特開 2023-101815 髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2023101815

(43)【公開日】2023-07-21

(54)【発明の名称】髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/095 20060101AFI20230713BHJP

   A61K 39/29 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20230713BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20230713BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20230713BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20230713BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230713BHJP

   C07K 14/22 20060101ALI20230713BHJP

   C12N 15/31 20060101ALI20230713BHJP

【ＦＩ】

A61K39/095

A61K39/29

A61K47/02

A61K47/34

A61P31/04

A61P37/04

A61K47/26

A61K47/18

A61K9/08

A61P43/00 121

C07K14/22 ZNA

C12N15/31

【審査請求】有

【請求項の数】14

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023092374

(22)【出願日】2023-06-05

(62)【分割の表示】P 2021031816の分割

【原出願日】2014-09-05

(31)【優先権主張番号】61/875,068

(32)【優先日】2013-09-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/926,717

(32)【優先日】2014-01-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/989,432

(32)【優先日】2014-05-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(74)【代理人】

【識別番号】100185960

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 理愛

(72)【発明者】

【氏名】アンナリーサ シビル アンダーソン

(72)【発明者】

【氏名】ラサッパ ガウンダー アルマグハム

(72)【発明者】

【氏名】ジョン アーウィン ファーリー

(72)【発明者】

【氏名】リア ダイアン フレチャー

(72)【発明者】

【氏名】シャノン ハリス

(72)【発明者】

【氏名】キャサリン ウテ ジャンセン

(72)【発明者】

【氏名】トーマス リチャード ジョーンズ

(72)【発明者】

【氏名】ラクシュミ カンドキ

(72)【発明者】

【氏名】バウソン ローン

(72)【発明者】

【氏名】ジョン ランス ペレズ

(72)【発明者】

【氏名】ガリー ウォレン ズロトゥニック

(57)【要約】

【課題】多様なＭｎＢ分離株に対して有効な交差防御ワクチンまたは組成物を提供すること。
【解決手段】一態様において、本発明は、配列番号１に記載の配列を有する第一のポリペプチドと、配列番号２に記載の配列を有する第二のポリペプチドとを含む組成物に関する。一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第一のポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第二のポリペプチド、第一のポリペプチドに対して約２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して約２．８のモル比のポリソルベート８０、約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。一実施形態では、組成物の用量は、合計体積で約０．５ｍｌである。一実施形態では、２用量の組成物によって、多様な異種のサブファミリーＡおよびサブファミリーＢ株に対する殺菌力価がヒトにおいて誘導される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株およびＢ株に対して免疫応答を誘発するために用いる、
ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第一の脂質付加ポリペプチドと、
ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第二の脂質付加ポリペプチドと
を含む液体組成物。

【請求項2】

組成物が、ポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

組成物が、約１２０μｇ／ｍｌの第一のポリペプチド；約１２０μｇ／ｍｌの第二のポリペプチド；約２．８モル比のポリソルベート８０；約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム；約１０ｍＭのヒスチジン；および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

組成物が、０．５ｍｌ用量につき、約６０μｇ／ｍｌの第一のポリペプチド；約６０μｇ／ｍｌの第二のポリペプチド；約１８μｇのポリソルベート８０；約２５０μｇのアルミニウム；約７８０μｇのヒスチジン；および約４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む、請求項２に記載の組成物。

【請求項5】

組成物が、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

第一のポリペプチドが合計で２５８アミノ酸を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

第一のポリペプチドがポリペプチドのＮ末端に配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

組成物が、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない、請求項１に記載の組成物。

【請求項9】

第二のポリペプチドが合計で２６１アミノ酸を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項10】

第二のポリペプチドがポリペプチドのＮ末端に配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項11】

組成物が、多くとも２つの脂質付加ポリペプチドを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項12】

第一のポリペプチドが配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の組成物。

【請求項13】

第二のポリペプチドが配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の組成物。

【請求項14】

組成物が凍結乾燥されていない、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株およびＢ株に対して免疫応答を誘発するために用いる、請求項１に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される、２０１３年９月８日出願の米国仮特許出願第６１／８７５，０６８号、２０１４年１月１３日出願の米国仮特許出願第６１／９２６，７１７号、および２０１４年５月６日出願の米国仮特許出願第６１／９８９，４３２号の利益を主張する。

【0002】

発明の分野
本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法に関する。

【背景技術】

【0003】

髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、敗血症、髄膜炎、および死を引き起こしうるグラム陰性被包性細菌である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、化学的におよび抗原に関して特徴的な多糖莢膜に基づき、少なくとも１２の血清型（血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ－１３５、Ｘ、ＹおよびＺが含まれる）に分類することができる。その血清型のうちの５つ（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、Ｗ１３５）である菌株が、疾患の大部分の原因である。

【0004】

髄膜炎菌性髄膜炎は、抗生物質が利用可能であるにもかかわらず、小児および若年成人を数時間で死に至らしめることのある破壊的な疾患である。髄膜炎菌の血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、ＹおよびＷ１３５および／またはＸに対する、改良された免疫原性組成物が求められている。

【0005】

現在のところ、広範なＭｎＢ分離株に対して有効な交差防御ワクチンまたは組成物は、まだ市販されていない。たとえば、Ｂ血清型疾患に対する防御について認可されている多成分組成物に関するこれまでの公表結果では、非相同のＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）変異体を発現する複数菌株に対する直接の殺菌性免疫応答は、少なくとも青年では実証されていない。Ｂ血清型疾患に対する防御用の多成分組成物に関するこれまでの公表結果は、せいぜい、多成分組成物中のＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）変異体と相同であるＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）変異体に対する免疫原性を示しているにすぎないと思われる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】米国仮特許出願第６１／８７５，０６８号

【特許文献2】米国仮特許出願第６１／９２６，７１７号

【特許文献3】米国仮特許出願第６１／９８９，４３２号

【特許文献4】ＷＯ／２０１２／０３２４８９

【特許文献5】ＷＯ／２０１３／１３２４５２

【特許文献6】米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号

【特許文献7】米国特許公開第ＵＳ２０１３０２４３８０７号

【特許文献8】米国特許公開ＵＳ２０１２／００９３８５２

【特許文献9】ＷＯ２０１２０２５８７３

【特許文献10】米国特許公開ＵＳ２０１３／０１７１１９４

【特許文献11】米国特許公開ＵＳ２００９／００１６９４６

【特許文献12】米国特許第７４７９２８３号

【特許文献13】ＷＯ１９９０／０１３３１３

【特許文献14】ＥＰ１６６６０５７Ｂ１

【特許文献15】米国特許第５，８２０，８７０号

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】ＵＫ Ｍａｒｋｅｔｉｎｇ Ａｕｔｈｏｒｉｓａｔｉｏｎ ＰＬ０６７４５／０１２１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

したがって、多様なＭｎＢ分離株に対して有効な交差防御ワクチンまたは組成物が求められており、同様に（たとえば、異なる地理的領域を代表する）多様なまたは異種の髄膜炎菌株の一団に対する現実世界でのワクチン有効範囲を明らかにする必要もある。

【課題を解決するための手段】

【0009】

これらおよび他の要求に応じるために、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法に関する。

【0010】

一態様において、本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第二の脂質付加ポリペプチド、第一のポリペプチドに対して約２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して約２．８のモル比のポリソルベート８０、約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む組成物に関する。一実施形態では、初回用量は、合計体積で約０．５ｍｌである。一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ－１３５、Ｘ、Ｙ、またはＺに対する殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。一実施形態では、組成物は、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。一実施形態では、第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を有する。一実施形態では、第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を有する。一実施形態では、組成物は、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価の少なくとも２倍の強さである血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導し、殺菌力価の増大は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定において同一条件下で測定される。一実施形態では、第一の脂質付加ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、第二の脂質付加ポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。

【0011】

別の態様において、本発明は、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘発する方法に関する。方法は、ヒトに有効量の組成物の初回用量および二回目用量を投与することを含み、前記組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第二の脂質付加ポリペプチド、第一のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。一実施形態では、組成物の用量は、合計体積０．５ｍｌである。一実施形態では、ヒトに多くとも２用量の組成物を投与する。一実施形態では、ヒトに組成物の追加免疫用量をさらに投与しない。一実施形態では、ヒトに組成物の三回目用量を投与する。一実施形態では、三回目用量の後、ヒトに組成物の追加免疫用量をさらに投与しない。一実施形態では、ヒトに組成物の四回目用量をさらに投与しない。一実施形態では、三回目用量は、初回用量の後約６か月の期間内にヒトに投与する。一実施形態では、二回目用量は、初回用量から少なくとも３０日後に投与する。一実施形態では、方法は、組成物の三回目用量を投与することをさらに含み、三回目用量は、二回目用量から少なくとも９０日後に投与する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定において同一条件下で測定したとき、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価の少なくとも２倍の強さである血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。一実施形態では、免疫応答は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１１２７と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を有する。一実施形態では、第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を有する。一実施形態では、第一の脂質付加ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、第二の脂質付加ポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。

【0012】

別の態様において、本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、第一のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、合計体積が約０．５ｍｌである組成物に関する。一実施形態では、組成物は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌免疫応答を誘発する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定において同一条件下で測定したとき、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価の少なくとも２倍の強さである血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。一実施形態では、組成物は、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。一実施形態では、組成物は、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。一実施形態では、第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を有する。一実施形態では、第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を有する。一実施形態では、第一の脂質付加ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、第二の脂質付加ポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】ｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達する対象の割合を示すグラフである。ｈＳＢＡ＝ヒト補体を使用する血清殺菌検定、ＬＬＯＱ＝定量下限。

【図2】ｒＬＰ２０８６で免疫処置後の個々のヒト対象のうち、プリンストン大学アウトブレイク株およびＵＣＳＢアウトブレイク株に対するｈＳＢＡ力価の上昇が４倍に達する対象の百分率を示すグラフである（Ｂ１９７１０１２試験－実施例５、実施例６に記載）。臨床試験Ｂ１９７１０１２において２価ｒＬＰ２０８６で免疫処置した９人のヒト対象からの血清サンプルを、プリンストン大学およびＵＣＳＢからのＭｎＢアウトブレイク株を使用する試験的ｈＳＢＡにおいて評価した。実施例９を参照されたい。

【発明を実施するための形態】

【0014】

本発明者らは、意外にも、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第一の脂質付加ポリペプチドと、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第二の脂質付加ポリペプチドとを含む組成物を発見した。組成物は、ヒトにおいて、許容される安全性プロファイルを有し、組成物は、驚いたことに、ヒトにおいて、少なくとも２種類を超える多様な髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して、広く交差反応性の殺菌免疫応答を惹起する。

【0015】

本発明者らは、意外にも、２用量投与スケジュールおよび３用量投与スケジュールによって、高い割合のヒト対象において、ワクチンと非相同のＬＰ２０８６（Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ））を有する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡおよびＢからの試験株に対して、８以上のｈＳＢＡ力価が得られたことをさらに発見した。３用量投与スケジュールでは、２用量投与スケジュールと比較したとき、ヒトにおいて、多様なＭｎＢ臨床菌株に対する最も広い防御を得ることができる。

【0016】

本発明者らは、意外にも、ｒＬＰ２０８６組成物と、ヒトパピローマウイルスに対する四価の免疫原性組成物（ＨＰＶ４）を同時に投与した後、ヒトパピローマウイルスおよび髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する活発な免疫応答が生じたことも発見した。たとえば、ｒＬＰ２０８６組成物とＨＰＶ４組成物の同時投与によって、少なくとも、ｒＬＰ２０８６組成物中のｆＨＢＰと非相同であるｆＨＢＰを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ試験株に対する免疫応答が生じた。このような異種試験株としては、それぞれがｒＬＰ２０８６組成物中のｆＨＢＰと非相同であるＡ２２ ｆＨＢＰ、Ａ５６ ｆＨＢＰ、Ｂ２４ ｆＨＢＰ、またはＢ４４ ｆＨＢＰを発現する野生型髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株が挙げられる。数ある中でもＡ２２ ｆＨＢＰ、Ａ５６ ｆＨＢＰ、Ｂ２４ ｆＨＢＰ、およびＢ４４ ｆＨＢＰを始めとする変異体ｆＨＢＰタンパク質について記載している、ＷＯ／２０１２／０３２４８９、ＷＯ／２０１３／１３２４５２、米国特許公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号、および米国特許公開第ＵＳ２０１３０２４３８０７号を参照されたい。これら参考文献は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される。意外にも、同時投与によって、少なくともＨＰＶ型６、１１、１６、および／または１８に対する免疫応答も生じた。ｒＬＰ２０８６組成物とＨＰＶ４組成物の同時投与後のＨＰＶ型に対する免疫応答は、ｒＬＰ２０８６組成物不在でＨＰＶ４組成物を投与して生じた免疫応答と比べても劣っていなかった。

【0017】

加えて、本発明者らは、意外にも、ｒＬＰ２０８６組成物と、ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎に対する免疫原性組成物を同時に投与した後、ジフテリア、破傷風、百日咳、および灰白髄炎と、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対する活発な免疫応答が生じたことを発見した。たとえば、ｒＬＰ２０８６組成物とＲＥＰＥＶＡＸ組成物の同時投与によって、少なくとも、ｒＬＰ２０８６組成物中のｆＨＢＰと非相同であるｆＨＢＰを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ試験株に対する免疫応答が生じた。同時投与によって、意外にも、少なくともＲＥＰＥＶＡＸの９種類の抗原：ジフテリア、破傷風、百日咳トキソイド、百日咳線維状赤血球凝集素、百日咳パータクチン、百日咳線毛凝集原２＋３型、ポリオウイルス１型、ポリオウイルス２型、ポリオウイルス３型に対する免疫応答も生じた。ｒＬＰ２０８６組成物とＲＥＰＥＶＡＸ組成物の同時投与後のＲＥＰＥＶＡＸ抗原に対する免疫応答は、ｒＬＰ２０８６組成物不在でＲＥＰＥＶＡＸ組成物を投与して生じた免疫応答と比べても劣っていなかった。

【0018】

さらに、本発明者らは、意外にも、ｒＬＰ２０８６組成物が、ｆＨＢＰ Ｂ１５３変異体を発現するＳＴ４０９髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対する殺菌免疫応答を誘発することを発見した。たとえば、ｆＨＢＰ Ｂ１５３変異体を発現する菌株は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において、２価のヒトｒＬＰ２０８６組成物抗血清と接触させたとき、死滅しやすくなることが判明した。

【0019】

組成物およびワクチン
一態様において、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する組成物に関する。組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第一の脂質付加ポリペプチドと、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第二の脂質付加ポリペプチドとを含む。

【0020】

本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂの複数菌株に対して有効な広域防御免疫応答を誘発する単一の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ポリペプチド成分を発見した。したがって、一実施形態では、組成物は、融合タンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、キメラタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、ハイブリッドタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、ペプチド断片をさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、ｆＨＢＰでないナイセリアポリペプチドをさらに含まない。たとえば、一実施形態では、組成物は、ＰｏｒＡタンパク質を含まない。別の実施形態では、組成物は、ＮａｄＡタンパク質を含まない。別の実施形態では、組成物は、ナイセリアヘパリン結合抗原（ＮＨＢＡ）をさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、ナイセリア外膜小胞（ＯＭＶ）をさらに含まない。好ましい実施形態では、組成物は、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチド以外の抗原をさらに含まない。

【0021】

別の態様において、本発明者らは、意外にも、多くとも２種類の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株由来のポリペプチド抗原が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂの複数菌株に対して有効な広域防御免疫応答を誘発することを発見した。したがって、一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ Ｍ９８２５０７７１株および／または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ ＣＤＣ１５７３株由来のものでないポリペプチドをさらに含まない。

【0022】

一実施形態では、組成物は、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。たとえば、組成物は、配列番号１および／または配列番号２の全長との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。

【0023】

一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、各ポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、リン酸アルミニウムとしての０．５ｍｇアルミニウム／ｍｌ、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、組成物は、合計体積が約０．５ｍｌであることが好ましい。

【0024】

別の態様において、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第二の脂質付加ポリペプチド、各ポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、リン酸アルミニウムとしての０．５ｍｇアルミニウム／ｍｌ、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。

【0025】

別の態様において、組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、ｃ）１８μｇのポリソルベート８０、ｄ）２５０μｇのアルミニウム、ｅ）７８０μｇのヒスチジン、およびｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。

【0026】

例示的一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる約６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる約６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、第一の脂質付加ポリペプチドに対して、また第二の脂質付加ポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウム、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、組成物は、合計体積が約０．５ｍｌである。この例示的実施形態において、組成物は、緩衝剤処理された等張性滅菌液体懸濁液である。この例示的実施形態において、組成物は、ｐＨが６．０である。この例示的実施形態において、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドは、アルミニウムに吸着されている。

【0027】

一実施形態では、組成物は、合計体積が約０．５ｍｌである。一実施形態では、組成物の初回用量は、合計体積が約０．５ｍｌである。「初回用量」とは、０日目に投与される組成物の用量を指す。「二回目用量」または「三回目用量」とは、初回用量に引き続いて投与される組成物の用量を指し、初回用量と同じ量でも、そうでなくてもよい。

【0028】

組成物は、初回用量がヒトに投与された後、免疫原性を有する。一実施形態では、初回用量は、合計体積で約０．５ｍｌである。

【0029】

組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において同一条件下で測定したとき、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価の少なくとも１倍の強さ、好ましくは少なくとも２倍の強さを超える血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。

【0030】

殺菌力価または殺菌免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂに対するものである。好ましい実施形態では、殺菌力価または殺菌免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対するものである。殺菌力価または殺菌免疫応答は、少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ、サブファミリーＢ、Ｂ０１菌株に対するものであることが最も好ましい。

【0031】

一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌検定において同一条件下で測定したとき、組成物の用量を投与された後のヒトにおいて、前記用量を投与される前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価の少なくとも１倍を超える、たとえば、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍の強さである血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。

【0032】

一実施形態では、組成物は、免疫原性組成物である。一実施形態では、組成物は、ヒト用の免疫原性組成物である。別の実施形態では、組成物は、ワクチンである。「ワクチン」とは、その抗原に特異的である免疫応答を誘発する少なくとも１つのエピトープを含んでいる抗原を含む組成物を指す。ワクチンは、皮下、経口、口鼻、または鼻腔内の投与経路によって、直接対象に投与することができる。ワクチンは、筋肉内投与することが好ましい。一実施形態では、組成物は、ヒトワクチンである。一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物である。

【0033】

一実施形態では、組成物は、液体組成物である。好ましい実施形態では、組成物は、液体懸濁液組成物である。別の好ましい実施形態では、組成物は、凍結乾燥されていない。

【0034】

第一のポリペプチド
一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第一のポリペプチドを含む。好ましい一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第一のポリペプチドを含み、組成物は、合計体積が０．５ｍｌであることが好ましい。別の実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第一のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１からの改変されたＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰについての記述は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開ＵＳ２０１２／００９３８５２で開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３箇所の位置において共有結合で連結した主な３種の脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１によって、Ｎ末端側が脂質付加されている。第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を含む。

【0035】

第一のポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１からの対応する野生型配列と比べると、ポリペプチドのＮ末端側領域に導入された２つの変更を含む。２番目の位置にあるグリシンは、クローン化部位を導入する結果として付加される。第二の変更は、４つのアミノ酸の欠失を含む。したがって、一実施形態では、第一のポリペプチドは、Ｎ末端にＣ－Ｇ－Ｓ－Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号１の最初の４つのアミノ酸残基を参照されたい。

【0036】

第一のポリペプチド配列と野生型ナイセリア配列のＮ末端側の相違点を以下に示す。したがって、一実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、またはそれ以上のアミノ酸残基を含む。第一のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の４つ、より好ましくは少なくとも最初の６つ、最も好ましくは少なくとも最初の８つのアミノ酸残基を含むことが好ましい。

【0037】

組換えとナイセリアサブファミリーＡ ＬＰ２０８６ポリペプチドの予想Ｎ末端側配列の比較
ｒＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ ＣＧＳＳ－－－－－ＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号４）
ナイセリアＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ Ｃ－ＳＳＧＳ－ＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号５）
＞Ａ０５（配列番号１）
ＣＧＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ

【0038】

一実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第一のポリペプチドは、合計で２５８アミノ酸を有する。一実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１との配列同一性が１００％未満であるアミノ酸配列を含まない。別の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。別の実施形態では、第一のポリペプチドは、アミノ酸配列ＫＤＮを含む。たとえば、配列番号１のアミノ酸残基７３～７５を参照されたい。別の実施形態では、第一のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、第一のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。

【0039】

好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、当技術分野で知られている標準技術を使用して、組換え宿主細胞において容易に発現される。別の好ましい実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基を含む。第一のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の２つ、より好ましくは少なくとも最初の４つ、最も好ましくは少なくとも最初の８つのアミノ酸残基を含むことが好ましい。

【0040】

別の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基を含む。

【0041】

第二のポリペプチド
一実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第二のポリペプチドを含む。好ましい一実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第二のポリペプチドを含み、組成物は、合計体積が０．５ｍｌであることが好ましい。別の実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第二のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３からのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰについての記述は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許公開ＵＳ２０１２／００９３８５２で開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３箇所の位置において共有結合で連結した主な３種の脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１によって、Ｎ末端側が脂質付加されている。第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を含む。一実施形態では、第二のポリペプチドは、Ｎ末端にＣ－Ｇ－Ｓ－Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号２の最初の４つのアミノ酸残基を参照されたい。
＞Ｂ０１（配列番号２）
ＣＧＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＴＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＥＱＤＰＥＨＳＥＫＭＶＡＫＲＲＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＤＶＭＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＶＡＹＩＫＰＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＥＫＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴＡＮＧＩＨＨＩＧＬＡＡＫＱ

【0042】

一実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第二のポリペプチドは、合計で２６１アミノ酸を有する。一実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。別の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２との配列同一性が１００％未満であるポリペプチドをさらに含まない。好ましい実施形態では、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドは、それぞれのポリペプチドのＮ末端にＣ－Ｇ－Ｓ－Ｓ（配列番号３）配列を含む。

【0043】

好ましい実施形態では、第二のポリペプチドは、当技術分野で知られている標準技術を使用して、組換え宿主細胞において容易に発現される。別の好ましい実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基を含む。第二のポリペプチドは、配列番号２の少なくとも最初の２つ、より好ましくは少なくとも最初の４つ、最も好ましくは少なくとも最初の８つのアミノ酸残基を含むことが好ましい。

【0044】

別の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基を含む。

【0045】

ポリソルベート８０
ポリソルベート８０（ＰＳ－８０）は、非イオン性界面活性剤である。モノクローナル抗体に基づくｉｎ ｖｉｔｒｏ効力検定を使用しての安定性加速試験では、最終製剤においてＰＳ－８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対するモル比がより大きい場合のサブファミリーＢタンパク質の不安定性が実証された。様々な比率のＰＳ－８０を用いた別の実験では、効力の保持に最適な、ＰＳ－８０のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質に対するモル比は、およそ２．８±１．４であることが示された。

【0046】

組成物中のＰＳ－８０の濃度は、ＰＳ－８０のポリペプチドに対するモル比に応じて決まる。一実施形態では、組成物は、第一のポリペプチドに対して、また第二のポリペプチドに対して２．８±１．４のモル比のＰＳ－８０を含む。一実施形態では、組成物は、第一のポリペプチドに対して、また第二のポリペプチドに対して２．８±１．１のモル比のＰＳ－８０を含む。一実施形態では、組成物は、ポリペプチドに対して少なくとも１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、または３．３のモル比のＰＳ－８０を含む。組成物は、ポリペプチドに対して２．８のモル比のＰＳ－８０を含むことが好ましい。

【0047】

ＰＳ－８０の対ポリペプチドモル比は、どちらの値もモルで示される、ＰＳ－８０の測定濃度および合計ポリペプチド測定濃度から算出することにより求める。たとえば、ＰＳ－８０の対タンパク質モル比は、（たとえば、逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）による）ＰＳ－８０の測定濃度を、（たとえば、イオン交換高圧液体クロマトグラフィー（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）による）最終原薬中の合計タンパク質測定濃度に対して算出することにより求められ、どちらの値もモルで示される。

【0048】

ワクチン製剤中のポリソルベート８０の濃度の定量化には、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用する。界面活性剤の濃度は、脂肪酸部分のけん化によって求められ、ポリソルベート８０は、４０℃でのアルカリ加水分解によって遊離オレイン酸に変換される。Ｃ１８カラムを使用するＲＰ－ＨＰＬＣによってサンプルを分離し、ＵＶ検出器を２００ｎｍの波長で使用して定量化する。

【0049】

第一および第二のポリペプチドは、陰イオン交換ＨＰＬＣによって分割される。ｒＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡおよびＢタンパク質は、異なる保持時間で溶離し、それぞれのｒＬＰ２０８６タンパク質基準材料に対して生成された検量線を使用して定量化される。

【0050】

用語「モル比」ならびにｆＨＢＰおよびＰＳ－８０を含む免疫原性組成物についての記述は、その全体がそれぞれ参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１２０２５８７３および米国特許公開ＵＳ２０１３／０１７１１９４でさらに開示されている。

【0051】

本明細書で使用する用語「モル比」とは、組成物中の２種の異なる要素のモル数の比を指す。一部の実施形態では、モル比は、界面活性剤のモルのポリペプチドのモルに対する比である。一部の実施形態では、モル比は、ＰＳ－８０のモルのタンパク質のモルに対する比である。一実施形態では、モル比は、タンパク質濃度およびポリソルベート８０濃度に基づき、次式を使用して算出することができる。

【0052】

【数1】

【0053】

一実施形態では、組成物は、約０．００１５、０．００１７、０．００１９、０．００２１、０．００２３、０．００２５、０．００２７、０．００２９、０．００３１、０．００３３、０．００３５、０．００３７、０．００３９、０．００４１、０．００４３、０．００４５、０．００４７、０．００４９、０．００５１ｍｇ／ｍＬのＰＳ－８０を含む。組成物は、約０．００３５ｍｇ／ｍＬのＰＳ－８０を含むことが好ましい。

【0054】

別の実施形態では、組成物は、約１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、または２５μｇのＰＳ－８０を含む。好ましい実施形態では、組成物は、約１８μｇのＰＳ－８０を含む。

【0055】

別の実施形態では、組成物は、０．０００５％～１％の範囲に及ぶＰＳ－８０濃度を含む。たとえば、組成物中のＰＳ－８０濃度は、少なくとも０．０００５％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、または１．１％のＰＳ－８０でよい。好ましい実施形態では、組成物は、約０．０７％のＰＳ－８０を含む。

【0056】

任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。

【0057】

アルミニウム
組成物は、約０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウムを含むことが好ましい。一実施形態では、組成物は、リン酸アルミニウムとしての約０．５ｍｇのアルミニウム／ｍｌを含む。０．５０ｍｇ／ｍｌのＡｌＰＯ_４を安定剤として加えると、製造しやすさおよび安定性が向上する。この濃度により、サブファミリーＡおよびＢタンパク質のアルミニウムへの結合（９０％以上の結合）が維持される。

【0058】

リン酸アルミニウムの製造方法は、その全体が参照により援用される、米国特許公開ＵＳ２００９／００１６９４６に記載されている。

【0059】

一実施形態では、組成物は、アルミニウム以外に多価カチオンをさらに含まない。一実施形態では、組成物は、Ａｌ（ＯＨ）_３またはＡｌ（ＳＯ_４）_３をさらに含まない。

【0060】

添加剤
一実施形態では、組成物は、ヒスチジンを含む。一実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムを含む。組成物は、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含むことが好ましい。一実施形態では、組成物は、１０ｍＭのヒスチジンおよび１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。

【0061】

別の実施形態では、組成物は、約６５０μｇ、６６０μｇ、６７０μｇ、６８０μｇ、６９０μｇ、７００μｇ、７１０μｇ、７２０μｇ、７３０μｇ、７４０μｇ、７５０μｇ、７６０μｇ、７７０μｇ、７８０μｇ、７９０μｇ、８００μｇ、８１０μｇ、８２０μｇ、８３０μｇ、８４０μｇ、または８５０μｇのヒスチジンを含む。組成物は、約７８０μｇのヒスチジンを含むことが好ましい。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。

【0062】

一実施形態では、組成物は、トリス、リン酸、またはコハク酸緩衝剤を含む。好ましい実施形態では、組成物は、トリス緩衝剤を含まない。好ましくは、組成物は、リン酸緩衝剤を含まない。好ましい一実施形態では、組成物は、コハク酸緩衝剤を含まない。好ましい実施形態では、組成物は、ヒスチジン緩衝剤を含む。

【0063】

好ましい実施形態では、組成物のｐＨは、６．０～７．０の間であり、ｐＨ６．０が最も好ましい。一実施形態では、組成物のｐＨは、高くとも６．１である。

【0064】

殺菌活性
組成物をヒトに投与することによって誘発される免疫応答は、４つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ（ＭｎＢ）株に対して、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）を使用して明らかにされる。ｈＳＢＡにおいて使用する４ＭｎＢ株は、菌株プールから選択した。菌株プールは、米国およびヨーロッパから臨床的に関係のある髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株を体系的に集めた収蔵物であった。ＳＢＡ用の４菌株のうちの２種類は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡからのものであり、４菌株のうちの別の２種類は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢからのものである。

【0065】

すべての試験株、特に、第一のポリペプチドと非相同である配列を有するリポタンパク質２０８６変異体を発現する菌株に高い割合のｈＳＢＡが応答することは、組成物が防御性の広いワクチンであること、および少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、高い血清防御を付与するのに２用量で十分であることを示唆する。

【0066】

すべての試験株、特に、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドの両方と非相同である配列を有するリポタンパク質２０８６変異体を発現する菌株に高い割合のｈＳＢＡが応答することは、組成物が防御性の広いワクチンであること、およびｒＬＰ２０８６（ＦＨＢＰ）サブファミリーＡおよび／またはサブファミリーＢを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ株に対して高い血清防御を付与するのに、約６か月の期間内に多くとも３用量で十分であることを示唆する。

【0067】

一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。たとえば、一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、菌株Ｍ９８２５０７７１と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６Ａ０４株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ０５株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ１２株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ２２株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ１２株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ０４株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ１９株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ａ０７株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ａ２２、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ａ０６、Ａ１５、およびＡ２９、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。

【0068】

一実施形態では、免疫応答は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ５６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ０６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ１５株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ２９株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ａ６２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、第一のポリペプチドとの同一性が少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８４％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。

【0069】

別の実施形態では、免疫応答は、第一のポリペプチドとの同一性が多くとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が多くとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が多くとも８５％、より好ましくは多くとも９９％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。

【0070】

一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。たとえば、一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、菌株ＣＤＣ１１２７と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。好ましい実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、菌株ＣＤＣ１５７３と異種である、リポタンパク質２０８６変異体を発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。

【0071】

一実施形態では、免疫応答は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ２４株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ４４株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ１６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ０３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ０９株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ１５株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂ Ｂ１５３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３と異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、第二のポリペプチドとの同一性が少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８７％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。

【0072】

別の実施形態では、免疫応答は、第二のポリペプチドとの同一性が多くとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が多くとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３が発現するＨ因子結合タンパク質との同一性が多くとも８８％、より好ましくは少なくとも９９％であるアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。

【0073】

一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株が含まれる。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４、およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株が含まれる。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ｂ１５が含まれる。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ｂ１５３が含まれる。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ｂ１６株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ｂ０３株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ菌株は、ＬＰ２０８６ Ｂ０９株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ｂ０３、およびＢ０９、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。別の実施形態では、ｈＳＢＡ菌株には、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６、またはこれらのいずれかの組合せが含まれる。

【0074】

一実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して免疫応答を誘発する。免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、また髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性であることが好ましい。

【0075】

一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する免疫応答が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答より強い。たとえば、一実施形態では、免疫原性組成物は、同一条件下で試験したとき、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対してよりも高い殺菌力価を誘発する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する、より高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の二回目用量の後３０日以内に生じる。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する、より高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の三回目用量なしで生じる。

【0076】

別の実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対する免疫応答より強い。たとえば、一実施形態では、免疫原性組成物は、同一条件下で試験したとき、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＡ株に対してよりも高い殺菌力価を誘発する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する、より高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の二回目用量の後３０日以内に生じる。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型ＢサブファミリーＢ株に対する、より高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の三回目用量なしで生じる。

【0077】

力価
一実施形態では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、ヒトにおける殺菌力価を増大させる。一実施形態では、殺菌力価の増大は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の初回用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、初回用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比較される。一実施形態では、力価の増大は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の二回目用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、組成物の二回目用量の後に認められる。別の実施形態では、殺菌力価の増大は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の三回目用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、組成物の三回目用量の後に認められる。

【0078】

一実施形態では、組成物は、用量が投与された後のヒトにおいて殺菌力価を誘導し、殺菌力価は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価の少なくとも１倍の強さを超える。たとえば、殺菌力価は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、組成物の用量を投与された後のヒトにおいて、用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍の高さでよい。

【0079】

一実施形態では、「応答者」とは、ヒトを指し、その場合、組成物は、用量が投与された後のヒトにおいて殺菌力価を誘導し、殺菌力価は、用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価の少なくとも１倍の強さを超える。好ましい実施形態では、応答者は、用量が投与される前のヒトにおける殺菌力価と比べて、ｈＳＢＡ力価の上昇が少なくとも４倍以上に達する。このような応答者は、防御性力価を有すると呼ぶことができる。

【0080】

一実施形態では、ｈＳＢＡ力価は、測定可能な効果を生じる血清サンプルの最高希釈度の逆数である。たとえば、一実施形態では、ｈＳＢＡ力価は、Ｔ３０ＣＦＵ値（すなわち、試験血清を除くすべての検定成分を含有する検定ウェルにおいてインキュベートした後に生存する細菌の数、１００％細菌生存）と比べてＭｎＢ細菌を少なくとも５０％減少させる（５０％細菌生存）、試験血清の最も高い２倍希釈度の逆数である。

【0081】

一実施形態では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定したとき、初回用量を投与された後のヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける殺菌力価（たとえば、初回用量なしでのヒトにおける殺菌力価）の少なくとも２倍の強さである殺菌力価を誘導する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を利用するヒト血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において同一条件下で測定したとき、ヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける殺菌力価の少なくとも４倍の強さである殺菌力価を誘導する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を利用するヒト血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において同一条件下で測定したとき、ヒトにおいて、初回用量を投与される前のヒトにおける殺菌力価の少なくとも８倍の強さである殺菌力価を誘導する。

【0082】

好ましい実施形態では、ヒト血清補体は、所与のＳＢＡ試験株について固有の殺菌活性が弱いヒトから得たものである。固有の殺菌活性が弱いとは、たとえば、所与のＳＢＡ試験株に対して少なくとも１：４希釈度未満である殺菌力価をいう。一実施形態では、ヒト補体は、所与のＳＢＡ試験株に対して少なくとも１：４未満、たとえば１：２希釈度であるｈＳＢＡ力価を有し、組成物が投与されなかったヒトから得たものである。

【0083】

ヒトは、二価ｒＬＰ２０８６組成物などの組成物が投与される前に１：４未満のｈＳＢＡ力価を示すこともあり、または組成物が投与される前に１：４以上のｈＳＢＡ力価を示すこともある。したがって、好ましい実施形態および実施例において、組成物の少なくとも１用量をヒトに投与すると、ｈＳＢＡ力価は、少なくとも１：４を超える、たとえば、１：８以上のｈＳＢＡ力価、１：１６以上のｈＳＢＡ力価、１：３２以上のｈＳＢＡ力価となる。本明細書に記載のそれぞれの実施例は、ｈＳＢＡ力価が１：８以上および／または１：１６以上であるヒト対象の割合の評価を含み、二価ｒＬＰ２０８６組成物をヒトに投与した。ｈＳＢＡ力価が１：４を超えるという好ましい評価は、ヒトにおいて誘発された防御、すなわち、殺菌免疫応答が、組成物と関連付けられることを示す。

【0084】

一実施形態では、ヒトは、組成物の初回用量が投与された後、ｈＳＢＡの定量下限（ＬＬＯＱ）以上のｈＳＢＡ力価を有する。別の実施形態では、ヒトは、組成物の二回目用量が投与された後、ｈＳＢＡのＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を有する。別の実施形態では、ヒトは、組成物の三回目用量が投与された後、ｈＳＢＡのＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を有する。

【0085】

付加的免疫原性組成物
本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する殺菌応答に悪影響を及ぼすことなく、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に対する免疫原性組成物と共に投与できることを発見した。実施例７および実施例８で説明するとおり、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）試験株への実質的なｈＳＢＡ応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＧＡＲＤＡＳＩＬが投与されたヒトの中で、また髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）対する免疫原性組成物および食塩水が投与されたヒトにおいて認められた。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の三回目用量から約１か月後に、ｈＳＢＡ応答の付加的な増大が認められた。

【0086】

さらに、本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＨＰＶに対する免疫原性組成物の両方が投与された後のヒトにおいて、組成物が投与される前のヒトにおける免疫応答と比べて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびＨＰＶ両方に対する活発な免疫応答が生じたことを発見した。実施例７および実施例８で説明するとおり、ＨＰＶに対する力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＧＡＲＤＡＳＩＬが投与された後のヒトにおいて、免疫原性組成物が投与される前のヒトにおける力価と比べて増大した。ＨＰＶに対する力価の増大は、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍を超える、またはそれ以上であった。

【0087】

したがって、一実施形態では、方法は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘発することを含み、ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物をそのヒトに投与することをさらに含む。免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対して殺菌性であることが好ましい。一実施形態では、方法は、ＨＰＶに対する免疫応答を誘発することをさらに含む。好ましい実施形態では、方法は、ヒトパピローマウイルス６、１１、１６、および１８型のいずれか１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する免疫応答を誘発することをさらに含む。一実施形態では、ＨＰＶに対する免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する前記組成物の投与から２４時間以内にそのヒトに投与する。

【0088】

一実施形態では、方法は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘発することを含み、ＨＰＶに対する免疫原性組成物をそのヒトに投与することをさらに含む。免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対して殺菌性であることが好ましい。一実施形態では、方法は、ＨＰＶに対する免疫応答を誘発することをさらに含む。好ましい実施形態では、方法は、ヒトパピローマウイルス６、１１、１６、および１８型のいずれか１種、またはこれらのいずれかの組合せに対する免疫応答を誘発することをさらに含む。一実施形態では、ヒトパピローマウイルスに対する免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する前記組成物の投与から２４時間以内にそのヒトに投与する。

【0089】

別の態様において、本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する殺菌応答に悪影響を及ぼすことなく、ジフテリア、破傷風、無細胞百日咳、および不活化灰白髄炎ウイルス（ｄＴａＰ）に対する免疫原性組成物と共に投与できることを発見した。実施例４で説明するとおり、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）試験株への実質的なｈＳＢＡ応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＲＥＰＥＶＡＸが投与されたヒトの中で認められた。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の三回目用量から約１か月後に、ｈＳＢＡ応答の付加的な増大が認められた。

【0090】

さらに、本発明者らは、意外にも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびｄＴａＰに対する免疫原性組成物の両方が投与された後のヒトにおいて、組成物が投与される前のヒトにおける免疫応答と比べて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびｄＴａＰ両方に対する活発な免疫応答が生じたことを発見した。実施例４で説明するとおり、ｄＴａＰに対する力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物およびＲＥＰＥＶＡＸが投与された後のヒトにおいて、免疫原性組成物が投与される前のヒトにおける力価と比べて増大した。ｄＴａＰに対する力価の増大は、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍を超える、またはそれ以上であった。

【0091】

方法および投与
一態様において、本発明は、ヒトにおいて、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘発する方法に関する。別の態様において、本発明は、ヒトにワクチン接種する方法に関する。一実施形態では、方法は、上述の組成物の少なくとも１用量をヒトに投与することを含む。別の実施形態では、方法は、上述の組成物の少なくとも初回用量および二回目用量をヒトに投与することを含む。

【0092】

意外にも、本発明者らは、組成物の２用量スケジュールにより、ヒトにおいて、多様な異種サブファミリーＡ株に対して、また多様な異種サブファミリーＢ株に対して殺菌力価が誘導されることを発見した。たとえば、上述の組成物の２用量スケジュールに従って、ｈＳＢＡ力価が１：８以上であるヒトの百分率は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２またはＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６を発現するＳＢＡ試験株で９０％以上であった。実施例１を参照されたい。

【0093】

一実施形態では、二回目用量は、初回用量から少なくとも２０、３０、５０、６０、１００、１２０、１６０、１７０、または１８０日後、かつ初回用量から多くとも２５０、２１０、２００、または１９０日後に投与する。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。

【0094】

別の実施形態では、二回目用量は、初回用量から約３０日後に投与する。別の実施形態では、二回目用量は、初回用量から約６０日後、たとえば、０、２か月免疫処置スケジュールで投与する。別の実施形態では、二回目用量は、初回用量から約１８０日後、たとえば、０、６か月免疫処置スケジュールで投与する。さらに別の実施形態では、二回目用量は、初回用量から約１２０日後、たとえば、２、６か月免疫処置スケジュールで投与する。

【0095】

一実施形態では、方法は、ヒトに組成物を２用量、多くとも２用量投与することを含む。一実施形態では、２用量は、初回用量の後約６か月の期間内に投与する。一実施形態では、方法は、ヒトへの追加免疫のさらなる投与を含まない。本明細書で使用する「追加免疫」とは、組成物をヒトに追加投与することを指す。多くとも２用量の組成物をヒトに投与することが有利となりうる。その利点として、たとえば、ヒトが完全な投与スケジュールを遵守するのを容易にすること、およびスケジュールの費用効果を促進することが挙げられる。

【0096】

一実施形態では、初回用量および二回目用量は、初回用量後約２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００日の期間、また４００、３９０、３８０、３７０、３６５、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、または２００日の期間にわたりヒトに投与する。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。

【0097】

一実施形態では、初回用量および二回目用量は、約３０日の期間にわたりヒトに投与する。別の実施形態では、初回用量および二回目用量は、約６０日の期間にわたりヒトに投与する。別の実施形態では、初回用量および二回目用量は、約１８０日の期間にわたりヒトに投与する。

【0098】

３用量
本発明者らはさらに、意外にも、組成物の３用量スケジュールによって、２用量スケジュールより高い百分率のヒトにおいて、非相同のＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）を発現する菌株に対するより広い殺菌力価が誘導されたことを発見した。たとえば、上述の組成物の２用量スケジュールに従って、ｈＳＢＡ力価が１：８以上であるヒトの百分率は、ＳＢＡ試験株ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４について６５％以上であった。上述の組成物の３用量スケジュールに従って、ｈＳＢＡ力価が１：８以上であるヒトの百分率は、ＳＢＡ試験株Ｂ２４およびＢ４４について８６％以上であった。実施例１を参照されたい。

【0099】

したがって、一実施形態では、組成物の３用量スケジュールによって、２用量スケジュールより高い百分率のヒトにおいて、第一および／または第二のポリペプチドと非相同であるＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）を発現する複数菌株に対する殺菌力価が誘導される。

【0100】

一実施形態では、方法は、ヒトに組成物を３用量投与することを含む。別の実施形態では、方法は、多くとも３用量の組成物を投与することを含む。一実施形態では、３用量は、初回用量の後約６か月の期間内に投与する。一実施形態では、方法は、三回目用量の後に追加免疫用量をヒトに投与することを含む。別の実施形態では、方法は、三回目用量の後にヒトに追加免疫用量を投与することを含まない。別の実施形態では、方法は、ヒトに組成物の４回目用量または追加免疫用量を投与することをさらに含まない。別の実施形態では、約６か月の期間内に多くとも３用量をヒトに投与する。

【0101】

例示的実施形態では、二回目用量は、初回用量から約３０日後に投与し、三回目用量は、二回目用量から約１５０日後、たとえば、０、１、６か月免疫処置スケジュールで投与する。別の例示的実施形態では、二回目用量は、初回用量から約６０日後に投与し、三回目用量は、二回目用量から約１２０日後、たとえば、０、２、６か月免疫処置スケジュールで投与する。

【0102】

一実施形態では、初回用量、二回目用量、および三回目用量は、約１５０、１６０、１７０、または１８０日の期間、また多くとも２４０、２１０、２００、または１９０日の期間にわたりヒトに投与する。任意の最小値を本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を規定してもよい。初回用量、二回目用量、および三回目用量は、約１８０日または６か月の期間にわたりヒトに投与することが好ましい。たとえば、二回目用量は、初回用量から約６０日後にヒトに投与することができ、三回目用量は、二回目用量から約１２０日後にヒトに投与することができる。したがって、例示的な投与スケジュールは、約０、２、および６か月の時点でヒトに用量を投与することを含む。

【0103】

上述のとおり、複数の用量の免疫原性組成物をヒトに投与することができ、各用量の間の日数は、様々となりうる。この方法の利点としては、たとえば、ヒトが柔軟に投与スケジュールを遵守できることが挙げられる。

【0104】

実施例
以下の実施例により、本発明の実施形態を例示する。本明細書において別段指摘しない限り、以下の実施例では、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、０．５ｍＬ用量あたり６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む、０．５ｍＬ用量あたり６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、第一のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、第二のポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート８０、組成物に対しての０．５ｍｇＡｌ^３＋／ｍｌ、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む組成物の好ましい例示的実施形態である、治験用二価組換えワクチン（ｒＬＰ２０８６）に言及する。より詳細には、治験用二価組換えｒＬＰ２０８６ワクチンは、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第一の脂質付加ポリペプチド、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第二の脂質付加ポリペプチド、（ｃ）１８μｇのポリソルベート８０、（ｄ）２５０μｇのアルミニウム、（ｅ）７８０μｇのヒスチジン、および（ｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。各用量は、０．５ｍＬとした。

【実施例0105】

実施例１：１１才～１８才の健康な対象において２または３用量のレジメンで投与したときの、治験用髄膜炎菌血清型Ｂ二価（ＭｎＢ）ｒＬＰ２０８６ワクチンの、健康な青年における安全性、忍容性、および免疫原性
背景：１１～１８才の健康な青年において、２または３回のワクチン処置を含む５種類の用量レジメン（表１）を使用して、治験用二価組換えワクチン（ｒＬＰ２０８６）の安全性、忍容性、および免疫原性を試験した。

【0106】

ワクチンは、それぞれ６０μｇの精製サブファミリーＡおよび精製サブファミリーＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質、２．８のモル比のポリソルベート８０、およびＡｌＰＯ_４としての０．２５ｍｇのＡｌ^３＋、１０ｍＭのヒスチジンで緩衝剤処理したｐＨ６．０の食塩水を含有するように、０．５ｍｌ用量で製剤する。

【0107】

活性対照として役立てることのできる、安全性、免疫原性、および有効性が実証済みの対ＭｎＢワクチンは知られていないため、食塩水を偽薬として使用する。標準食塩水は、０．５ｍｌ用量中に０．９％の塩化ナトリウムを含む。

【0108】

方法：この第二相無作為化偽薬対照単盲検試験におけるすべての対象が、０、１、２および６か月の時点でワクチン処置訪問に参加した。盲検化のために、ワクチンの予定がなかったときは、食塩水対照を与えた。すべてワクチン中の変異体とは異なる、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）ｆＨＢＰ変異体Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４およびＢ４４を発現する４種のＭｎＢ試験株（すなわち、主要評価項目分析における４種の「主要ｈＳＢＡ試験株」）を用い、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）を実施した。不要な有害事象（ＡＥ）、必要な局所および全身応答、ならびに解熱剤の使用について評価した。

【0109】

ｈＳＢＡ力価幾何平均値を、両側９５％信頼区間（ＣＩ）と共に、各血液採取の時点で、各主要菌株について計算した。幾何平均上昇倍率を、９５％ＣＩと共に計算した。

【0110】

応答者とは、ｈＳＢＡ力価がｈＳＢＡ検定の定量下限（ＬＬＯＱ）以上である対象であると定義した。主要評価項目分析における４種のｈＳＢＡ試験株それぞれのＬＬＯＱは、１：８に相当するｈＳＢＡ力価であった。各主要試験株の検出限界（ＬＯＤ）は、１：４に相当する力価であった（髄膜炎菌疾患に対する防御の相関現象であると広くみなされる）。

【0111】

結果：最後のワクチン用量から１か月後、８６～９９％の対象（３用量後、Ｐ＜０．００１）および６９～１００％の対象（２用量後）は、各ＭｎＢ試験株に対してｈＳＢＡ力価が８以上であった。試験用量１の後、まとめて、ｒＬＰ２０８６受容者の１９～２７％（重度１．１～４．３％）および２３～２７％（重度０．０～１．０％）が、それぞれ発赤および腫脹を経験した。注射部位疼痛は、試験用量１の後、最もよくある局所反応であった（重度７．６～１３．１％）。二価ｒＬＰ２０８６ワクチンの初回試験用量後の３８℃以上の発熱は、食塩水受容者における２．１％と比べて、まとめて３．３～６．５％が経験した。局所および全身反応は、一般に、後続の用量の後よりも、用量１の後に頻繁に起こった。１７１２人のうち４３人の対象（２．５％）が、５１例の重篤なＡＥを報告し、２症例が、関連ありとみなされた（めまい、悪寒、および頭痛の１症例と発熱および嘔吐の１症例）。死亡は報告されなかった。

【0112】

【表1】

【0113】

結論：二価ｒＬＰ２０８６は、許容される安全性プロファイルを示した。５種類すべての投与レジメンによって、高い割合の対象において、４種類すべての試験株に対して８以上のｈＳＢＡ力価が得られた。一部の試験株に対して、３用量の後の割合が、２用量と比べて高いことは、３用量によって、多様なＭｎＢ臨床株に対して最も広い防御がもたらされうることを示唆している。世界的な第３相臨床試験が、二価ｒＬＰ２０８６ワクチンで進行中である。

【0114】

この研究の目的の一つは、１群対象（無作為化される０、１、および６か月スケジュール）および２群対象（無作為化される０、２、および６か月スケジュール）において、二価ｒＬＰ２０８６での３回目のワクチン処置から１か月後、ＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を発現するＭｎＢ株で実施するｈＳＢＡによって測定される免疫応答を評価することであった。免疫原性分析の評価項目は、４種の主要ＭｎＢ試験株（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４）それぞれについて、７か月目（または二価ｒＬＰ２０８６の３回目用量から１か月後）にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上に達している、１群および２群の対象の割合であった。ＬＬＯＱは、４種の主要ＭｎＢ試験株について１：８であった。

【0115】

評価可能な免疫原性集団について、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ｈＳＢＡ力価が１：８以上に達する１群の対象の割合は、Ａ２２では９１．７％、Ａ５６では９９．４％、Ｂ２４では８９％、Ｂ４４では８８．５％であった（上の表１を参照されたい）。９７．５％ＣＩの下限がすべての菌株について５０％を超えていたので（菌株Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４について、それぞれ、８７．８％、ｐ＜０．００１；９７．８％、ｐ＜０．００１；８４．７％、ｐ＜０．００１；および８４．１％、ｐ＜０．００１）、１群の対象について、研究の目的は果たされた。

【0116】

２群について、３用量の二価ｒＬＰ２０８６の後、ｈＳＢＡ力価が１：８以上に達する対象の割合は、Ａ２２では９５．０％、Ａ５６では９８．９％、Ｂ２４では８８．４％、Ｂ４４では８６．１％であった（上の表１を参照されたい）。１群でわかったのと同様に、９７．５％ＣＩの下限は、すべての菌株について５０％を超えており（菌株Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４について、それぞれ、９１．７％、ｐ＜０．００１；９６．９％、ｐ＜０．００１；８４．１％、ｐ＜０．００１；および８１．４％、ｐ＜０．００１）、２群の対象についても目的が果たされたことが示された。

【0117】

第二の目的は、３群対象（無作為化される０および６か月スケジュール）において、二価ｒＬＰ２０８６の二回目用量から１か月後、ＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を発現するＭｎＢ株で実施したｈＳＢＡによって測定される免疫応答を評価することであった。この第二の目的は、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについて、７か月目（または二価ｒＬＰ２０８６の二回目用量から１か月後）にｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ（１：８）以上に達している３群の対象の割合であった。

【0118】

２用量の二価ｒＬＰ２０８６の後にｈＳＢＡ力価が１：８以上に達する３群の対象の割合は、主要ＭｎＢ試験株について９３．５％、９８．４％、８１．１％、および７７．５％であり、９７．５％ＣＩの下限がすべての菌株で５０％を超えていたので（菌株Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４について、それぞれ、９０．０％、ｐ＜０．００１；９６．２％、ｐ＜０．００１；７６．０％、ｐ＜０．００１；および７２．２％、ｐ＜０．００１。上の表１を参照されたい）、この第二の目的も果たされた。

【0119】

別の第二の目的は、１群～５群の対象について、各血液採取の時点で、４種の主要ＭｎＢ試験株それぞれについてのｈＳＢＡ力価がＬＬＯＱ以上である対象の割合であった。４種の主要ｈＳＢＡ試験株それぞれについてのＬＬＯＱは、１：８の力価であった。評価可能な免疫原性集団について、試験時までにｈＳＢＡ力価が１：８以上である対象の割合を上の表１に示す。

【0120】

１用量の二価ｒＬＰ２０８６の後にｈＳＢＡ力価が１：８以上であった対象の割合（注射３から１か月後の５群［２および６か月スケジュール］）は、Ａ２２では５５．９％、Ａ５６では６７．６％、Ｂ２４では５６．９％、Ｂ４４では２３．８％であった。

【0121】

２用量の二価ｒＬＰ２０８６から１か月後にｈＳＢＡ力価が１：８以上であった対象の割合は、サブファミリーＡ株では７４．６％～１００％、サブファミリーＢ株では５４．０％～８１．１％の範囲であった。３用量の後、割合は増加し、サブファミリーＡ株およびＢ株について、それぞれ、９１．７％～９９．４％および８６．１％～８９．０％の範囲となった。

【実施例0122】

実施例２：ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ＨＳＢＡ）
ヒト血流からのＭｎＢクリアランスは、補体が媒介する溶菌によって主に実現され、無傷の補体系は、ＭｎＢが引き起こす感染に対する抵抗力にとって重要である。補体が媒介するＭｎＢのｉｎ ｖｉｖｏでの溶菌は、髄膜炎菌疾患の防御の代用であることが示されている機能血清検定である、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）によってｉｎ ｖｉｔｒｏで模倣される。すなわち、ヒト補体を使用する血清殺菌検定（ｈＳＢＡ）において細菌死滅が実証されることは、髄膜炎菌疾患に対する防御と相互に関係がある。ワクチンによって惹起される免疫を、４種のＭｎＢ株（ｆＨＢＰ変異体Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、およびＢ４４）に対するｈＳＢＡを使用して明らかにする。

【0123】

実施例に記載のｈＳＢＡでは、評価項目の判定に４種の主要ＭｎＢ試験株を使用した。すなわち、これらの菌株を使用して、ｈＳＢＡ免疫原性評価項目を用いるワクチン有効性の推定を行った。これら試験株は、米国およびヨーロッパを循環する疾患分離株の９０％超を占める６種の系統発生的ｆＨＢＰ亜群のうちの４種である。

【0124】

【表2】

【0125】

侵襲性疾患分離株から４種の主要ＭｎＢ試験株を選択する際、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＬＰ２０８６表面発現の集団分布を考慮に入れた手法を使用した。さらに、髄膜炎菌疾患のリスクのある集団は、大部分の菌株に対してベースライン殺菌活性が存在しないまたは低いことを特徴とするため、ｈＳＢＡ試験株は、低いベースラインｈＳＢＡ陽性度を示す必要があった。加えて、４種の主要ＭｎＢ試験株はそれぞれ、ワクチン中のＬＰ２０８６変異体とは異なるＬＰ２０８６変異体を発現し、したがって、集団の中を循環する侵襲性髄膜炎菌疾患（ＩＭＤ）菌株に対する機能免疫原性および有効性に関する目的の評価が可能になる。

【0126】

ｈＳＢＡでは、補体が媒介する殺菌活性を始動することのできる、血清中の抗髄膜炎菌血清型Ｂ（ＭｎＢ）抗体の量が測定される。簡潔に述べると、試験血清は、２倍ずつ段階希釈し、９６ウェル検定プレートに加える。ＭｎＢ ＳＢＡ試験株およびヒト血清補体を加えて、殺菌反応を開始する。検定プレートを３７℃で３０～６０分間（ＳＢＡ試験株次第、Ｔ３０と呼ぶ）インキュベートした後、このインキュベートを経ても生存する細菌を含有する反応混合物を希釈し、マイクロフィルタープレートに移す。終夜インキュベートした後、コロニー形成単位（ＣＦＵ）として示される生存細菌を、Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ分析装置を使用して数え上げる。生ＣＦＵデータを電子的に記録し、ｈＳＢＡ力価を算出するデータ解析アプリケーションに移す。ｈＳＢＡ力価は、Ｔ３０ＣＦＵ値（すなわち、試験血清を除くすべての検定成分を含有する検定ウェルにおいてインキュベートした後に生存する細菌の数、１００％細菌生存）と比べて、ＭｎＢ細菌を少なくとも５０％減少させる（５０％細菌生存）、試験血清の最も高い２倍希釈度の逆数である。力価は、段階力価、すなわち、１：４、１：８、１：１６などとして報告することができる。血清サンプルは、２個体で試験し、同じ検定で判定を繰り返す。反復測定値が同一でないサンプルについて報告する最終力価は、システム適性およびサンプル適性判断基準（たとえば、反復力価は、１段階の２倍希釈度内で一致しなければならない）を満たすとき、２つの反復測定値の低い方である。

【0127】

ｈＳＢＡ検定は、試験血清をダルベッコリン酸緩衝食塩水で段階希釈した後に行った。９６ウェルプレート中の連続希釈された血清に、細菌（おおよそ２０００コロニー形成単位）およびヒト血清補体（最終濃度２０重量％）を加え、小半径オービタルシェーカーにおいて、３７℃、７００ｒｐｍで（ｈＳＢＡ試験株に応じて）３０～４０分間インキュベートした。インキュベートした後、反応混合物の一部分をマイクロフィルタープレートに移した。終夜インキュベートした後、生存細菌をＩｍｍｕｎｏｓｐｏｔ分析装置（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ、米国オハイオ州シェーカーハイツ）で計数し、ｈＳＢＡ力価をＳＡＳ（バージョン９．２）で分析した。ｈＳＢＡ力価は、試験血清にさらされていない対照（すなわち、ｈＳＢＡ反応終盤の生存細菌）と比べて細菌を５０％減少させる、内挿された試験血清希釈度の逆数として算出した。実施例１の表１で列挙する菌株を用いた検定の資格付与の際に確立された、ｈＳＢＡ検定の定量下限以上であったｈＳＢＡ力価に基づき、パープロトコールｈＳＢＡを実施した。

【0128】

ヒト血清は、ＳＢＡ用の補体供給源である。しかし、ｈＳＢＡ力価は、使用するヒト補体ロットに応じて様々となりうる。したがって、ヒト補体は、厳密なスクリーニングおよび資格付与によって管理して、ｈＳＢＡにおいて一貫した性能を確保することが好ましい。ｈＳＢＡについては、ヒト血清補体を何人もの健常な成人からプールしてもよいし、または個々のドナーから使用（すなわち、プールしない）してもよい。