの実施形態では、創始動物は、ゲノム中の様々な位置に導入遺伝子のレトロウ
イルス挿入を有してもよい。別の実施形態では、導入遺伝子は、効率ははるかに低いが、
妊娠中期胚の子宮内レトロウイルス感染によって生殖系列に導入してもよい。

【0151】

さらに他の実施形態では、トランスジェニック動物は、Ｓｃｈｎｉｅｋｅ ｅｔ ａｌ
．、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９７，２７８：２１３０及びＣｉｂｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．、
Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９８，２８０：１２５６に記載されている核移植技術によって産生
してもよい。この方法を用いて、ドナー動物（例えば、マウス）由来の体細胞（例えば、
初代胎児線維芽細胞）を目的の遺伝子（例えば、ヒトＣＲＢＮ）のコード配列を含む構築
物で安定にトランスフェクトする。次いで、安定にトランスフェクトされた線維芽細胞を
、脱核した卵母細胞に融合させ、培養し、雌性マウスに移入してトランスジェニックマウ
スを作製する。

【0152】

外因性ＤＮＡを導入するためのベクターとしては、限定するものではないが、プラスミ
ド、レトロウイルス及び他の動物ウイルス、ＢＡＣ、ＹＡＣなどが挙げられる。限定する
ものではないが、構築、分子クローニング、増幅、産生、トランスフェクション、形質転
換、形質導入、感染、エレクトロポレーションなどを含む、これらのベクターを操作する
ための方法は、当技術分野で周知である。

【0153】

トランスジェニック遺伝子構築物または標的化構築物は、従来の分子生物学的技術を用
いて、目的の遺伝子（例えば、ｈＣＲＢＮ）またはその断片を適切なベクター（例えば、
プラスミド、レトロウイルス及び他の動物ウイルス、ＢＡＣ、ＹＡＣ）に挿入することに
よって作製してもよい。いくつかの実施形態では、標的化構築物は、全長ｈＣＲＢＮ遺伝
子を含む。特定の実施形態では、標的化構築物は、全長ｈＣＲＢＮのｃＤＮＡを含む。他
の実施形態では、標的化構築物は、ｈＣＲＢＮ遺伝子の断片を含む。さらに他の実施形態
では、標的化構築物は、ｈＣＲＢＮのｃＤＮＡの断片を含む。標的化構築物はまた、目的
の遺伝子（例えば、ｈＣＲＢＮ）の後にポリ（Ａ）配列（例えば、ｂＧＨ ｐＡ）を含ん
でもよい。さらに、標的化構築物は、形質転換された宿主細胞（例えば、ＥＳ細胞）が導
入遺伝子を組み込んだ形質転換細胞を豊富にするために様々な選択プロトコールに供され
るように、選択マーカー（例えばネオマイシン選択カセット）を含んでもよい。

【0154】

特定の他の実施形態では、標的化構築物は、目的の遺伝子（例えば、ｈＣＲＢＮ）に隣
接するマウス相同アーム、ポリ（Ａ）配列（例えば、ｂＧＨ ｐＡ）、及び選択マーカー
（例えば、ネオマイシン選択カセット）をさらに含む。一実施形態では、隣接するマウス
相同アームは、５’相同性アーム及び３’相同性アームを含む。特定の実施形態では、隣
接するマウス相同アームはマウスゲノムＤＮＡであり、目的の遺伝子（例えば、ｈＣＲＢ
Ｎ）がマウスゲノムのどこに安定して組み込まれるかを決定する。別の実施形態では、目
的の遺伝子（例えば、ｈＣＲＢＮ）のマウスゲノムへの安定した組込みは、相同組換えに
よるものである。

【0155】

特定の実施形態では、標的化構築物は、目的の遺伝子、ポリ（Ａ）配列、選択マーカー
、５’相同性アーム、及び３’相同性アームを含む。一実施形態では、標的化構築物は、
ｈＣＲＢＮのｃＤＮＡまたはその断片、ｂＧＨｐＡ配列、ネオマイシン選択カセット、５
’相同性アーム、及び３’相同性アームを含む。別の実施形態では、標的化構築物は、全
長ｈＣＲＢＮのｃＤＮＡ、ｂＧＨｐＡ配列、ネオマイシン選択カセット、５’相同性アー
ム、及び３’相同性アームを含む。さらに別の実施形態では、標的化構築物は、ｈＣＲＢ
ＮのｃＤＮＡの断片、ｂＧＨ ｐＡ配列、ネオマイシン選択カセット、５’相同性アーム
、及び３’相同性アームを含む。さらに別の実施形態では、標的化構築物は、ヒトＣＲＢ
Ｎアイソフォーム１のコドン２４で開始し、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１の最終コドン
で終わるポリペプチドをコードするｈＣＲＢＮのｃＤＮＡの断片、ｂＧＨｐＡ配列、ネオ
マイシン選択カセット、５’相同性アーム、及び３’相同性アームを含む。さらに別の実
施形態では、標的化構築物は、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３で開始し、ヒ
トＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドをコードするｈＣＲＢＮ
のｃＤＮＡの断片、ｂＧＨｐＡ配列、ネオマイシン選択カセット、５’相同性アーム、及
び３’相同性アームを含む。一実施形態では、標的化構築物は、配列番号５の核酸配列を
有するｈＣＲＢＮアイソフォーム１のｃＤＮＡ、ｂＧＨｐＡ配列、ネオマイシン選択カセ
ット、５’相同性アーム、及び３’相同性アームを含む。別の実施形態では、標的化構築
物は、配列番号６の核酸配列を有するｈＣＲＢＮアイソフォーム２のｃＤＮＡ、ｂＧＨｐ
Ａ配列、ネオマイシン選択カセット、５’相同性アーム、及び３’相同性アームを含む。
１つの特定の実施形態では、標的化構築物は、配列番号７の核酸配列を有するｈＣＲＢＮ
のｃＤＮＡの断片、ｂＧＨｐＡ配列、ネオマイシン選択カセット、５’相同性アーム、及
び３’相同性アームを含む。別の特定の実施形態では、標的化構築物は、配列番号８の核
酸配列を含む。いくつかの実施形態では、標的化構築物は、マウス染色体に安定に組み込
まれる。

【0156】

選択マーカーをゲノムＤＮＡに残すことは、多くの予期しない問題を引き起こす場合が
あることが示されている。例えば、ネオマイシンカセットの存在は、隣接する遺伝子座の
発現を変化し得る。影響を受ける隣接する遺伝子が、類似または同一の機能を有する場合
があるので、隣接する遺伝子が同じファミリーにある遺伝子クラスターでは、これは特に
問題となり得る。その場合、標的化構築物のわずかな相違が表現型の顕著な差につながる
場合がある。したがって、標的化構築物は、通常、ネオマイシン選択カセットに隣接する
２つのｌｏｘＰ部位を含むので、ネオマイシンカセットは、Ｃｒｅリコンビナーゼの一過
性発現によって標的化した後に除去してもよい。これにより、１つのｌｏｘＰ部位がゲノ
ムＤＮＡに残る。理論的には、小さなｌｏｘＰ部位であっても、隣接する遺伝子の発現に
変化を引き起こす可能性があるが、そのような症例はまだ報告されていない。

【0157】

様々な遺伝子編集方法を用いて、宿主細胞における導入遺伝子の標的化を増強してもよ
い。遺伝子編集方法の非限定的な例としては、転写アクチベーター様エフェクターヌクレ
アーゼ（ＴＡＬＥＮ）、クラスター化された規則的に間隔を置いた短いパリンドローム反
復（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）、及びジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）遺伝子編
集手順が挙げられる。ＴＡＬＥＮは、転写アクチベーター様エフェクターＤＮＡ結合ドメ
インをＤＮＡ切断ドメインに融合させることによって生成される人工制限酵素である。こ
のような操作された転写アクチベーター様エフェクターを（ＤＮＡ鎖を切断する）ＤＮＡ
切断ドメインと組み合わせることにより、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を
操作し得る。これらの制限酵素が細胞に導入されると、インサイチュでのゲノム編集に使
用可能である。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムは、遺伝子編集（特定の遺伝子の配列の
付加、分裂、または変化）に一般的に使用される別のシステムである。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃ
ａｓ９システムは、プラスミド及びファージなどの外来遺伝子エレメントに対して耐性を
付与する原核生物の免疫系である。ＣＲＩＳＰＲスペーサーは、真核生物におけるＲＮＡ
ｉに類似した様式でこれらの外因性遺伝子エレメントを認識し切断する。Ｃａｓ９タンパ
ク質及び適切なガイドＲＮＡを細胞に送達することにより、宿主ゲノムを任意の所望の位
置で切断することができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、ジンクフィン
ガーＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合させることによって生成される人工
制限酵素である。ジンクフィンガードメインは、特定の所望のＤＮＡ配列を標的とするよ
うに操作してもよい。これによってジンクフィンガーヌクレアーゼが、ゲノム内の固有の
配列を標的とすることが可能になる。

【0158】

様々な遺伝子編集手順は、異なる長所及び短所を有する。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベー
スの遺伝子操作が最新であり、その落とし穴がちょうど発見されており、例えば、非特異
的なサイト選択が報告されている。標的領域が数百塩基対より大きい場合、ＣＲＩＳＰＲ
／Ｃａｓ９システムはまた、あまり効果的ではない傾向がある。一般に、遺伝子操作マウ
スは、どの遺伝子編集方法が機能するか、または他の方法よりも、ある１つの方法がうま
くいく理由に関して、予測不可能である。

【0159】

いくつかの実施形態では、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集手順が使用される。特定の実施形態で
は、様々なＴＡＬＥＮ及び対応するＴＡＬＥＮ標的部位は、最も活性の高いＴＡＬＥＮを
選択するように設計される。次に、最も活性の高いＴＡＬＥＮとＴＡＬＥＮ標的部位の対
を、その後の遺伝子標的化のために使用する。他の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ
９遺伝子編集手順を使用する。特定の実施形態では、様々なガイドＲＮＡ及び対応するＣ
ＲＩＳＰＲ標的部位を、最も活性の高いガイドＲＮＡを選択するように設計する。続いて
、最も活性の高い一対のガイドＲＮＡ及びＣＲＩＳＰ標的部位を、その後の遺伝子標的化
に使用する。さらに他の実施形態では、ＺＦＮ遺伝子編集手順を使用する。特定の実施形
態では、様々なＺＦＮ及び対応するＺＦＮ標的部位を、最も活性の高いＺＦＮを選択する
ように設計する。次に、最も高い活性を有するＺＦＮ及びＺＦＮ標的部位の対をその後の
遺伝子標的化に使用する。１つの特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編
集手順は、所望の遺伝子標的化を生成しなかった。驚くべきことに、別の特定の実施形態
では、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集手順は、所望の遺伝子標的化を生じた。

【0160】

一実施形態では、エレクトロポレーションによって所望のＤＮＡをＥＳ細胞にトランス
フェクトし、トランスフェクトされたＥＳ細胞からトランスジェニック動物を産生する。
別の実施形態では、適切なＤＮＡを、好ましくは単一細胞段階で、胚の前核または細胞質
に同時注射し、その胚を成熟トランスジェニック動物に発生させる。

【0161】

特定の実施形態では、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集手順を、ＥＳ細胞のトランスフェクション
と組み合わせて使用して、トランスジェニックマウスを作製する。別の特定の実施形態で
は、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集手順を、前核注射と組み合わせて使用してトランスジェニック
マウスを作製する。さらに別の特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集
手順を、ＥＳ細胞のトランスフェクションと組み合わせて使用して、トランスジェニック
マウスを作製する。さらに別の特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集
手順を、前核注射と組み合わせて使用して、トランスジェニックマウスを作製する。特定
の実施形態では、ＺＦＮ遺伝子編集手順を、ＥＳ細胞のトランスフェクションと組み合わ
せて使用して、トランスジェニックマウスを作製する。別の特定の実施形態では、ＺＦＮ
遺伝子編集手順を、前核注射と組み合わせて使用して、トランスジェニックマウスを作製
する。一実施形態では、ＥＳ細胞のトランスフェクションまたは前核注射と組み合わせた
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集手順では、所望のトランスジェニックマウスの産生に
成功しなかった。驚くべきことに、別の実施形態では、ＥＳ細胞のトランスフェクション
と組み合わせたＴＡＬＥＮ遺伝子編集手順で、所望のトランスジェニックマウスが産生さ
れた。

【0162】

トランスジェニック動物は、当技術分野で公知の任意の適切な方法によって導入遺伝子
の存在及び／または発現についてスクリーニングしてもよい。特定の実施形態では、スク
リーニングは、導入遺伝子のＤＮＡまたはＲＮＡの少なくとも一部に相補的なオリゴヌク
レオチドプローブを用いて、サザンブロットまたはノーザンブロット分析によって達成さ
れる。他の実施形態では、スクリーニングは、導入遺伝子によりコードされるタンパク質
に対する抗体特異的結合を用いたウエスタンブロット分析によって達成される。いくつか
の実施形態では、トランスジェニック動物（例えば、トランスジェニックマウス）の尾組
織からＤＮＡを調製し、導入遺伝子についてのサザンブロット分析またはＰＣＲによって
分析する。他の実施形態では、最高レベルで導入遺伝子を発現すると考えられる細胞、組
織または器官を、ＰＣＲまたはサザンブロット、ノーザンブロットまたはウエスタンブロ
ット分析を用いて導入遺伝子の存在及び発現について試験する。さらに他の実施形態では
、導入遺伝子を発現する任意の細胞、組織または器官を、そのような方法を用いて導入遺
伝子の存在及び発現について試験してもよい。

【0163】

創始動物を育種、同系交配、異系交配、または異種交配させて、所望のトランスジェニ
ック動物のコロニーを産生してもよい。そのような育種戦略の非限定的な例としては、以
下が挙げられる：別々の系統を確立するための２つ以上の組込み部位を有する創始動物の
異種交配；各導入遺伝子の相加効果のおかげで導入遺伝子をより高いレベルで発現する複
合導入遺伝子を産生するための別個の系統の同系交配；導入遺伝子の発現を増大させるか
、及び／または所与の組込み部位についてホモ接合性のマウスを産生するためにヘテロ接
合性トランスジェニックマウスを交配すること；別個のホモ接合性株を交配して複合ヘテ
ロ接合性またはホモ接合性株を産生すること；導入遺伝子の発現及び導入遺伝子の発現の
生理学的効果に対する対立遺伝子を改変する効果を研究するために、異なる同系交配の遺
伝的背景へ動物を育種すること。

【0164】

トランスジェニックマウスを作製するために使用され得るマウス株としては、限定する
ものではないが、ＣＤ－１（登録商標）ヌードマウス、ＣＤ－１マウス、ＮＵ／ＮＵマウ
ス、ＢＡＬＢ／Ｃヌードマウス、ＢＡＬＢ／Ｃマウス、ＮＩＨ－ＩＩＩマウス、ＳＣＩＤ
（商標）マウス、非近交系ＳＣＩＤ（商標）マウス、ＳＣＩＤ（商標）ベージュマウス、
Ｃ３Ｈマウス、Ｃ５７ＢＬ／６マウス、ＤＢＡ／２マウス、ＦＶＢマウス、ＣＢ１７マウ
ス、１２９マウス、ＳＪＬマウス、Ｂ６Ｃ３Ｆ１マウス、ＢＤＦ１マウス、ＣＤＦ１マウ
ス、ＣＢ６Ｆ１マウス、ＣＦ－１マウス、Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウス、ＳＫＨ１
マウス、ＰＧＰマウス、及びＢ６ＳＪＬマウスが挙げられる。さらに、各マウス株内の様
々な亜株（例えば、ＪまたはＮ亜株）を使用してもよい。特定の実施形態では、アルビノ
Ｂ６Ｎマウスを使用する。いくつかの実施形態では、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを使用する
。他の実施形態では、Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウスを使用する。特定の実施形態では、Ｃ５７
ＢＬ／６ＮＴａｃマウスを使用する。

【0165】

５．４ ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスの使用方法
ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスは、限定するものではないが、有効
性、特異性、毒性、薬物動態学、薬力学、作用機序、投与レジメンの最適化、及びそのよ
うな疾患のための他の治療薬との併用療法の研究を含む、様々な疾患（例えば、がん）の
処置における化合物の評価などの様々な研究のために使用してもよい。

【0166】

５．４．１ トランスジェニックマウスを使用する方法における読み取りのためのバイ
オマーカー
ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを用いるこれらの研究の多くにおい
て、バイオマーカーは研究者にとって重要な情報を提供し、安全かつ有効な治療法の設計
及び開発においてそれらを導く。特定のバイオマーカーの検出可能な増減は、所与の治療
（例えば、化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬
学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体
またはその多形体）に応答する特定の疾患（例えば、がん）を有する対象において観察さ
れ、これらのバイオマーカーのレベルは、処置に対する対象の反応性をモニターするため
に使用され得る。

【0167】

「生物学的マーカー」または「バイオマーカー」とは、その変化及び／または検出が特
定の生物学的状態を示す物質である。いくつかの実施形態では、所定の処置（例えば、化
合物、または薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、同位体置換体、プロドラッ
グ、水和物、共結晶、包接体、またはその多形体）に対する疾患（例えば、がん）の応答
性が示される。

【0168】

本明細書で提供される様々な方法の特定の実施形態では、バイオマーカーとは、セレブ
ロン（ＣＲＢＮ）によって、例えば、タンパク質間の相互作用（例えば、特定のＣＲＢＮ
基質またはその下流のエフェクター）を通じるか、または種々の細胞経路（例えば、シグ
ナル伝達経路）を通じて、直接的または間接的に影響されるタンパク質である。特定の実
施形態では、バイオマーカーは、ＣＲＢＮ関連タンパク質（ＣＡＰ）である。いくつかの
実施形態では、バイオマーカーは、ＣＲＢＮによって直接的または間接的に影響を受ける
タンパク質のｍＲＮＡである。他の実施形態では、バイオマーカーは、ＣＲＢＮによって
直接的または間接的に影響を受けるタンパク質のｃＤＮＡである。特定の実施形態では、
バイオマーカーは、ＣＲＢＮの１つ以上のアイソフォームによって直接的または間接的に
影響を受ける。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、直接的または間接的にＣＲ
ＢＮの１つのアイソフォームによって影響を受けるが、他のアイソフォームによって影響
を受けない。

【0169】

本明細書で提供されるバイオマーカーの各々としては、様々なアイソフォーム、リン酸
化型、切断型、修飾（改変）型、及びそれらのスプライシングバリアントが挙げられる。

【0170】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるバイオマーカーは、ｅＲＦ３ａ（ＧＳ
ＰＴ－１）、ｅＲＦ３ｂ、ｅＲＦ３ｃ、ＩＫＺＦ１（Ｉｋａｒｏｓ）、ＩＫＺＦ３（Ａｉ
ｏｌｏｓ）、ＣＫ１ａ、ＰＡＢＰ１、ｅＲＦ１、ＢＩＰ、ｅＥＦ１α、ＰＥＲＫ、ＧＣＮ
２、ｅＩＦ２ａ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、ＤＤＩＴ３、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１
０Ｂ、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＦＡＳ、ＦＡＤＤ、ＩＲ
Ｅ１、ＸＢＰ１、ＳＥＣ２４Ｄ、ＤＮＡＪＢ９、ＥＤＥＭ１、ＥＤＥＭ２、ＨＹＯＵ１、
ＡＴＦ６、ＨＳＰＡ５、カスパーゼ８、ＢＩＤ、カスパーゼ９、カスパーゼ７、カスパー
ゼ３、ＰＡＲＰ、Ｍｃｌ－１、及びＢＡＤからなる群より選択される。

【0171】

特定の実施形態では、バイオマーカーは、ＣＤＫＮ１Ａ、Ｍｙｃ、ＩＲＦ４、ＩＲＦ７
、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＺＦＰ９１
、ＺＮＦ１９８、ＭＶＰ、Ｐａｒｐ４、Ｒｏｎ、ＰＤＥ６Ｄ、ＴＬＲ３、ＳＴＡＴ１、Ｓ
ＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩＴ
２、ＩＳＧ１５、ＩＳＧ２０、、ＩＦＩ２１、ＩＦＩ３５、ＩＦＩ６、ＩＦＩＴＭ３、Ｉ
ＦＩＴＭ２ＷＩＺ、ＧＢＰ２、ＧＢＰ４、ＳＥＬＬ、ＳＮＸ２０、ＫＬＦ１３、ＧＢＰ１
、ＭＡＲＣＫＳ、ＳＬＡＭＦ１、ＳＡＳＨ１、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0172】

他の実施形態では、このバイオマーカーは、ＡＢＣＥ１、ＡＣＬＹ、ＡＣＴＢ、ＡＬＤ
ＯＡ、ＡＲＩＤ１Ａ、Ｃ７ＯＲＦ４２、ＣＯＰＳ６、ＣＰＳＦ６、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＣＳ
ＮＫ２Ａ１、ＣＴＰＳ、ＣＲＢＮ、ＤＤＢ１、ＤＤＩＴ４、ＤＤＸ１７、ＤＤＸ２１、Ｄ
ＤＸ５８、ＤＤＸ５８、ＤＤＸ６０、ＤＤＸ６０Ｌ、ＤＨＸ９、ＤＮＡＪＣ１、ＤＵＴ、
ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１ＡＬ３、ＥＥＦ１Ｇ、ＥＩＦ２Ｓ１、ＥＩＦ２Ｓ２、ＥＩＦ３Ｊ
、ＥＩＦ４Ａ１、ＥＷＳＲ１、ＦＡＳＮ、ＦＢＸＯ２１、ＦＥＲＭＴ３、ＦＵＢＰ１、Ｇ
３ＢＰ１、Ｇ３ＢＰ２、ＧＢＥ１、ＧＢＰ１、ＧＮＡＳ、ＧＮＢ２Ｌ１、ＧＮＢ３、Ｈ２
ＡＦＪ、Ｈ２ＡＦＸ、Ｈ２ＡＦＺ、ＨＩＳＴ１Ｈ１Ａ、ＨＩＳＴ１Ｈ１Ｂ、ＨＩＳＴ１Ｈ
１Ｃ、ＨＩＳＴ１Ｈ１Ｄ、ＨＩＳＴ１Ｈ１Ｅ、ＨＩＳＴ１Ｈ２ＡＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１
、ＨＮＲＮＰＣ、ＨＮＲＮＰＨ２、ＨＮＲＮＰＲ、ＨＳＰＡ１Ａ、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＨＳＰ
Ａ８、ＨＳＰＡ９、ＩＦＩ１６、ＩＦＩ２７、ＩＦＩ２７Ｌ２、ＩＦＩ３５、ＩＦＩ４４
、ＩＦＩ４４Ｌ、ＩＦＩ６、ＩＦＩＨ１、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ２、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩ
Ｔ５、ＩＦＩＴＭ２、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＮ、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＧ、Ｉ
ＦＮＧＲ１、ＩＧＦ２ＢＰ２、ＩＫＫＥ、ＩＫＺＦ１（Ｉｋａｒｏｓ）、ＩＫＺＦ３（Ａ
ｉｏｌｏｓ）、ＩＬＦ３、ＩＰＯ５、ＩＲＦ１、ＩＲＦ２、ＩＲＦ３、ＩＲＦ４、ＩＲＦ
７、ＩＲＦ８、ＩＲＦ９、ＩＳＧ１５、ＩＳＧ２０、ＫＣＮＡＢ２、ＭＡＣＦ１、ＭＣＭ
２、ＭＣＭ７、ＭＸ１、ＭＸ２、ＭＹＨ１０、ＮＡＣＡ、ＮＡＰ１Ｌ２、ＮＣＬ、ＮＥＤ
Ｄ８、ＮＵＰ８８、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＯＡＳＬ、ＰＡＢＰＣ１、ＰＡＢＰ
Ｃ４、ＰＣＭ１、ＰＤＸＫ、ＰＰＡＴ、ＰＲＫＤＣ、ＰＴＰＲＣ、ＰＴＲＨ２、ＲＰＬ１
０Ａ、ＲＰＬ１１、ＲＰＬ１２、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＰＬ１４、ＲＰＬ１５、ＲＰＬ１８Ａ
、ＲＰＬ１９、ＲＰＬ２１、ＲＰＬ３、ＲＰＬ３０、ＲＰＬ４、ＲＰＬ７、ＲＰＬ７Ａ、
ＲＰＬ９、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＲＰＳ１３、ＲＰＳ１６、ＲＰＳ１９、ＲＰＳ２、
ＲＰＳ６、ＳＥＣ２３Ｂ、ＳＥＣ２４Ａ、ＳＥＣ２４Ｃ、ＳＭＣ４、ＳＮＤ１、ＳＴＡＴ
、ＳＴＡＴ－ＰＯ４、ＳＴＡＴ３、ＳＹＮＣＲＩＰ、ＴＢＫ１、ＴＢＫ１－ＰＯ４、ＴＢ
Ｌ１ＸＲ１、ＴＬＲ１、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＰＤ５２、ＴＵＢ
Ａ１Ａ、ＴＵＢＡ１Ｂ、ＴＵＢＡ１Ｃ、ＵＡＰ１、ＵＢＡ５２、ＵＢＡＰ２Ｌ，ＵＢＢ、
ＵＢＥ２Ｏ、ＵＢＥ２Ｑ１、ＵＳＰ１５、ＶＡＰＡ、ＸＡＦ１、ＸＲＣＣ６、ＹＷＨＡＥ
、ＺＦＰ９１、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0173】

さらに他の実施形態では、このバイオマーカーは、ＡＲＨＧＡＰ１８、ＣＡＳＳ４、Ｃ
ＣＮＡ２、ＣＯＲＯ１Ｂ、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＣＹＴＬ１、ＤＡＢ２、ＨＳＰＢ１、ＩＫＺ
Ｆ１、ＩＴＭ２Ｃ、ＰＰＦＩＢＰ１、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＹＥＡＴＳ２、ＺＦＰ９１、ま
たはそれらの任意の組み合わせである。

【0174】

さらに他の実施形態では、このバイオマーカーは、ＡＲＨＧＡＰ１８、ＣＡＬＭ１、Ｃ
ＡＳＳ４、ＣＣＮＡ２、ＣＯＲＯ１Ｂ、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＤＡＢ２、ＨＳＰＢ１、ＩＫＺ
Ｆ１、ＩＴＭ２Ｃ、ＰＰＦＩＢＰ１、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＺＦＰ９１、またはそれらの任
意の組み合わせである。

【0175】

いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、ＡＨＮＡＫ、ＡＬＯＸ５、ＡＭＰＤ３、
ＡＮＸＡ４、ＡＮＸＡ６、ＡＴＰ２Ｂ４、ＢＭＦ、ＢＳＴ２、Ｃ１０ｏｒｆ７６、Ｃ１９
ｏｒｆ６６、ＣＤ３６、ＣＬＮ３、ＣＮＮ３、ＣＯＲＯ１Ｂ、ＣＰＮＥ２、ＣＳＲＰ２、
ＣＴＮＮＤ１、ＣＴＳＨ、ＤＡＰＫ２、ＤＤＸ５８、ＤＨＸ５８、ＤＬＧ２、ＤＴＸ３Ｌ
、ＥＩＦ２ＡＫ２、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＥＴＶ６、ＥＸＴＬ２、Ｆ１３Ａ１、ＦＡＭ６５Ｂ
、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＥＳ、ＦＭＮＬ３、ＧＢＰ１、ＧＭＦＧ、ＧＭＰＲ、ＨＩＰ１、ＨＬ
Ａ－Ｂ、ＨＬＡ－ＤＭＡ、ＨＰＳＥ、ＩＤ３、ＩＦＩ３５、ＩＦＩＨ１、ＩＦＩＴ１、Ｉ
ＦＩＴ３、ＩＦＩＴ５、ＩＦＩＴＭ２、ＩＬ４Ｉ１、ＩＲＦ７、ＩＲＦ９、ＩＳＧ１５、
ＩＳＧ２０、ＩＴＧＢ７、ＪＡＫ３、ＬＡＰ３、ＬＧＡＬＳ１、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＬＩ
ＭＤ１、ＭＡＮ２Ａ２、ＭＡＲＣＫＳ、ＭＦＩ２、ＭＧＡＲＰ、ＭＯＶ１０、ＭＰＰ７、
ＭＵＣ１、ＭＸ１、ＭＸ２、ＭＹＯ１Ｇ、ＮＣＦ２、ＮＭＥ３、ＮＭＩ、ＮＴ５Ｃ３Ａ、
ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＰＡＲＰ１４、ＰＡＲＰ９、ＰＢＸＩＰ１、ＰＬＤ４、
ＰＬＥＫＨＯ１、ＰＬＳＣＲ１、ＰＬＸＮＢ２、ＰＯＭＰ、ＰＰＦＩＢＰ１、ＰＴＭＳ、
ＱＰＲＴ、ＲＡＢ１３、ＲＣＮ１、ＲＧＣＣ、ＲＮＦ２１３、Ｓ１００Ａ１３、ＳＡＭＤ
９Ｌ、ＳＡＭＨＤ１、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＳＬＦＮ１１、ＳＬＦＮ１３、ＳＬＦＮ５、Ｓ
Ｐ１１０、ＳＰ１４０、ＳＰＮ、ＳＰＲ、ＳＴＡＰ１、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＴＡＰ
１、ＴＡＸ１ＢＰ３、ＴＨＥＭＩＳ２、ＴＨＴＰＡ、ＴＮＦＡＩＰ８Ｌ２、ＴＮＦＳＦ８
、ＴＰ５３Ｉ３、ＴＲＥＸ１、ＴＲＩＭ２２、ＴＴＣ３９Ｃ、ＴＸＮＩＰ、ＵＢＡ７、Ｕ
ＢＥ２Ｌ６、ＵＳＰ４１、ＶＣＬ、ＶＮＮ２、ＺＢＴＢ３８、ＡＲＨＧＡＰ１９、ＡＳＮ
Ｓ、ＡＳＰＭ、Ｂ４ＧＡＬＴ３、ＢＡＮＫ１、ＢＣＤＩＮ３Ｄ、ＢＬＺＦ１、ＣＡ２、Ｃ
Ａ８、ＣＡＭＳＡＰ３、ＣＣＤＣ６９、ＣＣＮＢ１、ＣＤＣ７、ＣＤＣＡ３、ＣＥＮＰＦ
、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＤＨＰＳ、ＤＬＧＡＰ５、ＤＯＫ３、ＥＣＴ２、ＥＦＣＡＢ４Ｂ、Ｅ
ＨＭＴ１、ＥＨＭＴ２、ＥＰＣＡＭ、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１９５Ａ、ＦＢＲＳＬ１、ＦＨ
ＯＤ１、ＦＩＧＮＬ１、ＧＰＴ２、ＧＲＡＭＤ１Ａ、ＧＲＡＭＤ１Ｂ、ＧＲＰＥＬ２、Ｈ
ＪＵＲＰ、ＨＭＣＥＳ、ＨＭＭＲ、ＨＯＸＣ４、ＩＣＡＭ２、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、
ＩＲＳ２、ＫＩＦ１８Ｂ、ＫＩＦ２２、ＫＩＦ２Ｃ、ＬＩＰＧ、ＬＰＸＮ、ＭＩＮＡ、Ｍ
ＩＳ１８ＢＰ１、ＮＥＩＬ１、ＮＦＫＢＩＤ、ＮＰＩＰＢ５、ＯＭＡ１、ＯＲＣ６、ＰＡ
ＲＶＢ、ＰＢＫ、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＫＭＹＴ１、ＰＬＫ１、ＰＯＤＸＬ、ＰＯＤＸＬ２、Ｐ
ＯＬＥ２、ＰＲＤＭ１５、ＰＲＮＰ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＴＧ１、ＰＹＲＯＸＤ１、ＲＡＳ
Ａ４Ｂ、ＲＡＳＳＦ６、ＲＧＳ１、ＲＧＳ２、ＳＥＣ１４Ｌ１、ＳＧＯＬ１、ＳＧＯＬ２
、ＳＬＣＯ３Ａ１、ＳＬＣＯ４Ａ１、ＴＡＣＣ３、ＴＩＭＭ８Ｂ、ＴＯＰ２Ａ、ＴＰＸ２
、ＴＲＩＢ３、ＷＩＺ、ＷＳＢ１、ＷＷＣ１、ＺＦＰ９１、ＺＭＹＭ２、ＺＮＦ３８５Ｂ
、ＺＮＦ５８１、ＺＮＦ６４４、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0176】

一実施形態では、このバイオマーカーは、ＡＤＡＭ１９、ＡＩＦ１、ＡＬＤＨ１Ａ１、
ＡＬＤＨ２、ＡＬＯＸ５、ＡＭＰＤ３、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＨ、ＡＲＨ
ＧＡＰ１０、ＡＴＰ２Ｂ４、ＢＳＴ２、Ｃ４Ａ、Ｃ４ＢＰＡ、Ｃ４ｏｒｆ３３、バイオマ
ーカーＮ２、ＣＡＳＰ４、ＣＣＲ７、ＣＤ１Ｄ、ＣＤ６３、ＣＤ８６、ＣＤＲ２、ＣＯＲ
Ｏ１Ｂ、ＣＰＮＥ２、ＣＹＴＨ４、ＤＡＰＫ２、ＤＤＸ５８、ＤＤＸ６０、ＤＤＸ６０Ｌ
、ＤＨＸ５８、ＤＮＡＳＥ１Ｌ３、ＤＴＸ３Ｌ、ＥＩＦ２ＡＫ２、ＥＬＯＶＬ７、ＥＰＢ
４１Ｌ１、Ｆ１３Ａ１、ＦＡＭ１２９Ａ、ＦＢＬＮ１、ＦＣＲＬＡ、ＦＥＲＭＴ３、ＦＧ
Ｄ６、ＦＬＮＡ、ＧＡＬＮＴ７、ＧＢＰ１、ＧＢＰ２、ＧＢＰ４、ＧＩＰＣ１、ＧＰＤ１
、ＧＰＸ３、ＨＡＢＰ２、ＨＢＡ１、ＨＢＤ、ＨＥＲＣ３、ＨＥＲＣ６、ＨＧＦ、ＨＩＧ
Ｄ１Ａ、ＨＭＯＸ１、ＨＳＰＡ８、ＨＳＰＢ１、ＩＦＩ３５、ＩＦＩ４４、ＩＦＩ４４Ｌ
、ＩＦＩＨ１、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ２、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴ５、ＩＦＩＴＭ３、ＩＬ
３ＲＡ、ＩＲＦ７、ＩＲＦ９、ＩＳＧ１５、ＩＳＧ２０、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＢ３、ＩＴ
ＧＢ７、ＩＴＰＫＢ、ＫＩＡＡ１６１８、Ｌ１ＴＤ１、ＬＡＰ３、ＬＤＢ３、ＬＧＡＬＳ
１、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、ＬＧＡＬＳ９、ＬＧＡＬＳ９Ｂ、ＬＭＮＡ、ＬＰＩＮ１、ＭＡＰ
３Ｋ１１、ＭＣＡＭ、ＭＣＭ８、ＭＧＬＬ、ＭＰＰ７、ＭＵＣ１、ＭＸ１、ＭＸ２、ＭＹ
Ｌ４、ＮＣＦ４、ＮＭＩ、ＮＱＯ１、ＮＵＢ１、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＯＡＳ
Ｌ、ＯＲＭＤＬ２、ＯＴＯＦ、Ｐ２ＲＹ６、ＰＡＰＳＳ２、ＰＡＲＰ１４、ＰＡＲＰ９、
ＰＢＸＩＰ１、ＰＨＦ１１、ＰＨＦ１５、ＰＬＧ、ＰＬＳＣＲ１、ＰＲＥＸ１、ＰＲＥＸ
２、ＰＲＩＣ２８５、ＰＲＫＣＩ、ＰＳＡＰ、ＰＴＭＳ、ＲＡＢ１３、ＲＡＳＳＦ４、Ｒ
ＣＮ１、ＲＧＬ１、ＲＧＳ１３、ＲＮＦ２１３、ＲＴＮ２、ＲＴＰ４、ＲＵＮＸ３、Ｓ１
００Ａ１３、ＳＡＭＤ９、ＳＡＭＤ９Ｌ、ＳＡＭＨＤ１、ＳＥＲＰＩＮＡ７、ＳＥＲＰＩ
ＮＦ２、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＳＩＰＡ１Ｌ３、ＳＬＡＭＦ１、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ２３
Ａ２、ＳＬＣ２７Ａ３、ＳＬＦＮ５、ＳＯＤ２、ＳＰＮ、ＳＰＲ、ＳＲＣ、ＳＴＡＴ１、
ＳＴＡＴ２、ＳＹＮＪ２ＢＰ、ＴＡＸ１ＢＰ３、ＴＢＣ１Ｄ１３、ＴＤＲＤ７、ＴＧＯＬ
Ｎ２、ＴＬＲ７、ＴＭＥＭ８７Ａ、ＴＭＯＤ２、ＴＮＦＡＩＰ２、ＴＮＦＡＩＰ８Ｌ２、
ＴＲＡＮＫ１、ＴＲＩＭ１４、ＴＲＰＣ４、ＴＲＰＭ４、ＴＳＰＡＮ１４、ＴＳＰＡＮ３
、ＵＢＡ７、ＵＢＥ２Ｌ６、ＵＳＰ１８、ＵＳＰ４１、ＶＮＮ２、ＶＴＮ、ＸＡＦ１、Ｚ
ＣＣＨＣ２、ＺＥＲ１、ＺＮＦ３８５Ａ、ＺＮＦ４８０、ＺＮＦ７７０、３－Ｓｅｐ、Ａ
ＤＩＰＯＲ２、ＡＨＲ、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＤＯＣ、ＡＬＫＢＨ６、ＡＬＰＬ、ＡＰ１Ｓ３
、ＡＰＢＢ１ＩＰ、ＡＲＨＧＡＰ２４、ＡＲＨＧＡＰ２７、ＡＲＮＴ、ＢＣＬ１１Ａ、Ｂ
ＣＬ２Ａ１、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬＡＦ１、ＢＮＩＰ３Ｌ、Ｃ１９ｏｒｆ２２、Ｃ９ｏｒ
ｆ４０、ＣＡＮＸ、ＣＤ２２、ＣＤ４４、ＣＤ５、ＣＤＣ４２ＳＥ２、ＣＥＮＰＪ、ＣＥ
Ｐ９７、ＣＦＬＡＲ、ＣＬＤＮ２３、ＣＬＥＣ１７Ａ、ＣＯＸ１７、ＣＲＯＣＣ、ＣＲＹ
Ｍ、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＤＢＮ１、ＤＥＮＮＤ１Ｃ、ＤＮＭ２、ＤＯＫ３、ＤＴＷＤ１、Ｅ
ＨＤ１、ＥＩＦ４Ｈ、ＥＮＯ２、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＢ１、ＥＲＣＣ６、Ｅ
ＴＳ１、ＥＶＩ２Ｂ、ＥＶＬ、ＦＡＲ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ５、ＧＡＢ
ＰＢ１、ＧＡＭＴ、ＧＡＰＴ、ＧＡＳ７、ＧＡＴＭ、ＧＬＲＸ、ＧＮＧ２、ＧＲＰＥＬ２
、ＧＹＰＣ、ＧＺＭＢ、ＨＫ２、ＨＬＴＦ、ＨＴＲＡ３、ＩＦＮＡＲ２、ＩＫＺＦ１、Ｉ
ＫＺＦ３、ＩＬ１６、ＩＮＦ２、ＩＱＳＥＣ１、ＩＲＦ４、ＩＳＹＮＡ１、ＩＴＧＡＬ、
ＩＴＧＢ２、ＫＤＭ５Ｂ、ＫＨＫ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＴ２、ＬＢＨ、ＬＮＸ１、ＬＲＲＣ
２５、ＬＵＣ７Ｌ、ＬＹＳＭＤ２、ＭＥＦ２Ｂ、ＭＥＦ２Ｄ、ＭＩＣＡＬ３、ＭＹＨ１１
、ＮＡＲＦ、ＮＢＲ１、ＮＥＤＤ９、ＮＥＦＬ、ＯＭＡ１、ＰＡＲＶＢ、ＰＤＫ１、ＰＦ
ＫＦＢ４、ＰＧＭ１、ＰＩＲ、ＰＬＥＫＨＧ１、ＰＭＳ２ＣＬ、ＰＯＤＸＬ２、ＰＯＵ２
ＡＦ１、ＰＰＰ１Ｒ２、ＰＴＰＲ、ＰＴＰＲＥ、ＰＴＰＲＦ、ＰＴＰＲＯ、ＰＴＴＧ１、
ＰＶＲＬ１、ＲＡＢ３３Ａ、ＲＡＮＢＰ３、ＲＡＳＧＲＰ３、ＲＡＳＳＦ６、ＲＢＢＰ５
、ＲＨＯＦ、ＲＰＳ２９、ＲＰＳ４Ｙ２、ＳＡＭＤ１、ＳＣ５ＤＬ、ＳＥＣ１４Ｌ１、Ｓ
ＥＭＡ７Ａ、ＳＥＲＰＩＮＢ９、ＳＥＴＤ８、ＳＨ２Ｄ３Ｃ、ＳＩＴ１、ＳＬＡＭＦ７、
ＳＬＣ１６Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ２、ＳＮＡＰ２３、ＳＮＸ１１、ＳＰ１４０、ＳＰＩＢ、
ＳＰＴＡＮ１、ＳＰＴＢ、ＳＳＢＩＰ１、ＳＴＫ１７Ｂ、ＳＹＮＣＲＩＰ、ＴＣＰ１１Ｌ
１、ＴＧＭ２、ＴＪＡＰ１、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、
ＴＯＭ１、ＴＯＲ１ＡＩＰ１、ＴＰ５３Ｉ１１、ＴＳＴＤ１、ＴＵＢＢ２Ｂ、ＵＢＥ２Ｊ
１、ＶＡＴ１、ＶＩＭ、ＷＩＰＦ１、ＷＩＺ、ＺＢＴＢ３２、ＺＦＰ９１、ＺＭＹＭ２、
ＺＮＦ３１６、ＺＮＦ６４４、ＺＮＦ８０５、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0177】

いくつかの実施形態では、このバイオマーカーは、ＡＣＳＳ１、ＡＣＹ３、ＡＤＡＭ１
９、ＡＤＣＹ７、ＡＩＦ１、ＡＬＤＨ２、ＡＭＰＤ３、ＡＮＫ３、ＡＮＸＡ４、ＡＮＸＡ
６、ＡＮＸＡ６、ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ、ＡＰＯＢＲ、Ｂ２Ｍ、ＢＣＬ９Ｌ、ＢＳＴ２、Ｃ１
９ｏｒｆ６６、ＣＡＳＰ１０、ＣＣＤＣ２８Ｂ、ＣＤ４０、ＣＤ５９、ＣＤ８３、ＣＧＮ
、ＣＬＳＴＮ１、ＣＭＰＫ２、ＣＯＬ２３Ａ１、ＣＯＲＯ１Ｂ、ＣＯＲＯ１Ｃ、ＣＴＮＮ
Ｄ１、ＣＴＳＨ、ＣＴＴＮＢＰ２ＮＬ、ＣＹＴＨ１、ＣＹＴＨ４、ＤＤＸ５８、ＤＤＸ６
０、ＤＴＸ３Ｌ、ＥＩＦ２ＡＫ２、ＥＴＨＥ１、Ｆ１１Ｒ、ＦＡＤＳ２、ＦＡＭ７６Ａ、
ＦＤＦＴ１、ＦＧＤ４、ＦＬＮＡ、ＦＬＮＢ、ＦＲＲＳ１、ＦＳＣＮ１、ＧＣＨ１、ＧＭ
ＦＧ、ＧＮＢ４、ＧＮＧ２、Ｈ１Ｆ０、ＨＥＣＴＤ１、ＨＥＬＺ２、ＨＧＦ、ＨＧＳＮＡ
Ｔ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＳＰＢ１、ＨＹＩ、ＩＦＩ３５、ＩＦＩＴ
１、ＩＦＩＴ３、ＩＦＩＴ５、ＩＬ４Ｉ１、ＩＰＣＥＦ１、ＩＲＦ９、ＩＳＧ１５、ＩＳ
Ｇ２０、ＪＡＤＥ２、ＫＩＡＡ０１０１、ＬＡＴ２、ＬＧＡＬＳ１、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、
ＬＧＡＬＳ９、ＬＧＡＬＳ９Ｂ、ＬＭＣＤ１、ＬＭＮＡ、ＬＹ７５、ＬＹＳＭＤ２、ＭＡ
ＧＥＤ４、ＭＡＰＫ１０、ＭＢＤ１、ＭＥＡ１、ＭＴ２Ａ、ＭＸ１、ＭＸ２、ＭＹＢＰＣ
２、ＮＣＯＡ７、ＮＣＯＡ７、ＮＥＸＮ、ＮＴ５Ｃ３Ａ、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３
、ＯＳＢＰＬ１０、ＰＡＲＰ１０、ＰＡＲＰ１４、ＰＡＲＰ９、ＰＣＤＨＧＣ３、ＰＬＧ
、ＰＬＳＣＲ１、ＰＲＣＰ、ＰＴＴＧ１ＩＰ、ＰＹＧＯ２、ＱＰＣＴ、Ｓ１００Ａ１３、
ＳＡＭＨＤ１、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＳＩＲＰＢ１、ＳＬＣ２３Ａ２、ＳＬＣ２５Ａ３３、
ＳＬＣ７Ａ７、ＳＬＦＮ５、ＳＯＷＡＨＤ、ＳＰ１１０、ＳＰ１４０、ＳＰＲ、ＳＴＡＴ
１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＫ３、ＳＹＢＵ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、ＴＤＲＤ７、ＴＨＥＭＩＳ
２、ＴＮＦＡＩＰ８Ｌ２、ＴＮＦＳＦ９、ＴＲＩＭ１４、ＴＲＩＭ２１、ＴＲＩＭ２２、
ＴＹＭＰ、ＵＢＥ２Ｌ６、ＵＳＰ４０、ＶＰＲＥＢ１、ＡＤＩＰＯＲ２、ＡＴＦ５、ＢＡ
ＣＨ２、ＢＡＮＫ１、ＢＣＤＩＮ３Ｄ、ＣＤ３２０、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＤＥＰＴＯＲ、Ｅ
ＴＳ１、ＧＬＩＰＲ１Ｌ１、ＧＮＧ７、ＧＰＴ２、ＨＳＢＰ１、ＩＣＡＭ２、ＩＫＺＦ１
、ＩＫＺＦ３、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ２、ＫＲＴ６Ｂ、ＫＲＴ９、ＭＥＤ１２Ｌ
、ＮＥＩＬ１、ＮＵＧＧＣ、ＯＭＡ１、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＤＺＲＮ３、ＰＯＤＸＬ、ＳＹＮ
ＧＲ３、ＳＹＴＬ１、ＷＩＺ、ＺＦＰ９１、ＺＭＹＭ２、またはそれらの任意の組み合わ
せである。

【0178】

他の実施形態では、このバイオマーカーは、ＡＤＩＰＯＲ２、ＡＴＦ５、ＢＡＣＨ２、
ＢＡＮＫ１、ＢＣＤＩＮ３Ｄ、ＣＤ３２０、ＣＳＮＫ１Ａ１、ＤＥＰＴＯＲ、ＥＴＳ１、
ＧＬＩＰＲ１Ｌ１、ＧＮＧ７、ＧＰＴ２、ＨＳＢＰ１、ＩＣＡＭ２、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺ
Ｆ３、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ２、ＫＲＴ６Ｂ、ＫＲＴ９、ＭＥＤ１２Ｌ、ＮＥＩ
Ｌ１、ＮＵＧＧＣ、ＯＭＡ１、ＰＤＥ６Ｄ、ＰＤＺＲＮ３、ＰＯＤＸＬ、ＳＹＮＧＲ３、
ＳＹＴＬ１、ＷＩＺ、ＺＦＰ９１、ＺＭＹＭ２、またはそれらの任意の組み合わせである
。

【0179】

特定の実施形態では、このバイオマーカーは、ＡＭＰＫ、ＣＵＬ４Ａ、ＣＵＬ４Ｂ、Ｄ
ＤＢ１、ＤＤＢ２、ＤＵＳ３Ｌ、ＦＡＳ１、ＧＳＫ３Ｂ、ＩＲＦ４、ＮＦｋＢ、ＰＨＧＤ
Ｈ、ＲＡＮＢＰ６、ＸＢＰ－１、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0180】

いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、任意の上述のバイオマーカーのマウス等
価物である。

【0181】

いくつかの実施形態では、測定されるバイオマーカーは、１つのバイオマーカーを含む
。特定の実施形態では、測定されるバイオマーカーは、２つのバイオマーカーを含む。他
の実施形態では、測定されるバイオマーカーは、３つのバイオマーカーを含む。特定の実
施形態では、測定されるバイオマーカーは、４つのバイオマーカーを含む。いくつかの実
施形態では、測定されるバイオマーカーは、５つのバイオマーカーを含む。他の実施形態
では、測定されるバイオマーカーは、６つのバイオマーカーを含む。さらに他の実施形態
では、測定されるバイオマーカーは、７つのバイオマーカーを含む。特定の実施形態では
、測定されるバイオマーカーは、８つのバイオマーカーを含む。他の実施形態では、測定
されるバイオマーカーは、９つのバイオマーカーを含む。別の実施形態では、測定される
バイオマーカーは、１０以上のバイオマーカーを含む。

【0182】

特定の実施形態では、生物学的試料由来のバイオマーカー、例えば、ＣＲＢＮまたはＣ
ＲＢＮによって直接または間接的に影響を受けるバイオマーカーのタンパク質レベルを検
出及び定量する方法であって、この試料内のタンパク質と、バイオマーカータンパク質と
免疫特異的に結合する第１の抗体とを接触させることを包含する、方法が提供される。い
くつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、（ｉ）第１の抗体に結合したバイ
オマーカータンパク質を、バイオマーカータンパク質に免疫特異的に結合する、検出可能
な標識を有する第２の抗体と接触させ、ここでこの第２の抗体が第１の抗体よりもバイオ
マーカータンパク質上の異なるエピトープに免疫特異的に結合すること；（ｉｉ）このバ
イオマーカータンパク質に結合した第２の抗体の存在を検出すること；及び（ｉｉｉ）こ
の第２抗体中の検出可能な標識の量に基づいてバイオマーカータンパク質の量を決定する
ことをさらに包含する。他の実施形態では、本明細書で提供される方法は、（ｉ）第１の
抗体に結合したバイオマーカータンパク質と、この第１の抗体に免疫特異的に結合する検
出可能な標識を有する第２の抗体と接触させること；（ｉｉ）この第１の抗体に結合した
第２の抗体の存在を検出すること；ならびに（ｉｉｉ）この第２抗体中の検出可能な標識
の量に基づいてバイオマーカータンパク質の量を決定することをさらに包含する。

【0183】

本明細書で提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、この方法は、二重染色免
疫組織化学を使用して、ＣＲＢＮまたはＣＲＢＮによって直接的または間接的に影響を受
けるタンパク質などのバイオマーカーのレベルを決定することを包含する。二重染色免疫
組織化学アッセイでは、本明細書で提供されるバイオマーカー及び別の疾患特異的バイオ
マーカー（例えば、がんバイオマーカー）が、本明細書で提供されるバイオマーカーを標
的とする第１の標識抗体及びがんバイオマーカーを標的とする第２の標識抗体を用いて同
時に検出される。そのようなアッセイは、本明細書で提供されるバイオマーカーを検出及
び測定するための特異性、精度及び感度を改善し得る。特定の実施形態では、がんバイオ
マーカーは、固形がんバイオマーカーである。他の実施形態では、がんバイオマーカーは
、血液がんバイオマーカーである。いくつかの実施形態では、がんバイオマーカーは、リ
ンパ腫バイオマーカーである。他の実施形態では、がんバイオマーカーは、白血病バイオ
マーカーである。さらに他の実施形態では、がんバイオマーカーは多発性骨髄腫バイオマ
ーカーである。

【0184】

したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法は、（ｉ）試料内の
タンパク質と、本明細書に提供されるバイオマーカーに免疫特異的に結合する第１の抗体
とを接触させることであって、この第１の抗体が、第１の検出可能な標識とカップリング
される、接触させること；（ｉｉ）試料内のタンパク質を、がんバイオマーカーに免疫特
異的に結合する第２の抗体と接触させることであって、この第２の抗体は、第２の検出可
能な標識とカップリングされている、接触させることと；（ｉｉｉ）タンパク質に結合し
た第１の抗体及び第２の抗体の存在を検出すること；ならびに（ｉｖ）この第１抗体中の
検出可能な標識の量に基づいて本明細書で提供されるバイオマーカーのレベルを決定する
こと、及び第２抗体中の検出可能な標識の量に基づいてがんバイオマーカーのレベルを決
定することを包含する。特定の実施形態では、がんバイオマーカーは、固形がんバイオマ
ーカーである。他の実施形態では、がんバイオマーカーは、血液がんバイオマーカーであ
る。いくつかの実施形態では、がんバイオマーカーは、リンパ腫バイオマーカーである。
他の実施形態では、がんバイオマーカーは、白血病バイオマーカーである。さらに他の実
施形態では、がんバイオマーカーは多発性骨髄腫バイオマーカーである。

【0185】

特定の実施形態では、本明細書において、生物学的試料からの、本明細書で提供される
ＣＲＢＮまたはバイオマーカーなどのバイオマーカーのＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）レベル
を検出及び定量する方法であって：（ａ）試料からＲＮＡを得ること；（ｂ）このＲＮＡ
を、ＲＮＡ中の配列に特異的に結合するプライマーと接触させて、このＲＮＡに相補的な
配列を有する第１のＤＮＡ分子を生成すること；（ｃ）バイオマーカーをコードする遺伝
子のセグメントに対応するＤＮＡを増幅すること；及び（ｄ）増幅されたＤＮＡの量に基
づいてバイオマーカーのＲＮＡレベルを決定すること、を包含する方法が提供される。

【0186】

いくつかの実施形態では、バイオマーカー（複数可）は、ＣＲＢＮ、ｅＲＦ３ａ、ｅＲ
Ｆ３ｂ、ｅＲＦ３ｃ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３及びＤＤＩＴ３のような、本明細書で提供され
る他のバイオマーカー（複数可）と組み合わせて評価される。

【0187】

本明細書で提供される様々な方法の特定の実施形態では、２つ以上のステップが連続し
て実施される。本明細書で提供される方法の他の実施形態では、２つ以上のステップが並
行して（例えば、同時に）実行される。

【0188】

ｅＲＦ３ａ、ｅＲＦ３ｂ、ｅＲＦ３ｃ、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫ１ａ、ＰＡＢＰ
１、ｅＲＦ１、ＢＩＰ、ｅＥＦ１α、ＰＥＲＫ、ＧＣＮ２、ｅＩＦ２ａ、ＡＴＦ４、ＡＴ
Ｆ３、ＤＤＩＴ３、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＴＮＦＲ
ＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＦＡＳ、ＦＡＤＤ、ＩＲＥ１、ＸＢＰ１、ＳＥＣ２４Ｄ、
ＤＮＡＪＢ９、ＥＤＥＭ１、ＥＤＥＭ２、ＨＹＯＵ１、ＡＴＦ６、ＨＳＰＡ５、カスパー
ゼ８、ＢＩＤ、カスパーゼ９、カスパーゼ７、カスパーゼ３、ＰＡＲＰ、Ｍｃｌ－１、Ｂ
ＡＤ、ＣＤＫＮ１Ａ、Ｍｙｃ、ＩＲＦ４、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＲＩＧ－
Ｉ、ＭＤＡ－５、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＺＦＰ９１、ＺＮＦ１９８、ＭＶＰ、Ｐａｒｐ４
、Ｒｏｎ、ＰＤＥ６Ｄ、ＴＬＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＩＦＮａ、Ｉ
ＦＮｂ、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩＴ２、ＩＳＧ１５、ＩＳＧ２０、、ＩＦ
Ｉ２１、ＩＦＩ３５、ＩＦＩ６、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＩＴＭ２ＷＩＺ、ＧＢＰ２、ＧＢＰ
４、ＳＥＬＬ、ＳＮＸ２０、ＫＬＦ１３、ＧＢＰ１、ＭＡＲＣＫＳ、ＳＬＡＭＦ１、ＳＡ
ＳＨ１、またはそれらの組み合わせのようなバイオマーカーのタンパク質レベルを検出及
び定量する方法について本明細書で提供される例示的なアッセイは、イムノアッセイ、例
えば、ウエスタンブロット解析及び酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（例えば、
サンドウィッチＥＬＩＳＡ）である。ｅＲＦ３ａ、ｅＲＦ３ｂ、ｅＲＦ３ｃ、ＩＫＺＦ１
、ＩＫＺＦ３、ＣＫ１ａ、ＰＡＢＰ１、ｅＲＦ１、ＢＩＰ、ｅＥＦ１α、ＰＥＲＫ、ＧＣ
Ｎ２、ｅＩＦ２ａ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、ＤＤＩＴ３、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ
１０Ｂ、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＦＡＳ、ＦＡＤＤ、Ｉ
ＲＥ１、ＸＢＰ１、ＳＥＣ２４Ｄ、ＤＮＡＪＢ９、ＥＤＥＭ１、ＥＤＥＭ２、ＨＹＯＵ１
、ＡＴＦ６、ＨＳＰＡ５、カスパーゼ８、ＢＩＤ、カスパーゼ９、カスパーゼ７、カスパ
ーゼ３、ＰＡＲＰ、Ｍｃｌ－１、及びＢＡＤ、ＣＤＫＮ１Ａ、Ｍｙｃ、ＩＲＦ４、ＩＲＦ
７、ＩＦＩＴ１、ＩＦＩＴ３、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＺＦＰ９
１、ＺＮＦ１９８、ＭＶＰ、Ｐａｒｐ４、Ｒｏｎ、ＰＤＥ６Ｄ、ＴＬＲ３、ＳＴＡＴ１、
ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩ
Ｔ２、ＩＳＧ１５、ＩＳＧ２０、、ＩＦＩ２１、ＩＦＩ３５、ＩＦＩ６、ＩＦＩＴＭ３、
ＩＦＩＴＭ２ＷＩＺ、ＧＢＰ２、ＧＢＰ４、ＳＥＬＬ、ＳＮＸ２０、ＫＬＦ１３、ＧＢＰ
１、ＭＡＲＣＫＳ、ＳＬＡＭＦ１、ＳＡＳＨ１、またはそれらの組み合わせなどのバイオ
マーカーのＲＮＡレベルを検出及び定量する方法のための本明細書で提供される例示的な
アッセイは、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、例えば、定量的なＲＴ－Ｐ
ＣＲ（ｑＲＴ ＰＣＲ）である。

【0189】

５．４．２処置化合物
本明細書で提供される様々な化合物は、１つ以上のキラル中心を含み、エナンチオマー
の混合物（例えば、ラセミ混合物）またはジアステレオマーの混合物として存在し得る。
本明細書で提供される方法は、そのような化合物の立体異性的に純粋な形態ならびにそれ
らの形態の混合物の使用を包含する。例えば、特定の化合物のエナンチオマーの等量また
は不等量を含む混合物は、本明細書で提供される方法において使用され得る。これらの異
性体は、キラルカラムまたはキラル分割剤などの標準的技術を使用して、非対称的に合成
されても、または分割されてもよい。Ｊａｃｑｕｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｍ
ｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅ
ｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎ １９７７，３３：２７２５－２７３６；Ｅｌｉｅｌ，Ｓｔｅｒｅｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ
，ＮＹ，１９６２）；Ｗｉｌｅｎ，Ｔａｂｌｅｓ ｏｆ Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ Ａｇｅｎ
ｔｓ ａｎｄ Ｏｐｔｉｃａｌ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，ｐ．２６８（Ｅｌｉｅｌ，ｅ
ｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ，Ｉ
Ｎ，１９７２）を参照のこと。

【0190】

特定の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガ
ーゼ複合体を直接的または間接的に調節するＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ調節化合
物（ＣＭＣ）である。いくつかの実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮに直接結合し得る。
他の実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮタンパク質の構造変化を誘導し得る。さらに他の
実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮに直接結合し、ＣＲＢＮタンパク質の構造変化を誘導
し得る。さらに他の実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体
中の他のサブユニットに直接結合し得る。

【0191】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合物は、免疫調節化合物（例えば、
サリドマイド、レナリドマイド、またはポマリドマイド）である。一実施形態では、本明
細書で提供される化合物は、サリドマイドである。別の実施形態では、本明細書で提供さ
れる化合物は、レナリドマイドである。さらに別の実施形態では、本明細書で提供される
化合物はポマリドマイドである。

【0192】

特定の実施形態では、本明細書で提供されるＣＭＣは、免疫調節化合物である。他の実
施形態では、本明細書で提供されるＣＭＣは、免疫調節化合物ではない。いくつかの実施
形態では、本明細書で提供される免疫調節化合物はＣＭＣである。他の実施形態では、本
明細書で提供される免疫調節化合物はＣＭＣではない。

【0193】

本明細書中で使用される場合、他に示されない限り、「免疫調節化合物」という用語は
、ＬＰＳ誘導単球ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１２、ＩＬ－６、ＭＩＰ－１α、ＭＣ
Ｐ－１、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、及びＣｏｘ－２産生を阻害する特定の有機低分子を
包含し得る。

【0194】

特定の理論に限定されることはないが、本明細書に開示される免疫調節化合物によって
及ぼされる生物学的効果の１つは、骨髄性細胞ＴＮＦ－α産生の減少である。本明細書に
開示される免疫調節化合物は、ＴＮＦ－αｍＲＮＡの分解を増強し得る。

【0195】

さらに、理論に限定されることはないが、本明細書に開示される免疫調節化合物はまた
、Ｔ細胞の強力な共刺激因子であり得、用量依存性の方式で細胞増殖を劇的に増大し得る
。本明細書中に開示される免疫調節化合物はまた、ＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットよりもＣＤ
８＋Ｔ細胞サブセットに対してより大きな共刺激効果を有し得る。さらに、この化合物は
、骨髄性細胞応答に対する抗炎症特性を有するが、Ｔ細胞をより効率的に共刺激してより
大量のＩＬ－２、ＩＦＮ－γを生成し、Ｔ細胞増殖及びＣＤ８＋Ｔ細胞細胞傷害活性を増
強し得る。さらに、特定の理論に制限されることはないが、本明細書中に開示される免疫
調節化合物は、サイトカイン活性化を介して間接的に、及びナチュラルキラー（「ＮＫ」
）細胞及びナチュラルキラーＴ（「ＮＫＴ」）細胞上で直接作用し得、ＮＫ細胞が、限定
するものではないが、ＩＦＮ－γなどの有益なサイトカインを産生する能力、ならびにＮ
Ｋ及びＮＫＴ細胞の細胞傷害活性を増強する能力を増大し得る。

【0196】

他の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、
以下の構造を有する、３－（５－アミノ－２－メチル－４－オキソ－４Ｈ－キナゾリン－
３－イル）－ピペリジン－２，６－ジオン（「化合物Ａ」）：

【化2】

、
以下の構造を有する、３－（４－（（４－（モルホリノメチル）ベンジル）オキシ）－１
－オキソイソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン（「化合物Ｂ」）：

【化3】

、
以下の構造を有する、１－（３－クロロ－４－メチルフェニル）－３－（（２－（２，６
－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）尿
素（」化合物Ｃ」）：

【化4】

、
以下の構造を有する、２－（４－クロロフェニル）－Ｎ－（（２－（２，６－ジオキソピ
ペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）－２，２－ジフ
ルオロアセトアミド（「化合物Ｄ」）：

【化5】

、及び
以下の構造を有する、２－（４－フルオロフェニル）－Ｎ－（（２－（２，６－ジオキソ
ピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）－２，２－ジ
フルオロアセトアミド（「化合物Ｅ」）：

【化6】

、
またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩
、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体、か
らなる群より選択される。

【0197】

化合物Ａは、その開示が全体として参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第
７，６３５，７００号に記載のとおり調製されてもよい。その化合物はまた、本明細書の
教示に基づいて当業者に明らかな他の方法に従って合成することもできる。特定の実施形
態では、化合物Ａは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，８
０２，６８５号に記載の結晶型である。いくつかの実施形態では、化合物Ａの塩酸塩は、
本明細書で提供される方法において使用される。化合物Ａを用いてがん及び他の疾患を処
置、予防及び／または管理する方法は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、
米国特許第８，９０６，９３２号に記載されている。

【0198】

化合物Ｂ及びその調製方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許
第８，５１８，９７２号に記載されている。

【0199】

化合物Ｃ及びその調製方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許
第８，８７７，７８０号に記載されている。

【0200】

化合物Ｄ及びＥならびにそれらを調製する方法は、参照によりその全体が本明細書に組
み込まれる米国特許第９，４９９，５１４号に記載されている。

【0201】

一実施形態では、本明細書で提供される化合物は、化合物Ａ、またはその立体異性体も
しくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換
体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である。別の実施形態では、
本明細書で提供される化合物は、化合物Ｂ、またはその立体異性体もしくは立体異性体の
混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、
水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である。さらに別の実施形態では、本明細書で提
供される化合物は、化合物Ｃ、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変
異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結
晶、包接体もしくは多形体である。さらに別の実施形態では、本明細書で提供される化合
物は、化合物Ｄ、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学
的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体も
しくは多形体である。さらにもう１つの実施形態では、本明細書で提供される化合物は、
化合物Ｅ、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許
容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは
多形体である。

【0202】

特定の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、増大した抗多発性骨髄腫活性、
増大した抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性、または増強された免疫調節活性を有する化合物である。
いくつかの実施形態では、この化合物は、増大した抗多発性骨髄腫活性を有する。他の実
施形態では、この化合物は、増大した抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する。さらに他の実施形
態では、この化合物は、免疫調節活性が増強されている。さらに他の実施形態では、この
化合物は、増大した抗多発性骨髄腫活性及び増大した抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する。特
定の実施形態では、この化合物は、増大した抗多発性骨髄腫活性及び増強された免疫調節
活性を有する。いくつかの実施形態では、この化合物は、増大した抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性
及び増強された免疫調節活性を有する。他の実施形態では、この化合物は、増大した抗多
発性骨髄腫活性、増大した抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性、及び増強された免疫調節活性を有する
。

【0203】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合物はまた、抗体またはその断片で
あってもよい。特定の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、モノクローナル抗
体である。他の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、ポリクローナル抗体であ
る。さらに他の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、ヒト化抗体、ヒト抗体、
またはキメラ抗体である。一実施形態では、本明細書で提供される化合物は、ヒト化抗体
である。別の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、ヒト抗体である。さらに別
の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、キメラ抗体である。さらに別の実施形
態では、本明細書で提供される化合物は、脱免疫化された抗体である。一実施形態では、
本明細書で提供される化合物は、複合ヒト抗体である。

【0204】

特定の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、抗体断片から形成された、Ｆａ
ｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、トリアボデ
ィ、テトラボディまたは多価特異的抗体である。

【0205】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合物は、薬剤にコンジュゲートされ
た抗体である。他の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、放射性同位元素、金
属キレート剤、酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、及び化学発光化合物からなる群より
選択される薬剤にコンジュゲートした抗体である。

【0206】

本明細書で提供される様々な方法の他の実施形態では、化合物は抗体である。いくつか
の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－Ｌ２抗体、ＣＴＬＡ－
４抗体、ＣＤ３８抗体、及びＳＬＡＭＦ７抗体からなる群より選択される。一実施形態で
は、抗体は、ＰＤ－１抗体である。別の実施形態では、抗体はＰＤ－Ｌ１抗体である。さ
らに別の実施形態では、抗体はＰＤ－Ｌ２抗体である。さらに別の実施形態では、抗体は
ＣＴＬＡ－４抗体である。一実施形態では、抗体はＣＤ３８抗体である。別の実施形態で
は、抗体はＳＬＡＭＦ７抗体である。

【0207】

いくつかの実施形態では、抗体は、ニボルマブ（すなわち、ＢＭＳ－９３６５５８、Ｍ
ＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８）、ＭＫ－３４７５（すなわち、ペムブロリズマブ、
ラムブロリズマブ）、ピジリズマブ（すなわち、ＣＴ－０１１）、ＭＥＤＩ－０６８０（
すなわち、ＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ－００１、デュルバルマブ（すなわち、ＭＥＤＩ－
４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（すなわち、ＭＤＸ－１１０５）、アベルマブ（すな
わち、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、アテロリズマブ（すなわち、ＭＰＤＬ－３２８０Ａ）
、イピリムマブ、ダラツムマブ、及びエロツズマブからなる群より選択される。一実施形
態では、抗体はニボルマブである。別の実施形態では、抗体はＭＫ－３４７５である。さ
らに別の実施形態では、抗体はピジリズマブである。さらに別の実施形態では、抗体は、
ＭＥＤＩ－０６８０である。一実施形態では、抗体は、ＰＤＲ－００１である。別の実施
形態では、抗体はデュルバルマブである。さらに別の実施形態では、抗体はＢＭＳ－９３
６５５９である。さらに別の実施形態では、抗体は、アベルマブである。一実施形態では
、抗体はアテゾリズマブである。別の実施形態では、抗体はイピリムマブである。さらに
別の実施形態では、抗体は、ダラツムマブである。さらに別の実施形態では、抗体はエロ
ツズマブである。

【0208】

本明細書で提供される様々な方法の特定の実施形態では、化合物は、パターン認識受容
体（ＰＲＲ）アゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＲＲアゴニストは、ＴＬＲ
３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、ＲＩＧ
－１アゴニスト、ＭＤＡ５アゴニスト及びＡＩＭ２アゴニストからなる群より選択される
。一実施形態では、ＰＲＲアゴニストは、ＴＬＲ３アゴニストである。別の実施形態では
、ＰＲＲアゴニストは、ＴＬＲ７アゴニストである。さらに別の実施形態では、ＰＲＲア
ゴニストは、ＴＬＲ８アゴニストである。さらに別の実施形態では、ＰＲＲアゴニストは
、ＴＬＲ９アゴニストである。一実施形態では、ＰＲＲアゴニストは、ＲＩＧ－１アゴニ
ストである。別の実施形態では、ＰＲＲアゴニストは、ＭＤＡ５アゴニストである。さら
に別の実施形態では、ＰＲＲアゴニストはＡＩＭ２アゴニストである。

【0209】

本明細書で提供される様々な方法のさらに他の実施形態では、化合物は分子模倣物であ
る。いくつかの実施形態では、分子模倣物は、アザシチジン、ロミデプシン、ＡＴＲＡ、
シクロホスファミド及びＣｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）からなる群より選択される。一実
施形態では、分子模倣体は、アザシチジンである。別の実施形態では、分子模倣物は、ロ
ミデプシンである。さらに別の実施形態では、分子模倣物はＡＴＲＡである。さらに別の
実施形態では、分子模倣物は、シクロホスファミドである。一実施形態では、分子模倣物
はＣｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）である。

【0210】

本明細書で提供される様々な方法のさらに他の実施形態では、化合物は酵素（例えば、
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ））またはタンパク質分解系（例えば、プロテアソー
ム）の阻害剤である。いくつかの実施形態では、化合物は、ＨＤＡＣの阻害剤である。特
定の実施形態では、化合物は、ＨＡＤＣ６の阻害剤である。特定の実施形態では、化合物
は、ＡＣＹ－２４１である。他の実施形態では、化合物はプロテアソームの阻害剤である
。一実施形態では、化合物は、カルフィルゾミブである。別の実施形態では、化合物は、
イキサゾミブである。

【0211】

いくつかの実施形態では、化合物は、抗がん化合物である。特定の実施形態では、化合
物はアントラサイクリンである。

【0212】

本明細書で提供される様々な化合物は、本明細書で提供される方法のいずれかにおいて
、個々に使用されてもよいし、または組み合わせて使用されてもよい。特定の実施形態で
は、本明細書で提供される様々な化合物は、本明細書で提供される任意の方法において個
々に使用される。他の実施形態では、本明細書で提供される様々な化合物は、本明細書で
提供される任意の方法と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、本明細書で
提供される２つの化合物を組み合わせて使用する。特定の実施形態では、本明細書で提供
される３つの化合物を組み合わせて使用する。他の実施形態では、本明細書で提供される
４つの化合物を組み合わせて使用する。さらに他の実施形態では、本明細書で提供される
５つの化合物を組み合わせて使用する。さらに他の実施形態では、本明細書で提供される
６つ以上の化合物を組み合わせて使用する。

【0213】

本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、処置化合物の投与は、インビト
ロで実施される（例えば、トランスジェニックマウス由来の単離細胞、細胞株、組織また
は器官に化合物を投与する）。他の実施形態では、処置化合物の投与をインビボで行う（
例えば、化合物をトランスジェニックマウスに投与する）。一実施形態では、単離された
細胞、細胞株、組織または器官は、ある期間、例えば、５、１０、１５、２０、２５、３
０、３５、４０、４５、５０もしくは５５分、または１、２、３、４、５、６、７、８、
９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２
、２３もしくは２４時間、または２、３もしくはそれ以上の日数の間、化合物と接触され
る。

【0214】

５．４．３ 処置化合物の投与量及び／またはスケジュールを最適化するための方法
別の態様では、本明細書において、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジ
ェニックマウスにおいて、化合物の投与量及び／またはスケジュールを最適化するための
方法であって：
（ａ）この化合物をトランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）このトランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）この試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；及び
（ｄ）このバイオマーカーのレベルに基づいて化合物の投与量及び／またはスケジュー
ルを調節すること；
を包含し、ここでこのバイオマーカーがＣＲＢＮ関連タンパク質（ＣＡＰ）である方法が
提供される。

【0215】

特定の実施形態では、この方法は、投与量を最適化するための方法である。他の実施形
態では、この方法は、投与スケジュールを最適化するための方法である。特定の実施形態
では、この方法は、投与スケジュール及び投与量を最適化するための方法である。特定の
実施形態では、本明細書で使用されるトランスジェニックマウスは、ヒトＣＲＢＮをコー
ドする核酸配列を含む。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする核酸配列は、マ
ウス染色体に安定して組み込まれる。他の実施形態では、核酸配列は、ヒトＣＲＢＮの断
片をコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする核酸配列は、マ
ウス染色体に安定に組み込まれる。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコー
ドする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタンパク質
をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲＢＮタンパク質
の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、ヒトＣＲＢＮま
たはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号８を含む。

【0216】

本明細書で提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、バイオマーカーは、セク
ション５．４．１で提供されるバイオマーカーを含む。特定の実施形態では、化合物の投
与量は、バイオマーカーのレベルがバイオマーカーのベースレベルよりも高い場合に調整
される。他の実施形態では、化合物の投与スケジュールは、バイオマーカーのレベルがバ
イオマーカーのベースレベルよりも高い場合に調整される。他の実施形態では、バイオマ
ーカーのレベルがバイオマーカーのベースレベルより高い場合、化合物の投与量及び投与
スケジュールの両方が調整される。特定の実施形態では、化合物の投与量は、バイオマー
カーのレベルがバイオマーカーのベースレベルよりも低い場合に調整される。他の実施形
態では、化合物の投与スケジュールは、バイオマーカーのレベルがバイオマーカーのベー
スレベルよりも低い場合に調整される。他の実施形態では、バイオマーカーのレベルがバ
イオマーカーのベースレベルより低い場合、化合物の投与量及び投与スケジュールの両方
が調整される。

【0217】

いくつかの実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、科学者によって決定され
た任意のレベルである。他の実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、以前の測
定に基づく経験的レベルである。特定の実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは
、２つ以上の以前の測定値に基づく標準レベルまたは平均レベルである。いくつかの実施
形態では、バイオマーカーのベースレベルは、ヒトＣＲＢＮ導入遺伝子を保有していない
マウス由来の試料中のバイオマーカーのレベルである。他の実施形態では、バイオマーカ
ーのベースレベルは、ヒトＣＲＢＮ導入遺伝子を発現するマウス由来の試料中のバイオマ
ーカーのレベルである。さらに他の実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、化
合物によって処理されていないヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウス由来の
試料中のバイオマーカーのレベルである。さらに他の実施形態では、バイオマーカーのベ
ースレベルは、化合物によって処置されたヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマ
ウス由来の試料中のバイオマーカーのレベルである。

【0218】

いくつかの実施形態では、測定されるバイオマーカーは、１つのバイオマーカーを含む
。特定の実施形態では、測定されるバイオマーカーは、２つ以上のバイオマーカーを含む
。いくつかの実施形態では、バイオマーカーのレベルは、バイオマーカーのタンパク質レ
ベルを検出及び定量することによって測定される。他の実施形態では、バイオマーカーの
レベルは、バイオマーカーの核酸レベルを検出及び定量することによって測定される。一
実施形態では、バイオマーカーのｃＤＮＡレベルを検出及び定量することによって、バイ
オマーカーのレベルを測定する。別の実施形態では、バイオマーカーのレベルは、バイオ
マーカーのｍＲＮＡレベルを検出及び定量することによって測定される。本明細書で提供
され、または当該分野で周知のバイオマーカーを測定する任意の適切な方法を使用して、
バイオマーカーのレベルを検出及び定量してもよい。

【0219】

トランスジェニックマウスに、本明細書で提供される処置化合物、またはその立体異性
体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体
置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体を、経口、非経口（例え
ば、筋肉内、腹腔内、静脈内、ＣＩＶ、嚢内の注射もしくは注入、皮下注射またはインプ
ラント）、吸入、鼻、膣、直腸、舌下、または局所（例えば、経皮または局所）経路の投
与によって投与してもよい。処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混
合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水
和物、共結晶、包接体もしく多形体は、単独で配合されてもよく、または各投与経路に適
した、医薬上許容される賦形剤、担体、アジュバント、及びビヒクルと適切な投与単位で
、一緒に配合されてもよい。

【0220】

一実施形態では、処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互
変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共
結晶、包接体もしくは多形体を経口投与する。別の実施形態では、処置化合物、またはそ
の立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和
物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体は非経口的に
投与される。さらに別の実施形態では、処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体
異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロド
ラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体は、静脈内で投与される。

【0221】

本明細書で使用される処置化合物は、セクション５．４．２に開示されている任意の化
合物である。

【0222】

特定の実施形態では、使用される化合物は、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体
を直接的または間接的に調節するＣＭＣである。いくつかの実施形態では、ＣＭＣはＣＲ
ＢＮに直接結合し得る。他の実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮタンパク質の構造変化を
誘導し得る。さらに他の実施形態では、ＣＭＣはＣＲＢＮに直接結合し、ＣＲＢＮタンパ
ク質の構造変化を誘導し得る。さらに他の実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビ
キチンリガーゼ複合体中の他のサブユニットに直接結合し得る。

【0223】

いくつかの実施形態では、使用される化合物は、免疫調節化合物（例えば、サリドマイ
ド、レナリドマイド、またはポマリドマイド）である。一実施形態では、本明細書で提供
される化合物は、サリドマイドである。別の実施形態では、本明細書で提供される化合物
はレナリドマイドである。さらに別の実施形態では、本明細書で提供される化合物はポマ
リドマイドである。

【0224】

他の実施形態では、使用される化合物は、以下の構造を有する、３－（５－アミノ－２
－メチル－４－オキソ－４Ｈ－キナゾリン－３－イル）－ピペリジン－２，６－ジオン（
「化合物Ａ」）：

【化7】

、
以下の構造を有する３－（４－（（４－（モルホリノメチル）ベンジル）オキシ）－１－
オキソイソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン（「化合物Ｂ」）：

【化8】

、
以下の構造を有する、１－（３－クロロ－４－メチルフェニル）－３－（（２－（２，６
－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）尿
素（「化合物Ｃ」）：

【化9】

、
以下の構造を有する、２－（４－クロロフェニル）－Ｎ－（（２－（２，６－ジオキソピ
ペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）－２，２－ジフ
ルオロアセトアミド（「化合物Ｄ」）：

【化10】

、及び
以下の構造を有する、２－（４－フルオロフェニル）－Ｎ－（（２－（２，６－ジオキソ
ピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）－２，２－ジ
フルオロアセトアミド（「化合物Ｅ」）：

【化11】

、
またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩
、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体、か
らなる群より選択される化合物である。

【0225】

一実施形態では、使用される化合物は、化合物Ａ、またはその立体異性体もしくは立体
異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロド
ラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である。別の実施形態では、使用される
化合物は、化合物Ｂ、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、
薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接
体もしくは多形体である。さらに別の実施形態では、使用される化合物は、化合物Ｃ、ま
たはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、
溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である
。さらに別の実施形態では、使用される化合物は、化合物Ｄ、またはその立体異性体もし
くは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体
、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である。さらにもう１つの実施
形態では、使用される化合物は、化合物Ｅ、またはその立体異性体もしくは立体異性体の
混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、
水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である。

【0226】

一実施形態では、処置化合物は、化合物Ａまたはその立体異性体もしくは立体異性体の
混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、
水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは、Ａｉｏｌｏｓ、Ｉｋ
ａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される１つ以上のバイオマーカーである。
別の実施形態では、処置化合物は、化合物Ｂまたはその立体異性体もしくは立体異性体の
混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、
水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは、Ａｉｏｌｏｓ、Ｉｋ
ａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択されるより１つ以上のバイオマーカーであ
る。さらに別の実施形態では、処置化合物は、化合物Ｃまたはその立体異性体もしくは立
体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロ
ドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは、Ａｉｏｌ
ｏｓ、Ｉｋａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される１つ以上のバイオマーカ
ーである。さらに別の実施形態では、処置化合物は、化合物Ｄ、またはその立体異性体も
しくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換
体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは、
Ａｉｏｌｏｓ、Ｉｋａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される少なくとも１つ
以上のバイオマーカーである。一実施形態では、処置化合物は、化合物Ｅ、またはその立
体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、
同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマ
ーカーは、Ａｉｏｌｏｓ、Ｉｋａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される１つ
以上のバイオマーカーである。

【0227】

特定の実施形態では、化合物の量は、約０．００５～約１，０００ｍｇ／日、約０．０
１～約５００ｍｇ／日、約０．０１～約２５０ｍｇ／日、約０．０１～約１００ｍｇ／日
、約０．１～約１００ｍｇ／日、約０．５～約１００ｍｇ／日、約１～約１００ｍｇ／日
、約０．０１～約５０ｍｇ／日、約０．１～約５０ｍｇ／日、約０．５～約５０ｍｇ／日
、約１～約５０ｍｇ／日、約０．０２～約２５ｍｇ／日、または約０．０５～約１０ｍｇ
／日である。

【0228】

特定の実施形態では、化合物の量は、約０．００５～約１，０００ｍｇ／日、約０．０
１～約５００ｍｇ／日、約０．０１～約２５０ｍｇ／日、約０．０１～約１００ｍｇ／日
、約０．１～約１００ｍｇ／日、約０．５～約１００ｍｇ／日、約１～約１００ｍｇ／日
、約０．０１～約５０ｍｇ／日、約０．１～約５０ｍｇ／日、約０．５～約５０ｍｇ／日
、約１～約５０ｍｇ／日、約０．０２～約２５ｍｇ／日、または１日おきに約０．０５～
約１０ｍｇである。

【0229】

特定の実施形態では、化合物の量は、１日あたり、約０．１、約０．２、約０．５、約
１、約２、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約４５、約５０、
約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、または約１５０ｍｇである。

【0230】

１つの実施形態では、化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互
変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共
結晶、包接体もしくは多形体の、本明細書に記載の状態での毎日の投与範囲は、例えば、
１日１回の単回投与として、または１日を通して分割した投与として、１日あたり約０．
５ｍｇ～約５０ｍｇの範囲内にある。いくつかの実施形態では、投与量は、１日あたり約
１ｍｇ～約５０ｍｇの範囲である。他の実施形態では、投与量は、１日あたり約０．５ｍ
ｇ～約５ｍｇの範囲である。１日あたりの特定の用量としては、１日あたり０．１、０．
２、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１
５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８
、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、
４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ｍｇが挙げられる。

【0231】

特定の実施形態では、推奨される開始投与量は、１日あたり０．５、１、２、３、４、
５、１０、１５、２０、２５または５０ｍｇであり得る。別の実施形態では、推奨される
開始投与量は、１日あたり０．５、１、２、３、４または５ｍｇであり得る。用量は、１
５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０ｍｇ／日に段階的に増大させても
よい。

【0232】

特定の実施形態では、化合物の量は、約０．００１～約１００ｍｇ／ｋｇ／日、約０．
０１～約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１～約２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１～約１０
ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１～約９ｍｇ／ｋｇ／日、０．０１～約８ｍｇ／ｋｇ／日、約
０．０１～約７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１～約６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１～約５ｍ
ｇ／ｋｇ／日、約０．０１～約４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１～約３ｍｇ／ｋｇ／日、約
０．０１～約２ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．０１～約１ｍｇ／ｋｇ／日である。

【0233】

投与量はまた、ｍｇ／ｋｇ／日以外の単位で表してもよい。例えば、非経口投与のため
の用量は、ｍｇ／ｍ２／日として表してもよい。当業者は、対象の身長もしくは重量のい
ずれかまたはその両方を考慮して、用量をｍｇ／ｋｇ／日からｍｇ／ｍ２／日に変換する
方法を容易に知ることになる(ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ａｎ
ｉｍａｌｆｒａｍｅ．ｈｔｍを参照のこと)。

【0234】

特定の実施形態では、投与される化合物の量は、約０．００１～約５００μＭ、約０．
００２～約２００μＭ、約０．００５～約１００μＭ、約０．０１～約５０μＭ、約１～
約５０μＭ、約０．０２～約２５μＭ、約０．０５～約２０μＭ、約０．１～約２０μＭ
、約０．５～約２０μＭ、または約１μＭ～約２０μＭの範囲の定常状態で、化合物の血
漿濃度を提供するのに十分である。

【0235】

他の実施形態では、投与される化合物の量は、約５～約１００ｎＭ、約５～約５０ｎＭ
、約１０～約１００ｎＭ、約１０～約５０ｎＭ、または約５０～約１００ｎＭの範囲の定
常状態で化合物の血漿濃度を提供するのに十分である。

【0236】

本明細書中で使用される場合、「定常状態での血漿濃度」という用語は、本明細書で提
供される化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学
的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体も
しくは多形体の投与の期間後に達した濃度である。一旦、定常状態に達すると、化合物の
血漿濃度の時間依存曲線上に小さなピーク及びトラフが存在する。

【0237】

特定の実施形態では、投与される化合物の量は、化合物の最大血漿濃度（ピーク濃度）
を提供するのに十分であり、約０．００１～約５００μＭ、約０．００２～約２００μＭ
、約０．００５～約１００μＭ、約０．０１～約５０μＭ、約１～約５０μＭ、約０．０
２～約２５μＭ、約０．０５～約２０μＭ、約０．１～約２０μＭ、約０．５～約２０μ
Ｍ、または約１～約２０μＭの範囲である。

【0238】

特定の実施形態では、投与される化合物の量は、化合物の最小血漿濃度（トラフ濃度）
を提供するのに十分であり、約０．００１～約５００μＭ、約０．００２～約２００μＭ
、約０．００５～約１００μＭ、約０．０１～約５０μＭ、約１～約５０μＭ、約０．０
１～約２５μＭ、約０．０１～約２０μＭ、約０．０２～約２０μＭ、約０．０２～約２
０μＭ、または約０．０１～約２０μＭの範囲である。

【0239】

特定の実施形態では、投与される化合物の量は、化合物の曲線下面積（ＡＵＣ）を提供
するのに十分であり、約１００～約１００，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬ、約１，０００～約
５０，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬ、約５，０００～約２５，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬ、また
は約５，０００～約１０，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬの範囲である。

【0240】

処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的
に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もし
くは多形体は、単回投与（例えば、単回ボーラス注射）として投与されてもよく、または
経時的に（例えば、経時的に分割されたボーラス用量）投与されてもよい。化合物は、例
えば、マウスが何らかの検出可能な安定した生物学的効果を経験するまで、またはマウス
が疾患の進行もしくは容認できない毒性を経験するまで、必要に応じて繰り返し投与され
てもよい。安定な疾患またはその欠如は、マウスの症状の評価、バイオマーカーの測定、
及びＸ線、ＣＡＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩスキャン、または他の一般に受け入れられている評価
様式を用いて画像化された腫瘍の可視化などの当技術分野で公知の方法によって決定され
る。

【0241】

処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的
に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もし
くは多形体は、１日１回（ＱＤ）投与されてもよいし、または１日２回（ＢＩＤ）、１日
３回（ＴＩＤ）、１日４回（ＱＩＤ）などの毎日複数回用量に分けられてもよい。さらに
、投与は、連続的（すなわち、連続して毎日または毎日）または断続的、例えばサイクル
（すなわち、薬物なしの休薬の日、週、または月を含む）であってもよい。本明細書で使
用される場合、「毎日」という用語は、処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体
異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロド
ラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体が、例えば、ある期間、１日に１回また
は１回を超えて投与されることを意味するものとする。「連続的」という用語は、治療用
化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容
される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多
形体を、少なくとも１０日から５２週間の中断しない期間の間毎日投与することを意味す
るものとする。本明細書で使用される「間欠的」または「断続的に」という用語は、規則
的または不規則のいずれかの間隔で停止及び開始を意味するものとする。例えば、処置化
合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容さ
れる塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形
体の間欠的投与は、１週あたり１～６回の投与、サイクルの投与（例えば、２～８週間連
続して毎日投与し、次いで、最大で１週間投与しない休薬期間）、または隔日投与である
。本明細書で使用する「サイクリング」という用語は、処置化合物、またはその立体異性
体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体
置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体が、毎日または連続的に
投与されるが、休薬期間があることを意味するものとする。特定の実施形態では、休薬期
間は、治療期間と同じ長さである。他の実施形態では、休薬期間は、治療期間とは異なる
長さを有する。

【0242】

いくつかの実施形態では、投与頻度は、ほぼ毎日の投与～ほぼ毎月の投与の範囲である
。特定の実施形態では、投与は１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日おき１回
、週２回、毎週１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回である。一実施
形態では、処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体
、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包
接体もしくは多形体を１日１回投与する。別の実施形態では、処置化合物、またはその立
体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、
同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体を１日２回投与す
る。さらに別の実施形態では、処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の
混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、
水和物、共結晶、包接体もしくは多形体を１日３回投与する。さらに別の実施形態では、
処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に
許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしく
は多形体を１日４回投与する。

【0243】

特定の実施形態では、処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物
、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物
、共結晶、包接体もしくは多形体は、１日～６か月、１週間～３ヶ月、１週間～４週間、
１週間～３週間、または１週間～２週間にわたって１日１回投与される。特定の実施形態
では、処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬
学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体
もしくは多形体は、１週間、２週間、３週間、または４週間の間、１日１回投与される。
一実施形態では、処置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変
異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結
晶、包接体もしくは多形体は、１週間の間、１日１回投与される。別の実施形態では、処
置化合物、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許
容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは
多形体は、２週間の間１日１回投与される。さらに別の実施形態では、処置化合物または
その立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒
和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体は、３週間
の間、１日１回投与される。さらに別の実施形態では、処置化合物またはその立体異性体
もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置
換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体は、４週間の間、１日１回
投与される。

【0244】

本明細書においてはまた、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスにおいて
処置化合物の投与量及び／またはスケジュールを最適化するための方法であって：
（ａ）ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスに化合物を投与すること；
（ｂ）トランスジェニックマウスの身体的外観を観察すること；及び
（ｃ）ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスの身体的外観が標準を満たす
かまたは満たさない場合、化合物の投与量及び／またはスケジュールを調節すること、を
包含する方法も提供される。

【0245】

本明細書で提供される様々な方法の特定の実施形態では、２つ以上のステップが連続的
に実施される。本明細書で提供される方法の他の実施形態では、２つ以上のステップが並
行して（例えば、同時に）実行される。

【0246】

特定の実施形態では、化合物の投与量は、トランスジェニックマウスの身体的外観が標
準を満たす場合に調整される。いくつかの実施形態では、化合物の投与スケジュールは、
トランスジェニックマウスの身体的外観が標準を満たす場合に調整される。他の実施形態
では、トランスジェニックマウスの身体的外観が標準を満たす場合、化合物の投与量及び
スケジュールを調整する。特定の実施形態では、トランスジェニックマウスの身体的外観
が標準を満たさない場合、化合物の投与量を調整する。いくつかの実施形態では、トラン
スジェニックマウスの身体的外観が標準を満たさない場合、化合物の投与スケジュールを
調整する。他の実施形態では、トランスジェニックマウスの身体的外観が標準を満たさな
い場合、化合物の投与量及びスケジュールを調整する。

【0247】

さらに本明細書においては、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスにおい
て処置化合物の投与量及び／またはスケジュールを最適化する方法であって、
（ａ）この化合物をトランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）このトランスジェニックマウスの生物学的パラメーターを測定すること；ならび
に
（ｃ）ＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスの生物学的パラメーターが標準を
満たすかまたは満たさない場合、化合物の投与量及び／またはスケジュールを調節するこ
と、を包含する方法が提供される。

【0248】

本明細書で提供される様々な方法の特定の実施形態では、２つ以上のステップが連続的
に実施される。本明細書で提供される方法の他の実施形態では、２つ以上のステップが並
行して（例えば、同時に）実行される。

【0249】

特定の実施形態では、トランスジェニックマウスの生物学的パラメーターが標準を満た
す場合、化合物の投与量を調整する。いくつかの実施形態では、トランスジェニックマウ
スの生物学的パラメーターが標準を満たす場合、化合物の投与スケジュールを調整する。
他の実施形態では、トランスジェニックマウスの生物学的パラメーターが標準を満たす場
合、化合物の投与量及びスケジュールを調整する。特定の実施形態では、トランスジェニ
ックマウスの生物学的パラメーターが標準を満たさない場合、化合物の投与量を調整する
。いくつかの実施形態では、トランスジェニックマウスの生物学的パラメーターが標準を
満たさない場合、化合物の投与スケジュールを調整する。他の実施形態では、トランスジ
ェニックマウスの生物学的パラメーターが基準を満たさない場合、化合物の投与量及びス
ケジュールを調整する。

【0250】

トランスジェニックマウスの生物学的パラメーターの非限定的な例としては、代謝パラ
メーター、神経学的パラメーター、認知パラメーター、行動パラメーター、遺伝子及びタ
ンパク質発現／修飾、エピジェネティックパラメーター、腫瘍増殖、免疫学的パラメータ
ー、組織学的パラメーター、血液パラメーター及び組織パラメーターが挙げられる。

【0251】

５．４．４ 化合物または化合物の組み合わせの効果を評価するための方法
別の態様では、本明細書において、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジ
ェニックマウスにおける化合物の効果を評価するための方法であって、
（ａ）この化合物をトランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）このトランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）この試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；及び
（ｄ）このバイオマーカーのレベルをバイオマーカーのベースレベルと比較することを
包含し、ここでバイオマーカーがＣＡＰである方法が提供される。

【0252】

さらに別の態様では、本明細書において、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトラ
ンスジェニックマウスにおける化合物の組み合わせの効果を評価するための方法であって
、
（ａ）このトランスジェニックマウスに第１の化合物及び第２の化合物を投与すること
；
（ｂ）このトランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）この試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；及び
（ｄ）このバイオマーカーのレベルをバイオマーカーのベースレベルと比較すること；
を包含し、ここでこのバイオマーカーがＣＡＰである方法が提供される。

【0253】

いくつかの実施形態では、化合物の組み合わせの効果を評価する方法は、第１の化合物
、第２の化合物、及び第３の化合物を組み合わせて投与することを包含する。他の実施形
態では、本方法は、４つ以上の化合物を組み合わせて投与することを包含する。特定の実
施形態では、この化合物は同時に投与される。他の実施形態では、化合物は連続的に投与
される。

【0254】

特定の実施形態では、本明細書で使用される様々なトランスジェニックマウスは、ヒト
ＣＲＢＮをコードする核酸配列を含む。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮをコードする
核酸配列は、マウス染色体に安定して組み込まれる。他の実施形態では、核酸配列は、ヒ
トＣＲＢＮの断片をコードする。特定の実施形態では、ヒトＣＲＢＮの断片をコードする
核酸配列は、マウス染色体に安定に組み込まれる。一実施形態では、全長ヒトＣＲＢＮタ
ンパク質をコードする核酸配列は、配列番号５を含む。別の実施形態では、全長ヒトＣＲ
ＢＮタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号６を含む。一実施形態では、ヒトＣＲ
ＢＮタンパク質の断片をコードする核酸配列は、配列番号７を含む。別の実施形態では、
ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を包含する標的化構築物は、配列番号
８を含む。

【0255】

いくつかの実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、科学者によって決定され
る任意のレベルである。他の実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、以前の測
定に基づく経験的レベルである。特定の実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは
、２つ以上の以前の測定値に基づく標準レベルまたは平均レベルである。いくつかの実施
形態では、バイオマーカーのベースレベルは、ヒトＣＲＢＮ導入遺伝子を保有していない
マウス由来の試料中のバイオマーカーのレベルである。他の実施形態では、バイオマーカ
ーのベースレベルは、ヒトＣＲＢＮ導入遺伝子を発現するマウス由来の試料中のバイオマ
ーカーのレベルである。さらに他の実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、い
ずれの化合物によっても処理されていない、ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニック
マウス由来の試料中のバイオマーカーのレベルである。さらに他の実施形態では、バイオ
マーカーのベースレベルは、１つ以上の化合物によって処理された、ヒトＣＲＢＮを発現
するトランスジェニックマウス由来の試料中のバイオマーカーのレベルである。

【0256】

特定の実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、化合物がトランスジェニック
マウスに投与されない場合のバイオマーカーのレベルである。いくつかの実施形態では、
バイオマーカーのベースレベルは、トランスジェニックマウスに１つの化合物のみが投与
された場合のバイオマーカーのレベルである。特定の実施形態では、唯一の化合物は第１
の化合物である。他の実施形態では、唯一の化合物は第２の化合物である。さらに他の実
施形態では、唯一の化合物は、第３の化合物である。さらに他の実施形態では、唯一の化
合物は対照化合物である。いくつかの実施形態では、バイオマーカーのベースレベルは、
２つの化合物の基準の組み合せがトランスジェニックマウスに投与された場合のバイオマ
ーカーのレベルである。特定の実施形態では、この基準の組み合せは、第１の化合物及び
別の化合物を含む。他の実施形態では、この基準の組み合わせは、第２の化合物及び別の
化合物を含む。さらに他の実施形態では、この基準の組み合わせは、第３の化合物及び別
の化合物を含む。さらに他の実施形態では、この基準の組み合せは、第１の化合物及び第
２の化合物を含む。特定の実施形態では、この基準の組み合せは、２つ以上の他の化合物
（すなわち、第１の化合物でも第２の化合物でもない）を含む。

【0257】

特定の実施形態では、化合物（または化合物の組み合わせ）の効果は、抗原特異的Ｔ細
胞殺傷に対する効果である。

【0258】

いくつかの実施形態では、組み合わせの化合物は、同時または連続してのいずれかで投
与される。特定の実施形態では、この化合物は同時に投与される。他の実施形態では、こ
の化合物は連続的に投与される。本方法のさらに別の実施形態では、この化合物は特定の
順序で投与される。さらに別の実施形態では、この化合物は異なる順序で投与される。特
定の実施形態では、この化合物は、特定の順序とは逆の順序で投与される。

【0259】

いくつかの実施形態では、処置化合物は、セクション５．４．２に提供される化合物を
含む。

【0260】

化合物の組み合わせの効果を評価するための任意の１つの方法において、化合物は、同
一または異なるタイプの分子（例えば、低分子化学物質、または生物製剤、例えば、タン
パク質、ペプチド、核酸、またはオリゴヌクレオチド）から選択してもよい。いくつかの
実施形態では、化合物は、同じタイプの分子から選択される。他の実施形態では、化合物
は、異なるタイプの分子から選択される。特定の実施形態では、化合物は、免疫調節化合
物、抗体、ＰＲＲアゴニスト、分子模倣物、酵素の阻害剤、タンパク質分解系の阻害剤、
及び任意のタイプの抗がん剤から選択してもよい。いくつかの実施形態では、この化合物
は、任意の２つのタイプの免疫調節化合物、抗体、ＰＲＲアゴニスト、分子模倣物、酵素
の阻害剤、タンパク質分解系の阻害剤、及び任意のタイプの抗がん剤から選択してもよい
。他の実施形態では、この化合物は、任意の３つのタイプの免疫調節化合物、抗体、ＰＲ
Ｒアゴニスト、分子模倣物、酵素の阻害剤、タンパク質分解系の阻害剤、及び任意のタイ
プの抗がん剤から選択してもよい。さらに他の実施形態では、この化合物は、任意の４つ
のタイプの免疫調節化合物、抗体、ＰＲＲアゴニスト、分子模倣物、酵素の阻害剤、タン
パク質分解系の阻害剤、及び任意のタイプの抗がん剤から選択してもよい。さらに他の実
施形態では、この化合物は、任意の５つのタイプの免疫調節化合物、抗体、ＰＲＲアゴニ
スト、分子模倣物、酵素の阻害剤、タンパク質分解系の阻害剤、及び任意のタイプの抗が
ん剤から選択してもよい。さらに他の実施形態では、この化合物は、任意の６つのタイプ
の免疫調節化合物、抗体、ＰＲＲアゴニスト、分子模倣物、酵素の阻害剤、タンパク質分
解系の阻害剤、及び任意のタイプの抗がん剤から選択してもよい。さらに他の実施形態で
は、この化合物は、全ての７種類の免疫調節化合物、抗体、ＰＲＲアゴニスト、分子模倣
物、酵素の阻害剤、タンパク質分解系の阻害剤、及び任意のタイプの抗がん剤から選択し
てもよい。

【0261】

特定の実施形態では、使用される化合物は、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼを直接
的または間接的に調節するＣＭＣである。いくつかの実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮ
に直接結合し得る。他の実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮタンパク質の構造変化を誘導
し得る。さらに他の実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮに直接結合し、ＣＲＢＮタンパク
質の構造変化を誘導し得る。さらに他の実施形態では、ＣＭＣは、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキ
チンリガーゼ複合体中の他のサブユニットに直接結合し得る。

【0262】

いくつかの実施形態では、使用される化合物は、免疫調節化合物（例えば、サリドマイ
ド、レナリドマイド、またはポマリドマイド）である。一実施形態では、本明細書で提供
される化合物は、サリドマイドである。別の実施形態では、本明細書で提供される化合物
はレナリドマイドである。さらに別の実施形態では、本明細書で提供される化合物はポマ
リドマイドである。

【0263】

他の実施形態では、使用される化合物は、以下の構造を有する、３－（５－アミノ－２
－メチル－４－オキソ－４Ｈ－キナゾリン－３－イル）－ピペリジン－２，６－ジオン（
「化合物Ａ」）：

【化12】

、
以下の構造を有する、３－（４－（（４－（モルホリノメチル）ベンジル）オキシ）－１
－オキソイソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン（「化合物Ｂ」）：

【化13】

、
以下の構造を有する、１－（３－クロロ－４－メチルフェニル）－３－（（２－（２，６
－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）尿
素（「化合物Ｃ」）：
：

【化14】

、
以下の構造を有する、２－（４－クロロフェニル）－Ｎ－（（２－（２，６－ジオキソピ
ペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）－２，２－ジフ
ルオロアセトアミド（「化合物Ｄ」）：

【化15】

、及び
以下の構造を有する、２－（４－フルオロフェニル）－Ｎ－（（２－（２，６－ジオキソ
ピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）－２，２－ジ
フルオロアセトアミド（「化合物Ｅ」）：

【化16】

、
またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、同位体置換体、プロドラ
ッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体からなる群より選択される化合物である。

【0264】

一実施形態では、使用される化合物は、化合物Ａ、またはその立体異性体もしくは立体
異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロド
ラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である。別の実施形態では、使用される
化合物は、化合物Ｂ、またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、
薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接
体もしくは多形体である。さらに別の実施形態では、使用される化合物は、化合物Ｃ、ま
たはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、
溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である
。さらに別の実施形態では、使用される化合物は、化合物Ｄ、またはその立体異性体もし
くは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体
、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である。さらにもう１つの実施
形態では、使用される化合物は、化合物Ｅ、またはその立体異性体もしくは立体異性体の
混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ、
水和物、共結晶、包接体もしくは多形体である。

【0265】

化合物の組み合わせの効果を評価するための方法の特定の実施形態では、化合物の組み
合わせは２つの化合物を含む。いくつかの実施形態では、化合物の組み合わせは３つの化
合物を含む。他の実施形態では、化合物の組み合わせは４つの化合物を含む。さらに他の
実施形態では、化合物の組み合わせは５つの化合物を含む。さらに他の実施形態では、化
合物の組み合わせは、６つ以上の化合物を含む。

【0266】

一実施形態では、組み合わせの化合物の１つはデキサメタゾンである。別の実施形態で
は、組み合わせの化合物の１つはＣＭＣである。さらに別の実施形態では、組み合わせの
化合物の１つは、免疫調節化合物である。さらに別の実施形態では、組み合わせの化合物
の１つは、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドからなる群より選択され
る免疫調節化合物である。一実施形態では、組み合わせの化合物の１つはサリドマイドで
ある。別の実施形態では、組み合わせの化合物の１つはレナリドマイドである。さらに別
の実施形態では、組み合わせの化合物の１つはポマリドマイドである。一実施形態では、
組み合わせの化合物の１つは、抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する化合物である。別の実施形
態では、組み合わせの化合物の１つは、抗多発性骨髄腫活性を有する化合物である。

【0267】

特定の実施形態では、組み合わせの化合物の１つは、イキサゾミブ、カルフィルゾミブ
、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、
デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群より選択される。一実施形態で
は、組み合わせの化合物の１つはイキサゾミブである。別の実施形態では、組み合わせの
化合物の１つはカルフィルゾミブである。さらに別の実施形態では、組み合わせの化合物
の１つはエロツズマブである。さらに別の実施形態では、組み合わせの化合物の１つは、
ダラツムマブである。一実施形態では、組み合わせの化合物の１つはアザシチジンである
。別の実施形態では、組み合わせの化合物の１つはＡＣＹ－２４１である。さらに別の実
施形態では、組み合わせの化合物の１つはシクロホスファミドである。さらに別の実施形
態では、組み合わせの化合物の１つはデュルバルマブである。一実施形態では、組み合わ
せの化合物の１つはアブラキサンである。別の実施形態では、組み合わせの化合物の１つ
はニボルマブである。

【0268】

特定の実施形態では、化合物の組み合わせには、ＣＭＣ及びデキサメタゾンが含まれる
。いくつかの実施形態では、化合物の組み合わせには、免疫調節化合物及びデキサメタゾ
ンが含まれる。他の実施形態では、化合物の組み合わせには、サリドマイド、レナリドマ
イド、及びポマリドマイド、及びデキサメタゾンからなる群より選択される免疫調節化合
物が含まれる。さらに他の実施形態では、化合物の組み合わせには、抗Ｂ細胞悪性腫瘍活
性を有する化合物及びデキサメタゾンが含まれる。さらに他の実施形態では、化合物の組
み合わせには、抗多発性骨髄腫活性を有する化合物及びデキサメタゾンが含まれる。一実
施形態では、化合物の組み合わせには、サリドマイド及びデキサメタゾンが含まれる。別
の実施形態では、化合物の組み合わせには、レナリドマイド及びデキサメタゾンが含まれ
る。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、ポマリドマイド及びデキサメタ
ゾンが含まれる。

【0269】

特定の実施形態では、化合物の組み合わせには、ＣＭＣ、デキサメタゾン、ならびにイ
キサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－
２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群
より選択される化合物が含まれる。いくつかの実施形態では、化合物の組み合わせには、
免疫調節化合物、デキサメタゾン、ならびにイキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズ
マブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバル
マブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群より選択される化合物が含まれる。他の実
施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、サリドマイド、レナリドマイド
及びポマリドマイドからなる群より選択される免疫調節化合物、ならびにイキサゾミブ、
カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シク
ロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン、及びニボルマブからなる群より選択さ
れる化合物が含まれる。さらに他の実施形態では、化合物の組み合わせには、抗Ｂ細胞悪
性腫瘍活性を有する化合物、デキサメタゾン、ならびにイキサゾミブ、カルフィルゾミブ
、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、
デュルバルマブ、アブラキサン、及びニボルマブからなる群より選択される化合物が含ま
れる。さらに他の実施形態では、化合物の組み合わせには、抗多発性骨髄腫活性を有する
化合物、デキサメタゾン、ならびにイキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダ
ラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、ア
ブラキサン、及びニボルマブからなる群より選択される化合物が含まれる。一実施形態で
は、化合物の組み合わせには、サリドマイド、デキサメタゾン、ならびにイキサゾミブ、
カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シク
ロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群より選択され
る化合物が含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、レナリドマイド、デ
キサメタゾン、ならびにイキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ
、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン
及びニボルマブからなる群より選択される化合物が含まれる。さらに別の実施形態では、
化合物の組み合わせには、ポマリドマイド、デキサメタゾン、ならびにイキサゾミブ、カ
ルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロ
ホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブからなる群より選択される
化合物が含まれる。

【0270】

一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びイキサゾミ
ブが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ＣＭＣ、
及びカルフィルゾミブが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、
デキサメタゾン、ＣＭＣ及びエロツズマブが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物
の組み合わせには、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びダラツムマブが含まれる。一実施形態
では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びアザシチジンが含まれる。
別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びＡＣＹ－２
４１が含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、
ＣＭＣ、及びシクロホスファミドが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合
わせには、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びデュルバルマブが含まれる。一実施形態では、
化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びアブラキサンが含まれる。別の
実施形態では、化合物の組み合わせは、デキサメタゾン、ＣＭＣ、及びニボルマブが含ま
れる。

【0271】

一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びイ
キサゾミブが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、
免疫調節化合物、及びカルフィルゾミブが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の
組み合わせには、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びエロツズマブが含まれる。さら
に別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及び
ダラツムマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、
免疫調節化合物、及びアザシチジンが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせ
には、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びＡＣＹ－２４１が含まれる。さらに別の実
施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びシクロホ
スファミドが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタ
ゾン、免疫調節化合物、及びデュルバルマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み
合わせには、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びアブラキサンが含まれる。別の実施
形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、免疫調節化合物、及びニボルマブ
が含まれる。

【0272】

一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、レナリドマイド及びイキ
サゾミブが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、レ
ナリドマイド及びカルフィルゾミブが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み
合わせには、デキサメタゾン、レナリドマイド及びエロツズマブが含まれる。さらに別の
実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、レナリドマイド、及びダラツ
ムマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、レナリ
ドマイド及びアザシチジンが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デ
キサメタゾン、レナリドマイド、及びＡＣＹ－２４１が含まれる。さらに別の実施形態で
は、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、レナリドマイド、及びシクロホスファミ
ドが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、レ
ナリドマイド及びデュルバルマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには
、デキサメタゾン、レナリドマイド及びアブラキサンが含まれる。別の実施形態では、化
合物の組み合わせには、デキサメタゾン、レナリドマイド及びニボルマブが含まれる。

【0273】

一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、サリドマイド及びイキサ
ゾミブが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、サリ
ドマイド及びカルフィルゾミブが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わ
せには、デキサメタゾン、サリドマイド及びエロツズマブが含まれる。さらに別の実施形
態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、サリドマイド及びダラツムマブが含
まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、サリドマイド及び
アザシチジンが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン
、サリドマイド、及びＡＣＹ－２４１が含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組
み合わせには、デキサメタゾン、サリドマイド及びシクロホスファミドが含まれる。さら
に別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、サリドマイド及びデュ
ルバルマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、サ
リドマイド及びアブラキサンが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、
デキサメタゾン、サリドマイド及びニボルマブが含まれる。

【0274】

一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ポマリドマイド、及びイ
キサゾミブが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、
ポマリドマイド、及びカルフィルゾミブが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の
組み合わせには、デキサメタゾン、ポマリドマイド及びエロツズマブが含まれる。さらに
別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ポマリドマイド及びダラ
ツムマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ポマ
リドマイド及びアザシチジンが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、
デキサメタゾン、ポマリドマイド、及びＡＣＹ－２４１が含まれる。さらに別の実施形態
では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ポマリドマイド、及びシクロホスファ
ミドが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、
ポマリドマイド及びデュルバルマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせに
は、デキサメタゾン、ポマリドマイド、及びアブラキサンが含まれる。別の実施形態では
、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、ポマリドマイド及びニボルマブが含まれる
。

【0275】

一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を
有する化合物、及びイキサゾミブが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせに
は、デキサメタゾン、抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する化合物、及びカルフィルゾミブが含
まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗Ｂ細胞
悪性腫瘍活性を有する化合物、及びエロツズマブが含まれる。さらに別の実施形態では、
化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する化合物、及び
ダラツムマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、
抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する化合物、及びアザシチジンが含まれる。別の実施形態では
、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する化合物、及
びＡＣＹ－２４１が含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキ
サメタゾン、抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する化合物、及びシクロホスファミドが含まれる
。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗Ｂ細胞悪性腫
瘍活性を有する化合物、及びデュルバルマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み
合わせには、デキサメタゾン、抗Ｂ細胞悪性腫瘍活性を有する化合物、及びアブラキサン
が含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗Ｂ細胞悪
性腫瘍活性を有する化合物、及びニボルマブが含まれる。

【0276】

一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗多発性骨髄腫活性を有
する化合物、及びイキサゾミブが含まれる。別の実施形態では、化合物の組み合わせには
、デキサメタゾン、抗多発性骨髄腫活性を有する化合物、及びカルフィルゾミブが含まれ
る。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗多発性骨髄
腫活性を有する化合物、及びエロツズマブが含まれる。さらに別の実施形態では、化合物
の組み合わせには、デキサメタゾン、抗多発性骨髄腫活性を有する化合物、及びダラツム
マブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗多発性
骨髄腫活性を有する化合物、及びアザシチジンが含まれる。別の実施形態では、化合物の
組み合わせには、デキサメタゾン、抗多発性骨髄腫活性を有する化合物、及びＡＣＹ－２
４１が含まれる。さらに別の実施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、
抗多発性骨髄腫活性を有する化合物、及びシクロホスファミドが含まれる。さらに別の実
施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗多発性骨髄腫活性を有する化
合物、及びデュルバルマブが含まれる。一実施形態では、化合物の組み合わせには、デキ
サメタゾン、抗多発性骨髄腫活性を有する化合物、及びアブラキサンが含まれる。別の実
施形態では、化合物の組み合わせには、デキサメタゾン、抗多発性骨髄腫活性を有する化
合物、及びニボルマブが含まれる。

【0277】

いくつかの実施形態では、測定されるバイオマーカーは、セクション５．４．１で提供
されるバイオマーカーを含む。

【0278】

本明細書で提供される様々な方法の特定の実施形態では、バイオマーカーとは、ＣＲＢ
Ｎによって、例えばタンパク質間の相互作用（例えば、特定のＣＲＢＮ基質またはその下
流のエフェクター）を通じて、または様々な細胞経路（例えば、シグナル伝達経路）を通
じて直接または間接的に影響されるタンパク質である。特定の実施形態では、バイオマー
カーは、ＣＡＰである。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、ＣＲＢＮによって
直接的または間接的に影響を受けるタンパク質のｍＲＮＡである。他の実施形態では、バ
イオマーカーは、ＣＲＢＮによって直接的または間接的に影響を受けるタンパク質のｃＤ
ＮＡである。特定の実施形態では、バイオマーカーは、ＣＲＢＮの１つ以上のアイソフォ
ームによって直接的または間接的に影響を受ける。いくつかの実施形態では、バイオマー
カーは、ＣＲＢＮの１つのアイソフォームによって直接的または間接的に影響を受けるが
、他のアイソフォームによっては影響を受けない。

【0279】

いくつかの実施形態では、測定されるバイオマーカーは、１つのバイオマーカーを含む
。特定の実施形態では、測定されるバイオマーカーは、２つ以上のバイオマーカーを含む
。いくつかの実施形態では、バイオマーカーのレベルは、バイオマーカーのタンパク質レ
ベルを検出及び定量することによって測定される。他の実施形態では、バイオマーカーの
レベルは、バイオマーカーの核酸レベルを検出及び定量することによって測定される。一
実施形態では、バイオマーカーのレベルは、バイオマーカーのｃＤＮＡレベルを検出及び
定量することによって測定される。別の実施形態では、バイオマーカーのレベルは、バイ
オマーカーのｍＲＮＡレベルを検出及び定量することによって測定される。本明細書で提
供されるか、または当該分野で周知のバイオマーカーを測定する任意の適切な方法を使用
して、バイオマーカーのレベルを検出及び定量してもよい。

【0280】

一実施形態では、処置化合物は、化合物Ａ、またはその立体異性体もしくは立体異性体
の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッグ
、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは、Ａｉｏｌｏｓ、Ｉ
ｋａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される１つ以上のバイオマーカーである
。別の実施形態では、処置化合物は、化合物Ｂ、またはその立体異性体もしくは立体異性
体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プロドラッ
グ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは、Ａｉｏｌｏｓ、
Ｉｋａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される１つ以上のバイオマーカーであ
る。さらに別の実施形態では、処置化合物は、化合物Ｃ、またはその立体異性体もしくは
立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置換体、プ
ロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは、Ａｉｏ
ｌｏｓ、Ｉｋａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される１つ以上のバイオマー
カーである。さらに別の実施形態では、処置化合物は、化合物Ｄ、またはその立体異性体
もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置
換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは
、Ａｉｏｌｏｓ、Ｉｋａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される１つ以上のバ
イオマーカーである。一実施形態では、処置化合物は、化合物Ｅ、またはその立体異性体
もしくは立体異性体の混合物、互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、同位体置
換体、プロドラッグ、水和物、共結晶、包接体もしくは多形体であり、バイオマーカーは
、Ａｉｏｌｏｓ、Ｉｋａｒｏｓ、及びＧＳＰＴ１からなる群より選択される１つ以上のバ
イオマーカーである。

【0281】

５．４．５ 抗原特異的Ｔ細胞殺傷に対する化合物の効果の評価方法
本明細書で提供される様々な方法の特定の実施形態では、化合物または化合物の組み合
わせの効果は、抗原特異的Ｔ細胞殺傷に対する効果である。Ｔ細胞媒介細胞傷害性は、ナ
イーブＴ細胞に種々の特異的抗原をもたらす抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって誘導され得
る。ＡＰＣの非限定的な例としては、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、特定のＢ細胞
、及び特定の活性化上皮細胞が挙げられる。次いで、活性化された細胞傷害性Ｔ細胞は、
その表面に特異的抗原（例えば、腫瘍抗原）を有する標的細胞（例えば、腫瘍細胞）を殺
傷する。インビボまたはインビトロでの抗原特異的Ｔ細胞殺傷を評価するための様々な方
法は、科学文献に開示されている（例えば、自己樹状細胞でパルスされた乳房腫瘍細胞溶
解物により誘導されるＴ細胞応答のインビトロ分析（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉ
ｓ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｂｒｅａｓｔ
ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅ ｐｕｌｓｅｄ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ
ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ））。Ｄｅｌｉｒｅｚｈ ｅｔ ａｌ．、Ａｄｖａｎ
ｃｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１２、３：１２６－１３６を
参照のこと。

【0282】

方法の特定の実施形態では、ＡＰＣはＤＣである。いくつかの実施形態では、ＡＰＣは
マクロファージである。特定の実施形態では、ＡＰＣは動物から単離される。他の実施形
態では、ＡＰＣは、動物由来の単離末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からインビトロで誘導さ
れる。さらに他の実施形態では、ＡＰＣは、動物由来の単離されたプログラム可能な単球
由来細胞（ＰＣＭＯ）からインビトロで誘導される。

【0283】

ＡＰＣ（例えば、ＤＣ）の成熟は、種々の因子（例えば、ＴＮＦ－α）及び／または馴
化培地（例えば、単球馴化培地（ＭＣＭ）、線維芽細胞馴化培地（ＦＣＭ）、ＰＨＡ活性
化Ｔ細胞順化培地（ＴＣＭ）、または線維芽細胞及びＴ細胞馴化培地（ＦＣＭ－ＴＣＭ）
によって誘発され得る。未分画の腫瘍由来抗原、例えば、腫瘍細胞溶解物、腫瘍細胞膜か
ら溶出したペプチド、アポトーシス腫瘍細胞、腫瘍ペプチドパルス化ＤＣ由来エキソソー
ム、腫瘍とＤＣとの融合体、及び腫瘍細胞ＲＮＡを、ＤＣのパルス化に用いてもよい。種
々の実施形態では、腫瘍細胞は、固形腫瘍細胞または血液癌細胞のような任意の種類の腫
瘍細胞であってもよい。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は多発性骨髄腫細胞である。
他の実施形態では、腫瘍細胞はＢ細胞悪性腫瘍細胞である。

【0284】

次いで、パルス化ＤＣは、増殖、細胞毒性、自己腫瘍細胞に対するサイトカイン放出に
おいてＴ細胞応答を誘発し得る。したがって、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞細胞毒性、及びサイト
カイン放出は、文献に開示された周知のアッセイを用いて測定することができる。Ｄｅｌ
ｉｒｅｚｈ ｅｔ ａｌ．、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌ．２０１２、３：１２６－１３６を参照のこと。

【0285】

前述の詳細な説明及び添付の実施例は単なる例示であり、主題の範囲を限定するものと
解釈すべきではないことが理解される。開示された実施形態に対する様々な変更及び改変
は、当業者には明らかであろう。化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成物、処方物、
トランスジェニックマウスの作製方法及び／または本明細書で提供される使用方法に関連
するものを含むが、これらに限定されない、このような変更及び改変は、その趣旨及び範
囲から逸脱することなくなされ得る。本明細書中で参照される米国特許及び刊行物は、参
照として援用される。

【0286】

例えば、１つ以上の試薬（例えば、ＴＡＬＥＮ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦＮ、核
酸プライマーなど）、１つ以上の手順（例えば、トランスフェクション、エレクトロポレ
ーションなど）、または１つ以上のステップ（例えば、本明細書中に提供される様々な方
法におけるステップ（ａ）、ステップ（ｂ）、ステップ（ｃ）、ステップ（ｄ））に関す
る上記で列挙された実施形態の任意の組み合わせはまた、本明細書中に提供される任意の
様々な方法と関係して考慮される。

【0287】

本発明の特定の実施形態は、以下の非限定的な実施例によって例示される。

【実施例0288】

６．実施例
以下の実施例は、他に詳細に記載されている場合を除いて、当業者に周知であり日常的
な標準的な技術を用いて行われる。この実施例は単なる例示であることが意図される。

【0289】

６．１ ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスの作製のための標的化構築物の生成
ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１及びマウスＣＲＢＮアイソフォーム２（ヒトＣＲＢＮア
イソフォーム１に対応する）の最初の２３アミノ酸は同一である。これらの２３個のアミ
ノ酸は、ヒトまたはマウスＣＲＢＮ遺伝子のエキソン１によってコードされる。別のスプ
ライシング機構は、第２３番目のアミノ酸を除去して、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２ま
たはマウスＣＲＢＮアイソフォーム１を生成する（これはそれぞれヒトＣＲＢＮアイソフ
ォーム１またはマウスＣＲＢＮアイソフォーム２よりも１アミノ酸短い）。従って、マウ
スエキソン１／イントロン１／エキソン２スプライシングが維持され得る。ノックインの
戦略は、エキソン２で開始する、ＣＲＢＮをコードするヒトｃＤＮＡを挿入することであ
る。これは、ｃＤＮＡのインビボ発現に重要なイントロンを含むことにより、内因性マウ
スプロモーターからのヒトｃＤＮＡの十分な発現を確実にする助けとなるはずである。ヒ
トＣＲＢＮのｃＤＮＡコード配列の後のポリ（Ａ）配列は、転写産物を終結させ、マウス
遺伝子の任意のさらなるスプライシングまたは発現を破壊する。宿主マウスにおける選択
的スプライシング機構は、トランスジェニックマウスにおいてヒトＣＲＢＮアイソフォー
ム１及びヒトＣＲＢＮアイソフォーム２を生成することができるであろう。エキソン３は
、エキソン１とはフレーム外であり、そのため異常なスプライシングは機能的ＣＲＢＮタ
ンパク質を生じないであろう。

【0290】

図１は、標的化構築物の生成、ＥＳ細胞または胚への標的化構築物の導入、キメラの産
生、及び生殖系列伝達を含む、ヒトＣＲＢＮノックイントランスジェニックマウスの作製
のフローチャートを示す。

【0291】

図２は、マウスゲノム中のヒトＣＲＢＮにおけるノッキングの設計を示す。図２のパー
トＡは、マウスゲノム中のマウスＣＲＢＮ遺伝子の一部（エキソン２及びエキソン３を含
む）を示す。図２のパートＢは、標的化構築物を示しており、これは、ヒトＣＲＢＮアイ
ソフォーム１のｃＤＮＡの一部（コドン２４、グルタミン酸から開始し、終止コドンで終
わる）、その後に組換えポリ（Ａ）配列（例えば、ｂＧＨ ｐＡ）及び２つのｌｏｘＰ部
位が隣接するネオマイシン選択カセット、ならびに５’相同性アーム及び３’相同性アー
ムを含む。パートＡとパートＢとの間の点線は、ヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡ、ｂＧＨ ｐＡ
、ｌｏｘに隣接するネオマイシン選択カセット、ならびに５’相同アーム及び３’相同ア
ームを含む標的化構築物による、マウスゲノムの一部（マウスＣＲＢＮ遺伝子のエキソン
２を含む）の置換を示す。パートＣは、標的化構築物配列がマウスゲノムに安定に組み込
まれている、ヒトＣＲＢＮノックイン後の標的化されたゲノムを示す。パートＤは、ネオ
マイシン選択カセットのＣｒｅ切除後の標的ゲノムを示す。

【0292】

図３Ａ～３Ｃは、ドナーベクターの一例ＣＲＢＮ ＫＩベクターＶ２－ｐＵＣのクロー
ニング戦略を示す。図３Ｃでは、ＣＲＢＮ ＫＩベクターＶ２－ｐＵＣが、（１）ｐＵＣ
５７－Ｓｉｍｐｌｅクローニングベクターの骨格、（２）ＣＲＢＮの断片（コドン２４、
グルタミン酸塩から開始し、停止コドンで終わる）、続いて組換えポリ（Ａ）配列（例え
ば、ｂＧＨｐＡ）ならびにＰＧＫ－ＥＭ７プロモーターによって制御され、２つのｌｏｘ
Ｐ部位が隣接するネオマイシン選択カセットをコードするヒトｃＤＮＡ配列、ならびに（
３）５ｋｂの５’相同アーム、及び２．８ｋｂの３’相同性アームを、それぞれ、（２）
の５’末端及び３’末端に含むことが示される。相同性アームは、マウスＣＲＢＮ遺伝子
のエキソン２に隣接するイントロン配列と一致し、マウスゲノムとの相同組換えを促進す
る。構成要素（２）及び（３）を含むＣＲＢＮ ＫＩベクターＶ２－ｐＵＣの領域は、図
２Ｂに示される標的化構築物に対応する。この標的化構築物の核酸配列は、配列番号８に
明記されている。

【0293】

ＣＲＢＮ ＫＩベクターＶ２－ｐＵＣは、以下のようにして作製した：（１）合成ＤＮ
Ａであって、１．５ｋｂのマウスＣＲＢＮイントロン１及びマウスＣＲＢＮエキソン２の
開始点、続いてコドン２４グルタミンで開始し終止コドンまでのヒトＣＲＢＮアイソフォ
ーム１、ウシ成長ホルモンポリ（Ａ）シグナル、及び１．５ｋｂのマウスＣＲＢＮイント
ロン３を包含する合成ＤＮＡ（図３Ａ）を、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｉｎｃ．（Ｐｉｓｃａ
ｔａｗａｙ、ＮＪ）によって合成し、Ｋｐｎ Ｉ及びＸｈｏ Ｉ制限部位を、イントロン
３の開始に含めて、ネオマイシン選択カセットのクローニングを可能にした；（２）ＣＲ
ＢＮ ＫＩ標的化構築物を、ＥｃｏＲＶ制限部位のプラスミドｐＵＣ５７－Ｓｉｍｐｌｅ
にクローニングして、プラスミドＣＲＢＮ－ｐＵＣを作製した（マップは示さず）；（３
）次に、ＰＧＫプロモーター、ネオマイシン選択カセット、及びＳＶ４０ポリ（Ａ）を含
む１６３７ｂｐのＫｐｎＩ／ＸｈｏＩ断片のＰＢ－ＭＶ１Ｎｅｏ（図３Ｂ）を、ＫｐｎＩ
及びＸｈｏＩ制限部位でＣＲＢＮ－ｐＵＣ中にクローニングして、ドナーベクターＣＲＢ
Ｎ ＫＩ Ｖｅｃｔｏｒ－Ｖ２－ｐＵＣを生成した（図３Ｃ）。次いで、ドナーベクター
ＣＲＢＮ ＫＩ Ｖｅｃｔｏｒ－Ｖ２－ｐＵＣをマウスＥＳ細胞にエレクトロポレーショ
ンした。

【0294】

６．２ ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮの設計及びそれらの活性の試験
３つのＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮを、ネオマイシンカセット挿入部位を標的化して標的
化を増強するように設計した。ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ １は、
ＴＡＴＧＣＧＧＡＣＣＴＴＴＡＴＣＴＡｔｇｇｃｔｇｇａａｔｔｔｃｃｔａＡＧＴＧＣＡ
ＧＧＧＡＧＣＣＡＣＡ（配列番号９）という核酸配列を標的する。
ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ ２は、ＴＧＣＡＧＴＡＴＧＣＧＧＡＣＣＴＴｔａｔｃｔａｔ
ｇｇｃｔｇｇａａｔＴＴＣＣＴＡＡＧＴＧＣＡＧＧＧＡ（配列番号１０）という核酸配列
を標的とする。ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ ３は、ＴＣＴＧＣＣＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴａ
ｃａｇｔａｔｇｔｇｇｔｔｔａＧＴＣＡＴＴＧＡＧＣＡＡＡＴＧＣＡ（配列番号１１）の
核酸配列を標的とする。

【0295】

図４は、Ｃｅｌ－１アッセイを用いた３つのＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮの試薬活性試験
を示す。予想されるバンドサイズは、ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ１及び２では１７０ｂｐ
及び１６０ｂｐであり、ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ３では２００ｂｐ及び１３０ｂｐであ
る。この結果、ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ１が５％の活性を有し、ＸＴＮ（商標）ＴＡＬ
ＥＮ２が９％の活性を有し、ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ ３が３％の活性を有したことが
示される。従って、ＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ ２は最も活性が高く、ドナーベクターＣ
ＲＢＮ ＫＩ Ｖｅｃｔｏｒ－Ｖ２－ｐＵＣとともにマウスＥＳ細胞にエレクトロポレー
ションされた。

【0296】

６．３ マウスＥＳ細胞のエレクトロポレーション及びヒトＣＲＢＮ遺伝子を含むクロ
ーンの同定
Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ ＪＭ８ ＥＳ細胞を、ドナーベクターＣＲＢＮ ＫＩ Ｖｅ
ｃｔｏｒ－Ｖ２－ｐＵＣ及びＸＴＮ（商標）ＴＡＬＥＮ ２を用いてエレクトロポレーシ
ョンした。正確な５’及び３’標的化を検出するために、プライマーを用いた標的化のた
めに２４のＥＳクローンをスクリーニングした。５’及び３’標的を検出するためのＰＣ
Ｒプライマーを表１に列挙する。
表１．５’及び３’標的を検出するためのＰＣＲプライマー

【表1】

【0297】

３つのＥＳクローンを、５’末端及び３’末端の両方で正確な標的化で同定した。２つ
のクローン（Ｄ３及びＥ１）についての結果を図５に示す。ゲルの左半分は、ＥＳクロー
ンＤ３のＰＣＲ産物を示し、ゲルの右半分はＥＳクローンＥ１のＰＣＲ産物を示す。５’
ＰＣＲ産物は、約１９６８ｂｐという予想サイズを有し、３’ＰＣＲ産物は約１９３９ｂ
ｐという予想サイズを有する。

【0298】

ＰＣＲ産物の配列は、クローンＥ１、Ｄ２、及びＤ３について５’及び３’末端を標的
とすることが確認された。例えば、５’標的化のＰＣＲ産物は、標的化アームと、ゲノム
配列との５’末端での、及びヒトＣＲＢＮのｃＤＮＡとの３’末端での接合部を示した。
これらのＥＳクローンを核型決定して、増殖した。

【0299】

６．４ ＥＳ細胞の移植及びキメラの作製
２つのＥＳクローン（Ｄ２及びＥ１）を、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ芽球に注入した。３
．５日齢のマウス胚（胚盤胞）を、クローンＤ２及びＥ１由来のＥＳ細胞の標準的な注入
方法に用いた。次いで、注入された胚盤胞を、偽妊娠雌性マウスに移植した。キメラは、
Ｎｎｔ遺伝子型またはコート色によって生まれ、確認された。クローンＥ１は、最高レベ
ルのキメラ現象をもたらした。これらのキメラは、生殖系列伝達のために繁殖するように
選択した。

【0300】

６．５ ヒトＣＲＢＮ遺伝子の生殖細胞系伝達
ネオマイシン耐性カセットの欠失を達成し、生殖系列伝達を決定するために、クローン
Ｅ１由来のキメラを、Ｃｒｅリコンビナーゼデレター（ｄｅｌｅｔｅｒ）マウス（ＲＯＳ
Ａ２６座から発現されたＣｒｅ）に交配させた。子孫は、ヒトｃＤＮＡ挿入物に特異的な
ＰＣＲプライマーを用いて評価した。３匹の仔（２匹の雌及び１匹の雄）をＰＣＲによっ
て同定し、ヒトｃＤＮＡ－ｂＧＨ ｐＡ、１つのｌｏｘＰ部位を含み、かつネオマイシン
カセットを含まないことを配列で確認した。

【0301】

図６は、３つの生殖系列動物の５’標的化ＰＣＲ確認を示す。レーン１は、分子量マー
カーである。レーン２～４は、クローンＥ１キメラから生成された３つの生殖系列動物由
来のＰＣＲ産物である。レーン２は、ＣＲＢＮ６２３由来のＰＣＲ産物であり；レーン３
は、３由来のＰＣＲ産物であり；レーン４は、ＣＲＢＮ＋Ｃｒｅ４由来のＰＣＲ産物であ
る。レーン５及び６は、それぞれ陰性対照及び陽性対照である。

【0302】

図７は、遺伝子型決定プライマーを用いた３つの生殖系列動物のｈｕ－ｃＤＮＡ－ｐＡ
ＰＣＲ確認を示す。レーン１は、分子量マーカーである。レーン２～４は、クローンＥ
１キメラから生成された３つの生殖系列動物由来のＰＣＲ産物である。レーン２は、ＣＲ
ＢＮ６２３由来のＰＣＲ産物であり；レーン３は、３由来のＰＣＲ産物であり；レーン４
は、ＣＲＢＮ＋Ｃｒｅ４由来のＰＣＲ産物である。レーン５及び６は、それぞれ陰性対照
及び陽性対照である。

【0303】

使用される遺伝子型決定プライマーは、以下のとおりである：フォワードプライマーは
、ＴＧＴＧＴＴＧＣＣＴＴＣＡＡＣＣＡＴＧＴ（配列番号１６）の核酸配列を含むＣＲＢ
Ｎｈｕ－ｃＤＮＡ－Ｆ１である。リバースプライマーは、ＣＡＧＣＡＴＧＣＣＴＧＣＴＡ
ＴＴＧＴＣＴ（配列番号１７）の核酸配列を含むｂＧＨｐＡ－Ｒ１である。

【0304】

６．６ ヒトＣＲＢＮ遺伝子についてホモ接合性のマウスの育種及び同定
ヒトＣＲＢＮ遺伝子の生殖系列伝達を有する上記の２つのヘテロ接合性雌性マウスを、
増殖育種のために使用した。これは、ヒトＣＲＢＮ遺伝子を発現する安定した系統のマウ
スを確保し確立することであった。目標は、ヒトＣＲＢＮ遺伝子とホモ接合マウスのコホ
ートを確立すること、及びＣｒｅリコンビナーゼ対立遺伝子を削除することであった。雌
性マウスを、非Ｃｒｅ Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃマウスと育種してＣｒｅ遺伝子を除去し
、ヘテロ接合性のヒトＣＲＢＮノックインマウスを作製した。ヘテロ接合ヒトＣＲＢＮノ
ックインマウス間の交配によって、ホモ接合ヒトＣＲＢＮノックインマウスを産生した。

【0305】

６．７ ヒトＣＲＢＮ遺伝子についてホモ接合性のマウス及び他の遺伝的背景を有する
マウスの育種
ヒトＣＲＢＮ遺伝子についてホモ接合性のマウスを、他の遺伝的背景のマウス、例えば
ＮＳＧ／ＮＯＧマウス、Ｖｋ＊ｍｙｃ多発性骨髄性モデル、Ｅｕ－ｖ－ａｂｌ／Ｅｕ－ｃ
－Ｍｙｃ（ウイルス接種＋プリスチン）多発性骨髄腫モデル、Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃリンパ腫
モデル、ヒトＩＫＺＦ１／３トランスジェニックマウスなどと育種してもよい。これらの
育種されたマウスは、限定するものではないが、異種移植の分析、抗腫瘍効果、及び免疫
細胞効果を含むさらなる研究に有用である。

【0306】

６．８ 免疫調節化合物の研究におけるヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスの使用
ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスに由来する細胞、細胞株、組織または器官を使
用して、化合物（例えば、サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイド及びセクショ
ン５．４．２で提供される他の化合物などの免疫調節化合物）をインビトロまたはエキソ
ビボで研究してもよい。ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスを使用して、化合物（例
えば、サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイド、及びセクション５．４．２で提
供される他の化合物などの免疫調節化合物）をインビボで研究してもよい。これらの研究
には、限定するものではないが、結合アッセイ（例えば、ＣＲＢＮ結合アッセイ、ＣＡＰ
結合アッセイ）、標的タンパク質分解アッセイ、下流機能アッセイ、バイオマーカーアッ
セイ、プロテオミクス研究、毒性、薬物動態、薬力学、様々な疾患の処置の有効性、投与
レジメン最適化、処置の特異性、併用療法、作用機序などが挙げられる。

【0307】

例えば、ＣＲＢＮ基質（例えば、Ａｉｏｌｏｓ、Ｉｋａｒｏｓ、またはＧＳＰＴ１）の
分解を、ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスから単離した脾臓細胞のエキソビボ化合
物処理によって評価した。野生型（ＷＴ）、ヘテロ接合体（ＨＥＴ）、及びホモ接合性ヒ
トＣＲＢＮノックインマウス（ＨＯＭ）由来の脾臓を収集し、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商
標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、
ＣＡ）を用いて、５ｍＬのＰＢＳ中で解離させた。脾臓ホモジネートを、７０μｍの予備
分離フィルター（＃１３０－０９５－８２３、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用い
て１５ｍＬのコニカルチューブに濾過し、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。デカン
トした後、脾細胞を、１ｍＬのＡＣＫ Ｌｙｓｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｇｉｂｃｏ＃Ａ１
０４９２－０１、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ
、ＭＡ）中に２分間再懸濁して赤血球を溶解した。１０ｍＬの冷ＰＢＳを各コニカルチュ
ーブに添加して溶解を停止させ、脾細胞を再び１２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。デ
カントした後、脾細胞を１ｍＬのＰＢＳに再懸濁し、再び濾過して、各マウス表現型につ
いてプールし、Ｖｉ－Ｃｅｌｌ（商標）ＸＲ細胞カウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌ
ｔｅｒ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を用いてカウントして生存率を判定した。カ
ウント及び生存率の確認の後、プールされた脾細胞を有するチューブを、１２００ｒｐｍ
で５分間遠心分離し、デカントし、濃度５．５×１０^６脾細胞／ｍＬ（脾細胞の数次第で
２０～３０ｍＬ）の１０％ＦＢＳを補充した暖かいＲＰＭＩ １６４０培地に再懸濁した
。

【0308】

１５×１０^６個のＷＴ、ＨＥＴ、またはＨＯＭ脾細胞を、別々の６ウェルプレートのウ
ェルにプレートした。ＤＭＳＯ（最終濃度０．２％）／ＲＰＭＩ １６４０培地で希釈し
た化合物を、１０μＭ～１ｎＭの範囲の濃度でウェルに分注した。０．２％のＤＭＳＯも
陰性対照として各プレートの１つのウェルに分注した。脾細胞を３７℃のインキュベータ
ー内で４～２４時間、化合物で処理した。次いで、化合物で処置した脾細胞を、１５ｍＬ
コニカルチューブに集め、１５００ｒｐｍで６分間遠心分離し、培地を吸引除去し、５ｍ
ＬのＰＢＳで１回洗浄した。洗浄後、脾細胞を再び遠心分離し、ＰＢＳを吸引除去し、脾
細胞ペレットをドライアイス上で急速凍結した。

【0309】

脾細胞ペレットを、ｃＯｍｐｌｅｔｅ ＵＬＴＲＡプロテアーゼ阻害剤の錠剤（＃０５
８９２９２０００１、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、
Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）及びホスファターゼ阻害剤（Ｐｉｅｒｃｅ＃７８４４
２、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を補
充した冷１Ｘ細胞溶解緩衝液（＃９８０３、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）を用いて溶解した。溶解物のタンパク質濃度を、Ｂ
ＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ＃Ａ１０４９２－０１、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆ
ｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を用いて測定し、ウエスタ
ンブロットを実施して、エキソビボ化合物処理から生じる基質分解を評価した。各脾臓溶
解物２０μｇを、４～１２％のＣｒｉｔｅｒｉｏｎ ＸＴ Ｂｉｓ Ｔｒｉｓゲル（Ｂｉ
ｏ－Ｒａｄ＃３４５０１２４、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌ
ｅｓ、ＣＡ）にロードし、１３０Ｖで１．５時間泳動させ、次いでＴｒａｎｓ－Ｂｌｏｔ
Ｔｕｒｂｏ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ）を用いてニトロセルロース膜上に転写した。Ｏｄｙｓｓｅｙ（登録商標）ブロッ
キング緩衝液（＃９２７－４０１００、ＬＩ－ＣＯＲ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｌ
ｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ）で１時間ブロッキングした後、膜を、Ａｉｏｌｏｓ（ポリクローナ
ルヤギ＃ｓｃ－１８６８３、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａ
ｌｌａｓ、ＴＸ）、Ｉｋａｒｏｓ（モノクローナルウサギ、＃１４８５９、Ｃｅｌｌ Ｓ
ｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＧＳＰＴ－１（ポリクローナルウサギ、＃
ａｂ４９８７８、Ａｂｃａｍ ＰＬＣ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄ
ｏｍ）、ＧＡＰＤＨ（モノクローナルマウス、＃ＡＭ４３００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈ
ｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートした。ＰＢ
ＳＴで洗浄した後、膜を、蛍光二次抗体、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０（登録商標）
ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ａ－２１０７６、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈ
ｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）またはＩＲＤｙｅ（登録商標）８００ＣＷヤギ抗マウスＩ
ｇＧ（＃９２６－３２２１０、ＬＩ－ＣＯＲ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて、
室温で１時間プローブした。二次抗体とのインキュベーション後、膜を、ＰＢＳＴ中で再
び洗浄した。Ｏｄｙｓｓｅｙ（登録商標）ＣＬｘ画像化システム（ＬＩ－ＣＯＲ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて膜を走査し、Ｉｍａｇｅ Ｓｔｕｄｉｏ（商標）ソフト
ウェアを用いて定量した。

【0310】

最初のパイロット実験では、化合物Ｂと、１μＭまたは１０μＭで、２４時間エキソビ
ボでインキュベーションした結果、ＨＥＴ及びＨＯＭ脾細胞におけるＡｉｏｌｏｓ（図８
Ａ及び８Ｂ）及びＩｋａｒｏｓ（図９Ａ及び９Ｂ）の有意な分解、ならびにＷＴ脾細胞に
おける最小限の分解が生じた。

【0311】

図８Ａ及び図８Ｂによって、１０μＭの化合物Ｂの処理が、ＨＯＭ脾細胞で８４％の分
解、ＨＥＴ脾細胞で７７％の分解、及びＷＴ脾細胞で２７％の分解をもたらしたこと、な
らびに１μＭの化合物Ｂの処理が、ＨＯＭ脾細胞で８１％の分解、ＨＥＴ脾細胞で７６％
の分解、及びＷＴ脾細胞での２８％の分解が生じたことが示される。

【0312】

図９Ａ及び図９Ｂによって、化合物Ｂでの２４時間のエキソビボ処理後、Ｉｋａｒｏｓ
について分解の同様の傾向が示される。１０μＭの化合物Ｂでは、Ｉｋａｒｏｓの分解は
、ＨＯＭ脾細胞では８２％、ＨＥＴ脾細胞では６８％、そしてＷＴ脾細胞ではわずか２０
％の分解が観察された。同様に、化合物Ｂの１μＭ処理は、ＨＯＭ脾細胞では７６％のＩ
ｋａｒｏｓ分解、ＨＥＴ脾細胞では６０％の分解、及びＷＴ脾細胞では２３％の分解をも
たらした。

【0313】

ＷＴ、ＨＥＴ、及びＨＯＭマウス由来の脾細胞を用いた第２のエキソビボ実験を、化合
物Ｂ濃度の範囲に応じたＡｉｏｌｏｓまたはＩｋａｒｏｓ分解の用量依存性を研究するた
めに行った。これらの用量としては、１、０．１、０．０１、及び０．００１μＭの化合
物Ｂが含まれ、インキュベーション時間は６時間に短縮された。

【0314】

ＨＯＭ脾臓細胞におけるエキソビボ処理後、Ａｉｏｌｏｓの７８％、６６％、５４％、
及び２８％の分解が、それぞれ化合物Ｂの１、０．１、０．０１及び０．００１μＭで観
察された（図１０Ａの右のパネル及び図１０Ｂ）。ＨＥＴ脾細胞では、Ａｉｏｌｏｓの４
１％、３２％、１３％、及び０％の分解が、それぞれ１、０．１、０．０１及び０．００
１μＭの化合物Ｂで観察された（図１０Ａの中央パネル及び図１０Ｂ）。ＷＴ脾臓細胞で
は、この実験では化合物Ｂのいずれの濃度でも、Ａｉｏｌｏｓの分解は観察されなかった
（図１０Ａの左パネル及び図１０Ｂ）。

【0315】

同様の用量依存性応答が、ＨＯＭ及びＨＥＴ脾臓細胞におけるＩｋａｒｏｓ分解につい
て観察された。ＨＯＭ脾臓細胞では、Ｉｋａｒｏｓの５９％、５５％、４１％及び１４％
の分解が、それぞれ１、１．０、０．０１及び０．００１μＭの化合物Ｂで観察された（
図１１Ａの右パネル及び図１１Ｂ）。ＨＥＴ脾臓細胞では、Ｉｋａｒｏｓの４９％、４５
％、８％及び０％の分解が、それぞれ、１、１．０、０．０１及び０．００１μＭの化合
物Ｂで観察された（図１１Ａの中央パネル及び図１１Ｂ）。Ａｉｏｌｏｓ分解について観
察されたものと同様に、いずれの濃度の化合物ＢでもＷＴ脾細胞においてＩｋａｒｏｓの
分解は観察されなかった（図１１Ａの左パネル及び図１１Ｂ）。

【0316】

ＷＴ及びＨＯＭマウス由来の脾臓細胞を用いた追加のエキソビボ実験を行い、化合物Ｃ
及び化合物Ｅを用いたＧＳＰＴ１分解を評価した。化合物Ｂを用いたこれまでのエキソビ
ボ実験と同様に、１０％ＦＢＳを補充した、ＲＰＭＩ １６４０培地中の１５×１０^６個
のＷＴ及びＨＯＭ脾細胞を、６ウェルプレートにプレートした。ＷＴ及びＨＯＭ脾細胞を
、化合物Ｃを用いて１００ｎＭまたは１ｎＭで、化合物Ｅを用いて１０μＭまたは１００
ｎＭで、３７℃で４時間処理した。脾細胞を収集し、１５ｍＬのコニカルチューブに移し
、１５００ｒｐｍで６分間遠心分離し、培地を吸引除去し、５ｍＬのＰＢＳで１回洗浄し
た。洗浄後、脾細胞を再び遠心分離し、ＰＢＳを吸引除去し、脾細胞ペレットをドライア
イス上で急速凍結した。上記の溶解緩衝液を用いて脾細胞を溶解し、タンパク質濃度を測
定した。ＧＳＰＴ１分解を決定するために、２０μｇのタンパク質を用いたウエスタンブ
ロットを行った。

【0317】

ウエスタンブロット分析によって、化合物Ｃによるエキソビボ処理後のＨＯＭ脾細胞に
おけるＧＳＰＴ１の有意な分解及びＷＴ脾細胞におけるＧＳＰＴ１の最小限の分解のみが
示された。ＨＯＭ脾細胞では、ＧＳＰＴ１の６５％及び８９％の分解が、それぞれ、１ｎ
Ｍ及び１００ｎＭの化合物Ｃで観察された（図１２Ａの右パネル及び図１２Ｂ）。対照的
に、ＷＴ脾細胞では、それぞれ、１ｎＭ及び１００ｎＭの化合物ＣでＧＳＰＴ１のわずか
１１％及び７％の分解が観察された（図１２Ａの左パネル及び図１２Ｂ）。

【0318】

同様に、エキソビボで他の化合物である化合物Ｅで処理した脾細胞のウエスタンブロッ
ト分析では、ＨＯＭ脾細胞ではＧＳＰＴ１の有意な分解を示したが、ＷＴ脾細胞では示さ
なかった。１０μＭ及び１００ｎＭの化合物Ｅでは、ＧＳＰＴ１の７４％及び７０％の分
解がそれぞれＨＯＭ脾細胞で観察された（図１３Ａ右パネル及び１３Ｂ）。しかし、ＷＴ
脾臓細胞では、１０μＭ及び１００ｎＭの化合物Ｅでは、それぞれ、ＧＳＰＴ１の６％及
び０％の分解が観察された（図１３Ａ左パネル及び１３Ｂ）。

【0319】

これらの例示的なエキソビボ結果によって、ヒトＣＲＢＮトランスジェニックマウスが
、例えば、種々の疾患（例えば、がん）の処置における、特定の化合物（例えば、免疫調
節化合物、例えばサリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイド、及びセクション５．
４．２で提供される他の化合物）の有効性、特異性、毒性、薬物動態、薬力学、作用機序
を評価すること；これらの化合物の投与レジメンの最適化；ならびに、そのような疾患の
ための他の治療薬との併用療法を研究することにおいて用いられ得ることが示される。
＊＊＊＊＊

【0320】

前述から、特定の実施形態が例示の目的のために本明細書に記載されているが、本明細
書で提供されるものの趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な改変がなされ得ることが
理解される。上記で引用された全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み
込まれる。

【0321】

７．配列表
本明細書は、コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表のコピーとともに提出されてい
る。２０１７年１月１２日に作成され、サイズが３１，８９９バイトである１２８２７－
９７４－２２８＿ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔと名付けられたＣＲＦは、配列表の紙のコピー
と同一であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【配列表】

2022078072000001.app

【手続補正書】

【提出日】2022-03-11

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

トランスジェニックマウスであって、そのゲノムが、ヒトセレブロン(CRBN)またはその機能性断片をコードする核酸を含む、前記トランスジェニックマウスにおいて、化合物の投与量及び／または投与スケジュールを最適化するための方法であって、前記機能性断片は、天然のヒトCRBNの、E3ユビキチン-リガーゼ複合体を形成する能力を示し、かつ、標的タンパク質のユビキチン化及びその後のプロテアソーム分解を媒介し、前記マウスは、前記ヒトCRBNまたはその機能性断片を発現し、かつ、内因性マウスCRBNを発現せず、前記方法は、
(a)前記化合物を前記トランスジェニックマウスに投与するステップ、
(b)前記トランスジェニックマウスから試料を得るステップ、
(c)前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定するステップ、及び
(d)前記バイオマーカーのレベルに基づいて前記化合物の投与量及び／または投与スケジュールを調節するステップ
を含み、前記バイオマーカーは、CRBN関連タンパク質(CAP)である、前記方法。

【請求項2】

(i)前記バイオマーカーのレベルが前記バイオマーカーのベースレベルよりも高い場合、または
(ii)前記バイオマーカーのレベルが前記バイオマーカーのベースレベルよりも低い場合、
前記化合物の投与量及び／または投与スケジュールが調節される、請求項l記載の方法。

【請求項3】

トランスジェニックマウスであって、そのゲノムが、ヒトCRBNまたはその機能性断片をコードする核酸を含む、前記トランスジェニックマウスにおける化合物の効果を評価するための方法であって、前記機能性断片は、天然のヒトCRBNの、E3ユビキチン-リガーゼ複合体を形成する能力を示し、かつ、標的タンパク質のユビキチン化及びその後のプロテアソーム分解を媒介し、前記マウスは、前記ヒトCRBNまたはその機能性断片を発現し、かつ、内因性マウスCRBNを発現せず、前記方法は、
(a)前記化合物を前記トランスジェニックマウスに投与するステップ、
(b)前記トランスジェニックマウスから試料を得るステップ、
(c)前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定するステップ、及び
(d)前記バイオマーカーのレベルを前記バイオマーカーのベースレベルと比較するステップ
を含み、前記バイオマーカーは、CRBN関連タンパク質(CAP)であり、かつ、前記化合物の効果は、抗原特異的T細胞殺傷に対する効果である、前記方法。

【請求項4】

前記バイオマーカーのベースレベルが、
(a)化合物が前記トランスジェニックマウスに投与されていない場合の、または
(b)前記トランスジェニックマウスに対照化合物を投与する場合の
前記バイオマーカーのレベルである、請求項3記載の方法。

【請求項5】

トランスジェニックマウスであって、そのゲノムが、ヒトセレブロン(CRBN)またはその機能性断片をコードする核酸を含む、前記トランスジェニックマウスにおける化合物の組み合わせの効果を評価するための方法であって、前記機能性断片は、天然のヒトCRBNの、E3ユビキチン-リガーゼ複合体を形成する能力を示し、かつ、標的タンパク質のユビキチン化及びその後のプロテアソーム分解を媒介し、前記マウスは、前記ヒトCRBNまたはその機能性断片を発現し、かつ、内因性マウスCRBNを発現せず、前記方法は、
(a)前記トランスジェニックマウスに第1の化合物及び第2の化合物を投与するステップ、
(b)前記トランスジェニックマウスから試料を得るステップ、
(c)前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定するステップ、及び
(d)前記バイオマーカーのレベルを前記バイオマーカーのベースレベルと比較するステップ
を含み、前記バイオマーカーは、CRBN関連タンパク質(CAP)であり、かつ、前記化合物の組み合わせの効果は、抗原特異的T細胞殺傷に対する効果である、前記方法。

【請求項6】

前記バイオマーカーのベースレベルが、
(a)化合物が前記トランスジェニックマウスに投与されていない場合；
(b)前記トランスジェニックマウスに前記第1の化合物のみを投与する場合；
(c)前記トランスジェニックマウスに前記第2の化合物のみを投与する場合；
(d)対照化合物を前記トランスジェニックマウスに投与する場合；
(e)前記第1の化合物と別の化合物との組み合わせを前記トランスジェニックマウスに投与する場合；
(f)前記トランスジェニックマウスに前記第2の化合物と別の化合物との組み合わせを投与する場合；または
(g)2種以上の他の化合物の組み合わせを前記トランスジェニックマウスに投与する場合の前記バイオマーカーのレベルである、請求項5記載の方法。

【請求項7】

前記化合物が、同時または連続してのいずれかで投与される、請求項5または6記載の方法。

【請求項8】

前記化合物、前記第1の化合物及び／または前記第2の化合物が:
(a)免疫調節化合物（好ましくは、前記免疫調節化合物は、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドからなる群から選択される）;
(b)パターン認識受容体(PRR)アゴニスト（好ましくは、前記PRRアゴニストは、TLR3アゴニスト、TLR7アゴニスト、TLR8アゴニスト、TLR9アゴニスト、RIG-Iアゴニスト、MDA5アゴニスト、及びAIM2アゴニストからなる群から選択される）;
(c)抗体（好ましくは、前記抗体は、PD-I抗体、PD-LI抗体、PD-L2抗体、CTLA-4抗体、CD38抗体、及びSLAMF7抗体からなる群から選択されるか、または、前記抗体は、ニボルマブ(すなわち、BMS-936558、MDX-1106、ONO-4538)、MK-3475(すなわち、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ)、ピジリズマブ(すなわち、CT-OI1)、MEDI-0680(すなわち、AMP-514)、PDR-OOI、デュルバルマブ(すなわち、MEDI-4736)、BMS-936559(すなわち、MDX-1105)、アベルマブ(すなわち、MSB00107189)、アテゾリズマブ(すなわち、MPDL-3280A)、イピリムマブ、ダラツムマブ、及びエロツズマブからなる群から選択される）;または
(d)分子模倣物（好ましくは、前記分子模倣物は、アザシチジン、ロミデプシン、ATRA、シクロホスファミド、及びセレブレックス＠からなる群から選択される）である、請求項1～7のいずれか1項記載の方法。

【請求項9】

前記化合物の組み合わせが:
(a)デキサメタゾン及びCRBN E3ユビキチンリガーゼ調節化合物(CMC);または
(b)デキサメタゾン及び前記免疫調節化合物（好ましくは、前記免疫調節化合物は、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドからなる群から選択される）を含む、請求項5～8のいずれか1項記載の方法。

【請求項10】

ステップ(a)が、前記トランスジェニックマウスに第3の化合物を投与することをさらに含む、請求項5記載の方法。

【請求項11】

(a)前記第1の化合物がデキサメタゾンであり;
(b)前記第2の化合物が、前記CMCまたは前記免疫調節化合物であり（好ましくは、前記免疫調節化合物は、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドからなる群から選択される）;かつ／または
(c)前記第3の化合物が、イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、ACY-241、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン、及びニボルマブからなる群から選択される、請求項5～10のいずれか1項記載の方法。

【請求項12】

前記バイオマーカーが、eRF3a、eRF3b、eRF3c、IKZF1、IKZF3、CK1a、PABP1、eRF1、BIP、eEF1α、PERK、GCN2、eIF2a、ATF4、ATF3、DDIT3、PPP1R15A、TNFRSF10B、GADD45A、TNFRSF1A、TNFRSF1B、FAS、FADD、IRE1、XBP1、SEC24D、DNAJB9、EDEM1、EDEM2、HYOU1、ATF6、HSPA5、カスパーゼ8、BID、カスパーゼ9、カスパーゼ7、カスパーゼ3、PARP、Mcl-1、BAD、CDKN1A、Myc、IRF4、IRF7、IFIT1、IFIT3、RIG-I、MDA-5、TBK1、IKKe、ZFP91、ZNF198、MVP、Parp4、Ron、PDE6D、TLR3、STAT1、STAT2、STAT3、IFNa、IFNb、OAS1、OAS2、OAS3、IFIT2、ISG15、ISG20、IFI21、IFI35、IFI6、IFITM3、IFITM2WIZ、GBP2、GBP4、SELL、SNX20、KLF13、GBP1、MARCKS、SLAMF1、またはSASH15からなる群から選択される、請求項1～11のいずれか記載の方法。

【請求項13】

CRBNまたはその機能性断片をコードする前記核酸が:
(a)全長ヒトCRBNタンパク質をコードし、配列番号5または配列番号6を含むか;
(b)マウス-ヒトキメラCRBN遺伝子を含むか;
(c)ヒトCRBNアイソフォームIのコドン24のグルタミン酸で開始し、ヒトCRBNアイソフォームIの最終コドンで終わるポリペプチドを含む、ヒトCRBNタンパク質の断片をコードするか;
(d)ヒトCRBNアイソフォーム2のコドン23のグルタミン酸で開始し、ヒトCRBNアイソフォーム2の最終コドンで終わるポリペプチドを含む、ヒトCRBNタンパク質の断片をコードするか;または
(e)ヒトCBRNタンパク質の断片をコードし、配列番号7を含む、請求項1～12のいずれか1項記載の方法。

【請求項14】

前記ヒトCRBNまたはその機能性断片の発現が、相同なマウスプロモーターによって制御される、請求項1～13のいずれか1項記載の方法。

【請求項15】

前記核酸が、染色体に安定に組み込まれている、請求項1～14のいずれか1項記載の方法。

【手続補正書】

【提出日】2022-03-11

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０３２１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0321】

７．配列表
本明細書は、コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表のコピーとともに提出されてい
る。２０１７年１月１２日に作成され、サイズが３１，８９９バイトである１２８２７－
９７４－２２８＿ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔと名付けられたＣＲＦは、配列表の紙のコピー
と同一であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
トランスジェニックマウスであって、そのゲノムが、ヒトセレブロン（ＣＲＢＮ）また
はその断片をコードする核酸を含み、ここで内因性マウスＣＲＢＮが、前記トランスジェ
ニックマウスで発現されない、前記トランスジェニックマウス。
（構成２）
前記核酸が全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする、構成１に記載のトランスジェニ
ックマウス。
（構成３）
全長ヒトＣＲＢＮタンパク質をコードする前記核酸が、配列番号５または配列番号６を
含む、構成２に記載のトランスジェニックマウス。
（構成４）
前記核酸が、マウス－ヒトキメラＣＲＢＮ遺伝子を含む、構成１に記載のトランスジェ
ニックマウス。
（構成５）
前記核酸が、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム１のコドン２４のグルタミン酸で開始し、ヒ
トＣＲＢＮアイソフォーム１の最終コドンで終わるポリペプチドを含む、ヒトＣＲＢＮタ
ンパク質の断片をコードする、構成１または４に記載のトランスジェニックマウス。
（構成６）
前記核酸が、ヒトＣＲＢＮアイソフォーム２のコドン２３のグルタミン酸で開始し、ヒ
トＣＲＢＮアイソフォーム２の最終コドンで終わるポリペプチドを含む、ヒトＣＲＢＮタ
ンパク質の断片をコードする、構成１または４に記載のトランスジェニックマウス。
（構成７）
ヒトＣＲＢＮの断片をコードする前記核酸が配列番号７を含む、構成１、４、５または
６のいずれか１項に記載のトランスジェニックマウス。
（構成８）
ヒトＣＲＢＮの発現が、相同なマウスプロモーターによって制御される、構成１～７の
いずれか１項に記載のトランスジェニックマウス。
（構成９）
前記核酸が、染色体に安定に組み込まれている、構成１～８のいずれか１項に記載のト
ランスジェニックマウス。
（構成１０）
ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、構成１～９のいずれか１項
に記載のトランスジェニックマウスから得られた単離された細胞。
（構成１１）
ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、構成１～９のいずれか１項
に記載のトランスジェニックマウスに由来する形質転換細胞株。
（構成１２）
ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、構成１～９のいずれか１項
に記載のトランスジェニックマウスから得られた単離された組織。
（構成１３）
ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を含む、構成１～９のいずれか１項
に記載のトランスジェニックマウスから得られた単離器官。
（構成１４）
ヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを作製する方法であって、
（ａ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸を含むポリヌクレオチド構築物をマ
ウス卵、胚または胚性幹（ＥＳ）細胞に導入すること；及び
（ｂ）ヒトＣＲＢＮまたはその断片をコードする核酸配列を有するマウス卵、胚またはＥ
Ｓ細胞を雌性マウスに移入することを包含する、前記方法。
（構成１５）
前記核酸が、構成２～７のいずれか１項に記載のものである、構成１４に記載の方法。
（構成１６）
前記ポリヌクレオチド構築物が、配列番号８の核酸配列を含む、構成１４または１５に
記載の方法。
（構成１７）
雌性マウスを育種すること、ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫を選択するこ
とをさらに包含する、構成１４～１６のいずれか１項に記載の方法。
（構成１８）
ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現する子孫と遺伝的背景のマウスとを育種することを
さらに包含する、構成１７に記載の方法。
（構成１９）
前記遺伝的背景のマウスが、ＮＳＧ／ＮＯＧマウスモデル、Ｖｋ＊ｍｙｃ多発性骨髄腫
マウスモデル、Ｅｕ－ｖ－ａｂｌ／Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデル、Ｅｕ－
ｃ－Ｍｙｃリンパ腫マウスモデル、ヒトＩＫＺＦ１トランスジェニックマウスモデル、及
びヒトＩＫＺＦ３トランスジェニックマウスモデルからなる群より選択される、構成１８
に記載の方法。
（構成２０）
遺伝的背景においてヒトＣＲＢＮを発現するトランスジェニックマウスを作製する方法
であって、構成１～９のいずれか１項に記載のトランスジェニックマウスと前記遺伝的背
景のマウスとを育種することを包含する、前記方法。
（構成２１）
前記遺伝的背景のマウスが、ＮＳＧ／ＮＯＧマウスモデル、Ｖｋ＊ｍｙｃ多発性骨髄腫
マウスモデル、Ｅｕ－ｖ－ａｂｌ／Ｅｕ－ｃ－Ｍｙｃ多発性骨髄腫マウスモデル、Ｅｕ－
ｃ－Ｍｙｃリンパ腫マウスモデル、ヒトＩＫＺＦ１トランスジェニックマウスモデル、及
びヒトＩＫＺＦ３トランスジェニックマウスモデルからなる群より選択される、構成２０
に記載の方法。
（構成２２）
構成１４～２１のいずれか１項に記載の方法によって作製されたトランスジェニックマ
ウス。
（構成２３）
ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスにおいて、化合物の
投与量及び／またはスケジュールを最適化する方法であって、
（ａ）前記化合物を前記トランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）前記トランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；ならびに
（ｄ）前記バイオマーカーのレベルに基づいて前記化合物の投与量及び／またはスケジュ
ールを調節すること；を包含し、
ここで、前記バイオマーカーはＣＲＢＮ関連タンパク質（ＣＡＰ）である、前記方法。
（構成２４）
前記トランスジェニックマウスが、構成１～９または２２のいずれか１項に記載のトラ
ンスジェニックマウスである、構成２３に記載の方法。
（構成２５）
前記バイオマーカーのレベルが前記バイオマーカーのベースレベルよりも高い場合、前
記化合物の投与量及び／またはスケジュールが調整される、構成２３または２４に記載の
方法。
（構成２６）
前記バイオマーカーのレベルが前記バイオマーカーのベースレベルより低い場合、前記
化合物の投与量及び／またはスケジュールが調整される、構成２３または２４に記載の方
法。
（構成２７）
前記バイオマーカーが、ｅＲＦ３ａ、ｅＲＦ３ｂ、ｅＲＦ３ｃ、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ
３、ＣＫ１ａ、ＰＡＢＰ１、ｅＲＦ１、ＢＩＰ、ｅＥＦ１α、ＰＥＲＫ、ＧＣＮ２、ｅＩ
Ｆ２ａ、ＡＴＦ４、ＡＴＦ３、ＤＤＩＴ３、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、Ｇ
ＡＤＤ４５Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＦＡＳ、ＦＡＤＤ、ＩＲＥ１、Ｘ
ＢＰ１、ＳＥＣ２４Ｄ、ＤＮＡＪＢ９、ＥＤＥＭ１、ＥＤＥＭ２、ＨＹＯＵ１、ＡＴＦ６
、ＨＳＰＡ５、カスパーゼ８、ＢＩＤ、カスパーゼ９、カスパーゼ７、カスパーゼ３、Ｐ
ＡＲＰ、Ｍｃｌ－１、ＢＡＤ、ＣＤＫＮ１Ａ、Ｍｙｃ、ＩＲＦ４、ＩＲＦ７、ＩＦＩＴ１
、ＩＦＩＴ３、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ－５、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＺＦＰ９１、ＺＮＦ１９
８、ＭＶＰ、Ｐａｒｐ４、Ｒｏｎ、ＰＤＥ６Ｄ、ＴＬＲ３、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、Ｓ
ＴＡＴ３、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＯＡＳ１、ＯＡＳ２、ＯＡＳ３、ＩＦＩＴ２、ＩＳＧ１
５、ＩＳＧ２０、、ＩＦＩ２１、ＩＦＩ３５、ＩＦＩ６、ＩＦＩＴＭ３、ＩＦＩＴＭ２Ｗ
ＩＺ、ＧＢＰ２、ＧＢＰ４、ＳＥＬＬ、ＳＮＸ２０、ＫＬＦ１３、ＧＢＰ１、ＭＡＲＣＫ
Ｓ、ＳＬＡＭＦ１、及びＳＡＳＨ１からなる群より選択される、構成２３～２６のいずれ
か１項に記載の方法。
（構成２８）
ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスにおける化合物の効
果を評価するための方法であって、
（ａ）前記化合物を前記トランスジェニックマウスに投与すること；
（ｂ）前記トランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；及び
（ｄ）前記バイオマーカーのレベルをバイオマーカーのベースレベルと比較すること；を
包含し、前記バイオマーカーはＣＡＰである、前記方法。
（構成２９）
前記トランスジェニックマウスが、構成１～９または２２のいずれか１項に記載のトラ
ンスジェニックマウスである、構成２８に記載の方法。
（構成３０）
前記バイオマーカーのベースレベルが、
（ｉ）化合物が前記トランスジェニックマウスに投与されていない場合；または（ｉｉ）
前記トランスジェニックマウスに対照化合物を投与する場合の前記バイオマーカーのレベ
ルである、構成２８または２９に記載の方法。
（構成３１）
ヒトＣＲＢＮまたはその断片を発現するトランスジェニックマウスにおける化合物の組
み合せの効果を評価するための方法であって：
（ａ）前記トランスジェニックマウスに第１の化合物及び第２の化合物を投与すること；
（ｂ）前記トランスジェニックマウスから試料を得ること；
（ｃ）前記試料中のバイオマーカーのレベルを測定すること；ならびに
（ｄ）前記バイオマーカーのレベルを前記バイオマーカーのベースレベルと比較すること
；
を包含し、ここで前記バイオマーカーはＣＡＰである、前記方法。
（構成３２）
前記トランスジェニックマウスが、構成１～９または２２のいずれか１項に記載のトラ
ンスジェニックマウスである、構成３１に記載の方法。
（構成３３）
前記バイオマーカーのベースレベルが、（ｉ）化合物が前記トランスジェニックマウス
に投与されていない場合；（ｉｉ）前記トランスジェニックマウスに前記第１の化合物の
みを投与する場合；（ｉｉｉ）前記トランスジェニックマウスに前記第２の化合物のみを
投与する場合；（ｉｖ）対照化合物を前記トランスジェニックマウスに投与する場合；（
ｖ）前記第１の化合物と別の化合物との組み合せを前記トランスジェニックマウスに投与
する場合；（ｖｉ）前記トランスジェニックマウスに前記第２の化合物と別の化合物との
組み合わせを投与する場合；または（ｖｉｉ）２種以上の他の化合物の組み合わせを前記
トランスジェニックマウスに投与する場合の前記バイオマーカーのレベルである、構成３
１または３２に記載の方法。
（構成３４）
前記化合物が、同時または連続してのいずれかで投与される、構成３１～３３のいずれ
か１項に記載の方法。
（構成３５）
前記化合物が免疫調節化合物である、構成２３～３４のいずれか１項に記載の方法。
（構成３６）
前記免疫調節化合物が、サリドマイド、レナリドマイド及びポマリドマイドからなる群
より選択される、構成３５に記載の方法。
（構成３７）
前記免疫調節化合物がサリドマイドである、構成３６に記載の方法。
（構成３８）
前記免疫調節化合物がレナリドマイドである、構成３６に記載の方法。
（構成３９）
前記免疫調節化合物がポマリドマイドである、構成３６に記載の方法。
（構成４０）
前記化合物が、パターン認識受容体（ＰＲＲ）アゴニストである、構成２３～３４のい
ずれか１項に記載の方法。
（構成４１）
前記ＰＲＲアゴニストが、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニ
スト、ＴＬＲ９アゴニスト、ＲＩＧ－１アゴニスト、ＭＤＡ５アゴニスト及びＡＩＭ２ア
ゴニストからなる群より選択される、構成４０に記載の方法。
（構成４２）
前記ＰＲＲアゴニストがＴＬＲ３アゴニストである、構成４１に記載の方法。
（構成４３）
前記ＰＲＲアゴニストがＴＬＲ７アゴニストである、構成４１に記載の方法。
（構成４４）
前記ＰＲＲアゴニストがＴＬＲ８アゴニストである、構成４１に記載の方法。
（構成４５）
前記ＰＲＲアゴニストがＴＬＲ９アゴニストである、構成４１に記載の方法。
（構成４６）
前記ＰＲＲアゴニストがＲＩＧ－１アゴニストである、構成４１に記載の方法。
（構成４７）
前記ＰＲＲアゴニストがＭＤＡ５アゴニストである、構成４１に記載の方法。
（構成４８）
前記ＰＲＲアゴニストがＡＩＭ２アゴニストである、構成４１に記載の方法。
（構成４９）
前記化合物が抗体である、構成２３～３４のいずれか１項に記載の方法。
（構成５０）
前記抗体が、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、ＰＤ－Ｌ２抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、Ｃ
Ｄ３８抗体、及びＳＬＡＭＦ７抗体からなる群より選択される、構成４９に記載の方法。
（構成５１）
前記抗体がＰＤ－１抗体である、構成５０に記載の方法。
（構成５２）
前記抗体がＰＤ－Ｌ１抗体である、構成５０に記載の方法。
（構成５３）
前記抗体がＰＤ－Ｌ２抗体である、構成５０に記載の方法。
（構成５４）
前記抗体がＣＴＬＡ－４抗体である、構成５０に記載の方法。
（構成５５）
前記抗体がＣＤ３８抗体である、構成５０に記載の方法。
（構成５６）
前記抗体がＳＬＡＭＦ７抗体である、構成５０に記載の方法。
（構成５７）
前記抗体が、ニボルマブ（すなわち、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮ
Ｏ－４５３８）、ＭＫ－３４７５（すなわち、ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ）、
ピジリズマブ（すなわち、ＣＴ－０１１）、ＭＥＤＩ－０６８０（すなわち、ＡＭＰ－５
１４）、ＰＤＲ－００１、デュルバルマブ（すなわち、ＭＥＤＩ－４７３６）、ＢＭＳ－
９３６５５９（すなわち、ＭＤＸ－１１０５）、アベルマブ（すなわち、ＭＳＢ００１０
７１８Ｃ）、アテゾリズマブ（すなわち、ＭＰＤＬ－３２８０Ａ）、イピリムマブ、ダラ
ツムマブ、及びエロツズマブからなる群より選択される、構成４９に記載の方法。
（構成５８）
前記抗体がニボルルマブである、構成５７に記載の方法。
（構成５９）
前記抗体がデュルバルマブである、構成５７に記載の方法。
（構成６０）
前記抗体がイピリムマブである、構成５７に記載の方法。
（構成６１）
前記抗体がダラツムマブである、構成５７に記載の方法。
（構成６２）
前記抗体がエロツズマブである、構成５７に記載の方法。
（構成６３）
前記化合物が分子模倣物である、構成２３～３４のいずれか１項に記載の方法。
（構成６４）
前記分子模倣物が、アザシチジン、ロミデプシン、ＡＴＲＡ、シクロホスファミド、及
びセレブレックス（登録商標）からなる群より選択される、構成６３に記載の方法。
（構成６５）
前記分子模倣物がアザシチジンである、構成６４に記載の方法。
（構成６６）
分子模倣物がロミデプシンである、構成６４に記載の方法。
（構成６７）
前記分子模倣物がＡＴＲＡである、構成６４に記載の方法。
（構成６８）
前記分子模倣物がシクロホスファミドである、構成６４に記載の方法。
（構成６９）
前記分子模倣物がＣｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）である、構成６４に記載の方法。
（構成７０）
ステップ（ａ）が、前記トランスジェニックマウスに第３の化合物を投与することをさ
らに含む、構成３１または３２に記載の方法。
（構成７１）
前記第１の化合物がデキサメタゾンである、構成３１、３２、または７０のいずれか１
項に記載の方法。
（構成７２）
前記第２の化合物が、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ調節化合物（ＣＭＣ）または
免疫調節化合物である、構成３１、３２、７０、または７１のいずれか１項に記載の方法
。
（構成７３）
前記免疫調節化合物が、サリドマイド、レナリドマイド及びポマリドマイドからなる群
より選択される、構成７２に記載の方法。
（構成７４）
前記第３の化合物が、イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ
、アザシチジン、ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン
及びニボルマブからなる群より選択される、構成７０～７３のいずれか１項に記載の方法
。
（構成７５）
前記化合物の組み合わせが、デキサメタゾン及びＣＭＣを含む、構成３１または３２に
記載の方法。
（構成７６）
前記化合物の組み合わせが、デキサメタゾン及び免疫調節化合物を含む、構成３１また
は３２に記載の方法。
（構成７７）
前記免疫調節化合物が、サリドマイド、レナリドマイド及びポマリドマイドからなる群
より選択される、構成７６に記載の方法。
（構成７８）
前記化合物の組み合わせが、
（ａ）デキサメタゾン；
（ｂ）ＣＭＣ；ならびに
（ｃ）イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、
ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブか
らなる群より選択される化合物、を含む、構成７０に記載の方法。
（構成７９）
前記化合物の組み合わせが、
（ａ）デキサメタゾン；
（ｂ）免疫調節化合物；ならびに
（ｃ）イキサゾミブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、ダラツムマブ、アザシチジン、
ＡＣＹ－２４１、シクロホスファミド、デュルバルマブ、アブラキサン及びニボルマブか
らなる群より選択される化合物を含む、構成７０に記載の方法。
（構成８０）
前記免疫調節化合物が、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドからなる
群より選択される、構成７９に記載の方法。
（構成８１）
化合物または化合物の組み合わせの効果が、抗原特異的Ｔ細胞殺傷に対する効果である
、構成２８～８０のいずれか１項に記載の方法。

【外国語明細書】