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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022078218
(43)【公開日】2022-05-24
(54)【発明の名称】甲状腺ホルモンアナログ及びその多形体の合成方法
(51)【国際特許分類】
C07D 237/16 20060101AFI20220517BHJP
A61K 31/53 20060101ALI20220517BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20220517BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20220517BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220517BHJP
A61P 5/14 20060101ALI20220517BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20220517BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220517BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20220517BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220517BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220517BHJP
A61P 9/06 20060101ALI20220517BHJP
A61P 13/02 20060101ALI20220517BHJP
A61P 25/14 20060101ALI20220517BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220517BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20220517BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20220517BHJP
A61P 27/16 20060101ALI20220517BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220517BHJP
C07D 405/12 20060101ALI20220517BHJP
C07K 14/72 20060101ALN20220517BHJP
【ＦＩ】
C07D237/16
A61K31/53 ZNA
A61P1/16
A61P3/06
A61P29/00
A61P5/14
A61P3/04
A61P3/10
A61P19/08
A61P9/10 101
A61P9/00
A61P9/06
A61P13/02
A61P25/14
A61P35/00
A61P25/28
A61P25/18
A61P27/16
A61P25/00
C07D405/12 CSP
C07K14/72
【審査請求】有
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022034154
(22)【出願日】2022-03-07
(62)【分割の表示】P 2020020343の分割
【原出願日】2013-09-17
(31)【優先権主張番号】61/790,432
(32)【優先日】2013-03-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】61/702,137
(32)【優先日】2012-09-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(71)【出願人】
【識別番号】512190723
【氏名又は名称】マドリガル・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド
【氏名又は名称原語表記】ＭＡＤＲＩＧＡＬ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，ＩＮＣ．
(71)【出願人】
【識別番号】507196446
【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｌｔｄ．
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】特許業務法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ディー・キース・ヘスター
(72)【発明者】
【氏名】ロバート・ジェイ・ダギッド
(72)【発明者】
【氏名】マーサ・ケリー
(72)【発明者】
【氏名】アンナ・シャスノフ
(72)【発明者】
【氏名】ガン・ドン
(72)【発明者】
【氏名】エドウィン・エル・クロウ
(72)【発明者】
【氏名】レベッカ・タウブ
(72)【発明者】
【氏名】チャールズ・エイチ・レイノルズ
(72)【発明者】
【氏名】ドク・スン・チェ
(72)【発明者】
【氏名】リエンホー・シュウ
(72)【発明者】
【氏名】ピン・ワン
(57)【要約】 （修正有）
【課題】甲状腺ホルモンアナログとしてのピリダジノン化合物及びそのプロドラッグの合成方法を提供する。
【解決手段】２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）の形態Ｉの結晶の製造方法であって、溶媒と、化合物Ａを含有する試料とを含む混合物を第１の温度に加熱する工程；及び前記混合物を前記第１の温度よりも低い第２の温度まで冷却し、前記形態Ｉの結晶を得る工程を含み、前記溶媒がエタノール、イソプロパノール又はその組合せである方法を提供する。
【選択図】図１
【解決手段】２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）の形態Ｉの結晶の製造方法であって、溶媒と、化合物Ａを含有する試料とを含む混合物を第１の温度に加熱する工程；及び前記混合物を前記第１の温度よりも低い第２の温度まで冷却し、前記形態Ｉの結晶を得る工程を含み、前記溶媒がエタノール、イソプロパノール又はその組合せである方法を提供する。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）Ｒ１ＭｇＸ又はＲ１Ｌｉを式（Ｉ）：
の化合物と接触させ、式（ＩＩ）：
の化合物を形成する工程（上記各式中、Ｒ１はイソプロピル又はイソプロペニルであり、Ｘはハロであり、Ｒ２はＨ又はアミン保護基である。）と；
（ｂ）Ｒ１がイソプロペニルである場合には塩基の存在下、又はＲ１がイソプロピルである場合には酸化剤の存在下で式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）：
の化合物に変換する工程を含む合成方法。
【化1】
【化2】
（ｂ）Ｒ１がイソプロペニルである場合には塩基の存在下、又はＲ１がイソプロピルである場合には酸化剤の存在下で式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）：
【化3】
【請求項2】
（ｃ）式（ＩＩＩ）の化合物のアミン保護基Ｒ２が、存在する場合にはこれを除去し、６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを形成する工程を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
Ｒ１をイソプロペニルとし、及びＸをＢｒとしてＲ１ＭｇＸを式（Ｉ）の化合物と接触させることにより工程（ａ）を実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
ＴＨＦと式（Ｉ）の化合物の体積対重量比が、７～１５となるＴＨＦ中で工程（ａ）を実施する、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
ルイス酸の存在下で工程（ａ）を実施する、請求項３に記載の方法。
【請求項6】
前記ルイス酸が、ハロゲン化リチウムである、請求項３に記載の方法。
【請求項7】
工程（ｂ）における前記塩基が、金属水酸化物である、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
前記金属水酸化物が、水酸化カリウムである、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
Ｒ１をイソプロピルとし、及びＸをＣｌとしてＲ１ＭｇＸを式（Ｉ）の化合物と接触させることにより工程（ａ）を実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項10】
ＴＨＦと式（Ｉ）の化合物の体積対重量比が、７～３０となるＴＨＦ中で工程（ａ）を実施する、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
工程（ｂ）における前記酸化剤が臭素であり、酸の存在下で工程（ｂ）を実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項12】
Ｒ２が、アセチル又はベンゾイルである、請求項１に記載の方法。
【請求項13】
Ｒ２が、ベンゾイルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
３，６－ジクロロピリダジンを２，６－ジクロロ－４－アミノフェノールと接触させて３，５－ジクロロ－４－（（６－クロロピリダジン－３－イル）オキシ）アニリンを形成し、３，５－ジクロロ－４－（（６－クロロピリダジン－３－イル）オキシ）アニリンを加水分解し、加水分解の前又は後に３，５－ジクロロ－４－（（６－クロロピリダジン－３－イル）オキシ）アニリンのアミン基を保護して式（Ｉ）の化合物を形成することにより、式（Ｉ）の化合物を提供する工程を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項15】
工程（ａ）の前に式（Ｉ）の化合物を８０～１００℃の温度の酸性溶液中で精製する工程を更に含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
３，６－ジクロロピリダジンを２，６－ジクロロ－４－アミノフェノールと接触させる工程を極性非プロトン性溶媒中で塩基の存在下に６０～１２０℃の反応温度にて実施する、請求項１４に記載の方法。
【請求項17】
前記極性非プロトン性溶媒が、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）であり、前記塩基がＣｓ２ＣＯ３であり、前記反応温度が約６５℃である、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
更に、（ｄ）６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを式（ＩＶ）：
［式中、
Ｒ３はＨ又はＣＨ２Ｒａであり、前記式中、Ｒａはヒドロキシル基、Ｏ結合型アミノ酸、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２又は－ＯＣ（Ｏ）－Ｒｂであり、Ｒｂは低級アルキル基、アルコキシ基、アルキル酸、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ２）ｎ－ヘテロアリール基であり、及びｎは０又は１であり；
Ｒ４はＨであり；並びに
Ｒ５はＣＨ２ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｈ、又はそのエステルもしくはアミドであり、あるいはＲ４とＲ５は一緒になって－Ｎ＝Ｃ（Ｒｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、前記式中、ＲｃはＨ又はシアノ基である。］の化合物に変換する工程を更に含む、請求項２に記載の方法。
【化4】
Ｒ３はＨ又はＣＨ２Ｒａであり、前記式中、Ｒａはヒドロキシル基、Ｏ結合型アミノ酸、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２又は－ＯＣ（Ｏ）－Ｒｂであり、Ｒｂは低級アルキル基、アルコキシ基、アルキル酸、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ２）ｎ－ヘテロアリール基であり、及びｎは０又は１であり；
Ｒ４はＨであり；並びに
Ｒ５はＣＨ２ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｈ、又はそのエステルもしくはアミドであり、あるいはＲ４とＲ５は一緒になって－Ｎ＝Ｃ（Ｒｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、前記式中、ＲｃはＨ又はシアノ基である。］の化合物に変換する工程を更に含む、請求項２に記載の方法。
【請求項19】
式（ＩＶ）の化合物が、２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）であり、６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを（２－シアノアセチル）カルバミン酸エチル及び金属亜硝酸塩と接触させた後、ＤＭＡＣ中にて酢酸カリウムで処理することにより工程（ｄ）を実施する、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
更に、２θ＝約１０．５°、１８．７°、２２．９°、２３．６°及び２４．７°にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）の１形態（形態Ｉ）を形成する工程を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
式（ＩＶ）の化合物が式（Ｖ）
（式中、Ｒ３はＣＨ２Ｒａである。）の化合物であり、及び６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを（２－シアノアセチル）カルバミン酸エチルと接触させて、２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）を形成し、並びに適切な条件下で化合物Ａを式（Ｖ）の化合物に変換することにより工程（ｄ）を実施する、請求項１８に記載の方法。
【化5】
【請求項22】
２θ＝約１０．５°、１８．７°、２２．９°、２３．６°及び２４．７°にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）の形態（形態Ｉ）。
【請求項23】
更に２θ＝約８．２°、１１．２°、１５．７°、１６．４°、１７．７°、３０．０°及び３２．２°にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項２２に記載の形態。
【請求項24】
図１に示すものと実質的に同様の粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項２２に記載の形態。
【請求項25】
前記形態の純度が、９９％を上回る、請求項２２に記載の形態。
【請求項26】
請求項２２に記載の形態と医薬として許容可能な担体を含有する医薬組成物。
【請求項27】
【化6】
【請求項28】
その治療を必要とする対象における甲状腺ホルモン不応症（ＲＴＨ）の治療のための医薬組成物であって、治療有効量の式（ＩＶ）：
［式中、
Ｒ３はＨ又はＣＨ２Ｒａであり、前記式中、Ｒａはヒドロキシル基、Ｏ結合型アミノ酸、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２又は－ＯＣ（Ｏ）－Ｒｂであり、Ｒｂは低級アルキル基、アルコキシ基、アルキル酸、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ２）ｎ－ヘテロアリール基であり、及びｎは０又は１であり；
Ｒ４はＨであり；並びに
Ｒ５はＣＨ２ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｈ、又はそのエステルもしくはアミドであり、あるいはＲ４とＲ５は一緒になり、－Ｎ＝Ｃ（Ｒｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、前記式中、ＲｃはＨ又はシアノ基である。］の化合物を含有しており；
前記対象が少なくとも１カ所のＴＲβ突然変異をもつ、前記医薬組成物。
【化7】
Ｒ３はＨ又はＣＨ２Ｒａであり、前記式中、Ｒａはヒドロキシル基、Ｏ結合型アミノ酸、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２又は－ＯＣ（Ｏ）－Ｒｂであり、Ｒｂは低級アルキル基、アルコキシ基、アルキル酸、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ２）ｎ－ヘテロアリール基であり、及びｎは０又は１であり；
Ｒ４はＨであり；並びに
Ｒ５はＣＨ２ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｈ、又はそのエステルもしくはアミドであり、あるいはＲ４とＲ５は一緒になり、－Ｎ＝Ｃ（Ｒｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、前記式中、ＲｃはＨ又はシアノ基である。］の化合物を含有しており；
前記対象が少なくとも１カ所のＴＲβ突然変異をもつ、前記医薬組成物。
【請求項29】
前記化合物が、２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）である、請求項２８に記載のＲＴＨ治療のための医薬組成物。
【請求項30】
前記対象が、肥満症、高脂血症、高コレステロール血症、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、骨疾患、甲状腺系変性、アテローム性動脈硬化症、心血管障害、頻脈、多動行動、甲状腺機能低下症、甲状腺腫、注意欠陥多動性障害、学習障害、精神遅滞、難聴、骨年齢遅延、神経もしくは精神疾患又は甲状腺癌をもつ、請求項２８に記載のＲＴＨ治療のための医薬組成物。
【請求項31】
前記ＴＲβ突然変異が、配列番号１のアミノ酸位置２３４位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ２３４Ｔ）；配列番号１のアミノ酸位置２４３位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からグルタミン（Ｑ）への置換（Ｒ２４３Ｑ）；配列番号１のアミノ酸位置３１６位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からヒスチジン（Ｈ）への置換（Ｒ３１６Ｈ）；及び配列番号１のアミノ酸位置３１７位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ３１７Ｔ）から構成される群から選択される、請求項２８に記載のＲＴＨ治療のための医薬組成物。
【請求項32】
請求項２２に記載の形態の製造方法であって、
溶媒と、化合物Ａを含有する試料を含む混合物を第１の温度に加熱する工程と；
前記混合物を前記第１の温度よりも低い第２の温度まで冷却し、請求項２２に記載の形態を得る工程を含み、前記溶媒がエタノール、イソプロパノール、メチルイソブチルケトン及びその組合せから選択される、前記方法。
溶媒と、化合物Ａを含有する試料を含む混合物を第１の温度に加熱する工程と；
前記混合物を前記第１の温度よりも低い第２の温度まで冷却し、請求項２２に記載の形態を得る工程を含み、前記溶媒がエタノール、イソプロパノール、メチルイソブチルケトン及びその組合せから選択される、前記方法。
【請求項33】
前記第１の温度が、約６０℃～約８０℃である、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記第２の温度が、約０℃～約６０℃である、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項35】
前記第２の温度が、約４０℃～約６０℃である、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
前記溶媒が、エタノール又はメチルイソブチルケトンである、請求項３４に記載の方法。
【請求項37】
化合物Ａを含有する試料が、化合物Ａの溶媒和物を含む、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項38】
化合物Ａの前記溶媒和物が、エタノール溶媒和物、メチルイソブチルケトン溶媒和物、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド溶媒和物又は水和物である、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
更に前記混合物の冷却後に、前記混合物を濾過し、フィルターケーキを得る工程を含む、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項40】
更に混合物の濾過後に、フィルターケーキを有機溶媒でリンスし、リンスしたフィルターケーキを得る工程を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
前記有機溶媒が、アルコールである、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
前記アルコールが、エタノールである、請求項４１に記載の方法。
【請求項43】
更にフィルターケーキのリンス後に、リンスしたフィルターケーキを乾燥し、化合物Ａの形態Ｉを得る工程を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項44】
前記リンスしたフィルターケーキを乾燥する、請求項４３に記載の方法。
【請求項45】
請求項４４に記載の方法により製造された化合物Ａの形態Ｉ。
【請求項46】
化合物Ａの溶媒和物を実質的に含まない、請求項４５に記載の形態Ｉ。
【請求項47】
純度が、９５％以上である、請求項４５に記載の形態Ｉ。
【請求項48】
化合物Ａの溶媒和物が、約５％以下である、請求項４５に記載の形態Ｉ。
【請求項49】
請求項２２に記載の形態の製造方法であって、
エタノール、イソプロパノール、メチルイソブチルケトン及びその組合せから選択される溶媒と、化合物Ａを含有する試料を含む混合物を第１の温度に加熱する工程と；
前記混合物を前記第１の温度よりも低い第２の温度まで冷却する工程と；
前記混合物を濾過し、フィルターケーキを得る工程と；
前記フィルターケーキを有機溶媒でリンスし、リンスしたフィルターケーキを得る工程と；
前記リンスしたフィルターケーキを乾燥し、請求項２２に記載の形態を得る工程
を含む、前記方法。
エタノール、イソプロパノール、メチルイソブチルケトン及びその組合せから選択される溶媒と、化合物Ａを含有する試料を含む混合物を第１の温度に加熱する工程と；
前記混合物を前記第１の温度よりも低い第２の温度まで冷却する工程と；
前記混合物を濾過し、フィルターケーキを得る工程と；
前記フィルターケーキを有機溶媒でリンスし、リンスしたフィルターケーキを得る工程と；
前記リンスしたフィルターケーキを乾燥し、請求項２２に記載の形態を得る工程
を含む、前記方法。
【請求項50】
請求項２２に記載の形態の形態の製造方法であって、
エタノールと、化合物Ａを含有する試料を含む混合物を第１の温度に加熱する工程と；
前記混合物を前記第１の温度よりも低く且つ約４０℃よりも高い第２の温度まで冷却する工程と；
前記混合物を４０℃以上の温度で濾過し、フィルターケーキを得る工程と；
前記フィルターケーキを約４０℃以上の温度にてエタノールでリンスし、リンスしたフィルターケーキを得る工程と；
前記リンスしたフィルターケーキを約４０℃以上の温度で乾燥し、請求項２２に記載の形態を得る工程
を含む、前記方法。
エタノールと、化合物Ａを含有する試料を含む混合物を第１の温度に加熱する工程と；
前記混合物を前記第１の温度よりも低く且つ約４０℃よりも高い第２の温度まで冷却する工程と；
前記混合物を４０℃以上の温度で濾過し、フィルターケーキを得る工程と；
前記フィルターケーキを約４０℃以上の温度にてエタノールでリンスし、リンスしたフィルターケーキを得る工程と；
前記リンスしたフィルターケーキを約４０℃以上の温度で乾燥し、請求項２２に記載の形態を得る工程
を含む、前記方法。
【請求項51】
請求項５０に記載の方法により製造された化合物Ａの形態Ｉ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、２０１２年９月１７日に出願された米国仮特許出願第６１／７０２，１３７号、及び２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９０，４３２号の優先権およびその利益を主張し、それらは各々、その全体が本出願に援用される。
【背景技術】
【0002】
２０１３年９月１６日に作製され、大きさが４ＫＢである、本テキストファイル名「４１２４５－５２２００１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」の内容は、本出願に援用される。
【0003】
甲状腺ホルモンは正常な成長及び発生と、代謝恒常性の維持に不可欠である（Ｐａｕｌ Ｍ．Ｙｅｎ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．８１（３）：ｐｐ．１０９７－１１２６（２００１））。甲状腺ホルモンの血中濃度は視床下部／脳下垂体／甲状腺（ＨＰＴ）系のフィードバック機構により厳密に調節される。甲状腺機能低下症又は甲状腺機能亢進症に至る甲状腺機能異常は、甲状腺ホルモンが心機能、体重、代謝、代謝率、体温、コレステロール、骨、筋肉及び行動に重大な影響を及ぼすことを明白に示している。
【0004】
甲状腺ホルモンの生物的作用は甲状腺ホルモン受容体（ＴＲないしＴＨＲ）を介する（Ｍ．Ａ．Ｌａｚａｒ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．１４：ｐｐ．３４８－３９９（１９９３））。ＴＲは核内受容体と呼ばれるスーパーファミリーに属する。ＴＲはリガンド誘導性転写因子として作用するレチノイド受容体と共にヘテロダイマーを形成する。ＴＲはリガンド結合ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン及びアミノ末端ドメインをもち、ＤＮＡ応答エレメント並びに各種核内コアクチベーター及びコリプレッサーとの相互作用を介して遺伝子発現を調節する。甲状腺ホルモン受容体はα及びβの２種の別個の遺伝子に由来する。これらの個々の遺伝子産物は選択的ＲＮＡプロセシングを介して複数の形態の夫々の受容体を産生する。主要な甲状腺受容体アイソフォームはα１、α２、β１及びβ２である。甲状腺ホルモン受容体α１、β１及びβ２は甲状腺ホルモンと結合する。甲状腺ホルモン受容体サブタイプは特定の生物学的応答への寄与において夫々相違し得ることが示されている。最近の研究によると、ＴＲβ１はＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）の調節と肝臓における甲状腺ホルモン作用の調節に重要な役割を果たすことが示唆されている。ＴＲβ２はＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）の調節に重要な役割を果たす（Ａｂｅｌ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｖｏｌ １０４：ｐｐ．２９１－３００（１９９９））。ＴＲβ１は心拍数の調節に重要な役割を果たす（Ｂ．Ｇｌｏｓｓ ｅｔ．ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１４２：ｐｐ．５４４－５５０（２００１）；Ｃ．Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，Ｖｏｌ．２７５：ｐｐ．Ｒ６４０－Ｒ６４６（１９９８））。
【0005】
甲状腺ホルモン受容体β選択性及び／又は組織選択的作用の高い甲状腺ホルモンアナログを合成することが検討されている。このような甲状腺ホルモン類似体は心血管機能又は視床下部／脳下垂体／甲状腺系の正常機能にさほど影響を与えずに、体重、脂質、コレステロール及びリポ蛋白質の望ましい減少をもたらすと思われる（例えばＪｏｈａｒａｐｕｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１２，５５（１２），ｐｐ ５６４９－５６７５参照）。甲状腺ホルモンの有益な効果を維持しながら甲状腺機能亢進症と甲状腺機能低下症の望ましくない影響のない甲状腺ホルモンアナログが開発されるならば、肥満症、高脂血症、高コレステロール血症、糖尿病等の代謝疾患や、脂肪肝及びＮＡＳＨ、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、甲状腺機能低下症、甲状腺癌、甲状腺疾患、甲状腺ホルモン不応症並びに関連障害及び疾患等の他の障害及び疾患をもつ患者の治療に新たな道が開けるであろう。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Ｐａｕｌ Ｍ．Ｙｅｎ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．８１（３）：ｐｐ．１０９７－１１２６（２００１）
【非特許文献2】Ｍ．Ａ．Ｌａｚａｒ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．１４：ｐｐ．３４８－３９９（１９９３）
【非特許文献3】Ａｂｅｌ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｖｏｌ １０４：ｐｐ．２９１－３００（１９９９）
【非特許文献4】Ｂ．Ｇｌｏｓｓ ｅｔ．ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１４２：ｐｐ．５４４－５５０（２００１）
【非特許文献5】Ｃ．Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，Ｖｏｌ．２７５：ｐｐ．Ｒ６４０－Ｒ６４６（１９９８）
【非特許文献6】Ｊｏｈａｒａｐｕｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１２，５５（１２），ｐｐ ５６４９－５６７５。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明は一面においてピリダジノン化合物等の甲状腺ホルモンアナログとそのプロドラッグの合成方法を提供する。甲状腺ホルモンアナログとそのプロドラッグの理想的な合成方法は例えば生成化合物を高純度及び高収率で提供する方法であろう。本発明はこれらの望ましい特徴の１つ以上を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本開示は甲状腺ホルモンアナログとしてのピリダジノン化合物の製造用中間体として有用な化合物である６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（「中間体７」）を製造するために使用することができる合成方法に関し、前記方法は、
（ａ）Ｒ１ＭｇＸ又はＲ１Ｌｉを式（Ｉ）：
（ａ）Ｒ１ＭｇＸ又はＲ１Ｌｉを式（Ｉ）：
【0009】
【化1】
【0010】
【化2】
（ｂ）Ｒ１がイソプロペニルである場合には塩基の存在下、又はＲ１がイソプロピルである場合には酸化剤の存在下で式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）：
【0011】
【化3】
の化合物に変換する工程を含む。
【0012】
工程（ａ）において、溶媒はＴＨＦ、ジエチルエーテル、トルエン又はジオキサン等の非プロトン性有機溶媒とすることができ、反応温度は０～６０℃、２０～５０℃、３０～４５℃、又は３５～４５℃とすることができ、反応時間は１０分間～１０時間、１～８時間、又は３～５時間とすることができ、グリニャール試薬（Ｒ１ＭｇＸ）の量は式（Ｉ）の化合物の３～１０倍等量又は３～６倍等量とすることができる。
【0013】
工程（ｂ）では、塩基を使用して式（ＩＩ）の化合物を異性化する。塩基は有機塩基又は無機塩基とすることができる。塩基の例としては、限定されないが、トリエチルアミン、ピリジン、ＫＯＨ、ＮａＯＨ及び炭酸塩が挙げられる。異性化は例えば酸処理や非プロトン性溶媒中での加熱等の他の条件下で実施することもできる。
【0014】
更に工程（ｂ）において、酸化剤は特に限定されない。例えば、臭素の酢酸溶液又はプロピオン酸溶液を使用することができる。
【0015】
アミン保護基の例としては、限定されないが、置換アルキル基、アシル基（例えばベンゾイル基又はアセチル基）及びシリル基が挙げられる。ヒドロキシ及びアミン保護基はＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ．Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９１）に記載されている。
【0016】
１実施形態では、Ｒ１をイソプロペニルとし、ＸをＢｒとしてＲ１ＭｇＸを式（Ｉ）の化合物と接触させることにより工程（ａ）を実施する。この反応で使用する溶媒はＴＨＦとすることができ、ＴＨＦと式（Ｉ）の化合物の体積対重量比は７～３０（又は７～１５）とする。この工程はルイス酸（例えばハロゲン化リチウム）の存在下で実施してもよい。
【0017】
１実施形態では、Ｒ１をイソプロピルとし、ＸをＣｌとしてＲ１ＭｇＸを式（Ｉ）の化合物と接触させることにより工程（ａ）を実施する。この反応で使用する溶媒はＴＨＦとすることができ、ＴＨＦと式（Ｉ）の化合物の体積対重量比は７～３０（又は７～１５）とする。この工程はルイス酸（例えばハロゲン化リチウム）の存在下で実施してもよい。
【0018】
１実施形態において、工程（ｂ）における塩基は金属水酸化物（例えば水酸化カリウム）である。
【0019】
１実施形態において、工程（ｂ）における酸化剤は臭素であり、酸の存在下で工程（ｂ）を実施する。
【0020】
１実施形態において、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）におけるＲ２基はアセチル基又はベンゾイル基である。別の実施形態において、Ｒ２はベンゾイル基である。
【0021】
１実施形態において、前記方法は更に、３，６－ジクロロピリダジンを２，６－ジクロロ－４－アミノフェノールと接触させて３，５－ジクロロ－４－（（６－クロロピリダジン－３－イル）オキシ）アニリンを形成し、３，５－ジクロロ－４－（（６－クロロピリダジン－３－イル）オキシ）アニリンを加水分解し、加水分解の前又は後に３，５－ジクロロ－４－（（６－クロロピリダジン－３－イル）オキシ）アニリンのアミン基を保護して式（Ｉ）の化合物を形成することにより、式（Ｉ）の化合物を提供する工程を含む。３，６－ジクロロピリダジンを２，６－ジクロロ－４－アミノフェノールと接触させる工程は極性非プロトン性溶媒（例えばジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ））中で塩基（例えばＣｓ２ＣＯ３）の存在下に６０～１２０℃（例えば約６５℃）の反応温度にて実施する。更に、精製工程を加えてもよい。即ち、工程（ａ）の前に、式（Ｉ）の化合物を８０～１００℃の温度の酸性溶液中で精製する。
【0022】
１実施形態において、前記方法は更に、工程（ｃ）の式（ＩＩＩ）の化合物のアミン保護基Ｒ２が存在する場合には、これを除去し、６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを形成する工程を含む。
【0023】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された化合物、例えば中間体７は純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。
【0024】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された化合物、即ち６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンは６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－５－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンが１．５％未満であり、例えば６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－５－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンが１．０％未満、又は６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－５－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンが０．５％未満である。
【0025】
別の実施形態において、上記方法により製造された化合物は６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－５－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを含有していない。
【0026】
本発明の合成方法は更に、甲状腺ホルモンアナログとしてのピリダジノン化合物とそのプロドラッグを合成するために以下の工程、即ち
（ｄ）６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを式（ＩＶ）：
（ｄ）６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを式（ＩＶ）：
【0027】
【化4】
Ｒ３はＨ又はＣＨ２Ｒａであり、前記式中、Ｒａはヒドロキシル基、Ｏ結合型アミノ酸、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２又は－ＯＣ（Ｏ）－Ｒｂであり、Ｒｂは低級アルキル基、アルコキシ基、アルキル酸、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ２）ｎ－ヘテロアリール基であり、ｎは０又は１であり；
Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＣＨ２ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｈ、又はそのエステルもしくはアミドであり、あるいはＲ４とＲ５は一緒になり、－Ｎ＝Ｃ（Ｒｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、前記式中、ＲｃはＨ又はシアノ基である。］の化合物に変換する工程を含んでいてもよい。
【0028】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）であり、６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを（２－シアノアセチル）カルバミン酸エチル及び金属亜硝酸塩と接触させた後、ＤＭＡＣ中にて酢酸カリウムで処理することにより上記工程を実施する。
【0029】
１実施形態において、前記方法は更に、２θ＝約１０．５°、１８．７°、２２．９°、２３．６°及び２４．７°にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）の１形態（形態Ｉ）を形成する工程を含む。
【0030】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は式（Ｖ）
【0031】
【化5】
【0032】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された式（ＩＶ）の化合物、例えば２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）は純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。例えば、不純物（即ち、本願明細書に記載の方法により製造された組成物中の式（ＩＶ）の化合物以外の全成分、例えば副生成物、出発材料、溶媒残渣、重金属等）の含有率は１５％未満、１４％未満、１０％未満、８％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．８％未満、０．５％未満、又は０．２％未満である。
【0033】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された式（ＩＶ）の化合物は形態Ｉの化合物Ａであり、純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。例えば、不純物（即ち、本願明細書に記載の方法により製造された組成物中の化合物Ａ以外の全成分、例えば副生成物、出発材料、溶媒残渣、重金属等）の含有率は１５％未満、１４％未満、１０％未満、８％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．８％未満、０．５％未満、又は０．２％未満である。
【0034】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された式（ＩＶ）の化合物は形態Ｉの化合物Ａであり、形態Ｉは純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。例えば、不純物（即ち、本願明細書に記載の方法により製造された組成物中の形態Ｉ以外の全成分、例えば化合物Ａの他の形態、副生成物、出発材料、溶媒残渣、重金属等）の含有率は１５％未満、１４％未満、１０％未満、８％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．８％未満、０．５％未満、又は０．２％未満である。
【0035】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）を含有する組成物は対応するβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体（例えば化合物Ａのβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体である２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル）が１．５％未満（例えば１．０％未満、例えば０．５％未満）である。
【0036】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）を含有する組成物は対応するβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体（例えば化合物Ａのβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体である２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル）を含有していない。
【0037】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）を含有する組成物は重金属（例えば銀）が１．５％未満（例えば０．１％未満）である。
【0038】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）を含有する組成物は重金属（例えば銀、金又は白金）を含有していない。
【0039】
本願明細書に記載の合成方法は米国特許第７，４５２，８８２号に開示されている方法等の従来の方法に比較して利点がある。例えば、２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）の総収率が著しく高い（例えば米国特許第７，４５２，８８２号に開示されている方法に従って製造した場合は～９％であるのに対して＞４０％）。また、合成の位置選択性が遥かに優れている。更に、この新規方法は処理し易く、例えば濾過し易い。最後に、化合物Ａについて本願明細書に記載する方法では重金属を使用していない。これに対して、米国特許第７，４５２，８８２号に記載されている経路では銀を使用していたため、樹脂による除染処理が必要であった。
【0040】
更に別の態様において、本発明は８５％を上回る式（ＩＶ）の化合物、１．５％未満の対応するβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体（即ち
【0041】
【化6】
【0042】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。例えば、不純物（即ち、式（ＩＶ）の化合物を含有する組成物中の式（ＩＶ）の化合物以外の全成分、例えば副生成物、出発材料、溶媒残渣、重金属等）の含有率は１５％未満、１４％未満、１０％未満、８％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．８％未満、０．５％未満、又は０．２％未満である。
【0043】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は形態Ｉの化合物Ａであり、純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。例えば、不純物（即ち、化合物Ａを含有する組成物中の化合物Ａ以外の全成分、例えば副生成物、出発材料、溶媒残渣、重金属等）の含有率は１５％未満、１４％未満、１０％未満、８％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．８％未満、０．５％未満、又は０．２％未満である。
【0044】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は形態Ｉの化合物Ａであり、形態Ｉは純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。例えば、不純物（即ち、形態Ｉを含有する組成物中の形態Ｉ以外の全成分、例えば化合物Ａの他の形態、副生成物、出発材料、溶媒残渣、重金属等）の含有率は１５％未満、１４％未満、１０％未満、８％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．８％未満、０．５％未満、又は０．２％未満である。
【0045】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は対応するβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体（例えば化合物Ａのβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体である２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル）が１．５％未満（例えば１．０％未満、例えば０．５％未満）である。
【0046】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は対応するβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体（例えば化合物Ａのβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体である２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル）を含有していない。
【0047】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は重金属（例えば銀、金又は白金）が１．５％未満（例えば１．０％未満、例えば０．５％未満）である。
【0048】
１実施形態において、本願明細書に記載の方法により製造された式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は重金属（例えば銀）を含有していない。
【0049】
更に、本発明は２θ＝約１０．５°、１８．７°、２２．９°、２３．６°及び２４．７°にピークを含む粉末Ｘ線回折（「ＸＲＰＤ」）パターンを特徴とする２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）の１形態（形態Ｉ）に関する。
【0050】
１実施形態において、形態Ｉは２θ＝約８．２°、１１．２°、１５．７°、１６．４°、１７．７°、３０．０°及び３２．２°にもピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【0051】
１実施形態において、形態Ｉは２θ＝約８．２°、１０．５°、１８．７°、２２．９°、２３．６°及び２４．７°にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【0052】
１実施形態において、形態Ｉは２θ＝約８．２°、１０．５°、１１．２°、１５．７°、１６．４°、１７．７°、１８．７°、２２．９°、２３．６°及び２４．７°にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【0053】
１実施形態において、形態Ｉは２θ＝約８．２°、１０．５°、１１．２°、１５．７°、１６．４°、１７．７°、１８．７°、２２．９°、２３．６°、２４．７°、３０．０°及び３２．２°にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【0054】
別の実施形態において、形態Ｉは図１に示すパターンと実質的に同様の粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【0055】
別の態様において、本開示は形態Ｉの製造方法に関する。前記方法は化合物Ａを含有する試料（例えば化合物Ａの粗調製物又は精製調製物）をアルコール（例えばエタノール）、ケトン（例えばメチルイソブチルケトン、即ちＭＩＢＫ）、又はアルコールもしくはケトンを含む水溶液等の有機溶媒と混合する工程を含む。例えば、こうして得られた出発化合物Ａと溶媒を含む混合物（例えばスラリー又は懸濁液）を第１の温度に加熱後、前記第１の温度よりも低い第２の温度まで冷却する。有機溶媒はエタノールが好ましい。形態変換する出発化合物Ａは水和物（例えば一水和物又は二水和物）又は有機溶媒（例えばジメチルアセトアミド、エタノール又はＭＩＢＫ）の溶媒和物等の溶媒和物とすることができる。あるいは、出発化合物Ａは非溶媒和物（例えば非水和物）とすることができる。
【0056】
１実施形態では、化合物Ａを有機溶媒と共に高温（例えば約６０～１１０℃又は約８０℃）に加熱してスラリー又は懸濁液を形成した後に、（例えば約０～６０℃、約４０～６０℃、約４５～５５℃の温度まで、又は約室温に）冷却して化合物Ａ形態Ｉを得ることにより、前記方法を実施する。例えば、前記有機溶媒はエタノールであり、約４０℃を上回る温度まで化合物Ａを含有するスラリーを冷却し、形態Ｉを得ることができる。例えば、前記有機溶媒はＭＩＢＫであり、化合物Ａを含有するスラリーを室温まで冷却して形態Ｉを得ることができる。
【0057】
別の実施形態では、化合物Ａのエタノール懸濁液を高温（例えば約８０℃）まで加熱した後に約４０℃以上の温度（例えば約４５～５５℃）まで冷却し、濾過し（例えば約４５～５５℃）、加温（例えば４５～５５℃）したエタノールで洗浄し、例えば４５～５５℃で乾燥し、化合物Ａの溶媒和物（例えばエタノール溶媒和物）を実質的に含有しない化合物Ａの形態Ｉを得る。例えば、製造時点での化合物Ａの形態Ｉはエタノール溶媒和物含有率が＜５％（例えば＜２％、＜１％、＜０．５％、又は＜０．１％）である。
【0058】
１実施形態において、前記方法は更に、混合物を冷却した後に混合物を濾過する工程を含む。前記濾過工程は約０℃～約６０℃の温度（例えば約４０～６０℃、約４５～５５℃、又は約室温）で実施し、フィルターケーキを得ることができる。
【0059】
１実施形態において、前記方法は更に、混合物を濾過した後にフィルターケーキをリンスする工程を含む。前記リンス工程は有機溶媒（例えばエタノール等のアルコール）を使用して約０℃～約６０℃の温度（例えば約４０～６０℃、約４５～５５℃、又は約室温）で実施し、リンスしたフィルターケーキを得ることができる。
【0060】
１実施形態において、前記方法は更に、フィルターケーキをリンスした後に、リンスしたフィルターケーキを乾燥する工程を含む。前記乾燥工程は約０℃～約６０℃の温度（例えば約４０～６０℃、約４５～５５℃、又は約室温）で実施し、化合物Ａの形態Ｉを得ることができる。
【0061】
１実施形態において、形態Ｉは純度が９１％を上回り、例えば９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、又は９７．５％超である。
【0062】
１実施形態において、形態Ｉは純度が９８％を上回り、例えば９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。
【0063】
別の態様において、本開示は例えば６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（「中間体７」）の合成に有用な下式：
【0064】
【化7】
【0065】
本開示はその治療を必要とする対象における甲状腺ホルモン不応症（ＲＴＨ）の治療方法も提供する。前記方法は少なくとも１カ所のＴＲβ突然変異をもつ対象に治療有効量の式（ＩＶ）：
【0066】
【化8】
Ｒ３はＨ又はＣＨ２Ｒａであり、前記式中、Ｒａはヒドロキシル基、Ｏ結合型アミノ酸、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２又は－ＯＣ（Ｏ）－Ｒｂであり、Ｒｂは低級アルキル基、アルコキシ基、アルキル酸、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ２）ｎ－ヘテロアリールであり、ｎは０又は１であり；
Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＣＨ２ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｈ、又はそのエステルもしくはアミドであり、あるいはＲ４はＲ５は一緒になって－Ｎ＝Ｃ（Ｒｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、前記式中、ＲｃはＨ又はシアノ基である。］の化合物を投与する段階を含む。
【0067】
甲状腺ホルモン不応症（ＲＴＨ）は甲状腺ホルモンに対する種々の組織の感受性低下を特徴とする症候群であり、主にＴＨＲβの常染色体優性突然変異に起因する。Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００５，４４，４６１２－４６２６参照。
【0068】
１実施形態において、上記方法で使用する化合物は２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）、例えば形態Ｉの化合物Ａである。
【0069】
１実施形態において、上記方法により治療する対象は肥満症、高脂血症、高コレステロール血症、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、骨疾患、甲状腺系変性、アテローム性動脈硬化症、心血管障害、頻脈、多動行動、甲状腺機能低下症、甲状腺腫、注意欠陥多動性障害、学習障害、精神遅滞、難聴、骨年齢遅延、神経もしくは精神疾患又は甲状腺癌をもつ。
【0070】
１実施形態において、前記ＴＨＲβ突然変異は配列番号１のアミノ酸位置２３４位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ２３４Ｔ）；配列番号１のアミノ酸位置２４３位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からグルタミン（Ｑ）への置換（Ｒ２４３Ｑ）；配列番号１のアミノ酸位置３１６位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からヒスチジン（Ｈ）への置換（Ｒ３１６Ｈ）；及び配列番号１のアミノ酸位置３１７位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ３１７Ｔ）から構成される群から選択される。別の実施形態において、前記方法で使用する化合物は突然変異体ＴＨＲβの活性を回復する。
【0071】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）の純度は本願明細書に記載する適切な溶媒から粗生成物である化合物を再スラリー化することにより得られる。別の実施形態において、前記化合物は溶媒和物（例えば水和物）ではない。
【0072】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。
【0073】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は形態Ｉの化合物Ａであり、純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。
【0074】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は形態Ｉの化合物Ａであり、形態Ｉは純度が８５％を上回り、例えば８６％超、９０％超、９２．５％超、９５％超、９６％超、９７％超、９７．５％超、９８％超、９８．５％超、９９％超、９９．２％超、９９．５％超、又は９９．８％超である。
【0075】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は対応するβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体（例えば化合物Ａのβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体である２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル）が１．５％未満（例えば１．０％未満、例えば０．５％未満）である。
【0076】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は対応するβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体（例えば化合物Ａのβ－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン位置異性体である２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル）を含有していない。
【0077】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物（例えば化合物Ａ）は重金属（例えば銀、金又は白金）が１．５％未満（例えば１．０％未満、例えば０．５％未満）である。
【0078】
１実施形態において、前記対象は哺乳動物である。別の実施形態において、前記対象はヒトである。
【0079】
本開示は更に式（ＩＶ）の化合物又はその医薬として許容可能な塩に対する対象の応答性の判定方法を提供し、前記方法は、
（ａ）対象からの試料を準備する段階と；
（ｂ）甲状腺ホルモン受容体（「ＴＲ」）の突然変異を検出し、前記突然変異が存在するならば、前記対象は前記化合物又はその医薬として許容可能な塩に対して応答性であると判定する段階を含む。
（ａ）対象からの試料を準備する段階と；
（ｂ）甲状腺ホルモン受容体（「ＴＲ」）の突然変異を検出し、前記突然変異が存在するならば、前記対象は前記化合物又はその医薬として許容可能な塩に対して応答性であると判定する段階を含む。
【0080】
１実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）である。
【0081】
１実施形態において、ＴＲはＴＲβである。
【0082】
１実施形態において、本発明の方法により治療する対象は肥満症、高脂血症、高コレステロール血症、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、骨疾患、甲状腺系変性、アテローム性動脈硬化症、心血管障害、頻脈、多動行動、甲状腺機能低下症、甲状腺腫、注意欠陥多動性障害、学習障害、精神遅滞、難聴、骨年齢遅延、神経もしくは精神疾患又は甲状腺癌をもつ。
【0083】
１実施形態では、式（ＩＶ）の化合物に対する応答性の判定方法を前記甲状腺ホルモン不応症の治療方法と併用することができる。即ち、治療前に対象を試験し、前記化合物に対する応答性を判定する。
【0084】
本発明の他の特徴と利点は詳細な説明、実施例及び特許請求の範囲から容易に理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【0085】
【図1】２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）形態Ｉの粉末Ｘ線回折図（ＸＲＰＤ）である。
【図2】化合物Ａ形態Ｉの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）図である。
【図4】ＴＨＲβにおけるＴ３と化合物Ａを重ね合わせて示すＭａｃＰｙｍｏｌモデリング画像である。
【図5】図５ＡはＴ３と野生型ＴＨＲβの極性相互作用を示すＭａｃＰｙｍｏｌモデリング画像であり、Ｔ３はＡｒｇ３２０と非常に特異的に相互作用する。図５Ｂは化合物Ａと野生型ＴＨＲβの極性相互作用を示すＭａｃＰｙｍｏｌモデリング画像であり、化合物ＡはＡｒｇ３２０及びＡｒｇ３１６と相互作用する。
【図6】突然変異がリガンド結合ドメイン（「ＬＢＤ」）の極性領域に多くの変化をもたらすことを示すＭａｃＰｙｍｏｌモデリング画像である。
【図7】図７ＡはＴ３とＡｌａ２３４Ｔｈｒ、Ａｒｇ２４３Ｇｌｎ、Ａｒｇ３１６Ｈｉｓ、Ａｌａ３１７ＴｈｒのＴＨＲβ突然変異体との相互作用を示すＭａｃＰｙｍｏｌモデリング画像である。図７Ｂは化合物ＡとＡｌａ２３４Ｔｈｒ、Ａｒｇ２４３Ｇｌｎ、Ａｒｇ３１６Ｈｉｓ、Ａｌａ３１７ＴｈｒのＴＨＲβ突然変異体との相互作用を示すＭａｃＰｙｍｏｌモデリング画像であり、Ｔ３に比較して化合物Ａでは負電荷をもつ複素環が突然変異を受け入れ易いことを示している。
【発明を実施するための形態】
【0086】
本明細書と特許請求の範囲で使用する単数形の不定冠詞及び定冠詞は文脈からそうでないことが明白である場合を除き、複数の指示対象を含む。従って、例えば「反応体」と言う場合には、単数の反応体のみならず、２種類以上の異なる反応体の組合せ又は混合物も含み、「置換基」と言う場合には、単数の置換基に加えて２個以上の置換基も含み、他の用語についても同様である。
【0087】
本願明細書で使用する「例えば」、「例として」、「等の」又は「含む」等の用語はより一般的な対象を具体的に表す例を紹介するものである。これらの例は単に開示を理解し易くするために挙げるものであり、如何なる点でも限定的ではない。更に、本願明細書で使用する「～でもよい」、「非必須の」、「場合により」又は「場合により～でもよい」なる用語はこれらの用語により説明する状況が存在してもしなくてもよいという意味であり、従って、このような記載はそのような状況が存在する場合と、存在しない場合を含む。例えば、「場合により存在する」なる用語は対象が存在してもしなくてもよいという意味であり、従って、このような記載は対象が存在する場合と対象が存在しない場合を含む。
【0088】
本発明の説明及び特許請求の範囲では、以下の用語を以下の定義に従って使用する。
【0089】
本願明細書で使用する「ＴＲ」又は「ＴＨＲ」なる略語は甲状腺ホルモン受容体を意味する。種々の生物種（例えばヒト、ラット、ニワトリ等）に由来するＴＲ核酸及びポリペプチドが従来記載されている。例えば、各々その内容全体を本願に援用するＲ．Ｌ．Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００１），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １５（３）：３９８－４１０；Ｊ．Ｓａｐ ｅｔ ａｌ．（１９８６），Ｎａｔｕｒｅ ３２４：６３５－６４０；Ｃ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８６），Ｎａｔｕｒｅ ３２４：６４１－６４６；及びＣ．Ｃ．Ｔｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８６），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３７：１６１０－１６１４を参照されたい。ヒトＴＲβのアミノ酸配列は例えば本願に援用するＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｐ１０８２８．２に記載されている。
【0090】
【表1】
【0091】
配列番号１においてヒトＴＲβの２３４位、２４３位、３１６位及び３１７位の残基を下線で示す。上記アミノ酸配列をコードするヒトＴＲβヌクレオチド配列の部分は配列番号２である。ヒトＴＲβのヌクレオチド配列は例えば本願に援用するＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００４６１．４に記載されている。
【0092】
【表2】
【0093】
本願明細書で使用する「式を有する」又は「構造を有する」なる用語は限定的なものではなく、「含む」なる用語を一般に使用する場合と同様に使用する。「独立して～から選択される」なる用語は本願では指定する要素（例えばＲ基等）が同一でも異なってもよいことを示すために使用する。
【0094】
本願明細書で使用する「アルキル」なる用語は、必ずしもそうでなくてもよいが、通常では炭素原子数１～約２４の分岐鎖又は非分岐鎖飽和炭化水素基（例えばメチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、オクチル、デシル等）と、シクロアルキル基（例えばシクロペンチル、シクロヘキシル等）を意味する。必ずしもそうでなくてもよいが、一般に、本願明細書におけるアルキル基は炭素原子数１～約１８とすることができ、このような基は炭素原子数１～約１２とすることができる。「低級アルキル」なる用語は炭素原子数１～６、例えば炭素原子数１、２、３、４、５又は６のアルキル基を意味する。「置換アルキル」とは、１個以上の置換基で置換されたアルキル基を意味し、「ヘテロ原子含有アルキル」及び「ヘテロアルキル」なる用語は以下に詳述するように、少なくとも１個の炭素原子をヘテロ原子で置換えたアルキル置換基を意味する。
【0095】
本願明細書で使用する「アルケニル」なる用語は少なくとも１個の二重結合を含む炭素原子数２～約２４の直鎖、分岐鎖又は環状炭化水素基（例えばエテニル、ｎ－プロペニル、イソプロペニル、ｎ－ブテニル、イソブテニル、オクテニル、デセニル、テトラデセニル、ヘキサデセニル、エイコセニル、テトラコセニル等）を意味する。この場合も必ずしもそうでなくてもよいが、一般に、本願明細書におけるアルケニル基は炭素原子数２～約１８とすることができ、例えば炭素原子数２～１２とすることができる。「低級アルケニル」なる用語は炭素原子数２～６のアルケニル基を意味する。「置換アルケニル」なる用語は１個以上の置換基で置換されたアルケニル基を意味し、「ヘテロ原子含有アルケニル」及び「ヘテロアルケニル」なる用語は少なくとも１個の炭素原子をヘテロ原子（例えばＮ、Ｐ、Ｏ又はＳ）で置換えたアルケニル基を意味する。
【0096】
本願明細書で使用する「アルキニル」なる用語は少なくとも１個の三重結合を含む炭素原子数２～２４の直鎖又は分岐鎖炭化水素基（例えばエチニル、ｎ－プロピニル等）を意味する。この場合も必ずしもそうでなくてもよいが、一般に、本願明細書におけるアルキニル基は炭素原子数２～約１８とすることができ、このような基は更に炭素原子数２～１２とすることができる。「低級アルキニル」なる用語は炭素原子数２～６のアルキニル基を意味する。「置換アルキニル」なる用語は１個以上の置換基で置換されたアルキニル基を意味し、「ヘテロ原子含有アルキニル」及び「ヘテロアルキニル」なる用語は少なくとも１個の炭素原子をヘテロ原子で置換えたアルキニル基を意味する。
【0097】
本願明細書で使用する「アルコキシ」なる用語は１個の末端エーテル結合を介して結合したアルキル基を意味し、即ち「アルコキシ」基は－Ｏ－アルキルとして表すことができ、ここでアルキルは上記に定義した通りである。「低級アルコキシ」基とは炭素原子数の１～６のアルコキシ基を意味し、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ、ｔ－ブチルオキシ等が挙げられる。本願明細書で「Ｃ１－Ｃ６アルコキシ」又は「低級アルコキシ」と称する置換基は例えば炭素原子数１～３とすることができ、別の例として、このような置換基は炭素原子数１又は２とすることができる（即ちメトキシ及びエトキシ）。
【0098】
「アルキル酸」なる用語はアルキル基上に存在する酸置換基を意味し、例えば－（ＣＨ２）ｏＣＯＯＨ（式中、ｏは１～６の整数である。）が挙げられる。アルキル基は直鎖でも分岐鎖でもよい。
【0099】
本願明細書で使用する「アリール」なる用語は、特に指定しない限り、必ずしもそうでなくてもよいが、一般に炭素原子数５～３０であり、１個の芳香環又は（個々の芳香環がメチレン部分やエチレン部分等の共通の基と結合するように）融合、直接結合もしくは間接結合した複数の芳香環を含む芳香族置換基を意味する。アリール基は例えば炭素原子数５～２０とすることができ、別の例として、アリール基は炭素原子数５～１２とすることができる。例えば、アリール基は１個の芳香環又は融合もしくは結合した２個の芳香環を含むことができる（例えばフェニル、ナフチル、ビフェニル、ジフェニルエーテル、ジフェニルアミン、ベンゾフェノン等）。「置換アリール」とは１個以上の置換基で置換されたアリール部分を意味し、「ヘテロ原子含有アリール」及び「ヘテロアリール」なる用語は以下に詳述するように、少なくとも１個の炭素原子をヘテロ原子で置換えたアリール置換基を意味する。特に指定しない限り、「アリール」なる用語は非置換、置換、及び／又はヘテロ原子含有芳香族置換基をもつ環を包含する。
【0100】
「アラルキル」なる用語はアリール置換基をもつアルキル基を意味し、「アルカリール」なる用語はアルキル置換基をもつアリール基を意味し、ここで「アルキル」及び「アリール」は上記に定義した通りである。一般に、本願明細書におけるアラルキル基とアルカリール基は炭素原子数６～３０である。アラルキル基とアルカリール基は例えば炭素原子数６～２０とすることができ、別の例として、このような基は炭素原子数６～１２とすることができる。
【0101】
「アミノ」なる用語は本願明細書では－ＮＺ１Ｚ２基の意味で使用し、前記式中、Ｚ１及びＺ２は水素又は非水素置換基であり、非水素置換基としては、例えばアルキル、アリール、アルケニル、アラルキル、並びにその置換及び／又はヘテロ原子含有物が挙げられる。
【0102】
「ハロ」及び「ハロゲン」なる用語は従来の意味で使用し、クロロ、ブロモ、フルオロ又はヨード置換基を意味する。
【0103】
「ヘテロ原子含有アルキル基」（別称「ヘテロアルキル」基）や「ヘテロ原子含有アリール基」（別称「ヘテロアリール」基）等における「ヘテロ原子含有」なる用語は１個以上の炭素原子を炭素以外の原子、例えば窒素、酸素、硫黄、リン又はケイ素、典型的には窒素、酸素又は硫黄で置換えた分子、結合又は置換基を意味する。同様に、「ヘテロアルキル」なる用語はヘテロ原子を含有するアルキル置換基を意味し、「複素環」又は「複素環式」なる用語はヘテロ原子を含有する環状部分を意味し、「ヘテロアリール」及び「複素芳香族」なる用語は夫々ヘテロ原子を含有する「アリール」及び「芳香族」置換基を意味し、他の用語についても同様である。ヘテロアルキル基の例としては、アルコキシアリール、アルキルスルファニル置換アルキル、Ｎ－アルキル化アミノアルキル等が挙げられる。ヘテロアリール置換基の例としては、ピロリル、ピロリジニル、ピリジニル、キノリニル、インドリル、フリル、ピリミジニル、イミダゾリル、１，２，４－トリアゾリル、テトラゾリル等が挙げられ、ヘテロ原子含有脂環式基の例はピロリジノ、モルホリノ、ピペラジノ、ピペリジノ、テトラヒドロフラニル等である。
【0104】
「ヒドロカルビル」とは直鎖、分岐鎖、環状、飽和及び不飽和種を含めて炭素原子数１～約３０、例えば炭素原子数１～約２４、特に炭素原子数１～約１８、特に炭素原子数約１～１２の１価ヒドロカルビル基を意味し、例えばアルキル基、アルケニル基、アリール基等が挙げられる。「置換ヒドロカルビル」とは、１個以上の置換基で置換されたヒドロカルビル基を意味し、「ヘテロ原子含有ヒドロカルビル」なる用語は少なくとも１個の炭素原子をヘテロ原子で置換えたヒドロカルビル基を意味する。
【0105】
「Ｏ結合型アミノ酸」なる用語はアミノ酸のカルボキシル基の酸素を介して、好ましくはアミノ酸のカルボキシ末端のカルボキシル基を介して分子と結合した天然又は合成の任意アミノ酸を意味する。
【0106】
本願明細書で使用する「保護基」なる用語は多官能性化合物において別の反応性部位で選択的に反応を実施できるように、特定の官能性部分（例えばＯ、Ｓ又はＮ）を一時的にブロックすることを意味する。好ましい実施形態において、保護基は良好な収率で選択的に反応し、予想される反応に対して安定な保護基質を生じ、保護基は容易に入手可能で好ましくは非毒性であって他の官能基を攻撃しない試薬により良好な収率で選択的に除去されなければならず、保護基は（より好ましくは新しい立体中心を生じずに）容易に脱離可能な誘導体を形成し、保護基は反応部位が増えように付加的官能価を最小とする。本願明細書に詳述するように、酸素、硫黄、窒素及び炭素保護基を利用することができる。例えば、所定の実施形態では、所定の代表的な酸素保護基を利用することができる。これらの酸素保護基としては、限定されないが、メチルエーテル類、置換メチルエーテル類（例えばＭＯＭ（メトキシメチルエーテル）、ＭＴＭ（メチルチオメチルエーテル）、ＢＯＭ（ベンジルオキシメチルエーテル）及びＰＭＢＭ（ｐ－メトキシベンジルオキシメチルエーテル））、置換エチルエーテル類、置換ベンジルエーテル類、シリルエーテル類（例えばＴＭＳ（トリメチルシリルエーテル）、ＴＥＳ（トリエチルシリルエーテル）、ＴＩＰＳ（トリイソプロピルシリルエーテル）、ＴＢＤＭＳ（ｔ－ブチルジメチルシリルエーテル）、トリベンジルシリルエーテル、及びＴＢＤＰＳ（ｔ－ブチルジフェニルシリルエーテル））、エステル類（例えばギ酸エステル、酢酸エステル、安息香酸エステル（Ｂｚ）、トリフルオロ酢酸エステル、及びジクロロ酢酸エステル）、炭酸エステル類、環状アセタール類及びケタール類が挙げられる。所定の他の代表的な実施形態では、窒素保護基を利用する。窒素保護基と、保護方法及び脱保護方法は当分野で公知である。窒素保護基としては、限定されないが、カルバミン酸エステル類（例えばカルバミン酸メチル、カルバミン酸エチル、置換カルバミン酸エチル（例えばＴｒｏｃ））、アミド類、環状イミド誘導体、Ｎ－アルキルアミン類、Ｎ－アリールアミン類、イミン誘導体及びエナミン誘導体が挙げられる。更に他の実施形態では、所定の代表的な硫黄保護基を利用してもよい。硫黄保護基としては、限定されないが、上記酸素保護基に加え、脂肪族カルボン酸（例えばアクリル酸）、マレイミド、ビニルスルホニル及び場合により置換されたマレイン酸が挙げられる。本願明細書では所定の他の代表的な保護基について詳述するが、当然のことながら、本発明はこれらの保護基に限定するものではなく、上記基準を使用して種々の他の等価の保護基を容易に認識し、本発明で利用することができる。更に、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：１９９９には種々の保護基が記載されており、その内容全体を本願に援用する。
【0107】
「置換ヒドロカルビル」、「置換アルキル」、「置換アリール」等における「置換」とは、上記定義でも触れたように、ヒドロカルビル、アルキル、アリール又は他の部分において、炭素（又は他の）原子と結合している少なくとも１個の水素原子が１個以上の水素以外の置換基で置換えられていることを意味する。このような置換基の例としては、限定されないが、官能基と、ヒドロカルビル部分としてＣ１－Ｃ２４アルキル（例えばＣ１－Ｃ１８アルキル、より特定的にはＣ１－Ｃ１２アルキル、より特定的にはＣ１－Ｃ６アルキル）、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル（例えばＣ２－Ｃ１８アルケニル、より特定的にはＣ２－Ｃ１２アルケニル、より特定的にはＣ２－Ｃ６アルケニル）、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル（例えばＣ２－Ｃ１８アルキニル、より特定的にはＣ２－Ｃ１２アルキニル、より特定的にはＣ２－Ｃ６アルキニル）、Ｃ５－Ｃ３０アリール（例えばＣ５－Ｃ２０アリール、より特定的にはＣ５－Ｃ１２アリール）、及びＣ６－Ｃ３０アラルキル（例えばＣ６－Ｃ２０アラルキル、より特定的にはＣ６－Ｃ１２アラルキル）が挙げられる。
【0108】
「官能基」とは、上記定義でも触れたように、１以上の炭化水素以外の官能価を含む水素以外の基を意味する。官能基の例としては、限定されないが、ハロ、ヒドロキシル、スルフヒドリル、Ｃ１－Ｃ２４アルコキシ、Ｃ２－Ｃ２４アルケニルオキシ、Ｃ２－Ｃ２４アルキニルオキシ、Ｃ５－Ｃ２０アリールオキシ、アシル（例えばＣ２－Ｃ２４アルキルカルボニル（－ＣＯ－アルキル）及びＣ６－Ｃ２０アリールカルボニル（－ＣＯ－アリール））、アシルオキシ（－Ｏ－アシル）、Ｃ２－Ｃ２４アルコキシカルボニル（－（ＣＯ）－Ｏ－アルキル）、Ｃ６－Ｃ２０アリールオキシカルボニル（－（ＣＯ）－Ｏ－アリール）、ハロカルボニル（－ＣＯ）－Ｘ（式中、Ｘはハロである。）、Ｃ２－Ｃ２４アルキルカルボナト（－Ｏ－（ＣＯ）－Ｏ－アルキル）、Ｃ６－Ｃ２０アリールカルボナト（－Ｏ－（ＣＯ）－Ｏ－アリール）、カルボキシ（－ＣＯＯＨ）、カルボキシラト（－ＣＯＯ－ ）、カルバモイル（－（ＣＯ）－ＮＨ２）、モノ置換Ｃ１－Ｃ２４アルキルカルバモイル（－（ＣＯ）－ＮＨ（Ｃ１－Ｃ２４アルキル））、ジ置換アルキルカルバモイル（－（ＣＯ）－Ｎ（Ｃ１－Ｃ２４アルキル）２）、モノ置換アリールカルバモイル（－（ＣＯ）－ＮＨ－アリール）、チオカルバモイル（－（ＣＳ）－ＮＨ２）、カルバミド（－ＮＨ－（ＣＯ）－ＮＨ２）、シアノ（－Ｃ≡Ｎ）、イソシアノ（－Ｎ＋≡Ｃ－）、シアナト（－Ｏ－Ｃ≡Ｎ）、イソシアナト（－Ｏ－Ｎ＋≡Ｃ－）、イソチオシアナト（－Ｓ－Ｃ≡Ｎ）、アジド（－Ｎ＝Ｎ＋＝Ｎ－）、ホルミル（－（ＣＯ）－Ｈ）、チオホルミル（－（ＣＳ）－Ｈ）、アミノ（－ＮＨ２）、モノ－及びジ－（Ｃ１－Ｃ２４アルキル）置換アミノ、モノ－及びジ－（Ｃ５－Ｃ２０アリール）置換アミノ、Ｃ２－Ｃ２４アルキルアミド（－ＮＨ－（ＣＯ）－アルキル）、Ｃ５－Ｃ２０アリールアミド（－ＮＨ－（ＣＯ）－アリール）、イミノ（－ＣＲ＝ＮＨ（式中、Ｒ＝水素、Ｃ１－Ｃ２４アルキル、Ｃ５－Ｃ２０アリール、Ｃ６－Ｃ２０アルカリール、Ｃ６－Ｃ２０アラルキル等である。）、アルキルイミノ（－ＣＲ＝Ｎ（アルキル）（式中、Ｒ＝水素、アルキル、アリール、アルカリール等である。）、アリールイミノ（－ＣＲ＝Ｎ（アリール）（式中、Ｒ＝水素、アルキル、アリール、アルカリール等である。）、ニトロ（－ＮＯ２）、ニトロソ（－ＮＯ）、スルホ（－ＳＯ２－ＯＨ）、スルホナト（－ＳＯ２－Ｏ－）、Ｃ１－Ｃ２４アルキルスルファニル（－Ｓ－アルキル、別称「アルキルチオ」）、アリールスルファニル（－Ｓ－アリール、別称「アリールチオ」）、Ｃ１－Ｃ２４アルキルスルフィニル（－（ＳＯ）－アルキル）、Ｃ５－Ｃ２０アリールスルフィニル（－（ＳＯ）－アリール）、Ｃ１－Ｃ２４アルキルスルホニル（－ＳＯ２－アルキル）、Ｃ５－Ｃ２０アリールスルホニル（－ＳＯ２－アリール）、ホスホノ（－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２）、ホスホナト（－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－）２）、ホスフィナト（－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－））、ホスホ（－ＰＯ２）及びホスフィノ（－ＰＨ２）、モノ－及びジ－（Ｃ１－Ｃ２４アルキル）置換ホスフィノ、モノ－及びジ－（Ｃ５－Ｃ２０アリール）置換ホスフィノが挙げられ；更にヒドロカルビル部分としてＣ１－Ｃ２４アルキル（例えばＣ１－Ｃ１８アルキル、より特定的にはＣ１－Ｃ１２アルキル、より特定的にはＣ１－Ｃ６アルキル）、Ｃ２－Ｃ２４アルケニル（例えばＣ２－Ｃ１８アルケニル、より特定的にはＣ２－Ｃ１２アルケニル、より特定的にはＣ２－Ｃ６アルケニル）、Ｃ２－Ｃ２４アルキニル（例えばＣ２－Ｃ１８アルキニル、より特定的にはＣ２－Ｃ１２アルキニル、より特定的にはＣ２－Ｃ６アルキニル）、Ｃ５－Ｃ３０アリール（例えばＣ５－Ｃ２０アリール、より特定的にはＣ５－Ｃ１２アリール）、及びＣ６－Ｃ３０アラルキル（例えばＣ６－Ｃ２０アラルキル、より特定的にはＣ６－Ｃ１２アラルキル）が挙げられる。更に、上記官能基は、個々の基が許容する場合には、上記に具体的に挙げたもの等の１以上の他の官能基又は１以上のヒドロカルビル部分で更に置換されていてもよい。同様に、上記ヒドロカルビル部分は上記に具体的に挙げたもの等の１以上の官能基又は他のヒドロカルビル部分で更に置換されていてもよい。
【0109】
「方法を統合する」なる用語は多段階法をより少数の工程又は単位操作に短縮することを意味する。単位操作は変換に加え、処理工程と単離工程も含む。遠心、濾過、蒸留、デカント、沈降／結晶化、及び包装が単位操作の例である。文献には統合及び他の方法改良の非常に多くの例が挙げられている（例えばＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００７，７２，９７５７－９７６０参照）。
【0110】
当然のことながら、上記定義には重複しているものもあるため、化学部分によっては２以上の定義に含まれるものもある。
【0111】
置換された基の例のリストの先頭に「置換」なる用語が付いている場合には、この用語はその基の個々の例に適用されるものとする。例えば、「置換アルキル及びアリール」なる用語は「置換アルキル及び置換アリール」と解釈すべきである。
【0112】
本開示は化合物（例えば甲状腺ホルモンアナログとしてのピリダジノン化合物の合成用中間体として有用な化合物）の合成方法を提供する。甲状腺ホルモンアナログとしてのピリダジノン化合物とそのプロドラッグは例えば米国特許第７，４５２，８８２号、７，８０７，６７４号及び８，０７６，３３４号に開示されている。
【0113】
特に、本発明は６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（「中間体７」）又はその塩の製造方法に関し、前記方法は、
（ａ）Ｒ１ＭｇＸ又はＲ１Ｌｉを式（Ｉ）：
（ａ）Ｒ１ＭｇＸ又はＲ１Ｌｉを式（Ｉ）：
【0114】
【化9】
【0115】
【化10】
（ｂ）Ｒ１がイソプロペニルである場合には塩基の存在下、又はＲ１がイソプロピルである場合には酸化剤の存在下で式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）：
【0116】
【化11】
【0117】
本開示は更に甲状腺ホルモンアナログとしてのピリダジノン化合物とそのプロドラッグの合成方法に関する。このような化合物としては、米国特許第７，４５２，８８２号、７，８０７，６７４号及び８，０７６，３３４号に開示されているものが挙げられる。特に、本開示は式（ＩＶ）：
【0118】
【化12】
Ｒ３はＨ又はＣＨ２Ｒａであり、前記式中、Ｒａはヒドロキシル基、Ｏ結合型アミノ酸、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２又は－ＯＣ（Ｏ）－Ｒｂであり、Ｒｂは低級アルキル基、アルコキシ基、アルキル酸、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ２）ｎ－ヘテロアリール基であり、ｎは０又は１であり；
Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＣＨ２ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｈ、又はそのエステルもしくはアミドであり、あるいはＲ４とＲ５は一緒になり、－Ｎ＝Ｃ（Ｒｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－であり、前記式中、ＲｃはＨ又はシアノ基である。前記方法は、
（ａ）Ｒ１ＭｇＸ又はＲ１Ｌｉを式（Ｉ）：
【0119】
【化13】
【0120】
【化14】
（ｂ）Ｒ１がイソプロペニルである場合には塩基の存在下、又はＲ１がイソプロピルである場合には臭素および酸の存在下で式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）：
【0121】
【化15】
（ｃ）式（ＩＩＩ）の化合物のアミン保護基Ｒ２が存在する場合にはこれを除去し、６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを形成する工程と；場合により
（ｄ）適切な条件下で６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを式（ＩＶ）の化合物に変換する工程を含む。
【0122】
本発明は更に以下のスキームに従い、実施例に示すような本発明の種々の開示化合物の詳細な合成方法を提供する。
【0123】
本明細書では随所において、組成物が特定の成分を有する、含む、又は含有すると記載しているが、これは、組成物が指定成分から本質的に構成される、又は指定成分から構成されるという意味でもある。同様に、方法が特定の処理工程を有する、包含する、又は含むと記載している場合には、これらの方法が指定工程から本質的に構成される、又は指定工程から構成されるという意味でもある。更に、当然のことながら、発明を実施可能である限り、工程の順序又は所定の操作を実施する順序は重要ではない。更に、２以上の工程又は操作を同時に実施することもできる。
【0124】
本発明の合成方法は多様な官能基に対応することができ、従って、種々の置換された出発材料を使用することができる。前記方法では一般に方法全体の終点又は終点付近で所望の最終化合物が得られるが、場合によっては、化合物をその医薬として許容可能な塩、エステル又はプロドラッグに更に変換することが望ましい場合もある。
【0125】
所定の実施形態では、下記スキーム１又は２に従って６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（「中間体７」）を製造する。
【0126】
スキーム１：イソプロピルグリニャール試薬（ｉＰｒＭｇＸ）による６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（中間体７）の合成。
【0127】
【化16】
【0128】
スキーム２：イソプロペニルグリニャール試薬による６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（中間体７）の合成
【0129】
【化17】
【0130】
ステージ１：３，５－ジクロロ－４－（（６－クロロピリダジン－３－イル）オキシ）アニリン（化合物２）及びＮ－（３，５－ジクロロ－４－（（６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）ベンズアミド又はＮ－（３，５－ジクロロ－４－（（６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）アセトアミド（化合物４）の合成
【0131】
適切な有機溶媒（例えばＤＭＳＯ又はＤＭＡＣ）中で少量の金属炭酸塩（例えば炭酸セシウム又は炭酸カリウム）や金属アルコキシド（例えばカリウムｔ－ブトキシド）等の適切な塩基の存在下に適切な反応温度（例えば６０～１２０℃）にて反応が完了するまで、通常では約３～３０時間、例えば約３～１５時間にわたって３，６－ジクロロピリダジンを２，６－ジクロロ－４－アミノフェノールと接触させることにより化合物２を製造する。
【0132】
２を適切なアミン保護試薬（例えば無水安息香酸又は塩化ベンゾイル）で保護した後に、保護した中間体を適切な有機溶媒（例えば酢酸）の存在下で適切な反応温度（例えば１００～１２０℃）にて反応が完了するまで、通常では約２～２０時間、例えば約５～１５時間にわたって酢酸ナトリウムで処理することにより化合物４を製造する。粗生成物を適切な溶媒（例えば水と酢酸の混液）で適切な温度（例えば８８～１００℃）にて精製する。化合物２を加水分解条件に供することにより酢酸エステルで保護された化合物４を製造することができる。
【0133】
ステージ２：Ｎ－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）ベンズアミド又はＮ－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）アセトアミド（化合物６）及び６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（中間体７）の合成
【0134】
適切な有機溶媒（例えばテトラヒドロフラン又はジオキサン）中で化合物４をイソプロピルグリニャールと接触させた後に酸化工程を実施することにより、化合物６を製造する。酸化工程は適切な有機溶媒（例えば酢酸）中で臭素等の酸化試薬の存在下に適切な反応温度（例えば６０～９０℃）にて反応が完了するまで、通常では約２～１０時間、例えば約２～５時間実施することができる。
【0135】
当然のことながら、化合物６から中間体７への変換を完了するためには脱保護反応が必要である、特に、中間体７に存在する遊離アミノ基を得るためにはＮ保護基（即ちアセチル又はベンゾイル）を除去する必要がある。従って、１実施形態では、化合物６（式中、Ｒ２はＢｚである。）を金属水酸化物（例えばＫＯＨ又はＮａＯＨ）や金属炭酸塩（例えば炭酸ナトリウム）等の塩基で脱保護することにより中間体７を得る。別の実施形態では、化合物６（式中、Ｒ２はＡｃである。）をトリフルオロ酢酸等の酸で脱保護することにより中間体７を得る。
【0136】
あるいは、適切な有機溶媒（例えばテトラヒドロフランや２－メチルＴＨＦ）中で化合物４をイソプロペニルグリニャールと接触させた後に（例えば５Ａから６へと）異性化し、金属水酸化物（例えばＫＯＨ）等の塩基の処理下で脱保護することにより化合物７を製造する。異性化／脱保護工程は適切な反応温度（例えば６０～９０℃）にて反応が完了するまで、通常では約１０～６０時間、例えば９０℃にて約１６時間実施する。
【0137】
グリニャール反応はＬｉＣｌやＬｉＢｒ等のルイス酸の存在下で適切な反応温度（例えば室温～４０℃）にて反応が完了するまで、通常では約２～１０時間、例えば約２～５時間実施することができる。
【0138】
所定の実施形態では、化合物５又は５Ａの合成の結果、中間体７の収率は当分野で公知の他の方法に比較して改善される。例えば、５又は５Ａの合成の結果、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、又は９０％超の収率となる。
【0139】
所定の実施形態において、グリニャール反応は位置選択性を改善するため、化合物６のβ－イソプロピル位置異性体、即ち
【0140】
【化18】
【0141】
１実施形態において、６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（「中間体７」）から化合物Ａへの変換は下記スキーム３に従って実施される。
【0142】
【化19】
【0143】
ステージ３：６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（中間体８）の合成
適切な溶媒（例えば酢酸と水の混液）中で酸（例えばＨＣｌ）の存在下に適切な反応温度（例えば１０℃未満）にて反応が完了するまで６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを（２－シアノアセチル）カルバミン酸エチル及び金属亜硝酸塩（例えば亜硝酸ナトリウム）と接触させることにより中間体８を製造する。
適切な溶媒（例えば酢酸と水の混液）中で酸（例えばＨＣｌ）の存在下に適切な反応温度（例えば１０℃未満）にて反応が完了するまで６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オンを（２－シアノアセチル）カルバミン酸エチル及び金属亜硝酸塩（例えば亜硝酸ナトリウム）と接触させることにより中間体８を製造する。
【0144】
ステージ４：２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（化合物Ａ）の合成
適切な溶媒（例えばＤＭＡＣ）中で適切な反応温度（例えば約１２０℃）にて反応が完了するまで中間体８と塩基（例えば酢酸ナトリウム又は酢酸カリウム）を接触させることにより化合物Ａを製造する。
適切な溶媒（例えばＤＭＡＣ）中で適切な反応温度（例えば約１２０℃）にて反応が完了するまで中間体８と塩基（例えば酢酸ナトリウム又は酢酸カリウム）を接触させることにより化合物Ａを製造する。
【0145】
所定の実施形態において、６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（「中間体７」）からＭＧＬ－３９１６以外の式（ＩＶ）の化合物（例えばそのプロドラッグ）への変換は例えばその内容全体を本願に援用する米国特許第７，４５２，８８２号、７，８０７，６７４号及び８，０７６，３３４号に記載の条件下で実施される。
【0146】
例えば米国特許第７，４５２，８８２号に従来開示されている合成経路におけるビアリールエーテル形成は位置選択性が不良であったが、これに対して本願明細書に記載の合成方法はグリニャール試薬によりイソプロペニル基又はイソプロピル基を導入する結果、位置選択性に優れる。また、ビアリールエーテル生成物をキログラム単位の量で合成する場合には濾過時間がバッチ当たり１週間を上回るため、これを単離することはほぼ実質的に不可能であったが、ビアリールエーテル形成をベンズアミド保護に統合にすることにより、本願明細書に開示する方法はこの生成物を単離せずに済む。
【0147】
本発明は高純度及び／又は特定形態（例えば形態Ｉ）の化合物、本願明細書に記載の組成物、並びに肥満症、高脂血症、高コレステロール血症、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、骨疾患、甲状腺系変性、アテローム性動脈硬化症、心血管障害、頻脈、多動行動、甲状腺機能低下症、甲状腺腫、注意欠陥多動性障害、学習障害、精神遅滞、難聴、骨年齢遅延、神経もしくは精神疾患又は甲状腺癌の治療又は予防方法を提供する。
【0148】
当然のことながら、本願明細書に開示する方法は所望の化合物の大規模及び小規模いずれの製造にも適している。本願明細書に記載の方法の好ましい実施形態では、実験／実験室規模ではなく大規模、例えば工業生産規模で甲状腺ホルモンアナログを製造することができる。例えば、本開示の方法によるバッチ型方法は少なくとも１ｇ、又は少なくとも５ｇ、又は少なくとも１０ｇ、又は少なくとも１００ｇ、又は少なくとも１ｋｇ、又は少なくとも１００ｋｇの甲状腺ホルモンアナログのバッチの製造を可能にする。更に、前記方法はＨＰＬＣにより測定した純度が少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％である甲状腺ホルモンアナログの製造を可能にする。
【0149】
医薬組成物
本発明は更に、少なくとも１種の医薬として許容可能な賦形剤又は担体と共に式ＩＶの化合物を含有する医薬組成物を提供する。
本発明は更に、少なくとも１種の医薬として許容可能な賦形剤又は担体と共に式ＩＶの化合物を含有する医薬組成物を提供する。
【0150】
「医薬組成物」とは、対象に投与するのに適した形態の本発明の化合物を含有する製剤である。１実施形態において、医薬組成物はバルク又は単位剤形である。単位剤形は例えばカプセル剤、静注バッグ、錠剤、シングルポンプ式エアゾールインヘラー又はバイアル等の各種剤形のいずれかである。単位用量の組成物における活性成分（例えば開示化合物又はその塩、水和物、溶媒和物又は異性体の製剤）の量は有効量であり、特定の該当治療により異なる。当業者に自明の通り、患者の年齢と状態に応じて用量を常法により変更することが必要な場合がある。用量は投与経路によっても異なる。経口、経肺、直腸、非経口、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入、口腔、舌下、胸膜内、髄腔内、鼻腔内等の種々の経路が考えられる。本発明の化合物の局所又は経皮投与用剤形としては、散剤、スプレー剤、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、溶液剤、パッチ及び吸入剤が挙げられる。１実施形態では、活性化合物を無菌条件下で医薬として許容可能な担体及び必要に応じて防腐剤、緩衝剤又は噴射剤と混合する。
【0151】
本願明細書で使用する「医薬として許容可能」なる用語は適切な医学的判断の範囲内で過度の毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題もしくは合併症を生じずにヒト及び動物の組織と接触使用するのに適しており、妥当なメリット／リスク比に見合う前記化合物、材料、組成物、担体及び／又は剤形を意味する。
【0152】
「医薬として許容可能な賦形剤又は担体」は一般に安全で非毒性であり、生物学的にも他の面でも有害でない医薬組成物を製造するのに有用な賦形剤又は担体を意味し、獣医学用と人体医薬用とに許容可能な賦形剤を含む。本明細書と特許請求の範囲で使用する「医薬として許容可能な賦形剤」とは１種及び２種以上のこのような賦形剤を包含する。
【0153】
本発明の医薬組成物はその目的とする投与経路に適合可能となるように製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口腔（例えば吸入）、経皮（局所）、及び経粘膜投与が挙げられる。非経口、皮内又は皮下投与用に使用される溶液剤又は懸濁剤には以下の成分、即ち滅菌希釈剤（例えば注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒）；抗細菌剤（例えばベンジルアルコールやメチルパラベン）；酸化防止剤（例えばアスコルビン酸や重亜硫酸ナトリウム）；キレート剤（例えばエチレンジアミン四酢酸）；緩衝剤（例えば酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩）及び浸透圧調節剤（例えば塩化ナトリウム又はブドウ糖）を添加することができる。ｐＨは塩酸又は水酸化ナトリウム等の酸又は塩基で調整することができる。非経口製剤はガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は多用量バイアルに封入することができる。
【0154】
本願明細書で使用する「治療有効量」なる用語は指定疾患もしくは病態を治療、改善もしくは予防するため、又は検出可能な治療効果もしくは阻害効果を発揮するための薬剤の量を意味する。前記効果は当分野で公知の任意アッセイ方法により検出することができる。ある対象の厳密な有効量はその対象の体重、寸法及び健康状態；病態の種類と程度；及び投与に選択する治療法又は治療法の併用によって異なる。所与状況の治療有効量は医師の技量と判断の範囲内の日常的実験により決定することができる。好ましい１態様において、治療する疾患又は病態は代謝障害である。
【0155】
本発明の方法の実施においては、有効量の本発明の化合物のいずれか１種あるいは本発明の化合物のいずれか又はその医薬として許容可能な塩もしくはエステルの組合せを当分野で公知の通常の許容可能な方法のいずれかにより単剤又は併用剤として投与する。従って、前記化合物又は組成物を経口（例えば口腔）、舌下、非経口（例えば筋肉内、静脈内又は皮下）、直腸（例えば坐剤又は洗浄剤）、経皮（例えば皮膚エレクトロポレーション）又は吸入（例えばエアゾール）により、固体、液体もしくは気体剤形（例えば錠剤及び懸濁剤）で投与することができる。投与は適宜単一の単位剤形で持続療法により実施することもできるし、単回療法で実施することもできる。治療のための組成物はパモ酸等の親油性塩と共に油性エマルション又は分散液の形態でもよいし、皮下又は筋肉内投与用の生分解性徐放性組成物の形態でもよい。
【0156】
本発明の組成物の製造に有用な医薬担体は固体、液体又は気体とすることができ、従って、前記組成物は錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、散剤、腸溶コート又は他の保護製剤（例えばイオン交換樹脂に結合したものや、脂質－蛋白質ベシクルにパッケージングしたもの）、徐放性製剤、溶液剤、懸濁剤、エリキシル剤、エアゾール等の形態をとることができる。担体は石油、動物、植物又は合成由来のもの等の各種油類（例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等）から選択することができる。特に注射溶液剤（血液と等張の場合）には、水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液及びグリコールが好ましい液体担体である。例えば、静脈内投与用製剤は固体活性成分を水に溶解して水溶液を形成し、前記水溶液を滅菌することにより製造される活性成分の滅菌水溶液を含む。適切な医薬賦形剤としては、澱粉、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、タルク、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等が挙げられる。組成物には防腐剤、安定剤、湿潤剤又は乳化剤、浸透圧調節用塩類、緩衝剤等の従来の医薬添加剤を添加してもよい。適切な医薬担体とその製剤化についてはＥ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ著Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。このような組成物はいずれにしても、レシピエントに正しく投与するのに適した剤形となるように、適切な担体と共に有効量の活性化合物を含有している。
【0157】
前記医薬製剤は更に防腐剤、溶解補助剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、着香剤、浸透圧調節用塩類、緩衝剤、コーティング剤又は酸化防止剤も含有することができる。前記製剤は更に他の治療薬として有益な物質を含有することができ、このような物質としては式Ｉの成分以外の他の活性成分が挙げられる。
【0158】
本発明の化合物は少なくとも１カ所のＴＲβ突然変異をもつ対象における甲状腺ホルモン不応症（ＲＴＨ）の治療のための医薬として有用である。前記対象としては肥満症、高脂血症、高コレステロール血症、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、骨疾患、甲状腺系変性、アテローム性動脈硬化症、心血管障害、頻脈、多動行動、甲状腺機能低下症、甲状腺腫、注意欠陥多動性障害、学習障害、精神遅滞、難聴、骨年齢遅延、神経もしくは精神疾患又は甲状腺癌等の疾患をもつものが挙げられる。
【0159】
本発明の化合物の治療有効量ないし用量は広い範囲をとることができ、当分野で公知の方法で決定することができる。例えば、体重に応じて薬剤を投与することができる。このような用量は投与する特定の化合物、投与経路、治療する病態及び治療する患者等の特定の各症例における個々の要件に合わせて調節される。別の実施形態では、薬剤を固定用量で投与することができ、例えば体重に応じて調節しない。一般に、成人への経口又は非経口投与の場合、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇの１日用量が適切であると考えられるが、必要な場合には前記上限を越えてもよい。用量は１日当たり約５ｍｇ～約４００ｍｇが好ましい。好ましい用量は１日当たり約２０ｍｇ～約１００ｍｇとすることができる。前記１日用量を単回投与することもできるし、複数回に分けて投与することもでき、非経口投与では、持続輸液してもよい。
【0160】
薬剤の有効量は医師又は他の有資格観察者が判断した場合に客観的に認識可能な改善をもたらすと判断される量である。本願明細書で使用する「用量効果的」なる用語は対象又は細胞に所望の生物学的効果を生じるための活性化合物の量を意味する。
【0161】
医薬組成物は投与説明書と共に容器、パック又はディスペンサーに収容することができる。
【0162】
本発明の化合物は更に塩を形成することが可能である。これらの全形態も本発明の範囲内に含まれる。
【0163】
本願明細書で使用する「医薬として許容可能な塩」なる用語はその酸塩又は塩基塩を形成することにより親化合物を変換した本発明の化合物の誘導体を意味する。医薬として許容可能な塩の例としては、限定されないが、アミン、アルカリ等の塩基性残基の無機もしくは有機酸塩又はカルボン酸等の酸性残基の有機塩が挙げられる。医薬として許容可能な塩としては、例えば非毒性無機又は有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩又は第四級アンモニウム塩が挙げられる。例えば、このような従来の非毒性塩としては、限定されないが、２－アセトキシ安息香酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、炭酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、１，２－エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコリルアルサニル酸、ヘキシルレゾルシン酸、ヒドラバミン酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフトエ酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ナプシル酸、硝酸、蓚酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、塩基性酢酸、琥珀酸、スルファミン酸、スルファニル酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、及び通常のアミノ酸（例えばグリシン、アラニン、フェニルアラニン、アルギニン等）から選択される無機酸及び有機酸から誘導されるものが挙げられる。
【0164】
医薬として許容可能な塩の他の例としては、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ピルビン酸、マロン酸、３－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、４－クロロベンゼンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、４－トルエンスルホン酸、樟脳スルホン酸、４－メチルビシクロ－［２．２．２］－オクタ－２－エン－１－カルボン酸、３－フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ－ブチル酢酸、ムコン酸等から誘導されるものが挙げられる。本発明は更に、親化合物に存在する酸性プロトンが金属イオン（例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、又はアルミニウムイオン）で置換えられる場合又はエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ－メチルグルカミン、ジエチルアミン、ジエチルアミノエタノール、エチレンジアミン、イミダゾール、リジン、アルギニン、モルホリン、２－ヒドロキシエチルモルホリン、ジベンジルエチレンジアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、ピロリジン、ベンジルアミン、水酸化テトラメチルアンモニウム等の有機塩基と配位する場合に形成される塩も包含する。
【0165】
当然のことながら、医薬として許容可能な塩と言う場合には常に同一塩の本願明細書に定義するような溶媒付加形態（溶媒和物）又は結晶形態（多形体）を包含する。
【0166】
本発明の化合物はエステル（例えば医薬として許容可能なエステル）として製造することもできる。例えば、化合物中のカルボン酸官能基をその対応するエステル（例えばメチル、エチル又は他のエステル）に変換することができる。また、化合物中のアルコール基をその対応するエステル（例えば酢酸エステル、プロピオン酸エステル又は他のエステル）に変換することもできる。
【0167】
本発明の化合物はプロドラッグ（例えば医薬として許容可能なプロドラッグ）として製造することもできる。「プロ－ドラッグ」及び「プロドラッグ」なる用語は本願明細書では同義に使用し、活性な親薬剤を生体内で放出する任意化合物を意味する。プロドラッグは医薬品の多数の望ましい品質（例えば溶解度、生体利用性、製造性等）を強化することが知られているので、本発明の化合物はプロドラッグ形態で送達することができる。従って、本発明は本発明の化合物のプロドラッグ、前記プロドラッグの送達方法及び前記プロドラッグを含有する組成物も包含するものとする。「プロドラッグ」とは、このようなプロドラッグを対象に投与したときに本発明の活性な親薬剤を生体内で放出する任意の共有結合担体を包含するものとする。本発明におけるプロドラッグは日常的操作又は生体内で開裂して親化合物となるように、化合物中に存在する官能基を修飾することにより製造される。プロドラッグとしては、ヒドロキシ基、アミノ基、スルフヒドリル基、カルボキシ基又はカルボニル基が生体内で開裂して夫々遊離ヒドロキシル基、遊離アミノ基、遊離スルフヒドリル基、遊離カルボキシ基又は遊離カルボニル基を形成することができる任意基と結合した本発明の化合物が挙げられる。
【0168】
プロドラッグの例としては、限定されないが、本発明の化合物中のヒドロキシ官能基のエステル類（例えば酢酸エステル、ジアルキルアミノ酢酸エステル、ギ酸エステル、リン酸エステル、硫酸エステル及び安息香酸エステル誘導体）及びカルバミン酸エステル類（例えばＮ，Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）、カルボキシル官能基のエステル類（例えばエチルエステル、モルホリノエタノールエステル）、アミノ官能基のＮ－アシル誘導体（例えばＮ－アセチル）、Ｎ－マンニッヒ塩基、シッフ塩基及びエナミノン類、ケトン及びアルデヒド官能基のオキシム類、アセタール類、ケタール類及びエノールエステル類等が挙げられる。Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ，Ｈ．，Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｐ１－９２，Ｅｌｅｓｅｖｉｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ－Ｏｘｆｏｒｄ（１９８５）参照。
【0169】
前記化合物又はその医薬として許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグは経口、鼻腔内、経皮、経肺、吸入、口腔、舌下、腹腔内、皮下、筋肉内、静脈内、直腸、胸膜内、髄腔内及び非経口投与される。１実施形態では、前記化合物を経口投与する。所定の投与経路の利点は当業者に当業者に理解されよう。
【0170】
前記化合物を利用する投与レジメンは患者のタイプ、種、年齢、体重、性別及び病態；治療する病態の重篤度；投与経路；患者の腎及び肝機能；並びに利用する特定化合物又はその塩等の各種因子に従って選択される。通常の知識をもつ医師又は獣医であれば、病態の進行を予防、抑制又は阻止するために必要な薬剤の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【0171】
本発明の開示化合物の製剤化及び投与技術については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９５）を参酌することができる。１実施形態において、本願明細書に記載する化合物とその医薬として許容可能な塩は医薬製剤中で医薬として許容可能な担体又は希釈剤と共に使用される。適切な医薬として許容可能な担体としては、不活性固体充填剤又は希釈剤と、滅菌水溶液又は有機溶液が挙げられる。前記化合物は本願明細書に記載の範囲内の望ましい投与量を提供するために十分な量でこのような医薬組成物中に存在する。
【0172】
本発明はリガンド結合ドメインに突然変異を含む突然変異体ＴＲβを発現する対象に、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物、例えば化合物Ａ（例えばその形態Ｉ）を投与することにより、対象における甲状腺ホルモン不応症の症状を治療又は緩和する方法に関する。
【0173】
本開示は更に、対象からの試料を準備する段階と；少なくとも１カ所のＴＲβ突然変異（例えばＴＲβポリペプチドのリガンド結合ドメイン、例えば配列番号１に記載のポリペプチドにおける遺伝子突然変異又は突然変異）を検出し、前記突然変異が存在するならば、前記対象は式（ＩＶ）の化合物、例えば化合物Ａ（例えばその形態Ｉ）に対して応答性であると判定する段階により、本願明細書に開示する式（ＩＶ）の化合物に対する甲状腺ホルモン不応症（ＲＴＨ）をもつ対象の応答性を判定する方法を提供する。前記方法は更に、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物、例えば化合物Ａ（例えばその形態Ｉ）を投与することにより、前記突然変異をもつ対象を治療する段階を含むことができる。
【0174】
１実施形態において、化合物Ａ等の式（ＩＶ）の化合物に対して現在又は将来応答性を示す対象は肥満症、高脂血症、高コレステロール血症、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝炎、脂肪肝、骨疾患、甲状腺系変性、アテローム性動脈硬化症、心血管障害、頻脈、多動行動、甲状腺機能低下症、甲状腺腫、注意欠陥多動性障害、学習障害、精神遅滞、難聴、骨年齢遅延、神経もしくは精神疾患又は甲状腺癌をもつ。
【0175】
更に、本開示は対象からの試料におけるＴＲβ遺伝子突然変異の有無を判定する段階と；ＴＲβ遺伝子突然変異の有無に基づき、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物、例えば化合物Ａ（例えばその形態Ｉ）の投与を含む治療法を選択する段階を含む方法も提供する。
【0176】
本開示は更に、配列番号２に記載の核酸配列中にＴＲβ遺伝子突然変異を含む突然変異体ＴＲβ核酸配列に相補的なプライマーで対象からの試料中の核酸を増幅する段階と；増幅した核酸の有無を判定する段階と；増幅した核酸の有無に基づき、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物の投与を含む治療法を選択する段階、又は増幅した核酸の有無に基づき、治療有効量の式（ＩＶ）の化合物を投与することにより対象を治療する段階を含む方法を提供する。
【0177】
本願明細書に記載の突然変異体ＴＲβは突然変異体ＴＲβポリペプチド又は突然変異体ＴＲβポリペプチドをコードする核酸配列である。
【0178】
１実施形態において、突然変異体ＴＲβは配列番号１のアミノ酸位置２３４位、２４３位、３１６位及び３１７位に１カ所以上の突然変異を含む。より好ましくは、突然変異は配列番号１のアミノ酸位置２３４位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ２３４Ｔ）；配列番号１のアミノ酸位置２４３位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からグルタミン（Ｑ）への置換（Ｒ２４３Ｑ）；配列番号１のアミノ酸位置３１６位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からヒスチジン（Ｈ）への置換（Ｒ３１６Ｈ）；及び配列番号１のアミノ酸位置３１７位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ３１７Ｔ）から構成される群から選択される。
【0179】
１実施形態において、突然変異体ＴＲβは配列番号１のアミノ酸位置２３４位、２４３位、３１６位、及び３１７位に１カ所以上の突然変異をもつ突然変異体ＴＲβポリペプチドをコードする核酸配列を含む。突然変異体ＴＲβポリペプチド又は突然変異体ＴＲβポリペプチドに特徴的なペプチドフラグメントをコードする核酸配列は任意の適切な方法を使用して検出することができる。例えば、突然変異体ＴＲβポリペプチドをコードする核酸配列は、適切に選択されたＤＮＡ源とポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマーを当分野で周知の方法に従って使用して全長ゲノム再シークエンシング又は標的領域再シークエンシング（後者はターゲットリシークエンシングとも言う）を使用して検出することができる。例えば，Ｂｅｎｔｌｅｙ（２００６）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ．１６：５４５－５２、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ １９：１１２４－３２参照。前記方法は通常一般には、ゲノムＤＮＡ精製工程、着目領域を増幅するためのＰＣＲ増幅工程、サイクルシークエンシング工程、シークエンシング反応クリーンアップ工程、キャピラリー電気泳動工程及びデータ解析工程を伴う。イン・シリコプライマー設計ツールを使用して着目領域に対応するための高品質ＰＣＲプライマーを設計する。サイクルシークエンシング法は変性、アニール及び伸長の逐次ラウンドをサーマルサイクラーで実施して伸長産物を直線的に増幅させる簡単な方法である。通常では、末端ヌクレオチド塩基をＧ、Ａ、Ｔ又はＣと識別する蛍光タグを前記産物の末端に付加する。取込まれなかったダイターミネーターと塩はキャピラリー電気泳動注入に関して競合する可能性があるので、洗浄により除去する。キャピラリー電気泳動中に、サイクルシークエンシング反応の産物はポリマーを充填したキャピラリー内を泳動する。負電荷ＤＮＡフラグメントは正電極に向かってキャピラリー内を移動するにつれてサイズ毎に分離される。電気泳動後に、データ取得ソフトウェアにより生データのサンプルファイルを作成する。ダウンストリームソフトウェアアプリケーションを使用して更にデータ解析を実施し、取得したカラーデータ画像を対応するヌクレオチド塩基に翻訳する。上記の代わりに又は上記に加えて、前記方法はマイクロアレイによる標的領域ゲノムＤＮＡ検出及び／又はシークエンシングの使用を含むことができる。適切なＰＣＲプライマーを選択して再シークエンシングを実施するためのキット、試薬及び方法は例えばＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｇｉｌｅｎｔ及びＮｉｍｂｌｅＧｅｎ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）から市販されている。本発明で使用するには、例えば、配列番号１のアミノ酸位置２３４位、２４３位、３１６位、及び３１７位に１カ所以上の突然変異をもつ突然変異体ＴＲβポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも該当部分を増幅するようにＰＣＲプライマーを選択することができる。
【0180】
上記の代わりに又は上記に加えて、当分野で周知の方法に従ってサザンブロット法を使用して突然変異体ＴＲβポリペプチドをコードする核酸配列を検出してもよい。
【0181】
所定の実施形態において、本発明の方法は対象からの試料中でＴＲβの突然変異体を検出するためのアッセイを実施する工程を含む。本願明細書で使用する「対象からの試料」とは対象から採取又は由来する細胞又は細胞成分を含む任意の適切な試料を意味する。１実施形態において、前記試料は血液試料である。１実施形態において、前記試料は例えば甲状腺から採取された生検試料である。
【0182】
本開示は更に、突然変異体ＴＲβポリペプチドと式（ＩＶ）の化合物を含むリガンド－突然変異体ＴＲβ複合体を提供する。例えば、前記複合体を形成する突然変異体ＴＲβポリペプチドは配列番号１のアミノ酸位置２３４位、２４３位、３１６位、及び３１７位に１カ所以上の突然変異を含む。例えば、前記複合体を形成する化合物は化合物Ａである。
【0183】
更に、本開示は突然変異体ＴＲβ核酸配列と、突然変異体ＴＲβ核酸配列に相補的なＰＣＲプライマーを含むプライマー－核酸複合体を提供し、前記突然変異体核酸配列は配列番号２に記載の核酸配列中にＥＺＨ２遺伝子突然変異を含む。
【0184】
本願に引用する全特許、特許出願及び刊行物はその内容全体を本願に援用する。一方、明確な定義を含む特許、特許出願又は刊行物を本願に援用する場合には、これらの明確な定義はこれらの定義が含まれる援用特許、特許出願又は刊行物に適用されるものであると理解すべきであり、本願の明細書の他の部分、特に本願の特許請求の範囲に適用されるものではないと理解すべきである。
【0185】
以上、本発明をその好ましい特定の実施形態について説明したが、当然のことながら、上記記載及び以下の実施例は本発明を例証するものであって、その範囲を制限するものではない。本発明の範囲から逸脱しない限り、種々の変更及び均等物の置換えが可能であり、更に、他の態様、利点及び変更も本発明が属する分野の当業者に想到されることは当業者に理解されよう。
【0186】
本願明細書で使用する全百分率及び比は特に指定しない限り、重量に基づく。本発明の他の特徴及び利点は以下の種々の実施例から明白である。以下の実施例は本発明の実施に有用な種々の要素及び手法について例証する。以下の実施例は請求する発明を制限するものではない。本開示に基づき、当業者は本発明を実施するために有用な他の要素及び手法を認識し、利用することができる。
【実施例0187】
特に指定しない限り、下記実施例に記載する化合物に使用した分析機器及びパラメーターは以下の通りである。
【0188】
ＸＲＰＤデータはＣｕＫα線（４５ｋＶ，４０ｍＡ）を使用して２θ＝３～４５°でスキャン速度０．１２°／ｍｉｎ及びステップサイズ０．０２０°にて粉末Ｘ線回折装置（ＣｕｂｉＸ－Ｐｒｏ ＸＲＤ）で取得した。
【0189】
Ｓｉゼロ復帰超微量試料ホルダーに試料をセットした。１０ｍｍ照射幅を使用して分析を行い、ハードウェア／ソフトウェアには以下のパラメーターを設定した。
Ｘ線管：ＣｕＫα，４５ｋＶ，４０ｍＡ
検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ
ＡＳＳ主スリット：１°固定
発散スリット（Ｐｒｏｇ）：自動－５ｍｍ照射長
ソーラースリット：０．０２ラジアン
散乱スリット（ＰＡＳＳ）：自動－５ｍｍ観測長
スキャンレンジ：３．０～４５．０°
スキャンモード：連続
ステップサイズ：０．０２°
ステップ毎の時間：１０秒
動作長：２．５４°。
Ｘ線管：ＣｕＫα，４５ｋＶ，４０ｍＡ
検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ
ＡＳＳ主スリット：１°固定
発散スリット（Ｐｒｏｇ）：自動－５ｍｍ照射長
ソーラースリット：０．０２ラジアン
散乱スリット（ＰＡＳＳ）：自動－５ｍｍ観測長
スキャンレンジ：３．０～４５．０°
スキャンモード：連続
ステップサイズ：０．０２°
ステップ毎の時間：１０秒
動作長：２．５４°。
【0190】
分析後に、Ｘ’Ｐｅｒｔ ＨｉｇｈＳｃｏｒｅ Ｐｌｕｓソフトウェアを以下のパラメーターと共に使用してデータを可調節スリットから固定スリットに変換した。
固定発散スリットサイズ：１．００°，１．５９ｍｍ
交差点：４４．３ °ω。
固定発散スリットサイズ：１．００°，１．５９ｍｍ
交差点：４４．３ °ω。
【0191】
以下の実施例において、特に指定しない限り、化合物４はベンゾイル基で保護された化合物である。
【0192】
実施例１：Ｎ－（３，５－ジクロロ－４－（（６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）ベンズアミド（Ｒ２がベンゾイルである化合物４）の製造
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、還流冷却器、及びＮ２導入管／排出管を装着した１Ｌ容三口丸底フラスコに３，６－ジクロロピリダジン（１００ｇ，０．６７２ｍｏｌ，１倍重量）、４－アミノ－２，６－ジクロロフェノール（１２２ｇ，０．６８６ｍｏｌ，１．０２当量）及びＤＭＡＣ（５００ｍＬ，５倍容量）を仕込んだ。得られた溶液に炭酸セシウム（２５１ｇ，０．７７１ｍｏｌ，１．１５当量）を加え、懸濁液を１１０℃まで加熱した。この温度で３時間後、バッチ温度を７０℃まで下げ、この温度で１６時間撹拌した。１Ｈ ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ）によると、ほぼ全量のジクロロピリダジンが消費されていたので、反応は完了したとみなした。バッチを室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ，２０倍容量）を使用して３Ｌ容丸底フラスコに移した。シリカゲル（１００ｇ，１倍重量）を加え、懸濁液を３０分間撹拌し、濾過した。濾液が無色で溶出するまで反応容器とケーキをＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ，５倍容量）でリンスした。得られた濾液を１０％ＮａＣｌ水溶液（２Ｌ，２０倍容量）で処理し、２相混合物を３０分間撹拌し、下部水層を捨てた。上部有機層を減圧下に濃縮乾涸した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ，１倍容量）を残渣に加え、減圧下に濃縮乾涸し、粗生成物である化合物２（２５１ｇ，１２８％収率）を油状物として得た。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９３．４％であった。１Ｈ ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ）は帰属した構造に一致し、≒２５％ＤＭＡＣ及び２％ＥｔＯＡｃが存在することを示した。
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、還流冷却器、及びＮ２導入管／排出管を装着した１Ｌ容三口丸底フラスコに３，６－ジクロロピリダジン（１００ｇ，０．６７２ｍｏｌ，１倍重量）、４－アミノ－２，６－ジクロロフェノール（１２２ｇ，０．６８６ｍｏｌ，１．０２当量）及びＤＭＡＣ（５００ｍＬ，５倍容量）を仕込んだ。得られた溶液に炭酸セシウム（２５１ｇ，０．７７１ｍｏｌ，１．１５当量）を加え、懸濁液を１１０℃まで加熱した。この温度で３時間後、バッチ温度を７０℃まで下げ、この温度で１６時間撹拌した。１Ｈ ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ）によると、ほぼ全量のジクロロピリダジンが消費されていたので、反応は完了したとみなした。バッチを室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ，２０倍容量）を使用して３Ｌ容丸底フラスコに移した。シリカゲル（１００ｇ，１倍重量）を加え、懸濁液を３０分間撹拌し、濾過した。濾液が無色で溶出するまで反応容器とケーキをＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ，５倍容量）でリンスした。得られた濾液を１０％ＮａＣｌ水溶液（２Ｌ，２０倍容量）で処理し、２相混合物を３０分間撹拌し、下部水層を捨てた。上部有機層を減圧下に濃縮乾涸した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ，１倍容量）を残渣に加え、減圧下に濃縮乾涸し、粗生成物である化合物２（２５１ｇ，１２８％収率）を油状物として得た。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９３．４％であった。１Ｈ ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ）は帰属した構造に一致し、≒２５％ＤＭＡＣ及び２％ＥｔＯＡｃが存在することを示した。
【0193】
化合物２の他の合成条件を下表１～３に記載する。
【0194】
【表3】
【0195】
【表4】
【0196】
【表5】
【0197】
上記粗生成物２を酢酸（１．４８Ｌ，７．５倍容量）に溶解し、無水安息香酸（１６８ｇ，０．７４１ｍｏｌ，１．１当量）を加えた。得られた混合物を１００℃まで加熱し、この温度で３５分後に２の量は０．８％であった。酢酸ナトリウム（１１０ｇ，２当量）を加え、温度を１１０℃まで上げた。この温度で１４．５時間後に、反応混合物のＨＰＬＣ分析は中間体が残留していないことを示したので、反応は完了したとみなした。バッチを７５℃まで冷却し、バッチ温度を７２～７５℃に維持しながら、水（１．５Ｌ，７．７倍容量）を１時間かけて加えた。バッチを２１℃まで冷却し、Ｓｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過した。反応容器とケーキを順次水洗（１Ｌ，５倍容量）した。採取した固形分を５０℃の真空オーブンで１６時間乾燥後、粗生成物４の収量は１９５ｇ（７７％）であった。ＨＰＬＣ分析（Ｂ法，２２０ｎｍ）によると、純度は９１．６％であった。
【0198】
ＨＰＬＣ法Ｂ：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８，３．５μＭ，４．６×１５０ｍｍ
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．
移動相Ａ：０．０５％ＴＦＡ水溶液
移動相Ｂ：０．０５％ＴＦＡ水溶液
希釈剤：５０：５０ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８，３．５μＭ，４．６×１５０ｍｍ
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．
移動相Ａ：０．０５％ＴＦＡ水溶液
移動相Ｂ：０．０５％ＴＦＡ水溶液
希釈剤：５０：５０ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ
【0199】
【表6】
【0200】
１Ｈ ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ）は帰属した構造に一致し、酢酸含有率１％を示した。無水安息香酸の代わりに塩化ベンゾイルも保護に使用した。塩化ベンゾイルを使用した場合には、炭酸セシウムや炭酸カリウム等の塩基を使用し、室温で反応を実施した。
【0201】
化合物４の他の合成条件を下表４及び５に記載する。
【0202】
【表7】
【0203】
【表8】
【0204】
化合物４の精製：オーバーヘッド撹拌機、熱電対、還流冷却器、及びＮ２導入管／排出管を装着した５Ｌ容三口丸底フラスコに粗生成物４（１００ｇ，１倍重量）と酢酸（２Ｌ，２０倍容量）を仕込んだ。スラリーを撹拌し、９５℃まで加熱すると、溶解が生じた。バッチ温度を≒９５℃に維持しながら、水（２Ｌ，２０倍容量）を２．７５時間かけて加えると、沈澱が生じた。得られたスラリーを更に３０分間９５℃に加熱後、加熱を停止した。バッチが周囲温度に達した後、便宜上この温度で一晩撹拌し、Ｓｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過した。反応容器とケーキを順次水（１Ｌ，１０倍容量）でリンスした。採取した白色固体を９１ｇ（９１％）の一定重量になるまで４０℃の真空オーブンで乾燥した。乾燥した固体のＨＰＬＣ分析によると、純度は９８．０％であった。１Ｈ ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ）は帰属した構造に一致し、酢酸含有率は０．３％であった。下表６に化合物４の他の精製条件をまとめる。
【0205】
【表9】
【0206】
実施例２：６－（４－アミノ－２，６－ジクロロフェノキシ）－４－イソプロピルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（中間体７）の製造
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、Ｎ２導入管／排出管、及び還流冷却器を装着した４Ｌ容四口丸底フラスコに４（９５ｇ，０．２５３ｍｏｌ，１倍重量）、ＴＨＦ（６６５ｍＬ，７倍容量）、及びＬｉＣｌ（３２．３ｇ，０．７５９ｍｏｌ，３当量）を仕込んだ。得られた懸濁液を３５℃まで加熱し、バッチ温度を３５～４５℃に維持しながら、イソプロペニルマグネシウムブロミド溶液（０．５Ｍ ＴＨＦ溶液，１．７２Ｌ，０．８５９ｍｏｌ，３．４当量）を８０分間かけて加えた。得られたスラリーを４０℃に３時間加熱後、ＨＰＬＣ分析は８７％の変換率を示した。イソプロペニルマグネシウムブロミド溶液（０．５Ｍ ＴＨＦ溶液，５１ｍＬ，０．０２６ｍｏｌ，０．１当量）を加え、スラリーを４０～４３℃で更に９０分間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は９２．９％の変換率を示したので、反応は完了したとみなした。加熱を停止し、反応混合物を１４℃まで冷却し、バッチ温度を２６℃未満に維持しながら、３Ｎ ＨＣｌ水溶液（３８０ｍＬ，４倍容量）を１５分間かけてゆっくりと加えると、全固形分が溶解した。下部水層を捨て、ＴＨＦ（３５０ｍＬ，３．７倍容量）で抽出した。下部水層を捨てた後、有機層を合わせ、４に対して約５倍容量まで減圧下に濃縮した。得られた溶液に１０％（ｗ／ｗ）ＫＯＨ水溶液（５３２ｍＬ，５．６倍容量）を加え、ショートパス蒸留装置を使用してＴＨＦを留去しながら、混合物を８５℃まで加熱した。バッチを８５℃に１１時間維持し、加熱を停止した。バッチを便宜上、一晩かけて周囲温度まで冷却した。得られたスラリーをＨＰＬＣ分析（下記Ａ法）した処、中間体７への変換率は９９％であり、反応は完了したとみなした。
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、Ｎ２導入管／排出管、及び還流冷却器を装着した４Ｌ容四口丸底フラスコに４（９５ｇ，０．２５３ｍｏｌ，１倍重量）、ＴＨＦ（６６５ｍＬ，７倍容量）、及びＬｉＣｌ（３２．３ｇ，０．７５９ｍｏｌ，３当量）を仕込んだ。得られた懸濁液を３５℃まで加熱し、バッチ温度を３５～４５℃に維持しながら、イソプロペニルマグネシウムブロミド溶液（０．５Ｍ ＴＨＦ溶液，１．７２Ｌ，０．８５９ｍｏｌ，３．４当量）を８０分間かけて加えた。得られたスラリーを４０℃に３時間加熱後、ＨＰＬＣ分析は８７％の変換率を示した。イソプロペニルマグネシウムブロミド溶液（０．５Ｍ ＴＨＦ溶液，５１ｍＬ，０．０２６ｍｏｌ，０．１当量）を加え、スラリーを４０～４３℃で更に９０分間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は９２．９％の変換率を示したので、反応は完了したとみなした。加熱を停止し、反応混合物を１４℃まで冷却し、バッチ温度を２６℃未満に維持しながら、３Ｎ ＨＣｌ水溶液（３８０ｍＬ，４倍容量）を１５分間かけてゆっくりと加えると、全固形分が溶解した。下部水層を捨て、ＴＨＦ（３５０ｍＬ，３．７倍容量）で抽出した。下部水層を捨てた後、有機層を合わせ、４に対して約５倍容量まで減圧下に濃縮した。得られた溶液に１０％（ｗ／ｗ）ＫＯＨ水溶液（５３２ｍＬ，５．６倍容量）を加え、ショートパス蒸留装置を使用してＴＨＦを留去しながら、混合物を８５℃まで加熱した。バッチを８５℃に１１時間維持し、加熱を停止した。バッチを便宜上、一晩かけて周囲温度まで冷却した。得られたスラリーをＨＰＬＣ分析（下記Ａ法）した処、中間体７への変換率は９９％であり、反応は完了したとみなした。
【0207】
ＨＰＬＣ法Ａ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８，３．５μＭ，４．６×１５０ｍｍ
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．
移動相Ａ：０．０５％ＴＦＡ水溶液
移動相Ｂ：０．０５％ＴＦＡ水溶液
希釈剤：５０：５０ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ。
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８，３．５μＭ，４．６×１５０ｍｍ
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．
移動相Ａ：０．０５％ＴＦＡ水溶液
移動相Ｂ：０．０５％ＴＦＡ水溶液
希釈剤：５０：５０ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ。
【0208】
【表10】
【0209】
バッチ温度を４８℃に調整し、バッチ温度を４６～４８℃に維持しながら、３Ｎ ＨＣｌ水溶液（１５２ｍＬ，１．６倍容量）を３５分間かけて加え、ｐＨを７．５～８．０に調整した。加熱を停止し、スラリーを３０℃まで冷却した。１Ｈ ＮＭＲ分析（ＤＭＳＯ）によると、中間体７／ＴＨＦモル比は１．０：０．２２であった（添付資料１４）。バッチを３０℃にてＳｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過し、反応容器とケーキを順次水洗（４７５ｍＬ，５倍容量）した。ベージュ色固体の中間体７を８１．６ｇ（１０２％収率）の一定重量になるまで４０℃の真空オーブンで乾燥した。カール・フィッシャー解析によると、含水率は０．８％であった。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）は帰属した構造に一致し、ＴＨＦ含有率は０．４％であった。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９２．６％であった。下表７～１０は中間体７を製造するための反応パラメーターの概要を示す。
【0210】
【表11】
【0211】
【表12】
【0212】
【表13】
【0213】
【表14】
【0214】
実施例３：（２－シアノ－２－（２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）ヒドラゾノ）アセチル）カルバミン酸（Ｚ）－エチル（中間体８）の製造
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、Ｎ２導入管／排出管を装着した２Ｌ容三口丸底フラスコに中間体７（７５．０ｇ，０．２３９ｍｏｌ，１倍重量）、酢酸（６００ｍＬ，８倍容量）、水（１５０ｍＬ，２倍容量）、及び濃ＨＣｌ（７１．３ｍＬ，０．９５倍容量）を仕込んだ。得られた低粘度スラリーを６℃まで冷却し、バッチ温度を１０℃未満に維持しながら、ＮａＮＯ２（１６．８ｇ，０．２４３ｍｏｌ，１．０２当量）の水（３７．５ｍＬ，０．５倍容量）溶液を１０分間かけて加えた。５～１０℃で更に１０分間撹拌後、ＨＰＬＣ分析によると、中間体７はジアゾニウム中間体に完全に変換したことが判明した。バッチ温度を１０℃未満に維持しながら、ＮａＯＡｃ（５４．５ｇ，０．６６４ｍｏｌ，２．７８当量）の水（２２５ｍＬ，３倍容量）溶液を６分間かけて加えた。すぐにＮ－シアノアセチルウレタン（３７．９ｇ，０．２４３ｍｏｌ，１．０２当量）を加え、冷却を停止し、３５分間かけてバッチを８℃まで自然昇温させた。ＨＰＬＣ分析によると、ジアゾニウム中間体は完全に消費されたので、反応は完了したとみなした。バッチを２１℃まで自然昇温させ、Ｓｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過した。反応容器とケーキを順次２回水洗（３７５ｍＬ，５倍容量）した。オレンジ色の固体を採取し、３５℃の真空オーブンで６４時間乾燥し、粗生成物である中間体８（１０４．８ｇ，９１％）を得た。
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、Ｎ２導入管／排出管を装着した２Ｌ容三口丸底フラスコに中間体７（７５．０ｇ，０．２３９ｍｏｌ，１倍重量）、酢酸（６００ｍＬ，８倍容量）、水（１５０ｍＬ，２倍容量）、及び濃ＨＣｌ（７１．３ｍＬ，０．９５倍容量）を仕込んだ。得られた低粘度スラリーを６℃まで冷却し、バッチ温度を１０℃未満に維持しながら、ＮａＮＯ２（１６．８ｇ，０．２４３ｍｏｌ，１．０２当量）の水（３７．５ｍＬ，０．５倍容量）溶液を１０分間かけて加えた。５～１０℃で更に１０分間撹拌後、ＨＰＬＣ分析によると、中間体７はジアゾニウム中間体に完全に変換したことが判明した。バッチ温度を１０℃未満に維持しながら、ＮａＯＡｃ（５４．５ｇ，０．６６４ｍｏｌ，２．７８当量）の水（２２５ｍＬ，３倍容量）溶液を６分間かけて加えた。すぐにＮ－シアノアセチルウレタン（３７．９ｇ，０．２４３ｍｏｌ，１．０２当量）を加え、冷却を停止し、３５分間かけてバッチを８℃まで自然昇温させた。ＨＰＬＣ分析によると、ジアゾニウム中間体は完全に消費されたので、反応は完了したとみなした。バッチを２１℃まで自然昇温させ、Ｓｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過した。反応容器とケーキを順次２回水洗（３７５ｍＬ，５倍容量）した。オレンジ色の固体を採取し、３５℃の真空オーブンで６４時間乾燥し、粗生成物である中間体８（１０４．８ｇ，９１％）を得た。
【0215】
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、及びＮ２導入管／排出管を装着した１Ｌ容三口丸底フラスコに粗生成物である中間体８（１０４．４ｇ，１倍重量）と酢酸（５２２ｍＬ，５倍容量）を仕込んだ。得られたスラリーを５０℃まで加熱し、この温度に１．５時間維持した。バッチを２５℃まで２時間かけて自然放冷し、Ｓｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過した。反応容器とケーキを順次水洗（５２２ｍＬ，５倍容量）し、ケーキを１．７５時間減圧下でコンディショニングした。得られた明るいオレンジ色の固体を４０℃の真空オーブンで一定重量になるまで乾燥し、目的生成物８９．９ｇ（中間体７からの収率７８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）は帰属した構造に一致した。
【0216】
実施例４：２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（化合物Ａ）の製造
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、Ｎ２導入管／排出管、及び還流冷却器を装着した２Ｌ容三口丸底フラスコに中間体８（８９．３ｇ，０．１８５ｍｏｌ，１倍重量）、ＤＭＡＣ（４４６ｍＬ，５倍容量）、及びＫＯＡｃ（２０．０ｇ，０．２０４ｍｏｌ，１．１当量）を仕込んだ。混合物を１２０℃まで加熱し、この温度に２時間維持した。ＨＰＬＣ分析は化合物Ａへの完全な変換を示した。バッチ温度を１時間かけて１８℃に調整し、酢酸（２２．３ｍＬ，０．２５倍容量）を加えた。バッチ温度を８℃に調整し、水（７１４ｍＬ，８倍容量）を１時間かけて加えると、オレンジ色のスラリーが形成された。バッチをＳｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過し、ケーキを便宜上、非減圧下のＮ２下で一晩かけてコンディショニングした。１：１アセトン／水（４４５ｍＬ，５倍容量）のプレミックス溶液をフラスコに加え、減圧下にリンス液としてケーキに加えた。ケーキを２時間減圧下でコンディショニング後、オーバーヘッド撹拌機、熱電対、及びＮ２導入管／排出管を装着した清浄な１Ｌ容三口丸底フラスコに移した。エタノール（３５７ｍＬ，４倍容量）とアセトン（３５７ｍＬ，４倍容量）を加え、得られたスラリーを６０℃まで加熱すると、溶解が生じた。バッチ温度を５５～６０℃に維持しながら、水（８９０ｍＬ，１０倍容量）を９０分間かけて加えた。得られたスラリーを２５℃まで冷却し、Ｓｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過した。反応容器とケーキを順次１：１ ＥｔＯＨ／水溶液（４４６ｍＬ，５倍容量）で洗浄した。ケーキを便宜上、非減圧下のＮ２下で一晩かけてコンディショニングした。ケーキの亀裂を平らにし、真空に引いた。ケーキを水洗（１７９ｍＬ，２倍容量）し、７０．５ｇ（８７％，粗生成物である化合物Ａ）の一定重量になるまで４５℃の真空オーブンで乾燥した。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９４．８％であった。
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、Ｎ２導入管／排出管、及び還流冷却器を装着した２Ｌ容三口丸底フラスコに中間体８（８９．３ｇ，０．１８５ｍｏｌ，１倍重量）、ＤＭＡＣ（４４６ｍＬ，５倍容量）、及びＫＯＡｃ（２０．０ｇ，０．２０４ｍｏｌ，１．１当量）を仕込んだ。混合物を１２０℃まで加熱し、この温度に２時間維持した。ＨＰＬＣ分析は化合物Ａへの完全な変換を示した。バッチ温度を１時間かけて１８℃に調整し、酢酸（２２．３ｍＬ，０．２５倍容量）を加えた。バッチ温度を８℃に調整し、水（７１４ｍＬ，８倍容量）を１時間かけて加えると、オレンジ色のスラリーが形成された。バッチをＳｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過し、ケーキを便宜上、非減圧下のＮ２下で一晩かけてコンディショニングした。１：１アセトン／水（４４５ｍＬ，５倍容量）のプレミックス溶液をフラスコに加え、減圧下にリンス液としてケーキに加えた。ケーキを２時間減圧下でコンディショニング後、オーバーヘッド撹拌機、熱電対、及びＮ２導入管／排出管を装着した清浄な１Ｌ容三口丸底フラスコに移した。エタノール（３５７ｍＬ，４倍容量）とアセトン（３５７ｍＬ，４倍容量）を加え、得られたスラリーを６０℃まで加熱すると、溶解が生じた。バッチ温度を５５～６０℃に維持しながら、水（８９０ｍＬ，１０倍容量）を９０分間かけて加えた。得られたスラリーを２５℃まで冷却し、Ｓｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過した。反応容器とケーキを順次１：１ ＥｔＯＨ／水溶液（４４６ｍＬ，５倍容量）で洗浄した。ケーキを便宜上、非減圧下のＮ２下で一晩かけてコンディショニングした。ケーキの亀裂を平らにし、真空に引いた。ケーキを水洗（１７９ｍＬ，２倍容量）し、７０．５ｇ（８７％，粗生成物である化合物Ａ）の一定重量になるまで４５℃の真空オーブンで乾燥した。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９４．８％であった。
【0217】
オーバーヘッド撹拌機、熱電対、Ｎ２導入管／排出管、及び還流冷却器を装着した５００ｍＬ容三口丸底フラスコに粗生成物である化合物Ａ（７０．０ｇ）とＭＩＢＫ（３５０ｍＬ，５倍容量）を仕込んだ。得られたオレンジ色のスラリーを５０℃まで加熱し、この温度に２時間維持した。バッチを２３℃まで自然放冷し、Ｓｈａｒｋｓｋｉｎ濾紙で濾過した。反応容器とケーキを順次ＭＩＢＫ（３５ｍＬ，０．５倍容量）で２回洗浄した。固形分を採取し、５８．５ｇ（８４％）の一定重量になるまで４５℃の真空オーブンで乾燥した。オーバーヘッド撹拌機、熱電対、Ｎ２導入管／排出管及び還流冷却器を装着した５００ｍＬ容三口丸底フラスコにこの固体を加えた。エタノール（２９０ｍＬ，５倍容量）を加え、スラリーを加熱還流した。還流下で３．５時間後に、ＸＲＰＤはこの固体が形態Ｉに一致することを示したので、加熱を停止した。２５℃に達したら、バッチを濾紙で濾過し、反応容器とケーキを順次ＥｔＯＨ（１７４ｍＬ，３倍容量）で洗浄した。黄褐色の固体である化合物Ａを５０．４ｇ（８７％，中間体８からの収率は６４％）の一定重量になるまで４０℃の真空オーブンで乾燥した。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９９．１％であった。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）は帰属した構造に一致した。
【0218】
実施例５：２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（化合物Ａ）の大規模製造
下記スキームに従って化合物Ａの大規模バッチを合成した。下記スキームにおける条件は上記実施例１～４に記載した条件と同様である。
下記スキームに従って化合物Ａの大規模バッチを合成した。下記スキームにおける条件は上記実施例１～４に記載した条件と同様である。
【0219】
【化20】
【0220】
４の合成：５０Ｌ容ジャケット付ガラス容器（Ｎ２置換下）に３，６－ジクロロピリダジン（２．００ｋｇ）、４－アミノ－２，６－ジクロロフェノール（２．４４ｋｇ）及びＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（１０．０Ｌ）を仕込んだ。バッチを３回真空（２６ｉｎＨｇ）／窒素（１ＰＳＩＧ）置換した。炭酸セシウム（５．０３ｋｇ）を加え、バッチ温度を３．５時間かけて２２．３℃から６５．０℃に調整した。バッチを６５．０℃に２０時間維持した。この時点で、１Ｈ ＮＭＲ分析によると、３，６－ジクロロピリダジンは２に対して３．３４％であった。バッチ温度を２１．５℃に調整し、酢酸エチル（４．００Ｌ）をバッチに加えた。バッチを１０分間撹拌後、ポリプロピレン濾布を装着した１８”Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターで濾過した。濾過は１５分間を要した。酢酸エチル（５．３４Ｌ）を容器に加え、リンス液としてフィルターに移した。次にバッチを手動でフィルターに再懸濁した後、再び真空に引いた。この工程を更に２回繰返し、フィルターケーキを１０分間コンディショニングした。予め調製しておいた１５％塩化ナトリウム水溶液（１６．０Ｌ）を入れた１００Ｌ容器に濾液を加えた。バッチを５分間撹拌後、３５分間分離させた。界面が認められなかったので、計算値２３Ｌの下部水相を捨てた。１５％塩化ナトリウムの水溶液１６．０Ｌをバッチに加えた。バッチを６分間撹拌後、７分間分離させた。～１９Ｌで界面が認められたので、下部水相を捨てた。１５％塩化ナトリウム水溶液１７．０Ｌをバッチに加えた。バッチを７分間撹拌後、１１分間分離させた。下部水相を捨てた。容器を減圧蒸留にセットアップし、バッチ温度を２１℃付近に維持しながら、２時間２０分間かけてバッチを１７．０Ｌから８．０Ｌまで濃縮した。無水安息香酸（３．１９ｋｇ）と酢酸（１８．０Ｌ）を容器に加えた。容器を減圧蒸留にセットアップし、バッチ温度を２０～５５℃に維持しながら、バッチを２日間（２０℃に一晩維持）かけて２８．０Ｌから１２．０Ｌまで濃縮した。この時点で、１Ｈ ＮＭＲ分析によると、酢酸と酢酸エチルのモル比は１．０：０．０１５であった。酢酸（４．０Ｌ）をバッチに加え、バッチを１２Ｌまで蒸留した。１Ｈ ＮＭＲ分析によると、酢酸と酢酸エチルのモル比は１．０：０．００３６であった。酢酸（２０．０Ｌ）をバッチに加え、バッチ温度を７０．０℃に調整した。バッチから試料抽出し、ＨＰＬＣ分析した処、２は０．１６％であった。酢酸ナトリウム（２，２０ｋｇ）をバッチに加え、バッチ温度を７２．４℃から１１０．０℃に調整した。１８．５時間後に、ＨＰＬＣ分析によると、中間体Ｂは検出されなかった。バッチ温度を１１１．３℃から７４．７℃に調整し、２時間かけてバッチに脱イオン水（３０．０Ｌ）を加えた。バッチ温度を２０．５℃に調整後、ポリプロピレン濾布を装着した２４”Ｈａｓｅｌｌｏｙ Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターを使用して濾過した。予め調製しておいた１：１酢酸の脱イオン水（１０．０Ｌ）溶液を容器に加え、５分間撹拌した。洗浄液をフィルターに移した後、バッチを手動でフィルターに再懸濁した後、再び真空に引いた。脱イオン水（１０．０Ｌ）を容器に加えた後、フィルターに移した。バッチを手動でフィルターに再懸濁した後、再び真空に引いた。脱イオン水（１０．０Ｌ）を直接フィルターに加えた後、バッチを手動でフィルターに再懸濁した後、再び真空に引いた。フィルターケーキを１８時間コンディショニングし、１４．４ｋｇの４を得た。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９３．７％であった。この湿潤ケーキを精製に供した。１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器（Ｎ２置換下）に粗生成物４（湿潤ケーキ１４．４２ｋｇ）、酢酸（４８．８Ｌ）を仕込み、撹拌機を始動した。脱イオン水（１．７４Ｌ）を加えた。バッチ（スラリー）温度を４．２５時間かけて１８．１℃から１００．１℃に調整した。バッチを１００．１～１０６．１℃に１時間維持した後、７３．１℃に調整した。バッチ温度を７３．１～７０．３℃に維持しながら、脱イオン水（２８．０Ｌ）を１時間かけてバッチに加えた。バッチ温度を一晩かけて更に７０．３℃から２５．０℃に調整した。ポリプロピレン濾布を装着した２４”Ｈａｓｔｅｌｌｏｙ Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターを使用してバッチを濾過した。濾過は１３分間を要した。脱イオン水（９．００Ｌ）と酢酸（１１．０Ｌ）の溶液を調製し、１００Ｌ容器に加えた。混合物を５分間撹拌後、フィルターケーキに移した。脱イオン水（２０．０Ｌ）を容器に加え、６分間撹拌後、フィルターケーキに移した。脱イオン水（２０．０Ｌ）を容器に加え、９分間撹拌後、フィルターケーキに移した。バッチを３日間コンディショニングした後、真空オーブン乾燥のために乾燥トレーに移した。５０℃及び２８”／Ｈｇでバッチから３日後に、収率７４％（３．７ｋｇ）で４がオフホワイト固体として得られた。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは帰属した構造に一致し、ＨＰＬＣ分析によると、純度は９８．８７％であり、ＫＦ解析は０．１４％Ｈ２Ｏを示した。
【0221】
中間体７の合成：１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器（Ｎ２置換下）にテトラヒドロフラン（４４．４Ｌ）を仕込んだ。撹拌機を始動し（１２５ＲＰＭ）、４（３．６７ｋｇ）を加えた後、塩化リチウム（１．２６ｋｇ）を加えた。バッチ温度は２６．７℃であることが確認され、琥珀色の溶液であった。バッチを２４．３～３３．６℃に維持しながら、イソプロペニルマグネシウムブロミド１．６４モル２－メチルＴＨＦ（２１．２９ｋｇ）溶液を２．５時間かけて加えた。バッチを２４．５℃で１７時間撹拌し、この時点でＨＰＬＣ分析した処、４は９％であった。第２の１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器（Ｎ２置換下）に３Ｎ塩化水素（１８．３Ｌ）を仕込んだ。バッチ温度を２０～４６℃に維持しながら、３Ｎ ＨＣｌを仕込んだ容器に２５分間かけてバッチを移した。２相溶液が認められた。クエンチしたバッチを第１の１００Ｌ容器に戻し、残留している少量の残渣をクエンチした。ＴＨＦ（２．００Ｌ）をリンス液として使用した。バッチ温度は４０．９℃であることが認められ、３１８ＲＰＭで４５分間撹拌した。バッチ温度を２１．８℃に調整し、層分離させた。分離には１０分間を要した。下部水相を捨てた（～２６．０Ｌ）。塩化ナトリウム（１．５６ｋｇ）の脱イオン水（１４．０Ｌ）溶液を調製し、バッチに加えた。これを３１８ＲＰＭで１０分間撹拌し、撹拌機を停止した。分離には３分間を要した。下部水相を捨てた（～１６．０Ｌ）。～２４”／Ｈｇ及びジャケット温度５０～５５℃を使用してバッチを５８．０Ｌから１８．４Ｌまで減圧蒸留した。７２Ｌ容丸底フラスコ内で水酸化カリウム（２．３０ｋｇ）の脱イオン水（２０．７Ｌ）溶液を調製した。２個の蒸留ヘッドを使用して容器を常圧蒸留にセットアップし、バッチを７２Ｌ容器に移した。ＴＨＦ（０．７５Ｌ）をリンス液として使用した。バッチ容量は～４１．０Ｌとし、温度は６４．１℃に調整し、Ｎ２スイープにより蒸留を開始した。バッチ温度を８５．４℃にするように蒸留下に加熱を続け、この時点で７２Ｌ容器を還流にセットアップした（蒸留終了時のバッチ容量は約２８．０Ｌであった）。バッチを８５℃に１３時間維持し、この時点でＨＰＬＣ分析した処、化合物６Ａは０．３％であった。加熱を停止し、バッチを１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器に移した。固形分が認められた。バッチ温度を７０．６℃から５６．７℃に調整した。バッチ温度を５６．７～４６．７℃に維持しながら、予め調製しておいた炭酸水素ナトリウム（２．８２ｋｇ）の脱イオン水（３５．０Ｌ）溶液を８０分間かけて加えた。添加終了時のバッチｐＨは９．８であった。バッチを４６．７～４９．０℃に４０分間維持した後、２５．０℃まで冷却した。１８”ステンレス鋼Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターを使用してバッチを濾過した。脱イオン水（１８．４Ｌ）を容器に加え、フィルターに移した。フィルターケーキを手動でフィルターに再懸濁した後、液体を捨てた。この工程をもう一度繰返すと、フィルターケーキは厚み３”となった。フィルターケーキをフィルター上で３日間コンディショニングし、乾燥トレーに移し、４５℃の真空オーブンで乾燥し、ＨＰＬＣ純度８７．６％で２．９３ｋｇの中間体７（９５％収率）を得た。
【0222】
中間体８の合成：１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器（Ｎ２置換下で苛性ソーダ入りスクラバーに接続）に酢酸（１３．０Ｌ）を仕込んだ。中間体７（２．８５ｋｇ）を容器に加え、撹拌機を始動した。Ｎ－シアノアセチルウレタン（１．５６ｋｇ）と脱イオン水（５．７０Ｌ）を容器に加えた。バッチ温度を１７．０℃から５．５℃に調整すると、低粘度スラリーが認められた。この時点でバッチ温度を４．８℃～８．８℃に維持しながら、３７％塩化水素（２．７０Ｌ）を１０分間かけて加えた。バッチ温度を５．８℃～８．７℃に維持しながら、予め調製しておいた亜硝酸ナトリウム（６３８ｇ）の脱イオン水（１．４２Ｌ）溶液を２６分間かけて加えた。添加中に容器ヘッドスペースに茶色い気体が認められた。ＨＰＬＣ分析によると、中間体７は検出されなかった。この時点で、バッチ温度を５．５℃～９．５℃に維持しながら、予め調製しておいた酢酸ナトリウム（２．０７ｋｇ）の脱イオン水（８．５０Ｌ）溶液を４７分間かけて加えた。添加後、バッチのレベルの真上の容器壁にオレンジ色の残渣の薄層が認められた。バッチ温度を９．４℃から２４．５℃に調整し、２５℃（±５℃）に１２時間維持した。ポリプロピレン濾布を装着した２４”Ｈａｓｔｅｌｌｏｙ Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターを使用してバッチを濾過した。濾過は３０分間を要した。容器を１：１酢酸／脱イオン水１４．３Ｌでリンスした。反応容器に残っているオレンジ色の残渣をリンス液で洗い流した。リンス液をフィルターに移し、バッチを手動で再懸濁した。再び真空に引いて洗浄液を除去した。２回目の１：１酢酸／脱イオン水洗浄を上記のように実施し、バッチをフィルター上で２６時間コンディショニングした。湿潤フィルターケーキのＨＰＬＣ分析によると、純度は９０．４％であった。バッチを４５℃及び２８”／Ｈｇの真空オーブンで３．９７ｋｇ（９１％収率）の一定重量になるまで乾燥した。
【0223】
化合物ＡのＤＭＡＣ溶媒和物の製造
Ｎ２置換下の１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器に中間体８（３．９０ｋｇ）と酢酸カリウム（８７５ｇ）を仕込んだ。Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ，１８．３Ｌ）を容器に加え、撹拌機を始動した。バッチ温度を２時間かけて１１５℃に調整した。１１５℃で２時間後、バッチから試料抽出し、ＨＰＬＣ分析した処、０．２７％の中間体８が残留していた。バッチ温度を一晩かけて２５．０℃に調整した。酢酸（９７５ｍＬ）をバッチに加え、バッチを更に３時間撹拌した。バッチをカルボイに移し、容器をＤＭＡＣ ８００ｍＬでリンスした。減圧を使用して１０μｍインラインフィルターを通してバッチを１００Ｌ容器に戻し、ＤＭＡＣリンス液（１．１５Ｌ）を使用した。濾過は開始時には迅速であったが、終了時には遅くなり、フィルターが詰まった。バッチ温度を１１．１℃に調整し、バッチ温度を５～１５℃に維持しながら、２時間２０分間かけて脱イオン水（３５．１Ｌ）を加えた。バッチを１時間維持し、密織ポリプロピレン濾布を装着した１８” Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターを使用して濾過した。濾過は１５時間を要した。１：１エタノール／脱イオン水洗浄液（１９．５Ｌ）を容器に加え、１０℃まで冷却し、フィルターケーキに移した。ケーキをＮ２及び減圧下で８時間コンディショニングし、乾燥トレーに移した。バッチを４５℃及び２８”／Ｈｇの真空オーブンで乾燥し、８９％収率（３．７７ｋｇ）で化合物ＡのＤＭＡＣ溶媒和物をオレンジ色／黄褐色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは帰属した構造に一致し、カール・フィッシャー解析によると、０．４９％Ｈ２Ｏであった。ＸＲＰＤは予想通りの形態、即ち化合物ＡのＤＭＡＣ溶媒和物を示した。熱重量分析（ＴＧＡ）によると、重量減少は１６％であった。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９３．６７％であった。
Ｎ２置換下の１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器に中間体８（３．９０ｋｇ）と酢酸カリウム（８７５ｇ）を仕込んだ。Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ，１８．３Ｌ）を容器に加え、撹拌機を始動した。バッチ温度を２時間かけて１１５℃に調整した。１１５℃で２時間後、バッチから試料抽出し、ＨＰＬＣ分析した処、０．２７％の中間体８が残留していた。バッチ温度を一晩かけて２５．０℃に調整した。酢酸（９７５ｍＬ）をバッチに加え、バッチを更に３時間撹拌した。バッチをカルボイに移し、容器をＤＭＡＣ ８００ｍＬでリンスした。減圧を使用して１０μｍインラインフィルターを通してバッチを１００Ｌ容器に戻し、ＤＭＡＣリンス液（１．１５Ｌ）を使用した。濾過は開始時には迅速であったが、終了時には遅くなり、フィルターが詰まった。バッチ温度を１１．１℃に調整し、バッチ温度を５～１５℃に維持しながら、２時間２０分間かけて脱イオン水（３５．１Ｌ）を加えた。バッチを１時間維持し、密織ポリプロピレン濾布を装着した１８” Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターを使用して濾過した。濾過は１５時間を要した。１：１エタノール／脱イオン水洗浄液（１９．５Ｌ）を容器に加え、１０℃まで冷却し、フィルターケーキに移した。ケーキをＮ２及び減圧下で８時間コンディショニングし、乾燥トレーに移した。バッチを４５℃及び２８”／Ｈｇの真空オーブンで乾燥し、８９％収率（３．７７ｋｇ）で化合物ＡのＤＭＡＣ溶媒和物をオレンジ色／黄褐色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは帰属した構造に一致し、カール・フィッシャー解析によると、０．４９％Ｈ２Ｏであった。ＸＲＰＤは予想通りの形態、即ち化合物ＡのＤＭＡＣ溶媒和物を示した。熱重量分析（ＴＧＡ）によると、重量減少は１６％であった。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９３．６７％であった。
【0224】
粗生成物である化合物Ａの製造
Ｎ２置換下の１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器に化合物ＡのＤＭＡＣ溶媒和物（３．７５ｋｇ）とエタノール（１５．０Ｌ）を仕込んだ。撹拌機を始動し、アセトン（１５．０Ｌ）を加えた。１時間かけてバッチ温度を１０．６℃から６０．０℃に調整した。この時点で、バッチは溶液であった。バッチ温度を６０±５℃に維持しながら、１．５時間かけて脱イオン水をバッチに加えた。バッチを６０±５℃に１時間に維持し、２３．５℃まで冷却した。密織（０．６７ＣＦＭ）ポリプロピレン濾布を装着した１８”Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターをセットアップし、バッチを濾過した。濾過は１５時間を要した。１：１エタノール／脱イオン水洗浄液（１９．５Ｌ）を容器に加え、フィルターケーキに移した。ケーキをＮ２及び減圧下に８時間コンディショニングし、乾燥トレーに移した。バッチを４５℃及び２８”／Ｈｇの真空オーブンで５日間乾燥し、９４％収率（２．９０ｋｇ）で化合物Ａを粉末状の黄褐色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは帰属した構造に一致し、カール・フィッシャー解析は６．６％Ｈ２Ｏを示した。ＸＲＰＤは予想通りの二水和物の形態を示した。ＴＧＡによると、重量減少は６．７％であった。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９６．４％（ＡＵＣ）であった。
Ｎ２置換下の１００Ｌ容ジャケット付ガラス容器に化合物ＡのＤＭＡＣ溶媒和物（３．７５ｋｇ）とエタノール（１５．０Ｌ）を仕込んだ。撹拌機を始動し、アセトン（１５．０Ｌ）を加えた。１時間かけてバッチ温度を１０．６℃から６０．０℃に調整した。この時点で、バッチは溶液であった。バッチ温度を６０±５℃に維持しながら、１．５時間かけて脱イオン水をバッチに加えた。バッチを６０±５℃に１時間に維持し、２３．５℃まで冷却した。密織（０．６７ＣＦＭ）ポリプロピレン濾布を装着した１８”Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターをセットアップし、バッチを濾過した。濾過は１５時間を要した。１：１エタノール／脱イオン水洗浄液（１９．５Ｌ）を容器に加え、フィルターケーキに移した。ケーキをＮ２及び減圧下に８時間コンディショニングし、乾燥トレーに移した。バッチを４５℃及び２８”／Ｈｇの真空オーブンで５日間乾燥し、９４％収率（２．９０ｋｇ）で化合物Ａを粉末状の黄褐色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは帰属した構造に一致し、カール・フィッシャー解析は６．６％Ｈ２Ｏを示した。ＸＲＰＤは予想通りの二水和物の形態を示した。ＴＧＡによると、重量減少は６．７％であった。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９６．４％（ＡＵＣ）であった。
【0225】
粗生成物である化合物Ａの精製
Ｎ２置換下の５０Ｌ容ジャケット付ガラス容器に粗生成物である化合物Ａ（２．９０ｋｇ）とメチルイソブチルケトン（１４．５Ｌ）を仕込んだ。撹拌機を始動し、１．５時間かけてバッチ温度を２０．２℃から５０．４℃に調整した。バッチを５０℃（±５℃）に１時間維持し、２０～２５℃まで冷却した。バッチを２０～２５℃に２．５時間維持した。密織（０．６７ＣＦＭ）ポリプロピレン濾布を装着した１８”Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターをセットアップし、バッチを濾過した。濾過は２０分間を要した。メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ，１．４５Ｌ）を容器に加え、フィルターケーキに移した。ケーキを手動で再懸濁し、液体を減圧吸引した。メチルイソブチルケトン（２．９０Ｌ）をフィルターケーキに加え、ケーキを手動で再懸濁した。液体を減圧吸引し、ケーキを１５時間減圧及び窒素下でコンディショニングした。フィルターケーキを乾燥し、黄褐色の硬い１８”×１．５”ディスク状にした。これを手で砕き、コーヒー豆挽き機にかけ、７６％収率（２．７２ｋｇ）でＭＧＬ－３１９６ ＭＩＢＫ溶媒和物を黄褐色粉末状固体として得た。オーブン乾燥は不要であった。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは帰属した構造に一致し、カール・フィッシャー解析は＜０．１％Ｈ２Ｏを示した。ＸＲＰＤは予想通りのＭＩＢＫ溶媒和物の形態を示した。ＴＧＡによると、重量減少は１７．３％であった。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９８．５％であった。
Ｎ２置換下の５０Ｌ容ジャケット付ガラス容器に粗生成物である化合物Ａ（２．９０ｋｇ）とメチルイソブチルケトン（１４．５Ｌ）を仕込んだ。撹拌機を始動し、１．５時間かけてバッチ温度を２０．２℃から５０．４℃に調整した。バッチを５０℃（±５℃）に１時間維持し、２０～２５℃まで冷却した。バッチを２０～２５℃に２．５時間維持した。密織（０．６７ＣＦＭ）ポリプロピレン濾布を装着した１８”Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターをセットアップし、バッチを濾過した。濾過は２０分間を要した。メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ，１．４５Ｌ）を容器に加え、フィルターケーキに移した。ケーキを手動で再懸濁し、液体を減圧吸引した。メチルイソブチルケトン（２．９０Ｌ）をフィルターケーキに加え、ケーキを手動で再懸濁した。液体を減圧吸引し、ケーキを１５時間減圧及び窒素下でコンディショニングした。フィルターケーキを乾燥し、黄褐色の硬い１８”×１．５”ディスク状にした。これを手で砕き、コーヒー豆挽き機にかけ、７６％収率（２．７２ｋｇ）でＭＧＬ－３１９６ ＭＩＢＫ溶媒和物を黄褐色粉末状固体として得た。オーブン乾燥は不要であった。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは帰属した構造に一致し、カール・フィッシャー解析は＜０．１％Ｈ２Ｏを示した。ＸＲＰＤは予想通りのＭＩＢＫ溶媒和物の形態を示した。ＴＧＡによると、重量減少は１７．３％であった。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９８．５％であった。
【0226】
実施例６：化合物Ａから形態Ｉへの変換
上記実施例５に記載したように中間体８から得られた１：１ ＭＩＢＫ溶媒和物としての精製化合物Ａ（４８０２ｇ）をエタノール２４リットルと共に１００Ｌ容ジャケット付反応容器に仕込んだ。得られたスラリーを１時間２５分間かけて８０±５℃（還流）まで加熱し、混合物をこの温度で４時間２５分間撹拌した。濾過した固体を２時間５５分の時点で分析した処、形態変換は完了し、ＸＲＰＤスペクトルは形態Ｉに一致した。混合物を４５分間かけて２０±５℃まで冷却し、この温度で１５分間撹拌した。スラリーを濾過し、予め濾過しておいたエタノール（２×４．８Ｌ）でフィルターケーキを２回洗浄した。湿潤ケーキ（４．２８ｋｇ）を４０±５℃で１１８時間減圧乾燥し、３３９０の化合物Ａ形態Ｉを得た。
上記実施例５に記載したように中間体８から得られた１：１ ＭＩＢＫ溶媒和物としての精製化合物Ａ（４８０２ｇ）をエタノール２４リットルと共に１００Ｌ容ジャケット付反応容器に仕込んだ。得られたスラリーを１時間２５分間かけて８０±５℃（還流）まで加熱し、混合物をこの温度で４時間２５分間撹拌した。濾過した固体を２時間５５分の時点で分析した処、形態変換は完了し、ＸＲＰＤスペクトルは形態Ｉに一致した。混合物を４５分間かけて２０±５℃まで冷却し、この温度で１５分間撹拌した。スラリーを濾過し、予め濾過しておいたエタノール（２×４．８Ｌ）でフィルターケーキを２回洗浄した。湿潤ケーキ（４．２８ｋｇ）を４０±５℃で１１８時間減圧乾燥し、３３９０の化合物Ａ形態Ｉを得た。
【0227】
上記方法により作製した化合物Ａ形態Ｉの各種ロットで粉末Ｘ線回折試験を実施した。微粉化後のＸＲＰＤによると形態１が確認される。
【0228】
形態Ｉのデータを下表１１に示し、形態Ｉの回折図を図１として示す。
【0229】
【表15】
【0230】
形態Ｉは３２１℃付近に溶融開始点をもち、溶融後、分解することがＤＳＣにより判明した（図２）。
【0231】
実施例７：化合物Ａ形態Ｉの製造：化合物Ａの溶媒和物から形態Ｉへの変換
Ｎ２置換下の５０Ｌ容ジャケット付ガラス容器に上記実施例５からの化合物ＡのＭＩＢＫ溶媒和物（２．７２ｋｇ）とエタノール（１３．６Ｌ）を仕込んだ。撹拌機を始動し、バッチ温度を１．３時間かけて１６．８℃から７９．４℃に調整した。バッチを７９．５℃に２時間維持し、ＸＲＰＤ分析用に試料抽出した。ＸＲＰＤは形態Ｉを示したので、バッチを１時間１０分間かけて２４．９℃まで冷却した。密織（０．６７ＣＦＭ）ポリプロピレン濾布を装着した１８”Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターをセットアップし、バッチを濾過した。濾過は４分間を要した。エタノール（２．８Ｌ）を容器に加え、フィルターケーキに移した。ケーキを手動で再懸濁し、液体を減圧吸引した。エタノール（２．８０Ｌ）をフィルターケーキに加え、ケーキを手動で再懸濁した。液体を減圧吸引し、ケーキを減圧及び窒素下で１時間コンディショニングした。フィルターケーキを乾燥パンに移し、４５℃及び２８”／Ｈｇで１日間乾燥し、８９％収率（１．９６ｋｇ）で化合物Ａを薄黄色固体として得た。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９９．６％であった。ＸＲＰＤ解析は形態Ｉに一致する。この材料３００ｇを２”ジェットミルで粉砕し、２８４ｇ（９５％収率）の微粉状の化合物Ａを得た。ＸＲＰＤ解析によると、微粉状の化合物Ａは形態Ｉのままであることが確認された。
Ｎ２置換下の５０Ｌ容ジャケット付ガラス容器に上記実施例５からの化合物ＡのＭＩＢＫ溶媒和物（２．７２ｋｇ）とエタノール（１３．６Ｌ）を仕込んだ。撹拌機を始動し、バッチ温度を１．３時間かけて１６．８℃から７９．４℃に調整した。バッチを７９．５℃に２時間維持し、ＸＲＰＤ分析用に試料抽出した。ＸＲＰＤは形態Ｉを示したので、バッチを１時間１０分間かけて２４．９℃まで冷却した。密織（０．６７ＣＦＭ）ポリプロピレン濾布を装着した１８”Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターをセットアップし、バッチを濾過した。濾過は４分間を要した。エタノール（２．８Ｌ）を容器に加え、フィルターケーキに移した。ケーキを手動で再懸濁し、液体を減圧吸引した。エタノール（２．８０Ｌ）をフィルターケーキに加え、ケーキを手動で再懸濁した。液体を減圧吸引し、ケーキを減圧及び窒素下で１時間コンディショニングした。フィルターケーキを乾燥パンに移し、４５℃及び２８”／Ｈｇで１日間乾燥し、８９％収率（１．９６ｋｇ）で化合物Ａを薄黄色固体として得た。ＨＰＬＣ分析によると、純度は９９．６％であった。ＸＲＰＤ解析は形態Ｉに一致する。この材料３００ｇを２”ジェットミルで粉砕し、２８４ｇ（９５％収率）の微粉状の化合物Ａを得た。ＸＲＰＤ解析によると、微粉状の化合物Ａは形態Ｉのままであることが確認された。
【0232】
実施例７に記載したように二水和物及びＭＩＢＫ溶媒和物を経て化合物ＡのＤＭＡＣ溶媒和物を形態Ｉに変換することができる。別法では、８倍容量のエタノールと共に８０℃まで２時間加熱後に室温まで冷却して濾過することにより、７５％の収率（中間体８から計算した収率）でＤＭＡＣ溶媒和物は形態Ｉに直接変換された。別の反応では、８倍容量のＭＩＢＫと共に８０℃まで加熱後に室温まで冷却することにより、ＤＭＡＣ溶媒和物と二水和物の混合物であった化合物Ａの試料は６９％の収率で形態Ｉに変換された。
【0233】
化合物Ａと甲状腺ホルモン受容体の相互作用のモデリング
ＲＣＳＢ蛋白質データバンクから結晶構造（ＩＤ番号：１Ｎ４６、１ＮＱ０、１ＮＱ１、１ＮＱ２及び１ＮＵＯ）を入手した。Ｍａｃ ＯＳ Ｘ用ＭａｃＰｙｍｏｌ（Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ ２００６ ＤｅＬａｎｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＬＬＣ．；現在はＳｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ Ｉｎｃ．の製品）を使用して蛋白質共結晶構造を整列させた。リガンド－蛋白質相互作用の全分析にもＭａｃＰｙｍｏｌを使用し、図３～９を得た。これらの図から総合的に判断すると、化合物ＡはＴＨＲβ突然変異体における構造変異をより良好に受け入れることが可能である。例えば突然変異体Ａｒｇ３１６Ｈｉｓにおいて、Ａｒｇ３１６はＨｉｓに突然変異しており、Ａｒｇ３２０はリガンドから若干ずれている。その結果、Ａｒｇ３１６Ｈｉｓ突然変異体ではＡｒｇ３２０とＴ３の特異的相互作用が弱まる。これに対して、化合物Ａにおける大きな負の分極性複素環はＡｒｇ３１６Ｈｉｓ突然変異により妨害されない良好な相互作用を形成する。換言するならば、より大きく、より分極性の高い複素環をもつ化合物ＡはＡｒｇ３２０及び突然変異したＨｉｓ３１６との間に良好な相互作用を維持する。例えば図８及び９参照。結果は他の突然変異についても同様である。
ＲＣＳＢ蛋白質データバンクから結晶構造（ＩＤ番号：１Ｎ４６、１ＮＱ０、１ＮＱ１、１ＮＱ２及び１ＮＵＯ）を入手した。Ｍａｃ ＯＳ Ｘ用ＭａｃＰｙｍｏｌ（Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ ２００６ ＤｅＬａｎｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＬＬＣ．；現在はＳｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ Ｉｎｃ．の製品）を使用して蛋白質共結晶構造を整列させた。リガンド－蛋白質相互作用の全分析にもＭａｃＰｙｍｏｌを使用し、図３～９を得た。これらの図から総合的に判断すると、化合物ＡはＴＨＲβ突然変異体における構造変異をより良好に受け入れることが可能である。例えば突然変異体Ａｒｇ３１６Ｈｉｓにおいて、Ａｒｇ３１６はＨｉｓに突然変異しており、Ａｒｇ３２０はリガンドから若干ずれている。その結果、Ａｒｇ３１６Ｈｉｓ突然変異体ではＡｒｇ３２０とＴ３の特異的相互作用が弱まる。これに対して、化合物Ａにおける大きな負の分極性複素環はＡｒｇ３１６Ｈｉｓ突然変異により妨害されない良好な相互作用を形成する。換言するならば、より大きく、より分極性の高い複素環をもつ化合物ＡはＡｒｇ３２０及び突然変異したＨｉｓ３１６との間に良好な相互作用を維持する。例えば図８及び９参照。結果は他の突然変異についても同様である。
【0234】
下表に所定のＴＲβ突然変異体の生化学的性質をまとめる。他の突然変異体とその性質については、例えばＭ．Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９４；９４（２）：５０６－５１５，Ｂ．Ｒ．Ｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２００３，１７（４）：６４３－６５２；及びＢ．Ｒ．Ｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２００３，１７（１）：１０７－１１６を参照することができ、各々その内容全体を本願に援用する。
【0235】
【表16】
【0236】
均等物
発明の趣旨又は本質的特徴から逸脱しない限り、他の特定形態でも本発明を実施することができる。従って、上記実施形態は本願明細書に記載する発明を制限するものではなく、あらゆる点において例証であるとみなすべきである。 従って、本発明の範囲は上記記載ではなく、以下の特許請求の範囲により指定されるものであり、特許請求の範囲の均等物の意味と範囲に含まれるあらゆる変更も特許請求の範囲に含むものとする。
発明の趣旨又は本質的特徴から逸脱しない限り、他の特定形態でも本発明を実施することができる。従って、上記実施形態は本願明細書に記載する発明を制限するものではなく、あらゆる点において例証であるとみなすべきである。 従って、本発明の範囲は上記記載ではなく、以下の特許請求の範囲により指定されるものであり、特許請求の範囲の均等物の意味と範囲に含まれるあらゆる変更も特許請求の範囲に含むものとする。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-04-05
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
２－（３，５－ジクロロ－４－（（５－イソプロピル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－カルボニトリル（「化合物Ａ」）の形態であって、前記形態が二水和物である、形態。
【請求項2】
請求項１に記載の形態と医薬として許容可能な担体とを含有する、医薬組成物。
【請求項3】
対象における非アルコール性脂肪性肝炎を治療するための医薬の製造における、請求項１に記載の形態の使用。
【請求項4】
対象における脂肪肝疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１に記載の形態の使用。
【請求項5】
対象における高コレステロール血症を治療するための医薬の製造における、請求項１に記載の形態の使用。
【請求項6】
少なくとも１カ所のＴＲβ突然変異をもつ対象における甲状腺ホルモン不応症（ＲＴＨ）を治療するための医薬の製造における、請求項１に記載の形態の使用。
【請求項7】
前記対象が、脂肪肝疾患、甲状腺系変性、頻脈、多動行動、甲状腺機能低下症、甲状腺腫、注意欠陥多動性障害、学習障害、難聴、骨年齢遅延、又は甲状腺癌をもつ、請求項６に記載の使用。
【請求項8】
前記ＴＲβ突然変異が、
配列番号１のアミノ酸位置２３４位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ２３４Ｔ）；
配列番号１のアミノ酸位置２４３位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からグルタミン（Ｑ）への置換（Ｒ２４３Ｑ）；
配列番号１のアミノ酸位置３１６位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からヒスチジン（Ｈ）への置換（Ｒ３１６Ｈ）；及び
配列番号１のアミノ酸位置３１７位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ３１７Ｔ）
から構成される群から選択される、請求項６に記載の使用。
配列番号１のアミノ酸位置２３４位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ２３４Ｔ）；
配列番号１のアミノ酸位置２４３位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からグルタミン（Ｑ）への置換（Ｒ２４３Ｑ）；
配列番号１のアミノ酸位置３１６位における野生型残基アルギニン（Ｒ）からヒスチジン（Ｈ）への置換（Ｒ３１６Ｈ）；及び
配列番号１のアミノ酸位置３１７位における野生型残基アラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換（Ａ３１７Ｔ）
から構成される群から選択される、請求項６に記載の使用。
【請求項9】
前記二水和物が、カール・フィッシャー解析による測定で、６．６％のＨ２Ｏを有する、請求項１に記載の形態。
【請求項10】
（ａ）化合物Ａの溶媒和物にアセトンを加えて、混合物を調製する工程、
（ｂ）前記混合物を、第１の温度に加熱する工程、
（ｃ）前記混合物を第１の温度に維持しながら、前記混合物に脱イオン水を加える工程、
（ｄ）前記混合物を、第２の温度に冷却する工程、
（ｅ）前記混合物を濾過して、フィルターケーキを生成する工程、及び
（ｆ）前記フィルターケーキを乾燥する工程
を含む方法によって調製される、請求項１に記載の形態。
（ｂ）前記混合物を、第１の温度に加熱する工程、
（ｃ）前記混合物を第１の温度に維持しながら、前記混合物に脱イオン水を加える工程、
（ｄ）前記混合物を、第２の温度に冷却する工程、
（ｅ）前記混合物を濾過して、フィルターケーキを生成する工程、及び
（ｆ）前記フィルターケーキを乾燥する工程
を含む方法によって調製される、請求項１に記載の形態。