特開 2022-80924 リソソーム活性促進剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022080924

(43)【公開日】2022-05-31

(54)【発明の名称】リソソーム活性促進剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/232 20060101AFI20220524BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220524BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20220524BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20220524BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20220524BHJP

   A61P 3/08 20060101ALI20220524BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20220524BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20220524BHJP

   A61K 8/9789 20170101ALI20220524BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20220524BHJP

   A61K 127/00 20060101ALN20220524BHJP

   A61K 135/00 20060101ALN20220524BHJP

【ＦＩ】

A61K36/232

A61P43/00 107

A61P3/06

A61P3/00

A61P43/00 111

A61P17/00

A61P3/08

A61P19/08

A61P25/08

A61K8/9789

A61Q19/00

A61K127:00

A61K135:00

【審査請求】未請求

【請求項の数】5

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2020192148

(22)【出願日】2020-11-19

(71)【出願人】

【識別番号】000113470

【氏名又は名称】ポーラ化成工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100137338

【弁理士】

【氏名又は名称】辻田 朋子

(74)【代理人】

【識別番号】100196313

【弁理士】

【氏名又は名称】村松 大輔

(72)【発明者】

【氏名】多田 明弘

(72)【発明者】

【氏名】三谷 信

(72)【発明者】

【氏名】稲葉 知佳

【テーマコード（参考）】

4C083

4C088

【Ｆターム（参考）】

4C083AA111

4C083AA112

4C083AC102

4C083AC112

4C083AC122

4C083AC172

4C083AC432

4C083CC04

4C083DD23

4C083DD27

4C083EE12

4C088AB41

4C088AC05

4C088BA08

4C088MA63

4C088NA14

4C088ZA06

4C088ZA89

4C088ZA96

4C088ZB21

4C088ZC19

4C088ZC21

4C088ZC33

4C088ZC35

(57)【要約】

【課題】新規なリソソーム活性促進剤を提供することを課題とする。
【解決手段】本発明は、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）に属する植物の抽出物を有効成分とする、線維芽細胞のリソソーム活性促進剤である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）に属する植物の抽出物を有効成分とする、線維芽細胞のリソソーム活性促進剤。

【請求項2】

セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）に属する植物が、アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｋｅｉｓｋｅｉ）である、請求項１に記載の線維芽細胞のリソソーム活性促進剤。

【請求項3】

真皮のリソソーム活性を促進するための、請求項１又は２に記載の線維芽細胞のリソソーム活性促進剤。

【請求項4】

前記植物の抽出物の含有量が、乾燥質量を基準として、０．５～４．０質量％であることを特徴とする、請求項１～３の何れか一項に記載の線維芽細胞のリソソーム活性促進剤。

【請求項5】

請求項１～４の何れか一項に記載の線維芽細胞のリソソーム活性促進剤を含む、線維芽細胞のリソソーム活性を促進するための外用剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、線維芽細胞におけるリソソーム活性促進剤に関する。

【背景技術】

【0002】

リソソームは、真核生物が持つ細胞小器官の一つであり、内部に加水分解酵素を持つ細胞内消化の場である。エンドサイトーシスやオートファジーによって膜内に取り込まれた生体高分子はリソソームにおいて分解され、分解物のうち有用なものは、細胞質に吸収され再利用され、不用物はエキソサイトーシスによって細胞外に廃棄されるか、残余小体として細胞内に留まる。

【0003】

リソソームの活性は種々の疾患に関わっていることが知られている。代表的な疾患としては、リソソーム蓄積症が知られている。リソソーム蓄積症は、多くの場合リソソーム内で働く加水分解酵素の欠損または変異によって当該酵素の基質が分解されずに沈着物として細胞内に蓄積することによって発症する。リソソーム蓄積症には、広範な臨床的不均一性および生物学的多様性があり、脂質蓄積症、ムコ多糖症、ムコ脂質症、および糖タンパク質蓄積症が含まれる（特許文献１及び２参照）。

【0004】

そこで、近年、リソソーム活性を向上させる成分の探索がなされており、イネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）ジュズダマ属（Ｃｏｉｘ）に属する植物の抽出物、カバノキ科（Ｂｅｔｕｌａｃｅａｅ）カバノキ属（Ｂｅｔｕｌａ）に属する植物の抽出物が、リソソーム活性を促進することが知られている（特許文献３）。

【0005】

他方、ケラチノサイト内におけるリソソーム活性を向上させメラノソームタンパク質の分解を促進することにより美白効果が得られることが知られている（特許文献４、非特許文献１及び２）。

【0006】

また、リソソーム内酵素であるカテプシンＢ１、Ｄがコラーゲンを分解すること（非特許文献３）、ヒアルロン酸がリソソーム内に取り込まれ分解されること（非特許文献４）が知られている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】特表２０１４－５１７０１５号公報

【特許文献2】特表２０１４－５２３８８１号公報

【特許文献3】特開２０１７－２０６４６８号公報

【特許文献4】特開２０１５－１００７１号公報

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】富士フイルム株式会社、“シミの原因となるメラニン色素が表皮細胞内で分解される現象を実証 美白有用成分「ＡＭＡ（エーエムエー）」にメラニン色素分解促進効果を確認”、［ｏｎｌｉｎｅ］、２０１３年１１月２８日、［令和２年９月９日検索］、インターネット〈ＵＲＬ：https://www.chem-t.com/fax/images/tmp_file1_1385607762.pdf〉

【非特許文献2】富士フイルム株式会社、“タンパク質分解酵素「カテプシンＶ」がシミの原因となるメラニン色素を含むメラノソームの分解に関与することを発見 米ぬか脂質に含有される「オリザノール」が、メラノソームの分解を促すことを確認”、［ｏｎｌｉｎｅ］、２０１５年１１月５日、［令和２年９月９日検索］、インターネット〈URL:https://www.chem-t.com/fax/images/tmp_file1_1446691328.pdf〉

【非特許文献3】Biochem.J.(1974)137,387-398

【非特許文献4】Matrix Biol.2002Jan;21(1):15-23.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

上述したようにリソソームは種々の疾患に関連しており、その活性を向上させ得る成分の開発が望まれている。そこで、本発明は、新規なリソソーム活性促進剤を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

上記課題を解決する本発明は、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）に属する植物の抽出物を有効成分とする、線維芽細胞のリソソーム活性促進剤である。
本発明の線維芽細胞のリソソーム活性促進剤は、リソソームの活性低下に起因する疾患の治療又は予防や、リソソームの活性に関連する生体機能向上、特に皮膚状態の改善に有用である。

【0011】

本発明の好ましい形態では、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）に属する植物が、アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｋｅｉｓｋｅｉ）である。

【0012】

本発明の好ましい形態では、本発明は、真皮のリソソーム活性を促進するためのリソソーム活性促進剤である。

【0013】

本発明の好ましい形態では、前記植物の抽出物の含有量が、乾燥質量を基準として、０．５～４．０質量％である。

【0014】

本発明は、上記線維芽細胞のリソソーム活性促進剤を含む、線維芽細胞のリソソーム活性を促進するための外用剤にも関する。
このような本発明の外用剤は、容易に継続使用することができ、リソソームの活性低下に起因する疾患の治療又は予防や、リソソームの活性に関連する生体機能向上、特に皮膚状態の改善に有用である。

【発明の効果】

【0015】

本発明の線維芽細胞のリソソーム活性促進剤は、線維芽細胞においてリソソームの活性を向上させることができる。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】試験例１における、アシタバ抽出物を未添加の場合（コントロール）における、真皮線維芽細胞のリソソーム活性を示す蛍光写真である。写真中のスケールバーは５００μｍを示す。

【図2】試験例１における、０．１％のアシタバ抽出物を添加した場合における、真皮線維芽細胞のリソソーム活性を示す蛍光写真である。写真中のスケールバーは５００μｍを示す。

【図3】試験例１における、０．０５％のアシタバ抽出物を添加した場合における、真皮線維芽細胞のリソソーム活性を示す蛍光写真である。写真中のスケールバーは５００μｍを示す。

【図4】試験例２における、アシタバ抽出物を未配合の化粧水を添加した場合における、真皮線維芽細胞のリソソーム活性を示す蛍光写真である。写真中のスケールバーは、５００μｍを示す。

【図5】試験例２における、アシタバ抽出物を配合した化粧水を添加した場合における、真皮線維芽細胞のリソソーム活性を示す蛍光写真である。写真中のスケールバーは、５００μｍを示す。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本発明の線維芽細胞のリソソーム活性促進剤（以下、単にリソソーム活性促進剤という）は、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）に属する植物の抽出物（以下、単にシシウド属の抽出物ともいう）を含む。
前記セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）に属する植物としては、アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｋｅｉｓｋｅｉ）が好ましく挙げられる。

【0018】

シシウド属に属する植物の抽出部位は、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、茎部、花部、果実部、根部などが挙げられるが、これらの中でも、特に葉部及び／又は茎部を用いることが好ましい。

【0019】

抽出に際して、シシウド属に属する植物の抽出部位又はその乾燥物は、予め、粉砕或いは細切して抽出効率を向上させるように加工することが好ましい。抽出部位の乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

【0020】

抽出は、常圧、若しくは加圧、減圧下で、室温、冷却又は加熱した状態で抽出溶媒に浸漬させて抽出する方法、水蒸気蒸留などの蒸留法を用いて抽出する方法並びに抽出部位を圧搾して抽出物を得る圧搾法などが例示され、これらの方法を単独で、又は２種以上を組み合わせて抽出を行うこともできる。

【0021】

浸漬によって抽出する場合、シシウド属に属する植物の植物体、地上部、根茎部、及び／又は種子の乾燥物１質量部に対して溶媒を１～３０質量部加え、室温であれば数日間、溶媒の沸点付近の温度であれば数時間浸漬することにより行うことができる。浸漬後は、室温まで冷却し、不要物を除去した後、溶媒を減圧濃縮等により濃縮液をえることができる。濃縮液を５℃で静置し、析出した澱をろ過することにより、所望の抽出物を得ることができる。

【0022】

抽出溶媒としては、極性溶媒が好ましく、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール及びブタノール等のアルコール類、１，３－ブチレングリコール、ポリプロピレングリコール及びグリセリン等の多価アルコール類、アセトン及びメチルエチルケトン等のケトン類、並びにジエチルエーテル及びテトラヒドロフラン等のエーテル類から選択される１種又は２種以上が好適に例示でき、中でも１，３－ブチレングリコール、又は水を用いて抽出することが好ましい。
このようにして得られた抽出物、又はこれを適宜濃縮したものを本発明のリソソーム活性促進剤とすることができる。

【0023】

また、シシウド属の抽出物は、市販のものを用いることができ、これを本発明のリソソーム活性促進剤とすることができる。例えば、「アシタバ抽出液ＢＧ（丸善製薬株式会社製）」を用いることができる。

【0024】

本発明のリソソーム活性促進剤全量に対し、シシウド属の抽出物の含有量は、乾燥質量を基準として、好ましくは０．５～４．０質量％であり、より好ましくは０．９～２．７質量％であり、さらに好ましくは１．５～２．０質量％である。

【0025】

本発明のリソソーム活性促進剤は、線維芽細胞におけるリソソームの活性を促進する効果に優れる。線維芽細胞は、結合組織を構成する細胞の一つであり、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の細胞外基質を構成する成分を合成する働きを担う。
線維芽細胞は、真皮等の皮膚組織、皮膚支帯等の皮下組織、筋組織、神経組織に存在する。本発明のリソソーム活性促進剤は、上記の線維芽細胞が分布する組織のリソソーム活性を促進するために用いることができ、好ましくは、真皮における線維芽細胞のリソソーム活性を促進するために用いることができる。

【0026】

本発明のリソソーム活性促進剤は、当該リソソーム活性促進剤を原液で利用しても良いし、当該リソソーム活性促進剤を任意の濃度に希釈して利用してもよい。また、本発明のリソソーム活性促進剤は、製剤化に用いられる任意の成分と適宜組み合わせて配合することにより、外用剤又は経口剤の形態とすることができる。
本発明においては、リソソーム活性促進剤を含む外用剤又は経口剤の形態とすることが好ましい。

【0027】

外用剤としては化粧料、医薬部外品、医薬品などが好適に例示でき、本発明の効果を損ねない限度において、通常使用される任意成分を含有することもできる。このような任意成分としては、例えば、マカデミアナッツ油、アボカド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ等のオイル、ワックス類；流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類；オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類；セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、オクチルドデカノール、ミリスチルアルコール、セトステアリルアルコール等の高級アルコール等；イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ－２－エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ－２－エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ－２－ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ－２－エチルヘキサン酸グリセリン、トリ－２－エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ－２－エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類等の油剤類；脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類；塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類；イミダゾリン系両性界面活性剤（２－ココイル－２－イミダゾリニウムヒドロキサイド－１－カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類；ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２－オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック（登録商標）型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２－デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類；ポリエチレングリコール、グリセリン、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、２，４－ヘキサンジオール等の多価アルコール類；ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類；パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤；アントラニル酸系紫外線吸収剤；サリチル酸系紫外線吸収剤；桂皮酸系紫外線吸収剤；ベンゾフェノン系紫外線吸収剤；糖系紫外線吸収剤；２－（２’－ヒドロキシ－５’－ｔ－オクチルフェニル）ベンゾトリアゾール、４－メトキシ－４’－ｔ－ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類；エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類フェノキシエタノール等の抗菌剤などが好ましく例示できる。

【0028】

経口剤としては、例えば、菓子やパン、麺などの一般食品、ドリンク製剤、カプセル剤や錠剤の形態をとる健康増進の目的を有する食品群（例えば、特定保健用食品等）、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤や、錠剤の形態をとる経口投与医薬品等が例示できる。
経口剤の形態とする場合においては、許容される任意成分を含有することができる。この様な任意成分としては、食品であれば、塩、砂糖、グルタミン酸ナトリウム、イノシン酸ナトリウム、酢等の調味成分、着色成分、フレーバー等の矯臭成分、増粘剤、乳化・分散剤、保存料、安定剤、各種ビタミン類等が好適に例示でき、健康増進の目的を有する食品群や医薬品であれば、結晶セルロース、乳糖等の賦形剤、アラビヤガムやヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、クロスカルメロースナトリウム、デンプン等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、矯味、矯臭剤、着色剤、各種ビタミン類等が好ましく例示できる。これらを常法に従って処理することにより、本発明の経口剤を製造することができる。

【0029】

外用剤におけるシシウド属の抽出物の総含有量は、乾燥質量として、０．０００５～０．００４０質量％、より好ましくは０．０００９～０．００２７質量％である。
経口剤におけるシシウド属の抽出物の総含有量は、乾燥質量として、０．０５～１００質量％、より好ましくは３０～８０質量％とすることができる。
また、固形分として前記植物の抽出物を１日あたり１０～１０００ｍｇを１回又は数回に分けて飲用する形態とすることが好ましい。

【0030】

本発明のリソソーム活性促進剤は、リソソーム活性の低下により引き起こされる種々の疾患の治療又は予防のために用いることができる。このような疾患としては、脂質蓄積症、ムコ多糖症、ムコ脂質症及び糖タンパク質蓄積症を含むリソソーム蓄積症が挙げられ、さらに具体的には、アクチベーター欠損症／ＧＭ２ガングリオシドーシス、α－マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステロールエステル蓄積症、慢性ヘキソサミニダーゼＡ欠乏症、シスチン症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー病、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病（例えば、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型）、ＧＭ１ガングリオシドーシス（例えば、乳児性、後期乳児性／若年性、成人性／慢性）、Ｉ ｃｅｌｌ病／ムコリピドーシスＩＩ、乳児性遊離シアル酸蓄積症／ＩＳＳＤ、若年性ヘキソサミニダーゼＡ欠乏症、クラッベ病（例えば、乳児性発症、遅延性発症）、異染性白質ジストロフィー、ムコ多糖症疾患、偽性ハーラーポリジストロフィー／ムコリピドーシスＩＩＩＡ（例えば、ＭＰＳ Ｉ ハーラー症候群、ＭＰＳ Ｉ シャイエ症候群、ＭＰＳ Ｉ ハーラー・シャイエ症候群、ＭＰＳ ＩＩ ハンター症候群、サンフィリッポ症候群Ａ型／ＭＰＳ ＩＩＩ Ａ、サンフィリッポ症候群Ｂ型／ＭＰＳ ＩＩＩ Ｂ、サンフィリッポ症候群Ｃ型／ＭＰＳ ＩＩＩ Ｃ、サンフィリッポ症候群Ｄ型／ＭＰＳ ＩＩＩ Ｄ、モルキオＡ型／ＭＰＳ ＩＶ Ａ、モルキオＢ型／ＭＰＳ ＩＶ Ｂ、ＭＰＳ ＩＸ ヒアルロニダーゼ欠損症、ＭＰＳ ＶＩ マロトー・ラミー、ＭＰＳ ＶＩＩ スライ症候群、ムコリピドーシスＩ／シアリドーシス、ムコリピドーシスＩＩＩ Ｃ、ムコリピドーシスＩＶ型）、多種スルファターゼ欠損症、ニーマン・ピック病（例えば、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型）、神経セロイドリポフスチン症（例えば、ＣＬＮ６病－非定型後期乳児性、遅発変異型、早期若年性、バッテン・シュピールマイアー・フォークト／若年性ＮＣＬ／ＣＬＮ３病、後期乳児性ＣＬＮ５のフィンランド変異型、ヤンスキー・ビールショースキー病／後期乳児性ＣＬＮ２／ＴＰＰ１病、クッフス／成人発症ＮＣＬ／ＣＬＮ４病、北部型癲癇（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｅｐｉｌｅｐｓｙ）／後期乳児性ＣＬＮ８の変異型、サンタボーリ・ハルシア（Ｓａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ）／乳児性ＣＬＮ１／ＰＴＴ病、β－マンノシドーシス）、ポンペ病／糖原蓄積症ＩＩ型、濃化異骨症、サンドホフ病／ＧＭ２ガングリオシドーシス（例えば、成人性発症、乳児性、若年性）、シンドラー病、サラ病／シアル酸蓄積症、テイ・サックス病／ＧＭ２ガングリオシドーシスまたはウォルマン病等が挙げられる。

【0031】

本発明のリソソーム活性促進剤は、リソソーム活性の低下によって引き起こされる、皮膚状態の低下に対して用いることができ、具体的には、ヒアルロン酸産生促進、又はコラーゲン産生促進の用途で用いることができる。

【実施例0032】

＜試験例１＞アシタバ抽出物を用いた、線維芽細胞におけるリソソーム活性の評価
培地（１０％ＦＢＳ＋１％ＡＡ／ＤＭＥＭ）に懸濁した正常ヒト真皮線維芽細胞（ＮＨＤＦ、＃５８８４ 新生児）を、２．５×１０^４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように４ ｗｅｌｌチャンバーに分配し、３７℃、５％ＣＯ_２環境下で２４時間培養した。
新たな培地にアシタバ抽出物（アシタバ抽出液ＢＧ（丸善製薬株式会社製））を最終濃度が０．１％、又は０．０５％（乾燥質量でそれぞれ０．００１４８％、０．０００７４％）となるように添加し、エキス含有培地とした。培養後の細胞について、チャンバー内の培地を前記エキス含有培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ_２環境下で２４時間培養した。コントロールとしては、培養後に交換する培地としてアシタバ抽出物を未添加の培地を添加し、同様の条件で培養したものを用いた。

【0033】

培養後、培地を除去し、ＰＢＳで洗浄後、下記の染色培地を５００μｌ／ｗｅｌｌずつ添加し、３７℃で３０分以上培養した。
・染色培地：Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｍａｒｋｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）のＥｓｔｅｒＧｒｅｅｎ １ｕｎｉｔに対して、１０μｌのＤＭＳＯを添加し、前記培地で１００００倍希釈したもの

【0034】

培地を除去し、ＰＢＳで洗浄後、滅菌水で５倍希釈した５×Ｏｐｔｉ－Ｋｌｅａｒを５００μｌ／ｗｅｌｌずつ添加し、観察用の細胞を調製した。その後、蛍光顕微鏡により、ＥＸ／ＥＭ：４９０／５２０ｎｍの測定波長で細胞の観察を行った。結果を図１～３に示す。

【0035】

図１～３に示すように、アシタバ抽出物を０．１％（図２）、及び０．０５％（図３）を添加した場合は、前記抽出物を未添加のコントロール（図１）と比して、リソソームの蛍光強度が上昇した。
よって、アシタバ抽出物には線維芽細胞におけるリソソーム活性を促進する作用があることが明らかとなった。

【0036】

＜試験例２＞アシタバ抽出物を有効成分とする化粧水を用いた、線維芽細胞におけるリソソーム活性の評価
（１）化粧水の製造
以下に示す処方に従って、皮膚外用剤である化粧料を作成した。即ち、処方成分を８０℃ に加熱し、攪拌、可溶化した後に、攪拌冷却して実施例１の化粧水を得た。また、下記のアシタバ抽出液ＢＧを等量の水に替えた比較例１（アシタバ抽出液ＢＧを未添加）も作成した。

【0037】

【表1】

【0038】

（２）リソソーム活性の評価試験
培地（１０％ＦＢＳ＋１％ＡＡ／ＤＭＥＭ）に懸濁した正常ヒト真皮線維芽細胞（ＮＨＤＦ、＃５８８４ 新生児）を、２．５×１０^４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように４ ｗｅｌｌチャンバーに分配し、３７℃、５％ＣＯ_２環境下で２４時間培養した。
新たな培地に実施例１又は比較例１を４０倍希釈となるように添加し、これらを化粧水含有培地とした。培養後の細胞について、チャンバー内の培地を化粧水含有培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ_２環境下で２４時間培養した。

【0039】

培養後、培地を除去し、ＰＢＳで洗浄後、下記の染色培地を５００μｌ／ｗｅｌｌずつ添加し、３７℃で３０分以上培養した。
・染色培地：Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｍａｒｋｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）のＥｓｔｅｒＧｒｅｅｎ １ｕｎｉｔに対して、１０μｌのＤＭＳＯを添加し、前記培地で１００００倍希釈したもの

【0040】

培地を除去し、ＰＢＳで洗浄後、滅菌水で５倍希釈した５×Ｏｐｔｉ－Ｋｌｅａｒを５００μｌ／ｗｅｌｌずつ添加し、観察用の細胞を調製した。その後、蛍光顕微鏡により、ＥＸ／ＥＭ：４９０／５２０ｎｍの測定波長で細胞の観察を行った。結果を図４及び５に示す。

【0041】

図４及び５に示すように、アシタバ抽出物を含む実施例１を添加した場合（図５）は、当該抽出物を含まない比較例１を添加した場合（図４）と比して、リソソームの蛍光強度が上昇した。
よって、アシタバ抽出物を配合した化粧水には線維芽細胞におけるリソソーム活性を促進する作用があることが明らかとなった。

【産業上の利用可能性】

【0042】

本発明は、医薬品、化粧料、又はサプリメント等に応用できる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】