特開 2022-8301 ヒト化型親和性成熟抗ＦｃＲｎ抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2022008301

(43)【公開日】2022-01-13

(54)【発明の名称】ヒト化型親和性成熟抗ＦｃＲｎ抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20220105BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20220105BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20220105BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20220105BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20220105BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20220105BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 17/04 20060101ALI20220105BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20220105BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220105BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20220105BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P37/02

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P1/04

A61P7/00

A61P7/06

A61P21/04

A61P25/02

A61P27/02

A61P3/00

A61P9/00

A61P21/00

A61P25/00

A61P3/10

A61P17/04

A61P37/08

A61K39/395 Y

A61K39/395 N

G01N33/53 P

G01N33/53 M

【審査請求】有

【請求項の数】16

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2021136205

(22)【出願日】2021-08-24

(62)【分割の表示】P 2018511346の分割

【原出願日】2016-05-12

(31)【優先権主張番号】62/160,423

(32)【優先日】2015-05-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/217,490

(32)【優先日】2015-09-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】517396386

【氏名又は名称】シンティミューン，インコーポレイティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100134784

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 和美

(72)【発明者】

【氏名】ローレンス ジェイ．ブランバーグ

(72)【発明者】

【氏名】リチャード エス．ブランバーグ

(72)【発明者】

【氏名】スーザン ダーナ ジョーンズ

(72)【発明者】

【氏名】デリー ルーペニアン

(72)【発明者】

【氏名】ロバート ジョージ エドワード ホールゲイト

(72)【発明者】

【氏名】ティモシー デイビッド ジョーンズ

(72)【発明者】

【氏名】アーロン ロバート ハーン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB31

4C085BB43

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

【課題】ＦｃＲｎに結合する抗体及び抗体の抗原結合部分、ならびにＦｃＲｎと抗体Ｆｃ領域との相互作用を調節及び阻害するためのこれらの使用を提供すること。
【解決手段】本明細書では、ＦｃＲｎに結合すること及び、ＦｃＲｎのＩｇＧ Ｆｃへの結合を遮断することに有用な、組換え型抗体及びその抗原結合部分が提供される。ＦｃＲｎ結合タンパク質は、自己免疫性障害を含めた様々な障害の治療に使用することができる。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域がＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び、ＣＤＲ３を含み、
ＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
ＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
ＣＤＲ３の配列が配列番号７８である、前記抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

ＣＤＲ３の配列が配列番号７６である、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項3】

ＣＤＲ３の配列が配列番号７４である、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項4】

ＣＤＲ３の配列が、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、及び配列番号５７からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項5】

ＣＤＲ３の配列が配列番号４９または配列番号５５である、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項6】

前記重鎖可変領域のＫａｂａｔ１０３位のアミノ酸がトリプトファンである、請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項7】

軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記軽鎖可変領域が、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
ＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
ＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
ＣＤＲ３の配列が、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６５、及び配列番号６８からなる群から選択される、前記抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域のそれぞれが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
前記重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
前記重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
前記重鎖のＣＤＲ３の配列が、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号７４、配列番号７６、及び配列番号７８からなる群から選択され、
前記軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
前記軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
前記軽鎖のＣＤＲ３の配列が、配列番号１０、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６５、及び配列番号６８からなる群から選択される、前記抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

前記重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号４９または配列番号５５であり、前記軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、請求項８に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項10】

前記重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、前記軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、請求項９に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項11】

前記抗体または抗原結合断片が、キメラ型抗体もしくは抗原結合断片、またはヒト化型抗体もしくは抗原結合断片である、請求項１から１０のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項12】

前記抗体または抗原結合断片が、ヒト化型抗体または抗原結合断片である、請求項１から１０のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項13】

重鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域の配列が、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、もしくは配列番号５８である、または前記重鎖可変領域の配列が、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、もしくは配列番号５８の前記重鎖可変領域アミノ酸配列に対し少なくとも９５％同一である、前記抗体またはその抗原結合断片。

【請求項14】

軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域の配列が配列番号２０または配列番号２２である、請求項１３に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項15】

前記重鎖可変領域の配列が配列番号５０または配列番号５６である、請求項１３に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項16】

前記重鎖可変領域の配列が配列番号５６であり、軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域の配列が配列番号２２である、請求項１５に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項17】

軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、もしくは配列番号７０である、または前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、もしくは配列番号７０の前記軽鎖可変領域アミノ酸配列に対し少なくとも９５％同一である、請求項１３に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項18】

軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２０または配列番号２２の前記軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、請求項１５に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項19】

軽鎖可変領域をさらに含み、前記重鎖可変領域が配列番号５６のアミノ酸配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２２の前記軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、請求項１５に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項20】

ＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、もしくは配列番号７０である、または前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、もしくは配列番号７０の前記軽鎖可変領域アミノ酸配列に対し少なくとも９５％同一である、前記抗体またはその抗原結合断片。

【請求項21】

前記軽鎖可変領域の配列が配列番号６７である、請求項２０に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項22】

重鎖可変領域をさらに含み、前記重鎖可変領域が配列番号１２のフレームワーク領域を含む、請求項２１に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項23】

重鎖可変領域をさらに含み、前記重鎖可変領域の配列が配列番号１２である、請求項２１に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項24】

ＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、もしくは配列番号１８の前記重鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、または配列番号１８のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。

【請求項25】

前記重鎖可変領域が、配列番号１２の前記重鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号１２のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項26】

ＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、もしくは配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、または配列番号２６のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。

【請求項27】

前記軽鎖可変領域が、配列番号２０もしくは配列番号２２の前記軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号２０もしくは配列番号２２のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、請求項２６に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項28】

前記軽鎖可変領域が、配列番号２２の前記軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号２２のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、請求項２７に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項29】

軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、もしくは配列番号２６の前記軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、または配列番号２６のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項30】

アイソタイプのＩｇＧ４を有する、請求項１から２９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項31】

前記重鎖中にＳ２４１Ｐ修飾を含有する、請求項３０に記載の抗体。

【請求項32】

前記重鎖中にＣ末端リジンが欠如している、請求項３０に記載の抗体。

【請求項33】

前記重鎖中にＳ２４１Ｐ修飾を含有し、かつ前記重鎖中にＣ末端リジンが欠如している、請求項３０に記載の抗体。

【請求項34】

ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、または二重特異性抗体である、請求項１から２９のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片。

【請求項35】

請求項１から３４のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片に対し競合または交差遮断する、抗体。

【請求項36】

請求項１から３５のいずれか１項に記載のＦｃＲｎ抗体または抗原結合断片をコードする、単離核酸。

【請求項37】

請求項３６に記載の単離核酸を含む、核酸ベクター。

【請求項38】

請求項３６に記載の単離核酸を含む、原核宿主細胞または真核宿主細胞。

【請求項39】

請求項１から３５のいずれか１項に記載のＦｃＲｎ抗体または抗原結合断片と薬学的に許容される担体とを含む、組成物。

【請求項40】

ＦｃＲｎとＩｇＧ Ｆｃとの間の相互作用を調節する方法であって、ＦｃＲｎを、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。

【請求項41】

細胞による抗体分解を促進する方法であって、ＦｃＲｎを、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。

【請求項42】

対象における抗体分解を促進する方法であって、前記対象に、有効量の、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を投与することを含む、前記方法。

【請求項43】

前記分解される抗体が自己抗体である、請求項４１または４２に記載の方法。

【請求項44】

前記分解される抗体が治療抗体である、請求項４１または４２に記載の方法。

【請求項45】

対象におけるＩｇＧ媒介疾患を緩和する方法であって、前記対象に、前記ＩｇＧ媒介疾患の緩和に有効な量の、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を投与することを含む、前記方法。

【請求項46】

ＦｃＲｎによる免疫複合体の結合を阻害する、またはＦｃＲｎ－免疫複合体相互作用を阻害することにより免疫複合体の循環を減少させる方法であって、ＦｃＲｎを、有効量の、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。

【請求項47】

抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の提示を阻害する方法であって、前記ＡＰＣを、前記抗原の提示の阻害に有効な量の、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。

【請求項48】

抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の交差提示を阻害する方法であって、前記ＡＰＣを、前記抗原の交差提示の阻害に有効な量の、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。

【請求項49】

抗原提示細胞（ＡＰＣ）による炎症性サイトカインの分泌を阻害する方法であって、前記ＡＰＣを、前記炎症性サイトカインの分泌の阻害に有効な量の、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。

【請求項50】

前記炎症性サイトカインが、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、または腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦα）である、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

抗原提示細胞によるＴ細胞活性化を阻害する方法であって、前記抗原提示細胞を、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。

【請求項52】

自己免疫性疾患を治療する、阻害する、またはその重症度を低減することを、それを必要としている対象において行う方法であって、有効量の、請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合断片を投与することを含む、前記方法。

【請求項53】

前記自己免疫性疾患が、以下からなる群から選択される、請求項５２に記載の方法：尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、腫瘍随伴天疱瘡、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、クローン病、特発性血小板減少性紫斑（ＩＴＰ）、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、重症筋無力症（ＭＧ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、多巣性運動ニューロパチー、視神経脊髄炎、自己免疫性血小板減少症、免疫性好中球減少症、抗血友病ＦＶＩＩＩインヒビター、抗リン脂質抗体症候群、川崎病、ＡＮＣＡ関連疾患、多発性筋炎、皮膚筋炎、水胞性類天疱瘡、多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン・バレー症候群、慢性多発ニューロパチー、潰瘍性大腸炎、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス眼症、自己免疫性蕁麻疹、血管炎及びラスムッセン脳炎。

【請求項54】

酸性ｐＨ及び生理的ｐＨの両方でＦｃＲｎと結合する抗体を同定する方法であって、ｐＨ５．８～６．４で行われる２つ以上のスクリーニングステップを含む、前記方法。

【請求項55】

請求項５４に記載の方法であって、
（ａ）候補抗体の集合を、ｐＨ５．８～６．４でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する前記抗体を単離することと、
（ｂ）ステップ（ａ）の前記単離抗体を、ｐＨ５．８～７．６でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する前記抗体を単離することと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記単離抗体を、ｐＨ５．８～６．４でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する前記抗体を単離することと、
を含む、前記方法。

【請求項56】

胎盤を介した病原性抗体の伝播を遮断する方法であって、治療有効量のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を、必要としている妊娠中の哺乳動物に投与することを含む、前記方法。

【請求項57】

対象からのＩＣのクリアランスを増加させる方法であって、ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を、それを必要としている対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項58】

前記対象が免疫複合体媒介血管炎を有する、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

試験抗体またはその抗原結合断片が、ＦｃＲｎと免疫複合体との間の相互作用を遮断するかどうか、または減らすかどうかを決定する方法であって、
（ａ）哺乳動物から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、前記全血の第１の部分に添加することと、
（ｃ）前記免疫複合体の前記添加後に、前記全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量の前記サイトカインを得ることと、
（ｄ）試験抗体またはその抗原結合断片を、前記全血の第２の部分に添加することと、
（ｅ）前記試験抗体またはその抗原結合断片の前記添加後にまたは前記添加と同時に、前記免疫複合体を、前記全血の前記第２の部分に添加することと、
（ｆ）前記免疫複合体の前記添加後に、前記全血の前記第２の部分中のサイトカインの量を測定して、第２の量の前記サイトカインを得ることと、
を含む、前記方法。

【請求項60】

抗ＦｃＲｎ療法に対する患者の応答性の期待レベルを決定する方法であって、
（ａ）前記抗ＦｃＲｎ療法の開始前に、前記患者から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、前記全血の第１の部分に添加することと、
（ｃ）前記免疫複合体の前記添加後に、前記全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量の前記サイトカインを得ることと、
（ｄ）ＦｃＲｎと免疫複合体との間の相互作用を遮断するまたは減らすことが知られている抗体またはその抗原結合断片を、前記全血の第２の部分に添加することと、
（ｅ）前記抗体またはその抗原結合断片の前記添加後にまたは前記添加と同時に、前記免疫複合体を、前記全血の前記第２の部分に添加することと、
（ｆ）前記免疫複合体の前記添加後に、前記全血の前記第２の部分中のサイトカインの量を測定して、第２の量の前記サイトカインを得ることと、
（ｇ）前記第１の量の前記サイトカインと前記第２の量の前記サイトカインとの間の差を決定することと、
を含む、前記方法。

【請求項61】

抗ＦｃＲｎ療法に対する患者の応答をモニターする方法であって、
（ａ）抗ＦｃＲｎ療法の開始前に、前記患者から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、前記全血に添加することと、
（ｃ）前記免疫複合体の前記添加後に、前記全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量の前記サイトカインを得ることと、
（ｄ）抗ＦｃＲｎ療法の開始後に、前記患者から全血を得ることと、
（ｅ）免疫複合体を、ステップ（ｄ）の前記全血に添加することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）の前記免疫複合体の前記添加後に、前記全血中のサイトカインの量を測定して、第２の量の前記サイトカインを得ることと、
（ｇ）前記第１の量の前記サイトカインと前記第２の量の前記サイトカインとの間の差を決定することと、
を含む、前記方法。

【請求項62】

前記哺乳動物がヒトである、請求項５９に記載の方法。

【請求項63】

前記患者がヒトである、請求項６０または６１に記載の方法。

【請求項64】

前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒト化型、キメラ型、または非天然存在の完全ヒト型である、請求項５９に記載の方法。

【請求項65】

前記抗体またはその抗原結合断片が、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体、ＦＶ、ｓｃＦＶ、遮断ペプチド、またはこれらの断片である、請求項５９または６０に記載の方法。

【請求項66】

前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｆ（ａｂ’）_２である、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号５６を有する重鎖可変領域及び配列番号２２を有する軽鎖可変領域を含む、請求項６５に記載の方法。

【請求項68】

前記抗ＦｃＲｎ療法が、
（ａ）配列番号４９もしくは配列番号５５の配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号５０もしくは配列番号５６の重鎖可変領域アミノ酸配列；
（ｃ）配列番号５０の重鎖可変領域アミノ酸配列及び、配列番号２０もしくは配列番号２２の軽鎖可変領域配列；または
（ｄ）配列番号５６の重鎖可変領域アミノ酸配列及び、配列番号２０もしくは配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列；
を含む抗体の投与である、請求項６０または６１に記載の方法。

【請求項69】

前記抗ＦｃＲｎ療法が、配列番号５６の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域配列を含む抗体の投与である、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

前記抗体が、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体、ＦＶ、ｓｃＦＶ、遮断ペプチド、またはこれらの断片である、請求項６８に記載の方法。

【請求項71】

前記抗体がＦ（ａｂ’）_２である、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記サイトカインが、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、またはインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）である、請求項５９から７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記免疫複合体が人工免疫複合体である、請求項５９から７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記免疫複合体が、４－ヒドロキシ－５－ヨード－３－ニトロフェニルアセチル基（ＮＩＰ）とニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ）と抗ＮＩＰ抗体との多量体複合体である、請求項５９から７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

ステップ（ｇ）で決定される前記差が対照値と比較される、請求項６０または６１に記載の方法。

【請求項76】

ステップ（ｇ）で決定される前記差が、Ｆｃドメイン中にＦｃＲｎとの結合を無効にする３点突然変異（Ｉ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ａ）を伴う抗体を含む免疫複合体を用いて前記方法が行われる場合に得られる差と比較される、請求項６０または６１に記載の方法。

【請求項77】

前記抗ＦｃＲｎ療法が、ステップ（ｇ）で決定される、前記第１の量の前記サイトカインと前記第２の量の前記サイトカインとの間の差に基づいて調整される、請求項６１に記載の方法。

【請求項78】

治療抗体の投与前に内在性抗体の分解を促進する方法であって、前記治療抗体を投与する前に、ＦｃＲｎのＩｇＧ結合部位に対し特異的な抗ＦｃＲｎ抗体またはその断片を、前記治療抗体を用いた治療を必要としている患者に投与することを含む、前記方法。

【請求項79】

前記治療抗体を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記治療抗体の薬物動態または薬物力学が増強される、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記抗ＦｃＲｎ抗体またはその断片が、配列番号５６の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域配列を含む、請求項７８に記載の方法。

【請求項82】

対象に投与された内在性治療抗体の分解を促進する方法であって、有効量の抗ＦｃＲｎ抗体またはその断片を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項83】

前記抗ＦｃＲｎ抗体またはその断片が、配列番号５６の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域配列を含む、請求項８２に記載の方法。

【請求項84】

抗ＦｃＲｎ抗体の投与後の対象における抗ＦｃＲｎ抗体のレベルを測定する方法であって、
（ａ）抗ＦｃＲｎ抗体が投与された後に、前記対象から単球を含む全血を得ることと、
（ｂ）前記単球の細胞表面のＦｃＲｎ発現レベルを測定することと、
を含む、前記方法。

【請求項85】

前記対象が哺乳動物である、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記哺乳動物がヒトである、請求項８５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１５年５月１２日に出願された米国出願第６２／１６０，４２３号及び２０１５年９月１１日に出願された米国出願第６２／２１７，４９０号の優先権を主張する。これらの出願はいずれも、その全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

発明の分野
本発明は、ＦｃＲｎに結合する抗体及び抗体の抗原結合部分、ならびにＦｃＲｎと抗体Ｆｃ領域との相互作用を調節及び阻害するためのこれらの使用に関する。当該抗体は、自己免疫性障害及び他の障害を治療するための治療薬として有用である。
配列表

【0003】

配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してアスキー形式で提出された配列表を含み、この配列表は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。配列表は２０１５年８月７日に作成され、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称であり、サイズが８７，２４６バイトである。

【背景技術】

【0004】

新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、ＩｇＧに対する細胞内輸送の複合膜Ｆｃ受容体である。当初、ＦｃＲｎは新生児期に機能する受容体として同定された。ＦｃＲｎは、げっ歯類の内臓から１２ｋＤａのタンパク質と４０～５０ｋＤａのタンパク質との間にあるヘテロ二量体として初めて単離され（Ｒｏｄｅｗａｌｄ ＆ Ｋｒａｅｈｅｎｂｕｈｌ １９８４，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９９（１ Ｐｔ２）：１５９ｓ－１５４ｓ；Ｓｉｍｉｓｔｅｒ ＆ Ｒｅｅｓ，１９８５，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：７３３－７３８）、１９８９年にクローニングされた（Ｓｉｍｉｓｔｅｒ ＆ Ｍｏｓｔｏｖ，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：１８４－１８７）。ＦｃＲｎをクローニングし、次に結晶化することにより、ＦｃＲｎが、１２ｋＤａのβ２－ミクログロブリン軽鎖と非共有会合した約５０ｋＤａの主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩ様重鎖を有することが明らかになった。ＦｃＲｎは、当初は胎児及び新生児期との関連で認識されていたが、現在では成体期を通じて機能し続けることが知られている。ＦｃＲｎは主として初期の酸性エンドソーム中に存在し、ｐＨ依存的にＩｇＧのＦｃ領域に結合する。ＦｃＲｎは、ｐＨ６．５ではマイクロ～ナノ分子親和性で結合するのに対し、生理的ｐＨではＦｃへの結合は無視できる程度にわずかである。ＦｃＲｎの大部分は、ほとんどの細胞ではエンドソーム中に存在し、その酸性環境内でＦｃＲｎとそのＩｇＧ Ｆｃリガンドとの相互作用が発生する。造血細胞などの一部の細胞では、細胞内の発現に加えて、細胞表面上で顕著なレベルのＦｃＲｎを検出することができる（Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：３２６６－３２７６）。この場合、腫瘍状態または感染状態におけるように細胞外環境が酸性であるとき、ＦｃＲｎがこうした細胞タイプの細胞表面上のＩｇＧに結合し得る可能性がある。ＦｃＲｎは、貪食された単量体ＩｇＧに結合し、それをリソソーム区画における分解から保護し、そしてＩｇＧを細胞表面に運搬して細胞外の中性ｐＨにて放出することにより、血清ＩｇＧ濃度を調節する。ＦｃＲｎが結合しないＩｇＧはリソソーム経路に入って分解されるため、ＦｃＲｎは、この機構を通してＩｇＧの血清半減期を長くする役割を担っている。

【0005】

ＦｃＲｎは、生命の最初の段階の間、胎盤または新生児の腸壁でのＩｇＧの移行を媒介することにより、出生前後の子孫に受動免疫を与える。ＦｃＲｎは成体期を通じて機能し続け、例えば肺及び肝臓の上皮、血管内皮といった様々な組織中で発現され、さらに単球、マクロファージ、及び樹状細胞中でも発現される。

【0006】

ＦｃＲｎ欠損マウスは、病原性血清ＩｇＧを高濃度で維持することができないため、病原性ＩｇＧ自己抗体が原因となる自己免疫性疾患に対する抵抗性がより高い（Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：４９３２－４９３９；Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６９０－６９６；Ｉｓｒａｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｌ．８９：５７３－５７８）。より高い親和性でＦｃＲｎに結合する修飾Ｆｃ領域を有するよう遺伝子操作された抗体を投与することにより、マウス関節炎モデルの疾患が緩和されることが見いだされた（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８７：１０１５－１０２２）。ＩｇＧの高用量投与は、複数の自己免疫性疾患において対症療法的効果を有するが、これは少なくとも部分的には、ＦｃＲｎによって媒介されるＩｇＧ保護が飽和することにより説明することができる（Ｊｉｎ ＆ Ｂａｌｔｈａｓａｒ，２００５，Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６６：４０３－４１０；Ａｋｉｌｅｓｈ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１３：１３２８－１３３３；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：３４４０－３４５０）。したがって、ＦｃＲｎ－ＩｇＧ相互作用の特異的遮断は、病原性ＩｇＧ抗体の分解促進に使用することができ、例えば、ＩｇＧによって媒介される自己免疫性疾患の治療、及び投与後血清からの治療抗体の除去に使用することができる。例えば、実験的誘発による自己免疫性重症筋無力症のラットモデルでは、ＦｃＲｎ重鎖特異的モノクローナル抗体を用いた処置により、血清ＩｇＧ濃度の低減及び疾患の重症度の減少がもたらされた（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７８：５３９０－５３９８）。

【0007】

造血細胞中にＦｃＲｎが存在しないことと、血液からＩｇＧ含有免疫複合体をより急速に除去することとは関連性がある（Ｑｉａｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：９３３７－９３４２）。このことは、ＦｃＲｎ－ＩｇＧ相互作用の特異的遮断により、ＩｇＧ含有免疫複合体の循環からの除去も促進されることを示すものである。

【0008】

ＦｃＲｎは、身体の種々の区画間のＩｇＧ及び任意の結合カーゴの移動を、極性細胞を横断する経細胞輸送を介して調節する。このプロセスは、感染からの粘膜保護において、例えば消化管において、重要な役割を果たしている。ＦｃＲｎは、腸の上皮細胞バリアを横断して内腔にＩｇＧを運搬する。ＩｇＧが内腔の抗原に結合した後、ＩｇＧ／抗原複合体はＦｃＲｎによりバリアを通って粘膜固有層に戻され、樹状細胞によるＩｇＧ／抗原複合体の処理及び、所属リンパ節のＣＤ４^＋Ｔ細胞に対する抗原提示を可能にする。

【0009】

また、ＦｃＲｎは、ＩｇＧ複合化抗原のＭＨＣクラスＩＩ抗原提示及びＭＨＣクラスＩ交差提示においても重要な役割を果たしている。抗原がＩｇＧ含有免疫複合体（ＩＣ）として提示されると、ＣＤ８－ＣＤ１１ｂ^＋ＣＤ１１ｃ^＋である樹状細胞（炎症性樹状細胞）は、ＦｃＲｎ発現に高度に依存する経路において、低い抗原用量で顕著な交差提示を示す。この経路は、Ｆｃγ受容体によるＩＣの酸性エンドソーム内への内部移行を伴う。次に起こる抗原提示細胞（ＡＰＣ）内でのＦｃＲｎによるＩＣの結合により、特定の機序が開始され、その結果、抗原を有するＩＣはコンパートメントに輸送され、このコンパートメントで、抗原はＭＨＣへのロードに適合性のペプチドエピトープに加工される（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０８：９９２７－９９３２；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２，ｍＡｂｓ ｖｏｌ．４，ｐａｇｅ ２０８，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）。したがって、ＤＣにおけるＦｃＲｎは、ＭＨＣ ＩＩ抗原提示を増強し、かつ抗原特異的なＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖を誘発し、さらにＣＤ８^＋Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞）に対する抗原提示において根幹的な役割を示している。この後者のＣＤ８^＋Ｔ細胞経路は交差提示と呼ばれ、細胞外抗原をＭＨＣクラスＩ依存経路に乗り換えさせることを伴う。

【0010】

ＦｃＲｎ－Ｉｇ ＩＣ相互作用の遮断は、ＩＣの抗原提示と、次に起こる免疫関連抗原提示によって刺激されるＴ細胞活性化とを阻害する。ＤＣなどのＡＰＣにおけるＩｇＧ ＩＣとの相互作用は、ＩＬ－１２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦαなどの炎症性サイトカインの分泌も促進する。したがって、ＦｃＲｎ－Ｉｇ ＩＣ相互作用の遮断は、自然免疫細胞及び抗原活性化Ｔ細胞による炎症性サイトカインの産生を阻害する上で有用である。

【0011】

ＦｃＲｎは、血清アルブミンのための結合部位を含有するが、ＦｃＲｎ重鎖の向かい合った面でのＦｃＲｎとＩｇＧまたはアルブミンとのイオン相互作用があることにより、この結合部位は、ＩｇＧのＦｃドメインのための結合部位とは異なる。ＦｃＲｎのアルブミンへの結合は、ＩｇＧへの結合のように、強度にｐＨ依存的であり、酸性ｐＨ（通常はｐＨ６未満、最適にはｐＨ５）で起こり、中性ｐＨでは起こらない。ＦｃＲｎのＩｇＧを分解から保護する役割と同様、ＦｃＲｎのアルブミンとの結合は、アルブミンを分解から保護し、アルブミンの血清半減期の延長をもたらす。

【発明の概要】

【0012】

本発明は、ＦｃＲｎに結合する抗体及びその抗原結合部分を提供する。こういった抗体は、ＩｇＧのＦｃドメインのための結合部位に重複するＦｃＲｎのエピトープに結合し、ＩｇＧ及び免疫複合体としてのＩｇＧに対するＦｃＲｎの結合を、低減または阻害する。

【0013】

本明細書では、重鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖可変領域がＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び、ＣＤＲ３を含み、
ＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
ＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
ＣＤＲ３の配列が配列番号７８である、抗体またはその抗原結合断片が提供される。

【0014】

一実施形態では、ＣＤＲ３の配列は配列番号７６である。別の実施形態では、ＣＤＲ３の配列は配列番号７４である。

【0015】

別の実施形態では、ＣＤＲ３の配列は、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号７４、配列番号７６、及び配列番号７８からなる群から選択される。一実施形態では、ＣＤＲ３の配列は、配列番号４９または配列番号５５である。

【0016】

抗体または抗原結合断片の一部の実施形態では、重鎖可変領域のＫａｂａｔ１０３位のアミノ酸は、トリプトファンである。一部の実施形態では、重鎖可変領域のＫａｂａｔ１０３位のアミノ酸は、アルギニンである。

【0017】

また、本明細書では、軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、軽鎖可変領域がＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び、ＣＤＲ３を含み、
ＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
ＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
ＣＤＲ３の配列が、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６５、及び配列番号６８からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合断片も提供される。

【0018】

また、本明細書では、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のそれぞれが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、及び配列番号５７からなる群から選択され、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が、配列番号１０、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６５、及び配列番号６８からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合断片も提供される。

【0019】

一部の実施形態では、重鎖のＣＤＲ３の配列は配列番号４９または配列番号５５であり、軽鎖のＣＤＲ３の配列は配列番号１０である。一部の実施形態では、重鎖のＣＤＲ３の配列は配列番号５５であり、軽鎖のＣＤＲ３の配列は配列番号１０である。

【0020】

一部の実施形態では、本明細書における抗体または抗原結合断片は、キメラ型またはヒト化型の抗体または抗原結合断片である。

【0021】

また、本明細書では、重鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片であって、重鎖可変領域の配列が、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、もしくは配列番号５８である、または重鎖可変領域の配列が、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、もしくは配列番号５８の重鎖可変領域アミノ酸配列に対し少なくとも９５％同一である、抗体またはその抗原結合断片も提供される。

【0022】

一部の実施形態では、当該抗体または抗原結合断片は、軽鎖可変領域をさらに含み、軽鎖可変領域の配列は配列番号２０または配列番号２２である。一部の実施形態では、重鎖可変領域の配列は、配列番号５０または配列番号５６である。一部の実施形態では、重鎖可変領域の配列は配列番号５６であり、軽鎖可変領域の配列は配列番号２２である。

【0023】

一部の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、軽鎖可変領域をさらに含み、軽鎖可変領域の配列は、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、もしくは配列番号７０である、または軽鎖可変領域の配列は、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、もしくは配列番号７０の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対し少なくとも９５％同一である。

【0024】

一部の実施形態では、重鎖可変領域の配列は配列番号５０または配列番号５６であり、軽鎖可変領域の配列は配列番号２０または配列番号２２である。一部の実施形態では、重鎖可変領域の配列は配列番号５６であり、軽鎖可変領域は、配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む。

【0025】

また、ＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域の配列が、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、もしくは配列番号７０である、または軽鎖可変領域の配列が、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、もしくは配列番号７０の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対し少なくとも９５％同一である、抗体またはその抗原結合断片も提供される。一部の実施形態では、軽鎖可変領域の配列は配列番号６７である。一部の実施形態では、軽鎖可変領域の配列は配列番号６７であり、抗体または抗原結合断片は重鎖可変領域をさらに含み、重鎖可変領域は配列番号１２のフレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域の配列は配列番号６７であり、抗体または抗原結合断片は重鎖可変領域をさらに含み、重鎖可変領域配列は配列番号１２の重鎖可変領域を含む。

【0026】

また、本明細書では、ＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、もしくは配列番号１８の前記重鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、または配列番号１８のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、抗体またはその抗原結合断片も提供される。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１２の重鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号１２のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む。

【0027】

また、ＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、もしくは配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、または配列番号２６のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、抗体またはその抗原結合断片も提供される。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２０もしくは配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号２０もしくは配列番号２２のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２２の軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号２２のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む。

【0028】

また、本明細書では、ＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、もしくは配列番号１８の前記重鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、または配列番号１８のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含み、かつ軽鎖可変領域をさらに含み、軽鎖可変領域が、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、もしくは配列番号２６の軽鎖可変領域アミノ酸配列のフレームワーク領域を含む、または配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、または配列番号２６のフレームワーク領域に対し少なくとも９５％同一であるフレームワーク領域を含む、抗体またはその抗原結合断片も提供される。

【0029】

本明細書に記載される抗体の一部の実施形態では、当該抗体はアイソタイプのＩｇＧ４を有する。一部の実施形態では、当該抗体は、重鎖中にＳ２４１Ｐ修飾を含有する。一部の実施形態では、当該抗体は、重鎖中にＣ末端リジンが欠如している。一部の実施形態では、当該抗体は、重鎖中にＳ２４１Ｐ修飾を含有し、かつ重鎖中にＣ末端リジンが欠如している。

【0030】

一部の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、または二重特異性抗体である。

【0031】

また、本明細書では、本明細書に記載されるＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片に対して、競合または交差遮断する抗体も提供される。

【0032】

また、本明細書では、本明細書に記載されるＦｃＲｎ抗体または抗原結合断片をコードする単離核酸も提供される。また、本明細書では、本明細書に記載されるＦｃＲｎ抗体または抗原結合断片をコードする単離核酸を含む、核酸ベクターも提供される。また、本明細書では、本明細書に記載されるＦｃＲｎ抗体または抗原結合断片をコードする単離核酸を含む、原核宿主細胞または真核宿主細胞も提供される。また、本明細書では、本明細書に記載されるＦｃＲｎ抗体または抗原結合断片と薬学的に許容される担体とを含む、組成物も提供される。

【0033】

また、本明細書では、ＦｃＲｎとＩｇＧ Ｆｃとの間の相互作用を調節する方法であって、ＦｃＲｎを、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法も提供される。

【0034】

また、本明細書では、細胞による抗体分解を促進する方法であって、ＦｃＲｎを、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法も提供される。

【0035】

また、本明細書では、対象における抗体分解を促進する方法であって、対象に、有効量の、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片を投与することを含む、方法も提供される。一部の実施形態では、分解される抗体は、自己抗体である。一部の実施形態では、分解される抗体は、治療抗体である。

【0036】

また、本明細書では、対象におけるＩｇＧ媒介疾患を緩和する方法であって、対象に、ＩｇＧ媒介疾患の緩和に有効な量の、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片を投与することを含む、方法も提供される。

【0037】

また、本明細書では、ＦｃＲｎによる免疫複合体の結合を阻害する、またはＦｃＲｎ－免疫複合体相互作用を阻害することにより免疫複合体の循環を減少させる方法であって、ＦｃＲｎを、有効量の、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法も提供される。

【0038】

また、本明細書では、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の提示を阻害する方法であって、ＡＰＣを、抗原の提示の阻害に有効な量の、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法も提供される。

【0039】

また、本明細書では、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の交差提示を阻害する方法であって、ＡＰＣを、抗原の交差提示の阻害に有効な量の、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法も提供される。

【0040】

また、本明細書では、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による炎症性サイトカインの分泌を阻害する方法であって、ＡＰＣを、炎症性サイトカインの分泌の阻害に有効な量の、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法も提供される。一部の実施形態では、炎症性サイトカインは、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、または腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦα）である。

【0041】

また、本明細書では、抗原提示細胞によるＴ細胞活性化を阻害する方法であって、抗原提示細胞を、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法も提供される。

【0042】

また、本明細書では、自己免疫性疾患の治療、阻害、またはその重症度の低減を、それを必要とする対象において行う方法であって、有効量の、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片を投与することを含む、方法も提供される。一部の実施形態では、自己免疫性疾患は、以下からなる群から選択される：尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、腫瘍随伴天疱瘡、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、クローン病、特発性血小板減少性紫斑（ＩＴＰ）、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、重症筋無力症（ＭＧ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、多巣性運動ニューロパチー、視神経脊髄炎、自己免疫性血小板減少症、免疫性好中球減少症、抗血友病ＦＶＩＩＩインヒビター、抗リン脂質抗体症候群、川崎病、ＡＮＣＡ関連疾患、多発性筋炎、皮膚筋炎、水胞性類天疱瘡、多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン・バレー症候群、慢性多発ニューロパチー、潰瘍性大腸炎、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス眼症、自己免疫性蕁麻疹、血管炎、及びラスムッセン脳炎。

【0043】

また、本明細書では、酸性ｐＨ及び生理的ｐＨの両方でＦｃＲｎに結合する抗体を同定する方法であって、ｐＨ５．８～６．４で行われる２つ以上のスクリーニングステップを含む、方法も提供される。一部の実施形態では、当該方法は、
（ａ）候補抗体の集合を、ｐＨ５．８～６．４でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する抗体を単離することと、
（ｂ）ステップ（ａ）の単離抗体を、ｐＨ５．８～７．６でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する抗体を単離することと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の単離抗体を、ｐＨ５．８～６．４でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する抗体を単離することと、
を含む。

【0044】

また、本明細書では、胎盤を介した病原性抗体の伝播を遮断する方法であって、治療有効量のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を、それを必要としている妊娠中の哺乳動物に投与することを含む、方法も提供される。

【0045】

また、本明細書では、対象からのＩＣのクリアランスを増加させる方法であって、ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を、それを必要としている対象に投与することを含む、方法も提供される。一部の実施形態では、対象は、免疫複合体媒介血管炎を有する。

【0046】

また、本明細書では、試験抗体またはその抗原結合断片が、ＦｃＲｎと免疫複合体との間の相互作用を遮断するかどうか、または減らすかどうかを決定する方法であって、
（ａ）哺乳動物から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、全血の第１の部分に添加することと、
（ｃ）免疫複合体の添加後に、全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量のサイトカインを得ることと、
（ｄ）試験抗体またはその抗原結合断片を、全血の第２の部分に添加することと、
（ｅ）試験抗体またはその抗原結合断片の添加後にまたは添加と同時に、免疫複合体を、全血の第２の部分に添加することと、
（ｆ）免疫複合体の添加後に、全血の第２の部分中のサイトカインの量を測定して、第２の量のサイトカインを得ることと、
を含む、方法も提供される。

【0047】

一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化型、キメラ型、または非天然存在の完全ヒト型である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体、ＦＶ、ｓｃＦＶ、遮断ペプチド、またはこれらの抗原結合断片である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５６を有する重鎖可変領域及び配列番号２２を有する軽鎖可変領域を含む。

【0048】

一部の実施形態では、サイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、またはインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）である。一部の実施形態では、免疫複合体は人工免疫複合体であり、すなわち、哺乳動物中に天然に存在しない。一部の実施形態では、当該免疫複合体は、４－ヒドロキシ－５－ヨード－３－ニトロフェニルアセチル基（ＮＩＰ）とニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ）と抗ＮＩＰ抗体との多量体複合体を含む。

【0049】

また、本明細書では、抗ＦｃＲｎ療法に対する患者の応答性の期待レベルを決定する方法であって、
（ａ）抗ＦｃＲｎ療法の開始前に、患者から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、全血の第１の部分に添加することと、
（ｃ）免疫複合体の添加後に、全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量のサイトカインを得ることと、
（ｄ）ＦｃＲｎと免疫複合体との間の相互作用を遮断するまたは減らすことが知られている抗体またはその抗原結合断片を、全血の第２の部分に添加することと、
（ｅ）抗体またはその抗原結合断片の添加後にまたは添加と同時に、免疫複合体を、全血の第２の部分に添加することと、
（ｆ）免疫複合体の添加後に、全血の第２の部分中のサイトカインの量を測定して、第２の量のサイトカインを得ることと、
（ｇ）第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差を決定することと、
を含む、方法も提供される。

【0050】

一部の実施形態では、患者はヒトである。

【0051】

一部の実施形態では、抗ＦｃＲｎ療法は、配列番号５６の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域配列を含む抗体の投与である。

【0052】

一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体、ＦＶ、ｓｃＦＶ、遮断ペプチド、またはこれらの断片である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）_２である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５６を有する重鎖可変領域及び配列番号２２を有する軽鎖可変領域を含む。

【0053】

一部の実施形態では、サイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、またはインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）である。一部の実施形態では、免疫複合体は人工免疫複合体であり、すなわち、哺乳動物中に天然に存在しない。一部の実施形態では、当該免疫複合体は、４－ヒドロキシ－５－ヨード－３－ニトロフェニルアセチル基（ＮＩＰ）とニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ）と抗ＮＩＰ抗体との多量体複合体を含む。一部の実施形態では、ステップ（ｇ）で決定される差は、対照値と比較される。一部の実施形態では、ステップ（ｇ）で決定される差は、Ｆｃドメイン中にＦｃＲｎへの結合を無効にする３点突然変異（Ｉ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ａ）を伴う抗体を含む免疫複合体を用いて当該方法が行われる場合に得られる差と比較される。

【0054】

また、本明細書では、抗ＦｃＲｎ療法に対する患者の応答をモニターする方法であって、
（ａ）抗ＦｃＲｎ療法の開始前に、患者から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、全血に添加することと、
（ｃ）免疫複合体の添加後に、全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量のサイトカインを得ることと、
（ｄ）抗ＦｃＲｎ療法の開始後に、患者から全血を得ることと、
（ｅ）免疫複合体を、ステップ（ｄ）の全血に添加することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）の免疫複合体の添加後に、全血中のサイトカインの量を測定して、第２の量のサイトカインを得ることと、
（ｇ）第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差を決定することと、
を含む、方法も提供される。

【0055】

一部の実施形態では、当該患者はヒトである。

【0056】

一部の実施形態では、当該抗ＦｃＲｎ療法は、配列番号５６の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域配列を含む抗体の投与である。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体、ＦＶ、ｓｃＦＶ、遮断ペプチド、またはこれらの断片である。一部の実施形態では、当該抗体はＦ（ａｂ’）_２である。

【0057】

一部の実施形態では、当該サイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、またはインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）である。一部の実施形態では、当該免疫複合体は、４－ヒドロキシ－５－ヨード－３－ニトロフェニルアセチル基（ＮＩＰ）とニワトリオボアルブミン（ＮＩＰ）と抗ＮＩＰ抗体との多量体複合体を含む。一部の実施形態では、ステップ（ｇ）で決定される差は、対照値と比較される。一部の実施形態では、ステップ（ｇ）で決定される差は、Ｆｃドメイン中にＦｃＲｎへの結合を無効にする３点突然変異（Ｉ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ａ）を伴う抗体を含む免疫複合体を用いて当該方法が行われる場合に得られる差と比較される。一部の実施形態では、抗ＦｃＲｎ療法は、ステップ（ｇ）で決定される、第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差に基づいて調整される。

【0058】

また、本明細書では、治療抗体の投与前に内在性抗体の分解を促進する方法であって、治療抗体を投与する前に、ＦｃＲｎのＩｇＧ結合部位に対し特異的な抗ＦｃＲｎ抗体またはその断片を、治療抗体を用いた処置を必要としている患者に投与することを含む、方法も提供される。

【0059】

また、本明細書では、対象に投与された内在性治療抗体の分解を促進する方法であって、有効量の抗ＦｃＲｎ抗体またはその断片を前記対象に投与することを含む、方法も提供される。

【0060】

一部の実施形態では、当該方法は、治療抗体を対象に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、治療抗体の薬物動態または薬物力学が増強される。

【0061】

また、本明細書では、対象における抗ＦｃＲｎ抗体の投与後の抗ＦｃＲｎ抗体のレベルを測定する方法であって、抗ＦｃＲｎ抗体が投与された後に、対象から単球を含む全血を得ることと、単球細胞表面のＦｃＲｎ発現レベルを測定することと、を含む方法も、提供される。一部の実施形態では、当該対象は哺乳動物である。他の実施形態では、当該哺乳動物はヒトである。

【0062】

本特許または出願ファイルには、カラーで制作された図面が少なくとも１点含まれている。カラー図面で発行された本特許または特許出願のコピーは、要請時及び必要料金の支払時に特許商標庁から提供されることになる。

【図面の簡単な説明】

【0063】

【図1】ヒト化型重鎖変異体（Ｖ_Ｈ１～Ｖ_Ｈ４）のアミノ酸配列を示す図である。これらの変異体は、ヒト重鎖可変ドメイン配列に基づいており、潜在的免疫原性を最小限にするため、ある特定の位置に組み込まれたアミノ酸の変更を示すように整列されている。ヒト化型フレームワークの中で変動するアミノ酸残基には下線が引かれている。Ｋａｂａｔ ＣＤＲが枠で囲まれている。

【図2】ヒト化型軽鎖変異体（Ｖκ１～Ｖκ３、Ｖκ５）のアミノ酸配列を示す図である。これらの変異体は、ヒト軽鎖可変ドメイン配列に基づいており、潜在的免疫原性を最小限にするため、ある特定の位置に組み込まれたアミノ酸の変更を示すように整列されている。ヒト化型フレームワークの中で変動するアミノ酸残基には下線が引かれている。Ｋａｂａｔ ＣＤＲが枠で囲まれている。

【図3】親和性成熟重鎖Ｈ１、Ｈ３、及びＥ７ならびに親和性成熟軽鎖Ｅ８と親マウス抗体とを比較する競合ＥＬＩＳＡを示す図である。ヒト化型親Ｖκ１軽鎖を用いて親和性成熟重鎖をｓｃＦｖとして発現させ、ヒト化型親Ｖ_Ｈ１重鎖を用いて親和性成熟軽鎖をｓｃＦｖとして発現させた。固定されたＦｃＲｎへの結合について、ｐＨ７．４（Ａ）及びｐＨ６．０（Ｂ）で、ｓｃＦｖ抗体をビオチン化親マウス抗体と競合させ、結合したビオチン化親マウス抗体をストレプトアビジン－ＨＲＰによって検出した。

【図4】ヒト化型親（Ｖ_Ｈ１Ｖκ１）重鎖及び軽鎖、または親和性成熟（Ｈ１Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１、Ｈ１Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ２、Ｇ７Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１、Ｇ７Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ２）重鎖及び軽鎖を含むＩｇＧ４抗体と、キメラ型親マウス抗体とを比較する直接結合アッセイを示す図である。抗体をｐＨ７．４（Ａ）及びｐＨ６．０（Ｂ）で固定されたＦｃＲｎと反応させ、結合した抗体を抗ヒトカッパＨＲＰで検出した。

【図5】ヒト化型親（Ｖ_Ｈ１Ｖκ１）重鎖及び軽鎖、または親和性成熟（Ｈ１Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１、Ｈ１Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ２、Ｆ７Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１、Ｆ７Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ２）重鎖及び軽鎖を含むＩｇＧ４抗体と、キメラ型親マウス抗体とを比較する競合ＥＬＩＳＡを示す図である。ｐＨ７．４（Ａ）及びｐＨ６．０（Ｂ）で、試験抗体をビオチン化親マウス抗体と競合させ、結合したビオチン化親マウス抗体をストレプトアビジン－ＨＲＰによって検出した。

【図6】ヒト化型親（Ｖ_Ｈ１Ｖκ１）可変ドメインまたは親和性成熟（Ｈ３Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１）可変ドメインを含む、一価のｓｃＦｖと二価のＩｇＧ抗体とを比較する競合ＥＬＩＳＡを示す図である。ｐＨ７．４（Ａ）及びｐＨ６．０（Ｂ）で、試験抗体をビオチン化親マウス抗体と競合させ、結合したビオチン化親マウス抗体をストレプトアビジン－ＨＲＰによって検出した。

【図7】ｐＨ７．４及び６．０におけるｍＡｂのヒトＦｃＲｎへの結合を示す図である。親和性成熟Ｅ８またはヒト化型親Ｖκ２軽鎖と対合させたＧ９またはＨ３親和性成熟重鎖を含むＩｇＧ抗体を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＣＭ５センサーチップとカップリングさせた。センサーグラムは、ｐＨ７．４及びｐＨ６．０における、固定されたｍＡｂに注入された滴定量の単量体ヒトＦｃＲｎの結合を示している。（Ａ）Ｇ９Ｅ８、（Ｂ）Ｈ３Ｅ８、（Ｃ）Ｇ９Ｖκ２、（Ｄ）Ｈ３Ｖκ２。

【図8】腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）の放出を測定した全血アッセイの結果を示す図である。黒色のバーは、Ｈ３Ｖκ２を伴わずに０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体で実行したアッセイを表し、灰色のバーは、Ｈ３Ｖκ２の存在下で０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体で実行したアッセイを表す。４つの棒グラフは、左から右に、２４時間時における動物１、４８時間時における動物１、２４時間時における動物２、４８時間時における動物２を表す。動物１は非応答者である。すなわち、ＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体による刺激で産生されたＴＮＦ－αの量が無視できる程度にわずかであった。動物２による２４時間時のＴＮＦ－α産生は、実際にはＨ３Ｖκ２によって阻害されていたが、大量のＴＮＦ－αの産生により黒色バー及び灰色バーの両方がこのグラフの測定上限を超えたため、この阻害は表に現れなかった。

【図9】インターロイキン－６（ＩＬ－６）の放出を測定した全血アッセイの結果を示す図である。黒色のバーは、Ｈ３Ｖκ２を伴わずに０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体で実行したアッセイを表し、灰色のバーは、Ｈ３Ｖκ２の存在下で０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体で実行したアッセイを表す。４つの棒グラフは、左から右に、２４時間時における動物１、４８時間時における動物１、２４時間時における動物２、４８時間時における動物２を表す。

【図10】インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）の放出を測定した全血アッセイの結果を示す図である。黒色のバーは、Ｈ３Ｖκ２を伴わずに０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体で実行したアッセイを表し、灰色のバーは、Ｈ３Ｖκ２の存在下で０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体で実行したアッセイを表す。４つの棒グラフは、左から右に、２４時間時における動物１、４８時間時における動物１、２４時間時における動物２、４８時間時における動物２を表す。

【図11】別の全血アッセイの結果を示す図である。右寄りにある（緑、青、及び赤で示される）バーは、Ｈ３Ｖκ２がサイトカインの産生量に用量依存的な阻害効果を及ぼすことを示している。

【図12】ヒトＩｇＧサブクラスであるＩｇＧ１及びＩｇＧ４ならびに抗ヒトＦｃＲｎ ｍＡｂであるＨ３Ｖｋ２の、ｐＨ７．４及び６．０におけるヒトＦｃＲｎへの結合を示す図である。代表的なセンサーグラムは、ｐＨ７．４及びｐＨ６．０における、固定された（Ａ）Ｈ３Ｖｋ２、（Ｂ）ｈＩｇＧ１、及び（Ｃ）ｈＩｇＧ４に注入した滴定量のｈＦｃＲｎの結合を示している。

【図13】ｐＨ７．４及びｐＨ６．０におけるＨ３Ｖｋ２のカニクイザルＦｃＲｎへの結合を示す図である。代表的なセンサーグラムは、固定されたＡｂに注入した滴定量の（Ａ）ｐＨ７．４におけるｈＦｃＲｎ、（Ｂ）ｐＨ７．４及びｐＨ６．０におけるｈＦｃＲｎ、及び（Ｃ）ｐＨ７．４及びｐＨ６．０におけるｃＦｃＲｎの結合を示している。

【図14】インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）の放出を測定した全血アッセイの結果を示す図である。黒色のバーは、Ｈ３Ｖκ２を伴わずに０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体で実行したアッセイを表し、灰色のバーは、Ｈ３Ｖκ２の存在下で０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体で実行したアッセイを表す。４つの棒グラフは、左から右に、２４時間時における動物１、４８時間時における動物１、２４時間時における動物２、４８時間時における動物２を表す。

【図15】Ｈ３Ｖｋ２がｈＦｃＲｎ遺伝子導入マウスのｈＩｇＧ異化作用に及ぼす影響を示す図である。データは、４８時間時のマウス血漿中のＨｕＬｙｓ１１の量を基準とした残留ＨｕＬｙｓ１１（ヒトＩｇＧ１）のパーセント（±標準誤差）としてプロットされている。２０ｍｇ／ｋｇのＨ３Ｖｋ２注入は、この４８時間時の採血の２時間後である。Ｈ３Ｖｋ２処置後に収集された最初のデータポイントは、３日目の投与後６時間時である。

【図16】Ｈ３Ｖｋ２がｈＦｃＲｎ遺伝子導入マウスの多量体免疫複合体（ＩＣ）異化作用に及ぼす影響を示す図である。本研究は、Ｑｉａｏ ＳＷ，ＰＮＡＳ ２００８に従って設計した。結果は、示された時点における２４時間ベースラインを基準とした残留ＩＣのパーセント（±標準誤差）としてプロットされている。

【図17】ヒト血液を使用した全血アッセイの結果を示す図である。この全血アッセイでは、ＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ複合体またはＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩＨＨ複合体の存在下で、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、及びインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）の放出を測定した。

【図18】ヒト血液を使用した別の全血アッセイの結果を示す図である。この全血アッセイでは、無関連のＩｇＧ４及びＩｇＧ１対照に対しＨ３Ｅ８及びＨ３Ｖｋ２を試験した。

【図19】ヒト血液を使用し、Ｆ（ａｂ’）_２形式の試験抗体及び対照抗体を使用した、別の全血アッセイの結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0064】

一態様では、ＦｃＲｎに結合する抗体及び結合タンパク質が本明細書で提供される。より詳細には、当該抗体は、抗体Ｆｃのための結合部位に重複するＦｃＲｎのエピトープに結合する。結果として、当該抗体は、ＦｃＲｎのＩｇＧ Ｆｃへの結合、ＩｇＧの保護、及び免疫複合体（ＩＣ）の抗原提示などのＦｃＲｎ媒介機能を調節する。別の態様では、ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分をコードする配列を含む単離核酸が提供される。別の態様では、対象への投与に好適な、ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分と薬学的に許容される担体とを含む組成物が提供される。

【0065】

一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体は、ヒトＩｇＧのヒトＦｃＲｎへの結合を阻害するが、ヒト血清アルブミンのヒトＦｃＲｎへの結合は阻害しない。一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体は、ヒトＩｇＧの血清半減期を減少させるが、ヒト血清アルブミンの血清半減期は減少させない。

【0066】

別の態様では、治療の方法が提供される。例えば、ＩｇＧ ＦｃのＦｃＲｎへの結合を低減することにより、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合部分は、循環ＩｇＧの半減期を低減するためと、抗体媒介自己免疫性障害を治療または防止するためとに使用することができる。同様に、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合部分は、安定性のために、ＩｇＧ Ｆｃ領域を含む治療ＩｇＧ及び他の治療剤の半減期を低減するために使用することができる。このような方法は、ＦｃＲｎ媒介ＩｇＧ保護の低減を必要としている個体に、ＦｃＲｎのヒトＩｇＧへの結合を阻害するのに十分な量のＦｃＲｎ抗体を投与することを含む。

【0067】

新生児Ｆｃ受容体としても知られるＦｃＲｎは、ＩｇＧに対する複合膜Ｆｃ受容体である。ＦｃＲｎは、膜結合型アルファ－鎖（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ００４１０７）及び可溶性β２－ミクログロブリン（β２ｍ）（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ００４０４８）のヘテロ二量体であり、構造上、ＭＨＣクラスＩ分子に関連する。ＦｃＲｎは、貪食されたＩｇＧに結合し、それをリソソーム区画における分解から保護し、そしてＩｇＧを細胞表面に運搬して細胞外の中性ｐＨにて放出することにより、血清ＩｇＧ濃度を調節する。この機序を通して、ＦｃＲｎは、ＩｇＧの血清半減期を長くする役割を担っている。したがって、ＦｃＲｎ－ＩｇＧ相互作用の特異的な遮断を、病原性ＩｇＧ抗体の分解を促進するために使用することができる。ＦｃＲｎは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞（ＤＣ））内の多価性ＩｇＧ免疫複合体（ＩＣ）とも結合し、抗原提示細胞は、Ｔ細胞に提示しＴ細胞媒介免疫応答を活性化させるため、結合したＩＣを抗原処理経路に向ける。したがって、ＦｃＲｎ－ＩｇＧ相互作用の特異的な遮断は、炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＦＮγ、またはＴＮＦα）の産生を低減することを含めて、Ｔ細胞媒介免疫応答を阻害するために使用することができる。

【0068】

ＦｃＲｎに特異的に結合しＦｃＲｎのＩｇＧへの結合を遮断するが、ＦｃＲｎのアルブミン結合部位には実質的に結合しない、マウス抗体に由来する抗体が提供される。当該抗体は、ｐＨ７．４及びｐＨ６．０におけるＦｃＲｎとの結合親和性が大幅に改善されており、したがって、生理的条件及び酸性条件下で、ＩｇＧ ＦｃのＦｃＲｎとの結合を遮断する。当該抗体は、自己免疫性疾患及び炎症性疾患の治療に有用である。当該抗体は、１つ以上の親和性成熟ＣＤＲを含む。親和性成熟の手順により、６．０～７．４のクリティカルなｐＨ範囲にわたり高い親和性でＦｃＲｎに結合する抗体が提供される。したがって、当該抗体は、一旦エンドソームの酸性環境内に内部移行されると、ＩｇＧ Ｆｃが結合するのを効果的に遮断する。

【0069】

ある特定の実施形態によれば、この改善された抗体は、免疫原性低減のためのヒト化型フレームワークも特徴としている。ある特定の実施形態では、ＦｃＲｎ特異的抗体のＣＤＲは、ヒト抗体から得られたフレームワーク中にある。他の実施形態では、ＦｃＲｎ特異的抗体のＣＤＲは、２つ以上のヒト抗体の複合物であるフレームワーク中にある。他の実施形態では、ＦｃＲｎ特異的抗体の表面が露出したフレームワーク残基は、ヒト抗体のフレームワーク残基に置き換えられる。好ましい実施形態では、フレームワークは、広い個体群範囲にわたってＴ細胞エピトープであることが予測されるアミノ酸配列の存在を最小限にするように選択される。ＣＤＲは、ヒト定常領域に結合したマウスフレームワーク（すなわち、キメラ型抗体）中にあってもよい。

【0070】

本明細書でさらに説明されるように、親和性成熟のため、重鎖及び軽鎖可変ドメインＣＤＲ３領域を変異させ、ｓｃＦｖ形態においてｐＨ６．０及びｐＨ７．４でスクリーニングした。アミノ酸配列の変化を、配列ＫＮＣＮＮＣＮＮＣＮＮＣＳＶＣＮＷＣＹＧＧ（配列番号７１）を含むオリゴヌクレオチドを使用して、重鎖ＣＤＲ３Ｈ領域のアミノ酸９８～１０３位（ＣＤＲ３Ｈのアミノ酸９８～１０２及びＦＷ４のアミノ酸１０３）に導入した。変化は、選択されたアミノ酸の各位置について以下のように提供した：アミノ酸９８：Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｓ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸９９：Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸１００：Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸１００ａ：Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸１０１：Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｐ、Ｒ；アミノ酸１０２：Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸１０３：Ｒ、Ｗ。アミノ酸配列の変化を、オリゴヌクレオチド配列ＴＧＴＭＲＳＶＭＧＴＶＳＫＲＳＲＲＣＷＭＣＹＹＣＢＷＣＲＹＣＴＴＣ（配列番号７２）を使用して、軽鎖ＣＤＲ３Ｌ領域のアミノ酸８９～９７位に導入した。変化は、選択されたアミノ酸の各位置について以下のように提供した：アミノ酸８８：Ｃ；アミノ酸８９：Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ；アミノ酸９０：Ａ、Ｅ、Ｋ、Ｐ、Ｑ、Ｔ；アミノ酸９１：Ｃ、Ｓ、Ｗ、Ｙ；アミノ酸９２：Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｗ、Ｙ；アミノ酸９３：Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｓ；アミノ酸９４：Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；アミノ酸９５：Ｆ、Ｌ、Ｐ、Ｓ；アミノ酸９６：Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸９７：Ａ、Ｉ、Ｔ、Ｖ。

【0071】

後述の実施例に示すように、この操作により、ＦｃＲｎ結合親和性を大幅に改善するいくつかのＣＤＲ３Ｈ変異体がもたらされた。得られた変異体を、ＣＤＲ３Ｈライブラリーに導入された変動性と比較して検査すると、比較的アミノ酸の変化が無いままであった特定の位置と、変化が導入され結合が改善されたと思われる他の位置とが示される。したがって、重鎖が、変更され得るある特定のアミノ酸を含むＣＤＲ３Ｈを含む、ＦｃＲｎに結合する抗体及びその抗原結合部分が提供される。ある１つのそのような実施形態では、ＣＤＲ３Ｈは、ＶＸ_１ＰＰＸ_２Ｘ_３（式中、Ｘ_１はＡ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ_２はＧ、またはＲであり、Ｘ_３はＩ、Ｌ、またはＶである）（配列番号７３）を含む。別のそのような実施形態では、重鎖ＣＤＲ３Ｈは、ＳＴＴＶＸ_１ＰＰＸ_２Ｘ_３（式中、Ｘ_１はＡ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ_２はＧ、またはＲであり、Ｘ_３はＩ、Ｌ、またはＶである）（配列番号７４）である。別のそのような実施形態では、重鎖ＣＤＲ３Ｈは、ＶＸ_１ＰＰＸ_２Ｘ_３（式中、Ｘ_１はＡ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｇ、Ｈ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_３はＨ、Ｉ、Ｌ、またはＶである）（配列番号７５）を含む。別のそのような実施形態では、重鎖ＣＤＲ３Ｈは、ＳＴＴＶＸ_１ＰＰＸ_２Ｘ_３（式中、Ｘ_１はＡ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ_２は、Ａ、Ｇ、Ｈ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_３はＨ、Ｉ、Ｌ、またはＶである）（配列番号７６）である。別のそのような実施形態では、重鎖ＣＤＲ３Ｈは、ＶＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５（式中、Ｘ_１はＡ、Ｈ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ_２は、Ａ、またはＰであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、またはＰであり、Ｘ_４はＡ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_５はＦ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、またはＶであり、Ｘ_２及びＸ_３のうちの少なくとも１つはＰである）（配列番号７７）を含む。別のそのような実施形態では、重鎖ＣＤＲ３Ｈは、ＳＴＴＶＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５（式中、Ｘ_１はＡ、Ｈ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ_２は、Ａ、またはＰであり、Ｘ_３はＡ、Ｄ、またはＰであり、Ｘ_４はＡ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ_５はＦ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、またはＶであり、Ｘ_２及びＸ_３のうちの少なくとも１つはＰである）（配列番号７８）である。

【0072】

ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３Ｈは、ＳＴＴＶＳＰＡＤＦ（配列番号２７）、ＳＴＴＶＳＰＰＰＩ（配列番号２９）、ＳＴＴＶＳＰＰＡＨ（配列番号３１）、またはＳＴＴＶＡＰＰＲＬ（配列番号３３）である。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３Ｈは、ＳＴＴＶＨＰＤＲＮ（配列番号３５）、ＳＴＴＶＳＰＰＡＬ（配列番号３７）、またはＳＴＴＶＨＰＤＨＮ（配列番号３９）、ＳＴＴＶＳＰＰＨＬ（配列番号４１）である。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３Ｈは、ＳＴＴＶＡＰＰＰＬ（配列番号４３）、ＳＴＴＶＳＰＰＨＬ（配列番号４５）、ＳＴＴＶＡＰＰＧＨ（配列番号４７）、またはＳＴＴＶＳＰＰＲＶ（配列番号４９）である。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ３Ｈは、ＳＴＴＶＳＰＰＰＬ（配列番号５１）、ＳＴＴＶＡＰＰＡＨ（配列番号５３）、ＳＴＴＶＲＰＰＧＩ（配列番号５５）、またはＳＴＴＶＳＡＰＧＶ（配列番号５７）である。これらのうちのある特定の実施形態では、重鎖可変ドメインの１０３位のアミノ酸は、トリプトファンである。これらのうちのある特定の実施形態では、重鎖可変ドメインの１０３位のアミノ酸は、アルギニンである。

【0073】

ＣＤＲ３Ｈが上記のようなある特定の実施形態では、ＣＤＲ１Ｈが配列番号２により示され、ＣＤＲ２Ｈが配列番号４により示される。

【0074】

既知の抗体構造に鑑み、マウス抗体のフレームワーク配列を考慮に入れて、いくつかの重鎖及び軽鎖フレームワークを開発した。免疫原性Ｔ細胞エピトープを最小限にする目的で、ヒト可変ドメイン配列からヒト化型フレームワークを組み立てた。４つのそのようなヒト化型重鎖フレームワーク及び４つのそのような軽鎖ヒト化型フレームワークが以下のように例示される：Ｖ_Ｈ１（配列番号１２）；Ｖ_Ｈ２（配列番号１４）；Ｖ_Ｈ３（配列番号１６）；Ｖ_Ｈ４（配列番号１８）；Ｖκ１（配列番号２０）；Ｖκ２（配列番号２２）；Ｖκ３（配列番号２４）；及びＶκ５（配列番号２６）。これらの例示されたヒト化型フレームワークに対応するオリゴヌクレオチド配列は、以下によって記載される：配列番号１１（Ｖ_Ｈ１）；配列番号１３（Ｖ_Ｈ２）；配列番号１５（Ｖ_Ｈ３）；配列番号１７（Ｖ_Ｈ４）；配列番号１９（Ｖκ１）；配列番号２１（Ｖκ２）；配列番号２３（Ｖκ３）；及び配列番号２５（Ｖκ５）。配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、及び配列番号１８で提供される重鎖可変ドメイン配列において、ＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、及びＣＤＲ３Ｈアミノ酸は「Ｘａａ」として表される。ＣＤＲ１Ｈ及びＣＤＲ２Ｈのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２及び配列番号４に記載される通りである。ＣＤＲ１Ｈに対応するオリゴヌクレオチド配列は配列番号１によって記載され、ＣＤＲ２Ｈに対応するオリゴヌクレオチド配列は配列番号３によって記載される。配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、及び配列番号２６で提供される軽鎖可変ドメイン配列において、全ての位置で特定のアミノ酸が指定される。ＣＤＲ１Ｌのアミノ酸配列は配列番号６に記載される通りであり、ＣＤＲ２Ｌは配列番号８に記載される通りであり、ＣＤＲ３Ｌは配列番号１０に記載される通りである。対応するオリゴヌクレオチド配列は、以下によって記載される通りである：配列番号５（ＣＤＲ１Ｌ）；配列番号７（ＣＤＲ２Ｌ）；及び配列番号９（ＣＤＲ３Ｌ）。重鎖及び軽鎖におけるＦＷ及びＣＤＲの位置は、それぞれ図１及び図２からも明白となる。

【0075】

表１では、親和性成熟ヒト化型ＦｃＲｎ結合抗体における重鎖及び軽鎖の可変ドメイン及びＣＤＲについての非限定的な例が提供される。本明細書に記載されるように、可変ドメインは、ｐＨ６．０及びｐＨ７．４で結合が改善するように選択されたものであり、親マウス抗体に対する実質的な結合の改善を示している。

【表1】

【0076】

親和性成熟重鎖ＣＤＲ３は、重鎖ＣＤＲ１（例えば、配列番号２を有するＣＤＲ１）及び／または重鎖ＣＤＲ２（例えば、配列番号４を有するＣＤＲ２）と組み合わせることができる。親和性成熟軽鎖ＣＤＲ３は、軽鎖ＣＤＲ１（例えば、配列番号６を有するＣＤＲ１）及び／または軽鎖ＣＤＲ２（例えば、配列番号８を有するＣＤＲ２）と組み合わせることができる。

【0077】

後述の実施例で開示されるように、本明細書で例示される様々な抗体可変ドメインはマウス抗体に基づき、親和性成熟ＣＤＲを含有する。そして、ある特定の実施形態はヒト化型ＦＷも特徴としている。表１で開示される重鎖及び軽鎖可変ドメインが、適合性であるように設計されていることは、明白となろう。したがって、表１で開示される重鎖可変ドメインは、任意の開示された軽鎖と共に共発現させて機能的抗ＦｃＲｎ抗体を作り出すことができる。さらに、親和性成熟重鎖可変ドメインは、本明細書で開示されるヒト化型非親和性成熟軽鎖可変ドメインと対をなすことができ、親和性成熟軽鎖可変ドメインは、ヒト化型非親和性成熟重鎖可変ドメインと対をなすことができる。好ましい実施形態では、親和性成熟重鎖可変ドメインは、ヒト化型軽鎖可変ドメインと対をなすことができる。また、表１は、Ｖ_Ｈ１における重鎖ＣＤＲならびにＶκ１及びＶκ２における軽鎖ＣＤＲも示している。重鎖ＣＤＲは、例えば、本明細書で開示されるフレームワークＶ_Ｈ２、Ｖ_Ｈ３、及びＶ_Ｈ４（図１参照）に対しても適合性である。軽鎖ＣＤＲは、例えば、本明細書で開示されるフレームワークＶκ３及びＶκ５ｎ（図２参照）に対しても適合性である。本明細書で使用される場合、Ｖ_Ｈ１、Ｖ_Ｈ２、Ｖ_Ｈ３、Ｖ_Ｈ４、Ｖκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ５という名称は、本明細書に開示される例示的なヒト化型フレームワークを指し、ヒトの生殖系遺伝子ファミリーに言及しているわけではない。本明細書で開示される任意の重鎖または軽鎖可変ドメインは、相補性可変ドメインのライブラリーと組み合わせることができ、そしてスクリーニングを行って、結合特性の改善及び変更を有する新たな抗体を同定できるということが明らかになる。

【0078】

本明細書では、表１で開示されるものに類似するが、同一ではない抗体及び抗原結合部分が提供される。当該抗体は、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失、挿入、及び／または追加を有することができる。ある特定の実施形態では、ＦｃＲｎ抗体は、表１に記載される重鎖可変ドメインに対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一である重鎖可変ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＦｃＲｎ抗体は、表１に記載される軽鎖可変ドメインに対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一である軽鎖可変ドメインを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、表１に記載される重鎖可変ドメイン、または、表１に記載される重鎖可変ドメインに対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％同一である重鎖可変ドメインと、表１に記載される軽鎖可変ドメイン、または、表１に記載される軽鎖可変ドメインに対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％同一である軽鎖可変ドメインと、を含む。

【0079】

一実施形態では、ＦｃＲｎ抗体は、ＣＤＲ配列、すなわち表１に記載されるＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、及びＣＤＲ３Ｈ、を含む重鎖可変ドメインと、Ｖ_Ｈ１、Ｖ_Ｈ２、Ｖ_Ｈ３、もしくはＶ_Ｈ４のフレームワーク（すなわち、ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３、及びＦＷ４）、または、Ｖ_Ｈ１、Ｖ_Ｈ２、Ｖ_Ｈ３、もしくはＶ_Ｈ４のフレームワークに対し少なくとも８５％、９０％、もしくは９５％同一であるフレームワークと、を含有する。一実施形態では、ＦｃＲｎ抗体は、表１に記載されるＣＤＲ配列を含む重鎖可変ドメインと、当該重鎖可変ドメインが表１に記載される可変ドメインに対し少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるようなフレームワークと、を含有する。

【0080】

一実施形態では、ＦｃＲｎ抗体は、ＣＤＲ配列、すなわち表１に記載されるＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、及びＣＤＲ３Ｌを含む軽鎖可変ドメインと、Ｖκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、もしくはＶκ５のフレームワーク（すなわち、ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３、及びＦＷ４）、または、Ｖκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、もしくはＶκ５のフレームワークに対し少なくとも８５％、９０％、もしくは９５％同一であるフレームワークと、を含有する。一実施形態では、ＦｃＲｎ抗体は、表１に記載されるＣＤＲ配列を含む軽鎖可変ドメインと、当該軽鎖可変ドメインが表１に記載される軽鎖可変ドメインに対し少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であるようなフレームワークと、を含有する。

【0081】

一実施形態では、ＦｃＲｎ抗体は、ＣＤＲ配列、すなわち表１に記載されるＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、及びＣＤＲ３Ｈ、を含む重鎖可変ドメインと、Ｖ_Ｈ１、Ｖ_Ｈ２、Ｖ_Ｈ３、もしくはＶ_Ｈ４のフレームワーク（すなわち、ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３、及びＦＷ４）、または、Ｖ_Ｈ１、Ｖ_Ｈ２、Ｖ_Ｈ３、もしくはＶ_Ｈ４のフレームワークに対し少なくとも８５％、９０％、もしくは９５％同一であるフレームワークと、Ｖκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、もしくはＶκ５を含む軽鎖可変ドメイン、または、Ｖκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、もしくはＶκ５に対し少なくとも８５％、９０％、もしくは９５％同一である配列と、を含有する。

【0082】

「同一性」とは、２つのアミノ酸または核酸の配列間で共有される、同一な位置の数またはパーセンテージを指し、２つの配列の最適な配列比較のために導入される必要のあるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れている。

【0083】

アミノ酸配列が、別のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一であると記載される場合、これらのアミノ酸配列は保存的置換によって異なる（全ての置換が保存的置換である場合を含む）可能性がある。

【0084】

一部の場合では、アミノ酸置換は、（ａ）置換エリアにおけるペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖のバルク、の維持に及ぼす影響が顕著に異ならない置換を選択することによって、行われ得る。例えば、天然に存在する残基は、側鎖の性質に基づいて以下の群に分類することができる；（１）疎水性アミノ酸（メチオニン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン）；（２）中性親水性アミノ酸（システイン、セリン、及びトレオニン）；（３）酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）；（４）塩基性アミノ酸（アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、及びアルギニン）；（５）鎖配向に影響を及ぼすアミノ酸（グリシン及びプロリン）；ならびに（６）芳香族アミノ酸（トリプトファン、チロシン、及びフェニルアラニン）。これらの群内でなされる置換は、保存的置換とみなすことができる。置換の例としては、限定するものではないが、以下の置換が挙げられる：アラニンに対するバリン、アルギニンに対するリジン、アスパラギンに対するグルタミン、アスパラギン酸に対するグルタミン酸、システインに対するセリン、グルタミンに対するアスパラギン、グルタミン酸に対するアスパラギン酸、グリシンに対するプロリン、ヒスチジンに対するアルギニン、イソロイシンに対するロイシン、ロイシンに対するイソロイシン、リジンに対するアルギニン、メチオニンに対するロイシン、フェニルアラニンに対するロイシン、プロリンに対するグリシン、セリンに対するトレオニン、トレオニンに対するセリン、トリプトファンに対するチロシン、チロシンに対するフェニルアラニン、及び／またはバリンに対するロイシン。

【0085】

配列の類似性を決定するための方法及びコンピュータープログラムは公的に入手可能であり、以下に限定するものではないが、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２：３８７，１９８４）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０））、及びＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）が挙げられる。よく知られているスミス・ウォーターマンアルゴリズムも、類似性の決定に使用することができる。ＢＬＡＳＴプログラムは、ＮＣＢＩ及び他のソース（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，ＮＣＢＩ ＮＬＭ ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；ＢＬＡＳＴ２．０ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ／）から公的に入手可能である。配列比較の際には、これらの方法により、様々な置換、欠失、及び他の修飾が説明される。

【0086】

本明細書で使用する「相補性決定領域」（ＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）という用語は、抗原結合のために必要な存在である、抗体可変ドメインのアミノ酸残基を指す。各可変ドメインは、通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３として識別される３つのＣＤＲ領域を有する。各相補性決定領域は、Ｋａｂａｔにより定義される「相補性決定領域」（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）及び８９～９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）及び９５～１０２（Ｈ３）について）からのアミノ酸残基を含むことができる。同様に、「フレームワーク」（ＦＷ）は、Ｋａｂａｔ番号付け方式を考慮に入れて、軽鎖可変ドメインにおける１～２３（ＦＷ１）、３５～４９（ＦＷ２）、５７～８８（ＦＷ３）、及び９８～１０７（ＦＷ４）のアミノ酸ならびに重鎖可変ドメインにおける１～３０（ＦＷ１）、３６～４９（ＦＷ２）、６６～９４（ＦＷ３）、及び１０３～１１３（ＦＷ４）のアミノ酸を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７，１９９１））。

【0087】

Ｋａｂａｔ残基の名称は、必ずしもアミノ酸残基の直線的番号付けに直接対応しているわけではない。実際の直線的アミノ酸配列は、基本的な可変ドメイン構造における構造的成分（フレームワークであっても、相補性決定領域（ＣＤＲ）であっても）の短縮または挿入に対応して、厳密なＫａｂａｔ番号付けよりも少ないアミノ酸またはさらなるアミノ酸を含有する可能性がある。残基における正確なＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列中の相同的な残基と「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付け配列との配列比較により、所与の抗体に対して決定することができる。

【0088】

本明細書で使用される「抗体可変ドメイン」とは、抗体分子の軽鎖及び重鎖の一部を指し、これには相補性決定領域（ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列が含まれる。Ｖ_Ｈは重鎖の可変ドメインを指す。Ｖ_Ｌは軽鎖の可変ドメインを指す。

【0089】

抗体は、特定の抗原または物質を認識しそれに結合するタンパク質である。好ましい実施形態では、本明細書で記載される抗体または抗原結合部分は、少なくとも天然のリガンド（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ）と同じ強度でＦｃＲｎと結合する。親和性は、抗原と抗体との解離に関する平衡定数（Ｋｄ）によって表され、抗原決定基と抗体結合部位との間の結合強度を測定するものである。抗原に対する抗体の親和性は、好適な表面プラズモンエネルギー共鳴測定法によって決定することができる。そのような測定法は、国際特許出願公開第ＷＯ２００５／０１２３５９号及び本明細書の他の箇所に記載されるＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイであり得る。親和性を決定する他の方法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ、またはラジオイムノアッセイなどの競合アッセイが挙げられる。

【0090】

結合活性は、抗体とその抗原との間の結合強度の尺度である。結合活性は、抗原決定基と抗体上の抗原結合部位との間の親和性ならびに、抗体当たりの結合部位の数（数価）の両方に関連する。例えば、一価の抗体（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）は、特定のエピトープに対して１つの結合部位を有する。ＩｇＧ抗体は、２つの抗原結合部位を有する。典型的なＫの値（解離定数Ｋ_ｄの逆数）は、１０^５～１０^１１リットル／ｍｏｌである。１０^４リットル／ｍｏｌより小さい任意のＫが、非特異的結合を示すものとみなされる。

【0091】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分は、１０^５～１０^１２リットル／ｍｏｌ、１０^６～１０^１２リットル／ｍｏｌ、１０^７～１０^１２リットル／ｍｏｌ、１０^８～１０^１２リットル／ｍｏｌ、１０^９～１０^１２リットル／ｍｏｌ、１０^１０～１０^１２リットル／ｍｏｌ、または１０^１１～１０^１２リットル／ｍｏｌのＫ_ｄで、ヒトＦｃＲｎのＦｃ結合部分に結合する。他の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分は、１０^５～１０^１１リットル／ｍｏｌ、１０^６～１０^１１リットル／ｍｏｌ、１０^７～１０^１１リットル／ｍｏｌ、１０^８～１０^１１リットル／ｍｏｌ、１０^９～１０^１１リットル／ｍｏｌ、または１０^１０～１０^１１リットル／ｍｏｌのＫ_ｄで、ヒトＦｃＲｎのＦｃ結合部分に結合する。他の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分は、１０^５～１０^１０リットル／ｍｏｌ、１０^６～１０^１０リットル／ｍｏｌ、１０^７～１０^１０リットル／ｍｏｌ、１０^８～１０^１０リットル／ｍｏｌ、または１０^９～１０^１０リットル／ｍｏｌのＫ_ｄで、ヒトＦｃＲｎのＦｃ結合部分に結合する。他の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分は、１０^５～１０^８リットル／ｍｏｌ、１０^６～１０^８リットル／ｍｏｌ、または１０^７～１０^８リットル／ｍｏｌのＫ_ｄで、ヒトＦｃＲｎのＦｃ結合部分に結合する。

【0092】

ヒトに投与されたときに免疫原性を最小限にするために、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分は、ヒト定常領域を含むことが好ましい。したがって、抗体は任意のアイソタイプまたはサブタイプとすることができ、以下に限定するものではないが、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２ａ、ＩｇＧ_２ｂ、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥが含まれる。抗体クラスは、エフェクター機能を最適化するように（例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増加または低減するように）選択することができる。ある特定の実施形態では、定常領域（すなわち、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３、及び／またはヒンジ領域）は、例えばＦｃ受容体への結合を増加または減少させるために、修飾される。ある特定の実施形態では、定常領域は、重鎖－重鎖結合を促進または安定化させるために修飾される。ある特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ_４抗体であり、重鎖のヒンジ領域は、２４１位のセリンをプロリンに変更することによって修飾され、これにより血清半減期の延長がもたらされる（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５－１０８）。ある特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ_４抗体であり、重鎖の４７８位のＣ末端のリジンが欠失される。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ_４抗体は両方のＳ２４１Ｐ修飾を有し、Ｃ末端リジンが欠如している。

【0093】

ある特定の実施形態では、ＦｃＲｎ結合抗体断片が提供される。Ｆｖは、６つの超可変ループ（ＣＤＲ）を含めた完全な重鎖及び軽鎖可変ドメインを含有する最小の断片である。定常ドメインは欠如し、可変ドメインは非共有結合的に会合している。重鎖及び軽鎖は、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインが会合して抗原結合部位を形成することを可能にするリンカーを使用して、単一のポリペプチド鎖（「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」）に接続することができる。例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９を参照。一実施形態では、当該リンカーは（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）_３である。ｓｃＦｖ断片は、全抗体の定常領域が欠如しているため、全抗体よりもかなり小さい。また、ｓｃＦｖ断片は、通常の重鎖定常ドメインと他の生物学的分子との相互作用も有さず、ある特定の実施形態で望まれ得る。

【0094】

本明細書で使用される「抗体」とは、単量体及び多量体を指す。インタクトな抗体（多量体を含む）、または抗体の抗原結合領域を有する抗体断片を使用することができる。抗原結合領域としては、以下に限定するものではないが、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２断片が挙げられる。抗体断片を調製する方法は、当技術分野で周知である。例えば、重鎖のヒンジ領域が欠如している一価のＦａｂ断片は、パパインを用いたタンパク質分解消化によって、全免疫グロブリンから調製することができる。重鎖のヒンジ領域を保持する二価のＦ（ａｂ’）_２断片は、ペプシンを用いたタンパク質分解消化によって調製することができる。

【0095】

Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、及び任意選択によりＣ_Ｌ、Ｃ_Ｈ１、または他の定常ドメインを含有する抗体の断片も、使用することができる。そのような断片を、組換えにより産生することもできる。多くの他の有用な抗原結合抗体断片が当技術分野で公知であり、以下に限定するものではないが、二重特異性抗体、三重特異性抗体、単一ドメイン抗体、ならびに他の一価及び多価の形態が挙げられる。

【0096】

さらに、多価の抗原結合タンパク質（以下に限定するものではないが、抗体、その抗原結合断片、及び抗体の全てまたは一部の抗原結合部分を含むタンパク質の形態をとり得る）が提供される。多価の抗原結合タンパク質は、単一特異的、二重特異的、または多重特異的であり得る。特異性という用語は、特定の分子が結合することができる、異なるタイプの抗原決定基の数を指す。免疫グロブリン分子が１つのタイプの抗原決定基のみに結合する場合、この免疫グロブリン分子は単一特異的である。免疫グロブリン分子が異なるタイプの抗原決定基に結合する場合、この免疫グロブリン分子は多重特異的である。

【0097】

一実施形態では、多価の単鎖抗体は、可変の重鎖断片に結合した可変の軽鎖断片（ｓｃｆｖに類似）を含み、これはさらに、別のペプチドリンカーにより、少なくとも１つの他の抗原結合ドメインに結合する。典型的には、このペプチドリンカーは、約１５アミノ酸残基から構成される。好ましい実施形態では、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈドメインの数が等しい。例えば、二価の単鎖抗体は、以下のように表すことができる：Ｖ_Ｌ－Ｌ_１－Ｖ_Ｈ－Ｌ_２－Ｖ_Ｌ－Ｌ_３－Ｖ_Ｈ、またはＶ_Ｌ－Ｌ_１－Ｖ_Ｈ－Ｌ_２－Ｖ_Ｈ－Ｌ_３－Ｖ_Ｌ、またはＶ_Ｈ－Ｌ_１－Ｖ_Ｌ－Ｌ_２－Ｖ_Ｈ－Ｌ_３－Ｖ_Ｌ、またはＶ_Ｈ－Ｌ_ｌ－Ｖ_Ｌ－Ｌ_２－ＶＬ－Ｌ_３－Ｖ_Ｈ。三価以上の多価の単鎖抗体は、追加のペプチドリンカーによって二価の単鎖抗体に連結された１つ以上の抗体断片を有する。三価の単鎖抗体の一例は、Ｖ_Ｌ－Ｌ_１－Ｖ_Ｈ－Ｌ_２－Ｖ_Ｌ－Ｌ_Ｉ－Ｖ_Ｈ－Ｌ_２－Ｖ_Ｌ－Ｌ_Ｉ－Ｖ_Ｈである。

【0098】

２つの単鎖抗体は、組み合わせて二重特異性抗体（二価の二量体としても知られる）を形成することができる。例えば、欧州特許出願第０４０４０９７号またはＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４を参照。二重特異性抗体は、２つの鎖を有する。二重特異性抗体の各鎖は、約５～１０アミノ酸残基の短いリンカー（例えば、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）_２）によってＶ_Ｌドメインに接続したＶ_Ｈドメインを含む。そのようなリンカーは、同じ鎖のドメイン間における鎖内の対合を防止する程度に十分短いため、異なる鎖の相補ドメイン間における鎖間の対合を推進し、２つの抗原結合部位を再形成する。二重特異性抗体の構造はコンパクトであり、分子の両端に抗原結合部位を有する。

【0099】

Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌのフレームワーク配列変異体及び親和性成熟抗体は、前臨床エキソビボアッセイに供して潜在的免疫原性を評価することができる。このようなアッセイの１つにＥＰＩＳＣＲＥＥＮ（商標）があり、これは、タンパク質治療薬に対するＴ細胞応答を定量化することにより、Ｔ細胞の免疫原性を予測するための有効な技術をもたらすものである。当該アッセイは、世界的母集団において発現されるＨＬＡ－ＤＲアロタイプの数及び頻度を最も良好に代表するように、ＭＨＣクラスＩＩハプロタイプに基づいて慎重に選択された血液ドナーのコホートを使用する。当該アッセイは、全タンパク質の免疫原性を、Ｔ細胞応答の大きさ及び頻度の両観点から評価し得る方法を提供する（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．２００４ ２４（９）：５６０－７２；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．２００５ ３（５）：９９１－１０００）。

【0100】

本明細書で開示される抗体とＦｃＲｎとの結合に対し競合もしくは交差遮断する抗体、または本明細書で開示される抗体によって自らの結合が交差遮断される抗体は、本明細書で開示されるＦｃＲｎ活性を遮断する方法で使用することができる。一部の場合では、これらの競合抗体、交差遮断抗体、または被交差遮断抗体は、本明細書に記載される抗体が結合するエピトープに隣接及び／または重複しているＦｃＲｎのエピトープに結合する。一部の場合では、これらの競合抗体、交差遮断抗体、または被交差遮断抗体は、本明細書に記載される抗体が結合するエピトープと同じＦｃＲｎのエピトープに結合する、キメラ型抗体、完全ヒト型抗体、またはヒト化型抗体である。

【0101】

競合抗体、交差遮断抗体、及び被交差遮断抗体は、当技術分野で公知の任意の好適な方法を使用して同定することができ、この方法には、競合抗体または交差遮断抗体とヒトＦｃＲｎとの結合によって本明細書で開示される抗体の結合が防止される、またはその逆である、競合ＥＬＩＳＡまたはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイが含まれる。

【0102】

ある特定の実施形態では、当該競合抗体または交差遮断抗体は、ヒトＩｇＧのヒトＦｃＲｎへの結合を遮断する抗体であって、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、及び配列番号５８からなる群から選択される重鎖配列と、配列番号２０、配列番号２２、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、及び配列番号７０からなる群から選択される軽鎖配列とを有する抗体の結合に対し、競合またはクロス遮断する抗体である。一部の実施形態では、当該競合または交差遮断は、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超である。

【0103】

一部の実施形態では、当該競合抗体または交差遮断抗体は、ヒトＩｇＧのヒトＦｃＲｎへの結合を遮断する抗体であって、配列番号５６の重鎖配列及び配列番号２２の軽鎖配列を有する抗体の結合に対し、競合または交差遮断する抗体である。一部の実施形態では、当該競合または交差遮断は、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超である。

【0104】

ある特定の実施形態では、当該競合抗体または被交差遮断抗体は、ヒトＩｇＧのヒトＦｃＲｎへの結合を遮断する抗体であって、自らのＦｃＲｎへの結合が、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、及び配列番号５８からなる群から選択される重鎖配列と、配列番号２０、配列番号２２、配列番号６１、配列番号６４、配列番号６７、及び配列番号７０からなる群から選択される軽鎖配列とを有する抗体によって、競合または交差遮断される抗体である。一部の実施形態では、当該競合または被交差遮断抗体は、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超で競合または交差遮断される。

【0105】

一部の実施形態では、当該競合抗体または被交差遮断抗体は、ヒトＩｇＧのヒトＦｃＲｎへの結合を遮断する抗体であって、自らのＦｃＲｎへの結合が、配列番号５６の重鎖配列及び配列番号２２の軽鎖配列を有する抗体の結合によって、競合または交差遮断される抗体である。一部の実施形態では、当該競合または被交差遮断抗体は、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超で競合または交差遮断される。

【0106】

一部の実施形態では、当該競合抗体、交差遮断抗体、または被交差遮断抗体は、キメラ型、完全ヒト型、またはヒト化型である。一部の実施形態では、当該競合抗体、交差遮断抗体、または被交差遮断抗体は、１０^５～１０^１１リットル／ｍｏｌ、１０^６～１０^１１リットル／ｍｏｌ、１０^７～１０^１１リットル／ｍｏｌ、１０^８～１０^１１リットル／ｍｏｌ、１０^９～１０^１１リットル／ｍｏｌ、または１０^１０～１０^１１リットル／ｍｏｌの親和性で、ヒトＦｃＲｎのＦｃ結合部位に結合する。

【0107】

また、本明細書では、抗ＦｃＲｎ抗体及びその機能的断片をコードする核酸、ベクター、宿主細胞ならびに発現系が提供される。抗ＦｃＲｎ抗体及びその機能的断片をコードする核酸は、例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、合成的に産生されたＤＮＡもしくはＲＮＡ、または、これらのポリヌクレオチドを単独でもしくは組み合わせで含む、組換えにより産生されたキメラ型核酸分子とすることができる。例えば、真核及び／または原核宿主細胞における発現に好適な発現制御配列に対し作用可能に結合した、本明細書に記載される抗ＦｃＲｎ抗体をコードするポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターが提供される。バクテリアなどの原核細胞及び真核系（限定するものではないが、酵母及び哺乳細胞培養系を含む）で抗体及び断片を効率的に合成するため、様々な発現ベクターが開発されている。ベクターは、染色体配列、非染色体配列及び合成ＤＮＡ配列のセグメントを含むことができる。

【0108】

任意の好適な発現ベクターを使用することができる。例えば、真核クローニングベクターには、Ｅ．ｃｏｌｉからのプラスミド、例えば、ｃｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ｐＵＣ、ｐＫＳＭ、及びＲＰ４、が含まれる。真核ベクターには、ファージＤＮＡの派生物、例えばＭ１３及び他の糸状一本鎖ＤＮＡファージ、が含まれる。酵母に有用なベクターの例に、２μプラスミドがある。哺乳動物細胞における発現に好適なベクターとしては、よく知られているＳＶ４０、アデノウイルス、レトロウイルス由来のＤＮＡ配列の派生物、及び上述のような機能的哺乳動物ベクターの組み合わせに由来するシャトルベクター、及び機能的プラスミド、例えば、ｐＬｅｎｔｉ６．３／Ｖ５－ＤＥＳＴ（登録商標）、Ｔ－Ｒｅｘ（商標）－ＤＥＳＴ３１（登録商標）、ｐＧｅｎｅ／Ｖ５－ＨｉｓｐＧｅｎｅ／Ｖ５－Ｈｉｓ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ）、が挙げられる。

【0109】

さらなる真核発現ベクターが当技術分野で知られている（例えば、Ｐ．Ｊ．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ａｎｄ Ｐ．Ｂｅｒｇ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１，３２７－３４１（１９８２）；Ｓｕｂｒａｍａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１：８５４－８６４（１９８１）；Ｋａｕｆｍａｎｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，” Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ Ｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ Ｍｏｄｕｌａｒ Ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ＤＮＡ Ｇｅｎｅ，” Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９，６０１－６２１（１９８２）；Ｋａｕｆｍａｎｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５９，６０１－６６４（１９８２）；Ｓｃａｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，”Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｅ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ＤＮＡ Ｇｅｎｅ Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｏｖａｒｙ Ｃｅｌｌｓ，” Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０，４６５４－４６５９（１９８３）；Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７，４２１６－４２２０，（１９８０））。

【0110】

発現ベクターは、発現されるＤＮＡ配列または断片に作動可能に結合した、少なくとも１つの発現制御配列を含有することができる。制御配列は、クローニングされたＤＮＡ配列の発現を制御及び調節するためにベクターに挿入される。有用な発現制御配列の例には、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ｔａｃ系、ｔｒｃ系、ｌａｍｂｄａファージの主要オペレーター領域及びプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の制御領域、酵母の解糖プロモーター（例えば、３－ホスホグリセリン酸キナーゼ）、酵母の酸性ホスファターゼのプロモーター（例えば、Ｐｈｏ５）、酵母のアルファ接合因子、ならびにサイトメガロウイルス、ポリオーマ、アデノウイルス、レトロウイルス、及びサルウイルスに由来するプロモーター（例えば、ＳＶ４０の初期プロモーター及び後期プロモーター）、ならびに原核細胞または真核細胞及びそのウイルスまたはその組み合わせの遺伝子発現を制御することが知られている他の配列、がある。使用することができる他の発現制御配列の例としては、チャイニーズハムスターの伸長因子１α（ＣＨＥＦ１）遺伝子からのＤＮＡ制御配列が挙げられる（Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ＆ Ａｌｌｉｓｏｎ，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９；米国特許第５，８８８，８０９号）。

【0111】

また、先に説明した発現ベクターを含有する組換え型宿主細胞も提供される。本明細書に記載の抗体及びその抗原結合部分は、ハイブリドーマ以外の細胞株で発現することができる。本明細書に記載されるポリペプチドをコードする配列を含む核酸は、好適な哺乳動物宿主細胞の形質転換のために使用することができる。

【0112】

特に好ましい細胞株は、高いレベルの発現、目的のプロテインの構成的発現及び宿主タンパク質からの最低限の混入、に基づいて選択される。発現の宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当技術分野で周知であり、多くの不死化細胞株、例えば、以下に限定するものではないが、ＮＳ０細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞及びその他多数が挙げられる。一部の実施形態では、当該細胞はミエローマ細胞、例えばＳＰ２／０であり、これは、高濃度のＩｇＧを腹水から回収することができるマウスの腹腔中にトランスフェクトし、培養下で増殖させることができる。好適なさらなる真核細胞としては、酵母及び他の真菌類が挙げられる。有用な原核宿主としては、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ＳＧ－９３６、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ １０１、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ１７７６、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ２２８２、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨＩ、及びＥ．ｃｏｌｉ ＭＲＣｌ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓが挙げられる。

【0113】

これらの存在する組換え型宿主細胞は、抗体またはその抗原結合部分の産生に使用することができ、これは、抗体またはその断片の発現を可能にする条件下で細胞を培養し、抗体またはその断片を宿主細胞または宿主細胞の周囲の媒体から精製することによって行われる。したがって、一実施形態では、ＦｃＲｎのＦｃ結合領域と結合可能な抗体を産生するための方法であって、（ａ）上述のように宿主細胞を培養することと、（ｂ）前記抗体を宿主細胞または宿主細胞の培地から単離することと、を含む、方法が提供される。

【0114】

形質転換宿主は、当技術分野で公知の手法に従って、発酵槽で増殖させ、培養することができる。ひとたび抗体の発現が所望レベルに到達したら、硫酸アンモニウム沈殿法、親和性カラムでの精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動法などを含めた、当技術分野の標準的な手順に従って、抗体を精製することができる。本明細書に記載される治療方法における使用に関しては、抗体は、少なくとも９０％、９５％、９８％、または９９％の純度に精製されることが好ましい。

【0115】

組換え型宿主細胞中で分泌するための発現抗体または断片の標的化は、目的の抗体コード遺伝子の５’末端に、シグナルまたは分泌リーダーペプチドコード配列を挿入することによって、容易に行うことができる（Ｓｈｏｋｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６０（６）：６５４－６４（２００３），Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：１－６（１９９７）及びｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１４：４６８３－４６９０（１９８６）を参照）。これらの分泌リーダーペプチド要素は、原核配列または真核配列のいずれかに由来し得る。したがって、分泌リーダーペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に連結して、ポリペプチドの移動を宿主細胞サイトゾルの外に向け、分泌を培地内に向けさせるアミノ酸であり、好適に使用される。

【0116】

当該抗体またはその抗原結合部分は、さらなるアミノ酸残基に対し融合していてもよい。このようなアミノ酸残基は、単離を容易にする可能性のあるペプチドタグであり得る。当該抗体が特定の臓器または組織にホーミングするための他のアミノ酸残基も企図される。

【0117】

一部の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合部分は１つ以上のエフェクター分子にコンジュゲートされており、これにより、何らかの所望の性質（例えば、血清半減期の増加）が当該抗体またはその抗原結合部分にもたらされる。特定の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートされる。ＰＥＧは、任意のアミノ酸側鎖または末端アミノ酸官能基、例えば、遊離アミノ基、イミノ基、チオール基、ヒドロキシル基、またはカルボキシ基に付着していてもよい。ＰＥＧを抗体に付着させる方法は、当技術分野で公知であり、用いることができる。例えば、欧州特許出願第ＥＰ０９４８５４４号；欧州特許出願第ＥＰ１０９００３７号；“Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ） Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，” １９９２，Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ（ｅｄ），Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；“Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ） Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，” １９９７，Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ ＆ Ｓ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ （ｅｄｓ），Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ；“Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，” １９９８，Ｍ．Ａｓｌａｍ ＆ Ａ．Ｄｅｎｔ，Ｇｒｏｖｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ｏｒ Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．２００２，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００２，５４：５３１－５４５を参照。

【0118】

別の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分は、当該抗体をコードする核酸を遺伝子導入動物において発現させ、当該抗体を発現させ回収できるようにすることによって、作製される。例えば、当該抗体は、組織特異的に発現させることができ、これにより回収及び精製が容易になる。ある１つのこのような実施形態では、授乳中の哺乳動物の分泌腺で発現される抗体。遺伝子導入動物としては、以下に限定するものではないが、マウス、ヤギ、及びウサギが挙げられる。

【0119】

本明細書では、酸性ｐＨ及び生理的ｐＨの両方でＦｃＲｎと結合する抗体を同定する方法が提供される。当該方法は、酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５．０～６．６、ｐＨ５．８～６．４、ｐＨ６．０～６．２、またはｐＨ６．０）で行われる、２つ以上のスクリーニングステップを含む。この２つ以上の酸性スクリーニングステップは、生理的ｐＨ（例えば、ｐＨ６．８～８．２、ｐＨ６．８～７．６、ｐＨ７．２～７．４、またはｐＨ７．４）で行われるスクリーニングステップと交互に行われる。

【0120】

例えば、このような方法の一実施形態は、
（ａ）候補抗体の集合を、ｐＨ５．８～６．４でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する抗体を単離することと、
（ｂ）ステップ（ａ）の単離抗体を、ｐＨ５．８～７．６でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する抗体を単離することと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の単離抗体を、ｐＨ５．８～６．４でＦｃＲｎまたはその一部に接触させ、ＦｃＲｎまたはその一部に結合する抗体を単離することと、
を含む。

【0121】

別の実施形態は、
（ａ）ＦｃＲｎ結合抗体候補の集合を用意することと、
（ｂ）ＦｃＲｎ結合抗体候補の集合を、ＦｃＲｎまたはその一部に、ｐＨ６．０で、ＦｃＲｎまたはその一部とＦｃＲｎ結合抗体候補の少なくとも一部との間に複合体が形成されるような条件下で、接触させることと、
（ｃ）複合体を単離することと、
（ｄ）ＦｃＲｎ結合抗体候補を、単離複合体から分離することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）からの、分離されたＦｃＲｎ結合抗体候補を、ＦｃＲｎまたはその一部に、ｐＨ７．４で、ＦｃＲｎまたはその一部とＦｃＲｎ結合抗体候補の少なくとも一部との間に複合体が形成されるような条件下で、接触させることと、
（ｆ）ステップ（ｅ）で形成された複合体を単離することと、
（ｇ）ＦｃＲｎ結合抗体候補を、ステップ（ｆ）の単離複合体から分離することと、
（ｈ）ステップ（ｇ）からの、分離されたＦｃＲｎ結合抗体候補を、ＦｃＲｎまたはその一部に、ｐＨ６．０で、ＦｃＲｎまたはその一部とＦｃＲｎ結合抗体候補の少なくとも一部との間に複合体が形成されるような条件下で、接触させることと、
（ｉ）ステップ（ｈ）で形成された複合体を単離することと、
（ｊ）ＦｃＲｎ結合抗体候補を、ステップ（ｉ）の単離抗体から分離して、酸性ｐＨ及び生理的ｐＨの両方でＦｃＲｎに結合する抗体を得ることと、
を含む。

【0122】

一部の実施形態では、当該ＦｃＲｎ結合抗体候補の集合は、抗体またはその一部のライブラリー（例えば、ファージに提示されるｓｃＦｖのライブラリー）とすることができる。

【0123】

一部の実施形態では、ＦｃＲｎまたはその一部の濃度は、各接触ステップで減少する。例えば、ステップ（ｂ）は２５ｎＭの濃度で行われ得、ステップ（ｅ）は２．５ｎＭの濃度で行われ得、ステップ（ｈ）は０．２５ｎＭの濃度で行われ得る。

【0124】

一部の実施形態では、当該ＦｃＲｎまたはその一部は、固体支持体（例えば磁気ビーズ）に付着していてもよい。そのような実施形態では、単離ステップは単に、抗体と、固体支持体に付着したＦｃＲｎまたはその一部との結合であり得、例えば、固体支持体がクロマトグラフィーカラムである場合にそのような可能性がある。一部の実施形態では、ＦｃＲｎまたはその一部は、ＦｃＲｎまたはその一部と抗体との間の複合体の単離を容易にする部分に付着していてもよい。例えば、ＦｃＲｎまたはその一部は、ビオチンに付着していてもよい。

【0125】

本明細書に記載の、抗体またはその抗原結合部分の物理的性質及び機能的性質は、通例の手順によって決定することができる。例えば、抗体がＦｃＲｎ活性を遮断する能力は、いくつかの方法によって評価することができる。１つのやり方は、ＦｃＲｎのＦｃ結合領域に結合することが知られている抗体との競合的結合を示すことである。もう１つのやり方は、異化作用からの血清Ｉｇの保護を示すことである。例えば、Ａｋｉｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：４５８０－８８を参照。別のやり方は、試験薬剤の存在下で、ＦｃＲｎにおける抗体を再利用または経細胞輸送する能力を測定することである。例えば、Ｃｌａｙｐｏｏｌ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２８０３８－５０では、ヒトＦｃＲｎ及びβ_２ｍを発現するようにトランスフェクトされたＭａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を使用して、ＩｇＧの経細胞輸送を実証した。ＦｃＲｎを内因的に発現する、他の好適な極性化上皮細胞株としては、ヒト腸上皮細胞株Ｔ８４及びＣａｃｏ－２が挙げられる。実施例では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分における、ＦｃＲｎに結合し、クラスＩＩ ＭＨＣによる抗原提示及びクラスＩ ＭＨＣによる交差提示を阻害する能力を決定するためのアッセイ法が提供される。

【0126】

本明細書では、免疫複合体（ＩＣ）の処理を調節する抗ＦｃＲｎ抗体の能力を決定するための、全血ベースのアッセイが提供される。ＦｃＲｎは、単量体ＩｇＧに結合し異化作用に向かわせないように機能し、このようにしてＩｇＧの血清半減期が延びる。一方、多量体のＩｇＧまたは抗原－抗体ＩＣは、ＦｃＲｎと相互作用してサイトカイン産生を活性化し、かつＩＣを抗原提示経路に誘導する。ＦｃＲｎの主な役割は、おそらくはＩｇＧ含有ＩＣの摂取、処理、及び提示を介した、細胞性免疫機能の調節である。ＦｃＲｎ生物学におけるこの態様に関連したサイトカイン産生活性化により、抗ＦｃＲｎ抗体における、このＦｃＲｎ－ＩｇＧ相互作用を調節する（例えば、遮断するまたは減らす）能力を決定するための、全血ベースのアッセイの開発が可能になる。

【0127】

一実施形態では、当該アッセイは、哺乳動物（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）から全血を得、試験抗体またはその抗原結合断片の存在下または非存在下で、予め形成した免疫複合体を全血に添加してサイトカインの産生を刺激することと、好適なサイトカインの産生量を測定することと、を含む。試験抗体またはその抗原結合断片が、試験抗体またはその抗原結合断片の存在下または非存在下で測定されたサイトカイン量と比較して、測定されたサイトカイン量を遮断するまたは減らすことができる場合、この試験抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃＲｎとＩＣとの相互作用を妨害可能であるとみなされる。測定されたサイトカインがＦｃＲｎとＩＣとの相互作用の結果であることを保証するための対照として、当該アッセイは、ＩｇＧがＦｃＲｎと結合不可能なＩＣを用いて実行してもよい。このようなＩｇＧは公知である（例えば、Ｑｉａｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：９３３７－９３４２を参照）。このようなＩｇＧを用いて当該アッセイを実行すれば、サイトカイン産生はない、または非常に少ない結果になるはずである。

【0128】

別の実施形態では、当該アッセイは、どの患者が抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片を用いた療法の利益を得る見込みがあるかを予測するために使用することもできる。このバージョンのアッセイでは、当該アッセイは、ＦｃＲｎとＩＣとの相互作用を遮断するまたは減らすのに有効であることが知られている、抗体またはその抗原結合断片を用いて実行される。既知の抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片の非存在下でアッセイを実行した場合との対比で、既知の抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片を用いたアッセイを実行した場合にサイトカイン産生量の顕著な低減を示す患者は、サイトカイン産生量のより少ない低減または皆無の低減を示す患者よりも、抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片を用いた療法から利益を得る見込みがより高いと考えられる。

【0129】

上述の別バージョンのアッセイは、対象または患者に、全血アッセイで使用するために対象または患者の血液を得る前に、試験抗体もしくはその抗原結合断片、または既知の抗ＦｃＲｎ抗体もしくはその抗原結合断片を投与することを伴う。このバージョンのアッセイでは、試験抗体もしくはその抗原結合断片、または既知の抗ＦｃＲｎ抗体もしくはその抗原結合断片は、既に血液中に存在することになるため、試験抗体もしくはその抗原結合断片、または既知の抗ＦｃＲｎ抗体もしくはその抗原結合断片は、全血に添加されない。

【0130】

全血ベースのアッセイの別の使用は、抗ＦｃＲｎ療法に対する患者の応答のモニターである。この実施形態では、当該アッセイは、抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片を所定の時間期間の間受けている患者の血液で実行される。予め形成したＩＣを血液に添加し、産生されたサイトカインの量を測定する。この量を、抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片を用いた治療の開始前に得た、同じ患者の血液から産生された量と比較する。治療の開始前に実行される当該アッセイにおいて、産生されたサイトカインの量がより少ない場合、このことは患者が当該療法に応答していることを示す。治療の開始前に患者から採取した血液において、治療が所定の時間期間の間進行した後に採取した血液と比較して、皆無の差、または有意でない差が観察される場合、このことは患者が当該療法に対し有意に応答していないことを示す。何らかの差が観察される場合では、差の大きさは、応答の大きさの指標となり、差が大きいほど、患者は抗ＦｃＲｎ療法に大きく応答していることになる。このバージョンのアッセイは、血液に抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片を添加することを伴わないと考えられる。

【0131】

本明細書では、試験抗体またはその抗原結合断片が、ＦｃＲｎと免疫複合体との間の相互作用を遮断するかどうか、または減らすかどうかを決定する方法であって、
（ａ）哺乳動物から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、全血の第１の部分に添加することと、
（ｃ）免疫複合体の添加後に、全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量のサイトカインを得ることと、
（ｄ）試験抗体またはその抗原結合断片を、全血の第２の部分に添加することと、
（ｅ）試験抗体またはその抗原結合断片の添加後にまたは添加と同時に、免疫複合体を、全血の第２の部分に添加することと、
（ｆ）免疫複合体の添加後に、全血の第２の部分中のサイトカインの量を測定して、第２の量のサイトカインを得ることと、
（ｇ）第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差を決定することと、
を含み、
第１の量のサイトカインが第２の量のサイトカインよりも大きい場合、試験抗体またはその抗原結合断片がＦｃＲｎと免疫複合体との相互作用を遮断しているまたは減らしている、方法が提供される。

【0132】

本明細書では、抗ＦｃＲｎ療法に対する患者の応答性の期待レベルを決定する方法であって、
（ａ）抗ＦｃＲｎ療法の開始前に、患者から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、全血の第１の部分に添加することと、
（ｃ）免疫複合体の添加後に、全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量のサイトカインを得ることと、
（ｄ）ＦｃＲｎと免疫複合体との間の相互作用を遮断するまたは減らすことが知られている抗体またはその抗原結合断片を、全血の第２の部分に添加することと、
（ｅ）抗体またはその抗原結合断片の添加後にまたは添加と同時に、免疫複合体を、全血の第２の部分に添加することと、
（ｆ）免疫複合体の添加後に、全血の第２の部分中のサイトカインの量を測定して、第２の量のサイトカインを得ることと、
（ｇ）第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差を決定することと、
を含む、方法が提供される。

【0133】

第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差の大きさは、第１の量が第２の量よりも大きい場合、患者が抗ＦｃＲｎ療法に対して応答することが期待される程度を示す。この期待される応答の程度に応じて、患者は抗ＦｃＲｎ療法を受けるように選択され得る。

【0134】

本明細書では、抗ＦｃＲｎ療法に対する患者の応答をモニターする方法であって、
（ａ）抗ＦｃＲｎ療法の開始前に、患者から全血を得ることと、
（ｂ）免疫複合体を、全血に添加することと、
（ｃ）免疫複合体の添加後に、全血中のサイトカインの量を測定して、第１の量のサイトカインを得ることと、
（ｄ）抗ＦｃＲｎ療法の開始後に、患者から全血を得ることと、
（ｅ）免疫複合体を、ステップ（ｄ）の全血に添加することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）の免疫複合体の添加後に、全血中のサイトカインの量を測定して、第２の量のサイトカインを得ることと、
（ｇ）第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差を決定することと、
を含む、方法が提供される。

【0135】

第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差の大きさは、第１の量が第２の量よりも大きい場合、患者が抗ＦｃＲｎ療法に対して応答している程度を示す。観察された応答性の程度に応じて、抗ＦｃＲｎ療法を調整することができる。例えば、第１の量が第２の量よりもわずかに大きいに過ぎない場合、抗ＦｃＲｎ療法を増加させることができる。抗ＦｃＲｎ療法が本明細書に記載される抗体である場合、抗体の投与頻度を増加させ、かつ／または投与用量を増加させることができる。療法の調整後に、アッセイを再び実行してもよい。このようにして、アッセイ、療法調整、アッセイ、療法調整等の反復プロセスを行って、療法の最適なレベルを決定することができる。

【0136】

上述した方法における一部の実施形態では、第１の量のサイトカインと第２の量のサイトカインとの間の差は、対照の値と比較される。

【0137】

上述した方法における一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。一部の実施形態では、ヒトは自己免疫性疾患にかかっている。一部の実施形態では、ヒトは、以下からなる群から選択される自己免疫性疾患にかかっている：尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、腫瘍随伴天疱瘡、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、クローン病、特発性血小板減少性紫斑（ＩＴＰ）、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、重症筋無力症（ＭＧ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、多巣性運動ニューロパチー、視神経脊髄炎、自己免疫性血小板減少症、免疫性好中球減少症、抗血友病ＦＶＩＩＩインヒビター、抗リン脂質抗体症候群、川崎病、ＡＮＣＡ関連疾患、多発性筋炎、皮膚筋炎、水胞性類天疱瘡、多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン・バレー症候群、慢性多発ニューロパチー、潰瘍性大腸炎、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス眼症、自己免疫性蕁麻疹、血管炎及びラスムッセン脳炎。

【0138】

一部の実施形態では、免疫複合体は、抗原＋抗原特異的抗体である。一部の実施形態では、免疫複合体は人工免疫複合体であり、すなわち、哺乳動物中に天然に存在しない。例えば、当該免疫複合体は、４－ヒドロキシ－５－ヨード－３－ニトロフェニル酢酸（ＮＩＰ）とニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ）と抗ＮＩＰ抗体との多量体複合体とすることができる。抗ＮＩＰ抗体についての１つの可能性としては、４－ヒドロキシ－５－ヨード－３－ニトロフェニル酢酸に特異的なマウス可変領域と野生型ヒトＩｇＣ_１からのＦｃドメインとを含有するキメラ型ＩｇＧ抗体がある（Ｃｌａｙｐｏｏｌ，２００４，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ１５：１７４６－１７５９）。別の実施形態では、抗ＮＩＰ抗体は、Ｆｃドメイン中にＦｃＲｎへの結合を無効にする３点突然変異（Ｉ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ａ）を伴うＩｇＧ抗体である。一部の実施形態では、免疫複合体は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５のＮＩＰ部分を含むＮＩＰ－ＯＶＡ抗体複合体である。

【0139】

本明細書に記載されるアッセイにおける免疫複合体の機能は、ＦｃＲｎの多量体化である。したがって、当該アッセイは、この機能を行うことができる他の物質を用いて実行され得る。例えば、適切に間隔が置かれたＦｃドメインを有する物質を使用することができる。このような物質としては、ＦｃＲｎが認識できるＦｃドメインを有する抗体でコーティングされたスチレンビーズ、または適切に間隔が置かれたＦｃドメインを含有するポリペプチドでコーティングされたスチレンビーズであり得る。抗体が当該ビーズに直接結合していてもよく、または、この抗体が認識する抗原が当該ビーズに直接結合し、抗体は、抗原を認識し抗原に結合することにより当該ビーズに付着していてもよい。

【0140】

したがって、本明細書では、ＦｃＲｎを多量体化する方法であって、
（ａ）哺乳動物から全血を得ることと、
（ｂ）全血に、適切に間隔が置かれたＦｃドメインを有する物質を添加し、全血中のＦｃＲｎが多量体化されることと、
を含む、方法が提供される。

【0141】

一部の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片は、当該物質の前、または当該物質と同時に、全血に添加される。

【0142】

一部の実施形態では、当該方法は、（ｃ）全血中のサイトカインの量を測定すること、を含む。一部の実施形態では、サイトカインの量は、抗ＦｃＲｎ抗体または抗原結合断片の非存在下または存在下で測定され、測定された量の差が決定される。

【0143】

上述した方法における一部の実施形態では、当該サイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、またはインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）である。全血中のサイトカインの量は、当技術分野で公知の方法によって測定することができる。例えば、サイトカインタンパク質の量はサイトカインに特異的な抗体を用いて測定することができ、または全血中のサイトカインのｍＲＮＡ転写物の量を測定することができる。

【0144】

抗ＦｃＲｎ療法に対する患者の応答性の期待レベルの決定についての上に記載した方法における一部の実施形態では、応答性の期待レベルを特定するレポート、及び／または患者が抗ＦｃＲｎ療法を受けるように選択されたというレポートが生成され、このレポートは医療提供業者に伝えられ、抗ＦｃＲｎ療法が患者に投与される。一部の実施形態では、応答性の期待レベルを特定するレポート、及び／または患者が抗ＦｃＲｎ療法を受けるように選択されたというレポートが生成され、このレポートは医師に伝えられ、医師は抗ＦｃＲｎ療法を投与するか、または別の医療提供業者に抗ＦｃＲｎ療法を投与するように指示する。

【0145】

上述されたアッセイ法における一部の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体、ＦＶ、ｓｃＦＶ、遮断ペプチド、またはこれらの断片である。一部の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）_２である。一部の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５６を有する重鎖可変領域及び配列番号２２を有する軽鎖可変領域を含む。

【0146】

上述の患者の抗ＦｃＲｎ療法に対する応答をモニターするための方法における一部の実施形態では、当該抗ＦｃＲｎ療法は、ＦｃＲｎのＦｃ結合領域に結合し、ＩｇＧのＦｃＲｎへの結合を遮断するまたは減らす抗体を、患者に投与することである。一部の実施形態では、当該抗体は、Ｈ３Ｖκ２、Ｈ３Ｅ８、Ｇ９Ｖκ２、またはＧ９Ｅ８である。一部の実施形態では、当該抗体は、配列番号４９または配列番号５５の配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、配列番号５０または配列番号５６に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。一部の実施形態、例えばＧ９Ｖκ２では、当該抗体は、配列番号５０に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。一部の実施形態、例えばＨ３Ｖκ２では、当該抗体は、配列番号５６に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号２２に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体、ＦＶ、ｓｃＦＶ、遮断ペプチド、またはこれらの断片である。一部の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合断片は、Ｆ（ａｂ’）_２である。

【0147】

一部の実施形態では、全血に添加される抗体の量は、様々な量を試験し用量－応答曲線を確立することによって決定される。一部の実施形態では、添加される抗体の量は、全血中の抗体濃度を１ｎＭ～１μＭ、１０ｎＭ～７５０ｎＭ、または１００ｎＭ～５００ｎＭにする程度に十分な量である。

【0148】

上述したアッセイ法における一部の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化型、キメラ型、または非天然存在の完全ヒト型である。

【0149】

本明細書で開示される抗体が結合するヒトＦｃＲｎの特定の領域またはエピトープは、当技術分野で公知の、任意の好適なエピトープマッピング法によって同定することができる。そのような方法には、当該抗体がＦｃＲｎのどのアミノ酸に結合するかを決定するために、ＦｃＲｎからの様々な長さのペプチドをスクリーニングして当該抗体に結合するものを探ることが含まれる。当該ペプチドは、ＦｃＲｎのタンパク質分解消化または化学合成などの周知の方法によって産生することができる。質量分析などの手法を使用して、当該抗体に結合するペプチドを同定してもよい。代替的に、ＮＭＲ分光法またはＸ線結晶学を使用することができる。結合ペプチドは、ひとたび同定されれば、ＦｃＲｎの同じエピトープと結合するさらなる抗体を得るための免疫原として使用することができる。

【0150】

本明細書に記載の抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合断片は、予防または治療の目的のために哺乳動物に使用される場合、薬学的に許容される担体を追加的に含む組成物の形態で投与されることになる。好適な薬学的に許容される担体としては、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、ブドウ糖、ヒスチジン、グルタミン酸塩、クエン酸塩、マンニトール、トレハロース、スクロース、アルギニン、酢酸塩、ポリソルベート８０、ポロクサマー１８８などに加えて、これらの組み合わせが挙げられる。薬学的に許容される担体は、少量の補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤、保存料または緩衝液をさらに含むことができ、これらは抗体の貯蔵寿命または有効性を増強する。

【0151】

一部の実施形態では、抗体及び薬学的に許容される担体を含む当該組成物は、凍結乾燥される。

【0152】

抗体及び薬学的に許容される担体を含む当該組成物は、本明細書に記載の抗ＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を様々な濃度で含むことができる。例えば、当該組成物は、抗体を１０ｍｇ／ｍｌ～２００ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ～１３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ～１２５ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ～１１０ｍｇ／ｍｌ、または８０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌで含むことができる。また、当該組成物は、抗体を約１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、１３０ｍｇ／ｍｌ、１４０ｍｇ／ｍｌ、または１５０ｍｇ／ｍｌで含むことができる。

【0153】

本明細書に記載される方法では、治療有効量の、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分が、それを必要としている哺乳動物に投与される。本明細書で使用される「投与する」という用語は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分を、哺乳動物に対し、求められる結果を達成し得る任意の方法によって送達させることを意味する。当該抗体またはその抗原結合部分は、例えば、皮下、静脈内、または筋肉内に投与することができる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分はヒトに対する投与に特に有用であるが、他の哺乳動物に投与することもできる。本明細書で使用される「哺乳動物」という用語には、以下に限定するものではないが、ヒト、実験動物、家庭用ペット及び家畜が含まれる。「治療有効量」とは、哺乳動物に投与された場合に所望の治療効果をもたらすために有効な、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分の量を意味する。例えば、疾患に応じて、抗体に関しては、０．１、１．０、３．０、６．０、または１０．０ｍｇ／Ｋｇが必要とされ得る。１５０，０００ｇ／モルの分子量を有するＩｇＧ（２つの結合部位）に関しては、これらの用量は、５Ｌの血液量に対しおよそ１８ｎＭ、１８０ｎＭ、５４０ｎＭ、１．０８μＭ、及び１．８μＭの結合部位に対応する。

【0154】

ある特定の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合部分は、静脈内注入により哺乳動物に投与され、すなわち、当該抗体またはその抗原結合部分は、ある特定の時間期間にわたり哺乳動物の静脈内に導入される。ある特定の実施形態では、当該時間期間は、約５分、約１０分、約３０分、約１時間、約２時間、約４時間、または約８時間である。

【0155】

ある特定の実施形態では、当該抗体またはその抗原結合部分は、皮下送達により哺乳動物に投与され、すなわち、哺乳動物の皮膚の下に、一般的には皮膚をつまみ持ち上げて下部にある組織から離すことによって形成された皮膚の下の空間に、当該抗体またはその抗原結合部分を注入する。

【0156】

ある特定の実施形態では、１回用量の化合物または組成物が、毎日、１日おき、２日に１回、３日に１回、週１回、週２回、週３回、または２週に１回、対象に投与される。他の実施形態では、２回、３回または４回用量の化合物または組成物が、毎日、２日に１回、３日に１回、週１回、または２週に１回、対象に投与される。一部の実施形態では、化合物または組成物の用量（複数可）が、２日間、３日間、５日間、７日間、１４日間、または２１日間、投与される。ある特定の実施形態では、化合物または組成物の１回用量が、１ヵ月、１．５ヵ月、２ヵ月、２．５ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月またはそれ以上、投与される。

【0157】

投与方法には、以下に限定するものではないが、非経口、皮内、硝子体内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、経口、舌下、鼻腔内、大脳内、膣内、経皮、経粘膜、直腸、吸入、または局所的（特に耳、鼻、目、または皮膚に対して）が含まれる。投与様式は、実施する者の自由裁量に委ねられる。ほとんどの場合、投与は結果的に化合物の血流内への放出となる。

【0158】

特定の実施形態では、化合物を局在的に投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、限定のためではないが、局在的注入、局所的適用、注射により、カテーテルを用いて、またはインプラントを用いて、達成することができ、前記インプラントは、シラスチック膜などの膜、または繊維を含めた、多孔質、非多孔質、またはゼラチン質の材料でできている。このような場合、投与は、かなりの程度の化合物を血流内に放出することなく、局在的組織を選択的に標的とすることができる。

【0159】

肺への投与も、例えば吸入器またはネブライザーの使用により、エアロゾル化剤を用いた配合により、またはフルオロカーボンもしくは合成肺サーファクタントでの灌流を介して、用いることができる。ある特定の実施形態では、化合物は、従来の結合剤及びトリグリセリドなどのビヒクルを用いて、座薬として配合される。

【0160】

別の実施形態では、化合物は小胞、特にリポソームで送達される（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３；Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ （ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３－３６５（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，ｉｂｉｄ．，ｐｐ．３１７－３２７を参照；全般的にはｉｂｉｄ．参照）。

【0161】

別の実施形態では、化合物は、徐放系で送達される（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照）。徐放系の例は、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３による概説で論じられており、これを使用することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ，ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１；Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照；また、Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５も参照）。

【0162】

上述の投与スケジュールは、説明の目的で提供されるに過ぎず、限定的にみなすべきではない。当業者であれば、全ての用量が本発明の範囲内であることを容易に理解することになる。

【0163】

「自己免疫性疾患」とは、対象自身の抗体が宿主組織に反応する、または免疫エフェクターのＴ細胞が内在性の自己ペプチドに自己反応性であり組織破壊を引き起こす、疾患のクラスを指す。したがって、免疫応答は、対象自身の抗原（自己抗原と呼ばれる）に対して開始される。本明細書で使用される「自己抗原」とは、正常な宿主組織の抗原を指す。正常な宿主組織は、腫瘍性細胞を含まない。

【0164】

ＦｃＲｎに結合する抗体及び抗原結合断片を、免疫応答を調節するために、または免疫障害などの障害を治療、防止、または診断するために、対象に投与することができる。「治療する」という用語は、障害もしくは疾患の改善もしくは寛解、または障害もしくは疾患の進行の低減もしくは防止に有効な療法を投与することを指す。有効量は、例えば状態または障害、個々の対象に応じて変動し得、対象に合わせて対応され得る。ＦｃＲｎに結合する抗体及び抗原結合断片は、インビトロで使用することもできる。

【0165】

一実施形態では、ＦｃＲｎとＩｇＧ Ｆｃとの間の相互作用を調節する方法であって、細胞中または対象中にあるＦｃＲｎを、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法が提供される。一実施形態では、当該調節は、ＦｃＲｎとＩｇＧ Ｆｃとの相互作用を阻害する。したがって、細胞によるまたは対象における抗体分解を促進する方法が提供される。一実施形態では、当該抗体は自己抗体である。別の実施形態では、当該抗体は治療抗体である。

【0166】

別の実施形態では、対象におけるＩｇＧ媒介疾患を治療または緩和する方法であって、対象に、本明細書で開示される抗体または抗原結合断片を、ＩｇＧ媒介疾患の治療または緩和に有効な量で投与することを含む、方法が提供される。このようなＩｇＧ媒介疾患は、病原ＩｇＧ抗体を単量体形態で、またはＩｇＧ含有免疫複合体（ＩＣ）として伴う疾患であり得、凝血異常、血管炎、コラーゲン障害、皮膚科系疾患、神経系疾患、炎症性腸疾患、及び臓器特異的障害が含まれ得る。

【0167】

別の実施形態では、胎盤を介した病原性抗体の伝播を遮断する方法であって、治療有効量の、本明細書で開示されるＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を、それを必要としている妊娠中の哺乳動物に投与することを含む、方法が提供される。

【0168】

別の実施形態では、ＦｃＲｎによる免疫複合体（ＩＣ）の結合を阻害する方法であって、細胞中または対象中にあるＦｃＲｎを、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法が提供される。したがって、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の提示を阻害する方法であって、ＡＰＣを、ある量の抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む、方法も提供される。同様に、別の実施形態では、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の交差提示を阻害する方法であって、ＡＰＣを、ある量の抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む、方法が提供される。

【0169】

別の実施形態では、対象からのＩＣのクリアランスを増加させる方法であって、本明細書に記載されるＦｃＲｎ抗体または抗原結合部分を、必要としている対象に投与することを含む、方法が提供される。このような方法は、ＩＣ媒介血管炎を治療するために使用することができる。

【0170】

別の実施形態では、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による炎症性サイトカインの分泌を阻害する方法であって、ＡＰＣを、抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む、方法が提供される。炎症性サイトカインの非限定的な例としては、例えば、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）及びインターフェロンγ（ＩＦＮγ）が挙げられる。

【0171】

別の実施形態では、抗原提示細胞によるＴ細胞活性化を阻害する方法であって、抗原提示細胞を、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片に接触させることを含む、方法が提供される。

【0172】

本明細書では、自己免疫性疾患を治療する方法であって、有効量のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を、それを必要としている患者に投与することを含む、方法が提供される。治療することができる疾患の非限定的例としては、天疱瘡（尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡または腫瘍随伴天疱瘡）、クローン病、特発性血小板減少性紫斑（ＩＴＰ）、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、重症筋無力症（ＭＧ）及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）が挙げられる。さらなる非限定的な自己免疫性疾患としては、以下のものが挙げられる：自己免疫性血小板減少症、免疫性好中球減少症、抗血友病ＦＶＩＩＩインヒビター、抗リン脂質抗体症候群、川崎病、ＡＮＣＡ－随伴性疾患、多発性筋炎、水疱性類天疱瘡、多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン・バレー症候群、慢性多発ニューロパチー、潰瘍性大腸炎、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス眼症、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、原発性硬化性胆管炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性脳脊髄炎、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、自己免疫性溶血性貧血、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症、混合性結合組織病、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫随伴性不妊症、糸球体腎炎（例えば、半月体性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、インシュリン抵抗性糖尿病、及び自己免疫性糖尿病（１型糖尿病；インシュリン依存性糖尿病）。自己免疫性疾患は、アテローム動脈硬化症及びアルツハイマー病も包含するものと認識されている。別の実施形態では、自己免疫性疾患として以下のものが挙げられる：肝炎、自己免疫性血友病、自己免疫性リンパ球増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、糸球体腎炎、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性高脂質血症、自己免疫性免疫不全症、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性蕁麻疹ニューロパチー、自己免疫性軸索ニューロパチー、Ｂａｌｏ疾患、ベーチェット病、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性再発性多巣的骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、良性粘膜類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、本態性混合型クリオグロブリン血症、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、拡張型心筋症、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性血管中心性線維症、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、エヴァンス症候群、線維化肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、橋本脳炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性ヘルペス、特発性低補体血症性尿細管間質性腎炎、多発骨髄腫、多巣性運動ニューロパチー、ＮＭＤＡ受容体抗体脳炎、ＩｇＧ４関連疾患、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、炎症性大動脈瘤、炎症性偽腫瘍、封入体筋炎、間質性膀胱炎、若年性関節炎、キュットナー腫瘍、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、リニアＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ライム病、慢性、縦隔線維症、メニエール病、顕微鏡的多発性血管炎、ミクリッツ症候群、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーバーマン病、多巣的線維性硬化症、ナルコレプシー、視神経炎、オーモンド病（後腹膜線維症）、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓに関連する小児科自己免疫性神経精神医学的障害）、腫瘍随伴小脳変性症、異常タンパク性多発ニューロパチー、発作性夜間血色素尿（ＰＮＨ）、パリーロンベルク症候群、パーソネージ・ターナー症候群、大動脈周囲炎、動脈周囲炎、末梢性ニューロパチー、静脈周囲脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、Ｉ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型自己免疫性多腺症候群、多発性筋痛リウマチ、心膜切開後症候群、プロゲステロン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、乾癬性関節炎、特発性肺線維症、壊疽性膿皮症、赤芽球ろう、レーノー現象、反射性交感神経性ジストロフィー、ライテル症候群、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、リウマチ熱、リーデル甲状腺炎、類肉腫症、シュミット症候群、強膜炎、シェーグレン症候群、精液及び睾丸の自己免疫病、全身硬直症候群、細菌性亜急性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎、高安動脈炎、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、未分化型葯隔組織疾患（ＵＣＴＤ）、小水疱性皮膚症、白斑、ラスムッセン脳炎、及びワルデンストレームマクログロブリン血症。

【0173】

他の実施形態では、感染性疾患を治療する方法であって、有効量のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を、それを必要としている患者に投与することを含む、方法が提供される。

【0174】

一部の実施形態では、Ｆｃドメインを含有する治療タンパク質、例えば、Ｆｃドメインを含む治療抗体または非抗体タンパク質の血清半減期を低減する方法が提供される。そのような方法は、このような治療タンパク質が望ましくない生理的影響を引き起こす場合に、この治療タンパク質の血流からの除去を増強することができる。この方法に好適であり得る治療タンパク質の例としては、ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）（ナタリズマブ）及びＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）が挙げられる。一部の実施形態では、当該方法により、治療タンパク質の半減期が約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％減る。

【0175】

一部の実施形態では、ＩｇＧが結合した放射性トレーサーまたは他の抗体－薬物結合体を循環から除去することが望ましい場合に、これらを除去するための方法が提供される。一部の実施形態では、ＩｇＧ低下剤を用いてＦｃＲｎをブロックすれば、内在性ＩｇＧレベルを減少させ、ＩｇＧ含有治療剤の薬物動態及び薬物力学の増強を可能にすることにおいて、有益であると考えられる。この場合、そのような治療剤を投与する前に、ＩｇＧ結合部位に特異的な抗ＦｃＲｎ抗体で前処理すれば、単量体形態の、またはＩｇＧ含有免疫複合体（ＩＣ）としての内在性ＩｇＧ抗体に由来する競合を低下させ、投与するＩｇＧベースの治療剤をいっそう保護することが可能になる。

【0176】

本明細書では、本明細書に記載のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分を使用する方法が提供される。したがって、免疫応答の調節に、または免疫障害などの障害の治療、防止、または診断に使用するための、本明細書に記載のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分が提供される。また、ＦｃＲｎとＩｇＧ Ｆｃとの相互作用を調節して、細胞による、または対象における抗体分解の促進に使用するための、本明細書に記載のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分が提供される。一部の実施形態では、当該抗体は、自己抗体または治療抗体である。また、対象におけるＩｇＧ媒介疾患の治療または緩和に使用するための、本明細書に記載のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分も提供され、当該ＩｇＧ媒介疾患は病原ＩｇＧ抗体を伴う疾患であり得、凝血異常、血管炎、コラーゲン障害、皮膚科系疾患、神経系疾患、炎症性腸疾患、及び臓器特異的障害が含まれ得る。

【0177】

本明細書では、ＦｃＲｎによる免疫複合体（ＩＣ）の結合の阻害、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の提示の阻害、または抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の交差提示の阻害に使用するための、本明細書に記載のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分が提供される。また、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による炎症性サイトカインの分泌の阻害に使用するための、本明細書に記載のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分も提供され、当該炎症性サイトカインには、例えば、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）及びインターフェロンγ（ＩＦＮγ）が含まれる。また、Ｔ細胞活性化の阻害に使用するための、本明細書に記載のＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分も提供される。

【0178】

本明細書ではＦｃＲｎ抗体またはその抗原結合部分が提供され、これらは本明細書で記載されるように、天疱瘡（尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡または腫瘍随伴性天疱瘡）、クローン病、特発性血小板減少性紫斑（ＩＴＰ）、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）、血栓性血小板減少性紫斑（ＴＴＰ）、重症筋無力症（ＭＧ）及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）の処置に使用される。さらなる非限定的な自己免疫性疾患としては、以下のものが挙げられる：自己免疫性血小板減少症、免疫性好中球減少症、抗血友病ＦＶＩＩＩインヒビター、抗リン脂質抗体症候群、川崎病、ＡＮＣＡ－随伴性疾患、多発性筋炎、水疱性類天疱瘡、多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン・バレー症候群、慢性多発ニューロパチー、潰瘍性大腸炎、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス眼症、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、原発性硬化性胆管炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性脳脊髄炎、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、自己免疫性溶血性貧血、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症、混合性結合組織病、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫随伴性不妊症、糸球体腎炎（例えば、半月体性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、インシュリン抵抗性糖尿病、及び自己免疫性糖尿病（１型糖尿病；インシュリン依存性糖尿病）。自己免疫性疾患は、アテローム動脈硬化症及びアルツハイマー病も包含するものと認識されている。別の実施形態では、自己免疫性疾患として以下のものが挙げられる：肝炎、自己免疫性血友病、自己免疫性リンパ球増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、糸球体腎炎、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性高脂質血症、自己免疫性免疫不全症、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性蕁麻疹ニューロパチー、自己免疫性軸索ニューロパチー、Ｂａｌｏ疾患、ベーチェット病、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性再発性多巣的骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、良性粘膜類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、本態性混合型クリオグロブリン血症、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、拡張型心筋症、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性血管中心性線維症、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、エヴァンス症候群、線維化肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、橋本脳炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性ヘルペス、特発性低補体血症性尿細管間質性腎炎、多発骨髄腫、多巣性運動ニューロパチー、ＮＭＤＡ受容体抗体脳炎、ＩｇＧ４関連疾患、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、炎症性大動脈瘤、炎症性偽腫瘍、封入体筋炎、間質性膀胱炎、若年性関節炎、キュットナー腫瘍、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、リニアＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ライム病、慢性、縦隔線維症、メニエール病、顕微鏡的多発性血管炎、ミクリッツ症候群、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーバーマン病、多巣的線維性硬化症、ナルコレプシー、視神経炎、オーモンド病（後腹膜線維症）、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓに関連する小児科自己免疫性神経精神医学的障害）、腫瘍随伴小脳変性症、異常タンパク性多発ニューロパチー、発作性夜間血色素尿（ＰＮＨ）、パリーロンベルク症候群、パーソネージ・ターナー症候群、大動脈周囲炎、動脈周囲炎、末梢性ニューロパチー、静脈周囲脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、Ｉ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型自己免疫性多腺症候群、多発性筋痛リウマチ、心膜切開後症候群、プロゲステロン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、乾癬性関節炎、特発性肺線維症、壊疽性膿皮症、赤芽球ろう、レーノー現象、反射性交感神経性ジストロフィー、ライテル症候群、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、リウマチ熱、リーデル甲状腺炎、類肉腫症、シュミット症候群、強膜炎、シェーグレン症候群、精液及び睾丸の自己免疫病、全身硬直症候群、細菌性亜急性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎、高安動脈炎、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、未分化型葯隔組織疾患（ＵＣＴＤ）、小水疱性皮膚症、白斑、ラスムッセン脳炎、またはワルデンストレームマクログロブリン血症。

【0179】

本明細書に記載される方法では、本明細書に記載の治療有効量の抗体またはその抗原結合部分は、他の薬剤、薬物、またはホルモンと組み合わせて（例えば、同時に、順次に、または別個に）投与することができる。一部の実施形態では、当該他の薬剤、薬物、またはホルモンは、小分子、ペプチド、またはタンパク質（抗体または抗原結合断片を含む）とすることができる。一部の実施形態では、当該他の薬剤、薬物、またはホルモンは、同じ組成物で投与されても別個の組成物で投与されてもよい。一部の実施形態では、当該他の薬剤、薬物、またはホルモンは、本明細書に記載される障害、疾患、または状態を治療するための公知の薬剤、化合物、またはホルモンである。例えば、一部の実施形態では、当該他の薬剤は、免疫媒介疾患の処置のためのモノクローナル抗体療法とすることができる。他の実施形態では、当該他の薬剤は、補体系のインヒビターとすることができる。例えば、Ｆｃガンマ受容体及びＦｃＲｎを対象とする組み合わせは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／１６４６０５に記載されている。

【0180】

一部の実施形態では、当該他の薬剤、薬物、またはホルモンは、免疫阻害剤、免疫賦活性剤、免疫調節物質、またはこれらの組み合わせである。一部の実施形態では、当該他の薬剤、薬物、またはホルモンは、Ｉｇ静注療法；非ステロイド性抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）；コルチコステロイド；シクロスポリン、ラパマイシン、アスコマイシン、またはこれらの免疫阻害性アナログ、例えば、シクロスポリンＡ、シクロスポリンＧ、ＦＫ－５０６、ラパマイシン、４０－０－（２－６０ヒドロキシ）エチル－ラパマイシン；シクロホスファミド；アザチオプリン；メトトレキセート；ミコフェノレート；ブレキナル；ＦＴＹ７２０；レフルノミド；ミゾリビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５－デオキシスペルグアリン；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば、白血球受容体に対するモノクローナル抗体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、もしくはＣＤ５８またはこれらのリガンド；他の免疫調節化合物、例えば、ＣＴＬＡ４Ｉｇ；他の接着分子インヒビター、例えば、ｍＡｂまたは、セレクチンアンタゴニスト及びＶＬＡ－４アンタゴニストを含めた低分子量インヒビター；免疫調節サイトカイン、例えば、アルファ－インターフェロン、ガンマ－インターフェロン、または腫瘍壊死因子－アルファ；あるいは免疫賦活性サイトカイン、例えば、インターロイキン－２。

【0181】

本明細書では、対象における抗ＦｃＲｎ抗体の投与後の抗ＦｃＲｎ抗体のレベルを測定する方法であって、抗ＦｃＲｎ抗体の投与後に対象から単球を含む全血を得ることと、単球細胞表面のＦｃＲｎ発現レベルを測定することと、を含む、方法が提供される。いかなる特定の理論にも限定されることなく、単球細胞表面ＦｃＲｎレベルと抗ＦｃＲｎ抗体の存在との間に相関が存在することが示されている。単球細胞表面のＦｃＲｎ発現レベルは、当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができ、例えば、幾何平均蛍光強度を含むことができる。

【0182】

当業者によって、本明細書で開示される本発明の原理における変形形態が考案され得ることは、理解されかつ予想されるべきであり、このような変更は本発明の範囲内に含まれるべきであることが意図されている。

【0183】

本発明の全体にわたり、様々な刊行物が引用されている。こういった刊行物は、本発明が関係する最新技術を、より十分に説明するために、参照によりその全体が本明細書によって本出願に組み込まれる。以下の実施例は本発明をさらに例示するものであるが、いかなる形でも本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。

【実施例0184】

実施例１
可変ドメインのヒト化
ヒト投与用に好適な重鎖及び軽鎖可変領域を、マウスモノクローナル抗体に基づいて設計した。マウスモノクローナル抗体の選択は、ＦｃＲｎに結合する能力ならびにＦｃＲｎ及びＩｇＧ Ｆｃの結合を遮断する能力に関して行った。マウス抗体は、ヒト血清アルブミンに対し実質的に結合しない。既存の抗体構造に基づいたモノクローナル抗体のモデルを使用して、ヒト抗体用の可変領域フレームワークをヒトＶ領域のセグメントから設計した。潜在的免疫原性を最小限にするために、ヒトＴ細胞エピトープを除去するように設計されたある特定のフレームワーク位置で選択されるアミノ酸を用いて、いくつかの変異体を設計した。

【0185】

重鎖及び軽鎖Ｖ領域遺伝子を、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）を使用して全長遺伝子に組み立てられた重複オリゴヌクレオチドから構築し、次に増幅しクローニングに好適な制限部位を追加した。

【0186】

ヒトＩｇＧ４定常領域を用いて４つの重鎖変異体を構築した。これらの変異体を、Ｖ_Ｈ１、Ｖ_Ｈ２、Ｖ_Ｈ３、及びＶ_Ｈ４と称する。これら重鎖変異体の可変ドメインのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２、１４、１６、及び１８によって表される。これら重鎖変異体の可変ドメインのオリゴヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１１、１３、１５、及び１７によって表される。図１は、４つの変異体の配列比較を示している。４つの軽鎖変異体を構築し、ヒトカッパ鎖として発現させた。これらの変異体を、Ｖκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、及びＶκ５と称する。これら軽鎖変異体のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２０、２２、２４、及び２６によって表される。これら軽鎖変異体の可変ドメインのオリゴヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１９、２１、２３、及び２５によって表される。図２は、４つの変異体の配列比較を示している。

【0187】

上流のサイトメガロウイルス即時／初期プロモーター／エンハンサー、免疫グロブリンシグナル配列、及び免疫グロブリン定常領域を用いて、Ｖ領域遺伝子を哺乳動物発現ベクターにクローニングすることにより、抗体を全体のＩｇＧとして発現させた。ベクターをＨＥＫ ＥＢＮＡ細胞にトランスフェクトし、発現を定量化し、抗体をプロテインＡカラム上で精製した。

【0188】

ＨＥＫ ＥＢＮＡ細胞への一過性トランスフェクションにより、４つの重鎖変異体及び４つの軽鎖変異体に対する重鎖－軽鎖組み合わせ全１６通りを発現させた。プロテインＡセファロースカラム上で抗体を精製し、定量化した。上に示されたように、ＦｃＲｎは、主として初期の酸性エンドソーム中に存在し、低ｐＨでＦｃ領域に結合することにより、貪食されたＩｇＧを取り込む。貪食されたＩｇＧのＦｃに対するＦｃＲｎの結合を遮断するために、ＦｃＲｎ抗体が、生理的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）の細胞内環境に曝露されたＦｃＲｎに結合することも望ましい。そのため、精製抗体のＦｃＲｎとの結合を、ｐＨ６．０及びｐＨ７．４における競合ＥＬＩＳＡアッセイで評価した。

【0189】

ＥＬＩＳＡについては、Ｎｕｎｃ Ｉｍｍｕｒｏマキシソープ９６ウェル平底マイクロタイタープレートをｐＨ７．４で終夜、Ｆｃ結合領域とは異なるアルブミン結合エピトープに特異的なＦｃＲｎ抗体でプレコーティングした。翌日、ｐＨ７．４のＰＢＳに希釈した１μｇ／ｍｌの組換え型ヒトＦｃＲｎ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＴ００９－Ｈ０８Ｈ）をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。一連の４倍希釈の２５μｇ／ｍｌ～０．００１５μｇ／ｍｌの対照または試験ＩｇＧ４抗体を、一定の濃度のビオチン化親マウス抗体と予混合し、プレートに添加し３７℃で１時間インキュベートした。ビオチン化ｍＡｂの結合を、ストレプトアビジン－ＨＲＰ及びＴＭＢ基質で検出した。吸光度を４５０ｎｍで読み取り、結合曲線をプロットした。１６の組み合わせの結合をｐＨ７．４及びｐＨ６．０の両方で試験し、表２に示すように親マウス抗体との比較により定量化した。

【表2】

【0190】

実施例２
親和性成熟
酸性ｐＨ及び生理的ｐＨにおける結合親和性を改善するため、重鎖及び軽鎖可変ドメインＣＤＲ３領域を変異させ、ｓｃＦｖ形態においてｐＨ６．０及びｐＨ７．４でスクリーニングした。ｓｃＦｖを調製するため、重複ＰＣＲを使用して、Ｖ_Ｈ及びＶκをコードする遺伝子を１５アミノ酸（Ｇ_４Ｓ）_３リンカーで組み立てた。ｓｃＦｖ配列を遺伝子３融合タンパク質としてファージミドベクターにクローニングし、ベクターをＥ．ｃｏｌｉ（ＴＧ１）に形質転換させた。Ｖ_Ｈ１及びＶκ１変異体を使用して親和性成熟プロセスを行った。スクリーニングのため、Ｖ_Ｈ１における重鎖ＣＤＲ３のライブラリーをヒト化型親Ｖκ１軽鎖と合わせ、Ｖκ１における軽鎖ＣＤＲ３のライブラリーをヒト化型親Ｖ_Ｈ１重鎖と合わせた。

【0191】

アミノ酸配列の変化を、オリゴヌクレオチド配列ＫＮＣＮＮＣＮＮＣＮＮＣＳＶＣＮＷＣＹＧＧ（配列番号７１）を使用して、重鎖ＣＤＲ３Ｈ領域のアミノ酸９８～１０３位（ＣＤＲ３Ｈのアミノ酸９８～１０２及びＦＷ４のアミノ酸１０３）に導入した。変化は、選択されたアミノ酸の各位置について以下のように提供した：アミノ酸９８：Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｓ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸９９：Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸１００：Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸１００ａ：Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸１０１：Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｐ、Ｒ；アミノ酸１０２：Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸１０３：Ｒ、Ｗ。アミノ酸配列の変化を、オリゴヌクレオチド配列ＴＧＴＭＲＳＶＭＧＴＶＳＫＲＳＲＲＣＷＭＣＹＹＣＢＷＣＲＹＣＴＴＣ（配列番号７２）を使用して、軽鎖ＣＤＲ３Ｌ領域のアミノ酸８９～９７位に導入した。変化は、選択されたアミノ酸の各位置について以下のように提供した：アミノ酸８８：Ｃ；アミノ酸８９：Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ；アミノ酸９０：Ａ、Ｅ、Ｋ、Ｐ、Ｑ、Ｔ；アミノ酸９１：Ｃ、Ｓ、Ｗ、Ｙ；アミノ酸９２：Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｗ、Ｙ；アミノ酸９３：Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｓ；アミノ酸９４：Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；アミノ酸９５：Ｆ、Ｌ、Ｐ、Ｓ；アミノ酸９６：Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｖ、Ｙ；アミノ酸９７：Ａ、Ｉ、Ｔ、Ｖ。

【0192】

各ＣＤＲについて、およそ３～６ｘ１０^６のＤＮＡ配列を含有する約５～１０ｘ１０^７ファージのライブラリー（すなわち、各ＤＮＡ配列につき約１０～２０のコピーが示された）を可溶性抗原との結合についてスクリーニングした。具体的には、ファージライブラリーを可溶性のビオチン化ＦｃＲｎを用いて混合し、次にＦｃＲｎ－抗体ファージ複合体をストレプトアビジンでコーティングしたビーズ上に捕捉した。酸性エンドソーム及び生理的ｐＨにおいてＦｃＲｎに結合する抗体を得るため、交互のｐＨで連続的ラウンドのライブラリースクリーニングを行った。また、各連続的スクリーニングラウンドの厳密性を高めるため、ＦｃＲｎ抗原の濃度を低減した。最初の選択ラウンドは、２５ｎＭの抗原の目標濃度でｐＨ６．０にて行った。第２のラウンドは、２．５ｎＭの抗原の濃度でｐＨ７．４にて行った。第３のラウンドは、０．２５ｎＭの抗原の濃度でｐＨ６．０にて行った。

【0193】

Ｖ_Ｈ ＣＤＲ３及びＶ_Ｌ ＣＤＲ３のライブラリーから、合計で約６０のｓｃＦｖ抗体をさらなる試験用に選択した。ｓｃＦｖ抗体は、バクテリアのペリプラズム抽出物から調製し、競合ＥＬＩＳＡによりｐＨ６．０及びｐＨ７．４で試験した。競合ＥＬＩＳＡでは、固定されたＦｃＲｎとの結合について、ｓｃＦｖ抗体断片をビオチン化親マウス抗体と競合させた。ヒト化型変異体の試験に使用したＥＬＩＳＡのように、９６ウェル平底マイクロタイタープレートを、Ｆｃ結合領域とは異なるアルブミン結合エピトープに特異的なＦｃＲｎ抗体１μｇ／ｍｌでプレコーティングした。結合は、ｐＨ７．４及びｐＨ６．０で決定した。図３は、ヒト化型親Ｖκ１軽鎖を有するｓｃＦｖとして発現させた親和性成熟重鎖の３つ（Ｈ１、Ｈ３、Ｅ７）と、親Ｖ_Ｈ１重鎖を有するｓｃＦｖとして発現させた親和性成熟軽鎖の１つ（Ｅ８）について、ｐＨ６．０及びｐＨ７．４の両方で、結合親和性の増加を示している。表３は、１５の重鎖及び２つの軽鎖で観察され、親マウス抗体との比較により定量化された、結合の改善を示している。

【表3】

【0194】

Ｖ_Ｈ１フレームワーク中に親和性成熟重鎖ＣＤＲ３を含有するｓｃＦｖについて、結合の大幅な改善が測定された。そのため、これらの重鎖を改善された軽鎖と組み合わせて試験を進めた。上の実施例１で示したように、Ｖκ１及びＶκ２軽鎖は、Ｖ_Ｈ１（及び他のＶ_Ｈ変異体）と対合させたときに類似した結合を示し、Ｖκ２フレームワークはＶκ１よりも免疫原性が低いことが予測された。そのため、親和性成熟ＣＤＲ３を含有するＶκ１及びＶκ２ベースの軽鎖を、改善された重鎖と組み合わせて試験を進めた。

【0195】

実施例３
ＩｇＧ抗体の開発
８つの親和性成熟重鎖（Ａ８、Ｃ４、Ｆ７、Ｇ４、Ｇ７、Ｇ９、Ｈ１、及びＨ３）を選択し、Ｅ８のＣＤＲ３を含有するヒト化型軽鎖（Ｖκ１またはＶκ２）と共に発現させた。ＨＥＫ細胞の一過性トランスフェクションにより、１６の組み合わせを二価のＩｇＧ４抗体として発現させ、次にこのＩｇＧ４抗体を精製した。親和性成熟重鎖をヒト化型であるが非親和性成熟軽鎖とも組み合わせて発現させ、ある特定の親和性成熟軽鎖をヒト化型であるが非親和性成熟重鎖と共に発現させた。

【0196】

実施例４
ＥＬＩＳＡによって決定されるＩｇＧ４抗体の抗原結合及びブロック特性
直接結合ＥＬＩＳＡにより、親和性成熟ＩｇＧを、ヒト化型親Ｖ_Ｈ１／Ｖκ１ ＩｇＧと比較した。Ｎｕｎｃ Ｉｍｍｕｒｏマキシソープ９６ウェル平底マイクロタイタープレートをｐＨ７．４で終夜、Ｆｃ結合領域とは異なるアルブミン結合エピトープに特異的なＦｃＲｎ抗体でプレコーティングした。翌日、ｐＨ７．４のＰＢＳに希釈した１μｇ／ｍｌの組換え型ヒトＦｃＲｎ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＴ００９－Ｈ０８Ｈ）をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次に、４％の乳汁／ＰＢＳで非特異的結合をブロックした。滴定したヒト化型親ＩｇＧまたはヒト化型親和性成熟ＩｇＧをウェルに添加し、次に抗ヒトカッパＨＲＰを使用して結合抗体を検出した。図４は、Ｈ１Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１、Ｈ１Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ２、Ｇ７Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１、及びＧ７Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ２ ＩｇＧの固定されたＦｃＲｎとの結合が、ヒト化型親Ｖ_Ｈ１Ｖκ１ ＩｇＧまたはキメラ型親マウス抗体と比較して増加したことを示している。

【0197】

また、ＩｇＧ４抗体は抗原結合の試験も、競合ＥＬＩＳＡにおいてｐＨ６．０及びｐＨ７．４で行った。Ｎｕｎｃ Ｉｍｍｕｒｏマキシソープ９６ウェル平底マイクロタイタープレート（Ｆｉｓｈｅｒ，ｃａｔ．ｎｏ．ＤＩＳ－９７１－０３０Ｊ）をｐＨ７．４で終夜、Ｆｃ結合領域とは異なるアルブミン結合エピトープに特異的なＦｃＲｎ抗体１μｇ／ｍｌでプレコーティングした。翌日、ｐＨ７．４のＰＢＳに希釈した１μｇ／ｍｌの組換え型ヒトＦｃＲｎ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．ｃａｔ．ｎｏ．ＣＴ００９－Ｈ０８Ｈ）をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをｐＨ７．４のＰＢＳＴで３回洗浄した後、プレートをｐＨ７．４のＰＢＳＭで３７℃にて１時間ブロックした。この時点以降、全ての洗浄及びインキュベートステップは、選択されたアッセイｐＨ（ｐＨ６．０または７．４）で実施した。ＰＢＳＴで３回洗浄した後、２５μｇ／ｍｌから最終濃度０．００６ｇμ／ｍｌまでの一連の試験抗体４倍希釈液を一定の濃度のビオチン化親マウス抗体（最終濃度０．４μｇ／ｍｌ）と予混合し、ＦｃＲｎでコーティングしたプレートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴ洗浄を３回行った後、ビオチン化ｍＡｂの結合をストレプトアビジン－ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ．ｎｏ．Ｓ５５１２）及びＴＭＢ基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ．ｎｏ．００－２０２３）で検出した。３ＭのＨＣｌで反応を停止させ、Ｄｙｎｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＭＲＸ ＴＣ ＩＩプレートリーダー上で４５０ｎｍにおける吸光度を読み取り、結合曲線をプロットした。

【0198】

図５において４つの抗体（Ｈ１Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１、Ｈ１Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ２、Ｆ７Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１、Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ２）について示されるように、親和性成熟ＩｇＧは、競合ＥＬＩＳＡにおいて、キメラ型親マウス抗体及びヒト化型親Ｖ_Ｈ１Ｖκ１抗体と同様の挙動をとった。

【0199】

また、競合ＥＬＩＳＡは、一価（ｓｃＦｖ）または二価（ＩｇＧ）の形態で発現させた親和性成熟重鎖及び軽鎖のある特定の組み合わせをヒト化型親Ｖ_Ｈ１Ｖκ１と比較するためにも使用した。図６は、ｐＨ７．４及びｐＨ６．０の両方におけるＨ３Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１ ＩｇＧ、Ｈ３Ｖ_Ｈ１＿Ｖκ１ ｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ１Ｖκ１ ＩｇＧ、及びＶ_Ｈ１Ｖκ１ ｓｃＦｖの結合を比較するものである。ｓｃＦｖ形態では、親和性成熟Ｈ３Ｖ_Ｈ１＿Ｖκ１ ｓｃＦｖは、Ｖ_Ｈ１Ｖκ１ ｓｃＦｖの親と比較して、結合の顕著な改善を示した。また、このｓｃＦｖ形態と比較すると、二価のＩｇＧとして発現させた場合、Ｈ３Ｖ_Ｈ１＿Ｅ８Ｖκ１ ＩｇＧ及びＶ_Ｈ１Ｖκ１の両方が結合の改善を示した。

【0200】

さらなるヒト化型親和性成熟重鎖及びヒト化型親和性成熟軽鎖を競合ＥＬＩＳＡで試験した。ヒト化型親和性成熟重鎖及びヒト化型非親和性成熟軽鎖の組み合わせも試験した。得られた結果を表４及び５に概括する。これらは、ｐＨ７．４及びｐＨ６．０で実施した実験における平均相対ＩＣ_５０値ならびに実験回数（ｎ）を示すものである。これらの組み合わせにおけるＩＣ_５０値を、同じプレート上で試験したキメラ型親マウス抗体を基準に正規化した。

【表4】

【表5】

【0201】

ｐＨ６．０における全ヒトＩｇＧとの競合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒト化型親和性成熟抗体のＦｃＲｎへの結合をさらに評価した。Ｎｕｎｃ Ｉｍｍｕｒｏマキシソープ９６ウェル平底マイクロタイタープレート（Ｆｉｓｈｅｒ，ｃａｔ．ｎｏ．ＤＩＳ－９７１－０３０Ｊ）をｐＨ７．４で終夜、ＦｃＲｎのＦｃ結合領域とは異なるアルブミン結合エピトープに特異的なＦｃＲｎ抗体１μｇ／ｍｌでプレコーティングした。翌日、ｐＨ７．４のＰＢＳに希釈した０．５μｇ／ｍｌの組換え型ヒトＦｃＲｎ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．ｃａｔ．ｎｏ．ＣＴ００９－Ｈ０８Ｈ）をウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートをｐＨ７．４のＰＢＳＴで３回洗浄した後、プレートをｐＨ７．４のＰＢＳＭで３７℃にて１時間ブロックした。この時点以降、全ての洗浄及びインキュベートステップは、アッセイｐＨ６．０で実施した。ＰＢＳＴで３回洗浄した後、２５μｇ／ｍｌから最終濃度０．０３４ｇμ／ｍｌまでの一連の試験抗体３倍希釈液を一定濃度のビオチン化ヒト血清ＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ．ｎｏ．Ｉ４５０６、最終濃度２５μｇ／ｍｌ）と予混合し、プレートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴ洗浄を３回行った後、ビオチン化ＩｇＧの結合をストレプトアビジン－ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ．ｎｏ．Ｓ５５１２）及びＴＭＢ基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ．ｎｏ．００－２０２３）で検出した。３ＭのＨＣｌで反応を停止させ、Ｄｙｎｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＭＲＸ ＴＣ ＩＩプレートリーダー上で４５０ｎｍにおける吸光度を読み取り、結合曲線をプロットした。

【0202】

ヒト血清ＩｇＧの存在下でのｐＨ６．０におけるヒト化型親和性成熟重鎖及びヒト化型親和性成熟軽鎖の組み合わせのＦｃＲｎへの結合を、キメラ型親マウス抗体のＦｃＲｎへの結合と比較した。結果を表６に概括する。平均相対ＩＣ_５０値を、同じプレート上で試験したキメラ型抗体を基準に正規化した。

【表6】

【0203】

ヒト血清ＩｇＧの存在下でのｐＨ６．０におけるヒト化型親和性成熟重鎖及びヒト化型非親和性成熟軽鎖の組み合わせのＦｃＲｎへの結合を、親マウスＦｃＲｎ抗体のＦｃＲｎへの結合と比較した。結果を表７に概括する。平均相対ＩＣ_５０値を、同じプレート上で試験した親マウス抗体を基準に正規化した。

【表7】

【0204】

ヒト化型親和性成熟重鎖及び軽鎖のいくつかの組み合わせならびにヒト化型親和性成熟重鎖とヒト化型非親和性成熟軽鎖との対合のいくつかの組み合わせに関するさらなるデータを、次の表８に示す。

【表8】

実施例５
表面プラズモン共鳴を使用したｍＡｂ結合動態の決定

【0205】

抗体をｐＨ４．５の１０ｍＭ ＮａＡｃに希釈し、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＣＭ５チップ上に固定し、およそ５００～１０００のＲＵレベルにした。ｐＨ７．４またはｐＨ６．０における１ｘＰＢＳ－Ｐ中１２～８００ｎＭの濃度のＦｃＲｎの注入により、分析を実施した。表９は、１：１ラングミュアモデルを使用して適合させた動態データを示すものである。

【表9】

【0206】

さらなる試験では、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）により、親和性成熟重鎖及び軽鎖を含むＩｇＧの親和性をヒト化型親Ｖ_Ｈ１／Ｖκ１抗体と比較した。プロテインＡ及びアナライト（ＦｃＲｎ）でコーティングしたＣＭ５チップの表面に抗体を流し、抗体を捕捉した。次の表１０に示すように、親和性成熟重鎖及び軽鎖を含む抗体は、ヒト化型親Ｖ_Ｈ１／Ｖκ１抗体に類似した親和性を示した。

【表10】

【0207】

ある親和性成熟重鎖（すなわち、Ｇ９Ｖ_Ｈ１、Ｈ３Ｖ_Ｈ１、またはＨ１Ｖ_Ｈ１）を一定に保持する抗体間におけるＶκ１を有する場合とＶκ２を有する場合との対比較ならびに、Ｖκ２を一定に保持する抗体間におけるＨ３Ｖ_Ｈ１を有する場合とＧ９Ｖ_Ｈ１を有する場合との対比較を行った。標準的なアミンカップリング化学を使用して、ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＢＲ１００５３０）表面のフローセル（Ｆ_ｃ）１、２、３及び４にプロテインＡ（Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｐ６０３１）をコーティングした。ｐＨ５．０の１０ｍＭの酢酸緩衝液中２０μｇ／ｍｌのタンパク質濃度で固定化を行い、目標応答レベルを５００レゾナンスユニット（ＲＵ）にした。１０ｎＭの抗体をＦ_ｃ２、３及び４上で１０μｌ／ｍｉｎで捕捉して約１７２のＲＵ（５０～１５０ＲＵのアナライト結合レベル（Ｒ_ｍａｘ））を得、表面を安定させた。

【0208】

動態分析のため、５０～０．０２ｎＭ ＦｃＲｎの２倍希釈範囲を選択した。ＦｃＲｎアナライトの会合フェーズを４５０秒間モニターし、解離を４０μｌ／分で１５００秒間測定した。Ｆ_ｃ１は参照チャネルであり、他のフローセルからこれを減算して非特異的結合を補正した。動態値は、１：１結合モデルに基づいている（表１１）。

【表11】

【0209】

さらなる試験では、製造業者による説明通りにアミンカップリング化学を使用してｍＡｂ（約５００～７００レゾナンスユニット）とカップリングさせたＣＭ５センサーチップと共に、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を行った。カップリングは、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に３μｇ／ｍｌの各タンパク質を注入することによって実施した。ＨＢＳ－Ｐ緩衝液ｐＨ７．４（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％のｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０）またはリン酸緩衝液ｐＨ６．０（６７ｍＭリン酸緩衝液、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％のＴｗｅｅｎ２０）をランニング緩衝液及び希釈緩衝液として使用した。滴定量の単量体Ｈｉｓタグ付きｈＦｃＲｎ（４００．０～１２．５ｎＭ）を、ｐＨ７．４またはｐＨ６．０の固定化した抗体に注入することにより、結合動態を決定した。全てのＳＰＲ実験を２５℃、４０μｌ／ｍｉｎの流量で行った。結合データをゼロ調整し、参照セル値を減算した。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン４．１）が提供するラングミュア１：１リガンド結合モデルを使用して結合動態を決定した。適合度の近似は統計値χ^２によって説明される。

【0210】

図７は、表面プラズモン共鳴によって決定される、変異体軽鎖Ｖκ２または親和性成熟軽鎖Ｅ８と対合させた親和性成熟重鎖Ｇ９またはＨ３における結合の会合及び解離のプロットを示すものである。動態速度定数は、次の１２で提供される。動態速度定数は、簡易的な一次（１：１）ラングミュア二分子相互作用を使用して得た。動態値は、二重反復試験の平均値を表す。χ^２（カイ２乗）値は、結合モデルに対する適合度を表す。

【表12】

【0211】

さらなる試験では、製造業者による説明通りにアミンカップリング化学を使用して抗体（約５５０レゾナンスユニット（ＲＵ））とカップリングさせたＣＭ５センサーチップと共に、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を行った。カップリングは、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に２．５μｇ／ｍｌの各タンパク質を注入することによって実施した。ＨＢＳ－Ｐ緩衝液ｐＨ７．４（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％のｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０）またはリン酸緩衝液ｐＨ６．０（６７ｍＭリン酸緩衝液、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％のＴｗｅｅｎ２０）をランニング緩衝液及び希釈緩衝液として使用した。滴定量（４００．０－１２．５ｎＭ）の単量体Ｈｉｓタグ付きヒトＦｃＲｎ（ｈＦｃＲｎ）（ＪＴＡ）を、ｐＨ７．４またはｐＨ６．０の固定されたｍＡｂ Ｈ３Ｖｋ２に注入することにより、結合動態を決定した。ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）及びヒトＩｇＧ４（ｈＩｇＧ４）については、１０．０００～３２５．０ｎＭを注入した。全てのＳＰＲ実験を２５℃、４０μｌ／分の流量で行った。結合データをゼロ調整し、参照セル値を減算した。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン４．１）が提供するラングミュア１：１リガンド結合モデルを使用して結合動態を決定した。適合度の近似は統計値χ２によって説明される。

【0212】

図１２は、ｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ４、及びＨ３Ｖｋ２についての結合の会合及び解離のプロットを示している。次の表１３は、結果を表形式で示している。

【表13】

【0213】

予想されたように、ｈＩｇＧ１及びｈＩｇＧ４は、厳密にｐＨ依存的に結合することが示され、ｐＨ６．０ではおよそ１μＭのＫＤであったが、中性ｐＨでは（１０．０００ｎＭの最高濃度の注入で）非常に弱い結合応答が得られるに過ぎなかった。

【0214】

さらなる試験では、Ｈ３Ｖｋ２の、２社の異なる供給業者から得たカニクイザルＦｃＲｎ及びヒトＦｃＲｎに対する結合を試験した。

【0215】

製造業者による説明通りにアミンカップリング化学を使用してｍＡｂ Ｈ３Ｖｋ２（約５５０レゾナンスユニット（ＲＵ））とカップリングさせたＣＭ５センサーチップと共に、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を行った。カップリングは、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に２．５μｇ／ｍｌのＨ３Ｖｋ２を注入することによって実施した。ＨＢＳ－Ｐ緩衝液ｐＨ７．４（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％のｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０）またはリン酸緩衝液ｐＨ６．０（６７ｍＭリン酸緩衝液、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％のＴｗｅｅｎ２０）をランニング緩衝液及び希釈緩衝液として使用した。結合動態は、ｐＨ７．４またはｐＨ６．０において、滴定量（４００．０～１２．５ｎＭ）の受容体を固定されたＡｂ（単量体Ｈｉｓタグ付きヒトＦｃＲｎ（ｈＦｃＲｎ））（ＪＴＡ）、またはＳＩＮＯ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃから得たヒトＦｃＲｎ及びカニクイザルＦｃＲｎ（ｃＦｃＲｎ）に注入することによって決定した。全てのＳＰＲ実験を２５℃、４０μｌ／ｍｉｎの流量で行った。結合データをゼロ調整し、参照セル値を減算した。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン４．１）が提供するラングミュア１：１リガンド結合モデルを使用して結合動態を決定した。適合度の近似は統計値χ２によって説明される。

【0216】

図１３は、結合の会合及び解離のプロットを示している。次の表１４は、結果を表形式で示している。

【0217】

【表14】

【0218】

この実験セットアップでは、ＳＩＮＯ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．から得たＨ３Ｖｋ２のヒトＦｃＲｎ及びカニクイザルＦｃＲｎに対する結合動態を決定した。比較として、自家で産生し、ある特定の過去の研究で使用した単量体ヒトＦｃＲｎ（ＪＴＡ）をｐＨ７．４で本実験に含めた。ＳＩＮＯ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．による市販のヒト形態は、インハウスで産生したヒトバージョンに非常に類似した動態定数を示した。カニクイザルＦｃＲｎは、両方のｐＨ条件で抗体に結合することが示されたが、ｐＨ７．４における親和性は、ヒト受容体よりも多少（およそ２倍）弱いものであった。

【0219】

実施例６
抗原提示アッセイ
骨髄樹状細胞（ＢＭＤＣ）の調製 － 骨髄（ＢＭ）細胞を８匹のメスＢ６．Ｃｇ－Ｆｃｇｒｔ^{ｔｍ１Ｄｃｒ} Ｔｇ（ＦＣＧＲＴ）３２Ｄｃｒ／ＤｃｒＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙストック番号０１４５６５）から採取した。これらのマウスは、ＦｃＲｎ α鎖のノックアウト対立遺伝子（Ｆｃｇｒｔ^{ｔｍ１Ｄｃｒ}）を有し、ヒトＦｃＲｎプロモーターの制御下でヒトＦｃＲｎ α鎖（ＦＣＧＲＴ）導入遺伝子を発現する。完全ＲＰＭＩ（Ｃ－ＲＰＭＩ）の入った約７０の非ＴＣ処理ペトリ皿内に、ＢＭ細胞を２ｘ１０^６／１０ｃｍ^２でて蒔いた。３日目及び６日目にＧＭ－ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）をＢＭ細胞に補充し、ＢＭＤＣ培養の８～１２日目に使用のために採取（または凍結）した。

【0220】

抗原提示アッセイでは、ＢＭＤＣによるＦｃＲｎ媒介抗原提示をＴ細胞活性化によって評価する。具体的には、ＢＭＤＣを抗原＋抗原特異的抗体（ＮＩＰ－ＯＶＡ＋抗ＮＩＰ－ＩｇＧ）の免疫複合体と共にインキュベートした後、抗原特異的Ｔ細胞の活性化を決定する。（アイソタイプが一致する非特異的な対照抗体と比較して）抗ＦｃＲｎ抗体が（ＦｃＲｎとＩＣとの結合を遮断することにより）抗原提示を阻害し、それによりＮＩＰ－ＯＶＡの処理及びＴ細胞への提示を遮断する能力を、Ｔ細胞活性化の決定によって評価する。Ｔ細胞活性化は、ＥＬＩＳＡを使用しＩＬ２及びＩＦＮ－γの産生を定量化して評価する。非特異的抗原提示用の対照（すなわち、抗原提示のバックグラウンドレベルがＦｃＲｎの媒介を受けない）は、ＢＭＤＣを試験抗体及び非複合化抗原（すなわち、抗ＮＩＰ－ＩｇＧを伴わないＮＩＰ－ＯＶＡ）と共にインキュベートすることにより用意する。

【0221】

最初に、ＢＭＤＣを試験抗体またはアイソタイプ対照と共にインキュベートする。具体的には、ＢＭＤＣを９６ウェルプレート内に５ｘ１０^４／１００μｌ／ウェルにて播種し、３７℃で３０～６０分間インキュベートする。各ウェルに１００μｌの各試験抗体（またはアイソタイプ対照）を添加して、５０、２５、１２．５、６．２５、または３．１２５ｎＭの抗体濃度を達成する。ＢＭＤＣ－抗体混合物を３０～６０分間インキュベートしてから免疫複合体（ＩＣ）を添加する。十分な数のウェルを準備して、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化阻害に関して、そして三重反復における測定に関して、各抗体の希釈液一式を試験する。

【0222】

免疫複合体（ＩＣ）形成
抗ＮＩＰ－ＩｇＧ（２倍濃度＝２００μｇ／ｍｌ）及びＮＩＰ－オボアルブミン（「ＮＩＰ－ＯＶＡ」）（２倍濃度＝２００μｇ／ｍｌ）各２．５ｍｌを混合し、３７℃で６０分インキュベートして、２００μｇ／ｍｌの免疫複合体（ＩＣ）を形成する。１００μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡの未処理（すなわち、非複合化）試料５ｍｌを調製する。

【0223】

ＢＭＤＣへの添加用に、各試験抗体（またはアイソタイプ対照）及びＩＣの混合物を調製する。バックグラウンド対照を提供するため、各試験抗体をＮＩＰ－ＯＶＡとも混合する。具体的には、試験抗体の段階希釈液（１００、５０、２５、１２．５、６．２５ｎＭ）を調製し、各希釈液２５０μｌをＩＣ ２５０μｌ及び１００μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ ２５０μｌに添加して、５０、２５、１２．５、６．２５、及び３．１２５ｎＭの濃度の試験抗体を含有する試験抗体＋ＩＣまたは試験抗体＋ＮＩＰ－ＯＶＡ溶液を産生する。

【0224】

試験抗体で処理済ＢＤＭＣを含有する９６ウェルプレートを遠心処理し、２５μｌ／ウェルの培地以外を全て取り除き、試験抗体＋ＩＣまたは試験抗体＋ＮＩＰ－ＯＶＡ溶液１００μｌをウェルに添加し、次に３７℃で２～３時間インキュベートする。

【0225】

Ｔ細胞調製物
ＣＤ８^＋Ｔ細胞を得るため、メスのＯＴＩ、Ｃ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ＴｃｒａＴｃｒｂ）１１００Ｍｊｂ／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙストック番号００３８３１）の脾臓及びリンパ節から単細胞懸濁液を採取する。これらの遺伝子導入マウスは、Ｈ２Ｋ^ｂのコンテキストにおいてオボアルブミン残基２５７～２６４を認識するように設計された遺伝子導入Ｔ細胞受容体を発現し、正の選択におけるペプチドの役割及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の抗原に対する応答を研究するために使用される。Ｍｉｌｔｅｎｙｉキットを使用して非ＣＤ８^＋Ｔ細胞を枯渇させる。

【0226】

ＣＤ４^＋Ｔ細胞を得るため、メスのＯＴＩＩ、Ｂ６．Ｃｇ－Ｔｇ（ＴｃｒａＴｃｒｂ）４２５Ｃｂｎ／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙストック番号００４１９４）の脾臓及びリンパ節から単細胞懸濁液を採取する。これらの遺伝子導入マウスは、ＣＤ４共受容体と対合し、かつＩ－Ａｂのコンテキストでニワトリオボアルブミン３２３～３３９に特異的である、マウスアルファ鎖及びベータ鎖Ｔ細胞受容体を発現する。Ｍｉｌｔｅｎｙｉキットを使用して非ＣＤ４^＋Ｔ細胞を枯渇させる。

【0227】

ＢＤＭＣ，試験抗体、及びＩＣ（または非複合化ＮＩＰ－ＯＶＡ）を含有する９６ウェルプレートを遠心処理し、２５μｌ／ウェル以外を除去し、ウェルを予熱したＣ－ＲＰＭＩで２回洗浄する。

【0228】

１．５ｘ１０^５／２００μｌ／ウェルの量のＴ細胞（ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋のいずれか）を３７℃で２４時間インキュベートする。各ウェルから１５０μｌを採取して、ＥＬＩＳＡによりＩＬ２を定量化する。１５０μｌ／ウェルのＣ－ＲＰＭＩを各ウェルに戻し、次に３７℃でさらに４８時間（合計７２時間）インキュベートする。この時点で各ウェルから１５０μｌを採取して、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮ－ガンマを定量化する。

【0229】

ＩＬ２及びＩＦＮ－ガンマの培養上清への分泌をＥＬＩＳＡによって測定することにより、ＯＴＩ（ＣＤ８^＋）及びＯＴＩＩ（ＣＤ４^＋）Ｔ細胞の各培養条件に対する応答を評価する。ＩＬ２は、２４時間時における両方の培養液、ＯＴＩについては１から３に希釈したもの、ＯＴＩＩについては１から２０に希釈したものから測定する。ＩＦＮ－γは、２４時間時における１から３に希釈したＯＴＩ培養液及び、７２時間時における１から２０に希釈したＯＴＩＩ培養液から測定する。

【0230】

実施例７
免疫原性試験
抗体を前臨床エキソビボＴ細胞アッセイ（ＥＰＩＳＣＲＥＥＮ（登録商標）、Ａｎｔｉｔｏｐｅ Ｌｔｄ．）に供する。ＥＰＩＳＣＲＥＥＮ（登録商標）（Ａｎｔｉｔｏｐｅ Ｌｔｄ．）アッセイは、世界的母集団において発現されるＨＬＡ－ＤＲアロタイプの数及び頻度を代表するために選択されたコホートを使用して、タンパク質治療薬に対するＴ細胞応答を定量化することにより、Ｔ細胞免疫原性を有効に予測する。

【0231】

実施例８
全血アッセイ
抗ＦｃＲｎ抗体が生理的に適切な環境においてサイトカイン産生を遮断する能力を試験するため、カニクイザルからの全血を使用したアッセイを開発した。全血に、０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡまたは抗ＮＩＰヒトＩｇＧが結合した０．１μｇ／ｍｌのＮＩＰ－ＯＶＡ、のいずれかを添加した。ＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧは、当該アッセイにおいて代理的な免疫複合体として機能し、ＦｃＲｎに結合し、サイトカイン産生などのＦｃＲｎのエフェクター機能を始動させる。ＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧの添加により、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、及びインターロイキン－１β（ＩＬ－１β）といったサイトカインが大量に産生された（それぞれ図８、９、１０、及び１４の黒色のバーを参照）。これとは対照的に、ＮＩＰ－ＯＶＡを単独で添加してもサイトカインは放出されなかった。ＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧにおけるＩｇＧをＩＨＨ（Ｆｃドメイン中にＦｃＲｎへの結合を無効にする３点突然変異（Ｉ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ａ）を伴う抗ＮＩＰヒトＩｇＧ１（Ｑｉａｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：９３３７－９３４２））に置き換えた場合、サイトカイン放出は観察されなかった。これは、当該アッセイで測定された効果がＦｃＲｎ依存的であることを示すものである。

【0232】

抗ＦｃＲｎ抗体Ｈ３Ｖκ２の存在下でＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧを添加したところ、サイトカイン産生量が著しく減少した（それぞれ図８、９、１０、及び１４の灰色のバーを参照）。これは、本明細書に記載される抗ＦｃＲｎ抗体がＦｃＲｎとＩＣとの相互作用による効果の１つを遮断するのに有効であることを示すものである。注目すべき点は、本アッセイにおいて全てのサルが顕著な量のサイトカインを産生したわけではないことである。したがって、全てのサルがＨ３Ｖκ２によるサイトカイン産生の阻害を測定可能な程度に示したわけではない。顕著な量のサイトカインを産生しなかったサルは、抗ＦｃＲｎ抗体を用いた療法に適していないであろう。これとは逆に、顕著な量のサイトカイン産生を示し、Ｈ３Ｖκ２の存在下でサイトカイン産生の良好な阻害を示したサルは、抗ＦｃＲｎ抗体を用いた療法に適しているであろう。

【0233】

図１１は、Ｈ３Ｖκ２の量を増加させて添加した別の全血ベースのアッセイの結果を示している。グラフの右寄りにある３つのバーが示すように、Ｈ３Ｖκ２はサイトカイン産生量に用量依存的な阻害効果を及ぼすことが観察された。

【0234】

上述の全血アッセイを、ヒトからの全血での使用に適応させた。ヒト対象からのヘパリン化全血に、１．０μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの様々な濃度で予め形成したＮＩＰ－ＯＶＡの免疫複合体を、安定的濃度の、抗ＮＩＰヒトＩｇＧ、またはＦｃＲｎに結合しないように変異させた抗ＮＩＰ－ＩＨＨのいずれかと共に添加した。全血試料を３７℃でインキュベートし、２４時間後または３６時間後に、ＥＬＩＳＡまたはビーズアレイのいずれかによりサイトカインレベルを測定した。図１７に示すように、ＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧ免疫複合体は、複数の異なるサイトカインの放出を刺激したが、ＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩＨＨ免疫複合体からの応答の欠如は、当該アッセイで測定された効果がＦｃＲｎ依存的であったことを示すものである。

【0235】

図１８は、ＩｇＧ４形式の抗ＦｃＲｎ抗体であるＨ３Ｅ８及びＨ３Ｖκ２の存在下でＮＩＰ－ＯＶＡ－ＩｇＧを添加したところ、サイトカイン産生量が減少したことを示している。当該アッセイを、Ｈ３Ｖκ２及びＦ（ａｂ’）_２形式の対照抗体を用いて再実施した。結果を図１９に示す。この結果は、本明細書に記載される抗ＦｃＲｎ抗体が、ヒト全血において、ＦｃＲｎとＩＣとの相互作用による効果の１つを遮断するのに有効であることを示すものである。

【0236】

実施例９
ＩｇＧクリアランス研究
抗ＦｃＲｎ抗体がヒトＩｇＧクリアランスに及ぼす影響を検討するため、遺伝子導入マウスを使用したインビボ試験を行った。ヒトＦＣＧＲＴ導入遺伝子に対し半接合である２０匹の１４．９週±３日齢のｈＦｃＲｎ ＴＧマウスを、それぞれが５匹のメス及び５匹のオスを含む１群及び２群に分けた。０日目に、全てのマウスに対し、２４５ｍｇ／ｋｇのヒトＩＶＩＧを５ｍｇ／ｋｇの鶏卵リゾチーム特異的ヒト化型ＩｇＧ１ ｍＡｂ、ＨｕＬｙｓ１１と混合して合計２５０ｍｇ／ｋｇにしたものを、静脈注入により予め投与した。ＩｇＧ／／ＨｕＬｙｓ１１の静脈注入後４８、５６、７２、８０、９６、１２０、及び１４４時間時に各マウスから血液試料を収集した。４８時間時の採血の１時間後、２０ｍｇ／ｋｇのＨ３Ｖκ２またはＰＢＳを静脈投与した。ＨｕＬｙｓ１１の血漿濃度をＥＬＩＳＡにより定量化した。２０ｍｇ／ｋｇのＨ３Ｖκ２を用いた処置により、ＨｕＬｙｓ１１の血漿濃度において、ＰＢＳ対照群に対して３倍の非常に顕著な低減（ｐ＝０．０００１）がもたらされた。この結果は、Ｈ３Ｖκ２によるｈＦｃＲｎ遮断が、ｈＩｇＧの循環からのクリアランスを促進することを示すものである。

【0237】

図１５は当該研究の結果を示しており、４８時間時のマウス血漿中のＨｕＬｙｓ１１の量を基準とした残留ＨｕＬｙｓ１１（ヒトＩｇＧ１）のパーセント（±標準誤差）としてプロットされている。２０ｍｇ／ｋｇのＳＹＮＴ００１注入は、この４８時間時の採血の２時間後である。

【0238】

実施例１０
免疫複合体クリアランス研究
抗ＦｃＲｎ抗体が、Ｑｉａｏ ＳＷ，ＰＮＡＳ ２００８に従ってインビトロで形成されｈＦｃＲｎ ＴＧマウスに静脈内注入される、多量体免疫複合体に及ぼす影響を検討するため、遺伝子導入マウスを使用したインビボ試験を行った。ヒトＦＣＧＲＴ導入遺伝子に対し半接合である１６匹の８．１週＋／－３日齢のｈＦｃＲｎ Ｔｇマウスから、８匹のマウス（オス４匹／メス４匹）を２群にランダム抽出した。７５０μｇ／ｍｌの^ＮＩＰｈＩｇＧ抗ＮＩＰを７５μｇ／ｍｌのＮＩＰ結合オボアルブミン（ＯＶＡ１つ当たり１１のＮＩＰ分子）と共に、ＰＢＳ中で室温で２０分間インキュベートすることにより、多量体ＩＣを形成した。０日目に、各グループの８匹のマウスに対し、^ＮＩＰｈＩｇＧ／ＮＩＰ－ＯＶＡ ＩＣをそれぞれ７．５ｍｇ／ｋｇ及び０．７５ｍｇ／ｋｇ、静脈注入により予め投与した。これは、２０ｇの体重用量については１５０μｇの^ＮＩＰｈＩｇＧ＋１５μｇのＮＩＰ－ＯＶＡに相当する。免疫複合体の静脈注入後２４、３２、４８、５６、７２、９６、及び１２０時間時に血液試料を収集した。２４時間時の採血の１時間後、２０ｍｇ／ｋｇのＨ３Ｖκ２またはＰＢＳを静脈投与した。^ＮＩＰｈＩｇＧの血漿濃度をＥＬＩＳＡにより定量化した。このインビボ実験における結果は、実施例９の単量体ＩｇＧに見られたものと同様に、ＩｇＧと抗原との間で形成される免疫複合体の異化作用にＦｃＲｎがもたらす保護を、Ｈ３Ｖκ２が阻害することを確認するものである。

【0239】

図１６は当該試験の結果を示しており、示された時点における２４時間ベースライン（±標準誤差）を基準とした残留ＩＣの平均％としてプロットされている。

【0240】

実施例１１
単球のＦｃＲｎ発現
抗ＦｃＲｎ抗体注入後の薬物動態性質及びさらなる薬物力学マーカーの応答を特徴づけるための、カニクイザル全血試料における単球のＦｃＲｎ発現。カニクイザルに対し、週に１回、静脈注入を介して、ビヒクル（１群）、１０ｍｇ／ｋｇ／用量のＨ３Ｖκ２（２群）、４０ｍｇ／ｋｇ／用量のＨ３Ｖκ２（３群）、または４０ｍｇ／ｋｇ／用量のＨ３Ｅ８（４群）のいずれかを４週間投与し、その後に４週間の回復期間を設けた。全血試料を静脈穿刺によりＫ_２ＥＤＴＡ抗凝固剤を含有するチューブ内に収集し、分析時まで室温で保管した。抗ＦｃＲｎ抗体の初回注入前及び最初の注入から２時間後に２つの試料を採取し、その後後続の各注入の直前及び２時間後に採取した。血液のアリコートを使用して、ＡＤＶＩＡにより白血球数（合計、絶対及び差分％）を測定した。白血球数及び総リンパ球数（ＴＬＣ）を全血のμＬ当たりのリンパ球（細胞／μＬ）として報告した。全血のμＬ当たりのリンパ球（細胞／μＬ）に加えて、単球の細胞数を相対百分率（％）として報告した。

【0241】

細胞外及び細胞内単球のＦｃＲｎ発現レベルを、フローサイトメトリーにより、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＴＭ ＩＩフローサイトメーターをＦＡＣＳＤｉｖａＴＭソフトウェアと共に使用して分析した。単球における細胞外及び細胞内のＦｃＲｎ受容体発現については、ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋ＦｃＲｎ＋細胞におけるＦｃＲｎ発現の幾何平均蛍光強度（ＧｅｏＭＦＩ）と、ＣＤ１４＋単球母集団からのＦｃＲｎを発現するＣＤ１４＋単球の百分率の値を報告した。加えて、単球（ＣＤ４５＋／ＣＤ１４＋）の絶対数及び相対百分率を報告した。

【0242】

投与した動物の大多数において、研究前の時点と比較した場合に、表１５に示すように、各時点の投与後２時間のＣＤ４５＋／ＣＤ１４＋ＦｃＲｎ＋細胞における細胞外ＦｃＲｎ発現に関して、幾何平均蛍光強度（ＧｅｏＭＦＩ）の減少の傾向が得られた。これらの変化は、抗ＦｃＲｎ抗体のＦｃＲｎ受容体への結合が増加した結果であるとみなされた。全般的に、ｇｅｏＭＦＩ値は、各予定投与の前に研究前のレベルに戻っていた。このパターンは処置群全体に観察され、減少の大きさは、Ｈ３Ｖκ２を１０ｍｇ／ｋｇ／用量受けた群と、Ｈ３Ｖκ２を４０ｍｇ／ｋｇ／用量受けた群と、Ｈ３Ｅ８を４０ｍｇ／ｋｇ／用量受けた群との間で類似していた。ＣＤ１４＋単球における細胞外ＦｃＲｎ発現に関しては、ＣＤ４５＋／ＣＤ１４＋／ＦｃＲｎ＋の相対百分率に変化は観察されなかった。

【0243】

各時点における全体的な変動性及び傾向の欠如を考慮すると、メイン期間及び回復期間中の全ての処置群における細胞内のＦｃＲｎ発現に関するＣＤ４５＋／ＣＤ１４＋／ＦｃＲｎ＋の相対百分率及び幾何平均では、ＳＹＮＴ００１－Ｈ３Ｖｋ２及びＳＹＮＴ００１－Ｈ３Ｅ８に関連した白血球数の変化はなかった。

【0244】

これらのデータは、細胞表面単球のＦｃＲｎ発現が、抗ＦｃＲｎ抗体薬物レベルの代理的なマーカーとして使用され得ることを示唆するものである。

【表15】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【配列表】

2022008301000001.app

【手続補正書】

【提出日】2021-09-22

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項1】

重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

対象におけるＩｇＧ媒介疾患を緩和するための医薬組成物であって、前記ＩｇＧ媒介疾患の緩和に有効なＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の量を含み、
前記医薬組成物が前記対象に投与され、
前記ＩｇＧ媒介疾患が、凝血異常、血管炎、コラーゲン障害、皮膚科系疾患、神経系疾患、炎症性腸疾患、及び臓器特異的障害から選択され、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項3】

ＦｃＲｎによる免疫複合体（ＩＣ）の結合を阻害する、またはＦｃＲｎ－免疫複合体相互作用を阻害することにより免疫複合体の循環を減少させるための医薬組成物であって、ＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の有効量を含み、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項4】

抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の提示を阻害するための医薬組成物であって、前記抗原の提示の阻害に有効なＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の量を含み、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項5】

抗原提示細胞（ＡＰＣ）による免疫複合化抗原の交差提示を阻害するための医薬組成物であって、前記抗原の交差提示の阻害に有効なＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の量を含み、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び、ＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項6】

抗原提示細胞（ＡＰＣ）による炎症性サイトカインの分泌を阻害するための医薬組成物であって、前記炎症性サイトカインの分泌の阻害に有効なＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の量を含み、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項7】

前記炎症性サイトカインが、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、または腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦα）である、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項8】

自己免疫性疾患の治療を必要としている対象において自己免疫疾患を治療するための医薬組成物であって、ＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の有効量を含み、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項9】

前記自己免疫性疾患が、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、および重症筋無力症（ＭＧ）からなる群より選択される、請求項８に記載の医薬組成物。

【請求項10】

胎盤を介した病原性抗体の伝播を遮断するための医薬組成物であって、ＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の有効量を含み、
前記病原性抗体の伝播の遮断を必要としている妊娠中の哺乳動物に投与され、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項11】

対象からのＩＣのクリアランスを増加させるための医薬組成物であって、ＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の有効量を含み、前記ＩＣのクリアランスの増加を必要としている対象に投与され、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び、ＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項12】

前記対象が免疫複合体媒介血管炎を有する、請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

対象における自己抗体の分解を促進するための医薬組成物であって、ＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の有効量を含み、前記組成物が前記対象に投与され、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び、ＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項14】

前記自己抗体の分解が治療抗体の投与の前に促進され、前記対象が前記治療抗体によって治療されることを必要としている、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

対象における外来性治療抗体の分解を促進するための医薬組成物であって、ＦｃＲｎに結合する抗体または抗原結合断片の有効量を含み、前記対象に投与され、
前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦｃＲｎに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれがＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び、ＣＤＲ３を含み、
重鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号２であり、
重鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号４であり、
重鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号５５であり、
軽鎖のＣＤＲ１の配列が配列番号６であり、
軽鎖のＣＤＲ２の配列が配列番号８であり、
軽鎖のＣＤＲ３の配列が配列番号１０である、医薬組成物。

【請求項16】

前記抗原結合断片が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域の配列が配列番号５６を含み、前記軽鎖可変領域の配列が配列番号２２を含む、請求項２～１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。