(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023103257
(43)【公開日】2023-07-26
(54)【発明の名称】抗トリプターゼ抗体、その組成物、及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230719BHJP
C07K 16/40 20060101ALI20230719BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20230719BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20230719BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20230719BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20230719BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230719BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230719BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230719BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20230719BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20230719BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20230719BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20230719BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20230719BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20230719BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20230719BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20230719BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20230719BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230719BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20230719BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C07K16/40
C07K16/18
C07K16/46
C07K16/24
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C12N5/10
A61K39/395 N
A61K39/395 M
A61K9/08
A61P11/00
A61P29/00
A61P37/06
A61P11/06
A61P17/06
A61P17/00
A61P37/08
A61P11/02
A61P1/04
A61P19/02
C12N1/15
C12P21/08
【審査請求】有
【請求項の数】66
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2023069091
(22)【出願日】2023-04-20
(62)【分割の表示】P 2021019018の分割
【原出願日】2018-02-09
(31)【優先権主張番号】62/457,722
(32)【優先日】2017-02-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＵＮＩＸ
(71)【出願人】
【識別番号】509012625
【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】チェン， シャオチョン
(72)【発明者】
【氏名】デニス， マーク
(72)【発明者】
【氏名】ジャックマン， ジャネット
(72)【発明者】
【氏名】ケルバー， ジェームズ ティー．
(72)【発明者】
【氏名】ルー， メイスン
(72)【発明者】
【氏名】マウン， ヘンリー アール．
(72)【発明者】
【氏名】ラージャパクサ， カティラ
(72)【発明者】
【氏名】ラマヌジャン， サロージャ
(72)【発明者】
【氏名】ステイトン， トレーシー
(72)【発明者】
【氏名】ウー， ローレン
(72)【発明者】
【氏名】イー， タンション
(57)【要約】 （修正有）
【課題】抗トリプターゼ抗体及びその薬学的組成物を含む組成物、並びにそれを使用する方法を提供する。
【解決手段】ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、又は、その抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＧＹＡＩＴのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、又は、その抗原結合断片を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、又は、その抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＧＹＡＩＴのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴのアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、又は、その抗原結合断片を提供する。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項2】
前記抗体が、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項3】
以下のＶＨドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む、請求項１または２に記載の抗体。
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項4】
前記ＶＨドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項5】
以下のＶＬドメインＦＲ：
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項6】
前記ＶＬドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項7】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項8】
前記抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、を含む、請求項７に記載の抗体。
【請求項9】
前記抗体が、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項10】
前記抗体が、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項11】
（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体。
【請求項12】
（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体。
【請求項13】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つのＨＶＲ：
（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項14】
前記抗体が、前記ＶＨドメインＦＲ－Ｈ３にＡｒｇ７１及びＶａｌ７８（Ｋａｂａｔ番号付け）をさらに含む、請求項１３に記載の抗体。
【請求項15】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、（ａ）配列番号３６、４７、４８、４９、５０、５１、及び５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３７、５３、５８、もしくは５９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項16】
以下のＶＨドメインＦＲ：
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４を含む、請求項１３～１５のいずれか１項に記載の抗体。
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４を含む、請求項１３～１５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項17】
前記ＶＨドメインが、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、請求項１３～１６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項18】
以下のＶＬドメインＦＲ：
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４を含む、請求項１３～１７のいずれか１項に記載の抗体。
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４を含む、請求項１３～１７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項19】
前記ＶＬドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、請求項１３～１８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項20】
ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、を含む、前記ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項21】
前記抗体が、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、を含む、請求項２０に記載の抗体。
【請求項22】
前記抗体が、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１３～２１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項23】
前記抗体が、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１３～２１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項24】
（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体。
【請求項25】
（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、単離された抗体。
【請求項26】
前記抗体が、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項27】
前記抗体が、配列番号７１のＨｉｓ５１と、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基と、を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、請求項２６に記載の抗体。
【請求項28】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基をさらに含む、請求項２６または２７に記載の抗体。
【請求項29】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個全てのアミノ酸残基を含む、請求項２８に記載の抗体。
【請求項30】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０を含む、請求項２８または２９に記載の抗体。
【請求項31】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項32】
前記エピトープが、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される、請求項２６～３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項33】
前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面及び四量体のヒトトリプターゼベータ１の大界面の両方を解離することができる、請求項１～１２または２６～３２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項34】
前記抗体が、配列番号７１のＧｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、及びＬｅｕ１０２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、請求項１３～２５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項35】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む、請求項３４に記載の抗体。
【請求項36】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、または１４個全てのアミノ酸残基を含む、請求項３５に記載の抗体。
【請求項37】
前記エピトープが、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６を含む、請求項３５または３６に記載の抗体。
【請求項38】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する、請求項３４～３７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項39】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１四量体に関連し、前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ３５及びＡｒｇ２１６のうちの１つまたは両方をさらに含む、請求項３４～３８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項40】
前記エピトープが、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される、請求項３４～３９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項41】
前記抗体が、前記ヒトトリプターゼベータ１の小界面及び／または大界面を解離することができる、請求項１３～２５または３４～４０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項42】
前記抗体が、カニクイザル（ｃｙｎｏ）トリプターゼとさらに結合する、請求項１～４１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項43】
前記抗体が、ヒトトリプターゼアルファとさらに結合する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項44】
前記抗体が、ヒトトリプターゼベータ２またはヒトトリプターゼベータ３とさらに結合する、請求項４３に記載の抗体。
【請求項45】
前記抗体が、ヒトトリプターゼベータ２及びヒトトリプターゼベータ３と結合する、請求項４４に記載の抗体。
【請求項46】
前記抗体が、約１ｎＭ以下のＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項１～４５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項47】
前記ＫＤが、表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記抗体が、約１２０ｐＭ～約０．５ｎＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項４７に記載の抗体。
【請求項49】
前記抗体が、約１２０ｐＭ～約３００ｐＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項４８に記載の抗体。
【請求項50】
前記抗体が、約１２０ｐＭ～約２００ｐＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項４９に記載の抗体。
【請求項51】
前記抗体が、約１８０ｐＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項５０に記載の抗体。
【請求項52】
前記抗体が、約４００ｐＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項４８に記載の抗体。
【請求項53】
前記抗体が、前記ヒトトリプターゼベータ１の酵素活性を阻害することができる、請求項１～５２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項54】
前記抗体が、基質として合成ペプチドＳ－２２８８を使用するヒトトリプターゼベータ酵素アッセイによって判定された場合に、約２．５ｎＭ以下のＩＣ５０で前記トリプターゼの活性を阻害する、請求項５３に記載の抗体。
【請求項55】
前記抗体が、約５５０ｐＭ～約２．５ｎＭのＩＣ５０で前記トリプターゼの活性を阻害する、請求項５４に記載の抗体。
【請求項56】
前記抗体が、約５００ｐＭ～約２ｎＭのＩＣ５０で前記トリプターゼの活性を阻害する、請求項５５に記載の抗体。
【請求項57】
前記抗体が、約５５０ｎＭ～１．５ｎＭのＩＣ５０で前記トリプターゼの活性を阻害する、請求項５６に記載の抗体。
【請求項58】
前記抗体が、約５００ｐＭ～約７００ｐＭのＩＣ５０で前記トリプターゼの活性を阻害する、請求項５６に記載の抗体。
【請求項59】
前記抗体が、ｐＨ６で前記ヒトトリプターゼベータ１の酵素活性を阻害することができる、請求項１～５８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項60】
前記抗体が、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激を阻害することができる、請求項１～５９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項61】
前記抗体が、マスト細胞ヒスタミン放出を阻害することができる、請求項１～６０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項62】
前記抗体が、ＩｇＥ誘発ヒスタミン放出及び／またはトリプターゼ誘発ヒスタミン放出を阻害することができる、請求項６１に記載の抗体。
【請求項63】
前記抗体が、カニクイザル気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）または鼻吸収試料におけるトリプターゼ活性を阻害することができる、請求項１～６２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項64】
前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項１～６３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項65】
前記抗体が、一価フォーマットにあるときに四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項６４に記載の抗体。
【請求項66】
前記一価フォーマットが、Ｆａｂフォーマットである、請求項６５に記載の抗体。
【請求項67】
前記抗体が、ヘパリンの存在下で四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項１～６６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項68】
請求項１～６７のいずれか１項に記載の抗体と同じエピトープに結合する抗体。
【請求項69】
１～６８のいずれか１項に記載の抗体とヒトトリプターゼベータ１への結合について競合するか、またはそれをクロスブロックするか、またはそれによってクロスブロックされる、抗体。
【請求項70】
前記抗体が、同じエピトープに結合するか、またはヒトトリプターゼベータ１への結合について競合するかどうかは、エピトープビニングアッセイによって判定される、請求項６８または６９に記載の抗体。
【請求項71】
前記抗体が、モノクローナルである、請求項１～７０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項72】
前記抗体が、ヒト化されている、請求項１～７０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項73】
前記抗体が、ヒトトリプターゼベータ１と結合する抗体断片である、請求項１～７２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項74】
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される、請求項７３に記載の抗体。
【請求項75】
前記抗体が、全長抗体である、請求項１～７２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項76】
前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項７５に記載の抗体。
【請求項77】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項７６に記載の抗体。
【請求項78】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ４抗体である、請求項７６に記載の抗体。
【請求項79】
前記ＩｇＧ４抗体が、Ｓ２２８Ｐ変異（ＥＵ番号付け）を含む、請求項７８に記載の抗体。
【請求項80】
前記抗体が、単一特異性抗体である、請求項１～７９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項81】
前記抗体が、多重特異性抗体である、請求項１～７９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項82】
前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項８１に記載の抗体。
【請求項83】
前記抗体が、ヒトトリプターゼベータ１に結合する第１の結合ドメインと、第２の生物学的分子に結合する第２の結合ドメインとを含み、前記第２の生物学的分子が、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－５（ＩＬ－５）、インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）、ＩｇＥ、及びインターロイキン－３３（ＩＬ－３３）からなる群から選択される、請求項８２に記載の抗体。
【請求項84】
前記第２の生物学的分子が、ＩＬ－１３である、請求項８３に記載の抗体。
【請求項85】
前記第２の生物学的分子が、ＩＬ－３３である、請求項８３に記載の抗体。
【請求項86】
前記第２の生物学的分子が、ＩｇＥである、請求項８３に記載の抗体。
【請求項87】
請求項１～８６のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離された核酸、または前記抗体を一緒にコードする単離された核酸のセット。
【請求項88】
配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体をコードする単離された核酸、または前記抗体を一緒にコードする単離された核酸のセットであって、配列番号１０４及び／または配列番号１０５の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、前記核酸またはセット。
【請求項89】
前記抗体が、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記核酸またはセットが、配列番号１０６及び／または配列番号１０７の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、請求項８７または８８に記載の核酸。
【請求項90】
前記抗体が、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記核酸またはセットが、配列番号１０８及び／または配列番号１０７の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、請求項８７または８８に記載の核酸。
【請求項91】
前記核酸が、配列番号１０８及び／または配列番号１０７の配列を含む、請求項８７、８８、及び９０のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項92】
配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む前記抗体をコードする単離された核酸、または前記抗体を一緒にコードする単離された核酸のセットであって、配列番号１０９及び／または配列番号１１０の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、前記核酸またはセット。
【請求項93】
前記抗体が、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記核酸またはセットが、配列番号１１１及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、請求項８７または９２に記載の核酸。
【請求項94】
前記抗体が、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記核酸またはセットが、配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、請求項８７または９２に記載の核酸。
【請求項95】
前記核酸またはセットが、配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列を含む、請求項８７、９２、及び９４のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項96】
請求項８７～９５のいずれか１項に記載の単離された核酸または単離された核酸のセットを含むベクターまたはベクターのセット。
【請求項97】
請求項９６のベクターまたはベクターのセットを含む宿主細胞。
【請求項98】
前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である、請求項９７に記載の宿主細胞。
【請求項99】
前記哺乳動物細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項９８に記載の宿主細胞。
【請求項100】
前記宿主細胞が、原核細胞である、請求項９７に記載の宿主細胞。
【請求項101】
前記原核細胞が、Ｅ．ｃｏｌｉである、請求項１００に記載の宿主細胞。
【請求項102】
請求項１～８６のいずれか１項に記載の抗体の産生方法であって、請求項９７に記載の宿主細胞を、前記抗体の産生を可能にする好適な条件下で、培養培地で培養することを含む、前記方法。
【請求項103】
前記方法が、前記宿主細胞または前記培養培地から前記抗体を回収することをさらに含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項104】
請求項１～８６のいずれか１項に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項105】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む薬学的組成物であって、基質としてＳ－２２８８を使用するインビトロトリプターゼ酵素アッセイによって判定された場合に、前記抗体が、約０．１ｎＭ～約１ｎＭのＫＤで単量体のトリプターゼベータ１と結合し、及び／または前記抗体が、約０．１ｎＭ～約５ｎＭの半数阻害濃度（ＩＣ５０）で前記トリプターゼの前記酵素活性を阻害することができる、前記薬学的組成物。
【請求項106】
前記抗体が、約０．５ｎＭ～約１ｎＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項107】
前記抗体が、約０．１ｎＭ～約０．５ｎＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項108】
前記抗体が、約０．４ｎＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項１０５または１０７に記載の組成物。
【請求項109】
前記抗体が、約０．２ｎＭのＫＤで前記トリプターゼと結合する、請求項１０５または１０７に記載の組成物。
【請求項110】
前記ＫＤが、表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される、請求項１０５～１０９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項111】
前記抗体が、約０．５ｎＭ～約５ｎＭのＩＣ５０で前記トリプターゼの前記活性を阻害することができる、請求項１０５～１１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項112】
前記抗体が、約０．１ｎＭ～約２ｎＭのＩＣ５０で前記トリプターゼの前記活性を阻害することができる、請求項１０５～１１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項113】
前記抗体が、約４ｎＭのＩＣ５０で前記ヒトトリプターゼの活性を阻害することができる、請求項１０５～１１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項114】
前記抗体が、約０．６ｎＭのＩＣ５０で前記トリプターゼの前記活性を阻害することができる、請求項１０５～１１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項115】
前記抗体が、ｐＨ６で前記トリプターゼ活性を阻害することができる、請求項１０５～１１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項116】
前記抗体が、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激を阻害することができる、請求項１０５～１１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項117】
前記抗体が、マスト細胞ヒスタミン放出を阻害することができる、請求項１０５～１１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項118】
前記抗体が、ＩｇＥ誘発ヒスタミン放出及び／またはトリプターゼ誘発ヒスタミン放出を阻害することができる、請求項１１７に記載の組成物。
【請求項119】
前記抗体が、活性トリプターゼＥＬＩＳＡアッセイによって評価されるように、カニクイザルトリプターゼＤ１を阻害することができる、請求項１０５～１１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項120】
前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項１０５～１１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項121】
前記抗体が、一価フォーマットにあるときに四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項122】
前記一価フォーマットが、Ｆａｂフォーマットである、請求項１２１に記載の組成物。
【請求項123】
前記抗体が、ヘパリンの存在下で四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項１０５～１２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項124】
前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２３のいずれか１項に記載の組成物。
（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項125】
前記抗体が、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項126】
前記抗体が、以下のＶＨドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２５のいずれか１項に記載の組成物。
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項127】
前記抗体の前記ＶＨドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項128】
前記抗体が、以下のＶＬドメインＦＲ：
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２７のいずれか１項に記載の組成物。
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項129】
前記抗体の前記ＶＬドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項130】
前記抗体が、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１２４～１２９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項131】
前記抗体が、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１２４～１２９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項132】
前記抗体が、以下の６つのＨＶＲ：
（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、または１１４～１２３のいずれか１項に記載の組成物。
（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、または１１４～１２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項133】
前記抗体が、（ａ）配列番号３６、４７、４８、４９、５０、５１、及び５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）配列番号３７、５３、５８、または５９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、を含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、または１３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項134】
前記抗体が、以下のＶＨドメインＦＲ：
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、１３２、または１３３のいずれか１項に記載の組成物。
（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び
（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、１３２、または１３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項135】
前記抗体の前記ＶＨドメインが、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、または１３２～１３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項136】
前記抗体が、以下のＶＬドメインＦＲ：
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、または１３２～１３５のいずれか１項に記載の組成物。
（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、
（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、
（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び
（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、または１３２～１３５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項137】
前記抗体の前記ＶＬドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、または１３２～１３６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項138】
前記抗体が、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１３２～１３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項139】
前記抗体が、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１３２～１３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項140】
前記抗体が、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、または１１５～１３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項141】
前記抗体が、配列番号７１のＨｉｓ５１と、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基と、を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、請求項１４０に記載の組成物。
【請求項142】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む、請求項１４０または１４１に記載の組成物。
【請求項143】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個全てのアミノ酸残基を含む、請求項１４２に記載の組成物。
【請求項144】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０を含む、請求項１４２または１４３に記載の組成物。
【請求項145】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する、請求項１４０～１４４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項146】
前記エピトープが、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される、請求項１４０～１４５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項147】
前記抗体が、前記四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面及び前記四量体のヒトトリプターゼベータ１の大界面の両方を解離することができる、請求項１０５、１０７、１０８、１１０～１１３、１１５～１３１、または１４０～１４６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項148】
前記抗体が、配列番号７１のＧｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、及びＬｅｕ１０２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、または１３２～１３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項149】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む、請求項１４８に記載の組成物。
【請求項150】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、または１４個全てのアミノ酸残基を含む、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項151】
前記エピトープが、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６を含む、請求項１４９または１５０に記載の組成物。
【請求項152】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する、請求項１４８～１５１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項153】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１四量体に関連し、前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ３５及びＡｒｇ２１６のうちの１つまたは両方をさらに含む、請求項１５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項154】
前記エピトープが、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される、請求項１４８～１５３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項155】
前記抗体が、前記ヒトトリプターゼベータ１の小界面及び／または大界面を解離することができる、請求項１０５、１０７、１０９～１１２、１１４～１２３、１３２～１３９、または１４８～１５４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項156】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む薬学的組成物であって、前記抗体が、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、前記薬学的組成物。
【請求項157】
前記抗体が、配列番号７１のＨｉｓ５１と、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基と、を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、請求項１５６に記載の組成物。
【請求項158】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む、請求項１５６または１５７に記載の組成物。
【請求項159】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個全てのアミノ酸残基を含む、請求項１５８に記載の組成物。
【請求項160】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０を含む、請求項１５８または１５９に記載の組成物。
【請求項161】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する、請求項１５６～１６０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項162】
前記エピトープが、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される、請求項１５６～１６１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項163】
前記抗体が、前記四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面及び前記四量体のヒトトリプターゼベータ１の大界面の両方を解離することができる、請求項１５６～１６２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項164】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む薬学的組成物であって、前記抗体が、配列番号７１のＧｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、及びＬｅｕ１０２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する、前記薬学的組成物。
【請求項165】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む、請求項１６４に記載の組成物。
【請求項166】
前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、または１４個全てのアミノ酸残基を含む、請求項１６５に記載の組成物。
【請求項167】
前記エピトープが、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６を含む、請求項１６５または１６６に記載の組成物。
【請求項168】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する、請求項１６４～１６７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項169】
前記エピトープが、ヒトトリプターゼベータ１四量体に関連し、前記ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープが、配列番号７１のＧｌｎ３５及びＡｒｇ２１６のうちの１つまたは両方をさらに含む、請求項１６８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項170】
前記エピトープが、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される、請求項１６４～１６９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項171】
前記抗体が、前記ヒトトリプターゼベータ１の小界面及び／または大界面を解離することができる、請求項１６４～１７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項172】
前記抗体が、ヒトトリプターゼアルファ、トリプターゼベータ２、トリプターゼベータ３、及び／またはカニクイザルトリプターゼＤ１とさらに結合することができる、請求項１０５～１７１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項173】
前記抗体が、モノクローナルである、請求項１０５～１７２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項174】
前記抗体が、ヒト化されている、請求項１０５～１７２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項175】
前記組成物が、ヒトにおける使用のためのものである、請求項１０４～１７４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項176】
前記組成物が、凍結乾燥されている、請求項１０４～１７５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項177】
前記組成物が、液体である、請求項１０４～１７５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項178】
前記賦形剤が、抗酸化剤である、請求項１０４～１７７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項179】
前記組成物が、Ｎ－アセチルトリプトファン、トリプトファン、メチオニン、システイン、グルタチオン、チオソルビトール、アスコルビン酸、モノチオグリセロール、シクロデキストリン、トロロックス（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）、ピリドキシン、マンニトール、及び金属キレート剤からなる群から選択される１つ以上の抗酸化剤を含む、請求項１７８に記載の組成物。
【請求項180】
前記組成物が、Ｎ－アセチルトリプトファン及び／またはメチオニンを含む、請求項１７９に記載の組成物。
【請求項181】
前記組成物が、Ｎ－アセチルトリプトファン及びメチオニンを含む、請求項１８０に記載の組成物。
【請求項182】
薬学的組成物であって、
（ｉ）ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み、ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位における前記トリプトファンの酸化が、３０％以下である、前記単離された抗体、またはその抗原結合断片、を含む、前記薬学的組成物。
（ｉ）ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み、ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位における前記トリプトファンの酸化が、３０％以下である、前記単離された抗体、またはその抗原結合断片、を含む、前記薬学的組成物。
【請求項183】
ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位における前記トリプトファンの酸化が、ＡＡＰＨストレス試験に従って判定される、請求項１８２に記載の組成物。
【請求項184】
ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位における前記トリプトファンの酸化が、前記組成物の初期生成から１年以内に判定される、請求項１８２に記載の組成物。
【請求項185】
ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位における前記トリプトファンの酸化が、２８％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、または６％以下である、請求項１８２～１８４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項186】
前記組成物が、約０．１ｍＭ～約５ｍＭの濃度でＮ－アセチルトリプトファンを含む、請求項１８０～１８５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項187】
前記Ｎ－アセチルトリプトファンの濃度が、約０．１ｍＭ～約１ｍＭである、請求項１８６に記載の組成物。
【請求項188】
前記Ｎ－アセチルトリプトファンの濃度が、約０．３ｍＭである、請求項１８７に記載の組成物。
【請求項189】
前記組成物が、約１ｍＭ～約２０ｍＭの濃度でメチオニンを含む、請求項１８０～１８８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項190】
前記メチオニンの濃度が、約１ｍＭ～約１０ｍＭである、請求項１８９に記載の組成物。
【請求項191】
前記メチオニンの濃度が、約５ｍＭである、請求項１９０に記載の組成物。
【請求項192】
薬学的組成物であって、
（ｉ）ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記単離された抗体、またはその抗原結合断片と、
（ｉｉ）約０．１ｍｍ～約１ｍＭの濃度のＮ－アセチルトリプトファンと、
（ｉｉｉ）約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度のメチオニンと、を含む、前記薬学的組成物。
（ｉ）ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記単離された抗体、またはその抗原結合断片と、
（ｉｉ）約０．１ｍｍ～約１ｍＭの濃度のＮ－アセチルトリプトファンと、
（ｉｉｉ）約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度のメチオニンと、を含む、前記薬学的組成物。
【請求項193】
前記抗体の濃度が、約１ｍｇ／ｍｌ～約２５０ｍｇ／ｍｌである、請求項１０４～１９２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項194】
前記抗体の濃度が、約１５０ｍｇ／ｍｌである、請求項１９３に記載の組成物。
【請求項195】
安定剤、緩衝剤、界面活性剤、及び張性剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）からなる群から選択される１つ以上のさらなる賦形剤をさらに含む、請求項１０４～１９４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項196】
前記組成物が、緩衝剤をさらに含む、請求項１９５に記載の組成物。
【請求項197】
前記緩衝剤が、アルギニンコハク酸及び／またはヒスチジンコハク酸を含む、請求項１９６に記載の組成物。
【請求項198】
前記緩衝剤が、アルギニンコハク酸及びヒスチジンコハク酸を含む、請求項１９７に記載の組成物。
【請求項199】
前記アルギニンコハク酸の濃度が、約５０ｍＭ～約５００ｍＭである、請求項１９７または１９８に記載の組成物。
【請求項200】
前記アルギニンコハク酸の濃度が、約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、請求項１９９に記載の組成物。
【請求項201】
前記アルギニンコハク酸の濃度が、約２００ｍＭである、請求項２００に記載の組成物。
【請求項202】
前記ヒスチジンコハク酸の濃度が、約１ｍＭ～約５０ｍＭである、請求項１９７～２０１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項203】
前記ヒスチジンコハク酸の濃度が、約１５ｍＭ～約２５ｍＭである、請求項２０２に記載の組成物。
【請求項204】
前記ヒスチジンコハク酸の濃度が、約２０ｍＭである、請求項２０３に記載の組成物。
【請求項205】
前記組成物が、界面活性剤をさらに含む、請求項１９５～２０４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項206】
前記界面活性剤が、ポロキサマー１８８またはポリソルベート２０である、請求項２０５に記載の組成物。
【請求項207】
前記界面活性剤が、ポロキサマー１８８である、請求項２０６に記載の組成物。
【請求項208】
前記ポロキサマー１８８の濃度が、約０．００５％～約０．１％である、請求項２０７に記載の組成物。
【請求項209】
前記ポロキサマー１８８の濃度が、約０．００５％～約０．０５％である、請求項２０８に記載の組成物。
【請求項210】
前記ポロキサマー１８８の濃度が、約０．０２％である、請求項２０９に記載の組成物。
【請求項211】
前記組成物のｐＨが、約４．５～約７．０である、請求項１０４～２１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項212】
前記組成物のｐＨが、約４．５～約６．５である、請求項２１１に記載の組成物。
【請求項213】
前記組成物のｐＨが、約５．８である、請求項２１２に記載の組成物。
【請求項214】
前記組成物が、遮光容器内にある、請求項１０４～２１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項215】
前記組成物が、プレフィルドシリンジ内にある、請求項１０４～２１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項216】
前記組成物が、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１０４～２１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項217】
前記ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－１３抗体である、請求項２１６に記載の組成物。
【請求項218】
前記抗ＩＬ－１３抗体が、レブリキズマブである、請求項２１７に記載の組成物。
【請求項219】
前記ＩＬ－５軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである、請求項２１６に記載の組成物。
【請求項220】
前記ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである、請求項２１６に記載の組成物。
【請求項221】
前記ＩＬ－３３結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－３３抗体である、請求項２１７に記載の組成物。
【請求項222】
前記Ｍ１プライムアンタゴニストが、キリズマブである、請求項２１６に記載の組成物。
【請求項223】
前記組成物が、ヒトへの投与のために製剤化される、請求項１０４～２２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項224】
医薬品として使用するための請求項１～８６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項225】
障害の治療に使用するための請求項１～８６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項226】
前記障害が、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、正常もしくは異常組織常在性細胞または間質細胞の増加された数もしくは分布に関連する障害、または肥満細胞症からなる群から選択される、請求項２２５に記載の使用のための抗体。
【請求項227】
前記障害が、肺障害である、請求項２２６に記載の使用のための抗体。
【請求項228】
前記肺障害が、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２２７に記載の使用のための抗体。
【請求項229】
前記肺障害が、喘息である、請求項２２８に記載の使用のための抗体。
【請求項230】
前記喘息が、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である、請求項２２９に記載の使用のための抗体。
【請求項231】
前記自己免疫不全が、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される、請求項２２６に記載の使用のための抗体。
【請求項232】
前記炎症性障害が、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である、請求項２２６に記載の使用のための抗体。
【請求項233】
前記線維性障害が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項２２６に記載の使用のための抗体。
【請求項234】
さらなる治療剤と組み合わせて使用するための、請求項２２５～２３３のいずれか１項に記載の使用のための抗体。
【請求項235】
前記さらなる治療剤が、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である、請求項２３４に記載の使用のための抗体。
【請求項236】
前記ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－１３抗体である、請求項２３５に記載の使用のための抗体。
【請求項237】
前記抗ＩＬ－１３抗体が、レブリキズマブである、請求項２３６に記載の使用のための抗体。
【請求項238】
前記ＩＬ－５軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである、請求項２３４に記載の使用ための抗体。
【請求項239】
前記ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである、請求項２３５に記載の使用のための抗体。
【請求項240】
前記ＩＬ－３３結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－３３抗体である、請求項２３９に記載の使用のための抗体。
【請求項241】
前記Ｍ１プライムアンタゴニストが、キリズマブである、請求項２３５に記載の使用のための抗体。
【請求項242】
皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与するための、請求項２２５～２４１のいずれか１項に記載の使用のための抗体。
【請求項243】
皮下投与するための、請求項２４２に記載の使用のための抗体。
【請求項244】
ヒト対象において使用するための、請求項２２５～２４３のいずれか１項に記載の使用のための抗体。
【請求項245】
医薬品として使用するための請求項１０４～２２３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項246】
障害の治療に使用するための請求項１０４～２２３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項247】
前記障害が、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、正常もしくは異常組織常在性細胞または間質細胞の増加された数もしくは分布に関連する障害、または肥満細胞症からなる群から選択される、請求項２４６に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項248】
前記障害が、肺障害である、請求項２４７に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項249】
前記肺障害が、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２４８に記載の使用のための抗薬学的組成物。
【請求項250】
前記肺障害が、喘息である、請求項２４９に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項251】
前記喘息が、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である、請求項２５０に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項252】
前記自己免疫不全が、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される、請求項２４７に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項253】
前記炎症性障害が、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である、請求項２４７に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項254】
前記線維性障害が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項２４７に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項255】
さらなる治療剤と組み合わせて使用するための、請求項２４６～２５４のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項256】
前記さらなる治療剤が、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である、請求項２５５に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項257】
前記ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－１３抗体である、請求項２５６に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項258】
前記抗ＩＬ－１３抗体が、レブリキズマブである、請求項２５７に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項259】
前記ＩＬ－５軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである、請求項２５６に記載の使用ための薬学的組成物。
【請求項260】
前記ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである、請求項２５６に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項261】
前記ＩＬ－３３結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－３３抗体である、請求項２６０に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項262】
前記Ｍ１プライムアンタゴニストが、キリズマブである、請求項２５６に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項263】
皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与するための、請求項２４６～２６２のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項264】
皮下投与するための、請求項２６３に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項265】
ヒト対象において使用するための、請求項２４６～２６４のいずれか１項に記載の使用のための薬学的組成物。
【請求項266】
障害を治療するための医薬品の製造における、請求項１～８６のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項267】
前記障害が、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、正常もしくは異常組織常在性細胞または間質細胞の増加された数もしくは分布に関連する障害、または肥満細胞症からなる群から選択される、請求項２６６に記載の使用。
【請求項268】
前記障害が、肺障害である、請求項２６７に記載の使用。
【請求項269】
前記肺障害が、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２６８に記載の使用。
【請求項270】
前記肺障害が、喘息である、請求項２６９に記載の使用。
【請求項271】
前記喘息が、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である、請求項２７０に記載の使用。
【請求項272】
前記自己免疫不全が、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される、請求項２６７に記載の使用。
【請求項273】
前記炎症性障害が、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である、請求項２６７に記載の使用。
【請求項274】
前記線維性障害が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項２６７に記載の使用。
【請求項275】
前記医薬品が、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤と組み合わせて使用するために製剤化される、請求項２６５～２７４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項276】
前記ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－１３抗体である、請求項２７５に記載の使用。
【請求項277】
前記抗ＩＬ－１３抗体が、レブリキズマブである、請求項２７６に記載の使用。
【請求項278】
前記ＩＬ－５軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである、請求項２７５に記載の使用。
【請求項279】
前記ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである、請求項２７５に記載の使用。
【請求項280】
前記ＩＬ－３３結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－３３抗体である、請求項２７９に記載の使用。
【請求項281】
前記Ｍ１プライムアンタゴニストが、キリズマブである、請求項２７５に記載の使用。
【請求項282】
障害を治療するための医薬品の製造における、請求項１０４～２２３のいずれか１項に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項283】
前記障害が、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、正常もしくは異常組織常在性細胞または間質細胞の増加された数もしくは分布に関連する障害、または肥満細胞症からなる群から選択される、請求項２８２に記載の使用。
【請求項284】
前記障害が、肺障害である、請求項２８３に記載の使用。
【請求項285】
前記肺障害が、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２８４に記載の使用。
【請求項286】
前記肺障害が、喘息である、請求項２８５に記載の使用。
【請求項287】
前記喘息が、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である、請求項２８６に記載の使用。
【請求項288】
前記自己免疫不全が、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される、請求項２８３に記載の使用。
【請求項289】
前記炎症性障害が、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である、請求項２８３に記載の使用。
【請求項290】
前記線維性障害が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項２８３に記載の使用。
【請求項291】
前記医薬品が、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤と組み合わせて使用するために製剤化される、請求項２８２～２９０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項292】
前記ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－１３抗体である、請求項２９１に記載の使用。
【請求項293】
前記抗ＩＬ－１３抗体が、レブリキズマブである、請求項２９２に記載の使用。
【請求項294】
前記ＩＬ－５軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである、請求項２９１に記載の使用。
【請求項295】
前記ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである、請求項２９１に記載の使用。
【請求項296】
前記ＩＬ－３３結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－３３抗体である、請求項２９５に記載の使用。
【請求項297】
前記Ｍ１プライムアンタゴニストが、キリズマブである、請求項２９１に記載の使用。
【請求項298】
障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の請求項１～８６のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項299】
前記障害が、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、正常もしくは異常組織常在性細胞または間質細胞の増加された数もしくは分布に関連する障害、または肥満細胞症からなる群から選択される、請求項２９８に記載の方法。
【請求項300】
前記障害が、肺障害である、請求項２９９に記載の方法。
【請求項301】
前記肺障害が、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項３００に記載の方法。
【請求項302】
前記肺障害が、喘息である、請求項３０１に記載の方法。
【請求項303】
前記喘息が、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である、請求項３０２に記載の方法。
【請求項304】
前記自己免疫不全が、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される、請求項２９９に記載の方法。
【請求項305】
前記炎症性障害が、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である、請求項２９９に記載の方法。
【請求項306】
前記線維性障害が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項２９９に記載の方法。
【請求項307】
前記方法が、さらなる治療剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項２９８～３０６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項308】
前記さらなる治療剤が、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である、請求項３０７に記載の方法。
【請求項309】
前記ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－１３抗体である、請求項３０８に記載の方法。
【請求項310】
前記抗ＩＬ－１３抗体が、レブリキズマブである、請求項３０９に記載の方法。
【請求項311】
前記ＩＬ－５軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである、請求項３０８に記載の方法。
【請求項312】
前記ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである、請求項３０８に記載の方法。
【請求項313】
前記ＩＬ－３３結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－３３抗体である、請求項３１２に記載の方法。
【請求項314】
前記Ｍ１プライムアンタゴニストが、キリズマブである、請求項３０８に記載の方法。
【請求項315】
前記抗体が、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与される、請求項２９８～３１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項316】
前記対象が、ヒトである、請求項２９４～３１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項317】
障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の請求項１０４～２２３のいずれか１項に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項318】
前記障害が、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、正常もしくは異常組織常在性細胞または間質細胞の増加された数もしくは分布に関連する障害、または肥満細胞症からなる群から選択される、請求項３１７に記載の方法。
【請求項319】
前記障害が、肺障害である、請求項３１８に記載の方法。
【請求項320】
前記肺障害が、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項３１９に記載の方法。
【請求項321】
前記肺障害が、喘息である、請求項３２０に記載の方法。
【請求項322】
前記喘息が、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である、請求項３２１に記載の方法。
【請求項323】
前記自己免疫不全が、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される、請求項３１８に記載の方法。
【請求項324】
前記炎症性障害が、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である、請求項３１８に記載の方法。
【請求項325】
前記線維性障害が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項３１８に記載の方法。
【請求項326】
前記方法が、さらなる治療剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項３１７～３２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項327】
前記さらなる治療剤が、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である、請求項３２６に記載の方法。
【請求項328】
前記ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－１３抗体である、請求項３２７に記載の方法。
【請求項329】
前記抗ＩＬ－１３抗体が、レブリキズマブである、請求項３２８に記載の方法。
【請求項330】
前記ＩＬ－５軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである、請求項３２７に記載の方法。
【請求項331】
前記ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである、請求項３２７に記載の方法。
【請求項332】
前記ＩＬ－３３結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－３３抗体である、請求項３３１に記載の方法。
【請求項333】
前記Ｍ１プライムアンタゴニストが、キリズマブである、請求項３２７に記載の方法。
【請求項334】
前記薬学的組成物が、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与される、請求項３１７～３３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項335】
前記薬学的組成物が、皮下投与される、請求項３３４に記載の方法。
【請求項336】
前記対象が、ヒトである、請求項３１７～３３５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１７年２月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／４５７，７２２号に対する利益を主張する。
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１７年２月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／４５７，７２２号に対する利益を主張する。
【0002】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式にて電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１８年２月９日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、５０４７４－１１２ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿２．９．１８＿ＳＴ２５という名称であり、１０８，９６７バイトのサイズである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式にて電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１８年２月９日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、５０４７４－１１２ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿２．９．１８＿ＳＴ２５という名称であり、１０８，９６７バイトのサイズである。
【0003】
本発明は、抗トリプターゼ抗体、薬学的組成物、及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【0004】
ヒトトリプターゼベータは、マスト細胞中、及びより少ない程度に好塩基球中に豊富にあるトリプシン様セリンプロテアーゼである。ＴＰＳＡＢ１及びＴＰＳＢ２遺伝子座によって産生されるヒトトリプターゼベータ（その３つのサブタイプであるトリプターゼベータ１、トリプターゼベータ２、及びトリプターゼベータ３が存在する）は、ヒトマスト細胞よって産生される優勢活性トリプターゼである。これらの２つの遺伝子座は、４つのトリプターゼアイソフォームを産生し、ＴＰＳＡＢ１は、トリプターゼアルファ及びトリプターゼベータ１を産生するが、ＴＰＳＢ２は、トリプターゼベータ２及びトリプターゼベータ３を産生する。トリプターゼアルファ、ならびにトリプターゼガンマ、トリプターゼデルタ、及びトリプターゼイプシロンなどの他のアイソフォームは、大部分において不活性である。
【0005】
タンパク分解性に処理された、活性トリプターゼベータは、ヘパリンと複合した四量体としてマスト細胞の分泌顆粒中に保管される。ＩｇＥ依存性刺激（例えば、アレルゲン）、または非ＩｇＥ依存性刺激（例えば、物質Ｐもしくは活性トリプターゼ）によって引き起こされ得る、マスト細胞の胞脱顆粒は、他の顆粒酵素及びヒスタミンと共にトリプターゼベータの放出をもたらす。以前の研究では、喘息患者の気管支平滑筋及び上皮中の増加されたマスト細胞数、ならびに気管支肺胞洗浄液中のトリプターゼベータの増加されたレベルが観察されている。加えて、トリプターゼは、気道気管支収縮及び気道過反応性に寄与し、また、特発性肺線維症及び細胞外マトリックス回転における役割を果たすことが示唆されており、それらは気道リモデリングプロセスを証明する。
【0006】
トリプターゼは、治療抗トリプターゼアンタゴニストを含む改善された治療及び治療方法の必要が残っている喘息及び他の肺障害、炎症性障害、自己免疫不全、及び線維性障害を含む様々な疾患及び障害に関与していると示唆されている。小分子トリプターゼ阻害剤（例えば、Ｃａｉｒｎｓ，Ｊ．Ａ．，２００５，Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １８：５５－６６を参照されたい）を開発する試みがあるが、しかしながら、知る限りでは、生物学的トリプターゼアンタゴニスト治療、特に抗トリプターゼアンタゴニスト抗体は報告されていない。
【発明の概要】
【0007】
本発明は、抗トリプターゼ抗体、その薬学的組成物、ならびにその使用方法に関する。
【0008】
一態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とし、抗体は、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７、２、８、４、５、及び６のアミノ酸配列を含む６つのＨＶＲによって定義される。いくつかの実施形態では、抗体は、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインフレームワーク領域Ｌ２（ＦＲ－Ｌ２）にＳ４３、Ｐ４６、及びＷ４７（Ｋａｂａｔ番号付け）をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインフレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0009】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とし、抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0010】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単離された抗体を特徴とする。
【0011】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単離された抗体を特徴とする。
【0012】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とし、抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＤＮＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＰＧＧＳＲＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＰＫＮＴＬＦＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
【0013】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とし、抗体は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％配列、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＰＧＧＳＲＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＰＫＮＴＬＦＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
【0014】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とする。
【0015】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１と、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基とを含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個全てのアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面及び四量体のヒトトリプターゼベータ１の大界面の両方を解離することができる。
【0016】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とし、抗体は、以下の６つＨＶＲ：（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３０、３１、３２、３３、３４、及び３５のアミノ酸配列を含む６つのＨＶＲによって定義される。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨドメインＦＲ－Ｈ３にＡｒｇ７１及びＶａｌ７８（Ｋａｂａｔ番号付け）をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0017】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とし、抗体は、（ａ）配列番号３６、４７、４８、４９、５０、５１、及び５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３７、５３、５８、もしくは５９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0018】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とし、抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。他の実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0019】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単離された抗体を特徴とする。
【0020】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単離された抗体を特徴とする。
【0021】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を特徴とし、抗体は、（ａ）配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【0022】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＧｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、及びＬｅｕ１０２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、または１４個全てのアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１四量体に関連し、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５及びＡｒｇ２１６のうちの１つまたは両方をさらに含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼベータ１の小界面及び／または大界面を解離することができる。
【0023】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、カニクイザル（ｃｙｎｏ）トリプターゼとさらに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼアルファとさらに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼベータ２またはヒトトリプターゼベータ３とさらに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼベータ２及びヒトトリプターゼベータ３と結合する。
【0024】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、約１ｎＭ以下のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、ＫＤは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗体は、約１２０ｐＭ～約０．５ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約１２０ｐＭ～約３００ｐＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約１２０ｐＭ～約２００ｐＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約１８０ｐＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約４００ｐＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、ＳＰＲアッセイは、２５℃で行われる。いくつかの実施形態では、ＫＤは、例えば、実施例１の節（Ａ）（ｖｉｉ）に記載されるように、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＳＰＲアッセイを用いて測定される。いくつかの実施形態では、ＳＰＲアッセイは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００または同等の機器を用いることができる。いくつかの実施形態では、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップ（または同等のセンサーチップ）は、モノクローナルマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体で固定されており、抗トリプターゼ抗体は、フローセル上で逐次的に捕捉される。Ｈｉｓタグ付きヒトトリプターゼベータ１単量体（配列番号１２８）の連続３倍希釈液を、３０μｌ／分の流量で注射する。各試料を、３分会合及び１０分解離で分析する。アッセイは、２５℃で行われる。各注射後、チップを３ＭのＭｇＣｌ２を使用して再生成する。結合応答は、応答ユニット（ＲＵ）を、同様の密度の無関連のＩｇＧを捕捉するフローセルから控除することによって訂正する。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを、動態分析に使用する。
【0025】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼベータ１の酵素活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、基質として合成ペプチドＳ－２２８８を使用するヒトトリプターゼベータ酵素アッセイによって判定された場合に、約２．５ｎＭ以下のＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、約５５０ｐＭ～約２．５ｎＭのＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、約５００ｐＭ～約２ｎＭのＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、約５５０ｎＭ～１．５ｎＭのＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、約５００ｐＭ～約７００ｐＭのＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体の阻害活性は、実施例１（Ａ）（ｖｉｉｉ）（ａ））に記載されるように判定される。いくつかの実施形態では、合成ペプチドＳ－２２８８を使用するヒトトリプターゼベータ酵素アッセイにおけるヘパリンの最終濃度は、６６μｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体活性酵素を、ＴＮＨ緩衝剤（２００ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍＬのヘパリン、０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ｐＨ８．０）中で０．７５ｎＭに希釈し、３８４ウェルプレート中抗トリプターゼ抗体（ＰＢＳ中で希釈された）と１：１で組み合わせる。プレートは、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で１時間インキュベートする。比色基質Ｓ－２２８８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ、品番８２－０８５２－３９）、または同等基質を、ＴＮＨ緩衝剤中で１２００μＭに希釈し、プレートに添加する。いくつかの実施形態では、最終ウェル中濃度は、４００μＭのＳ－２２８８、０．２５ｎＭの組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体、６６μｇ／ｍＬのヘパリン、及び０．１０～２２２ｎＭの抗トリプターゼ抗体である。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で４０分間インキュベートし、次いで、Ａ４０５で読み取る。抗トリプターゼ抗体のＩＣ５０を、それらのそれぞれの曲線の４パラメータフィットから判定する。
【0026】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、ｐＨ６でヒトトリプターゼベータ１の酵素活性を阻害することができる。具体的には、抗体の阻害活性は、ｐＨ６で判定され得る。
【0027】
いくつかの実施形態では、抗体は、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、マスト細胞ヒスタミン放出を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＥ誘発ヒスタミン放出及び／またはトリプターゼ誘発ヒスタミン放出を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、活性トリプターゼＥＬＩＳＡアッセイによって評価されるように、カニクイザルトリプターゼＤ１を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、カニクイザル気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）または鼻吸収試料におけるトリプターゼ活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、一価フォーマットにあるときに四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる。いくつかの実施形態では、一価フォーマットは、Ｆａｂフォーマットである。いくつかの実施形態では、抗体は、ヘパリンの存在下で四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、６６μｇ／ｍｌのヘパリンの存在下で四量体のトリプターゼベータを解離することができる。
【0028】
別の態様では本発明は、前述の抗体のうちのいずれか１つと同じエピトープに結合する、抗体を特徴とする。いくつかの実施形態では、抗体が、同じエピトープに結合するか、またはヒトトリプターゼベータ１への結合について競合するかどうかは、エピトープビニングアッセイによって判定される。いくつかの実施形態では、エピトープビニングアッセイは実施例３の節Ｃに記載されるような、ＯＣＴＥＴ（登録商標）エピトープビニングアッセイである。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１単量体タンパク質は、Ｌｙｓ残基でＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチンと反応させることによってビオチン化する。ビオチン化単量体を、動態緩衝剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．）で５μｇ／ｍｌで希釈し、ストレプトアビジンセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．）上に固定化する。固定化ステップの後、ヒトトリプターゼベータ１固定化センサーを、第１の抗体で飽和し、１０～２０μｇ／ｍｌで希釈し、続いて２．５μｇ／ｍｌで希釈した第２の抗体と共に結合する。いくつかの実施形態では、エピトープビニングアッセイは、３０℃で行われる。
【0029】
別の態様では、本発明は、前述の抗体のいずれか１つとヒトトリプターゼベータ１への結合について競合するか、またはそれをクロスブロックするか、またはそれによってクロスブロックされる抗体を特徴とする。
【0030】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラである。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化されている。
【0031】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、トリプターゼと結合する抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される。
【0032】
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４抗体は、ヒンジ領域中で変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、置換変異である。いくつかの実施形態では、置換変異は、アミノ酸残基Ｓ２２８（ＥＵ番号付け）におけるものである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４抗体は、Ｓ２２８Ｐ変異（ＥＵ番号付け）を含む。
【0033】
上述の態様のうちのいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、単一特異性抗体である。
【0034】
前述の態様のいずれかのうちのいくつかの実施形態では、抗体は、多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、トリプターゼと結合する第１の結合ドメインと、第２の生物学的分子に結合する第２の結合ドメインとを含み、第２の生物学的分子が、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－５（ＩＬ－５）、インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）、ＩｇＥ、及びインターロイキン－３３（ＩＬ－３３）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の生物学的分子は、ＩＬ－１３である。いくつかの実施形態では、第２の生物学的分子は、ＩＬ－３３である。いくつかの実施形態では、第２の生物学的分子は、ＩｇＥである。
【0035】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体のうちのいずれかをコードする単離された核酸、または抗体を一緒にコードする単離された核酸のセットを特徴とする。
【0036】
別の態様では、本発明は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体をコードする単離された核酸、または抗体を一緒にコードする単離された核酸のセットを特徴とし、核酸が、配列番号１０４及び／または配列番号１０５の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、核酸またはセットが、配列番号１０６及び／または配列番号１０７の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、核酸またはセットが、配列番号１０８及び／または配列番号１０７の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸またはセットは、配列番号１０８及び／または配列番号１０７の配列を含む。
【0037】
別の態様では、本発明は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体をコードする単離された核酸、または抗体を一緒にコードする単離された核酸のセットを特徴とし、核酸が、配列番号１０９及び／または配列番号１１０の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、核酸またはセットが、配列番号１１１及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、核酸またはセットが、配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸またはセットは、配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列を含む。
【0038】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の単離された核酸または単離された核酸のセットのいずれかを含むベクター（例えば、発現ベクター）またはベクターのセットを特徴とする。別の態様では、本発明は、前述の核酸及び／またはベクター及び／または核酸のセット及び／またはベクターのセットを含む宿主細胞を特徴とする。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核細胞である。いくつかの実施形態では、原核細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉである。
【0039】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体のうちのいずれかの産生方法であって、前述のベクター（例えば、発現ベクター）またはベクターのセットのうちのいずれかを含む宿主細胞を、抗体の産生を可能にする好適な条件下で、培養培地で培養することを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、方法は、本抗体を宿主細胞または培養培地から回収することをさらに含む。
【0040】
別の態様では、本発明は、前述の抗体のいずれか１つを含む組成物（例えば、薬学的組成物）を特徴とする。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含む。
【0041】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む薬学的組成物を特徴とし、基質としてＳ－２２８８を使用するインビトロトリプターゼ酵素アッセイによって判定された場合に、抗体が、約０．１ｎＭ～約１ｎＭのＫＤで単量体のトリプターゼベータ１と結合し、及び／または抗体が、約０．１ｎＭ～約５ｎＭの半数阻害濃度（ＩＣ５０）でトリプターゼの酵素活性を阻害することができる。
【0042】
前述の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、約０．５ｎＭ～約１ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１ｎＭ～約０．５ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．４ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．２ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、ＫＤは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、ＳＰＲアッセイは、２５℃で行われる。いくつかの実施形態では、ＫＤは、例えば、実施例１の節（Ａ）（ｖｉｉ）に記載されるように、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＳＰＲアッセイを用いて測定される。いくつかの実施形態では、ＳＰＲアッセイは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００または同等の機器を用いることができる。いくつかの実施形態では、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップ（または同等のセンサーチップ）は、モノクローナルマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体で固定されており、抗トリプターゼ抗体は、フローセル上で逐次的に捕捉される。Ｈｉｓタグ付きヒトトリプターゼベータ１単量体（配列番号１２８）の連続３倍希釈液を、３０μｌ／分の流量で注射する。各試料を、３分会合及び１０分解離で分析する。アッセイは、２５℃で行われる。各注射後、チップを３ＭのＭｇＣｌ２を使用して再生成する。結合応答は、応答ユニット（ＲＵ）を、同様の密度の無関連のＩｇＧを捕捉するフローセルから控除することによって訂正する。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを、動態分析に使用する。
【0043】
前述の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、約０．５ｎＭ～約５ｎＭのＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１ｎＭ～約２ｎＭのＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約４ｎＭのＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．６ｎＭのＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、基質としてＳ－２２８８を使用するインビトロトリプターゼ酵素アッセイにおいて、ｐＨ６でトリプターゼ活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体の阻害活性は、実施例（例えば、実施例１、節（Ａ）（ｖｉｉｉ）（ａ））に記載されるように判定される。いくつかの実施形態では、組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体活性酵素を、ＴＮＨ緩衝剤（２００ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍＬのヘパリン、０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ｐＨ８．０）中で０．７５ｎＭに希釈し、３８４ウェルプレート中抗トリプターゼ抗体（ＰＢＳ中で希釈された）と１：１で組み合わせる。プレートは、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で１時間インキュベートする。比色基質Ｓ－２２８８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ、品番８２－０８５２－３９）、または同等基質を、ＴＮＨ緩衝剤中で１２００μＭに希釈し、プレートに添加する。いくつかの実施形態では、最終ウェル中濃度は、４００μＭのＳ－２２８８、０．２５ｎＭの組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体、６６μｇ／ｍＬのヘパリン、及び０．１０～２２２ｎＭの抗トリプターゼ抗体である。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で４０分間インキュベートし、次いで、Ａ４０５で読み取る。抗トリプターゼ抗体のＩＣ５０を、それらのそれぞれの曲線の４パラメータフィットから判定する。いくつかの実施形態では、合成ペプチドＳ－２２８８を使用するヒトトリプターゼベータ酵素アッセイにおけるヘパリンの最終濃度は、６６μｇ／ｍｌである。
【0044】
前述の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、マスト細胞ヒスタミン放出を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＥ誘発ヒスタミン放出及び／またはトリプターゼ誘発ヒスタミン放出を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、カニクイザル気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）または鼻吸収試料におけるトリプターゼ活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、一価フォーマットにあるときに四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる。いくつかの実施形態では、一価フォーマットは、Ｆａｂフォーマットである。いくつかの実施形態では、抗体は、ヘパリンの存在下で四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、６６μｇ／ｍｌのヘパリンの存在下で四量体のトリプターゼベータを解離することができる。
【0045】
前述の態様のいくつかの実施形態では、抗体は、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体のＶＨドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体のＶＬドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１と、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基とを含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個全てのアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面及び四量体のヒトトリプターゼベータ１の大界面の両方を解離することができる。
【0046】
前述の態様の他の実施形態では、抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３６、４７、４８、４９、５０、５１、及び５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３７、５３、５８、または５９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体のＶＨドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体のＶＬドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＧｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、及びＬｅｕ１０２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、または１４個全てのアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１四量体に関連し、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５及びＡｒｇ２１６のうちの１つまたは両方をさらに含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼベータ１の小界面及び／または大界面を解離することができる。
【0047】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む組成物（例えば、薬学的組成物）を特徴とし、抗体が、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または少なくとも４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１と、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基とを含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個全てのアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面及び四量体のヒトトリプターゼベータ１の大界面の両方を解離することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体のＶＨドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体のＶＬドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0048】
別の態様では、本発明は、ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む組成物（例えば、薬学的組成物）を特徴とし、抗体が、配列番号７１のＧｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、及びＬｅｕ１０２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、または１４個全てのアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１四量体に関連し、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５及びＡｒｇ２１６のうちの１つまたは両方をさらに含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼベータ１の小界面及び／または大界面を解離することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３６、４７、４８、４９、５０、５１、及び５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３７、５３、５８、または５９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＨドメインＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体のＶＨドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、以下のＶＬドメインＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体のＶＬドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0049】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼアルファ、トリプターゼベータ２、トリプターゼベータ３、及び／またはカニクイザルトリプターゼＤ１とさらに結合することができる。
【0050】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のいずれかにおいて、抗体は、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化されている。
【0051】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれかにおいて、組成物は、ヒトにおいて使用するためのものであり得る。
【0052】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれかは、凍結乾燥され得る。他の実施形態では、前述の組成物（例えば、薬学的組成物）は、液体であり得る。
【0053】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）、賦形剤は、抗酸化剤であり得る。いくつかの実施形態では、組成物は、Ｎ－アセチルトリプトファン、トリプトファン、メチオニン、システイン、グルタチオン、チオソルビトール、アスコルビン酸、モノチオグリセロール、シクロデキストリン、トロロックス（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）、ピリドキシン、マンニトール、及び金属キレート剤からなる群から選択される１つ以上の抗酸化剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、Ｎ－アセチルトリプトファンまたはメチオニンを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、Ｎ－アセチルトリプトファン及びメチオニンを含む。
【0054】
別の態様では、本発明は、（ｉ）ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片を含む組成物（例えば、薬学的組成物）を特徴とし、抗体は、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み、ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位におけるトリプトファンの酸化は、３０％以下である。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位におけるトリプトファンの酸化は、２８％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、または６％以下である。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位におけるトリプトファンの酸化は、ＡＡＰＨストレス試験に従って判定される。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ－Ｈ３（配列番号８）の６位におけるトリプトファンの酸化は、組成物の初期生成から１年以内に判定される。
【0055】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれかは、約０．１ｍＭ～約５ｍＭの濃度でＮ－アセチルトリプトファンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎ－アセチルトリプトファンの濃度は、約０．１ｍＭ～約１ｍＭである。いくつかの実施形態では、Ｎ－アセチルトリプトファンの濃度は、約０．３ｍＭである。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍＭ～約２０ｍＭの濃度でメチオニンを含む。いくつかの実施形態では、メチオニンの濃度は、約１ｍＭ～約１０ｍＭである。いくつかの実施形態では、メチオニンの濃度は、約５ｍＭである。
【0056】
別の態様では、本発明は、（ｉ）ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、単離された抗体、またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）約０．１ｍＭ～約１ｍＭの濃度のＮ－アセチルトリプトファンと、（ｉｉｉ）約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度のメチオニンとを含む組成物（例えば、薬学的組成物）を特徴とする。
【0057】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれかにおいて、抗体の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ～約２５０ｍｇ／ｍｌであり得る。いくつかの実施形態では、抗体の濃度は、約１５０ｍｇ／ｍｌである。
【0058】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれかは、安定剤、緩衝剤、界面活性剤、及び張性剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）からなる群から選択される１つ以上のさらなる賦形剤をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、緩衝剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、アルギニンコハク酸及び／またはヒスチジンコハク酸である。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、アルギニンコハク酸及びヒスチジンコハク酸を含む。いくつかの実施形態では、アルギニンコハク酸の濃度は、約５０ｍＭ～約５００ｍＭである。いくつかの実施形態では、アルギニンコハク酸の濃度は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭである。いくつかの実施形態では、アルギニンコハク酸の濃度は、約２００ｍＭである。いくつかの実施形態では、ヒスチジンコハク酸の濃度は、約１ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、ヒスチジンコハク酸の濃度は、約１５ｍＭ～約２５ｍＭである。いくつかの実施形態では、ヒスチジンコハク酸の濃度は、約２０ｍＭである。いくつかの実施形態では、組成物は、界面活性剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポロキサマー１８８またはポリソルベート２０である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポロキサマー１８８である。いくつかの実施形態では、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．００５％～約０．１％である。いくつかの実施形態では、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．００５％～約０．０５％である。いくつかの実施形態では、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０２％である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約４．５～約７．０である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約４．５～約６．５である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約５．５である。いくつかの実施形態では、組成物は、遮光容器内にある。いくつかの実施形態では、組成物は、プレフィルドシリンジ内にある。
【0059】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれかは、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｍ１プライムアンタゴニストは、キリズマブである。いくつかの例では、ＩｇＥアンタゴニストは、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））である。
【0060】
前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれかは、ヒトに投与するために製剤化され得る。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、非ヒト定常領域配列を含まない抗体を含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、非ヒトフレームワーク及び非ヒト定常領域配列を含まない抗体を含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である抗体を含む。
【0061】
いくつかの態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つは、医薬品として使用され得る。
【0062】
いくつかの態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つは、障害を治療することにおいて使用され得る。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である。いくつかの実施形態では、自己免疫不全は、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、炎症性障害は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵ、慢性特発性蕁麻疹、ＣＳＵとしても既知である）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である。いくつかの実施形態では、線維性障害は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、障害は、正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肥満細胞症である。いくつかの実施形態では、抗体は、さらなる治療剤と組み合わせて使用するためのものである。いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｍ１プライムアンタゴニストは、キリズマブである。いくつかの実施形態では、抗体は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与するためのものである。いくつかの実施形態では、抗体は、皮下投与するためのものである。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト対象において使用するためのものである。
【0063】
いくつかの態様では前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれか１つは、医薬品として使用され得る。
【0064】
いくつかの態様では、前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれかは、障害を治療することにおいて使用され得る。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である。いくつかの実施形態では、自己免疫不全は、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、炎症性障害は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である。いくつかの実施形態では、線維性障害は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、障害は、正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肥満細胞症である。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、薬学的組成物）は、さらなる治療剤と組み合わせて使用するためのものである。いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｍ１プライムアンタゴニストは、キリズマブである。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、薬学的組成物）は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与するためのものである。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、薬学的組成物）は、皮下投与される。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、薬学的組成物）は、ヒト対象において使用するためのものである。
【0065】
いくつかの態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つは、障害を治療するための医薬品の製造において使用され得る。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である。いくつかの実施形態では、自己免疫不全は、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、炎症性障害は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である。いくつかの実施形態では、線維性障害は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、障害は、正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肥満細胞症である。いくつかの実施形態では、医薬品は、さらなる治療剤と組み合わせて使用するために製剤化される。いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｍ１プライムアンタゴニストは、キリズマブである。いくつかの実施形態では、医薬品は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与するために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬品は、皮下投与するために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬品は、ヒト対象において使用するために製剤化される。
【0066】
いくつかの態様では、前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれか１つは、障害を治療するための医薬品の製造において使用され得る。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である。いくつかの実施形態では、自己免疫不全は、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、炎症性障害は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である。いくつかの実施形態では、線維性障害は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、障害は、正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肥満細胞症である。いくつかの実施形態では、医薬品は、さらなる治療剤と組み合わせて使用するために製剤化される。いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｍ１プライムアンタゴニストは、キリズマブである。いくつかの実施形態では、医薬品は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与するために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬品は、皮下投与するために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬品は、ヒト対象において使用するために製剤化される。
【0067】
別の態様では、本発明は、障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、方法は、対象に、治療有効量の前述の抗体のうちのいずれか１つを投与することを含む。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である。いくつかの実施形態では、自己免疫不全は、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、炎症性障害は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である。いくつかの実施形態では、線維性障害は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、障害は、正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肥満細胞症である。いくつかの実施形態では、方法は、さらなる治療剤を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｍ１プライムアンタゴニストは、キリズマブである。いくつかの実施形態では、ＩｇＥアンタゴニストは、オマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗体は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【0068】
別の態様では、本発明は、障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、方法は、対象に、治療有効量の前述の組成物（例えば、薬学的組成物）のうちのいずれか１つを投与することを含む。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息、気道過反応性、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息である。いくつかの実施形態では、自己免疫不全は、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、及びクローン病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、炎症性障害は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎である。いくつかの実施形態では、線維性障害は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、障害は、正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肥満細胞症である。いくつかの実施形態では、方法は、さらなる治療剤を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｍ１プライムアンタゴニストは、オマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、組成物は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【図面の簡単な説明】
【0069】
【図1-1】Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＣｏｎｔａｃｔ表記による、相補性決定領域（ＣＤＲ）を示すｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２のＶＨ及びＶＬドメインの配列整列である。超可変領域（ＨＶＲ）は、下線が引かれている。
【図1-2】Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＣｏｎｔａｃｔ表記による、相補性決定領域（ＣＤＲ）を示すｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２のＶＨ及びＶＬドメインの配列整列である。超可変領域（ＨＶＲ）は、下線が引かれている。
【図2A】ヒトトリプターゼ酵素アッセイによって判定される、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧの阻害分析の結果を示す一連のグラフである。両方の抗体は、トリプターゼ酵素活性を完全に阻害した。
【図2B】ヒト初期気道平滑筋細胞（ＳＭＣ）増殖（図２Ｂ）及び収縮（図２Ｃ）アッセイの結果を示すグラフである。トリプターゼベータの添加は、ヒト初期気道ＳＭＣ増殖を刺激し、それは抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４またはｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４の添加によって（図２Ｂ）用量依存性様式で阻害された。トリプターゼの添加はまた、ヒト初期気道ＳＭＣ収縮も刺激し、それはまたｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４（図２Ｃ）の添加によって阻害された。
【図2C】ヒト初期気道平滑筋細胞（ＳＭＣ）増殖（図２Ｂ）及び収縮（図２Ｃ）アッセイの結果を示すグラフである。トリプターゼベータの添加は、ヒト初期気道ＳＭＣ増殖を刺激し、それは抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４またはｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４の添加によって（図２Ｂ）用量依存性様式で阻害された。トリプターゼの添加はまた、ヒト初期気道ＳＭＣ収縮も刺激し、それはまたｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４（図２Ｃ）の添加によって阻害された。
【図2D】マスト細胞がトリプターゼベータまたは抗４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニルアセチル（ＮＰ）ＩｇＥ及びＮＰの添加によってインビトロで刺激されたマスト細胞脱顆粒アッセイの結果を示すグラフである。トリプターゼの添加は、ヒスタミン放出をもたらし、それはｈｕ３１Ａ．ｖ１１の添加によってブロックされた（図２Ｄ）。触媒不活性変異体トリプターゼ（Ｓ１９５Ａ）は、対照として機能を果たした。ＩｇＥ及びＮＰの添加はまた、ヒスタミン放出をもたらし、それはトリプターゼ小分子阻害剤（ＳＭＩ）またはｈｕ３１Ａ．ｖ１１の添加によって阻害（３０～５０％）された（図２Ｅ）。
【図2E】マスト細胞がトリプターゼベータまたは抗４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニルアセチル（ＮＰ）ＩｇＥ及びＮＰの添加によってインビトロで刺激されたマスト細胞脱顆粒アッセイの結果を示すグラフである。トリプターゼの添加は、ヒスタミン放出をもたらし、それはｈｕ３１Ａ．ｖ１１の添加によってブロックされた（図２Ｄ）。触媒不活性変異体トリプターゼ（Ｓ１９５Ａ）は、対照として機能を果たした。ＩｇＥ及びＮＰの添加はまた、ヒスタミン放出をもたらし、それはトリプターゼ小分子阻害剤（ＳＭＩ）またはｈｕ３１Ａ．ｖ１１の添加によって阻害（３０～５０％）された（図２Ｅ）。
【図3A】サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析されたｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂによるヒトトリプターゼベータ１四量体の解離の結果を示すグラフである。ＳＥＣによって３つの試験が分析された：試験１は、ＷＴ四量体のトリプターゼのみを含み、それは保持時間Ｔｒ＝２６分、保持容量Ｖｒ＝１３ｍｌのピーク１をもたらした；試験２は、ＷＴ四量体のトリプターゼ＋Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１＋ヘパリンを含み、それはピーク２（Ｔｒ＝２７．６分、Ｖｒ＝１３．８ｍｌ）及びピーク４（Ｔｒ＝３１分、Ｖｒ＝１５．５ｍｌ）をもたらした；試験３は、ヘパリンを含まないＷＴ四量体のトリプターゼ＋Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１を含み、それはピーク３（Ｔｒ＝２８．１分、Ｖｒ＝１４ｍｌ）及びピーク４（Ｔｒ＝３１分、Ｖｒ＝１５．５ｍｌ）をもたらした。
【図3B】ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂによるヒトトリプターゼベータ１四量体の解離の結果を示すグラフである。ＳＥＣによって３つの試験が分析された：試験１は、Ｈｉｓタグ付き単量体のトリプターゼ＋Ｆａｂ ｈｕＥ１０４．ｖ２を含み、それはピーク２（Ｔｒ＝２５．８分）及びピーク６（３１．６分）をもたらした；試験２は、ＷＴ四量体のトリプターゼ＋Ｆａｂ ｈｕＥ１０４．ｖ２を含み、それはピーク３（Ｔｒ＝２６分）及びピーク７（Ｔｒ＝３１．８分）をもたらした；試験３は、ＷＴ四量体のトリプターゼ＋Ｆａｂ ｈｕＥ１０４．ｖ２＋ヘパリンを含み、それはピーク１（Ｔｒ＝２１分）、ピーク４（Ｔｒ＝２７．２分）、及びピーク５（Ｔｒ＝３１．２分）をもたらした。
【図4A】ベースライントリプターゼレベル（４ｎｇ／ｍｌの血清、１０ｎｇ／ｍｌの肺組織、図４Ａ）または高トリプターゼレベル（１０ｎｇ／ｍｌの血清、４０ｎｇ／ｍｌの肺組織、図４Ｂ）で、解離抗トリプターゼ抗体のＰＫ及び中和活性を、トリプターゼ四量体特異性安定化抗体と比較する薬物動態（ＰＫ）シミュレーションの結果を示す一連のグラフである。
【図4B】ベースライントリプターゼレベル（４ｎｇ／ｍｌの血清、１０ｎｇ／ｍｌの肺組織、図４Ａ）または高トリプターゼレベル（１０ｎｇ／ｍｌの血清、４０ｎｇ／ｍｌの肺組織、図４Ｂ）で、解離抗トリプターゼ抗体のＰＫ及び中和活性を、トリプターゼ四量体特異性安定化抗体と比較する薬物動態（ＰＫ）シミュレーションの結果を示す一連のグラフである。
【図4C】ベースライントリプターゼレベルまたは高トリプターゼレベルで、解離抗トリプターゼ抗体をトリプターゼ四量体特異性安定化抗体と比較する中和活性シミュレーションの結果を示す一連のグラフである。
【図5A】ヒトトリプターゼベータ１がｐＨ６（図５Ａ）及び７．５（図５Ｂ）の両方で線維素原をペプチド断片に切断したことを示す、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ青色染色ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）ゲル（上のパネル）の画像を示す。高濃度のヘパリンの実験条件下で、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂは、ｐＨ６及びｐＨ７．５の両方で線維素原切断をブロックしたが、ｈｕＥ１０２．ｖ２ Ｆａｂはブロックしなかった。レーン１、線維素原のみ、切断されていない線維素原のアルファ、ベータ、及びガンマ鎖を示す；レーン２、線維素原及びトリプターゼベータ；レーン３、線維素原、トリプターゼベータ、及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂ；レーン４、線維素原、トリプターゼベータ、及びＢ１２ ＩｇＧ；レーン５、線維素原、トリプターゼベータ１、及びｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ；レーン６は、Ｂ１２ ｍＩｇＧ１のみを示す。アルファ鎖の強度の減少は、トリプターゼタンパク質分解活性を示し、それは下のパネルで分析及び定量化された。
【図5B】ヒトトリプターゼベータ１がｐＨ６（図５Ａ）及び７．５（図５Ｂ）の両方で線維素原をペプチド断片に切断したことを示す、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ青色染色ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）ゲル（上のパネル）の画像を示す。高濃度のヘパリンの実験条件下で、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂは、ｐＨ６及びｐＨ７．５の両方で線維素原切断をブロックしたが、ｈｕＥ１０２．ｖ２ Ｆａｂはブロックしなかった。レーン１、線維素原のみ、切断されていない線維素原のアルファ、ベータ、及びガンマ鎖を示す；レーン２、線維素原及びトリプターゼベータ；レーン３、線維素原、トリプターゼベータ、及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂ；レーン４、線維素原、トリプターゼベータ、及びＢ１２ ＩｇＧ；レーン５、線維素原、トリプターゼベータ１、及びｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ；レーン６は、Ｂ１２ ｍＩｇＧ１のみを示す。アルファ鎖の強度の減少は、トリプターゼタンパク質分解活性を示し、それは下のパネルで分析及び定量化された。
【図6A】ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＦａｂによるＷＴまたは変異体四量体の解離の結果を示すグラフである。ＳＥＣによって４つの試験が分析された：試験１は、ＷＴ四量体＋ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂを含み、それは参照ピーク（Ｔｒ＝２１．６分）をもたらした；試験２は、四量体Ｙ７５Ｃバリアント＋ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂを含み、それはピーク１（Ｔｒ＝２５．６分）及びピーク４（Ｔｒ＝３１．６分）をもたらした；試験３は、四量体Ｉ９９Ｃバリアント＋ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂを含み、それはピーク２（Ｔｒ＝２３．９分）及びピーク４（Ｔｒ＝３１．６分）をもたらした；試験４は、ＷＴ四量体＋ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂを含み、それはピーク３（Ｔｒ＝２８．１分）及びピーク４（Ｔｒ＝３１．６分）をもたらした。
【図6B】サイズ排除クロマトグラフィーピーク図６ＡのＣｏｏｍａｓｓｉｅ青色染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル分析の結果を示す。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂは、トリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃ及びＩ９９Ｃを含む錯体を形成し、四量体を共有結合した二量体に解離した。
【図6C】ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＦａｂによるＷＴまたは変異体四量体の解離の結果を示すグラフである。ＳＥＣによって３つの試験が分析された：試験１は、四量体Ｙ７５Ｃバリアント＋ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂを含み、それはピーク１（Ｔｒ＝２１．６分）及びピーク４（Ｔｒ＝３１分）をもたらした；試験２は、四量体Ｉ９９Ｃバリアント＋ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂを含み、それはピーク２及びピーク５（Ｔｒ＝３１分）をもたらした；試験３は、ＷＴ四量体＋ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂを含み、それはピーク３（Ｔｒ＝２６分）及びピーク６（Ｔｒ＝３１．８分）をもたらした。結果は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂが、トリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃ及びＩ９９Ｃを含む錯体を形成し、Ｉ９９Ｃ大界面ロック四量体のみを共有結合した二量体に解離したことを示す。ピーク４、５、及び６は全て、ＳＤＳ－ＰＡＧＤによって判定された場合、過度のＦａｂを含む（データは示されず）。
【図7-1】遺伝子配列番号付け、及哺乳動物セリントリプシンに典型的には使用されるキモトリプシノーゲン番号付け（「ｃｈｙｍｏ－ｎｕｍｂ」）システムに沿った成熟ヒトトリプターゼベータ１のアミノ酸配列を示す。
【図7-2】遺伝子配列番号付け、及哺乳動物セリントリプシンに典型的には使用されるキモトリプシノーゲン番号付け（「ｃｈｙｍｏ－ｎｕｍｂ」）システムに沿った成熟ヒトトリプターゼベータ１のアミノ酸配列を示す。
【図8】ヒトトリプターゼベータ１上のＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合エピトープを示す（トリプターゼ残基は全てキモトリプシノーゲン番号付け）。
【図9】トリプターゼ四量体上のＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のモデルを示す描画である。Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と複合したトリプターゼ単量体は、トリプターゼ四量体中でプロトマーＡ及びＣに整列された。重鎖及び軽鎖が示される。このモデルにおける隣接するトリプターゼプロトマー上のＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の軽鎖間の衝突は、点線の楕円によって印付けられる。
【図10】錯体構造中で検出されたトリプターゼの６０ｓループ中の立体配座変化を示す。Ｖａｌ６０ｃ及びＶａｌ９０（棒で示される）は、四量体のトリプターゼの大界面におけるタンパク質－タンパク質相互作用の一部として隣接するプロトマーからのＴｙｒ１７３ｄの結合のための疎水性ポケットを創造する。四量体立体構造中のトリプターゼプロトマーが示される。Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と結合されたトリプターゼは、四量体錯体の１つのプロトマーに重なっている。Ｖａｌ６０ｃの立体構造は、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１が結合されたときに変化し、それは、Ｔｙｒ１７３ｄがそのポケットと結合することを妨げることが予期される立体障害を創造する（トリプターゼ残基は全てキモトリプシノーゲン番号付け）。
【図11】ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と結合した後に錯体構造中で検出された小界面に位置するトリプターゼの３０ｓループ中の立体配座変化を示す。
【図12A】４つのｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂと複合したＷＴトリプターゼ四量体の結晶構造の描画である。トリプターゼプロトマーは、文字標識またはプロトマーに従って示される（Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３９２：３０６－３１１，１９９８を参照されたい）。
【図12B】水素重水素交換（ＨＤＸ）によって評価された場合に、トリプターゼ四量体の小界面上で結合するｈｕＥ１０４．ｖ１の影響の描画である。
【図13】それぞれが静脈内（ＩＶ）注射によって１または１０ｍｇ／ｋｇで、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに投与されるヒト化抗トリプターゼ抗体ｈｕＥ１０４．ｖ２及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１の薬物動態（ＰＫ）分析の結果を示すグラフである。グラフは、時間（日）の関数としての抗トリプターゼ抗体の濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。結果は３つの動物からのものである。
【図14】対照抗ｇＤ ＩｇＧ４抗体と比較したヒト化抗トリプターゼ抗体ｈｕＥ１０４．ｖ２及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＰＫ分析の結果を示すグラフである。各抗体は、３０ｍｇ／ｋｇでカニクイザル（ｃｙｎｏ）に静脈注射によって投与された。グラフは、時間（日）の関数としての抗トリプターゼ抗体の濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図15-1】試料中の活性トリプターゼ（左のパネル）及び全トリプターゼ（右のパネル）の量を測定するためのアッセイの概略図である。トリプターゼ単量体及び四量体が示される。左のパネルでは、大豆トリプシン阻害剤（ＳＢＴＩ）が添加される。次に、例示的なビオチン化活性基準プローブ（ＡＢＰ）をトリプターゼ含有試料（例えば、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ））に添加して、活性トリプターゼを標識した。標識は、例示的な小分子阻害剤Ｇ０２８４９８５５（例えば、ＢＭＳ－２６２０８４、Ｓｕｔｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２：３２２９－３３，２００２，Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２，６７：３５９５－３６００）の添加によって停止した。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１抗体を添加して、トリプターゼ四量体を解離した。次いで、標識されたトリプターゼを、ストレプトアビジンに複合体化された西洋ワサビペルオキシダーゼを使用する酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）で検出した。全トリプターゼアッセイにおいて、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１を試料に添加して、試料中のトリプターゼ四量体を解離した。次いで、トリプターゼの量をＥＬＩＳＡを用いて判定した。
【図15-2】試料中の活性トリプターゼ（左のパネル）及び全トリプターゼ（右のパネル）の量を測定するためのアッセイの概略図である。トリプターゼ単量体及び四量体が示される。左のパネルでは、大豆トリプシン阻害剤（ＳＢＴＩ）が添加される。次に、例示的なビオチン化活性基準プローブ（ＡＢＰ）をトリプターゼ含有試料（例えば、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ））に添加して、活性トリプターゼを標識した。標識は、例示的な小分子阻害剤Ｇ０２８４９８５５（例えば、ＢＭＳ－２６２０８４、Ｓｕｔｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２：３２２９－３３，２００２，Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２，６７：３５９５－３６００）の添加によって停止した。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１抗体を添加して、トリプターゼ四量体を解離した。次いで、標識されたトリプターゼを、ストレプトアビジンに複合体化された西洋ワサビペルオキシダーゼを使用する酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）で検出した。全トリプターゼアッセイにおいて、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１を試料に添加して、試料中のトリプターゼ四量体を解離した。次いで、トリプターゼの量をＥＬＩＳＡを用いて判定した。
【図16】静脈内（ＩＶ）投与によって３０ｍｇ／ｋｇで抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１を投与されたカニクイザルから得られたＢＡＬ試料で行われた活性トリプターゼアッセイの結果を示す。上のパネルは、実験プロトコルの概略図を示す。
【図17】実施例６に記載されるカニクイザル回虫チャレンジモデルの実験プロトコルを示す概略図である。
【図18A】実施例６に記載されるカニクイザル回虫チャレンジ実験における個々の動物から得られたＢＡＬで行われた活性トリプターゼアッセイ（図１８Ａ）及び全トリプターゼアッセイ（図１８Ｂ）の結果を示すグラフである。
【図18B】実施例６に記載されるカニクイザル回虫チャレンジ実験における個々の動物から得られたＢＡＬで行われた活性トリプターゼアッセイ（図１８Ａ）及び全トリプターゼアッセイ（図１８Ｂ）の結果を示すグラフである。
【図18C】実施例６に記載されるカニクイザル回虫チャレンジ実験における個々の動物からの合成吸収性マトリックス（ＳＡＭ）を用いる鼻吸収によって得られた鼻粘膜ライニング流体（ＭＬＦ）中の全トリプターゼの量を判定するために全トリプターゼアッセイの結果を示すグラフである。
【図19】抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の投与は、ヒト移植マウスにおいてＩｇＥ媒介受動全身アナフィラキシーを阻害したことを示すグラフである。ＩｇＥチャレンジで、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１で処置されたマウスは、対照抗ｇＤ抗体で処置されたマウスと比較して改善された体温維持を示した。＊＊＊Ｐ＜０．０００１（対応のあるＴ検定）。
【発明を実施するための形態】
【0070】
Ｉ．定義
本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野の当業者に容易に知られているそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。
本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野の当業者に容易に知られているそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。
【0071】
本明細書の目的での「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、あるいはアミノ酸配列変化を含有してもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列において同一である。
【0072】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一結合部位の間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載の方法を含む当技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な例証的かつ例示的な実施形態が、以下に記載される。
【0073】
「ＫＤは、表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される」という用語は、特許請求の範囲の文脈において使用されるとき、ＫＤが、実施例１（Ａ）（ｖｉｉ）に記載の方法に従って測定されることを意味し、それは抗トリプターゼ抗体のヒトトリプターゼベータ１単量体、例えば、配列番号１２８に示されるＨｉｓ６－タグ付きトリプターゼ単量体との結合の動態パラメータを測定し、トリプターゼ四量体を自然に形成しない。アッセイは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００または同等の機器を用いることができる。簡潔には、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップ（または同等のセンサーチップ）は、モノクローナルマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体で固定されており、抗トリプターゼ抗体は、フローセル上で逐次的に捕捉される。ヒトトリプターゼベータ１単量体の連続３倍希釈液を、３０μｌ／分の流量で注射する。各試料を、３分会合及び１０分解離で分析する。アッセイは、２５℃で行われる。各注射後、チップを３ＭのＭｇＣｌ２を使用して再生成する。結合応答は、応答ユニット（ＲＵ）を、同様の密度の無関連のＩｇＧを捕捉するフローセルから控除することによって訂正する。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを、動態分析に使用する。
【0074】
「親和性成熟」抗体は、１つ以上のＨＶＲ及び／またはフレームワーク領域に１つ以上の改変を有するものであり、それは、それらの改変（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の向上をもたらす。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはさらにはピコモルの親和性を有するであろう。親和性成熟抗体は、当該技術分野で既知の手順によって産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３，１９９２は、ＶＨ及びＶＬドメインシャフリングによる親和性成熟を記載している。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９－３８１３，１９９４、Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７－１５５，１９９５、Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４－２００４，１９９５、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０－３３１９，１９９５、及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６，１９９２によって説明される。
【0075】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない様々な抗体構造を包含する。
【0076】
本明細書で使用される場合、「トリプターゼ」という用語は、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からの任意の天然トリプターゼを指す。トリプターゼはまた、当該技術分野においてマスト細胞トリプターゼ、マスト細胞プロテアーゼＩＩ、皮膚トリプターゼ、肺トリプターゼ、下垂体トリプターゼ、マスト細胞中性プロテイナーゼ、及びマスト細胞セリンプロテイナーゼＩＩとしても既知である。「トリプターゼ」という用語は、トリプターゼアルファ（ＴＰＳＡＢ１によってヒトにおいてコードされる）、トリプターゼベータ（ＴＰＳＡＢ１及びＴＰＳＢ２によってヒトにおいてコードされる；以下を参照されたい）、トリプターゼデルタ（ＴＰＳＤ１によってヒトにおいてコードされる）、トリプターゼガンマ（ＴＰＳＧ１によってヒトにおいてコードされる）、及びトリプターゼイプシロン（ＰＲＳＳ２２によってヒトにおいてコードされる）を包含する。トリプターゼアルファ、ベータ、及びガンマタンパク質は、可溶性であるが、トリプターゼイプシロンタンパク質は、膜結合されている。トリプターゼベータ及びガンマは、活性セリンプロテアーゼであるが、それらは異なる特異性を有する。トリプターゼアルファ及びデルタタンパク質は、それらが典型的な活性セリンプロテアーゼとは異なる重要位置に残基を有するため、大部分が不活性プロテアーゼである。例示的なトリプターゼアルファ完全長タンパク質配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＣＺ９８９１０．１（配列番号１１８）のもとで見出され得る。例示的なトリプターゼガンマ完全長タンパク質配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ９ＮＲＲ２またはＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｑ９ＮＲＲ２．３、ＡＡＦ０３６９５．１、ＮＰ＿０３６５９９．３、もしくはＡＡＦ７６４５７．１のもとで見出され得る。例示的なトリプターゼデルタ完全長タンパク質配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ９ＢＺＪ３またはＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３６３４９．１のもとで見出され得る。いくつかのトリプターゼ遺伝子は、ヒト染色体１６ｐ１３．３上にクラスター化される。本用語は、「完全長」の、未処理トリプターゼ、ならびに細胞内の処理から生じるトリプターゼの任意の形態を包含する。トリプターゼベータは、マスト細胞内に発現される主なトリプターゼであるが、トリプターゼアルファは、好塩基球中に発現される主なトリプターゼである。トリプターゼアルファ及びトリプターゼベータは、典型的には、約３０個のアミノ酸のリーダー配列及び約２４５個のアミノ酸の触媒配列を含む（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍ．２６：４５１－４６３，２００６を参照されたい）。
【0077】
本明細書で使用される場合、「トリプターゼベータ」という用語は、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からの任意の天然トリプターゼベータを指す。トリプターゼベータは、マスト細胞分泌顆粒の主要構成要素であるセリンプロテアーゼである。本明細書で使用される場合、本用語は、トリプターゼベータ１（ＴＰＳＡＢ１遺伝子によってコードされ、この遺伝子はトリプターゼアルファ１もコードする）、トリプターゼベータ２（ＴＰＳＢ２遺伝子によってコードされる）、及びトリプターゼベータ３（ＴＰＳＢ２遺伝子によってまたコードされる）を包含する。例示的なヒトトリプターゼベータ１配列は、配列番号７１に示される（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３２８５．２もまた参照されたい）。例示的なヒトトリプターゼベータ２配列は、配列番号７２に示される（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＤ１３８７６．１もまた参照されたい）。例示的なヒトトリプターゼベータ３配列は、配列番号７３に示される（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０７７０７８．５もまた参照されたい）。トリプターゼベータという用語は、「完全長」の、未処理トリプターゼベータ、ならびにタンパク質分解処理を含む、翻訳後修飾から生じるトリプターゼベータを包含する。完全長、プロトリプターゼベータは、２つのタンパク質分解ステップで処理されると考えられる。初めに、Ｒ－３での自己触媒分子間切断は、特に酸性ｐＨ及びポリアニオン（例えば、ヘパリンまたは硫酸デキストラン）の存在下で生じる。次に、残りのプロジペプチドは、除去される（ジぺプチジルペチダーゼＩによる可能性が高い）。完全長ヒトトリプターゼベータ１については、以下の配列番号７１に関して、下線が引かれたアミノ酸残基は天然リーダー配列に対応し、太字及び灰色で色付けされたアミノ酸残基はプロドメインに対応し、それは切断されて成熟タンパク質を形成する（例えば、Ｓａｋａｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：９８８－９９５，１９９６を参照されたい）
【0078】
成熟、酵素活性トリプターゼベータは典型的には、ホモ四量体またはヘテロ四量体であるが、活性単量体が報告されている（例えば、Ｆｕｋｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：３１６５，２００６を参照されたい）。トリプターゼベータ四量体のサブユニットは、サブユニットの間の疎水性及び極性相互作用によって一緒になり、ポリアニオン（特にヘパリン及び硫酸デキストラン）によって安定化される。トリプターゼという用語は、トリプターゼ四量体またはトリプターゼ単量体を指すことができる。成熟ヒトトリプターゼベータ１、ベータ２、及びベータ３の例示的な配列は、それぞれ配列番号９７、配列番号１１６、及び配列番号１１７に示される。各サブユニット活性部位は、四量体の中心細孔に面し、それは約５０×３０のオングストロームを測定する（例えば、Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３９２：３０６－３１１，１９９８を参照されたい）。中心細孔のサイズは、典型的には、阻害剤によって活性部位のアクセスを制限する。トリプターゼベータの例示的な基質としては、これらに限定されないが、ＰＡＲ２、Ｃ３、線維素原、フィブロネクチン、及びキニノーゲン挙げられる。
【0079】
「抗トリプターゼ抗体」、「トリプターゼと結合する抗体」、及び「トリプターゼに特異的に結合する抗体」という用語は、抗体がトリプターゼを標的とする際に診断及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でトリプターゼと結合することができる抗体を指す。一実施形態では、無関係の非トリプターゼタンパク質への抗トリプターゼ抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定される場合、トリプターゼへの抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、トリプターゼと結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。ある特定の実施形態では、抗トリプターゼ抗体は、異なる種由来のトリプターゼ間で保存されるトリプターゼのエピトープに結合する。
【0080】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、参照抗体と比較して抗原の重複する組のアミノ酸残基と接触するか、または競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原への結合を５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、または９０％以上ブロックする抗体を指す。いくつかの実施形態では、抗体によって接触されるアミノ酸残基のセットは、参照抗体によって接触されるアミノ酸残基のセットと完全に重複しているか、または部分的に重複している場合がある。いくつかの実施形態では、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体は、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原への結合を５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、または９０％以上ブロックし、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原への結合を５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、または９０％以上ブロックする。例示的な競合アッセイが、本明細書に提供される。
【0081】
請求項の文脈において「エピトープビニングアッセイによって判定される」という用語は、抗体が、実施例３の節Ｃに記載されるようなＯＣＴＥＴ（登録商標）エピトープビニングアッセイを用いて同じエピトープに結合すること及び／または参照抗トリプターゼ抗体（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１またはｈｕＥ１０４．ｖ２）と結合について競合することが判定されることを意味する。簡潔には、ヒトトリプターゼベータ１単量体タンパク質は、Ｌｙｓ残基でＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチンと反応させることによってビオチン化される。ビオチン化単量体を、動態緩衝剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．）で５μｇ／ｍｌに希釈し、ストレプトアビジンセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．）上に固定化する。固定化ステップの後、ヒトトリプターゼベータ１固定化センサーを、第１の抗体で飽和し、１０～２０μｇ／ｍｌで希釈し、続いて２．５μｇ／ｍｌで希釈した第２の抗体と共に結合する。そのようなエピトープ結合アッセイのための試験温度は、３０℃である。第２の抗体による結合シグナルは、２つの抗体が、同時に、異なる、非重複エピトープで抗原と結合し得ることを意味するが、結合シグナルが、それらが一般的なエピトープを共有することを意味しない。いくつかの例では、第２の抗体による部分シグナルが観察され（すなわち、シグナルは、第１の抗体が添加されなかった場合に観察されるシグナルよりも少ないが、バックグラウンドよりは大きい）、それはエピトープが部分的に重複することを意味する。
【0082】
「抗体断片」には、インタクトな抗体の一部分、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域が含まれる。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２，１９９５を参照されたい）；一本鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【0083】
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して表記される１つの残留「Ｆｃ」断片とが産生される。Ｆａｂ断片は、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と共にＬ鎖全体、ならびに１つの重鎖の第１の定常領域ドメイン（ＣＨ１）からなる。抗体のペプシン処理により、単一の大きいＦ（ａｂ’）２断片が産出され、これは、概して、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合Ｆａｂ断片に対応し、依然として抗原に架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、抗体のヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含めＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にさらなる数個の残基を有することが、Ｆａｂ断片とは異なっている。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的結合もまた知られている。
【0084】
本明細書の「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。本用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在することもあれば、しないこともある。本明細書において別段明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【0085】
「Ｆｖ」は、密接な非共有結合にある１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗原結合特異性を抗体に与える、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨのみを含むＦｖの半分）ですら、親和性は全結合部位より低い場合があるとはいえ、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【0086】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも短縮される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に結合されるＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合に所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓＦｖに関する考察については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５，１９９４を参照されたい。
【0087】
「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間のＶドメイン対合が達成され、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個の残基）を用いてｓＦｖ断片（前の段落を参照されたい）を構築することによって調製された小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８，１９９３により完全に記載されている。
【0088】
「結合ドメイン」とは、標的エピトープ、抗原、リガンド、または受容体に特異的に結合する化合物または分子の一部を意味する。結合ドメインは、抗体（例えば、モノクローナル、ポリクローナル、組み換え、ヒト化、及びキメラ抗体）、抗体断片またはその部分（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’２、ｓｃＦｖ抗体、ＳＭＩＰ、ドメイン抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、アフィボディ、ナノボディ、ならびに抗体のＶＨ及び／またはＶＬドメイン）、受容体、リガンド、アプタマー、及び特定された結合パートナーを有する他の分子を含むが、これらに限定されない。
【0089】
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体とは、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害または低減する抗体である。ある特定の遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にまたは完全に阻害する。いくつかの実施形態では、活性は、トリプターゼ酵素活性、例えば、プロテアーゼ活性であり得る。他の例では、活性は、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激であり得る。他の例では、活性は、マスト細胞ヒスタミン放出（例えば、ＩｇＥ誘発ヒスタミン放出及び／またはトリプターゼ誘発ヒスタミン放出）であり得る。本発明の抗体は、トリプターゼの生物学的活性を、少なくとも約１％、約５％、約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％阻害することができる。
【0090】
「基質として合成ペプチドＳ－２２８８を使用するヒトトリプターゼベータ酵素アッセイによって判定された場合に」という用語は、請求項の文脈において、阻害活性が、実施例１（Ａ）（ｖｉｉｉ）（ａ）に記載されるアッセイに従って測定されることを意味する。簡潔には、組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体活性酵素を、ＴＮＨ緩衝剤（２００ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍＬのヘパリン、０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ｐＨ８．０）中で０．７５ｎＭに希釈し、３８４ウェルプレート中抗トリプターゼ抗体（ＰＢＳ中で希釈された）と１：１で組み合わせる。プレートは、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で１時間インキュベートする。比色基質Ｓ－２２８８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ、品番８２－０８５２－３９）、または同等基質を、ＴＮＨ緩衝剤中で１２００μＭに希釈し、プレートに添加する。最終ウェル中濃度は、４００μＭのＳ－２２８８、０．２５ｎＭの組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体、６６μｇ／ｍＬのヘパリン、及び０．１０～２２２ｎＭの抗トリプターゼ抗体である。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で４０分間インキュベートし、次いで、Ａ４０５で読み取る。抗トリプターゼ抗体のＩＣ５０を、それらのそれぞれの曲線の４パラメータフィットから判定する。
【0091】
抗体の「クラス」は、その重鎖が所有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。５つの主なクラスの抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類される。異なるクラスの免役グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【0092】
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属する生物学的活性を指し、抗体のアイソタイプに応じて多様である。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【0093】
「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合することにより、これらの細胞毒性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に結合し、次いで細胞毒により標的細胞を殺滅させることを可能にする、細胞毒性の形態を指す。抗体は細胞毒性細胞を「備え」ており、このような殺滅には絶対に必要である。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２，１９９１のページ４６４の表３に要約されている。対象となる分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイが行われ得る。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、対象となる分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６，１９９８に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価され得る。
【0094】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、これらの受容体のアレルバリアント及び代替としてはスプライシング形態を含め、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４，１９９７の概説Ｍ．を参照されたい）。ＦｃＲは、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２，１９９１、Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４，１９９４、及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１，１９９５に概説される。将来的に特定されるものも含む他のＦｃＲは、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。本用語はまた、母体ＩｇＧｓの胎児への移行に関与している新生児受容体ＦｃＲｎも含む（例えば、Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７，１９７６、及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９，１９９４を参照されたい）。
【0095】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、かつエフェクター機能を実行する白血球である。好ましくは、この細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を行う。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞毒性Ｔ細胞、及び好中球が挙げられ、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、天然の源、例えば血液から単離することができる。
【0096】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が（適当なサブクラスの）抗体と結合することにより開始され、その抗体にはそれらの同族抗原が結合する。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３，１９９６に記載されるＣＤＣアッセイが行われ得る。
【0097】
「エピトープ」は、抗体が選択的に結合する抗原の部分である。ポリペプチド抗原については、線形エピトープは、約４～１５個（例えば、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２個のアミノ酸残基のペプチド部分である。非線形の立体配座エピトープは、タンパク質の三次元（３Ｄ）構造中で近接するポリペプチド配列の残基を含み得る。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗体のいずれかの原子の４オングストローム（Å）以内であるアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、パートナーＦａｂのいずれかの原子の４Å以内であるトリプターゼプロトマーのアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、抗体のいずれかの原子の３．５Å、３Å、２．５Å、または２Å以内であるアミノ酸を含む。抗原（すなわち、パラトープ）と接触する抗体アミノ酸残基は、例えば、抗原と複合した抗体の結晶構造を決定することによって、または水素／重水素交換を行うことによって決定され得る。
【0098】
「エピトープは、Ｘ線結晶学モデルによって判定される」という用語は、請求項の文脈において使用されるとき、トリプターゼアミノ酸残基（例えば、ヒトトリプターゼベータ１残基）の原子が、例えば、実施例３に記載されるようなＸ線結晶学モデルにおいて、抗トリプターゼ抗体（例えば、本明細書に記載の任意の抗トリプターゼ抗体、例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１またはｈｕＥ１０４．ｖ２）のいずれかの原子の４Å以内であると判定されることを意味する。いくつかの実施形態では、Ｘ線結晶学モデルは、約３．５Å以下、約３Å以下、約２．５Å以下、約２．１５Å以下、または約２Å以下の分解能を有する。
【0099】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指すために本明細書で同義に使用される。
【0100】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のものに対応するアミノ酸配列を有するもの、及び／またはヒト抗体を作成するための技術のうちの任意のものを用いて作製されているものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に排除する。
【0101】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループに由来する。一般に、この配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ，ｖｏｌｓ．１－３，１９９１にあるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記参照）にあるようなサブグループカッパＩＩＩまたはカッパＩＶである。一実施形態では、ＶＨに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記参照）におけるサブグループＩＩＩである。
【0102】
非ヒト（例えば、齧歯動物）抗体の「ヒト化」抗体は、非ヒト抗体に由来する配列を最小限含有するキメラ抗体である。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の抗体特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基によって代置される、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の能力をさらに改良するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになる。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことになる。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５，１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９，１９８８、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６，１９９２を参照されたい。
【0103】
「免疫複合体」は、細胞傷害性剤を含むが、これに限定されない１つ以上の異種分子（複数可）に複合体化される抗体である。
【0104】
本明細書に開示される様々な抗体について記載するために用いられる場合、「単離」という用語は、抗体が発現された細胞または細胞培養物から特定され、分離及び／または回収されている、抗体を意味する。その天然環境の混入成分は、典型的にはポリペプチドの診断的または治療的使用を妨害する材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。一部の実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動法）またはクロマトグラフィー法（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）の方法によって判定した場合に、９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体の純度の評定方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７，２００７を参照をされたい。好ましい実施形態では、抗体は、（１）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用してＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（２）クマシーブルーもしくは好ましくは銀染色を使用して非還元条件または還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質になるまで精製される。単離された抗体としては、組み換え細胞内のインサイツの抗体が挙げられるが、これは、ポリペプチド天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないためである。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップにより調製される。
【0105】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一である、及び／または抗原上の同じエピトープに結合するが、例えば、天然に存在する変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能なバリアント抗体を除いて、そのようなバリアントは一般に、少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向された異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない、様々な技術により作製され得、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、「モノクローナル抗体」という用語は、二重特異性抗体を包含する。
【0106】
「二価抗体」という用語は、抗原に対して２つの結合部位を有する抗体を指す。二価抗体は、限定することなく、ＩｇＧフォーマットまたはＦ（ａｂ’）２フォーマット中にあり得る。
【0107】
「多重特異性抗体」という用語は、最も広義に使用され、１つの抗原上の２つ以上の決定基もしくはエピトープ、または２つ以上の抗原上の２つ以上の決定基もしくはエピトープに結合する抗体を包含する。そのような多重特異性抗体には、全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ、及びトリアボディ、共有結合または非共有結合した抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。「ポリエピトープ特異性」とは、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合し得る能力を指す。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。「二特異性（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」または「二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」は、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる能力を指す。しかしながら、二重特異性抗体とは対照的に、二特異性抗体は、アミノ酸配列が同一である２つの抗原結合アームを有し、各Ｆａｂアームにより２つの抗原を認識することができる。二特異性により、抗体は、高い親和性で単一のＦａｂまたはＩｇＧ分子として２つの異なる抗原と相互作用することができるようになる。一実施形態に従うと、多重特異性抗体は、５μＭ～０．００１ｐＭ、３μＭ～０．００１ｐＭ、１μＭ～０．００１ｐＭ、０．５μＭ～０．００１ｐＭ、または０．１μＭ～０．００１ｐＭの親和性で各エピトープに結合する。「単一特異性」とは、１つのエピトープのみに結合し得る能力を指す。
【0108】
「ネイキッド抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合体化されていない抗体を指す。ネイキッド抗体が薬学的組成物中に存在してもよい。
【0109】
抗体と標的分子との結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープに「結合する」または「結合」または「特異的結合」または「特異的に結合する」または「特異的である」という用語は、非特異的相互作用とはある程度異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、分子の結合を対照分子の結合と比較して決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似した対照分子、例えば、過剰な標識されていない標的との競合によって決定し得る。この場合、標識された標的のプローブへの結合が過剰な標識されていない標的によって競合的に阻害されると、特異的結合が示される。特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」またはそれ「に特異的に結合する」またはそれ「に特異的」であるという用語は、本明細書で使用される場合、例えば、標的へのＫＤが、１０－４Ｍ以下、または１０－５Ｍ以下、または１０－６Ｍ以下、または１０－７Ｍ以下、または１０－８Ｍ以下、または１０－９Ｍ以下、または１０－１０Ｍ以下、または１０－１１Ｍ以下、または１０－１２Ｍ以下、または１０－４Ｍ～１０－６Ｍ、または１０－６Ｍ～１０－１０Ｍまたは１０－７Ｍ～１０－９Ｍの範囲である分子によって呈され得る。当業者によって理解されるであろう通り、親和性とＫＤとは反比例する。抗原の高い親和性は、低いＫＤ値によって測定される。一実施形態では、「特異的結合」という用語は、分子が、いずれの他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにも実質的に結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する、結合を指す。
【0110】
「パラトープ」とは、抗原のエピトープに結合する抗体の一部を意味する。パラトープは、典型的には、抗体のＦｖ領域の約１５～２２個のアミノ酸残基の領域であり、抗体のＶＨ及びＶＬ鎖からのアミノ酸を含み得る。
【0111】
「可変」という用語は、可変ドメインのある特定のセグメントが配列において抗体間で広範囲にわたって異なるという事実を指す。可変または「Ｖ」ドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性を定義する。しかしながら、可変性は、１１０個のアミノ酸の長さの可変ドメイン全体に均等に分布しているわけではない。代わりに、Ｖ領域は、各々９～１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれる極度の可変性のより短い領域によって分離される１５～３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変である範囲からなる。「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用されるとき、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、例えば、ＶＬでは残基約２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７（Ｌ３）、ならびにＶＨでは残基約２６～３５（Ｈ１）、４９～６５（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）（一実施形態では、Ｈ１は、残基約３１～３５）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ（上記参照））からのアミノ酸残基、及び／または「超可変ループ」（例えば、ＶＬでは残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、及び９１～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨでは２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）からのアミノ酸残基を含む；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、ベータシート構造を接続し、かつある場合には、その一部を形成するループを形成する、３つの超可変領域によって接続されたベータシート立体配置を主に採用する４つのＦＲを含む。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって、他方の鎖の超可変領域と近接して保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ（上記参照）を参照されたい）。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列中に出現する：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
【0112】
「Ｋａｂａｔにあるような可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置番号付け」という用語、及びそれらの変形は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記参照）における抗体の編集物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮、またはそれへの挿入に対応するより少ないアミノ酸またはさらなるアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入断片（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、「標準の」Ｋａｂａｔにより番号付けられた配列との抗体の配列の相同性領域でのアライメントによって所与の抗体について決定され得る。
【0113】
Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、一般に、可変ドメイン内の残基（およそ軽鎖の残基１～１０７及び重鎖の残基１～１１３）を指すときに用いられる（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ（上記参照））。「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵ指標」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記参照）で報告されているＥＵ指標）。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。本明細書で別途指示されない限り、抗体の可変ドメイン中の残基番号への言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。本明細書で別途指示されない限り、抗体の定常ドメイン中の残基番号への言及は、ＥＵ番号付けシステム（例えば、米国仮特許出願第６０／６４０，３２３号、ＥＵ番号付けに関する図面を参照されたい）による残基番号付けを意味する。
【0114】
「障害」または「疾患」は、抗体（例えば、本明細書に記載の任意のトリプターゼ抗体）での処置により利益を得るであろう任意の状態である。これには、哺乳動物を問題の障害にかかりやすくする病理学的状態を含む慢性及び急性障害または疾患が挙げられる。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。いくつかの例では、障害は、トリプターゼ関連障害またはトリプターゼ媒介障害であり得る。
【0115】
本明細書で使用される「トリプターゼ関連障害」及び「トリプターゼ媒介障害」という用語は、トリプターゼによって媒介されるか、またはそれと関連する、任意の障害もしくは状態を指す。いくつかの実施形態では、トリプターゼ関連障害は、身体における局所的及び／または全身的なトリプターゼレベルまたは活性に起因して非定型症状が現れ得る過剰なトリプターゼレベルまたは活性と関連する。
【0116】
いくつかの実施形態では、肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、致命的であり得る悪化する症状（憎悪または突発）の急性事象を伴う持続性慢性重症喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アトピー性（アレルギーとしても既知である）喘息、非アレルギー性喘息（例えば、呼吸器ウイルス（例えば、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルス、及び呼吸器発疹ウイルス）、または吸入刺激物（大気汚染物質、煙霧、ディーゼル粒子、屋内もしくは屋外での揮発性化学薬品及びガス、またはさらには冷乾燥空気によって）による感染症によってしばしば誘発される）である。
【0117】
いくつかの実施形態では、喘息は、断続的もしくは運動誘発性であるか、「煙」（典型的には紙巻きたばこ、葉巻、パイプ）、吸入もしくは「蒸気吸入」（たばこ、大麻、または他のそのような物質）への急性もしくは慢性の直接または間接曝露に起因する喘息、またはアスピリンもしくは関連するＮＳＡＩＤＳの最近の摂取によって誘発される喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、軽度またはコルチコステロイド未感作喘息であるか、新たに診断された未治療の喘息であるか、または症状（咳、喘鳴、息切れ／呼吸困難、または胸痛）を抑制するために以前は局所的または全身的な吸入ステロイドの慢性的使用を必要としなかった喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、慢性の、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、コルチコステロイドまたは他の慢性喘息コントローラー薬剤で制御されない喘息である。
【0118】
いくつかの実施形態では、喘息は、中等度～重度の喘息である。ある特定の実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、重度の喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息（例えば、感染症及び／または呼吸器発疹ウイルス（ＲＳＶ）に起因する）、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／憎悪性喘息、軽度喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未感作喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御されない喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、２型Ｔヘルパーリンパ球（Ｔｈ２）もしくは２型（Ｔｈ２）高Ｔヘルパーリンパ球、または２型（Ｔ２）駆動喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、好酸球喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アレルギー性喘息である。いくつかの実施形態では、個体は、好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）であると判定されている。ＷＯ２０１５／０６１４４１を参照されたい。いくつかの実施形態では、喘息は、ペリオスチン高喘息である（例えば、少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、または５０ｎｇ／ｍＬ血清のうちのいずれかのペリオスチンレベルを有する）。いくつかの実施形態では、喘息は、好酸球高喘息である（例えば、少なくとも約１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００好酸球数／ｍｌ血液のうちのいずれか）。ある特定の実施形態では、喘息は、Ｔｈ２低喘息または非Ｔｈ２駆動喘息である。いくつかの実施形態では、個体は、好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）であると判定されている。ＷＯ２０１５／０６１４４１を参照されたい。いくつかの実施形態では、喘息は、ペリオスチン低喘息である（例えば、約２０ｎｇ／ｍＬ血清未満のペリオスチンレベルを有する）。いくつかの実施形態では、喘息は、好酸球低喘息である（例えば、約１５０好酸球数／μｌ血液未満または約１００好酸球数／μｌ血液未満）。
【0119】
本明細書で使用される「Ｔｈ２高喘息」という用語は、例えば、ＩＬ１３、ＩＬ４、ＩＬ９、ＩＬ５の、１つ以上のＴｈ２細胞関連サイトカインの高レベルを呈するか、またはＴｈ２サイトカイン関連炎症を呈する喘息を指す。ある特定の実施形態では、Ｔｈ２高喘息という用語は、好酸球高喘息と交換可能に使用され得る。ある特定の実施形態では、Ｔｈ２高喘息は、Ｔｈ２駆動喘息である。いくつかの実施形態では、喘息患者は、好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）であると判定されている。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／０６１４４１号を参照されたい。ある特定の実施形態では、個体は、対照または参照レベルと比較して、好酸球性特徴遺伝子のうちの少なくとも１つの高められたレベルを有すると判定されている。ＷＯ２０１５／０６１４４１を参照されたい。ある特定の実施形態では、Ｔｈ２高喘息は、ペリオスチン高喘息である。いくつかの実施形態では、個体は、高血清ペリオスチンを有する。ある特定の実施形態では、個体は、１８歳以上である。ある特定の実施形態では、個体は、対照または参照レベルと比較して、血清ペリオスチンの高められたレベルを有すると判定されている。ある特定の実施形態では、対照または参照レベルは、集団におけるペリオスチンの中間レベルである。ある特定の実施形態では、個体は、２０ｎｇ／ｍｌ以上の血清ペリオスチンを有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、２５ｎｇ／ｍｌ以上の血清ペリオスチンを有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、５０ｎｇ／ｍｌ以上の血清ペリオスチンを有すると判定されている。ある特定の実施形態では、血清ペリオスチンの対照または参照レベルは、２０ｎｇ／ｍｌ、２５ｎｇ／ｍｌ、または５０ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、喘息は、好酸球高喘息である。ある特定の実施形態では、個体は、対照または参照レベルと比較して、高められた好酸球数を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、対照または参照レベルは、集団の中間レベルである。ある特定の実施形態では、個体は、１５０以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、２００以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、２５０以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、３００以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、３５０以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、４００以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、４５０以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、５００以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の好ましい実施形態では、個体は、３００以上の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、好酸球は、末梢血好酸球である。ある特定の実施形態では、好酸球は、痰中好酸球である。ある特定の実施形態では、個体は、ＦｅＮＯ（呼気一酸化窒素）の高められたレベル及び／またはＩｇＥの高められたレベルを呈する。例えば、いくつかの例では、個体は、約２５０十億分率（ｐｐｂ）超、約２７５ｐｐｂ超、約３００ｐｐｂ超、約３２５ｐｐｂ超、約３２５ｐｐｂ超、または約３５０ｐｐｂ超のＦｅＮＯレベルを呈する。いくつかの例では、個体は、５０ＩＵ／ｍｌを超えるＩｇＥレベルを有する。
【0120】
本明細書で使用される「Ｔｈ２低喘息」または「非Ｔｈ２高喘息」という用語は、例えば、ＩＬ１３、ＩＬ４、ＩＬ９、ＩＬ５の、１つ以上のＴｈ２細胞関連サイトカインの低レベルを呈するか、または非Ｔｈ２サイトカイン関連炎症を呈する喘息を指す。ある特定の実施形態では、Ｔｈ２低喘息という用語は、好酸球低喘息と交換可能に使用され得る。いくつかの実施形態では、喘息患者は、好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）であると判定されている。例えば、ＷＯ２０１５／０６１４４１を参照されたい。ある特定の実施形態では、Ｔｈ２低喘息は、Ｔｈ１７駆動喘息である。ある特定の実施形態では、Ｔｈ２低喘息は、ペリオスチン低喘息である。ある特定の実施形態では、個体は、１８歳以上である。ある特定の実施形態では、個体は、対照または参照レベルと比較して、血清ペリオスチンの低減されたレベルを有すると判定されている。ある特定の実施形態では、対照または参照レベルは、集団におけるペリオスチンの中間レベルである。ある特定の実施形態では、個体は、２０ｎｇ／ｍｌ未満の血清ペリオスチンを有すると判定されている。ある特定の実施形態では、喘息は、好酸球低喘息である。ある特定の実施形態では、個体は、対照または参照レベルと比較して低減された好酸球数を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、対照または参照レベルは、集団の中間レベルである。ある特定の実施形態では、個体は、１５０未満の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の実施形態では、個体は、１００未満の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。ある特定の好ましい実施形態では、個体は、３００未満の好酸球数／μｌ血液を有すると判定されている。
【0121】
いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、またはリンパ球性障害は、食道炎（例えば、好酸球性食道炎）、アレルギー性鼻炎、非アレルギー性鼻炎、ポリープを伴う鼻副鼻腔炎、鼻ポリープ、気管支炎、慢性肺炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、気道炎症、アレルギー性鼻炎、気管支拡張症、及び／または慢性気管支炎である。
【0122】
いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、またはリンパ球性障害は、関節炎である。いくつかの実施形態では、関節炎は、リウマチ性関節炎である。いくつかの実施形態では、関節炎は、骨関節炎、リウマチ性関節炎、若年性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、早期関節炎、多関節リウマチ性関節炎、全身型リウマチ性関節炎、腸疾患性関節炎、反応性関節炎、乾癬性関節炎、及び／または傷害の結果としての関節炎である。
【0123】
いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、またはリンパ球性障害は、胃腸炎症状態である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、大腸炎（例えば、外界からの刺激によって引き起こされる（例えば、治療レジメン、例えば、化学療法、放射線療法などによって引き起こされるかまたはそれと関連する）大腸炎）、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、膠原線維性もしくはリンパ球性大腸炎、壊死性腸炎、慢性肉芽腫性疾患またはセリアック病などの状態における大腸炎、食物アレルギー、胃炎、胃腸炎、感染性胃炎もしくは腸炎（例えば、ヘリコバクターピロリ菌感染慢性活動性胃炎）、食道炎、及び感染体によって引き起こされる胃腸炎症の他の形態、または潰瘍性大腸炎である。
【0124】
いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、またはリンパ球性障害は、胃腸炎症状態である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病（ＣＤ）である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、大腸炎（例えば、外界からの刺激によって引き起こされる（例えば、治療レジメン、例えば、化学療法、放射線療法などによって引き起こされるかまたはそれと関連する）大腸炎）、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、膠原線維性もしくはリンパ球性大腸炎、壊死性腸炎、慢性肉芽腫性疾患またはセリアック病などの状態における大腸炎、食物アレルギー、胃炎、胃腸炎、感染性胃炎もしくは腸炎（例えば、ヘリコバクターピロリ菌感染慢性活動性胃炎）、及び感染体によって引き起こされる胃腸炎症の他の形態、または潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病（ＣＤ）である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、軽度～中等度の遠位大腸炎である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、軽度～中等度の広範性大腸炎である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、重度の大腸炎である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、クローン病（ＣＤ）である。いくつかの実施形態では、クローン病は、急性病期にある。いくつかの実施形態では、クローン病は、誘導臨床的寛解期にある。いくつかの実施形態では、クローン病は、持続応答／寛解期にある。いくつかの実施形態では、クローン病は、軽度～中等度の疾患である。いくつかの実施形態では、クローン病は、中等度～重度の疾患である。いくつかの実施形態では、クローン病は、重度／劇症の疾患である。いくつかの実施形態では、クローン病は、回腸、回腸結腸、または結腸疾患である。
【0125】
いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、もしくはリンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）もしくは間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮）の増加された数もしくは分布に関連する障害は、ループスもしくは全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、またはループス（例えば、腎臓に影響を与えるループス腎炎（ＬＮ）、または血液及び／またはリンパ系臓器（リンパ節、脾臓、胸腺、及び関連するリンパ管）に影響を与える腎外性ループス（ＥＲＬ）、及び／または関節及び／または他の臓器であるが、必ずしも腎臓である必要はない）の１つ以上の臓器特異性症状である。
【0126】
いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、または線維性障害は、敗血症及び／または外傷、ＨＩＶ感染、またはＡＮＣＡ関連血管炎（ＡＡＶ）などの特発性（未知の病因学の）、多発血管炎性肉芽腫症（ウェゲナー肉芽腫症として以前に既知である）、ベーチェット病、心血管疾患、好酸球性気管支炎、ライター症候群、ＳＥＡ症候群（血清反応陰性、腱付着部症、関節症症候群）、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、強皮症、例えば、全身性硬化症とも称される全身性強皮症、脈管炎（例えば、側頭動脈炎、頭蓋動脈炎、またはホートン疾患とも称される巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ））、筋炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、乾癬、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、例えば、尋常性天疱瘡、アテローム性動脈硬化症、ループス、スティル病、重症筋無力症、セリアック病、再発寛解型（ＲＲＭＳ）もしくは一次性進行型（ＰＰＭＳ）もしくは二次性進行型（ＳＰＭＳ）サブタイプの多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン・バレー疾患、Ｉ型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）もしくはインスリン依存性（ＩＤＤＭ）もしくは若年発症性ＤＭ型、甲状腺炎（例えば、グレーブス病）、セリアック病、チャーグ・ストラウス症候群、筋痛症候群、好酸球増多症候群、好酸球性血管性浮腫を含む浮腫反応、蠕虫感染症、オンコセルカ皮膚炎、好酸球性食道炎、好酸球性腸炎、好酸球性大腸炎、閉塞性睡眠時無呼吸、心内膜心筋線維症、アジソン病、レイノー病もしくは現象、自己免疫性肝炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、または臓器移植拒絶に関連する。
【0127】
いくつかの実施形態では、障害は、皮膚の炎症性障害である。いくつかの実施形態では、障害は、アトピー性皮膚炎またはオンコセルカ皮膚炎である。いくつかの実施形態では、障害は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）である。
【0128】
いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、または好酸球性障害は、線維性障害である。いくつかの実施形態では、線維障害は、肺線維症、肝線維症（例えば、肝硬変（例えば、アルコール誘導性肝硬変、ウイルス誘導性肝硬変、Ｃ型肝炎後肝硬変、及び原発性胆汁性肝硬変）と関連する線維症、住血吸虫症、胆管炎（例えば、硬化性胆管炎）、及び自己免疫誘導性肝炎）、腎臓線維症（例えば、尿細管間質線維症、強皮症、糖尿病性腎炎、及び糸球体腎炎）、皮膚線維症（例えば、強皮症、肥厚性及びケロイド瘢痕、腎性線維化性皮膚症、ならびに熱傷）、骨髄線維症、神経線維腫症、線維腫、腸管線維症、及び外科処置に起因する線維性癒着）、心臓線維症（例えば、心筋梗塞と関連する線維症）、血管線維症（例えば、血管形成術後動脈再狭窄及びアテローム性動脈硬化症と関連する線維症）、眼線維症（例えば、白内障手術後の増殖性硝子体網膜症と関連する線維症、及び後眼窩線維症）、ならびに骨髄線維症（例えば、特発性骨髄線維症及び薬物誘発性骨髄線維症）を含む。線維症は、臓器特異性または全身性（例えば、全身性硬化症、及びＧＶＨＤと関連する線維症）であり得る。いくつかの実施形態では、線維性障害は、肺線維症である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、線維性間質性肺炎である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、特発性線維化性肺胞炎としても既知である特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、ＩＰＦは、性別、年齢、及び生理機能（ＧＡＰ）ステージＩである。いくつかの実施形態では、ＩＰＦは、ＧＡＰステージＩＩである。いくつかの実施形態では、ＩＰＦは、ＧＡＰステージＩＩＩである。いくつかの実施形態では、肺線維症は、散発性ＩＰＦである。いくつかの実施形態では、肺線維症は、家族性肺線維症である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、組み合わされた肺線維症及び肺気腫である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、以下のうちの１つ以上と関連する：通常型間質性肺炎、特発性間質性肺炎、剥離性間質性肺炎、呼吸器細気管支炎間質性肺疾患、急性間質性肺炎、非特異性間質性肺炎、サルコイドーシス、特発性器質化肺炎、好酸球性肺炎、感染症、職業性または環境性物質への曝露、紙巻きたばこ喫煙、薬物または放射線によって誘発される間質性肺疾患、リウマチ性疾患関連間質性肺疾患、リンパ系間質性肺炎、上葉優位型肺線維症、肺ランゲルハンス細胞組織球症、全身性強皮症間質性肺疾患、ヘルマンスキー・パドラック症候群、及びテロメアの短縮による疾患。
【0129】
いくつかの実施形態では、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、また好酸球性障害は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、慢性閉塞性肺疾患（ＧＯＬＤ）カテゴリーＡに関する国際指針である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、ＧＯＬＤカテゴリーＢである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、ＧＯＬＤカテゴリーＣである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、ＧＯＬＤカテゴリーＤである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、慢性気管支炎である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、肺気腫である。いくつかの実施形態では、肺気腫は、近位腺房、汎細葉性、または遠位腺房肺気腫である。いくつかの実施形態では、肺気腫は、たばこ誘発性肺気腫である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、粒子粉塵、化学煙霧、及び／または大気汚染への曝露と関連する。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、肺発達の障害と関連する。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、慢性閉塞性喘息である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、アルファ１抗トリプシン欠乏と関連する。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、セリンプロテアーゼ阻害剤クレードＥ、メンバー２（ＳＥＲＰＩＮＥ２）の分裂と関連する。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、持続性全身性炎症を伴うＣＯＰＤである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、好酸球性または２型Ｔヘルパー（ＴＨ２）高ＣＯＰＤである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは持続性細菌コロニー形成を伴うＣＯＰＤである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、頻繁な増悪を伴うＣＯＰＤである。いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、または好酸球性障害は、喘息ＣＯＰＤ重複症候群（ＡＣＯＳ）である。いくつかの実施形態では、ＡＣＯＳは、好酸球優勢、好中球優勢、混合パターン、または非炎症（非顆粒球性）ＡＣＯＳである。いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、または好酸球性障害は、ＣＯＰＤ閉塞性睡眠時無呼吸（ＯＳＡ）重複症候群である。
【0130】
上記のリストは包括的なものではなく、当業者であれば、疾患または障害が様々なカテゴリー内に入り得ることを理解することになる。
【0131】
「添付文書」という用語は、そのような治療製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症、及び／またはその使用に関する警告についての情報を含有する、治療製品の商業用パッケージに通例含まれる指示書を指すために使用される。
【0132】
「薬学的製剤」及び「薬学的組成物」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、内部に含まれる活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象が受け入れられない程度に毒性の追加の成分も含まない調製物を指す。そのような製剤は、滅菌である。好ましい実施形態では、薬学的組成物または薬学的製剤は、ヒト対象に投与される。
【0133】
「滅菌」薬学的製剤は、無菌であるか、または全ての生存微生物及びそれらの胞子を含まないか、またはそれらを本質的に含まない。
【0134】
「安定した」薬学的製剤とは、内部のタンパク質（例えば、抗トリプターゼ抗体などの抗体）が保管時にその物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物学的活性を本質的に保持する製剤である。好ましくは、製剤は、保管時に、その物理的及び化学的安定性、ならびにその生物学的活性を本質的に保持する。保管期間は、一般に、製剤の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技術が当該技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）、Ｊｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０（１９９３）に概説される。安定性は、選択された露光量及び／または温度で選択された期間にわたって測定され得る。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することにより、及び／または目視検査により）；ＲＯＳ形成の評価（例えば、光ストレスアッセイまたはＡＡＰＨストレスアッセイを使用することにより）；タンパク質の特定のアミノ酸残基の酸化（例えば、モノクローナル抗体のＴｒｐ残基及び／またはＭｅｔ残基）；カチオン交換クロマトグラフィー、画像キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、またはキャピラリーゾーン電気泳動を使用した電荷不均一性の評定；アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析；質量分光分析；還元されたインタクトな抗体を比較するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；ペプチドマップ（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ－Ｃ）分析；タンパク質の生物学的活性または標的結合機能（例えば、抗体の抗原結合機能）の評価等を含む様々な異なる方法で質的及び／または量的に評価され得る。不安定性は、凝集、脱アミド（例えば、Ａｓｎ脱アミド）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化及び／またはＴｒｐ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン（複数可）、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化差異等のうちのいずれか１つ以上を伴い得る。
【0135】
抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、それが、色及び／または透明度の目視検査時に、またはＵＶ光散乱もしくはサイズ排除クロマトグラフィーによって測定されたときに、凝集、沈殿、断片化、及び／または変性の兆候をほとんどまたは全く示さない場合、薬学的製剤中で「その物理的安定性を保持する」。
【0136】
抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、所与の時点での化学的安定性が、抗体が以下に定義されるその生物学的活性を依然として保持しているとみなされるようなものである場合、薬学的製剤中で「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、抗体の化学的に改変された形態を検出及び定量化することによって評定され得る。化学的改変は、例えば、トリプシンペプチドマッピング、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、及び液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を使用して評価され得るタンパク質酸化を含み得る。他の種類の化学的改変としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィーまたはｉｃＩＥＦによって評価され得る抗体の電荷改変が挙げられる。
【0137】
抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、所与の時点での抗体の生物学的活性が、例えば、モノクローナル抗体（例えば、抗トリプターゼモノクローナル抗体）の抗原結合アッセイまたはインビトロ阻害アッセイで決定される、薬学的製剤が調製された時点で呈される生物学的活性の約２０％以内（約１０％以内等）である場合（アッセイのエラー内）、薬学的製剤中で「その生物学的活性を保持する」。いくつかの実施形態では、所与の時点での抗体の生物学的活性は、薬学的製剤が調製された時点で呈される生物学的活性の約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％である。
【0138】
本明細書で使用される場合、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）の「生物学的活性」とは、標的に結合する抗体の能力、例えば、抗原に結合するモノクローナル抗体の能力を指す。これは、インビトロまたはインビボで測定され得る生物学的応答をさらに含み得る。そのような活性は、アンタゴニスト活性またはアゴニスト活性であり得る。
【0139】
「酸化感受性の」タンパク質（例えば、抗トリプターゼ抗体などの抗体）は、メチオニン（Ｍｅｔ）、システイン（Ｃｙｓ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、及びチロシン（Ｔｙｒ）等であるが、これらに限定されない、酸化しやすいことが見出されている１つ以上の残基（複数可）を含むタンパク質である。例えば、モノクローナル抗体のＦａｂ部分内のトリプトファンアミノ酸またはモノクローナル抗体のＦｃ部分内のメチオニンアミノ酸が酸化感受性であり得る。
【0140】
「酸化パーセント」という用語は、特定のアミノ酸残基、例えば、Ｔｒｐ残基（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＨＶＲ－Ｈ３中のＴｒｐ１００）またはＭｅｔ残基で酸化される製剤（例えば、薬学的組成物）中の抗体のパーセンテージを指す。酸化パーセントは、例えば、１つ以上の特定の酸化プローンアミノ酸残基が存在する１つ以上のトリプシンペプチドの質量分析（ＭＳ）によって判定され得る。ある特定の実施形態では、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＨＶＲ－Ｈ３中のＴｒｐ１００の酸化パーセンテージは、ＭＳ分析によって判定された場合にＴｒｐ１００が全体（酸化及び非酸化）のトリプシンペプチドの質量を超えて存在する、酸化されたトリプシンペプチドの質量によって判定される。酸化パーセントは、例えば、抗体またはその薬学的組成物の初期生成から９ヵ月、１２ヵ月、１８ヵ月、または２年以内に判定され得る。
【0141】
本明細書で使用される「ＡＡＰＨストレス試験に従って判定される」という用語は、特定のアミノ酸残基（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＨＶＲ－Ｈ３中のＴｒｐ１００）での酸化パーセントが、例えば、実施例５に記載されるように、４０℃で２５時間、５ｍＭのＡＡＰＨ中で１５０ｍｇ／ｍｌで抗体を配合した後にトリプシンペプチドの質量分析によって判定されることを意味する。ストレス抗体は、トリプシンで消化され、消化されたペプチドは、酸化のパーセンテージを決定するために超高速液体クロマトグラフィー－高分解能質量分析（ＵＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ）にかけた。
【0142】
本明細書で使用される場合、「緩衝液」とは、その酸－塩基複合体成分の作用によりｐＨの変化に抵抗する緩衝溶液を指す。この発明の緩衝剤は、好ましくは、約４．５～約８．０（例えば、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、または約８）の範囲のｐＨ、例えば、約ｐＨ５．５を有する。例えば、酢酸ヒスチジンは、ｐＨをこの範囲内で制御する緩衝液の例である。別の好適な緩衝剤は、アルギニンコハク酸及び／またはヒスチジンコハク酸である。
【0143】
「保存料」とは、例えば、内部の細菌作用を本質的に低減させ、それ故に多目的製剤の生産を容易にするために製剤に任意に含まれ得る化合物である。可能な防腐剤の例としては、例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチルアンモニウムクロライドの混合物）及びベンゼトニウムクロライドが挙げられる。他の種類の防腐剤としては、芳香族アルコール、例えば、フェノール、ブチル、及びベンジルアルコール、アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾールが挙げられる。一実施形態では、本明細書における保存料は、ベンジルアルコールである。
【0144】
本明細書で使用される場合、「界面活性剤」とは、表面活性剤、好ましくは、非イオン性界面活性剤を指す。本明細書における界面活性剤の例としては、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）、トリトン（ＴＲＩＴＯＮ）（登録商標）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグルコシドナトリウム、ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、またはステアリルスルホベタイン、ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシン、またはステアリルサルコシン、リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、またはセチルベタイン、ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノールアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルミドプロピルベタイン、またはイソステアラミドプロピルベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）、ミリスタミドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、またはイソステアラミドプロピルジメチルアミン、メチルココイルタウリン酸ナトリウムまたはメチルオレイルタウリン酸二ナトリウム、ならびにＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、及びエチレングリコール及びプロピレングリコールのコポリマー（例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ブロックコポリマー型、例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ－６８）等が挙げられる。一実施形態では、本明細書における界面活性剤は、ポリソルベート２０である。なお別の実施形態では、本明細書における界面活性剤は、ポロキサマー１８８である。
【0145】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【0146】
本出願に使用される「プロドラッグ」という用語は、親薬物と比較すると腫瘍細胞に対して細胞毒性が低く、酵素によって活性化されるかまたはより活性な親形態へと変換され得る、薬学的に活性な物質の前駆体または誘導体形態を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４，ｐｐ．３７５－３８２，６１５ｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）及びＳｔｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．（ｅｄ．），ｐｐ．２４７－２６７，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照されたい。本発明のプロドラッグには、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、スルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄアミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β－ラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５－フルオロシトシン及び他の５－フルオロウリジンプロドラッグが挙げられるがこれらに限定されず、これらは、より活性な細胞毒性遊離薬物へと変換され得る。本発明において使用するためのプロドラッグ形態に誘導体化することができる細胞毒性薬の例には、上記の化学療法剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【0147】
「対象」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、家畜動物（ウシ及びヒツジなど）、競技用動物、愛玩動物（ネコ、イヌ、及びウマなど）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル（例えば、カニクイザル）などの非ヒト霊長類）、ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるがこれらに限定されない。
【0148】
本明細書で使用されるとき、「投与する」とは、ある投薬量の化合物（例えば、本発明の抗トリプターゼ抗体またはさらなる治療剤）または組成物（例えば、薬学的組成物、例えば、本発明の抗トリプターゼ抗体、また任意にさらなる治療剤を含む薬学的組成物であり、それは抗酸化剤（例えば、Ｎ－アセチルトリプトファン及び／またはメチオニン）などの賦形剤を含み得る）を対象に与える方法を意味する。本明細書に記載される方法に用いられる組成物は、例えば、硝子体内、筋肉内、静脈内、皮内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内（ｉｎｔｒａｐｒｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙ）、胸膜内、気管内、くも膜内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙ）、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小胞内、経粘膜、心膜内、臍帯内、眼球内、眼窩内、経口、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、眼窩周囲、結膜、テノン嚢下、前房内、網膜下、眼球後、毛細胆管内（ｉｎｔｒａｃａｎａｌｉｃｕｌａｒｌｙ）、吸入、注射、埋め込み、注入、持続注入、標的細胞に直接的に流す局所灌流、カテーテル、洗浄、クリーム、または脂質組成物で投与することができる。本明細書に記載の方法で利用される組成物はまた、全身または局所投与され得る。投与方法は、様々な因子（例えば、投与される化合物または組成物、及び治療される状態、疾患、または障害の重症度）に応じて多様であり得る。
【0149】
薬剤、例えば、抗トリプターゼ抗体または薬学的製剤（例えば、抗酸化剤（Ｎ－アセチルトリプトファン及び／またはメチオニン）などの賦形剤を含み得る、抗トリプターゼ抗体を含む薬学的製剤）の「有効量」または「治療有効量」とは、必要な投与量で必要な期間にわたって所望の治療または予防結果を達成するのに有効な量を指す。治療有効量の抗体もしくは抗体断片（例えば、抗トリプターゼ抗体）、またはその組成物は、障害もしくは疾患の緩和もしくは治療、または障害もしくは疾患と関連する症状の予防、低減、緩和、もしくは治療を行うことができる。
【0150】
本明細書で使用される場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」などのその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に行われ得る。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の回復または寛解、及び緩解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体を使用して、疾患の発達を遅延させるか、または疾患の進行を減速させる。患者は、例えば、喘息治療法を受けた後に、その患者が以下：繰り返す喘鳴、咳嗽、呼吸困難、胸部絞扼感、夜間に発生または悪化する症状、冷気、運動、またはアレルゲンへの曝露によって誘発される症状のうちの１つ以上において、観測できる及び／または測定できるほどの低減または不在を示した場合に、喘息の「治療」が成功したことになり得る。
【0151】
「インターロイキン－５（ＩＬ－５）」という用語は、本明細書で使用される場合、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からの任意の天然ＩＬ－５を指す。本用語は、「完全長」の、未処理ＩＬ－５、成熟ＩＬ－５、ならびに翻訳後修飾から生じるＩＬ－５の任意の形態を包含する。本用語は、ＩＬ－５の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたはアレルバリアントも包含する。例示的なＩＬ－５のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｐ０５１１３として見出すことができる。
【0152】
「ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＩＬ－５と、ＩＬ－５受容体アルファ（ＩＬ５ＲＡ）などのその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル変換を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、分子を指す。本発明の方法において使用することができる例示的なＩＬ－５軸結合アンタゴニストとしては、例えば、ＩＬ－５結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－５抗体（例えば、メポリズマブ、ベンラリズマブ、及びレスリズマブ）及び抗ＩＬ－５受容体結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－５Ｒ抗体））が挙げられる。
【0153】
本明細書で使用される場合、「インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）」という用語は、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からの任意の天然ＩＬ－１３を指す。ＩＬ－１３は、２型Ｔヘルパー（Ｔｈ２）細胞を含む多くの細胞型によって分泌されるサイトカインである。本用語は、「完全長」の、未処理ＩＬ－１３、成熟ＩＬ－１３、ならびに翻訳後修飾から生じるＩＬ－１３の任意の形態を包含する。例示的なヒトＩＬ－１３のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５２２５として見出すことができる。
【0154】
「ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＩＬ－１３と、ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ４Ｒα）、ＩＬ－１３受容体アルファ１（ＩＬ１３ＲＡ１）、及びＩＬ－１３受容体アルファ２（ＩＬ１３ＲＡ２）などのその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル変換を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、分子を指す。ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストとしては、ＩＬ－１３結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－１３抗体、例えば、レブリキズマブ、２２８Ｂ／Ｃ－１、２２８Ａ－４、２２７－２６、及び２２７－４３（例えば、米国特許第７，６７４，４５９号、同第８，０６７，１９９号、同第８，０８８，６１８号、同第８，３１８，１６０号、及び同第８，７３４，７９７号を参照されたい）及びＩＬ－１３受容体結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ４Ｒα抗体、抗ＩＬ１３ＲＡ１抗体、または抗ＩＬ１３ＲＡ２抗体）が挙げられる。
【0155】
本明細書で使用される場合、「インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）」という用語は、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からの任意の天然ＩＬ－１７を指し、ファミリーメンバーである、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、及びＩＬ－１７Ｆを含む。本用語は、「完全長」の、未処理ＩＬ－１７、成熟ＩＬ－１７、ならびに翻訳後修飾から生じるＩＬ－１７の任意の形態を包含する。例示的なヒトＩＬ－１７Ａのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ１６５５２として見出すことができる。例示的なヒトＩＬ－１７Ｂのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ９ＵＨＦ５として見出すことができる。例示的なヒトＩＬ－１７Ｃのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ９Ｐ０Ｍ４として見出すことができる。例示的なヒトＩＬ－１７Ｄのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ８ＴＡＤ２として見出すことができる。例示的なヒトＩＬ－１７Ｅのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ９Ｈ２９３として見出すことができる。例示的なヒトＩＬ－１７Ｆのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ９６ＰＤ４として見出すことができる。
【0156】
「ＩＬ－１７軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＩＬ－１７と、インターロイキン－１７受容体（ＩＬ－１７Ｒ）ファミリーメンバータンパク質である、インターロイキン１７受容体Ａ（ＩＬ１７ＲＡ）、インターロイキン１７受容体Ｂ（ＩＬ１７ＲＢ）、インターロイキン１７受容体Ｃ（ＩＬ１７ＲＣ）、インターロイキン１７受容体Ｄ（ＩＬ１７ＲＤ）、インターロイキン１７受容体Ｅ（ＩＬ１７ＲＥ）、及びインターロイキン１７受容体Ｅ様（ＩＬ１７ＲＥＬ）などのその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル変換を、減少させるか、遮断するか、阻害するか、抑止するか、またはそれに干渉する、分子を指す。例示的なＩＬ－１７軸結合アンタゴニストとしては、例えば、ＩＬ－１７結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－１７抗体（例えば、セクキヌマブ（ＡＩＮ４１７）、イキセキズマブ（ＬＹ２４３９８２１）、ビメキズマブ、及びＮＩ－１４０１）、及びＩＬ－１７受容体結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－１７Ｒ抗体（例えば、ブロダルマブ（ＡＭＧ－８２７）））が挙げられる。例えば、ＷＯ２００６／０１３１０７、ＷＯ２００７／０７０７５０、ＷＯ２０１２／１５６２１９、及び米国特許第８，７１５，６６９号を参照されたい。
【0157】
本明細書に使用される「インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）」という用語は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＩＬ－３３を指す。ＩＬ－３３はまた、当該技術分野において、高内皮細静脈の核内因子（ＮＦ－ＨＥＶ、例えば、Ｂａｅｋｋｅｖｏｌｄ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６３（１）：６９－７９，２００３を参照されたい）、ＤＶＳ２７、Ｃ９ｏｒｆ２６、及びインターロイキン－１ファミリーメンバー１１（ＩＬ－１Ｆ１１）とも称される。本用語は、「完全長」の、未処理ＩＬ－３３、成熟ＩＬ－３３、ならびに翻訳後修飾から生じるＩＬ－３３の任意の形態を包含する。ヒト完全長の、未処理ＩＬ－３３は、２７０個のアミノ酸（ａ．ａ．）を含みＩＬ－３３１－２７０と称されることもある。ヒトＩＬ－３３の処理形態には、例えば、ＩＬ－３３９５－２７０、ＩＬ－３３９９－２７０、ＩＬ－３３１０９－２７０、ＩＬ－３３１１２－２７０、ＩＬ－３３１－１７８、及びＩＬ－３３１７９－２７０が挙げられる（Ｌｅｆｒａｎｃａｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０９（５）：１６７３－１６７８，２０１２及びＭａｒｔｉｎ，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：４４９－４５７，２０１３）。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ－３３の処理形態、例えば、ＩＬ－３３９５－２７０、ＩＬ－３３９９－２７０、ＩＬ－３３１０９－２７０、またはカルパイン、プロテイナーゼ３、好中球エラスターゼ、及びカテプシンＧなどのプロテアーゼによって処理された他の形態は、完全長ＩＬ－３３と比較して増加した生物学的活性を有し得る。本用語はまた、ＩＬ－３３の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント（例えば、エクソン３を欠く構成的に活性なスプライスバリアントｓｐＩＬ－３３、Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８６（２２）：２００７８－２００８６，２０１１）またはアレルバリアントを包含する。ＩＬ－３３は、細胞内（例えば、核内）に、または分泌サイトカイン形態として存在しても良い。全長ＩＬ－３３タンパク質は、核局在化配列（ヒトＩＬ－３３のアミノ酸１～７５）を含むヘリックスターンヘリックスのＤＮＡ結合モチーフを含んでおり、これには、クロマチン結合モチーフ（ヒトＩＬ－３３のアミノ酸４０～５８）を含む。処理され分泌されるＩＬ－３３の形態は、これらのＮ－末端モチーフを欠く。例示的なヒトＩＬ－３３のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｏ９５７６０として見出すことができる。
【0158】
本明細書で互換的に使用される「インターロイキン１受容体様１（ＩＬ１ＲＬ１）」及び「ＳＴ２」という用語は、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からの任意の天然ＳＴ２を指す。ＳＴ２は、当該技術分野でＤＥＲ４、Ｔ１、及びＦＩＴ－１とも称される。本用語は、「完全長」の、未処理ＳＴ２、成熟ＳＴ２、ならびに翻訳後修飾から生じるＳＴ２の任意の形態を包含する。ＳＴ２の少なくとも４つのアイソフォームが当該技術分野で既知であり、これらには、以下に記載するように、デュアルプロモーター系からの差次的ｍＲＮＡ発現から生じる可溶性（ＩＬ１ＲＬ１－ａとしても知られる、ｓＳＴ２）及び膜貫通（ＩＬ１ＲＬ１－ｂとしても知られるＳＴ２Ｌ）、ならびに代替的なスプライシングから生じるＳＴ２Ｖ及びＳＴ２ＬＶが含まれる。ＳＴ２Ｌのドメイン構造は、３つの細胞外免疫グロブリン様Ｃ２ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質トル／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメインを含む。ｓＳＴ２は、ＳＴ２Ｌ内に含まれる膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを欠き、固有の９個のアミノ酸（ａ．ａ．）Ｃ末端配列を含む（例えば、Ｋａｋｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．７：８２７－８４０，２００８を参照されたい）。ｓＳＴ２は、可溶性ＩＬ－３３を阻害するデコイ受容体として機能し得る。この用語はまた、ＳＴ２の天然のバリアント、例えば、スプライスバリアント（例えば、３つ目の免疫グロブリンモチーフを欠き、固有の疎水性尾部を有するＳＴ２Ｖ、及びＳＴ２Ｌの膜貫通ドメインを欠くＳＴ２ＬＶ）またはアレルバリアント（例えば、本明細書に記載されるように、喘息の危険性に対して保護するバリアントまたは喘息の危険性を与えるバリアント）を包含する。例示的なヒトＳＴ２のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０１６３８として見出すことができる。ＳＴ２は、コレセプタータンパク質ＩＬ－１ＲＡｃＰと共にＩＬ－３３受容体の一部である。ＩＬ－３３がＳＴ２と共受容体インターロイキン－１受容体補助タンパク質（ＩＬ－１ＲＡｃＰ）に結合することにより、下流シグナル伝達を促進する１：１：１の三重シグナル伝達錯体が形成される（例えば、Ｌｉｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １７（１０）：１３９８－１４１０，２００９、及びＬｉｕ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１１０（３７）：１４９１８－１４９２４，２０１３を参照されたい）。
【0159】
「ＩＬ－３３軸」とは、核酸（例えば、遺伝子、または遺伝子から転写されたｍＲＮＡ）、またはＩＬ－３３シグナル変換に関与するポリペプチドを意味する。例えば、ＩＬ－３３軸としては、リガンドＩＬ－３３、受容体（例えば、ＳＴ２及び／またはＩＬ－１ＲＡｃＰ）、アダプター分子（例えば、ＭｙＤ８８）、または受容体分子及び／またはアダプター分子と関連するタンパク質（例えば、インターロイキン－１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）及びインターロイキン－１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）などのキナーゼ、またはＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）などのＥ３ユビキチンリガーゼ）を挙げられ得る。
【0160】
「ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト」は、ＩＬ－３３軸結合パートナーとその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用を阻害する分子を指す。本明細書で使用される場合、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニスト、ＳＴ２結合アンタゴニスト、及びＩＬ１ＲＡｃＰ結合アンタゴニストを含む。例示的なＩＬ－３３軸結合アンタゴニストとしては、抗ＩＬ－３３抗体及びその抗原結合断片（例えば、ＡＮＢ－０２０（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｉｎｃ．）などの抗ＩＬ－３３抗体、またはＥＰ１７２５２６１、ＵＳ８１８７５９６、ＷＯ２０１１／０３１６００、ＷＯ２０１４／１６４９５９、ＷＯ２０１５／０９９１７５、もしくはＷＯ２０１５／１０６０８０（それぞれ、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載される抗体のいずれか）；ＩＬ－３３及び／またはその受容体（ＳＴ２及び／またはＩＬ－１ＲＡｃＰ）に結合し、リガンド－受容体の相互作用を遮断するポリペプチド（例えば、ＳＴ２－Ｆｃタンパク質、例えばＷＯ２０１４／１５２１９５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるもの；イムノアドヘシン、ペプチボディ、及び可溶性ＳＴ２、またはそれらの誘導体）；抗ＩＬ－３３受容体抗体（例えば、抗ＳＴ２抗体、例えば、ＡＭＧ－２８２（Ａｍｇｅｎ）もしくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）、またはＷＯ２０１３／１７３７６１及びＷＯ２０１３／１６５８９４（それぞれ、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載される抗ＳＴ２抗体のいずれか；あるいはＳＴ２－Ｆｃタンパク質、例えばＷＯ２０１３／１７３７６１、ＷＯ２０１３／１６５８９４、またはＷＯ２０１４／１５２１９５（それぞれ、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるもの）；ならびに小分子阻害剤などのＩＬ－３３受容体アンタゴニスト、ＩＬ－３３に結合するアプタマー、及びストリンジェントな条件下でＩＬ－３３軸の核酸配列とハイブリダイズする核酸（例えば、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピートＲＮＡ（ＣＲＩＳＰＲ－ＲＮＡもしくはｃｒＲＮＡ）（Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ．３３９：８２３－２６，２０１３）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡ配列を有する一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を含む）が挙げられる。
【0161】
「抗ＩＬ－３３抗体」、「ＩＬ－３３に結合する抗体」、及び「ＩＬ－３３に特異的に結合する抗体」という用語は、抗体が診断剤及び／または治療剤としてＩＬ－３３を標的とすることに有用となるような十分な親和性でＩＬ－３３に結合することができる抗体を指す。一実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体の無関係の非ＩＬ－３３タンパク質への結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定した場合に、この抗体のＩＬ－３３への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＩＬ－３３に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、異なる種に由来するＩＬ－３３の間で保存されているＩＬ－３３のエピトープに結合する。
【0162】
「ＳＴ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＳＴ２のＩＬ－３３、ＩＬ１ＲＡｃＰ、及び／または第２のＳＴ２分子の相互作用を阻害する分子を指す。ＳＴ２結合アンタゴニストは、リンカー（例えば、セリン－グリシン（ＳＧ）リンカー、グリシン－グリシン（ＧＧ）リンカー、またはこれらのバリアント（例えば、ＳＧＧ、ＧＧＳ、ＳＧＳ、またはＧＳＧリンカー））を通して直接的にまたは間接的に互いに付着する、ＩＬ－３３結合ドメイン（例えば、ＳＴ２またはＩＬ１ＲＡｃＰタンパク質の全てまたは一部）及び多量化ドメイン（例えば、免疫グロブリンのＦｃ部分、例えば、アイソタイプｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、及びｌｇＧ４、ならびに各アイソタイプ群内の任意のアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメイン）を含む「ＳＴ２－Ｆｃタンパク質」などのタンパク質であっても良く、これには、それらの全体が参照により各々本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３／１７３７６１、ＷＯ２０１３／１６５８９４、及びＷＯ２０１４／１５２１９５に記載されているＳＴ２－Ｆｃタンパク質及びこれらのバリアントが含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ＳＴ２結合アンタゴニストは、抗ＳＴ２抗体、例えば、ＡＭＧ－２８２（Ａｍｇｅｎ）もしくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）またはＷＯ２０１３／１７３７６１及びＷＯ２０１３／１６５８９４に記載される抗ＳＴ２抗体のいずれかであり得る。
【0163】
「単離された核酸」は、その天然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、通常核酸分子を含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子が染色体外に、またはその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【0164】
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物における、操作可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。例えば、原核生物に適している制御配列は、プロモーター、任意選択でオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することが知られている。
【0165】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、同義に使用され、外因性核酸が中に導入されている細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらには、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫が含まれる。子孫は、核酸含有量が親細胞と完全に同一ではない場合があるが、変異を含み得る。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【0166】
核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれるときに「作動可能に連結」される。例えば、プレ配列または分泌リーダーのためのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与する前タンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのためのＤＮＡに作動可能に連結され、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響する場合に、コード配列に作動可能に連結され、あるいはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するように位置付けられる場合に、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」は、連結されるＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的であり、かつ読み相（ｒｅａｄｉｎｇ ｐｈａｓｅ）にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、連続的である必要はない。連結は、簡便な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合には、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが従来の慣例に従って使用される。
【0167】
本明細書で特定されるポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントが得られるように、配列をアライメントし、必要に応じてギャップを導入した後に、いずれの保存的置換も配列同一性の一部とはみなさずに、候補配列内のアミノ酸残基が、比較されるポリペプチド内のアミノ酸残基と同一である割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを判定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内である様々な手段で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、アライメントを測定するための適切なパラメータを判定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）に提出されており、米国著作権番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能である。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、ＵＮＩＸオペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄで使用する場合はコンパイルすべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムにより設定されており、変動しない。
【0168】
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に用いられる状況において、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下の通りに計算する：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列整列プログラムＡＬＩＧＮ－２によってそのプログラムのＡとＢとの整列において完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは等しくないことが理解される。別途具体的に示されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して得られる。
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列整列プログラムＡＬＩＧＮ－２によってそのプログラムのＡとＢとの整列において完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは等しくないことが理解される。別途具体的に示されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【0169】
本明細書に記載されるアミノ酸配列は、別途示されない限り、連続的なアミノ酸配列である。
【0170】
「ベクター」という用語は、本明細書に使用されるとき、核酸分子が結合している別の核酸分子を輸送することができる核酸分子を指すことを意図する。ベクターの一種には「プラスミド」があり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る円形の二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の種類はファージベクターである。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、これにおいて、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノムへとライゲーションされる。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞における自己複製が可能である（例えば、細菌起源の複製を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに統合することができるため、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが動作可能に連結されている遺伝子の発現を導くことが可能である。そのようなベクターは、本明細書において「組み換え発現ベクター」（または単純に「組み換えベクター」もしくは「発現ベクター」）と称される。一般に、組み換えＤＮＡ技術における利用される発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は、互換的に使用され得る。
【0171】
ＩＩ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、トリプターゼに結合する新規な抗体に部分的に基づく。別の態様では、本発明は、部分的には、抗トリプターゼ抗体の特定の残基（例えば、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＶＨドメインのＷ１００を指すＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００などのＨＶＲ残基）は、酸化感受性であり得るという発見に基づく。本発明は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）の酸化を低減するまたは妨げるための抗酸化剤（例えば、Ｎ－アセチルトリプトファン及び／またはメチオニン）を含む薬学的組成物を提供する。他の好適な抗酸化賦形剤は、限定することなく、フリートリプトファン、シクロデキストリン、トロロックス（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）、ピリドキシン、ポリオール（例えば、マンニトール）、及び金属キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）を含む。例えば、Ｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９８：４４８５－４５００，２００９を参照されたい。本発明の抗体及び薬学的組成物は、障害（例えば、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害、またはトリプターゼ関連障害もしくはトリプターゼ媒介障害の診断及び／または治療に有用である。別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）の酸化を低減または排除するための凍結乾燥されている薬学的組成物を提供する。
一態様では、本発明は、トリプターゼに結合する新規な抗体に部分的に基づく。別の態様では、本発明は、部分的には、抗トリプターゼ抗体の特定の残基（例えば、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＶＨドメインのＷ１００を指すＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００などのＨＶＲ残基）は、酸化感受性であり得るという発見に基づく。本発明は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）の酸化を低減するまたは妨げるための抗酸化剤（例えば、Ｎ－アセチルトリプトファン及び／またはメチオニン）を含む薬学的組成物を提供する。他の好適な抗酸化賦形剤は、限定することなく、フリートリプトファン、シクロデキストリン、トロロックス（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）、ピリドキシン、ポリオール（例えば、マンニトール）、及び金属キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）を含む。例えば、Ｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９８：４４８５－４５００，２００９を参照されたい。本発明の抗体及び薬学的組成物は、障害（例えば、肺障害、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害、またはトリプターゼ関連障害もしくはトリプターゼ媒介障害の診断及び／または治療に有用である。別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）の酸化を低減または排除するための凍結乾燥されている薬学的組成物を提供する。
【0172】
Ａ．例示的な抗トリプターゼ抗体
本発明は、トリプターゼと結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、約１００ｎＭ以下（例えば、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１０ｎＭ以下（例えば、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１ｎＭ以下（例えば、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、０．５ｎＭ以下（例えば、０．５ｎＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１ｎＭ～約０．５ｎＭ（例えば、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、または約０．５ｎＭ）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約１ｐＭ～約５００ｐＭ、約１ｐＭ～約４００ｐＭ、約１ｐＭ～約３００ｐＭ、約１ｐＭ～約２００ｐＭ、約１ｐＭ～約１００ｐＭ、約１ｐＭ～約５０ｐＭ、約２５ｐＭ～約５００ｐＭ、約２５ｐＭ～約４００ｐＭ、約２５ｐＭ～約３００ｐＭ、約２５ｐＭ～約１００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約５０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約４２５ｐＭ、約５０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約３７５ｐＭ、約５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約３２５ｐＭ、約５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約５０ｐＭ～約２７５ｐＭ、約５０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約２００ｐＭ、約５０ｐＭ～約１８０ｐＭ、約５０ｐＭ～約１７５ｐＭ、約５０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約１２５ｐＭ、約５０ｐＭ～約１００ｐＭ、約５０ｐＭ～約７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約５００ｐＭ、約１００ｐＭ～約４７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約４２５ｐＭ、約１００ｐＭ～約４００ｐＭ、約１００ｐＭ～約３７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約３２５ｐＭ、約１００ｐＭ～約３００ｐＭ、約１００ｐＭ～約２７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約２２５ｐＭ、約１００ｐＭ～約２００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１８０ｐＭ、約１００ｐＭ～約１７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約１２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４７５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３７５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３７５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２７５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２００ｐＭ、約１７５ｐＭ～約５００ｐＭ、約１７５ｐＭ～約４７５ｐＭ、約１７５ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１７５ｐＭ～約４２５ｐＭ、約１７５ｐＭ～約４００ｐＭ、約１７５ｐＭ～約３７５ｐＭ、約１７５ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１７５ｐＭ～約３２５ｐＭ、約１７５ｐＭ～約３００ｐＭ、または約１８０ｐＭ～約４００ｐＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．４ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．２ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１８ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、トリプターゼは、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１、ヒトトリプターゼベータ２、及び／またはヒトトリプターゼベータ３）である。いくつかの実施形態では、ＫＤは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＳＰＲアッセイによって判定される。ある特定の実施形態では、トリプターゼは、ヒトトリプターゼアルファである。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。
本発明は、トリプターゼと結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、約１００ｎＭ以下（例えば、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１０ｎＭ以下（例えば、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１ｎＭ以下（例えば、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、０．５ｎＭ以下（例えば、０．５ｎＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１ｎＭ～約０．５ｎＭ（例えば、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、または約０．５ｎＭ）のＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約１ｐＭ～約５００ｐＭ、約１ｐＭ～約４００ｐＭ、約１ｐＭ～約３００ｐＭ、約１ｐＭ～約２００ｐＭ、約１ｐＭ～約１００ｐＭ、約１ｐＭ～約５０ｐＭ、約２５ｐＭ～約５００ｐＭ、約２５ｐＭ～約４００ｐＭ、約２５ｐＭ～約３００ｐＭ、約２５ｐＭ～約１００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約５０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約４２５ｐＭ、約５０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約３７５ｐＭ、約５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約３２５ｐＭ、約５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約５０ｐＭ～約２７５ｐＭ、約５０ｐＭ～約２５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約２００ｐＭ、約５０ｐＭ～約１８０ｐＭ、約５０ｐＭ～約１７５ｐＭ、約５０ｐＭ～約１５０ｐＭ、約５０ｐＭ～約１２５ｐＭ、約５０ｐＭ～約１００ｐＭ、約５０ｐＭ～約７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約５００ｐＭ、約１００ｐＭ～約４７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約４２５ｐＭ、約１００ｐＭ～約４００ｐＭ、約１００ｐＭ～約３７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約３２５ｐＭ、約１００ｐＭ～約３００ｐＭ、約１００ｐＭ～約２７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約２５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約２２５ｐＭ、約１００ｐＭ～約２００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１８０ｐＭ、約１００ｐＭ～約１７５ｐＭ、約１００ｐＭ～約１５０ｐＭ、約１００ｐＭ～約１２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４７５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３７５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３７５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２７５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２２５ｐＭ、約１５０ｐＭ～約２００ｐＭ、約１７５ｐＭ～約５００ｐＭ、約１７５ｐＭ～約４７５ｐＭ、約１７５ｐＭ～約４５０ｐＭ、約１７５ｐＭ～約４２５ｐＭ、約１７５ｐＭ～約４００ｐＭ、約１７５ｐＭ～約３７５ｐＭ、約１７５ｐＭ～約３５０ｐＭ、約１７５ｐＭ～約３２５ｐＭ、約１７５ｐＭ～約３００ｐＭ、または約１８０ｐＭ～約４００ｐＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．４ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．２ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１８ｎＭのＫＤでトリプターゼと結合する。いくつかの実施形態では、トリプターゼは、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１、ヒトトリプターゼベータ２、及び／またはヒトトリプターゼベータ３）である。いくつかの実施形態では、ＫＤは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＳＰＲアッセイによって判定される。ある特定の実施形態では、トリプターゼは、ヒトトリプターゼアルファである。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。
【0173】
別の実施例において、いくつかの実施形態では、本発明の抗トリプターゼ抗体（前述の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかを含む）は、トリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、例えば、インビトロトリプターゼ酵素アッセイにおいて判定されるように、トリプターゼのタンパク質分解活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、人工的基質、例えば、合成ペプチドＳ－２２８８は、インビトロトリプターゼ酵素アッセイにおいて基質として使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、例えば、基質としてＳ－２２８８を使用するインビトロトリプターゼ酵素アッセイによって判定される場合、約１００ｎＭ以下（例えば、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２．５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）の半数阻害濃度（ＩＣ５０）でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、基質としてＳ－２２８８を使用するインビトロトリプターゼ酵素アッセイによって判定される場合、約１０ｎＭ以下（例えば、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２．５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、基質としてＳ－２２８８を使用するインビトロトリプターゼ酵素アッセイによって判定される場合、約２．５ｎＭ以下（例えば、２．５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１ｎＭ～約２ｎＭ（例えば、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、約１．０ｎＭ、約１．１ｎＭ、約１．２ｎＭ、約１．３ｎＭ、約１．４ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１．６ｎＭ、約１．７ｎＭ、約１．８ｎＭ、約１．９ｎＭ、または約２．０ｎＭ）のＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．５ｎＭ～約２．５ｎＭ（例えば、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、約１．０ｎＭ、約１．１ｎＭ、約１．２ｎＭ、約１．３ｎＭ、約１．４ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１．６ｎＭ、約１．７ｎＭ、約１．８ｎＭ、約１．９ｎＭ、約２．０ｎＭ、約２．１ｎＭ、約２．２ｎＭ、約２．３ｎＭ、約２．４ｎＭ、または約２．５ｎＭ）のＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約１ｐＭ～約２．５ｎＭ、約２５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約７５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約１００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約１２５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約１５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約１７５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約２００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約２２５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約２５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約３００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約３２５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約３２５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約３５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約３７５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約４００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約４２５ｐＭ～約２．５ｎＭ、約４５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約５００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約４５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約５００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約５５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約６００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約６５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約７００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約７５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約８００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約８５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約９００ｐＭ～約２．５ｎＭ、約９５０ｐＭ～約２．５ｎＭ、約１ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．１ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．２ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．３ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．４ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．５ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．６ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．７ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．８ｎＭ～約２．５ｎＭ、約１．９ｎＭ～約２．５ｎＭ、約２．０ｎＭ～約２．５ｎＭ、約２．１ｎＭ～約２．５ｎＭ、約２．２ｎＭ～約２．５ｎＭ、約２．３ｎＭ～約２．５ｎＭ、約５００ｐＭ～約１．９ｐＭ、約７５０ｐＭ～約１．９ｐＭ、約１ｎＭ～約１．９ｐＭ、約１．２５ｎＭ～約１．９ｐＭ、約１．５ｎＭ～約１．９ｐＭ、約１ｎＭ～約１．８５ｎＭ、約１．２５ｎＭ～約１．８５ｎＭ、約１．２５ｎＭ～約１．８５ｎＭ、約１．５ｎＭ～約１．８５ｎＭ、約１ｎＭ～約１．８ｎＭ、約１．２５ｎＭ～約１．８ｎＭ、約１．５ｎＭ～約１．８ｎＭ、または約１．６ｎＭ～約１．８ｎＭのＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約１．８ｎＭのＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。他の実施形態では、抗体は、約０．５ｎＭ～約１ｎＭ（例えば、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、または約１．０ｎＭ）のＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約１ｐＭ～約１ｎＭ、約２５ｐＭ～約１ｎＭ、約５０ｐＭ～約１ｎＭ、約７５ｐＭ～約１ｎＭ、約１００ｐＭ～約１ｎＭ、約１２５ｐＭ～約１ｎＭ、約１５０ｐＭ～約１ｎＭ、約１７５ｐＭ～約１ｎＭ、約２００ｐＭ～約１ｎＭ、約２２５ｐＭ～約１ｎＭ、約２５０ｐＭ～約１ｎＭ、約３００ｐＭ～約１ｎＭ、約３２５ｐＭ～約１ｎＭ、約３５０ｐＭ～約１ｎＭ、約３７５ｐＭ～約１ｎＭ、約４００ｐＭ～約１ｎＭ、約４２５ｐＭ～約１ｎＭ、約４５０ｐＭ～約１ｎＭ、約５００ｐＭ～約１ｎＭ、約４５０ｐＭ～約１ｎＭ、約５００ｐＭ～約１ｎＭ、約５５０ｐＭ～約１ｎＭ、約６００ｐＭ～約１ｎＭ、約６５０ｐＭ～約１ｎＭ、約７００ｐＭ～約１ｎＭ、約７５０ｐＭ、約２５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約３００ｐＭ～約８００ｐＭ、約３２５ｐＭ～約８００ｐＭ、約３２５ｐＭ～約８００ｐＭ、約３５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約３７５ｐＭ～約８００ｐＭ、約４００ｐＭ～約８００ｐＭ、約４２５ｐＭ～約８００ｐＭ、約４５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約５００ｐＭ～約８００ｐＭ、約４５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約５００ｐＭ～約８００ｐＭ、約５５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約６００ｐＭ～約８００ｐＭ、約６５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約７００ｐＭ～約８００ｐＭ、約７５０ｐＭ～約８００ｐＭ、約１ｐＭ～約６００ｐＭ、約２５ｐＭ～約６００ｐＭ、約５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約７５ｐＭ～約６００ｐＭ、約１００ｐＭ～約６００ｐＭ、約１２５ｐＭ～約６００ｐＭ、約１５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約１７５ｐＭ～約６００ｐＭ、約２００ｐＭ～約６００ｐＭ、約２２５ｐＭ～約６００ｐＭ、約２５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約３００ｐＭ～約６００ｐＭ、約３２５ｐＭ～約６００ｐＭ、約３２５ｐＭ～約６００ｐＭ、約３５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約３７５ｐＭ～約６００ｐＭ、約４００ｐＭ～約６００ｐＭ、約４２５ｐＭ～約６００ｐＭ、約４５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約５００ｐＭ～約６００ｐＭ、約４５０ｐＭ～約６００ｐＭ、約５００ｐＭ～約６００ｐＭ、または約５５０ｐＭ～約６００ｐＭのＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．６ｎＭのＩＣ５０でヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、トリプターゼは、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１、ヒトトリプターゼベータ２、及び／またはヒトトリプターゼベータ３）である。いくつかの例では、抗体の阻害活性は、本明細書に記載されるように、例えば、実施例（例えば、実施例１、具体的には節（Ａ）（ｖｉｉｉ）（ａ））、または当該技術分野で既知の他のアプローチによって判定される。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、一価抗体またはその抗原結合抗体断片（例えば、Ｆａｂ）としてヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。他の実施形態では、抗体は、二価抗体（例えば、ＩｇＧ抗体（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）またはＦ（ａｂ’）２）としてヒトトリプターゼの活性を阻害することができる。
【0174】
いくつかの例では、本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、ヒト初期気道平滑筋細胞のトリプターゼ刺激収縮を阻害し得る。他の例では、本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、ヒト初期気道平滑筋細胞のトリプターゼ刺激収縮を阻害し得る。さらに他の例では、本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、トリプターゼもしくはＩｇＥ－刺激マスト細胞脱顆粒及び／またはヒスタミン放出を阻害し得る。さらなる例では、本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、例えば、対象への投与の際に、活性トリプターゼ（例えば、気管支肺胞洗浄液または鼻吸収試料などの試料中）の量を低減し得る。例えば、本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、活性トリプターゼの量を約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上低減し得る。低減は、活性トリプターゼの参照量、例えば、抗トリプターゼ抗体の投与前の試料中の活性トリプターゼの量に関連し得る。
【0175】
いくつかの例では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）Ｘ１がＡｓｐまたはＳｅｒであり、Ｘ２がＴｙｒまたはＰｈｅであり、Ｘ３がＶａｌまたはＨｉｓである、Ｘ１Ｘ２ＧＭＸ３（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）Ｘ１がＡｓｎまたはＡｓｐであり、Ｘ２がＴｙｒまたはＡｓｎであり、Ｘ３がＡｓｐまたはＴｙｒである、ＲＸ１Ｘ２Ｘ３ＤＷＹＦＤＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つの超可変領域（ＨＶＲ）、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上組み合わせ、ならびに配列番号１～６のうちのいずれかと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上のバリアントを含み得る。
【0176】
例えば、いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つの超可変領域（ＨＶＲ）、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ、ならびに配列番号２または４～８のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上のバリアントを含み得る。
【0177】
１つの特定の実施例において、いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、以下の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、以下の軽鎖ＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１などの配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【0178】
別の特定の実施例において、いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＤＮＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、以下の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＰＧＧＳＲＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＰＫＮＴＬＦＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、以下の軽鎖ＦＲ：（ａ）ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＰＷＩＹ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、抗体３１ａなどの配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【0179】
いくつかの例では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）配列番号９、１０１、１０２、１０３、及び１０４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１０、１０５、及び１０６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、いくつかの例では、抗体は、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の例では、抗体は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【0180】
いくつかの例では、前述の抗体のうちのいずれかは、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または少なくとも４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または４個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１と、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基とを含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個全てのアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面及び四量体のヒトトリプターゼベータ１の大界面の両方を解離することができる。
【0181】
いくつかの例では、前述の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、軽鎖可変領域アミノ酸残基Ｖａｌ３０、Ｔｈｒ３１、Ｔｙｒ３２、Ｔｙｒ３４、Ａｒｇ５０、Ｔｙｒ９０、Ｈｉｓ９２、Ｓｅｒ９３、及びＴｙｒ９４、ならびに重鎖可変領域アミノ酸残基Ｐｈｅ５０、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｙ５３、Ｓｅｒ５４、Ｓｅｒ５５、Ｔｈｒ５６、Ｔｙｒ５８、Ａｒｇ９５、Ｔｙｒ９７、及びＡｓｐ９８からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、または１９個のアミノ酸残基）を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）と結合するパラトープを含む。
【0182】
例えば、いくつかの例では、抗トリプターゼ抗体は、軽鎖可変領域アミノ酸残基Ｖａｌ３０、Ｔｈｒ３１、Ｔｙｒ３２、Ｔｙｒ３４、Ａｒｇ５０、Ｔｙｒ９０、Ｈｉｓ９２、Ｓｅｒ９３、及びＴｙｒ９４または重鎖可変領域アミノ酸残基Ｐｈｅ５０、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｙ５３、Ｓｅｒ５４、Ｓｅｒ５５、Ｔｈｒ５６、Ｔｙｒ５８、Ａｒｇ９５、Ｔｙｒ９７、及びＡｓｐ９８を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）と結合するパラトープを含む。いくつかの例では、抗トリプターゼ抗体は、軽鎖可変領域アミノ酸残基Ｖａｌ３０、Ｔｈｒ３１、Ｔｙｒ３２、Ｔｙｒ３４、Ａｒｇ５０、Ｔｙｒ９０、Ｈｉｓ９２、Ｓｅｒ９３、及びＴｙｒ９４、ならびに重鎖可変領域アミノ酸残基Ｐｈｅ５０、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｙ５３、Ｓｅｒ５４、Ｓｅｒ５５、Ｔｈｒ５６、Ｔｙｒ５８、Ａｒｇ９５、Ｔｙｒ９７、及びＡｓｐ９８を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）と結合するパラトープを含む。
【0183】
いくつかの例では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つの超可変領域（ＨＶＲ）、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ、ならびに配列番号３０～３５のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上のバリアントを含み得る。
【0184】
いくつかの例では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）配列番号３６、４７、４８、４９、５０、５１、及び５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３７、５３、５８、または５９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。
【0185】
いくつかの例では、前述の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）のうちのいずれかは、以下の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＩｌｅまたはＶａｌである、ＷＸ１ＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３９）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）Ｘ１がＶａｌまたはＳｅｒであり、Ｘ２がＡｒｇまたはＶａｌであり、Ｘ３がＶａｌまたはＰｈｅであり、Ｘ４がＴｙｒまたはＰｈｅである、ＲＸ１ＴＩＳＸ２ＤＴＳＫＮＱＸ３ＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＸ４ＣＡＲ（配列番号４０）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【0186】
例えば、いくつかの例では、前述の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）のうちのいずれかは、以下の重鎖ＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【0187】
別の実施例では、いくつかの例では、前述の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）のうちのいずれかは、以下の重鎖ＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＳＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【0188】
別の実施例では、いくつかの例では、前述の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）のうちのいずれかは、以下の重鎖ＦＲ：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＳＴＩＳＲＤＴＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【0189】
いくつかの例では、前述の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）のうちのいずれかは、以下の軽鎖ＦＲ：（ａ）Ｘ１がＩｌｅまたはＡｌａであり、Ｘ２がＭｅｔまたはＬｅｕである、ＤＸ１ＱＸ２ＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６０）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）Ｘ１がＡｌａまたはＰｒｏである、ＷＹＱＱＫＰＧＫＸ１ＰＫＬＬＩＹ（配列番号６１）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）Ｘ１がＧｌｙまたはＧｌｕであり、Ｘ２がＴｙｒまたはＰｈｅである、ＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＸ１ＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＸ２Ｃ（配列番号６２）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【0190】
例えば、特定の例では、前述の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）のうちのいずれかは、以下の軽鎖ＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【0191】
いくつかの実施形態では、前述の抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）のうちのいずれかは、以下の軽鎖ＦＲ：（ａ）ＡＡＶＬＴＱＴＰＡＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＳＩＳＣ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）Ｘ１がＣｙｓまたはＡｌａである、ＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＥＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＸ１ＤＤＡＡＴＹＦＣ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含み得る。
【0192】
いくつかの例では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）配列番号３６、４７、４８、４９、５０、５１、及び５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３７、５３、５８、または５９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、いくつかの例では、抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例では、抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの例で、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【0193】
別の特定の実施例において、いくつかの実施形態では、抗トリプターゼ抗体は、（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗トリプターゼ抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗トリプターゼ抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。いくつかの実施形態では、抗トリプターゼ抗体は、以下の軽鎖ＦＲ：（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。いくつかの実施形態では、抗トリプターゼ抗体は、抗トリプターゼ抗体ｈｕＥ１０４．ｖ２などの配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【0194】
別の特定の実施例において、いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、（ａ）配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、以下の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）：（ａ）ＱＸＳＬＥＥＳＧＧＧＬＦＫＰＴＤＴＬＴＬＴＣＴＶＳＲＦＳＬＩ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＳＰＥＮＧＬＥＷＩＧ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＳＴＩＴＲＮＴＮＥＮＴＶＴＬＫＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、以下の軽鎖ＦＲ：（ａ）ＡＡＶＬＴＱＴＰＡＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＳＩＳＣ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２、（ｃ）Ｘ１がＣｙｓまたはＡｌａであるＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＥＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＸ１ＤＤＡＡＴＹＦＣ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、抗体Ｅ１０４などの、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【0195】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖、及び／または（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ｃ末端でリジン（Ｋ）残基をさらに含む。
【0196】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖、及び／または（ｂ）配列番号７９のアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ｃ末端でリジン（Ｋ）残基をさらに含む。
【0197】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖、及び／または（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。いくつかの例では、抗体は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ｃ末端でリジン（Ｋ）残基をさらに含む。
【0198】
いくつかの例では、本発明は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む重鎖、及び／または（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。いくつかの例では、抗体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ｃ末端でリジン（Ｋ）残基をさらに含む。
【0199】
いくつかの例では、前述の抗体のうちのいずれかは、配列番号７１のＧｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、及びＬｅｕ１０２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、または３個全ての残基を含むヒトトリプターゼベータ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、または１４個全てのアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトトリプターゼベータ１四量体に関連し、ヒトトリプターゼベータ１上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５及びＡｒｇ２１６のうちの１つまたは両方をさらに含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトトリプターゼベータ１の小界面及び／または大界面を解離することができる。
【0200】
いくつかの例では、前述の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、軽鎖可変領域アミノ酸残基Ｔｙｒ２９、Ａｓｎ３０、Ａｒｇ３２、及びＡｒｇ９４、ならびに重鎖可変領域アミノ酸残基Ｇｌｙ３１、Ｔｙｒ３２、Ｓｅｒ５２、Ｓｅｒ５３、Ａｌａ５４、Ｔｈｒ５６、Ｐｈｅ５８、Ｐｒｏ９６、Ａｒｇ９７、Ｇｌｙ９８、Ｔｙｒ９９、及びＡｒｇ１００ｅからなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、または１６個、１９個のアミノ酸残基）を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）と結合するパラトープを含む。
【0201】
例えば、いくつかの例では、抗トリプターゼ抗体は、軽鎖可変領域アミノ酸残基Ｔｙｒ２９、Ａｓｎ３０、Ａｒｇ３２、及びＡｒｇ９４または重鎖可変領域アミノ酸残基Ｇｌｙ３１、Ｔｙｒ３２、Ｓｅｒ５２、Ｓｅｒ５３、Ａｌａ５４、Ｔｈｒ５６、Ｐｈｅ５８、Ｐｒｏ９６、Ａｒｇ９７、Ｇｌｙ９８、Ｔｙｒ９９、及びＡｒｇ１００ｅを含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）と結合するパラトープを含む。いくつかの例では、抗トリプターゼ抗体は、軽鎖可変領域アミノ酸残基Ｔｙｒ２９、Ａｓｎ３０、Ａｒｇ３２、及びＡｒｇ９４、ならびに重鎖可変領域アミノ酸残基Ｇｌｙ３１、Ｔｙｒ３２、Ｓｅｒ５２、Ｓｅｒ５３、Ａｌａ５４、Ｔｈｒ５６、Ｐｈｅ５８、Ｐｒｏ９６、Ａｒｇ９７、Ｇｌｙ９８、Ｔｙｒ９９、及びＡｒｇ１００ｅを含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）と結合するパラトープを含む。
【0202】
いくつかの例では、前述の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、ヒトトリプターゼと結合する。いくつかの例では、前述の抗体のうちのいずれかは、カニクイザル（ｃｙｎｏ）トリプターゼと結合する。いくつかの例では、抗体は、ヒトトリプターゼアルファまたはヒトトリプターゼベータと結合する。いくつかの例では、抗体は、ヒトトリプターゼベータ１、ヒトトリプターゼベータ２、またはヒトトリプターゼベータ３と結合する。
【0203】
別の態様では、本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｈｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、及びＡｌａ８５からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、または７個のアミノ酸残基）、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する抗トリプターゼ抗体を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または少なくとも４個全ての残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１と、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、及びＡｓｐ８２からなる群から選択される少なくとも１個、少なくとも２個、もしくは３個全ての残基と、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ６７、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、もしくは１２個全てのアミノ酸残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープは、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、四量体のトリプターゼの小界面及び四量体のトリプターゼトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）の大界面の両方を解離することができる。
【0204】
さらに別の態様では、本発明は、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、及びＡｒｇ１０６からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、または７個のアミノ酸残基）、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）のエピトープに結合する抗トリプターゼ抗体を提供する。いくつかの実施形態では、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープは、配列番号７１のＴｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、または１４個全てのアミノ酸残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）単量体または四量体に関連する。いくつかの実施形態では、エピトープは、四量体に関連し、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープは、配列番号７１のＧｌｎ３５及びＡｒｇ２１６のうちの１つもしくは両方、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｘ線結晶解析モデルによって判定される。いくつかの実施形態では、抗体は、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）の小界面及び／または大界面を解離することができる。
【0205】
いくつかの実施形態では、前述の抗体のうちのいずれかは、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される１個以上のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１１個のアミノ酸残基）、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。
【0206】
例えば、いくつかの例では、前述の抗体のうちのいずれかは、配列番号７１のＧｌｎ６７または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＡｓｐ８２または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＬｅｕ８３または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＡｌａ８４または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＡｒｇ８７または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＰｒｏ１０３または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＶａｌ１０４または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＳｅｒ１０５または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＡｒｇ１０６または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＧｌｕ１２８または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＧｌｕ１２９または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。
【0207】
いくつかの実施形態では、前述の抗体のうちのいずれかは、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、及びＧｌｕ１２９からなる群から選択される２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、または１１個全てのアミノ酸残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。
【0208】
いくつかの例では、前述の抗体のうちのいずれかは、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｈｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｌａ８５、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される１つ以上のさらなるアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、または５個のさらなるアミノ酸残基）、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。例えば、いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＶａｌ８０または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗トリプターゼ抗体は、配列番号７１のＬｙｓ８１または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＡｌａ８５または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＰｒｏ１３０または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。
【0209】
いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｈｉｓ５１、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｌａ８５、及びＰｒｏ１３０からなる群から選択される２個以上、３個以上、４個以上、または５個以上のさらなるアミノ酸残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。
【0210】
いくつかの例では、抗トリプターゼ抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗トリプターゼ抗体は、配列番号７１のＨｉｓ５１、Ｇｌｎ６７、Ｖａｌ８０、Ｌｙｓ８１、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｌａ８５、Ａｒｇ８７、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＰｒｏ１３０からなるトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。
【0211】
他の例では、前述の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｇｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、及びＡｒｇ２１６からなる群から選択される１個以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個）のさらなるアミノ酸残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。例えば、いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＧｌｎ３５または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＴｒｐ５５または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＧｌｎ１００または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＬｅｕ１０１または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＬｅｕ１０２または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＧｌｕ１２６または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＬｅｕ１２７または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のＡｒｇ２１６または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｇｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、及びＡｒｇ２１６からなる群から選択される２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、または８個以上のさらなるアミノ酸残基、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸をさらに含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。
【0212】
いくつかの例では、抗トリプターゼ抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を参照し得る、Ｇｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６、または任意のトリプターゼタンパク質の対応するアミノ酸を含むトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。いくつかの例では、抗トリプターゼ抗体は、配列番号７１のＧｌｎ３５、Ｔｒｐ５５、Ｇｌｎ６７、Ａｓｐ８２、Ｌｅｕ８３、Ａｌａ８４、Ａｒｇ８７、Ｇｌｎ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｐｒｏ１０３、Ｖａｌ１０４、Ｓｅｒ１０５、Ａｒｇ１０６、Ｇｌｕ１２６、Ｌｅｕ１２７、Ｇｌｕ１２８、Ｇｌｕ１２９、及びＡｒｇ２１６からなるトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）上のエピトープに結合する。
【0213】
別の態様では、本発明、前述の抗体のうちのいずれかとトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼベータ１）との結合について競合する抗体を提供する。
【0214】
別の態様では、本発明は、前述の抗体のうちのいずれかと同じエピトープまたは重複エピトープに結合する抗体を提供する。
【0215】
いくつかの実施形態では、前述の抗体のうちのいずれかは、四量体の構造（マスト細胞分泌顆粒中に存在するか、またはそこから放出される成熟トリプターゼなど）を有するトリプターゼを分裂し、小分子量種、例えば、単量体、二量体、及び／または三量体を形成する能力を有し得る。
【0216】
さらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗体は、以下の節１～７に記載される特徴のうちのいずれかを、単独または組み合わせで組み込み得る。
【0217】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、≦１ｐＭ、または≦０．１ｐＭ（例えば、１０－６Ｍ以下、例えば、１０－６Ｍ～１０－９Ｍ以下、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ以下）の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、約１００ｎＭ以下（例えば、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１０ｎＭ以下（例えば、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１ｎＭ以下（例えば、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、上記または本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、約０．５ｎＭ以下（例えば、０．５ｎＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１ｎＭ～約０．５ｎＭ（例えば、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、または約０．５ｎＭ）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．４ｎＭのＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１８ｎＭのＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、≦１ｐＭ、または≦０．１ｐＭ（例えば、１０－６Ｍ以下、例えば、１０－６Ｍ～１０－９Ｍ以下、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ以下）の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、約１００ｎＭ以下（例えば、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１０ｎＭ以下（例えば、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、１ｎＭ以下（例えば、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、上記または本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、約０．５ｎＭ以下（例えば、０．５ｎＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１ｎＭ～約０．５ｎＭ（例えば、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．４ｎＭ、または約０．５ｎＭ）のＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．４ｎＭのＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１８ｎＭのＫＤでトリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）と結合する。
【0218】
一実施形態では、ＫＤは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、対象となる抗体及びその抗原のＦａｂバージョンを用いて行われる。例えば、抗体に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の一連の滴定の存在下で、Ｆａｂを最低濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡させ、次いで、抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートで結合した抗体を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１，１９９９を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸塩（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、続いて、室温（約２３℃）で２～５時間、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンによってブロックする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］－抗原を、対象となるＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９，１９９７の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ－１２の評定と一致する）。次いで、対象となるＦａｂを一晩インキュベートするが、このインキュベーションは、平衡が達成されることを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続し得る。その後、混合物を、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のため、捕捉プレートに移す。次いでこの溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）でプレートを１０分間計数する。２０％以下の最大結合を付与する各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイにおける使用のために選択する。
【0219】
別の実施形態によると、ＫＤは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイは、固定化抗原ＣＭ５チップを約１０応答単位（ＲＵ）で用いて２５℃で行われる。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の指示に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原をｐＨ４．８の１０ｍＭの酢酸ナトリウムによって５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後、５μｌ／分の流量で注射し、カップリングされたタンパク質の約１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注射に続いて、１Ｍのエタノールアミンを注射して、未反応基を遮断する。動態測定については、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）界面活性剤を含むもの（ＰＢＳＴ）に、２５℃で、約２５μＬ／分の流速で注射する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価用ソフトウェアバージョン３．２版）を使用して、会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時に適合することによって、計算する。平衡解離定数（ＫＤ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１，１９９９）を参照されたい。オン速度が、上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって、１０６Ｍ－１ｓ－１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃でのＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗－抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、判定することができる。
【0220】
いくつかの実施形態では、ＫＤは、例えば、実施例１の節（Ａ）（ｖｉｉ）に記載されるように、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＳＰＲアッセイを用いて測定される。いくつかの実施形態では、ＳＰＲアッセイは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００または同等の機器を用いることができる。いくつかの実施形態では、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップ（または同等のセンサーチップ）は、モノクローナルマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体で固定されており、抗トリプターゼ抗体は、フローセル上で逐次的に捕捉される。Ｈｉｓタグ付きヒトトリプターゼベータ１単量体（配列番号１２８）の連続３倍希釈液を、３０μｌ／分の流量で注射する。各試料を、３分会合及び１０分解離で分析する。アッセイは、２５℃で行われる。各注射後、チップを３ＭのＭｇＣｌ２を使用して再生成する。結合応答は、応答ユニット（ＲＵ）を、同様の密度の無関連のＩｇＧを捕捉するフローセルから控除することによって訂正する。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを、動態分析に使用する。
【0221】
２．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片に関する概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたく、またＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片に関する概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたく、またＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【0222】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４，２００３、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－６４４８，１９９３を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４，２００３に記載される。
【0223】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
【0224】
抗体断片は、本明細書に記載される、インタクトな抗体のタンパク分解、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）の産生を含むが、これらに限定されない、様々な技術によって作製され得る。
【0225】
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５，１９８４に記載されている）。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えばサルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５，１９８４に記載されている）。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えばサルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
【0226】
ある特定の実施形態では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意選択で、ヒト定常領域の少なくとも一部も含むことになる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基の由来となった抗体）に由来する対応する残基で置換される。
【0227】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３，２００８に概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９，１９８８、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３，１９８９、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４，２００５（特異性決定領域（ＳＤＲ）移植を説明）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８，１９９１（「リサーフェシング」を説明）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０，２００５（「ＦＲシャッフリング」を説明）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８，２００５及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０，２０００（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」アプローチを説明）にさらに記載されている。
【0228】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「最良適合」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６，１９９３を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５，１９９２、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３，１９９３を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３，２００８を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４，１９９７及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８，１９９６参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0229】
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４，２００１及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９，２００８に記載される。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４，２００１及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９，２００８に記載される。
【0230】
ヒト抗体は、抗原投与に応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するかもしくは動物の染色体内にランダムに組み込まれているヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。そのようなトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５，２００５を参照されたい。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載）、米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）、ならびに米国特許出願公開第２００７／００６１９００号（ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）も参照されたい。そのような動物により生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによりさらに修飾され得る。
【0231】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が説明されている。（例えば、ＫｏｚｂｏｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１，１９８４、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６，１９９１を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２，２００６に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを説明）に記載されるものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）については、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０（３）：９２７－９３７，２００５及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７（３）：１８５－９１，２００５にも記載されている。
【0232】
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。次いで、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術は、以下に記載される。
【0233】
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、所望される活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体に関してそのようなライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で既知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４，１９９０、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８，１９９１、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７，１９９２、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０，２００４、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３，２００４、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２，２００４、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２，２００４にさらに説明されている。
本発明の抗体は、所望される活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体に関してそのようなライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で既知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４，１９９０、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８，１９９１、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７，１９９２、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０，２００４、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３，２００４、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２，２００４、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２，２００４にさらに説明されている。
【0234】
ある特定のファージ提示法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別個にクローニングされ、ファージライブラリ内で無作為に組み換えられ、これがその後、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５，１９９４に記載されているように抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片をディスプレイする。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、高親和性抗体を免疫原に提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯＪ．１２：７２５－７３４，１９９３．に記載されるように、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローン化して、免疫化を伴わずに幅広い非自己抗原及び自己抗原に抗体の単一源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８，１９９２に記載されるように、幹細胞からの再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度に可変的なＨＶＲ３領域をコードし、インビトロでの再編成を達成することによってナイーブライブラリを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリを説明している特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【0235】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片とみなされる。
【0236】
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、トリプターゼの２つの異なるエピトープに結合し得る。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、トリプターゼに対するものであり、他方は、任意の他の抗原（例えば、第２の生物学的分子）に対するものである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、トリプターゼの２つの異なるエピトープに結合することができる。他の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）に対するものであり、他方は、任意の他の抗原（例えば、第２の生物学的分子、例えば、ＩＬ－１３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１７、ＩＬ－３３、ＩｇＥ、Ｍ１プライム、ＣＲＴＨ２、またはＴＲＰＡ）に対するものである。したがって、二重特異性抗体は、トリプターゼ及びＩＬ－１３、トリプターゼ及びＩＬ－４、トリプターゼ及びＩＬ－５、トリプターゼ及びＩＬ－１７、またはトリプターゼ及びＩＬ－３３に対する結合特異性を有し得る。特に、二重特異性抗体は、トリプターゼ及びＩＬ－１３またはトリプターゼ及びＩＬ－３３に対する結合特異性を有し得る。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、トリプターゼの２つの異なるエピトープに結合し得る。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、トリプターゼに対するものであり、他方は、任意の他の抗原（例えば、第２の生物学的分子）に対するものである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、トリプターゼの２つの異なるエピトープに結合することができる。他の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、トリプターゼ（例えば、ヒトトリプターゼ、例えば、ヒトトリプターゼベータ）に対するものであり、他方は、任意の他の抗原（例えば、第２の生物学的分子、例えば、ＩＬ－１３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１７、ＩＬ－３３、ＩｇＥ、Ｍ１プライム、ＣＲＴＨ２、またはＴＲＰＡ）に対するものである。したがって、二重特異性抗体は、トリプターゼ及びＩＬ－１３、トリプターゼ及びＩＬ－４、トリプターゼ及びＩＬ－５、トリプターゼ及びＩＬ－１７、またはトリプターゼ及びＩＬ－３３に対する結合特異性を有し得る。特に、二重特異性抗体は、トリプターゼ及びＩＬ－１３またはトリプターゼ及びＩＬ－３３に対する結合特異性を有し得る。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。
【0237】
例えば、いくつかの例では、二重特異性抗体は、トリプターゼと結合する第１の結合ドメインと、ＩＬ－１３と結合する第２の結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、トリプターゼと結合する第１の結合ドメインは、例えば、（ａ）Ｘ１がＡｓｐまたはＳｅｒであり、Ｘ２がＴｙｒまたはＰｈｅであり、Ｘ３がＶａｌまたはＨｉｓである、Ｘ１Ｘ２ＧＭＸ３（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）Ｘ１がＡｓｎまたはＡｓｐであり、Ｘ２がＴｙｒまたはＡｓｎであり、Ｘ３がＡｓｐまたはＴｙｒである、ＲＸ１Ｘ２Ｘ３ＤＷＹＦＤＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つの超可変領域（ＨＶＲ）、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ、ならびに配列番号１～６のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上のバリアントを含み得る。いくつかの例では、ＩＬ－１３と結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号８６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つのＨＶＲ、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ、ならびに配列番号８４～８９のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上のバリアントを含み得る。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、抗ＩＬ－１３レブリキズマブの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【0238】
例えば、いくつかの例では、トリプターゼと結合する第１の結合ドメインは、ｈｕ３１ａ．ｖ１１などの、（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。いくつかの例では、ＩＬ－１３と結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号８６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含み得る。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、抗ＩＬ－１３レブリキズマブの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ｈｕ３１ａ．ｖ１１のＶＨ及び／またはＶＬのアミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインは、抗ＩＬ－１３抗体レブリキズマブのＶＨ及び／またはＶＬのアミノ酸配列を含む。
【0239】
前述の二重特異性抗トリプターゼ／抗ＩＬ－１３抗体のうちのいずれかは、（ａ）配列番号９と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１０と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含むトリプターゼと結合する第１の結合ドメインを含み得る。前述の二重特異性抗トリプターゼ／抗ＩＬ－１３抗体のうちのいずれかは、（ａ）配列番号９０または配列番号１１４と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号９１または配列番号１１５と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含むＩＬ－１３と結合する第２の結合ドメインを含み得る。いくつかの例では、第２の結合ドメインは、レブリキズマブのＶＨ及び／またはＶＬドメインを含む。
【0240】
別の実施例では、いくつかの例では、二重特異性抗体は、トリプターゼと結合する第１の結合ドメイン、及びＩＬ－３３と結合する第２の結合ドメインを含む。ＩＬ－３３と結合する第２の結合ドメインは、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１６／０１６８２４２号に記載される抗ＩＬ－３３抗体のうちのいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、トリプターゼと結合する第１の結合ドメインは、例えば、（ａ）Ｘ１がＡｓｐまたはＳｅｒであり、Ｘ２がＴｙｒまたはＰｈｅであり、Ｘ３がＶａｌまたはＨｉｓである、Ｘ１Ｘ２ＧＭＸ３（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）Ｘ１がＡｓｎまたはＡｓｐであり、Ｘ２がＴｙｒまたはＡｓｎであり、Ｘ３がＡｓｐまたはＴｙｒである、ＲＸ１Ｘ２Ｘ３ＤＷＹＦＤＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つの超可変領域（ＨＶＲ）、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ、ならびに配列番号１～６のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上のバリアントを含み得る。いくつかの例では、ＩＬ－３３と結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号１２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号１２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号１２４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号１２５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つのＨＶＲ、または上記のＨＶＲのうちの１つ以上の組み合わせ、ならびに配列番号１２０～１２５のうちのいずれか１つと少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上のバリアントを含み得る。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、抗ＩＬ－３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【0241】
例えば、いくつかの例では、トリプターゼと結合する第１の結合ドメインは、ｈｕ３１ａ．ｖ１１などの、（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。いくつかの例では、ＩＬ－３３と結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号１２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号１２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号１２４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号１２５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含み得る。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、抗ＩＬ－３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ｈｕ３１ａ．ｖ１１のＶＨ及び／またはＶＬのアミノ酸配列を含み、第２の結合ドメインは、抗ＩＬ－３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８ＩのＶＨ及び／またはＶＬのアミノ酸配列を含む。
【0242】
前述の二重特異性抗トリプターゼ／抗ＩＬ－３３抗体のうちのいずれかは、（ａ）配列番号９と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１０と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含むトリプターゼと結合する第１の結合ドメインを含み得る。前述の二重特異性抗トリプターゼ／抗ＩＬ－３３抗体のうちのいずれかは、（ａ）配列番号１２６と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１２７と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）、もしくはその配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含むＩＬ－３３と結合する第２の結合ドメインを含み得る。いくつかの例では、第２の結合ドメインは、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８ＩのＶＨ及び／またはＶＬドメインを含む。
【0243】
多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７，１９８３、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯＪ．１０：３６５５，１９９１を参照されたい）、及び「ノブインホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、静電ステアリング効果を操作して抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１，１９８５を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３，１９９２を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８，１９９３を参照されたい）、及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８，１９９４を参照されたい）、ならびに三重特異性抗体を調製すること（例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０，１９９１に記載されているような）によって作製され得る。
【0244】
「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
【0245】
本明細書の抗体または断片には、トリプターゼならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【0246】
ノブイントゥホール（Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ）
多重特異性抗体を産生する方法としてのノブイントゥホールの使用は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、ＷＯ２００９／０８９００４、ＵＳ２００９／０１８２１２７、ＵＳ２０１１／０２８７００９、Ｍａｒｖｉｎ ａｎｄ Ｚｈｕ，Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９－６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．２６：１－９に記載される。簡潔な非限定的考察が、以下に提供される。
多重特異性抗体を産生する方法としてのノブイントゥホールの使用は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、ＷＯ２００９／０８９００４、ＵＳ２００９／０１８２１２７、ＵＳ２０１１／０２８７００９、Ｍａｒｖｉｎ ａｎｄ Ｚｈｕ，Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９－６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．２６：１－９に記載される。簡潔な非限定的考察が、以下に提供される。
【0247】
「隆起」は、ヘテロ多量体を安定化させ、それにより、例えば、ホモ多量体形成よりもヘテロ多量体形成を優先するように、第１のポリペプチドの界面から突出し、したがって隣接する界面（すなわち、第２のポリペプチドの界面）にある相補的空洞内に位置付けることが可能な、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。隆起は、元の界面内に存在してもよく、または、合成により（例えば、界面をコードする核酸を変化させることによって）導入してもよい。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドの界面をコードする核酸を、隆起をコードするように変化させる。これを達成するために、第１のポリペプチドの界面の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも大きい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードする核酸で置き換えられる。２つ以上の元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解されるだろう。様々なアミノ残基の側鎖体積は、例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９の表１または米国特許第７，６４２，２２８号の表１に示されている。
【0248】
いくつかの実施形態では、隆起の形成のための移入残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される天然に存在するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、移入残基は、トリプトファンまたはチロシンである。いくつかの実施形態では、隆起の形成のための原型残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン、またはバリンのように、小さな側鎖体積を有する。例えば、米国特許第７，６４２，２２８号を参照されたい。
【0249】
「空洞」は、第２のポリペプチドの界面から凹んでおり、したがって、隣接する第１のポリペプチドの界面上の対応する隆起を収容する少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。空洞は、元の界面内に存在してもよく、または、合成により（例えば、界面をコードする核酸を変化させることによって）導入してもよい。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸は、空洞をコードするように改変される。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置き換えられる。２つ以上の元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解されるだろう。いくつかの実施形態では、空洞の形成のための移入残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される天然のアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、移入残基は、セリン、アラニン、またはスレオニンである。いくつかの実施形態では、空洞の形成のための原型残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファンのように、大きな側鎖体積を有する。
【0250】
隆起は、空洞内で「位置付け可能」であり、これは、それぞれ、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの界面の隆起及び空洞の空間的位置、ならびに隆起及び空洞の大きさが、界面での第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの正常な会合を著しく乱すことなく隆起が空洞内に位置し得るようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐなどの隆起は、典型的には界面の軸から直角に伸びず、好ましい立体構造を有しないため、対応する空洞との隆起のアライメントは、一部の事例では、Ｘ線結晶学または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるものといった三次元構造に基づく隆起／空洞対のモデリングに依存し得る。これは、当該技術分野で広く許容されている技術を使用して達成することができる。
【0251】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。
【0252】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。
【0253】
７．抗体バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、阻害活性などの、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによるか、またはペプチド合成により調製され得る。そのような修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基からの欠失、及び／または残基への挿入、及び／または残基の置換が含まれる。最終構築物に到達するように、欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせることができるが、但し、その最終構築物が、所望の特徴、例えば、抗原結合性を有することを条件とする。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、阻害活性などの、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによるか、またはペプチド合成により調製され得る。そのような修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基からの欠失、及び／または残基への挿入、及び／または残基の置換が含まれる。最終構築物に到達するように、欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせることができるが、但し、その最終構築物が、所望の特徴、例えば、抗原結合性を有することを条件とする。
【0254】
ａ）置換、挿入、及び欠失バリアント
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントを提供する。置換変異誘発のために対象となる部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される通りである。アミノ酸置換が対象となる抗体に導入され、生成物が所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低減、またはＡＤＣＣまたはＣＤＣの改善についてスクリーニングされ得る。
表１
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントを提供する。置換変異誘発のために対象となる部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される通りである。アミノ酸置換が対象となる抗体に導入され、生成物が所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低減、またはＡＤＣＣまたはＣＤＣの改善についてスクリーニングされ得る。
表１
【0255】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【0256】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【0257】
ある種類の置換型バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる試験のために選択される結果として生じるバリアント（複数可）は、親抗体と比較してある特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修正（例えば、改善）を有し、及び／または実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有する。例示的な置換型バリアントは、例えば、本明細書に記載の技術などのファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して簡便に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基が変異し、バリアント抗体がファージにディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【0258】
改変（例えば、置換）は、ＨＶＲにおいて、例えば、抗体親和性を改善するために行われ得る。そのような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、即ち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６，２００８を参照されたい）、及び／または抗原と接触する残基で行われ得、結果として得られたバリアントＶＨまたはＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、それから再選択することによる親和性成熟が、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリが創出される。次いで、ライブラリがスクリーニングされ、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを特定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６つの残基）が無作為化されるＨＶＲ指向手法を伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。ＨＶＲ－Ｈ３及びＨＶＲ－Ｌ３が特に標的とされることが多い。
【0259】
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、そのような改変が抗体の抗原に結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（例えば、本明細書に提供されるような保存的置換）がＨＶＲ内で行われ得る。そのような改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であり得る。上に提供されるバリアントＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されていないか、または１つ、２つ、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を有するかのいずれかである。
【0260】
変異誘発のために標的とされ得る抗体の残基または領域の特定に有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５，１９８９によって説明されている「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕなどの荷電残基）のうちのある残基または残基群を特定し、それを中性または負荷電アミノ酸（例えば、Ａｌａまたはポリアラニン）によって置き換えて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを判定する。さらなる置換は、最初の置換に対する機能感受性を示すアミノ酸位置に導入され得る。あるいは、または加えて、抗原－抗体錯体の結晶構造は、抗体と抗原との間の接触点を特定する。そのような接触残基及び隣接する残基が置換の候補として標的とされてもよく、または排除されてもよい。バリアントは、スクリーニングされて、それらが所望の特性を有するかどうかが決定され得る。
【0261】
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、及び単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子の他の挿入バリアントには、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端もしくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増加させる。
【0262】
ｂ）グリコシル化バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成され得る。
【0263】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２，１９９７を参照されたい。オリゴ糖類には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ある特定の改善された特性によって抗体バリアントを作製するために、本発明の抗体中にオリゴ糖の修飾が行われ得る。
【0264】
一実施形態では、Ｆｃ領域に結合した（直接的にまたは間接的に）フコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、そのような抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、または２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６で説明されているＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、錯体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体内のわずかな配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち２９４～３００位の間に位置してもよい。そのようなフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号及び同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、
ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９，２００４、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４，２００４が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５，１９８６、ＵＳ２００３／０１５７１０８、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（特に実施例１１））、ならびにアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４，２００４、Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０－６８８，２００６、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９，２００４、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４，２００４が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５，１９８６、ＵＳ２００３／０１５７１０８、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（特に実施例１１））、ならびにアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４，２００４、Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０－６８８，２００６、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【0265】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分される、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供される。そのような抗体変異体は、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８、米国特許第６，６０２，６８４号、及びＵＳ２００５／０１２３５４６に記載されている。Ｆｃ領域に付着しているオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を含む抗体バリアントも提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７、ＷＯ１９９８／５８９６４、及びＷＯ１９９９／２２７６４に記載されている。
【0266】
ｃ）Ｆｃ領域バリアント
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
【0267】
ある特定の実施形態では、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を所有し、それにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、さらに特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要であるか、または有害である用途に対して望ましい候補となる、抗体バリアントを企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故にＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２，１９９１のページ４６４の表３に要約されている。対象となる分子のＡＤＣＣ活性を評定するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３，１９８６及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２，１９８５、米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１，１９８７を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、対象となる分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６，１９９８に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができないためにＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評定するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３，１９９６、Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２，２００３、及びＣｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３，２００４を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期決定も、当該技術分野で既知の方法を使用して行われ得る（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９，２００６を参照されたい）。
【0268】
低下したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体としては、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７位のうちの２つ以上での置換を有するＦｃ変異体、例えば、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体が挙げられる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【0269】
ＦｃＲへの結合が改善または低減されたある特定の抗体バリアントが記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４，２００１を参照されたい）。
【0270】
ある特定の実施形態において、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【0271】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４，２０００に記載されるように、改変された（すなわち、改善されたか、または低減されたかのいずれか）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）をもたらすＦｃ領域で改変が行われる。
【0272】
母体ＩｇＧの胎児への移入に関与する、半減期が増加し、かつ新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７，１９７６及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９，１９９４）は、ＵＳ２００５／００１４９３４に記載される。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃバリアントは、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【0273】
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０，１９８８、米国特許第５，６４８，２６０号及び同第５，６２４，８２１号、ならびにＷＯ９４／２９３５１もまた参照されたい。
【0274】
ｄ）システイン操作された抗体バリアント
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「チオＭＡｂ」を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基が抗体のアクセス可能な部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を他の部分（薬物部分またはリンカー－薬物部分など）に複合体化して、本明細書にさらに記載される免疫複合体を作製することができる。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちの任意の１つ以上を、システインで置換することができる：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号で説明されているように生成し得る。
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「チオＭＡｂ」を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基が抗体のアクセス可能な部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を他の部分（薬物部分またはリンカー－薬物部分など）に複合体化して、本明細書にさらに記載される免疫複合体を作製することができる。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちの任意の１つ以上を、システインで置換することができる：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号で説明されているように生成し得る。
【0275】
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、いずれの分子量のものであってもよく、分岐状であっても非分岐状であってもよい。抗体に結合するポリマーの数は異なり得、２つ以上のポリマーが結合する場合、それらは同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／またはタイプは、改善されるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下にてある療法で使用されるか等を含むが、これらに限定されない考慮すべき事項に基づいて決定され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、いずれの分子量のものであってもよく、分岐状であっても非分岐状であってもよい。抗体に結合するポリマーの数は異なり得、２つ以上のポリマーが結合する場合、それらは同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／またはタイプは、改善されるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下にてある療法で使用されるか等を含むが、これらに限定されない考慮すべき事項に基づいて決定され得る。
【0276】
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体及び非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００－１１６０５，２００５）。放射線は、いずれの波長のものであってもよく、通常の細胞を傷つけないが、抗体－非タンパク質性部分に近接する細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
【0277】
Ｂ．組み換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え方法及び組成物を使用して産生されてもよい。一実施形態では、本明細書に記載される抗トリプターゼ抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる一実施形態において、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる一実施形態において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、２９３細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗トリプターゼ抗体を作製する方法であって、上述のような、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む、方法が提供される。
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え方法及び組成物を使用して産生されてもよい。一実施形態では、本明細書に記載される抗トリプターゼ抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる一実施形態において、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる一実施形態において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、２９３細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗トリプターゼ抗体を作製する方法であって、上述のような、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む、方法が提供される。
【0278】
抗トリプターゼ抗体の組み換え産生について、例えば、上記の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞でのさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクターに挿入される。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【0279】
抗体をコードするベクターのクローン化または発現に好適な宿主細胞は、本明細書に記載される原核生物細胞または真核生物細胞を含む。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌中で産生され得る。細菌中での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４（Ｅ．ｃｏｌｉ中の抗体断片の発現を説明）を参照されたい。発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。
【0280】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗体をコードするベクターにとって好適なクローニングまたは発現宿主であり、そのグリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４，２００４及びＬｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５，２００６を参照されたい。
【0281】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために昆虫細胞と組み合わせて使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【0282】
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載）を参照されたい。
【0283】
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳動物細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９，１９７７に記載される２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１，１９８０に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８，１９８２に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６，１９８０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８，２００３を参照されたい。
【0284】
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗トリプターゼ抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され得るか、スクリーニングされ得るか、または特徴付けられ得る。
本明細書に提供される抗トリプターゼ抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され得るか、スクリーニングされ得るか、または特徴付けられ得る。
【0285】
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）などの既知の方法によって、その抗原結合活性に関して試験される。
一態様では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）などの既知の方法によって、その抗原結合活性に関して試験される。
【0286】
別の態様では、競合アッセイを用いて、トリプターゼへの結合について本発明の抗トリプターゼ抗体と競合する抗体が特定され得る。ある特定の実施形態では、そのような競合抗体は、本発明の抗トリプターゼ抗体によって結合されるものと同じエピトープ（例えば、線形または立体配座エピトープ）に結合する。ある特定の実施形態では、そのような競合抗体は、本発明の抗トリプターゼ抗体によって結合される重複エピトープ（例えば、線形または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），１９９６に提供されている。
【0287】
例示的な競合アッセイでは、固定化されたトリプターゼが、トリプターゼと結合する第１の標識抗体と、トリプターゼへの結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体とを含む溶液中で、インキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化されたトリプターゼを、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体のトリプターゼへの結合を許容する条件下でのインキュベーションの後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化されたトリプターゼに関連する標識の量を測定する。固定化されたトリプターゼに関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がトリプターゼへの結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ），１９８８を参照されたい。
【0288】
別の実施形態では、同じエピトープへの結合についての２つの抗体の競合は、エピトープビニングによって判定される。例えば、標識抗原は、固形表面で固定され、第１の抗体の飽和量と反応する。次いで、第２の競合抗体が添加される。例えば、ＯＣＴＥＴ（登録商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）また他のバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）技術によって検出される、第２の抗体による任意のさらなる結合は、２つの抗体が、異なる、非重複エピトープに結合することを示す。さらなる結合は、２つの抗体が、同じまたは重複エピトープに結合することを示さない。ＥＬＩＳＡ、サイズ排除クロマトグラフィー、結晶解析、ＨＤＸ－ＭＳ、変異誘発、及び他のＳＰＲ方法を含む、いくつかの他の方法はまた、２つの抗体が、同じまたは重複エピトープに結合することを示すために用いられ得る。抗体が、本発明の抗体をクロスブロックするか、またはそれによってクロスブロックされるかどうかを判定するために、同様の技術が使用され得る。
【0289】
２．活性アッセイ
一態様において、生物学的活性を有するその抗トリプターゼ抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性は、例えば、トリプターゼ（例えば、血流中または気道中トリプターゼ）またはそのペプチド断片と、インビボ、インビトロ、またはエキソビボのいずれかで結合することを含み得る。他の実施形態では、生物学的活性は、トリプターゼをブロックまたは中和することを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、生物学的活性は、トリプターゼタンパク質分解活性をブロックまたは中和することを含み得る。そのような生物学的活性をインビボ及び／またはインビトロで有する抗体も提供される。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、そのような生物学的活性について試験される。
一態様において、生物学的活性を有するその抗トリプターゼ抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性は、例えば、トリプターゼ（例えば、血流中または気道中トリプターゼ）またはそのペプチド断片と、インビボ、インビトロ、またはエキソビボのいずれかで結合することを含み得る。他の実施形態では、生物学的活性は、トリプターゼをブロックまたは中和することを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、生物学的活性は、トリプターゼタンパク質分解活性をブロックまたは中和することを含み得る。そのような生物学的活性をインビボ及び／またはインビトロで有する抗体も提供される。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、そのような生物学的活性について試験される。
【0290】
例えば、いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、例えば、実施例（例えば、実施例１、特に節（Ａ）（ｖｉｉｉ）（ａ））に記載されるように、例えば、ペプチド基質（例えば、合成ペプチドＳ－２２８８）を使用するトリプターゼ酵素アッセイで、または当該技術分野で既知の方法（例えば、Ｆｕｋｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：３１６５－３１７２，２００６を参照されたい）を用いて、トリプターゼ活性の阻害に関して試験される。いくつかの実施形態では、トリプターゼ酵素アッセイにおけるトリプターゼ活性の阻害は、ｐＨ（例えば、約ｐＨ７、例えば、約ｐＨ７、約ｐＨ７．４、または約ｐＨ８）またはそのほぼ中性ｐＨで行われる。他の実施形態では、トリプターゼ酵素アッセイにおけるトリプターゼ活性の阻害は、酸性ｐＨ（例えば、約ｐＨ６．０、例えば、約ｐＨ４．０、約ｐＨ５．０、約ｐＨ６．０、または約ｐＨ６．５）で行われる。
【0291】
他の実施形態では、本発明の抗体は、四量体の構造（マスト細胞分泌顆粒中に存在するか、またはそこから放出される成熟トリプターゼなど）を有するトリプターゼを分裂し、単量体を形成する能力に関して試験され、それはゲル濾過クロマトグラフィー（例えば、ＳＵＰＥＲＯＳＥ（登録商標）１２ゲル濾過クロマトグラフィー）を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して判定され得る。例えば、Ｆｕｋｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：３１６５－３１７２，２００６を参照されたい。
【0292】
さらに他の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、実施例１に記載されるように、ヒト初期気道平滑筋細胞のトリプターゼ刺激増殖及び／または収縮を阻害する能力に関して試験される。
【0293】
さらに他の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、トリプターゼ及び／またはＩｇＥによって刺激されるマスト細胞脱顆粒及び／またはヒスタミン放出を阻害する能力に関して試験される。そのようなアッセイは、例えば、実施例１に記載される。
【0294】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、例えば、対象への抗体の投与（例えば、静脈内または皮下注射によって）後に対象から得られた試料（例えば、気管支肺胞洗浄液）中で、例えば、活性トリプターゼアッセイ（例えば、図１５及び実施例６を参照されたい）において、活性トリプターゼを阻害する能力に関して試験される。
【0295】
またさらなる実施形態では、本発明の抗体は、例えば、対象への抗体の投与（例えば、静脈内または皮下注射によって）後に対象から得られた試料（例えば、気管支肺胞洗浄液）中で、例えば、全トリプターゼアッセイ（例えば、図１５及び実施例６を参照されたい）において、全トリプターゼレベルを調節（例えば、増加または減少）する能力に関して試験される。
【0296】
Ｄ．免疫複合体
本発明はまた、化学療法剤もしくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体等の１つ以上の細胞傷害性薬剤と複合された本明細書における抗トリプターゼ抗体を含む、免疫複合体を提供する。
本発明はまた、化学療法剤もしくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体等の１つ以上の細胞傷害性薬剤と複合された本明細書における抗トリプターゼ抗体を含む、免疫複合体を提供する。
【0297】
一実施形態では、免疫複合体は、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ０４２５２３５Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などのオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号、同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６－３３４２，１９９３、及びＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５－２９２８，１９９８を参照されたい）；ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７－５２３，２００６；Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８－３６２，２００６；Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７－７２１，２００５；Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９－８３４，２０００；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９－１５３２，２００２；Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６－４３４３，２００２；及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル（ｌａｒｏｔａｘｅｌ）、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）、及びオルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ）などのタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５を含むがこれらに限定されない１つ以上の薬物に抗体が複合体化されている抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）である。
【0298】
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むがこれらに限定されない酵素活性毒素またはその断片に複合体化された、本明細書に記載される抗体を含む。
【0299】
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に複合体化されて放射性複合体を形成する、本明細書に記載される抗体を含む。放射性複合体の産生には、様々な放射性同位体が利用可能である。例は、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体を含む。放射性複合体を検出に使用する場合、それは、シンチグラフ研究のための放射性原子、例えば、テクネチウム－９９ｍ（ｔｃ９９ｍ）もしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）撮像（磁気共鳴撮像ｍｒｉとしても知られる）のためのスピン標識、例えば、ここでもヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄を含み得る。
【0300】
抗体及び細胞傷害性剤の複合体は、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）などの多様な二官能性タンパク質結合剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８，１９８７に記載されるように調製され得る。炭素－１４で標識された１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲート化のための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内において細胞毒性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（例えば、Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７－１３１，１９９２、米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい）が使用され得る。
【0301】
本明細書の免疫複合体またはＡＤＣは、市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（サクシニミジル－（４－ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬で調製されるそのような複合体を明示的に企図するが、これらに限定されない。
【0302】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、生体試料中のトリプターゼの存在の検出に有用である。「検出すること」という用語は、本明細書で使用されるとき、定量または定性検出を包含する。ある特定の実施形態では、生体試料は、これらに限定されないが、マスト細胞、好塩基球、上皮細胞、または肺組織（例えば、気管支平滑筋）を含む細胞または組織を含む。ある特定の実施形態では、生体試料は、血液（例えば、全血、血清、または血漿）、痰、気管支肺胞洗浄、または鼻吸収試料を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかは、生体試料中のトリプターゼの存在の検出に有用である。「検出すること」という用語は、本明細書で使用されるとき、定量または定性検出を包含する。ある特定の実施形態では、生体試料は、これらに限定されないが、マスト細胞、好塩基球、上皮細胞、または肺組織（例えば、気管支平滑筋）を含む細胞または組織を含む。ある特定の実施形態では、生体試料は、血液（例えば、全血、血清、または血漿）、痰、気管支肺胞洗浄、または鼻吸収試料を含む。
【0303】
一実施形態では、診断または検出方法において使用するための抗トリプターゼ抗体が提供される。さらなる態様では、生体試料中のトリプターゼの存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、抗トリプターゼ抗体のトリプターゼへの結合を許容する条件下で生体試料を本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体と接触させることと、錯体が抗トリプターゼ抗体とトリプターゼとの間に形成されるかを検出することと、を含む。そのような方法は、インビトロまたはインビボ方法であり得る。一実施形態では、例えば、トリプターゼが患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗トリプターゼ抗体が、抗トリプターゼ抗体での治療に適格な対象を選択するために使用される。
【0304】
本発明の抗体を使用して診断され得る例示的な障害としては、肺障害（例えば、喘息（例えば、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息）、気道過反応性、またはＣＯＰＤ）、自己免疫不全（例えば、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、ＩＢＤ、及びクローン病）、炎症性障害（例えば、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎）、線維性障害（例えば、ＩＰＦ）、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮などの増加された数もしくは分布に関連する障害、ならびにトリプターゼ関連障害もしくはトリプターゼ媒介障害が挙げられる。
【0305】
例えば、いくつかの例では、本発明の抗体は、例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍ．２６：４５１－４６３，２００６）に記載されるように、アナフィラキシー（例えば、急性全身性アナフィラキシー）または肥満細胞症（例えば、非急性全身性肥満細胞症）を診断または検出するために使用され得る。本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡにおいて、全トリプターゼ、プロトリプターゼ、及び／または成熟トリプターゼのレベルを検出するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＥＬＩＳＡにおいて捕捉抗体として使用され得る。他の実施形態では、本発明の抗体は、ＥＬＩＳＡにおいて検出抗体として使用され得る。特定の実施形態では、血清または血漿中の全トリプターゼの正常参照レベルは、約１～１５ｎｇ／ｍＬ（例えば、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ）であり得る。いくつかの例では、全トリプターゼの正常参照レベルに対する増加は、トリプターゼ関連障害の診断指標として使用される。いくつかの実施形態では、血清または血漿中の成熟トリプターゼの正常参照レベルは、＜１ｎｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、成熟トリプターゼの正常参照レベルに対する増加は、トリプターゼ関連障害の診断指標として使用される。
【0306】
ある特定の実施形態では、標識された抗トリプターゼ抗体が提供される。標識としては、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、電子密度の高い標識、化学発光標識、及び放射性標識等）、ならびに間接的に、例えば、酵素反応または分子相互作用により検出される酵素またはリガンド等の部分が挙げられるが、これらに限定されない。例となる標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体等のフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。
【0307】
Ｆ．薬学的製剤
本発明の抗トリプターゼ抗体の薬学的製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望される度合いの純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．，１９８０を参照されたい）と混合することによって調製することができる。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量及び濃度ではレシピエントに非毒性であり、それらとしては、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
本発明の抗トリプターゼ抗体の薬学的製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望される度合いの純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．，１９８０を参照されたい）と混合することによって調製することができる。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量及び濃度ではレシピエントに非毒性であり、それらとしては、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【0308】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものを含み、後者の製剤はヒスチジン－酢酸緩衝液を含む。
【0309】
本明細書における製剤はまた、治療されている特定の適応症に必要とされる２つ以上の活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含んでもよい。例えば、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）軸結合アンタゴニスト、インターロイキン－５（ＩＬ－５）軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１プライムアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤もしくは喘息症状コントローラー薬剤、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはホスホジエステラーゼ阻害剤をさらに提供することが望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体、例えば、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの例では、Ｍ１プライムアンタゴニストは、キリズマブである。いくつかの例では、ＩｇＥアンタゴニストは、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））である。そのような活性成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
【0310】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、もしくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル内、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロ乳濁液、ナノ粒子、及びナノカプセル）内、またはマクロ乳濁液中にも取り込まれ得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．，１９８０に開示されている。
【0311】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【0312】
インビボ投与に使用される製剤は一般に、滅菌される。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に達成することができる。
【0313】
本発明は、抗酸化剤を含む薬学的組成物を提供する。そのような組成物は、本明細書に記載の抗体（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１などの抗トリプターゼ抗体）の酸化を低減するために使用され得る。いくつかの例では、抗酸化剤は、トリプトファン残基、例えば、可変領域のＨＶＲ領域またはＦＲ領域のトリプトファン残基の酸化を低減するために含まれる。特定の例では、抗酸化剤は、抗トリプターゼ抗体、例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１中のＷ１００のＨＶＲ－Ｈ３残基の酸化を低減するために含まれる。いくつかの例では、抗酸化剤は、メチオニン残基、例えば、Ｆｃ残基Ｍ２５１、Ｍ３５７、及び／またはＭ４２７（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の）などの抗体（例えば、抗トリプターゼ抗体）のＦｃ領域のメチオニン残基の酸化を低減するために組成物中に含まれる。
【0314】
いくつかの例では、薬学的組成物は、本明細書に記載の抗体のうちのいずれか及び抗酸化剤を含む。いくつかの例では、抗体は、酸化感受性（例えば、１つ以上の（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個）のトリプトファンまたはメチオニン残基で）である。任意の好適な抗酸化剤が使用され得る。例えば、いくつかの例では、組成物は、Ｎ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンまたはＮ－アセチルＤ－トリプトファン）、トリプトファン、メチオニン（例えば、Ｌ－メチオニン）、システイン、グルタチオン、チオソルビトール、アスコルビン酸、モノチオグリセロール、シクロデキストリン、トロロックス、ピリドキシン、ポリオール（例えば、マンニトール）、スクロース、金属キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、及びそれらの組み合わせ（例えば、Ｎ－アセチルトリプトファン及びメチオニンの組み合わせ）からなる群から選択される１つ以上の抗酸化剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つの抗酸化剤）を含む。いくつかの例では、抗酸化剤は、Ｎ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンまたはＮ－アセチルＤ－トリプトファン）である。他の例では、抗酸化剤は、メチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン）である。特定の例では、組成物は、Ｎ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンまたはＮ－アセチルＤ－トリプトファン）及びメチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン）を含む。いくつかの例では、Ｎ－アセチルトリプトファンは、抗体中のトリプトファンの酸化を低減するまたは妨げる。いくつかの例では、メチオニンは、抗体中のメチオニンの酸化を低減するまたは妨げる。
【0315】
薬学的組成物は、酸化を低減または排除するために任意の好適な濃度の抗酸化剤を含み得る。例えば、ポリオール（例えば、マンニトール）またはスクロースの濃度は、約１％（ｗ／ｖ）～約２５％（ｗ／ｖ）、例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、または約２５％（ｗ／ｖ）であり得る。特定の例では、ポリオール（例えば、マンニトール）またはスクロースの濃度は、約１５％（ｗ／ｖ）であり得る。別の実施例では、金属キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）の濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、約０．１％、約０．１５％、約０．２％、約０．２５％、約０．３％、約０．４％、約０．４５％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、または約１％（ｗ／ｖ）であり得る。特定の例では、金属キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）の濃度は、約０．４％（ｗ／ｖ）であり得る。さらに別の実施例では、メチオニン及び／またはトリプトファンの濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ、例えば、約０．１ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍｌであり得る。いくつかの例では、メチオニン及び／またはトリプトファンの濃度は、約２ｍｇ／ｍｌである。
【0316】
例えば、いくつかの例では、本発明は、
（ｉ）ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、単離された抗体、またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）Ｎ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンまたはＮ－アセチルＤ－トリプトファン）と、（ｉｉｉ）メチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン）と、を含む薬学的組成物を提供する。
（ｉ）ヒトトリプターゼと結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）ＤＹＧＭＶ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＦＩＳＳＧＳＳＴＶＹＹＡＤＴＭＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＤＤＷＹＦＤＶ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）ＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＲＴＳＤＬＡＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＹＨＳＹＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、単離された抗体、またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）Ｎ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンまたはＮ－アセチルＤ－トリプトファン）と、（ｉｉｉ）メチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン）と、を含む薬学的組成物を提供する。
【0317】
任意の好適な濃度のＮ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンまたはＮ－アセチルＤ－トリプトファン）は、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかにおいて使用され得る。いくつかの例では、Ｎ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンまたはＮ－アセチルＤ－トリプトファン）の濃度は、約０．０５ｍＭ～約２０ｍＭ（例えば、約０．０５ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１９ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１８ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１７ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１６ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１５ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１４ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１２ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１１ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約９ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約７ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約６ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約５ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約４ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約３ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約２ｍＭ、約０．０５ｍＭ～約１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約０．９ｍＭ、約０．１～約０．８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約０．７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約０．６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約０．５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約０．４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約０．３ｍＭ、約０．２ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１９ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１８ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１７ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１６ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１５ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１４ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１２ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１１ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．２ｍＭ～約９ｍＭ、約０．２ｍＭ～約８ｍＭ、約０．２ｍＭ～約７ｍＭ、約０．２ｍＭ～約６ｍＭ、約０．２ｍＭ～約５ｍＭ、約０．２ｍＭ～約４ｍＭ、約０．２ｍＭ～約３ｍＭ、約０．２ｍＭ～約２ｍＭ、約０．２ｍＭ～約１ｍＭ、約０．２ｍＭ～約０．９ｍＭ、約０．２～約０．８ｍＭ、約０．２ｍＭ～約０．７ｍＭ、約０．２ｍＭ～約０．６ｍＭ、約０．２ｍＭ～約０．５ｍＭ、約０．２ｍＭ～約０．４ｍＭ、約０．２ｍＭ～約０．３ｍＭ、約０．３ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１９ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１８ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１７ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１６ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１５ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１４ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１２ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１１ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．３ｍＭ～約９ｍＭ、約０．３ｍＭ～約８ｍＭ、約０．３ｍＭ～約７ｍＭ、約０．３ｍＭ～約６ｍＭ、約０．３ｍＭ～約５ｍＭ、約０．３ｍＭ～約４ｍＭ、約０．３ｍＭ～約３ｍＭ、約０．３ｍＭ～約２ｍＭ、約０．３ｍＭ～約１ｍＭ、約０．３ｍＭ～約０．９ｍＭ、約０．３～約０．８ｍＭ、約０．３ｍＭ～約０．７ｍＭ、約０．３ｍＭ～約０．６ｍＭ、約０．３ｍＭ～約０．５ｍＭ、または約０．３ｍＭ～約０．４ｍＭ）である。いくつかの例では、Ｎ－アセチルトリプトファンは、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ（例えば、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、または約１ｍＭ）の濃度である。特定の例では、Ｎ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンまたはＮ－アセチルＤ－トリプトファン）の濃度は、約０．３ｍＭである。特定の例では、Ｎ－アセチルトリプトファンは、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファンである。
【0318】
任意の好適な濃度のメチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン）は、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかにおいて使用され得る。例えば、いくつかの例では、メチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン）の濃度は、約０．１ｍＭ～約３０ｍＭ（例えば、約０．１ｍＭ～約３０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１１ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約９ｍＭ、約０．１ｍＭ～約８ｍＭ、約０．１ｍＭ～約７ｍＭ、約０．１ｍＭ～約６ｍＭ、約０．１ｍＭ～約５ｍＭ、約０．１ｍＭ～約４ｍＭ、約０．１ｍＭ～約３ｍＭ、約０．１ｍＭ～約２ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約１ｍＭ～約１９ｍＭ、約１ｍＭ～約１８ｍＭ、約１ｍＭ～約１７ｍＭ、約１ｍＭ～約１６ｍＭ、約１ｍＭ～約１５ｍＭ、約１ｍＭ～約１４ｍＭ、約１ｍＭ～約１３ｍＭ、約１ｍＭ～約１３ｍＭ、約１ｍＭ～約１２ｍＭ、約１ｍＭ～約１１ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約９ｍＭ、約１ｍＭ～約８ｍＭ、約１ｍＭ～約７ｍＭ、約１ｍＭ～約６ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約１ｍＭ～約４ｍＭ、約１ｍＭ～約３ｍＭ、約１ｍＭ～約２ｍＭ、約２ｍＭ～約２０ｍＭ、約２ｍＭ～約１９ｍＭ、約２ｍＭ～約１８ｍＭ、約２ｍＭ～約１７ｍＭ、約２ｍＭ～約１６ｍＭ、約２ｍＭ～約１５ｍＭ、約２ｍＭ～約１４ｍＭ、約２ｍＭ～約１３ｍＭ、約２ｍＭ～約１３ｍＭ、約２ｍＭ～約１２ｍＭ、約２ｍＭ～約１１ｍＭ、約２ｍＭ～約１０ｍＭ、約２ｍＭ～約９ｍＭ、約２ｍＭ～約８ｍＭ、約２ｍＭ～約７ｍＭ、約２ｍＭ～約６ｍＭ、約２ｍＭ～約５ｍＭ、約２ｍＭ～約４ｍＭ、約２ｍＭ～約３ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約１９ｍＭ、約５ｍＭ～約１８ｍＭ、約５ｍＭ～約１７ｍＭ、約５ｍＭ～約１６ｍＭ、約５ｍＭ～約１５ｍＭ、約５ｍＭ～約１４ｍＭ、約５ｍＭ～約１３ｍＭ、約５ｍＭ～約１３ｍＭ、約５ｍＭ～約１２ｍＭ、約５ｍＭ～約１１ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭ、約５ｍＭ～約９ｍＭ、約５ｍＭ～約８ｍＭ、約５ｍＭ～約７ｍＭ、または約５ｍＭ～約６ｍＭ）である。いくつかの例では、メチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン）は、約１ｍＭ～約１０ｍＭ（例えば、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、または約１０ｍＭ）の濃度である。特定の例では、メチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン）の濃度は、約５ｍＭである。他の例では、メチオニンの濃度は、約１０ｍＭである。特定の例では、メチオニンは、Ｌ－メチオニンである。
【0319】
いくつかの例では、抗酸化剤（例えば、Ｎ－アセチルトリプトファン（例えば、Ｎ－アセチルＤＬ－トリプトファン）及び／またはメチオニン（例えば、Ｌ－メチオニンまたはＤ－メチオニン））の存在は、抗トリプターゼ抗体の酸化パーセントを、特定の残基（例えば、トリプトファン残基またはメチオニン残基、例えば、ＨＶＲ－Ｈ３残基（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＶＨドメインのＷ１００）中またはＦｃ残基（例えば、Ｆｃ残基Ｍ２５１、Ｍ３５７、及び／またはＭ４２７（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の））で、例えば、抗酸化剤の不在下での残基で酸化パーセントに対して、約１％、約２％、約５％、約６％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約２８％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上低減する。
【0320】
抗体が、酸化感受性であるＨＶＲ－Ｈ３（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１）中のＶＨドメインＷ１００残基を含む例において、いくつかの例では、ＨＶＲ－Ｈ３中のＶＨドメインＷ１００残基は、約３５％未満（例えば、３５％未満、３４％未満、３３％未満、３２％未満、３１％未満、３０％未満、２９％未満、２８％未満、２７％未満、２６％未満、２５％未満、２４％未満、２３％未満、２２％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、またはそれより少ない）の酸化パーセントを有する。例えば、いくつかの例では、ＨＶＲ－Ｈ３中のＷ１００残基は、約３５％未満の酸化パーセントを有する。他の例では、ＨＶＲ－Ｈ３中のＷ１００残基は、約２５％未満の酸化パーセントを有する。さらに他の例では、ＨＶＲ－Ｈ３中のＷ１００残基は、約１５％未満の酸化パーセントを有する。さらに他の例では、ＨＶＲ－Ｈ３中のＷ１００残基は、約１０％未満の酸化パーセントを有する。他の例では、ＨＶＲ－Ｈ３中のＷ１００残基は、約５％未満の酸化パーセントを有する。他の例では、ＨＶＲ－Ｈ３中のＷ１００残基は、約４％、約３％、約２％、または約１％未満の酸化パーセントを有する。
【0321】
例としては、抗体が酸化感受性であるＨＶＲ－Ｈ３中のＶＨドメインＷ１００残基を含む場合のいくつかの例において、いくつかの例では、ＨＶＲ－Ｈ３中のＶＨドメインＷ１００残基は、約１％～約５０％、約１％～約４５％、約１％～約４０％、約１％～約３５％、約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約１％～約５％、約１％～約４％、約１％～約３％、約１％～約２％、約５％～約５０％、約５％～約４５％、約５％～約５０％、約５％～約３５％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％、約５％～約１０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４５％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％、約１０％～約１５％、約１５％～約５０％、約１５％～約４５％、約１５％～約４０％、約１５％～約３５％、約１５％～約３０％、約１５％～約２５％、約１５％～約２０％、約２５％～約５０％、または約３０％～約５０％の酸化パーセントを有する。
【0322】
酸化パーセントは、例えば、抗体またはその薬学的組成物の初期生成から約１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月、１１ヵ月、１２ヵ月、１８ヵ月、２年、またはそれ以上以内に判定され得る。いくつかの例では、酸化パーセントは、抗体またはその薬学的組成物の初期生成から約９ヵ月、約１２ヵ月、約１８ヵ月、または２年以内に判定される。
【0323】
本発明の組成物中の抗体の濃度は、例えば、約１ｍｇ／ｍＬ～約３５０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１ｍｇ／ｍＬ～約３５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約３２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約２７５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約２２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約７５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約２５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約３５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約３２５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約２７５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約７５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約３５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約３２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２７５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約７５ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約３５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約３２５ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約２７５ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約２５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約２２５ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約３５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約３２５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約２７５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約２２５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬ～約１７５ｍｇ／ｍＬの範囲であり得る。いくつかの例では、抗体は、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、または約２００ｍｇ／ｍＬの濃度である。特定の例では、抗体の濃度は、約１５０ｍｇ／ｍＬである。
【0324】
本明細書に記載の組成物のうちのいずれかは、安定剤、緩衝剤、界面活性剤、及び張性剤からなる群から選択される１つ以上のさらなる賦形剤を含み得る。いくつかの例では、緩衝剤は、アルギニンコハク酸及び／またはヒスチジンコハク酸を含む。いくつかの例では、緩衝剤は、アルギニンコハク酸及びヒスチジンコハク酸を含む。
【0325】
任意の好適な濃度のアルギニンコハク酸が使用され得る。例えば、いくつかの例では、アルギニンコハク酸の濃度は、約１０ｍＭ～約５００ｍＭ（例えば、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約７５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１７５ｍＭ、約２００ｍＭ、約２２５ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２７５ｍＭ、約３００ｍＭ、約３２５ｍＭ、約３５０ｍＭ、約３７５ｍＭ、約４００ｍＭ、約４２５ｍＭ、約４５０ｍＭ、約４７５ｍＭ、または約５００ｍＭ）である。例えば、いくつかの例では、アルギニンコハク酸の濃度は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約１７５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、約２２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約２７５ｍＭ～約３００ｍＭ、約１００ｍＭ～約２５０ｍＭ、約１２５ｍＭ～約２５０ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約１７５ｍＭ～約２５０ｍＭ、約２００ｍＭ～約２５０ｍＭ、約１００ｍＭ～約２２５ｍＭ、約１２５ｍＭ～約２２５ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２２５ｍＭ、約１７５ｍＭ～約２２５ｍＭ、約２００ｍＭ～約２２５ｍＭ、約１００ｍＭ～約２００ｍＭ、約１２５ｍＭ～約２００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ、または約１７５ｍＭ～約２００ｍＭである。特定の例では、アルギニンコハク酸の濃度は、約２００ｍＭである。
【0326】
任意の好適な濃度のヒスチジンコハク酸が使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ヒスチジンコハク酸の濃度は、約１ｍＭ～約１００ｍＭ（例えば、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭ）である。特定の例では、ヒスチジンコハク酸の濃度は、約２０ｍＭである。
【0327】
本明細書に記載の組成物のうちのいずれかは、約４．０～約７．０（例えば、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、または約７．０）のｐＨを有し得る。いくつかの例では、ｐＨは、約４．５～約７．０（例えば、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、または約７．０）である。いくつかの例では、ｐＨは、約４．５～約６．５（例えば、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、または約６．５）である。いくつかの例では、ｐＨは、約５．０～約６．０（例えば、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、または約６．０）である。いくつかの例では、ｐＨは、約５．５である。
【0328】
任意の好適な界面活性剤は、本明細書に記載の組成物において使用され得る。いくつかの例では、界面活性剤は、ポロキサマー１８８またはポリソルベート２０である。任意の好適な濃度のポロキサマー１８８が使用され得る。例えば、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．００５％～約０．５％、約０．００５％～約０．０５％、または約０．０２％であり得る。いくつかの例では、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、または約０．１％である。特定の実施形態では、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０２％である。任意の好適な濃度のポリソルベート２０が使用され得る。例えば、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００５％～約０．５％、約０．００５％～約０．０５％、または約０．０２％であり得る。いくつかの例では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、または約０．１％である。
【0329】
特定の例では、組成物は、約１５０ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載の抗トリプターゼ抗体（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１）、約２００ｍＭのアルギニンコハク酸、約２０ｍＭのヒスチジンコハク酸、約０．３ｍＭのＮ－アセチルＤＬ－トリプトファン）、約５ｍＭのＬ－メチオニン、約０．０２％のポロキサマー１８８を含み、約５．８のｐＨを有する。
【0330】
本明細書に記載の組成物のいずれかは、任意の好適な経路による投与のために製剤化され得る。特定の例では、組成物は、皮下投与または静脈内投与のために製剤化される。いくつかの例では、組成物は、皮下投与のために製剤化される。
【0331】
Ｇ．治療方法及び組成物
本発明の抗トリプターゼ抗体または薬学的組成物のうちのいずれかが、治療方法に使用され得る。
本発明の抗トリプターゼ抗体または薬学的組成物のうちのいずれかが、治療方法に使用され得る。
【0332】
一態様では、医薬品として使用するための、抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物が提供される。さらなる態様では、障害の治療に使用するための、抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物が提供される。ある特定の実施形態では、治療方法に使用するための、抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物が提供され得る。ある特定の実施形態では、本発明は、有効量の抗トリプターゼ抗体を対象に投与することを含む、障害を有する対象を治療する方法に使用するための、抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤を対象に投与することをさらに含む。上記の実施形態のうちのいずれかによる「対象」は、好ましくはヒトである。
【0333】
さらなる態様では、本発明は、医薬品の製造または調製における抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物の使用を提供する。一実施形態では、医薬品は、障害の治療用である。さらなる実施形態では、薬剤は、障害を有する対象に有効量の薬剤を投与することを含む、障害を治療する方法において使用するためのものである。１つのそのような実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載のような、有効量の少なくとも１つの追加の治療薬を対象に投与することをさらに含む。上記の実施形態のうちのいずれかによる「対象」は、ヒトであり得る。
【0334】
さらなる態様では、本発明は、例えば、肺障害（例えば、喘息（例えば、Ｔｈ２高喘息またはＴｈ２低喘息）、気道過反応性、またはＣＯＰＤ）、自己免疫不全（例えば、リウマチ性関節炎、乾癬、好酸球性食道炎、ＩＢＤ、またはクローン病）、炎症性障害（例えば、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）、アナフィラキシー、アトピー性皮膚炎、またはアレルギー性鼻炎）、線維性障害（例えば、ＩＰＦ）、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮などの増加された数もしくは分布に関連する障害、ならびにトリプターゼ関連障害もしくはトリプターゼ媒介障害を含む、障害を治療するための方法を提供する。一実施形態では、方法は、有効量の抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物を障害を有する対象に投与することを含む。１つのそのような実施形態では、本方法は、以下に記載のような、有効量の少なくとも１つの追加の治療薬を対象に投与することをさらに含む。上記の実施形態のうちのいずれかによる「対象」は、ヒトであり得る。
【0335】
さらなる態様では、本発明は、例えば、上記の治療法のいずれかにおける使用のための、本明細書に提供される抗トリプターゼ抗体のいずれかを含む薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかと薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗トリプターゼ抗体のうちのいずれかと、例えば、以下に記載の少なくとも１つの追加の治療薬とを含む。上記の節Ｆに記載の薬学的製剤のうちのいずれか（例えば、Ｎ－アセチルトリプトファン及び／またはメチオニンなどの抗酸化剤を含むもの）は、本明細書に記載の使用または方法のうちのいずれかにおいて使用され得る。
【0336】
いくつかの実施形態では、障害は、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、リンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）または間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮など）の増加された数もしくは分布に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。
【0337】
いくつかの実施形態では、肺障害は、顆粒球性（好酸球性及び／または好中球）肺炎症、感染誘導性肺状態（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肺炎症、感染誘導性肺状態（ウイルス（例えば、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルス）、細菌、または真菌（例えば、アスペルギルス）と関連するものを含む）トリガーと関連する。いくつかの実施形態では、障害は、アレルゲン誘導性肺状態、毒性環境汚染物質肺状態（例えば、石綿肺症、珪肺症、またはベリリウム症）、胃吸引誘導性肺状態であるか、または、免疫調節異常もしくは嚢胞性線維症などの遺伝的素因による炎症状態と関連する。いくつかの実施形態では、障害は、身体的外傷誘導性肺状態（例えば、人工呼吸器傷害）、肺気腫、たばこ誘発性肺気腫、気管支炎、サルコイドーシス、組織球増加症、リンパ管筋腫症、急性肺傷害、急性呼吸促迫症候群、慢性肺疾患、気管支肺異形成症、肺炎（例えば、市中肺炎、院内肺炎、人工呼吸器関連性肺炎、ウイルス性肺炎、細菌性肺炎、及び重度の肺炎）、気道憎悪、及び急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む）である。いくつかの実施形態では、肺障害は、ＣＯＰＤである。
【0338】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、致命的であり得る悪化する症状（憎悪または突発）の急性事象を伴う持続性慢性重症喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アトピー性（アレルギーとしても既知である）喘息、非アレルギー性喘息（例えば、呼吸器ウイルス（例えば、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルス、及び呼吸器発疹ウイルス）、または吸入刺激物（大気汚染物質、煙霧、ディーゼル粒子、屋内もしくは屋外での揮発性化学薬品及びガス、またはさらには冷乾燥空気によって）による感染症によってしばしば誘発される）である。
【0339】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、喘息は、「煙」（典型的には紙巻きたばこ、葉巻、パイプ）、吸入もしくは「蒸気吸入」（たばこ、大麻、または他のそのような物質）への急性もしくは慢性の直接または間接曝露に起因する断続的もしくは運動誘発性の喘息、またはアスピリンもしくは関連するＮＳＡＩＤＳの最近の摂取によって誘発される喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、軽度またはコルチコステロイド未感作喘息であるか、新たに診断された未治療の喘息であるか、または症状（咳、喘鳴、息切れ／呼吸困難、または胸痛）を抑制するために以前は局所的または全身的な吸入ステロイドの慢性的使用を必要としなかった喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、慢性の、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、コルチコステロイドまたは他の慢性喘息コントローラー薬剤で制御されない喘息である。
【0340】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、喘息は、中等度～重度の喘息である。ある特定の実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、重度の喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息（例えば、感染症及び／または呼吸器発疹ウイルス（ＲＳＶ）に起因する）、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／憎悪性喘息、軽度喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未感作喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御されない喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、２型Ｔヘルパーリンパ球（Ｔｈ２）もしくは２型（Ｔｈ２）高Ｔヘルパーリンパ球、または２型（Ｔ２）駆動喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、好酸球喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アレルギー性喘息である。いくつかの実施形態では、個体は、好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）であると判定されている。ＷＯ２０１５／０６１４４１を参照されたい。いくつかの実施形態では、喘息は、ペリオスチン高喘息である（例えば、少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、または５０ｎｇ／ｍＬ血清のうちのいずれかのペリオスチンレベルを有する）。血清ペリオスチンレベルを判定する方法は、例えば、ＵＳ２０１２／０１５６１９４に提供される。いくつかの実施形態では、喘息は、好酸球高喘息である（例えば、少なくとも約１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００好酸球数／ｍｌ血液のうちのいずれか）。ある特定の実施形態では、喘息は、Ｔｈ２低喘息または非Ｔｈ２駆動喘息である。いくつかの実施形態では、個体は、好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）であると判定されている。ＷＯ２０１５／０６１４４１を参照されたい。いくつかの実施形態では、喘息は、ペリオスチン低喘息である（例えば、約２０ｎｇ／ｍＬ血清未満のペリオスチンレベルを有する）。いくつかの実施形態では、喘息は、好酸球低喘息である（例えば、約１５０好酸球数／μｌ血液未満または約１００好酸球数／μｌ血液未満）。ある特定の実施形態では、個体は、ＦｅＮＯ（呼気一酸化窒素）の高められたレベル及び／またはＩｇＥの高められたレベルを呈する。例えば、いくつかの例では、個体は、約２５０十億分率（ｐｐｂ）超、約２７５ｐｐｂ超、約３００ｐｐｂ超、約３２５ｐｐｂ超、約３２５ｐｐｂ超、または約３５０ｐｐｂ超のＦｅＮＯレベルを呈する。いくつかの例では、個体は、５０ＩＵ／ｍｌを超えるＩｇＥレベルを有する。いくつかの実施形態では、個体は、予期される４０％～８０％の１秒間努力呼気容量（ＦＥＶ１）を有する。
【0341】
方法のうちのいずれかの他の実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、または好酸球性障害は、肺線維症である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。
【0342】
方法のうちのいずれかのまたさらなる実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、またはリンパ球性障害は、食道炎（例えば、好酸球性食道炎）、アレルギー性鼻炎、非アレルギー性鼻炎、ポリープを伴う鼻副鼻腔炎、鼻ポリープ、気管支炎、慢性肺炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、気道炎症、アレルギー性鼻炎、気管支拡張症、及び／または慢性気管支炎である。
【0343】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、またはリンパ球性障害は、関節炎である。いくつかの実施形態では、関節炎は、リウマチ性関節炎である。いくつかの実施形態では、関節炎は、骨関節炎、リウマチ性関節炎、若年性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、早期関節炎、多関節リウマチ性関節炎、全身型リウマチ性関節炎、腸疾患性関節炎、反応性関節炎、乾癬性関節炎、及び／または傷害の結果としての関節炎である。
【0344】
方法のうちのいずれかのさらなる他の実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、またはリンパ球性障害は、胃腸炎症状態である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、大腸炎（例えば、外界からの刺激によって引き起こされる（例えば、治療レジメン、例えば、化学療法、放射線療法などによって引き起こされるかまたはそれと関連する）大腸炎）、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、膠原線維性もしくはリンパ球性大腸炎、壊死性腸炎、慢性肉芽腫性疾患またはセリアック病などの状態における大腸炎、食物アレルギー、胃炎、胃腸炎、感染性胃炎もしくは腸炎（例えば、ヘリコバクターピロリ菌感染慢性活動性胃炎）、食道炎、及び感染体によって引き起こされる胃腸炎症の他の形態、または潰瘍性大腸炎である。
【0345】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、またはリンパ球性障害は、胃腸炎症状態である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病（ＣＤ）である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、大腸炎（例えば、外界からの刺激によって引き起こされる（例えば、治療レジメン、例えば、化学療法、放射線療法などによって引き起こされるかまたはそれと関連する）大腸炎）、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、膠原線維性もしくはリンパ球性大腸炎、壊死性腸炎、慢性肉芽腫性疾患またはセリアック病などの状態における大腸炎、食物アレルギー、胃炎、胃腸炎、感染性胃炎もしくは腸炎（例えば、ヘリコバクターピロリ菌感染慢性活動性胃炎）、及び感染体によって引き起こされる胃腸炎症の他の形態、または潰瘍性大腸炎である。
【0346】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病（ＣＤ）である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、軽度～中等度の遠位大腸炎である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、軽度～中等度の広範性大腸炎である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、重度の大腸炎である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、クローン病（ＣＤ）である。いくつかの実施形態では、クローン病は、急性病期にある。いくつかの実施形態では、クローン病は、誘導臨床的寛解期にある。いくつかの実施形態では、クローン病は、持続応答／寛解期にある。いくつかの実施形態では、クローン病は、軽度～中等度の疾患である。いくつかの実施形態では、クローン病は、中等度～重度の疾患である。いくつかの実施形態では、クローン病は、重度／劇症の疾患である。いくつかの実施形態では、クローン病は、回腸、回腸結腸、または結腸疾患である。
【0347】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性または好酸球性）障害、単球性障害、もしくはリンパ球性障害、または正常もしくは異常組織常在性細胞（マスト細胞、マクロファージ、またはリンパ球など）もしくは間質細胞（線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮、または内皮）の増加された数もしくは分布に関連する障害は、ループスもしくは全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、またはループス（例えば、腎臓に影響を与えるループス腎炎（ＬＮ）、または血液及び／またはリンパ系臓器（リンパ節、脾臓、胸腺、及び関連するリンパ管）に影響を与える腎外性ループス（ＥＲＬ）、及び／または関節及び／または他の臓器であるが、必ずしも腎臓である必要はない）の１つ以上の臓器特異性症状である。
【0348】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、または線維性障害は、敗血症及び／または外傷、ＨＩＶ感染、またはＡＮＣＡ関連血管炎（ＡＡＶ）などの特発性（未知の病因学の）、多発血管炎性肉芽腫症（ウェゲナー肉芽腫症として以前に既知である）、ベーチェット病、心血管疾患、好酸球性気管支炎、ライター症候群、ＳＥＡ症候群（血清反応陰性、腱付着部症、関節症症候群）、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、強皮症、例えば、全身性硬化症とも称される全身性強皮症、脈管炎（例えば、側頭動脈炎、頭蓋動脈炎、またはホートン疾患とも称される巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ））、筋炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、乾癬、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、例えば、尋常性天疱瘡、アテローム性動脈硬化症、ループス、スティル病、重症筋無力症、セリアック病、再発寛解型（ＲＲＭＳ）もしくは一次性進行型（ＰＰＭＳ）もしくは二次性進行型（ＳＰＭＳ）サブタイプの多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン・バレー疾患、Ｉ型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）もしくはインスリン依存性（ＩＤＤＭ）もしくは若年発症性ＤＭ型、甲状腺炎（例えば、グレーブス病）、セリアック病、チャーグ・ストラウス症候群、筋痛症候群、好酸球増多症候群、好酸球性血管性浮腫を含む浮腫反応、蠕虫感染症、オンコセルカ皮膚炎、好酸球性食道炎、好酸球性腸炎、好酸球性大腸炎、閉塞性睡眠時無呼吸、心内膜心筋線維症、アジソン病、レイノー病もしくは現象、自己免疫性肝炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、または臓器移植拒絶に関連する。
【0349】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、障害は、皮膚の炎症性障害である。いくつかの実施形態では、障害は、アトピー性皮膚炎またはオンコセルカ皮膚炎である。いくつかの実施形態では、障害は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＩＵまたはＣＳＵ）である。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ＩＬ－１３アンタゴニスト、ＩＬ－３３アンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、カルシウム阻害剤、ロイコトリエン阻害剤、または抗ヒスタミンを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３アンタゴニストは、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩｇＥアンタゴニストは、オマリズマブまたはリゲリズマブである。
【0350】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、または好酸球性障害は、線維性障害である。いくつかの実施形態では、線維障害は、肺線維症、肝線維症（例えば、肝硬変（例えば、アルコール誘導性肝硬変、ウイルス誘導性肝硬変、Ｃ型肝炎後肝硬変、及び原発性胆汁性肝硬変）と関連する線維症、住血吸虫症、胆管炎（例えば、硬化性胆管炎）、及び自己免疫誘導性肝炎）、腎臓線維症（例えば、尿細管間質線維症、強皮症、糖尿病性腎炎、及び糸球体腎炎）、皮膚線維症（例えば、強皮症、肥厚性及びケロイド瘢痕、腎性線維化性皮膚症、ならびに熱傷）、骨髄線維症、神経線維腫症、線維腫、腸管線維症、及び外科処置に起因する線維性癒着）、心臓線維症（例えば、心筋梗塞と関連する線維症）、血管線維症（例えば、血管形成術後動脈再狭窄及びアテローム性動脈硬化症と関連する線維症）、眼線維症（例えば、白内障手術後の増殖性硝子体網膜症と関連する線維症、及び後眼窩線維症）、ならびに骨髄線維症（例えば、特発性骨髄線維症及び薬物誘発性骨髄線維症）を含む。線維症は、臓器特異性または全身性（例えば、全身性硬化症、及びＧＶＨＤと関連する線維症）であり得る。いくつかの実施形態では、線維性障害は、肺線維症である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、線維性間質性肺炎である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、特発性線維化性肺胞炎としても既知である特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、ＩＰＦは、性別、年齢、及び生理機能（ＧＡＰ）ステージＩである。いくつかの実施形態では、ＩＰＦは、ＧＡＰステージＩＩである。いくつかの実施形態では、ＩＰＦは、ＧＡＰステージＩＩＩである。いくつかの実施形態では、肺線維症は、散発性ＩＰＦである。いくつかの実施形態では、肺線維症は、家族性肺線維症である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、組み合わされた肺線維症及び肺気腫である。いくつかの実施形態では、肺線維症は、以下のうちの１つ以上と関連する：通常型間質性肺炎、特発性間質性肺炎、剥離性間質性肺炎、呼吸器細気管支炎間質性肺疾患、急性間質性肺炎、非特異性間質性肺炎、サルコイドーシス、特発性器質化肺炎、好酸球性肺炎、感染症、職業性または環境性物質への曝露、紙巻きたばこ喫煙、薬物または放射線によって誘発される間質性肺疾患、リウマチ性疾患関連間質性肺疾患、リンパ系間質性肺炎、上葉優位型肺線維症、肺ランゲルハンス細胞組織球症、全身性強皮症間質性肺疾患、ヘルマンスキー・パドラック症候群、及びテロメアの短縮による疾患。
【0351】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、または好酸球性障害は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、慢性閉塞性肺疾患（ＧＯＬＤ）カテゴリーＡに関する国際指針である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、ＧＯＬＤカテゴリーＢである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、ＧＯＬＤカテゴリーＣである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、ＧＯＬＤカテゴリーＤである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、慢性気管支炎である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、肺気腫である。いくつかの実施形態では、肺気腫は、近位腺房、汎細葉性、または遠位腺房肺気腫である。いくつかの実施形態では、肺気腫は、たばこ誘発性肺気腫である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、粒子粉塵、化学煙霧、及び／または大気汚染への曝露と関連する。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、肺発達の障害と関連する。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、慢性閉塞性喘息である。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、アルファ１抗トリプシン欠乏と関連する。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、セリンプロテアーゼ阻害剤クレードＥ、メンバー２（ＳＥＲＰＩＮＥ２）の分裂と関連する。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、持続性全身性炎症を伴うＣＯＰＤである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、好酸球性または２型Ｔヘルパー（ＴＨ２）高ＣＯＰＤである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは持続性細菌コロニー形成を伴うＣＯＰＤである。いくつかの実施形態では、ＣＯＰＤは、頻繁な増悪を伴うＣＯＰＤである。いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、または好酸球性障害は、喘息ＣＯＰＤ重複症候群（ＡＣＯＳ）である。いくつかの実施形態では、ＡＣＯＳは、好酸球優勢、好中球優勢、混合パターン、または非炎症（非顆粒球性）ＡＣＯＳである。いくつかの実施形態では、自己免疫不全、炎症性障害、線維性障害、好中球障害、または好酸球性障害は、ＣＯＰＤ閉塞性睡眠時無呼吸（ＯＳＡ）重複症候群である。
【0352】
本発明の抗体、またはその薬学的組成物は、治療において単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体、またはその薬学的組成物は、少なくとも１つのさらなる治療剤と同時投与され得る。ある特定の実施形態では、さらなる治療剤は、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）軸結合アンタゴニスト、インターロイキン－５（ＩＬ－５）軸結合アンタゴニスト、またはＩＬ－３３軸結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体、例えば、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニストまたはＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストまたはＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。
【0353】
いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、以下に記載されるように、喘息治療薬である。中等度の喘息は、現在、日常的に吸入される抗炎症性コルチコステロイドまたは肥満細胞阻害剤、例えば、必要に応じて（一日当たり３～４回）吸入ベータ２アゴニストを加えたクロモグリク酸ナトリウムまたはネドクロミルによって処置され、進展症状またはアレルゲンもしくは運動誘発性喘息が緩和される。例示的な吸入コルチコステロイドとしては、ＱＶＡＲ（登録商標）、ＰＵＬＭＩＣＯＲＴ（登録商標）、ＳＹＭＢＩＣＯＲＴ（登録商標）、ＡＥＲＯＢＩＤ（登録商標）、ＦＬＯＶＥＮＴ（登録商標）、ＦＬＯＮＡＳＥ（登録商標）、ＡＤＶＡＩＲ（登録商標）、及びＡＺＭＡＣＯＲＴ（登録商標）が挙げられる。さらなる喘息治療薬は、長時間作用型の呼吸器作用薬（ＬＡＢＤ）を含む。ある特定の実施形態では、ＬＡＢＤは、長時間作用型ベータ－２アゴニスト（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、長時間作用型ムスカリン性アンタゴニスト（ＬＡＭＡ）、テオフィリン、または経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）である。例示的なＬＡＢＤとしては、ＳＹＭＢＩＣＯＲＴ（登録商標）、ＡＤＶＡＩＲ（登録商標）、ＢＲＯＶＡＮＡ（登録商標）、ＦＯＲＡＤＩＬ（登録商標）、ＰＥＲＦＯＲＯＭＩＳＴ（商標）、及びＳＥＲＥＶＥＮＴ（登録商標）が挙げられる。
【0354】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、気管支拡張剤または喘息症状コントローラー薬剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤または喘息コントローラー薬剤は、短時間作用型β２アゴニスト（ＳＡＢＡ）（アルブテロールなど）などのβ２アドレナリンアゴニスト、または長時間作用型β２アドレナリンアゴニスト（ＬＡＢＡ）である。いくつかの実施形態では、ＬＡＢＡは、サルメテロール、アベジテロール、インダカテロール、ビランテロール、及び／またはホルモテロール（ホルモテロールフマル酸塩水和物）である。いくつかの実施形態では、喘息コントローラー薬剤は、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）である。いくつかの実施形態では、ＬＴＲＡは、モンテルカスト、ザフィルルカスト、及び／またはジロイトンである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤または喘息コントローラー薬剤は、長時間作用型ムスカリン性アセチルコリン受容体（コリン作動性）アンタゴニスト（ＬＡＭＡ）などのムスカリン性アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＬＡＭＡは、グリコピロニウムである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤または喘息コントローラー薬剤は、苦味受容体（ＴＡＳ２Ｒなどの）などのイオンチャネルのアゴニストである。
【0355】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、気管支拡張剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤は、吸入気管支拡張剤である。いくつかの実施形態では、吸入気管支拡張剤は、β２アドレナリンアゴニストである。いくつかの実施形態では、β２アドレナリンアゴニストは、短時間作用型β２アドレナリンアゴニスト（ＳＡＢＡ）である。いくつかの実施形態では、ＳＡＢＡは、ビトルテロール、フェノテロール、イソプロテレノール、レバルブテロール、メタプロテレノール、ピルブテロール、プロカテロール、リトドリン、アルブテロール、及び／またはテルブタリンである。いくつかの実施形態では、β２アドレナリンアゴニストは、長時間作用型β２アドレナリンアゴニスト（ＬＡＢＡ）である。いくつかの実施形態では、ＬＡＢＡは、アルホルモテロール、バンブテロール、クレンブテロール、ホルモテロール、サルメテロール、アベジテロール、カルモテロール、インダカテロール、オロダテロール、及び／またはビランテロールである。いくつかの実施形態では、吸入気管支拡張剤は、ムスカリン性受容体アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ムスカリン性受容体アンタゴニストは、短時間作用型ムスカリン性受容体アンタゴニスト（ＳＡＭＡ）である。いくつかの実施形態では、ＳＡＭＡは、臭化イプラトロピウムである。いくつかの実施形態では、ムスカリン性受容体アンタゴニストは、長時間作用型ムスカリン性受容体アンタゴニスト（ＬＡＭＡ）である。いくつかの実施形態では、ＬＡＭＡは、チオトロピウム臭化物、臭化グリコピロニウム、臭化ウメクリジニウム、臭化アクリジニウム、及び／またはレベフェナシンである。いくつかの実施形態では、吸入気管支拡張剤は、ＳＡＢＡ／ＳＡＭＡの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ＳＡＢＡ／ＳＡＭＡの組み合わせは、アルブテロール／イプラトロピウムである。いくつかの実施形態では、吸入気管支拡張剤は、ＬＡＢＡ／ＬＡＭＡの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ＬＡＢＡ／ＬＡＭＡの組み合わせは、ホルモテロール／アクリジニウム、ホルモテロール／グリコピロニウム、ホルモテロール／チオトロピウム、インダカテロール／グリコピロニウム、インダカテロール／チオトロピウム、オロダテロール／チオトロピウム、サルメテロール／チオトロピウム、及び／またはビランテロール／ウメクリジニウムである。いくつかの実施形態では、吸入気管支拡張剤は、二官能性気管支拡張剤である。いくつかの実施形態では、二官能性気管支拡張剤は、ムスカリン性アンタゴニスト／β２アゴニスト（ＭＡＢＡ）である。いくつかの実施形態では、ＭＡＢＡは、バテフェンテロール、ＴＨＲＸ２００４９５、ＡＺＤ２１１５、ＬＡＳ１９０７９２、ＴＥＩ３２５２、ＰＦ－３４２９２８１、及び／またはＰＦ－４３４８２３５である。いくつかの実施形態では、吸入気管支拡張剤は、ＴＡＳ２Ｒのアゴニストである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤は、霧化ＳＡＢＡである。いくつかの実施形態では、霧化ＳＡＢＡは、アルブテロール及び／またはレバルブテロールである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤は、霧化ＬＡＢＡである。いくつかの実施形態では、霧化ＬＡＢＡは、アルホルモテロール及び／またはホルモテロールである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤は、霧化ＳＡＭＡである。いくつかの実施形態では、霧化ＳＡＭＡは、イプラトロピウムである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤は、霧化ＬＡＭＡである。いくつかの実施形態では、霧化ＬＡＭＡは、グリコピロニウム及び／またはレベフェナシンである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤は、霧化ＳＡＢＡ／ＳＡＭＡの組み合わせである。いくつかの実施形態では、霧化ＳＡＢＡ／ＳＡＭＡの組み合わせは、アルブテロール／イプラトロピウムである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤は、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）である。いくつかの実施形態では、ＬＴＲＡは、モンテルカスト、ザフィルルカスト、及び／またはジロイトンである。いくつかの実施形態では、気管支拡張剤は、メチルキサンチンである。いくつかの実施形態では、メチルキサンチンは、テオフィリンである。
【0356】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、免疫調節剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、Ｅ型免疫グロブリン（ＩｇＥ）に対する抗体または抗ＩｇＥ（ＩｇＥ阻害剤）である。いくつかの実施形態では、抗ＩｇＥは、オマリズマブ及び／またはリゲリズマブである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、クロモリンをさらに含む。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、メチルキサンチンをさらに含む。いくつかの実施形態では、メチルキサンチンは、テオフィリンまたはカフェインである。
【0357】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ）または経口コルチコステロイドなどの１つ以上のコルチコステロイドを投与することをさらに含む。非限定的な、例示的なコルチコステロイドとしては、ベタメタゾンジプロピオン酸エステル、ブデソニド、シクレソニド、フルニソリド、フルチカゾンプロピオン酸エステル、フルチカゾンフロ酸エステル、モメタゾン、及び／またはトリアムシノロンアセトニドなどの吸入コルチコステロイド、ならびにメチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、及びプレドニゾンなどの経口コルチコステロイドが挙げられる。いくつかの実施形態では、コルチコステロイドは、ＩＣＳである。いくつかの実施形態では、ＩＣＳは、ベクロメタゾン、ブデソニド、フルニソリド、フルチカゾンフロ酸エステル、フルチカゾンプロピオン酸エステル、モメタゾン、シクレソニド、及び／またはトリアムシノロンである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ＩＣＳ／ＬＡＢＡ及び／またはＬＡＭＡの組み合わせを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＳ／ＬＡＢＡ及び／またはＬＡＭＡの組み合わせは、フルチカゾンプロピオン酸エステル／サルメテロール、ブデソニド／ホルモテロール、モメタゾン／ホルモテロール、フルチカゾンフロ酸エステル／ビランテロール、フルチカゾンプロピオン酸エステル／ホルモテロール、ベクロメタゾン／ホルモテロール、フルチカゾンフロ酸エステル／ウメクリジニウム、フルチカゾンフロ酸エステル／ビランテロール／ウメクリジニウム、フルチカゾン／サルメテロール／チオトロピウム、ベクロメタゾン／ホルモテロール／グリコピロニウム、ブデソニド／ホルモテロール／グリコピロニウム、及び／またはブデソニド／ホルモテロール／チオトロピウムである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、霧化コルチコステロイドを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、霧化コルチコステロイドは、ブデソニドである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、経口または静脈内コルチコステロイドを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、経口または静脈内コルチコステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、及び／またはヒドロコルチゾンである。
【0358】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ＩＴＫ、ＢＴＫ、ＪＡＫ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、及び／またはＪＡＫ３）、ＩＬ－９、ＩＬ－６、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＩＬ－４、ＩＬ－１７（例えば、ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－１７Ｆ）、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ－２５、ＩＬ－３３、ＩｇＥ、ＩＬ－９受容体、ＩＬ－５受容体、ＩＬ－４受容体α、ＩＬ－１３受容体（例えば、ＩＬ－１３受容体α１及び／またはα２）、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ－Ｒ、ＩＬ－７受容体（例えば、ＩＬ７Ｒα）、ＩＬ－１７受容体（例えば、ＩＬ－１７Ｒβ）、ＳＴ２（ＩＬ－３３受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ／ＣＤ２３、Ｆｌａｐ、Ｓｙｋキナーゼ；ＣＣＲ４、ＴＬＲ９、ＣＣＲ３、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ならびにＧＭ－ＣＳＦから選択される１つ以上の標的を阻害するＴＨ２またはＴ２経路阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＩＬ－５アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５アンタゴニストは、ベンラリズマブ、メポリズマブ、及び／またはレスリズマブである。いくつかの実施形態では、方法は、ＩＬ－１３アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３アンタゴニストは、レブリキズマブ、デクトレクマブ、またはトラロキヌマブである。いくつかの実施形態では、方法は、ＩＬ－４アンタゴニスト（ＩＬ－４／ＩＬ－１３アンタゴニストを含む）を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－４アンタゴニストは、デュピルマブまたはＱＢＸ－２５８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）である。いくつかの実施形態では、方法は、ＴＳＬＰアンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＳＬＰアンタゴニストは、ＡＭＧ－１５７（ＭＥＤＩ－９９２９）である。いくつかの実施形態では、方法は、ＳＴ２アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＩＬ－１７アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１７アンタゴニストは、セクキヌマブ、イキセキズマブ、またはビメキズマブである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、フェビピプラントを投与することをさらに含む。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、マシチニブを投与することをさらに含む。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、またはＰＤＥ３及び／またはＰＤＥ４アンタゴニストなどのアンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＥアンタゴニストは、Ｔｈｅｏ－２４、ダリレスプ、またはロフルミラストである。
【0359】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、アミノサリチル酸塩；ステロイド；生物学的製剤；チオプリン；メトトレキサート；カルシニューリン阻害剤、例えば、シクロスポリンまたはタクロリムス；及び抗生物質から選択される１つ以上の活性成分を投与することをさらに含む。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、経口または局所製剤でさらなる活性成分を投与することを含む。アミノサリチル酸塩の例としては、オイドラギットＳコーティング、ｐＨ依存性メサラミン、エチルセルロースコーティングメサラミン、及びマルチマトリックス放出メサラミンの様な形態での、４－アミノサリチル酸、スルファサラジン、バルサラジド、オルサラジン、及びメサラジンが挙げられる。ステロイドの例としては、コルチコステロイドまたはグルココルチコステロイドが挙げられる。コルチコステロイドの例としては、例えば、ヒドロコルチゾン浣腸またはヒドロコルチゾン形態の様な形態での、プレドニゾン及びヒドロコルチゾンもしくはメチルプレドニゾロン、または第２の生成コルチコステロイド、例えば、ブデソニドまたはアザチオプリンが挙げられる。生物学的製剤の例としては、エタネルセプト；腫瘍壊死因子アルファに対する抗体、例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、またはセルトリズマブ；ＩＬ－１２及びＩＬ－２３に対する抗体、例えば、ウステキヌマブ；ベドリズマブ；エトロリズマブ、ならびにナタリズマブが挙げられる。チオプリンの例としては、アザチオプリン、６－メルカプトプリン、及びチオグアニンが挙げられる。抗生物質の例としては、バンコマイシン、リファキシミン、メトロニダゾール、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ジアミノジフェニルスルホン及びシプロフロキサシン、ならびにガンシクロビルの様な抗ウイルス剤が挙げられる。
【0360】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、抗線維化剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗線維化剤は、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ－β）刺激コラーゲン合成を阻害し、細胞外マトリックスを減少させ、及び／または線維芽細胞増殖をブロックする。いくつかの実施形態では、抗線維化剤は、ピルフェニドンである。いくつかの実施形態では、抗線維化剤は、ＰＢＩ－４０５０である。いくつかの実施形態では、抗線維化剤は、タイペルカストである。
【0361】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、チロシンキナーゼ阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、１つ以上の線維形成成長因子の生成を媒介するチロシンキナーゼを阻害する。いくつかの実施形態では、線維形成成長因子は、血小板由来成長因子、血管内皮成長因子、及び／または線維芽細胞成長因子である。いくつかの実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ及び／またはニンテダニブである。いくつかの実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、ニンテダニブである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、下痢止剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、下痢止剤は、ロペラミドである。
【0362】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、抗体を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体は、抗インターロイキン（ＩＬ）－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、トラロキヌマブである。いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＩＬ－４／抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－４／抗ＩＬ－１３抗体は、ＳＡＲ１５６５９７である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＧＦ抗体は、ＦＧ－３０１９である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＬＯＸＬ２抗体は、シムツズマブである。いくつかの実施形態では、抗体は、抗αｖβ６インテグリン受容体抗体である。いくつかの実施形態では、抗αｖβ６インテグリン受容体抗体は、ＳＴＸ－１００である。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
【0363】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、リゾホスファチジン酸－１（ＬＰＡ１）受容体アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ１受容体アンタゴニストは、ＢＭＳ－９８６０２０である。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ガレクチン３阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ガレクチン３阻害剤は、ＴＤ－１３９である。
【0364】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、緩和療法を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、緩和療法は、抗生物質、抗不安薬、コルチコステロイド、及びオピオイドのうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗生物質は、広範囲スペクトル抗生物質である。いくつかの実施形態では、抗生物質は、ペニシリン、β－ラクタマー阻害剤、及び／またはセファロスポリンである。いくつかの実施形態では、抗生物質は、ピペラシリン／タゾバクタム、セフィキシム、セフトリアキソン、及び／またはセフジニルである。いくつかの実施形態では、抗不安薬は、アルプラゾラム、ブスピロン、クロルプロマジン、ジアゼパム、ミダゾラム、ロラゼパム、及び／またはプロメタジンである。いくつかの実施形態では、コルチコステロイドは、グルココルチコステロイドである。いくつかの実施形態では、グルココルチコステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、及び／またはヒドロコルチゾンである。いくつかの実施形態では、オピオイドは、モルヒネ、コデイン、ジヒドロコデイン、及び／またはジアモルフィンである。
【0365】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、抗生物質を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗生物質は、マクロライドである。いくつかの実施形態では、マクロライドは、アジスロマイシン、及び／またはクラリスロマイシンである。いくつかの実施形態では、抗生物質は、ドキシサイクリンである。いくつかの実施形態では、抗生物質は、トリメトプリム／スルファメトキサゾールである。いくつかの実施形態では、抗生物質は、セファロスポリンである。いくつかの実施形態では、セファロスポリンは、セフェピム、セフィキシム、セフポドキシム、セフプロジル、セフタジジム、及び／またはセフロキシムである。いくつかの実施形態では、抗生物質は、ペニシリンである。いくつかの実施形態では、抗生物質は、アモキシシリン、アンピシリン、及び／またはピバンピシリンである。いくつかの実施形態では、抗生物質は、ペニシリン／β－ラクタマーゼ阻害剤の組み合わせである。いくつかの実施形態では、ペニシリン／β－ラクタマーゼ阻害剤の組み合わせは、アモキシシリン／クラブラン酸及び／またはピペラシリン／タゾバクタムである。いくつかの実施形態では、抗生物質は、フルオロキノロンである。いくつかの実施形態では、フルオロキノロンは、シプロフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、及び／またはオフロキサシンである。
【0366】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ホスホジエステラーゼ阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ホスホジエステラーゼ阻害剤は、ホスホジエステラーゼ５型阻害剤である。いくつかの実施形態では、ホスホジエステラーゼ阻害剤は、アバナフィル、ベンズアミドナフィル、ダサンタフィル、イカリイン、ロデナフィル、ミロデナフィル、シルデナフィル、タダラフィル、ウデナフィル、及び／またはバルデナフィルである。いくつかの実施形態では、ＰＤＥ阻害剤は、ＰＤＥ－４阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＤＥ－４阻害剤は、ロフルミラスト、シロミラスト、テトミラスト、及び／またはＣＨＦ６００１である。いくつかの実施形態では、ＰＤＥ阻害剤は、ＰＤＥ－３／ＰＤＥ－４阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＤＥ－３／ＰＤＥ－４阻害剤は、ＲＰＬ－５５４である。
【0367】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、細胞障害性剤及び／または免疫抑制剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞障害性剤及び／または免疫抑制剤は、アザチオプリン、コルヒチン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、及び／またはサリドマイドである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、肺における枯渇したグルタチオンレベルを復元する薬剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、肺における枯渇したグルタチオンレベルを復元する薬剤は、Ｎ－アセチルシステインである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、抗凝固薬を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗凝固薬は、ワルファリン、ヘパリン、活性化プロテインＣ、及び／または組織因子経路阻害剤である。
【0368】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、エンドセリン受容体アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法エンドセリン受容体アンタゴニストは、ボセンタン、マシテンタン、及び／またはアンブリセンタンである。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ＴＮＦ－αアンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ－αアンタゴニストは、エタネルセプト、アダリムマブ、インフリキシマブ、セルトリズマブ、及びゴリムマブのうちの１つ以上を含む。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、インターフェロンガンマ１ｂを投与することをさらに含む。
【0369】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、インターロイキン（ＩＬ）阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ阻害剤は、ＩＬ－５阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５阻害剤は、メポリズマブ及び／またはベンラリズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ阻害剤は、ＩＬ－１７Ａ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１７Ａ阻害剤は、ＣＮＴＯ－６７８５である。
【0370】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ｐ３８マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｐ３８ ＭＡＰＫ阻害剤は、ロスマピモド及び／またはＡＺＤ－７６２４である。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ＣＸＣＲ２アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＲ２アンタゴニストは、ダニリキシンである。
【0371】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、ワクチン接種をさらに含む。いくつかの実施形態では、ワクチン接種は、肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｉ）及び／またはインフルエンザに対するワクチン接種である。いくつかの実施形態では、ワクチン接種は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及び／またはインフルエンザに対するワクチン接種である。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、抗ウイルス療法を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ウイルス療法は、オセルタミビル、ペラミビル、及び／またはザナミビルである。
【0372】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、胃食道逆流及び／または少量誤嚥の予防をさらに含む。
【0373】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、換気補助をさらに含む。いくつかの実施形態では、換気補助は、機械的換気である。いくつかの実施形態では、換気補助は、非侵襲的換気である。いくつかの実施形態では、換気補助は、酸素補給である。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、肺リハビリテーションをさらに含む。
【0374】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、肺移植をさらに含む。いくつかの実施形態では、肺移植は、片肺移植である。いくつかの実施形態では、肺移植は、両肺移植である。
【0375】
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、非薬理学的介入をさらに含む。いくつかの実施形態では、非薬理学的介入は、禁煙、健康な食事、及び／または定期的な運動である。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、禁煙のための薬理学的補助をさらに含む。いくつかの実施形態では、禁煙のための薬理学的補助は、ニコチン置換療法、ブプロピオン、及び／またはバレニクリンである。いくつかの実施形態では、非薬理学的介入は、肺療法である。いくつかの実施形態では、肺療法は、肺リハビリテーション及び／または酸素補給である。いくつかの実施形態では、非薬理学的介入は、肺手術である。いくつかの実施形態では、肺手術は、肺容量減少手術、片肺移植、両肺移植、または肺嚢胞切除である。いくつかの実施形態では、非薬理学的介入は、機器の使用である。いくつかの実施形態では、機器は、肺容量減少コイル、呼気気道ステント、及び／または鼻換気補助システムである。
【0376】
上述のそのような併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び個別投与を包含するが、この場合、抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物の投与は、さらなる治療剤（複数可）の投与の前に、それと同時に、及び／またはその後に行われ得る。一実施形態では、抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物の投与及びさらなる治療剤の投与は、互いの約一カ月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内、または約１、２、３、４、５、６、７、８、もしくは９時間以内、または約１、５、１０、２０、３０、４０、もしくは５０分以内に行われる。連続投与を含む実施形態に関して、抗トリプターゼ抗体は、さらなる治療剤（複数可）の投与の前に、またはその後に投与され得る。
【0377】
本発明の抗トリプターゼ抗体、またはその薬学的組成物（及び任意のさらなる治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。いくつかの例では、本発明の抗トリプターゼ抗体は、硝子体内、筋肉内、静脈内、皮内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、くも膜内、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小胞内、経粘膜、心膜内、臍帯内、眼球内、眼窩内、経口、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、眼窩周囲、結膜、テノン嚢下、前房内、網膜下、眼球後、毛細胆管内、吸入、注射、埋め込み、注入、持続注入、標的細胞に直接的に流す局所灌流、カテーテル、洗浄、クリーム、または脂質組成物で投与され得る。特定の例では、抗体、またはその薬学的組成物は、皮下投与によって投与され得る。本明細書に記載の方法で利用される組成物はまた、全身または局所投与され得る。投薬は、投与が短期であるか長期であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内または皮下注射等の注射によるものであってもよい。単回または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない、様々な投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【0378】
本発明の抗体、またはその薬学的組成物は、良好な医療行為と一致する様式で、製剤化され、投薬され、及び投与されるだろう。これに関連して考慮すべき要素には、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の因子が含まれる。抗体、またはその薬学的組成物は、必ずしもそうである必要はないが、任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤と共に製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上で考察される他の要因に左右される。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量で、本明細書記載の投与経路によって、または本明細書に記載の投薬量の約１～９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【0379】
疾患の予防または治療に関して、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、及び抗体への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。抗体は、一度に、または一連の治療にわたって患者に適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、１回以上の別個の投与によるものであれ連続注入によるものであれ、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者に投与するための初回候補投薬量となり得る。１つの典型的な日用量は、上で言及した因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～２００ｍｇ／ｋｇ以上であり得る。数日以上にわたって繰り返される投与に関して、状態に応じて、処置は、疾患の症状の所望される抑制が発生するまで、一般に持続される。抗体の１つの例示の投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。そのような用量は、断続的に、例えば、毎週、２週間毎、３週間毎、または４週間毎（例えば、患者が約２～約２０回、または例えば約６回の用量の抗体を受容するように）投与されてもよい。例えば、用量は、１ヶ月に１回（例えば、皮下注射によって）投与してもよい。最初のより高い負荷用量が投与され得て、１つ以上のより低い用量が続く。しかしながら、他の投与量レジメンは有用であり得る。この療法の進行は、従来の技術及び解析によって容易に監視される。いくつかの例では、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、または約２００ｍｇ／ｍＬの用量の抗体が、例えば、皮下注射によって投与され得る。いくつかの例では、約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体が、皮下注射によって投与され得る。
【0380】
上記の製剤または治療方法のうちのいずれも、抗トリプターゼ抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫複合体を使用して行われ得ることが理解される。
【0381】
Ｈ．製品
本発明の別の態様では、上記の疾患（例えば、トリプターゼ関連障害）の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製品が提供される。製品は、容器と、容器上のもしくは容器に関連するラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈注射用溶液バッグなどが挙げられる。これらの容器は、ガラスまたはプラスチックなどのさまざまな材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物との組み合わせで、病態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって穿孔可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体、またはその薬学的組成物である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択される病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物を内部に収容した第１の容器と、（ｂ）追加の治療薬を含む組成物を内部に収容した第２の容器とを含み得る。本発明のこの実施形態における製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。製品は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
本発明の別の態様では、上記の疾患（例えば、トリプターゼ関連障害）の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製品が提供される。製品は、容器と、容器上のもしくは容器に関連するラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈注射用溶液バッグなどが挙げられる。これらの容器は、ガラスまたはプラスチックなどのさまざまな材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物との組み合わせで、病態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって穿孔可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体、またはその薬学的組成物である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択される病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物を内部に収容した第１の容器と、（ｂ）追加の治療薬を含む組成物を内部に収容した第２の容器とを含み得る。本発明のこの実施形態における製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。製品は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【0382】
上記の製品はいずれも、抗トリプターゼ抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫複合体を含み得ることが理解される。
【実施例0383】
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上述の概要を考慮すると、様々な他の実施形態が実施され得ることを理解する。特に明記しない限り、ヒトトリプターゼベータ１は、研究で使用された。
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上述の概要を考慮すると、様々な他の実施形態が実施され得ることを理解する。特に明記しない限り、ヒトトリプターゼベータ１は、研究で使用された。
【0384】
実施例１：抗トリプターゼ抗体の生成及びヒト化
Ａ．材料及び方法
残基番号は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に従う。
Ａ．材料及び方法
残基番号は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に従う。
【0385】
（ｉ）昆虫細胞及び哺乳動物細胞におけるトリプターゼの組み換え発現及び精製
成熟野生型ヒトトリプターゼベータ１（Ｉｌｅ１６－Ｐｒｏ２４６キモトリプシノーゲン番号付け、配列番号９７）をコードする配列を、ポリヘドリンプロモーター及びｇｐ６７分泌シグナル配列の後に、修飾ｐＡｃＧＰ６７Ａベクターにクローニングした。別途指示されない限り、この節では、トリプターゼは、ヒトトリプターゼベータ１（ヒトトリプターゼｂ１とも称される）を指す。構築物は、Ｎ末端Ｈｉｓ６タグ、エンテロキナーゼ切断部位、及びいくつかの構築物に関してはＣ末端ＦＬＡＧタグを含む。部位指向性変異誘発は、標準ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）プロトコル（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して行われ、トリプターゼ変異体を生成した。全ての構築物は、ＤＮＡ配列決定によって確認される。組み換えバキュロウイルスを、標準プロトコルの後にＳｆ９細胞中でＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ（商標）システム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して生成した。Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ細胞を、大規模のタンパク質生成のために感染させ、感染後４８時間で採取した。採取された培地を、１ｍＭのＮｉＣｌ２、５ｍＭのＣａＣｌ２、及び２０ｍＭのトリスｐＨ８で補充し、３０分間振盪し、次いで、８５００ｘｇで２０分間遠心分離し、培地から細胞及び沈殿物を除去した。上清培地を、ニッケル－ニトリロ三酢酸（Ｎｉ－ＮＴＡ）親和性カラムに充填する前に０．２２μＭのポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フィルターを通して濾過した。ヒトトリプターゼベータ１もまた、ＣＨＯ ＤＰ１２哺乳動物細胞株中の一過性形質転換によって発現された。細胞培養培地を、以下に記載されるＮｉ－ＮＴＡ親和性精製で開始する同じ精製に施した。
成熟野生型ヒトトリプターゼベータ１（Ｉｌｅ１６－Ｐｒｏ２４６キモトリプシノーゲン番号付け、配列番号９７）をコードする配列を、ポリヘドリンプロモーター及びｇｐ６７分泌シグナル配列の後に、修飾ｐＡｃＧＰ６７Ａベクターにクローニングした。別途指示されない限り、この節では、トリプターゼは、ヒトトリプターゼベータ１（ヒトトリプターゼｂ１とも称される）を指す。構築物は、Ｎ末端Ｈｉｓ６タグ、エンテロキナーゼ切断部位、及びいくつかの構築物に関してはＣ末端ＦＬＡＧタグを含む。部位指向性変異誘発は、標準ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）プロトコル（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して行われ、トリプターゼ変異体を生成した。全ての構築物は、ＤＮＡ配列決定によって確認される。組み換えバキュロウイルスを、標準プロトコルの後にＳｆ９細胞中でＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ（商標）システム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して生成した。Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ細胞を、大規模のタンパク質生成のために感染させ、感染後４８時間で採取した。採取された培地を、１ｍＭのＮｉＣｌ２、５ｍＭのＣａＣｌ２、及び２０ｍＭのトリスｐＨ８で補充し、３０分間振盪し、次いで、８５００ｘｇで２０分間遠心分離し、培地から細胞及び沈殿物を除去した。上清培地を、ニッケル－ニトリロ三酢酸（Ｎｉ－ＮＴＡ）親和性カラムに充填する前に０．２２μＭのポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フィルターを通して濾過した。ヒトトリプターゼベータ１もまた、ＣＨＯ ＤＰ１２哺乳動物細胞株中の一過性形質転換によって発現された。細胞培養培地を、以下に記載されるＮｉ－ＮＴＡ親和性精製で開始する同じ精製に施した。
【0386】
分泌Ｈｉｓ６－タグ付き組み換えトリプターゼ（野生型または変異体）を含む昆虫細胞培地またはＣＨＯ細胞培地を、１７０ｃｍ／時間の体積流量で１０ｍＬのＮｉ－ＮＴＡスーパーフローカラム（Ｑｉａｇｅｎ）に充填した。カラムを１０ＣＶ（カラム体積）の洗浄緩衝剤（２０ｍＭのトリスｐＨ８、１０ｍＭのイミダゾール、３００ｍＭのＮａＣｌ）で洗浄し、８ＣＶの溶出緩衝剤（２０ｍＭのトリスｐＨ８、３００ｍＭのイミダゾール、３００ｍＭのＮａＣｌ）で溶出した。トリプターゼを含むドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によってアッセイされた画分を、プールし、濃縮し、製造者によって推奨される流量でランニング緩衝剤（１０ｍＭの３－（Ｎ－モルフォリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）ｐＨ６．８、２ＭのＮａＣｌ）を使用するさらなる精製のためにＳ２００サイズ排除カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に充填した。Ｈｉｓタグ付き組み換えトリプターゼ（単量体）を含む画分を、プールし、濃縮した。次いで、組み換えトリプターゼを、０．５ｍｇ／ｍｌのヘパリン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）及び０．１ｍｇ／ｍｌのエンテロキナーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ）を含む緩衝剤（ｐＨ６．８の１０ｍＭのＭＯＰＳ、０．２ＭのＮａＣｌ）中２ｍｇ／ｍｌの濃度で、室温で一晩切断した。このステップは、Ｎ末端Ｈｉｓ６タグを除去し、四量体化及びタンパク分解性活性トリプターゼをもたらし、それは残基１６（キモトリプシノーゲン番号付け）で開始する新たに形成されたＮ末端配列としてＩＶＧＧを有する。次いで、四量体トリプターゼを、緩衝剤（ｐＨ６．８の１０ｍＭのＭＯＰＳ、及び２ＭのＮａＣｌ）中で、Ｓ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するサイズ排除クロマトグラフィーにかけて、エンテロキナーゼ及び任意の切断されていない組み換えトリプターゼを除去することによって四量体トリプターゼを精製した。
【0387】
トリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃ及びＩ９９Ｃ、ならびに触媒不活性変異体Ｓ１９５Ａ（完全長トリプターゼ配列配列番号７１のＡｌａ置換に対するＳｅｒ２２４に対応する、キモトリプシノーゲン番号付け）を、上に記載されるようにＮｉ親和性クロマトグラフィーによって精製した。次いで、ジスルフィド結合トリプターゼ二量体変異体を、Ｓ２００サイズ排除クロマトグラフィーによって非ジスルフィド結合トリプターゼ単量体変異体から分離した。ジスルフィド結合二量体変異体を、野生型トリプターゼについて上に記載されるように四量体にさらに処理した。
【0388】
（ｉｉ）抗ヒトトリプターゼウサギ及びマウスモノクローナル抗体生成 ２匹のウサギを、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）を用いてＣＨＯ由来ヒトトリプターゼベータ１（四量体）で免疫化した。ウサギを、フロイント不完全アジュバンド（ＩＦＡ）を用いて同じタンパク質で２週間毎に１回ブーストした。４つの注射後、精製された血清試料を、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって結合について評価し、酵素活性アッセイを用いてヒトトリプターゼ活性の阻害ついて評価した。次いで、ヒトトリプターゼ活性の阻害を示したウサギのうちの１匹から採取された脾臓のＢ細胞を、ウサギ融合パートナーで融合した。１０～１４日後、上清を採取し、ＥＬＩＳＡによってタンパク質結合についてスクリーニングした。
【0389】
ＥＬＩＳＡプロトコルは、以下の通りであった。９６ウェルＮＵＮＣ ＭＡＸＩＳＯＲＢ（登録商標）ＥＬＩＳＡプレートを、５μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェルで、ＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ（登録商標）ビオチン結合タンパク質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３１０００、ストック１０ｍｇ／ｍｌ）で一晩コーティングした。ウェルを、洗浄緩衝剤（０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄し、乾燥でブロットした。次いで、ウェルを、２００μｌ／ウェルのブロッキング緩衝剤（０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０を含むＰＢＳ）でブロックし、室温で３０分間以上インキュベートした。ビオチン化ヒトトリプターゼベータ１タンパク質（アッセイ緩衝剤に希釈；０．５％のＢＳＡ、０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、及び０．１ｍｇ／ｍｌのヘパリンを含むＰＢＳ）を、１μｇ／ｍｌでウェルに添加し、室温で１時間±１０分インキュベートした。トリプターゼが四量体として残ることを確実にするために、ヘパリンを含んだ。ウェルを、洗浄緩衝剤（２００μｌ／ウェル）で３回洗浄し、乾燥でブロットした。ハイブリドーマ上清（試料）または対照（例えば、陽性対照ウサギ精製ポリクローナル抗体ＹＺ４２０９（ストック０．２５ｍｇ／ｍｌ）をウェル（アッセイ緩衝剤（１００μｌ／ウェル）に希釈）に添加し、室温で１時間インキュベートした。次に、ウェルを洗浄緩衝剤（２００μｌ／ウェル）で３回洗浄し、乾燥でブロットした。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合体（ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３１４６０）を添加し（アッセイ緩衝剤（１００μｌ／ウェル）中で１：１０，０００に希釈）、室温で３０分間インキュベートした。ウェルを、洗浄緩衝剤（２００μｌ／ウェル）で３回さらに洗浄し、乾燥でブロットした。基質（ＢｉｏＦＸ ＴＭＢ基質、品番ＴＭＢＷ－１０００－０１）を添加し（１００μｌ／ウェル）、室温で５分間インキュベートした。反応を、１００μｌ／ウェルのＢｉｏＦＸ停止溶液（品番ＢＳＴＰ－０１００－０１）の添加によって停止させ、プレートをＡ６５０で読み取った。
【0390】
全てのＥＬＩＳＡ陽性クローンを、標準方法（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ（商標）；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する親和性クロマトグラフィーによって精製し、次いで、組み換えトリプターゼ活性アッセイにおいてヒトトリプターゼ活性の阻害についてスクリーニングした。簡潔には、抗体を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で０．００７～１００，０００ｎｇ／ｍＬ（０．０４６ｐＭ～６６７ｎＭ）に希釈した。組み換えヒトトリプターゼベータ１を、ＴＮＨ緩衝剤（２００ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍＬのヘパリン、０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ｐＨ８．０）中で３ｎＭに希釈し、黒３８４ウェルプレート（ＶｉｅｗＰｌａｔｅ－３８４Ｆ、黒、クリアボトム、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号６００７４７０）中で抗トリプターゼ抗体と１：１に組み合わせた。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で１時間インキュベートした。比色基質Ｓ－２２８８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ、品番８２－０８５２－３９）を、ＴＮＨ緩衝剤中で９００μＭに希釈し、プレートに添加した。最終ウェル中濃度は、３００μＭのＳ－２２８８、１ｎＭの組み換えヒトトリプターゼベータ１、及び０．０１５ｐＭ～２２２ｎＭの抗トリプターゼ抗体であった。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で４０分間インキュベートし、次いで、Ａ４０５で読み取った。抗トリプターゼ抗体の半数阻害濃度（ＩＣ５０）を、それらのそれぞれの曲線の４パラメータフィットから判定した。次いで、所望の阻害を示すクローンを、希釈を制限（単一の細胞／ウェル）することによってサブクローニングし、上に記載されるように再試験し、さらに特徴付けた。
【0391】
マウスハイブリドーマを生成し、スクリーニングし、陽性クローンを同様の様式で分析した。３匹のＡ／Ｊマウス（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄ．）を、抗原（ＥＰＣ，Ｉｎｃ．番号ＴＲ９１３）として精製されたトリプターゼタンパク質で免疫化した。フロイント完全アジュバント（第１の免疫化）または不完全フロイントアジュバンド（第２、第３、及び第４の免疫化）を用いて１：１に混合及び乳化した後、免疫化毎に２０μｇ／マウスで皮下及び腹腔内に投与される酵素活性トリプターゼ。ブースト（第５の免疫化）は、アジュバンドを有さなかった。第４の免疫化の後、免疫化マウスの血清を、ＥＬＩＳＡによって試験し、１：１．２８ｘ１０４の希釈でＯＤ４５０＞２．１６より高い血清力価を有するマウスをハイブリドーマ融合のために選択した。１０７ｘ１０６で単離された脾臓細胞を、ポリエチレングリコール（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ７７７７－５Ｇ）の存在下で融合のために１００ｘ１０６Ｓｐ２／０骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ）と混合した。Ｎｏ．Ｐ７７７７－５Ｇ）。２４のクローンを、トリプターゼへの結合についてスクリーニングし、トリプターゼ酵素活性の阻害についてアッセイした。クローンＴ３１ａ（本明細書で「３１Ａ」及び「ｍｕ．３１Ａ」とも称される）をヒト化のために選択した。
【0392】
（ｉｉｉ）ウサギ抗トリプターゼハイブリドーマクローンの分子クローニング及び再フォーマット
ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体（ＲＮｅａｓｙ（登録商標）ミニキット、Ｑｉａｇｅｎ）を産生するハイブリドーマ細胞から全ＲＮＡを抽出した。ＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ増幅キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、ＲＮＡをまず逆転写し、次いで、以下のプライマーと共に可変軽（ＶＬ）及び可変重（ＶＨ）ドメインの第１の標準ｃＤＮＡ合成及び５’ＲＡＣＥ ＰＣＲ増幅を行った：
軽鎖（ＬＣ）フォワードプライマー：
ユニバーサルプライマーミックス（ＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ増幅キット、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３４８５８）
重鎖（ＨＣ）フォワードプライマー：
ユニバーサルプライマーミックス（ＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ増幅キット、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３４８５８）
ＬＣリバースプライムマー：
５’－ＧＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＴＣＣＡＧＴＴＧＣ－３’（配列番号７４）
ＨＣリバースプライマー：
５’－ＣＡＴＴＧＧＴＧＡＧＧＧＴＧＣＣＣＧＡＧＴＴＣ－３’（配列番号７５）
ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体（ＲＮｅａｓｙ（登録商標）ミニキット、Ｑｉａｇｅｎ）を産生するハイブリドーマ細胞から全ＲＮＡを抽出した。ＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ増幅キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、ＲＮＡをまず逆転写し、次いで、以下のプライマーと共に可変軽（ＶＬ）及び可変重（ＶＨ）ドメインの第１の標準ｃＤＮＡ合成及び５’ＲＡＣＥ ＰＣＲ増幅を行った：
軽鎖（ＬＣ）フォワードプライマー：
ユニバーサルプライマーミックス（ＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ増幅キット、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３４８５８）
重鎖（ＨＣ）フォワードプライマー：
ユニバーサルプライマーミックス（ＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ増幅キット、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３４８５８）
ＬＣリバースプライムマー：
５’－ＧＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＴＣＣＡＧＴＴＧＣ－３’（配列番号７４）
ＨＣリバースプライマー：
５’－ＣＡＴＴＧＧＴＧＡＧＧＧＴＧＣＣＣＧＡＧＴＴＣ－３’（配列番号７５）
【0393】
ＬＣ及びＨＣリバースプライマーは、定常軽（ＣＬ）及び定常重ドメイン１（ＣＨ１）中の領域にアニーリングするように設計された。
【0394】
増幅されたＰＣＲ産生物を直接配列決定した。次いで、特定されたＶＬ ＤＮＡ配列を、ヒトカッパ定常ドメインを含むｐＲＫ哺乳動物細胞発現ベクターにサブクローニングした。ＶＨ ＤＮＡ配列を、完全長ヒトγ１定常ドメインをコードするｐＲＫベクターに挿入した。
【0395】
（ｉｖ）ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体Ｅ１０４のヒト化
ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体Ｅ１０４からのＶＬ（配列番号５３）及びＶＨ（配列番号５２）ドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨサブグループＩＶ（ＶＨＩＶ）コンセンサス配列（それぞれ配列番号９２及び９３）とアライメントさせた。例えば、Ｄｅｎｎｉｓ，Ｃｈ．２ ＣＤＲ Ｒｅｐａｉｒ：Ａ Ｎｏｖｅｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｅｄｓ．Ｓｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい。超可変領域（ＨＶＲ）を、コンセンサスヒトＶＬＫＩ及びＶＨＩＶアクセプターフレームワークへと操作し、ＣＤＲ移植バリアントを生成した。Ｅ１０４ ＶＬドメインから、２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）、及び８９～９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩに移植した。ＶＨドメインから、２６～３５ｂ位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）、及び９３～１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩＶに移植した。重要であり得るフレームワークバーニア位置を評価するために、選択されたバーニア位置を変異させてウサギ配列に戻した。変異させてウサギ配列に戻したバーニア位置は、ＶＬにおける２位、４位、４３位、６８位、及び８７位、ならびにＶＨにおける３７位、６７位、７１位、７８位、及び９１位を含んだ。
ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体Ｅ１０４からのＶＬ（配列番号５３）及びＶＨ（配列番号５２）ドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨサブグループＩＶ（ＶＨＩＶ）コンセンサス配列（それぞれ配列番号９２及び９３）とアライメントさせた。例えば、Ｄｅｎｎｉｓ，Ｃｈ．２ ＣＤＲ Ｒｅｐａｉｒ：Ａ Ｎｏｖｅｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｅｄｓ．Ｓｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい。超可変領域（ＨＶＲ）を、コンセンサスヒトＶＬＫＩ及びＶＨＩＶアクセプターフレームワークへと操作し、ＣＤＲ移植バリアントを生成した。Ｅ１０４ ＶＬドメインから、２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）、及び８９～９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩに移植した。ＶＨドメインから、２６～３５ｂ位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）、及び９３～１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩＶに移植した。重要であり得るフレームワークバーニア位置を評価するために、選択されたバーニア位置を変異させてウサギ配列に戻した。変異させてウサギ配列に戻したバーニア位置は、ＶＬにおける２位、４位、４３位、６８位、及び８７位、ならびにＶＨにおける３７位、６７位、７１位、７８位、及び９１位を含んだ。
【0396】
ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体Ｅ１０４からのＶＬ及びＶＨドメインもまた、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）コンセンサス配列（それぞれ配列番号９２及び９４）とアライメントさせた。Ｄｅｎｎｉｓ（上記参照）を参照されたい。超可変領域（ＨＶＲ）を、コンセンサスヒトＶＬＫＩ及びＶＨＩＩＩアクセプターフレームワークへと操作し、ＣＤＲ移植バリアントを生成した。ｒａｂ．Ｅ１０４ ＶＬドメインから、２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）、及び８９～９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩに移植した。ＶＨドメインから、２６～３５位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）、及び９３～１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩＩＩを移植した。
【0397】
合計、２つの異なるバージョンのヒト化ＶＬ配列及び６つの異なるバージョンのヒト化ＶＨ配列を合成し、ｐＲＫ哺乳動物発現ベクターへと逐次的にサブクローニングした。異なるバージョンのＬＣ及びＨＣを組み合わせることによって、合計１２個の異なるヒト化Ｅ１０４バリアント（ｖ１～ｖ１２）を生成した（表３）。全てのヒト化抗トリプターゼバリアントは、哺乳動物細胞中にＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体として発現された。抗体を、標準方法（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ（商標）；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する親和性クロマトグラフィーによって精製した。実施例部分で使用された全てのＩｇＧ４抗体は、重鎖定常領域でＳ２２８Ｐ変異（ＥＵ番号付け）を含んだが、しかしながら、本明細書に記載の本発明は、Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４バリアントに限定されない。
【0398】
ｈｕＥ１０４．ｖ２のＶＨドメインをコードするＤＮＡ配列は、配列番号１０９に示される。ｈｕＥ１０４．ｖ２のＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、配列番号１１０に示される。重鎖（ＩｇＧ１）をコードするＤＮＡ配列は、配列番号１１１に示される。重鎖（ＩｇＧ４．Ｓ２２８Ｐ）をコードするＤＮＡ配列は、配列番号１１３に示される。軽鎖（ＩｇＧ１及びＩｇＧ４）をコードするＤＮＡ配列は、配列番号１１２に示される。ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ１の重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列は、配列番号８０に示される。ｈｕＥ１０４．ｖ２（ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）の軽鎖（ＬＣ）のアミノ酸配列は、配列番号８１に示される。ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４ Ｓ２２８ＰのＨＣのアミノ酸配列は、配列番号８２に示される。
【0399】
（ｖ）マウス抗トリプターゼモノクローナル抗体３１Ａのヒト化
マウス抗トリプターゼモノクローナル抗体３１Ａ（「ｍｕ．３１Ａ」）からのＶＬ（配列番号２０）及びＶＨ（配列番号１９）ドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）コンセンサス配列（それぞれ配列番号９２及び９３）とアライメントさせた。超可変領域（ＨＶＲ）を、コンセンサスヒトＶＬＫＩ及びＶＨＩＩＩアクセプターフレームワークへと操作し、ＣＤＲ移植バリアントを生成した。ｍｕ．３１Ａ ＶＬドメインから、２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）、及び８９～９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩに移植した。ｍｕ．３１Ａ ＶＨドメインから、２６～３５位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）、及び９３～１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩＩＩに移植した。フレームワークバーニア位置の重要性を評価するために、選択されたバーニア位置を変異させてマウス配列に戻した。変異させてマウス配列に戻したバーニア位置は、ＶＬにおける４位、４３位、４６位、４７位、及び７１位、ならびにＶＨにおける４９位を含んだ。
マウス抗トリプターゼモノクローナル抗体３１Ａ（「ｍｕ．３１Ａ」）からのＶＬ（配列番号２０）及びＶＨ（配列番号１９）ドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）コンセンサス配列（それぞれ配列番号９２及び９３）とアライメントさせた。超可変領域（ＨＶＲ）を、コンセンサスヒトＶＬＫＩ及びＶＨＩＩＩアクセプターフレームワークへと操作し、ＣＤＲ移植バリアントを生成した。ｍｕ．３１Ａ ＶＬドメインから、２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）、及び８９～９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩに移植した。ｍｕ．３１Ａ ＶＨドメインから、２６～３５位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）、及び９３～１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩＩＩに移植した。フレームワークバーニア位置の重要性を評価するために、選択されたバーニア位置を変異させてマウス配列に戻した。変異させてマウス配列に戻したバーニア位置は、ＶＬにおける４位、４３位、４６位、４７位、及び７１位、ならびにＶＨにおける４９位を含んだ。
【0400】
要約すると、３つのヒト化ＬＣ及び５つのヒト化ＨＣを合成して、ｐＲＫ哺乳動物発現ベクターへと逐次的にサブクローニングした。異なるバージョンのＬＣ及びＨＣを組み合わせることによって、３１Ａ（「ｈｕ３１Ａ」）の合計１５個の異なるヒト化バリアント（ｖ１～ｖ１５）を生成した（表４）。
【0401】
全てのヒト化抗トリプターゼバリアントは、哺乳動物細胞中にＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体として発現された。抗体を、標準方法（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ（商標）；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）を使用する親和性クロマトグラフィーによって精製した。
【0402】
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＶＨドメインをコードするＤＮＡ配列は、配列番号１０４に示される。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、配列番号１０５に示される。重鎖（ＩｇＧ１）をコードするＤＮＡ配列は、配列番号１０６に示される。重鎖（ＩｇＧ４．Ｓ２２８Ｐ）をコードするＤＮＡ配列は、配列番号１０８に示される。軽鎖（ＩｇＧ１及びＩｇＧ４）をコードするＤＮＡ配列は、配列番号１０７に示される。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ１のＨＣのアミノ酸配列は、配列番号７６に示される。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ１のＬＣのアミノ酸配列は、配列番号７７に示される。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４ Ｓ２２８ＰのＨＣのアミノ酸配列は、配列番号７８に示される。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４ Ｓ２２８ＰのＬＣのアミノ酸配列は、配列番号７９に示される。
【0403】
（ｖｉ）Ｆａｂ断片のクローニング、発現、及び精製
Ｆａｂは、以前に記載のように、クローニングされ、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現された（Ｓｉｍｍｏｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２６３：１３３－１４７，２００２；Ｌｏｍｂａｎａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．５：１７４８８，２０１５を参照されたい）。発現されたＦａｂを含むＥ．ｃｏｌｉ細胞ペーストを、Ｆａｂを発現する発酵から採取し、２５ｍＭのＥＤＴＡ及び１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）を含むＰＢＳ緩衝剤に溶解した。混合物を均質化し、次いで、マイクロフルイダイザーを２回通過させた。次いで、懸濁液を２１，５００ｘｇで６０分間遠心分離した。次いで、上清を、５ｍｌ／分でＰＢＳを用いて平衡させたプロテインＧカラムに充填した。カラムを、ＰＢＳ緩衝剤でベースラインまで洗浄し、次いで、タンパク質を、０．６％の酢酸で溶出した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってアッセイされたＦａｂを含む画分をプールし、次いで、２０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ５．５）で平衡させた５０ｍＬのＳＰ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）カラムに充填した。カラムを、２つのカラム体積に対して２０ｍＭのＭＥＳ緩衝剤（ｐＨ５．５）で洗浄し、次いで、２０ｍＭのＭＥＳ緩衝剤（ｐＨ５．５）中で０．５ＭのＮａＣｌに線形勾配で溶出した。最終精製として、イオン交換クロマトグラフィーからのＦａｂ含有画分を、濃縮し、ＰＢＳ緩衝剤中でＳ７５サイズ排除クロマトグラフィーにかけた。実験で使用された全てのＦａｂに同じプロトコルを使用した。
Ｆａｂは、以前に記載のように、クローニングされ、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現された（Ｓｉｍｍｏｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２６３：１３３－１４７，２００２；Ｌｏｍｂａｎａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．５：１７４８８，２０１５を参照されたい）。発現されたＦａｂを含むＥ．ｃｏｌｉ細胞ペーストを、Ｆａｂを発現する発酵から採取し、２５ｍＭのＥＤＴＡ及び１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）を含むＰＢＳ緩衝剤に溶解した。混合物を均質化し、次いで、マイクロフルイダイザーを２回通過させた。次いで、懸濁液を２１，５００ｘｇで６０分間遠心分離した。次いで、上清を、５ｍｌ／分でＰＢＳを用いて平衡させたプロテインＧカラムに充填した。カラムを、ＰＢＳ緩衝剤でベースラインまで洗浄し、次いで、タンパク質を、０．６％の酢酸で溶出した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってアッセイされたＦａｂを含む画分をプールし、次いで、２０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ５．５）で平衡させた５０ｍＬのＳＰ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）カラムに充填した。カラムを、２つのカラム体積に対して２０ｍＭのＭＥＳ緩衝剤（ｐＨ５．５）で洗浄し、次いで、２０ｍＭのＭＥＳ緩衝剤（ｐＨ５．５）中で０．５ＭのＮａＣｌに線形勾配で溶出した。最終精製として、イオン交換クロマトグラフィーからのＦａｂ含有画分を、濃縮し、ＰＢＳ緩衝剤中でＳ７５サイズ排除クロマトグラフィーにかけた。実験で使用された全てのＦａｂに同じプロトコルを使用した。
【0404】
（ｖｉｉ）ヒト化抗トリプターゼバリアントのＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析
この実験では、全てのヒト化バリアントは、２９３細胞の一過性形質転換によってＩｇＧとして発現された。ＩｇＧを、プロテインＧ親和性クロマトグラフィーで精製した。組み換えＨｉｓタグ付きヒトトリプターゼベータ１単量体（配列番号１２８）に対する各バリアントの親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００を使用するＳＰＲ分析によって判定された。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップを、モノクローナルマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅからのヒト抗体捕捉キット）で固定し、抗トリプターゼバリアントを各フローセル上で逐次的に捕捉した。ヒトトリプターゼベータ１単量体の連続３倍希釈液を、３０μｌ／分の流量で注射した。各試料を、３分会合及び１０分解離で分析した。各注射後、チップを３ＭのＭｇＣｌ２を使用して再生成した。結合応答は、応答ユニット（ＲＵ）を、同様の密度の無関連のＩｇＧを捕捉するフローセルから控除することによって訂正した。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを、動態分析に使用した。
この実験では、全てのヒト化バリアントは、２９３細胞の一過性形質転換によってＩｇＧとして発現された。ＩｇＧを、プロテインＧ親和性クロマトグラフィーで精製した。組み換えＨｉｓタグ付きヒトトリプターゼベータ１単量体（配列番号１２８）に対する各バリアントの親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００を使用するＳＰＲ分析によって判定された。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップを、モノクローナルマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅからのヒト抗体捕捉キット）で固定し、抗トリプターゼバリアントを各フローセル上で逐次的に捕捉した。ヒトトリプターゼベータ１単量体の連続３倍希釈液を、３０μｌ／分の流量で注射した。各試料を、３分会合及び１０分解離で分析した。各注射後、チップを３ＭのＭｇＣｌ２を使用して再生成した。結合応答は、応答ユニット（ＲＵ）を、同様の密度の無関連のＩｇＧを捕捉するフローセルから控除することによって訂正した。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを、動態分析に使用した。
【0405】
（ｖｉｉｉ）ヒト化抗トリプターゼバリアントの阻害活性の分析
ａ．トリプターゼ酵素アッセイ
ヒト化抗トリプターゼ抗体によるヒトトリプターゼ活性の阻害を、組み換えトリプターゼ活性アッセイを使用して測定した。ｈｕ３１ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びｈｕ３１ａ．ｖ１１ ＩｇＧ１を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で０．０５～１００μｇ／ｍｌ（０．３０～６６７ｎＭ）に希釈し、ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ１を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で０．０２～５０μｇ／ｍｌ（０．１５～３３３ｎＭ）に希釈した。組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体活性酵素を、ＴＮＨ緩衝剤（２００ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍＬのヘパリン、０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ｐＨ８．０）中で０．７５ｎＭに希釈し、黒３８４ウェルプレート（ＶｉｅｗＰｌａｔｅ－３８４Ｆ、黒、クリアボトム、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号６００７４７０）中で抗トリプターゼ抗体と１：１に組み合わせた。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で１時間インキュベートした。比色基質Ｓ－２２８８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ、品番８２－０８５２－３９）を、ＴＮＨ緩衝剤中で１２００μＭに希釈し、プレートに添加した。最終ウェル中濃度は、４００μＭのＳ－２２８８、０．２５ｎＭの組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体、６６μｇ／ｍＬのヘパリン、ならびにｈｕ３１Ａ．ｖ１１については０．１０～２２２ｎＭの抗トリプターゼ抗体、及びｈｕＥ１０４．ｖ２について０．０５～１１１ｎＭであった。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で４０分間インキュベートし、次いで、Ａ４０５で読み取った。抗トリプターゼ抗体のＩＣ５０を、それらのそれぞれの曲線の４パラメータフィットから判定した。
ａ．トリプターゼ酵素アッセイ
ヒト化抗トリプターゼ抗体によるヒトトリプターゼ活性の阻害を、組み換えトリプターゼ活性アッセイを使用して測定した。ｈｕ３１ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びｈｕ３１ａ．ｖ１１ ＩｇＧ１を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で０．０５～１００μｇ／ｍｌ（０．３０～６６７ｎＭ）に希釈し、ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ１を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で０．０２～５０μｇ／ｍｌ（０．１５～３３３ｎＭ）に希釈した。組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体活性酵素を、ＴＮＨ緩衝剤（２００ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍＬのヘパリン、０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ｐＨ８．０）中で０．７５ｎＭに希釈し、黒３８４ウェルプレート（ＶｉｅｗＰｌａｔｅ－３８４Ｆ、黒、クリアボトム、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号６００７４７０）中で抗トリプターゼ抗体と１：１に組み合わせた。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で１時間インキュベートした。比色基質Ｓ－２２８８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ、品番８２－０８５２－３９）を、ＴＮＨ緩衝剤中で１２００μＭに希釈し、プレートに添加した。最終ウェル中濃度は、４００μＭのＳ－２２８８、０．２５ｎＭの組み換えヒトトリプターゼベータ１四量体、６６μｇ／ｍＬのヘパリン、ならびにｈｕ３１Ａ．ｖ１１については０．１０～２２２ｎＭの抗トリプターゼ抗体、及びｈｕＥ１０４．ｖ２について０．０５～１１１ｎＭであった。プレートを、穏やかに撹拌しながら、周囲温度で４０分間インキュベートし、次いで、Ａ４０５で読み取った。抗トリプターゼ抗体のＩＣ５０を、それらのそれぞれの曲線の４パラメータフィットから判定した。
【0406】
ｂ．気管支平滑筋細胞増殖アッセイ及びコラーゲン系収縮アッセイ
ヒト気管支平滑筋細胞（ＢＳＭＣ；カタログ番号ＣＣ－２５７６、Ｌｏｎｚａ Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を、完全培養培地ＳｍＧＭ－２（カタログ番号ＣＣ－３１８２、Ｌｏｎｚａ）中、３７℃で、５％のＣＯ２で、加湿インキュベーター中で培養した。アッセイ培地は、ヒト血清または補充物が添加されていないＳｍＧｍ－２培養培地であった（カタログ番号ＣＣ－３１８１、Ｌｏｎｚａ）。ヒト野生型四量体トリプターゼまたはヒトＳ１９５Ａ触媒不活性トリプターゼ酵素（キモトリプシノーゲン番号付け）を、特定の濃度で使用した。抗ヒトトリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４を、特定の濃度で使用した。
ヒト気管支平滑筋細胞（ＢＳＭＣ；カタログ番号ＣＣ－２５７６、Ｌｏｎｚａ Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を、完全培養培地ＳｍＧＭ－２（カタログ番号ＣＣ－３１８２、Ｌｏｎｚａ）中、３７℃で、５％のＣＯ２で、加湿インキュベーター中で培養した。アッセイ培地は、ヒト血清または補充物が添加されていないＳｍＧｍ－２培養培地であった（カタログ番号ＣＣ－３１８１、Ｌｏｎｚａ）。ヒト野生型四量体トリプターゼまたはヒトＳ１９５Ａ触媒不活性トリプターゼ酵素（キモトリプシノーゲン番号付け）を、特定の濃度で使用した。抗ヒトトリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４を、特定の濃度で使用した。
【0407】
増殖アッセイのために、アッセイを行う１日前に、ＢＳＭＣを、完全培養培地中、９６ウェル組織培養プレート（カタログ番号３５３０７２、Ｆａｌｃｏｎ ＢＤ）に２ｘ１０５細胞／ｍｌで播種した。２４時間後、培養培地を、アッセイ培地で置き換え、細胞を、さらに２４時間インキュベートした。抗ヒトトリプターゼ抗体を、９６ウェル組織培養プレート（カタログ番号３５３０７２、Ｆａｌｃｏｎ ＢＤ）中のアッセイ培地中で３．３倍に連続して希釈した。１００μＬの希釈したｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４を、１００μＬの２００ｎＭのヒトトリプターゼを含む９６ウェルプレートに移した。活性トリプターゼ及び抗ヒトトリプターゼ抗体を、室温で３０分間インキュベートした。この時点で、アッセイ培地を藩種した細胞から除去し、１００μＬの希釈した抗体及びトリプターゼと置き換えた。抗体の最終濃度は、２．０μＭ～４ｐＭの範囲であった。トリプターゼの最終濃度は、１００ｎＭ（ヘパリンを含まない）であった。最終塩濃度は、約１３０ｍＭであった。トリプターゼのみを含むウェルを、刺激対照として含んだ。アッセイ培地のみを含むウェルを、非刺激対照として含んだ。ウェル当たり１μＣｉのＨ３－チミジンを添加する前に、プレートを、３７℃で２４時間インキュベートした。さらに６時間インキュベートした後、増殖をＨ３－チミジン取り込みによって測定した。細胞関連放射活性を、シンチレーション測定によって定量化した。結果を３つ組の試料の平均として表した。グラフを生成し、統計的分析をＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ（Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して行った。
【0408】
コラーゲン系収縮アッセイのために、アッセイを行う１日前に、ＢＳＭＣを、製造者の手引き（カタログ番号ＣＢＡ－２０１、Ｃｅｌｌ ＢｉｏＬａｂｓ Ｉｎｃ．）に従って２４ウェルプレート（カタログ番号３５３０４７、Ｆａｌｃｏｎ ＢＤ）中に９ｘ１０６細胞／ｍＬでコラーゲン中に播種した。３７℃で１時間インキュベートした後、細胞を１ｍＬのアッセイ培地で重層させた。３７℃で２４時間インキュベートした後、培地を２５０μＬの新鮮なアッセイ培地で置き換えた。トリプターゼを、細胞：コラーゲンマトリックスを含む特定のウェルに添加する前に、４μＭの抗ヒトトリプターゼ抗体の存在下または不在下で、２５０μＬのアッセイ培地中で６６０ｎＭに希釈し、３７℃で３０分間インキュベートした。最終濃度は、３３０ｎＭのトリプターゼ及び２μＭの抗体（ヘパリンを含まない）であった。最終塩濃度は、約１３０ｍＭであった。細胞収縮は、滅菌ピペットチップを使用するプレートウォールからの細胞：コラーゲンマトリックスの放出によって開始された。アッセイ培地のみを、非刺激対照として使用した。細胞収縮の開始時（ｔ＝０）に、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ ＡｌｐｈａＩｍａｇｅｒ（登録商標）を使用して、細胞：コラーゲンマトリックスを可視化し、画像化し、録画した。細胞を、３７°でさらに３時間インキュベートし、細胞：コラーゲンマトリックスを、再画像化し、録画した（ｔ＝３）。データを、ＮＩＨ Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェアを使用して分析した。データを、収縮の開始（ｔ＝０）から３時間の時点（ｔ＝３）までの細胞：コラーゲンマトリックスの直径の変化パーセントとして表した。結果を３つ組の試料の平均として表した。
【0409】
ｃ．マスト細胞ヒスタミン放出アッセイ
ヒトマスト細胞株ＬＡＤ２を使用した。ＬＡＤ２細胞を、血清を含まない成長培地である、ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）－３４栄養補給剤（カタログ番号１０６４０－０１９、Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１倍のペニシリン－ストレプトマイシン－グルタミン（カタログ番号１０３７８－０１６、Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及び１００ｎｇ／ｍＬの組み換えヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）（カタログ番号５７３９０８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を含むＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）－３４中、３７℃で、５％のＣＯ２で、加湿インキュベーター中で培養した。Ｋｉｒｓｈｅｎｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２７：６７７－６８２，２００３を参照されたい。ヒトトリプターゼ野生型またはヒトトリプターゼＳ１９５Ａ変異体を、特定の濃度で使用した。Ｓｅｒｏｔｅｃ Ｉｎｃ．ＮＰ－ＢＳＡ（カタログ番号Ｎ５０５０Ｈ－１０、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐｅｔａｌｕｍａ，ＣＡ）から得られた抗ＮＰヒトＩｇＥ（ＪＷ８．５．１３；Ｊａｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２８５（２７）：２０８５０－２０８５９，２０１０を参照されたい）を、ヒスタミン放出を誘発するために特定の濃度で使用した。抗ヒトトリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４を、特定の濃度で使用した。小分子阻害剤Ｇ０２８４９８５５を、特定の濃度で使用した。細胞刺激を、タイロード塩（カタログ番号Ｔ－２３９７、Ｓｉｇｍａ）を使用して行った。ヒスタミンを、ヒスタミンＥＬＩＳＡキット（ＧｅｎＷａｙ．カタログ番号４０－３７１－２５０１０）を使用して測定した。
ヒトマスト細胞株ＬＡＤ２を使用した。ＬＡＤ２細胞を、血清を含まない成長培地である、ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）－３４栄養補給剤（カタログ番号１０６４０－０１９、Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１倍のペニシリン－ストレプトマイシン－グルタミン（カタログ番号１０３７８－０１６、Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及び１００ｎｇ／ｍＬの組み換えヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）（カタログ番号５７３９０８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を含むＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）－３４中、３７℃で、５％のＣＯ２で、加湿インキュベーター中で培養した。Ｋｉｒｓｈｅｎｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２７：６７７－６８２，２００３を参照されたい。ヒトトリプターゼ野生型またはヒトトリプターゼＳ１９５Ａ変異体を、特定の濃度で使用した。Ｓｅｒｏｔｅｃ Ｉｎｃ．ＮＰ－ＢＳＡ（カタログ番号Ｎ５０５０Ｈ－１０、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐｅｔａｌｕｍａ，ＣＡ）から得られた抗ＮＰヒトＩｇＥ（ＪＷ８．５．１３；Ｊａｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２８５（２７）：２０８５０－２０８５９，２０１０を参照されたい）を、ヒスタミン放出を誘発するために特定の濃度で使用した。抗ヒトトリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４を、特定の濃度で使用した。小分子阻害剤Ｇ０２８４９８５５を、特定の濃度で使用した。細胞刺激を、タイロード塩（カタログ番号Ｔ－２３９７、Ｓｉｇｍａ）を使用して行った。ヒスタミンを、ヒスタミンＥＬＩＳＡキット（ＧｅｎＷａｙ．カタログ番号４０－３７１－２５０１０）を使用して測定した。
【0410】
ヒトＩｇＥ誘発ヒスタミン放出アッセイのために、ＬＡＤ２細胞を、６つのウェルディッシュの２つのウェルに４ｘ１０６細胞／４ｍｌで播種した。抗ＮＰ ＩｇＥ（１００ｎｇ／ｍｌ）を、１つのウェルに添加し、細胞を、３７℃で一晩インキュベートし、細胞をプライムした。他のウェルにおいて、抗ＮＰ ＩｇＥを添加することなく細胞を培地のみで培養し、陰性対照として役目を果たした。一晩インキュベートした後、細胞を、細胞培養培地で３回洗浄し、結合されていないＩｇＥを除去した。細胞を、４ｍＬのタイロード塩（細胞密度１ｘ１０６細胞／ｍｌ）に再懸濁し、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ（登録商標）チューブにアリコートした（３００，０００細胞／チューブ）。試料を、１００μｇ／ｍＬのｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４または１０μＭのＧ０２８４９８５５と共にインキュベートし、完全に混合し、室温で１時間インキュベートした。インキュベートした後、ＮＰ－ＢＳＡを、０．１μｇ／ｍＬの最終濃度で試料に添加し、細胞脱顆粒を誘発した。試料を、完全に混合し、ＣＯ２インキュベーターで、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞を、室温で５分間、３０００ｒｐｍで遠心分離し、上清をヒスタミン測定のために収集した。脱顆粒上清中のヒスタミンを、ヒスタミンＥＬＩＳＡキットを使用して定量化した。データを２つ組の試料の平均として表した。
【0411】
ヒトトリプターゼ誘発ヒスタミン放出アッセイのために、ＬＡＤ２細胞を、１０６細胞／ｍＬの濃度でタイロード塩に再懸濁し、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ（登録商標）チューブ（３００，０００細胞／チューブ）にアリコートした。細胞脱顆粒を促進するために、細胞を、３μｇ／ｍＬのトリプターゼ（野生型またはＳ１９５Ａ変異体）、または室温で４５分間１００μｇ／ｍＬのｈｕ３１Ａ．ｖ１１と共に事前にインキュベートされていた３μｇ／ｍＬのトリプターゼで処理した。ＰＢＳを、非刺激対照として使用した。試料を、完全に混合し、ＣＯ２インキュベーターで、３７℃で１時間インキュベートした。最終塩濃度は、約１４０ｍＭであった。次いで、細胞を、室温で５分間、３０００ｒｐｍで遠心分離し、上清をヒスタミン測定のために収集した。脱顆粒上清中のヒスタミンを、ヒスタミンＥＬＩＳＡキットを使用して定量化した。データを２つ組の試料の平均として表した。
【0412】
（ｉｘ）組み換えトリプターゼ単量体及び四量体の精製
内因性シグナルペプチド（配列番号７１のアミノ酸残基１～１５）及びプロペプチド（配列番号７１のアミノ酸残基１６～３０）を含まないヒトトリプターゼは、操作されたエンテロキナーゼ切断部位を有するＨｉｓタグ付き組み換えタンパク質として哺乳動物ＣＨＯ細胞中に発現され、５回の限外濾過、続いてＰＢＳに５回の希釈を行った。次いで、培地を、Ｎｉ－ＮＴＡカラムに充填し、２５０ｍＭのイミダゾールで溶出した。溶出物を、１０ｍＭのＭＯＰＳ、０．２ＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．８の緩衝剤に透析し、単量体トリプターゼを産出した。切断されていないＨｉｓ６タグ付きトリプターゼ単量体は、単量体を残し、四量体を形成しない。
内因性シグナルペプチド（配列番号７１のアミノ酸残基１～１５）及びプロペプチド（配列番号７１のアミノ酸残基１６～３０）を含まないヒトトリプターゼは、操作されたエンテロキナーゼ切断部位を有するＨｉｓタグ付き組み換えタンパク質として哺乳動物ＣＨＯ細胞中に発現され、５回の限外濾過、続いてＰＢＳに５回の希釈を行った。次いで、培地を、Ｎｉ－ＮＴＡカラムに充填し、２５０ｍＭのイミダゾールで溶出した。溶出物を、１０ｍＭのＭＯＰＳ、０．２ＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．８の緩衝剤に透析し、単量体トリプターゼを産出した。切断されていないＨｉｓ６タグ付きトリプターゼ単量体は、単量体を残し、四量体を形成しない。
【0413】
四量体トリプターゼを生成するために、Ｈｉｓタグを含む単量体トリプターゼを、０．１ｍｇ／ｍｌのエンテロキナーゼ酵素を用いて消化し、室温で１６～２０時間、０．５ｍｇ／ｍｌで、硫酸デキストラン－１０ナトリウム塩で安定化した。タンパク質を、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）２００カラム上で１０ｍＭのＭＯＰＳ、２ＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．８の最終緩衝剤に通過させ、四量体を単量体から及びいかなる残基汚染プロテアーゼからも分離した。例示的な精製された四量体は、図３Ａ、ピーク１に示される。プールされた四量体トリプターゼを、免疫化及び活性アッセイのために使用した。
【0414】
Ｂ．結果
（ｉ）ハイブリドーマクローニング
ＥＬＩＳＡ陽性ハイブリドーマクローンからの５匹のウサギ抗トリプターゼ抗体の分子クローニングは、４つの固有の抗トリプターゼクローンを明らかにした。これらのうち、クローンＥ１０４は、酵素アッセイにおいて最も頑強な阻害活性を示し、さらなる操作のために選択された。同時に、酵素アッセイにおいて阻害活性を示したマウス抗トリプターゼモノクローナル抗体クローン３１Ａはまた、さらなる操作のために選択された。
（ｉ）ハイブリドーマクローニング
ＥＬＩＳＡ陽性ハイブリドーマクローンからの５匹のウサギ抗トリプターゼ抗体の分子クローニングは、４つの固有の抗トリプターゼクローンを明らかにした。これらのうち、クローンＥ１０４は、酵素アッセイにおいて最も頑強な阻害活性を示し、さらなる操作のために選択された。同時に、酵素アッセイにおいて阻害活性を示したマウス抗トリプターゼモノクローナル抗体クローン３１Ａはまた、さらなる操作のために選択された。
【0415】
（ｉｉ）キメラＥ１０４（ｃｈＥ１０４）バリアントの生成
ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体Ｅ１０４の軽鎖は、ウサギカッパ軽鎖であり、それは可変ドメイン（ＶＬ）のＦＲ３中のＣｙｓ８０と定常ドメイン（ＣＬ）中のＣｙｓ１７０との間にジスルフィド架橋を含む。ＶＬにおけるＣｙｓ８０の重要性を評価するために、アラニン（Ｃｙｓ８０Ａｌａ）に変異した８０位でシステインを含むキメラＥ１０４バリアントを生成した。表２に示されるように、サイズ排除クロマトグラフィーによって判定されるＣｙｓ８０及びＣｙｓ８０Ａｌａキメラバリアントの両方における高い単量体％によって明示されるように、産出または凝集に関して２つのバリアントの間に差はなかった。したがって、Ｃｙｓ８０残基はヒト化バージョンにおいて重要でなく、Ｃｙｓ８０はＶＨ４移植にあるようにプロリン残基に変化されたことが判定された。加えて、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインのいずれかに融合された可変ドメインＦＲ３においてＣｙｓ８０Ａｌａ変異を含むキメラＥ１０４抗体は、８０位でシステインを含むウサギモノクローナル抗体と同様の阻害活性を示した（データは示されていない）。
表２：産出及び凝集における抗トリプターゼ抗体Ｅ１０４のＣｙｓ８０残基の効果
ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体Ｅ１０４の軽鎖は、ウサギカッパ軽鎖であり、それは可変ドメイン（ＶＬ）のＦＲ３中のＣｙｓ８０と定常ドメイン（ＣＬ）中のＣｙｓ１７０との間にジスルフィド架橋を含む。ＶＬにおけるＣｙｓ８０の重要性を評価するために、アラニン（Ｃｙｓ８０Ａｌａ）に変異した８０位でシステインを含むキメラＥ１０４バリアントを生成した。表２に示されるように、サイズ排除クロマトグラフィーによって判定されるＣｙｓ８０及びＣｙｓ８０Ａｌａキメラバリアントの両方における高い単量体％によって明示されるように、産出または凝集に関して２つのバリアントの間に差はなかった。したがって、Ｃｙｓ８０残基はヒト化バージョンにおいて重要でなく、Ｃｙｓ８０はＶＨ４移植にあるようにプロリン残基に変化されたことが判定された。加えて、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインのいずれかに融合された可変ドメインＦＲ３においてＣｙｓ８０Ａｌａ変異を含むキメラＥ１０４抗体は、８０位でシステインを含むウサギモノクローナル抗体と同様の阻害活性を示した（データは示されていない）。
表２：産出及び凝集における抗トリプターゼ抗体Ｅ１０４のＣｙｓ８０残基の効果
【0416】
（ｉｉｉ）ウサギ抗トリプターゼモノクローナル抗体クローンＥ１０４及びマウス抗トリプターゼモノクローナル抗体クローン３１Ａのヒト化
全てのヒト化バリアントは、ＩｇＧとして発現され、それらの結合親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＳＰＲアッセイにおいて評価された。一般に、全てのヒト化Ｅ１０４バリアント（ｈｕＥ１０４）は、ヒトトリプターゼベータ１単量体に対して同様の結合親和性を示した（表３）。表３は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＳＰＲ分析によって判定された場合のｈｕＥ１０４バリアント、ならびに結合親和性（ＫＤを単位とする）を列挙する。表３はまた、各バリアントのＶＨ及びＶＬドメインの配列番号を提供する。表３中の各クローンを、ＩｇＧ１フォーマットにおいて試験した。一貫して、非常に同様のＩＣ５０値が、ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ５クローン、ならびに程度はそれより少ないが、ｈｕＥ１０４．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ１２が、酵素アッセイにおいていくつかの「フック効果」（酵素活性の増加、すなわち、抗体阻害活性の減少が高抗体濃度で観察された）を示したことを除いて、上に記載の酵素活性アッセイにおいてこれらの抗体について観察された。ウサギモノクローナル抗体（Ｖ７１Ｒ）の元のＡｒｇ残基に対するヒト化抗体のＶ７１、及びウサギモノクローナル抗体（Ｆ７８Ｖ）の元のＶａｌ残基に対するヒト化抗体のＦ７８からの重鎖ＦＲ３領域での修飾は、Ｅ１０４．ｖ１、ｖ５、ｖ１１、及びｖ１２で見られたフック効果を排除した。Ｅ１０４．ｖ９キメラクローンは、親ウサギモノクローナルＡｂ Ｅ１０４にあるようにＲ７１及びＶ７８を含んだ。表３を参照されたい。図１２Ｂに示されるように、７１位でのアルギニン（Ｒ）残基及び７８位でのバリン（Ｖ）残基（両方共にＫａｂａｔ番号付け）は、ＨＶＲ－Ｈ２の立体構造において重要な役割を果たし得、それ故に抗体をトリプターゼと結合する。結果として、ｈｕＥ１０４．ｖ２におけるＶ７１Ｒ及びＦ７８Ｖの修飾は、小界面を形成する２つのプロトマーの会合において重要であるトリプターゼ８０ループの立体構造に影響を及ぼした可能性がある。例えば、米以下の実施例３を参照されたい。したがって、Ｖ７１Ｒ及びＦ７８Ｖの復帰を有するｈｕ１０４．ｖ２は、７１位におけるＶ及び７８位におけるＦを有するｖ１と比較して結合活性及び阻害活性を改善した。ｖ１、ｖ５、ｖ１１、及びｖ１２を除く全てのバリアントは、上に記載の酵素アッセイによって測定された場合に、トリプターゼ活性の完全な阻害を示した。ヒト化クローンｈｕＥ１０４．ｖ２を、さらなる評価のために選択した。ｈｕＥ１０４．ｖ２の重鎖及び軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、図１に示される。
表３：ヒト化Ｅ１０４（ｈｕＥ１０４）バリアントの結合親和性（括弧内のヒトトリプターゼｂ１単量体に対する結合親和性）
全てのヒト化バリアントは、ＩｇＧとして発現され、それらの結合親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＳＰＲアッセイにおいて評価された。一般に、全てのヒト化Ｅ１０４バリアント（ｈｕＥ１０４）は、ヒトトリプターゼベータ１単量体に対して同様の結合親和性を示した（表３）。表３は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＳＰＲ分析によって判定された場合のｈｕＥ１０４バリアント、ならびに結合親和性（ＫＤを単位とする）を列挙する。表３はまた、各バリアントのＶＨ及びＶＬドメインの配列番号を提供する。表３中の各クローンを、ＩｇＧ１フォーマットにおいて試験した。一貫して、非常に同様のＩＣ５０値が、ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ５クローン、ならびに程度はそれより少ないが、ｈｕＥ１０４．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ１２が、酵素アッセイにおいていくつかの「フック効果」（酵素活性の増加、すなわち、抗体阻害活性の減少が高抗体濃度で観察された）を示したことを除いて、上に記載の酵素活性アッセイにおいてこれらの抗体について観察された。ウサギモノクローナル抗体（Ｖ７１Ｒ）の元のＡｒｇ残基に対するヒト化抗体のＶ７１、及びウサギモノクローナル抗体（Ｆ７８Ｖ）の元のＶａｌ残基に対するヒト化抗体のＦ７８からの重鎖ＦＲ３領域での修飾は、Ｅ１０４．ｖ１、ｖ５、ｖ１１、及びｖ１２で見られたフック効果を排除した。Ｅ１０４．ｖ９キメラクローンは、親ウサギモノクローナルＡｂ Ｅ１０４にあるようにＲ７１及びＶ７８を含んだ。表３を参照されたい。図１２Ｂに示されるように、７１位でのアルギニン（Ｒ）残基及び７８位でのバリン（Ｖ）残基（両方共にＫａｂａｔ番号付け）は、ＨＶＲ－Ｈ２の立体構造において重要な役割を果たし得、それ故に抗体をトリプターゼと結合する。結果として、ｈｕＥ１０４．ｖ２におけるＶ７１Ｒ及びＦ７８Ｖの修飾は、小界面を形成する２つのプロトマーの会合において重要であるトリプターゼ８０ループの立体構造に影響を及ぼした可能性がある。例えば、米以下の実施例３を参照されたい。したがって、Ｖ７１Ｒ及びＦ７８Ｖの復帰を有するｈｕ１０４．ｖ２は、７１位におけるＶ及び７８位におけるＦを有するｖ１と比較して結合活性及び阻害活性を改善した。ｖ１、ｖ５、ｖ１１、及びｖ１２を除く全てのバリアントは、上に記載の酵素アッセイによって測定された場合に、トリプターゼ活性の完全な阻害を示した。ヒト化クローンｈｕＥ１０４．ｖ２を、さらなる評価のために選択した。ｈｕＥ１０４．ｖ２の重鎖及び軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、図１に示される。
表３：ヒト化Ｅ１０４（ｈｕＥ１０４）バリアントの結合親和性（括弧内のヒトトリプターゼｂ１単量体に対する結合親和性）
【0417】
表４は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＳＰＲ分析によって測定された場合のｈｕ３１Ａバリアント、ならびに結合親和性（ＫＤナノモルを単位とする）を列挙する。表４はまた、各抗体のＶＨ及びＶＬの配列番号を示す。全てのバリアントは、酵素アッセイによって測定された場合に、トリプターゼ活性の完全な阻害を示した（データは示されていない）。表４中の各クローンを、ＩｇＧ１フォーマットにおいて試験した。クローンｈｕ３１Ａ．ｖ１１は、酵素アッセイにおいて最良の親和性及び最良の阻害活性を示し、それ故にさらなる評価のために選択された。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の重鎖及び軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、図１に示される。
表４：ヒト化３１Ａ（ｈｕ３１Ａ）バリアントの結合親和性（括弧内のヒトトリプターゼｂ１単量体に対する結合親和性）
表４：ヒト化３１Ａ（ｈｕ３１Ａ）バリアントの結合親和性（括弧内のヒトトリプターゼｂ１単量体に対する結合親和性）
【0418】
ヒト化抗トリプターゼ抗体の阻害活性もまた、上に記載の組み換えトリプターゼ酵素活性アッセイを使用して判定した。ｈ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４の両方は、酵素アッセイにおいてトリプターゼ活性を完全に阻害した（図２Ａを参照されたい）。ＩＣ５０値は、以下に示される（表５）。
表５：ヒト化抗トリプターゼ抗体の阻害活性（ＩＣ５０）
表５：ヒト化抗トリプターゼ抗体の阻害活性（ＩＣ５０）
【0419】
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２の両方は、トリプターゼベータ１に加えて、ヒトトリプターゼベータ２、及びベータ３と結合及び阻害する。代表的なデータは、親和性分析及び標的としてヒトトリプターゼベータ１を使用する酵素アッセイについて上に記載のプロトコルに基づいて、以下の表６に示される。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２もまた、カニクイザルトリプターゼＤ１と結合及び阻害する。
表６：ヒト化抗トリプターゼ抗体の親和性及びＩＣ５０
表６：ヒト化抗トリプターゼ抗体の親和性及びＩＣ５０
【0420】
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４またはｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４の阻害活性を、ヒト初期気道平滑筋細胞（ＳＭＣ）機能のいくつかのエクスビボモデルにおいてさらに評価した。培養培地へのトリプターゼベータ１の添加は、ヒト初期気道ＳＭＣ（図２Ｂ）の増殖の増加、ならびに細胞の収縮（図２Ｃ）をもたらす。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１またはｈｕＥ１０４．ｖ２の添加は、増殖の用量依存的低減をもたらし、３００μｇ／ｍｌでベースラインレベルまで増殖を阻害した（図２Ｂ）。同様に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１またはｈｕＥ１０４．ｖ２の添加は、ベースラインレベルまで収縮を低減した（図２Ｃ）。これらのデータは、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２がトリプターゼ機能を阻害したことを示す。
【0421】
マスト細胞へのトリプターゼまたはＩｇＥの添加は、脱顆粒及びヒスタミンの放出をもたらす（図２Ｄ～２Ｅ）。ヒスタミン放出を阻害するｈｕ３１Ａ．ｖ１１の能力を評価した。Ｓ１９５Ａ置換を有するトリプターゼベータ１は、触媒不活性である。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の添加は、ヒスタミン放出を促進するトリプターゼの能力をブロックした（図２Ｄ～２Ｅ）。阻害の程度（３０～５０％）は、トリプターゼベータ１活性、Ｇ０２８４９８５５の小分子阻害剤と同様であった（図２Ｅ）。これらのデータは、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１がトリプターゼ機能を阻害することをさらに示す。
【0422】
実施例２：ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧは、ヒトトリプターゼベータ四量体を解離する
活性四量体トリプターゼの結晶構造は、各プロトマーの触媒部位（各プロトマーのＳ１９５、Ｈ５７、及びＤ１０２によって表される、キモトリプシノーゲン番号付け）が、四量体の孔の内側に位置すること、及び活性部位へのアクセスが、ペプチド基質及びより小さい分子のみがアクセスを得ることができるように限定されていることを示す（Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３９２：３０６－１１，１９９９）。現在まで、哺乳動物セリンプロテアーゼ阻害剤は、トリプターゼのタンパク質分解活性を阻害するとは知られていない。クニッツドメイン型構造のヒトセリンプロテアーゼ阻害剤は、活性部位にアクセスするには大きすぎる。ヒトにおけるトリプターゼの天然阻害剤は知られていない。現在までに、トリプターゼの唯一の既知の天然高分子阻害剤は、ヒル由来トリプターゼ阻害剤（ＬＤＴＩ）（Ｓｏｍｍｅｒｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３７３：６８５－９４，１９９７）及びダニ由来プロテアーゼ阻害剤（ＴｄＰＩ）（Ｐａｅｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６８：１１７２－８６，２００７）である。ＬＤＴＩ（４．７ｋＤａ）及びＴｄＰＩ（１１．１ｋＤａ）は、それぞれ、４つのトリプターゼ四量体の活性部位のうちの２つまたは３つをブロックする能力を有する。ＬＤＴＩ及びＴｄＰＩは、トリプターゼ四量体を解離しない。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＩｇＧ及びＦａｂの両方は、ＬＤＴＩまたはＴｄＰＩよりはるかに大きく、さらにそれらはトリプターゼを完全に阻害する。
活性四量体トリプターゼの結晶構造は、各プロトマーの触媒部位（各プロトマーのＳ１９５、Ｈ５７、及びＤ１０２によって表される、キモトリプシノーゲン番号付け）が、四量体の孔の内側に位置すること、及び活性部位へのアクセスが、ペプチド基質及びより小さい分子のみがアクセスを得ることができるように限定されていることを示す（Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３９２：３０６－１１，１９９９）。現在まで、哺乳動物セリンプロテアーゼ阻害剤は、トリプターゼのタンパク質分解活性を阻害するとは知られていない。クニッツドメイン型構造のヒトセリンプロテアーゼ阻害剤は、活性部位にアクセスするには大きすぎる。ヒトにおけるトリプターゼの天然阻害剤は知られていない。現在までに、トリプターゼの唯一の既知の天然高分子阻害剤は、ヒル由来トリプターゼ阻害剤（ＬＤＴＩ）（Ｓｏｍｍｅｒｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３７３：６８５－９４，１９９７）及びダニ由来プロテアーゼ阻害剤（ＴｄＰＩ）（Ｐａｅｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６８：１１７２－８６，２００７）である。ＬＤＴＩ（４．７ｋＤａ）及びＴｄＰＩ（１１．１ｋＤａ）は、それぞれ、４つのトリプターゼ四量体の活性部位のうちの２つまたは３つをブロックする能力を有する。ＬＤＴＩ及びＴｄＰＩは、トリプターゼ四量体を解離しない。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＩｇＧ及びＦａｂの両方は、ＬＤＴＩまたはＴｄＰＩよりはるかに大きく、さらにそれらはトリプターゼを完全に阻害する。
【0423】
溶液中で四量体トリプターゼと結合するＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の化学量論を判定した。活性四量体トリプターゼベータ１を、各プロトマーに対して２倍のモル過剰のＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と混合し、錯体形成の平衡を達成させた。四量体が非共有結合的にアセンブリされるため、四量体構造における各抗体の解離効果は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析され、個々のタンパク質のピークの保持時間／容量及び分子量を判定した。タンパク質を含む画分を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって特徴付け、タンパク質構成成分を判定した（図３Ａ）。四量体トリプターゼの保持時間のみが、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と複合したとき（ｔｒ＝２８．１分、試験３、ピーク３）よりも著しくより短かった（ｔｒ＝２６分、試験１、ピーク１）。多角度光散乱法（ＭＡＬＳ）と組み合わせたさらなるＳＥＣ分析を行い、溶出されたタンパク質錯体の分子量を判定した。四量体トリプターゼは、ＭＡＬＳに従うと、１２０ｋＤａ±０．２％の分子量を有し、それはアミノ酸配列（グリコシル化を除く）に基づく１０９．５３７ｋＤａの理論分子量と一致する。Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と複合したトリプターゼを含むタンパク質ピークは、ＭＡＬＳ（ピーク３）によって６７．７ｋＤａ±３％であると測定され、それは１Ｆａｂと結合される１トリプターゼ単量体を含む錯体を反映する。これは、トリプターゼ四量体が、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１への結合によって単量体に解離することを示し、それは結晶構造（実施例３を参照されたい）及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂの阻害活性によってさらに確証される。
【0424】
同じ四量体トリプターゼ／Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１錯体を、高濃度ヘパリン、例えば、１００μｇ／ｍｌのヘパリン（試験２）を含んだ酵素アッセイ緩衝剤中でＳＥＣによって分析したとき、トリプターゼ－Ｆａｂ錯体の保持時間は、２８．１分（試験３、ピーク３）～２７．６分（試験２、ピーク２）にわずかに減少し、それはトリプターゼ単量体及びＦａｂのタンパク質錯体と結合するヘパリンに起因する可能性が高い。ブタ腸粘膜からのヘパリンは、６～３０ｋＤａの範囲の分子量を有するポリアニオン鎖の混合物であり、ほとんどの鎖は１７～１９ｋＤａの範囲である。この結果は、四量体トリプターゼへのヘパリンの安定化効果もまた、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１によって中和または破壊され、さらに１００μｇ／ｍｌのヘパリンの高濃度でもＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１が四量体を完全に解離することを妨げることができないことを示す。図３Ａを参照されたい。
【0425】
溶液中の四量体トリプターゼへのｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂの結合の化学量論もまた判定した。活性四量体トリプターゼを、各プロトマーに対して２倍のモル過剰のＦａｂと混合し、錯体形成の平衡を達成させた。結果として得られた錯体混合物を、ヘパリンを含まないトリプターゼＳＥＣ緩衝剤を用いてＳＥＣによって分離し、個々のタンパク質ピークの保持時間／容量及び分子量を判定した）。タンパク質を含む画分を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって特徴付け、タンパク質構成成分を判定した（データは示されていない）。ＷＴ四量体トリプターゼは、ＭＡＬＳに従うと、ｔｒ＝２６分の保持時間（例えば、図３Ａのピーク１を参照されたい）、及び１２０ｋＤａ±０．２％の分子量を有し、それはアミノ酸配列（グリコシル化を除く）に基づく１０９．５３７ｋＤａの理論分子量と一致する。
【0426】
ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂは、ＳＥＣ－ＭＡＬＳによって判定された場合に、ｔｒ＝２１．６ｍＬの保持時間、及び２７６．１ｋＤａの分子量で、ＷＴ四量体トリプターゼとの同種の錯体を形成した（データは示されていない）。これは、それと結合された４つのＦａｂを含むトリプターゼ四量体の錯体を表す。このピークからの画分のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、Ｆａｂ及びトリプターゼプロトマーの存在を確認した。したがって、ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂは、四量体トリプターゼを含む安定した錯体を形成し、四量体の安定性には影響しなかった（データは示されていない）。
【0427】
単量体Ｈｉｓ６タグ付きトリプターゼ（図３Ｂ、試験１）またはＷＴ四量体トリプターゼ（図３Ｂ、試験２）を、２倍のモル過剰のｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂと混合し、各錯体混合物はＳＥＣによって個別に分析された。各クロマトグラムの第１のタンパク質ピークは、それぞれ、ｔｒ＝２５．８分（図２Ｂ、試験１、ピーク２）及びｔｒ＝２６分（図２Ｂ、試験２、ピーク３）の保持時間を有した。これらの２つの第１のピークからの画分のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、トリプターゼ及びＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂの両方が、このピークに存在することを示した。両方のタンパク質ピークもまた、ＭＡＬＳによって分析し、６８ｋＤａ±３％の分子量を判定し、それは１Ｆａｂと結合される１トリプターゼ単量体を含む錯体を反映する。各試験の第２のピークは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって判定された場合に、それぞれ、ｔｒ＝３１．６分（試験１、ピーク６）及びｔｒ＝３１．８（試験２、ピーク７）の保持時間を有し、Ｆａｂ ｈｕＥ１０４．ｖ２のみを含んだ。両方のＳＥＣ試験のクロマトグラムは、実際に重ね合わせて、四量体トリプターゼまたはＨｉｓタグ付き単量体トリプターゼを錯体形成のために使用したかどうかとは無関係に、保持時間が実際に同一であったため、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ結合が、ＷＴ四量体トリプターゼを単量体に解離することを示した。
【0428】
四量体トリプターゼを、１００μｇ／ｍＬのヘパリンの存在下で、過剰なｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂと再度混合し、ランニング緩衝剤（試験３）としてＴＮＨ緩衝剤中でＳＥＣによって分析し、３つのタンパク質ピークが観察された：第１のピークは、ＷＴ四量体トリプターゼのみ（ｔｒ＝２６分、例えば、図３Ａ、ピーク１）よりもはるかに短い保持時間（ｔｒ＝２１分、図３Ｂ、試験３、ピーク１）を有する。第２のピークは、ｔｒ＝２７．２分（図３Ｂ、試験３、ピーク４）の保持時間を有し、最後のピークは、ｔｒ＝３１．２分（図３Ｂ、試験３、ピーク５）の保持時間を有し、それはＦａｂのみを示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、トリプターゼ及びＦａｂの両方がピーク１及び４に存在し、ピーク１は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂによって結合された活性四量体を含み、ピーク４は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂによって結合されたトリプターゼ単量体を含む（データは示されていない）ことを示した。これは、１００μｇ／ｍＬの高濃度のヘパリンの存在下で、四量体トリプターゼの画分のみが、ピーク４にあるようにｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂによって解離されたが、トリプターゼの大部分は、ピーク１でｈｕ１０４．ｖ２ Ｆａｂと結合された四量体トリプターゼを残したことを結論付けることをもたらした。要約すると、ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂは、検出可能な阻害活性を示さなかったが、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、トリプターゼ四量体を完全に解離した。しかしながら、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＦａｂまたはｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧとは異なり、四量体を解離するｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂの能力は、高濃度のヘパリンによって部分的に中和された。したがって、これらのデータに基づいて、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂは、高濃度のヘパリンありまたはなしでトリプターゼ四量体を解離することができ、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、高濃度のヘパリンの不在下でトリプターゼ四量体を解離することができることを結論付ける。
【0429】
各トリプターゼ単量体は、触媒三残基の同一のセットを有し、４つの単量体は、基質が侵入する中間孔に面する４つの触媒部位を含む四量体を形成するためにアセンブリする。Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ（上記参照）を参照されたい。Ｐｅｒｅｉｒａらは、活性部位をブロックすることによる小分子トリプターゼ阻害剤の設計について論じる。開発中のいくつかの小分子トリプターゼ阻害剤は、乏しい選択性または乏しい生物学的利用能のために中断されていた。例えば、Ｃａｉｒｎｓ，Ｊ．Ａ．，２００５，Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １８：５５－６６を参照されたい。
【0430】
野生型四量体トリプターゼは、一緒に共有結合的に保持されておらず、生理学的条件下で単量体に解離することができる（Ｓｃｈｗａｒｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：７３７２－７３７０，１９８６、Ａｌｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２４８：８２１－８２７，１９８７、Ｓｃｈｗａｒｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：２３０４－２３１１，１９９０）。成熟トリプターゼが、四量体として高酵素活性を示し、生理学的関連条件下で単量体として不活性であることが報告されている（Ｓｃｈｗａｒｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：７３７２－７３７９，１９８６）。本明細書に示されるデータは、ｈｕ３１．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２の両方が、トリプターゼ単量体と結合し、四量体を単量体に少なくとも低濃度のヘパリンで解離し、解離後、単量体と結合されたままであることを示す。単量体トリプターゼは、ある特定の条件化で酵素活性であり得ることもまた報告されている（Ｆｕｋｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：３１６５，２００６、Ｆａｊａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３６９：６０３－６１０）。観察は、不活性単量体中の血清が、単量体と結合する解離抗体に対して主なシンクとして作用し得るため、解離抗トリプターゼ抗体が、四量体安定化活性部位ブロッキング抗体などの活性部位ブロッキング阻害剤より劣ることになるかどうかという問題を提起する。加えて、四量体安定化活性部位ブロッキング抗体は、単量体がある特定の条件下で酵素活性であり得る場合に、治療としてより有利であり得る。
【0431】
薬物動態－薬力学（ＰＫＰＤ）モデルを用いるシリコ実験において、四量体安定化中和抗体と比較して、四量体解離抗体の有効性を初めに調査した。モデルを、Ｓｉｍｂｉｏｌｏｇｙ（登録商標）ソフトウェア（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ Ｉｎｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＭＡ）で開発し、循環中及び肺組織中の四量体トリプターゼ生成、解離、及びクリアランス、ならびに抗トリプターゼ抗体のＰＫ及び結合効果をシミュレーションした。２つの種類の抗体は、以下の通りに考えられる：（１）結合時に四量体を素早く解離するが、単量体とも結合する、解離抗体、及び（２）その基質へのアクセスをブロックすることによって活性四量体のみと結合し、その活性を中和するが、四量体の半減期も延長する、安定化四量体特異性抗体。０．２ｎＭのＫＤを有する四量体解離抗体を、３００ｍｇを４週間毎に皮下投与する仮定用量のレジメンでシミュレーションした。抗体の１０％の肺分配係数を推測した。ベースラインシナリオに関して、血清中４ｎｇ／ｍｌの全トリプターゼ及び組織区画中１０ｎｇ／ｍｌの全トリプターゼを推測し、高トリプターゼシナリオに関して、１０ｎｇ／ｍｌの血清トリプターゼ及び４０ｎｇ／ｍｌ組織トリプターゼレベルを推測した。単量体への生理学的四量体解離の相対速度定数、及び各種のクリアランスは、全トリプターゼプール内に８：１比の単量体対四量体をもたらす。
【0432】
解離抗体または安定化抗体のいずれかの３００ｍｇを４週間毎に皮下投与するシミュレーションした用量レジメンに関して、図４Ａの左のパネルは、ベースラインシナリオでの肺における全抗体及び遊離／結合されていない抗体の両方の抗体の濃度を示し、右のパネルは、単量体及び四量体の両方の事前処理レベルに対する対応する肺（遊離）トリプターゼレベルを示す。結果は、ＫＤ＝０．２ｎＭを有する解離抗体について（上のパネル）、肺抗体のほとんどは、遊離のままであり（左上のパネル）、単量体及び四量体と結合するにも関わらず十分な薬物有用性を示し、結果はさらに、解離抗体が、四量体（活性）トリプターゼにおいて９０％超の持続された低減を達成することを示す（右上のパネル）。安定化抗体（下のパネル）について、ほぼ全ての抗体が遊離であるが（左下のパネル）、しかしながら、四量体における低減は、８０％以上を維持されるのみである。
【0433】
安定化抗体の四量体特異性が高い全トリプターゼ条件下で有利であると考えることができたため、これらのシミュレーションをより高トリプターゼシナリオで繰り返した（図４Ｂ）。これらの条件下で、より多くの解離抗体が、不活性単量体トリプターゼによって結合され、解離抗体によってより低い遊離抗体（図４Ｂの左上のパネルを図４Ａのものと比較）をもたらし、より少ないが依然として良好な四量体の中和（最低で約８０％）をもたらす（図４Ｂ、右上のパネル）。比較すると、四量体安定化抗体については、単量体への結合の不在に起因するより大きな遊離抗体にも関わらず（図４Ｂ、左下のパネル）、抗体は、シミュレーションで安定化抗体（ＫＤ＝０．０２ｎＭ）について１０倍高い親和性が推測されたにも関わらず（図４Ｂ、右下のパネル）、同じ条件下で解離抗体と比較してより少ない中和（最低で約７０％）を達成する。より少ない中和は、四量体に対する「リザーバー」として機能を果たす結合された標的のより大きな安定性（半減期）に起因する。したがって、これらのシミュレーションは、解離抗体が有望であり、試験される異なるシナリオで四量体特異性安定化抗体よりも良好に作用することを予期する。
【0434】
次に、解離抗体が、異なる抗体用量で四量体特異性安定化抗体とどのように比較するかを試験した。図４Ｃは、抗体用量レベル（３０、１００、３００ｍｇ、皮下、４週間毎）の機能としてベースライン及び高トリプターゼシナリオの両方での、両方の種類の抗体の四量体の中和を示す。ベースラインシナリオ（図４Ｃ、左のパネル）では、解離抗体は、一貫して、考えられる全ての用量にわたって、安定化抗体よりも四量体活性を低減する。高トリプターゼシナリオ（図４Ｃ、右のパネル）では、解離抗体は、四量体の中和に関して全てにおいて安定化抗体より性能が優れているが、最も低い用量（３０ｍｇ）ではそうではなく、この点では、２つの抗体は比較可能なほどに機能する。概して、解離抗体（ＫＤ＝０．２ｎＭ）よりも１０倍大きな親和性（ＫＤ＝０．０２ｎＭ）にも関わらず、安定化抗体を使用して達成されるより少ない中和は、解離抗体と比較して、安定化抗体を使用する比較可能な四量体の中和について、はるかにより高い親和性の要求（＞１０倍）を示す。両方のシナリオに関して、（９０％）四量体の中和のための最適な用量は、安定化抗体について推測された１０倍大きな親和性にも関わらず、安定化抗体に対してよりも解離抗体に対してより低い（結果は示されていない）。したがって、モデルの下で、解離抗体は、用量範囲にわたって、１０倍高い親和性を有する安定化抗体より性能が優れているか、またはそれと少なくとも一致し、血清及び肺トリプターゼ濃度が試験される。加えて、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧが、全てのトリプターゼ活性を完全に阻害したことを本明細書で示した。図２Ａ及び表５を参照されたい。
【0435】
知る限りでは、治療用途のために開発されたトリプターゼ四量体解離抗体のいかなる例も存在していない。急性喘息肺を含む疾患組織の炎症性遺伝子座は、対照対象と比較して酸性である；例えば、Ｈｕｎｔ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６１：６９４－６９９，２０００、Ｓｔｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １５：３９８２，１９９５；Ｂｅｌｌｏｃｑ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：５０８６，１９９８、及びＬａｒｄｎｅｒＪ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．６９：５２２，２００１を参照されたい）。公開されたデータは、マウスモノクローナル抗トリプターゼ抗体Ｂ１２が、中性ｐＨでヒトトリプターゼベータを中和するが、酸性ｐＨ６で、酵素アッセイにおいてヒトトリプターゼベータ活性を中和することが不可能であることを示した（Ｆｕｋｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：３１６５，２００６を参照されたい）。それ故に、抗体ｈｕ３１ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２を、中性ｐＨ及び酸性ｐＨの両方で線維素原を切断することにおいてヒトトリプターゼの活性ベータを阻害するそれらの能力について試験した。
【0436】
簡潔には、ヒトトリプターゼベータ四量体（１．０μｇ／ｍＬ）を、室温で、ｐＨ６．０または７．５（５０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍｌのヘパリン）のＴＮＨ緩衝剤中で３０分間試験された抗体と共に事前にインキュベートした。次いで、混合物を、５μｇのヒト線維素原基質（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、カタログ番号ＨＩＣ－０１５０Ｒ）と共に３７℃で２．５時間インキュベートした。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂ、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ、及びＢ１２ ｍＩｇＧ１を２００μｇ／ｍＬで各々試験した。切断生成物を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びクマシーブルー染色によって分析した。
【0437】
図５Ａ及び５Ｂに示されるように、ヒトトリプターゼベータ１は、ｐＨ６及び７．５の両方で、線維素原アルファ及びベータ鎖を切断した（レーン１、線維素原のみを、レーン２、線維素原及びトリプターゼベータ１と比較）。抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂは、ｐＨ６及びｐＨ７．５の両方でヒトトリプターゼベータを阻害した（レーン３）が、０．１ｍｇ／ｍｌの高濃度ヘパリンのアッセイ条件下でｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは阻害しなかった（レーン５）。レーン６はＢ１２ ｍＩｇＧ１のみであった。線維素原アルファ鎖の減少は、トリプターゼタンパク質分解活性を示す。線維素原ベータ鎖もまた切断されるが、ベータ鎖切断は、ゲル上で不明瞭である傾向がある。したがって、アルファ鎖の強度は、定量化され、図５Ａ及び５Ｂの下のパネルに示される。したがって、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂは、ｐＨ６及び７．５でトリプターゼ活性を阻害したが、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、高ヘパリン濃度のアッセイ条件下で阻害ではなかった。
【0438】
ＩｇＧフォーマット抗体（ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４）の阻害活性もまた、ｐＨ６、７、または８のＴＮＨ緩衝剤中で、１ｎＭのトリプターゼ及び４００μＭの発色性Ｓ－２２８８の存在下で、阻害アッセイにおいて基質としてＳ－２２８８ペプチドを使用して評価した。この実験でのヘパリンの最終濃度は、約９５μｇ／ｍｌであった。ＩｇＧフォーマットにおけるｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２は両方とも、ｐＨ６、７、及び８でトリプターゼ活性を完全に阻害した（データは示されていない）。
【0439】
それ故に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ及びｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧの両方は、高親和性でトリプターゼと結合し、また喘息などのトリプターゼ関連障害の生理学的関連条件下で、トリプターゼ活性を効率的に阻害する。興味深いことには、これらの実験条件において、マウスモノクローナル抗ヒトトリプターゼ抗体Ｂ１２ ＩｇＧ１はまた、公開された結果とは逆に、ｐＨ６でヒトトリプターゼベータの阻害を示した（図５Ａ、レーン４）。誤差は、酸性ｐＨによって活性化され、Ｂ１２阻害に抵抗性である公開されたデータ中アッセイのために使用された材料中に存在する任意の残留非トリプターゼプロテアーゼ活性に起因し得る。
【0440】
実施例３：抗トリプターゼ抗体の構造分析
Ａ．３１Ａファミリー抗体
（ｉ）．Ｘ線結晶学モデル
野生型四量体トリプターゼを、１．５倍のモル過剰のＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及び２倍のモル過剰の大豆トリプシン阻害剤（ＳＴＩ）（Ｒｏｃｈｅ）と混合し、室温で１０分間インキュベートした。ＳＴＩを添加して結晶化を促進した。次いで、混合物を、１０ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ６．８）、０．５ＭのＮａＣｌ中で、Ｓ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するＳＥＣにかけた。トリプターゼの三重錯体を含む画分、ＳＴＩ、及びＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１をプールし、４０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
Ａ．３１Ａファミリー抗体
（ｉ）．Ｘ線結晶学モデル
野生型四量体トリプターゼを、１．５倍のモル過剰のＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及び２倍のモル過剰の大豆トリプシン阻害剤（ＳＴＩ）（Ｒｏｃｈｅ）と混合し、室温で１０分間インキュベートした。ＳＴＩを添加して結晶化を促進した。次いで、混合物を、１０ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ６．８）、０．５ＭのＮａＣｌ中で、Ｓ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するＳＥＣにかけた。トリプターゼの三重錯体を含む画分、ＳＴＩ、及びＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１をプールし、４０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
【0441】
トリプターゼ／Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１／ＳＴＩの結晶を、懸滴で蒸気拡散法を用いて１９℃で成長させた。０．１Ｍのトリス（ｐＨ７．５）、０．２Ｍの硫酸リチウム、及び５％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４０００を含む結晶化緩衝剤を、タンパク質溶液と同じ容量で混合した。結晶を、２５％のエチレングリコールを含む人工的な母液中に浸漬し、液体窒素中でガラス化した。
【0442】
表７は、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１／トリプターゼ／ＳＴＩの構造に関するＸ線データの収集及び精密化情報を示す。２．１５Åに及ぶ回折データを、ＡＬＳビームライン５．０．２で、六方格子で収集した。データ低減及びスケーリングは、６／ｍｍｍへのラウエ群の割り当てを可能にした（Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２７６，３０７－３２６，１９９７、Ｗｉｎｎ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｓｅｃｔ．Ｄ－Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６７，２３５－２４２，２０１１）。単位細胞体積及び提案されたタンパク質含有量に基づいて、単一のＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１／トリプターゼ／ＳＴＩ錯体を、結晶学非対照単位で予期した。構造を、分子置換（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４０：６５８－６７４，２００７）を使用して空間群Ｐ６２２２で解析した。以下の探査プローブを、それぞれ分離体として使用した：ＰＤＢ受託４Ａ６Ｌに由来する以前に判定されたトリプターゼプロトマー（Ｌｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２２：１０４９－１０５４，２０１２）、ＰＤＢ １ＡＶＵからのＳＴＩ（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７５：３４７－３６３，１９９８）、ＰＤＢ １ＦＶＣからのＣＤＲループの剥奪されたＦｖ断片（Ｅｉｇｅｎｂｒｏｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２９：９６９－９９５，１９９３）、及びＰＤＢ １ＦＶＤからの定常領域。いくつかが精密化を抑制した後（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｓｅｃｔ．Ｄ－Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６７：３５５－３６７，２０１１）、電子密度マップは、Ｆａｂタンパク質配列の訂正、ならびに欠損している残基及び側鎖を明確な密度に適合させることを可能にした（Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｓｅｃｔ．Ｄ－Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６：４８６－５０１，２０１０）。水を自動的に添加した（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｓｅｃｔ．Ｄ－Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６：２１３－２２１，２０１０）。より多くのラウンドのモデル調整及び精密化（ＢＵＳＴＥＲソフトウェア；Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ Ｌｔｄ．，２０１１）は、最終モデルをもたらした。モデルは、トリプターゼ残基Ｉｌｅ１６－Ｌｙｓ２４４（キモトリプシノーゲン番号付け）、ＳＴＩ残基Ａｓｐ１－Ａｓｐ１７７、Ｆａｂ軽鎖残基Ａｓｐ１－Ｃｙｓ２１４（Ｋａｂａｔ番号付け）（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，１９９１）について連続的である。Ｆａｂ重鎖は、定常ドメインにおける５個のアミノ酸残基ギャップを除いて連続的である。形状相補性統計（Ｓｃ）（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：９４６－９５０，１９９３）の値は、０．７３であり、他の強結合Ｆａｂ／抗原錯体と一致する。最も大きなタンパク質間接触面積は、それらは各々それらの界面で１２６０Å２溶媒アクセス可能表面（Ｂｒｏｇｅｒ Ｃ，ｘｓａｅ，Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，２０００）を失うため、トリプターゼとＳＴＩとの間である。対照的に、Ｆａｂ／トリプターゼ接触は、各側で７６０Å２のみであり、Ｆａｂの軽鎖及び重鎖の間に均等に分布される。４Å以下の結晶充填接触は、ＳＴＩ、トリプターゼ、及び４個全てのＦａｂドメインの周りに良好に分布され、多数の水素結合ならびに疎水性接触を含む。
表７：Ｘ線データの収集及び精密化Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１／トリプターゼ／ＳＴＩ
表７：Ｘ線データの収集及び精密化Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１／トリプターゼ／ＳＴＩ
【0443】
（ｉｉ）水素重水素交換（ＨＤＸ）によって分析され、ＭＳによって測定される抗トリプターゼ抗体のエピトープマッピング
抗体の存在下及び不在下での単量体トリプターゼの重水素取り込みの割合を測定して、抗体結合の際に修飾される構造領域を判定した。結合された試料は、トリプターゼ及びそれぞれの抗体の１：１の混合物を含み、調製し、室温で１時間インキュベートした。重水素標識前のトリプターゼ濃度は、抗体結合試料及び抗体結合されていない試料において３０μＭであった。ＨＤＸ実験は、試料を、ｐＤ７．０で２０ｍＭの酢酸ヒスチジンを含む重水素標識緩衝剤に１５倍に希釈することを含んだ。３０秒～１０００分で対数的に試された６つの標識時間を、３つ組に取り、ｐＨをｐＨ２．５に低下させ、２Ｍの塩化グアニジウム（ＧｄｍＣｌ）及び０．２５Ｍのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を添加することによってクエンチし、以前に記載されるように冷オンラインシステムに注射した（Ｍａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ．Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２２：１８９８－１９０５，２０１１）。
抗体の存在下及び不在下での単量体トリプターゼの重水素取り込みの割合を測定して、抗体結合の際に修飾される構造領域を判定した。結合された試料は、トリプターゼ及びそれぞれの抗体の１：１の混合物を含み、調製し、室温で１時間インキュベートした。重水素標識前のトリプターゼ濃度は、抗体結合試料及び抗体結合されていない試料において３０μＭであった。ＨＤＸ実験は、試料を、ｐＤ７．０で２０ｍＭの酢酸ヒスチジンを含む重水素標識緩衝剤に１５倍に希釈することを含んだ。３０秒～１０００分で対数的に試された６つの標識時間を、３つ組に取り、ｐＨをｐＨ２．５に低下させ、２Ｍの塩化グアニジウム（ＧｄｍＣｌ）及び０．２５Ｍのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を添加することによってクエンチし、以前に記載されるように冷オンラインシステムに注射した（Ｍａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ．Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２２：１８９８－１９０５，２０１１）。
【0444】
簡潔には、試料をまず固定化ペプシンカラム（２．１ｘ３０ｍＭ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に通過させ、淡水化するためにトラップカラム（Ａｃｑｕｉｔｙ Ｖａｎｇｕａｒｄ Ｃ８）に充填した。次いで、ペプチド断片を、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（商標）ＢＥＨ Ｃ１８カラム（１．７μＭの粒子サイズ、１．０×５０ｍｍ）を使用する逆相クロマトグラフィーによって分離し、質量分析のために、質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ（商標）、ｍ／ｚ４００で１２０ｋＨｚの分解能）に導入した。クロマトグラフィー移動相を以前に記載されるように調製し、重水素逆交換を最小化した（Ｗａｌｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２３：２１３２－２１３９，２０１２）。ＥｘＭＳプログラム（Ｋａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ．Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２２：１９０６－１９１５，２０１１）を使用して、重水素化ペプチドを特定し、抽出されたイオンクロマトグラムを調製し、次いでそれをインハウスパイソンスクリプトによって分析した（Ｗａｌｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１０：１８８９８－１８９０３，２０１３）。これらのスクリプトを、各ペプチドによる平均で、縮退荷電状態を組み合わせ、二項式を用いる同位体分布に適合させ、実施された重水素の数を抽出した。
【0445】
（ｉｉｉ）液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）による完全質量
精製されたタンパク質（トリプターゼ及びその変異体を含む）を、０．１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（Ｔｈｅｒｍｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）で酸性化し、１０μＭの最終濃度に希釈した。試料を、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０無限高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）－チップキューブインターフェース（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）と結合されたＡｇｉｌｅｎｔ ６５２０精密質量四重極飛行時間型（Ｑ－ＴＯＦ）で分析した。タンパク質を、４０ｎＬ／分の流量で、ＰＬＲＰ－Ｓ １５０ｍｍ×７５μＭのカラム上で逆相ＨＰＬＣによって分離し、１０分で、５～８０％の勾配水溶性溶媒Ａ（９７％のＨ２Ｏ、３％のアセトニトリル、０．１％のギ酸）と有機溶媒Ｂ（９８％のアセトニトリル、０．１％のギ酸）とに分離した。データを、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）で収集し、生の質量スペクトルをデコンボリューションして完全質量データを生成した。主なピークは、６１７６４．４Ｄａ及び６３１５２．９Ｄａで観察された。複数のＧｌｃＮＡｃ（２０３Ｄａ）質量の添加もまた観察された。
精製されたタンパク質（トリプターゼ及びその変異体を含む）を、０．１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（Ｔｈｅｒｍｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）で酸性化し、１０μＭの最終濃度に希釈した。試料を、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０無限高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）－チップキューブインターフェース（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）と結合されたＡｇｉｌｅｎｔ ６５２０精密質量四重極飛行時間型（Ｑ－ＴＯＦ）で分析した。タンパク質を、４０ｎＬ／分の流量で、ＰＬＲＰ－Ｓ １５０ｍｍ×７５μＭのカラム上で逆相ＨＰＬＣによって分離し、１０分で、５～８０％の勾配水溶性溶媒Ａ（９７％のＨ２Ｏ、３％のアセトニトリル、０．１％のギ酸）と有機溶媒Ｂ（９８％のアセトニトリル、０．１％のギ酸）とに分離した。データを、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）で収集し、生の質量スペクトルをデコンボリューションして完全質量データを生成した。主なピークは、６１７６４．４Ｄａ及び６３１５２．９Ｄａで観察された。複数のＧｌｃＮＡｃ（２０３Ｄａ）質量の添加もまた観察された。
【0446】
（ｉｖ）結果
ヒトトリプターゼの結晶構造は、四量体の各単量体が、６つのループセグメントを介して２つの異なる界面でその隣接物に接触することを示す：その全体において参照により本明細書に組み込まれるＰｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３９２：３０６－１１，１９９８によって記載されるプロトマーの命名法に従う大界面（プロトマーＡ／Ｄ及びＢ／Ｃの間）または小界面（プロトマーＡ／Ｂ及びＣ／Ｄの間）。各プロトマーの６つの表面ループは、活性部位を囲み、単量体間接触を係合する（Ｐｅｒｅｉｒａ（上記参照））。その間でも、１４７ループ、７０～８０ループ、及び３７ループは、小界面の相互作用において係合し、１７３フラップ、９７ループ、及び６０ループは、大界面相互作用において重要である。小界面は、疎水性相互作用のみを含むが、大界面は、いくつかの極性、疎水性相互作用に加えて荷電相互作用を含む。ヘパリンは、２つの隣接するプロトマーＡ／Ｂ及びＣ／Ｄにわたる正に荷電された残基と非共有結合することによって、四量体のせん断点であると考えられる小界面をさらに安定化させる。Ｐｅｒｅｉｒａ（上記参照）を参照されたい。自然に、小界面は、四量体のせん断点であり、その後に大界面によって保持される二量体の解離が続く。トリプターゼの半減期は、全身性アナフィラキシーの発症後のヒト血液中の循環において約２～３時間である（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８３：１５５１－１５５５，１９８９を参照されたい）。四量体の正常半減期は約３０分である。
ヒトトリプターゼの結晶構造は、四量体の各単量体が、６つのループセグメントを介して２つの異なる界面でその隣接物に接触することを示す：その全体において参照により本明細書に組み込まれるＰｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３９２：３０６－１１，１９９８によって記載されるプロトマーの命名法に従う大界面（プロトマーＡ／Ｄ及びＢ／Ｃの間）または小界面（プロトマーＡ／Ｂ及びＣ／Ｄの間）。各プロトマーの６つの表面ループは、活性部位を囲み、単量体間接触を係合する（Ｐｅｒｅｉｒａ（上記参照））。その間でも、１４７ループ、７０～８０ループ、及び３７ループは、小界面の相互作用において係合し、１７３フラップ、９７ループ、及び６０ループは、大界面相互作用において重要である。小界面は、疎水性相互作用のみを含むが、大界面は、いくつかの極性、疎水性相互作用に加えて荷電相互作用を含む。ヘパリンは、２つの隣接するプロトマーＡ／Ｂ及びＣ／Ｄにわたる正に荷電された残基と非共有結合することによって、四量体のせん断点であると考えられる小界面をさらに安定化させる。Ｐｅｒｅｉｒａ（上記参照）を参照されたい。自然に、小界面は、四量体のせん断点であり、その後に大界面によって保持される二量体の解離が続く。トリプターゼの半減期は、全身性アナフィラキシーの発症後のヒト血液中の循環において約２～３時間である（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８３：１５５１－１５５５，１９８９を参照されたい）。四量体の正常半減期は約３０分である。
【0447】
トリプターゼ四量体を保持する小タンパク質界面または大タンパク質界面が、トリプターゼと結合するｈｕ３１Ａ．ｖ１１またはｈｕＥ１０４．ｖ２によって一緒に不安定化されるかどうかを判定した。２つのトリプターゼ変異体を生成し、それは、Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ（上記参照）によって記載されるプロトマーの命名法に従う大界面（プロトマーＡ／Ｄ及びＢ／Ｃの間）または小界面（プロトマーＡ／Ｂ及びＣ／Ｄの間）のいずれかで分子間ジスルフィド結合を介する四量体において２つの隣接するプロトマーの共有結合をもたらす。したがって、小界面の解離が共有ジスルフィド結合二量体形成に起因して妨げられるとき、大界面の解離は依然として可能である。反対に、大界面の解離が、共有ジスルフィド結合二量体形成に起因して妨げられるとき、小界面の解離は依然として可能である。
【0448】
小界面におけるＴｙｒ７５及び大界面におけるＩｌｅ９９（キモトリプシノーゲン番号付け、図７）を、システインに個別に変異させた。これらの部位は、四量体の準２回対称に起因してこれらの界面においてそれら自身に面するため、これらの部位を選択した（Ｓｏｍｍｅｒｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：１０９８４－９１，１９９９）。ＰｙＭＯＬソフトウェアを使用するシリコにおけるＴｙｒ７５またはＩｌｅ９９のシステインへの置換は、各対向するシステインのチオール間の２．４Å及び３．２Åのそれぞれの距離を示し、それは２．０５Åの典型的なジスルフィド結合の長さよりもいくらか大きい。それにもかかわらず、２つの結果として得られた四量体変異体は、発現され、精製されて、トリプシンペプチドＭＳ分析によって判定されるように、それぞれの界面の間で形成されたジスルフィド結合を含んだ。さらに、両方の変異体もまた酵素活性であったが、野生型四量体トリプターゼと比較した場合、約半分の触媒効率（ｋｃａｔ／ＫＭ）であった（表８）。
表８：野生型の酵素活性及び変異体トリプターゼ
表８：野生型の酵素活性及び変異体トリプターゼ
【0449】
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＦａｂまたはｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂで錯体化されたこれらの変異体のサイズを分析した。トリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃ及びＩ９９Ｃをそれぞれ、野生型トリプターゼにおいて上に記載のように、錯体形成のために２倍のモル過剰のＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１で混合し、サイズ排除クロマトグラフィーによって分析した。比較のための参照として、野生型四量体トリプターゼを、抗体ｈｕＥ１０４．ｖ１からのＦａｂで錯体化し、それはトリプターゼと特異的に結合するが、四量体を解離せず、高い抗体対四量体の比率で阻害活性を失う。ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂを有する野生型四量体トリプターゼ錯体は、２１．６分の保持時間を有した（図６Ａ、参照ピーク）。この錯体のＳＥＣ－ＭＡＬＳ分析は、４つの結合Ｆａｂを有する１つのトリプターゼ四量体を含む錯体を示す、２７６．１ｋＤａの分子量を判定した。
【0450】
Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１は、それぞれ、２５．６分（図６Ａ、試験２、ピーク１）及び２３．９分（図６Ａ、試験３、ピーク２）の保持時間を有する四量体トリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃ及びＩ９９Ｃを含む錯体を形成した（図６Ａ）。両方の保持時間は、参照錯体の保持時間よりも長く、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１を有する錯体形成の際に両方の四量体変異体がそれらのぞれぞれの共有結合二量体に解離することを示す。各ピークからの試料を取集し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、各ピークにおける種を確認した（図６Ｂ）。これらの溶出されたタンパク質ピークのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びそれぞれのトリプターゼ二量体の両方が、同じ画分中に存在したことを示す（図６Ｂ）。試験４のピーク３（２８．１分のＴｒ）及びピーク４（３１．６分のＴｒ）は、それぞれ、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１、及び過剰Ｆａｂと錯体化されたＷＴ単量体を表した。少量のピーク３の試料を、ＳＤＳ ＰＡＧＥにおいてピーク４の試料に持ち越した。Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と複合したトリプターゼ変異体の両方は、参照ピークよりも長い保持時間で試験し、大界面及び小界面の両方がＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１結合の際に不安定化されることを示す。この不安定化は、野生型トリプターゼ四量体について観察されるように四量体解離をもたらし、それは最終的にはトリプターゼのタンパク質分解活性を不活性化する。Ｂ１２ Ｆａｂもまた両方の変異体四量体を不安定化した（データは示されていない）。
【0451】
成熟ヒトトリプターゼベータ１とのヒト化抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合を、Ｘ線結晶学モデルを用いて研究し、２．１５Å分解能でのｈｕ３１Ａ．ｖ１１のトリプターゼ及びＦａｂ断片の間の分子錯体の構造を判定した。結果は、１つのｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂと相互作用する１つのトリプターゼ／ＳＴＩ（大豆トリプシン阻害剤）複合体を含む結晶学非対照単位であった。ＳＴＩを結晶化の目的のために含んだ。
【0452】
エピトープの１つの定義は、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂの任意の原子の４Å以内であるトリプターゼアミノ酸のセットである。プログラムＰｙＭＯＬを、エピトープを見出すために使用した。トリプターゼポリペプチド鎖中のアミノ酸残基は、配列番号付けから外れる慣習（キモトリプシノーゲン番号付け）に従って番号付けされ、同種のタンパク質にわたる比較を可能し得る。このトリプターゼ残基番号付けスキームを翻訳する表、及び単純な配列スキームが提供される（図７）。以下のトリプターゼ残基を、括弧内の遺伝子配列番号付けスキームを含む慣習に従って命名する。
【0453】
トリプターゼ上のｈｕ３１Ａ．ｖ１１のエピトープは、以下の残基を含む：Ｈ３６、Ｑ５０、Ｖ６０ｃ、Ｋ６０ｄ、Ｄ６０ｅ、Ｌ６１、Ａ６２、Ａ６３、Ｒ６５、Ｐ８４、Ｖ８５、Ｓ８６、Ｒ８７、Ｅ１０９、Ｅ１１０、Ｐ１１１（それぞれ配列番号７１のＨ５１、Ｑ６７、Ｖ８０、Ｋ８１、Ｄ８２、Ｌ８３、Ａ８４、Ａ８５、Ｒ８７、Ｐ１０３、Ｖ１０４、Ｓ１０５、Ｒ１０６、Ｅ１２８、Ｅ１２９、及びＰ１３０に対応する、キモトリプシノーゲン番号付け）。図８を参照されたい。トリプターゼの６０ｓ、８０ｓ、及び１００ｓループの残基は、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と親密な接触にあるが、Ｈｉｓ３６及びＧｌｎ５０残基は、Ｆａｂとの相互作用の周辺でより親密な接触にある。Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ（上記参照）もまた参照されたい。Ｆａｂ－トリプターゼ接触は、Ｆａｂ軽鎖（Ｖａｌ３０、Ｔｈｒ３１、Ｔｙｒ３２、Ｔｙｒ３４、Ａｒｇ５０、Ｔｙｒ９０、Ｈｉｓ９２、Ｓｅｒ９３、Ｔｙｒ９４）及び重鎖（Ｐｈｅ５０、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｙ５３、Ｓｅｒ５４、Ｓｅｒ５５、Ｔｈｒ５６、Ｔｙｒ５８、Ａｒｇ９５、Ｔｙｒ９７、Ａｓｐ９８）からの同様の寄与で、溶媒（各側）から７６０Å２を排除する。上に記載のエピトープ残基はまた、他の３１Ａ由来抗体に適用することが考えられる。
【0454】
三重錯体からのＦａｂ／トリプターゼ二量体を、野生型四量体（Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ（上記参照）からのトリプターゼプロトマーＡ及びＤに重ねたとき、２つのＦａｂが四量体プレーンに対してほぼ直角である四量体の同じ側に位置することを見出した（図９）。プロトマーＢ及びＣに対してこのプロセスを繰り返すことによって、四量体の反対側に２つＦａｂを配置する。とりわけ、これらの結果は、Ｆａｂ軽鎖間の立体衝突を強調し、四量体トリプターゼとの錯体としてではなく、ＳＥＣ上に単量体トリプターゼとの１：１の錯体としてＦａｂが溶出する事実と一致する（図９）
【0455】
四量体トリプターゼは、経時的な酵素活性における崩壊及び溶液中の円二色性（ＣＤ）スペクトルの変化によって監視された場合に、一緒に共有結合的に保持されておらず、生理学的条件下で単量体に解離することができる（Ｓｃｈｗａｒｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：７３７２－７３７９，１９８６；Ｓｃｈｗａｒｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：２３０４－１１，１９９０）。四量体の各プロトマーへのｈｕ３１Ａ．ｖ１１（ＦａｂまたはＩｇＧ）の結合は、トリプターゼと結合したときにＦａｂの立体衝突に起因して、四量体の解離を促進及び加速し、任意の四量体の再会合を妨げる。したがって、トリプターゼは、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１結合によって引き起こされる各プロトマーにおけるアロステリック変化に起因して、より急速な様式で、解離し、酵素不活性単量体になる。四量体における疑似２回対称のために、小界面及び大界面を構成するほぼ全ての相互作用が２回存在する。これはまた、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１結合によって引き起こされるトリプターゼ構造における各々のわずかな変化が、各界面において２回生じ、それによって不安定化を増強することを意味する。
【0456】
トリプターゼとのＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の錯体構造は、大界面中にある、６０ｓループの著しい変化を示す。具体的には、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂによって結合したとき、残基Ｖａｌ６０ｃ（配列番号７１のＶａｌ８０に対応する）は、結合されていないトリプターゼ構造中に見出されるその位置と比較したとき、側鎖において著しい移動を有する。結合されていないトリプターゼ四量体において、隣接するプロトマーからのＴｙｒ１７３ｄは、残基Ｖａｌ６０ｃ及びＶａｌ９０（図１０、両方共にキモトリプシノーゲン番号付けに従う、図７もまた参照されたい）によって創造された疎水性ポケット中に位置する。抗体錯体において、Ｖａｌ６０ｃの立体配座変化は、そのポケットとのＴｙｒ１７３ｄ結合を妨げる立体障害を創造する。トリプターゼとのｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合が、６０ｓループの一部と近くの残基との相互作用を含むため、それは、Ｖａｌ６０ｃにおけるこの立体配座変化に関与し得る。これは、大界面の不安定化をもたらし得、したがって不活性単量体へのトリプターゼ四量体の解離を高める。
【0457】
トリプターゼ中のＨｉｓ３６（キモトリプシノーゲン番号付け；配列番号７１のＨｉｓ５１に対応する）のイミダゾール環は、Ｆａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１との疎水性相互作用を作り、結合されていない四量体構造中のトリプターゼプロトマーと比較したとき、トリプターゼ残基Ｈｉｓ３６、Ｐｒｏ３７ａ、及びＴｙｒ３７ｂの３０ｓループにおけるＣαの痕跡の変化をもたらす。これは、小界面においてＰｒｏ１５２及びＰｒｏ１５２ａを含む隣接するプロトマーとの重要な疎水性相互作用が衰弱され得るように、Ｔｙｒ３７ｂ側鎖の立体構造に影響する（図１１、全てキモトリプシノーゲン番号付けに従う、図７もまた参照されたい）。
【0458】
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂを有する２つの異なるジスルフィドロックトリプターゼバリアントＹ７５Ｃ及びＩ９９Ｃの錯体形成の研究は、四量体トリプターゼの大界面及び小界面の両方が、抗体によって不安定化されることを示す。四量体と結合されるＦａｂの立体衝突、ならびに大界面及び小界面の重要な相互作用残基への立体配座変化の両方は、四量体解離に寄与することにおいて需要である可能性が高い。これらの２つの因子は、相互排他的ではない。インシリコに示された四量体の各プロトマーと結合したときのｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂに由来する立体障害は、単一ＩｇＧからの２つのＦａｂが典型的には１つの四量体と同時に結合することができなかったことを示す（図９）。この観察は、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＦａｂ及びＩｇＧの両方が四量体を解離することができ、それによって酵素活性を阻害することの発見と一貫する。この観察はまた、抗体によって結合された解離された単量体が四量体を形成するために再アセンブリする可能性が低いことを示す。
【0459】
次に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂと結合された単量体トリプターゼのＨＤＸ実験を行い、溶液中の結合相互作用を研究した。経時的なＨＤＸの程度を質量分析によって監視した。この方法は、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１結合エピトープを示す情報を提供するが、それはまた、エピトープに結合する抗体から離れて生じ得る立体配座安定性のアロステリック変化を検出する。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１が結合されたときにトリプターゼ中でより遅い交換を示したアミド結合は、残基２５～２９、４０～４１、５７～５９、６０～６１、６６～６７、８３～８８、１０８～１１０、及び２３１～２３３（キモトリプシノーゲン番号付け）の領域に位置した。これらの領域を４Å以内の結晶構造中に見られるＦａｂ ｈｕ３１Ａ．ｖ１１でトリプターゼ残基と比較したとき、６０ｓ、８０ｓ、及び１００ｓループ中の結合エピトープ残基を特定する両方の方法の間で高度の重複を観察した（図８）。主なトリプターゼ配列の２０ｓ、４０ｓ、５０ｓ、及び２３０ｓ領域中の位置などのＨＤＸによって特定される他の領域は、結晶構造によって抗体と直接接触していないが、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の存在下で立体配座動力学の低減を示す。興味深いことには、残基５７～５９は、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１結によってアロステリックに影響されるように思われる。この短いαヘリックスは、セリンプロテアーゼ中の触媒三残基の一部であり、かつ触媒活性に対して必須である残基Ｈｉｓ５７（キモトリプシノーゲン番号付け）を含む。ＨＤＸによって特定された残基４０及び４１は、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と直接接触していないが、それらは、それらのヘアピンループ中でＴｙｒ３７ｂ（キモトリプシノーゲン番号付け）をディスプレイする逆平行ベータシートの一部として興味深い構造位置にあり、それは上に議論されるように小界面に対して重要な接触残基である（図１１）。この領域に対する構造的改変は、小界面の安定性に影響を与え得、四量体解離をもたらす可能性がある。
【0460】
ＨＤＸによるそれらの構造動力学の変化も経る、２０ｓループ（非構造ループ中の全ての残基）及び２３０ｓ領域（２３０ｓヘリックスとも称される）中のペプチド結合は、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合部位から離れている。ＨＤＸ実験は、構造動力学の変化を監視し、バルク立体配座の変化と特定の立体配座のエネルギー安定性の変化を区別しない。全体として、ＨＤＸ及びＸ線結晶学モデルによって得られた構造情報と、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１結合によってアロステリックに影響される特定されたさらなる残基との間に高度の一貫性を見出した。
【0461】
Ｂ．Ｅ１０４由来抗トリプターゼ抗体の構造分析
（ｉ）材料及び方法
ｈｕＥ１０４．ｖ１の結合は四量体を解離しないため、ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂを使用してトリプターゼ四量体を有する結晶構造を生成した。トリプターゼ／ｈｕＥ１０４．ｖ１の結晶を、０．１Ｍのトリス（ｐＨ８．５）、０．２Ｍの塩化カルシウム、２０％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４０００、及び８％のペンタエリスリトールエトキシレートを含むリザーバー溶液とタンパク質を１：１（ｖ／ｖ）で混合することによって蒸気拡散法を用いて１９℃で成長させた。結晶を、０．１Ｍのトリス（ｐＨ８．５）、０．２Ｍの塩化カルシウム、３５％のＰＥＧ３３５０を含む人工的な母液中で凍結保護し、液体窒素中で急速冷凍した。Ｐｉｌａｔｕｓ ６Ｍピクセルアレイ検出器及び０．９７９５Åの波長Ｘ線を用いて、回折データを、３Åの分解能に及ぶ単斜格子で、ＳＳＲＬビームライン１２～２で収集した。データを低減し（Ｋａｂｓｃｈ，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６：１２５－１３２，２０１０；Ｖｏｎｒｈｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６７：２９３－３０２，２０１１）、スケーリングし（Ｗｉｎｎ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６７：２３５－２４２，２０１１）、構造は、４つのＦａｂによって結合されるトリプターゼ四量体を明らかにする空間群Ｐ２１における分子置換（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４０：６５８－６７４，２００７）によって解析した。分子置換探査プローブは、回転関数のみを用いて肘角度の範囲で修飾されたバージョンをスキャニングすることによる、ＰＤＢ受託４Ａ６Ｌからのトリプターゼプロトマー、及びＰＤＢ受託１ＦＶＤに由来する抗体Ｆａｂ断片であった。限られた精密化の後、１つのＦａｂ定常領域を、１ＦＶＤからの定常領域のみを使用して分子置換探査で置き換えた。トリプターゼ残基の番号付けをキモトリプシノーゲンスキームに変更し、Ｆａｂ－Ｅ１０４ｖ１残基の番号付けをＫａｂａｔスキームに変更した。モデル及び電子密度マップの検査及び調節を、Ｃｏｏｔ（Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６：４８６－５０１，２０１０）を用いて行い、構造をＲＥＦＭＡＣ５（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６７：３５５－３６７，２０１１）及びＰｈｅｎｉｘ．ｒｅｆｉｎｅ（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６，２１３－２２１，２０１０）を用いて精密化した。データ収集及び精密化測定基準は表９に現れる。ＨＤＸ実験を、上に記載されるように行った。
表９：トリプターゼベータｈｕＥ１０４．Ｖ１ Ｆａｂに関するＸ線測定基準の表
（ｉ）材料及び方法
ｈｕＥ１０４．ｖ１の結合は四量体を解離しないため、ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂを使用してトリプターゼ四量体を有する結晶構造を生成した。トリプターゼ／ｈｕＥ１０４．ｖ１の結晶を、０．１Ｍのトリス（ｐＨ８．５）、０．２Ｍの塩化カルシウム、２０％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４０００、及び８％のペンタエリスリトールエトキシレートを含むリザーバー溶液とタンパク質を１：１（ｖ／ｖ）で混合することによって蒸気拡散法を用いて１９℃で成長させた。結晶を、０．１Ｍのトリス（ｐＨ８．５）、０．２Ｍの塩化カルシウム、３５％のＰＥＧ３３５０を含む人工的な母液中で凍結保護し、液体窒素中で急速冷凍した。Ｐｉｌａｔｕｓ ６Ｍピクセルアレイ検出器及び０．９７９５Åの波長Ｘ線を用いて、回折データを、３Åの分解能に及ぶ単斜格子で、ＳＳＲＬビームライン１２～２で収集した。データを低減し（Ｋａｂｓｃｈ，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６：１２５－１３２，２０１０；Ｖｏｎｒｈｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６７：２９３－３０２，２０１１）、スケーリングし（Ｗｉｎｎ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６７：２３５－２４２，２０１１）、構造は、４つのＦａｂによって結合されるトリプターゼ四量体を明らかにする空間群Ｐ２１における分子置換（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４０：６５８－６７４，２００７）によって解析した。分子置換探査プローブは、回転関数のみを用いて肘角度の範囲で修飾されたバージョンをスキャニングすることによる、ＰＤＢ受託４Ａ６Ｌからのトリプターゼプロトマー、及びＰＤＢ受託１ＦＶＤに由来する抗体Ｆａｂ断片であった。限られた精密化の後、１つのＦａｂ定常領域を、１ＦＶＤからの定常領域のみを使用して分子置換探査で置き換えた。トリプターゼ残基の番号付けをキモトリプシノーゲンスキームに変更し、Ｆａｂ－Ｅ１０４ｖ１残基の番号付けをＫａｂａｔスキームに変更した。モデル及び電子密度マップの検査及び調節を、Ｃｏｏｔ（Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６：４８６－５０１，２０１０）を用いて行い、構造をＲＥＦＭＡＣ５（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６７：３５５－３６７，２０１１）及びＰｈｅｎｉｘ．ｒｅｆｉｎｅ（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６，２１３－２２１，２０１０）を用いて精密化した。データ収集及び精密化測定基準は表９に現れる。ＨＤＸ実験を、上に記載されるように行った。
表９：トリプターゼベータｈｕＥ１０４．Ｖ１ Ｆａｂに関するＸ線測定基準の表
【0462】
（ｉｉ）結果
トリプターゼ四量体を保持する小タンパク質界面または大タンパク質界面が、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ結合時に一緒に不安定化されるかどうかを判定するために、四量体トリプターゼ変異体Ｙ７５ＣまたはＩ９９Ｃ（上記を参照されたい）を、錯体形成のために２倍のモル過剰のＦａｂ ｈｕＥ１０４．ｖ２と混合し、ＳＥＣによって分析した（図６Ｃ）。ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、四量体トリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃを含む錯体を形成し、クロマトグラムは、過剰Ｆａｂを含む、ｔｒ＝２１．６分（図６Ｃ、試験１、ピーク１）及びｔｒ＝３１分（ピーク４）の保持時間を有する２つのピークを示す。ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、四量体トリプターゼ変異体Ｉ９９Ｃを含む錯体を形成し、クロマトグラムは、過剰Ｆａｂを含む、ｔｒ＝２３．８分（図６Ｃ、試験２、ピーク２）及びｔｒ＝３１分（試験２、ピーク５）の保持時間を有する２つのピークを示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ及びトリプターゼ二量体変異体の両方がピーク１及び２に存在し、過剰Ｆａｂがピーク４及び５に存在したことを示した（データは示されていない）。比較のために、ＷＴトリプターゼ四量体と複合したｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、ｈｕＥ１０４．ｖ２（ｔｒ＝２３．８分、試験２、ピーク２）と複合したトリプターゼ四量体変異体Ｉ９９Ｃよりも小さいＦａｂ ｈｕＥ１０４．ｖによって結合された単量体を含む、ｔｒ＝２６分（図６Ｃ、試験３、ピーク３）の保持時間を有した。ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂと複合したトリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃ（小界面ロック変異体四量体）は、ｈｕＥ１０４．ｖ１の４つのＦａｂと結合されたＷＴトリプターゼ四量体の安定したインタクトな錯体と同様の保持時間を有した（図６Ａ、試験１、参照ピークを参照されたい）。一方で、ｈｕＥ１０４．ｖ２と複合したトリプターゼ変異体Ｉ９９Ｃ（大界面ロック変異体四量体）は、試験１での第１のピークより小さい錯体を示すより長い保持時間を有した。結果は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂが四量体の小界面のみを解離することができたが、大界面は解離できなかった。したがって、野生型トリプターゼ四量体に結合するとき、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ結合は、小界面のみを解離する。実験的条件下で、解離された小界面は、高局所濃度（例えば、０．１ｍｇ／ｍｌ）で存在するヘパリンによって素早く復元され得、それは四量体の再アセンブリをもたらす。このヘパリン濃度は、生理学的ヘパリン濃度よりも実質的に高く、それは約１．５μｇ／ｍｌの血清であることが報告されている（例えば、Ｅｎｇｅｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２３：５７８－５８１，１９６１及びＤａｖｉｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｓ．Ａｆｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．１００：３０７－３０７，２０１０を参照されたい）。低濃度のヘパリンで、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、ＷＴトリプターゼ四量体を完全に解離することができ、トリプターゼ活性を中和するが、ＩｇＧフォーマットにおけるｈｕＥ１０４．ｖ２よりも可能性は少ない。
トリプターゼ四量体を保持する小タンパク質界面または大タンパク質界面が、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ結合時に一緒に不安定化されるかどうかを判定するために、四量体トリプターゼ変異体Ｙ７５ＣまたはＩ９９Ｃ（上記を参照されたい）を、錯体形成のために２倍のモル過剰のＦａｂ ｈｕＥ１０４．ｖ２と混合し、ＳＥＣによって分析した（図６Ｃ）。ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、四量体トリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃを含む錯体を形成し、クロマトグラムは、過剰Ｆａｂを含む、ｔｒ＝２１．６分（図６Ｃ、試験１、ピーク１）及びｔｒ＝３１分（ピーク４）の保持時間を有する２つのピークを示す。ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、四量体トリプターゼ変異体Ｉ９９Ｃを含む錯体を形成し、クロマトグラムは、過剰Ｆａｂを含む、ｔｒ＝２３．８分（図６Ｃ、試験２、ピーク２）及びｔｒ＝３１分（試験２、ピーク５）の保持時間を有する２つのピークを示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ及びトリプターゼ二量体変異体の両方がピーク１及び２に存在し、過剰Ｆａｂがピーク４及び５に存在したことを示した（データは示されていない）。比較のために、ＷＴトリプターゼ四量体と複合したｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、ｈｕＥ１０４．ｖ２（ｔｒ＝２３．８分、試験２、ピーク２）と複合したトリプターゼ四量体変異体Ｉ９９Ｃよりも小さいＦａｂ ｈｕＥ１０４．ｖによって結合された単量体を含む、ｔｒ＝２６分（図６Ｃ、試験３、ピーク３）の保持時間を有した。ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂと複合したトリプターゼ変異体Ｙ７５Ｃ（小界面ロック変異体四量体）は、ｈｕＥ１０４．ｖ１の４つのＦａｂと結合されたＷＴトリプターゼ四量体の安定したインタクトな錯体と同様の保持時間を有した（図６Ａ、試験１、参照ピークを参照されたい）。一方で、ｈｕＥ１０４．ｖ２と複合したトリプターゼ変異体Ｉ９９Ｃ（大界面ロック変異体四量体）は、試験１での第１のピークより小さい錯体を示すより長い保持時間を有した。結果は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂが四量体の小界面のみを解離することができたが、大界面は解離できなかった。したがって、野生型トリプターゼ四量体に結合するとき、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ結合は、小界面のみを解離する。実験的条件下で、解離された小界面は、高局所濃度（例えば、０．１ｍｇ／ｍｌ）で存在するヘパリンによって素早く復元され得、それは四量体の再アセンブリをもたらす。このヘパリン濃度は、生理学的ヘパリン濃度よりも実質的に高く、それは約１．５μｇ／ｍｌの血清であることが報告されている（例えば、Ｅｎｇｅｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２３：５７８－５８１，１９６１及びＤａｖｉｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｓ．Ａｆｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．１００：３０７－３０７，２０１０を参照されたい）。低濃度のヘパリンで、ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは、ＷＴトリプターゼ四量体を完全に解離することができ、トリプターゼ活性を中和するが、ＩｇＧフォーマットにおけるｈｕＥ１０４．ｖ２よりも可能性は少ない。
【0463】
トリプターゼ上のｈｕＥ１０４．ｖ２の正確な結合エピトープについてのさらなる洞察を得るために、Ｆａｂ ｈｕＥ１０４．ｖ２／トリプターゼ錯体を結晶化することを試みた。いずれの好適な結晶も得ることができなかったため、サイズ排除クロマトグラフィーによって単離された４つのＦａｂ Ｅ１０４．ｖ１と結合されたＷＴ四量体トリプターゼの錯体を、結晶化のために使用した。ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２は、２つのバーニアフレームワーク位置のみが異なるが、ＨＶＲは同一である。したがって、ｈｕＥ１０４．ｖ１は、ｈｕＥ１０４．ｖ２の結合エピトープを明らかにするために良好な代替物であった。成熟ヒトトリプターゼベータ１とのヒト化抗トリプターゼ抗体ｈｕＥ１０４．ｖ１（実施例１を参照されたい）の結合を、Ｘ線結晶学モデルを用いて研究し、３．０オングストローム（Å）分解能でのｈｕＥ１０４．ｖ１のトリプターゼ及びＦａｂ断片の間の分子錯体の構造を判定した。結果は、各Ｆａｂがトリプターゼプロトマーのうちの１つのみとほぼ排他的に相互作用するような方法で４つのｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂと相互作用するＥＧＲクロロメチルケトンと複合することによって安定化された、１つのトリプターゼ四量体を含む結晶学非対照単位であった（図１２Ａ）。分子間結晶充填接触環境は、大きな空隙を含まず、４Åより少ない中程度の数の結晶充填接触を有する。例えば、２つのｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂ ＶＬドメインは、それらのＡＢＤＥ β一本鎖の面で非結晶学２倍接触を経験し、Ｔｈｒ及びＳｅｒ鎖鎖及び他のものからのＨ結合を含む。いくつの分子間接触を含む別のより小さい領域は、重鎖定常ドメイン（同じ鎖の可変ドメインとのペプチド結合の近く）及び隣接する軽鎖定常ドメインの「底」の間に存在する。より多くの残基（２４３対お約２１５）を有するトリプターゼプロトマーにも関わらず、トリプターゼプロトマー（平均３．５）よりもＦａｂ（平均１２）の充填接触においてより多くの残基が存在する。この意味では、結晶は、Ｆａｂ－Ｆａｂ分子間接触を介して少なくとも部分的に形成される。
【0464】
ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂの３つの複製物は、１４０°、１３８°、及び１４１°の密接に同様の肘角度（可変ドメイン（ＶＨ及びＶＬ）及び定常ドメイン（ＣＨ及びＣＬ）の間の角度を示した。ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂの第４の複製物を、その定常領域に対する相対的に乏しい電子密度によって特徴付け、１５２°の肘角度を示した。抗体抗原結合の表面積（パラトープ）は、トリプターゼプロトマーとの接触に対して損失した溶媒アクセス可能表面積（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６：２１３－２２１，２０１０）として計算し（平均６８２Å２）、軽鎖２９％に対して重鎖７１％によって支配される。形状相補性統計（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：９４６－９５０，１９９３）、Ｓｃは、平均０．７６であり、タンパク質抗原を有する抗体に関してハイエンドである。この結果の分解能は、水構造を識別するには低すぎたが、Ｓｃ値は、極めて少ない界面水が存在する可能性が高いことを示唆する。非結晶学対称（ＮＣＳ）抑制の使用は、Ｒを含まない値に従って優れた精密化をもたらした。Ｆａｂドメイン（ＶＬ、ＣＬ、ＶＨ、またはＣＨ１）のＣα原子の重ね合わせに関する平均平方根偏差（ＲＭＳＤ）は、オングストロームの十分のいくつかの程度であった。
【0465】
それらのパートナートリプターゼの４Å以内の抗体残基は、４つの複製物に対して密接に同様であり、以下を含む：軽鎖残基Ｙ２９、Ｎ３０、Ｒ３２（ＨＶＲ－Ｌ１）、Ｒ９４（ＨＶＲ－Ｌ３）、ならびに重鎖残基Ｇ３１、Ｙ３２（ＨＶＲ－Ｈ１）、Ｓ５２、Ｓ５３、Ａ５４、Ｔ５６、Ｆ５８（ＨＶＲ－Ｈ２）、及びＰ９６、Ｒ９７、Ｇ９８、Ｙ９９、Ｒ１００ｅ（ＨＶＲ－Ｈ３）。
【0466】
各ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂは、パートナートリプターゼプロトマーの密接に類似した領域と接触する。このエピトープは、切断された活性部位基質結合から約９０°離れており、ほぼ正方形の平面トリプターゼ四量体の平面から垂直に突き出る各Ｆａｂを配置する。トリプターゼプロトマーは、トリプターゼ環の周囲で、上／下／上／下の様式で会合するため、四量体及びから「上」に突き出る２つのＦａｂ及び「下」に突き出る２つのＦａｂが存在する（図１２Ａ）。
【0467】
結晶学非対照単位（ａｓｕ）は、ほぼ対称の四量体に組織化された４つのトリプターゼプロトマーを含む。４つのトリプターゼプロトマーはそれぞれ、活性部位（Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－クロロメチルケトンを使用する処理からの）で共有的に修飾され、約０．１ÅのＣα原子に基づく対でのｒｍｓｄで重なる。各プロトマーがａｓｕにおける４つのＦａｂのうちの１つのみの４Å以内であった場合、次いで４つのｈｕＥ１０４．ｖ１エピトープ、各トリプターゼプロトマーに対して１つを定義することが可能となり、厳密な対称を欠き、これらの４つのエピトープはわずかに異なり得る。本明細書において「非パートナーＦａｂ」と称される、それとの相互作用のバルクを提供しないＦａｂの４Å以内であるいくつかのトリプターゼ残基が存在する。これが事実であるため、トリプターゼ四量体に関するｈｕＥ１０４．ｖ１エピトープを定義することもまた可能である。
【0468】
プログラムＰｙＭＯＬを使用して、この実施例ではｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂの任意の原子の４Å以内であるトリプターゼアミノ酸のセットである、エピトープを定義した。トリプターゼポリペプチド鎖中のアミノ酸残基は、上に記載されるようにキモトリプシノーゲン番号付けスキームに従って番号付けされ得る（図７）。以下のトリプターゼ残基を、括弧内の遺伝子配列番号付けスキームを含むキモトリプシノーゲン番号付けスキームに従って命名する。
【0469】
トリプターゼプロトマー及びそのパートナーＦａｂの間で定義される４つエピトープが存在する。４つ全ては、トリプターゼアミノ酸残基のほぼ同一のセットを含む。それらの残基は以下の通りである：Ｗ３８、Ｑ５０、Ｄ６０ｅ、Ｌ６１、Ａ６２、Ｒ６５、Ｑ８１、Ｌ８２、Ｌ８３、Ｐ８４、Ｖ８５、Ｓ８６、Ｒ８７、Ｅ１０７、Ｌ１０８、Ｅ１０９、及びＥ１１０（配列番号７１の位置に対応する残基と共に遺伝子配列番号付けスキームを使用する、それぞれ、残基Ｗ５５、Ｑ６７、Ｄ８２、Ｌ８３、Ａ８４、Ｒ８７、Ｑ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０２、Ｐ１０３、Ｖ１０４、Ｓ１０５、Ｒ１０６、Ｅ１２６、Ｌ１２７、Ｅ１２８、及びＥ１２９に対応するキモトリプシノーゲン番号付け）。残基Ｌ６１（配列番号７１のＬ８３）は、４つのうち２つについては不在であるが、４Å基準をわずかのみ超過する。残基Ｑ８１（配列番号７１のＱ１００）は、４つのうち１つについては不在である。そうではない場合、次いで４つ全ては定義基準によって同一となる。
【0470】
また、非パートナーＦａｂは、四量体における少数の４Å接触を作る。それが、四量体エピトープをプロトマーエピトープと区別するこれらのトリプターゼ残基である。接触されたトリプターゼ残基は以下の通りである：Ｑ２０及びＲ１８７（それぞれ、配列番号７１のＱ３５及びＲ２１６）。
【0471】
したがって、トリプターゼ四量体上のｈｕＥ１０４．ｖ１のエピトープは、以下の各々の４つの例の合計である：Ｗ３８、Ｑ５０、Ｄ６０ｅ、Ｌ６１、Ａ６２、Ｒ６５、Ｌ８２、Ｌ８３、Ｐ８４、Ｖ８５、Ｓ８６、Ｒ８７、Ｅ１０７、Ｌ１０８、Ｅ１０９、及びＥ１１０（それぞれ、配列番号７１の残基Ｗ５５、Ｑ６７、Ｄ８２、Ｌ８３、Ａ８４、Ｒ８７、Ｌ１０１、Ｌ１０２、Ｐ１０３、Ｖ１０４、Ｓ１０５、Ｒ１０６、Ｅ１２６、Ｌ１２７、Ｅ１２８、及びＥ１２９に対応する、キモトリプシノーゲン番号付け、）、加えてＱ８１（配列番号７１のＱ１００）の３つの例、加えてＱ２０（配列番号７１のＱ３５）の１つの例、加えてＲ１８７（配列番号７１のＲ２１６）の３つの例。上に記載のエピトープ残基はまた、ｈｕＥ１０４．ｖ２を含む他のＥ１０４由来抗体に適用することが考えられる。
【0472】
ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｖ２は同じＣＤＲ配列を有し、同じエピトープンに結合し、２つのバリアントは、ＦａｂならびにＩｇＧにおいて異なった作用をする：ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂは四量体を、より具体的には小界面で解離するが、ｈｕＥ１０４．ｖ１ Ｆａｂは解離しない；ＩｇＧにおいて、ｈｕＥ１０４．ｖ２は、四量体を解離及び不活性化するが、高い抗体対トリプターゼ比でｈｕＥ１０４．ｖ１は阻害活性を失う。ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２はトリプターゼ上の同じ接触残基と結合するが、それらがトリプターゼとどのように相互作用するかにわずかな違いが存在することを仮定した。溶液中でトリプターゼを有するｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ間の相互作用の違いを特定するために、単量体トリプターゼのみを用いてＨＤＸ実験を行うか、またはｈｕＥ１０４．ｖ１もしくはｈｕＥ１０４．ｖ２のいずれかと結合し、経時的な水素重水素交換の程度を質量分析によって監視した。この方法はｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２の結合エピトープを示す情報を提供するが、それは全体的に抗体結合エピトープから離れて生じ得た構造動力学の変化を監視する。これらの測定は、バルク立体配座の変化と特定の立体配座のエネルギー安定性の変化を区別しない。
【0473】
ｈｕＥ１０４．ｖ１またはｈｕＥ１０４．ｖ２のいずれかが結合されたときにトリプターゼ中でより遅い交換を示したアミド結合は、残基２５～２７、６０～６１、６６～６８、８８、及び１０８～１１０（キモトリプシノーゲン番号付け；表１０）の領域に位置したが、ｈｕＥ１０４．ｖ１またはｈｕＥ１０４．ｖ２のみに特異的であったより遅い交換を示したアミド結合もまた見出された。例えば、トリプターゼ残基４７～５０、５４～５５、８５～８７、１１９～１２２、１７９、２３０～２３１、及び２４４～２４５（キモトリプシノーゲン番号付け）のアミド結合は、ｈｕＥ１０４．ｖ１が結合されたときのみより遅い交換を示した。一方で、トリプターゼ残基２５、４１～４３、８１～８１、及び１６０～１６２のアミド結合は、ｈｕＥ１０４．ｖ２が結合されたときのみより遅い交換を示した（表１０）。より遅い水素交換における最も興味深い違いは、トリプターゼ中の残基８１～８３（配列番号７１のＱ１００、Ｌ１０１、及びＬ１０２に対応する、キモトリプシノーゲン番号付けにおけるＱ８１、Ｌ８２、及びＬ８３）のアミド結合であり、それはｈｕＥ１０４．ｖ２が結合されたときにより遅い交換のみを示した。この領域は、それが小界面の２つの重要な接触残基（Ｙ７４及びＹ７５）が存在するループの一部であるため、特に興味深い。トリプターゼ残基８１～８３はまた、四量体トリプターゼとの結晶構造錯体においてみられるように、ｈｕＥ１０４．ｖ１のＨＶＲ－Ｈ２と直接接触しているが、ＨＤＸの結果によると、この領域は、トリプターゼとのｈｕＥ１０４．ｖ１の相互作用についてよりも強くかつおそらく異なるｈｕＥ１０４．ｖ２との相互作用を作らなければならないと考えられる。８０ｓループＣα骨格及び側鎖への立体配座変化は、Ｙ７４及びＹ７５の立体配座に影響を与える可能性があり、それは四量体錯体における２つのトリプターゼプロトマー間の疎水性小界面に対して重要である。界面が対称であるため、両方の相互作用プロトマーからの残基Ｙ７４及びＹ７５は、ｈｕＥ１０４．ｖ２が各プロトマーと結合されたときに影響され、それはこの界面の任意の変化及び不安定性を増幅する。
【0474】
上に述べられるように、ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２の間の違いは、バーニアフレームワーク残基Ｖ７１Ｒ及びＦ７８Ｖである。抗体の重鎖における７１位でのフレームワーク残基の変化がＨＶＲ－Ｈ２の構造に影響を与えるということが以前に報告されている。ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２におけるＨＶＲ－Ｈ２のモデリング実験は、これが事実であることを確認する（データは示されていない）。理論によって拘束されることなく、両方のバーニア残基の変化は、トリプターゼ残基８１～８３との相互作用が異なり、四量体の小界面の変化に翻訳するように、ＨＶＲ－Ｈ２の構造に影響を与えることができた。さらに、構造的に近接する、残基Ｒ６９及びＥ７０（キモトリプシノーゲン番号付け）のトリプターゼアミド結合はまた、ｈｕＥ１０４．ｖ２が結合されたときのみより遅いＨＤＸを示す。この発見は、７０ｓループへの変化を作り、小界面の重要な部分を構成し、さらにはその可能性が高い。
【0475】
結晶構造中に見られるＦａｂ Ｅ１０４．ｖ１の４Å以内のトリプターゼ残基とのＦａｂ結合に起因するより遅いＨＤＸの領域を比較したとき、２０ｓ、４０ｓ、６０ｓ、８０ｓ、及び１００ループ中の結合エピトープ残基を特定する両方の方法の間で高度の重複を観察した（表１０）。主なトリプターゼ配列の１１０ｓ、１６０ｓ、１７９、２３０ｓ、及び２４５領域中の位置などのＨＤＸによって特定される他の領域は、結晶構造によって抗体と直接接触していないが、ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２の存在下で立体配座動力学の低減を示す。
表１０：ｈｕＥ１０４．ｖ１またはｈｕＥ１０４．ｖ２と結合されたときにより遅いＨＤＸを示したトリプターゼ残基のアミド結合
表１０：ｈｕＥ１０４．ｖ１またはｈｕＥ１０４．ｖ２と結合されたときにより遅いＨＤＸを示したトリプターゼ残基のアミド結合
【0476】
これらのデータを要約すると、ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２は、ヒトトリプターゼベータ１上で同じＨＶＲ配列及び同じ接触残基を有する。しかしながら、ＨＤＸ研究に基づくと、２つの抗体が標的と結合する方法におけるわずかな違いを検出した。ｈｕＥ１０４．ｖ１の重鎖ＦＲ３領域におけるＶ７１及びＦ７８は、図１２Ｂに示される。図に示されるように、ｈｕＥ１０４．ｖ２における重鎖のＦＲ３領域におけるＶ７１Ｒ及びＦ７８Ｖは、ＨＶＲ－Ｈ２の位置及びトリプターゼとのＨＶＲ－Ｈ２の結合に影響した可能性があり、ｈｕＥ１０４．ｖ２が結合されたときのＱ８１、Ｌ８２、及びＬ８３領域（キモトリプシノーゲン番号付け）においてより遅いＨＤＸによって明示される。Ｑ８１、Ｌ８２、及びＬ８３残基は、結合されていないトリプターゼと比較した場合に、ｈｕＥ１０４．ｖ２がトリプターゼと結合されたときにより遅いＨＤＸを示した。結果として、隣接するプロトマーを含むＹ７５の疎水性相互作用は衰弱される。ｈｕＥ１０４．ｖ１は、７１位でＶ、及び７８位でＦを有する（ＶＨＩＶ移植にあるように）。この文脈では、ＨＶＲ－Ｈ２はわずかに異なって表され、トリプターゼとのＥ１０４．ｖ１の結合の影響は、同じ接触残基であるが、Ｅ１０４．ｖ２と比較した場合に、小界面の解離がわずかに異なる。
【0477】
要約すると、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂ及びＩｇＧの両方は、トリプターゼ四量体を解離する。ｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ及びＩｇＧの両方はまた、トリプターゼ四量体を解離する。Ｆａｂではないが、ｈｕＥ１０４．ｖ１ ＩｇＧは、トリプターゼ四量体を解離することができる。しかしながら、高い抗体対四量体の比率でｈｕＥ１０４．ｖ１ ＩｇＧは阻害活性を損失する。同じ四量体との１超のｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｆａｂ結合は立体衝突を引き起こすが、同じ四量体とのｈｕＥ１０４．ｖ２ Ｆａｂ結合は引き起こさない。したがって、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のヒンジ領域は、ｈｕＥ１０４．ｖ１ ＩｇＧの２つのＦａｂを方向付けることにおいて役割を果たし、四量体の解離をもたらす十分な張力を創造する（データは示されていない）。しかしながら、高い抗体対四量体の比率で、ｈｕＥ１０４．ｖ１ ＩｇＧは、一価結合剤、すなわち、Ｆａｂとして四量体と結合し、阻害活性を損失する可能性がより高い。
【0478】
Ｃ．ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２はヒトトリプターゼベータ１との結合について競合する
Ｘ線結晶学モデルによって判定されたｈｕ３１Ａ．ｖ１１のエピトープは、ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２のエピトープと実質的に重複する。次に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２が、エピトープビニングによってヒトトリプターゼベータ１との結合について競合するかどうかを判定した。エピトープビニングを、ＯＣＴＥＴ（登録商標）ＲＥＤ３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して行った。簡潔には、ヒトトリプターゼβベータ１単量体タンパク質を、Ｌｙｓ残基でＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチンと反応させることによってビオチン化した。ビオチン化単量体を、動態緩衝剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）で５μｇ／ｍｌで希釈し、ストレプトアビジンセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）上に固定化した。固定化ステップの後、ヒトトリプターゼベータ１固定化センサーを、第１の抗体で飽和し、１０～２０μｇ／ｍｌで希釈し、続いて２．５μｇ／ｍｌで希釈した第２の抗体と共に結合した。第２の抗体による結合シグナルは、２つの抗体が、異なる、非重複エピトープで抗原と同時に結合し得ることを意味するが、結合シグナルが、それらが一般的なエピトープを共有することを意味しない。Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏデータ分析ソフトウェア８．１を使用してエピトープビニングマトリックスを生成した。
Ｘ線結晶学モデルによって判定されたｈｕ３１Ａ．ｖ１１のエピトープは、ｈｕＥ１０４．ｖ１及びｈｕＥ１０４．ｖ２のエピトープと実質的に重複する。次に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２が、エピトープビニングによってヒトトリプターゼベータ１との結合について競合するかどうかを判定した。エピトープビニングを、ＯＣＴＥＴ（登録商標）ＲＥＤ３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して行った。簡潔には、ヒトトリプターゼβベータ１単量体タンパク質を、Ｌｙｓ残基でＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチンと反応させることによってビオチン化した。ビオチン化単量体を、動態緩衝剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）で５μｇ／ｍｌで希釈し、ストレプトアビジンセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）上に固定化した。固定化ステップの後、ヒトトリプターゼベータ１固定化センサーを、第１の抗体で飽和し、１０～２０μｇ／ｍｌで希釈し、続いて２．５μｇ／ｍｌで希釈した第２の抗体と共に結合した。第２の抗体による結合シグナルは、２つの抗体が、異なる、非重複エピトープで抗原と同時に結合し得ることを意味するが、結合シグナルが、それらが一般的なエピトープを共有することを意味しない。Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏデータ分析ソフトウェア８．１を使用してエピトープビニングマトリックスを生成した。
【0479】
以下の表１１に示される結果は、さらなる結合シグナルは、第１の抗体としてのｈｕＥ１０４．ｖ２及び第２の抗体としてのｈｕ３１Ａ．ｖ１１またはその逆のいずれか使用しても検出されなかったことを示す。緩衝剤の後に添加された一方の抗体はさらなる結合をもたらした。したがって、２つの抗体はヒトトリプターゼベータ１との結合について競合する。
表１１：ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２はヒトベータトリプターゼ１との結合について競合する
表１１：ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２はヒトベータトリプターゼ１との結合について競合する
【0480】
実施例４：ヒト化抗トリプターゼ抗体の薬物動態（ＰＫ）分析
ヒト化抗トリプターゼ抗体の薬力学的（ＰＫ）特徴を評価するために、ｈｕＥ１０４．ｖ２またはｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４抗体を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝３）に１または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）注射によって投与した。Ｃ５７－ＢＬ６マウス血清中の抗ｇＤ ＩｇＧ４、抗トリプターゼｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４、または抗トリプターゼｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４の濃度を、捕捉についてはヒツジ抗ヒトＩｇＧ（Ｔｈｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、及び検出についてはＨＲＰ複合体化ヒツジ抗ヒトＩｇＧ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ）を使用して、ジェネリック免疫グロブリン薬物動態ＥＬＩＳＡで判定した。アッセイ感受性は血清中１５．６ｎｇ／ｍＬであった。ｈｕＥ１０４．ｖ２及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４抗体は同様のＰＫを呈し、試験された用量範囲にわたる用量比例及び線形ＰＫによって特徴づけられる（図１３及び表１２）。加えて、両方の抗体は、比較的に低いクリアランス（約５ｍｌ／日／ｋｇ）を有し、両方の抗体が、単回用量投与の後に良好に作用し、許容された範囲内で良好であることが示唆される。他の実験では、ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ１は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４抗体と同様に行った（データは示されていない）。
表１２：マウスにおけるヒト化抗トリプターゼ抗体のＰＫ分析
ヒト化抗トリプターゼ抗体の薬力学的（ＰＫ）特徴を評価するために、ｈｕＥ１０４．ｖ２またはｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４抗体を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝３）に１または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）注射によって投与した。Ｃ５７－ＢＬ６マウス血清中の抗ｇＤ ＩｇＧ４、抗トリプターゼｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４、または抗トリプターゼｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４の濃度を、捕捉についてはヒツジ抗ヒトＩｇＧ（Ｔｈｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、及び検出についてはＨＲＰ複合体化ヒツジ抗ヒトＩｇＧ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ）を使用して、ジェネリック免疫グロブリン薬物動態ＥＬＩＳＡで判定した。アッセイ感受性は血清中１５．６ｎｇ／ｍＬであった。ｈｕＥ１０４．ｖ２及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４抗体は同様のＰＫを呈し、試験された用量範囲にわたる用量比例及び線形ＰＫによって特徴づけられる（図１３及び表１２）。加えて、両方の抗体は、比較的に低いクリアランス（約５ｍｌ／日／ｋｇ）を有し、両方の抗体が、単回用量投与の後に良好に作用し、許容された範囲内で良好であることが示唆される。他の実験では、ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ１は、ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４抗体と同様に行った（データは示されていない）。
表１２：マウスにおけるヒト化抗トリプターゼ抗体のＰＫ分析
【0481】
ヒト化抗トリプターゼ抗体のＰＫ特徴もまた、雄のカニクイザル（ｃｙｎｏ）（ｎ＝３）において評価した。参照抗体（抗ｇＤ）、ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４、またはｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４を、３０ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）注射によって投与した（図１４及び表１３）。カニクイザル血清中の抗ｇＤ ＩｇＧ４、抗トリプターゼｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４、または抗トリプターゼｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４の濃度を、ビオチン複合体化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ）捕捉及びＡｌｅｘａ（登録商標）Ｆｌｕｏｒ ６４７複合体化マウス抗ヒトＦｃ（Ｒ１０Ｚ８Ｅ９）検出からなるＧｙｒｏｌａｂ ＸＰ免疫測定法で判定した。アッセイ感受性は血清中４１ｎｇ／ｍＬであった。表１３は、曲線下面積（ＡＵＣ）、クリアランス（ＣＬ）、Ｃｍａｘ、及び半減期（Ｔ１／２）を示す。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１は、参照抗ｇＤ抗体と同様の薬物動態を呈した。約３ｍＬ／日／ｋｇの低いクリアランス（ＣＬ）及び約１５日のＴ１／２は、許容される範囲内で良好であった。
表１３：カニクイザル（ｎ＝３）におけるヒト化抗トリプターゼ抗体のＰＫ分析
表１３：カニクイザル（ｎ＝３）におけるヒト化抗トリプターゼ抗体のＰＫ分析
【0482】
実施例５：ＨＶＲ－Ｈ３ Ｔｒｐ１００（Ｗ１００）酸化を緩和するための抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の製剤
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２抗体の両方を評価している間に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＨＶＲ－Ｈ３領域に存在するＶＨ Ｔｒｐ１００残基（図１）は、例えば、２，２－アゾビス（２－アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）（「ＡＡＰＨストレス」とも称される）または周囲光（「周囲光ストレス」）への曝露の後、酸化感受性であることを予想外にも発見した。この酸化は、治療抗体の文脈では望ましくないと考えられ得る。しかしながら、Ｔｒｐ１００残基は、トリプターゼとのｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合、ならびに阻害活性に関して重要であることが見出された。例えば、以下に記載されるように、酸化を緩和するためのＴｒｐ１００の変異は、低減された結合親和性及び阻害活性を有するバリアントをもたらす。それ故に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の酸化、特にＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００では、抗酸化剤賦形剤、例えば、Ｎ－アセチルトリプトファン及び／またはメチオニンを含む製剤を使用して緩和される。
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１及びｈｕＥ１０４．ｖ２抗体の両方を評価している間に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１のＨＶＲ－Ｈ３領域に存在するＶＨ Ｔｒｐ１００残基（図１）は、例えば、２，２－アゾビス（２－アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）（「ＡＡＰＨストレス」とも称される）または周囲光（「周囲光ストレス」）への曝露の後、酸化感受性であることを予想外にも発見した。この酸化は、治療抗体の文脈では望ましくないと考えられ得る。しかしながら、Ｔｒｐ１００残基は、トリプターゼとのｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合、ならびに阻害活性に関して重要であることが見出された。例えば、以下に記載されるように、酸化を緩和するためのＴｒｐ１００の変異は、低減された結合親和性及び阻害活性を有するバリアントをもたらす。それ故に、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の酸化、特にＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００では、抗酸化剤賦形剤、例えば、Ｎ－アセチルトリプトファン及び／またはメチオニンを含む製剤を使用して緩和される。
【0483】
トリプターゼ結合及び阻害活性に対する、ＡＡＰＨストレス及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００（すなわち、ＶＨドメインの１００位でのトリプトファン残基、図１を参照されたい）酸化の影響を、評価した。試料を１ｍＭのＡＡＰＨ中で４０℃で１６時間製剤化した。これらの条件下で、Ｗ１００酸化の７５％の増加があった（酸化パーセント）。ストレス抗体は、トリプシンで消化され、消化されたペプチドは、トリプトファン酸化のパーセンテージを決定するためにＵＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（超高速液体クロマトグラフィー－高分解能質量分析）にかけた。簡潔には、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の２５０μｇの試料は、ｐＨ８．６で１時間、６Ｍの塩酸グアニジン、３６０ｍＭのトリス、及び２ｍＭのＥＤＴＡ中の２０ｍＭのＤＴＴで低減された。低減された試料を室温に冷却し、１Ｍのヨード酢酸（最終濃度、５０ｍＭ）を使用して暗所で１５分間アルキル化した。次いで、試料を、消化緩衝剤（２５ｍＭのＴｒｉｓ、２ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ８．２）に緩衝剤交換した。緩衝剤交換された試料を、１：４０（ｗ／ｗ）の酵素対抗体の比率を用いて、３７℃で４時間、トリプシンで消化した。消化を、３．０％の最終濃度まで１００％のギ酸の添加によって停止した。
【0484】
１０μｇのトリプシンペプチドは、１．７μＭ、１３０Åの粒子を有するＷａｔｅｒｓ２．１×１５０ｍｍ、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＣＳＨ Ｃ１８カラムへの注射であり、以下の勾配を有するＱ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計システムに結合された７７℃で０．２ｍＬ／分の流量で試験する：０～２分で１％ Ｂ（アセトニトリル中０．１％のギ酸）；７分で１３％のＢ；４２分で３５％のＢ；４４～４６分で８５％のＢ；４６．１分で１％のＢ。Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅを、データ依存モードで操作し、３５，０００の分解能で２００～２０００ｍ／ｚからの完全ＭＳスキャン、及び１ｘ１０６の自動利得制御（ＡＧＣ）標的を収集した。スキャン当たり８個の最も豊富なイオンを、１７，５００の分解能及び１ｘ１０５のＡＧＣ標的でタンデムＭＳのために選択した。Ｗ１００酸化の相対定量を、以下の通りに生成した：（１）ピーク面積を、天然トリプシンペプチド及びその酸化された対応物について、１０％以上の相対的な豊富さを有する荷電状態からの上位３つの最も豊富なアイソトープの抽出されたイオンクロマトグラムを積分することによって計算した（２）合計酸化ピーク面積を、酸化された面積及び天然ピーク面積の合計によって分割し、酸化パーセントを得るために１００を掛けた。
【0485】
表１４中の結果は、ＡＡＰＨストレスが、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＳＰＲ分析によって測定された場合に、トリプターゼ単量体とのｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合を低減したことを示す（表１４）。低減された結合をまたトリプターゼ四量体との結合に関して観察した。対照的に、トリプターゼ単量体及び四量体とのｈｕＥ１０４．ｖ２の結合は、ＡＡＰＨストレスによって影響されなかった（表１４）。さらに、ＡＡＰＨストレスは、インビトロトリプターゼ酵素活性アッセイにおいて約５倍ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の活性を低減したが、ｈｕＥ１０４．ｖ２の阻害活性は影響されなかった（データは示されていない）。要約すると、ＡＡＰＨストレス後、ＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００で７５％の酸化を有したｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４は、約６倍高いＫＤ（すなわ、低減された親和性）（３５％のＲｍａｘで）、及びＩＣ５０において５倍増加（すなわち、効力の減少）を示した。Ｒｍａｘは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ＳＰＲ実験において最大応答を示し、Ｒｍａｘの減少は、トリプターゼと結合されるより少ないＡＡＰＨストレス抗体の事実を反映する。対照的に、ＡＡＰＨストレスは、存在する場合、ｈｕＥ１０４．ｖ２ ＩｇＧ４の結合及び効力に対して最小の影響を有した。
表１４：ＡＡＰＨストレスはトリプターゼとのｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合を低減する
表１４：ＡＡＰＨストレスはトリプターゼとのｈｕ３１Ａ．ｖ１１の結合を低減する
【0486】
ＨＶＲ－Ｈ３酸化を低減するための１つのアプローチにおいて、ＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００での置換を有するバリアント抗体を産生し、トリプターゼベータ１単量体とのこれらのバリアントの結合を評価する（表１５）。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の残基Ｗ１００を、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、またはアルギニン（Ｒ）に変異させた。驚くべきことに、全てのバリアントは、トリプターゼベータ１単量体との低減された結合を示した。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｗ１００Ｆバリアントは、他のバリアントと比較して、トリプターゼベータ１単量体に関して最も高い親和性を有したが、同様のオンレート（Ｋｏｎ）を有する野生型ｈｕ３１Ａ．ｖ１１と比較して約１００倍より早いオフレート（Ｋｏｆｆ）を呈した（表１５）。さらに、これらのバリアントは、阻害活性に関してｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＷＴより劣っていた（表１５）。バリアントのうちのいくつかに関して、阻害活性は本質的に損失した（例えば、Ｗ１００Ｒ、Ｗ１００Ｌ、及びＷ１００Ｖに対して）。ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｗ１００Ｆ及びＷ１００Ｙバリアントは、ヒトトリプターゼベータ１を阻害したが、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＷＴと比較して約２～３倍増加した（すなわち、低減された活性）ＩＣ５０値を有した。表１５において、「ｎｄ」は、検出可能でないか、または１μＭを超えないことを示す。
表１５：トリプターゼベータ１単量体に対する結合親和性へのｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｗ１００バリアントの影響及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１野生型と比較した場合のＩＣ５０（倍増として）
表１５：トリプターゼベータ１単量体に対する結合親和性へのｈｕ３１Ａ．ｖ１１ Ｗ１００バリアントの影響及びｈｕ３１Ａ．ｖ１１野生型と比較した場合のＩＣ５０（倍増として）
【0487】
上に記載されるように、構造研究は、ＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００が、トリプターゼ（キモトリプシノーゲン番号付け）のＲ６５との相互作用を含むトリプターゼとの複数の相互作用を作製したことを明らかにし、それはｈｕ３１Ａ．ｖ１１の接触残基の一部であると判定した（図８を参照されたい）。１００位でのＴｒｐは、Ｗ１００Ｆ変異体におけるＰｈｅよりも大きな程度にトリプターゼと相互作用し、より高い結合親和性及びより効力のある阻害活性をもたらすと考えられる。
【0488】
上に記載されるように、ＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００で酸化を有するｈｕ３１Ａ．ｖ１１の低減された親和性及び阻害活性、ならびにトリプターゼ阻害におけるＷ１００の重要性を考慮して、Ｗ１００での酸化を緩和する代替的な戦略を探究した。Ｗ１００酸化を低減する抗酸化賦形剤の能力を判定した。一実施例では、試料を、例示的な抗酸化賦形剤、すなわち、０．０２％のポリソルベート２０、２００ｍＭのアルギニンコハク酸（ｐＨ５．５）、及び１５０ｍｇ／ｍＬのｈｕ３１Ａ．ｖ１１抗体を含む製剤中０．３ｍＭのＮ－アセチルトリプトファン（ＮＡＴ）及び５ｍＭのメチオニン（Ｍｅｔ）ありまたはなしで、４０℃で２４時間５ｍＭのＡＡＰＨにかけた。ＣＤＲ Ｈ３ Ｗ１００の酸化レベル及び抗体の効力を、発色性Ｓ－２２８８酵素アッセイに基づいて測定した。以下の表１６中のデータは、この実験において、ＡＡＰＨストレスはｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４のＷ１００で３８％の酸化をもたらし、それは参照非ストレス抗体試料と比較した場合に、３２％の効力損失をもたらしたことを示す（ｎ＝２）。０．３ｍＭのＮＡＴ及び５ｍＭのＭｅｔを含む製剤中の抗体組成物は、３８％から２６％に低減された酸化レベル、及び３２％から２１％に低減された効力損失を示した（ｎ＝２）。したがって、ＮＡＴ及びＭｅｔなどの抗酸化賦形剤を含む製剤は、Ｗ１００でのＡＡＰＨ誘発酸化を低減し、抗体効力を復元した。別の実施例では、試料を、酸化賦形剤ありまたはなしで同じ製剤中周囲光ストレス条件（５０００Ｌｕｘ／時間で６０時間、ＡＡＰＨよりも軽度のストレス条件である）に施した。軽度の周囲光ストレス条件は、Ｗ１００で６％の酸化をもたらし、賦形剤の存在は、酸化のレベルをさらに低減した（表１６）。周囲光誘発ストレスプロセスによって誘発された酸化レベルは、抗体効力に影響しなかった。
表１６：ｈｕ３１Ａ．ｖ１１酸化への抗酸化製剤の影響
表１６：ｈｕ３１Ａ．ｖ１１酸化への抗酸化製剤の影響
【0489】
要約すると、これらの結果は、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００が予想外にも酸化感受性であることを示す。変異誘発のデータは、Ｗ１００が、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１抗体の結合親和性及び阻害活性に関して重要であり、この残基で試験されたバリアントのいずれも野生型ｈｕ３１Ａ．ｖ１１に対して比較可能な親和性または阻害活性を有しなかったことを示した。ＮＡＴ及びＭｅｔなどの抗酸化剤を、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＨＶＲ－Ｈ３ Ｗ１００で観察される予期されない酸化を緩和するために、例えば、障害（例えば、喘息）の治療のための薬学的抗体製剤において、使用することができる。
【0490】
実施例６：抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１はインビボでトリプターゼ活性を阻害する
Ａ．材料及び方法
（ｉ）カニクイザル活性トリプターゼＥＬＩＳＡアッセイ
生体試料、例えば、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中のカニクイザル（ｃｙｎｏ）活性トリプターゼ（四量体）の濃度を、ＥＬＩＳＡアッセイによって判定した。カニクイザルトリプターゼＤ１を認識するモノクローナル抗体を、捕捉抗体として利用した。組み換えカニクイザル活性トリプターゼＤ１をアッセイ標準の調製のための原材料として使用した。アッセイ標準、対照、及び希釈された試料を、５００μｇ／ｍｌの大豆トリプシン阻害剤（ＳＢＴＩ、Ｓｉｇｍａカタログ番号１０１０９８８６００１）と共に１０分間インキュベートし、次いで、活性基準プローブ（ＡＢＰ；Ｇ０３５３８１６）で１時間標識した。Ｐａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１６：２８８２－８５，２００６を参照されたい。ＳＢＴＩを使用して単量体における活性部位と結合し、それは活性単量体、特異的インビトロ条件で形成し得る種によって引き起こされる任意のバックグラウンドを低減する。ＳＢＴＩは、トリプターゼが四量体構造にあるとき、活性部位と結合することはできない。小分子トリプターゼ阻害剤（Ｇ０２８４９８５５）を、２０分間添加して、ＡＢＰ標識を停止した。四量体解離抗体（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４）を１０分間添加して、ＡＢＰ標識及び非標識四量体の両方を解離した。この混合物を、捕捉抗体と共に１時間ＥＬＩＳＡプレートに添加し、１倍のＰＢＳＴで洗浄し、ＳＡ－ＨＲＰ試薬（ストレプトアビジン複合体化西洋ワサビペルオキシダーゼ、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ（ＧＥ）カタログ番号ＲＰＮ４４０１Ｖ）と共に２時間インキュベートした。比色シグナルをＨＲＰ基質、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を適用することによって生成し、反応をリン酸を添加することによって停止した。プレートを、検出吸光度については４５０ｎＭ、参照吸光度については６５０ｎＭを使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）プレートリーダーで読み取った。アッセイは、２０～０．０４ｎｇ／ｍＬ（ウェル中）の報告可能な範囲を有し、アッセイ最小定量可能濃度（ＭＱＣ）は、カニクイザルＢＡＬの１：２の希釈液中０．０８ｎｇ／ｍＬであると判定した。各々の個別のカニクイザル試料を、２つ組において単一の希釈液でスクリーニングした。ＭＱＣを下回った最小の希釈液でアッセイした試料を、報告可能未満（ＬＴＲ）として報告した。
Ａ．材料及び方法
（ｉ）カニクイザル活性トリプターゼＥＬＩＳＡアッセイ
生体試料、例えば、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中のカニクイザル（ｃｙｎｏ）活性トリプターゼ（四量体）の濃度を、ＥＬＩＳＡアッセイによって判定した。カニクイザルトリプターゼＤ１を認識するモノクローナル抗体を、捕捉抗体として利用した。組み換えカニクイザル活性トリプターゼＤ１をアッセイ標準の調製のための原材料として使用した。アッセイ標準、対照、及び希釈された試料を、５００μｇ／ｍｌの大豆トリプシン阻害剤（ＳＢＴＩ、Ｓｉｇｍａカタログ番号１０１０９８８６００１）と共に１０分間インキュベートし、次いで、活性基準プローブ（ＡＢＰ；Ｇ０３５３８１６）で１時間標識した。Ｐａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１６：２８８２－８５，２００６を参照されたい。ＳＢＴＩを使用して単量体における活性部位と結合し、それは活性単量体、特異的インビトロ条件で形成し得る種によって引き起こされる任意のバックグラウンドを低減する。ＳＢＴＩは、トリプターゼが四量体構造にあるとき、活性部位と結合することはできない。小分子トリプターゼ阻害剤（Ｇ０２８４９８５５）を、２０分間添加して、ＡＢＰ標識を停止した。四量体解離抗体（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４）を１０分間添加して、ＡＢＰ標識及び非標識四量体の両方を解離した。この混合物を、捕捉抗体と共に１時間ＥＬＩＳＡプレートに添加し、１倍のＰＢＳＴで洗浄し、ＳＡ－ＨＲＰ試薬（ストレプトアビジン複合体化西洋ワサビペルオキシダーゼ、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ（ＧＥ）カタログ番号ＲＰＮ４４０１Ｖ）と共に２時間インキュベートした。比色シグナルをＨＲＰ基質、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を適用することによって生成し、反応をリン酸を添加することによって停止した。プレートを、検出吸光度については４５０ｎＭ、参照吸光度については６５０ｎＭを使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）プレートリーダーで読み取った。アッセイは、２０～０．０４ｎｇ／ｍＬ（ウェル中）の報告可能な範囲を有し、アッセイ最小定量可能濃度（ＭＱＣ）は、カニクイザルＢＡＬの１：２の希釈液中０．０８ｎｇ／ｍＬであると判定した。各々の個別のカニクイザル試料を、２つ組において単一の希釈液でスクリーニングした。ＭＱＣを下回った最小の希釈液でアッセイした試料を、報告可能未満（ＬＴＲ）として報告した。
【0491】
（ｉｉ）カニクイザル全トリプターゼＥＬＩＳＡアッセイ
生体試料、例えば、ＢＡＬ中のカニクイザル（ｃｙｎｏ）全トリプターゼの濃度を、ＥＬＩＳＡアッセイによって判定した。カニクイザルトリプターゼＤ１を認識する抗体を、捕捉抗体として利用した。カニクイザルトリプターゼＤ１との結合について四量体解離抗体と競合することなく、カニクイザルトリプターゼＤ１を認識する抗体を、検出抗体として利用した。組み換えカニクイザル活性トリプターゼＤ１をアッセイ標準の調製のための原材料として使用した。四量体解離抗体（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１、ＩｇＧ４）を、存在する任意の四量体を解離するために、アッセイ標準、対照、希釈された試料に１０分間添加した。この混合物を、２時間捕捉抗体と共にＥＬＩＳＡプレートに添加し、次いで、１倍のＰＢＳＴで洗浄した。ビオチン化検出抗体を１時間添加した。次に、ＳＡ－ＨＲＰ試薬を１時間添加した。比色シグナルをＴＭＢによって生成し、反応をリン酸を添加することによって停止した。プレートを、検出吸光度については４５０ｎＭ、参照吸光度については６５０ｎＭを使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダーで読み取った。アッセイは、２０～０．０２ｎｇ／ｍＬ（ウェル中）の報告可能な範囲を有し、アッセイＭＱＣは、カニクイザルＢＡＬの１：２の希釈液中０．０８ｎｇ／ｍＬであると判定した。各々の個別のカニクイザル試料を、２つ組において単一の希釈液でスクリーニングした。ＭＱＣを下回った最小の希釈液でアッセイした試料を、報告可能未満（ＬＴＲ）として報告した。
生体試料、例えば、ＢＡＬ中のカニクイザル（ｃｙｎｏ）全トリプターゼの濃度を、ＥＬＩＳＡアッセイによって判定した。カニクイザルトリプターゼＤ１を認識する抗体を、捕捉抗体として利用した。カニクイザルトリプターゼＤ１との結合について四量体解離抗体と競合することなく、カニクイザルトリプターゼＤ１を認識する抗体を、検出抗体として利用した。組み換えカニクイザル活性トリプターゼＤ１をアッセイ標準の調製のための原材料として使用した。四量体解離抗体（例えば、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１、ＩｇＧ４）を、存在する任意の四量体を解離するために、アッセイ標準、対照、希釈された試料に１０分間添加した。この混合物を、２時間捕捉抗体と共にＥＬＩＳＡプレートに添加し、次いで、１倍のＰＢＳＴで洗浄した。ビオチン化検出抗体を１時間添加した。次に、ＳＡ－ＨＲＰ試薬を１時間添加した。比色シグナルをＴＭＢによって生成し、反応をリン酸を添加することによって停止した。プレートを、検出吸光度については４５０ｎＭ、参照吸光度については６５０ｎＭを使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダーで読み取った。アッセイは、２０～０．０２ｎｇ／ｍＬ（ウェル中）の報告可能な範囲を有し、アッセイＭＱＣは、カニクイザルＢＡＬの１：２の希釈液中０．０８ｎｇ／ｍＬであると判定した。各々の個別のカニクイザル試料を、２つ組において単一の希釈液でスクリーニングした。ＭＱＣを下回った最小の希釈液でアッセイした試料を、報告可能未満（ＬＴＲ）として報告した。
【0492】
（ｉｉｉ）ヒト活性トリプターゼＥＬＩＳＡアッセイ
ヒト活性トリプターゼ（四量体）の濃度をＥＬＩＳＡアッセイによって判定した。ヒトトリプターゼを認識し、かつトリプターゼ四量体を解離することができるマウスモノクローナル抗体クローンＢ１２を、捕捉抗体として利用した（Ｆｕｋｕｏｋａ ｅｔ ａｌ（上記参照））。ヒトトリプターゼと結合する他の抗体もまた使用することができる。組み換えヒト活性トリプターゼベータ１を精製し、アッセイ標準の調製のための原材料として使用した。アッセイ標準、対照、及び希釈された試料を、５００μｇ／ｍｌのＳＢＴＩと共に１０分間インキュベートし、次いで、ＡＢＰ（Ｇ０３５３８１６）で１時間標識した。小分子トリプターゼ阻害剤（Ｇ０２８４９８５５）を、２０分間添加して、ＡＢＰ標識を停止した。この混合物を、捕捉抗体と共に１時間ＥＬＩＳＡプレートに添加し、１倍のＰＢＳＴで洗浄し、ＳＡ－ＨＲＰ試薬と共に２時間インキュベートした。比色シグナルをＴＭＢを適用することによって生成し、反応をリン酸を添加することによって停止した。プレートを、検出吸光度については４５０ｎＭ、参照吸光度については６５０ｎＭを使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダーで読み取った。
ヒト活性トリプターゼ（四量体）の濃度をＥＬＩＳＡアッセイによって判定した。ヒトトリプターゼを認識し、かつトリプターゼ四量体を解離することができるマウスモノクローナル抗体クローンＢ１２を、捕捉抗体として利用した（Ｆｕｋｕｏｋａ ｅｔ ａｌ（上記参照））。ヒトトリプターゼと結合する他の抗体もまた使用することができる。組み換えヒト活性トリプターゼベータ１を精製し、アッセイ標準の調製のための原材料として使用した。アッセイ標準、対照、及び希釈された試料を、５００μｇ／ｍｌのＳＢＴＩと共に１０分間インキュベートし、次いで、ＡＢＰ（Ｇ０３５３８１６）で１時間標識した。小分子トリプターゼ阻害剤（Ｇ０２８４９８５５）を、２０分間添加して、ＡＢＰ標識を停止した。この混合物を、捕捉抗体と共に１時間ＥＬＩＳＡプレートに添加し、１倍のＰＢＳＴで洗浄し、ＳＡ－ＨＲＰ試薬と共に２時間インキュベートした。比色シグナルをＴＭＢを適用することによって生成し、反応をリン酸を添加することによって停止した。プレートを、検出吸光度については４５０ｎＭ、参照吸光度については６５０ｎＭを使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダーで読み取った。
【0493】
（ｉｖ）ヒト全トリプターゼＥＬＩＳＡアッセイ
ヒト全トリプターゼの濃度をＥＬＩＳＡアッセイによって判定した。ヒトトリプターゼを認識し、かつトリプターゼ四量体を解離することができる抗体（クローンＢ１２）を、捕捉抗体として利用した。ヒトトリプターゼを認識するモノクローナル抗体を、検出抗体として利用した。組み換えヒト活性トリプターゼベータ１を精製し、アッセイ標準の調製のための原材料として使用した。試料を、２時間捕捉抗体と共にＥＬＩＳＡプレートに添加し、次いで、１倍のＰＢＳＴで洗浄した。ビオチン化検出抗体を１時間添加した。次に、ＳＡ－ＨＲＰ試薬を１時間添加した。比色シグナルをＴＭＢを適用することによって生成し、反応をリン酸を添加することによって停止した。プレートを、検出吸光度については４５０ｎＭ、参照吸光度については６５０ｎＭを使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダーで読み取った。
ヒト全トリプターゼの濃度をＥＬＩＳＡアッセイによって判定した。ヒトトリプターゼを認識し、かつトリプターゼ四量体を解離することができる抗体（クローンＢ１２）を、捕捉抗体として利用した。ヒトトリプターゼを認識するモノクローナル抗体を、検出抗体として利用した。組み換えヒト活性トリプターゼベータ１を精製し、アッセイ標準の調製のための原材料として使用した。試料を、２時間捕捉抗体と共にＥＬＩＳＡプレートに添加し、次いで、１倍のＰＢＳＴで洗浄した。ビオチン化検出抗体を１時間添加した。次に、ＳＡ－ＨＲＰ試薬を１時間添加した。比色シグナルをＴＭＢを適用することによって生成し、反応をリン酸を添加することによって停止した。プレートを、検出吸光度については４５０ｎＭ、参照吸光度については６５０ｎＭを使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダーで読み取った。
【0494】
Ｂ．結果
インビボでｈｕ３１Ａ．ｖ１１などの抗トリプターゼ抗体がトリプターゼを標的にし、活性トリプターゼ活性を阻害するかどうかを評価するために、アッセイは、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）（例えば、カニクイザルからの）などの試料中に存在する活性トリプターゼの量を測定するために開発されるか、または鼻吸収などのより少ない侵襲的方法によって行われた。標識（例えば、ビオチン）、リンカー、及び活性トリプターゼと反応する反応基を含む活性基準プローブを開発した。このプローブは、選択的かつ共有的に活性トリプターゼと結合する。Ｐａｎ ｅｔ ａｌ（上記参照）を参照されたい。このツールは、試料中の活性トリプターゼの量を測定するために使用され得る（図１５）。ＢＡＬ収集手順は、気道への緩衝剤の点滴及びその流体の逐次的な回収（可変であり得る）を含み、それ故に正常化因子は、時点及び動物にわたる試料を比較するために必要とされる。尿素は、血管及び気道区画の間で受動拡散を伴う小分子であるため、血清中のＢＡＬ／尿素の割合が、時点にわたって及び動物にわたって正常化するために使用され得る。Ｐｉｎｈｅｉｒｏ ｄｅ Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．２０１０，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ １４：Ｒ３９を参照されたい。
インビボでｈｕ３１Ａ．ｖ１１などの抗トリプターゼ抗体がトリプターゼを標的にし、活性トリプターゼ活性を阻害するかどうかを評価するために、アッセイは、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）（例えば、カニクイザルからの）などの試料中に存在する活性トリプターゼの量を測定するために開発されるか、または鼻吸収などのより少ない侵襲的方法によって行われた。標識（例えば、ビオチン）、リンカー、及び活性トリプターゼと反応する反応基を含む活性基準プローブを開発した。このプローブは、選択的かつ共有的に活性トリプターゼと結合する。Ｐａｎ ｅｔ ａｌ（上記参照）を参照されたい。このツールは、試料中の活性トリプターゼの量を測定するために使用され得る（図１５）。ＢＡＬ収集手順は、気道への緩衝剤の点滴及びその流体の逐次的な回収（可変であり得る）を含み、それ故に正常化因子は、時点及び動物にわたる試料を比較するために必要とされる。尿素は、血管及び気道区画の間で受動拡散を伴う小分子であるため、血清中のＢＡＬ／尿素の割合が、時点にわたって及び動物にわたって正常化するために使用され得る。Ｐｉｎｈｅｉｒｏ ｄｅ Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．２０１０，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ １４：Ｒ３９を参照されたい。
【0495】
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の投与がインビボでトリプターゼを標的としたかどうかを判定するために、３０ｍｇ／ｋｇの用量を健康な非チャレンジカニクイザルへ静脈内注射することによって投与し、ＢＡＬ中の活性トリプターゼの量を判定した。ベースラインで、活性トリプターゼレベルは、動物にわたって比較的に低くかつ可変であった。活性トリプターゼの減少されたレベルの傾向は、ベースラインで検出可能な活性トリプターゼを有する動物におけるｈｕ３１Ａ．ｖ１１の投与後に、ＢＡＬ中で観察された（図１６）。
【0496】
ｈｕ３１Ａ．ｖ１１投与の効果もまた、カニクイザルサルは様々な経路によって繰り返される投与によって寄生線虫回虫に対して感作されるアレルゲンチャレンジモデルにおいて評価した（図１７）。感作段階は、０、７、１５、７１、７８、及び８５日目で腹腔内及び筋肉内によって；２９、５０、１２０、１８４、及び１９８～２０５日目で吸入によって；及び３４日目で筋肉内によって回虫の投与を含んだ（図１７）。膨疹発赤を、これらの日の皮内投与の後に、－７、５７、及び１４０日目で評価した。各動物は、ＯＲＤ（最適反応用量）によって判定されるように、回虫の最適な用量を受け、それは、各動物において所望の応答を誘発するための回虫の適切な用量レベルを特徴付けるために行い（感作段階の間に行われた）。用量は、４，４００及び４０００μｇ／ｍｌを含んだ。実験段階は、ビヒクルを１日目に投与し、続いて２日目に吸入による回虫の投与、３０分後にＢＡＬ及び鼻吸収のサンプリングが続く、ビヒクル段階を含み、全トリプターゼの量及び活性トリプターゼを評価した（図１７）。４週間後、薬物段階は、１日目にｈｕ３１Ａ．ｖ１１の投与、続いて２日目に回虫の投与、及び３０分後にＢＡＬ及び鼻吸収のサンプリングを含み、全トリプターゼ及び活性トリプターゼの量を評価した（図１７）。
【0497】
回虫感作モデルにおいて、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の投与は、ベースラインで検出可能な活性トリプターゼレベルを有した５匹の動物のＢＡＬにおいて活性トリプターゼの著しい減少をもたらし（図１８Ａ）、この抗体がインビボでトリプターゼ活性を阻害することを示す。さらに、抗トリプターゼ抗体の投与はまた、全ての動物のＢＡＬにおいて全トリプターゼの量の増加をもたらした（図１８Ｂ）。他の実験は、鼻粘膜ライニング流体（ＭＬＦ）中の全トリプターゼのレベルが、鼻吸収試料中の全トリプターゼのレベルによって評価されるように、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１の投与後に増加したことを示した（図１８Ｃ）。この実験では、合成吸収性マトリックス（ＳＡＭ；Ｈｕｎｔ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ（ＵＫ），Ｌｔｄ，Ｗｅｓｔ Ｓｕｓｓｅｘ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を用いてＭＬＦを収集した。投与後の全トリプターゼの増加は、標的結合を示す。活性トリプターゼは、投与の前及び後で鼻吸収試料において検出不可能であった。図１８Ａ及び１８Ｃ中の＊は、検出より低いレベルを示す。
【0498】
次に、インビボでの活性の検証もまた、ヒト移植ＩＬ２Ｒｇｎｕｌｌ－３／ＧＭ／ＳＦ ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスにおいて試験した。ヒトマスト細胞移植及びヒトＩｇＥ依存性アレルギー性応答のためのヒト化マウスモデルを、以前に開発した。簡潔には、ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ストック番号０１３０６２）を、ＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）バックグラウンドから開発し、それらのＮＳＧ親と同様に、ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスは成熟Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び機能的ＮＫ細胞を欠き、マウスサイトカインシグナル伝達が不足している。これらのマウスは、３つの同時注射導入遺伝子を含み、それぞれはヒトサイトメガロウイルスプロモーター／エンハンサー配列によって駆動される。トリプルトランスジェニックＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスは、ヒトＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＩＬ－３の２～４ｎｇ／ｍｌの血清レベルを構成的に生成し、細胞増殖及び生存シグナルを提供する（例えば、Ｂｒｙｃｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８（３）：７６９－７７９，２０１６を参照されたい）。ＮＳＧ－ＳＧＭ３ ＢＬＴマウスは、末梢リンパ系組織、粘膜組織、及び腹膜腔を集合するヒトマスト細胞を発達させる。ＮＳＧ－ＳＧＭ３ ＢＬＴマウスにおけるヒトマスト細胞は、ＣＤ１１７、トリプターゼ、及びＩｇＥ受容体を発現し、カルシウム流を経て、ＩｇＥ依存性抗原特異性様式で脱顆粒する。チャレンジで、ＮＳＧ－ＳＧＭ３－ＢＬＴマウスは、体温の変化を測定することによって分析され得るヒトマスト細胞依存性抗原特異性ＩｇＥ媒介受動全身アナフィラキシー応答を発達させる。
【0499】
実験を、移植マウスにおいてＩｇＥ媒介受動全身アナフィラキシーを阻害することにおける抗トリプターゼ抗体の能力を試験するために設計した。１０～１２週齢のＮＳＧ－ＳＧＭ３マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙストック番号０１３０６２）を、３つの群に分けた：群１：ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスを腹腔内で（ｉ．ｐ．）アイソタイプ抗体（５００μｇ／マウス）で処置した；群２：ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスを腹腔内でヒト抗トリプターゼ抗体（ｈｕ３１Ａ．ｖ１１ ＩｇＧ４、１３．３ｍｇ／ｍＬ）（５００μｇ／マウス）で処置した；群３：ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスを腹腔内でトリプターゼ小分子阻害剤Ｇ０２８４９８５５（３０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。１日目に、体温測定を促進するために全てのマウスの腹部の毛をきれいに剃った。０日目に、参照アイソタイプ抗体または抗トリプターゼ抗体のいずれかを動物に注射した。用量体積を１００μＬで製剤化した。抗トリプターゼ抗体を、注射のために２００μＬの食塩水に溶解した。処置から１５分後、群１～３のマウスを、抗ＮＰ（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニルアセチルハプテン）ＩｇＥ ＪＷ８．５．１３（Ｓｉｇｍａカタログ番号８７０８０７０６－１ＶＬ；ＵＳ２００７／０２５３９４８及びＪａｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２７）：２０８５０－２０８５９，２０１０もまた参照されたい）（２００μＬの食塩水中１．６μｇ）で静脈内感作させた。１日目（治療から２４時間後）に、マウスを手動で抑制し、かつ胸骨のすぐ下の剃られた腹部の皮膚に対してＢｒａｕｎ ＴｈｅｒｍｏＳｃａｎ（登録商標）Ｐｒｏ４０００をしっかり置くことによって体温を測定した。ベースライン体温測定の直後に、マウスを２００μＬの食塩水中の担体タンパク質ＢＳＡ（ＮＰ－ＢＳＡ）に複合体化された５００μｇの抗原ＮＰで静脈内によりチャレンジを行った。チャレンジ後１５分毎に、体温を少なくとも６０分間測定する。
【0500】
図１９に示されるように、ＩｇＥチャレンジで、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１で処置されたマウスは、対照抗ｇＤ抗体で処置されたマウスと比較した場合に、改善された体温維持を示した。
【0501】
これらのデータは、抗トリプターゼ抗体ｈｕ３１Ａ．ｖ１１が活性であり、結合してインビボでトリプターゼ活性を阻害し得ることを示す。これらのデータは、ｈｕ３１Ａ．ｖ１１などの抗トリプターゼ抗体が、喘息などのトリプターゼ関連障害の治療のための治療剤として使用され得るというさらなる証拠を提供する。
【0502】
他の実施形態
前述の発明は、明確な理解のために例証及び例によっていくらか詳細に記載されているが、説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
前述の発明は、明確な理解のために例証及び例によっていくらか詳細に記載されているが、説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
【0503】
ＩＶ．配列表
表１７は、本出願にわたって使用される配列を示す。
表１７：配列表
SEQUENCE LISTING
<110> Genentech, Inc.
F. Hoffman-La Roche AG
<120> ANTI-TRYPTASE ANTIBODIES, COMPOSITIONS THEREOF, AND USES THEREOF
<130> 50474-112WO2
<150> US 62/457,722
<151> 2017-02-10
<160> 128
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> X is Asp or Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Tyr or Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> X is Val or His
<400> 1
Xaa Xaa Gly Met Xaa
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 2
Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Asn or Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> X is Tyr or Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> X is Asp or Tyr
<400> 3
Arg Xaa Xaa Xaa Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 4
Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 5
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 6
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1 5
<210> 7
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 7
Asp Tyr Gly Met Val
1 5
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 8
Arg Asn Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 9
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asn Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 12
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 13
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 13
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 14
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 15
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 16
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 16
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 17
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 17
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 18
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 19
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 20
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 21
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 21
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 22
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 23
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 23
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln
1 5 10 15
Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 24
Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 25
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 25
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 26
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 26
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 27
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 27
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 28
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 29
Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 30
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 30
Gly Tyr Ala Ile Thr
1 5
<210> 31
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 31
Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys Ser
1 5 10 15
<210> 32
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 32
Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 33
Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn Arg Leu Gly
1 5 10
<210> 34
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 34
Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser
1 5
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 35
Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser Gly Asp Thr Thr
1 5 10
<210> 36
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile
20 25 30
<210> 39
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Ile or Val
<400> 39
Trp Xaa Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 40
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Val or Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> X is Arg or Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> X is Val or Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> X is Tyr or Phe
<400> 40
Arg Xaa Thr Ile Ser Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Xaa Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Xaa Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 41
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 42
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 42
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 43
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 43
Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 44
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile
20 25 30
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 45
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 46
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 46
Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 47
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 48
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 49
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 52
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Lys Pro Thr Asp Thr
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr Ala
20 25 30
Ile Thr Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Asn Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys Ser
50 55 60
Arg Ser Thr Ile Thr Arg Asn Thr Asn Glu Asn Thr Val Thr Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 53
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 53
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
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Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 54
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 54
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Lys Pro Thr Asp Thr
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile
20 25
<210> 55
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 55
Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Asn Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 56
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 56
Arg Ser Thr Ile Thr Arg Asn Thr Asn Glu Asn Thr Val Thr Leu Lys
1 5 10 15
Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 57
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 58
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 58
Asp Ala Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 59
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Glu Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Ile or Ala
<220>
<221> MOD_RES
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<223> X is Met or Leu
<400> 60
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> X is Ala or Pro
<400> 61
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1 5 10 15
<210> 62
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
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<223> X is Gly or Glu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(31)
<223> X is Tyr or Phe
<400> 62
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Xaa Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Xaa Cys
20 25 30
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 63
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 64
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 65
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 65
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 66
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 66
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 67
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 67
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys
20
<210> 68
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 68
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 69
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> X is Cys or Ala
<400> 69
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Glu Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Xaa Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 70
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 71
<211> 275
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 71
Met Leu Asn Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Val Leu Ala Ser Arg Ala
1 5 10 15
Tyr Ala Ala Pro Ala Pro Gly Gln Ala Leu Gln Arg Val Gly Ile Val
20 25 30
Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu
35 40 45
Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile
50 55 60
His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp Val
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu Tyr
85 90 95
Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro Gln
100 105 110
Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu Glu
115 120 125
Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr Gly Trp
145 150 155 160
Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu Lys
165 170 175
Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala Lys Tyr
180 185 190
His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg Asp Asp
195 200 205
Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser
210 215 220
Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln Ala Gly
225 230 235 240
Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro Gly Ile
245 250 255
Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr Val Pro
260 265 270
Lys Lys Pro
275
<210> 72
<211> 275
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 72
Met Leu Asn Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Val Leu Ala Ser Arg Ala
1 5 10 15
Tyr Ala Ala Pro Ala Pro Gly Gln Ala Leu Gln Arg Val Gly Ile Val
20 25 30
Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu
35 40 45
Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile
50 55 60
His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp Val
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu Tyr
85 90 95
Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro Gln
100 105 110
Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu Glu
115 120 125
Glu Pro Val Lys Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr Gly Trp
145 150 155 160
Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu Lys
165 170 175
Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala Lys Tyr
180 185 190
His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg Asp Asp
195 200 205
Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser
210 215 220
Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln Ala Gly
225 230 235 240
Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro Gly Ile
245 250 255
Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr Val Pro
260 265 270
Lys Lys Pro
275
<210> 73
<211> 233
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 73
Met Leu Asn Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Val Leu Ala Ser Arg Ala
1 5 10 15
Tyr Ala Ala Pro Ala Pro Gly Gln Ala Leu Gln Arg Val Gly Ile Val
20 25 30
Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu
35 40 45
Arg Val Arg Asp Arg Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile
50 55 60
His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp Val
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu Tyr
85 90 95
Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro Gln
100 105 110
Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu Glu
115 120 125
Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr Gly Trp
145 150 155 160
Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu Lys
165 170 175
Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala Lys Tyr
180 185 190
His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg Asp Asp
195 200 205
Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Val Ala Thr
210 215 220
Ala Pro His Thr Phe Pro Ala Pro Ser
225 230
<210> 74
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 74
gatggtgact gttccagttg c 21
<210> 75
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 75
cattggtgag ggtgcccgag ttc 23
<210> 76
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asn Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 77
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 77
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 78
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 78
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asn Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
<210> 79
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 79
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 80
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 80
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly
450
<210> 81
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 81
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
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Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
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Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
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Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 82
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr
210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 83
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Ala Tyr Ser Val Asn
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Met Ile Trp Gly Asp Gly Lys Ile Val Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
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<223> Synthetic Construct
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Arg Ala Ser Lys Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His
1 5 10 15
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Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
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Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Arg Thr
1 5
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Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
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Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ala Tyr
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Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
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Leu Val Thr Val Ser Ser
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Asp Ser Tyr
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Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn
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Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<220>
<223> Synthetic Construct
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthethic Construct
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
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Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
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Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
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Cys Ala Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Phe Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 95
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 95
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
1 5 10 15
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20 25 30
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35
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<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 96
Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe
1 5 10 15
Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gly Gly
20 25 30
Thr Glu Val Val Val Lys
35
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<211> 245
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 97
Ile Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser
20 25 30
Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro
35 40 45
Asp Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His
50 55 60
Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His
65 70 75 80
Pro Gln Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu
85 90 95
Leu Glu Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu
100 105 110
Pro Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr
115 120 125
Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro
130 135 140
Leu Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala
145 150 155 160
Lys Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg
165 170 175
Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly
180 185 190
Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln
195 200 205
Ala Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro
210 215 220
Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr
225 230 235 240
Val Pro Lys Lys Pro
245
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Val Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 100
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 100
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Val Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 101
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Val Tyr Cys
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Thr Arg Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 102
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 102
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 103
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 103
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 104
gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcagc caggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc gattatggca tggtgtgggt gcgccaggcc 120
ccaggcaaag gcctggaatg ggtggccttc atcagcagcg gcagcagcac cgtgtattat 180
gccgatacca tgaaaggccg cttcaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaagat accgccgtgt attattgcac ccgccgcaac 300
tacgatgatt ggtatttcga tgtgtggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagt 357
<210> 105
<211> 318
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 105
gatatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60
atcacctgca gcgccagcag cagcgtgacc tatatgtatt ggtatcagca gaaaccaggc 120
aaaagcccaa aaccatggat ctatcgcacc agcgatctgg ccagcggcgt gccaagccgc 180
ttcagcggca gcggcagcgg caccgatttc accctgacca tcagcagcct gcagccagaa 240
gatttcgcca cctattattg ccagcactat cacagctatc cactgacctt cggccagggt 300
accaaggtgg agatcaaa 318
<210> 106
<211> 1347
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 106
gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcagc caggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc gattatggca tggtgtgggt gcgccaggcc 120
ccaggcaaag gcctggaatg ggtggccttc atcagcagcg gcagcagcac cgtgtattat 180
gccgatacca tgaaaggccg cttcaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaagat accgccgtgt attattgcac ccgccgcaac 300
tacgatgatt ggtatttcga tgtgtggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagtgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgactgtg ccctctagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaagagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 107
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 107
gatatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60
atcacctgca gcgccagcag cagcgtgacc tatatgtatt ggtatcagca gaaaccaggc 120
aaaagcccaa aaccatggat ctatcgcacc agcgatctgg ccagcggcgt gccaagccgc 180
ttcagcggca gcggcagcgg caccgatttc accctgacca tcagcagcct gcagccagaa 240
gatttcgcca cctattattg ccagcactat cacagctatc cactgacctt cggccagggt 300
accaaggtgg agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcttct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 108
<211> 1338
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 108
gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcagc caggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc gattatggca tggtgtgggt gcgccaggcc 120
ccaggcaaag gcctggaatg ggtggccttc atcagcagcg gcagcagcac cgtgtattat 180
gccgatacca tgaaaggccg cttcaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaagat accgccgtgt attattgcac ccgccgcaac 300
tacgatgatt ggtatttcga tgtgtggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagtgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctgct cccgcagtac ttctgagtcc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgactgtg ccctctagca gcttgggcac caagacctac 600
acgtgcaacg tggatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaaacgcgt tgagtccaaa 660
tatggtcccc catgcccacc atgcccagca cctgagttcc tggggggacc atcagtcttc 720
ctgttccccc caaaacccaa ggacactctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca ggaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggatggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agttcaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaaggcct cccgtcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag agccacaggt gtacaccctg cccccatccc aggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag caggctaacc gtggacaaga gcaggtggca ggaggggaat 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca gaagagcctc 1320
tccctgtctc tgggtaaa 1338
<210> 109
<211> 366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 109
gaagtgcagc tggtggaaag cggcccaggc ctggtgaaac caagcgaaac cctgagcctg 60
acctgcaccg tgagccgctt cagcctgatc ggctatgcca tcacctggat ccgccagcca 120
ccaggcaaag gcctggaatg gatcggcggc atcagcagcg ccgccaccac cttctatagc 180
agctgggcca aaagccgcgt gaccatcagc cgcgatacca gcaaaaacca ggtgagcctg 240
aaactgagca gcgtgaccgc cgccgatacc gccgtgtatt attgcgcccg cgatccacgc 300
ggctatggcg ccgccctgga tcgcctggat ctgtggggcc agggcaccct ggtgaccgtc 360
tcgagt 366
<210> 110
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 110
gatatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60
atcacctgcc agagcatcaa aagcgtgtat aacaaccgcc tgggctggta tcagcagaaa 120
ccaggcaaag ccccaaaact gctgatctat gaaaccagca tcctgaccag cggcgtgcca 180
agccgcttca gcggcagcgg cagcggcacc gatttcaccc tgaccatcag cagcctgcag 240
ccagaagatt tcgccaccta ttattgcgcc ggcggcttcg atcgcagcgg cgataccacc 300
ttcggccagg gtaccaaggt ggagatcaaa 330
<210> 111
<211> 1356
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 111
gaagtgcagc tggtggaaag cggcccaggc ctggtgaaac caagcgaaac cctgagcctg 60
acctgcaccg tgagccgctt cagcctgatc ggctatgcca tcacctggat ccgccagcca 120
ccaggcaaag gcctggaatg gatcggcggc atcagcagcg ccgccaccac cttctatagc 180
agctgggcca aaagccgcgt gaccatcagc cgcgatacca gcaaaaacca ggtgagcctg 240
aaactgagca gcgtgaccgc cgccgatacc gccgtgtatt attgcgcccg cgatccacgc 300
ggctatggcg ccgccctgga tcgcctggat ctgtggggcc agggcaccct ggtgaccgtc 360
tcgagtgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgactgtgc cctctagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gaagagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 112
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 112
gatatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60
atcacctgcc agagcatcaa aagcgtgtat aacaaccgcc tgggctggta tcagcagaaa 120
ccaggcaaag ccccaaaact gctgatctat gaaaccagca tcctgaccag cggcgtgcca 180
agccgcttca gcggcagcgg cagcggcacc gatttcaccc tgaccatcag cagcctgcag 240
ccagaagatt tcgccaccta ttattgcgcc ggcggcttcg atcgcagcgg cgataccacc 300
ttcggccagg gtaccaaggt ggagatcaaa cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 360
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgctt ctgttgtgtg cctgctgaat 420
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651
<210> 113
<211> 1347
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 113
gaagtgcagc tggtggaaag cggcccaggc ctggtgaaac caagcgaaac cctgagcctg 60
acctgcaccg tgagccgctt cagcctgatc ggctatgcca tcacctggat ccgccagcca 120
ccaggcaaag gcctggaatg gatcggcggc atcagcagcg ccgccaccac cttctatagc 180
agctgggcca aaagccgcgt gaccatcagc cgcgatacca gcaaaaacca ggtgagcctg 240
aaactgagca gcgtgaccgc cgccgatacc gccgtgtatt attgcgcccg cgatccacgc 300
ggctatggcg ccgccctgga tcgcctggat ctgtggggcc agggcaccct ggtgaccgtc 360
tcgagtgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctgctc ccgcagtact 420
tctgagtcca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgactgtgc cctctagcag cttgggcacc 600
aagacctaca cgtgcaacgt ggatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caaacgcgtt 660
gagtccaaat atggtccccc atgcccacca tgcccagcac ctgagttcct ggggggacca 720
tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840
gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aggctaaccg tggacaagag caggtggcag 1260
gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 1320
aagagcctct ccctgtctct gggtaaa 1347
<210> 114
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 114
Glu Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ala Tyr
20 25 30
Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Met Ile Trp Gly Asp Gly Lys Ile Val Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu
65 70 75 80
Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Asp Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ser
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 115
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 115
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 116
<211> 256
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 116
Ile Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser
20 25 30
Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro
35 40 45
Asp Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His
50 55 60
Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His
65 70 75 80
Pro Gln Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu
85 90 95
Leu Glu Glu Pro Val Lys Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu
100 105 110
Pro Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr
115 120 125
Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro
130 135 140
Leu Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala
145 150 155 160
Lys Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg
165 170 175
Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly
180 185 190
Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln
195 200 205
Ala Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro
210 215 220
Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr
225 230 235 240
Val Pro Lys Lys Pro Gly Asn Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
245 250 255
<210> 117
<211> 256
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 117
Ile Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Arg Asp Arg Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser
20 25 30
Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro
35 40 45
Asp Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His
50 55 60
Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His
65 70 75 80
Pro Gln Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu
85 90 95
Leu Glu Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu
100 105 110
Pro Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr
115 120 125
Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro
130 135 140
Leu Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala
145 150 155 160
Lys Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg
165 170 175
Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly
180 185 190
Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln
195 200 205
Ala Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro
210 215 220
Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr
225 230 235 240
Val Pro Lys Lys Pro Gly Asn Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
245 250 255
<210> 118
<211> 256
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 118
Ile Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Arg Asp Arg Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser
20 25 30
Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Gly Pro
35 40 45
Asp Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His
50 55 60
Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His
65 70 75 80
Pro Gln Phe Tyr Ile Ile Gln Thr Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu
85 90 95
Leu Glu Glu Pro Val Asn Ile Ser Ser Arg Val His Thr Val Met Leu
100 105 110
Pro Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr
115 120 125
Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Pro Leu Ser Pro Pro Phe Pro
130 135 140
Leu Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala
145 150 155 160
Lys Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Ile Arg
165 170 175
Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Ser Gln Arg Asp Ser Cys Lys Gly
180 185 190
Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln
195 200 205
Ala Gly Val Val Ser Trp Asp Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro
210 215 220
Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr
225 230 235 240
Val Pro Lys Lys Pro Gly Asn Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
245 250 255
<210> 119
<211> 268
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 119
Ala Leu Pro Val Leu Val Ser Pro Ala His Ala Ala Pro Ala Pro Gly
1 5 10 15
Gln Ala Leu Gln Arg Val Gly Ile Val Gly Gly Lys Glu Ala Pro Arg
20 25 30
Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Leu His Gly Gln Tyr Trp
35 40 45
Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr
50 55 60
Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp Val Lys Asp Leu Ala Asp Leu Arg
65 70 75 80
Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro
85 90 95
Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro Gln Phe Tyr Ala Val Gln Ile Gly
100 105 110
Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu Glu Glu Pro Val Asn Val Ser Ser
115 120 125
His Val His Thr Val Thr Leu Pro Pro Ala Leu Glu Thr Phe Pro Pro
130 135 140
Gly Thr Pro Cys Trp Val Thr Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Val
145 150 155 160
Arg Leu Pro Pro Pro Tyr Pro Leu Lys Glu Val Glu Val Pro Ile Val
165 170 175
Glu Asn Gln Leu Cys Asp Ala Glu Tyr His Thr Gly Leu His Thr Gly
180 185 190
Asp Ser Phe Arg Ile Val Arg Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Ser Glu
195 200 205
Lys His Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys
210 215 220
Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln Ala Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly
225 230 235 240
Cys Ala Leu Pro Asn Arg Pro Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr
245 250 255
Leu Asp Trp Ile His Arg Tyr Val Pro Glu Lys Pro
260 265
<210> 120
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 120
Ser Phe Ser Met Ser
1 5
<210> 121
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 121
Thr Ile Ser Gly Gly Lys Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 122
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 122
Ala Asn Tyr Gly Asn Trp Phe Phe Glu Val
1 5 10
<210> 123
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 123
Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala Lys Tyr Gly Leu Ser Leu Leu Asn
1 5 10 15
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 124
Ala Ala Ser Asn Arg Gly Ser
1 5
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 125
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 126
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 126
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Lys Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Trp Phe Phe Glu Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 127
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 127
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala Lys Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Leu Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Phe Ala Ala Ser Asn Arg Gly Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 128
<211> 260
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 128
Ala Gly Ser Thr His His His His His His Asp Asp Asp Asp Lys Ile
1 5 10 15
Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser
20 25 30
Leu Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu
35 40 45
Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp
50 55 60
Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu
65 70 75 80
Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro
85 90 95
Gln Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu
100 105 110
Glu Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu Pro
115 120 125
Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr Gly
130 135 140
Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu
145 150 155 160
Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala Lys
165 170 175
Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg Asp
180 185 190
Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp
195 200 205
Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln Ala
210 215 220
Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro Gly
225 230 235 240
Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr Val
245 250 255
Pro Lys Lys Pro
260
表１７は、本出願にわたって使用される配列を示す。
表１７：配列表
SEQUENCE LISTING
<110> Genentech, Inc.
F. Hoffman-La Roche AG
<120> ANTI-TRYPTASE ANTIBODIES, COMPOSITIONS THEREOF, AND USES THEREOF
<130> 50474-112WO2
<150> US 62/457,722
<151> 2017-02-10
<160> 128
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> X is Asp or Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Tyr or Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> X is Val or His
<400> 1
Xaa Xaa Gly Met Xaa
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 2
Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Asn or Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> X is Tyr or Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> X is Asp or Tyr
<400> 3
Arg Xaa Xaa Xaa Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 4
Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 5
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1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 6
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1 5
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<400> 7
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 8
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 9
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Arg Arg Asn Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
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85 90 95
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<211> 30
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Construct
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
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<220>
<223> Synthetic Construct
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 13
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<223> Synthetic Construct
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 17
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
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<223> Synthetic Construct
<400> 19
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Arg Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly
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<223> Synthetic Construct
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Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
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Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
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50 55 60
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Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 21
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
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<223> Synthetic Construct
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Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
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<211> 32
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 23
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<223> Synthetic Construct
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Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<223> Synthetic Construct
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Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
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<223> Synthetic Construct
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Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
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<211> 32
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 27
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
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Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<223> Synthetic Construct
<400> 28
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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<223> Synthetic Construct
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Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val
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<223> Synthetic Construct
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Gly Tyr Ala Ile Thr
1 5
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 31
Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys Ser
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 32
Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 33
Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn Arg Leu Gly
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 34
Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 35
Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser Gly Asp Thr Thr
1 5 10
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<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
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Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
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Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
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Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile
20 25 30
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Ile or Val
<400> 39
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<210> 40
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> X is Val or Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> X is Arg or Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> X is Val or Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> X is Tyr or Phe
<400> 40
Arg Xaa Thr Ile Ser Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Xaa Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Xaa Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 41
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 42
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 42
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 43
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 43
Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 44
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile
20 25 30
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 45
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 46
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 46
Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 47
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 48
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 49
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 52
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Lys Pro Thr Asp Thr
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr Ala
20 25 30
Ile Thr Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Asn Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys Ser
50 55 60
Arg Ser Thr Ile Thr Arg Asn Thr Asn Glu Asn Thr Val Thr Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 53
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 53
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Glu Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 54
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 54
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Lys Pro Thr Asp Thr
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile
20 25
<210> 55
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 55
Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Asn Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 56
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 56
Arg Ser Thr Ile Thr Arg Asn Thr Asn Glu Asn Thr Val Thr Leu Lys
1 5 10 15
Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 57
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 58
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 58
Asp Ala Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 59
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 59
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Glu Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
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<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
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<223> X is Ala or Pro
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<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
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<223> X is Gly or Glu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(31)
<223> X is Tyr or Phe
<400> 62
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Xaa Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Xaa Cys
20 25 30
<210> 63
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 63
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
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<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 65
<211> 15
<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 65
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 66
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 67
Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys
20
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<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 68
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 69
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> X is Cys or Ala
<400> 69
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Glu Thr Gln Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Xaa Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 70
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 71
<211> 275
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 71
Met Leu Asn Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Val Leu Ala Ser Arg Ala
1 5 10 15
Tyr Ala Ala Pro Ala Pro Gly Gln Ala Leu Gln Arg Val Gly Ile Val
20 25 30
Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu
35 40 45
Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile
50 55 60
His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp Val
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu Tyr
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Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro Gln
100 105 110
Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu Glu
115 120 125
Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr Gly Trp
145 150 155 160
Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu Lys
165 170 175
Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala Lys Tyr
180 185 190
His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg Asp Asp
195 200 205
Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser
210 215 220
Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln Ala Gly
225 230 235 240
Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro Gly Ile
245 250 255
Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr Val Pro
260 265 270
Lys Lys Pro
275
<210> 72
<211> 275
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 72
Met Leu Asn Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Val Leu Ala Ser Arg Ala
1 5 10 15
Tyr Ala Ala Pro Ala Pro Gly Gln Ala Leu Gln Arg Val Gly Ile Val
20 25 30
Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu
35 40 45
Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile
50 55 60
His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp Val
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu Tyr
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Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro Gln
100 105 110
Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu Glu
115 120 125
Glu Pro Val Lys Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr Gly Trp
145 150 155 160
Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu Lys
165 170 175
Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala Lys Tyr
180 185 190
His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg Asp Asp
195 200 205
Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser
210 215 220
Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln Ala Gly
225 230 235 240
Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro Gly Ile
245 250 255
Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr Val Pro
260 265 270
Lys Lys Pro
275
<210> 73
<211> 233
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 73
Met Leu Asn Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Val Leu Ala Ser Arg Ala
1 5 10 15
Tyr Ala Ala Pro Ala Pro Gly Gln Ala Leu Gln Arg Val Gly Ile Val
20 25 30
Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu
35 40 45
Arg Val Arg Asp Arg Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile
50 55 60
His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp Val
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu Tyr
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Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro Gln
100 105 110
Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu Glu
115 120 125
Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr Gly Trp
145 150 155 160
Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu Lys
165 170 175
Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala Lys Tyr
180 185 190
His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg Asp Asp
195 200 205
Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Val Ala Thr
210 215 220
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<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 75
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asn Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 77
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 77
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 78
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 78
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asn Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
<210> 79
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 79
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
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Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 80
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 80
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
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Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly
450
<210> 81
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 81
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
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Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
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65 70 75 80
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85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
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130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
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195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 82
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Arg Phe Ser Leu Ile Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Ser Ala Ala Thr Thr Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Arg Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr
210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
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<211> 217
<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 83
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ile Lys Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser
85 90 95
Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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Arg Ala Ser Lys Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His
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Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
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Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ala Tyr
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Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
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Ala Met Ile Trp Gly Asp Gly Lys Ile Val Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
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Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu
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Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
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Gly Asp Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ser
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Leu Val Thr Val Ser Ser
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Asp Ser Tyr
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Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn
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Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
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Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
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Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Phe Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
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<223> Synthetic Construct
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Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
1 5 10 15
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35
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 96
Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe
1 5 10 15
Cys Ala Gly Gly Phe Asp Arg Ser Gly Asp Thr Thr Phe Gly Gly Gly
20 25 30
Thr Glu Val Val Val Lys
35
<210> 97
<211> 245
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 97
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser
20 25 30
Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro
35 40 45
Asp Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His
50 55 60
Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His
65 70 75 80
Pro Gln Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu
85 90 95
Leu Glu Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu
100 105 110
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115 120 125
Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro
130 135 140
Leu Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala
145 150 155 160
Lys Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg
165 170 175
Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly
180 185 190
Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln
195 200 205
Ala Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro
210 215 220
Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr
225 230 235 240
Val Pro Lys Lys Pro
245
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<211> 119
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Val Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 101
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Val Tyr Cys
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Thr Arg Arg Asp Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 102
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
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Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
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100 105
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<211> 106
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 103
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 104
gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcagc caggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc gattatggca tggtgtgggt gcgccaggcc 120
ccaggcaaag gcctggaatg ggtggccttc atcagcagcg gcagcagcac cgtgtattat 180
gccgatacca tgaaaggccg cttcaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaagat accgccgtgt attattgcac ccgccgcaac 300
tacgatgatt ggtatttcga tgtgtggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagt 357
<210> 105
<211> 318
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 105
gatatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60
atcacctgca gcgccagcag cagcgtgacc tatatgtatt ggtatcagca gaaaccaggc 120
aaaagcccaa aaccatggat ctatcgcacc agcgatctgg ccagcggcgt gccaagccgc 180
ttcagcggca gcggcagcgg caccgatttc accctgacca tcagcagcct gcagccagaa 240
gatttcgcca cctattattg ccagcactat cacagctatc cactgacctt cggccagggt 300
accaaggtgg agatcaaa 318
<210> 106
<211> 1347
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 106
gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcagc caggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc gattatggca tggtgtgggt gcgccaggcc 120
ccaggcaaag gcctggaatg ggtggccttc atcagcagcg gcagcagcac cgtgtattat 180
gccgatacca tgaaaggccg cttcaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaagat accgccgtgt attattgcac ccgccgcaac 300
tacgatgatt ggtatttcga tgtgtggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagtgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgactgtg ccctctagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaagagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347
<210> 107
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 107
gatatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60
atcacctgca gcgccagcag cagcgtgacc tatatgtatt ggtatcagca gaaaccaggc 120
aaaagcccaa aaccatggat ctatcgcacc agcgatctgg ccagcggcgt gccaagccgc 180
ttcagcggca gcggcagcgg caccgatttc accctgacca tcagcagcct gcagccagaa 240
gatttcgcca cctattattg ccagcactat cacagctatc cactgacctt cggccagggt 300
accaaggtgg agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcttct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 108
<211> 1338
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 108
gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcagc caggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc gattatggca tggtgtgggt gcgccaggcc 120
ccaggcaaag gcctggaatg ggtggccttc atcagcagcg gcagcagcac cgtgtattat 180
gccgatacca tgaaaggccg cttcaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaagat accgccgtgt attattgcac ccgccgcaac 300
tacgatgatt ggtatttcga tgtgtggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagtgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctgct cccgcagtac ttctgagtcc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgactgtg ccctctagca gcttgggcac caagacctac 600
acgtgcaacg tggatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaaacgcgt tgagtccaaa 660
tatggtcccc catgcccacc atgcccagca cctgagttcc tggggggacc atcagtcttc 720
ctgttccccc caaaacccaa ggacactctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca ggaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggatggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agttcaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaaggcct cccgtcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag agccacaggt gtacaccctg cccccatccc aggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag caggctaacc gtggacaaga gcaggtggca ggaggggaat 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca gaagagcctc 1320
tccctgtctc tgggtaaa 1338
<210> 109
<211> 366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 109
gaagtgcagc tggtggaaag cggcccaggc ctggtgaaac caagcgaaac cctgagcctg 60
acctgcaccg tgagccgctt cagcctgatc ggctatgcca tcacctggat ccgccagcca 120
ccaggcaaag gcctggaatg gatcggcggc atcagcagcg ccgccaccac cttctatagc 180
agctgggcca aaagccgcgt gaccatcagc cgcgatacca gcaaaaacca ggtgagcctg 240
aaactgagca gcgtgaccgc cgccgatacc gccgtgtatt attgcgcccg cgatccacgc 300
ggctatggcg ccgccctgga tcgcctggat ctgtggggcc agggcaccct ggtgaccgtc 360
tcgagt 366
<210> 110
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 110
gatatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60
atcacctgcc agagcatcaa aagcgtgtat aacaaccgcc tgggctggta tcagcagaaa 120
ccaggcaaag ccccaaaact gctgatctat gaaaccagca tcctgaccag cggcgtgcca 180
agccgcttca gcggcagcgg cagcggcacc gatttcaccc tgaccatcag cagcctgcag 240
ccagaagatt tcgccaccta ttattgcgcc ggcggcttcg atcgcagcgg cgataccacc 300
ttcggccagg gtaccaaggt ggagatcaaa 330
<210> 111
<211> 1356
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 111
gaagtgcagc tggtggaaag cggcccaggc ctggtgaaac caagcgaaac cctgagcctg 60
acctgcaccg tgagccgctt cagcctgatc ggctatgcca tcacctggat ccgccagcca 120
ccaggcaaag gcctggaatg gatcggcggc atcagcagcg ccgccaccac cttctatagc 180
agctgggcca aaagccgcgt gaccatcagc cgcgatacca gcaaaaacca ggtgagcctg 240
aaactgagca gcgtgaccgc cgccgatacc gccgtgtatt attgcgcccg cgatccacgc 300
ggctatggcg ccgccctgga tcgcctggat ctgtggggcc agggcaccct ggtgaccgtc 360
tcgagtgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgactgtgc cctctagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gaagagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 112
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 112
gatatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60
atcacctgcc agagcatcaa aagcgtgtat aacaaccgcc tgggctggta tcagcagaaa 120
ccaggcaaag ccccaaaact gctgatctat gaaaccagca tcctgaccag cggcgtgcca 180
agccgcttca gcggcagcgg cagcggcacc gatttcaccc tgaccatcag cagcctgcag 240
ccagaagatt tcgccaccta ttattgcgcc ggcggcttcg atcgcagcgg cgataccacc 300
ttcggccagg gtaccaaggt ggagatcaaa cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 360
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgctt ctgttgtgtg cctgctgaat 420
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651
<210> 113
<211> 1347
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 113
gaagtgcagc tggtggaaag cggcccaggc ctggtgaaac caagcgaaac cctgagcctg 60
acctgcaccg tgagccgctt cagcctgatc ggctatgcca tcacctggat ccgccagcca 120
ccaggcaaag gcctggaatg gatcggcggc atcagcagcg ccgccaccac cttctatagc 180
agctgggcca aaagccgcgt gaccatcagc cgcgatacca gcaaaaacca ggtgagcctg 240
aaactgagca gcgtgaccgc cgccgatacc gccgtgtatt attgcgcccg cgatccacgc 300
ggctatggcg ccgccctgga tcgcctggat ctgtggggcc agggcaccct ggtgaccgtc 360
tcgagtgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctgctc ccgcagtact 420
tctgagtcca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgactgtgc cctctagcag cttgggcacc 600
aagacctaca cgtgcaacgt ggatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caaacgcgtt 660
gagtccaaat atggtccccc atgcccacca tgcccagcac ctgagttcct ggggggacca 720
tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840
gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aggctaaccg tggacaagag caggtggcag 1260
gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 1320
aagagcctct ccctgtctct gggtaaa 1347
<210> 114
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 114
Glu Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ala Tyr
20 25 30
Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Met Ile Trp Gly Asp Gly Lys Ile Val Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu
65 70 75 80
Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Asp Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ser
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 115
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 115
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 116
<211> 256
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 116
Ile Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser
20 25 30
Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro
35 40 45
Asp Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His
50 55 60
Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His
65 70 75 80
Pro Gln Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu
85 90 95
Leu Glu Glu Pro Val Lys Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu
100 105 110
Pro Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr
115 120 125
Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro
130 135 140
Leu Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala
145 150 155 160
Lys Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg
165 170 175
Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly
180 185 190
Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln
195 200 205
Ala Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro
210 215 220
Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr
225 230 235 240
Val Pro Lys Lys Pro Gly Asn Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
245 250 255
<210> 117
<211> 256
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 117
Ile Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Arg Asp Arg Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser
20 25 30
Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro
35 40 45
Asp Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His
50 55 60
Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His
65 70 75 80
Pro Gln Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu
85 90 95
Leu Glu Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu
100 105 110
Pro Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr
115 120 125
Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro
130 135 140
Leu Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala
145 150 155 160
Lys Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg
165 170 175
Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly
180 185 190
Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln
195 200 205
Ala Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro
210 215 220
Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr
225 230 235 240
Val Pro Lys Lys Pro Gly Asn Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
245 250 255
<210> 118
<211> 256
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 118
Ile Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val
1 5 10 15
Ser Leu Arg Val Arg Asp Arg Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser
20 25 30
Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Gly Pro
35 40 45
Asp Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His
50 55 60
Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His
65 70 75 80
Pro Gln Phe Tyr Ile Ile Gln Thr Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu
85 90 95
Leu Glu Glu Pro Val Asn Ile Ser Ser Arg Val His Thr Val Met Leu
100 105 110
Pro Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr
115 120 125
Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Pro Leu Ser Pro Pro Phe Pro
130 135 140
Leu Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala
145 150 155 160
Lys Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Ile Arg
165 170 175
Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Ser Gln Arg Asp Ser Cys Lys Gly
180 185 190
Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln
195 200 205
Ala Gly Val Val Ser Trp Asp Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro
210 215 220
Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr
225 230 235 240
Val Pro Lys Lys Pro Gly Asn Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
245 250 255
<210> 119
<211> 268
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 119
Ala Leu Pro Val Leu Val Ser Pro Ala His Ala Ala Pro Ala Pro Gly
1 5 10 15
Gln Ala Leu Gln Arg Val Gly Ile Val Gly Gly Lys Glu Ala Pro Arg
20 25 30
Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Leu His Gly Gln Tyr Trp
35 40 45
Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr
50 55 60
Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp Val Lys Asp Leu Ala Asp Leu Arg
65 70 75 80
Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro
85 90 95
Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro Gln Phe Tyr Ala Val Gln Ile Gly
100 105 110
Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu Glu Glu Pro Val Asn Val Ser Ser
115 120 125
His Val His Thr Val Thr Leu Pro Pro Ala Leu Glu Thr Phe Pro Pro
130 135 140
Gly Thr Pro Cys Trp Val Thr Gly Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Val
145 150 155 160
Arg Leu Pro Pro Pro Tyr Pro Leu Lys Glu Val Glu Val Pro Ile Val
165 170 175
Glu Asn Gln Leu Cys Asp Ala Glu Tyr His Thr Gly Leu His Thr Gly
180 185 190
Asp Ser Phe Arg Ile Val Arg Asp Asp Met Leu Cys Ala Gly Ser Glu
195 200 205
Lys His Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys
210 215 220
Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln Ala Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly
225 230 235 240
Cys Ala Leu Pro Asn Arg Pro Gly Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr
245 250 255
Leu Asp Trp Ile His Arg Tyr Val Pro Glu Lys Pro
260 265
<210> 120
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 120
Ser Phe Ser Met Ser
1 5
<210> 121
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 121
Thr Ile Ser Gly Gly Lys Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 122
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 122
Ala Asn Tyr Gly Asn Trp Phe Phe Glu Val
1 5 10
<210> 123
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 123
Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala Lys Tyr Gly Leu Ser Leu Leu Asn
1 5 10 15
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 124
Ala Ala Ser Asn Arg Gly Ser
1 5
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 125
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 126
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 126
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Lys Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Asn Tyr Gly Asn Trp Phe Phe Glu Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 127
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 127
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala Lys Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Leu Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Phe Ala Ala Ser Asn Arg Gly Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 128
<211> 260
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 128
Ala Gly Ser Thr His His His His His His Asp Asp Asp Asp Lys Ile
1 5 10 15
Val Gly Gly Gln Glu Ala Pro Arg Ser Lys Trp Pro Trp Gln Val Ser
20 25 30
Leu Arg Val His Gly Pro Tyr Trp Met His Phe Cys Gly Gly Ser Leu
35 40 45
Ile His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Gly Pro Asp
50 55 60
Val Lys Asp Leu Ala Ala Leu Arg Val Gln Leu Arg Glu Gln His Leu
65 70 75 80
Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Leu Pro Val Ser Arg Ile Ile Val His Pro
85 90 95
Gln Phe Tyr Thr Ala Gln Ile Gly Ala Asp Ile Ala Leu Leu Glu Leu
100 105 110
Glu Glu Pro Val Asn Val Ser Ser His Val His Thr Val Thr Leu Pro
115 120 125
Pro Ala Ser Glu Thr Phe Pro Pro Gly Met Pro Cys Trp Val Thr Gly
130 135 140
Trp Gly Asp Val Asp Asn Asp Glu Arg Leu Pro Pro Pro Phe Pro Leu
145 150 155 160
Lys Gln Val Lys Val Pro Ile Met Glu Asn His Ile Cys Asp Ala Lys
165 170 175
Tyr His Leu Gly Ala Tyr Thr Gly Asp Asp Val Arg Ile Val Arg Asp
180 185 190
Asp Met Leu Cys Ala Gly Asn Thr Arg Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp
195 200 205
Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Lys Val Asn Gly Thr Trp Leu Gln Ala
210 215 220
Gly Val Val Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Pro Asn Arg Pro Gly
225 230 235 240
Ile Tyr Thr Arg Val Thr Tyr Tyr Leu Asp Trp Ile His His Tyr Val
245 250 255
Pro Lys Lys Pro
260
【図1-1】
【図1-2】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図2E】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図7-1】
【図7-2】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図13】
【図14】
【図15-1】
【図15-2】
【図16】
【図17】
【図18A】
【図18B】
【図18C】
【図19】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-05-22
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記ヒトトリプターゼベータ１に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項2】
前記抗体が、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）に記載のＶＨドメイン及び（ｂ）に記載のＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項3】
前記ＶＨドメインが、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項4】
前記ＶＬドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項5】
前記抗体が、ヒトトリプターゼベータ１の酵素活性を阻害することができる、請求項１に記載の抗体。
【請求項6】
前記抗体が、約１８０ｐＭのＫ
Ｄ
で前記トリプターゼと結合する、請求項５に記載の抗体。
【請求項7】
前記抗体が、発色性合成ペプチド基質を使用するヒトトリプターゼベータ酵素アッセイによって決定された場合に、約２．８ｎＭ以下のＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害する、請求項５に記載の抗体。
【請求項8】
（ｉ）前記抗体が、ｐＨ６でヒトトリプターゼベータ１の酵素活性を阻害することができる；
（ｉｉ）前記抗体が、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激を阻害することができる；
（ｉｉｉ）前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる；
（ｉｖ）前記抗体が、一価フォーマットにあるときに四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる；及び／または
（ｖ）前記抗体が、低濃度のヘパリンの存在下で四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項５に記載の抗体。
（ｉｉ）前記抗体が、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激を阻害することができる；
（ｉｉｉ）前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる；
（ｉｖ）前記抗体が、一価フォーマットにあるときに四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる；及び／または
（ｖ）前記抗体が、低濃度のヘパリンの存在下で四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項５に記載の抗体。
【請求項9】
前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面を解離することができる、請求項１に記載の抗体。
【請求項10】
前記抗体が、カニクイザルトリプターゼ、ヒトトリプターゼアルファ、ヒトトリプターゼベータ２及び／またはヒトトリプターゼベータ３とさらに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項11】
前記抗体が、ヒト化されている、請求項１に記載の抗体。
【請求項12】
前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項13】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項１２に記載の抗体。
【請求項14】
前記ＩｇＧ４抗体が、重鎖定常領域にＳ２２８Ｐ変異（ＥＵ番号付けに従う）を含む、請求項１３に記載の抗体。
【請求項15】
前記抗体が、単一特異性抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項16】
前記抗体が、多重特異性抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項17】
前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、請求項１６に記載の抗体。
【請求項18】
前記抗体が、ヒトトリプターゼベータ１に結合する第１の結合ドメインと、第２の生物学的分子に結合する第２の結合ドメインとを含み、前記第２の生物学的分子が、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－５（ＩＬ－５）、インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）、ＩｇＥ、及びインターロイキン－３３（ＩＬ－３３）からなる群から選択される、請求項１７に記載の抗体。
【請求項19】
請求項１に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項20】
前記賦形剤が、抗酸化剤である、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項21】
前記賦形剤が、約０．１ｍＭ～約１ｍＭの濃度でＮ－アセチルトリプトファンを含み、約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度でメチオニンを含む、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項22】
遮光容器内にあるか、またはプレフィルドシリンジ内にある、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項23】
請求項５に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項24】
（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、または（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離された抗体。
【請求項25】
請求項２４に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項26】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する抗体、またはその抗原結合断片をコードする、単離された核酸、または単離された核酸のセットであって、前記抗体が、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、単離された核酸、または単離された核酸のセット。
（ａ）ＧＹＡＩＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）ＧＩＳＳＡＡＴＴＦＹＳＳＷＡＫＳ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）ＤＰＲＧＹＧＡＡＬＤＲＬＤＬ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）ＱＳＩＫＳＶＹＮＮＲＬＧ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）ＥＴＳＩＬＴＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）ＡＧＧＦＤＲＳＧＤＴＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項27】
前記抗体が、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）に記載のＶＨドメイン及び（ｂ）に記載のＶＬドメインを含む、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項28】
前記抗体が、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）に記載のＶＨドメイン及び（ｂ）に記載のＶＬドメインを含む、請求項２７に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項29】
前記抗体が、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）に記載のＶＨドメイン及び（ｂ）に記載のＶＬドメインを含む、請求項２８に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項30】
前記抗体が、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項31】
前記抗体が、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項32】
前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１の小界面及び四量体のヒトトリプターゼベータ１の大界面の両方を解離することができる、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項33】
前記抗体が、カニクイザルトリプターゼ、ヒトトリプターゼアルファ、ヒトトリプターゼベータ２及び／またはヒトトリプターゼベータ３とさらに結合する、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項34】
前記抗体が、約１ｎＭ以下のＫ
Ｄ
で前記トリプターゼと結合する、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項35】
前記抗体が、約１８０ｐＭのＫ
Ｄ
で前記トリプターゼと結合する、請求項３４に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項36】
前記抗体が、ヒトトリプターゼベータ１の酵素活性を阻害することができる、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項37】
前記抗体が、発色性合成ペプチド基質を使用するヒトトリプターゼベータ酵素アッセイによって決定された場合に、約２．８ｎＭ以下のＩＣ５０でトリプターゼの活性を阻害する、請求項３６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項38】
（ｉ）前記抗体が、ｐＨ６でヒトトリプターゼベータ１の酵素活性を阻害することができる；
（ｉｉ）前記抗体が、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激を阻害することができる；
（ｉｉｉ）前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる；
（ｉｖ）前記抗体が、一価フォーマットにあるときに四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる；及び／または
（ｖ）前記抗体が、低濃度のヘパリンの存在下で四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
（ｉｉ）前記抗体が、気管支平滑筋細胞増殖及び／またはコラーゲン系収縮のトリプターゼ媒介刺激を阻害することができる；
（ｉｉｉ）前記抗体が、四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる；
（ｉｖ）前記抗体が、一価フォーマットにあるときに四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる；及び／または
（ｖ）前記抗体が、低濃度のヘパリンの存在下で四量体のヒトトリプターゼベータ１を解離することができる、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項39】
前記抗体が、モノクローナル抗体であるか、またはヒト化されている、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項40】
前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項２６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項41】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項４０に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項42】
前記ＩｇＧ４抗体が、重鎖定常領域にＳ２２８Ｐ変異（ＥＵ番号付けに従う）を含む、請求項４１に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項43】
前記抗体が、単一特異性抗体であるか、または多重特異性抗体である、請求項２９に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項44】
前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、請求項４３に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項45】
前記抗体が、ヒトトリプターゼベータ１に結合する第１の結合ドメインと、第２の生物学的分子に結合する第２の結合ドメインとを含み、前記第２の生物学的分子が、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－５（ＩＬ－５）、インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）、ＩｇＥ、及びインターロイキン－３３（ＩＬ－３３）からなる群から選択される、請求項４４に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項46】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する抗体、またはその抗原結合断片をコードする、単離された核酸、または単離された核酸のセットであって、前記抗体が、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、前記核酸または核酸のセットが、配列番号１０９及び／または配列番号１１０の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項47】
配列番号１０９及び／または配列番号１１０の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項４６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項48】
配列番号１０９及び／または配列番号１１０の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項４７に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項49】
配列番号１０９及び／または配列番号１１０の配列と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項４８に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項50】
配列番号１０９及び／または配列番号１１０の配列を含む、請求項４６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項51】
前記抗体が、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記核酸または核酸のセットが、配列番号１１１及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項４６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項52】
配列番号１１１及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５１に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項53】
配列番号１１１及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５２に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項54】
配列番号１１１及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５３に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項55】
配列番号１１１及び／または配列番号１１２の配列を含む、請求項５４に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項56】
前記抗体が、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記核酸または核酸のセットが、配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項４６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項57】
配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５６に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項58】
配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５７に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項59】
配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５８に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項60】
配列番号１１３及び／または配列番号１１２の配列を含む、請求項５９に記載の単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項61】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する抗体、またはその抗原結合断片をコードする、単離された核酸、または単離された核酸のセットであって、前記抗体が、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項62】
（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、または（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、をコードする、単離された核酸、または単離された核酸のセット。
【請求項63】
請求項２６に記載の単離された核酸または単離された核酸のセットを含む、ベクターまたはベクターのセット。
【請求項64】
請求項６３に記載のベクターまたはベクターのセットを含む、単離された宿主細胞。
【請求項65】
前記宿主細胞が、哺乳動物細胞または原核細胞である、請求項６４に記載の単離された宿主細胞。
【請求項66】
ヒトトリプターゼベータ１に結合する抗体の産生方法であって、請求項６５に記載の単離された宿主細胞を、前記抗体の産生を可能にする好適な条件下で、培養培地で培養することを含む、方法。
【外国語明細書】