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▶ バーディー バイオファーマシューティカルズ インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022092041
(43)【公開日】2022-06-21
(54)【発明の名称】標的免疫療法のための化合物
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20220614BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220614BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220614BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20220614BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28
A61K39/395 C
A61K39/395 E
A61K39/395 L
A61K39/395 T
A61P35/00
A61K47/68
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022066294
(22)【出願日】2022-04-13
(62)【分割の表示】P 2019165174の分割
【原出願日】2013-07-16
(31)【優先権主張番号】201210248481.9
(32)【優先日】2012-07-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】517071025
【氏名又は名称】バーディー バイオファーマシューティカルズ インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100095407
【弁理士】
【氏名又は名称】木村 満
(74)【代理人】
【識別番号】100132883
【弁理士】
【氏名又は名称】森川 泰司
(74)【代理人】
【識別番号】100148633
【弁理士】
【氏名又は名称】桜田 圭
(74)【代理人】
【識別番号】100147924
【弁理士】
【氏名又は名称】美恵 英樹
(72)【発明者】
【氏名】リ、リシン
(57)【要約】
【課題】標的免疫療法のための化合物、ならびにそれらを含む組成物の提供。
【解決手段】式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ（Ｉ）の構造を有し、式中、ＴＭは、腫瘍細胞上に発現する抗原に特異的に結合し、且つ、直接的に又は間接的に、細胞増殖を抑制すること又はアポトーシスを誘導することができる免疫グロブリン又はその機能性フラグメントを含む標的部分であり、ＡＭは、ヒトのＴＬＲ７およびＴＬＲ８に特異的に結合し、且つ、ヒトの、樹状細胞、ＮＫ細胞、又はこれらの両方を活性化する活性化部分であり、Ｌは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、ことを特徴とする化合物。
【選択図】なし
【解決手段】式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ（Ｉ）の構造を有し、式中、ＴＭは、腫瘍細胞上に発現する抗原に特異的に結合し、且つ、直接的に又は間接的に、細胞増殖を抑制すること又はアポトーシスを誘導することができる免疫グロブリン又はその機能性フラグメントを含む標的部分であり、ＡＭは、ヒトのＴＬＲ７およびＴＬＲ８に特異的に結合し、且つ、ヒトの、樹状細胞、ＮＫ細胞、又はこれらの両方を活性化する活性化部分であり、Ｌは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、ことを特徴とする化合物。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有し、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒト樹状細胞、ＮＫ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらの組み合わせを活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物。
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒト樹状細胞、ＮＫ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらの組み合わせを活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年７月１８日出願の中国特許出願第２０１２１０２４８４８１．９号の利益および同出願に対する優先権を主張し、この出願の全開示は、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１２年７月１８日出願の中国特許出願第２０１２１０２４８４８１．９号の利益および同出願に対する優先権を主張し、この出願の全開示は、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、標的免疫療法のための化合物、ならびにそれらを含む組成物に関する。更に、本発明は、癌のような疾患の治療における化合物の使用に関する。
【背景技術】
【0003】
発明の背景
治療抗体は、２０年以上にわたって臨床用途に使用されてきた。現在、Ｒｉｔｕｘａｎ（１９９７年）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（１９９８年）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（２０００年）、Ｃａｍｐａｔｈ（２００１年）、Ｚｅｖａｌｉｎ（２００２年）、Ｂｅｘｘｅｒ（２００３年）、Ａｖａｓｔｉｎ（２００４年）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（２００４年）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（２００６年）、Ａｒｚｅｒｒａ（２００９年）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（２０１１年）、Ｙｅｒｖｏｙ（２０１１年）、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（２０１１年）、Ｐｅｒｊｅｔａ（２０１２年）、およびＫａｄｃｙｌａ（２０１３年）を含む１５種の抗腫瘍抗体薬が臨床において存在する。これらの抗体は、主に、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＣＤ２０、およびＶＥＧＦの４つの分子を標的にする。
治療抗体は、２０年以上にわたって臨床用途に使用されてきた。現在、Ｒｉｔｕｘａｎ（１９９７年）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（１９９８年）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（２０００年）、Ｃａｍｐａｔｈ（２００１年）、Ｚｅｖａｌｉｎ（２００２年）、Ｂｅｘｘｅｒ（２００３年）、Ａｖａｓｔｉｎ（２００４年）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（２００４年）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（２００６年）、Ａｒｚｅｒｒａ（２００９年）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（２０１１年）、Ｙｅｒｖｏｙ（２０１１年）、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（２０１１年）、Ｐｅｒｊｅｔａ（２０１２年）、およびＫａｄｃｙｌａ（２０１３年）を含む１５種の抗腫瘍抗体薬が臨床において存在する。これらの抗体は、主に、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＣＤ２０、およびＶＥＧＦの４つの分子を標的にする。
【0004】
一般に、治療抗体は、３つの機構を介して腫瘍細胞を死滅させる（非特許文献１）。（１）直接的な抗体作用、すなわち、リガンド／受容体シグナル伝達の遮断または作動薬活性、アポトーシスの誘発、および薬剤または細胞障害剤の送達。抗体受容体活性化の活性は、直接的な腫瘍細胞死滅効果を生じさせることができる。例えば、幾つかの抗体は、腫瘍細胞の表面の受容体に結合し、受容体を活性化させ、アポトーシスをもたらすことができる（例えば、ミトコンドリアにおいて）。抗体は、受容体拮抗活性により腫瘍細胞死滅を仲介することもできる。例えば、ある特定の抗体は、細胞表面受容体に結合し、二量体化、キナーゼ活性化、および下流シグナル伝達を遮断し、それによって増殖を阻害し、アポトーシスを促進することができる。抗体の酵素への結合は、中和、シグナル抑止、および細胞死をもたらすことができる。（２）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞仲介細胞障害（ＡＤＣＣ）、Ｔ細胞機能調節などを含む免疫仲介細胞死滅機構による。腫瘍細胞の免疫仲介死滅は、以下の方法により達成されうる。貪食作用の誘発、補体活性化、抗体依存性細胞仲介細胞障害、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）により腫瘍に対して標的化された遺伝子修飾Ｔ細胞、樹状細胞への抗体仲介抗原交差提示によるＴ細胞の活性化、細胞障害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）のようなＴ細胞阻害性受容体の阻害。これらのうち、抗体特徴のＦｃ部分が、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ仲介腫瘍細胞死滅効果のためにとりわけ重要である。（３）血管受容体拮抗剤またはリガンドを捕捉して、間質細胞阻害、間質細胞への毒素の送達、および血管系への毒素の送達を含む血管および間質細胞の切除（ａｂｌａｔｉｏｎ）を誘発することを介した、腫瘍血管系およびマトリックスに対する抗体の特異的な効果。（非特許文献２）。
【0005】
治療モノクローナル抗体薬は、抗癌薬の研究および開発を前進させた。しかし、抗体免疫原性、腫瘍標的の長期使用における耐容性、およびシグナル伝達経路の単純な単一遮断による長期効果のような幾つかの問題を解決するために、以前として更なる研究が必要である。要約すると、過半数の抗体は、腫瘍細胞の長期の効率的な阻害および死滅を達成することが困難である。
【0006】
１９６４年に雑誌「Ｎａｔｕｒｅ」は、新しい着想の抗体薬剤複合体（ＡＤＣ）技術を公表し、これは、近年大きな進歩が見られている。ＡＤＣは、化学リンカー（リンカー）を介して、抗体を高い毒性の薬剤（毒素）と共有結合させる。抗体は癌細胞表面抗原分子を認識し、エンドサイトーシスＡＤＣは、それを細胞質の中に運び込み、特定の細胞内環境において、リンカーの加水分解後に放出された毒素は、細胞を死滅させる。
【0007】
Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓは、そのような薬剤であるブレンツキシマブベドチン（商標名アドセトリス（Ａｄｃｅｔｒｉｓ））を開発し、これはＦＤＡにより市販することが承認されている。これは、腫瘍細胞を死滅させる改善された効率を有する、リンパ腫細胞特異的ＣＤ３０分子を標的にする抗体と結合した合成毒性抗癌薬である、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。
【0008】
現在、数十のそのようなＡＤＣ薬が臨床試験の最中である。これらのうち、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＩｍｍｕｎｏｇｅｎは、乳癌を治療するために、マイタンシンと結合したトラスツズマブを薬剤名称アド－トラスツズマブエムタンシン（カドシラ（Ｋａｄｃｙｌａ））として共同で開発し、これはＴ－ＤＭ１としても知られている。２０１３年２月には、ＦＤＡはヒト上皮増殖因子受容体２（Ｈｅｒ２）陽性転移乳癌に対するＴーＤＭ１を承認した。マイタンシンは、チューブリンに結合し、非還元性二重マレイミド－プロパンジオール錯体を形成することにより微小管の形成を防止することができる、小分子毒素である。トラスツズマブは、ヒトＨｅｒ２を標的にすることによって、乳癌および胃癌に対して作用する。これは、Ｈｅｒ２陽性癌に対して承認された。しかし、トラスツズマブは、全てのＨｅｒ２陽性細胞のアポトーシスを促進することはできない。Ｔ－ＤＭ１は、Ｈｅｒ２受容体を選択的に標的にするトラスツズマブを、強力な細胞障害剤のマイタンシンと組み合わせて、腫瘍細胞を死滅させる。Ｔ－ＤＭ１抗体は、Ｈｅｒ２受容体に結合して、複合体から放出されたマイタンシンの細胞内部移行を引き起こし、それによって腫瘍細胞を死滅させる。Ｔ－ＤＭ１は、より良好な全体的な効能および薬物動態特性、ならびに低い毒性を有する。
【0009】
伝統的な小分子化学療法薬は、強力な毒性および薬物動態的な利点を有するが、腫瘍の治療経過において、重篤な副作用によって他の生理学的標的に影響を与え得る。抗体薬剤複合体は、標的化機能を、特定の薬物動態を有する小分子薬剤と組み合わせる。抗体薬剤複合体の構造は、標的化機能を有するモノクローナル抗体と、特定の薬理学的特性を有する化合物との結合である。この技術は、治療効果または細胞毒素のような他の機能を有する分子と結合される、標的に結合特異性を有する治療抗体を必要とする。結合抗体のエンドサイトーシス、結合の安定性、ならびに毒素の放出および死滅活性のような多くの要因が、この種類の抗体の効果に影響を与える。
【0010】
現在使用されている毒素分子には、チューブリン阻害剤である、オーリスタチン類縁体モノメチルオーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ、およびマイタンシンが含まれる。モノメチルオーリスタチンＥは、微小管凝集を阻害し、腫瘍細胞の有糸分裂に干渉し、かつアポトーシスを誘発することができる合成微小管ポリマー阻害剤である（非特許文献３、非特許文献４）。モノメチルオーリスタチンＦは、Ｃ末端に荷電フェニルアラニン残基を有する抗有糸分裂オーリスタチン誘導体である。非荷電ＭＭＡＥと比較して、これは、細胞シグナル伝達経路への障害を最小限にし、細胞障害性を最小限にする。ＣＤ３０細胞による多数の試験は、ｍＡｂ－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル－ＭＭＡＦ（ｍＡｂ－Ｌ１－ＭＭＡＦ）が、ＭＭＡＦのみよりも２，２００倍強力な毒性を有することを見出した（非特許文献５）。マイタンシンは、チューブリン重合の阻害剤として作用する抗有糸分裂剤であり、したがって細胞核における微小管の形成に干渉する。マイタンシンは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびタンパク質の合成も阻害し、最大の効果はＤＮＡ合成において見られる。
【0011】
抗体薬剤複合体は、直接的および間接的な抗癌効果を有する。抗体は、リガンド／受容体シグナル伝達を遮断または活性化し、アポトーシスを誘発し、同時にペイロード薬剤（例えば、薬剤、毒素、小型干渉ＲＮＡまたは放射性同位体）を腫瘍細胞に対して直接的または間接的に提示または送達することができる。治療抗体薬剤複合体は、抗体と結合薬剤の二重特性を利用し、第１は、標的分子に特異的に結合する結合機能であり、第２は、抗体自体の腫瘍細胞死滅機能であり、第３は、複合薬の特定の効果である。現行の抗体薬剤複合体薬は、どのように腫瘍細胞を直接的に死滅させるかについては制限されている。しかし、抗体、リンカー分子、毒素分子、および複合体化の技術における厳しい要件、ならびに腫瘍微環境分子内に毒素を運び込むことに対する制限のため、実際の臨床研究において依然として幾つかの困難が存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0012】
【非特許文献1】Ｓｃｏｔｔ ＡＭ，Ｗｏｌｃｈｏｋ ＪＤ，Ｏｌｄ ＬＪ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．（２０１２），１２：２７８－８７
【非特許文献2】Ｓｃｏｔｔ ＡＭ，Ｗｏｌｃｈｏｋ ＪＤ，Ｏｌｄ ＬＪ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２０１２，１２（４）：２７８－８７
【非特許文献3】Ｎａｕｍｏｖｓｋｉ Ｌ ａｎｄ Ｊｕｎｕｔｕｌａ ＪＲ．Ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ，ａ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｎｏｎ－ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ ｍＡｂ ａｎｄ ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｅ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２００３；１２（２）：２４８－５７
【非特許文献4】Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ＪＡ，Ｃｅｒｖｅｎｙ ＣＧ ｅｔ ａｌ．ｃＡＣ１０－ｖｃＭＭＡＥ，ａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ３０－ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｂｌｏｏｄ １０２（４）：１４５８－６５
【非特許文献5】Ｄｏｒｏｎｉｎａ ＳＯ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｆ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｉｎｋｅｒ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｎ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，２００６；１７（１）：ｐ１１４－２４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0013】
一態様において、本発明は、式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有する化合物であって、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、樹状細胞、マクロファージ、単球、骨髄由来抑制細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されないヒト免疫細胞を活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物を提供する。
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、樹状細胞、マクロファージ、単球、骨髄由来抑制細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されないヒト免疫細胞を活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物を提供する。
【0014】
幾つかの実施形態において、ヒト樹状細胞は形質細胞様樹状細胞である。幾つかの実施形態において、ヒト樹状細胞は骨髄樹状細胞である。
【0015】
幾つかの実施形態において、ＡＭは、ヒトトール様受容体７（ＴＬＲ７）および／もしくはＴＬＲ８に特異的に結合すること、またはＴＬＲ７および／もしくはＴＬＲ８を介してヒト免疫細胞を活性化することができる。
【0016】
別の態様において、本発明は、式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有する化合物であって、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒトＴＬＲ７および／もしくはＴＬＲ８に特異的に結合すること、またはＴＬＲ７および／もしくはＴＬＲ８を介してヒト免疫細胞を活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物を提供する。
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒトＴＬＲ７および／もしくはＴＬＲ８に特異的に結合すること、またはＴＬＲ７および／もしくはＴＬＲ８を介してヒト免疫細胞を活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物を提供する。
【0017】
幾つかの実施形態において、ＡＭは、ヒトＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方に特異的に結合すること、またはＴＬＲ７および／もしくはＴＬＲ８を介してヒト免疫細胞を活性化することができる。
【0018】
幾つかの実施形態において、ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭは、ＣｐＧオリゴヌクレオチを含まない。
【0019】
幾つかの実施形態において、標的部分は、非腫瘍細胞と比較して、腫瘍細胞に特異的または優先的に結合することができる。幾つかの実施形態において、腫瘍細胞は、癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肉腫、リンパ腫、骨髄腫、または中枢神経系癌のものである。
【0020】
幾つかの実施形態において、標的部分は、非腫瘍抗原と比較して、腫瘍抗原に特異的または優先的に結合することができる。幾つかの実施形態において、腫瘍抗原は、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、およびＣＤ１３７からなる群から選択される。幾つかの実施形態において、腫瘍抗原は、４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＡＧＳ－５、ＡＧＳ－１６、アンジオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ－０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児性抗原、ＣＴＬＡ４、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）、ＥＤ－Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、グルココルチコイド誘発性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαν、インテグリンανβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ルイスＹ、メソテリン、ｃ－ＭＥＴ、ＭＮ炭酸脱水酵素ＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ネクチン－４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、シンデカン－１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、およびこれらの変異体からなる群から選択される。
【0021】
幾つかの実施形態において、標的部分は、免疫グロブリン、タンパク質、ペプチド、小分子、ナノ粒子、または核酸を含む。
【0022】
幾つかの実施形態において、標的部分は、抗体またはその機能性フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（ベリムマブ）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、トレメリムマブ、ニボルマブ、ダセツズマブ、ウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ランブロリズマブ（Ｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、およびブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）からなる群から選択される。
【0023】
幾つかの実施形態において、標的部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、単一ドメイン抗体、ＴおよびＡｂｓ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄｓ－ｓｃＦｖ、Ｆｄ、線状抗体、ミニボディ、二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、二重特異的抗体フラグメント、バイボディ（ｂｉｂｏｄｙ）、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）、ｓｃ－二特異性抗体、カッパ（ラムダ）体、ＢｉＴＥ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＳＩＰ、ＳＭＩＰ、ＤＡＲＴ、または１つ以上のＣＤＲを含む抗体類縁体を含む。
【0024】
幾つかの実施形態において、標的部分は、ＶＥＧＦＲのＡＴＷＬＰＰＲポリペプチド、トロンボスポンジン－１模倣体、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣＧ（環状）ポリペプチド、ＳＣＨ２２１１５３フラグメント、ＮＣＮＧＲＣ（環状）ポリペプチド、ＣＴＴＨＷＧＦＴＬＣポリペプチド、ＣＧＮＫＲＴＲＧＣポリペプチド（ＬｙＰ－１）、オクトレオチド、バプレオチド、ランレオチド、Ｃ－３９４０ポリペプチド、デカペプチル、ルプロン、ゾラデックス、またはセトロレリクスを含む。
【0025】
幾つかの実施形態において、標的部分は、葉酸またはその誘導体を含む。
【0026】
幾つかの実施形態において、標的部分は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、４－１ＢＢ、ＬＡＧ３、表面リガンドアンフィレギュリンの一部の完全長、ベータセルリン、ＥＧＦ、エフリン、エピジェン（ｅｐｉｇｅｎ）、エピレギュリン、ＩＧＦ、ニューレグリン、ＴＧＦ、ＴＲＡＩＬ、またはＶＥＧＦの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または可溶形態を含む。
【0027】
幾つかの実施形態において、標的部分はナノ粒子を含む。
【0028】
幾つかの実施形態において、標的部分はアプタマーを含む。
【0029】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、（ａ）一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、好ましくはＯＲＮ０２、ＯＲＮ０６、ｓｓポリ（Ｕ）、ｓｓＲＮＡ４０、ｓｓＲＮＡ４１、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、もしくはポリ（ｄＴ）、または（ｂ）トール様受容体リガンド（ＴＬＲＬ）類縁体、好ましくはＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ２６４、ＣＬ３０７、ガーディキモド、ロキソリビン、イミキモド、もしくはレシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）を含む。
【0030】
幾つかの実施形態において、リンカーは、ヒドラジン基、ポリペプチド、ジスルフィド基、およびチオエーテル基からなる群から選択される。
【0031】
幾つかの実施形態において、リンカーは酵素切断性である。幾つかの実施形態において、リンカーは酵素切断性ではない。
【0032】
幾つかの実施形態において、本発明は、本明細書において提供される化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物を提供する。
【0033】
幾つかの実施形態において、薬学的組成物は第２の化学療法剤を更に含む。幾つかの実施形態において、化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、イマタニブ（ｉｍａｔａｎｉｂ）、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン（ｍｉｎｏｓｉｎｅ）、ゲムシタビン、シタラビン、５－フルオロウラシル、メトトレキセート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ゲムシタビン、エポチロン、ビノレルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンＤ、ミトキサントロン、アクリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、またはイダルビシンからなる群から選択される。
【0034】
なお別の態様において、本発明は、疾患状態の治療の必要な対象において疾患状態を治療する方法であって、治療有効量の本明細書において提供される化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を、対象に投与することを含む方法を提供する。
【0035】
幾つかの実施形態において、疾患状態は腫瘍である。幾つかの実施形態において、疾患状態は異常細胞増殖を含む。幾つかの実施形態において、異常細胞増殖は前癌性病変を含む。幾つかの実施形態において、異常増殖は癌細胞のものである。
【0036】
幾つかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、濾胞性リンパ腫、胃癌、神経膠芽腫、頭頸部癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、および腎細胞癌からなる群から選択される。
【0037】
更なる態様において、本発明は、式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有する化合物であって、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数であり、
但し、ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは治療剤を含まない、化合物を提供する。
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数であり、
但し、ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは治療剤を含まない、化合物を提供する。
【0038】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ＴＬＲリガンド、Ｎｏｄ様受容体リガンド、ＲＩＧ様受容体リガンド、ＣＬＲリガンド、ＣＤＳリガンド、またはインフラマソーム誘発剤を含む。
【0039】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ７／ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＴＬＲ１０からなる群から選択される１つ以上のＴＬＲのリガンド（トール様受容体リガンド、ＴＬＲＬ）を含む。
【0040】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、
（ｉ）（ａ）加熱死菌生成物、好ましくはＨＫＡＬ、ＨＫＥＢ、ＨＫＨＰ、ＨＫＬＭ、ＨＫＬＰ、ＨＫＬＲ、ＨＫＭＦ、ＨＫＰＡ、ＨＫＰＧ、またはＨＫＳＡ、ＨＫＳＰ、および（ｂ）細胞壁成分生成物、好ましくはＬＡＭ、ＬＭ、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ＬＴＡ、ＰＧＮ、ＦＳＬ、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、またはザイモサンからなる群から選択されるＴＬＲ２のリガンド、
（ｉｉ）ポリ（Ｉ：Ｃ）およびポリ（Ａ：Ｕ）からなる群から選択されるＴＬＲ３のリガンド、
（ｉｉｉ）ＬＰＳおよびＭＰＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ４のリガンド、
（ｉｖ）ＦＬＡおよびフラゲリンからなる群から選択されるＴＬＲ５のリガンド、
（ｖ）ＯＲＮ０２、ＯＲＮ０６、ｓｓポリ（Ｕ）、ｓｓＲＮＡ４０、ｓｓＲＮＡ４１、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、ポリ（ｄＴ）、ＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ２６４、ＣＬ３０７、ガーディキモド、ロキソリビン、イミキモド、およびレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）からなる群から選択されるＴＬＲ７／８のリガンド、
（ｖｉ）ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１８２６、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２００７、ＯＤＮ２２１６、ＯＤＮ２３３６、ＯＤＮ２３９５、およびＯＤＮ Ｍ３６２からなる群から選択されるＴＬＲ９のリガンド、
（ｖｉｉ）ＴＬＲ１０のリガンド、
（ｖｉｉｉ）ＮＯＤ１作動薬（Ｃ１２－ｉＥ－ＤＡＰ、ｉＥ－ＤＡＰ、Ｔｒｉ－ＤＡＰ）、ＮＯＤ２作動薬（Ｌ１８－ＭＤＰ、ＭＤＰ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ－Ｄ－ＡＳＮ、ムラブチド（Ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ）、Ｎ－グリコリル－ＭＤＰ）、およびＮＯＤ１／ＮＯＤ２作動薬（Ｍ－ＴｒｉＤＡＰ、ＰＧＮ）からなる群から選択されるヌクレオチドオリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様のリガンド、
（ｉｘ）５′ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、およびポリ（Ｉ：Ｃ）からなる群から選択される１つ以上のＲＩＧ－Ｉ－様受容体（ＲＬＲ）のリガンド、
（ｘ）カードランＡＬ、ＨＫＣＡ、ＨＫＳＣ、ＷＧＰ、ザイモサン、およびトレハロース－６，６－ジベヘン酸塩からなる群から選択される１つ以上のＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）のリガンド、
（ｘｉ）ｃ－ＧＭＰ、ｃ－Ｇ－ＡＭＰ、ｃ－Ｇ－ＧＭＰ、ｃ－Ａ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＵＭＰ、ＨＳＶ－６０、ＩＳＤ、ｐＣｐＧ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、ポリ（ｄＡ）、およびＶＡＣＶ－７０からなる群から選択される１つ以上の細胞質ＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）のリガンド、あるいは
（ｘｉｉ）（ａ）ＮＬＲＰ３インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはミョウバン結晶、ＡＴＰ、ＣＰＰＤ結晶、ヘルモゾイン（Ｈｅｒｍｏｚｏｉｎ）、ＭＳＵ結晶、ナノＳｉＯ２、ナイジェリシン、および（ｂ）ＡＩＭ２インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはポリ（ｄＡ：ｄＴ）からなる群から選択されるインフラマソーム誘発剤、
を含む。
（ｉ）（ａ）加熱死菌生成物、好ましくはＨＫＡＬ、ＨＫＥＢ、ＨＫＨＰ、ＨＫＬＭ、ＨＫＬＰ、ＨＫＬＲ、ＨＫＭＦ、ＨＫＰＡ、ＨＫＰＧ、またはＨＫＳＡ、ＨＫＳＰ、および（ｂ）細胞壁成分生成物、好ましくはＬＡＭ、ＬＭ、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ＬＴＡ、ＰＧＮ、ＦＳＬ、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、またはザイモサンからなる群から選択されるＴＬＲ２のリガンド、
（ｉｉ）ポリ（Ｉ：Ｃ）およびポリ（Ａ：Ｕ）からなる群から選択されるＴＬＲ３のリガンド、
（ｉｉｉ）ＬＰＳおよびＭＰＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ４のリガンド、
（ｉｖ）ＦＬＡおよびフラゲリンからなる群から選択されるＴＬＲ５のリガンド、
（ｖ）ＯＲＮ０２、ＯＲＮ０６、ｓｓポリ（Ｕ）、ｓｓＲＮＡ４０、ｓｓＲＮＡ４１、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、ポリ（ｄＴ）、ＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ２６４、ＣＬ３０７、ガーディキモド、ロキソリビン、イミキモド、およびレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）からなる群から選択されるＴＬＲ７／８のリガンド、
（ｖｉ）ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１８２６、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２００７、ＯＤＮ２２１６、ＯＤＮ２３３６、ＯＤＮ２３９５、およびＯＤＮ Ｍ３６２からなる群から選択されるＴＬＲ９のリガンド、
（ｖｉｉ）ＴＬＲ１０のリガンド、
（ｖｉｉｉ）ＮＯＤ１作動薬（Ｃ１２－ｉＥ－ＤＡＰ、ｉＥ－ＤＡＰ、Ｔｒｉ－ＤＡＰ）、ＮＯＤ２作動薬（Ｌ１８－ＭＤＰ、ＭＤＰ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ－Ｄ－ＡＳＮ、ムラブチド（Ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ）、Ｎ－グリコリル－ＭＤＰ）、およびＮＯＤ１／ＮＯＤ２作動薬（Ｍ－ＴｒｉＤＡＰ、ＰＧＮ）からなる群から選択されるヌクレオチドオリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様のリガンド、
（ｉｘ）５′ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、およびポリ（Ｉ：Ｃ）からなる群から選択される１つ以上のＲＩＧ－Ｉ－様受容体（ＲＬＲ）のリガンド、
（ｘ）カードランＡＬ、ＨＫＣＡ、ＨＫＳＣ、ＷＧＰ、ザイモサン、およびトレハロース－６，６－ジベヘン酸塩からなる群から選択される１つ以上のＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）のリガンド、
（ｘｉ）ｃ－ＧＭＰ、ｃ－Ｇ－ＡＭＰ、ｃ－Ｇ－ＧＭＰ、ｃ－Ａ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＵＭＰ、ＨＳＶ－６０、ＩＳＤ、ｐＣｐＧ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、ポリ（ｄＡ）、およびＶＡＣＶ－７０からなる群から選択される１つ以上の細胞質ＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）のリガンド、あるいは
（ｘｉｉ）（ａ）ＮＬＲＰ３インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはミョウバン結晶、ＡＴＰ、ＣＰＰＤ結晶、ヘルモゾイン（Ｈｅｒｍｏｚｏｉｎ）、ＭＳＵ結晶、ナノＳｉＯ２、ナイジェリシン、および（ｂ）ＡＩＭ２インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはポリ（ｄＡ：ｄＴ）からなる群から選択されるインフラマソーム誘発剤、
を含む。
【0041】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ＩＭＯ２１３４、ＩＭＯ２０５、ＭＧＮ－１７０３、ＭＧＮ－１７０４、アガトリモド（Ａｇａｔｏｌｉｍｏｄ）、ＳＤ－１０１、ＱＡＸ－９３５、ＤＩＭＳ０１５０、ポリネクスクアットロ（Ｐｏｌｌｉｎｅｘ Ｑｕａｔｔｒｏ）、ＯＭ－１７４、エリトラン、ＴＡＫ－２４２、ＮＩ－０１０１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１８、ＩＬ－７、またはＩＬ－１５を含む。
【0042】
参照による組み込み
本明細書に記述された全ての刊行物、特許、および特許出願は、まるでそれぞれ個別の刊行物、特許、および特許出願が特定的および個別に参照により組み込まれるように示されているかのように、同じ程度で、参照により組み込まれる。
本明細書に記述された全ての刊行物、特許、および特許出願は、まるでそれぞれ個別の刊行物、特許、および特許出願が特定的および個別に参照により組み込まれるように示されているかのように、同じ程度で、参照により組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【0043】
【図1】複合化合物の特性を描写する。トラスツズマブＭＣ－ｖｃ－レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）およびトラスツズマブ－レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）複合体の、Ｈｅｒ２発現Ｌ細胞への結合を、ＦＡＣＳ分析による決定によって、非複合トラスツズマブ（基準として）、対照ヒトＩｇＧ、および無関係のヒトＩｇＧ１抗体と比較する。
【図2】トラスツズマブ、トラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬ、およびトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬ複合体のインビトロ抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）分析を描写する。ＰＢＭＣ（効果器細胞）をＳＫＢＲ３細胞（標的細胞）と共に、対照ヒトＩｇＧ１、トラスツズマブ、またはトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬ複合体を異なる濃度で含有する９６ウエルプレートに（標的／効果器比１／６０）１７時間加えた。全ての実験を二重に実施した。分析は、陰性ＳＫＢＲ３個体群の決定に基づいた。死細胞をＬＤＨにより染色した。
【図3A】濃縮前後のＤＣのパーセンテージを描写する。上側の２つのプロットにおける数字は、系統の枯渇前後の総細胞のＤＣ（ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｌｉｎ－）のパーセンテージを表す。下側のプロットにおける数字は、系統の枯渇前後の総ＤＣのｍＤＣ（ＣＤ１１Ｃ＋ＣＤ１２３－）およびｐＤＣ（ＣＤ１２３＋ＣＤ１１Ｃ－）のパーセンテージを表す。
【図3B】精製されたヒトＤＣのサイトカイン産生の分析を描写する。精製されたヒトＤＣを９６ウエルプレートに播種し、同種未処理（培地）または処理済みの異なる濃度のＴＬＲＬ、またはトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬと共に、３７℃のインキュベーターにおいて直接２０～２２時間培養した。別の実験において、増加濃度のセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびセツキシマブＭＣ－ＴＬＲＬを、ヒトＤＣによる処理のために提供した。上澄みを収集し、ヒトＩＦＮ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－１２（ｐ７０）、およびＴＮＦ－αをＥＬＩＳＡにより分析した。データは三連培養物の平均±ＳＤで提示され、３人の健康な提供者の２人からの独立した実験の代表値である。
【図3C】精製されたヒトＤＣのサイトカイン産生の分析を描写する。精製されたヒトＤＣを９６ウエルプレートに播種し、同種未処理（培地）または処理済みの異なる濃度のＴＬＲＬ、またはトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬと共に、３７℃のインキュベーターにおいて直接２０～２２時間培養した。別の実験において、増加濃度のセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびセツキシマブＭＣ－ＴＬＲＬを、ヒトＤＣによる処理のために提供した。上澄みを収集し、ヒトＩＦＮ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－１２（ｐ７０）、およびＴＮＦ－αをＥＬＩＳＡにより分析した。データは三連培養物の平均±ＳＤで提示され、３人の健康な提供者の２人からの独立した実験の代表値である。
【図3D】精製されたヒトＤＣのサイトカイン産生の分析を描写する。精製されたヒトＤＣを９６ウエルプレートに播種し、同種未処理（培地）または処理済みの異なる濃度のＴＬＲＬ、またはトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬと共に、３７℃のインキュベーターにおいて直接２０～２２時間培養した。別の実験において、増加濃度のセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびセツキシマブＭＣ－ＴＬＲＬを、ヒトＤＣによる処理のために提供した。上澄みを収集し、ヒトＩＦＮ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－１２（ｐ７０）、およびＴＮＦ－αをＥＬＩＳＡにより分析した。データは三連培養物の平均±ＳＤで提示され、３人の健康な提供者の２人からの独立した実験の代表値である。
【図4A】ＰＤＸ胃癌モデルにおけるトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬの治療効能を描写する。皮下に患者由来胃腫瘍を担持する、ＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕヌードマウスの６～８週齢の雌マウスに、１０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬ、トラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬ、もしくは非複合トラスツズマブ、または生理食塩水を静脈内投与して処理した（１群あたり１２匹のマウス）。処理は、４５日間にわたって毎週実施した。治療は、腫瘍が平均して１７０ｍｍ３のサイズに達したときに開始した。図４Ａ：データは、平均腫瘍体積（平均±ＳＤ）を表す。腫瘍増殖曲線は、腫瘍が２０００ｍｍ３のサイズに達したときに停止した。
【図4B】ＰＤＸ胃癌モデルにおけるトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬの治療効能を描写する。皮下に患者由来胃腫瘍を担持する、ＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕヌードマウスの６～８週齢の雌マウスに、１０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬ、トラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬ、もしくは非複合トラスツズマブ、または生理食塩水を静脈内投与して処理した（１群あたり１２匹のマウス）。処理は、４５日間にわたって毎週実施した。治療は、腫瘍が平均して１７０ｍｍ３のサイズに達したときに開始した。図４Ｂ：治療の間および後でのマウスの体重の変動。検出可能な体重減少は観察されなかった。
【図4C】ＰＤＸ胃癌モデルにおけるトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬおよびトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬの治療効能を描写する。皮下に患者由来胃腫瘍を担持する、ＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕヌードマウスの６～８週齢の雌マウスに、１０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬ、トラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬ、もしくは非複合トラスツズマブ、または生理食塩水を静脈内投与して処理した（１群あたり１２匹のマウス）。処理は、４５日間にわたって毎週実施した。治療は、腫瘍が平均して１７０ｍｍ３のサイズに達したときに開始した。図４Ｃ：処理および対照群の生存曲線、トラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬまたは非複合トラスツズマブを受けたマウスでは有意な延長。
【図5A】ヌード／Ｈ１６５０ヒト肺癌モデルにおけるセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬの治療効能を描写する。皮下にＨ１６５０肺癌細胞を担持する、ＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕヌードマウスの６～８週齢の雌マウスに、１０ｍｇ／ｋｇのセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬもしくは非複合セツキシマブ、または生理食塩水を静脈内投与して処理した（１群あたり１２匹のマウス）。処理は、４５日間にわたって毎週実施した。治療は、腫瘍が平均して１７０ｍｍ３のサイズに達したときに開始した。データは、平均腫瘍体積（平均±ＳＤ）を表す。腫瘍増殖曲線は、腫瘍が２０００ｍｍ３のサイズに達したときに停止した。図５Ａ：ヒト肺癌モデルにおけるセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬの治療効能。
【図5B】ヌード／Ｈ１６５０ヒト肺癌モデルにおけるセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬの治療効能を描写する。皮下にＨ１６５０肺癌細胞を担持する、ＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕヌードマウスの６～８週齢の雌マウスに、１０ｍｇ／ｋｇのセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬもしくは非複合セツキシマブ、または生理食塩水を静脈内投与して処理した（１群あたり１２匹のマウス）。処理は、４５日間にわたって毎週実施した。治療は、腫瘍が平均して１７０ｍｍ３のサイズに達したときに開始した。データは、平均腫瘍体積（平均±ＳＤ）を表す。腫瘍増殖曲線は、腫瘍が２０００ｍｍ３のサイズに達したときに停止した。図５Ｂ：治療の間および後でのマウスの体重の変動。検出可能な体重減少は観察されなかった。
【発明を実施するための形態】
【0044】
本発明の新規特徴は、添付の特許請求の範囲において特定的に記載される。本発明の特徴および利点のより良好な理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を記載する以下の発明を実施するための形態および添付図面を参照することによって得られる。
【0045】
本発明の幾つかの態様が、例示のために適用例を参照しながら下記に記載されている。多数の特定の詳細、関係性、および方法が、本発明の完全な理解を提供するために記載されていることを、理解するべきである。しかし当業者は、本発明が１つ以上の特定の詳細を用いることなく、または他の方法を用いて実施され得ることを、容易に認識する。本発明は、作用または事象の例示された順番に限定されず、幾つかの作用は、他の作用または事象と異なる順番で、および／または同時に生じ得る。
【0046】
更に、全ての例示された作用または事象が、本発明の方法論の実施を必要とするわけではない。
【0047】
本明細書において使用される用語法は、特定の実施形態を記載するだけの目的であり、本発明を限定することを意図しない。本明細書で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、特に文脈から別段に明白に示されない限り、複数形を含むことも意図される。更に、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」、またはこれらの変形が、発明を実施するための形態および／または特許請求の範囲のいずれかに使用される程度において、そのような用語は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同じ意味で包括的であることが意図される。
【0048】
用語「約」または「およそ」は、当業者により決定される特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味し、これは、部分的には、値がどのように測定または決定されたか、すなわち測定系の限界によって決まる。例えば「約」は、当該技術の実践にしたがって、１以内または１を越える標準偏差を意味することができる。あるいは、「約」は、所定の値の２０％まで、好ましくは１０％まで、より好ましくは５％まで、より好ましくは更に１％までの範囲を意味することができる。あるいは、特に生物系または過程に関して、用語は、値の桁数の範囲内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味することができる。特定の値が出願および特許請求の範囲に記載される場合、特に記述のない限り、特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味する用語「約」が、想定されるべきである。
【0049】
１．定義および略語
特に定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、一般に、本発明が属する当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。一般に、本明細書、ならびに細胞培養、分子遺伝子技術、有機化学、および核酸化学とハイブリッド形成における実験室手順に使用される命名法は、当該技術において周知であり、一般的に用いられているものである。標準的な技術が、核酸およびペプチド合成に使用される。技術および手順は、当該技術における従来の方法、およびこの文書の全体にわたって提供されている多様な一般的な参照に従って一般に実施される。本明細書、ならびに分析化学および下記に記載されている有機合成における実験室手順に使用される命名法は、当該技術において周知であり、一般的に用いられているものである。標準的な技術またはそれらの変更が、化学合成および化学分析に使用される。
特に定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、一般に、本発明が属する当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。一般に、本明細書、ならびに細胞培養、分子遺伝子技術、有機化学、および核酸化学とハイブリッド形成における実験室手順に使用される命名法は、当該技術において周知であり、一般的に用いられているものである。標準的な技術が、核酸およびペプチド合成に使用される。技術および手順は、当該技術における従来の方法、およびこの文書の全体にわたって提供されている多様な一般的な参照に従って一般に実施される。本明細書、ならびに分析化学および下記に記載されている有機合成における実験室手順に使用される命名法は、当該技術において周知であり、一般的に用いられているものである。標準的な技術またはそれらの変更が、化学合成および化学分析に使用される。
【0050】
用語「アルキル」は、それ自体または別の置換基の一部として、特に記述のない限り、直鎖もしくは分岐鎖もしくは環状の炭化水素ラジカル、またはこれらの組み合わせを意味し、これらは、完全飽和、単または多不飽和であり得、指定された数の炭素原子を有する（すなわち、Ｃ１～Ｃ１０は１～１０個の炭素を意味する）二価および多価ラジカルを含むことができる。飽和炭化水素ラジカルの例には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチルのような基、例えばｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチルの相同体および異性体などが挙げられるが、これらに限定されない。不飽和アルキル基は１つ以上の二重結合または三重結合を有する基である。不飽和アルキル基の例としては、ビニル、２－プロペニル、クロチル、２－イソペンテニル、２－（ブタジエニル）、２，４－ペンタジエニル、３－（１，４－ペンタジエニル）、エチニル、１－および３－プロピニル、３－ブチニル、ならびにより高次のホモログおよび異性体が挙げられるが、これらに限定されない。用語「アルキル」は、特に示されない限り、「ヘテロアルキル」のように、下記により詳細に定義されるアルキルの誘導体を含むことも意図される。炭化水素基に限定されるアルキル基は、「ホモアルキル」と呼ばれる。
【0051】
用語「アルキレン」は、それ自体または別の置換基の一部として、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－により例示されるが、これに限定されないアルカンから誘導される二価ラジカルを意味し、下記に「ヘテロアルキレン」と記載される基を更に含む。典型的には、アルキル（またはアルキレン）基は、１～２４個の炭素原子を有し、１０個以下の炭素原子を有するこれらの基が本発明に好ましい。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、一般に８個以下の炭素原子を有する短鎖アルキルまたはアルキレン基である。
【0052】
用語「アルコキシ」、「アルキルアミノ」、および「アルキルチオ」（またはチオアルコキシ）は、従来の意味で使用され、酸素原子、アミノ基、または硫黄原子を介して分子の残りの部分にそれぞれ結合しているアルキル基を意味する。
【0053】
用語「ヘテロアルキル」は、それ自体または別の用語と組み合わされて、特に記述のない限り、記述された数の炭素原子、ならびにＯ、Ｎ、Ｓｉ、およびＳからなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子から構成され、かつ窒素および硫黄原子が場合により酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子が、場合により四級化されていてもよい、安定した直鎖もしくは分岐鎖もしくは環状炭化水素ラジカル、またはこれらの組み合わせを意味する。ヘテロ原子（複数可）のＯ、Ｎ、およびＳ、およびＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置、またはアルキル基が分子の残りの部分に結合している位置に配置され得る。例には、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ３、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２、－Ｓ（Ｏ）－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２－ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｏ－ＣＨ３、－Ｓｉ（ＣＨ３）３、－ＣＨ２－ＣＨ＝Ｎ－ＯＣＨ３、および－ＣＨ＝ＣＨ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。２個までのヘテロ原子は、例えば－ＣＨ２－ＮＨ－ＯＣＨ３および－ＣＨ２－Ｏ－Ｓｉ（ＣＨ３）３のように連続的であり得る。同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、それ自体または別の置換基の一部として、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－および－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ２－により例示されるが、これらに限定されないヘテロアルキルから誘導される二価ラジカルを意味する。ヘテロアルキレン基に対して、ヘテロ原子は、鎖末端のいずれか、または両方を占有することもできる（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。またさらに、アルキレンおよびヘテロアルキレン連結基に対して、連結基の向きは、連結基の式が記載される方向により意味されない。例えば、式：－Ｃ（Ｏ）２Ｒ′－は、－Ｃ（Ｏ）２Ｒ′－および－Ｒ′Ｃ（Ｏ）２－の両方を表す。
【0054】
一般に、「アシル置換基」も、上記に記載された基から選択される。本明細書で使用されるとき、用語「アシル置換基」は、結合して、本発明の化合物の多環式核に直接的または間接的に結合したカルボニル炭素の原子価を満たす基を意味する。
【0055】
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、それら自体または他の用語と組み合わされて、特に記述のない限り、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環状型を表す。加えて、ヘテロシクロアルキルに対して、ヘテロ原子は、そのヘテロ環が分子の残りの部分に付加される位置を占有することができる。シクロアルキルの例には、シクロペンチル、シクロヘキシル、１－シクロへキセニル、３－シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクロアルキルの例には、１－（１，２，５，６－テトラヒドロピリジル）、１－ピペリジニル、２－ピペリジニル、３－ピペリジニル、４－モルホリニル、３－モルホリニル、テトラヒドロフラン－２－イル、テトラヒドロフラン－３－イル、テトラヒドロチエン－２－イル、テトラヒドロチエン－３－イル、１－ピペラジニル、２－ピペラジニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0056】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、これら自体または別の置換基の一部として、特に記述のない限り、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。加えて、「ハロアルキル」のような用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むことが意図される。例えば、用語「ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル」は、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、４－クロロブチル、３－ブロモプロピルなどを含むが、これらに限定されないことが意図される。
【0057】
用語「アリール」は、特に記述のない限り、多不飽和芳香族炭化水素置換基を意味し、これは単環または多環式の環（好ましくは、１～３つの環）であり得、これらは共に縮合している、または共有結合している。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１～４個のヘテロ原子を含有するアリール基（または環）を意味し、ここで窒素および硫黄原子は、場合により酸化されており、窒素原子(複数可)は、場合により四級化されている。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を介して、分子の残りの部分に結合することができる。アリールおよびヘテロアリール基の例としては、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、４－ビフェニル、１－ピロリル、２－ピロリル、３－ピロリル、３－ピラゾリル、２－イミダゾリル、４－イミダゾリル、ピラジニル、２－オキサゾリル、４－オキサゾリル、２－フェニル－４－オキサゾリル、５－オキサゾリル、３－イソキサゾリル、４－イソキサゾリル、５－イソキサゾリル、２－チアゾリル、４－チアゾリル、５－チアゾリル、２－フリル、３－フリル、２－チエニル、３－チエニル、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、２－ピリミジル、４－ピリミジル、５－ベンゾチアゾリル、プリニル、２－ベンズイミダゾリル、５－インドリル、１－イソキノリル、５－イソキノリル、２－キノキサリニル、５－キノキサリニル、３－キノリル、および６－キノリルが挙げられるが、これらに限定されない。上記に示されたアリールおよびヘテロアリール環系のそれぞれにおける置換基は、下記に記載されている許容される置換基の群から選択される。
【0058】
簡潔さのため、用語「アリール」は、他の用語と組み合わせて使用されたとき（例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）、上記に定義されたアリールおよびヘテロアリール環の両方を含む。このように、用語「アリールアルキル」は、炭素原子（例えば、メチレン基）が例えば酸素原子に代えられているアルキル基（例えば、フェノキシメチル、２－ピリジルオキシメチル、３－（１－ナフチルオキシ）プロピルなど）を含むアルキル基にアリール基が結合しているラジカル（例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなど）を含むことが意図される。
【0059】
上記の用語（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」、および「ヘテロアリール」）のそれぞれは、示されたラジカルの置換および非置換形態の両方を含む。それぞれの種類のラジカルの好ましい置換基は、下記に提供されている。
【0060】
アルキルおよびヘテロアルキルラジカル（多くの場合にアルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルと呼ばれている基を含む）の置換基は、一般に、それぞれ「アルキル置換基」および「ヘテロアルキル置換基」と呼ばれており、これらは、－ＯＲ′、＝Ｏ、＝ＮＲ′、＝Ｎ－ＯＲ′、－ＮＲ′Ｒ″、－ＳＲ′、－ハロゲン、－ＳｉＲ′Ｒ″Ｒ'''、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ′、－Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＣＯ２Ｒ′、－ＣＯＮＲ′Ｒ″、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ′Ｒ″、－ＮＲ″Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＮＲ′－Ｃ（Ｏ）ＮＲ″Ｒ'''、－ＮＲ″Ｃ（Ｏ）２Ｒ′、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ′Ｒ″Ｒ'''）＝ＮＲ''''、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ′Ｒ″）＝ＮＲ'''、－Ｓ（Ｏ）Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ′Ｒ″、－ＮＲＳＯ２Ｒ′、－ＣＮ、および－ＮＯ２から選択されるが、これらに限定されない１つ以上の様々な基であり得、ここで数はゼロから（２ｍ′＋１）の範囲であり、ｍ′は、そのようなラジカルの炭素原子の総数である。Ｒ′、Ｒ″、Ｒ'''、およびＲ''''は、それぞれ好ましくは独立して、水素、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アリール、例えば１～３つのハロゲンで置換されているアリール、置換もしくは非置換アルキル、アルコキシ、もしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基を意味する。本発明の化合物が１つを越えるＲ基を含む場合、例えば、それぞれのＲ基は、１つを越えるこれらの基が存在する場合、それぞれＲ′、Ｒ″、Ｒ'''、およびＲ''''基として独立して選択される。Ｒ′およびＲ″が同じ窒素原子に結合している場合、これらは窒素原子と組み合わされて、５員、６員、または７員環を形成することができる。例えば、－ＮＲ′Ｒ″は１－ピロリジニルおよび４－モルホリニルを含むが、これらに限定されないことが意図される。置換基についての上記の考察から、当業者は、用語「アルキル」が、ハロアルキル（例えば、－ＣＦ３および－ＣＨ２ＣＦ３）、ならびにアシル（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、－Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３など）のように、水素基以外の基に結合している炭素原子を含む基を含むことが意図されることを理解する。
【0061】
アルキルラジカルに対して記載された置換基と同様に、アリール置換基およびヘテロアリール置換基は、一般に、それぞれ「アリール置換基」および「ヘテロアリール置換基」と呼ばれ、様々であり、例えばハロゲン、－ＯＲ′、＝Ｏ、＝ＮＲ′、＝Ｎ－ＯＲ′、－ＮＲ′Ｒ″、－ＳＲ′、－ハロゲン、－ＳｉＲ′Ｒ″Ｒ'''、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ′、－Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＣＯ２Ｒ′、－ＣＯＮＲ′Ｒ″、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ′Ｒ″、－ＮＲ″Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＮＲ′－Ｃ（Ｏ）ＮＲ″Ｒ'''、－ＮＲ″Ｃ（Ｏ）２Ｒ′、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ′Ｒ″）＝ＮＲ'''、－Ｓ（Ｏ）Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ′Ｒ″、－ＮＲＳＯ２Ｒ′、－ＣＮおよび－ＮＯ２、－Ｒ′、－Ｎ３、－ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１～Ｃ４）アルコキシおよびフルオロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキルから選択され、ここで数はゼロから芳香族環系の空原子価（ｏｐｅｎ ｖａｌｅｎｃｅ）の総数の範囲であり、Ｒ′、Ｒ″、Ｒ'''、およびＲ''''は、好ましくは、水素、（Ｃ１～Ｃ８）アルキルおよびヘテロアルキル、非置換アリールおよびヘテロアリール、（非置換アリール）－（Ｃ１～Ｃ４）アルキルおよび（非置換アリール）オキシ－（Ｃ１～Ｃ４）アルキルから独立して選択される。本発明の化合物が１つを越えるＲ基を含む場合、例えば、それぞれのＲ基は、１つを越えるこれらの基が存在する場合、それぞれＲ′、Ｒ″、Ｒ'''、およびＲ''''基として独立して選択される。
【0062】
アリールまたはヘテロアリール環の隣接原子におけるアリール置換基のうちの２つは、場合により、式：－Ｔ－Ｃ（Ｏ）－（ＣＲＲ′）ｑ－Ｕ－の置換基に代えられていてもよく、式中、ＴおよびＵは、独立して、－ＮＲ－、－Ｏ－、－ＣＲＲ′－、または単結合であり、ｑは、０～３の整数である。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接原子における置換基のうちの２つは、場合により、式：－Ａ－（ＣＨ２）ｒ－Ｂ－の置換基に代えられていてもよく、式中、ＡおよびＢは、独立して、－ＣＲＲ′－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ′－、または単結合であり、ｒは、１から４の整数である。そのように形成された新規環の単結合のうちの１つは、任意に二重結合と置き換えられることがある。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接原子における置換基のうちの２つは、場合により、式：－（ＣＲＲ′）ｓ－Ｘ－（ＣＲ″Ｒ'''）ｄ－の置換基に代えられていてもよく、式中、ｓおよびｄは、独立して０～３の整数であり、Ｘは、－Ｏ－、－ＮＲ′－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－、または－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ′－である。置換基Ｒ、Ｒ′、Ｒ″、およびＲ'''は、好ましくは、水素、または置換もしくは非置換（Ｃ１～Ｃ６）アルキルから独立して選択される。
【0063】
本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロ原子」は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）、およびケイ素（Ｓｉ）を含む。
【0064】
ＩＩ．組成物
一態様において、本発明は、式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有する化合物であって、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒト樹状細胞、ＮＫ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらの組み合わせを活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物を提供する。
一態様において、本発明は、式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有する化合物であって、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒト樹状細胞、ＮＫ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらの組み合わせを活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物を提供する。
【0065】
別の態様において、本発明は、式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有する化合物であって、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８に特異的に結合することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物を提供する。
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８に特異的に結合することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物を提供する。
【0066】
更なる態様において、本発明は、式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有する化合物であって、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数であり、但し、ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは治療剤を含まない、化合物を提供する。
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数であり、但し、ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは治療剤を含まない、化合物を提供する。
【0067】
Ａ． 標的部分
一般に、本発明の化合物は、標的部分を含む。
一般に、本発明の化合物は、標的部分を含む。
【0068】
本明細書において「標的部分（ＴＭ）」または「標的剤」とは、一般的に「標的」または「マーカー」と呼ばれる、標的分子、細胞、粒子、組織、または凝集体に特異的または選択的に結合する分子、複合体、または凝集体を意味し、これらは本明細書において更に詳細に考察される。
【0069】
幾つかの実施形態において、標的部分は、免疫グロブリン、タンパク質、ペプチド、小分子、ナノ粒子、または核酸を含む。
【0070】
抗体（例えば、キメラ、ヒト化、およびヒト）、受容体のリガンド、レクチン、および多糖類、ならびにある特定の酵素の基質のような例示的な標的剤が、当該技術において認識されており、本発明の実施において制限されることなく有用である。他の標的剤は、特定の分子認識モチーフを含まず、活性化部分に分子量を付加するナノ粒子、ポリ（エチレングリコール）のような巨大分子、多糖、およびポリアミノ酸を含む部類の化合物を含む。付加分子量は、活性化部分の薬物動態、例えば血清半減期に影響を与える。
【0071】
幾つかの実施形態において、標的部分は、抗体、抗体フラグメント、二重特異的抗体、または他の抗体に基づいた分子もしくは化合物である。しかし、標的部分の他の例は、当該技術において知られており、例えば、アプタマー、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、受容体結合リガンド、核酸、ビオチンアビジン結合対、結合ペプチド、またはタンパク質などを使用することができる。用語「標的部分」および「結合部分」は、本明細書において同義的に使用される。
【0072】
標的
本明細書において「標的」または「マーカー」とは、特定の標的部分に特異的に結合することができる任意の実体を意味する。幾つかの実施形態において、標的は、１つ以上の特定の細胞または組織型と特異的に関連する。幾つかの実施形態において、標的は、１つ以上の特定の疾患状態と特異的に関連する。幾つかの実施形態において、標的は、１つ以上の特定の発達段階と特異的に関連する。例えば、細胞型特異的マーカーは、典型的には、その細胞型において基準細胞個体群より少なくとも２倍大きなレベルで発現する。幾つかの実施形態において、細胞型特異的マーカーは、基準個体群における平均発現より少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも１，０００倍大きなレベルで存在する。細胞型特異的マーカーの検出または測定は、多くの、大部分の、または全ての他の細胞型から、目的の細胞型(単数)または細胞型（複数）を識別することを可能にし得る。幾つかの実施形態において、標的は、本明細書に記載されているように、タンパク質、炭水化物、脂質、および／または核酸を含むことができる。
本明細書において「標的」または「マーカー」とは、特定の標的部分に特異的に結合することができる任意の実体を意味する。幾つかの実施形態において、標的は、１つ以上の特定の細胞または組織型と特異的に関連する。幾つかの実施形態において、標的は、１つ以上の特定の疾患状態と特異的に関連する。幾つかの実施形態において、標的は、１つ以上の特定の発達段階と特異的に関連する。例えば、細胞型特異的マーカーは、典型的には、その細胞型において基準細胞個体群より少なくとも２倍大きなレベルで発現する。幾つかの実施形態において、細胞型特異的マーカーは、基準個体群における平均発現より少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも１，０００倍大きなレベルで存在する。細胞型特異的マーカーの検出または測定は、多くの、大部分の、または全ての他の細胞型から、目的の細胞型(単数)または細胞型（複数）を識別することを可能にし得る。幾つかの実施形態において、標的は、本明細書に記載されているように、タンパク質、炭水化物、脂質、および／または核酸を含むことができる。
【0073】
物質は、核酸標的部分に特異的に結合する場合、本明細書に記載されている目的において「標的化される」と考慮される。幾つかの実施形態において、核酸標的部分は、厳密な条件下で標的に特異的に結合する。標的部分を含む本発明の複合体または化合物は、標的部分が標的に特異的に結合し、それによって複合体または化合物組成物の全体を、特定の臓器、組織、細胞、細胞外マトリックス成分、および／または細胞内区画に送達する場合、「標的化される」とみなされる。
【0074】
ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、臓器、組織、細胞、細胞外マトリックス成分、および／または細胞内区画と関連する１つ以上の標的（例えば、抗原）に特異的に結合する標的部分を含む。幾つかの実施形態において、化合物は、特定の臓器または臓器系と関連する標的に特異的に結合する標的部分を含む。幾つかの実施形態において、本発明の化合物は、１つ以上の細胞内標的（例えば、オルガネラ、細胞内タンパク質）に特異的に結合する核標的部分を含む。幾つかの実施形態において、化合物は、罹患した臓器、組織、細胞、細胞外マトリックス成分、および／または細胞内区画と関連する標的に特異的に結合する標的部分を含む。幾つかの実施形態において、化合物は、特定の細胞型（例えば、内皮細胞、癌細胞、悪性細胞、前立腺癌細胞など）と関連する標的に特異的に結合する標的部分を含む。
【0075】
幾つかの実施形態において、本発明の化合物は、１つ以上の特定の組織型（例えば、肝組織対前立腺組織）に特異的な標的に結合する標的部分を含む。幾つかの実施形態において、本発明の化合物は、１つ以上の特定の細胞型（例えば、Ｔ細胞対Ｂ細胞）に特異的な標的に結合する標的部分を含む。幾つかの実施形態において、本発明の化合物は、１つ以上の特定の疾患状態（例えば、腫瘍細胞対健康な細胞）に特異的な標的に結合する標的部分を含む。幾つかの実施形態において、本発明の化合物は、１つ以上の特定の発達段階（例えば、幹細胞対分化細胞）に特異的な標的に結合する標的部分を含む。
【0076】
幾つかの実施形態において、標的は、１つまたは幾つかの細胞型と、１つもしくは幾つかの疾患と、および／または１つもしくは幾つかの発達段階と独占的または一次的に関連するマーカーであり得る。細胞型特異的マーカーは、典型的には、例えばほぼ等しい量の複数（例えば、５～１０またはそれ以上）の異なる組織もしくは臓器由来の細胞を含有する混合物からなり得る基準細胞個体群よりも、その細胞型において少なくとも２倍大きなレベルで発現する。幾つかの実施形態において、細胞型特異的マーカーは、基準個体群における平均発現より少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも１０００倍大きなレベルで存在する。細胞型特異的マーカーの検出または測定は、多くの、大部分の、または全ての他の細胞型から、目的の細胞型(単数)または細胞型（複数）を識別することを可能にし得る。
【0077】
幾つかの実施形態において、標的は、タンパク質、炭水化物、脂質、および／または核酸を含む。幾つかの実施形態において、標的は、腫瘍マーカー、インテグリン、細胞表面受容体、膜貫通タンパク質、細胞間タンパク質、イオンチャンネル、膜輸送体タンパク質、酵素、抗体、キメラタンパク質、糖タンパク質などのような、タンパク質および／またはその特徴的な部分を含む。幾つかの実施形態において、標的は、糖タンパク質、糖（例えば、単糖、二糖、多糖）、糖衣（すなわち、大部分の真核細胞の外側表面の炭水化物豊富辺縁帯）などのような、炭水化物および／またはその特徴的な部分を含む。幾つかの実施形態において、標的は、油、脂肪酸、グリセリド、ホルモン、ステロイド（すなわち、コレステロール、胆汁酸）、ビタミン（例えば、ビタミンＥ）、リン脂質、スフィンゴ脂質、リポタンパク質などのような脂質および／またはその特徴的な部分を含む。幾つかの実施形態において、標的は、ＤＮＡ核酸；ＲＮＡ核酸；修飾ＤＮＡ核酸；修飾ＲＮＡ核酸；ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ＤＮＡ、および修飾ＲＮＡの任意の組み合わせを含む核酸のような、核酸および／またはその特徴的な部分を含む。
【0078】
多数のマーカーが当該技術において知られている。典型的なマーカーには、細胞表面タンパク質、例えば受容体が含まれる。例示的な受容体の例には、トランスフェリン受容体、ＬＤＬ受容体、上皮増殖因子受容体ファミリーメンバー（例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、Ｈｅｒ４）または血管内皮増殖因子受容体のような増殖因子受容体、サイトカイン受容体、細胞接着分子、インテグリン、セレクチン、およびＣＤ分子が挙げられるが、これらに限定されない。マーカーは、悪性細胞に対して独占的または高量で存在する分子、例えば腫瘍抗原であり得る。
【0079】
腫瘍抗原
幾つかの実施形態において、標的部分は、非腫瘍細胞と比較して、腫瘍細胞に特異的または優先的に結合することができる。
幾つかの実施形態において、標的部分は、非腫瘍細胞と比較して、腫瘍細胞に特異的または優先的に結合することができる。
【0080】
標的部分の腫瘍細胞への結合は、当該技術に既知のアッセイを使用して測定することができる。
【0081】
幾つかの実施形態において、腫瘍細胞は、癌腫、肉腫、リンパ腫、骨髄腫、または中枢神経系癌のものである。
【0082】
幾つかの実施形態において、標的部分は、非腫瘍抗原と比較して、腫瘍抗原に特異的または優先的に結合することができる。
【0083】
本明細書において「特異的に結合する」または「優先的に結合する」は、２つの結合パートナー間の結合（例えば、標的部分とその結合パートナーとの間）が、２つの結合パートナーにとって選択的であり、不要または非特異的な相互作用と区別され得ることを意味する。例えば、特定の抗原決定基に結合する抗原結合部分の能力は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または、当業者に周知の他の技術、例えば、表面プラスモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅ機器により分析）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））および伝統的な結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかによって測定することができる。用語「抗［抗原］抗体」および「［抗原］に結合する抗体」は、抗体が抗原を標的にする診断および／または治療剤として有用であるように、十分な親和性を持って対応する抗原に結合することができる抗体を意味する。幾つかの実施形態において、無関係のタンパク質への抗［抗原］抗体の結合の程度が、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定して、抗原への抗体の結合が約１０％未満である。幾つかの実施形態において、［抗原］に結合する抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または＜０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。上記の定義は、抗原に結合する抗原結合部分にも適用可能であることが理解される。
【0084】
ある特定の実施形態において、標的は腫瘍マーカーである。幾つかの実施形態において、腫瘍マーカーは、正常な臓器、組織、および／または細胞に存在しない、腫瘍に存在する抗原である。幾つかの実施形態において、腫瘍マーカーは、正常な臓器、組織、および／または細胞よりも腫瘍において多く見られる抗原である。幾つかの実施形態において、腫瘍マーカーは、正常な細胞よりも悪性癌細胞において多く見られる抗原である。
【0085】
本明細書において「腫瘍抗原」とは、腫瘍細胞により産生される抗原性物質を意味し、すなわち、宿主において免疫応答を引き起こす。体内の正常なタンパク質は、自己反応性細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）および自己抗体産生Ｂリンパ球が、一次リンパ組織（ＢＭ）において「中枢的に」、二次リンパ組織（主にＴ細胞では胸腺であり、Ｂ細胞では脾臓／リンパ節である）において「末梢的」選別されるプロセスである自己寛容のために、抗原性ではない。このように、免疫系に曝露されない任意のタンパク質が、免疫応答を引き起こす。これには、免疫系から十分に隔絶されている正常なタンパク質、通常は極めて少量で産生されるタンパク質、通常はある特定の発達段階においてのみ産生されるタンパク質、または構造が突然変異に起因して修飾されるタンパク質が含まれ得る。
【0086】
幾つかの実施形態において、標的は、正常な組織および／または細胞に対して腫瘍組織および／または細胞に優先的に発現する。
【0087】
本発明の幾つかの実施形態において、マーカーは腫瘍マーカーである。マーカーは、非分裂細胞よりも分裂細胞において高いレベルで発現するポリペプチドであり得る。例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ－２としても知られている）は、ＥＧＦ受容体ファミリーのメンバーであり、乳癌に関連する腫瘍の細胞表面に発現する。別の例は、ナノ粒子をヌクレオリンに向かわせるのに適した標的剤であるＦ３として知られているペプチドである（Ｐｏｒｋｋａ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９９：７４４４；ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１６３：８７１）。ナノ粒子およびＡ１０アプタマー（ＰＳＭＡに特異的に結合する）を含む標的化粒子は、ドセタキセルを前立腺癌腫瘍に特異的および効果的に送達できたことが示されている。
【0088】
腫瘍細胞の生物学的挙動のシグナル伝達経路を特異的に干渉および調節する、これらの腫瘍標的を特異的に標的にする抗体または他の薬剤は、直接的に調節して、またはシグナル伝達経路を遮断して、腫瘍細胞の増殖を阻害する、またはアポトーシスを誘発する。現在まで、数十の標的薬剤が、固形腫瘍または血液学的悪性腫瘍の臨床研究および治療に対して承認されており、多数の標的化薬剤が血液学的悪性腫瘍のために存在する。
【0089】
幾つかの実施形態において、腫瘍抗原（または腫瘍標的）は、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、およびＣＤ１３７からなる群から選択される。
【0090】
幾つかの実施形態において、腫瘍抗原（または腫瘍標的）は、４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＡＧＳ－５、ＡＧＳ－１６、アンジオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ－０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児性抗原、ＣＴＬＡ４、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）、ＥＤ－Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、グルココルチコイド誘発性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαν、インテグリンανβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ルイスＹ抗原、メソテリン、ｃ－ＭＥＴ、ＭＮ炭酸脱水酵素ＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ネクチン－４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ、Ｘ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、シンデカン－１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、およびこれらの変異体からなる群から選択される。腫瘍抗原の変異体は、当該技術に既知の、および／または天然に生じる様々な突然変異体またはポリンポルミズム（ｐｏｌｙｍｐｏｒｍｉｓｍ）を包含する。
【0091】
抗体：
幾つかの実施形態において、標的部分は、抗体またはその機能性フラグメントを含む。
幾つかの実施形態において、標的部分は、抗体またはその機能性フラグメントを含む。
【0092】
本明細書において「免疫グロブリン」または「抗体」は、完全長（すなわち、天然に生じる、もしくは正常な免疫グロブリン遺伝子フラグメント組み換えプロセスにより形成される）免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ抗体）、または抗体フラグメントのような、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な（すなわち、特異的に結合する）部分を意味する。抗体または抗体フラグメントは、主張される主題の範囲内で複合され得る、そうでなければ誘導体化され得る。そのような抗体には、ＩｇＧｌ、ｌｇＧ２ａ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４（およびＩｇＧ４サブフォーム）、ならびにＩｇＡアイソフォームが含まれる。
【0093】
本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味で使用されており、所望の抗原結合活性を示し、かつＦｃ領域または免疫グロブリンのＦｃ領域に等しい領域を含む限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、および抗体フラグメントが含まれるが、これらに限定されない様々な抗体構造を包含する。用語「完全長抗体」、「未処理抗体」、および「全抗体」は、本明細書において交換可能に使用され、未変性抗体構造と実質的に類似した構造を有する、または本明細書に定義されているＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を意味する。
【0094】
本明細書において「未変性抗体」とは、様々な構造を有する天然に生じる免疫グロブリン分子を意味する。例えば、未変性ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。ＮからＣ末端まで、各重鎖は、可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）がその後に続く。同様に、ＮからＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインがその後に続く。抗体の軽鎖を、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの型のうちの１つに割り当てることができる。
【0095】
本明細書において「抗体フラグメント」とは、未処理抗体が結合する抗原に結合する未処理抗体の一部を含む未処理抗体以外の分子を意味する。抗体フラグメントの例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆａｂ′－ＳＨ、Ｆ（ａｂ′）２、二特異性抗体、線状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、および抗体フラグメントから形成される多特異的抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の抗体フラグメントの概説には、例えば、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）を参照すること。ｓｃＦｖフラグメントの概説には、例えば、Ｐｌｉｉｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照すること。また国際公開第９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号を参照すること。再利用受容体結合エピトープ残基を含み、かつ増加したインビボ半減期を有するＦａｂおよびＦ（ａｂ′）２フラグメントの考察には、米国特許第５，８６９，０４６号を参照すること。二特異性抗体は、二価または二重特異的であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６４４４－６４４８（１９９３）を参照すること。また三特異性抗体（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）および四特性抗体（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）も、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む抗体フラグメントである。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ， Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照すること）。抗体フラグメントは、本明細書に記載されているように、未処理抗体のタンパク質分解性消化、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生が含まれるが、これらに限定されない種々の技術により産生されることができる。
【0096】
本明細書において「抗原結合ドメイン」は、抗原の一部または全てに特異的に結合し、かつ相補的である領域を含む抗体の部分を意味する。抗原結合ドメインは、例えば、１つ以上の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）により提供され得る。特に、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【0097】
本明細書において「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを意味する。未変性抗体の重鎖および軽鎖（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）の可変ドメインは、一般に同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）および３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照すること。単一のＶＨまたはＶＬドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。
【0098】
本明細書において「超可変領域」または「ＨＶＲ」とは、配列において超可変である、および／または構造的に確定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの各領域を意味する。一般に、未変性４鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、それは、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）における３つのＨＶＲ、およびＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）における３つのＨＶＲである。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ由来の、および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、配列可変性が一番高いものである、および／または抗原認識に関与する。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは、一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。超可変領域（ＨＶＲ）は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とも呼ばれ、これらの用語は、抗原結合領域を形成する可変領域の部分の参照に際し、本明細書において交換可能に使用される。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ． Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８３）およびＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７（１９８７）により記載されており、定義には、互いに比較したとき、アミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。いずれにしても、抗体またはその変異体のＣＤＲを参照するいずれかの定義は、本明細書において定義および使用される用語の範囲内であることが意図される。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、配列およびＣＤＲのサイズに応じて変わる。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮すると、どの残基が特定のＣＤＲを含むかについて日常的に決定することができる。
【0099】
本発明の抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または抗体融合タンパク質であり得る。
【0100】
本明細書ににおいて「キメラ抗体」とは、１つの種から誘導された抗体、好ましくは齧歯類抗体、より好ましくはネズミ抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、重および軽抗体鎖の両方の可変領域を含有する組み換えタンパク質を意味し、一方、抗体分子の定常領域は、ヒト抗体のものから誘導される。獣医用途では、キメラ抗体の定常ドメインは、類人霊長類、ネコ、またはイヌのような他の種のものから誘導され得る。
【0101】
本明細書において「ヒト化抗体」とは、１つの種からの抗体、例えば齧歯類抗体由来のＣＤＲが、齧歯類抗体の重および軽可変鎖からヒト重および軽可変ドメインに変換される、組み合えタンパク質を意味する。抗体分子の定常ドメインは、ヒト抗体のものから誘導される。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体のフレームワーク領域の特定の残基、特に、ＣＤＲ配列に接触するまたは近いものは、修飾され得、例えば元の齧歯類、類人霊長類、または他の抗体由来の対応する残基に代えられ得る。
【0102】
本明細書において「ヒト抗体」とは、例えば、抗原負荷に応答して特定のヒト抗体を産生するように「操作」された遺伝子導入マウスから得た抗体を意味する。この技術においてヒト重および軽鎖座のエレメントは、内在性の重および軽鎖座の標的化破損（ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｓ）を含有する胚幹細胞系から誘導されるマウスの株に導入される。遺伝子導入マウスは、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、該マウスを、ヒト抗原分泌ハイブリドーマの産生に使用することができる。遺伝子導入マウスからヒト抗体を得る方法は、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３（１９９４），Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６（１９９４）およびＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．６：５７９（１９９４）に記載されている。完全なヒト抗体も、遺伝子または染色体形質移入法、ならびにファージディスプレイ技術により構築することができ、これらは全て当該技術において知られている。未免疫化供給者由来の免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからの、インビトロにおけるヒト抗体およびそのフラグメントの産生について、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３（１９９０）を参照すること。この技術では、抗体可変ドメイン遺伝子は、フレームにおいて、繊維状バクテリオファージの主要または微量コートタンパク質遺伝子のいずれかにクローンされ、ファージ粒子の表面に機能性抗体フラグメントとして表示される。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体の機能性の特性に基づいた選択も、これらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択という結果になる。このような方法で、ファージはＢ細胞の幾つかの特性を模倣する。ファージディスプレイは様々なフォーマットで実施することができ、これらの概説には、例えばＪｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｈｉｓｗｅｌｌ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５５６４－５７１（１９９３）を参照すること。ヒト抗体も、インビトロ活性化Ｂ細胞により生成され得る。その全体が参照として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照すること。
【0103】
本明細書において「抗体融合タンパク質」とは、２つ以上の同じまたは異なる天然の抗体、一本鎖抗体、または同じもしくは異なる特異性を有する抗体フラグメントのセグメントが結合している、組み換え的に産生された抗原結合分子を意味する。融合タンパク質は、少なくとも１つの特異的結合部位を含む。融合タンパク質の原子価は、抗原(複数可)またはエピトープ（複数可）に対して、融合タンパク質が有する結合アームまたは部位の総数を示し、すなわち、一価、二価、三価、または多価である。抗体融合タンパク質の多価性は、抗原への結合において複数の相互作用を利用することができ、したがって抗原または異なる抗原への結合の親和性を向上させることを意味する。特異性は、どれくらい異なる種類の抗原またはエピトープに、抗体融合タンパク質が結合できるか、すなわち、単一特異性、二重特異性、三重特異性、多重特異性を示す。これらの定義を使用して、天然抗体、例えばＩｇＧは二価であり、それは、１種類の抗原またはエピトープに結合するので、２つの結合アームを有するが単一特異性であるからである。単一特異性の多価融合タンパク質は、同じ抗原またはエピトープに対して１つを越える結合部位を有する。例えば、単一特異性の二特異性抗体は、同じ抗原に反応性を持つ２つの結合部位を有する融合タンパク質である。融合タンパク質は、異なる抗体成分または同じ抗体成分の複数コピーの多価または多重特異性の組み合わせを含むことができる。融合タンパク質は、追加的に治療剤を含むことができる。
【0104】
幾つかの実施形態において、標的部分は、目的の標的細胞または標的部位において発現された抗原に対する特異性に基づいて選択される、抗体または抗体フラグメントである。多種多様な腫瘍特異性または他の疾患特異性抗原が同定されており、これらの抗原に対す抗体は、そのような腫瘍または他の疾患の治療に使用されてきた、または使用することが提案されてきた。当該技術に既知の抗体を、本発明の化合物に、特に、標的抗原が関連する疾患の治療に使用することができる。本発明の抗体リンカー薬剤複合体が標的にすることができる標的抗原（およびこれらの関連する疾患）の例には、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ１３７、４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＡＧＳ－５、ＡＧＳ－１６、アンジオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ－０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児性抗原、ＣＴＬＡ４、クリプト、ＥＤ－Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、グルココルチコイド誘発性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαν、インテグリンανβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ルイスＹ、メソテリン、ｃ－ＭＥＴ、ＭＮ炭酸脱水酵素ＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ネクチン－４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、シンデカン－１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３を挙げることができる。
【0105】
幾つかの実施形態において、抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（ベリムマブ）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、トレメリムマブ、ニボルマブ、ダセツズマブ、ウレルマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ランブロリズマブ、およびブリナツモマブからなる群から選択される。
【0106】
Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の治療に使用されるキメラ抗体である。これは、９０％のＢ細胞非ホジキンリンパ腫において発現しているＣＤ２０抗原を発現する、Ｂ細胞の表面に対して作用する。ＲｉｔｕｘａｎはＣＤ２０に結合して、ＣＤＣおよびＡＤＣＣを介してＢ細胞溶解を誘発する、ならびに幾つかの細胞障害性化学療法薬に対して薬剤耐性があるヒトリンパ球を感作する。
【0107】
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）は、２５％から３０％の乳癌において発現しているＨｅｒ２のヒト上皮増殖因子受容体細胞体ドメインに対して作用する、ヒト化モノクローナル抗体である。トラスツズマブは、（１）Ｈｅｒ２受容体のダウンレギュレーション、Ｈｅｒ２細胞内シグナル伝達経路の阻害、およびアポトーシスの誘発、（２）腫瘍細胞を死滅させる免疫機構関連抗体依存性ＡＤＣＣおよびＣＤＣ、（３）化学療法の効果の増強を介して抗腫瘍効果を有すると考えられる。
【0108】
Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して作用するキメラ抗体である。ＥｒｂｉｔｕｘはＥＧＦＲに結合して、そのシグナル伝達経路を阻害し、細胞増殖、浸潤、および転移、ならびに血管新生に影響を与える。ＥＧＦＲシグナル伝達経路の阻害は、化学療法薬および放射線療法の効果を増強することができる。
【0109】
Ａｖａｓｔｉｎ（ベバシズマブ）は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を標的にするヒト化モノクローナル抗体である。そのＶＥＧＦＲへの結合は、ＶＥＧＦおよびシグナル伝達経路を阻害し、腫瘍血管新生の阻害をもたらす。
【0110】
現在開発中の他の抗体も、標的部分として使用することができる。例えば、以下の標的に対する治療モノクローナル抗体が、腫瘍の治療のために開発中である。ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、およびＣＤ１３７、ならびに４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＡＧＳ－５、ＡＧＳ－１６、アンジオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ－０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児性抗原、ＣＴＬＡ４、クリプト、ＥＤ－Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、グルココルチコイド誘発性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαν、インテグリンανβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ルイス、メソテリン、ｃ－ＭＥＴ、ＭＮ炭酸脱水酵素ＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ネクチン－４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、シンデカン－１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、およびＶＥＧＦＲ－３、ならびにこれらの変異体。（Ｓｃｏｔｔ ＡＭ，Ｗｏｌｃｈｏｋ ＪＤ，Ｏｌｄ ＬＪ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２０１２，２２：１２（４）：２７８－８７）。
【0111】
幾つかの実施形態において、標的部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、単一ドメイン抗体、ＴおよびＡｂｓ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄｓ－ｓｃＦｖ、Ｆｄ、線状抗体、ミニボディ、二特異性抗体、二重特異的抗体フラグメント、バイボディ、トリボディ、ｓｃ－二特異性抗体、カッパ（ラムダ）体、ＢｉＴＥ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＳＩＰ、ＳＭＩＰ、ＤＡＲＴ、または１つ以上のＣＤＲを含む抗体類縁体を含む。
【0112】
以下の表は、様々な抗体構造および研究される標的を示す。
【表1】
【0113】
幾つかの実施形態において、標的部分は、ＶＥＧＦＲのＡＴＷＬＰＰＲポリペプチド、トロンボスポンジン－１模倣体、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣＧ（環状）ポリペプチド、ＳＣＨ２２１１５３フラグメント、ＮＣＮＧＲＣ（環状）ポリペプチド、ＣＴＴＨＷＧＦＴＬＣポリペプチド、ＣＧＮＫＲＴＲＧＣポリペプチド（ＬｙＰ－１）、オクトレオチド、バプレオチド、ランレオチド、Ｃ－３９４０ポリペプチド、デカペプチル、ルプロン、ゾラデックス、またはセトロレリクスを含む。
【0114】
葉酸
幾つかの実施形態において、標的部分は、葉酸またはその誘導体を含む。
幾つかの実施形態において、標的部分は、葉酸またはその誘導体を含む。
【0115】
近年、葉酸の研究は大く前進している。葉酸は、細胞分裂に必要な小分子ビタミンである。腫瘍細胞は異常に分裂し、細胞分裂を支持するのに十分な葉酸を捕捉するために、腫瘍細胞表面に葉酸受容体（ＦＲ）を多く発現する。
【0116】
データは、腫瘍細胞におけるＦＲ発現が正常細胞より２０～２００倍多いことを示す。様々な悪性腫瘍におけるＦＲの発現率は、卵巣癌では８２％、非小細胞肺癌では６６％、腎臓癌では６４％、結腸癌では３４％、乳癌では２９％である（Ｘｉａ Ｗ，Ｌｏｗ ＰＳ．Ｌａｔｅ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ．Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２０１０；１４；５３（１９）：６８１１－２４）。葉酸（ＦＡ）の発現率、ならびに上皮腫瘍浸潤および転移の悪性度は、正相関する。ＦＡは、ＦＲ仲介エンドサイトーシスを介して細胞に侵入し、ＦＡは、そのカルボキシル基を介して、細胞に侵入する薬剤とＦＡ複合体を形成する。酸性条件下（ｐＨ５の値）では、ＦＲはＦＡから分離し、ＦＡは薬剤を細胞質に放出する。
【0117】
臨床的には、系を使用して、腫瘍細胞を選択的に攻撃する薬剤を送達することができる。葉酸は、小さい分子量を有し、非免疫原性および高い安定性を有し、合成するのに安価である。より重要なことは、薬剤と担体との化学結合が簡単であり、そのように、薬剤送達系を構築するために、ＦＡを標的部分として使用することは、癌治療研究の活発な分野となっている。現在、臨床試験中のＥＣ１４５（ＦＡ化学療法薬剤複合体化合物）は、癌細胞を有効に攻撃することができる（Ｐｒｉｂｂｌｅ Ｐ ａｎｄ Ｅｄｅｌｍａｎ ＭＪ．ＥＣ１４５：ａ ｎｏｖｅｌ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｇｅｎｔ ｆｏｒ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｌｕｎｇ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ（２０１２）２１：７５５－７６１）。
【0118】
他の標的部分
幾つかの実施形態において、標的部分は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＣＤ４７、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、４－１ＢＢ、ＬＡＧ３、表面リガンドアンフィレギュリンの一部の完全長、ベータセルリン、ＥＧＦ、エフリン、エピジェン、エピレギュリン、ＩＧＦ、ニューレグリン、ＴＧＦ、ＴＲＡＩＬ、またはＶＥＧＦの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または可溶形態を含む。
幾つかの実施形態において、標的部分は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＣＤ４７、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、４－１ＢＢ、ＬＡＧ３、表面リガンドアンフィレギュリンの一部の完全長、ベータセルリン、ＥＧＦ、エフリン、エピジェン、エピレギュリン、ＩＧＦ、ニューレグリン、ＴＧＦ、ＴＲＡＩＬ、またはＶＥＧＦの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または可溶形態を含む。
【0119】
ナノ粒子
幾つかの実施形態において、標的部分は、粒子（標的粒子）、好ましくはナノ粒子、場合により、標的に特異的または優先的に結合することができる標的分子に結合する標的化ナノ粒子を含む。幾つかの実施形態において、標的粒子は、それ自体本発明の化合物を（例えば、腫瘍細胞または組織中の濃縮によって）導き、その中には追加の標的化合物は何も結合していない。
幾つかの実施形態において、標的部分は、粒子（標的粒子）、好ましくはナノ粒子、場合により、標的に特異的または優先的に結合することができる標的分子に結合する標的化ナノ粒子を含む。幾つかの実施形態において、標的粒子は、それ自体本発明の化合物を（例えば、腫瘍細胞または組織中の濃縮によって）導き、その中には追加の標的化合物は何も結合していない。
【0120】
本明細書において「ナノ粒子」とは、１０００ｎｍ未満の直径を有する任意の粒子を意味する。幾つかの実施形態において、治療剤および／または標的分子は、ポリマーマトリックスと関連することができる。幾つかの実施形態において、標的分子は、ポリマーマトリックスの表面と共有的に結合することができる。幾つかの実施形態において、共有的結合はリンカーにより仲介される。幾つかの実施形態において、治療剤は、ポリマーマトリックスの表面と結合得る、ポリマーマトリックス内に封入され得る、ポリマーマトリックスに囲まれ得る、および／またはポリマーマトリックスの全体にわたって分散され得る。その全体が組み込まれる、米国特許第８，２４６，９６８号。
【0121】
一般に、本発明のナノ粒子は、任意の種類の粒子を含む。任意の粒子を本発明により使用することができる。幾つかの実施形態において、粒子は生分解性および生体適合性である。一般に、生体適合性物質は、細胞に対して毒性ではない。幾つかの実施形態において、物質は、細胞へのその付加が、ある特定の閾値未満の細胞死をもたらす場合に生体適合性であるとみなされる。幾つかの実施形態において、物質は、細胞へのその付加が、有害な作用を誘発しない場合に生体適合性であるとみなされる。一般に、生分解性物質は、生理学的条件下で治療関連時間（例えば、数週間、数か月間、または数年間）にわたって分解を受けるものである。幾つかの実施形態において、生分解性物質は、細胞機構により分解され得る物質である。幾つかの実施形態において、生分解性物質は、化学プロセスにより分解され得る物質である。幾つかの実施形態において、粒子は、生体適合性および生分解性の両方である物質である。幾つかの実施形態において、粒子は、生体適合性であるが、生分解性ではない物質である。幾つかの実施形態において、粒子は、生分解性であるが、生体適合性ではない物質である。
【0122】
幾つかの実施形態において、粒子は、腎排泄限界より大きなサイズである（例えば、６ｎｍを越える直径を有する粒子）。幾つかの実施形態において、粒子は、肝臓による血流からの粒子のクリアランスを避けるのに十分に小さい（例えば、１０００ｎｍ未満の直径を有する粒子）。一般に、粒子の生理化学的特徴は、腎排泄および肝臓クリアランスの減少により、標的化粒子を血漿に長期間循環させることができるべきである。
【0123】
各粒子が同様の特性を有するように、サイズ、形状、および／または組成が比較的均一である粒子の個体群を使用することが、多くの場合に望ましい。例えば、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の粒子が、５％、１０％、または２０％の平均直径または最大寸法の範囲内にある直径または最大寸法を有することができる。幾つかの実施形態において、粒子の個体群は、サイズ、形状、および／または組成に関して不均質であり得る。
【0124】
ゼータ電位は、粒子の表面電位の測度である。幾つかの実施形態において、粒子は－５０ｍＶ～＋５０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は－２５ｍＶ～＋２５ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は－１０ｍＶ～＋１０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は－５ｍＶ～＋５ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は０ｍＶ～＋５０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は０ｍＶ～＋２５ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は０ｍＶ～＋１０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は０ｍＶ～＋５ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は－５０ｍＶ～０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は－２５ｍＶ～０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は－１０ｍＶ～０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は－５ｍＶ～０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。幾つかの実施形態において、粒子は、実質的に中性のゼータ電位（すなわち、およそ０ｍＶ）を有する。
【0125】
様々な異なる粒子を本発明により使用することができる。幾つかの実施形態において、粒子は球形または球状である。幾つかの実施形態において、粒子は球形または球状である。幾つかの実施形態において、粒子は平坦または平板形状である。幾つかの実施形態において、粒子は立方体または立方形である。幾つかの実施形態において、粒子は長円形または楕円形である。幾つかの実施形態において、粒子は円柱形、円錐形、または角錐形である。
【0126】
幾つかの実施形態において、粒子は微粒子（例えば、微小球）である。一般に、「微粒子」は、１０００ｎｍ未満の直径を有する任意の粒子を意味する。幾つかの実施形態において、粒子はピコ粒子（例えば、ピコ流体（ｐｉｃｏｓｐｈｅｒｅｓ））である。一般に、「ピコ粒子」は、１ｎｍ未満の直径を有する任意の粒子を意味する。幾つかの実施形態において、粒子はリポソームである。幾つかの実施形態において、粒子はミセルである。
【0127】
粒子は、中実または中空であり得、１つ以上の層を含むことができる（例えば、ナノシェル、ナノリング）。幾つかの実施形態において、各層は、他の層(複数可)と比べて独自の組成および独自の特性を有する。例えば、粒子は、コア／シェル構造を有することができ、ここでコアは第１の層であり、シェルは第２の層である。粒子は、複数の異なる層を含むことができる。幾つかの実施形態において、第１の層は実質的に架橋され得、第２の層は実質的に架橋されていない、などである。幾つかの実施形態において、１つ、幾つか、または全ての異なる層が、送達される１つ以上の治療または診断剤を含むことができる。幾つかの実施形態において、第１の層は送達される薬剤を含み、第２の層は送達される薬剤を含まない、などである。幾つかの実施形態において、それぞれ個別の層は、送達される異なる薬剤または薬剤のセットを含む。
【0128】
幾つかの実施形態において、粒子は多孔質であり、これは粒子が、典型的には粒子のサイズと比較して小さい穴またはチャンネルを含有することを意味する。例えば、粒子は多孔質シリカ粒子、例えばメソ多孔質シリカナノ粒子であり得、または多孔質シリカの被覆を有することができる（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１７：４５７０）。粒子は、約１ｎｍ～約５０ｎｍの直径、例えば約１～２０ｎｍの直径の範囲の孔を有することができる。粒子の体積の約１０％～９５％が孔またはチャンネル内に空洞を構成することができる。
【0129】
粒子は、被覆層を有することができる。生体適合被覆層の使用は、例えば粒子が細胞に毒性を有する材料を含有する場合に有益であり得る。適切な被覆材料には、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のような天然のタンパク質、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはＰＥＧ誘導体、リン脂質－（ＰＥＧ）、シリカ、脂質、ポリマーのような生体適合親水性ポリマー、デキストランのような炭水化物、本発明のナノ粒子と結合し得る他のナノ粒子などが含まれるが、これらに限定されない。被覆は、浸漬、層毎の技術、自己構築、複合などのような様々な方法により適用または構築され得る。自己構築は、高次構造（例えば、分子）の成分の互いの天然の誘引に依存した高次構造への自発的構築のプロセスを意味する。典型的には、分子の無作為移動、およびサイズ、形状、組成、または化学的特性に基づいた結合の形成を介して生じる。
【0130】
ポリマーの例には、ポリアルキレン（例えば、ポリエチレン）、ポリカーボネート（例えば、ポリ（１，３－ジオキサン－２オン））、ポリ無水物（例えば、ポリ（セバシン酸無水物））、ポリヒドロキシ酸（例えば、ポリ（β－ヒドロキシアルカノエート））、ポリフマレート、ポリカプロラクトン、ポリアミド（例えば、ポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド）、ポリ（オルトエステル）、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、およびポリアミンが挙げられる。幾つかの実施形態において、本発明のポリマーには、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１７７．２６００によってヒトにおける使用が承認されているポリマーが含まれ、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリバレロラクトン、ポリ（１，３－ジオキサン－２オン））、ポリ無水物（例えば、ポリ（セバシン酸無水物））、ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール）、ポリウレタン、ポリメタクリレート、ポリアクリレート、およびポリシアノアクリレートが含まれるが、これらに限定されない
【0131】
幾つかの実施形態において、粒子は、非ポリマー粒子（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、無機材料を含むポリマー、骨由来材料、骨代用物、ウイルス粒子など）であり得る。幾つかの実施形態において、送達される治療または診断剤は、そのような非ポリマー粒子の表面と結合することができる。幾つかの実施形態において、非ポリマー粒子は、金属原子（例えば、金原子）の凝集体のような非ポリマー成分の凝集体である。幾つかの実施形態において、治療または診断剤は、非ポリマー成分の凝集体の表面と結合し得る、ならびに／または非ポリマー成分の凝集体内に封入され得る、非ポリマー成分の凝集体に囲まれ得る、および／もしくは非ポリマー成分の凝集体の全体にわたって分散され得る。
【0132】
粒子（例えば、ナノ粒子、微粒子）は、当該技術に既知の任意の方法を使用して調製することができる。例えば、粒子状製剤は、ナノ沈殿、流動集束流体チャンネル（ｆｌｏｗ ｆｏｃｕｓｉｎｇ ｆｌｕｉｄｉｃ ｃｈａｎｎｅｌ）、噴霧乾燥、単および二重乳剤溶媒蒸発（ｓｉｎｇｌｅ ａｎｄ ｄｏｕｂｌｅ ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ））、溶媒抽出、相分離、微粉砕、マイクロエマルション処理、微細加工、ナノ加工、犠牲層、単純および複合コアセルベーションの方法、ならびに当業者に周知の他の方法により形成され得る。代替的または追加的に、単分散半導体、導電性、磁性、有機および他のナノ粒子の水性および有機溶媒合成が記載されている（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｓｍａｌｌ，１：４８；Ｍｕｒｒａｙ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍａｔ．Ｓｃｉ．，３０：５４５、およびＴｒｉｎｄａｄｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃｈｅｍ．Ｍａｔ．，１３：３８４３）。
【0133】
封入剤の送達のための微粒子を作製する方法は、文献に記載されている（例えば、Ｄｏｕｂｒｏｗ，Ｅｄ．，“Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ ａｎｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９２；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，５：１３；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，δ：２７５、およびＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．，３５：７５５を参照すること）。
【0134】
核酸標的部分
幾つかの実施形態において、標的部分は核酸標的部分を含む。
幾つかの実施形態において、標的部分は核酸標的部分を含む。
【0135】
一般に、核酸標的部分は、臓器、組織、細胞、細胞外マトリックス成分、および／または細胞内区画（標的）と関連する成分に結合する任意のポリヌクレオチドである。
【0136】
幾つかの実施形態において、核酸標的部分はアプタマーである。
【0137】
アプタマーは、典型的には、特定の臓器、組織、細胞、細胞外マトリックス成分、および／または細胞内区画と関連する特定の標的構造に結合するポリヌクレオチドである。一般に、アプタマーの標的機能は、アプタマーの三次元構造に基づいている。幾つかの実施形態において、アプタマーの標的への結合は、典型的には、アプタマーおよび標的の両方の二次元および／または三次元構造間の相互作用により仲介される。幾つかの実施形態において、アプタマーの標的への結合は、アプタマーの一次配列のみに基づいてはいないが、アプタマーおよび／または標的の三次元構造(複数可)によって決まる。幾つかの実施形態において、アプタマーは、塩基対形成を破損する構造（例えば、ヘアピンループ）により干渉される、相補的なワトソン－クリック塩基対形成を介して標的に結合する。
【0138】
幾つかの実施形態において、核酸標的部分は、スピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）である（ＰＣＴ公報国際公開第９８／０８８５６号、同第０２／１００４４２号、および同第０６／１１７２１７号）。一般に、スピーゲルマーは、標的に特異的に結合することができる合成鏡像核酸（すなわち、鏡像アプタマー）である。スピーゲルマーは、エキソおよびエンドヌクレアーゼに対する感受性をなくする構造的特徴により特徴付けられる。
【0139】
当業者は、標的に特異的に結合することができる任意の核酸標的部分（例えば、アプタマーまたはスピーゲルマー）を、本発明に従って使用できることを認識する。幾つかの実施形態において、本発明に従って使用される核酸標的部分は、疾患、障害、および／または状態と関連するマーカーを標的にすることができる。幾つかの実施形態において、本発明に従って使用される核酸標的部分は、癌関連標的を標的にすることができる。幾つかの実施形態において、本発明に従って使用される核酸標的部分は、腫瘍マーカーを標的にすることができる。任意の種類の癌および／または任意の腫瘍マーカーを、本発明の核酸標的部分の使用により標的にすることができる。幾つかの例を挙げると、核酸標的部分は、前立腺癌、肺癌、乳癌、結腸直腸癌、膀胱癌、膵癌、子宮内膜癌、卵巣癌、骨癌、食道癌、肝癌、胃癌、脳腫瘍、皮膚黒色腫、および／または白血病と関連するマーカーを標的にすることができる。
【0140】
本発明の核酸（下記に更に詳細に記載される、核酸核酸標的部分、および／または送達される機能性ＲＮＡ、例えば、ＲＮＡｉ誘発性実体、リボザイム、ｔＲＮＡなどを含む）は、化学合成、酵素合成、長い前駆体の酵素的または化学的な切断などが含まれるが、これらに限定されない任意の利用可能な技術によって調製され得る。ＲＮＡを合成する方法は、当該技術において知られている（例えば、Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（ｅｄ．）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ［Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ］，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．：ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８４、およびＨｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．（ｅｄ．）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖ．２８８（Ｃｌｉｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２００５を参照すること）。
【0141】
核酸核酸標的部分を形成する核酸は、天然に生じるヌクレオシド、修飾ヌクレオシド、１つ以上のヌクレオシドの間に挿入された炭化水素リンカー（例えば、アルキレン）もしくはポリエーテルリンカー（例えば、ＰＥＧリンカー）を有する天然に生じるヌクレオシド、１つ以上のヌクレオシドの間に挿入された炭化水素もしくはＰＥＧリンカーを有する修飾ヌクレオシド、またはこれらの組み合わせを含むことができる。幾つかの実施形態において、核酸核酸標的部分のヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドは、炭化水素リンカーまたはポリエーテルリンカーにより代えられ得、但し、核酸核酸標的部分の親和性および選択性は、置換により実質的に低減されないことが条件である（例えば、標的に対する核酸核酸標的部分の解離定数は、約１×１０－３Ｍを越えるべきではない）。
【0142】
本発明の核酸は、天然に生じる核酸において見出される種類のみのヌクレオチドを含み得る、または代わりに、１つ以上のヌクレオチド類縁体を含み得る、もしくは天然に生じる核酸と他の点で異なる構造を有し得る。米国特許第６，４０３，７７９号、同第６，３９９，７５４号、同第６，２２５，４６０号、同第６，１２７，５３３号、同第６，０３１，０８６号、同第６，００５，０８７号、同第５，９７７，０８９号、およびこれらにおける参考文献は、使用することができる多種多様な特定のヌクレオチド類縁体および修飾を開示する。Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．（ｅｄ．）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（１ｓｔ ｅｄ） Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；ＩＳＢＮ：０８２４７０５６６１；１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）およびこれにおける参考文献を参照すること。例えば、２′修飾には、ハロ、アルコキシ、およびアリルオキシ基が含まれる。幾つかの実施形態において、２′－ＯＨ基は、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、またはＣＮから選択される基により代えられており、ここでＲは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩである。修飾結合の例には、ホスホロチオエートおよび５′－Ｎ－ホスホラミダイト結合が挙げられる。
【0143】
様々な異なるヌクレオチド類縁体、修飾主鎖、または非天然に生じるヌクレオシド間結合を含む核酸を、本発明に利用することができる。本発明の核酸は、天然ヌクレオシド（すなわち、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジン）、または修飾ヌクレオシドを含むことができる。修飾ヌクレオチドの例には、塩基修飾ヌクレオシド（例えば、アラシチジン、イノシン、イソグアノシン、ネブラリン、プソイドウリジン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノプリン、２－チオチミジン、３－デアザ－５－アザシチジン、２′－デオキシウリジン、３－ニトルピロール、４－メチルインドール、４－チオウリジン、４－チオチミジン、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、２－チオウリジン、５－ブロモシチジン、５－ヨードウリジン、イノシン、６－アザウリジン、６－クロロプリン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－アザアデノシン、８－アジドアデノシン、ベンゾイミダゾール、Ｍ１－メチルアデノシン、ピロロ－ピリミジン、２－アミノ－６－クロロプリン、３－メチルアデノシン、５－プロピニルシチジン、５－プロピニルウリジン、５－ブロモウリジン、５－フルオロウリジン、５－メチルシチジン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ（６）－メチルグアニン、および２－チオシチジン）、化学的または生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化塩基）、修飾糖（例えば、２′－フルオロリボース、２′－アミノリボース、２′－アジドリボース、２′－Ｏ－メチルリボース、Ｌ－エナンチオメル酸ヌクレオシドアラビノース、およびヘキソース）、修飾ホスフェート基（ホスホロチオエートおよび５′－Ｎ－ホスホラミダイト結合）、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。核酸の化学合成のための天然および修飾ヌクレオチドモノマーは、容易に入手可能である。幾つかの場合において、そのような修飾を含む核酸は、天然に生じるヌクレオチドのみからなる核酸と比べて改善された特性を示す。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている核酸修飾を利用して、ヌクレアーゼ（例えば、エキソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼなど）による消化を低減および／または防止する。例えば、核酸の構造は、消化を低減するため、一方または両方の鎖の３′末端にヌクレオチド類縁体を含めることにより安定化され得る。
【0144】
修飾核酸は、分子の全長にわたって均一に修飾される必要はない。異なるヌクレオチド修飾および／または主鎖構造は、核酸の様々な位置に存在することができる。当業者は、ヌクレオチド類縁体または他の修飾(複数可)が、核酸の機能が実質的に影響を受けないように、核酸の任意の位置(複数可)に配置されうることを理解する。幾つかの例を挙げると、修飾は、標的に特異的に結合する核酸標的部分の能力が実質的に影響を受けないように、核酸標的部分の任意の位置に配置され得る。修飾領域は、一方または両方の鎖の５′末端および／または３′末端であり得る。例えば、両方の鎖のいずれかの５′末端および／または３′末端において、およそ１～５つの残基がヌクレオチド類縁体である、および／または主鎖修飾を有する修飾核酸標的部分が、用いられている。修飾は、５′または３′末端修飾であり得る。一方または両方の核酸鎖は、少なくとも５０％の非修飾ヌクレオチド、少なくとも８０％の非修飾ヌクレオチド、少なくとも９０％の非修飾ヌクレオチド、または１００％の非修飾ヌクレオチドを含むことができる。
【0145】
本発明の核酸は、例えば、米国特許出願公開第２００３／０１７５９５０号、同第２００４／０１９２６２６号、同第２００４／００９２４７０号、同第２００５／００２０５２５号、および同第２００５／００３２７３３号に記載されているように、糖、ヌクレオシド、またはヌクレオシド間結合への修飾を含むことができる。本発明は、これらに記載されている修飾のいずれかを１つ以上有する任意の核酸の使用を包含する。例えば、多数の末端複合体、例えばコレステロール、リトコール酸、アルル酸（ａｌｕｒｉｃ ａｃｉｄ）、または長アルキル分岐鎖のような脂質が、細胞取り込みを改善すると報告されている。類縁体および修飾は、例えば、当該技術に既知の任意の適切なアッセイを使用して、例えば、治療または診断剤の改善された送達、標的への核酸標的部分の改善された特異的結合などをもたらすものを選択するために試験されることができる。幾つかの実施形態において、本発明の核酸は、１つ以上の非天然ヌクレオシド結合を含むことができる。幾つかの実施形態において、核酸標的部分の３′末端、５′末端、または３′末端と５′末端の両方における１つ以上の内部ヌクレオチドは、転化されて、３′－３′結合または５′－５′結合のような結合を生じる。
【0146】
幾つかの実施形態において、本発明の核酸は、合成ではないが、天然環境から単離された天然に生じる実体である。
【0147】
任意の方法を使用して、新規核酸標的部分を設計することができる（例えば、米国特許第６，７１６，５８３号、同第６，４６５，１８９号、同第６，４８２，５９４号、同第６，４５８，５４３号、同第６，４５８，５３９号、同第６，３７６，１９０号、同第６，３４４，３１８号、同第６，２４２，２４６号、同第６，１８４，３６４号、同第６，００１，５７７号、同第５，９５８，６９１号、同第５，８７４，２１８号、同第５，８５３，９８４号、同第５，８４３，７３２号、同第５，８４３，６５３号、同第５，８１７，７８５号、同第５，７８９，１６３号、同第５，７６３，１７７号、同第５，６９６，２４９号、同第５，６６０，９８５号、同第５，５９５，８７７号、同第５，５６７，５８８号、および同第５，２７０，１６３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００６９９１０号、同第２００４／００７２２３４号、同第２００４／００４３９２３号、同第２００３／００８７３０１号、同第２００３／００５４３６０号、および同第２００２／００６４７８０号を参照すること）。本発明は、新規核酸標的部分を設計する方法を提供する。本発明は、候補核酸標的部分の混合物から新規核酸標的部分を単離または同定する方法を更に提供する。
【0148】
タンパク質、炭水化物、脂質、および／または核酸に結合する核酸標的部分を、設計および／または同定することができる。幾つかの実施形態において、核酸標的部分は、腫瘍マーカー、インテグリン、細胞表面受容体、膜貫通タンパク質、細胞間タンパク質、イオンチャンネル、膜輸送タンパク質、酵素、抗体、キメラタンパク質などのような、タンパク質および／またはその特徴的な部分に結合する本発明の複合体に使用されるように設計および／または同定され得る。幾つかの実施形態において、核酸標的部分は、糖タンパク質、糖（例えば、単糖、二糖、および多糖）、糖衣（すなわち、大部分の真核細胞の外側表面の炭水化物豊富辺縁帯）などのような、炭水化物および／またはその特徴的な部分に結合する本発明の複合体に使用されるように設計および／または同定され得る。幾つかの実施形態において、核酸標的部分は、油、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、グリセリド、ホルモン、ステロイド（例えば、コレステロール、胆汁酸）、ビタミン（例えば、ビタミンＥ）、リン脂質、スフィンゴ脂質、リポタンパク質などのような、脂質および／またはその特徴的な部分に結合する本発明の複合体に使用されるように設計および／または同定され得る。幾つかの実施形態において、核酸標的部分は、ＤＮＡ核酸；ＲＮＡ核酸；修飾ＤＮＡ核酸；修飾ＲＮＡ核酸；ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ＤＮＡ、および修飾ＲＮＡの任意の組み合わせを含む核酸のような、核酸および／またはその特徴的な部分に結合する本発明の複合体に使用されるように設計および／または同定され得る。
【0149】
核酸標的部分（例えば、アプタマーまたはスピーゲルマー）は、任意の利用可能な方法を使用して設計および／または同定され得る。幾つかの実施形態において、核酸標的部分は、核酸の候補混合物から核酸標的部分を同定することにより設計および／または同定される。試験管内進化法（ＳＥＬＥＸ）またはその変形は、核酸の候補混合物から、標的に結合する核酸標的部分を同定する一般に使用される方法である。
【0150】
標的に選択的に結合する核酸標的部分は、ＳＥＬＥＸプロセスまたはその変形により単離され得るが、但し、標的をＳＥＬＥＸプロセスに標的として使用できることが条件である。
【0151】
Ｂ． 活性化部分
一般に、本発明の化合物は、活性化部分を含む。
一般に、本発明の化合物は、活性化部分を含む。
【0152】
本明細書において「活性化部分」とは、身体の免疫系または腫瘍細胞を刺激または増強することができる分子または薬剤を意味する。一般に、活性化部分は、トール様受容体、ヌクレオチドオリゴマー化ドメイン様受容体、ＲＩＧ－Ｉ様受容体、ｃ型レクチン受容体、または細胞質ＤＮＡセンサー、またはこれらの組み合わせに対して直接的または間接的に作用する。
【0153】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、樹状細胞、マクロファージ、単球、骨髄由来抑制細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらに組み合わせが含まれるが、これらに限定されないヒト免疫細胞を活性化することができる。
【0154】
樹状細胞
樹状細胞は、最も強力な抗原提示細胞である。樹状細胞は、先天および適応免疫応答の両方の開始に必須の役割を果たす。樹状細胞は、免疫寛容性の誘発および維持において主要な役割も果たす。
樹状細胞は、最も強力な抗原提示細胞である。樹状細胞は、先天および適応免疫応答の両方の開始に必須の役割を果たす。樹状細胞は、免疫寛容性の誘発および維持において主要な役割も果たす。
【0155】
本明細書において「樹状細胞」（ＤＣ）は、２つの主なサブタイプ、すなわち骨髄ＤＣ（ｍＤＣ）および形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）を含む異種細胞個体群を意味する（Ｓｔｅｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１４９，１－１６）。これらの２つの血液ＤＣサブタイプは、これらのＣＤ１１ｃ（インテグン相補体受容体）およびＣＤ１２３（ＩＬ－３Ｒα）の発現により元々分化していた。ｐＤＣおよびｍＤＣ個体群は、それぞれヒトにおいて約０．２～約０．６％のＰＢＭＣ個体群を構成する。
【0156】
本明細書において「ｐＤＣ」とは、形質細胞様樹状細胞を意味し、血液および末梢リンパ器官において見出される樹状細胞のサブタイプを表す。これらの細胞は、表面マーカ－ＣＤ１２３、ＢＤＣＡ－２（ＣＤ３０３）、およびＢＤＣＡ－４（ＣＤ３０４）、およびＨＬＡ－ＤＲを発現するが、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ３、ＣＤ２０、またはＣＤ５６を発現せず、このことによって従来の樹状細胞、単球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞から区別される。先天免疫系の成分として、これらの細胞は、細胞内トール様受容体７および９を発現し、これらはｓｓＲＮＡまたはＣｐＧ ＤＮＡモチーフのようなウイルスおよび細菌の核酸の検出を可能にする。刺激およびそれに続く活性化によって、これらの細胞は大量のＩ型インターフェロン（主に、ＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－β）、ならびにＩＩＩ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－λ）を産生し、これらは、広範囲の効果を仲介する重要な多面的抗ウイルス化合物である。多数のＩ型インターフェロンを生成することによって、サイトカインおよびケモカイン、形質細胞様樹状細胞は、身体の先天および適応免疫応答に広範囲に関与する。これらは、免疫応答強度、持続期間、および応答様式に関与するＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および他の細胞を調節することができ、したがって、腫瘍、感染、および自己免疫性疾患において非常に重要な機能を果たす。（Ｌｉｕ ＹＪ．ＩＰＣ：ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ ｔｙｐｅ １ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；２３：２７５－３０６．Ｇｉｌｌｉｅｔ Ｍ，Ｃａｏ Ｗ，Ｌｉｕ ＹＪ．Ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ：ｓｅｎｓｉｎｇ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８ Ａｕｇ；８（８）：５９４－６０６）。
【0157】
本明細書において「ｍＤＣ」とは、骨髄樹状細胞を意味し、血液および末梢リンパ器官において見出される循環樹状細胞のサブタイプを表す。これらの細胞は、表面マーカーＣＤ１１ｃ、ＣＤ１ａ、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＢＤＣＡ－１（ＣＤ１ｃ）またはＢＤＣＡ－３（ＣＤ１４１）のいずれかを発現する。これらはＢＤＣＡ－２またはＣＤ１２３を発現せず、このことによってｐＤＣから区別される。ｍＤＣも、ＣＤ３、ＣＤ２０、またはＣＤ５６を発現しない。先天免疫系の成分として、ｍＤＣは、ＴＬＲ２、３、４、５、６、および８を含むトール様受容体（ＴＬＲ）を発現し、これらは細菌およびウイルス成分の検出を可能にする。刺激およびそれに続く活性化によって、これらの細胞は、抗原特異的ＣＤ４、ならびにＣＤ８Ｔ細胞を活性化する、最も強力な抗原提示細胞である。加えて、ｍＤＣは、大量のＩＬ－１２およびＩＬ２３を産生する能力を有し、このことは、Ｔｈ１仲介またはＴｈ１７細胞仲介免疫の誘発にとって重要である。
【0158】
研究は、乳癌、頭頸部癌、卵巣癌のような多くの固形腫瘍がｐＤＣ浸潤を有すること（Ｔｒｅｉｌｌｅｕｘ Ｉ，Ｂｌａｙ ＪＹ，Ｂｅｎｄｒｉｓｓ－Ｖｅｒｍａｒｅ Ｎ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｓｔａｇｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００４；１０：７４６６－７４７４．Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｅ，Ｗｏｌｌｅｎｂｅｒｇ Ｂ，Ｒｏｔｈｅｎｆｕｓｓｅｒ Ｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００３；６３：６４７８－６４８７．Ｚｏｕ ＷＰ，Ｍａｃｈｅｌｏｎ Ｖ，Ｃｏｕｌｏｍｂ－Ｌ’Ｈｅｒｍｉｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｏｍａｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ－１ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ ｒｅｃｒｕｉｔｓ ａｎｄ ａｌｔｅｒｓ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ Ｍｅｄ ２００１；７：１３３９－１３４６）、および腫瘍細胞により分泌された因子がＤＣ成熟を阻害することを見出した。（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ ＤＩ，Ｃｏｒａｋ Ｊ，Ｃｉｅｒｎｉｋ ＩＦ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９７；３：４８３－４９０．Ｂｅｌｌ Ｄ，Ｃｈｏｍａｒａｔ Ｐ，Ｂｒｏｙｌｅｓ Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｉｓｓｕｅ，ｉｍｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｉｄｅ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ，ｗｈｅｒｅａｓ ｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ ａｒｅａｓ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９９；１９０：１４１７－１４２５．Ｍｅｎｅｔｒｉｅｒ－Ｃａｕｘ Ｃ，Ｍｏｎｔｍａｉｎ Ｇ，Ｄｉｅｕ ＭＣ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ＣＤ３４ （＋） ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｂｙ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ：ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ．Ｂｌｏｏｄ １９９８；９２：４７７８－４７９１）。これらの未成熟ＤＣ細胞は、抗腫瘍免疫の促進において役割を果たさなかった。対照的に、腫瘍微環境内のＤＣは、抗腫瘍免疫を阻害し、血管新生を促進することによって、腫瘍増殖を促進する。トール様受容体７作動薬イミキモドおよびトール様受容体９作動薬ＣｐＧ薬剤は、腫瘍微環境内のｐＤＣを刺激して、腫瘍発達を阻害することができる。（Ｄｕｍｍｅｒ Ｒ，Ｕｒｏｓｅｖｉｃ Ｍ，Ｋｅｍｐｆ Ｗ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ ｉｎ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｈｏｗ ｄｏｅｓ ｉｔ ｗｏｒｋ？ Ｂｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２００３；１４９：５７－５８．Ｍｉｌｌｅｒ ＲＬ，Ｇｅｒｓｔｅｒ ＪＦ，Ｏｗｅｎｓ ＭＬ ｅｔ ａｌ Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏｐｉｃａｌｌｙ：ａ ｎｏｖｅｌ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍｏｄｉｆｉｅｒ ａｎｄ ｎｅｗ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｄｒｕｇ．Ｉｎｔ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９９；２１：１－１４．Ｈｏｆｍａｎｎ ＭＡ，Ｋｏｒｓ Ｃ， Ａｕｄｒｉｎｇ Ｈ ｅｔ ａｌ Ｐｈａｓｅ １ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌｌｙ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ＴＬＲ９－ａｇｏｎｉｓｔ ＰＦ－３５１２６７６ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２００８；３１：５２０－５２７）。
【0159】
幾つかの実施形態において、ヒト樹状細胞は形質細胞様樹状細胞である。
【0160】
幾つかの実施形態において、ヒト樹状細胞は骨髄樹状細胞である。
【0161】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ヒトＴＬＲ７またはＴＬＲ８に特異的に結合することができ、したがってｐＤＣまたはｍＤＣのいずれかを活性化することができる。
【0162】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ヒトＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方に特異的に結合することができ、したがってｐＤＣおよびｍＤＣの両方を活性化することができる。ｐＤＣは、エンドソームトール様受容体（ＴＬＲ）７及びＴＬＲ９を選択的に発現し、一方、ｍＤＣは、ＴＬＲ８を選択的に発現する。Ｂａｏ Ｍ，Ｌｉｕ ＹＪ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＬＲ７／９ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌ．２０１３ Ｊａｎ；４（１）：４０－５２．Ｈeｍｏｎｔ Ｃ，Ｎｅｅｌ Ａ，Ｈｅｓｌａｎ Ｍ，Ｂｒａｕｄｅａｕ Ｃ，Ｊｏｓｉｅｎ Ｒ．Ｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄ ｍＤＣ ｓｕｂｓｅｔｓ ｅｘｈｉｂｉｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ＴＬＲ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．２０１３ Ａｐｒ；９３（４）：５９９－６０９。
【0163】
ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、好ましくはヒトＮＫ細胞を活性化することができる。
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、好ましくはヒトＮＫ細胞を活性化することができる。
【0164】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、免疫系の主な成分を構成する細胞障害性リンパ球の種類である。ＮＫ細胞は、ＣＤ５６またはＣＤ１６の発現、およびＴ細胞受容体（ＣＤ３）の不在により定義される末梢血リンパ球のサブセットである。これらは、ＭＨＣ非制限様式で初回刺激することなく、形質転換細胞系を認識し、死滅させる。ＮＫ細胞は、ウイルスに感染した腫瘍および細胞の拒絶に重要な役割を果たす。ＮＫ細胞が標的細胞を認識し、十分なシグナルを送達して、標的溶解の引き起こすプロセスは、細胞表面における一連の阻害性および活性化受容体によって決定される。変更された自己からの自己のＮＫ識別は、ＭＨＣ－Ｉ分子、ならびに非ＭＨＣリガンド様ＣＤ４８およびＣｌｒ－１ｂの阻害性受容体認識を伴う。感染または損傷細胞（変更された自己）のＮＫ認識はＮＫＧ２Ｄ、Ｌｙ４９Ｈ、およびＮＫｐ４６／Ｎｃｒ１を含む様々な活性化受容体により認識されるストレス誘発性リガンド（例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｒａｅ１、Ｈ６０、Ｍｕｌｔ１）、またはウイルスコードリガンド（例えば、ｍ１５７、ヘマグルチニン）によって調整される。
【0165】
ＮＫ細胞は、同種または自家幹細胞移植後に、数か月にわたって末梢血において優性にリンパ球細胞を提示し、この期間における病原体に対する免疫において主な役割を有する（Ｒｅｉｔｔｉｅ ｅｔ ａｌ（１９８９ Ｂｌｏｏｄ ７３：１３５１－１３５８；Ｌｏｗｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ （１９９８）Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２１：６７９－６８６）。生着、移植片対宿主病、抗白血病活性、および移植後感染におけるＮＫ細胞の役割は、Ｌｏｗｄｅｌｌ（２００３）Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １３：３９９－４０４において概説されている。
【0166】
ヒトＮＫ細胞は、天然の細胞障害性および抗体依存性細胞障害性（ＡＤＣＣ）を介して腫瘍細胞およびウイルス感染細胞の溶解を仲介する。
【0167】
ヒトＮＫ細胞は、正および負の細胞溶解性シグナルにより制御される。負（阻害性）のシグナルは、受容体のＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａを含有するＣ－レクチンドメインにより、および幾つかのキラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）により伝達される。阻害性シグナルによるＮＫ溶解の調節は、標的細胞表面に発現した特定のＨＬＡクラスＩ対立遺伝子がＮＫ細胞の阻害性受容体を連結する、「自己喪失」の仮説として知られている。腫瘍細胞および幾つかのウイルス感染細胞（例えば、ＣＭＶ）におけるＨＬＡ分子のダウンレギュレーションは、この阻害を標的閾値未満に下げ、標的細胞がＮＫ初回刺激および活性化分子も担持する場合、標的細胞は、ＮＫ細胞仲介溶解に敏感になり得る。ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９作動薬は、ｍＤＣおよびｐＤＣの両方を活性化して、Ｉ型ＩＦＮを産生し、ＧＩＴＲ－リガンドのような同時刺激分子を発現し、続いてＮＫ細胞を活性化して、ＩＦＮ－ｇを産生し、強力にＮＫ細胞の死滅機能を促進することができる。
【0168】
阻害性受容体は、２つの群に分けられ、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）と呼ばれるＩｇスーパーファミリーのもの、および細胞表面でＣＤ９４と二量体を形成する、レクチンファミリーのＮＫＧ２である。ＫＩＲは２または３ドメイン細胞外構造を有し、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、または－Ｃに結合する。ＮＫＧ２／ＣＤ９４複合体は、ＨＬＡ－Ｅを連結する。
【0169】
阻害性ＫＩＲは、ＩＴＩＭを含有する細胞内ドメインを４つまで有し、特徴づけられた最適なものは、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、およびＫＩＲ２ＤＬ３であり、これらはＨＬＡ－Ｃ分子に結合することが知られている。ＫＩＲ２ＤＬ２およびＫＩＲ２ＤＬ３は、群１のＨＬＡ－Ｃ対立遺伝子に結合し、一方、ＫＩＲ２ＤＬ１は、群２の対立遺伝子に結合する。ある特定の白血病／リンパ腫細胞は、群１および２の両方のＨＬＡ－Ｃ対立遺伝子を発現し、ＮＫ仲介細胞溶解に抵抗性であることが知られている。
【0170】
正の活性化シグナルに関して、ＡＤＣＣは、ＣＤ１６を介して仲介されると考えられ、ＣＤ２、ＣＤ３８、ＣＤ６９、ＮＫＲＰ－Ｉ、ＣＤ４０、Ｂ７－２、ＮＫ－ＴＲ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０、およびＮＫｐ４４を含む、天然の細胞障害性の原因となる多数の引き金受容体が同定されている。加えて、短い細胞質内尾部を有する幾つかのＫＩＲ分子も、刺激性である。これらのＫＩＲ（ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、およびＫＩＲ２ＤＳ４）は、ＨＬＡ－Ｃに結合することが知られており、これらの細胞外ドメインは関連する阻害性ＫＩＲと同一である。活性化ＫＩＲは、ＩＴＩＭを欠いており、代わりに、ＤＡＰ１２と結合し、ＮＫ細胞活性化をもたらす。阻害性ＫＩＲ対活性化ＫＩＲの発現制御の機構は、依然として不明である。
【0171】
腫瘍細胞
幾つかの実施形態において、活性化部分は、腫瘍細胞を活性化することができる。幾つかの報告が、マウスまたはヒトの癌または癌細胞系におけるＴＬＲの発現を記載している。例えば、ＴＬＲ１～ＴＬＲ６は、結腸、肺、前立腺、および黒色腫のマウス腫瘍細胞系により発現され（Ｈｕａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｅｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００５；６５（１２）：５００９-５０１４）、ＴＬＲ３は、ヒト乳癌細胞により発現され（Ｓａｌａｕｎ Ｂ，Ｃｏｓｔｅ Ｉ，Ｒｉｓｓｏａｎ ＭＣ，Ｌｅｂｅｃｑｕｅ ＳＪ，Ｒｅｎｎｏ Ｔ．ＴＬＲ３ ｃａｎ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｔｒｉｇｇｅｒ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６；１７６（８）：４８９４-４９０１）、肝細胞癌および胃癌細胞は、ＴＬＲ２およびＴＬＲ４（Ｈｕａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｖｉａ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７；６７（９）：４３４６-４３５２）を発現し、ＴＬＲ９（Ｄｒｏｅｍａｎｎ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ９．Ｒｅｓｐｉｒ Ｒｅｓ．２００５；６：１）およびＴＬＲ４（Ｈｅ Ｗ，Ｌｉｕ Ｑ，Ｗａｎｇ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｗ，Ｌｉ Ｎ，Ｃａｏ Ｘ．ＴＬＲ４ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｉｍｍｕｎｅ ｅｓｃａｐｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７；４４（１１）：２８５０-２８５９）は、ヒト肺癌細胞により発現される。ＴＬＲ7およびＴＬＲ８は、ヒト肺癌の腫瘍細胞において見出される（Ｃｈｅｒｆｉｌｓ－Ｖｉｃｉｎｉ Ｊ，Ｐｌａｔｏｎｏｖａ Ｓ，Ｇｉｌｌａｒｄ Ｍ，Ｌａｕｒａｎｓ Ｌ，Ｖａｌｉｄｉｒｅ Ｐ Ｃａｌｉａｎｄｒｏ Ｒ，Ｍａｇｄｅｌｅｉｎａｔ Ｐ，Ｍａｍｉ－Ｃｈｏｕａｉｂ Ｆ，Ｄｉｅｕ－Ｎｏｓｊｅａｎ ＭＣ，Ｆｒｉｄｍａｎ ＷＨ，Ｄａｍｏｔｔｅ Ｄ，Ｓａｕｔeｓ－Ｆｒｉｄｍａｎ Ｃ，Ｃｒｅｍｅｒ Ｉ．Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１０；１２０（４）：１２８５-１２９７）。
幾つかの実施形態において、活性化部分は、腫瘍細胞を活性化することができる。幾つかの報告が、マウスまたはヒトの癌または癌細胞系におけるＴＬＲの発現を記載している。例えば、ＴＬＲ１～ＴＬＲ６は、結腸、肺、前立腺、および黒色腫のマウス腫瘍細胞系により発現され（Ｈｕａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｅｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００５；６５（１２）：５００９-５０１４）、ＴＬＲ３は、ヒト乳癌細胞により発現され（Ｓａｌａｕｎ Ｂ，Ｃｏｓｔｅ Ｉ，Ｒｉｓｓｏａｎ ＭＣ，Ｌｅｂｅｃｑｕｅ ＳＪ，Ｒｅｎｎｏ Ｔ．ＴＬＲ３ ｃａｎ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｔｒｉｇｇｅｒ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６；１７６（８）：４８９４-４９０１）、肝細胞癌および胃癌細胞は、ＴＬＲ２およびＴＬＲ４（Ｈｕａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｖｉａ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７；６７（９）：４３４６-４３５２）を発現し、ＴＬＲ９（Ｄｒｏｅｍａｎｎ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ９．Ｒｅｓｐｉｒ Ｒｅｓ．２００５；６：１）およびＴＬＲ４（Ｈｅ Ｗ，Ｌｉｕ Ｑ，Ｗａｎｇ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｗ，Ｌｉ Ｎ，Ｃａｏ Ｘ．ＴＬＲ４ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｉｍｍｕｎｅ ｅｓｃａｐｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７；４４（１１）：２８５０-２８５９）は、ヒト肺癌細胞により発現される。ＴＬＲ7およびＴＬＲ８は、ヒト肺癌の腫瘍細胞において見出される（Ｃｈｅｒｆｉｌｓ－Ｖｉｃｉｎｉ Ｊ，Ｐｌａｔｏｎｏｖａ Ｓ，Ｇｉｌｌａｒｄ Ｍ，Ｌａｕｒａｎｓ Ｌ，Ｖａｌｉｄｉｒｅ Ｐ Ｃａｌｉａｎｄｒｏ Ｒ，Ｍａｇｄｅｌｅｉｎａｔ Ｐ，Ｍａｍｉ－Ｃｈｏｕａｉｂ Ｆ，Ｄｉｅｕ－Ｎｏｓｊｅａｎ ＭＣ，Ｆｒｉｄｍａｎ ＷＨ，Ｄａｍｏｔｔｅ Ｄ，Ｓａｕｔeｓ－Ｆｒｉｄｍａｎ Ｃ，Ｃｒｅｍｅｒ Ｉ．Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１０；１２０（４）：１２８５-１２９７）。
【0172】
腫瘍細胞への効果は様々であり得、例えば、ヒト乳癌および黒色腫細胞におけるポリＩ：ＣによるＴＬＲ３の刺激は、腫瘍細胞のアポトーシスを直接引き起こす（Ｓａｌａｕｎ Ｂ，Ｃｏｓｔｅ Ｉ，Ｒｉｓｓｏａｎ ＭＣ，Ｌｅｂｅｃｑｕｅ ＳＪ，Ｒｅｎｎｏ Ｔ．ＴＬＲ３ ｃａｎ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｔｒｉｇｇｅｒ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６；１７６（８）：４８９４-４９０１．，Ｓａｌａｕｎ Ｂ，Ｌｅｂｅｃｑｕｅ Ｓ，Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ Ｓ，Ｒｉｍｏｌｄｉ Ｄ，Ｒｏｍｅｒｏ Ｐ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ？ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７；１３（１５ Ｐｔ １）：４５６５-４５７４）。一方、ヒト肺癌細胞は、機能的に活性なトール様受容体９を発現し、ＣｐＧ－ＯＤＮによるＴＬＲ－９発現細胞系Ａ５４９およびＨｅＬａの刺激は、抗アポトーシス効果を示した。いずれにしても、蓄積されたデータは、ＴＬＲが癌細胞と十分に関連し、直接的または間接的に効果を与え得ることを示す。
【0173】
活性化部分の化学組成物
一般に、本発明の活性化部分は、タンパク質、抗体、核酸、小分子、またはリガンドを含む。
一般に、本発明の活性化部分は、タンパク質、抗体、核酸、小分子、またはリガンドを含む。
【0174】
幾つかの実施形態において、ＡＭは、ヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８に特異的に結合することができる。
【0175】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、（ａ）一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、好ましくはＯＲＮ０２、ＯＲＮ０６、ｓｓポリ（Ｕ）、ｓｓＲＮＡ４０、ｓｓＲＮＡ４１、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、もしくはポリ（ｄＴ）、または（ｂ）リガンド類縁体、好ましくはＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ２６４、ＣＬ３０７、ガーディキモド、ロキソリビン、イミキモド、もしくはレシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）を含む。
【0176】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ＴＬＲリガンド（ＴＬＲＬ）、Ｎｏｄ様受容体リガンド、ＲＩＧ様受容体リガンド、ＣＬＲリガンド、ＣＤＳリガンド、またはインフラマソーム誘発剤を含む。
【0177】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ７／ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＴＬＲ１０からなる群から選択される１つ以上のＴＬＲのリガンドを含む。
【0178】
ＴＬＲは、微生物産物を感知する、および／または適応免疫応答を開始する、タンパク質のファミリーである。ＴＬＲは樹状細胞（ＤＣ）を活性化する。ＴＬＲは、ロイシン豊富反復の外部ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ＴＩＲ（トール／インターロイキン受容体）ドメインを含有する、保存膜貫通分子である。ＴＬＲは、多くの場合に「ＰＡＭＰ」（病原体関連分子パターン）と呼ばれる、微生物内の特有の構造を認識する。ＴＬＲに結合するリガンドは、炎症および免疫に関与する因子の産生を誘発する細胞内シグナル伝達経路のカスケードを引き起こす。
【0179】
これらの受容体に使用できる例示的な作動薬には、限定されることなく、リポタンパク質、リポポリペプチド、ペプチドグリカン、ザイモサン、リポ多糖、ナイセリアタンパク質、フラゲイリン（ｆｌａｇｅｉｌｉｎ）、プロフィイリン（ｐｒｏｆｉｉｌｉｎ）、ガラクトセラミド、ムラミルジペプチド、ギウコピラノシル（ｇｉｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）脂質Ａ（ＧＬＡ）、およびレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（Ｒ８４８）が含まれる。ペプチドグリカン、リポタンパク質、およびリポタイコ酸は、グラム陽性の細胞壁成分である。リポ多糖は、大部分の細菌により発現される。フラゲイリンは、病原性および片利共生性の細菌により分泌される細菌鞭毛の構造成分である。ガラクトシルセラミド（α－ＧａｌＣｅｒ）は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性化剤である。ムラミルジペプチドは、全ての細菌において共通な生体活性ペプチドグリカンモチーフである。そのような作動薬は、トール様受容体を介して先天免疫活性を仲介する。同族受容体に対する作動薬の特異的結合は、多くの場合、親和性で表される。本発明のリガンドは、約１０４Ｍ－１～約１０８Ｍ－１の親和性で結合することができる。親和性は、Ｋｄ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎにより計算される（ｋｏｆｆは、解離速度定数であり、ｋｏｎは、会合速度定数であり、Ｋｄは、平衡定数である）。単一または複数の作動薬を使用することができる。
【0180】
ヒトでは、少なくとも８つのＴＬＲが同定されている。細胞の表面に発現するＴＬＲには、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ７／ＴＬＲ８が含まれ、ＴＬＲ９およびＴＬＲ１０は、ＥＲ区画により発現される。ヒト樹状細胞サブセットは、特有のＴＬＲ発現パターンに基づいて同定され得る。例としては、ＤＣの骨髄または「従来」のサブセット（ｍＤＣ）は、刺激されたとき、ＴＬＲ２～８を発現し、一連の活性化マーカー（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩ、ＣＣＲ７）、炎症促進性サイトカイン、ならびにケモクム（ｃｈｅｍｏｋｍｅ）が産生される。この刺激の結果、およびもたらされる発現は、抗原特異的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞初回刺激である。これらのＤＣは、増強された許容量を得て抗体を取り込み、これらを適切な形態でＴ細胞に提示する。対照的に、ＤＣの形質細胞様サブセット（ｐＤＣ）は、活性化によりＴＬＲ７およびＴＬＲ９のみを発現し、ＮＫ細胞、ならびにＴ細胞の活性化をもたらす。特定の理論に束縛されることを望むものではないが、死亡腫瘍細胞がＤＣ機能に有害な影響を与え得るので、ＴＬＲ作動薬によるＤＣの活性化は、癌を治療する免疫療法の手法において、抗腫瘍免疫を初回刺激するのに有益であると仮定される。放射線および化学療法を使用する乳癌の治療の成功には、ＴＬＲ４の活性化が必要であることも示唆されている。
【0181】
当該技術に既知であり、本発明に有用であるＴＬＲ作動薬には、以下が含まれるが、これらに限定されない。パム（Ｐａｍ）３Ｃｙｓ、ＴＬＲ－１／２作動薬；細胞壁成分生成物（ＬＡＭ、ＬＭ、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ＬＴＡ）、ＴＬＲ－２作動薬；ＭＡＬＰ２、ＴＬＲ－２作動薬；Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＴＬＲ－２作動薬；ＦＳＬ、ＴＬＲ－２作動薬；ザイモサン、ＴＬＲ－２作動薬；ＰＧＮ、ＴＬＲ－２作動薬；ポリリボシン酸（ｐｏｌｙｒｉｂｏｓｉｎｉｃ）；ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、ＴＬＲ－３作動薬；ポリアデノシン－ポリウリシジル酸（ポリＡＵ）、ＴＬＲ－３作動薬；ポリ－Ｌ－リシンおよびカルボキシメチルセリチロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｉｔｉｌｏｓｅ）（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））により安定化されたポリイノシン－ポリシチジル酸、ＴＬＲ－３作動薬；モノホスポリル（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐ ｏｒｙｌ）リピドＡ（ＭＰＬ）、ＴＬＲ－４作動薬；ＬＰＳ、ＴＬＲ－４作動薬；細菌フラゲリン、ＴＬＲ－５作動薬；ＦＬＡ、ＴＬＲ－５作動薬；ＯＲＮ０２、ＴＬＲ－７／８作動薬；ＯＲＮ０６、ＴＬＲ－７／８作動薬；ｓｓポリ（Ｕ）、ＴＬＲ－７／８作動薬；ｓｓＲＮＡ４０、ＴＬＲ－７／８作動薬；ｓｓＲＮＡ４１、ＴＬＲ－７／８作動薬；ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、７／８作動薬；ポリ（ｄＴ）、ＴＬＲ－７／８作動薬；ＣＬ０７５、ＴＬＲ－７／８作動薬；ＣＬ０９７、ＴＬＲ－７／８作動薬；ＣＬ２６４、ＴＬＲ－７／８作動薬；ＣＬ３０７、ＴＬＲ－７／８作動薬；ガーディキモド、ＴＬＲ－７／８作動薬；ロキソリビン、ＴＬＲ－７／８作動薬；イミキモド、ＴＬＲ－７／８作動薬；レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）、ＴＬＲ－７／８作動薬；ならびにＯＤＮ１５８５、ＴＬＲ－９作動薬；ＯＤＮ１６６８、ＴＬＲ－９作動薬；ＯＤＮ１８２６、ＴＬＲ－９作動薬；ＯＤＮ２００６、ＴＬＲ－９作動薬；ＯＤＮ２００７、ＴＬＲ－９作動薬；ＯＤＮ２２１６、ＴＬＲ－９作動薬；ＯＤＮ２３３６、ＴＬＲ－９作動薬；ＯＤＮ２３９５、ＴＬＲ－９作動薬；ＯＤＮ Ｍ３６２ ＴＬＲ－９作動薬。
【0182】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、
（ｉ）（ａ）加熱死菌生成物、好ましくはＨＫＡＬ、ＨＫＥＢ、ＨＫＨＰ、ＨＫＬＭ、ＨＫＬＰ、ＨＫＬＲ、ＨＫＭＦ、ＨＫＰＡ、ＨＫＰＧ、またはＨＫＳＡ、ＨＫＳＰ、および（ｂ）細胞壁成分生成物、好ましくはＬＡＭ、ＬＭ、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ＬＴＡ、ＰＧＮ、ＦＳＬ、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、またはザイモサンからなる群から選択されるＴＬＲ２のリガンド、
（ｉｉ）ポリ（Ｉ：Ｃ）およびポリ（Ａ：Ｕ）からなる群から選択されるＴＬＲ３のリガンド、
（ｉｉｉ）ＬＰＳおよびＭＰＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ４のリガンド、
（ｉｖ）ＦＬＡおよびフラゲリンからなる群から選択されるＴＬＲ５のリガンド、
（ｖ）ＯＲＮ０２（ＴＬＲ８）、ＯＲＮ０６（ＴＬＲ８）、ｓｓポリ（Ｕ）（ＴＬＲ８）、ｓｓＲＮＡ４０（ＴＬＲ８）、ｓｓＲＮＡ４１（ＴＬＲ８）、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ（ＴＬＲ８）ポリ（ｄＴ）（ＴＬＲ７／８）、ＣＬ０７５（ＴＬＲ７／８）、ＣＬ０９７（ＴＬＲ７／８）、ＣＬ２６４（ＴＬＲ７）、ＣＬ３０７（ＴＬＲ７）、ガーディキモド（ＴＬＲ７）、ロキソリビン（ＴＬＲ７）、イミキモド（ＴＬＲ７／８）、およびレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（ＴＬＲ７／８）からなる群から選択されるるＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ７およびＴＬＲのリガンド、
（ｖｉ）ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１８２６、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２００７、ＯＤＮ２２１６、ＯＤＮ２３３６、ＯＤＮ２３９５、およびＯＤＮ Ｍ３６２からなる群から選択されるＴＬＲ９のリガンド、
（ｖｉｉ）ＴＬＲ１０のリガンド、
（ｖｉｉｉ）ＮＯＤ１作動薬（Ｃ１２－ｉＥ－ＤＡＰ、ｉＥ－ＤＡＰ、Ｔｒｉ－ＤＡＰ）、ＮＯＤ２作動薬（Ｌ１８－ＭＤＰ、ＭＤＰ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ－Ｄ－ＡＳＮ、ムラブチド（Ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ）、Ｎ－グリコリル－ＭＤＰ）、およびＮＯＤ１／ＮＯＤ２作動薬（Ｍ－ＴｒｉＤＡＰ、ＰＧＮ）からなる群から選択されるヌクレオチドオリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様のリガンド、
（ｉｘ）５′ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、およびポリ（Ｉ：Ｃ）からなる群から選択される１つ以上のＲＩＧ－Ｉ－様受容体（ＲＬＲ）のリガンド、
（ｘ）カードランＡＬ、ＨＫＣＡ、ＨＫＳＣ、ＷＧＰ、ザイモサン、およびトレハロース－６，６－ジベヘン酸塩からなる群から選択される１つ以上のＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）のリガンド、
（ｘｉ）ｃ－ＧＭＰ、ｃ－Ｇ－ＡＭＰ、ｃ－Ｇ－ＧＭＰ、ｃ－Ａ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＵＭＰ、ＨＳＶ－６０、ＩＳＤ、ｐＣｐＧ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、ポリ（ｄＡ）、およびＶＡＣＶ－７０からなる群から選択される１つ以上の細胞質ＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）のリガンド、ならびに
（ｘｉｉ）（ａ）ＮＬＲＰ３インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはミョウバン結晶、ＡＴＰ、ＣＰＰＤ結晶、ヘルモゾイン（Ｈｅｒｍｏｚｏｉｎ）、ＭＳＵ結晶、ナノＳｉＯ２、ナイジェリシン、および（ｂ）ＡＩＭ２インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはポリ（ｄＡ：ｄＴ）からなる群から選択されるインフラマソーム誘発剤、
を含む。
（ｉ）（ａ）加熱死菌生成物、好ましくはＨＫＡＬ、ＨＫＥＢ、ＨＫＨＰ、ＨＫＬＭ、ＨＫＬＰ、ＨＫＬＲ、ＨＫＭＦ、ＨＫＰＡ、ＨＫＰＧ、またはＨＫＳＡ、ＨＫＳＰ、および（ｂ）細胞壁成分生成物、好ましくはＬＡＭ、ＬＭ、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ＬＴＡ、ＰＧＮ、ＦＳＬ、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、またはザイモサンからなる群から選択されるＴＬＲ２のリガンド、
（ｉｉ）ポリ（Ｉ：Ｃ）およびポリ（Ａ：Ｕ）からなる群から選択されるＴＬＲ３のリガンド、
（ｉｉｉ）ＬＰＳおよびＭＰＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ４のリガンド、
（ｉｖ）ＦＬＡおよびフラゲリンからなる群から選択されるＴＬＲ５のリガンド、
（ｖ）ＯＲＮ０２（ＴＬＲ８）、ＯＲＮ０６（ＴＬＲ８）、ｓｓポリ（Ｕ）（ＴＬＲ８）、ｓｓＲＮＡ４０（ＴＬＲ８）、ｓｓＲＮＡ４１（ＴＬＲ８）、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ（ＴＬＲ８）ポリ（ｄＴ）（ＴＬＲ７／８）、ＣＬ０７５（ＴＬＲ７／８）、ＣＬ０９７（ＴＬＲ７／８）、ＣＬ２６４（ＴＬＲ７）、ＣＬ３０７（ＴＬＲ７）、ガーディキモド（ＴＬＲ７）、ロキソリビン（ＴＬＲ７）、イミキモド（ＴＬＲ７／８）、およびレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（ＴＬＲ７／８）からなる群から選択されるるＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ７およびＴＬＲのリガンド、
（ｖｉ）ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１８２６、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２００７、ＯＤＮ２２１６、ＯＤＮ２３３６、ＯＤＮ２３９５、およびＯＤＮ Ｍ３６２からなる群から選択されるＴＬＲ９のリガンド、
（ｖｉｉ）ＴＬＲ１０のリガンド、
（ｖｉｉｉ）ＮＯＤ１作動薬（Ｃ１２－ｉＥ－ＤＡＰ、ｉＥ－ＤＡＰ、Ｔｒｉ－ＤＡＰ）、ＮＯＤ２作動薬（Ｌ１８－ＭＤＰ、ＭＤＰ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ－Ｄ－ＡＳＮ、ムラブチド（Ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ）、Ｎ－グリコリル－ＭＤＰ）、およびＮＯＤ１／ＮＯＤ２作動薬（Ｍ－ＴｒｉＤＡＰ、ＰＧＮ）からなる群から選択されるヌクレオチドオリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様のリガンド、
（ｉｘ）５′ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、およびポリ（Ｉ：Ｃ）からなる群から選択される１つ以上のＲＩＧ－Ｉ－様受容体（ＲＬＲ）のリガンド、
（ｘ）カードランＡＬ、ＨＫＣＡ、ＨＫＳＣ、ＷＧＰ、ザイモサン、およびトレハロース－６，６－ジベヘン酸塩からなる群から選択される１つ以上のＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）のリガンド、
（ｘｉ）ｃ－ＧＭＰ、ｃ－Ｇ－ＡＭＰ、ｃ－Ｇ－ＧＭＰ、ｃ－Ａ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＵＭＰ、ＨＳＶ－６０、ＩＳＤ、ｐＣｐＧ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、ポリ（ｄＡ）、およびＶＡＣＶ－７０からなる群から選択される１つ以上の細胞質ＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）のリガンド、ならびに
（ｘｉｉ）（ａ）ＮＬＲＰ３インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはミョウバン結晶、ＡＴＰ、ＣＰＰＤ結晶、ヘルモゾイン（Ｈｅｒｍｏｚｏｉｎ）、ＭＳＵ結晶、ナノＳｉＯ２、ナイジェリシン、および（ｂ）ＡＩＭ２インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはポリ（ｄＡ：ｄＴ）からなる群から選択されるインフラマソーム誘発剤、
を含む。
【0183】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ＩＭＯ２１３４、ＩＭＯ２０５、ＭＧＮ－１７０３、ＭＧＮ－１７０４、アガトリモド（Ａｇａｔｏｌｉｍｏｄ）、ＳＤ－１０１、ＱＡＸ－９３５、ＤＩＭＳ０１５０、ポリネクスクアットロ、ＯＭ－１７４、エリトラン、ＴＡＫ－２４２、ＮＩ－０１０１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１８、ＩＬ－７、またはＩＬ－１５を含む。
【0184】
幾つかの実施形態において、活性化部分は、ヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８に特異的に結合することができ、好ましくは、レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（Ｒ８４８）のように、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方に特異的に結合し、したがってｐＤＣおよびｍＤＣの両方を活性化することができる。ＴＬＲ７およびＴＬＲ８は、系統的および構造的に関連している。ＴＬＲ７は、ヒトｐＤＣおよびＢ細胞により選択的に発現される。ＴＬＲ８は、ｍＤＣ、単球、マクロファージ、および骨髄抑制細胞において優位に発現される。ＴＬＲ７特異的作動薬は、形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）を活性化して、大量の１型ＩＦＮを産生し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、およびｍＤＣの活性化を促進する同時刺激分子を高いレベルで発現する。ＴＬＲ８特異的作動薬は、骨髄ＤＣ、単球、マクロファージ、または骨髄由来抑制細胞を活性化して、大量の１型ＩＦＮ、ＩＬ－１２、およびＩＬ－２３を産生し、抗原特異的ＣＤ４およびＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を促進するＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、および同時刺激分子を高いレベルで発現する。
【0185】
ＴＬＲを介してヒト免疫細胞を活性化する追加の部分または分子は、ＴＬＲレポーター細胞系、例えばＩｎｖｉｖｏＧｅｎからの２９３／ＴＬＲレポーター細胞により同定され得る。
【0186】
ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８を活性化することができる追加の部分または分子は、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎからの２９３／ＴＬＲレポーター細胞、ならびにｐＤＣを刺激して、１型ＩＦＮを産生する、およびｍＤＣを刺激して、１型ＩＦＮおよびＩＬ－１２を産生する、また、ＣＤ８０、ＣＤ８６の発現をアップレギュレートする、これらの追加の部分の能力を使用して、同定され得る。
【0187】
１型ＩＦＮ、ならびに活性化ｐＤＣおよび／またはｍＤＣにより発現されたＧＩＴＲリガンドのような同時刺激分子を介してＮＫ細胞を活性化することができる活性化部分は、全末梢血単核細胞アッセイにおいて、ＮＫ細胞増殖および活性化マーカーＣＤ６９の発現により同定され得る。
【0188】
細胞死を被る、および１型ＩＦＮ、ＩＬ－１ａ／ｂ、ＴＮＦ、またはＩＬ－６のようなサイトカインを産生するように、腫瘍細胞を活性化することができる活性化部分は、当該技術に既知の方法を使用して同定され得る。
【0189】
ＤＣ細胞、単球、マクロファージ、骨髄抑制細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または腫瘍細胞を活性化することができる追加の活性化部分または分子は、当該技術に既知の方法を使用して同定され得る。
【0190】
幾つかの実施形態において、標的部分が抗体（もしくは、そのフラグメント）、またはアプタマーを含む場合、活性化部分は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含まない。
【0191】
幾つかの実施形態において、特に、標的部分が、抗体もしくはそのフラグメント、またはアプタマーを含む場合、活性化部分は、化学療法剤のような治療剤、または抗体薬剤複合体に一般に使用される毒素のような）毒素を含まない。したがって、一般に本発明の化合物は、抗体薬剤複合体（ＡＤＣ）または抗体ＣｐＧ複合体を包含しない。
【0192】
Ｃ． リンカー
一般に、本発明の化合物は、標的部分および活性化部分を結合するリンカーを含む。しかし、幾つかの化合物において、リンカーが存在せず、活性化部分および標的部分は直接結合している。
一般に、本発明の化合物は、標的部分および活性化部分を結合するリンカーを含む。しかし、幾つかの化合物において、リンカーが存在せず、活性化部分および標的部分は直接結合している。
【0193】
本明細書において「リンカー」とは、第１の分子を、化学結合を介して第２の分子に接続する部分を意味する。本発明のリンカーでは、接続は、生物学的に活性な形態の第１および／または第２の分子を放出するように切断され得る。リンカーの好ましい例は、中性ｐＨで安定しているが、低ｐＨの条件下で容易に切断される結合を含む部分である。リンカーの特に好ましい例は、７～８のｐＨ値で安定しているが、４～６のｐＨ値で容易に切断される結合を含む部分である。リンカーの別の例は、酵素の存在により容易に切断される結合を含む部分である。そのような酵素感受性リンカーの好ましい例は、エンドソームペプチドの認識配列を含むペプチドである。リンカーの別の例は、低還元電位（例えば、低チオールまたはグルタチオン濃度）の条件下で安定しているが、高還元電位（例えば、高チオールまたはグルタチオン濃度）の条件下で切断される、酸化還元電位感受性リンカーである。そのような酸化還元電位感受性リンカーの好ましい例には、ジスルフィドおよびスルフェンアミドが挙げられる。特に好ましい例には、チオールとの反応に対してジスルフィド結合の感受性を制御するように、アリール基が、立体的に嵩高い電子吸引性または電子供与性置換基により置換されている、置換アリールアルキルジスルフィドが挙げられる。リンカーの別の例は、放射線への曝露により容易に切断される結合を含む部分である。そのような放射線感受性リンカーの好ましい例は、光への曝露により切断される２－ニトロベンジルエーテルである。リンカーの特に好ましい例は、結合が切断されるまで、２つの結合分子のうちの一方の生物学的活性を遮蔽する部分である。
【0194】
幾つかの実施形態において、本発明の化合物は、ヒドラジン基、ポリペプチド、ジスルフィド基、およびチオエーテル基からなる群から選択されるリンカーを含む。
【0195】
本明細書において「ヒドラジン基」または「ヒドラジンリンカー」または「自己環化ヒドラジンリンカー」は、ｐＨのシフトのような条件の変化によって、環化反応を受けて、１つ以上の環を形成するリンカー部分を意味する。ヒドラジン部分は、結合すると、ヒドラゾンに変換される。この結合は、例えば、Ｌ４部分のケトン基との反応を介して生じ得る。したがって、ヒドラジンリンカーという用語は、結合によるヒドラゾンへのこの変換のため、本発明のリンカーを表すのに使用することもできる。
【0196】
本明細書において「五員ヒドラジンリンカー」または「５員ヒドラジンリンカー」は、ｐＨのシフトのような条件の変化によって、環化反応を受けて、１つ以上の５員環を形成するヒドラジン含有分子部分を意味する。あるいは、この五員リンカーは、五員ヒドラジンリンカーまたは５員ヒドラジンリンカーとして同様に記載され得る。
【0197】
本明細書において「六員ヒドラジンリンカー」または「６員ヒドラジンリンカー」は、ｐＨのシフトのような条件の変化によって、環化反応を受けて、１つ以上の６員環を形成するヒドラジン含有分子部分を意味する。この六員リンカーは、六員ヒドラジンリンカーまたは６員ヒドラジンリンカーとして同様に記載され得る。
【0198】
本明細書において「環化反応」は、ペプチド、ヒドラジン、またはジスルフィドリンカーの環化を意味し、そのリンカーの環への環化を示し、薬剤リガンド複合体の分離を開始する。この割合は、生体外で測定され、生成物の少なくとも９０％、９５％、または１００％が形成されたときに完了する。
【0199】
幾つかの実施形態において、本発明の化合物は、標的部分と活性化部分の間にリンカー領域を含み、リンカーは、細胞内環境（例えば、リソソームもしくはエンドソーム、またはリポソーム、またはカベオラ内）に存在する切断剤より切断可能である。リンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼ、またはリソソームもしくはエンドソームプロテアーゼが含まれるが、これらに限定されないプロテアーゼ酵素により切断されるペプチジルリンカーであり得る。典型的には、ペプチジルリンカーは、少なくとも２個のアミノ酸長さ、または少なくとも３個のアミノ酸長さである。切断剤には、カテプシンＢおよびＤ、ならびにプラスミンが含まれ得、これらは全てジペプチド薬剤誘導体を加水分解して、標的細胞内に活性薬剤の放出をもたらすことが知られている（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３を参照すること）。最も典型的なものは、標的細胞または組織に存在する酵素により切断可能であるペプチジルリンカーである。例えば、チオール依存性プロテアーゼカテプシンＢにより切断可能であり、かつ癌性組織において高度に発現しているペプチジルリンカーを、使用することができる（例えば、Ｐｈｅ－ＬｅｕまたはＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙリンカー）。他のそのようなリンカーは、例えば米国特許第６，２１４，３４５号に記載されている。幾つかの実施形態において、細胞内プロテアーゼにより切断可能なペプチジルリンカーは、Ｖａｌ－ＣｉｔリンカーまたはＰｈｅ－Ｌｙｓリンカーである（例えば、ｖａｌ－ｃｉｔリンカーによるドキソルビシンの合成を記載する米国特許第６，２１４，３４５号を参照すること）。治療剤の細胞内タンパク質溶解性放出を使用する１つの利点は、薬剤が、複合されたときに典型的には弱毒化されること、および複合体の血清安定性が典型的に高いことである。
【0200】
幾つかの実施形態において、切断可能リンカーは、ｐＨ感受性であり、すなわち、ある特定のｐＨ値での加水分解に感受性がある。典型的には、酸性条件下で加水分解可能なｐＨ感受性リンカー。例えば、リソソーム内で加水分解可能な酸不安定リンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス－アコニット酸アミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を使用することできる。（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号、同第５，８２４，８０５号、同第５，６２２，９２９号、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３；Ｎｅｖｉｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３－１４６６１を参照すること）。そのようなリンカーは、血液中のような中性ｐＨ条件下で比較的安定しているが、ほぼリソソームのｐＨであるｐＨ５．５または５．０未満では不安定である。ある特定の実施形態において、加水分解性リンカーは、チオエーテルリンカーである（例えば、アクリルヒドラゾン結合を介して治療剤に結合したチオエーテル（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号を参照すること））。
【0201】
なお他の実施形態において、リンカーは、還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－５－アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）ブチレート）およびＳＭＰＴ（Ｎ－スクシンイミジル－オキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－ピリジル－ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴ（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：５９２４－５９３１；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７を参照すること。また、米国特許第４，８８０，９３５号を参照すること）を使用して形成され得るものを含む様々なジスルフィドリンカーが、当該技術において知られている。
【0202】
なお他の特定の実施形態において、リンカーは、マロン酸塩リンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５：１３８７－９３）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ－Ｍｅｄ－Ｃｈｅｍ．３（１０）：１２９９－１３０４）、または３′－Ｎアミド類縁体（Ｌａｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ－Ｍｅｄ－Ｃｈｅｍ．３（１０）：１３０５－１２）である。
【0203】
典型的には、リンカーは、細胞外環境に対して実質的に感受性がない。本明細書で使用されるとき、「細胞外環境に対して実質的に感受性がない」は、リンカーの文脈において、本発明の化合物の試料中の約２０％以下、典型的には約１５％以下、より典型的には約１０％以下、さらにより典型的には約５％以下、約３％以下、または約１％以下のリンカーが、本発明の化合物が細胞外環境（例えば、血漿）に存在する場合に切断されることを意味する。リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性がないかは、例えば、血漿と共に、（ａ）本発明の化合物（「化合物試料」）および（ｂ）等モル量の非複合抗体または治療剤（「対照試料」）の両方を所定の時間（例えば、２、４、８、１６、または２４時間）にわたって独立してインキュベートし、次に、例えば高速液体クロマトグラフィーにより測定して、化合物試料中の非複合抗体または治療剤の量を、対照試料に存在するものと比較することによって、決定され得る。
【0204】
他の非相互排他的実施形態において、リンカーは細胞内部移行を促進する。ある特定の実施形態において、リンカーは、活性化部分と複合したときに細胞内部移行を促進する。なお他の実施形態において、リンカーは、標的部分および活性化部分の両方と複合したときに細胞内部移行を促進する。
【0205】
本発明の組成物および方法で使用され得る様々なリンカーは、国際公開第２００４０１０９５７号、表題「Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ，Ａｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｒ ａｎ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ」、 ＵＳ２０１２０１４１５０９Ａ１、およびＵＳ２０１２０２８８５１２Ａ１に記載されている（これらの開示は、参照として本明細書に組み込まれる）。
【0206】
ある特定の実施形態において、リンカー単位は、以下の一般式、－Ｔａ－Ｗｗ－Ｙｙ－を有し、
式中、－Ｔ－は、ストレッチャー単位であり、ａは、０または１であり、各－Ｗ－は、独立してアミノ酸単位であり、ｗは、独立して２～１２の範囲の整数であり、－Ｙ－は、スペーサー単位であり、ｙは、０、１、または２である。
式中、－Ｔ－は、ストレッチャー単位であり、ａは、０または１であり、各－Ｗ－は、独立してアミノ酸単位であり、ｗは、独立して２～１２の範囲の整数であり、－Ｙ－は、スペーサー単位であり、ｙは、０、１、または２である。
【0207】
ストレッチャー単位
ストレッチャー単位（－Ｔ－）は、存在する場合、標的部分をアミノ酸単位（－Ｗ－）に結合させる。天然または化学操作された抗体のような標的部分に存在し得る有用な官能基には、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマーヒドロキシル基、およびカルボキシルが含まれるが、これらに限定されない。適切な官能基は、スルフヒドリルおよびアミノである。スルフヒドリル基は、抗体の分子内ジスルフィド結合の還元により生成され得る。あるいは、スルフヒドリル基は、抗体のリシン部分のアミノ基と、２－イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）または他のスルフヒドリル生成試薬との反応により、生成され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、組み換え抗体であり、１つ以上のリシンを担持するために操作される。他の実施形態において、組み換え抗体は、追加のスルフヒドリル基、例えば追加のシステインを担持するために操作される。
ストレッチャー単位（－Ｔ－）は、存在する場合、標的部分をアミノ酸単位（－Ｗ－）に結合させる。天然または化学操作された抗体のような標的部分に存在し得る有用な官能基には、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマーヒドロキシル基、およびカルボキシルが含まれるが、これらに限定されない。適切な官能基は、スルフヒドリルおよびアミノである。スルフヒドリル基は、抗体の分子内ジスルフィド結合の還元により生成され得る。あるいは、スルフヒドリル基は、抗体のリシン部分のアミノ基と、２－イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）または他のスルフヒドリル生成試薬との反応により、生成され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、組み換え抗体であり、１つ以上のリシンを担持するために操作される。他の実施形態において、組み換え抗体は、追加のスルフヒドリル基、例えば追加のシステインを担持するために操作される。
【0208】
幾つかの実施形態において、ストレッチャー単位は、抗体の硫黄原子との結合を形成する。硫黄原子は、還元された抗体（Ａ）のスルフヒドリル（－ＳＨ）基から誘導され得る。これらの実施形態の代表的なストレッチャー単位は、式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）の角括弧内に表されており、式中、－Ａ－、－Ｗ－、－Ｙ－、－Ｄ、ｗ、およびｙは、上記に定義されたとおりであり、Ｒ１は、－Ｃ１～Ｃ１０アルキレン、－Ｃ３～Ｃ８カルボシクロ－、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ８アルキル）－、－アリーレン－、－Ｃ１～Ｃ１０アルキレン－アリーレン－、－アリーレン－Ｃ１～Ｃ１０アルキレン－、－Ｃ１－Ｃ１０アルキレン－（Ｃ３～Ｃ８カルボシクロ）－、－（Ｃ３～Ｃ８カルボシクロ）－Ｃ１～Ｃ１０アルキレン－、－Ｃ３～Ｃ８ヘテロシクロ－、－Ｃ１～Ｃ１０アルキレン－（Ｃ３～Ｃ８ヘテロシクロ）－、－（Ｃ３～Ｃ８ヘテロシクロ）－Ｃ１～Ｃ１０アルキレン－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－、および－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－ＣＨ２－であり、ｒは、１～１０の範囲の整数である。
【化1】
【0209】
例示的なストレッチャー単位は、式（ＩＩａ）のものであり、式中、Ｒ１は、－（ＣＨ２）５－である。
【化2】
【0210】
別の例示的なストレッチャー単位は、式（ＩＩａ）のものであり、式中、Ｒ１は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－ＣＨ２－であり、ｒは、２である。
【化3】
【0211】
更に別の例示的なストレッチャー単位は、式（ＩＩｂ）のものであり、式中、Ｒ１は、－（ＣＨ２）５－である。
【化4】
【0212】
他のある特定の実施形態において、ストレッチャー単位は、抗体単位の硫黄原子とストレッチャー単位の硫黄原子の間のジスルフィド結合を介して、別の単位（Ａ）に結合している。この実施形態の代表的なストレッチャー単位は、式（ＩＩＩ）の角括弧内に表されており、式中、Ｒ１、－Ａ－、－Ｗ－、－Ｙ－、－Ｄ、ｗ、およびｙは、上記に定義されたとおりである。
【化5】
【0213】
別の特定の実施形態において、ストレッチャーの反応性基は、抗体のアミノ基と反応性であり得る反応部位を含有する。アミノ基は、アルギニンまたはリシンのものであり得る。適切なアミン反応部位には、スクシンイミドエステル、４－ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、およびイソチオシアネートなどの活性化エステルが含まれるが、これらに限定されない。これらの実施形態の代表的なストレッチャー単位は、式（ＩＶａ）および（ＩＶｂ）の角括弧内に表されており、式中、Ｒ１、Ａ－、－Ｗ－、－Ｙ－、－Ｄ、ｗ、およびｙは、上記に定義されたとおりである。
【化6】
【0214】
なお別の態様において、ストレッチャーの反応性官能基は、抗体に存在し得る修飾炭水化物基と反応性である反応部位を含有する。幾つかの実施形態において、抗体は、酵素的にグリコシル化されて、炭水化物部分を提供する。炭水化物は、過ヨウ素酸ナトリウムのような試薬により中程度に酸化され、酸化された炭化水素のカルボニル単位は、Ｋａｎｅｋｏ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ ２：１３３－４１に記載されているような、ヒドラジド、オキシム、反応性アミン、ヒドラジン、チオセミカルバジド、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドのような官能基を含有するストレッチャーと縮合され得る。この実施形態の代表的なストレッチャー単位は、式（Ｖａ）～（ＩＶｃ）の角括弧内に表されており、式中、Ｒ１、Ａ－、－Ｗ－、－Ｙ－、－Ｄ、ｗ、およびｙは、上記に定義されたとおりである。
【化7】
【0215】
アミノ酸単位
アミノ酸単位（－Ｗ－）は、ストレッチャー単位（－Ｔ－）を、スペーサー単位が存在する場合にはスペーサー単位（－Ｙ－）に結合させ、ストレッチャー単位を、スペーサー単位が不在の場合には細胞障害剤または細胞増殖抑制剤（活性化部分、Ｄ）に結合させる。－Ｗｗ－は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチド、またはドデカペプチド単位である。各－Ｗ－単位は、独立して、下記に示されている角括弧内に式を有し、ｗは、２～１２の範囲の整数であり、
式中、Ｒ２は、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ベンジル、ｐ－ヒドロキシベンジル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、－ＣＨ２ＣＯＮＨ２、－ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）３ＮＨ２、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、－（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）４ＮＨ２、－（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、－（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、－（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２－ピリジルメチル－、３－ピリジルメチル－、４－ピリジルメチル－、フェニル、シクロヘキシル、
である。
アミノ酸単位（－Ｗ－）は、ストレッチャー単位（－Ｔ－）を、スペーサー単位が存在する場合にはスペーサー単位（－Ｙ－）に結合させ、ストレッチャー単位を、スペーサー単位が不在の場合には細胞障害剤または細胞増殖抑制剤（活性化部分、Ｄ）に結合させる。－Ｗｗ－は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチド、またはドデカペプチド単位である。各－Ｗ－単位は、独立して、下記に示されている角括弧内に式を有し、ｗは、２～１２の範囲の整数であり、
【化8】
【化9】
【0216】
リンカーのアミノ酸単位は、腫瘍関連プロテアーゼが含まれるが、これに限定されない酵素により酵素的に切断されて、活性化部分（－Ｄ）を遊離することができ、これは、放出されるとインビボでプロトン化されて、活性化分子（Ｄ）を提供する。
【0217】
例示的なＷｗ単位は、式（ＶＩ）～（ＶＩＩＩ）により表される。
式中、Ｒ３およびＲ４は、以下のとおりである。
式中、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、以下のとおりである。
式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、以下のとおりである。
【化10】
【表2】
【化11】
【表3】
【化12】
【表4】
【0218】
適切なアミノ酸単位には、式（ＶＩ）の単位が含まれるが、これらに限定されず、式中、Ｒ３は、ベンジルであり、Ｒ４は、－（ＣＨ２）４ＮＨ２であり、Ｒ３は、イソプロピルであり、Ｒ４は、-（ＣＨ２）４ＮＨ２であり；またはＲ３は、イソプロピルであり、Ｒ４は、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２である。別の適切なアミノ酸単位は、式（ＶＩＩ）の単位であり、式中、Ｒ３は、ベンジルであり、Ｒ４は、ベンジルであり、Ｒ５は、－（ＣＨ２）４ＮＨ２である。－Ｗｗ－単位は、特定の腫瘍関連プロテアーゼによる酵素切断に対する選択性において設計および最適化され得る。適切な－Ｗｗ－単位は、プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、およびＤ、ならびにプラスミンにより触媒される切断のものである。
【0219】
幾つかの実施形態において、－Ｗｗ－は、ジペプチド、トリペプチド、またはテトラペプチド単位である。
【0220】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６が水素以外である場合、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６が結合する炭素原子はキラルである。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６が結合する各炭素原子は、（Ｓ）または（Ｒ）立体配置において独立している。
【0221】
幾つかの実施形態において、アミノ酸単位は、フェニルアラニン－リシンジペプチド（Ｐｈｅ－ＬｙｓまたはＦＫリンカー）である。幾つかの実施形態において、アミノ酸単位は、バリン－シトルリンジペプチド（Ｖａｌ－ＣｉｔまたはＶＣリンカー）である。幾つかの実施形態において、アミノ酸単位は、５－アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニンリシン、テトライソキノリンカルボキシレートリシン、シクロヘキシルアラニンリシン、イソネペコチン酸（ｉｓｏｎｅｐｅｃｏｔｉｃ ａｃｉｄ）リシン、ベータ－アラニンリシン、グリシンセリンバリングルタミン、またはイソネペコチン酸である。
【0222】
アミノ酸単位は、天然のアミノ酸を含むことができる。他の実施形態において、アミノ酸単位は、非天然のアミノ酸を含むことができる。
【0223】
スペーサー単位
スペーサー単位（－Ｙ－）は、存在する場合、アミノ酸単位を薬剤単位に結合させる。スペーサー単位には、自己犠牲的および非自己犠牲的の２つの一般的な種類がある。非自己犠牲的スペーサー単位は、スペーサー単位の一部または全てが、ＴＭ－リンカー－ＡＭ複合体または薬剤－リンカー化合物からのアミノ酸単位の酵素切断の後、活性化部分単位に結合したままであるものである。非自己犠牲的スペーサー単位の例には、（グリシン－グリシン）スペーサー単位およびグリシンスペーサー単位が挙げられるが、これらに限定されない。グリシン－グリシンスペーサー単位またはグリシンスペーサー単位を含有するＴＭ－リンカー－ＡＭ複合体が、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼ、またはリンパ球関連プロテアーゼを介して酵素切断を受ける場合、グリシン－グリシン－薬剤部分またはグリシン－薬剤部分は、Ａ－Ｔ－Ｗｗ－から切断される。ＡＭを遊離するため、独立している加水分解反応が、標的細胞内で生じて、グリシン－薬剤単位結合を切断するべきである。
スペーサー単位（－Ｙ－）は、存在する場合、アミノ酸単位を薬剤単位に結合させる。スペーサー単位には、自己犠牲的および非自己犠牲的の２つの一般的な種類がある。非自己犠牲的スペーサー単位は、スペーサー単位の一部または全てが、ＴＭ－リンカー－ＡＭ複合体または薬剤－リンカー化合物からのアミノ酸単位の酵素切断の後、活性化部分単位に結合したままであるものである。非自己犠牲的スペーサー単位の例には、（グリシン－グリシン）スペーサー単位およびグリシンスペーサー単位が挙げられるが、これらに限定されない。グリシン－グリシンスペーサー単位またはグリシンスペーサー単位を含有するＴＭ－リンカー－ＡＭ複合体が、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼ、またはリンパ球関連プロテアーゼを介して酵素切断を受ける場合、グリシン－グリシン－薬剤部分またはグリシン－薬剤部分は、Ａ－Ｔ－Ｗｗ－から切断される。ＡＭを遊離するため、独立している加水分解反応が、標的細胞内で生じて、グリシン－薬剤単位結合を切断するべきである。
【0224】
典型的な実施形態において、－Ｙｙ－は、ｐ－アミノベンジルエーテルであり、これはＱｍにより置換され得、ここでＱは、－Ｃ１～Ｃ８アルキル、－Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、－ハロゲン、－ニトロ、または－シアノであり、ｍは、０～４の範囲の整数である。
【0225】
幾つかの実施形態において、非自己犠牲的スペーサー単位（－Ｙ－）は、－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－である。
【0226】
幾つかの実施形態において、非自己犠牲的スペーサー単位（－Ｙ－）は、－Ｇｌｙ－である。
【0227】
１つの実施形態において、ＡＭ－リンカー化合物またはＴＭ－リンカー－ＡＭ複合体は、スペーサー単位を欠いている（ｙ＝０）。
【0228】
あるいは、自己犠牲的スペーサー単位を含有するＴＭ－リンカー－ＡＭ複合体は、別個の加水分解ステップの必要がなく、ＡＭ（Ｄ）を放出することができる。これらの実施形態において、－Ｙ－は、ｐ－アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）単位であり、それは、ＰＡＢ基の窒素原子を介して－Ｗｗ－に結合し、かつカーボネート、カルバメート、またはエーテル基を介して－Ｄに直接接続している。
【0229】
自己犠牲的スペーサー単位の他の例には、２－アミノイミダゾール－５－メタノール誘導体（例えば、Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７を参照すること）、およびオルトまたはパラ－アミノベンジルアセタールのような、ＰＡＢ基と電子的に等価の芳香族化合物が挙げられるが、これらに限定されない。置換および非置換４－アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ ｅｔ ａｌ．，１９７２，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）、ならびに２－アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）のようなアミド結合加水分解によって簡易環化を受けるスペーサーを、使用することができる。α位置のグリシンが置換されているアミン含有薬剤の排除（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ， ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）も、ＴＭ－リンカー－ＡＭ複合体に適用することができる自己犠牲的スペーサー戦略の例である。
【0230】
代替的な実施形態において、スペーサー単位は、分岐ビス（ヒドロキシメチル）スチレン（ＢＨＭＳ）単位であり、これを部分の組み込みに使用することができる。
【0231】
典型的なスペーサー単位（－Ｙｙ－）は、式（ＩＸ）～（ＸＩ）により表され、
式中Ｑは、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ１～Ｃ８アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、またはシアノであり、ｍは、０～４の範囲の整数である。
【化13】
【化14】
【0232】
幾つかの実施形態において、リンカーは酵素切断性である。幾つかの実施形態において、リンカーは酵素切断性ではない。
【0233】
ＩＩＩ．薬学的製剤および投与
本発明は、更に、本明細書の化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む、薬学的製剤に関する。
本発明は、更に、本明細書の化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む、薬学的製剤に関する。
【0234】
付加塩またはその水和物のような薬学的に許容される担体を含む本明細書に記載されている化合物は、多種多様な投与経路または様式を使用して患者に送達することができる。適切な投与経路には、吸入、経皮、経口、直腸内、経粘膜、腸内、ならびに筋肉内、皮下、および静脈内を含む非経口投与が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、標的部分として抗体または抗体フラグメントを含む本発明の化合物は、非経口、より好ましくは静脈内投与される。
【0235】
本明細書で使用されるとき、用語「投与する」または「投与」は、化合物を意図される作用部位へ直接的および間接的に送達する全ての方法を包含することが意図される。
【0236】
本明細書に記載されている化合物、またはその薬学的に許容される塩および／もしくは水和物は、単独で、本発明の他の化合物と組み合わされて、および／または他の治療剤との組み合わされたカクテルにより投与され得る。当然のことながら、本発明の化合物と同時投与することができる治療剤の選択は、部分的には、治療される状態によって決まる。
【0237】
例えば、自己誘発剤に依存する生物により引き起こされる疾患状態に罹患している患者に投与される場合、本発明の化合物は、疼痛、感染、および他の症状、ならびに疾患に一般的に関連する副作用を治療するために使用される薬剤を含有するカクテルにより投与され得る。そのような薬剤には、例えば、鎮痛薬、抗生物質などが含まれる。
【0238】
癌治療を受けている患者に投与される場合、化合物は、抗癌剤および／または補助増強剤を含有するカクテルにより投与され得る。化合物は、また、制吐薬、放射線保護剤などのような、放射線療法の副作用を治療する薬剤を含有するカクテルにより投与され得る。
【0239】
本発明の化合物と同時投与することができる補助増強剤には、例えば、三環系抗うつ剤（例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドキセピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピン、およびマプロチリン）、非三環系抗うつ剤（例えば、セルトラリン、トラゾドン、およびシタロプラム）、Ｃａ＋２拮抗薬（例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピン、およびカロベリン）、アンホテリシン、トリパラノール類縁体（例えば、タモキシフェン）、抗不整脈薬（例えば、キニジン）、降圧薬（例えば、レセルピン）、チオール枯渇薬（例えば、ブチオニン、およびスルホキシイミン）、ならびにカルシウムロイコポリンが含まれる。
【0240】
本発明の活性化合物(複数可)は、それ自体、または活性化合物(複数可)が１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、もしくは希釈剤と混合される薬学的組成物の形態で投与される。本発明に使用される薬学的組成物は、活性化合物を薬学的に使用できる調合剤に加工することを促進する賦形剤および佐剤を含む、１つ以上の生理学的に許容される担体を使用する従来の方法で典型的に処方される。適切な処方は、選択される投与経路によって決まる。
【0241】
経粘膜投与には、透過される関門に適する浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は、当該技術において一般に知られている。
【0242】
経口投与では、化合物は、活性化合物(複数可)を当該技術に周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることによって、容易に処方され得る。そのような担体は、本発明の化合物が錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤として、治療される患者の経口摂取用に処方されることを可能にする。賦形剤を固め、得られた混合物を場合により粉砕し、所望であれば適切な佐剤を加えた後、顆粒の混合物を加工して、錠剤または糖衣剤コアを得ることによって、経口使用のための薬学的調合剤を得ることができる。適切な賦形剤は、特に、乳糖、ショ糖、マンニトール、またはソルビトールを含む糖類のような充填剤、例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のようなセルロース調製物である。望ましい場合、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、またはアルギン酸ナトリウムのようなその塩のような崩壊剤を加えることができる。
【0243】
糖衣錠コアは適切な被覆で提供される。この目的のために、糖濃縮液が使用され得、これは場合によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含有することができる。染料または顔料を、確認のため、または活性化合物の用量の異なる組み合わせを特徴付けるために、錠剤または糖衣剤被覆に加えることができる。
【0244】
経口用に使用できる薬学的調合剤には、ゼラチンから作られる押し込み式カプセル剤、ならびにゼラチンと、グリセロール、またはソルビトールのような可塑剤から作られる軟質密閉カプセル剤が含まれる。押込嵌めカプセルは、ラクトース等の充填剤、デンプン等の結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、および任意に、安定剤との混合物内に、活性成分を含んでもよい。軟質カプセル剤では、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールのような適切な液体中に溶解または懸濁されてもよい。加えて、安定剤が添加され得る。経口投与用のすべての製剤は、かかる投与に適した投与量でなければならない。
【0245】
口腔内投与では、組成物は従来の方法により処方された錠剤またはロゼンジ剤の形態をとることができる。
【0246】
吸入による投与では、本発明により使用される化合物は、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、二酸化炭素、または他の適切なガスの使用により、加圧パックまたは噴霧器からのエアゾールスプレー状の形態で都合良く送達される。加圧エアゾールの場合、投与量単位は、計量を送出するための弁を備えることにより決定され得る。例えば吸入器または注入器で用いるゼラチンのカプセル剤およびカートリッジ剤は、化合物と、乳糖またはデンプンのような適切な粉末基剤との粉末ミックスを含有して、処方され得る。
【0247】
化合物は、注入による、例えばボーラス注入または持続点滴による非経口投与用に処方され得る。注射は、本発明の組成物の好ましい投与方法である。注射用製剤は、単位剤形、例えば、防腐剤が添加されているアンプル剤または多用量容器により存在し得る。組成物は、懸濁剤、液剤、または油性もしくは水性媒材中の乳剤のような形態をとることができ、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤のような処方剤を含有することができ、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸、もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩のようなものを含み得る。
【0248】
非経口投与用の薬学的製剤は、水溶性形態の活性化合物の水溶液を含む。加えて、活性化合物の懸濁剤は、適切な油状注射用懸濁剤として調製され得る。適切な親油性溶媒または媒材には、ゴマ油のような脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、またはリポソームが含まれる。水性注射用懸濁剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランのような懸濁剤の粘度を増加させる物質を含有し得る。場合により、懸濁剤は、適切な安定化剤、または高濃度溶液の調製を可能にするための化合物の可溶性を増加させる薬剤を含有することもできる。注射用には、本発明の薬剤は、水溶液で、好ましくはハンクス溶液、リンゲル溶液または生理食塩水緩衝液のような生理学的に適合する緩衝液で処方され得る。
【0249】
あるいは、活性成分は、使用する前に適切な媒材、例えば、無パイロジェン滅菌水により構成される粉末の形態であり得る。
【0250】
化合物は、また、例えばカカオバターまたは他のグリセリドのような従来の坐剤基剤を含有する、坐剤または停留浣腸のような直腸用組成物にも処方され得る。
【0251】
前記の製剤に加えて、化合物は、デポー製剤としても処方され得る。そのような長期作用製剤は、埋め込みもしくは経皮送達（例えば、皮下もしくは筋肉内）、筋肉内注射、または経皮パッチにより投与され得る。したがって、例えば化合物は、適切なポリマーもしくは疎水性材料により（例えば、許容される油中の乳剤として）、またはイオン交換樹脂により、またはやや難溶性の誘導体として、例えばやや難溶性の塩として処方することができる。
【0252】
薬学的組成物は、適切な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含むこともできる。そのような担体または賦形剤の例には、炭酸カルシウム、カルシウムホセート（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓａｔｅ）、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールのようなポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【0253】
好ましい薬学的組成物は、静脈内注射のような注射用に処方された組成物であり、総薬学的組成物の１００重量％に基づいて、約０．０１重量％～約１００重量％の本発明の化合物を含む。薬剤－リガンド複合体は、抗体が特定の癌を標的にするように選択されている、抗体－細胞毒素複合体であってもよい。
【0254】
幾つかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は第２の化学療法剤を更に含む。
【0255】
本明細書において「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物を意味する。例には、ゲムシタビン、イリノテカン、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、サイトキシン、ＴＡＸＯＬ、メトトレキセート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、およびカルボプラチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【0256】
幾つかの実施形態において、第２の化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、イマタニブ（ｉｍａｔａｎｉｂ）、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン（ｍｉｎｏｓｉｎｅ）、ゲムシタビン、シタラビン、５－フルオロウラシル、メトトレキセート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ゲムシタビン、エポチロン、ビノレルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンＤ、ミトキサントロン、アクリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、またはイダルビシンからなる群から選択される。
【0257】
ＩＶ． キット
別の態様において、本発明は、１つ以上の本発明の化合物または組成物と、化合物または組成物の使用指示書とを含むキットを提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本発明のリンカーアームを別の分子と複合させるキットを提供する。キットは、リンカーと、リンカーを特定の官能基に結合するための指示書とを含む。キットは、１つ以上の細胞障害薬、標的剤、検出可能標識、薬学的塩、または緩衝液も含むことができる。キットは、容器、および場合により１つ以上のバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、またはシリンジも含むことができる。キットの他のフォーマットは、当業者に理解され、本発明の範囲内である。
別の態様において、本発明は、１つ以上の本発明の化合物または組成物と、化合物または組成物の使用指示書とを含むキットを提供する。例示的な実施形態において、本発明は、本発明のリンカーアームを別の分子と複合させるキットを提供する。キットは、リンカーと、リンカーを特定の官能基に結合するための指示書とを含む。キットは、１つ以上の細胞障害薬、標的剤、検出可能標識、薬学的塩、または緩衝液も含むことができる。キットは、容器、および場合により１つ以上のバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、またはシリンジも含むことができる。キットの他のフォーマットは、当業者に理解され、本発明の範囲内である。
【0258】
Ｖ． 医療用途
別の態様において、本発明は、疾患状態の治療の必要な対象において疾患状態を治療する方法であって、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を、対象に投与することを含む方法を提供する。
別の態様において、本発明は、疾患状態の治療の必要な対象において疾患状態を治療する方法であって、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を、対象に投与することを含む方法を提供する。
【0259】
上記に記載された組成物および構築物に加えて、本発明は、本発明の化合物の多数の用途も提供する。本発明の化合物の用途には、腫瘍細胞または癌細胞の死滅または増殖もしくは複製の阻害、癌の治療、前癌性状態の治療、腫瘍細胞または癌細胞の増殖の防止、癌の予防、自己免疫性抗体を発現する細胞の増殖の防止が含まれる。これらの用途は、有効量の本発明の化合物を、それを必要とする哺乳動物またはヒトのような動物に投与することを含む。
【0260】
本発明の化合物は、ヒトのような動物において癌のような疾患を治療するのに有用である。本発明の組成物の薬学的有効量を用いて薬学的に許容される方法により組成物を対象に提供することによる、腫瘍を治療するための組成物および用途が、提供される。
【0261】
本明細書において「癌」とは、無調節な細胞増殖により特徴付けられる、ヒトにおける病理状態を意味する。例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。癌のより詳細な例には、肺（小細胞および非小細胞）、乳房、前立腺、カルチノイド、膀胱、胃、膵臓、肝臓（肝細胞）、肝芽腫、直腸結腸、頭頸部扁平上皮癌、食道、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、中皮腫、黒色腫、肉腫、骨肉腫、脂肪肉腫、甲状腺、デスモイド、慢性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0262】
本明細書において「抑制する」、または「治療する」もしくは「治療」は、低減、治療処置、および予防また防止処置が意図され、目的は目指す病理障害または状態を低減または防止することである。一例において、本発明の化合物を投与した後、癌患者は、腫瘍サイズの低減を経験し得る。「治療」または「治療する」には、（１）疾患の病理もしくは症状を経験もしくは表す対象において疾患を抑制すること、（２）疾患の病理もしくは症状を経験もしくは表す対象において疾患を改善すること、および／または（３）疾患の病理もしくは症状を経験もしくは表す対象において疾患のあらゆる測定可能な減少をもたらすこと、が含まれる。本発明の化合物が癌細胞の増殖を防止する、および／または死滅させ得る程度まで、細胞増殖抑制的および／または細胞障害的であり得る。
【0263】
本明細書において「治療有効量」とは、対象または哺乳動物において疾患を「治療する」のに有効な、本明細書に提供される化合物の量を意味する。癌の場合では、薬剤の治療有効量は、癌細胞の数を低減する、腫瘍サイズを低減する、末梢臓器への癌細胞の浸潤を阻害する、腫瘍転移を阻害する、腫瘍増殖をある程度まで抑制する、および／または癌に関連する１つ以上の症状をある程度まで軽減する、のいずれかをし得る。
【0264】
１つ以上の更なる治療剤と「組み合わせて」投与することには、任意の順番での同時（同時発生的）および連続的な投与が含まれる。本明細書で使用されるとき、用語「薬学的な組み合わせ」は、活性成分の混合または組み合わせにより得られる生成物を意味し、活性成分の固定された、および固定されない組み合わせの両方を含む。用語「固定された組み合わせ」は、活性成分、例えば式（1）の化合物および共薬剤が、両方とも、単一実体または投与の形態において同時に患者に投与されることを意味する。用語「固定されない組み合わせ」は、活性成分、例えば式（1）の化合物および共薬剤が、両方とも、別々の実体として、同時に、同時発生的に、または連続的に特定の時間制限なしで患者に投与されることを意味し、そのような投与は、患者の身体に活性成分の治療有効量を提供する。後者は、カクテル療法、例えば３つ以上の活性成分の投与にも適用される。
【0265】
幾つかの実施形態において、疾患状態は腫瘍である。
【0266】
幾つかの実施形態において、疾患状態は、前癌性病変のような異常細胞増殖を含む。
【0267】
本発明は、動物における癌の治療に対して、および腫瘍細胞または癌細胞の増殖の阻害に対して特に有用である。癌または前癌性状態は、非制御的細胞増殖により特徴付けられる腫瘍、転移、または任意の疾患もしくは障害を含み、本発明の薬剤－リガンド複合体の投与により治療または予防され得る。化合物は、活性化部分を腫瘍細胞または癌細胞に送達する。幾つかの実施形態において、標的部分は、癌細胞または腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合または関連する。リガンドへの近接性のため、内部移行した後、活性化部分は、例えば受容体仲介エンドサイトーシスを介して腫瘍細胞または癌細胞内に取り込まれ得る。抗原は、腫瘍細胞もしくは癌細胞に結合することができる、または腫瘍細胞もしくは癌細胞と関連する細胞外マトリックスタンパク質であり得る。いったん細胞内に入ると、リンカーは、腫瘍細胞または癌細胞関連プロテアーゼにより加水分解的または酵素的に切断され、それによって活性化部分を放出する。次に、放出された活性化部分は、自由に拡散し、免疫細胞または腫瘍細胞の免疫活性を誘発または増強する。代替的な実施形態において、活性化部分は、化合物の腫瘍微環境から切断され、続いて薬剤は細胞に浸透する。
【0268】
本発明の化合物により標的にされ得る前癌性状態の代表例には、化生（ｍｅｔａｐｌａｓｉａ）、過形成（ｈｙｐｅｒｐｌｙｓｉａ）、異形成、結腸直腸ポリープ、光線性角化症（ａｃｔｉｎｉｃ ｋｅｔａｔｏｓｉｓ）、光線性口唇炎、ヒトパピローマウイルス、白斑症、扁平苔癬（ｌｙｃｈｅｎ ｐｌａｎｕｓ）、およびボーエン病が含まれる。
【0269】
本発明の化合物により標的にされ得る癌または腫瘍の代表例には、肺癌、結腸癌、前立腺癌、リンパ腫、黒色腫、乳癌、卵巣癌、精巣癌、ＣＮＳ癌、腎癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、口腔癌、鼻腔癌、子宮頸癌、および白血病が挙げられる。化合物に使用される特定の標的部分は、活性化部分が、薬剤で治療される腫瘍組織を標的にするように選択され得る（すなわち、腫瘍特異的抗原に特異的な標的剤が、選択される）ことが、当業者には容易に理解される。そのような標的部分の例は、当該技術において良く知られており、その例には、乳癌の治療では抗Ｈｅｒ２、リンパ腫の治療では抗ＣＤ２０、前立腺癌の治療では抗ＰＳＭＡ、および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫の治療では抗ＣＤ３０が挙げられる。
【0270】
幾つかの実施形態において、異常増殖は癌細胞のものである。
【0271】
幾つかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、濾胞性リンパ腫、胃癌、神経膠芽腫、頭頸部癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、および腎細胞癌からなる群から選択される。
【0272】
幾つかの実施形態において、本発明は、細胞の死滅に使用される化合物を提供する。化合物は、細胞を死滅させるのに十分な量で前記細胞に投与される。例示的な実施形態において、化合物は、細胞を担持する対象に投与される。更なる例示的な実施形態において、投与は、細胞（例えば、細胞は腫瘍細胞であり得る）を含む腫瘍の増殖を抑制または停止させるために役立つ。増殖を抑制させるための投与において、細胞の増殖の割合は、投与前の増殖の割合より少なくとも１０％下回るべきである。好ましくは、増殖の割合は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％抑制される、または完全に停止される。
【0273】
有効投与量
本発明における使用に適した薬学的組成物には、活性成分が治療有効量、すなわち、その意図される目的を達成する有効量で含有される組成物が含まれる。特定の用途のための実際の有効量は、とりわけ、治療される状態によって決まる。有効量の決定は、とりわけ本明細書の詳細な開示を考慮すると、十分に当業者の能力の範囲内である。
本発明における使用に適した薬学的組成物には、活性成分が治療有効量、すなわち、その意図される目的を達成する有効量で含有される組成物が含まれる。特定の用途のための実際の有効量は、とりわけ、治療される状態によって決まる。有効量の決定は、とりわけ本明細書の詳細な開示を考慮すると、十分に当業者の能力の範囲内である。
【0274】
本明細書に記載されている任意の化合物にとって、治療有効量は、細胞培養アッセイによって最初に決定することができる。標的血漿濃度は、細胞増殖または分裂を阻害することができる活性化合物の濃度である。好ましい実施形態において、細胞活性は、少なくとも２５％阻害される。細胞活性の阻害を少なくとも約３０％、５０％、７５％、もしくは更に９０％、またはそれ以上誘発することができる活性化合物(複数可)の標的血漿濃度が、本発明において好ましい。患者における細胞活性の阻害率をモニターして、達成される血漿薬剤濃度の適切さを評価することができ、投与量を、上方または下方調整して、所望の阻害率を達成することができる。
【0275】
当該技術において良く知られているように、ヒトにおける使用の治療有効量は、動物モデルによっても決定され得る。例えば、ヒトへの用量は、動物に有効であることが見出されている循環濃度を達成するように処方され得る。ヒトへの投与量は、細胞阻害をモニターし、上記に記載されているように、投与量を上方または下方調整することによって調整され得る。
【0276】
治療有効用量は、同様の薬理学的活性を示すことが知られている化合物に対するヒトデータからも決定され得る。適用される用量は、既知の化合物と比較した投与化合物の相対的な生物学的利用能および効力に基づいて調整され得る。
【0277】
上記に記載された方法および当該技術に周知の他の方法に基づいて、ヒトにおいて最大効能を達成する用量を調整することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【0278】
局所投与の場合では、投与化合物の全身循環濃度は、特に重要ではない。そのような場合には、化合物は、意図される結果を達成するのに有効な局所濃度を達成するように投与される。
【0279】
異常細胞増殖に関連する疾患の予防および／または治療における使用には、約０．００１μＭ～２０μＭの投与化合物の循環濃度が好ましく、約０．０１μＭ～５μＭが好ましい。
【0280】
本明細書に記載されている化合物の経口投与用の患者用量は、典型的には約１ｍｇ／日～約１０，０００ｍｇ／日、より典型的には約１０ｍｇ／日～約１，０００ｍｇ／日、最も典型的には約５０ｍｇ／日～約５００ｍｇ／日の範囲である。患者の体重の観点から記述すると、典型的な投与量範囲は、約０．０１～約１５０ｍｇ／ｋｇ／日、より典型的には約０．１～約１５ｍｇ／ｋｇ／日、最も典型的には約１～約１０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば５ｍｇ／ｋｇ／日または３ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【0281】
少なくとも幾つかの実施形態において、腫瘍増殖を遅延または阻害する患者用量は、１μｍｏｌ／ｋｇ／日以下であり得る。例えば、患者用量は、０．９、０．６、０．５、０．４５、０．３、０．２、０．１５、または０．１μｍｏｌ／ｋｇ／日以下（薬剤のモル参照）であり得る。好ましくは、抗体と薬剤の複合体は、少なくとも５日間にわたって１日投与量を投与したとき、腫瘍の増殖を遅延する。
【0282】
他の投与モデルでは、投与量および間隔を個別に調整して、治療される特定の臨床適応症に有効な投与化合物の血漿レベルを提供する。例えば、一実施形態において、本発明の化合物を比較的高濃度で１日あたり複数回投与することができる。あるいは、本発明の化合物を最小有効濃度で投与すること、および少ない頻度の投与レジメンで使用することが、より望ましいことがある。このことは、個別疾患の重篤度に相応する治療レジメンを提供する。
【0283】
本明細書において提供される技術を利用して、有意な毒性を生じないが、特定の患者が示す臨床症状を治療するのに完全に有効である、有効治療処置レジメンを計画することができる。この計画は、化合物の効力、相対的な生物学的利用能、患者の体重、副作用の存在および重篤度、好ましい投与様式、ならびに選択された薬剤の毒性プロファイルのような要因を考慮することによって、活性化合物を注意深く選択することを伴うべきである。
【0284】
本発明の好ましい実施形態が本明細書において示され、記載されてきたが、そのような実施形態は単なる例として提供されていることが、当業者には明白である。ここで、当業者は、多数の変化形、変更、および置換を本発明から逸脱することなく想定するであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する種々の代替手段が、本発明の実施において採用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲に含まれる方法および構造、ならびにそれらの等価物が、それにより包含されることが意図される。
【実施例0285】
本発明が更に例示されるが、本発明の化合物の調製を例示する以下および実施例に制限されない。
【0286】
実施例１
ｈｅｒ２またはｅｇｆｒ形質移入Ｌ細胞系
試薬：Ｌ細胞は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ；Ｃａｔ Ｎｏ ＣＲＬ２６４８）由来のものであり、Ｈｅｒ２／ｐＥＺ－Ｌｖ１０５またはｅｇｆｒ／ｐＣＭＶ ｃＤＮＡは、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．，（カタログ番号Ｈ１０００４）またはＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ（カタログ番号Ｚ２８６６）から購入し、グルコースＤＭＥＭ、Ｌ－グルタミン、リポフェクタミン２０００は（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）のものである。
ｈｅｒ２またはｅｇｆｒ形質移入Ｌ細胞系
試薬：Ｌ細胞は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ；Ｃａｔ Ｎｏ ＣＲＬ２６４８）由来のものであり、Ｈｅｒ２／ｐＥＺ－Ｌｖ１０５またはｅｇｆｒ／ｐＣＭＶ ｃＤＮＡは、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．，（カタログ番号Ｈ１０００４）またはＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ（カタログ番号Ｚ２８６６）から購入し、グルコースＤＭＥＭ、Ｌ－グルタミン、リポフェクタミン２０００は（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）のものである。
【0287】
スクリーニング用の細胞系を作製するため、標的Ｈｅｒ２またはＥＧＦＲを発現するＬ細胞である複合トラスツズマブを生成した。Ｈｅｒ２／ｐＥＺ－Ｌｖ１０５またはｅｇｆｒ／ｐＣＭＶ ｃＤＮＡ構築物を、標準的なリポフェクタミン２０００プロトコールにより、Ｌ細胞（高グルコースＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋２ｍＬのＬ－グルタミン細胞に増殖させた）に形質移入した。
【0288】
結合分析（ＦＡＣＳ分析）
複合トラスツズマブの結合能を決定するため、ヒトｈｅｒ２を発現するＬ細胞のＦＡＣＳ分析を実施した。簡潔には、ｈｅｒ２を一過的に導入した１００μｌ中およそ１０６細胞のＬ細胞を、様々な量のトラスツズマブ複合抗体、ＰＢＳ、もしくは二次抗体のみと共にインキュベートするか、または無関係のｈｕＩｇＧを陰性対照として使用した。洗浄した後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、１００μＬの反応量中の２０μＬの、フィコエリトリン（Ｍｕ抗ヒトＰＥ）二次抗体に結合したマウス抗ヒトＩｇＧと共に室温で３０分間インキュベートした。洗浄した後、細胞を２００μＬの２％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳで固定し、フローサイトメトリーを実施した。同じ手順をアイソタイプ対照として無関係のヒトＩｇＧ抗体に対して使用して、細胞系毎にベースラインＰＭＴを設定した。フローサイトメトリーを、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（登録商標）により実施し、幾何平均蛍光強度をそれぞれの試料に対して記録した。記録したデータを、ＦｌｏｗＪｏソフトウエアを使用して分析した。結果を図１に示す。
複合トラスツズマブの結合能を決定するため、ヒトｈｅｒ２を発現するＬ細胞のＦＡＣＳ分析を実施した。簡潔には、ｈｅｒ２を一過的に導入した１００μｌ中およそ１０６細胞のＬ細胞を、様々な量のトラスツズマブ複合抗体、ＰＢＳ、もしくは二次抗体のみと共にインキュベートするか、または無関係のｈｕＩｇＧを陰性対照として使用した。洗浄した後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、１００μＬの反応量中の２０μＬの、フィコエリトリン（Ｍｕ抗ヒトＰＥ）二次抗体に結合したマウス抗ヒトＩｇＧと共に室温で３０分間インキュベートした。洗浄した後、細胞を２００μＬの２％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳで固定し、フローサイトメトリーを実施した。同じ手順をアイソタイプ対照として無関係のヒトＩｇＧ抗体に対して使用して、細胞系毎にベースラインＰＭＴを設定した。フローサイトメトリーを、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（登録商標）により実施し、幾何平均蛍光強度をそれぞれの試料に対して記録した。記録したデータを、ＦｌｏｗＪｏソフトウエアを使用して分析した。結果を図１に示す。
【0289】
抗体とトール様受容体リガンドの複合体の生成
試薬：トラスツズマブ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、セツキシマブ（Ｍｅｒｃｋ，）、レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）と結合したＭＣ－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢ（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＴＬＲＬ）またはレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）と結合したＭＣ（ＭＣ－ＴＬＲＬ）（Ｃｏｎｔｒａｃｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｃｈｉｎａにおいて合成）、ホウ酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５、ＤＴＰＡ、ＤＴＮＢ、およびマレイミドカプロイル－モノメチル（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）。
試薬：トラスツズマブ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、セツキシマブ（Ｍｅｒｃｋ，）、レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）と結合したＭＣ－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢ（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＴＬＲＬ）またはレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）と結合したＭＣ（ＭＣ－ＴＬＲＬ）（Ｃｏｎｔｒａｃｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｃｈｉｎａにおいて合成）、ホウ酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５、ＤＴＰＡ、ＤＴＮＢ、およびマレイミドカプロイル－モノメチル（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）。
【0290】
抗体ＴＬＲリガンド複合体の生成に使用した薬剤は、トラスツズマブおよびレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（ＴＬＲＬ）を含み、幾つかの場合では、セツキシマブを複合体として使用した。ＴＬＡＣの生成に使用したリンカーは、切断可能リンカーＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢまたは切断不能リンカーＭＣであった。
【0291】
トラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬまたはセツキシマブＭＣ－ＴＬＲＬの調製
トラスツズマブを、２０ｍｇ／ｍＬでの緩衝液交換によりＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）から精製し、５００ｍＭのホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭの塩化ナトリウムにｐＨ８．０で溶解した抗体を、１００ｍＭの過剰量ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理する。３７℃で約３０分間インキュベートした後、緩衝液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂による溶出で交換し、１ｍＭのＤＴＰＡを有するＰＢＳで溶出する。チオール／Ａｂ値は、ＤＴＮＢ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）との反応および４１２ｎｍでの吸光度の決定により、溶液の２８０ｎｍでの吸光度およびチオール濃度から還元抗体濃度を決定することによって調べる。ＰＢＳに溶解した還元抗体を氷上で冷やす。ＤＭＳＯに溶解した、レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）と結合したＭｃである薬剤リンカー試薬を、既知の濃度でアセトニトリルおよび水において希釈し、ＰＢＳ中の冷却還元抗体に加える。約１時間後、過剰量のマレイミドを加えて、反応を停止させ、あらゆる未反応抗体のチオール基をキャップする。幾つかの場合において、標準的な手順により免疫グロブリンのリシンへの結合を実施した。反応混合物を遠心分離限外濾過により濃縮し、複合抗体を精製し、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂を介する溶出により脱塩し、０．２μｍフィルターにより滅菌条件下で濾過し、凍結保存した。セツキシマブＭＣ－ＴＬＲＬの調製は、同じ手順を使用した。
トラスツズマブを、２０ｍｇ／ｍＬでの緩衝液交換によりＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）から精製し、５００ｍＭのホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭの塩化ナトリウムにｐＨ８．０で溶解した抗体を、１００ｍＭの過剰量ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理する。３７℃で約３０分間インキュベートした後、緩衝液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂による溶出で交換し、１ｍＭのＤＴＰＡを有するＰＢＳで溶出する。チオール／Ａｂ値は、ＤＴＮＢ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）との反応および４１２ｎｍでの吸光度の決定により、溶液の２８０ｎｍでの吸光度およびチオール濃度から還元抗体濃度を決定することによって調べる。ＰＢＳに溶解した還元抗体を氷上で冷やす。ＤＭＳＯに溶解した、レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）と結合したＭｃである薬剤リンカー試薬を、既知の濃度でアセトニトリルおよび水において希釈し、ＰＢＳ中の冷却還元抗体に加える。約１時間後、過剰量のマレイミドを加えて、反応を停止させ、あらゆる未反応抗体のチオール基をキャップする。幾つかの場合において、標準的な手順により免疫グロブリンのリシンへの結合を実施した。反応混合物を遠心分離限外濾過により濃縮し、複合抗体を精製し、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂を介する溶出により脱塩し、０．２μｍフィルターにより滅菌条件下で濾過し、凍結保存した。セツキシマブＭＣ－ＴＬＲＬの調製は、同じ手順を使用した。
【0292】
トラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬまたはセツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬの調製
抗体を、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン（ｖｃ）－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）によりシステインを介してＴＬＲＬに結合した。ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢリンカーは、カテプシンＢのような細胞間プロテアーゼにより切断可能であり、切断されると、遊離薬剤を放出し（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２１：７７８－７８４（２００３））、一方、ＭＣリンカーは、細胞内プロテアーゼによる切断に対して抵抗性がある。精製されたトラスツズマブを、５００ｍＭのホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭの塩化ナトリウムにｐＨ８．０で溶解し、１００ＭＭの過剰量ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で更に処理した。３７℃で約３０分間インキュベートした後、緩衝液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂による溶出で交換し、１ｍＭのＤＴＰＡを有するＰＢＳで溶出する。チオール／Ａｂ値は、ＤＴＮＢ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）との反応および４１２ｎｍ（吸光係数＝１３６００ｃｍ－１Ｍ－１）での吸光度の決定により、溶液の２８０ｎｍでの吸光度およびチオール濃度から還元抗体濃度を決定することによって調べた。ＰＢＳに溶解した還元抗体を氷上で冷やした。ＤＭＳＯ中のレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）と結合したＭＣ－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰを、アセトニトリルおよび水に溶解し、ＰＢＳ中の冷却還元抗体に加えた。１時間のインキュベーションの後、過剰量のマレイミドを加えて、反応を停止させ、あらゆる未反応抗体のチオール基をキャップした。幾つかの場合において、標準的な手順により免疫グロブリンのリシンへの結合を実施した。反応混合物を遠心分離限外濾過により濃縮し、抗体薬剤複合体を精製し、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂を介する溶出により脱塩し、０．２μｍフィルターにより滅菌条件下で濾過し、凍結保存した。セツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬの調製は、同じ手順を使用した。
抗体を、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン（ｖｃ）－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）によりシステインを介してＴＬＲＬに結合した。ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢリンカーは、カテプシンＢのような細胞間プロテアーゼにより切断可能であり、切断されると、遊離薬剤を放出し（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２１：７７８－７８４（２００３））、一方、ＭＣリンカーは、細胞内プロテアーゼによる切断に対して抵抗性がある。精製されたトラスツズマブを、５００ｍＭのホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭの塩化ナトリウムにｐＨ８．０で溶解し、１００ＭＭの過剰量ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で更に処理した。３７℃で約３０分間インキュベートした後、緩衝液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５樹脂による溶出で交換し、１ｍＭのＤＴＰＡを有するＰＢＳで溶出する。チオール／Ａｂ値は、ＤＴＮＢ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）との反応および４１２ｎｍ（吸光係数＝１３６００ｃｍ－１Ｍ－１）での吸光度の決定により、溶液の２８０ｎｍでの吸光度およびチオール濃度から還元抗体濃度を決定することによって調べた。ＰＢＳに溶解した還元抗体を氷上で冷やした。ＤＭＳＯ中のレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）と結合したＭＣ－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰを、アセトニトリルおよび水に溶解し、ＰＢＳ中の冷却還元抗体に加えた。１時間のインキュベーションの後、過剰量のマレイミドを加えて、反応を停止させ、あらゆる未反応抗体のチオール基をキャップした。幾つかの場合において、標準的な手順により免疫グロブリンのリシンへの結合を実施した。反応混合物を遠心分離限外濾過により濃縮し、抗体薬剤複合体を精製し、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂を介する溶出により脱塩し、０．２μｍフィルターにより滅菌条件下で濾過し、凍結保存した。セツキシマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬの調製は、同じ手順を使用した。
【0293】
典型的には、抗体とＭＣ－ＴＬＲＬまたはＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬとの複合反応は、異なる数の結合複合ＴＬＲＬ薬剤、すなわち薬剤が１から約８の分布である薬剤装填（ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ）を持つ抗体を含む異種混合物をもたらす。したがって、抗体ＭＣ－ＴＬＲＬまたは抗体ＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬは、単離精製された種分子、ならびに平均薬剤装填１～８の混合物を含む。対照プロセスでは、薬剤装填は、３～５の範囲であった。複合反応による化合物調製の抗体あたりのＴＬＲＬ薬剤部分の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、電気泳動、およびＨＰＬＣのような従来の方法により特徴決定され得る。薬剤に関する抗体ＭＣ－ＴＬＲＬまたは抗体ＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬの定量分布も決定することができる。ＥＬＩＳＡにより、抗体とＴＬＲＬの複合の特定の調製における薬剤ペイロード数の平均値を決定することができる（Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３－７０７０；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１１：８４３－８５２）。しかし、薬剤値の分布は、抗体抗原結合およびＥＬＩＳＡの検出限界により、識別不能である。また、抗体薬剤複合体を検出するためのＥＬＩＳＡアッセイは、薬剤部分が抗体に、例えば重鎖もしくは軽鎖フラグメント、または特定のアミノ酸残基に結合しているかを決定しない。幾つかの場合において、薬剤が、他の薬剤装填を有するトラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬまたはトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬ由来のある特定の値である、均質トラスツズマブＭＣ－ＴＬＲＬまたはトラスツズマブＭＣ－ｖｃ－ＴＬＲＬの分離、精製、および特徴決定は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動のような方法により達成され得る。
【0294】
抗体依存性細胞仲介細胞障害性アッセイ（ＡＤＣＣ）
試薬：ＳＫＢＲ３細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＨＴＢ－３０）、ＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号２２４００、ロット番号７４７８０９）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１１８３５、ロット番号７６４９５６）、ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、カタログ番号ＳＨ３００８４．０３、ロット番号ＧＲＨ００５４）、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ、カタログ番号１７－１４４０－０２）、９６ウエルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３５９９、カタログ番号３９１６）、トリパンブルー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１５２５０－０６１）、ＬＤＨキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７８９１）、ＥＬＩＳＡ読み取り機ＭＤ５（Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｄｅｖｉｃｅ）、ヒト化抗体Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；商標名トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ））を、使用前に、水で再構成して１０ｍｇ／ｍｌの貯蔵液を作製した。
試薬：ＳＫＢＲ３細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＨＴＢ－３０）、ＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号２２４００、ロット番号７４７８０９）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１１８３５、ロット番号７６４９５６）、ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、カタログ番号ＳＨ３００８４．０３、ロット番号ＧＲＨ００５４）、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ、カタログ番号１７－１４４０－０２）、９６ウエルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３５９９、カタログ番号３９１６）、トリパンブルー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１５２５０－０６１）、ＬＤＨキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７８９１）、ＥＬＩＳＡ読み取り機ＭＤ５（Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｄｅｖｉｃｅ）、ヒト化抗体Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；商標名トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ））を、使用前に、水で再構成して１０ｍｇ／ｍｌの貯蔵液を作製した。
【0295】
高いペイロードのＴＬＲＬと結合したトラスツズマブが、依然として効果器（ｅｆｆｅｃｔｏｒ）機能を有するかどうかを決定するために、幾つかの異なる複合形体の抗体依存性細胞仲介細胞障害（ＡＤＣＣ）活性を試験し、有意に増強されたＡＤＣＣ活性を有することを示されているトラスツズマブ基準材料のＡＤＣＣ活性と比較した。ＡＤＣＣアッセイは、効果器細胞として健康な提供者からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）および標的細胞としてヒトＳＫＲＢ３細胞系を使用して実施した。１日目には、１×１０４／１００μＬのＳＫＢＲ３細胞を９６ウエルプレートに播種し、続いて５％ＣＯ２により３７℃で４８時間インキュベートした。
【0296】
３日目には、ヒトＰＢＭＣを、健康な志願提供者から得たヒト血液から新たに調製した。ヒト静脈血試料をクエン酸アンモニウム（ＡＣＤ－Ａ）管に収集した。管を数回逆さまにし、全血を１本の５０ｍＬ円錐管に移した。血液を、２％ＦＢＳ中のＰＢＳにより１：３に希釈した。Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅを、血液／ＰＢＳ混合物の下側にゆっくりと分配した。試料を、上側層（血漿／ＰＢＳ）を吸引により除去する前に、２４００ｒｐｍで室温で３０分間遠心分離した。軟膜を、滅菌ピペットで収集し、５０ｍＬの円錐管に集めた。ＷＢＣの目に見える塊が軟膜の下に残存する場合、過剰量のＦｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅを除去しないように注意しながら、ＷＢＣ材料の全てを収集した。滅菌ＰＢＳ－２％ＦＢＳを加え、逆さまにすることによって混合した。希釈ＰＢＭＣ懸濁液を２５０×ｇで室温で２０分間遠心分離し、細胞ペレットを収集した。ＰＢＭＣペレットを、２％の熱不活性化ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０培地に懸濁し、洗浄し、生存細胞の数をトリパンブルー排除により調べた。１．２×１０７細胞／ｍＬの密度で調製し、使用の準備を整えた。一方、１２、４、１．２、０．４、０．１２、０．０４、０．０１２、０．００４～０μｇ／ｍＬの範囲の抗体最終濃度が、ＲＰＭＩ－１６４０において良好に調製された。
【0297】
次に試験および対照抗体の一連の希釈物を、標的細胞を含有するウエルに加え、５０μＬのＲＰＭＩ－１６４０培地中のＰＢＭＣ効果器細胞を、効果器：標的細胞比が６０：１で各ウエルに加え、更に１７時間インキュベートした。プレートをインキュベーションの終了時に遠心分離し、上澄みを、ＬＤＨ（乳酸デヒドロゲナーゼ）測定キットを使用して、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性についてアッセイした。細胞溶解は、マイクロプレート読み取り機を使用して４９０ｎｍの吸光度により定量化した。標的細胞のみを含有するウエルの吸光度をバックグラウンドの対照とし、一方、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００で溶解した標的細胞を含有するウエルは、利用可能な最大シグナルを提供した。抗体依存性細胞障害性は、抗体の添加なしで標的および効果器細胞を含有するウエルで測定された。細胞障害性は、以下の方程式：
細胞障害％＝１００％×［Ａ４９０ｎｍ（試料）－Ａ４９０（標的細胞）－Ａ４９０（効果細胞］／［Ａ４９０ｎｍ（溶解標的細胞）－Ａ４９０ｎｍ（標的細胞）］に従って計算した。
細胞障害％＝１００％×［Ａ４９０ｎｍ（試料）－Ａ４９０（標的細胞）－Ａ４９０（効果細胞］／［Ａ４９０ｎｍ（溶解標的細胞）－Ａ４９０ｎｍ（標的細胞）］に従って計算した。
【0298】
試料希釈物の複製物からの平均ＡＤＣＣ値を、抗体濃度に対してプロットし、ＥＣ５０値およびＡＤＣＣ（％）の最大範囲をＰｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｄ）に当て嵌めることによって求めた。
【0299】
ＰＢＭＣからのヒト樹状細部（ＤＣ）の濃縮
ヒトＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により、健康な志願提供者から得た軟膜から調製した。樹状細胞は、ヒトＰＢＭＣからの抗ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ１４、およびＣＤ１６抗体の混合物により、磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いる負の枯渇（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｂｅａｄｓ）を使用して濃縮した。ＤＣの濃縮を、ヤギ抗マウスＦＩＴＣ（系列）、ＨＬＡ－ＤＲ－ＡＰＣＣｙ７、ＣＤ１２３－ＢＶ４２１、およびＣＤ１１Ｃ－ＡＰＣで染色した。染色された細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにより分析した。抗ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１Ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１２３モノクローナル抗体は、ＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＢｉｏｌｇｅｎｄから購入した。
ヒトＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により、健康な志願提供者から得た軟膜から調製した。樹状細胞は、ヒトＰＢＭＣからの抗ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ１４、およびＣＤ１６抗体の混合物により、磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いる負の枯渇（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｂｅａｄｓ）を使用して濃縮した。ＤＣの濃縮を、ヤギ抗マウスＦＩＴＣ（系列）、ＨＬＡ－ＤＲ－ＡＰＣＣｙ７、ＣＤ１２３－ＢＶ４２１、およびＣＤ１１Ｃ－ＡＰＣで染色した。染色された細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにより分析した。抗ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１Ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１２３モノクローナル抗体は、ＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＢｉｏｌｇｅｎｄから購入した。
【0300】
図３（ａ）は、濃縮前後のＤＣのパーセンテージを示す。上側の２つのプロットにおける数字は、系統の枯渇前後の総細胞のＤＣ（ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｌｉｎ－）のパーセンテージを表す。下側のプロットにおける数字は、系統の枯渇前後の総ＤＣのｍＤＣ（ＣＤ１１Ｃ＋ＣＤ１２３－）およびｐＤＣ（ＣＤ１２３＋ＣＤ１１Ｃ－）のパーセンテージを表す。
【0301】
濃縮したヒトＤＣおよびサイトカイン発現の刺激
１～２×１０５濃縮ＤＣを、９６ウエルプレートにおいて１００μＬの培地にプレーティングし、１００μＬの希釈刺激薬をプレートに加え、３７℃のインキュベーター中で２０～２２時間培養した。上澄みを収集し、ヒトＩＦＮ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－１２（ｐ７０）、およびＴＮＡ－αをＥＬＩＳＡ（Ｍａｔｔｅｃｈ ＡＢ）により分析した。
１～２×１０５濃縮ＤＣを、９６ウエルプレートにおいて１００μＬの培地にプレーティングし、１００μＬの希釈刺激薬をプレートに加え、３７℃のインキュベーター中で２０～２２時間培養した。上澄みを収集し、ヒトＩＦＮ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－１２（ｐ７０）、およびＴＮＡ－αをＥＬＩＳＡ（Ｍａｔｔｅｃｈ ＡＢ）により分析した。
【0302】
統計分析
全ての比較の有意性は、偽（ｍｏｃｋ）と試料群との間の不等分散を推定し、スチューデント両側ｔ検定を使用して計算され、結果は、ｐ＜０．０５の場合に有意であるとした。パラメーター間の相関関係は、スピアマンの順位相関検定を使用して評価し、Ｐ値＜０．０５を統計的に有意であるとした。
全ての比較の有意性は、偽（ｍｏｃｋ）と試料群との間の不等分散を推定し、スチューデント両側ｔ検定を使用して計算され、結果は、ｐ＜０．０５の場合に有意であるとした。パラメーター間の相関関係は、スピアマンの順位相関検定を使用して評価し、Ｐ値＜０．０５を統計的に有意であるとした。
【0303】
トラスツズマブＴＬＲＬ複合体またはセツキシマブＴＬＲＬ複合体を使用するインビボ腫瘍細胞死滅アッセイ
患者由来胃癌異種移植片（ＰＤＸ）マウスモデルの作製のため、６～８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（ＳＬＡＣ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）を、腫瘍フラグメント埋め込みに使用した。動物には、通常のヌードマウス食餌を与え、実験動物の飼育および使用のガイド（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）、ならびに研究機関の動物管理および使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）の規制に従って、ＳＰＦ動物施設に収容した。大きさが約１５～３０ｍｍ３の特許ＳＴＯ番号６９胃癌フラグメントをＢａｌｂ／ｃヌードマウスの腹部右側（皮下）に埋め込んだ。
患者由来胃癌異種移植片（ＰＤＸ）マウスモデルの作製のため、６～８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（ＳＬＡＣ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）を、腫瘍フラグメント埋め込みに使用した。動物には、通常のヌードマウス食餌を与え、実験動物の飼育および使用のガイド（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）、ならびに研究機関の動物管理および使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）の規制に従って、ＳＰＦ動物施設に収容した。大きさが約１５～３０ｍｍ３の特許ＳＴＯ番号６９胃癌フラグメントをＢａｌｂ／ｃヌードマウスの腹部右側（皮下）に埋め込んだ。
【0304】
肺癌異種移植片モデルの作製のため、６～８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスを、腫瘍フラグメントの埋め込みに使用した。ヒト肺癌細胞系Ｈ１６５０（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ５８８３）を、１０％血清を含有するＲＰＭＩ－１６４０培地で培養し、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの腹部右側（皮下）に埋め込んだ。各マウスは、１００μＬのマトリゲルにおける接種ごとに２×１０６細胞を接種された。
【0305】
薬剤を、５～２０ｍｇ／ｋｇの抗体または２０ｍｇ／ｋｇのＴａｒｃｅｖａもしくは基準薬剤をＱＷＫ（毎週投与）×３、静脈内経路で投与した。腫瘍を、１週間に１回、カリパスにより測定し、その皮下増殖を決定した。腫瘍を、１週間に２回、カリパスにより二次元で測定した。腫瘍体積は、以下の式：腫瘍の体積＝（長さ×幅２）×０．５を使用して計算した。平均腫瘍体積または体重を、グラフプログラムＰｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｔ）を用いてプロットした。効果試験のエンドポイントを、最初の治療の３０～４５日後、または腫瘍サイズが約２０００ｍｍ３に達したとき、のいずれか早いほうに設定した。マウスが２０％超の体重を失う場合、または非常に重症であり、適切に食餌または水を摂ることができなくなった場合には、そのマウスを試験から除外し、安楽死させた。腫瘍をエンドポイントでマウスから収集し、ＦＦＰＥ組織の調製のため、ＬＮ２で半凍結し、ホルマリンで半固定した。
【0306】
（付記１）
式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有し、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒト樹状細胞、ＮＫ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらの組み合わせを活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物。
式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有し、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒト樹状細胞、ＮＫ細胞、もしくは腫瘍細胞、またはこれらの組み合わせを活性化することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物。
【0307】
（付記２）
前記ヒト樹状細胞は、形質細胞様樹状細胞である、
ことを特徴とする付記１に記載の化合物。
前記ヒト樹状細胞は、形質細胞様樹状細胞である、
ことを特徴とする付記１に記載の化合物。
【0308】
（付記３）
前記ヒト樹状細胞は、骨髄樹状細胞である、
ことを特徴とする付記１に記載の化合物。
前記ヒト樹状細胞は、骨髄樹状細胞である、
ことを特徴とする付記１に記載の化合物。
【0309】
（付記４）
前記ＡＭは、ヒトＴＬＲ７またはＴＬＲ８に特異的に結合することができる、
ことを特徴とする付記１に記載の化合物。
前記ＡＭは、ヒトＴＬＲ７またはＴＬＲ８に特異的に結合することができる、
ことを特徴とする付記１に記載の化合物。
【0310】
（付記５）
前記ＡＭは、ヒトＴＬＲ７およびＴＬＲ８に特異的に結合することができる、
ことを特徴とする付記１に記載の化合物。
前記ＡＭは、ヒトＴＬＲ７およびＴＬＲ８に特異的に結合することができる、
ことを特徴とする付記１に記載の化合物。
【0311】
（付記６）
式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有し、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８に特異的に結合することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物。
式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有し、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、ヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８に特異的に結合することができる活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数である、化合物。
【0312】
（付記７）
前記ＡＭは、ヒトＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方に特異的に結合することができる、
ことを特徴とする付記６に記載の化合物。
前記ＡＭは、ヒトＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方に特異的に結合することができる、
ことを特徴とする付記６に記載の化合物。
【0313】
（付記８）
ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭはＣｐＧオリゴヌクレオチドを含まない、
ことを特徴とする付記１乃至７のいずれか１つに記載の化合物。
ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭはＣｐＧオリゴヌクレオチドを含まない、
ことを特徴とする付記１乃至７のいずれか１つに記載の化合物。
【0314】
（付記９）
前記標的部分は、非腫瘍細胞と比較して、腫瘍細胞に特異的または優先的に結合することができる、
ことを特徴とする付記１乃至８のいずれか１つに記載の化合物。
前記標的部分は、非腫瘍細胞と比較して、腫瘍細胞に特異的または優先的に結合することができる、
ことを特徴とする付記１乃至８のいずれか１つに記載の化合物。
【0315】
（付記１０）
前記腫瘍細胞は、癌腫、肉腫、リンパ腫、骨髄腫、または中枢神経系癌のものである、
ことを特徴とする付記９に記載の化合物。
前記腫瘍細胞は、癌腫、肉腫、リンパ腫、骨髄腫、または中枢神経系癌のものである、
ことを特徴とする付記９に記載の化合物。
【0316】
（付記１１）
前記標的部分は、非腫瘍抗原と比較して、腫瘍抗原に特異的または優先的に結合することができる、
ことを特徴とする付記１乃至８のいずれか１つに記載の化合物。
前記標的部分は、非腫瘍抗原と比較して、腫瘍抗原に特異的または優先的に結合することができる、
ことを特徴とする付記１乃至８のいずれか１つに記載の化合物。
【0317】
（付記１２）
前記腫瘍抗原は、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、およびＣＤ１３７からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１１に記載の化合物。
前記腫瘍抗原は、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、およびＣＤ１３７からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１１に記載の化合物。
【0318】
（付記１３）
前記腫瘍抗原は、４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＡＧＳ－５、ＡＧＳ－１６、アンジオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ－０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児性抗原、ＣＴＬＡ４、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）、ＥＤ－Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、グルココルチコイド誘発性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαν、インテグリンανβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ルイスＹ、メソテリン、ｃ－ＭＥＴ、ＭＮ炭酸脱水酵素ＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ネクチン－４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、シンデカン－１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、およびこれらの変異体からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１１に記載の化合物。
前記腫瘍抗原は、４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＡＧＳ－５、ＡＧＳ－１６、アンジオポエチン２、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ２、Ｂ７Ｈ３、ＢＴ－０６２、ＢＴＬＡ、ＣＡＩＸ、癌胎児性抗原、ＣＴＬＡ４、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）、ＥＤ－Ｂ、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＬ７、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、フィブロネクチン、葉酸受容体、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、グルココルチコイド誘発性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、ｇｐ１００、ｇｐＡ３３、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＯＳ、ＩＧＦ１Ｒ、インテグリンαν、インテグリンανβ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ルイスＹ、メソテリン、ｃ－ＭＥＴ、ＭＮ炭酸脱水酵素ＩＸ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ネクチン－４、ＮＫＧＤ２、ＮＯＴＣＨ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＬＣ４４Ａ４、シンデカン－１、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＩＭ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、およびこれらの変異体からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１１に記載の化合物。
【0319】
（付記１４）
前記標的部分は、免疫グロブリン、タンパク質、ペプチド、小分子、ナノ粒子、または核酸を含む、
ことを特徴とする付記１乃至１３のいずれか１つに記載の化合物。
前記標的部分は、免疫グロブリン、タンパク質、ペプチド、小分子、ナノ粒子、または核酸を含む、
ことを特徴とする付記１乃至１３のいずれか１つに記載の化合物。
【0320】
（付記１５）
前記標的部分は、抗体またはその機能性フラグメントを含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
前記標的部分は、抗体またはその機能性フラグメントを含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
【0321】
（付記１６）
前記抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（ベリムマブ）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、トレメリムマブ、ニボルマブ、ダセツズマブ、ウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ランブロリズマブ（Ｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、およびブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１５に記載の化合物。
前記抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（ベリムマブ）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、トレメリムマブ、ニボルマブ、ダセツズマブ、ウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ランブロリズマブ（Ｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、およびブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１５に記載の化合物。
【0322】
（付記１７）
前記標的部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、単一ドメイン抗体、ＴおよびＡｂｓ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄｓ－ｓｃＦｖ、Ｆｄ、線状抗体、ミニボディ、二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、二重特異的抗体フラグメント、バイボディ（ｂｉｂｏｄｙ）、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）、ｓｃ－二特異性抗体、カッパ（ラムダ）体、ＢｉＴＥ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＳＩＰ、ＳＭＩＰ、ＤＡＲＴ、または１つ以上のＣＤＲを含む抗体類縁体を含む、
ことを特徴とする付記１５に記載の化合物。
前記標的部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、単一ドメイン抗体、ＴおよびＡｂｓ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄｓ－ｓｃＦｖ、Ｆｄ、線状抗体、ミニボディ、二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、二重特異的抗体フラグメント、バイボディ（ｂｉｂｏｄｙ）、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）、ｓｃ－二特異性抗体、カッパ（ラムダ）体、ＢｉＴＥ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＳＩＰ、ＳＭＩＰ、ＤＡＲＴ、または１つ以上のＣＤＲを含む抗体類縁体を含む、
ことを特徴とする付記１５に記載の化合物。
【0323】
（付記１８）
前記標的部分は、ＶＥＧＦＲのＡＴＷＬＰＰＲポリペプチド、トロンボスポンジン－１模倣体、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣＧ（環状）ポリペプチド、ＳＣＨ２２１１５３フラグメント、ＮＣＮＧＲＣ（環状）ポリペプチド、ＣＴＴＨＷＧＦＴＬＣポリペプチド、ＣＧＮＫＲＴＲＧＣポリペプチド（ＬｙＰ－１）、オクトレオチド、バプレオチド、ランレオチド、Ｃ－３９４０ポリペプチド、デカペプチル、ルプロン、ゾラデックス、またはセトロレリクスを含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
前記標的部分は、ＶＥＧＦＲのＡＴＷＬＰＰＲポリペプチド、トロンボスポンジン－１模倣体、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣＧ（環状）ポリペプチド、ＳＣＨ２２１１５３フラグメント、ＮＣＮＧＲＣ（環状）ポリペプチド、ＣＴＴＨＷＧＦＴＬＣポリペプチド、ＣＧＮＫＲＴＲＧＣポリペプチド（ＬｙＰ－１）、オクトレオチド、バプレオチド、ランレオチド、Ｃ－３９４０ポリペプチド、デカペプチル、ルプロン、ゾラデックス、またはセトロレリクスを含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
【0324】
（付記１９）
前記標的部分は、葉酸またはその誘導体を含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
前記標的部分は、葉酸またはその誘導体を含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
【0325】
（付記２０）
前記標的部分は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、４－１ＢＢ、ＬＡＧ３、表面リガンドアンフィレギュリンの一部の完全長、ベータセルリン、ＥＧＦ、エフリン、エピジェン（ｅｐｉｇｅｎ）、エピレギュリン、ＩＧＦ、ニューレグリン、ＴＧＦ、ＴＲＡＩＬ、またはＶＥＧＦの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または可溶形態を含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
前記標的部分は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、４－１ＢＢ、ＬＡＧ３、表面リガンドアンフィレギュリンの一部の完全長、ベータセルリン、ＥＧＦ、エフリン、エピジェン（ｅｐｉｇｅｎ）、エピレギュリン、ＩＧＦ、ニューレグリン、ＴＧＦ、ＴＲＡＩＬ、またはＶＥＧＦの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または可溶形態を含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
【0326】
（付記２１）
前記標的部分は、ナノ粒子を含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
前記標的部分は、ナノ粒子を含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
【0327】
（付記２２）
前記標的部分は、アプタマーを含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
前記標的部分は、アプタマーを含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の化合物。
【0328】
（付記２３）
前記活性化部は、（ａ）一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、好ましくはＯＲＮ０２、ＯＲＮ０６、ｓｓポリ（Ｕ）、ｓｓＲＮＡ４０、ｓｓＲＮＡ４１、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、もしくはポリ（ｄＴ）、または（ｂ）受容体リガンド類縁体、好ましくはＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ２６４、ＣＬ３０７、ガーディキモド、ロキソリビン、イミキモド、もしくはレシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）を含む、
ことを特徴とする付記１乃至２２のいずれか１つに記載の化合物。
前記活性化部は、（ａ）一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、好ましくはＯＲＮ０２、ＯＲＮ０６、ｓｓポリ（Ｕ）、ｓｓＲＮＡ４０、ｓｓＲＮＡ４１、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、もしくはポリ（ｄＴ）、または（ｂ）受容体リガンド類縁体、好ましくはＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ２６４、ＣＬ３０７、ガーディキモド、ロキソリビン、イミキモド、もしくはレシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）を含む、
ことを特徴とする付記１乃至２２のいずれか１つに記載の化合物。
【0329】
（付記２４）
前記ＡＭは、レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（Ｒ８４８）を含む、
ことを特徴とする付記２３に記載の化合物。
前記ＡＭは、レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（Ｒ８４８）を含む、
ことを特徴とする付記２３に記載の化合物。
【0330】
（付記２５）
前記リンカーは、ヒドラジン基、ポリペプチド、ジスルフィド基、およびチオエーテル基からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１乃至２４のいずれか１つに記載の化合物。
前記リンカーは、ヒドラジン基、ポリペプチド、ジスルフィド基、およびチオエーテル基からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１乃至２４のいずれか１つに記載の化合物。
【0331】
（付記２６）
前記リンカーは、酵素切断性である、
ことを特徴とする付記１乃至２４のいずれか１つに記載の化合物。
前記リンカーは、酵素切断性である、
ことを特徴とする付記１乃至２４のいずれか１つに記載の化合物。
【0332】
（付記２７）
前記リンカーは、酵素切断性ではない、
ことを特徴とする付記１乃至２４のいずれか１つに記載の化合物。
前記リンカーは、酵素切断性ではない、
ことを特徴とする付記１乃至２４のいずれか１つに記載の化合物。
【0333】
（付記２８）
付記１乃至２７のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
付記１乃至２７のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
【0334】
（付記２９）
第２の化学療法剤を更に含む、付記２８に記載の薬学的組成物。
第２の化学療法剤を更に含む、付記２８に記載の薬学的組成物。
【0335】
（付記３０）
前記化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、イマタニブ（ｉｍａｔａｎｉｂ）、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン（ｍｉｎｏｓｉｎｅ）、ゲムシタビン、シタラビン、５－フルオロウラシル、メトトレキセート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ゲムシタビン、エポチロン、ビノレルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンＤ、ミトキサントロン、アクリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、またはイダルビシンからなる群から選択される、
ことを特徴とする付記２９に記載の薬学的組成物。
前記化学療法剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、イマタニブ（ｉｍａｔａｎｉｂ）、パクリタキセル、シクロホスファミド、ロバスタチン、ミノシン（ｍｉｎｏｓｉｎｅ）、ゲムシタビン、シタラビン、５－フルオロウラシル、メトトレキセート、ドセタキセル、ゴセレリン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、テニポシド、エトポシド、ゲムシタビン、エポチロン、ビノレルビン、カンプトテシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンＤ、ミトキサントロン、アクリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、またはイダルビシンからなる群から選択される、
ことを特徴とする付記２９に記載の薬学的組成物。
【0336】
（付記３１）
疾患状態の治療の必要な対象において疾患状態を治療する方法であって、治療有効量の付記１乃至２７のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、を含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含む、方法。
疾患状態の治療の必要な対象において疾患状態を治療する方法であって、治療有効量の付記１乃至２７のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、を含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含む、方法。
【0337】
（付記３２）
前記疾患状態は、腫瘍である、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法。
前記疾患状態は、腫瘍である、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法。
【0338】
（付記３３）
前記疾患状態は、異常細胞増殖を含む、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法。
前記疾患状態は、異常細胞増殖を含む、
ことを特徴とする付記３１に記載の方法。
【0339】
（付記３４）
前記異常細胞増殖は、前癌性病変を含む、
ことを特徴とする付記３３に記載の方法。
前記異常細胞増殖は、前癌性病変を含む、
ことを特徴とする付記３３に記載の方法。
【0340】
（付記３５）
前記異常増殖は、癌細胞のものである、
ことを特徴とする付記３３に記載の方法。
前記異常増殖は、癌細胞のものである、
ことを特徴とする付記３３に記載の方法。
【0341】
（付記３６）
前記癌は、乳癌、結腸直腸癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、濾胞性リンパ腫、胃癌、神経膠芽腫、頭頸部癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、および腎細胞癌からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記３５に記載の方法。
前記癌は、乳癌、結腸直腸癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、濾胞性リンパ腫、胃癌、神経膠芽腫、頭頸部癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、および腎細胞癌からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記３５に記載の方法。
【0342】
（付記３７）
式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有し、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数であり、
但し、ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは治療剤を含まない、化合物。
式（Ｉ）、ＴＭ－Ｌｎ－ＡＭ （Ｉ）の構造を有し、
式中、ＴＭは、標的部分であり、ＡＭは、活性化部分であり、Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０および１から選択される整数であり、
但し、ＴＭが抗体を含む場合、ＡＭは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは治療剤を含まない、化合物。
【0343】
（付記３８）
前記活性化部分は、ＴＬＲリガンド（ＴＬＲＬ）、Ｎｏｄ様受容体リガンド、ＲＩＧ様受容体リガンド、ＣＬＲリガンド、ＣＤＳリガンド、またはインフラマソーム誘発剤を含む、
ことを特徴とする付記３７に記載の化合物。
前記活性化部分は、ＴＬＲリガンド（ＴＬＲＬ）、Ｎｏｄ様受容体リガンド、ＲＩＧ様受容体リガンド、ＣＬＲリガンド、ＣＤＳリガンド、またはインフラマソーム誘発剤を含む、
ことを特徴とする付記３７に記載の化合物。
【0344】
（付記３９）
前記活性化部分は、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ７／ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＴＬＲ１０からなる群から選択される１つ以上のＴＬＲのリガンドを含む、
ことを特徴とする付記３８に記載の化合物。
前記活性化部分は、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ７／ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＴＬＲ１０からなる群から選択される１つ以上のＴＬＲのリガンドを含む、
ことを特徴とする付記３８に記載の化合物。
【0345】
（付記４０）
前活性化部分は、
（ｉ）（ａ）加熱死菌生成物、好ましくはＨＫＡＬ、ＨＫＥＢ、ＨＫＨＰ、ＨＫＬＭ、ＨＫＬＰ、ＨＫＬＲ、ＨＫＭＦ、ＨＫＰＡ、ＨＫＰＧ、またはＨＫＳＡ、ＨＫＳＰ、および（ｂ）細胞壁成分生成物、好ましくはＬＡＭ、ＬＭ、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ＬＴＡ、ＰＧＮ、ＦＳＬ、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、またはザイモサンからなる群から選択されるＴＬＲ２のリガンド、
（ｉｉ）ポリ（Ｉ：Ｃ）およびポリ（Ａ：Ｕ）からなる群から選択されるＴＬＲ３のリガンド、
（ｉｉｉ）ＬＰＳおよびＭＰＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ４のリガンド、
（ｉｖ）ＦＬＡおよびフラゲリンからなる群から選択されるＴＬＲ５のリガンド、
（ｖ）ＯＲＮ０２、ＯＲＮ０６、ｓｓポリ（Ｕ）、ｓｓＲＮＡ４０、ｓｓＲＮＡ４１、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、ポリ（ｄＴ）、ＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ２６４、ＣＬ３０７、ガーディキモド、ロキソリビン、イミキモド、およびレシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）からなる群から選択されるＴＬＲ７／８のリガンド、
（ｖｉ）ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１８２６、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２００７、ＯＤＮ２２１６、ＯＤＮ２３３６、ＯＤＮ２３９５、およびＯＤＮ Ｍ３６２からなる群から選択されるＴＬＲ９のリガンド、
（ｖｉｉ）ＴＬＲ１０のリガンド、
（ｖｉｉｉ）ＮＯＤ１作動薬（Ｃ１２－ｉＥ－ＤＡＰ、ｉＥ－ＤＡＰ、Ｔｒｉ－ＤＡＰ）、ＮＯＤ２作動薬（Ｌ１８－ＭＤＰ、ＭＤＰ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ－Ｄ－ＡＳＮ、ムラブチド（Ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ）、Ｎ－グリコリル－ＭＤＰ）、およびＮＯＤ１／ＮＯＤ２作動薬（Ｍ－ＴｒｉＤＡＰ、ＰＧＮ）からなる群から選択されるヌクレオチドオリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様のリガンド、
（ｉｘ）５′ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、およびポリ（Ｉ：Ｃ）からなる群から選択される１つ以上のＲＩＧ－Ｉ－様受容体（ＲＬＲ）のリガンド、
（ｘ）カードランＡＬ、ＨＫＣＡ、ＨＫＳＣ、ＷＧＰ、ザイモサン、およびトレハロース－６，６－ジベヘン酸塩からなる群から選択される１つ以上のＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）のリガンド、
（ｘｉ）ｃ－ＧＭＰ、ｃ－Ｇ－ＡＭＰ、ｃ－Ｇ－ＧＭＰ、ｃ－Ａ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＵＭＰ、ＨＳＶ－６０、ＩＳＤ、ｐＣｐＧ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、ポリ（ｄＡ）、およびＶＡＣＶ－７０からなる群から選択される１つ以上の細胞質ＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）のリガンド、あるいは
（ｘｉｉ）（ａ）ＮＬＲＰ３インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはミョウバン結晶、ＡＴＰ、ＣＰＰＤ結晶、ヘルモゾイン（Ｈｅｒｍｏｚｏｉｎ）、ＭＳＵ結晶、ナノＳｉＯ２、ナイジェリシン、および（ｂ）ＡＩＭ２インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはポリ（ｄＡ：ｄＴ）からなる群から選択されるインフラマソーム誘発剤、
を含む、
ことを特徴とする付記３９に記載の化合物。
前活性化部分は、
（ｉ）（ａ）加熱死菌生成物、好ましくはＨＫＡＬ、ＨＫＥＢ、ＨＫＨＰ、ＨＫＬＭ、ＨＫＬＰ、ＨＫＬＲ、ＨＫＭＦ、ＨＫＰＡ、ＨＫＰＧ、またはＨＫＳＡ、ＨＫＳＰ、および（ｂ）細胞壁成分生成物、好ましくはＬＡＭ、ＬＭ、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ＬＴＡ、ＰＧＮ、ＦＳＬ、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、またはザイモサンからなる群から選択されるＴＬＲ２のリガンド、
（ｉｉ）ポリ（Ｉ：Ｃ）およびポリ（Ａ：Ｕ）からなる群から選択されるＴＬＲ３のリガンド、
（ｉｉｉ）ＬＰＳおよびＭＰＬＡからなる群から選択されるＴＬＲ４のリガンド、
（ｉｖ）ＦＬＡおよびフラゲリンからなる群から選択されるＴＬＲ５のリガンド、
（ｖ）ＯＲＮ０２、ＯＲＮ０６、ｓｓポリ（Ｕ）、ｓｓＲＮＡ４０、ｓｓＲＮＡ４１、ｓｓＲＮＡ－ＤＲ、ポリ（ｄＴ）、ＣＬ０７５、ＣＬ０９７、ＣＬ２６４、ＣＬ３０７、ガーディキモド、ロキソリビン、イミキモド、およびレシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）からなる群から選択されるＴＬＲ７／８のリガンド、
（ｖｉ）ＯＤＮ１５８５、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１８２６、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２００７、ＯＤＮ２２１６、ＯＤＮ２３３６、ＯＤＮ２３９５、およびＯＤＮ Ｍ３６２からなる群から選択されるＴＬＲ９のリガンド、
（ｖｉｉ）ＴＬＲ１０のリガンド、
（ｖｉｉｉ）ＮＯＤ１作動薬（Ｃ１２－ｉＥ－ＤＡＰ、ｉＥ－ＤＡＰ、Ｔｒｉ－ＤＡＰ）、ＮＯＤ２作動薬（Ｌ１８－ＭＤＰ、ＭＤＰ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ、Ｍ－ＴｒｉＬＹＳ－Ｄ－ＡＳＮ、ムラブチド（Ｍｕｒａｂｕｔｉｄｅ）、Ｎ－グリコリル－ＭＤＰ）、およびＮＯＤ１／ＮＯＤ２作動薬（Ｍ－ＴｒｉＤＡＰ、ＰＧＮ）からなる群から選択されるヌクレオチドオリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様のリガンド、
（ｉｘ）５′ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、およびポリ（Ｉ：Ｃ）からなる群から選択される１つ以上のＲＩＧ－Ｉ－様受容体（ＲＬＲ）のリガンド、
（ｘ）カードランＡＬ、ＨＫＣＡ、ＨＫＳＣ、ＷＧＰ、ザイモサン、およびトレハロース－６，６－ジベヘン酸塩からなる群から選択される１つ以上のＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）のリガンド、
（ｘｉ）ｃ－ＧＭＰ、ｃ－Ｇ－ＡＭＰ、ｃ－Ｇ－ＧＭＰ、ｃ－Ａ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＡＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＩＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＧＭＰ、ｃ－ｄｉ－ＵＭＰ、ＨＳＶ－６０、ＩＳＤ、ｐＣｐＧ、ポリ（ｄＡ：ｄＴ）、ポリ（ｄＧ：ｄＣ）、ポリ（ｄＡ）、およびＶＡＣＶ－７０からなる群から選択される１つ以上の細胞質ＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）のリガンド、あるいは
（ｘｉｉ）（ａ）ＮＬＲＰ３インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはミョウバン結晶、ＡＴＰ、ＣＰＰＤ結晶、ヘルモゾイン（Ｈｅｒｍｏｚｏｉｎ）、ＭＳＵ結晶、ナノＳｉＯ２、ナイジェリシン、および（ｂ）ＡＩＭ２インフラマソームタンパク質複合体、好ましくはポリ（ｄＡ：ｄＴ）からなる群から選択されるインフラマソーム誘発剤、
を含む、
ことを特徴とする付記３９に記載の化合物。
【0346】
（付記４１）
前記活性化部分は、ＩＭＯ２１３４、ＩＭＯ２０５、ＭＧＮ－１７０３、ＭＧＮ－１７０４、アガトリモド（Ａｇａｔｏｌｉｍｏｄ）、ＳＤ－１０１、ＱＡＸ－９３５、ＤＩＭＳ０１５０、ポリネクスクアットロ（Ｐｏｌｌｉｎｅｘ Ｑｕａｔｔｒｏ）、ＯＭ－１７４、エリトラン、ＴＡＫ－２４２、ＮＩ－０１０１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１８、ＩＬ－７、またはＩＬ－１５を含む、
ことを特徴とする付記３７に記載の化合物。
前記活性化部分は、ＩＭＯ２１３４、ＩＭＯ２０５、ＭＧＮ－１７０３、ＭＧＮ－１７０４、アガトリモド（Ａｇａｔｏｌｉｍｏｄ）、ＳＤ－１０１、ＱＡＸ－９３５、ＤＩＭＳ０１５０、ポリネクスクアットロ（Ｐｏｌｌｉｎｅｘ Ｑｕａｔｔｒｏ）、ＯＭ－１７４、エリトラン、ＴＡＫ－２４２、ＮＩ－０１０１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１８、ＩＬ－７、またはＩＬ－１５を含む、
ことを特徴とする付記３７に記載の化合物。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5A】
【図5B】
