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特開2023-105405腸粘膜バリアを強固にする腸内細菌アッカーマンシアを増やし、腸内環境を良くする、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023105405
(43)【公開日】2023-07-31
(54)【発明の名称】腸粘膜バリアを強固にする腸内細菌アッカーマンシアを増やし、腸内環境を良くする、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 33/243 20190101AFI20230724BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20230724BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20230724BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20230724BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20230724BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230724BHJP
A61K 35/74 20150101ALI20230724BHJP
【ＦＩ】
A61K33/243
A61K9/10
A61K9/20
A61K9/48
A61P1/00
A61P43/00 111
A61K35/74 A
【審査請求】有
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022006194
(22)【出願日】2022-01-19
(11)【特許番号】
(45)【特許公報発行日】2022-06-20
(71)【出願人】
【識別番号】520372663
【氏名又は名称】株式会社ミスターウォーターマン
(71)【出願人】
【識別番号】506300730
【氏名又は名称】アプト株式会社
(71)【出願人】
【識別番号】591201686
【氏名又は名称】株式会社日本トリム
(74)【代理人】
【識別番号】100137338
【弁理士】
【氏名又は名称】辻田 朋子
(74)【代理人】
【識別番号】100196313
【弁理士】
【氏名又は名称】村松 大輔
(72)【発明者】
【氏名】堀 仁
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C076AA16
4C076AA36
4C076AA53
4C076BB01
4C076CC16
4C076FF02
4C076FF16
4C086AA01
4C086AA02
4C086HA12
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA21
4C086MA34
4C086NA14
4C086ZA66
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC54
4C087MA21
4C087MA34
4C087NA14
4C087ZA66
(57)【要約】
【課題】
本発明は、腸内細菌叢に存在するアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖する新規な組成物を提供することを、課題とする。
【解決手段】
白金ナノ粒子を有効成分として含む、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【選択図】 なし
本発明は、腸内細菌叢に存在するアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖する新規な組成物を提供することを、課題とする。
【解決手段】
白金ナノ粒子を有効成分として含む、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
白金ナノ粒子を有効成分として含む、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【請求項2】
前記白金ナノ粒子が電解水に分散されたものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記白金ナノ粒子の平均粒子径が５ｎｍ以下である、請求項２に記載のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【請求項4】
前記白金ナノ粒子を、０．０２μｇ／ｍＬ以上の濃度で含む、請求項２又は３に記載のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【請求項5】
固形製剤であり、電解水に溶解させることにより、請求項２～４の何れか一項に記載の組成物を調製するための、請求項１に記載のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）を増殖するための組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
腸内細菌叢に存在するアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）は、腸内環境の維持に寄与しており、これを増殖させる方法が開発されてきた。
例えば特許文献１には、グネチンＣ及び／又はその配糖体を有効成分として含有してなることを特徴とする腸内細菌叢改善組成物が記載されている。
例えば特許文献１には、グネチンＣ及び／又はその配糖体を有効成分として含有してなることを特徴とする腸内細菌叢改善組成物が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】国際公開２０２０－０７１５４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
本発明は、腸内細菌叢に存在するアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖する新規な組成物を提供することを、課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0005】
上記課題を解決する本発明は、白金ナノ粒子を有効成分として含む、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物である。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
【0006】
本発明の好ましい形態では、前記白金ナノ粒子は、電解水に分散されたものである。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
【0007】
本発明の好ましい形態では、前記白金ナノ粒子の平均粒子径が５ｎｍ以下である。
また本発明の好ましい形態では、前記白金ナノ粒子を、０．０２μｇ／ｍＬ以上の濃度で含む。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
また本発明の好ましい形態では、前記白金ナノ粒子を、０．０２μｇ／ｍＬ以上の濃度で含む。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
【0008】
本発明の好ましい形態では、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物は、固形製剤であり、電解水に溶解させることにより、上記した組成物を調製するための組成物である。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
【発明の効果】
【0009】
本発明によれば、アッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させる組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【発明を実施するための形態】
【0011】
本発明のアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ。以下、アッカーマンシア・ムシニフィラという）増殖用組成物は、白金ナノ粒子を有効成分として含む。
本発明によれば、腸内（特に、大腸）に存在するアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。またアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖により、腸粘膜バリアが強化され、腸内環境を改善することができる。
本発明によれば、腸内（特に、大腸）に存在するアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。またアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖により、腸粘膜バリアが強化され、腸内環境を改善することができる。
【0012】
本発明において、「白金ナノ粒子」とは、直径が１００ｎｍ以下の白金粒子をいう。白金ナノ粒子は、適宜本分野で公知の方法及び機器で製造することができる。
【0013】
アッカーマンシア・ムシニフィラは腸内、特に大腸に存在し、成人の腸内細菌の１～４％を占める。
アッカーマンシア・ムシニフィラがムチンを分泌することにより、腸粘膜における粘液層（ムチン層）が肥厚し、肥厚した粘液層によって糖類が身体に吸収することが妨げられるため、糖の吸収が悪くなり、痩身効果があると考えられている。実際に、肥満傾向にある人やＩＩ型糖尿病（成人発症型）の人の腸内には、アッカーマンシア・ムシニフィラが存在しないか、又はごく少量にしか存在しないことが知られている。
また粘液層は、腸管上皮を覆うことで物理的に腸管組織への細菌侵入を防止するとともに、層自体の粘性により細菌の上皮細胞への接着を防止している。
アッカーマンシア・ムシニフィラがムチンを分泌することにより、腸粘膜における粘液層（ムチン層）が肥厚し、肥厚した粘液層によって糖類が身体に吸収することが妨げられるため、糖の吸収が悪くなり、痩身効果があると考えられている。実際に、肥満傾向にある人やＩＩ型糖尿病（成人発症型）の人の腸内には、アッカーマンシア・ムシニフィラが存在しないか、又はごく少量にしか存在しないことが知られている。
また粘液層は、腸管上皮を覆うことで物理的に腸管組織への細菌侵入を防止するとともに、層自体の粘性により細菌の上皮細胞への接着を防止している。
【0014】
ところで、腸内の慢性的な炎症により腸粘膜バリアが破綻して腸管組織に細菌が侵入すると、腸壁のタイトジャンクションに隙間ができ、腸管透過性が亢進してしまう。このような症状を、腸漏れ症候群（リーキーガット症候群）という。
腸漏れ症候群を発症し、腸管透過性が亢進すると、ウイルスや細菌が腸から血中に漏れ出し、消化器系疾患（過敏性腸症候群等）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病等）、自己免疫疾患（関節リウマチ、セリアック病等）、皮膚疾患（ニキビ等）、神経変性疾患（アルツハイマー病、認知症、パーキンソン病等）等、様々な疾患を引き起こすことが知られている。
例えば腸漏れ症候群が発生した腸から、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）が血中に漏れ出て脳まで運ばれると、ミクログリアが活性化され、活性化されたミクログリアによりアミロイドβが産生・蓄積されることにより、認知機能障害を引き起こすことが知られている。
また、腸から漏れ出たＬＰＳが血流に乗って全身に運ばれると、全身が軽度の炎症状態に陥り、これによりインスリン抵抗性が悪化してＩＩ型糖尿病を引き起こすことが知られている。
腸漏れ症候群を発症し、腸管透過性が亢進すると、ウイルスや細菌が腸から血中に漏れ出し、消化器系疾患（過敏性腸症候群等）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病等）、自己免疫疾患（関節リウマチ、セリアック病等）、皮膚疾患（ニキビ等）、神経変性疾患（アルツハイマー病、認知症、パーキンソン病等）等、様々な疾患を引き起こすことが知られている。
例えば腸漏れ症候群が発生した腸から、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）が血中に漏れ出て脳まで運ばれると、ミクログリアが活性化され、活性化されたミクログリアによりアミロイドβが産生・蓄積されることにより、認知機能障害を引き起こすことが知られている。
また、腸から漏れ出たＬＰＳが血流に乗って全身に運ばれると、全身が軽度の炎症状態に陥り、これによりインスリン抵抗性が悪化してＩＩ型糖尿病を引き起こすことが知られている。
【0015】
本発明は、腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を増やすことによって、腸粘膜の粘液層を肥厚させ、腸管のタイトジャンクションでの隙間の生成を予防及び／又は改善することにより、腸漏れを抑制及び／又は改善することで、腸漏れ症候群に起因する諸疾患の予防及び／又は改善する効果が期待できる。また腸管の粘液層を肥厚させることで、腸内環境の改善効果も期待できる。
例えば、血中ＬＰＳ濃度が一定以上の人物は、腸漏れ症候群である蓋然性が高いため、このような人物が本発明に係る組成物を摂取することにより、アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を増やして腸管の粘液層を肥厚させる（換言すれば、腸粘膜バリアを強化する）ことで、腸漏れを改善し、上記諸疾患の予防又は改善をする効果が期待できる。
また、腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量が少ない人物が、本発明に係る組成物を摂取することにより、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を増やして粘液層を肥厚させる（換言すれば、腸粘膜バリアを強化する）ことができ、これにより肥満の改善（痩身）が期待できるとともに、腸漏れを予防し、上記諸疾患の予防効果も期待できる。
例えば、血中ＬＰＳ濃度が一定以上の人物は、腸漏れ症候群である蓋然性が高いため、このような人物が本発明に係る組成物を摂取することにより、アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を増やして腸管の粘液層を肥厚させる（換言すれば、腸粘膜バリアを強化する）ことで、腸漏れを改善し、上記諸疾患の予防又は改善をする効果が期待できる。
また、腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量が少ない人物が、本発明に係る組成物を摂取することにより、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を増やして粘液層を肥厚させる（換言すれば、腸粘膜バリアを強化する）ことができ、これにより肥満の改善（痩身）が期待できるとともに、腸漏れを予防し、上記諸疾患の予防効果も期待できる。
【0016】
腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラは、腸管内分泌細胞を刺激し、消化管ホルモンであるインクレチンを分泌させることが知られている。インクレチンは膵臓のランゲルハンス島β細胞を刺激して、血糖値依存的にインスリン分泌を促進する。よって本発明に係る組成物を摂取することにより、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増やすと、インクレチンの分泌の増加及びこれによるインスリンの分泌が増加により、ＩＩ型糖尿病の治療又は予防効果が期待できる。
また上記の通り、腸から血中に漏れ出たＬＰＳは、ＩＩ型糖尿病の原因のひとつとなるが、本発明に係る組成物によって腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を増やして粘液層を肥厚させ、腸漏れを改善又は予防すると、血中へＬＰＳが漏れ出ることを抑制又は予防することができるため、全身の炎症状態を改善又は予防することができ、その結果インスリン抵抗性を改善し、ＩＩ型糖尿病の治療又は予防効果が期待できる。
また上記の通り、腸から血中に漏れ出たＬＰＳは、ＩＩ型糖尿病の原因のひとつとなるが、本発明に係る組成物によって腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を増やして粘液層を肥厚させ、腸漏れを改善又は予防すると、血中へＬＰＳが漏れ出ることを抑制又は予防することができるため、全身の炎症状態を改善又は予防することができ、その結果インスリン抵抗性を改善し、ＩＩ型糖尿病の治療又は予防効果が期待できる。
【0017】
本発明の組成物は、液体状、固形状、半固形状等、その性状は特に制限されない。
【0018】
本発明の組成物が液体状である場合、分散媒は電解水であることが好ましい。換言すれば、本発明の好ましい形態では、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物は、白金ナノ粒子が電解水に分散された組成物である。
白金ナノ粒子及び電解水はそれぞれ腸内の活性酸素を除去することができることが知られているが、これらを同時に摂取した場合に、腸内細菌叢に含まれる腸内細菌のうち、特に腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラが増殖することについては、知られていない。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。なお電解水は、公知の方法及び機器で飲用可能なものを製造することができる。
白金ナノ粒子及び電解水はそれぞれ腸内の活性酸素を除去することができることが知られているが、これらを同時に摂取した場合に、腸内細菌叢に含まれる腸内細菌のうち、特に腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラが増殖することについては、知られていない。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。なお電解水は、公知の方法及び機器で飲用可能なものを製造することができる。
【0019】
電解水のｐＨは、８～１１であることが好ましく、９～１０であることがより好ましく、９．０～９．５であることがさらに好ましい。
【0020】
白金ナノ粒子の平均粒子径は、５ｎｍ以下であることが好ましく、４．５ｎｍ以下であることがより好ましく、４ｎｍ以下であることがさらに好ましく、３ｎｍ以下であることがさらにより好ましい。
また、平均粒子径は、０．５ｎｍ以上であることが好ましく、０．７５ｎｍ以上であることが好ましく、１．０ｎｍ以上であることがより好ましい。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
なお本発明において、平均粒子径とは、小角Ｘ線散乱法によるモデル数値解析により算出した粒子径である。詳細な算出方法は、後述する実施例において説明する。
また、平均粒子径は、０．５ｎｍ以上であることが好ましく、０．７５ｎｍ以上であることが好ましく、１．０ｎｍ以上であることがより好ましい。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
なお本発明において、平均粒子径とは、小角Ｘ線散乱法によるモデル数値解析により算出した粒子径である。詳細な算出方法は、後述する実施例において説明する。
【0021】
本発明が液体状である場合、組成物全体に対する白金ナノ粒子の濃度は、０．０２μｇ／ｍＬ以上であることが好ましく、０．０２４μｇ／ｍＬ以上であることがさらにより好ましく、０．０３μｇ／ｍＬ以上であることがさらにより好ましい。
また、組成物全体に対する白金ナノ粒子の濃度は、０．１μｇ／ｍＬ以下であることが好ましく、０．０９６μｇ／ｍＬ以下であることがより好ましく、０．０９μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましく、０．０８μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましく、０．０７６μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましく、０．０７μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましく、０．０６μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましい。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
また、組成物全体に対する白金ナノ粒子の濃度は、０．１μｇ／ｍＬ以下であることが好ましく、０．０９６μｇ／ｍＬ以下であることがより好ましく、０．０９μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましく、０．０８μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましく、０．０７６μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましく、０．０７μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましく、０．０６μｇ／ｍＬ以下であることがさらにより好ましい。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
【0022】
本発明が固形状（固体製剤）である場合、例えば錠剤やカプセル剤とすることができるが、錠剤とすることが好ましい。錠剤は、そのまま経口摂取する形態とすることや、摂取時に水（好ましくは電解水）に溶解させて摂取する形態とすることができる。
またカプセル剤とする場合には、適宜公知の方法で、白金ナノ粒子を封入したカプセル剤を製造することができる。
またカプセル剤とする場合には、適宜公知の方法で、白金ナノ粒子を封入したカプセル剤を製造することができる。
【0023】
固体製剤とする場合、１錠当たりの白金ナノ粒子の含有量は０．０１ｍｇ以上であることが好ましく、０．０１６ｍｇ以上であることがより好ましく、０．０２ｍｇ以上であることがさらにより好ましく、０．０２４ｍｇ以上であることがさらにより好ましく、０．０３ｍｇ以上であることがさらにより好ましい。
１錠当たりの白金ナノ粒子の含有量は、０．１ｍｇ以下であることが好ましく、０．０９６ｍｇ以下であることがより好ましく、０．０９ｍｇ以下であることがさらにより好ましく、０．０８ｍｇ以下であることがさらにより好ましく、０．０７６ｍｇ以下であることがさらにより好ましく、０．０７ｍｇ以下であることがさらにより好ましく、０．０６ｍｇ以下であることがさらにより好ましい。
１錠当たりの白金ナノ粒子の含有量は、０．１ｍｇ以下であることが好ましく、０．０９６ｍｇ以下であることがより好ましく、０．０９ｍｇ以下であることがさらにより好ましく、０．０８ｍｇ以下であることがさらにより好ましく、０．０７６ｍｇ以下であることがさらにより好ましく、０．０７ｍｇ以下であることがさらにより好ましく、０．０６ｍｇ以下であることがさらにより好ましい。
【0024】
本発明の好ましい形態では、固体製剤（好ましくは、錠剤）であり、電解水に溶解させることにより、上記組成物を調製するための、組成物である。
本発明によれば、電解水を分散媒とする液体状であるアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物を、用事調製することができる。
本発明によれば、電解水を分散媒とする液体状であるアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物を、用事調製することができる。
【0025】
本発明のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物は、本願発明の効果を阻害しない範囲で、公知の他の原料（矯味剤、矯臭剤、ｐＨ調整剤、賦形剤、増粘剤、香料、食用色素、甘味料、食物繊維、ビタミン類、保存料、酸化防止剤等）を含むことができる。
【0026】
本発明の組成物を摂取することにより、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。
例えば、電解水に白金ナノ粒子を電解水に分散させた、本発明に係るアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物を経口摂取する場合、１日あたりの白金ナノ粒子の摂取量が１０μｇ以上となるように摂取することが好ましく、１２μｇ以上となるように摂取することがより好ましく、１５μｇ以上となるように摂取することがさらに好ましく、１８μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、２０μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、２２μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、２５μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、２８μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、３０μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましい。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を促進することができる。
なお、１日あたりの白金ナノ粒子の摂取量の上限は、例えば５０μｇ以下を目安とすることができる。
また上記のようにしてアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を促進することにより、腸粘膜バリアを強化し、腸内環境を改善するとともに、腸漏れ症候群を改善及び／又は予防をすることができる。
例えば、電解水に白金ナノ粒子を電解水に分散させた、本発明に係るアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物を経口摂取する場合、１日あたりの白金ナノ粒子の摂取量が１０μｇ以上となるように摂取することが好ましく、１２μｇ以上となるように摂取することがより好ましく、１５μｇ以上となるように摂取することがさらに好ましく、１８μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、２０μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、２２μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、２５μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、２８μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましく、３０μｇ以上となるように摂取することがさらにより好ましい。
本発明によれば、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を促進することができる。
なお、１日あたりの白金ナノ粒子の摂取量の上限は、例えば５０μｇ以下を目安とすることができる。
また上記のようにしてアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を促進することにより、腸粘膜バリアを強化し、腸内環境を改善するとともに、腸漏れ症候群を改善及び／又は予防をすることができる。
【0027】
例えば、分散媒が電解水であり、白金ナノ粒子の濃度が１５μｇ／５００ｍＬである組成物であれば、１日当たりの３５０ｍＬ～１Ｌ以上飲用することで、上記摂取量を達成することができる。
【0028】
本発明に係る組成物の摂取期間としては、４週間以上連続して摂取することが好ましく、５週間以上連続して摂取することが好ましく、６週間以上連続して摂取することがさらにより好ましく、７週間以上連続して摂取することがさらにより好ましく、８週間以上連続して摂取することがさらにより好ましい。
本発明を上記期間で摂取することによって、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。なお、連続摂取期間の上限は特にない。
本発明を上記期間で摂取することによって、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。なお、連続摂取期間の上限は特にない。
【実施例0029】
以下、実施例を参照して本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲は、以下の実施例に限定されない。
【0030】
無作為に選出した被験者（３０代～６０代の男女）計１３人を、プラセボ群と試験群にわけた。
プラセボ群には、ペットボトル入り飲料水（水道水）５００ｍＬを１日２本、連続して８週間飲用させた（１日あたり１Ｌの水を飲用）。
試験群には、ペットボトル入りの、電解水に白金ナノ粒子を分散させた水（以下、電解ナノ白金水という）５００ｍＬを１日２本、連続して８週間飲用させた。
プラセボ群には、ペットボトル入り飲料水（水道水）５００ｍＬを１日２本、連続して８週間飲用させた（１日あたり１Ｌの水を飲用）。
試験群には、ペットボトル入りの、電解水に白金ナノ粒子を分散させた水（以下、電解ナノ白金水という）５００ｍＬを１日２本、連続して８週間飲用させた。
【0031】
本実施例において、電解ナノ白金水中の白金ナノ粒子の平均粒子径は２ｎｍであり、５００ｍＬペットボトル１本あたりの白金ナノ粒子の濃度は１５μｇである（すなわち、試験群は、１日あたり３０μｇの白金ナノ粒子を摂取した）。また電解ナノ白金水のｐHは９．２であった。本実施例において電解水に分散させた白金ナノ粒子の平均粒子径の測定方法を、以下に示す。
なお、被験者には何れも基礎疾患はなく、上記所定の飲用水を所定の量飲用すること以外は、普段と同じ生活を送った。
なお、被験者には何れも基礎疾患はなく、上記所定の飲用水を所定の量飲用すること以外は、普段と同じ生活を送った。
【0032】
＜白金ナノ粒子の平均粒子径の測定方法＞
白金ナノ粒子をｍｉｌｌｉ－Ｑ水に分散した試料を攪拌分散し、ガラス製キャピラリー（１．５ｍｍφ）に詰め、測定した。なおバックグラウンドとしてｍｉｌｌｉ－Ｑ水を測定した。なおｍｉｌｌｉ－Ｑ水は、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ（登録商標）（メルク社）を用いて製造することができる。
以下のように小角Ｘ線散乱法を用いた算出値を平均粒子径とした。
白金ナノ粒子をｍｉｌｌｉ－Ｑ水に分散した試料を攪拌分散し、ガラス製キャピラリー（１．５ｍｍφ）に詰め、測定した。なおバックグラウンドとしてｍｉｌｌｉ－Ｑ水を測定した。なおｍｉｌｌｉ－Ｑ水は、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ（登録商標）（メルク社）を用いて製造することができる。
以下のように小角Ｘ線散乱法を用いた算出値を平均粒子径とした。
【0033】
（１）算出に使用した装置
Ｘ線発生装置：理学電機（株）社製ＲＵ－２００（回転対陰極型）、Ｘ線源はＣｕＫａ線平面グラファイトインシデントモノクロメータ使用（出力は５０ｋＶ－２００ｍＡ）
光学系 ：理学電機（株）社製Ｋｒａｔｋｙカメラ
Ｕ－スリット：幅７０ｍｍ高さ１５ｍｍ
検出器 ：理学電機（株）社製、位置敏感型比例計数装置（ＰＳＰＣ）、スリット高さ８．６ｍｍ、積算時間６００００秒、チャンネル１０２４（８８．０３ｃｈ／ｄｅｇ．）
（２）算出方法
球体とみなした散乱体（白金微粒子）の電子密度変化による散乱波の強度Ｉ（ｑ）は以下の（ｉ）式で表される。
Ｉ（ｑ）＝｜Ω（ｑ）｜２（ｑは波数ベクトル（＝４πｓｉｎθ／λ））・・・（ｉ）
Ｘ線発生装置：理学電機（株）社製ＲＵ－２００（回転対陰極型）、Ｘ線源はＣｕＫａ線平面グラファイトインシデントモノクロメータ使用（出力は５０ｋＶ－２００ｍＡ）
光学系 ：理学電機（株）社製Ｋｒａｔｋｙカメラ
Ｕ－スリット：幅７０ｍｍ高さ１５ｍｍ
検出器 ：理学電機（株）社製、位置敏感型比例計数装置（ＰＳＰＣ）、スリット高さ８．６ｍｍ、積算時間６００００秒、チャンネル１０２４（８８．０３ｃｈ／ｄｅｇ．）
（２）算出方法
球体とみなした散乱体（白金微粒子）の電子密度変化による散乱波の強度Ｉ（ｑ）は以下の（ｉ）式で表される。
Ｉ（ｑ）＝｜Ω（ｑ）｜２（ｑは波数ベクトル（＝４πｓｉｎθ／λ））・・・（ｉ）
【0034】
散乱体の半径をＲとすると、形状因子は以下の（ｉｉ）式で表される。
Ω（ｑ，Ｒ）＝４πＲ３／（ｑＲ）３×（ｓｉｎ（ｑＲ）－ｑＲｃｏｓ（ｑＲ））・・・（ｉｉ）
粒子径の分布Ｐ（Ｒ）は、下記式（ｉｉｉ）のΓ分布であるとした。
Ω（ｑ，Ｒ）＝４πＲ３／（ｑＲ）３×（ｓｉｎ（ｑＲ）－ｑＲｃｏｓ（ｑＲ））・・・（ｉｉ）
粒子径の分布Ｐ（Ｒ）は、下記式（ｉｉｉ）のΓ分布であるとした。
【0035】
【数1】
【0036】
ここで、（ｉｉｉ）式中、Γ（Ｍ）はΓ関数、Ｒ０は散乱体の平均半径（白金ナノ粒子の平均粒子径）である。
分散を平均値で規格化した規格化分散σは下記式（ｉｖ）のように表される。
分散を平均値で規格化した規格化分散σは下記式（ｉｖ）のように表される。
【0037】
【数2】
【0038】
ここで、（ｉｖ）式中、Ｍは分布の広がりを決めるパラメータである。Ｍが大きくなるとガウス分布に似た左右対称に近いシャープな分布となり、Ｍが１以下になるとピークを持たない非常にプロードな分布を与える。
解析にはバックグラウンド処理後のプロファイルを用いた。
図１に、本実施例に係る白金ナノ粒子の平均粒子径を求めるのに使用した粒子径分布を示す。
解析にはバックグラウンド処理後のプロファイルを用いた。
図１に、本実施例に係る白金ナノ粒子の平均粒子径を求めるのに使用した粒子径分布を示す。
【0039】
試験前（飲用０目目）と試験後（飲用８週間後）において、糞便中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量（糞便中に含まれる腸内細菌全体の量に対する、アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量）と、血中ＬＰＳ濃度を測定した。
【0040】
糞便中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量は、高橋らの方法（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｐｒｉｍｅｒ ｆｏｒ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ Ａｒｃｈａｅａ ｕｓｉｎｇ ｎｅｘｔ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．）に従い、１６ｓ ｒＤＮＡ部分塩基配列を標的としたアンプリコンシーケンス解析により、測定した。具体的には、以下の方法で測定した。
【0041】
＜アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量の測定方法＞
＜１＞ＤＮＡ抽出
被験者から採取した糞便サンプル１００ｍｇを、４Ｍチオシアン酸グアニジウム、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ９．０）、４０ｍＭ ＥＤＴＡに懸濁した後、ＦａｓｔＰｒｅｐ－２ ５Ｇ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ， ＵＳＡ）を用いて、ジルコニアビーズで破砕した。各サンプル中のＤＮＡ濃度は、１０ｎｇ／ｍＬ（Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ ＮＤ８０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）により測定）となるように調整した。
＜２＞ライブラリーの作成
（２－１）フォワードプライマーとしてＰｒｏ３４１Ｆ、リバースプライマーとしてＰｒｏ８０５Ｒを使用して、タッチダウンＰＣＲ法により、ライブラリーを作成した。
反応混合液（全量２５ｍＬ）には、上記（１）で生成したゲノムＤＮＡが１０μｇ、上記プライマーが各０．２５ｍＭずつ含まれており、リアルタイムＰＣＲ試薬としてＭｉｇｈｔｙＡｍｐ ｆｏｒ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ（タカラバイオ）を使用した。
ＰＣＲ反応条件は、９８℃で２分間の初期変性の後，サイクル数により６５℃～５５℃の１５秒間のアニーリングと、６８℃で３０秒間の伸長を１サイクルとして、３５サイクル行った。アニーリング温度は１サイクルごとに１℃ずつ下げ、５５℃まで到達した以降は５５℃で一定とした。
（２－２）ＰＣＲ産物を、ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ ＰＣＲｕ９６フィルタープレート（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ， ＵＳＡ）で精製し、Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ＤＮＡ Ｃｈｉｐ １０００Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， ＵＳＡ）を用いて分析し、プライマーダイマーを検出し、各産物の平均分子量を決定した。
（２－３）精製したＰＣＲ産物を、ＭｉｇｈｔｙＡｍｐ ｆｏｒ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ（ＳＹＢＲ Ｐｌｕｓ）を用いて、Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ定量サーマルサイクラーでリアルタイム定量ＰＣＲ（ｑ－ＰＣＲ）により定量し、ライブラリーの濃度を測定した。
フォワードプライマーとしてＭｉｓｅｑ＿Ｆ、リバースプライマーとしてＭｉｓｅｑ＿Ｒを０．２ｍＭ添加し，標準物質としてＰｈｉＸコントロールライブラリー（米国イルミナ社）を連続的に希釈した。
ＰＣＲ反応条件は、９８℃で２分間の初期変性後、９８℃で１０秒間の変性、６０℃で１５秒間のアニーリング、６８℃で３０秒間の伸長を１サイクルとし、３０サイクル行った。
＜３＞アンプリコンシーケンス解析、微生物の同定及びアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量の計算
（３－１）上記＜２＞で作成したライブラリーについて、シーケンシングキットとしてＭｉＳｅｑ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ ｖ３（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）、シーケンサーとしてＭｉＳｅｑ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を用いて、アンプリコンシーケンス解析を行った。
（３－２）ＲＤＰ ＭｕｌｔｉＣｌａｓｓｉｆｉｅｒ ｖｅｒ ２．１１による相同性検索及び、ＤＢ－ＢＡ１３．０による微生物検索を行った。
（３－３）上記（４）の検索結果に基づき、腸内細菌叢中の細菌に占めるアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を計算した。
＜１＞ＤＮＡ抽出
被験者から採取した糞便サンプル１００ｍｇを、４Ｍチオシアン酸グアニジウム、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ９．０）、４０ｍＭ ＥＤＴＡに懸濁した後、ＦａｓｔＰｒｅｐ－２ ５Ｇ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ， ＵＳＡ）を用いて、ジルコニアビーズで破砕した。各サンプル中のＤＮＡ濃度は、１０ｎｇ／ｍＬ（Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ ＮＤ８０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）により測定）となるように調整した。
＜２＞ライブラリーの作成
（２－１）フォワードプライマーとしてＰｒｏ３４１Ｆ、リバースプライマーとしてＰｒｏ８０５Ｒを使用して、タッチダウンＰＣＲ法により、ライブラリーを作成した。
反応混合液（全量２５ｍＬ）には、上記（１）で生成したゲノムＤＮＡが１０μｇ、上記プライマーが各０．２５ｍＭずつ含まれており、リアルタイムＰＣＲ試薬としてＭｉｇｈｔｙＡｍｐ ｆｏｒ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ（タカラバイオ）を使用した。
ＰＣＲ反応条件は、９８℃で２分間の初期変性の後，サイクル数により６５℃～５５℃の１５秒間のアニーリングと、６８℃で３０秒間の伸長を１サイクルとして、３５サイクル行った。アニーリング温度は１サイクルごとに１℃ずつ下げ、５５℃まで到達した以降は５５℃で一定とした。
（２－２）ＰＣＲ産物を、ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ ＰＣＲｕ９６フィルタープレート（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ， ＵＳＡ）で精製し、Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ＤＮＡ Ｃｈｉｐ １０００Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， ＵＳＡ）を用いて分析し、プライマーダイマーを検出し、各産物の平均分子量を決定した。
（２－３）精製したＰＣＲ産物を、ＭｉｇｈｔｙＡｍｐ ｆｏｒ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ（ＳＹＢＲ Ｐｌｕｓ）を用いて、Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ定量サーマルサイクラーでリアルタイム定量ＰＣＲ（ｑ－ＰＣＲ）により定量し、ライブラリーの濃度を測定した。
フォワードプライマーとしてＭｉｓｅｑ＿Ｆ、リバースプライマーとしてＭｉｓｅｑ＿Ｒを０．２ｍＭ添加し，標準物質としてＰｈｉＸコントロールライブラリー（米国イルミナ社）を連続的に希釈した。
ＰＣＲ反応条件は、９８℃で２分間の初期変性後、９８℃で１０秒間の変性、６０℃で１５秒間のアニーリング、６８℃で３０秒間の伸長を１サイクルとし、３０サイクル行った。
＜３＞アンプリコンシーケンス解析、微生物の同定及びアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量の計算
（３－１）上記＜２＞で作成したライブラリーについて、シーケンシングキットとしてＭｉＳｅｑ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ ｖ３（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）、シーケンサーとしてＭｉＳｅｑ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を用いて、アンプリコンシーケンス解析を行った。
（３－２）ＲＤＰ ＭｕｌｔｉＣｌａｓｓｉｆｉｅｒ ｖｅｒ ２．１１による相同性検索及び、ＤＢ－ＢＡ１３．０による微生物検索を行った。
（３－３）上記（４）の検索結果に基づき、腸内細菌叢中の細菌に占めるアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を計算した。
【0042】
血中ＬＰＳ濃度は、比濁時間分析法により測定した。
【0043】
各指標の測定結果を、下記表１に示す。
なお表１中、アッカーマンシア・ムシニフィラの検出量が０％とは、アッカーマンシア・ムシニフィラが存在しないか、又は検出限界以下であったことを表す。
また、血中ＬＰＳ濃度が１．０以下とは、ＬＰＳの濃度が検出限界以下であったことを含む。
なお表１中、アッカーマンシア・ムシニフィラの検出量が０％とは、アッカーマンシア・ムシニフィラが存在しないか、又は検出限界以下であったことを表す。
また、血中ＬＰＳ濃度が１．０以下とは、ＬＰＳの濃度が検出限界以下であったことを含む。
【0044】
【表1】
【0045】
表１から明らかな通り、プラセボ群では、８週間の試験後において、アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量は０％（検出限界以下）で変化がない（被験者番号９～１２）か、又は減少していた（被験者番号６～８及び被験者番号１３）。
これに対し試験群では、８週間の試験後において、アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量が増加していた。
以上の結果から、本発明によれば、腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができることが明らかになった。
また、腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を指標として、アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量が少ない人物（例えば、糞便中の細菌に占めるアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量の割合が１％以下の人物）に対して、選択的に本発明の組成物を摂取させることを決定できることが示唆された。
これに対し試験群では、８週間の試験後において、アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量が増加していた。
以上の結果から、本発明によれば、腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができることが明らかになった。
また、腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量を指標として、アッカーマンシア・ムシニフィラの存在量が少ない人物（例えば、糞便中の細菌に占めるアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量の割合が１％以下の人物）に対して、選択的に本発明の組成物を摂取させることを決定できることが示唆された。
【0046】
上記の通り、アッカーマンシア・ムシニフィラは、腸粘膜における粘液層を肥厚させることが知られている。
上記の結果から、本発明に係る組成物を摂取することにより、大腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラが増殖した結果、腸粘膜における粘液層が肥厚することが示唆された。またこれにより、本発明に係る組成物を摂取することにより、腸粘膜バリアが強化され腸内環境が改善することが示唆された。
上記の結果から、本発明に係る組成物を摂取することにより、大腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラが増殖した結果、腸粘膜における粘液層が肥厚することが示唆された。またこれにより、本発明に係る組成物を摂取することにより、腸粘膜バリアが強化され腸内環境が改善することが示唆された。
【0047】
また、表１に表されている通り、プラセボ群では、試験前と比較して、試験後の血中ＬＰＳ濃度が上昇している被験者が２名いる（被験者番号７番及び１１番）。
上記の通り、腸漏れ症候群が起こると、ＬＰＳが血液中に漏れ出ることから、血中ＬＰＳ濃度が上昇した上記２被験者は、腸漏れが起こっている可能性がある。
これに対し、試験群では、８週間の試験後に血中ＬＰＳ濃度が上昇した被験者は一人もいなかった。換言すれば、試験群において、試験期間中に腸漏れの兆候が見られた被験者はいなかった。
上記の通り、腸漏れ症候群が起こると、ＬＰＳが血液中に漏れ出ることから、血中ＬＰＳ濃度が上昇した上記２被験者は、腸漏れが起こっている可能性がある。
これに対し、試験群では、８週間の試験後に血中ＬＰＳ濃度が上昇した被験者は一人もいなかった。換言すれば、試験群において、試験期間中に腸漏れの兆候が見られた被験者はいなかった。
【0048】
上記の通り、白金ナノ電解水を飲用することで、腸内のアッカーマンシア・ムシニフィラが増殖する。
増殖したアッカーマンシア・ムシニフィラにより、腸粘膜における粘液層が肥厚され、これにより腸漏れ症候群の発生が抑制されたことが、本実施例により示唆された。
上記の通り、腸漏れ症候群が発生すると、血液中のＬＰＳが体内の様々な箇所に運ばれることにより、種々の疾患が引き起こされるが、本発明に係る組成物を摂取することにより、ＬＰＳの血中への流出を抑制又は予防し、ＬＰＳによって引き起こされる種々の疾患を予防又は治療できることが示唆された。
また、血中ＬＰＳ濃度を指標として、血中ＬＰＳ濃度が高い人物に対して、選択的に本発明の組成物を摂取させることを決定できることが示唆された。
増殖したアッカーマンシア・ムシニフィラにより、腸粘膜における粘液層が肥厚され、これにより腸漏れ症候群の発生が抑制されたことが、本実施例により示唆された。
上記の通り、腸漏れ症候群が発生すると、血液中のＬＰＳが体内の様々な箇所に運ばれることにより、種々の疾患が引き起こされるが、本発明に係る組成物を摂取することにより、ＬＰＳの血中への流出を抑制又は予防し、ＬＰＳによって引き起こされる種々の疾患を予防又は治療できることが示唆された。
また、血中ＬＰＳ濃度を指標として、血中ＬＰＳ濃度が高い人物に対して、選択的に本発明の組成物を摂取させることを決定できることが示唆された。
【0049】
上記結果から、本発明に係るアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物を摂取することにより、腸粘膜バリアが強化され、上記したアルツハイマー型認知症やＩＩ型糖尿病等の、腸漏れ症候群が原因の一つとされる疾患の予防及び／又は改善ができることが示唆された。換言すれば、本発明に係るアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物は、腸漏れ症候群に起因する疾患の予防及び／又は治療に使用することができることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【0050】
本発明によれば、腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることができる。またこれにより、腸粘膜の粘液層を肥厚させ、腸粘膜バリアを強化し、これにより腸内環境を改善することができる。
【図1】
【手続補正書】
【提出日】2022-05-09
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量が少ない人物に対して用いられる、白金ナノ粒子を有効成分として含む、アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【請求項2】
前記腸内細菌叢中のアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量が少ない人物が、糞便中の細菌に占めるアッカーマンシア・ムシニフィラの存在量の割合が１％以下の人物である、請求項１に記載のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【請求項3】
前記白金ナノ粒子が電解水に分散されたものである、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項4】
前記白金ナノ粒子の平均粒子径が５ｎｍ以下である、請求項３に記載のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【請求項5】
前記白金ナノ粒子を、０．０２μｇ／ｍＬ以上の濃度で含む、請求項３又は４に記載のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。
【請求項6】
固形製剤であり、電解水に溶解させることにより、請求項３～５の何れか一項に記載の組成物を調製するための、請求項１又は２に記載のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖用組成物。